AR061604A1

AR061604A1 - SYNTHESIS OF AN INSULINOTROPIC PEPTIDE

Info

Publication number: AR061604A1
Application number: ARP070102735A
Authority: AR
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2006-06-23
Filing date: 2007-06-21
Publication date: 2008-09-10
Also published as: KR20090023619A; CA2654610A1; IL195421A0; EP2035451B1; NZ573093A; UA96602C2; ATE466881T1; DK2035451T3; AU2007263043B2; MA30530B1; US20080004429A1; AU2007263043A1; MY144608A; RU2009101969A; EP2035451A1; RU2448978C2; PT2035451E; KR101087859B1; CR10463A; NO20084863L

Abstract

La presente solicitud está relacionada con la preparacion de péptidos insulinotropicos que se sintetizan utilizando un método en fase solida y en solucion ('hibridaö). En general, el método incluye la síntesis de tres fragmentos de péptido intermediarios diferentes utilizando la química de fase solida. Entonces se utiliza la química de fase en solucion para anadir material de aminoácidos adicional a uno de los fragmentos. Entonces se acoplan los fragmentos en la fase en solucion solida. La utilizacion de una pseudoprolina en uno de los fragmentos facilita la síntesis en fase solida de ese fragmento y también facilita el subsiguiente acoplamiento en fase en solucion de este fragmento con otros fragmentos. La presente solicitud es muy util para la formacion de péptidos insulinotropicos como el GLP-1(7-36) y sus homologos naturales y no naturales. Reivindicacion 1: Un método para obtener un péptido insulinotropico, que comprende uno o más de los siguientes pasos: h) proporcionar un primer fragmento peptídico que incluye la secuencia de aminoácidos HX8EX10 (Id. de Sec. N° 6), en la que X8 y X10 son ambos residuos de un aminoácido aquiral, tanto H como E incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral; i) proporcionar un segundo fragmento peptídico que incluye la secuencia de aminoácidos TFTSDVX17-18YLEG (Id. de Sec. N° 8) en la que el residuo denotado mediante el símbolo X17-18 es un residuo dipeptídico de pseudoprolina, y dichos residuos de aminoácidos de la secuencia incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral; j) acoplar el primer fragmento al segundo fragmento para proporcionar un tercer fragmento peptídico que incluye la secuencia de aminoácidos HX8EX10TFTSDVX17-18YLEG (Id. de Sec. N° 11), y dichos residuos de aminoácidos de la secuencia incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral; k) proporcionar un cuarto fragmento peptídico que incluye la secuencia de aminoácidos QAAKEFIAWLVKX35 (Id. de Sec. N° 9), en el que X35 es un residuo de un aminoácido aquiral y dichos residuos de aminoácidos de la secuencia incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral; l) acoplar el cuarto fragmento peptídico a arginina para proporcionar un quinto fragmento peptídico que incluye la secuencia de aminoácidos QAAKEFIAWLVKX35R (Id. de Sec. N° 12), y dichos residuos de la secuencia incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral; y m) acoplar el quinto fragmento al tercer fragmento para proporcionar un péptido insulinotropico que incluye la secuencia de aminoácidos HX8EX10TFTSDVX17-18YLEGQAAkEFIAWLVK X35R (Id. de Sec. N° 13), y dichos residuos de la secuencia incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral. Reivindicacion 8: Un fragmento peptídico con la secuencia de aminoácidos HX8EX10 (Id. de Sec. N° 6), en el que X8 y X10 son ambos residuos de un aminoácido aquiral, tanto H como E, X8 y X10 incluyen opcionalmente la proteccion de la cadena lateral.The present application is related to the preparation of insulinotropic peptides that are synthesized using a solid phase and solution method ('hibridaö). In general, the method includes the synthesis of three different intermediate peptide fragments using solid phase chemistry. Then the phase chemistry in solution is used to add additional amino acid material to one of the fragments. The fragments are then coupled in the solid solution phase. The use of a pseudoproline in one of the fragments facilitates the solid phase synthesis of that fragment and also facilitates the subsequent phase coupling in solution of this fragment with other fragments. The present application is very useful for the formation of insulinotropic peptides such as GLP-1 (7-36) and their natural and unnatural counterparts. Claim 1: A method of obtaining an insulinotropic peptide, comprising one or more of the following steps: h) providing a first peptide fragment that includes the amino acid sequence HX8EX10 (Seq. ID No. 6), wherein X8 and X10 are both residues of an aquiral amino acid, both H and E optionally include side chain protection; i) providing a second peptide fragment that includes the amino acid sequence TFTSDVX17-18YLEG (Seq. ID No. 8) in which the residue denoted by the symbol X17-18 is a dipeptide residue of pseudoproline, and said amino acid residues of the sequence optionally include side chain protection; j) coupling the first fragment to the second fragment to provide a third peptide fragment that includes the amino acid sequence HX8EX10TFTSDVX17-18YLEG (Seq. ID No. 11), and said amino acid residues of the sequence optionally include chain protection side; k) providing a fourth peptide fragment that includes the amino acid sequence QAAKEFIAWLVKX35 (Sec. No. 9), wherein X35 is a residue of an aquiral amino acid and said amino acid residues of the sequence optionally include the protection of the side chain; l) coupling the fourth peptide fragment to arginine to provide a fifth peptide fragment that includes the amino acid sequence QAAKEFIAWLVKX35R (Seq. ID No. 12), and said sequence residues optionally include side chain protection; and m) coupling the fifth fragment to the third fragment to provide an insulinotropic peptide that includes the amino acid sequence HX8EX10TFTSDVX17-18YLEGQAAkEFIAWLVK X35R (Seq. ID No. 13), and said sequence residues optionally include side chain protection. Claim 8: A peptide fragment with the amino acid sequence HX8EX10 (Seq. ID No. 6), wherein X8 and X10 are both residues of an aquiral amino acid, both H and E, X8 and X10 optionally include the protection of the side chain