KR20210117260A - 입양 세포 요법을 사용한 치료방법 - Google Patents

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티나 알베르트손
제이콥 란돌프 가르시아
마크 길버트
히 리
클레어 서더랜드
니콜라우스 세바스챤 트레드
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주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
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Abstract

질환 및 병태 예를 들어 특정 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위한 세포 용량의 투여를 표함하는 입양 세포 요법, 관련된 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품이 제공된다. 상기 세포는 일반적으로 재조합 수용체 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종, 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)이다. 또한 세포 요법제와 관련된 독성을 발병할 위험을 평가하는 방법, 및 상기 위험 평가에 기초하여 대상체를 식별하는 방법 및 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.

Description

입양 세포 요법을 사용한 치료방법
관련 출원의 상호 참조
본원은, "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2018.11.30.자로 출원된 미국 가출원 제62/774,164호, "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2018.12.06.자로 출원된 미국 가출원 제62/776,415호, "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2019.05.14.자로 출원된 미국 가출원 제62/847,926호, "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2019.05.30.자로 출원된 미국 가출원 제62/854,945호, "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2019.08.22.자로 출원된 미국 가출원 제62/890,600호 및 "METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY"라는 명칭으로 2019.11.05.자로 출원된 미국 가출원 제62/931,204호의 우선권을 주장하며, 상기 출원들의 내용은 그 전체가 모든 목적으로 참조로 인용된다.
서열 목록의 참조에 의한 포함
본 출원은 전자전 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2019년 11월 28일에 생성된, 34.2 킬로바이트 크기의 파일명 735042019640SeqList.txt로 제공된다. 상기 서열 목록의 전자적 형식의 정보는 그 전체가 참조로서 포함된다.
기술 분야
본 개시는 일부 측면에서, 질환 및 병태, 예를 들어 특정 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체의 치료를 위해 세포 용량의 투여를 포함하는 입양 세포 요법 및 용도, 및 관련 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품에 관한 것이다. 상기 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체(CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세퐁 림프종, 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma; DLBCL)이다. 또한 세포 요법제와 관련된 독성을 발병할 위험을 평가하는 방법, 및 대상체를 식별하는 방법 및 위험 평가에 기초하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
질환 및 병태(condition)를 치료하기 위해 다양한 면역 요법 및/또는 세포 요법들이 이용 가능하다. 예를 들어 입양 세포 요법(키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 질환 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포 및 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법제의 투여와 관련된 것들을 포함하는)은 암 또는 다른 질환 또는 장애의 치료에 유리할 수 있다. 개선된 접근 방식이 요구된다. 그러한 요구를 충족시키는 방법, 용도 및 제조 물품이 제공된다.
본원에서는 재발된 또는 불응성 거대 B 세포 림프종(relapsed or refractory large B cell lymphoma; r/r LBCL)인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 임의의 상기 제공된 방법의 일부에서, 상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 각각의 용량의 T 세포는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR)를 포함하고, 상기 T 세포의 용량은 (약) 1×107 개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2×108 개의 CAR-발현 T 세포(수치를 포함함)를 포함하며; 상기 T 세포의 용량은 대략 1:1의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고; 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
또한, 본원에서는 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 함유하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다.
또한, 본원에서는 B 세포 악성 종양(B cell malignancy)인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 용량의 T 세포는, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
또한, 본원에서는 거대 B 세포 림프종(large B cell lymphoma)인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 용량의 T 세포는, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
본원에서는 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL 또는 거대 B 세포 림프종에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 T 세포의 용량은 (약) 1×107 개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2×108 개의 CAR-발현 T 세포(수치를 포함함)를 포함하며; 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 함유하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포의 용량은 정의된 비율의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이다.
본원에서는 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL 또는 거대 B 세포 림프종에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 T 세포의 용량은 정의된 비율의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고, 상기 비율은 (대략) 1:1이고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다.
또한 본원에서는 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하는 방법이 제공되되, 상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL 또는 거대 B 세포 림프종에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 T 세포 내지 (약) 1.5×108 개의 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함)를 함유하고, 상기 용량은 정의된 비율의 상기 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 함유하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이고, 상기 방법은 (1) 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%에서 완전 반응(CR) 및/또는 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%에서 객관적 반응(OR)을 초래하고 (2) 등급 2 초과의 사이토카인 방출 증후(CRS) 및/또는 등급 2 초과의 신경독성을 나타내는 대상체의 50% 이하를 초래하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법은, 림프종인 질환 또는 병태를 갖는 대상체에, 상기 림프종에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 대상체에서 상기 림프종은 중추신경계(CNS) 침범(involvement)과 관련되거나 또는 그를 포함하고; 상기 T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하며; 각각의 용량의 T 세포는 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 뇌병변, 예를 들어 측두엽 뇌병변(temporal lobe brain lesion)을 포함한다. 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 림프종은 B 세포 악성 종양이다. 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 림프종은 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종이다.
본원에서는, (a) 치료를 위해 여포성 림프종(FL)을 갖는 대상체를 선택하는 단계; (b) 상기 대상체에, FL에 의해서 발현된, 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 FL과 관련되는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 단계;를 포함하는 치료방법이 제공된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 공격성 비호지킨 림프종(aggressive non-Hodgkin lymphoma; NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma; DLBCL), 선택적으로 DLBCL NOS(드 노보(de novo)이거나 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환됨), 고-등급 B 세포 림프종(HGBCL), 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal B-cell lymphoma; PMBCL), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL), 형질전환된 여포성 림프종(tFL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로부터 선택된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 DLBCL NOS, 드 노보 DLBCL 또는 비활동성 림프종(indolent lymphoma)으로부터 형질전환된 DLBCL이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 드 노보 DLBCL이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 FL과는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 드 노보 DLBCL이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 고-등급 B 세포 림프종(high-grade B cell lymphoma; HGBCL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 HGBCL는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열(rearrangement)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 HGBCL는 DLBCL 조직학(DLBCL histology)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 이중/삼중 히트 림프종이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 외투 세포 림프종(MCL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 원발성 중추 신경계 림프종(primary central nervous system lymphoma; PCNSL)이 아니다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 형질전환된 여포성 림프종(tFL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 여포성 림프종(FL)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 FL은 소낭(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 거대 B 세포 림프종은 여포성 림프종 등급 3B(follicular lymphoma grade 3B; FL3B)이다.
임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량은 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에 대해 농축된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량 중의 상기 세포의 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 초과는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량은, 정의된 비율의 상기 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 정의된 비율은 대략 1:1이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 포함하고, 각각의 용량의 T 세포는 항원, 예를 들어 FL 또는 그의 세포 또는 조직에 의해서 발현되고/되거나 FL과 관련되는 표적 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하되, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는, (약) 0 내지 (약) 48시간, (약) 0 내지 (약) 36시간, (약) 0 내지 (약) 24시간, (약) 0 내지 (약) 12시간, (약) 0 내지 (약) 6시간, (약) 0 내지 (약) 2시간, (약) 0 내지 (약) 1시간, (약) 0 내지 (약) 30분, (약) 30분 내지 (약) 48시간, (약) 30분 내지 (약) 36시간, (약) 30분 내지 (약) 24시간, (약) 30분 내지 (약) 12시간, (약) 30분 내지 (약) 6시간, (약) 30분 내지 (약) 4시간, (약) 30분 내지 (약) 2시간, (약) 30분 내지 (약) 1시간, (약) 1시간 내지 (약) 48시간, (약) 1시간 내지 (약) 36시간, (약) 1시간 내지 (약) 24시간, (약) 1시간 내지 (약) 12시간, (약) 1시간 내지 (약) 6시간, (약) 1시간 내지 (약) 4시간, (약) 1시간 내지 (약) 2시간, (약) 2시간 내지 (약) 48시간, (약) 2시간 내지 (약) 36시간, (약) 2시간 내지 (약) 24시간, (약) 2시간 내지 (약) 12시간, (약) 2시간 내지 (약) 6시간, (약) 2시간 내지 (약) 4시간, (약) 4시간 내지 (약) 48시간, (약) 4시간 내지 (약) 36시간, (약) 4시간 내지 (약) 24시간, (약) 4시간 내지 (약) 12시간, (약) 4시간 내지 (약) 6시간, (약) 6시간 내지 (약) 48시간, (약) 6시간 내지 (약) 36시간, (약) 6시간 내지 (약) 24시간, (약) 6시간 내지 (약) 12시간, (약) 12시간 내지 (약) 48시간, (약) 12시간 내지 (약) 36시간, (약) 12시간 내지 (약) 24시간, (약) 24시간 내지 (약) 48시간, (약) 24시간 내지 (약) 36시간 또는 (약) 36시간 내지 (약) 48시간 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 2시간 간격으로 수행되거나; 또는 상기 제 1 조성물의 투여의 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여의 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CD4+ T 세포에 의해서 함유된 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 함유된 수용체는 동일한 재조합 수용체를 포함하고/하거나 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포의 용량은, 정의된 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고/이거나; 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 하나에서 상기 수용체를 함유하는 CD4+ T 세포 및 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 다른 것에서 상기 수용체를 함유하는 CD8+ T 세포는 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고/하거나; 상기 제 1 및 제 2 조성물로 투여된 상기 수용체를 함유하는 CD4+ T 세포 및 상기 수용체를 함유하는 CD8+ T 세포는 정의된 비율로 존재하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 정의된 비율은 (대략) 1:1이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1.5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 내지 (약) 1×108 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 7.5×107 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 병태와 관련되거나 또는 상기 질환 또는 병태와 관련된 병변 환경의 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 암이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양이고/이거나 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태, 예를 들어 상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma; DLBCL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 달리 명시되지 않은(not otherwise specified; NOS) DLBCL, 드 노보(de novo) DLBCL 또는 비활동성 림프종(indolent lymphoma)으로부터 형질전환된 DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 여포성 림프종(follicular lymphoma)으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 NHL 또는 상기 거대 B 세포 림프종은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(드 노보이거나 또는 비활동성으로부터 형질전환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 및/또는 여포성 림프종(FL), 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 FL은 소낭(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL)이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 표적 항원은 B 세포 항원인다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 상기 항원은 CD19이다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 대한 2종, 3종, 4종 또는 그 초과의 종래 요법제(prior therapy)로 치료한 후 관해 후 재발하거나 이에 대해 불응성으로 된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 종래 요법제는 안트라사이클린(anthracycline) 및 CD20-표적화된 제제를 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드(doxorubicin hydrochloride)(하이드록시다우노마이신(hydroxydaunomycin)), 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate)(온코빈(oncovin)) 및 프레드니손(prednisone))을 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 종래 요법제는 동종 또는 자가 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT)을 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 상기 HSCT를 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 상기 종래 요법제에 대한 반응에서 완전 관해(complete remission; CR)을 성취하지 않았다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 공격성 질환 또는 고-위험 질환을 갖거나 나쁜 예후(poor prognosis)를 갖는 것으로 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 화학불응성 질환을 갖거나 화학요법 후 지속성 또는 재발된 질환을 갖는 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 화학불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 중추신경계(CNS) 침범(involvement) 또는 2차 CNS 림프종과 관련되거나 그를 포함하는 림프종이거나 또는 그것을 갖는 것으로 식별되었다. 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 중추신경계(CNS) 침범(involvement) 또는 2차 CNS 림프종과 관련되거나 그를 포함하는 림프종이거나 또는 그것을 갖는 것으로 식별되고/되거나; 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 (CNS) 침범 또는 2차 CNS 림프종으로 림프종을 나타냈거나 또는 나타낸 것으로 식별된 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%는 상기 CNS 질환의 해결을 성취하였다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 연령 65세 또는 그 초과이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 치료된 상기 대상체 중에서, (약) 35% 초과, (약) 40% 초과, (약) 45% 또는 (약) 50% 초과, 또는 전술한 수치들 사이의 임의의 값은 연령 65세 또는 그 초과이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 연령 70세 또는 그 초과이다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 50% 또는 그 미만의 좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction; LVEF)을 갖는 손상된 심장 기능을 갖거나 또는 갖는 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 60 mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 클리어런스(calculated creatinine clearance)을 갖는 손상된 신장 기능을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 60% 또는 그 미만의 일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide; DLCO)을 갖는 손상된 폐 기능을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 정상 상한(upper limit of normal; ULN)의 (약) 2배 초과인 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(aspartate aminotransferase; AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase; ALT)을 갖는 손상된 간 기능을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 생성하는 백혈구 성분 채집의 시간과 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량 투여 사이에 가교 화학요법(bridging chemotherapy)을 받았다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 종래 요법 후 질환 조절을 위한 가교 화학요법을 받았다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 가교 화학요법은, 리툭시맙-젬시타빈 플러스 옥살리플라틴(Rituximab-gemcitabine plus oxaliplatin), 덱사메타손(Dexamethasone), 방사선 요법(radiotherapy), 리툭시맙(Rituximab), 프레드니손, BR, 레날리도마이드(Lenalidomide), 젬시타빈 플러스 옥살리플라틴(gemcitabine plus oxaliplatin), 브렌툭시맙 베도틴, 이브루티닙, 벤다무스틴(Bendamustine) 및/또는 젬시타빈 + 리툭시맙(Gemcitabine + rituximab) 중의 하나 이상으로부터 선택된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 0, 1 또는 2의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG PS)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 0 또는 1의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(ECOG PS)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 2의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(ECOG PS)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 대상체는 (약) 50 cm2 또는 그 초과인 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(sum of product dimensions; SPD)을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CAR은 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인(extracellular antigen-recognition domain) 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬을 함유하는 세포내 신호전달 도메인(intracellular signaling domain) 및 CD28 또는 4-1BB의 신호전달 도메인인 공자극 신호전달 영역을 함유한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포(primary T cell)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 상기 대상체의 자가조직(autologous)이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma)을 가졌거나 또는 가지는 것으로 식별되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(autologous stem cell transplant; ASCT) 투여 후 재발하는 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 성취하였다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(complete response; CR)을 성취하고, CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 CR을 나타내고/내거나; 1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 CR을 유지하고/하거나, 상기 CR을 성취한 후 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고; OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 나타내고/내거나; OR을 성취하는 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 반응을 유지하거나 또는 상기 OR을 성취한 후 3개월 또는 그 초과동안 또는 6개월 또는 그 초과동안 생존하고/하거나; 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 이중/삼중 히트 림프종을 가졌거나 또는 가지는 것으로 식별되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(ASCT) 투여 후 재발하는 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 성취하였다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포는 상기 대상체에 대해 자가(autologous)이고, 성분 채집(apheresis)을 위한 최소 절대 림프구 수(ALC)는 상기 요법제의 생산에 요구되지 않거나 특정되지 않고/않거나; 상기 세포는, 상기 질환 또는 병태를 갖는 대상체의 또는 상기 대상체의 선택된 집단의 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%에 대해 상기 방법에 따라 투여하기 위한 세포 생성물을 생성할 수 있는 방법에 의해서 생산된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50%, (약) 60%, (약) 70%, 또는 (약) 80% 초과는 등급 3 또는 그 초과의 사이토카인 방출 증후(CRS)를 나타내지 않고/않거나 등급 3 또는 그 초과의 신경독성을 나타내지 않고/않거나 40% 또는 50% 또는 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내는 않는다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CR 또는 상기 OR은 3개월 초과 또는 6개월 초과동안 지속될 수 있고/있거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 초과 또는 6개월 초과동안 지속될 수 있고/있거나; 상기 방법으로 치료되고 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과 또는 9개월 또는 그 초과동안 CR 중에 잔류하거나 또는 반응 중에 잔류하거나 또는 생존 상태를 유지하고/하거나; 1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는, 3개월 또는 그 초과 및/또는 6개월 또는 그 초과 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 반응 중에 잔류하고, CR 중에 잔류하고/하거나, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나; 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 성취하고; 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속될 수 있는 OR을 성취하고/하거나; 상기 방법으로 치료되고 OR을 성취하는 대상체의 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 반응 중에 잔류하거나 또는 생존한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 중추신경계(CNS) 침범(involvement)와 관련되거나 그를 포함하는 림프종이거나 또는 그것을 갖는 것으로 식별되고/되거나; 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 (CNS) 침범로 림프종을 나타냈거나 또는 나타낸 것으로 식별된 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%는 상기 CNS 질환의 해결을 성취하였다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는, (약) 0 내지 (약) 48시간, (약) 0 내지 (약) 36시간, (약) 0 내지 (약) 24시간, (약) 0 내지 (약) 12시간, (약) 0 내지 (약) 6시간, (약) 0 내지 (약) 2시간, (약) 0 내지 (약) 1시간, (약) 0 내지 (약) 30분, (약) 30분 내지 (약) 48시간, (약) 30분 내지 (약) 36시간, (약) 30분 내지 (약) 24시간, (약) 30분 내지 (약) 12시간, (약) 30분 내지 (약) 6시간, (약) 30분 내지 (약) 4시간, (약) 30분 내지 (약) 2시간, (약) 30분 내지 (약) 1시간, (약) 1시간 내지 (약) 48시간, (약) 1시간 내지 (약) 36시간, (약) 1시간 내지 (약) 24시간, (약) 1시간 내지 (약) 12시간, (약) 1시간 내지 (약) 6시간, (약) 1시간 내지 (약) 4시간, (약) 1시간 내지 (약) 2시간, (약) 2시간 내지 (약) 48시간, (약) 2시간 내지 (약) 36시간, (약) 2시간 내지 (약) 24시간, (약) 2시간 내지 (약) 12시간, (약) 2시간 내지 (약) 6시간, (약) 2시간 내지 (약) 4시간, (약) 4시간 내지 (약) 48시간, (약) 4시간 내지 (약) 36시간, (약) 4시간 내지 (약) 24시간, (약) 4시간 내지 (약) 12시간, (약) 4시간 내지 (약) 6시간, (약) 6시간 내지 (약) 48시간, (약) 6시간 내지 (약) 36시간, (약) 6시간 내지 (약) 24시간, (약) 6시간 내지 (약) 12시간, (약) 12시간 내지 (약) 48시간, (약) 12시간 내지 (약) 36시간, (약) 12시간 내지 (약) 24시간, (약) 24시간 내지 (약) 48시간, (약) 24시간 내지 (약) 36시간 또는 (약) 36시간 내지 (약) 48시간 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 2시간 간격으로 수행되거나; 또는 상기 제 1 조성물의 투여의 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여의 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CD4+ T 세포에 의해서 포함된 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 포함된 수용체는 동일한 재조합 수용체를 포함하고/하거나 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 림프종은 B 세포 악성 종양이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 림프종은 비호지킨 림프종(NHL)이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 CNS 질환의 완전 반응(CR) 또는 관해를 성취하고; CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 CR을 유지하고/하거나; 1개월까지 및/또는 3개월까지 CNS 질환의 CR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하고, CR을 유지하고/하거나, 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 CNS 질환의 객관적 반응(objective response; OR) 또는 관해를 성취하고; 3개월 또는 그 초과동안 또는 6개월 또는 그 초과동안 상기 OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 및/또는 CNS 질환의 OR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하거나 또는 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 생존하고/하거나; 상기 뇌병변은 그 크기 또는 부피가 (약) 25%, 50%, 75% 이상 또는 그 초과까지 감소되고/되거나; CNS 질환의 감소 또는 관해 또는 클리어런스(clearance)는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%에서 달성된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 또는 50% 초과는 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후(CRS)를 나타내지 않고/않거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%는 투여 시작 후 3일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않고/않거나 투여 시작 후 5일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않으며/않거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 발병 중앙값은 상기 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 그 후, 또는 그의 해결까지의 중앙값 시간(median time to resolution)이고/이거나 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 신경독성의 발명 중앙값은 (약) 8, 9, 10, 또는 11일 초과이다.
임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 유럽 연구 및 치료 기구 핵심 삶의 질 설문지 버전 3.0(European Organization for Research and Treatment Core Quality of Life Questionnaire version 3.0; EORTC QLQ-C30)에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 글로벌 건강 상태에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 신체 기능에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 피로에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다.
임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 평균 5-레벨 EuroQol-5D(mean 5-level EuroQol-5D) (EQ-5D-5L) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월에서의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 크다. 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 평균 글로벌 비주얼 아날로그 스케일(mean EuroQol global visual analog scale; EQ-VAS) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월에서의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 크다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 개시 전에, 상기 대상체는 상기 세포 용량의 투여 후 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제를 투여받지 않았다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제는 항-IL-6 항체, 항-IL-6 수용체 항체 또는 스테로이드이거나 또는 그를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이거나 또는 그를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 투여 및 모든 후속 조치는 외래 환자를 기준으로 및/또는 입원 없이 또는 하룻밤 입원하여 수행되며; 상기 대상체가 해열제 치료 후 열이 지속되거나 감소되거나 감소되지 않았거나 1℃ 초과 감소하지 않은 경우, 상기 대상체는 입원하거나 또는 병원에 하룻밤 머물고/머물거나 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받는다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 NHL은 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(드 노보이거나 또는 비활동성으로부터 형질전환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 및/또는 여포성 림프종(FL), 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 여포성 림프종(FL)을 갖는다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 NHL은 DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 달리 명시되지 않은(not otherwise specified; NOS) DLBCL, 드 노보(de novo) DLBCL 또는 비활동성 림프종(indolent lymphoma)으로부터 형질전환된 DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 여포성 림프종(follicular lymphoma)으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 NHL은 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 여포성 림프종(FL)을 갖는다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 0, 1 또는 2의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG PS)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 0 또는 1의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(ECOG PS)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 상기 질환 또는 병태, 예를 들어 거대 B 세포 림프종 또는 NHL에 대한 1종 또는 그 초과의 종래 요법제(prior therapy)로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 된다. 일부 구현예에서, 상기 1종, 2종 또는 3종의 종래 요법제는 상기 CAR을 발현하는 또다른 세포 용량 이외의 것이다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태에 대한 1종의 종래 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태에 대한 2종 또는 그 초과의 종래 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법(high-dose chemotherapy)에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT)에 부적격이거나 부적격인 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 둘 다에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 재발된/불응성 NHL이고, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법(high-dose chemotherapy) 및 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT) 둘 다에 부적격인 것으로 식별되거나 또는 식별되었고, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태에 대한 1종의 종래 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 재발된 또는 불응성 B 세포 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 또는 치료되었고/되었거나; 상기 대상체는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발된 또는 불응성 질환이거나 또는 그를 갖고/갖거나; 상기 대상체는 1 또는 2의 ECOG 성능 상태를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받는 경우, 상기 종래 종래 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함하고; 상기 세포 용량의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 구현예는, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma)을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 화학요법 림프종(chemorefractory lymphoma), 예를 들어 화학불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 종래 요법제(prior therapy)에 대한 반응에서 완전 관해(complete remission; CR)를 성취하지 않았고/않았거나; 상기 대상체는 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant; ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발된 것을 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 양전자 방출 단층 촬영(PET)-양성 질환을 갖는다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 치료받았다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 리툭시맙(rituximab)을 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드(doxorubicin hydrochloride)(하이드록시다우노마이신(hydroxydaunomycin)), 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate)(온코빈(oncovin)) 및 프레드니손(prednisone))을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 제공된 구현예는, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 이중/삼중 히트 림프종; 화학요법 림프종, 예를 들어 화학불응성 DLBCL; 상기 질환 또는 병태, 예를 들어 악성 종양, 예를 들어 NHL 또는 거대 B 세포 림프종을 치료하기 위한 종래 요법제에 대한 반응에서 완전 관해(CR)를 성취하지 않는 것; 및/또는 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant; ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발된 것; 및/또는 중추신경계(CNS) 침범(involvement)과 관련되거나 또는 그를 포함하는 림프종을 갖는 것;을 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 제공된 구현예는, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 여포성 림프종(FL), 예를 들어 소낭(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련되는 FL을 갖는 대상체를 식별 또는 선택하는 것을 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받은 경우, 상기 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 재발된 또는 불응성 B 세포 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 또는 치료되었고/되었거나; 상기 대상체는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발된 또는 불응성 질환이거나 또는 그를 갖고/갖거나; 상기 대상체는 1 또는 2의 ECOG 성능 상태를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받는 경우, 상기 종래 종래 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 재발된 또는 불응성 B 세포 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 또는 치료되었고/되었거나; 상기 대상체는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발된 또는 불응성 질환이거나 또는 그를 갖고/갖거나; 상기 대상체는 1 또는 2의 ECOG 성능 상태를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받는 경우, 상기 종래 종래 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함하고; 상기 세포 용량의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 재발된/불응성 NHL을 갖는 것; 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)에 부적격이거나 부적격인 것으로 식별된 것; 및 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 대한 1종의 종래 요법제(prior therapy)로 치료한 후 관해 후 재발하거나 이에 대해 불응성으로 된 것;의 대상체를 식별하거나 또는 선택한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 연령 70세 또는 그 초과; 및/또는 2의 ECOG 성능 상태; 및/또는 손상된 폐 기능, 선택적으로 (약) 60% 또는 그 미만의 일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide; DLCO)을 가짐; 및/또는 손상된 심장 기능, 선택적으로 (약) 50% 또는 그 미만의 좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction; LVEF)을 가짐; 및/또는 손상된 신장 기능, 선택적으로 (약) 60 mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 클리어런스(calculated creatinine clearance)을 가짐; 및/또는 손상된 간 기능, 선택적으로 정상 상한(upper limit of normal; ULN)의 (약) 2배 초과인 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(aspartate aminotransferase; AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase; ALT)을 가짐;을 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 외래 환자 전달을 통해서 수행되는 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 재발된 또는 불응성 거대 B 세포 림프종; 및/또는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제; 및/또는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후에 재발된 또는 불응성 질환; 1 또는 2의 ECOG 활동도; 및/또는 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받은 경우, 상기 종래 CD19-표적화된 요법 후 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함함;이거나 또는 그를 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 투여 전에, 상기 대상체는 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝(preconditioning)되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 직전에, 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법제를 상기 대상체에 투여하는 것을 포함한다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량 및/또는 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량 및/또는 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 비-3차 진료 센터(non-tertiary care center)에서 수행된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여 후, 상기 대상체는 외래 환자 환경, 선택적으로 전화 접촉 및/또는 의료전문가 방문을 통해서 모니터링된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 방법은, 상기 대상체에 추가의 치료학적 제제 또는 요법제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 추가 제제 또는 요법제는 세포 요법제와는 다른, 예를 들어 CAR+ T 세포 요법제와는 다른 요법제이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인; 막 관통 도메인(transmembrane domain); 공자극 분자(costimulatory molecule)로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인(cytoplasmic signaling domain), 이는 일부 경우에 4-1BB임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 CD3제타임;을 포함하며; 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인, 막 관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하거나; 또는 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인(extracellular antigen-recognition domain) 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인 및 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인인 공자극 신호 전달 영역을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 항원-결합 도메인은 scFv이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열 VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역(variable heavy chain region) 및 FMC63의 가변 경쇄 영역(variable light chain region) 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고, 일부 경우에, 상기 scFv는, VH; 링커(linker), 이는 일부 경우에 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나, 상기 scFv는 가요성 링커(flexible linker)를 포함하고/하거나 서열번호 43으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 영역이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 신호 전달 영역이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 1차 신호 전달 도메인은 CD3제타 신호 전달 도메인이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 1차 신호 전달 도메인은 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CAR은 상기 막 관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 더 포함한다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 스페이서는 면역 글로불린 힌지(immunoglobulin hinge) 또는 그의 변형된 버전, 일부 경우에, IgG4 힌지(IgG4 hinge), 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이다.
임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 스페이서는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산이고, CD28 세포외 영역을 포함하지 않는다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 스페이서는 (약) 12개의 아미노산 길이이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들 중의 어느 것의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되고/되거나; 상기 스페이서는 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 트레오닌(threonine)임,을 포함하거나 또는 그들로 구성된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 4-1BB이거나 또는 그를 함유함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 함유함;을 함유하며; 일부 경우에 상기 막 관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 함유하며; 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 4-1BB 신호 전잘 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 CD3제타 신호 전달 도메인임;을 순서대로 함유하거나; 또는 상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 4-1BB 신호 전잘 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 일부 경우에 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 함유함;을 순서대로 함유하며; 상기 스페이서는, (a) 면역 글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 함유하거나 또는 그들로 구성되고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않으며, (b) 면역 글로불린 힌지, 이는 일부 경우에 IgG4 힌지임, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 함유하거나 또는 그들로 구성되고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 함유하지 않거나, 또는 (c) 약) 12개의 아미노산 길이이고/이거나 면역 글로불린 힌지, 이는 일부 경우에 IgG4 힌지임, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 함유하거나 또는 구성되거나, 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들 중의 어느 것의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 트레오닌(threonine)임,을 함유하거나 또는 그들로 구성되는, 폴리펩티드 스페이서이고/이거나; 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 함유하고/하거나; 상기 1차 신호 전달 도메인은 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하고/하거나; 상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열 VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고, 일부 경우에, 상기 scFv는, VH; 링커, 이는 일부 경우에 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나, 상기 scFv는 가요성 링커를 함유하고/하거나 서열번호 24로 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 항원은 B 세포 항원이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 항원은 C19이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 투여 전에, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝되었다(preconditioned). 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 투여 직전에, 상기 대상체에 림프구고갈 요법제를 투여하는 것은 상기 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량 및/또는 림프구고갈 요법제의 투여는 외래 환자 전달을 통해 수행되며; 상기 대상체가 해열제 치료 후 열이 지속되거나 감소되거나 감소되지 않았거나 1℃ 초과 감소하지 않는 경우, 상기 대상체는 입원하거나 또는 병원에 하룻밤 머물고/머물거나 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받는다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량은 비경구적으로 투여된다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량은 정맥내 투여된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 대상체의 자가 조직(autologous)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 인간 대상체이다.
본원에서는 또한 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 제조 물품은 또한 본원에서 제공된 임의의 방법에 따른 상기 세포 용량을 투여하기 위한 지침을 함유한다.
본원에서는 세포 요법제의 투여 후 독성 발병 위험을 평가하는 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴(ferritin) 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준(level), 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(sum of product dimensions; SPD)이며; 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 함유하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 함유하지 않음; 및 (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며; (ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ(units per liter), 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고; (iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖(nanograms per milliliter), 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ(milligrams per liter), 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;를 포함한다.
본원에서는 대상체를 식별하는 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(SPD)이며; 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 함유하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 함유하지 않음; 및 (b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며; (ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고; (iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;를 포함한다.
본원에서는 치료 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(SPD)이며; 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 함유하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 함유하지 않음; 및 (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며; (ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고; (iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임; 및 (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제를 투여하는 단계;를 포함한다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 방법은 또한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 파라미터는 SPD이고, 상기 임계 수준은 50 cm2이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 하나 이상의 파라미터는 SPD 및 LDH이고, SPD에 대한 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이고 LDH에 대한 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 하나 이상의 파라미터는 페리틴 및 CRP이고, 페리틴에 대한 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖이며 CRP에 대한 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 생물학적 샘플은 혈액 또는 혈장 샘플이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 SPD는 상기 신체의 CT 및/또는 MRI 이미징 또는 다른 이미징을 기준으로 하여 측정된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 하나 이상의 분해 물질 또는 상기 SPD의 수준, 양 또는 농도는 치료 전에, 성분 채집 전에, 또는 세포 생성물 제조 전에 측정된다.
또한 본원에서는 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 평가하는 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 유전자 조작된 세포를 함유하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및 (b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임;을 포함한다.
또한 본원에서는 대상체를 식별하는 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 유전자 조작된 세포를 함유하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및 (b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임;을 포함한다.
또한 본원에서는 치료 방법이 제공되되, 상기 방법은, (a) 유전자 조작된 세포를 함유하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및 (b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임; 및 (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제를 투여하는 단계;를 포함한다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 방법은 또한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제공된 방법에서 상기 임계 수준은 500 개의 세포/㎕이다.
또한 본원에서는 상기 대상체가 세포 요법제를 투여받고 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 식별되는 경우 독성 증후에 대해 대상체를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하는 방법이 제공된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 신경독성 또는 CRS이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 신경독성 또는 CRS이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 중증 신경독성이거나 또는 등급 2 또는 그 초과의 신경독성, 등급 3 또는 그 초과의 신경독성, 또는 등급 4 또는 그 초과의 신경독성이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 신경독성이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 중증 신경독성 또는 등급 3 또는 그 초과의 신경독성이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 중증 CRS이거나 또는 등급 2 또는 그 초과의 CRS, 등급 3 또는 그 초과의 CRS, 또는 등급 4 또는 그 초과의 CRS이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 CRS이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 독성은 중증 CRS 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS이다.
본원에서는 또한 치료 방법이 제공되되, 대상체가 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 식별되는 경우 상기 대상체에, (a) (1) 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제 및 (2) 세포 요법제, 상기 제제는, 상기 대상체에 대한 상기 세포 요법제의 투여 개시 (i) 이전에, (ii) 1일, 2일, 또는 3일 내에, (iii) 그와 동시에 및/또는 (iv) 최초 발열 후에 투여됨; 및/또는 (b) 감소된 용량, 또는 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않거나, 또는 대부분의 대상체, 및/또는 세포 요법제의 투여 후 대상체가 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 질환 또는 병태를 갖는 대부분의 대상체,에서 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않는 용량의 세포 요법제;를 투여하고/하거나; (c) 상기 대상체에 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상동안 병원에 입원하여 세포 요법제를 투여한다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 요법제는 다르게는 외래 환자 기준으로 또는 1일 이상 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여되어야 한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료제는 항-IL-6 항체 또는 항-IL-6 수용체 항체이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 클라자키주맙(clazakizumab), 사릴루맙(sarilumab), 올로키주맙(olokizumab)(CDP6038), 엘실리모맙(elsilimomab), ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(sirukumab)(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 및 FM101 중에서 선택된 제제이거나 또는 그를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료제는 하나 이상의 스테로이드이거나 또는 그를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 스테로이드는 덱사메타손이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료는 바소프레써(vasopressor)의 투여를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료는 인큐베이션을 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제제 또는 다른 치료는 투석(dialysis)을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 병태와 관련되거나 또는 상기 질환 또는 병태와 관련된 병변의 환경의 세포에서 발현되는 항원(예를 들어 표적 항원)에 특이적으로 결합한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 항원은 B 세포 항원이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 항원은 CD19이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 암이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양이고/이거나 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종이다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태, 예를 들어 상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma; DLBCL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 달리 명시되지 않은(not otherwise specified; NOS) DLBCL, 드 노보(de novo) DLBCL 또는 비활동성 림프종(indolent lymphoma)으로부터 형질전환된 DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 여포성 림프종(follicular lymphoma)으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 FL은 소낭(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 질환 또는 병태는 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL)이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 조작된 세포는 T 세포, 예를 들어 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포이다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 요법은 대상체에 CD4+ T 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되, 각각의 용량의 T 세포는 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 항원, 예를 들어 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행된다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CD4+ T 세포에 의해서 함유된 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 함유된 수용체는 동일한 재조합 수용체를 포함하고/하거나 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포의 용량은, 정의된 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이고/이거나; 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 하나에서 상기 수용체를 함유하는 CD4+ T 세포 및 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 다른 것에서 상기 수용체를 함유하는 CD8+ T 세포는 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고/하거나; 상기 제 1 및 제 2 조성물로 투여된 상기 수용체를 함유하는 CD4+ T 세포 및 상기 수용체를 함유하는 CD8+ T 세포는 정의된 비율로 존재하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 정의된 비율은 (대략) 1:1이다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함); (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1.5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×107 내지 (약) 1×108 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함); (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 함유한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 7.5×107 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함한다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이거나 또는 상기 대상체의 자가 조직이다.
본원에서는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물; 및 본원에서 제공된 방법 중의 어느 것에 따라 독성을 발병할 위험을 평가하거나, 대상체를 식별하거나 또는 대상체를 치료하기 위한 지침을 포함하는, 제조 물품이 제공된다. 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 또한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 포함한다.
도 1은 20% 이상(≥)의 대상체에서 발생한 실험실 이상 및 치료 관련 부작용(TEAE)을 경험한 대상체의 백분율을 나타낸다. *: 연구 치료와 관련이 없고 림프종의 진행으로 인한 다기관 부전의 등급 5AE 1건; †: 성장 인자 및 광범위한 항생제 및 항진균제에 대한 호중구 감소증 동안 진행성 호흡 부전에 대한 기계적 환기를 거부한 대상체에서 23일에 발생한, 플루다라빈, 사이클로포스파미드 및 CAR T 세포 요법과 관련하여 조사자가 평가한 확산 폐포 손상의 등급 5 AE 1건.
도 2는 관찰된 CRS 및 신경독성 발병까지의 시간을 나타내는 카플란 마이어 곡선(Kaplan meier curve)이다.
도 3a 및 도 3b는 치료된 대상체의 서브그룹 사이의 3개월 객관적 반응률(ORR)을 도시한다.
도 4a 및 도 4b는 대상체의 전체 및 핵심 코호트에서 반응 기간(CR/PR, CR 또는 PR) 및 전체 생존을 나타낸다.
도 5a는 다양한 용량 수준에서 처리 후 다양한 시점에서 말초 혈액에서 CAR+ T 세포의 약동학을 나타낸다. 도 5b는 반응자 및 비반응자 사이의 처리 후 다양한 시점에서 말초 혈액에서 CAR+ T 세포의 약동학을 나타낸다. 도 5c는 임의의 신경독성이 발생하거나 발생하지 않은 대상체에서 치료 후 다양한 시점에서 말초 혈액에서 CAR+ T 세포의 약동학을 나타낸다.
도 6a는 특정 시점에서 측정된 화학불응성 형질전환된 DLBCL을 갖는 대상체의 말초 혈액 내 CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ T 세포의 수를 나타낸다. 도 6b는 우측 중두개와(middle cranial foss)의 두개내 이상 및 우측 후방 귀 부위의 피하 조직의 광범위한 이상을 보여주는 치료 전 축방향 PET-CT 영상을 도시한다. 도 6c는 항-CD19 CAR+ T 세포로 처리한 후의 도 2b의 이상을 해결한 치료 후 PET-CT 이미지이다. 도 6d는 치료 전 뇌 MRI(조영제를 이용한 고해상도 T1 강조 이미지, 축상 도시)로 우측 중두개와에 균일하게 조영된 종괴를 보여준다. 도 6e는 강화 덩어리(enhancing mass)의 거의 완전한 해상도를 보여주는 치료 후 MRI 이미지이다. 도 6f는 18F-플루오로데옥시글리코오스(화살표)의 강렬한 흡수와 관련된 우측 후방 귀 종양 재발을 보여주는 재발시 축 PET-CT 이미지이다. 도 6g는 절개 생체 검사(biopsy) 및 CAR+ T 세포의 재확장 후 후방 귀 종양의 해상도를 나타내는 PET-CT 이미지이다.
도 7은 CAR+ T 세포의 투여 전 대상체의 혈청에서 측정된 분석물의 수준 및 신경독성의 발병과의 상관관계를 나타낸다.
도 8은 진행-부재 시간(개월)을 플롯팅하고 항-CD19 세포 요법으로 치료된 NHL 대상체의 전체 코호트 및 코어 코호트 내의 개별 대상체에서 시간 경과에 따라 관찰된 최상의 전체 반응 및 반응 지속성, 및 개별 임상 결과를 나타냄으로써, CAR-T 발현 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 그래프를 나타낸다. a : 달리 명시되지 않는 한 환자는 1개월에 BOR을 달성하였음; b : 2명의 환자에서 관찰된 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 해결; c : 1명의 환자는 질병 진행 시 생검 후 재확대됨.
도 9a는 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 87 명의 대상체로부터의 혈액 샘플에서, 절단된(truncated) 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 유세포 분석에 의해 평가된 CAR-발현 CD3+ 세포/μL 혈액의 중앙값(±사분위수) 수(CD3, 원형; N = 87); 또는 CAR를 인코딩하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus) 후-전사 조절 요소 (WPRE)에 특이적인 프라이머를 사용하여 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 평가된 통합된 (integrated) CAR 트랜스진/㎍ 게놈 DNA의 중앙값(±사분위수) 카피(copies) 수(qPCR, 정사각형; N = 85)를 도시한다. 유세포 분석에서 CAR+ 세포 검출에 대한 컷오프는 CAR+ 게이트에서 ≥ 25 이벤트로 설정되었고, qPCR에 대한 검출 한계는 게놈 DNA μg 당 CAR 트랜스진의 ≥ 12.5 카피(copies)이었다. 도 9b는 11±3일에 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 67명의 대상체로부터의 혈액 및 골수 샘플에서 CD4+ 및 CD8+CAR-발현 세포/μL의 상대적 수를 도시한다. 선은 통일선을 나타내며 회귀선이 아니다.
도 10a 및 10b는 0일과 28일 사이의 곡선 아래의 중앙값(±사분위수)(AUC0-28; 도 10a) 및, 드 노보 또는 비활동성 림프종(DLBCL, NOS; N=27)으로부터 형질전환된 미만성 거대 B-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종(tFL; N=10), 변연부 림프종 또는 만성 림프구성 백혈병(tMZL/tCLL; N=4)으로부터 형질전환된 DLBCL, 또는 외투 세포 림프종(MCL; N-5)을 갖는 대상체 서브그룹의 CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포의 최대 혈청 농도(Cmax; CAR+ cells/μ; 도 10b)를 도시하며, 상기 대상체는 DL1에서 CAR-발현 T 세포를 투여 받았다.
도 11a 및 11b는, DL1 또는 DL2에서 CAR+ 세포를 갖는 대상체에서, CD3+, CD4+ 및 CD3+의 0일과 28일 사이의 중앙값(±사분위수) 면적(AUC0-28; 도 11a) 및 최대 혈청 농도(Cmax; CAR+ 세포/㎕ 혈액; 도 11b)를 도시한다.
도 12a-12d는 CRS를 발병하지 않은 대상체(CRS 없음)와 비교하여 사이토카인 방출 증후를 발병한 대상체(임의의 CRS)에서(CD4+: 도 12a; CD8+: 도 12b), 또는 NT를 발병하지 않은 대상체(NT 없음)와 비교하여 신경독성을 발병한 대상체(임의의 NT)에서(CD4+: 도 12c; CD8+: 도 12d), 시간 경과에 따른 CAR-발현 CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포/μL 혈액의 중앙값(±사분위수) 수를 도시한다.
도 13a 및 13b는 CR, PR 또는 PD의 최상의 전체 반응(BOR) 또는 CR의 3개월(M3) 지속 반응을 갖는 대상체로 분류된 대상체에서 피크 CD3+ CAR+ 세포/μL(CD3+ Cmax)의 수를 도시한다.
도 14a는 높은 CAR+ 세포 증폭(CD3+ Cmax > 500)을 나타내는 대상체 및 낮은 CAR+ 세포 증폭(CD3+ Cmax < 500)을 나타낸 대상체로부터의 혈청 샘플에서 사전-림프구 고갈 혈액 분석물 수준을 도시한다. 도 14b는 높은 CAR+ 세포 증폭을 나타낸 대상체(CD3+ Cmax > 500) 및 낮은 CAR+ 세포 증폭을 나타낸 대상체(CD3+ Cmax < 500)의 혈청 샘플에서 최고 혈액 분석물 수준을 도시한다.
도 15는 CAR+ 세포의 DL1 또는 DL2가 투여된 개별 대상체에 대한 CD3+ CAR+ 세포의 AUC0-28(세포*일/μL)에 대한 사전-림프구 고갈 SPD(cm2)를 도시하는 플롯을 도시한다.
도 16a 및 16b는 사이토카인 방출 증후군(CRS 등급 1-4)이 발생하지 않은 대상체(CRS 등급 0)와 비교한 사이토카인 방출 증후군(CRS 등급 1-4)이 발병한 대상체(도 16a)로부터 또는 NT이 발병하지 않은 대상체(NT 등급 0)와 비교한 신경독성이 발병한 대상체(NT 등급 1-4)에서의 혈청 샘플 중의 사전-림프구 고갈 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이량체(μg/L); CRP(mg/L) 및 사이토카인(pg/mL).
도 17은, CRS를 발병하지 않은 대상체(CRS 없음)와 비교하여 사이토카인 방출 증후가 발병한 대상체(임의의 CRS)에서, 또는 NT를 발병하지 않은 대상체(NT 없음)와 비교하여 신경독성을 발병한 대상체(임의의 NT)에서, 제품 치수의 합(SPD; cm2), 종양 부담의 지표, 및 락트산 디하이드로게나제(LDH; U/L) 수준의 사전-림프구 고갈 환자 파라미터의 평가를 도시한다.
도 18a는, 신경독성을 발병한 개체(등급 1-4 NT) 또는 NT를 발병하지 않은 대상체(등급 0 NT), 및 CRS를 발병한 개체(등급 1-4 CRS) 또는 CRS를 발병하지 않은 대상체(등급 0 CRS)에서, 사전-림프구 고갈 LDH(U/L) 수준에 대한 사전-림프구 고갈 SPD(cm2)를 도시한 플롯이다(우측 패널). 점선은 더 높은 CRS 또는 NT 비율과 관련된 SPD(50cm2 이상) 또는 LDH(500U/L 이상) 수준을 나타낸다. 도 18b는 95% 신뢰 구간(CI)으로 SPD(50cm2 이상) 또는 LDH(500U/L 이상)의 수준을 기반으로 하는 CRS 또는 NT 발병에 대한 승산비 추정치를 도시한다. 도 18c는 95% 신뢰 구간(CI)으로 임계값보다 낮은 값에 대한 승산비 추정을 포함하여 SPD 또는 LDH의 수준에 기초한 CRS 또는 NT를 개발하기 위한 승산비 추정치를 도시한다.
도 19는 3개월에 지속적인 반응을 보인 대상체 대 3개월에 반응이 없는 대상체에 대한 사전-림프구 고갈 종양 부담 파라미터(SPD) 및 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이량체(㎍/L); CRP 및 SAA-1(mg/L) 및 사이토카인(pg/mL).
도 20a 및 도 20b는 사이토카인 방출 증후(CRS)를 발병하지 않은 대상체(CRS 없음)과 비교하여 CRS를 발병한 대상체(임으의 CRS)로부터(도 20a) 또는 신경독성(NT)를 발병하지 않은 대상체(NT 없음)와 비교하여 NT를 발병한 대상체(임의의 NT)(도 20b)에서의 혈청 샘플 중의 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: CRP (mg/L), SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 21a는, 안정적인 질환(SD) 또는 진행성 질환(PD)를 갖는 대상체(N=17)와 비교한 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)의 최상의 총괄 반응(BDR)을 갖는 대상체(N=57)로부터의 혈청 샘플 중의 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다. 도 21b는, SD/PD의 3-개월 반응을 갖는 대상체(N=35)와 비교한, SD/PD의 3-개월 반응을 갖는 대상체(N=31)로부터의 혈청 샘플 중의 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다.
도 22는 95% 신뢰 구간으로 치료된 대상체의 서브그룹 사이의 3개월 객관적 반응률(ORR)을 도시한다.
CR, PR을 성취한 대상체, 반응, 비-반응자, 및 모든 치료된 대상체에 대하여, 도 23a 및 23b는 풀 코흐트(도 23a) 및 코어 코흐트(도 23b)에 대한 반응기간을 도시하고, 도 23c 및 도 23d는 풀 코흐트(도 23c) 및 코어 코흐트(도 23d)에 대한 총괄 생존을 도시한다. 중앙값 F/U는 반응 기간동안 6.3개월이었다.
도 24는 환자의 20% 이상(≥)에서 일어나는 풀 DLBLC 코흐트에서 치료-관련 부작용(TEAE)을 경험한 대상체의 백분율을 나타낸다. 최소 28일의 추적 관찰을 통해 DL1에서 일치하는 제품으로 치료받은 MCL 환자 5명에 대한 데이터는 포함되지 않았다. b : CAR+ T 세포 투여와 관련 없는 패혈성 쇼크의 등급 5 AE 1건. c : 확산성 치조 손상의 5등급 AE 1건, 조사자는 플루다라빈, 시클로포스파미드 및 CAR+ T 세포와 관련된 것으로 평가하였고, 성장 인자 및 광범위 항생제 및 항진균제에 대한 호중구 감소증 동안 진행성 호흡 부전으로 기계적 환기를 거부한 환자에서 23일째에 발생하였다. d : 실험실 변칙(Laboratory anomalies).
도 25는 전체 코호트에서 시간 경과에 따라 CRS 또는 신경독성이 발병한 대상체의 백분율을 나타낸다.
도 26은 실시예 8에 기재된 CAR T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물을 생성하기 위한 공정의 상이한 단계에서 CD4+ 및 CD8+ 세포가 강화된 T 세포 조성물의 T 세포 순도를 표시하는 상자 플롯을 보여준다. 조성물에서 CD4+ 및 CD8+ 세포의 빈도(총 백혈구의 %)가 표시된다
도 27a의 A 및 B 및 27b는 고 또는 저 제형 부피의 치료 세포 조성물 중에서 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포의 농도(도 27a의 A), 생존력(도 27a의 B), 및 카스파제-3-음성의 빈도(도 27c)를 표시하는 상자 플롯을 보여준다.
도 28a는 DL1 및 DL2에서의 투여를 위한 CAR T 세포 조성물에 존재하는 CD3+ CAR+ T T 세포의 수를 나타낸다. 도 28b는 DL1 및 DL2에서의 투여를 위한 CAR T 세포 조성물에 존재하는 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ 세포, 및 CD4+CAR+TNF-α+ 세포 및 CD8+CAR+TNF-α+ 세포의 수를 나타낸다.
도 29는 실시예 6에 기술된 연구 시점에 대상의 ≥20%에서 발생하는 FULL DLBCL 코호트에서 치료-응급 부작용(TEAE)을 경험한 대상의 백분율을 나타낸다. 최소 28일의 추적 관찰과 함께 DL1에서 적합 제품으로 치료된 MCL을 가진 6명의 대상체에 대한 데이터는 포함되지 않았다. b : CAR+ T 세포 투여와 관련 없는 패혈성 쇼크의 등급 5 AE 1건이 질병 진행 상황에서 발생함. c : 확산성 치조 손상의 5등급 AE 1건, 조사자는 플루다라빈, 시클로포스파미드 및 CAR+ T 세포와 관련된 것으로 평가하고, 성장 인자 및 광범위 항생제 및 항진균제에 대한 호중구 감소증 동안 진행성 호흡 부전으로 기계적 환기를 거부한 환자에서 23일째에 발생함. d : 실험실 변칙.
도 30은 95% 신뢰 구간을 사용하여 치료된 대상체의 하위 그룹 간의 6개월 객관적 반응률(ORR)을 도시한다. a 코어 코호트의 모든 용량 수준에서 치료된 모든 DLBCL 대상체를 포함한다.
CR, PR을 성취한 대상체, 반응, 비-반응자, 및 모든 치료된 대상체에 대하여, 도 31a 및 31b는 전체 코호트(도 31a) 및 코어 코호트(도 31b)에 대한 응답 기간(DOR)을 도시하고, 도 31c 및 31d는 전체 코호트(도 31c) 및 코어 코호트(도 31d)에 대한 전체 생존을 도시한다. NE: 평가불가
도 32a-32f는, 500개의 세포/μL 또는 그 미만 또는 500개의 세포/μL 초과의 CAR+ 세포/μL의 Cmax(도 32a); 50 cm2 또는 그 미만 또는 50 cm2 초과의 SPD(도 32b); 500 유닛/L 또는 그 미만 또는 500 유닛/L 초과의 LDH; 10 mg/L 또는 그 미만의 CRP 및 5000 ng/mL 또는 그 미만의 페리틴 또는 10 mg/L 초과의 CRP 및 5000 ng/mL 초과의 페리틴(도 32d); 및 입원 환자 및 외래 환자 환경(도 32e-32f)로 그룹핑된 대상체에서, 500개 세포/μ+ 세포/μFIG 이하의 Cmax로 그룹화된 대상체에서 다양한 의료 자원 파라미터(평균 입원 일수, 중환자실(ICU) 평균 일수, % 토실리주맙 사용 및 % 바소프레써, 삽관 또는 투석 사용, 평균 입원 기간)의 사용을 보여준다.
도 33은 기준선부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입 후 6개월까지 대상체에 대한 평균 선호도 가중 건강 상태 점수를 도시한다.
도 34는 기준선으로부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입 후 6개월까지 대상체에 대한 기준선으로부터의 평균 변화를 도시한다.
도 35는 기준선으로부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입 후 6개월까지 평가된 건강 상태 유용성 점수에서 임상적으로 의미 있는 변화를 갖는 대상체의 비율을 도시한다.
도 36a-36e는 기준선부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입후 6개월까지의 이동성(도 36a), 자가 관리(도 36b), 일상 활동(도 36c), 통증/불편(도 36d) 및 불안/우울증(도 36e) 치수를 갖는 중등도, 중증 또는 극도의 문제를 보고하는 환자의 백분율을 보여준다.
도 37은 기준선부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입 후 6개월까지 대상체에 대한 평균 전체 건강 평가 점수(EQ-VAS)를 도시한다.
도 38은 기준선으로부터 CAR+ T 세포 조성물의 주입 후 6개월까지 대상체에 대한 EQ-VAS 점수의 기준선으로부터의 평균 변화를 나타낸다.
도 39는 용량 수준 1(DL1) 및 용량 수준 2(DL2)에 대한 용량 수준에 의한 CAR T 세포 확장을 보여준다.
도 40은 CRS 및 NE의 발병 및 해결 날짜 내 HRU(Healthcare Resource Utilization)를 식별하는 방법을 보여준다.
도 40은 CRS 및 NE의 발병 및 해결 날짜 내 HRU(Healthcare Resource Utilization)를 식별하는 방법을 보여준다.
도 41은 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종을 갖는 대상체에 대한 시설, 약물 및 진단 비용을 보여준다.
도 42는 치료 후 3개월에 완전 반응(CR) 또는 진행성 질환(PD)을 나타내는 대상체에서 치료 전 종양 생검에서 차등 유전자 발현 프로파일을 보여준다.
도 43은 여포성 림프종 세포주 샘플(FL; FL_DLBCL_DN)과 비교하여 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 세포주 샘플에서 보다 높게 발현된 유전자를 포함하는, 3개월 치료 후에 PD와와 관련된 다양한 농축된 유전자 세트를 나타낸다.
도 44는 FL 종양 생체 검사와 DLBCL 종양 생검 사이의 차등 유전자 발현을 보여준다.
도 45a-45b는 FL 종양과 DLBCL 종양 사이의 예시적인 유전자 EZH2(도 45a) 및 CD3ε(도 45b)의 차등 유전자 발현을 보여준다.
도 46a 및 도 46b는 DLBCL("DLBCL 유전자 세트"로 명명됨; 도 46a)에서 대 FL("FL 유전자 세트"로 명명됨; 도 46b)에서 상승되는 것으로 발견된 유전자와, CR을 계속 나타낸 대상체 또는 PD를 계속 나타낸 대상체 사이에서 단일-샘플 유전자 세트 농축 분석(ssGSEA)을 나타내고, DLBCL에서 보여진 것들과 비교하여 FL에서 보여진 것과 보다 유사한 종양 유전자 발현 프로파일을 갖는 대상체가 3개월 치료 후에 CR을 나타낼 보다 높은 가능성이 있었다는 것을 설명한다.
도 47은 재발된/불응성 거대 B 세포 림프종(R/R LBCL), DLBCL, 미만성 거대 B-세포 림프종; FL3B, 여포성 림프종 등급 3B; PMBCL, 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종; RCT, 무작위 대조 시험; R/R, 재발성/불응성; SCNSL, 2차 중추신경계 림프종의의 치료 계열, 질환 서브타입 및 하위집단에 의한 연구의 개요를 보여준다. a: 도면에 수록된 연구 카운트(study count)는 일부 집단 내의 다중 서브그룹의 보고로 인해 총 78개를 초과한다; b: "혼합 이식 인구"에는 이식 적격 환자와 이식 부적격 환자가 모두 등록된 연구가 포함된다. "혼합 모집단"에는 모집단이 지정되지 않은 연구를 포함한다.
도 48은 백혈구 제거되고 결과적으로 CAR+ T 세포 요법으로 치료된 대상체의 개요, 및 모든 용량 수준 DL1, DL1D, DL2 및 DL3에 걸쳐 결과를 평가하기 위해 사용된 치료 요법을 도시한다.
도 49a-49c는 DOR 중앙값(도 49a), CR을 갖는 대상체 간의 PFS 중앙값(도 49b), 및 CR을 성취한 대상체 간의 OS 중앙값(도 49c)을 포함하여 반응에 대해 평가 가능한 대상체 간의 효능 및 반응 결과를 도시한다.
도 50a-50b는 객관적 반응률(도 50a) 및 완전 반응률(도 50b)을 포함하는 반응을 갖는 모든 평가가능한 대상체 및 대상체에 대해 하위그룹에 걸쳐 관찰된 반응을 도시한다.
도 51a-51f는 조직학적 서브그룹(도 51b)에 의해서, 브릿징 요법(도 51c)에 의해서, 화학요법-민감성 대 화학요법 불응성 상태(도 51d)에 의해서, 사전-LDC SPD 상태(도 51e)에 의해서, 연령 그룹(도 51f)에 의해서 진행-부재 생존에 상대적인 서브그룹에 대한 반응 기간 및 동반질환이 있는 피험자와 동반질환이 없는 피험자의 반응 기간(도 51g)을 도시한다.
도 52a-52b는 전반적인 건강 상태(도 52a) 및 신체 기능(도 52b)의 기준선으로부터 평균(SE) 변화로 평가된 반응을 도시한다.
도 53a-53b는 피로(도 53a) 및 통증(도 53b)에 대한 기준선으로부터의 평균(SE) 변화로서 평가된 반응을 도시한다.
도 54a의 A 및 B 및 54b의 C 및 D는 글로벌 건강 상태(도 54a의 A), 신체 기능(도 54a의 B, 1개월은 제외), 피로(도 54b의 C) 및 통증(도 54b의 D)을 포함한 영역에서 임상적으로 유의미한 개선, 상태의 무변화 또는 악화를 겪은 EORTC QLQ-C30 설문에 대해 평가 가능한 대상체의 결과를 도시한다.
55a-55b는 건강 상태 지수 점수(도 55a) 및 EQ-VAS(도 55b)에 대한 기준선으로부터의 평균(SE) 변화로서 평가된 EORTC QLQ-C30 질문에 대해 평가 가능한 대상체의 반응을 도시한다.
도 56은 효능 및 객관적 반응에 대해 평가된 입원 환자 또는 외래 환자로서 모니터링된 개별 대상체의 결과를 도시한다.
도 57은 토실리주맙, 토실리주맙 및 스테로이드, 혈압강하제 또는 스테로이드만을 투여받은 CRS, NE 또는 CRS 및 NE 둘 다를 갖는 대상체의 백분율을 도시한다.
도 58은 12개월(11.2-16.7 범위)의 중앙값 후속 조치(95% CI)로 완전 반응자(CR) 및 부분 반응자(PR)에 대한 반응에 대해 평가할 수 있는 대상체 간의 지속된 반응 및 반응 기간의 확률을 도시한다.
도 59는 연령, LBCL 서브타입, 가교 요법의 사용, 높은 질병 부담의 존재, 종래 HSCT 및 2차 CNS 림프종을 비롯한 다양한 임상 특성을 갖는 대상체 사이에서 95% 신뢰 구간의 전체 반응률(ORR) 및 완전 반응(CR)을 도시한다.
도 60은 완전 반응자(CR), 부분 반응자(PR), 무반응자, 및 전체 평균을 포함하는 객관적 반응에 의해 평가된 대상체에 대한 무진행 생존(PFS) 확률을 도시한다.
도 61은 완전 반응자(CR), 부분 반응자(PR), 무반응자, 및 총 평균을 포함하는 객관적 반응에 의해 평가된 대상체에 대한 전체 생존(OS)의 확률을 도시한다.
도 62는 HGL, tFL, PMBCL, tiNHL 및 DLBCL, NOS를 포함하는 조직학적 하위유형에 의한 무진행 생존(PFS)을 도시한다.
도 63은 연구일 기준 261명의 대상체에 대한 qPCR 및 유세포 분석에 의해 분석된 CAR+ T 세포(CD19+ B 세포, CD3+ 절단된 수용체 및 이식유전자)에 대한 세포 동역학 파라미터를 도시한다.
도 64는 유세포 분석을 통해 연구 일자별로 분석된 CAR+ T 세포(CD3+, CD4+ 및 CD8+ 절단된 수용체+)에 대한 세포 운동 매개변수를 도시한다.
I. 유전자 조작 세포를 이용한 세포 요법의 방법 및 용도
일반적으로 암 또는 종양, 예를 들어 백혈병 또는 림프종, 가장 특별하게는 B 세포 악성 종양 또는 비호지킨 림프종(NHL)이거나 또는 그들을 포함하는 질환 또는 병태를 갖는 대상체의 치료를 위한 방법 및 조작된 세포(예를 들어 T 세포) 및/또는 조성물의 용도가 제공된다. 임의의 상기 제공된 방법의 특정 구현예에서, 상기 T 세포는 CD19에 대해 지시되는 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된다. 일부 측면에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세포 림프종이다. 일부 측면에서, 상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종이다. 일부 측면에서, 상기 질환 또는 병태는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 또는 그의 서브타입이다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 특정 대안 방법과 비교하여, 예를 들어 치료된 대상체의 특정 구릅에서 개선된 반응 및/또는 보다 지속가능한 반응 또는 효능 및/또는 감소된 위험의 독성 또는 다른 부작용 제공하거나 또는 그를 성취한다. 일부 구현에에서, 상기 방법은 특정 수 똔느 상대적 수의 상기 조작된 세포의 투여, 정의된 비율의 특정 타입의 세포의 투여, 특정 환자 집단의 치료, 예를 들어 특정 위험 프로파일, 스태킹(staging), 및/또는 종래 치료 이력, 및/또는 그들의 조합에 의해서 유리하다.
또한 특정 파라미터, 예를 들어 독성의 발병과 상관될 수 있는 특정 바이오마커 또는 분석물의 발현을 평가하는 것을 포함하는 방법, 및 치료 방법, 예를 들어 독성을 예방하고/하거나 개선하는 처치 방법이 제공된다. 또한, 반응, 예를 들어 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR), 이는 일부 경우에 적어도 3개월, 6개월 또는 그 초과동안 지속될 수 있음; 안전성 결과, 예를 들어 면역 세포 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 후 독성의 발병, 예를 들어 신경독성 또는 CRS를 포함하는, 결과, 예를 들어 치료학적 결과와 상관될 수 있는, 특정 파라미터, 예를 들어 특정 바이오마커 또는 분석물의 발현을 평가하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 또한, 상기 파라미터, 예를 들어 바이오마커 또는 분석물의 발현의 평가에 기반하여 반응의 가능성 및/또는 독성의 발현 가능성을 평가하는 방법이 제공된다. 또한 세포 요법제에서 사용하기 위한 조성물이 제공된다. 또한 예를 들어 본원에서 제공된 방법에 사용하기 위한 제조 물품 및 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 제조 물품 및 키트는 또한 본원에서 제공된 방법에 따르는 사용 지침을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, 백혈병 또는 림프종에 의해 발현, 관련 및/또는 특이적인 항원 및/또는 그것이 유래된 세포 유형을 인식하는, 일반적으로 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 키메라 수용체인, 유전자 조작된 (재조합) 세포 표면 수용체를 발현하는 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 상기 세포는 일반적으로 투여용으로 제형화된 조성물로 투여되며; 상기 방법은 일반적으로 하나 이상의 상기 세포 용량을 상기 대상체에 투여하는 것을 포함하되, 상기 용량(들)은 상기 조성물 내에 특정 수 또는 상대 수의 세포 또는 조작된 세포, 및/또는 정의된 비율 또는 조성물의 2종 또는 그 초과의 서브-타입, 예를 들어 CD4 대 CD8 T 세포를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 세포, 집단, 및 조성물은 입양 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법을 통해서, 치료되는 상기 특정 질환 또는 병태를 갖는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 림프종 또는 백혈병, 또는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종 또는 비-히지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체를 항원 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포)의 용량을 사용하여 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 특정 그룹 또는 서브세트의 대상체, 예를 들어 고-위험 질환, 예를 들어 고-위험 NHL 또는 고-위험 거대 B 세포 악성 종양을 갖는 것으로 식별된 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 공격성 및/또는 불량한 예후 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)의 형태, 예를 들어 표준 요법에 대해 재발되었거나 또는 불응성(R/R)이고/이거나 불량한 예후를 갖는 NHL을 갖는 대상체를 치료한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 표준 요법에 대해 재발되었거나 또는 불응성(R/R)인 거대 B 세포 림프종을 갖는 대상체를 치료한다. 일부 경우에, 이용가능한 요법, 케어의 표준(a standard of care; SOC), 또는 요법이 지시하는 질환 및/또는 환자 집단을 위한 참조 요법에 대한 총괄 반응 속도(ORR; 일부 경우에 객관적 반응률이라고도 알려짐)는 40% 미만이고/이거나 상기 완전 반응(CR; 일부 경우에 완전 관해라고도 함)은 20% 미만이다. 일부 구현예에서, 화학불응성 DLBCL에서, 참조 또는 이용 가능한 치료 또는 표준 치료 요법의 ORR은 약 26%이고 CR 비율은 약 8%이다[문헌 「Crump et al. Outcomes in refractory aggressive diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL): Results from the international SCHOLAR study. ASCO 2016 [Abstract 7516]」 참조]. 일부 측면에서, 상기 제공된 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품은 이용 가능한 요법에 대해 개선되고 우수한 반응을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 개선되거나 우수한 반응은 현재 치료 표준(SOC)에 대한 것이다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양, 예를 들어 B-세포 NHL, 비호지킨 림프종(NHL)의 치료를 위한 현재 SOC는 최대 3주기의 리툭시맙, 덱사메타손, 시타라빈(AraC) 및 시스플라틴(R-DHAP), 덱사메타손, 시타라빈(AraC) 및 시스플라틴(R-DHAP), 리툭시맙, 이포스파미드, 카보플라틴 및 에토포사이드(R-ICE), 또는 리툭시맙, 젬시타빈, 덱사메타손 및 시스플라틴(R-GDP), 이어서 카르무스틴, 에토포사이드, 시타라빈 및 멜팔란(BEAM) 고용량 화학요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)을 반응하는 대상체에서 포함한다[문헌 「Crump et al., J Clin Oncol. 2014; 32(31):3490-6; Gisselbrecht, et al., J Clin Oncol. 2010;28(27):4184-90; van Imhoff et al., J Clin Oncol. 2017;35(5):544-51」 참조].
거대 B-세포 림프종(LBCL)은 비호지킨 림프종(NHL)의 가장 통상적인 서브타입이다. 제 1 선 치료(frontline treetment)는 대상체의 약 60%에서 완치되지만, 대상체의 약 30%는 재발하고 약 10%는 제 1 선 치료에 불응한다. 재발성/불응성(R/R) 질환을 갖는 대상체를 위한 치료 옵션, 특히 3차 또는 그 이상(3L+) 요법은 주로 구조 화학 요법(CT)을 포함한다. 2개의 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포 제품 및 항체-약물 접합체가 3차 요법으로 승인되었다. R/R LBCL에 대한 2차 이상(2L+) 또는 3L+ 요법 내에서 충족되지 않은 의학적 요구는 위에 나열된 새로운 요법을 포함하여 LBCL 대상체의 임상 결과에 대한 증거에 대한 체계적인 문헌 검토(SLR)를 기반으로 식별되었다.
「Cochrane Handbook for Systematic Reviews of Interventions 및 European Union Health Technology Assessment」 요구 사항에 따라 실시한 예시적인 SLR을 기반으로 하여 8683개의 데이터베이스 기록 및 추가 출처를 선별하여 78개의 고유한 연구를 다루는 103개의 출판물이 확인되었다. 상기 검토는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종 등급 3B(FL3B), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 비활동성 림프종에서 형질전환된 DLBCL, 및 이차 중추 신경계(SCNS) 침범을 갖는 R/R DLBCL를 포함하는 R/R LBCL 내에서 무작위 및 비무작위/관찰 연구를 확인하였다. 검토된 출처는 EMBASE, MEDLINE, The Cochrane Library, 및 임상 회의(ASCO, ESMO, EHA, ASH, ICML, AACR, 및 EORTC)를 포함하였다. SLR을 나타내는 예시적인 개략도가 도 47에 도시되어 있다. 확인된 연구는 치료 계열 및 R/R LBCL 하위 유형으로 특징지워졌다. 확인된 연구에서 관찰된 OS, PFS, DOR, OR 및 안전성이 설명되었다. 질병 하위 유형, 대상체 적격성 기준 및 추적 기간은 연구에 따라 현저하게 다르다.
예시적인 SLR에 기초하여, 3L+ 집단에서 11건의 구조 CT 및 2건의 CAR T 세포 요법 연구에서 생존 결과가 보고되었다. 구조(salvage) CT의 경우 연구 전반에 걸쳐 보고된 ORR 범위는 0%~54%인 반면 CR 범위는 5.6%~31%이다. 20개월에 mOS를 보고한 한 개의 외부 연구에서 중앙값 OS(mOS)은 3-9개월 사이였다. 구조 CT 연구에서 보고된 중앙값 PFS(mPFS)은 2-6개월 범위였다. CAR T 세포 요법 중에서, 항-CD19 CAR T 세포 요법으로 치료받은 대상체(n=101)는 58%의 CR 비율을 보고했으며 중앙값 추적관찰 기간(중앙값 27.1개월) 후 DOR 중앙값(mDOR)은 11.1개월이었다. mPFS는 5.9개월이었고 mOS에 도달하지 못하였다. 중앙값 19.3개월의 추적 조사에서 다른 항-CD19 CAR T 세포 요법(n=115)으로 치료 받은 대상체의 CR은 40%였지만 mDOR에는 도달하지 못하였다. mOS는 주입된 모든 환자에서 11.1개월이었다.
2L+ 이식 적격 모집단(36개 연구)에서 고용량 CT + HSCT를 받은 피험자는 9개월에서 5년 사이에 mOS를 달성하였다. 이식 부적격 인구에서 16개의 연구에서 3-20개월 사이에 mOS가 보고되었다. 이식 가능 인구와 부적격 인구가 혼합된 연구(30개 연구)에서 1-17개월의 mOS가 보고되었다.
제한된 샘플 크기를 가진 몇 가지 연구에서 LBCL 하위 유형(예를 들어 PMBCL, SCNS 림프종, 비 FL 비활동성 림프종에서 형질전환된 DLBCL, FL3B)의 결과를 보고하는 것으로 나타났다. 3L+ 설정에서 1개의 연구에서 중앙값 6.6개월 후에도 mOS에 도달하지 못했다고 보고하였다. 2L+ 설정에서 4개의 연구에서 각각 2-9개월 및 10-16개월 범위의 mPFS 및 mOS 결과를 보고하였다.
R/R LBCL에서 구조 화학 요법의 안전성을 평가한 연구 중에서 호중구 감소증, 백혈구 감소증, 혈소판 감소증 및 감염이 가장 흔히 보고된 부작용(AE)이었고, 호중구 감소증이 가장 많이 보고되었다. CAR T 세포 요법의 안전성 결과를 보고한 3건의 연구 중 데이터에 따르면 혈액학적 이상반응(림프고갈 CT와 관련이 있을 수 있음), 사이토카인 방출 증후군 및 신경독성이 가장 많이 보고되었다.
예시적인 연구에 기반면, 재발성/불응성 거대 B세포 림프종(LBCL) 환자의 50% 미만이 3차 또는 후속 치료에 대한 반응을 성취한다[문헌 「Van Den Neste et al. Bone Marrow Transplant. 2016;51:51-7」; 「Gonzalez-Barca E et al. Bone Marrow Transplant 2019」 참조]. 자가 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)을 사용한 고용량 화학요법은 화학요법에 민감한 질병이 있는 이식 적격 환자의 첫 재발시 표준 치료법으로 남아 있지만[문헌 「National Comprehensive Cancer Network Clinical Practice Guidelines in Oncology. March 6, 2019」 참조], 대부분의 환자는 이 방법으로 치료되지 않는다[문헌 「Van Den Neste et al. Bone Marrow Transplant. 2016;51:51-7」; 「Gonzalez-Barca E et al. Bone Marrow Transplant 2019, National Comprehensive Cancer Network Clinical Practice Guidelines in Oncology. March 6, 2019, Gisselbrecht C et al. J Clin Oncol. 2010; 28:4184-90」 참조]. 일부 연구에서는 기존 치료에 대한 완전 반응(CR) 비율이 7%이고 전체 생존(OS)이 6개월인 화학요법-불응성 질환이 있는 대상체에서 결과가 더 나쁘다[문헌 「Crump et al. Blood. 2017;130:1800-8」 참조]. 부작용은 고령, 중추신경계(CNS) 침범[문헌 「Thanarajasingam et al. Br J Haematol. 2018;183:149-52;」; 「Nabhan et al. J Clin Oncol. 2018; 36:7545」 참조] 및 동반 질환[문헌 「Pfreundschuh Blood. 2010;116:5103-10」 참조]과 관련이 있었다.
특정 CD19-유래된 CAR-T 세포 요법제는, 악시캅타진 실로류셀(axicabtagene ciloleucel; axi-cel) 및 티사젠류셀(tisagenlecleucel)를 포함하는, B 세포 림프종의 치료에 유용하다. 하나의 예시적 구현예에서, axi-cel-치료된 대상체는 54%의 CR 비율(조사자당)을 달성했으며 40%는 지속 관해(중앙값 추적, 15.4개월)을 나타내었다[문헌 「Neelapu et al. N Engl Med. 2017. 377;2531-44」 참조].
대부분의 대상체에서, CRS(93%) 및 NE(64%)가 발병하였고, 발병까지의 평균 시간은 각각 2일 및 5일이었으며; 등급≥3 CRS(Lee의 등급 기준[문헌 「Lee et al. Blood. 2014;124:188-95」 참조] 및 NE는 각각 13% 및 28%에서 발병하였으며 43%는 토실리주맙을 투여 받았다(27%는 코르티코스테로이드를 투여 받았다). 또 다른 예시적인 연구에서, 티사젠류셀을 투여받은 환자의 약 1/3이 1년에 지속 관해를 유지하였다[문헌 「Schuster et al. N Engl J Med. 2019. 380:45-56」 참조]. 대부분의 대상체(58%)는 CRS를 발병한 반면, 21%는 NE를 가졌다. 등급≥3 CRS[Penn 등급 기준, 문헌 「Porter et al. J Hematol Oncol. 2018;11:35」 참조] 및 NE는 각각 환자의 22% 및 12%에서 보고되었다. 또한, 이들 요법은 PMBCL, FL 이외의 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL, FL3B를 갖는 환자를 포함하는 특정 고-위험 특징, 예를 들어 CNS 림프종, 중등도의 신장/심장 질환, 브릿징 요법에 대한 요건을 갖는 환자의 치료를 포함하지 않는다.
현재 증거에 대한 상기 SLR 및 조사는 유리한 이점/위험 및 지속적인 반응을 제공하는 추가 치료 옵션에 대한 중요하고 높은 충족되지 않은 요구를 보여주었으며, 이는 2L+ 및 3L+ LBCL을 갖는 대상체에 대해 이용가능한 치료법으로 충족되지 않는다. 또한, LBCL의 더 희귀한 하위 유형에 대해 제한된 데이터를 사용할 수 있었다. 이러한 결과는 해결해야 할 R/R LBCL에 대한 중요한 치료 격차와 기존 치료법의 개선 필요성을 드러내었다. 본원에서는 상기 필요에 부합하는 구현예가 제공된다.
일부 구현예에서, 방법, 용도 및 제조 물품은 예를 들어 연령, 특정 유형의 질병, 진단 기준, 선행 치료 및/또는 선행 치료에 대한 반응에 기초하여 특정 그룹 또는 서브세트의 대상체를 선택하거나 확인하는 것을 포함한 대상체의 치료를 위해 사용되거나 이를 수반한다. 일부 구현예에서, 방법은 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 완화 후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 하나 이상의 표준 요법 방식에 대해 재발하였거나 불응성(R/R)인 대상체;를 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 B 세포 림프종 및/또는 호지킨 림프종(NHL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종, 예를 들어 재발된/불응성(R/R) 거대 B 세포 림프종을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 거대 B 세포 림프종, 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)(예를 들어 DLBCL 달리 명시되지 않은 (NOS; 드 노보 또는 비활동성으로부터 형질전환됨) 또는 다른 DLBCL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종 또는 여포성 림프종, 예를 들어 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)를 갖는다. 일부 측면에서, 상기 B 세포 림프종은 미만성 거대 B-세포 림프종, 여포성 림프종 또는 PBMCL이거나 또는 그를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 DLBCL, 달리 명시되지 않은 (NOS)인 DLBCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 림프종, 예를 들어 상기 DLBCL은 드 노보이다. 일부 구현예에서, 상기 림프종, 예를 들어 상기 DLBCL은 또다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된다. 일부 구현예에서, 상기 림프종, 예를 들어 상기 DLBCL은 여포성 림프종으로부터 형질전환된다(tFL). 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 여포성 림프종(FL)을 갖는다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 상기 방법은 CD19-유도된 CAR T 세포 요법제(CD19-directed CAR T cell therapy)의 투여에 기반하며, 상기 CAR은 CD19-유도된 scFv 항원 결합 도메인(예를 들어 FMC63로부터 유래됨)을 함유한다. 상기 CAR은 CD3제타로부터 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유하고, 또한 4-1BB 공자극 도메인을 도입하며, 이는 CD28-함유 컨스트럭트(CD28-containing construct)에 비해 CRS 및 NE의 더 낮은 발생률과 관련된다[문헌 「Lu et al. J Clin Oncol. 2018;36:3041」 참조]. 일부 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 방법은 생체외에서 별도로 형질도입 및 증폭되고, 동일한(약 1:1) 표적 용량으로 투여되는 CD8+ 및 CD4+ T-세포 서브세트를 포함한다. 일부 구현예에서, 종래 연구에서 증가된 독성과 관련된 두 가지 파라미터인 투여된 총 및 CD8+ CAR+ T-세포 용량에 낮은 변동성이 있다[문헌 「Neelapu et al. N Engl Med. 2017. 377;2531-44」; 「Turtle et al. Sci Transl Med. 2016;8:355ra116」; 「Hay et al. Blood. 2017;130:2295-306」 참조].
특정 구현예에서, 상기 제공된 방법은 특정 LBCL 서브타입 또는 고-위험 그룹, 예를 들어 고령 환자 및 동반 질환 또는 중추신경계 침범이 있는 환자를 치료하는데 사용될 수 있으며, 이는 사용 가능한 치료 옵션은 여전히 제한적이다. 예를 들어 종래 CAR T 세포 요법은 전문화된 치료 센터로의 투여[문헌 「Yescarta Risk Evaluation and Mitigation Strategy (REMS). Gilead Pharma September 10, 2019」; 「Kymriah Risk Evaluation and Mitigation Strategy (REMS) Novartis September 10, 2019」 참조] 및 치료가 어려운 환자에게 임팩트 사용으로 제한할 수 있는, 사이토카인 방출 증후(CRS) 및 신경학적 사건(NE)을 비롯한 심각한 CAR T 세포 관련 독성과 관련된다. 유리한 이점/위험을 갖는 CAR T-세포 요법, 특히 중증 CRS 및 NE의 높은 효능 및 낮은 발병률을 갖는 요법은 대상체 서브그룹 및 외래 환자 투여/모니터링의 광범위한 포함을 허용할 수 있다.
특정 구현예에서, 상기 제공된 방법은 다른 항-CD19 CAR-T 요법제를 포함하는 다른 요법제를 사용한 치료로부터 이전에 배제된 특정 대상체를 포함한, LBCL을 갖는 대상체에서 선호하는 결과를 생성한다. 본원에서 나타낸 대상체의 그룹에서 LBCL을 갖는 대상체에서 CD19-유도된 CAR T 세포를 사용한 치료는 생체내에서 증가된 CAR T-세포 증폭, 및 주입후 장기간 지속된 CAR T 세포와 관련된 반응을 포함하는, 지속가능한 반응을 생성하였다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은, 화학 요법에 불응성이거나 브릿징 요법으로 질환 조절을 위해 즉각적인 치료가 필요한 환자를 포함하는, 공격적이고, 고-위험인 질환을 갖는 심하게 사전 치료를 받은 환자에서 선호하는 결과를 나타내었다. 본원에서의 관찰은 상기 제공된 방법에 따라 CD19-지향 CAR T 세포 요법으로 공격성, 고위험 질환을 가진 대상체를 치료하는 것을 뒷받침한다. 예를 들어 PMBCL, FL과는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL, FL3B을 갖는 대상체, 및 특정 고-위험 특징, 예를 들어 2차 CNS 림프종, 중등도의 신장/심장 질환, 및 브릿징 요법에 대한 요건을 갖는 환자는 상기 제공된 방법에 다라 치료될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 심하게 치료된(예를 들어 상기 질환을 치료하는데 2종, 3종 또는 그 초과의 종래 요법제를 사용한) 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 또한, 상기 제공된 방법에 의해서 치료될 수 있는 서브그룹 중에는 75세 초과자를 비롯한 연령 65세 이상의 고령 서브그룹이 있다. 본원에서 관찰한 결과, 지속가능한 반응을 포함한 ORR 및 CR이 중증 CRS 및 NE의 발생률이 낮은 모든 서브그룹에서 관찰되었음을 보여준다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법으로 치료한 모든 대상체의 절반 미만에서 CRS 또는 NE가 발생한다. 일부 구현예에서, 등급 3 이상(≥)의 CRS 및 NE의 발생률은 낮으며(각각 2% 및 10%), 실시예에 기재된 바와 같이 치료된 대상체 그룹에서 치명적인 CRS 또는 NE가 발생하지 않았다. 일부 구현예에서, CRS 및 NE의 낮은 전체 발생률 및 중증도는 늦은 발병(각각 중앙값, 5일 및 9일)과 함께 선택된 대상체에서 외래 환자 투여/모니터링을 지원한다. 일부 구현예에서, 외래 환자 환경에서 CAR T 세포 조성물을 받은 대상체의 안전성 및 효능 결과는 전체 치료 집단과 유사하다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포 요법은 일반적으로 대학 의료 센터의 입원 치료로 제한되었지만, 미국에서 재발된/불응성(R/R) 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL)을 갖는 환자 대부분은 항암 요법의 외래 환자 전달이 통상적인 비대학 의료 센터에서 요법을 받는다. 임의의 본원에서 제공된 상기 구현예 중의 일부 구현예에서, 외래 환자 환경에서 CAR T 세포의 주입 및 관리는 커뮤니티/비대학 센터에서의 더 넓은 활용 및 개선된 접근성을 유도한다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 구현예 중의 어느 것을 사용한 치료는 이 연구에서 고위험, 공격성 재발된/불응성 LBCL을 갖는 대상체들 중에서 높은 지속성 CR 비율 및 중증 CRS 및 NE의 낮은 발생률을 나타낸다. 일부 구현예에서, 흔하지 않은 LBCL 조직학적 서브타입 및 불량한 예후 특성을 갖는 서브타입을 포함하여 충족되지 않은 의학적 요구가 있는 대상체 서브그룹에서 임상적으로 유의미한 활성이 관찰된다. 일부 구현예에서, 중증 CRS 및 NE 발생률의 낮은 발생률 및 늦은 발명 시간은 외래 환자 투여/모니터링을 허용한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 임의의 방법의 고유한 위험/이점 프로파일은 환자 및 잠재적 치료 부위를 더 많이 포함할 수 있게 한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 0-1 또는 0-2의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(ECOG)를 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 일반적으로 요법제 또는 특정 참조 요법제에 불량하게 반응하는 이ㅠ치 환자 또는 그의 대상체의 불량-예후 집단, 예를 들어 1개 이상, 예를 들어 2개 또는 3개의 염색체 전위를 갖는 것[예를 들어 소위 "이중-히트" 또는 "삼중-히트" 림프종; 전좌 MYC/8q24 유전자좌 보유; 일반적으로 t(14; 18) (q32; q21) bcl-2 유전자 또는/및 BCL6/3q27 염색체 전위와 조합; 예를 들어 문헌 「Xu et al. (2013) Int J Clin Exp Pathol. 6(4): 788-794」 참조], 및/또는 재발된 것, 예를 들어 자가 줄기 세포 이식물(ASCT)의 투여 후 12개월 이내에 재발된 것, 및/도는 화학불응성으로 간주되는 것을 치료한다.
일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는 제공된 방법이 독성의 증가된 위험 없이 세포 요법에 대해 이용 가능한 특정 방법과 비교하여 높은 내구성으로 높은 반응을 달성하는데 사용될 수 있다는 관찰에 기반한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 세포 치료를 위해 입양으로 이식된 세포의 장기간 지속성 및/또는 대상체에서 발생하는 독성의 낮은 비율을 허용한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 요법제에 반응할 가능성이 있거나 또는 보다 가능성이 있는 세포 요법제로 치료하기 위해 대상체를 선택하고/하거나 독성의 위험을 최소화하면서 보다 높은 반응 속도 및/또는 지속가능한 반응을 위한 적절한 용량 또는 투여 요법을 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는, 대상체가, 개선된 반응, 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)과 비교하여 여포성 림프종(FL)의 것과 보다 유사한 유전자 발현 패턴과 관련된 유전자 발현 패턴을 나타낸 완전 반응(CR)을 나타낸다는 관찰에 기반한다. 상기 제공된 구현예 및 상기 방법은 CAR-T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법의 안전하고 효과적인 임상 적용을 촉진하기 위한 합리적인 전략을 알려줄 수 있다.
일부 측면에서, 상기 대상체는 이식 부적격(transplant non-eligible; TNE) 림프종을 가지며, 예를 들어 상기 대상체는 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)에 부적격이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 TNE 재발된/불응성(R/R) 공격성 거대 B 세포 NHL을 갖는다. 일부 측면에서, 면역 화학요법으로 1차 요법에 실패하고 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)에 부적격인 R/R 공격적 거대 B 세포 NHL는 불량한 예후를 갖는다. 일부 측면에서, 이러한 대상체에 대해 사용 가능한 치료 옵션은 방사선 요법을 포함하거나 포함하지 않는 리툭시맙과 함께 백금/젬시타빈 기반 또는 벤다무스틴 기반 요법을 포함한다. 그러나, 일부 측면에서, 치료 옵션의 부족으로 인해 사용 가능한 치료법의 장기적인 결과는 여전히 좋지 않다. 상기제공된 방법은 상기 대상데에 대한 개선된 치료를 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예는 상기 제공된 CAR-발현 T 세포 요법을 받는 대상체에 의해 보고된 바와 같이 건강 관련 삶의 질(HRQoL) 개선의 이점을 제공한다. 일부 측면에서, 치료 과정 중 초기, 예를 들어 투여 후 1개월 이내에, 상기 대상체는 세포 요법의 투여와 관련된 이상 반응(예를 들어 독성) 및 투여로부터 여전히 회복 중일 수 있다. 상기 제공된 세포 요법의 방법 및 사용은 특히 장기간에 걸쳐 환자가 보고한 HRQoL의 현저한 개선을 초래하는 것으로 관찰되었다(예를 들어 12개월 또는 상기 세포 요법제의 투여 후). 상기 제공된 방법은 다양한 대상에 대해 개선된 HRQoL을 비롯한 개선된 치료 결과를 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 항원 수용체(예를 들어 CAR)는 상기 질환 또는 병태와 관련된, 예를 들어 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종 또는 NHL과 관련된 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태와 관련된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, 이카파(Igkappa), 이글람다(Iglambda), CD79a, CD79b 또는 CD30로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 장애, 예를 들어 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종과 관련된 항원은 CD19이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 요법제의 투여 후 독성을 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제를 포함하되, 상기 방법은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되며; 상기 대상체는 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없음; (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제를 투여하는 단계;를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 치료 방법에서 사용하기 위한 세포 요법제 포함하되, 상기 방법은 대상체에 상기 세포 요법제를 투여하는 것으로 포함하고, 여기서 상기 대상체는 독성을 발병할 위험이 있는 것으로 식별되었으며, 상기 대상체를 식별하는 것은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체에서의 종양의, 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되며; 상기 대상체는 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및 (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임; 및 여기서 (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및 선택적으로 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;를 포함한다.
치료 방법에서 사용하기 위한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제로서, 상기 방법은, 대상체에 상기 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 것을 포함하되, 상기 대상체는 독성을 발병할 위험이 있는 것으로 식별되었으며, 상기 대상체를 식별하는 것은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되며; 상기 대상체는 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및 (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임; 및 여기서 (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;를 포함한다.
세포 요법제의 투여 후 독성을 감소시키는 방법에서 사용하기 위한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제로서, 상기 방법은, (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되며; 상기 대상체는 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고; 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및 (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서 (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나; (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임; 및 여기서 (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 대상체, 조직, 또는 세포에, 예를 들어 상기 질환, 병태 또는 장애를 가질 위험이 있거나, 또는 갖는 것으로 의심되는 것에 대한 상기 세포 또는 상기 세포를 함유하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 대상체가 성인인 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 (약) 30, 40, 50, 60, 또는 70세 이상의 연령이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종(예를 들어 DLBCL)의 특정 예후 또는 위험을 갖는 것으로 선택되거나 또는 식별된 대상체에 대한 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 것으로 선택되거나 또는 식별된 대상체에 대한 세포의 투여를 포함한다. 림프종, 예를 들어 비호지킨 림프종 (NHL) 또는 거대 B 세포 림프종은 가변적인 질환일 수 있다. NHL를 갖는 일부 대상체는 치료 없이 생존할 수 있지만 다른 대상체는 즉각적인 처치가 필요할 수 있다. 일부 경우에, NHL을 갖는 대상체는 질병 예후 및/또는 권장 치료 전략을 알려줄 수 있는 그룹으로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 이들 그룹은 "저위험", "중위험", "고위험" 및/또는 "매우 고위험"일 수 있으며 환자는 제한되지는 않지만 유전적 이상 및/또는 형태학적 또는 물리적 특성을 포함하는 다수의 인자에 의존하는 것으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 및/또는 제조 물품 또는 조성물에 따라 치료된 대상체는 NHL의 위험에 기반하여 분류 또는 식별된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 고위험 NHL을 갖는 것이다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 재조합 수용체를 발현하는 세포의 투여 전에, 상기 질환 또는 병태, 예를 들어 거대 B 세포 림프종 또는 NHL을 표적화하는 요법제 또는 치료학적 제제로 사전에 치료받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT 또는 자가 HSCT으로 사전에 치료받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 표준 요법으로 치료한 후 불량한 예후를 가졌고/가졌거나 1회 이사으이 사전 요법을 실패하였다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 질환 또는 장애, 예를 들어 림프구 고갈 요법제와는 다른 거대 B 세포 림프종 또는 NHL를 치료하기 위한 적어도 또는 적어도 (약) 1종, 2종, 3종, 또는 4종의 다른 요법제 및/또는 상기 항원 수용체를 발현하는 세포 용량을 사전에 투여 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 치료받았거나 안트라사이클린, CD20 표적화된 제제, 및/또는 이브루티닙을 투여 받았다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 화학 요법 또는 방사 요법으로 사전에 치료받았다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 다른 요법제 또는 치료학적 제제에 대해 불응성이거나 비-반응성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 예를 들어 화학 요법 또는 방사 요법을 포함하는 또다른 요법 또는 치료학적 처치로 치료한 후 지속적 또는 재발된 질환을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT에 적격인 것과 같이 이식에 적격인 대상체이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어 자가 HSCT에 적격인 것과 같이 이식에 적격인 대상체이다. 일부 상기 구현예에서, 상기 대상체는 적격임에도 불구하고 상기 대상체에 대한 상기 조작된 세포(예를 들어 CAR-T 세포) 또는 상기 세포를 함유하는 조성물의 투여 전에, 사전에 이식을 받았다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 이식에 부적격인 것(또한 이식 부적격으로도 알려짐, TNE)이고, 예를 들어 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT에 부적격인 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 본원에서 상기 제공된 구현예에 따르는 상기 조작된 세포(예를 들어 CAR-T 세포) 또는 상기 세포를 함유하는 조성물을 투여받는다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 대상체거 하기 기준 중의 적어도 하나를 충족하기 때문에 조혈 줄기 세포 이식에 부적격인 것이다: 연령 70세 이상(≥), 2의 ECOG PS, 및/또는 손상된 폐(DLCO≤60%, 그러나 실내 공기에서 SaO2≥92% 및 CTCAE≤1 호흡곤란), 심장(LVEF≥40% 및 <50%), 신장(크레아티닌 클리어런스>30 및 <60mL/min), 또는 간 기능(AST/ALT>2 및 ≤5×ULN).
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법(high-dose chemotherapy)에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT)에 부적격이거나 부적격인 것으로 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 둘 다에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 식별되었다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 재발된/불응성 NHL이고, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법(high-dose chemotherapy) 및 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT) 둘 다에 부적격인 것으로 식별되거나 또는 식별되었고, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태에 대한 1종의 종래 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 연령 70세 이상으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 2의 ECOG 활동도를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 손상된 폐기능, 선택적으로 (약) 60% 이하의 일산화탄소(DLCO)에 대한 폐의 확산 능력을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 손상된 심장 기능, 선택적으로 (약) 50% 미만의 좌심실 박출률(LVEF)을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 손상된 신장 기능, 선택적으로 (약) 60mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 클리어런스를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 손상된 간 기능, 선택적으로 정상 상한(ULN)의 (약) 2배 초과의 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT)를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 중추신경계(CNS) 침범과 관련되거나 관련된 림프종을 가지며, 상기 대상체는 항경련제, 예를 들어 레비티라세탐으로 사전에 치료받았다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 고위험 대 B 세포 림프종 또는 고위험 NHL을 갖는 것으로 선택되거나 또는 식별된 대상체에 대한 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 하나 이상의 세포 유전적 이상, 예를 들어 B 세포 악성 종양, 예를 들어 고위험 B 세포 림프종 똔느 고위험 NHL과 관련된 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종(BL), 외투 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL)인 것을 특징으로 하거나 또는 그것인 것으로 결정된 질환 또는 병태를 갖는 것에 기반하여 선택되거나 또는 식별된다. 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 방법을 이요아여 치료되는 상기 대상체는 공격성 거대 B 세포 림프종 또는 공격성 NHL, 특히 달리 명시되지 않은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), (NOS; 드 노보 또는 비활동성으로부터 형질전환됨), 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)을 갖는 대상체를 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 여포성 림프종(FL)을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 방법을 사용하여 치료되는 상기 대상체는 여포성 림프종(FL) 또는 다른 비활동성 림프종에서 형질전환된 DLBCL을 갖는 대상체를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 방법을 사용하여 치료되는 상기 대상체는 비활동성 조직으로부터 형질전환된 DLBCL(tDLBCL)을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 변연부 림프종(MZL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)에서 형질전환된 DLBCL(예를 들어 Richter's)를 갖는다. 일부 구현예에서, CLL의 공격성 림프종으로의 변형으로 정의되며, 가장 일반적으로 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)인, CLL에서 형질전환된 대상체는 리히터 증후군(Richter's syndrome; RS)을 나타낼 수 있다[문헌 「Parikh et al. Blood 2014 123:1647-1657」 참조].
일부 구현예에서, 상기 대상체는 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 MCL은 염색체 전위(chromosomal translocation) t(11:14)(q13;132)에 의해서 특징지워진다[문헌 「Vose JM, et al. Am J Hematol. 2017.; 92:806-813」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 TP53 돌연변이(mutation) 및/또는 높은 증식 지수(Ki67>30%)를 포함하는 불량한 위험 인자를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 종래 골수 침범, 이전 흉수 및/또는 CNS 질환을 포함하는 불량한 위험 인자를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 MCL 변이체를 포함하는 불량한 위험 인자를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 MCL의 블라스토이드 변이체를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 MCL의 다형성 변이체를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 1 이하의 종래 라인의 요법 후 (재발된/불응성, R/R)을 실패한 외투 세포 림프종(MCL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7의 종래 라인의 요법 후 (재발된/불응성, R/R)을 실패한 외투 세포 림프종(MCL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 종래 이브루티닙 및/또는 베네토클락스를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 이브루티닙 및/또는 베네토클락스를 받은 후 재발한 MCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 안트라사이클린 및 CD20-표적화 제제(예를 들어 R-CHOP)를 함유하는 1 또는 그 초과의 면역화학 요법제를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 종래 조혈 줄기 세포 요법(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT 또는 자가 HSCT를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 R/R 질환을 갖는 MCL을 발현하는 사이클린 D1을 확인하였다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 종래 요법제는 안트라사이클린(anthracycline) 및 CD20-표적화된 제제를 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드(doxorubicin hydrochloride)(하이드록시다우노마이신(hydroxydaunomycin)), 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate)(온코빈(oncovin)) 및 프레드니손(prednisone))을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 불량한 활동도를 갖는다. 일부 측면에서, 치료되는 집단은 어디에서나 0-2인 동부 종양학 그룹 협회 활동도(ECOG)를 갖는 대상체를 포함한다. 임의의 구현예들의 다른 측면에서, 치료되는 상기 대상체는 2종 또는 그 초과의 종래 요법을 실패하였다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 변연부 림프종(MZL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)으로부터 형질전환된 DLBCL(예를 들어 Richter's)을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 불량한 총괄 생존율과 상관되는 특징을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 완전 반응(CR)을 성취하지 않았으며, 자가 조혈 줄기 세포 이식(ASCT)을 받은 적이 없고, 1 또는 그 초과의 라인 요법에 대해 불응성이고, 1차 불응성 질환을 갖고/갖거나 2의 ECOG 활동 점수 또는 0 및 1의 ECOG 활동 점수를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 0 또는 1의 ECOG 활동도를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다.
일부 구현예에서, 치료되는 상기 대상체는, 2라인의 요법제의 실패 후 미만성 B-세포 림프종(DLBCL), 드 노보(de novo)이거나 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환된 림프종(달리 명시되지 않은한, NOS), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL) 및 여포성 림프종 등급 3B(FL3B), 및 0-2의 ECOG의 점수를 갖는 대상체의 그룹을 포함하고, 상기 대상체는 동종 줄기 세포 이식(SCT)으로 사전 치료받았다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 치료되는 상기 대상체는 여포성 림프종(FL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체 그룹은 "풀 코흐트(full cohort)"로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 대상체가 상기 기준에 부합하는 경우 입양 세포 요법제로 치료를 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 그룹("전체 코호트") 내에서, 상기 대상체는, 상기 대상체가 불량한 활동도(예를 들어 ECOG 2)을 갖고/갖거나 변연부 림프종(MZL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL, Richter's)으로부터 변형된 DLBCL를 갖는 경우 치료를 위해 선택되지 않거나 또는 치료로부터 배제된다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 상기 대상체가 2라인의 요법제의 실패 후 미만성 B-세포 림프종(DLBCL), 드 노보이거나 또는 비활동성으로부터 형질전환된 림프종(NOS), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL) 및 여포성 림프종 등급 3B(FL3B), 및 0 또는 1의 ECOG의 점수를 갖는 대상체의 그룹을 포함하고, 상기 대상체는 동종 줄기 세포 이식(SCT)으로 사전 치료받았지만, 변연부 림프종(MZL) 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL, Richter's)으로부터 형질전환된 DLBCL를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 상기 대상체가 여포성 림프종(FL)을 갖는 경우 치료를 위해 선택된다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 화학불응성 림프종, 선택적으로는 화학불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 종래 요법제에 대한 반응세서 완전 관해(CR)을 성취하지 않았다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 대상체는 자가 줄기 세포 이식(ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발하였다.
일부 구현예에서, 상기 대상체 그룹은 "코어 코흐트(core cohort)"로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료되는 상기 대상체는 상기 코어 코흐트 중의 대상체이다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는 특정 대상체 집단, 예를 들어 특정 용량의 세포 요법제를 투여받은 상기 코어 코흐트 대상체는, 55% 초과의 완전 반응(CR) 속도, 높은 내구성, 예를 들어 장기간, 예를 들어 3개월 초과에 걸쳐서 유지되는 반응, 65% 초과의 3-개월 ORR, 및 대략 50%의 3-개월 CR 속도로 80% 초과의 총괄 반응 속도(ORR)을 나타낸다. 특히 상기 제공된 관찰은 상기 3-개월 ORR이 2개 또는 3개의 염색체 전위["이중-히트" 또는 "삼중-히트 림프종; 통상적으로 상기 t(14; 18) (q32; q21) bcl-2 유전자 및/또는d BCL6/3q27 염색체 전위와의 조합에서 전위 MYC/8q24 loci를 가짐; 문헌 「Xu et al. (2013) Int J Clin Exp Pathol. 6(4): 788-794)」 참조], 원발성 불응성 림프종, 화학불응성 DLBCL를 갖는 대상체, 및 사전에 CR을 성취하지 않은 대상체에서 높았다는 것을 나타내었다.
일부 측면에서, 높은 반응률 및/또는 높은 반응 내구성, 및 낮은 수준 및/또는 발생률의 독성과 관련되는 특정 용량의 세포 요법제의 조성의 조성물의 투여를 위한 조성물, 방법 및 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 투여된 상기 조성물 또는 용량은 세포 및/또는 특정 표현형, 예를 들어 표적 수와 비교할때 특정 범위 및/또는 정도의 변동성 또는 가변성의 특정 수의 세포 또는 특정 수의 표현형을 갖는 하나 이상의 세포의 플랫 및/또는 고정된 용량, 예를 들어 정빌 플랫 용량이다. 일부 구현예에서, 투여되는 조성물 또는 용량은 CD4+ 및 CD8+ 세포의 정의된 비율 (예를 들어, CD4+ : CD8+ CAR + T 세포의 1:1 비율)을 포함하고/하거나 이러한 비율로부터 일정 정도의 가변성 내에있는 비율, 예를들어 ±10% 이하, 예를 들어 ±8% 이하, 예를 들어 ±10% 이하, ±8% 이하와 같은 분산 정도로 포함한다. 일부 구현예에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 개별적으로 제형화되고 투여된다. 일부 구현예에서, 투여된 세포는 일관된 활성 및/또는 기능, 예를 들어 사이토카인 생산, 세포자연사 및/또는 확장을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 예를 들어, 조성물에서 또는 제제간에 세포 수, 세포 기능 및/또는 세포 활성과 관련하여 매우 일관되고 정의된 활성 및 낮은 가변성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 활성 및/또는 기능의 일관성, 예를 들어, 조성물 제제 간의 낮은 가변성은 개선된 효능 및/또는 안전성을 허용한다. 일부 구현예에서, 정의된 조성물의 투여는 높은 이질성을 갖는 세포 조성물의 투여에 비해 낮은 생성물 가변성 및 낮은 독성 (예를 들어 CRS 또는 신경독성)을 초래한다. 일부 구현예에서, 정의되고 일관된 조성물은 또한 일관된 세포 확장을 나타낸다. 이러한 일관성은 용량 확인, 치료 창, 용량 반응 평가 및 안전성 또는 독성 결과와 관련될 수 있는 대상체의 인자 확인을 용이하게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 특정 용량 수준의 단일 주입을 받은 특정 코호트의 대상체에서 6 개월 후 60 % 이상의 지속적인 반응률을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 일부 코호트의 대상체는 6 개월에 80 % 이상의 전체 반응률 (ORR, 일부 경우 객관적 반응률이라고도 함), 60 % 이상의 완전 반응 (CR) 비율 및/또는 높은 지속적 CR 비율을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 정의된 용량을 받은 대상체는 예를 들어, CRS 또는 NT를 나타내지 않는 대상체의 2/3 이상과 같이 개선된 안전성 결과를 보인다. 일부 측면에서, 중증 CRS 또는 중증 NT의 비율은 낮다. 일부 구현예에서, 특정 정의된 용량으로 관찰된 더 높은 노출 (예를 들어, Cmax 및 AUC0-28)은 증가된 독성 (예를들어, CRS 또는 NT)과 관련이 없다. 일부 구현예에서, 대상체의 특정 인자, 예를 들어 특정 바이오 마커를 사용하여 독성 위험을 예측할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 낮은 독성 위험으로 높은 반응률을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물, 제조 물품, 키트, 방법 및 용도를 사용하여 치료받은 대상체의 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하는 세포 요법제의 투여 전 또는 후에 독성을 개선, 치료 또는 예방하기 위해 제제 (예를들어, 토실리주맙 및/또는 덱사메타손)를 투여 받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 조작된 세포 (예를들어, CAR-T 세포)를 받기 전에 어떠한 예방 치료도 받지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예는 예를 들어 외래 환자에 대한 세포 요법의 투여를 허용하는 이점을 제공한다. CAR T 세포 요법은 일반적으로 대학 의료 센터와 같은 입원 환자 환경에서 시행되었다. 그러나 R/R 미만성 거대 B 세포 림프종을 갖는 많은 대상체는 암 치료의 외래 환자 전달이 수행되는 의료 센터에서 치료를 받는다. 일부 측면에서, 외래 환자 환경에서 CAR T 세포 요법의 주입 및 관리는 커뮤니티/비대학 센터에서 외래 환자 치료의 광범위한 활용을 포함하여 이러한 요법에 대한 접근을 개선할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 용량 및/또는 림프구 고갈 요법제의 투여는 비-3차 치료 센터에서 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 요법의 투여, 예를 들어 상기 제공된 구현예에 따른 T 세포의 투여량은 외래 환자를 기준으로 수행될 수 있거나, 하룻밤 체류가 필요한 병원 입원과 같이 대상체에 대한 병원 입원을 필요로 하지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 이러한 외래 환자 투여는 낮은 독성으로 높고 내구성 있는 반응률을 유지하면서 접근성을 향상시키고 비용을 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 외래 치료는 종래 치료에 의해 이미 면역이 저하된 환자에게 유리할 수 있으며, 림프구 고갈 이후에 발생하며 입원 또는 입원 환자 환경에서 노출될 위험이 더 커진다. 일부 측면에서, 외래 환자 치료는 또한 입원 환자, 병원 환경 또는 이식 센터에 접근할 수 없는 피험자에 대한 치료 옵션을 증가시켜 치료에 대한 접근성을 확대한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여 후, 상기 대상체는 선택적으로 전화 연락 및/또는 의료 전문가의 방문을 통해 외래 환자 환경에서 모니터링된다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 조성물, 제조 물품, 키트, 방법 및 용도를 이용하는 것을 기준으로 외래 환자에 대해 치료된 대상체는 적어도 3일 동안 또는 특정 백분율의 대상체에서, 예를 들어 적어도 3일 동안 외래 환자에서 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%에 대해 외래 환자를 유지한다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 적어도 4일, 5일, 6일, 7일, 8일 또는 그 초과동안 외래 환자를 유지한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조성물, 제조 물품, 키트, 방법 및 용도를 이용하여 치료된 대상체는 다른 조성물, 제조 물품, 키트, 방법 및 용도로 치료된 대상체와 비교하여 예를 들어 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35% 또는 적어도 40%의 입원 기간 감소를 나타낸다.
일부 구현예에서, 상기 방법, 세포 및 조성물은 다양한 환자 특성 및/또는 종양 부담에 걸쳐 대상체에게 높은 비율의 지속적인 반응을 제공 할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법, 세포 및 조성물은 부작용 또는 독성의 위험이 감소한 불량한 예후를 가진 고위험 환자에게 높은 비율의 지속적인 반응을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도는 신경독성(NT) 또는 사이토카인 방출 증후(CRS)과 같은 세포 요법과 관련될 수 있는 독성 또는 기타 부작용의 위험 감소 및/또는 보다 지속적인 반응 또는 효능 및/또는 보다 높은 반응 비율을 제공하거나 달성한다. 일부 측면에서, 제공된 관찰은 중증 NT (sNT) 또는 중증 CRS (sCRS)의 낮은 비율과 독성이없는 높은 비율의 환자(예 : NT 또는 CRS)를 나타낸다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75% 또는 그 초과는 완전 반응(CR)을 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%는 객관적 반응(OR)을 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 초과는 1개월까지, 2개월까지 또는 3개월까지 CR 또는 OR을 성취한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 그 초과까지, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 초과는 반응 중에 잔류하고, 예를 들어 CR 또는 OR 중에 잔류한다. 일부 구현예에서, 상기 반응, 예를 들어 CR 또는 OR은 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월 또는 9개월동안, 예를 들어 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 또는 적어도 약 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 초과에서 또는 1개월까지 또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체에서 지속될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 초과, 또는 1개월까지 또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체는 (약) 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월 또는 9개월 초과동안 생존하거나 또는 진행없이 생존한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 사용한 치료에 의한 대상체에 관측된 초래되는 반응은 치료된 대사수의 대상체에서 임의의 독성의 낮은 위험 또는 중증 독성의 낮은 위험과 관련되거나 또는 그것을 초래한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 또는 그 초과는 임의의 등급의 CRS 또는 임의의 등급의 신경독성(NT)을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 (약) 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 초과는 중증 CRS 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS를 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 (약) 50%, 60%, 70%, 80% 또는 그 초과는 중증 신경독성 또는 등급 3 또는 그 초과의 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5의 신경독성을 나타내지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%는 조기 발병 CRS 또는 신경독성을 나타내지 않고/않거나 투여 개시 후 1일, 2일, 3일 또는 4일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%는 투여 개시 후 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않는다. 일부 측면에서, 상기 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중에서 신경독성 발병의 중앙값은 상기 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 해결까지의 중앙값 시간 또는 그 이후이다. 일부 경우에, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 신경독성의 발병 중앙값은 (약) 8, 9, 10, 또는 11일 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 결과는, (약) 5×107 내지 (약) 1.5×108 개, 예를 들어 (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(예를 들어 CAR+ T 세포)의 용량, 예를 들어 본원에서 기술된 정의된 비율, 예를 들어 (대략) 1:1 비율로, 및/또는 특정 유형의 CAR+ T 세포 예를 들어 CD4+CAR+ T 세포 및/또는 CD8+CAR+ T 세포의 정밀하거나 또는 평평하거나 또는 고정된 수(precise or flat or fixed number)로 투여된 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 T 세포의 용량, 및/또는 특정 정도의 분산(variance) 이내의, 예를 들어 상기 정밀하거나 또는 평평하거나 또는 고정된 수와 비교하여 + 또는 -(일부 경우에 ±로 표시되는, 플러스 또는 마이너스), 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15%인 다수의 임의의 상기 세포의 투여 후에 관찰된다. 일부 구현예에서, 상기 평평하거나 또는 고정된 수의 세포는 (약) 2.5×107, 5×07, 10×107, 15×107 또는 20×107개의 총 CAR+ T 세포 또는 CD8+ 및/또는 CD4+ CAR+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 용량에서 세포의 수는 5×107 개의 CD4+CAR+ T 세포(일부 경우에 2.5×107 개의 CD4+CAR+ T 세포 및 2.5×107 개의 CD8+CAR+ T 세포)를 포함하거나 또는 그들로 구성되거나 또는 그들로 필수적으로 구성되고; 일부 구현예에서, 그것은 10×107 개의 CAR+ T 세포(일부 경우에 5×107 개의 CD4+CAR+ T 세포 및 5×107 개의 CD8+CAR+ T 세포)를 포함하거나 또는 그들로 구성되거나 또는 그들로 필수적으로 구성된다. 일부 측면에서, 투여된 세포의 수는, 상기 구현예에서 상기 수의 특정 정도의 분산 이내에, 예를 들어 상기 세포의 수(들)과 비교하여 플러스 또는 마이너스(±) 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10% 이내에, 예를 들어 플러스 또는 마이너스 8% 이내이다. 일부 측면에서, 상기 용량은, 상기 세포들(예를 들어 총 CAR+ T 세포 또는 CD8+ 및/또는 CD4+ CAR+ T 세포)와, 치료 반응, 또는 그의 기간을 나타내는 하나 이상의 결과(예를 들어 관해, 완전한 관해 및/또는 특정 관해 기간을 달성할 가능성) 또는 임의의 전술한 것의 기간 사이의 상관관계가 관측되는(선택적으로 선형 관계) 범위 내이다. 일부 측면에서, 보다 높은 용량의 세포가 투여되면 예를 들어 중증 CRS 또는 중증 신경독성의 대상체에서 독성(예를 들어 CRS 또는 신경독성)의 발병률 또는 위험, 또는 독성의 발병률 또는 위험에 실질적으로 영향을 미치거나 영향을 미치지 않으면서 더 큰 반응을 초래할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
일부 측면에서, 상기 제공된 방법은 높거나 또는 특정한 반응 속도(rate of response)(예를 들어 투여 후 특정 기간 예를 들어 3개월 또는 6개월 후에 평가된 집단 중의 반응 속도), 예를 들어 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 또는 80% 또는 81%, 82%, 83%, 84% 또는 85% 이상의 ORR(예를 들어 6개월 또는 3개월의 ORR) 및 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 71%, 72%, 73% 이상 또는 대략 75% 이상의 CR 속도(CR rate)(예를 들어 6개월 또는 3개월 CR 속도)를 성취할 수 있으며, 이는 또한 예를 들어 특정 기간 또는 적어도 특정 기간동안 지속되며, 예를 들어 요법 개시 후 1, 3 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 상기 반응 속도 및 지속성은 단지 상기 요법의 단일 투여 또는 용량 후에 제공된다. 일부 구현예에서 상기 제공된 방법에 의해서 및/또는 일부 구현예에서 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 사용한 상기 대상체의 치료는 또한 대상체가 높은 반응 속도를 달성하지만 더 높은 세포 투여량에서도 신경독성 또는 CRS와 같은 발달 독성의 더 높은 발병률을 나타내지 않게 한다. 일부 구현예에서, 상기 반응을 성취하는 대상체의 (약) 50%, 55% 또는 60% 초과는 임의의 등급의 독성, 예를 들어 임의의 등급의 CRS 및/또는 신경독성을 나타내지 않는다.
따라서, 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법, 제조 물품 및/또는 조성물은 입양 세포 요법과 같은 치료를 위한 다른 이용 가능한 방법 또는 솔루션 또는 접근법에 비해 이점을 제공할 수 있다. 특히, 상기 제공된 구현예 중에서 독성 또는 부작용의 발생을 감소시키면서 높은 비율로 지속적인 반응을 달성함으로써 고위험 NHL을 갖는 대상체에 이점을 제공하는 구현예가 있다.
A. 치료 방법
본원에서는 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 또한, 조작된 세포 및/또는 그의 조성물의 투여를 포함하는, 질환 또는 병태 예를 들어 백혈병 또는 림프종 또는 B-세포 악성종양, 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 또는 이의 서브타입, 거대 B-세포 림프종 및/또는 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체의 치료 방법을 포함하는, 방법 및 조작된 세포(예를 들어 T 세포) 및/또는 그의 조성물의 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법 및 용도는 특정 대안 방법과 비교하여 예를 들어 특정 그룹의 치료된 대상체에서 개선된 반응 및/또는 보다 지속가능한 반응 또는 효능 및/또는 감소된 위험의 독성 또는 다른 부작용을 성취할 수 있다. 일부 측면에서, 또한 대상체, 예를 들어 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포를 투여하는 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 또한 질환 또는 장애의 치료를 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포의 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 또한 질환 또는 장애의 치료를 위한 약제를 제조하기 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포의 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 또한 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 또는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에 투여하기 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포를 투여하는 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 상기 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물, 예를 들어 조작된 T 세포의 사용은 본원에서 기술된 임의의 방법에 따른다.
또한, 질환 또는 병태, 예를 들어 본원에서 기술된 임의의 질환 또는 병태를 갖는 대상체를 선택하고; 상기 대상체에 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다.
키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체 또는 이를 포함하는 조성물을 발현하는 조작된 세포는 다양한 치료, 진단 및 예방 적응증에 유용하다. 예를 들어 조작된 세포 또는 조작된 세포를 포함하는 조성물은 대상체에서 다양한 질환 및 장애를 치료하는데 유용하다. 이러한 방법 및 용도는 예를 들어 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을 질환, 병태 또는 장애, 예를 들어 B 세포 악성 종양, 예을 들어 거대 B 세포 림프종 종양에 걸린 대상체에 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물은 질환 또는 장애의 치료에 영향을 미치는 유효량으로 투여된다. 용도는 이러한 방법 및 치료, 및 이러한 치료 방법을 수행하기위한 약제의 제조에서 조작된 세포 또는 조성물의 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을 질환 또는 병태를 갖거나 의심되는 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에서 질환 또는 병태 또는 장애를 치료한다.
입양 세포 요법을 위한 세포의 일반적인 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어 미국특허출원공개공보 제US2003/0170238호(Gruenberg et al); 미국특허 제4,690,915호(Rosenberg); 문헌 「Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)」에 기재되어 있다. 예를 들어 문헌 「Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338」을 참조한다.
치료되는 질환 또는 병태는 항원의 발현이 질환 상태 또는 장애의 병인과 관련되고 및/또는 이를 수반하고, 예를 들어 그러한 질환, 병태, 또는 장애를 일으키거나, 악화시키거나, 그렇지 않으면 수반한다. 예시적인 질환 및 상태는 세포의 악성종양 또는 형질전환(예를 들어 암), 자가 면역 또는 염증성 질환, 또는 감염성 질환과 연관된 질환 또는 병태를 포함할 수 있고, 예를 들어 박테리아, 바이러스, 또는 다른 병원체에 의해 발생한다. 치료될 수 있는 다양한 질환 및 상태와 관련된 항원을 포함하는 예시적인 항원은 앞서 서술된다. 특정 구현예에서, 키메릭 항원 수용체(CAR) 또는 트랜스제닉 TCR은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.
질환 중에, 병태 및 장애는 고형 종양, 혈액 악성 종양 및 흑색종을 포함하는 종양 및 국소 및 전이성 종양을 포함하고, 전이성 종양, 바이러스 또는 다른 병원체, 예를 들어 HIV, HCV, HBV, CMV, HPV, 및 기생충 질환으로 감염된 것과 같은 감염성 질환, 및 자가면역 및 염증성 질환을 포함하는 종양이다.
일부 구현예에서, 질환, 장애 또는 병태는 종양, 암, 악성 종양, 신생물, 또는 다른 증식성 질환 또는 장애이다. 그러한 질환은 백혈병, 림프종, 예를 들어 급성 골수(또는 골수성) 백혈병(AML), 만성 골수(또는 골수성) 백혈병(CML), 급성 림프구(또는 림프구성) 백혈병(ALL), 만성 림프구 백혈병(CLL), 털세포 백혈병(HCL), 작은 림프구 림프종(SLL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 한계 영역 림프종(MZL), 버킷 림프종(BL), 호지킨 림프종(HL), 비-호지킨 림프종(NHL), 퇴행성 거대세포 림프종(ALCL), 여포성 림프종(FL), 불응성 여포성 림프종, 확산성 거대 B- 세포 림프종(DLBCL) 및 다발성 골수종(MM)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 치료되는 상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양(B cell malignancy)이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 및 미만성거대 B 세포 림프종(DLBCL) 중에서 선택된 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 NHL이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 달리 명시되지 않은 DLBCL(DLBCL, NOS)이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 NHL이고 상기 NHL은, 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(드 노보이거나 또는 비활동성으로부터 형질전환됨), 원발 가슴세로칸 큰 비세포 림프종(PMBCL), T 세포/혈구가 풍부한 큰 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종(BL), 외투 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 외투 세포 림프종(MCL)이다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법, 용도 또는 제조 물품에 따라 치료된 상기 질환 또는 병태는 DLBCL이다. 일부 측면에서, DLBCL는 DLBCL, 달리 명시되지 않는(NOS)이며, 이는 일부 경우에, 드 노보 또는 비활동성 질환으로부터 형질전환된 것으로 특징지워질 수 있다.
일부 구현예에서, 치료를 위해 선택된 및/또는 임의의 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 DLBCL, NOS을 갖는 대상체는, 우세한 절외 위치(predominant extranodal location)를 갖는 DLBCL이 아닌 DLBCL, 말기 분화된 B 세포의 거대 세포 림프종이 아닌 DLBCL, 또는 DLBCL와 다른 림프성 종양 사이에 있는 특징들을 갖는 B 세포 신생물이 아닌 DLBCL을 갖는다.
일부 구현예에서, 치료를 위해 선택된 및/또는 임의의 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 DLBCL, NOS을 갖는 대상체는, T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(TCHRBCL)이 아니고, 중추신경계(CNS)의 1차 DLBCL이 아니며, 원발성 피부 DLBCL, 다리 유형 또는 엡스타인-바 바이러스(EBV)-양성 DLBCL(예를 들어 노인의 EBV 양성 DLBCL)이 아닌 DLBCL, 및 일부 경우에, 만성 염증과 관련된 DLBCL가 아닌 DLBCL를 갖는다.
일부 구현예에서, 치료를 위해 선택된 및/또는 임의의 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 DLBCL, NOS을 갖는 대상체는, B-림프구성 백혈병/림프종(B-LBL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 버킷 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 또는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종을 갖는다. 일부 측면에서, DLBCL은 DLBCL, NOS이며, 이는 일부 경우에 B-림프구성 백혈병/림프종(B-LBL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 버킷 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 또는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종으로서 특징지워질 수 있다.
일부 구현예에서, 치료를 위해 선택된 및/또는 임의의 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 DLBCL, NOS을 갖는 대상체는, 기원 세포의 분자 및/또는 세포유전학적 특징에 기초하여 배 중심 B 세포 유사(germinal center B-cell-like; GCB) 및 활성화된 B 세포 유사(activated B-cell-like; ABC)인 DLBCL을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 DLBCL는 드 노보 또는 1차 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태(예를 들어 림프종 예를 들어 DLBCL)는 상이한 서브타입의 질환 또는 병태, 예를 들어 비활동성 림프종, 예를 들어 여포성 림프종(FL)으로부터 형질전환된것이다. 일부 구현예에서, 다른 비활동성 림프종은 예를 들어 변연부 B 세포 림프종(MZL) 및 만성 림프구성 백혈병/소세포 림프종(CLL/SLL)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL이고; 일부 측면에서, 다른 비활동성 림프종에서 형질전환된 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 형질전환된 여포성 림프종(tFL)을 갖는 것으로 의심되거나 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 FL로부터 형질전환된 DLBCL이다. 일부 측면에서, 상기 질환 또는 병태는 FL과 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL이다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법, 용도 또는 제조 물품에 따라 치료되는 상기 질환 또는 병태는 또다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환되는 DLBCL, 예를 들어 변연부 림프종으로부터 형질전환되는(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL이다. 일부 경우에, 상기 질환 또는 병태는 DLBCL tMZL 또는 DLBCL tCLL이다. 일부 구현예에서, 그것은 Fl과는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 질환 또는 병태이다. 일부 구현예에서, 그것은 DLBCL 또는 거대 B 세포 림프종, 예를 들어 DLBCL 또는 FL 또는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 거대 B 세포 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL, 예를 들어 DLBCL tMZL 또는 DLBCL tCLL이다.
일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 상기 대상체가 여포성 림프종(FL)을 갖는 경우 치료를 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 약화된 외투 구역(attenuated mantle zone), 분극 손실 및/또는 유형체 대식세포(tangible body macrophage)의 부재를 나타내는 신생물 소낭(neoplastic follicle)을 나타내거나 그와 관련된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 중심세포와 중심아세포의 혼합물과 관련된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 중심세포와 관련되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 등급 3 FL이다. 일부 구현예에서, 상기 등급 3 FL은 고출력 필드(HPF)당 15개 이상의 중심아세포를 나타내거나 또는 그와 관련된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 FL은 소낭(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 소낭 내에서 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현과 관련된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 t(14;18)/IGH-BCL2 및/또는 BCL6 재배열과 관련되거나 또는 그에 의해서 특징지워진다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 t(14;18)(q32;q21) 전좌와 관련된다. 일부 측면에서, 상기 t(14;18)(q32;q21) 전좌는 BCL2 발현을 면역글로불린(Ig) 중위좌(IGH) 증강제(enhancer)의 제어 하에 둔다. 일부 측면에서, t(14;18)은 등급 1 및 2의 FL의 대략 90%, 등급 3A의 60~70%, 등급 3B의 FL의 경우 15~30%에서 검출된다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 BCL2 전좌 t(2;18) 및 t(18;22)와 관련된다. 일부 구현예에서, 전좌 t(2;18) 및 t(18;22)와 관련된 상기 FL은 BCL6 재배열과도 관련된다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 FL은 소낭 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공동 발현 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련된다.
일부 구현예에서, 상기 FL은 림프절 및/또는 비장, 골수, 말초혈액 및 기타 림프절외 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 FL은 림프절을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 FL과 관련된 예시적 특징들은 문헌 「Choi et al. (2018) Arch Pathol Lab Med 142:1330-1340; Luminari et al., (2012) Rev. Brad. Hematol. Hemoter., 34:54-59 and Salles (2007) ASH Education Book, 2007:216-25」에 기술된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, FL의 경우에, 질환 부담의 정도를 평가하는데 사용된 예시적 파라미터는 헤모글로빈 수준(예를 들어 <12 g/dL 또는 <10 g/dL), 적혈구 침강 속도(ESR), 락트산 디하이드로게나제(lactic dehydrogenase; LDH) 수준, 및 β2-마이크로글로불린(B2M) 값, 유전자 발현, 단일 염기 다형성(SNPs; 예를 들어 IL-8, IL-2, Il-12B, 및 IL1RN에서), miRNA 발현, 및 단백질 발현(예를 들어 CD68, STAT1, FOXP3, CD57)과 같은 파라미터를 포함한다[문헌 「Salles (2007) ASH Education Book, 2007:216-25」 참조]. 상기 FL의 경우, 질환의 정도 또는 부담은 질병의 정도 또는 부담은 앤아버 스테이징 시스템(the Ann Arbor staging system), 종양 부담, 부피가 큰 질병, 결절 또는 결절외 질병 부위의 수, 및/또는 골수 침범에 의해 평가될 수 있다.
일부 측면에서, 대상체의 생존율, 예를 들어 FL을 갖는 대상체는 이탈리아 림프종 간 그룹(ILI) 및/또는 국제 여포 림프종 예후 인자 프로젝트(IFLPFP)에서 개발한 점수 시스템에 기반한다[문헌 「Luminari et al., (2012) Rev. Brad. Hematol. Hemoter., 34:54-59」 참조]. 일부 측면에서, ILI 점수는 연령, 성별, B 증상, 림프절외 부위 수, 적혈구 침강 속도(ESR) 및 락트산 디하이드로게나제(LDH)의 독립적인 예후 역할에 기반한다. 일부 측면에서, 상기 IFLPFP 점수는 연령, 앤아버 병기, 헤모글로빈 수치, 결절 부위 면적 수 및 혈청 LDH 수치의 위험 요소에 기반한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 여포성 림프종(FL)을 갖는 대상체를 선택하고, 상기 대상체에 FL에 의해서 발현딘 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 FL과 관련되는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 을 포함하고, 각각의 용량의 T 세포는, FL에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 FL과 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 질병 또는 병태는 림프절외 고-등급 비호지킨 B 세포 림프종(an extranodal high-grade non-Hodgkin B-cell lymphoma)이다. 일부 구현예에서, 상기 림프절외 고-등급 비호지킨 B 세포 림프종은 1차 CNS 림프종(PCNSL)이다. 일부 구현예에서, 상기 PCNSL은 전신 림프종이 없는 중추신경계(CNS)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 PCNSL은 뇌, 척추, 뇌척수액(CSF) 및 눈에 국한된다. 일부 구현예에서, 상기 PCNSL은 미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL)이다. 일부 구현예에서, 상기 PCNSL은 버킷, 저등급 또는 T 세포 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 PCNSL은 신경학적 신호를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 신경학적 증후는 국소 신경학적 결손, 정신 상태 및 행동 변화, 증가된 두개내압의 증상 및/또는 발작을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태와 관련된 예시적인 특징은 문헌 「Grommes et al. (J. Clin Oncol 2017; 35(21):2410-18)」에 기술된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따른 치료를 위한 상기 대상체는 원발성 중추신경계 림프종(PCNSL)을 갖지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 2차 중추 신경계 림프종(SCNSL)이다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 은 전신 림프종 환자에게 있다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 전이성 림프종이라고 한다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 뇌, 수막, 척수 및 눈을 침범할 수 있는 공격성 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 연수막 확산을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 SCNSL은 뇌 실질 질환을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태와 관련된 예시적 특징들은 문헌 「Malikova et al. (Neurophychiatric Disease and Treatment 2018; 14:733-40.)」에 기술된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열, 선택적으로 DLBCL 조직학을 갖는 고-등급 B 세포 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 DLBCL NOS(드 노보(de novo)이거나 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환됨)이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)이다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 여포성 림프종(FL)이다. 일부 구현예에서, 그것은 CNS 침범을 갖는 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 중추신경계에서 DLBCL의 재발(2차 CNS 림프종)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 2차 CNS 림프종은 뇌 실질(brain parenchyma) 및/또는 연수막을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 질병 또는 장애를 치료하기 위해 적어도 (약) 1, 2, 3, 4 또는 5개의 다른 요법으로 치료받았거나 이전에 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 이전에 메트로트렉세이트, 티오테파 및/또는 시타라빈을 투여받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 이전에 조혈 줄기 세포 요법(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT 또는 자가 HSCT를 받은 적이 있다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종 또는 이중/삼중 히트 분자 하위 유형의 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 식별되었다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC(골수 세포증 종양 유전자), BCL2(B-세포 림프종 2) 및/또는 BCL6(B-세포 림프종 6) 유전자 재배열(예를 들어 위치이동)의 존재를 특징으로 하는 이중 히트 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 재배열은 다른 유전자 재배열과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 예를 들어, 다른 유전자 재배열은 BCL2를 수반하는 t(14;18)(q32;q21)를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 재배열은 BCL6/3q27과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC, BCL2 및 BCL6 유전자 재배열의 존재를 특징으로 하는 삼중 히트 림프종이다; 예를 들어, 문헌[Aukema 등, (2011) Blood 117:2319-2331]을 참조한다. 상기 구현예의 일부 측면에서, 대상체는 ECOG 0-1이거나 MZL 또는 CLL로부터 형질 전환된 DLBCL을 갖지 않거나 갖는 것으로 의심되지 않거나 특성화되지 않는다. 측면에서, 요법은 상기 대상체에 대해 표시되고/거나 지침은 상기 집단 내의 대상체에 대한 투여를 나타낸다. 일부 구현예에서, 2016년 WHO 기준(Swerdlow {FF54} 등, (2016) Blood 127(20):2375-2390)에 기초하여, 이중/삼중 히트 림프종은 DLBCL 조직 구조(이중/삼중 히트)를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종으로 간주될 수 있다.
일부 구현예에서, NHL은 Lugano 분류에 기초한 단계일 수 있다(예를 들어 Cheson 등, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5 참조한다.). 일부 경우에, 병기는 로마 숫자 I에서 IV(1-4)로 설명되며, 림프계 외부 기관(절외 기관)에 영향을 미치는 제한된 병기(I 또는 II) 림프종은 E로 표시된다. I 단계는 하나의 결절 또는 인접한 결절 그룹의 관여 또는 결절 관여가 없는 단일 결절 외 병변(IE)을 나타낸다. 2 단계는 횡격막의 같은 쪽에 있는 2 이상의 노드 그룹 또는 제한된 인접하는 림프절외 관여(IIE)를 갖는 노드 규모에 의한 I 또는 II 단계의 관여를 나타낸다. III 단계는 비장 관여와 함께 횡경막 위의 노드 또는 횡경막 양쪽에 있는 노드의 관여를 나타낸다. IV 단계는 추가의 비인접한 림프절 외 개입의 관여를 나타낸다. 또한, "부피가 큰 질병(bulky disease)"은 특히 II 단계에 관한 가슴의 거대 종양을 설명하는데 사용될 수 있다. 질병의 정도는 열성 림프종에 대해서는 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및 비열성 조직 구조에 대해서는 CT에 의해 결정된다. 일부 구현예에서 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 상기 대상체는 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography; PET) 양성 질환을 갖는다.
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받은 경우, 상기 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 동부 종양학 그룹 협회(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG) 활동도 지표가 사용되어 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법들에서 불량한 ECOG 활동도를 나타냈던 대상체를 평가하거나 선택할 수 있다(예를 들어, 문헌[Oken et al.(1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655] 참조). ECOG 척도의 활동도는 스스로를 돌보는 능력, 일상 활동 및 신체 능력(예를 들어, 걷기, 일하기 등)의 관점에서 환자의 기능 수준을 설명한다. 일부 구현예에서, 0의 ECOG 수행 상태는 대상체가 정상적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 1의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 신체 활동에 일부 제한을 나타내나 대상체는 완전히 걸을 수 있다. 일부 측면에서, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 환자는 50% 이상 걸을 수 있다. 일부 경우에, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 또한 스스로를 돌볼 수 있다; 예를 들어, 문헌[Sørensen et al., (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775]을 참조한다. ECOG 활동도를 반영하는 기준은 하기 표 1에 설명되어 있다:
Figure pct00001
임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량이 아닌 질환 또는 상태에 대한 하나 이상의 종래 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하였거나 이에 대해 불응성으로 되었다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 치료 후 관해 후 재발하였거나, 또는 1종, 2종 또는 3종 또는 그 초과의 종래 요법제에 대해 불응성으로 되었다(상기 CAR을 발현하는 또다른 세포 용량과는 다름). 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 예를 들어 상기 세포 용량이 2차 요법이 되도록, 치료 후 관해 후 재발하였거나, 또는 1종의 종래 요법제에 대해 불응성으로 되었다(상기 CAR을 발현하는 또다른 세포 용량과는 다름). 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 예를 들어 상기 세포 용량이 3차 또는 그 후의 요법, 예를 들어 4차 요법이 되도록, 치료 후 관해 후 재발하였거나, 또는 1종, 2종 또는 3종 또는 그 초과의 종래 요법제에 대해 불응성으로 되었다(상기 CAR을 발현하는 또다른 세포 용량과는 다름).
일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는 재발된 또는 불응성 공격성 거대 B세포 림프종(R/R LBCL)을 갖는 성인 대상체를 포함한다. 적격 대상체는, 2종 또는 그 초과의 세포 요법제를 사용한 치료 후, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL, 달리 명시되지 않은 [NOS], 비활동성 조직에서 형질전환된 DLBCL 포함[tDLBCL]), MYC 및 BCL2를 갖는 고-등급 B 세포 림프종 및/또는 DLBCL 조직을 갖는 BCL6 재배열, 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL), 또는 여포성 림프종 등급 3B를 갖는다. 일부 구현예에서, 2차 CNS 림프종을 갖는 대상체는 상기 제공된 구현예에 따라 치료될 수 있다. 일부 측면에서, 항-CD19 CAR 주입 후 완전 반응을 달성했지만 재발된 대상체는 상기 제공된 구현예에 따라 치료될 수 있다. 일부 구현예에서, CAR-발현 T 세포 요법제, 예를 들어 동일한 CAR+ T 세포를 발현하고, 상기 제 1 주입 후 최상의 반응인 안정적인 질환(SD)을 성취한 조작된 T 세포를 사전에 투여 받은 대상체는 상기 제공된 구현예, 예를 들어 상기 CAR-발현 T 세포 요법제 제 2 주입 또는 주기로서 치료될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 재발된 또는 불응성 B 세포 림프종을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 또는 치료되었고/되었거나; 상기 대상체는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발된 또는 불응성 질환이거나 또는 그를 갖고/갖거나; 상기 대상체는 1 또는 2의 ECOG 성능 상태를 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나; 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받는 경우, 상기 종래 종래 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행된다.
일부 측면에서, 외래 환자 환경에서, 예를 들어 비-3차 진료기관에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 대상체는 재발된/불응성 B-세포 NHL을 갖는 성인 환자를 포함한다. 일부 측면에서, 외래 환자 환경에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 대상체는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 여포성 림프종(tDLBCL)에서 발생하는 형질전환된 DLBCL, MYC 및 BCL2을 갖는 고-등급 B 세포 림프종 및/또는 DLBCL 조직학을 갖는 BCL6 재배열을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어 외래 환자 환경에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료되는 대상체는 안트라사이클린 및 리툭시맙로 치료되었고 DLBCL에 대한 2개 이상의 전신 요법 또는 자가 HSCT 후 재발된/불응성 질환을 갖는 대상체를 포함한다.
일부 구현예에서, 외래 환자 전달을 통해서 수행되는 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해, 상기 제공된 구현예는, 재발된 또는 불응성 거대 B 세포 림프종; 및/또는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제; 및/또는 2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후에 재발된 또는 불응성 질환; 1 또는 2의 ECOG 활동도; 및/또는 상기 대상체가 종래 CD19-표적화된 요법을 받은 경우, 상기 종래 CD19-표적화된 요법 후 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함함;이거나 또는 그를 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 제공된 구현예는, 상기 세포 용량의 투여를 위해 이중/삼중 히트 림프종; 화학 불응성 림프종, 선택적으로 화학 불응성 DLBCL을 갖고; 악성 종양, 선택적으로 NHL을 치료하기 위한 종래 요법제에 대한 반응에서 완전한 관해(CR)를 성취하지 못하였고/하였거나; 자가 줄기 세포 이식(ASCT)을 받은 후 1년 이내에 또는 1년 이내에 재발하였고/하였거나; 중추신경계(CNS) 침범과 관련되거나 관련된 림프종을 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는 공격성 B-세포 NHL에 대한 단일 면역화학요법에서 재발하였거나 이에 불응성이며 HSCT에 부적격인 성인 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 달리 명시되지 않은 경우 (NOS; 드 노보 또는 형질전환된 여포성 림프종[tFL]), MYC 및 BCL2를 갖는 고-등급 B 세포 림프종 및/또는 DLBCL 조직학을 갖는 BCL6 재배열(이중/삼중) 히트 림프종[DHL/THL]), 안트라사이클린 및 CD20-표적화된 제제를 함유하는 면역 화학 요법제의 1차 종래 라인 후(1 prior line) 난포성 림프종 등급 3B을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는 2차 CNS 침범을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는 고용량 화학요법 및 HSCT 둘 다에 대해 부적격으로 간주되고 이식 부적격(TNE)이지만, CAR T 세포 요법에 대해서는 적격을 유지하는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, TNE인 대상체는 하기 TNE 기준 중의 적어도 하나를 포함한다: (a) 연령≥70세; (b) 2의 ECGO 활동도; 및/또는 (c) 폐기능 장애(일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력[DLCO]≤60%이지만, 실내 공기에서 SaO2≥92% 및 CTCAE≤1 호흡곤란), 심장(좌심실 박출률[LVEF]≥40% 및 <50%), 신장(크레아티닌 클리어런스>30 및, 60 L/min), 또는 간 기능(AST/ALT>2 및 ≤5×ULN). 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료되는 대상체는 CAR-발현 T 세포 요법제, 예를 들어 동일한 CAR+ T 세포를 발현하는 조작된 T 세포를 사전에 투여받았고 제 1 주입 후 완전 반응을 성취하였지만 예를 들어 상기 CAR-발현 T 세포 요법제의 제 2 주입으로서 재발한 대상체를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 제공된 구현예는 상기 세포 용량의 투여를 위해, 재발된/불응성 NHL을 갖는 것; 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)에 부적격이거나 부적격인 것으로 식별된 것; 및 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 대한 1종의 종래 요법제(prior therapy)로 치료한 후 관해 후 재발하거나 이에 대해 불응성으로 된 것;의 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 제공된 구현예는 상기 세포 용량의 투여를 위해, 연령 70세 또는 그 초과; 및/또는 2의 ECOG 성능 상태; 및/또는 손상된 폐 기능, 선택적으로 (약) 60% 또는 그 미만의 일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide; DLCO)을 가짐; 및/또는 손상된 심장 기능, 선택적으로 (약) 50% 또는 그 미만의 좌심실 박출률(left ventricular ejection fraction; LVEF)을 가짐; 및/또는 손상된 신장 기능, 선택적으로 (약) 60 mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 클리어런스(calculated creatinine clearance)을 가짐; 및/또는 손상된 간 기능, 선택적으로 정상 상한(upper limit of normal; ULN)의 (약) 2배 초과인 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(aspartate aminotransferase; AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase; ALT)을 가짐;을 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료하기 위한 대상체는 적절한 기관 기능을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 적절한 기관 기능을 결정하기 위한 예시적인 기준은 다음을 포함한다: 포화 O2 농도 SaO2≥실내 공기의 92% 및 유해 사례에 대한 일반 용어 기준(CTCAE)≤1 호흡곤란; LVEF≥40%; 계산된 크레아티닌 클리어런스(Cockcroft and Gault)>30mL/min; AST/ALT≤5×ULN; 림프구 고갈 화학 요법을 받기에 적절한 골수 기능; 및/또는 총 빌리루빈<2.0 mg/dL(또는 길버트 증후군 또는 간 림프종 침윤을 갖는 대상체의 경우<3.0 mg/dL).
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 감염성 질환 또는 병태, 예를 들어 바이러스성, 레트로바이러스성, 박테리아성, 및 원생동물 감염, 면역 결핍, 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스타인-바 바이러스(EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 자가 면역 또는 염증성 질환 또는 병태, 예를 들어 관절염, 예를 들어 류마티스 관절염(RA), 제 1형 당뇨병, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 염증성 장 질환, 건선, 경피증, 자가면역 갑상선 질환, 그레이브병, 크론병, 다발성 경화증, 천식 및/또는 이식과 관련된 질환 또는 병태이다.
일부 구현예에서, 질환 또는 장애와 관련된 항원은 αvβ6 인테그린(avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원(BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9(CA9, 또한 CAIX 또는 G250로 공지됨), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B(CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로 공지됨), 암태아성 항원(CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1(CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 표피 성장 인자 단백질(EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이(EGFR vIII), 상피 당단백 2(EPG-2), 상피 당단백 40(EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2(EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5(FCRL5, 또한 Fc 수용체 유사 5 또는 FCRH5로 공지됨), 태아성 아세틸콜린 수용체(태아성 AchR), 폴레이트 결합 단백질(FBP), 폴레이트 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화된 GD2(OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100(gp100), 글리피칸-3(GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D(GPRC5D), Her2/neu(수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3(erb-B3), Her4(erb-B4), erbB 이량체, 인간 고분자량-멜라노마-연관 항원(HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1(HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2(IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접착 분자(L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 반복 함유 8 패밀리 멤버 A(LRRC8A), 루이스 Y, 멜라노마-연관 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린(MSLN), c-Met, 뮤린 사이토메갈로바이러스(CMV), 뮤신 1(MUC1), MUC16, 천연 킬러 그룹 2 구성원 D(NKG2D) 리간드, 멜란 A(MART-1), 신경 세포 부착 분자(NCAM), 온코페탈 항원, 멜라노마의 우선 발현된 항원(PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이적 항원, 전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막 항원(PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 희귀 수용체 1(ROR1), 서바이빈, 세포영양막 당단백(TPBG, 또한 5T4로 공지됨), 종양-연관 당단백 72(TAG72), 티로시나제 관련된 단백질 1(TRP1, TYRP1 또는 gp75라고도 알려짐), 티로시나제 관련된 단백질 2(TRP2, 도파크롬 타우토머라제(dopachrome tautomerase), 도파크롬 델타-이소머라제(dopachrome delta-isomerase) 또는 DCT라고도 알려짐), 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2), 윌름스 종양 1(WT- 1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원, 또는 유니버설 태그로 연관된 항원, 및/또는 비오틴화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자 중에서 선택된다. 일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커의 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 연관된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B 세포 림프종(예를 들어 DLBCL)이고 상기 항원은 CD19이다.
일부 구현예에서, 상기 항원은 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 바이러스성 항원(예를 들어 HIV, HCV, HBV 등으로부터 바이러스성 항원), 박테리아성 항원, 및/또는 기생충 항원이다. 일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되고, 여기서 세포는 세포 치료를 받을 대상체, 또는 그러한 대상체로부터 유래된 샘플로부터 분리 및/또는 그렇지 않으면 준비된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 환자로부터 유래되고, 분리 및 처리 후 동일한 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 치료, 예를 들어 입양 T 세포 치료는 동종이계 전달에 의해 수행되고, 여기서 세포는 세포 치료를 받거나 궁극적으로 받을 대상체, 예를 들어 제 1 대상체 이외의 대상체로부터 분리 및/또는 그렇지 않으면 준비된다. 그러한 구현예에서, 그다음, 세포는 동일한 종의 다른 대상체, 예를 들어 제 2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 및 제 2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제 2 대상체는 제 2 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 슈퍼타입을 발현한다.
세포는 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내 주사, 눈주위(periocular) 주사, 망막하 주사, 유리체내 주사, 트랜스-경막 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하(subconjectval, subconjuntival) 주사, 서브-테논 주사, 안구후 주사, 안구주위(peribulbar) 주사, 또는 후배엽 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 그들은 비경구, 폐내 및 비강 내, 및 국소 치료를 위해 필요한 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 세포의 단일 일시 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 그것은 예를 들어 3 일 이하의 기간에 걸쳐 세포의 다중 일시 투여에 의해, 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 용량의 투여 또는 임의의 추가 치료, 예를 들어 림프구 마비 치료, 처치 치료 및/또는 병용 치료는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량 또는 임의의 추가 요법제, 예를 들어 상기 림프구 고갈 요법제, 처치 요법제(intervention therapy), 및/또는 조합 요법제의 투여는 입원환자 전달을 통해서 수행된다. 일부 측면에서, 상기 세포 용량 또는 임의의 추가 요법제, 예를 들어 상기 림프구 고갈 요법제, 처치 요법제, 및/또는 조합 요법제의 투여는 입원 환자 환경, 예를 들어 대학 의료 센터에서 수행된다. 일부 측면에서, 상기 요법은 외래 환자 환경, 예를 들어 비-대학 의료 센터에서 받는다. 일부 측면에서, 외래 환자 환경에서 상기 세포 용량 또는 임의의 추가 요법제, 예를 들어 상기 림프구 고갈 요법제, 처치 요법제, 및/또는 조합 요법제의 투여 및 관리는 커뮤니티/비대학 센터에서의 더 넓은 활용 및 개선된 접근성을 결과할 수 있습니다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질환의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 타입, 질환의 중증도 및 과정, 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 치료, 대상체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 수 있다. 조성물 및 세포는 일부 구체 예에서 한번의 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다.
일부 구현예에서, 세포는 조합 치료의 일부로서, 예를 들어 동시에 또는 순차적으로, 임의의 순서로, 다른 치료적 개입, 예를 들어 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 작용제, 예를 들어 세포독성 또는 치료제가 투여된다. 일부 구현예에서 세포는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 다른 치료적 개입과 관련하여 동시에 또는 임의의 순서로 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 추가의 치료제는 본원에서 기술된 임의의 개입 또는 제제, 본원에서 예를 들어 섹션 II에서 기술된 독성 증후을 개선시킬 수 있는 임의의 개입 또는 제제이다. 일부 상황에서, 세포는 세포 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키도록 또는 그 반대의 시간에 충분히 근접한 다른 치료와 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 작용제는 예를 들어 지속성을 향상시키기 위해, IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 화학요법 작용제의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 예를 들어 투여 전에 종양 부담을 감소시키기 위해, 화학요법 작용제, 예를 들어 처리 화학요법 작용제의 투여를 포함한다.
일부 측면에서 면역결핍(예를 들어 림프구결핍) 치료를 가진 전처리 대상체는 입양 세포 치료(ACT)의 효과를 개선시킬 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, 방법은 세포 치료의 개시 전에 대상체에 전처리 작용제, 예를 들어 림프구 마비 또는 화학요법 작용제, 예를 들어 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 또는 그의 조합을 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어 대상체는 세포 치료의의 개시 적어도 2일 전, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7 일 전 전처리 작용제를 투여받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 치료의 개시 7 일 이하 전, 예를 들어 6, 5, 4, 3 또는 2일 이하 이전에 전처리 작용제를 투여받는다.
일부 구현예에서, 대상체는 20 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 약 20 mg/kg 내지 100 mg/대상체의 체중 kg, 예를 들어 40 mg/kg 내지 80 mg/kg 또는 약 40 mg/kg 내지 80 mg/kg의 용량으로 사이클로포스파미드로 전처리된다. 일부 측면에서, 대상체는 60 mg/kg 또는 약 60 mg/kg의 사이클로포스파미드로 전처리되거나 또는 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 매일, 격일로 또는 3 일 마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 림프구 마비 작용제가 사이클로포스파미드를 포함하는 경우, 대상체는 사이클로포스파미드를 100 mg/m2내지 500 mg/m2또는 약 100 mg/m2내지 500 mg/대상체의 신체 표면적 m2, 예를 들어 200 mg/m2 내지 400 mg/m2 또는 250 mg/m2 내지 350 mg/m2 또는 약 200 mg/m2 내지 400 mg/m2 또는 약 250 mg/m2 내지 350 mg/m2의 용량(각각의 수치를 포함함)으로 투여된다. 일부 경우에, 상기 대상체는 약 100 mg/m2의 사이클로포스아미드를 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 약 200 mg/m2의 사이클로포스아미드를 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 약 250 mg/m2의 사이클로포스아미드를 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 약 300 mg/m2의 사이클로포스아미드를 투여받는다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 매일, 격일로 또는 3 일 마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 1일 내지 5 일 동안, 예를 들어 3 일 내지 5 일 동안과 같이, 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 세포 요법의 개시 전에 3 일 동안 매일 약 300 mg/대상체의 신체 표면적 m2의 사이클로포스파미드를 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 세포 요법의 개시 전에 총 (약) 300 mg/m2, 400 mg/m2, 500 mg/m2, 600 mg/m2, 700 mg/m2, 800 mg/m2, 900 mg/m2, 1000 mg/m2, 1200 mg/m2, 1500 mg/m2, 1800 mg/m2, 2000 mg/m2, 2500 mg/m2, 2700 mg/m2, 3000 mg/m2, 3300 mg/m2, 3600 mg/m2, 4000 mg/m2 또는 5000 mg/m2의 사이클로포스파미드 또는 전술한 임의의 수치로 정의된 범위로 투여받는다.
일부 구현예에서, 림프구 마비 작용제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체는 (약) 1 mg/m2 내지 (약) 100 mg/m2, 예를 들어 (약) 10 mg/m2 내지 (약) 75 mg/m2, (약) 15 mg/m2 내지 (약) 50 mg/m2, (약) 20 mg/m2 내지 (약) 40 mg/m2, (약) 24 mg/m2 내지 (약) 35 mg/m2의 용량(각각의 수치를 포함함)으로 플라다라빈(fludarabine)을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 (약) 10 mg/m2의 용량으로 플라다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 (약) 15 mg/m2의 용량으로 플라다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 (약) 20 mg/m2의 용량으로 플라다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 (약) 25 mg/m2의 용량으로 플라다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 (약) 30 mg/m2의 용량으로 플라다라빈을 투여받는다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 매일, 격일로 또는 3 일 마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 1일 내지 5 일 동안, 예를 들어 3 일 내지 5 일 동안과 같이, 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 세포 요법의 개시 전에 3 일 동안 매일 약 30 mg/ 대상체의 신체 표면적 m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 세포 요법의 개시 전에 총 (약) 10 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 40 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 70 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2, 150 mg/m2, 180 mg/m2, 200 mg/m2, 250 mg/m2, 270 mg/m2, 300 mg/m2, 330 mg/m2, 360 mg/m2, 400 mg/m2 또는 500 mg/m2 의 사이클로포스파미드 또는 전술한 임의의 수치로 정의된 범위로 투여받는다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 사이클로포스파미드 또는 플루다라빈과 같은 단일 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 플루다라빈 또는 다른 림프구 고갈제 없이 사이클로포스파미드만 투여한다. 일부 구현예에서, 투여 전에, 대상체는 2 내지 4일 동안 매일 체표면적 m2 당 (약) 200-400 mg/m2 또는 (약) 300 mg/m2의 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 사이클로포스파미드 또는 다른 림프구 고갈제 없이 플루다라빈만 투여한다. 일부 구현예에서, 투여 전에, 대상체는 2 내지 4일 동안 매일 체표면적 m2 당 (약) 20-40 mg/m2 또는 (약) 30 mg/m2의 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 받았다.
일부 구현예에서, 림프구 마비 작용제는 작용제의 조합, 예를 들어 사이클로포스파미드 및 플루다 라빈의 조합을 포함한다. 따라서, 작용제의 조합은 앞서 기재된 바와 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴에서 사이클로포스파미드 및 앞서 기재된 바와 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴에서 플루다라빈을 포함할 수 있다. 예를 들어 일부 측면에서, 대상체는 1차 또는 후속 용량 전에 (약) 60 mg/kg(~ 2 g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3회 내지 5회 용량의 25 mg/m2 플루다라빈을 투여받는다. 일부에서 대상체는 세포를 투여하기 전에 플루다라빈(3일 동안 30 mg/m2/일) 및 사이클로포스파미드(3일 동안 300 mg/m2/일)(flu/cy)를 동시에 정맥내 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 감소된, 지연된 또는 제거된 용량의 하나 이상의 용량의 림프구 고갈제(들)를 투여받는다.
일부 구현예에서, 섹션 III.E에기술된 바와 같이 재조합 수용체(예를 들어 CAR)로 세포 요법의 세포를 조작하기 위해 대상체로부터 세포를 수집한 후(예를 들어 백혈구 성분 채집술에 의해)에 그리고 상기 림프구 고갈 요법 전에, 상기 대상체는 브릿징 요법을 받을 수 있다. 상기 브릿징 요법은 화학 요법이다. 상기 브릿징 요법은 조작된 (예를 들어 CAR+) T 세포의 용량을 받기 전에 상기 질환의 조절을 위한 임의의 항암 요법일 수 있다. 임의의 다양한 요법제들이 환자의 연령, 질병의 중증도 또는 정도, 부작용 가능성, 림프구 고갈 요법 전 투여 시기, 종래 요법 및 기타 인자와 같은 인자들을 기반으로 하는 것을 포함하는 특정 질환 또는 병태를 치료하기 위한 숙련된 의사의 판단에 기초하여 브릿징 요법제로서 투여될 수 있다. 브릿징 요법은 방사 요법 또는 화학 요법을 포함할 수 있다. 상기 림프구 고갈 요법 전에 브릿지로서 제공될 수 있는 예시적 요법제는, 제한되지는 않지만, 리툭시맙, 덱사메타손, 프레드니손, 레날리도마이드, 젬시타빈, 옥살리플라틴, 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin), 이브루티닌 또는 벤다무스틴, 또는 전술한 것들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 상기 브릿징 요법제는 젬시타빈 및 옥살리플라틴이다. 일부 경우에, 상기 브릿징 요법제는 젬시타빈 및 리툭시맙이다. 일부 구현예에서, 상기 브릿징 요법제는 리툭시맙 및 젬시타빈 및 옥살리플라틴이다. 상기 림프구 고갈 요법을 받기 전에 상기 대상체는 예를 들어 양전자 방출 단층 촬영(PET)에 의해 질환 상태에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 상기 브릿징 요법 후 PET-양성 질환을 나타내는 대상체에게만 림프구 고갈 요법이 제공되고 조작된(예를 들어 CAR+) T 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 대상체가 브릿징 요법 후 CR을 달성하는 경우, 대상체는 림프구 고갈 요법 또는 조작된(예를 들어 CAR+) T 세포의 용량을 제공받지 않는다.
세포의 투여 후, 일부 구현예에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예를 들어 임의의 다수의 공지 된 방법에 의해 측정된다. 평가하는 파라미터는 in vivo, 예를 들어 영상화, 또는 ex vivo, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이 적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌 「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에서 서술된 세포독성 분석과 같은 적합한 공지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포는 임의의 수의 방식으로 추가로 변형되어, 그의 치료 또는 예방 효능이 증가된다. 예를 들어 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR은 링커를 통해 표적 부분에 직접 또는 간접적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 표적 부분에 대한 적화합물, 예를 들어 CAR 또는 TCR을 컨쥬게이션시키는 관행은 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 「Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 1 1 1 (1995)」, 및 미국특허 제5,087,616호를 참조한다. 일부 구현예에서, 세포는 조합 치료의 일부로서, 예를 들어 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 시약, 예를 들어 세포 독성제 또는 치료제와 같은 다른 치료적 개입과 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로와 같이 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서 세포는 하나 이상의 추가 치료제 또는 다른 치료 개입과 관련하여 어떤 순서로든 동시에 또는 순차적으로 공동-투여된다. 일부 상황에서, 상기 세포들은, 충분히 가까운 시간에 또 다른 요법과 공동-투여되어, 세포 집단은 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키거나 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 제제는 예를 들어 지속성을 향상시키기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 예를 들어 주입 반응의 위험을 최소화하기 위해 사전 투약된다. 일부 측면에서, 상기 사전 투약은 진통제 및/또는 항히스타민제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 사전 투약은 아세트아미노펜 및/또는 디펜히드라민, 또는 다른 H1-항히스타민제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 환자는, 상기 세포 요법으로 치료하기 약 30 내지 60분 전에, 아세트아미노펜(예를 들어 650mg 경구) 및 디펜하이드라민(예를 들어 25-50mg, IV 또는 경구), 또는 다른 H1-항히스타민제로 치료한다.
B. 투여량
일부 구현예에서, 세포의 용량은 제공된 방법, 및/또는 제조 또는 조성물의 제공된 물품에 따라 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 크기 또는 시기는 대상체에서 특정 질환 또는 병태의 함수로서 결정된다. 일부 경우에, 제공된 설명의 관점에서 특정 질환에 대한 용량의 크기 또는 시기는 경험적으로 결정될 수 있다.
임의의 상기 제공된 구현예 중의 일부에서, T 세포, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하는 조작된 T 세포의 용량은 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 포함하거나, 그에 대해 농축되거나, 또는 그에 대해 농축된 세포 조성물 또는 세포 집단을 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량 중의 상기 세포의 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 초과는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, T 세포의 용량은, 정의된 비율의 상기 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1이다. 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 정의된 비율은 대략 1:1이다.
임의의 제공된 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 포함하되, 각각의 용량의 상기 T 세포는 상기 질환 또는 장애에 의해서 발현된 표적 항원, 예를 들어 본원에서 기술된 임의의 것, 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 장애와 관련되는 재조합 수용체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 (약) 2×105 개의 세포/kg 내지 (약) 2×106 개의 세포/kg, 예를 들어 (약) 4×105 개의 세포/kg 내지 (약) 1×106 개의 세포/kg 또는 (약) 6×105 개의 세포/kg 내지 (약) 8×105 개의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세표의 용량은 2×105 개 이하의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR- 발현 세포)/대상체의 체중 킬로그램(세포/kg), 예를 들어 (약) 3×105 개 이하의 세포/kg, (약) 4×105 개 이하의 세포/kg, (약) 5×105 개 이하의 세포/kg, (약) 6×105 개 이하의 세포/kg, (약) 7×105 개 이하의 세포/kg, (약) 8×105 개 이하의 세포/kg, (약) 9×105 개 이하의 세포/kg, (약) 1×106 개 이하의 세포/kg, 또는 (약) 2×106 개 이하의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 2×105 개의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR- 발현 세포)/대상체의 체중 킬로그램(세포/kg), 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 3×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 4×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 5×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 6×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 7×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 8×105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 9×105 개의 세포/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 1×106 개의 세포/kg, 또는 적어도 또는 적어도 약 또는 (약) 2×106 개의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포의 수이다.
특정 구현예에서, 상기 세포, 또는 서브-유형의 세포의 개별 집단은, (약) 0.1 백만 내지 (약) 100 십억개의 세포 및/또는 세포의 양/대상체 체중 kg, 예를 들어 (약) 0.1 백만개 내지 (약) 50 십억개의 세포(예를 들어 (약) 5 백만개의 세포, (약) 25 백만개의 세포, (약) 500 백만개의 세포, (약) 1 십억개의 세포, (약) 5 십억개의 세포, (약) 20 십억개의 세포, (약) 30 십억개의 세포, (약) 40 십억개의 세포, 또는 전술한 임의의 2개 수치의 범위), (약) 1 백만개 내지 (약) 50 십억개의 세포(예를 들어 (약) 5 백만개의 세포, (약) 25 백만개의 세포, (약) 500 백만개의 세포, (약) 1 십억개의 세포, (약) 5 십억개의 세포, (약) 20 십억개의 세포, (약) 30 십억개의 세포, (약) 40 십억개의 세포, 또는 전술한 임의의 2개 수치의 범위), 예를 들어 (약) 10 백만개 내지 (약) 100 십억개의 세포(예를 들어 (약) 20 백만개의 세포, (약) 30 백만개의 세포, (약) 40 백만개의 세포, (약) 60 백만개의 세포, (약) 70 백만개의 세포, (약) 80 백만개의 세포, (약) 90 백만개의 세포, (약) 10 십억개의 세포, (약) 25 십억개의 세포, (약) 50 십억개의 세포, (약) 75 십억개의 세포, (약) 90 십억개의 세포, 또는 전술한 임의의 2개 수치의 범위), 및 일부 경우에 (약) 100 백만개의 세포 내지 (약) 50 십억개의 세포 (예를 들어 (약) 120 백만개의 세포, (약) 250 백만개의 세포, (약) 350 백만개의 세포, (약) 650 백만개의 세포, (약) 800 백만개의 세포, (약) 900 백만개의 세포, (약) 3 십억개의 세포, (약) 30 십억개의 세포, (약) 45 십억개의 세포) 또는 이들 범위의 값 및/또는 대상체 체중 kg 당의 범위로 대상체에 투여된다. 투여량은 질환 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 기타 치료에 특정한 속성에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 값들은 재조합 수용체-발현 세포의 수를 지칭하며, 다른 구현예에서, 그들은 투여된 T 세포 또는 PBMC 또는 총 세포의 수를 지칭한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포인 상기 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 세포의 용량이 대상체의 체 표면적 또는 체중에 연결되지 않거나 이에 기초하지 않도록 세포의 균일 용량 또는 고정 용량의 세포이다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108 　내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 또는 (약) 2.5×108　내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 예를 들어 (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, 적어도 또는 적어도 약 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1.5×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 또는 적어도 약 5×108 개의 CAR-발현 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 세포 요법은 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 수, (약) 5×105 내지 (약) 1×107 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 수, 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 적어도 (약) 1×105 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 수를 포함하는 세포 투여량의 투여를 포함하는데, 예를 들어 적어도 (약) 1×106 개, 적어도 (약) 1×107 개, 적어도 (약) 1×108 개의 그러한 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 상기 수는 CD3+, CD8+, 또는 CD4+ 및 CD8+, 일부 경우에는 또한 재조합 수용체-발현(예를 들어 CAR+) 세포의 총 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 상기 세포 요법은, (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107 개의 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107 개의 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포(각각의 수치를 포함함)의 수의 세포를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 총 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107 개의 총 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포, 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107 개의 총 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포(각각의 수치를 포함함)의 수의 세포를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 상기 T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포 또는 (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포의 용량은, (약) 1×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포 또는 (약) 5×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포의 용량은, (약) 1.5×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포 또는 (약) 0.75×107 개의 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 용량은 (약) 1×106 내지 (약) 5×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포, 예를 들어 (약) 5×106 내지 (약) 1×108 개의 상기 세포, 예를 들어 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 개의 총 상기 세포의 범위, 또는 2개 앞선 값 중 임의의 사이 범위에서 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 용량으로 투여되고, 각각의 용량 또는 총 용량은 앞선 값 중 임의의 범위 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 0.25×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포(각각의 수치를 포함함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 (약) 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 2.5×108, 또는 5×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포, 예를 들어 생존가능한 T 세포인 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 예를 들어 상기 대상체가 인간인 경우, 상기 용량은 약 5×108 개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵구(peripheral blood mononuclear cell; PBMC)를, 예를 들어 (약) 1×106 내지 (약) 5×108 개 범위의 상기 세포, 예를 들어 (약) 2×106, 5×106, 1×107, 5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 개 범위의 총 상기 세포, 또는 전술한 수치 중의 임의의 2개 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 생존가능한 세포인 상기 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 환자에게 다중 용량이 투여되고, 각각의 용량 또는 총 용량은 임의의 전술한 값 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 (약) 5×108 내지 (약) 5×108 개의 총 세포 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 1×108 내지 (약) 1.5×108 개의 총 세포 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1.5×108 개의 총 세포 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 또는 (약) 1×105 내지 (약) 1.5×108 개의 총 세포 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포의 용량은 단일 용량으로서 대상체에 투여되거나 2주, 1달, 3달, 6달, 1년 이상의 기간 내에 오직 1회 투여된다.
입양 세포 치료의 경우, 주어진 "용량"의 투여는 단일 조성물로서 세포의 주어진 양 또는 수의 투여 및/또는 단일 중단없는 투여, 예를 들어 단일 주사 또는 연속 주입으로서를 포함하고, 또한, 특정된 기간, 예를 들어 3일 이하에 걸쳐, 다중 개별 조성물 또는 주입으로 제공된, 분할 용량 또는 복수의 조성물로서 세포의 주어진 양 또는 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 용량은 단일 시점에서 제공되거나 개시되는 세포의 특정 수의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나, 일부 상황에서, 용량은 3 일 이하, 예를 들어 3 일 동안 또는 2 일 동안 하루에 한번에 걸쳐 다중 주사 또는 주입으로, 또는 단일 기간에 걸쳐 다중 주입에 의해 투여된다.
따라서, 일부 측면에서, 용량의 세포는 단일 약학적 조성물에서 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 세포는 용량의 세포를 총괄적으로 함유하는, 복수의 조성물에서 투여된다.
일부 구현예에서, 용어 "분할 용량"은 1 일 초과에 걸쳐 투여되도록 분할된 용량을 가리킨다. 용량의 이러한 타입은 본 방법에 포함되고 단일 용량으로 간주된다.
따라서, 세포의 용량은 분할 용량, 예를 들어 시간에 걸쳐 투여되는 분할 용량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 용량은 2 일에 걸쳐 또는 3 일에 걸쳐 대상체에 투여될 수있다. 분할 투여를 위한 예시적인 방법은 첫째날에 용량의 25%를 투여하고 둘째날에 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 용량의 33%는 첫째날에 투여될 수 있고 나머지 67%는 둘째날에 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 용량의 10%는 첫째날에 투여되고, 용량의 30%는 둘째 날에 투여되고, 용량의 60%는 셋째날에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 용량은 3 일 초과에 걸쳐 퍼지지 않는다.
일부 구현예에서, 용량의 세포는 용량의 일부 세포를 각각 함유하는, 선택적으로 보다 많은, 제 1 및 제 2와 같은, 복수의 조성물 또는 용액의 투여에 의해 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 상이한 집단 및/또는 세포의 서브-타입을 각각 함유하는, 복수의 조성물은 선택적으로, 특정 기간 내에, 별도로 또는 독립적으로 투여된다. 예를 들어 세포의 집단 또는 서브-타입은 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포, 및/또는 각각 CD8+ 및 CD4+ 농축된 집단, 예를 들어 재조합 수용체를 발현시키기 위해 유전자 조작된 세포를 각각 개별적으로 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 용량의 투여는 CD8+ T 세포의 용량 또는 CD4+ T 세포의 용량을 포함하는 제 1 조성물의 투여 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 다른 용량을 포함하는 제 2 조성물의 투여를 포함한다.
일부 구현예에 있어서, 조성물 또는 용량의 투여, 예를 들어 복수의 세포 조성물의 투여는 별도로 세포 조성물의 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 별도 투여는 임의의 순서로, 동시에, 또는 순차적으로 수행된다. 특정 구현예에서, 상기 별도의 투여는 CD8+ T 세포의 용량 또는 CD4+ T 세포의 용량을 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 다른 용량을 포함하는 제 2 조성물을 임의의 순서로 투여함으로써 순차적으로 수행된다. 일부 구현예에서, 용량은 제 1 조성물 및 제 2 조성물을 포함하고, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 각각 48시간 이내에, 예를 들어 각각 36시간 이하의 시간 또는 각각 24시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 0 내지 12 시간 간격, 0 내지 6 시간 간격 또는 0 내지 2 시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여의 개시 및 제 2 조성물의 투여의 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제 2 조성물의 투여 완료 및/또는 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다.
일부 구현예에서, 제 1 조성물, 예를 들어 용량의 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제 1 조성물, 예를 들어 용량의 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물은 제 2 조성물 이전에 투여된다. 특정 구현예에서, 상기 CD8+ T 세포는 상기 CD4+ T 세포 전에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포의 용량 또는 조성물은 재조합 수용체(예를 들어 CAR)를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체(예를 들어 CAR)를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 정의된 또는 표적 비를 포함하고, 이러한 비는 선택적으로, 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1, 예를 들어 약 1:1이다. 일부 측면에서, 상이한 세포 집단의 표적 또는 원하는 비(예를 들어 CD4+:CD8+ 비 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비, 예를 들어 1:1)로 조성물 또는 용량의 투여는 하나의 집단을 함유하는 세포 조성물의 투여 후 다른 집단을 포함하는 별도 세포 조성물의 투여를 포함하고, 여기서, 투여는 표적 또는 원하는 비로 또는 약 표적 또는 원하는 비로 있다. 일부 측면에서, 한정된 비율로 세포의 용량 또는 조성물의 투여는 T 세포 치료의 증폭, 지속성 및/또는 항종양 활성을 개선시킨다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 CD4+ CAR+ 생존가능한 세포 및 (약) 2.5×107 개의 CD8+CAR+ 생존가능한 세포를 포함하는, (약) 5×107 개의 CD3+ CAR+ 생존가능한 세포이다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 CD4+ CAR+ 생존가능한 세포 및 (약) 5×107 개의 CD8+CAR+ 생존가능한 세포를 포함하는, (약) 1×108 개의 CD3+ CAR+ 생존가능한 세포이다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 0.75×108 개의 CD4+ CAR+ 생존가능한 세포 및 (약) 0.75×108 개의 CD8+CAR+ 생존가능한 세포를 포함하는, (약) 1.5×108 개의 CD3+ CAR+ 생존가능한 세포이다.
일부 구현예에서, 대상체는 세포의 다중 용량, 예를 들어 2 회 이상 용량 또는 다중 연속 용량을 받는다. 일부 구현예에서, 2 가지 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 제 1 용량 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일 후 투여되는, 연속 용량, 예를 들어 제 2 용량을 받는다. 일부 구현예에서, 다중 연속 용량은 추가 용량 또는 용량이 연속 용량의 투여 후 투여되도록, 제 1 용량 후에 투여된다. 일부 측면에서, 추가 용량으로 대상체에 투여되는 세포의 수는 제 1 용량 및/또는 연속 용량과 동일하거나 유사하다. 일부 구현예에서, 추가 용량 또는 용량들은 이전 용량 보다 더 크다.
일부 측면에서, 제 1 및/또는 연속 용량의 크기는 이전 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 정도, 범위, 또는 전이의 타입, 단계와 같은 대상체에서 질환 부담, 및/또는 독성 결과를 발생시키는 대상체의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응과 같은, 하나 이상의 기준에 기반하여 결정된다.
일부 측면에서, 제 1 용량의 투여 및 연속 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35 일, 약 14 내지 약 28 일, 또는 15 내지 27 일이다. 일부 구현예에서, 연속 용량의 투여는 제 1 용량의 투여 후 약 14 일 초과 및 약 28 일 미만의 시점에 있다. 일부 측면에서, 제 1및 연속 용량 사이의 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가 용량 또는 용량들, 예를 들어 연속 용량은 연속 용량의 투여 후 투여된다. 일부 측면에서, 추가 연속 용량 또는 용량들은 이전 용량의 투여 후 적어도 약 14 일 및 약 28 일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 용량은 이전 용량 후 약 14 일 미만, 예를 들어 이전 용량 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13 일에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량은 이전 용량 후 약 14 일 미만으로 투여되지 않고 및/또는 용량은 이전 용량 후 약 28 일 초과로 투여되지 않는다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포의 용량은 T 세포의 제 1 용량 및 T 세포의 연속 용량을 포함하는 2 가지 용량(예를 들어 이중 용량)을 포함하고, 여기서 제 1 용량 및 제 2 용량 중 하나 또는 둘다는 T 세포의 분할 용량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 질환 부담을 감소시키는데 효과적일 정도로 충분히 일반적으로 크다.
일부 구현예에서, 세포는 원하는 용량으로 투여되는데, 이는 일부 측면에서 세포 또는 세포 타입(들)의 원하는 용량 또는 수 세포 타입(들)의 원하는 비를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서 세포의 용량은 세포의 총 수(또는 체중 kg 당 수) 및 개별 집단 또는 서브-타입의 원하는 비, 예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비를 기반으로 한다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 개별 집단 또는 개별 세포 타입에서 세포의 원하는 총 수(또는 체중 kg 당 수)를 기반으로 한다. 일부 구현예에서, 투여 량은 개별 집단에서 총 세포의 원하는 수, 원하는 비, 및 세포의 원하는 총 수와 같은, 그러한 특징의 조합에 기반한다.
일부 구현예에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 서브-타입은 T 세포의 원하는 용량과 같은, 총 세포의 원하는 용량의 허용된 차이로 또는 그의 내에 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 세포의 원하는 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중의 단위 당 세포의 원하는 수, 예를 들어 cells/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 최소 세포수 또는 체중의 단위 당 세포의 최소 수이거나 그 이상이다. 일부 측면에서, 원하는 용량으로 투여된 총 세포 중에서, 개별 집단 또는 서브-타입은 원하는 산출 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비), 예를 들어 그러한 비의 특정 허용된 차이 또는 오차 범위 내에 있거나 그 근처이다.
일부 구현예에서, 세포는 CD4+ 세포의 원하는 용량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 용량과 같은, 세포의 하나 이상의 개별 집단 또는 서브-타입의 원하는 용량의 허용된 차이에서 또는 그 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 서브-타입 또는 집단의 세포의 원하는 수, 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중의 단위당 그러한 세포의 원하는 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 집단 또는 서브-타입의 세포의 최소 수 또는 체중의 단위 당 집단 또는 서브-타입의 세포의 최소 수이거나 그 이상이다.
따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 총 세포의 원하는 고정된 용량 및 원하는 비에 기반하고, 및/또는 하나 이상, 예를 들어 개별 서브-타입 또는 서브-집단 각각의 원하는 고정된 용량에 기반한다. 따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 T 세포의 원하는 고정된 또는 최소 투여 및 CD4+ 대 CD8+ 세포의 원하는 비에 기반하고, 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정된 또는 최소 투여에 기반한다.
일부 구현예에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 서브-타입, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ T 세포 또는 서브-타입의 원하는 산출 비의 허용 범위 내에서 또는 그 범위 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비는 특정 비일 수 있거나 비의 범위일 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 원하는 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비)는 (약) 1:5 내지 (약) 5:1(또는 (약) 1:5 초과 및 (약) 5:1 미만)이고, 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1(또는 (약) 1:3 초과 및 (약) 3:1 미만), 예를 들어 (약) 2:1 내지 (약) 1:5(또는 (약) 1:5 초과 및 (약) 2:1 미만), 예를 들어 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5, 또는 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 허용되는 차이는 원하는 비의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% 이내이고, 이들 범위 사이의 임의의 값을 포함한다.
특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포의 수를 가리킨다. 다른 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여되는 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 수 또는 농도를 가리킨다.
일부 측면에서, 용량의 크기는 이전 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 정도, 범위, 또는 전이의 타입, 단계와 같은 대상체에서 질환 부담, 및/또는 독성 결과를 발생시키는 대상체의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응과 같은, 하나 이상의 기준에 기반하여 결정된다.
일부 구현예에서, 또한, 방법은 키메릭 항원 수용체(CAR) 및/또는 림프구 마비 치료를 발현하는 하나 이상의 추가 용량의 세포를 투여하는 단계를 포함하고 /하거나 상기 방법의 하나 이상의 단계가 반복된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 동일하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 상이하며, 예를 들어 초기 용량에 비해 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 이상 보다 높은 것과 같이, 보다 높거나, 예를 들어 초기 용량에 비해, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 이하 보다 낮은 것과 같이, 보다 낮다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량의 투여는 초기 치료 또는 임의이 이전 치료에 대한 대상체의 반응, 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 정도, 범위, 또는 전이의 타입, 단계와 같은 대상체에서 질환 부담, 및/또는 독성 결과를 발생시키는 대상체의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기반하여 결정된다.
C. 반응, 효능 및 생존
일부 구현예에서, 상기 투여는 대상체가 또다른 요법에 내성임에도 불구하고 상기 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 치료된 대상체의 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 관해(; CR)를 달성하고/하거나; 본 발명에 따라 치료된 대상체의 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60% 또는 적어도 약 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 50%, 대상체의 적어도 (약) 60%, 대상체의 적어도 (약) 70%, 대상체의 적어도 (약) 80% 또는 대상체의 적어도 (약) 90%는 CR을 나타내거/내거나 객관적 반응(OR)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 효과적인 치료를 위해 평가된 기준은 총괄 반응속도(overall response rate; ORR; 일부 경우에 '객관적 반응 속도'라고도 알려짐), 완전 반응(complete response; CR; 일부 경우에 '완전 관해'라고도 알려짐), 반응 기간(duration of response; DOR), 증식-부재 생존율(progression-free survival; PFS), 및/또는 총괄 생존율(overall survival; OS)을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공되는 방법에 따라 치료되는 대상체의 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 관해(CR; 일부 경우에 '완전 반응'이라고도 함)를 달성하고, (약) 3 개월, 6 개월 또는 12 개월 또는 13 개월 이상 또는 대략 14 개월의 무진행 생존(PFS) 및/또는 전체 생존(OS)을 나타내고; 평균적으로, 상기 방법에 따라 치료되는 대상체는 (약) 6 개월, 12 개월, 또는 18개월의 중간 PFS 또는 OS를 나타내고; 및/또는 대상체는 요법 이후 적어도 (약) 6, 12, 18 개월 이상 또는 그 초과 동안 PFS 또는 OS를 나타낸다.
일부 측면에서, NHL을 갖는 대상체과 같은 대상에서의 반응률은 루가노 기준(Lugano criteria)[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등의, (2015) Radiology 2:323-338」; 「Cheson et al., B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5」 참조]에 기초한다. 일부 측면에서, 반응 평가는 임의의 임상, 혈액학적 및/또는 분자 방법을 이용한다. 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 양전자 방출 단층 촬영(PET)-컴퓨터 단층 촬영(CT) 및/또는 CT의 적절한 사용을 포함한다. PET-CT 평가는 FDG-avid 림프종에 대한 플루오로데옥시글루코스(FDG)의 사용을 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, PET-CT가 FDG-avid 조직학에서 반응을 평가하기 위해 사용될 경우, 5-포인트 척도가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 5-포인트 척도는 다음 기준으로 구성된다: 1, 배경 위의 흡수 없음; 2, 흡수≤종격(mediastinum); 3, 흡수> 종격(mediastinum) 그러나 ≤리버(liver); 4, 적당한 흡수> 리버(liver); 5, 리버(liver) 및/또는 새로운 병변보다 현저히 높은 흡수; X, 새로운 흡수 영역이 림프종과 관련이 없음.
일부 측면에서, 기술 된바와 같이 루가노 기준을 사용한 완전 반응은 완전한 대사 반응 및 다양한 측정 가능한 부위에서의 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, 여기서 PET-CT가 사용될 때 CR은 5-포인트 척도에서 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기술된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 높거나 비장 또는 골수 내에서 활성화되는(예를 들어 화학 요법 또는 골수성 콜로니-자극 인자를 갖는) Waldeyer의 고리 또는 림프절 부위에서, 흡수는 정상적인 종격동 및/또는 리버(liver)보다 클 수 있다. 이러한 상황에서, 조직이 높은 생리학적 흡수를 갖더라도 초기 관여 부위에서의 흡수가 정상 조직을 둘러싸는 것보다 크지 않으면 완전한 대사 반응이 추론될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 CR은 질환의 림프절 외 부위가 없고, 표적 노드/결절 덩어리는 병변의 가장 긴 횡 직경(LDi)에서 1.5cm 이하로 회귀해야한다. 추가 평가 부위에는 골수가 포함되며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 골수에서 FDG-avid 질환의 증거가 부족하다는 것을 나타내고, CT 기반 평가는 정상적인 형태를 나타내어야하며, 결정되지 않은 경우 IHC 음성이어야 한다. 추가 부위에는 장기 확대 평가가 포함될 수 있으며 이는 정상으로 회귀해야 한다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, CR의 경우에는 없어야 한다[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등의, (2015) Radiology 2:323-338」; 「Cheson et al., B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5」 참조].
일부 측면에서, 기술된 바와 같이 루가노 기준을 사용한 부분 반응(PR; 일부 경우에 '부분 관해'라고도 함)은 다양한 측정 가능한 부위에서의 부분 대사 및/또는 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, 여기서 PET-CT가 사용될 때 PR은 임의의 크기의 기준선 및 잔류 질량(들)과 비교하여 흡수가 감소된 4 또는 5의 점수로 기술된다. 중간에, 그러한 발견은 반응하는 질환을 나타낼 수 있다. 치료가 끝날때 그러한 발견은 잔류 질환을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6 개의 대상 측정 가능 노드 및 림프종 부위의 SPD가 ≥0%로 감소한 것으로 기술된다. CT에서 측정하기에 병변이 너무 작은 경우 5 mm×5 mm가 기본값으로 할당되며; 병변이 더 이상 보이지 않으면 상기 값은 0 mm×0 mm이고; 5mm×5mm보다 크지만 정상보다 작은 노드의 경우 실제 측정 값이 계산에 사용된다. 추가적인 평가 부위는 골수를 포함하는데, 여기서 PET-CT 기반 평가는 정상 골수에서의 흡수보다 잔류 흡수가 높다는 것을 나타내야하지만, 기준선과 비교하여 감소된 잔류 흡수를 나타내어야한다(화학 요법의 허용되는 반응성 변화와 호환되는 확산 흡수). 일부 측면에서, 결절 반응(nodal response)과 관련하여 골수에서 지속적인 초점 변화가있는 경우, MRI 또는 생검 또는 간격 스캔(interval scan)에 의한 추가 평가를 고려해야 한다. 일부 측면에서, 추가 부위는 장기 비대 평가를 포함할 수 있으며, 비장은 정상을 초과하여 >50% 길이로 회귀해야한다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되는데, 이는 PR의 경우 부재/정상, 퇴행하지만 증가하지 않아야한다. PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 사용하여 반응/안정적인 질환(SD) 또는 진행성 질환(PD)을 측정할 수 없다[ 문헌 「Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al, (2015) 방사선과 2:323-338」; 「Cheson et al., B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5」 참조].
상기 연구는 헬싱키 선언, 조화 우수 임상 관리 지침에 관한 국제 컨퍼런스(International Conference on Harmonisation Good Clinical Practice guidelines) 및 해당 규제 요건에 따라 수행되었다.
일부 측면에서, 무진행 생존(PFS)은 암과 같은 질환의 치료 동안 및 이후에 대상체가 질환과 함께 살지만 악화되지 않는 시간의 길이로 기술된다. 일부 측면에서, 객관적 반응(OR)은 측정 가능한 반응으로 기술된다. 일부 측면에서, 객관적 반응률(ORR; 일부 경우에 '총괄 반응 속도'라고도 알려짐)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 비율로 기술된다. 일부 측면에서, 전체 생존(OS)은 진단 날짜 또는 질환, 예를 들어 암의 치료 시작 날짜부터 질환으로 진단된 대상체가 여전히 살아있는 시간의 길이로 기술된다. 일부 측면에서, 무 사건 생존(EFS)은 암 치료 후, 치료가 예방 또는 지연을 의도한 특정 합병증 또는 사건이없는 병태로 대상체가 지속되는 시간의 길이로 기술된다. 이러한 사건에는 암으로의 복귀 또는 뼈로 퍼진 암으로 인한 뼈 통증 또는 사망과 같은 특정 증후의 발병이 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 반응 지속 시간의 측정(DOR)은 종양 반응의 기록부터 질환 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하기위한 파라미터는 지속적인 반응, 예를 들어 요법 개시로부터 일정 시간 후에 지속되는 반응을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응은 요법 개시 후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24 개월에서의 반응률에 의해 지시된다. 일부 구현예에서, 반응은 3 개월 초과 또는 6 개월 초과 동안 지속된다.
일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용되며; 일부 측면에서, 고형 종양에서 사용된다[문헌 「Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.」 참조]. 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 일부 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소멸 및 임의의 병리적 림프절(표적 또는 비-표적 여부)이 짧은 축에서 <10 mm로 감소되어야하는 것으로 기술된다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분 반응은, 기준선 합직경을 기준으로하여, 표적 병변 직경의 합에서 적어도 30% 이상 감소한 것으로 기술된다. 다른 측면에서, 진행성 질환(PD)은 연구에서 가장 작은 합계(이는 연구에서 가장 작은 경우 기준 합계를 포함 함)를 고려하여 표적 병변의 직경의 합계에서 적어도 20% 증가한 것으로 기술된다. 20%의 상대적 증가에 더하여, 상기 합은 또한 적어도 5mm 이상의 절대 증가를 보여 주어야한다(일부 측면에서 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주 됨). 다른 측면에서, 안정적인 질환(SD)은 연구 중에 가장 작은 합 직경을 기준으로하여, PR 자격을 갖추기에 충분한 축소 또는 PD 자격을 갖추기에 충분한 증가로 설명되지 않는다.
일부 구현예에서, 여포성 림프종(FL)이 있는 대상체에서의 생존율은 일반적으로 상기 기재된 바와 같이 이탈리아 림프종 그룹(ILI) 및/또는 국제 여포성 림프종 예후 인자 프로젝트(the International Follicular Lymphoma Prognostic Factor Project; IFLPFP)에 의해 개발된 스코어링 시스템에 기초한다[문헌 「Luminari et al., (2012) Rev. Brad. Hematol. Hemoter., 34:54-59」 참조]. 일부 구현예에서, FL과 같은 질환의 정도는 일반적으로 위에서 설명한 바와 같이 앤아버 병기 결정 시스템, 종양 부담, 벌키한 질환, 결절 또는 결절외 질환 부위의 수, 및/또는 골수 침범에 의해 평가될 수 있다.
일부 측면에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 투여는 일반적으로 대상체에서 질환 또는 병태의 확장 또는 부담을 감소시키거나 방지한다. 예를 들어 질환 또는 병태가 종양인 경우, 상기 방법은 일반적으로 골수 또는 분자적으로 검출 가능한 암에서 종양 크기, 용량(volume), 전이, 블라스트의 비율을 감소시키고/시키거나 종양 부담과 관련된 예후 또는 생존 또는 다른 증후을 개선시킨다.
질환 부담은 대상체 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액, 예를 들어 종양의 기관 또는 조직 또는 예를 들어 전이를 나타내는 다른 위치에서 질환의 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어 종양 세포는 특정 혈액 악성 종양의 맥락에서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량될 수 있다. 질환 부하는 일부 구현예에서, 종양의 질량, 전이의 수 또는 정도 및/또는 골수에 존재하는 블라스트 세포의 백분율을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 갖는다. 질환 부담의 정도는 혈액 또는 골수에서 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다.
일부 측면에서, CLL을 갖는 대상체와 같은 대상체에서의 반응률은 만성 림프구성 백혈병에 관한 국제 워크숍(IWCLL) 반응 기준에 기초한다(Hallek, 등의., Blood 2008, Jun 15; 111 (12) : 5446- 5456). 일부 측면에서, 이러한 기준은 다음과 같이 기술된다: 일부 측면에서, 면역 표현형에 의한 말초 혈액 클론 림프구의 부재, 임파선염의 부재, 간 비대 또는 비장 비대증의 부재, 전신 증후(constitutional symptoms)의 부재 및 만족스러운 혈구 수를 필요로하는 완전 관해(CR; 일부 경우에 '완전 반응'으로도 알려짐); 불완전한 골수 회복(CRi)으로 완전 관해, 일부 측면에서 상기 CR로 설명되어 있지만 정상적인 혈구 수는 없음; 일부 측면에서 말초 혈액 카운트의 개선과 함께 림프구 수에서 ≥ 50% 감소, 림프절 병증에서 ≥ 50% 감소 또는 간 또는 비장에서의 ≥ 50% 감소로 설명되는 부분 완화(PR; 일부 경우에 '부분 반응'으로도 알려짐); 일부 측면에서 림프구 수의 > 5 x109/L로의 ≥ 50% 증가, 림프절 병증의 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기의 ≥ 50% 증가, CLL로 인한 리히터의 변형 또는 새로운 세포질로 설명되는 진행성 질환(PD); 및 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족시키지 않는 것으로 기술된 안정적인 질환.
일부 구현예에서, 대상체는 세포 용량의 투여 1 개월 이내에 대상체의 림프절의 크기가 약 20mm 이하, 크기가 약 10mm 이하 또는 크기가 약 10 mm 이하인 경우 CR 또는 OR을 나타낸다.
일부 구현예에서, CLL의 인덱스 클론은 대상체의 골수에서(또는 방법에 따라 치료 된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 인덱스 클론은 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 인덱스 클론은 세포의 투여 후 적어도 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월 또는 그 시점에 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 예를 들어 광 현미경에 의해 검출된 골수에서 10% 이상의 블라스트, 골수에서 20% 이상의 블라스트, 골수에서 30% 이상의 블라스트, 골수에서 40% 이상 또는 골수에서 50% 이상의 블라스트와 같이, 골수에서 5% 이상의 블라스트가 있는 경우 대상체가 형태학적 질환을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 블라스트가 있는 경우 대상체는 완전 또는 임상 완화를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 림프종을 갖는다. 질환 부담의 정도는 혈액 또는 골수 중의 잔여 백혈병(leukemia)의 분석에 의해서 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 예를들어, 광 현미경에 의해 검출된 골수에서 10% 이상의 블라스트, 골수에서 20% 이상의 블라스트, 골수에서 30% 이상의 블라스트, 골수에서 40% 이상 또는 골수에서 50% 이상의 블라스트와 같이, 골수에서 5% 이상의 블라스트가 있는 경우 대상체가 형태학적 질환을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5 % 미만의 블라스트가있는 경우 대상체는 완전 또는 임상 완화를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 완전한 완화를 나타낼 수 있지만, (광 현미경 기술에 의해) 형태적으로 검출할 수 없는 소량의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 블라스트를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우, 대상체는 최소 잔류 질환(MRD)을 나타낸다고 한다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 적은 수의 세포의 민감한 검출을 가능하게하는 임의의 다양한 분자 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 기술은 염색체 전위에 의해 생성된 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전 사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 암 세포를 식별하기 위해 유동 세포 측정법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암의 분자 검출은 100,000 개의 정상 세포에서 최소 1 개의 백혈병 세포를 검출 할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 100,000 개 세포 중 1 개 이상의 백혈병 세포가, 예를 들어 PCR 또는 유세포 분석에 의해 검출되는 경우 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질환 부담은 분자적으로 검출 불가능하거나 MRD-이므로, 일부 경우에, PCR 또는 유세포 분석 기술을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포를 검출할 수 없다.
일부 구현예에서, 상기 백혈병, 예를 들어 CLL의 지표 클론은 대상체의 골수(또는 본 방법에 따라 치료된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상을 초과한 골수)에서 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 백혈병, 예를 들어 CLL의 지표 클론은 IGH 심층 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지표 클론은 세포의 투여 후 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 또는 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 이상의 시기에 검출되지 않는다.
일부 측면에서, MRD는 유세포 분석에 의해 검출된다. 유세포 분석을 사용하여 암세포에 대한 골수 및 말초 혈액 샘플을 모니터링할 수 있다. 특정 측면에서, 유세포 분석은 골수에서 암세포의 존재를 감지하거나 모니터링하는 데 사용된다. 일부 측면에서, 유세포 분석에 의한 다중 파라미터 면역학적 검출은 암세포를 검출하는 데 사용된다 (예를들어, Coustan-Smith 등, (1998) Lancet 351:550-554 참조한다.). 일부 측면에서, 질량 세포계측법에 의한 다중 파라미터 면역학적 검출은 암세포를 검출하는 데 사용된다. 일부 예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 파라미터는 암세포를 탐지하는 데 사용된다. 검출에 사용되는 항원은 검출되는 암에 따라 선택된다 (Foon and Todd (1986) Blood 68:1-31).
일부 예에서, 골수는 골수 흡인물 또는 골수 생검에 의해 수확되고, 림프구는 분석을 위해 분리된다. 형광색소(예: 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 피코에리트린, 페리디닌 클로로필 단백질 또는 비오틴)에 접합된 단일클론 및/또는 다중클론 항체를 사용하여 분리된 림프구에서 말단 데옥시뉴클레오티딜 전이효소(TdT), CD3, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD33, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD34, CD45, CD56, CD79b, IgM, 및/또는 KORSA3544 와 같은 에피토프를 검출할 수 있다. 그런 다음 다중 에피토프를 감지하기 위해 다중 파라미터 유세포 분석 또는 질량 세포 분석과 같은 유세포 분석을 사용하여 표지된 세포를 감지할 수 있다.
림프 세포는 광산란 점 플롯을 기반으로 식별 및 게이팅된 다음, 관심 면역표현형 특징을 발현하는 세포 집단을 식별하기 위해 이차적으로 게이팅될 수 있다. 예시적인 에피토프는 하기 표 2에 제시되어 있다. 백혈병 및 림프종의 다른 면역학적 분류는 문헌 「Foon and Todd (Blood (1986) 68(1): 1-31)」에 의해서 제공된다. 일부 측면에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 ALL 또는 NHL 표현형을 보유하는 살아있는 림프구를 정량화함으로써 달성될 수 있다. 일부 측면에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 CLL 면역표현형(예: 낮은 전방/측면 산란; CD3neg; CD5+; CD14neg; CD19+; CD23+; CD45+; CD56neg)을 보유하는 살아있는 림프구를 정량화하여 달성될 수 있다.
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일부 측면에서, 수확된 B 세포의 면역글로불린 중쇄(IGH) 유전자좌의 딥 시퀀싱을 사용하여 최소 잔류 질병(MRD)을 검출할 수 있다. 특정 IgG 재배열의 클론 존재는 CLL 또는 NHL과 같은 B 세포 악성종양의 존재 및/또는 이의 악성 세포의 잔류 존재를 검출하는 표지자를 제공할 수 있다. 일부 측면에서, B 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 집단과 같은 세포를 채취하고 혈액으로부터 단리한다. 일부 측면에서, 세포는 골수로부터, 예를 들어 골수 흡인물 또는 골수 생검으로부터 및/또는 다른 생물학적 샘플로부터 수확되고 단리된다. 일부 측면에서, 상보성 결정 영역 3(CDR3)의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 증폭은, 최소 잔류 질병을 평가할 목적으로 세포의 클론 집단을 식별하는 데 사용할 수 있는 유전자 좌위의 V 및 J 영역 내에서 고도로 보존된 서열에 대한 프라이머를 사용하여 달성된다. 특정 계통의 세포 수에 관한 정보를 제공하고/하거나 클론 집단과 같은 이의 결합 부위 또는 가변 중쇄와 같은 특정 가변 사슬을 발현하는 것을 포함하는 단일 세포 시퀀싱 접근법과 같은 클론 집단을 검출하기 위한 다른 방법이 사용될 수 있다. 일부 측면에서, IGH DNA는 IGH 서열의 공통 V 및 퇴행 공통 J 영역을 인식하는 것과 같은 상이한 세포 클론 간에 공유되는 가변 사슬의 영역을 인식하는 퇴화 프라이머 또는 프라이머를 사용하여 증폭된다. V 영역의 예시적인 서열은 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT (서열번호 57)이다. J 영역의 예시적인 퇴화 공통서열은 ACCTGAGGAGACGGTGACC(서열번호 58)이다.
일부 측면에서 PCR 산물 또는 시퀀싱 결과는 재배열된 대립유전자에 특이적이며 MRD 검출을 위한 클론 표지자 역할을 한다. CDR3 영역의 PCR 증폭 후, PCR 산물은 CAR-T 세포 요법(예컨대, CD19 CAR-T 세포 요법)으로 B 세포 악성 종양을 치료한 후 MRD의 민감한 검출을 위한 대립유전자 특이적 PCR을 위한 프로브로 구성된 환자 특이적 올리고뉴클레오티드를 생성하도록 시퀀싱될 수 있다. 공통 프라이머를 사용하여 PCR 산물이 생성되지 않는 예에서 프레임워크 영역 1에 대한 V 영역 패밀리 특이적 프라이머가 대신 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 치료 후 NHL 또는 CLL과 같은 B 세포 악성 종양의 세포, 예를 들어 악성 또는 클론 IGH 서열에 상응하는 검출 가능한 IGH 서열과 같은 PCR-검출 가능한 종양 세포의 지속성은 재발 위험 증가와 관련이 있다. 일부 측면에서, 치료 후 악성 IGH 서열에 대해 음성인 환자(일부 측면에서, 진행성 질환을 나타내는 다른 기준의 맥락에서 또는 림프절 비대의 지속 또는 일부 맥락에서 질병 또는 완전한 반응의 부족과 관련될 수 있는 기타 기준과 같은 부분적 반응만을 나타내는 경우에도)는 지속적인 악성 IGH 서열을 가진 환자와 비교하여 PFS의 가능성이 증가하거나 CR 또는 지속성 CR로 진입하거나 생존 기간이 연장되는 것으로 간주될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 예후 및 병기 결정은 예를 들어 림프절 크기 또는 기타 병기 기준과 같은 다른 임상 증후의 해결과 비교하여 요법 투여 후 단기간 내에 악성 세포의 제거가 관찰되는 치료에 특히 관련이 있다. 예를 들어, 일부 그러한 측면에서, 골수와 같은 샘플에서 검출 가능한 IGH의 부재 또는 최소 잔류 질병은 다른 이용 가능한 병기결정 또는 예후 접근법과 비교하여 반응 또는 반응 가능성 또는 그의 지속성에 대한 바람직한 판독일 수 있다. 일부 측면에서, MRD의 결과(예: IGH 딥 시퀀싱 정보)는 추가 개입 또는 이의 부족을 알릴 수 있다. 예를 들어, 일부 상황에서 방법 및 기타 제공된 실시예는 악성 IGH에 대해 음성으로 간주되는 대상체는 일부 측면에서 추가 치료를 받지 않거나 제공된 요법의 용량을 추가로 투여받지 않을 수 있거나 대상체에게 더 낮거나 감소된 용량을 투여할 수 있음을 제공한다. 역으로, IGH 딥 시퀀싱을 통해 MRD를 나타내는 대상체가 추가 치료, 예를 들어 초기에 유사하거나 더 높은 용량으로 투여된 요법 또는 추가 치료로 제공되거나 명시될 수 있다. 일부 측면에서, 첫 번째 용량의 투여 후 질병 또는 상태가 지속되고/하거나 첫 번째 용량의 투여가 대상에서 질병 또는 상태를 근절하기에 충분하지 않다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 질환 또는 병태의 부담, 예를 들어 종양 세포 수, 종양 크기, 환자 생존 기간 또는 무-생존 생존 기간을, 대상체가 하나 이상의 대안적인 치료제를 받는 것과 같은 것 및/또는 대상체가 세포 및/또는 제공된 방법에 따른 림프구 보충제 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물의 용량을 받지 않는 것과 같이 대안적인 투약 요법을 사용하는 유사한 방법으로 관찰되는 감소와 비교하여, 더 큰 정도로 및/또는 더 큰 시간 동안 감소시킨다. 일부 구현예에서, 대상체에서의 질환 또는 병태의 부담이 검출, 평가 또는 측정된다. 질환 부담은 일부 측면에서 대상체 또는 기관 또는 조직 또는 혈액 또는 혈청과 같은 대상체의 체액에서 질환 또는 질환-관련 세포, 예를 들어 종양세포의 총 수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 측면에서, 대상의 생존, 특정 기간 내의 생존, 생존의 정도, 무-사건 또는 증후이없는 생존의 존재 또는 지속 기간, 또는 무-재발 생존이 평가된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태의 임의의 증후이 평가된다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태 부담의 척도가 명시된다.
일부 구현예에서, 대상체의 무 사건 생존률 또는 전체 생존율은, 다른 방법 예를 들어 대상이 하나 이상의 대안적인 치료제를 받는 방법 및/또는 대상체가 용량의 세포, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물에 따른 림프구 보충제를 받지 않는 것과 비교하여 상기 방법으로 개선된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 투여 후 6 개월에 상기 방법으로 치료된 대상체에 대한 무 사건 생존율 또는 확률은, 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과이다. 일부 측면에서, 전체 생존율은 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과이다. 일부 구현예에서, 상기 방법으로 치료된 대상체는 무-사건 생존, 무-재발 생존 또는 적어도 6 개월 이상, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 년 이상의 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 진행 시간은 예를 들어 약 6 개월 이상 또는 적어도 11, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 년의 진행 시간과 같이 개선된다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 의한 치료 후, 재발 가능성은 다른 방법, 예를 들어 대상체가 하나 이상의 대안적인 치료제를 투여받는 방법 및/또는 대상체가 용량의 세포 및/또는 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 림프구 보충제를 받지 않는 방법과 비교하여 감소된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 제1 용량 후 6 개월에서의 재발 확률은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만 보다 적다.
일부 경우에, 투여된 세포, 예를 들어 입양적으로 전달된 세포의 약동학은 가용성, 예를 들어 투여된 세포의 생체 이용률을 평가하기 위해 결정된다. 입양적으로 전달된 세포의 약동학을 결정하는 방법은 조작된 세포가 투여된 대상체로부터 말초 혈액을 채취하고, 말초 혈액에서 조작된 세포의 수 또는 비율을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 세포를 선택 및/또는 분리하기 위한 접근법은 키메라 항원 수용체(CAR)-특이적 항체(예를 들어 문헌 「Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38」 참조) 단백질 L(문헌 「Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29」 참조), Strep-Tag 서열과 같은 에피토프 태그를 CAR의 특정 부위에 직접 도입하여 Strep-Tag에 대한 결합 시약은 CAR 폴리펩티드(국제공개공보 제WO2014/190273호 참조)에 특이적으로 결합하는 CAR(문헌 「Liu et al. (2016) Nature Biotechnology, 34:430」; 국제공개공보 제WO2015/095895호 참조) 및 모노클로날 항체를 직접 평가하는데 사용되도록 하는 것을 포함할 수 있다. 외인성 마커 유전자는 일부 경우, 조작된 세포 요법과 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 세포 자살을 촉진할 수도있다. 일부 경우 절단된 표피 성장 인자 수용체(EGFRt)는 형질 도입된 세포에서 관심 형질 전환 유전자(CAR 또는 TCR)와 공-발현 될 수 있다(예를 들어 미국특허 제8,802,374호 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®), 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체, 또는 EGFRt 작제물 및 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 다른 재조합 수용체로 조작된 세포를 식별 또는 선택하는데 사용될 수 있고/거나 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하는데 사용될 수 있는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있다. 미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu 등의, Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)를 참조한다.
일부 구현예에서, 환자로부터 수득된 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액에서 CAR+ T 세포의 수는 예를 들어 세포의 약동학을 결정하기 위해 세포 요법제의 투여 후, 일정 기간에 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 상기 방법에 의해 처리된 대부분의 대상체에서 검출 가능한 CAR+ T 세포, 선택적으로 CAR+ CD8+ T 세포 및/또는 CAR+ CD4+ T 세포의 수는, μL 당 1 세포 초과, μL 당 5 세포 초과 또는 μL 당 10 세포 초과이다.
D. 독성
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은, 예를 들어 대안의 세포 요법제, 예를 들어 대안의 CAR+ T 세포 조성물 및/또는 대안의 용량의 세포, 예를 들어 정의된 비율로 투여되지 않는 세포의 용량의 투여와 비교하여, 낮은 독성 비율 및/또는 낮은 독성 수준, 독성 결과 또는 병태, 독성-촉진 프로파일, 요인, 또는 성질, 예를 들어 사이토카인 방출 증후(CRS) 또는 신경독성(neurotoxicity; NT)과 관련되거나 이를 나타내는 병태 또는 결과를 초래하는 특징을 포함하도록 설계되거나 또는 그러한 특징을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 예를 들어 특정 다른 세포 요법제와 비교하여, 신경독성(NT), 사이토카인 방출 증후(CRS)과 같은 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나, 또는 독성 또는 독성 결과의 비율 또는 가능성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상의 적어도 (약) 섭씨 38도의 발열 및 적어도 (약) 20mg/dL의 CRP 혈장 수준의 위험을 야기하지 않거나, 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료되는 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상은 임의의 등급의 CRS 또는 임의의 등급의 신경독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 등급 2 이상의 사이토카인 방출 증후(CRS) 및/또는 등급 2 이상의 신경독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 중증 독성 결과(예를 들어 중증 CRS 또는 중증 신경독성)을 나타내지 않거나, 예를 들어 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않고 및/또는 중증 CRS를 나타내지 않거나, 또는 치료 후 특정 기간 내에, 예를 들어 세포의 투여 후 1주, 2주, 또는 1개월 이내에 이러한 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 독성을 결정하기 위해 평가되는 파라미터로는 부작용(AE), 복용량-제한 독성(DLT), CRS 및 NT를 포함한다.
키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 이용한 치료와 같은 입양 T 세포 요법제의 투여는 사이토카인 방출 증후 및 신경독성과 같은 독성 효과 또는 결과를 유도할 수 있다. 일부 구체예에서, 이러한 효과 또는 결과는 관찰된 독성의 기초가 되는 순환하는 사이토카인의 높은 수준과 유사하다.
일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후(CRS) 또는 중증 CRS(sCRS)이거나 이와 관련되거나 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어, sCRS은 일부 경우에 입양 T 세포 요법 및 다른 생물학적 생성물의 대상체에 투여 후 발생할 수 있다. 문헌 「Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014)」; 「Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013)」; 및 「Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78」을 참조한다.
전형적으로, CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵구 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 야기된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 다량의 염증 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 유발하고/하거나 내피 기관 손상을 유발하여 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사망을 초래할 수 있다. 중증의 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종성 혈관 내 응고를 유발할 수 있다. 생명을 위협하는 다른 심각한 중증에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 열, 특히 고열(≥38.5℃ 또는 ≥101.3°F)은 CRS와 관련이있다. 경우에 따라 CRS의 특징 또는 증후은 감염을 모방한다. 일부 구현예에서, CRS 증후을 나타내는 대상체에서 감염이 또한 고려되고, 배양물 별 모니터링 및 경험적 항생제 치료가 투여될 수 있다. CRS와 관련된 다른 증후으로는, 심장 기능 장애, 성인 호흡 곤란 증후군, 신부전 및/또는 간부전, 응고증, 파종 성 혈관 내 응고 및 모세관 누출 증후군이 있다.
CRS는 항-IL-6 요법, 예를 들어 항-IL-6 항체, 예를 들어 토실리주맙, 또는 항생제 또는 기재된 다른 제제와 같은 항-염증 요법을 사용하여 치료될 수 있다. CRS의 결과, 징후 및 증후은 공지되어 있으며 본원에 기재된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 특정 투여 요법 또는 투여가 주어진 CRS 관련 결과, 징후 또는 증후에 영향을 미치거나 영향을 미치지 않는 경우, 특정 결과, 징후 및 증후 및/또는 그 양 또는 정도가 특정될 수 있다.
CAR-발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 일반적으로 CAR을 발현하는 세포의 주입 후 6-20일에 발생한다. Xu 등의, Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다. 일부 경우에, CRS는 CAR T 세포 주입 후 6일 미만 또는 20일 초과 시에 발생한다. CRS의 발생 정도 및 시기는, 주입 시 기준선 사이토카인 수준 또는 종양 부담과 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 상승된 혈청 수준의 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α 및/또는 인터류킨(IL) -2를 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
CRS와 관련된 예시적인 결과는 열, 경직(rigors), 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 뇌병증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경계 합병증은 섬망, 발작과 유사한 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증 및/또는 둔화가 포함한다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애 및 신부전이 포함된다. 일부 측면에서, CRS는 혈청-페리틴, d-이량체, 아미노 트랜스퍼라제, 락테이트 데 하이드로게나제 및 트리글리세리드와 같은 하나 이상의 인자의 증가, 또는 저섬유소혈증 또는 간 비장 비대와 관련이 있다. CRS와 관련된 다른 예시적인 징후 또는 증후은 혈역학적 불안정, 열성 호중구 감소증, 혈청 C-반응성 단백질(CRP) 증가, 응고 파라미터(예를 들어 국제 표준화 비율(INR), 프로트롬빈 시간(PTI) 및/또는 피브리노겐)의 변화), 심장 및 기타 기관 기능의 변화, 및/또는 절대 호중구 수(ANC)를 포함한다.
일부 구현예에서, CRS와 관련된 결과에는 다음 중 하나 이상이 포함된다: 2일 이상, 예를 들어 3일 이상, 예를 들어 4일 이상 또는 적어도 연속 3일 이상 동안의 지속적인 열, 예를 들어 특정 온도, 예를 들어 약 섭씨 38도 이상의 열; 약 섭씨 38도 이상의 열; 둘 이상의 사이토카인(예를 들어, 인터페론 감마(IFNγ), GM -CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토카인 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNFα)로 이루어진 군 중에서 둘 이상)의 전처리 수준과 비교하여, 이러한 사이토카인 중 하나 이상의 예를 들어 적어도 또는 약 75의 최대 접힘 변화, 또는, 예를 들어 적어도 또는 약 250의 최대 접힘 변화와 같은 사이토카인의 상승; 및/또는 저혈압과 같은 독성의 하나 이상의 임상 징후(예를 들어, 적어도 하나의 정맥 혈압 조절기에 의해 측정된 바와 같이); 저산소증(예를 들어, 약 90% 이하의 혈장 산소(PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경계 장애(정신 병태 변화, 방해 및 발작 포함). 일부 구현예에서, 신경독성(NT)은 CRS와 동시에 관찰될 수 있다.
예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 다른 인자를 포함하는 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 하나 이상의 이러한 인자의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 T 세포와 상호 작용하는 세포, 예를 들어 선천성 면역 세포 또는 B 세포에 의한 것일 수 있다.
일부 구현예에서, CRS 관련 혈청 인자 또는 CRS 관련 결과는 인터페론 감마(IFN-γ), TNF-a, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 염증성 단백질(MIP)-1, 종양 괴사 인자 알파(TNFα), IL-6 및 IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프락토킨 및/또는 IL-5을 포함하는 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질(CRP)을 포함한다. CRS의 조기에 쉽게 측정할 수 있는 위험 인자일뿐 아니라 CRP는 세포 확장의 지표이기도하다. 일부 구현예에서, ≥15 mg/dL과 같은 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 나타내는 다른 인자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 치료 전, 동안 또는 후에 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인이 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극인자(GM-CSF), 또는 대식세포 염증성 단백질(MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 모니터링된다.
sCRS 발병 위험이 높은 환자를 예측하기 위해 CRS의 발병과 관련이있는 것으로 나타난 CRS 기준이 개발되었다(문헌 「Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25」 참조). 요소에는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증 유발 사이토카인의 혈청 수준 상승, 예를 들어 치료로 유발된 상승이 전처리 종양 부담 및 sCRS 증후과 상관 관계가 있는 7 가지 사이토카인 세트(IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalkine, 및 GM-CSF)가 포함된다. CRS의 진단 및 관리에 대한 다른 지침이 알려져 있다(예를 들어 문헌 「Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95」 참조). 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 3에 상세히 기재된 것들이다.
Figure pct00003
일부 측면에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 4에 상세히 기술된 기준이다.
Figure pct00004
일부 구현예에서, 고-용량 바소프레써(vasopressor) 요법제는 하기 표 5에 기술된 것들을 포함한다.
Figure pct00005
일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS(예를 들어 중등도 또는 경증 CRS)의 부재이다. 일부 구현예에서, 투여 후 대상체가 다음을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 그의 용량의 세포의 투여에 반응하여 또는 이차적으로 "중증 CRS"("sCRS")를 발생시키는 것으로 간주된다: (1) 적어도 3 일 동안 섭씨 38도 이상의 열; (2) 다음을 포함하는 사이토카인의 상승 (a) 투여 직후의 수준과 비교하여 다음 7 개의 사이토카인 그룹 중 2 개 이상에 대해 적어도 75 배 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토킨 및 IL-5 및/또는 (b) 투여 직후의 수준과 비교하여 다음 7 개의 사이토카인 그룹 중 하나 이상에 대해 적어도 250 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토킨 및 IL-5; 및 (c) 저혈압과 같은 독성의 적어도 하나의 임상 징후(적어도 하나의 정맥 혈관 압박기가 필요함) 또는 저산소증(PO2 <90%) 또는 하나 이상의 신경계 장애(들) (정신 병태 변화, 방해 및/또는 발작 포함). 일부 구현예에서, 중증 CRS는 표 3 또는 표 4에 제시된 바와 같이 등급이 3 이상인 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, 독성 결과의 수준, 예를 들어 CRS 관련 결과, 예를 들어 CRS 지표의 혈청 수준은 ELISA에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 발열 및/또는 C-반응성 단백질(CRP) 수치가 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 발열이 있고 CRP가 15mg/dL 이상인 대상체는 중증 CRS가 발병할 위험이 높은 것으로 간주될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 CRS 관련 혈청 인자 또는 CRS 관련 결과는, Flt-3L, 프락탈카인(fracktalkine), 과립구 대식세포 집락 자극 인자(granulocyte macrophage colony stimulating factor; GM-CSF), 인터류킨-1 베타(IL-1β, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, 인터페폰 감마(IFN-γ), 대식세포 염증성 단백질(MIP)-1, MIP-1, sIL-2Rα, 또는 종양 괴사 인자 알파(tumor necrosis factor alpha; TNFα)를 포함하는, 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인의 수준 및/또는 농도 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한다. CRS의 조기에 쉽게 측정할 수 있는 위험 인자일뿐 아니라 CRP는 세포 확장의 지표이기도하다. 일부 구현예에서, ≥15 mg/dL과 같은 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 나타내는 다른 인자를 포함한다.
일부 구현예에서, 4 등급 이상과 같은 중증 CRS 또는 3 등급 CRS 이상과 관련된 결과는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 2 일 이상, 예를 들어 3 일 이상, 예를 들어 4 일 이상 또는 연속 3 일 이상 동안 지속적인 열, 예를 들어 특정 온도의 열, 예를 들어 약 섭씨 38도 이상; 약 섭씨 38도 이상의 열; 2 개 이상의 사이토카인 (예를 들어, 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토카인 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)으로 이루어진 군 중 2 개 이상)의 전처리 수준과 비교하여 최대 배수 변화와 같은 사이토카인의 상승, 예를 들어, 적어도 또는 약 75, 또는 이러한 사이토카인 중 하나 이상의 최대 배수 변화 예를 들어 적어도 또는 약 250; 및/ 또는 저혈압과 같은 독성의 하나 이상의 임상 징후(예를 들어, 적어도 하나의 정맥 혈관 압박기에 의해 측정된 바와 같이); 저산소증 (예를 들어, 약 90% 이하의 혈장 산소 (PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경계 장애(정신 병태 변화, 방해 및 발작 포함). 일부 구현예에서, 중증 CRS는 중환자실(ICU)에서의 관리 또는 주의를 요구하는 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, 중증 CRS와 같은 CRS는 (1) 지속적인 열 (최소 3 일 동안 섭씨 38도 이상의 열) 및 (2) 적어도 약 20 mg/dL의 CRP의 혈청 수준의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, CRS는 둘 이상의 혈관 압축기의 사용을 요구하는 저혈압 또는 기계적 환기를 요구하는 호흡 부전을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈관 압축제의 용량은 2 차 또는 후속 투여에서 증가된다.
일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 3 급 CRS는 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 증가, 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제의 증가, 오한, 열성 호중구 감소증, 두통, 좌심실 기능 장애, 뇌병증, 뇌수종 및/또는 진전을 포함한다.
다양한 결과를 측정 또는 검출하는 방법이 특정될 수 있다.
일부 측면에서, 독성 결과는 신경독성이거나 이와 관련되어있다. 일부 구현예에서, 신경독성의 임상 위험과 관련된 증후은 혼란, 섬망, 실어증, 표현성 실어증, 둔화, 근육간대경련, 무기력, 변경된 정신 병태, 경련, 발작과 유사한 활동, 발작(선택적으로 뇌파도(EEG)에 의해 식별됨), 베타 아밀로이드(Aβ) 수준 증가, 글루타메이트 수준 증가, 및 증가된 수준의 산소 라디칼을 포함한다. 일부 구현예에서, 신경독성은 중증도에 기초하여 등급화된다[예를들어 등급 1-5 규모 사용함(예를들어 문헌 「Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)」; 「National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)」 참조)].
일부 경우에는 신경 증후이 sCRS의 가장 초기 증후일 수 있다. 일부 구현예에서, 신경 증후은 세포 요법 주입 후 5 내지 7 일에 시작되는 것으로 보인다. 일부 구현예에서, 신경학적 변화 지속 기간은 3 일 내지 19 일의 범위일 수 있다. 어떤 경우에는 sCRS의 다른 증후이 해결된 후 신경학적 변화가 회복된다. 일부 구현예에서, 신경 학적 변화의 시간 또는 해결 정도는 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)로의 치료에 의해 앞당겨지지 않는다.　
일부 구현예에서, 투여 후 대상체가 다음 중에서 자가-치료(예를 들어, 목욕, 드레싱 및 탈의, 수유, 화장실 사용, 약물 복용)를 제한하는 증후을 보이는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 그의 용량의 세포의 투여에 반응하거나 이차적으로 "중증 신경독성"을 나타내는 것으로 간주된다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴행을 포함한 말초 운동 신경 병증의 증후; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴행을 포함한 말초 감각 신경 병증의 증후, 감각 지각 왜곡과 같은 감각 이상, 비정상이고 불쾌한 감각, 신경 또는 신경 그룹을 따라 강렬한 고통스러운 감각과 같은 신경통, 및/또는 따끔 거림의 비정상적인 피부 감각을 유발하는 감각 뉴런의 기능 장애와 같은 감각 이상, 마비, 압력, 자극이 없을 때 추위 및 따뜻함. 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 표 6에 제시된 바와 같이 3 등급 이상의 신경독성을 포함한다.
Figure pct00006
일부 구현예에서, 상기 방법은 다른 방법과 비교하여 CRS 또는 신경독성과 관련된 증후을 감소시킨다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 다른 방법과 비교하여 중증 CRS 또는 3 등급 이상의 CRS와 관련된 증후, 결과 또는 인자를 포함하여 CRS와 관련된 증후, 결과 또는 인자를 감소시킨다. 예를 들어, 제시된 방법에 따라 치료된 대상체는 검출할 수 없고/거나 CRS, 기술된 바와 같이 예를들어 표 3 또는 표 4에 제시된, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 등급 이상의 CRS의 증후, 결과 또는 인자가 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 다른 방법으로 치료받는 대상과 비교하여 사지 약화 또는 마비와 같은 신경독성, 기억 상실, 시력 및/또는 지각, 제어 불가능한 강박 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 운동 제어 상실을 포함한 인지 및 행동 문제, 인지 기능 저하, 자율 신경계 기능 장애 및 성적 기능 장애를 포함한 행동 문제의 증후이 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 말초 운동 신경 병증, 말초 감각 신경 병증, 감각 이상, 신경통 또는 감각 이상과 관련된 증후이 감소될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 신경계의 사망과 같은 신경계 및/또는 뇌의 손상을 포함하는 신경독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 측면에서, 상기 방법은 베타 아밀로이드(Aβ), 글루타메이트 및 산소 라디칼과 같은 신경독성과 관련된 인자의 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 유독성 결과는 용량-제한 독성(DLT)이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량-제한 독성이다. 일부 구현예에서, 유독성 결과는 용량-제한 독성의 부재이다. 일부 구현예에서, 용량 제한 독성(DLT)은 특정 독성을 평가하기 위해 알려진 또는 공개된 지침에 의해 평가된 3 등급 이상의 독성으로 정의되며, 예컨대 상기 임의의 것 및 국립 암 연구소(NCI) 유해 사건에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) 버전 4.0을 포함한다.
일부 구현예에서, 낮은 비율, 위험 또는 독성 발생 가능성, 예를 들어 CRS 또는 신경독성 또는 중증 CRS 또는 신경독성, 예컨대 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 용량의 T 세포를 투여함으로써 관찰된 3 등급 이상의 CRS 또는 신경독성은 외래 환자 기반으로 세포 요법제의 투여를 허용한다. 일부 구현예에서, 세포 요법제의 투여, 예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포(예를 들어 CAR+ T 세포)의 복용량은 외래 환자 기반으로 수행되거나 하룻밤 체류해야하는 병원 입원과 같이 대상체를 병원에 입원시킬 필요없다.
일부 측면에서, 세포 요법, 예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포의 용량(예를 들어, CAR+ T 세포)이 투여된, 외래환자 기초 치료 대상을 포함한, 대상체는, 대상이 신경독성 또는 CRS와 같은 독성의 징후 또는 증후을 보일 때까지 또는 그렇지 않을 때 세포 용량의 투여 전 또는 투여로 독성을 치료하기위한 처치를 투여받지 않는다. 독성을 치료, 지연, 약독화 또는 완화시키기위한 예시적인 작용제가 섹션 II에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 대상체가 세포 요법을 투여한 경우, 예를 들어 외래 환자를 대상으로 치료된 대상체를 포함한 T 세포의 용량(예 : CAR+ T 세포)은, 대상체가 열을 나타내거나 열을 줄이기 위해 치료를 받거나 투여하도록 지시받는다. 일부 구현예에서, 대상체의 열은 특정 임계 온도 또는 수준 이상(또는 그 이상) 인 대상체의 체온으로 특징 지워진다. 일부 측면에서, 임계 온도는 적어도 저열, 적어도 적당한 열 및/또는 적어도 고열과 관련된 온도이다. 일부 구현예에서, 임계 온도는 특정 온도 또는 범위이다. 예를 들어, 임계 온도는 적어도 섭씨 약 38, 39, 40, 41 또는 42도 및/또는 섭씨 약 38도 내지 섭씨 약 39도 또는 섭씨 약 39도 내지 섭씨 약 40도, 또는 섭씨 약 40도 내지 섭씨 약 41도, 또는 섭씨 약 41도 내지 섭씨 약 42도의 범위일 수 있다.
일부 구현예에서, 열을 감소시키도록 설계된 치료는 해열제 치료를 포함한다. 해열제는 해열 효과를 갖는 것으로 알려진 임의의 수의 작용제 중 하나와 같이 열을 감소시키는 임의의 작용제, 예를 들어 화합물, 조성물 또는 성분을 포함할 수 있으며, 예컨대 NSAIDs(예컨대 이부프로펜, 나프록센, 케토 프로펜 및 니메술라이드 등), 살리실레이트, 예컨대, 아스피린, 콜린 살리실레이트, 마그네슘 살리실레이트 및 나트륨 살리실레이트, 파라세타몰, 아세트아미노펜, 메타미졸, 나부메톤, 피낙손, 안티피린, 해열제이다. 일부 구현예에서, 해열제는 아세트아미노펜이다. 일부 구현예에서, 아세트아미노펜은 4 시간마다 최대 12.5 mg / kg의 용량으로 경구 또는 정맥 내 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 이부프로펜 또는 아스피린이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 열이 지속적인 열인 경우, 대상체에 독성을 치료하기위한 대안적인 치료, 예를 들어 하기 섹션 II에 기재된 임의의 치료가 투여된다. 외래 환자를 대상으로 치료를 받는 대상체의 경우, 대상체가 발열이 있거나 지속되는 것으로 결정된 경우 대상체는 병원으로 돌아오도록 지시 받는다. 일부 구현예에서, 그 또는 그녀가 해당 임계 온도 이상에서 열이 나는 경우, 대상체의 열이나 체온이 감소하지 않는 경우, 또는 예를들어 NSAID 또는 살리실레이트, 예를 들어, 이부프로펜, 아세트 아미노펜 또는 아스피린과 같은 해열제 치료와 같이 열을 줄이기 위해 설계된 치료와 같은 특정 치료 후 지정된 양 이상 또는 감소하지 않은 경우(예를 들어, 1℃ 이상, 일반적으로 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃만큼 변동하지 않음), 대상체는 지속 열이 갖거나, 이를 갖는 것으로 결정되거나, 갖는 것으로 간주된다. 예를 들어, 그 또는 그녀가 적어도 약 섭씨 38℃ 또는 39℃ 정도의 열이 나거나 열이있는 것으로 판단되고, 아세트 아미노펜과 같은 해열제로 치료 한 후에도 6 시간 이상, 8 시간 이상 또는 12 시간 이상 또는 24 시간 이상의 기간 동안 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃ 이상, 또는 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5% 이상 감소되되지 않는 경우 대상체는 열이 지속되는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 해열제의 투여량은, 박테리아 또는 바이러스 감염, 예를 들어 국소 또는 전신 감염과 관련된 열과 같은 특정 유형의 열 또는 열을 감소시키는 것과 같이 일반적으로 효과적인 투여량이다.
일부 구현예에서, 대상체가 관련 임계 온도 이상에서 발열을 나타내며 대상체의 열 또는 체온이 약 1℃이상 변동하지 않고, 일반적으로 약 0.5℃, 0.4 ℃, 0.3 ℃ 또는 0.2 ℃이상 변동하지 않는 경우, 지속적인 열이 있거나 이를 갖는 것으로 결정되거나 간주된다. 그러한 양의 변동이 없거나 일정량의 변동은 일반적으로 주어진 기간 동안 측정된다(예를 들어 24 시간, 12 시간, 8 시간, 6 시간, 3 시간 또는 1 시간 이상의 기간으로, 열의 첫 징후 또는 표시된 임계 값을 초과하는 첫 번째 온도에서 측정). 일부 구현예에서 예를 들어, 그 또는 그녀가 적어도 섭씨 38℃ 또는 39℃ 이상의 열을 보이고, 약 6 시간 이상, 8 시간 이상, 또는 12 시간 이상, 또는 24 시간 이상의 기간 동안 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃ 이상 온도 변동이 없는 경우, 대상체가 지속적인 열을 나타내는 것으로 간주되거나 결정된다.
일부 구현예에서, 열은 지속적인 열이고; 일부 측면에서, 대상체는 대상체가 지속 열이있는 것으로 결정된 시점, 예를들어 그러한 결정 또는 독성을 유발할 가능성이있는 초기 치료, 예를 들어 CAR+ T 세포와 같은 T 세포의 용량과 같은 세포 요법 후 첫 번째 결정의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 시간 또는 더 적은 시간 내에 치료된다.
일부 구현예에서, 독성-표적화 요법과 같은 독성을 치료하기위한 하나 이상의 처치제 또는 작용제는 예를 들어, 상기 언급된 구현예 중 어느 하나에 따라 측정된 바와 같이, 대상체가 지속된 열을 나타내는 것으로 결정되거나 식별된(예를 들어, 첫 번째 결정되거나 식별된) 시점 또는 그 직후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 독성-표적화 요법은 그러한 식별 또는 결정의 특정 시간 내, 예컨대 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간 또는 8시간 이내에 투여된다.
E. 건강 상태 및 건강 관련 삶의 질
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 건강 관련 삶의 질(Health Related Quality of Life; HQRL)에 보고된 대상체의 향상 및 상기 투여 전과 비교하여 CAR+ T 세포의 용량의 투여 후 증후 영향에 대한 효과를 생성하는 특징들로 설계되거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 특징들은 CAR-발현 세포 용량의 투여 전(예를 들어, 기준선(BL)에서) 및 CAR-발현 세포의 투여 후 1회 이상 다양한 시간에, 예를 들어 2주마다, 매월, 2개월마다, 3개월마다 또는 그 초과에, 유럽 연구 및 치료 기구 핵심 삶의 질 설문지 버전 3.0(European Organization for Research and Treatment Core Quality of Life Questionnaire version 3.0; EORTC QLQ-C30)의 투여에 의해서 모니터링되거나 또는 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 평가는 대체 건강 상태와 관련하여 특정 건강 상태에 대한 개인의 선호도의 강도 측정을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 상기 EORTC QLQ-C30은 모든 암 진단을 받은 대상체에게 적용될 수 있는 는 삶의 질 척도이다. 일부 측면에서, 그것은 일반적인 신체 증후, 신체 기능, 피로와 권태감, 사회적 및 정서적 기능을 다루는 30개 항목을 포함한다. 일부 측면에서, 서브스케일 점수(subscale scores)는 0 내지 100 척도로 변환되며, 기능 척도에서 더 높은 점수는 더 나은 기능을 나타내고 증후 척도에서 더 높은 점수는 더 나쁜 증후을 나타낸다. 일부 구현예에서, 유용성 척도(utility scale)는 0(사망)에서 1(최적 또는 "완전한" 건강)까지의 척도에 숫자 값을 할당한다. 일부 구현예에서, 다른 건강 상태에서 보낸 시간은 품질-조정 수명(quality-adjusted life-years)으로 집계된다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 대상체의 웰빙 및 인지된 건강 상태, 예를 들어 EuroQol-5D (EQ-5D)에 의해서 결정된 것, EuroQoL Group에서 임상 및 경제적 평가를 위한 단순하고 일반적인 건강 척도로 개발한 표준화된 건강 상태 척도의 향상을 초래하는 특징들로 설계되거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 대상체의 웰빙 및 인지된 건강 상태, 예를 들어 건강 효용 지수 점수 및 시각적 아날로그 척도 [VAS]에 의해서 결정된 것, (EQ-5D-5L)의 향상을 초래하는 특징들로 설계되거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L(일반적인, 선호도 기반 측정)은 건강 상태 유용성을 평가할 수 있다[문헌 「Brooks R. Health Policy (1996); 37(1):53-72; The EuroQoL Group. Health Policy (1990); 16(3):199-208; Pickard AS et al. health Qual Life Outcomes (2007); 5:70」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L은 광범위한 건강 상태에서 건강 상태 유용성을 평가할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L은 단일 요약 지수(즉, 건강 상태 지수 점수)와 글로벌 시각 아날로그 척도(EQ-VAS)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L 건강상태 평가는 이동성, 자기관리, 일상활동, 통증/불편, 불안/우울 등 건강의 5가지 차원으로 구성된다. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L은 -0.109에서 1까지의 척도로 설정된 미국 값을 사용하여 단일 요약 지수로 채점되며, 0점은 사망, 1점은 "완전한 건강", 음수 점수는 사망보다 더 나쁘게 인식된 상태를 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 EQ-5D-5L 단일 요약 지수 점수에서 기준선으로부터 ≥0.07의 변화는 임상적으로 유의미한 변화의 지표이다[문헌 「Pickard et al. Health Qual Life Outcomes (2007); 5:70」 참조].
일부 구현예에서, 상기 EQ-VAS는 0-100 척도로 평가되며, 0은 상상할 수 있는 최악의 건강 상태를 나타내고 100은 상상할 수 있는 최상의 건강 상태를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체들은 0-100 사이의 숫자에 ×를 표시하여 평가 당일 자신의 건강을 평가한다(EQ-5D-5L 사용자 지침 참조. https://euroqol.org/wp-content/uploads/2016/09/ EQ-5D-5L_UserGuide_2015.pdf. Accessed April 9, 2019).
일부 구현예에서, 대상체들은 자신들의 점수를 결정한다. 일부 측면에서, 기술 시스템은 차원(이동성, 자기 관리, 일상 활동, 통증/불편, 불안/우울)을 포함한다. 일부 측면에서, 각 차원은 5단계(문제 없음, 약간의 문제, 중간 문제, 심각한 문제, 극도의 문제)를 갖는다. 상기 VAS 등급 척도는 수직 20cm 시각적 아날로그 척도로 상단에 상상할 수 있는 최상의 건강 상태를 표시하고 하단에 상상할 수 있는 최악의 건강 상태를 각각 100과 0의 숫자 값으로 표시한다. 일부 경우에, 참가자는 5개 차원 각각에서 가장 적절한 설명에 대해 상자에 표시(또는 십자 표시)하여 자신의 건강 상태를 나타내도록 요청받는다.
일부 측면에서, 환자 보고 결과(PRO)는 치료에 대한 환자의 경험을 측정하는 데 사용할 수 있다. 일부 측면에서, PRO는 의료인의 해석 없이 환자가 직접 제공할 수 있다. 일부 측면에서, CAR T 세포 요법을 받는 환자에서 HRQoL을 검사하기 위한 예시 도구는 PROMIS, SF-36 및 EQ-5D-5L을 포함한다. 임의의 구현예 중의 일부에서, EORTC QLQ-C30 및 EQ-5D-5L은 건강 관련 삶의 질을 평가하는데 사용된다. 일부 측면에서, 환자의 HRQoL에 대한 치료의 단기 및 장기 효과가 모두 조사된다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 유럽 연구 및 치료 기구 핵심 삶의 질 설문지 버전 3.0(European Organization for Research and Treatment Core Quality of Life Questionnaire version 3.0; EORTC QLQ-C30)에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 글로벌 건강 상태에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 신체 기능에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 피로에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타낸다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체 중에서 상기 평균 5-수준 EuroQol-5D (EQ-5D-5L) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 더 크다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예에 따라 치료된 대상체 중에서 평균 EuroQol 글로벌 시각 아날로그 척도(EQ-VAS) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 더 크다.
F. 바이오마커, 분석물 또는 파라미터
상기 제공된 방법 중에는 독성, 예를 들어 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성 및/또는 CRS, 예를 들어 중증 CRS와 관련된 바이오마커(예를 들어 분석물) 또는 파라미터를 평가하거나 검출하는 것을 포함하는 대상체의 세포 요법과 관련된 독성 발병 위험을 평가하는 방법이 있다. 또한 상기 제공된 방법 중에는 완전 반응(CR) 및 부분 반응(PR)을 포함하는 객관적 반응(OR)과 같은 반응 결과와 관련된 바이오마커(예를 들어 분석물) 또는 파라미터를 평가하거나 검출하는 것을 포함하는 대상체의 세포 요법에 대한 반응 가능성을 평가하는 방법이 있다. 일부 구현예에서, 상기 연관 반응 결과는 초기 반응 후 3개월, 6개월, 9개월, 12개월 또는 그 초과동안 지속되는 반응과 같은 지속 반응을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 바이오마커(예를 들어 분석물)의 하나 또는 패널 및/또는 바이오마커(예를 들어 분석물)의 패널과 관련된 파라미터(예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)의 존재 또는 부재를 평가하거나 검출하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 방법은, 상기 하나 이상의 파라미터를 특정 참조값, 예를 들어 임계 수준(본원에서 "임계값"이라고도 함), 예를 들어 독성을 발병할 위험과 관련된 것들 또는 특정 반응, 예를 들어 OR, CR 또는 PR, 또는 지속가능한 반응, 예를 들어 초기 반응 후 3개월, 6개월, 9개월, 12개월 또는 그 초과동안 지속될 수 있는 반응과 관련된 것들과 비교하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법들은 또한 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 바이오마커의 참조 값 또는 임계 수준에 대한 바이오마커의 비교에 기초하여 세포 요법으로 치료할 대상체를 선택하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한, 예를 들어 바이오마커의 존재 또는 부재 평가 및/또는 상기 바이오마커와 상기 바이오마커의 참조값 또는 임계 수준의 비교에 기반으로 독성의 발병을 치료, 예방, 지연 및/또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 요법제를 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 요법제의 투여 후 대상체의 반응 가능성 또는 독성 발병 위험을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생물학적 샘플 중에서 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도를 평가하는 것을 포함하되, 상기 생물학적 샘플은 상기 세포 요법제로 치료할 후보인 대상체로부터 얻어진 것이며, 상기 세포 요법제는 선택적으로 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량 또는 조성을 포함하고; 상기 생물학적 샘플은 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 얻어지고/하거나 상기 생물학적 샘플은 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않는다. 일부 경우에, 상기 방법은, 개별적으로 상기 샘플 내 분석물의 수준, 양 또는 농도를 임계 수준과 비교하여 상기 세포 요법제의 투여 후 독성이 발병할 위험을 결정하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 비교는 상기 세포 요법제의 투여 후 대상체의 반응 가능성 또는 독성 발병 위험을 결정하는데 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 또한, 상기 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 상기 바이오마커의 참조값 또는 임계 수준의 비교에 기반하여, 본원에서, 예를 들어 섹션 I.A 및 I.B에서 기술된 것과 같은 특정 용량의 세포 요법제의 투여를 포함하는, 세포 요법제, 예를 들어 특정 용량의 세포 요법제로 치료할 대상체를 선택하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한, 상기 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 상기 바이오마커의 참조값 또는 임계 수준의 비교에 기반하여, 추가 제제, 예를 들어 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 기타 치료제로 치료를 위한 댓항체를 선택하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 속성, 요인, 환자의 특성 및/또는 질병 또는 상태이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 종양 부담과 관련된 파라미터, 예를 들어 종양 부담의 측정이다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한, 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 바이오마커의 참조값 또는 임계 수준에 대한 바이오마커의 비교에 의해 결정된 독성 위험에 기초하여 독성의 가능한 증후에 대해 대상체를 추가로 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 생물학적 샘플, 예를 들어 상기 대상체로부터의 혈액 샘플 또는 조직은 바이오마커(예를 들어 분석물)의 존재 또는 부재를 검출하기 위해서, 예를 들어 상기 바이오마커의 파라미터(예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)를 검출 또는 측정하고/하거나 특정 결과 및/또는 독성의 분석, 상관관계 및/또는 검출을 위해 바이오마커의 존재를 평가하기 위해서 얻어질 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 발현 및/또는 임상 및 실험실 파라미터를 포함하는 바이오마커와 관련된 특정 생리학적 또는 생물학적 파라미터는 세포 요법제의 투여 전 또는 후에 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 발현 바이오마커 또는 분석물 및/또는 임상 및 실험실 파라미터는 세포 요법제(사전-치료)의 투여 전에 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 발현 바이오마커 또는 분석물 및/또는 임상 및 실험실 파라미터는 세포 요법의 투여 후(치료 후) 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 농도, 양, 수준 또는 활성 및/또는 임상 및 실험실 파라미터는 세포 요법제의 투여 전 또는 후에 하나 이상의 시점에서 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 기간 동안 상기 바이오마커(예를 들어 분석물) 및/또는 임상 및 실험실 파라미터의 피크 농도, 양, 수준 또는 활성도 결정할 수 있다.
일부 구현예에서, 바이오마커 또는 분석물은, 특정 상태 또는 현상의 지표이거나 또는 그와 연관될 수 있는, 세포를 포함하는, 생물학적 샘풀에 의해서 발현된 또는 그 중의 객관적으로 측정가능한 특징 또는 분자, 예를 들어 생물학적 공정, 치료 결과, 세포 표현형 또는 질환 상태이다. 일부 측면에서, 바이오마커 또는 분석물 또는 바이오마커 또는 분석물와 관련된 파라미터가 측정되거나 또는 검출될 수 있다. 예를 들어 바이오마커 또는 분석물의 발현의 존재 또는 부재가 검출될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 파라미터 예를 들어 상기 바이오마커 또는 분석물의 농도, 양, 수준 또는 활성이 측정되거나 또는 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 바이오마커 또는 분석물의 존재, 부재, 발현, 농도, 양, 수준 및/또는 활성은 특정 상태의 지표 및/또는 예측, 예를 들어 상기 대상체의 특정 치료학적 결과 또는 상태과 관련되고, 상관될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 바이오마커 또는 분석물의 존재, 부재, 발현, 농도, 양, 수준 및/또는 활성, 예를 들어 본원에서 기술된 임의의 것들을 사용하여 특정 결과 또는 상태, 예를 들어 반응 결과 또는 독성 결과를 비롯한 특정 치료학적 결과를 평가할 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적 바이오마커는 사이토카인, 세포 표면 분자, 케모카인, 수용체, 가용성 수용체, 가용성 혈청 단백질 및/또는 분해 산물을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 분석물은 또한 환자의 특정 속성, 인자, 특징 및/또는 상기 환자의 질환 병태 또는 인자 지표 및/또는 (질환 부담을 포함하는) 상기 환자의 질환 또는 병태, 및/또는 임상적 또는 실험실 파라미터를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 평가될 수 있는, 그의 파라미터를 포함하는, 바이오마커 또는 분석물은, 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), 인터류킨-6(IL-6), IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페폰 알파 2(IFN-α2), 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파(MIP-1α), 대식세포 염증성 단백질 1 베타(MIP-1β), 에오탁신, 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), IL-1 수용체 알파(IL-1Rα), IL-1β, IFN-γ-유도성 단백질 10(IP-10), 퍼포린 및 D-이량체(피브린 분해 산물)를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 페리틴, CRP, D-이량체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1α를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 바이오마커(예를 들어 분석물)는 페리틴, CRP, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 또는 MIP-1β를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 바이오마커의 존재 또는 부재, 예를 들어 하나 이상의 바이오마커와 관련된 파라미터(예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)을 검출하는 것을 포함하며, 여기서 상기 하나 이상의 바이오마커는 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), 인터류킨-6(IL-6), IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페폰 알파 2(IFN-α2), 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파(MIP-1α), 대식세포 염증성 단백질 1 베타(MIP-1β), 에오탁신, 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), IL-1 수용체 알파(IL-1Rα), IL-1β, IFN-γ-유도성 단백질 10(IP-10), 퍼포린 및 D-이량체(피브린 분해 산물)로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 평가되는 파라미터는 환자의 속성, 인자, 특성 및/또는 질병 또는 상태, 및/또는 바이오마커의 발현이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 환자의 질병 또는 병태 및/또는 질환의 병태를 나타내는 하나 이상의 인자이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 종양 부담을 나타낸다. 일부 구현예에서, 종양의 부담을 나타내는 상기 인자는 종양(들)의 용량(volume) 측정이다. 일부 구현예에서, 용량(volume) 측정은 병변(들), 예컨대 종양 크기, 종양 직경, 종양 용량(volume), 종양 질량, 종양 부하 또는 용량(volume), 종양 관련 부종, 종양 관련 괴사 및/또는 전이의 수 또는 정도의 측정이다. 일부 구현예에서, 종양의 용량(volume) 측정은 2 차원 측정이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병변(들) 면적은 모든 측정 가능한 종양의 가장 긴 직경 및 가장 긴 수직 직경의 산물로 계산된다. 일부 경우에, 종양의 용량(volume) 측정은 일차원 측정이다. 일부 경우에 측정 가능한 병변의 크기는 가장 긴 직경으로 평가된다. 일부 구현예에서, 직경의 생성물 (SPD), 최장 종양 직경 (LD), 최장 종양 직경의 합(SLD), 괴사, 종양 용량(volume), 괴사 용량(volume), 괴사-종양 비율 (NTR), 주변 부종 (PTE) 및 부종-종양 비율(ETR)이 측정된다.
종양 부담을 측정하고 평가하기 위한 예시적인 방법은 예를 들어,Carceller 등의, 소아 혈액 암. (2016) 63(8):1400-1406 and Eisenhauer 등의, Eur J Cancer. (2009) 45(2):228-247에 기술된 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 용량(volume) 측정은 모든 측정 가능한 종양의 최대 수직 직경의 생성물의 합을 결정함으로써 측정된 직경의 생성물(SPD)의 합이다. 일부 측면에서, 종양 또는 병변은 가장 긴 직경 (LD) 및/또는 모든 측정 가능한 병변의 가장 긴 종양 직경 (SLD)의 합을 결정함으로써 일차원으로 측정된다. 일부 구현예에서, 종양의 용량(volume) 측정은 괴사 용량(volume) 및/또는 괴사-종양 비 (NTR)와 같은 종양 괴사의 용량(volume) 정량이며, Monsky 등의, Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961를 참조한다. 일부 측면에서, 종양의 용량(volume) 측정은 종양 관련 부종의 용량(volume) 정량, 예를 들어, 종양 주변 부종(PTE) 및/또는 부종-종양 비(ETR)이다. 일부 구현예에서, 대상체의 컴퓨터 단층 촬영(CT), 양전자 방출 단층 촬영(PET) 및/또는 자기 공명 영상(MRI)과 같은 영상화 기술을 사용하여 측정이 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 종양의 용량(volume) 측정은 대상체의 병태 또는 질환을 확인 및/또는 발견하기 위한 일상적인 평가 또는 혈액 채취와 같은 스크리닝 세션에서 결정된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)의 존재 또는 부재 및/또는 파라미터는 생물학적 샘플로부터 평가된다. 일부 측면에서, 상기 생물학적 샘플은 체액 또는 조직이다. 일부 상기 구현예에서, 상기 생물학적 샘플, 예를 들어 체액은 전혈, 혈청 또는 혈장이거나 또는 그를 함유한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)의 존재 또는 부재 및/또는 파라미터는 상기 세포 요법제의 투여 전에(예를 들어 사전-주입), 예를 들어 상기 조작된 세포의 투여 개시 전 2일까지, 7일까지, 14일까지, 21일까지, 28일까지, 35일까지 또는 40일까지 얻어진 것에서 평가된다. 일부 구현예에서, 상기 생물학적 샘플은 상기 세포 요법제의 투여 전에(예를 들어 사전-주입), 예를 들어 상기 조작된 세포의 투여 개시 전 2일까지, 7일까지, 14일까지, 21일까지, 28일까지, 35일까지 또는 40일까지 얻어진 대상체로부터 평가된다.
일부 구현예에서, 상기 생물학적 샘플은 성분 채집 또는 백혈구 성분 채집 샘플이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)의 존재 또는 부재 및/또는 파라미터는 평가되거나 또는 상기 생물학적 샘플은 상기 세포 요법제의 투여 후에 얻어진다. 일부 구현예에서, 상기 시약은 진단 목적으로 상기 세포 요법제의 투여 전 또는 상기 세포 요법제의 투여 후에 사용되어 대상체를 식별하고/하거나 치료 결과 및/또는 독성을 평가할 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커의 값을 측정하는 것은 생체외 분석을 수행하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 생체외 분석은 면역분석, 압타머 기반 분석, 조직학적 또는 세포학적 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커의 값은 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 면역블롯팅, 면역침전, 방사선면역분석(RIA), 면역염색, 유세포분석, 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance; SPR), 화학발광 분석(chemiluminescence assay), 측면 유동 면역분석, 억제 분석 또는 결합력 분석에 의해서 측정된다. 일부 경우에, 하나 이상의 바이오마커 중 하나 이상의 값은 하나 이상의 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약을 사용하여 결정된다. 일부 측면에서, 상기 결합 시약은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 압타머 또는 핵산 프로브이다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커(예를 들어, 분석물)의 값을 측정하는 것은 분석물을 생물학적 샘플과 직접적으로 또는 간접적으로 검출할 수 있는 시약을 접촉시키고 생물학적 샘플에서 분석물의 존재 또는 부재, 수준, 양 또는 농도를 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)는 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 페리틴, CRP, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-알파, IFN-감마, MCP-1, MIP-1베타, 에오탁신, G-CSF, IL-1R알파, IL-1R베타, IP-10, 퍼포린(perforin) 및 D-이량체(피브린 분해 산물)이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)는 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-알파, IFN-알파2, MCP-1 및 MIP-1베타이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 바이오마커(예를 들어 분석물)는 LDH이거나 또는 그를 포함한다.
일부 측면에서, 상기 시약은 상기 분석물에 특이적으로 결합하는 결합 분자이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 시약은 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 시약은 상기 분석물의 기질 또는 결합 파트너이거나 또는 그를 포함한다.
일부 구현예에서, LDH의 존재, 부재 또는 파라미터(예를 들어 수준, 양, 농도 및/또는 다른 척도)는 샘플 중에서 검출되거나 또는 결정된다. LDH를 검출하거나 측정하는 다양한 방법이 공지되어 있다. 예를 들어 NAD+를 NADH로 환원시켜 락테이트로부터 피루브산으로의 LDH 전환을 측정하는 분석법을 사용하여 샘플에서 LDH를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 샘플은 조효소 NAD의 존재하에 락테이트와 접촉시켜서 시료의 LDH를 측정하여 NADH를 생성한 다음, 전자 전달제의 존재 하에 산화시킨다. 일부 구현예에서, 상기 NADH는 가시광선 범위의 흡수를 측정하여 감지할 수 있는 프로브 또는 염료 전구체와 상호 작용한다. 일부 구체예에서, 디아포라아제는 NADH를 사용하여 테트라졸륨염(INT)을 적색 포르마잔 생성물(red formazan product)로 환원시키고 생성물을 측정한다. 따라서, 일부 구현예에서, 형성된 유색 제품의 양은 샘플의 LDH 활성에 정비례한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 샘플 중에서 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도를 임계 수준과 개별적으로 비교함으로써, 상기 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 결정하거나 또는 대상체가 상기 세포 요법제에 대한 반응을 성취할 가능성을 결정한다. 일부 측면에서, 상기 예시적 임계 수준은 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중에서 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도의 평균 또는 중앙값의 범위 또는 표준 편차 내의 평균 또는 중앙값 및 값들을 기준으로 하여 결정될 수 있으되, 상기 그룹의 각각의 대상체는, 특정 결과, 예를 들어 반응을 나타내거나 나타내지 않는 것, 또는 독성을 발병하거나 또는 독성을 발병하지 않는 것을 포함하는, 특정 치료 결과를 나타낸다. 일부 구현예에서, 임계값을 결정하는 특정 측면은 하기 섹션 I.E.1 및 I.E.2에서 기술된 것들을 포함한다.
1. 반응 결과와 관련된 예시적인 바이오마커, 분석물 또는 파라미터
일부 구현예에서, 상기 분석물 또는 바이오마커는 특정 반응 결과, 예를 들어 객관적 반응(OR) 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR), 또는 지속 반응, 예를 들어 3개월, 6개월, 9개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR 또는 CR 또는 PR의 지표 및/또는 예측과 관련되고, 상관된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 참조값 또는 임계 수준과 비교하여 상기 하나 이상의 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 낮거나 또는 감소된 수준 또는 증가된 수준은 상기 반응, 예를 들어 OR, CR 또는 PR, 예를 들어 섹션 I.C에서 기술된 임의의 반응 결과, 예를 들어 3개월, 6개월, 9개월 또는 그 초과동안 지속되는 반응과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 분석물 또는 바이오마커는, 세포 요법제를 투여 받은 대상체에서, 예를 들어 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물을 사용한, 특정 결과, 예를 들어 특정 반응 또는 지속가능한 반응 결과와 관련되고, 상관된다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제의 투여 전에 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 하나 이상의 분석물의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 특정 결과, 예를 들어 특정 반응 또는 지속가능한 반응 결과의 지표 및/또는 예측과 관련되고, 상관될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 특정 반응 또는 지속가능한 반응 결과와 상관될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 반응 결과는 본원에서, 예를 들어 섹션 I.C에서 기술된 임의의 반응 결과일 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 샘플 중의 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도를 개별적으로 임계 수준과 비교함으로써, 대상체가 상기 세포 요법제에 대한 반응을 성취하게 될 가능성을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 샘플 중의 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도를 개별적으로 임계 수준과 비교함으로써 대상체가 상기 세포 요법제에 대한 반응을 성취하게 될 가능성을 결정한 결과에 기초하여 치료에 반응할 수 있는 대상체를 선택하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 치료를 위해 선택된 상기 대상체에 상기 세포 요법제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 반응 또는 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 없는 것으로 결정되는 경우, 상기 대상체에 대한 추가의 치료학적 제제를 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 반응 결과, 및/또는 지속가능한 반응과 관련된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 LDH, 페리틴, CRP, D-이량체, 혈청 아밀로이드 A1(SAA-1), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ, MIP-1α 및 C-X-C 모티프 케토카인 10(CXCL10)를 포함한다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 반응 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적 분석물 또는 바이오마커는 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 및 IL-10으로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 분석물 또는 바이오마커에 있어서, 상기 대상체는, 상기 하나 이상의 분석물이 임계 수준 미만인 경우 반응을 성취할 가능성이 있으며, 상기 대상체는, 상기 하나 이상의 분석물이 임계 수준 초과인 경우 반응을 성취할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 상기 반응은 객관적 반응이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 객관적 반응은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)이거나 또는 그를 포함한다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중에서, 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 및 IL-10의 감소된 수준은 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 포함하는 객관적 반응을 성취하는 것과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 또는 IL-10의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하였다. 일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 또는 IL-10의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 안정적인 질환(SD) 및/또는 진행성 질환(PD)을 나타내었다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 지속적인 반응의 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 분석물 또는 바이오마커는 LDH, 페리틴, CRP, D-이량체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ, MIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 경우 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 있으며, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 초과인 경우 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 지속되는 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 최소 3개월 동안 지속되는 CR 또는 PR이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 감소된 수준의 LDH, 페리틴, CRP, D-이량체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ, MIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β는 지속가능한 반응, 예를 들어 적어도 3개월 동안 지속될 수 있는 CR 또는 PR을 성취하는 것과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, CRP, D-이량체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ, MIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하였다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, CRP, D-이량체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ, MIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하지 못하였다.
일부 구현예에서, 상기 반응은 지속가능한 반응, 예를 들어 적어도 3개월동안 지속될 수 있는 CR 또는 PR이다.
일부 구현예에서, LDH에 대한 상기 임계 수준은 (약) 600 U/L, 500 U/L, 400 U/L, 300 U/L 또는 200 U/L 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, 페리틴에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1000 ㎍/L, 900 ㎍/L, 800 ㎍/L, 700 ㎍/L, 600 ㎍/L, 500 ㎍/L, 400 ㎍/L, 300 ㎍/L 또는 200 ㎍/L 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, CRP에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 mg/L, 19 mg/L, 18 mg/L, 17 mg/L, 16 mg/L, 15 mg/L, 14 mg/L, 13 mg/L, 12 mg/L, 11 mg/L, 10 mg/L, 9 mg/L, 8 mg/L, 7 mg/L, 6 mg/L 또는 5 mg/L 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, D-이량체에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1000 ㎍/L, 900 ㎍/L, 800 ㎍/L, 700 ㎍/L, 600 ㎍/L, 500 ㎍/L, 400 ㎍/L, 300 ㎍/L 또는 200 ㎍/L 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, SAA-1에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 50 mg/L, 40 mg/L, 30 mg/L 또는 20 mg/L 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, IL-6에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 6 pg/mL, 5 pg/mL, 4 pg/mL, 3 pg/mL 또는 2 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, IL-10에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 2 pg/mL, 1 pg/mL, 0.9 pg/mL, 0.8 pg/mL, 0.7 pg/mL, 0.6 pg/mL 또는 0.5 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, IL-15에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 7 pg/mL, 6 pg/mL, 5 pg/mL, 4 pg/mL 또는 3 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, IL-16에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1000 pg/mL, 900 pg/mL, 800 pg/mL, 700 pg/mL 또는 600 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, TNF-α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 10 pg/mL, 9 pg/mL, 8 pg/mL, 7 pg/mL 또는 6 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 구현예에서, IFN-γ에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 30 pg/mL, 20 pg/mL, 10 pg/mL, 9 pg/mL, 8 pg/mL 또는 7 pg/mL 또는 (약) 그 미만이고;
일부 구현예에서, MIP-1α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 40 pg/mL, 30 pg/mL 또는 20 pg/mL 또는 (약) 그 미만이고/이거나;
일부 구현예에서, CXCL-10에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1500 pg/mL, 1000 pg/mL, 900 pg/mL, 800 pg/mL, 700 pg/mL, 600 pg/mL 또는 500 pg/mL 또는 (약) 그 미만이다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 지속적인 반응의 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 분석물 또는 바이오마커는 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β 및 TNF-α로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 경우 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 있으며, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 초과인 경우 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 지속되는 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 최소 3개월 동안 지속되는 CR 또는 PR이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 감소된 수준의 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β 및 TNF-α는 지속가능한 반응, 예를 들어 적어도 3개월 동안 지속될 수 있는 CR 또는 PR을 성취하는 것과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β 또는 TNF-α의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하였다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β 또는 TNF-α의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하지 못하였다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 지속적인 반응의 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 분석물 또는 바이오마커는 헤모글로빈 또는 알부민으로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 초과인 경우 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 있으며, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 지속가능한 반응을 성취할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 이상 지속되는 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 지속가능한 반응은 최소 3개월 동안 지속되는 CR 또는 PR이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 상승된 수준의 헤모글로빈 또는 알부민은 지속가능한 반응, 예를 들어 적어도 3개월 동안 지속될 수 있는 CR 또는 PR을 성취하는 것과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 헤모글로빈 또는 알부민의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하였다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 헤모글로빈 또는 알부민의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물의 투여 후 지속적인 반응을 성취하지 못하였다.
2. 독성 결과와 관련된 예시적 바이오마커, 분석물 또는 파라미터
일부 구현예에서, 상기 분석물 또는 바이오마커는, 세포 요법제를 투여 받은 대상체에서, 예를 들어 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물을 사용한, 특정 결과, 예를 들어 독성의 발병과 관련되고, 상관된다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제의 투여 전에 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 하나 이상의 분석물의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 예를 들어 독성의 발병, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 I.D에서 기술된 임의의 독성 결과의 지표 및/또는 예측과 관련되고, 상관될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 특정 결과 또는 독성, 예를 들어 NT 또는 CRS의 발병과 상관될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 세포 요법제, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 I.D에서 기술된 임의의 것과 잠재적으로 관련된 독성이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 신경독성(NT) 또는 사이토카인 방출 증후(CRS)이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 중증 NT 또는 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 2 또는 그 초과의 NT 또는 등급 2 또는 그 초과의 CRS이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 3 또는 그 초과의 NT 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 샘플 중의 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도를 개별적으로 임계 수준과 비교함으로써, 상기 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 샘플 중의 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도를 개별적으로 임계 수준과 비교함으로써, 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 평가 결과를 따르거나 기반으로 하여 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및, 선택적으로 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 기타 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 대상체가 세포 요법을 받고 독성을 발병할 위험이 있는 것으로 식별되는 경우 독성 증후에 대해 대상체를 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체가 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 식별되는 경우 하기 단계 중의 하나 이상이 상기 대상체에 대해 수행될 수 있다: (a) (1) 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제 및 (2) 세포 요법제, 상기 제제는, 상기 대상체에 대한 상기 세포 요법제의 투여 개시 (i) 이전에, (ii) 1일, 2일, 또는 3일 내에, (iii) 그와 동시에 및/또는 (iv) 최초 발열 후에 투여됨; 및/또는 (b) 상기 대상체에, 감소된 용량, 또는 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않거나, 또는 대부분의 대상체, 및/또는 세포 요법제의 투여 후 대상체가 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 질환 또는 병태를 갖는 대부분의 대상체,에서 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않는 용량의 세포 요법제를 투여하는 단계; 및/또는 (c) 상기 대상체에 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상동안 병원에 입원하여 세포 요법제를 투여하는 단계, 선택적으로 상기 세포 요법제는 다르게는 외래 환자 기준으로 또는 1일 이상 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여되어야 함.
일부 구현예에서, 평가될 수 있는, 그의 파라미터를 포함하는, 바이오마커 또는 분석물은, 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), 인터류킨-6(IL-6), IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페폰 알파 2(IFN-α2), 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파(MIP-1α), 대식세포 염증성 단백질 1 베타(MIP-1β), 에오탁신, 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), IL-1 수용체 알파(IL-1Rα), IL-1β, IFN-γ-유도성 단백질 10(IP-10), 퍼포린 및 D-이량체(피브린 분해 산물)를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 페리틴, CRP, D-이량체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1α를 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 바이오마커(예를 들어 분석물)는 페리틴, CRP, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 또는 MIP-1β를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 참조값 또는 임계 수준과 비교한 하나 이상의 상기 바이오마커(예를 들어 바이오마커)의 상승된 수준 또는 증가된 수준은 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성 또는 등급 3 또는 그 초과 또는 등급 4 또는 5의 신경독성의 발병과 관련될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 참조값 또는 임계 수준과 비교한 하나 이상의 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 상승된 수준 또는 증가된 수준은 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성 또는 등급 3 또는 그 초과 또는 등급 4 또는 5의 신경독성의 발병과 관련될 수 있다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 분석물 또는 바이오마커는 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 초과인 경우 독성을 발병할 위험이 있으며, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 경우 독성을 발병할 낮은 위험을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 신경독성이다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중에서, 상승된 수준의 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β는 신경독성을 발병할 보다 높은 위험과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 어떠한 독성도 발병하지 않았다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 계속해서 독성이 발병하였다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 2 또는 그 초과의 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 3 또는 그 초과의 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 중증 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 2 또는 그 초과의 CRS이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 등급 3 또는 그 초과의 CRS이다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 중증 CRS이다.
일부 구현예에서, LDH에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L, 600 U/L 또는 700 U/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 페리틴에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 500 ng/mL, 600 ng/mL, 700 ng/mL, 800 ng/mL, 900 ng/mL, 1000 ng/mL 또는 1500 ng/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, CRP에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 mg/L, 30 mg/L, 40 mg/L, 50 mg/L, 60 mg/L, 70 mg/L 또는 80 mg/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, IL-6에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL, 20 pg/mL 또는 30 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, IL-8에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL, 20 pg/mL 또는 30 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, IL-10에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 pg/mL, 30 pg/mL, 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL 또는 70 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, TNF-α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 pg/mL 또는 30 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, IFN-α2에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL, 70 pg/mL 또는 80 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, MCP-1에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 200 pg/mL 또는 300 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, MIP-1에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL, 70 pg/mL 또는 80 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, SPD에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, LDH에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 페리틴에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1000 ng/mL, 2000 ng/mL, 3000 ng/mL, 4000 ng/mL, 5000 ng/mL, 6000 ng/mL, 7000 ng/mL 또는 8000 ng/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, CRP에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 5 mg/L, 10 mg/L, 15 mg/L, 20 mg/L, 25 mg/L, 30 mg/L, 40 mg/L 또는 50 mg/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 SPD이고, 상기 임계 수준은 50 cm2이다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터는 SPD 및 LDH이고, SPD에 대한 상기 임계 수준은 50 cm2이고 LDH에 대한 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 5000 ng/mL이다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 10 mg/L이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터는 페리틴 및 CRP이고, 페리틴에 대한 상기 임계 수준은 5000 ng/mL이고 CRP에 대한 상기 임계 수준은 10 mg/L이다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 분석물 또는 바이오마커는 IL-8, IL-10 및 CXCL10으로부터 선택된 하나 이상의 분석물을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 초과인 경우 독성을 발병할 위험이 있으며, 상기 대상체는 하나 이상의 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 경우 독성을 발병할 낮은 위험을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과의 NT이다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중에서, 상승된 수준의 IL-8, IL-10 및 CXCL10는 NT 또는 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과의 NT를 발병할 보다 높은 위험과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 IL-8, IL-10 또는 CXCL10의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 어떠한 독성도 발병하지 않았다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 IL-8, IL-10 또는 CXCL10의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 계속해서 독성이 발병하였다.
일부 측면에서, 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적 분석물 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정은 생성물 지름의 합(a sum of the products of diameters; SPD), LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), D-이량체(피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β로부터 선택된 하나 이상의 분석물 또는 종양 부담의 부피 측정을 포함한다. 일부 구현예에서, 전술한 분석물 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정 중의 어느 것에 있어서, 상기 대상체는, 상기 하나 이상의 분석물 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정 중의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성을 발병할 위험을 가지며, 상기 대상체는, 상기 하나 이상의 분석물 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정 중의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준을 하회하는 경우 독성을 발병할 낮은 위험을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 상승된 수준 또는 측정치의 생성물 직경의 합(SPD), LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), D-이량체(피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β는 신경독성(NT) 또는 사이토카인 발명 증후(CRS)를 발병할 높은 위험과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 분석물 또는 종양 부담의 부피 측정은 LDH, SPD, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 및 MIP-1β로부터 선택되고 상기 독성은 NT이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 분석물 또는 종양 부담의 부피 측정은 LDH, SPD, CRP, d-이량체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1β로부터 선택되고 상기 독성은 CRS이다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 상승된 수준 또는 측정치의 LDH, SPD, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 및 MIP-1β은 신경독성(NT)를 발병할 높은 위험과 관련될 수 있다. 일부 측면에서, 세포 요법제의 투여(사전-치료) 전에 얻어진 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 상승된 수준 또는 측정치의 LDH, SPD, CRP, d-이량체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1β는 사이토카인 방출 증후(CRS)를 발병할 높은 위험과 관련될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 32% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), D-이량체(피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α 또는 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도, 또는 생성물 직경의 합(SPD)의 종양 부담의 중앙값 또는 평균 부피 측정치 초과인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 어떠한 독성도 발병하지 않았다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 32% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 세포 요법을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질(CRP), D-이량체(피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α 또는 MIP-1β의 중앙값 또는 평균 수준, 양 또는 농도, 또는 생성물 직경의 합(SPD)의 종양 부담의 중앙값 또는 평균 부피 측정치 미만인 표준 편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 상태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 계속해서 독성이 발병하였다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 LDH에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L 또는 600 U/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 SPD에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2, 70 cm2, 80 cm2 또는 90cm2 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 IL-10에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 0.8 pg/mL, 0.9 pg/mL, 1 pg/mL, 2 pg/mL, 3 pg/mL 또는 4 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 IL-15에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL 또는 7 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 IL-16에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 600 pg/mL, 700 pg/mL, 800 pg/mL, 900 pg/mL 또는 1000 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 TNF-α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL 또는 10 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT이고 MIP-1β에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 70 pg/mL, 80 pg/mL, 90 pg/mL 또는 100 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 LDH에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L 또는 600 U/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 SPD에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 cm2, 30 cm2, 40 cm2 또는 50 cm2 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 페리틴에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 ng/mL, 400 ng/mL, 500 ng/mL, 600 ng/mL, 700 ng/mL, 800 ng/mL, 900 ng/mL 또는 1000 ng/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 CRP에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 mg/L, 30 mg/L 또는 40 mg/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 d-이량체에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 pg/mL, 400 pg/mL, 500 pg/mL, 600 pg/mL, 700 pg/mL, 800 pg/mL, 900 pg/mL 또는 1000 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 IL-6에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 2 pg/mL, 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL 또는 9 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 IL-15에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL 또는 10 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 TNF-α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL 또는 15 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 CRS이고 MIP-1α에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 20 pg/mL, 30 pg/mL 또는 40 pg/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 바이오마커는 LDH이고 일부 경우에, 독성, 예를 들어 CRS 또는 NT의 발병은 임계값 초과인 LDH 값과 상관된다. 일부 구현예에서, 상기 염증성 마커는 LDH이고 상기 임계값은 (약) 300 유닛/ℓ이거나, (약) 400 유닛/ℓ이거나, (약) 500 유닛/ℓ이거나 또는 (약) 600 유닛/ℓ이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT 또는 CRS이고 SPD에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT 또는 CRS이고 LDH에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT 또는 CRS이고 페리틴에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 1000 ng/mL, 2000 ng/mL, 3000 ng/mL, 4000 ng/mL, 5000 ng/mL, 6000 ng/mL, 7000 ng/mL 또는 8000 ng/mL 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 독성은 NT 또는 CRS이고 CRP에 대한 예시적 임계 수준은 (약) 5 mg/L, 10 mg/L, 15 mg/L, 20 mg/L, 25 mg/L, 30 mg/L, 40 mg/L 또는 50 mg/L 또는 (약) 그 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 SPD이고, 상기 임계 수준은 50 cm2이다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터는 SPD 및 LDH이고, SPD에 대한 상기 임계 수준은 50 cm2이고 LDH에 대한 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ이다.
일부 구현예에서, 상기 샘플 중의 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 수준, 양 또는 농도가 상기 분석물의 임계 수준 또는 그 초과인 경우, 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 기타 치료제가 상기 대상체에 대한 상기 세포 요법제의 투여 개시 전, 1일, 2일 또는 3일 이내에, 동시에 및/또는 최초 발열 시에 투여된다. 독성 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시키기 위해 제공된 방법과 관련하여 사용하기 위한 예시적 제제 또는 처치(intervention)는 섹션 II에 기술된다.
일부 경우에, 상기 샘플 중의 상기 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 또는 그 초과인 경우, 상기 세포 요법제는 감소된 용량 또는 독성 또는 심각한 독성의 발병 위험과 관련이 없거나, 또는 대다수의 대상체, 및/또는 상기 세포 요법제의 투여 후, 대상체가 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 질환 또는 병태를 갖는 대다수의 대상체에서 독성 또는 중증 독성 발생 위험과 관련이 없는 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 상기 샘플 중의 상기 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 또는 그 초과인 경우, 상기 세포 요법제는 입원 환자 환경에서 및/또는 병원에 1일 이상 입원한 대상체에게 투여되고, 선택적으로 상기 세포 요법제는 그렇지 않으면 외래 환자 기준으로 또는 1일 또는 그 초과동안 병원에 입원하지 않은 대상체에게 투여되어야 한다.
일부 구현예에서, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 수준, 양 또는 농도가 상기 분석물에 대한 임계 수준 미만인 경우, 상기 세포 요법제가 대상체에, 선택적으로 비-감소된 용량으로 투여된다. 일부 경우에, 상기 세포 요법제는 선택적으로 외래 환자 기준으로 또는 1일 또는 그 초과동안 입원하지 않고 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 분석물의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 미만인 경우, 상기 세포 요법제의 투여는, 상기 세포 요법제를 투여하기 전 또는 투여와 동시에 및/또는 발열 이외의 독성 증후의 징후가 나타나기 전에, 독성의 발병을 치료, 예방, 지연 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제를 투여하는 것으로 포함하지 않으며/않거나; 상기 세포 요법제의 투여는 외래 환자 환경에서 및/또는 밤새 또는 1일 이상 연속적인 대상체의 입원 없이 및/또는 대상체가 1일 이상 입원하지 않고 대상체에게 투여되거나 투여될 수 있다.
상기 제공된 방법의 일부 측면에서, 대상체는, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물) 또는 개별적으로 각각의 바이오마커(예를 들어 분석물)의 파라미터(예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)을 상기 바이오마커 또는 각각의 바이오마커에 대한 대응하는 파라미커의 참조값, 예를 들어 임계 수준과 비교함으로써 독성(예를 들어 신경독성, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5 NT 및/또는 CRS, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 또는 그 초과의 CRS)를 발명할 위험에 처하는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 상기 비교는, 상기 대상체가 독성, 예를 들어 NT, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5 NT 및/또는 CRS, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 또는 그 초과 CRS를 발병할 위험에 있는지의 여부를 나타내고/내거나, 상기 독성을 발병할 위험의 정도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 참조값은 단독으로 또는 패널에서 하나 이상의 바이오마커와 함께 이러한 독성이 발병하거나 발병할 가능성이 있는 우수한 예측 값(예를 들어 정확도, 민감도 및/또는 특이성)인 임계 수준 또는 컷-오프인 것이다. 일부 경우에, 상기 참조값, 예를 들어 임계 수준은, 세포 요법제로 미리 치료되고, 상기 바이오마커 또는, 개별적으로, 독성 결과의 존재(예를 들어 NT, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5 NT 및/또는 CRS, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 또는 그 초과 CRS의 존재)에 대한 패널에서 각각의 바이오마커의 파라미터의 상관관계에 대해 평가된 복수의 대상체로부터 존재하거나 또는 사전에 결정되거나 상기 방법을 수행하기 전에 알려질 수 있다.
일부 구현예에서, 대응하는 파라미터의 참조값, 예를 들어 임계 수준보다 높은 바이오마커(예를 들어 LDH, ferritin, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β)의 파라미터는 독성의 위험의 양성 예측(단독으로 또는 패널의 다른 바이오마커 평가와 함께)과 관련된다. 일부 구현예에서, 대응하는 파라미터의 참조값, 예를 들어 임계 수준과 동등하거나 또는 그보다 낮은 바이오마커의 파라미터는 독성의 위험의 음성 예측(단독으로 또는 패널의 다른 바이오마커 평가와 함께)과 관련된다.
일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 상기 바이오마커에 대해 양성인 샘플 중의 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)의 수준, 양, 농도 또는 다른 측정치에 기반하여 결정된다. 일부 측면에서, 상기 임계 수준은 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측저치의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받기 전에 대상체 그룹으로부터 얻은 생물학적 샘플 중의 분석물 또는 파라미터의 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의 표준 편차 내에 있으되, 상기 그룹 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 병태를 치료하기 위해 재조합 수용체-발현 치료 세포 조성물을 받은 후 독성, 예를 들어 NT, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5 NT 및/또는 CRS, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 또는 그 초과 CRS를 계속해서 발병하였다.
임의의 상기 제공된 방법 중의 일부 구현예에서, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)은 중증 NT, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과의 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5의 NT 및/또는 중증 CRS 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS을 발병할 위험과 상관되고/되거나 그것을 예측한다. 일부 구현예에서, 상기 임계 수준은 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내이고/이거나, 재조합 수용체-발현 치료학적 세포 조성물을 받기 전에 대상체의 그룹으로부터 얻어진 생물학적 샘플 중의 상기 분석물 또는 파라미터의 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의 표준편차 이내이되, 상기 그룹의 각각의 대상체는 동일한 질환 또는 병태를 치료하기 위한 재조합 수용체-발현 치료학적 세포 조성물을 받은 후 중증 NT, 예를 들어 중증 NT 또는 등급 3 또는 그 초과의 신경독성, 예를 들어 등급 4 또는 5의 NT 및/또는 중증 CRS 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS를 발병하는 것이 진행되었다.
일부 구현예에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 일부 경우에, 독성의 발달, 예를 들어 CRS 또는 NT는 임계 값을 초과하는 SPD 값과 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 임계 값은 약 30 cm2,약 40 cm2, 약 50 cm2, 약 60 cm2 또는 약 70 cm2 이다. 일부 구현예에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 임계 값은 약 30 cm2,약 40 cm2, 약 50 cm2, 약 60 cm2 또는 약 70 cm2 이다.
일부 구현예에서, 부피 종양 측정(volumetric tumor measurements)을 포함하는 상기 파라미터는 상기 세포 요법제에 대한 반응, 및/또는 독성, 예를 들어 CRS 또는 NT를 발병할 위험과 관련된다.
일부 구현예에서, 상기 부피 측정은 SPD이고 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다. 일부 구현예에서, 상기 부피 측정은 SPD이고 상기 임계 수준은 (약) 50 cm2이다.
일부 구현예에서, 상기 분석물은 LDH 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ유닛/ℓ(U/L), (약) 400 U/L, (약) 500 U/L 또는 (약) 600 U/L이다. 일부 구현예에서, 상기 분석물은 LDH 상기 임계 수준은 (약) 500 U/L이다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터 또는 바이오마커는 LDH이다. 일부 구현예에서, 상기 바이오마커는 LDH이고 상기 임계 수준은 (약) 500 U/L 또는 그 초과이다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터 또는 바이오마커는 SPD이다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 SPD이고, 상기 임계값은 (약) 50 cm2 또는 그 초과이다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 파라미터는 SPD 및 LDH이고, 상기 임계갑은 (약) 50 cm2 또는 그 초과의 SPD이고 (약) 500 U/L 또는 그 초과의 LDH이다. 일부 구현예에서, 상기 바이오마커 또는 파라미터는 CRS 또는 NT를 발병할 위험과 관련된다.
일부 구현예에서, 상기 임계값 초과, 예를 들어 (약) 50 cm2 또는 그 초과의 SPD 및 (약) 500 U/L 또는 그 초과의 LDH인 상기 파라미터 또는 바이오마커는 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-배 또는 그 초과로 증가된 CRS 또는 NT를 발병할 위험과 관련된다. 일부 구현예에서, 상기 임계값 미만, 예를 들어 (약) 500 cm2 미만의 SPD 및 (약) 500 U/L 미만의 LDH인 상기 파라미터 또는 바이오마커는 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-배 또는 그 초과로 감소된 CRS 또는 NT, 예를 들어 임의 등급의 CRS 또는 NT를 발병할 위험과 관련된다.
일부 구현예에서, 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)는, 상기 세포의 증가된 약동학적(pharmacokinetic; PK) 파라미터, 예를 들어 세포의 증가된 최대 혈청 농도(Cmax) 또는 증가된 노출(예를 들어 곡선 아래의 면적(area under the curve; AUC)과 관련된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 그의 파라미터를 포함하는 상기 바이오마커(예를 들어 분석물)는, IL-7, IL-15, MIP-1α 및 TNF-α를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 파라미터는 종양 부담, 예를 들어 종양 부담의 측정과 관련된 파라미터이다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한 상기 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 상기 바이오마커의 참조값 또는 임계 수준에 대한 상기 바이오마커의 비교를 기준으로 하여 가능한 독성 증후에 대해 상기 대상체를 모니터링하는 것을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 림프구 고갈의 시작 전에 수직 직경의 생성물의 합(SPD; ≥500 cm2) 또는 고 혈청 락테이트 디하이드로게나제(LDH; ≥500 U/L)에 의해서 측정된 높은 사전-치료 종양 부담을 갖는 NHL을 갖는 대상체는 또한 CRS 및/또는 NT를 발병할 높은 위험을 가질 수 있다. 일부 구현예에서 높은 사전-투여 수준의 염증성 마커, 예를 들어 페리틴 및 C-반응성 단백질(CRP)은 또한 CRS와 관련될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-6, IFN-γ, 페리틴 및 CRP의 피크 수준은 임의의 등급 또는 등급 3 또는 그 초과의 NT와 관련될 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL) 및 질병 부담이 높은 대상체는 CRS 발병 위험이 높을 수 있다. 일부 구현예에서, 중증 NT는 입양 세포 요법 시 더 높은 질병 부담과 관련될 수 있다. 일부 구현예에서, 뇌척수액(CSF)의 단백질 수준은 기준 측정값과 비교하여 NT 환자에서 상승할 수 있다. 일부 측면에서, 다른 기관 기능 장애(간 및 신장), 저산소혈증 및 감염 또한 뇌병증에 기여할 수 있다. 일부 측면에서, 사이토카인 매개 내피 활성화는 고농도의 전신 사이토카인을 CSF로 이동시키는 응고병증, 모세혈관 누출 및 혈액-뇌 장벽 파괴와 관련될 수 있다.
3. 측정 시약
일부 구현예에서, 상기 파라미터, 예를 들어 환자 인자, 바이오마커, 염증성 마커 및/또는 사이토카인은 검출할 수 있거나 상기 파라미터에 특이적인 하나 이상의 시약(들)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터의 검출 또는 평가 및/또는 요법, 예를 들어 세포 요법을 조정하기 위한 키트 및 제조 물품이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 또한 선택적으로 세포 요법으로, 선택적으로 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량 또는 조성을 포함하는 치료 후보인 대상체의 생물학적 샘플을 분석하기 위해 시약을 사용하기 위한 지침이 제공된다. 상기 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-C 모티프 케모카인 리간드(Motif Chemokine Ligand) 13(CCL13), C-반응성 단백질(CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10(CXCL10), D-이량체(피브린 분해산물), 페리틴, IFN-α, 인터류킨-2(IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마(IFN-γ), 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 대식세포 염증성 단백질(MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1(SAA-1), 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 수준 및 존재가 검출 및 평가된다. 상기 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-반응성 단백질(CRP), 적혈구 침강 속도(ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린(β2-M) 또는 락테이트 디하이드로게나제(LDH)의 수준 또는 존재가 검출되고 평가됩니다. 또한, 종양 부담을 나타내는 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출 및 평가하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 바이오마커의 값을 측정하는 것은 분석물을 생물학적 샘플과 직접적으로 또는 간접적으로 검출할 수 있는 시약을 접촉시키고 생물학적 샘플에서 분석물의 존재 또는 부재, 수준, 양 또는 농도를 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 바이오마커는 C-C 모티프 케모카인 리간드 13(CCL13), C-반응성 단백질(CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10(CXCL10), D-이량체(피브린 분해산물), 페리틴, IFN-α, 인터류킨-2(IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마(IFN-γ), 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 대식세포 염증성 단백질(MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1(SAA-1), 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터류킨-2(IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마(IFN-γ), 락테이트 디하이드로게나제(LDH), 대식세포 염증성 단백질(MIP-1α), MIP-1β, 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1(SAA-1), 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 수준 또는 존재가 검출 및 평가된다. 상기 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-반응성 단백질(CRP), 적혈구 침강 속도(ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린(β2-M), 또는 락테이트 디하이드로게나제(LDH)의 수준 또는 존재가 검출 및 평가된다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 파라미터, 예를 들어 바이오마커는 LDH이거나 또는 그를 포함한다.
일부 측면에서, 상기 시약은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 분자이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 시약은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 시약은 바이오마커의 기질 또는 결합 파트너이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, LDH의 존재, 부재 또는 수준, 양, 농도 및/또는 기타 측정값이 샘플에서 검출되거나 결정된다. LDH를 검출하거나 측정하는 다양한 방법이 알려져 있다. 예를 들어 NAD+를 NADH로 환원시켜 락테이트에서 피루브산으로 LDH 전환을 측정하는 분석법을 사용하여 샘플에서 LDH를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 샘플은 조효소 NAD의 존재하에 락테이트와 접촉시켜서 상기 샘플의 LDH를 측정하여 NADH를 생성한 다음 전자 전달제의 존재 하에 산화된다. 일부 구현예에서, 상기 NADH는 가시광선 범위의 흡수를 측정하여 감지할 수 있는 프로브 또는 염료 전구체와 상호 작용한다. 일부 구체예에서, 디아포라아제는 상기 NADH를 사용하여 테트라졸륨염(INT)을 적색 포르마잔 생성물로 환원시키고 생성물을 측정한다. 따라서, 일부 구현예에서, 형성된 유색 제품의 양은 샘플의 LDH 활성에 정비례한다.
일부 구현예에서, 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 면역 분석법을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 효소-결합 면역 흡착 분석 (ELISA), 효소 면역 분석 (EIA), 방사성 면역 분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR)은 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 감지하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제조 물품을 사용하는 것은 종양 부담을 나타내는 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커의 분석 또는 평가는 유세포 분석을 사용한다. 일부 경우에, 시약은 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커에 결합하는 가용성 단백질이다. 일부 구체예에서, 시약은 C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소 효소 (LDH)에 결합하는 단백질이다.
일부 구현예에서, C-반응성 단백질(CRP)은 혈청, 혈장 또는 혈액과 같은 샘플로부터 인간 CRP의 정량적 측정을 수득하기 위해 생체외 효소-연결 면역 흡착 분석을 사용하여 CRP는 평가된다. 일부 구체예에서, CRP는 인간 효소-연결 면역 흡착 분석(ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 적혈구 침강 속도(ESR)는 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 적혈구가 떨어진 거리(시간당 밀리미터)를 측정함으로써 평가된다. 일부 측면에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험 관내 효소-결합 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 구체예에서, 알부민은 인간 효소-결합 면역 흡착 분석(ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린은 면역 검정을 사용하여 평가되거나 ELISA를 사용하여 검출된다. 락테이트 데하이드로게나제(LDH)는 비색 시험 또는 시험 관내 효소-결합 면역 흡착 분석법을 사용하여 평가된다.
제공된 항체 중에는 모노클론 항체 단편을 포함하는 모노클론 항체인 것이 있다. 여기에 사용된 바와 같은 용어 "모노클론 항체(monoclonal antibody)"는 실질적으로 균질한 항체의 집단 내에서 또는 이로부터 수득된 항체를 지칭한다. 즉, 모노클론 항체 제제의 생산 동안 발생하거나 자연적으로 발생하는 돌연변이를 함유하는 가능한 변이체(상기 변이체는 일반적으로 미미한 양으로 존재)를 제외하고 집단을 포함한 개별 항체들은 동일하다. 전형적으로 상이한 에피토프에 대하여 유도되는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와는 대조적으로, 모노클론 항체 제제의 각 모노클론 항체는 항원 상의 단일 에피토프에 대해 유도된다. 상기 용어는 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 모노클론 항체는 하이브리도마, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 및 기타 항체 디스플레이 방법으로의 생성을 포함하되 이에 국한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
간접적으로 또는 직접적으로 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 라벨에 부착된 바이오마커에 대한 항체를 포함하는 항체 면역접합체(antibody immunoconjugate)가 또한 제공된다. 이러한 항체 면역접합체는 연구 또는 진단 용도로 사용될 수 있다. 상기 라벨은 바람직하게는 직접 또는 간접적으로 검출 가능한 신호를 생성할 수 있다. 예를 들어 상기 라벨은 방사선 불투과성 또는 방사성 동위원소, 예를 들어 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I; 형광(형광단) 또는 화학발광(발색단) 화합물, 예를 들어 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민 또는 루시페린; 효소, 예를 들어 알칼리성 포스페이트, β-갈락토시다제 또는 호르세라디쉬 퍼옥시다제(horseradish peroxidase); 영상화제; 또는 금속 이온일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 라벨은 신티그래픽 연구(scintigraphic studies)를 위한 방사성 원자, 예를 들어 99Tc 또는 123I, 또는 핵 자기 공명(NMR) 이미징을 위한 스핀 라벨(자기 공명 이미징, MRI로도 알려짐), 예를 들어 지르코늄-89, 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철이다. 지르코늄-89는 예를 들어 PET 이미징을 위해 다양한 금속 킬레이트제와 복합체를 형성하고 항체와 접합될 수 있다(국제공개공보 제WO 2011/056983호 참조).
일부 구현예에서, 상기 항체 면역접합체는 간접적으로 검출가능하다. 예를 들어, 골수 세포 면역접합체의 집단 상에서 발현되는 마커에 대한 항체에 특이적이고 검출가능한 표지를 함유하는 2차 항체는 항체 면역접합체를 검출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출할 수 있거나 특이적인 항체는 다양한 공지된 분석에 의해 그의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 식별, 스크리닝 또는 특성화될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 항체는 예를 들어 면역검정, ELISA, 웨스턴 블롯팅 및/또는 세포 기반 결합 검정을 포함하는 유세포 측정 검정과 같은 공지된 방법에 의해 그의 항원 결합 활성에 대해 시험된다.
II. 독성 증후을 치료하거나 개선하는 처치 또는 제제
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법 및 제조 물품은 독성 발병을 치료, 예방, 지연 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 제제 또는 치료제와 관련하여 사용될 수 있거나, 또는 그를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 독성 발병을 치료, 예방, 지연 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 기타 치료제는 상기 유전자 조작된 세포를 포함하는 치료학적 세포 조성물의 투여 전에 및/또는 그와 동시에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제제, 예를 들어 독성-표적화 제제, 또는 독성 발병을 치료, 예방, 지연 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 기타 치료제는 스테로이드이거나, 사이토카인 수용체, 예를 들어 IL-6 수용체, CD122 수용체(IL-2R베타 수용체) 또는 CCR2의 길항제 또는 억제제이거나, 또는 사이토카인, 예를 들어 IL-6, MCP-1, IL-10, IFN-γ, IL-8, 또는 IL-18의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 사이토카인 수용체의 작용제 및/또는 사이토카인, 예를 들어 TGF-β이다. 일부 구현예에서, 상기 제제, 예를 들어 작용제, 길항제 또는 억제제는 항체 또는 항원-결합 단편, 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 유체 볼루스는 CRS와 관련된 저혈압 치료와 같은 처치로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 표적 헤마토크릿 수준(target hematocrit levels)은 >24%이다. 일부 구현예에서, 상기 처치는 혈액 또는 혈장 여과와 함께 흡수성 수지 기술의 사용을 포함한다. 일부 경우에, 상기 처치는 투석, 혈장교환술 또는 유사 기술을 포함한다. 일부 구현예에서, 바소프레써 또는 아세트아미노펜이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 순차적으로, 간헐적으로, 또는 상기 요법제, 예를 들어 상기 입양 세포 요법을 위한 세포와 동시에 또는 그와 동일한 조성물로 투여될 수 있다. 예를 들어 상기 제제는 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 전, 도중, 동시에, 또는 그 후에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 본원에서 기술된 시간에 및 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 독성-표적화 제제는 상기 면역 요법 및/또는 세포 요법의 개시 후 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 이내, 예를 들어 그 미만 또는 그 이하의 시간에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 독성-표적화 제제는 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 후 (약) 1일, 2일 또는 3일 이내에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제제, 예를 들어 독성-표적화 제제는 상기 대상체가 등급 2 또는 그 초과의 CRS 또는 등급 2 또는 그 초과의 신경독성을 나타내지 않는 시점에서 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 개시 후 대상체에 투여된다. 일부 측면에서, 독성-표적화 제제는 상기 대상체가 중증 CRS 또는 중증 신경독성을 나타내지 않는 시점에서 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 개시 후 대상체에 투여된다. 따라서 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 개시 사이에, 상기 대상체는 등급 2 또는 그 초과의 CRS, 예를 들어 중증 CRS를 나타내지 않고/않거나, 등급 2 또는 그 초과의 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성을 나타내지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 특정한 과정, 지침, 처치 또는 요법에 기반하여 또는 그에 기초하여, 예를 들어 결과, 예를 들어 독성 및/또는 반응 결과의 평가 및 모니터링, 및/또는 파라미터 또는 바이오마커, 예를 들어 약동학적 파라미터, 환자 속성 또는 인자 및/또는 바이오마커의 발현의 모니터링에 기반하여 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적 과정, 지침, 처치 또는 요법은 제한되지는 않지만 국제공개공보 제WO 2019/109035호에 기술된 처치 또는 요법을 포함한다.
독성, 예를 들어 중증 CRS(sCRS), 또는 중증 신경독성을 치료하거나 개선하기 위한 처치의 비-제한적 예는 표 7에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 처치는 토실리주맙 또는 기타 독성 표적 제제를 포함하며, 상기 대상체에서 (약) 38℃ 초과 또는 (약) 39℃ 초과의 지속적 또는 연속적 발열이 있는 시점일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 발열은 처치 전에 상기 대상체에서 10시간 초과, 12시간 초과, 16시간 초과, 또는 24시간 초과동안 유지된다.
Figure pct00007
상기 제제 또는 요법제 또는 처치의 다른 비-제한적 예는 하기 표 8(CRS) 및 표 9(NT)에 기술되어 있다. 일부 측면에서, 사이토카인 방출 증후(CRS)는 임상 발표(clinical presentation)에 기초한다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 발열, 저산소증 및 저혈압의 다른 원인에 대해 평가되고 치료된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 CRS를 갖는 것으로 의심되는 경우, 상기 CRS는 표 8에서의 지침에 따라 관리된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 동시 신경학적 독성을 갖는 것으로 의심되는 경우 상기 CRS 동안 상기 신경학적 독성은 표 9의 지침에 따라 관리된다.
증후는 중등도의 처치가 필요하고 이에 반응한다.1
열, FiO2 40% 미만의 산소 요구량, 또는 수액에 반응하는 저혈압 또는 1종의 저 용량의 바소프레써, 또는 등급 2의 기관 독성.
트랜스아미티스(transaminitis)
증후는 적극적인 처치가 필요하고 이에 반응한다..
발열, 40% FiO2 이상의 산소 요구량, 고용량 또는 다중 바소프레써를 필요로 하는 저혈압, 또는 등급 3의 기관 독성 또는 등급 4의 트랜스아미티스(transaminitis).
Figure pct00008
일부 측면에서, 신경학적 사건(NE) 또는 신경독성(NT)의 경우, 예를 들어 표 9에 기재된 바와 같이 신경학적 독성의 증후 및 증상에 대해 대상체를 모니터링한다. 일부 측면에서, 신경학적 증상의 다른 원인은 배제된다. 일부 측면에서, 중증이거나 치명적인 신경학적 독성에 대한 집중 치료 지원 요법이 제공된다. 일부 구현예에서, NT가 의심되는 경우, NT는 표 9의 지침에 따라 관리된다. 일부 측면에서, 대상체가 신경학적 독성 사건 동안 동시 CRS를 갖는 것으로 의심되는 경우, CRS는 표 8의 권고에 따라 관리된다.
Figure pct00009
일부 경우에, 상기 제제 또는 요법제 또는 처치제 예를 들어 독성-표적화 제제는 단독으로 투여되거나 또는 조성물 또는 제형, 예를 들어 본원에서 기술된 약학 조성물 또는 제형의 일부로서 투여된다. 따라서 단독 또는 약학 조성물의 일부로서 상기 제제는 정맥내 또는 경구, 또는 임의의 기타 허용가능한 공지의 경로 또는 본원에서 기술된 바와 같이 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 투약 요법에서 제제의 투여량 또는 상기 제제의 투여 빈도는, 대상체가 등급 2 또는 그 초과의 CRS 또는 신경독성, 예를 들어 중증, 예를 들어 등급 3 또는 그 초과의 CRS 후 또는 중증, 예를 들어 등급 3 또는 그 초과의 신경독성이 발병하였거나 또는 진단 받은 후(예를 들어 등급 3 또는 그 초과의 CRS 또는 신경독성의 신체적 신호 또는 증후가 나타난 후)에 상기 제제로 치료되는 방법에서 상기 제제의 투여량 또는 그의 빈도와 비교하여 감소된다. 일부 구현에에서, 투약 요법에서 제제의 투여량 또는 상기 제제의 투여 빈도는, 대상체가 상기 면역 요법제 및/또는 세포 요법제의 투여 후 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주 또는 그 초과에 CRS 또는 신경독성에 대해 치료 받는 방법에서 상기 제제의 투여량 또는 그의 빈도와 비교하여 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 투여량은 (약) 1.2-배, 1.5-배, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배 또는 그 초과까지 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 투여량은 (약) 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 그 초과까지 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 투여의 빈도는 감소되고, 예를 들어 매일 복용 횟수가 감소되거나 투약일 수가 감소된다.
A. 스테로이드
일부 구현예에서, 상기 제제, 예를 들어 면역 요법 및/또는 세포 요법에 대한 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료 및/또는 예방, 지연 또는 약화시키는 독성-표적화 제제는 스테로이드, 예를 들어 코르티코스테로이드이다. 코르티코스테로이드는 일반적으로 글루코코르티코이드 및 무기질 코르티코이드를 포함한다.
임의의 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드는 본원에서 제공된 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드는 합성 및 비합성 글루코코르티코이드를 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 제한되지는 않지만 알클로메타손, 알제스톤, 베클로메타손어(예를 들어 베클로메타손 디프로피오네이트), 베타메타손어(예를 들어 베타메타손 17-발레레이트, 베타메타손 나트륨 아세테이트, 베타메타손 인산나트륨, 베타메타손 발레레이트), 부데소니드, 클로베타졸어(예를 들어 클로베타솔 프로피오네이트), 클로베타손, 클로코르톨론어(예를 들어 클로코르톨론 피발레이트), 클로프레드놀, 코르티코스테론, 코르티손 및 하이드로코르티손어(예를 들어 하이드로코르티손 아세테이트), 아세테이트, 코르티바졸, 데플라자데손 덱사메타손 인산나트륨), 디플로라손어(예를 들어 디플로라손 디아세테이트), 디플루코르톨론, 디플루프레드네이트, 에녹솔론, 부데소니드, 플루아자코르트, 플루클로나이드, 플루드로코르티손어(예를 들어 플루드로코르티손 아세테이트), 플루메타손어(예를 들어 플루메타손 피발레이트), 플루니솔리드, 플루오시놀론어(예를 들어 플루오시놀론 아세토나이드), 플루오시노니드, 플루오코르틴, 플루오로코르톨론어(예를 들어 플루오로메톨론), 플루오로메톨론 , 플루프레드니덴, 플루프레드니솔론, 플루란드레놀리드, 플루티카손어(예를 들어 플루티카손 프로피오네이트), 포르모코르탈, 할시노니드, 할로베타졸, 할로메타손, 할로프레돈, 하이드로코르타메이트, 하이드로코르티손어(예를 들어 하이드로코르티손 21-부티레이트, 하이드로코르티손 아세포네이트, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손 부테프레이트, 하이드로코르티손 부티레이트, 하이드로코르티손 시피오네이트, 하이드로코르티손 헤미석시네이트, 하이드로코르티손 프로부테이트, 하이드로코르티손 나트륨 포스페이트, 하이드로코르티손 숙신산나트륨, 하이드로코르티손 발레레이트), 로테프레드놀 에타보네이트, 마지프레도네스, 메틸프레데니손(메틸프레드니솔론 아세포네이트, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 헤미석시네이트, 메틸프레드니솔론 나트륨 석시네이트), 모메타손어(예를 들어 모메타손 푸로에이트), 파라메타손어(예를 들어 파라메타손 아세테이트), 프레드니카베이트, 프레드니솔론어(예를 들어 프레드니솔론 25-디에틸아미노아세테이트, 프레드니솔론 나트륨 포스페이트, 프레드니솔론 21-헤미석시네이트, 프레드니솔론 아세테이트; 프레드니솔론 파르네실레이트, 프레드니솔론 헤미석시네이트, 프레드니솔론-21(베타-D-글루쿠로나이드), 프레드니솔론 메타설포벤조에이트, 프레드니솔론 스테아글레이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니솔론 테트라하이드로프탈레이트), 프레드니손, 프레드니발, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코르톨, 트리암시놀론어(예를 들어 암시놀론 아세토나이드, 트리암시놀론 베네토나이드, 트리암시놀론 헥사세토나이드, 트리암시놀론 아세토나이드 21-팔미테이트, 트리암시놀론 디아세테이트)를 포함한다. 이들 글루코르티코이드 및 그의 염은 예를 들어 문헌 「Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)」에서 상세히 논의되어 있다.
일부 구체예에서, 상기 글루코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손 중에서 선택된다. 특정 구체예에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 코르티코스테로이드이고 면역 요법 및/또는 세포 요법에 대한 하나 이상의 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경독성 증후을 치료, 개선 또는 감소시키는 데 치료학적으로 효과적인 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 개선 또는 성공적인 치료의 지표는 독성 등급 척도(예를 들어 CRS 또는 신경독성 등급 척도)에서 관련 점수, 예를 들어 3 미만의 점수, 또는 본 명세서에 논의된 바와 같은 등급 척도의 등급 또는 중증도의 변화, 예를 들어 4점에서 3점으로 변화, 또는 4점에서 2, 1 또는 0점으로 변화를 나타내지 못한 경우의 결정을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 코르티코스테로이드는 치료학적 유효량으로 제공된다. 치료학적 유효 농도는 공지의 생체외 또는 생체내(예를 들어 동물 모델) 시스템에서 시험하여 경험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어 면역요법제 및/또는 세포 요법제에 대한 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경독성의 부작용 또는 증상을 개선하기 위해 투여되는 선택된 코르티코스테로이드의 양은 표준 임상 기법에 의해서 결정될 수 있다. 또한, 동물 모델을 사용하여 최적의 투여량 범위를 식별할 수 있다. 경험적으로 결정할 수 있는 정확한 투여량은 특정 치료 제제, 요법 및 투여 일정, 투여 경로 및 질병의 심각성에 따라 달라질 수 있다.
상기 코르티코스테로이드는 CRS 또는 신경독성과 같은 독ECOG 활동도 관련된 하나 이상의 증후을 개선하는데 효과적인 임의의 양으로 투여될 수 있다. 상기 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드는 예를 들어 용량(dose) 당 (약) 0.1 내지 (약) 100 mg, per dose, (약) 0.1 내지 (약) 80 mg, (약) 0.1 내지 (약) 60 mg, (약) 0.1 내지 (약) 40 mg, (약) 0.1 내지 (약) 30 mg, (약) 0.1 내지 (약) 20 mg, (약) 0.1 내지 (약) 15 mg, (약) 0.1 내지 (약) 10 mg, (약) 0.1 내지 (약) 5 mg, (약) 0.2 내지 (약) 40 mg, (약) 0.2 내지 (약) 30 mg, (약) 0.2 내지 (약) 20 mg, (약) 0.2 내지 (약) 15 mg, (약) 0.2 내지 (약) 10 mg, (약) 0.2 내지 (약) 5 mg, (약) 0.4 내지 (약) 40 mg, (약) 0.4 내지 (약) 30 mg, (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, (약) 0.4 내지 (약) 15 mg, (약) 0.4 내지 (약) 10 mg, (약) 0.4 내지 (약) 5 mg, (약) 0.4 내지 (약) 4 mg, (약) 1 내지 (약) 20 mg, (약) 1 내지 (약) 15 mg 또는 1 내지 (약) 10 mg의 양으로 70 kg 성인 인간 대상체에 투여될 수 있다. 전형적으로, 상기 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드는 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 예를 들어 용량당 (약) 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.75 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg 또는 20 mg의 양으로 평균 성인 인간 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 코르티코스테로이드는 예를 들어 (약) 0.001 mg/kg (대상체의 체중), 0.002 mg/kg, 0.003 mg/kg, 0.004 mg/kg, 0.005 mg/kg, 0.006 mg/kg, 0.007 mg/kg, 0.008 mg/kg, 0.009 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.015 mg/kg, 0.02 mg/kg, 0.025 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.035 mg/kg, 0.04 mg/kg, 0.045 mg/kg, 0.05 mg/kg, 0.055 mg/kg, 0.06 mg/kg, 0.065 mg/kg, 0.07 mg/kg, 0.075 mg/kg, 0.08 mg/kg, 0.085 mg/kg, 0.09 mg/kg, 0.095 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.15 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.25 mg/kg, 0.30 mg/kg, 0.35 mg/kg, 0.40 mg/kg, 0.45 mg/kg, 0.50 mg/kg, 0.55 mg/kg, 0.60 mg/kg, 0.65 mg/kg, 0.70 mg/kg, 0.75 mg/kg, 0.80 mg/kg, 0.85 mg/kg, 0.90 mg/kg, 0.95 mg/kg, 1 mg/kg, 1.05 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.15 mg/kg, 1.20 mg/kg, 1.25 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.35 mg/kg 또는 1.4 mg/kg의 복용량으로 평균 인간 대상체에, 전형적으로 약 70 kg 내지 75 kg의 체중의 인간 대상체에 투여될 수 있다.
상기 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드, 예를 들어 덱사메타손은 경구(정제, 액체 또는 액체 농축물), PO, 정맥내(IV), 근육내 또는 임의의 다른 공지된 경로 또는 본원에서 기재된 경로(예를 들어 약학 제형과 관련하여)로 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 코르티코스테로이드는 일시 투여되며, 다른 측면에서는 일정 기간 동안 투여될 수 있다.
일부 측면에서, 상기 코르티코스테로이드는 1일 초과의 기간, 예를 들어 2일에 걸쳐, 3일에 걸쳐, 또는 4일에 걸쳐 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 코르티코스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여될 수 있다. 예를 들어 상기 코르티코스테로이드, 예를 들어 덱사메타손은 일부 구체예에서 3일 동안 하루 2회 10 mg(또는 등가물) IV로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 코르티코스테로이드, 예를 들어 글루코코르티코이드의 투여량은 치료당 더 낮은 투여량으로 연속적으로 투여된다. 따라서, 일부 상기 치료 요법에서, 상기 코르티코스테로이드의 용량은 테이퍼된다. 예를 들어 상기 코르티코스테로이드는 4 mg의 초기 용량(또는 덱사메타손에 대한 것과 같은 등가 용량)으로 투여될 수 있으며, 각각의 연속 투여시 상기 용량은, 그 용량이 다음 투여시 3mg, 그 다음 투여시 2mg, 그 다음 투여시 1mg이 되도록 낮출 수 있다.
일반적으로, 다른 코르티코스테로이드 간에 효능의 차이가 존재하기 때문에 투여되는 코르티코스테로이드의 용량은 특정 코르티코스테로이드에 따라 달라진다. 일반적으로 약물은 효능이 다양하므로 동등한 효과를 얻기 위해 용량이 다를 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 하기 표 8은 다양한 글루코코르티코이드 및 투여 경로에 대한 효능 측면에서 동등성을 나타낸다. 임상 투여에서 등가 효능은 잘 알려져 있습니다. 등가 스테로이드 투여(비시간적 치료 방식)에 관한 정보는 문헌 「the British National Formulary (BNF) 37, March 1999」에서 찾을 수 있다.
Figure pct00010
따라서, 일부 구현예에서, 상기 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손/day, 예를 들어 (약) 1.0 mg 내지 (약) 15 mg 덱사메타손/day, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg 덱사메타손/day, (약) 2.0 mg 내지 (약) 8 mg 덱사메타손/day, 또는 (약) 2.0 mg 내지 (약) 6 mg 덱사메타손/day의 등가 투여량(각각의 수치를 포함함)으로 투여된다. 일부 경우에, 상기 스테로이드는 (약) 4 mg 또는 (약) 8 mg 덱사메타손/day의 등가 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 토실리주맙(tocilizumab) 치료 후에도 발열이 지속되면 스테로이드가 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 덱사메타손은 발열이 지속되는 상태에서 최대 6-12시간마다 5-10mg의 용량으로 경구 또는 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 산소 보충과 동시에 또는 그 후에 투여된다.
B. 소교 세포 억제제(Microglial Cell Inhibitor)
일부 구현예에서, 조합 요법에서 상기 억제제는 소교 세포 활성의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여는 소교 세포의 활성을 조절한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 소교세포에서 신호전달 경로의 활성을 억제하는 길항제이다. 일부 구현예에서, 소교세포 억제제는 소교세포 항상성, 생존 및/또는 증식에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 CSF1R 신호 전달 경로를 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 CSF1R의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 소형 분자이다. 일부 경우에 상기 억제제가 항체이다.
일부 측면에서, 상기 억제제의 투여는, 소교 세포 항상성 및 생존의 변경, 소교 세포 증식의 감소 또는 차단, 소교 세포의 감소 또는 제거, 소교 활성화 감소, 소교 세포로부터의 산화질소 생성 감소, 소교세포에서 산화질소 합성효소 활성 감소, 또는 소교 세포 활성화에 의해 영향을 받는 운동 뉴런의 보호로부터 선택된 하나 이상의 효과를 생성한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는, CSF1R 억제의 혈청 또는 혈액 바이오마커의 수준을 변경시키거나, 또는 상기 억제제의 투여 개시 직전과 비교하여, 소변 콜라겐 유형 1 가교 N-텔로펩티드(NTX) 수준을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 제제의 투여는 소교 세포의 활성을 일시적으로 억제하고/하거나 소교 세포의 활성 억제가 영구적이지 못하다. 일부 구현예에서, 상기 제제의 투여는 CSF1R의 활성을 일시적으로 억제하고/하거나, 상기 CSF1R의 억제는 영구적이지 못하다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 소형 분자, 펩티드, 단백질, 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 항체 모방체, 압타머 또는 핵산 분자이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 소교 세포의 활성 억제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 소교 세포에서 신호 전달 경로 활성을 억제하는 길항제이다. 일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 소교세포 항상성, 생존 및/또는 증식에 영향을 준다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는, 항-염증제, NADPH 옥시다제(NOX2)의 억제제, 칼슘 채널 차단제, 나트륨 채널 차단제로부터 선택되고, GM-CSF를 억제하며, CSF1R을 억제하고, CSF-1을 특이적으로 결합하며, IL-34를 특이적으로 결합하고, 핵 인자 카파 B(NF-κB)의 활성화를 억제하며, CB2 수용체를 활성화시키고/시키거나 CB2 작용제(CB2 agonist), 포스포디에스테라제 억제제이고, 마이크로RNA-155(miR-155)를 억제하며, 마이크로RNA-124 (miR-124)를 상향 조절하고, 소교 세포에서 산화질소 생성을 억제하고, 산화질소 합성효소를 억제하거나, 전사 인자 NRF2(핵 인자(에리트로이드-유래된 2)-유사 2, 또는 NFE2L2라고도 함)를 활성화시킨다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 CSF1(대식세포 집락 자극 인자 MCSF라고도 함)를 표적화한다. 일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 M-CSF 수용체의 MCSF-자극된 인산화에 영향을 미친다[문헌 「Pryer et al. Proc Am Assoc Cancer Res, AACR Abstract nr DDT02-2 (2009)」 참조]. 일부 경우에, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 MCS110이다[국제공개공보 제WO2014/001802호; 문헌 「Clinical Trial Study Record Nos.:A1 NCT00757757; NCT02807844; NCT02435680; NCT01643850」 참조].
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 상기 CSF1 경로를 표적으로 한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CSF1R을 결합하는 소형 분자이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CSF1R 키나제에 대한 ATP 결합과 경쟁하여 CSF1R 키나제 활성을 억제하는 소형 분자이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 상기 CFS1R 수용체의 활성화를 억제하는 소형 분자이다. 일부 경우에, 상기 CFS1R에 대한 상기 CSF-1 리간드의 결합이 억제된다. 일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 미국 특허출원공개공보 제US20160032248호에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 PLX-3397, PLX7486, JNJ-40346527, JNJ28312141, ARRY-382, PLX73086 (AC-708), DCC-3014, AZD6495, GW2580, Ki20227, BLZ945, PLX647, PLX5622로부터 선택된 소형 분자 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 문헌 「Conway et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 102(44):16078-83 (2005); Dagher et al., Journal of Neuroinflammation, 12:139 (2015)」; 「Ohno et al., Mol Cancer Ther. 5(11):2634-43 (2006); von Tresckow et al. Clin Cancer Res.,21(8) (2015)」; 「Manthey et al. Mol Cancer Ther. (8(11):3151-61 (2009)」; 「Pyonteck et al., Nat Med. 19(10): 1264-1272 (2013)」; 「Haegel et al., Cancer Res AACR Abstract nr 288 (2015)」; 「Smith et al., Cancer Res AACR Abstract nr 4889 (2016)」; 「Clinical Trial Study Record Nos.: NCT01525602; NCT02734433; NCT02777710; NCT01804530; NCT01597739; NCT01572519; NCT01054014; NCT01316822; NCT02880371; NCT02673736」; 국제공개공보 제WO2008/063888A2호, 제WO2006/009755A2호, 미국 특허출원공개공보 제US20110044998호, 제US 2014/0065141호, 및 제US 2015/0119267호에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 4-((2-(((1R,2R)-2-하이드록시사이클로헥실)아미노)벤조[d]티아졸-6-일)옥시)-N-메틸피콜린아미드 (BLZ945) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00011
상기 식에서, R1은 알킬 피라졸 또는 알킬 카복스아미드이고, R2는 하이드록시사이클로알킬이다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 5-((5-클로로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸)-N-((6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)메틸)피리딘-2-아민, N-[5-[(5-클로로-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일)메틸]-2-피리디닐]-6-(트리플루오로메틸)-3-피리딘메탄아민)(PLX 3397) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 5-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-3-일메틸)-N-[[4-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]-2-피리딘아민 디하이드로클로라이드(PLX647) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00012
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00013
일부 구현예에서, 상기 제제는 미국특허 제US7893075호에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 4-시아노-N-[2-(1-사이클로헥센-1-일)-4-[1-[(디메틸아미노)아세틸]-4-피페리디닐]페닐]-1H-이미다졸-2-카복스아미드 모노하이드로클로라이드(JNJ28312141) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00014
일부 구현예에서, 상기 제제는 미국특허 제US7645755호에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 1H-이미다졸-2-카복스아미드, 5-시아노-N-(2-(4,4-디메틸-1-사이클로헥센-1-일)-6-(테트라하이드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-4-일)-3-피리디닐)-, 4-시아노-1H-이미다졸-2-카복실산 N-(2-(4,4-디메틸사이클로헥스-1-에닐)-6-(2,2,6,6-테트라메틸테트라하이드로피란-4-일)피리딘-3-일)아미드, 4-시아노-N-(2-(4,4-디메틸사이클로헥스-1-엔-1-일)-6-(2,2,6,6-테트라메틸-테트라하이드로-2H-피란-4-일)피리딘-3-일)-1H-이미다졸-2-카복스아미드(JNJ-40346527) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00015
또다른 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 5-(3- 메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)벤질)피리미딘-2,4-디아민(GW2580) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다(국제공개공보 제WO2009099553호 참조):
Figure pct00016
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 4-(2,4-디플루오로아닐리노)-7-에톡시-6-(4-메틸피페라진-1-일)퀴놀린-3-카복스아미드(AZD6495) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00017
일부 구현예에서, 소교 세포 활성을 감소시키는 상기 제제는 N-{4-[(6,7-디메톡시-4-퀴놀릴)옥시]-2-메톡시페닐}-N0-[1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]우레아(Ki20227) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00018
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 상기 CSF1 경로를 표적화하는 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CSF1R을 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 상기 항-CSF1R 항체는 CSF1R 이량체화를 차단한다. 일부 구현예에서, 상기 항-CSF1R 항체는 도메인 D4 및 D5에 의해서 형성되는 상기 CSF1R 이량체화 계면을 차단한다[문헌 「Ries et al. Cancer Cell 25(6):846-59 (2014)」 참조]. 일부 경우에, 상기 제제는 에막투주맙(RG7155; RO5509554), 카비랄리주맙(FPA-008), LY-3022855(IMC-CS4), AMG-820, TG-3003, MCS110, H27K15, 12-2D6, 2-4A5로부터 선택된다[문헌 「Rovida and Sbarba, J Clin Cell Immunol.6:6 (2015)」; 「Clinical Trial Study Record Nos.: NCT02760797; NCT01494688; NCT02323191; NCT01962337; NCT02471716; NCT02526017; NCT01346358; NCT02265536; NCT01444404; NCT02713529, NCT00757757; NCT02807844; NCT02435680; NCT01643850」 참조].
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 테트라사이클린 항생제이다. 예를 들어, 상기 제제는 소교 세포에서 IL-1b, IL-6, TNF-α 또는 iNOS 농도에 영향을 준다[문헌 「Yrjanheikki et al. PNAS 95(26): 15769-15774 (1998); Clinical Trial Study Record No: NCT01120899」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 오피오이드 길항제이다[문헌 「Younger et al. Pain Med. 10(4):663-672 (2009)」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 글루타메이트성 신경전달을 감소시킨다[미국 특허 제5,527,814호 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 NFkB 신호 전달을 조절한다[문헌 「Valera et al J. Neuroinflammation 12:93 (2015); Clinical Trial Study Record No: NCT00231140」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 칸나비노이드 수용체를 표적화한다[문헌 「Ramirez et al. J. Neurosci 25(8):1904-13(2005)」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미노사이클린, 날록손, 릴루졸, 레날리도마이드 및 칸나비노이드(선택적으로 WIN55 또는 212-2)로부터 선택된다.
소교 세포로부터의 산화질소 생성은 일부 경우에 신경독성을 유발하거나 증가시키는 것으로 여겨진다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 소교 세포로부터 산화질소 생성을 조절하거나 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 산화질소 합성(NOS)을 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 NOS 억제제는 로노프테린(Ronopterin)(VAS-203)이며, 이는 4-아미노-테트라하이드로비오프테린(4-ABH4)으로도 알려져 있다. 일부 구현예에서, 상기 NOS 억제제는 신두니스타트(cindunistat), A-84643, ONO-1714, L-NOARG, NCX-456, VAS-2381, GW-273629, NXN-462, CKD-712, KD-7040, 또는 구아니디노에틸디설파이드(guanidinoethyldisulfide)이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 문헌 「Hoing et al., Cell Stem Cell. 2012 Nov 2;11(5):620-32」에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 예를 들어 중추신경계로의 T 세포 트래픽킹(T cell trafficking)를 차단한다. 일부 구현예에서, T 세포 트래픽킹을 차단하는 것은 혈뇌장벽을 통과하는 것을 포함하여 면역 세포가 혈관 벽을 넘어 중추 신경계로 들어가는 것을 감소시키거나 예방할 수 있다. 일부 경우에, 활성화된 항원-특이적 T 세포는 CNS에서 재활성화시 IFN-γ 및 TNF를 포함하는 전염증성 사이토카인을 생성하여 소교 세포 및 성상 교세포(astrocyte)와 같은 상주 세포의 활성화를 유도한다. 문헌 「Kivisakk et al., Neurology. 2009 Jun 2; 72(22): 1922-1930」을 참조한다. 따라서, 일부 구현예에서, 예를 들어 세포의 트래픽킹을 차단하고/하거나 혈뇌장벽을 통과하는 능력을 억제함으로써 소교 세포로부터 활성화된 T 세포를 격리하는 것은 소교 세포 활성화를 감소시키거나 또는 제거할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 T 세포를 포함한 면역 세포의 부착 분자를 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 인테그린을 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 인테그린은 알파-4 인테그린이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 나탈리주맙(Tysabri®)이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 세포 표면 수용체를 조절한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 스핑고신-1-포스페이트(S1P) 수용체, 예를 들어 S1PR1 또는 S1PR5를 조절한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 세포 수용체, 예를 들어 스핑고신-1-포스페이트(S1P) 수용체, 예를 들어 S1PR1 또는 S1PR5의 내재화를 유발한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 핀골리모드(fingolimod)(Gilenya®) 또는 오자니모드(ozanimod)(RPC-1063)이다.
상기 전사 인자 NRF2는 예를 들어 프로모터 영역에 시스 작용 요소를 포함하는 유전자를 튜닝하여 항산화 반응을 조절하는 것으로 여겨진다. 상기 요소의 예는 항산화 반응 요소(ARE)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 NRF2를 활성화시킨다. 일부 구현예에서, 소교 세포에서 NRF2를 활성화시키는 경우 IFN 및 LPS에 대한 소교세포의 반응성 감소시킨다. 일부 구현예에서, NRF2를 활성화시키는 경우 탈수초화, 축삭 손실, 신경 세포 사멸 및/또는 희돌기아교세포 사멸을 억제, 감속 또는 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 NRF2에 의해 조절되는 세포 세포 보호 경로를 상향 조절한다. 일부 구현예에서, NRF2를 활성화시키는 상기 제제는 디메틸 푸마레이트(Tecfidera®)이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국특허 제8,399,514호에 기술된 임의의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 문헌 「Hoing et al., Cell Stem Cell. 2012 Nov 2;11(5):620-32」에 기술된 임의의 억제제이다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 (4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-비스(디메틸아미노)-3,10,12,12a-테트라하이드록시-1,11-디옥소-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-옥타하이드로테트라센-2-카복스아미드(미노사이클린) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국 특허출원공개공보 제US20100190755호에 기술된 임의의 화합물이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00019
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 3-(7-아미노-3-옥소-1H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온(레날리도마이드) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00020
또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 4R,4aS,7aR,12bS)-4a,9-디하이드록시-3-프롭-2-에닐-2,4,5,6,7a,13-헥사하이드로-1H-4,12-메탄벤조푸로[3,2-e]이소퀴놀린-7-온(날록손(naloxone)) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국 특허 제US8247425호에 기술된 임의의 화합물이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00021
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는, 미국 특허 제US5527814호에 기술된 바와 같은, 2-아미노-6-(트리플루오로메톡시)벤조티아졸, 6-(트리플루오로메톡시)벤조[d]티아졸-2-아민, 또는 6-(트리플루오로메톡시)-1,3-벤조티아졸-2-아민(릴루졸(riluzole)) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00022
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 소교 세포의 신호 전달 경로 조절자이다. 일부 경우에, 상기 제제는 소교 세포의 신호 전달을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 GM-CSF(CSF2) 억제제이다. 다른 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 이온 채널 차단제이다. 일부 특정 구현예에서, 상기 제제는 칼슘 채널 차단제이다. 예를 들어 특정 구체예에서, 상기 제제는 디하이드로피리딘 칼슘 채널 차단제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 마이크로RNA 억제제이다. 예를 들어 상기 제제는 miR-155를 표적화한다. 일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 MOR103, Nimodipine, IVIg, 및 LNA-anti-miR-155[문헌 「Butoxsky et al. Ann Neurol., 77(1):75-99 (2015) and Sanz et al., Br J Pharmacol. 167(8): 1702-1711 (2012)」; 「Winter et al., Ann Clin and Transl Neurol. 2328-9503 (2016)」; 「Clinical Trial Study Record Nos.: NCT01517282, NCT00750867」 참조]로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 3-(2-메톡시에틸) 5-프로판-2-일 2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카복실레이트(니모디핀(nimodipine)) 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국 특허 제US3799934호에 기술된 임의의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이다:
Figure pct00023
일부 경우에, 소교 세포 활성화를 감소시키는 상기 제제는 중추신경계에만 영향을 미치고/미치거나 종양 관련 대식세포에는 영향을 미치지 않는 형태로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 소교 세포 정지(microglia quiescence)를 촉진하지만 소교 세포의 수를 제거하거나 감소시키지는 않는다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 예를 들어 문헌 「Ponomarev et al., Nature Medicine, (1):64-70 (2011)」에 기술된 바와 같이 특히 뇌에서 소교 세포의 활동을 억제하는 것을 포함한다.
소교 세포 활성화를 감소시키는 예시적 제제, 및 상기 제제를 투여하기 위한 예시적인 투여 요법은 하기 표 9에 제시되어 있다:
Figure pct00024
C. 기타 제제(예를 들어 사이토카인 표적화 제제)
일부 구현예에서, 면역 요법 및/또는 세포 요법의 독성 증후, 예를 들어 CRS 또는 신경독성을 치료하거나 개선시키는, 상기 제제, 예를 들어 독성-표적화 제제는 사이토카인을 표적화하는 것이며, 예를 들어 사이토카인의 길항제 또는 억제제, 예를 들어 형질전환 성장 인자 베타(TGF-베타), 인터류킨 6(IL-6), 인터류킨 10(IL-10), IL-2, MIP1α(CCL4), TNF 알파, IL-1, 인터페론 감마(IFN-감마) 또는 단핵구 화학 유인 단백질-1(MCP-1)이다. 일부 구현예에서, CRS 또는 신경 독성과 같은 면역 요법 및/또는 세포 요법의 독성 증후을 치료하거나 개선시키는 상기 제제는, 사이토카인 수용체, 예를 들어 IL-6 수용체(IL-6R), IL-2 수용체(IL-2R/CD25), MCP-1(CCL2) 수용체(CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체(TGF-베타 I, II 또는 III ), IFN-감마 수용체(IFNGR), MIP1β 수용체(예를 들어 CCR5), TNF 알파 수용체(예를 들어 TNFR1), IL-1 수용체(IL-1-Rα/IL-1-Rβ), 또는 IL-10 수용체(IL-10R)를 표적화하는(예를 들어 그를 억제하거나 그의 길항제임) 것이다.
면역 요법 및/또는 세포 요법의 독성 증후을 치료하거나 개선시키는 선택된 제제의 양, 예를 들어 CRS 또는 신경독성과 같은 면역요법 및/또는 세포 요법에 대한 독성, 예를 들어의 증후 또는 부작용을 개선하기 위해 투여되는 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 예시적인 유해 사례에는 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 증가, 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제의 증가, 오한, 열성 호중구감소증, 두통, 저혈압, 좌심실 기능장애, 뇌병증, 수두증, 발작 및/또는 떨림이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 (약) 30 mg 내지 (약) 5000 mg, 예를 들어 (약) 50 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 100 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 500 mg 또는 500 mg 내지 (약) 1000 mg의 복용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 (약) 0.5 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, such as (약) 1 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 5 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 25 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 25 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg 또는 (약) 50 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 (약) 1 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 8 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 6 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 4 mg/kg 또는 6 mg/kg 내지 (약) 8 mg/kg의 복용량(각각의 수치를 포함함)으로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 제제는 적어도 또는 적어도 약 또는 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg 이상의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 4 mg/kg 또는 8 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제제는, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하 주사(subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 두개내, 흉곽내 또는 피하 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제제의 양은 약 또는 대략 매일 2회, 매일, 격일로, 주당 3회, 매주, 격주로 또는 한 달에 한 번 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 하기 기재된 바와 같은 제약 조성물 또는 제제와 같은 조성물 또는 제제의 일부로서 투여된다. 따라서, 일부 경우에, 상기 제제를 포함하는 조성물은 하기에 기재된 바와 같이 투여된다. 다른 측면에서, 상기 제제는 단독으로 투여되고 임의의 공지된 허용가능한 투여 경로 또는 조성물 및 약제학적 제형과 관련하여 본원에서 기술된 것에 의해서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 요법 및/또는 세포 요법의 독성 증후, 예를 들어 CRS 또는 신경독성을 치료하거나 개선하는 상기 제제는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 토실리주맙, 실툭시맙, 사릴루맙, 올로키주맙(CDP6038), 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-1019, FE301 또는 FM10이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 IL-6 또는 IL-6 수용체(IL-6R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 IL-6 또는 IL-6R에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 IL-6 활성을 중화하는 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 제제는 토실리주맙(아틀리주맙) 또는 사릴루맙, 항-IL-6R 항체이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국특허 제8,562,991호에 기술된 항-IL-6R 항체이다. 일부 경우에 IL-6을 표적화하는 상기 제제는 항-IL-6 항체, 예를 들어 실툭시맙, 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301, FM101 또는 올로키주맙(CDP6038)이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 리간드-수용체 상호작용을 억제하여 IL-6 활성을 중화할 수 있다. 이러한 일반적인 유형의 접근 방식의 실행 가능성은 인터류킨-1에 대한 자연 발생 수용체 길항제로 입증되었다. 문헌 「Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343:336-340」을 참조한다. 일부 측면에서, 상기 IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제는 IL-6 뮤테인, 예를 들어 미국특허 제5591827호에 기술된 것이다. 일부 구현예에서, 상기 IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 상기 토실리주맙은 상기 제공된 방법 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 (약) 1 mg/kg 내지 12 mg/kg, (약) 4 mg/kg, 8 mg/kg, 또는 10 mg/kg의 용량으로 조기 개입으로 투여됩니다. 일부 구현예에서, 상기 토실리주맙은 정맥내 주입으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 토실리주맙은 아세트아미노펜에 반응하지 않는 10시간 동안 지속되는 39℃ 이상의 지속적인 발열에 투여된다. 일부 구현예에서, 초기 용량의 48시간 후에 증후이 재발하는 경우 토실리주맙의 두 번째 투여가 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 상기 제제는 TGF-α 또는 TGF-β 수용체(예를 들어 TGF-β 수용체 I, II, 또는 III)의 작용제 또는 자극제이다. 일부 경우에, 상기 제제는 TGF-β 활성을 증가시키는 항체, 예를 들어 TGF-β 또는 그의 수용체 중의 하나에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, TGF-β 또는 그의 수용체의 작용제 또는 길항제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 MCP-1(CCL2) 또는 MCP-1 수용체(예를 들어 MCP-1 수용체 CCR2 또는 CCR4)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 MCP-1 활성을 중화하는 항체, 예를 들어 MCP-1 또는 이의 수용체(CCR2 또는 CCR4) 중 하나에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 MCP-1 길항제 또는 억제제는 문헌 「Gong et al. J Exp Med. 1997 Jul 7; 186(1): 131-137 or Shahrara et al. J Immunol 2008; 180:3447-3456」에 기술된 임의의 것이다. 일부 구현예에서, MCP-1 및/또는 그의 수용체(CCR2 또는 CCR4)의 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 IFN-γ 또는 IFN-γ 수용체(IFNGR)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 IFN-γ 활성을 중화하는 항체, 예를 들어 IFN-γ 또는 이의 수용체(IFNGR)에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 측면에서, 상기 IFN-감마 중화 항체는 문헌 「Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92 or Ozmen et al. J Immunol. 1993 Apr 1;150(7):2698-705」에 기술된 임의의 것이다. 일부 구현예에서, IFN-γ/IFNGR의 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 IL-10 또는 IL-10 수용체(IL-10R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 IL-10 활성을 중화하는 항체, 예를 들어 IL-10 또는 IL-10R에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 측면에서, 상기 IL-10 중화 항체는 문헌 「Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92 or Hunter et al. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):7368-75」에 기술된 임의의 것이다. 일부 구현예에서, IL-10/IL-10R의 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 IL-1 또는 IL-1 수용체(IL-1R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 IL-1 수용체 길항제이며, 이는 변형된 형태의 IL-1R, 예를 들어 아나킨라(anakinra)이다[문헌 「Fleischmann et al., (2006) Annals of the rheumatic diseases. 65(8):1006-12)」 참조]. 일부 측면에서, 상기 제제는 IL-1 활성을 중화시키는 항체, 예를 들어 IL-1 또는 IL-1R에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편, 예를 들어 카나키누맙(또한 EP 2277543 참조)이다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, IL-1/IL-1R의 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 종양 괴사 인자(TNF) 또는 종양 괴사 인자 수용체(TNFR)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 TNF 활성을 차단하는 항체, 예를 들어 TNF, 예를 들어 TNFα 또는 그의 수용체(TNFR, 예를 들어 TNFRp55 또는 TNFRp75)에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 측면에서, 상기 제제는 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙 및 에타너셉트로부터 선택된다. 일부 구현예에서, TNF/TNFR의 길항제 또는 억제제인 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 TNF에 영향을 주는 소형 분자, 예를 들어 레날리도마이드이다[예를 들어 문헌 「Muller et al. (1999) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 9 (11):1625」 참조].
일부 구현예에서, 상기 제제는 야누스 키나제(Janus kinase; JAK) 및 2개의 시그널 트랜스듀서(Signal Transducer) 및 전사 활성인자(STAT) 신호 전달 캐스케이드를 통한 신호 전달의 길항제 또는 억제제이다. JAK/STAT 단백질은 사이토카인 및 사이토카인 수용체 신호 전달의 일반적인 구성요소이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 JAK/STAT의 길항제 또는 억제제, 예를 들어 룩소리티닙(예를 들어 문헌 「Mesa et al. (2012) Nature Reviews Drug Discovery. 11(2):103-104」 참조), 토파시티닙(Xeljanz, Jakvinus tasocitinib 및 CP-690550으로도 알려짐), 바리시티닙(LY-3009104, INCB-28050로도 알려짐), 필고티닙(G-146034, GLPG-0634), 간도티닙(LY-2784544), 레스타우르티닙(CEP-701), 모멜로티닙(GS-0387, CYT-387), 파크리티닙(SB1518) 및 우파다시티닙(ABT-494)이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 소형 분자, 단백질 또는 펩티드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 상기 제제는 키나제 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 BTK(Bruton's tyrosine kinase)의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 이브루티닙 또는 아칼라브루티닙이거나 이를 포함한다[예를 들어 문헌 「Barrett et al., ASH 58th Annual Meeting San Diego, CA December 3-6, 2016, Abstract 654; Ruella et al., ASH 58th Annual Meeting San Diego, CA December 3-6, 2016, Abstract 2159」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 제제는 미국특허 제7,514,444; 8,008,309; 8,476,284; 8,497,277; 8,697,711; 8,703,780; 8,735,403; 8,754,090; 8,754,091; 8.957,079; 8,999,999; 9,125,889; 9,181,257; 또는 9,296,753호에 기술된 억제제이다.
일부 구현예에서, 혈액 또는 혈장 여과가 있는 흡수성 수지 기술과 같은 장치를 사용하여 사이토카인 수준을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 사이토카인 수준을 감소시키는데 사용되는 상기 장치는 체외 사이토카인 흡수제와 같은 물리적 사이토카인 흡수제이다. 일부 구현예에서, 물리적 사이토카인 흡수제는 생체 외, 체외 방식으로 혈류에서 사이토카인을 제거하는데 사용할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 다공성 중합체이다. 일부 구현예에서, 상기 제제는 CytoSorb이다[예를 들어 문헌 「Basu et al. Indian J Crit Care Med. (2014) 18(12): 822-824」 참조].
III. 재조합 수용체에 의해서 발현된 재조합 항원 수용체
일부 구현예에서, 제공된 방법과 관련하여 사용 또는 투여되는 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 T 세포 수용체(TCR)와 같은 조작된 항원 수용체를 함유하거나 함유하도록 조작된다. 상기 세포의 집단, 상기 세포를 함유하는 조성물 및/또는 상기 세포에 대해 농축된, 예컨대 T 세포 또는 CD8+ 또는 CD+ 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축되거나 선택된 조성물이 또한 제공된다. 조성물 중에는 예컨대 입양 세포 요법을 위한 투여용 약학 조성물 및 제형이 있다. 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물과 부합되게 대상체, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 유전자 전달은 먼저 세포를 자극하고, 예컨대 세포를 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하고, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 표지자의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 뒤이어 활성화된 세포의 형질도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서 증폭시켜 달성된다.
세포는 일반적으로 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 전이유전자 T 세포 수용체(TCR)와 같은 키메라 항원 수용체(CAR) 및 다른 항원 결합 수용체를 포함하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 또한 수용체 중에는 다른 키메라 수용체가 있다.
A. 키메라 항원 수용체(CAR)
본원에서 제공된 방법 또는 용도의 일부 구현예에서, 키메라 수용체와 같은 키메라 재조합 수용체는, 원하는 항원(예를 들어, 종양 항원)에 대한 특이성을 제공하는 리간드 결합 도메인(예를 들어 항체 또는 항체 단편)을 세포 내 신호전달 도메인과 결합하는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인은 자극 또는 활성화 세포 내 도메인 부분, 예를 들어 1차 활성화 신호 또는 1차 신호를 제공하는 T 세포 자극 또는 활성화 도메인 이다. 일부 구현예에서, 세포 내 도메인은 효과기 기능을 촉진하기 위해 공자극 신호전달 도메인 포함하거나 추가적으로 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포 내로 유전자 조작된 경우 키메라 수용체는 T 세포 활성을 조절할 수 있고, 및 일부 경우에, T 세포 분화 또는 항상성을 조절할 수 있고, 이에 의해 생체 내, 예를 들어 입양 세포 요법에 사용되기 위해 개선된 수명, 생존 및/또는 지속성을 갖는 유전자 조작된 세포를 생성할 수 있다
CAR을 포함하는 예시적 항원 수용체 및 상기 수용체를 조작하고 세포 내로 도입하는 방법은 예를 들어 문헌「국제 출원 공개 번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 및 미국 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353 및 8,479,118 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416」에 기재된 것들 및/또는 문헌「Sadelain 등, Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila 등 (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle 등, Curr. Opin. Immunol., 2012 Ocober; 24(5): 633-39; Wu 등, Cancer, 2012 March 18(2): 160-75」에 기재된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 문헌「미국 특허 번호 제7,446,190호」에 기재된 바와 같은 CAR 및 문헌「국제 출원 공개 번호 WO/2014055668 A1」에 기재된 것을 포함한다. CAR의 예로는 전술한 간행물 중 어느 하나, 예를 들어 문헌「WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190, 미국 특허 번호 8,389,282, Kochenderfer 등, 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang 등 (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens 등, Sci Transl Med. 2013 5(177)」에 개시된 바와 같은 CAR이 포함된다. 또한 문헌「국제 출원 공개 번호 WO2014031687, 미국 출원 번호 US 8,339,645, US 7,446,179, 미국 출원 공개 번호US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190 및 미국 특허 번호 8,389,282」을 참조한다.
키메라 수용체, 예를 들어 CARs 는 일반적으로 세포 외 항원 결합 도메인, 예를 들어 항체 분자의 부분, 일반적으로 scFv 항체 단편과 같은 항체의 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포에서 항원은 정상 또는 비-표적 세포 또는 조직에 비하여 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 정상 세포 상에서 발현되고/거나 조작된 세포 상에서 발현된다.
일부 구현예에서, 특정 항원(또는 마커 또는 리간드), 예를 들어 입양 요법에 의해 표적화될 특정 세포 유형에서 발현되는 항원, 예를 들어 암 마커 및/또는 감쇠 반응을 유도하도록 의도된 항원, 예를 들어 정상 또는 비질병 세포 유형에서 발현된 항원에 대한 특이성을 갖는 CAR이 작제된다. 따라서, CAR은 전형적으로 하나 이상의 항원 결합 분자, 예를 들어 하나 이상의 항원 결합 단편, 도메인 또는 부분 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인 및/또는 항체 분자를 세포 외 부분에 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체 분자의 항원 결합 부분 또는 부분들, 예를 들어 단클론성 항체(monoclonal antibody, mAb)의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)로부터 유래된 단일 사슬 항체 단편(single-chain antibody fragment, scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포 상에 발현된다. 항원 수용체 중에는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)가 있다. 일반적으로, 펩티드 MHC 복합체에 대하여 지시된 TCR 유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 CAR은 또한 TCR 유사 CAR로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 유사 CAR의 MHC-펩티드 복합체에 특이적인 세포 외 항원 결합 도메인은 일부 측면에서 링커 및/또는 막관통 도메인(들)을 통해 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분에 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 분자는 전형적으로 TCR과 같은 천연 항원 수용체를 통한 신호 및 선택적으로 공자극 수용체와 조합하여 상기 수용체를 통한 신호를 모방하거나 이와 유사할 수 있다.
일부 구현예에서, 키메라 수용체(예를 들어 CAR)와 같은 재조합 수용체는 항원(또는 리간드)에 특이적으로 결합하는 것과 같이 결합하는 리간드 결합 도메인을 포함한다. 키메라 수용체에 의해 표적화된 항원 중에는 입양 세포 요법을 통해 표적화될 질병, 병태 또는 세포 유형의 맥락에서 발현되는 것이 있다. 질병 및 병태 중에는 혈액학적 암, 면역계 암, 예를 들어 림프종, 백혈병 및/또는 골수종, 예를 들어 B, T 및 골수성 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종을 포함한 암 및 종양을 포함한 증식성, 신생물성 및 악성 질병 및 장애가 있다.
일부 구현예에서, 항원(또는 리간드)은 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원(또는 리간드)은 정상 또는 비표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질병 또는 병태의 세포, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포 상에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다.
일부 구현예에서, CAR은 세포 표면 상에 발현된 온전한 항원과 같은 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원 결합 단편(예를 들어 scFv)을 함유한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 타겟되는 항원은 αvβ인테그린(avb6 integrin), B세포 성숙 항원(BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 탈수 효소 9(CA9, CAIX 또는 G250으로도 공지), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B(CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 공지), 암배아 항원(CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1(CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 황산염 프로테오글리칸 4(chondroitin sulfate proteoglycan 4, CSPG4), 표피 성장 인자 단백질(EGFR), 타입 III 표피 성장 인자 수용체 돌연변이(EGFR vIII), 표피 당단백질 2(EPG-2), 표피 당단백질 40(EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2(EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5(FCRL5; FC 수용체 상동물 5 또는 FCRH5로도 공지), 태아 아세틸콜린 수용체(태아 AchR), 엽산 결합 단백질(FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2(OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100(gp100), 글리피칸-3(GPC3), G 단백질 결합 수용체 5D(GPRC5D), Her2/neu(수용체 티로신 키나제 erb-B2), Her3(erb-B3), Her4(erb-B4), erbB 2량체, 인간 고분자량 흑색종 관련 항원(HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1(HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2(HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2(IL-13Rα2), 키나제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor, kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자(L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 패밀리 8 멤버 A를 함유하는 루신 리치 반복(Leucine Rich Repeat Containing 8 Family Member A, LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종 관련 항원(MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린(MSLN), c-Met, 뮤린 시토메갈로 바이러스(CMV), 뮤신 1(MUC1), MUC16, 천연 킬러 2 그룹 D 멤버(NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자(NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종 우선 발현 항원(PRAME), 프로게스트론 수용체, 전립선 특이적 항원, 전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이적 막 항원(PSMA), 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1), 서바이빈(survivin), 영양막 당단백질(TPBG, 5T4로도 공지), 종양 관련 당단백질 72(TAG72), 티로시나제 관련 단백질 1(TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 공지), 티로시나제 관련 단백질 2(TRP2, 도파크롬 타우토머라제, 도파크롬 델타 이성화 효소 또는 DCT로도 공지), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2), 빌름스 종양 1(WT-1), 병원체 특이적 또는 병원체 발현 항원 또는 범용 태그 관련 항원 및/또는 비오티닐화 분자 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체 발현 분자이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 타겟되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 거대 B세포 림프종(예를 들어, DLBCL)이고 항원은 CD19 이다.
일부 구현예에서, 항원은 병원체 특이적 또는 병원체 발현 항원이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 바이러스성 항원(예를 들어 HIV, HCV, HBV 등으로부터의 바이러스 항원), 세균성 항원 및/또는 기생 항원이다.
"주요 조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex, MHC)"에 대한 언급은 일부 경우에, 세포 기구에 의해 가공된 펩티드 항원을 포함하여 폴리펩티드의 펩티드 항원과 복합체를 형성할 수 있는 다형성 펩티드 결합 부위 또는 결합 그루브(groove)를 함유하는 단백질, 일반적으로 당단백질을 지칭한다. 일부 경우에, MHC 분자는 TCR 또는 TCR 유사 항체와 같은 T 세포 상의 항원 수용체에 의해 인식 가능한 형상으로 항원 제시를 위해 펩티드와의 복합체로, 즉 MHC 펩티드 복합체를 포함하여 세포 표면 상에 제시되거나 발현될 수 있다. 일반적으로, MHC 클래스 I 분자는 일부 경우에, 3개의 α 도메인 및 비공유 결합된 β마이크로글로불린을 가지며, 막에 걸쳐있는 α 사슬을 갖는 이종 2량체이다. 일반적으로 MHC 클래스 II 분자는 두 개의 막관통 당단백질, α 및 β로 구성되며, 둘 다 전형적으로 막에 걸쳐 있다. MHC 분자는 펩티드에 결합하기 위한 항원 결합 부위 또는 부위들 및 적절한 항원 수용체에 의한 인식에 필요한 서열을 함유하는 MHC의 유효 부분을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 분자는 시토졸에서 유래한 펩티드를 세포 표면으로 전달하고, 여기서 MHC 펩티드 복합체는 T 세포, 예를 들어 일반적으로 CD8+ T 세포이나, 일부 경우에 CD4+ T 세포에 의해 인식된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 II 분자는 소포 시스템에서 유래한 펩티드를 세포 표면으로 전달하며, 이는 전형적으로 CD4+ T 세포에 의해 인식된다. 일반적으로, MHC 분자는 인간에서 인간 백혈구 항원(human leukocyte antigen, HLA) 및 마우스에서 H-2라고 통칭되는 연관된 유전자좌(loci) 그룹에 의해 암호화된다. 따라서, 전형적으로 인간 MHC는 인간 백혈구 항원(HLA)이라고도 할 수 있다.
용어 "MHC 펩티드 복합체(MHC-peptide complex)" 또는 "펩티드 MHC 복합체(peptide-MHC complex)" 또는 이의 변형은 예를 들어 일반적으로 MHC 분자의 결합 그루브(groove) 또는 틈에서 펩티드의 비공유 상호작용에 의한 펩티드 항원과 MHC 분자의 복합체 또는 회합을 지칭한다. 일부 구현예에서, MHC 펩티드 복합체는 세포의 표면 상에 존재하거나 제시된다. 일부 구현예에서, MHC 펩티드 복합체는 TCR, TCR 유사 CAR 또는 이의 항원 결합 부와 같은 항원 수용체에 의해 특이적으로 인식될 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드의 펩티드, 예를 들어 펩티드 항원 또는 에피토프는 예를 들어 항원 수용체에 의한 인식을 위해 MHC 분자와 회합할 수 있다. 일반적으로, 펩티드는 폴리펩티드 또는 단백질과 같은 보다 긴 생물학적 분자의 단편으로부터 유래되거나 이를 기초로 한다. 일부 구현예에서, 펩티드는 전형적으로 약 8 내지 약 24개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 펩티드는 MHC 클래스 II 복합체에서 인식을 위해 (약) 9 내지 22개의 아미노산 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 펩티드는 MHC 클래스 I 복합체에서 인식을 위해 (약) 8 내지 13개의 아미노산 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, MHC 펩티드 복합체와 같은 MHC 분자의 맥락에서 펩티드 인식시, 항원 수용체, 예를 들어 TCR 또는 TCR 유사 CAR은 T 세포 반응, 예를 들어 T 세포 증식, 사이토카인 생성, 세포 독성 T 세포 반응 또는 다른 반응을 유도하는 T 세포에 대한 활성화 신호를 생성하거나 유발시킨다.
일부 구현예에서, TCR 유사 항체 또는 항원 결합부는 공지되어 있거나, 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어 미국 출원 공개 번호 US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; US 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; 및 국제 PCT 공개 번호 WO 03/068201 참조).
일부 구현예에서, MHC 펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합부는 특정 MHC 펩티드 복합체를 함유하는 유효량의 면역원으로 숙주를 면역화함으로써 제조될 수 있다. 일부 경우에, MHC 펩티드 복합체의 펩티드는 종양 항원, 예를 들어 하기 기재된 바와 같은 범용 종양 항원, 골수종 항원 또는 다른 항원과 같이 MHC에 결합할 수 있는 항원의 에피토프이다. 일부 구현예에서, 이어서 유효량의 면역원이 면역 반응을 유도하기 위해 숙주에 투여되고, 여기서 면역원은 MHC 분자의 결합 그루브에서 펩티드의 3차원 제시에 대하여 면역 반응을 유도하기에 충분한 기간 동안 이의 3차원 형태를 유지한다. 이어서 숙주로부터 수집된 혈청은 MHC 분자의 결합 그루브에서 펩티드의 3차원 제시를 인식하는 바람직한 항체가 생성되고 있는지를 결정하기 위해 분석된다. 일부 구현예에서, 항체가 MHC 펩티드 복합체와 MHC 분자 단독, 관심 펩티드 단독 및 MHC와 무관한 펩티드의 복합체를 식별할 수 있는지 확인하기 위해 생성된 항체를 평가할 수 있다. 이어서 원하는 항체를 단리할 수 있다.
일부 구현예에서, MHC 펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합부는 파지 항체 라이브러리와 같은 항체 라이브러리 디스플레이 방법을 채택함으로써 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 라이브러리의 멤버가 CDR 또는 CDR들의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이되는 돌연변이 Fab, scFv 또는 다른 항체 형태의 파지 디스플레이 라이브러리가 생성될 수 있다. 예를 들어 문헌「미국 출원 공개 번호 US20020150914, US2014/0294841; 및 Cohen CJ. 등 (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332」을 참조한다.
본 명세서에서 용어 “항체(antibody)”는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원-결합) 항체 단편을 포함하는 다클론 및 단클론 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 가변 중쇄(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작된 및/또는 달리 형질전환된 형태의 면역글로불린, 예를 들어 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 완전한 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적(예를 들어, 이중 특이적) 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포괄한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 본 명세서에서 이의 기능성 항체 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포괄한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 단백질, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 전장일 수 있거나 또는 항원 결합 부분(Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 FV 단편(scFv))일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 불변 영역은 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 특히 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되고, 보다 특히, IgG1(예를 들어, 인간 IgG1)으로부터 선택된다. 다른 구현예에서, 항체 경쇄 불변 영역은 예를 들어, 카파 또는 람다, 특히 카파에서 선택된다.
항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편(antibody fragment)"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 ; 디아바디; 선형 항체; 가변 중쇄(VH) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 단일 도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 특정 구현예에서, 항체는 scFv와 같은 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편이다.
일부 경우에, 용어 “초가변 영역(hypervariable region)”또는 “HVR”과 동의어인 “상보성 결정 영역(complementarity determining region)”및 “CDR”은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. “프레임워크 영역(framework region)”및 “FR”은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌 「Kabat 등 (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,”5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat”넘버링 체계); Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia”넘버링 체계); MacCallum 등, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,”J. Mol. Biol. 262, 732-745,”(“Contact” 넘버링 체계); Lefranc MP 등, “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,”Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT”넘버링 체계); Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,”J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho”넘버링 체계); 및 Martin 등, “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,”PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM”넘버링 체계)」 에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 체계는 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면 Chothia 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. Kabat 및 Chothia 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 “30a”에 의해 수용되는 삽입(insertion) 및 일부 항체에서 나타나는 결실(deletion)이 있는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기반한다. 이 두 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(“삽입-결실(indel)”을 배치하여 차이가 있는 넘버링이 된다. Contact 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 기반하며 여러 측면에서 Chothia 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기반한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다.
하기 표 10은 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 각각 확인된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계 둘 다를 사용하여 잔기 넘버링이 나열된다. FR들은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR들 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
Figure pct00025
따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예를 들어 이의 가변 영역의 “CDR”또는 “상보적 결정 영역(complementary determining region)”또는 개별 지정 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에 있는 해당 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급될 경우, 상기 CDR은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내의 해당 CDR(예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는다고 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계를 사용하여 기재되지만, 제공된 항체는 전술한 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예를 들어 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계는 Kabat, Chothia, AbM 또는 Contact 방법 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같이 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
용어 “가변 영역(variable region)”또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VL) 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, 문헌「Kindt 등 Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007) 」을 참조한다). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 각각 선별하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VL 또는 VH 도메인을 사용하여 단리될 수 있다(예를 들어, 문헌 「Portolano 등, J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson 등, Nature 352:624-628 (1991)」 을 참조한다).
단일 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR 는 본 명세서 또는 알려진 항원, 예를 들어 암 마커 또는 표적화될 세포 또는 질병, 예를 들어 종양 세포 또는 암 세포, 예를 들어 기재된 임의의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 도메인을 포함한다.
항체 단편은 온전한 항체의 단백질 가수 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 합성 링커, 예를 들어 펩티드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것과 같이 자연적으로 발생하지 않고/거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않을 수 있는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합으로 생성된 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 scFv이다.
“인간화된(humanized)”항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 “인간화된 형태(humanized form)”는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서, 통상적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)의 해당 잔기로 치환되어 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화도가 회복되거나 개선된다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 CD19이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어, 문헌「미국 특허 공개 번호 US 2016/0152723」에 기재된 바와 같은 인간 항체이다.
일부 구현예에서 scFv 및/또는 VH 도메인은 FMC63으로부터 유래된다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체를 지칭한다(Ling, N. R., 등 (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열번호 38 및 39에 각각 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2 및 서열번호 40 또는 54에 제시된 CDR-H3; 및 서열번호 35에 제시된 CDR-L1 및 서열번호 36 또는 55에 제시된 CDR-L2 및 서열번호 37 또는 34에 제시된 CDR-L3을 포함한다.　 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 35의 CDR-L1 서열, 서열번호 36의 CDR-L2 서열, 서열번호 37의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 38의 CDR-H1 서열, 서열번호 39의 CDR-H2 서열, 서열번호 40의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 41에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열번호 42에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다.　 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 56에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 VH, 링커 및 VL 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 VL, 링커 및 VH 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 57에 제시된 뉴클레오티드 서열 또는 서열번호 57에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다.　 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 43에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서 scFv는 SJ25C1로부터 유래된다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체이다(Ling, N. R., 등 (1987). Leucocyte typing III. 302).　 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열번호 47-49에 각각 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3, 및 서열번호 44-46에 각각 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.　 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열번호 44의 CDR-L1 서열, 서열번호 45의 CDR-L2 서열, 서열번호 46의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 47의 CDR-H1 서열, 서열번호 48의 CDR-H2 서열, 서열번호 49의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄를 포함한다.　 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 50에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열번호 51에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 52에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 VH, 링커 및 VL 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 VL, 링커 및 VH 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 53에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원은 CD20이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD20에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD20에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 리툭시맙 scFv와 같은 리툭시맙이거나 이로부터 유래된 항체이다.
일부 구현예에서, 항원은 CD22이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD22에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD22에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 m971 scFv와 같은 m971이거나 이로부터 유래된 항체이다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 BCMA이다. 일부 구현예에서, scFv는 BCMA 에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 문헌「 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/090327 및 WO 2016/090320」 에 제시된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 GPRC5D이다. 일부 구현예에서, scFv는 GPRC5D에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, GPRC5D에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 문헌「국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/090329 및 WO 2016/090312」에 제시된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편을 함유하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv 를 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체(TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 의 항체 부분은 적어도 면역 글로불린 불변 영역, 예를 들어 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 스페이서는 스페이서의 부재와 비교하여 항원 결합 후에 세포의 반응성 증가를 제공하는 길이일 수 있다. 예시적인 스페이서는 문헌「Hudecek 등 (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, 국제 출원 공개 번호 WO2014031687, 미국 특허 번호 8,822,647 또는 특허 출원 공개 번호 US2014/0271635」에 기재된 것을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 ESKYGPPCPPCP (서열번호 1)을 가지며, 서열번호 2에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD 의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 1, 3, 4 또는 5 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 26-34에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 26-34 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 항원 수용체는 직접 또는 간접적으로 세포 외 도메인에 연결된 세포 내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인 및 세포 내 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 외 도메인은 ITAM 을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 항원 인식 도메인(예를 들어, 세포 외 도메인)은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화를 모방하는 신호 전달 성분과 같은 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호에 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 세포 외 도메인(예를 들어, scFv)에 연결되거나 융합된 막관통 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원 결합 성분(예를 들어, 항체)은 하나 이상의 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역에 연결된다.
일 구현예에서, 수용체(예를 들어, CAR)에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 회합하는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합을 피하도록 아미노산 치환에 의해 변형되거나 선택되어 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용이 최소화된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막관통 영역은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154로부터 유래된 것을 포함한다(즉, 적어도 이들의 막관통 영역(들)을 포함한다). 대안적으로 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿(triplet)이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 측면에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한 것이다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부위를 포함한다.
일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 세포 외 도메인 및 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 외 도메인 및 막관통은 본 명세서에 기재된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 수용체는 막관통 도메인이 유래된 분자의 세포 외 부분, 예를 들어 CD28 세포외 부분을 포함한다.
세포내 신호 전달 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합으로 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿(doublet)을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포질 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 두 종류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR을 통한 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 서열(1차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2차 또는 공자극 신호를 제공하는 서열(2차 세포질 신호 전달 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 신호 전달 요소 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
CAR 과 같은 수용체는 일반적으로 적어도 하나의 세포내 신호전달 요소 또는 요소를 포함한다. 일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예에는 CD3 제타 사슬, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유래된 것이 포함된다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 CD3 제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 일부 또는 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, 수용체는 T 세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타(CD3-ζ사슬과 같은 TCR 복합체의 세포내 성분 또는 신호 전달 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 항원 결합 부위는 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 또한 Fc 수용체 γCD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR은 CD3-제타(CD3-ζ또는 Fc 수용체 γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이에 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 다른 키메릭 수용체의 결찰시, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포내 신호 전달 도메인은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 효과기 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 자극 및/또는 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 맥락에서, CAR은 T 세포의 기능, 예를 들어 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예를 들어 사이토카인 또는 기타 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인의 절단 부분은 예를 들어 그것이 효과기 기능 신호를 형질도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인 또는 도메인들, 및 일부 측면에서는 또한 천연 맥락에서 항원 수용체 결합에 따라 신호 전달을 개시하기 위해 이러한 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체의 서열을 포함한다.
천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호가 필요하다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR이 동일한 세포에서 발현되고 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자의 세포 내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 공자극 수용체, 예를 들어 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS의 신호 전달 영역 및/또는 막관통 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 신호 전달 영역 및 공자극 성분 둘 다를 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 예를 들어 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에서 T 세포 공자극 분자의 세포 내 도메인을 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
일부 구현예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR 및 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO2014/055668 참조). 일부 측면에서, 세포는 하나 또는 그 이상의 자극성 또는 활성화 CAR 및/또는 공자극 CAR이다. 일부 구현예에서, 세포는 또한 억제성 CAR(iCAR, Fedorov 등, Sci. Transl. Medicine, 5(215) December, 2013 참조), 질환 또는 병태와 연관되고/되거나 이에 대해 특이적인 항원 이외의 항원을 인식하는 CAR을 포함하고, 이로써 질병-표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 신호는 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되어 예를 들어 표적외 효과(off-target effect)를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 2개의 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제 신호를 세포에 유도하여, 항원에 대한 수용체 중 하나의 결찰은 세포를 활성화하거나 반응을 유도하지만, 항원에 대한 제2 억제성 수용체의 결찰은 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 활성화 CAR 및 억제성 CARs(iCARs)을 조합하는 예가 있다. 예를 들어, 활성화 CAR이 질병 또는 병태에서 발현되나 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되나 질병 또는 병태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합하는 맥락에서 오프 타겟(off-target) 효과의 가능성을 감소시키는 것과 같은 전략이 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 키메라 수용체는 억제 CAR(예를 들어 iCAR)이거나 이를 포함하고 면역 반응, 예를 들어 세포에서 ITAM 및/또는 공자극 촉진 반응을 약화 또는 억제하는 세포 내 성분을 포함한다. 상기 세포 내 신호 전달 성분의 예는 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR을 포함한 EP2/4 아데노신 수용체를 포함한 면역 체크포인트 분자에서 발견되는 것이다. 일부 측면에서, 조작된 세포는 상기 억제 분자의 또는 이로부터 유래된 신호 전달 도메인을 포함하는 억제성 CAR를 포함하여, 이것이 예를 들어, 활성화 및/또는 공자극 CAR에 의해 유도되는 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.
특정 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3(예를 들어, CD3-제타) 세포 내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에 하나 이상, 예를 들어 2개 이상의 공자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 수용체는 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 마커 및/또는 세포를 포함하며, 추가적으로 대리 마커, 예를 들어 수용체를 발현하도록 형질도입 또는 조작된 세포를 확인하는데 사용되는 세포 표면 마커 를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 마커는 CD34, NGFR, 또는 표피 성장 인자 수용체, 예를 들어 표면 수용체(예를 들어, tEGFR)절단된 버전을 포함할 수 있다.일부 구현예에서, 마커를 암호화하는 핵산은 링커 서열, 예를 들어 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 선택적으로 링커 서열은 문헌「국제 출원 공개 번호 WO2014031687」에 개시된 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 마커는 링커 서열, 예를 들어 T2A 절단 가능한 링커 서열에 선택적으로 연결된 절단형 EGFR(tEGFR)일 수 있다.
절단형 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는 서열번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. T2A 링커 서열은 서열번호 6 또는 17에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 6 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 T 세포 표면 또는 이의 부위에서 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예를 들어 세포 표면 단백질 분자이다. 일부 구현예에서, 분자는 비-자기 분자, 예를 들어, 비-자기 단백질, 즉, 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역계에 의해 "자기"로 인식되지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않거나 및/또는 유전 공학, 예를 들어 성공적으로 공학처리된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것 외에는 어떠한 효과도 생성하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 입양 전달 및 리간드와의 만나는 세포의 반응을 향상 및/또는 약화시키기 위한 공자극 또는 면역 체크포인트 분자와 같이 생체내에서 마주치게 될 세포에 대한 리간드와 같은 일부 원하는 효과를 달리 발휘하는 치료 분자 또는 분자일 수 있다.
일부 경우에, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합 시 CD3-사슬 유도 신호만을 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137과 같은 공자극 수용체로부터 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 상기 신호 및 공자극 신호를 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 일부 측면에서 상이한 공자극 수용체의 다수의 공자극 도메인을 포함하는 것이다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인 및 CD28의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인 및 4-1BB의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 상기 구현예에서, 수용체는 Ig 분자, 예를 들어 인간 Ig 분자의 일부, 예를 들어 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지, 예를 들어 힌지 전용 스페이서를 함유하는 스페이서를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR 의 막관통 도메인은 인간 CD28의 막관통 도메인(예를 들어, 수탁 번호: P10747.1) 또는 이의 변이체, 예를 들어 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 8에 대해 (약) 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이거나 이를 포함하며; 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 일부를 함유하는 막관통 도메인은 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이에 대해 (약) 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포 내 신호전달 부분은 인간 CD28 또는 이의 기능적 변이체 또는 이의 일부의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인, 예를 들어, 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL의 GG로의 치환을 갖는 상기 도메인을 포함한다. 예를 들어, 세포 내 신호 전달 도메인은 서열번호 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 10 또는 11에 대해 (약) 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 내 도메인은 4-1BB(예를 들어, 수탁 번호: Q07011.1) 또는 이의 기능성 변이체 또는 이의 일부의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인, 예를 들어 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 12에 대해 (약) 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포 내 신호전달 부분은 인간 CD3 제타 자극성 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체, 예를 들어 인간 CD3ζ의 동형 단백질 3(수탁 번호: P20963.2)의 112 AA 세포질 도메인 또는 문헌「미국 특허 번호 7,446,190 또는 미국 특허 번호 8,911,993」에 기재된 바와 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 서열번호 13, 14 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 13, 14 또는 15에 대해 (약) 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 스페이서는 IgG의 힌지 영역 단독, 예를 들어 IgG4 또는 IgG1의 힌지 단독, 예를 들어 서열번호 1에 제시된 힌지 전용 스페이서를 함유한다. 다른 구현예에서, 스페이서는 CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결된 Ig 힌지, 예를 들어 선택적으로 CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4-유래 힌지이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 4에 제시된 바와 같이 CH2 및 CH3 도메인에 연결된 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열번호 3에 제시된 바와 같이 CH3 도메인에만 연결된 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 공지된 가요성 링커와 같은 다른 가요성 링커이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 상기 CAR은 scFv, 스페이서, 예를 들어 면역글로불린 분자의 일부, 예를 들어 힌지 영역 및/또는 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역, 예를 들어 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유도된 막관통 도메인, CD28-유도된 세포내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타 신호 전달 도메인의 전부 또는 일부를 함유하는 막관통 도메인을 포함한다.
특정 구현예에서, CAR 는 FMC63 유래 scFv 항원 결합 도메인; 면역글로불린 힌지 스페이서, 막관통 도메인, 및 4-1BB의 신호전달 영역인 공동자극 신호전달 영역 및 CD3-제타(CD3ζ사슬의 신호전달 영역을 포함하는 세포내 신호전달 영역을 포함하는 CD19-유도 CAR 이다. 일부 구현예에서, scFv 는 서열번호 43 의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv 는 아미노산 서열 RASQDISKYLN (서열번호 35), 아미노산 서열 SRLHSGV (서열번호 36), 및 아미노산 서열 GNTLPYTFG (서열번호 37)을 포함하는 CDR 을 갖는 VL, 및 아미노산 서열 DYGVS (서열번호 38), 아미노산 서열 VIWGSETTYYNSALKS (서열번호 39) 및 YAMDYWG (서열번호 40)을 포함하는 CDR 을 갖는 VH 를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호 8 의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열번호:8 과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 4-1BB 공자극 신호전달 도메인은 서열번호 12 의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 4-1BB 공자극 신호전달 도메인은 서열번호 12 와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3-제타 도메인은 서열번호 13 의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3-제타 신호전달 도메인은 이와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD19-유도 CAR 은 CD19와 결합하고, 사이토카인 생산 및/또는 T 세포에서 발현되고, CAR 을 통해, 예를 들어 CD19 에 결합함으로써 자극될 때 CD19+ 표적 세포에 대한 세포 독성을 조절한다.
일부 구현예에서, CAR 구조를 암호화하는 핵산 분자는 T2A 리보솜 스킵 요소 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어 CAR 을 암호화하는 서열의 하류를 암호화 하는 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, T2A 리보솜 스킵 요소를 암호화하는 서열은 서열번호 6 또는 17, 또는 서열번호 6 또는 17과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열이다. 일부 구현예에서, 항원 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 T 세포는 이러한 세포를 감지하는 마커로 사용될 수 있는 비-면역원성 선택 에피토프(예를 들어, 동일한 구조에서 두 단백질 발현을 위해 T2A 리보솜 교환으로 분리되는 CAR 및 EGFRt를 암호화하는 구조의 도입을 통해)로 절단된 EGFR(EGFRt) 를 발현하도록 제조될 수 있다 (U.S. 특허 No. 8,802,374 를 참고한다). 일부 구현예에서, tEGFR 서열을 암호화 하는 서열은 서열번호 7 또는 16, 또는 서열번호 7 또는 16와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열이다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩티드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 건너뛰기) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음 펩티드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, 문헌「de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 deFelipe 등 Traffic 5:616-626 (2004) 」 참조). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 여기에 개시된 방법 및 핵산에 사용될 수 있는 2A 서열의 예는, 이에 국한되는 것은 아니나, 문헌「미국 특허 공개 번호 20070116690」에 개시된 바와 같은 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열번호 21), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열번호 20), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열번호 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열번호 18 또는 19)이 있다.
대상체에 투여된 세포에 의해 발현되는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 은 일반적으로 치료되는 질환 또는 상태 또는 이의 세포에서 발현되거나, 이와 관련되고/되거나 이에 대해 특이적인 분자를 인식하거나 특이적으로 결합한다. 분자, 예를 들어 항원에 대한 특이적 결합시, 수용체는 일반적으로 ITAM-형질도입된 신호와 같은 면역자극 신호를 세포 내로 전달하여 질병 또는 상태를 표적으로 하는 면역 반응을 촉진한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 질환 또는 병태의 세포 또는 조직에 의해 발현되거나 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
B. T 세포 수용체(TCRs)
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 T 세포와 같은 조작된 세포는 종양, 바이러스 또는 자가 면역 단백질의 항원과 같은 표적 폴리펩티드의 펩티드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포 수용체(TCR) 또는 이의 항원 결합 부분을 발현하는 세포이다.
일부 구현예에서, "T 세포 수용체(T cell receptor)"또는 "TCR"은 가변 α 및 β사슬(각각 TCRα 및 TCRβ로도 공지) 또는 가변 γ및 δ사슬(각각 TCRα 및 TCRβ로도 공지) 또는 이의 항원 결합 부분을 함유하는 분자이고 이는 MHC 분자에 결합된 펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ형태이다. 전형적으로, αβ및 γδ형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만, 이를 발현하는 T 세포는 별개의 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포 표면에서 또는 가용성 형태로 발견될 수 있다. 일반적으로 TCR은 T 세포(또는 T 림프구)의 표면에서 발견되며, 이는 일반적으로 주요 조직 적합성 복합체(MHC) 분자에 결합된 항원의 인식을 담당한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "TCR"은 전체 TCR뿐만 아니라 항원 결합 부분 또는 이의 항원 결합 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ형태 또는 γδ형태의 TCR을 포함하는 온전한 또는 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 전장 미만의 TCR이지만 MHC 펩티드 복합체에 결합하는 것과 같이 MHC 분자에 결합된 특정 펩티드에 결합하는 항원 결합 부분이다. 일부 경우에, TCR의 항원 결합 부분 또는 단편은 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부만을 함유할 수 있으나, 그럼에도 전체 TCR이 결합하는 MHC 펩티드 복합체와 같은 펩티드 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 부분은 특정 MHC 펩티드 복합체에 결합하기 위한 결합 부위를 형성하기에 충분한 TCR의 가변 도메인, 예를 들어 TCR의 가변 α 사슬 및 가변 β사슬을 함유한다. 일반적으로, TCR의 가변 사슬은 펩티드, MHC 및/또는 MHC 펩티드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR의 가변 도메인은 초 가변 루프 또는 상보성 결정 영역(CDR)을 함유하며, 이는 일반적으로 항원 인식 및 결합 능력 및 특이성에 대한 1차 기여자이다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 또는 이의 조합물은 주어진 TCR 분자의 항원 결합 부위의 전부 또는 실질적으로 전부를 형성한다. TCR 사슬의 가변 영역 내의 다양한 CDR은 일반적으로 CDR에 비해 TCR 분자 중에서 일반적으로 가변성을 덜 나타내는 프레임워크 영역(FR)으로 분리된다(예를 들어 Jores 등, Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia 등, EMBO J. 7:3745, 1988 참조; 또한 Lefranc 등, Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003 참조). 일부 구현예에서, CDR3은 항원 결합 또는 특이성을 담당하는 주요 CDR이거나, 항원 인식 및/또는 펩티드 MHC 복합체의 가공된 펩티드 부분과의 상호 작용을 위한 주어진 TCR 가변 영역에서 3개의 CDR 중 가장 중요하다. 일부 맥락에서, 알파 사슬의 CDR1은 특정 항원 펩티드의 N 단말 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 맥락에서, 베타 사슬의 CDR1은 펩티드의 C-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 맥락에서, CDR2는 MHC 펩티드 복합체의 MHC 부분과의 상호 작용 또는 인식을 담당하는 1차 CDR이거나 이에 가장 강력하게 기여한다. 일부 구현예에서, β사슬의 가변 영역은 추가의 초 가변 영역(CDR4 또는 HVR4)을 함유할 수 있으며, 이는 일반적으로 항원 인식이 아닌 초 항원 결합에 관여한다(Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).
일부 구현예에서, TCR은 또한 불변 도메인, 막관통 도메인 및/또는 짧은 세포질 꼬리를 함유할 수 있다(예를 들어, Janeway 등, Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997 참조). 일부 측면에서, TCR 각 사슬은 1개의 N 말단 면역 글로불린 가변 도메인, 1개의 면역 글로불린 불변 도메인, 막관통 영역 및 C 말단 끝에서 짧은 세포질 꼬리를 소유할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 신호 전달 매개에 관여하는 CD3 복합체의 불변 단백질과 회합한다.
일부 구현예에서, TCR 사슬은 하나 이상의 불변 도메인을 함유한다. 예를 들어, 주어진 TCR 사슬(예를 들어, α-사슬 또는 β사슬)의 세포 외 부분은 세포막에 인접한 2개의 면역 글로불린 유사 도메인, 예를 들어 가변 도메인(예를 들어 Vα 또는 Vβ전형적으로 Kabat 넘버링(Kabat 등, “of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.)에 기초한 1 내지 116 아미노산) 및 불변 도메인(예를 들어 α 사슬 불변 도메인 즉 Cα, 전형적으로 Kabat 넘버링에 기초한 사슬의 117 내지 259 위치 또는 Cβ전형적으로 Kabat에 기초한 사슬의 117 내지 295 위치)을 함유할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 2개의 사슬에 의해 형성된 TCR의 세포 외 부분은 2개의 막 근위 불변 도메인과 2개의 막 원위 가변 도메인을 함유하고, 상기 가변 도메인 각각은 CDR을 함유한다. TCR의 불변 도메인은 시스테인 잔기가 이황화물 결합을 형성하여 TCR 2개의 사슬을 연결하는 짧은 연결 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 각각의 α 및 β사슬에 추가 시스테인 잔기를 가질 수 있어서, TCR은 불변 도메인에서 2개의 이황화물 결합을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR 사슬은 막관통 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 양으로 하전된다. 일부 경우에, TCR 사슬은 세포질 꼬리를 함유한다. 일부 경우에, 구조는 TCR이 CD3 및 이의 하위 단위와 같은 다른 분자와 회합하도록 한다. 예를 들어, 막관통 영역을 가진 불변 도메인을 함유하는 TCR은 세포막에 단백질을 고정하고 CD3 신호 전달 장치 또는 복합체의 불변 하위 단위와 회합할 수 있다. CD3 신호 전달 하위 단위(예를 들어 CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ 사슬)의 세포 내 꼬리는 TCR 복합체의 신호 전달 용량에 관여하는 하나 이상의 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프 즉 ITAM을 함유한다.
일부 구현예에서, TCR은 2개의 사슬 α 및 β또는 선택적으로 γ및 δ의 이종2량체일 수 있거나 단일 사슬 TCR 작제물일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 예를 들어 이황화물 결합 또는 이황화물 결합들에 의해 연결되는 2개의 별개의 사슬(α 및 β사슬 또는 γ및 δ사슬)을 함유하는 이종2량체이다.
일부 구현예에서, TCR은 Vα, β사슬 서열과 같은 공지된 TCR 서열(들)로부터 생성될 수 있으며, 이에 대해 실질적으로 전장 코딩 서열이 용이하게 이용가능하다. V 사슬 서열을 포함한 전장 TCR 서열을 세포 출처로부터 수득하는 방법이 잘 알려져 있다. 일부 구현예에서, TCR을 암호화하는 핵산은 예를 들어 주어진 세포 또는 세포들 내의 또는 이로부터 단리된 TCR 암호화 핵산의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 증폭에 의해 또는 공개적으로 이용 가능한 TCR DNA 서열의 합성에 의해 다양한 출처로부터 수득될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 생물학적 출처, 예를 들어 세포, 예를 들어 T 세포(예를 들어, 세포 독성 T 세포), T 세포 하이브리도마 또는 기타 공개적으로 이용 가능한 출처로부터 수득된다. 일부 구현예에서, T 세포는 생체 내에서 단리된 세포로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 흉선에서 선택된 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 네오에피토프 제한 TCR이다. 일부 구현예에서, T 세포는 배양된 T 세포 하이브리도마 또는 클론일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분 또는 이의 항원 결합 단편은 TCR 서열에 대한 지식으로부터 합성적으로 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 표적 폴리펩티드 항원 또는 이의 표적 T 세포 에피토프에 대한 후보 TCR의 라이브러리를 스크리닝하여 확인되거나 선택된 TCR로부터 생성된다. TCR 라이브러리는 PBMC, 비장 또는 기타 림프구 기관에 존재하는 세포를 포함하여 대상체로부터 단리된 T 세포로부터의 Vα 및 Vβ레퍼토리를 증폭하여 생성될 수 있다. 일부 경우에, T 세포는 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocyte, TIL)로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 CD4+ 또는 CD8+ 세포로부터 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR는 정상적인 건강한 대상체의 T 세포 출처, 즉 정상 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR는 유병 대상체의 T 세포 출처, 즉 유병 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간으로부터 수득된 T 세포와 같은 샘플에서 예를 들어 RT-PCR에 의해 Vα 및 Vβ의 유전자 레퍼토리를 증폭시키기 위해 퇴화(degenerate) 프라이머가 사용된다. 일부 구현예에서, scTv 라이브러리는 증폭된 생성물이 클로닝되거나 조립되어 링커에 의해 분리되는 나이브(naive) Vα 및 Vβ라이브러리로부터 조립될 수 있다. 대상체와 세포의 출처에 따라, 라이브러리는 HLA 대립유전자 특이적일 수 있다. 대안적으로, 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 모 또는 스캐폴드 TCR 분자의 돌연변이 발생 또는 다양화에 의해 생성될 수 있다. 일부 측면에서, TCR은 예를 들어 α 또는 β사슬의 예를 들어 돌연변이 유발에 의해 유도된 진화에 노출된다. 일부 측면에서, TCR의 CDR 내 특정 잔기가 변경된다. 일부 구현예에서, 선택된 TCR은 친화도 성숙에 의해 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 T 세포는 예를 들어 펩티드에 대한 CTL 활성을 평가하기 위해 스크리닝함으로써 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 예를 들어 항원 특이적 T 세포에 존재하는 TCR은 예를 들어 결합 활성, 예를 들어 항원에 대한 특정 친화도 또는 친화력에 의해 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분은 변형되었거나 조작된 것이다. 일부 구현예에서, 예를 들어 특정 MHC 펩티드 복합체에 대한 높은 친화도를 갖는 변경된 특성을 가진 TCR을 생성하기 위해 유도 진화 방법이 사용된다. 일부 구현예에서, 유도 진화는 효모 디스플레이(Holler 등 (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler 등 (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), 파지 디스플레이(Li 등 (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54) 또는 T 세포 디스플레이(Chervin 등 (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84)를 포함하되 이에 국한되지 않는 디스플레이 방법에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 디스플레이 접근 방식은 공지된 모 또는 참조 TCR을 조작 또는 변형하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, CDR의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이되고 원하는 변경된 특성, 예를 들어 원하는 표적 항원에 대한 보다 높은 친화도를 갖는 돌연변이가 선택되는, 돌연변이된 TCR을 생성하기 위한 템플릿으로 야생형 TCR이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 관심 TCR의 제조 또는 생성에 사용하기 위한 표적 폴리펩티드의 펩티드는 공지되어 있거나 용이하게 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 항원 결합 부분을 생성하는데 사용하기에 적합한 펩티드는 하기 기재된 표적 폴리펩티드와 같은 관심 표적 폴리펩티드에서 HLA 제한 모티프의 존재에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드는 이용 가능한 컴퓨터 예측 모델을 사용하여 식별된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 결합 부위를 예측하기 위한 상기 모델은 ProPred1(Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237) 및 SYFPEITHI(Schuler 등 (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007 참조)를 포함하되 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, MHC 제한 에피토프는 HLA-A0201이며, 이는 모든 백인의 약 39-46%에서 발현되고 따라서, TCR 또는 다른 MHC 펩티드 결합 분자를 제조하는데 사용하기 위한 MHC 항원의 적합한 선택을 나타낸다.
컴퓨터 예측 모델을 사용한 프로테아좀 및 면역 프로테아좀에 대한 HLA-A0201 결합 모티프 및 절단 부위가 공지되어 있다. MHC 클래스 I 결합 부위를 예측하기 위해, 상기 모델은 ProPred1(Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001에 보다 상세하게 기재됨) 및 SYFPEITHI(Schuler 등 SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007 참조)을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분은 결합 특성과 같은 하나 이상의 특질이 변경된 재조합으로 생산된 천연 단백질 또는 이의 돌연변이 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 인간, 마우스, 래트 또는 다른 포유동물과 같은 다양한 동물 종 중 하나에서 유래될 수 있다. TCR은 세포 결합 또는 가용성 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법의 목적을 위해, TCR은 세포의 표면 상에 발현된 세포 결합 형태이다.
일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 항원 결합 부분이다. 일부 구현예에서, TCR은 2량체성 TCR(dimeric TCR, dTCR)이다. 일부 구현예에서, TCR은 단일 사슬 TCR(single-chain TCR, sc-TCR)이다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR은 문헌「WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186」에 기재된 바와 같은 구조를 가지고 있다.
일부 구현예에서, TCR은 막관통 서열에 해당하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 세포질 서열에 해당하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 CD3과 TCR 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR을 포함하는 임의의 TCR은 T 세포 표면 상에 활성 TCR을 생성하는 신호 전달 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 세포의 표면 상에 발현된다.
일부 구현예에서 dTCR은 TCRα 사슬 가변 영역 서열에 해당하는 서열이 TCRα 사슬 불변 영역 세포 외 서열에 해당하는 서열의 N 말단에 융합된 제1 폴리펩티드 및 TCRβ사슬 가변 영역 서열에 해당하는 서열이 TCRβ사슬 불변 영역 세포 외 서열에 해당하는 N 말단 서열에 융합된 제2 폴리펩티드를 함유하고, 제1 및 제2 폴리펩티드는 이황화물 결합에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 결합은 천연 2량체 αβTCR에 존재하는 천연 사슬 간 이황화물 결합에 해당할 수 있다. 일부 구현예에서, 사슬 간 이황화물 결합은 천연 TCR에 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나 이상의 시스테인이 dTCR 폴리펩티드 쌍의 불변 영역 세포 외 서열에 편입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비천연 이황화물 결합이 모두 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 막에 고정하는 막관통 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, dTCR은 가변 α 도메인, 불변 α 도메인 및 불변 α 도메인의 C-말단에 부착된 제1 2량체화 모티프를 함유하는 TCRα 사슬 및 가변 β도메인, 불변 β도메인 및 불변 β도메인의 C-말단에 부착된 제1 2량체화 모티프를 포함하는 TCRβ사슬을 함유하고, 여기에서 제1 및 제2 2량체화 모티프는 TCRα 사슬과 TCRβ사슬을 서로 연결하는 제1 2량체화 모티프에 있는 아미노산과 제2 2량체화 모티프에 있는 아미노산 간의 공유 결합을 형성하기 위해 쉽게 상호 작용한다.
일부 구현예에서, TCR은 scTCR이다. 전형적으로, scTCR은 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다(예를 들어, Soo Hoo, W. F. 등 PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wulfing, C. and Pluckthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. 등 PNAS (USA) 90 3830 (1993); 국제 출원 공개 번호 WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; 및 Schlueter, C. J. 등 J. Mol. Biol. 256, 859 (1996) 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 도입된 비천연 사슬 간 이황화물 결합을 함유하여 TCR 사슬의 회합을 용이하게 한다(예를 들어 국제 출원 공개 번호 WO 03/020763 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 이의 C-말단에 융합된 이종 루신 지퍼(leucine zipper)가 사슬 회합을 촉진하는 비이황화물 연결 절단형 TCR이다(예를 들어 국제 출원 공개 번호 WO99/60120 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 펩티드 링커를 통해 TCRβ가변 도메인에 공유적으로 연결된 TCRα 가변 도메인을 함유하고 있다(예를 들어, 국제 출원 공개 번호 WO99/18129 참조).
일부 구현예에서, scTCR은 TCRα 사슬 가변 영역에 해당하는 아미노산 서열로 구성된 제1 세그먼트, TCRβ사슬 불변 도메인 세포 외 서열에 해당하는 아미노산 서열의 N 말단에 융합된 TCRβ사슬 가변 영역 서열에 해당하는 아미노산 서열로 구성된 제2 세그먼트 및 제2 세그먼트의 N 말단에 제1 세그먼트의 C 말단을 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, scTCR은 α 사슬 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제1 세그먼트 및 β사슬 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 β사슬 가변 영역 서열로 구성된 제2 세그먼트 및 막관통 서열 및 선택적으로 제2 세그먼트의 N 말단에 제1 세그먼트의 C 말단을 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, scTCR은 β사슬 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 TCRβ사슬 가변 영역 서열로 구성된 제1 세그먼트 및 α 사슬 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제2 세그먼트 및 막관통 서열 및 선택적으로 제2 세그먼트의 N 말단에 제1 세그먼트의 C 말단을 연결하는 링커 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 TCR 세그먼트를 연결하는 scTCR의 링커는 TCR 결합 특이성을 유지하면서 단일 폴리펩티드 가닥을 형성할 수 있는 임의의 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 예를 들어, 화학식 -P-AA-P-를 가질 수 있고, 여기서 P는 프롤린이고 AA는 아미노산 서열을 나타내며 여기서 아미노산은 글리신과 세린이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 세그먼트는 이의 가변 영역 서열이 상기 결합을 위해 배향되도록 쌍을 이룬다. 따라서, 일부 경우에, 링커는 제1 세그먼트의 C 말단과 제2 세그먼트의 N 말단 사이의 거리에 걸친 충분한 길이를 갖거나 그 반대의 경우도 있지만 표적 리간드에 대한 scTCR의 결합을 차단하거나 감소시킬 정도로 너무 길지 않다. 일부 구현예에서, 링커는 (약) 10 내지 45개의 아미노산, 예를 들어 10 내지 30개의 아미노산 또는 26 내지 41개의 아미노산 잔기, 예를 들어 29, 30, 31 또는 32개의 아미노산을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 화학식 -PGGG-(SGGGG)5-P-을 갖고 여기서 P는 프롤린이고, G는 글리신이고 S는 세린이다(서열번호 28). 일부 구현예에서, 링커는 서열 GSADDAKKDAAKKDGKS(서열번호 29)을 갖는다.
일부 구현예에서, scTCR은 β사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기에 α 사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기를 연결하는 공유 이황화물 결합을 함유하고 있다. 일부 구현예에서, 천연 TCR의 사슬 간 이황화물 결합은 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나 이상의 시스테인이 scTCR 폴리펩티드의 제1 및 제2 세그먼트의 불변 영역 세포 외 서열에 편입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비천연 이황화물 결합이 모두 바람직할 수 있다.
일부 구현예에서, 도입된 사슬 간 이황화물 결합, 천연 이황화물 결합을 함유하는 dTCR 또는 scTCR은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 천연 사슬 간 이황화물 결합을 형성하는 천연 시스테인 중 하나 이상이 다른 잔기, 예를 들어 세린 또는 알라닌으로 치환된다. 일부 구현예에서, 도입된 이황화물 결합은 제1 및 제2 세그먼트에 있는 비시스테인 잔기를 시스테인으로 돌연변이시킴으로써 형성될 수 있다. TCR의 예시적인 비천연 이황화물 결합은 문헌「국제 출원 공개 번호 WO2006/000830」에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원 결합 단편은 표적 항원에 대해 (약) 10-5 내지 10-12 M 및 그 안의 모든 개별 수치 및 범위의 평형 결합 상수를 갖는 친화도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MHC 펩티드 복합체 또는 리간드이다.
일부 구현예에서, α 및 β사슬과 같은 TCR을 암호화하는 핵산 또는 핵산들은 PCR, 클로닝 또는 기타 적합한 수단에 의해 증폭될 수 있고 적합한 발현 벡터 또는 벡터들로 클로닝될 수 있다. 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있으며, 임의의 적합한 숙주를 형질 전환하거나 형질 감염시키는데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 플라스미드 및 바이러스와 같이 번식 및 증폭 또는 발현 또는 둘다를 위해 설계된 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 벡터는 pUC 시리즈(Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈(Stratagene, LaJolla, Calif.), pET 시리즈(Novagen, Madison, Wis.), pGEX 시리즈(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) 또는 pEX 시리즈(Clontech, Palo Alto, Calif.)의 벡터일 수 있다. 일부 경우에, λλλλ및 λ와 같은 박테리오파지 벡터도 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 식물 발현 벡터가 사용될 수 있고 pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19(Clontech)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo(Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 사용된다.
일부 구현예에서, 재조합 발현 벡터는 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서 벡터는 조절 서열, 예를 들어 벡터가 도입되어야 하는 숙주 유형(예를 들어 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물)에 특이적인 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈을, 벡터가 DNA 또는 RNA 기반인지 고려하여 적절한 것으로 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 TCR 또는 항원 결합 부분(또는 다른 MHC 펩티드 결합 분자)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 작동 가능하게 연결된 비천연 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 비바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예를 들어 시토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터 및 뮤린 줄기 세포 바이러스의 긴 말단 반복에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 다른 공지된 프로모터도 고려된다.
일부 구현예에서, TCR을 암호화하는 벡터를 생성하기 위해, α 및 β사슬은 관심 TCR을 발현하는 T 세포 클론으로부터 단리된 총 cDNA로부터 PCR 증폭되어 발현 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, α 및 β사슬은 동일한 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, α 및 β사슬은 상이한 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, 생성된 α 및 β사슬은 레트로바이러스, 예를 들어 렌티바이러스 벡터로 통합된다. 유전적으로 조작된 세포 및 세포 제조방법.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법은 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포를 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 유전자 조작된 성분, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR의 도입을 위한 다양한 방법은 잘 알려져 있으며 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질도입, 트랜스포존 및 전기천공을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 핵산의 전달을 위한 방법을 포함한다.
수용체를 발현하고 제공된 방법에 의해 투여되는 세포 중에는 조작된 세포가 있다. 유전 공학은 일반적으로 예를 들어 레트로바이러스 형질도입, 형질감염 또는 형질전환에 의해 재조합 또는 조작된 성분을 암호화하는 핵산을 세포를 함유하는 조성물에 도입하는 것을 포함한다.
B. 키메라 자가 항체 수용체 (Chimeric Auto-Antibody Receptors, CAARs)
일부 구현예에서, 조작된 세포에서 발현되는 재조합 수용체 중에서 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 것는 키메라 자가항체 수용체(CAAR)이다. 일부 구현예에서, CAAR은 자가항체에 특이적이다. 일부 구현예에서, CAAR을 발현하는 세포, 예를 들어 CAAR을 발현하도록 조작된 T 세포는 정상적인 항체 발현 세포가 아닌 자가항체 발현 세포에 특이적으로 결합하여 이를 사멸하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 자가면역 질환과 같은 자가항원 발현과 관련된 자가면역 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생산하고 세포 표면에 자가항체를 나타내는 B 세포를 표적화할 수 있고, 치료적 개입을 위한 질병 특이적 표적으로 상기 B 세포를 표시할 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 항원 특이적 키메라 자가항체 수용체를 이용하여 질병을 유발하는 B 세포를 표적화함으로써 자가면역 질환에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 문헌「미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0051035」에 기재된 어느 하나와 같은 CAAR이다.
일부 구현예에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체(TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 2차 또는 공자극 신호 전달 영역(2차 세포 내 신호 전달 영역)을 포함한다.
일부 구현예에서, 자가항체 결합 도메인은 자가항원 또는 이의 단편을 포함한다. 자가항원의 선택은 표적화될 자가항체의 유형에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 자가 항원은 특정 질환 상태, 예를 들어 자가 면역 질환, 예를 들어 자가항체 매개 자가 면역 질환과 관련된 B 세포와 같은 표적 세포 상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환은 심상성 천포창(pemphigus vulgaris, PV)을 포함한다. 예시적인 자가항원은 데스모글레인 1(desmoglein 1, Dsg1) 및 Dsg3을 포함한다.
D. 다중 표적화
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 세포는 세포 상에 2개 이상의 유전자 조작 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 포함하며, 각각은 상이한 항원 중 동일한 것을 인식하고 전형적으로 각각은 상이한 세포 내 신호 전달 성분을 포함한다. 상기 다중 표적화 전략은 예를 들어, 문헌「국제 특허 출원 공개 번호 WO 2014055668 A1 (활성화 및 공자극 CAR의 조합, 예를 들어, 표적 외, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하나 치료될 질환 또는 병태의 세포에만 함께 존재하는 2개의 상이한 항원을 표적화하는 것을 기재) 및 Fedorov 등, Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013)(활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포, 예를 들어 활성화 CAR이 정상 또는 비-질병 세포 및 치료될 질병 또는 병태의 세포 둘 다에서 발현된 하나의 항원에 결합하고, 억제 CAR이 치료가 바람직하지 않은 세포 또는 정상 세포에서만 발현되는 다른 항원에 결합함을 기재)」에 기재되어 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제1 수용체에 의해 인식되는 항원, 예를 들어 제1 항원에 특이적인 결합시 세포에 대한 활성화 또는 자극 신호를 유도할 수 있는 제1 유전자 조작 항원 수용체(예를 들어, CAR 또는 TCR)를 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제2 수용체에 의해 인식되는 제2 항원에 특이적인 결합시 면역 세포에 대해 공자극 신호를 유도할 수 있는 제2 유전자 조작된 항원 수용체(예를 들어, CAR 또는 TCR), 예를 들어, 키메라 공자극 수용체를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 유전자 조작 항원 수용체(예를 들어 CAR 또는 TCR)은 세포에 대한 활성화 신호를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티브를 함유하는 세포 내 신호 전달 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체에 의해 유도된 활성화는 면역 반응의 개시, 예를 들어 ITAM 인산화 및/또는 ITAM 매개 신호 전달 캐스케이드의 개시, 면역학적 시냅스의 형성 및/또는 결합된 수용체(예를 들어 D4 또는 CD8 등) 근처 분자의 클러스터링, 하나 이상의 전사 인자, 예를 들어 NF-κ 및/또는 AP-1의 활성화 및/또는 사이토카인과 같은 인자의 유전자 발현, 증식 및/또는 생존의 유도를 초래하는 세포에서의 신호 전달 또는 단백질 발현의 변화를 수반한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 CD28, CD137(4-1BB), OX40 및/또는 ICOS와 같은 공자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 수용체는 상이한 공자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 제1 수용체는 CD28 공자극 신호 전달 영역을 함유하고 제2 수용체는 4-1BB 공자극 신호 전달 영역을 함유하거나 그 반대의 경우도 마찬가지이다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티브를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인과 공자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인 둘 다를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티브를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하고 제2 수용체는 공자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 동일한 세포에서 유도된 활성화 신호와 조합한 공자극 신호는 면역 반응, 예를 들어 강력하고 지속적인 면역 반응, 예를 들어 유전자 발현의 증가, 사이토카인 및 기타 인자의 분비 및 T 세포 매개 이펙터 기능, 예를 들어 세포 사멸을 초래하는 것이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체 단독의 결찰 또는 제2 수용체 단독의 결찰은 강력한 면역 반응을 유도하지 못한다. 일부 측면에서, 하나의 수용체만 결찰되는 경우에, 세포는 항원에 내성화되거나 반응하지 않거나 억제되고/거나 증식 또는 인자를 분비하거나 이펙터 기능을 수행하도록 유도되지 않는다. 그러나, 일부 상기 구현예에서, 다수의 수용체가 결찰되고 예를 들어 제1 및 제2 항원을 발현하는 세포와의 조우시, 예를 들어, 하나 이상의 사이토카인 분비, 증식, 지속성 및/또는 표적 세포의 세포 독성 사멸과 같은 면역 이펙터 기능의 수행에 의해 나타난 바와 같이 전체 면역 활성화 또는 자극과 같은 원하는 반응이 달성된다.
일부 구현예에서, 2개의 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 수용체 중 하나에 의한 항원 결합은 세포를 활성화하거나 반응을 유도하지만, 제2 억제 수용체에 의한 항원 결합은 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 활성화 CAR 및 억제 CAR 즉 iCAR(inhibitory CAR)을 조합하는 예가 있다. 예를 들어, 활성화 CAR이 질병 또는 병태에서 발현되나 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되나 질병 또는 병태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합하는 것과 같은 전략이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략은 특정 질환 또는 병태와 관련된 항원이 비질환 세포에서 발현되고/거나 조작된 세포 자체에서 일시적으로(예를 들어, 유전자 조작과 함께 자극시) 또는 영구적으로 발현되는 경우에 사용된다. 상기 경우에, 2개의 별도의 및 개별적으로 특이적인 항원 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 향상될 수 있다.
일부 구현예에서, 다수의 항원, 예를 들어, 제1 및 제2 항원이 표적화될 세포, 조직 또는 질병 또는 병태 예를 들어 암세포 상에서 발현된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 다수의 항원 중 하나 이상이 일반적으로 정상 또는 비질병 세포 또는 조직 및/또는 조작된 세포 자체와 같은 세포 요법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포 상에서도 발현된다. 상기 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
E. 세포 조작 방법
특정 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 본원에 제공된 방법 및 용도와 관련하여 사용되는 조작된 세포는 하나 이상의 입력 조성물 및/또는 단일 생물학적 샘플로부터 농축 T 세포의 출력 조성물을 생성하는 프로세스에 의해 생성된다. 특정 구현예에서, 출력 조성물은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR, 예를 들어 항-CD19 CAR을 발현하는 세포를 함유한다. 특정 구현예에서, 출력 조성물의 세포는 자가 세포 요법을 포함하여 본원에 제공된 임의의 방법 및 용도에 따라 요법으로서 대상체에게 투여하기에 적합하다. 일부 구현예에서, 출력 조성물은 농축 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 조성물이다.
일부 구현예에서, 조작된 세포를 생성하거나 생산하는 공정은 다음 단계 중 일부 또는 전부를 포함하는 공정에 의한 것이다: 생물학적 샘플을 수집하거나 획득; 생물학적 샘플에서 입력 세포를 분리, 선택 또는 농축; 입력 세포를 냉동 보존하고 저장; 자극 조건하에서 입력 세포를 해동 및/또는 인큐베이션; 재조합 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 CAR과 같은 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현하거나 함유하도록 자극된 세포를 조작; 예를 들어 임계 값, 밀도 또는 확장까지 조작된 세포를 배양; 배양된 세포를 출력 조성물로 제형화; 및/또는 세포가 주입을 위해 방출되고/되거나 대상체에게 투여하기에 적합할 때까지 제형화된 출력 세포를 동결보존 및 저장. 특정 구현예에서, 프로세스는 별도의 CD4+ 조성물 및 별도의 CD8+ 조성물과 같은 농축 T 세포의 2개 이상의 입력 조성물로 수행되며, 이는 동일한 시작 또는 초기 생물학적 샘플에서 별도로 처리 및 조작되고 정의된 비율(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 1:1 비율)로 대상체에 다시 주입된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포는 조작된 T 세포, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 형질도입된 T 세포이거나 이를 포함한다.
특정 구현예에서, 재조합 수용체(예: 항-CD19 CAR)를 발현하는 조작된 세포의 출력 조성물은 세포의 초기 및/또는 입력 조성물로부터 생성된다. 일부 구현예에서, 입력 조성물은 농축 T 세포, 농축 CD4+ T 세포 및/또는 농축 CD8+ T 세포의 조성물이다 (이하에서 농축 T 세포의 조성물, 농축 CD4+ T 세포의 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 조성물로도 각각 지칭됨). 일부 구현예에서, CD4+ T 세포가 농축된 조성물은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9%의 CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 조성물은 100%의 CD4+ T 세포를 포함하고 약 100% CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함하거나 함유하고/하거나 CD8+ T 세포를 함유하지 않고/하거나 CD8+ T 세포를 함유하지 않거나 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 본질적으로 CD4+ T 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, CD8+ T 세포가 농축된 조성물은 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9%의 CD8+ T 세포를 함유하거나, 또는 약 100% CD8+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 CD8+ T 세포의 조성물은 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하거나 함유하고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않거나 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 본질적으로 CD8+ T 세포로 구성된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포를 생산하는 방법은 다음 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: 세포, 예를 들어 입력 조성물의 세포를 활성화 및/또는 자극; 활성화 및/또는 자극된 세포를 유전적으로 조작하여, 예를 들어 형질도입 또는 형질감염에 의해 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입; 및/또는 예를 들어, 증식 및/또는 확장을 촉진하는 조건 하에 조작된 세포를 배양. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 세포가 인큐베이션, 활성화, 자극, 조작, 형질도입, 형질감염 및/또는 배양된 후에 생성된 출력 조성물을 수확, 수집 및/또는 제형화하는 것과 관련하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도에 따라 사용되는 기술된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은 조작된 세포는 세포를 선택, 단리, 활성화, 자극, 확장, 배양 및/또는 제형화하는 과정에 의해 생산되거나 생성된다. 일부 구현예에서, 이러한 방법에는 설명된 방법이 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도에 따라 사용되는, 기재된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은 조작된 세포는 예를 들어 WO 2019/089855 및 WO 2015/164675에 기재된 바와 같은 예시적인 공정에 의해 생산 또는 생성된다.
일부 구현예에서, 기술된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물(예를 들어 동일한 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 각각 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 포함하는 조성물)을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 예시적인 공정은, 농축 CD4+ 및 농축 CD8+ 세포 집단을 개별적으로 처리 단계에 적용하는 것을 포함한다. 조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 인간 말초혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 개별적으로 선택되며, 예를 들어, 백혈구 성분채집술에 의해 수득되어 별도의 농축 CD4+ 및 농축 CD8+ 세포 조성물을 생성한다. 일부 측면에서, 이러한 세포는 동결 보존될 수 있다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 조성물은 이후에 해동될 수 있고 개별적으로 자극, 형질도입 및 확장 단계를 거칠 수 있다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 해동된 CD4+ 및 CD8+ 세포는 예를 들어 항-CD3 및 항-CD28 항체에 결합된 상자성 폴리스티렌 코팅 비드의 존재 하에 개별적으로 자극된다(예: 1:1 비드 대 세포 비율). 일부 측면에서, 자극은 인간 재조합 IL-2, 인간 재조합 IL-15 및 N-아세틸 시스테인(NAC)을 포함하는 배지에서 수행된다. 일부 측면에서, CD4+ 세포용 세포 배양 배지는 또한 인간 재조합 IL-7을 포함할 수 있다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 비드 도입 후 CD4+ 및 CD8+ 세포는 동일한 항-CD19 CAR과 같은 동일한 CAR을 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 별도로 형질도입된다. 일부 측면에서, CAR은 뮤린 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린 스페이서, CD28로부터 유래된 막횡단 도메인, 4-1BB로부터 유래된 공동자극 영역, 및 CD3-제타 세포내 신호전달 도메인을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 벡터는 T2A 서열에 의해 CAR 구축물에 연결된 CAR 발현에 대한 대리 표지자 역할을 하는 절단된 수용체를 암호화할 수 있다. 예시적인 방법의 일부 측면에서, 세포는 10㎍/ml 황산프로타민의 존재하에 형질도입된다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 형질도입 후, 자기장에 노출시켜 비드는 세포 조성물로부터 제거된다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포 조성물은 생물반응기(예: Xuri W25 생물반응기)에 의한 지속적인 혼합 및 산소 전달과 함께 확장을 위해 별도로 배양된다. 일부 측면에서, 폴록사머가 배지에 추가된다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포 조성물 모두는 IL-2 및 IL-15의 존재 하에 배양된다. 일부 측면에서, CD4+ 세포 배지에는 IL-7도 포함된다. 일부 경우에, CD4+ 및 CD8+ 세포는 각각 수확 전에 4배 증폭으로 배양된다. 일부 측면에서, 임계값에 도달한 후 하루가 지나면 각 조성물의 세포를 별도로 수확하고 제형화하고 동결 보존할 수 있다. 일부 구현예에서, 기술된 바와 같이 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물(예를 들어 동일한 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 각각 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 포함하는 조성물)을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 예시적인 방법은 아래 표 11에 설명된 것들을 포함한다.
Figure pct00026
*대략 다른 측면에서, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 상이한 예시적 공정은 다음과 같은 점에서 상기 예시적 공정과 상이한 공정을 포함한다: NAC는 자극하는 동안 배지에 추가되지 않음; CD4+ 세포 배지에는 IL-2가 포함되어 있지 않음; 세포는 3:1의 비드 대 세포 비율로 자극됨; 세포는 더 높은 농도의 황산 프로타민으로 형질도입됨; 비드 제거는 약 7일째에 발생함; 및 확장은 정적 설정, 즉 연속 혼합 또는 관류(예: 반연속 및/또는 단계적 관류) 없이, 그리고 폴록사머 없이 수행됨.
일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 하나 이상의 개별 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 개별 조성물은 단일 생물학적 샘플, 예를 들어 환자 또는 건강한 개인과 같은 동일한 공여자로부터의 PBMC 또는 기타 백혈구의 샘플로부터 단리, 선택, 농축되거나 획득된다. 일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 별도 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 별도 조성물은, 예를 들어 단일 대상체로부터 획득, 수집 및/또는 채취한 단일 생물학적 샘플과 같은 동일한 생물학적 샘플로부터 초기에 분리, 선택 및/또는 농축되었다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD4+ T 세포의 선택을 받고, 여기서 음성 및 양성 분획은 모두 유지되고 음성 분획은 추가로 CD8+ T 세포의 선택을 받는다. 다른 구현예에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD8+ T 세포의 선택을 받고, 여기서 음성 및 양성 분획은 모두 유지되고 음성 분획은 추가로 CD4+ T 세포의 선택을 받는다. 일부 구현예에서, 선택 방법은 국제 PCT 공개 번호 WO2015/164675에 설명된 대로 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 방법은 국제 PCT 공개 번호 WO 2019/089855에 설명된 대로 수행된다. 일부 측면에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD8+ T 세포에 대해 양성적으로 선택되어 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 조성물을 생성하고, 음성 분획은 CD4+ T 세포에 대해 양성적으로 선택되어 농축 CD4+ T 세포의 적어도 하나의 조성물을 생성하여, 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 조성물 및 농축 CD4+ T 세포의 하나 이상의 조성물이 동일한 생물학적 샘플, 예를 들어 동일한 공여자 환자 또는 건강한 개체로부터의 별개의 조성물이 되도록 한다. 일부 측면에서, 농축 T 세포의 2개 이상의 개별 조성물 (예를 들어, 적어도 하나는 농축 CD4+ T 세포의 조성물이고 적어도 하나는 동일한 공여자로부터의 농축 CD8+ T 세포의 별개의 조성물)은 예를 들어, 동결 보호 또는 동결 보존 배지에 동결 일부 측면에서, 농축 T 세포의 2개 이상의 개별 조성물 (예를 들어, 적어도 하나는 농축 CD4+ T 세포의 조성물이고 적어도 하나는 동일한 생물학적 샘플로부터 농축 CD8+ T 세포의 별도의 조성물)은, 자극 시약과의 접촉에 의해 활성화 및/또는 자극된다 (예: T 세포 활성화를 위한 CD3/CD28 접합 자기 비드와의 인큐베이션에 의해). 일부 측면에서, 각각의 활성화/자극된 세포 조성은, 각 세포 조성물의 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에서 동일한 재조합 단백질을 발현하도록 재조합 단백질(예: CAR)을 암호화하는 바이러스 벡터를 사용하여 조작, 형질도입 및/또는 형질감염된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 자극 시약, 예를 들어 자기 비드를 세포 조성물로부터 제거하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 조작된 CD4+ T 세포를 함유하는 세포 조성물 및 조작된 CD8+ T 세포를 함유하는 세포 조성물은 예를 들어 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 집단의 개별 증폭을 위해 별도로 배양된다. 특정 구현예에서, 배양물로부터의 세포 조성물은, 예를 들어 제제 완충액에서 세포 조성물을 세척함으로써 수확 및/또는 수집 및/또는 제제화된다. 특정 구현예에서, CD4+ T 세포를 포함하는 제형화된 세포 조성물 및 CD8+ T 세포를 포함하는 제형화된 세포 조성물은 동결, 예를 들어 동결보존 배지에서 동결보호되거나 동결보존된다. 일부 측면에서, 각 제형의 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포는 동일한 공여자 또는 생물학적 샘플에서 유래하고 동일한 재조합 단백질(예: CAR, 예를 들어 항-CD19 CAR)을 발현한다. 일부 측면에서, 별도의 조작된 CD4+ 제제 및 별도의 조작된 CD8+ 제제는 동일한 공여자와 같이 이를 필요로 하는 대상에게 정의된 비율(예를들어, 1:1)로 투여된다.
1. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포 제조
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 세포, 예를 들어 T 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 또는 본원에 기재된 TCR를 발현하도록 유전적으로 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 세포 치료, 예를 들어 입양 세포 요법의 문맥에서 사용된다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 T 세포, 예를 들어 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다.
일부 구현예에서, 핵산, 예를 들어 재조합 단백질을 암호화하는 핵산은 이종 기원이다, 즉 예를 들어, 조작된 세포 및/또는 상기 세포가 유래한 유기체에서 보통 발견되지 않는 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 발생이 아니고, 예를 들어 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한, 자연계에서 발견되지 않는 핵산이다.
세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 기관에서 유래되며, 선천적 또는 적응성 면역 세포와 같은 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 기타 예시적인 세포는, 유도된 다능성 줄기 세포(induced pluripotent stem cell, iPSC)를 포함한, 다분화능 및 다능성 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상체에서 직접 단리되고/거나 대상체에서 단리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는, T 세포 또는 다른 세포 유형, 예를 들어 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단 중 하나 이상의 서브세트, 예를 들어 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 확장, 재순환, 국소화 및/또는 지속 용량, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것을 포함한다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종 이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 방법 중에는 기성품 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예를 들어 기성품 기술의 경우, 세포는 다능성 및/또는 다분화능, 예를 들어 줄기 세포, 예를 들어 유도된 다능성 줄기 세포(iPSC)이다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체에서 세포를 단리하고, 세포를 제조, 프로세싱, 배양 및/또는 조작하고, 동결 보존 전 또는 후에 동일한 대상체에게 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위 유형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(na
Figure pct00027
ve T, TN) 세포, 이펙터 T 세포(effector T cell, TEFF), 기억 T 세포 및 이의 하위 유형, 예를 들어 줄기 세포 기억 T(stem cell memory T, TSCM), 중앙 기억 T(central memory T, TCM), 이펙터 기억 T(effector memory T, TEM) 또는 말단 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 관련 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(regulatory T, Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예를 들어 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 있다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살해(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종 기원, 즉 예를 들어, 조작될 세포 및/또는 상기 세포가 유래된 유기체에서 보통 발견되지 않는, 또 다른 유기체 또는 세포에서 수득된 것과 같이 세포 또는 세포에서 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 상이한 다중 세포 유형 유래 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함하여 자연에서 발견되지 않는 핵산과 같이 천연 발생이 아니다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 준비는 하나 이상의 배양 및/또는 준비 단계를 포함한다. 예를 들어 CAR과 같은 유전자 변형 수용체를 코딩하는 핵산의 도입을 위한 세포는, 생물학적 샘플, 예를 들어 대상체에서 수득되거나 유래된 것과 같은 샘플에서 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는, 질병 또는 병태를 갖거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서 대상체는, 세포가 단리, 프로세싱 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 1 차 세포, 예를 들어 1 차 인간 세포이다. 샘플에는 대상체에서 직접 채취된 조직, 유체 및 기타 샘플뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전자 조작(예를 들어, 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입), 세척 및/또는 인큐베이션과 같은 하나 이상의 프로세스 단계에서 생성된 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 출처에서 직접 수득된 샘플 또는 프로세싱된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플에는 체액, 예를 들어 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플 (이로부터 유래된 프로세싱된 샘플 포함)이 포함되나, 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술 생성물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 내장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 기관 및/또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플에는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 상황에서 자가 및 동종이계 출처의 샘플이 포함된다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주에서 유래된다. 일부 구현예에서 세포는 이종성 출처, 예를 들어 마우스, 래트, 비인간 영장류 및 돼지에서 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 준비 및/또는 비친화도 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심 분리 및/또는 인큐베이션되어, 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용해 또는 제거한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예를 들어 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 내성에 근거하여 분리된다.
일부 예에서, 대상체의 순환 혈액 유래 세포는 예를 들어, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체에서 수집된 혈액 세포는 세척되어, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 프로세스 단계를 위한 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 둔다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 없다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 반자동 "플로우-쓰루(flow-through)" 원심 분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 접선 흐름 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후, 예를 들어 Ca++/Mg++이 없는 PBS와 같은 다양한 생체 적합성 완충액에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고, 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예를 들어 적혈구를 용해시키고 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심 분리에 의해 말초 혈액에서 백혈구의 준비를 포함한다.
일부 구현예에서, 선택 단계의 적어도 일부는 선택 시약과 함께 세포의 인큐베이션을 포함한다. 예를 들어 하나 이상의 상이한 세포 유형의 선택을 위한 하나 이상의 선택 시약을 이용하여 수행될 수 있는 선택 방법의 일부로서 선택 시약 또는 시약들과의 인큐베이션은 하나 이상의 특정 분자, 예를 들어 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산의 세포 상 또는 세포 내 발현 또는 존재에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 마커에 기초하여 분리를 위한 선택 시약 또는 시약들을 사용하는 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 선택 시약 또는 시약들은 친화도 또는 면역친화도 기반 분리인 분리를 초래한다. 예를 들어, 일부 측면에서 선택은 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포 집단의 분리를 위한 시약 또는 시약들과의 인큐베이션을 포함한다.
상기 공정의 일부 측면에서, 세포의 부피가 원하는 선호도 기반 선택 시약의 양과 혼합된다. 면역 친화도 기반 선택은 분리될 세포와 세포 상의 마커, 예를 들어 고체 표면, 예를 들어 입자 상의 항체 또는 기타 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 분자 간의 유리한 활발한 상호작용을 초래하는 임의의 시스템 또는 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 세포의 마커에 특이적인 선택 제제(예를 들어 항체)로 코팅된 입자 예를 들어 비드, 예를 들어 자성 비드를 사용하여 수행된다. 입자(예를 들어 비드)는 일정한 세포 밀도 대 입자(예를 들어, 비드) 비율로 흔들거나 혼합하면서 튜브나 백과 같은 컨테이너의 세포와 배양 또는 혼합되어 활발하게 선호하는 상호 작용의 촉진을 도울 수 있다. 다른 경우에, 방법은 선택의 전부 또는 일부가 원심 분리 챔버의 내부 공동에서 예를 들어, 원심 분리 회전 하에서 수행되는 세포의 선택을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 친화도 기반 선택 시약과 같은 선택 시약과 함께 세포의 인큐베이션은 원심 분리 챔버에서 수행된다. 특정 구현예에서, 문헌「국제 특허 출원, 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 20110003380 A1」에 기재된 시스템, 디바이스 또는 장치를 이용하여 단리 또는 분리가 수행된다. 일 예에서, 시스템은 문헌「국제 공개 번호 WO2016/073602」에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 상기 선택 단계 또는 이의 일부(예를 들어, 항체 코팅된 입자, 예를 들어 자성 비드와의 인큐베이션)을 원심분리기 챔버의 공동에서 수행함으로써, 사용자는 다양한 용액의 부피, 프로세싱 중 용액의 첨가 및 이의 타이밍과 같은 특정 파라미터를 제어할 수 있으며, 이는 다른 이용 가능한 방법에 비해 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 인큐베이션 중 공동의 액체 부피를 감소시키는 능력은 선택에 사용되는 입자(예를 들어 비드 시약)의 농도를 증가시킬 수 있어서 공동 내 세포의 총 수에는 영향을 주지 않고 용액의 화학적 전위를 증가시킬 수 있다. 상기는 차례로 가공되는 세포와 선택에 사용된 입자 사이의 쌍 방향 상호 작용을 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같이 시스템, 회로 및 제어와 연관된 경우, 챔버에서의 인큐베이션 단계 수행은 사용자가 인큐베이션 중에 원하는 시간에 용액의 교반에 영향을 미칠 수 있게 하고, 이는 또한 상호작용을 개선시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 선택 단계의 적어도 일부는 원심 분리 챔버에서 수행되고, 이는 선택 시약과 세포의 인큐베이션을 포함한다. 상기 공정의 일부 측면에서, 세포의 부피는 제조 업체의 지시에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 부피의 세포의 선택을 위해 튜브 또는 컨테이너에서 유사한 선택을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 원하는 친화도 기반 선택 시약의 양과 혼합된다. 일부 구현예에서, 제조사의 지시에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 부피의 세포에 대해 튜브 또는 컨테이너 기반 인큐베이션에서 세포의 선택을 위해 사용되는 동일한 선택 시약(들)의 양의 5% 이내, 10% 이내, 15% 이내, 20% 이내, 25% 이내, 50% 이내, 60% 이내, 70% 이내 또는 80% 이내의 양인 선택 시약 또는 시약들의 양이 사용된다.
일부 구현예에서, 선택, 예를 들어 세포의 면역 친화도 기반 선택을 위해, 세포는, 선택 시약, 예를 들어 농축 및/또는 고갈이 바림직한 세포 상의 표면 마커에 특이적으로 결합하나 조성물 중의 다른 세포 상에는 특이적으로 결합하지 않는 분자, 예를 들어 선택적으로 스캐폴드 예를 들어 중합체 또는 표면, 예를 들어 비드, 예를 들어 자성 비드, 예를 들어 CD4 및 CD8에 대해 특이적인 단클론성 항체에 결합된 자성 비드에 결합된 항체와 선택 완충제를 또한 함유하는 조성물에서 챔버의 공동에서 인큐베이션된다. 일부 구현예에서, 기재된 바와 같이 선택이 흔들거나 회전하는 튜브에서 수행될 때 동일한 수의 세포 또는 동일한 부피의 세포의 선택과 대략 동일하거나 유사한 효율을 달성하는데 전형적으로 사용되거나 필요한 선택 시약의 양과 비교하여 선택 시약이 실질적으로 보다 적은 양(예를 들어 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이내의 양)으로 챔버의 공동에 있는 세포에 첨가된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL 의 시약과의 인큐베이션으로 표적 부피를 달성하기 위해 세포 및 선택 시약에 선택 완충제의 첨가로 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 완충제 및 선택 시약은 세포에 첨가되기 전에 미리 혼합된다. 일부 구현예에서, 선택 완충제 및 선택 시약은 세포에 별도로 첨가된다. 일부 구현예에서, 선택 인큐베이션은 선호하는 상호 작용을 활발하게 촉진하는데 도움이 될 수 있는 주기적인 부드러운 혼합 조건으로 수행되고, 이로써 높은 선택 효율을 달성하면서 전반적으로 선택 시약의 보다 적은 사용이 가능하다.
일부 구현예에서, 선택 시약과의 인큐베이션 총 지속 기간은 약 5분 내지 6 시간, 예를 들어 30분 내지 3 시간, 예를 들어 적어도 약 30분, 60분, 120분 또는 180분 이다.
일부 구현예에서, 인큐베이션은 일반적으로 회전의 존재와 같은 혼합 조건 하에서 수행되며, 일반적으로 이는 상대적으로 낮은 힘 또는 속도, 예를 들어 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예를 들어 (약) 600 rpm 내지 (약) 1700 rpm(예를 들어 (약) 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 또는 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 이상), 예를 들어 챔버 또는 다른 컨테이너의 벽 또는 샘플에서 (약) 80g 내지 100g(예를 들어 (약) 80 g, 85 g, 90 g, 95 g 또는 100 g 또는 80 g, 85 g, 90 g, 95 g 또는 100 g 이상)의 RCF이다. 일부 구현예에서, 회전은 상기 낮은 속도에서의 회전 후 휴식 기간의 반복된 간격, 예를 들어 회전 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10초 동안의 휴식, 예를 들어 대략 1 또는 2초 회전 후 대략 5, 6, 7 또는 8초 동안의 휴식을 이용하여 수행된다.　
일부 구현예에서, 상기 공정은 챔버가 필수적인 완전히 폐쇄된 시스템 내에서 수행된다. 일부 구현예에서, 본 공정(및 일부 측면에서 또한 하나 이상의 추가 단계, 예를 들어 세포, 예를 들어 성분 채집술 샘플을 함유하는 샘플을 세척하는 이전 세척 단계)은 자동화 프로그램을 이용하여 단일 폐쇄 시스템에서 세척 및 결합 단계를 완성하기 위해 세포, 시약 및 기타 성분이 적절한 시간에 챔버로 유입되고 챔버 밖으로 밀어내어지고 원심분리가 달성되는 것과 같이 자동화된 방식으로 수행된다.
일부 구현예에서, 세포 및 선택 시약 및/또는 시약과의 인큐베이션 및/또는 혼합 후, 배양된 세포는 특정 시약 또는 시약들의 존재 또는 부재에 기초하여 세포를 선택하도록 분리된다. 일부 구현예에서, 분리는 선택 시약과 세포의 인큐베이션이 수행되었던 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 시약과 함께 인큐베이션 후, 선택 시약이 결합된 세포를 포함하는 인큐베이션된 세포는 세포의 면역 친화도 기반 분리를 위한 시스템으로 옮겨진다. 일부 구현예에서, 면역 친화도 기반 분리를 위한 시스템은 자성 분리 컬럼이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어, 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포 내 발현 또는 존재에 근거한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마커에 근거한 분리를 위한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역 친화도 기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리는, 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포에서 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의해 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포 발현 또는 발현 수준에 근거한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함한다.
상기 분리 단계는 시약과 결합한 세포가 추가 사용을 위해 보유되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포가 보유되는 음성 선택에 근거할 수 있다. 일부 예에서, 두 분획 모두 추가 사용을 위해 보유된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단의 세포 유형을 특이하게 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 마커에 근거하여 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 세포 집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포의 100% 농축 또는 제거를 초래할 필요가 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은, 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 초래할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 모든 상기 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다.
일부 예에서, 다중 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기에서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속적인 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계의 대상이 된다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는, 예를 들어 각각이 음성 선택에 대해 표적화된 마커에 특이적인 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 다중 마커를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다중 세포 유형이 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, T 세포의 특정 하위 집단, 예를 들어 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+ T 세포에 양성이거나 이를 높은 수준으로 발현하는 세포가 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는, 항-CD3/항-CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T 세포 증폭기)를 사용하여 양성으로 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포 집단의 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은, 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 발현(마커+)되거나 상대적으로 보다 높은 수준으로 발현(마커고)된 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 기타 결합제와 세포를 인큐베이션함으로써 달성된다.
특정 구현예에서, 생물학적 샘플, 예를 들어 PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD4+ T 세포의 선택에 노출된다. 특정 구현예에서, CD8+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD8+ T 세포의 선택에 노출된다. 특정 구현예에서, CD4+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단핵구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플에서 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 및/또는 CD8+ 선택 단계가 사용되어 조성물, 예를 들어 백혈구 성분 채집술을 통해 수득된 것과 같은 PBMC 조성물에서 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포가 분리된다. 일부 측면에서, 상기 CD4+ 및 CD8+ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 이펙터 T 세포 하위 집단에서 발현되거나 상대적으로 보다 높은 정도로 발현된 마커에 대해 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 더 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는, 예를 들어 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 근거한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 이펙터 기억 및/또는 중앙 기억 줄기 세포로 더 농축되거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축이 수행되어 투여 후의 장기간 생존, 증폭 및/또는 생착을 개선하는 것과 같이 효능을 증가시키며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다. 문헌「Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82; Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701」을 참조한다. 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포를 결합하면 효능이 더욱 향상된다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 둘 다에 존재한다. PBMC는, 예를 들어 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획으로 농축되거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD27, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 상기의 높은 표면 발현에 근거하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 근거한다. 일부 측면에서, TCM 세포로 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포의 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 근거하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 근거한 음성 선택 및 CD62L에 근거한 양성 선택의 대상이 된다. 일부 측면에서, 상기 선택은 동시에 수행되며 다른 측면에서, 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포 집단 또는 하위 집단을 준비하는 데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계가 또한 사용되어 CD4+ 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하여, CD4 기반 분리의 양성 및 음성 분획 둘 다가 보유되고, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계 후 후속 단계의 방법에서 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 CD4+ 세포 선택의 대상이 되고, 여기서 음성 및 양성 분획 둘 다가 보유된다. 이어서 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 근거한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포의 마커 특성에 근거한 양성 선택의 대상이 되고, 여기에서 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인해서 나이브, 중앙 기억 및 이펙터 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론성 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합되어 양성 및/또는 음성 선택에 대한 세포의 분리를 가능하게 한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기술(문헌「Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒHumana Press Inc., Totowa, NJ」에서 검토됨)을 사용하여 분리되거나 단리된다.
일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 작은, 자화 가능 또는 자성 반응 물질, 예를 들어 자성 반응 입자 또는 미세입자, 예를 들어 상자성 비드(예를 들어, 예를 들어 Dynabeads 또는 MACS 비드)와 함께 인큐베이션된다. 자성 반응 물질, 예를 들어 입자는, 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포, 세포들 또는 세포 집단 상에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 기타 결합 파트너와 같은 특정 결합 부재에 결합된 자성 반응 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 잘 알려진 많은 자성 반응 물질이 있다. 적합한 자성 입자에는 여기에 참조로 통합된 문헌「Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B」에 기재된 것이 포함된다. 콜로이드 크기의 입자, 예를 들어 문헌「Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti 등, 미국 특허 번호 5,200,084」에 기재된 것이 다른 예이다.
항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예를 들어 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 다른 시약이, 샘플 내의 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 일반적으로 인큐베이션이 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응 입자 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌리고 표지되지 않은 세포에서 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌린 세포가 보유되고; 음성 선택의 경우, 끌리지 않은 세포(비표지 세포)가 보유된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 중 수행되며, 여기에서 양성 및 음성 분획은 보유되고 더 프로세싱되거나 추가적인 분리 단계의 대상이 된다.
특정 구현예에서, 자성 반응 입자는 1차 항체 또는 기타 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 2차 항체- 또는 기타 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자가 비오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자성 반응 입자는 후속적으로 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응 입자는 세포에서 제거된다. 세포에서 자화 가능한 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체 및 절단 가능한 링커에 접합된 자화 가능한 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능한 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(MACS, Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS) 시스템은 이에 부착된 자화 입자를 갖는 세포를 고순도로 가려낼 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 외부 자기장의 적용 후에 비-표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 동안 제자리에 유지된다. 이어서, 상기 제1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리가 방지된 종은 상당한 방식으로 해제되어 용리 및 회수될 수 있다. 특정 구현예에서, 비-표적 세포는 표지되고, 이종 세포 집단에서 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 본 방법의 단리, 세포 준비, 분리, 프로세싱, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템이 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각을 수행하는 데 사용되어 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화한다. 일 예에서, 시스템은 문헌「국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 출원 20110003380 A1」에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합되거나 독립적인 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 프로세싱, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하고, 이는 사용자가 프로세스, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가하고/거나 이의 다양한 측면의 조정을 가능하게 한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는, 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준으로 세포의 자동화 분리를 위해 CliniMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소는 통합된 마이크로 컴퓨터, 자기 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 통합된 컴퓨터는 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템을 지시하여 표준화된 순서로 반복 절차를 수행한다. 일부 측면에서, 자성 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜브 세트 전체의 유량을 제어하고 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충제의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체 결합된 자화 가능 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 준비 백은 튜빙 세트에 연결되고, 이는 완충제를 함유하는 백 및 세포 수집 백에 차례로 연결된다. 튜브 세트는 사전 컬럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 튜브로 구성되며 일회용이다. 분리 프로그램이 개시된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 보유되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 컬럼에 보유되지 않는다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 보유된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은, 자기장을 제거한 후 컬럼에서 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, CliniMACS Prodigy 시스템에는 자동화된 세척 및 원심 분리에 의해 세포의 분획화를 가능하게 하는 세포 프로세싱 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템은 출처 세포 생성물의 거시적인 층을 식별하여 최적의 세포 분획화 종점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함할 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 예를 들어, 세포 분화 및 증폭, 항원 로딩 및 장기간 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합된 세포 배양 챔버를 또한 포함할 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게 할 수 있고, 통합된 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 문헌「Klebanoff 등 (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82 및 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701」을 참조한다.
일부 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은 유세포 분석을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되고, 여기서 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은 분취 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은, FACS 기반 검출 시스템과 조합으로 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 문헌「국제 출원 WO 2010/033140, Cho 등 (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin 등 (2008) J Biophoton. 1(5):355-376」 참조). 두 경우 모두에서, 세포는 고순도로 잘 정의된 T 세포 서브세트의 단리를 가능하게 하는 다중 마커로 표지될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 근거할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 기타 결합 파트너의 결합에 근거한 세포의 분리는, 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과의 조합으로 예를 들어 분취 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 다중 마커에 근거한 양성 및 음성 선택을 동시에 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 준비 방법은 단리, 배양, 및/또는 조작의 전 또는 후에 예를 들어, 동결 보존과 같은 세포 동결을 위한 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속적인 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 세척 단계 후에 동결 용액에 현탁되어 혈장 및 혈소판을 제거한다. 일부 측면에서, 공지된 다양한 임의의 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS 또는 기타 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 이는 배지로 1:1로 희석되어 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 된다. 일부 구현예에서, 세포 성분은 (약) 5%, 6%, 7%, 7.5%, 8%, 9% 또는 10%, 또는 예를 들어, (약) 7.5% DMSO 와 같이 정의되는 범위의 디메틸설폭사이드를 포함하는 제형에 보관된다. 일부 측면에서, 성분은 25% 인간 알부민의 (약) 0.5%, 1%, 2% 또는 2.5% (v/v), 또는 예를 들어 (약) 1% (v/v) 25% 인간 알부민 과 같이 정의되는 범위의 인간 알부민을 포함하는 제형에 보관된다. 이어서 세포를 일반적으로 분당 1℃의 속도로 -80℃ 까지 동결시키고, 액체 질소 보관 탱크의 기상에서 보관한다.
일부 구현예에서, 분리 및/또는 선택은 농축된 T 세포, 예를 들어, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, 및/또는 CD8+ T 세포의 하나 이상의 입력 조성물을 생성한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 개별 입력 조성물이 단일 생물학적 샘플로부터 분리, 선택, 농축되거나 수득된다. 일부 구현예에서, 별도의 입력 조성물은 동일한 대상체로부터 수집, 채취 및/또는 수득된 별개의 생물학적 샘플로부터 분리, 선택, 농축 및/또는 수득된다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 입력 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100% 또는 약 100%의 CD3+ T 세포를 포함하는 농축된 T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축된 T 세포의 입력 조성물은 본질적으로 CD3+ T 세포로 이루어진다..
특정 구현예에서, 하나 이상의 입력 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100% 또는 약 100%의 CD4+ T 세포를 포함하는 농축된 CD4+ T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, CD4+ T 세포의 입력 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함하거나, 및/또는 CD8+ T 세포를 함유하지 않고/하거나 CD8+ T 세포가 없거나 실질적으로 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 조성물은 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%의 CD8+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, CD8+ T 세포의 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않거나 및/또는 CD4+ T 세포를 함유하지 않거나 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 구현예에서, 농축된 T 세포의 조성물은 본직적으로 CD8+ T 세포로 이루어진다.
1. 활성화 및 자극
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 전 또는 관련하여 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 기르기(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 번식을 포함할 수 있다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예를 들어 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜브 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 세포 배양 또는 세포를 기르기 위한 기타 컨테이너에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단 내 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하도록 설계된 것을 포함하여, 항원 노출을 모방하고/거나 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍한다.
조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화하도록 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극 또는 활성화할 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 켜거나 개시한다. 상기 제제는 항체, 예를 들어 TCR에 특이적인 것, 예를 들어 항-CD3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 조건은 공자극 수용체, 예를 들어 항-CD28을 자극할 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제 및/또는 리간드는 고체 지지체 예를 들어 비드에 결합될 수 있고/거나 하나 이상의 사이토카인일 수 있다. 선택적으로, 증폭 방법은 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가(예를 들어, 약 0.5 ng/ml 이상의 농도로)하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 제제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 약 10 유닛/mL 이상이다.
일부 측면에서, 인큐베이션은 문헌「미국 특허 번호 6,040,1 77(Riddell 등), Klebanoff 등 (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82 및/또는 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701」에 기재된 것과 같은 기술에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는, 배양 개시 조성물 배양보조 세포, 예를 들어 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가하고(예를 들어, 생성된 세포 집단이 증폭될 초기 집단 내 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40개 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유하도록); 상기 배양물을 인큐베이션(예를 들어, T 세포 수를 증폭하기에 충분한 시간 동안)하여 증폭된다. 일부 측면에서, 비분할 배양보조 세포는 감마-조사된 PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC에 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열을 방지한다. 일부 측면에서, 배양보조 세포는 T 세포 집단을 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 약 25 ℃이상, 일반적으로 약 30 ℃이상 및 일반적으로 (약) 37 ℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분할 EBV-형질 전환 림프모구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 배양보조 세포는 임의의 적합한 양, 예를 들어 약 10:1 이상의 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율로 제공된다.
구현예에서, 항원 특이적 T 세포, 예를 들어 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체에서 T 세포를 단리하고 동일한 항원으로 시험관 내에서 상기 세포를 자극함으로써 시토메갈로바이러스 항원에 대해 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에서 인큐베이션의 적어도 일부는 예를 들어 문헌「국제 공개 번호 WO2016/073602」에 기재된 바와 같은 원심분리 회전 하에서, 원심분리기 챔버의 내부 공동에서 수행된다. 일부 구현예에서, 원심분리기 챔버에서 수행되는 인큐베이션의 적어도 일부는 자극 및/또는 활성화를 유도하기 위한 시약 또는 시약들과 혼합하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 선택된 세포와 같은 세포는 원심분리기 챔버에서 자극 조건 또는 자극제와 혼합된다. 상기 과정의 일부 측면에서, 세포의 부피는 세포 배양 플레이트 또는 다른 시스템에서 유사한 자극을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 하나 이상의 자극 조건 또는 제제의 양으로 혼합된다.
일부 구현예에서, 자극제는, 선택이 원심분리기 챔버, 예를 들어 주기적으로 흔들거나 회전하는 튜브나 백에서 혼합되지 않고 수행될 경우 같은 수의 세포 또는 같은 부피의 세포와 대략 동일하거나 유사한 선택 효율을 달성하기 위해 전형적으로 사용되거나 필요한 자극제의 양과 비교하여 실질적으로 보다 적은 양(예를 들어 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이내의 양)으로 챔버의 공동에 있는 세포에 첨가된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 또는 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL 이상 의 시약으로 인큐베이션하는 표적 부피를 달성하기 위해 세포 및 자극제에 인큐베이션 완충제의 첨가로 수행된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션 완충제 및 자극제는 세포에 첨가하기 전에 미리 혼합된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션 완충제 및 자극제는 세포에 별도로 첨가된다. 일부 구현예에서, 자극 인큐베이션은 주기적인 부드러운 혼합 조건으로 수행되며, 이는 선호하는 상호 작용을 활발하게 촉진하는데 도움이 될 수 있으며, 이로써 세포의 자극 및 활성화를 달성하면서 전반적으로 자극제의 보다 적은 사용이 가능할 수 있다.
일부 구현예에서, 인큐베이션은 일반적으로 회전의 존재와 같은 혼합 조건 하에서 수행되며, 일반적으로 이는 상대적으로 낮은 힘 또는 속도, 예를 들어 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예를 들어 (약) 600 rpm 내지 (약) 1700 rpm(예를 들어 (약) 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 또는 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 이상), 예를 들어 챔버 또는 다른 컨테이너의 벽 또는 샘플에서 (약) 80g 내지 100g(예를 들어 (약) 80 g, 85 g, 90 g, 95 g 또는 100 g 또는 80 g, 85 g, 90 g, 95 g 또는 100 g 이상)의 RCF이다. 일부 구현예에서, 회전은 상기 낮은 속도에서의 회전 후 휴식 기간의 반복된 간격, 예를 들어 회전 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 초 동안의 휴식, 예를 들어 대략 1 또는 2 초 회전 후 대략 5, 6, 7 또는 8 초 동안의 휴식을 이용하여 수행된다.
일부 구현예에서, 예를 들어 자극제와 인큐베이션의 총 지속 시간은 (약) 1시간 내지 96시간, 1시간 내지 72시간, 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간, 예를 들어 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간 또는 72시간 이상 또는 약 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간 또는 72시간 이상이다. 일부 구현예에서, 추가 배양은 (약) 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간 동안이다.
특정 구현예에서, 자극 조건은 인큐베이팅, 배양, 및/또는 농축된 T 세포의 조성물 및/또는 하나 이상의 사이토카인과 함께 배양을 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포 대해 내인성이고/거나 T 세포에 의해 발현되는 수용체에 결합하고/거나 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버는 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-4(IL-4), 인터류킨-7(IL-7), 인터류킨-9 (IL-9), 인터류킨 12(IL-12), 인터류킨 15(IL-15), 과립구 콜로니 자극 인자(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF) 및 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)를 포함하되 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 세포의 활성화 및/또는 증식 자극 결과는, 예를 들어, 형질전환에 우선한다.
2. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용된 조작된 세포, 예를 들어 T 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 본원에 기재된 CAR 또는 TCR을 발현하도록 유전자 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 재조합 수용체 및/또는 다른 분자를 코딩하는 핵산 서열의 도입, 전달 또는 전환에 의해 조작된다.
일부 구현예에서, 조작된 세포를 생산하는 방법은 세포, 예를 들어 자극 또는 활성화된 세포로의 재조합 수용체(예를 들어, 항-CD19 CAR)를 암호화 하는 폴리뉴클레오타이드의 도입을 포함한다. 특정 구현예에서, 재조합 단백질은 예를 들어 본원에서 기재된 임의의 재조합 수용체일 수 있다. 세포에서 재조합 수용체와 같은 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자의 도입은 공지된 다수의 임의의 벡터를 사용하여 수행될 수 있다. 상기 벡터에는 렌티바이러스 및 감마레트바이러스 시스템을 포함한 바이러스 및 비바이러스 시스템뿐만 아니라 피기백(PiggyBac) 또는 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty) 기반 유전자 전달 시스템과 같은 트랜스포손 기반 시스템이 포함된다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질 도입, 트랜스포손 및 전기천공을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 핵산의 전달을 위한 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 조작은 하나 이상의 농축된 T 세포의 조작된 조성물을 생산한다.
특정 구현예에서, 자극된 T 세포의 하나 이상의 조성물은 농축된 T 세포의 2개의 개별 자극된 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 분리 및/또는 농축된 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물이 개별적으로 조작된다. 특정 구현예에서, 2개의 개별 조성물은 농축된 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, 2개의 개별 조성물은 농축된 CD8+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 농축된 CD4+ T 세포 및 농축된 CD8+ T 세포의 2개의 개별 조성물은 별도로 유전적으로 조작된다.
일부 구현예에서, 유전자 전달은 세포를 먼저 자극함으로써, 예를 들어, 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 예를 들어 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극 후에 활성화된 세포의 형질 도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서의 증폭과 이를 조합함으로써 달성된다. 특정 구현예에서, 유전자 전달은, 예를 들어 기재된 임의의 방법에 의해 자극 조건 하에서 세포를 먼저 인큐베이션함으로써 달성된다.
일부 구현예에서, 유전자 조작을 위한 방법은 재조합 단백질, 예를 들어 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 분자와 조성물의 하나 이상의 세포를 접촉시킴으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 접촉은 회전 접종(예를 들어 원심분리 접종)과 같은 원심분리로 달성될 수 있다. 상기 방법은 문헌「국제 공개 번호 WO2016/073602」에 기재된 바와 같은 임의의 것을 포함한다. 예시적인 원심분리 챔버는 Biosafe SA에 의해 생산 및 판매되는 챔버를 포함하며, Sepax®및 Sepax®2 시스템과 함께 사용하기 위한 챔버를 포함하고, A-200/F 및 A-200 원심분리 챔버 및 상기 시스템과 함께 사용하기 위한 다양한 키트를 포함한다. 예시적인 챔버, 시스템 및 공정 기기 및 캐비닛은 예를 들어 문헌「미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0171951 및 국제 출원 공개 번호 WO 00/38762」에 기재되어 있고, 각각의 내용은 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함된다. 상기 시스템과 함께 사용하기 위한 예시적인 키트는 제품 이름 CS-430.1, CS-490.1, CS-600.1 또는 CS-900.2로 BioSafe SA에서 판매되는 일회용 키트를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 접촉은 회전 접종(예를 들어 원심분리 접종)과 같은 원심분리로 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포, 벡터, 예를 들어 바이러스 입자 및 시약을 함유하는 조성물을 일반적으로 상대적으로 작은 힘 또는 낮은 속도, 예를 들어 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예를 들어 (약) 600 rpm 내지 1700 rpm(예를 들어 (약) 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 또는 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 이상)으로 회전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 회전은 예를 들어 챔버 또는 공동의 내벽 또는 외벽에서 측정된 바와 같은 힘, 예를 들어 (약) 100 g 내지 3200 g(예를 들어 (약) 100 g, 200 g, 300 g, 400 g, 500 g, 1000 g, 1500 g, 2000 g, 2500 g, 3000 g 또는 3200 g 또는 100 g, 200 g, 300 g, 400 g, 500 g, 1000 g, 1500 g, 2000 g, 2500 g, 3000 g 또는 3200 g 이상 또는 약 100 g, 200 g, 300 g, 400 g, 500 g, 1000 g, 1500 g, 2000 g, 2500 g, 3000 g 또는 3200 g)의 상대 원심력으로 수행된다. 용어 "상대 원심력(relative centrifugal force)" 또는 RCF는 일반적으로 회전축과 비교하여 공간의 특정 지점에서 지구의 중력에 대해 상대적인 물체 또는 물질(예를 들어 세포, 샘플 또는 펠릿 및/또는 회전되는 챔버 또는 다른 컨테이너의 지점)에 부여된 효과적인 힘으로 이해된다. 상기 값은 중력, 회전 속도 및 회전 반경(회전 축과 RCF가 측정되는 물체, 물질 또는 입자로부터의 거리)을 고려하여 잘 알려진 수식을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 시스템은 형질 도입 단계 및 시스템, 예를 들어 본 명세서 또는 문헌「국제 공개 번호 WO2016/073602」에 기재된 바와 같은 원심분리 챔버로 수행되거나 이와 관련하여 수행될 수 있는 하나 이상의 공정 단계에서 수행되는 하나 이상의 다양한 다른 공정 단계의 측면을 작동, 자동화, 제어 및/또는 모니터링하기 위한 기기를 포함하여 다른 기기와 공동으로 포함되고/거나 이와 공동으로 배치된다. 일부 구현예에서 상기 기기는 캐비닛 내에 함유되어 있다. 일부 구현예에서, 기기에는 제어 회로, 원심 분리기, 커버, 모터, 펌프, 센서, 디스플레이 및 사용자 인터페이스를 함유하는 하우징을 포함하는 캐비닛이 포함된다. 예시적인 디바이스가 문헌「미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 US 2008/0171951」에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 시스템은 일련의 컨테이너, 예를 들어 백, 튜브, 스톱콕, 클램프, 커넥터 및 원심분리 챔버를 포함한다. 일부 구현예에서, 백과 같은 컨테이너는 동일한 백 또는 별도의 백과 같은 동일한 컨테이너 또는 별도의 컨테이너에 형질 도입될 세포 및 바이러스 벡터 입자를 함유하는 백과 같은 하나 이상의 컨테이너를 포함한다. 일부 구현예에서, 시스템은 백과 같은 하나 이상의 컨테이너를 추가로 포함하며, 챔버 내로 들어오는 희석 및/또는 세척 용액과 같은 배지 및/또는 방법 중에 성분 및/또는 조성물을 희석, 재현탁 및/또는 세척하기 위한 기타 성분을 함유한다. 컨테이너는 예를 들어 입력 라인, 희석 라인, 세척 라인, 폐기물 라인 및/또는 출력 라인에 대응하는 위치에서 시스템의 하나 이상의 위치에 연결될 수 있다.
일부 구현예에서, 챔버는 원심분리기와 연관되고, 이는 예를 들어 회전축 주위에서 챔버의 회전에 영향을 미칠 수 있다. 회전은 세포의 형질 도입과 관련하여 및/또는 다른 공정 단계 중 하나 이상에서 인큐베이션 전, 중 및/또는 후에 발생할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 다양한 공정 단계는 예를 들어, 특정 힘으로의 회전 하에서 수행된다. 챔버는 원심 분리 중에 수직으로 위치하고 측면 벽과 축은 수직 또는 일반적으로 수직이며, 말단 벽은 수평 또는 일반적으로 수평이 되도록, 챔버는 전형적으로 수직 또는 일반적으로 수직 회전할 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 조작, 예를 들어 형질 도입의 적어도 한 파트, 및/또는 유전자 조작 다음으로 세포들은 유전적으로 조작된 세포의 배양, 예를 들어 세포의 배양 또는 증폭을 위해 생물반응기 백으로 옮겨진다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은, 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스(AAV)에서 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌「Koste 등 (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens 등 (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino 등 (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park 등, Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557」 참조).
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(long terminal repeat sequence, LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(Moloney murine leukemia virus, MoMLV), 골수 증식육종 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기 세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV) 또는 비장 초점 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV) 에서 유래된 레트로바이러스 벡터를 갖는다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스에서 유래된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 출처에서 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스는 전형적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽(amphotropic)이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 시스템이 문헌「예를 들어, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa 등 (1991) Virology 180:849-852; Burns 등 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109」 에 기재되어 있다.
렌티바이러스 형질 도입 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌「Wang 등 (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper 등 (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen 등 (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri 등 (2003) Blood. 102(2): 497-505」에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자는 렌티바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 것과 같은 레트로바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 게놈을 함유한다. 바이러스 벡터의 일부 측면에서, CAR과 같은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 이종 핵산은 벡터 게놈의 5′LTR 및 3′LTR 서열 사이에 함유되고/거나 위치한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 게놈은 HIV-1 게놈 또는 SIV 게놈과 같은 렌티바이러스 게놈이다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터는 독성 유전자를 약화시켜 배가시킴으로써 생성되었으며, 예를 들어, 유전자 env, vif, vpu 및 nef는 결실되어 치료 목적으로 벡터를 더 안전하게 만들 수 있다. 렌티바이러스 벡터는 공지되어 있다. 문헌「Naldini 등, (1996 및 1998); Zufferey 등, (1997); Dull 등, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136」을 참조한다. 일부 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 플라스미드 기반 또는 바이러스 기반이며, 숙주 세포로 핵산을 전달하기 위한, 선택을 위한 및 외부 핵산을 통합하기 위한 필수 서열을 운반하도록 구성된다. 공지된 렌티바이러스는 미국형 배양 컬렉션(American Type Culture Collection, "ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209)과 같은 기탁 기관 또는 컬렉션으로부터 용이하게 수득될 수 있거나 일반적으로 이용 가능한 기술을 사용하여 공지된 출처로부터 단리될 수 있다.
렌티바이러스 벡터의 비제한적인 예로는 인간 면역결핍 바이러스 1(Human Immunodeficiency Virus 1, HIV-1), HIV-2, 시미안 면역결핍 바이러스(Simian Immunodeficiency Virus, SIV), 인간 T 림프성 바이러스 1(Human T-lymphotropic virus 1, HTLV-1), HTLV-2 또는 말 감염 빈혈 바이러스(equine infection anemia virus, E1AV)와 같은 렌티바이러스 유래 벡터가 포함된다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터는 HIV 독성 유전자를 약화시켜 배가시킴으로써 생성되었으며, 예를 들어, 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef가 결실되어 치료 목적으로 벡터를 더 안전하게 만든다. 렌티바이러스 벡터는 당업계에 공지되어 있으며, 문헌「Naldini 등, (1996 및 1998); Zufferey 등, (1997); Dull 등, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136」을 참조한다. 일부 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 플라스미드 기반 또는 바이러스 기반이며, 숙주 세포로 핵산을 전달하기 위한, 선택을 위한 및 외부 핵산을 통합하기 위한 필수 서열을 운반하도록 구성된다. 공지된 렌티바이러스는 미국형 배양 컬렉션("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209)과 같은 기탁 기관 또는 컬렉션으로부터 용이하게 수득될 수 있거나 일반적으로 이용 가능한 기술을 사용하여 공지된 출처로부터 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 게놈 벡터는 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스의 5′및 3′LTR 서열을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 바이러스 게놈 작제물은 렌티 바이러스의 5′및 3′LTR로부터의 서열을 함유할 수 있고, 특히 렌티바이러스의 5′LTR에서 R 및 U5 서열 및 렌티바이러스에서 비활성화되거나 자가 비활성화 3′LTR을 함유할 수 있다. LTR 서열은 임의의 종으로부터 임의의 렌티바이러스로부터의 LTR 서열일 수 있다. 예를 들어, 이는 HIV, SIV, FIV 또는 BIV로부터의 LTR 서열일 수 있다. 전형적으로 LTR 서열은 HIV LTR 서열이다.
일부 구현예에서, HIV 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터의 핵산은 추가 전사 단위가 결여된다. 벡터 게놈은 비활성화되거나 또는 자가 비활성화 3′LTR을 함유할 수 있다(Zufferey 등 J Virol 72: 9873, 1998; Miyoshi 등, J Virol 72:8150, 1998). 예를 들어, 바이러스 벡터 RNA를 생성하는데 사용되는 핵산의 3′LTR의 U3 영역에서의 결실은 자가 비활성화(self-inactivating, SIN) 벡터를 생성하는데 사용될 수 있다. 이어서 상기 결실은 역전사 동안 프로바이러스(proviral) DNA의 5′LTR로 전달될 수 있다. 자가 비활성화 벡터는 일반적으로 벡터 통합 중에 5′LTR로 복사되는 3′긴 말단 반복(long terminal repeat, LTR)으로부터의 인핸서 및 프로모터 서열의 결실을 갖는다. 일부 구현예에서 충분한 서열이 LTR의 전사 활성을 폐지하기 위해 TATA 박스의 제거를 포함하여 제거될 수 있다. 이는 형질 도입된 세포에 있는 전체 길이 벡터 RNA의 생산을 방지할 수 있다. 일부 측면에서, 3′LTR의 U3 요소는 인핸서 서열, TATA 박스, Sp1 및 NF-카파 B 부위의 결실을 함유한다. 자가 비활성화 3′LTR의 결과로, 도입 및 역전사 후에 생성된 프로바이러스(provirus)는 불활성화된 5′LTR을 함유한다. 이는 벡터 게놈의 이동 위험 및 근처 세포 프로모터에 대한 LTR의 영향을 감소시킴으로써 안전성을 개선할 수 있다. 자가 비활성화 3′LTR은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 작제될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 벡터 역가 또는 벡터의 시험관 내 또는 생체 내 특성에 영향을 미치지 않는다.
선택적으로, 렌티바이러스 5′LTR로부터의 U3 서열은 이종 프로모터 서열과 같은 바이러스 작제물에서 프로모터 서열로 대체될 수 있다. 이는 패키징 세포주에서 회수되는 바이러스 역가를 증가시킬 수 있다. 인핸서 서열도 포함될 수 있다. 패키징 세포주에서 바이러스 RNA 게놈의 발현을 증가시키는 임의의 인핸서/프로모터 조합이 사용될 수 있다. 일 예로, CMV 인핸서/프로모터 서열이 사용된다(미국 특허 번호 5,385,839 및 미국 특허 번호 5,168,062).
특정 구현예에서, 삽입 돌연변이 발생의 위험은 렌티바이러스 벡터 게놈과 같은 레트로바이러스 벡터 게놈을 통합 결함이 있는 것으로 작제함으로써 최소화할 수 있다. 비통합 벡터 게놈을 생성하기 위해 다양한 접근법을 추구할 수 있다. 일부 구현예에서, 비활성 인테그라제인 단백질을 암호화하도록 pol 유전자의 인테그라제 효소 성분으로 돌연변이(들)가 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터 게놈 자체는 예를 들어 하나 또는 둘 다의 부착 부위를 돌연변이 또는 결실시키거나 3′LTR 근위 폴리푸린 트랙(polypurine tract, PPT)을 결실 또는 변경을 통해 비기능성으로 만들어 통합을 방지하도록 변경될 수 있다. 일부 구현예에서, 비유전적 접근법이 이용 가능하고; 이는 인테그라제의 하나 이상의 기능을 억제하는 약리학 제제를 포함한다. 상기 접근법은 상호 배타적이지 않다; 즉, 이 중 하나 이상을 한 번에 사용할 수 있다. 예를 들어, 인테그라제와 부착 부위 모두 비기능성일 수 있거나, 인테그라제와 PPT 부위가 비기능성일 수 있거나 또는 부착 부위와 PPT 부위가 비기능성일 수 있거나 또는 이들 모두가 비기능성일 수 있다. 상기 방법과 바이러스 벡터 게놈이 공지되어 있고 이용 가능하다(Philpott and Thrasher, Human Gene Therapy 18:483, 2007; Engelman 등 J Virol 69:2729, 1995; Brown et al J Virol 73:9011 (1999); WO 2009/076524; McWilliams 등, J Virol 77:11150, 2003; Powell and Levin J Virol 70:5288, 1996. 참조).
일부 구현예에서, 벡터는 원핵생물 숙주 세포와 같은 숙주 세포에서 번식을 위한 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터의 핵산은 세균 세포와 같은 원핵 세포에서 번식을 위한 하나 이상의 복제 기원을 함유한다. 일부 구현예에서, 원핵 생물 복제 기원을 포함하는 벡터는 또한 유전자 발현이 약물 내성과 같은 검출 가능하거나 선택 가능한 마커를 부여하는 유전자를 함유할 수 있다.
게놈이 바이러스 벡터 게놈의 RNA 카피를 함유하는 레트로바이러스 입자를 생성하기 위해 다양한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 성분이 바이러스 기반 유전자 전달 시스템을 만드는데 관여한다: 첫째, 구조 단백질뿐만 아니라 바이러스 벡터 입자를 생성하는데 필요한 효소를 포함하는 패키징 플라스미드 및 둘째, 바이러스 벡터 자체, 즉, 전달될 유전 물질이다. 생물학적 안전성 보호 장치를 상기 성분 중 하나 또는 둘 다의 설계에 도입할 수 있다.
일부 구현예에서, 패키징 플라스미드는 외피(envelope) 단백질 이외의 HIV-1과 같은 모든 레트로바이러스 단백질을 함유할 수 있다(Naldini 등, 1998). 다른 구현예에서, 바이러스 벡터에는 독성과 관련된 유전자, 예를 들어 vpr, vif, vpu 및 nef 및/또는 Tat, 즉 HIV의 1차 활성 인자(transactivator)와 같은 추가 바이러스 유전자가 결여될 수 있다. 일부 구현예에서, HIV 기반 렌티바이러스 벡터와 같은 렌티바이러스 벡터는 모 바이러스의 3 가지 유전자, 즉 gag, pol 및 rev만을 포함하며, 이는 재조합을 통한 야생형 바이러스의 재구성 가능성을 감소시키거나 제거한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 게놈은 바이러스 벡터 게놈으로부터 바이러스 입자로 전사되고 바이러스 게놈 RNA를 패키징하기 위해 필요한 모든 성분을 함유하는 패키징 세포주로 도입된다. 대안적으로, 바이러스 벡터 게놈은 하나 이상의 서열, 예를 들어, 관심 재조합 핵산뿐만 아니라 바이러스 성분을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 포함할 수 있다. 그러나, 일부 측면에서, 표적 세포에서 게놈의 복제를 방지하기 위하여, 복제에 요구되는 내인성 바이러스 유전자는 제거되고 패키징 세포주에서 별도로 제공된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 입자를 생성하는데 필요한 성분을 함유하는 하나 이상의 플라스미드 벡터로 형질 감염된다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 LTR, 시스 작용(cis-acting) 패키징 서열 및 관심서열, 즉 CAR과 같은 항원 수용체를 암호화하는 핵산; 및 바이러스의 효소 성분 및/또는 구조 성분, 예를 들어 Gag, pol 및/또는 rev를 암호화하는 하나 이상의 헬퍼 플라스미드를 포함한 바이러스 벡터 게놈을 함유하는 플라스미드로 형질 감염된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 입자를 생성하는 다양한 유전 성분을 분리하기 위해 다중 벡터가 이용된다. 상기 일부 구현예에서, 패키징 세포에 별도의 벡터를 제공하는 것은 달리 복제 능력이 있는 바이러스를 생성할 수 있는 재조합 사건의 기회를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 모든 레트로바이러스 성분을 갖는 단일 플라스미드 벡터를 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 입자, 예를 들어 렌티바이러스 벡터 입자는 숙주 세포의 형질 도입 효율을 증가시키기 위한 위형(pseudotype)이다. 예를 들어, 일부 구현예에서 레트로바이러스 벡터 입자, 예를 들어 렌티바이러스 벡터 입자는 VSV-G 당단백질을 갖는 위형이고, 이는 형질 도입될 수 있는 세포 유형을 확장하여 광범위한 세포 숙주 범위를 제공한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 예를 들어 신드비스(Sindbis) 바이러스 외피, GALV 또는 VSV-G와 같은 이방성, 다방성 또는 양쪽성 외피를 포함하는 비천연 외피 당단백질을 암호화하는 플라스미드 또는 폴리뉴클레오티드로 형질 감염된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 바이러스 게놈 RNA를 렌티바이러스 벡터 입자로 패키징하기 위해 트랜스로 요구되는 바이러스의 조절 및 구조 단백질을 포함한 성분을 제공한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 렌티바이러스 단백질을 발현하고 기능성 렌티바이러스 벡터 입자를 생성할 수 있는 임의의 세포주일 수 있다. 일부 측면에서, 적합한 패키징 세포주에는 293(ATCC CCL X), 293T, HeLa(ATCC CCL 2), D17(ATCC CCL 183), MDCK(ATCC CCL 34), BHK(ATCC CCL-10) 및 Cf2Th(ATCC CRL 1430) 세포가 포함된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 안정적으로 바이러스 단백질(들)을 발현한다. 예를 들어, 일부 측면에서, gag, pol, rev 및/또는 기타 구조 유전자를 함유하나 LTR 및 패키징 성분은 함유하지 않는 패키징 세포주가 작제될 수 있다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 이종 단백질을 암호화하는 핵산 분자 및/또는 외피 당단백질을 암호화하는 핵산을 함유하는 바이러스 벡터 게놈과 함께 하나 이상의 바이러스 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 일시적으로 형질 감염될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 및 패키징 및/또는 헬퍼 플라스미드는 패키징 세포주 내로 형질 감염 또는 감염을 통해 도입된다. 패키징 세포주는 바이러스 벡터 게놈을 함유하는 바이러스 벡터 입자를 생산한다. 형질 감염 또는 감염을 위한 방법은 잘 알려져 있다. 비제한적인 예에는 인산 칼슘, DEAE-덱스트란 및 리포펙션(lipofection) 방법, 전기 천공 및 미세 주입이 포함된다.
재조합 플라스미드 및 레트로바이러스 LTR 및 패키징 서열이 특정 세포주로(예를 들어, 인산 칼슘 침전에 의해) 도입될 때, 패키징 서열은 재조합 플라스미드의 RNA 전사물이 바이러스 입자로 패키징되도록 허용할 수 있으며, 이어서 이는 배양 배지로 분비될 수 있다. 일부 구현예에서 재조합 레트로바이러스를 함유하는 배지가 이어서 수집되고, 선택적으로 농축 및 유전자 전달을 위해 사용된다. 예를 들어, 일부 측면에서, 패키징 플라스미드 및 패키징 세포주로의 전달 벡터와의 공동 형질 감염 후, 바이러스 벡터 입자는 배양 배지로부터 회수되고 당업자들에 의해 사용되는 표준 방법에 의해 적정된다.
일부 구현예에서, 렌티바이러스 벡터와 같은 레트로바이러스 벡터는 렌티바이러스 입자의 생성을 허용하는 플라스미드의 도입에 의해 예시적인 HEK 293T 세포주와 같은 패키징 세포주에서 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 패키징 세포는 형질 감염되고/거나 gag 및 pol을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및 재조합 수용체, 예를 들어 항원 수용체, 예를 들어 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 rev 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 선택적 및/또는 추가적으로 형질 감염되고/거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 VSV-G와 같은 비천연 외피 당단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 선택적 및/또는 추가적으로 형질 감염되고/거나 이를 함유한다. 상기 일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 HEK 293T 세포의 형질 감염 후 대략 2일 후에, 세포 상청액은 재조합 렌티바이러스 벡터를 함유하고 이는 회수되어 적정될 수 있다.
회수 및/또는 생성된 레트로바이러스 벡터 입자는 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 표적 세포를 형질 도입하는데 사용될 수 있다. 일단 표적 세포에 존재하게 되면, 바이러스 RNA는 역전사되고, 핵으로 들어가서 안정적으로 숙주 게놈에 통합된다. 바이러스 RNA의 통합 후 1 또는 2일 후, 재조합 단백질, 예를 들어 항원 수용체, 예를 들어 CAR의 발현이 검출될 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 바이러스 입자와 복수의 세포를 포함하는 세포 조성물을 접촉, 예를 들어, 인큐베이션함으로써 세포를 형질 도입하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 형질 감염 또는 형질 도입될 세포는 대상체로부터 농축 및/또는 선택된 세포와 같은 대상체로부터 얻어진 1차 세포이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 중 형질 도입될 세포의 농도는 (약) 1.0×105 세포/mL 내지 1.0×108 세포/mL, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 또는 약 1.0×105 세포/mL, 5×105 세포/mL, 1×106 세포/mL, 5×106 세포/mL, 1×107 세포/mL, 5×107 세포/mL 또는 1×108 세포/mL 이다.
일부 구현예에서, 바이러스 입자는 형질 도입될 세포의 총 수당 바이러스 벡터 입자의 특정 비율의 카피 또는 이의 감염 단위(IU)로 제공된다(IU/세포). 예를 들어, 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 접촉하는 동안 하나의 세포 당 (약) 또는 적어도 (약) 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60 IU 또는 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60 IU 의 바이러스 벡터 입자로 존재한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자의 역가는 (약) 1×106 IU/mL 내지 1×108 IU/mL, 예를 들어 (약) 5×106 IU/mL 내지 5×107 IU/mL, 예를 들어 6×106 IU/mL, 7×106 IU/mL, 8×106 IU/mL, 9×106 IU/mL, 1×107 IU/mL, 2×107 IU/mL, 3×107 IU/mL, 4×107 IU/mL 또는 5 x107 IU/mL 이상이다.
일부 구현예에서, 형질 도입은 100 미만, 예를 들어 일반적으로 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 이하 미만의 감염 다중도(multiplicity of infection, MOI)를 달성할 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 바이러스 입자와 세포를 접촉 또는 인큐베이션하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 접촉은 30 분 내지 72시간, 예를 들어 30 분 내지 48시간, 30 분 내지 24시간 또는 1 시간 내지 24시간, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 30 분, 1 시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 36시간 이상 동안이다.
일부 구현예에서, 접촉은 용액에서 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 및 바이러스 입자는 (약) 0.5 mL 내지 500 mL, 예를 들어 (약) 0.5 mL 내지 200 mL, 0.5 mL 내지 100 mL, 0.5 mL 내지 50 mL, 0.5 mL 내지 10 mL, 0.5 mL 내지 5 mL, 5 mL 내지 500 mL, 5 mL 내지 200 mL, 5 mL 내지 100 mL, 5 mL 내지 50 mL, 5 mL 내지 10 mL, 10 mL 내지 500 mL, 10 mL 내지 200 mL, 10 mL 내지 100 mL, 10 mL 내지 50 mL, 50 mL 내지 500 mL, 50 mL 내지 200 mL, 50 mL 내지 100 mL, 100 mL 내지 500 mL, 100 mL 내지 200 mL 또는 200 mL 내지 500 mL의 부피에서 접촉된다.
특정 구현예에서, 입력 세포는 바이러스 DNA에 의해 암호화되는 재조합 수용체에 결합하거나 이를 인식하는 결합 분자를 포함하는 입자로 처리, 인큐베이션 또는 접촉된다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자와 세포의 인큐베이션은 바이러스 벡터 입자로 형질 도입된 세포를 포함하는 출력 조성물을 초래하거나 생성한다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기 천공을 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, 문헌「Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo 등 (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437」 참조). 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전위를 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, 문헌「Manuri 등 (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma 등 (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang 등 (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126」 참조). 면역 세포에 유전 물질을 도입 및 발현시키는 기타 방법은, 인산칼슘 형질 감염(예를 들어, 문헌「Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.」에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜-매개 형질 감염; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 인산스트론튬 DNA 공-침전(Brash 등, Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다.
재조합 생성물을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 전달을 위한 기타 접근법 및 벡터는 예를 들어, 문헌「국제 특허 출원 공개 번호: WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190」에 기재된 것이다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, T 세포는 증폭 중 또는 증폭 후에 예를 들어 T 세포 수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)로 형질감염될 수 있다. 원하는 수용체의 유전자 도입을 위한 상기 형질 감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 이어서 유전자 변형 세포 집단은 초기 자극(예를 들어 CD3/CD28 자극)으로부터 유리될 수 있으며, 후속적으로 제2 유형의 자극, 예를 들어 새로이 도입된 수용체를 통해 자극될 수 있다. 상기 제2 유형의 자극은 새로운 수용체의 프레임워크 내에서 직접 결합하는(예를 들어 수용체 내의 불변 영역을 인지함으로써) 유전자 도입된 수용체의 펩티드/MHC 분자, 즉 동종(교차 결합) 리간드(예를 들어 CAR의 천연 리간드) 또는 임의의 리간드(예를 들어 항체) 형태의 항원 자극을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌「Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy”Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 또는 Barrett 등, Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014)」을 참조한다.
일부 경우에, 세포, 예를 들어, T 세포가 활성화되는 것이 필요하지 않은 벡터를 사용할 수 있다. 일부 상기의 경우에, 세포는 활성화되기 전에 선택 및/또는 형질 도입될 수 있다. 따라서, 세포는 세포 배양 이전에 또는 후속적으로 조작될 수 있고, 일부 경우에는 배양의 적어도 일부와 동시에 또는 그 동안에 조작될 수 있다.
[0854] 도입을 위한 추가 핵산, 예를 들어 유전자 중에, 예를 들어 전달된 세포의 생존 능력 및/또는 기능을 촉진함으로써 요법의 효능을 개선하는 유전자; 생체 내 생존 또는 국소화를 평가하는 것과 같이 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하는 유전자; 문헌「Lupton S. D. 등, Mol. 및 Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell 등, Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)」에 기재된 바와 같이 예를 들어, 생체 내에서 음성 선택에 세포를 취약하게 만들어 안정성을 개선하는 유전자가 있다; 또한 우세한 양성 선택 가능한 마커와 음성 선택 가능한 마커의 융합에서 유래된 2작용성 선택 가능한 융합 유전자의 사용을 기재한 문헌「국제 출원 공개 번호 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton 등」을 참조한다. 예를 들어, 문헌「Riddell 등, 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17 열」을 참조한다.
1. 조작된 세포의 배양, 증폭 및 제형
일부 구현예에서, 조작된 세포를 제조하기 위한 방법, 예를 들어 세포 요법을 위해 본원에서 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물은 세포를 배양하기 위한 하나 이상의 단계, 예를 들어 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건 하에서 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 단계, 예를 들어 형질 도입 또는 형질 감염에 의해 재조합 폴리펩티드를 세포에 도입하는 단계 후에 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건 하에서 배양된다. 특정 구현예에서, 세포가 자극 조건 하에서 인큐베이션되고 재조합 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 형질 도입되거나 형질 감염된 후, 세포가 배양된다. 따라서, 일부 구현예에서, CAR 을 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오타이드로 형질도입 또는 형질감염으로 조작된 CAR-양성 T 세포의 조성물은 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건에서 배양된다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 조작된 T 세포의 조성물은 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물이거나 이를 포함하며, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물을 포함한다.
특정 구현예에서, 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 분리 및/또는 농축된 농축된 T 세포의 2개의 개별 조성물은, 예를 들어 유전자 조작에 이어서, 예를 들어 세포에 형질도입 또는 형질감염으로 재조합 폴리펩티드를 도입하는 자극 조건, 에서 각각 배양된다. 특정 구현예에서, 2개의 개별 조성물은 농축된 CD4+ T 세포의 조성물, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축된 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, 2개의 개별 조성물은 농축된 CD8+ T 세포의 조성물, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축된 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 농축된 CD4+ T 세포 및 농축된 CD8+ T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 각각 별도로 조작된 농축된 CD4+ T 세포의 조성물 및 농축된 CD8+ T 세포의 조성물은 예를 들어, 증식 및/또는 확장을 촉진하는 조건 하에 각각 배양된다.
일부 구현예에서, 배양은 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건에서 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 조건은 세포 집단의 증식, 증폭, 활성, 및/또는 생존을 촉진하도록 설계될 수 있다. 특정 구현예에서, 자극 조건은 하나 이상의 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 작용제, 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포의 성장, 분리, 및/또는 증폭을 활성화 시키도록 설계된 임의의 다른 작용제을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 세포들은 하나 이상의 사이토카인 존재 하에 배양된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포에 의해 발현되고/되거나 내인성인 수용체에 결합하고/하거나 수용체에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 사이토카인의 4- 알파-헬릭스 다발 패밀리의 구성원이거나이를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인의 4- 알파-헬릭스 다발 패밀리의 구성원은 인터류킨-2 (IL-2), 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-7 (IL-7), 인터류킨-9 (IL-9), 인터류킨-12 (IL-12), 인터류킨-15 (IL-15), 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF) 및 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 재조합 사이토카인은 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15 이다. 일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 조작된 세포는 사이토카인, 예를 들어, 농도가 1 IU/mL 내지 2,000 IU/mL, 10 IU/mL 내지 100 IU/mL, 50 IU/mL 내지 200 IU/mL, 100 IU/mL 내지 500 IU/mL, 내지 100 IU/mL 및 1,000 IU/mL, 500 IU/mL 내지 2,000 IU/mL, 또는 100 IU/mL 내지 1,500 IU/mL 인 재조합 인간 사이토카인 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, 배양은 일반적으로 인간 T 림프구와 같은 1차 면역 세포의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 약 25 ℃일반적으로 적어도 약 30 ℃이상 및 일반적으로 (약) 37 ℃를 포함하는 조건에서 수행된다. 일부 구현예에서, 농축된 T 세포 조성물은 25 내지 38 ℃예를 들어 30 내지 37 ℃예를 들어 (약) 37 ℃± 2 ℃의 온도에서 인큐베이션된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 배양, 예를 들어, 배양 또는 증폭이 원하는 또는 임계 밀도, 세포 수 또는 세포의 단위 용량을 초래할 때까지 기간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 이상 초과 또는 동안이다.
특정 구현예에서, 배양은 폐쇄된 시스템에서 수행된다. 특정 구현예에서, 배양은 멸균 조건 하에서 폐쇄된 시스템으로 수행된다. 특정 구현예에서, 배양은 시스템의 하나 이상의 단계와 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 구현예에서 농축된 T 세포 조성물은 폐쇄된 시스템에서 제거되어 배양을 위한 생물 반응기에 배치되고/거나 연결된다. 배양에 적합한 생물 반응기의 예에는 GE Xuri W25, GE Xuri W5, Sartorius BioSTAT RM 20 | 50, Finesse SmartRocker Bioreactor Systems 및 Pall XRS Bioreactor Systems이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 생물 반응기는 배양 단계 중 적어도 일부 동안 세포를 관류 및/또는 혼합하는데 사용된다.
일부 구현예에서, 혼합은 흔들림 및/또는 움직임이거나 이를 포함한다. 일부 경우에, 생물 반응기는 움직임이나 흔들림에 노출될 수 있고, 이는 일부 측면에서, 산소 전달을 증가시킬 수 있다. 생체 반응기를 움직이는 것은 수평 축을 따라 회전하는 것, 수직 축을 따라 회전하는 것, 생물 반응기의 경사진 또는 기울어진 수평 축을 따라 흔들리는 움직임 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있으나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 인큐베이션의 적어도 일부는 흔들리면서 수행된다. 흔들리는 속도 및 흔들리는 각도는 원하는 교반을 달성하기 위해 조정될 수 있다. 일부 구현예에서 흔들기 각도는 (약) 20°, 19°, 18°, 17°, 16°, 15°, 14°, 13°, 12°, 11°, 10°, 9°, 8°, 7°, 6°, 5°, 4°, 3°, 2° 또는 1°이다. 특정 구현예에서, 흔들기 각도는 6-16°이다. 다른 구현예에서, 흔들기 각도는 7-16°이다. 다른 구현예에서, 흔들기 각도는 8-12°이다. 일부 구현예에서, 흔들기 속도는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 1 12, 13, 14 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 rpm이다. 일부 구현예에서, 흔들기 속도는 4 내지 12 rpm, 예를 들어 4 내지 6 rpm(수치 포함)이다.
일부 구현예에서, 생물 반응기는 (약) 또는 적어도 0.01 L/min, 0.05 L/min, 0.1 L/min, 0.2 L/min, 0.3 L/min, 0.4 L/min, 0.5 L/min, 1.0 L/min, 1.5 L/min 또는 2.0 L/min 또는 2.0 L/min 초과 의 안정적인 공기 흐름을 가지면서 37 ℃또는 근방 온도 및 5% 또는 근방 CO2 수준을 유지한다. 특정 구현예에서, 배양의 적어도 일부분은 예를 들어, 배양 세포의 배양 개시 및/또는 밀도와 관련한 타이밍에 따라, 관류, 예를 들어 290 ml/일, 580 ml/일 및/또는 1160 ml/일의 속도로 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 배양 증폭의 적어도 일부는 흔들림 동작, 예를 들어 5° 내지 10°, 예를 들어 6°의 각도에서, 일정한 흔들림 속도, 예를 들어 5 내지 15 RPM, 예를 들어 6 RMP 또는 10 RPM의 속도로 수행된다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법, 용도 또는 제조 물품에 따라 세포 요법 및/또는 조작된 세포를 제조, 생성 또는 생산하는 방법은 세포의 제형, 예를 들어 인큐베이션, 조작 및 배양 전 또는 후에 처리 단계, 및/또는 기재된 바와 같은 하나 이상의 다른 처리 단계에 따라 유전자 조작된 세포의 제형을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 제형화를 포함한 하나 이상의 처리 단계는, 폐쇄 시스템에서 수행될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 세포 요법을 제조, 생성 또는 생성하기 위한 하나 이상의 단계(예를 들어, 원심분리 챔버 및/또는 폐쇄 시스템에서 수행)에서 처리되고/되거나 조작된 세포는 세포의 제형화, 예를 들어 배양, 예를 들어 배양 및 확장, 전 또는 후 형질전환 단계 및/또는 본원에 기재된 하나 이상의 다른 단계에 따라 유전자 조작된 세포의 제형화를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포는 이의 주어진 용량 또는 분획에서 투여를 위한 세포 수를 포함하는 단일 용량 형태 조성물로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 재조합 항원 수용체, 예를 들어, CAR 또는 TCR로 조작된 세포를 포함하는 세포의 단위 용량은 약학 조성물 또는 제형와 같은 조성물 또는 제형으로 제공된다. 상기 조성물은 질병, 병태 및 장애의 예방 또는 치료를 위한 방법 또는 검출, 진단 및 예측 방법 및 용도 및 제조 물품을 포함하여 제공된 방법과 부합되게 사용될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 투여 용량, 예를 들어 단일 단위 투여 용량 또는 다회 투여 용량으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알 안으로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이알은 융합 바이알일 수 있다. 일부 구현예에서, 바이알은 조작된 세포, 예를 들어 이의 주어진 용량 또는 분획에서 투여를 위한 세포 수를 포함하는 단일 단위 용량으로 제형화된다.
일부 구현예에서, 세포는 약학적으로 허용 가능한 완충제로 제형화되며, 이는 일부 측면에서 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정은 약학적으로 허용 가능하거나 대상체에 투여하기에 바람직한 배지 또는 제형화 완충제로 배지의 교환을 포함한다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 하나 이상의 선택적인 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있는 약학적으로 허용 가능한 완충제에서 세포를 교체하기 위해 형질 도입 및/또는 증폭된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함한 상기 약학적 형태의 예시는 대상체에게 세포 및 조성물을 투여하기 위해 허용 가능한 형태와 함께 하기에 기재된 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 제형화 완충제는 냉동 보존제를 함유한다. 일부 구현예에서, 세포는 1.0% 내지 30% DMSO 용액, 예를 들어 5% 내지 20% DMSO 용액 또는 5% 내지 10% DMSO 용액을 함유하는 냉동 보존 용액으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 냉동보존 용액은 예를 들어, 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 기타 적합한 세포 동결 배지를 함유하는 PBS이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 냉동보존 용액은 예를 들어 7.5% DMSO 이상 또는 약 7.5% DMSO이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 냉동보존 용액에서 세포를 교체하기 위해 형질 도입된 및/또는 증폭된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포들은 냉동, 예를 들어 최종 농도가 12.5%, 12.0%, 11.5%, 11.0%, 10.5%, 10.0%, 9.5%, 9.0%, 8.5%, 8.0%, 7.5%, 7.0%, 6.5%, 6.0%, 5.5%, 또는 5.0% DMSO, 또는 1% 내지 15%, 6% 내지 12%, 5% 내지 10%, 또는 6% 내지 8% 이거나 약 12.5%, 12.0%, 11.5%, 11.0%, 10.5%, 10.0%, 9.5%, 9.0%, 8.5%, 8.0%, 7.5%, 7.0%, 6.5%, 6.0%, 5.5%, 또는 5.0% DMSO, 또는 1% 내지 15%, 6% 내지 12%, 5% 내지 10%, 또는 6% 내지 8% 인 DMSO 배지 및/또는 용액 으로 동결보호 또는 동결보존되었다. 특정 구현예에서, 세포들은 냉동, 예를 들어 최종 농도가 5.0%, 4.5%, 4.0%, 3.5%, 3.0%, 2.5%, 2.0%, 1.5%, 1.25%, 1.0%, 0.75%, 0.5%, 또는 0.25% HSA, 또는 0.1% 내지 5%, 0.25% 내지 4%, 0.5% 내지 2%, 또는 1% 내지 2% HSA 이거나 약 5.0%, 4.5%, 4.0%, 3.5%, 3.0%, 2.5%, 2.0%, 1.5%, 1.25%, 1.0%, 0.75%, 0.5%, 또는 0.25% HSA, 또는 0.1% 내지 5%, 0.25% 내지 4%, 0.5% 내지 2%, 또는 1% 내지 2% HSA 배지 및/또는 용액 으로 동결보호 또는 동결보존되었다.
일부 구현예에서, 제형은 배양된 또는 확장된 세포와 같은 세포를 세척, 희석 또는 농축시키는 것을 포함하는 하나 이상의 공정 단계를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 공정은 주어진 단위 용량 또는 이의 분획으로 투여를 위한 세포의 수를 포함하는 단위 투여 용량 형태 조성물과 같은 원하는 농도 또는 수로 세포를 희석 또는 농축하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 원하는 대로 세포의 농도를 증가시키기 위해 부피 감소를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 원하는 대로 세포의 농도를 감소시키기 위해 부피 첨가를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정은 형질 도입 및/또는 확장된 세포에 제형 완충액의 부피를 추가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형 완충제의 부피는 (약) 10 mL 내지 1000 mL, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 또는 약 50 mL, 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 600 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL 또는 1000 mL 이다.
일부 구현예에서, 세포 조성물을 제형화하기 위한 상기 공정 단계는 폐쇄된 시스템에서 수행된다. 예시적인 상기 공정 단계는 Sepax®또는 Sepax 2®세포 처리 시스템과 사용하기 위한 것을 포함하여 Biosafe SA에 의해 생산 및 판매되는 원심분리 챔버와 같은 세포 처리 시스템과 관련된 하나 이상의 시스템 또는 키트와 함께 원심분리 챔버를 사용하여 수행될 수 있다. 예시적인 시스템 및 공정이 문헌「국제 공개 번호 WO2016/073602」에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 방법은 기재된 바와 같이, 상기 구현예 중 어느 하나에서 제형 완충제, 예를 들어 약학적으로 허용 가능한 완충제에서 제형화된 세포의 생성된 조성물인 제형화된 조성물을 원심분리 챔버의 내부 공동에서 발현 또는 이로부터의 전달을 달성하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형화된 조성물의 발현 또는 전달은 원심 분리 챔버를 가진 폐쇄 시스템의 일부로서 작동적으로 연결된 본 명세서에 기재된 생물 의학 재료 용기와 같은 컨테이너이다. 일부 구현예에서, 생물 의학 재료 용기는 하나 이상의 공정 단계를 수행하는 폐쇄 시스템 또는 디바이스에 통합 및 작동 가능한 연결을 위해 구성되고/거나 이에 통합되거나 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 생물 의학 재료 용기는 출력 라인 또는 출력 위치에서 시스템에 연결된다. 일부 경우에, 폐쇄 시스템은 입구 튜브에서 생물 의학 재료 용기의 바이알에 연결된다. 본 명세서에 기재된 생물 의학 재료 용기와 함께 사용하기 위한 예시적인 폐쇄 시스템은 Sepax®및 Sepax®2 시스템을 포함한다.
일부 구현예에서, 폐쇄 시스템, 예를 들어 원심분리 챔버 또는 세포 처리 시스템은 하나 또는 다수의 컨테이너, 예를 들어 생물 의학 재료 용기가 제형화된 조성물의 발현을 위해 연결될 수 있는 포트를 가진 튜브 라인의 각 끝에 결합된 다수의 회로를 가진 튜브 매니폴드를 함유하는 다중 포트 출력 키트를 포함한다. 일부 측면에서, 원하는 수 또는 다수의 상기 바이알은 다중 포트 출력 중 하나 이상, 일반적으로 2개 이상, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8개 이상의 포트에 멸균적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나 이상의 컨테이너, 예를 들어, 생물 의학 재료 용기는 포트들 또는 모든 포트보다 더 적은 포트에 부착될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 시스템은 다수의 생물 의학 재료 용기 바이알 안으로 출력 조성물의 발현을 초래할 수 있다.
일부 측면에서, 세포는 투여 용량, 예를 들어 단일 단위 투여 용량 또는 다중 투여 용량의 양으로 하나 이상의 다수의 출력 컨테이너, 예를 들어 생물 의학 재료 용기의 바이알에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 생물 의학 재료 용기의 바이알은 각각 주어진 단위 용량 또는 이의 분획에서 투여를 위한 세포의 수를 함유할 수 있다. 따라서, 각 바이알은, 일부 측면에서, 투여를 위한 단일 단위 용량을 함유할 수 있거나, 다수의 바이알 중 하나 이상, 예를 들어 2개의 바이알 또는 3개의 바이알이 함께 투여를 위한 단위 용량을 구성하도록 원하는 단위 용량의 분획을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 4 바이알이 함께 투여를 위한 용량으로 구성된다.
따라서, 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알은 일반적으로 투여될 세포를 예를 들어, 하나 이상의 이의 단위 투여량으로 함유한다. 단위 투여량은 대상체에 투여될 세포의 양 또는 수일 수 있거나 투여될 세포의 2배(또는 그 이상)의 수일 수 있다. 이는 대상체에 투여될 세포의 가장 낮은 단위 용량 또는 가장 낮은 가능한 단위 용량일 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 제조 물품은 하나 이상의 다수의 출력 컨테이너를 포함한다.
일부 구현예에서, 각각의 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알은 개별적으로 세포의 단위 용량을 포함한다. 따라서 일부 구현예에서, 각각의 컨테이너는 동일하거나 대략 또는 실질적으로 동일한 수의 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량은 (약) 또는 적어도 (약) 1×106, 2×106, 5×106, 1×107, 5×107, 또는 1×108 개 이상의 조작된 세포, 총 세포, T 세포 또는 PBMC를 함유한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량은 (약) 또는 적어도 (약) 1×106, 2×106, 5×106, 1×107, 5×107, 또는 1×108 개의 CD3+ 인 CAR+ T 세포, 예를 들어 CD4+ 또는 CD8+, 또는 이의 가능한 아형을 함유한다.
일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 10 mL 및 (약) 100 mL, 예를 들어 (약) 또는 적어도 (약) 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL 또는 100 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 1 mL 및 (약) 10 mL, 예를 들어 (약) 1mL 및 (약) 5mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4 mL 및 (약) 5 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.4 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.5 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.6 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.7 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.8 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.9 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알에 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 5.0 mL 이다.
일부 구현예에서, 제형화된 세포 조성물은 mL 당 (약) 0.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 1.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 1.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.6×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.7×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.8×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 2.9×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 3.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 3.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 4.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, mL 당 (약) 4.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상 또는 mL 당 (약) 5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상의 농도를 가진다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다.
일부 구현예에서, 컨테이너, 예를 들어 백 또는 바이알 내 세포는 냉동보존될 수 있다. 일부 구현예에서, 컨테이너, 예를 들어 바이알은 사용될 때까지 액체 질소에 보관될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 의해 생산된 세포 또는 상기 세포를 포함하는 조성물은 대상체에질병 또는 병태 치료를 위해, 예를 들어 본원에 기재된 방법, 용도 및 제조 물품에 따라 투여될 수 있다.
IV. 조성물 및 제형
일부 구현예에서, 재조합 항원 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR로 조작된 세포의 용량은 약제학적 조성물 또는 제제와 같은 조성물 또는 제제로서 제공된다. 본원에 기재된 예시적 조성물 및 제형은 세포 조작의 방법과 관련에서 제조된 것을 포함한다. 이러한 조성물은 제공된 방법, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물, 예를 들어 질병, 병태 및 장애의 예방 또는 치료, 또는 검출, 진단 및 예후 방법에 따라 사용될 수 있다.
용어 "약학 제형(pharmaceutical formulation)"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태이고, 상기 제형이 투여될 대상체에 허용 가능하지 않게 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)"는 활성 성분이 아닌 약학 제형의 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서, 담체의 선택은 특정 세포 또는 제제에 의해 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 적합한 다양한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화 벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 방부제 혼합물이 사용된다. 방부제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.0001 중량% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어, 문헌「Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)」에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용체에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 방부제(예를 들어 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이팅제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 자당; 나트륨과 같은 염 형성 카운터 이온; 금속 착물(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서 완충제는 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2개 이상의 완충제 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)」에 보다 상세하게 기재되어 있다.
제형 또는 조성물은 세포 또는 제제에 상보적인 활성을 가진 것으로 예방 또는 치료될 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 상기 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적절히 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 기타 약학적 활성제 또는 약물을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포는 염, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여된다. 약학적으로 적합하고 허용 가능한 산성 부가 염은 염산, 브롬화수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산과 같은 유기산에서 유래된 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 제제 또는 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료적 또는 예방적 효능은 치료 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 조건에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 질병 증상의 바람직한 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여량 처방이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 바람직한 투여량이 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
제제 또는 세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하 주사(subconjuntival injection), 결막 하 주사(subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 세포 또는 제제의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 예를 들어, 3일 이하의 기간에 걸쳐 세포 또는 제제의 다중 볼루스 투여에 의해, 또는 세포 또는 제제의 지속적인 투여에 의해 투여된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은, 치료될 질병의 유형, 제제 또는 제제, 세포의 유형 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 제제 또는 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 대상체의 임상 이력 및 제제 또는 세포에 대한 반응 및 주치의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에게 적합하게 투여된다.
세포 또는 제제는 표준 투여 기술, 제형 및/또는 디바이스를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 보관 및 투여를 위한 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 디바이스가 제공된다. 세포의 투여는 자가 조직 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체가 하나의 대상체에서 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이하고, 양립 가능한 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포 또는 신경독성 증상을 치료 또는 개선하는 제제를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 이는 주사 가능한 단위 투여량 형태(용액, 현탁액, 에멀젼)로 제형화될 것이다.
제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육, 비강, 볼, 설하 또는 좌약 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 여기에 사용된 바와 같은 용어 "비경구(parenteral)"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 조성물은 멸균 액체 제제, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 보통 겔, 기타 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 보다 용이하다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 반면에, 점성 조성물은 적절한 점도 범위 내에서 제형화되어 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공할 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균 주사용 용액은 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예를 들어 멸균수, 생리 식염수, 글루코오스, 덱스트로스 등과의 혼합물과 같은 용매에 제제 또는 세포를 혼입시킴으로써 제조될 수 있다.
생체 내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포 용량은 냉동 보존된 조성물이다. 일부 측면에서, 조성물은 냉동보존된 조성물을 해동한 후 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 해동 후 (약) 30분,45분, 60분, 90분, 120분, 150분 또는 180분 내에 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 해동 후 (약) 120분 내에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 용량은 주사기로 투여된다. 일부 구현예에서, 주사기의 부피는 (약) 0.5, 1, 2, 2.5, 3, 4, 5, 7.5, 10, 20 또는 25 mL 또는 전술한 것 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다.
V. 병용 요법
상기 방법, 제조 물품(articles of manufacture), 용도 또는 조성물의 일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량은 일반적으로 세포 요법 또는 예를 들어 CAR+ T 세포 요법 이외의 또 다른 세포 요법 이외의 추가 치료제 또는 요법과 조합하여 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 또는 용도에서, 그리고/또는 제조 물품 또는 조성물과 함께, 세포 요법, 예를 들어, CAR+ T 세포와 같은 유전적으로 조작된 T 세포의 용량은 예를 들어 하나 이상의 추가 치료적 개입과 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로, 임의의 순서로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 추가 치료적 개입은, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 또는 이의 아형 또는 B 세포 악성 종양, 예를 들어, NHL과 같은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 임의의 제제 또는 치료, 및/또는 조작된 세포 요법의 효능, 지속성 및/또는 활성을 증가시키기 위한 임의의 제제 또는 치료를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제 또는 요법은 불량한 반응자이거나, 불량한 반응자일 가능성이 있거나, 또는 불량한 가능자로 예상되는 대상체 및/또는 반응하지 않거나, 반응하지 않을 가능성이 있거나, 그리고/또는 반응하지 않을 것으로 예상되거나 특정 시간 내 및/또는 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량을 이용한 치료에 대해 어느 정도로 반응하지 않는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 추가 치료제는 예를 들어 상기 세포 요법의 투여의 개시 후 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 완전한 반응 또는 전반적인 반응을 나타내지 않거나, 나타내지 않을 가능성이 있거나, 또는 나타내지 않을 것으로 예상되는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 추가 치료제는 예를 들어 상기 세포 요법의 투여 후 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 진행성 질병(progressive disease, PD)을 나타내거나, 나타낼 가능성이 있거나, 또는 나타낼 것으로 예상되는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법으로 치료되었거나 또는 이전에 치료되어 유사한 상황에 있는 다수의 대상체에 기초한 반응 또는 특정 반응을 나타내지 않을 가능성이 있거나 또는 나타내지 않을 것으로 예상된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량 에 대해 불량한 반응을 나타낼 수 있거나, 나타낼 가능성이 더 높은 대상체는 선행 요법을 이용한 치료, 임의로 화학요법제를 이용한 선행 요법 후 안정 또는 진행성 질환(SD/PD)을 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있는 NHL을 나타내는 대상체, 이는 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 상태 2로 확인되었거나 확인된 대상체, 즉 형질전환된 여포 림프종(tFL)이 있는 것으로 확인되었거나 확인된 대상체, 또는 MZL 및 CLL 에서 형질전환된 DLBCL 를 포함하는 것으로 확인되었거나 확인된 대상체를 포함하는 것으로 관찰된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법은 세포 요법 단독으로 투여하였을 때 및 추가적 제제 또는 요법과 함께 병용하여 투여하였을 때 세포 요법에 불량한 반응을 나타내는 대상체 선별하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 병용 요법 방법으로 치료받을 대상체는 B 세포 악성 종양, 예를 들어 NHL, 이는 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 상태 2, 형질전환된 여포 림프종(tFL), 또는 MZL 및 CLL 에서 형질전환된 DLBCL 을 갖는 대상체이다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 요법은 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량 개시 전에, 이를 수반하거나 동시에 및/또는 이후에 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 세포 요법 투여 후 대상체의 혈액에서 세포 요법의 약동학(pharmacokinetic, PK)은 세포 요법에 대해 반응하는(예를 들어, CR 또는 OR을 나타내는) 대상체 대 세포 요법에 반응하지 않는(예를 들어, PD를 나타내는) 대상체 간에 유사하거나 또는 실질적으로 다르지 않다. 일부 구현예에서, 이러한 관찰은 세포 요법이 대상체에서 확장되거나 확장되고 있지만, 최적의 효능을 나타내지 않을 수 있음을 나타낸다.
일부 맥락에서, 세포 요법의 최적의 효능은 투여된 세포가 표적, 예를 들어, 표적 항원을 인식하고 결합하여, 대상체, 종양 및 이의 환경 내에서 적절한 부위로 왕래(traffic), 국소화 및 성공적으로 진입하는 능력에 따라 달라질 수 있다. 일부 맥락에서, 최적의 효능은 투여된 세포가 활성화되고, 팽창되고, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함한 다양한 효과기 기능을 발휘하고, 장기간을 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태(예를 들어 장기 지속 기억의, 덜분화된, 효과기 상태)로의 분화, 이행 또는 재프로그래밍에 관여하고, 질병의 국소 미세 환경에서 면역 억제 상태를 피하거나 감소시키고, 표적 리간드 또는 항원에 대한 제거 및 재노출 후에 효과적이고 강력한 기억반응을 제공하고, 그리고 고갈(exhaustion), 면역성 결핍, 말초 내성, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는, 능력에 따라 달라질 수 있다.
일부 측면에서, 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법의 효능은 질병이나 장애, 예를 들어, TME의 국소 미세 환경에 존재하는 면역 억제 활성 또는 인자에 의해 제한될 수 있다. 일부 측면에서, TME는 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 기능, 증식, 생존 및/또는 지속성을 억제할 수 있는 인자 또는 조건을 함유하거나 생산한다.
일부 구현예에서, 세포 치료의 개시 전에 부수적으로 또는 동시에 및/또는 순차적으로 추가 제제 또는 요법의 투여, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포) 의 용량은 세포 치료의 활성, 효능 및/또는 지속성을 개선시키고/거나 처리된 대상체의 반응을 개선시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법을 위한 추가 제제는 CAR+ T 세포와 같이, 예를 들어 조작된 T 세포 치료와 같은 세포 치료의 치료 효과의 효능 및/또는 안전성을 강화, 증진 및/또는 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 을 발현하는 세포의 효능, 생존 또는 지속성을 강화하거나 개선시킨다.
일부 구현예에서, 요법의 추가 제제는 항체 또는 세포독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학요법제이다. 일부 구현예에서, 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제는 면역 조절제, 면역 관문 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나아제 억제제이다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 포스파타아제 억제제, 키나아제 억제제, 사이토카인, 면역 조절제, 또는 조절 T(Treg) 세포의 수준 또는 활성을 감소시키는 제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포 치료의 유해 효과를 감소시키거나 개선시킴으로써 안전성을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 동일한 질병, 병태 또는 동반질환을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 유해 효과 또는 부작용을 개선, 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 요법, 치료 또는 제제는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 이식, 입양 세포 요법, 항체, 세포 독성제, 화학 요법제, 사이토카인, 성장 억제제, 항 호르몬제, 키나아제 억제제, 항 혈관 형성제, 심장 보호제, 면역 자극제, 면역 억제제, 면역 관문 억제제, 항생제, 혈관 형성 억제제, 대사 조절제 또는 다른 치료제 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질, 펩티드, 핵산, 소분자 제제, 세포, 독소, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합물 또는 임의의 다른 유형의 치료제, 예를 들어 방사선이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 수술, 화학 요법, 방사선 요법, 이식, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포의 투여, 키나아제 억제제, 면역 관문 억제제, mTOR 경로 억제제, 면역 억제제, 면역 조절제, 항체, 면역 제거제, 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편, 항체 접합체, 기타 항체 요법, 세포 독소, 스테로이드, 사이토카인, 펩티드 백신, 호르몬 요법, 항 대사제, 대사 조절제, 칼슘 의존성 포스파타제 칼시뉴린 또는 p70S6 키나아제 FK506을 억제하거나 또는 p70S6 키나아제를 억제하는 약물, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 프로테아좀 억제제, GITR 작용제, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제, 단백질 키나아제 억제제, 종양 용해 바이러스 및/또는 다른 유형의 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 치료는 골수 이식, 플루다라빈과 같은 화학 요법제를 이용한 T 세포 제거 요법, 외부 빔 방사선 요법(external-beam radiation therapy, XRT), 시클로포스파미드 및/또는 항체 요법이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나아제(Bruton's tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어 단클론 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나아제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 화학 요법제이다. 예시적인 화학 요법제는 안트라사이클린(예를 들어, 리포솜 독소루비신과 같은 독소루비신); 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈); 알킬화제(예를 들어, 시클로포스파미드, 데카르바진, 멜팔란, 이포스파미드, 테모졸로마이드); 면역 세포 항체(예를 들어, 알렘투주맙, 겜투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙); 항 대사제(예를 들어, 엽산 길항제, 피리미딘 유사체, 플루다라빈과 같은 퓨린 유사체 및 아데노신 디아미나제 억제제 포함); TNFR 글루코코티코이드 유도 TNFR 관련 단백질(glucocorticoid induced TNFR related protein, GITR) 작용제; 프로테아좀 억제제(예를 들어, 아클라시노마이신 A, 글리오톡신 또는 보르테조밉); 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항 종양 면역 반응, 예를 들어 투여된 조작된 세포로부터 항 종양 면역 반응을, 예를 들어 면역 억제 신호 전달을 억제하거나 면역 자극 신호 전달을 강화함으로써 자극, 증폭 및/또는 달리 강화할 수 있는 면역 조절제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 펩티드, 단백질이거나 소분자이다. 일부 구현예에서, 단백질은 융합 단백질 또는 재조합 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 세포, 예를 들어 T 세포, B 세포 또는 항원-제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 수용체와 같은 면역학적 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 융합 단백질, 소분자 또는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어 단클론 항체인 추가 제제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 관문 경로의 성분을 차단, 억제 또는 방해한다. 면역 체계에는 자체 내성을 유지하고 면역 반응을 조절하는 데 관여하는 다중 억제 경로가 있다. 종양은 특히 종양 항원에 특이적인 T 세포(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264), 예를 들어 CAR 발현 세포와 같은 조작된 세포에 대한 면역 내성의 주요 메커니즘으로 특정 면역 관문 경로를 사용할 수 있다. 많은 상기 면역 관문은 리간드-수용체 상호 작용에 의해 개시되기 때문에, 리간드 및/또는 이들의 수용체에 대한 항체에 의해 쉽게 차단될 수 있다. 대다수의 항암제와 대조적으로, 관문 억제제는 반드시 종양 세포를 직접 표적화하는 것이 아니라 면역 체계의 내인성 항 종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 이의 리간드를 표적화한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 길항 분자인 면역조절제이거나 분자의 기능, 또는 면역 관문 분자를 포함하는 신호전달 경로를 억제 또는 차단할 수 있는 면역관문 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 관문 분자 또는 경로는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, LAG-3, TIM3, VISTA, 아데노신 2A 수용체(Adenosine 2A Receptor, A2AR), 또는 아데노신 또는 전술한 것 중 임의의 것을 포함하는 경로이다. 특정 구현예에서, 소분자, 핵산 억제제(예를 들어, RNAi) 또는 항체 분자와 같은 면역 관문 경로를 차단하는 길항 분자는 암 및 다른 질병에 대한 면역 요법의 유망한 수단이 되고 있다.
일부 구현예에서, 면역 관문 억제제는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해하는 분자이다. 관문 단백질은 T-세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 상기 단백질은 T-세포 반응의 공자극 또는 억제성 상호 작용을 담당한다. 면역 관문 단백질은 생리적 면역 반응의 자체 내성 및 지속 및 진폭을 조절하고 유지한다.
면역 관문 억제제에는 면역 체계의 억제 경로를 통계적으로 유의한 방식으로 차단 또는 억제하는 임의의 제제가 포함된다. 상기 억제제에는 소분자 억제제가 포함될 수 있거나, 면역 관문 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하고 이를 차단하거나 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극은 면역 관문 경로 성분을 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극에 대해 표적화될 수 있는 예시적인 면역 관문 분자에는 PD-1(CD279), PD-L1(CD274, B7-H1), PDL2(CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3(CD223), TIM-3, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GITR(TNFRSF18, AITR), CD40, OX40(CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원(tumor associated antigens, TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4(CD2 분자 패밀리에 속하고 모든 NK, γδ및 기억 CD8+(αβT 세포 상에서 발현됨), CD160(또한 BY55로 지칭), CGEN-15049, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), HVEM(TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신 및 형질 전환 성장 인자 수용체(transforming growth factor receptor, TGFR; 예를 들어, TGFR 베타)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 면역 관문 억제제에는 임의의 상기 분자 중 하나 이상의 활성에 결합하고 이를 차단 또는 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 다른 결합 단백질이 포함된다.
예시적인 면역 관문 억제제에는 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체; 티실리무맙, CP-675,206으로도 공지), 항-OX40, PD-L1 단클론 항체(항-B7-H1; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항-PD-1 항체), CT-011(항-PD-1 항체), BY55 단클론 항체, AMP224(항-PD-L1 항체), BMS-936559(항-PD-L1 항체), MPLDL3280A(항-PD-L1 항체), MSB0010718C(항-PD-L1 항체) 및 이필리무맙(항-CTLA-4 항체; Yervoy®및 MDX-101로도 공지)이 포함된다. 예시적인 면역 조절 항체에는 다클리주맙(Zenapax), 베바시주맙(Avastin®바실리시맙(Basiliximab), 이필리무맙(Ipilimumab), 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), MPDL3280A, 피딜리주맙(CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A(아테졸리주맙(Atezolizumab)), 트레멜리무맙(tremelimumab), IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙(urelumab), PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C(아벨루맙(Avelumab)), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙(Ulocuplumab), BKT140, 발리루맙(CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 릴리루맙(BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙(Emactuzumab), CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 다른 예시적인 면역조절제에는, 예를 들어, 아푸투주맙(Roche®로부터 이용 가능); 페그필그라스팀(Neulasta®레날리도마이드(CC-5013, Revlimid®탈리도마이드(Thalomid®액티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터류킨 1, 인터류킨 2 및 인터페론 감마, IRX Therapeutics으로부터 이용 가능한 CAS 951209-71-5를 포함하는 인간 사이토카인 혼합물)가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 예정된 세포사멸 1(Programmed cell death 1, PD-1)에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. PD-1은 B 세포, NK 세포 및 T 세포에서 발현되는 면역 관문 단백질이다(Shinohara 등, 1995, Genomics 23:704-6; Blank 등, 2007, Cancer Immunol Immunother 56:739-45; Finger 등, 1997, Gene 197:177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). PD-1의 주요 역할은 감염에 대한 반응으로 염증 중에 말초 조직에서 T 세포의 활성을 제한하는 것뿐만 아니라 자가 면역을 제한하는 것이다. PD-1 발현은 활성화된 T 세포에서 유도되고, 내인성 리간드 중 하나에 PD-1의 결합은 자극성 키나아제를 억제함으로써 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 또한 TCR “정지 신호(stop signal)”를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 Treg 세포 상에서 높게 발현되고 리간드의 존재 하에서 이의 증식을 증가시킬 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-PD 1 항체는 흑색종, 비-소세포폐암, 방광암, 전립선암, 대장암, 두경부암, 삼중-음성 유방암, 백혈병, 림프종 및 신장 세포암의 치료에 사용되어 왔다(Topalian 등, 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Lipson 등, 2013, Clin Cancer Res 19:462-8; Berger 등, 2008, Clin Cancer Res 14:3044-51; Gildener-Leapman 등, 2013, Oral Oncol 49:1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85). 예시적인 항 PD-1 항체에는 니볼루맙(Opdivo by BMS), 펨브롤리주맙(Keytruda by Merck), 피딜리주맙(CT-011 by Cure Tech), 람브롤리주맙(MK-3475 by Merck) 및 AMP-224(Merck)가 포함되고, 니볼루맙(Opdivo, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭; Bristol-Myers Squibb)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌「미국 특허 8,008,449 및 국제 출원 WO2006/121168」에 기술되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 단클론 항체이다. 피딜리주맙(Pidilizumab) 및 다른 인간화된 항 PD-1 단클론 항체는 문헌「국제 출원 WO2009/101611」에 기술되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로 공지되었고, 키트루다(Keytruda), MK03475로도 지칭; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 단클론 항체이다. 펨브롤리주맙(Pembrolizumab) 및 다른 인간화된 항-PD-1 항체는 문헌「미국 특허 US 8,354,509 및 국제 출원 WO2009/114335」에 기술되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 다른 것들, 예를 들어 문헌「US 8,609,089, US 2010028330, US 20120114649 및/또는 US 20150210769」에 기술된 항-PD-1 항체들 중에서 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어, 문헌「WO2010/027827 및 WO2011/066342」에 기술됨)는 PD-1과 B7-H1 사이의 상호 작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
일부 구현예에서 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 PD-L1(CD274 및 B7-H1로도 공지) 및/또는 PD-L2(CD273 및 B7-DC로도 공지) 에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. PD-L1 및 PD-L2는 활성화된 T 세포, B 세포, 골수성 세포, 대식 세포 및 일부 유형의 종양 세포에서 발견되는, PD-1에 대한 리간드이다. 항 종양 요법은 항-PD-L1 항체에 중점을 두었다. PD-1 및 PD-L1의 복합체는 CD8+ T 세포의 증식을 억제하고 면역 반응을 감소시킨다(Topalian 등, 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Brahmer 등, 2012, N Eng J Med 366:2455-65). 항-PD-L1 항체는 비-소세포폐암, 흑색종, 대장암(colorectal cancer), 신장 세포암, 췌장암, 위암, 난소암, 유방암 및 혈액 악성 종양의 치료에 사용되어 왔다(Brahmer 등, 2012, N Eng J Med 366:2455-65; Ott 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5300-9; Radvanyi 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85; Berger 등, 2008, Clin Cancer Res 14:13044-51). 예시적인 항-PD-L1 항체에는 MDX-1105(Medarex), MEDI4736(Medimmune), MPDL3280A(Genentech), BMS-935559(Bristol-Myers Squibb) 및 MSB0010718C가 포함된다. MEDI4736(Medimmune)은 PD-L1에 결합하고 PD-1과 리간드의 상호 작용을 억제하는 인간 단클론 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론 항체이다. PD-L1에 대한 MDPL3280A 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌「미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 출원 공개 번호 20120039906」에 기술되어 있다. 다른 항-PD-L1 결합제에는 YW243.55.S70(WO2010/077634 참조) 및 MDX-1105(BMS-936559로도 지칭 및 예를 들어, WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 결합제)가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD152로도 공지된 세포 독성 T-림프구 관련 항원(Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen, CTLA-4)의 억제제 이거나, CTLA-4 에 결합하는 제제이다. CTLA-4 는 T-세포 활성화를 조절하는 기능을 하는 공동-억제 분자이다. CTLA-4는 T-세포 상에서 독점적으로 발현되는 면역글로불린 상과(superfamily)의 멤버이다. CTLA-4는 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 하며, 헬퍼 T-세포 활성을 억제하고 조절 T-세포 면역 억제 활성을 향상시키는 것으로 보고되어 있다. CTLA-4의 정확한 작용 기전은 여전히 연구 중이지만, CD80 및 CD86에 결합하는 데 CD28을 능가하고 T 세포에 억제제 신호를 능동적으로 전달함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 것으로 제안되었다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-CTLA-4 항체는 흑색종, 전립선암, 소세포폐암, 비-소세포폐암의 치료를 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다(Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14:848-61; Ott 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5300; Weber, 2007, Oncologist 12:864-72; Wada 등, 2013, J Transl Med 11:89). 항-CTLA-4의 중요한 특징은 항 종양 효과의 동역학이며, 생리적 반응에 필요한 초기 치료 후 최대 6개월의 지연 기간이 있다. 일부 경우에, 치료 개시 후 감소가 보이기 전에 종양 크기가 실제로 증가할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 예시적인 항-CTLA-4 항체에는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer)이 포함된다. 이필리무맙(ipilimumab)은 최근 전이성 흑색종 치료에 대한 FDA 승인을 받았다(Wada 등, 2013, J Transl Med 11:89).
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD223으로도 공지된, 림프구 활성화 유전자-3(Lymphocyte activation gene-3, LAG-3) 에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. LAG-3은 또 다른 면역 관문 단백질이다. LAG-3은 림프구 활성의 억제 및 일부 경우에 림프구 아네르기(anergy)의 유도와 관련되어 있다. LAG-3은 B 세포, NK 세포 및 수지상 세포를 포함한 면역 체계의 다양한 세포 상에서 발현된다. LAG-3은 MHC 클래스 II 수용체에 대한 천연 리간드이며, 이는 강력한 면역 억제 활성이 부여된 세포를 포함하여 흑색종 침윤성 T 세포 상에서 실질적으로 발현된다. 예시적인 항-LAG-3 항체에는 LAG-3을 표적화하는 단클론 항체인 BMS-986016(Bristol-Myers Squib)이 포함된다. IMP701(Immutep)은 LAG-3 항체 길항제이고 IMP731(Immutep 및 GlaxoSmithKline)은 LAG-3 항체를 고갈시킨다. 다른 LAG-3 억제제에는 MHC 클래스 II 분자에 결합하고 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC)를 활성화시키는 LAG-3의 가용성 부분 및 Ig의 재조합 융합 단백질인 IMP321(Immutep)이 포함된다. 다른 항체는 예를 들어, 문헌「WO2010/019570 및 US 2015/0259420」에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인-3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-3, TIM-3) 에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. 활성화된 Th1 세포 상에서 초기에 확인된 TIM-3 은 면역 반응의 음성 조절자인 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 T-세포 매개 항 종양 면역을 촉진하고 다양한 마우스 종양 모델에서 항 종양 활성을 갖는다. 다른 면역 치료제, 예를 들어 TSR-042, 항 CD137 항체 및 기타와 TIM-3 봉쇄의 조합은 항 종양 효과를 증가시키는 데 부가적이거나 상승적일 수 있다. TIM-3 발현은 흑색종, NSCLC 및 신장암을 포함하는 다수의 상이한 종양 유형과 관련이 있으며, 또한 종양내 TIM-3의 발현은 NSCLC, 자궁경부암 및 위암을 포함하는 다양한 종양 유형에 걸친 나쁜 예후와 상관 관계가 있는 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 또한, 다수의 만성 바이러스성 질병에 대한 면역 증가를 촉진시키는데 관심이 있다. TIM-3은 또한 갈렉틴-9(galectin-9), 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 및 HMGB1을 포함하는 다수의 리간드와 상호 작용하는 것으로 나타났지만, 상기 중 어느 것이(있는 경우) 항 종양 반응의 조절과 관련이 있는지는 현재 명확하지 않다. 일부 구현예에서, TIM-3을 표적화하는 항체, 항체 단편, 소분자 또는 펩티드 억제제는 TIM-3의 IgV 도메인에 결합하여 이의 리간드와의 상호 작용을 억제할 수 있다. TIM-3을 억제하는 예시적인 항체 및 펩티드는 문헌「미국 출원 US 2015/0218274, 국제 출원 WO2013/006490 및 미국 출원 US 2010/0247521」에 기술되어 있다. 다른 항-TIM-3 항체에는 RMT3-23의 인간화된 버전(Ngiow 등, 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) 및 클론 8B.2C12(Monney 등, 2002, Nature, 415:536-541)가 포함된다. TIM-3 및 PD-1을 억제하는 이중 특이적 항체는 문헌「미국 출원 US 2013/0156774」에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CEACAM 억제제(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5 억제제) 이다. 일부 구현예에서, CEACAM의 억제제는 항-CEACAM 항체 분자이다. 예시적인 항-CEACAM-1 항체, 예를 들어 단클론 항체 34B1, 26H7 및 5F4는 문헌「WO 2010/125571, WO 2013/082366, WO 2014/059251 및 WO 2014/022332」에 기술되어 있으며; 또는 이의 재조합 형태는 예를 들어 문헌「 US 2004/0047858, US 7,132,255 및 WO 99/052552」에 기술된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항-CEACAM 항체는, 예를 들어 문헌「Zheng 등 PLoS One. (2011) 6(6): e21146」에 기술된 바와 같이 CEACAM-5에 결합하거나, 예를 들어, 문헌「WO 2013/054331 및 US 2014/0271618」에 기술된 바와 같이 CEACAM-1 및 CEACAM-5와 교차 반응한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD137로도 공지된 4-1BB 에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. 4-1BB는 TNFR 상과(superfamily)에 속하는 막관통 당단백질이다. 4-1BB 수용체는 활성화된 T 세포 및 B 세포 및 단핵구 상에 존재한다. 예시적인 항-4-1BB 항체는 잠재적 면역자극 및 항종양제 활성을 갖는 우렐루맙(BMS-663513)이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 OX40 및 CD134로도 공지된 종양 괴사 인자 수용체 상과(superfamily), 멤버 4(TNFRSF4) 에 결합하고/하거나 이를 억제하는 제제이다. TNFRSF4 는 TNFR 상과(superfamily)의 다른 멤버이다. OX40은 휴지기 나이브 T 세포(naive T cell)에서 구성적으로 발현되지 않으며, 2차 공자극 면역 관문 분자로서 작용한다. 예시적인 항-OX40 항체는 MEDI6469 및 MOXR0916(RG7888, Genentech)이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 조절 T 세포(Treg) 집단을 감소시키는 제제 또는 분자이다. Treg 세포의 수를 감소(예를 들어, 고갈)시키는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 CD25 고갈, 시클로포스파미드 투여 및 글루코코티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-induced TNFR family related gene, GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역 체계를 강화시키는 활성화된 T 세포 상에서 상향 조절되는 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. 성분채집술 전 또는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여 전에, 대상체에서 Treg 세포의 수를 감소시키는 것은, 종양 미세 환경에서 원치 않는 면역 세포(예를 들어, Treg)의 수를 감소시키고, 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제 및/또는 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 GITR 항체와 같은, GITR을 표적화하고/거나 GITR 기능을 조절하는 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능을 조절하는 분자(예를 들어, GITR 작용제 및/또는 GITR 항체 고갈 Treg)는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제는 세포의 성분채집술 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드 및 항-GITR 항체는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전에 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, GITR 작용제 제제이다. 예시적인 GITR 작용제는 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예를 들어 예를 들어 미국 특허 번호 6,111,090, 유럽 특허 번호 090505B 1, 미국 특허 번호 8,586,023, PCT 공개 번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기술된 GITR 융합 단백질 또는 예를 들어, 미국 특허 번호 7,025,962, 유럽 특허 번호 1947183B 1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국 특허 번호 8,388,967, 미국 특허 번호 8,591,886, 유럽 특허 번호 EP1866339, PCT 공개 번호 WO 2011/028683, PCT 공개 번호 WO 2013/039954, PCT 공개 번호 WO2005/007190, PCT 공개 번호 WO 2007/133822, PCT 공개 번호 WO2005/055808, PCT 공개 번호 WO 99/40196, PCT 공개 번호 WO 2001/03720, PCT 공개 번호 WO99/20758, PCT 공개 번호 WO2006/083289, PCT 공개 번호 WO 2005/115451, 미국 특허 번호 7,618,632 및 PCT 공개 번호 WO 2011/051726에 기술된 항-GITR 항체를 포함한다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 투여된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 종양 침윤 또는 이행(transmigration)을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD40, 예를 들어 CD40L, 예를 들어 재조합 인간 CD40L을 자극한다. 분화 클러스터 40(CD40)은 또한 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. CD40은 항원-제시 세포에서 발견되는 공자극 단백질이며 광범위한 면역 및 염증 반응을 매개한다. CD40은 또한 일부 악성 종양에서 발현되어 증식을 촉진한다. 예시적인 항-CD40 항체는 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(Novartis, 길항제), SEA-CD40(Seattle Genetics) 및 CP-870,893이다. 일부 구현예에서, 종양 침윤을 향상시키는 추가 제제는 티로신 키나아제 억제제, 수니티닙(sunitnib), 헤파라나제(heparanase) 및/또는 케모카인 수용체, 예를 들어 CCR2, CCR4 및 CCR7을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 탈리도마이드의 구조적 또는 기능적 유사체 또는 유도체 및/또는 E3 유비퀴틴 연결효소의 억제제인 면역조절제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 세레블론(Cereblon, CRBN)에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN 및 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN의 단백질 또는 유전자 발현을 상향조절한다. 일부 측면에서, CRBN은 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 연결효소에 대한 기질 어댑터이고, 이 효소의 특이성을 조절한다. 일부 구현예에서, CRBN 또는 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 대한 결합은 E3 유비퀴틴 연결효소 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 유비퀴틴화를 유도하고/유도하거나 KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 연결효소에 의해 카세인 키나아제 1A1 (CK1α)의 유비퀴틴화를 유도한다. 일부 구현예에서, CK1α의 유비퀴틴화는 CK1α 분해를 초래한다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스(IKZF1) 전사인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 단백질 또는 유전자 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 이카로스 단백질 수준의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스(IKZF3) 전사인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 단백질 또는 유전자 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 아이올로스 단백질 수준의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스(IKZF1) 및 아이올로스(IKZF3) 전사인자 모두의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 유비퀴틴화 및 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 아이올로스 단백질 수준 및 이카로스 단백질 수준 모두의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 선택적 사이토카인 억제 약물(SelCID)이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 포스포디에스터라제-4(PDE4)의 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CDC25 포스파타아제의 효소 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CDC25 포스파타아제의 세포내 교환을 바꾼다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 탈리도마이드(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-l,3(2H)-디온) 또는 탈리도마이드의 유사체 또는 유도체이다. 특정 구현예에서, 탈리도마이드 유도체는 유사한 생물학적 활성을 가진 탈리도마이드의 구조적 변이체를 포함한다. 예시적인 탈리도마이드 유도체에는 레날리도마이드(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™Celgene Corporation), 포말리도마이드(ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™또는 POMALYST™으로도 공지(Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501, 및 CDC- 801, 및 문헌「미국 특허 번호 5,712,291; 7,320,991; 및 8,716,315; 미국 출원 번호 2016/0313300; 및 PCT 공개 번호 WO 2002/068414 및 WO 2008/154252」에 기재된 화합물이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 5,635,517」에 기술된 바와 같은 벤조 고리(benzo ring)에서 아미노로 치환된 1-옥소- 및 1,3 디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 다음의 구조식의 화합물이다:
Figure pct00028
여기서, X와 Y 중 하나는 -C(O)-이고 X와 Y 중 다른 하나는 -C(O)- 또는 -CH2-이고, R5는 수소 또는 저급 알킬이거나, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 구현예에서, X는 -C(O)-이고 Y는 -CH2-이다. 일부 구현예에서, X와 Y는 모두 -C(O)-이다. 일부 구현예에서, R5는 수소이다. 다른 구현예에서, R5는 메틸이다.
일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)프탈 면역 조절 화합물(phthalimmunomodulatory compounds) 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소아이소인돌의 클래스에 속하는 화합물, 예를 들어 본원에 각각 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 6,281,230; 6,316,471; 6,335,349; 및 6,476,052, 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US97/13375(국제 공개 번호 WO 98/03502)」에 기재된 것이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 다음의 구조식의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00029
여기서
X와 Y 중 하나는 -C(O)- 이고 X와 Y 중 다른 하나는 -C(O)- 또는 -CH2- 이고;
(1) R1, R2, R3, 및 R4 각각은 독립적으로 할로(halo), 1 내지 4개의 탄소 원자의 알킬 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 알콕시이거나, 또는
(2) R1, R3 , R4, 및 R5 중 하나는 -NHRa이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고, Ra는 수소 또는 1 내지 8개의 탄소 원자의 알킬이고;
R5는 수소 또는 1 내지 8개의 탄소 원자의 알킬, 벤질, 또는 할로이고;
단, X와 Y가 -C(O)-이고 (i) R1, R2, R3, 및 R4 각각이 플루오로(fluoro)이거나; 또는 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나가 아미노(amino)인 경우, R5는 수소 이외의 것이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 각각 참조로 포함된, 문헌「미국 특허 번호 7,091,353, 미국 특허 공개 번호 2003/0045552, 및 국제 출원 번호 PCT/USOI/50401(국제 공개 번호 WO02/059106)」에 기재된 아이소인돌 면역 조절 화합물의 클래스에 속하는 화합물이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 [2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸]-아마이드; (2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-카르밤산 tert-부틸 에스테르; 4-(아미노메틸)-2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-아이소인돌린-1,3-디온; N-(2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-아세트아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜)-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}사이클로프로필-카르복사마이드; 2-클로로-N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}아세트아마이드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)-3-피리딜카르복사마이드; 3-{1-옥소-4-(벤질아미노)아이소인돌린-2-일}피페리딘-2,6-디온; 2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-4-(벤질아미노)아이소인돌린-1,3-디온; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}프로판아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-3-피리딜카르복사마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}헵탄아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-2-퓨릴카르복사마이드; {N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)카바모일}메틸 아세테이트; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)펜탄아마이드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)-2-티에닐카르복사마이드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(부틸아미노)카르복사마이드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(옥틸아미노)카르복사마이드; 또는 N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(벤질아미노)카르복사마이드이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 각각 참조로 포함된 문헌「미국 특허 출원 공개 번호 2002/0045643, 국제 공개 번호 WO 98/54170, 및 미국 특허 번호 6,395,754」에 기재된 아이소인돌-면역 조절 화합물의 클래스에 속하는 화합물이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 5,798,368」에 기술된 4 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소아이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 6,403,613」에 기재된 1-옥소 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)아이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 둘 다 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 6,380,239 및 미국 특허 번호 7,244,759」에 기재된 바와 같은 인돌린 고리의 4- 또는 5-위치에 치환된 1-옥소 또는 1,3-디옥소아이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 2-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산 또는 4-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 4-카바모일-4-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-부티르산, 4-카바모일-2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-부티르산, 2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-4-페닐카바모일-부티르산 또는 2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-펜탄디온산이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌「미국 특허 번호 6,458,810」에 기재된 바와 같은 2,6-디옥소-3-하이드록시피페리딘-5-일로 2-위치에서 치환된 아이소인돌린-1-온 또는 아이소인돌린-1,3-디온이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 거울상 이성질체 또는 이의 거울상 이성질체 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트(clathrate), 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 문헌「Oshima, K. 등, Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. 등, Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); 및 Collins, 등, Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017)」에 기술된 바와 같다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트, 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 레날리도마이드, 레날리도마이드의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트, 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 레날리도마이드, 또는 ((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-아이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 약물 또는 이의 유사체 및/또는 이의 유도체, 예를 들어 레날리도마이드, 포말리도마이드(pomalidomide) 또는 아프레밀라스트(apremilast)를 포함한다. 예를 들어, 문헌「Bertilaccio 등, Blood (2013) 122:4171, Otahal 등, Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940; Fecteau 등, Blood (2014) 124(10):1637-1644 및 Kuramitsu 등, Cancer Gene Therapy (2015) 22:487-495」를 참조한다. 레날리도마이드((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온; 레블리미드(Revlimid)로도 공지)는 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 시행을 포함하여 다수의 면역 조절 효과를 갖는다. 예를 들어, 일부 경우에, 레날리도마이드는 T 세포 반응을 조절하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 인터류킨(IL)-2 생성의 증가를 초래하고, Th2에서 Th1로 T 헬퍼(Th) 반응의 이동을 유도하고, T 세포의 조절(Treg) 서브세트의 팽창을 억제하고, 여포성 림프종 및 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL)에서 면역 시냅스의 기능을 향상시킨다(Otahal 등, Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). 레날리도마이드는 또한, 다발성 골수종(MM) 환자에게서 직접적인 종양파괴 활성을 가지며, 림프 조직의 미세 환경에서 발견되는 간호사 유사 세포(nurse-like cell)와 같은 지지 세포에 영향을 미침으로써 CLL 종양 세포의 생존을 직접 및 간접적으로 조절한다. 레날리도마이드는 또한 CD3 결찰 또는 수지상 세포-매개 활성화를 통한 T 세포의 활성화에 반응하여 T-세포 증식 및 인터페론-γ 생산을 강화할 수 있다. 레날리도마이드는 또한, 악성 B 세포가 CD80, CD86, HLA-DR, CD95 및 CD40과 같은 더 높은 수준의 면역 자극 분자를 발현하도록 유도할 수 있다(Fecteau 등, Blood (2014) 124(10):1637-1644). 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 1mg 내지 약 20mg, 예를 들어, 약 1mg 내지 약 10mg, 약 2.5mg 내지 약 7.5mg, 약 5mg 내지 약 15mg, 예를 들어 약 5mg, 10mg, 15mg 또는 20mg의 투여량으로 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 10μg/kg 내지 5mg/kg, 예를 들어, 약 100μg/kg 내지 약 2mg/kg, 약 200μg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 400μg/kg 내지 약 600μg/kg, 예를 들어 약 500μg/kg의 단위 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1의 억제제 또는 이들의 조합물 중에서 선택된 하나 이상의 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, B-세포 억제제는 항체(예를 들어, 단일- 또는 이중 특이적 항체) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 표적, 예를 들어 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1을 표적으로 하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD20 억제제, 예를 들어 항-CD20 항체(예를 들어, 항-CD20 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD20 항체에는 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), 옥렐리주맙(ocrelizumab; GA101 또는 RO5072759로도 공지), 벨투주맙(veltuzumab), 오비누투주맙(obinutuzumab), TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals), 오카라투주맙(ocaratuzumab; AME-133v로도 공지) 및 Pro131921(Genentech)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌「Lim 등 Haematologica. (2010) 95(1):135-43」을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 리툭시맙을 포함한다. 리툭시맙은 CD20에 결합하고 CD20 발현 세포의 세포 용해를 유발하는 키메라 마우스/인간 단클론 항체 IgG1 카파이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20 억제제는 소분자이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD22 억제제, 예를 들어 항-CD22 항체(예를 들어, 항-CD22 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD22 항체는 에프라투주맙 및 RFB4를 포함한다. 일부 구현예에서, CD22 억제제는 소분자이다. 일부 구현예에서, 항체는 선택적으로 화학 요법제와 같은 제2 제제에 접합된 단일 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 단클론 항체-MMAE 접합체(예를 들어, DCDT2980S)이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 항체의 scFv, 예를 들어 항체 RFB4의 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(Pseudomonas exotoxin-A)(예를 들어, BL22)의 전부 또는 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, 목세투모맙 파수도톡스(moxetumomab pasudotox))의 전부 또는 단편(예를 들어, 38 kDa 단편)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 선택적으로 독소에 접합된, 항-CD19/CD22 이중 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)의 전부 또는 일부, 예를 들어, 디프테리아 독소(DT)의 처음 389개 아미노산, DT 390, 예를 들어 리간드-지향 독소(ligand-directed toxin), 예를 들어 DT2219ARL에 선택적으로 연결된 항-CD19/CD22 이중 특이적 부분(예를 들어, 인간 CD19 및 CD22를 인식하는 2개의 scFv 리간드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 부분(예를 들어, 항-CD19/항-CD22)은 독소, 예를 들어 탈글리코실화 리신 A 사슬(예를 들어, 콤보톡스)에 연결된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 사이토카인이거나 종양 미세 환경에서 사이토카인의 발현 증가를 유도하는 제제이다. 사이토카인은 T 세포 팽창, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 한다. 본원에서 제공된 방법 또는 용도, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 병용 요법을 받는 대상체에게 투여될 수 있는 사이토카인에는 IL-2, IL-4, IL-7, IL- 9, IL-15, IL-18 및 IL-21 중 하나 이상이 포함된다. 일부 구현예에서, 투여되는 사이토카인은 IL-7, IL-15 또는 IL-21 또는 이들의 조합물이다. 일부 구현예에서, 대상체에 대한 사이토카인 투여는 투여된 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포의 반응 또는 항-종양 활성 등 특정 측면을 향상할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 세포 간 매개체로서 다른 세포 상에서 작용하는, 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질과 같은 사이토카인이다. 상기 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 성장 호르몬, 예를 들어 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬(bovine growth hormone); 부갑상선 호르몬(parathyroid hormone); 티록신(thyroxine); 인슐린; 프로인슐린(proinsulin); 릴랙신(relaxin); 프로릴랙신(prorelaxin); 당단백질 호르몬(glycoprotein hormones), 예를 들어 여포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 황체 형성 호르몬(LH); 간 성장 인자(hepatic growth factor); 섬유아세포 성장 인자(fibroblast growth factor); 프로락틴(prolactin); 태반성 락토겐(placental lactogen); 종양 괴사 인자-알파 및 -베타(tumor necrosis factor-alpha and -beta); 뮬러관 억제 물질(mullerian-inhibiting substance); 마우스 성선자극호르몬 관련 펩티드(mouse gonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관 내피 성장 인자; 인테그린(integrin); 트롬보포이에틴(TPO); 신경 성장 인자, 예를 들어 NGF-베타; 혈소판 성장 인자; TGF-알파 및 TGF-베타 등의 형질 전환 성장 인자(TGF); 인슐린 유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골 유도성 인자(osteoinductive factor); 인터페론-알파, 베타 및 -감마와 같은 인터페론; 대식 세포-CSF(M-CSF)와 같은 집락 자극 인자(colony stimulating factor, CSF); 과립구-대식 세포-CSF(GM-CSF); 과립구-CSF(G-CSF); 인터류킨(IL), 예를 들어 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양 괴사 인자인 IL-15; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand, KL)를 포함한 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 천연(native) 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 예를 들어, 면역 조절제는 사이토카인이고 사이토카인은 IL-4, TNF-α, GM-CSF 또는 IL-2이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 인터류킨-15(IL-15) 폴리펩티드, 인터류킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 폴리펩티드 또는 이들의 조합물, 예를 들어 hetIL-15(Admune Therapeutics, LLC)를 포함한다. hetIL-15는 IL-15 및 IL-15Rα의 이종이량체성(heterodimeric) 비공유 복합체이다. hetIL-15는 예를 들어, 문헌「U.S. 8,124,084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 및 U.S. 2011/0081311」에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 하나 이상의 사이토카인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨은 천연 사이토카인의 조합물인 백혈구 인터류킨 주사(Multikine)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 아데노신 수준 및/또는 아데노신 경로 성분의 조절제이다. 아데노신은 신체에서 면역 조절제로서 기능할 수 있다. 예를 들어, 아데노신 수용체 하위 유형(subtypes)을 비선택적으로 활성화시키는 아데노신 및 일부 아데노신 유사체는 염증성 산화 산물의 호중구 생성을 감소시킨다(Cronstein 등, Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts 등, Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier 등, J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein 등, Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). 일부 경우에, 세포외 아데노신 또는 아데노신 유사체의 농도는 특정 환경, 예를 들어, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 증가할 수 있다. 일부 경우에, 아데노신 또는 아데노신 유사체 신호 전달은 저산소증(hypoxia) 또는 저산소증과 관련된 인자 또는 이의 조절, 예를 들어 저산소증 유도성 인자(hypoxia inducible factor, HIF)에 의존한다. 일부 구현예에서, 아데노신 신호 전달의 증가는 세포내 cAMP 및 cAMP-의존성 단백질 키나아제를 증가시켜, 염증-전 사이토카인 생성의 억제를 초래할 수 있고, 면역 억제 분자의 합성 및 Treg의 발달로 이어질 수 있다(Sitkovsky 등, Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605). 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신, 아데노신 유사체 및/또는 아데노신 신호 전달의 면역 억제 효과를 감소시키거나 역효과를 낼 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 구동 A2-아데노신성 T 세포(hypoxia-driven A2-adenosinergic T cell) 면역 억제를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체의 길항제, 세포외 아데노신-퇴화 작용제, CD39/CD73 체외 효소에 의한 아데노신 생성 억제제 및 저산소증-HIF-1α 신호 전달 억제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 아데노신 수용체의 활성이나 양을 억제하는 제제이다. 특정 구현예에서 세포외 아데노신의 억제제(예를 들어, 세포외 아데노신의 형성을 방지, 분해, 불활성화 및/또는 감소시키는 제제) 및/또는 아데노신 수용체 억제제(예를 들어, 아데노신 수용체 길항제)에 의한 세포외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제 또는 감소는 대식 세포, 호중구, 과립구, 수지상 세포, T- 및/또는 B 세포-매개 반응과 같은 면역 반응을 강화할 수 있다. 또한, Gs 단백질 매개 cAMP 의존성 세포내 경로 억제제 및 아데노신 수용체-촉발 Gi 단백질 매개 세포내 경로 억제제는 또한 급성 및 만성 염증을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제, 예를 들어 아데노신 수용체 A2a, A2b, A1 및 A3 중 하나 이상의 길항제 또는 작용제이다. 각각 A1 및 A3은 억제하고, A2a 및 A2b는 자극한다. A2a, A2b 및 A3과 같은 특정 아데노신 수용체는 염증 중에 면역 반응을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 따라서, 길항성 면역 억제 아데노신 수용체는 면역 반응, 예를 들어, 투여된 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포로부터의 면역 반응을 증강, 증진 또는 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 및 아데노신 수용체를 통한 아데노신-촉발 신호 전달의 생성을 억제한다. 예를 들어, 면역 반응의 강화, 국소 조직 염증 및 표적화된 조직 파괴는, 아데노신 생성 국소 조직 저산소증을 억제 또는 감소시킴으로써; 축적된 세포외 아데노신을 분해(또는 불활성화)함으로써; 면역 세포 상에서 아데노신 수용체의 발현을 방지하거나 감소시킴으로써; 및/또는 아데노신 수용체를 통해 아데노신 리간드에 의한 신호 전달을 억제/길항함으로써, 향상될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 아데노신 수용체 길항제이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체, 예를 들어 A2a, A2b 또는 A3 수용체에 대한 길항제인 소분자 또는 화학적 화합물이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체에 결합하지만 Gi 단백질 의존성 세포내 경로를 촉발하지 않는, 펩티드 또는 펩티드 유사체이다. 예시적인 길항제는 문헌「미국 특허 번호 5,565,566; 5,545, 627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771」에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 A2a 길항제와 같은 A2 수용체(A2R) 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제에는 KW6002(이스트라데필린(istradefyline)), SCH58261, 카페인(caffeine), 파라잔틴(paraxanthine), 3,7-디메틸-1-프로파르길잔틴(DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데난트(preladenant), 비파데난트(vipadenant, BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP, 및 A2R 발현을 표적화하는 억제성 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA, 또는 A2R을 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 문헌「Ohta 등, Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin 등, Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone 등, Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis 등, Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky 등, Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8,883,500; US 20140377240; WO02/055083; US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279」에 기재된 A2R 길항제이다.
특정 구현예에서, 아데노신 수용체 길항제는 아데노신 수용체를 암호화하는 mRNA에 특이적으로 결합하는, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자(예를 들어, 소형 억제성 RNA(small inhibitory RNA, siRNA)) 또는 촉매 핵산 분자(예를 들어, 리보자임)이다. 일부 구현예에서, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산 분자는 A2a, A2b 또는 A3을 암호화하는 핵산에 결합한다. 일부 구현예에서, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산은 아데노신 수용체의 생화학적 경로 하류를 표적화한다. 예를 들어, 역배열 분자 또는 촉매 핵산은 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로에 관여하는 효소를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체, 예를 들어 A2a, A2b 또는 A3의 우성 음성 돌연변이체 형태를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는, 세포외 아데노신을 억제하는 제제이다. 세포외 아데노신을 억제하는 추가 제제는, 세포외 아데노신을 비기능성으로 만드는(또는 상기 기능을 감소시키는) 제제, 예를 들어, 아데노신의 구조를 변형시켜 아데노신 수용체를 통해 신호를 전달하는 아데노신의 능력을 억제하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 생성 또는 아데노신 분해 효소, 이의 형질전환된 형태 또는 이의 조절제이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신에 선택적으로 결합하여 파괴하고, 이렇게 하여 내인성으로 형성된 아데노신의 아데노신 수용체를 통한 신호 전달 및 염증을 종결시키는 능력을 파괴 또는 현저히 감소시키는, 효소(예를 들어, 아데노신 탈아미노효소) 또는 다른 촉매 분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 탈아미노효소(ADA) 또는 이의 형질전환된 형태, 예를 들어 재조합 ADA 및/또는 폴리에틸렌 글리콜-변형 ADA(ADA-PEG)이며, 이는 세포외 아데노신의 국소 조직 축적을 억제할 수 있다. ADA-PEG는 ADA SCID 환자의 치료에 사용되어 왔다(Hershfield (1995) Hum Mutat. 5:107). 일부 구현예에서, 세포외 아데노신을 억제하는 제제는 세포외 아데노신의 형성을 방지 또는 감소시키고/거나 세포외 아데노신의 축적을 방지 또는 감소시켜 아데노신의 면역 억제 효과를 파괴하거나 실질적으로 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵 전사 인자의 조절제를 포함하여, 전-염증성 분자의 합성 및/또는 분비 조절에 관여하는 효소 및 단백질을 특이적으로 억제한다. 아데노신 수용체 발현 또는 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로 또는 cAMP 의존성 세포내 경로 발현의 억제는 면역 반응의 증가/향상을 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신을 생성 또는 생산하는 체외 효소(ectoenzyme)를 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신을 생성하기 위해 협력하여 기능하는 CD39 및 CD73 체외 효소를 표적화한다. CD39(엑토뉴클레오사이드 트리포스페이트 디포스포하이드로라제로도 불림)는 세포외 ATP(또는 ADP)를 5'AMP로 전환시킨다. 이어서, CD73(5'뉴클레오티다제로도 불림)은 5'AΜΡ를 아데노신으로 전환시킨다. CD39의 활성은 NDP 키나아제 및 아데닐레이트 키나아제의 작용에 의해 가역적이지만, CD73의 활성은 비가역적이다. CD39 및 CD73은 내피 세포 및 Treg를 포함하는 종양 간질 세포(tumor stromal cell) 및 다수의 암 세포에서도 발현된다. 예를 들어, 내피 세포에서 CD39 및 CD73의 발현은 종양 미세 환경의 저산소 조건 하에서 증가된다. 종양 저산소증은 산소 전달을 약화시키는 불충분한 혈액 공급 및 조직화되지 않은 종양 혈관 구조로부터 생길 수 있다(Carroll and Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7(6):1-16). 저산소증은 또한 아데노신을 AMP로 전환시키는 아데닐레이트 키나아제(adenylate kinase, AK)를 억제하여 매우 높은 세포외 아데노신 농도를 야기한다. 따라서, 아데노신은 고형 종양에서 또는 주위에서, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)을 빈번하게 발생시키는 상태인 저산소증에 반응하여 고농도로 방출된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항-CD39 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-CD73 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 MEDI9447 또는 TY/23, α-β메틸렌-아데노신 디포스페이트(ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52 중 하나 이상이다(예를 들어, 문헌「Allard 등 Clin Cancer Res (2013) 19(20):5626-5635; Hausler 등, Am J Transl Res (2014) 6(2):129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70(16):6407-6411」을 참조한다).
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 화학 요법제(때때로 세포독성제로 지칭됨)이다. 특정 구현예에서, 화학 요법제는 암과 같은 과증식성 장애의 치료, 예방 또는 개선에 효과적인 것으로 알려진 임의의 제제이다. 화학 요법제는, 소분자, 합성 약물, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 핵산 (예를 들어, 안티센스 뉴클레오타이드 서열, 삼중 나선, 및 생물학적 활성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 DNA 및 RNA 폴리뉴클레오타이드), 항체, 합성 또는 천연 무기 분자, 유사 제제(mimetic agents), 및 합성 또는 천연 유기 분자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 화학요법 약물은 알킬화제, 안트라사이클린, 세포골격 파괴제(탁산), 에포틸론, 히스톤 디아세틸라제 억제제, 토포아이소머라제 억제제, 토포아이소머라제 Ⅱ억제제, 키나아제 억제제, 뉴클레오타이드 유사체 및 전구체 유사체, 펩티드 항생제, 백금 기반 제제, 및 빈카 알칼로이드 및 유도체를 포함한다.
화학 요법제는 아바렐릭스(abarelix), 알데스류킨(aldesleukin), 알렘투주맙(alemtuzumab), 알리트레티노인(alitretinoin), 알로푸리놀(allopurinol), 알트레타민(altretamine), 아미포스틴(amifostine), 아나스트로졸(anastrozole), 삼산화비소(arsenic trioxide), 아스파라기나제(asparaginase), BCG 라이브(BCG live), 베바시주맙(bevaceizumab), 벡사로텐(bexarotene), 블레오마이신(bleomycin), 보르테조밉(bortezomib), 부설판(busulfan), 칼루스테론(calusterone), 캄토테신(camptothecin), 카페시타빈(capecitabine), 카보플라틴(carboplatin), 카르무스틴(carmustine), 셀레콕시브(celecoxib), 세툭시맙(cetuximab), 클로람부실(chlorambucil), 시나칼셋(cinacalcet), 시스플라틴(cisplatin), 클라드리빈(cladribine), 사이클로포스파마이드(cyclophosphamide), 시타라빈(cytarabine), 다카바진(dacarbazine), 닥티노마이신(dactinomycin), 다베포에틴 알파(darbepoetin alfa), 다우노루비신(daunorubicin), 데닐류킨 디프티톡스(denileukin diftitox), 덱스라족산(dexrazoxane), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 드로모스타놀론(dromostanolone), 엘리엇 B 용액(Elliott's B solution), 에피루비신(epirubicin), 에포에틴 알파(epoetin alfa), 에스트라무스틴(estramustine), 에토포사이드(etoposide), 엑세메스탄(exemestane), 필그라스팀(filgrastim), 플록수리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 플루오로우라실(fluorouracil), 풀베스트란트(fulvestrant), 젬시타빈(gemcitabine), 젬투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin), 제피티닙(gefitinib), 고세렐린(goserelin), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan), 이다루비신(idarubicin), 이포스파마이드(ifosfamide), 이마티닙(imatinib), 인터페론 알파-2a(interferon alfa-2a), 인터페론 알파-2b(interferon alfa-2b), 이리노테칸(irinotecan), 레트로졸(letrozole), 류코보린(leucovorin), 레바미솔(levamisole), 로무스틴(lomustine), 메클로레타민(meclorethamine), 메게스트롤(megestrol), 멜팔란(melphalan), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 메스나(mesna), 메토트렉세이트(methotrexate), 메톡살렌(methoxsalen), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 미토마이신 C(mitomycin C), 미토탄(mitotane), 미톡산트론(mitoxantrone), 난드롤론(nandrolone), 노페투모맙(nofetumomab), 오블리머센(oblimersen), 오프렐베킨(oprelvekin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 파클리탁셀(paclitaxel), 파미드로네이트(pamidronate), 페가데마제(pegademase), 페가스파가제(pegaspargase), 페그필그라스팀(pegfilgrastim), 페메트렉시드(pemetrexed), 펜토스타틴(pentostatin), 피포브로만(pipobroman), 플리카마이신(plicamycin), 폴리페프로산(polifeprosan), 포르피머(porfimer), 프로카바진(procarbazine), 퀴나크린(quinacrine), 라스부리카제(rasburicase), 리툭시맙(rituximab), 사그라모스팀(sargramostim), 스트렙토조신(streptozocin), 탈크(talc), 타목시펜(tamoxifen), 타세바(tarceva), 테모졸로마이드(temozolomide), 테니포사이드(teniposide), 테스토락톤(testolactone), 티오구아닌(thioguanine), 티오테파(thiotepa), 토포테칸(topotecan), 토레미펜(toremifene), 토시투모맙(tositumomab), 트라스투주맙(trastuzumab), 트레티노인(tretinoin), 우라실 머스타드(uracil mustard), 발루비신(valrubicin), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 및 졸레드로네이트(zoledronate)를 포함하나, 이로 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도성 인자 1 알파(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α) 신호 전달의 억제제이다. HIF-1α의 예시적인 억제제는 디곡신(digoxin), 아크리플라빈(acriflavine), 시르투인-7(sirtuin-7) 및 가네테스핍(ganetespib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 티로신 포스파타아제 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 단백질 티로신 포스파타아제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는 SHP-1 억제제, 예를 들어, 본원에 기재된 SHP-1 억제제, 예를 들어 스티보글루코네이트 나트륨(sodium stibogluconate)이다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는 SHP-2 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제이다. CDK4 키나아제 억제제, BTK 키나아제 억제제, MNK 키나아제 억제제 또는 DGK 키나아제 억제제와 같은 키나아제 억제제는 종양 세포에 존재하는 구성적인 활성 생존 경로를 조절하고/거나 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 브루톤 티로신 키나아제(Bruton's tyrosine kinase, BTK) 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나아제(PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 CDK4 억제제, 예를 들어 CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 mTOR 억제제, 예를 들어 예를 들어 라파마이신, 라파마이신 유사체, OSI-027이다. mTOR 억제제는 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 MNK 억제제 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 다른 예시적인 키나아제 억제제는 AKT 억제제 페리포신(perifosine), mTOR 억제제 템시로리무스(temsirolimus), Src 키나아제 억제제 다사티닙(dasatinib) 및 포스타마티닙(fostamatinib), JAK2 억제제 파크리티닙(pacritinib) 및 룩솔리티닙(ruxolitinib), PKCβ억제제 엔자스타우린(enzastaurin) 및 브리오스타틴(bryostatin) 및 AAK 억제제 알리세르팁(alisertib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 이브루티닙(PCI- 32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된 BTK 억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터류킨-2-유도성 키나아제(ITK)의 키나아제 활성을 감소시키거나 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로-2-페-1-논; PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(PCI-32765)이고, 이브루티닙은 어떤 시간의 기간 동안 매일, 예를 들어 21일 주기 동안 매일 또는 28일 주기 동안 매일, 약 250mg, 300mg, 350mg, 400mg, 420mg, 440mg, 460mg, 480mg, 500mg, 520mg, 540mg, 560mg, 580mg, 600mg(예를 들어, 250mg, 420mg 또는 560mg)의 단위 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 이상의 주기로 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 문헌「국제 출원 WO 2015/079417」에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십(idelalisib, PI3Kδ억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 라파마이신(mTOR)의 포유류 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 템시로리무스(temsirolimus); 리다포로리무스(ridaforolimus, AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버로리무스(everolimus, RAD001); 라파마이신(AY22989); 시마피모드(simapimod); AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765 중에서 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib) 및 트라메티닙(trametinib)과 같은 미토겐-활성화 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 전- 또는 항-세포자연사(apoptotic) 단백질을 조절하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 림프종 2(B-cell lymphoma 2, BCL-2) 억제제(예를 들어, ABT-199 또는 GDC-0199로도 명명되는 베네토클락스(venetoclax); 또는 ABT-737)를 포함한다. 베네토클락스는 항-세포자연사 단백질인 BCL-2를 억제하는, 소분자(4-(4-{[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸-1-사이클로헥세-1-닐]메틸}-1-피페라지닐)-N-({3-니트로-4-[(테트라하이드로-2H-피란-4-일메틸)아미노]페닐}설포닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일옥시)벤즈아마이드)이다. 전- 또는 항-세포자연사 단백질을 조절하는 다른 제제는 최대 효능을 위한 BCL-2 억제제 ABT-737, 나비토클락스(navitoclax, ABT-263); Mcl-1 siRNA 또는 Mcl-1 억제제 레티노이드 N-(4-하이드록시페닐) 레틴아마이드(4-HPR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 종양 괴사 인자-관련 세포자연사 유도 리간드(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)와 같은 전-세포자연사 자극을 제공하며, 이는 종양 세포 표면의 TRAIL 사멸 수용체 DR-4 및 DR-5 또는 TRAIL-R2 작용제 항체에 결합함으로써 세포자연사 경로를 활성화할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 독성제, 예를 들어 CPX-351(Celator Pharmaceuticals), 시타라빈(cytarabine), 다우노루비신(daunorubicin), 보사록신(vosaroxin, Sunesis Pharmaceuticals), 사파시타빈(sapacitabine, Cyclacel Pharmaceuticals), 이다루비신(idarubicin) 또는 미토산트론(mitoxantrone)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저메틸화제(hypomethylating agent), 예를 들어 DNA 메틸전달효소(DNA methyltransferase) 억제제, 예를 들어 아자시티딘(azacytidine) 또는 데시타빈(decitabine)을 포함한다.
다른 구현예에서, 추가 요법은 이식, 예를 들어 동종이계(allogeneic) 줄기세포 이식이다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈은 예를 들어, 조작된 세포 예를 들어, CAR 발현 세포를 투여하기 전에 대상체에서 수행된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 멜팔란(melphalan), 사이톡산(Cytoxan), 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입) 전, 투여와 동시 또는 투여 후에 대상체에 투여된다. 일 예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 종양 용해 바이러스이다. 일부 구현예에서, 종양 용해 바이러스는 암세포에서 선택적으로 복제하고 암세포의 사멸을 촉발하거나 암세포의 성장을 늦출 수 있다. 일부 경우에, 종양 용해 바이러스는 비-암세포에 효과가 없거나 최소한의 효과를 보인다. 종양 용해 바이러스에는 종양 용해성 아데노바이러스, 종양 용해성 단순 헤르페스 바이러스, 종양 용해성 레트로바이러스, 종양 용해성 파보바이러스, 종양 용해성 우두 바이러스, 종양 용해성 신비스(Sinbis) 바이러스, 종양 용해성 인플루엔자 바이러스 또는 종양 용해성 RNA 바이러스(예를 들어, 종양 용해성 레오바이러스, 종양 용해성 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle Disease Virus, NDV), 종양 용해성 홍역 바이러스 또는 종양 용해성 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus, VSV))가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
기타 예시적인 병용 요법, 치료 및/또는 제제는 항 알레르기성 제제, 항구토제, 진통제 및 부가물 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 신경보호제, 자유라디칼 제거제, 심장보호제, 안트라사이클린 혈관외유출 중화제 및 영양소와 같은 세포보호제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제로서 사용되는 항체는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제(예를 들어, 사이톡산(Cytoxan), 플루다라빈, 히스톤 탈아세틸효소 억제제, 탈메틸화제, 펩티드 백신, 항종양 항생제, 티로신 키나아제 억제제, 알킬화제, 항-미세소관제 또는 항-유사분열제), 항-알레르기제, 항-구역질제(또는 항구토제), 진통제 또는 본원에 기재된 세포 보호제에 접합되거나 그렇지 않으면 결합된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항체 약물 접합체이다.
본원에 기재된 임의의 추가 제제는 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물 병용 요법, 예를 들어 병용 요법 중 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 운반체, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 것을 포함하는 약학 조성물로서 제조 및 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물 병용 요법은 추가 제제, 요법 또는 치료와 임의의 순서로 동시에, 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 상기 투여는 대상체의 신체에서 각각의 제제를 치료적 유효 수준으로 제공한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 동일한 약학 조성물의 일부로서 또는 동일한 전달 방법을 사용하여 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물 병용 요법과 공동-투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 치료, 예를 들어 조작된 T 세포 용량(예를 들어, CAR+ T 세포)와 동시에 하지만 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포의 투여 전에 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포와 함께 인큐베이션된다.
일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 조작된 T 세포 용량(예를 들어, CAR+ T 세포) 의 투여 전 또는 후속으로, 선택된 기간에 의해 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 상기 기간은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월 또는 3개월이다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 여러 번 투여된다. 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물의 세포 치료, 예를 들어 조작된 T 세포 용량(예를 들어, CAR+ T 세포) 전에, 예를 들어 투여 2주, 12일, 10일, 8일, 1주일, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본원에 기재된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물의 세포 치료, 예를 들어 조작된 T 세포 용량(예를 들어, CAR+ T 세포) 후에, 예를 들어 투여 2주, 12일, 10일, 8일, 1주일, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 후에 투여된다.
추가 제제의 단위 용량은 임의의 치료적 유효량, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 단위 용량일 수 있고, 추가 제제의 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 투여될 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 유형, 단위 용량 및/또는 빈도, 질병의 중증도 및 경과, 선행 요법, 환자의 임상 이력 및 세포 치료, 예를 들어 조작된 T 세포(CAR+ T 세포)의 용량에 대한 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다.
VI. 제조 물품 및 키트
또한, 제공된 방법 및 용도에 따라 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포 또는 이러한 세포를 함유하는 조성물을 함유하는 제조 물품 및 키트, 그리고 임의적으로 사용 지침서, 예를 들어, 투여 지침서가 제공된다.
일부 구현예에서, 치료적 유효량의 본원에 기재된 조작된 세포를 포함하는 조성물, 및 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양을 치료하기 위해 대상체에게, 투여를 위한 지침서를 포함하는 제조 물품 및/또는 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 지침서는 본원에 제공된 방법 및 용도의 구성 요소의 일부 또는 전부를 명시할 수 있다. 일부 구현예에서, 지침서는 세포 요법을 위한 세포의 투여에 대한 특정 지침, 예를 들어, 용량, 시기, 선택 및/또는 투여를 위한 대상체의 식별 및 투여에 대한 조건을 명시한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 요법, 예를 들어 림프구 고갈 요법 및/또는 병용 요법, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 것을 위한 하나 이상의 추가 제제를 추가로 포함하고 요법을 위한 추가 제제를 투여하기 위한 지침서를 임의로 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 림프구 고갈 요법을 위한 제제를 추가로 포함하고, 임의로 림프구 고갈 요법을 투여하기 위한 지침서를 임의로 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 투여용 조성물을 수반하는 라벨 또는 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 지침은 치료를 위한 대상체의 선택 또는 식별 기준을 명시한다. 일부 구현예에서, 상기 기준은 거대 B 세포 림프종과 같은 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 기준은 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL) 또는 이의 하위 유형 또는 NHL 또는 이의 하위 유형 및/또는 고-위험 NHL 을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 공격적 NHL, 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL), 종격 거대 B-세포 림프종(primary mediastinal large B-cell lymphoma, PMBCL), T 세포/조직구 풍부성 거대 B-세포 림프종(T cell/histocyte-rich large B cell lymphoma,TCHRBCL), 버키트 림프종(Burkitt's lymphoma, BL), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL) 및/또는 여포성 림프종(follicular lymphoma, FL) 으로 특징 또는 결정되는 질병 또는 병태를 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다. 특정 구현예에서, 치료받을 대상체는 달리 명시되지 않고(NOS) 일부 측면에서 드 노보 또는 비활동성(indolent)에서 형질전환된 것을 포함하여 공격적 NHL, 특히, 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL) 을 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 치료받는 대상체 또는 집단수는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(primary mediastinal large B-cell lymphoma, PMBCL) 또는 여포성 림프종 단계 3B(follicular lymphoma grade 3B, FL3B) 를 갖는 대상체를 포함하여 및/또는 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 여포성 림프종(follicular lymphoma, FL)을 갖는다.
일부 측면에서, 지침은 치료받을 대상체는 일부 경우에, 림프절 외 위치가 우세한 DLBCL이 아닌 DLBCL, 말단 분화된 B 세포의 대세포 림프종이 아닌 DLBCL, 또는 DLBCL과 다른 림프구 사이에 중간 특성을 가진 B 세포 신생물이 아닌 DLBCL 또는 다른 림프종으로 특징되어 질 수 있는 DLBCL, NOS 을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 일부 경우에, T 세포/조직구 풍부성 거대 B-세포 림프종(T cell/histocyte-rich large B cell lymphoma, TCHRBCL)이 아닌 DLBCL, 중추 신경계(CNS) 의 원발성 DLBCL 이 아닌 DLBCL, 원발성 피부 DLBCL 이 아닌 DLBCL, 다리 유형 또는 엡스타인-바 바이러스(Epstein-Barr virus, EBV)-양성 DLBCL(예를 들어, 노인들의 EBV-양성 DLBCL), 및 선택적으로 만성 염증과 관련된 DLBCL 이 아닌 DLBCL 로 특징지어지는, 달리 명시되지 않은 DLBCL(DLBCL, NOS) 을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 일부 경우에, B-림프모구 백혈병/림프종(B-lymphoblastic leukemia/lymphoma, B-LBL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종(high-grade B cell lymphoma), 버키트 림프종(Burkitt's lymphoma, BL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 또는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종으로 특징지어지는 DLBCL, NOS 을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다. 일부 측면에서, DLBCL 은 일부 경우에, B-림프모구 백혈병/림프종(B-lymphoblastic leukemia/lymphoma, B-LBL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종(high-grade B cell lymphoma), 버키트 림프종(Burkitt's lymphoma, BL)이 아닌 고-등급 B 세포 림프종, 또는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종이 아닌 고-등급 B 세포 림프종으로 특징지어 지는 DLBCL, NOS 이다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 일부 경우에, 배중심 B 세포 유사(germinal center B-cell-like, GCB) 및 활성화 B-세포-유사(activated B-cell-like, ABC)에 기초한 분자 및/또는 기원 세포의 세포유전적 특징으로 특징지어질 수 있는 DLBCL, NOS 를 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 DLBCL 을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다. 일부 측면에서, DLBCL 은, 달리 명시되지 않는한(NOS), 일부 경우에, 드 노보 또는 비활동성(indolent) 질환에서 형질전환된 것으로 특징지어 질 수 있다. 일부 구현예에서, DLBCL 은 드 노보 또는 원발성 DLBCL 이다. 일부 구현예에서, 치료 받을 질병 또는 병태(예를 들어, 림프종 예를 들어 DLBCL) 는 다른 하위 유형의 질병 또는 병태, 예를 들어 비활동성(indolent) 림프종에서 변형되고, 예를 들어 여포성 림프종(follicular lymphoma, FL) 에서 형질전환된 것이다.
일부 구현예에서, 상기 다른 비활동성(indolent) 림프종은, 예를 들어, 변연부 B-세포 림프종(marginal zone B-cell lymphoma, MZL) 및 만성 림프모구 백혈병/소-림프구림프종(chronic lymphocytic leukemia/small-cell lymphocytic lymphoma, CLL/SLL) 을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 받는 질병 또는 병태는 여포성 림프종에서 형질전환된 DLBCL(tFL); 일부 측면에서, 다른 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 DLBCL 일 수 있다. 일부 구현예에서, 치료받을 질병 또는 병태는 FL 에서 형질전환된 DLBCL 이다. 일부 측면에서, 치료받을 질병 또는 병태는 FL 이외의 다른 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 DLBCL 이다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 다른 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 DLBCL, 예를 들어 변연부 B-세포 림프종에서 형질전환된 DLBCL(tMZL) 또는 만성 림프모구 백혈병에서 형질전환된 DLBCL(tCLL; Richter's) 을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다. 일부 경우에, 치료받을 질병 또느 병태는 DLBCL tMZL 또는 DLBCL tCLL 이다. 일부 경우에, 치료 받을 질병 또는 병태는 FL 이외의 다른 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 DLBCL 또는 거대 B 세포 림프종, 예를 들어 DLBCL 또는 FL 에서 형질전환된 거대 B 세포 림프종 또는 다른 비활동성(indolent) 림프종일 수 있다.
일부 구현예에서, 지침은 치료받을 대상체는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고-등급 B 세포 림프종, 선택적으로 DLBCL 조직학을 갖는 대상체를 포함한다고 명시한다. 일부 구현예에서, 치료받을 질병 또는 병태는 DLBCL NOS(드 노보 또는 비활동성(indolent)에서 형질전환된)이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(primary mediastinal large B-cell lymphoma, PMBCL) 또는 여포성 림프종 단계 3B(follicular lymphoma grade 3B, FL3B)일 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 CNS 개입이 있는 DLBCL 일 수 있다.
일부 구현예에서, 지시는 치료될 대상체는 이중/삼중 히트 림프종 또는 이중/삼중 히트 분자 하위 유형의 림프종을 갖는 것으로 확인되거나 확인되었음을 명시한다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC(골수 세포증 종양 유전자), BCL2(B-세포 림프종 2) 및/또는 BCL6(B-세포 림프종 6) 유전자 재배열(예를 들어 위치이동)의 존재를 특징으로 하는 이중 히트 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 재배열은 다른 유전자 재배열과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 예를 들어, 다른 유전자 재배열은 BCL2를 수반하는 t(14;18)(q32;q21)를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 재배열은 BCL6/3q27과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC, BCL2 및 BCL6 유전자 재배열의 존재를 특징으로 하는 삼중 히트 림프종이다; 예를 들어, 문헌「Aukema 등, (2011) Blood 117:2319-2331」을 참조한다.
일부 구현예에서, 치료받을 대상체 또는 집단수는 나쁜 수행 능력을 나타내는 상기 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 치료받을 집단수는 예를 들어, 0-2 의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 를 가지는 대상체를 포함한다. 임의의 구현예 중 다른 측면에서, 치료받을 대상체는 ECOG 0-1 를 포함하거나 ECOG2 대상체를 포함하지 않는다. 임의의 구현예 중 일부 구현예에서, 치료받을 대상체는 둘 이상의 이전 치료법이 실패했다. 일부 구현예에서, 대상체는 변연부 B-세포 림프종(marginal zone B-cell lymphoma, MZL) 및 만성 림프모구 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL; Richter's) 에서 형질전환된 DLBCL 을 포함하지 않고/않거나 DLBCL 은 드 노보 또는 비활동성(indolent) 질병에서 형질전환된 것으로 특징지어진다. 일부 구현예에서, 대상체는 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)을 가진다. 임의의 구현예 중 일부는, 대상체는 여포성 림프종(follicular lymphoma, FL)을 갖는다. 상기 구현예의 일부 측면에서, 대상체는 ECOG 0-1 이거나, MZL 또는 CLL 에서 형질전환된 DLBCL 을 갖지 않거나, 갖는 것으로 의심되거나 특징지어 지지 않는다. 일부 구현예에서, 지침은 세포 요법의 투여는 이전 치료법에 대하여 화학불응성 림프종(예를 들어, 화학불응성 DLBCL)을 갖고/갖거나 완전완화(complete remission, CR) 이 이루어지지 않은 것으로 확인된 이중/삼중 히트 림프종(또는 DLBCL 조직학을 갖는 MYC, BCL2 및 BCL6 유전자 재배열을 갖는 고-등급 B-세포 림프종)을 갖거나 갖는 것으로 확인된 대상체를 위한 것으로 명시한다.
일부 구현예에서, 지침은 투여될 세포의 용량을 명시한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 용량은 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포를 (약) 1×106 내지 (약) 5×108 예를 들어, 상기 세포의 (약) 1×107 내지 (약) 2×108, 예를 들어 총 상기 세포의 (약) 1×107, 5×107, 1×108 또는 1.5×108, 또는 상기 값 중 임의의 두 값 사이의 범위로 포함하는 것으로 지침에서 명시된다. 일부 구현예에서, 환자는 다회 용량으로 투여되고, 및 각 용량 또는 총 용량은 상기 값 중 하나이다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 컨테이너, 선택적으로 바이알은 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 을 발현하는 다수의 CD4+ T 세포를 포함하고, 및 컨테이너, 선택적으로 바이알은 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 을 발현하는 다수의 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 컨테이너, 선택적으로 바이알은 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 을 발현하는 다수의 CD4+ T 세포를 포함하고, 및 컨테이너, 선택적으로 바이알은 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 을 발현하는 다수의 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 냉동보존은 세포를 포함한다. 일부 측면에서 컨테이너는 백일 수 있다. 일부 측면에서, 컨테이너는 바이알일 수 있다.
일부 구현예에서, 바이알과 같은 컨테이너는 (약) 10×106 T 세포 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 이상, (약) 15×106 T 세포 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 이상, (약) 25×106 T 세포 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 이상 포함한다. 일부 측면에서, 바이알은 ml 당 (약) 1000만 내지 (약) 7000만, ml 당 (약) 1000만 내지 (약) 5000만, ml 당 (약) 1000만 내지 (약) 2500만, ml 당 (약) 1000만 내지 (약) 1500만, ml 당 1500만 세포 및 (약) 70000만 세포, ml 당 (약) 1500 만 내지 (약) 5000만 세포, ml 당 (약) 1500 만 내지 (약) 2500만 세포, ml 당 (약) 2500 만 내지 (약) 7000만 세포, ml 당 (약) 2500 만 내지 (약) 5000만 세포, 및 ml 당 (약) 5000만 세포 내지 7000 만 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 컨테이너 내 세포의 농도는 컨테이너 내 살아있는 세포의 농도이다.
일부 구현예에서, 바이알과 같은 컨테이너는 ml 당 (약) 0.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 1.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 1.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.6×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.7×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.8×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 2.9×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 3.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 3.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 4.0×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, ml 당 (약) 4.5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상, 또는 ml 당 (약) 5×106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 상기 살아있는 세포 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다.
일부 구현예에서, 바이알의 다수 또는 세포의 다수 또는 세포의 단위용량은 투여를 위해, 종합적으로, 세포 용량은 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×108 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×107 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 를 각각 포함하는 것으로 명시된다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD3+ 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 바이알의 다수 또는 세포의 다수 또는 세포의 단위용량은 투여를 해 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD3+CD4+ T 세포의 하나 이상의 단위 용량 및 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD3+CD8+ T 세포의 하나 이상의 단위 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량의 세포의 수는 살아있는 세포이다.
일부 측면에서, 물품은 하나 이상의 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 CD4+수용체+(예를 들어, CAR+) 세포 및 CD8+수용체+(예를 들어, CAR+) 세포의 단위 용량은 (약) 1×107 내지 (약) 2×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포, (약) 5×107 내지 (약) 1.5×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포, (약) 5×107 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포, (약) 1×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포, 또는 (약) 1.5×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포인 단위 용량을 포함하고, 선택적으로 물품 내 정보는 하나 또는 복수의 단위용량 섭취 및/또는 상기 하나 또는 복수의 단위용량에 따른 부피를 명시한다.
일부 경우에, 물품은 CD8+ 세포의 하나 이상의 단위 용량을 포함하고, 용량은 (약) 5×106 내지 (약) 1×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함, 용량은 (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함, 용량은 (약) 2.5×107 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함, 또는 용량은 (약) 5×107 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함, 또는 용량은 (약) 0.75×108 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ T 세포를 포함하며, 선택적으로 물품 내 정보는 하나 또는 복수의 단위용량 섭취 및/또는 상기 하나 또는 복수의 단위용량에 따른 부피를 명시한다. 일부 구현예에서, 물품 내 세포는, 종합적으로, (약) 1×108 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 또는 CD3+ 세포 이하, (약) 1×107 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 또는 CD3+ 세포 이하, (약) 0.5×107 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 또는 CD3+ 세포 이하, (약) 1×106 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 또는 CD3+ 세포 이하, (약) 0.5×106 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포 또는 CD3+ 세포 이하의 세포 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량의 세포의 수는 살아있는 세포이다.
일부 구현예에서, 각 바이알 또는 복수의 바이알 또는 복수의 세포 또는 투여를 위해 명시된 세포의 단위 용량은 집합적으로 세포의 용량이 대상체의 체표면적 또는 체중에 결부되지 않거나 이를 기초로 하지 않도록, 세포의 균일한 수, 양 또는 용량 또는 세포의 고정된 수, 양 또는 용량을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 단일 용량으로 대상체 또는 환자에게 투여될 수 있는, 조작된 T 세포와 같은 세포의 수 또는 양이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 주어진 용량 투여를 위한 세포 수의 분획이다.
일부 구현예에서, 각 바이알 또는 다수의 바이알 또는 다수의 세포 또는 세포의 단위 용량은 투여를 위해, 종합적으로, 용량은 약 5×108 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초혈액단핵구(PBMCs) 이하, 예를 들어, 약 1×106 내지 5×108 상기 세포, 예를 들어 (약) 2×106, 5×106, 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 총 상기 세포의 범위 내 또는 상기 값 중 임의의 두 값 사이의 범위 임을 명시한다.
일부 구현예에서, 각 바이알 또는 다수의 바이알 또는 다수의 세포 또는 세포의 단일 용량은, 종합적으로, 유전적으로 조작된 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 2.5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 1×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106 내지 (약) 5×106 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 2.5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106 내지 (약) 1×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 2.5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107 내지 (약) 1×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108 내지 (약) 2.5×108 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×108 내지 (약) 5×108 총 CAR-발현 T 세포를 포함하고, 투여를 위해 명시한다.
일부 구현예에서, 각 바이알 또는 다수의 바이알 또는 다수의 세포 또는 세포의 단일 용량은, 종합적으로, 유전적으로 조작된 세포의 용량은 적어도 또는 적어도 (약) 1×105 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 2.5×105 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 5×105 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 1×106 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 2.5×106 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 5×106 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 1×107 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 2.5×107 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 5×107 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 1×108 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 2.5×108 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 5×108 CAR-발현 세포를 포함하고, 투여를 위해 명시한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 살아있는 상기 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 투여 용량을 위한 지시는 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), (약) 5×105 내지 (약) 1×107개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 단위 용량의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 1×105개 이상 또는 약 1×105개 이상의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예를 들어 1×106개 이상 또는 약 1×106개 이상, 1×107개 이상 또는 약 1×107개 이상, 1×108개 이상 또는 약 1×108개 이상의 상기 세포의 수를 포함하는 단위 용량의 세포 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 숫자는 CD3+ 또는 CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+, 일부 경우에 또한 재조합 수용체 발현(예를 들어 CAR+) 세포의 총 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 투여 용량을 위한 지시는 (약) 1×105 내지 (약) 5×108개의 CD3+ 또는 CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107개의 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107개의 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+, CD8+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 단위 용량의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 투여 용량을 위한 지시는 (약) 1×105 내지 (약) 5×108개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포 또는 (약) 1×106 내지 (약) 1×107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 또는 CD4+/CD8+/CAR+ 세포(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 단위 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 살아있는 상기 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 용량의 투여를 위한 지침은 적어도 또는 적어도 (약) 2.5×107 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 5×107 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포, 적어도 또는 적어도 (약) 1×108 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포를 포함하는 세포 수의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 용량의 투여를 위한 지침은 (약) 2.5×107 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포, (약) 5×107 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포, (약) 1×108 CD3+/CAR+, CD8+/CAR+, 또는 CD4+/CD8+/CAR+ T 세포를 포함하는 세포 수의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 세포의 수는 살아있는 상기 세포의 수이다.
일부 구현예에서, 용량의 투여를 위한 지침은 (약) 2.5×107 CD4+ CAR+ 살아있는 세포 및 (약) 2.5×107 CD8+ CAR+ 살아있는 세포의 분리된 용량을 포함하는 (약) 5×107 CD3+ CAR+ 살아있는 세포 수의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 용량의 투여를 위한 지침은 (약) 5×107 CD4+CAR+ 살아있는 세포 및 (약) 5 x107 CD8+CAR+ 살아있는 세포의 분리된 용량을 포함하는 (약) 1×108 CD3+CAR+ 살아있는 세포 수의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 용량의 투여를 위한 지침은 (약) 0.75×108 CD4+CAR+ 살아있는 세포 및 (약) 0.75×108 CD8+CAR+ 살아있는 세포의 분리된 용량을 포함하는 (약) 1.5×108 CD3+CAR+ 살아있는 세포 수의 투여를 명시한다.
일부 구현예에서, 지침서는 투여 섭생법 및 투여 시기를 명시할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지침은 세포의 다중 용량, 예를 들어, 2회 이상의 용량을 대상체에게 투여하는 것을 명시할 수 있다. 일부 구현예에서, 지침서는 다중 용량의 시기, 예를 들어, 제1 용량 후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 투여되는 제2 용량; 및/또는 각 용량에서 투여량을 명시한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 복수의 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포, 및 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 복수의 CD4+ T 세포의 전부 또는 일부를 투여하고 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포를 더 투여하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 CD8+ 세포를 투여하기 전에 CD4+ T 세포를 투여하는 것을 명시한다. 일부 경우에, 지침서는 CD4+ 세포를 투여하기 전에 CD8+ T 세포를 투여하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 복수의 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포, 및 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 복수의 CD8+ T 세포 및 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포의 전부 또는 일부를 투여하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 투여 섭생법 및 세포 투여 시기를 명시한다.
일부 측면에서, 지침서는 CD4+ T 세포의 전부 또는 일부 및 CD8+ T 세포의 전부 또는 일부를 48시간 간격, 예를 들어 36시간 이하 간격, 24 시간 이하 간격, 12시간 이하 간격, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6 시간 간격 또는 0 내지 2 시간 간격으로 투여하는 것을 명시한다. 일부 경우에, 지침서는 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포를 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하 간격으로 투여하는 것을 명시한다.
일부 구현예에서, 지시는 세포의 용량 또는 수 또는 세포의 유형 및/또는 세포 유형의 비율, 예를 들어 각각의 집단 수 또는 아형, 예를 들어 CD4+ 와 CD8+ 의 비율을 지정한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지시는 세포들은 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 하위 유형과 같은 다중 세포 집단 또는 하위 유형의 산출 비율의 허용된 범위 또는 내, (약) 5:1 내지 (약) 5:1(또는 약 1:5 초과 내지 약 5:1 미만) 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1(또는 약 1:3 초과 내지 약 3:1 미만), 예를 들어 (약) 2:1 내지 (약) 1:5(또는 약 1:5 초과 내지 약 2:1 미만), 예를 들어 (약) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 허용된 차이는 원하는 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% (상기 범위 사이의 임의의 수치 포함) 이내에서 투여되는 것으로 지정한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 본원에 기재된 바와 같이, 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제, 예를 들어, 림프구 고갈 요법 및/또는 병용 요법, 및 임의로 추가 제제를 투여하기 위한 지침서를 추가로 포함한다. 일부 예시에서, 제조 물품은 하나 이상의 치료제를 더 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제는 면역조절제, 세포독성제, 항암제 또는 방사선치료제이다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 독성의 발달 또는 발달 위험을 위한 치료, 예방, 지연, 억제 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 제제 또는 치료제를 포함하고/하거나 대상체에서 독성의 발달 또는 발달 위험을 치료, 예방, 지연, 억제 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 제제 또는 치료제의 투여에 대한 지침을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제는 항-IL-6-항체 또는 항-IL-6 수용체 항체이거나 이를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제제 또는 치료제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 클라자키주맙(clazakizumab), 사릴루맙(sarilumab), 올로키주맙(olokizumab, CDP6038), 엘실리모맙(elsilimomab), ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(sirukumab, CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 및 FM101 중에서 선택된 제제이거나 이를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제제 또는 치료제는 하나 이상의 스테로이드; 사이토카인 수용체 또는 IL-10, IL-10R, IL-6, IL-6 수용체, IFNγIFNGR, IL-2, IL-2R/CD25, MCP-1, CCR2, CCR4, MIP1β알파, TNFR1, IL-1, 및 IL-1R알파/IL-1베타 중에서 선택되는 사이토카인의 길항제 또는 억제제; 또는 미세아교세포 활성 또는 기능을 예방, 차단 또는 감소시킬 수 있는 제제 이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 미세아교세포 활성 또는 기능을 예방, 차단 또는 감소시킬 수 있는 제제는 항-염증제, NADPH 산화효소(NOX2) 억제제, 칼슘 채널 차단제, 나트륨 채널 차단제, GM-CSF 억제, CSF1R 억제, CSF-1에 특이적으로 결합, IL-34에 특이적으로 결합, 핵인자 활성화 카파 B(nuclear factor kappa B, NF-κ 억제, CB2 수용체를 활성화하고/하거나 CB2 작용제, 포스포디에스테라제 억제제, microRNA-155(miR-155)를 억제 또는 microRNA-124(miR-124)를 상향조절 중에서 선택된다. 일부 경우에, 작용제는 미노사이클린(minocycline), 날록손(naloxone), 니모디핀(nimodipine), 리루졸(Riluzole), MOR103, 레날리도마이드(lenalidomide), 칸나비노이드(선택적으로 WIN55 또는 212-2), 정맥내 면역글로불린(IVIg), 이부딜라스트(lenalidomide), 항-miR-155 잠금 핵산(LNA), MCS110, PLX-3397, PLX647, PLX108-D1, PLX7486, JNJ-40346527, JNJ28312141, ARRY-382, AC-708, DCC-3014, 5-(3-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)벤질)피리미딘-2,4-디아민(5-(3-methoxy-4-((4-methoxybenzyl)oxy)benzyl) pyrimidine-2,4-diamine, GW2580), AZD6495, Ki20227, BLZ945, 에막투주맙(emactuzumab), IMC-CS4, FPA008, LY-3022855, AMG-820 및 TG-3003 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 작용제는 집락 자극 인자 1 수용체(colony stimulating factor 1 receptor, CSF1R)의 억제제이다. 예를 들어, 제제 PLX-3397, PLX647, PLX108-D1, PLX7486, JNJ-40346527, JNJ28312141, ARRY-382, AC-708, DCC-3014, 5-(3-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)벤질)피리미딘-2,4-디아민(5-(3-methoxy-4-((4-methoxybenzyl)oxy)benzyl) pyrimidine-2,4-diamine, GW2580), AZD6495, Ki20227, BLZ945 또는 이의 약학적 염 또는 이의 전구체; 에막투주맙(emactuzumab), IMC-CS4, FPA008, LY-3022855, AMG-820 및 TG-3003 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 상기 중 임의의 것의 조합이다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 생물학적 샘플, 예를 들어 투여 후보이거나 요법이 투여된 대상체로부터의 생물학적 샘플을 분석하기 위한 하나 이상의 시약 및 선택적으로 시약 또는 분석법의 사용 지침을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플이거나 이로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 시약은 세포 요법의 투여 전 또는 세포 요법의 투여 후, 진단 목적으로 대상체를 확인하고/하거나 치료 결과 및/또는 독성을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 독성과 관련된 특정 바이오마커, 예를 들어 사이토카인 또는 피분석물의 수준을 측정하기 위한 시약 및 측정 지침을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 시약은 바이오마커(예를 들어, 피분석물), 예를 들어 면역 분석, 앱 타머-기반 분석, 조직학적 또는 세포학적 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석을 측정하기 위해 시험관내 (in vitro) 분석을 수행하기 위한 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 시험관내 분석은 효소결합면역흡착분석 (ELISA), 면역블롯팅, 면역침강, 방사선 면역 검정 (RIA), 면역 염색, 유세포 분석, 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 화학 발광 분석, 측면 유동 면역 분석, 억제 분석 및 결합활성 분석 (avidity assay) 중에서 선택된다. 일부 측면에서, 시약은 바이오마커(피분석물)에 특이적으로 결합하는 결합 시약이다. 일부 경우에, 결합 시약은 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 앱타머 또는 핵산 프로브이다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 하나 이상의 피분석물을 검출할 수 있는 하나 이상의 제제 및 치료 후보인 대상체의 생물학적 샘플의 분석에 사용하기 위한 제제를 위한 지침을 포함한다. 하나 이상의 피분석물은 LDH, 페리틴(ferritin), CRP, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-알파, IFN-감마, MCP-1, MIP-1베타, 에오탁신(eotaxin), G-CSF, IL-1R알파, IL-1R베타, IP-10, 퍼포린(perforin), 및 D-이량체(피브린 분해 산물) 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 피분석물은 LDH, 페리틴(ferritin) 및/또는 CRP 를 포함한다. 일부 구현예에서, 피분석물의 한계값 수준과 비교하여 피분석물의 존재 또는 부재, 수준, 양, 또는 농도를 분석하기 위한 지침 역시 포함된다. 일부 구현예에서, 지침은 임의의 제공된 방법에 따라 상기 피분석물, 예를 들어 LDH, 페리틴(ferritin) 및/또는 CRP 의 평가 또는 모니터링을 수행하기 위한 방법을 명시한다.
일부 구현예에서, 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 피분석물의 한계값 수준 이상인 경우, 대상체에게 독성의 발달 또는 발달 위험을 위한 치료, 예방, 지연, 억제 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 제제 또는 치료제를 (i) 우선하여, (ii) 1, 2, 또는 3 일 동안 (iii) 동시에 및/또는 (iv) 첫번째 발열 시점에, 대상체에게 세포 요법 투여의 개시를 명시하여 포함한다. 일부 경우에, 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 분석물의 한계값 수준 이상인 경우, 세포 요법은 세포 요법의 투여 후 대상체에게 독성 또는 중증 독성 발생 위험과 관련이 없거나, 대다수의 대상체 및/또는 대상체가 갖고 있거나 가질 것으로 의심되는 질병 또는 상태를 갖는 대상체의 대다수에서 독성 또는 중증 독성 발생 위험과 관련이 없는 감소된 용량 또는 정량으로 투여되는 것으로 명시한다. 일부 경우에, 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 분석물의 한계값 수준 이상인 경우, 세포 요법은 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상 병원 입원과 함께 투여되며, 선택적으로 세포 요법은 그렇지 않으면 외래환자 기준으로 또는 1일 이상 병원 입원 없이 대상체에게 투여되는 것으로 명시한다.
일부 구현예에서, 세포 요법 투여에 대한 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 분석물의 한계값 아래인 경우, 대상체에게 세포 요법을 선택적으로 비-감소된 용량, 선택적으로 외래환자 기준으로 또는 하루 이상 동안 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 세포 요법 투여에 대한 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 분석물의 한계값 아래인 경우, 세포 요법 투여에 우선하여 또는 동시에 및/또는 발열 이외의 독성의 징후 또는 증상의 발달에 우선하여 독성 발생을 치료, 예방, 지연 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제를 대상체에게 투여하지 않는 것으로 명시한다. 일부 측면에서, 세포 요법 투여에 대한 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 분석물의 한계값 아래인 경우, 세포 요법의 투여는 외래환자 기준 및/또는 하루동안 또는 연속 1일 이상 동안 대상체의 입원 없이 및/또는 대상체의 병원 입원 없이 1일 이상 투여되는 것으로 명시된다.
제조 물품 및/또는 키트는 세포 요법을 추가로 포함할 수 있고/있거나 세포 요법과 함께, 그 전에 및/또는 세포 요법을 사용한 치료와 관련하여 사용하기 위한 지침을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 지침은 제제의 투여를 포함하고, 및 지침은 샘플 내 피분석물의 수준, 양 또는 농도가 피분석물의 한계값 수준 이상인 경우, 대상체에게 제제를 투여하는 것을 명시한다. 일부 측면에서, 지침은 대상체에게 독성의 발달 또는 발달 위험을 위한 치료, 예방, 지연, 억제 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 제제 또는 치료제를 (i) 우선하여, (ii) 1, 2, 또는 3 일 동안 (iii) 동시에 및/또는 (iv) 첫번째 발열 시점에, 대상체에게 세포 요법 투여의 개시를 추가로 명시한다.
제조 물품 및/또는 키트에는 용기 및 표지(label) 또는 용기 위의 또는 그와 연관된 포장 삽입물 등이 포함될 수 있다. 적합한 용기에는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, IV 용액백 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기에는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 있는 것을 포함하여 정맥 주사용 용액백, 바이알 또는 경구 투여 제제를 위한 병 또는 바이알이 포함된다. 표지 또는 포장 삽입물은 조성물이 질환 또는 병태 치료에 사용됨을 나타낼 수 있다. 제조 물품은 (a) 조성물이 함유된 제1 용기, 상기 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 포함하고; 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기, 상기 조성물은 제2 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품은 (a) 제1 조성물이 함유된 제1 용기, 상기 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포의 아형을 포함하고; 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기, 상기 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포의 다른 아형을 포함한다. 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품에는 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 다른 용기 또는 동일한 용기가 추가로 포함될 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같이 다른 물질이 추가로 포함될 수 있다.
IV. 예시적 구현예
상기 제공된 구현예는 아래와 같다:
1. 세포 요법제의 투여 후 독성 발병 위험을 평가하는 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴(ferritin) 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준(level), 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(sum of product dimensions; SPD)이며;
여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
(b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
(i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며;
(ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ(units per liter), 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고;
(iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖(nanograms per milliliter), 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
(iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ(milligrams per liter), 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
를 포함하는, 방법.
2. 대상체를 식별하는 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(SPD)이며;
여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
(b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
(i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며;
(ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고;
(iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
(iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
를 포함하는, 방법.
3. 치료 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체에서 종양의 생성물 치수의 합(SPD)이며;
여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
(b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
(i) 상기 파라미터는 생성물 치수의 합(SPD)이며, 상기 임계 수준은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 초과이며;
(ii) 상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 (약) 300 유닛/ℓ, 400 유닛/ℓ, 500 유닛/ℓ 또는 600 유닛/ℓ 초과이고;
(iii) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
(iv) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
및
(c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 선택적으로,를 투여하고, 선택적으로, 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;
를 포함하는, 방법.
4. 구현예 1 내지 3 중의 어느 하나에 있어서,
상기 파라미터는 SPD이고, 상기 임계 수준은 50 cm2인, 방법.
5. 구현예 1 내지 3 중의 어느 하나에 있어서,
상기 파라미터는 LDH이고, 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ인, 방법.
6. 구현예 1 내지 5 중의 어느 하나에 있어서,
상기 하나 이상의 파라미터는 SPD 및 LDH이고, SPD에 대한 상기 임계 수준은50 cm2 이며 LDH에 대한 상기 임계 수준은 500 유닛/ℓ인, 방법.
7. 구현예 1 내지 3 중의 어느 하나에 있어서,
상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖인, 방법.
8. 구현예 1 내지 3 중의 어느 하나에 있어서,
상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ인, 방법.
9. 구현예 1 내지 3, 7 및 8 중의 어느 하나에 있어서,
상기 하나 이상의 파라미터는 페리틴 및 CRP이고, 페리틴에 대한 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖이며 CRP에 대한 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ인, 방법.
10. 구현예 1 내지 9 중의 어느 하나에 있어서,
상기 생물학적 샘플은 혈액 또는 혈장 샘플인, 방법.
11. 구현예 1 내지 10 중의 어느 하나에 있어서,
상기 SPD는 상기 신체의 CT 및/또는 MRI 이미징 또는 다른 이미징을 기준으로 하여 측정되는, 방법.
12. 구현예 1 내지 11 중의 어느 하나에 있어서,
하나 이상의 분해 물질 또는 상기 SPD의 수준, 양 또는 농도는 치료 전에, 성분 채집 전에, 또는 세포 생성물 제조 전에 측정되는, 방법.
13. 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 평가하는 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
(b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임;
을 포함하는, 방법.
14. 대상체를 식별하는 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
(b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임;
을 포함하는, 방법.
15. 치료 방법으로서,
상기 방법은,
(a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
(b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 식별하는 단계, 여기서 상기 대상체는 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕임; 및
(c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및, 선택적으로, 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;
를 포함하는, 방법.
16. 구현예 13 내지 15 중의 어느 하나에 있어서,
상기 임계 수준은 500 개의 세포/㎕인, 방법.
17. 구현예 1 내지 16 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체가 세포 요법제를 투여받고 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 식별되는 경우 독성 증후에 대해 대상체를 모니터링하는 단계를 더 포함하는, 방법.
18. 구현예 1 내지 17 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 신경독성 또는 CRS인, 방법.
19. 구현예 1 내지 18 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 신경독성 또는 CRS인, 방법.
20. 구현예 1 내지 19 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 중증 신경독성이거나 또는 등급 2 또는 그 초과의 신경독성, 등급 3 또는 그 초과의 신경독성, 또는 등급 4 또는 그 초과의 신경독성인, 방법.
21. 구현예 1 내지 20 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 신경독성인, 방법.
22. 구현예 1 내지 20 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 중증 신경독성 또는 등급 3 또는 그 초과의 신경독성인, 방법.
23. 구현예 1 내지 19 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 중증 CRS이거나 또는 등급 2 또는 그 초과의 CRS, 등급 3 또는 그 초과의 CRS, 또는 등급 4 또는 그 초과의 CRS인, 방법.
24. 구현예 1 내지 19 및 23 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 등급 1 또는 그 초과의 CRS인, 방법.
25. 구현예 1 내지 19 및 23 중의 어느 하나에 있어서,
상기 독성은 중증 CRS 또는 등급 3 또는 그 초과의 CRS인, 방법.
26. 구현예 1 내지 25 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체가 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 식별되는 경우 상기 대상체에,
(a) (1) 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제 및 (2) 세포 요법제, 상기 제제는, 상기 대상체에 대한 상기 세포 요법제의 투여 개시 (i) 이전에, (ii) 1일, 2일, 또는 3일 내에, (iii) 그와 동시에 및/또는 (iv) 최초 발열 후에 투여됨; 및/또는
(b) 감소된 용량, 또는 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않거나, 또는 대부분의 대상체, 및/또는 세포 요법제의 투여 후 대상체가 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 질환 또는 병태를 갖는 대부분의 대상체,에서 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않는 용량의 세포 요법제;를 투여하고/하거나;
(c) 상기 대상체에 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상동안 병원에 입원하여 세포 요법제를 투여하되, 선택적으로 상기 세포 요법제는 다르게는 외래 환자 기준으로 또는 1일 이상 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여되는 것인, 방법.
27. 구현예 26에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료제는 항-IL-6 항체 또는 항-IL-6 수용체 항체인, 방법.
28. 구현예 27에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 클라자키주맙(clazakizumab), 사릴루맙(sarilumab), 올로키주맙(olokizumab)(CDP6038), 엘실리모맙(elsilimomab), ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(sirukumab)(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 및 FM101 중에서 선택된 제제이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
29. 구현예 27 또는 28에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙인, 방법.
30. 구현예 26에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료제는 하나 이상의 스테로이드이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
31. 구현예 30에 있어서,
상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)인, 방법.
32. 구현예 30 또는 31에 있어서,
상기 스테로이드는 덱사메타손인, 방법.
33. 구현예 26에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료는 바소프레써(vasopressor)의 투여를 포함하는, 방법.
34. 구현예 26에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료는 인큐베이션을 포함하는, 방법.
35. 구현예 26에 있어서,
상기 제제 또는 다른 치료는 투석(dialysis)을 포함하는, 방법.
36. 구현예 1 내지 35 중의 어느 하나에 있어서,
상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 병태와 관련되거나 또는 상기 질환 또는 병태와 관련된 병변의 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
37. 구현예 1 내지 36 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 암인, 방법.
38. 구현예 1 내지 37 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종인, 방법.
39. 구현예 1 내지 38 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성종양이고/이거나 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphoblastic leukemia; CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
40. 구현예 1 내지 39 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
41. 구현예 40에 있어서,
상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)인, 방법.
42. 구현예 41에 있어서,
상기 DLBCL은 DLBCL, 달리 명시되지 않은(not otherwise specified) (NOS), 드 노보 DLBCL 또는 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL인, 방법.
43. 구현예 41 또는 42에 있어서,
상기 DLBCL은 드 노보 DLBCL인, 방법.
44. 구현예 41 또는 42에 있어서,
상기 DLBCL은 여포성 림프종으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL인, 방법.
45. 구현예 41 또는 42에 있어서,
상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL인, 방법.
46. 구현예 1 내지 39 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)인, 방법.
47. 구현예 1 내지 46 중의 어느 하나에 있어서,
상기 항원은 B 세포 항원, 선택적으로 CD19인, 방법.
48. 구현예 1 내지 47 중의 어느 하나에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
49. 구현예 1 내지 48 중의 어느 하나에 있어서,
상기 조작된 세포는 T 세포, 선택적으로 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포인, 방법.
50. 구현예 1 내지 49 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 요법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
51. 구현예 50에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행되는, 방법.
52. 구현예 50 또는 51에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
53. 구현예 50 내지 52 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
54. 구현예 50 내지 53 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ T 세포에 의해서 포함된 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 포함된 수용체는 동일한 재조합 수용체를 포함하고/하거나 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작되는, 방법.
55. 구현예 50 내지 54 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포의 용량은, 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인, 정의된 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고/하거나;
상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 하나에서 상기 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 다른 것에서 상기 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고/하거나;
상기 제 1 및 제 2 조성물로 투여된 상기 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 정의된 비율로 존재하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하는, 방법.
56. 구현예 55에 있어서,
상기 정의된 비율은 (대략) 1:1인, 방법.
57. 구현예 50 내지 56 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
(약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
(약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는
(약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
를 포함하는, 방법.
58. 구현예 50 내지 57 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
59. 구현예 50 내지 57 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
60. 구현예 50 내지 57 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
61. 구현예 50 내지 60 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
(약) 1×107 내지 (약) 1×108 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
(약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는
(약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
를 포함하는, 방법.
62. 구현예 50 내지 61 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
63. 구현예 50 내지 61 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
64. 구현예 50 내지 61 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
65. 구현예 47 내지 64 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이거나 또는 상기 대상체의 자가 조직인, 방법.
66. 구현예 1 내지 65 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
67. 제조 물품으로서,
재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물 및 선택적으로 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제; 및 구현예 1 내지 66 중의 어느 하나의 방법에 따라 독성을 발병할 위험을 평가하거나, 대상체를 식별하거나 또는 대상체를 치료하기 위한 지침을 포함하는, 제조 물품.
68. 질환 또는 병태를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
69. B 세포 악성 종양인 질환 또는 병태를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
70. 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
71. 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL에 의해서 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고,
상기 T 세포의 용량은 (약) 1×107 개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2×108 개의 CAR-발현 T 세포(수치를 포함함)를 포함하며;
상기 T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
72. 구현예 71에 있어서,
상기 T 세포의 용량은 정의된 비율의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인, 방법.
73. 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL에 의해서 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 T 세포의 용량은 정의된 비율의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이며, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
74. 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인 질환 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은 상기 대상체에, 상기 NHL에 의해서 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하고,
상기 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 T 세포 내지 (약) 1.5×108 개의 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함)를 포함하며;
상기 용량은 정의된 비율의 상기 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 상기 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포를 포함하고, 상기 비율은 대략 1:1이며;
상기 방법은, (1) 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%에서 완전 반응(CR) 및/또는 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%에서 객관적 반응(OR)을 초래하고 (2) 등급 2 초과의 사이토카인 방출 증후(CRS) 및/또는 등급 2 초과의 신경독성을 나타내는 대상체의 50% 이하를 초래하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
75. 대상체를 치료하는 방법으로서,
상기 방법은, 림프종인 질환 또는 병태를 갖는 대상체에, 상기 림프종에 의해서 발현된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되, 상기 대상체에서 상기 림프종은 중추신경계(CNS) 침범(involvement)과 관련되거나 또는 그를 포함하고; 상기 T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하며; 각각의 상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 개별적으로, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 표적 항원 또는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하고/하거나 상기 질환 또는 병태와 관련되는 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별도의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별도의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
76. 구현예 75에 있어서,
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 뇌병변, 선택적으로 측두엽 뇌병변을 포함하는, 방법.
77. 구현예 75 또는 76에 있어서,
상기 림프종은 B 세포 악성 종양인, 방법.
78. 구현예 75 내지 77 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프종은 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
78. 구현예 68 내지 78 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행되는, 방법.
80. 구현예 68 내지 79 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
81. 구현예 68 내지 80 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
82. 구현예 68 내지 81 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는, (약) 0 내지 (약) 48시간, (약) 0 내지 (약) 36시간, (약) 0 내지 (약) 24시간, (약) 0 내지 (약) 12시간, (약) 0 내지 (약) 6시간, (약) 0 내지 (약) 2시간, (약) 0 내지 (약) 1시간, (약) 0 내지 (약) 30분, (약) 30분 내지 (약) 48시간, (약) 30분 내지 (약) 36시간, (약) 30분 내지 (약) 24시간, (약) 30분 내지 (약) 12시간, (약) 30분 내지 (약) 6시간, (약) 30분 내지 (약) 4시간, (약) 30분 내지 (약) 2시간, (약) 30분 내지 (약) 1시간, (약) 1시간 내지 (약) 48시간, (약) 1시간 내지 (약) 36시간, (약) 1시간 내지 (약) 24시간, (약) 1시간 내지 (약) 12시간, (약) 1시간 내지 (약) 6시간, (약) 1시간 내지 (약) 4시간, (약) 1시간 내지 (약) 2시간, (약) 2시간 내지 (약) 48시간, (약) 2시간 내지 (약) 36시간, (약) 2시간 내지 (약) 24시간, (약) 2시간 내지 (약) 12시간, (약) 2시간 내지 (약) 6시간, (약) 2시간 내지 (약) 4시간, (약) 4시간 내지 (약) 48시간, (약) 4시간 내지 (약) 36시간, (약) 4시간 내지 (약) 24시간, (약) 4시간 내지 (약) 12시간, (약) 4시간 내지 (약) 6시간, (약) 6시간 내지 (약) 48시간, (약) 6시간 내지 (약) 36시간, (약) 6시간 내지 (약) 24시간, (약) 6시간 내지 (약) 12시간, (약) 12시간 내지 (약) 48시간, (약) 12시간 내지 (약) 36시간, (약) 12시간 내지 (약) 24시간, (약) 24시간 내지 (약) 48시간, (약) 24시간 내지 (약) 36시간 또는 (약) 36시간 내지 (약) 48시간 수행되는, 방법.
83. 구현예 68 내지 82 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 2시간 간격으로 수행되거나; 또는
상기 제 1 조성물의 투여의 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여의 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는, 방법.
84. 구현예 68 내지 83 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는, 방법.
85. 구현예 68 내지 84 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ T 세포에 의해서 포함된 상기 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 포함된 상기 수용체는 동일한 재조합 수용체이고/이거나 상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작되는, 방법.
86. 구현예 68 내지 71 및 75 내지 85 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포의 용량은, 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인, 정의된 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고/하거나;
상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 하나에서 상기 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 다른 것에서 상기 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고/하거나;
상기 제 1 및 제 2 조성물로 투여된 상기 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 정의된 비율로 존재하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하는, 방법.
87. 구현예 86에 있어서,
상기 정의된 비율은 (대략) 1:1인, 방법.
88. 구현예 68 내지 70, 72, 73 및 75 내지 87 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
(약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
(약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
(약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는
(약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
를 포함하는, 방법.
89. 구현예 68 내지 88 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
90. 구현예 68 내지 88 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
91. 구현예 68 내지 88 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
92. 구현예 68 내지 89 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
(약) 1×107 내지 (약) 1×108 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
(약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
(약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는
(약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
를 포함하는, 방법.
93. 구현예 68 내지 92 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
94. 구현예 68 내지 92 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
95. 구현예 68 내지 92 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
96. 구현예 68 내지 95 중의 어느 하나에 있어서,
상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 병태와 관련되거나 또는 상기 질환 또는 병태와 관련된 병변의 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
97. 구현예 68 및 79 내지 96 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 암인, 방법.
98. 구현예 68 및 79 내지 95 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종인, 방법.
99. 구현예 68 및 79 내지 96 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성종양이고/이거나 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphoblastic leukemia; CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
100. 구현예 68 및 79 내지 99 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
101. 구현예 70 내지 74 및 78 내지 100 중의 어느 하나에 있어서,
상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)인, 방법.
102. 구현예 101에 있어서,
상기 DLBCL은 DLBCL, 달리 명시되지 않은(not otherwise specified) (NOS), 드 노보 DLBCL 또는 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL인, 방법.
103. 구현예 101 또는 102에 있어서,
상기 DLBCL은 드 노보 DLBCL인, 방법.
104. 구현예 101 또는 102에 있어서,
상기 DLBCL은 여포성 림프종으로부터 형질전환된(tFL) DLBCL인, 방법.
105. 구현예 101 또는 102에 있어서,
상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL인, 방법.
106. 구현예 71 내지 74 및 99 중의 어느 하나에 있어서,
상기 NHL 또는 상기 거대 B 세포 림프종은, 공격성 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(드 노보(de novo)이거나 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환됨), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 외투 세포 림프종(MCL), 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로부터 선택되는, 방법.
107. 구현예 68 내지 99 중의 어느 하나에 있어서,
상기 질환 또는 병태는 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)인, 방법.
108. 구현예 68 내지 107 중의 어느 하나에 있어서,
상기 항원은 B 세포 항원, 선택적으로 CD19인, 방법.
109. 구현예 68 내지 70 및 79 내지 108 중의 어느 하나에 있어서,
상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
110. 구현예 68 내지 109 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포인, 방법.
110. 구현예 68 내지 110 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체의 자가 조직(autologous)인, 방법.
112. 구현예 68 내지 111 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma)을 가졌거나 또는 가지는 것으로 식별되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(autologous stem cell transplant; ASCT) 투여 후 재발하는 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 성취한 것인, 방법.
113. 구현예 68 내지 112 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(complete response; CR)을 성취하고;
CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 CR을 나타내고/내거나;
1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 CR을 유지하고/하거나, 상기 CR을 성취한 후 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고;
OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 나타내고/내거나;
OR을 성취하는 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 반응을 유지하거나 또는 상기 OR을 성취한 후 3개월 또는 그 초과동안 또는 6개월 또는 그 초과동안 생존하고/하거나;
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 이중/삼중 히트 림프종을 가졌거나 또는 가지는 것으로 식별되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(ASCT) 투여 후 재발하는 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속되는 OR을 성취한 것인, 방법.
114. 구현예 68 내지 113 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포는 상기 대상체에 대해 자가(autologous)이고,
성분 채집(apheresis)을 위한 최소 절대 림프구 수(ALC)는 상기 요법제의 생산에 요구되지 않거나 특정되지 않고/않거나;
상기 세포는, 상기 질환 또는 병태를 갖는 대상체의 또는 상기 대상체의 선택된 집단의 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%에 대해 상기 방법에 따라 투여하기 위한 세포 생성물을 생성할 수 있는 방법에 의해서 생산되는, 방법.
115. 구현예 68 내지 113 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50%, (약) 60%, (약) 70%, 또는 (약) 80% 초과는 등급 3 또는 그 초과의 사이토카인 방출 증후(CRS)를 나타내지 않고/않거나 등급 3 또는 그 초과의 신경독성을 나타내지 않고/않거나 40% 또는 50% 또는 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내는 않는 것인, 방법.
116. 구현예 74 및 79 내지 115 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CR 또는 상기 OR은 3개월 초과 또는 6개월 초과동안 지속될 수 있고/있거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 초과 또는 6개월 초과동안 지속될 수 있고/있거나;
상기 방법으로 치료되고 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과 또는 9개월 또는 그 초과동안 CR 중에 잔류하거나 또는 반응 중에 잔류하거나 또는 생존 상태를 유지하고/하거나;
1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는, 3개월 또는 그 초과 및/또는 6개월 또는 그 초과 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 반응 중에 잔류하고, CR 중에 잔류하고/하거나, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 성취하고;
대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 지속될 수 있는 OR을 성취하고/하거나;
상기 방법으로 치료되고 OR을 성취하는 대상체의 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 반응 중에 잔류하거나 또는 생존하는 것인, 방법.
117. 구현예 68 내지 116 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 중추신경계(CNS) 침범(involvement)와 관련되거나 그를 포함하는 림프종이거나 또는 그것을 갖는 것으로 식별되고/되거나;
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에 (CNS) 침범로 림프종을 나타냈거나 또는 나타낸 것으로 식별된 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%는 상기 CNS 질환의 해결을 성취한 것인, 방법.
118. 구현예 75 내지 117 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 CNS 질환의 완전 반응(CR) 또는 관해를 성취하고;
CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 또는 그 초과 또는 6개월 또는 그 초과동안 CR을 유지하고/하거나;
1개월까지 및/또는 3개월까지 CNS 질환의 CR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하고, CR을 유지하고/하거나, 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 및/또는 9개월 또는 그 초과동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 CNS 질환의 객관적 반응(objective response; OR) 또는 관해를 성취하고;
3개월 또는 그 초과동안 또는 6개월 또는 그 초과동안 상기 OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%, 및/또는 CNS 질환의 OR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하거나 또는 3개월 또는 그 초과동안 및/또는 6개월 또는 그 초과동안 생존하고/하거나;
상기 뇌병변은 그 크기 또는 부피가 (약) 25%, 50%, 75% 이상 또는 그 초과까지 감소되고/되거나;
CNS 질환의 감소 또는 관해 또는 클리어런스(clearance)는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%에서 달성되는, 방법.
119. 구현예 68 내지 118 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 또는 50% 초과는 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후(CRS)를 나타내지 않고/않거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%는 투여 시작 후 3일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않고/않거나 투여 시작 후 5일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않으며/않거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 발병 중앙값은 상기 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 그 후, 또는 그의 해결까지의 중앙값 시간(median time to resolution)이고/이거나 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 신경독성의 발명 중앙값은 (약) 8, 9, 10, 또는 11일 초과인, 방법.
120. 구현예 68 내지 119 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여 개시 전에, 상기 대상체는 상기 세포 용량의 투여 후 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 치료제를 투여받지 않은 것인, 방법.
121. 구현예 120에 있어서,
상기 제제는 항-IL-6 항체, 항-IL-6 수용체 항체 또는 스테로이드이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
121. 구현예 120 또는 121에 있어서,
상기 제제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
123. 구현예 68 내지 122 중의 어느 하나에 있어서,
상기 투여 및 모든 후속 조치는 외래 환자를 기준으로 및/또는 입원 없이 또는 하룻밤 입원하여 수행되며;
상기 대상체가 해열제 치료 후 열이 지속되거나 감소되거나 감소되지 않았거나 1℃ 초과 감소하지 않은 경우, 상기 대상체는 입원하거나 또는 병원에 하룻밤 머물고/머물거나 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받는 것인, 방법.
124. 구현예 68 내지 123 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 0, 1 또는 2의 동부 종양학 그룹 협회 활동도(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG PS)을 갖거나 갖는 것으로 식별된 것인, 방법.
125. 구현예 68 내지 124 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 대한 1종 또는 그 초과의 종래 요법제(prior therapy), 선택적으로 1종, 2종 또는 3종의 종래 세포 요법제로 치료한 후 관해 후 재발하거나 그에 대해 불응성으로 되는 것인, 방법.
126. 구현예 68 내지 125 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여 전에,
상기 대상체는 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma)을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나;
상기 대상체는 화학요법 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학불응성 DLBCL을 갖는 것으로 식별되거나 또는 식별되었고/되었거나;
상기 대상체는 종래 요법제(prior therapy)에 대한 반응에서 완전 관해(complete remission; CR)를 성취하지 않았고/않았거나;
상기 대상체는 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant; ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발된 것인, 방법.
127. 구현예 68 내지 126 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해,
이중/삼중 히트 림프종;
화학요법 림프종, 선택적으로 화학불응성 DLBCL;
상기 악성 종양, 선택적으로 상기 NHL을 치료하기 위한 종래 요법제에 대한 반응에서 완전 관해(CR)를 성취하지 않는 것; 및/또는
자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant; ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발된 것; 및/또는
중추신경계(CNS) 침범(involvement)과 관련되거나 또는 그를 포함하는 림프종을 갖는 것;
을 갖는 대상체를 식별하거나 또는 선택하는 것을 포함하는, 방법.
128. 구현예 68 내지 127 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체에 추가 치료학적 제제 또는 요법제, 선택적으로 세포 요법제와 다른 것, 선택적으로 CAR+ T 세포 요법제와 다른 것을 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
129. 구현예 48 내지 66 및 71 내지 128 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인; 막 관통 도메인(transmembrane domain); 공자극 분자(costimulatory molecule)로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인(cytoplasmic signaling domain), 이는 선택적으로 4-1BB임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3제타(CD3zeta)임;을 포함하며;
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인, 막 관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하거나; 또는
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인(extracellular antigen-recognition domain) 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인 및 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 도메인인 공자극 신호 전달 영역을 포함하는, 방법.
130. 구현예 129에 있어서,
상기 항원-결합 도메인은 scFv인, 방법.
131. 구현예 130에 있어서,
상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열 VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역(variable heavy chain region) 및 FMC63의 가변 경쇄 영역(variable light chain region) 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고, 선택적으로 상기 scFv는, VH; 링커(linker), 선택적으로 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나, 상기 scFv는 가요성 링커(flexible linker)를 포함하고/하거나 서열번호 43으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
132. 구현예 129 내지 131 중의 어느 하나에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호 전달 영역인, 방법.
133. 구현예 129 내지 132 중의 어느 하나에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 신호 전달 영역인, 방법.
134. 구현예 129 내지 133 중의 어느 하나에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하는, 방법.
135. 구현예 129 내지 134 중의 어느 하나에 있어서,
상기 1차 신호 전달 도메인은 CD3제타 신호 전달 도메인인, 방법.
136. 구현예 129 내지 135 중의 어느 하나에 있어서,
상기 1차 신호 전달 도메인은 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하는, 방법.
137. 구현예 129 내지 136 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CAR은 상기 막 관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 더 포함하는, 방법.
138. 구현예 137에 있어서,
상기 스페이서는 면역 글로불린 힌지(immunoglobulin hinge) 또는 그의 변형된 버전, 선택적으로 IgG4 힌지(IgG4 hinge), 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서인, 방법.
139. 구현예 137 또는 138에 있어서,
상기 스페이서는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산이고, CD28 세포외 영역을 포함하지 않는 것인, 방법.
140. 구현예 137 내지 139 중의 어느 하나에 있어서,
상기 스페이서는 (약) 12개의 아미노산 길이인, 방법.
141. 구현예 137 내지 140 중의 어느 하나에 있어서,
상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들 중의 어느 것의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되고/되거나;
상기 스페이서는 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 트레오닌(threonine)임,을 포함하거나 또는 그들로 구성되는, 방법.
142. 구현예 48 내지 66 및 71 내지 141 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하며; 선택적으로 상기 막 관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함하며;
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전잘 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인임;을 순서대로 포함하거나; 또는
상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 scFv; 막 관통 도메인; 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전잘 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 순서대로 포함하며;
상기 스페이서는, (a) 면역 글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역 글로불린 힌지, 이는 선택적으로 IgG4 힌지임, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 약) 12개의 아미노산 길이이고/이거나 면역 글로불린 힌지, 이는 선택적으로 IgG4 힌지임, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 구성되거나, 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들 중의 어느 것의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 트레오닌(threonine)임,을 포함하거나 또는 그들로 구성되는, 폴리펩티드 스페이서이고/이거나;
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
상기 1차 신호 전달 도메인은 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하고/하거나;
상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열 VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고, 선택적으로, 상기 scFv는, VH; 링커, 이는 선택적으로 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나, 상기 scFv는 가요성 링커를 포함하고/하거나 서열번호 43으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
143. 구현예 1 내지 66 및 68 내지 142 중의 어느 하나에 있어서,
상기 투여 전에, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝(preconditioning)되는, 방법.
144. 구현예 50 내지 66 및 68 내지 143 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여 직전에, 상기 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 상기 대상체에 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
145. 구현예 144에 있어서,
상기 세포 용량 및/또는 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 외래 환자 전달을 통해 수행되는, 방법.
146. 구현예 144 또는 145에 있어서,
상기 대상체가 해열제 치료 후 열이 지속되거나 감소되거나 감소되지 않았거나 1℃ 초과 감소하지 않은 경우, 상기 대상체는 입원하거나 또는 병원에 하룻밤 머물고/머물거나 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받는 것인, 방법.
147. 구현예 50 내지 66 및 68 내지 146 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량은 비경구적으로, 선택적으로 정맥내 투여되는, 방법.
148. 구현예 68 내지 147 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
149. 제조 물품으로서,
재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물; 및 선택적으로 구현예 68 내지 147 중의 어느 하나의 방법에 따라 상기 세포 용량을 투여하기 위한 지침을 포함하는, 제조 물품.
VIII. 정의
용어 “폴리펩티드(polypeptide)”및 “단백질(protein)”은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 제공된 수용체 및 다른 폴리펩티드(예를 들어, 링커 또는 펩티드)를 포함한 폴리펩티드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하여 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어들은 또한 폴리펩티드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 및 인산화를 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩티드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 자연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 상기 변형은 부위-지정 돌연변이 유발을 통한 것과 같이 의도적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통한 것과 같이 우발적일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 “대상체(subject)”는 포유류, 예를 들어 인간 또는 다른 동물이며, 일반적으로 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체, 예를 들어 작용제 또는 작용제, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 환자는 포유 동물, 일반적으로 영장류, 예를 들어 인간이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상은 남성 또는 여성일 수 있으며 유아, 청소년, 청소년, 성인 및 노인 대상을 포함하는 임의의 적합한 나이일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 영장류가 아닌 포유류, 예를 들어 설치류이다.
본원에서 사용된 바와 같은 “치료(treatment, treat, treating)”는 질병 또는 병태 또는 장애 또는 이와 관련된 증상, 역효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과 중 어느 하나의 감소, 전이 방지, 질병 진행의 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 차도 또는 향상된 예후를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 용어는 질병의 완전한 치료 또는 모든 증상이나 결과에 있어 임의의 증상이나 영향(들)의 완전한 제거를 의미하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 “질병의 발병 지연(delaying development of a disease)”은 질병(예를 들어 암)의 발병을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 치료 중인 대상체 및/또는 질병의 이력에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 충분하거나 유의미한 지연은 대상체에 질병이 발병하지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발병과 같이 말기 암이 지연될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 “예방(preventing)”은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발과 관련하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포 및 조성물은 질병의 발병을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추는 데 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 “억제(suppress)”한다는 것은 다른 조건과 비교하여 또는 대안적으로 관심 조건 또는 매개변수를 제외하고 달리 동일한 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는 종양의 성장 속도를 세포의 부재 시 종양의 성장 속도에 비해 감소시킨다.
제제, 예를 들어 약학적 제형, 결합 분자, 항체, 세포 또는 조성물의 “유효량(effective amount)”은 투여의 맥락에서, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 원하는 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량/양에서와 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다.
제제, 예를 들어 약학적 제형 또는 세포의 “치료적 유효량(therapeutically effective amount)”은 예를 들어 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 원하는 치료적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 나이, 성별 및 체중 및 투여된 세포의 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 세포 및/또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
“예방적 유효량(prophylactically effective amount)”은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 시간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 통상적으로, 예방적 투여량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다. 더 낮은 종양 부담의 맥락에서, 일부 측면에서 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 높을 것이다.
본원에 사용된 용어 “약(about)”은 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 “약(about)”의 값 또는 매개변수에 대한 언급은 상기 값 또는 매개변수 자체에 관한 구현예를 포함(기술)한다.
본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태(“a”, “an” 및 “the”)는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, 단수 형태(“a”또는 “an”)는 “적어도 하나(at least one)”또는 “하나 이상(one or more)”을 의미한다.
본 개시 전체에서, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 모든 가능한 하위 범위 및 상기 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이 각각의 사이에 오는 값과 상기 언급된 범위에서 임의의 다르게 언급되거나 사이에 오는 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 상기 더 작은 범위의 상한 내지 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한계를 조건으로 청구된 주제 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 상기 포함된 한계 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 청구된 주제에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 조성물(composition)은 세포를 포함하여 둘 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합물일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 하나 이상의 특정 세포 유형 또는 세포 집단을 지칭할 때 "농축화(enriching)"는, 예를 들어 조성물 내의 총 세포 수 또는 조성물의 부피와 비교하여, 또는 다른 세포 유형에 비해, 예를 들어 집단 또는 세포에 의해 발현되는 표지자를 기초로 한 양성 선별에 의해, 또는 고갈되는 세포 집단 또는 세포 상에 존재하지 않는 표지자를 기초로 한 음성 선별에 의해 세포 유형 또는 집단의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭한다. 상기 용어는 조성물로부터 다른 세포, 세포 유형 또는 집단의 완전한 제거를 요구하지 않으며, 그렇게 농축된 세포가 농축 조성물에 100% 또는 거의 100%로 존재하는 것을 요구하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “양성(positive)”이라는 진술은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 존재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군 또는 형광 마이너스 1(fluorescence minus one, FMO) 게이팅 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “음성(negative)”이라는 진술은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 부재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군 또는 형광 마이너스 1(fluorescence minus one, FMO) 게이팅 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “벡터(vector)”는 이에 연결된 다른 핵산을 번식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 이것이 도입된 숙주 세포의 유전체에 편입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이것이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 “발현 벡터(expression vector)”로 지칭된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본원에서 정의되며, 본원에 상기 정의를 포함하는 것이 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.
본 출원에서 언급된 특허 문헌, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 달리 부합하지 않는 경우, 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
IX. 실시예
하기 실시예들은 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.
X. 실시예
하기 실시예들은 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.
재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)을 가진 대상체에게 항-CD19 CAR-발현 세포 투여
A. 대상체 및 치료
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 포함하는 치료 CAR+ T 세포 조성물을 B 세포 악성 종양이 있는 대상체에게 투여하였다.
실시예 1.A.1
B 세포 악성 종양 환자에게 상기 요법을 투여하는 진행 중인 임상 연구에서 특정 시점(1.A.1)을 통한 평가를 위해 결과들이 실시예 1.A.1 에 기재되어 있다. 구체적으로, 성인 인간 대상체의 코호트(전체 코호트) (이 시점에서 55명)은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)을 포함하는 재발성 또는 불응성(R/R) 공격성 비호지킨 림프종(NHL), 드 노보 또는 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된(NOS), 고-등급 B 세포 림프종, MYC 및 BCL2 및/또는 DLBCL 조직학(이중/삼중 히트)이 있는 BCL6 재배열, 만성 림프구성 백혈병(CLL) 에서 형질전환된 DLBCL 또는 변연부 B-세포 림프종(MZL), 원발성 종격동 거대 B-세포 림프종(PMBCL), 및 2차 요법의 실패 후 여포성 림프종 단계 3B(FL3B) 를 가졌다. 치료 대상체 중에는 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 점수가 0 및 2 사이 였다(추적 기간 중앙값 3.2개월). 1차 요법 후 MCL을 갖는 대상체도 연구에 포함되었지만(실시예 2 참조), 전체 코호트에는 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 대상체가 포함되지 않았다. 이전의 동종 줄기 세포 이식(SCT), 이차 중추 신경계(CNS) 관련 또는 ECOG 점수를 기준으로 제외된 대상체는 없었으며 성분채집에 필요한 최소 절대 림프구 수(ALC)는 없었다.
결과는 전체 코호트 내 대상체의 핵심 하위 집합에 대해 개별적으로 평가되었다(전체 코호트 내 대상체 중 나쁜 수행 상태(ECOG 2), 변연부 림프종(MZL) 및/또는 만성 림프모구 백혈병(CLL, Richter's)에서 형질전환된 DLBCL, 및 원발성 종격동 거대 b세포 림프종(PMBCL) 및 여포성 림프종단계 3B(FL3B)(핵심 코호트)을 갖는 대상체 제외). 핵심 코호트에는 DLBCL, NOS 및 형질전환된 여포성 림프종(tFL) 또는 고-등급 B 세포 림프종(이중/삼중 히트) 또는 DLBCL 조직학을 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있는 고-등급 B 세포 림프종(이중/삼중 히트) 및 0 또는 1의 ECOG PS(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 를 갖는 대상체가 포함된다. 실시예 1.A.1의 특정 시점에서, 이 핵심 코호트 내 44명의 대상체에 대한 결과가 평가되었다.
실시예 1.A.1 의 특정 시점에서 전체 및 핵심 코호트 대상체의 인구 통계 및 기준선 특징은 표 E1 에 제시되어 있다.
Figure pct00030
투여된 치료적 T 세포 조성물은 치료될 개별 대상체로부터의 백혈구 성분채집 샘플로부터의 CD4+ 및 CD8+ 세포의 면역친화성 기반(예를 들어, 면역자기 선택) 농축을 포함하는 프로세스에 의해 생성되었다. 분리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 별도로 활성화하고 항-CD19 CAR을 암호화하는 바이러스 벡터(예를 들어, 렌티바이러스 벡터)로 독립적으로 형질도입한 다음, 소량의 조작된 세포 집단의 개별 확장 및 동결보존을 수행했다. CAR은 뮤린 항체(FMC63에서 유래된 가변 영역, VL-링커-VH 방향)에서 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린에서 유래된 스페이서, CD28에서 유래된 막관통 도메인, 4-1BB에서 유래된 공자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 바이러스 벡터는 CAR 발현에 대한 대리 마커 역할을 하는 절단된 수용체를 암호화하는 서열을 추가로 포함하고; T2A 리보솜 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리된다.
동결보존된 세포 조성물을 정맥내 투여 전에 해동시켰다. 약 1:1의 표적 비율로 투여된 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단을 투여함으로써 치료적 T 세포 용량을 정의된 세포 조성물로서 투여하였다. 대상체에게 다음과 같이 단일 또는 이중 용량의 CAR-발현 T 세포(각각 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 개별 주입을 통한 각각의 단일 용량)를 투여하였다: 5×107 총 CAR-발현 T 세포(실시예 1.A.1에서 평가된 대상에 대해 n=30)를 함유하는 단일 용량의 용량 수준 1(DL -1), 각 용량이 약 14일 간격으로 투여되는 DL1의 이중 용량(실시예 1.A.1에서 평가된 대상체에 대해 n= 6, 1일 및 14일에 투여된 대상체, 투여 오류로 인해 2회 용량 일정을 통해 실수로 2회 DL2 용량을 받은 대상체 1명 포함) 또는 단일 용량 용량 수준 1×108개의 총 CAR-발현 T 세포를 함유하는 2(DL-2)(실시예 1.A.1에서 평가된 대상체에 대해 n=18). 투여된 조성물에 대한 표적 용량 수준 및 T 세포 하위 세트의 수는 표 E2에 제시되어 있다.
Figure pct00031
CAR+ T 세포 주입 이전부터 대상체들은 3 일 동안 플루다라빈(독감, 30mg/m2) 및 사이클로포스파미드(Cy, 300mg/m2)를 사용한 림프 고갈 화학요법을 받았다. 대상체는 림프고갈 2-7일 후에 CAR-발현 T 세포를 받았다.
실시예 1.A.2
실시예 1.A.2 의 경우, 상기 실시예 1에 기술된 임상 연구의 후속 시점에서 결과가 분석되었다. 실시예 1.A.2 의 이 분석 시점에서 74명의 환자가 치료를 받았다(남성 51명, 여성 23명). 대상체는 전체 DLBCL 코호트에 69명의 대상체 (67명의 DLBCL NOS(45 드 노보, FL에서 형질전환된 14명, CLL 또는 MZL에서 형질전환된 8명), FL 등급 3B 1명 및 PMBCL 1명 포함) 및 MCL 코호트의 5 대상체를 포함했다. 전체(DLBCL) 코호트의 대상체 중 나이 중앙값은 61세(범위 26, 82), 이전 치료법 중앙값은 3(범위 1, 12), 46(67%)은 화학불응성, 32(46%) 그리고 최소 16명(23%)의 환자가 이중/삼중 히트 림프종을 가졌다. 핵심 코호트의 49명 대상체가 1.A.2 의 특정 시점에서 평가되었다.
B. 안전성
CAR-T 세포 요법의 투여 후 치료-응급 이상반응(TEAE)의 존재 또는 부재를 평가하였다. 대상체들은 또한 신경 독성(혼란(confusion), 실어증(aphasia), 뇌병증(encephalopathy), 간대성 근경련 발작(myoclonus seizures), 경련(convulsions), 혼수(lethargy), 및/또는 정신 상태 변화(altered mental status)의 증상을 포함한 신경학적 합병증)에 대해 국립암연구소에 따라 1-5 등급으로 평가 및 모니터링되었다-Common Toxicity Criteria (CTCAE) scale, version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). Common Toxicity Criteria (CTCAE) scale, version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). 문헌「Common Terminology for Adverse Events (CTCAE) Version 4, U.S. Department of Health and Human Services, Published: May 28, 2009 (v4.03: June 14, 2010); and Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)」을 참고한다. 사이토카인 방출 증후군(Cytokine release syndrome, CRS)도 결정되고 모니터링되었으며 심각도에 따라 등급이 매겨졌다. 문헌「Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95」참조한다. 일부 경우에는 CAR+ T 세포 투여 후 90일까지 림프구 고갈에서 시작하여 부작용 데이터가 보고되고 수집되었다.
실시예 1.B.1
실시예 1.B.1은 실시예 1.A.1의 분석 특정 시점에 따른 결과를 설명한다.
도. 1 은 대상체의 ≥20% 에서 발생한 실험실 이상 및 TEAE를 경험한 것으로 관찰된 대상체의 백분율을 나타낸다. 도. 1 에 나타나는 TEAE 에 추가적으로, 이하 현상 용어들은 환자의 ≥5% 에서 등급 3-4 로 확인되었다: 백혈구 감소(13.6%), 뇌병증(encephalopathy)(12%), 고혈압(hypertension)(7%). 관찰된 독성의 정도는 용량 수준 1과 2 사이에서 일관되었다.
실시예 1.B.1 분석에서 전체 코호트 대상체의 84%에서 중증(등급 3 또는 그 이상) 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS) 및 중증 신경독성이 관찰되지 않았다. 또한 전체 코호트 대상체의 60%가 CRS 또는 신경독성의 어떠한 등급도 발병하지 않은 것으로 관찰되었다. CRS, 신경독성(NT), sCRS 또는 중증 신경독성(sNT) 발생률의 차이는 용량 수준 사이에 관찰되지 않았다. 표 E3은 최소 1회 용량의 CAR-T 세포를 투여받은 환자에서 28일 후 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경독성 부작용의 발생률을 요약한 것이다. 표 E3에 나타난 바와 같이, 단일 용량의 DL2 또는 이중 용량의 DL1을 받은 모든 대상체에서 sCRS(등급 3-4)가 관찰되지 않았다. 중증 신경독성 또는 중증 CRS(등급 3-4)는 전체 코호트의 대상체의 16%(9/55)와 핵심 하위 집단의 대상체의 18%(8/44)에서 관찰되었다. 대상체의 11%(n=6)가 토실리주맙(tocilizumab)을 받았고, 대상체의 24%(n=13)가 덱사메타손(dexamethasone)을 받았다. 전체 코호트 내의 ECOG 2 대상체 중 관찰된 CRS 및 신경독성 비율은 각각 71% 및 29% 이었다.
Figure pct00032
도. 2 1.B.1의 분석을 위해 관찰된 CRS 및/또는 신경독성 개시까지의 시간을 나타내는 카플란 마이어 곡선(Kaplan meier curve)을 나타낸다. 도시된 바와 같이, 관찰된 CRS 발병 및 신경독성 발병까지의 중앙값 시간은 각각 5일 및 11일이었고, 세포 요법 투여 개시 후 72시간 이내에 CRS 발병을 경험한 환자는 11%에 불과했다. CRS 및 신경독성이 1등급 또는 그 이상으로 해결되는데 걸리는 시간의 중앙값은 각각 5일 및 7일이었다. CRS 및 신경독성의 해결을 완료하는데 걸리는 중앙값은 각각 5일 및 11일이었다. 결과는 대상체에서 CRS 또는 신경독성의 조기 발병률이 낮다는 결론과 일치했다.
실시예 1.B.2
실시예 1.B.2 는 실시예 1.A.2의 특정 시점에서의 분석을 기술한다. 이 특정 시점까지, 유해 사례(adverse event, AE) 데이터는 림프구 고갈(lymphodepletion, LD)부터 CAR-발현 T 세포 투여 후 90일까지 수집되었다. 두 번째 특정 시점에서 DLBCL 코호트(전체 코호트)의 69명의 대상체들이 DL1 단일 용량을 받은 38명, DL2 단일 용량을 받은 25명, DL1 이중 용량 일정을 받은 6명의 대상체들이 안전성에 대해 평가되었다. CRS 또는 NT 이외의 가장 흔한 TEAE에는 호중구 감소증(neutropenia)(41%, 28/69), 피로(fatigue)(30%, 21/69), 혈소판 감소증(thrombocytopenia)(30%, 21/69) 및 빈혈(anemia)(26%, 18/69)이 포함되었다. 미만성 폐포 손상(diffuse alveolar damage)의 등급 5 TEAE가 하나 관찰되었다.
급성 주입 독성은 관찰되지 않았으며 전체 코호트의 대부분의 대상체는, 64%(44/69), CRS 또는 NT가 없는 것으로 관찰되었으며, 이는 CAR-발현 T 세포의 외래환자 전달이 가능할 수 있음을 나타낸다. CRS 및 NT를 포함한 CAR T 세포-관련 독성의 비율은 용량 수준 간에 차이가 없었다. 안전성 프로파일은 집단 및 용량 수준에서 유사한 것으로 관찰되었다. 임의 등급의 CRS 또는 NT를 경험한 전체 코호트의 25명(36%) 중 21명(30%)은 CRS를, 14명(20%)은 NT를 경험했다. 3등급 CRS를 가진 대상자는 없었고 1명(1%, 1/69)만이 4등급 CRS를 갖고 ICU 치료가 요구되었으며; 다른 29%(20/69)는 1-2등급 CRS를 가졌다. NT가 있는 대상체의 20% 중 6%(4/69)는 1-2등급이었고 14%(10/69)는 3-4등급이었으며, 2(3%)가 발작을 일으켰다. 5등급 CRS 또는 5등급 NT는 관찰되지 않았다. 뇌부종의 발생은 관찰되지 않았다. 모든 CRS 및 NT 현상는 분석 당시 진행 중인 1등급 떨림(tremor)의 한 사례를 제외하고 해결되었다. 첫 번째 CRS 및 NT 발병까지의 시간 중앙값은 각각 5일(범위 2, 12) 및 10일(범위 5, 23)이었다. 주입 후 처음 72시간 동안에는 NT가 관찰되지 않았으며 10%(7/69)만이 CRS(모두 1등급)를 갖는 것으로 관찰되었다. NT는 대상체의 >70%에서 CRS가 선행되었다. 전반적으로, 13명의 대상체(19%)가 항-사이토카인 요법(토실리주맙(tocilizumab) 단독 1(1%), 덱사메타손(dexamethasone) 단독 6(9%) 또는 둘 다 6(9%))과 함께 CRS 또는 NT에 대한 중재가 필요했고 단 한 명만 임의의 승압약(vasopressor) 지원이 필요했다. 토실리주맙과 덱사메타손의 중앙값은 각각 1과 6이었다. 중앙값 CRS 및 NT 기간은 각각 5일 및 11일이었다. 핵심 코호트(n=49)의 분석에서도 유사한 CRS 및 NT 비율이 나타났다.
이 평가에서 CRS 및/또는 NT의 낮은 발병률과 늦은 발병이 두 용량 수준에서 관찰되었으며, 열 또는 특정 기간 이상 지속되는 열의 첫 징후가 있을 때 입원하는 것과 같이 외래환자 주입의 가능성을 뒷받침했다. 5등급 CRS 또는 5등급 NT는 관찰되지 않았고 모든 중증 CRS 및 중증 NT는 해소되었다. 또한, 환자 3명 중 약 2명은 CRS 또는 NT가 없었고, 이는 외래환자 기준으로 세포를 투여할 수 있음을 뒷받침한다. 1.B.2의 평가 시점에 4명의 대상체가 외래환자 환경에서 치료를 받았다. 또한, DL1 또는 DL2를 투여받은 대상체에서 독성의 의미 있는 차이가 관찰되지 않았으며, 이는 독성 또는 안전성 문제의 위험 증가 없이 더 높은 반응률을 달성했음을 나타낸다.
C. 치료 후 반응 결과
CAR+ T 세포 투여 후 1, 3, 6, 7, 12, 18, 및 24개월에 종양 부하를 평가하는 것을 포함하여 반응에 대해 대상체를 모니터링하였다.
실시예 1.C.1
실시예 1.C.1 은 실시예 1.A.1 및 1.B.1 의 분석 특정 시점에 따른 결과를 설명한다.
반응률은 표 E4 에 나열되어 있다. 사전 치료를 많이 받았거나 예후가 좋지 않거나 재발성 또는 불응성 질환이 있는 대상체를 포함하는 대상체 코호트에서 높은 내구성 반응률이 관찰되었다. 핵심(n=44) 코호트의 모든 용량에 걸친 대상체의 경우, 관찰된 전체 반응률(ORR)은 86%이고 관찰된 완전 반응(CR) 비율은 59% 이었다. 핵심 코호트의 경우 3개월 후 전체 반응률(ORR)은 66% 이었다. 3개월 CR 비율은 핵심 코호트 중 50% 이었다. 핵심 코호트에서 3개월 ORR은 용량 수준 1에서 58%(11/19), 용량 수준 2에서 78% 이었다. 3개월 CR 비율은 용량 수준 1의 경우 42%(8/19), 용량 수준 2의 경우 56%(5/9) 이었으며, 이는 치료 결과에 대한 제안된 용량 반응 효과와 일치한다. 또한, 결과는 용량과 반응 지속성 사이의 관계와 일치했다.
Figure pct00033
전체 및 핵심 코호트에서 대상체의 다양한 하위 그룹 사이의 전체 반응률이 도 3a 및 3b 에 각각도시되어 있다. 저위험 DLBCL 하위 그룹에서 반응률은 일반적으로 높았다. 이중/삼중 히트 분자 하위유형, 일차 불응성 또는 화학불응성 DLBCL이 있거나 이전에 CR에 도달한 적이 없는 환자에서 50% 이상의 ORR이 3개월에 관찰되었다. 2명의 환자에서 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 해결이 관찰되었다.
평가의 특정 시점 이전에 6개월 이상 치료를 받은 대상체 중 3개월에 반응을 보였던 10명의 환자 중 9명(90%)이 6개월에 반응을 유지했다. 평가 시점에서 반응한 핵심 하위 집합의 대상체의 97%가 생존했으며 추적 관찰 기간 중앙값은 3.2개월이었다.
반응 기간 및 전체 생존에 대한 결과(최고의 전체 반응(비-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)에 의해 그룹화됨)는 대상체의 전체 및 핵심 코호트에 대해 도 4a 및 4b 에 각각 제시되어 있다. 나타나는 바와 같이, 반응자에서 연장된 생존이 관찰되었고, CR이 있는 대상체에서 반응의 지속성이 증가하였다. 3개월에 반응을 보인 모든 환자는 평가 당시 생존했지만, 낮은 수행 상태(ECOG 2)를 가진 대상 5/6는 사망하였다.
도 8은 전체 및 핵심 코호트 내의 개별 대상체에 대한 무진행 시간(개월)을 플로팅하는 그래프를 나타낸다. 각 막대는 단일 환자를 나타낸다. 음영은 최상의 전체 응답을 나타내고(각각의 경우 달리 표시되지 않는 한 1개월에 달성됨); 질감은 복용량을 나타낸다(단색 = 복용량 수준 1, 단일 복용량; 교차 해치, 복용량 수준 2, 단일 복용량; 수직 해치 = 복용량 수준 1, 2회 복용). 수평 화살표는 진행 중인 반응을 나타낸다. 특정 개별 대상체는 초기에(예를 들어, 1개월에) 안정 질환(stable disease, SD) 또는 부분 반응(Partial Response, PR)을 나타내는 것으로 평가되었고 나중에 PR(예를 들어, SD에서 PR로의 전환) 또는 CR을 달성한 것으로 관찰되었다. 상기의 경우, 언급된 바와 같이 개별 환자 막대의 음영은 최상의 전체 반응을 나타내고, 각 개별 주제 막대를 따라 점(성취된 반응에 대한 음영의 동일한 대응)은 대상체에서 각 SD, PR 및/또는 CR이 관찰된 시점을 나타낸다.
2명의 환자에서 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 해결이 관찰되었다. 한 대상체의 CAR+ 세포는 재발 후 생검 후 확장된 것으로 관찰되었다. 생검 후 확장을 보인 대상체는 화학불응성 형질전환된 DLBCL(BCL2 재배열 및 MYC 및 BCL6의 다중 카피를 갖는 종자 중심 하위유형)을 가졌다. 대상체는 DL-1에서 CAR+ T 세포를 투여받았고 말초혈액 내 CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ T 세포의 수를 특정 시점에서 측정하였으며, 도 6a에 나타내었다. 대상체는 이전에 용량 조절된 에토포시드(etoposide), 독소루비신(doxorubicin) 및 시클로포스파미드(cyclophosphamide)와 빈크리스틴(vincristine) 및 프레드니손과 리툭시맙(prednisone plus rituximab, DA-EPOCH-R) 및 8/8 HLA 일치 비혈연 기증자로부터 중간 강도 동종 줄기 세포 이식(intermediate-intensity allogeneic stem-cell transplantation)을 포함한 5가지 이전 치료법으로 치료를 받았고 이에 대해 난치였다. 동종 줄기 세포 이식 후 및 CAR+ T 세포를 받기 전에 대상체는 모든 혈통에서 100% 기증자 키메라 현상을 보였고 면역억제 요법을 중단했으며 이식편대숙주병(graft versus host disease, GVHD)이 없었다. CAR+ T 세포를 투여하기 전에, 대상체는 양전자 방출 단층 촬영 및 컴퓨터 단층 촬영(positron-emission tomography and computed tomography, PET-CT)(도 6b)에 의해 관찰되고 자기 공명 영상(magnetic resonance imaging, MRI)에 의해 확인된 귀주위 종괴 및 측두엽 병변이 있었다(도 6d).
항-CD19 CAR-T 세포 치료를 받은 후, 대상체는 신경독성 또는 CRS의 관찰된 징후 없이 PET-CT(도 6c) 및 뇌 MRI(도 6e)에 의해 나타난 바와 같이 주입 후 28일에 CR을 달성하였다. CAR-T 세포 주입 3개월 후, 이 대상체에서 귀주위 종괴(periauricular mass)의 재발이 관찰되었고(도 6F), 절개 생검을 수행하였다. 도 6a에 나타나는 바와 같이, 생검 후, 눈에 보이는 종양은 더 이상의 치료 없이 후퇴하였다. 약동학적 분석은 말초 혈액에서 CAR+ T 세포의 현저한 재팽창(관찰된 초기 확장보다 높은 수준으로, 주입 후 약 113일에 관찰된 최고 수준으로)을 나타내었으며, 이는 종양 퇴행과 일치했다. 이어서, 대상체는 생검 후 1개월에 PET-CT를 재병기화함으로써 확인된 바와 같이 두 번째 CR을 달성하고(도 6g), CAR-T 세포 주입 후 6개월에 CR을 유지하였다. 대상체에 대한 추가 평가는 CNS 반응이 지속되었고 대상체는 12개월에 CR 상태를 유지함을 보여주었다.
CAR+ T 세포의 재-팽창이 관찰된 생검을 받은 대상체에서 관찰된 결과는 CAR+ T 세포의 재-팽창 및 활성화가 기능적 또는 활성 CAR+ T 세포의 감소 또는 손실 및/또는 CAR-T 세포 요법에 대한 항종양 반응 후 재발 후에 생체 내에서 개시될 수 있다는 결론과 일치한다. 추가로, 초기 CAR+ T 세포 주입 후 늦은 생체 내 재-팽창 후, CAR+ T 세포는 항종양 활성을 재-실행할 수 있다. 이 결과는 CAR+ T 세포 재-팽창 및 활성화가 생체 내에서 촉발될 수 있고 CAR+ T 세포를 재활성화하는 방법이 그 효능을 더욱 증가시킬 수 있음을 뒷받침한다.
CNS 관련된 2명의 DLBCL 대상체에서 완전한 반응은 어떠한 등급의 신경독성도 발생하지 않은 것으로 관찰되었다. 이들 결과는 본원에 제공된 구현예의 CAR+ T 세포가 신경독성과 같은 독성의 위험을 증가시키지 않거나 실질적으로 증가시키지 않으면서 CNS에 쉽게 접근할 수 있고 CNS 종양을 감소시키거나 제거하는 효과기 기능을 발휘할 수 있다는 관찰과 일치한다. 다른 연구에서, 항-CD19 CAR T 세포로 모두 치료된 대상체 중에서, 신경독성의 발병률과 뇌에서 CNS 백혈병의 존재 사이에 명확한 상관관계가 관찰되지 않았다(상기 CAR T 세포 요법에 반응하는 것으로 관찰된 것). 따라서 CAR-T 요법으로 치료한 후 일부 문맥에서 신경독성이 발생할 수 있는 반면, 이러한 신경독성은 반드시 뇌에서의 표적 발현 또는 CNS에서 CAR T 세포의 활성의 결과가 아닐 수 있으며 CAR+ T 세포에 의한 "온-타겟" 독성의 결과가 아닐 수 있다. .
실시예 1.C.2
실시예 1.C.2 실시예 1.A.2 및 1.B.2 의 분석 특정 시점에 따른 결과를 설명한다.
실시예 1.C.2 의 특정 시점까지 전체 DLBCL 코호트에서 68명의 대상체가 반응에 대해 평가되었다. 전체 또는 객관적 반응(OR), 3개월 및 6개월 객관적 반응률은 각각 75%(51/68), 49%(27/55) 및 40%(14/35) 이었다. 완전 반응(CR) 비율, 3개월 CR 비율 및 6개월 CR 비율은 각각 56%(38/68), 40%(22/55) 및 37%(13/35) 이었다. 3개월에 개선된 반응률을 향한 경향은 DL1과 비교하여 DL2에서 치료된 대상체에서 관찰되었다: ORR 은 63% (12/19; 95% CI 38, 84) vs 40% (12/30; 95% CI 23, 59) 이고 p=0.148, 및 CR 은 58% (11/19; 95% CI 34, 80) vs 27% (8/30; 95% CI: 12, 46) 이고 p=0.0385. 이중/삼중 림프종 대상체 16명 중 ORR은 81%, 3개월 CR율은 60% 이었다.
핵심 코호트에서(실시예 1.C.2의 특정 시점에 대해 n=49), OR, 3개월 및 6개월 OR 비율은 84%(41/49), 65%(26/40) 및 57%(13/23) 이었다. CR 비율, 3개월 CR 비율 및 6개월 CR 비율은 각각 61%(30/49), 53%(21/40) 및 52%(12/23) 이었다. 더 높은 용량에서 3개월 동안 개선된 내구성 ORR 및 CR에서 유사한 경향이 관찰되었다. 구체적으로, DL2를 투여한 핵심 코호트 환자의 경우 3개월 ORR은 80%(12/15; 95% CI 52, 96)이고 3개월 CR 은 73%(11/15, 95% CI 45, 92) 이며, 각각 P= 0.159 및 p=0.0409 이었다. DL2를 받고 3개월 추적 관찰(n=15)한 핵심 코호트의 대상체 중 3개월 ORR은 80%, 3개월 CR은 73% 이었다.
1.C.2의 이 특정 시점에서 전체 코호트 및 핵심 코호트의 DOR 중앙값은 각각 5.0개월 및 9.2개월이었다. CR의 중앙값은 전체 코호트에서 9.2개월이었다. CR의 중앙값 기간은 핵심 코호트에서 도달하지 않았다. 전체 생존 기간(OS) 중앙값은 전체 코호트에서 13.7개월이었고 핵심 코호트에서는 도달하지 않았다. 6개월 OS는 전체 코호트에서 75% 이었으며 중앙값은 5.8개월이었다. 6개월 OS는 핵심 코호트에서 88%였으며 중앙값은 5.6개월 이었다.
D. 혈액 내 CAR + T 세포 평가
실시예 1.A.1, 1.B.1 및 1.C.1에 기술된 특정 시점의 데이터를 기반으로, 약물동력학적 분석을 수행하여 치료 후 다양한 시점에서 말초혈액의 CAR+ T 세포 수를 평가했다. DLBCL 코호트에서 실시예 1.A.1의 특정 시점에서 평가된 55명의 대상체와 외투 세포 림프종(MCL) 코호트에서 4명의 대상체(동일한 특정 시점에서 평가됨)의 결과를 하기 실시예 2에 기재된 바와 같이 분석하였다. 약동학적(PK) 측정은 CAR 구조에서 발현된 마커를 검출하기 위한 검증된 유세포 분석 및 CAR 구조의 통합을 검출하기 위한 정량적 PCR 기반 분석을 사용하여 수행되었다. B 세포 무형성은 항-CD19 항체를 사용한 유세포 분석에 의해 평가되었다. 도 5a에 나타나는 바와 같이, 로그 척도로 플롯팅된 세포/μL 혈액(중앙값 ± 사분위수)의 수로 측정된 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포는 두 투여 용량 수준에서 평가 과정 전반에 걸쳐 검출되었다. DL1에 비해 DL2를 투여받은 대상체는 말초혈액에서 CD3+/CAR+, CD4+/CAR+ 및 CD8+/CAR+ T 세포 하위 집합에 대해 더 높은 중앙값 Cmax 및 중앙값 AUC0-28을 가졌다(각각 AUC0-28: DL2 vs. DL1 은 CD3+, CD4+, 및 CD8+ 에 대하여 각각 1836 vs. 461, 350 vs. 182, 및 1628 vs. 114; CD8+ 에 대하여 p < 0.05; Cmax: DL2 vs. DL1 은 각각 99.8 vs. 27.9, 15.1 vs. 5.2, 및 73.1 vs. 5.5 세포/μL). 최대 CD3+ CAR+ T 세포 팽창까지의 시간 중앙값은 15일(범위 8-29)이었고 용량 수준 간에 차이가 없었다. CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포는 상대적으로 유사한 수준에서 골수에 위치한다.
증가된 중앙 곡선 아래 면적(AUC)(시간 경과에 따른 혈액 내 CD8+ CAR+ T 세포 수)은 관찰된 독성 증가 없이 더 낮은 용량 수준과 비교하여 더 높은 용량 수준이 투여된 대상체에서 관찰되었다. 무반응자(PD)보다 반응자(CR/PR)에서 더 높은 피크 CD8+/CAR+ T 세포 노출이 관찰되었다. 3개월 및 6개월을 포함하여 평가 시간 동안 세포의 지속성은 질병이 진행된 대상체에서도 관찰되었다(도 5b). CD8+ CAR+ T 세포의 중앙값 Cmax 및 중앙값 AUC0-28은 반응 대상체에서 더 높았고 3개월째 지속 반응으로 더 높았다(3개월 CR/PR vs. 3개월 PD 에서, CD8+ Cmax 중앙값 = 20.8 vs. 5.5; CD8+ AUC0-28 중앙값 = 235 vs. 55). CAR T 세포 지속성에 대해 평가된 대상체 중 29명의 대상체 중 90% 및 93%가 3개월째에 각각 검출 가능한 CD8+ 및 CD4+ CAR+ T 세포를 가졌고; 19명의 대상체 중 63%와 58%가 6개월에 각각 검출 가능한 CD8+ 및 CD4+ CAR+ T 세포를 가졌다. 3개월과 6개월에 지속적인 반응 또는 재발이 있는 대상체 사이에 CAR+ T 세포의 지속성에 통계적으로 유의한 차이가 관찰되지 않았다. CAR+ T 세포는 PK가 있는 11명의 대상체 중 89%에서 재발 시점에 검출 가능했지만 B 세포 무형성(<1 세포/㎕)은 거의 모든 대상체에서 3개월째에 97%(34/35), 6개월째에 100% (24/24)를 보여주었다.
DL1과 비교하여 DL2에서 더 높은 Cmax 및 AUC0-28은 증가된 CRS 또는 NT와 관련이 있는 것으로 관찰되지 않았다. 임의의 NT 또는 > 등급 2 CRS의 경우, CD4+/CAR+ 및 CD8+/CAR+ T 세포의 중앙값 AUC는 DL2에 대한 중앙값 AUC보다 각각 5 내지 10배 및 3 내지 5배 더 높았다. 염증성 사이토카인의 더 높은 질병 부담 및 기준선 수준은 CAR+ T 세포의 더 높은 피크 수준, 더 높은 사이토카인 피크 수준 및 더 높은 CRS 및 NT 발병률과 관련이 있는 것으로 관찰되었다. 결과는 DL2에서 더 높은 Cmax 및 중앙값 AUC0-28이 CRS 또는 NT를 증가시키지 않는다는 결론과 일치했다.
결과는 치료가 열악한 반응을 보인 대상체에서도 조작된 세포의 장기간 노출 및 지속을 초래한다는 결론과 일치했다. 일부 구현예에서, 예를 들어 면역 체크포인트 조절자 또는 다른 면역 조절제의 투여, 예를 들어 재발 또는 질병 진행 후, 예를 들어, 말초 혈액의 세포의 수준으로 측정된 조작된 세포가 대상체에서 지속될 때 병용 접근은 사용된다. 일부 측면에서, 장기간 동안 지속된 세포는 다른 제제 또는 치료의 투여 후 재-팽창되거나 활성화되고/되거나 항종양 기능을 나타낸다. 더 높은 중앙값 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포 수는 일반적으로 신경독성이 발생한 대상체의 혈액에서 시간이 지남에 따라 관찰되었다(도 5c). 결과는 CAR+ T 세포가 독성 증가 없이 더 높은 용량 수준에서 증가하는 확장 및 지속성, 3개월째 반응 지속성을 나타냈다는 것을 나타내었다. 결과는 혈중 CAR+ T 세포 및 사이토카인의 높은 피크 수준이 NT 및 CRS와 연관될 수 있고 기준선 대상체 인자에 의해 영향을 받을 수 있다는 제안과 일치하는 것으로 관찰되었다. CAR+ T 세포가 재발 시점에 존재하는 것으로 관찰되었으며, 이는 병용 또는 재치료 접근법이 특정 이점을 제공할 수 있음을 나타낸다.
E. 혈액 피분석물 및 신경독성, CRS 및 반응
사이토카인을 포함하는 다양한 전처리 혈액 피분석물을 CAR+ T 세포의 투여 전에 대상체의 혈청에서 측정하였다(실시예 1.A.1의 특정 시점에서 평가된 대상체). 사이토카인은 다중 사이토카인 분석을 사용하여 측정되었다. 신경 독성 발병 위험과의 잠재적 상관 관계는 단변량 비모수 테스트(univariate nonparametric tests )를 기반으로한 통계 분석을 사용하여 평가되었다.
도 7 은 CAR+ T 세포 요법 후 신경독성이 발생하지 않은 대상체 대 신경독성을 발생시킨 대상체에서 평가된 피분석물의 중간 수준을 단위(LDH, U/L; 페리틴(ferritin), ng/mL; CRP, mg/L; 사이토카인, pg/mL)로 나타낸다. LDH, 페리틴(ferritin), CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한 특정 혈액 피분석물의 수준은 발달 신경독성의 위험 수준과 관련 있는 것으로 관찰되었다(Wilcoxon p 값 <0.05, 다중도 조정 없음). 특히, 결과는, 일부 구현예에서 질병 부담으로 간주하여, LDH의 치료 전 수준이 특정 대상체의 잠재적인 신경독성 위험 평가 및/또는 위험-적응 투여 또는 특정 치료의 조정에 유용할 수 있다는 결론과 일치했다. 또한, CAR-T 세포 조성물의 투여 전에 측정된 종양 부담은 신경독성 발병 위험과 상관관계가 있었다(Spearman p 값 <0.05).
일부 측면에서, LDH 수준은 단독으로 및/또는 또 다른 치료 전 매개변수, 예를 들어 질병 부담에 대한 다른 측정 또는 지표, 예를 들어 체적 종양 측정, 예를 들어 질병 부담의 SPD(sum of product dimensions) 또는 다른 CT-기반 또는 MRI-기반 체적 측정와 함께 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 질병 부담을 나타내는 하나 이상의 매개변수가 평가되고, 일부 상황에서는 T 세포 요법 후 신경독성이 발생할 위험의 존재, 부재 또는 위험 정도를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 매개변수는 LDH 및/또는 부피 종양 측정을 포함한다.
추가적인 분석에서, 하기 실시예 2에 기술된 실시예 1.A.1의 특정 시점에서 DLBCL 코호트의 55명의 대상체 및 외투 세포 림프종(MCL)의 4명의 대상체는 안전성 평가와의 상관관계 분석에 포함되었다. 안전성에 대해 평가된 59명의 대상체에서 CRS는 32%(30% 1-2등급, 0% 3등급, 2% 4등급)에서 관찰되었고; NT는 20%(5% 1-2등급, 10% 3등급, 5% 4등급)에서 관찰되었다. 용량 수준은 CRS 또는 NT와 상관관계가 없었다(각각 p=0.565 및 p=1.00). 임의 등급의 CRS 및 NT와 상관 관계가 있는 대상체 인자는 영상 결과를 기반으로 하는 직경의 곱(SPD)의 합으로 측정할 때 수행 상태가 더 낮고(예를 들어, ECOG 상태 2)(p=0.03) 질병 부담이 더 높았다(p <0.05). 임의 등급 NT의 발생과 관련이 있는 것으로 관찰된 전-CAR+ T 세포 주입 임상 실험실 매개변수 및 사이토카인 측정에는 더 높은 혈청 LDH, 페리틴(ferritin) 및 CRP 및 더 높은 혈장 IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β 이 포함되었다(각각 p<0.05). IL-8, IL-10 및 CXCL10의 더 높은 전-CAR+ T 세포 주입 혈장 수준은 또한 등급 3-4 NT와 관련이 있었다(각각에 대해 p<0.05).
반응에 대해 평가된 DLBCL 코호트의 54명의 대상체 중에서 CLL 또는 MZL에서 변환된 더 높은 ECOG 점수 및 DLBCL은 3개월째에 더 낮은 내구성 반응과 상관관계가 있었다(둘 모두에 대해 p=0.02). 최상의 ORR과 관련된 전-CAR+ T 세포 주입 매개변수에는 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF 및 IL-10의 더 낮은 값이 포함되었고 3개월 후 지속 반응과 관련된 매개변수에는 더 낮은 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1βTNF-α 및 더 높은 전-CAR+ T 주입 헤모글로빈 및 알부민이 포함되었다(각각에 대해 p<0.05).
일부 경우에, 투여를 위한 성분채집 샘플 및 CAR+ T 세포 조성이 평가되었고 임상 결과와 상관관계가 있었다. 결과는 T 세포 기억 하위 집합과 T 세포 기능이 특정 임상 결과와 상관관계가 있을 수 있음을 보여주었다.
결과는 염증 상태 및 치료 전 높은 종양 부담을 포함한 특정 기준 환자 특성이 CAR-발현 T 세포 투여 후 독성 증가 위험이 있는 환자를 식별하는데 유용할 수 있음을 보여주었다. 낮은 종양 부담 및 낮은 염증 상태는 개선된 독성 프로파일 및 더 나은 반응 지속성과 관련이 있는 것으로 관찰되었다. 결과는 치료 과정에서 더 일찍 대상체를 치료하고/하거나 잠재적 조기 개입을 위해 대상체를 위험 계층화하기 위해 임상 및 실험실 바이오마커 패널을 평가하는 것이 독성 위험을 완화하고 반응의 지속성을 개선할 수 있음을 뒷받침한다.
외투 세포 림프종(MCL)이 있는 대상체에 대한 항-CD19 CAR-발현 세포 투여
실시예 1에 기재된 바와 같이 생성된, CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4 및 CD8 T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물을 ≥ 1 이전 치료법 후 실패한(재발성/불응성, R/R) 외투 세포 림프종(MCL)을 갖는 인간 대상체에게 투여하였다. 적격 환자는 최소 1개의 이전 치료법 라인 후에 R/R 질환이 있는 MCL(사이클린 D1 발현 또는 t[11;14]의 증거)을 확인했다. 이전의 동종 줄기 세포 이식(SCT), 2차 중추 신경계(CNS) 관련을 기반으로 제외된 대상은 없었으며 성분채집에 필요한 최소 절대 림프구 수(ALC)는 없었다. 대상체는 또한 ECOG 점수 2를 기반으로 제외되지 않았으며, 이는 나중에 ECOG 점수가 0-1인 대상체도 포함하도록 수정되었다. T 세포 조성물의 제조 동안 가교 화학요법(Bridging chemotherapy)이 허용되었다.
실시예 2.A
실시예 1에 기재된 바와 같이 생성된, CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물을 다음 단계에서 최소 1개의 이전 치료법 라인이 실패한 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 4명의 인간 대상체에게 투여하였다. 동결보존된 세포 조성물을 정맥내 투여 전에 해동시켰다. 치료 T 세포 조성물은 약 1:1의 표적 비율로 투여된 동일한 대상체로부터 유래된 CAR+ 조작된 T 세포의 제형화된 CD4+ 및 CD8+ 집단과 함께 정의된 조성물 세포 생성물로서 투여되었다. 대상체에게 5×107 CAR-발현 T 세포를 함유하는 용량 수준 1(DL1)의 단일 용량으로 CAR-발현 T 세포의 용량(CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 분할 또는 개별 용량)을 투여하였다. CAR+ T 세포 주입 3일 전부터 대상체들은 플루다라빈(fludarabine)(독감, 30mg/m2) 및 사이클로포스파미드（cyclophosphamide）(Cy, 300mg/m2)로 림프구 고갈 화학요법을 받았다.
대상체들은 실시예　1에 기술된 바와 같이 반응 및 독성에 대해 모니터링되었다. 어떤 대상체에서도 CRS 또는 신경독성이 관찰되지 않았다. 치료를 받은 4명의 대상체　중 2명의 대상체는 PR(내구성이 아님)을 달성했고 2명의 환자는 진행성 질환을 가졌다.
실시예 2.B
적어도 1개의 이전 치료법에 실패한 외투 세포 림프종(MCL)을 가진 9명의 인간 대상체에 대해 실시예　2.A에 기술된 임상 연구의 후속 시점에서 안전성 및 효능을 평가하였다. 평균 나이는 66세(범위 58~78세)였으며 이 중 7명이 남성이었다. 조직학에는 배반포유사체（blastoid）(n=3) 및 다형성（pleiomorphic）(n=1) 변이가 포함되었다. 8명의 대상체는 Ki67 >30%(범위 40%-80%)를 기록했고 1명의 대상체는 TP53 돌연변이를 가졌다. 이　특정 시점에서 대상체는 이전에 조혈모세포 이식을 받은 3명의 대상체를 포함하여 선행 요법의 중앙값 5(범위 3-7)를 받았다. 9명의 대상체 모두 이전에 이브루티닙（ibrutinib）으로 치료를 받았으며, 그 중 4명은 이브루티닙에서 진행성 질환에 가장 잘 반응했다. 9명 중 6명(67%)이 가교 화학요법을 받았다．　
실시예 2.A에 기술된 바와 같이 림프구 고갈 화학요법(LDC)을 받은 후, 대상체들은 실시예 1.A 에 기재된 바와 같이 일반적으로 5×107 CAR-발현 T 세포의 단일 용량(DL1, 약 2.5×107 CD4+CAR+ T 세포 및 2.5×107 CD8+ CAR+ T 세포, 6명의 대상체)으로, 또는 1×108개의 CAR-발현 T 세포(DL2, 약 5×107 CD4+CAR+ T 세포 및 5×107 CD8+ CAR+ T 세포, 3명의 대상체)의 단일 용량의 CAR-발현 T 세포의 용량(CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 용량을 별도로 투여함으로써)으로 투여받았다.
9명의 대상체 중 4명(44%)이 심각한 치료-응급 이상반응(TEAE)을 겪었고, 9명의 대상체 중 5명(56%)이 등급 (G) 3/4 TEAE 를 가졌으며, 주로 빈혈(anemia), 호중구감소증(neutropenia) 및 저인산혈증(hypophosphatemia) (각각 22%) 이었고, 9명 중 3명(33%)은 등급 1(G1) 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)을 가졌다. CRS 발병까지의 중앙값 시간은 6일(범위 2-7)이었고 해결까지의 중앙 시간은 6일(범위 2-6)이었다. 1명의 대상체가 토실리주맙(tocilizumab)과 코르티코스테로이드(corticosteroids)를 투여받았다. 신경학적 사건은 없었다. DL1 코호트에서 4명의 대상체가 사망했다(3명은 질병 진행으로, 1명은 항-CD19 CAR-발현 T 세포 용량 투여 후 새로운 항암 요법을 받은 후).
전체 반응률은 78%(9명 중 7명, DL1 코호트에서 6명 중 4명 포함(중앙값 추적 12.4개월[95% CI: 9.2-12.4]) 및 DL2 코호트에서 3명 모두 (중앙값 추적 1.4개월[95% CI: 1.0-1.4])이었다. DL1 코호트의 2명의 대상체는 마지막 추적(각각 281일 및 378일)까지 지속적인 CR을 유지했다.
CAR+ T 세포 확장이 정점에 도달하는데 걸리는 시간의 중앙값은 DL1의 경우 9.5일(범위 9-10), DL2의 경우 17.5일(10-27)이었다.
종합적으로, 이들 데이터는 R/R MCL을 갖는 대상체에 대한 항-CD19 CAR-T 세포 치료적 T 세포 조성물의 투여가 허용 가능한 독성 및 임상 반응을 초래하였음을 입증한다.
실시예 2.C
안전성 및 반응 결과는 이전에 1개 이상의 치료법에 실패한 R/R 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 17명의 인간 대상체에 대해 실시예 2.A에 기재된 임상 연구의 후속 특정 시점에서 평가되었다. 대상체들은 실시예 1에 기재된 바와 같이 반응 및 안전성을 위해 Lugano 기준에 따른 효능 평가, 및 Lee 등 (2014) 기준에 의해 CRS 및 NE 의 등급, 및 CTCAE, 버전 4.03 에 의해 각각 모니터링 되었다. 대상체들은 항-CD19 CAR-T 세포 치료 T 세포 조성물 투여 후 용량 제한 독성(DLT)에 대해 28일 동안, 그리고 치료-응급 이상반응(TEAE)에 대해 90일 동안 모니터링 되었다. Kaplan-Meier 방법을 사용하여 반응 기간(DOR), 전체 생존(OR) 및 무진행 생존(PFS)을 결정했다.
치료할 개별 대상체로부터의 백혈구 성분채집법 샘플 유래 CD4+ 및 CD8+ 세포의 면역친화성 기반(예를 들어, 면역자기 선택) 농축에 의해 25명의 대상체로부터 치료 T 세포 조성물을 제조하였다. 분리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 개별적으로 활성화하고 항-CD19 CAR을 암호화하는 바이러스 벡터(예를 들어, 렌티바이러스 벡터)로 독립적으로 형질도입한 다음, 소량의 조작된 세포 집단의 개별 확장 및 동결보존을 수행했다. 치료적 T 세포 조성물을 투여하기 전, 질병 진행 및 사망(n=3)으로 인해 7명의 대상체에 대한 치료가 중단되었고, 이차 악성종양으로 인해 포함 기준을 더 이상 충족하지 못하거나(n=1), 중간 화학요법 동안 CR에 도달했다(n =3).
실시예 2.A에 기재된 바와 같이 림프구 고갈 화학요법(LDC)을 받은 후, 나머지 대상체들은 실시예 1.A 에 기재된 바와 같이 일반적으로 5×107 CAR-발현 T 세포의 단일 용량(DL1, 약 2.5×107 CD4+CAR+ T 세포 및 2.5×107 CD8+ CAR+ T 세포, 6명의 대상체)으로, 또는 1×108개의 CAR-발현 T 세포(DL2, 약 5×107 CD4+CAR+ T 세포 및 5×107 CD8+ CAR+ T 세포, 3명의 대상체)의 단일 용량의 CAR-발현 T 세포의 용량(CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 용량을 별도로 투여함으로써)으로 투여받았다. 용량 수준 1(DL1)의 추가 대상 1명은 CD8+ CAR+ 세포 생존력이 감소된 부적합 CAR-발현 T 세포 제품을 받았고 높은 종양 증식 지수(Ki67 90%)를 나타냈고; 이 대상체는 안전성 및 효능 분석에 포함되지 않았다.
이 특정 시점에서 처리된 대상체의 인구 통계 및 대상체 특성은 표 E4.1에 기재되어 있다. 기준선에서 대부분의 대상체는 이브루티닙(ibrutinib)을 포함하여 여러 라인의 이전 치료법을 받았고, 대다수의 대상체는 배반구/다형 변이체, TP53 돌연변이 또는 Ki67 >30%를 포함한 나쁜 위험 인자를 가지고 있었다. 17명의 대상체 중 10명(59%)이 가교 항암 요법을 받았다.
Figure pct00034
A. 안전성
이 특정 시점에서 이 대상체 집단의 유해 사례는 표 E4.2 에 기재되어 있다. 가장 흔한 등급 3 또는 등급 4 치료-응급 이상반응(TEAE)은 혈구감소증(cytopenia)이었다. 한 대상체는 CAR-발현 T 세포 투여 후 31일에 새로운 항암 요법(리툭시맙(rituximab) 및 레날리도마이드(lenalidomide))을 받은 후 38일에 폐포 손상의 등급 5 TEAE를 가졌고 CAR-발현 T 세포 용량과 관련이 없는 것으로 간주되었다. 등급 5 종양 용해 증후군의 한 가지 용량 제한 독성(DLT)은 DL2에서 CAR-발현 T 세포의 투여를 받은 대상체에서 10-12일째에 발생했다. 이 대상체는 높은 종양 부담, 210cm2의 가장 긴 수직 치수의 곱, 흉수, 골수 침투 및 위 침범을 보였다. 대상체는 삽관을 거부했고 나중에 사망했다.
Figure pct00035
표 E4.3에서 나타나는 바와 같이, DL2 로 치료받은 1명의 대상체에서 심각한 CRS(등급 4)가 관찰되었다. 2명의 대상체에서 심각한 NE를 포함한 NE는 DL2 로 치료된 대상에서 발생했다. 부적합 제품을 받은 대상체는 CRS 또는 NE를 경험하지 않았다.
Figure pct00036
A. 반응
이 특정 시점에서 이 집단의 대상체에 대한 전체 반응률은 표 E4.4에 기재되어 있다. 이 연구에서 평가된 마지막 특정 시점에서 7명의 대상체가 계속 CR을 가졌다: DL1에서 365일까지 대상체 1명, DL1에서 545일까지 대상체 1명, DL2에서 180일까지 2명의 대상체 및 90일까지 3명의 대상체. 반응 완료까지의 중앙 시간(CR)은 1개월이었고, 반응 기간 중앙값(DOR)은 임상 연구의 이 특정 시점에서 아직 도달하지 않았다(관찰 범위 1.0-16.2+). DL1에서 대상체는 마지막 평가 시점(545일)까지 반응을 유지했고 DL2 대상체는 180일까지 반응을 유지했다. 17명의 대상체 중 5명은 치료에 반응하지 않았다: 이차 중추 신경계(CNS) 개입이 있는 1명의 대상체는 반응하지 않았다(29일째에 안정적 질병). 2명의 대상체는 재발 시 중추신경계(CNS) 질환을 가졌다: 1명의 대상체는 90일에 CNS와 전신 질환을 모두 가지고 있었고 1명의 대상체는 180일에 고립된 CNS 질환을 가졌다.
Figure pct00037
용량 수준에 따른 CAR T 세포 확장을 도 39 에 나타내었다. 마지막 PK 샘플링 시간이 29일 이전이었기 때문에 2명의 대상체의 약동학(PK) 매개변수가 계산되지 않았다. 결과는 DL2에서 증가된 세포 확장을 보여준다. 이론에 얽매이지 않고 DL2에서 이러한 증가된 확장은 이 용량 수준에서 관찰된 증가된 CRS 및 NE와 연관될 수 있으며; 그러나 이 관찰은 소수의 대상체를 기반으로 한다.
종합적으로, 이들 데이터는 R/R MCL을 갖는 대상체에 항-CD19 CAR-T 세포 치료 T 세포 조성물의 투여가 등급 3 또는 4 CRS 및 NE의 낮은 발병률을 포함하는 허용 가능한 독성을 초래했다는 관찰과 일치한다. CRS 및 NE의 발생률은 유사한 항-CD19 CAR T 세포 조성물로 치료된 공격적인 B-세포 NHL이 있는 대상체(n=102)에서 실시예 6에 기술된 연구에서 관찰된 것과 유사했으며, 여기서 1% 개발된 등급 3/4 CRS 및 13% 등급 3/4 NE(표 E19 참조) 이었다. 결과는 또한 이 연구의 특정 시점에서 71%의 최상의 ORR 및 53%의 CR 비율을 포함하여 R/R MCL이 있는 대상에서 유리한 반응률을 보여주었다. 이 특정 시점에서 7명의 대상체(41%)가 CR이 진행 중이고 CR의 중앙값에 아직 도달하지 않았다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL) 환자의 반응, 안전성, 약동학, 약력학 및 혈액 피분석물의 추가 평가
반응 결과, 안전성 결과, 약동학 및 약력학 매개변수, 및 혈액 피분석물은 상기 실시예 1에 기재된 임상 연구의 후속 시점에서 환자에서 평가되었다.
A. 대상체 및 치료
이 실시예에 제시된 이 특정 시점에서의 분석은 전체 DLBCL 코호트에서 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여받은 총 91명의 대상체에 대한 평가(88명(CORE 코호트에서 65명)은 반응에 대해 평가하고 91명(CORE 코호트에서 67명)은 안전성에 대해 평가했다)를 기반으로 한다. 전체 코호트는 DLBCL, NOS 드 노보 및 임의의 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 ECOG 0-2 를 포함하고; 분석을 위한 핵심 코호트에는 DLBCL, NOS 및 여포성 림프종(tFL) 또는 고급 B-세포 림프종에서 변형되고 ECOG PS(Eastern Cooperative Oncology Group performance status) 0 또는 1 인 대상체를 포함했다. 핵심 코호트에는 이중/삼중 히트 발현자, 1차 불응성 질환, 2개 이상의 치료법에 불응성인 경우와 같이 3-6개월의 짧은 전체 생존 기간(OS)을 예측할 수 있는 최소 1개의 저위험 질병 특징이 있었지만 CR 이 달성되지 않았고, 또는 자가 줄기 세포 이식(ASCT)을 받은 적이 없었다. 1차 치료 후 MCL이 있는 대상체도 연구에 포함되었다. 일부 구현예에서 달리 명시되지 않은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)(NOS; 드 노보 및 여포성 림프종 tFL로부터 형질전환됨) 또는 DLBCL 조직학을 갖고 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있는 고급 B 세포 림프종을 갖는 대상체의 코호트, 및 ECOG 점수가 2인 대상체 또는 이전에 조혈모세포 이식(HSCT)을 받은 대상체를 제외하고, 본원에 제공하는 CAR-T 조성물이 투여된다. 일부 구현예에서, 핵심 코호트의 대상체에는 단일 용량의 DL2(1×108 총 CAR-발현 T 세포)로 항-CD19 CAR+ T 세포가 투여된다.
이 특정 시점에서 총 140명의 대상체가 백혈구 성분 채집술을 받았으며, 이 중 10명은 제조된 조성물을 기다리고, 2명은 제조 전에 철회되었으며, 2명은 조성물을 사용할 수 없었다. 제품을 구할 수 있었던 또 다른 18명의 대상체 중 4명은 치료를 기다리고 있었고 4명은 퇴원했으며 10명은 진행성 질병이 발생했거나 사망했다. 총 108명의 대상체에게 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여되었으며, 그 중 6명은 평가할 수 없었고 11명은 부적합한 항-CD19 CAR-발현 세포(특정 사양을 충족하지는 않지만 투여에 안전한 것으로 간주되는 조성물)를 받았다. 대상체는 DL1(n=45), DL1(n=6) 또는 DL2(n=40)의 이중 용량을 받았습니다. 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 6명의 대상체는 DL1에서 CAR+ 세포를 투여받았고(5명은 적합 제품으로, 1명은 부적합 제품으로 치료), 5명은 28일의 추적 관찰을 완료했다. 한 명의 MCL 대상체는 CRS가 발생했으며 아무도 토실리주맙(tocilizumab)이나 덱사메타손(dexamethasone)을 투여받지 않았다. 제품은 DLBCL 코호트에서 성분채집된 대상체(126/128)의 98%가 사용할 수 있었다.
이 특정 시점의 대상체는 외래환자 환경에서 치료를 받은 5명의 환자를 포함했다(DL1로 치료한 4명의 대상체 포함, DL2로 치료한 1명, 핵심 코호트에 포함된 4명 포함). 외래환자 환경에서 치료를 받은 대상체의 경우 나이 중앙값은 57세(범위 26-61세), 3명은 DLBCL, NOS, 1명은 tFL, 1명은 PMBCL 이었다. 5명의 대상체 모두 ECOG 점수가 0 또는 1이었다. 외래환자 결과에 대한 데이터에는 이 실시예에서 분석을 위한 시점 이후 외래환자 환경에서 치료를 받고 데이터를 사용할 수 있게된 3명의 추가 대상체(총 8명의 대상체)에 대한 결과가 포함되었다.
특정 시점에서 전체 및 핵심 코호트 대상체의 인구 통계 및 기준선 특성은 표 E5에 기재되어 있다.
Figure pct00038
B. 치료 후 안전성 및 반응 결과
표 E6 에 기재된 바와 같이 객관적 반응률(ORR)은 74% 이었으며 완전한 반응(CR)을 보인 대상체는 52% 이었다. 임의 등급의 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 발생률은 35%였으며 1%는 중증 CRS 이었다. 임의 등급의 신경독성(NT)의 발생률은 19% 이었으며, 1%는 중증 NT 이었다.
Figure pct00039
a 유사한 결과를 보이는 DL1D(용량 수준 1, 2회 용량 일정)로 치료받은 4명의 환자. b PD, 사망 또는 28일 재병기 스캔 사건이 있는 환자를 포함한다. 한 환자는 사용 가능한 재병기 스캔이 없었다.
c 데이터 스냅샷 날짜 28일 전에 적합성 CAR-발현 세포 제품의 최소 1회 용량을 받았거나 사망한 모든 대상체를 포함한다.
표 E7 에 기재되어 있는 바와 같이, 전체 DLBCL 집단에서 높은 반응률과 낮은 중증 독성이 관찰되었다.
Figure pct00040
a PD, 사망 또는 28일 재병기 스캔 사건이 있는 환자를 포함한다. 한 환자는 사용 가능한 재병기 스캔이 없었다. b 데이터 스냅샷 날짜 28일 전에 적합 CAR+ 발현 세포를 1회 이상 투여받았거나 사망한 모든 대상체를 포함한다.
표 E8 에 기재되어 있는 바와 같이, 높은 반응률 및 용량 의존적 반응이 대상체의 핵심 코호트에서 관찰되었다.
Figure pct00041
a 유사한 결과를 보이는 DL1D 로 치료받은 환자 4명 (핵심).b PD, 사망 또는 28일 재병기 스캔 사건이 있는 환자를 포함한다. 한 환자는 사용 가능한 재병기 스캔이 없었다.
c 분모는 데이터 스냅샷 날짜 이전에 3개월 이상 전에 CAR+ 세포를 투여받았고 3개월째에 효능 평가 또는 PD 또는 사망에 대한 사전 평가를 받은 환자의 수이다.
d 분모는 데이터 스냅샷 날짜 이전에 6개월 이상 전에 CAR+ 세포를 투여받고 6개월째에 효능 평가 또는 PD 또는 사망에 대한 사전 평가를 받은 환자의 수이다.
핵심 코호트에서 모든 용량 수준으로 치료된 모든 DLBCL 환자를 포함하는, 저위험 DLBCL 하위그룹에 있는 대상체의 다양한 하위그룹 사이의 3개월 객관적 반응률(ORR)은 도 22에 도시되어 있다. 결과는 저위험 DLBCL 하위 그룹에서 높은 내구성 ORR을 보여주었다.
반응 기간(DOR) 및 전체 생존(최고의 전체 반응(비-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)에 의해 그룹화됨)에 대한 결과는 대상체의 전체 코호트 및 코어 코호트 코호트에 대해 도 23a-23d 에 도시되어 있다. 결과는 또한 3개월에 CR이 있는 대상체의 80%(16/20)가 6개월에 CR에 머무르고 6개월에 반응(CR 또는 PR)이 있는 대상체의 92%(11/12)가 계속해서 장기적으로 반응한다.
도 24는 이 특정 시점에서 실험실 이상 및 치료-응급 이상반응(TEAE)을 경험한 것으로 관찰된 대상체의 백분율을 도시한다(최소 28일의 추적 관찰을 통해 DL1에서 일치하는 제품으로 치료된 MCL 환자 5명에 대한 데이터는 포함). 도 24에 도시된 TEAE에 추가적으로, ≥5% 환자에서 등급 3-4 에서 다음과 같은 사건 용어가 관찰되었다: 뇌병증(encephalopathy)(8%), 범혈구감소증(Pancytopenia)(5%) 및 열성 호중구감소증(Febrile neutropenia)(7%). 8명의 환자(9%)는 홍조, 두통, 발열(fever), 발열(pyrexia), 오한, 경직, 구토, 발진, 두드러기, 가려움증, 저혈압, 천명, 기관지경련, 숨가쁨, 메스꺼움, 구토, 요통, 기침 및 주입 관련 반응을 포함하여 CAR+세포 투여와 관련된 투여 당일 AE로 정의된 주입 독성을 가졌다. 오한(2), 발열(5), 홍조(1), 두통(1), 저혈압(1), 주입 관련 반응(1), 발진(1), 소양증(1) 및 구토(1)가 포함된 사건은 6개의 등급 1 사건, 1개의 등급 2(오한) 및 1개의 등급 3(저혈압) 사건이 있다. 핵심 코호트의 TEAE는 전체 코호트의 TEAE와 크게 다르지 않았다. 외래환자 설정 그룹에서 치료된 대상체에서 가장 흔한 관련 TEAE는 CRS, 저혈압, 구토, 빈혈 및 호흡곤란 이었다.
표 E9는 DL1S 및 DL2S를 받은 대상체에 대해 전체 또는 핵심 코호트에서 25% 이상의 대상체에서 발생한 TEAE 및 신경 독성을 나타낸다. DLBCL 집단에서 명백한 용량-독성 관계는 관찰되지 않았다.
Figure pct00042
a 용량 수준 1, 2회 용량 일정으로 치료된 4명의 환자 포함한다.b 실험실 이상.
도 25는 CAR+ 세포의 투여 후 다양한 특정 시점에서 CRS 및/또는 NT를 갖는 것으로 관찰된 대상체의 수 및 백분율을 도시한다. 이 평가에서, CRS 또는 NT 사건의 발병에 대한 중앙값 시간은 각각 5일(범위 1-14) 또는 10(범위 3-23)일인 것으로 관찰되었다. CAR+ 세포 투여 후 처음 72시간 이내에 1명의 환자가 NT(1등급)를 받았고 14%(91명 중 13명)만이 CRS(7등급 1; 6등급 2)를 가졌다. CRS 또는 NT의 중간 기간(Q1, Q3)은 각각 5(4, 8)일 또는 10.5(7, 19)일 이었다. NT는 17건 중 12건(71%)에서 CRS가 선행되었다. 평가 가능한 모든 NT 사건은 등급 1 떨림 1건을 제외하고 분석 시점에 해결되었고 2명의 환자는 진행 중인 NT와 함께 진행성 질환으로 사망하였다(본 실시예에 기재된 분석 시점 이후에 분석된 추가 대상을 포함하는 보고된 사건의 안전성 데이터베이스에 기초함).
전체 코호트(n=91)에서 CRS 또는 NT가 발병한 선택된 대상체에게 다음과 같이 토실리주맙(tocilizumab) 및/또는 덱사메타손(dexamethasone)을 사용한 항-사이토카인 요법을 투여했다: 토실리주맙 단독, 4%(n=4); 덱사메타손 단독, 9%(n = 8); 토실리주맙 및 덱사메타손, 8%(n = 7). 덱사메타손의 중앙값 수는 6(범위, 2-99)이었고; 토실리주맙 용량의 중앙값은 1(범위, 1-3)이었다.
표 E10은 DL1 또는 DL2에서 단일 용량을 받은 핵심 코호트의 대상체의 독성 결과를 보여준다. CRS 또는 NT로 인한 사망은 발생하지 않았다. CRS의 발병 시간 중앙값은 5일(범위, 2-14)이었고 NT는 11.5일(범위, 5-23) 이었다. 핵심 코호트에서 13%(n = 9)는 토실리주맙(tocilizumab)을 받았고 18%(n = 12)는 독성을 개선하기 위해 덱사메타손(dexamethasone)을 받았다. 대상체의 18%(67명 중 12명)는 뇌병증(13%), 6%(67명 중 4명)는 실어증, 3%(67명 중 2명)가 발작을 포함하여 뇌병증과 일치하는 신경독성 용어를 나타냈다. 표 E10에서, 표시된 독성 결과를 나타내는 대상체 수 또는 전체 대상체(괄호)의%는 모든 용량 수준에서 또는 특히 DL1 또는 DL2가 투여된 대상체에서 표시된다. 또한 괄호 안에는 상위 및 하위 95% 신뢰 구간이 표시된다.
Figure pct00043
a 유사한 결과를 보이는 DL1D 로 치료받은 환자 4명 b 혼란 상태, 뇌병증, 실어증, 운동 실조, 소뇌 증후군, 섬망, 우울한 의식 수준, 어지러움, 정동, 손과 눈의 협응 장애, 기억 장애, 떨림, 동요, 주의력 장애, 구음 장애, 정신 상태 변화, 근력 약화 포함, 발작, 졸음 및 요실금을 포함한다.
부적합 제품을 받은 12명의 대상체 중 DL1에서 10명, DL2에서 2명 모두 28일 추적 관찰을 받았다. CRS는 대상체의 33%(4/12)에서 관찰되었으며 NT는 대상체 중 어느 곳에서도 관찰되지 않았다. 2명의 대상체는 토실리주맙(tocilizumab)을 투여받았고 3명의 대상체는 덱사메타손(dexamethasone)을 투여받았다. 독성 비율은 일치하는 제품을 투여받은 더 큰 코호트에서 관찰된 것과 비슷했다. 부적합 제품을 받은 대상체에서 약동학(PK) 확장은 CRS/NT가 있는 대상체, 높은 종양 부담 또는 LDH 수준을 가진 대상체에서 더 높았다.
C. 외래환자 투여의 평가
이 특정 시점에서 여러 임상 현장에서 외래환자 환경(중앙값 나이 58.5세 및 ECOG 0 또는 1) 치료를 받은 총 8명의 대상체에 대한 데이터를 평가했으며, 여기에는 이 실시예의 목적을 위해 분석된 특정 시점 이후 데이터가 제공된 3명의 대상체도 포함된다. 평균 입원 기간은 입원 환자 환경에서 치료받은 대상체의 경우 15.6일(SD 9.6, n = 86)이었고 외래환자 환경에서 치료받은 대상체의 경우 9.3일(SD 11.9, n=8) 이었다. 입원 기간의 40% 감소가 외래환자 환경에서 치료된 대상에서 관찰되었다. 외래환자 CAR+ T 세포 투여 후 입원 전 일수의 중앙값은 5일(범위: 4-22)이었다. 외래환자 투여 후 아무도 중환자실(ICU)에 입원할 필요가 없었다.
투여 후 28일 이상의 추적 관찰을 통해 외래환자 환경에서 치료받은 8명의 대상 중 1명은 용량 제한 독성 기간 동안 외래환자로 남아 있었다. 7명의 환자가 발열(연구일 4일에 1명, 연구일 ≥ 5일에 입원)로 입원했으며, 6명의 환자가 CRS(4등급 1, 2등급 2) 및 2명의 환자가 1등급 NT로 입원했다. 중증 CRS 또는 NT를 경험한 환자는 없었다. 1명의 환자는 CRS(2등급)에 대해 덱사메타손 없이 토실리주맙으로 치료를 받았고 CRS 또는 NT에 대해 덱사메타손으로 치료한 환자는 없었다. 한 환자는 CAR+ T 세포 투여 3일 후에 입원했다.
입원 및 외래환자 환경에서 치료를 받은 91명의 대상체 중 11명의 대상체(12%)가 독성 관리를 위해 ICU 입원이 필요했다. CRS 또는 NT 관리를 위해 ICU 입원이 필요한 8명(9%); 2명의 대상체(2%)가 급성 호흡기 사건의 관리를 위해 ICU 입원이 필요했다(CAR+ T 세포 투여와 관련된 1명, 관련 없는 1명). 6명의 대상체(6%)가 삽관되었다(본 실시예에 기술된 분석 시점 이후에 분석된 추가 대상체를 포함하여 보고된 사건의 안전성 데이터베이스를 기반으로 함, n=94); 7명의 대상체(7%)가 승압제를 투여받았다(TEAE 평가에서 CAR+ T 세포 투여 후 처음 28일 동안 저혈압을 나타내는 것으로 정의된, 보고된 사건의 안전성 데이터베이스를 기반으로 함); 그리고 2명의 대상체(2%)가 혈액여과를 받았다(보고된 사건의 안전성 데이터베이스를 기반으로 함). 결과는 ICU 수준의 치료 및 관련 절차를 필요로 하는 환자가 거의 없음을 보여주었다. 결과는 외래환자 환경에서 독성의 안전한 관리, 적절한 교육 및 외래환자 모니터링을 통해 외래환자 투여의 타당성을 뒷받침했다.
외래환자 투여 평가는 안전한 외래환자 투여의 가능성을 뒷받침했다. 30%의 대상체가 재-입원되지 않았다.
D. 약동학적 평가
대리 마커로 사용되는 절단된 수용체에 특이적인 항체를 사용하는 유세포 분석, 및 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스 전사 후 조절 요소(WPRE)에 특이적인 프라이머를 이용하는 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 로 평가 가능한 PK가 있는 DLBCL 코호트 내 87명의 대상체에서 투여 전 시점(사전 치료 또는 사전 림프고갈 화학요법(LDC)) 및 투여 후 다양한 특정 시점(투여일을 1일로 함) 에서 말초혈액 및 골수 내 CAR+ T 세포 수 이다. 0일에서 28일 사이에 표시된 CAR+ 세포 집단(AUC0-28)에 대한 마이크로리터당 수를 나타내는 곡선 아래 면적과 CAR+ 세포의 최대 또는 피크 혈액 농도(Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액)를 평가했다. B-세포 무형성은 CD19로 염색함으로써 유세포 분석에 의해 말초 혈액에서 평가되었다. 사이토카인은 다중 사이토카인 분석을 사용하여 측정되었다. 안전성 분석을 위해 다른 용량 수준을 받은 모든 대상체의 데이터를 통합했다. 반응 분석을 위해 데이터를 용량 수준으로 계층화했다. 통계 분석은 다중도 조정 없이 양면적이었다.
도 9a는 qPCR 또는 유세포 분석에 의해 평가된 바와 같이 다양한 지시된 특정-시점에서 혈액 마이크로리터당 CAR T 세포의 검출된 수를 나타낸다. 도 9b는 11 + 3일째에 혈액 1 마이크로리터당 CAR+ 세포 대(versus) 11 + 3일째에 골수 1 마이크로리터당을 나타낸다. 도 9a에 도시된 바와 같이, 대상체의 샘플에서 CAR-발현 세포의 수준은 유세포 분석 기반 분석 및 qPCR 기반 분석 모두에 의해 관찰되었다. 도 9b에 도시된 바와 같이, PK 결과가 평가된 모든 대상체(유세포분석 및 qPCR에 대해 n= 86 및 85, 각각 유세포 분석 결과가 없는 환자 1명 및 qPCR 결과가 없는 2명의 환자 제외)는 혈액과 골수에서 CAR을 발현하는 세포가 검출 가능했다. 결과는 CAR+ T 세포가 골수 및 혈액과 유사하게 이동했다는 관찰과 일치했다.
시간 경과에 따른 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 수준(AUC0-28 및 Cmax에 의해 평가됨)은 용량 수준 1(DL1)을 받은 다른 환자 하위그룹에서 비교되었다: 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL, NOS) 또는 형질전환된 여포성 림프종(tFL)(CORE; N=32), 변연부 림프종 또는 만성 림프구성 백혈병에서 형질전환된 DLBCL(tMZL/tCLL; N=4), 또는 DL1에서 CAR-발현 T 세포를 받은 외투 세포 림프종(MCL; N=5). 도 10a 및 10b에 도시된 바와 같이, AUC0-28 및 Cmax는 비-핵심 하위군에서 더 낮은 경향이 있는 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 확장과 함께 상이한 질병 하위군에서 대상체 사이에서 다양하였다. PMBCL(n = 2) 및 FL3B(n = 1)는 제한된 환자 수로 인해 표시되지 않았다. DL2를 받은 대상체의 확장은 DL1을 받은 대상체와 유사했다.
E. 용량 수준에 따른 약동학적 평가
CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대한 AUC0-28 및 Cmax는 또한 핵심에서 용량 수준 1(DL1; n=32)을 받은 대상체와 용량 수준 2(DL2; n=27)를 받은 대상체에 대해 비교되었다. 코호트(DLBCL, NOS 또는 고-등급 B-세포 림프종(이중/삼중 적중)이 있는 대상; N=59). 도 11a 및 11b 및 표 E11에서 기재하고 있는 바와 같이, DL1을 받은 대상체와 비교하여 DL2를 받은 대상체에서 CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대해 더 높은 중앙값 AUC0-28이 관찰되었다. 유사하게, DL2를 받은 대상체들의 더 높은 확장 경향은 전체 DLBCL 코호트에서 관찰되었다. 독성의 증가 없이 DL1을 받은 사람들과 비교하여 DL2를 받은 대상체들 사이에서 3개월에 더 높은 반응 지속성(DOR)이 관찰되었다. CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포에 대한 Cmax까지의 중앙값 시간(Tmax) 은 DL1 및 DL2를 받은 대상체 간에 유사했다.
증가된 CAR+ T 세포 노출은 DL1 대 DL2에서 관찰되었으며, 이는 DL2 대상체에서 증가된 독성 없이 증가된 반응 내구성에 해당했다.
Figure pct00044
F. 지속성
CAR-발현 세포의 지속성 및 CD19+ B 세포 무형성(CD19+ B 세포의 낮은 수 또는 부재)은 혈액 내 검출 가능한 CD3+, CD4+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포 수준 및 CD19+ B 세포 수준에 각각 기초하여 CAR+ T 세포가 투여된 DLBCL이 있는 평가 가능한 대상에서 다양한 시점에서 평가되었다. 결과는 표 E12에 나와 있다. 진행 시 평가된 대상체 중(BOR에 관계없이 진행 시간; n=37), 0.17 CD4+ CAR+ 세포/㎕ 중앙값(범위, 0-65.5 세포/㎕) 및 0.15 CD8+ CAR+ 세포/㎕ 중앙값(범위, 0-131.8 cells/μL)이 진행 시 관찰되었다. 재발 시(CR 달성 후 진행 시점) 평가된 대상체 중(n=12), 0.17/μL(범위, 0-35.1 세포/μL) CD4+ CAR-발현 세포의 중앙값 및 0.20개 세포/μL의 중앙값 (범위, 0-131.8 세포/μL) CD8+ CAR-발현 세포가 재발 시 관찰되었다. CAR-발현 세포의 장기간 지속이 12개월에 DLBCL을 갖는 평가 가능한 대상체의 75%에서 관찰되었다. B 세포 무형성증의 장기간 지속은 12개월에 대상의 75%에서 관찰되었으며, 재발 상태에 관계없이 대상에서 관찰되었다. 결과는 항-CD19 CAR-발현 세포가 대부분의 대상체에서 장기간 지속성을 나타냈다는 결론과 일치하며, 심지어 재발된 환자에서도 지속적이고 낮은 수준의 질병 조절 가능성을 시사한다.
재발한 대상체 중 91.7%(11/12)가 재발 당시 혈액에서 검출 가능한 CAR-발현 세포를 가지고 있었다. 이 결과는 일부 구현예에서 병용 요법 또는 다른 개입이 소진될 수 있는 세포와 같은 CAR-발현 세포를 증대 및/또는 부스팅하는 데 사용될 수 있다는 결론과 일치한다.
Figure pct00045
G 약동학적 평가 및 독성
CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 AUC0-28 및 Cmax는 또한 임의 등급(이 평가에서 등급 1-4 중 하나, 등급 5 CRS 또는 NT가 관찰되지 않음) 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 CRS 또는 NT의 등급을 나타내는 것으로 평가되지 않은 대상체에 대한 신경독성(NT) 이 있는 핵심 코호트의 대상체에 대해 비교되었다. CD4+ CAR+ AUC0-28 중앙값(Q1, Q3)은 CRS가 없는 경우(등급 0, n=43) 59(18, 210), 및 임의 CRS(등급 1-4, n=20)에 대해 267(91, 1510)(p = 0.001) 이고; CD8+ CAR+ AUC0-28 중앙값(Q1, Q3)은 CRS가 없는 경우(0등급, n=43) 310(36,900), 및 임의 CRS(1-4등급, n=20)에 대해 605(174, 5619)(p = 0.021) 이고; CD4+ CAR+ AUC0-28 중앙값(Q1, Q3)은 NT가 없는 경우(등급 0, n=50) 71(23, 244), 및 임의 NT(등급 1-4, n=13)에 대해 1269(184, 3057)(p = 0.003) 이며; CD8+ CAR+ AUC0-28 중앙값(Q1, Q3)은 NT가 없는 경우(등급 0, n=50)의 경우 304(43,799), 및 임의의 NT(등급 1-4, n=13)의 경우 2463(607, 7691)(p = 0.004) 이었다. 상기에 기재되어 있고 도 12a-12d에서 나타나는 바와 같이, 시간 경과에 따른 더 높은 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포 수준은 CRS 및 NT와 연관되었다.
H. 약동학적 평가 및 반응
피크 CD3+ CAR+ 세포/μL(CD3+ Cmax)의 수는 CR, PR 또는 PD의 전체 반응(BOR)이 가장 우수한 대상에서 시간 경과에 따라 평가되었다. 도 1 내지 도 4에 도시된 바와 같이. 도 13a 및 13b에 도시된 바와 같이, 더 높은 BOR을 향한 경향은 더 높은 확장을 갖는 대상체에서 관찰되었으며, 대상체 사이에 변동성이 있었다.
I. 혈액 피분석물 및 환자 매개변수에 의한 약동학적 평가
인터류킨-7(IL-7), IL-15, 대식세포 염증 단백질(MIP-1α)을 포함하는 사전 CAR+ T 세포 치료(사전 림프구 고갈 화학요법) 혈장 사이토카인 수준은 CAR+CD3+ 혈액 Cmax < 500 CAR+ T 세포/μL(N=7)을 나타내는 대상체와 비교하여 CAR+CD3+ 혈액 Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL(N=55) 를 나타내는 대상에서 평가되었다. 도 14a에 나타나는 바와 같이, 상승된 전-CAR+ T 세포 치료 사이토카인 혈장 수준은 IL-7 p 은 제외(p=0.07)하고; CAR+CD3+ Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL(Wilcoxon P 값 <.05(조정 다중도 없음)와 관련된 것으로 관찰되었다.
다양한 혈장 사이토카인(IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마(IFN-γ종양 괴사 인자 알파(TNF-α), MIP-1α, MIP-1β단핵구 화학유인물질 단백질-1(MCP-1) 및 CXC 모티프 케모카인 10(CXCL10)) 의 피크 수준은 또한 CAR+ CD3+ 혈액 Cmax < 500 CAR+ T 세포/μL; N=9)을 나타내는 대상체와 비교하여 CAR+ CD3+ 혈액 Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL(N=68)을 나타내는 대상체에서 평가되었다. 도 14b에 나타나는 바와 같이, 더 높은 피크 사이토카인 수준은 CAR+CD3+ Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL(Wilcoxon P 값 < 0.05; 조정 다중성 없음)과 관련된 것으로 관찰되었다.
종양 부담의 지표인 사전 CAR+ T 세포 치료(사전 림프구 고갈 화학요법(LDC)) 체적 종양 측정 치수의 합(SPD)과 CAR+ T 노출 시간을 나타내는 CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0-28 사이의 관계가 평가되었다. 도 15에 나타나는 바와 같이, 기준선 SPD와 CD3+ AUC0-28 사이에 양의 상관관계가 관찰되었으며, Spearman 상관관계는 0.32 및 p = 0.019 이었다.
J. 사전 치료 환자 매개변수 및 반응 및 독성 결과
염증성 마커 및 사이토카인, 예를 들어 페리틴(Ferritin), C-반응성 단백질(CRP), D-이량체(피브린 분해 산물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β을 포함하는 사전 CAR+ T 세포 치료(pre-LDC) 피분석물 수준은 임의 CRS 또는 NT(0등급)이 없는, 임의 등급(여기서는 등급 1-4) 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경독성(NT)을 가진 대상체에 대해 비교되었다. 이 코호트에서, CRS 등급 1-4를 갖는 대상체 중에서, 하나를 제외한 모든 CRS 사건이 등급 1 또는 2인 것으로 결정되었다. 도 16a(CRS) 및 도 16b(NT)에서 나타나는 바와 같이, 단변량 분석(CRS 를 위한 페리틴(p=0.14) 및 CRS 를 위한 CRP(p=0.09)를 제외한 모든 피분석물의 경우 Wilcoxon P 값 < 0.05)에 기초하여 더 높은 피크 혈장 사이토카인 수준 및 염증성 마커 수준이 CRS 및 NT와 관련된 것으로 관찰되었다. CRS의 경우, 다변수 분석에서 종양 부담을 조정한 후 MIP-1βIL-10 및 TNF는 p < 0.05; NT, IL-15, IL-6, MIP-1α 및 TNF의 경우 p < 0.05 이었다.
사전 치료(pre-LDC) 환자 매개변수, 예를 들어 젖산 탈수소효소(LDH) 수치 및 종양 부담의 지표인 SPD(sum of product dimensions)와 같은 체적 종양 측정을 CRS 또는 NT가 발병한 것으로 관찰된 대상체에 비해 CRS 또는 신경독성이 발병한 것으로 관찰되지 않은 대상체들 사이에 비교했다. 도 17에 나타나는 바와 같이, CRS 또는 NT를 갖는 대상체는 SPD(cm2) 및 LDH(U/L) 수준과 같은 사전 치료 환자 매개변수의 더 높은 수준을 나타내었고; 이러한 수준은 단변량 통계 분석을 통해 CRS 또는 NT와 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. CRS 및 NT와 관련된 것으로 관찰된 다른 환자 매개변수에는 진단 이후 더 짧은 시간이 포함된다(CRS 및 NT에 대해 각각 p=0.05 및 p=0.09). CRS 또는 NT와 관련이 없는 것으로 관찰된 환자 매개변수에는 나이(각각 p=0.19 및 p=0.54) 및 이전 치료 횟수(각각 p=0.67 및 p=0.59), 질병 단계 0-2 vs 3-4 (p=0.79, p=0.51), 및 환자 체중(각각 p=0.35 및 p=0.44) 이 포함되었다.
도 18a는 개별 환자들 사이의 사전 치료 SPD 및 LDH 수준(점; 개별 환자가 어떠한 등급의 신경독성을 나타내거나 나타내지 않았는지 여부를 나타내는 개별 점의 음영(왼쪽 패널) 또는 등급 CRS를 나타내거나 나타내지 않았는지 여부를 나타냄)를 나타낸다(우측 패널). 도 18a에서 y 및 x축의 점선은 각각 SPD ≥50 cm2 및 LDH ≥500 U/L을 나타낸다. 도 18b에 나타나는 바와 같이 약 50 cm2 이상의 SPD 및/또는 약 500U/L 이상의 LDH는 NT 및 CRS의 위험과 관련이 있는 것으로 관찰되었다.
도 18a에서 점선으로 표시된 SPD 및 LDH 수준 이상 또는 이하의 대상체에서 CRS 또는 NT 발병에 대한 계산된 승산비(odds ratio)는 95% 신뢰 구간(CI)으로, 도 18b 및 18c에 나타나는 바와 같이 추정한다. 1 이상의 승산비는 CRS 또는 NT가 발병할 증가된 확률 또는 가능성을 나타낸다. 도시된 바와 같이, 50 cm2 이상의 SPD, 500 U/L 이상의 LDH는 CRS 또는 NT 발병 위험 증가와 관련이 있는 것으로 관찰되었다. SPD가 50cm2 이상이고 LDH가 500U/L 이상인 경우 임의 등급의 CRS 및 NT 발병 위험이 약 8배 증가하는 것으로 관찰되고, SPD가 50cm2 미만 및 LDH가 500U/L 미만인 경우 임의 등급의 CRS 및 NT의 위험이 감소된 것으로 나타났다. 결과는 높은 종양 부담 및 염증성 바이오마커를 포함한 기준선 환자 매개변수와 CAR+ T 세포 확장 및 증가된 CRS 및 신경독성 비율과의 연관성과 일치했다.
종양 부하(SPD), 염증성 사이토카인 및 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α 및 CXCL10를 포함하는 기타 혈액 피분석물을 포함하는 관련된 마커를 포함한 다양한 사전 치료(사전 LDC) 환자 매개변수를 단변량 통계 분석으로 3개월에 지속 반응이 있는 대상과 없는 대상을 비교했다. 도 19에 나타나는 바와 같이, 종양 부담의 특정 마커, 염증 또는 염증성 사이토카인의 마커는 지속 반응을 나타내는 대상에서 더 낮은 것으로 관찰되었다(SPD를 제외한 모든 매개변수에 대해 p 값 < 0.05(p = 0.1274)). 단독으로 분석했을 때 DL2를 투여받은 대상체에서도 유사한 결과가 관찰되었다. 높은 종양 부담 및 염증성 바이오마커를 포함한 기준선 환자 매개변수와 지속적인 반응의 역 연관성이 관찰되었다. 일부 측면에서, 이러한 역 연관성은 CAR+ T 세포의 더 높은 확장 및 고갈로 인한 것일 수 있다.
CRS 및 NT의 정도의 발달에 대한 환자 요인, 임상 상관관계 및 혈액 피분석물 사이의 관계는 단변량 비모수 테스트를 기반으로 하는 통계 분석을 사용하여 평가되었다. 표 E13은 일변량 분석의 결과를 나열한다. 이 평가에서 나이가 40세 미만이고 이전 HSCT가 없는 경우 CRS 또는 NT의 발병률과 상관관계가 있다. 나이가 40세 미만의 대상체는 고령 환자보다 통계적으로 더 높은 종양 부담 비율이 다른 것으로 관찰되지 않았다. ECOG 점수가 2인 대상체은 ECOG 점수가 0-1인 대상체와 비교하여 통계적으로 더 높은 종양 부담 비율이 없었다. 이전에 HSCT 또는 이중/삼중 히트 또는 이중 발현이 없는 환자는 CRS 또는 NT와 관련이 없었다.
Figure pct00046
K. 피크 혈액 피분석물, 반응 및 독성
CRP, 혈청 아밀로이드 A1(SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-α, MIP-1α, MIP-1βMCP-1, CXCL10 및 C-C 모티프 케모카인 리간드 13(C-C Motif Chemokine Ligand 13, CCL13)와 같은 염증성 마커 및 사이토카인을 포함한 혈액 피분석물의 치료 후 최고 혈장 수준은 등급 1-4 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경독성(NT)이 있는 대상체에 대해 CRS 또는 NT 가 관찰되지 않은 대상체와 비교되었습니다. 도 20a(CRS; CRS 등급 0, n=51; CRS 등급 1-4, n=28) 및 도 20b(NT; NT 등급 0, n=63; NT 등급 1-4, n=16)에 나타나는 바와 같이, 더 높은 최고 혈장 사이토카인 수준 및 염증 마커 수준이 CRS 및 NT와 관련된 것으로 관찰되었다(CRS 없음 vs. 임의 CRS 및 NT 없음 vs. 임의 NT, IL-15를 제외하고 Wilcoxon P 값 < 0.001(각각 P= 0.05 및 0.006)).
CRP, SAA-1, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, 림프독소-알파(LT-α), TNF-α, IFN-γMIP-1α, MIP-1βMCP-1, CXCL10 및 변형 성장 인자 베타(TGF-β 와 같은 염증성 마커 및 사이토카인을 포함한 혈액 피분석물의 최고 혈장 수준은 안정 질환(SD) 또는 진행성 질환(PD)(N=17)이 있는 대상체의 수준과 비교한 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)(N=57) 의 전체 반응(BOR) 이 가장 우수한 대상체에 대해; 또는 3개월에 CR/PR을 나타낸 대상체(N=35)와 비교하여 3개월 SD 또는 PD(SD/PD)를 갖는 대상체(N=31)에 대해 평가되었다. 도 21a(최상의 전체 응답(BOR)) 및 도 21b(3개월 반응)에 나타나는 바와 같이, 더 낮은 피크 혈장 사이토카인 수준 및 염증성 마커 수준은 더 나은 BOR 및 3개월째 반응과 관련이 있는 것으로 관찰되었다(다중도 조정 없이 Wilcoxon P 값 < 0.05).
이 연구에서, 항-CD19 CAR+ 세포 조성물의 투여는 저위험 질병 특징을 갖는 재발성/불응성 공격성 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체에게 투여되었다. 이 실시예에서 분석 시점에서 중간 기간의 CR에 도달하지 않은 상태에서 81% ORR, DL2에서 63% CR, 모든 용량 수준에서 3개월 시점에 CR 상태인 환자의 80%가 6개월 시점에 CR 상태, 모든 용량 수준에서 9.2개월 시점에 치료받은 대상체의 DOR 중앙값을 포함하여 지속적인 반응을 포함한 반응이 관찰되었다. 결과는 또한 관리 가능한 독성 수준 및 일부 구현예에서 외래 환자 투여와 일치할 수 있는 유리한 안전성 프로파일과 일치하였다. 낮은 비율의 중증 CRS(1%) 및 중증 신경독성(12%)이 관찰되었으며 처음 72시간 동안에는 거의 사건이 없었다. 결과는 외래환자 투여의 가능성과 일치했다.
약동학 평가는 CAR+ T 세포의 더 높은 확장이 일반적으로 CRS 및 NT의 증가된 비율과 관련이 있음을 보여주었다. DL2를 투여받은 대상체는 DL1을 투여받은 대상체에 비해 더 높은 CAR T 노출을 보였으며, 이는 일반적으로 독성 발생의 증가 없이 반응의 지속성 증가에 해당한다. 일부 측면에서, 사전 LDC, 항상성 및 염증성 사이토카인 및 종양 부하를 포함하는 환자 인자와 같은 사전 치료는 매우 높은 확장 및 독성과 연관되고/되거나 유도하는 것으로 관찰되었다. 투여된 CAR+ T 세포는 모든 환자의 혈액 및 골수에서 확장되는 것으로 나타났으며, 대상체 및 질병 유형 간에 가변성이 있었다. 투여된 CAR+ T 세포도 장기간 지속성을 나타내어 평가 가능한 환자의 75%(9/12)가 12개월에 CAR T 세포를 검출할 수 있었다. CAR T 세포와 B 세포 무형성은 재발 시점에 여전히 존재하는 것으로 관찰되었으며(각각 11/12 및 12/12 환자), 이는 종양이 CAR T 세포 작용을 회피할 수 있고 병용 전략이 재발 또는 재발을 예방하는 데 효과적이며, 소진된 CAR T 세포를 증강, 강화 또는 강화할 수 있음을 뒷받침한다. 일반적으로, 다른 환자 요인 및/또는 질병 특성, 예를 들어, 종양 부담이 반응을 결정하는데 기여할 수 있음을 뒷받침하는 대상체 간의 가변성과 함께 더 높은 확장으로 더 높은 반응의 경향이 관찰되었다.
투여를 위한 치료적 T 세포 조성물의 속성 및 조성물의 생성을 위한 공정
상기 실시예 1 및 2에서 투여에 사용된, CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 예시적인 T 세포 조성물은 유세포 분석 및 시험관내 분석을 사용하여 100개 이상의 표현형, 기능 및 세포 건강 관련 속성에 대해 평가되었다. 재발성/불응성 B 세포 비호지킨 림프종의 치료를 위한 항-CD19 CAR-T 세포 요법을 평가하는 임상 연구에 등록된 대상체에 대해 생성된 치료 세포 조성물을 조사하였다(N=63; 핵심 코호트). 다양한 속성에 대해 조작 전후에 세포를 평가하였다. 평가된 예시적인 속성은 표 E14에 제시되어 있다. CAR T 세포의 기억 및 세포 건강 표현형을 유세포 분석을 사용하여 조사하였다. T 세포 기능은 시험관 내 항원 특이적 생물학적 검정을 사용하여 평가되었다. 대표적인 수의 동결-해동 주기를 거친 치료적 T 세포 조성물에 대해 특성화 및 방출 시험을 수행하였다.
Figure pct00047
투여용 세포 조성물의 생성을 위해, 자가 세포를 백혈구 성분채집술을 통해 대상체로부터 분리하였다. 백혈구 성분채집 샘플은 CAR-발현 세포의 생성을 위한 과정을 거쳤다. 상기 과정은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정제를 위한 자동 세척 및 면역친화도 기반 선택을 사용한 세포 세척을 포함하여 각각 CD8+(여기서 중앙값 99%, IQR(Inter Quartile Range) 98-100%의 세포는 CD8+임) 및 CD4+ (여기서 중앙값 99%, IQR 99-100%, 세포는 CD4+임) 세포에 대해 농축된 2개의 조성물을 생성했다.
농축된 CD4+ 및 CD8+ 조성물의 세포는 41BB 공자극 도메인을 갖는 항-CD19 CAR을 암호화하는 벡터를 사용하여 렌티바이러스 형질도입에 개별적으로 적용되었다. 그런 다음, 형질도입된 집단을 세포 증폭을 위한 자극 시약의 존재 하에 별도로 인큐베이션하였다. 증폭된 CD8+ 및 CD4+ 세포를 제형화하고 별도로 동결보존하고 투여 전에 보관하였다. 세포 건강을 나타내는 매개변수에서 상이한 환자 속성을 갖는 것과 같은 상이한 환자로부터 유래된 로트 및/또는 세포 조성 사이의 변동을 최소화하기 위해, 세포는 로트에 걸쳐 일정한 부피로 유지되었다. 세포 생성물은 생존 가능한 세포 농도의 좁은 범위를 나타냈다(한 그룹의 피험자에 대한 세포 조성 평가를 기반으로, CD8+: 중앙값 31×106개 세포/mL, IQR 28-40×106개 세포/mL, N=38; CD4+: 중앙값 35×106 세포/mL, IQR 31-40×106, N=36).
도 26에 도시되고 표 E15에 요약된 바와 같이, 자동화된 T 세포 정제는 순수한 CD8+ 및 CD4+ T 세포 집단을 생성하였다. 이 전략은 비-T 세포를 형질도입할 확률을 감소시켰고 증폭 기간과 무관하게 치료 세포 조성물에서 높은 T 세포 순도를 초래했다.
Figure pct00048
투여 부위에서 세포 조성물을 해동하고 적절한 용량의 CD8+CAR+ 및 CD4+CAR+ 세포의 수에 상응하는 각 조성물의 표적 부피에 따라 개별적으로 투여하였다(예를들어, 5×107 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는 DL1(CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ 세포 각각 2.5×107) 또는 1×108 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는 DL2(CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ 세포 각각 5 x107)).
임상 시험 중에 큰 부피 제형에서 작은 부피 제형으로 공정의 변경이 있었다. 변화 후 치료적 세포 조성물은 생존 세포 농도의 엄격하게 제어된 범위와 함께 일정하게 낮은 부피로 제형화되었다. 어떤 경우에는 큰 부피 제형 대신 작은 부피 제형이 사용되었다. 투여용 조성물에서 CAR-발현 T 세포의 건강을 나타내는 매개변수는 큰 부피 및 작은 부피로 제형화된 세포 조성물에서 예를 들어, 해동 후, 생존력, 세포 표면 Annexin V 발현 및 활성 세포내 Caspase 3 수준을 측정함으로써, 평가되었다.
큰 부피 제형에서 작은 부피 제형으로의 공정 변경은 공정 견고성을 증가시키고 세포 건강 속성의 가변성을 감소시켰다. 개별 세포 조성물로부터의 CD4+ 및 CD8+ T 세포 중 농도, 생존 세포의 백분율, 및 활성 카스파제-3 음성 세포의 백분율에 대한 값을 도 27a의 A 및 B 및 27b에 나타내었고 표 E16에 요약하였다. 아넥신 V-발현 세포의 중앙값 백분율은 CD8+CAR+ T 세포의 11%(IQR 9-18%; N=33)와 CD4+CAR+ T 세포의 10%(IQR 8-17%; N=31)였다. 카스파제 3 발현은 아넥신 V 발현과 유사한 것으로 관찰되었다. 작은 부피 제형으로의 전환은 공정의 견고성을 증가시키고 세포 건강 속성의 변동을 감소시켰다.
Figure pct00049
투여용 조성물에서 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ T 세포의 양을 정확하게 제어 하였다. 예시적 일련의 대상체에 실제로 투여된 세포의 수는 주어진 용량에 대한 목표 세포 수의 8% 이하인 것으로 관찰되었다:
· DL1에서 세포가 투여된 대상체에 대하여 2.4-2.7×107 (목표 ±8%) CD4+CAR+ T 세포 (n = 48)
· DL2에서 세포가 투여된 대상체에 대하여 4.6-5.1×107 (목표 ± 8%) CD4+CAR+ T 세포 또는 4.6-5.1×107 (목표 ±8%) CD8+CAR+ T 세포 (n = 20).
투여된 용량의 범위는 상이한 예시적 일련의 대상체에서 변동성이 낮은 것으로 밝혀졌다:
· DL1에서 48-52 Х6 CD3+CAR+T 세포 (n =34)
· DL2에서 96-101Х6 CD3+CAR+T 세포 (n = 29)
· DL1에서 24-27×106 CD4+CAR+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 (n = 34)
· DL2에서 46-51×106 CD4+CAR+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 (n = 29).
도 28a에 도시된 바와 같이, 대상체에게 투여된 CAR-발현 T 세포 조성물은 높은 T 세포 순도 및 로트 사이의 낮은 분산을 나타내는 것으로 관찰되었다. 예를 들어, 공정 및 생성물 제어의 관점에서, CAR T 세포를 함유하는 치료 세포 조성물은 세포-특이적 T 세포 기능에서 로트-투-로트 (lot-to-lot) 변동성이 낮은 것으로 관찰되었다.
시험관내 항원-특이적 사이토카인 축적 및 세포 내 사이토카인 염색 (intracellular cytokine staining, ICS)은 다수의 사이토카인 (IL-2, TNF-α 및 IFN-γ에 대한 사이토카인 생산을 위한 로트 간에 유사한 낮은 분산을 나타내었다. 예시적 ICS 실험에서, 조성물로부터의 세포를 CD19로 자극하고, TNF-α를 포함하는 사이토카인에 대해 염색하고, 메모리 표현형 마커로서 C-C 케모카인 수용체 유형 7 (CCR7)을 포함하는 표면 단백질을 유세포 분석에 의해 분석하였다. 사이토카인 또는 표면 단백질에 대해 양성인 투여용 조성물 중 세포의 수를 측정하였다. 도. 28B 는 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ 및, CD4+CAR+TNF-α+ 및 CD8+CAR+TNF-α+ 및, CD4+CAR+CCR7+ 및 CD8+CAR+CCR7+ 의 수를 나타내며, DL1 및 DL2에서의 투여를 위해 CAR T 세포 조성물에 존재한다. 이러한 결과는 표 E17에 요약되어 있다. 그 결과는 CD4+CAR+ and CD8+CAR+ 세포, CD4+CAR+TNF-α+ 및 CD8+CAR+TNF-α+ 세포, CD4+CAR+CCR7+ 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수의 변동성 (variability)이 낮다는 것을 보여준다. 예를 들어, TNF-α 생성에 대해 양성인 세포의 수에 대하여 타이트한 범위 (tight range)가 관찰되었다 (n = 61).
Figure pct00050
CD19로 자극한 후 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)의 CAR+ 세포에 의한 생산을 나타내는 파라미터는 CD4+CAR+ T 세포에 대해 37% (N = 59) 및 CD8+CAR+ T 세포에 대해 51% (N = 61)의 상대 표준 편차 (RSD)를 갖는, 상이한 로트 간에 좁은 범위 (narrow range)를 보여주었다.
상기 결과는, 정확하고 일관된 용량의 CD4+ 및 CD8+ CAR T 세포, CD4+ 및 CD8+ T 세포 배양 조건의 제어 및 최적화, 사이토카인 생산의 낮은 가변성을 포함하는 조성물, 및/또는 투여를 위한 조성물의 일정한 제형 및 부피는 조성물에서 일관된 세포 건강을 유도할 수 있다는 관찰 결과와 일치했다. 제공된 구현예에서, 이러한 제조 및 제어 과정의 측면은 다수의 상이한 대상체로부터의 세포를 사용하여 조작되고 이들 대상체에 투여하기 위해 생성된 이러한 세포 조성물의 속성의 낮은 가변성에 기여한다. 일부 측면에서 이러한 측면은 대상체 사이에 투여된 CD4+ 및 CD8+ 세포의 정확하고 일관된 고정 용량의 사용; 예를들어, 다양한 대상체에서 표현형(예: CCR7) 및 시험관 내 기능(예: 항원 자극 후 IL-2, TNF-α 및 IFN-γ 생산)의 낮은 약물 산물 로트 간 변동성을 초래하는 조건과 같은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 배양 조건의 제어 및 최적화; 및 세포 건강을 나타내는 속성에서 방법에 의해 생성된 치료 세포 조성물 사이의 일관성을 초래하거나 일관성에 기여할 수 있는 일정한 제형 및 약물 산물의 부피의 사용을 포함한다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여를 위한 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)이 있는 대상체의 투여 전후 종양 생검에서 바이오마커 평가
CAR-발현 세포의 투여 전 및/또는 후에 대상체로부터 수집된 종양 생검에서 여러 바이오마커의 발현을 평가하였다.
A. 종양 생검 샘플
종양 생검은, 실시예 1.A.2의 평가 시점을 기준으로 위의 실시예 1 및 2에서 설명된, CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 치료적 CAR+ T 세포 조성물로 치료를 받은 재발성 또는 불응성(R/R) 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 또는 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 선택된 대상체로부터 수집되었다. 종양 생검은 CAR+ T 세포의 투여 전(처리 전) 및 투여 후 7 내지 20일(처리 후)에 얻었다.진행 중인 연구에서 실시예 1.A.2의 시점을 통한 평가를 위해 본 실시예에 결과가 설명되어 있다. 총 28명의 대상체(25 DLBCL 및 3 MCL)의 43개 생검(치료 전 26개, 치료 후 17개, 일치 쌍 15개)의 결과를 조사했다.
B. 바이오마커 평가, 반응 및 안전성 결과
종양 생검에서 CAR+ T 세포의 침윤은 항-CD19 CAR을 암호화하는 mRNA에 특이적인 제자리 혼성화(ISH) 프로브를 사용하여 정량화되었다. CAR T 세포, 비-CAR T 세포 및 B 세포는 CAR-발현 세포, CD4, CD8, CD19, CD20, CD73, FOXP3, CD163, IDO 및 PD-L1에 대한 세포 표면 대리 마커를 검출하는 다중 면역형광(IF) 검정을 사용하여 계산하였다. 종양 생검 섹션을 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하고 조직의 질 및 종양 식별에 대해 평가했다. 면역형광 이미지는 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 분석되었다. 반응 결과에 대한 잠재적인 상관관계는 단변량 t-검정을 기반으로 한 통계적 분석을 사용하여 평가되었으며 p-값은 다중도 조정 없이 양측이었다.
투여 후 3개월을 포함하여 CAR+ T 세포 투여 후 다양한 시점에서 종양 부담을 평가하고, 대상체가 진행성 질환(PD), 안정적 질병(SD), 부분 반응(PR) 또는 완전 반응(CR)을 가졌는지 여부를 결정하는 것을 포함하여 대상체를 반응 및 안전성 결과에 대해 평가하였다. 평가된 안전성 결과에는 NCI-CTCAE v4.03(National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria) 척도에 따라 1-5 척도로 등급이 매겨진 신경독성(혼란, 실어증, 뇌병증, 간대성 근경련 발작, 경련, 혼수 및/또는 정신 상태 변화의 증상을 포함한 신경학적 합병증)이 포함되었다.
C. 결과
관찰된 객관적 반응률(ORR, CR 및 PR 포함)은 생검이 평가된 대상체에서 71%(20/28)였다. 등급 1, 2 CRS는 생검이 평가된 대상체의 36%(10/28; 등급 1, 2)에서 관찰되었으며 등급 2-4 NT는 생검이 평가된 대상체의 18%(5/28)에서 관찰되었다.
치료 전 종양 생검은 다양한 세포 조성물을 포함하는 것으로 관찰되었다: 종양 세포(중앙값: 77%; 범위 5-96%), CD4+ 세포(0.90%; 0.02-15%) 및 CD8+ 세포(1.5%; 0-23%). 상기 결과는 CAR+ T 세포 투여 후 3개월에 CR 또는 PR을 갖는 대상체가 PD를 갖는 대상체에 비해 치료 전 종양에서 내인성 CD4+ 세포의 더 높은 백분율을 가졌다는 것을 보여주었다 (CR, PR 중앙값: 7.9%; PD 중앙값: 0.38%, p < 0.0001). 치료 전 종양에서 CD8+ 세포의 비율은 3개월 반응 그룹 간에 차이가 없었다 (CR, PR 중앙값: 1.9%; PD 중앙값: 0.47%; p = 0.6496).
처리 후 생검에서, CAR+ T 세포가 종양에 침윤된 것으로 관찰되었으며, 생검 샘플에서 세포의 최대 22%를 구성하였다. 치료 후 샘플(투여 후 7~20일)의 종양 침윤 수준은, SD 또는 PD의 최상의 전체 반응(BOR)을 달성한 대상체(중앙값: 0.51%)와 비교하여, CR(중앙값: 3.9%) 또는 PR(중앙값: 1.1%)을 달성한 대상체에서 더 높은 것으로 관찰되었다.
CD4+ 및 CD8+ CAR T 세포 모두 치료 후 시점(투여 후 7 내지 20일)에 종양 영역에 침윤된 것으로 관찰되었지만, CR을 달성한 대상체는, SD 또는 PD의 BOR을 달성한 대상체(CR 중앙값: 0.83; SD, PD 중앙값: 0.14; p = 0.0097)와 비교하여, 이 치료 후 시점에서 CD8+ CAR+ T 세포 대 CD4+ CAR+ T 세포의 비율이 더 높은 것으로 관찰되었다.
개별 대상체의 일치하는 치료 전 및 후 생검을 비교하면, 결과는 궁극적으로 SD 또는 PD의 BOR을 달성하는 대상체와 비교하여 종양에서 CD8+ 세포(CAR+ T 및 비-CAR T)의 더 큰 치료 후 증가를 갖는 CR 또는 PR의 BOR을 궁극적으로 달성하는 대상체에 대한 경향을 보여주었다.
CD73, FOXP3, CD163, IDO 및 PD-L1을 포함한 면역억제 인자의 발현은, 치료 전(CD73 (median: 1.5%; range 0-42%), FOXP3 (0.10%; 0-1.5%), IDO (0.06%; 0-11%), CD163 (1.2%; 0-24%) 및 PD-L1 (0.16%; 0-56%)) 및 치료 후(CD73 (1.6%; 0-53%), FOXP3 (0.09%; 0-4.3%), IDO (0.28%; 0-15%), CD163 (3.6%; 0-22%) 및 PD-L1 (3.3%; 0-65%))에서 대상체 간에 다양했다. 일치하는 생검에서 CD8+ 세포의 치료 후 증가는 IDO(R2 = 0.64) 및 PD-L1(R2 = 0.61) 발현의 치료 후 증가와 관련이 있는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과는 평가 시점에 CD8+ CAR+ 세포의 침윤이 어느 정도의 반응 또는 반응 지속 기간을 달성할 잠재적 가능성을 나타낼 수 있고 이러한 세포의 존재 및/또는 활성이 TME 인자의 상향 조절을 초래할 수 있다는 결론과 일치한다.
D. 결론
CAR+ T 세포 투여 후 3개월째의 지속적인 반응은 치료 전 종양에서 더 높은 수준의 CD4+ 세포와 관련이 있는 것으로 관찰되었다. 치료 후 종양 세포에서, CD4+ 및 CD8+ 둘 다인 CAR+ T 세포가 종양 및 인접 조직에 침투하는 것으로 관찰되었다. ORR은 종양 생검에서 CAR+ T 세포의 증가와 관련이 있었다. 치료 전 종양 생검에서 CD8+ 수준에 비해 치료 후 종양 생검에서 CD8+ 수준의 증가는 증가된 IDO 및 PD-L1 발현과 관련이 있었다. 일부 구현예에서, CAR-T 세포의 투여 시 또는 투여 후에 투여되는 것과 같은 이러한 경로를 표적으로 하는 요법은 CAR+ T 세포 투여 후 하나 이상의 치료 결과 또는 그의 지속 기간을 향상시킬 수 있다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)이 있는 대상체의 반응 및 안전성 결과에 대한 추가 평가
반응 및 안전성 결과는 상기 실시예 1 및 3에 기재된 임상 연구의 후속 시점의 환자에서 평가되었다.
A. 대상체 및 치료
본 실시예에 제시된 이 시점에서의 분석은 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 전체 코호트(핵심 코호트에서 73명)의 총 102명의 대상체에 대한 평가를 기반으로 한다. 상기 전체 코호트에는 DLBCL이 있는 대상체 (DLBCL, NOS 드 노보 및 여포성 림프종에서 형질전환됨; 높은 등급 B 세포 림프종(이중/삼중 히트); CLL 또는 MZL로부터 형질전환된 DLBCL; PMBCL; 및 2차 요법 후 FL3B, ECOG 0-2;)가 포함되었으며, 분석을 위한 핵심 코호트에는 DLBCL, NOS가 있고 여포성 림프종(tFL) 또는 높은 등급 B-세포 림프종(이중/삼중 히트)에서 형질전환되었으며 ECOG PS(미동부종양학협력그룹 수행 상태)가 0 또는 1인 대상이 포함되었다. 1차 치료 후 MCL이 있는 대상체도 본 연구에 포함되었다. 예를 들어 이중/삼중 히트 발현자, 원발성 불응성 질환, 2개 이상의 요법에 불응성, CR에 도달한 적이 없음, 자가 줄기 세포 이식(ASCT)을 받은 적이 없거나 ECOG PS가 2인 경우, 전체 및 핵심 코호트에서 치료된 환자의 약 90%는 3-6개월의 짧은 중앙 전체 생존(OS)을 예측하는 적어도 하나의 저위험 질병 특징을 갖는다(문헌 「Crump 등, Blood (2017) 130: 1800-1808」 및 「Van de Neste 등, Bone Marrow Transplant. (2016) 51(1): 51-7」 참조). 이 시점에서 총 134명의 대상체가 백혈구 제거를 받았으며, 그 중 2명은 조성물 사용할 수 없었다. 산물은 DLBCL 코호트에서 대상체된 피험자의 99%(132/134)에 대해 사용 가능했다. 산물을 사용할 수 있었던 또 다른 18명의 대상체 중 5명은 철회했고 13명은 진행성 질병이 발생했거나 사망했다. 총 114명의 대상체가 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여받았고, 그 중 12명은 부적합 항-CD19 CAR-발현 세포(특정 사양을 반드시 충족하지는 않지만 투여에 안전한 것으로 간주되는 조성물)를 받았다. 대상체는 DL1(n=45), DL1(n=6) 또는 DL2(n=51)의 이중 용량을 받았다. 외투 세포 림프종(MCL)이 있는 7명의 대상체는 DL1에서 CAR+ 세포를 투여받았다. 이 시점에서 여덟(8) 명의 대상체가 외래 환자 환경에서 치료를 받았다. 이 시점에서 전체 및 핵심 코호트 대상체의 인구통계 및 기준선 특성은 표 E18에 나와 있다.
Figure pct00051
B. 치료 후 안전성 및 반응 결과
표 E19는 전체 및 핵심 코호트의 안전성 결과를 보여준다. 도시된 바와 같이, CRS 또는 NT로 인한 사망은 관찰되지 않았다. 전체 코호트에서 CRS 발병까지의 중앙값은 5일(범위, 2-12일)이었고 NT는 10일(범위, 3-23일)이었다. 전체 코호트에서 17%(n = 17)는 토실리주맙을 받았고 21%(n = 21)는 독성 중재로 코르티코스테로이드를 받았다. 핵심 코호트에서는 DL1과 비교하여 DL2에서 CRS 또는 NT의 증가가 관찰되지 않았다.
Figure pct00052
a 유사한 결과로 DL1D(용량 수준 1, 2회 용량 일정)로 치료된 3명의 환자.
도 29는 이 시점(n = 102)에서 실험실 이상 및 치료 발생 유해 사례(TEAE)를 경험한 것으로 관찰된 전체 코호트의 대상체의 백분율을 도시한다(최소 28일의 추적 관찰과 함께 DL1에서 적합 산물로 치료된 MCL을 가진 6명의 대상체에 대한 데이터는 포함되지 않음; 대상체의 20% 이상에서 발생하는 TEAE 및 실험실 이상을 보여줌).
표 E20에 나타난 바와 같이, 재발성 또는 불응성(R/R) DLBCL이 있는 대상체에서 높은 반응률이 관찰되었다. 상기 결과는 핵심 코호트에서 치료 결과에 대한 용량 반응 효과와 일치한다. 임계값(50cm2 이상의 산물 치수 합계(SPD)의 체적 종양 측정으로 표시됨)을 초과하는 종양 부담이 있는 대상체는 DL1 및 DL2를 받은 대상체 간에 유사하게 분포되었다(각 그룹의 대상체의 약 1/3).
Figure pct00053
a 유사한 결과를 보이는 DL1D(용량 수준 1, 2회 용량 일정)로 치료받은 3명의 환자.
핵심 코호트에서 모든 용량 수준으로 치료된 모든 DLBCL 환자를 포함하는, 저위험 DLBCL 하위 그룹에 있는 대상체의 다양한 하위 그룹 사이의 6개월 객관적 반응률(ORR)이 도 30에 제시되어 있다. 상기 결과는 항-CD19 CAR+ T 세포 투여에 대한 저위험 DLBCL 하위 그룹에서 높은 지속성의 ORR을 보여주었다.
반응 기간(DOR, 추적 중앙값 8개월) 및 전체 생존(최고의 전체 반응(무반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)으로 그룹화됨), 추적 중앙값 12개월)은 도 31a-31d에서 대상체의 전체 코호트 및 핵심 코호트에 대해 나타낸다. 상기 결과는 핵심 코호트에서 3개월에 CR을 보인 대상체의 88%가 6개월에도 CR을 계속 보였고 6개월에 CR을 나타낸 대상체의 93%가 장기간 계속해서 반응을 보였다는 것을 보여주었다.
상기 결과는 정확하고 일관된 용량의 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 함유하는 항-CD19 CAR+ 세포 조성물의 투여가 불량한 예후 및/또는 과도한 전처리를 갖는 R/R 공격적 NHL을 갖는 대상체에서 지속적인 반응을 초래한다는 관찰과 일치했다. 상기 결과는 6개월째 49% ORR 및 46% CR 비율로 핵심 코호트에서 양호한 지속 반응률을 보여주었고 6개월째 CR에서 93%의 대상체(모든 용량 수준에서)가 이 시점에서의 반응을 유지했다. 상기 결과는 또한 관리 가능한 독성 및 낮은 비율의 중증 CRS(1%) 및 중증 신경독성(13%)을 포함하는 양호한 안전성 프로파일과 일치했으며, 이는 일부 측면에서 외래 환자의 투여를 지원한다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)이 있는 대상체의 자원 활용 및 전처리 매개변수 및 증폭 평가
다양한 의료 자원과 혈액 분석 물질 및 질병 부담, 세포 증폭과 같은 다양한 전 치료 매개 변수의 활용은 항-CD19 CAR-발현 T 세포 치료 조성물을 받은 재발성/불응성 NHL을 갖는 대상체에서 상기 실시예에 기재된 임상 연구에 기재된 환자에서 평가되었다.
실시예 7.I.A. 대상체 및 치료
실시예 1, 3 및 6에 기재된 임상 연구의 특정 시점에서 1차 분석을 수행하였다. 본 예에서 제시된 이 시점에서의 분석은 전체 코호트에서 총 114명의 대상체에 대한 평가를 기반으로 한다. 이 시점에서 96명의 대상체가 입원 환자 환경으로 치료를 받았고 18명의 대상체가 외래 환자 환경으로 치료를 받았다.
상기 시점에서 입원 환자 및 외래 환자 환경으로 치료된 대상체의 인구 통계 및 기준선 특성이 표 E21에 나와있다.
Figure pct00054
실시예 7.I.B. 안전 결과
표 E22는 입원 환자 또는 외래 환자 환경에서 투여에 의해 치료를 받은 대상체의 특정 안전 관련 결과(CRS 및 신경학적 사건의 발생률)를 보여준다. CRS 또는 신경학적 사건 중 ICU 입원은 입원 치료를 받은 9명의 대상(9.4%)과 외래 치료를 받은 1명의 환자(5.6%)에서 발생했다.
Figure pct00055
실시예 7.I.C. 바이오마커 평가, 증폭 및 자원 활용
바이오마커 LDH, CRP 및 페리틴의 발현은 대상체로부터 수집된 종양 생검에서 평가되었고, 대상체의 종양 부담은 CAR-발현 세포의 (전처리) 투여 전 SPD(sum of product dimensions)의 체적 종양 측정에 의해 평가되었다. 최대 혈청 농도(Cmax; CD3+ CAR+ 세포/μL 혈액)도 투여 후 대상체에서 결정되었다. 대상은 임계값 이하 또는 그 이상인 SPD, LDH, CRP 및 Cmax 또는 입원 환자 또는 외래 환자 치료에 따라 그룹화되었으며 의료 자원 활용을 나타내는 다양한 매개 변수와의 연관성(입원일, 중환자실 단위(ICU), 토실리주맙 사용(독성 중재를 위한 약제, (%)) 및 혈압상승제, 삽관 또는 투석 사용(독성 중재를 위한 치료, (%))을 평가했다.
도 32a-32f는, 500개 세포/μL 이하 또는 500개 세포/μL CAR+ 세포/μL 초과의 Cmax(도 32a); 50cm2 이하 또는 50cm2이상 SPD(도 32B); 500 유닛/L 이하 또는 500 유닛/L 이상의 LDH(도 32C); 10 mg/L 이하의 CRP 및 5000 ng/mL 이하의 페리틴 또는 10 mg/L 초과의 CRP 및 5000 ng/mL 이상의 페리틴(도 32D), 및 입원 환자 환경 또는 외래 환자 환경(도 32E-32F)에 의해 그룹화된 대상체에서 다양한 의료 자원 매개변수의 사용을 보여준다.
상기 결과는 치료 전 종양 부담이 더 낮고, LDH, CRP 및/또는 페리틴과 같은 특정 혈액 분석물의 발현, 및/또는 치료 후 더 낮은 피크 CAR+ T 세포 수를 가진 대상체의 의료 자원 활용 감소(예를들어, 독성 치료 또는 중재의 사용 감소)와 일치했다. 외래 환자 환경에서 치료를 받은 대상체의 경우 입원 환자 환경에서 치료를 받은 환자에 비해 입원 기간이 42% 감소했다. 일반적으로 독성 중재(예를들어, 토실리주맙, 삽관, 혈압상승제, 투석)의 사용은 입원환자와 외래환자 치료군 모두에서 낮았고, 혈압강하제 사용은 외래환자 치료군에서 더 높은 것으로 관찰되었다. 결과는 외래환자 투여의 실행 가능성과 일치했다.
실시예 7.II.
상기 실시예 7.I에 기술된 동일한 임상 연구에서, 발병률, 의료 자원 활용(HRU), 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경학적 사건(NE) 비용은, 실시예 6에 기술된 바와 같이 항-CD19 CAR-발현 CD4/CD8 세포 조성물의 순응 용량을 받은 102명의 대상체의 하위 유형에서 평가되었다. 환자 특성, AE 발생률, 실험실 보고서, 시설 사용 및 처방 정보에 대한 정보를 얻었다. CRS 및 NE의 발병 및 해결 날짜 내의 의료 자원 활용(HRU)은 도 40에 설명된 방법을 사용하여 각 대상체에 대해 식별되었다. HRU는 각 대상체에 대해 식별되었다. 시험 관리 지침은 HRU가 CRS 및/또는 NE 관련인지 여부를 확인하기 위해 교차 확인되었다. CRS 또는 NE 등급과 관련된 비용은 공공 데이터베이스 및 국가 평균 비용에 대한 문헌을 사용하여 적용되었다(표 E22.1).
기준 대상체의 인구통계 및 임상적 특성은 CRS 및/또는 NE 프로필에 의해 평가되었다. 유해 사례(AE) 발생률은, 「Lee 등」의 기준에 의한 CRS 및 NE 등급(2014) 및 CTCAE, 버전 4.03, 각각에 포함되는 실시예 1에 기재된 바와 같이 평가되었다. CRS만, NE만, 비동시 CRS 및 NE(즉, 시작 날짜와 종료 날짜가 겹치지 않음), 동시 CRS와 NE(들)의 발생이 결정되었다.
진단, 약물(예를들어, 토실리주맙 및 코르티코스테로이드 사용) 및 시설 사용(예를들어, CRS 및/또는 NE 등급 및 중환자실(ICU) 이용률에 따른 평균 체류 기간(LOS))을 기반으로 하여 HRU가 결정되고 CRS 및 NE와 관련된 비용이 추정되었다. CRS 및/또는 NE 등급별 총 비용 중앙값을 추정하고 CRS 및/또는 NE 프로파일에 따라 분석했다.
Figure pct00056
AE 프로필에 따른 환자 특성은 표 E22.2에 나와 있다.
평가된 102명의 대상체 중 44명이 CRS 및/또는 NE(들)를 경험했고, 21명(21%)은 CRS만 있었고(G≥3 없음), 6명(6%)은 NE만(G≥4 없음), 6명 대상체(6%)는 CRS와 NE가 동시에 발생하지 않았고, 11명의 대상체(11%)는 CRS와 NE가 동시에 발생했다(1 G4 CRS 포함). CRS를 경험한 102명 중 38명(37%)의 대상체 중 1명은 3/4등급 CRS를 받았다. NE를 경험한 23/102명의 대상체(23%) 중 10명(10%)은 1/2 등급이었고 13명(13%)은 3/4 등급이었다. 44명의 대상체의 하위 유형 중 각 유해 사건 프로필의 대다수는 달리 명시되지 않은 DLBCL을 가지고 있었다. 이들 44명의 대상체 중 70%가 G≤2 사건을 가졌다(44명의 대상체 중 31명). CRS와 NE가 모두 있는 대상체 중 94%가 CRS를 먼저 받았다 (17명의 대상체 중 16명). 동시적이지 않은 사건이 있는 대상체 중 NE는 CRS가 해결된 후 2일의 중앙값을 나타냈다. NE 이전에 동시 사건 및 CRS가 있는 11명의 대상 중 10명(91%) 중 NE는 CRS 발병 후 중앙값 3.5일에 발생했다.
Figure pct00057
표 E22.3은 독성 등급에 따른 HRU를 제시합니다. CRS가 있는 38명의 대상체 중 11명(29%)이 토실리주맙을 받았고(11/102, 이 시점에서 평가된 대상체의 11%) CRS 및/또는 NE가 있는 44명 중 21명(48%)이 코르티코스테로이드를 받았다(예를들어, 덱사메타손) (21/102, 이 시점에서 평가된 피험자의 21%). 표 E22.3에 나타난 바와 같이 코르티코스테로이드 사용 비율은 AE 등급이 증가함에 따라 모든 CRS 및/또는 AE 프로파일에 걸쳐 증가했다.
Figure pct00058
표 E23은 HCRU와 치료된 대상체 간의 각 독성 발생에 대한 비용 중앙값을 요약한다. G≤2 대 G≥3 CRS 및/또는 NE에 대한 전체 중앙값 비용은 $16,533 대 $70,666이었다. 표 E23에 나타난 바와 같이, CRS 및/또는 NE에 대한 중앙 총 관리 비용은 주로 입원에 의해 주도되었으며, 범위는 G≤2 CRS 또는 NE 단독의 경우 $177-24,945, G≤2 동시 CRS 및 NE의 경우 $31,018, G≥3 CRS 및/또는 NE의 경우 $45,384-263,743이다.
Figure pct00059
도 41에 도시된 바와 같이, AE의 중증도가 증가함에 따라 CRS 및 NE 그룹에 대해 총 LOS가 증가하고 ICU 이용률이 증가하였다. CRS와 NE가 동시에 있는 대상체의 경우 모든 범주에서 의료 자원 활용이 1 등급 이상 또는 ≥3 AE으로 증가했다.
상기 분석은 CAR-발현 T 세포의 용량으로 치료받은 대상체 중 CRS 및/또는 NE의 70%가 등급 ≤2인 임상 연구의 시점을 기반으로 했다. 병원 및 ICU LOS는 CRS 및/또는 NE 관리 비용과 관련이 있다. 약제비(토실리주맙 포함)는 비용의 주요 구성 요소가 아닌 반면 시설 비용, 1차 입원 환자 및 중환자실 입원 비용은 총 관리 비용의 평균 92.6%를 차지했다. 본 연구와 이 시점의 대상체에서 AE 관리의 예상 비용은 해당 대상체 그룹에 대해 $177에서 $263,743까지 상당히 다양했다. 등급 ≥3 사건은 G≤2 사건에 비해 전체 비용 중앙값이 327% 증가했다($70,666 대 $16,533). 등급 ≥3 사건이 있는 대상체의 53.8%(7/13)는, 등급 ≤2의 사건이 있었던 대상체의 9.7%(3/31)와 비교하여 AE 관리를 위해 ICU에 입원했다.
이러한 결과는 AE 및 낮은 등급의 CRS 및 NE의 발생률 감소와 관련된 CAR T 세포 요법이 HRU 및 비용을 제한할 수 있다는 관찰과 일치한다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL) 환자의 건강 상태 평가
CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료용 CAR+ T 세포 조성물은 실시예 1, 3 및 6에 기재된 바와 같이 실질적으로 임상 연구에서 2개의 선행 요법 라인에 실패한 재발 및 불응성 비-호지킨 림프종을 갖는 대상체에게 투여되었다.
A. 건강 관련 삶의 질(HRQL) 및 증상(Sx) 영향
증상 영향, 기능적 척도 및 전반적인 건강 상태는 치료 후 대상체에서 평가되었다.
유럽 연구 및 치료 기구 핵심 삶의 질 설문지 버전 3.0(EORTC QLQ-C30)을 기준선(BL), 29일(1개월), 2개월 및 3개월에 시행하여 증상 영향, 기능적 척도 및 전반적인 건강 상태를 평가하였으며, 점수 범위는 0-100으로, 점수가 높을수록 HRQL이 개선되거나 증상 부담이 낮음을 나타낸다. 기능 및 삶의 질(QL) 점수에서 BL ≥10점에서 증가하거나 Sx 점수의 BL≥10점에서 감소는 임상적으로 의미 있는 개선으로 간주되었다. 임상 연구의 특정 시점에서 127명의 대상체 중 87명이 기준선에서 평가되었고 다른 시간 중 한 번 이상에서 평가되었다(BL 평가 후 BL+≥ 1). 평가 대상체의 평균 나이 범위는 62세(표준편차 11세)였다.
표 E24에 나타난 바와 같이, 증상 점수는 일반적으로 주입 후 개선되었다. 평균 전체 건강 상태, 감정 및 인지 기능 점수는 주입 후 1-3개월에서 BL에 비해 개선되었다. 신체적, 역할 및 사회적 기능 점수는 BL에 비해 1개월에 감소했고, 2-3개월에 BL에 비해 개선되었다. 주입 후 3개월 동안 특정 영역에서 임상적으로 의미 있는 개선을 달성한 대상체의 비율은 다음과 같다: 피로, 50%; 통증, 51%; 신체 기능, 22%; 및 전체 건강 상태, 41%.
이러한 결과는 해당 대상체의 하위 유형에서 증상 및 HQRL이 생존 대상체에서 개선되었으며 주입 후 2-3개월에 미리 지정된 영역에서 임상적으로 의미 있는 개선이 있었음을 보여준다.
Figure pct00060
B. 치료 후 선호-가중된 건강 상태
환자의 웰빙과 지각된 건강 상태를 측정하는 건강 효용 지수 점수 및 시각적 아날로그 척도[VAS](EQ-5D-5L)는 기준선, 29일(1개월) 및 2, 3, 6개월 및 이후 3개월마다 치료 대상에서 분석되었다. EQ-5D-5L 지수 점수는 널리 사용되는 미국 선호도 가중치를 사용하여 계산되었다. 임상 연구의 특정 시점에서 90명의 대상체가 기준선과 한 번 이상 다른 시점에서 평가되었다(BL+ ≥ 1 BL 평가 후). 평균 나이 범위는 61.7세였다(11.2세의 표준 편차(SD)).
표 E25에 나타난 바와 같이, 환자들은 과도하게 사전 치료를 받았고 90%는 짧은 전체 생존을 예측할 수 있는 1개 이상의 저위험 질병 특징을 가졌다.
Figure pct00061
EQ-5D 건강 상태 평가는 이동성, 자기 관리, 일상 활동, 통증/불편, 불안/우울을 포함한 건강의 5가지 차원으로 구성되며, -0.109에서 1까지의 척도로 설정된 미국 값을 사용하여 단일 요약 지수로 점수를 매겼다. 점수 0은 사망, 1은 "완전한 건강", 음수 점수는 사망보다 더 나쁘다고 인식되는 상태를 나타낸다. EQ-5D-5L 단일 요약 지수 점수에서 기준선으로부터 ≥0.07의 변화는 임상적으로 의미 있는 변화의 지표로 선험적으로 지정되었다(예를들어, 「Pickard AS, 등. Health Qual Life Outcomes. 2007; 5:70 」참조).
EQ-VAS 평가를 위해 대상체들은 평가 당일 0에서 100까지의 척도에 X를 표시하여 건강을 평가하도록 요청받았으며, 여기서 0은 상상할 수 있는 최악의 건강을 나타내고 100은 상상할 수 있는 최상의 건강을 나타낸다(즉, 더 높은 점수는 개선된 건강을 나타냄). 관찰된 점수의 분석에는 관찰된 점수의 기술 통계(예를들어 n, 평균, 표준 편차, 최소값, 백분위수 및 최대값)와 각 시점에서 기준선으로부터의 변화가 포함되었으며 기준선으로부터의 변화를 평가하기 위해 양측 Wilcoxon 부호 순위 검정으로 평가되었다.
환자 보고 결과(PRO)는 >57%의 준수율로 6개월 동안 평가되었다 (표 E26).
Figure pct00062
도 33에 나타낸 바와 같이, 평균 선호도 가중 건강 상태 점수는 0.83(기준선에서 0.104의 SD)이었고, 이는 주입 후 1개월에 감소(-0.012[SD 0.144]), 주입 후 2개월(0.010[SD 0.149])부터 6개월(0.019[SD 0.133])까지 기준선에서 증가했다. 기준선에서의 평균 기준 EQ-5D 건강 상태 유틸리티 점수는 미국의 인구 기준(평균 EQ-5D 지수 점수 = 0.867, 예를들어, 「Janssen B, 등. Chapter 3. Population norms for the EQ-5D. 2013 Sep 26. In: Szende A, 등, eds. Self-Reported Population Health: An International Perspective based on EQ-5D [Internet]. Dordrecht, Netherlands: Springer; 2014.」참조) 보다 낮았다.
기준선으로부터의 평균 변화는 1개월째에 감소를 나타내었고, 이어서 주입 후 2-6개월째부터 기준선으로부터의 증가를 나타내었다 (도 34). 6개월째에 환자의 30%가 0.07 이상의 개선을 경험했으며, 이는 임상적으로 의미 있는 개선을 나타내는 것으로 여겨진다(도 35).
EQ-5D-5L의 이동성, 자가 관리 및 일상 활동 차원에서 중등도, 중증 또는 극도의 문제를 보고하는 환자의 비율은 주입 후 1개월째에 증가했으며(도 36a-36c), 통증/불편함 및 불안/우울증이 없다고 보고한 환자는 기준선에서 주입 후 6개월까지 증가하였다(도 36D-36E).
도 37에 도시된 바와 같이, 평균 전체 건강 평가 점수(EQ-VAS)는 기준선에서 70.2에서 주입 후 6개월에서 83.4로 단조 증가하여 최소한으로 중요한 차이의 앵커 및 분포 기반 추정치를 초과했다(8-12 및 7-10, 각각). 평균 기준선 EQ-VAS 등급은 미국의 인구 표준보다 낮았다(평균 EQ-VAS=80)(예를들어, 「Jansen B,등」 참조). EQ-VAS 점수의 기준선으로부터의 평균 변화는 주입 후 1-6개월 동안 전반적인 건강 상태의 개선을 입증했다(도 38).
이러한 결과는 대상체의 해당 하위 유형에서, 평균 선호도 가중 건강 상태는 주입 후 1개월 동안 감소했지만 2-6개월 동안 증가했으며 임상적으로 의미 있는 개선이 주입 후 6개월에 환자의 30%에서 >0.07 임계값을 초과했다. 전체 건강 등급 점수는 기준선에서 주입 후 6개월까지 증가했다.
C. 치료의 12개월 후 건강 관련 삶의 질(HQRL) 및 선호-가중 건강 상태
삶의 질, 증상 및 건강 효용 영향은 상기 실시예 8.A 및 8.B에 기술된 동일한 연구의 나중 시점에서 대상체에서 평가되었다. 임상 연구의 이 시점에서, 매개변수는 기준선(BL; CAR+ T 세포 주입 전), 29일(1개월) 및 CAR+ T 세포 주입 후 2, 3, 6, 9, 12, 18 및 24개월에 대상체에서 평가되었다. BL의 척도 점수에서 10점 이상의 변화(기능/건강 상태의 증가 및 증상의 감소)는 임상적으로 의미 있는 것으로 간주되었다(즉, 환자가 중요하다고 식별한 변화). EORTC QLQ-C30의 사전 지정된 영역에서 임상적으로 의미 있는 변화(즉, 10점 개선 또는 악화)가 있는 대상자의 비율은 BL에서 6개월 및 12개월까지의 변화 점수를 기반으로 계산되었다. 또한, 건강 상태 지수 점수(EQ-5D) 및 EQ-5D-5L의 EQ-VAS에 대해 BL에서 평균 변화를 계산했다.
평가 당시 268명의 대상체 중 181명(평균 나이, 60세)이 EORTC QLQ-C30 설문지를 평가할 수 있었고 186명의 대상체(평균 나이, 60세)가 EQ-5D-5L 설문지를 평가할 수 있었다. EORTC QLQ-C30 및 EQ-5D-5L 평가 가능한 모집단에 대해 연구 중 추적 관찰 시간 중앙값이 각각 8.7개월 및 8.8개월이었던 시점의 인구 통계 및 기준선 특성이 표 E26.1에 나타나있다. 환자가 보고한 결과 조사 참여율은 최소 6개월의 추적 관찰이 있는 대상체의 경우 최소 63%; 12개월 이상의 추적 조사를 받은 대상체의 75%가 설문 조사를 완료했다.
Figure pct00063
이 시점의 결과는 표 E26.2에 요약되어 있다. EORTC QLQ-C30에서 미리 지정된 관심 영역의 경우, 전체 건강 상태의 평균 점수는 BL에 비해 1개월에서 12개월 사이에 개선을 보인 반면 신체 기능은 1개월에 감소한 다음 2개월에서 12개월에 BL에 비해 개선되었다. 보고된 피로 증상 부담은 BL과 비교하여 1개월째에 유사하게 유지되었고, 주입 후 2개월에서 12개월까지 개선되었다. 평균 통증 증상은 BL에 비해 1개월에서 12개월 사이에 지속적으로 낮았지만 평균 증상 부담은 변동하였다. BL 점수의 평균 변화는 12개월까지 전반적인 건강 상태에서 4.3~16.9, 신체 기능에서 -4.8~6.5, 피로에서 -15.5~0.0, 통증 점수에서 -8.8~-1.8 사이였다. 미국의 일반 인구의 결과와 비교하여, EORTC QLQ-C30 참조 값에 기초, 연구의 대상체들은 BL에서 대부분의 도메인에 대해 비슷한 평균 EORTC QLQ-C30 점수를 가졌으며, 이는 12개월 동안 유지되거나 개선되었다. 일부 대상체는, 6개월과 12개월에 전체 건강 상태(52% 및 61%), 신체 기능(30% 및 37%), 피로(53% 및 61%) 및 통증(35% 및 47%)에서 각각 임상적으로 의미 있는 개선을 보였다. 평균 EQ-5D-5L 미국 기반 건강 효용 지수 점수는 CAR+ T 세포 주입 1개월 후 감소한 후 2개월에서 3개월 사이에 점수 변동이 있었고, 6개월에서 12개월 사이에 BL에 비해 개선되었다. 평균 EQ-VAS 점수는 BL에 비해 1개월에서 12개월까지 개선된 것으로 나타났다.
Figure pct00064
EORTC QLQ-C30의 경우 기준선에서 ≥10점(MID)의 변화가 임상적으로 의미 있는 차이로 간주되었다. 기준선에서 12개월까지의 전체 건강 상태의 평균 변화는 4.3 내지 16.9(도 52a), 신체 기능은 -4.8 내지 6.5(도 52B), 피로는 -15.5 내지 0.0(도 53a), 통증은 -8.8 내지 -1.8(도 53b)이었다. 더 높은 비율의 대상체는, 전반적인 건강 상태(도 54a의 A), 신체 기능(도 54a의 B, 1개월 제외), 피로(도 54b의 C) 및 통증(도 54b의 D) 포함하는 영역에서 이 연구의 모든 시점에 걸쳐, 악화보다 임상적으로 의미 있는 개선을 경험했다.
건강 지수 점수의 기준선으로부터의 평균 변화는 1개월째에 감소하였고, 이어서 2개월째와 3개월째 사이의 점수 변동 및 6개월 내지 12개월째의 개선이 뒤따랐다(도 55a). EQ-VAS에서 기준선으로부터의 평균 변화는 1개월 및 그 이후까지 증가하였고, 각각 6개월 및 12개월에 9.1에서 11.9까지의 범위였다(도 55b).
상기 결과는 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 사용한 치료가 환자가 보고한 결과로 측정한 바와 같이 환자의 경험을 유의하게 개선하는 것으로 나타났음을 보여주었다. 상기 결과는 이 연구에서 DLBCL 코호트의 대상체가 12개월 동안 HRQL 및 건강 효용의 개선을 경험했음을 보여주었지만, 일부는 1개월에 상해를 보고했다. CAR T 세포 주입 후 12개월 동안 감소된 피로 및 통증 증상 부담도 관찰되었다. HRQL 및 증상 부담(EORTC QLQ-C30)은 항-CD19 CAR-발현 T 세포 투여 후 빠르면 1개월부터 12개월까지 개선되었다. HRQL 및 증상 부담에서 임상적으로 의미 있는 개선을 보이는 환자의 비율이 악화된 환자의 비율보다 더 컸다. 또한, 임상 반응이 있는 환자는 임상 반응이 없는 환자보다 HRQL에서 임상적으로 의미 있는 개선을 경험할 가능성이 더 높았다. 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 투여한 후, 건강 상태 지수 점수(EQ-5D-5L) 및 자가 평가 건강(EQ-VAS)은 1개월째부터 개선되었고, 이후 3개월에서 12개월까지 꾸준히 개선되었다. 이러한 결과는 주목할 만한 비율의 대상체가 CAR+ T 세포 주입 후 6개월 및 12개월에 임상적으로 의미 있는 개선을 보였다는 발견을 뒷받침한다.
재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL) 및 속발성 CNS 림프종이 있는 대상체에 대한 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물은 실시예 1, 3 및 6에 기재된 바와 같이 실질적으로 임상 연구에서 2개의 선행 요법 라인에 실패한 재발 및 불응성 비-호지킨 림프종을 갖는 대상체에 투여되었다. 본 연구에서, 치료를 위한 적격한 대상체는 연구 개시 시에 존재할 수 있는 2차 CNS 림프종을 갖는 대상체를 포함하거나, 또는 임상 연구 동안 2차 CNS 림프종이 발병한 경우, 대상체는 항-CD19 CAR 치료 T 세포 조성물을 계속 받을 수 있었다. CAR+ T 세포 조성물의 단일 초기 주입으로 치료받은 대상체와 재치료를 받은 대상체가 포함되었다.
Lugano 기준에 따른 효능 및 「Lee 등. (2014) 및 CTCAE, version 4.03」 의 기준에 따른 CRS 및 NE 등급의 평가를 포함하여 실시예 1에 기재된 바와 같이 반응 및 안전성에 대해 대상체를 모니터링하였다.
본 연구에서, 대상체는 약 1:1(각각 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 개별 주입을 통한 각각의 단일 용량)의 표적 비율로 투여된 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단의 개별 투여에 의해 정의된 조성물로서 항-CD19 CAR-발현 세포의 단일 용량을 다음과 같이 투여받았다: 5×107 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는 용량 수준 1(DL-1)의 단일 용량 또는 1×108 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는 용량 수준 2(DL-2)의 단일 용량. 첫 번째 투여 후 완전한 반응을 얻었지만 나중에 진행된 대상체는 두 번째 투여(재치료)를 받을 수 있다.
표 E27은 이 연구에서 분석된 이차 CNS 림프종을 앓고 있는 대상체의 환자 인구통계를 제시하며, 이는 분석 시점에 DL1에서 3명의 환자 및 DL2에서 6명의 환자를 포함한다. 2차 림프종 환자의 중앙 나이는 60세였으며 이전에 3회의 치료를 받았다. 2차 CNS 림프종의 발병은 다양했다: 치료된 대상체 중 9명의 대상체는 초기 치료(n=6), 재치료 전(n=2) 또는 주기(n=1)에서 이차 CNS 림프종을 가졌다. 10번째 환자는 초기 치료 당시 이차성 중추신경계 림프종 진단을 받았지만 나중에 상완 신경총 침범(CNS 침범 없음)으로 진단되어 분석에 포함되지 않았다.
Figure pct00065
표 E28에 나타낸 바와 같이, R/R DLBCL 및 이차 CNS 림프종이 있는 대상체는 상이한 조직학 및 다양한 유형의 CNS 침범에 관한 것을 포함하여 고도의 이질성을 나타내었다. 다른 조직학에는 여포성 림프종에서 변환된 DLBCL, 달리 명시되지 않은 DLBCL, MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있는 높은 등급 B 세포 림프종이 포함된다. 연수막 질환, 국소 실질 병변, 다발성 병변, 경막 침범 및 신경 침범을 포함한 다양한 유형의 CNS 침범이 관찰되었다.
Figure pct00066
CAR+ T 세포 증폭이 정점에 도달하는 시간 중앙값은 12.5일(중앙값 7-112일)이었다. 표 E29는 2차 CNS 림프종을 가진 대상체 그룹에서 치료-응급 이상 반응의 요약 및 본 연구에서 평가된 시점을 제공한다. 표 E29에 나타낸 바와 같이, 속발성 CNS 림프종을 가진 대상체 중 9명 중 1명은 등급 (G)2 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 G3 NE를 갖고; CRS의 발병은 1일(1등급)에 발생했고, 2일에 2등급으로 진행되었고, 3등급 NE의 발병은 6일에 의식 수준 감소(6-13일) 및 연하곤란(17-18일)에 발생했다. 낮은 등급의 추가 NE에는 혼란, 떨림, 구음 장애, 혼수, 동요, 경직, 내측 응시, 양측 안진, 확장된 왼쪽 동공, 경련, 발성 장애 및 연하곤란이 포함되었다.
재치료를 받은 대상체는 CRS 또는 NE를 갖지 않았지만, 3명 모든 재치료 대상체는 모두 초기 치료 시점에서 낮은 등급의 CRS를 가졌다. 1명의 재치료 대상체는 항-CD19 CAR+ 치료 T 세포 조성물로 초기 치료를 받았을 때 그리고 2차 CNS 림프종의 공식 진단 전에 G2 측두 부종의 NE를 가졌다. 2차 CNS 림프종이 있는 평가 대상체 중, 대상체는 예방적 레비티라세탐을 받았고, 1명의 대상체는 코르티코스테로이드 및 토실리주맙을 받았다.
Figure pct00067
Figure pct00068
기타 보고된 독성은 주로 혈구 감소증이었고, AE와 관련된 치료-관련 사망은 없었다 (표 E30).
Figure pct00069
반응은 Lugano 기준을 사용하여 평가되었으며 표 E31 및 E32에 요약되어 있다. 이들 모두 중 2차 CNS 림프종을 갖는 네 (4)명의 대상체가 치료에 반응하였으며, 이 중 2명은 치료 후 270일 및 545일에 진행 중인 완전 반응의 최고 반응을 보였다. 4가지 반응 모두는 치료적 T 세포 조성물로 초기 치료 후에 발생하였다. 재치료 대상체 중 누구도 반응하지 않았다.
Figure pct00070
Figure pct00071
이러한 결과는 투여된 항-CD19 CAR+ T 세포 조성물이 제한된 치료 옵션 및 불량한 예후가 있기 때문에 충족되지 않은 의학 요구가 높은 집단인 2차 CNS 림프종을 갖는 대상체에게 안전하게 전달할 수 있다는 발견과 일치한다. 투여된 항-CD19 CAR+ T 세포는 이 대상체 집단에서 관리 가능한 독성 및 임상 활성을 입증하였다. 이 집단에서 과도한 NE는 관찰되지 않았으며, 단 1명의 대상체가 극심한 NE(등급 3) 및 CRS(등급 2)를 나타냈다. 항-CD19 CAR-발현 T 세포에 대한 반응 또는 내성은 모든 대상체의 전신 및 CNS 림프종 부위에서 유사하였다. 또한, 초기 치료 시점에 2차 CNS 림프종을 가진 6명의 대상체 중 4명이 반응하였으며, 2명은 각각 CAR-T 세포 투여의 270일 및 545일에 마지막 분석 시점에 진행 중인 반응을 보였다.
재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)이 있는 고위험 이식 적격 대상에서 항-CD19 CAR-발현 세포 대 표준 치료(SOC) 요법의 비교
상기 실시예 1, 3 및 6에 기재된 연구에 사용된, CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물은 2개의 이전 치료법에 실패한 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종 환자에게 투여된다. 치료를 위한 적격 대상에는 공격성 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)(다르게 명시되지 않은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)[드 노보 또는 형질전환된 비활동성(indolent) NHL], 이중/삼중 히트 림프종, 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종, T 세포/조직구가 풍부한 거대 B 세포 림프종 또는 여포성 림프종 등급 3B) 및 CD20 항체와 안트라사이클린으로 1차 요법 후 완전 반응(CR) 달성 후 12개월 이내에 재발 및 불응성(R/R) 이 있는 대상이 포함된다. 제외 기준에는 자가 줄기 세포 이식(ASCT), 계획된 동종 줄기 세포 이식, 이전 유전자 또는 CD19 표적 치료 또는 활성 감염에 대한 부적격이 포함된다.
대상체들은 두 개의 다른 그룹에 할당된다. 그룹 1은 표준 치료(SOC) 요법의 3주기를 받는다. 재발성/불응성 DLBCL이 있는 이식 적격 대상체의 SOC에는 백금 기반 요법(예를 들어, 리툭시맙(rituximab), 덱사메타손(dexamethasone), 시타라빈(cytarabine, AraC) 및 시스플라틴(cisplatin, R-DHAP), 리툭시맙(rituximab), 이포스파미드(ifosfamide), 카보플라틴(carboplatin) 및 에토포사이드(etoposide, R-ICE), 또는 리툭시맙(rituximab), 겜시타빈(gemcitabine), 덱사메타손(dexamethasone) 및 시스플라틴(cisplatin, R-GDP))에 이어 카무스틴(carmustine), 에토포사이드(etoposide), 시타라빈(cytarabine) 및 멜팔란(melphalan, BEAM) 고용량 화학요법 및 반응 대상체에서 조혈모세포 이식(HSCT). 그룹 2는 플루다라빈/사이클로포스파미드로 림프 고갈을 겪은 후 100x106 CD8+ 및 CD4+ CAR+ T 세포의 표적 용량에서 항-CD19 CAR+ T 세포 주입을 겪는다. CAR+ T 세포의 제조 동안, 대상체는 SOC 치료법 요법을 받을 수 있다.
사전 치료 생검 유전자 발현 프로파일 및 임상 반응 분석
일반적으로 상기 실시예 1, 3 및 6에 기재된 바와 같이 항-CD19 CAR T 세포를 함유하는 치료 조작된 T 세포 조성물을 투여받은 재발성 또는 불응성(R/R) 공격성 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체를 유전자에 대해 치료 전 종양 생검에서의 발현 프로파일을 위해 평가하였다.
CAR T 세포 조성물의 투여 후, 대상체는 투여 후 3개월을 포함하여 임상 반응에 대해 모니터링되었고, CAR T 세포 조성물에 대한 반응은 대상체가 진행성 질환(PD) 또는 완전 반응(CR)을 가졌는지 여부를 평가함으로써 결정되었다.
미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)이 있는 50명의 대상체로부터 종양 생검을 림프구 고갈 화학요법 투여 전 및 CAR T 세포 투여 후 11일에 수집하고, 종양 생검에서 분리된 RNA로부터 준비된 상보적 DNA(cDNA) 샘플의 유전자 발현에 대해 RNA 시퀀싱(RNA-seq)으로 분석했다. 전-처리 종양 생검으로부터 RNA-seq를 사용하여 결정된 유전자 발현 수준은 자가 치료 CAR T 세포 조성물의 투여 후 반응과 사후 상관관계가 있었다.
도 42는 치료 후 3개월에 CR 또는 PD를 나타내는 대상체에서 치료 전 종양 생검에서 차등 유전자 발현 프로파일을 보여준다. Log2 배수 변화 컷오프를 0.6보다 크거나 -0.6 미만으로 설정하고 거짓 발견률(FDR)을 10% 이하로 설정하면 3에서 CR을 나타내는 대상의 치료 전 생검에서 고도로 발현된 360개의 유전자가 나타났다. 치료 후 개월(n = 16) 및 치료 후 3개월에 PD가 있는 대상체의 치료 전 생검에서 높게 발현된 380개 유전자(n = 29). 차등적으로 발현된 유전자 중에서, T 세포와 관련된 유전자의 발현은 치료 후 3개월에 CR을 나타낸 피험자의 치료 전 생검에서 더 높았다. 제스테 상동체 2(zeste homolog 2)의 히스톤 리신 메틸트랜스퍼라제 인핸서(histone lysine methyltransferase enhancer)를 코딩하는 유전자인 EZH2 및 EZH2의 표적인 유전자의 발현은 치료 후 3개월에 PD를 나타낸 대상체에 대한 사전 치료 생검에서 더 높았다.
도 43에 나타나는 바와 같이, FL에 비해 DLBCL에서 더 높은 수준으로 발현된 유전자로 확인된 유전자 세트("FL_DLBCL_DN" 유전자 세트로 지정; 하기 실시예 4에 기재된 바와 같이 75개의 사용 가능한 DLBCL 세포주 샘플 및 75개의 사용 가능한 FL 세포주 샘플의 차등 유전자 발현 분석으로부터), 또한 치료 후 3개월에 PD를 나타내는 대상체로부터의 생검과 관련된 유전자에 대해 고도로 농축된 것으로 밝혀졌다.
이러한 결과는 FL 및 EZH2 표적 유전자에 비해 DLBCL에서 더 높은 수준으로 발현된 유전자가 CAR-T 세포 투여 후 3개월에 대상체에서 PD와 관련된 유전자 중 사전 처리 생검 샘플에서 풍부하다는 것을 뒷받침한다.
미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL) 대 여포성 림프종(FL)의 유전자 발현 분석
유전자 발현을 위한 RNA-Seq는 상기 실시예 11 에서 기재한 약 75개의 여포성 림프종(FL) 및 약 75개의 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 이용 가능한 세포주 샘플로부터 분리된 RNA로부터 제조된 상보적 DNA(cDNA) 샘플에 대해 수행되었다. 분석된 세포주에는 DLBCL의 배중심 B 세포 유사(GCB) 및 활성화된 B 세포(ABC) 하위 유형이 모두 포함되었다. 도 44에 나타나는 바와 같이, DLBCL 및 FL 세포주에서 상승된 상이한 유전자 세트를 갖는 DLBCL 및 FL 종양 샘플에서 차등적 유전자 발현이 관찰되었다. FL 및 DLBCL 세포주 사이에 차등 발현을 나타내는 유전자 중에는 EZH2(도 45a; 제스테 상동체 2(zeste homolog 2)의 히스톤 리신 메틸트랜스퍼라제 인핸서(histone lysine methyltransferase enhancer)를 암호화함) 및 CD3E(도 45b; CD3-TCR 복합체에서 CD3e 분자, 엡실론을 암호화함)가 있었다. 나타낸 바와 같이, FL 종양은 DLBCL 세포주와 비교하여 EZH2의 더 낮은 발현 수준 및 더 높은 CD3E의 발현 수준을 나타내었다.
실시예 11에 기재된 바와 같이 항-CD19 치료 T 세포 조성물을 투여받은 대상체의 사전 치료 종양 생검에 대한 RNA-Seq에 의한 유전자 발현 프로파일을 DLBCL("DLBCL 유전자 세트"로 지정) 대 FL("FL 유전자 세트"로 지정)에서 상승된 것으로 밝혀진 도 44에 기재된 연구의 유전자 발현을 위해 분석하였다.
단일 샘플 유전자 세트 농축 분석(single-sample Gene Set Enrichment Analysis, ssGSEA)을 수행하여 샘플과 해당 유전자 세트의 각 쌍에 대한 개별 농축 점수를 계산했다. 도 46a에 나타나는 바와 같이, 실시예 11에 기술된 연구에서 CR을 나타내기 시작한 대상체는 PD를 나타내기 시작한 대상체에 비해 DLBCL 유전자 세트에 대해 더 낮은 ssGSEA 점수를 가졌다. 반대로, 도 46b에 나타나는 바와 같이, 실시예 11에 기술된 연구에서 CR을 나타내기 시작한 대상체는 PD를 나타내기 시작한 대상체에 비해 FL 유전자 세트에 대해 더 높은 ssGSEA 점수를 가졌다.
이러한 데이터는 DLBCL과 FL을 가진 대상체의 유전자 발현 프로필이 다르다는 것을 보여준다. 이러한 데이터는 FL이 있는 대상체 또는 DLBCL 대상체에 비해 FL 대상체에서 상승된 것으로 밝혀진 유전자 발현이 더 높은 대상체가 DLBCL을 가진 대상체 또는 FL에 비해 DLBCL이 증가하는 것으로 밝혀진 유전자를 발현하는 대상체보다 종양 환경으로의 T 세포 침윤에 덜 저항할 수 있다는 관찰과 일치한다.
항-CD19 CAR-발현 세포 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)이 있는 대상체의 안전성 및 효능 평가
CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물은 실질적으로 실시예 1, 3 및 6에 기술된 바와 같이 임상 연구에서 2개의 선행 요법 라인에 실패한 재발 및 불응성 거대 B 세포 림프종(LBCL)을 갖는 대상체를 포함하는 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종이 있는 대상체에게 투여되었다.
A. 대상체 및 치료
이 특정 시점에 제공된 데이터는 269명의 대상으로 달리 명시되지 않는 한 치료적 CAR+ T 세포 조성물을 받은 268명의 대상으로부터의 결과를 나타낸다. 이 대상체 그룹은 결과가 실시예 1, 3 및 6에 묘사된 대상체의 하위 집합을 포함했다.
거대 B 세포 림프종(LBCL 코호트, 이전에는 DLBCL 코호트라고도 기재됨)의 대상체에는 달리 명시되지 않은 재발성/불응성(R/R) DLBCL(NOS, 비활동성(indolent) 림프종에서 형질전환된 경우 포함), MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열이 있는 고등급 B 세포 림프종(HGBCL)(Swerdlow SH 등 Blood. 2016;127:2375-90), 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL), 또는 여포성 림프종 등급 3B(FL3B) 이 있는 18세 이상의 대상이 포함되었다. 대상체는 2회 이상의 요법 및 ECOG PS 0-2 이후에 R/R 질환이 있었다. 3/4등급 혈구감소증, 경증-중등도 기관 기능장애 및 이차 CNS 림프종이 있는 대상체가 적격이었다. 가교 요법이 허용되었지만 대상체는 플루다라빈(fludarabine) 및 시클로포스파미드(cyclophosphamide)로 림프구 고갈(LD) 전에 PET 양성 질환이 있어야 했다. 본원에 기재된 동일한 항-CD19 CAR을 발현하는 조작된 T 세포의 1차 주입 후 최상의 반응으로서 안정 질환(SD)을 달성한 대상체는 조작된 세포의 2차 주입을 받을 자격이 있었다. 대상체는 이전에 항-CD20 함유 화학면역요법(예를 들어, 안트라사이클린(anthracycline) 및 리툭시맙(rituximab)(또는 다른 CD20 표적 제제)을 받은 후 이후에 재발해야 하며 이전에 자가 또는 동종 HSCT를 받았을 수 있었다. 중등도의 신장(크레아티닌 클리어런스(creatinine clearance)<60 mL/min)을 갖는 대상) 및 심장(좌심실 구혈률 <50%) 기능 장애, 낮은 절대 림프구 수(최소 카운트 필요 없음) 및 이차 CNS 침범이 포함되었다. ALC, ANC, 혈소판 또는 헤모글로빈에 대한 더 낮은 역치는 없었다. DLBCL 코호트의 대상체의 결과에 대한 후속 조치가 평가되었다.
외투 세포 림프종(MCL) 코호트의 경우: MCL(진단은 cyclin D1 발현 또는 세포유전학, 형광 제자리 잡종화[FISH] 또는 중합효소 연쇄 반응[PCR]에 의한 t(11;14)의 증거로 확인되어야 함) 최소 1회 이상의 이전 MCL 치료법 후 재발한 또는 불응성 질환이 있다.
다른 기준에는 "호지킨 및 비호지킨 림프종의 초기 평가, 병기 및 반응 평가에 대한 권장 사항: Lugano 분류"에 따른 양전자 방출 단층 촬영(PET) 양성 질환이 포함되었고(Cheson BD 등 J Clin Oncol. 2014. 32:3059-68); 마지막 재발로부터 이용 가능한 보관된 종양 생검 조직 및 이용 가능한 상응하는 병리학 보고서, 또는 스크리닝 시점에 적어도 1개의 종양 관련 부위가 접근 가능한 것으로 간주된 경우, 질병 확인을 위해 치료 전 생검(가능한 경우 절제)을 받을 의향이 있었다. 대상체가 완전한 반응(CR)을 한 적 없는 경우 가장 최근의 생검 샘플이 허용되었다; ECOG PS(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status) 0 또는 1(참고, ECOG 상태 2도 프로토콜 수정 5까지 허용됨); 적절한 기관 기능, 다음과 같이 정의됨; 림프구 고갈 화학요법(LDC)을 받기에 적절한 골수 기능을 가졌다고 조사자가 평가함; 혈청 크레아티닌 ≤1.5 × 나이 조정 정상 상한치(ULN) 또는 계산된 크레아티닌 클리어런스(CrCl; Cockcroft 및 Gault) >30mL/min/1.73m2, 알라닌 아미노전이효소(ALT) ≤5 × ULN 및 총 빌리루빈 <2.0 mg/dL(또는 길버트 증후군 또는 간 림프종 침윤 환자의 경우 <3.0 mg/dL); 적절한 폐 기능, 국립암연구소(NCI) 이상반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) 등급 ≤1 호흡곤란 및 실내 공기의 산소 포화도(SaO2) ≥92%로 정의됨; 적격 판정 후 1개월 이내에 수행된 심초음파 또는 MUGA(Multiple Uptake Gated Acquisition) 스캔에 의해 평가된 LVEF(좌심실 구혈률) ≥40% 로 정의되는 적절한 심장 기능; 백혈구 성분채집술을 위한 적절한 혈관 접근(말초 라인 또는 외과적으로 배치된 라인). 이전에 CD19-표적 치료법을 받은 대상체는 선행 CD19 표적 치료를 완료한 후 생검에서 확인된 CD19 양성 림프종이 있어야 한다.
대상체들은 실시예 1에 기재된 바와 같이 항-CD19 치료 CAR T 세포 조성물로 치료받았다. 특히,항-CD19 CAR+ T 세포 구조는 4-1BB 공자극 도메인을 포함하였다. 모든 치료 대상에 대해, 치료 T 세포 조성물은 각각의 환자로부터의 CD8+ 및 CD4+ T-세포 하위세트가 정제되고 항-CD19 CAR로 형질도입되고 개별 표적에서 개별적으로 확장되고 CD8+ 및 CD4+ CAR T+ 세포의 개별 목표 수로 냉동보존된 별도의 CD4+ 및 CD8+ 조성물로 제조되었다. 항-CD19 CAR을 발현하기 위한 별도의 형질도입 및 시험관내 개별 확장을 포함하는 CD4 및 CD8 CAR+ T 세포 조성물의 개별 제조는 CD4+ 및 CD8+ CAR-조작된 T 세포를 대략 동일한 표적 용량(약 1: 1)으로 투여할 수 있도록 했다. 결과적으로, 투여된 총 및 CD8+ CAR+ T-세포 용량에서 낮은 변동성이 관찰되었다.
대상체들은 CAR T 세포로 치료하기 전에 정맥내 플루다라빈(fludarabine)(30mg/m2/일)과 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)(3일 동안 300mg/m2/일)로 치료했다. 림프구 고갈 화학요법은 CAR T 세포 투여 2~7일 전에 완료되었다. 연구 전반에 걸쳐 플루다라빈 투여는 플루다라빈 패키지 삽입물을 기반으로 했다. 플루다라빈 용량은 플루다라빈 라벨에 따라 신부전 환자에서 조정되었다. 림프구 고갈 화학요법의 용량은 표 E32.1에 설명되어 있다.
Figure pct00072
질환을 통제하기 위한 가교요법이 허용되었고, 백혈구성분채집술 후 및 림프 구고갈 화학요법 전에 연구자의 결정에 따라 투여되었다. 가교요법은 표 E32.2에 기재되어 있다.
Figure pct00073
B. 기준선 특성
분석을 위한 이 시점에서, 총 342명의 대상체는 백혈구성분채집술을 받았고, 이 중 268명은 CAR+ T 세포 조성물을 받았으며(또는 일부의 경우, 표시된 바와 같이 269명의 대상체), 24명은 부적합(nonconforming) 산물(즉, CD8+ 또는 CD4+ 성분은 방출 기준을 만족하지 않음)을 받았고, 모든 용량 수준에서 2명은 조성물을 사용할 수 없었으며, 48명은 주입 전 사망 또는 림프종 합병증의 이유로 주로 CAR-T 세포를 받지 못하였다(33명은 사망하였고 CAR-발현 T 세포를 받지 못하였다). CAR-발현 세포를 생성하기 위한 예시적인 제조 공정에서, 백혈구성분채집술부터 수확 기준 및 생산물 이용가능성까지의 평균 시간은 24일이였다.
환자의 특성은 표 E32.3(n=268) 및 표 E32.4(n=269)에 나타나 있다. 평균 나이은 고령의 하위 집단(41%는 ≥65세였고, 10%는 ≥75세였다)을 포함하여, 63세(범위, 18~86세)였으며; 65%의 대상체는 남성이었다. 대상체는 중등도의 합병증을 가지고 있었다(환자의 19% 및 5%는 각각 손상된 신장 및 심장 기능을 나타냈다). 대상체는 많은 사전 치료를 받았고(이전 요법의 방식의 평균 수는 3이었다) 공격성 질병이 있었다: 26%는 ≥ 4번의 이전 전신 요법의 방식을 받았고(3의 중앙값; 범위, 1-8); 34%는 이전에 자가 HSCT를 받았으며 3%는 이전에 동종이계 HSCT를 받았고; 67%는 화학요법에 불응성(마지막 요법의 방식에 대해 화학요법-불응성)이었으며; 44%는 CR을 달성한 적이 없었다. 모든 대상체 중 255명은 반응을 평가할 수 있었다. 대상체는 ≤1.5×나이 조정 ULN의 혈청 크레아티닌 수준 또는 >30 ml/분/1.73m2의 크레아티닌 클리어런스(CrCl)을 가졌다. 스크리닝 시, 대상체 중 58%는 ECOG PS 1을 가졌고; 59%는 가교 요법이 필요했으며; 림프구고갈 전에 22%는 LDH ≥500 U/L를 나타냈고, 28%는 SPD ≥50 cm2를 나타냈다.
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
C. 용량 및 결과의 평가
대상체는 50×106(n=51)의 DL1, 100×106(n=176)의 DL2 또는 150×106(n=41)의 DL3을 받았다. 스물 다섯명의 대상체(25명)가 외래 환자 환경에서 치료를 받았다. 본 실시예의 데이터는 모든 용량 수준에서 통합되었다.
3개의 단일 용량 스케줄이 테스트되었다. 용량 수준 1은 1일째에 제공된 단일 용량 및 15일 상에 제공된 CAR T 세포의 두 번째 용량과 함께 2회 용량 스케줄로 테스트되었다(표 E33.1). 모든 용량 수준이 확장되었으며 DL2가 용량 확인을 위한 표적 DL로 선택되었다. 용량-찾기 코호트의 효능 및 안전성은 베이지안(Bayesian) 방법(Quintana M, 등 Contemp Clin Trials 2016;48:153-65)을 사용하여 분석되어 권장 요법을 확인했으며, 이는 용량 확인에서 추가로 평가되었다. 이 연구는 모든 1차 및 2차 반응 종점을 충족하였다. 1차 종점은 치료-응급 부작용(TEAE) 및 전체 반응률(ORR)이었다. 2차 종점에는 CR 비율, 반응 기간(DOR), PFS, PFS 비율 및 OS가 포함되었다. CAR+ T 세포 조성물과 관련된 연구자-확인 신경학적 사건(NE)을 포함한, TEAE는 CTCAE 기준(예를 들어, v4.03.20)을 사용하여 등급화되었고; CRS는 Lee 기준(2014)에 따라 등급화되었으며; 세포 동역학, B-세포 무형성 및 면역원성과 관련된 매개변수를 하기에 기재된 바와 같이 평가하였다. ORR은 Lugano 기준을 사용하여 독립적인 검토에 의해 평가되었다. LBCL 코호트에서 모든 CAR+ T 세포 치료 대상체의 데이터를 DL에 걸쳐 분석하였다. 치료 처방 계획의 도표는 도 48에 기술되어 있다.
Figure pct00077
용량 제한 독성(DLT) 및 이상 반응(AE)은 다음과 같이 정의되었다: CAR+ T 세포와 관련된 임의의 치료-응급 등급 4 또는 5 AE; 7일 이내에 등급 ≤2로 해결되지 않은 CAR+ T 세포와 관련된 임의의 치료-응급 등급 3 AE; 3일 이내에 등급 ≤2로 해결되지 않은 임의의 치료-응급 등급 3 발작; 속성(B 세포 무형성 제외)에 관계없이 임의의 치료-응급 자가면역 독성 등급 ≥3. 2회 용량 스케줄에서 CAR+ T 세포와 관련된 독성으로 인해 2차 CAR+ T 세포 투여를 받을 수 없음. 다음의 예상되는 사건은 DLT로 간주되지 않았다: AE 보고 기준을 충족하더라도 연구자에 의해 임상적으로 유의한 것으로 간주되지 않은 등급 3 또는 4 실험실 값; 8시간 내에 등급 ≤2로 가역적인 등급 4 주입 독성; ≤2주 동안의 등급 3 또는 4 열 또는 발열성 호중성백혈구감소증; ≤2주 동안 등급 3 아미노전이효소; ≤2주 동안 골수 구획에서 T 세포 확장으로 인한 등급 3 뼈 통증; ≤2주 동안 등급 3 또는 4 종양 용해 증후군(TLS); ≤72 시간 내 등급 <3으로 해결되는 지원을 위한 단일 혈압강하제가 필요한 등급 3 또는 4 저혈압(다른 사이토카인 방출 증후군[CRS] 증상 없음); ≤72 시간 내 등급 <3으로 해결되는 지원(삽관이 필요하지 않음)을 위한 단일 혈압강하제가 필요한 등급 3 또는 4 단독 저혈압을 갖는 등급 3 또는 4 CRS; ≤7일 동안 등급 3 또는 4 뇌병증 및 등급 ≥3 사건의 시작부터 ≥28일 내에 기준선으로 해결됨; 등급 3 오한; 등급 3 또는 4 림프구 감소증; 등급 3 또는 4 백혈구감소증; 등급 3 또는 4 B 세포 무형성 및 저감마글로불린혈증.
치료-응급 이상 반응(TEAEs)은 CAR+ T 세포 투여의 개시로부터 지나 CAR+ T 세포의 최종 투여 후 90일을 포함하여 임의의 시간에 시작된 이상 반응으로 정의되었다. 다른 항암 치료를 시작한 후 또는 CAR+ T 세포 재치료 후에 발생한 모든 이상 반응은 CAR+ T 세포 TEAE로 간주되지 않았다. TEAE, 실험실 이상 및 신경학적 사건(CAR+ T 세포와 관련된 연구자 평가 신경학적 사건으로 정의됨)은 이상 반응에 대한 미국국립암연구소 공통 용어 기준 v4.03(National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events v4.03.2009. 2019년 10월 23일)을 사용하여 등급화되었고, CRS는 Lee 기준에 따라 등급화되었다(Lee 등 Blood. 2014; 188-95).
반응 기간은 질병 진행 또는 사망에 대한 최초의 완전 반응 또는 부분 반응으로부터의 시간으로 정의되었다. 무진행 생존은 CAR T 세포의 첫 번째 주입부터 질병의 진행 또는 사망까지의 시간으로 정의되었다. 전체 생존은 CAR T 세포의 첫 번째 주입부터 사망일까지의 시간으로 정의되었다.
D. 안전성 결과
용량-찾기(n=59) 및 용량-확장(n=80)에서 치료된 139명의 대상체 중, 9명(6%)이 DLT를 경험하였다(표 E33.2). 최대-내성 용량은 확인되지 않았다. DL2(100 ×106 CAR+ T-세포)는 용량-확인에서 평가된 용량이었다. DL3에서 등급 1 및 2 CRS의 증가된 비율을 제외하고, 모든 DL에 걸쳐 용량 관련 독성 및 효능 사이에 명확한 관계가 관찰되지 않았다(표 E33.2). DL1D(용량 수준 1, 이중 용량)에서 DLT가 발생하지 않았다. 등급 3 뇌병증의 모든 사건은 해결되었다. 등급 4 뇌병증은 사망 당시 질병 진행으로 인해 해결되지 않았다. 등급 4의 혈소판감소증의 두 사건 모두 회복/해결되었다. 모든 대상체의 데이터가 결합되었다.
Figure pct00078
CRS, 사이토카인 증후군; DL1, 용량 수준 1(단일 용량); DL2, 용량 수준 2(단일 용량); DLT, 용량-제한 독성.
상기 시점에서 치료된 모든 대상체의 이상 반응 결과는 표 E33.3에 기재되어 있다. 스크리닝 시, 대상체의 58%가 ECOG PS 1을 가졌고; 59%는 가교 요법이 필요하였으며; 22%는 LD 이전에 LDH ≥500 U/L이었고 28%는 SPD ≥50 cm2였다. 안전성 분석에서 평가된 CAR+ T 세포 조성물을 받은 268명의 대상체 중에서 가장 빈번하게 치료-응급 이상 반응(TEAE)은 호중성백혈구감소증(63%), 빈혈(48%), 피로(44%), CRS(42%) 및 메스꺼움(33%)이었다. 안전성 평가에 따르면 대상체의 79%가 등급 ≥3 TEAE, 주로 혈구감소증(호중성백혈구감소증, 60%; 빈혈, 37%; 혈소판감소증, 27%)을 나타냈다. CRS 또는 NE는 대상체의 47%에서 발생하였다. 모든 등급의 CRS는 발병 중앙값 5일에 대상체의 42%에서 발생하였고; 2%만이 등급 ≥3 CRS를 가졌다. NE는 발병 중앙값 9일에 대상체의 30%(3등급 이상, 10%)에서 발생하였다. 대상체의 19%는 토실리주맙을 받았고 21%는 CRS 및/또는 NE에 대해 코르티코스테로이드를 받았다. 7명의 대상체(3%)는 1개의 등급 5 DLT를 포함하여 등급 5 TEAE를 가졌고, 그 중 4명은 표 E33.3에 나타난 바와 같이 CAR+ T 세포 조성물 및 LDC에 기인하였다.
7명의 대상체(3%)는 1개의 등급 5 DLT를 포함하여 5등급 TEAE를 가졌고; 발생한 4개의 등급 5 TEAE는 CAR+ T 세포 조성물 및 림프구고갈 요법(LD)(미만성 폐포 손상, 폐출혈, 다장기기능장애증후군, 심근증)과 관련이 있었다. 3개의 등급 5 TEAE는 CAR+ T 세포 조성과 관련이 없었다: 플루다라빈 백질뇌병증, 패혈성 쇼크 및 진행다초점백질뇌병증. 연장된 등급 ≥3 혈구 감소증(29일째의 실험실 평가에 기초)이 대상체의 37%에서 보고되었다. 안전성은 나이 그룹, 조직학 및 장기 기능 장애가 있는 대상체에서 유사하였다.
표 E33A-1은 268명의 대상체 그룹에 대한 치료 이상 반응을 보여주고 표 E33A-2는 동일한 연구(n=269)의 다른 시점에서 모든 대상체 하위 그룹에 걸쳐 치료 나타나는 이상 반응을 보여준다. 표 E33B-1(n=268) 및 표 E33B-2(n=269)는 특별한 관심의 기타 이상 반응을 보여준다. 실험실 기반 저감마글로불린혈증(IgG<500 mg/dL)은 기준선에서 49%(258명 중 127명), 연구일 29일 상에 58%(236명 중 136명), 연구일 365일에 61%(112명 중 8명)에 존재하였다.
표 E33B-3은 발병률 및 관리 또는 CRS 및 NE를 보여준다. CRS와 NE는 가역적이었고, 1명의 대상체는 분석 시점에 해결되지 않은 NE(등급 1 떨림)를 나타내고 8명의 대상체는 다른 이유로 사망 시 CRS/NE가 진행 중이었다. CRS 및 NE에 대한 치료는 도 57에 기술되어 있고, 하나의 대상체는 CRS에 대해 아나킨라 및 실툭시맙을 받았으며, 하나의 대상체는 NE에 대해 실툭시맙을 받았다. 표 E33C는 ≥2%의 환자에서 발생한 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 치료-응급 증상을 보여준다. 표 E33D는 ≥5명의 환자에서 발생한 그룹별 치료-응급 신경학적 사건을 보여준다.
표 E33E-1 및 표 E33E-2는 용량 수준에 따른 이상 반응의 비교를 보여준다. 표 E33F는 환자 하위 그룹 간의 안전성 비교를 보여준다. 표 E33G는 외래 환자, 재치료 환자 및 부적합 산물을 받은 환자의 안전성 결과를 보여준다.
모든 환자의 절반 미만(47%)에서 CRS 및/또는 NE(표 E33B-E33D)가 발병했으며, 발병 중앙값은 각각 5일 및 9일이었다. 환자의 42%는 모든 등급의 CRS를 가졌다. 등급 3 또는 등급 4 CRS는 드물었으며, 환자의 2%에서만 발생하였다. CRS는 환자의 20%에서 토실리주맙 및/또는 코르티코스테로이드로 관리되었고; 10%는 토실리주맙만 받았다. 모든 등급의 NE는 환자의 30%에서 나타났으며 통상적으로 CRS 중 또는 후에 발생하였고(73%); 10%는 등급 3 또는 4 NE를 받았다. 등급 5 CRS 또는 NE를 받은 환자는 없었다. 특별 관심의 다른 TEAE에는 연장된 혈구감소증(환자의 37%), 저감마글로불린혈증(14%) 및 등급 ≥3 감염(12%)이 포함되었다. 18명의 환자(7%)가 CAR+T 세포 주입 후 초기 입원 기간 동안 중환자실에 입원하였다.
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E. 효능 및 반응 결과
상기 시점에서 치료된 대상체의 효능 및 반응 결과는 표 E33H-1에 기재되어 있다. IRC 평가에 의한 반응 및 지속성은 표 E33H-2에 설명되어 있다. 지속적인 반응의 확률과 반응의 기간은 도 58에 설명되어 있다. 중앙값 후속 관찰(95% CI)은 12 개월이었다(11.2-16.7 범위).
반응을 평가할 수 있는 대상체(n=255) 중에서 ORR은 73%(95% CI, 67-78)였고; CR 비율은 53%(95% CI, 47-59)였다. 반응은 예를 들어, 표 E33H에 나타난 바와 같이 질병 하위유형, 나이(예를 들어, 65세 이상의 대상체), 높은 종양 부담을 갖는 대상체, 및 화학요법-민감성 및 -불응성 상태를 기반으로 하는 것을 포함하여, 모든 대상체 하위 그룹에 걸쳐 유사하였다. 표 E33I-1 및 E33I-2는 용량 수준에 따른 효능 비교를 보여준다. 표 E33J는 분석 세트에 따른 효능의 비교를 보여준다. 표 E33K는 외래 환자, 재치료 환자 및 부적합 산물을 받은 환자에 대한 효능을 보여준다. 효능은 좁은 범위의 DL에서 유사했으며, ORR(P=0.68), PFS(P=0.46) 및 DOR(P=0.76)에 대한 개별 DL 간에 또는 분석 세트 간에 통계적으로 유의한 차이는 없었다. PAS에 대해 사전에 지정된 ORR의 1차 종점이 충족되었다. CAR+T 세포 조성물(n=15)을 사용한 재치료는 낮은 ORR(20%)을 초래하였다. 부적합 산물을 받은 환자(n=24)의 효능은 CAR+ T 세포 조성물을 받은 환자와 유사하였다.
반응은 신속하고 지속적이었고, 10.8개월의 중앙값 추적 관찰에서 첫 반응까지의 중앙값 시간은 1개월(범위, 0.7-6.0)이고 DOR 중앙값은 13.3개월(95% CI, 8.2-도달하지 않음[NR])이었다. CR을 나타내는 환자에서 DOR 중앙값은 도달하지 않았다(95% CI, 13.3-NR)(도 49a). PFS 중앙값은 6.8개월(95% CI, 3.3-11.8)이었다. CR을 나타내는 환자 중, PFS 중앙값은 도달하지 않았다(95% CI, 14.1-NR)(도 49b). PFS 비율 중앙값ㅇ은 0.72였다. 전반적으로, CAR+ T 세포 주입 후 PFS는 직전 요법의 PFS보다 실질적으로 더 길었다. OS 중앙값은 19.1개월이었고, 추적 관찰 중앙값은 12.2개월이었으며, 추정된 12개월 OS는 55%(95% CI, 48.4-61.9)였다. CR을 달성한 환자 중, 추정된 OS 중앙값은 도달하지 않았다(95% CI, NR-NR)(도 49c). 효능은 좁은 범위의 DL(표 E33I)에 걸쳐 유사하였으며(표　E33I), ORR(P=0.68), PFS(P=0.46) 및 DOR(P=0.76)에 대한 개별 DL 간에, 또는 분석 세트 간에 통계적으로 유의한 차이는 없었다(표 E33J). CAR-T 세포 조성물(n=15)을 사용한 재치료는 낮은 ORR(20%)을 초래하였다. 부적합 산물을 받은 환자(n=24)의 효능은 CAR+T 세포 조성물을 받은 환자와 유사하였다(표 E33K).
도 59에 나타난 바와 같이. ORR은 나이, LBCL 아형, 이전 HSCT 또는 이차 CNS 림프종에 따라 다르지 않았다. 가교 요법이 필요한 대상체와 질병 부담이 높은 대상체는 ORR이 낮은 경향이 있었다. 하위 그룹에 대한 CR 비율의 패턴은 ORR의 패턴과 유사하였다. PFS(도 60 및 표 E33L) 및 OS(도 61 및 표 E33M)를 객관적 반응으로 평가하였다. 이 분석 시점에서, 대상체의 37%는 12개월의 연구 추적 관찰을 받았고 68%는 6개월의 연구 추적 관찰을 받았다. 조직학적 아형에 의한 PFS는 도 62에 나타나 있다.
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외래 환자 주입/모니터링 및 고위험 환자, 예를 들어 흔하지 않은 조직학적 아형 및 HGBCL, 나이 ≥65세, 화학요법-불응성 질환 및 가교 요법이 필요한 환자를 포함한, 하위 그룹에 걸쳐 반응이 관찰되었다. 반응을 평가할 수 있는 이차 CNS 림프종을 나타내는 환자 6명 중 3명이 CR을 달성하였다. 유사하게, 반응은 나이 ≥65세, HGBCL, 화학요법-불응성 질환 및 이차 CNS 림프종의 고위험 하위 그룹에서 지속되었다(도 50a-50b). 그러나, 높은 종양 부담을 갖는 환자의 경우, PFS와 DOR이 더 짧았다. 표 E33N에 나타난 바와 같이, 가교 요법이 필요한 환자에서 PFS가 더 짧았다. 무화과. 도 51a는 반응 기간 및 무진행 생존을 나타낸다. 도 51B는 조직학적 그룹에 의한 반응 기간을 나타낸다. 도 51c는 가교 요법에 의한 반응 기간을 나타낸다. 도 51d는 화학요법-민감성 대 화학요법-불응성 상태에 의한 반응 기간을 나타낸다. 도 51e는 사전-LDC SPD 상태에 따른 반응 기간을 나타낸다. 도 51f는 나이 그룹별 반응 기간을 나타낸다. 도 51g는 동반질환이 있는 대상체 대 동반질환이 없는 대상체의 반응 기간을 보여준다.
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F. 세포 동역학, B 세포 무형성 면역원성
혈액 내 CAR + T 세포의 세포 동역학은 단일 주입으로 CAR + T 세포를 받고 기준선(CAR + T 세포 주입 전) 및 적어도 첫 28일 후 사후-기준선 측정을 갖는 LBCL 치료 코호트의 모든 환자를 기초로 하였다. CAR+ T 세포 이식유전자의 검출을 위해 검증된 실시간 정량적 PCR 검정을 사용하여 데이터를 평가하였다.
B 세포 무형성은 말초 혈액 림프구의 <3%를 나타내는 CD19+ B 세포로 정의되었다(Mueller KT 등 Clin Cancer Res. 2018.;24:6175-84).
항-CAR-발현 T 세포 항체는 전기화학발광 면역분석을 사용하여 검출되었다. 면역원성은 항-CAR-발현 T 세포 항체(CAR-발현 T 세포에 결합하는 기존에 존재하는 항체가 첫 번째 CAR-발현 T 세포 주입 전에 측정됨)의 보급률과 항-CAR-발현 T 세포 항체(CAR-발현 T 세포의 첫 번째 주입 후 임의의 시점에서 CAR-발현 T 세포에 결합하는 치료-유도 또는 치료-증진 항체))의 발생률을 계산하여 평가하였다.
238명의 평가 가능한 환자 중, 모든 DL에 걸쳐 CAR T-세포 확장이 정점에 도달하기까지의 시간 중앙값은 12일(사분위수 범위, 10-15); 최대 확장 중앙값(Cmax)은 23,963.7 카피/㎍이었고, 주입 후 첫 28일(AUC0-28d) 동안 곡선 아래 면적 중앙값은 214,283.0 일*카피/㎍이었다. 확장은 모든 DL에 걸쳐 유사하였다(표 E33O).
CAR+ T 세포는 59%(n=22/37)에서 1년에 장기간 지속성을 나타냈다. CD19+ B 세포 수준은 증가하기 전에 2-3개월 동안 낮게 유지되었으며, CAR+ CD4+ 및 CD8+ 세포 확장의 동역학은 유사하였다. qPCR로 분석된 CAR+ T 세포 및 261명의 대상체에 대해 분석된 유세포 분석에 대 CD19+ B 세포의 결과는 도 63 및 표 E33P에 나타나 있다. 유세포 분석에 의한 CAR+ T 세포에 대한 결과는 도 64에 나타나 있다.
반응자(CR 또는 PR; n=175)는 무반응자(n=50)보다 Cmax(4.06배) 및 AUC0-28d(2.59배)가 더 높았다. 더 높은 중앙값 Cmax는 또한 더 높은 기준선 종양 부하(2.45배), 모든 등급 CRS(2.31배), 모든 등급 NE(3.46배) 및 등급 ≥3 NE(5.06배)와 관련이 있었다(표 E33Q). CAR+ T-세포는 환자의 59%(n=22/37)에서 1년에 장기간 지속성을 나타냈고; 73%(n=36/49)는 1년에 지속적인 B 세포 무형성을 보였다. 항-CAR+ T 세포 항체는 첫 번째 CAR+ T 세포 조성물 주입 전 환자의 11%(n=28/261)에서 검출되었고, 주입 후 어느 시점에서든 11%(n=27/257)에서 검출되었다(대부분 치료-유도되었다). 항-CAR+ T 세포 항체 상태와 효능, 안전성 또는 세포 동역학 간의 관계는 항체 테스트에서 양성 반응을 보이는 환자 수가 적었기 때문에 결정적이지 않았다.
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G. 결론
재발성/불응성의 공격적인 LBCL을 나타내는 대상체에서 CD19-지향적 CAR T-세포 요법의 이러한 예에서 보고된 결과는 항-CD19 CAR+ T 세포를 사용한 치료가 생체 내(in vivo)에서 CAR T-세포 확장을 증가시키면서, 지속적인 반응을 일으켰고, CAR T-세포는 항-CD19 CAR+ T 세포 주입 후 장기간 지속되었다는 것을 보여준다. 이러한 결과는 공격성의 고위험 질병이 있는 과도하게 사전 치료를 받은 대상체 집단에서 관찰되었으며, 이들 중 대부분은 화학요법-불응성이었고 가교 요법으로 질환 통제를 위한 즉각적인 치료가 필요하였다. 본 연구에는 2차 CNS 침범, FL, FL3B 및 중등도 동반질환 이외의 무통성 림프종에서 변형된 DLBCL과 같은 불량한 예후의 특성을 갖는 대상체 하위 그룹도 포함되었다. 상기 연구에서 치료된 대상체 집단은 75세 이상의 사람들을 포함하여 일반적으로 더 나이가 많았다. 이러한 결과는 극심한 CRS 및 NE의 낮은 발생률로 관찰되었다. 본원에 기술된 연구의 모든 대상체 중 절반 미만이 CRS 또는 NE가 발생하였고, 등급 3 이상의 CRS 및 NE의 발생률은 낮았으며(각각 2% 및 10%), 치명적인 CRS 또는 NE는 발생하지 않았다. CRS 및 NE의 낮은 전체 발생률 및 심각도는 늦은 발병(각각 중앙값, 5일 및 9일)과 함께 선택된 대상에서 외래 환자 투여/모니터링을 지원한다. 본원에 기재된 다양한 연구에서 외래 환자 환경에서 항-CD19 CAR+ T 세포를 받은 25명의 대상체에서의 안전성 및 효능 결과는 대상체의 전체 치료 집단과 유사하였다.
결과는 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여가 R/R 거대 B 세포 NHL을 갖는 대상체에서 유리한 안전성 프로파일과 함께 지속적인 반응을 보였음을 입증하였다. 낮은 발병률과 CRS 및 NE의 늦은 발병은 외래 환자 투여를 허용하였다. 이러한 결과는 불응성, 고령자, 동반질환 및/또는 높은 종양 부담의 대상체를 포함하여, 조직학적 하위 그룹에 걸쳐 그리고 불량한 예후를 나타내는 대상체에서 임상적으로 의미있는 반응이 관찰되었음을 보여준다. 본원에 기술된 CAR+ T 세포 조성물을 이용한 치료는 본 연구에서 고위험, 공격적 재발성/불응성 LBCL을 갖는 환자에서 빠르고 높은 비율의 지속적 CR 및 극심한 CRS 및 NE의 낮은 발병률을 초래하였다. 흔하지 않은 DLBCL 조직학적 하위유형과 불량한 예후 특성을 나타내는 하위유형을 포함하여, 충족되지 않은 의학적 요구가 있는 환자 하위 그룹에서 임상적으로 의미있는 활성이 관찰되었다. 극심한 CRS 및 NE의 낮은 발생률 및 늦은 발병까지의 시간이 외래 환자 투여/모니터링을 허용하였다. 상기 결과는 더 큰 그룹의 대상체 및 잠재적 치료 부위를 치료하기 위한 기재된 조성물 및 방법의 유용성을 뒷받침한다.
재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 2차 이식 부적격(TNE) 대상체의 치료를 위한 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
상기 실시예 1, 3 및 6에 기재된 연구에 사용된 CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료학적 CAR+ T 세포 조성물을 1차 요법에 실패한, 재발성 및 불응성(R/R) 거대 B 세포 림프종과 같은, 이식 부적격(TNE) 재발성 및 불응성(R/R) 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 대상체에게 2차 요법으로 투여하였다.
치료를 위한 적격 대상체는 재발성/불응성 거대 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)(미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 다르게 명시되지 않은 [드노보(de novo) 또는 형질전환된 무통성 NHL, MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 [이중/삼중-히트 림프종]를 갖는 높은 등급의 림프종 또는 여포성 림프종 등급 3B)을 나타내는 대상체를 포함하였고 안트라사이클린 및 CD20 표적-제제(예를 들어, R-CHOP; 리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신 염산염(하이드록시다우노마이신), 빈크리스틴 설페이트(온코빈) 및 프레드니손)을 함유하는 면역화학요법의 1회 이전 방식만 받았다. 대상체에는 CAR T 세포 요법에 대한 기준을 여전히 충족하면서 다음 TNE 기준 중 적어도 하나를 충족하는 경우, 고-용량 화학요법에 이어 HSCT(예를 들어, 나이, 수행 상태 및/또는 동반질환을 기준으로 함)에 부적격으로 간주되는 대상체가 포함되었다: 나이 ≥70세, 미동부종양학협력그룹(Eastern Cooperative Oncology Group) 수행 상태 2, 및/또는 폐 손상(DLCO ≤60%, 그러나 실내 공기 SaO2 ≥92% 및 CTCAE ≤1 호흡곤란), 심장(LVEF ≥40% 및 <50%), 신장(크레아티닌 클리어런스 >30 및 < 60mL/분), 또는 간 기능(AST/ALT >2 및 ≤5×ULN)(표 E34A를 참조한다). 치료를 위한 적격 대상에는 또한 양전자 방출 단층촬영(PET)-양성 질환, 최종 재발 시 진단의 조직학적 확인(예를 들어, 진단의 중심 확인을 위해 충분한 종양 물질이 있어야 하며, 그렇지 않으면 새로운 종양 생검이 요구됨), 0 또는 1 또는 2의 ECOG PS 및/또는 백혈구성분채집술 과정을 위한 적절한 혈관 접근성(말초 라인 또는 외과적으로 배치된 라인)을 갖는 대상체가 포함되었다. 앞서 기술된 것과 동일한 항-CD19 CAR을 발현하는 T 세포의 투여를 이전에 받았고 완전 반응을 달성하였으며 재발한 대상체는 재치료에 적격이었다.
1차 종료점에는 객관적 반응률(ORR)이 포함되었고, 2차 종료점에는 이상 반응(AE), 완전 반응률(CRR), 반응 기간(DR), 약동학적 프로파일, 추정된 무진행 생존율, 무사건 생존율, 전체 생존율, 실험실 이상(laboratory anomalies) 및 건강 관련 삶의 질이 포함되었다. 효능은 2014 Lugano 기준(Cheson BD 등 J Clin Oncol. 2014; 32:3059-3067)에 따라 평가되었고 CRS는 Lee 기준(Lee criteria)을 이용하여 등급화되었다(Lee DW, 등 Blood. 2014;124:188-195). NE는 CAR+ T 세포 조성물과 관련된 것으로 간주된 이상 반응(AE)이었다. CRS를 제외한 AE는 이상 반응에 대한 미국국립암연구소 공통 용어 기준, 버전 4.03을 이용하여 등급화되었다. 대상체는 CAR+ T 세포 조성물 투여 후 90일 동안 치료-응급 AE(TEAE)에 대해 모니터링되었다. 대상체는 연구자의 재량에 따라 외래 환자로 처리될 수 있다. 환자가 진료소를 떠나거나 퇴원하거나 또는 주입 후 관찰 기간이 종료된 후 진료소를 떠난 경우, 대상체는 외래 환자로 모니터링되는 것으로 간주되었다. 대상체가 CAR+ T 세포 조성물 주입 동안 또는 주입 후 관찰 기간 직후 병원에 입원한 경우, 대상체는 입원 환자로서 모니터링되는 것으로 간주되었다. 약동학(PK) 매개변수는 유세포 분석에 의해 결정되었다.
Figure pct00104
실시예 14.A
첫 번째 분석 시점에서, 총 10명의 대상체가 백혈구성분채집술을 받았으며, 그 중 9명은 CAR+ T 세포 조성물을 받았고 1명의 대상체는 치료를 기다리고 있었다. 이들 대상체에 대해 CAR+T 세포 조성물은 모든 대상체에 대해 성공적으로 제조되었다. 대상체는 실시예 1에 기재된 바와 같이, 3일 동안 플루다라빈/사이클로포스파미드와 함께 림프고갈 후 2일 내지 7일 사이에 표적 용량의 DL2(100×106 CAR-발현 T 세포)을 받았다. 다섯(5)명의 대상체를 외래 환자로 주입하고 모니터링하였다.
나이 중앙값은 71세였고(범위, 64-79), 5명의 대상체는 남성이었다. 조직학적 분석에 기초하여, 대상체는 DLBCL NOS(n=7) 및 변환된 여포성 림프종(tFL, n=2)을 가졌다. 2명의 대상체는 삼중 히트를 가졌다(그 중 한 명은 tFL 조직학을 가짐). 5명의 대상체가 이전 요법으로부터 재발하였고, 4명의 대상체가 이전 요법에 대해 불응성인 질환을 가졌다. SPD와 LDH 중앙값은 각각 26.6 cm2와 201 U/L였다. 4명의 대상체는 SPD가 ≥50 cm2(n=4)이고 LDH가 ≥500 U/L(n=1)인 높은 종양 부담을 가졌다. HCT-CI(Hematopoietic Cell Transplantation Comorbidity Index) 점수 중앙값은 3(범위, 0-3)였다.
6명의 대상체는 주로 혈구 감소증이었던 등급 ≥3의 하나 이상의 치료-응급 이상 반응(TEAE)을 나타냈다. 3명의 대상체는 29일째에 등급 ≥3의 연장된 혈구 감소증을 나타냈다. 2명의 대상체는 모든 등급의 감염이 있었고, 등급 ≥3의 치료-응급 감염이 발생한 대상체는 없었다. CRS 또는 NE가 있는 대상체는 없었고, 토실리주맙, 코르티코스테로이드 또는 혈압강하제를 투여받은 대상체는 없었다. 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 주입 반응 또는 등급 5 TEAE의 사례는 없었다. 외래 환자로 치료 및 모니터링된 5명의 대상 중, CAR-발현 T 세포 주입 후 첫 29일 이내에 이상 반응으로 병원에 입원한 환자는 없었다.
9명의 대상체 모두 객관적인 반응을 달성하였다. 4명의 대상체가 완전 반응(CR); 및 분석 시간에서 진행 중인 CR이 계속되었다. 5명의 대상체는 부분 반응(PR)을 달성하였고; 2명의 대상체는 분석 시간에서 진행 중인 PR을 계속해서 나타냈다. 결과는 외래 환자 세트에서의 대상체와 비교하여 입원 환자 환경에서의 치료된 대상체에서 유사하였다. 추적 관찰 중앙값은 3.5개월이었다. CAR T 세포 확장이 정점에 도달하기까지의 시간 중앙값(범위)은 10(7-21)일이었다.
이러한 결과는 항-CD19 CAR-발현 T 세포가 사전에 지정된 기준에 의해 고용량 화학요법 및 HSCT에 대해 부적격한 R/R 공격적 B-세포 NHL을 갖는 대상체에서, 2차 요법으로서 외래 환자 환경에서를 포함하여, 성공적으로 투여될 수 있다는 관찰과 일치한다.
실시예 14.B
두 번째 분석 시점에서, 총 19명의 대상체가 백혈구성분채집술을 받았으며, 그 중 13명이 CAR+ T 세포 조성물을 받았다. 이러한 대상체에 대해, CAR+T 세포 조성물은 모든 대상체에 대해 성공적으로 제조되었다. 6명의 대상체가 외래 환자로 치료 및 모니터링되었습니다. CAR+ T 세포 조성물을 받은 모든 대상체는 안전성 분석에 포함되었고, 12명은 효능 분석에 포함되었다. 분석 시간에 CAR+ T 세포 조성물을 받은 13명의 대상체 중 9명의 대상체가 3개월 이상의 추적 관찰을 받았다. 부적합 산물(예를 들어, CD8 또는 CD4 세포 구성요소 중 하나 또는 둘 모두가 CAR+T 세포 조성물에 대한 출시 사양을 충족하지 않는 산물)을 받은 대상체는 없었고 제조 실패도 없었다.
나이 중앙값은 72세였다. 스크리닝 시, 8명의 대상체가 1개의 TNE 기준을 충족하였고, 4명의 대상체가 2개의 TNE 기준을 충족하였으며, 1명의 대상체가 ≥3 TNE 기준을 충족하였다. 외래 환자로 치료 및 모니터링된 6명의 대상체 중, CAR+T 세포 조성물 주입 후 첫 29일 이내에 AE로 입원한 사람은 아무도 없었다(표 E34B). 8명의 대상체(61.5%)가 등급 3 또는 4 TEAE, 대부분 혈구 감소증을 경험하였다. CAR+T 세포 조성물 주입 후 사망한 대상자는 없었다(표 E34C).
Figure pct00105
Figure pct00106
이 시점에서 평가된 대상체 중, 등급 3-4 CRS의 사건은 발생하지 않았고, NE를 경험한 대상체는 없었으며, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군 또는 주입 반응의 발생 사례가 없었다(표 E34D).
Figure pct00107
이 시점에서 효능에 대해 평가된 본 연구의 모든 대상체(12명의 대상체)는 객관적 반응(100% [12/12])을 달성하였고 6명의 대상체(50%)는 CR을 달성하였다(표 E34E). 이 시점에서 본 연구의 각 대상체에 대한 개별 결과는 표 E34F에 요약되어 있다. 12명의 대상체 모두 30일까지 초기 객관적 반응을 달성하였고, 12명의 대상체 중 7명(58%)이 CAR+T 세포 주입 후 3개월에 지속적인 반응을 유지하였다. 1명의 대상체는 9개월(270일) 동안 CR에 남아 있었고 1명의 대상체는 6개월(180일) 동안 CR에 남아 있었습니다(도 56). 본 연구에서 CAR T 세포의 최대 농도(Tmax)까지의 시간(11 [사분위수 범위(IQR): 11-15]일)은 12 [IQR: 10 15]일의 다른 연구에서 관찰된 CAR T 세포 조성물의 Tmax로 관찰된 것과 유사하였다(예를 들어, 상기 실시예 1, 3, 6 및 13에 기재됨).
Figure pct00108
Figure pct00109
상기 결과는 가장 흔한 등급 3 또는 4 TEAE가 혈구 감소증이었고, 어떠한 대상체도 등급 3-4 CRS를 나타내지 않았으며, 어떤 대상체도 신경학적 사건을 나타내지 않았고, 어떤 대상체도 등급 5 TEAE를 갖지 않았음을 보여주었다. 상기 결과는 또한 항-CD19 CAR-발현 T 세포 조성물의 투여가 CR을 포함하는 지속적인 반응을 초래하였음을 보여주었다. 본 연구에서 모든 대상체(100%)는 30일까지 초기 객관적 반응을 달성하였고, 6명의 환자(50%)는 CR을 달성하였으며, 7명의 환자(58%)는 CAR-발현 T 세포 주입 후 3개월에 지속적인 반응을 유지하였고, 2명의 환자는 각각 6개월 및 9개월 동안 CR이 진행 중이다. 이러한 결과는 항-CD19 CAR-발현 T 세포가 고용량 화학요법 및 HSCT에 부적격한 R/R 공격성 B-세포 비호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체에서 2차 요법으로 성공적으로 허용된다는 관찰과 일치한다.
외래 환자 환경에서 재발성 및 불응성(R/R) B-세포 비호지킨 림프종(NHL)의 치료를 위한 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
상기 실시예 1, 3 및 6에 기재된 연구에 사용된 CD19에 특이적인 키메라 항원-수용체(CAR)를 발현하는 자가 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 치료 CAR+ T 세포 조성물을 외래 환자 환경에서 3차 또는 그 이후의 요법으로 투여하였다.
치료를 위한 적격 대상체는 재발성/불응성 거대 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)(달리 명시되지 않은(NOS) 미만성 대 B 세포 림프종(DLBCL); 무통성 림프종에서 변형된 생검-확인 DLBCL, MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6[이중/삼중 히트 림프종]를 갖는 높은 등급의 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종(PMBCL) 및 여포성 림프종 등급 3B) 포함)을 갖는 성인 대상체를 포함하였다. 대상체는 이전에 안트라사이클린 및 리툭시맙(또는 다른 CD20 표적 제제)로 치료를 받았고 DLBCL에 대한 적어도 2개의 전신 요법의 방식 후 또는 자가 조혈모줄기세포 이식(HSCT) 후에 재발성 또는 불응성 질환이 있었다. 치료에 적합한 대상체에는 Lugano 분류에 의한 양전자 방출 단층촬영(PET)-양성 질환, 미동부종양학협력그룹(ECOG) 수행 상태가 0 또는 1인 대상체, 적절한 골수, 신장, 간, 폐 및 심장 기관 기능을 갖는 대상체, 백혈구성분채집술 과정을 위한 적절한 혈관 접근성 및/또는 이전 CD19-표적 요법을 완료한 이후 생검에서 확인된 CD19-양성 림프종이 있는 이전 CD19-표적 요법을 받은 대상체도 포함되었다.
대상체는 CD19-표적 CAR의 생산을 위해 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 분리하기 위한 백혈구성분채집술을 받았다. CD19-표적 CAR을 발현하는 세포를 생산하는 동안, 대상체는 질병 통제를 위해 저용량 화학요법을 받는 것이 허용되었다. 항-CD19 CAR-발현 T 세포 조성물의 성공적인 제조 후, 대상체는 림프구 고갈화학요법을 받은 후, 1회 용량의 100×106 CAR-발현 T 세포를 정맥내(IV) 주사로 투여받았다.
항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 후 재발성 및 불응성 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 외래 환자 대상체에 대한 안전성 및 반응 결과의 평가
반응 및 안전성 결과는 상기 실시예 1, 3, 6, 13, 14 및 15에 기술된 바와 같은 임상 연구로부터 외래 환자 환경에서 치료된, 거대 B 세포 림프종과 같은 재발성 및 불응성(R/R) 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 대상체 그룹에 걸쳐 평가되었다.
상기 실시예 1, 3, 6 및 13에 기재된 바와 같이, 항-CD19 CAR을 발현하는 CD4+ 및 CD8+ 세포의 소정의 조성물은 R/R 거대 B 세포 NHL을 나타내는 대상체에서 3차 요법 또는 이후 요법으로서 높은 반응률을 달성하였다. 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 신경학적 사건(NE)이 발생하는 대상체의 절반 미만에서(예를 들어, 대상체의 47%에서), 등급 3 또는 그 이상의 사건의 낮은 발생률(각각 CRS의 경우 2% 및 NE의 경우 10%) 및 발병 지연(각각 중앙값 5일 및 10일)을 고려하여 열 또는 신경학적 증상의 첫 징후에서 입원하는, 외래 환자 치료가 허용되었다.
실시예 16.A
외래 환자 환경에서 다양한 연구에 걸쳐 CAR+ T 세포를 투여받은 총 37명의 대상체가 이 분석 시점에서 분석되었다. 이 연구에서, 외래 환자 치료는 치료 대상체의 세 그룹 중 비대학 환경 또는 대학과 비대학 의료 센터 모두에서 수행되었다. 상기 그룹은 표 E35에 요약되어 있다.
Figure pct00110
하나의 그룹(그룹 A)은 일반적으로 실시예 1, 3, 6 및 13에 기재된 바와 같이 외래 환자 환경에서 치료된 R/R 거대 B 세포 NHL을 갖는 25명의 대상체의 하위세트를 포함하였다. 대상체는 50×106의 DL1, 100×106의 DL2 또는 150×106 CAR+ 세포의 DL3에서, 3차 요법 또는 그 이상으로 CAR+ T 세포 조성물을 받았다(대상체는 2개 이상의 이전 요법의 방식 및 1 이하의 ECOG PS를 가짐). 외투세포림프종(MCL) 코호트의 대상체는 ≥1의 이전 요법의 방식으로 치료를 받았다.
또 다른 그룹(그룹 B)에는 일반적으로 실시예 15에 기재된 바와 같이 CAR+ T 세포 조성물이 3차 요법 또는 이후 요법으로 투여된 연구의 7명의 대상체가 포함되었다. 대상체는 안트라사이클린 및 리툭시맙(또는 다른 CD20-표적 제제)로 치료되었고 DLBCL에 대한 적어도 2개의 전신 요법의 방식 후 또는 자가 HSCT 후 재발성 또는 불응성 질환이 있었다.
또 다른 그룹(그룹 C)은 CAR+ T 세포 조성물이 이식 부적격(TNE) 대상체에 대한 2차 요법으로서 투여된 연구의 5명의 대상체를 포함하였다. 대상체는 실시예 14에 기술된 TNE 기준 중 적어도 하나를 충족함으로써 고용량 화학요법에 이어 HSCT에 대해 부적격한 것으로 간주되었지만, 여전히 CAR T 세포 요법에 대한 기준(나이 ≥70세, ECOG PS 2, 폐 기능 장애(헤모글로빈 농도에 대해 ≤60%로 조정된 일산화탄소(DLCO)에 대한 폐의 확산 능력(DLCO ≤60%이지만, 실내 공기에서 산소 포화도 ≥92% 및 이상 반응에 대한 미국국립암연구소 공통 용어 기준 [NCI CTCAE] ≤1 호흡곤란), 심장 기능 장애(좌심실 박출률 ≥40% 내지 <50%), 신장 기능 장애(크레아티닌 클리어런스 >30 및 <60mL/분) 및 간 기능 장애(아스파테이트 아미노전이효소 및 알라닌 아미노전이효소 >2 및 ≤5 × 정상의 상한)을 만족하였다. 대상체는 안트라사이클린 및 CD20 표적 제제(예를 들어, R-CHOP)를 함유하는 면역화학요법의 단 1개의 이전 방식을 받았다.
본 연구에서, 적격 대상체는 R/R 거대 B 세포 NHL, 적절한 기관 기능 및 이전 전신 화학면역요법(≥2개의 이전 요법의 방식 및 ECOG PS ≤1 또는 1개의 이전 요법의 방식 및 ECOG PS, 기관 기능 및/또는 나이를 기초로 한 자가 조혈모줄기세포 이식에 대한 TNE로 간주됨)을 가졌다. 상기 실시예에 기재된 바와 같이 플루다라빈/사이클로포스파미드를 사용한 림프고갈 후, CAR+ T 세포 조성물을 그룹 A의 25개에 대해 3개의 용량 수준(50×106개의 CAR+ 세포의 DL1, 100×106개의 CAR+ 세포의 DL2 또는 150×106개의 CAR+ 세포의 DL3) 중 1개로 투여하였고, 전술한 그룹 B 및 C의 DL2(100×106 CAR+ T 세포)에서 투여하였다. 외래 환자 치료를 위해, 대상체는 CAR-발현 T 세포 주입 후 30일 동안 간병인이 있었고, 안전성 모니터링 교육(중요한 이상 반응 인식, 예를 들어, 열)을 받았고, 치료 장소로 1시간 이내의 이동거리에 있었다. 외래 환자 치료를 위한 모든 장소에는 여러 학문 분야에 걸친 CAR T 세포 요법 팀과 외래 환자 관리 및 이상 반응 모니터링을 위한 표준 운영 절차가 있었다. 사이토카인 방출 증후군(CRS; Lee 등(2014) 기준) 및 신경학적 사건(NE; CAR-발현 T 세포 투여와 관련된 것으로 정의됨, CTCAE 기준)은 병원에서 관리되었다.
분석 시간에, 연구 전반에 걸쳐 37명의 대상체는 연구 1일에 항-CD19 CAR+ T 세포를 받았고 65세 이상 대상체와 높은 종양 부담을 가진 대상체를 포함하여, 외래 환자로서 모니터링되었다. 환자 특성, 안전성 및 반응 결과는 하기 표 E35.1에 나타나 있다. 가장 빈번한 등급 ≥3의 치료-응급 AE는 혈구감소증(호중성백혈구감소증 43%, 빈혈 30%, 혈소판감소증 14%)이었다. 16명의 대상체는 모든 등급의 CRS를 가졌고 12명의 대상체는 모든 등급의 NE(19명의 대상체는 CRS 및/또는 NE를 가짐)를 가졌다. 극심한 CRS 및/또는 NE는 2명의 대상체에서만 발생하였으며 가역적이었다(표 E35.1 참조). 3명의 대상체는 토실리주맙 및 코르티코스테로이드를 받았고 4명의 대상체는 CRS 및/또는 NE에 대해 단독 코르티코스테로이드를 받았다. 토실리주맙을 단독으로 투여받은 대상체는 없었다. 37명의 대상체 중 22명(59%)은 언제든지 입원이 필요하였고; 입원을 필요로 하는 모든 대상체는 그룹 A 또는 그룹 B에서 나왔다. 이들 대상체 중 3명(8%)은 연구 3일 또는 그 이전에 모두 CRS로 입원하였고; 1명의 대상체는 ICU 수준의 치료가 필요하였다(재원 기간, 3일). 치료 후 입원까지의 시간 중앙값(범위)은 5일(2-22)이었고, 재원 기간의 중앙값(범위)은 6일(2-23)이었다. 그룹 C의 5명의 대상체를 모두를 포함하여 37명 중 15명(41%)은 항-CD19 CAR-발현 세포 주입 후 첫 29일 동안 병원에 입원하지 않았다.
모든 3개 그룹에 걸쳐, 대부분의 대상체는 CR을 포함하여 객관적인 반응을 달성하였다(표 E35.1 참조). 각 연구에서 CAR+ T 세포 확장이 정점에 도달하기까지 걸리는 시간 중앙값은 10일이었다(범위: 그룹 A에서 3-21일, 그룹 B에서 7-10일, 그룹 C에서 7-10일).
Figure pct00111
실시예 16.B
실시예 16.A 에서 전술한 바와 같이 동일한 연구의 다른 시점에서, 외래환자 환경에서 CAR+ T 세포가 투여된, 상이한 연구에 걸쳐 총 44명의 대상체가 이 분석 특정 시점에서 분석되었다. 본 연구에서 외래환자 치료는 치료 대상의 세 그룹 중 대학이 아닌 환경 또는 대학과 대학이 아닌 의료 센터에서 수행되었다. 외래환자 그룹은 다음을 포함했다: 연구에서 총 286명 중 25명의 대상체의 하위 집합을 포함하는 그룹 A(9%), 연구에서 그룹 B에는 총 27명 중 13명의 하위 집합 대상체(48%) 및 연구에서 그룹 C에는 총 13명에서 6명의 대상체의 하위 집합(46%)이 포함되었다. 효능은 CAR+T 세포 주입 후 1, 3, 6, 9, 12, 18 및 24개월에 연구자 평가를 기반으로 하는 2014 Lugano 기준(Cheson BD 등 J Clin Oncol. 2104;32:3059-3067) 에 따라 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 스캔으로 평가되었다. AE는 Lee 등 (Lee DW 등 Blood. 2014:188-195) 의 기준을 사용하여 등급이 매겨진 CRS를 제외하고 NCI CTCAE, 버전 4.03을 사용하여 등급이 매겨졌다. NE는 조사자 평가에 따라 CAR+ T 세포 조성과 관련된 것으로 간주되는 조사자 정의에 따른 AE 이었다. TEAE는 CAR+ T 세포 조성물 투여 후 90일 이내에 발생하는 것으로 정의되었다. 약동학적 매개변수는 유세포 분석에 의해 결정되었다. 추적 관찰 기간이 30일 이상인 모든 대상이 분석에 포함되었다.
외래환자 치료 요건에는 진료를 받아야 하는 치명적인 AE(발열, CRS 및 NE 증상)를 인식하기 위한 안전 모니터링 교육, CAR+ T 세포 조성 주입 후 30일 동안 간병인의 존재 및 CAR+ T 세포 조성물 주입 후 30일 동안 관리를 위한 장소에서 1시간 이동 시간 이내 체류가 포함되었다. 연구 장소 요구 사항에는 외래환자 및 입원 환자 환경의 여러 학문 CAR T 세포 치료 팀이 포함되었다.
외래 환자와 입원 환자 시설 사이의 CAR T 세포 환자 치료의 실행 계획 및 의사소통의 흐름이 일주일 내내 하루 24시간 동안 이용 가능한 장소에서 문서화 되었고, 외래환자 및 입원환자 의료 팀 사이의 관리 협동, 외래 환자 AE 모니터링을 위한 표준 운영 절차 및 주 7일 하루 24시간 동안 전화 의료가 보급되었다. 입원에는 CRS, NE 및 심각한 AE의 관리가 필요하다.
대상체는 외래환자 환경에서 CAR+ T 세포 주입을 받은 경우 또는 환자가 주입 당일 관찰 기간 종료 시 병원을 떠났거나 퇴원한 경우 "외래 환자"로 간주되었다.
기본 인구 통계 및 대상체 특성은 표 E35A에 표시되고 안전성 요약은 표 E35B에 설명되어 있다. 특별한 관심의 이상반응은 표 E35C에 보고되고, 대상체의 20% 이상에서 보고된 등급 TEAE는 표 E35D에 설명되어 있다. 연구 기간 동안 그룹 A에 대한 외래환자 치료 옵션이 추가되었으며 그룹 B 및 C에 대한 연구 시작부터 외래 환자 치료가 가능했다. 전체적으로, 실시예 1, 3, 6 및 13에 기재된 연구에서 9%의 대상체(25/286) (그룹 A), 실시예 15의 연구에 대해 48%(13/27) (그룹 B) 및 실시예 14의 연구에 대해 46%(6/13) (그룹 C) 가 외래 환자로 치료를 받다.
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
외래환자(표 E35E) 및 입원 환자(표 E35F)에 대한 입원 요약이 기재되어 있다. 그룹 A의 모든 참가자에 걸쳐 대상체당 입원 환자의 중앙값 입원 일수는 15.0일(범위, 4-98, n=244)이었고, 외래 환자의 경우 모든 연구에 따르면 6.0일(범위, 2-23, n=25)이고, 입원환자 입원이 60% 감소했다. 그룹 A의 외래 환자의 경우, 입원까지의 중앙 시간은 연구 5일(범위 3-22)이었고, 연구 4일 또는 그 이전에 입원한 대상체 중 6명(24%)과 ICU 입원이 필요한 대상체 1명(4%)이었다. 그룹 A에서 치료된 모든 269명의 대상체 중 19명(7%)은 독성 관리를 위해 ICU 입원이 필요했으며, 12명(4%)은 CRS 및/또는 NE 관리를 위해, 7명(3%)은 기타 AE 관리를 위해 입원했다. 효능(표 E35G) 및 약동학(표 E35H)은 외래 환자 설정의 모든 하위 그룹에 걸쳐 평가되었다. 실시예 1, 3, 6 및 13(또한 실시예 2에 기재됨)에 기재된 연구로부터의 MCL 코호트의 환자는 또한 외래 환자 환경에서 치료를 받았다.
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
결과는 R/R 거대 B 세포 NHL이 있는 대상의 하위 집합이 항-CD19 CAR+ T 세포로 성공적으로 치료되었고 고령 대상체 및 종양 부담이 높은 대상체를 포함하여 외래 환자 환경에서 CAR T 세포 관련 독성에 대해 모니터링되었음을 입증한다. 임의 등급 및 중증 CRS 및 NE의 낮은 비율 및 지연된 발병을 포함한 안전성 프로파일을 포함한 결과는 항-CD19 CAR-발현 세포를 함유하는 조성물로 치료된 R/R B-세포 NHL 환자에 대한 외래 환자 투여를 뒷받침한다. 결과는 외래환자 투여가 여러 학문 CAR T 세포 치료 팀에 의해 안전하게 관리되는 유해 사례와 적절한 환자 교육 및 외래 환자와 함께 다양한 임상 현장(대학/비대학, 이중/단일 개체)에 걸친 여러 임상 연구에서 성공적으로 구현되었음을 보여준다. 결과는 또한 다양한 환자 집단(노인, 동반질환, 높은 종양 부담)에서 심각한 CRS 및 NE가 낮은 발생률로 발생했으며 가역적이었다는 것을 보여준다. 결과는 심각한 CRS와 NE가 낮은 발생률로 발생했음을 보여주었다. 조기 입원 횟수가 적었고, 항-CD19 CAR+ T 세포 주입 후 첫 달에 대상자의 41%가 입원이 필요하지 않았고, 매우 낮은 비율의 대상(5%)에서 중환자실 수준의 치료가 필요했다. 대부분의 피험자는 본 연구에서 평가된 첫 번째 시점(65%) 및 두 번째 시점(80%)에서 객관적인 반응을 달성했다.
면역형광(IF) 및 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여를 위한 대상체의 투여 전 및 후 종양 생검에서 유전자 발현 분석에 의한 바이오마커의 추가 평가
상기 실시예 5에 기재된 유사한 평가의 후속 분석에서 CAR-발현 T 세포의 투여 전 및/또는 후에 대상체로부터 수집된 종양 생검에서 RNA 프로파일링을 사용한 다중 면역형광(IF) 및 유전자 발현 분석에 의해 다양한 바이오마커의 발현을 평가하였다.
A. 종양 생검 샘플
항-CD19 표적 치료 CAR+ T 세포 조성물로 치료를 받은 상기 실시예 1, 3, 6 및 13에 기재된 임상 연구의 재발성 또는 불응성(R/R) 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)을 갖는 선택된 대상체로부터 치료 전 기준선 및 투여 후 대략 11일(치료 후 D11)에 수득된 종양 생검을 수집하였다.
B. 세포 마커 평가
총 83명의 대상체(n = 58명의 사전 치료, n = 53명의 D11 주입 후, 28개의 일치 쌍)에서 111개의 생검을 다중 IF를 사용하여 검사했다.
생검은 검출을 위해 다음 3가지 IF 패널을 사용하여 평가되었다: (1) B 세포(CD19, CD20) 및 T 세포 계통(CD4, CD8) 마커 및 CAR+ 세포에 의해 발현되는 절단된 수용체(대리 마커)에 특이적인 항체, (2) 면역억제와 관련된 바이오마커(CD163, FoxP3, CD73, IDO1, PD-L1), 및 (3) 면역 세포 기능과 관련된 바이오마커(CD3, Ki67, GZMB, PD-1) 및 절단된 수용체에 특이적인 항체. 절단된 수용체에 특이적인 형광 표지된 항체를 사용하여 일반적으로 상기 실시예 5.B에 기재된 바와 같이 종양 생검 내에서 CAR-발현 T 세포를 확인하였다.
투여 후 3개월을 포함하여 CAR+ T 세포 투여 후 다양한 시점에서 종양 부담을 평가하고 대상체가 진행성 질환(PD), 안정 질환(SD), 부분 반응(PR) 또는 완전 반응(CR)을 가졌는지 여부를 결정하는 것을 포함하여 대상체를 반응 및 안전성 결과에 대해 평가하였다. 완전 반응(CR)의 최고 전체 반응(BOR)과 진행성 질환(PD)이 있는 대상체에 대한 마커 밀도의 차이 사이의 잠재적 연관성을 조사했다. 기준선 및 D11 바이오마커 발현은 주입 후 약 1개월(M1)에서의 초기 반응(PD n=16; CR n=42) 및 주입 후 약 9개월(M9)에서의 지속 반응(PD n=76, CR n=32, M1과 M9에서 평가된 55명의 대상체)과 상관관계가 있었다. 기준선과 D11 바이오마커 발현 밀도 사이의 연관성, 종양 및 종양 주변 영역 사이의 공간적 구별, 초기 및 지속 반응을 평가했다. 모든 비교는 중간 밀도의 차이를 기반으로 했으며 통계적 유의성은 (짝이 없는) Wilcoxon-Mann-Whitney 비모수 테스트를 통해 평가된 보정되지 않은 P 값을 사용하여 평가되었다.
대부분 종양 RNA 프로파일링은 50개의 기준선 생검 및 37개의 D11 치료 후 생검(11개의 일치하는 쌍)의 중복 하위 집합에서 수행되었다.
C. 결과
초기 반응과 상관관계가 있는 기준선 생검에서 바이오마커 발현 신호는 9개월(M9)에 지속적인 완전 반응과 상관관계가 있는 것과 달랐다. 기준선에서 PD-1+ T 세포의 21% 더 높은 존재는 초기 PD(P=0.007)를 가진 대상과 비교하여 조기 CR(M1에서)을 달성한 대상과 관련된 것으로 밝혀졌다. 지속성 CR(M9에서)이 있는 대상은 기준선(P=0.019)에서 종양 관련 CD163+ 대식세포의 수준이 39% 낮았고 M9에서 PD가 있는 대상보다 CD73+ 세포 수준이 270% 더 높았다(P=0.028). D11 치료 후 생검 종양의 평가는 초기 및 지속성 CR을 모두 갖는 대상체에서 절단된 수용체+ CD8+ T 세포(CAR+ T 세포를 나타냄) 수준이 28% 더 높았고(P=0.022), 및 절단된 수용체- CD4+ (비-CAR+ T 세포) 수준이 810% 더 높았으나(P=0.009), 절단된 수용체-CD8+ 세포는 그렇지 않았다(P=0.28).
기준선과 D11 치료 후 생검 사이의 마커 발현의 변화도 조사되었다. 내구성 CR(M9에서)이 있는 대상체는 D11에서 B-세포 밀도 감소(P=0.029) 및 CD8+GZMB+, Ki67+ (P=0.001) 및/또는 비-CAR+ T 세포(P=0.017) 뿐만 아니라 PD1+ CAR+ (P=0.001) 세포 밀도 증가를 갖는 것으로 밝혀졌다. 9개월에 지속성 CR을 갖는 대상체는 또한 기준선에 비해 주입 후 D11에서 종양 관련 CD163+ 대식세포에서 29% 증가를 갖는 것으로 관찰되었다(P=0.033).
공간 평가 및 다중 표지된 세포를 허용하는 IF 평가에서 관찰된 일반적인 경향은 대부분 종양 RNA 시퀀싱에서 관찰된 것과 일치했다. CD163의 더 낮은 기준선 발현(P=0.021) 및 CD73의 더 높은 발현(P=0.054)이 지속성 CR을 갖는 대상에서 관찰되었다. 추가로, CD3E, CD4 및 CAR 서열의 상승된 발현(P<0.001)은 치료에 반응한 대상체에서 더 큰 내인성 T 세포 및 CAR+ T 세포 종양 침윤과 일치하는 D11에 내구성 CR을 갖는 대상체에서도 관찰되었다. M9에서 CR을 갖는 대상체는 기준선에서의 CD163 발현에 비해 D11에서 측정된 증가된 CD163 발현을 나타내었다(P<0.001).
D. 결론
결과는 항-CD19 CAR-발현 세포로 초기 치료 시 종양 특이적 CAR+ T 세포의 증가된 침윤을 보여주었다. 이러한 결과는 초기 치료 시 종양 특이적 CAR+ T 세포의 증가된 침윤이 활성 면역 반응을 확립하는데 도움이 되었다는 결론과 일치한다. 또한, 추가적인 기능적 내인성 T 세포, 특히 CD4+ T 세포의 모집은 지속적인 반응과 연관되었다. 기준선에서 더 많은 수의 자극 및/또는 기능적 T 세포와 더 적은 수의 대식세포도 CAR+ T 세포 치료에 대한 지속적인 반응과 관련이 있었다. 이러한 결과는 또한 반응자에 있는 종양이 T 세포가 항원에 침투하고 반응할 수 있는 기준선 종양 미세환경(TME)을 가질 수 있고, CAR T+가 종양으로 진입하고 CAR+ T 세포 기능의 기능을 뒷받침하는 내인성 림프구의 후속 모집 및 자극을 촉진할 수 있다는 관찰을 뒷받침한다.
본 발명은 본 발명의 다양한 측면을 설명하기 위해, 예를 들어 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위를 제한하려는 것이 아니다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본 명세서의 기재 및 가르침에서 명백해질 것이다. 상기 변형은 공개의 진정한 범위와 정신에서 벗어나지 않고 실천될 수 있으며, 본 개시의 범위에 속하도록 의도된다.
서열목록
서열번호 서열 설명
1 ESKYGPPCPPCP 스페이서 (IgG4힌지) (aa)호모 사피엔스
2 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT 스페이서 (IgG4 힌지) (nt)호모 사피엔스
3 ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH3 스페이서호모 사피엔스
4 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH2-CH3 스페이서호모 사피엔스
5 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH IgD-힌지-Fc호모 사피엔스
6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A인공
7 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR인공
8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (수탁번호 P10747 의 아미노산 153-179)호모 사피엔스
9 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (수탁 번호 P10747의 아미노산 114-179)호모 사피엔스
10 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (P10747의 아미노산 180-220)호모 사피엔스
11 RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL 에서 GG)호모 사피엔스
12 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB (Q07011.1의 아미노산 214-255)호모 사피엔스
13 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
14 RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
15 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
16 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR인공
17 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A 인공
18 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
19 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
20 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A
21 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A
22 PGGG-(SGGGG)5-P- 여기서 P는 프롤린이고, G는 글리신이며 S는 세린이다. 링커
23 GSADDAKKDAAKKDGKS 링커
24 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 링커
25 gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc scFv 암호화 서열
26 X1PPX2PX1 는 글라이신, 시스테인 또는 아르기닌
X2 는 시스테인 또는 트레오닌		 힌지
27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
29 ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP 힌지
30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 힌지
31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
35 RASQDISKYLN CDR L1
36 SRLHSGV CDR L2
37 GNTLPYTFG CDR L3
38 DYGVS CDR H1
39 VIWGSETTYYNSALKS CDR H2
40 YAMDYWG CDR H3
41 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS VH
42 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT VL
43 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS scFv
44 KASQNVGTNVA CDR L1
45 SATYRNS CDR L2
46 QQYNRYPYT CDR L3
47 SYWMN CDR H1
48 QIYPGDGDTNYNGKFKG CDR H2
49 KTISSVVDFYFDY CDR H3
50 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSS VH
51 DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR VL
52 GGGGSGGGGSGGGGS 링커
53 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR scFv
54 HYYYGGSYAMDY CDR H3
55 HTSRLHS CDR L2
56 QQGNTLPYT CDR L3
57 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT IGH 프라이머
58 ACCTGAGGAGACGGTGACC IGH 프라이머
SEQUENCE LISTING <110> JUNO THERAPEUTICS, INC. ALBERTSON, Tina GARCIA, Jacob Randolph GILBERT, Mark LI, He SUTHERLAND, Claire <120> METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY <130> 735042019640 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/774,164 <151> 2018-11-30 <150> 62/776,415 <151> 2018-12-06 <150> 62/847,926 <151> 2019-05-14 <150> 62/854,945 <151> 2019-05-30 <150> 62/890,600 <151> 2019-08-22 <150> 62/931,204 <151> 2019-11-05 <160> 58 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 6 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 7 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 7 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 8 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 9 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 9 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 10 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 10 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 11 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <400> 11 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB <300> <308> UniProt Q07011.1 <309> 1995-02-01 <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 14 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 15 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 17 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 18 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 19 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 20 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 21 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> REPEAT <222> (5)...(9) <223> SGGGG is repeated 5 times <400> 22 Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 23 Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 24 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 25 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 25 gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60 atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120 gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240 gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300 ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420 cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480 tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540 accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600 agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660 gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720 gtgaccgtga gcagc 735 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <220> <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa = glycine, cysteine or arginine <220> <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> Xaa = cysteine or threonine <400> 26 Xaa Pro Pro Xaa Pro 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser 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Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val 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PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val 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Claims (176)

  1. 재발성 또는 불응성 거대 B 세포 림프종(relapsed or refractory large B cell lymphoma; r/r LBCL)인 질환 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로서,
    상기 방법은 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되, 각각의 용량의 T 세포는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor; CAR)를 포함하고,
    상기 T 세포의 용량은 (약) 1×107 개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2×108 개의 CAR-발현 T 세포(수치를 포함함)를 포함하며;
    상기 T 세포의 용량은 대략 1:1의 비율의 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 대 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고;
    상기 투여는 복수의 별개의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별개의 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은, 공격성 비호지킨 림프종(aggressive non-Hodgkin lymphoma; NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse Large B-Cell Lymphoma; DLBCL), 선택적으로 DLBCL NOS(드 노보(de novo)이거나 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환됨), 고-등급 B 세포 림프종(HGBCL), 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal B-cell lymphoma; PMBCL), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL), 형질전환된 여포성 림프종(tFL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로부터 선택되는, 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)인, 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 DLBCL은 DLBCL NOS, 드 노보 DLBCL이거나 또는 비활동성 림프종(indolent lymphoma)으로부터 형질전환된 DLBCL인, 방법.
  5. 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
    상기 DLBCL은 드 노보 DLBCL인 방법.
  6. 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
    상기 DLBCL은 FL과는 다른 비활동성 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL인, 방법.
  7. 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
    상기 DLBCL은 변연부 림프종(marginal zone lymphoma)으로부터 형질전환된(tMZL) DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된(tCLL; Richter's) DLBCL인, 방법.
  8. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 고-등급 B 세포 림프종(high-grade B cell lymphoma; HGBCL)인, 방법.
  9. 제 1 항, 제 2 항 및 제 8 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 HGBCL는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열(rearrangement)인, 방법.
  10. 제 1 항, 제 2 항, 제 8 항 및 제 9 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 HGBCL는 DLBCL 조직학(DLBCL histology)인, 방법.
  11. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 이중/삼중 히트 림프종인, 방법.
  12. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBCL)인, 방법.
  13. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 외투 세포 림프종(MCL)인, 방법.
  14. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 원발성 중추 신경계 림프종(primary central nervous system lymphoma; PCNSL)이 아닌 것인, 방법.
  15. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 형질전환된 여포성 림프종(tFL)인, 방법.
  16. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 여포성 림프종(FL)인, 방법.
  17. 치료 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 치료를 위해 여포성 림프종(FL)을 갖는 대상체를 선택하는 단계;
    (b) 상기 대상체에, FL 또는 그의 세포 또는 조직에 의해서 발현된 항원에 특이적으로 결합하고/하거나 FL과 관련되는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포의 용량을 투여하는 단계;
    를 포함하는, 방법.
  18. 제 17 항에 있어서,
    상기 T 세포의 용량은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 포함하되, 각각의 용량의 T 세포는 FL 또는 그의 세포 또는 조직에 의해서 발현된 항원에 특이적으로 결합하고/하거나 FL과 관련되는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별개의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별개의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
  19. 제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
    상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
  20. 제 17 항 내지 제 19 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원은 CD19인, 방법.
  21. 제 18 항 내지 제 20 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해 여포성 림프종(FL)을 갖는 대상체를 확인하거나 또는 선택하는 것을 포함하는, 방법.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 FL은 여포(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련되는 것인, 방법.
  23. 제 16 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 FL은 여포성 림프종 등급 3B(follicular lymphoma grade 3B; FL3B)인, 방법.
  24. 제 1 항 내지 제 23 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는, 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 위해 2종 이상의 선행 요법제(prior therapy)로 치료 후 관해 후에 재발했거나 그에 대해 불응성으로 되었던 것인, 방법.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는, 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 위해 3종 이상의 선행 요법제로 치료 후 관해 후에 재발했거나 그에 대해 불응성으로 되었던 것인, 방법.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는, 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 위해 4종 이상의 선행 요법제로 치료 후 관해 후에 재발했거나 그에 대해 불응성으로 되었던 것인, 방법.
  27. 제 24 항 내지 제 26 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 선행 요법제는 안트라사이클린(anthracycline) 및 CD20-표적화된 제제를 포함하는, 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 리툭시맙(rituximab)을 포함하는, 방법.
  29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 CD20-표적화된 제제는 R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신 하이드로클로라이드(doxorubicin hydrochloride)(하이드록시다우노마이신(hydroxydaunomycin)), 빈크리스틴 설페이트(vincristine sulfate)(온코빈(oncovin)) 및 프레드니손(prednisone))을 포함하는, 방법.
  30. 제 24 항 내지 제 29 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 선행 요법제가 선행 CD19-표적화된 요법제인 경우, 상기 선행 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함하는, 방법.
  31. 제 24 항 내지 제 30 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 선행 요법은 동종 또는 자가 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT)을 포함하는, 방법.
  32. 제 31 항에 있어서,
    상기 대상체는 상기 HSCT를 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발성 것인, 방법.
  33. 제 24 항 내지 제 32 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 상기 선행 요법제에 대한 반응에서 완전 관해(complete remission; CR)을 성취하지 않은 것인, 방법.
  34. 제 1 항 내지 제 33 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 공격성 질환 또는 고-위험 질환을 갖거나 나쁜 예후(poor prognosis)를 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 화학요법 불응성 질환(chemorefractory disease)을 갖거나 화학요법 후 지속성 또는 재발성 질환을 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 35 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 화학요법 불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법 불응성 DLBCL을 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 중추 신경계(CNS) 침범 또는 2차 CNS 림프종과 관련되거나 또는 그를 포함하는 림프종을 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 37 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 중추신경계(CNS) 침범(involvement) 또는 2차 CNS 림프종과 관련되거나 그를 포함하는 림프종이거나 또는 그것을 갖는 것으로 확인되고/되거나;
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, CNS 침범 또는 2차 CNS 림프종으로 림프종을 나타냈거나 또는 나타낸 것으로 확인되었으며, 상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%는 상기 CNS 질환의 해결(resolution)을 성취한 것인, 방법.
  39. 제 1 항 내지 제 38 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 연령 65세 또는 그 초과인, 방법.
  40. 제 1 항 내지 제 39 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    치료된 상기 대상체 중에서, (약) 35% 초과, (약) 40% 초과, (약) 45% 또는 (약) 50% 초과, 또는 전술한 수치들 사이의 임의의 값은 연령 65세 또는 그 초과인, 방법.
  41. 제 1 항 내지 제 39 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 연령 65세 이상인, 방법.
  42. 제 1 항 내지 제 41 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 50% 미만의 좌심실 구혈률(left ventricular ejection fraction; LVEF)을 갖는 손상된 심장 기능을 갖거나 또는 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  43. 제 1 항 내지 제 42 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 60 mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 청소율(calculated creatinine clearance)을 갖는 손상된 신장 기능을 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  44. 제 1 항 내지 제 43 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 (약) 60% 또는 그 미만의 일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide; DLCO)을 갖는 손상된 폐 기능을 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  45. 제 1 항 내지 제 44 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는, 선택적으로 정상 상한(upper limit of normal; ULN)의 (약) 2배 초과인 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(aspartate aminotransferase; AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase; ALT)를 갖는 손상된 간 기능을 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  46. 제 1 항 내지 제 45 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 생성하는 백혈구 성분 채집의 시간과 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량 투여 사이에 가교 화학요법(bridging chemotherapy)을 받은 것인, 방법.
  47. 제 1 항 내지 제 46 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 선행 요법 후 질환 조절을 위한 가교 화학요법을 받은 것인, 방법.
  48. 제 46 항 또는 제 47 항에 있어서,
    상기 가교 화학요법은, 리툭시맙-젬시타빈 플러스 옥살리플라틴(Rituximab-gemcitabine plus oxaliplatin), 덱사메타손(Dexamethasone), 방사선 요법(radiotherapy), 리툭시맙(Rituximab), 프레드니손, BR, 레날리도마이드(Lenalidomide), 젬시타빈 플러스 옥살리플라틴(gemcitabine plus oxaliplatin), 브렌툭시맙 베도틴, 이브루티닙, 벤다무스틴(Bendamustine) 및/또는 젬시타빈 + 리툭시맙(Gemcitabine + rituximab) 중의 하나 이상으로부터 선택되는, 방법.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법(high-dose chemotherapy)에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 확인된 것인, 방법.
  50. 제 1 항 내지 제 49 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation; HSCT)에 부적격이거나 부적격인 것으로 확인된 것인, 방법.
  51. 제 49 항 또는 제 50 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 둘 다에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 확인된 것인, 방법.
  52. 제 1 항 내지 제 52 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 직전에, 상기 대상체는 고-용량 화학 요법 및 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 둘 다에 부적격이거나 또는 부적격인 것으로 확인된 것이고, 상기 대상체는 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외에 상기 질환 또는 병태를 위해 1종의 선행 요법제로 치료 후 관해 후에 재발했거나 그에 대해 불응성으로 되었던 것인, 방법.
  53. 제 1 항 내지 제 52 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 0, 1 또는 2의 동부 종양학 그룹 협회의 전신 활동도(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG PS)를 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  54. 제 1 항 내지 제 53 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 0 또는 1의 동부 종양학 그룹 협회의 전신 활동도(ECOG PS)를 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  55. 제 1 항 내지 제 53 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 2의 동부 종양학 그룹 협회의 전신 활동도(ECOG PS)를 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  56. 제 1 항 내지 제 55 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 대상체는 (약) 50 cm2 이상인 대상체 내 종양의 생성물 치수의 합(sum of product dimensions; SPD)을 갖거나 갖는 것으로 확인된 것인, 방법.
  57. 제 1 항 내지 제 55 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 상기 대상체는 양전자 방출 단층촬영(positron emission tomography; PET)-양성 질환을 갖는 것인, 방법.
  58. 제 1 항 내지 제 56 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위한 상기 대상체를 확인하거나 또는 선택하는 것인, 방법.
  59. 제 1 항 내지 제 57 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해:
    재발성 또는 불응성 거대 B 세포 림프종; 및/또는
    안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제; 및/또는
    2회 이상의 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발성 또는 불응성 질환; 및/또는
    1 또는 2의 ECOG 전신 활동도; 및/또는
    상기 대상체가 선행 CD19-표적화된 요법을 받은 경우, 상기 선행 CD19-표적화된 요법 후에 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함하는 것;
    이거나 또는 그것을 갖는 대상체를 확인하거나 또는 선택하는 것을 포함하는, 방법.
  60. 제 1 항 내지 제 57 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해:
    연령 70세 이상; 및/또는
    2의 ECOG 전신 활동도; 및/또는
    손상된 폐 기능, 선택적으로 (약) 60% 또는 그 미만의 일산화탄소에 대한 폐의 확산 능력(diffusing capacity of the lungs for carbon monoxide; DLCO)을 가짐; 및/또는
    손상된 심장 기능, 선택적으로 (약) 50% 또는 그 미만의 좌심실 구혈률(left ventricular ejection fraction; LVEF)을 가짐; 및/또는
    손상된 신장 기능, 선택적으로 (약) 60 mL/min 미만의 계산된 크레아티닌 청소율(calculated creatinine clearance)을 가짐; 및/또는
    손상된 간 기능, 선택적으로 정상 상한(upper limit of normal; ULN)의 (약) 2배 초과인 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(aspartate aminotransferase; AST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase; ALT)을 가짐;
    이거나 또는 그것을 갖는 대상체를 확인하거나 또는 선택하는 것을 포함하는, 방법.
  61. 제 1 항 내지 제 57 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 전에, 상기 세포 용량의 투여를 위해:
    이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma);
    화학요법 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법 불응성 DLBCL;
    상기 악성 종양, 선택적으로 상기 NHL을 치료하기 위한 선행 요법제(prior therapy)에 대한 반응에서 완전 관해(complete remission; CR)를 성취하지 않는 것; 및/또는
    자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant; ASCT)을 받은 후 1년 이내 또는 1년 미만에 재발된 것; 및/또는
    중추신경계(CNS) 침범(involvement)과 관련되거나 또는 그를 포함하는 림프종을 갖는 것;
    을 갖는 대상체를 확인하거나 또는 선택하는 것을 포함하는, 방법.
  62. 제 1 항 내지 제 61 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포의 용량은 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에 대해 농축되고, 선택적으로 상기 T 세포의 용량 중 세포의 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 초과는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포인, 방법.
  63. 제 1 항 내지 제 17 항 및 제 19 항 내지 제 62 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행되는, 방법.
  64. 제 1 항 내지 제 17 항 및 제 19 항 내지 제 63 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
  65. 제 1 항 내지 제 17 항 및 제 19 항 내지 제 64 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
  66. 제 1 항 내지 제 17 항 및 제 19 항 내지 제 64 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되고, 약 0 내지 약 12시간 간격, 약 0 내지 약 6시간 간격 또는 약 0 내지 2시간 간격으로 수행되거나; 또는
    상기 제 1 조성물의 투여의 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여의 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는, 방법.
  67. 제 1 항 내지 제 17 항 및 제 19 항 내지 제 64 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는, 방법.
  68. 제 1 항 내지 제 67 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ T 세포에 의해서 포함된 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 포함된 상기 재조합 수용체는 동일한 재조합 수용체이고/이거나, 상기 CD4+ T 세포 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작되는, 방법.
  69. 제 1 항 내지 제 68 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
    (약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
    (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
    (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
    (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는
    (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
    를 포함하는, 방법.
  70. 제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
  71. 제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
  72. 제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
  73. 제 1 항 내지 제 69 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은,
    (약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
    (약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
    (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
    (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는
    (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
    를 포함하는, 방법.
  74. 제 1 항 내지 제 69 항, 제 70 항 및 제 73 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
  75. 제 1 항 내지 제 69 항, 제 71 항 및 제 73 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
  76. 제 1 항 내지 제 69 항, 제 72 항 및 제 73 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은, (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
  77. 제 1 항 내지 제 76 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 전에, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝(preconditioning)되는, 방법.
  78. 제 1 항 내지 제 77 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 세포 용량의 투여 직전에, 상기 대상체에 상기 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  79. 제 77 항 또는 제 78 항에 있어서,
    상기 세포 용량 및/또는 상기 림프구 고갈 요법제의 투여는 외래 환자 전달을 통해 수행되는, 방법.
  80. 제 79 항에 있어서,
    상기 세포 용량 및/또는 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 비-3차 진료 센터(non-tertiary care center)에서 수행되는, 방법.
  81. 제 1 항 내지 제 80 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 및 모든 후속 조치는 외래 환자를 기준으로 및/또는 입원 없이 또는 하룻밤 입원하여 수행되며;
    상기 대상체가 해열제 치료 후 열이 지속되거나 감소되거나 감소되지 않았거나 1℃ 초과 감소하지 않은 경우, 상기 대상체는 입원하거나 또는 병원에 하룻밤 머물고/머물거나 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후군 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받는 것인, 방법.
  82. 제 1 항 내지 제 81 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여 개시 전에, 상기 대상체는 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후군 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여받지 않은 것인, 방법.
  83. 제 1 항 내지 제 82 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체에, 신경독성 및/또는 사이토카인 방출 증후군 또는 이의 위험을 예방하거나 감소 또는 약화시키기 위한 제제 또는 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  84. 제 81 항 내지 제 83 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 항-IL-6 항체, 항-IL-6 수용체 항체 또는 스테로이드이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  85. 제 81 항 내지 제 84 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 토실리주맙, 실툭시맙, 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  86. 제 81 항 내지 제 85 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 토실리주맙이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  87. 제 81 항 내지 제 85 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제제는 덱사메타손이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  88. 제 1 항 내지 제 87 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에,
    상기 대상체는 안트라사이클린 및 하나 이상의 CD20-표적화된 제제로 치료되거나 또는 치료되었고/되었거나;
    상기 대상체는 2회 이상의 세포 요법 후 또는 자가 HSCT 후 재발된 또는 불응성 질환이거나 또는 그를 갖고/갖거나;
    상기 대상체는 0, 1 또는 2의 ECOG 전신 활동도를 갖는 것으로 확인되거나 또는 확인되었고/되었거나;
    상기 대상체가 선행 CD19-표적화된 세포 요법(prior CD19-targeted therapy)을 받은 경우, 상기 선행 CD19-표적화된 세포 요법 후 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플은 CD19를 발현하는 세포를 포함하고;
    상기 세포 용량의 투여는 외래 환자 전달을 통해서 수행되는, 방법.
  89. 제 1 항 내지 제 88 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포인, 방법.
  90. 제 1 항 내지 제 89 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 자가인, 방법.
  91. 제 1 항 내지 제 90 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma)을 가졌거나 또는 가지는 것으로 확인되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(autologous stem cell transplant; ASCT) 투여 후 재발한, 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 OR을 성취한 것인, 방법.
  92. 제 1 항 내지 제 91 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전 반응(complete response; CR)을 성취하고;
    CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 CR을 나타내고/내거나;
    1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 CR을 유지하고/하거나, 상기 CR을 성취한 후 3개월 이상 동안 및/또는 6개월 이상 동안 및/또는 9개월 이상 동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고;
    OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 OR을 나타내고/내거나;
    OR을 성취하는 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 반응을 유지하거나 또는 상기 OR을 성취한 후 3개월 이상 동안 또는 6개월 이상 동안 생존하고/하거나;
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 이중/삼중 히트 림프종을 가졌거나 또는 가지는 것으로 확인되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(ASCT) 투여 후 재발하는 대상체의 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%는 OR, 또는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속되는 OR을 성취한 것인, 방법.
  93. 제 1 항 내지 제 92 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%는 완전 반응(CR)을 성취하고;
    CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%는 6개월 이상 동안 지속되는 CR을 나타내고/내거나;
    1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%는 반응을 유지하고, CR을 유지하고/하거나, 상기 CR을 성취한 후 6개월 이상 동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 성취하고;
    OR을 성취하는 대상체의 적어도 60%는 6개월 이상 동안 지속되는 OR을 나타내고/내거나;
    OR을 성취하는 대상체의 적어도 50%는 반응을 유지하거나 또는 상기 OR을 성취한 후 6개월 이상 동안 생존하고/하거나;
    상기 세포 용량의 투여시 또는 그 전에, 이중/삼중 히트 림프종을 가졌거나 또는 가지는 것으로 확인되었거나 또는 자가 줄기 세포 이식물(ASCT) 투여 후 재발하는, 대상체의 적어도 40%는 OR, 또는 3개월 이상 동안 지속되는 OR을 성취한 것인, 방법.
  94. 제 1 항 내지 제 93 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 상기 대상체의 자가 조직(autologous)이고,
    성분 채집(apheresis)을 위한 최소 절대 림프구 수(ALC)는 상기 요법제의 생산에 요구되지 않거나 특정되지 않고/않거나;
    상기 세포는, 상기 질환 또는 병태를 갖는 대상체의 또는 상기 대상체의 선택된 집단의 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%에 대해 상기 방법에 따라 투여하기 위한 세포 생성물을 생성할 수 있는 방법에 의해서 생산되는, 방법.
  95. 제 92 항 내지 제 94 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CR 또는 상기 OR은 3개월 초과 또는 6개월 초과 동안 지속될 수 있고/있거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 초과 또는 6개월 초과 동안 지속될 수 있는 CR를 성취하고/하거나;
    상기 방법으로 치료되고 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 CR를 유지하고, 반응을 유지하고, 생존을 유지하고/하거나;
    상기 방법으로 치료되고, 1개월까지 및/또는 3개월까지 CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는, 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안, 반응을 유지하고, CR를 유지하고, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
    상기 방법으로 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 성취하고;
    대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 지속될 수 있는 OR을 성취하고/하거나;
    상기 방법으로 치료되고, OR을 성취하는 대상체의 적어도 35%, 적어도 40%, 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 반응을 유지하거나 또는 생존하는 것인, 방법.
  96. 제 1 항 내지 제 95 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 CNS 질환의 완전 반응(CR) 또는 관해를 성취하고;
    CR을 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 동안 CR을 유지하고/하거나;
    1개월까지 및/또는 3개월까지 CNS 질환의 CR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하고, CR을 유지하고/하거나, 3개월 이상 동안 및/또는 6개월 이상 동안 및/또는 9개월 이상 동안, 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 CNS 질환의 객관적 반응(objective response; OR) 또는 관해를 성취하고;
    CNS 질환의 OR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 3개월 이상 동안 또는 6개월 이상 동안; 및/또는
    CNS 질환의 OR 또는 관해를 성취하는 대상체의 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%는 반응을 유지하거나 또는 3개월 이상 동안 및/또는 6개월 이상 동안 생존하고/하거나;
    상기 뇌병변은 그 크기 또는 부피가 (약) 25%, 50%, 75% 이상 이상까지 감소되고/되거나;
    CNS 질환의 감소 또는 관해 또는 클리어런스(clearance)는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%에서 달성되는, 방법.
  97. 제 1 항 내지 제 96 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50%, (약) 60%, (약) 70%, 또는 (약) 80% 초과는 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS)를 나타내지 않고/않거나 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않고/않거나, 40% 또는 50% 또는 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내는 않는 것인, 방법.
  98. 제 1 항 내지 제 97 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 80% 초과는 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS)를 나타내지 않고/않거나 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않는 것인, 방법.
  99. 제 1 항 내지 제 98 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 95% 초과는 등급 3 이상의 CRS를 나타내지 않는 것인, 방법.
  100. 제 1 항 내지 제 99 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 85% 초과는 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않는 것인, 방법.
  101. 제 1 항 내지 제 100 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 또는 50% 초과는 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경 독성을 나타내지 않고/않거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%는 투여 시작 후 3일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않고/않거나 투여 시작 후 5일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않으며/않거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체 중 신경 독성의 발병 중앙값은 상기 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 그 후, 또는 그의 해결까지의 중앙값 시간(median time to resolution)이고/이거나, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 신경독성의 발병 중앙값은 (약) 8, 9, 10, 또는 11일 초과인, 방법.
  102. 제 1 항 내지 제 101 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과는 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경 독성을 나타내지 않고/않거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 45%는 투여 시작 후 3일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않고/않거나, 투여 시작 후 5일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않으며/않거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체 중 신경 독성의 발병 중앙값은 상기 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 그 후, 또는 그의 해결까지의 중앙값 시간(median time to resolution)이고/이거나 상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 신경독성의 발병 중앙값은 (약) 8일 초과인, 방법.
  103. 제 1 항 내지 제 102 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%는 완전 반응(CR)을 성취하고;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 70%는 객관적 반응(OR)을 성취하며;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과는 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome; CRS) 또는 신경독성을 나타내지 않고;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 80% 초과는 등급 3 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS)를 나타내지 않고/않거나 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않는 것인, 방법.
  104. 제 1 항 내지 제 103 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 유럽 연구 및 치료 기구의 삶의 핵심 질 설문지 버전 3.0(European Organization for Research and Treatment Core Quality of Life Questionnaire version 3.0; EORTC QLQ-C30)에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 글로벌 건강 상태에서 10 포인트 이상의 개선을 나타내고/내거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 신체 기능에서 10 포인트 이상의 개선을 나타내고/내거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 피로에서 10 포인트 이상의 개선을 나타내고/내거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타내고/내거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55% 또는 60% 초과는 EORTC QLQ-C30에서 치료전 또는 치료 후 1개월의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 통증(pain)에서 10 포인트 이상의 개선을 나타내는, 방법.
  105. 제 1 항 내지 제 104 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 평균 5-레벨(mean 5-level) EuroQol-5D (EQ-5D-5L) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월에서의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 더 크고/크거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체 중에서 평균 EuroQol 글로벌 비주얼 아날로그 스케일(EQ-VAS) 점수는 치료 전 또는 치료 후 1개월에서의 점수와 비교하여 투여 후 6개월 또는 12개월에 동일하거나 더 큰 것인, 방법.
  106. 제 1 항 내지 제 105 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인; 막 관통 도메인(transmembrane domain); 공자극 분자(costimulatory molecule)로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인(cytoplasmic signaling domain), 이는 선택적으로 4-1BB임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3제타(CD3zeta)임;을 포함하며;
    상기 CAR은, 상기 항원에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인, 막 관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함하거나; 또는
    상기 CAR은, 상기 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인(extracellular antigen-recognition domain) 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인 및 4-1BB의 신호 전달 도메인인 공자극 신호 전달 영역을 포함하는, 방법.
  107. 제 1 항 내지 제 106 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은 CD19에 특이적인 세포외 항원-결합 도메인, 막 관통 도메인, 4-1BB로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 CD3제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
  108. 제 107 항에 있어서,
    상기 항원-결합 도메인은 scFv인, 방법.
  109. 제 108 항에 있어서,
    상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 아미노산 서열, 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
    상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역(variable heavy chain region) 및 FMC63의 가변 경쇄 영역(variable light chain region) 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나, 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나, 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고,
    선택적으로 상기 scFv는, VH; 링커(linker), 선택적으로 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나,
    상기 scFv는 가요성 링커(flexible linker)를 포함하고/하거나 서열번호 43으로 제시된 아미노산 서열 세트를 포함하는, 방법.
  110. 제 108 항 또는 제 109 항에 있어서,
    상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역을 포함하는, 방법.
  111. 제 106 항 내지 제 110 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 신호 전달 영역인, 방법.
  112. 제 106 항 내지 제 111 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 서열번호 12 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하는, 방법.
  113. 제 106 항 내지 제 112 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 1차 신호 전달 도메인은 CD3제타 신호 전달 도메인인, 방법.
  114. 제 106 항 내지 제 113 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 1차 신호 전달 도메인은 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하는, 방법.
  115. 제 106 항 내지 제 114 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은 상기 막 관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 더 포함하는, 방법.
  116. 제 115 항에 있어서,
    상기 스페이서는 면역 글로불린 힌지(immunoglobulin hinge) 또는 그의 변형된 버전, 선택적으로 IgG4 힌지(IgG4 hinge), 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서인, 방법.
  117. 제 115 항 또는 제 116 항에 있어서,
    상기 스페이서는 (약) 12개의 아미노산 길이인, 방법.
  118. 제 115 항 내지 제 117 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 전술한 것들의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되고/되거나;
    상기 스페이서는 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임,을 포함하거나 또는 그들로 구성되는, 방법.
  119. 제 115 항 내지 제 118 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는,
    (a) 면역 글로불린 힌지 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되고, 약 15 개 미만의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며,
    (b) 면역 글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 그들로 구성되고, 약 15 개 미만의 아미노산을 포함하며, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는
    (c) (약) 12개의 아미노산 길이이고/이거나 면역 글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 또는 구성되거나, 또는
    (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 전술한 것들의 변이체를 갖거나 또는 그들로 구성되거나, 또는
    (e) 일반식 X1PPX2P, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임,을 포함하거나 또는 그들로 구성되는,
    폴리펩티드 스페이서이고/이거나;
    상기 공자극 도메인은 서열번호 12 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
    상기 1차 신호 전달 도메인은 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하고/하거나;
    상기 scFv는 RASQDISKYLN(서열번호 35)의 아미노산 서열, SRLHSGV(서열번호 36)의 아미노산 서열, 및/또는 GNTLPYTFG(서열번호 37)의 아미노산 서열 및/또는 DYGVS(서열번호 38)의 아미노산 서열, VIWGSETTYYNSALKS(서열번호 39)의 아미노산 서열, 및/또는 YAMDYWG(서열번호 40)의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
    상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열, FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열, 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하거나 또는 그와 동일한 에피토프(epitope)에 결합하거나 또는 전술한 것들 중의 임의의 것과의 결합을 위해 경쟁하고,
    선택적으로, 상기 scFv는, VH; 링커, 이는 선택적으로 서열번호 24를 포함함; 및 VL;을 순서대로 포함하고/하거나,
    상기 scFv는 가요성 링커를 포함하고/하거나 서열번호 43으로 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  120. 제 115 항 내지 제 119 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열번호 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 스페이서이고;
    상기 공자극 도메인은 서열번호 12를 포함하며;
    상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13, 14 또는 15를 포함하고;
    상기 항원 결합 도메인은 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역을 포함하는, 방법.
  121. 제 1 항 내지 제 120 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량은 비경구적으로, 선택적으로는 정맥내 투여되는, 방법.
  122. 제 1 항 내지 제 121 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
  123. 제조 물품으로서,
    재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물; 및
    선택적으로 제 1 항 내지 제 122 항 중의 어느 한 항의 방법에 따른 세포의 용량을 투여하기 위한 지침;
    을 포함하는, 제조 물품.
  124. 세포 요법제의 투여 후 독성 발병 위험을 평가하는 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴(ferritin) 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준(level), 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체 내 종양의 SPD(sum of product dimensions)이며;
    여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
    여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
    (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 확인하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
    (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
    (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
    을 포함하는, 방법.
  125. 대상체를 확인하는 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체 내 종양의 SPD(sum of product dimensions)이며;
    여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
    여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
    (b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 확인하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
    (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
    (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
    을 포함하는, 방법.
  126. 치료 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 대상체에서 하나 이상의 파라미터를 평가하는 단계, 상기 하나 이상의 파라미터는 상기 대상체로부터의 생물학적 샘플 중의 LDH, 페리틴 또는 C-반응성 단백질(CRP)의 수준, 양 또는 농도로부터 선택되거나, 또는 상기 대상체 내 종양의 SPD(sum of product dimensions)이며;
    여기서 상기 대상체는 상기 세포 요법제로 치료할 후보이며, 상기 세포 요법제는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량을 포함하고;
    여기서 상기 평가는 상기 세포 요법제를 투여하기 전에 수행되고/되거나 상기 생물학적 샘플 또는 종양은 상기 재조합 수용체 및/또는 상기 조작된 세포를 포함하지 않음; 및
    (b) 상기 대상체가 독성의 위험에 있는지를 확인하는 단계, 여기서 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준을 상회하는 경우 독성의 위험이 있으며 상기 대상체는 상기 하나 이상의 파라미터가 임계 수준 이하인 경우 독성의 위험이 없으며, 여기서
    (i) 상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 (약) 1000 ng/㎖, 2000 ng/㎖, 3000 ng/㎖, 4000 ng/㎖, 5000 ng/㎖, 6000 ng/㎖, 7000 ng/㎖ 또는 8000 ng/㎖ 초과이고/이거나;
    (ii) 상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 (약) 5 mg/ℓ, 10 mg/ℓ, 15 mg/ℓ, 20 mg/ℓ, 25 mg/ℓ, 30 mg/ℓ, 40 mg/ℓ 또는 50 mg/ℓ 초과임;
    및
    (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및 선택적으로, 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;
    를 포함하는, 방법.
  127. 제 124 항 내지 제 126 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 파라미터는 페리틴이고, 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖인, 방법.
  128. 제 124 항 내지 제 127 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 파라미터는 CRP이고, 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ인, 방법.
  129. 제 124 항 내지 제 128 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 하나 이상의 파라미터는 페리틴 및 CRP이고, 페리틴에 대한 상기 임계 수준은 5000 ng/㎖이며, CRP에 대한 상기 임계 수준은 10 mg/ℓ인, 방법.
  130. 제 124 항 내지 제 129 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 생물학적 샘플은 혈액 또는 혈장 샘플인, 방법.
  131. 제 124 항 내지 제 130 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 페라틴 또는 CRP의 수준, 양 또는 농도는 치료 전에, 성분 채집 전에, 세포 생성물 제조 전에 측정되는, 방법.
  132. 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 평가하는 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
    (b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 확인하는 단계, 여기서 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고, 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕ 초과임;
    을 포함하는, 방법.
  133. 대상체를 확인하는 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
    (b) 세포 요법제의 투여 후 독성을 발병할 위험을 갖는 대상체를 확인하는 단계, 여기서 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕ 초과임;
    을 포함하는, 방법.
  134. 치료 방법으로서,
    상기 방법은:
    (a) 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 요법제를 사전에 투여한 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 피크 농도를 평가하는 단계; 및
    (b) 상기 대상체가 독성 위험에 있는지를 확인하는 단계, 여기서 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준을 상회하는 경우 독성 위험이고 상기 대상체는 유전자 조작된 세포의 피크 농도가 임계 수준 이하인 경우 독성 위험이 아니며, 여기서 상기 임계 수준은 (약) 300 개의 세포/㎕, 400 개의 세포/㎕, 500 개의 세포/㎕, 600 개의 세포/㎕, 700 개의 세포/㎕, 800 개의 세포/㎕, 900 개의 세포/㎕ 또는 1000 개의 세포/㎕ 초과임; 및
    (c) 상기 평가 결과에 따라 또는 그를 기준으로 하여, 상기 대상체에 상기 세포 요법제, 및, 선택적으로, 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제를 투여하는 단계;
    를 포함하는, 방법.
  135. 제 132 항 내지 제 134 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 임계 수준은 500 개의 세포/㎕인, 방법.
  136. 제 124 항 내지 제 135 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 세포 요법제를 투여받고 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 확인되는 경우, 상기 대상체를 독성 증상에 대하여 모니터링하는 것을 더 포함하는, 방법.
  137. 제 124 항 내지 제 136 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)인, 방법.
  138. 제 124 항 내지 제 137 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 등급 1 이상의 신경독성 또는 CRS인, 방법.
  139. 제 124 항 내지 제 138 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 등급 1 이상의 신경독성인, 방법.
  140. 제 124 항 내지 제 139 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 중증 신경독성이거나 또는 등급 2 이상의 신경독성, 등급 3 이상의 신경독성, 또는 등급 4 이상의 신경독성인, 방법.
  141. 제 124 항 내지 제 140 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 중증 신경독성 또는 등급 3 이상의 신경독성인, 방법.
  142. 제 124 항 내지 제 138 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 등급 1 이상의 CRS인, 방법.
  143. 제 124 항 내지 제 138 항 및 제 142 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 중증 CRS이거나 또는 등급 2 이상의 CRS, 등급 3 이상의 CRS, 또는 등급 4 이상의 CRS인, 방법.
  144. 제 124 항 내지 제 138 항, 제 142 항 및 제 143 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성은 중증 CRS 또는 등급 3 이상의 CRS인, 방법.
  145. 제 124 항 내지 제 144 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 독성을 발병할 위험을 갖는 것으로 확인되는 경우 상기 대상체에:
    (a) (1) 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제 및 (2) 세포 요법제를 투여함, 상기 제제의 투여는, 상기 대상체에 대한 상기 세포 요법제의 투여 개시 (i) 이전에, (ii) 1일, 2일, 또는 3일 내에, (iii) 그와 동시에 및/또는 (iv) 최초 발열 후에 투여됨; 및/또는
    (b) 감소된 용량, 또는 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않거나, 또는 대부분의 대상체, 및/또는 세포 요법제의 투여 후 대상체가 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 질환 또는 병태를 갖는 대부분의 대상체,에서 독성 또는 중증 독성을 발병할 위험과 관련되지 않는 용량의 세포 요법제를 투여함; 및/또는
    (c) 상기 대상체에 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상 동안 병원에 입원하여 세포 요법제를 투여하고, 선택적으로 상기 세포 요법제는 외래 환자 기준으로 또는 1일 이상 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여되는 것인, 방법.
  146. 제 145 항에 있어서,
    상기 제제 또는 다른 치료제는 항-IL-6 항체 또는 항-IL-6 수용체 항체인, 방법.
  147. 제 146 항에 있어서,
    상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙(tocilizumab), 실툭시맙(siltuximab), 클라자키주맙(clazakizumab), 사릴루맙(sarilumab), 올로키주맙(olokizumab)(CDP6038), 엘실리모맙(elsilimomab), ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙(sirukumab)(CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 및 FM101 중에서 선택된 제제이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  148. 제 146 항 또는 제 147 항에 있어서,
    상기 제제 또는 다른 치료제는 토실리주맙인, 방법.
  149. 제 148 항에 있어서,
    상기 제제 또는 다른 치료제는 하나 이상의 스테로이드이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  150. 제 149 항에 있어서,
    상기 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)인, 방법.
  151. 제 149 항 또는 제 150 항에 있어서,
    상기 스테로이드는 덱사메타손인, 방법.
  152. 제 124 항 내지 제 151 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 재조합 수용체는 상기 질환 또는 병태와 관련되거나 또는 상기 질환 또는 병태와 관련된 병변의 환경의 세포에서 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인, 방법.
  153. 제 124 항 내지 제 152 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 암인, 방법.
  154. 제 124 항 내지 제 153 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종인, 방법.
  155. 제 124 항 내지 제 154 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 B 세포 악성종양이고/이거나 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia; ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphoblastic leukemia; CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
  156. 제 124 항 내지 제 155 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 질환 또는 병태는 거대 B 세포 림프종인, 방법.
  157. 제 156 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은, 공격성 비호지킨 림프종(aggressive non-Hodgkin lymphoma; NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma; DLBCL), 선택적으로 DLBCL NOS(드 노보(de novo) 또는 비활동성(indolent)으로부터 형질전환됨), 고-등급 B 세포 림프종(HGBCL), 이중/삼중 히트 림프종(double/triple hit lymphoma), 원발성 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal B-cell lymphoma; PMBCL), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma; MCL), 형질전환된 여포성 림프종(tFL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B)으로부터 선택되는, 방법.
  158. 제 156 항 또는 제 157 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)인, 방법.
  159. 제 156 항 또는 제 157 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 여포성 림프종(FL)인, 방법.
  160. 제 159 항에 있어서,
    상기 FL은 여포(follicles) 내 CD10, BCL6 및 BCL2의 공-발현, 및/또는 t(14;18)/(q32;q21)(IGH-BCL2) 및/또는 BCL6 재배열과 관련되는 것인, 방법.
  161. 제 156 항 또는 제 157 항에 있어서,
    상기 거대 B 세포 림프종은 외투 세포 림프종(MCL)인, 방법.
  162. 제 36 항 내지 제 49 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 재조합 수용체는 표적 항원에 결합하되, 상기 표적 항원은 B 세포 항원, 선택적으로 CD19인, 방법.
  163. 제 124 항 내지 제 162 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체(CAR)인, 방법.
  164. 제 124 항 내지 제 163 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 세포는 T 세포, 선택적으로 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포인, 방법.
  165. 제 124 항 내지 제 163 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 요법제의 투여는 상기 대상체에 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하되,
    각각의 용량의 T 세포는, 상기 질환 또는 병태에 의해서 발현된 항원 또는 상기 질환 또는 병태와 관련되는 그의 세포 또는 조직에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하고, 상기 투여는 복수의 별개의 조성물을 투여하는 것을 포함하되, 상기 복수의 별개의 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 및 CD4+ T 세포를 함유하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
  166. 제 165 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여의 개시는 상기 제 2 조성물의 투여의 개시 전에 수행되는, 방법.
  167. 제 165 항 또는 제 166 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 48시간 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
  168. 제 165 항 내지 제 167 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 36시간 이하의 간격, 24시간 이하의 간격, 12시간 이하의 간격, 6시간 이하의 간격, 4시간 이하의 간격, 2시간 이하의 간격, 1시간 이하의 간격 또는 30분 이하의 간격으로 수행되는, 방법.
  169. 제 124 항 내지 제 168 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ T 세포에 의해서 포함된 재조합 수용체 및/또는 상기 CD8+ T 세포에 의해서 포함된 재조합 수용체는 동일한 재조합 수용체이거나 이를 포함하고/하거나, 상기 CD4+ T 세포 및/또는 상기 CD8+ T 세포는 동일한 상기 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작되는, 방법.
  170. 제 124 항 내지 제 169 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ T 및/또는 상기 CD8+ T 세포의 용량은, 대략 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인, 정의된 비율의 상기 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포 대 상기 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포, 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포를 포함하고/하거나;
    상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 하나에서 상기 재조합 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 제 1 및 제 2 조성물 중의 다른 하나에서 상기 재조합 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고/하거나;
    상기 제 1 및 제 2 조성물로 투여된, 상기 수용체를 포함하는 CD4+ T 세포 및 상기 재조합 수용체를 포함하는 CD8+ T 세포는 정의된 비율로 존재하며, 상기 비율은 (대략) 1:1이거나 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하는, 방법.
  171. 제 124 항 내지 제 170 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 정의된 비율은 (대략) 1:1인, 방법.
  172. 제 124 항 내지 제 171 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은:
    (약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
    (약) 2.5×107 내지 (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
    (약) 5×107 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포(수치를 포함함);
    (약) 5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
    (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포; 또는
    (약) 1.5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 T 세포;
    를 포함하는, 방법.
  173. 제 124 항 내지 제 172 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 용량은:
    (약) 1×107 내지 (약) 1×108 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
    (약) 1.25×107 내지 (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
    (약) 2.5×107 내지 (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수치를 포함함);
    (약) 2.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
    (약) 5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포; 또는
    (약) 7.5×107 개의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포;
    를 포함하는, 방법.
  174. 제 124 항 내지 제 173 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 대상체로부터 얻어진 1차 T 세포이거나 또는 상기 대상체의 자가 조직인, 방법.
  175. 제 124 항 내지 제 174 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 인간 대상체인, 방법.
  176. 제조 물품으로서,
    재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물; 및
    선택적으로 독성의 발병 또는 발병 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 제제 또는 다른 치료제; 및
    제 124 항 내지 제 175 항 중의 어느 한 항의 방법에 따라 독성을 발병할 위험을 평가하거나, 대상체를 확인하거나 또는 대상체를 치료하기 위한 지침;
    을 포함하는, 제조 물품.
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