RU2441674C1 - Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent - Google Patents

Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent Download PDF

Info

Publication number
RU2441674C1
RU2441674C1 RU2010128583/14A RU2010128583A RU2441674C1 RU 2441674 C1 RU2441674 C1 RU 2441674C1 RU 2010128583/14 A RU2010128583/14 A RU 2010128583/14A RU 2010128583 A RU2010128583 A RU 2010128583A RU 2441674 C1 RU2441674 C1 RU 2441674C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
dna
immobilized
blood
dnase
immune complexes
Prior art date
Application number
RU2010128583/14A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Илья Петрович Гонтарь (RU)
Илья Петрович Гонтарь
Екатерина Станиславовна Симакова (RU)
Екатерина Станиславовна Симакова
Андрей Степанович Трофименко (RU)
Андрей Степанович Трофименко
Ирина Александровна Зборовская (RU)
Ирина Александровна Зборовская
Original Assignee
Илья Петрович Гонтарь
Екатерина Станиславовна Симакова
Андрей Степанович Трофименко
Ирина Александровна Зборовская
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Илья Петрович Гонтарь, Екатерина Станиславовна Симакова, Андрей Степанович Трофименко, Ирина Александровна Зборовская filed Critical Илья Петрович Гонтарь
Priority to RU2010128583/14A priority Critical patent/RU2441674C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2441674C1 publication Critical patent/RU2441674C1/en

Links

Landscapes

  • External Artificial Organs (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention is referred to the area of medicine, namely rheumatology, immunology and biotechnology and is related to lowering of content of DNA-containing circulating immune complexes in blood. In order to do that the blood is filtered through the original combined sorbent which is a composition consisting of granulated drug with immobilized DNAse I and granulated drug with immobilized Clq-component of complement. Both drugs are being synthesized separately using the emulsion polymerization method in the gaseous nitrogen flow on the basis of polyacrylamide carrier with magnetic properties which is granulated at the 2:1 carrier: iron ratio.
EFFECT: method provides for significant decrease of release of duplex DNA antibodies that are released into the blood flow in process of destruction of DNA-containing circulating immune complexes, while maintaining the effectiveness of destruction of said complexes.
1 dwg, 2 ex, 2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к ревматологии, иммунологии и биотехнологии, и может быть использовано для совершенствования лечения системной красной волчанки и других аутоиммунных заболеваний.The invention relates to medicine, namely to rheumatology, immunology and biotechnology, and can be used to improve the treatment of systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases.

Известно, что иммунные комплексы (ИК) оказывают выраженное влияние на тяжесть течения и прогноз различных заболеваний. В частности, доказана важная роль ДНК-содержащих ИК в прогрессировании поражения почек при системной красной волчанке, и тем самым в формировании прогноза жизни при данном заболевании. Показано, что ИК с высокомолекулярной ДНК наиболее патогенны, в отличие от ИК, содержащих ДНК малых размеров. Однако существующие в настоящее время способы удаления циркулирующих ИК (ЦИК) из кровотока (плазмаферез, гемосорбция, иммуносорбция с использованием иммобилизированных агентов, тропных к мономерным или агрегированным иммуноглобулинам) недостаточно избирательны в отношении элиминируемого вещества. Это приводит к значительной потере компонентов плазмы. Помимо необходимости заместительной терапии, следствием этого недостатка является существенное повышение частоты возникновения тяжелых бактериальных и вирусных инфекций, чему также способствует стандартная для лечения аутоиммунных заболеваний медикаментозная иммуносупрессия.It is known that immune complexes (IR) have a pronounced effect on the severity and prognosis of various diseases. In particular, the important role of DNA-containing IR in the progression of kidney damage in systemic lupus erythematosus, and thereby in the formation of a prognosis of life in this disease, has been proved. It has been shown that IR with high molecular weight DNA is the most pathogenic, in contrast to IR containing small DNA. However, the currently existing methods for removing circulating IR (CEC) from the bloodstream (plasmapheresis, hemosorption, immunosorption using immobilized agents tropic to monomeric or aggregated immunoglobulins) are not selective enough for the eliminated substance. This leads to a significant loss of plasma components. In addition to the need for replacement therapy, the consequence of this drawback is a significant increase in the incidence of severe bacterial and viral infections, which is also facilitated by the drug immunosuppression standard for the treatment of autoimmune diseases.

Удобным инструментом для разрушения ЦИК, содержащих высокомолекулярную ДНК, является дезоксирибонуклеаза I типа (ДНКаза I) - фермент, одной из физиологических функций которого является разрушение ДНК и нуклеопротеидов. Ранее нами был запатентован метод разрушения ДНК-содержащих ЦИК с помощью ДНКазы I, иммобилизированной на магнитоуправляемых полиакриламидных гранулах (МПГ) [Гонтарь И.П., Трофименко А.С., Зборовский А.Б., Шилова Л.Н., Симакова Е.С. Способ очистки крови от ДНК-содержащих иммунных комплексов с помощью иммобилизированного гранулированного магнитоуправляемого препарата: Патент RU 2356585 C2 // №заявки 2007105420/15; заявл. 13.02.2007; опубл. 27.05.2009, Бюл. №15. - 5 с.]. В дальнейшем данный метод обозначается как прототип.Прототип позволяет варьировать в широких пределах количество иммобилизированного фермента, а также использовать препарат многократно после проведения регенерации. При использовании прототипа в процессе обработки крови не происходит значительных изменений содержания форменных элементов. Прототип позволяет с высокой эффективностью разрушать высокомолекулярный дезоксирибонуклеиновый компонент ЦИК. Известно, что ДНК-содержащие ЦИК большого размера (более 20S) под действием ДНКазы I расщепляются через промежуточную стадию среднемолекулярных ЦИК (10S-20S) до небольших ЦИК (менее 10S). Последние намного менее патогенны, чем высокомолекулярные ЦИК, и быстрее элиминируются мононуклеарными фагоцитами печени и селезенки. Однако одним из продуктов ферментативного расщепления ДНК-содержащих ИК, помимо комплексов малого размера, могут быть свободные антитела к ДНК. Известно также, что при системной красной волчанке в состав ЦИК входят патогенные антитела к двуспиральной ДНК, значительное высвобождение которых в кровоток в процессе обработки крови иммобилизированной ДНКазой I нежелательно. Данный побочный эффект прототипа, обнаруженный нами в процессе испытаний in vivo на экспериментальной модели, представляет собой существенный недостаток и является основанием для доработки ранее запатентованного способа.A convenient tool for the destruction of CECs containing high molecular weight DNA is deoxyribonuclease type I (DNase I), an enzyme whose physiological function is the destruction of DNA and nucleoproteins. Previously, we patented a method for the destruction of DNA-containing CECs using DNase I immobilized on magnetically controlled polyacrylamide granules (PGM) [Gontar I.P., Trofimenko A.S., Zborovsky AB, Shilova L.N., Simakova E .FROM. A method of purifying blood from DNA-containing immune complexes using an immobilized granular magnetically controlled preparation: Patent RU 2356585 C2 // Application No. 2007105420/15; declared 02/13/2007; publ. 05/27/2009, bull. No. 15. - 5 p.]. In the future, this method is designated as a prototype. The prototype allows you to vary within wide limits the amount of immobilized enzyme, as well as to use the drug repeatedly after regeneration. When using the prototype in the process of blood processing does not occur significant changes in the content of uniform elements. The prototype allows with high efficiency to destroy the high molecular weight deoxyribonucleic component of the CEC. It is known that DNA-containing large CECs (greater than 20S) under the action of DNase I are cleaved through the intermediate stage of medium molecular CECs (10S-20S) to small CECs (less than 10S). The latter are much less pathogenic than high molecular weight CECs and are more rapidly eliminated by mononuclear phagocytes of the liver and spleen. However, one of the products of enzymatic cleavage of DNA-containing IR, in addition to small-sized complexes, can be free antibodies to DNA. It is also known that in systemic lupus erythematosus, the CEC contains pathogenic antibodies to double-stranded DNA, a significant release of which into the bloodstream during the processing of blood by immobilized DNase I is undesirable. This side effect of the prototype, which we found during in vivo tests on an experimental model, is a significant drawback and is the basis for the refinement of the previously patented method.

Уменьшение выброса антител к ДНК в кровоток в процессе расщепления ДНК-содержащих ЦИК ДНКазой I может быть достигнуто путем совместного применения иммобилизированного фермента и сорбента, фиксирующего антитела на промежуточной фазе ферментативной реакции в виде средне- или низкомолекулярных ЦИК. Этот способ технически более выгоден, чем сорбция свободных антител к ДНК, в связи со значительно меньшим количеством подлежащих сорбции молекул и, как следствие, с меньшей потребностью в сорбенте. Обязательным условием осуществления такой сорбционной процедуры является совместное применение иммобилизированной ДНКазы I и сорбента в одной перфузионной камере, наиболее удобным вариантом которого может быть использование композиции гранул с иммобилизированной ДНКазой I и гранул с сорбентом. Соблюдение этого условия дает возможность фиксировать короткоживущий промежуточный продукт ферментативной реакции - среднемолекулярные ЦИК - в месте его образования.A decrease in the release of antibodies to DNA into the bloodstream during the cleavage of DNA-containing CECs with DNase I can be achieved by the combined use of an immobilized enzyme and a sorbent that fixes antibodies in the intermediate phase of the enzymatic reaction in the form of medium or low molecular weight CECs. This method is technically more advantageous than the sorption of free antibodies to DNA, due to the significantly smaller number of molecules to be sorbed and, as a result, with a lower need for sorbent. A prerequisite for the implementation of such a sorption procedure is the combined use of immobilized DNase I and a sorbent in one perfusion chamber, the most convenient option of which may be to use a composition of granules with immobilized DNase I and granules with a sorbent. Observance of this condition makes it possible to fix the short-lived intermediate product of the enzymatic reaction — medium molecular weight CEC — at the site of its formation.

Перспективным лигандом для фиксации промежуточных продуктов распада ДНК-содержащих ЦИК является Clq-компонент комплемента (далее - Clq), реагирующий преимущественно со среднемолекулярными ИК [Kilgallon W., Amlot P.L., Williams B.D. Anti-Clq column: ligand specific purification of immune complexes from human serum or plasma. Analysis of the interaction between Clq and immune complexes // Clin. Exp.Immunol. - 1982. - Vol.48. - P.705-714]. Большая молекулярная масса Clq - около 460000 Да - упрощает его иммобилизацию, а нековалентный характер взаимодействия между Clq и ЦИК дает возможность легко регенерировать иммобилизированный Clq с помощью раствора с повышенной ионной силой. Еще одно важное преимущество заключается в возрастании активности плазменной ДНКазы I в присутствии Clq [Gaipl U.S., Beyer T.D., Heyder P. et1 al. Cooperation between Clq and DNase I in the clearance of necrotic cell-derived chromatin // Arthritis Rheum. - 2004. - Vol.50, N.2. - P.640-649]. При изучении уровня техники данных о совместном применении иммобилизированного Clq и иммобилизированной ДНКазы I для снижения уровня ДНК-содержащих ЦИК нами не найдено. Не выявлено также данных об иных иммобилизированных лигандах, используемых совместно с иммобилизированной ДНКазой I с целью снижения выделения антител к ДНК.A promising ligand for fixing the intermediate decay products of DNA-containing CECs is the Clq component of complement (hereinafter - Clq), which mainly reacts with medium molecular IR [Kilgallon W., Amlot P.L., Williams B.D. Anti-Clq column: ligand specific purification of immune complexes from human serum or plasma. Analysis of the interaction between Clq and immune complexes // Clin. Exp.Immunol. - 1982. - Vol. 48. - P.705-714]. The large molecular weight of Clq — about 460,000 Da — simplifies its immobilization, and the non-covalent nature of the interaction between Clq and CEC makes it possible to easily regenerate immobilized Clq using a solution with increased ionic strength. Another important advantage is the increased activity of plasma DNase I in the presence of Clq [Gaipl U.S., Beyer T. D., Heyder P. et1 al. Cooperation between Clq and DNase I in the clearance of necrotic cell-derived chromatin // Arthritis Rheum. - 2004 .-- Vol.50, N.2. - P.640-649]. When studying the prior art, data on the combined use of immobilized Clq and immobilized DNase I to reduce the level of DNA-containing CECs were not found. No data were also found on other immobilized ligands used in conjunction with immobilized DNase I to reduce the release of antibodies to DNA.

Известен способ селективного удаления из крови любого содержащегося в нем вещества, включающий определение его концентрации, добавление к раствору специфических антител в количестве, достаточном для связывания удаляемого вещества в составе ИК, и извлечение из раствора ЦИК, образованных de novo с помощью этих антител, с помощью твердофазного адсорбента на основе любого из трех лигандов: Clq, Fc-рецептора или ревматоидного фактора [Liberti P.A., Pollara P. Selective removal of immunospecifically recognizable substances from solution: Patent 4551435 USA // Appl. №06/526039; filed 24.08.1983; published 5.11.1985]. В качестве носителя для этих лигандов предлагается использовать полистироловый лист толщиной 0,1 мм, свернутый в спираль и помещенный в камеру, через которую перфузируется обрабатываемый раствор в направлении, соответствующем продольной оси спирали. Недостатками данного метода являются, во-первых, незначительная сорбционная емкость вследствие небольшой рабочей площади носителя; во-вторых, отсутствие магнитоуправляемости иммобилизированного Clq, что затрудняет манипуляции с препаратом. Более того, одновременное применение в единой перфузионной камере иммобилизированного таким образом Clq и МПГ на основе ДНКазы I крайне затруднено ввиду ограниченного расстояния между витками спирального листа, что нарушает подвижность МПГ и способствует повреждению гранул.A known method of selective removal from the blood of any substance contained in it, including determining its concentration, adding specific antibodies to the solution in an amount sufficient to bind the substance to be removed as part of the IR, and extracting from the solution the CECs formed de novo using these antibodies using solid phase adsorbent based on any of the three ligands: Clq, Fc receptor, or rheumatoid factor [Liberti PA, Pollara P. Selective removal of immunospecifically recognizable substances from solution: Patent 4551435 USA // Appl. No. 06/526039; filed 08/24/1983; published November 5, 1985]. It is proposed to use a polystyrene sheet with a thickness of 0.1 mm folded into a spiral and placed in a chamber through which the processed solution is perfused in the direction corresponding to the longitudinal axis of the spiral as a carrier for these ligands. The disadvantages of this method are, firstly, a small sorption capacity due to the small working area of the carrier; secondly, the lack of magnetically controlled immobilized Clq, which complicates the manipulation of the drug. Moreover, the simultaneous use of Clq and PGM based on DNase I immobilized in this way in a single perfusion chamber is extremely difficult due to the limited distance between the turns of the spiral sheet, which disrupts the mobility of the PGM and contributes to damage to the granules.

Решаемая задача состоит в разработке способа снижения содержания ДНК-содержащих циркулирующих иммунных комплексов путем пропускания крови через предварительно полученный методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота оригинальный комбинированный сорбент, представляющий собой смесь магнитоуправляемых полиакриламидных гранул с иммобилизированной ДНКазой I и магнитоуправляемых полиакриламидных гранул с иммобилизированным Clq (далее эта композиция обозначается как «комбинированный сорбент»), что обеспечивает снижение выброса антител к ДНК в кровоток по сравнению с прототипом.The problem to be solved is to develop a method for reducing the content of DNA-containing circulating immune complexes by passing blood through an original combined sorbent, which is a mixture of magnetically controlled polyacrylamide granules with immobilized DNase I and magnetically controlled polyacrylamide granules with immobilized Clq (previously obtained by emulsion polymerization in a nitrogen gas stream) (hereinafter this composition is referred to as a “combined sorbent”), which reduces ejection of DNA antibodies in the bloodstream as compared to the prototype.

Технический результат заявляемого изобретения представляет собой уменьшение количества антител к ДНК, выделяемых в кровоток в процессе разрушения ДНК-содержащих циркулирующих иммунных комплексов при пропускании крови через магнитоуправляемые полиакриламидные гранулы с иммобилизированной ДНКазой I. Технический результат достигается путем перфузии крови через комбинированный сорбент.The technical result of the claimed invention is a decrease in the number of antibodies to DNA secreted into the bloodstream during the destruction of DNA-containing circulating immune complexes by passing blood through magnetically controlled polyacrylamide granules with immobilized DNase I. The technical result is achieved by perfusion of blood through a combined sorbent.

Способ очистки крови от ДНК-содержащих иммунных комплексов с помощью комбинированного сорбента осуществляют следующим образом.A method of purifying blood from DNA-containing immune complexes using a combined sorbent is as follows.

Получение МПГ производится следующим способом. В сосуд, содержащий гексан и эмульгатор, подается под давлением по трубке химически инертный газ таким образом, чтобы создавать интенсивное перемешивание. В колбу для полимеризации вносится раствор окиси железа с гидрофильными свойствами и персульфат аммония, затем добавляется раствор, содержащий мономеры акриламида, метиленбисакриламида, NNN'N'-тетра-метилэтилендиамина и ДНКазы I. После завершения полимеризации МПГ отмывают от непрореагировавших мономеров, эмульгатора и гексана. МПГ с иммобилизированным Clq получают таким же способом, при этом единственным отличием от вышеприведенного является добавление Clq вместо ДНКазы I. Далее МПГ с ДНКазой I и МПГ с Clq смешивают, полученный комбинированный сорбент вносят в колонку и через нее перфузируется нативная гепаринизированная кровь. Регенерация препарата производится путем пропускания через колонку 1 М буфера глицин-HCl pH 2,2 дважды по 10 мин.Obtaining PGM is as follows. A chemically inert gas is introduced into the vessel containing hexane and an emulsifier under pressure through a tube so as to create intense mixing. A solution of iron oxide with hydrophilic properties and ammonium persulfate is added to the flask for polymerization, then a solution containing monomers of acrylamide, methylene bisacrylamide, NNN'N'-tetra-methylethylenediamine and DNase I is added. After polymerization is complete, PGMs are washed from unreacted monomers, hexane emulsifier. PGM with immobilized Clq is obtained in the same way, the only difference from the above is the addition of Clq instead of DNase I. Next, the PGM with DNase I and PGM with Clq are mixed, the resulting combined sorbent is introduced into the column and native heparinized blood is perfused through it. The drug is regenerated by passing through a column of 1 M glycine-HCl pH 2.2 buffer twice for 10 minutes.

Пример 1. Получение МПГ с иммобилизированной ДНКазой I и МПГ с иммобилизированным ClqExample 1. Obtaining PGM with immobilized DNase I and PGM with immobilized Clq

МПГ с иммобилизированной ДНКазой I и МПГ с иммобилизированным Clq получали раздельно. В 2 мл 0,15 М раствора натрия хлорида растворяли соответственно 300 мг и 100 мг акриламида и метиленбисакриламида (Reanal, Венгрия). Для получения МПГ с иммобилизированной ДНКазой I к такому раствору добавляли 0,6 мг бычьей панкреатической ДНКазы I (Sigma-Aldrich, США), а для получения МПГ с иммобилизированным Clq - 0,6 мг Clq (Sigma-Aldrich, США).PGM with immobilized DNase I and PGM with immobilized Clq were obtained separately. 300 mg and 100 mg of acrylamide and methylene bisacrylamide (Reanal, Hungary) were dissolved in 2 ml of a 0.15 M sodium chloride solution. To obtain PGM with immobilized DNase I, 0.6 mg of bovine pancreatic DNase I (Sigma-Aldrich, USA) was added to such a solution, and to obtain PGM with immobilized Clq, 0.6 mg of Clq (Sigma-Aldrich, USA).

В сосуд, содержащий 100 мл гексана и 0,5 мл эмульгатора СПЭН-85, подавали под давлением 0,2-1 атм газообразный азот по трубке сечением 0,8 мм таким образом, чтобы создавать интенсивное перемешивание в течение 5 мин. В колбу для полимеризации вносили 1 мл физиологического раствора pH 7,4 с 200 мг окиси железа с гидрофильными свойствами и 10 мг персульфата аммония. Через 1-2 мин добавляли 2 мл раствора, содержащего мономеры акриламида, метиленбисакриламида, иммобилизируемое вещество (ДНКазу I или Clq), а также 20 мкл NNN'N'-тетраметилэтилендиамина.At a pressure of 0.2-1 atm, nitrogen gas was introduced into a vessel containing 100 ml of hexane and 0.5 ml of SPEN-85 emulsifier through a tube with a cross section of 0.8 mm so as to create vigorous stirring for 5 minutes. In a flask for polymerization, 1 ml of physiological solution of pH 7.4 was added with 200 mg of iron oxide with hydrophilic properties and 10 mg of ammonium persulfate. After 1-2 minutes, 2 ml of a solution containing acrylamide monomers, methylene bisacrylamide, an immobilized substance (DNase I or Clq), and 20 μl of NNN'N'-tetramethylethylenediamine were added.

После завершения полимеризации гранулы в течение 10-15 мин отмывали ацетоном и физиологическим раствором с детергентом Твин-20 (0,05%) от непрореагировавших мономеров, эмульгатора и гексана. Гранулы имели стандартную сферическую форму с размером частиц геля 10-100 мкм. Соотношение полимерный носитель:железо=2:1 (в пересчете на сухую массу).After completion of the polymerization, the granules were washed with acetone and physiological saline with Tween-20 detergent (0.05%) from unreacted monomers, emulsifier and hexane for 10-15 minutes. The granules had a standard spherical shape with a particle size of the gel 10-100 microns. The ratio of the polymer carrier: iron = 2: 1 (in terms of dry weight).

Пример 2. Перфузия крови через комбинированный сорбент и прототип.Example 2. Blood perfusion through a combined sorbent and prototype.

В колонку объемом 40 мл вносили МПГ: при исследовании комбинированного сорбента - смесь МПГ с иммобилизированной ДНКазой I и МПГ с иммобилизированным Clq в соотношении 3:1 (объем: объем), при исследовании прототипа - МПГ с иммобилизированной ДНКазой I. Используя колонку с комбинированным сорбентом, проведена обработка нативной гепаринизированной крови 23 больных системной красной волчанкой (СКВ); для контроля применяли перфузию образцов крови тех же больных через прототип. Через колонку перфузировали со скоростью 10 мл/ч по 20 мл нативной гепаринизированной крови. Далее комбинированный сорбент и прототип отмывали от несвязавшихся белков забуференным физиологическим раствором pH 7,4 и проводили регенерацию 1 М глицин-HCl буфером pH 2,2 двукратно по 10 мин.PGM was added to a 40 ml column: in the study of a combined sorbent, a mixture of PGM with immobilized DNase I and PGM with immobilized Clq in a ratio of 3: 1 (volume: volume), in the study of the prototype, PGM with immobilized DNase I. Using a column with a combined sorbent , treatment of native heparinized blood of 23 patients with systemic lupus erythematosus (SLE); for control, perfusion of blood samples of the same patients through the prototype was used. Through a column, 20 ml of native heparinized blood were perfused at a rate of 10 ml / h. Next, the combined sorbent and prototype were washed from unbound proteins with a buffered saline solution of pH 7.4 and regenerated with 1 M glycine-HCl buffer pH 2.2 twice for 10 minutes.

Содержание ЦИК в сыворотке крови определяли методом преципитации в поли-этиленгликоле-6000 по Haskova в модификации Лемперта (1988), концентрацию сывороточных антител к двуспиральной ДНК - методом ИФА с использованием коммерческих наборов (Orgentec Diagnostika, Германия), также оценивали содержание форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов). Значения всех исследуемых показателей для каждого образца измеряли двукратно - до и после перфузии.The serum CEC content was determined by the Haskova method of precipitation in polyethylene glycol-6000 according to Lempert modification (1988), the concentration of serum antibodies to double-stranded DNA by ELISA using commercial kits (Orgentec Diagnostika, Germany), and the content of blood cells was also evaluated ( red blood cells, white blood cells, platelets). The values of all the studied parameters for each sample were measured twice - before and after perfusion.

Динамика сывороточных концентраций ЦИК и антител к двуспиральной ДНК в результате осуществления заявляемого способа приведена в таблице 1, динамика концентрации форменных элементов крови - в таблице 2. Из указанных значений следует, что при перфузии через комбинированный сорбент достигается снижение содержания ЦИК на 69,7% от исходного, а при перфузии через прототип - на 61,8% от исходного, при этом различия как абсолютных значений концентрации ЦИК, так и темпов убыли последней не являются статистически достоверными. Однако при перфузии крови через прототип концентрация антител к двуспиральной ДНК повышается на 15,7%, а при использовании комбинированного сорбента - на 8,4%; данное различие является статистически значимым. При использовании обоих способов содержание форменных элементов крови достоверно не изменяется. Следовательно, полученные при прямом сопоставлении с прототипом данные свидетельствуют о значительном снижении выброса антител к двуспиральной ДНК и сохранении эффективности разрушения ДНК-содержащих ЦИК при использовании заявляемого способа.The dynamics of serum concentrations of CEC and antibodies to double-stranded DNA as a result of the implementation of the proposed method are shown in table 1, the dynamics of the concentration of blood cells in table 2. From these values it follows that when perfused through a combined sorbent, a decrease in the content of CEC by 69.7% is achieved the initial, and when perfusion through the prototype - by 61.8% of the original, the differences in both the absolute values of the concentration of the CEC and the rate of decrease of the latter are not statistically significant. However, when blood perfusion through the prototype, the concentration of antibodies to double-stranded DNA increases by 15.7%, and when using a combined sorbent - by 8.4%; this difference is statistically significant. When using both methods, the content of blood cells is not significantly changed. Therefore, obtained by direct comparison with the prototype, the data indicate a significant reduction in the release of antibodies to double-stranded DNA and maintaining the efficiency of the destruction of DNA-containing CECs using the proposed method.

После использования комбинированный сорбент и прототип регенерировали 1 М глицин-HCl буфером, pH 2,2. После первой регенерации потеря удельной ДНКазной активности составила 11% для обоих препаратов, эффект в отношении антител к двуспиральной ДНК существенно не изменялся. При последующих повторных регенерациях (до 10 раз) потери активности иммобилизированных лигандов не происходило.After use, the combined sorbent and prototype were regenerated with 1 M glycine-HCl buffer, pH 2.2. After the first regeneration, the loss of specific DNase activity was 11% for both drugs; the effect on antibodies to double-stranded DNA did not change significantly. In subsequent repeated regenerations (up to 10 times), there was no loss of activity of the immobilized ligands.

МКИ A61M 1/38 A61P 37/00MKI A61M 1/38 A61P 37/00

СПОСОБ ОЧИСТКИ КРОВИ ОТ ДНК-СОДЕРЖАЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ С ПОМОЩЬЮ КОМБИНИРОВАННОГО СОРБЕНТАMETHOD FOR BLOOD CLEANING FROM DNA-CONTAINING IMMUNE COMPLEXES USING A COMBINED SORBENT

Таблица 1Table 1 Изменение концентраций циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и антител к двуспиральной ДНК в результате перфузии через комбинированный сорбент и через прототипChanges in the concentrations of circulating immune complexes (CECs) and antibodies to double-stranded DNA as a result of perfusion through a combined sorbent and through a prototype ПоказательIndicator ИсходноOriginally После перфузииAfter perfusion pp через комбинированный сорбентthrough a combined sorbent через прототипthrough prototype ЦИКCEC 7,6 (6,7-8,5)7.6 (6.7-8.5) 2,3(1,1-3,5) 2.3 (1.1-3.5) 2,9 (2,0-3,8)2.9 (2.0-3.8) 0,845∗0.845 ∗ - значение, Ед (М (95%ДИ))- value, U (M (95% CI)) - темп прироста, %- growth rate,% -- -69,7-69.7 -61,8-61.8 0,671^0.671 ^ Антитела к двуспиральной ДНКAntibodies to double-stranded DNA 46,4 (36,9-55,9)46.4 (36.9-55.9) 50,3 (39,7-60,9) 50.3 (39.7-60.9) 53,7 (44,2-63,2)53.7 (44.2-63.2) 0,029∗0.029 ∗ - значение, МЕ/мл (М (95%ДИ))- value, IU / ml (M (95% CI)) - темп прироста, %- growth rate,% -- 8,48.4 15,715.7 0,034^0,034 ^

∗ - для различия между комбинированным сорбентом и прототипом, непарный критерий Стьюдента∗ - for the difference between the combined sorbent and prototype, unpaired student criterion

^ - для различия между комбинированным сорбентом и прототипом, точный критерий Фишера^ - for the difference between the combined sorbent and prototype, Fisher’s exact test

Таблица 2table 2 Изменение концентраций форменных элементов крови в результате перфузии через комбинированный сорбент и через прототипThe change in the concentration of blood cells as a result of perfusion through a combined sorbent and through the prototype ПоказательIndicator ИсходноOriginally После перфузииAfter perfusion p∗p ∗ через комбинированный сорбентthrough a combined sorbent через прототипthrough prototype Эритроциты, ×1012 л-1 (М (95%ДИ))Red blood cells, × 10 12 L -1 (M (95% CI)) 3,6 (2,4-1,8)3.6 (2.4-1.8) 3,8 (2,4-5,2)3.8 (2.4-5.2) 4,0 (2,6-5,4)4.0 (2.6-5.4) 0,7100.710 Лейкоциты, ×109 л-1 (М (95%ДИ))White blood cells × 10 9 L -1 (M (95% CI)) 5,2(1,8-8,6)5.2 (1.8-8.6) 4,0(1,1-6,9)4.0 (1.1-6.9) 4,3 (0,6-8,0)4.3 (0.6-8.0) 0,2940.294 Тромбоциты, ×109 л-1 (М (95%ДИ))Platelets × 10 9 L -1 (M (95% CI)) 272,6(189,1-356,1)272.6 (189.1-356.1) 252,7 (200,6-304,8)252.7 (200.6-304.8) 245,3 (174,8-315,8)245.3 (174.8-315.8) 0,9240.924

∗ - для различия между комбинированным сорбентом и прототипом, непарный критерий Стьюдента∗ - for the difference between the combined sorbent and prototype, unpaired student criterion

Claims (1)

Способ снижения содержания ДНК-содержащих циркулирующих иммунных комплексов, включающий пропускание крови через гранулированный препарат с иммобилизированной ДНКазой I на основе полиакриламидного носителя с магнитными свойствами, который гранулируют методом эмульсионной полимеризации при соотношении носитель:железо 2:1, отличающийся тем, что кровь пропускают через композицию, состоящую из, во-первых, гранулированного препарата с иммобилизированной ДНКазой I на основе полиакриламидного носителя с магнитными свойствами и, во-вторых, гранулированного препарата с иммобилизированным Clq-компонентом комплемента на основе полиакриламидного носителя с магнитными свойствами, который гранулируют методом эмульсионной полимеризации при соотношении носитель:железо 2:1. A method of reducing the content of DNA-containing circulating immune complexes, including passing blood through a granular preparation with immobilized DNase I based on a polyacrylamide carrier with magnetic properties, which is granulated by emulsion polymerization with a carrier: iron ratio of 2: 1, characterized in that the blood is passed through the composition consisting of, firstly, a granular preparation with immobilized DNase I based on a polyacrylamide carrier with magnetic properties and, secondly, g cured preparation with an immobilized Clq complement component based on a polyacrylamide carrier with magnetic properties, which is granulated by emulsion polymerization with a carrier: iron ratio of 2: 1.
RU2010128583/14A 2010-07-09 2010-07-09 Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent RU2441674C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010128583/14A RU2441674C1 (en) 2010-07-09 2010-07-09 Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010128583/14A RU2441674C1 (en) 2010-07-09 2010-07-09 Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2441674C1 true RU2441674C1 (en) 2012-02-10

Family

ID=45853571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010128583/14A RU2441674C1 (en) 2010-07-09 2010-07-09 Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2441674C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017137495A1 (en) 2016-02-09 2017-08-17 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Blood treatment with inactivation of circulating nucleic acids
RU2670674C1 (en) * 2017-05-02 2018-10-24 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии" Method of simultaneous removal of interleukin-12 and interleukin-23 from biological fluids using magnetically controlled granules
US11724015B2 (en) 2017-09-18 2023-08-15 Santersus Ag Method and device for purification of blood from circulating cell free DNA

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
АЛЕКСАНДРОВ А.В. Иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами как селективные сорбенты для удаления изотипов ревматоидного фактора и циркулирующих иммунных комплексов в терапии ревматоидного артрита, автореф. дис. на соиск. учен. степ. канд. наук, 1996, с.3-15. ЕГИЯН Л.К. Циркулирующие иммунные комплексы и система комплемента при острой цереброваскулярной патологии, автореф. дис. на соиск. учен. степ, канд. мед. наук, 2005, с.3-12. KILGALLON W, et al. Anti-Clq column: ligand specific purification of immune complexes from human serum or plasma. Analysis of the interaction between Clq and immune complexes. Clin Exp Immunol. 1982 Jun; 48(3):705-14. GAIPL US, et al. Cooperation between Clq and DNase I in the clearance of necrotic cell-derived chromatin Arthritis Rheum. 2004 Feb; 50(2):640-9. TERMAN D.S. et al. Degradation of the circulating DNA by extracorporeal circulation over nuclease immobilized on nylon microcapsules, J. Clin. Invest., 1976, May, 57( *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017137495A1 (en) 2016-02-09 2017-08-17 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Blood treatment with inactivation of circulating nucleic acids
US11344661B2 (en) 2016-02-09 2022-05-31 Fresenius Medical Care Deutschland Gmbh Blood treatment with inactivation of circulating nucleic acids
RU2670674C1 (en) * 2017-05-02 2018-10-24 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии" Method of simultaneous removal of interleukin-12 and interleukin-23 from biological fluids using magnetically controlled granules
US11724015B2 (en) 2017-09-18 2023-08-15 Santersus Ag Method and device for purification of blood from circulating cell free DNA
US11771811B2 (en) 2017-09-18 2023-10-03 Santersus Ag Method and device for purification of blood from circulating cell free DNA
US11771812B2 (en) 2017-09-18 2023-10-03 Santersus Ag Method and device for purification of blood from circulating cell free DNA

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7341539B2 (en) Methods and devices for purifying blood from circulating cell-free DNA
EP2331568B1 (en) Treating inflammatory conditions
US9173943B2 (en) Imprinted polymer nanoparticles
Williams et al. Affinity capture of a biotinylated retrovirus on macroporous monolithic adsorbents: Towards a rapid single‐step purification process
Alkan et al. Selective removal of the autoantibodies from rheumatoid arthritis patient plasma using protein A carrying affinity cryogels
Bereli et al. Oriented immobilized anti-LDL antibody carrying poly (hydroxyethyl methacrylate) cryogel for cholesterol removal from human plasma
JP2009000536A (en) Extracorporeal capturing of specific bio-macromolecular entity from extracellular body fluids
RU2441674C1 (en) Method for blood purification from dna-containing immune complexes using combined sorbent
Odabaşı et al. Pathogenic antibody removal using magnetically stabilized fluidized bed
US6080404A (en) Materials and methods for removal of substances from fluids
Spina et al. Chemically modified poly (2‐hydroxyethyl methacrylate) cryogel for the adsorption of heparin
Uzun et al. Poly (hydroxyethyl methacrylate) based affinity membranes for in vitro removal of anti-dsDNA antibodies from SLE plasma
JPS62192172A (en) Adsorbing body
RU2641924C1 (en) Sorption material, method of its production and method of its application
Yilmaz et al. Specific adsorption of the autoantibodies from rheumatoid arthritis patient plasma using histidine-containing affinity beads
JPS59186558A (en) Adsorbing material of self-antibody and/or immunological composite
RU2739352C1 (en) Method for preparing preparation for rheumatoid factor removal from blood of patients with rheumatoid arthritis
JP2008206753A (en) Inflammatory disease treating column
JPS59186559A (en) Self-antibody and/or immunological composite adsorbing material
RU2670674C1 (en) Method of simultaneous removal of interleukin-12 and interleukin-23 from biological fluids using magnetically controlled granules
CN114405488B (en) Protein-bound toxoid blood perfusion adsorbent and preparation method and application thereof
JP5924637B2 (en) PCSK9 adsorber
RU2356585C2 (en) Blood purification from dna-immunocomplexes with immobilised granulated magnetic preparation
JPH0226988B2 (en)
Özbek et al. Molecular imprinted based microcryogels for thrombin purification

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20120710

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20140620

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150710

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20170511

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190710