NO333231B1 - Enantiomerisk rene aminoheteroarylforbindelser, farmasoytisk preparat samt anvendelser derav - Google Patents

Enantiomerisk rene aminoheteroarylforbindelser, farmasoytisk preparat samt anvendelser derav Download PDF

Info

Publication number
NO333231B1
NO333231B1 NO20071290A NO20071290A NO333231B1 NO 333231 B1 NO333231 B1 NO 333231B1 NO 20071290 A NO20071290 A NO 20071290A NO 20071290 A NO20071290 A NO 20071290A NO 333231 B1 NO333231 B1 NO 333231B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
phenyl
dichloro
ethoxy
added
Prior art date
Application number
NO20071290A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20071290L (no
Inventor
Jingrong Jean Cui
Lee Andrew Funk
Lei Jia
Pei-Pei Kung
Jerry Jialun Meng
Mitchell David Nambu
Mason Alan Pairish
Hong Shen
Michelle Bich Tran-Dube
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35967909&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO333231(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of NO20071290L publication Critical patent/NO20071290L/no
Publication of NO333231B1 publication Critical patent/NO333231B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/18—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4418—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cyproheptadine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/73—Unsubstituted amino or imino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/76—Nitrogen atoms to which a second hetero atom is attached
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Abstract

Enantiomerisk ren forbindelse med formel (I) er tilveiebrakt, så vel som fremgangsmåter for deres syntese og anvendelse. Foretrukne forbindelser er potente inhibitorer av cMet-proteinkinasen og er anvendelige ved behandling av abnormale cellevekstforstyrrelser, slike som kreft.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår generelt nye kjemiske forbindelser og anvendelser derav. Mer spesielt, tilveiebringer oppfinnelsen enantiomerisk rene aminoheteroarylforbin-delser, særlig aminopyridiner og aminopyraziner, som har proteintyrosinkinaseaktivitet, og anvendelse av slike forbindelser. Foretrukne forbindelser er c-Met-inhibitorer anvendelige for behandling av abnormal cellevekst, slik som kreft.
Hepatocyttvekstfaktoren (HGF), reseptor (c-MET eller HGFR) reseptortyrosinkinase (RTK) har blitt vist i mange humane kreftformer å være involvert i onkogonese, tumor-progressjon med økt cellemotilitet og invasjon, så vel som metastaser (se f.eks. P.C. Ma, G. Malik, J. Christensen & R. Salgia (2003b). Cancer Metastasis Rev., 22, 309-25; G. Maulik, A. Shrikhande, T. Kijima, P.C. Ma, P.T. Morrison & R. Salgia (2002b). Cyto-kine Growth Factor Rev., 13, 41-59). c-MET (HGFR) kan aktiveres gjennom overekspresjon eller mutasjoner i forskjellige humane kreftformer som inkluderer små-cellelungekreft (SCLC), (P.C. Ma, T. Kijima, G. Maulik, E.A. Fox, M. Sattler, J.D. Griffin, B.E. Johnson & R. Salgia (2003a). Cancer Res., 63, 6272-6281). c-MET er en reseptortyrosinkinase som kodes av Met protoonkogene og overfører de biologiske effektene til hepatocyttvekstfaktor (HGF), som også refereres til som "scat-ter"-faktor (SF). Jiang et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 29: 209-248 (1999). c-MET og HGF er uttrykt i et antall vevstyper, selv om deres ekspresjon normalt først og fremst er begrenset til celler av epitel- og mesenchymal opprinnelse, respektivt. c-MET og HGF er påkrevet for normal pattedyrutvikling og har vist seg å være viktig i cellemigrasjon, celleproliferasjon og overlevelse, morfogen differensiering og organisering av tredi-mensjonale rørformede strukturer (f.eks. renale tubulære celler, kjerteldannelse, etc). I tillegg til deres effekter på epitelceller h ar HGF/SF blitt rapportert å være en angiogen faktor, og c-MET-signallisering i endotelceller kan indusere mange av de cellulære responsene nødvendige for angiogenese (proliferasjon, motilitet, invasjon). c-MET-reseptoren har vist seg å være uttrykt i et antall humane kreftformer. c-MET og dets ligand, HGF, har også vist seg å være kouttrykt ved hevede nivåer i et antall humane kreftformer (særlig sarkomer). Imidlertid, p.g.a. at reseptoren og liganden vanligvis uttrykkes av forskjellige celletyper, blir c-MET-signallisering mest vanlig regulert av tumorstroma (tumor-vert) interaksjoner. Videre har c-MET-genamplifikasjon, mutasjon og omleiring blitt observert i et undersett av humane kreftformer. Familier med germlin-jemutasjoner som aktiverer c-MET-kinase er tilbøyelig til multiple nyretumorer så vel som tumorer i annet vev. Et antall studier har korrelert denne ekspresjonen av c-MET og/eller HGF/SF med stadiet av sykdomsprogressjon av forskjellige typer kreft (som inkluderer lunge, kolon, bryst, prostata, lever, bukspyttkjertel, hjerne, nyre, eggstokk, mage, hud og benkreft). Videre har overekspresjonen av c-MET eller HGF vist seg å korrelere med dårlig prognose og sykdomsutkomme i et antall viktige humane kreftformer som inkluderer lunge, lever, mage og bryst. c-MET har også vært direkte implisert i kreftformer uten et vellykket behandlingsregime, slik som bukspyttkjertelkreft, gliom, og hepatocellulær karsinom.
Eksempler på c-MET (HGFR) -inhibitorer, deres syntese og anvendelse kan finnes i U.S. patentsøknad serie nr. 10/786,610, med tittelen "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors", inngitt 26. februar 2004, og korresponderende internasjonal søknad PCT/US2004/005495 med samme tittel, inngitt 26. februar 2004.
Det vil være ønskelig å ha nye c-MET (HGFR) -inhibitorer og fremgangsmåter for anvendelse av slike inhibitorer for behandling av abnormal cellevekst, slik som kreft.
I en utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen en enantiomerisk ren forbindelse med formel i
hvori:
Y er N eller CR<12>; R<1>er valgt fra hydrogen, halogen, C6-12aryl, 5-12 leddet heteroaryl (hvori heteroaryl representerer furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksazol, tiazol, imidazol, imidazolin, imidazolidin, pyrazol, pyrazolin, pyrazolidin, isoksazol, isotiazol, oksadiazol, triazol, tiadiazol, pyran, pyridin, piperidin, dioksan, morfolin, ditian, tiomorfolin, pyridazin, pyrimidin, pyrazin, piperazin, triazin, tritian eller azitidin), C3.12cykloalkyl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, -0(CR<6>R<7>)nR<4>, -C(0)R<4>, -C(0)OR<4>, -CN, -N02, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>, -C(0)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, Ci-6alkyl, C2-8alkenyl, og C2-8alkynyl; og hvert hydrogen i R<1>er eventuelt substituert med en eller flere R<3->grupper;
R<2>er hydrogen;
hver R<3>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>,
-S(0)2OR<4>, -N02, -NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -CN, -C(0)R<4>, -OC(0)R<4>, -0(CR<6>R<7>)nR<4>, -NR<4>C(0)R<5>, -(CR<6>R<7>)nC(0)OR<4>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -(CR<6>R<7>)nC(0)NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nNCR<4>R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)NR<5>R<6>, -NR<4>S(0)pR<5>eller -C(0)NR<4>R<5>, hvert hydrogen i R er eventuelt substituert med R , og R -grupper på tilstøtende atomer kan kombineres for å danne et C6-12aryl, 5-12 leddet heteroaryl, C3-12cykloalkyl eller 3-12 leddet heteroalicyklisk gruppe;
hverR<4>,R<5>,R<6>og R<7>er uavhengig hydrogen, halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme nitrogenatom kan, sammen med nitrogenet til hvilke de er bundet, kombineres for å danne en 3 til 12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe som eventuelt inneholder 1 til 3 ytterligere heteroatomer valgt fra N, O og S; eller hvilke som helst to av R<4>, R5,R6og R<7>bundet til samme karbonatom kan kombineres for å danne en C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe; og hvert hydrogen iR4, R<5>, R<6>og R<7>er eventuelt substituert med R<8>;
hver R<8>er uavhengig halogen, C1-2alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3.12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -NH2, -CN, -OH, -O-Ci-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)„(3-12 leddet heteroalicyklisk) eller -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl); og hvert hydrogen i R<8>er eventuelt substituert med R<n>;
hver R<n>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C1-12alkoksy, C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -O-C1-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -O-CCJ^Ce-n aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk), -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl) eller -CN, og hvert hydrogen i R<11>er eventuelt substituert med halogen, -OH, -CN, -C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -O-C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -CO, -SO eller -SO2;
R<12>er hydrogen;
hver m er uavhengig 0,1 eller 2;
hver n er uavhengig 0,1, 2, 3 eller 4;
hver p er uavhengig 1 eller 2;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen er Y N.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen er Y CR<12>.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen er Y CR<12>og R<12>er H.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen, og i kombinasjon med et hvilket
som helst annet spesielt aspekt som ikke er inkonsistent, er R<1>furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksazol, tiazol, imidazol, imidazolin, imidazolidin, pyrazol, pyrazolin, pyrazolidin, isoksazol, isotiazol, oksadiazol, triazol, tiadiazol, pyran, pyridin, piperidin, dioksan, morfolin, ditian, tiomorfolin, pyridazin, pyrimidin, pyrazin, piperazin, triazin, tritian eller fenylgruppe, og hvert hydrogen i R1 er eventuelt substituert med en eller flere R<3->grupper.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen, og i kombinasjon med hvilke som helst andre spesielle aspekter som ikke er inkonsistente, er R1 en sammensmeltet ringhe-teroarylgruppe og hvert hydrogen i R<1>er eventuelt substituert med en eller flere R<3->grupper.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen, og i kombinasjon med et hvilket som helst annet spesielt aspekt som ikke er inkonsistent, er R<1>hydrogen.
I et annet spesielt aspekt av denne utførelsesformen, og i kombinasjon med et hvilket som helst annet spesielt aspekt som ikke er inkonsistent, er R<1>et halogen.
I en annen utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen en enantiomerisk ren forbindelse med formel la
hvori:
Y er CH; R<1>er en furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksazol, tiazol, imidazol, imidazolin, imidazolidin, pyrazol, pyrazolin, pyrazolidin, isoksazol, isotiazol, oksadiazol, triazol, tiadiazol, pyran, pyridin, piperidin, dioksane, morfolin, ditian, tiomorfolin, pyridazin, pyrimidin, pyrazin, piperazin, triazin, tritian, azitidin eller fenylgruppe; og hvert hydrogen i R<1>er eventuelt substituert med R<3>; hver R<3>er uavhengig halogen; C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>, -S(0)2OR<4>, -N02, -NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -CN, -C(0)R<4>, -OC(0)R<4>, -0(CR<6>R<7>)nR<4>, -NR<4>C(0)R<5>, -(CR<6>R<7>)nC(0)OR<4>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -(CR<6>R<7>)nC(0)NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nNCR<4>R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)NR<5>R<6>, -NR<4>S(0)pR<5>eller-C(0)NR<4>R<5>, hvert hydrogen i R<3>er eventuelt substituert med R<8>, og R<3->grupper på tilstøtende atomer kan kombineres for å danne en C6-i2aryl, 5-12 leddet heteroaryl, C3.12cykloalkyl eller 3-12 leddet heteroalicyklisk gruppe;
hverR<4>,R<5>,R<6>og R<7>er uavhengig hydrogen, halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme nitrogenatom kan, sammen med nitrogenet til hvilket de er bundet, kombineres for å danne en 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe som eventuelt inneholder 1 til 3 ytterligere heteroatomer valgt fra N, O og S; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme karbonatom kan kombineres for å danne en C3.12cykloalkyl, C6-12
aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe; og hvert hydrogen iR4, R<5>, R<6>og R<7>er eventuelt substituert med R<8>;
hver R8 er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -NH2, -CN, -OH, -O-Ci-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk) eller -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl); og hvert hydrogen i R<8>er eventuelt substituert med R<n>;
hver R<n>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C1.12alkoksy, C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -O-C1-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk), -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl) eller -CN, og hvert hydrogen i R<n>er eventuelt substituert med halogen, -OH, -CN, -C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -O-C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -CO, -SO eller -SO2;
hver m er uavhengig 0, 1 eller 2;
hver n er uavhengig 0,1,2,3 eller 4;
hver p er uavhengig 1 eller 2;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav.
I en annen utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen en enantiomerisk ren forbindelse valgt fra gruppen som består av
5 -brom-3 - [(R)-1 -(2,6-diklor-3 -fluor-f eny l)-etoksy ] -pyrazin-2-y lamin; 5-jod-3-[(R)l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin; 5-brom-3-[l(R)-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin; 4-{5-amino-6-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-benzosyre; (4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -fenyl)-piperazin-1- yl-metanon; 4-(4- {5-amino-6-[(R)-l -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -benzoyl)-piperazine- 1-karboksylsyre tert-butylester; 3-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-[4-(piperazin-l-ylcarbonyl)fenyl] pyridin-2- amin; 4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-lfuorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-N-[2-(dimetylamino)etyl]-N-metylbenzamid; (4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}fenyl)metanol; 4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-lfuorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-N-[3-(dimetylamino)propyl]-N-metylbenzamid; tert-butyl 4-(4- {6-amino-5-[( 1 R)-1 -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}benzoyl)piperazine-1 -carboksylat; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-[l-(l-metyl-piperidin-4-yl)-lH-pyrazol-4-yl]-pyridin-2-ylamin; 1 -[4-(4- {6-amino-5-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 - yl)-piperidin-1 -yl]-2-hydroksy-etanon; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-syklopentyl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2- ylamin; 3- [(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin; 1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fiuor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1-yl)-piperidin-1 -yl]-2-hydroksy-etanon; 3-[(R)-l -(2,6-diklor-3-lfuor-fenyl)-etoksy]-5-[ 1 -(1 -metyl-piperidin-4-yl)-1 H-pyrazol-4-yl]-pyrazin-2-ylamin; 1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fiuor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1-yl)-piperidin-1 -yl]-2-dimetylamino-etanon;
3-[(R)-l-(2-klor-3,6-difluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, solvat eller hydrat derav.
I en annen utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en farmasøytisk sammensetning som innbefatter en hvilken som helst av forbindelsene ifølge oppfinnelsen og en farma-søytisk akseptabel bærer. Eksempler på slike sammensetninger er beskrevet nedenfor.
Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen inkluderer de som har c-MET-inhibitoraktivitet som definert ved en hvilken som helst av en eller flere av IC50, Ki eller prosent inhibering (% I). Fagmannen kan lett bestemme hvis en forbindelse har slik aktivitet ved utføring av passende undersøkelse, og beskrivelser av slike undersøkelser er vist i eksempeldelen heri. I en utførelsesform, har særlig foretrukne forbindelser en c-MET Ki på mindre enn 5 uM eller mindre enn 2 uM eller mindre enn 1 uM, eller mindre enn 500 nM eller mindre enn 200 nM eller mindre enn 100 nM. I en annen utførelses-form, har særlig foretrukne forbindelser en c-MET-inhibering ved 1 uM på minst 10% eller minst 20% eller minst 30% eller minst 40% eller minst 50% eller minst 60% eller minst 70% eller minst 80% eller minst 90%. Fremgangsmåter for å måle c-MET/HGFR-aktivitet er beskrevet i eksemplene heri.
I en annen utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen en forbindelse med formel 1 eller la for behandling av abnormal cellevekst hos et pattedyr. I en annen utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen anvendelse av en slik forbindelse for fremstilling av et medikament for behandling av abnormal cellevekst hos et pattedyr.
I en spesifikk utførelsesform av en hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen beskrevet heri, er den abnormale celleveksten kreft, som inkluderer, men er ikke begrenset til, lungekreft, benkreft, bukspyttkjertelkreft, hudkreft, kreft i hode og hals, kutant eller intraokulær melanom, livmorkreft, eggstokkreft, rektalkreft, kreft i den anale regionen, magekreft, kolonkreft, brystkreft, karsinom i fallopianrørene, karsinom i endometrium, karsinom i cervix, karsinom i vagina, karsinom i vulva, Hodgkin's sykdom, kreft i spiserøret, kreft i tynntarm, kreft i det endokrine systemet, kreft i tyroid-kjertelen, kreft i paratyroidkjertelen, kreft i adrenalkjertelen, mykvevsarkom, kreft i uretra, kreft i penis, prostatakreft, kronisk eller akutt leukemi, lymfocytiske lymfomer, kreft i blæren, kreft i nyre eller ureter, renalcellekarsinom, karsinom i renal pelvis, neo-plasmer i sentralnervesystemet (CNS), primær CNS-lymfom, ryggradtumorer, hjerte-stammegliom, hypofyseadenom eller en kombinasjon av en eller flere av de foregående kreftformene. I en annen utførelsesform av nevnte fremgangsmåte er nevnte abnormale cellevekst en benign proliferativ sykdom, som inkluderer, men er ikke begrenset til, psoriasis, benign prostatahypertrofl eller restenose.
I ytterligere spesifikke utførelsesformer av oppfinnelsen beskrevet heri, administreres forbindelsene ifølge oppfinnelsen i en kombinasjon av en mengde av en eller flere substanser valgt fra antitumormidler, antiangiogenesemidler, signaltransduksjonsinhibitorer og antiproliferative midler, hvilke mengder er sammen effektive når det gjelder å behandle nevnte abnormale cellevekst. Slike substanser inkluderer de som er beskrevet i PCT publikasjon nr. WO 00/38715, WO 00/38716, WO 00/38717, WO 00/38718, WO 00/38719, WO 00/38730, WO 00/38665, WO 99/37107 og WO 00/38786.
Eksempler på antitumormidler inkluderer mitotiske inhibitorer, f.eks. vinkaalkaloidde-rivater slik som vinblastinvinorelbin, vindescin og vinkristin; kolkiner allokokin, hali-kondrin, N-benzoyltrimetyl-mety leter kolkicinsyre, dolastatin 10, maystansin, rizoksin, taksaner slik som taksol (paklitaksel), docetaksel (taksoter), 2'-N-[3-(dimetylamino)propyl]glutaramat (taksolderivat), tiokolkisin, tritylcystein, teniposid, meotreksat, azatioprin, fluorouricil, cytocinarabinosid, 2'2'-difluordeoksycytidin (gem-citabin), adriamycin og mitamycin. Alkyleringsmidler, f.eks. cis-platin, karboplatin ok-siplatin, iproplatin, etylester av N-acetyl-DL-sarkosyl-L-leucin (Asaley eller Asaleks), 1,4-cykloheksadien-l,4-dikarbaminsyre, 2,5-bis(l-azirdinyl)-3,6-diokso-, dietylester (diazikuon), l,4-bis(metansulfonyloksy)butan (bisulfan eller leukosulfan) klorozotocin, klomeson, cyanomorfolinodoksorubicin, cyklodison, dianhydroglaktitol, fluorodopan, hepsulfam, mitomycin C, hykanteonmitomycin C, mitozolamid, l-(2-kloretyl)-4-(3-klorpropyl)-piperazin dihydroklorid, piperazindion, pipobroman, porfiromycin, spiro-hydantoinsennep, teroksiron, tetraplatin, tiotepa, trietylenmelamin, uracilnitrogensen-nep, bis(3-mesyloksypropyl)aminhydroklorid, mitomycin, nitrosureamidler slike som cykloheksyl-kloretylnitrosurea, metylcykloheksyl-kloretylnitrosurea 1 -(2-kloretyl)-3-(2,6-diokso-3-piperidyl)-l-nitrosurea, bis(2-kloretyl)nitrosurea, prokarbazin, dakarba-zin, nitrogensenneprelaterte forbindelser slik som mekloretamin, cyklofosfamid, ifosa-mid, melfalan, klorambucil, estramustinnatriumfosfat, stroptozin, og temozolamid. DNA-antimetabolitter, f.eks. 5-fluoruracil, cytosinarabinosid, hydroksyurea, 2-[(3-hydroksy-2-pyrinodinyl)metylen]-hydrazinkarbotioamid, deoksyfluoruridin, 5 - hydroksy-2-formylpyridin tiosemikarbazon, a-2'-deoksy-6-tioguanosid, afidikolingly-cinat, 5-azadeoksycytidin, B-tioguanindeoksyribosid, cyklocytidin, guanazol, inosidgly-kodialdehyd, makbecin II, pyrazolimidazol, kladribin, pentostatin, tioguanin, merkapto-purin, bleomycin, 2-klordeoksyadenosin, inhibitorer av tymidylatsyntase slik som ral-titreksed og pemetrekseddinatrium, klofarabin, floksuridin og fludarabin. DNA/RNA-antimetabolitter, f.eks. L-alanosid, 5-azacytidin, acivicin, aminopterin og derivater derav slike som N-[2-klor-5-[[(2,4-diamino-5-metyl-6-kinazolinyl)metyl]amino]benzoyl]-L-aspartinsyre, N-[4-[[(2,4-diamino-5-etyl-6-kinazolinyl)metyl]amino]benzoyl]-L-aspartinsyre, N-[2 -klor-4- [[(2,4-diaminopteridinyl)metyl] amino]benzoy 1]-L-aspartinsyre, løselig Baker's antifol, diklorallyl lawson, brekinar, ftoraf, dihydro-5-azacytidin, metotreksat, N-(fosfonoacetyl)-L-aspartinsyre tertranatriumsalt pyrazofuran, trimetreksat, plikamycin, aktinomycin D, krypytofycin, og analoger slike som krypto-mycin-52 eller f.eks. en av de foretrukne antimetabolittene beskrevet i europeisk patentsøknad nr. 239362 slik som N-(5-[N-(3,4-dihydro-2-metyl-4-oksokinazolin-6-ylmetyl)- N-metylamino]-2-tenoyl)-L-glutamsyre; vekstfaktorinhibitorer; cellesykelinhibitorer; interkalsineringsantibiotiske midler, f.eks. adriamycin og bleomycin; proteiner, f.eks. interferon; og antihormoner, f.eks. anti-østrogen slik som Nolvadex™ (tamoksifen) eller f.eks. antiandrogener slike som Casodex™ (4'-cyano-3-(4-fluorfenylsulfonyl)-2-hydroksy-2-metyl-3'-(trifluormetyl)propionanilid). Slik samtidig behandling kan oppnås ved simultan, sekvensiell eller separat dosering av de individuelle komponentene for behandling.
Antiangiogenesemidler inkluderer MMP-2 (matriksmetalloprotienase 2) -inhibitorer, MMP-9 (matriksmetalloprotienase 9) -inhibitorer og COX-II (cykloksygenase II) -inhibitorer. Eksepler på anvendelige COS-II-inhibitorer inkluderer CELEBREX™
(alekoksib), baldekoksib, og rofekoksib. Eksempler på anvendelige matriksmetallopro-teinaseinhibitorer er beskrevet i WO 96/33172 (publisert 24. oktober 1996), WO 96/27583 (publisert 7. mars 1996), europeisk patentsøknad nr. 97304971.1 (inngitt 8. juli 1997), europeisk patentsøknad nr. 99308617.2 (inngitt 29. oktober 1999), WO 98/07697 (publisert 26. februar 1998), WO 98/03516 (publisert 29. januar 1998), WO 98/34918 (publisert 13. august 1996), WO 98/34915 (publisert 13. august 1998), WO 98/33768 (publisert 6- august 1998), WO 98/30566 (publisert 16. juli 1998), europeisk patentpublikasjon nr. 606,046 (publisert 13. juli 1994), europeisk patentpublikasjon nr. 931,788 (publisert 28. juli 1999), WO 90/05719 (publisert 31. mai 1990), WO 99/52910) publisert 21. oktober 1999), WO 99/52889 (publisert 21. oktober 1999), WO 99/29667 (publisert 17. juni 1999), PCT internasjonal søknad nr. PCT/1B98/01113 (ingitt 21. juli 1998), europeisk patentsøknad nr. 99302232.1 (utgitt 25. mars 1999), Britisk patentsøknad nr. 9912961.1 (inngitt 3. juni 1999), US "Provisional" søknad nr. 60/148,464 (inngitt 12. august 1999), US patent 5,863,949 (meddelt 26. januar 1999),
US patent 5,861,510 (meddelt 19. januar 1999) og europeisk patentpublikasjon 780,386 (publisert 25. juni 1997). Foretrukne MMP-2 og MMP-9 inhibitorer er de som har liten eller ingen aktivitet når det gjelder å inhibere MMP-1. Mer foretrukket er de som selek-tivt inhiberer MMP-2 og/eller MMP-9 relativt til andre matriksmetalloproteinaser (dvs. MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12ogMMP-13).
Eksempler på MMP-inhibitorer inkluderer AG-3340, RO 32-3555, RS 13-0830 og føl-gende forbindelser: 3-[[4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonyl]-(l-hydroksykarbamoyl-cyklopentyl)-amino]-propionsyre;
3- ekso-3-[4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-8-oksa-bicyklo[3.2.1]oktan-3-karboksylsyre hydroksyamid;
(2R, 3R) 1 -[4-(2-klor-4-fluor-benzyloksy)-benzensulfonyl]-3-hydroksy-3-metyl-piperidin-2-karboksylsyre hydroksyamid;
4- [4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-tetrahydro-pyran-4-karboksylsyre hydroksyamid; "
3- [[4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonyl]-(l-hydroksykarbamoyl-cyklobutyl)-amino]-propionsyre;
4- [4-(4-klor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-tetrahydro-pyran-4-karboksylsyre hydroksyamid;
3-[4-(4-klor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-tetrahydro-pyran-3-karboksylsyre hydroksyamid;
(2R, 3R) 1 -[4-(4-fluor-2-metyl-benzyloksy)-benzensulfonyl]-3-hydroksy-3-metyl-piperidin-2-karboksylsyre hydroksyamid;
3-[[4-(4-lfuor-fenoksy)-benzensulfonyl]-(l-hydroksykarbamoyl-l-metyl-etyl)-amino]-propionsyre;
3-[[4-(4-lfuor-fenoksy)-benzensulfonyl]-(4-hydroksykarbamoyl-tetrahydro-pyran-4-yl)-amino]-propionsyre;
3-ekso-3-[4-(4-klor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-8-oksa-bicyklo[3.2.1]oktan-3-karboksylsyre hydroksyamid;
3-endo-3-[4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-8-oksa-bicyklo[3.2.1]oktan-3-karboksylsyre hydroksyamid;
3-[4-(4-fluor-fenoksy)-benzensulfonylamino]-tetrahydro-furan-3-karboksylsyre hydroksyamid; og farmasøytisk akseptable salter, solvater og hydrater derav.
Eksempler på signaltransduksjonsinhibitorer inkluderer midler som kan inhibere EGFR (epidermal vekstfaktorreseptor) -responser, slike som EGFR-antistoffer, EGF-antistoffer, og molekyler som er EGFR-inhibitorer; VEGF (vaskulær endotel vekstfak-tor) -inhibitorer; og erbB2-reseptorinhibitorer, slike som organiske molekyler eller antistoffer som binder til erbB2-reseptoren, f.eks. HERCEPTIN™ (Genentech, Inc. of South San Francisco, California, USA).
EGFR-inhibitorer er beskrevet f.eks. i WO 95/19970 (publisert 27. juli 1995), WO 98/14451 (publisert 9. april 1998), WO 98/02434 (publisert 22. januar 1998) og US patent 5,747,498 (meddelt 5. mai 1998). EGFR-inhiberende midler inkluderer, men er ikke begrenset til, de monoklonale antistoffene C225 og anti-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated of New York, New York, USA), forbindelsene ZD-1839 (Astra-Zeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc. of Annandale, New Jersey, USA) og OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station, New Jersey, USA), VRCTC-310 (Ventech Research) og EGF fusjontoksin (Seragen Inc. of Hopkin-ton, Massachusetts).
VEGF-inhibitorer, f.eks. SU5416 og SU-6668 (Sugen Inc. of South San Francisco, California, USA) kan også kombineres eller koadministreres med sammensetningen. VEGF-inhibitorer er f.eks. beskrevet i WO 99/24440 (publisert 20. mai 1999), PCT internasjonal søknad PCT/IB99/00797 (inngitt 3. mai 1999), i WO 95/21613 (publisert 17. august 1995), WO 99/61422 (publisert 2. desember 1999), US patent 5,834,504 (meddelt 10. november 1998), WO 98750356 (publisert 12. november 1998), US patent 5,883,113 (meddlet 16. mars 1999), US patent 5,886,020 (meddelt 23. mars 1999), US patent 5,792,783 (meddelt 11. august 1998), WO 99/10349 (publisert 4. mars 1999), WO 97/32856 (publisert 12. september 1997), WO 97/22596 (publisert 26. juni 1997), WO 98/54093 (publisert 3. desember 1998), WO 98/02438 (publisert 22. januar 1998), WO 99/16755 (publisert 8. april 1999) og WO 98/02437 (publisert 22. januar 1998). Andre eksempler på noen spesifikke VEGF-inhibitorer er IM862 (Cytran Inc. of Kirkland, Washington, USA); anti-VEGF monoklonalt antistoff bevacizumab (Genentech Inc. of South San Francisco, California), og angiozym, et syntetisk ribozym fra Ribozym (Boulder, Colorado) og Chiron (Emeryville, California).
ErbB2-reseptorinhibitorer, slik som GW-282974 (Glaxo Wellcome plc), og de monoklonale antistoffene AR-209 (Aronex Pharmaceuticals INc. of The Woodlands, Tex-as, USA) og 2B-1 (Chiron), kan administreres i kombinasjon med sammensetningen. Slike erbB2-inhibitorer inkluderer de som er beskrevet i WO 98/02434 (publisert 24. januar 1998), WO 99/35146 (publisert 15. juli 1999), WO 99/35132 (publisert 15. juli 1999), WO 98/02437 (publisert 22. januar 1998), WO 97/13760 (publisert 17. april 1997), WO 95/19970 (publisert 27. juli 1995), US patent 5,587,458 (meddelt 24. desember 1996), og US patent 5,877,305 (meddelt 2. mars 1999). ErbB2-reseptorinhibitorer anvendelige ifølge oppfinnelsen er beskrevet i US "Provisional" søknad nr. 60/177,341, inngitt 27. januar 1999, og i US "Provisional" søknad nr. 60/117,346, inngitt 27. januar 1999.
Andre antiproliferative midler som kan anvendes inkluderer inhibitorer av enzymet far-nesylproteintransferase og inhibitorer av reseptoren tyrosinkinase PDGFr, som inklude rer forbindelsene beskrevet i følgende US patentsøknader: 09/221946 (inngitt 28. desember 1998); 09/454058 (inngitt 2. desmeber 1999); 09/501163 (inngitt 9. februar 2000); 09/539930 (inngitt 31. mars 2000); 09/202796 (inngitt 22. mai 1997); 09/384339 (inngitt 26. august 1999); og 98/383755 (inngitt 26. august 1999); og forbindelser beskrevet i følgende US "provisional" patentsøknader: 60/168207 (inngitt 30. november 1999); 60/170119 (inngitt 10. desember 1999); 60/177718 (inngitt 21. januar 2000); 60/168217 (inngitt 30. november 1999) og 60/200834 (inngitt 1. mai 2000).
Sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan også anvendes med andre midler anvendelige ved behandling av abnormal cellevekst eller kreft, som inkluderer, men er ikke begrenset til, midler i stand til å øke antitumorimmunresponsene, slike som CTLA4 (cyto-toksisk lymfocitantigen 4) -antistoffer, og andre midler i stand til å blokkere CTLA4; og anti-proliferative midler slike som andre farnesylproteintransferaseinhibitorer. Spesifikke CTLA4-antistoffer som kan anvendes ifølge oppfinnelsen inkluderer de som er beskrevet i US "provisional" søknad 60/113,647 (inngitt 23. desember 1998).
Med mindre annet er angitt, har følgende begreper anvendt i beskrivelsen og kravene betydningene beskrevet nedenfor. Variabler definert i denne delen, slik som R, X, n og lignende, er for referanse kun i denne delen, og er ikke ment å ha samme betydning som kan anvendes utenfor denne definisjonsdelen. Videre kan mange av gruppene definert heri eventuelt være substituert. Listingen i definisjonsdelen av typiske substituenter er eksempler og er ikke tiltenkt å begrense substituentene definert ellers i denne beskrivelsen og kravene.
"Alkyl" refererer til et mettet alifatisk hydrokarbonradikal som inkluderer rettkjedede og forgrenede grupper med 1 til 20 karbonatomer, foretrukket 1 til 12 karbonatomer, mer foretrukket 1 til 8 karbonatomer, eller 1 til 6 karbonatomer, eller 1 til 4 karbonatomer. "Lavere alkyl" refererer spesifikt til en alkylgruppe med 1 til 4 karbonatomer. Eksempler på alkylgrupper inkluderer metyl, etyl, propyl, 2-propyl, n-butyl, iso-butyl, tert-butyl, pentyl og lignende. Alkyl kan være substituert eller usubstituert. Typiske substituentgrupper inkluderer cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyklisk, hydroksy, alkoksy, aryloksy, merkapto, alkyltio, aryltio, cyano, halo, karbonyl, tiokarbonyl, O-karbamyl, N-karbamyl, O-tiokarbamyl, N-tiokarbamyl, C-amido, N-amido, C-karboksy, O-karboksy, nitro, silyl, amino og -NR<x>R<y>, hvor Rx og Ry er uavhengig valgt fra gruppen som består av hydrogen, alkyl, cykloalkyl, aryl, karbonyl, acetyl, sulfonyl, trifluor-metansulfonyl og kombinert en fem- eller seksleddet heteroalicyklisk ring.
"Cykloalkyl" refererer til en 3- til 8-leddet allkarbonmonocyklisk ring, en allkarbon 5-leddet/6-leddet eller 6-leddet/6-leddet sammensmeltet bicyklisk ring, eller en multi-cyklisk sammensmeltet ring (et "sammensmeltet" ringsystem betyr at hver ring i systemet deler et tilstøtende par av karbonatomer med hver annen ring i systemet) -gruppe, hvori en eller flere av ringene kan inneholde en eller flere dobbelbindinger, men ingen av ringene har et komplett konjugert pielektronsystem. Eksempler, uten begrensning, på cykloalkylgrupper er cyklopropan, cyklobutan, cyklopentan, cyklopenten, cykloheksan, cykloheksadien, adamantan, cykloheptan, cykloheptatrien, og lignende. En cykloalkylgruppe kan være substituerte eller usubstituerte. Typiske substituentgrupper inkluderer alkyl, aryl, heteroaryl, heteroalicyklisk, hydroksy, alkoksy, aryloksy, merkapto, alkyltio, aryltio, cyano, halo, karbonyl, tiokarbonyl, C-karboksy, O-karboksy, O-karbamyl, N-karbamyl, C-amido, N-amido, nitro, amino og -NR<x>R<y>, med Rx og Ry som definert ovenfor. Illustrative eksempler på cykloalkyl er avledet fra, men er ikke begrenset til, følgende:
"Alkenyl" refererer til en alkylgruppe, som definert heri, bestående av minst to karbonatomer og minst en karbon-karbon dobbelbinding. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, etenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-, 2- eller 3-butenyl, og lignende.
"Alkynyl" refererer til en alkylgruppe, som definert heri, som består av minst to karbonatomer og minst en karbon-karbon trippelbinding. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, etynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-, 2- eller 3-butynyl, og lignende.
"Aryl" refererer til allkarbon monocykliske eller sammensmeltede ringpolycykliske grupper med 6 til 12 karbonatomer som har et fullstendig konjugert pielektronsystem.
Eksempler, uten begrensning, på arylgrupper er fenyl, naftalenyl eller antracenyl. Arylgruppen kan være substituert eller usubstituert. Typiske substituenter inkluderer halo, trihalometyl, alkyl, hydroksy, alkoksy, aryloksy, merkapto, alkyltio, aryltio, cyano, nitro, karbonyl, tiokarbonyl, C-karboksy, O-karboksy, O-karbamoyl, N-karbamoyl, O-tiokarbamoyl, N-tiokarbamoyl, C-amido, N-amido, sulfinyl, sulfonyl, amino og
-NR<x>R<y>, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"Heteroaryl" refererer til en monocyklisk eller sammensmeltet ringgruppe med 5 til 12 ringatomer som inneholder en, to, tre eller fire ringheteroatomer valgt fra N, O og S, hvor resten av ringatomene er C, og i tillegg, har et fullstendig konjugert pielektronsystem. Eksempler, uten begrensning, på usubstituerte heteroarylgrupper er pyrrol, furan, tiofen, imidazol, oksazol, tiazol, pyrazol, pyridin, pyrimidin, kinolin, isokinolin, purin, tetrazol, triazin, og karbazol. Heteroarylgruppen kan være substituert eller
usubstituert. Typiske substituenter inkluderer alkyl, cykloalkyl, halo, trihalometyl, hydroksy, alkoksy, aryloksy, merkapto, alkyltio, aryltio, cyano, nitro, karbonyl, tiokarbonyl, sulfonamido, C-karboksy, O-karboksy, sulfinyl, sulfonyl, O-karbamyl, N-karbamyl, O-tiokarbamyl, N-tiokarbamyl, C-amido, N-amido, amino og -NR<x>R<y>, med Rx og Ry som definert ovenfor.
Et farmasøytisk akseptabelt heteroaryl er et som er tilstrekkelig stabilt til å bli bundet til en forbindelse ifølge oppfinnelsen, formulert til en farmasøytisk sammensetning og et-terfølgende administrert til en pasient som trenger det.
Eksempler på typiske monocykliske heteroarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til:
Eksempler på egnede sammensmeltede ringheteroarylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til:
"Heteroalicyklisk" eller "heterocykel" refererer til en monocyklisk eller sammensmeltet ringgruppe som har i ringene 3 til 12 ringatomer, hvori en eller to ringatomer er heteroatomer valgt fra N, O og S(0)n(hvor n er 0,1 eller 2), og resten av ringatomene er C. Ringene kan også ha en eller flere dobbelbindinger. Imidlertid, har ringene ikke et fullstendig konjugert pielektrosystem.
Eksempler på egnede mettede heteroalicykliske grupper inkluderer, men er ikke begrenset til:
Eksempler på egnede delvis umettede heteroalicykliske grupper inkluderer, men er ikke begrenset til:
Heterocykelgruppen er eventuelt substituert med en eller to substituenter uavhengig valgt fra halo, lavere alkyl, lavere alkyl substituert med karboksy, ester, hydroksy, eller mono- eller dialkylamino.
"Hydroksy" refererer til en -OH-gruppe.
"Alkoksy" refererer til både en -O-(alkyl) eller en -0-(umettede cykloalkyl)gruppe. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, meteoksy, etoksy, propok-sy, butoksy, cyklopropoksy, cyklobutyloksy, cyklopentyloksy, cykloheksyloksy, og lignende.
"Haloalkoksy" refererer til en -0-(haloalkyl)gruppe. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, trifluormetoksy, tribrommetoksy, og lignende.
"Aryloksy" refererer til en -O-aryl- eller en -O-heteroarylgruppe, som definert heri. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, fenoksy, pyridinyloksy, furanyloksy, tienyloksy, pyrimidinyloksy, pyrazinyloksy, og lignende, og derivater derav.
"Merkapto" refererer til en -SH-gruppe.
"Alkyltio" refererer til en -S-(alkyl)- eller en S-(usubstituert cykloalkyl)-gruppe. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, metyltio, etyltio, propyltio, butyltio, cyklopropyltio, cyklobutyltio, cyklopentyltio, cykloheksyltio, og lignende.
"Aryltio" refererer til en -S-aryl- eller -S-heteroarylgruppe, som definert heri. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, fenyltio, pyridinyltio, furanyltio, tienyltio, pyrimidinyltio og lignende og derivater derav.
"Acyl" eller "karbonyl" refererer til en -C(0)R -gruppe, hvori R er valgt fra gruppen som består av hydrogen, lavere alkyl, trihalometyl, usubstituert cykloalkyl, aryl eventuelt substituert med en eller flere, foretrukket en, to eller tre substituenter valgt fra gruppen som består av lavere alkyl, trihalometyl, lavere alkoksy, halo og -NR<x>R<y>-grupper, heteroaryl (bundet gjennom et ringkarbon) eventuelt substituert med en eller flere, fore-trukekt en, to eller tre substituenter valgt fra gruppen som består av lavere alkyl, trihaloalkyl, lavere alkoksy, halo og -NR<x>R<y>-grupper og heteroalicyklisk (bundet gjennom et ringkarbon) eventuelt substituert med en eller flere, foretrukket en, to eller tre, substituenter valgt fra gruppen som består av lavere alkyl, trihaloalkyl, lavere alkoksy, halo og -NR<x>R<y>-grupper. Representative acylgrupper inkluderer, men er ikke begrenset til, acetyl, trifluoracetyl, benzoyl og lignende.
"Aldehyd" refererer til en acylgruppe hvori R er hydrogen.
"Tioacyl" eller "tiokarbonyl" refererer til en -C(S)R som definert ovenfor.
En "tiokarbonyl"-gruppe refererer til en -C(S)R"-gruppe, med R" som definert ovenfor.
En "C-karboksy"-gruppe refererer til en -C(0)OR"-gruppe, med R" som definert ovenfor.
En "0-karboksy"-gruppe refererer til en -OC(0)R"-gruppe, med R" som definert ovenfor.
"Ester" refererer til en -C(0)OR"-gruppe med R" som definert heri, untatt at R" ikke kan være hydrogen.
"Acetyl"-grupper refererer til en -C(0)CH3-gruppe.
"Halo" refererer til fluor, klor, brom eller jod, foretrukket fluor eller klor.
"Trihalometyl"-gruppe refererer til en metylgruppe som har tre halosubstituenter, slik som en trifluormetylgruppe.
"Cyano" refererer til en -C=N-gruppe.
En "sulfinyl"-gruppe refererer til en -S(0)R"-gruppe hvori, i tillegg til å være som definert ovenfor, kan R" også være en hydroksygruppe.
En "sulfonylgruppe" refererer til en -S(0)2R"-gruppe hvori, i tillegg til å være som definert ovenfor, kan R" også være en hydroksygurppe.
"S-sulfonamido" refererer til en -S(0)2NR<x>R<y>-gruppe, med Rx og Ry er som definert ovenfor.
"N-sulfonamido" refererer til en -NR<x>S(0)2R<y>-gruppe, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"0-karbamyl"-gruppe refererer til en -OC(0)NR<x>R<y>-gruppe, med med Rx og Ry som definert ovenfor.
"N-karbamyl" refererer til en R<y>OC(0)NR<x->gruppe, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"O-tiokarbamyl" refererer til en -OC(S)NR<x>R<y>-gruppe, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"N-tiokarbamyl" refererer til en R<y>OC(S)NR<x->gruppe, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"Amino" refererer til en -NR<x>R<y>-gruppe, hvori Rx og Ry begge er hydrogen.
"C-amido" refererer til en -C(0)NR<x>R<y>-gruppe med Rx og Ry som definert ovenfor.
"N-amido" refererer til en R<x>C(0)NR<y->gruppe, med Rx og Ry som definert ovenfor.
"Nitro" refererer til en N02-gruppe.
"Haloalkyl" refererer til alkyl, foretrukket lavere alkyl, som er substituert med en eller flere like eller forskjellige haloatomer, f.eks. -CH2C1, -CF3, -CH2CF3, -CH2CC13, og lignende.
"Hydroksyalkyl" betyr et alkyl, foretrukket lavere alkyl, som er substituert med en, to eller tre hydroksygrupper; f.eks. hydroksymetyl, 1- eller 2-hydroksyetyl, 1,2-, 1,3-, eller 2,3-dihydroksypropyl, og lignende.
"Aralkyl" betyr alkyl, foretrukket lavere alkyl, som er substituert med en arylgruppe som definert ovenfor; f.eks. -CH2fenyl, -(CH2)2fenyl, -(CH2)3fenyl, CH3CH(CH3)CH2fenyl, og lignende og derivater derav.
"Heteroaralkyl"-gruppe betyr alkyl, foretrukket lavere alkyl, som er substituert med en heteroarylgruppe; f.eks. -CH2pyridinyl, -(CH2)2pyrimidinyl, -(CH2)3imidazolyl, og lignende, og derivater derav.
"Monoalkylamino" betyr et radikal -NHR, hvor R er en alkyl eller usubstituert cykloalkylgruppe; f.eks. metylamino, (l-metyletyl)amino, cykloheksylamino, og lignende.
"Dialkylamino" betyr et radikal -NRR, hvor hver R er uavhengig en alkyl eller usubstituert cykloalkylgruppe; dimetylamino, dietylamino, (l-metyletyl)-etylamino, cyklohek-sylmetylamino, cyklopentylmetylamino, og lignende.
"Eventuell" eller "eventuelt" betyr at den etterfølgende beskrevne hendelsen eller omstendigheten kan, men trenger ikke å inntreffe, og at beskrivelsen inkluderer tilfeller hvor hendelsen eller omstendigheten opptrer og tilfeller hvori den ikke gjør det. For eksempel betyr "heterocykelgruppe eventuelt substituert med en alkylgruppe", at alkylet kan, men trenger ikke å være tilstede, og beskrivelsen inkluderer situasjoner hvor heterocykelgruppen er substituert med en alkylgruppe og situasjoner hvor heterocykelgruppen ikke er substituert med alkylgruppen.
En "farmasøytisk sammensetning" refererer til en blanding av en eller flere av forbindelsene beskrevet heri, eller fysiologisk/farmasøytisk akseptable salter, solvater, hydrater eller prodrug derav, med andre kjemiske komponenter, slike som fysiolo- gisk/farmasøytisk akseptable bærere og eksipienter. Formålet med en farmasøytisk sammensetning er å lette administrasjon av en forbindelse til en organisme.
Slik det anvendes heri, refererer en "fysiologisk/farmasøytisk akseptabel bærer" til en bærer eller fortynningsmiddel som ikke forårsaker signifikant irritasjon på en organisme og som ikke forværrer den biologiske aktiviteten og egenskapene til administrerte forbindelsen.
En "farmasøytisk akseptabel eksipient" refererer til en inert substans tilsatt til en farma-søytisk sammensetning for ytterligere å lette administrasjon av en forbindelse. Eksempler, uten begrensning, på eksipienter inkluderer kalsiumkarbonat, kalsiumfosfat, forskjellige sukkertyper og stivelsestyper, cellulosederivater, gelatin, vegetabilske oljer og polyetylenglykoler.
Slik det anvendes heri, refererer uttrykket "farmasøytisk akseptabelt salt" til de saltene som opprettholder den biologiske aktiviteten og egenskapene til morforbindelsen. Slike salter inkluderer: (1) syreaddisjonssalter, som kan oppnås ved omsetning av den frie basen av morforbindelsen med uorganiske syrer slike som saltsyre, hydrobromsyre, salpetersyre, fosfor-syre, svovelsyre og perklorsyre og lignende, eller med organiske syrer slike som eddiksyre, oksalsyre, (D)- eller (L)-eplesyre, maleinsyre, metansulfonsyre, etansulfonsyre, p-toluensulfonsyre, salicylsyre, vinsyre, sitronsyre, ravsyre og malonsyre og lignende; eller (2) salter dannet når et surt proton tilstede i morforbindelsen enten erstattes med et metallion, f.eks. et alkalimetallion, et jordalkalion, eller et aluminiumion; eller koordi-nerer med en organisk base slik som etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metylglukamin og lignende.
"PK" refererer til reseptorproteintyrosinkinase (RTK'er), ikke-reseptor eller "cellulær" tyrosinkinase (CTK'er) og serin-treoninkinaser (STK'er).
"Modulering" refererer til forandring av den katalytiske aktiviteten til RTK'er, CTK'er og STK'er. Spesielt refererer modulering til aktivering av den katalytiske aktiviteten til RTK'er, CTK'er og STK'er, foretrukket aktivering eller inhibering av den katalytiske aktiviteten til RTK'er, CTK'er og STK'er, avhengig av konsentrasjonen av forbindelsen
eller saltet til hvilken RTK, CTK eller STK er eksponert eller, mer foretrukket inhibering av den katalytiske aktiviteten til RTK'er, CTK'er og STK'er.
"Katalytisk aktivitet" refererer til fosforyleringshastigheten til tyrosin under innflytelse, direkte eller indirekte, av RTK'er og/eller CTK'er eller fosforylering av serin og treonin under innflytelse, direkte eller indirekte, av STK'er.
"Å bringe i kontakt med" refererer til å bringe en forbindelse ifølge oppfinnelsen og en mål-PK sammen på en slik måte at forbindelsen kan påvirke den katalytiske aktiviteten til PK, enten direkte, dvs. ved interaksjon med kinasen i seg selv, eller indirekte, dvs. ved interaksjon med et annet molekyl, på hvilket den katalytiske aktiviteten til kinasen er avhengig. Slik "å bringe i kontakt med" kan omfatte " in vitro", dvs. i et testrør, en petriskål eller lignende. I et testrør kan å bringe i kontakt med involvere kun en forbindelse og en PK av interesse eller den kan involvere hele celler. Celler kan også opprett-holdes eller dyrkes i celledyrkingsskåler og bringes i kontakt med en forbindelse i det miljøet. I denne sammenheng, kan evnen til en spesiell forbindelse til å påvirke en PK-relatert forstyrrelse, dvs. IC5otil forbindelsen, definert nedenfor, bestemmes før anvendelse av forbindelsen in vivo med mer komplekse levende organismer bli forsøkt. For celler utenfor organismen eksisterer multiple fremgangsmåter, og er kjente for fagmannen, for å oppnå at PK'er kommer i kontakt med forbindelsene som inkluderer, men er ikke begrenset til, direkte cellemikroinjeksjon og et antall transmembrane bærerteknik-ker.
" In vitro" refererer til fremgangsmåter utført i et kunstig miljø slik som f.eks. uten begrensning, i et testrør eller dyrkningsmedium.
" In vivo" refererer til fremgangsmåter utført i levende organismer slik som, uten begrensning, en mus, rotte eller kanin.
"PK-relatert forstyrrelse", "PK-drevet forstyrrelse", og "abnormal PK-aktivitet" refererer alle til en tilstand kjennetegnet ved ikke tilfredsstillende, dvs. under eller, mer vanlig, over, PK-katalytisk aktivitet, hvor den spesielle PK kan være en RTK, en CTK eller en STK. Ikke tilfredsstillende katalytisk aktivitet kan oppstå som et resultat av enten:
(1) PK-ekspresjon i celler som normalt ikke uttrykker PK'er, (2) økt PK-ekspresjon som fører til uønsket celleproliferasjon, differensiering og/eller vekst, eller (3) redusert PK-ekspresjon som fører til uønskede reduksjoner i celleproliferasjon, differensiering og/eller vekst. Overaktivitet av en PK refererer enten til amplifisering av genet som ko-der en bestemt PK eller produksjon av et nivå av PK-aktivitet som kan korrelere med celleproliferasjon, differensiering og/eller vekstforstyrrelse (dvs. idet nivået av PK øker, øker alvorligheten til et eller flere av symptomene til den cellulære forstyrrelsen). Un-deraktivitet er selvfølgelig det motsatte, hvori alvorligheten til et eller flere symptomer til en cellulær forstyrrelse øker, idet nivået av PK-aktivitet reduseres. "Behandle" og "behandling" refererer til en fremgangsmåte for å lindre eller bekjempe en PK-mediert cellulær forstyrrelse og/eller dens ledsagende symptomer. Med spesielt hensyn til kreft, betyr disse begrepene kort fortalt at livsforventning til et individ berørt av krefttype vil økes eller at et eller flere av symptomene til sykdommen blir redusert. "Organisme" refererer til en hvilken som helst levende bestanddel som innbefatter minst en celle. En levende organisme kan være så enkel som f.eks. en enkel eukaryot celle eller så kompleks som et pattedyr, som inkluderer et menneske. "Terapeutisk effektiv mengde" refererer til den mengden av forbindelsen som administreres som vil lindre i noen grad et eller flere av symptomene på forstyrrelsen som behandles. Med referanse til behandling av kreft, refererer en terapeutisk effektiv mengde til den mengden som har minst en av følgende effekter: (1) redusere størrelse av tumoren; (2) inhibere (dvs. redusere hastigheten på i noen grad, foretrukket stoppe) tumormeta-staser; (3) inhibere i noen grad (dvs. redusere hastigheten i noen grad, foretrukket stoppe) tu-morvekst; og (4) frigi i noen grad (eller foretrukket eliminere) et eller flere av symptomene assosiert med kreft.
"Overvåke" betyr å observere eller detektere effekten av å bringe en forbindelse i kontakt med en celle som uttrykker en bestemt PK. Den observerte eller detekterte effekten kan være en forandring i cellefenotype, i den katalytiske aktiviteten til en PK eller en forandring i interaksjon mellom en PK og en naturlig bindingspartner. Teknikker for å observere eller detektere slike effekter er godt kjente i litteraturen. Effekten er valgt fra en forandring eller fravær av forandring i en cellefenotype, en forandring eller fravær av forandring i den katalytiske aktiviteten til nevnte proteinkinase eller en forandring eller
fravær av forandring i interaksjon mellom nevnte proteinkinase og en naturlig bindingspartner i et siste aspekt av oppfinnelsen.
"Cellefenotype" refererer til det utvendige utseendet av en celle eller vev eller den biologiske funksjonen til cellen eller vevet. Eksempler, uten begrensning, på en cellefenotype, er cellestørrelse, cellevekst, celleproliferasjon, celledifferensiering, celleoverlevel-se, apoptose og ernæringsopptak og anvendelse. Slike fenotypekarakteristikker er mål-bare ved teknikker kjente i litteraturen.
"Naturlig bindingspartner" refererer til et polypeptid som binder til en bestemt PK i en celle. Naturlige bindingspartnere kan spille en rolle i propagering av et signal i en PK-mediert signaltransduksjonsprosess. En forandring i interaksjonen mellom den naturlige bindingspartneren og PK kan manifesteres i seg selv som en økt eller redusert konsentrasjon av PK/naturlig bindingspartnerkompleks og, som et resultat, i en observerbar forandring i evnen til PK til å mediere signaltransduksjon.
Slik det anvendes heri, betyr begrepene "optisk ren", "enantiomerisk ren", "ren enantiomer" og "optisk ren enantiomer" en sammensetning som innbefatter en enantiomer av en forbindelse og er idet vesentlige uten den motsatte enantiomeren av forbindelsen. En typisk optisk ren forbindelse innbefatter mer enn ca. 80 vekt-% av en enantiomer av forbindelsen og mindre enn ca. 20 vekt-% av den motsatte enantiomeren av forbindelsen, mer foretrukket mer enn ca. 90 vekt-% av en enantiomer av forbindelsen og mindre enn ca. 10 vekt-% av den motsatte enantiomeren av forbindelsen, enda mer foretrukket mer enn ca. 95 vekt-% av en enantiomer av forbindelsen og mindre enn ca. 5 vekt-% av den motsatte enantiomeren av forbindelsen, mest foretrukket mer enn ca. 97 vekt-% av en enantiomer av forbindelsen og mindre enn ca. 3 vekt-% av den motsatte enantiomeren av forbindelsen.
Generelle synteseskjemaer for forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan finnes i eksempeldelen heri.
Noen av de generelle fremgangsmåtene er vist med referanse til syntese av forbindelser hvori l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksybestanddelen er den rene (R)-isomeren, og noen er vist med referanse til forbindelser hvori nevnte bestanddel er en rasemisk blanding. Det er å forstå at fremgangsmåtene heri kan anvendes ved fremstilling av rasemiske forbindelser eller enantiomerisk rene (R)-isomerer ved å velge de korresponderende rasemiske eller enantiomerisk rene utgangsmaterialene.
Fremgangsmåtene vist heri kan anvendes ved fremstilling av et bredt spekter av enantiomerisk rene forbindelser ved valg av passende enantiomerisk rene utgangsmaterialer. I tillegg til forbindelsene vist heri, tilveiebringer oppfinnelsen også enantiomerisk rene forbindelser som korresponderer til 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylaminforbindelsene vist i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495); i U.S. søknad serienr. som skal overdras, docketnr. PC 32546, inngitt 26. august 2004 med tittelen "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors", og i U.S. søk-nad serienr. som skal overdras, docketnr. PC 32548, inngitt 26. august 2004 og med tittelen "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors".
Med mindre annet er indikert, inkluderer alle referanser heri til forbindelsene ifølge oppfinnelsen referanser til salter, solvater, hydrater og komplekser derav, og til solvater, hydrater og komplekser av salter derav, som inkluderer polymorfer, stereoisomerer og isotopisk merkede versjoner derav.
Farmasøytisk akseptable salter inkluderer syreaddisjon- og basesalter (inkludert disal-ter). Egnede syreaddisjonssalter dannes fra syrer som danner ikke-toksiske salter. Eksempler inkluderer acetat, aspartat, benzoat, besylat, bikarbonat/karbonat, bisul-fat/sulfat, borat, kamsylat, sitrat, edisylat, esylat, format, fumarat, glukeptat, glukonat, glukuronat, heksafluorfosfat, hibenzat, hydroklorid/klorid, hydrobromid/bromid, hydro-jodid/jod, isetonat, laktat, malat, maleat, malonat, mesylat, metylsulfat, naftylat, 2-napsylat, nikotinat, nitrat, orotat, oksalat, palmitat, pamoat, fos-fat/hydrogenfosfat/dihydrogenfosfat, sakkarat, stearat, suksinat, tartrat, tosylat og trifluoracetatsalter.
Egnede basesalter blir dannet fra baser som danner ikke-toksiske salter. Eksempler inkluderer aluminium, arginin, benzatin, kalsium, kolin, dietylamin, diolamin, glycin, lysin, magnesium, meglumin, olamin, kalium, natrium, trometamin og sinksalter.
For gjennomgang av egnede salter, se "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" av Stahl og Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Tyskland, 2002). Et farmasøytisk akseptabelt salt av forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan lett fremstilles ved å blande sammen løsninger av forbindelsen og den ønskede syren eller basen, som hensiktsmessig. Saltet kan presipitere fra løsning og kan samles opp ved filtrering eller kan utvinnes ved fordamping av løsemidlet. Grad av ionisasjon i saltet kan variere fra fullstendig ionisert til tilnærmet ikke-ionisert.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan eksistere i både ikke-solvatiserte og solvatiserte former. Begrepet "solvat" anvendes heri for å beskrive et molekylært kompleks som innbefatter forbindelsen ifølge oppfinnelsen og et eller flere farmasøytisk akseptable løsemiddelmolekyler, f.eks. etanol. Begrepet "hydrat" anvendes når løsemidlet er vann. Farmasøytisk akseptable solvater ifølge oppfinnelsen inkluderer hydrater og solvater hvori krystalliseringsløsemidlet kan være isotopisk substituert, f.eks. D2O, d6-aceton, d6-DMSO.
Også inkludert innenfor omfanget av oppfinnelsen er komplekser slike som klatrater, legemiddel-vertinklusjonskomplekser hvori, til forskjell fra de tidligere nevnte solvate-ne, legemidlet og verten er tilstede i støkiometriske eller ikke-støkiometriske mengder. Også inkludert er komplekser av legemidler som inneholder to eller flere organiske og/eller uorganiske komponenter som kan være i støkiometriske eller ikke-støkiometriske mengder. De resulterende kompleksene kan være ionisert, delvis ionisert eller ikke-ionisert. For en gjennomgang av slike komplekser, se J. Pharm. Sei., 64 (8), 1269-1288 av Haleblian (august 1975).
Også innenfor omfanget av oppfinnelsen er polymorferog isomerer (inkludert optiske, geometriske og tautomere isomerer) av forbindelsene ifølge oppfinnelsen.
Derivater av forbindelsene som kan ha liten eller ingen farmakologisk aktivitet i seg selv, men kan, når administrert til en pasient, omdannes til forbindelsene ifølge oppfinnelsen, f.eks. ved hydrolyttisk spalting. Slike derivater blir referert til som "prodrug". Ytterligere informasjon når det gjelder anvendelsen av prodrug kan finnes i "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", bind 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi og W. Stel-la) og "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987 (red. E.B. Roche, American Pharmaceutical Association).
Prodrug kan f.eks. fremstilles ved å erstatte passende funksjonaliteter tilstede på forbindelsene ifølge oppfinnelsen med visse bestanddeler kjente for fagmannen som "pro- bestanddeler" f.eks. som beskrevet i "Design of Prodrugs" av H. Bundgaard (Elsevier, 1985).
Noen eksempler på prodrug inkluderer:
(i) hvor forbindelsen inneholder en karboksylsyrefunsjonalitet (-COOH), en ester derav, f.eks. erstatning av hydrogenet med (Ci-C8)alkyl; (ii) hvor forbindelsen inneholder en alkoholfunksjonalitet (-OH), en eter derav, f.eks. erstatning av hydrogenet med (Ci-C6)alkanoyloksymetyl; og (iii) hvor forbindelsen inneholder en primær eller sekundær aminofunksjonalitet (-NH2eller -NHR hvor R ^ H), et amid derav, f.eks. erstatning av et eller begge hydroge-nene med (Ci-Cio)alkanoyl.
Ytterligere eksempler på erstatningsgrupper ifølge de foregående eksemplene og eksempler på andre prodrugtyper kan finnes i de tidligere nevnte referanser.
Til slutt kan visse forbindelser ifølge oppfinnelsen i seg selv virke som prodrug på andre forbindelser ifølge oppfinnelsen.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen som inneholder et eller flere asymmetriske karbonatomer kan eksistere som to eller flere stereoisomerer. Hvor en forbindelse ifølge oppfinnelse inneholder en alkenyl- eller alkenylengruppe, er geometriske cis/ trans (eller Z/E) -isomerer mulig. Der forbindelsene inneholder f.eks. en keto- eller oksimgruppe eller en aromatisk forbindelse kan tautomerisk isomerisme ("tautomerisme) opptre. En enkel forbindelse kan fremvise mer enn en type isomerisme.
Inkludert innenfor omfanget av oppfinnelsen er alle stereoisomerer, geometriske isomerer og tautomere former av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, som inkluderer forbindelser som fremviser mer enn en type isomerisme, og blandinger av en eller flere derav. Også inkludert er syreaddisjons- og basesalter hvori motionet er optisk aktivt, f.eks. D-laktat eller L-lysin, eller rasemisk, f.eks. DL-tartrat eller DL-arginin. C/s/frø/ør-isomerer kan separeres ved vanlige teknikker godt kjente for fagmannen, f.eks. kromatografi og fraksjonell krystallisasjon.
Vanlige teknikker for fremstilling/isolering av individuelle enantiomerer inkluderer kiral syntese fra en egnet optisk ren forløper eller oppløsning av rasematet (eller rasematet av et salt eller derivat), f.eks. ved anvendelse av kiral høytrykksvæskekromatografi
(HPLC).
Alternativt, kan rasematet (eller en rasemisk forløper) omsettes med en egnet optisk aktiv forbindelse, f.eks. en alkohol, eller i tilfelle hvor forbindelsen inneholder en sur eller basisk bestanddel, en syre eller base slik som vinsyre eller 1-fenyletylamin. Den resulterende diastereomere blandingen kan separeres ved kromatografi og/eller fraksjonen krystallisasjon og en eller begge av diastereomerene omdannes til den korresponderende rene enantiomeren ved hjelp av fremgangsmåter godt kjente for fagmannen.
Kirale forbindelser ifølge oppfinnelsen (og kirale forløpere derav) kan oppnås i enantiomerisk anriket form ved anvendelse av kromatografi, typisk HPLC, på en asymmet-risk harpiks med en mobil fase som består av et hydrokarbon, typisk heptan eller heksan, som inneholder fra 0 til 50% isopropanol, typisk fra 2 til 20%, og fra 0 til 5% av et alkylamin, typisk 0,1% dietylamin. Konsentrasjon av eluatet gir den anrikede blandingen.
Stereoisomere konglomerater kan separeres ved vanlige teknikker kjente for fagmannen; se f.eks. "Stereochemistry of Organic Compounds", av E.L. Eliel (Wiley, New York, 1994).
Oppfinnelsen inkluderer også isotopmerkede forbindelser ifølge oppfinnelsen, hvori et eller flere atomer er erstattet med et atom som har samme atomtall, men en atommasse eller massetall forskjellig fra atommassen eller massetallet som vanligvis finnes i natu-ren. Eksempler på isotoper egnet for inklusjon i forbindelsene ifølge oppfinnelsen ink-
0 1 1111 14 luderer isotoper av hydrogen, slik som H og H, karbon, slik som C, C og C, klor, slik som<36>C1, fluor, slik som<I8>F, jod, slik som<I23>I og<I25>I, nitrogen, slik som<I3>N og<I5>N, oksygen, slik som<I5>0,170 og<I8>0, fosfor, slik som32P, og svovel, slik som 35S. Visse isotopmerkede forbindelser ifølge oppfinnelsen, f.eks. de som inkorporerer en radioaktiv isotop er anvendelige i legemiddel og/eller substratvevfortynningsstudier. De radioaktive isotopene tritium,<3>H og karbon-14,<14>C, er særlig anvendelige for dette formålet i lys av deres enkle inkorporering og enkle deteksjon. Substitusjon med tyngre
isotoper slik som deuterium,<2>H, kan gi visse terapeutiske fordeler som resultat av større metabolittisk stabilitet, f.eks. økt in vivo halveringstid, eller reduserte dosekrav, og kan således være foretrukket under noen omstendigheter. Substitusjon med positronemitte-
rende isotoper, slik som<n>C,<I8>F,I50og I<3>N, kan være anvendelig i positronemisjonsto-pografi (PET) -studier for undersøkelse av substratreseptorokkupering.
Isotopmerkede forbindelser ifølge oppfinnelsen kan generelt fremstilles ved vanlige teknikker kjente i litteraturen eller ved fremgangsmåter analoge med de beskrevet heri, ved anvendelse av et passende isotopmerket reagens istedenfor det ikke-merkede rea-genset som ellers anvendes.
Farmasøytisk akseptable solvater ifølge oppfinnelsen inkluderer de hvori krystallisa-sjonsløsemidlet kan være isotopsubstituert, dvs. D2O, dé-aceton, dé-DMSO.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen tiltenkt farmasøytisk anvendelse kan administreres som krystallinske eller amorfe produkter, eller blandinger derav. De kan f.eks. oppnås som faste plugger, pulvere eller filmer, ved fremgangsmåter slike som presipitasjon, krystallisasjon, frysetørking, spraytørking eller fordampningstørking. Mikrobølge- eller radiofrekvenstørking kan anvendes for dette formålet.
Forbindelsene kan administreres alene eller i kombinasjon med en eller flere forbindelser ifølge oppfinnelsen, eller i kombinasjon med et eller flere andre legemidler (eller som en hvilken som helst kombinasjon derav). Generelt, vil de administreres som en formulering i assosiasjon med en eller flere farmasøytisk akseptable eksipienter. Begrepet "eksipient" anvendes heri for å beskrive en hvilken som helst ingrediens forskjellig fra forbindelsene ifølge oppfinnelsen. Valg av eksipient vil i stor grad avhengig av fak-torer slike som den bestemte administrasjonsmåten, effekten av eksipienten på løselig-het og stabilitet, og typen doseringsform.
Farmasøytiske sammensetninger egnet for levering av forbindelser ifølge oppfinnelsen og fremgangsmåter for deres fremstilling vil være nærliggende for fagmannen. Slike sammensetninger og fremgangsmåter for deres fremstilling kan f.eks. finnes i "Reming-ton's Pharmaceutical Sciences", 19. utgave (Mack Publishing Company, 1995).
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres oralt. Oral administrasjon kan involvere svelging, slik at forbindelsen kommer inn i gastrointestinaltrakten, eller bukkal eller sublingual administrasjon kan anvendes hvorved forbindelsen kommer inn i blod-strømmen direkte fra munnen.
Formuleringer egnet for oral administrasjon inkluderer faste formuleringer slike som
tabletter, kapsler som inneholder partikulære materialer, væsker eller pulvere, lozenger (inkludert væskefyllte), tyggegummier, multi- og nano-partikulære materialer, geler, fast løsning, liposom, filmer (som inkluderer mukoadhesive), ovuler, sprayer og væskeformuleringer.
Væskeformuleringer inkludert suspensjoner, løsninger, siruper og eliksirer. Slike formuleringer kan anvendes som fyllstoffer i myke eller harde kapsler og inkluderer typisk en bærer, f.eks. vann, etanol, polyetylenglykol, propylenglykol, metylcellulose, eller en egnet olje, og et eller flere emulgeringsmidler og/eller suspenderingsmmidler. Væskeformuleringer kan også fremstilles ved rekonstitusjon av et faststoff, f.eks. fra en sachet.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også anvendes i rasktoppløsende, raskt integre-rende doseringsformer slik som de som er beskrevet i "Expert Opinion in Therapeutic
Patents", 11 (6), 981-986 av Lang og Chen (2001).
For tablettdoseirngsformer, avhengig av dose, kan legemidlet utgjøre fra 1 vekt-% til 80 vekt-% av doseringsformen, mer typisk fra 5 vekt-% til 60 vekt-% av doseringsformen. I tillegg til legemidlet, inneholder tabletter generelt et disintegreringsmiddel. Eksempler på disintegreirngsmidler inkluderer natriumstivelseglykolat, natriumkarboksymetylcel-lulose, kalsiumkarboksylcellulose, kroskarmellosenatrium, krospovidon, polyvinylpyrrolidon, metylcellulose, mikrokrystallinsk cellulose, lavere alkylsubstituert hydroksypropylcellulose, stivelse, pregelatinisert stivelse og natriumalginat. Generelt vil disin-tegreringsmidlet innbefatte fra 1 vekt-% til 25 vekt-%, foretrukket fra 5 vekt-% til 20 vekt-% av doseringsformen.
Bindemidler bli generelt anvendt for å bevirke kohesive kvaliteter til en tablettformule-ring. Egnede bindemidler inkluderer mikrokrystallinsk cellulose, gelatin, sukkere, polyetylenglykol, naturlig og syntetisk gummi, polyvinylpyrrolidon, pregelatinisert stivelse, hydroksypropylcellulose og hydroksypropylmetylcellulose. Tabletter kan også inneholde fortynningsmidler, slike som laktose (monohydrat, spraytørket monohydrat, vannfri og lignende), mannitol, xylitol, dekstrose, sukrose, sorbitol, mikrokrystallinsk cellulose, stivelse og dibasisk kalsiumfosfatdihydrat.
Tabletter kan også eventuelt inkludere overflateaktive midler, slike som natriumlaurylsulfat og polysorbat 80, og glidemidler slike som silisiumdioksid og talkum. Hvis tilste de, er de overflateaktive midlene typisk i mengder på fra 0,2 vekt-% til 5 vekt-% av
tabletten, og glidemidlene fra ca. 0,2 vekt-% til 1 vekt-% av tabletten.
Tablettene inneholder også generelt smøremidler slike som magnesiumstearat, kal-siumstearat, sinkstearat, natriumstearylfumarat og blandinger av magnesiumstearat med natriumlaurylsulfat. Smøremidler er generelt tilstede i mengder på fra 0,25 vekt-% til 10 vekt-%, foretrukket fra 0,5 vekt-% til 3 vekt-% av tabletten.
Andre vanlige ingredienser inkluderer antioksidanter, farvestoffer, smaksstoffer, kon-serveringsmidler og smaksmaskerende midler.
Eksempler på tabletter inneholder opp til ca. 80 vekt-% legemiddel, fra ca. 10 vekt-% til ca. 90 vekt-% bindemiddel, fra ca. 0 vekt-% til ca. 85 vekt-% fortynningsmiddel, fra ca. 2 vekt-% til ca. 10 vekt-% disintegreringsmiddel, og fra ca. 0,25 vekt-% til ca. 10 vekt-% smøremiddel. Tablettblandinger kan sammenpresses direkte eller ved valsing for å danne tabletter. Tablettblandinger eller porsjoner av blandinger kan alternativt våt-, tørr- eller smel-tegranuleres, smelteglødes eller ekstruderes før tablettering. Den endelige formuleringen kan inkludere et eller flere lag og kan være belagt eller ikke-belagt; eller innkapslet.
Formulering av tabletter er beskrevet i detalj i "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1", av H. Lieberman og L. Lachman, Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X).
Faste formuleringer for oral administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse. Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, kontrollert, målrettet og programmert frigivelse.
Egnede modifiserte frigivelsesformuleringer er beskrevet i U.S. patent nr. 6,106,864. Detaljer når det gjelder andre egnede frigivelsesteknologier slike som høyenergidisper-sjoner og osmotiske og belagte partikler kan finnes i Verma et al., Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001). Anvendelse av tyggegummi for å oppnå kontrollert frigivelse er beskrevet i WO 00/35298.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også bli administrert direkte til blodstrømmen, til muskel eller til et indre organ. Egnede måter for parenteral administrasjon inkluderer intravenøs, intraarteriell, intraperitoneal, intratekal, intraventrikulær, intrauretral, in-trasternal, intrakranial, intramuskulær og subkutan. Egnede innretninger for parenteral administrasjon inkluderer nål (som inkluderer mmikronål) -injektorer, nålfrie injektorer og infusjonsteknikker.
Parenterale formuleringer er typisk vandige løsninger som kan inneholde eksipienter slik som salter, karbohydrater og buffere (foretrukket til en pH på fra 3 til 9), men, for noen anvendelser, kan de mer egnet formuleres som en steril ikke-vandig løsning eller som en tørket for for anvendelse i forbindelse med en egnet vehikkel slik som sterilt, pyrogenfritt vann.
Fremstilling av parenterale formuleringer under sterile betingelser, f.eks. ved lyofilisasjon, kan lett utføres ved anvendelse av standard farmasøytiske teknikker godt kjente for fagmannen.
Løseligheten av forbindelsene ifølge oppfinnelsen anvendt ved fremstilling av de parenterale løsningene kan økes ved anvendelse av passende formuleringsteknikk, slik som inkorporering av løselighetsfremmende midler.
Formuleringer for parenteral administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse. Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, pulsert, kontrollert, målrettet og programmert frigivelse. Således kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen formuleres som et faststoff, delvis faststoff eller tiksotropisk væske for administrasjon som et implantert depot som gir modifisert frigivelse av den aktive forbindelsen. Eksempler på slike formuleringer inkluderer legemiddelbelagte stenter og PGLA-mikrosfærer.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også administreres topisk til hud eller mukosa, dvs. dermalt eller transdermalt. Typiske formuleringer for dette formålet inkluderer geler, hydrogeler, lotioner, løsninger, kremer, salver, støvepulvere, dressinger, skum, filmer, hudplastere, vaffere, implantater, svamper, fibere, bandasjer og mikroemulsjoner. Liposomer kan også anvendes. Typiske bærere inkluderer alkohol, vann, mineralolje, flytende petrolatum, hvit petrolatum, glyserin, polyetylenglykol og propylenglykol. Pe-netreringsforsterkere kan inkorporeres; se f.eks. J. Pharm. Sei., 88 (10), 955-958 av Fin- nin og Morgan (oktober 1999). Andre måter for topisk administrasjon inkluderer levering ved elektroporasjon, iontoforese, fonoforese, sonoforese og mikronål eller nålfri (f.eks. Poderject™, Bioject™, etc.) -injeksjon.
Formuleringer for topisk administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse. Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, pulsert, kontrollert, målrettet og programmert frigivelse.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også administreres intranasalt eller ved inhallasjon, typisk i form av et tørt pulver (enten alene, som en blanding, f.eks. i en tørrblan-ding med laktose, eller som en blandet komponentpartikkel, f.eks. blandet med fosfoli-pider, slike som fosfatidylkolin) fra en tørrpulverinhallerer eller som en aerosolspray fra en trykksatt beholder, pumpe, spray, atomiserer (foretrukket en atomiserer som anvender elektrohydrodynamikker for å gi en fin tåke), eller en forstøver, med eller uten anvendelse av et passende drivmiddel, slik som 1,1,1,2-tetrafluoretan eller 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropan. For intranasal anvendelse, kan pulveret inkludere et bioadhesivt middel, f.eks. kitosan eller cyklodekstrin.
Den trykksatte beholderen, pumpen, sprayen, atomisereren eller forstøveren inneholder en løsning eller suspensjon av forbindelsen ifølge oppfinnelsen som f.eks. innbefatter etanol, vandig etanol eller et egnet alternativt middel for dispergering, solubilisering eller utvidet frigivelse av det aktive midlet, et drivmiddel som løsemiddel og en eventuell surfaktant, slik som sorbitan trioleat, oljesyre, eller en oligomelkesyre.
Før anvendelse i en tørrpulver eller suspensjonsformulering, blir legemiddelproduktet mikronisert til en passende størrelse for levering ved inhallasjon (typisk mindre enn 5 u). Dette kan oppnås ved en hvilken som helst passende pulveringsfremgangsmåte, slik som spiraljetmaling, fluidsengjetmaling, superkritisk fluidprosessering for å danne na-nopartikler, høytrykkshomogenisering eller spraytørking.
Kapsler (f.eks. fremstilt fra gelatin eller HPMC), blendepakker og beholdere for anvendelse i en inhallerer eller insufflator kan formuleres til å inneholde en pulverblanding av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, en passende pulverbase slik som laktose eller stivelse og en ytelsesmodifiserer slik som 1-leucin, mannitol eller magnesiumstearat. Laktosen kan være vannfri eller i form av monohydratet, f.eks. sistnevnte. Andre egnede eksipien ter inkluderer dekstran, glukose, maltose, sorbitol, xylitol, fruktose, sukrose og trehalo-se.
En egnet løsningsformulering for anvendelse i en atomiserer ved anvendelse av elektro-hydrodynamikk for å gi en fin tåke kan inneholde fra 1 ug til 20 mg av forbindelsen
ifølge oppfinnelsen pr. utløsning og utløsningsvolumet kan variere fra 1 ul til 100 ul. En typisk formulering inkluderer en forbindelse ifølge oppfinnelsen, propylenglykol, sterilt vann, etanol og natriumklorid. Alternative løsemidler som kan anvendes istedenfor propylenglykol inkluderer glyserol og polyetylenglykol.
Egnede smaksstoffer, slik som mentol og levomentol, eller søtningsstoffer slik som sak-karin eller sakkarinnatrium, kan tilsettes til disse formuleringene ifølge oppfinnelsen tiltenkt inhallert/intranasal administrasjon.
Formuleringer for inhallert/intranasal administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse f.eks. ved anvendelse av poly(DL-melke-koglykolsyre (PGLA)). Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, pulsert, kontrollert, målrettet og programmert frigivelse.
I tilfelle tørrpulverinhallerere og aerosoler, blir doseringsenheten bestemt ved hjelp av en ventil som leverer en oppmålt mengde. Enheten ifølge oppfinnelsen blir typisk ar-rangert for å administrere en oppmålt dose eller "puff som inneholder en ønsket mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen. Den totale daglige dosen kan administreres i en enkel dose eller mer vanlig som oppdelte doser i løpet av dagen.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen kan administreres rektalt eller vaginalt, f.eks. i form av en stikkpille, pessar eller klyster. Kakaosmør er en tradisjonell stikkpillebase, men forskjellige alternativer kan anvendes hvis hensiktsmessig.
Formuleringer for rektal/vaginal administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse. Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, pulsert, kontrollert, målrettet og programmert frigivelse.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også administreres direkte til øyet eller øret, typisk i form av dråper av en mikronisert suspensjon eller løsning i isotont, pH-justert sterilt saltvann. Andre formuleringer egnet for okulær eller aural administrasjon inklu derer salver, bionedbrytbare (f.eks. absorberbare gelsvamper, kollagen) og ikke-bionedbrytbare (f.eks. silikon) implantater, vaffere, linser og partikulære eller vesikulæ-re systemer, slike som niosomer eller liposomer. En polymer slik som tverrbundet po-lyakrylsyre, polyvinylalkohol, hyaluronsyre, en cellulosepolymer, f.eks. hydroksypropylmetylcellulose, hydroksyetylcellulose, eller metylcellulose, eller en heteropolysakka-ridpolymer, f.eks. gelangummi, kan inkorporeres sammen med et konserveringsmiddel slik som benzalkoniumklorid. Slike formuleringer kan også leveres ved iontoforese.
Formuleringer for okulær/aural administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller modifisert frigivelse. Modifiserte frigivelsesformuleringer inkluderer forsinket, vedvarende, pulsert, kontrollert, målrettet eller programmert frigivelse.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen kan kombineres med løselige makromolekylære bestanddeler, slike som cyklodekstrin og egnede derivater derav eller polyetylenglykolin-neholdende polymerer, for å forbedre deres løselighet, oppløsningshastighet, smaks-maskering, biotilgjengelighet og/eller stabilitet for anvendelse i en hvilken som helst av de tidligere nevnte administrasjonsmåtene.
Legemiddel-cyklodekstrinkomplekser, er generelt funnet f.eks. å være anvendelige for de fleste doseringsformer og administrasjonsruter. Både inklusjons- og ikke-inklusjonskomplekser kan anvendes. Som et alternativ til direkte kompleksering med legemidlet, kan cyklodekstrinet anvendes som et hjelpeadditiv, dvs. som en bærer, fortynningsmiddel eller løselighetsfremmere. Mest vanlig anvendt for disse formålene er a -, B- eller y-cyklodekstriner, hvor eksempler på disse kan finnes i PCT publikasjonsnr. WO 91/11172, WO 94/02518 og WO 98/55148.
Mengden av den aktive forbindelsen som administreres vil avhengige av subjektet som behandles, alvorligheten til forstyrrelsen eller tilstanden, administrasjonshastighet, dis-posisjon av forbindelsen og retningslinjer fra ansvarlig lege. Imidlertid, er en effektiv dosering typisk i området fra ca. 0,001 til ca. 100 mg pr. kg kroppsvekt pr. dag, foretrukket ca. 0,01 til ca. 35 mg/kg/dag, i enkle eller oppdelte doser. For et 70 kg menneske, vil dette utgjøre ca. 0,07 til ca. 7000 mg/dag, foretrukket ca. 0,7 til ca. 2500 mg/dag. I noen tilfeller, kan doseringsnivåer under den lavere grensen i det tidligere nevnte området være mer enn adekvat, mens i andre tilfeller kan ytterligere høyere doser anvendes uten å forårsake noen skadelige bivirkninger, med slike høyere doser typisk oppdelt i flere mindre doser for administrasjon i løpet av dagen.
Hvis det er ønskelig å administrere en kombinasjon av de aktive forbindelsene, f.eks. for formålet behandling av en bestemt sykdom eller tilstand, kan to eller flere farmasøy-tiske sammensetninger, hvor minst en av disse inneholder en forbindelse ifølge oppfinnelsen, hensiktsmessig kombineres i form av et kit egnet for koadministrasjon av sammensetningene. Således inkluderer kittet to eller flere separate farmasøytiske sammensetninger, hvor minst en av disse inneholder en forbindelse ifølge oppfinnelsen, og måter for separat å holde tilbake nevnte sammensetninger, slike som beholdere, oppdelt flaske, eller oppdelt foliepakke. Et eksempel på et slikt kit er den vanlige blemmepak-ken anvendt for pakking av tabletter, kapsler og lignende.
Kittet er særlig egnet for administrering av forskjellige doseringsformer, f.eks. oral og parenteral, for administrasjon av de separate sammensetningene ved forskjellige dose-ringsintervaller, eller for titrering av de separate sammensetningene mot hverandre. For å gjøre bruken enklere, inkluderer kit typiske retningslinjer for administrasjon og kan bli levert med et huskehjelpemiddel.
Eksempler
I følgende eksempler betyr "Et" etyl, "Ac" betyr acetyl, "Me" betyr metyl, "Ms" betyr metansulfonyl (CH3S02), "iPr" betyr isopropyl, "HATU" betyr 2-(7-aza-lH-benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluroniumheksafluorfosfat, "Ph"betyr fenyl, "Boe" betyr tert-butoksykarbonyl, "EtOAc" betyr etylacetat, "HOAc" betyr eddiksyre, "NEt3" eller "Et3N" betyr trietylamin, "THF" betyr tetrahydrofuran, "DIC" betyr diisopropyl-karbodiimid, "HOBt" betyr hydroksybenzotriazol, "MeOH" betyr metanol, "i-PrOAc" betyr isopropylacetat, "KOAc" betyr kaliumacetat, "DMSO" betyr dimetylsulfoksid, "AcCl" betyr acetylklorid, "CDC13" betyr deuterert kloroform, "MTBE" beetyr metyl t-butyleter, "DMF" betyr dimetylformamid, "Ac20" betyr eddiksyreanhydrid, "Me3SOI" betyr trimetylsulfoksoniumjodid, "DMAP" betyr 4-dimetylaminopyridin, "dppf' betyr difenylfosifnoferrocen, "DME" betyr etylenglykoldimetyleter, "HOBT" betyr 1-hydroksybenzotriazol, "EDC" betyr l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid.
De følgende eksemplene er gitt for å illustrere oppfinnelsen. Det er imidlertid å forstå at oppfinnelsen ikke er begrenset til de spesifikke betingelsene eller detaljene beskrevet i disse eksemplene.
Reagenser kan syntetiseres som vist heri eller er tilgjengelige fra kommersielle kilder (f.eks. Aldrich, Milwaukee, WI; Acros, Morris Plains, NJ; Biosynth. International, Na- perville, IL; Frontier Scientific, Logan, UT; TCI America, Portland, OR; Combi-Blocks, San Diego, CA; Matrix Scientific, Columbia, SC; Acros, Morris Plains, NJ; Alfa Aesar, Ward Hill, MA; Apollo Scientific, UK; etc.) eller kan syntetiseres ved fremgangsmåter kjente i litteraturen.
Syntese av de mange spesifikke reagensene er vist i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610, med tittelen "Aminoheteroaryl Compounds as Portein Kinase Inhibitors", inngitt 26. februar 2004, og den korresponderende internasjonale søknaden PCT/US2004/005495 med samme tittel, inngitt 26. februar 2004. Andre reagenser kan syntetiseres ved tilpassing av fremgangsmåtene deri, og fagmannen kan lett tilpasse disse fremgangsmåtene for å fremstille ønskede forbindelser. Videre, inneholder disse referansene generelle fremgangsmåter og spesifikke eksempler på fremstilling av et stort antall heteroarylaminoforbindelser og fagmannen kan lett tilpasse slike fremgangsmåter og eksempler for fremstilling av forbindelser ifølge oppfinnelsen.
Når en generell eksemplifisert syntesefremgangsmåte er referert til, kan fagmannen lett bestemme passende reagenser, hvis ikke indikert, ved ekstrapolering fra de generelle eller eksempelfremgangsmåtene. Noen av de generelle fremgangsmåtene er gitt som eksempler for fremstilling av spesifikke forbindelser. Fagmannen kan lett tilpasse slike fremgangsmåter til syntese av andre forbindelser. Det er å forstå at R-grupper vist i de generelle fremgangsmåtene er ment å være generiske og ikke-begrensende, og korresponderer ikke til definisjoner av R-grupper ellers i dette dokumentet. Hver slik R-gruppe representerer en eller multiple kjemiske bestanddeler som kan være like eller forskjellige fra andre kjemiske bestanddeler også representert ved samme R-symbol. Fagmannen kan lett se området av R-grupper egnet i eksempelsyntesene. Videre, er re-presentasjon av en usubstituert posisjon i strukturen vist eller referert til i de generelle fremgangsmåtene for enkelhets skyld og utelukker ikke substitusjon som beskrevet ellers heri. For spesifikke grupper som kan være tilstede, enten som R-grupper i de generelle fremgangsmåtene eller som eventuelle substitusjoner ikke vist, refererer disse til beskrivelsen i resten av dokumentet, som inkluderer kravene, sammendrag og den detal-jerte beskrivelsen.
Noen av de generelle fremgangsmåtene er vist med referanse til syntese av forbindelser hvori l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksybestanddelen er den rene (R)-isomeren, og noen er vist med referanse til forbindelser hvori nevnte bestanddel er en rasemisk blanding. Det er å forstå at fremgangsmåtene heri kan anvendes for fremstilling av rasemiske for bindelser eller enantiomerisk rene (R)-isomerer ved valg av det korresponderende rasemiske eller enantiomerisk rene utgangsmaterialet.
Fremgangsmåtene vist heri kan anvendes ved fremstilling av et bredt spekter av enantiomerisk rene forbindelser ved seleksjon av passende enantiomerisk rent utgangsmateriale. I tillegg til forbindelsene vist heri, tilveiebringer oppfinnelsen også enantiomerisk rene forbindelser som korresponderer til 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylaminforbindelsene vist i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495); i U.S. patentsøknad serienummer som skal bli overdratt, docketnr. PC 32546, inngitt 26. august 2004 og med tittelen "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors"; og i U.S. patentsøknad serienummer, som skal overdras, docketnr. PC 32548, inngitt 26. august 2004, og med tittelen "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors".
Valg av utgangsmaterialer
5- brom- 3- r 1 -( 2, 6- dMor- 3- fluor- fenvO- etoksvl- pvridin- 2- ylamin ( rasemaf):
1. 2,6-diklor-3-fluoracetofenon (15 g, 0,072 mol) ble rørt i THF (150 ml, 0,5M) ved 0°C ved anvendelse av et isbad i 10 minutter. Litiumaluminiumhydrid (2,75 g, 0,072 mol) ble sakte tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt på isbad og vann (3 ml) ble tilsatt dråpevis fulgt av tilsetning av 15% NaOH (3 ml) langsomt. Blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 30 minutter. 15% NaOH (9 ml), MgS04ble tilsatt og blandingen ble filtrert for å fjerne faste stoffer. De faste stoffene ble vasket med THF (50 ml) og filtratet ble konsentrert som ga l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etanol (14,8 g, 95% utbytte) som en gul olje.<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 1,45 (d, 3H), 5,42 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,42 (m, 1H). 2. Til en rørt løsning av trifenylfosfin (8,2 g, 0,03 mol) og DEAD (13,65 ml av en 40% løsning i toluen) i THF (200 ml) ble det ved 0°C tilsatt en løsning av l-(2,6-diklor-3- fluor-fenyl)-etanol (4,55 g, 0,021 mol) og 3-hydroksy-nitropyridin (3,35 g, 0,023 mol) i THF (200 ml). Den resulterende lyse oransje løsningen ble rørt under en nitrogenatmosfære ved omgivelsestemperatur i 4 timer, hvorved utgangsmaterialene hadde blitt konsumert. Løsemidlet ble fjernet og det urene materialet ble tilsatt til silikagel, og eluert med etylacetat-heksan (20:80) som ga 3-(2,6-diklor-3-fluor-benzyloksy)-2-nitro-pyridin (6,21 g, 0,021 mol, 98%) som et rosa faststoff.<!>H NMR (CDC13,300 MHz) 5 1.8-1.85 (d, 3H), 6.0-6.15 (q, 1H), 7.0-7.1 (t, 1H), 7.2-7.21 (d, 1H), 7.25-7.5 (m, 2H), 8,0-8.05 (d, 1H). 3. Til en rørt blanding av AcOH (650 ml) og EtOH (500 ml) ble det suspendert 3-(2,6-diklor-3-lfuor-benzyloksy)-2-nitro-pyridin (9,43 g, 0,028 mol) og jernspon (15,7 g, 0,28 mol). Reaksjonsblandingen ble sakte varmet opp til refluks og ble rørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og deretter ble dietyleter (500 ml) og vann (500 ml) tilsatt. Løsningen ble forsiktig nøytralisert ved tilsetning av natriumkarbonat. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med mettet NaHC03(2x100 ml), H20 (2x100 ml) og saltvann (1x100 ml) og deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum som ga 3-(2,6-diklor-3-fluor-benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (9,04 g, 0,027 mol, 99%) som et lyst rosa faststoff.<]>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 1.8-1.85 (d, 3H), 4.9-5.2 (brs, 2H), 6.7-6.84 (q, 1H), 7.0-7.1 (m, 1H), 7.2-7.3 (m, 1H), 7.6-7.7 (m, 1H). 4. En rørt løsning av 3-(2,6-diklor-3-fluor-benzyloksy)-pyirdin-2-ylamin (9,07 g, 0,03 mol) i acetonitril ble avkjølt til 0°C ved anvendelse av isbad. Til denne løsningen ble det tilsatt N-bromsuksinimid (NBS) (5,33 g, 0,03 mol) porsjonsvis. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert til tørrhet under vakuum. Den resulterende mørke oljen ble løst i EtOAc (500 ml), og renset med silikagelkromatografi. Løsemidlene ble deretter fjernet i vakuum som ga 5-brom-3-(2,6-diklor-3-lfuor-benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (5,8 g, 0,015 mol, 51%) som et hvitt krystallinsk faststoff.<!>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 1.85-1.95 (d, 3H), 4.7-5.0 (brs, 2H), 5.9-6.01 (q, 1H), 6.8-6.95 (d, 1H), 7.01-7.2 (t, 1H), 7.4-7.45 (m, 1H), 7.8-7.85 (d, 1H). 5- jod- 3- r 1 -( 2, 6- diklor- 3- fluor- fenylVetoksvl- pvridin- 2- vlamin ( rasemaf):
Til en løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyirdin-2-ylamin (10,0 g, 33,2 mmol) i acetonitril 600 ml) og eddiksyre (120 ml) ble det tilsatt N-jodsuksinimid (11,2 g, 49,8 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og reaksjonen ble stoppet med Na2S2C«5-Løsning. Etter fordamping, ble resten fordelt mellom etylacetat og vann. Det organiske sjiktet ble vasket med 2N NaOH-løsning, saltvann og tørket over Na2S04. Det urene produktet ble renset på en silikagelkolonne som ga 5-jod-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (7,1 g, 50% utbytte). MS m/ z 427 [M+l].
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.74.7=6.57 Hz, 3 H) 5.91 - 5.99 (m, 3 H) 6.82 (d, 7=1.26 Hz, 1 H) 7.46 (t, 7=8.72 Hz, 1 H) 7.56 (dd, 7=8.97,4.93 Hz, 1 H) 7.62 (d, 7=1.52 Hz, 1 H).
5- brom- 3- ri-( 2, 6- diklor- 3- fluor- fenvn- etoksvl- pvrazin- 2- vlamin ( rasemaf):
1. 2,6-diklor-3-fluoracetofenon (15 g, 0,072 mol) ble rørt i THF (150 ml, 0,5M) ved 0°C ved anvendelse av et isbad i 10 minutter. Litiumaluminiumriydrid (fra Aldrich, 2,75 g, 0,072 mol) ble sakte tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt på isbad og vann (3 ml) ble tilsatt dråpevis fulgt av tilsetning av 15% NaOH (3 ml) langsomt. Blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 30 minutter. 15% NaOH (9 ml) og MgS04ble tilsatt og blandingen ble filtrert for å fjerne faste stoffer. De faste stoffene ble vasket med THF (50 ml) og filtratet ble konsentrert som ga l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etanol (14,8 g, 95% utbytte) som en gul olje.<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 1,45 (d, 3H), 5,42 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,42 (m, 1H). 2. 5-brom-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin ble fremstilt ved å følge fremgangsmåte 2 nedenfor, fra l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etanol og 3,5-dibrom-pyrazin-2-ylamin.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 1.74 (d, 3H), 6.40 (m, 1H), 6.52 (br s, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.56 (s, 1H).
MS m/ z 382 (M+l).
Enantiomerisk rene utgangsmaterialer
PLE er et enzym produsert av Roche og solgt gjennom Biocatalytics Inc. som et urent esterasepreparat fra griselever, ofte kjent som PLE-AS (levert fra Biocatalytics som ICR-123, solgt som en ammoniumsulfatsuspensjon). Enzymet er klassifisert i CAS-registeret som en "karboksylesterhydrolase, CAS nr. 9016-18-6". Det korresponderende enzymklassifiseringsnummeret er EC 3.1.1.1. Enzymet er kjent for å ha en bred subst-ratspesifisitet ovenfor hydrolyse av et bredt spekter av estere. Lipaseaktiviteten bestemmes ved anvendelse av en fremgangsmåte basert på hydrolyse av etylbutyrat i en pH-titrator. 1 LU (lipaseenhet) er en mengde av enzym som frigir 1 umol titrerbar smørsyre pr. minutt ved 22°C, pH 8,2. Fremstillingen rapportert heri (PLE-AS, som en suspensjon), blir vanligvis levert som en opak brungrønn væske med en deklarert aktivitet på >45 LU/mg (proteininnhold rundt 40 mg/ml).
( 1 SV 1 -( 2, 6- diklor- 3- fluorfenyl) etanol
(lS)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etanol, vist som forbindelse (S-l) i skjemaene nedenfor, ble fremstilt ved en kombinasjon av enzymatisk hydrolyse av rasemisk l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etylacetat, forestring og kjemisk hydrolyse med inversjon ifølge skjema B. Rasemisk l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etylacetat (forbindelse A2) ble fremstilt i henhold til skjema A.
1 -( 2, 6- diklor- 3- lfuorfenvl") etanol (Al): Natriumborhydrid (90 mg, 2,4 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2',6'-diklor-3'-fluor-acetofenon (Aldrich, katalog nr. 52,294-5) (207 mg, 1 mmol) i 2 ml vannfri CH3OH. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og deretter fordampet som ga en farveløs oljerest. Resten ble renset ved flashkromatografi (eluert med 0 —» 10% EtOAc i heksan) som ga forbindelse Al som en farveløs olje (180 mg; 0,88 mmol; 86,5% utbytte). MS (APCI) (M-H)" 208;<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1,64 (d, J=6,82 Hz, 3H), 3,02 (d, J=9,85 Hz, 1H), 6,97-7,07 (m, 1H), 7,19-7,33 (m, 1H). l-( 2, 6- diklor- 3- fluorfenvl) etylacetat (A2): Eddiksyreanhydrid (1,42 ml, 15 mmol) og pyridin (1,7 ml, 21 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av forbindelse Al (2,2 g, 10,5 mmol) i 20 ml CH2CI2. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer og ble deretter fordampet som ga en gulaktig oljerest. Resten ble renset mved flashkromatografi (eluert med 7 - > 9% EtOAc i heksan) som ga forbindelse A2 som en farveløs olje (2,26 g, 9,0 mmol, 85,6% utbytte).<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 8 ppm 1,88 (d, J=6,82 Hz, 3H), 2,31 (s, 3H), 6,62 (q, J=6,82 Hz, 1H), 7,25 (t, J=8,46 Hz, 1H), 7,49 (dd, J=8,84, 5,05 Hz, 1H).
Til en 50 ml mantlet kolbe utstyrt med en pH-elektrode, en overrører og en basetilset-ningsledning (IM NaOH) ble det tilsatt 1,2 ml 100 mM kaliumfosfatbuffer, pH 7,0 og 0,13 ml PLE AS-suspensjon. Deretter ble forbindelse A2 (0,13 g, 0,5 mmol, 1,00 ekv.) tilsatt dråpevis og den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur i 20 timer, mens pH til reaksjonsblandingen ble holdt konstant ved 7,0 ved anvendelse av IM NaOH. Både omdanningen og ee til reaksjonsblandingen ble overvåket ved RP-HPLC, og reaksjonen stoppet etter 50% av utgangsmaterialene var konsumert (ca. 17 timer under disse betingelsene). Blandingen ble deretter ekstrahert 3 ganger med 10 ml etylacetat for å utvinne både ester og alkohol som en blanding av R-l og S-2.
Metansulfonylklorid (0,06 ml, 0,6 mmol) ble tilsatt til en løsning av en blanding av R-l og S-2 (0,48 mmol) i 4 ml pyridin under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer og deretter fordampet som ga en olje. Vann (20 ml) ble tilsatt til blandingen og deretter ble EtOAc (20 ml x 2) tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. De organiske sjiktene ble kombinert, tørket, filtrert og fordampet som ga en blanding av R-3 og S-2. Denne blandingen ble anvendt i neste trinn i reaksjonen uten ytterligere rensing.
<!>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.66 (d, 7=7.1 Hz, 3 H) 1.84 (d, 7=7.1 Hz, 3 H) 2.09 (s, 3 H) 2.92 (s, 3 H) 6.39 (q, 7=7.0 Hz, 1 H) 6.46 (q, 7=6.8 Hz, 1 H) 6.98 - 7.07 (m, 1 H) 7.07 - 7.17 (m, 1 H) 7.23 - 7.30 (m, 1 H) 7.34 (dd, 7=8.8, 4.80 Hz, 1 H).
Kaliumacetat (0,027 g, 0,26 mmol) ble tilsatt til en blanding av R-3 og S-2 (0,48 mmol) i 4 ml DMF under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 100°C i 12 timer. Vann (20 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen og EtOAc (20 ml x 2) ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. Det kombinerte organiske sjiktet ble tørket, filtrert og fordampet som ga en olje av S-2 (72 mg, 61% utbytte i to trinn).
Kiralitet ee: 97,6%.
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1,66 (7=7.1 Hz, 3 H) 2.09 (s, 3 H) 6.39 (q, 7=6.8 Hz, 1 H) 7.02 (t, 7=8.5 Hz, 1 H) 7.22 - 7.30 (m, 1 H).
Natriummetoksid (19 mmol; 0,5M i metanol) ble sakte tilsatt til forbindelse S-2 (4,64 g, 18,8 mmol) under en nitrogenatmosfære ved 0°C. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Løsemidlet ble fordampet og H2O (100 ml) ble tilsatt. Den avkjølte reaksjonsblandingen ble nøytralisert med natriumacetat-eddiksyrebufferløsning til pH 7. Etylacetat (100 ml x 2) ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. De kombinerte organiske sjiktene ble tørket over Na2S04, filtrert og fordampet som ga et hvitt fast stoff (4,36 g, 94,9% utbytte).
SFC-MS: 97% ee.
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1,65 (d, 7=6.8 Hz, 3 H) 5.58 (q, 7=6.9 Hz, 1 H) 6.96 - 7.10 (m, 1 H) 7.22 - 7.36 (m, 1 H).
3-r(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksyl-2-nitropyridin
3-hydroksy-2-nitropyridin (175 mg, 1,21 mmol) og trifenylfosfin (440 mg, 1,65 mmol) ble sekvensielt tilsatt til en rørt løsning av (lS)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etanol (229,8 mg, 1,1 mmol) i THF (10 ml) under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble holdt ved romtemperatur i 1 time og deretter ble diisopropyl azo-dikarboksylat (0,34 ml, 1,65 mmol) tilsatt ved 0°C. Blandingen ble rørt i ytterligere 12 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet under vakuum som ga en olje. Resten ble renset med flashkromatografi (eluert med 20 - > 25% EtOAc i heksan) som ga tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff (321,5 mg; 0,97 mmol; 88,3% utbytte).<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 8 ppm 1.85 (d, 7=6.6 Hz, 3 H) 6.10 (q, 7=6.6 Hz, 1 H) 7.04 - 7.13 (m, 1 H) 7.21 (dd, 7=8.5,1.14 Hz, 1 H) 7.30 (dd, 7=9.0,4.9 Hz, 1 H) 7.37 (dd, 7=8.6,4.6 Hz, 1 H) 8.04 (dd, 7=4.6,1.3 Hz, 1 H). 3- r( lR>- l-( 2, 6- diklor- 3- fluorfenvl) etoksvlpvridin- 2- amin
Jern (365 mg) ble tilsatt til en rørt løsing av 3-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-2-nitropyridin (321 mg, 0,97 mmol) i en blanding av EtOH (2 ml) og 2M HC1 (0,2 ml) ved 0°C. Den resulterende løsningen ble varmet til 85°C i 2 timer. Celitt (0,5 g) ble tilsatt til den avkjølte reaksjonsblandingen. Denne blandingen ble filtrert over en celittseng og fordampet som ga tittelforbindelsen som en mørk olje.
MS (EPCI)(M+H)+ 301.
5- brom- 3- ri( R)-( 2, 6- diklor- 3- fluor- fenyl)- etoksvl- pvridin- 2- vlamin
Den enantiomerisk rene R-isomeren ble fremstilt som beskrevet ovenfor for rasematet, men ved anvendelse av de enantiomerisk rene utgangsmaterialene beskrevet ovenfor.<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 1.74 (d, 3H), 6.40 (m, 1H), 6.52 (br s, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.56 (s, 1H);
MS m/ z 382 (M+l).
5 - i od- 3 - KR) 1 -( 2, 6- diklor- 3 - fluor- fenvDetoks vi - pvridin- 2 - ylamin
Perjodsyre (60 mg, 0,24 mmol), jod (130 mg, 0,5 mmol) og svovelsyre (0,03 ml) ble tilsatt sekvensielt til en rørt løsning av 3-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-2-amin (0,97 mmol) i en blanding av eddiksyre (3 ml) og H2O (0,5 ml). Den resulterende løsningen ble varmet opp til 80°C i 5 timer. Den avkjølte reaksjonsblandingen ble stoppet med Na2SC«3 (80 mg) og gjort basisk med mettet Na2C03(2x100 ml) til pH 7. CH2C12(2x50 ml) ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. De kombinerte organiske sjiktene ble tørket over Na2S04og deretter filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble renset med flashkromatografi (eluert med 35 ->■ 40% EtOAc i heksan) som ga tittelforbindelsen som en gul olje (254 mg, 0,6 mmol; 61,6% utbytte).
MS (APCI) (M+H)<+>426.
<!>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.81 (d, 7=6.8 Hz, 3 H) 4.86 (s, 2 H) 5.98 (q, 7=6.57 Hz, 1 H) 6.96 (d, 7=1.5 Hz, 1 H) 7.08 (dd, 7=9.0, 8.0 Hz, 1 H) 7.31 (dd, 7=8.8, 4.8 Hz, 1 H) 7.78 (d, 7=1.8 Hz, 1 H).
5 - brom- 3 -\( R )- 1 -( 2, 6- diklor- 3 - fluor- fenvl)- etoksvl - pvrazin- 2- ylamin
Tittelforbindelsen ble fremstilt i henhold til fremgangsmåte 2 fra (lS)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etanol.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.53(s, 1H), 7.48(m, 1H), 7.39(t, 1H), 6.48 (s, 2H), 6.41(q, 1H), 1.74(d, 3H); LCMS: 381 [M+l];
c-Met Ki: 0.796 uM.
Generelt skjema I for syntese av 5-aryl-3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (6):
Generell fremgangsmåte 1 for syntese av 5-brom-3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (5): 1. Fremstilling av 3-(substituert benzyloksy)-2-nitro-pyridin (3): Til en rørt løsning av CS2CO3(1,0 molar ekvialent) i DMF (0,2M) ble det under N2-atmosfære som inneholder 3-hydroksy-4-nitro-pyridin (Aldrich, 1,0 molar ekvivalent) tilsatt substituert benzylbromid (1,0 molar ekvivalent). Blandingen ble rørt i 6 timer ved omgivelsestemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc og fordelt med H2O. Vannsjiktet ble ekstrahert med EtOAc to ganger. De organiske sjiktene ble deretter kombinert, vasket med H2O og saltvann, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum som ga 3-(substituert benzyloksy)-2-nitro-pyridin (3) som et fast stoff. 2. Fremstilling av 3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (4): Til en rørt blanding av AcOH og EtOH (1,3:1) ble det suspendert 3-(substituert benzyloksy)-2-nitro-pyridin (1,0 molar ekvivalent, IM) og jernspon (1,0 molar ekvivalent). Reaksjonsblandingen ble varmet opp langsomt til refluks og rørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og deretter filtrert gjennom en celittpute. Det resulterende filtratet ble nøytralisert med konsentrert NH4OH og deretter ekstrahert med EtOAc tre ganger. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med mettet NaHC03, H2O og saltvann, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum som ga 3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (4) som et fast stoff. 3. Fremstilling av 5 -brom-3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (5): En rørt løs-ning av 3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin (4) (1,0 molar ekvivalent) i acetonitril ble avkjølt til 0°C på isbad. Til denne løsningen ble det tilsatt en bromsuksinimid (Aldrich, 1,0 molar ekvivalent) porsjonsvis. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble konsentrert til tørrhet under vakuum. Den resulterende mørke oljen ble løst ved EtOAc og fordelt med H2O. Det organiske sjiktet ble deretter vasket med mettet NaHC03to ganger og saltvann en gang. Aktivt kull ble tilsatt til det organiske sjiktet og blandingen ble varmet opp til refluks. Løsningen ble deretter avkjølt til romtemperatur og filtrert gjennom en celittpute. Den organiske fraksjonen ble deretter konsentrert til tørrhet under vakuum til en tredjedel av det opprinnelige volumet. De faste stoffene ble deretter filtrert fra som ga 5-brom-3-(substituert benzy-loksy)-pyridin-2-ylamin (5) som et fast stoff. Generelt skjema II for syntese av 5-aryl-3-(substituert benzyloksy)-pyrazin-2-ylamin
Generell fremgangsmåte 2 for syntese av 5-brom-3-(substituert benzyloksy)-pyrazin-2-ylamin.
Til en isavkjølt løsning av substituert benzylalkohol (1,0 molar ekvivalent) og vannfri
tetrahydrofuran (0,14M) ble det tilsatt natriumhydrid (1,0 molar ekvivalent) sakte under nitrogenatmosfære. Etter røring i 30 minutter, ble 3,5-dibrompyrazin-2-ylamin (1,0 molar ekvivalent) i tetrahydrofuran (0,56M) tilsatt via tilsetningstrakt med en rask dråpevis tilsetning. Idet tilsetningen var fullstendig ble isbadet fjernet og reaksjonsblandingen
refluksert under nitrogen og overvåket med omvendtfase HPLC. Etter 18 timer viste
HPLC at hoveddelen av utgangsmaterialet 3,5-dibrompyrazin-2-ylamin hadde blitt konsumert og reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert, fortynnet med etylacetat, og vasket med saltvann. Det organiske sjiktet ble tørket over vannfri magnesiumsulfat og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble renset ved anvendelse av en silikageleluering med 1:1 etylacetat/diklormetan som ga 5-brom-3-(substituert benzyloksy)pyridin-2-ylamin som et hvitt faststoff i 60-90% utbytte.
Generell fremgangsmåte 3 for syntese av 5-aryl-3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin og 5-aryl-3-(substituert benzyloksy)-pyrazin-2-ylamin.
En blanding av 5-brom-3-(substituert benzyloksy)-pyridin-2-ylamin eller 5-brom-3-(substituert benzyloksy)-pyrazin-2-ylamin (1 molar ekvivalent), arylborsyre eller ester (1,2 molar ekvivalent), bis(trifenylfosfin)palladium II klorid (0,03 molar ekvivalent) og natriumkarbonat (3,0 molar ekvivalent) i etylenglykol dimetyleter og vann (10:0,5, 0,03M) ble avgasset og tilsatt med nitrogen tre ganger og deretter ble blandingen varmet opp til refluks under nitrogen over natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til omgivelsestemperatur og fortynnet med etylacetat. Blandingen ble vasket med vann, saltvann, tørket over Na2SC*4, og renset på en silikagelkolonne som ga 5-ary 1-3-(substituert ben-zyloksy)pyridin-2-ylamin, eller 5-aryl-3-(substituert benzyloksy)-pyrazin-2-ylamin.
Generell fremgangsmåte 4 for amideringsreaksjon av 6-amino-5-(substituert benzylok-sy)-pyridin-2-yll-benzosyre:
Til en løsning av 6-amino-5 -(substituert benzyloksy)-pyridin-3-yl]-benzosyre (1 molar ekvivalent), 1-hydroksybenzotriazolhydrat (HOBT, 1,2 molar ekvivalent), og l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydroklorid (EDC, 1,2 molar ekvivalent) i DMF (0,2M) ble det tilsatt amin (1,2 molar ekvivalent). Reaksjonsløsningen ble rørt ved romtemperatur over natten og deretter fortynnet med EtOAc og fordelt med H2O. Det organiske sjiktet ble separert og vannsjiktet ekstrahert med EtOAc. De organiske sjiktene ble kombinert, vasket med NaHC03, og konsentrert til tørrhet under vakuum. Materialet ble renset ved anvendelse av kolonnekromatografi (silikagel, 99:1 til 95:5 CH2Cl2/MeOH). Fraksjonene som inneholder produkt ble konsentrert under vakuum som ga amidproduktet.
Generell fremgangsmåte 5 for fremstilling av 3-(substituert benzyloksy)-5-(3-dialkylaminomety 1-1 H-indol-5-y l)-pyridin-2-ylamin:
Til en løsning av benzotriazol (1,0 molar ekvivalent) i diklormetan (0,2M) ble det tilsatt amin (1,0 molar ekvivalent). Reaksjonsblandingen ble rørt i 5 minutter ved romtemperatur hvoretter formaldehyd (37 vekt-%, 1,0 molar ekvivalent) ble tilsatt og reaksjonen satt lokk på og rørt ved romtemperatur i 3 timer. Idet TLC (10% etylacetatdiklormetan) viste konsumpsjon av utgangsbenzotriazolet ble reaksjonsblandingen tørket med vannfri magnesiumsulfat (10 g), filtrert og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble renset med silikagelkolonne eluert med 1:1 etylacetatdiklormetan som ga ønsket produkt som et hvitt fast stoff.
Til en løsning av aminometylbenzotriazolintermediatet (1,0 molar ekvivalent) i diklormetan (0,43M) ble det tilsatt aluminiumklorid (2,0M ekvivalent) fulgt av 3-(2,6-diklor-benzyloksy)-5-(lH-indol-5-yl)-pyridin-2-ylamin (1,1 molar ekvivalent). Reaksjonsblandingen ble satt lokk på og varmet opp med røring til 40°C i 3-4 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fjernet fra varmen og avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med natriumhydroksid (0,2M) og kloroform, satt lokk på en gang til og rørt kraftig ved romtemperatur for å løse opp resten i kolben. Kloroformen ble ekstrahert bort fra vannfasen, tørket over vannfri natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble renset med silikagelkolonne, først eluert med 1:1 etylacetatdiklormetan, for å eluere de minst polare urenhetene og deretter eluere produktet med 90:9:1, kloroform:metanol:ammoniumhydroksid. (Utbytte 10-67%).
Generell fremgangsmåte 6 for syntese av 3-(substituert benzyloksy)-5-fenyl-pyridin-2-ylamin ved anvendelse av 3-(3-metksy-benzyloksy)-5-fenyl-pyridin-2-ylamin:
Til en løsning av 3-benzyloksy-5-fenyl-pyridin-2-ylamin (eksempel 1-87, 3,27 g, 11,8 mmol) i metanol (30 ml) ble det tilsatt Pd(OH)2(2,5 g, 2,37 mmol). Blandingen ble avgasset og tilsatt hydrogen tre ganger og deretter rørt under hydrogenballong i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en celittpute, vasket med metanol og kondensert. Etter høyvakuumtørking, ble 2-amino-5-fenyl-pyridin-3-ol oppnådd (2,04 g, 93% utytte).
MS m/z 187 [M+l].
Til en løsning av 2-amino-5-fenyl-pyridin-3-ol (2,04 g, 10,95 mmol) i THF (vannfri, 30 ml) ble det tilsatt NaH (1,31 g, 32,85 mmol) sakte. Blandingen ble rørt under nitrogen i 20 minutter og deretter ble tritylklorid (3,66 g, 13,14 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten under nitrogen. Løsemidlet ble fordampet og resten ble løst i diklormetan, vasket med vann og tørket over Na2SC*4. Etter filtrering og kondensering ble det urene produktet renset på en silikagelkolonne eluert med EtOAcheksan (1:10) som ga 5-fenyl-2-(trityl-amino)-pyridin-3-ol (1,09 g, 23% utbytte). MS m/z 427 [M+l].
Til en løsning av 5-fenyl-2-(trityl-amino)-pyirdin-3-ol (100 mg, 0,24 mmol) i THF (3 ml) ble det tilsatt CS2CO3(79 mg, 0,24 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 20 minutter og deretter ble 3-metoksybenzylbromid (0,037 ml, 0,26 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, fortynnet med diklormetan (5 ml), og filtrert for å fjerne saltene. Løsemidlene ble fordampet og resten løst i 10% difluoreddiksyre i diklormetan (2 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 2 timer og fordampet. Resten ble løst i diklormetan, vasket med mettet NaHCC«3, og tørket over Na2S04. Etter filtrering og konsentrering ble det urene produktet renset på en silikagel kolonne eluert med metanol:diklormetan (fra 3% til 15% gradient) som ga 3-(3-metoksy-benzyloksy)-5-fenyl-pyridin-2-ylamin som et hvitt fast stoff (43,5 mg, 60% utbytte).
Generell fremgangsmåte 7 for syntese av 3-(substituert benzyloksy)-5-aryl-pyridin-2-ylamin ved anvendelse av 5-[4-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-fenyl]-3-(3-nitro-benzyloksy)-py ridin-2-y lamin:
Til en løsning av 2-amino-5-[4-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-fenyl]-pyridin-3-ol (fremstilt i henhold til fremgangsmåten for 2-amino-5-fenyl-pyridin-2-ol i eksempel 1-88 i U.S. patentsøknad serie nr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495) (45,5 mg, 0,14 mmol) i DMF (3 ml) ble det ved 0°C tilsatt NaH (60% i olje) (5,6 mg, 0,14 mmol) og blandingen ble rørt ved 0°C i 20 minutter. Deretter ble l-brommetyl-3-nitro-benzen tilsatt og blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time og ved romtemperatur i 2 timer. Kald IN vandig HC1 (0,1 ml) og løsemidlet fjernet under redusert trykk. Resten ble renset med silikagelkromatografi (CH2Cl2:MeOH:NH40H = 100:3:0,3) som ga 5-[4-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-fenyl]-3-(3-nitro-benzyloksy)-pyridin-2-ylamin som gult fast stoff (44 mg, 68%).
Generell fremgangsmåte 8 for syntese av {4-[6-amino-5-(substituert benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl} -[(2R)-2-pyrrolidin-1 -ylmetyl-pyrrolidin-1 -yl]-metanon ved anvendelse av {4-[6-amino-5-(4-fluor-2-trifluormetyl-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl} -
[(2R)-2-pyrrolidin-1 -ylmetyl-pyrrolidin-1 -yl]-metanon:
1. 6-amino-5-benzyloksy-nikotinsyre ble fremstilt i henhold til fremgangsmåte 3 fra 3-benzyloksy-5-brom-pyridin-2-ylamin og 4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l ,3,2]dioksaborolan-2-yl)-benzosyre.
MS m/z 321 (M+l).
2. [4-(6-amino-5-benzyloksypyridin-3-yl)-fenyl]-[(2R)-2-pyrrolidin-1 -ylmetyl-pyrrolidin-1-yl]-metanon ble fremstilt ved å følge fremgangsmåte 4 ved anvendelse av 6-amino-5-benzyloksynikotinsyre og (2R)-pyrrolidin-l-ylamin-pyrrolidin (fremstilt i eksempel 1-39 i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)).
MS m/z 457 (M+l).
3. Til en løsning av [4-(6-amino-5-benzyloksy-pyridin-3-yl)-fenyl]-[(2R)-pyrrolidin-l-ylmetyl-pyrrolidin-1 -yl]-metanon (2,28 g, 5,00 mmol) i metanol (25 ml) ble det tilsatt 10% Pd/C (100 mg). Blandingen ble avgasset og tilsatt hydrogen tre ganger og deretter rørt under hydrogenballong over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en celittpute, vasket med metanol, og kondensert. Etter høyvakuumtørking, ble [4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-fenyl]-[(2R)-2-pyrrolidin-l-ylmetyl-pyrrolidin-l-yl)-metanon oppnådd (1,74 g, 95% utbytte).
<!>H NMR(400 MHz, DMSO-d6) 5 7.79 (s, 1H), 7.54 (m, 3H), 7.46 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.22 (m, 1H), 3.45 (m, 2H), 2.66 (m, 1H), 2.52 (m, 4H), 1.96 (m, 2H), 1.84 (m, 3H), 1.64 (m, 4H);
MS m/ z 367 (M+l).
4. Til en omrørt løsning av [4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-fenyl]-[(2R)-2-pyrrolidin-1-ylmetyl-pyrrolidin-1-yl]-metanon (100 mg, 0,27 mmol) i vannfri DMF (15 ml) ble det under en N2-atmosfære ved 0°C tilsatt natriumhydrid (60% dispersjon i mineralolje, 11 mg, 0,49 mmol). Blandingen ble rørt ved 0°C i 30 minutter. 1-(brommetyl)-4-fluor-2-(trifluormetyl)benzen (0,046 ml, 0,27 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med EtOAc, og fordelt med H20. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med EtOAc (2x25 ml). De organiske sjiktene ble kombinert, vasket med H20 (1x15 ml), saltvann (1x15 ml), og tørket over MgS04, filtrert, konsentrert og renset på en silikagelkolonne som ga {4-[6-amino-5-(4-fluor-2-trifluormetyl-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl}-[(2R)-2-pyrrolidin-1-ylmetyl-pyrrolidin-1-yl]-metanon som off-white krystaller. Generell fremgangsmåte 9 for syntese av 2-dialkylmino-etansulfonsyre [6-amino-5-(substituert benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl-amid ved anvendelse av 2-dietylamino-etansulfonsyre {4-(6-amino-5-(2-klor-3,6-difluor-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl}-amid 1. Til en løsning av 4-(4-4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenylamin (5 g,
22,8 mmol) i diklormetan (120 ml) ble det tilsatt N-metylmorfolin (7,5 ml, 68,4 mmol). Denne blandingen ble avkjølt til 0°C under nitrogenatmosfære. 2-kloretansulfonylklorid (2,5 ml, 23,9 mmol) i diklormetan (60 ml) ble deretter tilsatt dråpevis med røring. Etter fullstendig reaksjon ble kolben rørt ved 0°C i 1 time og deretter ved romtemperatur med overvåking med TLF (1:1 etylacetatheksan) og beising med ninhydrin. Etter 4 timers omrøring var fremdeles noe utgangsborsyreester igjen og ytterligere 0,2 ekvivalenter (0,5 ml) 2-kloretansulfonylklorid i diklormetan (25 ml) ble tilsatt dråpevis ved rom-tempreatur. Etter 1 time hadde borsyreesteren blitt konsumert som fremgitt av TLF og
det totale reaksjons volumet ble redusert til det halve med rotasjonsfordampning. Inn-holdsstoffene ble fortynnet med etylacetat (200 ml), vasket med 50% saltvann (2x100 ml), tørket over vannfri natriumsulfat og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble renset ved anvendelse av silikagel (120 g) og eluert med 10% etylacetat, diklormetan for å gi etensulfonsyre [4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2dioksaborolan-2-yl)-fenyl]amidea som et hvitt fast stoff (6,2 g, 20,2 mmol, 89% utbytte).
<!>H NMR (CDC13, 300 MHz), 5 7.76 (d, J = 8.4,2H), 7.12 (d, J = 8.45,2H) 6.65 (s, 1H), 6.55 (dd, J = 9.77, 6.7,1H), 6.31 (d, J = 16.54,1H), 5.96 (d, J = 9.8,1H), 1.33 (s, 12H).
2. Til en løsning av etensulfonsyre [4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenyl]-amid (0,500 g, 1,6 mmol) i metanol (5 ml) ble det tilsatt dietylamin (0,707 g, 4,0 mmol) i metanol (5 ml) og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur og overvåket med TLC (1:1 etylacetat:heksan). Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen konsentrert i vakuum og resten fordelt mellom etylacetat (50 ml) og vann (50 ml). Etylacetatet ble deretter vasket med 50% saltvann (1x50 ml), tørket over vannfri natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble renset ved anvendelse av en 10 g forhåndspakket silikagelkolonne, eluert med 1:1 etylacetat:diklormetan som ga 2-dietylamin-etansulfonsyre [4-(4,4,5,5 -tetrametyl- [ 1,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenyl] -amid som et hvitt fast stoff (0,346 g, 0,90 mmol, 56%).<]>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 7.78 (d, J = 6.65, 2H) 7.15 (d, J = 6.66, 2H), 3.20 (m, 2H), 3.0 (m, 2H), 2.55 (q, J = 7.15, 7.16 4H), 1.34 (s, 12H), 1.05 (t, J = 7.19, 6H). 3. 2-dietylamin-etansulfonsyre {4-[6-amino-5-(2-klor-3,6-difluor-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl}-amid ble fremstilt ved å følge den generelle Suzuki-koblingsfremgangsmåten 3 fra 5-brom-3-(2-klor-3,6-difluor-benzyloksy)-pyridin-2-ylamin og 2-dietylamin-etansulfonsyre [4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2dioksaborolan-2-yl)-fenyl]-amid fremstilt i del 2 som et hvitt fast stoff i 60% utbytte.
Generell fremgangsmåte 10:
1. 4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]-doksaborolan-2-yl)anilin (3 g, 0,013 mol) ble oppløst i diklormetan (350 ml) og det ble tilsatt pyridin (1,02 g, 0,013 mol) og 4-nitrofenylklorformat. Reaksjonsblandingen ble rørt i 13 timer hvor TLC-analyse viste konsumpsjon av alt utgangsmateriale. Løsningen ble vasket med mettet NaHCC«3 (3x50 ml), vann (3x50 ml) og saltvann (3x50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket over Na2SC«4 og løsemidlet fjernet som ga et hvitt krystallinsk fast [4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenyl]-karbaminsyre fenylester, 4,45 g, 91%.<]>H NMR (CDCI3300 MHz) 5 1.4 (s, 12H), 7.1 (brs, 1H), 7.3 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.8 (d, 2H), 8.3 (d, 2H). 2. [4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenyl]-karbaminsyre fenylester (500 mg, 1,3 mmol) ble oppløst i vannfri diklormetan (0,5 ml) og trietylamin (0,187 ml, 1,3 mmol). Til denne rørte løsningen ble det tilsatt 1-metylpiperazin (eller et hvilket som helst annet amin) (0,144 ml, 1,3 mmol). Løsningen forandret farve til gul med en gang og TLC-analyse viste konsumpsjon av alt utgangsmateriale. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann (3x500 ml), mettet natriumbikarbonat (2x200 ml) og tørket før fjerning av løsemidlene i vakuum. Borsyreesterene ble anvendt uten ytterligere rensing. 3. Til en blanding av 2,1 ml DME og 2,8 ml 2N Na2C03ble det tilsatt 100 mg av bro-midavleiringen, 1 ekvivalent av borsyren og 5 mol-% Pd(PPh3)4. Reaksjonsblandingen ble rørt og varmet opp til 80°C over natten i to drams glass. Den urene blandingen ble filtrert gjennom celitt og ekstrahert med EtOAc (2x100 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med NaHC03(1x100 ml), fulgt av vann (1x100 ml) og deretter mettet saltvann (1x100 ml). Den resulterende blandingen ble konsentrert i vakuum. Resten ble oppløst i heksan og renset med kolonnekromatografi.
Generell fremgangsmåte 11: 1. Til en løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (10,0 g, 33,2 mmol) i acetonitril (600 ml) og eddiksyre (120 ml) ble det tilsatt N-jodsuksinimid (11,2 g, 49,8 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og reaksjonen ble stoppet med Na2S2C«5-løsning. Etter fordampning ble resten fordelt mellom etylacetat og vann. Det organiske sjiktet ble vasket med 2N NaOH-løsning, saltvann og tørket over Na2SC«4. Det urene produktet ble renset med silikagelkolonne som ga 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-jod-pyridin-2-ylamin (7,1 g, 50% utbytte).
MS m/z 427 [M+l].
2. Til en løsning av 3-[2-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-jod-pyridin-2-ylamin (7,1 g, 16,6 mmol) og prop-2-ynyl-karbaminsyre tert-butylester (3,1 g, 20,0 mmol) i THF (60 ml) og Et3N (60 ml) ble det tilsatt Cul (63 mg, 0,3 mmol) og Pd(PPh3)4(384 mg, 0,3 mmol). Blandingen ble rørt under nitrogen og overvåket med TLC til fullstendig reaksjon. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc og vasket med vann. Det urene produktet ble renset på en silikagelkolonne eluert med 20-405 EtOAc i heksan som ga (3-{6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -prop-2-ynyl)-karbaminsyre tert-butylester (2,2 g, 29% utbytte). 3. Løsningen av (3-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-prop-2-ynyl)-karbaminsyre tert-butylester i 25% TFA i diklormetan ble rørt i 2 timer, deretter vasket med 2N NaOH, vann to ganger, saltvann og tørket over Na2S04. Etter filtrering og fordampning, ble 5-(3-amino-prop-l-ynyl)-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin oppnådd i 93% utbytte. 4. Til en løsning av 5-(3-amino-prop-l-ynyl)-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (0,282 mmol, 1 ekv.) og 4-nitrofenyl kloroformat (1 ekv.) i vannfri diklormetan (10 ml) ble det tilsatt pyridin (1 ekv.). Reaksjonsblandingen ble rørt i 4 timer under nitrogen og deretter ble det valgte aminet (1 ekv.) og trietylamin (1 ekv.) tilsatt. Blandingen ble refluksert i 5 minutter og avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble vasket med vann. Det organiske sjiktet ble fordampet og renset med silikagelkolonne eluert med 0-20% metanol i diklormetan på forhåndspakket silikakolon-ner. Endelige utbytter varierte mellom 24% og 71%.
Generell fremgangsmåte 12:
1. Til en løsning av 5-(3-amino-prop-l-ynyl)-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (fremstilt i fremgangsmåte 11) (400 mg, 1,1 mmol) i diklormetan (17 ml) ble det tilsatt kloracetylklorid (153 mg, 1,4 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtempratur med TLC-overvåking av fullstendig reaksjon. Etter fullstendig reaksjon, ble løsemidlet fordampet som ga det urene produktet. 2. Til en løsning av N-(3-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl]-prop-2-ynyl)-2-klor-acetamid (1 ekv.) i acetonitril (5 ekv.) ble det tilsatt det individuelle aminet (5 ekv.). Blandingen ble refluksert under nitrogen over natten. Etter fordamping av løsemidlet ble resten renset på en silikagelkolonne eluert med 1-10% metanol i diklormetan som ga produktet med utbytter varierende fra 47% til 97%.
Generell fremgangsmåte 13:
1. Til en rørt løsning av 2-amino-3-benzyloksypyridin (42,0 g, 0,21 mmol) i CH3CN (600 ml) ved 0°C ble det tilsatt N-bromsuksinimid (37,1 g, 0,21 mmol) i løpet av 30 minutter. Blandingen ble rørt i 0,5 timer, og deretter ble reaksjonsblandingen fortynnet med EtOAc (900 ml) og fordelt med H2O (900 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann og tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert til tørrhet under vakuum som ga 3-benzyloksy-5-brom-pyridin-2-ylamin (31,0 g, 0,11 mol, 53%).<!>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 4.63-4.78 (brs, 2H), 5.04 (s, 2H), 7.07 (d, 1H, J, 1.8 Hz), 7.33-7.42 (m, 5H), 7.73 (d, 1H,7, 1.8 Hz). 2. Til en rørt blanding av 3-benzyloksy-5-brom-pyridin-2-ylamin (31,0 g, 0,11 mol) i en blanding av DME (600 ml) og H2O (600 ml) ble det tilsatt 4-karboksymetylborsyre (39,9 g, 0,11 mol), Pd(PPh3)4(6,4 g, 5,55 mmol) og Na2C03(82,0 g, 0,78 mol). Reaksjonsblandingen ble varmet opp sakte til refluks og rørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og deretter fortynnet med CH2CI2(1,5 1) og fordelt med H20 (700 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med mettet NaHC03(700 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Det urene materialet ble renset med kolonnekromatografi (silikagel, 1:1 til 4:1 EtOAc:heksan) og fraksjoner som inneholder produkt ble kombinert og konsentrert i vakuum som ga 4-(6-aminoi-5-benzyloksy-pyridin-3-yl)-benzosyre metylester (29,4 g, 0,086 mol, 79%).<]>H NMR (CDC13, 300 MHz) 5 3.92 (s, 3H), 4.82-4.94 (brs, 2H), 5.15 (s, 2H), 7.22 (d, m, J, 1.8 Hz), 7.33-7.42 (m, 5H), 7.54 (d, 2H, J, 8.6), 7.98 (d, 1H, J, 1.8 Hz), 8.06(d, 2H,7 8.6 Hz). 3. Til en rørt løsning av 4-(6-amino-5-benzyloksy-pyridin-3-yl)-benzosyre metylester (10,0 g, 0,03 mol) i EtOH:H20 (95:5, 600 ml) ble det tilsatt Pd/C (15,9 g, 0,015 mol) (reaksjonsblandingen ble avgasset under vakuum. Løsningen ble rørt under en H2-atmosfære i 22 timer. Løsningen ble filtrert gjennom våt celitt og celitten vasket med EtOH. Filtratet ble konsentrert under vakuum som ga 4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-benzosyre metylester (2,3 g, 9,3 mmol, 31%).<!>H NMR (MeOD, 300 MHz) 5 3.90 (s, 3H), 7.21 (d, 1H, J, 1.9 Hz), 7.62 (d, 2H, J, 8.5 Hz), 7.76 (d, 1H, J, 1.9 Hz), 8.04(d, 2H, J, 8.5 Hz). 4. Til en rørt løsning av 4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-benzosyre metylester (2,3 g, 9,3 mmol) i CH2C12(180 ml) ble det tilsatt N,N-diisopropyletylamin (3,2 ml, 0,019 mol), 4-metyl-benzensulfonsylklorid (2,66 g, 0,014 mol), og PS-DMAP (katalytisk mengde). Reaksjonsblandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 6 timer og deretter filtrert for å fjerne harpiksen. Harpiksen ble vasket med CH2CI2(3x20 ml), og de kombinerte fraksjonene ble vasket med 10% sitronsyre (100 ml), mettet NaCl (100 ml), tør-ket (Na2SC«4) og filtrert og konsentrert i vakuum. Det resulterende urene materialet ble renset med kolonnekromatografi (silikagel, 100% CH2C12til 95:5 CH2Cl2:MeOH) og fraksjonene som inneholder ønsket produkt ble kombinert og konsentrert i vakuum som ga 4-[6-amino-5-(toluen-4-sulfonyloksy)-pyridin-3-yl]-benzosyre metylester (3,3 g, 8,2 mmol, 88%).<]>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 2.47 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 4.81-4.88 (brs, 2H), 7.36-7.44 (m, 5H), 7.81 (d, 2H, J, 8.3 Hz), 8.05 (d, 2H, J, 8.4 Hz), 8.19-8.27 (brs, 1H). 5. Til en rørt løsning av l-(3-fluor-2-trifluormetyl-fenyl)-etanol (2,0 g, 9,6 mmol) i vannfri DMF (500 ml) ble det ved 0°C under en N2-atmosfære tilsatt NaH (0,38 g, 9,6 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt i 0,5 timer. En løsning av 4-[6-amino-5-(toluen-4-sulfonyloksy)-pyridin-3-yl]-benzosyre metylester (3,8 g, 9,6 mmol) i vannfri DMF (30 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen som fikk komme til omgivelsestemperatur sakte og ble rørt i 21 timer ved denne temperaturen. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med EtOAc (500 ml) og H20 (100 ml). Det organiske sjiktet ble separert fra og vannsjiktet ytterligere ekstrahert med EtOAc (1x200 ml). De organiske sjiktene ble kombinert og vasket med saltvann, tørket med Na2S04og konsentrert til tørrhet under vakuum. Den urene blandingen ble renset med kolonnekromatografi (silikagel, 40:60 til 70:30 EtOAc:heksan) og fraksjonene som inneholder produkt ble kombinert og konsentrert i vakuum som ga 4-{6-amino-5-[l-(3-fluor-2-trifluormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-benzosyre metylester (1,4 g, 3,2 mmol, 34%).<]>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 5 1.73 (d, 3H,J, 6.2 Hz), 3.91 (s, 3H), 4.87-4.64 (brs, 2H), 5.81 (q, 1H, J, 6.1, 6.3 Hz), 6.92 (d, 1H, J, 1.8 Hz), 7.38 (d, 2H, J, 8.5 Hz), 7.46-7.66 (m, 3H), 7.93 (d, 1H, J, 1.8 Hz), 8.02 (d, 2H, J, 8.5 Hz). 6. Til en rørt løsning av 4-{6-amino-5-[l-(3-fluor-2-trifluormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-benzosyre metylester (1,4 g, 3,2 mmol) i varm IPA (72 ml) ble det tilsatt H2O (38 ml) som inneholder LiOH (0,68 g, 16,2 mmol). Reaksjonsblandingen ble varmet til refluks i 3,5 timer. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert og fortynnet med EtOAc (200 ml) og ekstrahert etter avkjøling. Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann (50 ml), tørket over Na2S04og konsentrert under vakuum som ga 4- {6-amino-5-[l-(3-fluor-2-trifiuormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-benzosyre (1,2 g, 2,8 mmol, 88%). .<]>H NMR (MeOD, 300 MHz) 5 1.75 (d, 3H, J, 6.2 Hz), 4.88-4.93 (m, 1H), 7.01 (d, 1H, J, 1.8 Hz), 7.39 (d, 2H,J, 8.3 Hz), 7.52-7.67 (m, 3H), 7.80 (d, m, J, 1.8 Hz), 7.97 (d, 2H,7, 8.3 Hz). 7. Fremstilling av amidforbindelser: En rørt løsning av 4-{6-amino-5-[l-(3-fluor-2-trifluormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-benzosyre (50 mg, 0,12 mmol), EDC (27,0 mg, 0,13 mmol) og HOBt (18,0 g, 0,13 mmol) i DMF (2 ml) ble tilsatt til et to drams glass som inneholder NHR1R2(0,12 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med CH2CI2(3 ml) og fordelt med H2O. Det organiske sjiktet ble separert, vasket med mettet NaCl (1x2 ml) og mettet NaHC03(1x2 ml). Det organiske sjiktet ble konsentrert til tørrhet under vakuum. Materialet ble renset ved anvendelse av kolonnekromatografi (silikagel, 99:1 til 95:5 CH2Cl2/MeOH). Fraksjoner som inneholder produkt ble konsentrert under vakuum som ga amidforbindelser.
Generell fremgangsmåte 14:
1: Til en blanding av l-(2-kloretyl)pyrrolidin hydroklorid (200 mg, 1,18 mmol) og 4-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-fenyl]-lH-pyrazol (229 mg, 1,19 mmol) i DMF (6 ml) ble tilsatt CS2CO3. Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Vann (10 ml) ble deretter tilsatt til blandingen. Produktet ble ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). De kombinerte ekstraktene ble deretter vasket med saltvann (5x10 ml) for å fjerne DMF og deretter tørket over Na2S04og konsentrert (142 mg, 41% utbytte).
2: Til en blanding av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-jod-pyridin-2-ylamin (200 mg, 0,468 mmol), pinakolborsyreester (1,2 ekv.), Na2C03(149 mg, 1,41 mmol) i vann (1,25 ml), og dimetyletylglykol (3,75 ml, 0,1M) ble det tilsatt Pd(PPh3)2Cl2(16 mg, 0,020 mmol) i et mikrobølgereaksjonskar. Systemet ble avgasset og overstrømmet med nitrogen. Blandingen ble rørt ved 160°C i en mikrobølgeapparatur i 15 minutter. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur fulgt av tilsetning av vann (10 ml). Produktet ble ekstrahert med EtOAc (3x20 ml), tørket over Na2S04, og konsentrert. Det urene produktet ble renset med omvendt fase HPLC med 0,1% TFA i vann og acetonitril.
Generell fremgangsmåte 15:
1: Til en løsning av 3H-oksazolo[4,5-b]pyridin-2-on (13,6 g, 100 mmol) i acetonitril (600 ml) og eddiksyre (120 ml) ble det tilsatt N-bromsuksinimid (21,4 g, 120 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og reaksjonen ble stoppet med Na2S205-løsning. Etter fordampning ble resten fordelt mellom etylacetat og vann. Det organiske sjiktet ble vasket med 2N NaOH-løsning, saltvann og tørket over Na2S04. Det urene produktet ble renset på en silikagelkolonne som ga 6-brom-3H-oksazol[4,5-b]pyridin-2-on (11,5 g, 55% utbytte).
2: 6-brom-3H-oksazol[4,5-b]pyridin-2-on (21,5 g, 100 mmol) ble suspendert i NaOH-løsning (2N, 250 ml, 500 mmol). Blandingen ble refluksert over natten og en klar løs-ning ble oppnådd. Etter avkjøling til romtemperatur, ble reaksjonsløsningen nøytralisert til pH~7. Et CH2-lot ble frigitt og presipitat ble også observert. Produktet ble filtrert, vasket med vann og tørket under høyvakuum som ga 2-amino-5-brom-pyridin-3-ol som et off-white fast stoff (17,8 g, 98% utbytte).
3: Til en løsning av 2-amino-5-brom-pyridin-3-ol (358 mg, 1,89 mmol) i DMF (8 ml) ble det tilsatt CS2CO3(620 mg, 1,89 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur under nitrogen i 1 time. Til reaksjonsblandingen ble det tilsatt bromforbindelse (0,9 ekv.) i DMF (5 ml) sakte. Reaksjonsløsningen ble rørt under nitrogen i 5 timer og deretter fordelt mellom vann og etylacetat. Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann tre ganger og tørket over MgSCv Det urene produktet ble renset på en silikagelkolonne eluert med heksan-etylacetat (4:1) som ga produktet i 70%-80% utbytte.
Generell fremgangsmåte 16 ved anvendelse av eksempel 1-488 i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495): 1. Til en løsning av 3-benzyloksy-5-brom-pyridin-2-ylamin (1 g, 3,58 mmol) i dimetylsulfoksid (7 ml) ble det tilsatt sekvensielt bis(pinakolato)diboran (1,0 g, 3,94 mmol), kaliumacetat (1,05 g, ,10,7 mmol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocin]diklorpalladium (II), kompleks med diklormetan (1:1) (146 mg, 0,18 mmol). Blandingen ble varmet til 80°C i 16 timer og deretter avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat (50 ml) og filtrert. Filtratet ble vasket med vann (2x250 ml) og tørket over magnesiumsulfat. Konsentrering i vakuum ga det urene boronatet som et brunt fast stoff (1,13 g, 97%).
<]>H NMR (CDCI3) 5 1.32 (s, 12 H), 5.08 (s, 2H), 5.44 (br s, 2H), 7.33-7.42 (m, 6H), 8.03 (s, 1H).
2. Et 18 ml reaksjonskar ble tilsatt uren 3-benzyloksy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin (161 mg, 0,49 mol), dimetoksyetan (3 ml) og 2-brompyridin (117 mg, 0,72 mmol). Til denne løsningen ble det tilsatt [1,1'-bis(dimetylfosfino)ferrocin]diklorpalladium (II), kompleks med diklormetan (1:1) (20
mg, 0,05 mmol) og en 2M løsning av cesiumkarbonat i vann (0,75 ml, 1,5 mmol). Reak-toren ble varmet opp til 80°C i i 66 timer under en nitrogenatmosfære og deretter avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom etylacetat (5 ml) og vann (5 ml). Det organiske sjiktet ble vasket med ytterligere vann (5 ml) og fortynnet med dimetylformamid (5 ml). Polymerbundet sulfonsyre (0,5 g, 2,1 mmol) ble tilsatt til den orga-
niske løsningen og den resulterende blandingen ble forsiktig rørt i 2 timer. Harpiksen ble filtrert og vasket med dimetylformamid, metanol og metylenklorid (3x5 ml av hvert løsemiddel). Deretter ble polymeren omsatt med 2M ammoniakk i metanol i 1 time. Harpiksen ble filtrert og vasket med ytterligere 2M ammoniakk i metanol (2x5 ml) og de kombinerte filtratene ble konsentrert i vakuum. Rensing av det urene produktet med flashkolonnekromatografi ga 52,2 mg av produktet som en gyldenbrunt faststoff (38% utbytte).
Generell fremgangsmåte 17:
1. Til en løsning av 3-(2-klor-3,6-difluor-benzyloksy)-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin (fremgangsmåte 16) (10,0 g, 24,3 mmol) i t-butylalkohol (50 ml) ble det tilsatt boc-anhydrid (5,83 g, 26,7 mmol) og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Ytterligere Boc-anhydrid (2,25 g, 10,3 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen rørt over natten en gang til. Materialet ble konsentrert til en viskøs svart olje og anvendt slik den var. 2. Den urene borsyreesteren (24,3 mmol teoretisk) i THF (150 ml) ble tilsatt til en løs-ning av natriumbikarbonat (16,3 g, 194 mmol) i vann (150 ml) og aceton (23 ml). Blandingen ble avkjølt til 2°C og okson (13,5 g, 21,9 mmol) ble tilsatt sakte, mens temperaturen ble holdt under 8°C. Etter fullstendig tilsetning, ble reaksjonsblandingen rørt i 5 minutter og deretter ble reaksjonen stoppet med natriumbisulfitt (14,2 g) i vann (28 ml). Etylacetat ble tilsatt (200 ml) og sjiktene separert. Vannsjiktet ble nøytralisert med 6N HC1 og ekstrahert med etylacetat (2x200 ml). De kombinerte organiske fraksjonene ble vasket med vann (250 ml) og saltvann (250 ml), tørket (NaiSC^) og konsentrert til en uren svart olje. Silikagelkromatografi (etylacetat/heksan) ga produktet som et lyst brunt skum (4,78 g, 49,0%).
<]>H NMR (CDCI3) 5 1.48 (s, 9H), 1.74 (d, 3H), 5.75 (q, 1H), 6.61 (d, 1H), 76.89 (dt, 1H), 6.94-7.04 (m, 2H), 7.26(d, 1H), 8.19 (bs, 1H).
MS m/ z 401 (M+H)<+>.
3. Til cesiumkarbonat i et to drams glass ble det tilsatt [3-(2-klor-3,6-difluor-benzyloksy)-5-hydroksy-pyridin-2-yl]-karbaminsyre tert-butylester (100 mg, 0,25 mmol) i vannfri DMF (1 ml) fulgt av benzylbromid (89,2 ul, 0,75 mmol). Glasset ble satt lokk på og blandingen rørt ved 90°C over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom et 5 ml Chem-Elut-rør forhåndsfuktet med vann (3,5 ml) og eluert med 1:1 etylacetatmetylenklorid. Etter delvis konsentrering ble 4N HC1 i dioksan (1-2 ml) tilsatt og løsningen ble konsentrert. Omvendtfasekromatografi (vann: acetonitril, 0,05% TF A) fulgt av lyofilisasjon, ga det ønskede produktet som et off-white amorft faststoff (25,3 mg, 20,0%) og bis-addisjonsproduktet som et gyldenbrunt amorft faststoff (35,2 mg, 23,7%).
Generell fremgangsmåte 18:
Natriumborhydrid (1,5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av keton (3,89 mmol) i 10 ml etanol under en nitrogenatmosfære. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer. Blandingen ble deretter satt på isbad og reaksjonen stoppet med fortynnet vandig HC1. Etanolet ble fordampet og EtOAc tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en oljerest, forbindelse A5. Resten ble anvendt uten ytterligere rensing.
3-hydroksy-2-nitropyridin (1,1 molar ekvivalent) og trifenylfosfin (1,5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A5 (1,1 mmol) i 10 ml THF. Reaksjonsblandingen ble deretter satt på isbad og diisopropylazodikarboksylat (1,5 molar ekvivalent) ble tilsatt. Isbadet ble fjernet og blandingen rørt ved romtemperatur i 12 timer. Lø-semidlet ble fordampet som ga en gul oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc i heksan) som ga forbindelse Al.
2M HC1 (0,2 ml) ble tilsatt til en løsning av forbindelse Al (0,97 mmol) i 2 ml etanol. Blandingen ble deretter satt på isbad og Fe-pulver (365 mg) ble tilsatt sakte. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 85°C i 1 time og avkjølt til romtemperatur. Celitt (0,5 g) ble tilsatt og blandingen rørt og den resulterende blandingen ble filtrert gjennom et celittseng og renset med etanol. Filtratet ble fordampet som ga en brun oljerest, forbindelse A2. Resten ble anvendt uten ytteligere rensing.
Perjodsyre (0,25 molar ekvivalent), jod (0,5 molar ekvivalent), H2O (0,5 ml) og konsentrert svovelsyre (0,03 ml) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A2 i 3 ml eddiksyre. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 85°C i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt på isbad og gjort basisk med mettet vandig Na2C03til en pH på 3-4. Etylacetat ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2SC«4. Na2SC«4 ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc og heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A3.
Generell fremgangsmåte 19:
Borsyreester eller borsyre (1,3 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A3 (0,47 mmol) i 5 ml DME. Blandingen ble overstrømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklorbis(trifenylfosfino)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 1 ml H2O ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A4.
Generell fremgangsmåte 20:
Forbindelse A6 ble fremstilt ved anvendelse av generell fremgangsmåte 19. 0-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumfosforpentafluorid (HATU) (1,1 molar ekvivalent), diisopropyletylamin (5 molar ekvivalent) og amin (1,3 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A6 (0,17 mmol) i 3 ml DMF under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer. Mettet NaHCC>3 ble deretter tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som en brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc og heksan) som ga ønsket amidprodukt, forbindelse A7, som en gul olje.
Generell fremgangsmåte 21:
Syre (16 molar ekvivalent eller mindre) ble tilsatt til forbindelse A7 (0,13 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsningen ble rørt ved romtemperatur eller varmet opp til 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet og resten renset med silika-gelkromagrafi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som ga ønsket amidprodukt, forbindelse A8, som et gulaktig hvitt faststoff.
Generell fremgangsmåte 22:
Forbindelse A9 ble fremstilt ved anvendelse av generell fremgangsmåte 19. Di-tert-butyldikarbonat (3 molar ekvivalent) og 4-(dimetylamino)pyridin (0,14 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A9 (3 mmol) i 20 ml DMF. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsning-en. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en brungul oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med 25 ->• 30% EtOAc i heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A10 som en gulaktig olje (87,8% utbytte). Ozon ble boblet gjennom en løsning av forbindelse Al0 i 50 ml CH2CI2ved -78°C og dimetylsulfid ble tilsatt for å stoppe reaksjonen. Mettet natriumklorid ble tilsatt til reaksjonsblandingen og EtOAc ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktene ble kombinert og tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en gul oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med 35 -» 40% EtOAc i heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse All som en gulaktig olje (58,4% utbytte).
Generell fremgangsmåte 23: Reduktiv aminering
Aminhydrokloridsalt (1,2 molar ekvivalent), natriumacetat (2 molar ekvivalent i forhold til aminhydrokloridsaltet) ble tilsatt til en løsning av forbindelse All (0,45 mmol) i 4 ml CH3OH under en nitrogenatmosfære. Molekylsikt (0,5 g) ble tilsatt til reaksjonsblandingen og deretter ble natriumcyanoborhydrid (2 molar ekvivalent) tilsatt. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en celittseng og filtratet fordampet og renset med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som ga ønsket produkt, forbindelse A12, som en olje (52,6% utbytte). Syre (16 molar ekvivalent eller mindre) ble tilsatt til forbindelse A12 (0,17 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsningen ble rørt ved romtemperatur eller varmet opp til 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet og resten renset med silikagelkolonnekromatografi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som ga ønsket produkt, forbindelse A13.
Generell fremgangsmåte 24:
O-fenyldiaminer (1,2 molar ekvivalent) og natriumbisulfit (2,1 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse All (0,41 mmol) i 5 ml DMA. Den resulterende løs-ningen ble varmet opp til 110°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04bvle filtrert fra og filtratet fordampet som ga en brungul oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc i heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A14. Syre (16 molar ekvivalent eller mindre) ble tilsatt til forbindelse A14 (0,16 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsningen ble rørt ved romtemperatur eller varmet opp til 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet og resten renset med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som ga ønsket amidprodukt, forbindelse A15.
Generell fremgangsmåte 25:
Di-tert-butyldikarbonat (3 molar ekvivalent) og 4-(dimetylamino)pyridin (0,14 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse A3b (2 mmol) i 10 ml DMF. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere vannløs-ningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en brungul oljerest (forbindelse al6). Resten ble anvendt uten ytterligere rensing.
Bis(pinakolato)diboron (1,2 molar ekvivalent) og kaliumacetat (3,4 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse al6 i 4 ml DMSO. Blandingen ble overstrømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklobis(trifenylfosfino)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Den resulterende løsningen ble varmet opp til 80°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med 30% EtOAc i heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A17 (76% utbytte). HC1 (5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse Al7 (0,43 mmol) i 4 ml CH2CI2. Den resulterende blandingen ble varmet opp til 50°C i 12 timer. Mettet NaHC03ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å nøytrali-sere reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga ønsket produkt (forbindelse A18) som et gult faststoff (75% utbytte).
Generell fremgangsmåte 26:
Forbindelse Al7 (1,3 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av arylhalid (0,36 mmol) i 3 ml DME. Blandingen ble overstrømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklorbis(trifenylfosfino)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriurnkar-bonat (3 molar ekvivalent) i 0,8 ml H2O ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc i heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A19 (74,4% utbytte). HC1 (5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse Al 9 (0,26 mmol) i 10 ml isopropylalkohol. Den resulterende blandingen ble varmet opp til 50°C i 12 timer. Løsemidlet ble fordampet som ga ønsket produkt, forbindelse A20.
Generell fremgangsmåte 27:
Forbindelse Al 8 (1,3 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av arylhalid (0,21 mmol) i 3 ml DME. Blandingen ble overstrømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklorbis(trifenylfosfino)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 0,6 ml H2O ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi
(eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A21.
Generell fremgangsmåte 28:
Amin (1,5 molar ekvivalent) og K2CO3(1,5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av 4-halobenzylhalid (1,0 molar ekvivalent) i 2 ml toluen. Den resulterende blandingen ble mikrobølgebehandlet ved anvendelse av Smithsynthesizer (150°C, 1 time). Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga ønsket produkt, forbindelse A23. Resten ble anvendt i fremgangsmåte 11 uten ytterligere rensing for å syntetisere forbindelse A22.
Generell fremgangsmåte 29:
Amin (1,2 molar ekvivalent) og diisopropylamin (5 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av 4-brombenzensulfonylklorid (0,77 mmol) i 5 ml CHCI3under en nitrogenatmosfære. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga ønsket produkt, forbindelse A25. Resten ble anvendt i fremgangsmåte 11 uten ytterligere rensing for å syntetisere forbindelse A24.
Generell fremgangsmåte 30:
Borsyreester eller borsyre (1,2 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av l-klor-4-jodbenzen (0,84 mmol) i 10 ml DME under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble over-strømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklorbis(trifenylfosfino)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 1,8 ml H2O ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse A27. Forbindelse A27 ble anvendt i fremgangsmåte 11 for å syntetisere forbindelse A26.
Generell fremgangsmåte 31 for kiral separasjon av rasemater:
Den rasemiske prøven ble renset ved anvendelse av preparativ superkritisk fluidkroma-tografi SFC-MS. Eksempler på rensningsbetingelser: kolonne- Chiralpak AD-H, 250x21 mm, 5 mikron, 100A kolonne (kolonne nr. ADH0CJ-C1003); kolonnetempera-tur 35°C; mobil fase 35% metanol (med 0,1% isopropylamin)-modifisert CO2; preparativ strømningshastighet 52 ml/min.; isobar trykk ved 120 bar. Generell fremgangsmåte 32: ved anvendelse av (4-{6-amino-5-[l-(trifluormetyl-fenyi)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-(3,5-dimetyl-piperazin-l-yl)-metanon
Til en blanding av 4-[4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-benzoyl]-2,6-dimetyl-piperazin-l-karboksylsyre tert-butylester (100 mg, 0,23 mmol) og l-(l-brom-etyl)-3-trifluormetyl-benzen (64 mg, 0,25 mmol) i DMF (2 ml) ble det tilsatt NaH (12 mg, 0,47 mmol) ved 0°C. Blandingen ble rørt over natten. LCMS viste at reaksjonen var fullstendig, DMF og vann ble fjernet. TFA (2 ml) ble tilsatt til resten og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. TFA ble fjernet fulgt av tilsetning av metanol. Resten ble renset med prep-HPLC som ga (4-{6-amino-5-[l-(3-trifluormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-(3,5-dimetyl-piperazin-l-yl)-metanon (30 mg, utbytte 25,7%).
Generell fremgangsmåte 33: ved anvendelse av (4-{6-amino-5-[l-(2-trifluormetyl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl]-fenyl)-(3,5-dimetyl-piperazin-l-yl)-metanon
Til en blanding av 4-[4-(6-amino-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-benzoyl]-2,6-dimetyl-piperazin-l-karboksylsyre tert-butylester (50 mg, 0,12 mmol) og l-(l-brom-etyl)-2-trifluormetyl-benzen (32 mg, 0,12 mmol) i DMF (2 ml) ble det tilsatt 2M Cs2C03(0,18 ml, 0,35 mmol), fulgt av vann (0,5 ml) og blandingen ble rørt over natten og deretter varmet opp til 70°C i 8 timer, og LCMS viste at reaksjonen var fullstendig. DMF og vann ble fjernet. TFA (2 ml) ble tilsatt til resten og blandingen rørt ved romtemperatur i 3 timer. TFA ble fjernet, fulgt av tilsetning av metanol. Resten ble renset ved prep- HPLC som ga (4-{6-amino-5-[l-(2-trifluorme1yl-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-(3,5-dimetyl-piperazin-l-yl)-metanon (20 mg, utbytte 34,2%).
Generell fremgangsmåte 34: ved anvendelse av {4-[6-amino-5-(2-metyl-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl} -3,5-dimetyl-piperazin-1 -yl)-metanon
Til en blanding av (2R,6S)-4-[4-(6-aminoi-5-hydroksy-pyridin-3-yl)-benzoyi]-2,6-dimetyl-piperazin-l-karboksylsyre tert-butylester (100 mg, 0,23 mmol) og 1-brommetyl-2-metyl-benzen (47 mg, 0,25 mmol) i DMF (2 ml) ble det tilsatt 2M Cs2C03(0,35 ml, 0,7 mmol) fulgt av vann (0,5 ml). Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. LCMS viste at reaksjonen var fullstendig og DMF ble fjernet, fulgt av tilsetning av 4N HC1 i dioksan (2 ml) og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. De flyktige komponentene ble fjernet fulgt av tilsetning av metanol. Denne løs-ningen ble renset med preparativ HPLC som ga {4-[6-amino-5-(2-metyl-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-fenyl}-(3,5-dimetyl-piperazin-l-yl)-metanon (47 mg, utbytte 46,6%).
Generell fremgangsmåte 35: ved anvendelse av (6-amino-3-aza-bicyklo[3.1.0]heks-3-yl)-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-metanon
Til en blanding av [3-(4-jod-benzoyl)-3-aza-bicyklo[3.1.0]heks-6-yl]-karbaminsyre tert-butylester (100 mg, 0,234 mmol) og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin (100 mg, 0,234 mmol) i DME (2 ml) ble det tilsatt Pd(dppf)2Cl2*CH2Cl2(10 mg, 0,012 mmol) og Cs2C03(351 mg, 0,702 mmol). Blandingen ble boblet med nitrogen i 10 minutter og deretter mikrobølgebe-handlet ved 150°C i 30 minutter. LCMS viste at reaksjonen var fullstendig. Den urene reaksjonsblandingen ble fortynnet med etylacetat fulgt av vaskinger med vann og saltvann. Løsningen ble tørket over MgS04. Rensing med prep-HPLC ga et faststoff. Det faste stoffet ble rørt med 4N HCl/dioksan (3 ml) i 3 timer ved romtemperatur. De flyktige forbindelsene ble fjernet som ga en rest som ble renset med prep-HPLC som ga (6-amino-3-aza-bicyklo[3.1.0]heks-3-yl)-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-metanon (30 mg, utbytte 26%).
Generell fremgangsmåte 36: ved anvendelse av 5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-6'-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-[3,3']bipyridinyl-6-ylamin
Til en blanding av 6'-amino-5'-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-[3,3']bipyridinyl-6-ol (78 mg, 0,20 mmol), trifenylfosfin (63 mg, 0,24 mmol) og 2-morfolin-4-yl-etanol (0,026 ml, 0,22 mmol) ble det tilsatt DEAD (0,034 ml, 0,22 mmol). Etter røring over natten ble mer PPh3(63 mg, 0,24 mmol) og mer DEAD (0,034 ml, 0,22 mmol) tilsatt. Etter flere timer, ble mer alkohol (0,026 ml, 0,22 mmol) tilsatt. Etter ytterligere flere timer ble mer PPh3(63 mg, 0,24 mmol) og mer DEAD (0,034 ml, 0,22 mmol) tilsatt. Etter røring over natten, ble blandingen fordelt mellom diklormetan og halvmettet saltvann. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med diklormetan. De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2SC*4 og konsentrert med rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan og metanol som ga 5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-6'-(2-morfolin-4-yl-etoksy)-[3,3']bipyridinyl-6-ylamin (53 mg, 53%).
Generell fremgangsmåte 37: ved anvendelse av eksempel 1-650 i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)
3-(2,6-diklor-3-fluor-benzyloksy)-5-tiazol-2-yl-pyridin-2-ylamin: Til et mikrobølgerør utstyrt med en rørestav ble det tilsatt jodpyridylutgangsmateriale (300 mg, 0,702 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium(0) (40 mg, 5 mol-%), og tetrahydrofuran (vannfri, 6 ml). Glasset ble satt lokk på og overstrømmet med nitrogen i 5 minutter. 2-tiazolylzinkbromid (0,5M i THF, 1,4 mmol, 2,8 ml) ble deretter tilsatt via sprøyte. Glasset ble varmet opp til 120°C ved mikrobølgeovnbetingelser i 10 minutter. TLC (1:1 etylacetatmetylenklorid) viste en stor mengde av utgangsmateriale værende igjen. Ytterligere 2-tiazolylzinkbromid (0,5M i THF, 500 ul) ble tilsatt og glasset ble varmet opp til 120°C under mikrobølgebetingelser i 20 minutter. TLC (1:1 etylacetat:metylenklorid) viste en stor mengde av utgangsmateriale fremdeles tilbake. Ytterligere 2-tiazolylzinkbromid (0,5M i THF, 500 ul) ble tilsatt og glasset ble varmet opp til 120°C under mikrobølgebetingelser i 60 minutter. TLC (1:1 etylacetatmetylenklorid) viste fremdeles en stor mengde utgangsmateriale fremdeles tilbake, som også hadde blitt svært urent. Innholdet i glasset ble overstrømmet med mettet NH4Cl-løsning (10 ml) og denne løsningen ble ekstrahert med etylacetat (2x30 ml). De kombinerte etylacetatsjiktene ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble tilsatt en 10 g forhåndspakket silikagelkolonne og 1:1 etylacetat:metylenklorid ble anvendt for å eluere det ønskede produktet (40 mg, 15%). Generell fremgangsmåte 38: ved anvendelse av eksempel 1-652 i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495) 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-metyl-lH-imidazol-2-yl)-pyridin-2-ylamin: N-metylimidazol (92 mg, 1,1 mmol) ble oppløst i tetrahydrofuran (vannfri, 4 ml) i en 50 ml rundkolbe. Kolben ble avkjølt med et tørris/acetonbad under nitrogenatmosfære. N-butyllitium (2,5M, 562 ul, 1,4 mmol) ble tilsatt via sprøyte i 100 ul porsjoner i løpet av 5 minutter. Reaksjonsblandingen ble rørt ved -70°C i 30 minutter. Fast sinkklorid (vannfri, 383 mg, 2,8 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen rørt i 15 minutter. Isbadet ble deretter fjernet og reaksjonsblandingen varmet opp til romtemperatur. Idet alt sinkklori-det var i løsning og reaksjonsblandingen ved romtemperatur, ble jodskaffold (400 mg, 0,936 mmol) tilsatt i tetrahydrofuran (vannfri, 4 ml), fulgt av tetra-kis(trifenylfosfin)palladium (0) (108 mg, 10 mol-%) og reaksjonsblandingen varmet opp til refluks. Reaksjonsforløpet ble overvåket med LC/MS til alt utgangsjodskaffoldet var konsumert. Reaksjonsblandingen ble avkjølt og deretter fortynnet med mettet NH.4Cl-løsning (20 ml). Denne løsningen ble ekstrahert med etylacetat (2x50 ml). De kombinerte etylacetatsjiktene ble tørket over Na2SC«4, filtrert og konsentrert i vakuum. Det urene produktet ble tilsatt til en 10 g forhåndspakket silikagelkolonne og 10% metanol:etylacetat ble anvendt for å eluere det ønskedet produktet (25 mg, 7%). Generell fremgangsmåte 39: ved anvendelse av eksempel 1-657 i U.S. patentsøknad serienr. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)
Til 6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy-nikotinnitril (400 mg, 1,23 mmol) i 70 ml tørr metanol ble det ved 0°C boblet inn HCl-gass i 3 minutter. Blandingen ble rørt ved 3°C. De flyktige forbindelsene ble fjernet og de faste stoffene vasket med dietyleter som ga imidatet kvantitativt. Til 200 mg av imidatet i 4 ml metanol ble det ved 0°C tilsatt 2N metylamin i THF (837 (il). Blandingen ble rørt ved 0°C i ca. 1 time og deretter varmet opp til romtemperatur over natten. De flyktige forbindelsene ble fjernet og resten kromatografert med 10-20% metanol/diklormetan som ga 70 mg av produkt.
Generell fremgangsmåte 40:
1. 6-nitro-5-hydroksynikotinsyre (B2): Til en løsning av 5-hydroksynikotinsyre (Bl)
(7,0 g, 50 mmol) i konsentrert H2S04, ble det tilsatt 9 ml rykende HN03(90%) (9 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved 55-60°C i et forseglet rør i 4 dager. Blandingen ble deretter heilt over i is og pH ble justert til 3 med 50% NaOH. MgS04ble tilsatt for å mette den vandige blandingen, som deretter ble ekstrahert med isopropylalkohol (4x45 ml). Etter fjerning av isopropylalkohol under redusert trykk, ble 5,93 g (64% utbytte) av B2 oppnådd som et gult fast stoff.
.<]>H NMR (DMSO-d6) 5 8.01 (d, 1H, Ar-H), 8.41(d, 1H, Ar-H).
2. 2,6-diklorbenzyl-6-nitro-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinat (B3): 6-nitro-5-hydroksynikotinsyre (B2) (3,4 g, 18,5 mmol), 2,6-diklorbenzylbromid (8,88 g, 37 mmol), DIPEA (5,5 g, 42,5 mmol) ble oppløst i DMF (25 ml) i en 250 ml rundkolbe og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 4,5 timer og deretter konsentrert under redusert trykk. Den resulterende blandingen ble heilt over i is og filtrert. Det faste stoffet som ble samlet opp ble tørket under redusert trykk som ga 4,25 g (46% utbytte) avB3.
MS (APCI) (M+H)<+>503.
<!>H NMR (DMSO-d6) 5 5.47 (s, 2H, ArCH20), 5.71 (s, 2H, ArCH20), 7.24-7.43 (m, 6H, Ar-H), 8.26(d, 1H, Ar-H), 8.66(d, 1H, Ar-H).
3. 2,6-diklorbenzyl-6-amino-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinat (B4): En blanding av 2,6-diklorbenzyl-6-nitro-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinat (B3) (5,5 g, 10,96 mmol), jernpulver (0,92 g, 16,43 mmol), iseddiksyre (20 ml) og metanol (17 ml) ble rørt ved 85°C i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert til nær tørrhet og ammoniumhydroksid (30%) ble tilsatt for å nøytralisere blandingen. Minimummengde DMF ble til satt for å løse opp reaksjonsblandingen, som ble renset med flashkolonnekromatografi (eluent: EtOAc-EtOH, 9:1) som ga 4,5 g (87%) av B4 som et matt gult fast stoff.
MS (APCI) (M+H)<+>473.
4. 6-amino-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinsyre (B5): En blanding av 2,6-diklorbenzyl-6-amino-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinat (B4) (3,5 g, 7,4 mmol), liti-urnhydroksid (0,41 g, 17 mmol), vann (22 ml) og metanol (30 ml) ble rørt og refluksert ved 85°C i 5 timer. Blandingen ble konsentrert til tørrhet under redusert trykk. Den resulterende resten ble løst i vann, ekstrahert med en blanding av Et20/heksan (1:1,4x25 ml), og nøytralisert med IN HC1 som ga et hvitt presipitat, som ble filtrert og tørket under redusert trykk som ga 1,83 g (79%) av B5 som et hvitt fast stoff.<]>H NMR (DMSO-d6) 5 5.26 (s, 2H, ArCH20), 6.37 (s, 2H, NH2), 7.43-7.48 (t, 1H, Ar-H), 7.54 (s, 2H, Ar-H), 7.56 (s, 1H, Ar-H), 8.18 (s, 1H, Ar-H).
Til en oppstilling av 400 (il 0,2M løsning av forskjellige aminer i DMF i en 96-brønns plate ble det tilsatt 400 (il (0,2M i DMF) 4-[6-amino-5-(2,6-diklor-3-fluor-benzyloksy)-pyridin-3-yl]-benzosyre, 80 (il trietylamin (IM i DMF) og 160 (il HATU (0,5M i DMF) og reaksjonene ble rørt ved 70°C i 2 timer. Løsemidlet ble fjernet ved anvendelse av SpeedVac-apparatur og de urene reaksjonsblandingene ble gjenoppløst i DMSO og overført ved anvendelse av en væskehåndterer til en lml 96-brønns plate for å gi en slutteoretisk konsentrasjon på~10 mM. Reaksjonsblandingene ble analysert og positiv produktidentifisering ble gjort ved anvendelse av LC/MS. Morforrådsløsningen ble fortynnet til 50 nM og undersøkt for prosent inhibering av c-MET ved 50 nM.
Generell fremgangsmåte 41:
Til en oppstilling av 400 (il av 0,2M løsning av forskjellige aminer i DMF i en 96-brønns plate ble det tilsatt 400 (il (0,2M i DMF) av 6-amino-5-[(2,6-diklorbenzyl)oksy]nikotinsyre, 80 (il trietylamin (IM i DMF) og 160 (il HATU (0,5M i DMF) og reaksjonsblandingene ble rørt ved 70°C i 2 timer. Løsemidlet ble fjernet ved anvendelse av en SpeedVac-apparatur og de urene reaksjonsblandingene ble gjenopp-løst i DMSO og overført ved anvendelse av en væskehåndterer til en 1 ml 96-brønns plate for å gi en slutteoretisk konsentrasjon på~10 nM. Reaksjonsblandingene ble analysert og positiv produktidentifisering ble gjort ved anvendelse av LC/MS. Morfor-rådsløsningen ble fortynnet i 1 uM og undersøkt.
Generell fremgangsmåte 42 ved anvendelse av 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-N-(3-dimetylamino-propyl)-isobutyramid
Til en løsning av 4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-lH-pyrazol (5 g, 25,77 mmol) og 2-brom-2-metyl-propionsyre metylester (12,6 g, 27,06 mmol) i DMF (85 ml), ble det tilsatt CS2CO3(12,6 g, 38,65 mmol). Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 90°C på oljebad over natten. Reaksjonsløsningen ble avkjølt til romtemperatur og fordelt mellom vann og etylacetat. Den kombinerte etylacetatløsningen ble vasket med vann fem ganger, tørket over Na2S04og konsentrert som ga produktet 2-metyl-2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl[l ,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyrazol- l-yl]propionsyre metylester (4,776 g, 63% utbytte).
Til en løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-jod-pyridin-2-ylamin (6,363 g, 14,901 mmol) og 2-metyl-2-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyrazol-l-yl]propionsyre metylester (4,6 g, 15,64 mmol) i DME (27 ml) ble det tilsatt en løsning av CsF (6,79 g, 44,7 mmol) i vann (9,3 ml). Reaksjonsblandingen ble avgasset tre ganger med N2. Pd(dppf)CH2Cl2ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble avgasset tre ganger med N2. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 120°C under mikrobølgebe-tingelser (etterfølgende ble Pd tilsatt i intervaller på 30 minutter til fullstendig reaksjon). Vann ble tilsatt og reaksjonsblandingen ekstrahert med EtOAc, tørket over Na2S04og konsentrert som ga 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl]-pyrazol-l-yl}-2-metyl-propionsyre metylester. Det urene produktet ble renset med silikagelkolonnekromatografi med en gradient på 25%-50% EtOAc/heksan som ga 2-(4-{6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-2-metyl-propionsyre metylester (1,46 g, 21% utbytte) med en Rf 0,11 (50% EtOAc/heksan).
Til en løsning av metylesteren (2,92 g, 6,25 mmol) i MeOH (31 ml) ble det tilsatt en løsning av LiOH (450 mg, 18,76 mmol) i vann (6,25 ml). Reaksjonsblandingen ble varmet til 60°C til LCMS viste fullstendig hydrolyse (ca. 45 minutter). MeOH ble fjernet i vakuum og MeOH (2,5 ml) og vann (1 ml) ble tilsatt. pH ble justert til pH 5 med IN HC1, hvori produktet presipiterte ut. 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)- etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-2-metyl-propionsyreproduktet ble oppnådd etter filtrering (2,825 g, kvantitativt).
Til en løsning av 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-2-metyl-propionsyre (1,00 g, 2,20 mmol) i DMF (5,5 ml) ble det tilsatt HOBT (300 mg, 2,20 mmol), EDC (633 mg, 3,30 mmol) og N,N-dimetyl-propan-l,3-diamin (225 mg, 2,20 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter renset med omvendtfase C-18 prep HPLC eluert med acetonitril/vann med 0,1% eddiksyre som ga 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-N-(3-dimetylamino-propyl)-isobutyramid (170 mg, 14% utbytte).
Generell fremgangsmåte 43 ved anvendelse av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(3-metyl-pyrazol-1 -yl)-pyridin-1 -ylamin
Til en rørt løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-jod-pyridin-2-ylamin (100 mg, 0,23 mmol) og 3-metyl-lH-pyrazol (59 mg, 0,70 mmol) i DMSO (1 ml) ble tilsatt K3PO4(101 mg, 0,47 mmol), dodekan (0,015 ml, 0,05 mmol), cykloheksandiamin (0,009 ml, 0,07 mmol) og kobberjodid (Cul) (14 mg, 0,07 mmol). Løsningen ble boblet med nitrogen i 5 minutter og deretter bestrålet i en mikrobølgeapparatur ved 150°C i 2 timer, mens LCMS sjekket om reaksjonen var fullstendig, og blandingen renset med prep-HPLC som ga 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(3-metyl-pyrazol-l-yl)-pyridin-2-ylamin (30 mg), utbytte 34,2%.
Generell fremgangsmåte 44
2,5-dibrompyridin (1 molar ekvivalent) ble oppløst i vannfri toluen (0,085M) og avkjølt til -78°C. n-BuLi (1,2 molar ekvivalent) ble sakte tilsatt i løpet av 5 minutter og deretter ble den resulterende blandingen rørt ved -78°C. Etter 2 timer, ble R1COR2(1,3 molar ekvivalent) tilsatt og løsningen ble holdt ved -78°C. Etter 1 time, ble mettet vandig NH4CI tilsatt og løsningen ble varmet opp til romtemperatur. Produktet ble ekstrahert med EtOAc (3x) og de organiske ekstraktene ble kombinert, tørket (Na2S04), konsentrert og renset med kolonnekromatografi (10% EtOAc/heksan - 100% EtOAc) som ga urent produkt. Dette ble anvendt direkte i generell fremgangsmåte 27 som ga 25.
Generell fremgangsmåte 45
Til en løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fiuor-fenyl)-etoksy]-pyirdin-2-ylamin (1,8 g, 6,04 mmol), sinkcyanid, 98% (2,07 g, 12,07 mmol) og l,l'-bis(difenylfosfino)-ferrocen, 97% (0,4 g, 0,712 mmol) i DMF (48 ml) ble det tilsatt [l,l'-bis(difenylfosfino)-ferrocen]diklorpalladium(II)kompleks med diklormetan (1:1) (0,25 g, 0,30 mmol). Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 150°C over natten under nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med EtOAc (50 ml), vasket med 4:1:4 mettet NH4Cl/28% NH4OH/H2O (2x28 ml) og tørket over Na2S04. Den urene blandingen ble renset med en silikagelkolonne eluert med en lineær gradient av 25%-50%
(EtOAc/heksan) som ga 2-[l-(2-amino-pyridin-3-yloksy)-etyl]-3-klor-4-dimetylamino-
benzonitril som et gult faststoff (37% utbytte) og 2-[l-(2-amino-pyridin-3-yloksy)-etyi]-4-dimetylamino-isoftalonitril som et mørkt brunt faststoff (33% utbytte).
Generell fremgangsmåte 46
Til en blanding av 4-brom-imidazol (995 mg, 6,77 mmol), kaliumhydroksid (380 mg, 6,77 mmol), kaliumkarbonat (936 mg, 6,77 mmol) og tetra-n-butylammoniumbromid (109 mg, 0,339 mmol) i diklormetan (7 ml) ble det tilsatt tert-butylbromacetat (0,50 ml, 3,4 mmol). Etter røring over natten ble reaksjonsblandingen filtrert. Filtratet ble tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan og etylacetat som ga (4-brom-imidazol-l-yl)-eddiksyre tert-butylester (696 mg, 79%).
Generell fremgangsmåte 47
En 4M løsning av saltsyre i dioksan (0,22 ml, 0,89 mmol) ble tilsatt til en løsning av (4-{6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-imidazol-1 -yl)-eddiksyre tert-butylester (86 mg, 0,18 mmol) i diklormetan (2 ml). Etter røring i 2 dager ble reaksjonsblandingen konsentrert ved rotasjonsfordampning og resten løst i en mini-mum mengde metanol. Denne løsningen ble tilsatt dråpevis til eter og den resulterende blandingen ble stående over natten. Blandingen ble filtrert og presipitatet vasket med eter og lufttørket som ga (4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-imidazol-l-yl)-eddiksyre (83 mg, 93%).
Generell fremgangsmåte 48
En blanding av 4-brom-imidazol (217 mg, 1,48 mmol) og cesiumkarbonat (875 mg, 2,69 mmol) i dimetylformamid (5 ml) ble rørt i 30 minutter. 4-(2-klor-etyl)-morfolin hydroklorid (250 mg, 1,34 mmol) ble tilsatt og blandingen ble varmet opp til 50°C. Etter oppvarming over natten, ble reaksjonsblandingen konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble suspendert i en blanding av diklormetan og metanol og filtrert. Filtratet ble konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan og metanol som ga 4-[2-(4-brom-imidazol-l-yl)-etyl]-morfolin (148 mg, 42%).
Generell fremgangsmåte 49
Isoksazol (0,64 ml, 10 mmol) ble tilsatt til en løsning av N-jodsuksinimid (2,3 g, 10 mmol) i trifluoreddiksyre (20 ml). Etter røring over natten, ble vann (50 ml), heksan (50 ml) og natriumbisulfitt tilsatt til reaksjonsblandingen. Fasene ble separert og den organiske fasen tørket over Na2SC«4, filtrert og konsentrert ved rotasjonsfordampning som ga 4-jod-isoksazol (218 mg, 11%).
Generell fremgangsmåte 50
Trifluoreddiksyre (5 ml) ble tilsatt til en løsning av 6'-brom-5-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksy]-[3,3']bipyridinyl-6-yl-bis-(tert-butoksykarbonyl)-amin (1,3 g, 2,0 mmol) i diklormetan (15 ml). Etter 3 timer ble like porsjoner vann og mettet vandig natriumbikarbonat tilsatt. Fasene ble separert og vannfasene ekstrahert med diklormetan. De kombinerte organiske fasene ble tørket over NaiSCvog konsentrert ved rotasjonsfordampning som ga 6'-brom-5-[l-(2,6-diklor-3-fiuor-fenyl)-etoksy]-[3,3']bipyridinyl-6-ylamin (968 mg, 106%).
Et rør ble tilsatt 6'-brom-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-[3,3']bipyridinyl-6-ylamin (92 mg, 0,20 mmol), 4-pyrrolidin-l-yl-piperidin (0,62 g, 4,0 mmol) og N-metylpyrrolidinon (0,8 ml). Røret ble forseglet og blandingen varmet opp til 80°C over natten. Temperaturen ble økt til 100°C i 5,5 timer og deretter stoppet oppvarmingen opp. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom etylacetat og vann. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med etylacetat. De kombinerte organiske fasene ble tørket over MgSC«4, og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan, metanol, og ammoniumhydroksid som ga 5"-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-4-pyrrolidin-l-yl-3,4,5,6-tetrahydro-2H-[l,2',5',3"]terpyridin-6"-ylamin (53 mg, 50%).
Generell fremgangsmåte 51
Natriumhydrid (56 mg, 2,3 mmol) ble tilsatt til en løsning av piperidin-4-ol (214 mg, 2,11 mmol) i DMSO (8 ml). Etter røring i 30 minutter ble 2,5-dibrompyridin tilsatt. Etter røring i 24 timer, ble natriumhydrid (56 mg, 2,3 mmol) tilsatt. Etter røring i ytterligere 24 timer ble reaksjonsblandingen fordelt mellom etylacetat og vann. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med etylacetat. De kombinerte organiske fasene ble tørket over MgSC*4 og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering med diklormetan, metanol og ammoniumhydroksid som ga 5-brom-2-(piperidin-4-yloksy)-pyridin (316 mg, 58%).
Generell fremgangsmåte 52
Et reaksjonsrør ble tilsatt 2,5-dibrompyridin (0,24 g, 1,0 mmol), 4-amino-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (0,22 g, 1,1 mmol), di-isopropyletylamin (0,19 ml, 1,1 mmol) og N-metylpyrrolidinon (1,0 ml). Røret ble forseglet og blandingen ble varmet til 80°C over natten. Temperaturen ble økt til 120°C og blandingen varmet opp over natten. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom etylacetat og vann. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med etylacetat. De kombinerte organiske fasene ble tørket over MgS04og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering med etylacetat og heksan som ga 4-(5-brom-pyridin-2-ylamino)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (36 mg, 10%).
Generell fremgangsmåte 53
4-(4- {6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-etoksy-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -benzoyl)-piperazin-l-karboksylsyre tert-butylester: Til 4 ml DMSO ble det tilsatt 0,124 ml etanol fulgt av 32 mg NaH. Etter røring i 30 minutter ble 250 mg 4-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -benzoyl)-piperazin-1 -karboksylsyre tert-butylester tilsatt og reaksjonsblandingen ble varmet opp til 40°C. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt og heilt over i vann for presipitasjon. Etter nøytralisering til pH 6, ble 200 mg av et gyldenbrunt faststoff isolert, 77%. Generell fremgangsmåte 54
(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-hydroksy-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-fenyl)-piperazin-1-yl-metanon: Til 140 mg 4-[4-(6-amino-5-{l-[2,6-diklor-3-(2,4,6-trimetoksy-benzyloksy)-fenyl]-etoksy]-pyridin-3-yl)-benzoyl]-piperazin-1 -karboksylsyre tert-butylester (fra generell fremgangsmåte 53) ble det tilsatt 1 ml TFA, og løsningen forandret farve til rødaktig umiddelbart etterfølgende tilsetning av 100 ul trietylsilan 3 sekunder senere. Løsningen forandret farve til gul. Etter røring i 4 timer, ble 5 ml toluen tilsatt og løsemidlet ble fjernet i vakuum. Kromatografi med 10% MeOH/CH^Ck til 0,5% til 1% NH4OH/9,5 til 9% MeOH/90% CH2C12førte til 55 mg av et hvitt faststoff, 62% utbytte.
Generell fremgangsmåte 55
2-( 4- brom- 2- metoksyfenoksv) etanol ( 8a): Kaliumkarbonat (1,4 g, 10 mmol) ble tilsatt til en løsning av etylenkarbonat (1,8 g, 20 mmol) og 4-brom-2-metoksyfenol (1,05 g, 5 mmol) i 5 ml toluen under en inert atmosfære. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til 115°C i 12 timer. Vann (50 ml) og etylacetat (2x100 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen under røring. De organiske sjiktene ble kombinert, tørket, filtrert og fordampet
som ga en gul oljeaktig rest. Resten ble renset med flashkromatografi (edluert med 40 -> 45% EtOAc i heksan) som ga forbindelse 8a som en lys brun olje (1 g; 4,13 mmol; 82,6% utbytte).
MS (APCI) (M+H)<+>246.
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 2.83 (t, .7=6.3 Hz, 1 H) 3.84 (s, 3 H) 3.89 - 4.01 (m, 2 H) 4.03 - 4.13 (m, 2 H) 6.78 (d, .7=8.3 Hz, 1 H) 6.99 (d, 1 H) 7.02 (d, 1 H).
4- brom- 1 -( 2- kloretoksv)- 2- metoksybenzen ( 8b): Tionylklorid (0,3 ml) ble tilsatt til en
løsning av forbindelse 1 i 1 ml pyridin på isbad. Reaksjonsblandingen ble rørt på isbad i 10 minutter og deretter varmet opp til 100°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og nøytralisert med fortynnet HC1 (IM). CH2CI2(2x100 ml) ble tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. De kombinerte organiske sjiktene ble tørket over Na2S04og deretter konsentrert under vakuum. Resten ble renset med flashkromatografi (eluert med 10 -» 15% EtOAc i heksan) som ga forbindelse 8b som en farveløs olje (485 mg, 1,84 mmol, 50,3% utbytte).
MS (APCI) (M+H)<+>264.<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 3.81 (t, .7=6.2 Hz, 2 H) 3.85 (s, 3 H) 4.23 (t, .7=6.2 Hz, 2 H) 6.78 (d, .7=8.6 Hz, 1 H).
Forbindelse 9: Forbindelser med formel 9 kan dannes ved følgende eksempelfremgangsmåte: Forbindelse Al8 (1,3 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av arylhalid (0,51 mmol) i 7 ml DME. Blandingen ble overstrømmet med nitrogen flere ganger og deretter ble diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 1,5 ml H2O ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Vann (20 ml) ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som ga ønsket produkt, forbindelse 9.
Forbindelse 10: Forbindelser med formel 10 kan dannes ved følgende eksempelfremgangsmåte: Amin (7 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 9 (0,17 mmol) i 3 ml 2-metoksyetanol. Den resulterende løsningen varmes opp til 85°C i 12 timer. Vann (20 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes som gir en lys brun oljerest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 10.
Generell fremgangsmåte 56
Forbindelse 14: Forbindelser med formel 14 kan dannes ved følgende eksempelfremgangsmåte: Litiumheksametyldisilazid (1,2 molar ekvivalent, IM i THF) tilsettes til en løsning av alkohol (1 mmol) i 2 ml THF. Blandingen røres ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 30 minutter og deretter blir 5-brom-2-klorpyrimidin (1 molar ekvivalent) tilsatt. Den resulterende løsningen varmes opp til 75°C i 12 timer. Vann (20 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes for å gi en olje rest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc i heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 14.
Forbindelse 11: Forbindelse Al8 (1,3 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av 5-brom-2-klorpyrimidin eller forbindelse 14 (1 mmol) i 24 ml DME. Blandingen over-strømmes med nitrogen flere ganger og deretter blir diklorbis(trifenylfosfin)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 3 ml H2O tilsettes til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen varmes opp til 85°C i 12 timer. Vann (50 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (100 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes som gir en mørk brun oljerest. Resten renses med flashkromatografi (eluert med 40 -» 55% EtOAc i heksan) som gir forbindelse 11.
Forbindelse 12: Amin (2 molar ekvivalent) tilsettes til en lønsing av forbindelse 11 i 3 ml n-butanol. Reaksjonsblandingen bestråles i en mikrobølgeovn ved 120°C i 30 minutter. Den resulterende blandingen helles over i en blanding av H2O og EtOAc (100 ml; v:v, 1:1). Den organiske sjiktet tørkes, filtreres og fordampes som gir en lys brun oljerest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 12.
Forbindelse 13: Syre (16 molar ekvivalent eller mindre) tilsettes til forbindelse 12 (0,14 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsningen røres ved romtemperatur eller varmes opp til 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen fordampes og resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som gir ønsket amidprodukt, forbindelse 13, som et gulaktig hvitt faststoff.
Generell fremgangsmåte 57
Forbindelse 15: Natriumhydrid (1,3 molar ekvivalent) og RX (1,1 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av 2-amino-5-brompyridin (0,84 mmol) i 3 ml DMF. Reaksjonsblandingen bestråles i mikrobølgeovn ved 100°C i 20 minutter. Den resulterende blandingen helles over i en blanding av H2O og EtOAc (100 ml; v:v, 1:1). Det organiske sjiktet tørkes, filtreres og fordampes som gir en lys brun oljerest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 15.
Forbindelse 16: Forbindelse Al8 (1,3 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 15 (0,25 mmol) i 5 ml DME. Blandingen overstrømmes med nitrogen flere ganger og deretter blir diklorbis(trifenylfosfin)palladium (II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 0,8 ml H2O tilsettes til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen varmes opp til 85°C i 12 timer. Vann (50 ml) til settes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (100 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes som gir en mørk brun oljerest. Resten renses med flashkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc, og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 16.
Forbindelse 17: Syre (16 molar ekvivalent eller mindre) tilsettes til forbindelse 16 (0,114 mmol) ved romtemperatur. Den resulterende løsningen røres ved romtemperatur eller varmes opp til 60°C i 12 timer. Reaksjonsblandingen fordampes og resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, EtOAc og CH2CI2) som gir ønsket amidprodukt, forbindelse 17, som et gulaktig til hvitt faststoff.
Generell fremgangsmåte 58
t-(butoksykarbonyl)azetidin-3-karboksylsyre (1-1)(AXL016917.1000 mg, 4,97 mmol) ble oppløst i MeOH (5 mi)/toluen (20 ml) og blandingen avkjøles deretter til 0°C.
TMSCHNN (trimetylsilyldiazometan) (7,45 mmol) ble deretter dråpevis tilsatt i løpet av 15 minutter med noe bobling observert. Farven begynner å bli klarere og forandres sakte til gul. Løsningen røres i 10 minutter ved 0°C og varmes deretter opp til romtemperatur i løpet av 30 minutter. Løsningen ble deretter konsentrert og pumpet for å fjerne toluen som gir 1,055 g l-t-butyl-3-metylazetidin-l,3-dikarboksylat ( 1- 2) som anvendes direkte i neste trinn uten rensing (99% urent utbytte).
1-tert-butyl 3-metylazetidin-l,3-dikarboksylat (1055 mg, 4,90 mmol) løses i THF (17 ml) og avkjøles deretter til 0°C. MeOH (0,397 ml, 9,80 mmol) og LiBH4(14,7 mmol) tilsettes sekvensielt. Reaksjonsblandingen varmes opp til romtemperatur i løpet av 3 timer. Deretter blir 10% vandig kaliumnatriumtartratetahydrat (Rochelle's salt) (30 ml) og EtOAc (30 ml) tilsatt og løsningen røres ved romtemperatur i 30 minutter. Det organiske sjiktet separeres og tørkes deretter (Na2S04) og konsentreres som gir 674 mg t-butyl 3-(hydroksymetyl)azetidin-l-karboksylat ( 1- 3) som et urent produkt (klar olje). Produktet anvendes direkte i neste trinn uten rensing.
t-butyl 3-(hydroksymetyl)azetidin-l-karboksylat (674 mg, 3,60 mmol) oppløses i CH2C12(13 ml, 0,25M) og deretter blir Et3N (1,0 ml, 7,20 mmol), DMAP (44 mg, 0,360 mmol) og metansulfonylklorid (0,31 ml, 3,96 mmol) tilsatt sekvensielt ved 0°C med MsCl-tilsetting gjort sakte. Løsningen varmes opp til romtemperatur i løpet av 1 time. Etter 15 timer, blir mettet vandig NaHCOj(50 ml) tilsatt og deretter blir produktet ekstrahert med CH2CI2(2x50 ml) og de kombinerte organiske ekstraktene vaskes med saltvann (50 ml), tørkes (Na2S04), konsentreres og renses med flashkromatografi (Biotage Horizon - 10% EtOAc/heksan - 100% EtOAc) som gir 962 mg av ( 1- 4) som en olje (kvantitativt).
NaH (95%, 96 mg, 3,99 mmol) kombineres med DMF (10 ml) under N2ved romtemperatur. 4-brompyrazol (533 mg, 3,63 mmol) blir deretter tilsatt og blandingen røres ved romtemperatur. Etter 30 minutter blir ( 1- 4) tilsatt og løsningen varmes opp til 95°C. Etter 2 timer blir mettet vandig NH4C1 (50 ml) tilsatt og deretter EtOAc (50 ml). Det organiske ekstrakteres tørkes (Na2S04) og konsentreres, og kjøres deretter gjennom en kort silikagelpute med 50% EtOAc/heksan som gir 846 mg av uren ( 1- 5) som deretter anvendes direkte i neste trinn (74% urent utbytte).
( 1- 5) (846 mg, 2,68 mmol), CL6) (815 mg, 3,2 mmol), [l,l'-bis(difenylfosfino)-ferrocen]diklorpalladium (108 mg, 0,133 mmol) og KO Ac (893 mg, 9,10 mmol) blir kombinert i DMSO (10 ml, overstrømmet med N2i 10 minutter) og deretter ble løsning-en varmet opp til 80°C. Etter 16 timer, blir løsningen filtrert gjennom celitt og deretter blir H2O (50 ml) og EtOAc (50 ml) tilsatt. Den organiske fasen ekstraheres og tørkes (Na2S04), konsentreres og passeres deretter gjennom en celikaplugg med 50%
EtOAc/heksan. Løsemidlet konsentreres som gir 1,22 g av uren ( l - l ) som anvendes direkte i neste trinn.
Borsyreesteren (LT) (4144 mg, 11,4 mmol), CL8) (2890 mg, 7,60 mmol), diklor-bis(trifenylfosfin)palladium(II) (534 mg, 0,760 mmol), DME (40 ml, avgasset i 30 minutter med N2), og IN Na2C03(40 ml, avgasset i 30 minutter med N2) kombineres og oppvarmet til 80°C. Etter 16 timer blir reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og EtOAc (80 ml) tilsettes. Løsningen filtreres gjennom celitt og vann (80 ml) blir tilsatt. Det organiske sjiktet separeres, tørkes (Na2S04) og konsentreres. Produktet renses med flashkromatografi som gir 1486 mg av ( 1- 9) som et gyldenbrunt faststoff (36%). 1 g DOWEX 50WX2-400 ionebytterharpiks blir fremstilt ved å vaske det med H20 (500 ml), 1:1 H20/MeOH, MeOH (5x 250 ml), CH2C12(500 ml) og heksan (500 ml). DOWEX blir deretter tørket i vakuumovn ved 40°C i 1 dag. ( 1- 9) løst i MeOH og deretter DOWEX (588 mg, 1,096 mmol) tilsettes. Løsningen røres ved romtemperatur i 2 timer. Løsningen blir deretter filtrert og harpiksen vasket med MeOH (3x200 ml) og vaskingen kastet. Harpiksen blir deretter vasket med 3,5M NH3/MeOH og samlet opp. Løsningen blir deretter konsentrert som gir 374 mg av ( 1- 10) som et gummiaktig faststoff (78%).
For å danne forbindelser med formel ( 1- 11) kan følgende eksempelfremgangsmåte føl-ges. 1 molar ekvivalent av ( 1- 10) løst i DMF eller CH2CI2og deretter blir base (3 molar ekvivalenter) og/eller koblingsreagens (1,5 molar ekvivalenter) tilsatt. Til løsningen blir det tilsatt X-R (1,1 molar ekvivalent), hvor X f.eks. er Cl, Br, I, OMs, COC1, CO, COOH, etylen eller karbonat og R er en ønsket gruppe slik som de som er vist i eksemplene heri eller tilsvarende grupper. Den resulterende løsningen røres ved romtemperatur i 4 timer. H2O og EtOAc tilsettes og den organiske fasen ekstraheres, tørkes (Na2S04) og konsentreres. Det urene produktet kan renses ved preparativ HPLC eller andre metoder kjente i litteraturen for å gi produkt ( 1- 11).
Generell fremgangsmåte 59
3-azetidinol ( 2 - 2 ) : En reaksjonsblanding av N-benzhydrylazetidin-3-ol HCl-salt (2,76 g, 10,0 mmol) med palladiumhydroksid, 20% Pd (tørr base) på C (400 mg) i 50 ml MeOH hydrogeneres ved 55 psi i 48 timer. Reaksjonsblandingen filtreres gjennom en celittpute og vaskes godt med MeOH. Filtratet konsentreres under vakuum ved romtemperert
vannbad. Resten behandles med eter (3x30 ml) og løsemidlet dekanteres. Det faste stoffet lufttørkes som gir 571 mg av HCl-saltproduktet (2=2) som et hvitt faststoff (52% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 3.33 (s, 1 H) 3.63 - 3.80 (m, 2 H) 3.93 - 4.09 (m, 2 H) 4.40 - 4.58 (m, 1 H) 6.18 (d, .7=6.32 Hz, 1 H).
3-hydroksy-azetidin-l-karboksylsyre tert-butylester ( 3- 3): Til en kald (0°C bad) rørt
løsning av forbindelse ( 2- 2) (570 mg, 5,20 mmol) i 10 ml EtOH blir det tilsatt Et3N (1,8 ml, 13,0 mmol) og di-tert-butyldikarbonat (1,702 g, 7,38 mmol). Den resulterende blandingen av en klar løsning blir rørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen
konsentreres i vakuum. Resten fordeles mellom EtOAc (200 ml) og 0,5N sitronsyreløs-ning (30 ml) og saltvann (30 ml). Det organiske sjiktet tørkes (Na2S04) og konsentreres med vakuum for å gi 899 mg ( 2- 3) som en klar olje (52%).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.42 (s, 9 H) 3.78 (dd, 7=9.47,4.42 Hz, 2 H) 4.13 (dd, 7=9.35, 6.57 Hz, 2 H) 4.49 - 4.63 (m, 1 H).
3-metansulfonyloksy-azetidin-l-karboksylsyre tert-butylester ( 2- 4): Til en løsning av forbindelse (2=3) (466 mg, 2,69 mmol) med Et3N (0,75 ml, 5,38 mmol) og 4-(dimetylamino)-pyridin (33 mg, 0,269 mmol) i 10 ml CH2CI2ble det ved 0°C tilsatt metansulfonylklorid (0,25 ml, 3,23 mmol). Den resulterende blandingen av en brunfarvet løsning ble rørt ved 0°C til romtemperatur over natten. Reaksjonen blir stoppet med NaHC03, og deretter blir blandingen fordelt mellom CH2C12(200 ml) og mettet NaH-C03-løsning (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og deretter filtrert gjennom silikagelpute, eluert med heksan:EtOAc/l:l; og filtratet ble konsentrert med vakuum for å gi 614 mg ( 2- 4) som en gul olje (91% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.43 (s, 9 H) 3.05 (s, 3 H) 4.08 (dd, 7=10.36, 4.29 Hz, 2 H) 4.26 (dd, 7=10.36, 6.82 Hz, 2 H) 5.11 - 5.26 (m, 1 H). l-(3-azetidin-l-karboksylsyre tert-butylester)-4-brompyrazol ( 2- 6): Et 5 ml mikrobølge-rør ble tilsatt forbindelse ( 2- 4) (304 mg, 1,21 mmol); 4-brompyrazol ( 2- 5, 178 mg, 1,21 mmol) og NaH 60% i mineralolje (73 mg, 1,82 mmol) med 2 ml DMF. Den resulterende blandingen ble mikrobølgebehandlet ved 110°C i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet blir tørket (Na2S04), og deretter konsentreret ved vakuum som ga 360 mg ( 2- 6) som en gul olje (98%).
<!>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.36 - 1.43 (m, 9 H) 4.08 (s, 2 H) 4.18 - 4.31 (m, 2 H) 5.12 - 5.22 (m, 1 H) 7.67 (s, 1 H) 8.14 (s, 1 H).
tert-butyl 3-[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3-dioksoborolan-2-yl)-lH-pyrazol-l-yl]azetidin-l-karboksylat ( 2- 8): En reaksjonsbladning av forbindelse ( 2- 6) (225 mg, 0,74 mmol) og bis(pinakolat)diboron (2£7, 227 mg, 0,89 mmol) med KO Ac (247 mg, 2,52 mmol) i 3 ml DMSO ble overstrømmet med N2i 15 minutter, og deretter ble PdC^dppfhC^Cb (30 mg, 2,52 mmol) tilsatt. Den resulterende blandingen ble rørt ved 80°C under N2over natten. Deretter ble den avkjølt til romtemperatur og blandingen ble filtrert gjennom en celittpute og vasket godt med EtOAc. Filtratet ble ekstrahert med H2O (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og deretter konsent-
rert i vakuum. Resten ble deretter filtrert gjennom en silikagelpute, eluert med heksan:EtOAc/3:2. Filtratet ble konsentrert i vakuum som ga 250 mg av ( 2- 8") som en klar olje (97% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.18 -1.27 (m, 9 H) 1.28 - 1.34 (m, 6 H) 1.41
- 1.49 (m, 6 H) 4.22 - 4.33 (m, 2 H) 4.36 (t, J=8.59 Hz, 2 H) 4.98 - 5.13 (m, 1 H) 7.83 (s,2H). tert-butyl 3-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-lH-pyrazol-l-yl)azetidin-l-karboksylat ( 2- 10): En reaksjonsblanding av forbindelse ( 2- 8) (459 mg, 1,31 mmol) og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-jodpyridin-2-amin ( 2- 9) (374 mg, 0,88 mmol) i 13 ml etylenglykoldimetyleter, vannfri (DME) ble overstrømmet med N2i 15 minutter og deretter ble Pd(II)(PPh3)2Cl2(46 mg, 0,07 mmol) tilsatt og over-strømming med N2fortsatte i ytterligere 15 minutter. Ytterligere 1,0N Na2CC>3-løsning (3,9 ml, 3,9 mmol) ble tilsatt etter overstrømming med N2i 15 mintuter. Den resulterende blandingen ble rørt ved 85°C under N2over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celittpute og vasket godt med MeOH. Filtratet ble konsentrert i vakuum. Resten ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml), og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og deretter konsentrert i vakuum. Resten ble renset med Biotage-system (25M, 100% CH2C12; 100% CH2C12til 90% CH2C12med 10% MeOH) for å samle opp den ønskede fraksjonen som ga 421 mg av ( 2- 10) som en brunfarvet olje (92% utbytte).<!>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.17 - 1.26 (m, 9 H) 1.80 - 1.87 (m, 3 H) 4.04 - 4.18 (m, 2 H) 4.20 - 4.33 (m, 2 H) 4.34 - 4.41 (m, 1 H) 4.79 (s, 2 H) 5.02 (d, 7=7.58 Hz, 1 H) 7.04 (t, 7=8.46 Hz, 1 H) 7.33 - 7.41 (m, 1 H) 7.44 - 7.52 (m, 1 H) 7.53 - 7.58 (m, 1 H) 7.59 - 7.65 (m, 1 H) 7.72 - 7.78 (m, 1 H);
LCMS beregnet for C24H26C12FN503(M+H) 523, funnet 523. 5 -(1 -azetidin-3 -yl-1 H-pyrazol-4-y l)-3 - [ 1 -(2,6-diklor-3 -fluorfeny l)etoksy ]pyridin-2 -amin ( 2- 11): En reaksjonsblanding av forbindelse ( 2- 10) (421 mg, 0,81 mmol) med 4,0M HC1 i dioksan (2,0 ml, 8,1 mmol) i 5 ml CH2C12ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum. Resten ble behandlet med EtOAc. Det presipiterte faste stoffet ble filtrert fra og vasket godt med EtOAc, heksan og deretter tørket under vakuum som ga 275 mg av ( 2- 11) som et sandfarvet faststoff av HCl-salt (81% utbytte).<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.79 - 1.89 (m, 3 H) 3.56 (s, 1 H) 4.35 (s, 4 H) 5.40 (s, 1 H) 6.23 (d, 7=6.57 Hz, 2 H) 7.09 (s, 1 H) 7.40 - 7.54 (m, 1 H) 7.59 (dd, .7=8.84, 5.05 Hz, 1 H) 7.73 - 7.83 (m, 1 H) 7.86 (s, 1 H) 8.12 (s, 1 H) 9.20 (s, 1 H). LCMS beregnet for C19H18CI2FN5O (M+H) 423, funnet 423.
Forbindelser med formel 2- 12 kan fremstilles ved å følge eksempelfremgangsmåten: Til en reaksjonsblanding av forbindelse ( 2- 11) (1,0 ekv.) med Et3N (2,0 ekv.) i 2,0 ml DMF ble det ved romtemperatur tilsatt alkylbromid (1,1 ekv.). Den resulterende blandingen ble rørt under N2ved romtemperatur over natten. Reaksjonsbladningen ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04), og deretter konsentrert i vakuum. Resten ble renset med Dionex-system (5% til 95% MeCN:H20 vekt 0,1% HOAc-buffer) for å samle opp ønsket fraksjon som ga ( 2- 12).
Alternativt, kan forbindelser med formel 2- 12 fremstilles ved å følge eksempelfremgangsmåten: Til en reaksjonsløsning av alkylamin (1,0 ekv.) med iP^EtN (diisopropyletylamin) (3,0 ekv.) i 2,0 ml DMF ble det tilsatt HATU (1,5 ekv.). Etter røring i 30 minutter, blir forbindelse ( 2- 11) (1,0 ekv.) tilsatt. Den resulterende blandingen røres ved romtemperatur over natten. Reaksjonsbladningen fordeles mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet tørkes (Na2S04) og konsentreres i vakuum. Resten renses med Dionex-system (5% til 95% McCN:H20 vekt 0,1% HOAc) for å samle opp ønsket produkt som gir ( 2- 12).
Generell fremgangsmåte 60:
tert-butyl l-oksa-6-azaspiro[2,5]oktan-6-karboksylat ( 3- 2): En løsning av dimetylsul-foksoniummetylid ble fremstilt under N2fra NaH 60% dispersjon i mineralolje (440 mg, 11,0 mmol) og trimetylsulfoksoniumjodid (2,421 g, 11,0 mmol) i 5 ml vannfri DMSO. En annen løsning av l-Boc-4-okso-l-piperidinkarboksylat ( 3- 1,1,993 g, 10,0 mmol) i 5 ml DMSO ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blandingen ble rørt ved 55°C i 6 timer. Den avkjølte reaksjonsblandingen ble heilt over i is-H-20 og ekstrahert med EtOAc (2x200 ml). De kombinerte organiske sjiktene ble vasket med H2O (50 ml), saltvann (50 ml) og deretter tørket (Na2S04), og deretter konsentrert i vakuum som ga 1,4791 g ( 3- 2) som en gul olje (69% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.37 - 1.52 (m, 11 H) 1.71 - 1.84 (m, 2 H) 2.63 - 2.72 (m, 2 H) 3.35 - 3.49 (m, 2 H) 3.62 - 3.78 (m, 2 H).
tert-butyl 4-hydroksy-4- {[4-(4,4,5,5-tetrametyl-l ,3,2-dioksaborolan-2-yl)-lH-pyrazol-l-yl]metyl}piperidin-l-karboksylat ( 3- 4): En reaksjonsblanding av forbindelse ( 3- 2)
(214 mg, 1,0 mmol) og 4-(4,4,5,5-tetrametyl-l,3,2-dioksaborolan-2-yl)-lH-pyrazol (3=3, 194 mg, 1,0 mmol) med NaH 60% dispersjon i mineralolje (6 mg, 1,5 mmol) i 3 ml DMF ble rørt ved 90°C i 3 timer. Reaksjonsbladningen ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHCOa-løsning (50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum som ga 361 mg av ( 3- 4) som en gul olje (89% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.21 - 1.34 (m, 12 H) 1.39 - 1.50 (m, 9 H) 1.56 - 1.78 (m, 4 H) 3.14 (s, 2 H) 3.72 - 3.91 (m, 7=32.34 Hz, 2 H) 4.05 (s, 2 H) 7.65 (s, 1 H) 7.80 (s, 1 H) 8.00 (s, 1 H).
LCMS bergnet for C20H34BN3O5(M+H) 408, funnet 408. HPLC renhet 85%.
tert-butyl 4-[(4- {6-amino-5-[l -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} - 1H-pyrazol-l-yl)metyl]-hydroksypiperidin-l-karboksylat ( 3- 6): En reaksjonsblanding av forbindelse (3=4) (361 mg, 0,89 mmol) og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy-5-jodpyridin-2-amin ( 3- 5) (378 mg, 0,89 mmol) i 9,0 ml etylenglykol dimetyleter, vannfri (DME) ble overstrømmet med N2i 15 minutter og deretter ble Pd(II)(PPh3)2Cl2(32 mg, 0,05 mmol) tilsatt og blandingen ble fortsatt overstrømmet med N2i ytterligere 15 minutter. Ytterligere 1,0N Na2CC«3-løsning (3,9 ml, 3,9 mmol) ble tilsatt etter overstrøm-ming med N2i 15 minutter. Den resulterende blandingen ble rørt ved 85°C under N2over natten. Reaksjonsblandingen ble filtreret gjennom celittpute og vasket godt med MeOH. Filtratet ble konsentrert i vakuum. Resten ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tør-ket (Na2S03), og deretter konsentrert i vakuum. Resten ble renset med Dionex-system (25% til 95% MeCN:H20 vekt 0,1% HOAc-buffer) for å samle opp ønsket fraksjon som ga 147 mg av (3=6) som et hvitt fast stoff (28% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.34 - 1.39 (m, 9 H) 1.70 - 1.77 (m, 2 H) 1.79 (d, 7=6.57 Hz, 3 H) 3.06 (d, 7=12.63 Hz, 2 H) 3.62 (s, 2 H) 4.03 (s, 2 H) 4.79 (s, 1 H) 5.66 (s, 2 H) 6.08 (d, 7=6.82 Hz, 1 H) 6.86 (d, 7=1.52 Hz, 1 H) 7.44 (t, 7=8.72 Hz, 1 H) 7.51 - 7.58 (m, 2 H) 7.58 - 7.65 (m, 2 H) 7.73 (d, 7=1.52 Hz, 1 H) 7.78 (s, 1 H). LCMS beregnet for C27H32C12FN504(M+H) 581, funnet 581. HPLC-renhet 87%.
4-[(4- {6-amino-5-[l -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} - lH-pyrazol-1 - yl)metyl]piperidin-4-ol ( 3- 7): En reaksjonsblanding av forbindelse ( 3- 6) (145 mg, 0,25 mmol) med 4,0M HC1 i dioksan (2,0 ml, 8,1 mmol) i 5 ml CH2C12ble rørt ved romtemperatur i 2,0 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum. Resten ble renste med Dionex-system (5% til 95% MeCN:H20 vekt 0,1% HOAc-buffer) for å samle opp ønsket fraksjon som ga 76 mg av ( 3- 7) som en gul olje (63% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.41 - 1.55 (m, 2 H) 1.59 - 1.71 (m, 2 H) 1.81 (d, 7=6.57 Hz, 3 H) 2.88 - 3.00 (m, 2 H) 3.02 - 3.14 (m, 2 H) 4.08 (s, 2 H) 5.17 (s, 2 H) 6.14 - 6.27 (m, 7=6.57 Hz, 1 H) 7.05 (s, 1 H) 7.40 - 7.49 (m, 7=8.72, 8.72 Hz, 1 H) 7.51 - 7.60 (m, 7=9.09,4.80 Hz, 1 H) 7.63 (s, 1 H) 7.76 (s, 1 H) 7.91 (s, 1 H) 8.51 (s, 1 H) 8.81 (s, 1 H).
LCMS beregnet for C22H24CI2FN5O2(M+H) 481, funnet 481. HPLC-renhet 98%. Analyse (C22H24Cl2FN5O2x2.2HOAcx2.3H2O) C, H, N.
Generell fremgangsmåte 61;
Etyl 2-[(4-borm-lH-pyrazol-l-yl)metyl]cyklopropankarboksylat ( 4- 3): Til en reaks-jonsløsning av etyl 2-(hydroksymetyl)cyklopropankarboksylat ( 4- 1) (577 mg, 4,0 mmol) med Et3N (1,1 ml, 8,0 mmol) og DMAP (49 mg, 0,4 mmol) i 12 ml CH2C12ble det ved 0°C tilsatt metansulfonylklorid (0,4 ml, 4,8 mmol). Den resulterende blandingen av en brunfarvet suspensjon ble rørt ved 0°C til romtemperatur under N2over natten. Reaksjonsblandingen ble stoppet med NaHCOj, og blandingen ble deretter fordelt mellom CH2CI2(200 ml) og mettet NaHC03-løsning (50 ml) og saltvann (50 ml). Det orga niske sjiktet ble tørket (Na2SC«4) og deretter filtrert gjennom silikagelpute, eluert med heksan:EtOAc/l: 1. Filtratet ble konsentrert i vakuum som ga 880 mg av etyl 2-{[(metylsulfonyl)oksy]metyl}cyklopropankarboksylat som en gul olje (99% utbytte).<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 0.91 -1.02 (m, 1 H) 1.26 (q, 7=6.99 Hz, 3 H) 1.29 - 1.36 (m, 1 H) 1.63 - 1.74 (m, 1 H) 1.79 - 1.92 (m, 1 H) 3.02 (s, 3 H) 3.99 - 4.24 (m,4H).
En reaksjonsblanding av etyl 2-{[(metylsulfonyl)oksy]metyl}cyklopropankarboksylat (880 mg, 4,0 mmol), 4-brompyrazol ( 4- 2, 588 mg, 4,0 mmol) og NaH 60% i mineralolje (240 mg, 6,0 mmol) med 3,0 ml DMF ble dannet. Den resulterende blandingen ble rørt ved 90°C under N2i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tør-ket (Na2S04) og deretter konsentrert i vakuum som ga 812 mg av ( 4- 3) som en gul olje (74%).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 0.85 (dd, 7=7.96,3.16 Hz, 1 H) 0.88 - 0.98 (m, 1 H) 1.18 - 1.29 (m, 3 H) 1.56 - 1.71 (m, 1 H) 1.79 - 1.94 (m, 1 H) 3.96 - 4.08 (m, 2 H) 4.07 - 4.17 (m, 2 H) 7.45 (d, 7=3.79 Hz, 2 H).
LCMS beregnet for CioHi3BrN202(M+H) 274, funnet 274. HPLC-renhet 95%.
Etyl 2- {[4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3-dioksoborolan-2-yl)-1 H-pyrazol-1 - yl]metyl}cyklopropankarboksylat ( 4- 4): En reaksjonsblanding av forbindelse ( 4- 3) (812 mg, 2,97 mmol) og bis(pinakolat)diboron (906 mg, 3,57 mmol) med KO Ac (991 mg, 10,10 mmol) i 10,0 ml DMSO ble overstrømmet med N2i 15 minutter, og deretter ble PdCl2(dppf)2CH2Cl2(122 mg, 0,15 mmol) tilsatt. Den resulterende blandingen ble rørt ved 80°C under N2over natten. Etter avkjøling til romtemperatur, ble blandingen filtrert gjennom celittpute og vasket godt med EtOAc. Filtratet ble ekstrahert med H2O (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og deretter konsentrert i vakuum. Resten ble deretter filtrert gjennom silikgelpute og eluert med heksan:EtOAc/3:l. Filtratet ble konsentrert i vakuum som ga 945 mg av ( 4- 4) som en gul olje (98% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 0.85 (dd, 7=7.83,3.03 Hz, 1 H) 0.90 - 0.96 (m, 1 H) 1.20 - 1.24 (m, 3 H) 1.29 - 1.34 (m, 12 H) 1.62 - 1.71 (m, 1 H) 1.84 - 1.97 (m, 1 H) 3.96 - 4.07 (m, 1 H) 4.06 - 4.14 (m, 2 H) 4.15 - 4.23 (m, 7=14.27, 6.44 Hz, 1 H) 7.73 (s, 1 H) 7.77 (s, 1 H).
Etyl 2-[(4- {6-amino-5-[l -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}- lH-pyrazol-1 - yl)metyl]cyklopropankarboksylat ( 4- 6): En reaksjonsblanding av forbindelse av ( 4 - 4 )
(643 mg, 2,01 mmol) og 3-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-jodpyridin-2-amin (4= 5) (572 mg, 1,34 mmol) i 20,0 ml etylenglykol dimetyleter, vannfri (DME) ble over-strømmet med N2i 15 minutter og deretter ble Pd(II)(PPb.3)2Cl2 (71 mg, 0,1 mmol) tilsatt og blandingen ble fortsatt overstrømmet med N2i ytterligere 15 minutter. Ytterligere 1,0N Na2C03-løsning (6,0 ml, 6,0 mmol) ble tilsatt etter overstrømming med N2i 15 minutter. Den resulterende blandingen ble rørt ved 85°C under N2over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celittpute og vasket med MeOH. Filtratet ble konsentrert i vakuum. Resten ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og deretter konsentrert i vakuum. Resten ble renset med Biotage-system (25M CH2CI2100%; CH2C12100% til 90% CH2C12; 10% MeOH) for å samle opp ønsket fraksjon som ga 600 mg av ( 4- 6) som en brunfarvet olje (91% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 0.96 - 1.10 (m, 2 H) 1.15 (t, 7=7.07 Hz, 2 H) 1.74 (s, 3 H) 1.79 (d, 7=6.57 Hz, 3 H) 3.95 - 4.14 (m, 4 H) 5.66 (s, 2 H) 6.08 (d, 7=6.57 Hz, 1 H) 6.88 (s, 1 H) 7.43 (t, 7=8.72 Hz, 1 H) 7.49 - 7.62 (m, 2 H) 7.73 (s, 1 H) 7.88 (s, 1H).
LCMS beregnet for C23H23CI2FN4O3(M+H) 494, funnet 494. HPLC-renhet 95%.
2-[(4- {6-aminoi-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} - lH-pyrazol-1 - yl)metyl]cyklopropankarboksylsyre ( 4- 7): Til en reaksjonsløsning av forbindelse ( 4- 6)
(377 mg, 0,76 mmol) i 5,0 ml MeOH ble det ved romtemperatur under N2tilsatt en ytterligere løsning av 2,0N NaOH (2) (1,5 ml, 3,04 mmol). Den resulterende blandingen ble rørt ved 80°C i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum for å fjerne det meste av MeOH og blandingen ble surgjort med 2M HC1 til pH 4,0. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2(2x200 ml) og de organiske sjiktene ble vasket med saltvann (50 ml) og tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum som ga 324 mg av ( 4- 7) som et gult faststoff (92% utbytte).
<!>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 0.92 - 1.04 (m, 2 H) 1.57 - 1.72 (m, 2 H) 1.76 - 1.90 (m, 3 H) 3.98 - 4.18 (m, 2 H) 6.46 (s, 2 H) 6.89 - 7.02 (m, 1 H) 7.29 - 7.52 (m, 2 H) 7.52 - 7.63 (m, 2 H) 7.73 (d, 7=1.52 Hz, 1 H) 7.94 (s, 1 H) 12.19 (s, 1 H).
LCMS beregnet for C21H19CI2FN4O3(M-H) 463, funnet 463. HPLC-renhet 87%.
2-[(4- {6-amino-5-[l -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} - lH-pyrazol-1 - yl)metyl]-N-metylcyklopropankarboksamid ( 4- 8") (R = Me, R' = H): Til en reaksjons-løsning av (4=7) (1,0 ekv.) med iPr2EtN (2,0 ekv.) i 1,0 ml DMF ble det tilsatt HATU (1,5 ekv.). Etter røring i 30 minutter, ble alkylamin (1,1 ekv.) tilsatt. Den resulterende blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (2x50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum. Prøven var fri basert på fordeling mellom EtOAc (200 ml) og mettet NaHC03-løsning (50 ml) og saltvann (50 ml). Det organiske sjiktet ble tørket (Na2S04) og konsentrert i vakuum. Resten ble behandlet med 1,0 ml H2O og lyofilisert som ga ( 4- 8).
Generell fremgangsmåte 62:
Til en løsning av 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (12,83 g, 33,76 mmol) i vannfri DMF (100 ml) ble det tilsatt di-tert-butyldikarbonat (21,25 g, 97,35 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (0,793 g, 6,49 mmol). Reaksjonsblandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 18 timer under nitrogen. Til blandingen ble det tilsatt mettet NaHCC«3-løsning (300 ml), og blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x250 ml). De kombinerte ekstraktene ble vasket med vann (5x100 ml), mettet NaH-CO3og saltvann, og deretter tørket over Na2S04. Etter filtrering, fordamping og vaku-umtørking, ble di-boc-beskyttet 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin oppnådd som et off white skumaktig faststoff (19,59 g, 100% utbytte).<]>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 8 8.18 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.48 (t, 1H), 6.25 (q, 1H), 1.75 (d, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.19 (s, 9H).
Til en løsning av di-boc-beskyttet 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin (19,58 g, 33,76 mmol) i DMSO (68 ml) ble det tilsatt kaliumacetat (11,26 g, 114,78 mmol) og bis(pinakolato)diboron (10,29 g, 40,51 mmol). Blandingen ble avgasset og overstrømmet med nitrogen tre ganger, og deretter ble Pd(dppf)Cl2*CH2Cl2(1,38 g, 1,69 mmol) tilsatt. Reaksjonsbladningen ble avgasset og overstrømmet med nitrogen tre ganger, og blandingen ble deretter rørt i 80°C oljebad under nitrogen i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til omgivelsestemperatur, fortynnet med etylacetat (100 ml) og filtrert gjennom en celittpute som ble vasket med etylacetat. Den kombinerte etylacetatløsningen (700 ml) ble vasket med vann (5x100 ml), saltvann (100 ml) og tørket over Na2S04. Etter filtrering og konsentrering, ble resten renset på en silikagelkolonne eluer tmed EtOAc/heksan (0%-50%) som ga di-boc-beskyttet 3- [(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin som et skumaktig faststoff (20,59 g, 97% utbytte).
<]>H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 5 8.20 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.63 (dd, 1H), 7.47 (t, 1H), 6.20 (q, 1H), 1.73 (d, 3H), 1.50-1.13 (m, 30H).
Til en løsning av di-boc-beskyttet 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin (20,34 g, 32,42 mmol) i CH2C12(80 ml) ble det tilsatt en løsning av tørr HC1 i dioksan (4N, 40,5 ml, 162 mmol). Reak-sjonsløsningen ble rørt ved 80°C i oljebad under nitrogen i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til omgivelsestemperatur, fortynnet med EtOAc (400 ml) og derette vasket forsiktig, men raskt, med mettet NaHC03til vannsjiktet ble basisk (pH > 8). Det organiske sjiktet ble vasket med saltvann og tørket over Na2S04. Etter filtrering, for damping og høyvakuumtørking ble 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-lfuor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin oppnådd som et off white skumaktig faststoff (13,48 g, 97% utbytte).
<]>H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 5 8.01 (d, 1H), 7.27 (dd, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.03 (t, 1H), 6.12 (q, 1H), 5.08 (bs, 2H), 1.81 (d, 3H), 1.30 (s, 6H), 1.28 (s, 6H).
Til en rørt løsning av 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin (4,2711 g, 10,0 mmol) og 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (de fremgangsmåte 11) (3,9628 g, 12,0 mmol) i DME (40 ml) ble det tilsatt en løsning av Na2C03(3,1787 g, 30,0 mmol) i vann (10 ml). Løsningen ble avgasset og overstrømmet med nitrogen tre ganger. Til løsningen ble det tilsatt Pd(PPli3)2Cl2 (351 mg, 0,50 mmol). Reaksjonsløsningen ble avgasset og overstrømmet med nitrogen igjen tre ganger. Reaksjonsløsningen ble rørt ved 87°C oljebad i ca. 16 timer (eller til forbruk av boranpinakolesteren), avkjølt til omgivelsestemperatur og fortynnet med EtOAc (200 ml). Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en celittpute og vasket med EtOAc. EtOAc-løsningen ble vasket med saltvann, tørket over Na2S04og konsentrert. Det urene produktet ble renset på en silikagelkolonne eluert med EtOAc/heksansystem (0% EtOAc til 100% EtOAc) som ga 4-(4-{6-amino-5-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (3,4167 g, 65% utbytte,~95% renhet) med en Rf på 0,15 (50% EtOAc/heksan).
MS m/e 550 (M+l)<+>.
Til en løsning av 4-(4-{6-amino-5-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (566,7 mg, 1,03 mmol) i metanol (5 ml) eller diklormetan (30 ml) ble det tilsatt 4N HCl/dioksan (15 ml). Løs-ningen ble rørt i ca. 1 time eller til avbeskyttelsen var fullstendig. Løsemidlene ble fordampet og resten løst i metanol og blandingen ble renset på omvendtfase C-18 preparativ HPLC eluert med acetonitril/vann med 0,1% eddiksyre fra 5% til 30% med en lineær gradient. Etter lyofilisasjon ble 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylaminacetat oppnådd som et hvitt faststoff (410 mg, 78% u tbytte, 100% HPLC-renhet, 96,4% ee).
<]>H NMR (DMSO-de, 400 MHz) 8 7.84 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (dd, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (t, 1H), 6.83 (d, 1H), 6.02 (q, 1H), 5.57 (bs, 2H), 4.09 (m, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.53 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.82 (s, 3H), 1.73 (d, 3H), 1.70 (m, 2H).
MS m/ e 450 (M+l)<+>.
Generell fremgansmåte 63:
Til en suspensjon av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin som HCL-saltet (fremgangsmåte 6) (150 mg, 0,288 mmol) i CH2C12(2 ml) ble det tilsatt NEt3(0,121 ml, 0,863 mmol) og blandingen ble rørt i 30 minutter ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og eddik-syreklorkarbonylmetylester ble tilsatt og blandingen ble rørt i 1 time ved romtemperatur. Reaksjonen ble overvåket med LC-MS og etter fullstendig omdanning til ønsket produkt, ble vann (2 ml) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc (4x10 ml), tørket over Na2S04og konsentrert som ga kvantitativt utbytte av eddiksyre 2-[4-(4-{6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-piperidin-l-yl]-2-okso-etylester (164 mg, kvant).
Til en løsning av eddiksyre 2-[4-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-yl]-2-okso-etylester (164 mg, 0,298 mmol) i
MeOH (4 ml) ble det tilsatt LiOH (7 mg, 0,298 mmol) løst i 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble rørt i 30 minutter ved romtemperatur hvori LC-MS viste fullstendig omdanning til l-[4-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-yl]-2-hydroksy-etanon. Produktet ble renset på en omvendtfase C-18 preparativt HPLC eluert med acetonitril/vann som har 0,1% eddiksyre fra 10% til 40%.
Generell fremgangsmåte 64:
En 100 ml kolbe med rørstav ble tørket i ovn og avkjølt i tørr nitrogenatmosfære. Kolben ble utstyrt med en gummisprøytehette. Kolben ble nedsenket i isbad under nitrogen og 1,6 ml (1,6 mmol) av 1,0M boranløsning i THF ble introdusert. Deretter ble 2-(4-{5-amino-6-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1 -yl)-2-metyl-propionsyre (fremgangsmåte 5) (0,1 g, 0,221 mmol) i vannfri THF (1,0 ml) introdusert. Den resulterende blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur under nitrogen i 5 timer og deretter ble 6N HC1 (1,1 ml) tilsatt sakte, og deretter ble H20 (1,1 ml) og MeOH (7,4 ml) introdusert. Reaksjonsblandingen ble rørt kontinuerlig over natten. Det meste av løsemidlene ble fordampet i vakuum og deretter ble en IN NaOH-løsning anvendt for å justere pH til 11. Vann ble tilsatt og løsningen ble ekstrahert med EtOAc (3x30 ml) og tørket over Na2S04. Etter filtrering og konsentrering ble det urene produktet renset med en omvendtfase preparativ HPLC eluert med acetonitril/vann som inneholder 0,1% eddiksyre fra 10% til 60%. Etter lyofilisasjon av rene fraksjoner ble 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-2-metyl-propan-l-ol acetat oppnådd som et hvitt fast stoff (21 mg, 22% utbytte).
Generell fremgangsmåte 65:
Til en rørt løsning av 4-hydroksy-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (7,94 g, 39,45 mmol) i CH2C12(100 ml), avkjølt til 0°C, ble det sakte tilsatt NEt3(5,54 ml, 39,45 mmol) fulgt av metansulfonylklorid (3,06 ml, 39,45 mmol) og DMAP (48 mg, 0,39 mmol). Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Til blandingen ble det tilsatt vann (30 ml). Ekstraksjon med CH2C12(3x30 ml) fulgt av tørking (Na2SC«4) og fjerning av løsemidlet i vakuum ga 4-metansulfonyloksy-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester som et hvitt fast stoff (11,00 g, >99% utbytte).
<]>H NMR (CDC13, 400 MHz) 8 4.89 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Til en rørt løsning av 4-brom-pyrazol (10,44 g, 71,03 mmol) i vannfri DMF (96 ml), avkjølt til 0°C, ble det sakte tilsatt NaH (60% i mineralolje) (3,13 g, 78,133 mmol). Løsningen ble rørt i 1 time ved 0°C. 4-metansulfonyloksy-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (19,82 g, 71,03 mmol) ble tilsatt sakte og reaksjonsblandingen ble varmet opp til 100°C over natten eller til konsumpsjon av pyrazolet med NMR. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og vann ble tilsatt (20 ml) fulgt av ekstraksjon med EtOAc. De kombinerte ekstraktene ble vasket med mettet vandig NaCl (4x20 ml), tør-ket med Na2S04, og konsentrert som ga 4-(4-borm-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester som en oransje olje. Oljen ble renset ved anvendelse av silikagelkromatografi eluert med 10% EtOAc/heksan til 25% EtOAc/heksan som ga 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester som et hvitt faststoff (10,55 g, 45% utbytte) med en Rf = 0,4 (25% EtOAc/heksan, ved anvendelse av jod som beising.
<]>H NMR (CDCI3, 400 MHz) 8 7.46 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 4.23 (m, 3H), 2.88 (m, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
Til en løsning av 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (500 mg, 1,515 mmol) i CH2C12(3 ml) ble det tilsatt TFA (3 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur til LCMS indikerte fullstendig reaksjon. Løsemidlene ble fjernet i vakuum og resten løst i MeOH (15 ml). pH til løsningen ble justert til 9 med hydrok-sinharpiks som ha 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-piperidin.
Til en løsning av 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-piperidin (375 mg, 1,63 mmol) i DMF (3,26 ml) ble det tilsatt NEt3(230 ul, 1,63 mmol) og blandingen ble rørt i 5 minutter. Metyl-jodid (Mel) (1,63 ml, IM Mel i DMF, nylig fremstilt) ble tilsatt og reaksjonen ble reaksjonsblandingen ble rørt over natten ved romtemperatur. Vann ble tilsatt og løsningen ble ekstrahert med EtOAc (4x10 ml). Den organiske løsningen ble vasket med saltvann, tørket med Na2S04, konsentrert og tørket i vakuum som ga 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-l-metyl-piperidin (251 mg, 63% utbytte).
Generell fremgangsmåte 66:
Til en løsning av 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin (295 mg, 0,80 mmol) i vannfri DMF (4 ml) ble det tilsatt NaH (60% i mineralolje, 30,7 mg, 0,80 mmol). Blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur under nitrogen i 0,5 timer og deretter ble 4-metansulfonyloksy-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (223,5 mg, 0,80 mmol) introdusert. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til
90°C oljebad i 0,5 timer under nitrogen og avkjølt til omgivelsestemperatur. Vann ble tilsatt sakte til blandingen som ble ekstrahert med EtOAc, vasket med saltvann og tørket over Na2S04. Det urene produktet ble renste på en silikagelkolonne som ga 4-(4-{5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazol-2-yl} -pyrazol-1 -yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester som et hvitt faststoff (265 mg, 59% utbytte).
Til en løsning av 4-(4-{5-amino-6-[2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-pyrazol-l-yl)-piperidin-l-karboksylsyre tert-butylester (265 mg, 0,48 mmol) i CH2CI2ble det tilsatt 4N HCl/dioksan (4 ml). Blandingen ble rørt ved omgivelsestemperatur i 1 time. Etter fordamping ble resten løst i metanol (2,5 ml) og blandingen ble renset på omvendtfase C-18 preparativ HPLC ved anvendelse av acetonitril/vann som inneholder 0,1% eddiksyre med lineær gradient på 10%-40%. Etter lyofilisasjon ble 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylaminacetat oppnådd som et hvitt faststof (125 mg, 51% utbytte).
Generell fremgangsmåte 67:
0-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumfosforpentafluorid (HATU)
(66 mg, 0,17 mmol) ble tilsatt til en løsning av 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-propionsyre (69 mg, 0,16 mmol), trietylamin (0,024 ml, 0,17 mmol) og 3-dimetylamino-propylamin (0,022 ml, 0,17 mmol) i 1,6 ml DMF. Etter røring i 3 timer, ble reaksjonsblandingen konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan, metanol og ammoniumhydroksid som ga2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-N-(3-dimetylamino-propyl)-propionamid (41 mg, 50%).
Generell fremgangsmåte 68:
Dietylazodikarboksylat (0,48 ml, 3,1 mmol) ble tilsatt til en 0°C løsning av trifenylfosfin (0,80 g, 3,1 mmol) i THF (20 ml). Etter røring i 5 minutter ble 4-brom-pyrazol (0,30 mg, 2,0 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 5 minutter med røring, ble (2-hydroksyetyl)-metyl-karbaminsyre tert-butylester (0,45 g, 2,6 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble varmet opp til romtemperatur og rørt over natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og filtrert. Filtratet ble konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering av diklormetan og etylacetat som ga [2-(4-borm-pyrazol-l-yl)-etyl]-metyl-karbaminsyre tert-butylester (541 mg, 87%).
Generell fremgangsmåte 69:
Natriumhydrid (0,12 g, 4,9 mmol) ble tilsatt til en løsning av 4-brom-4H-pyrazol (0,60 g, 4,1 mmol) i DMF (10 ml). Etter røring i 10 minutter ble en løsning av 2-klor-propionsyre metylester i DMF (4 ml) tilsatt. Etter røring i 4 timer, ble reaksjonsblandingen fordelt mellom etylacetat og vann. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med etylacetat. De kombinerte organiske fasene ble tørket over MgSC«4og konsentrert ved rotasjonsfordampning. Resten ble renset med silikagelkromatografi ved anvendelse av gradienteluering med etylacetat og heksan som ga 2-(4-brom-pyrazol-l-yl)-propionsyre metylester (733 mg, 77%).
Generell fremgangsmåte 70:
En løsning av LiOH (34 mg, 1,4 mmol) i vann (0,4 ml) ble tilsatt til en løsning av 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-propionsyre metylester (70 mg, 0,15 mmol) i en blanding av THF (1,5 ml) og MeOH
(0,4 ml). Etter røring over natten, ble reaksjonsblandingen fordelt mellom diklormetan og halvmettet saltvann. En liten mengde etanol ble tilsatt og pH ble justert til 7 med IM HC1. Fasene ble separert og vannfasen ekstrahert med diklormetan. De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2SC*4, filtrert og konsentrert ved rotasjonsfordampning som ga 2-(4- {6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 - yl)-propionsyre (69 mg, 100%).
Generell fremgangsmåte 71:
Til en rørt løsning av 4-(3-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-pyrrolidin-2-karboksylsyre metylester (105 mg, 0,21 mmol) i THF (5 ml) ble det tilsatt 2M CH3NH2i THF (1,06 ml, 2,12 mmol), blandingen ble rørt og varmet opp til 55°C i 18 timer, mens LCMS ble anvendt for å sjekke om reaksjonen var fullstendig, THF ble fjernet, og resten renset med prep-HPLC som ga 4-(4-{6-amino-5-[ 1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-pyrrolidin-2-karboksylsyre metylamid (30 mg), utbytte 28,6%.
Generell fremgangsmåte 72:
tert-butyl 4-(4,4,5,5-tetrametyl-1,3,2-dioksaborolan-2-yl)-1 H-pyrazol-1 -karboksylat ( 21- 1): Di-tert-butyl dikarbonat (7,2 molar ekvivalent), 4-(dimetylamino)pyridin (0,84
molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av 4,4,5,5-tetrametyl-2-(lH-pyrazol-4-yl)-1,3,2-dioksaborolan (6 mmol) i 40 ml DMF. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 12 timer. Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tør-ket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en brungul oljerest som forbindelse 21- 1 (1,32 g, 4,56 mmol, 76%).
<!>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.32 (s, 12 H) 1.63 (s, 9 H) 7.91 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H). Resten ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing.
Forbindelse 21- 3, vist med det spesifikke eksemplet med 3-[l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-( lH-pyrazol-4-yl)pyridin-2-amin (21-3a):
Forbindelse 21- 1 (1,0 molar ekvivalent) ble tilsatt til en løsning av forbindelse 21- 2a (forbindelse 21-2, med R-substituenter som gir 2,6-diklor-3-fluorfenyl) (1,92 mmol) i 20 ml DME. Blandingen ble rørt ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 30 minutter og deretter ble diklorbis(trifenylfosfino)palladium(II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Natriumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 4 ml H20 ble tilsatt til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen ble varmet opp til 85°C i 12 timer. Alternative baser som anvendes var CsF og CS2CO3med 1 eller 2 ekvivalenter borsyreester, og ved romtemperatur (CsF) eller 80°C (alle). Vann ble tilsatt til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (150 ml x 2) ble deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet ble tørket over Na2S04. Na2S04ble filtrert fra og filtratet fordampet som ga en mørk brun oljerest. Resten ble renset med silikagelkromatografi (eluert med 0 -» 10% MeOH i etylacetat) som ga ønsket produkt, forbindelse 21- 3a (2,05 g, 53,6% utbytte).
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.60 (s, 1 H) 1.84 (d, 7=6.57 Hz, 3 H) 5.07 (s, 2 H) 6.06 (q, 7=6.57 Hz, 1 H) 6.89 (d, 7=1.77 Hz, 1 H) 6.96 - 7.06 (m, 1 H) 7.22 - 7.33 (m, 1 H) 7.67 (s, 2 H) 7.80 (d, 7=1.52 Hz, 1 H).
For fremstilling av forbindelser med formel 21-4, kan følgende eksempelfremgangsmåte anvendes: natriumhydrid (1,2 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 21- 3 (0,87 mmol) i 10 ml DMF. Blandingen røres ved romtemperatur under en nitro genatmosfære i 30 minutter og deretter blir forbindelse 21- 6 (1 molar ekvivalent) tilsatt. Den resulterende løsningen varmes opp til 85-90°C i 12 timer. Vann (20 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med EtOAc i heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 21- 4 (20-50% utbytte).
Generell fremgangsmåte 73:
L = Br, Cl, COOH, COC1, OMs, etylenkarbonat, aldehyd
Forbindelser med formel 22- 3 kan fremstilles ved følgende eksempelfremgangsmåte: Forbindelse 22- 2 (1,2 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 22- 1 (0,24 mmol) og base (3-5 molar ekvivalent) og/eller koblingsreagens (1 molar ekvivalent) i 5 ml DMF. Blandingen røres under nitrogenatmosfære i 12 timer. Vann (20 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 22- 3.
Generell fremgangsmåte 74:
Følgende fremgangsmåte kan anvendes for fremstilling av piperidin-pyrazol-2-aminopyridinderivater.
L' = Br, Cl, COOH, COC1, OMs, etylenkarbonat, aldehyd
tert- butyl 4-( 4- iod- lH- pvrazol- l- vl) piperidin- l- karboksvlat ( 23- la)
NaH (1,2 ekv., 0,68 mmol) blir porsjonsvis tilstt til en rørt løsning av 4-jodpyrazol (0,57 mmol) i DMF (2 1) ved 4°C. Den resulterende blandingen røres i 1 time ved 4°C og forbindelse 23- 4 (1,1 ekv., 0,63 mmol) ble deretter tilsatt. Den resulterende blandingen varmes opp til 100°C i 12 timer. Reaksjonen stoppes med H2O og blandingen ekstraheres med EtOAc flere ganger. De kombinerte organiske sjiktene tørkes, filtreres og konsentreres for å gi en oransje olje. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med 5% EtOAc i pentan) som gir forbindelse 23- la som et hvitt fast stoff (140 g, 66%).
tert- butvl- 4- r4-( 4, 4, 5, 5- tetrametyl- l, 3, 2- dioksato 1- karboksvlat ( 23- lb)
Bis(pinakolato)diboron (1,4 ekv., 134 g, 0,52 mol) og kaliumacetat (4 ekv., 145 g, 1,48 mol) blir sekvensielt tilsatt til en løsning av forbindelse 23- la (140 g, 0,37 mol) i 1,5 1 DMSO. Blandingen overstrømmes med nitrogen flere ganger og diklor-bis(trifenylfosfin)palladium(II) (0,05 ekv., 12,9 g, 0,018 mol) blir deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen varmes opp til 80°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen avkjøles til romtemperatur og filtreres gjennom en celittseng og vaskes med EtOAc. Filtratet vaskes med mettet NaCl (500 ml x 2), tørkes over Na2S04, filtreres og konsentreres. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med 5% EtOAc i heksan) som gir forbindelse 23- lb som et hvitt faststoff (55 g, 40%).
Forbindelse 23- 2 (1,0 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 23- lb (1,3 molar ekvivalent) i 15 ml DME. Blandingen overstrømmes med nitrogen flere ganger og deretter blir diklorbis(trifenylfosfin)palladium(II) (0,05 molar ekvivalent) tilsatt. Cesiumkarbonat (3 molar ekvivalent) i 4 ml H20 tilsettes til reaksjonsblandingen og den resulterende løsningen varmes opp til 85°C i 12 timer. Vann (10 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (150 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes som gir en mørk brun oljerest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med 75 -» 100% EtOAc i heksan) som gir forbindelse 23- 3a (61% utbytte).
Hydroklorid (19 ekv., 12 mmol) tilsettes til en løsning av forbindelse 23- 3a (0,63 mmol) i MeOH (4 ml). Blandingen røres ved romtemperatur i 12 timer. Løsemidlet fordampes og H20 (10 ml) tilsettes. Mettet NaHC03(vandig) tilsettes for å nøytralisere løsningen til pH 7. Etylacetat (100 ml x 2) tilsettes for å ekstrahere den vandige løsningen. De kombinerte organiske sjiktene kombineres og tørkes over Na2S04, filtreres og fordampes som gir forbindelse 23- 5a som en fast rest (0,6 mmol, 95% utbytte).
Forbindelser med formel 23- 7 kan dannes i henhold til følgende generelle fremgangsmåte: Forbindelse 23- 6 (1,2 molar ekvivalent) tilsettes til en løsning av forbindelse 23^5a (0,24 mmol) og base (3-5 molar ekvivalent) og/eller koblingsreagens (1 molar ekvivalent) i 5 ml DMF. Blandingen røres under nitrogenatmosfære i 12 timer. Vann (20 ml) tilsettes til reaksjonsblandingen for å stoppe reaksjonen. EtOAc (50 ml x 2) blir deretter tilsatt for å ekstrahere den vandige løsningen. EtOAc-sjiktet tørkes over Na2S04. Na2S04filtreres fra og filtratet fordampes for å gi en oljerest. Resten renses med silikagelkromatografi (eluert med CH3OH, CH2CI2, EtOAc, og heksan) som gir ønsket produkt, forbindelse 23- 7a.
Generell fremgangsmåte 75:
3-metoksyforbindelser kan fremstilles fra de korresponderende 3-fluorforbindelsene med følgende generelle fremgangsmåte. Til 4 ml DMSO tilsettes 0,124 ml etanol fulgt av 32 mg NaH. Etter røring i 30 minutter, blir 250 mg 24- 1 tilsatt og reaksjonsblandingen varmet opp til 40°C. Etter 3 timer blir reaksjonsblandingen avkjølt og heilt over i vann for å presipitere. Etter nøytralisering til pH 6 blir produktet 24- 2 isolert.
Generell fremgangsmåte 76:
Til en rørt løsning av 3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-[l-(2,2-dimetyl-[l,3]dioksolan-4-ylmetyl)-lH-pyrazol-4-yl]-pyridin-2-ylamin (150 mg, 0,31 mmol) i THF (3 ml) og H20 (2 ml) blir det tilsatt TFA (2 ml) ved 0°C og blandingen røres og varmes opp til romtemperatur og varmes deretter opp til 50°C i 5 timer, mens LCMS brukes for å sjekke om reaksjonen er fullstendig, og deretter blir THF fjernet og resten renset med prep-HPLC som gir 3-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl}-pyrazol-l-yl)-propan-l,2-diol (102 mg), utbytte 74,2%.
Generell fremgangsmåte 77:
Til en rørt løsning av 4-brom-lH-pyrazol i DMF blir det tilsatt natriumhydrid ved romtemperatur. Blandingen røres i 30 minutter, [l,3]dioksolan-2-on tilsettes og blandingen røres og varmes forsiktig opp til romtemperatur. Reaksjonsforløpet overvåkes med TLC. Etter at reaksjonen er utført, blir EtOac tilsatt, vasket med mettet NaHCC«3, vann og saltvann, tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert. Resten renses med silikagel, eluert med EtOAc og DCM 10%, som gir 2-(4-brom-pyrazol-l-yl)-etanol (0,22 g, utby-te 34%).
<!>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 7.49 (s, 1 H) 7.46 (s, 1 H) 4.18 - 4.23 (m, 2 H) 3.93 - 3.98 (m, 2 H) 3.09 (s, 1 H).
Eksempel 1: 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 2, fra (lS)-2-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etanol.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.53(s, 1H), 7.48(m, 1H), 7.39(t, 1H), 6.48 (s, 2H), 6.4l(q, 1H), 1.74(d, 3H);
LCMS: 381 [M+l];
c-Met Ki: 0.796 uM.
Eksempel 2: 4-{5-amino-6-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-benzosyre
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 3.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.16(s, 1H), 7.84(d, 2H), 7.77(d, 2H), 7.53(m, 1H), 7.37(t, 1H), 6.64 (s, 2H), 6.53(q, 1H), 1.78(d, 3H);
LCMS: 422 [M+l];
c-MetKi: 0.154 uM.
Eksempel 3: [4-{5-amino-6-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-fenyl)-piperazin-1 -yl-metanon
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 4.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.1 l(s, 1H), 7.73(d, 2H), 7.53(m, 1H), 7.37(t, 1H), 7.31(d, 2H), 6.55 (m, 3H), 3.51(br, 2H), 3.32(br, 2H), 2.67(br, 4H), 1.77(d, 3H); LCMS: 490 [M+l];
c-Met Ki: 0.027 uM.
Eksempel 4: 4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-benzoy l)-piperazin-1 -karboksylsyre tert-butylester
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 16 fulgt av 20.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8.12(s, 1H), 7.72(d, 2H), 7.50(m, 1H), 7.33(t, 3H), 6.55 (m, 3H), 3.51 (br, 2H), 3.39(m, 3H), 3.32(br, 3H), 1.77(d, 3H), 1.40(s, 9H); LCMS: 590 [M+l];
c-Met Ki: 0.335 uM.
Eksempel 5: 3-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-[4-(piperazin-l-ylkarbonyl)fenyl]pyridin-2-amin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 20 fulgt av 21, som en rasemiske blanding med den korresponderende S-enantiomeren til eksempel 119, fulgt av separasjon ved kiral kromatografi. Tittelforbindelsen fremstilles også som en enantiomerisk ren forbindelse med utgangspunkt i det kirale utgangsmaterialet.
<!>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.83 (d, J=6.57 Hz, 3 H) 3.35 (s, 4 H) 3.69 (s, 4 H) 6.24 (q, J=6.57 Hz, 1 H) 6.91 - 7.08 (m, 2 H) 7.10 (d, J=1.26 Hz, 1 H) 7.46 (t, J=8.72
Hz, 1 H) 7.50 (s, 4 H) 7.58 (dd, J=8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.91 (d, J=1.77 Hz, 1 H) 9.35 (s, 2H);
LCMS: 490 [M+l];
c-MetKi: 0.01 uM.
Eksempel 6: 4- {6-amino-5-[( 1 R)-1 -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)-etoksy]pyridin-3-yl}-N-[2-(dimetylamino)etyl]-N-metylbenzamid
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 20.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.80 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 1.97 (s, 3 H) 2.19 (s, 3 H) 2.30 - 2.42 (m, J=1.77 Hz, 2 H) 2.93 (s, 3 H) 3.22 - 3.29 (m, 1 H) 3.44 - 3.61 (m, 1 H) 5.95 (s, 2 H) 6.14 (q, J=6.57 Hz, 1 H) 6.98 (d, J=1.01 Hz, 1 H) 7.30 - 7.39 (m, 2 H) 7.40 - 7.47 (m, 3 H) 7.51 - 7.62 (m, 1 H) 7.87 (d, J=1.77 Hz, 1 H);
LCMS: 506 [M+l];
c-MetKi: 0.01 uM.
Eksempel 7: (4- {6-amino-5 -[(1 R)-1 -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} - fenyl)metanol
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 27.
<!>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.84 (d, J=6.57 Hz, 3 H) 4.49 (d, J=5.81 Hz, 2 H) 5.20 (t, J=5.81 Hz, 1 H) 6.25 (q, J=6.57 Hz, 1 H) 6.46 - 6.88 (m, 2 H) 7.04 (d, J=1.52
Hz, 1 H) 7.34 (s, 4 H) 7.46 (t, J=8.72 Hz, 1 H) 7.59 (dd, J=8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.76 (d, J=1.52 Hz, 1 H);
LCMS: 408 [M+l];
c-MetKi: 0.051 uM.
Eksempel 8: 4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-N-[3-(dimetylamino)propyl]-N-metylbenzamid
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 27.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1.60 - 1.73 (m, 2 H) 1.80 (d, J=6.57 Hz, 3 H) 1.94 (s, 3 H) 2.13 (s, 3 H) 2.20 - 2.29 (m, 2 H) 2.92 (s, 3 H) 3.36 - 3.50 (m, 2 H) 5.96 (s, 2 H) 6.14 (q, J=6.57 Hz, 1 H) 6.98 (s, 1 H) 7.37 (s, 2 H) 7.40 - 7.51 (m, 3 H) 7.55 (dd, J=8.84,4.80 Hz, 1 H) 7.86 (d, J=1.77 Hz, 1 H);
LCMS: 520 [M+l];
c-MetKi: 0.01 uM.
Eksempel 9: tert-butyl 4-(4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridine-3-yl}benzoyl)piperazin-1 -karboksylat
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 20.
<]>H NMR (400 MHz, kloroform-D) 5 ppm 1.46 (s, 9 H) 1.86 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 3.30 - 3.89 (m, 8 H) 4.90 (s, 2 H) 6.11 (q, J=6.57 Hz, 1 H) 6.98 (d, J=1.52 Hz, 1 H) 7.01 - 7.10
(m, 1 H) 7.30 (dd, J=8.97, 4.93 Hz, 1 H) 7.35 - 7.43 (m, 4 H) 7.88 (d, J=1.77 Hz, 1 H); LCMS: 590 [M+l];
c-Met Ki: 0.03 uM.
Eksempel 10: 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-[l-(l-metyl-piperidin-4-yl)-1 H-pyrazol-4-yl]-pyridin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 62 ved anvendelse av 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin og 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-l-metyl-piperidin (fremstilt i henhold til generell fremgangsmåte 11).
<]>H NMR (400MHz, CDC13) 5 7.65 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.31 (m,lH), 7.06 (m, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.08 (m, 1H), 5.50 (bs, 2H), 4.18 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.30 (m, 2H), 2.20 (m, 4H), 2.07 (s, 3H), 1.86 (d, J 8 Hz, 3H);
LCMS: 464 [M+l];
c-MetKi: 0.01 uM.
Eksempel 11: 1 -[4-(4- {6-amino-5-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 -yl)-piperidin-1 -yl]-2-hydroksy-etanon
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 63.
<]>H NMR (400MHz, CDC13) 5 7.72 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.06 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.08 (m, 1H), 5.00 (bs, 2H), 4.70 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 4.21 (s, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.18 (m, 1H), 3.00 (m, 1H), 2.223 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.86 (d, J8Hz, 3H);
LCMS: 508 [M+l];
c-Met Ki: 0.004 uM.
Eksempel 12: 3 - [(R)-1 -(2,6-diklor-3 - fluor-feny l)-etoksy ]-5 -(1 -syklopenty 1-1 H-pyrazol-4-yi)-pyridin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 62 ved anvendelse av 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(4,4,5,5-tetrametyl-[l,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyridin-2-ylamin og 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-l-cyklopentyl-piperidin (fremstilt i henhold til generell fremgangsmåte 11 ved anvendelse av bromcyklopentan som alkyle-ringsreagens).
<]>H NMR (400MHz, CDCI3) 5 7.73 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.08 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 2.04 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 1.86 (d,J8Hz, 3H), 1.73 (m, 2H);
LCMS: 435 [M+l];
c-Met Ki: 0.02 uM. Eksempel 13: 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 62.
<]>H NMR (400MHz, CDCI3) 5 7.69 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.07 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.07 (m, 1H), 5.25 (bs, 2H), 4.30 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 2.96 (m, 2H), 2.26 (m, 2H), 2.12 (m, 2H), 1.86 (d, J 8 Hz, 3H);
LCMS: 450 [M+l]; c-Met Ki: 0.003 uM.
Eksempel 14: 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2 -ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 66.
H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.86 (s, 1H), 7.76(s, 1H), 7.63(m, 2H), 7.54(m, 1H), 7.37(t, 1H), 6.46 (q, 1H), 6.15(s, 1H), 4.10(m, 1H), 3.01(m, 2H), 1.95(m, 2H), 1.85(s, 2H), 1.75(d, 3H), 1.67(dd, 1H);
LCMS: 451 [M+l];
c-MetKi: 0.010 uM.
Eksempel 15: 3 - [(R)-1 -(2,6-diklor-3 - fluor-feny l)-etoksy ]-5 -(1 H-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 3 ved anvendelse av 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin og 4-(4,4,5,5-tetrametyl-[ 1,3,2]dioksaborolan-2-yl)-pyrazol-1 -karboksylsyre tert-butylester.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 12.81(s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.48(m, 1H), 7.36(t, 1H), 6.48 (q, 1H), 6.12(s, 2H), 1.75(d, 3H);
LCMS: 368 [M+l];
c-Met Ki: 0.065 uM.
Eksempel 16: 1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl)-pyrazol-1 -yl)-piperidin-l -yl]-2-hydroksy-etanon
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåtene 62 og 63, ved anvendelse av 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin som utgangsmateriale.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.91 (s, 1H), 7.76(s, 1H), 7.64(s, 1H), 7.49(m, 1H), 7.36(t, 1H), 6.46 (q, 1H), 6.15(s, 2H), 4.57(br, 1H), 4.40(m, 2H), 4.12(br, 2H), 3.77(m, 1H), 3.35(m, 2H), 3.43(m, 1H), 3.16(m, 2H), 1.75(d, 3H);
LCMS: 509 [M+l];
c-MetKi: 0.015 uM. Eksempel 17: 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy-5-[l-(l-metyl-pipeirdin-4-yl)-1 H-pyrazol-4-yll-pyrazin-2-ylamin
Tittelforbindelsen fremstilles i henhold til fremgangsmåte 62 ved anvendelse av 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin og 4-(4-brom-pyrazol-l-yl)-l-metyl-piperidin (fremstilt i henhold til generell fremgangsmåte 11).
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.88 (s, 1H), 7.76(s, 1H), 7.64(s, 1H), 7.49(m, 1H), 7.36(t, 1H), 6.46 (q, 1H), 6.15(s, 2H), 4.02(m, 1H), 2.84(m, 2H), 2.19(s, 3H), 2.00(m, 4H), 1.85(m, 3H), 1.75(d, 3H);
LCMS: 465 [M+l];
c-Met Ki: 0.03 uM. Eksempel 18: 1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1 -yl)-piperidin-1 -yll-2-dimetylamin-etanon
Tittelforbindelsen ble fremstilt i henhold til fremgangsmåte 63 ved anvendelse av 3-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l -piperidin-4-yl-1 H-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2- ylamin koblet med dimetylaminoeddiksyre i nærvær av HOBt/EDC/trietylamin i DMF som beskrevet i fremgangsmåte 5 ved anvendelse av 5-brom-3-[(R)-l-(2,6-diklor-3- fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-ylamin som utgangsmateriale.
<]>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7.90 (s, 1H), 7.76(s, 1H), 7.65(s, 1H), 7.49(m, 1H), 7.36(t, 1H), 6.47 (q, 1H), 6.15(s, 2H), 4.39(m, 1H), 4.16(m, 1H), 3.16(m, 2H), 3.02(m, 1H), 2.75(m, 1H), 2.19(s, 6H), 2.01(m, 2H), 1.88(s, 1H), 1.75(d, 3H).;
LCMS: 536 [M+l];
c-MetKi: 0.015 uM.
Eksempel 19: 3-[(R)-l-(2-klor-3,6-difluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin
Tittelforbindelsen ble fremstilt i henhold til fremgangsmåte 62 ved anvendelse av 5-brom-3-[(R)-1 -(2-klor-3,6-difluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin som utgangsmateriale (i henhold til fremgangsmåtene for syntese av 5-brom-3-[l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin fra (S)-l-(2-klor-3,6-difluor-fenyl)-etanol, oppnådd fra Syn-Chem Inc.).
<!>H NMR (400MHz, DMSO-d6) 5 7.88 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 5.88 (m, 1H), 5.48 (bs, 2H), 4.08 (m, 1H), 2.96 (m, 2H), 2.53 (m, 1H), 2.45 (m, 1H), 1.89 (m, 1H), 1.80 (m, 4H), 1.67 (m, 4H);
LCMS: 434 [M+l];
c-Met Ki: 0.09 uM.
Biologiske eksempler
Det vil være å forstå at for en gitt serie av forbindelser, vil et antall biologiske aktivite-ter blir observert. I dens foretrukne aspekter, angår oppfinnelsen nye forbindelser i stand til å modulere, regulere og/eller inhibere proteinkinaseaktivitet. Følgende undersøkelser kan anvendes for å velge de forbindelsene som viser optimal grad av ønsket aktivitet.
Følgende in vitro undersøkelse kan anvendes for å bestemme aktivitetsnivået og effekten av forskjellige forbindelser ifølge oppfinnelsen på en eller flere PK'er. Tilsvarende undersøkelser kan designes langs samme linjer for hvilke som helst PK ved anvendelse av teknikker godt kjente i litteraturen. En litteraturreferanse er tilveiebragt (Z. Techni-kova-Dobrova, AM. Sardanelli, S. Papa, FEBS Lett. 4. november 1991, 292, 69-72). Den generelle fremgangsmåten er som følger: forbindelser og kinaseundersøkelsesrea-genser introduseres til testbrønner. Undersøkelsen initieres ved tilsetning av kinaseen-zymet. Enzyminhibitorer reduserer den målte aktiviteten av enzymet.
I den kontinuerlig koblede spektrofotometriske undersøkelsen blir tidsavhengig produksjon av ADP av kinasen bestemt ved analyse av konsumpsjonshastigheten av NADH ved å måle reduksjon i absorbanse ved 340 nm. Idet PK produserer ADP blir den gjen-omdannet til ATP ved reaksjon med fosfoenolpyruvat og pyruvatkinase. Pyruvat blir også produsert i denne reaksjonen. Pyruvat blir etterfølgende omdannet til laktat ved reaksjon med laktatdehydrogenase, som simultant omdanner NADH til NAD. NADH har en målbar absorbanse ved 340 nm, mens NAD har ikke.
Den foretrukne protokollen for utføring av de kontinuerlig koblede spektrofotometriske eksperimentene for spesifikke PK'er er tilveiebragt nedenfor. Imidlertid, er tilpassing av denne protokollen for å bestemme aktiviteten til forbindelser ovenfor andre RTK'er, så vel som for CTK'er og STK'er, godt innenfor omfanget av fagmannens kunnskap.
HGFR kontinuerlig koblet spektrofootmetrisk undersøkelse
Denne undersøkelsen analyserer tyrosinkinaseaktivitet til HGFR på Met-2-substratpeptidet, et peptid avledet fra aktiveringsloopen til HGFR.
Materialer og reagenser:
1. HGFR-enzym fra Upstate (Met, aktiv) kat. # 14-526
2. Met-2 peptid (HGFR aktiveringsloop) Ac-ARDMYDKEYYSVHNK (MW = 1960).
Løs opp i 200 mM HEPES, pH 7,5 ved 10 mM forrådsløsning.
3. IM PEP (fosfo-enol-pyruvat) i 200 mM HEPES, pH 7,5.
4. 100 mM NADH (B-nikotinamid adenindinukleotid, redusert form) i 200 mM
HEPES, pH 7,5.
5. 4M MgCb (magnesiumklkorid) i ddH20.
6. 1M DTT (ditiotreitol) i 200 mM HEPES, pH 7,5.
7. 15 enheter/ml LDH (melkesyredehydrogenase).
8. 15 enheter/ml PK (pyruvatkinase).
9. 5M NaCl løst i ddH20.
10. Tween-20 (proteinkvalitet) 10% løsning.
11. IM HEPES-buffer: (N-[2-hydroksyetyl]piperazin-N-[2-etansulfonsyre]) natriumsalt. Løs opp i ddH20, juster pH til 7,5, bring volumet til 11. Filtrer ved 0,1 um.
12. HPLC-kvalitet vann; Burdick og Jackson #365-4, 1 x4 liter (eller ekvivalent).
13. 100% DMSO (SIGMA).
14. Costar #3880 - svarte klare flatbunnede halvarealplater for Ki-bestemmelse og % inhibering. 15. Costar #3359 - 96 brønns polypropylenplater, rundbunnet for seriefortynninger.
16. Costar #3635 - UV-plate klare flatbunnede plater for % inhibering.
17. Beckman DU-650 w/mikrocelleholdere.
18. Beckman 4-posisjonsmikrocellekuvette.
Fremgangsmåte:
Fremstilling av fortynningsbuffer (DB) for enzym (for 30 ml preparat)
1. DB-sluttkonsentrasjon er 2 mM DTT, 25 mM NaCl2, 5 mM MgCl2, 0,01% Tween-20 og 50 mM HEPES-buffer, pH 7,5. 2. Fremstill 20 mM HEPES ved tilsetning av 1,5 ml IM HEPES til 28,1 ml ddH20. Tilsett resten av reagensene. Til 50 ml koniske glass, tilsett 60 ul IM DTT, 150 ul 5M NaCl2,150 (il IM MgCl2og 30 (il 10% Tween-20 for å gi et totalvolum på 30
ml.
3. Virvl i 5 -10 sekunder.
4. Ta ut alikvot av DB ved 1 ml/rør og merk rørene som "DB HGFR".
5. Bemerke: Dette kan gjentas og lagres på forskudd.
6. Frys ned ikke-anvendte alikvoter i mikrosentrifugerør i -20°C fryser.
Fremstilling av forbindelser
1. For forbindelsefortynningsplate, tilsett 4 (il 10 mM forrådsløsning til kolonne 1 til platen, og bring volum til 100 (il med 100% DMSO. 2. Sett opp Precision 2000 fortynningsfremgangsmåte. En sluttkonsentrasjon på 200 (iM forbindelse i 50% DMSO, 100 mM HEPES (1:2 seriefortynning).
Fremstilling av koblet enzymatisk buffer:
1. Sluttkonsentrasjon i undersøkelse:
2. For en 10 ml reaksjonsbuffer, tilsett 10 (il IM PEP, 33 (il 100 mM NADH, 50 (il 4M MgCl2,20 (il IM DTT, 6 (il 500 mM ATP og 500 (il 10 mM Met-2 peptid til
100 mM HEPES-buffer, pH 7,5 og virvl/bland sammen.
3. Tilsett koblingsenzymer, LDH og PK, til reaksjonsblandingen. Bland forsiktig ved inversjon.
Kjøring av prøver
1. Spektrofotometriske innstillinger:
2. Tilsett 85 (il CE-reaksjonsblanding til hver brønn til undersøkelsesplaten.
3. Tilsett 5 (il fortynnet forbindelse til en brønn i undersøkelsesplaten.
4. Tilsett 5 (il 50% DMSO for negativ kontroll til siste kolonne i undersøkelsespla-ten.
5. Bland med multikanalpipettor og orbitalrister.
6. Preinkuber i 10 minutter ved 37°C.
7. Tilsett 10 (il 500 nM HGFR til hver brønn til undersøkelsesplaten; slutt-HGFR-konsentrasjonen er 50 nM i et totalvolum på 100 ul.
8. Mål aktiviteten i 10 minutter ved X = 340 nm og 37°C.
Følgende in vitro undersøkelser kan anvendes for å bestemme aktivitetsnivået og effekten av forskjellige forbindelser ifølge oppfinnelsen på en eller flere av PK'ene. Tilsvarende undersøkelser kan designes langs samme linje for hvilken som helst PK ved anvendelse av teknikker kjente i litteraturen.
Flere av undersøkelsene beskrevet heri utføres i et ELISA (enzymbundet immunosor-bentsandwichundersøkelse) format (Voller et al., 1980, "Enzyme-Linked Immunosor-bent Assay", Manual of Clinical Immunology, 2. utgave, rose og Friedman, Am. Soc. of Microbiology, Washington, D.C., side 359-371). Generell fremgangsmåte er som føl-ger: en forbindelser introduseres til celler som uttrykker testkinasen, enten naturlig eller rekombinant, i en valgt tidsperiode hvoretter, hvis testkinasen er en reseptor, en ligand kjent for å aktivere reseptoren blir tilsatt. Cellene ly seres og ly såtet overføres til brønne-ne til en ELISA-plate på forhånd belagt med et spesifikt antistoff som gjenkjenner substratet til den enzymatiske fosforyleringsreaksjonen. Ikke-substratkomponenter til cellelysatet vaskes bort og mengden av fosforylering på substratet detekteres med et antistoff som spesifikt gjenkjenner fosfotyrosin sammenlignet med kontrollceller som ikke blir bragt i kontakt med en testforbindelse.
De foretrukne protokollene for utføring av ELISA-eksperiementene for spesifikke PK'er er tilveiebragt nedenfor. Imidlertid, er tilpassing av disse protokollene for bestemmelse av aktiviteten av forbindelser mot andre RTK'er, så vel som CTK'er og STK'er, godt innenfor fagmannens kunnskap.
Andre undersøkelser beskrevet heri, måler mengden av DNA som fremstilles som respons på aktivering av en testkinase, som er et generelt mål på en proliferativ respons. Generell fremgangsmåte for denne undersøkelsen er som følger: en forbindelse introduseres til celler som uttrykker testkinase, enten naturlig eller rekombinant, i en valgt tidsperiode hvoretter, hvis testkinasen er en reseptor, en ligand kjent for å aktivere reseptoren tilsettes. Etter inkubering, idet minste over natten, blir et DNA-merket reagens slik som 5-bromdeoksyuridin (BrdU) eller H<3->tymidin tilsatt. Mengden merket DNA detekteres enten med et anti-BrdU-antistoff eller ved å måle radioaktiviteten og sammenlig-nes med kontrollceller som ikke er bragt i kontakt med en testforbindelse.
MET- transfosforyleringsundersøkelse
Denne undersøkelsen anvendes for å måle fosfotyrosinnivåer på et poly(glutamsyre; tyrosin, 4:1) substrat som en måte for å identifisere agonister/antagonister av met-transfosforylering av substratet.
Materialer og reagenser:
1. Corning 96-brønns ELISA-plater, Corning katalog #25805-96.
2. Poly(glu-tyr), 4:1, Sigma, kat. nr. P 0275.
3. PBS, Gibco katalog #450-1300EB.
4. 50 mM HEPES.
5. Blokkeringsbuffer: løs opp 25 g bovint serumalbumin, Sigma kat. nr. A-7888, i 500 ml PBS, filtrer gjennom et 4 um filter.
6. Renset GST-fusjonsprotein som inneholder Met-kinasedomenet, SUGEN, Inc.
7. TBST-buffer.
8. 10% vandig (MilliQue H20) DMSO.
9. 10 mM vandig (dH20) adenosin-5'-trifosfat, Sigma kat. nr. A-5394.
10. 2X kinasefortynningsbuffer: for 100 ml, bland sammen 10 ml IM HEPES ved pH 7,5 med 0,4 ml 5% BSA/PBS, 0,2 ml 0,1M natriumortovanadat og 1 ml 5M natriumklorid i 88,4 ml dH20. 11. 4X ATP reaksjonsblanding: for 10 ml, bland 0,4 ml IM manganklorid og 0,02 ml 0,lMATPi9,56mldH2O. 12. 4X negative kontrollblandinger: for 10 ml, bland 0,4 ml IM manganklorid i 9,6 ml dH20. 13. NUNC 96-brønns V-bunnede polypropylenplater, Applied Scientific katalog #S-72092.
14. 500 mM EDTA.
15. Antistoffortynningsbuffer: for 100 ml bland 10 ml 5% BSA/PBS, 0,5 ml 5% Carna-tion® Instant Milk i PBS og 0,1 ml 0,1M natriumortovanadat i 88,4 ml TB ST.
16. Kaninpolyklonalt antofosfotyrosinantistoff, SUGEN, Inc.
17. Geite anti-kaninpepperrotperoksidasekonjugert antistoff, Biosource, Inc.
18. ABTS-løsning: for 11 bland sammen 19,1 g sitronsyre, 35,49 g Na2HP04og 500 mg
ABTS med tilstrekkelig dH20 for å utgjør 11.
19. ABTS/H202: bland sammen 15 ml ABST-løsning med 2 ul H2025 minutter før anvendelse. 20. 0,2M HC1.
Fremgangsmåte:
1. Belegg ELISA-plater med 2 ug poly(Glu-Tyr) i 100 ul PBS og hold over natten ved 4°C.
2. Blokker platen med 150 ul 5% BSA/PBS i 60 min.
3. Vask platen to ganger med PBS, og deretter en gang med 50 mM HEPES-buffer, pH 7,4. 4. Tilsett 50 (il av den fortynnede kinasen til alle brønner. (Renset kinase fortynnes med kinasefortynningsbuffer, sluttkonsentrasjon bør være 10 ng/brønn). 5. Tilsett 25 (il av testforbindelse (i 4% DMSO) eller DMSO alene (4% i dH20) for kontroller til platen.
6. Inkuber kinase/forbindelseblanding i 15 minutter.
7. Tilsett 25 (il av 40 mM MnCl2til de negative kontrollbrønnene.
8. Tilsett 25 (il ATP/MnCl2-blanding til alle andre brønner (untatt negative kontroller).
Inkuber i 5 minutter.
9. Tilsett 25 (il 500 mM EDTA for å stoppe reaksjonen.
10. Vask platen 3x med TB ST.
11. Tilsett 100 (il kaninpolyklonal anti-Ptyr fortynnet 1:10 000 i antistoffortynningsbuffer til hver brønn. Inkuber med risting ved romtemperatur i 1 time.
12. Vask platen 3x med TB ST.
13. Fortynning Biosource HRP-konjugat anti-kaninantistoff 1:6 000 i antistoffortynningsbuffer. Tilsett 100 (il pr. brønn og inkuber ved romtemperatur, med risting, i 1
time.
14. Vask platen lx med PBS.
15. Tilsett 100 (il ABTS/H202-løsning til hver brønn.
16. Hvis nødvendig, stopp utviklingsreaksjonen ved tilsetning av 100 (il 0,2M HC1 pr. brønn. 17. Avles plate på Dynatech MR7000 ELISA-avleser med testfilter ved 410 nM og refe-ransefilter ved 630 nM.
BrdU- inkorporeringsundersøkelser
Følgende undersøkelser anvender celler modulert for å uttrykke en valgt reseptor og deretter evaluere effekten av en forbindelse av interesse når det gjelder aktivitet av li-gandindusert DNA-syntese ved bestemmelse av BRDU-inkorporering i DNA'et.
Følgende materialer, reagenser og fremgangsmåter er generelle for hver av følgende BrdU-inkorporeringsundersøkelser. Varianser i spesifiserte undersøkelser er notert.
Generelle materialer og reagenser:
1. Passende ligand.
2. Passende modifiserte celler.
3. BrdU-merkingsreagens: 10 mM, i PBS, pH 7,4 (Roche Molecular Biochemicals,
Indianapolis, IN).
4. FixDenat: fikseringsløsning (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN).
5. Anti-BrdU-POD: musemonoklonalt antistoff konjugert med peroksidase (Chemicon,
Temecula, CA).
6. TMB-substratløsning: tetrametylbenzidin (TMB, klar for anvendelse, Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN).
7. PBS-vaskeløsning: IX PBS, pH 7,4.
8. Albumin, bovin (BSA), fraksjon V-pulver (Sigma Chemical Co., USA).
Generell fremgangsmåte:
1. Celler såes ved 8 000 celler/brønn i 10% CS, 2 mM Gin i DMEM, i en 96-brønns plate. Celler inkuberes over natten ved 37°C i 5% CO2. 2. Etter 24 timer, blir cellene vasket med PBS, og deretter serumsultet i serumfritt medium (0% CS DMEM med 0,1% BSA) i 24 timer. 3. På dag 3, blir passende ligand og testforbindelse tilsatt til cellene simultant. Negative kontrollbrønner mottar serumfritt DMEM med 0,1% BSA alene; positive kontrollceller mottar ligand, men ikke testforbindelse. Testforbindelser fremstilles i serumfritt DMEM med ligand i en 96 brønns plate, og seriefortynnes for 7 testkonsentrasjoner. 4. Etter 18 timer med ligandaktivering, blir fortynnet BrdU-merkingsreagens (1:100 i DMEM, 0,1% BSA) tilsatt og cellene inkuberes med BrdU (sluttkonsentrasjon er 10
uM) i 1,5 timer.
5. Etter inkubering med merkingsreagens, blir medium fjernet ved dekantering og tapping av den inverterte platen på et papirhåndkle. FixDentat-løsning tilsettes (50
ul/brønn) og platene inkuberes ved romtemperatur i 45 minutter på en platerister.
6. FixDentatløsningen fjernes ved dekantering og tapping av den inverterte platen på et papirhåndkle. Melk tilsettes (5% dehydrert melk i PBS, 200 (il/brønn) som en blok-keringsløsning og platen inkuberes i 30 minutter ved romtemperatur på en platerister. 7. Blokkeringsløsningen fjernes ved dekantering og brønnene vaskes en gang med PBS. Anti-BrdU-POD-løsning tilsettes (1:200 fortynning i PBS, 1% BSA, 50
ul/brønn) og platen inkuberes i 90 minutter ved romtemperatur på en platerister.
8. Antistoffkonjugat fjernes ved dekantering og rensing av brønnene fem ganger med
PBS, og platen tørkes ved invertering og tapping på et papirhåndkle.
9. TMB-substratløsning tilsettes (100 (il/brønn) og blandingen inkuberes i 20 minutter ved romtemperatur på en platerister til farveutvikling er tilstrekkelig for fotometrisk
deteksjon.
10. Absorbansen til prøvene måles ved 410 nm (i "dobbelbølgelengde"-modus ved en filteravlesning ved 490 nm, som en referansebølgelengde) på en Dynatech ELISA-plateavleser.
HGF- indusert BrdU- inkorporeringsundersøkelse
Materialer og reagenser:
1. Rekombinant human HGF (katalog nr. 249-HG, R&D Systems, Inc., USA).
2. BxPC-3-celler (ATCC CRL-1687).
Resten av materialer og reagenser, som ovenfor.
Fremgangsmåte:
1. Celler sås ved 9 000 celler/brønn i RPMI10% FBS i en 96 brønns plate. Celler inkuberes over natten ved 37°C i 5% CO2. 2. Etter 24 timer blir cellene vasket med PBS og deretter serumsultet i 100 (il serumfritt medium (RPMI med 0,1% BSA) i 24 timer. 3. På dag 3, blir 25 (il som inneholder ligand (fremstilt ved 1 ug/ml i RPMI med 0,1% BSA; slutt HGF-konsentrasjon er 200 ng/ml) og testforbindelser tilsatt cellene. Negative kontrollbrønner mottar 24 (il serumfritt RPMI med 0,1% BSA alene; de positive kontrollbrønnene mottar liganden (HGF), men ingen testforbindelse. Testfor-bindelsene fremstilt ved 5 ganger deres sluttkonsentrasjon i serumfritt RPMI med ligand i en 96 brønns plate, og seriefortynnes for å gi 7 testkonsentrasjoner. Typisk er den høyeste sluttkonsentrasjonen av testforbindelse 100 uM og 1:3 fortynninger anvendes (dvs. sluttestforbindelseskonsentrasjonsområdet er 0,137-100 uM). 4. Etter 18 timer med ligandaktivering, blir 12,5 (il fortynnet BrdU-merkingsreagens (1:100 i RPMI, 0,1% BSA) tilsatt til hver brønn og cellene inkuberes med BrdU
(sluttkonsentrasjon er 10 uM) i 1 time.
5. Samme som generell fremgangsmåte.
6. Samme som generell fremgangsmåte.
7. Blokkeringsløsningen fjernes ved dekantering og brønnene vaskes en gang med PBS. Anti-BrdU-POD-løsning (1:100 fortynning i PBS, 1% BSA) tilsettes (100
ul/brønn) og platen inkuberes i 90 minutter vd romtemperatur på en platerister.
8. Samme som generell fremgangsmåte.
9. Samme som generell fremgangsmåte.
10. Samme som generell fremgangsmåte.
Cellulær HGFR- autofosforyleringsundersøkelse
A549 celler (ATCC) anvendes i denne undersøkelsen. Celler sås i dyrkningsmedium (RPMI + 10% FBS) i 96 brønns plater og dyrkes over natten ved 37°C for tilfesting. Celler eksponeres for sultningsmedia (RPMI + 0,05% BSA). Fortynninger av inhibito-rene tilsettes til platene som inkuberes ved 37°C i 1 time. Cellene blir deretter stimulert ved tilsetning av 40 ng/ml HGF i 15 minutter. Cellene vaskes en gang med 1 mM Na3VC>4 i HBSS og blir deretter lysert. Lysatene fortynnes med 1 mM NaaVCui HBSS og overføres til en 96 brønns geite anti-kaninbelagt plate (Pierce) som er forhåndsbelagt med anti-HGFR-antistoff (Zymed Laboratories). Platene inkuberes over natten ved 4°C og vaskes med 1% Tween 20 i PBS flere ganger. HRP-PY20 (Santa Cruz) fortynnes og tilsettes til platene for 30 minutters inkubering. Platene blir deretter vasket igjen og TMB-peroksidasesubstrat (Kirkegaard & Perry) tilsettes og inkuberes i 10 minutter. Reaksjonen blir deretter stoppet ved tilsetning av 0,09N H2SO4. Platene måles ved OD-450 nm ved anvendelse av spektrofotometer. IC5o-verdier beregnes ved kurvetilpastning ved anvendelse av en fireparameteranalyse.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen måles for HGFR-inhiberingsaktivitet; data er vist i hver eksempel. Ki-data oppnås ved anvendelse av HGFR-kontinuerligkoblet spektrofo-tometrisk undersøkelse og ICso-data ble oppnådd ved anvendelse av den cellulære HGFR-autofosforyleringsundersøkelsen, hvor begge disse er beskrevet ovenfor.

Claims (9)

1. Enantiomerisk ren forbindelse,karakterisert vedformel i
hvori Y er N eller CR<12>; R<1>er valgt fra hydrogen, halogen, C6-12aryl, 5-12 leddet heteroaryl (hvori heteroaryl representerer furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksazol, tiazol, imidazol, imidazolin, imidazolidin, pyrazol, pyrazolin, pyrazolidin, isoksazol, isotiazol, oksadiazol, triazol, tiadiazol, pyran, pyridin, piperidin, dioksan, morfolin, ditian, tiomorfolin, pyridazin, pyrimidin, pyrazin, piperazin, triazin, tritian eller azitidin), C3.12cykloalkyl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, -0(CR<6>R7)nR<4>,-C(0)R<4>, -C(0)OR<4>, -CN, -N02, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>, -C(0)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, Ci.6alkyl, C2-g alkenyl, og C2.g alkynyl; og hvert hydrogen i R<1>er eventuelt substituert med en eller flere R<3->grupper; R<2>er hydrogen; hver R<3>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3.12cykloalkyl, C6-]2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>, -S(0)2OR<4>, -N02, -NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -CN, -C(0)R<4>, -OC(0)R<4>, -0(CR<6>R<7>)nR<4>, -NR<4>C(0)R<5>, -(CR<6>R<7>)nC(0)OR<4>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -(CR<6>R<7>)nC(0)NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nNCR<4>R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)NR<5>R<6>, -NR<4>S(0)pR<5>eller-C(0)NR<4>R<5>, hvert hydrogen i R<3>er eventuelt substituert med R<8>, og R<3->grupper på tilstøtende atomer kan kombineres for å danne et C6-12aryl, 5-12 leddet heteroaryl, C3-12cykloalkyl eller 3-12 leddet heteroalicyklisk gruppe; hverR4, R<5>, R<6>og R<7>er uavhengig hydrogen, halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme nitrogenatom kan, sammen med nitrogenet til hvilke de er bundet, kombineres for å danne en 3 til 12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe som eventuelt inneholder 1 til 3 ytterligere heteroatomer valgt fra N, O og S; eller hvilke som helst to av R<4>, R5,R6og R<7>bundet til samme karbonatom kan kombineres for å danne en C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe; og hvert hydrogen iR4, R<5>, R<6>og R<7>er eventuelt substituert med R<8>; hver R Q er uavhengig halogen, C1-2alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3.12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -NH2, -CN, -OH, -O-Ci-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk) eller -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl); og hvert hydrogen i R<8>er eventuelt substituert med R<n>; hver R<n>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C1-12alkoksy, C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -O-C1-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk), -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl) eller -CN, og hvert hydrogen i R<n>er eventuelt substituert med halogen, -OH, -CN, -C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -O-C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -CO, -SO eller -SO2; R<12>er hydrogen; hver m er uavhengig 0, 1 eller 2; hver n er uavhengig 0,1, 2, 3 eller 4; hver p er uavhengig 1 eller 2; eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1,karakterisert vedformel la
hvori: Y er CH; R<1>er en furan, tiofen, pyrrol, pyrrolin, pyrrolidin, dioksolan, oksazol, tiazol, imidazol, imidazolin, imidazolidin, pyrazol, pyrazolin, pyrazolidin, isoksazol, isotiazol, oksadiazol, triazol, tiadiazol, pyran, pyridin, piperidin, dioksane, morfolin, ditian, tiomorfolin, pyridazin, pyrimidin, pyrazin, piperazin, triazin, tritian, azitidin eller fenylgruppe; og hvert hydrogen i R<1>er eventuelt substituert med R<3>; hver R<3>er uavhengig halogen; C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2.i2alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -S(0)mR<4>, -S02NR<4>R<5>, -S(0)2OR<4>, -N02, -NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -CN, -C(0)R<4>, -OC(0)R<4>, -0(CR<6>R<7>)nR<4>, -NR<4>C(0)R<5>, -(CR<6>R<7>)nC(0)OR<4>, -(CR<6>R<7>)nOR<4>, -(CR<6>R<7>)nC(0)NR<4>R<5>, -(CR<6>R<7>)nNCR<4>R<5>, -C(=NR<6>)NR<4>R<5>, -NR<4>C(0)NR<5>R<6>, -NR<4>S(0)pR<5>eller -C(0)NR<4>R<5>, hvert hydrogen i R<3>er eventuelt substituert med R<8>, og R<3->grupper på tilstøtende atomer kan kombineres for å danne en C6-i2aryl, 5-12 leddet heteroaryl, C3.12cykloalkyl eller 3-12 leddet heteroalicyklisk gruppe; hverR4, R<5>, R<6>og R<7>er uavhengig hydrogen, halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme nitrogenatom kan, sammen med nitrogenet til hvilket de er bundet, kombineres for å danne en 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe som eventuelt inneholder 1 til 3 ytterligere heteroatomer valgt fra N, O og S; eller hvilke som helst to av R<4>, R<5>, R<6>og R<7>bundet til samme karbonatom kan kombineres for å danne en C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk eller 5-12 leddet heteroarylgruppe; og hvert hydrogen iR4, R<5>, R<6>og R<7>er eventuelt substituert med R<8>;hver R<8>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C2-12alkenyl, C2-12alkynyl, C3-12cykloalkyl, C6-i2aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -NH2, -CN, -OH, -O-Ci-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk) eller -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl); og hvert hydrogen i R8 er eventuelt substituert med R<n>;hver R<11>er uavhengig halogen, C1-12alkyl, C1-12alkoksy, C3.12cykloalkyl, C6-12aryl, 3-12 leddet heteroalicyklisk, 5-12 leddet heteroaryl, -O-d-12alkyl, -0-(CH2)nC3-i2cykloalkyl, -0-(CH2)nC6-i2aryl, -0-(CH2)n(3-12 leddet heteroalicyklisk), -0-(CH2)n(5-12 leddet heteroaryl) eller -CN, og hvert hydrogen i R<n>er eventuelt substituert med halogen, -OH, -CN, -C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -O-C1-12alkyl som kan være delvis eller fullt halogenert, -CO, -SO eller -SO2; hver m er uavhengig 0, 1 eller 2; hver n er uavhengig 0,1, 2, 3 eller 4; hver p er uavhengig 1 eller 2; eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav.
3. Enantiomerisk ren forbindelse,karakterisert vedat den er valgt fra gruppen som består av
5 -brom-3 - [(R)-1 -(2,6-diklor-3 -fluor-feny l)-etoksy ] -pyrazin-2-ylamin; 5-jod-3-[(R)l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin; 5-brom-3-[l(R)-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-2-ylamin; 4-{5-amino-6-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-benzosyre;
(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -fenyl)-piperazin-1-yl-metanon; 4-(4-{5-amino-6-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl}-benzoyl)-piperazine- 1-karboksylsyre tert-butylester;
3- [(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]-5-[4-(piperazin-1 -ylkarbonyl)feny 1] pyridin-2- amin;
4- {6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-lfuorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-N-[2-(dimetylamino)etyl]-N-metylbenzamid;
(4- {6-amino-5-[( 1 R)-1 -(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl} fenyl)metanol; 4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-lfuorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}-N-[3-(dirnetylarnino)propyl]-N-rnetylbenzamid; tert-butyl 4-(4-{6-amino-5-[(lR)-l-(2,6-diklor-3-fluorfenyl)etoksy]pyridin-3-yl}benzoyl)piperazine-1 -karboksylat;
3- [(R)-l -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-[ 1 -(1 -metyl-piperidin-4-yl)-1 H-pyrazol-4-yl]-pyridin-2 -ylamin;
1 -[4-(4- {6-amino-5-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyridin-3-yl} -pyrazol-1 - yl)-piperidin-1 -yl]-2-hydroksy-etanon; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-syklopentyl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2- ylamin;
3- [(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(lH-pyrazol-4-yl)-pyrazin-2-ylamin;
1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1 - yl)-piperidin-1 -yl]-2-hydroksy-etanon; 3-[(R)-l-(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-[l-(l-metyl-piperidin-4-yl)-lH-pyrazol-4-yl]-pyrazin-2-ylamin;
1 -[4-(4- {5-amino-6-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-pyrazin-2-yl} -pyrazol-1 - yl)-piperidin-1 -yl]-2-dimetylamino-etanon; 3-[(R)-l-(2-kloro-3,6-difluor-fenyl)-etoksy]-5-(l-piperidin-4-yl-lH-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin; eller et farmasøytisk akseptabelt salt, solvat eller hydrat derav.
4. Forbindelse ifølge krav 3,karakterisert vedat den er 3-[(R)-1 -(2,6-diklor-3-fluor-fenyl)-etoksy]-5-(l -piperidin-4-yl-1 H-pyrazol-4-yl)-pyridin-2-ylamin.
5. Anvendelse av en forbindelse, salt, hydrat eller solvat ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4 for fremstilling av et medikament for behandling av abnormal cellevekst i et pattedyr.
6. Anvendelse ifølge krav 5, hvori den abnormale celleveksten er kreft.
7. Forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4 for anvendelse i behandling av abnormal cellevekst hos et pattedyr.
8. Forbindelse ifølge krav 7, hvori den abnomale celleveksten er kreft.
9. Farmasøytisk sammensetning,karakterisert vedat den innbefatter en forbindelse, salt, hydrat eller solvat ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4 og en farmasøytisk akseptabel bærer.
NO20071290A 2004-08-26 2007-03-09 Enantiomerisk rene aminoheteroarylforbindelser, farmasoytisk preparat samt anvendelser derav NO333231B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US60508604P 2004-08-26 2004-08-26
PCT/IB2005/002837 WO2006021884A2 (en) 2004-08-26 2005-08-15 Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20071290L NO20071290L (no) 2007-05-29
NO333231B1 true NO333231B1 (no) 2013-04-15

Family

ID=35967909

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20071290A NO333231B1 (no) 2004-08-26 2007-03-09 Enantiomerisk rene aminoheteroarylforbindelser, farmasoytisk preparat samt anvendelser derav
NO2013008C NO2013008I2 (no) 2004-08-26 2013-04-15 Krizotinib eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO2013008C NO2013008I2 (no) 2004-08-26 2013-04-15 Krizotinib eller et farmasøytisk akseptabelt salt, hydrat eller solvat derav

Country Status (46)

Country Link
US (4) US7858643B2 (no)
EP (1) EP1786785B9 (no)
JP (1) JP4242911B2 (no)
KR (1) KR100859891B1 (no)
CN (1) CN101023064B (no)
AP (1) AP2373A (no)
AR (1) AR050788A1 (no)
AT (1) ATE463486T1 (no)
AU (1) AU2005276135B2 (no)
BR (2) BRPI0513915A (no)
CA (1) CA2578066C (no)
CR (1) CR8860A (no)
CY (2) CY1110044T1 (no)
DE (1) DE602005020465D1 (no)
DK (1) DK1786785T3 (no)
EA (1) EA013678B1 (no)
EC (1) ECSP077276A (no)
ES (1) ES2341351T3 (no)
FR (1) FR13C0015I2 (no)
GE (1) GEP20104906B (no)
GT (1) GT200500225A (no)
HK (1) HK1105414A1 (no)
HN (1) HN2005000476A (no)
HR (1) HRP20100298T1 (no)
IL (1) IL181384A (no)
LU (1) LU92155I2 (no)
MA (1) MA28828B1 (no)
ME (1) ME01788B (no)
MX (1) MX2007002312A (no)
MY (1) MY145177A (no)
NI (1) NI200700057A (no)
NL (1) NL1029799C2 (no)
NO (2) NO333231B1 (no)
NZ (1) NZ552866A (no)
PA (1) PA8643301A1 (no)
PE (1) PE20060501A1 (no)
PL (1) PL1786785T3 (no)
PT (1) PT1786785E (no)
RS (1) RS51362B (no)
SI (1) SI1786785T1 (no)
TN (1) TNSN07070A1 (no)
TW (1) TWI358406B (no)
UA (1) UA87153C2 (no)
UY (1) UY29081A1 (no)
WO (1) WO2006021884A2 (no)
ZA (1) ZA200700127B (no)

Families Citing this family (170)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
OA13151A (en) * 2003-02-26 2006-12-13 Sugen Inc Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors.
MY150088A (en) 2003-05-19 2013-11-29 Irm Llc Immunosuppressant compounds and compositions
PT1784396E (pt) * 2004-08-26 2011-01-27 Pfizer Compostos amino-heteroarílicos substituídos com pirazole como inibidores de proteína quinases
WO2006021884A2 (en) * 2004-08-26 2006-03-02 Pfizer Inc. Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
ES2402419T3 (es) * 2005-12-05 2013-05-03 Pfizer Products Inc. Polimorfos de un inhibidor de C-MET/HGFR
US7825137B2 (en) * 2005-12-05 2010-11-02 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
DE602007004092D1 (de) * 2006-03-22 2010-02-11 Vertex Pharma C-met-proteinkinasehemmer zur behandlung proliferativer erkrankungen
US8168383B2 (en) 2006-04-14 2012-05-01 Cell Signaling Technology, Inc. Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors
ES2561406T3 (es) 2006-04-14 2016-02-26 Cell Signaling Technology, Inc. Defectos de genes y quinasa ALK mutante en tumores sólidos humanos
WO2008021781A1 (en) * 2006-08-07 2008-02-21 Incyte Corporation Triazolotriazines as kinase inhibitors
GB0621607D0 (en) * 2006-10-31 2006-12-06 Chroma Therapeutics Ltd Inhibitors of c-Met
HUE026659T2 (en) 2006-11-22 2016-07-28 Incyte Holdings Corp Imidazotriazines and imidazopyrimidines as kinase inhibitors
US8455513B2 (en) 2007-01-10 2013-06-04 Aerie Pharmaceuticals, Inc. 6-aminoisoquinoline compounds
EP2120578B1 (en) * 2007-01-19 2014-11-19 Xcovery, INC. Kinase inhibitor compounds
WO2008127710A2 (en) 2007-04-13 2008-10-23 Dana Farber Cancer Institute Methods for treating cancer resistant to erbb therapeutics
WO2009036404A2 (en) 2007-09-13 2009-03-19 Codexis, Inc. Ketoreductase polypeptides for the reduction of acetophenones
EP2265270A1 (en) * 2008-02-04 2010-12-29 OSI Pharmaceuticals, Inc. 2-aminopyridine kinase inhibitors
AR070317A1 (es) * 2008-02-06 2010-03-31 Osi Pharm Inc Furo (3,2-c) piridina y tieno (3,2-c) piridinas
JPWO2009131173A1 (ja) 2008-04-23 2011-08-18 協和発酵キリン株式会社 ２−アミノキナゾリン誘導体
SI2300455T1 (sl) 2008-05-21 2017-12-29 Incyte Holdings Corporation Soli 2-fluoro-n-metil-4-(7-(kinolin-6-il-metil)-imidazo(1,2-b)1,2,4) triazin-2-il)benzamid in postopki v zvezi z njihovo pripravo
EP2143441A1 (en) * 2008-07-08 2010-01-13 Pierre Fabre Medicament Combination of a c-Met antagonist and an aminoheteroaryl compound for the treatment of cancer
US8450344B2 (en) 2008-07-25 2013-05-28 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Beta- and gamma-amino-isoquinoline amide compounds and substituted benzamide compounds
EP2356116A1 (en) 2008-11-20 2011-08-17 OSI Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrroloý2,3-b¨-pyridines and-pyrazines
BRPI0922457A2 (pt) 2008-12-18 2015-12-15 Novartis Ag forma polimórfica de ácido 1-(4-{1-[(e)-4-ciclo-hexil-3-trifluormetil-benziloxi-imino]-etil)-2-etil-benzil)-azetidino-3-carboxílico"
SG172248A1 (en) 2008-12-19 2011-07-28 Vertex Pharma Pyrazine derivatives useful as inhibitors of atr kinase
ES2834451T3 (es) 2009-05-01 2021-06-17 Aerie Pharmaceuticals Inc Inhibidores de mecanismo doble para el tratamiento de enfermedades
US9126931B2 (en) 2009-06-10 2015-09-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Tetracyclic compound
DE102009056886A1 (de) 2009-12-03 2011-06-09 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft cMet-Inhibitoren zur Behandlung der Endometriose
AU2011269788B2 (en) 2010-02-03 2015-12-10 Incyte Holdings Corporation Imidazo[1,2-b][1,2,4]triazines as c-Met inhibitors
EP2566858A2 (en) 2010-05-04 2013-03-13 Pfizer Inc. Heterocyclic derivatives as alk inhibitors
CA2798763A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds useful as inhibitors of atr kinase
EP2569287B1 (en) 2010-05-12 2014-07-09 Vertex Pharmaceuticals Inc. Compounds useful as inhibitors of atr kinase
US9062008B2 (en) * 2010-05-12 2015-06-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds useful as inhibitors of ATR kinase
US20130072495A1 (en) 2010-05-14 2013-03-21 OSI Pharmaceuticals, LLC Fused bicyclic kinase inhibitors
AR081039A1 (es) 2010-05-14 2012-05-30 Osi Pharmaceuticals Llc Inhibidores biciclicos fusionados de quinasa
KR101871436B1 (ko) 2010-05-17 2018-06-27 인코젠 쎄라퓨틱스 프라이빗 리미티드 단백질 키나제의 조절제로서의 신규한 3,5-디치환-3ｈ-이미다조[4,5-ｂ]피리딘 및 3,5- 디치환 -3ｈ-[1,2,3]트리아졸로[4,5-ｂ] 피리딘 화합물
US20130315895A1 (en) 2010-07-01 2013-11-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET
WO2012023597A1 (ja) 2010-08-20 2012-02-23 中外製薬株式会社 ４環性化合物を含む組成物
WO2012042421A1 (en) 2010-09-29 2012-04-05 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth
CN102464667B (zh) * 2010-11-03 2014-06-04 中国科学院上海药物研究所 一类五元杂环并嘧啶类化合物及其制备方法和用途
JP5965923B2 (ja) * 2011-02-24 2016-08-10 ジエンス ハンセン ファーマセウティカル カンパニー リミテッド プロテインキナーゼ阻害剤としてのリン含有化合物
WO2012119006A2 (en) * 2011-03-03 2012-09-07 Concert Pharmaceuticals, Inc. Derivatives of pyrazole-substituted amino-heteroaryl compounds
US9145390B2 (en) 2011-03-03 2015-09-29 Concert Pharmaceuticals, Inc. Derivatives of pyrazole-substituted amino-heteroaryl compounds
CN102718745A (zh) * 2011-03-30 2012-10-10 中国科学院上海药物研究所 新型胺基吡啶类化合物、其制备方法、包含此类化合物的药物组合物及其用途
JP2014513724A (ja) 2011-05-16 2014-06-05 オーエスアイ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー 融合二環キナーゼ阻害剤
CN102850328B (zh) * 2011-07-01 2014-12-24 苏州东南药业股份有限公司 吡啶类化合物、其制备方法、包含该化合物的药物组合物及其用途
US20160206608A1 (en) 2011-08-02 2016-07-21 Pfizer Inc. Crizotinib for use in the treatment of cancer
US20140350050A1 (en) * 2011-09-21 2014-11-27 Teligene Ltd. Pyridine compounds as inhibitors of kinase
CN103957917A (zh) 2011-09-30 2014-07-30 沃泰克斯药物股份有限公司 用atr抑制剂治疗胰腺癌和非小细胞肺癌
EP3878851A1 (en) 2011-09-30 2021-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Process for making compounds useful as inhibitors of atr kinase
CN103204844A (zh) * 2012-01-17 2013-07-17 上海艾力斯医药科技有限公司 氨基杂芳基化合物及其制备方法与应用
WO2013109991A1 (en) * 2012-01-20 2013-07-25 Acucela Inc. Substituted heterocyclic compounds for disease treatment
EP2620140A1 (en) 2012-01-26 2013-07-31 ratiopharm GmbH Crizotinib containing compositions
AP2014007881A0 (en) * 2012-03-06 2014-08-31 Pfizer Macrocyclic derivatives for the treatment of proliferative diseases
SG11201406185WA (en) 2012-03-30 2014-11-27 Rhizen Pharmaceuticals Sa Novel 3,5-disubstitued-3h-imidazo[4,5-b]pyridine and 3,5- disubstitued -3h-[1,2,3]triazolo[4,5-b] pyridine compounds as modulators of c-met protein kinases
PL2833973T3 (pl) 2012-04-05 2018-02-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Związki użyteczne jako inhibitory kinazy ATR i ich terapie skojarzone
CN103373986B (zh) * 2012-04-22 2016-10-05 东南大学 克里唑替尼前药及其制备方法与用途
CN103387535B (zh) * 2012-05-10 2016-06-01 广东东阳光药业有限公司 取代的炔基吡啶化合物及其使用方法和用途
CN103420987B (zh) * 2012-05-15 2015-11-25 上海医药工业研究院 吡啶衍生物及其制备方法
CN103420906B (zh) * 2012-05-21 2015-09-09 南京圣和药业股份有限公司 新型酪氨酸蛋白激酶抑制剂
WO2013181251A1 (en) 2012-05-29 2013-12-05 Ratiopharm Gmbh Crizotinib hydrochloride salt in crystalline
WO2013192512A1 (en) * 2012-06-22 2013-12-27 Concert Pharmaceuticals, Inc. Derivatives of pyrazole-substituted amino-heteroaryl compounds
CN103509008A (zh) * 2012-06-22 2014-01-15 康瑟特制药公司 吡唑取代的氨基-杂芳基化合物的衍生物
WO2014020467A2 (en) 2012-07-30 2014-02-06 Fresenius Kabi Oncology Ltd Process for the preparation of pyrazole substituted aminoheteroaryl compounds
JP2015529665A (ja) 2012-08-27 2015-10-08 ツェーエムエム−フォルシュングスツェントルム フュア モレクラレ メディツィン ゲーエムベーハー Ｍｔｈ１阻害剤としてのアミノヘテロアリール化合物
DK2898329T3 (en) 2012-09-24 2017-07-17 Ventana Med Syst Inc PROCEDURE FOR IDENTIFYING TREATMENT RESPONSIBLE NON-SMALL CELL LUNG CANCER USING ANAPLASTIC Lymphoma Kinase (ALK) AS MARKER
TR201815994T4 (tr) 2012-09-25 2018-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Ret inhibitörü.
EP2904406B1 (en) 2012-10-04 2018-03-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for measuring atr inhibition mediated increases in dna damage
WO2014081816A1 (en) * 2012-11-21 2014-05-30 Concert Pharmaceuticals, Inc. Fluoro-derivatives of pyrazole-substituted amino-heteroaryl compounds
CN104016979B (zh) * 2012-11-23 2017-05-03 广东东阳光药业有限公司 取代的环化合物及其使用方法和用途
WO2014089324A1 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 Calitor Sciences, Llc Substituted cyclic compounds and methods of use
WO2014111496A1 (en) * 2013-01-18 2014-07-24 F. Hoffmann-La Roche Ag 3-substituted pyrazoles and use as dlk inhibitors
WO2014115169A2 (en) * 2013-01-24 2014-07-31 Hetero Research Foundation Crizotinib solid dispersion
WO2014117718A1 (zh) * 2013-02-02 2014-08-07 正大天晴药业集团股份有限公司 取代的2-氨基吡啶类蛋白激酶抑制剂
WO2014139391A1 (en) * 2013-03-11 2014-09-18 Teligene Ltd Substituted pyridine compounds as kinases inhibitors
CN110396085A (zh) 2013-03-15 2019-11-01 爱瑞制药公司 联合治疗
WO2014203177A1 (en) * 2013-06-18 2014-12-24 Shilpa Medicare Limited Amorphous (r) -3- [1- (2, 6-dichloro-3-fluorophenyl) methoxy] -5- [1- (piperidin-4- yl) -1h-pyrazol-4-yl] pyridin-2-amine
CN104650049B (zh) * 2013-08-28 2018-06-08 广东东阳光药业有限公司 取代的吡啶化合物及其使用方法和用途
WO2015034729A1 (en) * 2013-09-05 2015-03-12 Calitor Sciences, Llc Substituted pyridine compounds and methods of use
US20160214961A1 (en) * 2013-09-10 2016-07-28 Shilpa Medicare Limited Novel salts of crizotinib and their preparation
TW201945337A (zh) * 2013-09-20 2019-12-01 美商拜奧馬林製藥公司 用於治療疾病之葡萄糖苷基腦醯胺(glucosylceramide)合成酶抑制劑
CN104513253A (zh) 2013-10-01 2015-04-15 南京波尔泰药业科技有限公司 用于治疗增殖性疾病的大环化合物
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
CN103755627B (zh) * 2014-01-09 2016-02-17 定陶县友帮化工有限公司 2-氨基-3-羟基-5-氯吡啶的合成方法
BR112016017344B1 (pt) * 2014-01-29 2023-05-16 Ucb Biopharma Sprl Composto de heteroaril amida, sua composição farmacêutica, seu uso, e método de interferir ou de prevenir, retardar, inverter, ou inibir a agregação da proteína ou peptídeo numa célula
JP6247992B2 (ja) * 2014-04-17 2017-12-13 株式会社ダイセル ハロゲン化合物の製造方法
CA2946268A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Crystal of tetracyclic compound
KR102412321B1 (ko) 2014-04-25 2022-06-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 4환성 화합물을 고용량 함유하는 제제
CN106536510B (zh) 2014-07-31 2019-04-26 正大天晴药业集团股份有限公司 吡啶取代的2-氨基吡啶类蛋白激酶抑制剂
TWI718102B (zh) 2014-08-08 2021-02-11 日商中外製藥股份有限公司 ４環性化合物的非晶質體
CN105348265A (zh) * 2014-08-19 2016-02-24 蔡苹 一种具有ALK和c-Met抑制活性的2,4-二取代杂环三氮唑类化合物的制备和应用
CA2955676A1 (en) 2014-08-25 2016-03-03 Pfizer Inc. Combination of a pd-1 antagonist and an alk inhibitor for treating cancer
CN105820113B (zh) * 2015-01-07 2018-04-20 爱技特科技（北京）有限公司 一种克唑替尼手性中间体的制备方法
RU2740261C2 (ru) 2015-01-16 2021-01-12 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Комбинированное лекарственное средство
CN104693184A (zh) * 2015-03-17 2015-06-10 安润医药科技（苏州）有限公司 克唑替尼的合成方法
US11464774B2 (en) 2015-09-30 2022-10-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for treating cancer using a combination of DNA damaging agents and ATR inhibitors
WO2017058780A1 (en) 2015-09-30 2017-04-06 Merck Patent Gmbh Combination of a pd-1 axis binding antagonist and an alk inhibitor for treating alk-negative cancer
US9643927B1 (en) 2015-11-17 2017-05-09 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of kinase inhibitors and intermediates thereof
AU2015414743B2 (en) * 2015-11-17 2019-07-18 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of kinase inhibitors and intermediates thereof
IL292302B2 (en) 2016-05-20 2023-10-01 Biohaven Pharm Holding Co Ltd Use of glutamate modulating factors in cancer immunotherapy
CN106083708A (zh) * 2016-06-30 2016-11-09 浙江大学 含2‑吡啶酮环侧链的2‑氨基吡啶衍生物及制备和应用
MX2019002396A (es) 2016-08-31 2019-07-08 Aerie Pharmaceuticals Inc Composiciones oftalmicas.
JOP20190154B1 (ar) 2016-12-22 2022-09-15 Amgen Inc بنز أيزو ثيازول، أيزو ثيازولو [3، 4-b] بيريدين، كينازولين، فثالازين، بيريدو [2، 3-d] بيريدازين ومشتقات بيريدو [2، 3-d] بيريميدين على هيئة مثبطات kras g12c لمعالجة سرطان الرئة، أو سرطان البنكرياس أو سرطان القولون والمستقيم
CN106831720B (zh) * 2017-01-21 2019-04-16 河北科技大学 双-4-(1h-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成方法及其应用
KR20190135027A (ko) 2017-03-31 2019-12-05 에어리 파마슈티컬즈, 인코포레이티드 아릴 시클로프로필-아미노-이소퀴놀리닐 아미드 화합물
JOP20190272A1 (ar) 2017-05-22 2019-11-21 Amgen Inc مثبطات kras g12c وطرق لاستخدامها
US10180422B1 (en) 2017-08-22 2019-01-15 Scripps Health Methods of treating a neuroendocrine tumor
ES2928576T3 (es) 2017-09-08 2022-11-21 Amgen Inc Inhibidores de KRAS G12C y métodos de uso de los mismos
JP6635999B2 (ja) * 2017-10-13 2020-01-29 株式会社ダイセル カリウム塩の製造方法、及びカリウム塩
CN108191833A (zh) * 2018-01-17 2018-06-22 浙江树人学院 克唑替尼衍生物及其制备方法和应用
WO2019206049A1 (en) * 2018-04-25 2019-10-31 Zhuhai Yufan Biotechnologies Co., Ltd Hpk1 inhibitors, preparation method and application thereof
CN110396087A (zh) * 2018-04-25 2019-11-01 珠海宇繁生物科技有限责任公司 Hpk1激酶抑制剂、制备方法及其应用
MA52496A (fr) 2018-05-04 2021-03-10 Amgen Inc Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation
MA52501A (fr) 2018-05-04 2021-03-10 Amgen Inc Inhibiteurs de kras g12c et leurs procédés d'utilisation
MX2020011907A (es) 2018-05-10 2021-01-29 Amgen Inc Inhibidores de kras g12c para el tratamiento de cancer.
CA3098885A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
EP3802537A1 (en) 2018-06-11 2021-04-14 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors for treating cancer
JP7369719B2 (ja) 2018-06-12 2023-10-26 アムジエン・インコーポレーテツド ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ阻害剤及びそれを使用する方法
WO2020050241A1 (ja) 2018-09-04 2020-03-12 中外製薬株式会社 ４環性化合物の製造方法
EP3849555A4 (en) 2018-09-14 2022-05-04 Aerie Pharmaceuticals, Inc. ARYL CYCLOPROPYL AMINO ISOCHINOLINYL AMIDE COMPOUNDS
JP2020090482A (ja) 2018-11-16 2020-06-11 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤化合物の重要な中間体の改良合成法
JP7377679B2 (ja) 2018-11-19 2023-11-10 アムジエン・インコーポレーテツド がん治療のためのｋｒａｓｇ１２ｃ阻害剤及び１種以上の薬学的に活性な追加の薬剤を含む併用療法
CA3117222A1 (en) 2018-11-19 2020-05-28 Amgen Inc. Kras g12c inhibitors and methods of using the same
MA54543A (fr) 2018-12-20 2022-03-30 Amgen Inc Inhibiteurs de kif18a
MX2021007104A (es) 2018-12-20 2021-08-11 Amgen Inc Inhibidores de kif18a.
JP2022513967A (ja) 2018-12-20 2022-02-09 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｉｆ１８ａ阻害剤として有用なヘテロアリールアミド
CA3123044A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Amgen Inc. Heteroaryl amides useful as kif18a inhibitors
US20220040324A1 (en) 2018-12-21 2022-02-10 Daiichi Sankyo Company, Limited Combination of antibody-drug conjugate and kinase inhibitor
WO2020180770A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Revolution Medicines, Inc. Bicyclic heterocyclyl compounds and uses thereof
CN113767100A (zh) 2019-03-01 2021-12-07 锐新医药公司 双环杂芳基化合物及其用途
EP3738593A1 (en) 2019-05-14 2020-11-18 Amgen, Inc Dosing of kras inhibitor for treatment of cancers
CN114144414A (zh) 2019-05-21 2022-03-04 美国安进公司 固态形式
CN114302880A (zh) 2019-08-02 2022-04-08 美国安进公司 Kif18a抑制剂
CA3147272A1 (en) 2019-08-02 2021-02-11 Amgen Inc. Kif18a inhibitors
JP2022542392A (ja) 2019-08-02 2022-10-03 アムジエン・インコーポレーテツド Ｋｉｆ１８ａ阻害剤としてのピリジン誘導体
AU2020324963A1 (en) 2019-08-02 2022-02-24 Amgen Inc. KIF18A inhibitors
US20220402916A1 (en) 2019-09-18 2022-12-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Small molecule inhibitors of kras g12c mutant
CN112552293A (zh) * 2019-09-25 2021-03-26 珠海宇繁生物科技有限责任公司 一种protac小分子化合物及其应用
MX2022004656A (es) 2019-10-24 2022-05-25 Amgen Inc Derivados de piridopirimidina utiles como inhibidores de kras g12c y kras g12d en el tratamiento del cancer.
EP4051678A1 (en) 2019-10-28 2022-09-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Small molecule inhibitors of kras g12c mutant
WO2021085653A1 (en) 2019-10-31 2021-05-06 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. 4-aminobut-2-enamide derivatives and salts thereof
JP2022553859A (ja) 2019-11-04 2022-12-26 レボリューション メディシンズ インコーポレイテッド Ｒａｓ阻害剤
TW202132315A (zh) 2019-11-04 2021-09-01 美商銳新醫藥公司 Ras 抑制劑
BR112022008565A2 (pt) 2019-11-04 2022-08-09 Revolution Medicines Inc Composto, composição farmacêutica, conjugado, métodos para tratar câncer e um distúrbio relativo à proteína ras
CN114901662A (zh) 2019-11-08 2022-08-12 锐新医药公司 双环杂芳基化合物及其用途
MX2022005726A (es) 2019-11-14 2022-06-09 Amgen Inc Sintesis mejorada del compuesto inhibidor de g12c de kras.
MX2022005708A (es) 2019-11-14 2022-06-08 Amgen Inc Sintesis mejorada del compuesto inhibidor de g12c de kras.
CN114980976A (zh) 2019-11-27 2022-08-30 锐新医药公司 共价ras抑制剂及其用途
WO2021106231A1 (en) 2019-11-29 2021-06-03 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. A compound having inhibitory activity against kras g12d mutation
JP2023509701A (ja) 2020-01-07 2023-03-09 レヴォリューション・メディスンズ，インコーポレイテッド Ｓｈｐ２阻害剤投薬およびがんを処置する方法
WO2021196655A1 (zh) * 2020-04-03 2021-10-07 中国药科大学 含苯并咪唑结构的化合物及其制备方法与用途
WO2021215545A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Anticancer combination therapy with n-(1-acryloyl-azetidin-3-yl)-2-((1h-indazol-3-yl)amino)methyl)-1h-imidazole-5-carboxamide inhibitor of kras-g12c
EP4139299A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Kras g12d protein inhibitors
IL299131A (en) 2020-06-18 2023-02-01 Revolution Medicines Inc Methods for delaying, preventing and treating acquired resistance to RAS inhibitors
WO2022014640A1 (ja) 2020-07-15 2022-01-20 大鵬薬品工業株式会社 腫瘍の治療に使用されるピリミジン化合物を含む組み合わせ
EP4208261A1 (en) 2020-09-03 2023-07-12 Revolution Medicines, Inc. Use of sos1 inhibitors to treat malignancies with shp2 mutations
EP4214209A1 (en) 2020-09-15 2023-07-26 Revolution Medicines, Inc. Indole derivatives as ras inhibitors in the treatment of cancer
CN114437058A (zh) * 2020-10-30 2022-05-06 珠海宇繁生物科技有限责任公司 氘代hpk1激酶抑制剂及其制备方法和应用
AR124449A1 (es) 2020-12-22 2023-03-29 Qilu Regor Therapeutics Inc Inhibidores de sos1 y usos de los mismos
CN117616031A (zh) 2021-05-05 2024-02-27 锐新医药公司 用于治疗癌症的ras抑制剂
WO2022235866A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Revolution Medicines, Inc. Covalent ras inhibitors and uses thereof
EP4334321A1 (en) 2021-05-05 2024-03-13 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
EP4347041A1 (en) 2021-05-28 2024-04-10 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Small molecule inhibitors of kras mutated proteins
AR127308A1 (es) 2021-10-08 2024-01-10 Revolution Medicines Inc Inhibidores ras
WO2023114954A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Genzyme Corporation Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors
EP4227307A1 (en) 2022-02-11 2023-08-16 Genzyme Corporation Pyrazolopyrazine compounds as shp2 inhibitors
WO2023172940A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Revolution Medicines, Inc. Methods for treating immune refractory lung cancer
CN114767676B (zh) * 2022-04-22 2024-04-19 珠海宇繁生物科技有限责任公司 Hpk1激酶抑制剂在预防和/或治疗人的病原体感染中的应用
WO2023240263A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic ras inhibitors
WO2024081916A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Black Diamond Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers using isoquinoline or 6-aza-quinoline derivatives

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO20054080L (no) * 2003-02-26 2005-11-21 Uszhang Jennifer R Aminoheteroarylforbindelser som roteinkinaseinhibitorer

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB129611A (en) 1919-04-15 1919-07-17 John Norman Riddell Hannam Improvements in Stropping or Sharpening Devices for Safety Razor Blades.
GB8827305D0 (en) 1988-11-23 1988-12-29 British Bio Technology Compounds
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5376645A (en) 1990-01-23 1994-12-27 University Of Kansas Derivatives of cyclodextrins exhibiting enhanced aqueous solubility and the use thereof
US5587458A (en) * 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
EP0625200B1 (en) * 1992-02-06 2005-05-11 Chiron Corporation Biosynthetic binding protein for cancer marker
US6177401B1 (en) 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5455258A (en) 1993-01-06 1995-10-03 Ciba-Geigy Corporation Arylsulfonamido-substituted hydroxamic acids
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
US5863949A (en) * 1995-03-08 1999-01-26 Pfizer Inc Arylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
EP0821671B1 (en) * 1995-04-20 2000-12-27 Pfizer Inc. Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives as mmp and tnf inhibitors
US5747498A (en) * 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5880141A (en) * 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
GB9518953D0 (en) 1995-09-15 1995-11-15 Pfizer Ltd Pharmaceutical formulations
GB9520822D0 (en) 1995-10-11 1995-12-13 Wellcome Found Therapeutically active compounds
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
DK0780386T3 (da) 1995-12-20 2003-02-03 Hoffmann La Roche Matrixmetalloproteaseinhibitorer
DK0885198T3 (da) 1996-03-05 2002-03-25 Astrazeneca Ab 4-Anilinoquinazolinderivater
WO1997049700A1 (en) 1996-06-27 1997-12-31 Pfizer Inc. Derivatives of 2-(2-oxo-ethylidene)-imidazolidin-4-one and their use as farnesyl protein transferase inhibitors
EP0818442A3 (en) 1996-07-12 1998-12-30 Pfizer Inc. Cyclic sulphone derivatives as inhibitors of metalloproteinases and of the production of tumour necrosis factor
AR007857A1 (es) 1996-07-13 1999-11-24 Glaxo Group Ltd Compuestos heterociclicos fusionados como inhibidores de proteina tirosina quinasa, sus metodos de preparacion, intermediarios uso en medicina ycomposiciones farmaceuticas que los contienen.
HRP970371A2 (en) 1996-07-13 1998-08-31 Kathryn Jane Smith Heterocyclic compounds
DE69718472T2 (de) 1996-07-13 2003-11-06 Glaxo Group Ltd Bicyclische heteroaromatische verbindungen als protein tyrosine kinase inhibitoren
DE19628569A1 (de) 1996-07-16 1998-01-22 Bayer Ag Substituierte N-(5-Isothiazolyl)-thioamide
EP0923585B1 (en) 1996-07-18 2002-05-08 Pfizer Inc. Phosphinate based inhibitors of matrix metalloproteases
JP2000501423A (ja) 1996-08-23 2000-02-08 ファイザー インク． アリールスルホニルアミノヒドロキサム酸誘導体
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
WO2000035296A1 (en) 1996-11-27 2000-06-22 Wm. Wrigley Jr. Company Improved release of medicament active agents from a chewing gum coating
PT950059E (pt) 1997-01-06 2004-10-29 Pfizer Derivados de sulfona ciclicos
ID22799A (id) 1997-02-03 1999-12-09 Pfizer Prod Inc Turunan-turunan asam arilsulfonilamino hidroksamat
JP2000507975A (ja) 1997-02-07 2000-06-27 ファイザー・インク Ｎ−ヒドロキシ−β−スルホニルプロピオンアミド誘導体類及びそれらのマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害薬としての使用
IL131123A0 (en) 1997-02-11 2001-01-28 Pfizer Arylsulfonyl hydroxamic acid derivatives
CA2289102A1 (en) 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
AU734009B2 (en) 1997-05-30 2001-05-31 Merck & Co., Inc. Novel angiogenesis inhibitors
GB9711643D0 (en) 1997-06-05 1997-07-30 Janssen Pharmaceutica Nv Glass thermoplastic systems
US6214872B1 (en) 1997-08-08 2001-04-10 Pfizer Inc. Aryloxyarylsulfonylamino hydroxamic acid derivatives
EP1005470B1 (en) 1997-08-22 2007-08-01 AstraZeneca AB Oxindolylquinazoline derivatives as angiogenesis inhibitors
AU744939B2 (en) 1997-09-26 2002-03-07 Merck & Co., Inc. Novel angiogenesis inhibitors
EP1028964A1 (en) 1997-11-11 2000-08-23 Pfizer Products Inc. Thienopyrimidine and thienopyridine derivatives useful as anticancer agents
GB9725782D0 (en) 1997-12-05 1998-02-04 Pfizer Ltd Therapeutic agents
JPH11236333A (ja) 1997-12-30 1999-08-31 Pfizer Prod Inc 抗ガン剤として有用なイミダゾリン−４−オン誘導体
GB9800575D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
GB9800569D0 (en) 1998-01-12 1998-03-11 Glaxo Group Ltd Heterocyclic compounds
GB9801690D0 (en) 1998-01-27 1998-03-25 Pfizer Ltd Therapeutic agents
DK0952148T3 (da) 1998-04-10 2004-09-20 Pfizer Prod Inc Cyclobutylaryloxyarylsulfonylaminohydroxamsyrederivater
PA8469401A1 (es) 1998-04-10 2000-05-24 Pfizer Prod Inc Derivados biciclicos del acido hidroxamico
PA8469501A1 (es) 1998-04-10 2000-09-29 Pfizer Prod Inc Hidroxamidas del acido (4-arilsulfonilamino)-tetrahidropiran-4-carboxilico
DK2020408T3 (da) 1998-05-29 2013-09-30 Sugen Inc Pyrrol-substitueret 2-indolinon som proteinkinaseinhibitor
UA60365C2 (uk) 1998-06-04 2003-10-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні ізотіазолу, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання у ссавця
BR9913315A (pt) 1998-08-27 2001-05-22 Pfizer Prod Inc Derivados de quinolin-2-ona úteis como agentes anticâncer
NZ509372A (en) 1998-08-27 2003-08-29 Pfizer Prod Inc Substituted quinolin-2-one derivatives, pharmaceuticals thereof and their use for treating abnormal cell growth (e.g. cancer)
US6114361A (en) 1998-11-05 2000-09-05 Pfizer Inc. 5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid hydroxamide derivatives
EP1006113A1 (en) 1998-12-02 2000-06-07 Pfizer Products Inc. Derivatives of 2-(2-oxo-ethylidene)-imidazolidin-4-one and their use to inhibit abnormal cell growth
US6649645B1 (en) 1998-12-23 2003-11-18 Pharmacia Corporation Combination therapy of radiation and a COX-2 inhibitor for treatment of neoplasia
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
KR20010109275A (ko) 1998-12-23 2001-12-08 로저 에이. 윌리암스 종양치료의 병용치료로서 사이클로옥시게나제-2 억제제와기질 금속단백분해효소 억제제를 사용하는 방법
UA71945C2 (en) 1999-01-27 2005-01-17 Pfizer Prod Inc Substituted bicyclic derivatives being used as anticancer agents
JP3270834B2 (ja) 1999-01-27 2002-04-02 ファイザー・プロダクツ・インク 抗がん剤として有用なヘテロ芳香族二環式誘導体
TR200201297T2 (tr) 1999-02-11 2002-06-21 Pfizer Products Inc. Antikanser maddeleri olarak faydalı heteroaril-ikame edilmiş kinolin-2-on türevleri.
US6586447B1 (en) 1999-04-01 2003-07-01 Pfizer Inc 3,3-disubstituted-oxindole derivatives useful as anticancer agents
US6511993B1 (en) * 1999-06-03 2003-01-28 Kevin Neil Dack Metalloprotease inhibitors
EP1081137A1 (en) 1999-08-12 2001-03-07 Pfizer Products Inc. Selective inhibitors of aggrecanase in osteoarthritis treatment
ES2212971T3 (es) 1999-11-30 2004-08-16 Pfizer Products Inc. Derivados de quinolina utiles para la inhibicion de la farnesil protein transferasa.
UA75055C2 (uk) * 1999-11-30 2006-03-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні бензоімідазолу, що використовуються як антипроліферативний засіб, фармацевтична композиція на їх основі
HN2000000266A (es) 2000-01-21 2001-05-21 Pfizer Prod Inc Compuesto anticanceroso y metodo de separacion de enantiomeros util para sintetizar dicho compuesto.
CA2399358C (en) * 2000-02-15 2006-03-21 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
US6844357B2 (en) 2000-05-01 2005-01-18 Pfizer Inc. Substituted quinolin-2-one derivatives useful as antiproliferative agents
SE0102439D0 (sv) 2001-07-05 2001-07-05 Astrazeneca Ab New compounds
SE0102438D0 (sv) 2001-07-05 2001-07-05 Astrazeneca Ab New compounds
WO2004004720A1 (en) 2002-07-03 2004-01-15 Astex Technology Limited 3-`(hetero) arylmethoxy ! pyridines and their analogues as p38 map kinase inhibitors
SE0203754D0 (sv) * 2002-12-17 2002-12-17 Astrazeneca Ab New compounds
SI2476667T1 (sl) * 2003-02-26 2014-10-30 Sugen, Inc. Aminoheteroarilne spojine kot inhibitorji protein-kinaze
WO2005002673A1 (en) 2003-07-03 2005-01-13 Astex Therapeutics Limited Raf kinase inhibitors
WO2006021884A2 (en) * 2004-08-26 2006-03-02 Pfizer Inc. Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
MX2007002247A (es) * 2004-08-26 2007-04-20 Pfizer Biotransformacion enantioselectiva para la preparacion de intermedios de inhibidores de la proteina tirosina quinasa.
PT1784396E (pt) * 2004-08-26 2011-01-27 Pfizer Compostos amino-heteroarílicos substituídos com pirazole como inibidores de proteína quinases
JP2008510792A (ja) * 2004-08-26 2008-04-10 ファイザー・インク タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤としてのアミノヘテロアリール化合物
ES2402419T3 (es) * 2005-12-05 2013-05-03 Pfizer Products Inc. Polimorfos de un inhibidor de C-MET/HGFR
US7825137B2 (en) * 2005-12-05 2010-11-02 Pfizer Inc. Method of treating abnormal cell growth

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO20054080L (no) * 2003-02-26 2005-11-21 Uszhang Jennifer R Aminoheteroarylforbindelser som roteinkinaseinhibitorer

Also Published As

Publication number Publication date
US20140288086A1 (en) 2014-09-25
CA2578066C (en) 2011-10-11
ES2341351T9 (es) 2013-07-23
EA200700352A1 (ru) 2007-08-31
NI200700057A (es) 2008-03-07
EP1786785A2 (en) 2007-05-23
ATE463486T1 (de) 2010-04-15
WO2006021884A3 (en) 2006-06-22
LU92155I9 (no) 2019-01-04
RS51362B (en) 2011-02-28
PT1786785E (pt) 2010-05-21
IL181384A (en) 2012-08-30
JP4242911B2 (ja) 2009-03-25
KR20070038562A (ko) 2007-04-10
NL1029799A1 (nl) 2006-02-28
CA2578066A1 (en) 2006-03-02
AP2373A (en) 2012-03-07
ZA200700127B (en) 2008-08-27
CR8860A (es) 2007-07-24
DE602005020465D1 (de) 2010-05-20
US8785632B2 (en) 2014-07-22
AU2005276135B2 (en) 2011-04-28
AU2005276135A1 (en) 2006-03-02
UA87153C2 (ru) 2009-06-25
MX2007002312A (es) 2007-04-16
KR100859891B1 (ko) 2008-09-23
HRP20100298T1 (hr) 2010-06-30
MA28828B1 (fr) 2007-08-01
FR13C0015I2 (fr) 2013-08-16
NO2013008I1 (no) 2013-04-29
SI1786785T1 (sl) 2010-07-30
CY2013014I1 (el) 2015-08-05
LU92155I2 (fr) 2013-04-22
ME01788B (me) 2011-02-28
PL1786785T3 (pl) 2010-08-31
EA013678B1 (ru) 2010-06-30
US7858643B2 (en) 2010-12-28
NO20071290L (no) 2007-05-29
NL1029799C2 (nl) 2006-10-17
US20100324061A1 (en) 2010-12-23
CA2578066E (en) 2006-03-02
AR050788A1 (es) 2006-11-22
PE20060501A1 (es) 2006-06-28
UY29081A1 (es) 2006-03-31
IL181384A0 (en) 2007-07-04
MY145177A (en) 2011-12-30
EP1786785B9 (en) 2013-05-22
NZ552866A (en) 2010-06-25
JP2008510790A (ja) 2008-04-10
NO2013008I2 (no) 2013-10-21
TW200621715A (en) 2006-07-01
PA8643301A1 (es) 2006-07-03
GT200500225A (es) 2006-03-21
DK1786785T3 (da) 2010-05-31
AP2007003888A0 (en) 2007-02-28
BR122020017756B1 (pt) 2022-02-15
HK1105414A1 (en) 2008-02-15
CN101023064B (zh) 2011-02-16
TNSN07070A1 (fr) 2008-06-02
EP1786785B1 (en) 2010-04-07
US20060046991A1 (en) 2006-03-02
BRPI0513915A (pt) 2008-05-20
TWI358406B (en) 2012-02-21
FR13C0015I1 (no) 2013-04-12
ES2341351T3 (es) 2010-06-18
ECSP077276A (es) 2007-03-29
US20120263706A1 (en) 2012-10-18
CY1110044T1 (el) 2015-01-14
CY2013014I2 (el) 2015-08-05
WO2006021884A2 (en) 2006-03-02
HN2005000476A (es) 2009-12-07
GEP20104906B (en) 2010-02-25
CN101023064A (zh) 2007-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1786785B9 (en) Enantiomerically pure aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
EP1784396B1 (en) Pyrazole-substituted aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors
US20060178374A1 (en) Aminoheteroaryl compounds as protein kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
SPCF Filing of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: XALKORI; REG. NO/DATE: EU/1/12/793/001-004 20121114

Spc suppl protection certif: 2013008

Filing date: 20130415

SPCG Granted supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: XALKORI; REG. NO/DATE: EU/1/12/793/001-004 20121114

Spc suppl protection certif: 2013008

Filing date: 20130415

Extension date: 20271023

CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: PFIZER INC., US

SPCS Change of name or address of the owner of a supplementary protection certificate

Owner name: PFIZER INC., US

Spc suppl protection certif: 2013008