MX2010008024A - Profarmaco que comprende un enlazador que se puede separar por si mismo. - Google Patents

Profarmaco que comprende un enlazador que se puede separar por si mismo.

Info

Publication number
MX2010008024A
MX2010008024A MX2010008024A MX2010008024A MX2010008024A MX 2010008024 A MX2010008024 A MX 2010008024A MX 2010008024 A MX2010008024 A MX 2010008024A MX 2010008024 A MX2010008024 A MX 2010008024A MX 2010008024 A MX2010008024 A MX 2010008024A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
group
mmol
poly
prodrug according
alkyl
Prior art date
Application number
MX2010008024A
Other languages
English (en)
Inventor
Ulrich Hersel
Harald Rau
Thomas Wegge
Felix Cleemann
Silvia Kaden
Original Assignee
Ascendis Pharma As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ascendis Pharma As filed Critical Ascendis Pharma As
Publication of MX2010008024A publication Critical patent/MX2010008024A/es

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere a un profármaco o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable que comprende un conjugado D-L enlazador de fármaco, en donde -D es una porción activa biológicamente que contiene amina; y -L es una porción enlazadora no activa biológicamente -L1 representada por la fórmula (I), en donde la línea punteada indica la fijación a la amina de la porción biológicamente activa y en donde R1, R1a, R2, R2a, R3, R3a, X, X1, X2, X3 tienen el significado como se indicó en la descripción y las reivindicaciones y en donde L' está substituido con uno a cuatro grupos L2/Z y opcionalmente substituido adicionalmente, siempre que el hidrógeno marcado con el asterisco en la fórmula (I) no está reemplazado por un substituyente; en donde L2 es un enlace químico único o un espaciador; y Z es un grupo portador. La invención también se refiere a A-L, en donde A es un grupo saliente, a la composición farmacéutica que comprende los prof ármacos y a su uso como medicamentos.

Description

PROFARMACO QUE COMPRENDE UN ENLAZADOR QUE SE PUEDE SEPARAR POR SI MISMO Campo de la Invención La presente invención se refiere a un profármaco o a una sal del mismo farmacéuticamente aceptable que comprende un conjugado D-L enlazador de fármaco. La invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprende los fármacos y a su uso como medicamentos .
Antecedentes de la Invención Para mejorar las propiedades fisicoquímicas o farmacocinéticas de un fármaco in vivo, tal fármaco puede ser conjugado con un portador.
Típicamente, los portadores en el suministro del fármaco son utilizados ya sea de un modo no covalente, con el fármaco formulado f isicoquímicamente en una mezcla del solvente-portador, o por fijación covalente de un reactivo portador a uno de los grupos funcionales del fármaco.
Sin embargo, el método no covalente requiere una encapsulación del fármaco altamente eficiente para prevenir la liberación del tipo de estallido, no controlada, del fármaco. La restricción de la difusión de una molécula del fármaco soluble en agua, no unida, requiere fuertes contactos Ref.212782 de van der Waals, mediadas frecuentemente por medio de las porciones hidrofóbicas . Muchos fármacos sensibles conformacionalmente , tales como las proteínas o los péptidos, se vuelven disfuncionales durante el proceso de encapsulacion y/o durante el almacenamiento subsiguiente del fármaco encapsulado. Además, tales fármacos que contienen amino padecen fácilmente reacciones secundarias con los productos de degradación del portador (véase, por ejemplo, D.H. Lee et al., J. Contr. Reí., 2003, 92, 291-299). Además, la dependencia del mecanismo de liberación del fármaco durante la biodegradación puede provocar una variabilidad interpaciente .
Alternativamente, los fármacos pueden ser conjugados con un portador por medio de los enlaces covalentes. Este método es aplicado a varias clases de moléculas, a partir de las así llamadas moléculas pequeñas por medio de productos naturales hasta las proteínas más grandes. Los conjugados del portador del fármaco covalente pueden ser divididos en dos grupos. En primer lugar, los conjugados, en donde el enlace covalente entre el portador y el fármaco está presente en su mayoría durante la acción del fármaco ("enlace covalente permanente"), es decir un derivado del fármaco exhibe sus efectos farmacológicos como es conocido para el fármaco como tal. En segundo lugar, el enlace covalente es separado previamente en su mayoría para la liberación del fármaco como tal, el cual puede exhibir sus efectos farmacológicos conocidos. En este último caso, el conjugado del portador del fármaco covalente es llamado el profármaco enlazado al portador o el profármaco del portador.
Para asegurar la separación del enlace covalente entre el portador y el fármaco, se requiere una remoción facilitada del enlace in vivo para liberar el fármaco (activación del profármaco) .
La activación del profármaco puede ocurrir por la separación enzimática o no enzimática del enlace entre el portador y la molécula del fármaco, o una combinación consecutiva de ambos, es decir una etapa enzimática seguida por un rearreglo no enzimático.
La activación del profármaco inducida enzimáticamente está caracterizada porque la separación en el medio ambiente in vitro libre de enzima tal como una solución amortiguadora acuosa, de, por ejemplo, un éster o una amida puede ocurrir, pero la velocidad correspondiente de la hidrólisis puede ser mucho muy lenta y no terapéuticamente útil. En un medio ambiente in vivo, las esterasas o amidasas están presentes típicamente y las esterasas y amidasas pueden provocar una aceleración catalítica significativa de las características cinéticas de la hidrólisis desde dos veces hasta varias ordenes de magnitud. Por lo tanto, la separación es controlada predominantemente por la reacción enzimática.
Una desventaja principal de la separación enzimática predominantemente es la variabilidad interpaciente. Los niveles de la enzima pueden diferir significativamente entre los individuos conduciendo a una variación biológica de la activación del profármaco por la separación enzimática. Los niveles de la enzima puede variar también dependiendo del sitio de administración. Por ejemplo, ya se sabe que en el caso de la inyección subcutánea, ciertas áreas del cuerpo producen efectos terapéuticos más predecibles que otros. Para reducir este efecto impredecible , la catálisis intramolecular o la separación no enzimática es de interés particular.
Por lo tanto, la separación autocatalítica independiente de la enzima, del portador y la porción biológicamente activa, es preferida. En la mayoría de los casos, esto se logra por una porción enlazadora diseñada apropiadamente entre el portador y la porción activa biológicamente, que está fijada directamente al grupo funcional de una porción activa biológicamente por medio de un enlace covalente.
Los tipos específicos del enlazador ya son conocidos en el arte. Y. Sohma et al., J. Med. Chem 46 (2003), 4124- 4135 describe profármacos basados en esteres, en donde el portador es soluble en agua y la porción activa biológicamente se deriva del inhibidor KNI-727 de la proteasa de VIH-1. El enlazador utilizado se fija a la porción activa biológicamente por medio del grupo de éster. El mecanismo de este sistema de profármacos es la activación-ciclización por la formación de la imida cíclica para la separación de los enlaces de éster.
Sin embargo, esto es desventajoso a causa de la estabilidad del grupo funcional de éster. Además, los grupos de éster pueden ser menos direccionales quimioselectivamente para la conjugación del portador o el enlazador y el fármaco.
A. J. Garman et al. (A.J. Garman, S.B. Kalindjan, FEBS Lett. 1987, 223 (2), 361-365 1987) utiliza PEG5000-anhídrido maleico para la modificación reversible de los grupos amino en el activador del plasminógeno del tipo del tejido y la urocinasa. La regeneración de la enzima funcional a partir del conjugado de PEG-uPA durante la incubación a pH 7.4 del amortiguador por la separación del linaje del ácido maleamico sigue una reacción cinética de primer orden con una vida media de 6.1 h. Una desventaja del ácido maleamico es la falta de estabilidad del conjugado a valores de pH inferiores. Esto limita la aplicabilidad del enlace del ácido maleamico a los agentes activos biológicamente que son estables a valores de pH básicos (elevados) , porque la purificación del conjugado polimérico del agente activo biológicamente tiene que ser efectuada bajo condiciones básicas (pH elevado) para prevenir la separación del profármaco prematuro.
En WO-A 2004/108070 el sistema de profármacos basado en el enlazador de la N, -bis- (2-hidroxietil ) glicina amida (bicina) es descrito. En este sistema, dos moléculas portadoras de PEG están enlazadas a una molécula de bicina unida a un grupo amino de la molécula del fármaco. Las primeras dos etapas en la activación del profármaco es la separación enzimática de los primeros enlaces que conectan ambas moléculas portadoras de PEG con los grupos hidroxi del grupo de activación de la bicina. Diferentes enlaces entre PEG y la bicina se describen conduciendo a diferentes características cinéticas de activación del profármaco. La segunda etapa en la activación del profármaco es la separación del segundo enlace que conecta el grupo de activación de la bicina al grupo amino de la molécula del fármaco. Esta desventaja principal de este sistema es la conexión del polímero al enlazador de bicina conduciendo a una velocidad lenta de la hidrólisis de este segundo enlace de bicina amida (tl/2 > 3 h en el amortiguador de fosfato) . En consecuencia, la liberación de un compuesto intermedio del profármaco modificado con bicina puede mostrar diferentes propiedades farmacocinéticas , inmunogénicas , toxicológicas y farmacodinámicas , cuando se compara con la molécula del fármaco natural original .
Otro sistema a base de bicina se describe en WO-A 2006/136586.
En consecuencia, existe la necesidad de profármacos enlazados al portador, alternativos, en donde el enlazador permita una separación autocatalítica para liberar un fármaco en una forma no modificada sin que permanezcan residuos que se originan desde el enlazador.
Breve Descripción de la Figura La figura 1 muestra los datos de la separación in vitro del enlazador de 13b, en donde las características de separación in vivo (triángulos) e in vitro (diamantes) son mostradas por representación semilogarítmica .
Descripción Detallada de la Invención Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proporcionar tales conjugados del enlazador del fármaco, en donde el enlazador está fijado covalentemente por medio de un enlace separable a una porción biológicamente activa (que representa el fármaco después de la liberación) , y en donde el enlazador está fijado además de manera covalente por medio de un enlace permanente a un portador directamente o por medio de un espaciador para formar el profármaco enlazado al portador.
Este objeto es logrado por un profármaco o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable que comprende un conjugado D-L enlazador de fármaco, en donde -D es una porción activa biológicamente que contiene nitrógeno; y -L es una porción enlazadora no activa biológicamente -L1 representada por la fórmula (I), en donde la línea punteada indica la fijación al nitrógeno de la porción biológicamente activa por la formación de un enlace de amida; X es C(RRa); N(R4); 0; C (R4R4a) -C (R5R5a) ; C(R5R5a)-C(R4Ra); C (RR4a) -N (R6) ; N (R6) -C (R4R4a) ; C(RR4a)-0; O 0-C (RR4a) ; XI es C; o S (0) ; X2 C(R7,R7a); o C(R7,R7a) -C(R8,R8a) ; X3 es 0; S; O -N-CN; Dl Dla ?2 D2a -,3 D3a D4 D4a D5 D5a D6 D7 D7a R8, R8a son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; y alquilo de Ci-4; opcionalmente , uno o más de los pares de Rla/R4a, Rla/R5a, Ra/R5a, R7a/R8a forman un enlace químico; opcionalmente, uno o más de los pares de R1/Rla, R2/R A/ R4/R4A, R5A/R5A, R7/R7A, R8/R8A están unidos junto con el átomo al cual los mismos están fijados para formar un cicloalquilo de C3-7; o un heterociclilo de 4 a 7 elementos ; opcionalmente, R4/R6 están unidos junto con los átomos a los cuales los mismos están fijados para formar un heterociclilo de 4 a 7 elementos saturado; opcionalmente, uno o más de los pares de R R5, R1/R6, R4/R5, R4/R6, R7/R8, R2/R3 están unidos junto con los átomos a los cuales los mismos están fijados para formar un anillo A; opcionalmente, R3/R3A están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos; A se selecciona del grupo que consiste de fenilo; natfilo indenilo; indanilo; tetralinilo ; cicloalquilo de C3-C10; heterocicliclo de 4 a 7 elementos, y heterobiciclilo de 9 a 11 elementos; y en donde L1 está substituido con uno a cuatro grupos L2/Z y opcionalmente substituido adicionalmente, siempre que el hidrógeno marcado con el asterisco en la fórmula (I) no está reemplazado por un substituyente; en donde L2 es un enlace químico único o un espaciador; y Z es un grupo portador.
Se encontró sorprendentemente que el alcance de la ciclización/activación por la formación de la imida cíclica puede ser extendida desde el éster hasta los productos de amida enlazados al portador, uniformes, a pesar de la estabilidad mucho más grande del enlace de amida bajo las condiciones acuosas. Se observó que las ?,?' -biscarboxamidas enlazadas a una porción que lleva un nucleofilo por medio de un enlace de amida y a la molécula del fármaco por medio del segundo enlace de amida exhibe la autohidrólisis en un intervalo que es útil para aplicaciones de profármacos. Además, se descubrió que los enlazadores pueden ser diseñados de modo que incluyan un portador fijado permanentemente a la porción de N, N' -biscarboxamida de tal modo que la formación de la imida cíclica pueda ser empleada como un principio de auto-activación en el diseño del profármaco de amida enlazado al portador.
Los ejemplos de tales productos de separación cíclica preferidos son estructuras del anillo de succinimida o de glutarimida substituidos. El pre-requisito para tal activación de la ciclización es la presencia de un nucleofilo que contiene amina en la estructura del enlazador y otro enlace de amida que no es el enlace del profármaco de amida sino un enlace de amida substituido con un átomo de hidrógeno .
En el caso de la separación del profármaco activado con succinimida o glutarimida, el nucleofilo que contiene la amina sirve como un grupo cercano para mejorar la nucleofilicidad del nitrógeno contenido en el enlace de amida permanente que a su vez ataca al grupo de carbonilo de la amida del profármaco y en consecuencia induce la acilación intramolecular del enlace de amida permanente que genera el anillo de imida cíclico.
Por lo tanto, las estructuras del enlazador preferidas comprenden un enlace permanente a un portador, un nucleófilo que contiene amina, y un enlace de amida permanente con un hidrógeno fijado al nitrógeno del enlace de amida. Los profármacos enlazados al portador, correspondientes, comprenden un enlazador que contiene un enlace permanente a un portador, un nucleófilo que contiene una amina y el enlace de amida permanente, y una porción activa biológicamente que contiene el nitrógeno, derivada del fármaco conjugado con respecto al enlazador por medio de un enlace de amida separable.
Enseguida se muestra un ejemplo de la separación resultante en una imida cíclica. El nitrógeno de la porción biológicamente activa es mostrado como una amina que contiene hidrógeno, que conduce a un fármaco que tiene un grupo funcional de amina primaria. Sin embargo también, por ejemplo, una amina secundaria puede ser parte del fármaco. Para razones de simplificación, uno a cuatro subst ituyentes obligatorios L2-Z que incluyen el portador no son mostrados .
Las propiedades preferidas del profármaco son provistas por una vida media de la hidrólisis en el amortiguador acuoso a pH 7.4 y 37 °C entre 1 h y 3 meses; velocidades semejantes de hidrólisis bajo las condiciones fisiológicas en el amortiguador y el plasma.
El profármaco de acuerdo con la presente invención puede mostrar una excelente correlación in vivo/in vitro de la separación del enlazador, un alto grado de independencia de la enzima y puede ser almacenado a pH inferior (separación dependiente del pH) .
Dentro del significado de la presente invención, los términos son utilizados como sigue.
"Porción D activa biológicamente" significa la parte del conjugado enlazador de fármaco, que resulta después de la separación en un fármaco D-H de una actividad biológica conocida .
"Enlazador no activo" significa un enlazador que no muestra los efectos farmacológicos del fármaco derivado del agente biológicamente activo.
"Alquilo" significa una cadena de carbonos ramificada o una cadena recta. Cada hidrógeno de un carbono del alquilo puede ser reemplazado por un subst ituyente .
"Alquilo de C1-4" significa una cadena de alquilo que tiene 1-4 átomos de carbono, por ejemplo si está presente al final de la molécula: metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, o por ejemplo -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2- , -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-, cuando dos porciones de la molécula están enlazadas por el grupo alquilo. Cada hidrógeno de un carbono del alquilo de Ci-4 puede ser reemplazado por un substituyente .
"Alquilo de Ca-6" significa una cadena de alquilo que tiene 1-6 átomos de carbono, por ejemplo si está presente al final de una molécula: alquilo de Ci-4f metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, n-pentilo, n-hexilo, o por ejemplo -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, - CH2 - CH2 - CH2 - , -CH(CaHs) -f -C(CH3)2-, cuando dos porciones de una molécula están enlazadas por el grupo alquilo. Cada hidrógeno de un carbono del alquilo de Ci-5 puede ser reemplazado por un substituyente .
En consecuencia, "alquilo de Ci-i8" significa una cadena de alquilo que tiene 1 a 18 átomos de carbono y "alquilo de C8-i8" significa una cadena de alquilo que tiene 8 a 18 átomos de carbono. En consecuencia, "alquilo de Ci-50" significa una cadena de alquilo que tiene 1 a 50 átomos de carbono .
"Alquenilo de C2-50" significa un alquenilo ramificado o no ramificado que tiene 2 a 50 átomos de carbono, por ejemplo, si está presente al final de una molécula: -CH2=CH2, -CH=CH-CH3( -CH2-CH=CH2, -CH=CH-CH2-CH3( -CH=CH-CH=CH2 , o por ejemplo -CH=CH-, cuando dos porciones de la molécula están enlazadas por el grupo alquenilo. Cada hidrógeno de un carbono de alquenilo de C2 -5o puede ser reemplazado por un subst ituyente como se específica adicionalmente . En consecuencia, el término "alquenilo" se refiere a una cadena de carbonos con al menos un doble enlace de carbono - carbono . Opc ionalmente , pueden estar presentes uno o más triples enlaces .
Alquinilo de C2-50" significa una cadena de alquinilo ramificada o no ramificada que tiene 2 a 50 átomos de carbono, por ejemplo si está presente al final de una molécula: -C=CH, -CH2-C=CH, CH2-CH2=C-CH, CH2-C=C-CH3 o por ejemplo -C=C- cuando dos porciones de la molécula están enlazadas por el grupo alquinilo. Cada hidrógeno de un carbono del alquinilo de C2 -5o puede ser reemplazado por un subst ituyente como se especifica adicionalmente. En consecuencia, el término "alquinilo" se refiere a una cadena de carbonos con al menos un triple enlace de carbono - carbono . Opc ionalmente , pueden estar presentes dos o más dobles enlaces .
"Cicloalquilo de C3-7" o "anillo de cicloalquilo de C3-7" significa una cadena de alquilo cíclico que tiene 3 a 7 átomos de carbono, que puede tener dobles enlaces de carbono - carbono que están saturados al menos parcialmente, por ejemplo ciclopropilo , ciclobutilo, cic lopent i lo , ciclohexilo, c iclohexeni lo , cicloheptilo . Cada hidrógeno de un carbón del cicloalquilo puede estar reemplazado por un subst ituyente . El termino "cicloalquilo de C3_7" o "anillo de cicloalquilo de C3-7" también incluye biciclos unidos por un puente semejantes al norbonano o norborneno . En consecuencia, "cicloalquilo de C3-5" significa un cicloalquilo que tiene 3 a 5 átomos de carbono .
En consecuencia, "cicloalquilo de C3-i0" significa un alquilo cíclico que tiene 3 a 10 átomos de carbono, por ejemplo cicloalquilo de C3-7, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentiló, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo. El término "cicloalquenilo de C3-i0" también incluye carbomono- y -biciclos saturados al menos parcialmente.
"Halógeno" significa fluoro, cloro, bromo o yodo. Se prefiere en general que el halógeno sea el fluoro o cloro.
"Heterociclilo de 4 a 7 elementos" o "heterociclo de 4 a 7 elementos" significa un anillo con 4, 5, 6 ó 7 átomos del anillo que puede contener hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que está saturado totalmente, parcialmente o que está insaturado) en donde al menos un átomo del anillo de hasta 4 átomos del anillo está reemplazado por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste de azufre (incluyendo -S(0)-, -S(0)2-), oxígeno y nitrógeno (incluyendo =N(0)-) y en donde el anillo está enlazado al resto de la molécula por medio de un átomo de carbono o de nitrógeno. Los ejemplos para un heterociclo de 4 a 7 elementos son azetidina, oxetano, tietano, furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, imidazol, imidazolina, pirazol, pirazolina, oxazol, oxazolina, isoxazol, isoxazolina, tiazol, tiazolina, isotiazol, isotiazolina , tiadiazol, tiadiazolina , tetrahidrofurano , tetrahidrotiofeno , pirrolidina, imidazolidina, pirazolidina , oxazolidina, isoxazolidina, tiazolidina, isotiazolidina, tiadiazolidina, sulfolano, pirano, dihidropirano , tetrahidropirano , imidazolidina, piridina, piridazina, pirazina, pirimidina, piperazina, piperidina, morfolina, tetrazol, triazol, triazolidina, tetrazolidina, diazepan, azepina u homopiperazina .
"Heterobiciclilo de 9 a 11 elementos" o "heterobiciclo de 9 a 11 elementos" significa un sistema heterocíclico de dos anillos con 9 a 11 átomos del anillo, en donde al menos un átomo del anillo es compartido por ambos anillos y que pueden contener hasta el número máximo de dobles enlaces (anillo aromático o no aromático que está saturado totalmente, parcialmente, o que está insaturado) en donde al menos un átomo del anillo de hasta 6 átomos del anillo está reemplazado por un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste de azufre (incluyendo -S(0)-, -S(0)2-), oxígeno y nitrógeno (incluyendo =N(0)-) y en donde el anillo está enlazado al resto de la molécula por medio de un átomo de carbono o nitrógeno. Los ejemplos para un heterobiciclo de 9 a 11 elementos son el indol, indolina, benzofurano, benzotiofeno , benzoxazol, bencisoxazol , benzotiazol, bencisotiazol , bencimidazol , bencimidazolina, quinolina, quinazolina, dihidroquinazolina , quinolina, dihidroquinolina, tetrahidroquinolina, decahidroquinolina, isoquinolina , decahidroisoquinolina, tetrahidroisoquinolina, dihidroisoquinolina , benzacepina, purina o pteridina. El término heterobiciclo de 9 a 11 elementos también incluye las estructuras de espiro de dos anillos semejantes al 1 , 4 -dioxa- 8 -azaespiro [4.5] decano o los heterociclos unidos por un puente semejantes al 8-aza-biciclo[3.2.1] octano .
En el caso de que los compuestos de acuerdo con la fórmula (I) contengan uno o más grupos ácidos o básicos, la invención también comprende sus sales aceptables farmacéutica o toxicológicamente correspondientes, en particular sus sales utilizables farmacéuticamente. Así, los compuestos de la fórmula (I) que contienen grupos ácidos pueden ser utilizados de acuerdo con la invención, por ejemplo, como sales de metales alcalinos, sales de metales alcal inotérreos o como sales de amonio. Los ejemplos más precisos de tales sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoniaco o aminas orgánicas tales como, por ejemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina o aminoácidos. Los compuestos de la fórmula (I) que contienen uno o más grupos básicos, es decir grupos que pueden ser protonados, pueden estar presentes y pueden seer utilizados de acuerdo con la invención en la forma de sus sales de adición con los ácidos orgánicos o inorgánicos. Los ejemplos de los ácidos adecuados incluyen cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico , ácido p-toluensulfónico , ácido naftalenodisulfónico , ácido oxálico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético , ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido feni lpropiónico , ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico, y otros ácidos conocidos por la persona experta en el arte. Si los compuestos de la fórmula (I) contienen simultáneamente grupos ácidos y básicos en la molécula, la invención también incluye además de las formas de la sal mencionadas, sales internas o betaínas ( zwitteriones ) . Las sales respectivas de la fórmula (I) pueden ser obtenidas por los métodos acostumbrados que son conocidos por la persona experta en el arte semejante, por ejemplo poniendo en contacto éstos con un ácido o base orgánica o inorgánica en un solvente o dispersante, o por intercambio aniónico o intercambio catiónico con otras sales. La presente invención también incluye todas las sales de los compuestos de la fórmula (I) las cuales, debido a su compatibilidad fisiológica baja, no son directamente adecuadas para su uso en substancias farmacéuticas pero que pueden ser utilizadas, por ejemplo, como compuestos intermedios para las reacciones químicas o para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables.
El término "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora tal como EMEA (Europa) y/o la FDA (US) y/o cualquier otra agencia reguladora nacional para su uso en animales, preferentemente en seres humanos .
"Composición farmacéutica" significa uno o más ingredientes activos, y uno o más ingredientes inertes, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación, formación de un complejo o agregación de cualesquiera dos o más de los ingredientes, o de la disociación de uno o más de los ingredientes, o de otros tipos de reacciones o interacciones de uno o más de los ingredientes. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas de la presente invención abarcan cualquier composición hecha mezclando un compuesto de la presente invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable (portador farmacéuticamente aceptable) .
El término "excipiente" se refiere a un diluyente, adyuvante, o vehículo con el cual la substancia terapéutica es administrada. Tal excipiente farmacéutico puede ser un líquido estéril, tal como el agua y aceites, incluyendo aquellos del petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, incluyendo pero sin estar limitado a aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de sésamo y semejantes. El agua es un excipiente preferido cuando la composición farmacéutica sea administrada oralmente. La solución salina y la dextrosa acuosa son excipientes preferidos, cuando la composición farmacéutica es administrada intravenosamente. Las soluciones salinas y la dextrosa acuosa y las soluciones de glicerol son empleadas preferentemente como excipientes líquidos para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y semejantes. La composición, si se desea, también puede contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes amortiguadores del pH . Estas composiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida y semejantes. La composición puede ser formulada como un supositorio, con los aglutinantes y excipientes tradicionales tales como glicéridos. La formulación oral puede incluir excipientes estándares tales como los grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Los ejemplos de los excipientes farmacéuticamente adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" por E.W. Martin. Tales composiciones contendrán una cantidad terapéuticamente efectiva de la substancia terapéutica, preferentemente en la forma purificada, junto con una cantidad adecuada del excipiente para proporcionar la forma para la administración apropiada al paciente. La formación debe seguir el modo de administración.
Preferentemente, X3 es 0.
Preferentemente, X es N(R4) , X1 es C y X3 es 0.
Preferentemente, X2 es C(R7R7a) .
Preferentemente, L1 se selecciona del grupo que consiste de: ?? en donde R es H; o alquilo de Ci-4; Y es NH; O; o S ; y R1, Rla, R2, R2a, R3, R3a, R4, X, X1, X2 tienen el significado como se indicó anteriormente.
Se prefiere aún más en donde L1 se selecciona del grupo que consiste de ?? ?? ?? en donde R tiene el significado que se indicó anteriormente.
Al menos uno (hasta cuatro) hidrógeno (s) está(n) reemplazado (s) por un grupo L2-Z. En el caso de que más de un grupo L2-Z esté presente, cada L2 y cada Z pueden ser seleccionados independientemente. Preferentemente, solamente un grupo L2-Z está presente conduciendo a la fórmula D-lZ-I^-Z.
En general, L2 puede estar fijado a L1 en cualquier posición alejada del reemplazo del hidrógeno marcado con un asterisco en la fórmula (I) . Preferentemente, uno a cuatro de los hidrógenos provistos por R, R1 hasta R8 directamente o como el hidrógeno del alquilo de C1-4 o grupos y anillos adicionales provistos por la definición de R y R1 hasta R8 están reemplazados por L2-Z.
Además, L1 puede estar substituido opcionalmente de manera adicional. En general, cualquier substituyente puede ser utilizado siempre que el principio de separación no sea afectado .
Preferentemente, uno o más substituyentes opcionales adicionales son seleccionados independientemente del grupo que consiste de halógeno; CN; COOR9; OR9; C(0)R9; C (O) N (R9R9a) ; S (0)2N(R9R9a) ; S(0)N(R9R9a) ; S(0)2R9; S(0)R9; N (R9) S (0) 2N (R9aR9b) ; SR9; N(R9R9a); N02 ; OC(0)R9; N (R9) C (O) R9a; N (R9) S (O) 2R9a; N(R9)S(0)R9a; N(R9)C(0)OR9a; N (R9) C (0) N (R9aR9b) ; OC (O) N (R9R9a) ; T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50; o alquinilo de C2-50, en donde T; alquilo de C1-50; alquenilo de C2- 50 , Y alquinilo de C2-50 están substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50; y alquinilo de C2-50 están interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -O- ; -C(0)-; -C (0) N (R11) - ; -StO NCR11) -; -SCOWR11) -; -S(0)2-; -S(0)-; -N(R1:l)S(0)2N(Rlla) -; -S-; -N (R11) - ; -0C(0)Ru; -N (R11) C (0) - ; -N(R11)S(0)2-; -N(R11)S(0) -; -N (R11) C (0) 0- ; -N (R11) C (0) N (Rlla) - ; y -0C(0)N(R RUa) -; R9, R9a, R9b son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; T; y alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-so, o alquinilo de C2-5o; en donde T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-so; y alquinilo de C2-50, son substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50, o alquinilo de C2- 50 , son interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -0-; -C(0)-; -C (0) N (R11) - ; -S (0) 2N (R11) - ; -S(0)N(Rn) -; -S(0)2-; -S(0)-; -N (R11) S (0) 2N (Rlla) - ; -S- ; -N (R11) - ; -OCfOjR11; -N (R11) C (O) - ; -N (R11) S (0) 2- ; -N (R11) S (O) - ; -N(Rn)C(0)0-; -N(R )C(0)N(Rlla) -; y -0C (0) N (R^R113) - ; T se selecciona del grupo que consiste de fenilo; naftilo; indenilo; indanilo; tretralinilo ; cicloalquilo de C3-C10; heterocicliclo de 4 a 7 elementos, o heterobiciclilo de 9 a 11 elementos, en donde T está substituido opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes .
R10 es halógeno; CN; oxo (=0); COOR12 ; OR12; C(0)R12; C(0)N(R12R12a) ; S(0)2N(R12R12a) ; S (0) N (R12R1 a) ; S(0)2R12; S(0)R12; N(R12)S(0)2N(R12aR12 ) ; SR1 ; N(R12R12a); N02 ; 0C(0)R12; N(R12)C(0)R12a; N(R12)S(0)2R12a; N (R12) S (O) R12a; N (R1 ) C (O) 0R1 a; N(R1 )C(0) (R12aR12b) ; OC (0) N (R12R12a) ; o alquilo de C1-6; en donde alquilo de Ci-6 está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes.
R11, Rlla, R12, R12a, R12 son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; o alquilo de Ci-6, en donde alquilo de Ci_6 está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes.
El término "interrumpido" significa que un grupo está insertado entre dos carbonos o al final de la cadena de carbonos entre el carbono y el hidrógeno.
L2 es un enlace químico único o un espaciador. En el caso de que L2 sea un espaciador, es definido preferentemente como uno o más substituyentes opcionales definidos anteriormente, siempre que L2 esté substituido con Z.
En consecuencia, cuando L2 sea otro que un enlace químico único, L2-Z es COOR9; OR9; C(0)R9; C (0) N (R9R9a) ; S (0)2N(R9R9a) ; S(0)N(R9R9a) ; S(0)2R9; S(0)R9; N (R9) S (0) 2N (R9aR9b) ; SR9; N(R9R9a); OC(0)R9; N (R9) C (0) R9a; N (R9) S (0) 2R9a ; N (R9) S (0) R9a; N(R9)C(0)OR9a; N (R9) C (O) N (R9aR9b) ; OC (0) N (R9R9a) ; T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50, o alquinilo de C2-so en donde T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50, y alquinilo de C2-50 están substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50; y alquinilo de C2-50 están interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -0-; -C(0)-; -C (0) N (R11) - ; -S (0) 2N (R11) - ; -S(0)N(Ru)-; -S(0)2-; -S(0)-; -N (R11) S (0) 2N (Rlla) - ; -S- ; -N (R11) - ; -0C(0)Rn; -N (R11) C (0) - ; -N (R11) S (0) 2- ; -N (R11) S (0) - ; -N (R11) C (0) 0- ; -N(R11)C(0)N(Rlla) - ; y -0C (0) N (R11Rlla) - ; R9, R9a, R9b son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; Z; T; y alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50 o alquinilo de C2-50; en donde T; alquilo de Ci-50 alquenilo de C2-50; y alquinilo de C2.50, son substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de C1-50; alquenilo de C2-50, y alquinilo de C2-50, son interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -0-; -C(0)-; -C (0) N (R11) - ; -S (0) 2N (R11) - ; -S(0)N(Rn)-; -S(0)2-; -S(0)-; -N (R11) S (0) 2N (Rlla) - ; -S-; -N (R11) - ; -OCÍOÍR11; -N (R11) C (0) - ; -N (R11) S (0) 2- ; -N (R11) S (0) - ; -N(R1:L)C(0)0-; -N(R11)C(0)N(Rlla) -; y -0C (0) N (RxlRlla) ; T se selecciona del grupo que consiste de fenilo; naftilo; indenilo; indanilo; tretralinilo ; cicloalquilo de C3-C10; heterocicliclo de 4 a 7 elementos; o heterobiciclilo de 9 a 11 elementos, en donde t está substituido opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes ; R10 es Z; halógeno; CN; OXO (=0); C00R12; 0R12 ; C (0) R1 ; C (0) N (R12R12a) ; S (0) 2N (R12R12a) ; S (0) N (R12R12a) ; S (0) 2R12 ; S(0)R12; N(R12)S (0) 2N(R1 aR12b) ; SR1 ; N(R12R12a); N02 ; OC(0)R12; N (R12) C (0) R12a; N(R12)S(0)2R12a; N (R12) S (0) R12a; N (R12) C (0) 0R1 a; N(R12)C(0) (R12aR12b) ; OC (0) (R12R12a) ; o alquilo de C1-6; en donde alquilo de Ci-6 está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes; R11, Rlla, R12, R12a, R12b son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; Z; o alquilo de Ci-6, en donde alquilo de Ci-6 está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes ; siempre que uno de R9 , R9a, R9b, R10, R11, Rlla, R12 , R12a, R12b sea Z.
Más preferentemente, L2 es una cadena de alquilo de Ci-20/ que está interrumpido opcionalmente por uno o más grupos seleccionados independientemente de -0-; y C (O) N (R3aa) ; substituido opcionalmente con uno o más grupos seleccionados independientemente de OH; y C (0) N (R3aaR3aaa) ; y en donde R3aa, R3aaa son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; y alquilo de C1-4.
Preferentemente, L2 tiene un peso molecular en el intervalo desde 14 g/mol hasta 750 g/mol.
Preferentemente, L2 está fijado a Z por medio de un grupo terminal seleccionado de En el caso de que L2 tenga tal grupo terminal, adicionalmente se prefiere que L2 tenga un peso molecular en el intervalo desde 14 g/mol hasta 500 g/mol calculado sin tal grupo terminal .
Preferentemente, L está representado por la fórmula (la) en donde R4 , L2 , y Z tienen el significado como se indicó anteriormente, y en donde R3a , R3aaa son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H ; y alquilo de Ci-4, o están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos. Preferentemente, R4 es H; o metilo.
Preferentemente, L está representado por la fórmula (Ib) en donde R1, Rla, R4, L2 y Z tienen el significado como se indicó anteriormente, y en donde R3aa es H; o alquilo de Ci-4. Preferentemente, R4 es H o metilo.
Preferentemente, R1 en la fórmula (I) es L2-Z.
Preferentemente, R3 en la fórmula (I) es L2-Z.
Preferentemente, R3, R3a en la fórmula (I) están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos, en donde el heterociclo está substituido con L2-Z.
Preferentemente, D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas o un biopolímero.
Preferentemente, D-H es un biopolímero seleccionado del grupo de biopolímeros que consiste de proteínas, polipéptidos , oligonucleótidos , y ácidos nucleicos de péptidos.
"Oligonucleótidos" significan ya sea ADN, AR , de una sola hebra o de doble hebra, ARNsi, AR mi , aptámeros, y cualesquiera modificaciones químicas de los mismos preferentemente con 2 a 1000 nucleótidos. Las modificaciones incluyen, pero no están limitadas a, aquellas que proporcionan otro grupos químicos que incorporan una carga adicional, polarizabilidad, unión de hidrógeno, interacción electrostática, y capacidad de fluidez a las bases de los ligandos de ácido nucleico o al ligando del ácido nucleico como un todo. Tales modificaciones incluyen, pero no están limitadas a, las modificaciones del azúcar en la posición 2', las modificaciones de pirimidina en la posición 5, las modificaciones de purina en la posición 8, las modificaciones en aminas exocíclicas, la substitución de 4 -tiouridina, la substitución de 5-bromo o 5 -yodo-uracilo ; las modificaciones de los soportes, metilaciones , combinaciones de pares base inusuales tales como isobases de isocitidina e isoguanidina y sémejantes. Las modificaciones también pueden incluir las modificaciones 3' y 5' tales como la coronación en los extremos y el cambio de estereoquímica.
Preferentemente, D-H es un polipéptido seleccionado del grupo de polipéptidos que consisten de ACTH, adenosina desaminasa, agalsidasa, alfa-1 antitripsina (AAT) , el inhibidor de la alfa-1 proteinasa (API) , alteplasa, amilinas (amilina, simlina) , anistreplasa , serina proteasa de ancrod, anticuerpos (monoclonales o policlonales , y fragmentos o fusiones), antitrombina III, antitripsinas, aprotinina, asparaginasas , atosiban, bifaliña, bivaluridina, proteínas morfogénicas de los huesos, inhibidor de la tripsina pancreática del bovino (BPTI) , fragmentos de caderina, calcitonina (del salmón) , colagenasa, inhibidor de la esterasa del complemento Cl, conotoxinas, fragmentos del receptor de citoquina, DNasa, dinorfina A, endorfinas, enfuvirtida, encefalinas, eritropoyetinas, exendinas, factor VII, factor Vlla, factor VIII, factor Villa, factor IX, fibrinolisina, factor del crecimiento de fibroblastos (FGF) el péptido de liberación de la hormona del crecimiento 2 (GHRP2), proteínas de fusión, hormonas estimulantes de los folículos, gramicidina, grelina, desacil-grelina, factor estimulante de la colonia de granulocitos (G-CSF) , galactosidasa , glucagon, péptidos semejantes al glucagon, glucocerebrosidasa , factor estimulante de la colonia de macrófagos de los granulocitos (GM-CSF) , proteínas para el choque térmico humano (HSP) , la proteína de activación de la fosfolipasa (PLAP) , gonadotropina coriónica (hCG) , hemoglobinas, vacunas contra la hepatitis B, hirudina, el inhibidor de la serina proteasa humana, hialuronidasas , idurnonidasa, globulinas inmunitarias, vacunas contra la influenza, interleucinas (1 alfa, 1 beta, 2, 3, 4, 6, 10, 11, 12, 13, 21), el antagonista del receptor de IL-1 (rhIL-la) , insulinas, factores del crecimiento semejantes a la insulina, la proteína de aglutinación del factor de crecimiento semejante a la insulina (rhIGFBP) , interferones (alfa 2a, alfa 2b, alfa 2c, beta la, beta Ib, gamma la, gamma Ib), la molécula de adhesión intracelular, el factor del crecimiento de los queratinocitos (KGF) , el ligando de la glucoproteína de P-selectina (PSGL) , factores de crecimiento de transformación, lactasa, leptina, leuprolida, levotiroxina, hormona luteinizante , vacuna contra la enfermedad de Lyme, péptidos natriuréticos (A P, BNP, CNP y fragmentos) , el neuropéptido Y, pancrelipasa, polipéptido pancreático, papaína, hormona paratiroidea; PGDF, pepsina, el péptido YY, la acetilhidrolasa del factor de activación de las plaquetas (PAF-AH) , prolactina, proteína C, timalfasina, octreotida, secretina, sermorelina, el receptor del factor de la necrosis tumoral soluble (TNFR) , la superóxido dismutasa (SOD) , somatropinas (hormona del crecimiento) , somatoprima, somatostatina, estreptocinasa, sucrasa, terlipresina, fragmento de la toxina del tétanos, tilactasa, trombinas, timosina, hormona estimulante de la tiroides, tirotropina, factor de la necrosis tumoral (TNF) , Fe de IgG- eceptor TNF, activador del plasminógeno del tejido (tPA) , TSH, urodilatina, urato oxidasa, urocinasa, vacunas, factor del crecimiento endotelial vascular (VEGF) , el péptido intestinal vasoactivo, vasopresina, ziconotida, lectina y ricina.
Preferentemente, D-H es una proteína preparada por tecnologías de ADN recombinante .
Preferentemente, D-H es una proteína seleccionada del grupo de proteínas que consisten de fragmentos de anticuerpos, proteínas de aglutinación del antígeno de una sola cadena, anticuerpos catalíticos y proteínas de fusión.
Preferentemente, D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas seleccionado del grupo de agentes que consisten de agentes activos sobre el sistema nervioso central, agentes antiinfecciosos, antialérgicos, inmunomoduladores , antiobesidad, anticoagulantes, antidiabéticos, antineoplásicos , antibacterianos, antifúngicos , analgésicos, anticonceptivos, antiinflamatorios, esteroidales , vasodilatadores, vasoconstrictores, y cardiovasculares con al menos un grupo amino primario o secundario.
Preferentemente, D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas seleccionado del grupo de agentes que consisten de acarbosa, alaproclato, alendronato, amantadina, amikacina, amineptina, aminoglutetimida, amisulprida, amlodipino, amotosaleno, amoxapina, amoxicilina, anfetamina, anfotericina B, ampicilina, amprenavir, amrinona, anileridina, apraclonidina, apramicina, articaína, atenolol, atomoxetina, avizafona, baclofeno, benazeprilo, benserazida, benzocaína, betaxolol, bleomicina, bromfenaco, brofaromina, carvedilol, catina, catinona, carbutamida, cefalexina, clinafloxacino, ciprofloxacino, deferoxamina, delavirdina, desipramina, daunorrubicina, dexmetilfenidato, dexmetilfenidato, diafenilsulfona, dizocilpina, dopamina, dobutamina, dorzolamida, doxorrubicina, duloxetina, eflornitina, enalaprilo, epinefrina, epirrubicina, ergolina, ertapenera, esmolol, enoxacina, etanbutol, fenfluramina, fenoldopam, fenoterol, fingolimod, flecainida, fluvoxamina, fosamprenavir, frovatriptano, furosemida, fluoxetina, gabapentina, gatifloxacino, gemifloxacino, gentamicina, grepafloxacino, hexilcaína, hidralazina, hidroclorotiazida, icofungipeno, idarrubicina, imiquimod, inversina, isoproterenol , isradipina, kanamicina A, ketamina, labetalol, lamivudina, levobunolol, levodopa, levotiroxina , lisinoprilo, lomefloxacino, loracarbef, maprotilina, mefloquina, melfalan, memantina, meropenem, mesalazina, mescalina, metildopa, metilendioximetanfetamina, metoprolol, milnaciprano, mitoxantrona, moxifloxacino, norepinefri a, norfloxacino, nortriptilina , neomicina B, nistatina, oseltamivir, ácido pamidrónico, paroxetina, pazufloxacino, permetrexed, perindoprilo, fenmetracina , fenelzina, pregabalina, procaina, pseudoefedrina, protriptilina, reboxetina, ritodrina, sabarrubicina, salbutamol, serotonina, sertralina, sitagliptina, sotalol, espectinomicina, sulfadiazina, sulfamerazina, sertralina, espectinomicina, sulfaleno, sulfametoxazol , tacrina, tamsulosina, terbutalina, timolol, tirofiban, tobramicina, tocainida, tosufloxacino, trandolaprilo, ácido tranexámico, tranilcipromina , trimerexato, trovafloxacino, valaciclovir, valganciclovir, vancomicina, viomicina, viloxazina, y zalcitavina.
Preferentemente, Z es un polímero de al menos 500 Da o un grupo alquilo de C8-18.
Preferentemente, Z se selecciona del grupo de polímeros reticulados opcionalmente que consisten de poli (propilenglicol) , poli (etilenglicol) , dextrano, quitosana, ácido hialurónico, alginato, xilano, mañano, carrageenina , agarosa, celulosa, almidón, almidón de hidroxialquilo (HAS), poli (alcoholes vinílicos) , poli (oxazolinas) , poli (anhídridos) , poli (orto ásteres), poli (carbonatos) , poli (uretanos) , poli (ácidos acrílicos) , poli (acrilamidas) , poli (acrilatos) , poli (metacrilatos) , poli (organofosfacenos) , polioxazolina, poli (siloxanos) , poli (amidas) , poli (vinilpirrolidona) , poli (cianoacrilatos) , poli (ásteres) , poli ( iminocarbonatos) , poli (aminoácidos) , colágeno, gelatina, hidrogel o una proteína del plasma de la sangre, y copolímeros de los mismos.
Preferentemente, Z es una proteína.
Preferentemente, Z es una proteína seleccionada del grupo que consiste de albúmina, transferrina, inmunoglobulina .
Preferentemente, Z es un poli (etilenglicol ) lineal o ramificado con un peso molecular desde 2,000 Da hasta 150,000 Da.
Es aún más preferido un profármaco de la presente invención, en donde D-H es un agonista del receptor de GLP-1,· L es L1 representado por la fórmula (I) como se indicó anteriormente, y Z es un hidrogel. Aún más preferentemente, en la fórmula (I) X es N(R4) , X1 es C y X3 es 0. Aún más preferentemente, L está representado por la fórmula (la) como está indicado anteriormente.
GLP-1 es una de las hormonas del péptido intestinal que son liberadas en el sistema circulatorio después de la admisión de alimentos. El mismo aumenta la liberación postprandial de insulina, cuando los elementos nutritivos (especialmente los carbohidratos) son absorbidos y su nivel sea elevado posprandialmente . El GLP-1 se asocia con los sitios del receptor de GLP-1 localizados sobre las células ß pancreáticas y eleva los niveles de cAMP endógenos de manera dependiente de la dosis. En los islotes de la rata aislados en la presencia de los niveles de la glucosa normoglucémicos anteriores, GLP-1 estimula la liberación de insulina. Un potencial terapéutico para GLP-1 en los pacientes con diabetes del tipo 2 fue sugerida anteriormente, debido a la profunda eficacia de este péptido insulinotrópico para estimular la secreción de la insulina cuando los niveles de glucosa son elevados y para dejar de hacerlo durante su regreso a la normoglucemia . El efecto antidiabetogénico de la amida del péptido 1 semejante al glucagón (7-36) en sujetos normales y pacientes con diabetes mellitus se describe por ejemplo en N. Eng. Med. 326 (20) : 1316-1322. Los estudios in vitro y los experimentos en animales sugieren que el GLP-1 mejora la sensibilidad a la insulina y tiene un efecto anabólico sobre las células pancreáticas ß. En los seres humanos, GLP-1 también se reportó que suprime la secreción de glucagón, desacelera el vaciado gástrico, e induce la saciedad, conduciendo a la pérdida de peso si es administrada durante semanas y meses.
La exendina-4 se reportó que se asocia con los receptores de GLP-1 localizados sobre las células beta pancreáticas con 2.5 veces una afinidad más elevada que GLP-1. En los islotes aislados de las ratas y las células beta en la presencia de la glucosa, la exendina mejora la secreción de la insulina de un modo dependiente de la dosis. La exendina-4 es un agonista de alta potencia y la exendina- (9-39) -amida truncada un antagonista en el receptor del péptido 1 semejante al glucagón- (7-36) -amida de las células beta de secreción de la insulina (véase J. Biol . Chem. 268(26) : 19650-19655) . Los estudios en los roedores diabéticos del tipo 2 revelaron que la exendina-4 es 5530 veces más potente que GLP-1 en la reducción de los niveles de la glucosa en la sangre. También, la duración de la acción reductora de la glucosa después de una sola administración de exendina-4 es significativamente más prolongada cuando se compara con GLP-1 (véase por ejemplo Diabetes 48 ( 5 ) : 1026 -1034 ) . La vida media en el plasma de la exendina-4 en los seres humanos se describió que va a ser solamente de 26 minutos. La exendina 4 reduce la glucosa en el ayuno postprandial y reduce la admisión de energía en los voluntarios sanos (véase por ejemplo Am. J. Physiol. Endocrinol . Metab. 281 (1) :E155-61) .
En consecuencia, en una modalidad aún más preferida, el agonista del receptor de GLP-1 es la exendina-4.
Los hidrogeles que van a ser utilizados ya son conocidos en el arte. Los hidrogeles adecuados pueden ser utilizados como los que son descritos en WO-A 2006/003014. En consecuencia, un hidrogel puede ser definido como una red polimérica hidrofílica o anfifílica, tridimensional, capaz de recibir cantidades grandes de agua. Las redes están compuestas de homopolímero o copolímeros, son insolubles debido a la presencia de reticulaciones químicas o físicas covalentes (iónicas, interacciones hidrofóbicas , enredamientos) . Las reticulaciones proporcionan la estructura y la integridad física de la red. Los hidrogeles exhiben una compatibilidad termodinámica con agua lo cual permitir que ellos se expandan en el medio acuoso. Las cadenas de la red están conectadas de tal modo que existan poros y que una fracción substancial de estos poros sea de dimensiones de entre 1 nm y 1000 mm.
Otro objeto de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende un profármaco de la presente invención o una sal farmacéutica del mismo junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
Todavía otro objeto de la presente invención es un profármaco de la presente invención o una composición farmacéutica de la presente invención para su uso como un medicamento.
Todavía otro objeto de la presente invención es un método de tratamiento, control, retardo o prevención en un paciente mamífero que tenga la necesidad del tratamiento de una o más condiciones que comprenden administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un profármaco de la presente invención o una composición farmacéutica de la presente invención o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable .
Otro objeto de la presente invención es un precursor del profármaco de la fórmula Act-L, en donde L tiene el significado como se indicó anteriormente y Act es un grupo saliente .
Preferentemente, Act es cloruro, bromuro, fluoruro, nitrofenoxi, imidazolilo, N-hidroxisuccinimidilo, N-hidroxibenzotriazolilo, N-hidroxiazobenzotriazolilo, pentafluorofenoxi , 2-tioxo-tiazolidinilo, o N-hidroxisulfosuccinimidilo .
Ej emplos Materiales y métodos Materiales: La exendina-4 protegida en la cadena lateral (J. Eng. et al., J. Biol . Chem. 1992, 267, 11, 7402-7405) sobre la resina de la amida de Rink, el BNP-32a protegido en la cadena lateral (del ser humano, CyslO y Cys26 intercambiado por Ala) sobre una resina de clorotritilo, el BNP-32b protegido en la cadena lateral con el grupo protector de la cadena lateral de ivDde sobre Lysl4 (del ser humano, CyslO y Cys26 intercambiados por Ala) sobre la resina de clorotritilo, y la amida del fragmento 1-29 del factor de liberación de la hormona del crecimiento humano protegida en la cadena lateral (GRF(l-29)) sobre la amida de Rink (cada una sintetizada por la estrategia Fmoc) se obtuvieron de Peptide Specialty Laboratories GmbH, Heidelberg, Alemania. Los grupos protectores de la cadena lateral estándares fueron utilizados para Lys27 de la exendina-4 y Lys21 de GRF (1-29) en donde se utilizaron los grupos protectores de la cadena lateral de Mmt .
La metoxi poli (etilenglicol ) maleimido-propionamida de 40 kDa (PEG40kDa maleimida) se obtuvo de Chirotech Technology Ltd, Cambridge, UK.
La resina de cloruro de 2 -clorotritilo, la resina de la amida de Sieber y los aminoácidos fueron de Merck Biosciences GmbH, Schwalbach/Ts , Alemania, si no se estableció de otra manera. La Fmoc-D-homocisteína (Trt) -OH y el ácido S-tritil-3 -mercaptopropiónico (Trt-MPA) fueron obtenidos de Bachem, AG, Bubendorf , Suiza. El 0- (N-Fmoc-2- aminoetil) -0' - (2-carboxietil) -undecaetilenglicol (Fmoc-Pop-OH) se obtuvo de Polypure AS, Oslo, Noruega. La Fmoc-4-(2-aminoetil) -1-carboximetil-piperazina (Fmoc-Acp-OH) se compro de NeoMPS SA, Strasbourg, Francia. El anhídrido cis-ciclohexano-1, 2-dicarboxílico se obtuvo de Alfa Aesar GmbH & Co KG, Karlsruhe, Alemania.
Todas las otras substancias químicas fueron de Sigma-ALDRICH Chemie GmbH, Taufkirchen, Alemania.
La síntesis en fase sólida se efectuó sobre la resina del cloruro de 2 -clorotritilo con una carga de 1.3 mmol/g o la resina de la amida de Sieber con una carga de 0.55 mmol/g. Se utilizaron jeringas equipadas con crisoles de polipropileno como los recipientes de la reacción.
La carga del primer aminoácido a las resinas se efectuó de acuerdo con las instrucciones del " fabricante .
Desprotección de Fmoc : Para la remoción del grupo protector de Fmoc, la resina se agitó con 2/2/96 (v/v/v) piperidina/DBU/DMF (dos veces, 10 minutos cada una) y se lava con DMF (diez veces) . Desprotección de ivDde : Para la remoción del grupo protector de ivDde, la resina se agita con 98/2 (v/v) de DMF/hidrato de hidrazina (3 veces, 10 minutos cada una) y se lava con DMF (diez veces) . Protección de Boc La terminación N de un péptido fue protegida por boc por agitación de la resina con 30 eq. de (boc)20 y 60 eq. de piridina en DCM. Después de 1 h la resina se lava con DCM (10 veces) .
Condición de unión estándar para los ácidos: La unión de los ácidos (ácidos alifáticos, Fmoc-aminoácidos) a los grupos amino sobre la resina fue lograda agitando la resina con 3 eq. del ácido, 3 eq. de PyBOP y 6 eq. de DIEA con relación a los grupos de amino libre sobre la resina (calculado con base en la carga teórica de la resina) en DMF a temperatura ambiente. Después de 1 hora la resina se lava con DMF (10 veces) .
Unión del ácido 3-maleimido propiónico: La unión del ácido 3-maleimido propiónico a los grupos de amino libre sobre la resina se logra por la agitación de la resina con 2 eq. del ácido, 2 eq. de DIC y 2 eq. de HOBt con relación a los grupos de amino libre en DMF a temperatura ambiente. Después de 30 minutos, la resina se lava con DMF (10 veces) .
Protocolo estándar para la síntesis de ureas sobre la resina: La síntesis de las ureas sobre la resina se logra por la agitación de la resina con 2.5 eq. del carbonato de bis (pentafluorofenilo) , 5 eq. de DIEA, y 0.25 eq. de DMAP con relación a los grupos de amino libre en DCM/ACN 1/1 a temperatura ambiente. Después de 15 minutos la resina se lavó con DMF (10 veces) . 5 eq. de la amina se disuelven en DMF. La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 60 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Protocolo de separación para la resina de amida de Sieber: Durante el complemento de la síntesis, la resina se lava con DCM (10 veces) , se seca in vacuo y se trata repetidamente (cinco veces en 15 minutos) con 97/2/1 (v/v) de DCM/TES/TFA. Las substancias eluidas fueron combinadas, las substancias volátiles fueron removidas bajo una corriente de nitrógeno y el producto se purifica por P-HPLC. Las fracciones de HPLC que contienen el producto fueron combinadas y liofilizadas .
Protocolo de separación para la resina de cloruro de 2-clorotritilo : Durante el complemento de la síntesis, la resina se lava con DCM, se seca in vacuo y se trata dos veces durante 30 minutos con 6/4 (v/v) de DCM/HFIP. Las substancias eluidas fueron combinadas, las substancias volátiles se eliminan bajo una corriente de nitrógeno y el producto se purifica por RP-HPLC. Las fracciones de HPLC que contienen el producto fueron combinadas y liofilizadas .
Protocolo de separación para la resina de amida de Rink: Durante el complemento de la síntesis, la resina se lava con DCM, se seca in vacuo y se trata con 2 mi del cóctel de separación de TFA (TFA/TES/agua/DTT 95/2/2/1) por 100 mg de resina durante 60 minutos a temperatura ambiente. Las substancias volátiles fueron removidas bajo una corriente de nitrógeno. Los productos laterales no polares y los grupos protectores fueron removidos por la precipitación del péptido a partir del éter dietílico. Los materiales precipitados se secan in vacuo y se disuelven en ACN/agua 1/1 y se purifican por RP-HPLC.
Los productos que contienen la amina obtenidos como sales de TFA se convirtieron a las sales de HC1 correspondientes utilizando una resina de intercambio iónico (Discovery DSC-SAX, Supelco, EUA) . Esta etapa se efectúa en el caso de que el TFA residual se espere que interfiera por ejemplo con las reacciones de unión subsiguientes.
Purificación por RP-HPLC: La RP-HPLC se hizo sobre una columna de 5 µ C18 ReproSil-Pur 300 ODS-3 de 100 x 20 mm o de 100 x 40 mm (Dr. Maisch, Ammerbuch, Alemania) conectada a un sistema de HPLC de Waters 600 y un detector de la absorbancia Waters 2487. Los gradientes lineales de la solución A (0.1 % de TFA en H20) y de la solución B (0.1 % de TFA en acetonitrilo) fueron utilizados. Las fracciones de HPLC que contienen el producto fueron liofilizadas .
Dispositivos analíticos: Se efectuó la espectroscopia de masa de ionización por electrorrociado (ESI-MS) sobre un instrumento Water ZQ 4000 ESI y los espectros, si es necesario, fueron interpretados por Waters Software MaxEnt.
La cromatografía por extrusión de tamaño (SEC) se efectuó utilizando un sistema AEKTAbasic de Amersham Bioscience equipado con una columna Superdex200 10/300 (Amersham Bioscience/GE Healthcare) , si no se establece de otra manera. Se utilizaron fosfato de sodio 10 mM, NaCl 140 mM, pH 7.4, EDTA 3 mM como una fase móvil.
Para la cromatografía de intercambio catiónico, un sistema AEKTAbasic de Amersham Bioscience se equipó con una columna Source 15S rellena con HR16/10 (Amersham Bioscience/GE Healthcare) .
La desalación se efectuó utilizando un sistema AEKTAbasic de Amersham Bioscience equipado con una columna de desalación HiPrep 26/10 y 0.1 % de ácido acético en agua como la fase móvil.
Hidrólisis del enlazador in vitro y liberación del fármaco: Los compuestos se disolvieron en el amortiguador A (fosfato de sodio 10 mM, NaCl 140 mM; pH 7.4, EDTA 3 mM) o el amortiguador B (acetato 0.1 M, EDTA 3 mM, pH 4.0), y la solución se filtra a través de un filtro de 0.2 µ?t? y se incuba a 37 °C. Las muestras fueron tomadas a intervalos de tiempo y se analizaron por RP-HPLC a 215 nm y ESI-MS. Las señales de UV que se correlacionan con la molécula del fármaco liberada fueron integradas y graficadas contra el tiempo de incubación. En el caso de tiempos de retención idénticos del profármaco y del fármaco, la relación de las señales de la masa se utilizó para determinar las características cinéticas de la liberación.
Para los conjugados de hidrogel, los compuestos fueron suspendidos en el amortiguador A y se incubaron a 37 °C. Las muestras fueron tomadas después de la centrifugación de la suspensión y se analizaron por RP-HPLC a 215 nm. Las señales de UV que se correlacionan con la molécula del fármaco liberado fueron integradas y graficadas contra el tiempo de incubación.
El software para el ajuste de la curva fue aplicado para estimar el tiempo medio correspondiente de la liberación.
Ejemplo 1 Síntesis del portador del ácido graso (1) resina de amida de . Desprotección de Fmoc Sieber Fmoc-Lys(lvDde) ? 2. Unión del ácido dodecanoico (Dda) Fmoc-L s{lvDde) Dda-Lys(ivDde) 1. Desprotección de ivDde separación , purificación 2. Unión de Fmoc-Pop-OH 1 se sintetizó sobre la resina de la amida de Sieber (477 mg , 0.262 mmol) por la unión de Fmoc-Lys ( ivDde ) -OH , desprotección de fmoc, la unión del ácido dodecanoico, la desprotección de ivDde, la unión de Fmoc-Pop-OH, la desprotección de fmoc, la unión del ácido 3-maleimido propiónico, la separación de la resina y la purificación como se mostraron anteriormente y se describe en "Materiales y Métodos" .
Rendimiento: 128 mg (0.119 mmol) .
MS: m/z 1101.0 = [M+Na] + (PM calculado = 1078.4 g/mol) .
Ej em lo 2 Síntesis del reactivo enlazador (2) 1. (PfpO)2CO resina de cloruro proteccion de Fmoc El reactivo enlazador 2 se sintetiza sobre la resina del cloruro de 3-clorotritilo (300 mg, 0.39 mmol) por la carga de la resina con Fmoc-Cys (Trt ) -OH, desprotección de fmoc, y la formación de urea sobre la resina utilizando la N, -dimetil-etilendiamina como la amina, la separación de la resina como se mostró anteriormente y como se describe en "Materiales y Métodos" . Para la separación de RP-HPLC, se utilizó HCl al 0.01 % en agua como la solución A y HCl al 0.01 % en acetonitrilo se utilizo como una solución B.
Rendimiento: 82 mg de la sal de HCl (0.16 mmol) .
MS: m/z 478.2 = [M+H] + (PM calculado = 477.6 g/mol) .
Ejemplo 3 Síntesis del compuesto intermedio del enlazador de exendina-4 (3) 2 (14 mg, 0.027 mmol), PyBOP (1.4 mg, 0.027 mmol), y DIEA (17 µ?, 0.10 mmol) se disuelven en 0.2 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a 22 mg de la exendina-4 protegida en la cadena lateral sobre la resina (0.1 mmol/g, 2.2 µ????) y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) y DC (10 veces) . 3 se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Rendimiento: 1.7 mg de 3 como la sal de TFA (0.38 µ????) .
MS: m/z 1468.7 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4403 g/mol).
Ejemplo 4 Síntesis del conjugado del ácido graso-PEG-enlazador exendina-4 (4) 3 (1.7 mg, 0.38 µ?????) , y 1 (0.6 mg, 0.58 µ????) se disuelven en 500 µ? de acetonitrilo/agua 7/3 (v/v) . Se agregan 40 µ? del amortiguador de fosfato 0.5 M (pH 7.4) y la mezcla se incuba a TA durante 10 minutos. El conjugado 4 se purifica por RP-HPLC.
S: m/z 1828.7 = [M+3H]+ (PM calculado = 5480 g/mol) .
Ejemplo 5 Síntesis del compuesto intermedio del enlazador (5a) ta El Fmoc-Acp-OH-2 HCl (100 mg, 0.21 mmol) se suspende en 400 µ? de DMF/DMSO 1/1 (v/v). La S-tritilcisteamina-HCl (75 mg, 0.21 mmol) , PyBOP (109 mg, 0.21 mmol) y DIEA (146 µ?, 0.86 mmol) fueron agregados y la mezcla se agita durante 60 minutos a TA. El grupo Fmoc se remueve agregando 75 µ? de piperidina y 25 µ? de DBU. Después de 15 minutos la mezcla se hidroliza y se acidifica (AcOH) y el compuesto se purifica por RP-HPLC. Después de la liofilización se obtienen 98 mg (0.4 mmol, de la sal de TFA doble) .
MS: m/z 511.6 = [M+Na] + (PM calculado = 488.7 g/mol).
Síntesis de la amoxapina monoamida del ácido cis-ciclohexano dicarboxílico (5b) + enantiómero La amoxapina (200 mg, 0.64 mmol) y el anhídrido cis-ciclohexano-1, 2 -dicarboxílico (108 mg, 0.70 mmol) se disuelve en 700 µ? de DMF seco. Se agrega piridina (130 µ? , 1.6 mmol) y la mezcla se agita durante 60 minutos a TA. La mezcla se apaga con 2 mi de acetonitrilo/ácido acético/agua (l/l/l) y se purifica por RP-HPLC. Después de la liofilización se obtienen 344 mg (0.49 mmol, sal de TFA doble) de 5b.
MS: m/z 468.5 = [M+H] + (PM calculado = 468.0 g/mol) .
Síntesis del conjugado de enlazador-amoxapina (5c) + enantiómero 5b (7 mg, 0.010 mmol) fue preactivado por incubación con PyBOP (12.5 mg, 0.024 mmol) y DIEA (5 µ?, 0.03 mmol) en 200 µ? de DMF seco durante 45 minutos a TA. Se agregan 5a (20 mg, 0.028 mmol) y DIEA (15 µ? , 0.09 mmol) y la mezcla se incuba durante unos 60 minutos adicionales. La mezcla se apaga con 0.5 mi de acetonitrilo/ácido acético/agua (1/1/1) y se purifica por RP-HPLC. Después de la liofilización se obtienen 3 mg (0.0026 mmol, de la sal de TFA doble) de 5c. MS: m/z 939.3 = [M+H] + (PM calculado = 938.6 g/mol).
Para la desprotección del tritilo, el liofilizado se incuba en 1 mi de HFIP y 3 µ? de TES durante 30 minutos. La mezcla se evapora y el tiol se purifica por RP-HPLC. Después de la liofilización se obtienen 2 mg (2.2 µp??? , de la sal de TFA doble) del conjugado de amoxapina-enlazador 5c.
MS: m/z 697.1 = [M+H] + (PM calculado = 696.3 g/mol) .
Síntesis del conjugado de ácido graso-PEG-amoxapina (5) El conjugado de amoxapina-enlazador 5c (2 mg, 2.2 µp???) y 1 (3.5 mg, 3.2 µt???) se disuelven en 900 µ? de acetonitrilo/agua 7/3 (v/v) . Se agregan 60 µ? del amortiguador de fosfato 0.5 M (pH 7.4) y la mezcla se incuba a TA durante 10 minutos. 5 se purifica por RP-HPLC.
MS: m/z 1774.9 = [M+H] + (PM calculado = 1774.7 g/mol).
Ejemplo 6 Síntesis del reactivo enlazador (6) El Fmoc-Asp (tBu) -OH (411 mg, 1 mmol) , HOBt (153 mg, 1 mmol) y DIC (160 µ?, 1 mmol) se disuelven en 2 mi de DMF y se incuban durante 10 minutos a TA. Se agrega la N,N-dimetil-etilendiamina (160 µ? , 1.5 mmol) y se agita a TA durante 30 minutos. Se agregan ácido acético (300 µ?) y el Fmoc-Asp (tBu) -NH- (CH2) 2-N (CH3) 2 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 220 mg (0.46 mmol) MS Fmoc-Asp (tBu) -NH- (CH2) 2-N (CH3) 2 : m/z 504.6 = [M+Na] + (PM calculado = 481.6 g/mol) .
El Fmoc-Asp (tBu) -NH- (CH2) 2- (CH3) 2 (220 mg, 0.46 mmol) se disuelve en 3 mi de 98/2 (v/v) de TFA/TES . Después de 30 minutos el solvente se remueve bajo una corriente de nitrógeno y 6 se purifica por RP-HPLC utilizando 0.01 % de HC1 en agua como el solvente A y 0.01 % de HCl en acetonitrilo como el solvente B.
Rendimiento: 146 mg (0.32 mmol, sal de HCl) MS: m/z 426.5 = [M+H] + (PM calculado = 425.5 g/mol).
Ej em lo 7 Síntesis de los reactivos enlazadores 7a y 7b 7a: R = H 7b: R = CH3 Síntesis de 7a: El Fmoc-As (tBu) -OH (300 mg, 0.73 mmol), HOBt (1112 mg, 0.73 mmol) , y DIC (117 µ? , 0.73 mmol) se disuelven en 2 mi de DMF y se incuban durante 10 minutos a TA. Se agrega Boc-etilendiamina (230 mg, 1.44 mmol) fue agregado y se agita a TA durante 30 minutos. Se agrega ácido acético (300 µ?) y el Fmoc-Asp (tBu) -NH- (CH2) 2-NH-boc se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 205 mg (0.37 mmol) MS intermedio: m/z 576.6 = [M+Na]+ (PM calculado = 553.7 g/mol) .
El Fmoc-As (tBu) -NH- (CH2) 2-NH-boc (205 mg, 0.37 mmol) se disuelve en 3 mi de 98/2 (v/v) de TFA/TES. Después de 30 minutos el solvente se remueve bajo una corriente de nitrógeno y el Fmoc-Asp (H) -NH- (CH2) 2_ H2 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 140 mg (0.27 mmol, sal de TFA) .
MS intermedio: m/z 398.8 = [M+H] + (PM calculado = 397.4 g/mol) .
El Fmoc-Asp (H) -NH- (CH2) 2-NH2 (140 mg, 0.27 mmol, sal de TFA) se disuelve en 1 mi de DMF y DIEA (140 µ? , 0.81 mmol) y boc20 (100 mg, 0.46 mmol) fue agregado. La solución fue agitada a TA durante 15 minutos y luego se acidifica con ácido acético (300 µ?) . 7a se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento de 7a: 120 mg (0.24 mmol) MS 7a: m/z 520.5 = [M+Na] + (PM calculado = 497.6 g/mol). 7b se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso de H2N- (CH2) 2-N (CH3) -boc en lugar de la boc-etilendiamina como la amina en la primera etapa.
Rendimiento de 7b: 115 mg MS 7b: m/z 534.5= [M+Na] + (PM calculado = 511.6 g/mol) .
Ejemplo 8 Síntesis de los conjugados de exendina-enlazador 8a, 8b y 8c 8a: R1 = H, R2 = H 8b: R1 = H, R2 = CH3 8c: R1 = CH3, R2 = CH3 Síntesis de 8a: 7a (30 mg, 60 µt???) , HOBt (9 mg, 60 µmol) , DIEA (12 µ?, 70 µp???) , y DIC (10 µ? , 63 µp???) se disuelven en 200 µ? de DMF y se agregan inmediatamente a la exendina-4 protegida en la cadena lateral (40 mg, 4 µt???) y se incuba durante 1 h a temperatura ambiente. La resina se lava diez veces con DMF y luego se incuba durante 5 minutos con 500 µ? del anhídrido acético/piridina/DMF 1/1/2. La resina se lava 10 veces con DMF y se remueve el grupo de fmoc . El Trt-ácido mercaptopropiónico fue unido y 8a se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento : 3.6 mg MS 8a: m/z 1108.5 = [M+4H]4+; 1477.8 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4432 g/mol) . 8b se sintetiza como se describió anteriormente para 8a excepto por el uso de 7b en lugar de 7a.
Rendimiento: 3.5 mg MS 8b: m/z 1112.5 = [M+4H] 4+; 1482.5 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4446 g/mol) . 8c se sintetiza como se describió anteriormente para 8a excepto por el uso de 6 en lugar de 7a.
Rendimiento : 3.2 mg MS 8c: m/z 1116.2 = [M+4H]4+; 1487.8 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4460 g/mol) .
E emplo 9 Sxntesis de los conjugados de PEG40kDa-enlazador-exendina 9a, 9b, y 9c 9a: R1 H, R2 = H 9b: R1 H, R2 = CH3 9c: R1 CHj, R2— CH3 Síntesis de 9a: 8a (3.6 mg) se disuelve en 300 µ? de agua/acetonitrilo 2/1 y se agregan 50 mg de PEG4 OkDa- maleimida. Se agregan 100 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M de pH 7 y después de 5 minutos la solución se acidifica con 50 µ? de ácido acético. 9a se purifica por cromatografía de intercambio iónico utilizando citrato de sodio 10 mM de pH 3 como el solvente A y citrato de sodio 10 mM de pH 3 y NaCl 1 M como el solvente B y un gradiente por etapa (de 0 a 40 % de B) . Las fracciones que contienen 9a fueron desaladas y liofilizadas .
Rendimiento: 14 mg 9b se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso de 8b.
Rendimiento: 15 mg 9c se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso de 8c.
Rendimiento: 13 mg.
Ejemplo 10 Síntesis del conjugado de ácido graso-enlazador-exendina 10 8c (1 mg) se disuelve en 100 µ? de acetoni tr i lo/agua l/l y se agrega 1 (1 mg) en 100 µ? de acetoni tr i lo/agua 3/1. Se agregan 100 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M, la reacción se agita durante 5 minutos, después de lo cual 10 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento 1.3 mg MS 10: m/z 1385.9 = [M+4H]4+; 1846.3 = [M+3H]3+ (PM calculado = 5528.3 g/mol) .
Ejemplo 11 Síntesis del reactivo de NHS-enlazador activado 11 diciclohexilcarbodiimida (10 mg , 48 µt???) , y NHS (8 mg, 70 µp???) en 300 µ? de DCM seco y se agita a TA durante 1 h. El solvente se remueve bajo una corriente de nitrógeno y 11 se purifica por RP-HPLC y se liofiliza.
Rendimiento: 22 mg (36 µp???) MS: m/z 631.5 = [M+Na] + (PM calculado = 608.7 g/mol).
Ejemplo 12 Síntesis del conjugado de enlazador- exendina ( fluoresceína) (12a) y el conjugado de enlazador-GRF (1-29) (fluoresceína) (12b) 12a: R = Exendina (eK27-fluoresceína) 12b: R = GRF (1-29) (eK21-fluoresceína) Se disuelven 6 (sal de HCl, 60 mg, 130 µ????), HOBt (20 mg, 130 µ? ) , DIEA (40 µ? , 230 µ????), y DIC (20 µ? , 126 µt???) se disuelven en 700 µ? de DMF y se agregan inmediatamente a la exendina-4 protegida en la cadena lateral sobre la resina (120 mg, 12 µ????) y se incuba durante 1 h a temperatura ambiente. La resina se lava diez veces con DMF y luego se incuba durante 5 minutos con 1 ml de anhídrido acét ico/piridina/DMF 1/1/2 (v/v/v) . La resina se lava diez veces con DMF y se remueve el grupo de fmoc . Se realiza la unión del ácido Trt-mercaptopropiónico de acuerdo con el método de unión estándar y la resina se lava cinco veces con DMF y diez veces con DCM . El grupo protector de Mmt de Lys27 se remueve por incubación de la resina cinco veces en 2 mi de DCM/HFIP 9/1 (v/v) durante 5 minutos. La resina se lava cinco veces con DCM y cinco veces con DMF y el éster de 5 , 6 -carboxi - fluoresceína-NHS (20 mg, 42 µ????) y se agrega DIEA (20 µ? , 115 µ?) en 300 µ? de DMF a la resina y se incuba durante 30 minutos. 12a se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 12 mg MS 12a: m/z 1205.9 = [M+4H]4+; 1607.0 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4818.3 g/mol) . 12b se sintetiza como se describió para 12a excepto por el uso de GRF(l-29) sobre la resina (120 mg, 12 µp???) . Rendimiento: 11 mg MS 12b: m/z 998.6 = [M+4H]4+; 1330.5 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3989.6 g/mol) .
Síntesis de la mercaptopropionil-exendina (Fluoresceína) (12c) y mercaptopropionil-GRF (1-29) (Fluoresceína) (12d) 12c: R = Exendina (eK27-fluoresceína) 12d: R = GRF(l-29) (eK21-fluoresceína) El ácido Trt-mercaptopropiónico fue unido de acuerdo con el método de unión estándar a la exendina-4 protegida en la cadena lateral sobre la resina (120 rag, 12 µp???) . La remoción del grupo protector de Mmt de Lys27 y la unión del éster de 5, 6-carboxi-fluoresceína-NHS se efectuó como se describe para 12a. 12c fue separado de la resina y purificado por RP-HPLC.
Rendimiento: 13 mg MS 12c: m/z 1545.6 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4633 g/mol) . 12d se sintetiza como se describió para 12c excepto por el uso de GRF (1-29) sobre la resina (120 mg, 12 µp???) . Rendimiento: 11 mg MS 12d: m/z 1269.1 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3804.3 g/mol) . Ejemplo 13 Síntesis del conjugado de PEG40kDa-enlazador-exendina ( Fluoresceína) reversible (13a) y el conjugado de PEG40kDa-enlazador-GRF (1-29) Fluoresceína) reversible (13b) 13a: R = Exendina (e?27 -fluoresceína) 13b: R = GRF (1-29) (e?21- fluoresceína) Se disuelve 12a (12 mg) en 500 µ? de acetonitrilo/agua 1/1 y se agregaron 120 mg de PEG40kDa- maleimida en 1 mi de acetoni trilo/agua 1/1. Se agregan 300 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M de pH 7.0 y la solución se acidifica después de 10 minutos con 300 µ? de ácido acético. 13a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala, y luego se liofiliza.
Rendimiento: 51 mg 13b se sintetiza como se describe para 13a excepto por el uso de 12b en lugar de 12a.
Rendimiento: 46 mg Síntesis del conjugado de PEG4OkDa-exendina (Fluoresceína) perramente (13c) y el conjugado de PEG40kDa-GRF (1-29) (Fluoresceína) permanente (13d) 13c : R = Exendina (eK27-fluoresceína) 13d: R = GRF(l-29) (eK21-fluoresceína) 13c se sintetiza como se describió para 13a excepto por el uso de 12c en lugar de Rendimiento: 55 mg. 13d se sintetiza como se describió para 13a excepto por el uso de 12d en lugar de Rendimiento: 45 mg Ejemplo 14 Síntesis del conjugado 14 del enlazador-GRF (1-29) 14 se sintetiza como se describió para 8c excepto por el uso de la resina de GRF(l-29) protegida en la cadena lateral.
Rendimiento: 10 mg MS 14: m/z 908.2 = [M+4H]4+; 1211.2 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3631.3 g/mol) .
Ejemplo 15 Síntesis del conjugado de PEG40kDa-enlazador-GRF (1-29) (15) 15 se sintetiza como se describió para 9c excepto por el uso de 14 y citrato de sodio 10 mM de pH 4 como el solvente A y citrato de sodio 10 mM de pH 4 y cloruro de sodio 1 M como el solvente B para la cromatografía de intercambio catiónico.
Rendimiento: 11 mg.
Ejemplo 16 Síntesis del compuesto intermedio 16 del enlazador La N, -dimetiletilendiamina (198 µ? , 1.8 mmol) y NaCNBH3 (58 mg, 0.9 mmol) se disuelven en metanol (5 mi) y se lleva a pH 5.5 por la adición de AcOH (250 µ?) . Se agrega una suspensión de 2 , 4 , 6 -trimetoxibenzaldehído (294 mg, 1.5 mmol) en EtOH (5 mi) y la reacción se agita a TA durante 1 h. Se agrega HCl 5 N (0.5 mi) y la mezcla se agita durante 12 h adicionales. El solvente se remueve bajo presión reducida, el residuo se disuelve en NaHC03 saturado y se extrae 3x con DCM. Las fases orgánicas combinadas se secan sobre NaS0 y el solvente se evapora bajo presión reducida.
Rendimiento: 303 mg (1.13 mmol) MS: m/z 269.3 = [M+H] + (PM calculado = 268.4 g/mol) .
Ejemplo 17 Síntesis del enlazador 17a y 17b O 17a: R = H 17b: R = e Síntesis de 17a: El Fmoc-As (OtBu) -OH (322 mg, 0.78 mmol) , la diamina protegida con Tmob 16 (150 mg, 0.56 mmol), HATU (255 mg, 0.67 mmol) y DIEA (290 µ? , 1.68 mmol) se disuelven en DMF (1.5 mi) . La mezcla se agita durante 30 minutos, se acidifica con AcOH y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 463 mg (5.97 mmol, sal de TFA, casi 90 % de pureza) .
MS Fmoc-Asp (OtBu) -N (TMOB) CH2CH2N(CH3) 2 : m/z 662.5 = [M+H] + (PM calculado = 661.8 g/mol) .
El Fmoc-Asp (OtBu) -N (Tmob) CH2CH2N(CH3) 2 (225 mg, 0.29 mmol) se disuelve en una solución de piperidina (50 µ?) y DBU (15 µ?) en DMF (1.5 mi). La mezcla se agita a TA durante 1.5 h. Se agrega AcOH y el Fmoc-Asp (OtBu) -N (TMOB) CH2CH2N (CH3) 2 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 114 mg (0.21 mmol, sal de TFA) MS H-Asp(OtBu) -N(Tmob)CH2CH2N(CH3)2: m/z 462.4 = [M+Na] + (PM calculado = 439.6 g/mol).
La sal de TFA de H-Asp (OtBu) -N (Tmob) CH2CH2N (CH3 ) 2 (114 mg, 0.21 mmol) se disuelve en NaHC03 saturado (10 mi) y se extrae 3x con DCM (3 x 10 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secan sobre NaS04 y el solvente se remueve bajo presión reducida. El residuo se disuelve en DMF (1.0 mi), se agregaron el ácido 6-tritilmercaptohexanoico (121 mg, 0.31 mmol), HATU (118 mg, 0.31 mmol) y DIEA (108 µ? , 0.62 mmol).
La mezcla se agita durante 30 minutos. Se agrega AcOH (200 µ?) y el TrtS (CH2) 5CONH-Asp (OtBu) -N (Tmob) CH2CH2N (CH3) 2 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento 95 mg (0.10 mmol, sal de TFA) MS TrtS (CH2)5CONH-Asp (OtBu) -N (Tmob) CH2CH2N(CH3) 2 : m/z 812.64 = [M+H]+ (PM calculado = 812.1 g/mol) .
El TrtS (CH2) sCONH-Asp (OtBu) -N (Tmob) CH2CH2N (CH3) 2 (95 mg, 0.10 mmol) se disuelve en una mezcla 3:1 de MeOH/H20 (1.0 mi), se agrega LiOH (7.4 mg, 0.31 mmol) y la mezcla se agita durante 5 h a 60 °C. Se agrega AcOH (100 µ?) y 17a se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 64 mg (0.07 mmol, sal de TFA) MS 17a: m/z 756.5 = [M+H] + (PM calculado = 756.0 g/mol) . 17b se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso de Fmoc-NMe-Asp (OtBu) -OH en lugar del Fmoc-Asp (OtBu) -OH en la primera etapa.
Rendimiento de 17b: 16 mg (18 µp??? , sal de TFA) MS 17b: m/z 770.5 = [M+H] + (PM calculado = 770.0 g/mol) .
Ejemplo 18 Síntesis de los conjugados 18a y 18b del enlazador-BNP Síntesis de 18a: Se disuelven 17a (8.0 mg, 0.01 mmol, PyBOP (5.2 mg, 1.0 µp???) y DIEA (7 µ? , 40 µp???) en DMF (400 µ?) y se agregan inmediatamente al BNP-32a protegido en la cadena lateral, unido a la resina (50 mg, 5 µt???) . Después de incubación durante 2 h a TA, la resina se lava con lOx DMF, 10 x DCM y se seca in vacuo. El producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 10.6 mg MS 18a: m/z 930.4 = [M+4H]4+; 1240.1 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3717.2 g/mol) . 18b se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso de 17b en lugar de 17a.
Rendimiento : 4.7 mg MS 18b: m/z 933.9= [M+4H]4+; 1244.7 = [M+3H] 3+ (PM calculado 3731.0 g/mol) .
Ejemplo 19 Síntesis de los conjugados 19a y 19b de PEG40kDa-enlazador BNP Se disuelve 18a (5.2 mg) en H20/acetonitrilo 1:1 que contiene 0.1 % de TFA (200 µ?) . Se agrega una solución de PEG40kDa-maleimida (70 mg) en H20/acetonitrilo 1:1 (1.5 mi) y el amortiguador de fosfato (30 µ?, H 7.4, 0.5 M) . La solución se incuba a TA, después de 5 minutos se agrega AcOH (30 µ?) . 19a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala, y se liofiliza.
Rendimiento: 19.2 mg. 19b se sintetiza como se describió para 19a excepto por el uso de 18b en lugar de 18a.
Ejemplo 20 Síntesis del enlazador 20 Fmoc-Asp(OH)OtBu (100 mg, 0.24 mmol) , H2N- (CH2) 2- (CH3) -boc (36 µ?, 0.20 mmol), HATU (92 mg, 0.24 mmol) y DIEA (105 µ?, 0.60 mmol) se disuelven en 1 mi de DMF. La mezcla se agita durante 1 h a TA, se acidifica con AcOH (100 µ?) y se purifica por HPLC.
Rendimiento: 91 mg (0.13 mmol) MS Fmoc-Asp (NH (CH2) 2N (CH3) -boc) OtBu: 590.3 = [M+Na] + (PM calculado = 567.7 g/mol) .
El Fmoc-As (NH(CH2)2N(CH3) -boc) OtBu (91 mg, 0.13 mmol) se disuelve en DMF (1.0 mi), se agregan piperidina (50 µ?) , y DBU (15 µ?) y la mezcla se agita durante 45 minutos a TA. Se agrega AcOH (100 µ?) y el NH2-Asp( H(aí2)2N(CH3) -boc)OtBu se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 39 mg (0.09 mmol, sal de TFA) MS NH2-Asp(NH(CH2)2N(CH3) -boc)0tBu: m/z 368.1 = [M+Na] + (PM calculado = 345.4 g/mol) .
El NH2-Asp(NH(CH2)2N(CH3) -boc)OtBu (36 mg, 0.09 mmol) se disuelve en DMF (0.5 mi), y se agregan el ácido 6-tritilmercaptohexanoico (55 mg, 0.14 mmol), HATU (53 mg, 0.14 mmol) y DIEA (49 µ?, 0.28 mmol). La mezcla se agita durante 45 minutos. Se agrega AcOH (100 µ?) y el TrtS (CH2) 5CONH-Asp(NH(CH2)2N(CH3) -boc)OtBu se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 41 mg (0.06 mmol) MS TrtS(CH2)5CONH-Asp(NH(CH2)2N(CH3) -boc)OtBu: m/z 740.6 = [M+Na]+ (PM calculado = 718.0 g/mol) .
El TrtS(CH2)5CONH-Asp(NH(CH2)2N(CH3) -boc)OtBu (41 mg, 0.06 mmol) se disuelve en dioxano/H20 1:1 (1.0 mi), se agrega LiOH (4.1 mg, 0.17 mmol) y la mezcla se agita a 60 °C durante 1 h. Se agrega AcOH (50 µ?) y 20 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 31 mg (0.05 mmol) MS 20: m/z 684.5 = [M+Na] + (PM calculado = 661.9 g/mol).
Ejemplo 21 Síntesis del conjugado enlazador-exendina 21 La exendina protegida en la cadena lateral, unida a la resina (50 mg, 5 µp???) con un grupo protector de Mmt sobre Lys27 fue primero protegido con boc en la terminación N (véanse Materiales y Métodos) y luego se incuba cinco veces (5 minutos) con 2 mi de DCM/HFIP 9/1 (v/v) para remover el grupo protector de Mmt de Lys27. Se disuelve 20 (6.6 mg, 10 µ????) , PyBOP (5.2 mg, 10 µ????) y DIEA (7 µ?, 40 µp???) en DMF (400 µ?) y se agregan inmediatamente a la resina. Se incuba durante 3 h a TA, la resina se lava con DMF 10 x, DCM lOx y se seca in vacuo. El producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento : 2.4 mg MS 21: m/z 1497.2 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4488.0 g/mol) . Ejemplo 22 Síntesis del conjugado 22 del ácido graso-enlazador-exendina 22 Se disuelve 21 (2.6 mg) en 200 µ? de acetonitrilo/agua 1/1 y se agrega 1 (0.8 mg) en 400 µ? de acetonitrilo/agua 7/3. Se agregan 100 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M, la reacción se agita durante 5 min después de lo cual 22 se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 2.4 mg MS 22: m/z 1388.3 = [M+4H]4+; 1857.1 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 5566.4 g/mol) .
Ejemplo 23 Síntesis del precursor El ácido 6-tritilmercaptohexanoico (200 mg, 0.51 mmol) , (PfpO)2CO (202 mg, 0.51 mmol) y colidina (340 µ?, 2.65 mmol) se disuelven en DMSO (1 mi) y se agita durante 30 minutos a TA. La mezcla se agrega a una solución de Fmoc-Lys-OH (170 mg, 0.46 mmol) en H20/piridina/BuOH (3:3:1, 6 mi). La reacción se calienta a 60 °C durante 2 h, se diluye con EtOAc, se extrae 2x con H2S04 0.1 M, 2x con salmuera y se seca sobre Na2S04. El solvente se evapora bajo presión reducida y el residuo se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 109 mg MS 23: m/z 741.3 = [M+H] + (PM calculado = 741.0 g/mol) .
Ejemplo 24 Síntesis de los enlazadores 24a-24c 24a: 1 = H. R2 = boc 24b: R1 = Me, R2 = boc 24c: R1 = R2 = Me Se disuelven 23 (186 mg, 0.25 mmol) y DIEA (160 µ? , 0.92 mmol) se disuelve en DCM (2 mi) , se agrega a la resina de cloruro de 2 -clorotritilo (312 mg, 1.3 mmol/g) y se agita durante 45 minutos a TA. Se agrega MeOH (0.6 mi) y la resina se incuba durante otros 15 minutos. La resina se lava con DCM (lOx) y DMF (lOx) . La desprotección de Fmoc y la formación de urea fueron logrados de acuerdo con los procedimientos generales (véase Materiales y Métodos) por la reacción con N-boc-etilendiamina (57 µ? , 0.34 mmol), el producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 14 mg MS 24a: m/z 705.4 [M+H]+; 727.3 [M+Na] + (PM calculado = 704.9 g/mol) . 24b se sintetiza como se describe para 24a excepto por el uso de N-boc-N-metiletilendiamina en lugar de N-boc-etilendiamina .
Rendimiento: 21 mg MS 24b: m/z 719.3 [M+H]+; 741.4 [M+Na] + (PM calculado = 719.0 g/mol) . 24c se sintetiza como se describe para 24a excepto por el uso de N, N-dimetilentilendiamina en lugar de N-boc-etilendilamina .
Rendimiento: 10 mg MS 24c: m/z 633.2 = [M+H] + ( PM calculado = 632.9 g/mol) .
Ejemplo 25 Síntesis de los conjugados 25a-25c de exendina-enlazador disuelven 24a (7.0 mg , 0.01 mmol), PyBOP (5.2 mg, 10 µt???) y DIEA (7 µ? , 40 µt???) en DMF (250 µ? ) , se agregan inmediatamente a la exendina protegida en la cadena lateral, unida a la resina (50 mg, 5 µp???) y se incuba durante 2 h a TA. La resina se lava con DMF (10 x), DCM (lOx) y se seca in vacuo. El producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC .
Rendimiento: 1.6 mg MS 25a: m/z 1511.8 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4530.8 g/mol). 25b se sintetiza como se describe para 25a excepto por el uso de 24b en lugar de 24a.
Rendimiento : 4.3 mg MS 25b: m/z 1516.3 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4544.8 g/mol). 25c se sintetiza como se describió para 25a excepto por el uso de 24c en lugar de Rendimiento: 1.3 mg MS 25c: m/z 1520.4 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4558.8 g/mol) .
Ejemplo 26 Síntesis de los conjugados 26a-26c del ácido graso-enlazador Se disuelve 25a (1.6 mg) en 200 µ? de acetonitrilo/agua 1:1 y se agrega 1 (0.11 mg) en 200 µ? de acetonitrilo/agua 7/3. Se agregan 30 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M, la reacción se agita durante 5 minutos, después de lo cual 26a se purifica por RP-HPLC.
MS 26a: m/z 1870.0 = [M+3H] 3+ ( PM calculado = 5609.2 g/mol ) . 26b se sintetiza como se describió para 26a excepto por el uso de 25b en lugar de 25a.
MS 26b: m/z 1875.9 = [M+3H] 3+, 1406.7 = [M+4H] + (PM calculado = 5623.2 g/mol) . 26c se sintetiza como se describió para 26a excepto por el uso de 25c en lugar de 25a.
MS 26c: m/z 1879.4 = [M+3H] 3+, 1410.5 = [M+4H] 4+ (PM calculado = 5637.2 g/mol) .
Ejemplo 27 Síntesis de los conjugados 27a-27c de 20kDa-PEG-enlazador-exendina Se disuelve 25a (2.0 mg) en H20/MeCN 1:1 que contiene 0.1 % de TFA (200 µ?) . Se agrega una solución de PEG40kDa-maleimida (18 mg) en H20/MeCN 1:1 (1 mi) y el amortiguador de fosfato (15 µ?, pH 7.4, 0.5 M) . La solución se incuba a TA, después de 5 minutos se agrega AcOH (20 µ?) y 27a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala y se liofiliza. 27b se sintetiza como se describió para 27a excepto por el uso de 25b en lugar de 25a. 27c se sintetiza como se describió para 27a excepto por el uso de 25c en lugar de 25a.
Ejemplo 28 Síntesis del enlazador 28: El cloruro de 6 -bromohexanoilo (46 µ? , 0.31 mmol) se disuelve en 0.2 mi de CH2C12 y se agrega a una solución de H2N-CH2-CH2-STrt (100 mg, 0.28 mmol), DIEA (97 µ? , 0.56 mmol) en CH2C12 (0.8 mi) . La mezcla se agita durante 2 h a TA. La mezcla de reacción se acidifica con AcOH (50 µ?) y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica sobre gel de sílice (heptano/EtOAc = 1:1) para obtener el Br-(CH2)5-CONH- (CH2)2-STrt.
Rendimiento: 137 mg (0.276 mmol, 98 %) .
MS Br- (CH2)5-C0NH- (CH2)2-STrt: 518.9 = [M+Na] + (PM calculado = 496.5 g/mol) .
Se agrega la N-boc-etilendiamina (81 µ?, 0.51 mmol) a una solución de Br- (CH2) 5-C0NH- (CH2) 2-STrt (230 mg, 0.46 mmol) y Na2C03 (196 mg, 1.85 mmol) en DMF (0.8 mi). La mezcla de reacción se agita durante 10 h a 70 °C. Después de enfriamiento a TA, la mezcla se diluye con 4 mi (MeCN/H20 = 25:75, con 0.1 % de TFA) y se purifica por RP-HPLC para dar el Boc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt .
Rendimiento: 189 mg (0.27 mmol, 59 %, sal de TFA).
MS Boc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt : 576.5 = [M+H] + (PM calculado = 575.5 g/mol).
El Boc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt (189 mg, 0.27 mmol) y HCHO (35 % acuoso, 113 µ?) se disuelve en MeCN (1.5 mi) y NaCNBH3 (34 mg, 0.54 mmol) fue agregado. La reacción se agita durante 5 h a TA. Después del complemento de la reacción ( S) la solución se diluye con H20 (5 mi) y se extrae con CH2C12 (3 x 5 mi) . Las capas orgánicas combinadas se secan sobre MgS0 , se filtran y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica por RP-HPLC para dar el Boc-NH-(CH2)2-N(CH3) - (CH2)5-CONH- (CH2)2-STrt.
Rendimiento: 62.8 mg (0.11 mmol, 39 %) .
MS Boc-NH- (CH2) 2-N(CH3) - (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt : 590.6 = [M+H] + (P calculado = 589.0 g/mol) .
El Boc-NH- (CH2)2-N(CH3) - (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt (62.8 mg, 0.11 mmol) se disuelve en THF (6 mi) y HCl en dioxano (130 µ?, solución 4 M) fue agregado. La mezcla de reacción se agita durante 12 h a TA. Se agregan 200 µ? de HCl en dioxano y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica por RP-HPLC para dar el H2N- (CH2)2-N(CH3) - (CH2) 5-CONH- (CH2) 2-STrt y el material de partida no consumido de Boc-NH- (CH2) 2-N(CH3) - (CH2) 5-C0NH- (CH2) 2-STrt .
Rendimiento: 32.8 mg (0.062 mmol, 44 %, sal de HCl) 28 y 14.7 mg (0.025 mmol, 23 %, sal de TFA) del material de partida MS 28: 490.5 = [M+H]+, (PM calculado = 489.0 g/mol).
Ejemplo 29 Procedimiento general para la síntesis de los precursores 29a y 29b de BNP substituidos con ácido carboxílico El anhídrido cis-ciclohexano-1 , 2 -dicarboxílico (231 mg, 1.5 mmol) y piridina (271 µ?, 2 mmol) se disuelven en DCM (2 mi) y se agrega a BNP-32a protegido en la cadena lateral, unido a la resina (300 mg) . Se incuba durante 1 h a TA, se lava con 10 x DCM y se seca in vacuo.
El BNP-32b protegido en la cadena lateral, unido a la resina, que lleva un grupo protector de ivDde en Lysl4, fue primero protegido con boc en la terminación N, se desprotege en la posición de Lysl4 (véanse Materiales y Métodos) y luego se hace reaccionar con el anhídrido cis-ciclohexano-1 , 2-dicarboxílico como se describió anteriormente para 29a.
Ejemplo 30 Síntesis para los BNP-enlazador- tioles 30a y 30b.
El H2N- (CH2)2-N(CH3) - (CH2)5-CONH- (CH2)2-STrt 28 (5.2 mg, 0.01 mmol), PyBOP (5.2 mg, 0.01 mmol) y DIEA (7.0 µ? , 0.04 mmol) se disuelve en DMF (300 µ?) y se agrega a BNP 29a protegido en la cadena lateral, unido a la resina (50 mg, 0.005 mmol) . Se incuba durante 2 h a TA, la resina se lava con DMF (lOx) , DCM (lOx) y se seca in vacuo. El producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento : 9.8 mg MS 30a: m/z 947.6 = [M+4H]4+; 1263.1 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3786.3 g/mol) . 30b 30b se sintetiza como se describió anteriormente excepto por el uso del derivado de BNP 29b unido a la resina en lugar de 29a.
Rendimiento: 7.4 mg.
MS 30b: m/z 947.5 = [M+4H]4+; 1263.0 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3786.3 g/mol) .
Ejemplo 31 Síntesis de los conjugados 31a y 31b de 40kDa-PEG-enlazador-BNP 30a (4 mg) se disuelve en H20/MeCN 1:1 que contiene 0.1 % de TFA (200 µ?) . Una solución de PEG40kDa-maleimida (42.2 mg) en H20/MeCN 1:1 (1 mi) y el amortiguador de fosfato (15 µ?, H 7.4, 0.5 M) fue agregado. La solución se incuba a TA, después de 5 minutos se agrega AcOH (20 µ?) y 31a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala y se liofiliza.
Rendimiento: 2.0 mg. 31b 31b se sintetiza como se describió para 31a excepto por el uso de 30b en lugar de 30a.
Rendimiento: 16.8 mg.
Ejemplo 32 Síntesis del enlazador 32 32 El cloruro de 3 -bromopropionilo (62.5 µ? , 0.62 mmol) se disuelve en 0.5 mi de CH2C12 y se agrega a una solución de H2N-CH2-CH2-STrt (200 mg, 0.56 mmol), DIEA (196 µ? , 1.1 mmol) en CH2C12 (1 mi) . La mezcla se agita durante 1 h a TA. La mezcla de la reacción se acidifica con AcOH (100 µ?) y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica sobre gel de sílice (heptano/EtOAc = 1:1) para obtener el Br-(CH2)2-CONH- (CH2)2-STrt .
Rendimiento: 223 mg (0.49 mmol, 87 %) .
MS Br- (CH2)2-CONH- (CH2)2-STrt : 478.7 = [M+Na] + (PM calculado = 454.7 g/mol) .
La N-Alloc-etilendiamina en la forma de la sal de HC1 (43.5 mg, 0.24 mmol) y DIEA (38 µ?, 0.22 mmol) se agregan a una solución de Br- (CH2) 2-CONH- (CH2) -STrt (100 mg, 0.22 mmol) y Na2C03 (93 mg, 0.87 mmol) en DMF (1 mi). La mezcla de reacción se agita durante 10 h a 70 °C. Después del enfriamiento gradual hasta TA, la mezcla de reacción se diluye con 4 mi (MeCN/H20 = 25:75, con 0.1 % de TFA) y se purifica por HPLC para dar la Alloc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 2-CONH- (CH2)2-STrt.
Rendimiento: 61 mg (0.096 mmol, 44 %, sal de TFA) .
MS Alloc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 2-CONH- (CH2) 2-STrt : 540.8 = [M+Na] + (PM calculado = 517.8 g/mol).
El Alloc-NH- (CH2) 2-NH- (CH2) 2-CONH- (CH2) 2-STrt (60.9 mg, 0.096 mmol) se disuelve en CH2C12 y se agrega Boc20 (42 mg, 0.19 mmol) . La solución se agita durante 20 h a TA. Después del complemento la reacción se apaga por la adición de 70 µ? de AcOH y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se diluye con 4 mi de MeCN/H20 (25:75, con 0.1 % de TFA) y se purifica por RP-HPLC para dar el Alloc-NH- (CH2) 2- N(Boc) - (CH2) 2-C0NH- (CH2) 2-STrt .
Rendimiento: 53.3 mg (0.086 mmol , 89 %) .
MS Alloc-NH- (CH2)2-N(Boc) - (CH2)2-CONH- (CH2)2-STrt: 640.6 [M+Na]+ (PM calculado = 617.9 g/mol).
El Alloc-NH- (CH2)2-N(Boc) - (CH2)2-C0NH- (CH2)2-STrt (48.3 mg, 0.078 mmol) se disuelve en THF, se agregan formiato de trietilamonio (62 µ?) y Pd(PPh3)4 (16 mg) . La solución se agita durante 12 h a TA y se verifica por MS . Después del complemento, el solvente se remueve in vacuo. El residuo se disuelve en MeCN/H20 (50:50, con 0.1 % de TFA) y se purifica por RP-HPLC para dar el H2N- (CH2) 2-N (Boc) - (CH2) 2-CONH- (CH2) 2-STrt (31) .
Rendimiento: 20.1 mg (0.031 mmol), 40 %, sal de TFA).
MS 31: 534.6 = [M+H]+, 556.6 = [M+Na]+, (PM calculado = 533.5 g/mol) .
Ejemplo 33 Síntesis de BNP-enlazador- tioles 33a y 33b 33a 33a se sintetiza como se describió para 30a excepto por el uso de 32 en lugar de 28.
Rendimiento : 8.0 mg MS 33a: m/z 933.5 = [M+4H]4+; 1244.3 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3729.9 g/mol) . 33b 33b se sintetiza como se describe para 30b excepto por el uso de 32 en lugar de 28.
Rendimiento: 5.0 mg MS 33b: m/z 933.5 = [M+4H]4+; 1244.3 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3715.9 g/mol) .
Ejemplo 34 Síntesis de los conjugados 34a y 34b de 40kDa-PEG-enlazador-BNP 34a disuelve 33a (4.3 mg) en H20/MeCN 1:1 que contiene 0.1 % de TFA (200 µ?) . Se agrega una solución de PEG40kDa-maleimida (46.8 mg) en H20/MeCN 1:1 (1 mi) y el amortiguador de fosfato (20 µ? , H 7.4, 0.5 M) . La solución se incuba a TA, después de 5 minutos se agrega AcOH (20 µ?) y 34a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala y se liofiliza.
Rendimiento: 9.7 mg. 34b se sintetiza como se describió para 34a excepto por el uso de 33b en lugar de 33a.
Rendimiento: 11.5 mg.
Ejemplo 35 Síntesis del enlazador 35 35 El bromuro de bromoacetilo (54 µ?, 0.62 mmol) se disuelve en 0.5 mi de CH2C12 y se agrega a una solución de H2N-CH2-CH2-STrt (200 mg, 0.56 mmol) y DIEA (196 µ? , 1.1 mmol) en CH2C12 (1 mi) . La mezcla se agita durante 1 h a TA. La mezcla de reacción se acidifica con AcOH (100 µ?) y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica sobre gel de sílice (heptano/EtOAc = 1:1) para obtener el producto de Br- (CH2) -CONH- (CH2)2-STrt.
Rendimiento: 245 mg (0.55 mmol, 99 %) .
MS Br- (CH2) -CONH- (CH2)2-STrt : 462.4 = [M+Na] + (PM calculado = 440.4 g/mol) .
La sal de HCl de la N-Alloc-etilendiamina (45 mg, 0.25 mmol) y DIEA (79 µ?, 0.45 mmol) se agrega a una solución de Br- (CH2) -CONH- (CH2) 2-STrt (100 mg, 0.23 mmol) en DMF (1 mi) . La mezcla de la reacción se agita durante 10 h a 70 °C. Después del enfriamiento gradual a TA, la mezcla de la reacción se diluye con H20/Et20 (1:1, 40 mi) y las capas se separan. La capa acuosa se extrae varias veces con Et20. Las capas orgánicas combinadas se secan con MgS0 , se filtran y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se purifica sobre gel de sílice (DCM/MeOH = 95:5) para dar el Alloc-NH- (CH2) 2-NH-CH2-CONH- (CH2) 2-STrt .
Rendimiento: 94 mg (0.186 mmol, 82 %, contiene DMF residual). MS Alloc-NH- (CH2) 2-NH-CH2-C0NH- (CH2) 2-STrt : 526.8 = [M+Na] + (PM calculado = 503.8 g/mol) .
El Alloc-NH- (CH2)2-NH-CH2-CONH- (CH2) 2-STrt (94 mg, 0.186 mmol, con DMF)) se disuelve en CH2C12 y se agrega Boc20 (81 mg, 0.37 mmol) . La solución se agita durante 20 h a TA. Después del complemento, la reacción se apaga por la adición de 100 µ? de AcOH y el solvente se remueve in vacuo. El residuo se diluye con 4 mi de MeCN/H20 (25:75, con 0.1 % de TFA) y se purifica por RP-HPLC para dar el Alloc-NH- (CH2) 2-N(Boc) -CH2-CONH- (CH2) 2-STrt.
Rendimiento: 34.7 mg (0.057 mmol, 26 %) .
MS Alloc-NH- (CH2)2-N(Boc) -CH2-CONH- (CH2) 2-STrt : 603.9 = [M+Na] + (PM calculado = 609.3 g/mol).
El Alloc-NH- (CH2) 2- (Boc) -CH2-CONH- (CH2) 2-STrt (34.7 mg, 0.048 mmol) se disuelve en THF, y se agrega el formiato de trietilamonio (38 µ?) y Pd(PPh3)4 (5 mg) . La solución se agita durante 12 h a TA y se verifica por MS . Después del complemento, el solvente se remueve in vacuo. El residuo se disuelve en MeCN/H20 (50:50, con 0.1 % de TFA) y se purifica por RP-HPLC para dar el H2N- (CH2) 2-N (Boc) -CH2-CONH- (CH2) 2-STrt 35.
Rendimiento: 12.6 mg (0.019 mmol) , 42 %, sal de TFA).
MS 35: 520.1 = [M+H]+, 542.2 = [M+Na]+' (PM calculado = 519.2 g/mol) .
Ejemplo 36 Síntesis de BNP-enlazador- tioles 36a y 36b 36a 36a se sintetiza como se describió para 30a excepto por el uso de 35 en lugar de 28.
Rendimiento: 9.1 mg MS 36a: m/z 930.0 = [M+4H]4+; 1239.6 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3715.9 g/mol) . 36b se sintetiza como se describió para 30b excepto por el uso de 35 en lugar de 28.
Rendimiento: 8.0 mg MS 36b: m/z 929.9 = [M+4H]4+; 1239.5 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 3715.9 g/mol) .
Ejemplo 37 Síntesis de los conjugados 37a y 37b de 40kDa-PEG-enlazador-BNP 37a Se disuelve 36a (4.2 mg) en H20/MeCN 1:1 que contiene 0.1 % de TFA (200 µ?) . Se agrega una solución de PEG40kDa-maleimida (68 mg) en H20/MeCN 1:1 (1 mi) y el amortiguador de fosfato (20 µ? , H 7.4, 0.5 M) . La solución se incuba a TA, después de 5 minutos se agrega AcOH (20 µ?) y 37a se purifica por cromatografía de intercambio catiónico, se desala y se liofiliza.
Rendimiento: 16 mg. 37b 37b se sintetiza como se describió para 37a excepto por el uso de 36b en lugar de 36a.
Rendimiento: 18.5 mg.
Ejemplo 38 Síntesis de los conjugados del enlazador-exendina Los conjugados de enlazador-exendina fueron sintetizados de acuerdo con el método de síntesis general A, B, C, D, o F Método A reactivo de unión de Exen- diamina H2N-Exendina (resina dina * ·? Método B reactivo de reactivo de unión de unión diácido Exen- diamina ll2N-Excndina (resina) dina ~ Método C reactivo de unión de diamina diácida 1. reactivo de Método D lljN-Exendina (resina) Método E HiN-Exendina (resina) dina 2. diamina protector e moc Método A Síntesis: Se disuelven el anhídrido diácido (0.2 mmol) y piridina (0.2 mmol) en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a la exendina-4 protegida en la cadena lateral sobre la resina (2 µ????) y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces). Se disuelven el PyBOP (0.1 mmol) y diamina (0.1 mmol) en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Los conjugados de exendina-enlazador fueron separados y purificados por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Método B Síntesis: Como se describió para el método A excepto que el anhídrido diácido y la piridina son reemplazados por el diácido (0.2 mmol), HOBt (0.2 mmol), DIC (0.2 mmol), y colidina (0.4 mmol).
Método C Síntesis: La diamina (0.6 mmol) se disuelve en 1 mi de DCM seco y se agrega anhídrido diácido (0.4 mmol) . La mezcla se agita durante 60 minutos a temperatura ambiente. Se retira el DCM, el residuo se disuelve en ACN/agua/AcOH, y el aminoácido se purifica por RP-HPLC y se liofiliza.
El aminoácido (0.1 mmol), HOBt (0.1 mmol), DIC (0.1 mmol) y colidina (0.2 mmol) se disuelven en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a exendina-4 sobre resina (2 µ????) y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Los conjugados de la exendina-enlazador se separan y se purifican por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Método D Síntesis: Se disuelven el anhídrido diácido (0.2 mmol) y piridina (0.2 mmol) en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a exendina-4 sobre resina (2 µt???) y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces). El PyBOP (0.1 mmol), HOBt (0.1 mmol) y colidina (0.4 mmol) se disuelven en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Se disuelven la diamina (0.1 mmol) y DIEA (0.3 mmol) en una mezcla de 0.4 mi de DMF y 0.4 mi de EtOH. La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Los conjugados de la exendina-enlazador se separan y se purifican por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Método E Síntesis: el aminoácido de Fmoc (0.1 mmol), PyBOP (0.1 mmol) y DIEA (0.2 mmol) se disuelven en 0.3 mi de DMF seco. La mezcla se agregó a exendina-4 sobre resina (2 µp???) y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. El grupo protector de Fmoc se remueve por la incubación de la resina en DMF/piperidina 4/1 (v/v) durante 2 x 10 min. La resina se lava con DMF (10 veces) y DCM (10 veces) . El cloroformiato de p-nitrofenilo (0.1 mmol) se disuelve en 0.3 mi de THF seco y DIEA (0.2 mmol) . La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DCF (10 veces) . La diamina (0.1 mmol) se disuelve en 0.3 mi de DMF. La mezcla se agrega a la resina y se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. La resina se lava con DMF (10 veces) . Los conjugados de exendina-enlazador se separaron y se purificaron por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Método F Síntesis: como se describe para el método A, seguido por la desprotección de fmoc y acetilacion: el grupo protector de Fmoc fue removido por la incubación de la resina en DMF/piperidina 4/1 (v/v) durante 2 x 10 minutos. La resina se lava con DMF (10 veces) . La acetilacion se efectúa por la incubación de la resina con anhídrido acético/piridina/DMF 1/1/2 (v/v/v) durante 30 minutos. La resina se lava con DMF (10 veces. Los conjugados de exendina-enlazador se separaron y se purificaron por RP-HPLC como se describe en "Materiales y Métodos" .
Los detalles adicionales que se refieren a los números de los compuestos, las materias primas, el método de síntesis, el peso molecular (PM) y los datos de MS son mostrados en la siguiente tabla. 20 20 Tabla 1 (Cont.) 20 Tabla 1 (Cont.) Tabla 1 (Cont.) 101 Tabla 1 (Cont.) 10 Ejemplo 39 Síntesis de los conjugados de hidrogel -enlazador-exendina 39 Las micropartículas de hidrogel funcionalizadas con maleimida se sintetizaron como se describe en EP 1 625 856 Al. 30 mg de las micropartículas de hidrogel derivadas de maleimida (carga de 40 µ????/g, 1.2 µ?t???) se hicieron reaccionar con 6 mg del compuesto 25a (1.32 µ????, 1.1 eq.) en 600 µ? de acetonitrilo (20/80 (v/v)/50 mM del amortiguador de fosfato (pH 7.4) durante 10 minutos para dar las micropartículas 39 del hidrogel cargado con la exendina-enlazador. El hidrogel cargado 39 se lava 5 veces con acetonitrilo/agua 50/50 (v/v) y tres veces con agua.
Ejemplo 40 Síntesis del enlazador 40 Se disuelven el Fmoc-Ala-OH (250 mg, 0.8 mmol) y DIEA (170 µ?, 1.0 mmol) en DCM (2 mi), se agregan a la resina del cloruro de 2 -clorotritilo (312 mg, 1.3 mmol/g) y se agita durante 45 minutos a TA. Se agrega metanol (0.6 mi) y la resina se incuba durante otros 15 minutos. La resina se lava con DCM (lOx) y DMF (lOx) . La desprotección de Fmoc y la formación de urea se lograron de acuerdo con los procedimientos generales (véanse Materiales y Métodos) por la reacción con el compuesto intermedio del enlazador 5a, el producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 53 mg MS 40: m/z 604.4 = [M+H] + (PM calculado = 603.8 g/mol).
Ejemplo 41 Síntesis del conjugado de exendina-enlazador 41 Se disuelven 40 (sal de HCl, 14.0 mg, 0.02 mmol) , PyBOP (10.2 mg, 0.02 mmol) y DIEA (17 µ? , 0.1 mmol) en DMF (300 µ?) , se agregan inmediatamente a la exendina protegida en la cadena lateral, unida a la resina (100 mg, 10 µp???) y se incuba durante 4 h a TA. La resina se lava con DMF (lOx) , DCM (lOx) y se seca in vacuo. El producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 5.4 mg MS 40: m/z 1510.9= [M+3H] 3+ (PM calculado = 4530.1 g/mol).
Ejemplo 42 Síntesis del conjugado de ácido graso- enlazador 42 Se disuelve 41 (1.6 mg) en 200 µ? acetonitrilo/agua 3/1 y se agrega 1 (0.11 mg) en 200 µ? de acetonitrilo/agua 3/1. Se agregan 30 µ? del amortiguador de fosfato de sodio 0.25 M, la reacción se agita durante 5 minutos, después de lo cual 42 se purifica por RP-HPLC.
MS 42: m/z 1870.2 = [ +3H] 3+ (PM calculado = 5608.4 g/mol) . Ejemplo 43 Síntesis del conjugado de hidrogel- enlazador-exendina 43 43 se sintetiza como se describió para 39 excepto por el uso de 41 en lugar de 25a.
Ejemplo 44 Síntesis del enlazador 44 44 se sintetiza como se describió para 40 excepto por el uso de 28 en lugar de 5a.
Rendimiento: 74 mg MS 44: m/z 605.4 = [M+H] + (PM calculado = 604.8 g/mol) .
Ejemplo 45 Síntesis del conjugado de exendina-enlazador 45 45 se sintetiza como se describió para 41 excepto por el uso de 44 en lugar de 40.
Rendimiento : 6.0 mg MS 45: m/z 1511.3 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4531.1 g/mol) . Ejemplo 46 Síntesis del conjugado de ácido graso-enlazador 46 46 46 se sintetiza como se describió para 42 excepto por el uso de 45 en lugar de 41.
MS 46: m/z 1870.5 = [M+3H] 3+ ( PM calculado = 5609.5 g/mol) .
Ejemplo 47 Síntesis del compuesto intermedio 47 del enlazador El sulfuro de tritilo (247 mg, 0.89 mmol) se suspende en 1 mi de DMSO. El DBU (152 µ? , 1.02 mmol) y 6-bromohexan-l-ol (173 mg, 0.96) fueron agregados y la mezcla se agita durante 5 minutos a TA. La mezcla de reacción se disuelve en 20 mi de acetato de etilo y se lava con H2S0 1 N (2x) y salmuera (3x) .La capa orgánica se seca (Na2S04) y las substancias volátiles se remueven in vacuo. El producto se purifica por cromatografía instantánea sobre sílice (heptano/AcOEt 1/1) .
Rendimiento de 283 mg del (S-tritil) -6 -mercaptohexan- l-ol .
El (S-tritil) -6-mercaptohexan-l-ol (466 mg, 1.24 mmol) se disuelven en 3.5 mi de DCM, 0.5 mi de DMSO y 0.6 mi de NEt3, y se enfría en un baño de hielo. La S03-piridina (408 mg, 2.57 mmol) se suspende en 0.5 mi de DMSO y se agrega a la mezcla de reacción. El baño de hielo se remueve y la reacción se agita durante 60 minutos a TA. La mezcla de la reacción se disuelve en 20 mi de Et20 y se extrae con H2S04 1 N (2x) y salmuera (3x) . La capa orgánica se seca (Na2S04) y las substancias volátiles se remueven in vacuo. El producto se purifica por cromatografía por desorción súbita sobre sílice (heptano/AcOEt l/l) .
Rendimiento: 390 mg de (S-tritil) -6-mercaptohexan-l-al 47 MS 47: m/z 243.1 = [Trt]+, 413.1 = [M+K] + (PM calculado = 374.4 g/mol) .
Ejemplo 48 Síntesis del enlazador 48 El Fmoc-Ala-OH (250 mg, 0.8 mmol) y DIEA (170 µ?, 1.0 mmol) se disuelven en DCM (2 mi), se agregan a la resina de cloruro de 2-clorotritilo (312 mg, 1.3 mmol/g) y se agita durante 45 minutos a TA. Se agrega metanol (0.6 mi) y la resina se incuba durante otros 15 minutos. La resina se lava con DCM (lOx) y DMF (lOx) . La desprotección de Fmoc y la formación de urea se lograron de acuerdo con los procedimientos generales (véanse Materiales y Métodos) por la reacción con etilendiamina . Para la alquilación reductora 47 (299 mg, 0.8 mmol) y Na(0Ac)3BH (340 mg, 1.6 mmol) se disuelven en 0.5 mi de DMF, 0.5 mi de MeOH y 10 µ? de AcOH, se agregan a la resina y se agitan durante 2 h a TA. La resina se lava con DMF (lOx) y DCM (lOx) . La protección de Boc se efectúa por la agitación de la resina en una solución del anhídrido de boc (218 mg, 1.0 mmol) y DIEA (170 µ?, 1.0 mmol) en DCM. La resina se lava con DCM (lOx) y el producto se separa de la resina y se purifica por RP-HPLC.
Rendimiento: 34 mg MS 48: m/z 634.2 [M+H] + (PM calculado = 633.9 g/mol) .
Ejemplo 49 Síntesis del conjugado de exendina-enlazador 49 49 se sintetiza como se describió para 41 except por el uso de 48 en lugar de 40.
Rendimiento: 4.8 mg MS 49: m/z 1487.3 = [M+3H] 3+ (PM calculado = 4460.0 g/mol). Ejemplo 50 Síntesis del conjugado de hidrogel-enlazador-exendina 50 hidrogel 50 se sintetiza como se describió para 39 excepto por el uso de 49 en lugar de Ejemplo 51 Características cinéticas de la liberación in vitro La liberación de la molécula del fármaco desde 38a hasta 38z, 38aa hasta 38ab, 4, 5, 9a, 9b, 9c, 10, 13a, 15, 19a, 19b, 22, 26a hasta 26c, 31a, 31b, 34a, 34b, 37a, 37b, 42, 43, 46, y 50 se efectúan por hidrólisis en el amortiguador a pH 7.4 y 37 °C o pH 4 y 37 °C como se describe en "Materiales y métodos" .
Compuesto ti/2 del amortiguador A ti/2 del amortiguador B (pH 7.4) (pH 4.0) 38a < 1 h 13 h 38b 20 h 72 d 38c > 3 m > 3 m 38d 58 d n.d. 38e 41 d n.d. 38f 23 h 114 d 38g 19 d ninguno 38h 47 d ninguno 38i 69 h 108 d 38j 16 d n.d. 38k 40 min 6 d 381 16 h n.d. 38m 17 h 66 d 38n 18 d n.d. 38o 11-12 h 22 d 38p 26 d 178 d 38q 26 d 210 d 38r 26 h 47 d 38s 80 min 80 h 38t 96 min 67 h 38u 51 d ninguno 38v 47 d ninguno 38w 8 d 3.2 a 38x 72 d n.d. 38y 11-14 h 105 d 38z 11 d 1.6 a 8aa 40 h 65 d 8ab 20 h 20 d 8ac 14 h n.d. 8ad 18 h n.d. 4 15 d n.d. 5 22 h n.d. 9a 340 h n.d. 9b 360 h n.d. 9c 120 h n.d. 10 130 h n.d. 13a 120 h n.d. 13b 160 h n.d. 15 160 h n.d. 19a 31 h n.d. 19b 18 h n.d. 22 40 d n.d. 26a 34 d n.d. 26b 40 d n.d. 26a 18 d n.d. 31a 22 h n.d. 31b 95 h n.d. 34a 42 h n.d. 34b 205 h n.d. 37a 138 h n.d. 37b 639 h n.d. 42 10 d n.d. 43 17 d n.d. 46 13 d n.d. 50 35 d n.d.
Ejemplo 52 Características cinéticas de la liberación - correlación in vitro/in vivo Las características cinéticas in vivo fueron determinadas comparando las características cinéticas de 13a con las características cinéticas de 13c y 13b con 13d, respectivamente, después de la inyección intravenosa en la rata. Los estudios en animales se efectuaron en Heidelberg Pharma AG, Heidelberg, Alemania. 13a (27 mg) se disuelve en 3.5 mi de PBS y 500 µ? de la solución resultante se inyectan intravenosamente en cada una de seis ratas. Las ratas SD macho con aproximadamente 270 g de peso fueron utilizadas. Las muestras de la sangre fueron extraídas a t = 0, 2 h, 24 h, 32 h, 48 h, 72 h, 92 h, 120 h, y 168 h, se preparó el plasma, y el plasma se analizó para verificar la fluorescencia de la fluoresceína utilizando un espectrómetro de Perkin Elmer LS 50B.
Las características farmacocinéticas de 13c se determinaron como se describe para 13a. Las características farmacocinéticas de 13b y 13d fueron determinadas como se describe para 13a, excepto por el uso de 20 mg de 13b y 13d cada uno en 2.5 mi de PBS y cuatro ratas .
La vida media de la hidrólisis del enlazador se calculó a partir de la relación de la fluorescencia de 13a comparado con la fluorescencia de 13c y 13b comparado con 13d, respectivamente, en los instantes del tiempo respectivos .
La vida media de la hidrólisis del enlazador in vivo se determinó que va a ser de 115 h y 160 h para 13a y 13b, respectivamente, que es una correlación excelente con respecto a la vida media de la hidrólisis del enlazador in vitro de 120 h y 160 h para 13a y 13b, respectivamente .
Abreviaturas Acp 4- (2-aminetil) -1-carboxiraetil-piperazina AcOH ácido acético Boc t-butiloxicarbonilo Dab ácido 2 , 4 -diaminobutírico DBU 1 , 3-diazobiciclo [5.4.0] undeceno DCM diclorometano Dda ácido dodecanoico DIC diisopropilcarbodiimida DIEA diisopropiletilamida DMPA dimetilamino-piridina DMF N, N-dimetilformamida DIVISO dimetilsulfóxido EDTA ácido etilendiamintetracético eq equivalente estequiométrico Fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo HATU hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-l- il) -?,?,?' ,?' -tetrametil-uronio HFIP hexafluoroisopropanol HEPES N- (2-hidroxietil) piperazin-N' - (ácido 2- etanosulfónico) HOBt N-hidroxibenzotriazol ivDde 1- (4 , 4 -dimetil-2 , 6 -dioxo-ciclohexilideno) -3 - metilbutilo LCMS espectrometría de masa unida a - cromatografía líquida Mal 3-maleimido propionilo Mmt 4 -metoxitritilo MS espectro de masa PM masa molecular n.d. no determinado PfpOH pentafluorofenol PyBOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris- pi rolidino- fosfonio RP-HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa TA temperatura ambiente SEC cromatografía por exclusión de tamaño Suc succinimidopropionilo TCP resina de cloruro de 2 -clorotritilo TES trietilsilano TMOB 2 , 4 , 6-trimetoxibencilo TFA ácido trifluoroacético THF tetrahidrofurano UV ultravioleta VIS visual Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (36)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un profármaco o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable caracterizado porque comprende un conjugado enlazador de fármaco D-L, donde : -D es una porción activa biológicamente que contiene nitrógeno; y -L es una porción enlazadora no activa biológicamente -L1 representada por la fórmula (I) , en donde la línea punteada indica la fijación al nitrógeno de la porción biológicamente activa por la formación de un enlace de amida; X es C(R4R4a); N(R4); 0; C (R4R4a) -C (R5R5a) ; C(R5R5a)-C(R4R4a); C(R4R4a) -N(R6) ; N (R6) -C (R4R4a) ; C(R4R4a)-0; u 0-C(R4Ra) ; XI es C; O S (0) ; X2 C(R7,R7a); O C(R7,R7a) -C(R8,R8a) ; X3 es O; S; o -N-CN; R1, RLA, R2, R2A, R3 , R3A, R4 , R4A, R5 , R5A, R6, R7, R7A, R8 , R8A son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; y alquilo de Ci-4 ; opcionalmente, uno o más de los pares de RLA/R4A, RLA/R5A, R4 /R5A, R7A/R8A forman un enlace químico; opcionalmente, uno o más de los pares de R1/RLA, R2/R2A, R4/R4A, R5A/R5A, R7/R A, R8/R8A están unidos junto con el átomo al cual los mismos están fijados para formar un cicloalquilo de C3-7; o un heterocicl ilo de 4 a 7 elementos ; opcionalmente, uno o más de los pares de R R4, R R5, R R6, R4/R5, R4/R6, R7/R8, R2/R3 están unidos junto con los átomos a los cuales los mismos están fijados para formar un anillo A; opcionalmente , R3/R3A están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos; A se selecciona del grupo que consiste de fenilo; natfilo; indenilo; indanilo; tetralinilo; cicloalquilo de C3-Cio; heterocicliclo de 4 a 7 elementos, y heterobiciclilo de 9 a 11 elementos; y en donde L1 está substituido con uno a cuatro grupos L2-Z y opcionalmente substituido adic ionalmente , siempre que el hidrógeno marcado con el asterisco en la fórmula (I) no está reemplazado por un substituyente ; en donde L2 es un enlace químico único o un espaciador; y Z es un grupo portador.
2. El profármaco de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X3 es O.
3. El profármaco de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque X es N(R4), X1 es C y X3 es 0.
4. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque X2 es C(R7Ra) .
5. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque L1 se selecciona del grupo que consiste de: 119 en donde R es H; o alquilo de Ci-4; Y es NH; 0; o S; y R1, Rla, R2, R2a, R3, R3a, R , X, X1, X2 tienen el significado de conformidad con la reivindicación 1.
6. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque L1 se selecciona del grupo que consiste de 121 ??? en donde R tiene el significado de conformidad con la reivindicación 5.
7. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque L2 es un enlace químico único, o L2-Z es COOR9; OR9; C(0)R9; C(0)N(R9R9a) ; S(0)2N(R9R9a) ; S (0) N (R9R9a) ; S(0)2R9; S(0)R9; N(R9) S (0) 2N(R9aR9b) ; SR9 ; N(R9R9a) ; 0C(0)R9; N (R9) C (O) R9a ; N(R9)S(0)2R9a; N(R9)S(0)R9a; N (R9) C (0) 0R9a ; N (R9 ) C (0) N (R9aR9b) ; OC (0) N (R9R9a) ; T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50, o alquinilo de C2-50, en donde T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50 y alquinilo de C2-50 están substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de Ci-so; alquenilo de C2-50; y alquinilo de C2-50 están interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -0-; -C(0)-; -CÍOWR11) -; -S (0) 2N (R11) - ; - S (0) N (R11 ) - ; -S(0)2-; -S(0)-; -N(R11)S(0)2N(Rlla) -; -S-; -N (R11) - ; -0C(0)R11; -N(R11)C(0) -; -N(Rn)S(0)2-; -N (R11) S (0) - ; -N (R11) C (0) O- ; -NlR^CfOlNlR113)-; y -OCÍOÍ ÍR^R113) - ; R9, R9a, R9b son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; Z; T; y alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50; o alquinilo de C2-50; en donde T; alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50; y alquinilo de C2-50, están substituidos opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes y en donde alquilo de Ci-50; alquenilo de C2-50, y alquinilo de 2.50, son interrumpidos opcionalmente por uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste de T, -C(0)0-; -0-; -C(0)-; -C (0) N (R11) - ; -S (0) 2N (R11) - ; -S(0)N(R11) -; -S(0)2-; -S(0)-; -N (R11) S (0) 2N (Rlla) - ; -S-; -N(R1X)-; -0C(0)R11; -N (R11) C (0) - ; -N (R11) S (0) 2- ; -N (R11) S (0) - ; -N(R11)C(0)0-; -N(R11)C(0)N(Rlla) - ; y -0C (0) N (R11Rlla) ; T se selecciona del grupo que consiste de fenilo; naftilo; indenilo; indanilo; tretralinilo; cicloalquilo de C3-Cio; heterocicliclo de 4 a 7 elementos; o heterobiciclilo de 9 a 11 elementos, en donde t está substituido opcionalmente con uno o más de R10, que son los mismos o diferentes ; R10 es Z; halógeno; CN; oxo (=0); C00R12; 0R12; C(0)R12; C(0)N(R12R12a) ; S (O) 2N (R12R12a) ; S (O) N (R12R1 a) ; S(0)2R12; S(0)R12; N(R12)S(0)2N(R12aR12b) ; SR12; N(R12R12a); N02 ; 0C(0)R12; N (R12) C (0) R12a; N(R12)S(0)2R12a; N (R12) S (0) R1 a; N (R12) C (O) 0R12a ; N(R12) C(0) (R12aR12b) ; 0C (0) N (R12R12a) ; o alquilo de C1-6; en donde alquilo de C1-s está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes; R11, Rlla, R12, R12a, R12b son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; Z; o alquilo de Ci-6, en donde alquilo de Ci-6 está substituido opcionalmente con uno o más de halógeno, que son los mismos o diferentes,- siempre que uno de R9, R9a, R9b, R10, R11, Rlla, R12, R12a, R12b sea Z.
8. El profárraaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque L2 es una cadena de alquilo de Ci-2o que está interrumpida opcionalmente por uno o más grupos seleccionados independientemente de -0-; y C(0)N(R3aa) ; substituido opcionalmente con uno o más grupos seleccionados independientemente de OH; y C (O) N (R3aaR3aaa) ; y en donde R3aa, R3aaa son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; y alquilo de Ci-4.
9. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque L2 tiene un peso molecular en el intervalo desde 14 g/mol hasta 750 g/mol.
10. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque L2 está fijado a Z por medio de un grupo terminal seleccionado de
11. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque L está representado por la fórmula (la) en donde R4, L2, y Z tienen el significado de conformidad con la reivindicación 1, y en donde R3aa, R3aaa son seleccionados independientemente del grupo que consiste de H; y alquilo de C1- , o están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos .
12. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque L está representado por la fórmula (Ib) en donde R1, Rla, R4, L2 y Z tienen el significado de conformidad con la reivindicación 1, y en donde R3aa es H; o alquilo de Ci_ .
13. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque R1 en la fórmula (I) es L2-Z.
14. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque R3 en la fórmula (I) es L2-Z.
15. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque R3, R3a en la fórmula (I) están unidos junto con el átomo de nitrógeno al cual los mismos están fijados para formar un heterociclo de 4 a 7 elementos, en donde el heterociclo está substituido con L2-Z.
16. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas o un biopolímero.
17. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque D-H es un biopolímero seleccionado del grupo de biopolímeros que consiste de proteínas, polipéptidos , oligonucleótidos , y ácidos nucleicos de péptidos.
18. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque D-H es un polipéptido seleccionado del grupo de polipéptidos que consisten de ACTH, adenosina desaminasa, agalsidasa, alfa-1 antitripsina, el inhibidor de la alfa-1 proteinasa, alteplasa, amilinas (amilina, simlina) , anistreplasa, serina proteasa de ancrod, anticuerpos (monoclonales o policlonales , y fragmentos o fusiones), antitrombina III, antitripsinas, aprotinina, asparaginasas , atosiban, bifaliña, bivaluridina , proteínas morfogénicas de los huesos, inhibidor de la tripsina pancreática del bovino, fragmentos de caderina, calcitonina (del salmón) , colagenasa, inhibidor de la esterasa del complemento Cl, conotoxinas, fragmentos del receptor de citoquina, DNasa, dinorfina A, endorfinas, enfuvirtida, encefaliñas, eritropoyetinas , exendinas, factor VII, factor Vlla, factor VIII, factor Villa, factor IX, fibrinolisina, factor del crecimiento de fibroblastos (FGF) , el péptido de liberación de la hormona del crecimiento 2 (GHRP2) , proteínas de fusión, hormonas estimulantes de los folículos, gramicidina, grelina, desacil-grelina, factor estimulante de la colonia de granulocitos (G-CSF) , galactosidasa, glucagón, péptidos semejantes al glucagón, glucocerebrosidasa , factor estimulante de la colonia de macrófagos de los granulocitos (GM-CSF) , proteínas para el choque térmico humano (HSP) , la proteína de activación de la fosfolipasa (PLAP) , gonadotropina coriónica (Hcg) , hemoglobinas, vacunas contra la hepatitis B, hirudina, el inhibidor de la serina proteasa humana, hialuronidasas , idurnonidasa, globulinas inmunitarias , vacunas contra la influenza, interleucinas (1 alfa, 1 beta, 2, 3, 4, 6, 10, 11, 12, 13, 21), el antagonista del receptor de IL-1 (rhlL-lra) , insulinas, factores del crecimiento semejantes a la insulina, la proteína de aglutinación del factor de crecimiento semejante a la insulina (rhIGFBP) , interferones (alfa 2a, alfa 2b, alfa 2c, beta la, beta Ib, gamma la, gamma Ib) , la molécula de adhesión intracelular, el factor del crecimiento de los queratinocitos (KGF) , el ligando de la glucoproteína de P-selectina (PSGL) , factores de crecimiento de transformación, lactasa, leptina, leuprolida, levotiroxina, hormona luteinizante , vacuna contra la enfermedad de Lyme, péptidos natriuréticos (A P, BNP, CNP y fragmentos) , el neuropéptido Y, pancrelipasa, polipéptido pancreático, papaína, hormona paratiroidea; PGDF, pepsina, el péptido YY, la acetilhidrolasa del factor de activación de las plaquetas (PAF-AH) , prolactina, proteína C, timalfasina, octreotida, secretina, sermorelina, el receptor del factor de la necrosis tumoral soluble (TNFR) , la superóxido dismutasa (SOD) , somatropinas (hormona del crecimiento) , somatoprima, somatostatina, estreptocinasa, sucrasa, terlipresina, fragmento de la toxina del tétanos, tilactasa, trombinas, timosina, hormona estimulante de la tiroides, tirotropina, factor de la necrosis tumoral (TNF) , Fe de IgG-receptor de TNF, activador del plasminógeno del tejido (Tpa) , TSH, urodilatina, urato oxidasa, urocinasa, vacunas, factor del crecimiento endotelial vascular, el péptido intestinal vasoactivo, vasopresina, ziconotida, lectina y ricina.
19. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque D-H es una proteína preparada por tecnologías de ADN recombinante .
20. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque D-H es una proteína seleccionada del grupo de proteínas que consiste de fragmentos de anticuerpos, proteínas de aglutinación del antígeno de una sola cadena, anticuerpos catalíticos y proteínas de fusión.
21. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas seleccionado del grupo de agentes que consisten de agentes activos sobre el sistema nervioso central, agentes antiinfecciosos, antialérgicos, inmunomoduladores , antiobesidad, anticoagulantes, antidiabéticos, antineoplásicos , antibacterianos, antifúngicos , analgésicos, anticonceptivos, antiinflamatorios, esteroidales , vasodilatadores, vasoconstrictores, y cardiovasculares con al menos un grupo amino primario o secundario.
22. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 y 21, caracterizado porque D-H es un agente bioactivo de moléculas pequeñas seleccionado del grupo de agentes que consisten de acarbosa, alaproclato, alendronato, amantadina, amikacina, amineptina, aminoglutetimida, amisulprida, amlodipino, amotosaleno, amoxapina, amoxicilina, anfetamina, anfotericina B, ampicilina, amprenavir, amrinona, anileridina, apraclonidina, apramicina, articaína, atenolol, atomoxetina, avizafona, baclofeno, benazeprilo, benserazida, benzocaína, betaxolol, bleomicina, bromfenaco, brofaromina, carvedilol, catina, catinona, carbutamida, cefalexina, clinafloxacino, ciprofloxacino, deferoxamina, delavirdina, desipramina, daunorrubicina, dexmetilfenidato, dexmetilfenidato, diafenilsulfona, dizocilpina, dopamina, dobutamina, dorzolamida, doxorrubicina, duloxetina, eflornitina, enalaprilo, epinefrina, epirrubicina, ergolina, ertapenem, esmolol, enoxacina, etanbutol, fenfluramina, fenoldopam, fenoterol, fingolimod, flecainida, fluvoxamina, fosamprenavir, frovatriptano, furosemida, fluoxetina, gabapentina, gatifloxacino, gemifloxacino, gentamicina, grepafloxacino, hexilcaína, hidralazina, hidroclorotiazida, icofungipeno, idarrubicina , imiquimod, inversina, isoproterenol , isradipina, kanamicina A, ketamina, labetalol, lamivudina, levobunolol, levodopa, levotiroxina, lisinoprilo, lomefloxacino, loracarbef, maprotilina, mefloquina, melfalan, memantina, meropenem, mesalazina, mescalina, metildopa, metilendioximetanfetamina , metoprolol, milnaciprano, mitoxantrona , moxifloxacino, norepinefriña , norfloxacino, nortriptilina, neomicina B, nistatina, oseltamivir, ácido pamidrónico, paroxetina, pazufloxacino, permetrexed, perindoprilo, fenmetracina, fenelzina, pregabalina, procaína, pseudoefedrina, protriptilina, reboxetina, ritodrina, sabarrubicina, salbutamol, serotonina, sertralina, sitagliptina, sotalol, espectinomicina, sulfadiazina, sulfamerazina, sertralina, espectinomicina, sulfaleno, sulfametoxazol , tacrina, tamsulosina, terbutalina, timolol, tirofiban, tobramicina, tocainida, tosufloxacino, trandolaprilo, ácido tranexáraico, tranilcipromina, trimerexato, trovafloxacino, valaciclovir, valganciclovir, vancomicina, viomicina, viloxazina, y zalcitavina.
23. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, caracterizado porque Z es un polímero de al menos 500 Da o un grupo alquilo de C8-i8-
24. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque Z se selecciona del grupo de polímeros reticulados opcionalmente que consisten de poli (propilenglicol) , poli (etilenglicol) , dextrano, quitosana, ácido hialurónico, alginato, xilano, mañano, carrageenina, agarosa, celulosa, almidón, almidón de hidroxialquilo, poli (alcoholes vinílicos) , poli (oxazolinas) , poli (anhídridos) , poli (orto ésteres) , poli (carbonatos) , poli (uretanos) , poli (ácidos acrílicos) , poli (acrilamidas) , poli (acrilatos) , poli (metacrilatos ) , poli (organofosfacenos) , polioxazolina, poli (siloxanos) , poli (amidas) , poli (vinilpirrolidona) , poli (cianoacrilatos) , poli (ésteres) , poli ( iminocarbonatos) , poli (aminoácidos) , colágeno, gelatina, hidrogel o una proteína del plasma de la sangre, y copolímeros de los mismos.
25. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizado porque Z es una proteína .
26. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, caracterizado porque Z es una proteína seleccionada del grupo que consiste de albúmina, transferrina, inmunoglobulina .
27. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque Z es un poli (etilenglicol) lineal o ramificado con un peso molecular desde 2,000 Da hasta 150,000 Da.
28. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, caracterizado porque D-H es un agonista del receptor de GLP-1,· L es L1 representado por la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, y Z es un hidrogel .
29. El profármaco de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el agonista el receptor de GLP-1 es la exendina-4.
30. El profármaco de conformidad con las reivindicaciones 28 o 29, caracterizado porque en la fórmula (I) X es N(R4), X1 es C y X3 es 0.
31. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 28 a 30, caracterizado porque L está representado por la fórmula (la) de conformidad con la reivindicación 11 o L está representado por la fórmula (Ib) de conformidad con la reivindicación 12.
32. Un precursor del profármaco de la fórmula Act-L, caracterizado porque L tiene el significado de conformidad con la reivindicación 1 y Act es un grupo saliente .
33. El precursor del profármaco de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque Act es cloruro, bromuro, fluoruro, nitrofenoxi, imidazolilo, N-hidroxisuccinimidilo, N-hidroxibenzotriazolilo, N-hidroxiazobenzotriazolilo, pentafluorofenoxi , 2-tioxo-tiazolidinilo, o N-hidroxisulfosuccinimidilo .
34. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31 o una sal farmacéutica del mismo junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable.
35. El profármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31, o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30, caracterizados porque se utilizan como un medicamento.
36. El uso de un profarmaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31 o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 34 o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento, control, retardo o prevención de una enfermedad o de una o más condiciones de la enfermedad en un paciente mamífero.
MX2010008024A 2008-02-01 2009-01-30 Profarmaco que comprende un enlazador que se puede separar por si mismo. MX2010008024A (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08150973 2008-02-01
EP08170872 2008-12-05
PCT/EP2009/051079 WO2009095479A2 (en) 2008-02-01 2009-01-30 Prodrug comprising a self-cleavable linker

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MX2010008024A true MX2010008024A (es) 2010-12-21

Family

ID=40823379

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MX2010008024A MX2010008024A (es) 2008-02-01 2009-01-30 Profarmaco que comprende un enlazador que se puede separar por si mismo.

Country Status (23)

Country Link
US (6) US8906847B2 (es)
EP (3) EP2596805B1 (es)
JP (2) JP5588354B2 (es)
CN (1) CN101980725B (es)
AU (1) AU2009209565B2 (es)
BR (1) BRPI0906643A2 (es)
CA (1) CA2712224C (es)
CY (1) CY1121961T1 (es)
DK (2) DK2237799T3 (es)
ES (2) ES2733355T3 (es)
HK (1) HK1152240A1 (es)
HR (1) HRP20191052T1 (es)
HU (1) HUE044174T2 (es)
IL (1) IL207150A (es)
LT (1) LT2237799T (es)
MX (1) MX2010008024A (es)
PL (1) PL2237799T3 (es)
PT (1) PT2237799T (es)
RS (1) RS58948B1 (es)
RU (2) RU2010136023A (es)
SI (1) SI2237799T1 (es)
WO (1) WO2009095479A2 (es)
ZA (1) ZA201005413B (es)

Families Citing this family (174)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1959986B1 (en) 2005-11-07 2014-07-23 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability
CN101578102B (zh) 2007-01-05 2013-07-17 印第安纳大学研究及科技有限公司 在生理性pH缓冲液中显示增强的溶解性的胰高血糖素类似物
EP2111414B1 (en) 2007-02-15 2014-07-02 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
EP2217701B9 (en) 2007-10-30 2015-02-18 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon antagonists
MX2010004298A (es) 2007-10-30 2010-05-03 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1.
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
DK2237799T3 (da) * 2008-02-01 2019-06-11 Ascendis Pharma As Prodrug omfattende en selv-spaltbar linker
SI2279007T1 (sl) 2008-04-29 2016-09-30 Ascendis Pharma Growth Disorders Division A/S Spojine pegiliranega rekombinantnega humanega rastnega hormona
EA020326B9 (ru) 2008-06-17 2015-03-31 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Агонисты смешанного действия на основе глюкозозависимого инсулинотропного пептида для лечения нарушений обмена веществ и ожирения
MX2010012695A (es) 2008-06-17 2011-03-15 Univ Indiana Res & Tech Corp Analogos de glucagon que exhiben solubilidad y estabilidad aumentadas en soluciones reguladoras de ph fisiologico.
PA8830501A1 (es) 2008-06-17 2010-07-27 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1
WO2010042596A2 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 The Uab Research Foundation Photo-activated protecting groups
JP5755566B2 (ja) 2008-12-19 2015-07-29 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ アミド系インスリンプロドラッグ
RU2550696C2 (ru) 2008-12-19 2015-05-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Основанные на амидах пролекарства пептидов глюкагонового надсемейства
CN102256992B (zh) 2008-12-19 2015-04-22 印第安纳大学研究及科技有限公司 胰岛素类似物
WO2010099200A1 (en) * 2009-02-24 2010-09-02 Nektar Therapeutics Oligomer-amino acid conjugates
DK3175863T3 (da) 2009-05-20 2022-02-07 Biomarin Pharm Inc Varianter af c-type natriuretisk peptid
WO2010148089A1 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Indiana University Research And Technology Corporation Gip receptor-active glucagon compounds
EP2459228B1 (en) 2009-07-31 2020-03-04 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Prodrugs comprising an insulin linker conjugate
CA2769162C (en) 2009-07-31 2017-12-05 Ascendis Pharma As Biodegradable polyethylene glycol based water-insoluble hydrogels
KR101759499B1 (ko) 2009-07-31 2017-07-19 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 지속형 인슐린 조성물
US9173953B2 (en) 2009-07-31 2015-11-03 Ascendis Pharma As Prodrugs containing an aromatic amine connected by an amido bond to a linker
US8758780B2 (en) 2009-10-06 2014-06-24 Ascendis Pharma As Subcutaneous paliperidone composition
WO2011051406A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Ascendis Pharma As Sterilization of biodegradable hydrogels
HUE038405T2 (hu) 2009-12-15 2018-10-29 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Átmenetileg polimer hordozóhoz kapcsolt száraz növekedési hormon készítmény
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
EP2525831B1 (en) 2010-01-22 2019-05-15 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked carbamate prodrug linkers
EP2525830B1 (en) * 2010-01-22 2016-05-11 Ascendis Pharma A/S Dipeptide-based prodrug linkers for aliphatic amine-containing drugs
EP2525829A1 (en) 2010-01-22 2012-11-28 Ascendis Pharma A/S Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs
KR20120123443A (ko) 2010-01-27 2012-11-08 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 대사 장애 및 비만 치료용 글루카곤 길항제-ｇｉｐ 항진제 콘쥬게이트
US20120035320A1 (en) * 2010-04-03 2012-02-09 University Of Iowa Research Foundation Polyacridine nucleic acid delivery peptide complexes
WO2011143209A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity
EP2568993A4 (en) 2010-05-13 2014-02-19 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXPRESSING G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY
EP2582719B1 (en) 2010-06-16 2016-08-10 Indiana University Research and Technology Corporation Single chain insulin agonists exhibiting high activity at the insulin receptor
US8946147B2 (en) 2010-06-24 2015-02-03 Indiana University Research And Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
CN103179979A (zh) * 2010-06-24 2013-06-26 印第安纳大学研究及科技有限公司 基于酰胺的胰高血糖素超家族肽前药
EP2438930A1 (en) * 2010-09-17 2012-04-11 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Prodrugs comprising an exendin linker conjugate
MA34885B1 (fr) 2010-12-22 2014-02-01 Indiana Unversity Res And Technology Corp Analogues du glucagon presentant una ctivite de recepteur de gip
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
LT2723367T (lt) 2011-06-22 2017-08-25 Indiana University Research And Technology Corporation Bendri gliukagono/glp-1 receptoriaus agonistai
US9907812B2 (en) 2011-06-22 2018-03-06 Vyome Biosciences Pvt. Ltd. Conjugate-based antifungal and antibacterial prodrugs
WO2013010840A2 (en) 2011-07-18 2013-01-24 Arts Biologics A/S Long acting biologically active luteinizing hormone (lh) compound
US20140323402A1 (en) * 2011-08-12 2014-10-30 Ascendis Phama A/S Protein Carrier-Linked Prodrugs
WO2013024048A1 (en) 2011-08-12 2013-02-21 Ascendis Pharma A/S Polymeric hyperbranched carrier-linked prodrugs
AU2012296955B2 (en) 2011-08-12 2016-12-15 Ascendis Pharma A/S Carrier-linked prodrugs having reversible carboxylic ester linkages
AU2012296949B2 (en) 2011-08-12 2016-09-15 Ascendis Pharma A/S High-loading water-soluble carrier-linked prodrugs
MX2014003993A (es) 2011-10-12 2014-08-08 Ascendis Pharma Ophthalmology Division As Prevencion y tratamiento de condiciones oculares.
WO2013059323A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-25 Prolynx Llc Peg conjugates of exenatide
BR112014007124A2 (pt) 2011-11-17 2017-06-13 Univ Indiana Res & Tech Corp superfamília de peptídeos gluxagon que exibem atividade no receptor glicocorticóide
JP6392123B2 (ja) 2011-12-20 2018-09-19 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 糖尿病治療のためのｃｔｐ系インスリンアナローグ
AU2013254756B2 (en) * 2012-04-25 2017-03-30 Ascendis Pharma A/S Prodrugs of hydroxyl-comprising drugs
US20150133383A1 (en) 2012-05-11 2015-05-14 Prorec Bio Ab Method for diagnosis and treatment of prolactin associated disorders
AR091477A1 (es) 2012-06-21 2015-02-04 Univ Indiana Res & Tech Corp Analogos de glucagon que presentan actividad de receptor de gip
WO2014036395A1 (en) * 2012-08-30 2014-03-06 The Scripps Research Institute SMALL MOLECULES TARGETING REPEAT r(CGG) SEQUENCES
JP6387008B2 (ja) 2012-09-26 2018-09-05 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ インスリンアナローグダイマー
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
SG11201501914XA (en) * 2012-10-11 2015-05-28 Ascendis Pharma Ophthalmology Division As Vegf neutralizing prodrugs for the treatment of ocular conditions
RU2647729C2 (ru) 2012-10-11 2018-03-19 Асцендис Фарма Ас Пролекарства на основе гидрогеля
AU2013328774B2 (en) 2012-10-11 2017-11-30 Ascendis Pharma A/S Diagnosis, prevention and treatment of diseases of the joint
EP2924053B1 (en) * 2012-11-22 2020-11-11 Glytech, Inc. Glycosylated linker, compound containing glycosylated linker moiety and physiologically active substance moiety or salt thereof, and methods for producing said compound or salt thereof
WO2014084110A1 (ja) 2012-11-30 2014-06-05 株式会社糖鎖工学研究所 糖鎖付加リンカー、糖鎖付加リンカーと生理活性物質とを含む化合物またはその塩、及びそれらの製造方法
KR20150096433A (ko) 2012-12-21 2015-08-24 사노피 이중 glp1/gip 또는 삼중 glp1/gip/글루카곤 효능제
JP6538645B2 (ja) 2013-03-14 2019-07-03 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ インスリン‐インクレチン複合物
CA2907830C (en) 2013-04-22 2022-03-29 Ascendis Pharma A/S Hydrogel-linked prodrugs releasing tagged drugs
JP6276390B2 (ja) * 2013-05-21 2018-02-07 成都先導薬物開発有限公司 化合物の細胞膜透過の方法
CN104177465B (zh) * 2013-05-21 2017-09-29 成都先导药物开发有限公司 一种化合物给药前体及药物载体制剂
AU2014333953C1 (en) * 2013-10-08 2020-06-25 Ascendis Pharma A/S Hydrogel-linked IL-1ra prodrug
EP3054981B1 (en) * 2013-10-08 2020-07-29 Ascendis Pharma A/S Protecting group comprising a purification tag
CA2929201A1 (en) 2013-11-11 2015-05-14 Ascendis Pharma Relaxin Division A/S Relaxin prodrugs
CN112043835B (zh) * 2013-12-06 2022-10-21 韩捷 用于含氮和羟基的药物的生物可逆引入基团
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
KR101768446B1 (ko) 2014-03-21 2017-08-17 애니젠 주식회사 신규한 엑세나타이드 유사체 및 그의 용도
CN104945499B (zh) * 2014-03-31 2019-12-10 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 结构修饰的glp-1类似物及其制备方法
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
ES2779974T3 (es) 2014-06-13 2020-08-21 Tenboron Oy Conjugados que comprenden un anticuerpo anti-egfr1
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
WO2016020373A1 (en) 2014-08-06 2016-02-11 Ascendis Pharma A/S Prodrugs comprising an aminoalkyl glycine linker
CN107001441A (zh) 2014-09-24 2017-08-01 印第安纳大学研究及科技有限公司 脂质化的基于酰胺的胰岛素前药
CN108271356A (zh) 2014-09-24 2018-07-10 印第安纳大学研究及科技有限公司 肠降血糖素-胰岛素缀合物
WO2016065042A1 (en) 2014-10-22 2016-04-28 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin d conjugates
US10265413B2 (en) 2014-11-05 2019-04-23 University Of The Sciences In Philadelphia High molecular weight biodegradable gelatin-doxorubicin conjugate
WO2016110577A1 (en) * 2015-01-09 2016-07-14 Ascendis Pharma A/S Cnp prodrugs
EP3303365A4 (en) 2015-05-29 2019-04-24 Ascendis Pharma Inc. PRODRUGS WITH A PYROGLUTAMATE LINKER
AR105319A1 (es) * 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
MA42924A (fr) 2015-09-23 2018-08-01 Hoffmann La Roche Variants optimisés d'anticorps anti-vegf
CN106554403B (zh) 2015-09-25 2021-08-31 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 艾塞那肽修饰物及其用途
JP6412906B2 (ja) 2015-11-03 2018-10-24 財團法人工業技術研究院Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ 化合物、リンカー−薬物およびリガンド−薬物複合体
NZ743488A (en) * 2016-01-08 2023-02-24 Ascendis Pharma Growth Disorders As Controlled-release cnp agonists with low initial npr-b activity
KR102373744B1 (ko) * 2016-01-08 2022-03-15 아센디스 파마 그로우쓰 디스오더스 에이/에스 낮은 npr-c 결합을 갖는 제어 방출성 cnp 작용제
AU2017205268B2 (en) 2016-01-08 2022-02-17 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S CNP prodrugs with large carrier moieties
LT3400019T (lt) * 2016-01-08 2022-12-12 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Cnp provaistai su prie žiedo fragmento prijungtu nešikliu
IL259658B1 (en) 2016-01-08 2024-02-01 Ascendis Pharma Growth Disorders As Controlled-release CNP agonists with reduced side effects
BR112018011152A2 (pt) 2016-01-08 2018-11-21 Ascendis Pharma Growth Disorders As agonistas de cnp de liberação controlada com estabilidade em nep aumentada
WO2017127528A1 (en) * 2016-01-19 2017-07-27 University Of Florida Research Foundation, Inc. Peptoid agonists of fibroblast growth receptors
IL301616A (en) * 2016-03-01 2023-05-01 Ascendis Pharma Bone Diseases As PTH medications
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
KR102465341B1 (ko) 2016-04-29 2022-11-09 디펜신 테라퓨틱스 에이피에스 간, 담관 및 췌장 장애의 치료
AU2017295938C1 (en) * 2016-07-13 2021-10-07 Ascendis Pharma A/S Conjugation method for carrier-linked prodrugs
PL3518960T3 (pl) 2016-09-29 2023-12-27 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Schemat dawkowania związku pth o kontrolowanym uwalnianiu
DK3518961T3 (da) * 2016-09-29 2023-04-24 Ascendis Pharma Bone Diseases As PTH-forbindelser med lave forhold mellem top og bund
US20190224329A1 (en) * 2016-09-29 2019-07-25 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Incremental Dose Finding in Controlled-Release PTH Compounds
US11564974B2 (en) 2016-09-29 2023-01-31 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Combination therapy with controlled-release CNP agonists
AR110299A1 (es) 2016-12-02 2019-03-13 Sanofi Sa Conjugados que comprenden un agonista dual de glp-1 / glucagón, un conector y ácido hialurónico
SG10202012106WA (en) 2016-12-13 2021-01-28 Defensin Therapeutics Aps Methods for treating inflammatory conditions of the lungs
CA3048467A1 (en) * 2016-12-29 2018-07-05 Development Center For Biotechnology Klk6-mediated cns-specific antibody prodrug activation
JP7152408B2 (ja) 2017-03-10 2022-10-12 キアペグ ファーマシューティカルズ アクチエボラグ 遊離可能コンジュゲート
SG10202107829YA (en) 2017-03-22 2021-08-30 Genentech Inc Hydrogel cross-linked hyaluronic acid prodrug compositions and methods
JOP20190245A1 (ar) 2017-04-20 2019-10-15 Novartis Ag أنظمة توصيل إطلاق مستدام تتضمن روابط بلا أثر لنقطة الربط
WO2019076675A1 (en) * 2017-10-06 2019-04-25 Instituto De Medicina Molecular TREATMENT OF STATES RELATED TO OBESITY
GB2571696B (en) 2017-10-09 2020-05-27 Compass Pathways Ltd Large scale method for the preparation of Psilocybin and formulations of Psilocybin so produced
CA3082288A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Defensin Therapeutics Aps Maturation of mucosal defense and gut/lung function in the preterm infant
BR112020010180A2 (pt) 2017-11-24 2021-01-12 Defensin Therapeutics Aps B-defensina e/ou a-defensina humana para uso na prevenção ou no tratamento de doença do enxerto contra hospedeiro aguda
CN109160883B (zh) * 2017-11-30 2021-10-08 银隆新能源股份有限公司 一种蒽醌盐正极材料及其合成方法
MX2020005517A (es) 2017-12-05 2020-11-09 Sunovion Pharmaceuticals Inc Formas cristalinas y metodos de produccion de las mismas.
CA3084953A1 (en) 2017-12-05 2019-06-13 Sunovion Pharmaceuticals Inc. Nonracemic mixtures and uses thereof
MX2020005860A (es) 2017-12-06 2020-09-09 Avidity Biosciences Inc Composiciones y metodos de tratamiento de atrofia muscular y distrofia miotonica.
IL308797A (en) 2018-03-28 2024-01-01 Ascendis Pharma Oncology Div A/S IL-2 conjugates
AU2019246390A1 (en) 2018-03-28 2020-08-06 Ascendis Pharma A/S Conjugates
US10799138B2 (en) 2018-04-05 2020-10-13 University Of Maryland, Baltimore Method of administering sotalol IV/switch
CA3096495A1 (en) 2018-04-10 2019-10-17 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Lixisenatide synthesis with capping
AU2019250359A1 (en) 2018-04-10 2020-11-26 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Method for cleavage of solid phase-bound peptides from the solid phase
BR112020022306A2 (pt) 2018-05-18 2021-02-23 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S dose de partida de conjugados de pth
TW202015735A (zh) 2018-05-30 2020-05-01 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／升糖素／ｇｉｐ三重受體促效劑、連接子及透明質酸之接合物
US11696902B2 (en) 2018-08-14 2023-07-11 AltaThera Pharmaceuticals, LLC Method of initiating and escalating sotalol hydrochloride dosing
US11344518B2 (en) 2018-08-14 2022-05-31 AltaThera Pharmaceuticals LLC Method of converting atrial fibrillation to normal sinus rhythm and loading oral sotalol in a shortened time frame
US11610660B1 (en) 2021-08-20 2023-03-21 AltaThera Pharmaceuticals LLC Antiarrhythmic drug dosing methods, medical devices, and systems
US10512620B1 (en) 2018-08-14 2019-12-24 AltaThera Pharmaceuticals, LLC Method of initiating and escalating sotalol hydrochloride dosing
BR112021004689A2 (pt) 2018-09-12 2021-06-08 Quiapeg Pharmaceuticals Ab conjugados glp-1 liberáveis
CA3114329A1 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Ascendis Pharma A/S Novel hydrogel conjugates
AU2019350376A1 (en) 2018-09-26 2021-03-18 Ascendis Pharma A/S Treatment of infections
CA3114272A1 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Ascendis Pharma A/S Degradable hyaluronic acid hydrogels
TW202027794A (zh) 2018-10-03 2020-08-01 瑞士商諾華公司 血管生成素樣３多肽之持續遞送
CN109125707B (zh) * 2018-10-19 2022-01-04 艾伟伦 GnRH类似物缓释组合物及其制备方法
KR20210113272A (ko) 2019-01-04 2021-09-15 아센디스 파마 온콜로지 디비전 에이/에스 선천 면역 작용제를 위한 지속되는 국소 약물 수준
EP3906018A1 (en) 2019-01-04 2021-11-10 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Induction of sustained local inflammation
WO2020141225A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma A/S Minimization of systemic inflammation
CA3125533A1 (en) 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Conjugates of pattern recognition receptor agonists
EP3923905A1 (en) 2019-02-11 2021-12-22 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Liquid pharmaceutical formulations of pth conjugates
JP2022520193A (ja) 2019-02-11 2022-03-29 アセンディス ファーマ グロース ディスオーダーズ エー／エス Ｃｎｐコンジュゲートの乾燥医薬製剤
EP3955918A1 (en) 2019-04-17 2022-02-23 COMPASS Pathfinder Limited Methods of treating neurocognitive disorders, chronic pain and reducing inflammation
SG11202113266YA (en) 2019-06-04 2021-12-30 Sunovion Pharmaceuticals Inc Modified release formulations and uses thereof
CA3143436A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma A/S Conjugates of .pi.-electron-pair-donating heteroaromatic nitrogen-comprising compounds
TW202114660A (zh) 2019-06-21 2021-04-16 丹麥商阿仙帝斯製藥公司 酪胺酸激酶抑制劑結合物
WO2020254613A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Controlled-release tyrosine kinase inhibitor compounds with localized pk properties
WO2020254606A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma A/S Conjugates of heteroaromatic nitrogen-comprising compounds
WO2020254607A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-ctla4 compounds with localized pd properties
WO2020254612A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Controlled-release tyrosine kinase inhibitor compounds with localized pd properties
US20220305136A1 (en) 2019-06-21 2022-09-29 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-ctla4 conjugates
WO2020254617A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Anti-ctla4 compounds with localized pk properties
EP4084872A1 (en) 2020-01-03 2022-11-09 Ascendis Pharma A/S Conjugates undergoing intramolecular rearrangements
US20230042670A1 (en) 2020-01-13 2023-02-09 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Hypoparathyroidism Treatment
AU2021237465A1 (en) 2020-03-19 2022-10-13 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2021224169A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Ascendis Pharma A/S Hydrogel irradiation
IL298642A (en) 2020-06-03 2023-01-01 Ascendis Pharma Oncology Div A/S il-2 sequences and uses thereof
AU2021319863A1 (en) 2020-08-05 2023-02-16 Ascendis Pharma A/S Conjugates comprising reversible linkers and uses thereof
CA3189715A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Glycosylated il-2 proteins and uses thereof
US20230322743A1 (en) * 2020-09-11 2023-10-12 Compass Pathfinder Limited Novel safrylamine derivatives having prodrug properties
AU2021349316A1 (en) 2020-09-28 2023-04-27 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Improvement of physical and mental well-being of patients with hypoparathyroidism
KR20230164709A (ko) 2021-04-01 2023-12-04 아센디스 파마 에이에스 염증 유발 질환을 치료하기 위한 지속형 성장 호르몬의 용도
CN113842379B (zh) * 2021-09-12 2024-04-23 东北农业大学 倍他洛尔作为ndm-1抑制剂或抗生素保护剂的新用途
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
AU2022350937A1 (en) 2021-09-22 2024-03-21 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Long-acting pth compound treatments
US11845736B2 (en) 2021-10-01 2023-12-19 Empathbio, Inc. Prodrugs of MDMA, MDA, and derivatives thereof
AU2022413318A1 (en) 2021-12-13 2024-05-16 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Effective doses of cnp conjugates
WO2023110727A2 (en) 2021-12-13 2023-06-22 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Novel cancer treatments with tlr7/8 agonists
US11912680B2 (en) 2021-12-28 2024-02-27 Empathbio, Inc. Nitric oxide releasing prodrugs of MDA and MDMA
WO2023227505A1 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Liquid pharmaceutical formulations of cnp compounds
WO2024094673A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Pth treatment regimen comprising two pth compounds

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6253997A (ja) * 1985-09-03 1987-03-09 Kowa Co 新規なアミノ配糖体及びこれを含有する製剤
TW517067B (en) * 1996-05-31 2003-01-11 Hoffmann La Roche Interferon conjugates
JP2002515063A (ja) * 1997-04-06 2002-05-21 カリフォルニア・インスティチュート・オブ・テクノロジー 予め決定されたｄｎａ配列にナノモル以下の濃度で結合するポリアミド
ES2257298T3 (es) * 1999-05-17 2006-08-01 Conjuchem, Inc. Proteccion de peptidos terapeuticos endogenos contra la actividad de la peptidasa a traves de la conjugacion con componentes sanguineos.
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US20070249620A1 (en) * 2004-07-02 2007-10-25 Hitoshi Kurata Urea Derivative
EP1625856A1 (en) 2004-08-13 2006-02-15 Complex Biosystems GmbH Hydrogel polymeric conjugates of a prodrug
US7968085B2 (en) 2004-07-05 2011-06-28 Ascendis Pharma A/S Hydrogel formulations
US20060115865A1 (en) * 2004-10-25 2006-06-01 Anlong Ouyang Lamotrigine analogs
US7678551B2 (en) 2004-10-25 2010-03-16 Seradyn, Inc. Immunoassays for lamotrigine
US7407117B2 (en) 2004-10-28 2008-08-05 Meadwestvaco Calmar, Inc. Liquid sprayer assembly
EP1838317A4 (en) * 2005-01-05 2012-02-29 Univ Minnesota ANALGESIC CONJUGATES
GB2427360A (en) 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
WO2009009716A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric drug delivery systems containing an aromatic allylic acid
DK2237799T3 (da) * 2008-02-01 2019-06-11 Ascendis Pharma As Prodrug omfattende en selv-spaltbar linker
EP2438930A1 (en) * 2010-09-17 2012-04-11 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Prodrugs comprising an exendin linker conjugate

Also Published As

Publication number Publication date
EP2237799B1 (en) 2019-04-10
CN101980725B (zh) 2013-06-12
ES2904673T3 (es) 2022-04-05
EP2596805A1 (en) 2013-05-29
ZA201005413B (en) 2012-04-25
US20240041897A1 (en) 2024-02-08
CN101980725A (zh) 2011-02-23
IL207150A (en) 2013-07-31
JP2014193908A (ja) 2014-10-09
WO2009095479A3 (en) 2009-10-01
AU2009209565B2 (en) 2013-09-19
US20200046725A1 (en) 2020-02-13
ES2733355T3 (es) 2019-11-28
SI2237799T1 (sl) 2019-07-31
RU2676324C2 (ru) 2018-12-28
HUE044174T2 (hu) 2019-10-28
US8906847B2 (en) 2014-12-09
DK2596805T3 (da) 2021-12-13
RU2018143571A (ru) 2020-06-10
DK2237799T3 (da) 2019-06-11
CA2712224C (en) 2016-03-08
RU2010136023A (ru) 2012-03-10
BRPI0906643A2 (pt) 2019-09-10
EP3981761A3 (en) 2022-08-24
RS58948B1 (sr) 2019-08-30
CY1121961T1 (el) 2020-10-14
EP2596805B1 (en) 2021-10-27
PL2237799T3 (pl) 2019-09-30
JP2011510954A (ja) 2011-04-07
US20220331334A1 (en) 2022-10-20
US20150057221A1 (en) 2015-02-26
US20170100490A1 (en) 2017-04-13
RU2014122036A (ru) 2015-12-10
CA2712224A1 (en) 2009-08-06
IL207150A0 (en) 2010-12-30
US20110053848A1 (en) 2011-03-03
JP5588354B2 (ja) 2014-09-10
AU2009209565A1 (en) 2009-08-06
HRP20191052T1 (hr) 2019-11-01
EP2237799A2 (en) 2010-10-13
LT2237799T (lt) 2019-07-25
PT2237799T (pt) 2019-07-05
EP3981761A2 (en) 2022-04-13
WO2009095479A2 (en) 2009-08-06
HK1152240A1 (en) 2012-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240041897A1 (en) Prodrug comprising a drug linker conjugate
CA2811352C (en) Prodrugs comprising an exendin linker conjugate
US9737615B2 (en) Hydrophobic core carrier compositions for delivery of therapeutic agents, methods of making and using the same
KR20120089843A (ko) 인슐린 링커 접합체를 포함한 프로드럭
IL217613A (en) Long-term insulin preparation
CA2613208A1 (en) N, n-bis- (2-hydroxyethyl) glycine amide as linker in polymer conjugated prodrugs
AU2005232371A1 (en) Polymeric prodrug with a self-immolative linker
RU2798085C2 (ru) Пролекарство, содержащее саморасщепляемый линкер
RU2798085C9 (ru) Пролекарство, содержащее саморасщепляемый линкер

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration