SE507028C2 - Ny medicinsk användning - Google Patents

Description

507 Û2à åstadkomma ny teknik för att förhindra eller behandla in- fektionssjukdomar förorsakade av herpesvirus hos däggdjur innefattande människan.

Ett annat ändamål med uppfinningen är att åstadkomma en ny kombination av aktiva beståndsdelar som kan använ- das för framställning av ett läkemedel för sådant för- hindrande eller behandling.

För dessa och andra ändamål som kommer att framgå av följande framställning åstadkommes genom uppfinningen ny teknik baserad på användningen av heparin eller heparan- sulfat i kombination med kitosan för framställning av ett läkemedel för att förhindra eller behandla infektions- sjukdomar förorsakade av herpesvirus hos däggdjur inne- fattande människan.

Vid en sådan användning är det föredraget att fram- ställningen av nämnda läkemedel baseras på en kombination av heparin och kitosan.

Både heparin och heparansulfat är kommersiellt till- gängliga på marknaden från flera leverantörer. Även par- tiellt hydrolyserade former av dessa beståndsdelar kan användas förutsatt att deras biologiska aktivitet förblir i huvudsak oförändrad.

Det läkemedel som skall användas för att förhindra eller bekämpa infektionssjukdom förorsakad av herpesvirus kan tillhandahållas i olika fysikaliska former, exempel- vis som pulver, salvor, pastor, geler, suspensioner, el- ler lösningar. Den form som användes är naturligtvis an- passad till karaktären av den störning som behandlas.

En av huvudkomponenterna i föreliggande läkemedel är polysackariden kitosan, som är en lineär, 1,4-bunden po- lysackaridenhet uppbyggd av ß-D-glukosaminenheter. Kito- sanet framställes genom N-deacetylering av kitin, en po- lymer som bildar skalet pá bl.a. insekter och skaldjur.

Kommersiellt kitin utvinnes från krabb- och räkskal, vil- 3* f 507 028 ka utgör biprodukter från fiskeindustrin.Genom att regle- ra alkalibehandlingen av kitiner är det möjligt att fram- ställa kitosaner med varierande grad av N-acetylering.

Vid behandling av kitin med alkali, såsom natriumhydrox- id, sker N-deacetylering, vari acetamidogrupper omvandlas till aminogrupper under bildning av kitosan.

De fysikaliska egenskaperna hos kitosan som åstad- kommer dess användbarhet beror pà graden av N-acetyle- ring, molekylvikt och homogenitet. Kitosanet är biodegra- derbart, av lysosym i kroppsvätskor. både med kitinas från matsmältningssystemet och Det är föredraget i anslutning till användningen en- ligt föreliggande uppfinning, att kitosanet har en grad av N-acetylering av högst ca 90% och företrädesvis högst ca 50%. Det är speciellt föredraget att graden av N- acetylering är mindre än ca 25%.

De två huvudkomponenterna i det läkemedel som är ak- tuellt vid föreliggande uppfinning, heparin eller hepa- ransulfat och kitosan, användes lämpligen i kombination med konventionella bärare eller excipienter av en medi- cinskt acceptabel karaktär. Helt allmänt är det föredra- get att matrisen är en vattenhaltig matris, och bäraren eller excipienten kan innehålla en viskositetsförhöjande polysackarid, som kan vara utvald bland hemicellulosor, exempelvis arabinoxylaner och glukomannaner, växtgummin, exempelvis guar gum, locust bean gum, cellulosor och de- rivat därav, exempelvis metylcellulosa, etylcellulosa, hydroxietylcellulosa, karboximetylcellulosa, stärkelse och stärkelsederivat, exempelvis hydroxietylstärkelse el- ler förnätad stärkelse, mikrobiella polysackarider, exem- pelvis xantangummi, kurdlan, pullulan, dextran. Även algpolysackarider, exempelvis agar, karragenaner, algi- ninsyra, kan användas som beståndsdel i bäraren eller ex- cipienten.

En föredragen polysackarid för användning i bäraren eller excipienten är ett cellulosaderivat, exempelvis me- tylcellulosa. 507 -'f| m I föreliggande läkemedel är det föredraget att den kombinerade mängden av viskositetsförhöjande polysackarid är mindre än ca 10 viktprocoent base- totalvikt. fysikalisk form av läkemedlet är gel- och nämnda kitosan rat på läkemedlets En föredragen formen, och i ett sådant gelformat läkemedel är nämnda kombinerade mängd av polysackarid och kitosan företrädes- vis inom intervallet ca 0,5 till ca 5 viktprocent räknat på läkemedlet som helhet.

Nämnda heparin eller heparansulfat är företrädesvis närvarande i läkemedlet i en mängd av från ca 0,1 till ca 2 viktprocent.

Föreliggande uppfinning avser även ett förfarande för att förhindra eller behandla infektionssjukdomar hos däggdjur innefattande människa förorsakade av herpesvi- rus. Detta förfarande innefattar steget applicering på ett ställe i behov av behandling av en aktiv mängd av ett läkemedel innehållande i kombination heparin eller hepa- ransulfat och kitosan.

Exempel på utföringsformer Föreliggande uppfinning kommer i det följande att illustreras i anslutning till icke inskränkande exempel.

I dessa exempel avser delar och procenttal vikt om ej an- nat anges. Föreliggande illustration göres i förening med bilagda ritning, vari: ' Effekten av HSV-1-plack avsatts mot serieprovutspäd- ning för 5 olika kompositioner illustrerande fullständigt läkemedel och kompositioner exkluderande en eller flera beståndsdelar.

EXEMPEL 1 - Framställning av fullständigt läkemedel Hydrokloridsaltet av kitosan med en N-deacetyle- (Pronova Biopolymers, Drammen, Norge) destillerat vatten till bild- ringsgrad av 16% upplöses i sterilfiltrerat, ning av en 3%-ig lösning av kitosanet.

En O,6% lösning av nativt heparin innehållande me- ' i 587 028 tylcellulosa i en koncentration av 4 g/L beredes.

Båda lösningarna autoklaveras och blandas under ste- rila betingelser i lika stora delar. Sorbinsyra tillsät- tes som ett konserveringsmedel i en antifungal mängd.

EXEMPEL 2 Kompositionen enligt Exempel 1 beredes på liknande sätt men under uteslutning av sorbinsyra.

EXEMPEL 3 Kompositionen enligt Exempel 1 beredes på liknande sätt men under uteslutning av sorbinsyra och heparin.

EXEMPEL 4 Kompositionen enligt Exempel 1 beredes på liknande sätt men denna gång under uteslutning av sorbinsyra och kitosan.

EXEMPEL 5 Kompositionen enligt Exmpel 1 beredes på liknande sätt men denna gång under uteslutning av förutom sorbin- syra och heparin även kitosan.

EXEMPEL 6 - Experimentell procedur Den diluent som användes i experimenten är isotonisk NaCl (O,136 M) och Eagle Minimum Essential Medium (EMEM). stam KOS321.

Proven utspädes i 24 brunnars plattor. 1 mL prov Använt virus är HSV-1, blandas med 1 mL isotonisk NaCl och utspädes sedan i se- rie med 2-faldiga utspädningar i isotonisk NaCl upp till en utspädning av 1:32. Den sista brunnen i varje rad in- nehàller endast isotonisk NaCl. Samma lösningar göres även i EMEM i stället för isotonisk NaCl.

Detaljerad procedur: 1. Tillsätt 100 PFU av HSV-1 i 100 uL isotonisk NaCl för serieutspädning av prov. 2. Inkubera i 10 min vid rumstemperatur. 507 ON | H ozïs (GMK AH1), 6 brunnars plattor) l 3. Tvätta cellerna (Green monkey njurceller konfluenta monoskikt, 3 dygn gamla, x med 2 mL av endera isotonisk NaCl eller EMEM. 4. Tillsätt 1 mL virusprovblandning till cellerna.

Inkubera i 1 h vid rumstemperatur. 6 Tvätta cellerna 2 x med 2 mL EMEM. 7. Tillsätt 3 mL standardmetylcellulosalösning. 8 Inkubera i 3 dygn i C02-inkubator vid 37°C. 9 Färga cellerna med kristallviolett lösning och räkna virala plack.

Resultat Den bilagda ritningen visar genom ett diagram resul- taten som HSV-1-plack avsatta mot provutspädning (neg. log2). Det framgår av resultaten som illustreras på rit- ningen att en utspädning av l:2 och 1:4 resulterade i in- hibering av alla beredningar troligen till följd av när- varon av metylcellulosa. I utspädningarna 1:16 och 1:32 var endast beredningar innehållande heparin aktiva. Upp till en utspädning av 1:32 upprätthölls den inhibitoriska effekten av beredningarna innehållande både heparin och kitosan.

Test med avseende på toxicitet har visat att samtli- ga kompositioner är ogiftiga vis-a-vis GMK-celler.

EXEMPEL 7 - Kliniska tester Följande kliniska utprovning gjordes under använd- ning av en komposition i enlighet med Exempel 1 ovan i form av en gel. Samtliga tester var riktade pà att för- hindra eller behandla orolabial infektion förorsakad av HSV-1-virus.

Fall 1 En 15 år gammal pojke behandlades upprepade gànger, både med profylaktisk behandling av tidiga symptom och och behandling av etablerad infektion. Lokal applikation av kompositionen enligt Exempel 1 eliminerade tidiga symptom inom 24 timmar respektive åstadkom läkning pà 72 i 507 028 timmar.

Fall 2 En 48 år gammal man behandlades profylaktiskt för tidiga symptom, varvid resultaten var desamma som i Fall l ovan.

Fall 3 En 9 år gammal flicka har framgångsrikt behandlats med läkemedlet enligt Exempel 1, både mot etablerad sjukdom och vid profylaktisk behandling.

Fall 4 En 3 år gammal pojke med fullt utvecklad läppinfektion behandlades topiskt med kompositionen enligt Exempel l ovan. Detta resulterade i avstannad infektion på 2 dygn och läkning på 4 dygn.

Fall 5 En 52 år gammal man har framgångsrikt använt gelen enligt Exempel l både för behandling av etablerad sjukdom och för profylaktisk behandling av tidiga symptom.

Ovan angivna resultat avseende både inhibition av viruscelltillväxt och klinisk testning verifierar samtli- ga den överraskande effekt som föreliggande kompositioner har på infektionssjukdom förorsakad av herpesvirus. Det faktum att sådana infektioner kunde framgångsrikt behand- las under användning av en kombination av heparin och ki- tosan var i själva verket oväntat och överraskande. Ehuru uppfinningen ej är inskränkt till någon speciell teori eller verkningsmekanism kan det vara så att den vid kom- positionen använda matrisen ger långsam frigöring av he- parinet i en aktiv form. Matrisen innefattande kitosan kan antas binda heparinet genom jonbindningar så att det ej inaktiveras av de enzymer som är närvarande i behand- lingsomgivningen, såsom enzymet heparinas. Detta var klart oväntat med hänsyn till heparinets känslighet för enzymatisk nedbrytning och inaktivering.

Det bör observeras, att uppfinningen såsom den ex- emplifierats ovan ej är inskränkt till redovisade utfö- ringsformer eftersom modifikationer är närliggande för fackmannan. Uppfinningens omfattning begränsas därför en- 507 ozš dast av bilagda patentkrav.

Claims (13)

10 15 20 25 30 35 9 l.- 507 028 PATENTKRAV

1. l. Användning av heparin eller heparansulfat i kom- bination med kitosan för framställning av ett läkemedel för att förhindra eller behandla infektionssjukdomar för- orsakade av herpesvirus på däggdjur innefattande männi- ska.

2. Användning enligt patentkravet l, vari framställ- ningen är baserad på kombinationen av heparin och kito- san.

3. Användning enligt patentkravet 1 eller 2, vari kitosanet har en grad av N-acetylering av högst ca 90% och företrädesvis högst ca 50%.

4. Användning enligt patentkravet 3, vari kitosanet har en grad av N-acetylering av mindre än ca 25%.

5. Användning enligt något av de föregående patent- kraven, vari nämnda läkemedel ytterligare innehåller en farmaceutiskt acceptabel bärare eller excipient.

6. Användning enligt något av de föregående patent- kraven, vari läkemedlet föreligger i form av ett pulver, en salva, en pasta, en gel, en suspension, en lösning el- ler en film.

7. Användning enligt patentkravet 5 eller 6, vari nämnda bärare eller excipient innefattar en viskositets- förhöjande polysackarid.

8. Användning enligt patentkravet 7, vari nämnda viskositetsförhöjande polysackarid utgöres av ett cellu- losaderivat.

9. Användning enligt något av de föregående patent- kraven, vari nämnda läkemedel innefattar en vattenhaltig matris.

10. Användning enligt något av patentkraven 6 till 8, vari nämnda viskositetsförhöjande polysackarid till- sammans med nämnda kitosan är närvarande i läkemedlet i en mängd av mindre än ca 10 viktprocent.

11. ll. Användning enligt patentkravet 10, vari nämnda läkemedel föreligger i form av en gel. 507 nås

12. Användning enligt patentkravet ll, vari nämnda viskositetsförhöjande polysackarid tillsammans med nämnda kitosan är närvarande i läkemedlet i en mängd av från ca 0,5 till ca 5 viktprocent. 5

13. Användning enligt något av de föregående patent- kraven, vari nämnda heparin eller heparansulfat är närva- rande i läkemedlet i en mängd av från ca 0,1 till ca 2 viktprocent.