JPH08508491A

JPH08508491A - ホスホジエステル結合をアミド結合に置き換えたオリゴヌクレオチド

Info

Publication number: JPH08508491A
Application number: JP6522132A
Authority: JP
Inventors: ベンカタチャラチャターベドゥラ，プラサド
Original assignee: スターリングウインスロップインコーポレイティド
Priority date: 1993-03-31
Filing date: 1994-03-21
Publication date: 1996-09-10
Also published as: EP0691977A1; HU9501974D0; CA2159629A1; EP0691977B1; AU6412794A; DE69407032T2; DE69407032D1; WO1994022891A1; US5663312A; ATE160572T1

Abstract

(57)【要約】 RNA及びDNAを構成する天然のオリゴヌクレオチドのバックボーンであるホスホジエステル結合がアミド結合に置き換えられたヌクレオシド間結合を含む、塩基数が３〜約200のオリゴヌクレオシド配列からなるオリゴヌクレオチド類似体が開示される。さらに、二官能価ヌクレオシド類似体、該二官能価ヌクレオシド類似体からの二量体及び三量体の製造方法、ならびに公知の常用の有機合成法を用いて、好ましくは固相合成において、より好ましくはペプチド自動合成装置中で該オリゴヌクレオチド類似体を合成するための、二量体及び三量体を含むこれらの二官能価ヌクレオシド中間体の使用方法が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】ホスホジエステル結合をアミド結合に置き換えたオリゴヌクレオチド発明の分野本発明は、RNA及びDNAを構成する天然のオリゴヌクレオチドのバックボーンであるホスホジエステル結合がアミド結合に置き換えられたヌクレオシド間結合を含む、塩基数が３〜約60のオリゴヌクレオシド配列からなるオリゴヌクレオチド類似体に関する。本発明は、また、二官能価ヌクレオシド類似体、該二官能価ヌクレオシド類似体からの二量体及び三量体の製造方法、ならびに公知の常用の有機合成法を用いて、好ましくは固相合成において、より好ましくはペプチド自動合成装置中で該オリゴヌクレオチド類似体を合成するための、二量体及び三量体を含むこれらの二官能価ヌクレオシド中間体の使用方法に関する。発明の背景アンチセンス（antisense）化合物は、核酸（RNAまたはDNA）中のヌクレオチド配列に結合するかまたはそれとハイブリッド形成して、核酸の作用（または合成）を阻害する。アンチセンス化合物はRNA及びDNAの両者とハイブリッド形成できるため、転写、RNAプロセッシングまたは翻訳のレベルで遺伝子発現を妨害することができる。たとえば、Klausner，A.，Biotechnology，8:303〜304（1990）で論じられているように、アンチセンス技術の実際への応用は、数々の技術的問題によってその進展が妨げられている。従って、天然の、ホスホジエステル結合したアンチセンスオリゴマー化合物は、体内の標的細胞などに存在するヌクレアーゼ；核酸の３’または５’末端に作用するエクソヌクレアーゼ、及び個々のヌクレオシド間の内部ホスホジエステル結合の位置で核酸を分解するエンドヌクレアーゼの両者によって急速に分解されやすい。このようなヌクレアーゼの作用の結果、投与される多くのアンチセンス化合物の有効半減期は極めて短いため、大用量を短い時間間隔で投与しなければならない。もう１つの問題は、現在入手できるDNA合成装置では、アンチセンスDNAまたは RNAの製造コストが高いことである。Armstrong，L．Business Week，1990年３月５日、89ページは、１ｇのアンチセンスDNAの製造コストを約＄100,000と見積もった。また、体（及び細胞）内の標的へのアンチセンス薬剤の送達に関して別の問題がある。たとえば、ゲノムDNAを標的とするアンチセンス薬剤は原形質膜及び核膜を透過しなければ核に入れない。その結果、膜透過性を増大するためには疎水性を増大しなければならないが、他方においては、細胞質及び細胞サイトゾルのような体液中においては親水性（水溶性）を増大しなければならないので、そのいずれかを優先するかを考えなければならない。さらに、アンチセンスDNAのようなオリゴヌクレオチド化合物は、キラール燐（phosphorous）中心の回りで立体配置の変換を受けやすい。このため、化合物が体内で遊離しているかまたは標的核酸に対してハイブリッド形成するかという安定性の問題も生じる。安定性と薬物送達の限界を克服するために、種々のオリゴヌクレオチド類似体が研究されてきた。実際に使用するのに必要なことは、このような類似体が優れた細胞透過性を有し、ヌクレアーゼ分解に対して抵抗性であり、標的核酸に対して配列特異的な優れたハイブリッド形成能を有し、しかもむずかしすぎたり費用がかかりすぎたりしない化学的方法で合成できることである。最近は、前記問題を克服すると同時に、安定で、ヌクレアーゼ抵抗性で、比較的製造コストが低く、しかも体じゅうの核酸標的に送達でき且つそれらとハイブリッド形成できるアンチセンス化合物を製造しようという努力がなされているが、それには、ホスホジエステル構造中への修飾の導入によって、または長さと向きが正常のホスホジエステルヌクレオシド間結合に近い非ホスフェートヌクレオシド間結合を使用することによって、「正常な」ヌクレオシド間ホスホジエステル結合とは異なるヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド配列からなるオリゴヌクレオチド類似体を合成することが必要である。Uhlman，E.及びPeyman ，A.，Chemical Reviews，9（4）:544〜584（1990）。これまで報告されている修飾ホスホジエステル結合の中には、ホスホロチオエート、アルキルホスホトリエステル、メチルホスホネート及びアルキルホスホルアミデートがある。また、非ホスフェートヌクレオシド間結合、たとえば、カーボネート、アセテート、カルバメート、スルホン、スルホキシド、スルホンアミド及びジアルキルまたはジアリール−シリル誘導体を含む種々の非イオン性オリゴヌクレオシド配列も合成され、報告されている。さらに最近になって、炭素原子２個と窒素原子１個または酸素原子１個を含むヌクレオシド結合や炭素原子３個を含むヌクレオシド結合を含むキメラオリゴヌクレオチド類似体が報告された。たとえば、国際特許公報WO 9202534参照。本発明は、RNA及びDNAを構成する天然オリゴヌクレオチドのバックボーンであるホスホジエステル結合がアミド結合に置き換えられたヌクレオシド間結合で均一に置換された、塩基数が３またはそれ以上のオリゴヌクレオシドを提供する。本発明はまた、RNA及びDNAを構成する天然オリゴヌクレオチドのバックボーンであるホスホジエステル結合がアミド結合に置き換えられたヌクレオシド間結合を含む、塩基数が３〜約200のオリゴヌクレオシド配列からなるキメラオリゴヌクレオチド類似体を提供する。本発明はさらに、二官能価ヌクレオシド類似体、該二官能価ヌクレオシド類似体からの二量体及び三量体の製造方法、ならびに公知の常用の有機合成法を用いて、好ましくは固相合成において、より好ましくはペプチド自動合成装置中で該オリゴヌクレオチド類似体を合成するための、二量体及び三量体を含むこれらの二官能価中間体の使用方法を提供する。本明細書中で使用する用語「オリゴヌクレオチド」は、「天然の」ホスホジエステルヌクレオシド間結合のみを含む核酸化合物を意味する。他方、用語「キメラオリゴヌクレオチド類似体」は、オリゴヌクレオシド結合及びホスホジエステルオリゴヌクレオチド結合の両者を含む配列からなる化合物を意味する。用語「オリゴヌクレオシド」は、合成（天然のホスホジエステルと対立するものとして）ヌクレオシド間結合のみを含むオリゴヌクレオチド類似体を意味する。発明の要約本発明は新規ヌクレオシド中間体、ならびにRNA及びDNAを構成する天然のオリゴヌクレオチドのバックボーンであるホスホジエステル結合がアミド結合に置き換えられたヌクレオシド間結合を含む、塩基数が３〜約60のオリゴヌクレオシド配列からなるオリゴヌクレオチド類似体の製造に有用なそれらの二量体及び三量体を提供する。本発明はまた、アミドヌクレオシド間結合を有する二量体及び三量体の製造方法、ならびに公知の常用の有機合成法を用いて、好ましくは固相合成において、より好ましくはペプチド自動合成装置中で該オリゴヌクレオチド類似体を合成するための、二量体及び三量体の使用方法を含む。本発明に係る、二官能価ヌクレオシド中間体の製造は反応式１に示し；本発明に係る、二量体及び三量体オリゴヌクレオチド類似化合物の合成、ならびに二量体及び三量体からのそれより長いオリゴヌクレオシドの合成は反応式２に示す。さらに詳しくは、本発明は、下記式の新規オリゴヌクレオチド類似体を提供する：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ、OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選ばれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ−、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；各Ｗは、（１）-3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)nn-5'-、（２）-3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、及び（３）天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合からなる群から選ばれるヌクレオシド間結合であるが、Ｗの少なくとも１個はヌクレオシド間結合（１）または（２）であり；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；ｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ただし、ｍ＋ｎの合計は２であり；ｊは１〜30の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］。本発明はまた、式IIの構造を有する二官能価二量体を提供する：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ、OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選ばれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ− 、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；Ｗは、 -3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)n-5'-、及び -3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、から選ばれるヌクレオシド間結合であり、；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；且つｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ｍ＋ｎの合計は２である］。発明の詳細な説明本発明の二官能価二量体は、式II：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ、OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選ばれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ− 、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；Ｗは、 -3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)n-5'-、及び -3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、から選ばれるヌクレオシド間結合であり、；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；ｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ｍ＋ｎの合計は２である］の構造を有する。本発明のオリゴヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類似体は、式Ｉを有する：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ、OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選ばれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ− 、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；各Ｗは、（１）-3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)n-5'-、（２）-3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、及び（３）天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合からなる群から選ばれるヌクレオシド間結合であるが、Ｗの少なくとも１個はヌクレオシド間結合（１）または（２）であり；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；ｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ｍ＋ｎの合計は２であり；ｊは１〜30の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］。本明細書中で使用する以下の用語は、特に断らない限り、以下の意味を有するものと理解されたい：「アルキル」は、直鎖または分枝鎖のいずれかであることができる飽和脂肪族炭化水素を意味する。好ましい基は、炭素数が約12以下であり、メチル、エチルならびにプロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルの構造異性体であることができる。「低級アルキル」は、炭素数が１〜７の前記アルキル基を意味する。適当な低級アルキル基はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、tert− ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル及びｎ−ヘプチルである。「アリール」は、フェニル、ナフチル、置換フェニル及び置換ナフチルを意味する。「置換フェニル（またはナフチル）」は、１個またはそれ以上の水素が、ハロ、低級アルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、低級アルコキシ、アルキルスルホニル及びトリフルオロメチルから選ばれる同一または異なる置換基で置換されたフェニル（またはナフチル）基を意味する。「ヘテロアリール基」は、ピリジル、フリル、チエニルまたはイミダゾリルを意味する。「置換ヘテロアリール」は、１個またはそれ以上の水素が、ハロ、低級アルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、低級アルコキシ、アルキルスルホニル及びトリフルオロメチルから選ばれた同一または異なる置換基で置換されたヘテロアリール基を意味する。「低級アルケニル」は、炭素数２〜８の不飽和脂肪族炭化水素、例えば、エチレン、プロピレン、ブチレン、イソブチレンなどを意味し、それらの全ての構造異性体及び幾何異性体を含む。「ハロ」は、ブロモ、クロロまたはフルオロを意味する。「Ｏ−、Ｓ−またはＮ−保護基」は、各々、酸素、硫黄または窒素官能価を不所望な反応から保護するように働く、酸素、硫黄または窒素原子に結合した基である。このような保護基は公知であり；その多くが“ The Peptides．”E．Gross及びJ．Meienhofer，Bds．Vol ３ Academic Press，N Y（1981）に記載されている。Ｎ−保護基は、Ｎ−アシル、Ｎ−アルコキシカルボニル、Ｎ−アリールメトキシ−カルボニル、トリフルオロメチルアシル及びＮ −アリールスルホニル保護基であることができる。適当なＯ−保護基としてはベンジル、tert−ブチル、メチル、トシル、ジメトキシトリチル、tert-ブチル-ジメチルシリル、及びカルボベンゾキシ基が挙げられる。Ｓ−保護基としては、メチル、tert−ブチル、ベンジル及びカルボベンゾキシ基が挙げられる。医薬として許容されうる塩としては、酸付加塩及び塩基付加塩の両者が挙げられる。「医薬として許容され得る塩」は、遊離塩基の生物学的有効性及び性質を保持するが、生物学的にまたは他の点で有害ではないそれらの塩を指す。適当な医薬として許容され得る酸付加塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸など及び有機酸、たとえば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸及びｐ−トルエンスルホン酸などを用いて形成できる。医薬として許容され得る塩基付加塩としては、無機塩基、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などから誘導されるものが挙げられる。特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウム塩である。医薬として許容され得る無毒性有機塩基から誘導される塩としては、第一、第二及び第三アミン、置換アミン（例えば、天然置換アミン）、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン（hydrabamine）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ペペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩が挙げられる。特に好ましい有機無毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノール−アミン及びジシクロヘキシルアミンである。本発明においてはまた、式Ｉの化合物の医薬として許容され得る酸付加塩も考えられる。薬理学の業界ではよく知られたことであるが、薬理活性のあるアミン化合物の無毒性付加塩はそれらの遊離塩基と活性の点では異らない。本発明はまた、本発明の二量体ヌクレオシド化合物を用いた前記オリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体化合物の製造方法であって、公知の常用の有機合成法によって５’−末端ヌクレオシド、中間二官能価単位及び３’ −末端ヌクレオシドをつなげて、アンチセンス化合物として有用な種々のオリゴマーを生成することからなる方法を提供する。反応式１に示したように、４個の重要な二官能価中間体ヌクレオシド、２、５、７及び10は、反応式１に概説した方法で製造でき、それらは３’または５’位のいずれかにアミノ基を、それに対応して５’または３’位にカルボキシ基を含む。反応式２に示したように、これらのアミノ官能基は、別の同様なヌクレオシドのカルボキシ基とのカップリング反応を受けて、天然のホスホジエステル結合の代わりにアミドアルキレンヌクレオシド間結合を有する新規二量体類似体を生成するであろう。本発明のもう一つの新しい側面は、今まで文献記載のない二量体12及び15ならびに三量体13及び16である。これらもまた、本発明のアミド結合オリゴヌクレオシド及びキメラオリゴヌクレオチド類似体の合成における重要な中間体である。反応式２に関しては、３’−アミノ−ヌクレオシド７と６’−カルボキシル− ヌクレオシド11とのカップリングによって新しいアミド−二量体12が生成されるであろう。次いで、３’−アミノ−ヌクレオシド７を二量体−酸12で処理することによって、反応式に示した新規アミノ−三量体13が生成される。別の型のアミド結合三量体16の製法は、３’−酸14と３−アミノ−ヌクレオシド10とを反応させて二量体中間体15を生成し、それが水添分解後に３’−酸14とのカップリング反応を受けて三量体16を生成することによるものである。反応式に示した合成反応は、種々の四量体及びアミド−アルキレンヌクレオシド間結合を含むそれより長いオリゴマーの製造に使用できる。反応式１アミド結合二量体、四量体及びそれより長いオリゴマーのための二官能価中間体反応式２アミド結合二量体、三量体及びそれより長いオリゴマーの合成反応式２（続）アミド結合二量体、三量体及びそれより長いオリゴマーの合成一実施態様において、本発明の化合物は塩基数約３〜約60、好ましくは約９〜約50、より好ましくは約12〜約25、最も好ましくは15〜18のオリゴマーアンチセンス薬剤を含んでなる。これらのアンチセンス薬剤は、１種またはそれ以上の無毒性の生理的に許容され得る担体、補助剤または賦形剤（本明細書中においてはこれらをひとまとめにして担体と称する）と共に、固体または液体の形態の非経口注射または経口投与用、直腸または局所投与用などの組成物に製剤化できる。組成物は、ヒトまたは動物に経口、直腸、非経口、（静脈内、筋肉内または皮下）、槽内、腟内、腹腔内、局所（散剤、軟膏剤または点滴剤）投与することもできるし、頬または鼻用噴霧剤として投与することもできる。非経口注射に適当な組成物は、生理的に許容され得る水性または非水性の滅菌溶液、分散液懸濁液または乳濁液及び滅菌注射溶液もしくは分散液に再構成される滅菌散剤を含むことができる。適当な水性及び非水性担体、希釈剤、溶剤または賦形剤の例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの適当な混合物、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが挙げられる。適当な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒度の保持、及び界面活性剤の使用によって保持できる。これらの組成物はまた、補助剤、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散助剤を含むことができる。微生物の作用は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実に防止できる。等張化剤、たとえば、糖、塩化ナトリウムなどを添加するのも望ましい。注射用剤形の吸収の延長は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを用いれば可能である。経口投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が挙げられる。このような固体剤形の場合には、活性化合物は、少なくとも１種の常用の不活性賦形剤（または担体）、たとえば、クエン酸ナトリウムもしくは燐酸二カルシウムまたは（ａ）充填剤または増量剤、例えば、澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール及び珪酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース及びアラビアゴム、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、たとえば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカ澱粉、アルギン酸、ある種の複合珪酸塩及び炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸着剤、たとえば、カオリン及びベントナイト、ならびに（ｉ）滑沢剤、たとえば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムまたはそれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合には、剤形はさらに緩衝剤を含むことができる。同様な型の固体組成物はまた、ラクトース、すなわち、乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟ゼラチンカプセル剤及び硬ゼラチンカプセル剤中に充填剤として使用できる。固体剤形、例えば、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤及び顆粒剤は、当業界において公知の皮膜及び外皮、たとえば、腸溶性皮膜などを用いて調製できる。それらは不透明化剤を含むことができ、さらに、腸管の一定部分で活性化合物を遅れて遊離するような組成物であることもできる。使用できる埋蔵組成物の例としては、ポリマー物質及びロウがある。活性化合物はまた、適当であるならば、１種またはそれ以上の前記賦形剤と共にミクロカプセル剤の形態にすることもできる。経口投与用の液体剤形としては、医薬として許容され得る乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤及びエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、活性化合物の他に、常用の不活性希釈剤、例えば、水または他の溶剤、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、特に、綿実油、ピーナッツ（ground-n ut）油、コーン胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールならびにソルビタンの脂肪酸エステルまたはこれらの物質の混合物などを含むことができる。このような不活性希釈剤の他に、組成物は補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤ならびに芳香剤を含むこともできる。懸濁剤は、活性化合物の他に、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微晶質セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含むことができる。直腸または腟内投与用の組成物は座剤であるのが好ましく、座剤は、本発明の化合物を適当な非刺激性賦形剤または担体、例えは、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは座剤用ロウと混合することによって調製できる。座剤は常温では固体であるが体温では液体であるため、直腸また腟内で溶融して、活性成分を放出する。局所投与用の剤形としては、軟膏剤、散剤、噴霧剤及び吸入剤が挙げられる。活性成分は、生理的に許容され得る担体及び必要に応じて任意の保存剤、緩衝剤または噴射剤と滅菌条件下で混合する。眼用製剤、眼軟膏剤、散剤及び液剤も考えられる。組成物中の活性成分の実際の投薬量は、個々の組成物及び投与方法に関して、所望の治療反応を得るのに有効な活性成分の量が得られるように変化させることができる。従って、選択される投薬量は、所期の治療作用、投与経路、所期の治療持続時間及び他の因子によって決まる。宿主に一度にまたは分割して投与される活性成分の総日用量は、例えば、体重 kg当り約0.5mg〜約10mgの量であることができる。投薬単位組成物は、合計して日用量を構成できるような量または約量を含むであることができる。しかしながら、個々の患者に関する具体的な用量レベルは、体重、全身健康状態、性別、食事、投与時間及び投与経路、吸収速度及び排出速度、他の薬物との併用の有無、及び治療される個々の疾病の重症度によって決まるであろうことを理解されたい。以下の例は本発明をさらに説明するものであるが、決して明細書及び請求の範囲を限定するものと解してはならない。実施例：実施例１：５’−カルベトキシメチル−３’−アセトアミド−５’，３’−ジデオキシチミジル−［３’（Ｏ）−＞５’（Ｃ）］−３−カルボベンゾキシアミノ −５’，３’−ジデオキシチミジン（12）５’−カルベトキシメチル−３’−アミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン（10ミリモル）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）（11 ミリモル）のTHF 50ml中溶液に、THF 50ml中３’−カルボベンゾキシアミノ−５ ’，３’−ジデオキシチミジン−５’−カルボン酸（11ミリモル）を１時間にわたって攪拌しながら滴加する。反応混合物を濾過し、減圧濃縮して二量体を生成する。実施例２：５’−カルベトキシメチル−３’−アセトアミド−５’，３’−ジデオキシチミジル［３’（Ｏ）−＞５’（Ｃ）］−３’−アセトアミド−５’，３ ’−ジデオキシチミジル［３’（Ｏ）−＞５’（Ｃ）］−３−カルボベンゾキシアミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン（13）５’−カルベトキシ−３’−アミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン（10ミリモル）の及びDCC（11ミリモル）のTHF 50ml中溶液に、THF 50ml中３’−カルボベンゾキシアミノ−５’，３’−ジデオキシチミジン−５’−カルボン酸（11 ミリモル）を１時間にわたって攪拌しながら滴加する。反応混合物を濾過し、減圧濃縮して二量体を生成する。実施例３：５’−カルボベンゾキシアミノ−３’−カルバモイル−５’，３’− ジデオキシチミジル［３’（Ｏ）−＞５’（Ｃ）］−３−カルボメトキシメチル −５’，３’−ジデオキシチミジン（15）５’−アミノメチル−３’−カルボメトキシメチル−５’，３’−ジデオキシチミジン14（10ミリモル）及びDCC（11ミリモル）のTHF 50ml中溶液に、THF 50m l中５’−カルボベンゾキシアミノメチル−５’，３’−ジデオキシチミジン− ３’−カルボン酸（11ミリモル）を１時間にわたって攪拌しながら滴加する。反応混合物を濾過し、減圧濃縮して二量体を生成する。実施例４：５’−カルボベンゾキシアミノメチル−３’−カルバモイル−５’，３’−ジデオキシチミジル−［３’（Ｏ）−＞５（Ｃ）］−３’カルバモイル−５’，３’−ジデオキシチミジル［３’（Ｏ）−＞５’（Ｃ）］− ３−カルボメトキシ−メチル−５’，３’−ジデオキシチミジン（16）前記二量体−エステル（15）を10％Pd／Ｃによって対応する二量体−アミンに水添分解する。二量体−アミン（10ミリモル）及びDCC（11ミリモル）のTHF 50ml 中溶液にTHF 50ml中５’−カルボベンゾキシ−アミノメチル−５’，３’−ジデオキシチミジン−３’−カルボン酸（11ミリモル）を１時間にわたって攪拌しながら滴加する。反応混合物を濾過し、減圧濃縮して、表題三量体を生成する。

Claims

【特許請求の範囲】１．式II：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ、OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選ばれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ− 、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選はれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；Ｗは、 -3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)n-5'-、及び -3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、から選ばれるヌクレオシド間結合であり、；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；ｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ｍ＋ｎの合計は２である］の構造を有する化合物。２．式Ｉ：［式中、各Ｒ₂は、Ｈ，OH、NR₃R₄、CHO、ヒドロキシ−低級アルキル、カルボアルコキシ−低級アルキル、カルボキシ−低級アルキル、低級アルケニル、アミノ−低級アルキル、低級アルキル、保護アルデヒド及びハロゲンからなる群から選ばれ；各Ｅは、Ｈ、OZ、SZ及びNHZからなる群から選はれ；各Ｚは、Ｈ、低級アルキル、低級アルケニル、アリール、アシルならびにＯ− 、Ｓ−及びＮ−保護基からなる群から選ばれ；各Ｂは独立して、アデニン、シトシン、グアニン、チミン、ウラシル、またはそれらの修飾形からなる群から選ばれ、該修飾形は、オリゴヌクレオシドまたはキメラオリゴヌクレオチド類似体のそのアンチセンス対応物（塩基はアデニン、シトシン、グアニン、チミン及びウラシルからなる群から選ばれる）に対する親和性を本質的には妨害せず；各Ｗは、（１）-3'-(CR₃R₄)m-CONR₁-(CR₃R₄)n-5'-、（２）-3'-(CR₃R₄)m-NR₁CO-(CR₃R₄)n-5'-、及び（３）天然ホスホジエステルヌクレオシド間結合からなる群から選ばれるヌクレオシド間結合であるがＷの少なくとも１個はヌクレオシド間結合（１）または（２）であり；各Ｒ₁、Ｒ₃及びＲ₄は、Ｈ、低級アルキル、アリール、アリール−低級アルキル及び低級アルケニルからなる群から選ばれ；ｍ及びｎは独立して、０、１または２であるが、ｍ＋ｎの合計は２であり；ｊは１〜30の整数であり；ｋは０または１〜60の整数であり；且つｑは０または１〜60の整数であるが、ただし、ｊ＋ｋ＋ｑの合計は３〜約60である］の構造を有する化合物もしくはその光学異性体またはその医薬として許容され得る塩。３．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が３〜60である請求の範囲第２項の化合物。４．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が９〜50である請求の範囲第２項の化合物。５．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が12〜25である請求の範囲第２項の化合物。６．ｊ＋ｋ＋ｑの合計が15〜18である請求の範囲第２項の化合物。７．３’及び５’末端の一方にカルボキシル部分を有し且つその３’及び５’ 末端の他方にアミノ部分を有する二官能価ヌクレオシド一量体、二量体及び三量体から選ばれた二官能価試薬を反応させることを含んでなる、アミド含有ヌクレオシド間結合を有するヌクレオチド類似体の合成方法。８．前記合成が固相合成である請求の範囲第７項の方法。９．前記合成をペプチド自動合成装置中で実施する請求の範囲第７項の方法。 10．遺伝子発現の抑制の必要な宿主哺乳類に、抑制有効量の、請求の範囲第２項の化合物を投与することを含んでなる遺伝子発現の抑制方法であって、該化合物が該遺伝子のヌクレオチド配列に対してハイブリッド形成する方法。 11．医薬として許容され得る形態の請求の範囲第１項の化合物。 12．生理的に許容され得る担体中に溶解または分散された請求の範囲第２項の化合物を含んでなる医薬組成物。