MX2011005788A - Inhibidores raf y sus usos. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona compuestos de imidazooxazol e imidazotiazol y sus síntesis; los compuestos de la presente invención son capaces de inhibir la actividad de la RAF cinasa, tal como BRAFV6ooE; los compuestos son útiles para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares tales como cáncer.

Description

INHIBIDORES RAF Y SUS USOS REFERENCIA CRUZADA - Esta solicitud de patente reclama prioridad de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número 61/120,198 presentada el 5 de Diciembre de 2008, titulada "RAF INHIBITORS AND THEIR USES," y nombrando a Jean-Marc Lapierre, Yanbin Liu, Manish Tandon, y a Mark A. Ashwell como los inventores, cuya descripción se incorpora en la presente, en su totalidad, como referencia.

CAMPO TÉCNICO La invención en general se refiere a compuestos y composiciones farmacéuticas, y más particularmente, la invención se refiere a inhibidores de RAF y usos de los mismos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Existen tres isoformas de RAF en humanos: A-RAF, B-RAF y C- RAF (Marais and Marshall. Cáncer Surv. 27: 101-125 (1996)). Estas serina/treonina proteínas cinasas son componentes de una trayectoria de señalización conservada en la dirección 3' de la pequeña proteína G RAS unida a la membrana, que es activada por factores de crecimiento, hormonas, y citocinas (Robinson and Cobb, Curr. Opin. Cell Biol. 9: 180-186 (1997)). Los RAS estimulan la activación de los RAF, lo que lleva a la activación de la MEK cinasa y subsiguientemente la ERK cinasa. Dependiendo del contexto celular, esta trayectoria media diversas funciones biológicas tales como el crecimiento, la sobrevivencia y la diferenciación celular predominantemente a través de la regulación de la transcripción, el metabolismo y de arreglos citoesqueléticos.

La trayectoria de señalización RAS-RAF ha sido asociada por mucho tiempo con los cánceres humanos debido a las mutaciones clínicas oncogénicas en el gen ras que ocurren en por lo menos 15% de todos los cánceres humanos (Davies, H. et al., Nature 417:949-954 (2002)), y la ERK cinasa en la dirección 3' es hiperactivada en 30% de los cánceres (Alien, et al., Semin. Oncol. 30: 105-1 16 (2003)). No obstante, por más de una década, las proteínas RAF han sido consideradas importantes en el cáncer sólo debido a su posición en la dirección 3' del RAS. Este punto de vista ha cambiado radicalmente cuando se encontraron activaciones de mutaciones B-RAF a una alta frecuencia en el cáncer humano, implicando que el B-RAF es un iniciador y promotor crítico de la malignidad (Davies, H. et al., Nature 417:949-954 (2002)).

Las mutaciones activadoras en el protooncogen B-RAF soportan el 70% de los melanomas, 50% de los cánceres de tiroide papilar y 10% de los cánceres de colon (Tuveson, et al., Cáncer Cell 4:95-98 (2003); y Xing, Endocrine-Related Cáncer. 12:245-262 (2005). Aproximadamente 90% de estas mutaciones ocurren como una sustitución de un solo nucleótido que convierte una valina a glutamato en el aminoácido 600 (V600E) en el dominio de la cinasa de B-RAF. Esta mutación aumenta la actividad basal de la cinasa de B-RAF, resultando en la activación de las proteínas MEK y ERK que finalmente lleva a un crecimiento celular incontrolado del tumor. Significativamente, las mutaciones RAF y RAS en general son mutuamente exclusivas en el mismo tipo de tumor, sugiriendo que estos genes están en la misma trayectoria de señalización oncogénica y que el RAS actúa para activar el B-RAS en estos tumores.

Estudios recientes han encontrado que el desarmado del B-RAF por ARN de poca interferencia en células de melanoma humanas e inhibe las cinasas MEK y REK, provocando el paro del crecimiento y finalmente promoviendo la apoptosis (Sharma, et al., Cáncer Res. 65:2412-2421 (2005); y Wellbrock et al., Cáncer Res. 64:2338-2342 (2004)). Además, los datos obtenidos de modelos de xenoinjerto de ARN de horquilla corta que se dirigen al B-RAF mutante han demostrado que la regresión del tumor resultante de la supresión del B-RAF es imposible, reversible, y fuertemente regulada (Hoeflich et al., Cáncer Res. 66:999-1006 (2006). Tomados juntos, la señalización de ganancia de función B-RAF está fuertemente asociada con una tumorigenicidad in vivo, que confirma al B-RAF como una diana importante para el tratamiento del cáncer.

Las referencias citadas en la presente no son admitidas como arte previo para la invención reclamada.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Una modalidad de la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I o sales farmacéuticamente aceptables del mismo en donde X es O, S(0)P; m es un entero de 1 a 3 ; n es un entero de 1 a 3; o es un entero de 0 a 2; p es un entero de 0 a 2; Z es hidrógeno, un enlace, -C(O)-, -C(0)NR4-, -S(0)2-; Ri es hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, - CN, -COOR4, -OR4, -NR4R5l R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo inferior sustituido o no sustituido, -COOR4, o -C(0)NR4R5; cada R4 y cada R5 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heterociclilo sustituido o no sustituido, y R4 y R5, tomados juntos, pueden formar un anillo; R6 es independientemente seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1 - Ce, alquilo de C1 - Ce sustituido con fluoro, cicloalquilo de C3 - Ce, cicloalquilo de C3 - C8 sustituido con fluoro, heterociclilo, heterocilico sustituido con alquilo de C1 - Cs, arilo, arilo sustituido con halógeno, heteroarilo sustituido con alquilo de C1 - C8, y heteroarilo sustituido con halógeno; R7 es H o (CH2O)0-P(O)OR4OR5.

En una modalidad, R2 y R3 son hidrógeno.

En una modalidad, R4 es hidrógeno.

En una modalidad, m + n = 4, y si m no es igual a n, entonces la configuración estereoquímica preferida es R.

En una modalidad, Z es hidrógeno, un enlace, -C(O)-, -C(0)NR4- , -S(0)2-; y 6 es heterociclilo sustituido con alquilo, o heteroarilo sustituido con alquilo.

En una modalidad, R-i es hidrógeno, halógeno, sustituido o no sustituido alquilo,-CN, -COOR4l -OR4, -NR4R5.

En una modalidad, hay un compuesto seleccionado del grupo que consiste de fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pir¡midin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo [2,1- b]t¡azol-6-il)fen¡lo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-dorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6^ il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-((3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-i [2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo [2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo¡ fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(4-cianofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de 3-(5-(2-(1-(4-fluorofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)im b]oxazol-6-il)fenilo¡ fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de ((3-(5-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)im b]oxazol-6-il)fenoxi)metoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1 -b)oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil-1H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2 -b]oxazol-6-¡l)fen¡ fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pir¡midin-4-¡l)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenox¡)metilo; fosfato diácido de (R)-((3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin il)imidazo[2, 1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfon¡l)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-2-fluoro-5-(5-(2- (1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)im b]oxazol-6-il)fen¡lo; y fosfato diácido de (R)-(2-fluoro-5-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imid il)fenoxi)meti!o o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como modalidad de la presente invención se incorpora el compuesto fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Una modalidad de la presente invención incorpora un profármaco, en donde el profármaco es hidrolizado in vivo para dar un compuesto de fórmula I como se define por la reivindicación 1 , en donde R7 es H o CH2OH después de la hidrólisis. En la modalidad relacionada, R7 es hidrógeno o -(CH20)0-P(0)OR4OR5 antes de la hidrólisis.

Una modalidad de la presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende además un segundo agente quimioterapéutico. En modalidades relacionadas el segundo agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de tamoxifeno, raloxifeno, anastrozol, exemestano, letrozol, cisplatina, carboplatina, paclitaxel, ciclofosfamida, lovastatina, mimosina, gemcitabina, Ara, 5-fluorouracilo, metotrexato, docetaxel, goserelina, vincristina, vinblastina, nocodazol, teniposido, etoposido, epotilona, navelbina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorubicina, epirubicina, idarubicin imatanib, gefitinib, erlotinib, sorafenib, sunitinib malato, trastuzumab, rituximab, cetuximab, y bevacizumab. En otra modalidad relacionada el segundo agente quimioterapéutico es un taxano, un inhibidor de aromatasa, una antracilcina, un fármaco dirigido a los microtúbulos, un fármaco venenoso de topoisomerasa, un anticuerpo monoclonal o poligonal dirigido, un inhibidor de una diana o enzima molecular (por ejemplo, un inhibidor de cinasa), o un fármaco análogo de citidina. En una modalidad adicional, el segundo agente quimioterapéutico es (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-pirrolo [3,2,1-ij] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il) pirrolidina-2, 5-diona.

Una modalidad de la presente invención proporciona además un método para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular. El método comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable, en donde se trata dicho trastorno proliferativo celular.

En una modalidad, las células con un trastorno proliferativo contienen ADN que codifica un RAF, mutante o del tipo silvestre. En una modalidad adicional, las células tienen una actividad constitutivamente incrementada de RAF. El RAF puede ser A- RAF, B-RAF, o C-RAF. En una modalidad, el B-RAF es un mutante, el mutante B-RAF puede ser B-RAFV600E.

El trastorno proliferativo celular puede ser una condición precancerosa, o un cáncer. En una modalidad, el trastorno proliferativo es melanoma, canceres de tiroide papilar, cáncer de colon, o Nevi congénito.

El trastorno proliferativo celular puede ser un cáncer que incluye cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, hepatoma, cáncer de cerebro, melanoma, mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, tumor hematológico, tumor linfoide, sarcoma, carcinoma, y adenocarcinoma.

La presente invención proporciona además un método para la modulación de la actividad de B-RAF. El método comprende poner en contacto una célula que contiene el gen de B-RAF con una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, análogo o derivado del mismo, en donde dicho contacto resulta en dicha actividad inhibitoria de B-RAF. En una modalidad, la actividad de B-RAF es la actividad cinasa de B-RAF. En una modalidad, el B-RAF es B-RAFV600E.

En una modalidad el método incorpora administrar el compuesto de fórmula I en combinación con un segundo agente quimioterapéutico. En modalidades relacionadas, el segundo agente quimioterapéutico es uno de tamoxifeno, raloxifeno, anastrozol, exemestano, letrozol, cisplatina, carboplatina, paclitaxel, ciclofosfamida, lovastatina, minocina, gemcitabina, Ara, 5-fluorouracilo, metotrexato, docetaxel, goserelina, vincristina, vinblastina, nocodazol, teniposido, etoposido, epotilona, navelbina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorubicína, epirubicina, idarubicin imatanib, gefitinib, erlotinib, sorafenib, sunitinib malato, trastuzumab, rituximab, cetuximab, y bevacizumab.

En una modalidad relacionada, el segundo agente quimioterapéutico es (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-p¡rrolo [3,2,1 -ij] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il) pirrolidina-2, 5-diona. Para esta combinación, puede tratarse de manera efectiva el cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon o cáncer pancreático.

Una modalidad de la presente invención incorpora un método para fabricar un medicamento de acuerdo con la fórmula I para usar en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular que incluye las condiciones cancerosas y precancerosas enlistadas anteriormente.

Otras características y ventajas de la presente invención serán aparentes a partir de las descripciones adicionales proporcionadas en la presente incluyendo los diferentes ejemplos. Los ejemplos proporcionados ilustran diferentes componentes y metodología útil en la práctica de la presente invención. Los ejemplos no limitan la invención reclamada. Con base en la presente descripción, el técnico experto puede identificar y emplear otros componentes y metodología útil para la práctica de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un esquema para la síntesis de los compuestos de fórmula I.

La Figura 2 muestra los efectos de los compuestos de fórmula en el Fosfo-ERK de células cancerígenas.

La Figura 3 muestra los efectos de los compuestos de fórmula en tumores humanos (A375) en un modelo de ratón de xenoinjerto.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN 1. Los compuestos La presente invención proporciona compuestos de imidazooxazol y/o imidazotiazol y su síntesis.

En una modalidad, la presente invención proporciona compuestos de fórmula I y su síntesis. en donde X es O, S(0)P; m es un entero de 1 a 3 ; n es un entero de 1 a 3; o es un entero de 0 a 2; p es un entero de 0 a 2; Z es hidrógeno, un enlace, -C(0)-, -C(0)NR4-, -S(0)2-; Ri es hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, -CN, -COOR4, -OR4, -NR4R5, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo inferior sustituido o no sustituido, -COOR4, o -C(0)NR4R5; cada R4 y cada R5 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heterociclilo sustituido o no sustituido, y R4 y R5, tomados juntos, pueden formar un anillo; R6 es independientemente seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1 - C8, alquilo de C1 - Ce sustituido con fluoro, cicloalquilo de C3 - Ce, cicloalquilo de C3 - C8 sustituido con fluoro, heterociclilo, heterocilico sustituido con alquilo de C-i - C8, arilo, arilo sustituido con halógeno, heteroarilo sustituido con alquilo de C1 - Cs, y heteroarilo sustituido con halógeno; R7 es H o (CH2O)0-P(O)OR4OR5.

El término "alquiló" se refiere a radicales que contienen carbono e hidrógeno, sin insaturación. Los radicales alquilo pueden ser rectos o ramificados. Radicales alquilo de ejemplo incluyen, sin limitación, metilo, etilo, propilo, isopropilo, hexilo, t-butilo, sec-butilo y similares. Los grupos alquilo pueden ser denotados por un intervalo, entonces, por ejemplo, un grupo alquilo de (C1 - C6) es un grupo alquilo que tiene de uno a seis átomos de carbono en la estructura lineal o ramificada del alquilo. Grupos alquilo sustituidos y no sustituidos pueden independientemente ser alquilo de (Ci -C5), alquilo de (C-? - Ce), alquilo de (Ci - C-m), alquilo de (C3 - C10), o alquilo de (C5 - C10). A menos de que se establezca lo contrario, el término "alquilo" no incluye "cicloalquilo." El término "alquilo inferior" se refiere a un alquilo de sin ramificar o ramificado.

Un grupo "cicloalquilo" se refiere a un grupo alquilo cíclico que tiene el número indicado de átomos de carbono en la "porción del anillo", en donde la "porción del anillo" puede consistir de una o más estructuras de anillo ya sea estructura de anillo fusionadas, espiro, o puenteadas. Por ejemplo, un grupo cicloalquilo de C3 a C6 (por ejemplo cicloalquilo de (C3 - Ce)) es una estructura de anillo que tiene entre 3 y 6 átomos de carbono en el anillo. Cuando no se da un intervalo, entonces el cicloalquilo tiene entre tres y nueve átomos de carbono (cicloalquilo de (C3 - C9)) en la porción del anillo. Grupos cicloalquilo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, y adamantilo. Grupos cicloalquilo preferidos tienen tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, o de tres a nueve átomos de carbono en la estructura de anillo.

El término "arilo" se refiere a un grupo carbocíclico aromático que tiene uno, dos, o tres anillos aromáticos. Grupos arilo de ejemplo incluyen, sin limitación, fenilo, naftilo, y similares. Los grupos arilo incluyen una, dos, o tres estructuras de anillos aromáticos fusionadas con uno o más anillos carbocíclicos o hetercíclicos adicionales que tienen de 4-9 miembros. Ejemplos grupos arilo fusionados incluyen benzociclobutanilo, indanilo, tetrahidronaftilenilo, 1 ,2,3,4-tetrahidrofenantrenilo, tetrahidroantracenilo, 1 ,4-dihidro-1 ,4-metannaftalenilo, benzodioxolilo.

El término "heteroarilo" se refiere a un grupo heteroaromático (heteroarilo) que tiene uno, dos, o tres anillos aromáticos que contienen de 1-4 heteroátomos (tales como nitrógeno, azufre, u oxígeno) en el anillo aromático. Los grupos heteroarilo incluyen una, dos, o tres estructuras de anillos aromáticos que contienen de 1-4 heteroátomos fusionados con uno o más anillos no aromáticos adicionales que tienen de 4-9 miembros. Los grupos heteroarilo que contienen un solo tipo de heteroátomos en el anillo aromático son denominados por el tipo de heteroátomos que contienen, entonces, heteroarilo que contiene nitrógeno, heteroarilo que contiene oxígeno y heteroarilo que contiene azufre denotan grupos heteroaromáticos que contienen uno o más átomos de nitrógeno, oxígeno o a sus respectivamente. Los grupos heteroarilo de ejemplo incluyen, sin limitación, piridilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, quinolilo, quinazolinilo, tiazolilo, benzo[b]tiofenilo, furanilo, imidazolilo, indolilo, y similares.

Los términos "heterociclilo" o "heterociclo" se refieren a cualesquier estructuras de anillo no aromáticas estables, saturadas o insaturadas que pueden estar fusionadas, espiro o puenteadas para formar anillos adicionales. Cada heterociclo consiste de uno o más átomos de carbono y de uno a cuatro heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno y azufre, "heterociclilo" o "heterociclo" incluyen estructuras de anillo heterocíclico monocíclico de 3-7 miembros no aromáticos estables y estructuras de anillo heterocíclico bicíclico de 8-11 miembros. Un radical heterociclilo puede estar unido a cualquier carbono endocíclico o átomo de nitrógeno que resulten la creación de una estructura estable. Heterociclos preferidos incluyen heterociclos monocíclicos de 3-7 miembros (más preferiblemente heterociclos monocíclicos de 5-7 miembros) y heterociclos monocíclicos de 8-10 miembros. Ejemplos de dichos grupos incluyen piperidinilo, piperazinilo, piranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, oxopiperidinilo, oxopirrolidinilo, oxoazepinílo, azepinilo, isoxozolilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, dioxolilo, dioxinilo, oxatiolilo, ditiolilo, sulfolanilo, dioxanilo, dioxolanilo, tetahidrofurodihidro furanilo, tetrahidropiranodihidro-furanilo, dihidropiranilo, tetrahidrofurofuranilo, tetrahidropiranofurano, quinuclidinil (1-azabiciclo[2.2.2]octanilo) y tropanil (8-met¡l-8-azabiciclo[3.2.1]octanilo).

El término alquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, arilo sustituido y heterociclilo sustituidos se refieren a grupos alquilo, cicloalquilo, arilo y heterociclilo como se definieron anteriormente, sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de flúor, arilo, heteroarilo, -O-alquilo de (C C6) y -NRsRe, en donde R5 y R6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo de (CrC6).

Todos los estereoisómeros de los compuestos de esta invención están contemplados, ya sea en una mezcla o en una forma pura o sustancialmente pura, que incluyen las formas cristalinas de las mezclas racémicas y las formas cristalinas de los isómeros individuales. La definición de los compuestos de acuerdo con la invención abarca todos los posibles estereoisómeros (por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico) y sus mezclas. Particularmente abarca las formas racémicas y los isómeros ópticos aislados que tienen una actividad específica. Las formas racémicas pueden ser resueltas por métodos físicos, tales como, por ejemplo, cristalización fraccionada, separación o cristalización de derivados diasteroméricos, separación por cromatografía de columna quiral o cromatografía de fluido supercrítico. Los isómeros ópticos individuales pueden obtenerse de los racematos por métodos convencionales, tales como, por ejemplo, la formación de sal con un ácido ópticamente activo seguido por cristalización. Además, todos los isómeros geométricos, tales como las configuraciones E- y Z- en un doble enlace, están dentro del alcance de la invención a menos de que se establezca lo contrario. Ciertos compuestos de esta invención pueden existir en formas tautoméricas. Todas las formas tautoméricas de los compuestos están consideradas dentro del alcance de esta invención a menos de que se establezca lo contrario. La presente invención también incluye una o más mezclas regioisómeras de un análogo o derivado.

Como se usa en la presente, el término "sal" es una sal farmacéuticamente aceptable y puede incluir sales de adición ácida incluyendo clorhidratos, bromhidratos, además de las sales formadas por la adición de una base tal como fosfatos, sulfatos, sulfatos ácidos, alquilsulfonatos, arilsulfonatos, acetatos, benzoatos, citratos, maleatos, fumaratos, succinatos, lactatos, y tartratos. La sal puede incluir cationes de metal alcalino tales como Na+, K+, L¡\ sales de metal alcalino térreo tales como Mg2+ o Ca2+, o sales de amina orgánica.

Como se usa en la presente, el término "metabolito" significa un producto del metabolismo de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, análogo o derivado del mismo, que exhibe una actividad similar in vivo a dicho compuesto de la presente invención.

En una modalidad de la presente invención, el compuesto es un compuesto de la fórmula I en donde R2 y R3 son hidrógeno.

En otra modalidad de la presente invención, el compuesto es un compuesto de fórmula I en donde R es hidrógeno.

En otra modalidad de la presente invención, el compuesto es un compuesto de fórmula I en donde R1 es hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, -CN, -COOR4, -OR4, -NR R5.

En modalidades relacionadas de la presente invención, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo inferior sustituido o no sustituido, -COOR4, o -C(O)NR4R5.

En aún otras modalidades de la invención, cada R y cada R5 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heterociclilo sustituido o no sustituido, y R4 y R5, tomados juntos, pueden formar un anillo.

En modalidades relacionadas, R6 es independientemente seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci - C8, alquilo de Ci - Ce sustituido con fluoro, cicloalquilo de C3 - Ce, cicloalquilo de C3 - Ce sustituido con fluoro, heterociclilo, heterociclilo de C1 - Ce sustituido con alquilo, arilo, arilo sustituido con halógeno, heteroarilo, heteroarilo sustituido con alquilo de C1 - Ce, y heteroarilo sustituido con halógeno.

En otra modalidad de la presente invención, el compuesto es un compuesto de fórmula I en donde m + n = 4, m no es igual a n, y la configuración es R. como se usa en la presente, la configuración de una molécula es la geometría permanente que resulta del arreglo espacial de sus átomos. La configuración puede ser cualquiera de R o S y se define de acuerdo con las reglas de la UlPAC (por sus siglas en inglés). Cuando está presente más de un átomo estereogénico en una molécula, cada uno se definirá de acuerdo la configuración R o S.

En otra modalidad de la presente invención, el compuestos un compuesto de fórmula I en donde Z es hidrógeno, un enlace, -C(O)-, -C(O)NR4, -S(O)2-; y R5 es heterociclilo sustituido con alquilo, o heteroarilo sustituido con alquilo.

En una modalidad de la presente invención, el compuesto es uno de los compuestos 1-24 enlistados en el Cuadro 1.

En una modalidad de la presente invención, el compuesto se selecciona del grupo que consiste de fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6- ¡l)fen¡lo¡ fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilam¡no)pirim¡din-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfon¡l)piperi^ [2,1 -b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1 -b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de 3-(5-(2-(1-(4-fluorofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imtó b]oxazol-6-il)fenilo¡ fosfato diácido de 3-(5-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)piperidin-4-ilamino)p¡rimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazo^ fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1 -(1 -metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2 -b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirirnidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-¡lsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(1 -metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piper¡din-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; y fosfato diácido de (R)-2-fluoro-5-(5-(2-(1-(1 -metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2J-b]oxazol-6-il)fenilo o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En otra modalidad de la presente invención, el compuesto se selecciona del grupo que consiste de fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; y fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirirnidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Ciertas modalidades incluyen compuestos de fórmula I que pueden servir como formas de profármaco de los compuestos correspondientes de fórmulas I en donde R7 es H. Sin pretender limitarse por una explicación mecanicista, la forma de profármaco puede ser disociada por hidrólisis para liberar el compuesto correspondiente en donde R7 es H. la hidrólisis puede ocurrir por rutas enzimáticas o no enzimáticas que producen la fórmula I donde R7 es H. alternativamente, la hidrólisis puede producir un derivado de hidroximetileno correspondiente, el cual con una hidrólisis subsiguiente, puede resultar en la liberación de compuestos donde R7 es H. en una de dichas modalidades R7 es (CH20)0-P(=0)OR4OR5, donde o es 0-2. En una modalidad preferida, R4 y R5 son hidrógeno. En una modalidad más preferida, o es 1 , y R4 y R5 son hidrógeno. 2. Métodos e intermediarios para preparar los compuestos de la invención Los métodos y procedimientos de síntesis estándar para la preparación de moléculas orgánicas y transformaciones y manipulaciones de grupos funcionales incluyen el uso de grupos protectores que pueden obtenerse de la literatura científica relevante o de libros de texto de referencia estándar en el campo. Aunque no se limita a ninguna de muchas fuentes, los libros de texto de referencia reconocidos de la síntesis orgánica incluyen: Smith, M. B.; March, J. March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5th ed.; John Wiley & Sons: New York, 2001 ; y Greene, T. W.; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3Rd; John Wiley & Sons: New York, 1999. Las siguientes descripciones de los métodos de síntesis están diseñadas para ilustrar, pero no para limitar, los procedimientos generales de preparación de los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención pueden ser preparados en una variedad de maneras, algunas de las cuales son conocidas en la técnica. En general, los compuestos de la presente invención pueden prepararse de materiales de partida disponibles en el comercio, compuestos conocidos en la literatura, o intermediarios preparados fácilmente, al emplear métodos de síntesis estándar y procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, o que serán aparentes para los técnicos expertos a la luz de las presentes enseñanzas. Los métodos y procedimientos de síntesis estándar para la preparación de moléculas orgánicas y transformaciones y manipulaciones de grupos funcionales pueden obtenerse de la literatura científica relevante o de libros de texto estándar en el campo. Los detalles para la síntesis de intermediarios usados en la presente invención pueden encontrarse en las publicaciones de patente del PCT WO 2004/1 10990, y WO 2006/044869, y WO 2007/123892.

Un método para preparar compuestos de imidazooxazol y imidazotiazol de la invención se describen en los Ejemplos siguientes y se ilustran en la Figura 1. En la Figura 1 , el intermediario II se hace reaccionar con oxicloruro de fósforo en piridina y se templa con agua para proporcionar el fosfato diácido III. Alternativamente, el compuesto II es primero desprotonado usando hidruro de sodio en DMF, luego tratado con un fosfato de clorometilo apropiado en presencia de yoduro de tetrabutil amonio para dar el intermediario IV. La conversión al fosfato diácido V se logra usando TFA en DCM o usando condiciones más suaves tales como agua en acetona 40-50 °C. El fosfato diácido es opcionalmente convertido a la sal de sodio o a otro farmacéuticamente aceptable usando hidróxido de sodio acuoso u otras bases. 3. Métodos de tratamiento Los compuestos de la presente invención pueden usarse para el tratamiento y/o prevención de un trastorno proliferativo celular tal como cáncer. Los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o metabolitos del mismo, son capaces de inhibir una o más RAF proteína cinasa. Entonces, los compuestos pueden ser usados para el tratamiento de un trastorno proliferativo celular caracterizado por una señalización aberrante de RAS-RAF. En una modalidad, las células del trastorno proliferativo celular tales como cáncer se anclan a un B-RAF mutado. En una modalidad adicional, el B-RAF mutado es B-RAF con la mutación V600E (B-RAF V600E). El trastorno proliferativo celular puede ser melanomas, cánceres de tiroide papilar, cánceres de colon.

La presente invención también proporciona un método de tratamiento de cualesquiera otras condiciones caracterizadas por un B-RAF V600E, por ejemplo, Nevi Congénito (comúnmente conocido como molas o pecas) que poseen B-RAFV600E, con los compuestos de imidazooxazol y/o imidazotiazol. En una modalidad adicional, la presente invención puede usarse profilácticamente (por ejemplo, aplicarse tópicamente a la piel) para prevenir que dicho nevi se transforme en melanomas malignos.

Como se usa en la presente un "sujeto" puede ser cualquier mamífero, por ejemplo un humano, primate, ratón, rata, perro, gato, vaca, caballo, cerdo, oveja, cabra, camello. En un aspecto preferido, el sujeto es un humano.

Como se usa en la presente un "sujeto en necesidad del mismo" es un sujeto que tiene un trastorno proliferativo celular que tiene un riesgo aumentado de desarrollar un trastorno proliferativo celular relacionado con la población en general. En un aspecto, un sujeto en necesidad del mismo aquí tiene una condición precancerosa. En un aspecto preferido, un sujeto en necesidad del mismo tiene cáncer.

Como se usa en la presente el término "trastorno proliferativo celular" se refiere a condiciones en las cuales un crecimiento anormal o desregulado de las células, o ambos, lleva al desarrollo de una condición o enfermedad indeseada, que puede o no ser cancerosa. En un aspecto, un trastorno proliferativo celular incluye una condición no cancerosa, por ejemplo, artritis reumatoide, inflamación, enfermedad autoinmune, condiciones linfoproliferativas; acromegalia; espondilitis reumatoide, osteoartritis, gota, otras condiciones artríticas; sepsis; choque séptico; choque endotóxico; sepsis gram-negativa; síndrome de choque tóxico; asma; síndrome de estrés respiratorio adulto; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; inflamación pulmonar crónica; enfermedad de intestino inflamado; enfermedad de Chron; psoriasis, eczema; colitis ulcerativa; fibrosis pancreática; fibrosis hepática; enfermedad renal aguda y crónica; síndrome de intestino irritable; piresis; restenosis; malaria cerebral; accidente cerebro-vascular y lesión isquémica; trauma renal; enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Huntington; enfermedad de Parkinson; dolor agudo y crónico; rinitis alérgica; conjuntivitis alérgica; falla cardíaca crónica; síndrome coronario agudo; caquexia; malaria, lepra; leismaniasis; enfermedad de Lyme; síndrome de Reiter; sinovitis aguda; degeneración muscular, bursitis; tendonitis; tenosinovitis; síndrome del disco intervertebral con hernia, ruptura o hundido; osteoporosis; trombosis; restenosis; silicosis, sarcosis pulmonar, enfermedad de reabsorción ósea, tal como osteoporosis; reacción de injerto contra hospedero; esclerosis múltiple; Lupus; fibromialgia; SIDA y otras enfermedades virales tales como Herpes Zoster, Herpes Simplex I o II, virus y la influenza y citomegalovirus; y diabetes mellitus. En otro aspecto, un trastorno proliferativo celular incluye un precáncer o una condición precancerosa. En otro aspecto, un trastorno proliferativo celular incluye cáncer. Diversos cánceres que se pueden tratar incluyen pero no se limitan a cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma renal, hepatoma, cáncer de cerebro, melanoma, mieloma múltiple, leucemia mielógena crónica, tumor hematológico, y tumor linfoide, incluyendo lesiones metastáticas en otros tejidos u órganos lejanos del sitio principal del tumor. Los cánceres a ser tratados incluyen pero no se limitan a sarcoma, carcinoma y adenocarcinoma. En un aspecto, una "célula de precáncer" o "célula precancerosa" es una célula que manifiesta un trastorno proliferativo celular que es un precáncer o una condición precancerosa. En otro aspecto, una "célula de cáncer" o "célula cancerosa" es una célula que manifiesta un trastorno proliferativo celular que es un cáncer. Puede usarse cualquier medio reproducible de medición para identificar células de cáncer o células precancerosas. En un aspecto preferido, las células de cáncer o células precancerosas son identificadas por tipificación o clasificación histológica de una muestra de tejido (por ejemplo, una muestra de biopsia). En otro ejemplo, las células de cáncer o , células precancerosas son identificadas a través del uso de marcadores moleculares adecuados.

Un "trastorno proliferativo celular del colon" es un trastorno proliferativo celular que involucra a las células del colon. En un aspecto preferido, el trastorno proliferativo celular del colon es cáncer de colon. En un aspecto preferido, las composiciones de la presente invención pueden ser usadas para tratar el cáncer de colon o trastornos proliferativos celulares del colon. En un aspecto, el cáncer de colon incluye todas formas del cáncer de colon. En otro aspecto, el cáncer de colon incluye cáncer de colon esporádico y hereditario. En otro aspecto, el cáncer de colon incluye neoplasmas malignos de colon, carcinoma in situ, tumores carcinoides típicos, y tumores carcinoides atípicos. En otro aspecto, el cáncer de colon incluye adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, y carcinoma celular adenoescamoso. En otro aspecto, el cáncer de colon está asociado con síndrome hereditario seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal no poliposo hereditario, poliposis adenomatoso familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot y poliposis juvenil. En otro aspecto, el cáncer de colon es provocado por un síndrome hereditario seleccionado del grupo que consiste de cáncer colorrectal no poliposo hereditario, poliposis adenomatoso familiar, síndrome de Gardner, síndrome de Peutz-Jeghers, síndrome de Turcot y poliposis juvenil.

En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares del colon incluyen todas las de trastornos proliferativos celulares que afecten las células del colon. En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares del colon incluyen cáncer de colon, condiciones precancerosas del colon, pólipos adenomatosos del colon y lesiones metacrónicas del colon. En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares del colon incluyen adenoma. En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares están caracterizados por hiperplasia, metaplasia, y displasia del colon. En otro aspecto, las enfermedades previas del colon que pueden predisponer a los individuos al desarrollo de trastornos proliferativos celulares del colon incluyen cáncer previo de colon. En otro aspecto. La enfermedad actual que pueden predisponer a los individuos al desarrollo de trastornos proliferativos celulares del colon incluye la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa. En un aspecto, un trastorno proliferativo celular del colon está asociado con una mutación en un gen seleccionado del grupo que consiste de p53, ras, FAP y DCC. En otro aspecto, un individuo tiene un riesgo elevado de desarrollar un trastorno proliferativo celular del colon debido a la presencia de una mutación en un gen seleccionado del grupo que consiste de p53, ras, FAP y DCC.

Un "trastorno proliferativo celular de la piel" es un trastorno proliferativo celular que involucra las células de la piel. En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares de la piel incluyen todas las formas de trastornos proliferativos celulares que afectan las células de la piel. En un aspecto, los trastornos proliferativos celulares de la piel incluyen una condición de precáncer o precancerosa de la piel, crecimientos o lesiones benignos de la piel, melanoma, melanoma maligno y otros crecimientos o lesiones malignos de la piel, y lesiones metastásicas en tejidos y órganos en el cuerpo diferentes de la piel. En otro aspecto, los trastornos proliferativos celulares de la piel incluyen hiperplasia, metaplasia y displasia de la piel.

En un aspecto, un cáncer que va a ser tratado ha sido clasificado de acuerdo al sistema de clasificación TNM del American Joint Committee on Cáncer (AJCC; por sus siglas en inglés), donde el tumor (T) ha sido asignado a una fase de TX, T1 , T1 mic, T1a, T1 b, T1 c, 12, T3, T4, T4a, T4b, T4c, o T4d; y donde los nodos linfáticos regionales (N) han sido asignados a una fase de NX, NO, N1 , N2, N2a, N2b, N3, N3a, N3b, o N3c¡ y donde la metástasis distante (M) ha sido asignada una fase de MX, MO, o M1. En otro aspecto, un cáncer que será tratado ha sido clasificado de acuerdo con la clasificación del American Joint Committee on Cáncer (AJCC) como Fase I, Fase II, Fase I IB, Fase MIA, Fase IIIB, Fase INC, o Fase IV. En otro aspecto, un cáncer que será tratado ha sido asignado un grado de acuerdo con una clasificación del AJCC como Grado GX (por ejemplo, un grado qué no puede ser evaluado), Grado 1 , Grado 2, Grado 3 o Grado 4. En otro aspecto, un cáncer que será tratado ha sido clasificado de acuerdo con una clasificación patológica del AJCC (pN) de pNX, pNO, PNO (I-), PNO (l+), PNO (mol-), PNO (mol+), PN1 , PN1 (mi), PN1 a, PN1 b, PN1c, pN2, pN2a, pN2b, pN3, pN3a, pN3b, o pN3c.

En un aspecto, un cáncer que será tratado incluye un tumor que ha sido determinado siendo igual o menor a 2 centímetros de diámetro. En otro aspecto, un cáncer que será tratado incluye un tumor que ha sido determinado siendo de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 centímetros de diámetro. En otro aspecto, un cáncer que será tratado incluye un tumor que ha sido determinado siendo mayor a o igual a aproximadamente 3 centímetros de diámetro. En un aspecto, un cáncer que será tratado incluye un tumor que ha sido determinado siendo mayor que 5 centímetros de diámetro. En un aspecto, un cáncer que será tratado se clasifica por apariencia microscópica como diferenciado, moderadamente diferenciado, deficientemente diferenciado, o no diferenciado. En otro aspecto, un cáncer que será tratado se clasifica por su apariencia microscópica con respecto al conteo de mitosis (por ejemplo, cantidad de división celular) o pleiomorfismo nuclear (por ejemplo, cambio en las células). En otro aspecto, un cáncer que será tratado especificado por su apariencia microscópica como estado asociado con áreas de necrosis (por ejemplo, áreas de muerte o degeneración celular). En un aspecto, un cáncer que será tratado se clasifica como teniendo un cariotipo anormal, teniendo un número normal de cromosomas, o teniendo uno o más cromosomas que son de apariencia anormal. En un aspecto, un cáncer que será tratado se clasifica como siendo aneuploide, triploide, tetraploide, o como teniendo ploide alterado. En un aspecto, un cáncer que será tratado se clasifica como teniendo una traslocación cromosomal, o una deleción o duplicación de un cromosoma entero, o una región de deleción, duplicación o amplificación de una porción de un cromosoma.

En un aspecto, un cromosoma que será tratado es evaluado por citometría de ADN, citometría de flujo, o citometría de imagen. En un aspecto, un cáncer que será tratado ha sido tipificado como teniendo 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% de las células en la fase de síntesis de división celular (por ejemplo, en la fase S de la división celular). En un aspecto, un cáncer que será tratado ha sido tipificado como teniendo una fracción de fase S baja o una fracción de fase S alta.

Como se usa en la presente, una "célula normal" es una célula que no puede clasificarse como parte de un "trastorno proliferativo celular". En un aspecto, una célula normal carece de crecimiento anormal y desregulado, o ambos, que puedan conducir al desarrollo de una condición o enfermedad indeseada. Preferiblemente, una célula normal normalmente tiene mecanismos de control de revisión del funcionamiento del ciclo celular.

Como se usa en la presente, "contactar una célula" se refiere a una condición en la cual un compuesto u otra composición de materia está en contacto directo con una célula, o está suficientemente cerca para inducir un efecto biológico deseado en una célula.

Como se usa en la presente, "compuesto candidato" se refiere a un compuesto de la presente invención que ha sido o será probado en uno o más ensayos biológicos in vitro o in vivo, para determinar si ese compuesto probablemente producirá una respuesta biológica o médica deseada en una célula, tejido, sistema, animal o humano esté siendo investigado por un investigador o médico clínico. En un aspecto, un compuesto candidato es un compuesto de fórmula I. En un aspecto preferido, la respuesta biológica o médica es el tratamiento del cáncer. En otro aspecto, la respuesta biológica o médica es el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo. En un aspecto, el ensayo biológico in vitro o in vivo incluye, pero no se limita a ensayos de crítica enzimática, ensayos de cambio de movilidad electroforética, ensayos de gen reportero, ensayos de viabilidad celular in vitro.

Como se usa en la presente, "monoterapia" se refiere a la administración de un solo compuesto activo o terapéutico a un sujeto en necesidad del mismo. Preferiblemente, monoterapia, implicará la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto activo. Por ejemplo, la monoterapia del cáncer con fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva con fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, análogo o derivados del mismo, a un sujeto necesidad de tratamiento de cáncer. La monoterapia puede ser contrastada con terapia de combinación, en la cual se administra una combinación de múltiples compuestos activos, preferiblemente con cada componente de la combinación presente en una cantidad terapéuticamente efectiva. En un aspecto, la monoterapia con un compuesto de la presente invención es más efectiva que la terapia de combinación para inducir un efecto biológico deseado.

Como se usa en la presente, "tratamiento" describe el manejo y cuidado de un paciente para el propósito de combatir una enfermedad, condición, o trastorno e influye la administración de un compuesto de la presente invención para prevenir la activación de los síntomas o complicaciones, aliviar los síntomas o complicaciones, o eliminar la enfermedad, condición o trastorno.

En un aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una reducción en el tamaño de un tumor. Una reducción en el tamaño de un tumor también puede referirse como "regresión del tumor". Preferiblemente, después del tratamiento, el tumor se reduce por 5% o más con relación al tamaño antes del tratamiento; más preferiblemente, el tamaño del tumor se reduce por 10% o más; más preferiblemente, se reduce por 20% o más; más preferiblemente, se reduce por 30% más; más preferiblemente, se reduce por 40% o más; aún más preferiblemente, se reduce por 50% o más; y lo más preferido, se reduce por más del 75% o aún más. El tamaño de un tumor puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, el tamaño de un tumor puede medirse como un diámetro del tumor.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una reducción en el volumen del tumor, preferiblemente, después del tratamiento, el volumen del tumor se reduce por 5% o más con relación a su tamaño antes del tratamiento; más preferiblemente, el volumen del tumor se reduce por 10% o más; más preferiblemente, se reduce por 20% o más; más preferiblemente, se reduce por 30% más; más preferiblemente, se reduce por 40% o más; aún más preferiblemente, se reduce por 50% o más; y lo más preferido, se reduce por más del 75% o aún más. El volumen del tumor puede medirse por cualquier medio reproducible de medición.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en la disminución en el número de tumores. Preferiblemente, después el tratamiento, el número de tumores se reduce por 5%, con relación al número previo al tratamiento, más preferiblemente, el número de tumores se reduce por 10% o más; más preferiblemente, se reduce por 20% o más; más preferiblemente, se reduce por 30% más; más preferiblemente, se reduce por 40% o más; aún más preferiblemente, se reduce por 50% o más; y lo más preferido, se reduce por más del 75% o aún más. El número de tumores puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, el número de tumores puede medirse al contar los tumores visibles al ojo simple o con una amplificación específica. En un aspecto preferido, la amplificación específica de es 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, o 50x.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en la disminución en el número de lesiones metastásicas en otros tejidos u órganos distantes del sitio del tumor principal. Preferiblemente, después del tratamiento, el número de lesiones metastásicas se reduce por 5% o más con relación al tratamiento previo; más preferiblemente, el número de lesiones metastásicas se reduce por 10% o más; más preferiblemente, se reduce por 20% o más; más preferiblemente, se reduce por 30% más; más preferiblemente, se reduce por 40% o más; aún más preferiblemente, se reduce por 50% o más; y lo más preferido, se reduce por más del 75% o aún más. El número de lesiones metastásicas puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un primer aspecto, el número de lesiones metastásicas puede medirse al contar las lesiones metastásicas visibles al ojo simple o a una amplificación específica. En un aspecto preferido, la amplificación específica es 2x, 3x, 4x, 5x, 10x, o 50x.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población de sujetos tratados en comparación con una población que recibe sólo portador. Preferiblemente, el tiempo de supervivencia promedio aumenta por más de 30 días; más preferiblemente, por más de 60 días; más preferiblemente, por más de 90 días; y más preferiblemente, por más de 120 días. Un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población puede ser medido cualquier medio posible. En un aspecto preferido, un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población puede medirse, por ejemplo, al calcular una población de la longitud promedio de supervivencia después del inicio del tratamiento con un compuesto activo. En otro aspecto preferido, también puede medirse un aumento en el tiempo de sobrevivencia de una población, para una población de longitud promedio de sobrevivencia que sigue al término de una primera ronda de tratamiento con un compuesto activo.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población de sujetos tratados en comparación con una población de sujetos sin tratar. Preferiblemente, el tiempo de supervivencia promedio aumenta por más de 30 días; más preferiblemente, por más de 60 días; más preferiblemente, por más de 90 días; y más preferiblemente, por más de 120 días. Un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población puede medirse por cualquier medio reproducible. En un aspecto preferido, puede medirse un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población, por ejemplo, al calcular para una población la longitud promedio de sobrevivencia después del inicio del tratamiento con un compuesto activo. En otro aspecto preferido, también puede medirse un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población por ejemplo, al calcular para una población de longitud promedio de sobrevivencia después del término de una primera ronda de tratamiento con un compuesto activo.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en un aumento del tiempo de supervivencia promedio de una población de sujetos tratados en comparación con una población que recibe monoterapia con un fármaco que no es un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, análogo o derivados del mismo. Preferiblemente, el tiempo de supervivencia promedio aumenta por más de 30 días; más preferiblemente, por más de 60 días; más preferiblemente, por más de 90 días; y más preferiblemente, por más de 120 días. Un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población puede medirse por cualquier medio reproducible. En un aspecto preferido, puede medirse un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población, por ejemplo, al calcular para una población la longitud promedio de sobrevivencia después del inicio del tratamiento con un compuesto activo. En otro aspecto preferido, también puede medirse un aumento en el tiempo de supervivencia promedio de una población por ejemplo, al calcular para una población la longitud promedio de sobrevivencia después del término de una primera ronda de tratamiento con un compuesto activo.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una disminución en la tasa de mortalidad de una población de sujetos tratados en comparación con una población que recibe sólo portador. En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una disminución en la tasa de mortalidad de una población de sujetos tratados en comparación con una población sin tratar. En un aspecto adicional, el tratamiento del cáncer resulta en una disminución en la tasa de mortalidad de una población de sujetos tratados en comparación con una población que recibe monoterapia con un fármaco que no es un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, análogo o derivado del mismo. Preferiblemente, la tasa de mortalidad disminuye por más de 2%, más preferiblemente, por más del 5%; más preferiblemente, por más de 10%; y más preferiblemente, por más del 25%. En un aspecto preferido, puede medirse una disminución en la tasa de mortalidad de una población de sujetos tratados por cualquier medio reproducible. En otro aspecto preferido, puede medirse una disminución en la tasa de mortalidad de una población, por ejemplo, al calcular para una población el número promedio de muertes relacionadas con la enfermedad por unidad de tiempo después del inicio del tratamiento con un compuesto activo. En otro aspecto preferido, también puede medirse una disminución en la tasa de mortalidad de una población, por ejemplo, al calcular para una población el número promedio de muertes relacionadas con la enfermedad por unidad de tiempo después del término de una primera ronda de tratamiento con un compuesto activo.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una disminución en la tasa de crecimiento del tumor. Preferiblemente, después del tratamiento, la tasa de crecimiento del tumor se reduce por lo menos por 5% con relación al número previo al tratamiento; más preferiblemente, la tasa de crecimiento del tumor se reduce por lo menos por 10%, más preferiblemente, se reduce por lo menos por 20%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 30%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 40%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%; aún más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%; y lo más preferido, se reduce por lo menos por 75%. La tasa de crecimiento del tumor puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, la tasa de crecimiento del tumor se mide de acuerdo con un cambio en el diámetro del tumor por unidad de tiempo.

En otro aspecto, el tratamiento del cáncer resulta en una disminución en el recrecimiento del tumor. Preferiblemente, después del tratamiento, el recrecimiento del tumor es menor que 5%; más preferiblemente, el recrecimiento del tumor es menor que 10%; más preferiblemente, menor que 20%; más preferiblemente, menor que 30%; más preferiblemente, menor que 40%; más preferiblemente, menor que 50%; aún más preferiblemente, menor que 50%, y lo más preferido, menor que 75%. El recrecimiento del tumor puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, el recrecimiento del tumor se mide, por ejemplo, al medir un aumento en el diámetro de un tumor después de un encogimiento previo del tumor que siguió al tratamiento. En otro aspecto preferido, el recrecimiento de un tumor es indicado por la falla de reaparición de tumores después de que el tratamiento ha sido detenido.

En otro aspecto, el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular resulta en una reducción en la tasa de proliferación celular. Preferiblemente, después del tratamiento, la tasa de proliferación celular es reducida por lo menos por 5%; más preferiblemente, por lo menos por 10%, más preferiblemente, por lo menos por 20%; más preferiblemente, por lo menos por 30%; más preferiblemente, por lo menos por 40%; más preferiblemente, por lo menos por 50%; aún más preferiblemente, por lo menos por 50%; y lo más preferido, por lo menos por 75%. La tasa de proliferación circular puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, la tasa de proliferación celular se mide, por ejemplo, al medir el número de células de división en una muestra de tejido por unidad de tiempo.

En otro aspecto, el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular resulta en una reducción en la proporción de células proliferativas. Preferiblemente, después del tratamiento, la proporción de células proliferativas se reduce por lo menos por 5%; más preferiblemente, por lo menos por 10%, más preferiblemente, por lo menos por 20%; más preferiblemente, por lo menos por 30%; más preferiblemente, por lo menos por 40%; más preferiblemente, por lo menos por 50%; aún más preferiblemente, por lo menos por 50%; y lo más preferido, por lo menos por 75%. La proporción de células proliferativas puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, la proporción de células proliferativas se mide, por ejemplo, al cuantificar el número de células en división con relación al número de células que no están en división en una muestra de tejido. En otro aspecto preferido, la proporción de las células proliferativas es equivalente al índice mitótico.

En otro aspecto, el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular resulta en una disminución en el tamaño de un área o zona de proliferación celular. Preferiblemente, después del tratamiento, se reduce el tamaño de un área o zona de proliferación celular por lo menos por 5% con relación a su tamaño previo al tratamiento; más preferiblemente se reduce por lo menos por 10%, más preferiblemente, se reduce por lo menos por 20%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 30%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 40%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%; aún más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%; y lo más preferido, se reduce por lo menos por 75%. El tamaño de un área o zona de proliferación celular puede medirse por un medio reproducible de medición. En un aspecto preferido, el tamaño de un área o zona de proliferación celular puede medirse como un diámetro o ancho de un área o zona de proliferación celular.

En otro aspecto, el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular resulta en una disminución en el número de proporción de células que tienen una apariencia o morfología anormal. Preferiblemente, después del tratamiento, el número de células que tienen una morfología anormal se reduce por lo menos por 5% con relación a su tamaño previo al tratamiento; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 10%, más preferiblemente, se reduce por lo menos por 20%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 30%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 40%; más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%; aún más preferiblemente, se reduce por lo menos por 50%, y lo más preferido, se reduce por lo menos por 75%. Una apariencia o morfología celular anormal puede medirse por cualquier medio reproducible de medición. En un aspecto, una morfología celular anormal se mide por microscopía, por ejemplo, usando un microscopio de cultivo de tejido invertido. En un aspecto, una morfología celular anormal toma la forma de un pleiomorfismo nuclear.

Como se usa en la presente, el término "selectividad" significa la tendencia de aparecer a una mayor frecuencia en una población que en otra población. En un aspecto, las poblaciones comparadas son poblaciones de células. En un aspecto preferido, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, análogo o derivado del mismo, actúa selectivamente en una célula de cáncer o precancerosa pero no en una célula normal. En otro aspecto preferido, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, análogo o derivado del mismo, actúa selectivamente para modular una diana molecular (por ejemplo, B-RAF). En otro aspecto preferido, la invención proporciona un método para inhibir selectivamente la actividad de una enzima, tal como cinasa. Preferiblemente, un evento ocurre selectivamente en una población A con relación a una población B se ocurre más de dos veces más frecuentemente en la población A en comparación con la población B. más preferiblemente, un evento ocurre selectivamente si ocurre más de cinco veces más frecuentemente en la población A. más preferiblemente, un evento ocurre selectivamente si ocurre más de diez veces más frecuentemente en la población A; más preferiblemente, más de quince veces; aún más preferiblemente, más de 100 veces; y lo más preferido, más de 1000 veces más frecuentemente en la población A en comparación con la población B. por ejemplo, puede decirse que la muerte celular ocurre selectivamente en células de cáncer si ocurre más de dos veces en frecuencia en las células de cáncer en comparación con las células normales.

En un aspecto preferido, un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivado del mismo, modula la actividad de una diana molecular (por ejemplo, B-RAF). En un aspecto, la modulación se refiere a estimular o inhibir una actividad de una diana molecular. Preferiblemente, un compuesto de la presente invención modula la actividad de una diana molecular si estimula o inhibe la actividad de la diana molecular por lo menos por 2 veces con relación a la actividad de la diana molecular bajo las mismas condiciones pero que carece sólo de la presencia de dicho compuesto. Más preferiblemente, un compuesto de la presente invención modula la actividad de una diana molecular si estimula o inhibe la actividad de la diana molecular por lo menos por 5 veces, por lo menos por 10 veces, por lo menos por 20 veces, por lo menos por 50 veces, por lo menos por 100 veces con relación a la actividad de la diana molecular bajo las mismas condiciones pero que carece sólo de la presencia de dicho compuesto. La actividad de una diana molecular puede medirse por cualquier medio reproducir. La actividad de una diana molecular puede medirse in vitro o in vivo. Por ejemplo, la actividad de una diana molecular puede medirse in vitro por un ensayo de actividad enzimática o un ensayo de unión de ADN, o la actividad de una diana molecular puede medirse in vivo al evaluar la expresión de un gen reportero.

En un aspecto, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivado del mismo, no modula significativamente la actividad de una diana molecular si la adición del compuesto no estimula o inhibe la actividad de la diana molecular por más de 10% con relación a la actividad de la diana molecular bajo las mismas condiciones, pero carece sólo de la presencia de dicho compuesto.

Como se usa en la presente, el término "isoenzima selectiva" significa la inhibición o estimulación preferencial de una primera isoforma de una enzima en comparación con una segunda isoforma de una enzima (por ejemplo, la inhibición o estimulación preferencial de una alfa isoenzima cinasa en comparación con una beta isoenzima cinasa). Preferiblemente, un compuesto de la presente invención de muestra un mínimo de un diferencial de cuatro veces, preferiblemente un diferencial de 10 veces, más preferiblemente un diferencial de quince veces, en la dosificación requerida para lograr el efecto biológico. Preferiblemente, un compuesto de la presente invención demuestra este diferencial a través de un intervalo de inhibición, y el diferencial es ejemplificado como el ICso, es decir, una inhibición del 50%, para una diana molecular de interés.

En una modalidad preferida, la administración de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivado del mismo, a una célula o un sujeto en necesidad del mismo resulta en la modulación (es decir, estimulación o inhibición) de una actividad de RAF. Como se usa en la presente, la actividad de RAF se refiere a cualquier función o actividad biológica que es realizada por el RAF. Por ejemplo, una función de RAF incluye la fosforilación en la dirección 3' de proteínas diana.

En una modalidad preferida, la administración de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo, o derivados del mismo, a una célula, o a un sujeto en necesidad del mismo resulta en la modulación (es decir, estimulación o inhibición) de una actividad de ERK1 o ERK2, o ambas. Como se usa en la presente, la actividad de ERK1 o ERK2 se refiere a cualquier función o actividad biológica que se realiza mediante el ERK1 o ERK2. Por ejemplo, una función del ERK1 o ERK2 incluye la fosforilación en la dirección 3' de proteínas diana.

En un aspecto, la activación se refiere a colocar una composición de materia (por ejemplo, proteína o ácido nucleico) en un estado adecuado para realizar una función biológica deseada. En un aspecto, una composición de materia capaz de ser activada sólo como un estado inactivado. En un aspecto, una composición activada de materia puede tener una función biológica inhibidora o estimulante, o ambas.

En un aspecto, la elevación se refiere a un aumento en una actividad biológica deseada de una composición de materia (por ejemplo, una proteína o un ácido nucleico). En un aspecto, la elevación puede ocurrir a través de un aumento en la concentración de una composición de materia.

Como se usa en la presente, "una trayectoria de punto de revisión del ciclo celular" se refiere a una trayectoria bioquímica que está implicada en la modulación de un punto de revisión de ciclo celular. Una trayectoria de punto de reacción de ciclo celular puede tener efectos estimuladores o inhibidores, o ambos, o una o más funciones que comprenden un punto de revisión del ciclo celular. Una trayectoria de punto de revisión de ciclo celular está comprendida de por lo menos dos composiciones de materia, preferiblemente proteínas, ambas de las cuales contribuyen a la modulación de un punto de revisión de ciclo celular. Una trayectoria de punto de revisión de ciclo celular puede ser activada a través de la activación de uno o más elementos de la trayectoria de punto de revisión de ciclo celular. Preferiblemente, una trayectoria de punto de revisión de ciclo celular es una trayectoria de señalización bioquímica.

Como se usa en la presente, "un regulador de punto de revisión del ciclo celular" se refiere a una composición de materia que puede funcionar, por lo menos en parte, para modular un punto de revisión del ciclo celular. Un regulador de punto de revisión del ciclo celular puede tener efectos estimulantes o inhibidores, o ambos, una o más funciones que comprenden un punto de revisión del ciclo celular. En un aspecto, un regulador de punto de revisión del ciclo celular es una proteína. En otro aspecto, un regulador de punto de revisión del ciclo celular no es una proteína.

En un aspecto, el tratamiento del cáncer o de un trastorno proliferativo celular resulta en la muerte celular, y preferiblemente, la muerte celular resulta en una disminución de por lo menos 10% en el número de células en una población. Más preferiblemente, la muerte celular significa una disminución de por lo menos 20%; más preferiblemente, una disminución de por lo menos 30%; más preferiblemente, una disminución de por lo menos 40%; más preferiblemente, una disminución de por lo menos 50%; más preferiblemente, una disminución de por lo menos 75%. El número de células en una población puede medirse por cualquier medio reproducible. En un aspecto, el número de células en una población se mide por clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS, por sus siglas en inglés). En otro aspecto, el número de células en una población se mide por microscopía de inmunofluorescencia. En otro aspecto, el número de células en una población se mide por microscopía de luz. En otro aspecto, los métodos de medición de la muerte celular son como se muestran en Li et al, (2003) Proc Nati Acad Sci USA. 100(5): 2674-8. En un aspecto, la muerte celular ocurre por apoptosis.

En un aspecto preferido, una cantidad efectiva de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivados del mismo, no es significativamente citotóxico a células normales. Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto no es significativamente citotóxico a células normales si la administración del compuesto en una cantidad terapéuticamente efectiva no induce la muerte celular en más del 10% de las células normales. Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto no afecta significativamente la viabilidad de las células normales si la administración del compuesto en una cantidad terapéuticamente efectiva no induce la muerte celular por más del 10% de las células normales. En un aspecto, la muerte celular ocurre por apoptosis.

En un aspecto, poner en contacto una célula con un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivado del mismo, induce o activa selectivamente la muerte celular en las células cancerígenas. Preferiblemente, la administración a un sujeto en necesidad del mismo de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo o derivado del mismo induce o activa selectivamente la muerte celular en las células cancerígenas. En otro aspecto, poner en contacto una célula con un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, metabolito, análogo, o derivado del mismo, induce selectivamente la muerte celular en una o más células afectadas por un trastorno proliferativo celular. Preferiblemente, la administración a un sujeto en necesidad del mismo de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, induce selectivamente la muerte celular en una o más células afectadas por un trastorno proliferativo celular. En un aspecto preferido, la presente invención se refiere a un método de tratamiento o prevención de cáncer al administrar un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo a un sujeto en necesidad del mismo, donde la administración del compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo, o derivado del mismo resulta en uno o más de lo siguiente: acumulación de células en la fase G1 y/o S del ciclo celular, citotoxicidad vía muerte celular en células cancerígenas sin una cantidad significativa de muerte celular en células normales, actividad antitumor en animales con un índice terapéutico de por lo menos 2, y activación de un punto de revisión del ciclo celular. Como se usa en la presente, "índice terapéutico" es la dosis máxima tolerada dividida entre la dosis eficaz.

Un experto en la técnica puede referirse a libros de texto generales para las descripciones detalladas de las técnicas conocidas discutidas en la presente o de técnicas equivalentes. Estos textos incluyen, Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley y Sons, Inc. (2005); Sambrook et al, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3d ed.), Coid Spring Harbor Press, Coid Spring Harbor, New York (2000); Coligan et al, Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, N. Y.; Enna et al, Current Protocols in Pharmacology, John Wiley & Sons, N. Y.; Fingí et al, The Pharmacological Basis of Therapeutics (1975), Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition (1990). Estos libros de texto pueden ser referidos, por supuesto, para hacer o usar un aspecto de la invención.

En aspectos adicionales, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, puede administrarse en combinación con un segundo agente quimioterapéutico que puede ser taxano, un inhibidor de aromatasa, una antraciclina, un fármaco dirigido a microtúbulos, un fármaco venenoso de topoisomerasa, un anticuerpo monoclonal o policlonal dirigido, un inhibidor de una diana molecular o enzima (por ejemplo, un inhibidor de cinasa), o un fármaco análogo de citidina. En aspectos preferidos, el agente quimioterapéutico puede ser, pero no se restringe a, tamoxifeno, raloxifeno, anastrozol, exemestano, letrozol, HERCEPTIN® (trastuzumab), GLEEVEC® (imatinib), TAXOL® (paclitaxel), ciclofosf amida, lovastatina, mimosina, araC, 5-fluorouracilo (5-FU), metotrexato (MTX), TAXOTERE® (docetaxel), ZOLADEX® (goserelina), vincristina, vinblastina, nocodazol, teniposido, etoposido, GEMZAR® (gemcitabina), epotilona, navelbina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorubicina (adriamicina), epirubicina o idarubicina o agentes listados en la American Cáncer Society's Guide to Cáncer Drugs, disponible en línea; véase, www.cancer.org/docroot/cdg/cdg O.asp. En otro aspecto, el segundo agente quimioterapéutico puede ser una citocina tal como G-CSF (factor estimulante de colonias de granulocitos). En otro aspecto, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, puede ser administrado en combinación con terapia de radiación. En aún otro aspecto, un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, puede ser administrado en combinación con combinaciones de terapia estándar tales como, pero no restringidas a, CMF (ciclofosfamida, metotrexato y 5-fluorouracilo), CAF (ciclofosfamida, adriamicina y 5-fluorouracilo), AC (adriamicina y ciclofosfamida), FEC (5-fluorouracilo, epirubicina, y ciclofosfamida), ACT o ATC (adriamicina, ciclofosfamida, y paclitaxel), o CMFP (ciclofosfamida, metotrexato, 5-fluorouracilo y prednisona).

Un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivados del mismo, puede ser incorporado en composiciones farmacéuticas adecuadas para administración. Dichas composiciones típicamente comprenden el compuesto (es decir, incluyendo el compuesto activo), y un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. Como se usa en la presente, "excipiente farmacéuticamente aceptable" o "portador farmacéuticamente aceptable" pretende incluir cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y similares, compatibles con la administración farmacéutica. Los portadores adecuados se describen en la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, un libro de texto de referencia estándar en el campo. Ejemplos preferidos de dichos portadores o diluyentes incluyen, pero no se limitan a, agua, solución salina, soluciones de ringer, solución de dextrosa, y albúmina de suero humano 5%. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen portadores sólidos tales como lactosa, alabastro, sacarosa, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico y similares. Ejemplos de portadores líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, agua y similares. De igual manera, el portador o diluyente puede incluir material retardantes del tiempo, conocidos en la técnica, tal como monoestearato de glicerol, o diestearato de gliceril, solo o con una cera, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, metacrilato de metilo o similares. También pueden incluirse otros rellenos, excipientes, saborizantes, y otros aditivos tales como los conocidos en la técnica en- una composición farmacéutica de acuerdo con esta invención. También pueden usarse liposomas y vehículos no acuosos tales como aceites fijos. El uso de dichos medios y agentes para las sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Se contempla el uso del mismo en las composiciones excepto en tanto que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo. También pueden incorporarse compuestos activos suplementarios en las composiciones.

En un aspecto, un puesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, se administra en una forma de dosificación adecuada preparada al combinar una cantidad terapéuticamente efectiva (por ejemplo, un nivel eficiente suficiente para lograr los efectos terapéuticos deseados a través de la inhibición del crecimiento del tumor, eliminación de las células del tumor, tratamiento o prevención de los trastornos celulares, etc.) de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, metabolito, análogo o derivado del mismo, (como un ingrediente activo) con portadores o diluyentes farmacéuticos estándar de acuerdo con procedimientos convencionales (es decir, al producir una composición farmacéutica de la invención). Estos procedimientos pueden implicar el mezclado, granulación, y compresión o disolución de ingredientes según sea adecuado para lograr la preparación deseada. 4. Las composiciones y formulaciones farmacéuticas Una composición farmacéutica de la invención es formulada para ser compatible con la ruta pretendida de administración. Ejemplos de ruta de administración incluyen administración parenteral, por ejemplo, intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (por ejemplo, inhalación), transdérmica (tópica), y transmucosal. Las soluciones o suspensiones usadas para la aplicación parenteral, intradérmica, o subcutánea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril tal como agua para inyección, solución salina, aceites fijos polietilen glicol, glicina, propilen glicol y otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o parabenos metílicos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisultido de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiamintetraacético; amortiguadores tales como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH puede ser ajustado con ácidos o bases, tales como ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. La preparación parenteral puede ser encerrada en ampolletas, jeringas desechables o frascos de dosis múltiples formatos de vidrio o de plástico.

Un compuesto composición farmacéutica de la invención puede administrarse un sujeto por muchos métodos bien conocidos actualmente usados para el tratamiento quimioterapéutico. Por ejemplo, para el tratamiento de cánceres, un compuesto de la invención puede ser inyectado directamente dentro de los tumores, inyectado dentro de la corriente sanguínea o cavidades corporales o tomado oralmente o aplicado a través de la piel con parches. La dosis elegida debe ser suficiente para constituir un tratamiento efectivo pero no tan alta como para provocar efectos secundarios indeseados. El estado de la condición de enfermedad (por ejemplo, cáncer, precáncer, o similar) y la salud del paciente debe monitorearse preferiblemente de manera cercana durante y por un periodo razonable después del tratamiento.

El término "cantidad terapéuticamente efectiva," como se usa en la presente, se refiere a una cantidad de un agente farmacéutico para tratar, mejorar, o prevenir una enfermedad o condición identificada, o para exhibir un efecto terapéutico o inhibidor detectable. El efecto puede ser detectado por cualquier método de ensayo conocido en la técnica. La cantidad efectiva precisa para un sujeto dependerá del peso corporal del sujeto, tamaño, y salud; la naturaleza y el grado de la condición; y del agente terapéutico o combinación de agentes terapéuticos seleccionados para la administración. Las cantidades terapéuticamente efectivas para una situación dada pueden ser determinadas por experimentación de rutina que está dentro de la experiencia y juicio del médico clínico. En un aspecto preferido, la enfermedad o condición a ser tratada es cáncer, en otro aspecto, la enfermedad o condición a ser tratada es un trastorno proliferativo celular.

Para cualquier compuesto, la cantidad terapéuticamente efectiva puede ser estimada al inicio ya sea en ensayos de cultivos celular, por ejemplo, células neoplásicas, o en modelos animales, usualmente ratas, ratones, conejos, perros o cerdos. El modelo animal también puede ser usado para determinar el intervalo de concentración adecuado y la ruta de administración. Luego tal información puede ser usada para determinar las dosis útiles y las rutas para la administración en humanos. La eficacia terapéutica/profiláctica y la toxicidad pueden determinarse por procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, el ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva para el 50% de la población) y el LD5o (la dosis letal para el 50% de la población). La proporción de la dosis entre los efectos tóxicos y los terapéuticos es el índice terapéutico, y puede expresarse como la proporción de LDso/ED50. Se prefieren las composiciones farmacéuticas que exhiben grandes índices terapéuticos. La dosificación puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada, la sensibilidad del paciente, y la ruta de administración.

La dosificación y la administración son ajustadas para proporcionar niveles suficientes del agente(s) activo o para mantener el efecto deseado. Los factores que deben ser tomados en consideración incluyen la gravedad del estado de la enfermedad, la salud general del sujeto, peso, edad, y género del sujeto, dieta, tiempo y frecuencia de la administración, combinación(es) de fármacos, reacciones de sensibilidad, y tolerancia/respuesta a la terapia. Las composiciones farmacéuticas de larga duración pueden ser administradas cada 3 o 4 días, cada semana, o una vez cada dos semanas dependiendo de la vida media y velocidad de eliminación de la formulación en particular.

Las composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos activos de la presente invención pueden ser fabricadas de una manera que es generalmente conocida, por ejemplo por medio de procedimientos convencionales de mezclado, disolución, granulación, formación de grageas, levigado, emulsificación, encapsulado, atrapado, o liofilización. Las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas de una manera convencional usando uno o más portadores farmacéuticamente aceptables que comprenden excipientes y/o auxiliares para facilitar el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden ser farmacéuticamente usadas. Por supuesto, la formulación apropiada depende de la ruta de administración elegida.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para usos de inyección incluyen soluciones acuosas estériles (solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. Para la administración intravenosa, los portadores adecuados incluyen salina fisiológica, agua bacteriostáctica, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.), o salina amortiguada con fosfato (PBS). En todos los casos, la composición debe ser estéril y debe ser fluida al grado de que exista una fácil aplicación por jeringa. Debe ser estable bajo las condiciones de fabricación y almacenamiento y debe conservarse contra la acción de contaminación por microorganismos tales como bacterias y hongos. El portador puede ser un solvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilen glicol, y polietilen glicol liquido, y similares) y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede ser mantenida, por ejemplo, mediante el uso de un revestimiento tal como lecitina, para el mantenimiento del tamaño de partículas requerido en el caso de una dispersión y mediante el uso de surfactantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede lograrse mediante varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorbutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede realizarse al incluir en la composición un agente que retarda la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones estériles inyectables pueden ser preparadas al incorporar el compuesto activo en la cantidad requerida en un solvente adecuado con uno o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por esterilización por filtración. En general, las dispersiones se preparan al incorporar el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de esos enumerados anteriormente.

En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación son secado al vacío y secado por congelación que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución previamente esterilizada por filtración del mismo.

Las composiciones orales incluyen en general un diluyente inerte o un portador comestible farmacéuticamente aceptable. Pueden estar encerrados en cápsulas de gelatina o comprimidos como tabletas. Para el propósito de la administración terapéutica oral, el compuesto activo puede ser incorporado con excipientes y usados en la forma de tabletas, pastillas o cápsulas. Las composiciones orales también pueden ser reparadas usando un portador fluido para el uso como un enjuague bucal, en donde el compuesto en el portador fluido se aplica oralmente y se hacen gárgaras o se expectora o se traga. Los agentes de unión farmacéuticamente compatibles, y/o materiales adyuvantes pueden ser incluidos como parte de la composición. Las tabletas, pildoras, cápsulas, pastillas y similares pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa, un agente desintegrante tal como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato de magnesio o Sterotes; a agente de deslizamiento tal como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante tal como hierbabuena, salicilato de metilo, o saborizantes de naranja.

Para la administración por inhalación, los compuestos se suministren en la forma de un spray en aerosol de un recipiente presurizado o surtidor, que contiene un propelente adecuado, por ejemplo, un gas tal como dióxido de carbono, o un nebulizador.

La administración sistémica también puede ser por medios transmucosales o transdérmicos. Para la administración transmucosal o transdérmica, se usan penetrantes apropiados para la barrera a ser permeada en la formulación. Dichos penetrantes son generalmente conocidos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, para la administración transmuscosal, detergentes, sales biliares y derivados del ácido fusidico. La administración transmucosal puede ser efectuada a través del uso de sprays nasales o supositorios. Para la administración transdérmica, los compuestos activos se formulan como ungüentos, pomadas, geles o cremas conocidos en general en la técnica.

En un aspecto, los compuestos activos se preparan con portadores farmacéuticamente aceptables que protegerán al compuesto contra una eliminación rápida del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes o sistemas de suministro microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como etilen vinil acetato, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Los métodos de preparación de dichas formulaciones serán evidentes para los expertos en la técnica. Los materiales también pueden ser obtenidos comercialmente de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Las suspensiones liposomales (incluyendo liposomas dirigidos a células infectadas con anticuerpos monoclonales a antígenos virales) pueden ser usados como portadores farmacéuticamente aceptables. Éstos pueden ser preparados de acuerdo con los métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, como se describe en la Pat. de E.U.A. No. 4,522,81 1.

Es especialmente ventajoso formular composiciones orales o parenterales en una forma de dosificación unitaria para la facilidad de administración y la uniformidad en la dosificación. La forma de dosis unitaria como se usa en la presente se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a ser tratado; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosis unitarias de la invención es dictada y directamente dependiente de las características únicas del compuesto activo y el efecto terapéutico particular por lograr.

En aplicaciones terapéuticas, las dosificaciones de las composiciones farmacéuticas usadas de acuerdo con la invención varían dependiendo del agente, la edad, el peso, y la condición clínica del paciente recipiente, y de la experiencia y juicio del médico clínico o practicante que administra la terapia, entre otros factores que afectan la dosificación seleccionada. Generalmente, la dosis debe ser suficiente para resultar en una lentificación, y preferiblemente regresión, del crecimiento de tumores y también preferiblemente que provoque una regresión completa del cáncer. La dosis puede variar de aproximadamente 0.01 mg/kg por día a aproximadamente 3000 mg/kg por día. En aspectos preferidos, las dosificaciones pueden variar de aproximadamente 1 mg/kg por día a aproximadamente 1000 mg/kg por día. En un aspecto, la dosis estará en el intervalo de aproximadamente 0.1 mg/día a aproximadamente 50 g/día; aproximadamente 0.1 mg/día a aproximadamente 25 g/día; aproximadamente 0.1 mg/día a aproximadamente 10 g/día; aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 3g/día; o aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 1 g/día, en una dosis sencilla, dividida, o continúa (cuya dosis puede ser ajustada para el peso del cuerpo del paciente en kg, área superficial en m2, y edad en años). Una cantidad efectiva de un agente farmacéutico es esa que proporciona una mejora que se identifica de manera objetiva como se aprecia por el clínico médico u otro observador calificado. Por ejemplo, la regresión de un tumor impaciente puede medirse con referencia al diámetro de un tumor. La disminución en el diámetro de un tumor indica regresión. La regresión también es indicada por la falla de los tumores a reaparecer después de que ha terminado el tratamiento. Como se usa en la presente, el término "manera efectiva de dosificación" se refiere a la cantidad de un compuesto activo para producir el efecto biológico deseado en un sujeto o célula.

La composición farmacéutica puede ser incluida en un recipiente, empaque, o surtidor junto con las instrucciones de administración.

Todas las patentes, solicitudes de patente y referencias citadas en la presente se incorporan como referencia en la presente en su totalidad.

EJEMPLOS Se proporcionan ejemplos a continuación para ilustrar adicionalmente los diferentes aspectos de la presente invención. Los ejemplos también ilustran la metodología útil para practicar la invención. Estos ejemplos no limitan la invención reclamada.

EJEMPLO 1 Preparación de fosfato di-sódico de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3- ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazof211-b1oxazol-6- il)fenoxi)metilo Etapa 1 : Preparación de fosfato potásico de di-ter-butilo A una mezcla de fosfonato de di-ter-butilo (40.0 g, 206.2 mmoles) y KHCO3 (12.6 I) en agua (178 mi) a 0 °C BAJO agitación vigorosa se añadió KMn04 como polvo fino en porciones durante 50 min (apreciar; reacción fuertemente exotérmica, es importante un enfriamiento eficiente). Después de la adición, la mezcla fue agitada a temperatura ambiente por 30 min y luego calentada a 60 °C por 15 min. El subproducto n02 fue filtrado. El filtrado fue decolorado por ebullición con carbón (3.2 g) y filtrado. El filtrado fue llevado la siguiente reacción sin purificación adicional.

Etapa 2: Preparación de fosfato ácido de di-ter-butilo vi S HCI CONC- A la solución obtenida en la etapa 1 se añadió ácido clorhídrico concentrado (16 mi) lentamente a 0 °C con agitación. El producto fue precipitado recolectado por filtración, secado bajo vacio durante la noche para proporcionar 28.3 g fosfato ácido de di-ter-butilo.

Etapa 3 : Preparación de fosfato de di-ter-butil clorometilo A una mezcla de fosfato ácido de di-ter-butilo (24.9 g, 133.3 mmoles), NaHC03 (39.9 g, 533.3 mmoles) y sulfato ácido de tetra-n-butilamonio (4.0 g, 13.3 mmoles) en agua (1000 mi) se añadió diclorometano (623 mi). La mezcla fue agitada a 0 °C por 20 min. y luego se añadió una solución de clorosulfato de clorometilo (23.5 g, 160 mmoles) en diclorometano (370 mi) con agitación vigorosa. La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente durante la noche (20 hrs). La capa orgánica fue separada, lavada con salmuera (500 mi), secada sobre sulfato de sodio y concentrada para proporcionar 14.0 g de fosfato de di-ter-butil clorometilo como un aceite incoloro. 1H RMN (DMSO-d6) 400 MHz d 5.72 (d, J = 15.5 Hz, 2H), 1 .14 (s, 18H).

Etapa 4: Preparación de fosfato de (R -di-ter-butil (3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)-piperidin-3-ila b1oxazol-6-il)fenoxi)metilo Una mezcla de (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil-1H-pirazol-3-ilsulfonil)piperid¡n-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenol (2.0 g, 3.85 mmoles), hidruro de sodio (0.185 g, 7.69 mmoles) y yoduro de tetra-n-butil amonio (0.42 g, 1.15 mmoles) en N,N-dimetilformida (15 mi) fue agitada a temperatura ambiente por 10 min. A esta mezcla se añadió una solución de fosfato de di-ter-butil clorometilo (1.29 g, 5.0 mmoles) en N,N-dimetilformida (5 mi). La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente por 24 hrs. Se removió el disolvente bajo vacío. El residuo fue tomado en diclorometano (100 mi), se lavó con agua (100 mi X 2), se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. El producto fue purificado por cromatografía en columna instantánea en gel de sílice para proporcionar 1.60 g de fosfato de (R)-di-ter-butil (3-(5-(2-(1 -(1 -metil- H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo como un sólido anaranjado. 1H RMN (DMSO-de) 400 MHz d 8.14-8.05 (m, 2H), 7.88 (d, J = 2.6 Hz, 1 H), 7.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.16-7.08 (m, 2H), 6.63 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 6.46 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 4.00-3.90 (m, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.78-3.70 (m, 1 H), 3.50-3.42 (m, 1 H), 2.57 (br. t, J = 10.1 Hz, 1 H), 2.43 (br. t, J = 10.3 Hz, 1 H), 1.98-1.80 (m, 2H), 1.66-1.52 (m, IH), 1.37 (s, 18H), 1.35-1.30 (m, 1 H); LCMS M+H = 743.

Método alternativo para la Etapa 4 (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil- H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenol (31.56 g, 0.0606 moles, 1.0 equiv) y Cs2C03 (39.49 g, 0.121 moles, 2.0 equiv) fueron cargados a un matraz. Se añadió DMF (126 mi, 4 volúmenes). La mezcla fue agitada a ta por 5 min. Se vote una solución del compuesto fosfato de di-ter-butil clorometilo en DMF (63 mi, 3.7 volúmenes) en la mezcla por 10 min. La mezcla resultante fue agitada a ta por 24 h. La reacción se terminó (HPLC: 0.17 % AUC de materiales de inicio). Se añadió EtOAc (285 mi). La mezcla fue enfriada a 12 °C con agitación vigorosa. Se añadió agua (380 mi) en 10 min mientras se mantenía la temperatura por debajo de 22 °C. La mezcla fue agitada por 10 min. Las dos capas fueron separadas. La fase acuosa fue extraída con EtOAc (285 mi). La frase orgánica combinada fue lavada con salmuera (1 15 mi). La solución fue evaporada hasta sequedad para dar un producto crudo aceitoso rojo claro (55 g, > 00 %,), sin purificación adicional para la siguiente Etapa.

Etapa 5: Preparación de fosfato di-ácido de (R)-(3-(5-(2-(1 -(1-metil-1 H-p¡razol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)¡midazo[2,1-b1oxazol-6-il)fenoxi)metilo A una solución de fosfato de (R)-di-ter-butil (3-(5-(2-(1-(1 -metil-1 H-pirazol-3-ilsulfon¡l)p¡peridin-3-¡lamino)p¡r¡m^ il)fenoxi)metilo (1.68 g, 2.26 mmoles) en diclorometano (34 mi) a 0 °C se añadió ácido trifluoroacético (2.61 mi, 34.0 mmoles) por goteo. La mezcla fue agitada a temperatura ambiente por 45 min. (o hasta la desaparición del material de inicio). El solvente fue removido bajo vacio. El residuo fue agitado en éter etílico (100 mi) por 2 hrs. El producto fue recolectado por centrifugación y secado bajo vacío durante la noche para proporcionar 1.50 g del compuesto del título como un sólido anaranjado. El producto crudo fue usado directamente en la etapa 6 sin purificación.

H RMN (DMSO-de) 400 MHz d 8.13-8.08 (m, 2H), 7.89 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.42 (t, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.34-7.24 (m, 3H), 7.17-7.12 (m, 1 H), 6.63 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 6.52 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 5.58 (d, J = 1 1.7 Hz, 2H), 4.40-3.90 (m, 1 H), 3.93 (s, 3H), 3.75-3.68 (m, H), 3.48-3.40 (m, 1 H), 2.60 (br. t, J = 10.1 Hz, 1 H), 2.55-2.45 (m, 1 H), 1.96-1.82 (m, 2H), 1.67-1.55 (m, 1 H), 1.46-1.34 (m, 1 H); LCMS M+H = 631.

Método alternativo para la Etapa 5 Una solución de fosfato de (R)-di-ter-butil (3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo cruda (28.15 g, 0.0326 moles,) en acetona (120 mi) fue cargada a un matraz de 500 ml_. Se añadió agua (120 mi) con agitación. La mezcla turbia fue calentada a 50 °C por 18 h. Precipitó un producto blanco cristalino. Luego la mezcla fue calentada hasta 55 °C por 24 h. La reacción terminó (monitoreada por HPLC). La mezcla de reacción se enfrió a 20 °C, se agitó por 3 h y se filtró a través de un embudo. La torta fue lavada con agua (3 X 120 mi) luego lavada con acetona (3 X 120 mi). El embudo de filtro fue mantenido en el alojamiento de vacío por otras 3 h. El sólido verdoso fue secado en un horno al vacío (80 °C/0.02 kg/cm2 (20 torr)) por 6 h para obtener el producto deseado (17.2 g).

Etapa 6: Preparación de fosfato di-sódico de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilam bloxazol-6-il)fenoxi)metilo A fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)irnidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo (2.93 g, 4.65 mmoles) en un matraz equipado con una barra de agitación, se añadió una solución de hidróxido de sodio (558 mg, 13.95 mmoles) en agua (30 mi). La mezcla resultante fue agitada hasta que se formó una solución transparente (30 min). La solución transparente fue transferida a un matraz de 500 mi. Mientras se agitaba, se añadieron lentamente 200 mi de acetona. La suspensión resultante se agitó por 10 min y luego se dejó en reposo sin agitación por 1 h. El líquido fue decantado del matraz para desecharlo. Al residuo se añadió acetona (200 mi). La solución fue agitada vigorosamente por 2 h. El producto sólido fue recolectado por centrifugación. Este sólido fue disuelto en 30 mi de agua y se añadieron 200 mi de acetona mientras se agitaba. Después de la agitación por 10 min, la suspensión se dejó sin agitación por 2 h y el liquido fue decantado. Al residuo se añadió acetona (200 mi) y la mezcla resultante fue agitada por 2 h. El sólido fue recolectado por centrifugación, secado bajo vacío a 45 °C por 24 h para proporcionar 2.30 g como un sólido naranja. 1H RMN (D20) 400 MHz d 7.63 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 7.59 (s, H), 7.54 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 7.40 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 7.22 (t, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.10 (dd, J = 8.2 2.0 Hz, 1 H), 6.96 (s, 1 H), 6.86 (d, J = 7.8 Hz, 1 H), 6.45 (s, 1 H), 6.16 (d, J = 5.5 Hz, 1 H), 5.34 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.59-3.48 (m, 1 H), 3.41 (br. d, J = 9.4 Hz, 1 H), 3.22 (br. d, J = 1 1.3 Hz, 1 H), 2.66-2.54 (m, IH), 2.40-2.28 (m, 1 H), 1.78-1.62 (m, 2H), 1.53-1.38 (m, 1 H), 1.30-1.19 (m, 1 H); LCMS M+H = 631 ; análisis elemental calculado para C25H24N8O8PS 2.6 Na 0.6 TFA 0.4 acetona, 42.23 %C, 3.54 %H, 14.38 %N, encontrado, 42.22 %C, 3.80 %H, 14.27 %N.

EJEMPLO 2 Preparación de fosfato diácido de (R)-3-(5-(3-(1-(4- clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilam¡no)fenil)imidazor2,1-bltiazol-6-il)fenilo A una solución de (R)-3-(5-(3-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)fenil)imidazo-[2,1-b]tiazol-6-il)fenol (0.322 g, 0.569 mmoles) en piridina (2.0 mL) a 0 °C se añadió POC13 (0.104 mL, 1.14 mmoles). Después de la adición, la mezcla fue agitada a temperatura ambiente por 2 horas, y luego se añadió 2 mL de agua. La mezcla resultante se agitó durante la noche y se acidificó usando una solución de HCI 1 N a pH = 1 - 2. El sólido fue recolectado por centrifugación y purificado por HPLC de fase inversa usando ácido fórmico como un modificador. Se obtuvo un sólido amarillo (1 10 mg). M.p. 239-245 °C; 1H RMN (DMSO-d6) 400 MHz d 8.70 (bs, 1 H), 8. 1 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 7.77-7.75 (m, 2H), 7.38-7.56 (m, 2H), 7.42 (m, 3H), 7.37-7.35 (m, 1 H), 7.22-7.21 (m. 2H), 6.46 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.95 (bs, 1 H), 3.72 (d, J = 10 Hz, 1 H), 3.46 (d, J = 12 Hz, 1 H), 2.52 (m, 1 H), 2.34 (t, J = 9.6 Hz, 1 H), 1.87 (m, 2H), 1.60-1.57 (m, 1 H), 1.43-1.37 (m, 1 H); ; 31P RMN (DMSO-d6) 400 MHz d -5.201.

LCMS M+H = 647.

EJEMPLO 3 Medición de la actividad RAF Materiales Las cinasas RAF y el anticuerpo anti-fosfo MEK1/2 fueron de Upstate (Charlottesville, VA). El sustrato RAF usado fue GST-MEK-1 , N-terminal de longitud complete, el cual fue expresado en E. coli y purificado de manera doméstica mediante HPLC. Todas las proteínas fueron divididas por alícuotas y almacenadas a -80 °C. El reactivo bloqueador Superblock™ en salina amortiguada con fosfato (PBS) fue de Pierce (cat. #37515). El ATP fue de Roche (cat. # 19035722). El anticuerpo cabra anti-conejo dirigido a fosfatasa alcalina fue de Pierce (cat. # 3 340).

Métodos Todos los ensayos bioquímicos de RAF fueron realizados usando un amortiguador de ensayo que contenía MOPS 20 mM, EGTA 5 mM, MgC12 37.5 mM, DTT 1 mM y ATP 50 µ?. Había 6.25 ng/pozo de B-RAF muíante y 7.5 ng/pozo de MEK-1 en las condiciones de ensayo finales. Los compuestos fueron diluidos serialmente en el amortiguador de ensayo que contenía DMSO al 1 %y 20 pl de compuestos de prueba a una concentración de tres veces más que la concentración final, y fueron añadidos a una placa de reacción de pozo en V de polipropileno. Los pozos de control de vehículo recibieron amortiguador sólo con DMSO a concentraciones equivalentes a los pozos de prueba. En una sucesión rápida, se añadieron 20 µ? de sustrato (0.45 ng/µ? MEK-1), seguido por 20 µ? de enzima (0.375 ng/µ? de B-RAF mutante). Estas placas de reacción fueron incubadas a temperatura ambiente por 30 minutos. La captura del MEK-1 fue iniciada al transferir 50 µ? de la mezcla de reacción a una microplaca Nunc Maxisorp™ que es diseñada para la captura de proteínas no específicas. Después de 30 minutos de captura del MEK-1 a temperatura ambiente, esta placa fue lavada con TBST (6 x 200 µ?/????) para terminar por completo la reacción. Luego la placa fue bloqueada por 1 hora mediante la adición de 100 µ?/???? de reactivo bloqueador Superblock™ en salina amortiguada con fosfato (PBS). La placa fue lavada de nuevo con TBST (6 veces con 200 µ?/????), seguido por la adición de 70 µ?/???? de Upstate anti-fosfo MEK 1/2 diluido 1 :1000 en Superblock de Pierce (PBS). Después de 60 minutos de incubación, esta placa fue lavada con TBST (6 veces con 200 µ?/????), y se añadieron 70 µ? del anticuerpo secundario (cabra anti-conejo dirigido a fosfatasa alcalina de Pierce) preparado a 1 :4000 en Superblock. Después de 45 minutos de incubación a temperatura ambiente, los pozos de la microplaca fueron lavados con TBST (6 veces con 200 µ?/????), y posteriormente se añadió 100 µ?/???? de sustrato de fosfatasa alcalina fluorescente Attofos™ de acuerdo con las instrucciones del fabricante (JBL Scientific). Se leyó la fluorescencia en un lector Perkin Elmer Envision multilabel, usando los siguientes filtros: Filtro de Excitación: CFP430 nM, Filtro de Emisión: Filtro de Emisión 579 nM.

Los compuestos de la presente invención previenen la fosforilación del MEK a través de la inhibición de las RAF cinasas. Los datos de inhibición de la trayectoria RAF/MEK/ERK para ciertos compuestos de la presente invención se muestran en el Cuadro 1.

EJEMPLO 4 Ensayo de fosforilación a base de células con lectura de electrotransferencia Los compuestos de la presente invención han sido explorados para su habilidad de inhibir todas las isoformas, tanto del tipo silvestre como muíante de las RAF cinasas ((A-RAF, B-RAF y C-RAF) en general, y en particular el B-RAF (V600E) muíante en las células cancerígenas humanas. A375 es una línea celular de melanoma humano que ancla la muíación V600-E más común del B-RAF encontrada en los cánceres humanos. La capacidad de los compuestos para inhibir las RAF cinasas en este ensayo se correlacionó con la reducción de la fosforilación de MEK y ERK, y por lo tanío es un indicador directo de la actividad terapéufica potencial in vivo.

Materiales Células A375 de ATCC fueron manlenidas a 37 °C, 5% CO2 en medio DMEM suplemeníado con suero bovino feíal al 10 %, penicilina/esíreptomicina y fungizona. (Invitrogen) Méíodos Los compuestos de prueba fueron disueltos y diluidos 1 : 1000 en DMSO. Células A375 fueron sembradas en placas de cultivo de íejido de seis pozos a 5-8 x 105 por pozo y cultivadas a 37 °C por 24 h. Las células fueron incubadas con compuestos por una hora antes de ser lisadas en amortiguador de carga EPage (Invitrogen). Los lisados fueron tratados con electroforesis en geles EPage al 8 % y transferidos a membranas de difluoruro de polivinilideno. Después de incubación con anticuerpos primarios y secundarios, las proteínas inmunoteñidas fueron detectadas y cuantificadas por un formador de imágenes de infrarrojo Odyssey (LI-COR). El análisis fue realizado por regresión no lineal para generar una curva de dosis respuesta. El valor calculado de IC50 fue la concentración del compuesto de prueba que causa una disminución de 50% en los niveles de fosfo-MEK y fosfo-ERK. Los anticuerpos primarios usados fueron anti-MEK (Stressgen), anti-ERK (BD Biosciences), anti-fosfo-ERK y anti-fosfo-MEK (Cell Signaling). Los anticuerpos secundarios usados fueron IRDYE800 anti-conejo, IRDYE 800 anti-ratón (Rockland), AlexaFluor680 anti-ratón y AlexaFluro680 anti-conejo (Invitrogen).

La Figura 2 muestra los efectos de los compuestos de fórmula I en el fosfo-ERK en células cancerígenas. Las células A375 fueron tratadas con 0, 12, 37, 1 11 , 333 y 1000 nM de los compuestos indicados por 1 hr. Se valoraron los niveles de Fosfo-ERK y ERK total por inmunotransferencia.

Los compuestos de la presente invención reducen los niveles de fosfo-MEK y fosfo-ERK a través de la inhibición de las RAF cinasas. Los datos de la inhibición de la trayectoria RAF/MEK/ERK para ciertos compuestos de la presente invención se muestran en la Figura 2 y en el Cuadro 1.

EJEMPLO 5 Ensayo de inhibición del crecimiento celular Los compuestos de la presente invención han sido probados para la actividad contra una variedad de líneas de células cancerígenas. La capacidad de los compuestos para inhibir el crecimiento celular en este ensayo se correlacionó con la reducción de la actividad de la enzima deshidrogenase encontrada en las células metabólicamente activas.

Materiales Una gran variedad de células cancerígenas de ATCC fueron mantenidas a 37 °C, 5% CO2 en medio DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10 %, penicilina/estreptomicina y fungízona (Invitrogen).

NCM460 (Incell), una línea celular epitelial de colon, el células epiteliales mamarias humanas (Cambrex) fueron mantenidas a 37 °C, 5 % C02 en medio DMEM y HEBM (Cambrex), respectivamente.

Métodos Los compuestos de prueba fueron disueltos y diluidos hasta 300X en DMSO luego diluidos 1 :40 en DMEM. Las células fueron sembradas en placas de cultivo de tejido de 96 pozos a 1 -5 x 103 por pozo y cultivadas a 37 °C por 24 h. Las células fueron incubadas con el compuesto de prueba por 72 horas seguido por incubación con el compuesto tetrazolio (3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna; MTS) y el reactivo de acoplamiento de electrones, metosulfato de fenazina (PMS) por 4 hr. El MTS fue químicamente reducido por deshidrogenasa en las células como formazan. La medición de la absorbancia del formazan fue evaluada usando un lector de microplacas ENVISION™ (Perkin Elmer) a 492 nm. El valor de IC50 calculado es la concentración del compuesto de prueba que provoca el 50 % de disminución en la absorbancia.

Los compuestos de la presente invención inhiben el crecimiento de una variedad de células cancerígenas. Los datos para ciertos compuestos de la invención se muestran en el Cuadro 2 y el Cuadro 3.

EJEMPLO 6 Observaciones con relación a los patrones de la actividad del compuesto Debido a los patrones inesperados de la inhibición enzimática y la línea celular, se cree que ciertos compuestos de fórmula I son profármacos. Además, estos compuestos sorprendentemente exhiben aumentos dramáticos en la solubilidad ayudando así a la capacidad de formularlos como composiciones terapéuticas efectivas.

Los compuestos 15 y 16 son análogos del compuesto 14 y comparten la estructura madre común del compuesto 14 pero tienen un fosfato o metil fosfato enlazado en el oxígeno fenólico de la estructura madre. Como se muestra en el Cuadro I, los compuestos de tiazol 15 y 16 son por mucho menos potentes para inhibir al mutante B-RAF que el compuesto 14. En particular, el compuesto 15 tiene aproximadamente 400 veces de aumento en el IC5o con relación al compuesto 14, el compuesto 16 tiene aproximadamente 193 veces de aumento. No obstante, un patrón similar no aparece para los datos de inhibición del ERK basado en células, también mostraban el Cuadro I, que se desvía por aproximadamente 2 y 4 veces en EC50, respectivamente. Un efecto similar se observa con los análogos de oxazol: los compuestos 17, 18 y 19. Por ejemplo, el compuesto 19 tiene un aumento de 365 en el IC50 del B-RAF con relación al compuesto 17 y casi ningún cambio en el EC50.

Una explicación para la discrepancia anterior para la actividad in vivo contra in vitro es que los compuestos 15, 16, 18 y 19 actúan como profármacos que son metabolizados o de otra manera convertidos por las células A375 para producir los compuestos 14 y 17, respectivamente.

Como se muestra en la Figura 3, los compuestos 17 y 19 retienen su actividad antitumor en un modelo de cáncer de xenoinjerto (los detalles de la medición se dan en el Ejemplo 7). El compuesto 17 fue inyectado intra-peritonealmente (IP) a 160 mg/kg y el compuesto 19 fue inyectado IP a 300 mg/kg (dosis equivalentes si se expresan en mmoles/kg, tomando en consideración los componentes de sal.

Aunque los compuestos 17 y 19 parecen ser igualmente efectivos en el modelo de xenoinjerto de la Figura 3, el compuesto 19 tiene ventajas potenciales adicionales. Como se observa en el Cuadro 4, el compuesto 19 es dramáticamente más soluble en solución acuosa en o cerca del pH biológicamente relevante. Entonces, este compuesto 19 probablemente es más fácil de formular (por ejemplo, para preparar una solución intravenosa, o para otros métodos de suministro conocidos en la técnica). Los detalles de la medición de la solubilidad se dan en el Ejemplo 8.

EJEMPLO 7 Protocolo para el modelo de xenoinjerto en ratones atímicos Un modelo de xenoinjerto de ratón fue realizado de acuerdo con el método de Jacob et al, Gene Ther Mol Biol 2004;8:213-219 y Wilhelm et al, Cáncer Research 2004; 64: 7099-7109.

Cuidado de animales Ratones de seis semanas hembras NCr nu/nu fueron adquiridos de Taconic Farms, Germantown, NY y se dejaron aclimatar por 1-2 semanas. Los ratones fueron alojados en jaulas de micro-aislación estériles, 5 ratones por jaula y recibieron alimento y agua ad libitum. Todos los procedimientos experimentales y manipulaciones quirúrgicas fueron aprobados de acuerdo con ArQuIe's Institutional Animal Care y Use Committee (IACUC; por sus siglas en inglés).

Modelo y líneas celulares de Tumor Las líneas celulares de carcinoma fueron obtenidas y propagadas como lo recomienda el American Type Tissue Culture (ATCC), (Manassas, Va). Los ratones fueron implantados subcutáneamente con 2.5 -10 x106 células en 0.1 mi de solución salina balanceada de Hanks, estéril, (HBSS) en el área del flanco superior derecho. La administración del compuesto comenzó cuando el tamaño del tumor varió entre 75 y 200mg. Las mediciones del tumor y los pesos corporales fueron recolectados dos a tres veces por semana con un calibrador y balanza electrónicos. El peso del tumor (mg) fue calculado de la ecuación longitud x (ancho)2)/2; esta fórmula también puede usarse para calcular el volumen del tumor suponiendo una unidad de densidad de 1 mg=1 mm3. El porcentaje de inhibición o inhibición del crecimiento del tumor (TGI) fue calculada usando la fórmula siguiente: 1 -[valor del tumor medio de los tratados/valor del tumor medio de control] x 100. Los tratamientos produjeron >30% de letalidad y/o >20% de pérdida de peso del cuerpo neto puede considerarse tóxico.

EJEMPLO 8 Protocolo para la determinación de la solubilidad de equilibrio a pH variable La solubilidad de los compuestos fue determinada por el método del matraz sacudido tradicional. Se mezclaron alícuotas de los compuestos sólidos con un amortiguador adecuado del pH deseado y se equilibró por sacudimiento a temperatura ambiente (~ 25 °C) por 6-24 horas. Después se usaron amortiguadores acuosos para el control del pH: 0. HCI 1 N pH=1.2, amortiguador de Lactato 50mM pH=3.0, amortiguador de acetato 50mM pH=5.0, y amortiguador de fosfato 100mM pH 7.4. Después del equilibrio, se filtraron muestras a través de un filtro de 0.45um y se analizaron por HPLC/UV contra las curvas de calibración de la solución estándar.

EJEMPLO 9 Combinación de los compuestos de ejemplo de la presente invención con inhibidores de c-Met A menos de que se establezca lo contrario, los siguientes materiales y métodos aplican a los ensayos biológicos descritos en la presente. Cultivo celular y reactivos: líneas de células cancerígenas fueron cultivadas en medio DMEM o RPMI que contenía suero bovino fetal al 10%, 100 unidades/ml penicilina, 100 pg/ml estreptomicina, y 2 mM L-glutamina.

Análisis de proliferación celular La sobrevivencia celular fue determinada por el ensayo MTS.

Brevemente, las células fueron colocadas en placas en una placa de 96 pozos a 2,000-10,000 células por pozo, cultivadas por 24 horas en medio de crecimiento completo, y luego tratadas con diversos fármacos y combinaciones de fármacos por 72 horas. Se añadió MTS y se incubó por 4 horas, seguido por evaluación de la viabilidad celular usando el lector de microplacas a 570 nm. Los datos fueron normalizados con controles sin tratar y analizados con Microsoft Excel.

Los estudios descritos en la presente usaron un compuesto de fórmula I mostrado en la presente, a saber fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1 -(1-metil-1 H-pirazol-3-Hsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo, un inhibidor deB-Raf mutante V600E en combinación con un inhibidor de pequeña molécula del receptor c-Met de tirosina cinasa, (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-pirrolo [3,2,1 -ij] quinolin-1 -il)-4(1 H-indol-3-il) pirrolidina -2,5,-diona.

Un panel de 55 líneas celulares cancerígenas abarcando un espectro de genotipos y orígenes de tejido fue estudiado en ensayos de citotoxicidad de MTS de 72 h a través de un amplio intervalo de concentraciones de compuestos. Los compuestos fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-met¡l-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimid¡n-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo y (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-pirrolo [3,2,1 -ij] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il) pirrolidina -2, 5,-diona fueron configurados como en tablero de ajedrez en ilusiones de tres veces para el ensayo de MTS de 72 h.

En el presente ejemplo, se realizaron dos experimentos independientes en paralelo. Se empleó el algoritmo de Chou para calcular el índice de combinación (Cl) como se muestra a continuación.

Criterio para el índice de Combinación (Cl) Los datos de combinación de fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1 -b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo con (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-¡j] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona se muestran en el Cuadro 5. Se indica la identidad y el tejido origen de las líneas celulares cancerígenas. Los resultados muestran que la combinación de fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, -b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo con (-)-trans-3-(5,6-dihid ro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona resultó en una citotoxicidad sinérgica en muchas líneas celulares incluyendo líneas celulares NCI-H52 (NSCLC), MDA-MB-231 (mama), SNU475 (hígado) y en PC3 (próstata) y demostraron una citotoxicidad sumada en muchas otras líneas celulares.

CUADRO 1 Compuestos de ejemplo de la invención CUADRO 2 Actividad contra las líneas celulares cancerígenas para algunos compuestos de ejemplo de la invención CUADRO 3 Actividad contra líneas celulares cancerígenas para el compuesto 19 Línea celular Tipo de célula GI50 (MM) WM-266.4 Melanoma 0.13 THP-1 Leucemia monocítica aguda 10.31 KG-1a AML 11.45 KG-1 AML 30.80 SW780 Vejiga 9.10 MCF-7 Adenocarcinoma de mama 12.54 MDAMB-231 Adenocarcinoma de mama 28.17 K562 CML 9.86 COLO-205 Colon 0.25 HCT-116 Colon 6.61 SW480 Colon 8.27 DLD-1 Colon 19.00 HCT-15 Colon 23.23 RKO Carcinoma de colon 0.57 WIDR Adenocarcinoma colorrectal 20.22 SW620 Adenocarcinoma colorrectal 22.77 LS41 1 N Carcinoma colorrectal 0.31 LOVO Carcinoma colorrectal 2.17 HT29 Carcinoma colorrectal 5.03 LS174T Carcinoma colorrectal 5.90 HEC1A Endometrial 2.72 AN3CA Endometrial 20.05 HT-1080 Fibrosarcoma 26.83 Kato11 1 Carcinoma gástrico 6.11 SNU-16 Carcinoma gástrico 15.70 HEP-G2 Carcinoma hepatocelular 1.38 RT1 12 Carcinoma celular de células de 1.92 vejiga urinaria humanas RT4 Carcinoma celular de células de 10.01 vejiga urinaria humanas 786-0 Riñon 18.20 CAK1-2 Riñón 26.25 CAK1-1 Riñon 30.33 NHI-H661 Carinoma de pulmón de células 16.24 grandes NCI-H460 Carinoma de pulmón de células 19.30 grandes SK-LMS-1 Leiomiosarcoma 15.25 HEP-3B Hígado 3.16 PLC/PRF/5 Hígado 13.55 SNU475 Hígado 29.05 SK-HEP-1 Adenocarcinoma de hígado 7.22 CALU-6 Pulmón 2.97 NCI-H1993 Adenocarcinoma de pulmón 26.25 A427 Carcinoma de pulmón 3.23 NCI-H526 Carcinoma de pulmón, cáncer de 58.86 pulmón de células pequeñas NCI-H441 Adenocarcinoma papilar de pulmón 17.84 BDC Linfoblasto 32.71 SK-MEL-28 Melanoma maligno 1.70 A-375 Melanoma 0.28 CC5292 MiT 8.20 U937 Linfoma histocítico monocito 20.17 NCI-H358 cáncer de pulmón de células 7.50 pequeñas, carcinoma bronquialveolar NCI-H1299 cáncer de pulmón de células 6.38 pequeñas SK-0V-3 Ovario 13.69 HPAF-II Páncreas 5.78 ASPC-I Páncreas 6.33 PANC-I Carcinoma epiteloide de páncreas 29.72 CFPPAC-1 Adenocarcinoma de ducto de 11.88 páncreas, fibrosis quística DU145 Próstata 9.62 A375 Piel 0.30 SKMES-1 Carcinoma de células escamosas 9.02 NCI-H520 Carcinoma de pulmón de células 20.25 escamosas MKN-45 Estómago 21.42 NTERA-2 el. D1 Carcinoma embrional pluripotente de 5.32 testículos CUADRO 4 Solubilidad acuosa de los compuestos de ejemplo a pH variable CUADRO 5 Isobolograma para las combinaciones de fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2- (1 -(1 -metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperid¡n-3-ilamino)pirimidin-4-il)im¡dazof2,1 -b1oxazol-6-il)fenoxi)metilo con (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H- ??GG???G3,2,1 -?? quinolin-1 -il)-4(1 H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona Líneas celulares Origen del tejido Indice de Clasificación combinación DAMB-231 Mama 0.62 Sinergia NCI-H520 Pulmón (NSCLC) 0.72 Sinergia SNU475 Hígado 0.73 Sinergia WIDR Colon 0.76 Sinergia NCI-H1993 Pulmón (NSCLC) 0.77 Sinergia SNU-387 Hígado 0.78 Sinergia BX-PC3 Páncreas 0.84 Sinergia WM-266.4 Piel 0.85 Sinergia NCI-H661 Pulmón (NSCLC) 0.90 Aditivo S -MES- Pulmón (NSCLC) 0.91 Aditivo A549 Pulmón (NSCLC) 0.92 Aditivo NCI-H460 Pulmón (NSCLC) 0.94 Aditivo NCI-H358 Pulmón (NSCLC) 0.95 Aditivo CAK1-2 Riñón 0.95 Aditivo NCI-H526 Pulmón (NSCLC) 0.95 Aditivo SNU-16 Estómago 0.95 Aditivo SW480 Colon 0.96 Aditivo U937 Sangre 0.98 Aditivo HCT-15 Colon 0.99 Aditivo ASPC-1 Páncreas 0.99 Aditivo DU4475 Mama 1.00 Aditivo NCI-H1299 Pulmón (NSCLC) 1.02 Aditivo KN- 5 Estómago 1.03 Aditivo CCS292 Tendón 1.03 Aditivo PLC/PRF/5 Hígado 1.03 Aditivo HCT-116 Colon 1.03 Aditivo 786-0 Riñón 1.04 Aditivo HT29 Colon 1.06 Aditivo CALU-6 Pulmón (NSCLC) 1.07 Aditivo SNU398 Hígado 1.07 Aditivo HEP-3B Hígado 1.10 Aditivo PANC-1 Páncreas 1.10 Aditivo DU145 Próstata 1.10 Aditivo CAK1-1 Riñón 1.13 Aditivo THP-1 Sangre 1.17 Aditivo HT-1080 Tejido conectivo 1.17 Aditivo K562 Sangre 1.21 Antagonismo LS174T Colon 1.25 Antagonismo Kato11 1 Estómago 1.28 Antagonismo LS411 N Colon 1.30 Antagonismo SW780 Vejiga 1.32 Antagonismo A375 Piel 1.35 Antagonismo RT112 Vejiga 1.35 Antagonismo SK-OV-3 Ovario 1.37 Antagonismo SW620 Colon 1.48 Antagonismo DLD-1 Colon 1.51 Antagonismo RT4 Vejiga 1.69 Antagonismo COLO-205 Colon 1.71 Antagonismo HL-60 Sangre 1.73 Antagonismo AN3CA Utero 1.75 Antagonismo HPAF-II Páncreas 1.91 Antagonismo BDCM Pulmón 1.97 Antagonismo SK-HEP-1 Hígado 2.00 Antagonismo SK-LMS-1 Vulva 2.13 Antagonismo RKO Colon 2.75 Antagonismo Aunque la discusión anterior describe diversas modalidades ejemplo de la invención, deberá ser aparente que los expertos en la técnica pueden hacer diversas modificaciones que lograrán algunas de las ventajas de la invención sin separarse del verdadero alcance de la invención.

Claims (35)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula I, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo: en donde X es O, S(0)p¡ m es un entero de 1 a 3 ; n es un entero de 1 a 3; o es un entero de 0 a 2; p es un entero de 0 a 2; Z es hidrógeno, un enlace, -C(O)-, -C(0)NR4-, -S(0)2-; Ri es hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, -CN, -COOR4, -OR4, -NR4R5, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo inferior sustituido o no sustituido, -COOR4l o -C(O)NR4R5; cada R4 y cada R5 son independientemente hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heterociclilo sustituido o no sustituido, y R4 y R5, tomados juntos, pueden formar un anillo; R6 es independientemente seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de C1 - C8, alquilo de C1 - C8 sustituido con fluoro, cicloalquilo de C3 - Ce, cicloalquilo de C3 - Ce sustituido con fluoro, heterociclilo, heterocilico sustituido con alquilo de C - Ce, arilo, arilo sustituido con halógeno, heteroarilo sustituido con alquilo de C1 - Ce, y heteroarilo sustituido con halógeno; R7 es H o (CH20)o-P(0)OR4OR5.

2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 y R3 son hidrógeno.

3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 es hidrógeno.

4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque m + n = 4, si m no es igual a n, entonces la configuración preferida es R.

5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Z es hidrógeno, un enlace, -C(O)-, C(0)NR4-, S(0)2-¡ y R6 es heterociclilo sustituido con alquilo, o heteroarilo sustituido con alquilo.

6. - Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1 -(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piper¡din-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo [2,1 -b]tiazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-((3-(5-(2-(1-(4- clorofenilsulfonil)pipendin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo [2,1-b]tiazol-6-¡l)fenox¡)metox¡)metilo¡ fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperid¡n-4-ilamino)pirimidin-4-il)irriidazo [2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(4-cianofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de 3-(5-(2-(1-(4-fluorofenilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2 ^ b]oxazol-6-il)fenilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(ciclopropilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de ((3-(5-(2-(1 -(cicloprop¡lsulfon¡l)p¡perid¡n-4-itamino)pirimid¡n-4-il)im¡dazo[2, 1 -b]oxazol-6-il)fenoxi)metoxi)metilo; fosfato diácido de (3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-4-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo¡ fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)p¡peridin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1 -b]oxazol-6-il)fenil; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirim¡din-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo¡ fosfato diácido de (R)-((3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)piri il)¡midazo[2, 1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-¡lamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]tiazol-6-il)fenoxi)metilo; fosfato diácido de (R)-2-fluoro-5-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilam¡no)pir¡midin-4-il)imidazo[2, 1 -b]oxazol-6-il)fenilo; y fosfato diácido de (R)-(2-fluoro-5-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)im¡dazo[2 -b]ox il)fenoxi)metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. - Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenilo¡ fosfato diácido de (R)-3-(5-(2-(1-(4-clorofenilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo [2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo; y fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2, 1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. - El compuesto fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9 - Un profármaco, en donde el profármaco es hidrolizado in vivo para dar un compuesto de fórmula I como se define por la reivindicación 1 , en donde R7 es H o CH2OH después de la hidrólisis.

10. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables.

1 1. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque comprende adicionalmente un segundo agente quimioterapéutico.

12. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque dicho segundo agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de tamoxifeno, raloxifeno, anastrozol, exemestano, letrozol, cisplatina, carboplatina, paclitaxel, ciclofosfamida, lovastatina, mimosina, gemcitabina, Ara, 5-fluorouracilo, metotrexato, docetaxel, goserelina, vincristina, vinblastina, nocodazol, teniposido, etoposido, epotilona, navelbina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorubicina, epirubicina, idarubicin imatanib, gefitinib, erlotinib, sorafenib, sunitinib malato, trastuzumab, rituximab, cetuximab, y bevacizumab.

13.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el segundo agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de taxano, un inhibidor de aromatasa, una antracilcina, un fármaco dirigido a los microtúbulos, un fármaco venenoso de topoisomerasa, un anticuerpo monoclonal o poligonal dirigido, un inhibidor de una enzima o diana molecular (por ejemplo, un inhibidor de cinasa), o un fármaco análogo de citidina.

14.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el segundo agente quimioterapéutico es (-)-trans-3-(5,6-d¡hidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-1-il)-4(1H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona.

15.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el compuesto de la fórmula I es fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-metil-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilam¡no)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)met¡lo.

16. - El uso de un compuesto de fórmula I como se define por cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular en un sujeto.

17. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde las células con el trastorno proliferativo contienen ADN que codifica un RAF.

18. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde el RAF es A-RAF, B-RAF o C-RAF.

19. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el RAF es B-RAF.

20. - El uso como el que se reclama, en la reivindicación 18, en donde el B-RAF es del tipo silvestre.

21.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 18, en donde el B-RAF es un mutante.

22. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 21 , en donde el B-RAF mutante es B-RAFV600E.

23. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde las células tienen una actividad RAF consecutivamente incrementada.

24. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es una condición precancerosa.

25. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es un cáncer.

26. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es melanoma.

27.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es cánceres de tiroide papilar.

28. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es cáncer de colon.

29. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es uno de cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, cáncer de próstata, carcinoma renal, hepatoma, cáncer de cerebro, melanoma, mieloma múltiple, leucemia mielógena aguda, tumor hematológico, tumor linfoide, sarcoma, carcinoma, y adenocarcinoma.

30.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho trastorno proliferativo celular es Nevi Congénito.

31.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 16, en donde dicho medicamento está adaptado para ser administrable en combinación con un segundo agente quimioterapéutico.

32.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 31 , en donde dicho segundo agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de tamoxifeno, raloxifeno, anastrozol, exemestano, letrozol, cisplatina, carboplatina, paclitaxel, ciclofosf amida, lovastatina, minocina, gemcitabina, Ara, 5-fluorouracilo, metotrexato, docetaxel, goserelina, vincristina, vinblastina, nocodazol, teniposido, etoposido, epotilona, navelbina, camptotecina, daunorubicina, dactinomicina, mitoxantrona, amsacrina, doxorubicina, epirubicina, idarubicin imatanib, gefitinib, erlotinib, sorafenib, sunitinib malato, trastuzumab, rituximab, cetuximab, y bevacizumab.

33. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 31 , en donde dicho segundo agente quimioterapéutico es (-)-trans-3-(5,6-dihidro-4H-pirrolo[3,2,1-ij] quinolin-1-il)-4(1 H-indol-3-il)pirrolidina-2,5-diona.

34. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 32, en donde el compuestó de la fórmula I es fosfato diácido de (R)-(3-(5-(2-(1-(1-met¡l-1 H-pirazol-3-ilsulfonil)piperidin-3-ilamino)pirimidin-4-il)imidazo[2,1-b]oxazol-6-il)fenoxi)metilo.

35. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 33, en donde el cáncer es un cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer de colon o cáncer pancreático.