RU2804883C1 - Способ оценки качества (3s)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к оценке качества фармацевтических продуктов. Раскрыто применение соединения химической формулы 2 или соответствующей соли для оценки чистоты фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту.

Химическая формула 2

Также раскрыто соединение химической формулы 2 и способ оценки чистоты фармацевтического продукта с его использованием. Группа изобретений обеспечивает возможность оценки качества фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту. 3 н. и 4 з. п. ф-лы, 4 ил., 3 табл., 3 пр.

Description

Область техники настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к родственному веществу (3S)-3-(4-(3-(l,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты и к способу оценки качества (3S)-3-(4-(3-(l,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты с его применением.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

Соединение следующей химической формулы 1, то есть (3S)-3-(4-(3-(l,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновая кислота, представляет собой лекарственное средство, разработанное в качестве терапевтического средства для лечения метаболических заболеваний; см. патентный документ 1 (патент Кореи №10-1569522) и патентный документ 2 (патент Кореи №10-1728900).

Химическая формула 1

Хотя оказывается предпочтительным, когда полученный активный фармацевтический ингредиент (АФИ) имеет высокую чистоту, очень редко смесь продуктов реакции представляет собой единственное чистое соединение в процессе получения активного фармацевтического ингредиента, и смесь продуктов реакции содержит примеси, такие как побочные продукты реакции и реагенты, используемые в реакции. Кроме того, поскольку активный фармацевтический ингредиент может быть модифицирован даже в течение процесса изготовления композиции или в процессе хранения композиции, часть активного фармацевтического ингредиента может подвергаться разложению или модификации и, таким образом, превращаться в примесь. Таким образом, содержание активного фармацевтического ингредиента, который присутствует в составе фармацевтического продукта, необходимо измерять в течение получения, хранения и использования активного фармацевтического ингредиента или лекарственного вещества или конечного фармацевтического продукта, и чистоту активного фармацевтического ингредиента обычно исследуют, осуществляя анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или газовой хроматографии (ГХ). Примесь, которая содержится в фармацевтических продуктах, также называется термином «родственная примесь» или «родственное вещество» и также является необходимой для контроля качества фармацевтических продуктов в целях определения присутствия или отсутствия родственных веществ, содержание которых превышает стандартное значение, составляющее, например, 0,1% или более.

Примеси идентифицируют, используя положения пиков на хроматограмме (пятен на пластинах для тонкослойной хроматографии (ТСХ); см. Strobel (страница 953) в издании Strobel, Н.А.; Heineman, W.R., «Химическое оборудование: систематический подход», третье издание, издательство John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1989 г.

Таким образом, примесь может быть идентифицирована по ее положению на хроматограмме, которое, как правило, измеряют как время между впрыскиванием образца в колонку и элюированием конкретного ингредиента через детектор, которое измеряется в минутах и называется термином «время удерживания». Этот период времени постоянно изменяется в зависимости от состояния оборудования и многих других факторов. Чтобы ослабить воздействие таких изменений на точность идентификации примеси, специалисты в данной области техники идентифицируют примеси с использованием «относительное время удерживания» (RRT); см. Strobel (страница 922). Значение RRT примеси представляет собой время удерживания примеси, деленное на время удерживания любого эталонного стандарта. Теоретически сам активный фармацевтический ингредиент может быть использован в качестве эталонного стандарта, но, как правило, он присутствует в смеси в избыточной пропорции в качестве основного вещества и насыщает колонку, в результате чего получается невоспроизводимое время удерживания. Таким образом, иногда оказывается предпочтительным, что активный фармацевтический ингредиент добавлен или присутствует в достаточно значительном количестве, чтобы существовала возможность его обнаружения, или выбрано альтернативное соединение, содержание которого является достаточно низким, чтобы не насыщать колонку, и такой соединение используется в качестве эталонного стандарта.

Исследователи и разработчики производства лекарственных средств понимают, что соединение в относительно чистом состоянии может быть использовано как «эталонный стандарт» в целях определения количества соединения в неизвестной смеси. Когда соединение используется как «внешний стандарт», раствор известной концентрации соединения анализируют с применением такой же технологии, как в случае неизвестной смеси; см. Strobel (страница 924) и Snyder (страница 549, Snyder, L.R.; Kirkland, J.J., «Введение в современную жидкостную хроматографию», второе издание, издательство John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1979 г.). Количество соединения в смеси может быть определено посредством сравнения величины отклик детектора.

Эталонное стандартное соединение также может быть использовано для определения количества другого соединения в смеси, когда задан «коэффициент отклика», который компенсирует различия в чувствительности детектора по отношению к двум соединениям; см. Strobel (страница 894). Для этой цели эталонное стандартное соединение добавляется непосредственно в смесь и называется термином «внутренний стандарт»; см. Strobel (страница 925) и Snyder (страница 552).

Эталонное стандартное соединение может быть использовано в качестве внутреннего стандарта, когда неизвестная смесь содержит некоторое эталонное стандартное соединение, с применением технологии, известной как «стандартная добавка», и при этом по меньшей мере два образца получают посредством добавления известных и различных количеств внутреннего стандарта; см. Strobel (страницы 391-393) и Snyder (страницы 571-572). Пропорция, в которой эталонное стандартное соединение первоначально присутствует в смеси, может быть определена по отклику детектора посредством построения графика зависимости отклика детектора от количества эталонного стандартное соединения, добавленного в каждый из образцов, и экстраполяции построенного графика до нулевой концентрации эталонного стандартное соединения; см., например, Strobel (фиг. 11.4, страница 392).

Документы предшествующего уровня техники

Патентные документы

Патентный документ 1: патент Кореи №10-1569522

Патентный документ

2: патент Кореи №10-1728900

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Strobel, Н.А.; Heineman, W.R., «Химическое оборудование: систематический подход», третье издание, издательство John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1989 г.

Непатентный документ: Snyder, L.R.; Kirkland, J.J., «Введение в современную жидкостную хроматографию», второе издание, издательство John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1979 г.

Национальный научно-исследовательский проект, поддерживающий настоящее изобретение

Номер проекта: HIl7C2529

Наименование министерства: Министерство здравоохранения и благосостояния

Руководящее исследованием специализированное учреждение:

Корейский институт развития промышленности здравоохранения

Название исследования: разработка современной медицинской технологии

Название исследовательского проекта (клиническая фаза 1): разработка эффективного (ЕС₅₀<1 нМ) средства для лечения диабета HD-6277 с прорывным гипогликемическим эффектом (HbAlc>1%) и отсутствием гипогликемического побочного эффекта

Степень участия: 1/1

Управляющее отделение: Hyundai Pharmaceutical Co., Ltd.

Период исследования: от 12 декабря 2017 года до 30 июня 2020 года

Краткое раскрытие настоящего изобретения

Техническая проблема

Настоящее изобретение выполнено в целях предложения родственного вещества (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты и способа оценки качества (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты с его применением.

Техническое решение

Согласно настоящему изобретению предложено соединение следующей химической формулы 2, которое представляет собой родственное вещество (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты или соответствующую соль.

Химическая формула 2

При использовании в настоящем документе термин «эталонный стандарт» означает соединение, которое может быть использовано как для количественного, так и для качественного анализа активного фармацевтического ингредиента. Например, в ВЭЖХ, время удерживания соединения позволяет устанавливать относительное время удерживания, что обеспечивает качественный анализ. Концентрация соединения в растворе перед впрыскиванием в колонку ВЭЖХ допускает сравнение площади пика на хроматограмме ВЭЖХ, что обеспечивает количественный анализ.

Хотя в технической литературе в данном отношении обычно описан эталонный стандарт, специалист в данной области техники может понимать, что отклик детектора может представлять собой высоту пика или вычисленную в результате интегрирования площадь пика на хроматограмме, полученной с применением элюента для ВЭЖХ с детектором ультрафиолетового (УФ) излучения или детектора показателя преломления, или, например, с применением элюента для ГХ с пламенно-ионизационным детектором детектора теплопроводности, или с применением элюента для пятен на пластинках ТСХ с флуоресцентным детектором или с другими детекторами, отклик которых представляет собой, например, поглощение ультрафиолетового излучения. Положение пика эталонного стандарта может быть использовано для вычисления относительного времени удерживания (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты и других примесей.

Когда (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновая кислота подвергается воздействию с использованием жестких условий, представляющих собой излучение, кислоту, температуру, влажность и другие факторы, получается родственное вещество (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты, и это родственное вещество может быть использовано в качестве эталонного стандарта.

Посредством применения указанных условий в процессе синтеза (3S)-3-(4-(3-(l,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты в следующем примере 1 авторы настоящего изобретения получили соответствующее родственное вещество, и в результате его исследования методами ВЭЖХ и масс-спектрометрии авторы настоящего изобретения подтвердили, что данное родственное вещество представляет собой соединение следующей химической формулы 2.

Химическая формула 2

Соединение химической формулы 2 может быть получено посредством химического синтеза для использования в качестве эталонного стандарта. Хотя в настоящем изобретении отсутствует соответствующее ограничение, соединение химической формулы 2 может быть получено, например, с осуществлением процесса по следующей схеме реакции 1.

Схема реакции 1

Конкретный способ синтеза включает следующие стадии.

Стадия 1. Синтез (3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)фенил)метанола

(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)фенил)метанол синтезирован в результате эпоксидирования (3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)фенил)метанола.

Стадия 2. Синтез 3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензилметансульфоната

3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензилметансульфонат синтезирован в результате метан сульфонирования (3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)фенил)метанола.

Стадия 3. Синтез (3S)-этил-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иноата

(3S)-этил-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иноат синтезирован в результате реакции 3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензилметансульфоната с (S)-этил-3-(4-пуагоксифенил)гекс-4-иноатом.

Стадия 4. Синтез (3S)-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иновой кислоты

(3S)-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иновая кислота синтезирована в результате гидролиза (3S)-этил-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иноата.

Соединение химической формулы 2 может быть использовано в форме соли. (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновая кислота может быть использована в форме фармацевтически приемлемой соли в фармацевтическом продукте. Таким образом, соединение химической формулы 2, которое представляет собой родственное вещество (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты, также может быть использовано в форме соли, которая представляет собой эквивалент фармацевтически приемлемой соли (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты; см. патентный документ 1 (патент Кореи №10-1569522). Например, соединение химической формулы 2 может быть использовано в форме фармацевтически приемлемой соли металла или соли аминокислоты при использовании в качестве эталонного стандарта. Например, соль металла представляет собой соль натрия, калия или кальция, и соль аминокислоты представляет собой, например, соль природной аминокислоты, такую как соль глицина, аланина, фенилаланина, валина, лизина и глутаминовой кислоты.

Согласно одному примерному варианту осуществления настоящего изобретения предложена композиция для оценки фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, содержащая соединение следующей химической формулы 2 или соответствующую соль.

Химическая формула 2

Как описано выше, соединение химической формулы 2 или соответствующая соль может находить применение в качестве эталонного стандарта для оценки качества активного фармацевтического ингредиента или лекарственного вещества или фармацевтического продукта, который содержит (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту. Другими словами, соединение химической формулы 2 или соответствующая соль может находить применение в качестве эталонного стандарта для оценки чистота, устойчивости при хранении или других показателей фармацевтического продукта в процессе получения фармацевтического продукта посредством анализа содержания (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты или соответствующего родственного вещества в фармацевтическом продукте.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен способ оценки качества фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, причем способ включает оценку содержания (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты в фармацевтическом продукте с использованием соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта.

Способ анализа содержания (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты в фармацевтическом продукте или активном фармацевтическом ингредиенте или лекарственном веществе с использованием соединения химической формулы 2 или соответствующей соли не ограничивается определенным образом, и может быть использован известный способ анализа вещества в композиции.

Например, в качестве способа анализа может быть использована высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Кроме того, способ анализа может дополнительно включать стадию качественного анализа вещества, в котором находят применение жидкостная хроматография/масс-спектрометрии (ЖХ/МС), жидкостная хроматография/тандемная масс-спектрометрия (ЖХ/МС/МС), спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР), или один или несколько указанных методов.

Например, когда образец анализируют с использованием ВЭЖХ, электрический сигнал, который эмитирует детектор, используется для построения графика пика, причем на оси X представлено время, и на оси Y представлена величина сигнала. Относительные результаты в отношении концентрации могут быть получены для высоты и площади пика и других параметров отделенного вещества. Представленное на оси X время (время удерживания RT) представляет собой качественный фактор по сравнению с эталонным стандартом, что является традиционно известным, а представленная как высота на оси Y площадь пика (площадь пика, высота пика) с осью X пика как базовой линии представляет собой качественный фактор. Чистота (процентная площадь) вычисляется как соотношение значения площади каждого пика к полной сумме площадей обнаруженных пиков.

В способе оценки качества фармацевтического продукта цель оценки содержания не должна быть обязательно ограниченной активным ингредиентом. Например, содержание других родственных веществ, присутствующих в качестве дополнения к активному ингредиенту, также может быть проанализировано с использованием соединения химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта.

Таким образом, согласно настоящему изобретению также предложен способ оценки качества фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(l,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, причем способ включает оценку содержания родственного вещества в фармацевтическом продукте с использованием соединение следующей химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта.

Согласно одному примерному варианту осуществления, когда содержание родственного вещества составляет менее чем 0,5% в течение хранения фармацевтического продукта в условиях долгосрочного хранения (при температуре 5°С±3°С в течение 36 месяцев), определяется соответствие критериям качества.

Согласно следующему примерному варианту осуществления, когда содержание родственного вещества составляет менее чем 0,5% в течение хранения фармацевтического продукта в условиях долгосрочного хранения (при температуре 25°С±2°С и относительной влажности 5% в течение 36 месяцев), определяется соответствие критериям качества.

Согласно следующему примерному варианту осуществления, когда содержание родственного вещества составляет менее чем 0,5% в течение хранения фармацевтического продукта в условиях долгосрочного хранения (при температуре 40°С±2°С и относительной влажности 5% в течение 24 месяцев), определяется соответствие критериям качества.

Согласно одному примерному варианту осуществления настоящего изобретения предложен способ анализа образца, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, причем способ включает:

a) получение данных посредством осуществления хроматографии образца; и

b) сравнение данных с хроматографическими данными соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли.

Химическая формула 2

Например, способ может включать:

(a) получение хроматограммы посредством осуществления высокоэффективной жидкостной хроматографии раствора (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты, содержащей соединение химической формулы 2 или соответствующей соли; и

(b) сравнение пика, полученного на хроматограмме, с пиком, полученным для соединения химической формулы 2 или соответствующей соли.

В качестве альтернативы, способ может включать:

(a) получение хроматограммы посредством осуществления тонкослойной хроматографии раствора (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты; и

(b) сравнение пятна, полученного на хроматограмме, с пятном, полученным для соединения химической формулы 2 или соответствующей соли.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен способ измерения времени удерживания на хроматографической колонке для (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты, причем способ включает:

осуществление хроматографии с использованием соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта.

Химическая формула 2

Полезные эффекты

Согласно настоящему изобретению оказывается возможной оценка качества, устойчивости и других показателей фармацевтической композиции, содержащей (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, с использованием соединения химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 проиллюстрированы данные инфракрасной (ИК) спектроскопии для соединения химической формулы 2.

На фиг. 2 проиллюстрированы данные дифференциальной сканирующей калориметрии и термогравиметрического анализа (ДСК-ДТГ) для соединения химической формулы 2.

На фиг. 3 проиллюстрированы данные рентгеновского дифракционного анализа (РДА) для соединения химической формулы 2.

На фиг. 4 проиллюстрировано сравнение результатов анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для контрольного и модифицированного образцов. На этом изображении синим цветом обозначен контрольный образец, и зеленым цветом обозначен модифицированный образец.

Подробное раскрытие вариантов осуществления настоящего изобретения

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно посредством примеров, но они представлены для цели описания настоящее изобретение, и объем настоящего изобретения не ограничивается каким-либо образом посредством данных примеров.

Примеры

Пример 1. Отделение родственного вещества

Приблизительно 35 мг содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту вещества, находящегося на хранении в условиях холодильника (при температуре 5°С±3°С) в течение приблизительно 2 лет, точно взвешивали и помещали в колбу объемом 50 мл, разбавитель добавляли в колбу до уровня, соответствующего приблизительно 2/3 объема, и полученную в результате смесь тщательно перемешивали. После этого родственное вещество анализировали с использованием хроматографа ВЭЖХ серии 1200 от компании Agilent Technologies.

Условия ВЭЖХ: технологические параметры

Колонка: Kinetex EVO С18, 5 мкм, 4,6 × 250 мм

Температура колонки: 25°С

Скорость потока: 1,0 мл/мин

Впрыскиваемый объем: 5 мкл

Концентрация образца: 0,7 мг/мл

Длина волны: 220 нм

Подвижная фаза А: раствор 0,01 М K₂HPO₄ (рН 7)

Подвижная фаза В: ацетонитрил

Разбавитель: смесь воды и ацетонитрила в соотношении 80/20

Градиент:

Результаты анализа представлены ниже.

Вещество, содержащее родственное вещество (RRT: 0,93, процентная площадь 0,26%), проанализированное методом ВЭЖХ, было подвергнуто качественному анализу методом МС и определению образующихся ионов с использованием квадрупольной времяпролетной системы (Q-TOF) ЖХ/МС. Система ЖХ-МС/МС обеспечивает качественный анализ вещества с использованием системы ВЭЖХ Agilent 1290 Infinity и квадрупольного времяпролетного масс-спектрометра Agilent 6550 Q-TOF. Анализ осуществляли в следующих условиях.

Условия ВЭЖХ

Колонка: колонка YMC-Pack Pro C18 (4,6 × 150 мм, 5 мкм), оборудованная предохранительной колонкой Phenomenex SecurityGuard C18 (4 × 20 мм)

Подвижная фаза А: раствор 0,1% муравьиной кислоты в смеси воды и метанола в соотношении 60/40

Подвижная фаза В: раствор 0,1% муравьиной кислоты в смеси ацетонитрила и метанола в соотношении 60/40

Скорость потока: 1 мл/мин (в течение 34 минут)

Впрыскиваемый объем: 10 мкл

Разбавитель: смесь воды и ацетонитрила в соотношении 10/90

Длина волны: 220 (или 260 нм)

Условия масс-спектроскопии

Капиллярное напряжение: 3500 В

Ионизация: ионизация методом электрораспыления, положительные ионы (ИЭР+)

Сушильный газ: 14

Распылительный газ: 50

Защитный газ: 12

Температура защитного газа: 400°С

Температура сушильного газа: 250°С

Полный диапазон сканирования МС, режим МС/МС (m/z): от 100 до 1000 Анализируемое вещество, отделенное на стадии обнаружения, вводили в потоке в масс-спектрометр, и в этом случае обнаруженный ион родственного вещества подвергали качественному анализу посредством выбора характеристического иона [М+Na] в масс-спектре.

В результате анализа были обнаружены три прогнозируемых соединения, и каждое прогнозируемое соединение было обнаружено и подвергнуто масс-спектрометрическому анализу. В результате этого было подтверждено, что химическая структура родственного вещества, представленного значением RRT 0,93, представляет собой структуру, соответствующую следующей химической формуле 2.

Химическая формула 2

(3S)-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иновая кислота

Пример 2. Синтез соединения химической формулы 2

Соединение химической формулы 2 было синтезировано следующим образом согласно приведенной ниже схеме реакции 1.

Схема реакции 1

Стадия 1. Синтез (3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)фенил)метанола

Мета-хлорпероксибензойную кислоту (МСРВА) (365,40 ммоль) помещали в колбу и растворяли в этилацетате (450 мл). Температуру внутри колбы снижали путем охлаждения до 0°С в процессе перемешивания. (3-(1,4-Диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)фенил)метанол (DS-PMA) (30 г, 121,80 ммоль) растворяли в этилацетате (150 мл) и полученный в результате раствор добавляли в колбу при 0°С. После добавления смесь перемешивали при комнатной температуре и затем анализировали методом ТСХ, чтобы подтвердить завершение реакции. Продукт реакции промывали однонормальным водным раствором гидроксида натрия (300 мл х 3) и очищенной водой (300 мл × 2). Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния, а затем фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Органический слой разделяли методом хроматографии на колонке с диоксидом кремния хроматография (этилацета т: н-гексан - 1:2 → этилацетат : н-гексан = 1:1) и концентрировали при пониженном давлении с получением твердого соединения.

Стадия 2. Синтез 3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензилметансульфоната

После того, как (3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)фенил)метанол (4,25 г, 16,20 ммоль) растворяли в этилацетате (42,5 мл), в этот раствор добавляли триэтиламин (3,38 мл, 24,30 ммоль) при комнатной температуре. Температуру снижали в процессе перемешивания в течение 30 минут, и в раствор медленно добавляли в капельном режиме метансульфонилхлорид (1,63 мл, 21,06 ммоль) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали при 5°С. Завершение реакции подтверждали методом ТСХ. В раствор добавляли очищенную воду (42,5 мл) при 5°С и полученную в результате смесь перемешивали. Органический слой экстрагировали, а затем промывали очищенной водой (42,5 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом магния (50 г) и фильтровали без концентрирования для осуществления последующей реакции.

Стадия 3. Синтез (3S)-этил-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иноата

Метансульфонированное вещество было получено с выходом 100%, причем реакция по механизму S_N2 была осуществлена с использованием 5,51 г вещества.

3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензилметансульфонат (5,51 г, 16,20 ммоль) и (S)-этил-3-(4-пуагоксифенил)гекс-4-иноат (3,57 г, 15,39 ммоль) помещали в колбу и растворяли в ацетонитриле (64 мл). После этого в раствор добавляли трехосновный фосфат калия (212,27 г, 32,405 ммоль) при комнатной температуре и смесь перемешивали в течение 90 минут в процессе нагревания при 74-76°С. После того, как методом ТСХ было подтверждено завершение реакции, температуру снижали до комнатной температуры. В раствор добавляли очищенную воду (30 мл) и этилацетат (30 мл), полученную в результате смесь перемешивали, а затем разделяли органический слой и водный слой. Органический слой дважды промывали водным раствором 5% хлорида натрия. Затем органический слой высушивали над безводным сульфатом магния и фильтровали. После фильтрования органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением твердого соединения.

Стадия 4. Синтез (3S)-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иновой кислоты

На этой стадии продукт реакции по механизму S_N2 был получен с выходом 100%, причем реакцию гидролиза осуществляли с использованием 7,11 г твердого соединения.

Тетрагидрофуран (36 мл) и метанол (36 мл) добавляли в (3S)-этил-3-(4-((3-(7-оксаспиро[бицикло[4.1.0]гептан-3,2'-[1,3]диоксолан]-6-ил)бензил)окси)фенил)гекс-4-иноат (7,11 г, 14,92 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали. Гидроксид калия (4,92 г, 74,59 ммоль) растворяли в очищенной вода (36 мл), полученный в результате раствор добавляли в смесь, которую затем перемешивали при 30°С в течение 30 минут. После того, как завершение реакции было подтверждено методом ТСХ, полученный в результате продукт концентрировали при значительно уменьшенном давлении. К нему добавляли очищенную воду, полученную в результате смесь перемешивали, а затем водный слой дважды промывали этилацетатом. После того, как внутреннюю температуру снижали при охлаждении до 0-5°С, органический слой экстрагировали при подкислении двухнормальным водным раствором хлористоводородной кислоты. Органический слой дважды промывали водным раствором 5% хлорида натрия и высушивали с использованием безводного сульфата магния, а затем концентрировали при пониженном давлении с получением целевого соединения.

Синтезированное вещество было идентифицировано методами ВЭЖХ и масс-спектрометрии, и было подтверждено, что данное вещество имеет структуру химической формулы 2. Кроме того, данное вещество было проанализировано спектроскопическими методами ЯМР и ИК. Результаты анализа методами ЯМР ¹Н, ЯМР ¹³С и 11К (фиг. 1) представлены ниже.

ЯМР ¹Н (300 МГц, DMSO-d₆) δ (м. д.): 12,27 (br, 1Н), 7,43 (1Н), 7,37 (1Н), 7,32 -7,27 (m, 3Н), 6,96 (d, 2Н), 5,09 (s, 1Н), 3,95-3,81 (m, 5Н), 3,12 (d, 1Н), 2,61-2,51 (m, 3Н), 2,16 (t, 2Н), 2,01 (d, 1Н), 1,79 (s, 3Н), 1,68-1,56 (m, 2Н)

ЯМР ¹³С (DMSO-d₆) δ (м. д.): 171,85, 157,18, 141,11, 137,27, 133,48, 128,45, 128,29, 126,73, 124,68, 124,39, 114,64, 105,44, 80,58, 78,16, 69,14, 63,84, 63,52, 59,88, 59,27, 42,81, 34,72, 32,70, 27,91, 25,45, 3,14

Спектр поглощения ИК с преобразованием Фурье (KBr): 2912 см^-1, 1706,14 см^-1, 1508,03 см^-1, 1111,62 см^-1

Кроме того, вещество было проанализировано методами рентгеновской дифракции и ДСК/ТГА, и результаты представлен на фиг. 2 и 3, соответственно. Условия анализа методами рентгеновской дифракции и ДСК/ТГА представлены ниже. Была подтверждена аморфность синтезированного вещества.

Условия рентгеновского дифракционного анализа

Дифрактометр: модель D8 Advance (Bruker)

Сила тока и напряжение: 40 мА, 40 кВ

Временной диапазон: от 3 минут до 45 минут (6 градусов/мин⋅*3)

Условия ДСК/ТГА

Прибор: модель TGA Q5000 IR/SDT Q600 (ТА)

Температурный диапазон: от 40°С до 600°С

Скорость нагревания: 20°С/мин

Пример 3. Подтверждение соединения химической формулы 2 в качестве родственного вещества

Был получен модифицированный образец с использованием окислителя для подтверждения получения родственного вещества. Приблизительно 35 мг содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты вещества, содержащегося в условиях холодильника при температуре 5°С±3°С в течение приблизительно 2 лет, точно взвешивали и помещали в колбу объемом 50 мл. Разбавитель добавляли в колбу до уровня, соответствующего приблизительно 2/3 объема, и полученную в результате смесь тщательно перемешивали. После того, как в смесь добавляли 2 мл раствора 3% пероксида водорода, полученную в результате смесь тщательно перемешивали и доводили до метки, используя разбавитель. Модифицированный образец выдерживали при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем родственное вещество анализировали с использованием ВЭЖХ (хроматограф серии 1200 от компании Agilent Technologies). Родственное вещество анализировали в таких же условиях, как в примере 1. В результате этого было подтверждено, что из модифицированного образца было получено родственное вещество (RRT 0,93, площадь 3,83%). Сравнение данных ВЭЖХ для обоих образцов с использованием образца, полученного в примере 1, в качестве контрольного образца, представлено на фиг. 4, где синим цветом обозначен контрольный образец, и зеленым цветом обозначен модифицированный образец. Было подтверждено более высокое содержание родственного вещества химической формулы 2 в модифицированном образце по сравнению с контрольным образцом.

Claims (23)

1. Применение соединения химической формулы 2 или соответствующей соли для оценки чистоты фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту:

Химическая формула 2.

2. Способ оценки чистоты фармацевтического продукта, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту, причем способ включает оценку содержания родственной примеси в фармацевтическом продукте с использованием соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта:

Химическая формула 2.

3. Способ по п. 2, причем упомянутый способ включает:

a) получение данных посредством осуществления хроматографии образца, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновую кислоту; и

b) сравнение данных с хроматографическими данными соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли:

Химическая формула 2.

4. Способ по п. 3, причем способ включает:

(a) получение хроматограммы посредством осуществления высокоэффективной жидкостной хроматографии образца, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты; и

(b) сравнение пика, полученного на хроматограмме, с пиком, полученным для соединения химической формулы 2 или соответствующей соли.

5. Способ по п. 3, причем способ включает:

(a) получение хроматограммы посредством осуществления тонкослойной хроматографии образца, содержащего (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты; и

(b) сравнение пятна, полученного на хроматограмме, с пятном, полученным для соединения химической формулы 2 или соответствующей соли.

6. Способ по п. 3, включающий измерение времени удерживания на хроматографической колонке для (3S)-3-(4-(3-(1,4-диоксаспиро[4,5]дец-7-ен-8-ил)бензилокси)фенил)гекс-4-иновой кислоты, причем способ включает осуществление хроматографии с использованием соединения следующей химической формулы 2 или соответствующей соли в качестве эталонного стандарта:

Химическая формула 2.

7. Соединение следующей химической формулы 2 или соответствующая соль:

Химическая формула 2.