CN110248678A - 调节car-t细胞的方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供了在体内调节用重组受体如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)工程化的细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括破坏所述受试者中现在存在或现在可能存在或过去存在或过去可能存在所述细胞的区，如包括肿瘤在内的病变。在一些实施方案中，所述破坏改变所述病灶的环境，例如肿瘤微环境。在一些实施方案中，所述破坏是活检。在一些方面，所提供的方法导致在进行所述破坏之后工程化细胞的扩增增加，并且在一些情况下，导致更稳健和耐久的反应。

Description

调节CAR-T细胞的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年12月3日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODSFOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/429,740、2017年1月10日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODS FOR MODULATION OFGENETICALLY ENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/444,784、2017年5月1日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODS FOR MODULATION OF GENETICALLYENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/492,950、2017年6月2日提交的标题为“调节工程化细胞的方法”(METHODS FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/514,777、2017年6月5日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODSFOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/515,512、2017年8月23日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODS FOR MODULATION OFGENETICALLY ENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/549,391以及2017年11月1日提交的标题为“调节基因工程化细胞的方法”(METHODS FOR MsODULATION OF GENETICALLYENGINEERED CELLS)的美国临时申请号62/580,414的优先权，将这些申请的内容通过引用以其全文并入。
通过引用并入序列表
本申请是与电子格式的序列表一起提交申请的。序列表以2017年11月29日创建、大小为34,855千字节的名为735042009140SeqList.txt的文件提供。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全文并入。
技术领域
本发明的公开文本在一些方面涉及在体内调节用重组受体(如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞的方法。在一些实施方案中，所述方法包括破坏受试者中存在或可能存在所述细胞的区和/或病灶(如肿瘤)，和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗。在一些实施方案中，破坏和/或治疗改变病灶的环境，例如肿瘤微环境。在一些实施方案中，破坏和/或治疗是活检。在一些方面，所提供的方法导致在进行所述破坏和/或治疗之后工程化细胞的扩增增加，并且在一些情况下，导致更稳健和持久的反应。
背景技术
各种策略可以用于免疫疗法，例如，涉及给予T细胞(例如基因工程化抗原受体(例如CAR))的过继细胞疗法。在一些方面，可用的方法可能不完全令人满意。需要用于过继细胞疗法的另外的策略，例如增强所给予的细胞的持久性、活性和/或增殖和反应的策略以及用于调节细胞的策略。提供了满足此类需要的方法。
发明内容
本文提供了用于扩增基因工程化细胞的方法，所述方法包括实现受试者中现在存在或现在可能存在或者过去存在或过去可能存在所述工程化细胞的区的破坏，和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗，所述受试者先前已经接受基因工程化细胞的给予以便治疗疾病或病症，其中所述方法导致所述受试者中、所述区中和/或所述受试者的组织或器官或流体中工程化细胞的扩增，和/或导致所述区、组织或器官或流体中工程化细胞数量的增加。在某些实施方案中，所述区是或者包含病灶或其部分。在一些实施方案中，所述病灶是肿瘤。在某些实施方案中，所述肿瘤是原发性或继发性肿瘤。在特定实施方案中，所述区是或包含骨髓组织。在某些实施方案中，区是或者包含病灶或其部分。
在一些任何此类实施方案中，在所述破坏和/或治疗时或紧接所述破坏和/或治疗之前，所述受试者在响应于基因工程化细胞的给予而缓解后已复发。在一些任何此类实施方案中，在破坏和/或治疗时或紧接破坏和/或治疗之前：所述受试者处于缓解期；血液中可检测的工程化细胞数量减少或无法检测到；与给予所述工程化细胞之后的先前时间点相比，来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的工程化细胞的数量减少；和/或来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的工程化细胞的细胞数量与开始给予工程化细胞后在所述受试者的血液中可检测的或检测到的工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与给予所述细胞后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
在一些任何此类实施方案中，所述破坏和/或治疗在开始给予所述基因工程化细胞之后或在所述基因工程化细胞的最后一次给药之后在、在约、或大于、或大于约2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年或更长时间时进行。在一些任何此类实施方案中，所述破坏和/或治疗包括给予免疫调节剂、辐射或物理或机械操纵所述区或病灶中的一种或多种。
在一些任何此类实施方案中，所述破坏和/或治疗包括给予免疫调节剂。在特定实施方案中，所述免疫调节剂是或包含免疫抑制分子，是或包含免疫检查点分子或免疫检查点途径的成员，和/或是或包含免疫检查点分子或途径的调节剂。在某些实施方案中，所述免疫检查点分子或途径是或包含PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷受体、CD73、CD39、腺苷2A受体(A2AR)、或腺苷或涉及任何前述项的途径。在某些实施方案中，所述免疫调节剂是沙利度胺或是沙利度胺的衍生物或类似物。在特定实施方案中，所述免疫调节剂是来那度胺或泊马度胺，阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在某些实施方案中，所述免疫调节剂是来那度胺，来那度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。
在一些任何此类实施方案中，在所述复发之后并且在所述破坏和/或治疗之前，未曾向所述受试者给予外源药剂或重组药剂以便治疗所述疾病或病症或以便调节所述工程化细胞的活性。在一些任何此类实施方案中，所述破坏和/或治疗包括辐射。在一些任何此类实施方案中，所述破坏和/或治疗包括对所述区或病灶的物理或机械操纵，任选地包括探查、戳刺或穿透所述区或病灶。在某些实施方案中，所述物理或机械操纵包括活检。在特定实施方案中，所述活检是通过针或套管针进行的。在某些实施方案中，所述活检包括切开活检。
在一些任何此类实施方案中，与在刚要进行所述破坏和/或治疗之前时相比，所述方法导致所述基因工程化细胞的扩增或所述基因工程化细胞的数量的增加。在特定实施方案中，所述细胞的扩增发生在所述破坏和/或治疗后在或在约24小时、48小时、96小时、7天、14天或28天内。在某些实施方案中，所述扩增导致与刚要进行所述破坏和/或治疗之前相比在血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的工程化细胞；或者所述扩增导致与所述破坏和/或治疗之前在血液中先前的工程化细胞水平峰值相比在血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的工程化细胞。在特定实施方案中，在所述破坏和/或治疗之后的某个时间在血液中可检测的工程化细胞的数量是：与在所述破坏和/或治疗之前的先前时间点的工程化细胞的数量相比有所增加(例如增加了1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或增加更多倍)；比在所述破坏和/或治疗之前在所述受试者血液中可检测的工程化细胞的数量峰值或最大值多1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更多倍；在已在血液中检测到此类细胞的最大值水平的峰值后的某个时间在血液中可检测到多于或大约多于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的所述工程化细胞。
在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞表达重组受体，所述重组受体特异性地结合与所述疾病或障碍相关的抗原或在所述环境或所述病灶的细胞中表达的抗原。在一些任何此类实施方案中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。在一些任何此类实施方案中，所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。在一些任何此类实施方案中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在一些任何此类实施方案中，所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在一些任何此类实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
在一些实施方案中，所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。在某些实施方案中，所述抗原是CD19。在特定实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述CAR还包含共刺激信号传导区域。在某些实施方案中，所述共刺激信号传导结构域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。在特定实施方案中，所述工程化细胞是CD4+或CD8+ T细胞。在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞对所述受试者是自体的。
在一些任何此类实施方案中，所述工程化细胞对所述受试者是同种异体的。在一些任何此类实施方案中，所给予的工程化细胞在约0.25x 106个细胞/kg受试者体重与5x106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg受试者体重与3x 106个细胞/kg、约0.75x 106个细胞/kg与2.5x 106个细胞/kg或约1x 106个细胞/kg与2x 106个细胞/kg之间，每个都包含端值。在一些任何此类实施方案中，将所述工程化细胞以包含所述细胞的单一药物组合物给予。在一些任何此类实施方案中，所给予的工程化细胞是分割剂量，其中将所述剂量的细胞以共同包含所述剂量的细胞的多种组合物经不超过三天的时间给予。
本文提供了治疗方法，其包括向受试者给予治疗方案，其中先前已经向所述受试者给予基因工程化细胞以便治疗疾病或病症，其中所述方法导致在所述受试者中、所述区中和/或所述受试者的组织或器官或流体中所述工程化细胞的扩增，和/或导致在所述区、组织或器官或流体中所述工程化细胞的数量的增加。
在某些实施方案中，所述治疗方案包括破坏受试者中存在、怀疑存在或已经存在或可能存在所述工程化细胞的区，和/或包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫调节剂中的一种或多种。在特定实施方案中，所述治疗方案和/或所述方法不包括基因工程化细胞的后续给予，和/或在没有这种后续给予的情况下实现扩增。在一些实施方案中，所述治疗方案是以亚治疗剂量给予和/或经由基因工程化细胞的扩增获得其治疗效果。在某些实施方案中，所述受试者在对所述基因工程化细胞的先前给予有反应后已复发，和/或过去对基因工程化细胞的先前给予没有反应。在一些实施方案中，所述受试者过去已对所述基因工程化细胞有反应，并且随后已停止反应和/或已复发。
附图说明
图1A显示对于依据最佳总体反应分组的受试者，在输注后的某些时间点测量的外周血中CD3+/CAR+T细胞的数量。
图1B-1D显示对于依据在3个月时的持续反应分组、实现反应的受试者，在输注后的某些时间点测量的外周血中的CD3+/CAR+T细胞、CD4+/CAR+T和CD8+/CAR+T细胞水平。
图2A显示了在某些时间点测量的患有化疗难治性转化的DLBCL的受试者的外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+ T细胞的数量。图2B描绘了治疗前轴向PET-CT图像，其显示右中颅窝中的颅内异常和右耳后区域中的皮下组织中的广泛异常。图2C是治疗后PET-CT图像，其描绘了在用抗CD19 CAR+ T细胞治疗后图2B中异常的消退。图2D是治疗前的脑MRI(使用造影剂的高分辨率T1加权图像；轴向图)，其显示右中颅窝中的均匀增强的肿块。图2E是治疗后MRI图像，其显示增强的肿块几乎完全消退。图2F是复发时的轴向PET-CT图像，其显示与18F-氟脱氧葡萄糖的强烈吸收相关的右后耳肿瘤复发(箭头)。图2G是PET-CT成像，其显示切开活检和CAR+ T细胞再扩增后，后耳肿瘤消退。
图3显示经历过实验室异常和在≥20％受试者中发生的治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比。*：一次多器官衰竭的5级AE，与研究治疗无关，并且是由于淋巴瘤进展所致；一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR T细胞疗法有关，在第23天发生于一名受试者中，所述受试者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子以及广谱抗生素和抗真菌药。
图4是描绘所观察到的至CRS和神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线。
图5A和图5B描绘了经治疗受试者的亚组之间的反应率。
图6A和图6B显示受试者的完整和核心群组的反应(CR/PR、CR或PR)持续时间和总体存活。
图7A显示在不同剂量水平下，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。
图7B显示在反应者与无反应者之间，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。
图7C显示在发生或未发生任何神经毒性的受试者中，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。
图8显示在给予CAR+ T细胞之前，在受试者血清中测量的分析物水平，以及与神经毒性发生的关联。
图9显示了这样的图，其标绘了无进展时间(月)并指示最佳总体反应和反应持久性，以及在用含有表达CAR-T的CD4+和CD8+ T细胞的抗CD19细胞疗法治疗的NHL受试者的完整群组和核心群组内在单独受试者中随时间观察到的单独临床结果。a：患者在第1个月时达到BOR，除非另有说明；b：在2名患者中观察到CNS由淋巴瘤累及的完全消退；c：一名患者在疾病进展时进行活检后再扩增
具体实施方式
I.在过继细胞疗法中调节基因工程化细胞
本文提供了用于体内调节基因工程化细胞，如加强、扩大或增加给予至受试者的基因工程化细胞的扩增、增殖和/或激活的方法。在一些实施方案中，在向受试者给予基因工程化细胞如重组受体表达细胞(例如CAR+ T细胞)后，提供的方法涉及破坏如操纵其中存在或可能存在所述工程化细胞的受试者中的区，如所述受试者的组织、器官、肿块或病灶区、或者其区域或部分，和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗。在一些实施方案中，已知或怀疑区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区、或其区域或部分)含有由基因工程化细胞识别的抗原表达细胞。特别地，相对于受试者中的其他区或区域，靶标区是这样的区，其中已知或怀疑相对于或相比于受试者中其他区具有更高或更大浓度或量的抗原或更高或更大数量的抗原特异性细胞。
在一些实施方案中，治疗和/或破坏改变所述区的环境，如改变病灶的环境，例如肿瘤微环境。在一些情况下，改变是这样直接或间接调节基因工程化T细胞的活性。在一些方面，改变足以促进先前给予的基因工程化细胞如重组受体表达细胞(例如CAR+ T细胞)的体内再激活、扩增和/或增殖。
基于T细胞的疗法如过继T细胞疗法(包括涉及给予表达对感兴趣的疾病或病症具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些过继细胞疗法，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)可有效治疗癌症以及其他疾病和障碍。在某些情况下，过继细胞疗法的可行途径可能并不总是完全令人满意。在一些情况下，最佳功效可取决于所给予细胞的以下能力：识别并结合靶标(例如，靶抗原)，运输、定位至并成功进入受试者、肿瘤和其环境内的适当位点。在一些情况下，最佳功效可取决于所给予细胞的以下能力：被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子如细胞因子)，持续(包括长期)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如长期记忆、低分化和效应子状态)，避免或减少疾病局部微环境中的免疫抑制条件，在清除并重新暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆反应，以及避免或减少消耗、无反应性、外周耐受、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些方面，免疫疗法(例如T细胞疗法)的功效可能受到免疫抑制活性或存在于疾病或障碍的局部微环境中的因素(例如TME)的限制。在一些方面，TME含有或产生可抑制T细胞疗法所给予的T细胞的活性、功能、增殖、存活和/或持久性的因素或条件。
在一些实施方案中，在给予至受试者后工程化细胞的暴露和持久性降低或下降。然而，观察结果表明，在一些情况下，增加表达重组受体的所给予细胞对于受试者的暴露(例如，随时间增加细胞数量或持续时间)可以改善过继细胞疗法的功效和治疗结果。在多个临床试验中向患有不同表达CD19的癌症的多名受试者给予不同的靶向CD19的表达CAR的T细胞后进行的初步分析揭示了表达CAR的细胞的更大和/或更长的暴露程度与治疗结果之间的相关。此类结果包括患者存活率和缓解，甚至在具有严重或显著肿瘤负荷的个体中的患者存活率和缓解。在一些方面，通过所提供的方法观察到的安全性特征可以降低组合疗法的不必要的安全性问题的风险，所述组合疗法涉及所提供的治疗性T细胞组合物和用于治疗疾病或病症的另一种疗法(例如免疫调节剂如检查点拮抗剂)。
本文发现在已经给予基因工程化T细胞的受试者中破坏病灶和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗可以导致受试者中所述细胞的扩增，即使在受试者已经复发后也是如此。本文提供了破坏(如操纵)受试者中存在或可能存在细胞的区和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射或者给予免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗的方法。在一些实施方案中，所述区是病灶，如肿瘤或癌症。在一些实施方案中，破坏和/或治疗可以通过病灶处或附近(例如在肿瘤处或附近或在与病灶相关的微环境(例如肿瘤微环境(TME))处或附近)的机械或物理改变来进行。在一些实施方案中，破坏和/或治疗可以通过给予药理剂或治疗剂(如免疫调节剂或能够调节T细胞或与病灶或病灶微环境相关的一个或多个细胞的活性的其他药剂)来实现。在一些情况下，药理剂是靶向病灶部位或与病灶的细胞例如与肿瘤微环境的细胞特异性地结合的治疗剂。在一些实施方案中，例如通过机械破坏或通过给予药理剂(如免疫调节剂)实现的破坏和/或治疗在开始给予重组受体表达T细胞(例如CAR+ T细胞)后大于或大于约一周、两个月、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、1年、2年或更长时间进行。
在一些实施方案中，在破坏和/或治疗时或者紧接破坏和/或治疗(如给予药理剂或治疗剂)之前，受试者在治疗后缓解后已复发。
A.病灶
在所提供的方法的多方面，现在存在或现在可能存在或者过去存在或过去可能存在的工程化细胞的受试者中的区是病灶或病灶的部分。在一些方面，病灶是已知或怀疑含有由给予的重组受体表达细胞识别的抗原表达细胞的病灶。进行所提供的方法以破坏病灶和/或治疗受试者，从而在体内调节基因工程化细胞。
在一些实施方案中，病灶包括因损伤或疾病而遭受损害的器官或组织的任何区域。在某些实施方案中，病灶是由于损伤或疾病而已经经历和/或正在经历结构异常变化的器官或组织的任何区域。在一些实施方案中，病灶是局限性且良好限定的。在一些实施方案中，病灶是非癌性的。在特定实施方案中，病灶是非肿瘤性的。在某些实施方案中，病灶是癌性的或怀疑是癌性的。在特定实施方案中，病灶是肿瘤。
在一些实施方案中，病灶是器官或组织上发现的病灶。在某些实施方案中，病灶存在于结缔组织、肌肉组织、神经组织或上皮组织中。在某些实施方案中，病灶存在于心脏、血管、唾液腺、食管、胃、肝、胆囊、胰腺、肠、结肠、直肠、下丘脑、垂体、松果腺、甲状腺、甲状旁腺、肾上腺、肾、输尿管、膀胱、尿道、淋巴系统、皮肤、肌肉、脑、脊髓、神经、卵巢、子宫、睾丸、前列腺、咽、喉、气管、支气管、肺、膈膜、骨、软骨、韧带或肌腱。
在某些实施方案中，病灶选自：软组织中的病灶，例如Morel-Lavallee病灶、Bankart病灶、Perthes病灶、Stener病灶或SLAP病灶；骨病灶，例如非骨化纤维瘤、ALPSA病灶或Hill-Sachs病灶；皮肤病灶，例如黑色素细胞痣、跳跃病灶或Osler结节；脓溢性皮肤角化病、黑色丘疹性皮肤病、白血病疹、Janeway病灶、卡波西肉瘤、斑痣或慢性瘢痕性角化病；胃肠道病灶，例如Dieulafoy病灶或Cameron病灶；内胚层病灶，例如黑色素细胞口腔病灶、子宫内膜上皮内瘤样病灶；另一种病灶，如冈氏病灶、良性淋巴上皮病灶、多发性硬化病灶、热带溃疡或疱疹性瘭疽。
在某些实施方案中，病灶是肿瘤或赘生物。在某些实施方案中，肿瘤是良性的。在特定实施方案中，肿瘤是癌前的或癌性的，或怀疑是癌性的或癌前的。在某些实施方案中，肿瘤是原发性肿瘤，即肿瘤是在病灶最初发展或出现的解剖部位发现。在一些实施方案中，肿瘤是继发性肿瘤，例如源自位于体内不同部位内的原发性肿瘤内的细胞的癌性肿瘤。
在一些实施方案中，病灶与作为B细胞恶性肿瘤或血液恶性肿瘤的癌症或增殖性疾病相关或由其引起，或怀疑与其相关或由其引起。在一些实施方案中，癌症或增殖性疾病是成淋巴细胞性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在一些实施方案中，癌症是CLL。在一些实施方案中，病灶与骨髓瘤、淋巴瘤或白血病相关或由其引起，或怀疑与其相关或由其引起。在一些实施方案中，病灶与非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、急性髓性白血病(AML)或骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(MM))相关或由其引起，或怀疑与其相关或由其引起。在一些实施方案中，病灶与MM或DBCBL相关或由其引起，或怀疑与其相关或由其引起。
在特定实施方案中，病灶与非血液癌相关或由其引起，或怀疑与非血液癌相关或由其引起，例如病灶是实体瘤。在一些实施方案中，病灶与膀胱癌、肺癌、脑癌、黑色素瘤(例如小细胞肺癌、黑色素瘤)、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、结直肠癌、胰腺癌、子宫内膜癌、食管癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、皮肤癌、甲状腺癌或子宫癌相关或由其引起，或怀疑与其相关或由其引起。在一些实施方案中，病灶与胰腺癌、膀胱癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、直肠癌、甲状腺癌、子宫癌、胃癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌、脑肿瘤、骨癌或软组织肉瘤相关或由其引起。
在特定实施方案中，病灶是含有或怀疑含有至少一种癌细胞的肿瘤。在一些实施方案中，病灶是含有或怀疑含有源自以下的癌细胞的肿瘤：AIDS相关癌症、乳腺癌、消化道/胃肠道癌、肛门癌、阑尾癌、胆管癌、结肠癌、结直肠癌、食管癌、胆囊癌、胰岛细胞瘤、胰腺神经内分泌瘤、肝癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌、胃(胃的)癌、内分泌系统癌、肾上腺皮质癌、甲状旁腺癌、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、甲状腺癌、眼癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、膀胱癌、肾(肾细胞)癌、阴茎癌、前列腺癌、移行细胞肾盂和输尿管癌、睾丸癌、尿道癌、Wilms肿瘤或其他儿童肾肿瘤、胚细胞癌、中枢神经系统癌、颅外胚细胞瘤、性腺外胚细胞瘤、卵巢胚细胞瘤、妇科癌症、宫颈癌、子宫内膜癌、妊娠滋养细胞肿瘤、卵巢上皮癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、头颈癌、下咽癌、喉癌、唇和口腔癌、转移性鳞颈癌(metastatic squamous neckcancer)、鼻咽癌、口咽癌、鼻窦和鼻腔癌、咽癌、唾液腺癌、咽喉癌、肌肉骨骼癌、骨癌、尤因氏肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、骨肉瘤、骨恶性纤维组织细胞瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤、子宫肉瘤、神经系统癌、脑肿瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、中枢神经系统非典型畸胎瘤/横纹肌样瘤、中枢神经系统胚胎瘤、中枢神经系统胚细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脊髓肿瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤和松果体母细胞瘤、神经母细胞瘤、呼吸系统癌、胸腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、恶性间皮瘤、胸腺瘤、胸腺癌、皮肤癌、卡波西肉瘤、黑色素瘤或Merkel细胞癌。
B.治疗和/或破坏病灶
本文提供了用于实现治疗和/或破坏病灶(例如肿瘤)以在体内调节基因工程化细胞(例如加强、扩大或增加给予至受试者的基因工程化细胞的扩增)的方法。在一些实施方案中，治疗和/或破坏包括机械破坏(例如活检、治疗和/或通过辐照例如外射束辐射破坏)，和/或药理学破坏(例如用免疫调节剂治疗)。
在一些实施方案中，病灶的治疗和/或破坏是直接或间接地例如通过改变与病灶相关的微环境改变工程化T细胞(如重组受体表达T细胞，例如CAR+ T细胞)的任何操纵、程序或治疗。在一些实施方案中，操纵、程序或治疗是机械破坏，例如活检。在特定实施方案中，操纵、程序或治疗是向具有病灶的受试者给予药理剂。在特定实施方案中，操纵、程序或治疗是将辐射应用于病灶。在一些实施方案中，治疗和/或破坏至少最初或立即减少病灶中的细胞数量。
在某些实施方案中，病灶的治疗和/或破坏包括破坏受试者中存在或可能存在工程化细胞(例如表达CAR的细胞)的区。在一些实施方案中，破坏病灶包括破坏曾经存在基因工程化细胞的区或可能已经存在基因工程化细胞的区。
在特定实施方案中，对病灶进行治疗和/或破坏以在体内调节基因工程化细胞，其中治疗和/或破坏是或导致病灶或与病灶相关的微环境(例如肿瘤微环境(TME))的改变。在一些实施方案中，改变可以包括微环境的至少一个组分的修饰、变化、置换或转化。在某些实施方案中，改变是指与进行治疗和/或破坏之前的病灶或微环境相比，病灶或微环境的修饰、变化、置换或转化。在特定实施方案中，改变是指与没有接受治疗和/或破坏的相似病灶(例如，相同类型例如肿瘤类型的病灶)或相同肿瘤类型的微环境相比，病灶或微环境的修饰、变化、置换或转化。在某些实施方案中，相似病灶位于不同的受试者中。在特定实施方案中，相似病灶与治疗和/或破坏的病灶位于同一受试者中。
在一些实施方案中，微环境的组分包含病灶内或病灶周围的细胞，例如癌细胞、非病灶细胞和在微环境内由细胞分泌、释放和/或表达的分子(例如信号传导分子)。非病灶细胞可以包括这样的细胞，其不是病灶的细胞但是包含在病灶周围或病灶内。非病灶细胞可以包括但不限于免疫细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞、周细胞和淋巴管内皮细胞。信号传导分子可以包括但不限于细胞因子、趋化因子、生长因子以及炎性和基质重塑酶。
在特定实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗至少最初或在一段时间内减少病灶的微环境内的细胞数量或至少一种细胞类型的细胞数量。在某些实施方案中，病灶是肿瘤，并且操纵、程序或治疗减少病灶中肿瘤细胞的数量。在特定实施方案中，病灶是癌性的，并且操纵、程序或治疗减少病灶中癌细胞的数量。在一些实施方案中，治疗和/或破坏是降低病灶的微环境内非病灶细胞的数量的操纵、程序或治疗。在病灶的微环境内发现的非病灶细胞包括但不限于微环境内的免疫细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞、周细胞和/或淋巴管内皮细胞。在某些实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗导致肿瘤的微环境内免疫细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞、周细胞和/或淋巴管内皮细胞的数量增加。
在特定实施方案中，治疗和/或破坏是至少最初或在一段时间内去除或杀伤病灶的细胞的操纵、程序或治疗。在一些实施方案中，病灶是肿瘤，并且操纵、程序或治疗至少最初或在一段时间内杀伤或去除病灶中的肿瘤细胞。在特定实施方案中，病灶是癌性的，并且操纵、程序或治疗杀伤或去除病灶中的癌细胞。在一些实施方案中，治疗和/或破坏杀伤或去除至少约0.001％、至少约0.01％、至少约0.1％、至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或至少约99.9％的病灶细胞。
在特定实施方案中，治疗和/或破坏是导致病灶的微环境中一种或多种类型的免疫细胞的数量改变的操纵、程序或治疗。在微环境中发现的免疫细胞类型可以包括但不限于T淋巴细胞、B淋巴细胞、天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、巨噬细胞(例如肿瘤相关巨噬细胞)、髓源性抑制细胞(MDSC)、树突细胞和嗜中性粒细胞(例如肿瘤相关的嗜中性粒细胞(TAN))。在某些实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗增加病灶的微环境中CD8+细胞、细胞毒性记忆CD8+T细胞(CD8+CD45RO+)、CD4+T辅助1(TH1)细胞、CD4+T辅助2(TH2)细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T(NKT)细胞和/或γδT淋巴细胞的数量。在特定实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗降低病灶的微环境中TH2细胞、CD4+T辅助17(TH17)细胞、免疫抑制T调节性细胞(Treg)、调节性B细胞(Breg)、B10细胞和/或肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的数量。
在一些实施方案中，治疗和/或破坏是增加病灶和/或病灶的微环境中存在的一种或多种信号传导分子的数量的操纵、程序或治疗。在一些实施方案中，信号传导分子可以包括但不限于细胞因子、趋化因子、生长因子以及炎性和基质重塑酶。在某些实施方案中，操纵、程序或治疗增加白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-17F(IL-17F)、白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素22(IL-22)和/或干扰素γ(IFN-γ)的量。在一些实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗使病灶和/或病灶的微环境中存在的信号传导分子的量增加至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约30倍、至少约40倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1,000倍。
在一些实施方案中，治疗和/或破坏是降低病灶和/或病灶的微环境中存在的一种或多种信号传导分子的数量的操纵、程序或治疗。在某些实施方案中，操纵、程序或治疗降低白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-17F(IL-17F)、白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素22(IL-22)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1、内皮素-2、内皮素-3、内皮单核细胞激活多肽II(EMAP2，也称为AIMP1)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子1(IGF1)、胰岛素样生长因子2(IGF2)、TGF-β、C-X-C基序趋化因子12(CXCL12)、血小板源生长因子(PDGF)、基质金属蛋白酶(MMP)和/或组织蛋白酶(例如组织蛋白酶L)的量。在一些实施方案中，治疗和/或破坏是一种操纵、程序或治疗，所述操纵、程序或治疗使病灶和/或病灶的微环境中的信号传导分子的量降低至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％、至少约99.9％或约100％。
1.机械破坏
在一些实施方案中，治疗和/或破坏涉及例如通过探查、戳刺和/或穿透病灶对区(如病灶)的物理或机械操纵。在一些实施方案中，通过对区的活检如病灶(例如肿瘤)的活检进行治疗和/或破坏。在一些实施方案中，用针进行活检。在一些实施方案中，活检是切开活检。
在一些实施方案中，用活检程序对病灶进行物理和/或机械破坏以在体内调节基因工程化细胞，例如从而加强、扩大或增加给予至受试者的基因工程化细胞的扩增。在一些实施方案中，活检程序是细针吸取，其中使用可以插入病灶的细长针和注射器从病灶抽出细胞和/或流体。具在特定实施方案中，活检是芯针吸活检，其中带有割尖的较大针用于从病灶去除一列组织。在特定实施方案中，活检是真空辅助活检，其中使用抽吸装置来增加通过针抽取的流体和/或细胞的量。在某些实施方案中，活检是图像引导的活检，其中病灶通过包括但不限于X射线、超声、CT扫描或MRI扫描的成像技术可视化，以允许医疗保健提供者(例如医生)使病灶可视化并将活检器械(例如针)引导至肿瘤。
在特定实施方案中，用一个或多个活检器械(例如针)破坏病灶以在体外调节基因工程化细胞。在一些实施方案中，活检器械是芯针。在某些实施方案中，活检器械是可用于细针吸取的针。在某些实施方案中，活检器械是套管针。
在特定实施方案中，活检器械是芯针。在一些实施方案中，芯针是10号、11号、12号、13号、14号、15号、16号、17号、18号、19号、20号、21号、22号、23号、24号、25号或26号。在某些实施方案中，芯针在10号与30号之间、10号与24号之间或14号与20号之间。在某些实施方案中，针的长度为约10cm、约11cm、约12cm、约13cm、约14cm、约15cm、约16cm、约17cm、约18cm、约19cm、约20cm、约21cm、约22cm、约23cm、约24cm、约25cm、约26cm、约27cm、约28cm、约29cm、约30cm、约31cm或约32cm。在一些实施方案中，芯针的长度在约5cm与约30cm、约10cm与约25cm或约10cm与约20cm之间。在某些实施方案中，芯针在14号与20号之间，并且长度为约10cm与20cm之间。在特定实施方案中，芯针是一次性的。在某些实施方案中，芯针是可重复使用的。
在一些实施方案中，通过细针吸取破坏病灶。在特定实施方案中，针是细针。在一些实施方案中，可用于细针吸取的针是20号、21号、22号、23号、24号、25号、26号、27号、28号、29号、30号、31号或32号。在某些实施方案中，针在20号与30号之间、22号与28号之间、20号与26号之间或约24号与约28号之间。在某些实施方案中，针可用于细针吸取，并且长度为约1cm、约2cm、约3cm、约4cm、约5cm、约6cm、约7cm、约8cm、约9cm、约10cm、约12cm、约14cm、约16cm、约18cm或约20cm。在一些实施方案中，针可用于细针吸取，并且长度在约1cm与约10cm之间、约5cm与约10cm之间或约1cm与约5cm之间。在某些实施方案中，针可用于细针吸取，在22号与28号之间，并且长度在1cm与10cm之间。
在一些实施方案中，用套管针或在套管针的帮助下破坏病灶以在体内调节基因工程化细胞。套管针通常用于腹腔镜手术技术，例如以获得并确保进入体腔(例如腹膜腔)的入口。常规的套管针可以包括例如密封件、尖锐的套管针、套管和用于在套管针穿透腹壁时保护器官的安全护罩。安全护罩通常设计为这样的机械装置，所述机械装置是装弹簧的并且当套管针尖端插入套管时被激活。套管针的尖端受到安全护罩的保护。当套管针穿过腹壁的层时，安全护罩缩回，露出套管针的尖锐尖端。当装置最终穿透最后一层腹部组织时并且就在进入腹部开放空间之前，安全护罩向前移动以再次覆盖套管针尖端。
套管针的例子包括包含带叶片的尖端的带叶片的套管针和钝套管针。最常用的带叶片的套管针尖端的类型是三面椎体设计，其便于通过可割穿组织(例如腹壁的组织)的三个锐边进入组织。带叶片的套管针还包括具有混合尖端的套管针。混合尖端具有较小的前导线性叶片，以产生切口，然后通过套管针的钝部件扩张。钝套管针被设计为在没有带叶片的尖端的情况下进入腔。钝套管针包括径向扩张的套管针，其被设计为在用不同的器械(例如手术刀)制作小切口后进入组织。在一些实施方案中，用带叶片的套管针或在带叶片的套管针的帮助下破坏病灶。在某些实施方案中，用钝套管针或在钝套管针的帮助下破坏病灶。
在一些实施方案中，将病灶用这样的套管针破坏，其直径为至少或约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约11mm、约12mm、约13mm、约14mm、约15mm、约16mm、约17mm、约18mm、约19mm或约20mm。在某些实施方案中，套管针的直径在约1mm与约20mm之间、约1mm与约15mm之间、约5mm与约15mm之间,约10mm与约15mm之间或约5mm与约12mm之间。在某些实施方案中，套管针的直径在约5mm与约12mm之间。
在某些实施方案中，通过钻取活检破坏病灶以在体内调节工程化细胞。在一些实施方案中，使用圆形叶片进行钻取活检，所述圆形叶片可以向下旋转穿过组织以收集圆柱形核心组织样品，例如皮肤样品。在某些实施方案中，钻孔的直径为至少或约0.1mm、约0.5mm、约1mm、约2mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约10mm、约11mm、约12mm、约13mm、约14mm、约15mm、约16mm、约17mm、约18mm、约19mm或约20mm。在某些实施方案中，钻头的直径在约1mm与约8mm之间。
在一些实施方案中，用切除活检破坏病灶。在某些实施方案中，切除活检包括去除全部或大部分病灶。在特定实施方案中，切除活检包括去除至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％、至少约99.5％、至少约99.9％或约100％的病灶。
在特定实施方案中，用切开活检破坏病灶。在某些实施方案中，切开活检包括去除至少一部分病灶。在某些实施方案中，切开活检包括去除至少约0.01％、至少约0.1％、至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的病灶。在特定实施方案中，切开活检包括去除少于约50％、少于约40％、少于约30％、少于约20％、少于约10％、少于约5％、少于约1％、少于约0.5％或少于约0.1％的病灶。
在一些实施方案中，用手术工具(例如套管针、刀或针)戳刺、刺、切割、撕裂、裂开、打开、切开、削刮和/或剖切病灶来破坏病灶。在特定实施方案中，戳刺、刺、切割、撕裂、裂开、打开、切开、削刮和/或剖切病灶导致对病灶的损伤。例如，在一些实施方案中，损伤包括刺孔、刺穿、切片、狭缝或撕裂。在一些实施方案中，破坏病灶导致对病灶的损伤，所述损伤包括小于或约0.001mm、约0.01mm、约0.1mm、约0.2mm、约0.3mm、约0.4mm、约0.5mm、约0.6mm、约0.7mm、约0.8mm、约0.9mm、约1mm、约1.1mm、约1.2mm、约1.3mm、约1.4mm、约1.5mm、约1.6mm、约1.7mm、约1.8mm、约1.9mm、约2mm、约2.5mm、约3mm、约4mm、约5mm、约6mm、约7mm、约8mm、约9mm、约1cm、约2cm、约3cm、约4cm、约5cm、约6cm、约7cm、约8cm、约9cm或约10cm的刺孔、刺穿、切片、狭缝或撕裂。在一些实施方案中，刺孔、刺穿、切片、狭缝或撕裂大于或等于约10cm。在某些实施方案中，通过用手术工具戳刺、刺、切割、撕裂、裂开、打开、切开、削刮和/或剖切病灶来破坏病灶，从而对病灶产生约0.001mm与约0.1mm之间、约0.1mm与约1mm之间、约1mm与约1cm之间或约1cm与约10cm之间的刺孔、刺穿、切片、狭缝或撕裂。
在某些实施方案中，机械破坏通过改变病灶的温度例如热疗法来进行。在特定实施方案中，机械破坏是冷冻消融疗法。在某些实施方案中，机械破坏是高温疗法。
在某些实施方案中，用冷冻消融疗法破坏病灶。冷冻消融疗法涉及冷冻肿瘤块，导致细胞内和细胞外冰晶沉积；破坏细胞膜、蛋白质和细胞器；以及诱导高渗环境，从而引起细胞死亡。用于冷冻消融疗法的方法和设备描述于Murphy等人,Sent.Urol.Oncol.79:133-140(2001)和美国专利号6,383,181、6,383,180、5,993,444、5,654,279、5,437,673和5,147,355。
在特定实施方案中，用高温疗法破坏病灶。高温疗法通常涉及将肿瘤块的温度升高至约42℃至约44℃的范围。病灶的温度可以进一步升高至所述范围之上；然而，这样的温度可能增加对周围健康组织的损伤，同时不会导致待治疗的病灶内细胞死亡增加。可以通过本领域技术人员已知的任何手段在高温疗法中加热肿瘤。在一些实施方案中，可以通过微波、高强度聚焦超声、铁磁热籽、局部电流场、红外辐射、湿式或干式射频消融、激光光凝术、激光间质热疗法和电烙术将病灶加热。可以通过波导施加器、喇叭、螺旋、电流片和紧凑的施加器生成微波和无线电波。
用于升高病灶(例如肿瘤)的温度的其他方法、设备和组合物综述于Wust等人,Lancet Oncol.3:487-97(2002)，并且描述于美国专利号6,470,217、6,379,347、6,165,440、6,163,726、6,099,554、6,009,351、5,776,175、5,707,401、5,658,234、5,620,479、5,549,639和5,523,058。
2.通过辐照治疗和/或破坏
在某些实施方案中，通过用辐照或辐射疗法来治疗和/或破坏病灶，以在体内调节基因工程化细胞。在某些实施方案中，辐射疗法使用高能辐射来收缩病灶(例如肿瘤)，并杀伤病灶内的细胞(例如癌细胞)。在一些实施方案中，用电离辐射即包含这样的粒子或光子的辐射治疗和/或破坏病灶，所述粒子或光子具有充分能量或可以经由核相互作用产生充分能量以产生电离。在一些实施方案中，通过将病灶暴露于X射线、γ射线、带电粒子(例如电子)或可用于癌症治疗的任何其他类型的辐射来治疗和/或破坏病灶。
辐射疗法可以包括用于治疗癌症和/或相关疾病的任何治疗性辐射的来源，所述辐射疗法包括但不限于电离辐射疗法、近距离放射疗法、密封源辐射疗法、全身放射性同位素疗法、未密封源放射疗法、放射性核素疗法、外射束辐射疗法、辐射手术、带电粒子放射疗法、中子放射疗法、X射线疗法、伽马射线疗法和钴疗法。
在某些实施方案中，用外射束疗法(EBT)治疗和/或破坏病灶，其中将外部电离辐射源在受试者身体的包含病灶的区域应用于受试者。在一些实施方案中，EBT包括正电压级(即表面)辐射射束以治疗和/或破坏皮肤上存在的病灶。在某些实施方案中，EBT包括兆伏级(例如深度)辐射射束，用于治疗内部病灶，例如膀胱、肠、前列腺、肺或脑的病灶。在特定实施方案中，用EBT治疗和/或破坏病灶包括将X射线、伽马射线、电子束、质子束或电离核束递送至病灶。在一些实施方案中，通过EBT治疗和/或破坏病灶，EBT使用直线加速器、准直管、钴机、表面辐射治疗(SRT)机、正电压X射线机进行。
在一些实施方案中，用内部辐射疗法，即近距离放射疗法来治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，近距离放射疗法包括在病灶区处或附近施加辐射源。在特定实施方案中，近距离放射疗法包括间质辐射，其中辐射源包含在小颗粒、种子、金属丝、管和/或容器中，并且直接放置在病灶中或病灶旁边。在某些实施方案中，近距离放射疗法包括腔内辐射，其中放射性物质的容器放置在身体的体腔(例如胸腔或大肠)中。在某些实施方案中，超声波、X射线和/或CT扫描用于帮助放置放射源。
在一些实施方案中，用永久性近距离放射疗法来治疗和/或破坏病灶，所述永久性近距离放射疗法包括将小容器(例如，约一粒米大小的容器)置于病灶中。在某些实施方案中，容器在几周或几个月的时间内发出辐射，并在辐射用完后留在原位。
在特定实施方案中，用短暂性近距离放射疗法来治疗和/或破坏病灶，所述短暂性近距离放射疗法包括将圆筒、空心针、管(导管)和/或充满液体的球囊置于待治疗的区中，然后在治疗后将其移除。在一些实施方案中，放射性物质在这些容器中放置一小段时间然后被移除。在一些实施方案中，短暂性近距离放射疗法可以是高剂量率(HDR)近距离放射疗法，其中辐射源每次在病灶处或病灶附近放置几分钟，然后被移除。这一过程可以每天重复两次持续一周，或者每周一次持续几周。在一些实施方案中，暂时性近距离放射疗法是低剂量率(LDR)近距离放射疗法，其中辐射源在移除之前保持原位长达7天。
在一些实施方案中，通过全身性辐射疗法治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，全身性辐射疗法包括给予放射性物质(如放射性碘)，其穿过血液以杀伤病灶细胞。可以在放射性核素疗法中给予的代表性放射性同位素包括但不限于磷-32、钇-90、镝-165、铟-111、锶-89、钐-153、铼-186、碘-131、碘-125、镥-177和铋-213。虽然所有这些放射性同位素可以与提供靶向特异性的生物分子连接，但是碘-131、铟-111、磷-32、钐-153和铼-186可以在没有这种缀合的情况下全身给予。本领域技术人员可基于存在于所述赘生物上的细胞表面分子选择特异性生物分子用于靶向特定赘生物以进行放射性核素治疗。在一些实施方案中，放射性粒子与结合病灶细胞的单克隆抗体或其活性片段或变体缀合。放射性药物的例子包括但不限于替伊莫单抗，一种与钇-90或铟-111缀合的抗CD20单克隆抗体；和托西莫单抗，一种与碘-131缀合的抗CD20单克隆抗体。
3.药理学治疗和/或破坏
在一些实施方案中，通过向受试者给予药剂治疗和/或破坏病灶以在体内调节基因工程化细胞，例如以加强、扩大或增加给予至受试者的基因工程化细胞的扩增。在特定实施方案中，药剂是药物药剂。在一些实施方案中，药剂是治疗剂。在一些实施方案中，药剂是免疫调节剂。在特定实施方案中，药剂是化学治疗剂。
在一些实施方案中，药剂(如免疫调节剂)能够抑制或阻断分子的功能或涉及所述分子的信号传导途径。在一些实施方案中，分子在免疫细胞上表达或者分子是免疫突触的一部分，如在T细胞或抗原呈递细胞或与免疫应答相关的其他细胞上表达。在一些这样的方面，分子是免疫抑制分子或者分子是免疫检查点分子。在一些实施方案中，免疫检查点分子或途径是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷2A受体(A2AR)、或腺苷或涉及任何前述项的途径。
在一些实施方案中，化学治疗剂是或包含抗体，所述抗体可以是抗体片段、单链抗体、多特异性抗体或免疫缀合物。在一些实施方案中，抗体与免疫检查点分子或其配体或受体特异性地结合。在一些实施方案中，抗体能够阻断或损害免疫检查点分子与其配体或受体之间的相互作用。
在一些实施方案中，通过向受试者给予免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶以在体内调节基因工程化细胞。在一些实施方案中，免疫调节剂阻断、抑制或抵消免疫检查点途径的组分。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫应答的多种抑制途径。肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制，特别是针对对于肿瘤抗原具有特异性的T细胞，例如工程化细胞，如表达CAR的细胞(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer12:252-264)。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用开始的，所以它们可以容易地被针对配体和/或其受体的抗体阻断。与大多数抗癌剂相反，检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。
在特定实施方案中，通过向受试者给予免疫检查点抑制剂来治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是完全或部分减少、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。在一些实施方案中，检查点蛋白是调节T细胞激活或功能和/或负责与T细胞应答相关的共刺激或抑制相互作用的任何蛋白质。免疫检查点蛋白调节和维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。免疫检查点抑制剂包括阻断、抑制或降低免疫系统的抑制途径的活性或功能的任何药剂。此类抑制剂可包括小分子抑制剂或可包括抗体或其抗原结合片段，其结合至并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用。在一些实施方案中，特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的示例性免疫检查点分子包括但不限于PD-1(CD279)、PD-L1(CD274、B7-H1)、PDL2(CD273、B7-DC)、CTLA-4、LAG-3(CD223)、TIM-3、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GITR(TNFRSF18、AITR)、CD40、OX40(CD134、TNFRSF4)、CXCR2、肿瘤相关抗原(TAA)、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4(属于分子的CD2家族并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I类、MHC II类、GAL9、腺苷和转化生长因子受体(TGFR；例如，TGFRβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，其结合至并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美木单抗(Tremelimumab)(CTLA-4阻断抗体，也称为替西木单抗(ticilimumab)、CP-675,206)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-H1；MEDI4736，也称为度伐鲁单抗)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(nivolumab)(抗PD-1抗体)、CT-011(抗PD-1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PD-L1抗体)、BMS-936559(抗PD-L1抗体)、MPLDL3280A(抗PD-L1抗体)、MSB0010718C(抗PD-L1抗体)和伊匹单抗(ipilimumab)(抗CTLA-4抗体，也称为MDX-010和MDX-101)。免疫调节抗体的示例包括但不限于达珠单抗(Daclizumab)(Zenapax)、贝伐单抗(Bevacizumab)巴利昔单抗(Basiliximab)、伊匹单抗(Ipilimumab)、纳武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A(阿特珠单抗(Atezolizumab))、曲美木单抗(tremelimumab)、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C(阿维单抗(Avelumab))、MEDI4736(度伐鲁单抗(durvalumab))、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗(Ulocuplumab)、BKT140、伐立鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127)、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(BMS-986015、IPH2101)、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗(Emactuzumab)、CC-90002和MNRP1685A或其抗体结合片段。其他示例性免疫调节剂包括例如阿福图珠单抗(afutuzumab)(可从获得)；培非司亭(pegfilgrastim)来那度胺(lenalidomide)(CC-5013，)；沙利度胺(thalidomide)actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白细胞介素1、白细胞介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
在一些实施方案中，通过向结合和/或抑制程序性细胞死亡1(PD-1)的受试者给予免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶。PD-1是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer ImmunolImmunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在炎症过程中限制外周组织中T细胞的活性以响应感染，以及限制自身免疫。在激活的T细胞中诱导PD-1表达，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还起到抑制TCR“停止信号”的作用。PD-1在Treg细胞上高度表达，并且可以在配体的存在下增加它们的增殖(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗PD 1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Lipson等人,2013,ClinCancer Res 19:462-8；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:3044-51；Gildener-Leapman等人,2013,Oral Oncol 49:1089-96；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol5:278-85)。在一些实施方案中，通过向受试者给予抗PD-1抗体或其抗原结合片段来治疗和/或破坏病灶。示例性抗PD-1抗体包括纳武单抗(BMS的Opdivo)、派姆单抗(Merck的Keytruda)、匹利珠单抗(Cure Tech的CT-011)、lambrolizumab(Merck的MK-3475)和AMP-224(Merck)，纳武单抗(也称为Opdivo，BMS-936558或MDX1106；Bristol-Myers Squibb)是特异性地阻断PD-1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性地结合PD-1的其他人单克隆抗体描述于US 8,008,449和WO 2006/121168。匹利珠单抗(CT-011；CureTech)是与PD-1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体描述于WO 2009/101611。派姆单抗(先前称为lambrolizumab，也称为Keytruda，MK03475；Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体描述于US 8,354,509和WO 2009/114335。其他抗PD-1抗体包括AMP 514(Amplimmune)，尤其是例如US 8,609,089、US 2010028330、US 20120114649和/或US 20150210769中描述的抗PD-1抗体。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，描述于WO 2010/027827和WO 2011/066342中)是阻断PD-1与B7-H1之间相互作用的PD-L2Fc融合可溶性受体。
在某些实施方案中，通过向受试者给予免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶，所述免疫调节剂结合和/或抑制PD-L1(也称为CD274和B7-H1)和/或PD-L2(也称为CD273和B7-DC)。PD-L1和PD-L2是PD-1的配体，发现于激活的T细胞、B细胞、骨髓细胞、巨噬细胞和一些类型的肿瘤细胞上。抗肿瘤疗法已集中于抗PD-L1抗体。PD-1和PD-L1的复合物抑制CD8+T细胞的增殖并降低免疫应答(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65)。抗PD-L1抗体已被用于治疗非小细胞肺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌和血液恶性肿瘤(Brahmer等人,2012,NEng J Med 366:2455-65；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300-9；Radvanyi等人,2013,Clin Cancer Res 19:5541；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:13044-51)。在某些实施方案中，通过向受试者给予抗PD-L1抗体或其抗原结合片段来治疗和/或破坏病灶。示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(Medarex)、MEDI4736(度伐鲁单抗，Medimmune)、MPDL3280A(Genentech)、BMS-935559(Bristol-Myers Squibb)和MSB0010718C。
在一些实施方案中，免疫调节剂是抗PD-L1抗体。示例性抗PD-L1抗体是MEDI4736(度伐鲁单抗，Medimmune)，其是与PD-L1结合并且抑制配体与PD-1的相互作用的人单克隆抗体(参见美国专利号8,779,108)。在一些实施方案中，免疫调节剂是MDPL3280A(Genentech/Roche)，其是与PD-L1结合的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906。其他PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO 2010/077634)、MDX-1105(也称为BMS-936559，并且例如WO 2007/005874中描述的抗PD-L1结合剂)、LY3300054(参见US 2017/0058033)、阿特珠单抗(参见美国专利号8,217,149)和阿维单抗(美国专利号9.624,298)。
在某些实施方案中，通过给予细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)的抑制剂(也称为CD152)来治疗和/或破坏病灶。CTLA-4是用于调节T细胞激活的共抑制分子。CTLA-4是仅在T细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。CTLA-4起到抑制T细胞激活的作用，并且据报道其抑制辅助T细胞活性并增强调节性T细胞免疫抑制活性。尽管CTLA-4的明确作用机制仍在研究之中，但已经表明其通过在与CD80和CD86结合中与CD28竞争而胜出以及积极地将抑制剂信号传递至T细胞来抑制T细胞激活(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗CTLA-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(Robert&Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61；Ott等人,2013,ClinCancer Res 19:5300；Weber,2007,Oncologist 12:864-72；Wada等人,2013,J Transl Med11:89)。抗CTLA-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学，其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下，在观察到缩小之前，肿瘤可能实际上在治疗开始后增大(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。在某些实施方案中，通过向受试者给予抗CTLA-4抗体或其抗原结合片段来治疗和/或破坏病灶。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美木单抗(Pfizer)。伊匹单抗最近获得FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤(Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。
在某些实施方案中，通过给予结合和/或抑制淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)的免疫调节剂(也称为CD223)来治疗和/或破坏病灶。LAG-3是免疫检查点蛋白，其与淋巴细胞活性的抑制相关，并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。LAG-3在免疫系统中的各种细胞上表达，包括B细胞、NK细胞和树突细胞。LAG-3是MHC II类受体的天然配体，所述MHCII类受体基本上在黑色素瘤浸润的T细胞(包括具有有效免疫抑制活性的T细胞)上表达。在某些实施方案中，通过向受试者给予抗LAG-3抗体或其抗原结合片段来治疗和/或破坏病灶。示例性抗LAG-3抗体包括BMS-986016(Bristol-Myers Squib)，其是靶向LAG-3的单克隆抗体。IMP701(Immutep)是拮抗剂LAG-3抗体并且IMP731(Immutep和GlaxoSmithKline)是耗尽的LAG-3抗体。其他LAG-3抑制剂包括IMP321(Immutep)，其是LAG-3的可溶部分的重组融合蛋白；和结合MHC II类分子并激活抗原呈递细胞(APC)的Ig。其他抗体描述于例如WO2010/019570和US 2015/0259420。
在一些实施方案中，通过给予结合和/或抑制T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(TIM-3)的免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶。最初在激活的Th1细胞上鉴定的TIM-3已被证明是免疫应答的负调节物。TIM-3的阻断促进T细胞介导的抗肿瘤免疫，并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。TIM-3阻断与其他免疫治疗剂如TSR-042、抗CD137抗体和其他的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。TIM-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、NSCLC和肾癌)相关，另外，肿瘤内TIM-3的表达已经被证明与跨越一系列肿瘤类型(包括NSCLC、宫颈癌和胃癌)的不良预后相关。TIM-3的阻断也有利于提高对许多慢性病毒性疾病的免疫。TIM-3也已被证明与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和HMGB1)相互作用，尽管目前尚不清楚这些配体中有哪些(如果有的话)是与抗肿瘤反应的调节有关。在一些实施方案中，靶向TIM-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与TIM-3的IgV结构域结合以抑制与其配体的相互作用。在一些实施方案中，通过给予抗体或其抗原结合片段或结合和/或抑制TIM-3的肽来治疗和/或破坏病灶。抑制TIM-3的示例性抗体和肽描述于US 2015/0218274、WO 2013/006490和US 2010/0247521。其他抗TIM-3抗体包括人源化形式的RMT3-23(Ngiow等人,2011,Cancer Res,71:3540-3551)和克隆8B.2C12(Monney等人,2002,Nature,415:536-541)。抑制TIM-3和PD-1的双特异性抗体描述于US2013/0156774。
在一些实施方案中，通过向受试者给予CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)来治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，CEACAM的抑制剂是抗CEACAM抗体或其抗原结合片段或变体。示例性抗CEACAM-1抗体描述于WO 2010/125571、WO2013/082366、WO 2014/059251和WO 2014/022332，例如单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或其重组形式，如在例如US 2004/0047858、US 7,132,255和WO 99/052552中所述。在一些实施方案中，抗CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如在例如Zheng等人PLoS One.(2011)6(6):e21146中所述；或与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如在例如WO 2013/054331和US 2014/0271618中所述。
在某些实施方案中，通过给予结合和/或抑制4-1BB(也称为CD137)的免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶。4-1BB是属于TNFR超家族的跨膜糖蛋白。4-1BB受体存在于激活的T细胞和B细胞以及单核细胞上。在一些实施方案中，向受试者给予抗-4-1BB抗体或其抗原结合片段以治疗和/或破坏病灶。示例性抗4-1BB抗体是乌瑞鲁单抗(BMS-663513)，其具有潜在的免疫刺激和抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，通过给予免疫调节剂来治疗和/或破坏病灶，所述免疫调节剂是沙利度胺的结构或功能类似物或衍生物和/或E3泛素连接酶的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂与赛拉隆蛋白(cereblon)(CRBN)结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN和CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂上调CRBN的蛋白质或基因表达。在一些方面，CRBN是CRL4CRBN E3泛素连接酶的底物衔接子，并调节所述酶的特异性。在一些实施方案中，与CRB或CRBN E3泛素连接酶复合物的结合会抑制E3泛素连接酶的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂诱导KZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的泛素化和/或诱导IKZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂通过CRL4CRBN E3泛素连接酶诱导酪蛋白激酶1A1(CK1α)的泛素化。在一些实施方案中，CK1α的泛素化导致CK1α降解。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Ikaros的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的给予导致Ikaros蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Aiolos(IKZF3)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Aiolos的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的给予导致Aiolos蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)和Aiolos(IKZF3)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化。在某些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化和降解。在一些实施方案中，免疫调节剂的给予导致Aiolos蛋白水平和Ikaros蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是选择性细胞因子抑制药物(SelCID)。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制磷酸二酯酶-4(PDE4)的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制CDC25磷酸酶的酶活性。在一些实施方案中，免疫调节剂改变CDC25磷酸酶的细胞内运输。
在一些实施方案中，免疫调节剂是沙利度胺(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-异吲哚-1,3(2H)-二酮)或沙利度胺的类似物或衍生物。在某些实施方案中，沙利度胺衍生物包括具有相似生物学活性的沙利度胺的结构变体。示例性沙利度胺衍生物包括但不限于来那度胺(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM；Celgene Corporation)、泊马度胺(也称为ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM或POMALYSTTM；Celgene Corporation)、CC-1088、CDC-501和CDC-801，和美国专利号5,712,291；7,320,991和8,716,315；美国申请号2016/0313300和PCT公开号WO 2002/068414和WO 2008/154252中披露的化合物。
在一些实施方案中，免疫调节剂是苯并环中经氨基取代的1-氧代-和1,3二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉，如美国专利号5,635,517中所述，将其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是下式的化合物：
其中X和Y中的一个是-C(O)-并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-，并且R5是氢或低级烷基或其药学上可接受额盐。在一些实施方案中，X是-C(O)-并且Y是-CH2-。在一些实施方案中，X和Y二者都是-C(O)-。在一些实施方案中，R5是氢。在其他实施方案中，R5是甲基。
在一些实施方案中，免疫调节化合物是这样的化合物，其属于一类取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)邻苯二甲酸免疫调节化合物和取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚，如美国专利号6,281,230、6,316,471、6,335,349和6,476,052以及国际专利申请号PCT/US 97/13375(国际公开号WO 98/03502)中所述的那些，其中每一篇文献均通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是下式的化合物：
其中
X和Y中的一个是-C(O)-，并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-；
(1)R1、R2、R3和R4中每一个独立地是卤素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基，或
(2)R1、R3、R4和R5中的一个是-NHRa，并且R1、R2、R3和R4中其余的是氢，其中Ra是氢或1至8个碳原子的烷基；
R5是氢或1至8个碳原子的烷基、苄基或卤素；
条件是如果X和Y是-C(O)-并且(i)R1、R2、R3和R4中每一个是氟；或(ii)R1、R2、R3和R4中每一个是氨基，则R5不是氢；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，免疫调节剂是属于异吲哚免疫调剂化合物类别的化合物,披露于美国专利号7,091,353/美国专利公开号2003/0045552和国际申请号PCT/USOI/50401(国际公开号WO 02/059106)中，将其各自通过引用并入本文。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基]-酰胺；(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异吲哚啉-1,3-二酮；N-(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-乙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}环丙基-甲酰胺；2-氯-N-{(2-(2,6-二氧代)(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}乙酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺；3-{1-氧代-4-(苄基氨基)异吲哚啉-2-基}哌啶-2,6-二酮；2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-4-(苄氨基)异吲哚啉-1,3-二酮；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}丙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-3-吡啶基甲酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二异吲哚啉-4-基)甲基}庚酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-2-呋喃甲酰胺；{N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)氨基甲酰基}乙酸甲酯；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2-噻吩基甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(丁基氨基)甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺；或N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基]甲基}(苄氨基)甲酰胺。
在一些实施方案中，免疫调节剂是这样的化合物，其属于美国专利申请公开号2002/0045643、国际公开号WO 98/54170和美国专利号6,395,754中公开的一类异吲哚-免疫调节化合物，将每一篇文献通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号5,798,368中所述的四取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号6,403,613中公开的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是美国专利号6,380,239和美国专利号7,244,759中所述的在吲哚啉环的4-或5-位取代的1-氧代或1,3-二氧代异吲哚啉，所述两篇文献均通过引用并入本文。
在一些实施方案中，免疫调节剂是2-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸或4-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸。在一些实施方案中，免疫调节化合物是4-氨基甲酰基-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-4-苯基氨基甲酰基-丁酸或2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-戊二酸。
在一些实施方案中，免疫调节剂是如通过引用并入本文的美国专利号6,458,810中所述的在2-位被2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异吲哚啉-1-酮或异吲哚啉-1,3-二酮。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮或其对映体或对映体的混合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。
在一些实施方案中，免疫调节剂是如Oshima,K.等人,Nihon Rinsho.,72(6):1130-5(2014)；Millrine,D.等人,Trends Mol Med.,23(4):348-364(2017)；和Collins,等人,Biochem J.,474(7):1127-1147(2017)中所述。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是来那度胺，泊马度胺，阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺，来那度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺或((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。
在某些实施方案中，通过向受试者给予沙利度胺衍生物来那度胺((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)来治疗和/或破坏病灶。来那度胺被FDA批准用于治疗多发性骨髓瘤、与缺失5q相关的骨髓增生异常综合症以及最近用于治疗复发/难治性套细胞淋巴瘤(MCL)。来那度胺通常是沙利度胺的合成衍生物，并且目前被理解为具有多种免疫调节作用，包括在T细胞与抗原呈递细胞(APC)之间使得免疫突触形成。例如，在一些情况下，来那度胺调节T细胞应答并导致增加CD4+和CD8+T细胞中白细胞介素(IL)-2的产生，诱导T辅助(Th)反应从Th2转变为Th1，抑制调节性T细胞子集(Treg)的扩增，以及改善滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中免疫突触的功能(Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺在患有多发性骨髓瘤(MM)的患者中也具有直接的肿瘤杀伤活性，并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的呵护样(nurse-like)细胞)直接和间接地调节CLL肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应于经由CD3连接激活T细胞或树突细胞介导的激活而增强T细胞增殖和干扰素-γ产生。此外，来那度胺被认为减少包括TNF-α、IL-1、IL-6和IL-12在内的促炎细胞因子的增殖，并经由增加NK细胞激活来增强抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。来那度胺还可以诱导恶性B细胞表达更高水平的免疫刺激分子，如CD80、CD86、HLA-DR、CD95和CD40(Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644)。Cereblon即一种E3泛素连接酶，其被鉴定为沙利度胺诱导的畸形发生的主要靶标(Ito等人,T.,(2010)Science 327:1345-1350)。来那度胺也靶向小脑，并且已经显示这导致c-Myc和IRF4表达的减少，同时还增加导致G1细胞周期阻滞的p21的表达(Lopez-Girona等人,(2012)Leukemia 26:2326–2335)
在一些实施方案中，通过给予调节腺苷水平和/或调节腺苷途径组分的活性或量的药剂来治疗和/或破坏病灶。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如，腺苷和一些非选择性激活腺苷受体亚型的腺苷类似物减少炎症氧化产物的嗜中性粒细胞产生(Cronstein等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.451:291,1985；Roberts等人,Biochem.J.,227:669,1985；Schrier等人,J.Immunol.137:3284,1986；Cronstein等人,ClinicalImmunol.Immunopath.42:76,1987)。在一些情况下，细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度可以在特定环境(例如肿瘤微环境(TME))中增加。在一些情况下，腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或在缺氧或其调节中所涉及的因子，例如缺氧诱导型因子(HIF)。在一些实施方案中，腺苷信号传导的增加可以增加细胞内cAMP和cAMP依赖性蛋白激酶，其导致抑制促炎性细胞因子产生，并且可以导致免疫抑制分子的合成和Treg的发展(Sitkovsky等人,CancerImmunol Res(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中，另外的药剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制效应。在一些实施方案中，另外的药剂可以减少或逆转缺氧驱动的A2-腺苷酸能T细胞免疫抑制。在一些实施方案中，另外的药剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、CD39/CD73胞外酶产生腺苷的抑制剂和缺氧-HIF-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。
在特定实施方案中，向受试者给予抑制或减少细胞外腺苷的药剂以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，向受试者给予抑制腺苷受体的活性和/或量的药剂以治疗和/或破坏病灶。特定实施方案考虑通过细胞外腺苷的抑制剂(例如防止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(例如腺苷受体拮抗剂)可以增强免疫应答，如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞，T细胞和/或B细胞介导的应答。此外，Gs蛋白介导的cAMP依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的Gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。
在一些实施方案中，向受试者给予腺苷受体拮抗剂以治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，向受试者给予腺苷受体拮抗剂以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，腺苷受体拮抗剂是A2a、A2b和/或A3拮抗剂。A2a、A2b和A3受体可以抑制或降低免疫应答，因此拮抗免疫抑制性腺苷受体可以扩大、加强或增强免疫应答。在一些实施方案中，向受试者给予通过腺苷受体抑制细胞外腺苷产生和/或抑制腺苷触发的信号传导的药剂，以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，通过抑制或减少产生腺苷的局部组织缺氧；通过降解(或使其失活)积累的细胞外腺苷；通过防止或减少免疫细胞上腺苷受体的表达；和/或通过抑制腺苷配体通过腺苷受体的信号传导，可以增强对病灶、病灶的组织炎症和病灶的靶标组织破坏的免疫应答。
在特定实施方案中，向受试者给予腺苷受体拮抗剂以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，拮抗剂是小分子腺苷受体拮抗剂，如A2a、A2b或A3受体拮抗剂。在一些实施方案中，拮抗剂是肽或拟肽，其结合A2a、A3b和/或A3腺苷受体，但不会触发Gi蛋白依赖性细胞内信号传导途径。此类拮抗剂的例子描述于美国专利号5,565,566、5,545,627、5,981,524、5,861,405、6,066,642、6,326,390、5,670,501、6,117,998、6,232,297、5,786,360、5,424,297、6,313,131、5,504,090和6,322,771。
在一些实施方案中，向受试者给予A2受体(A2R)受体拮抗剂以治疗和/或破坏病灶。示例性A2R拮抗剂包括但不限于示例性的A2R拮抗剂包括KW6002(伊曲茶碱(istradefyline))、SCH58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(DMPX)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(CSC)、MSX-2、MSX-3、MSX-4、CGS-15943、ZM-241385、SCH-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(BII014)、V2006、ST-1535、SYN-115、PSB-1115、ZM241365、FSPTP和靶向A2R表达的抑制性核酸(例如，siRNA或shRNA)或靶向A2R的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的药剂是描述于例如以下文献中的A2R拮抗剂：Ohta等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2006)103:13132-13137；Jin等人,CancerRes.(2010)70(6):2245-2255；Leone等人,Computational and StructuralBiotechnology Journal(2015)13:265-272；Beavis等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2013)110:14711–14716；和Pinna,A.,Expert Opin Investig Drugs(2009)18:1619-1631；Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605；US 8,080,554；US 8,716,301；US 20140056922；WO 2008/147482；US 8,883,500；US 20140377240；WO 02/055083；US 7,141,575；US 7,405,219；US 8,883,500；US 8,450,329和US 8,987,279。
在特定实施方案中，向受试者给予腺苷受体拮抗剂以治疗和/或破坏病灶，所述腺苷受体拮抗剂是与编码腺苷受体的mRNA特异性地结合的反义分子、抑制核酸分子(例如，小抑制性RNA(siRNA))或催化核酸分子(例如核酶)。在一些实施方案中，反义分子、抑制核酸分子或催化核酸分子结合编码A2a、A2b或A3的核酸。在一些实施方案中，反义分子、抑制核酸分子或催化核酸靶向腺苷受体下游的生化途径。例如，反义分子或催化核酸可以抑制参与Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径的酶。在一些实施方案中，另外的药剂包括腺苷受体(如A2a、A2b或A3)的显性阴性突变形式。
在一些实施方案中，通过向受试者给予抑制细胞外腺苷的药剂来治疗和/或破坏病灶。抑制细胞外腺苷的药剂包括使细胞外腺苷失去功能(例如使细胞外腺苷不能结合和/或激活腺苷受体)的药剂，如修饰细胞外腺苷结构的物质。在一些实施方案中，另外的药剂是细胞外腺苷生成或腺苷降解酶、其修饰形式或其调节剂。例如，在一些实施方案中，另外的药剂是酶(例如腺苷脱氨酶)或另一种催化分子，所述酶或另一种催化分子选择性地结合并破坏腺苷，从而消除或降低内源形成的腺苷通过腺苷受体发送信号以及终止炎症的能力。
在某些实施方案中，通过向受试者给予腺苷脱氨酶(ADA)或其修饰形式(例如重组ADA和/或聚乙二醇修饰的ADA(ADA-PEG))来治疗和/或破坏病灶。腺苷脱氨酶可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ADA-PEG已用于治疗患有ADA SCID的患者(Hershfield(1995)HumMutat.5:107)。在一些实施方案中，向受试者给予抑制细胞外腺苷的药剂，其包括防止或降低细胞外腺苷形成，和/或防止或降低细胞外腺苷的积累的药剂，从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用。在一些实施方案中，向受试者给予这样的药剂，其特异性地抑制参与调节促炎分子的合成和/或分泌的酶和蛋白质，包括核转录因子的调节剂。抑制腺苷受体表达或Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径或cAMP依赖性细胞内途径的表达可以导致免疫应答的增加/增强。
在一些实施方案中，向受试者给予靶向胞外酶的药剂以治疗和/或破坏病灶，所述胞外酶生成或产生细胞外腺苷。在一些实施方案中，药剂靶向CD39和CD73胞外酶，它们共同用于生成细胞外腺苷。CD39(也称为ectonucleoside三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外ATP(或ADP)转化为5'AMP。随后，CD73(也称为5'核苷酸酶)将5'AMP转化为腺苷。CD39的活性可通过NDP激酶和腺苷酸激酶的作用逆转，而CD73的活性是不可逆的。CD39和CD73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和Treg)上表达，并且也在许多癌细胞上表达。例如，在肿瘤微环境的缺氧条件下，CD39和CD73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能源于血液供应不足和肿瘤血管杂乱，从而影响氧气的输送(Carroll and Ashcroft(2005),Expert.Rev.Mol.Med.7(6):1-16)。缺氧也抑制将腺苷转化为AMP的腺苷酸激酶(AK)，从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此，腺苷响应于缺氧以高浓度释放，缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围肿瘤微环境(TME)经常出现的条件。在一些实施方案中，另外的药剂是抗CD39抗体或其抗原结合片段、抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如MEDI9447或TY/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(ADP)、ARL 67156、POM-3、IPH52中的一种或多种(参见例如Allard等人Clin Cancer Res(2013)19(20):5626-5635；Hausler等人,Am J Transl Res(2014)6(2):129-139；Zhang,B.,Cancer Res.(2010)70(16):6407-6411)。
在一些实施方案中，向受试者给予化学治疗剂(有时称为细胞毒性剂)以治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，病灶是肿瘤。在特定实施方案中，病灶是癌性的。在特定实施方案中，化学治疗剂是本领域技术人员已知的对于治疗、预防或改善过度增殖性障碍(如癌症)有效的任何药剂。化学治疗剂包括但不限于小分子、合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(例如，DNA和RNA多核苷酸，其包括但不限于编码生物活性蛋白质、多肽或肽的反义核苷酸序列、三螺旋和核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂和合成或天然有机分子。在特定实施方案中，化学治疗药物包括烷化剂、蒽环类、细胞骨架破坏剂(紫杉烷类)、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物和前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂以及长春花生物碱和衍生物。
在某些实施方案中，通过给予化学治疗剂治疗和/或破坏病灶以在体内调节基因工程化细胞。化学治疗剂可以包括但不限于阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活性BCG、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、阿法达贝泊汀、道诺霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西紫杉醇、多柔比星、屈他雄酮、Elliott's B溶液、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿嘧啶、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉西他滨、吉妥珠单抗奥佐米星、吉非替尼、戈舍瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸、左旋咪唑、洛莫司汀、meclorethamine、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲氧沙林、甲泼尼龙、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、诺菲单抗、奥利美生、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、培加酶、培门冬酶、培非司亭、培美曲塞、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、聚苯丙生、卟菲尔钠、丙卡巴肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、链脲佐菌素、滑石、他莫昔芬、特罗凯、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、噻替哌、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨和唑来膦酸盐。
C.基因工程化细胞的再扩增
在一些实施方案中，所提供的方法促进受试者中工程化细胞的再扩增，在某些情况下，其可远远超过在治疗和/或破坏之前的初始扩增水平峰值。在一些实施方案中，所提供的方法在工程化细胞的水平峰值下降或不可检测时调节基因工程化T细胞的扩增和/或持久性。在一些实施方案中，被诱导再扩增的基因工程化细胞在其给予的受试者中展现出更好的效力。
用于监测或检测CAR+ T细胞的方法是已知的，并且示例性方法在IV.C部分中描述。在一些实施方案中，可以在给予至受试者之后检测或定量给予的细胞的扩增的度或程度。例如，在一些方面，定量PCR(qPCR)用于评估在受试者的血液或血清或器官或组织(例如，疾病部位)中表达嵌合受体(例如，表达CAR的细胞)的细胞的量。在一些方面，扩增(包括工程化细胞的数量)被定量为每微克的DNA中编码受体(例如CAR)的DNA或质粒的拷贝，或定量为每微升样品(例如血液或血清)中表达受体的(例如表达CAR的)细胞的数量，或每微升样品中外周血单核细胞(PBMC)或白细胞或T细胞的总数量。在一些实施方案中，也可以进行流式细胞术测定，其通常使用对受体具特异性的抗体检测表达受体的细胞。还可以使用基于细胞的测定来检测功能细胞的数量或百分比，所述功能细胞例如为能够结合至和/或中和和/或诱导针对疾病或病症的细胞或表达由受体识别的抗原的细胞的应答(例如细胞毒性应答)的细胞。在任何此类实施方案中，与重组受体相关的另一种标记(例如表达CAR的细胞)的表达范围或水平可以用于区分受试者体内的所给予细胞与内源细胞。
在一些实施方案中，根据所提供的方法破坏病灶例如通过促进细胞的扩增和/或随着时间的持久性促进了针对基于T细胞的疗法所给予的细胞(例如T细胞)的激活、再扩增和/或增加受试者对所述细胞的暴露。在一些实施方案中，与在不破坏病灶的情况下向一个或多个受试者给予T细胞疗法的方法相比，T细胞疗法展现出在这样治疗的受试者或多个受试者(按平均数计)中增加或延长的扩增和/或持久性。在一些实施方案中，与在不破坏病灶的情况下仅给予T细胞相比，所提供的涉及破坏体内病灶的方法可以在这样治疗的受试者或多个受试者(按平均数计)中增加暴露于细胞(例如T细胞)的最大值、总量和/或持续时间。这种增加可以为或为约或为至少约1.2倍、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10.0倍、20.0倍、30.0倍、40.0倍、50.0倍或更多倍。
在一些实施方案中，通过所提供的方法实现的受试者对所给予的细胞的暴露增加(例如，细胞数量增加或随着时间持续时间延长)改善了免疫疗法(例如T细胞疗法)的功效和治疗结果。在一些方面，如与其他方法相比，所述方法的有利之处在于，对表达重组受体的细胞(例如，表达CAR的细胞)的更大和/或更长程度的暴露改善治疗结果。此类结果可包括患者存活率和缓解，甚至在具有严重肿瘤负荷的个体中的患者存活率和缓解。在一些方面，在治疗和/或破坏病灶后实现的在这样治疗的受试者或多个受试者(按平均数计)中增加或延长的扩增和/或持久性与一个或多个受试者中肿瘤有关结果的益处相关。在一些实施方案中，肿瘤有关结果包括一个或多个受试者中肿瘤负荷的减少或骨髓原始细胞(blastmarrow)的减少。在一些实施方案中，在所述方法的给予后，肿瘤负荷的减少量为或至少为或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施方案中，与已经用不涉及破坏病灶的方法治疗的这样治疗的一个受试者或多个受试者(按平均数计)相比，疾病负荷、肿瘤大小、肿瘤体积、肿瘤质量和/或肿瘤负担或体积在细胞剂量后降低至少或约50％、60％、70％、80％、90％或更多。
在一些实施方案中，所提供的方法有效地治疗受试者，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性和/或在给予工程化细胞(如重组受体表达细胞例如CAR+ T细胞)后已经复发。在一些实施方案中，有效治疗的所评估标准包括总体反应率(ORR)、完全反应(CR)、反应持续时间(DOR)、无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)。在一些实施方案中，与不涉及破坏病灶的方法相比，所述方法和用途在这样治疗的一个受试者或多个受试者(按平均数计)中提供或实现更持久的反应。在所提供方法的任何一种的特定实施方案中，在根据所提供的方法破坏病灶和/或给予药理剂或治疗剂后反应例如ORR或CR是持久的，持续大于3个月、大于6个月、大于12个月、大于18个月、大于24个月、大于30个月、大于36个月或更长时间。
II.细胞疗法和工程化细胞
所提供的治疗方法涉及将表达重组受体的细胞及其组合物给予至受试者，例如患者。在一些实施方案中，细胞含有或经工程化以含有工程化受体例如工程化抗原受体如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)。细胞包括此类细胞群、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞如T细胞或CD8+或CD4+细胞。所述组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激所述细胞，如通过将其与诱导应答(如增殖、存活和/或激活，例如如通过细胞因子或激活标记的表达所测量的)的刺激进行组合，然后转导激活的细胞，并且在培养物中扩增至足以用于临床应用的数量。
用于引入基因工程化的组分(例如，抗原受体，例如CAR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔来进行。
A.重组受体
细胞通常表达重组受体如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))和其他抗原结合受体如转基因T细胞受体(TCR)。所述受体还包括其他嵌合受体，例如嵌合自身抗体受体(CAAR)。
1.嵌合抗原受体(CAR)
在一些实施方案中，重组受体包括嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，CAR对特定抗原(或标记或配体，例如在特定细胞类型的表面上表达的抗原)具有特异性。在一些实施方案中，抗原是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞例如肿瘤细胞或致病细胞上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在特定实施方案中，重组受体(如嵌合受体)含有细胞内信号传导区域，所述细胞内信号传导区域包括细胞质信号传导结构域(也可互换地称为细胞内信号传导结构域)，例如能够在T细胞中诱导初级激活信号的细胞质(细胞内)区域，例如，T细胞受体(TCR)组分的细胞质信号传导结构域(例如CD3-zeta(CD3ζ)链的ζ链的细胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分)；和/或所述细胞内信号传导区域包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。
在一些实施方案中，嵌合受体还含有特异性地结合至抗原(或配体)的细胞外结合结构域。在一些实施方案中，嵌合受体是CAR，其含有特异性地结合至抗原的细胞外抗原识别结构域。在一些实施方案中，抗原(或配体)是在细胞表面上表达的蛋白质。在一些实施方案中，CAR是TCR样CAR，并且抗原是加工过的肽抗原，如细胞内蛋白的肽抗原，其与TCR一样在主要组织相容性复合物(MHC)分子的背景下在细胞表面上被识别。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类受体工程化并引入细胞的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO 2012/129514、WO 2014031687、WO 2013/166321、WO 2013/071154、WO 2013/123061、美国专利申请公开号US 2002131960、US 2013287748、US 20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP 2537416，和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人，Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18日(2):160-75。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中所述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668 A1中所述的那些。CAR的实例包括如在任何上述出版物中披露的CAR，所述出版物例如WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号：7,446,190和美国专利号：8,389,282。嵌合受体(如CAR)通常包括细胞外抗原结合结构域，如抗体分子的一部分，通常是抗体的可变重(VH)链区域和/或可变轻(VL)链区域，例如scFv抗体片段。
在一些实施方案中，受体靶向的抗原是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞例如肿瘤细胞或致病细胞上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在一些实施方案中，CAR被构建为具有对特定抗原(或标记或配体)的特异性，所述特定抗原例如为在过继疗法靶向的特定细胞类型中表达的抗原(例如癌症标记)和/或旨在诱导衰减应答的抗原(例如在正常或未患病细胞类型上表达的抗原)。因此，CAR通常在其细胞外部分中包括一种或多种抗原结合分子，例如一种或多种抗原结合片段、结构域或部分，或一种或多种抗体可变结构域，和/或抗体分子。在一些实施方案中，所述CAR包括抗体分子的一个或多个抗原结合部分，如源自单克隆抗体(mAb)的可变重链(VH)和可变轻链(VL)的单链抗体片段(scFv)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分作为重组受体(例如抗原受体)的部分在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有针对肽-MHC复合物表现出TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。在一些实施方案中，在一些方面，对TCR样CAR的MHC-肽复合物具有特异性的细胞外抗原结合结构域通过接头和/或一个或多个跨膜结构域与一个或多个细胞内信号传导组分连接。在一些实施方案中，此类分子通常可以通过天然抗原受体(如TCR)模拟或接近信号，并且任选地通过这种受体与共刺激受体组合模拟或接近信号。
在一些实施方案中，重组受体(例如嵌合受体，例如CAR)包括与抗原(或配体)结合(例如特异性结合)的配体结合结构域。嵌合受体靶向的抗原包括在通过过继细胞疗法靶向的疾病、病症或细胞类型的情况下表达的抗原。所述疾病和病症包括增殖性、肿瘤性和恶性疾病和障碍，包括癌症和肿瘤，包括血液癌、免疫系统癌症，如淋巴瘤、白血病和/或骨髓瘤，如B型白血病、T型白血病和骨髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，抗原(或配体)是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，抗原(或配体)在疾病或病症的细胞(例如肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。
在一些实施方案中，CAR含有抗体或抗原结合片段(例如scFv)，其特异性识别在细胞表面上表达的抗原，例如完整抗原。
在一些实施方案中，被所述受体靶向的抗原是或包括孤儿酪氨酸激酶受体ROR1、tEGFR、Her2、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、3或4、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ轻链、路易斯Y、L1-细胞粘附分子、MAGE-A1、间皮素、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2D配体、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、和MAGE A3、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白(如细胞周期蛋白A1(CCNA1))、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。
在某些实施方案中，工程化细胞表达重组受体和/或与抗原结合的CAR。在特定实施方案中，抗原是αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、表皮生长因子蛋白(EGFR)、截短的表皮生长因子蛋白(tEGFR)、III型表皮生长因子受体突变(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、胎儿乙酰胆碱受体、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Ra)、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富含亮氨酸的重复序列的8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、间皮素、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wilms肿瘤1(WT-1)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、病原体特异性抗原或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化的分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Iglambda、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，CAR结合病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，CAR对病毒抗原(如HIV、HCV、HBV等)、细菌抗原和/或寄生虫抗原具有特异性。
在一些实施方案中，CAR含有TCR样抗体，例如抗体或抗原结合片段(例如scFv)，其特异性识别作为MHC-肽复合物存在于细胞表面上的细胞内抗原(例如肿瘤相关抗原)。在一些实施方案中，识别MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以作为重组受体的部分(例如抗原受体)在细胞上表达。所述抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。通常，含有针对肽-MHC复合物表现出TCR样特异性的抗体或抗原结合片段的CAR也可以称为TCR样CAR。
提及“主要组织相容性复合物”(MHC)是指含有多态性肽结合位点或结合沟的蛋白质，通常是糖蛋白，在一些情况下，所述蛋白质可以与多肽的肽抗原(包括由细胞机构处理的肽抗原)复合。在一些情况下，MHC分子可以在细胞表面上展示或表达，包括作为与肽的复合物，即MHC-肽复合物，用于呈现具有T细胞上的抗原受体(例如TCR或TCR样抗体)可识别的构象的抗原。通常，MHC I类分子是异二聚体，其具有跨越α链的膜，在一些情况下具有三个α结构域和非共价缔合的β2微球蛋白。通常，MHC II类分子由两种跨膜糖蛋白α和β组成，两者通常都跨越膜。MHC分子可以包括MHC的有效部分，其含有抗原结合位点或用于结合肽的位点以及由适当抗原受体识别所需的序列。在一些实施方案中，MHC I类分子将源自胞质溶胶的肽递送至细胞表面，其中MHC-肽复合物由T细胞(例如通常CD8+T细胞，但在一些情况下是CD4+ T细胞)识别。在一些实施方案中，MHC II类分子将源自囊泡系统的肽递送至细胞表面，其中所述肽通常由CD4+T细胞识别。通常，MHC分子由一组连锁基因座编码，其在小鼠中统称为H-2并且在人中统称为人白细胞抗原(HLA)。因此，通常人MHC也以可称为人白细胞抗原(HLA)。
术语“MHC-肽复合物”或“肽-MHC复合物”或其变体是指肽抗原与MHC分子的复合物或缔合物，例如通常通过所述肽在MHC分子的结合沟或裂缝中的非共价相互作用来形成。在一些实施方案中，MHC-肽复合物存在或展示于细胞表面上。在一些实施方案中，MHC-肽复合物可由抗原受体(例如TCR、TCR样CAR或其抗原结合部分)特异性地识别。
在一些实施方案中，多肽的肽(例如肽抗原或表位)可以与MHC分子缔合，例如用于由抗原受体识别。通常，所述肽源自或基于较长生物分子(例如多肽或蛋白质)的片段。在一些实施方案中，所述肽的长度通常为约8至约24个氨基酸。在一些实施方案中，肽的长度为或为约9至22个氨基酸，用于在MHC II类复合物中识别。在一些实施方案中，肽的长度为或为约8至13个氨基酸，用于在MHC I类复合物中识别。在一些实施方案中，在识别MHC分子(例如MHC-肽复合物)背景中的肽后，抗原受体(例如TCR或TCR样CAR)产生或触发激活信号至T细胞，诱导T细胞应答，如T细胞增殖、细胞因子产生、细胞毒性T细胞应答或其他应答。
在一些实施方案中，TCR样抗体或抗原结合部分是已知的或可通过已知方法产生(参见例如美国公开申请号US 2002/0150914；US 2003/0223994；US 2004/0191260；US2006/0034850；US 2007/00992530；US 20090226474；US 20090304679；和国际PCT公开号WO03/068201)。
在一些实施方案中，特异性地结合至MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过用有效量的含有特定MHC-肽复合物的免疫原对宿主进行免疫来产生。在一些情况下，MHC-肽复合物的肽是能够结合至MHC的抗原的表位，例如肿瘤抗原，例如通用肿瘤抗原、骨髓瘤抗原或如下文所述的其他抗原。在一些实施方案中，然后向宿主给予有效量的免疫原以用于引发免疫应答，其中所述免疫原保持其三维形式持续一段足以引发针对所述肽在所述MHC分子的结合沟中的三维呈递的免疫应答的时间。然后测定从宿主收集的血清以确定是否产生了识别MHC分子结合沟中的肽的三维呈现的所需抗体。在一些实施方案中，可以评估所产生的抗体以确认所述抗体可以区分MHC-肽复合物与单独的MHC分子、单独的目标肽以及MHC与无关肽的复合物。然后可以分离所需的抗体。
在一些实施方案中，特异性地结合至MHC-肽复合物的抗体或其抗原结合部分可以通过采用抗体文库展示方法(例如噬菌体抗体文库)来产生。在一些实施方案中，可以产生突变体Fab、scFv或其他抗体形式的噬菌体展示文库，例如，其中所述文库的成员在一个或多个CDR的一个或多个残基处发生突变。参见例如美国公开申请号US 20020150914、US2014/0294841；和Cohen CJ.等人(2003)J Mol.Recogn.16:324-332。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性结合抗原的可变重链(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体(peptibody)、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体(heteroconjugateantibody)、多特异性(例如，双特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联二-scFv、串联三-scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应理解为涵盖其功能性抗体片段。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
在一些实施方案中，抗原结合蛋白、抗体及其抗原结合片段特异性地识别全长抗体的抗原。在一些实施方案中，抗体的重链和轻链可以是全长的或者可以是抗原结合部分(Fab、F(ab')2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在其他实施方案中，所述抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别是选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别是IgG1(例如，人IgG1)。在另一个实施方案中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
所提供的抗体包括抗体片段。“抗体片段”是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；可变重链(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和单一结构域VH单一抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在具体实施方案中，所述抗体是包含可变重链区和/或可变轻链区的单链抗体片段，如scFv。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如，Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。单个VH或VL结构域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
单结构域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。在一些实施方案中，CAR包含特异性地结合抗原的抗体重链结构域，所述抗原例如癌症标记或待靶向的细胞或疾病(例如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原，例如本文所述或已知的任何靶抗原。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，所述抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些实施方案中，抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是这样的抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指所述非人抗体的变体，其经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，衍生出CDR残基的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
因此，在一些实施方案中，嵌合抗原受体(包括TCR样CAR)包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含主要信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。
在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)(包括重组受体(例如CAR)的抗体部分)还包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分，例如铰链区(例如IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，重组受体(例如CAR，包括其抗体部分)还包括间隔子，所述间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分或其变体或经修饰形式，例如铰链区(例如，IgG4铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，重组受体还包含间隔子和/或铰链区。在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG如IgG4或IgG1的。在一些方面，所述恒定区的部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。与不存在间隔子的情况下相比，间隔子的长度可以提供抗原结合后增强的细胞反应性。示例性间隔子例如铰链区包括国际专利申请公开号WO 2014031687中描述的那些。在一些例子中，间隔子的长度为或为约12个氨基酸或者长度不超过12个氨基酸。示例性间隔子包括具有至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸，约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔子区具有约12个或更少的氨基酸、约119个或更少的氨基酸或约229个或更少的氨基酸。示例性间隔子包括单独的IgG4铰链、与CH2和CH3结构域连接的IgG4铰链或与CH3结构域连接的IgG4铰链。示例性间隔子包括但不限于Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；国际专利申请公开号WO 2014031687、美国专利号8,822,647或公开的申请号US 2014/0271635中所述的那些。
在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG如IgG4或IgG1的。在一些实施方案中，间隔子具有序列ESKYGPPCPPCP(如SEQ ID NO:1所示)，并且由SEQ ID NO:2所示的序列编码。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:3中列出的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:4中列出的序列。在一些实施方案中，恒定区或部分是IgD。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:5中列出的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现与SEQ ID NO:1、3、4或5中的任一序列至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:26-34所示的序列。在一些实施方案中，间隔子具有展现与SEQ ID NO:26-34中的任一序列至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
所述抗原识别结构域通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如通过抗原受体复合物(如TCR复合物)(在CAR的情况下)模拟激活和/或经由另一种细胞表面受体模拟信号的信号传导组分)连接。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和细胞内信号传导结构域或区域连接。在一些实施方案中，所述跨膜结构域与细胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用天然与所述受体(例如，CAR)中的一个结构域缔合的跨膜结构域。在一些情形中，通过氨基酸取代选择或修饰所述跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与所述受体复合物的其他成员的相互作用。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域源自天然或合成来源。当来源是天然的时，在一些方面，所述结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括源自以下项的那些跨膜区(即，包括以下项的至少一个或多个跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，CD154。可替代地，在一些实施方案中，跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，例如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域。
细胞内信号传导结构域或区域包括模拟或接近以下项的那些：通过天然抗原受体传导的信号，通过与共刺激受体组合的受体传导的信号，和/或仅通过共刺激受体传导的信号。在一些实施方案中，短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个之间氨基酸的接头，例如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在于CAR的跨膜结构域与细胞质信号传导结构域或区域之间，并且形成连接。
受体例如CAR通常包括至少一种细胞内信号传导组分或多种细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链例如CD3ζ链。因此，在一些方面，所述抗原结合部分与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，受体例如CAR进一步包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，CAR或其他嵌合受体包括CD3-ζ(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接CAR或其他嵌合受体后，所述受体的细胞质结构域或细胞内信号传导结构域或区域激活免疫细胞(例如，工程化以表达CAR的T细胞)的至少一种正常效应子功能或反应。例如，在一些情况下，CAR诱导T细胞的功能，例如细胞溶解活性或T辅助活性，例如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，例如，如果抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域或区域的截短部分转导效应子功能信号，则使用所述截短部分代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，一个或多个细胞内信号传导结构域或区域包括T细胞受体(TCR)的细胞质序列，并且在一些方面还包括共受体的那些细胞质序列，所述共受体在自然环境中与此类受体协同作用以在抗原受体接合后启动信号转导，和/或此类分子的任何衍生物或变体，和/或具有相同功能性能力的任何合成序列。
在天然TCR的情况下，完全激活通常不仅需要通过TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在所述CAR中。在其他实施方案中，所述CAR不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。
在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的细胞质信号传导序列来介导：通过TCR启动抗原依赖性初级激活的那些(初级细胞质信号传导序列)，和以非抗原依赖性方式作用以提供刺激或共刺激信号的那些(次级细胞质信号传导序列)。在一些方面，CAR包括此类信号传导组分中的一种或两种。
在一些方面，所述CAR包括调节所述TCR复合物的初级激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM)。含有初级细胞质信号传导序列的ITAM的例子包括源自以下项的那些：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD8、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。在一些实施方案中，CAR中的一种或多种细胞质信号传导分子含有源自CD3ζ的细胞质信号传导结构域或区域或其部分或序列。
在一些实施方案中，CAR包括共刺激受体(例如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS)的信号传导结构域或区域和/或跨膜部分。在一些方面，相同CAR同时包括激活和共刺激组分。
在一些实施方案中，激活结构域包括于一个CAR内，而共刺激组分是由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括激活或刺激CAR、共刺激CAR，它们均在相同细胞上表达(参见WO 2014/055668)。在一些方面，细胞包含一种或多种刺激或激活CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方案中，细胞还包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月)，如识别除了与疾病或病症相关和/或对所述疾病或病症具有特异性的抗原以外的抗原的CAR，其中通过靶向疾病的CAR递送的激活信号由于抑制性CAR与其配体的结合而有所减小或被抑制，例如以减小脱靶效应。
在某些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含连接至CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含与CD3ζ细胞内结构域连接的嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，CAR在细胞质部分中包含一个或多个，例如两个或更多个共刺激结构域和激活结构域，例如主激活结构域。示例性CAR包含CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些实施方案中，CAR或其他抗原受体还包括标记，例如细胞表面标记，其可以用于确认细胞表达受体的转导或工程化，所述受体例如细胞表面受体的截短形式，例如截短的EGFR(tEGFR)。在一些方面，所述标记包括CD34、NGFR或表皮生长因子受体(例如，tEGFR)的全部或部分(例如，截短形式)。在一些实施方案中，编码所述标记的核酸与编码接头序列(如可切割的接头序列，例如T2A)的多核苷酸可操作地连接。例如，标记和任选的接头序列可以是国际专利申请公开号WO 2014031687中公开的任何一种。例如，标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，如T2A可切割接头序列。截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性多肽包含SEQ ID NO:7或16中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:7或16至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQ ID NO:6或17中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:6或17至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，标记是并非在T细胞上天然发现或并非在T细胞表面上天然发现的分子(例如细胞表面蛋白)或其部分。在一些实施方案中，所述分子是非自身分子(例如，非自身蛋白)，即没有被细胞过继转移到其中的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中，所述标记不起任何治疗功能和/或除了用作基因工程化(例如，用于选择成功工程化的细胞)的标记之外不产生任何作用。在其他实施方案中，所述标记可以是治疗性分子或另外发挥一些所需作用的分子，如在体内细胞将遇到的配体，如共刺激性或免疫检查点分子，以在过继转移和遇到配体时增强和/或减弱所述细胞的应答。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体如CD28或CD137的细胞内信号传导结构域的信号；在一些方面，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scFv，并且所述细胞内结构域含有ITAM。在一些方面，所述细胞内信号传导结构域包括CD3-zeta(CD3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括连接细胞外结构域与细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。细胞外结构域和跨膜结构域可以直接或间接连接。在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜通过间隔子(如本文描述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，受体含有衍生跨膜结构域的分子的细胞外部分，如CD28细胞外部分。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有源自T细胞共刺激分子或其功能变体的细胞内结构域，如位于跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或41BB。
在一些实施方案中，scFv源自FMC63。FMC63是针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987)。Leucocyte typingIII.302)。FMC63抗体包含分别在SEQ ID NO:38和39中所示的CDRH1和H2，以及在SEQ IDNO:40或54中所示的CDRH3、和在SEQ ID NO:35中所示的CDRL1、和在SEQ ID NO:36或55中所示的CDR L2、和在SEQ ID NO:37或56中所示的CDR L3。FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，svFv包含含有SEQ ID NO:35中所示的CDRL1、SEQ ID NO:36或55中所示的CDRL2、和SEQ ID NO:37或56中所示的CDRL3的可变轻链，和/或含有SEQ ID NO:38中所示的CDRH1、SEQ ID NO:39中所示的CDRH2、和SEQ ID NO:40或54中所示的CDRH3的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:41中所示的FMC63的可变重链区和SEQ ID NO:42中所示的FMC63的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ ID NO:24所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，svFc是由SEQ ID NO:25中所示的核苷酸序列或展现与SEQ ID NO:25至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:43至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，scFv源自SJ25C1。SJ25C1是针对人来源的表达CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.等人(1987)。Leucocyte typingIII.302)。SJ25C1抗体包含SEQ ID NO:47-49分别所示的CDRH1、H2和H3，以及SEQ ID NO:44-46分别所示的CDRL1、L2和L3序列。SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，svFv包含含有SEQ ID NO:44中所示的CDRL1、SEQ ID NO:45中所示的CDRL2、和SEQ ID NO:46中所示的CDRL3的可变轻链，和/或含有SEQ ID NO:47中所示的CDRH1、SEQ ID NO:48中所示的CDRH2和SEQ ID NO:49中所示的CDRH3的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQID NO:50中所示的SJ25C1的可变重链区和SEQ ID NO:51中所示的SJ25C1的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链和可变轻链通过接头连接。在一些实施方案中，接头如SEQ IDNO:52所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:53至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
例如，在一些实施方案中，CAR含有抗体例如抗体片段、跨膜结构域(其是CD28的跨膜部分或其功能变体或含有CD28跨膜部分或其功能变体)以及含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR含有抗体例如抗体片段，跨膜结构域(其是CD28的跨膜部分或其功能变体或含有CD28的跨膜部分或其功能变体)以及含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，受体进一步包括含有Ig分子(如人Ig分子，如Ig铰链，例如IgG4铰链)的一部分的间隔子如仅含铰链的间隔子。
在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)的跨膜结构域是或包括人CD28的跨膜结构域(例如，登录号P01747.1)或其变体，例如包含SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:8至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列或与SEQID NO:9具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列，或者例如人CD28的27个氨基酸的跨膜结构域。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)的细胞内信号传导结构域或区域、区域或一个或多个组分含有人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或区域或其功能变体或部分，例如在天然CD28蛋白的位置186-187具有LL至GG取代的结构域或区域。例如，在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域或区域可以包含SEQ ID NO:10或11中所示的氨基酸序列，或展现与SEQ ID NO:10或11至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞内结构域或区域包含4-1BB的细胞内共刺激信号传导结构域或区域(例如，登录号Q07011.1)或其功能变体或部分，例如SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列或展现与SEQ IDNO:12至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列，或例如人4-1BB的42个氨基酸的细胞质结构域。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的细胞内信号传导结构域或区域包含人CD3链，任选地ζ刺激性信号传导结构域或区域或其功能变体，例如人CD3ζ的同种型3的112个AA的细胞质结构域或区域(登录号：P20963.2)或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域或区域。例如，在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域或区域包含如SEQ ID NO:13、14或15中所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:13、14或15至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，间隔子仅含有IgG的铰链区，例如仅IgG4或IgG1的铰链，例如SEQ IDNO:1中所示的仅铰链间隔子。在其他实施方案中，间隔子是或含有Ig铰链，例如，IgG4源铰链，其任选地连接至CH2和/或CH3结构域。在一些实施方案中，间隔子是与CH2和CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，间隔子是仅与CH3结构域连接的Ig铰链，例如IgG4铰链，如SEQ ID NO:3中所示。在一些实施方案中，间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。
例如，在一些实施方案中，CAR包括抗体(如抗体片段，包括scFv)、间隔子(如含有免疫球蛋白分子的一部分的间隔子，如铰链区和/或重链分子的一个或多个恒定区，如含有Ig铰链的间隔子)、含有CD28衍生的跨膜结构域的全部或部分的跨膜结构域、CD28衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR包括抗体或片段(例如scFv)、间隔子(如任何含Ig铰链的间隔子)、CD28衍生的跨膜结构域、4-1BB衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ衍生的信号传导结构域。
在一些实施方案中，编码此类CAR构建体的核酸分子进一步包括编码T2A核糖体跳跃元件的序列和/或tEGFR序列(例如在编码CAR的序列的下游)。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:6或17中所示的T2A核糖体跳跃元件，或展现与SEQ ID NO:6或17至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，还可以生成表达抗原受体(例如CAR)的T细胞以将截短的EGFR(EGFRt)表达为非免疫原性选择表位(例如通过引入编码被T2A核糖体开关分隔开的CAR和EGFRt的构建体，以表达来自相同构建体的两种蛋白质)，然后所述非免疫原性选择表位可用作检测此类细胞的标记(参见例如美国专利号8,802,374)。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:7或16中所示的tEGFR序列，或展现与SEQ ID NO:7或16至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
由给予受试者的细胞表达的重组受体例如CAR通常识别或特异性地结合至分子，所述分子在被治疗的疾病或病症或其细胞中表达、与被治疗的疾病或病症或其细胞相关和/或特异于被治疗的疾病或病症或其细胞。在与分子例如抗原特异性结合后，受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向疾病或病症的免疫应答。例如，在一些实施方案中细胞表达所述CAR，其特异性地结合至由疾病或病症的细胞或组织表达的或与疾病或病症相关的抗原。
2.T细胞受体(TCR)
在一些实施方案中，提供了工程化细胞，例如T细胞，其表达识别靶多肽(例如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位的T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRα和TCRβ)的分子或其抗原结合部分，并且其能够特异性结合至与MHC分子结合的肽。在一些实施方案中，所述TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR一般在结构上相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，发现TCR在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，所述TCR是这样的抗原结合部分，其少于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合(如与MHC-肽复合物结合)。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合与完整TCR结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链的可变区内的各个CDR通常由框架区(FR)隔开，与CDR相比，所述框架区通常在TCR分子之间展示较低可变性(参见，例如，Jores等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者是在给定TCR可变区的用于所述肽-MHC复合物的加工肽部分的抗原识别和/或用于与其相互作用的三个CDR中最重要的CDR。在一些情境下，所述α链的CDR1可以与某些抗原肽的N-末端部分相互作用。在一些情境下，所述β链的CDR1可以与所述肽的C-末端部分相互作用。在一些情境下，CDR2对与所述MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或识别具有最强的作用或者是主要的负责CDR。在一些实施方案中，所述β-链的可变区可以含有另外的高变区(CDR4或HVR4)，其通常参与超抗原结合而非抗原识别(Kotb(1995)Clinical Microbiology Reviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短细胞质尾(参见，例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4页:33,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短细胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白质缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链的细胞外部分(例如，α链或β链)可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，例如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences ofProteins of Immunological Interest”,US Dept.Health and Human Services,PublicHealth Service National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定域或Cα，通常基于Kabat编号的位置117至259，或β链恒定结构域或Cβ，通常基于Kabat的链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有CDR。TCR的恒定结构域可含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可在每条α和β链中具有另外的半胱氨酸残基，使得TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，所述TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，所述跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，所述TCR链含有胞质尾。在一些情况下，结构允许TCR与其他分子(如CD3和其亚基)缔合。例如，含有恒定结构域与跨膜区的TCR可以将所述蛋白质锚定在细胞膜中并与所述CD3信号传导装置或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如，CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者其可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，TCR是含有两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体，所述链是通过例如一个或多个二硫键连接。
在一些实施方案中，TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα,β链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞，例如细胞毒性T细胞)、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，T细胞可以是培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分可以根据对TCR序列的了解以合成方式产生。
在一些实施方案中，TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库而鉴定或选择的TCR产生的。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，可以从CD4+或CD8+细胞产生TCR文库。在一些实施方案中，所述TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源扩增，即正常TCR文库。在一些实施方案中，所述TCR可以从患病受试者的T细胞来源扩增，即患病TCR文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如通过在从人获得的样品(如T细胞)中进行RT-PCR。在一些实施方案中，scTv文库可以从天然Vα和Vβ文库组装，其中扩增的产物被克隆或组装以通过接头分开。取决于受试者和细胞的来源，所述文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，所述TCR经受定向进化，如通过诱变例如所述α或β链。在一些方面，所述TCR的CDR内的特定残基被改变。在一些实施方案中，可以通过亲和力成熟来修饰选择的TCR。在一些实施方案中，可以选择抗原特异性T细胞，如通过筛选以评估针对所述肽的CTL活性。在一些方面，可以选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR，如通过结合活性，例如对所述抗原的特定亲和力或亲合力。
在一些实施方案中，基因工程化的抗原受体包括从天然存在的T细胞克隆的重组T细胞受体(TCR)和/或TCR。在一些实施方案中，从患者鉴定、分离靶抗原(例如，癌抗原)的高亲和力T细胞克隆，并将其引入细胞中。在一些实施方案中，已经在用人免疫系统基因(例如，人白细胞抗原系统或HLA)工程化的转基因小鼠中产生针对靶抗原的TCR克隆。参见，例如，肿瘤抗原(参见，例如，Parkhurst等人(2009)Clin Cancer Res.15:169-180和Cohen等人(2005)J Immunol.175:5799-5808。在一些实施方案中，使用噬菌体展示来分离针对靶抗原的TCR(参见，例如，Varela-Rohena等人(2008)Nat Med.14:1390-1395和Li(2005)NatBiotechnol.23:349-354。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分是已经修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性如具有较高的对特定MHC-肽复合物的亲和力的TCR。在一些实施方案中，定向进化是通过展示方法实现的，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)Proc Natl AcadSci U S A,97,5387-92)、噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示途径涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，野生型TCR可以用作模板以用于产生诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基被突变，并且选择具有所需改变的特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于产生或生成目标TCR的靶多肽的肽是已知的或可以由熟练技术人员容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生TCR或抗原结合部分的肽可以基于目标靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用本领域技术人员已知的计算机预测模型鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics 17(12):1236-1237)和SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods inMolecular Biology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的约39％-46％中表达，并因此代表用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
使用计算机预测模型的HLA-A0201结合基序以及蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点是本领域技术人员已知的。用于预测MHC I类结合位点的此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR bindingsites.BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction.，Immunoinformatics Methods in Molecular Biology,第409(1)卷:75-93 2007)。
在一些实施方案中，所述TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白质或其突变形式(其中一种或多种特性(如结合特征)已经被改变)。在一些实施方案中，TCR可以来源于各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，所述TCR呈在细胞的表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，所述TCR是全长TCR。在一些实施方案中，所述TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，所述TCR是二聚体TCR(dTCR)。在一些实施方案中，所述TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，所述TCR确实含有对应于胞质序列的序列。在一些实施方案中，所述TCR能够与CD3形成TCR复合物。在一些实施方案中，任何TCR(包括dTCR或scTCR)可以与在T细胞的表面上产生活性TCR的信号传导结构域连接。在一些实施方案中，所述TCR在细胞的表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽(其中对应于TCRα链可变区序列的序列与对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)和第二多肽(其中对应于TCRβ链可变区序列的序列与对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端融合)，所述第一和第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚αβTCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键不存在于天然TCR中。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。在一些实施方案中，所述TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链(含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至恒定α结构域C末端的第一二聚化基序)和TCRβ链(包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至恒定β结构域C末端的第一二聚化基序)，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在第一二聚化基序的氨基酸与第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将TCRα链与TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，TCR是scTCR。通常，可以使用本领域技术人员已知的方法产生scTCR。参见例如Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)90 3830(1993)；国际公开PCT号WO 96/13593、WO 96/18105、WO 99/60120、WO 99/18129、WO 03/020763、WO 2011/044186；和Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进TCR链的缔合(参见，例如，国际公开PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C-末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如国际公开的PCT号WO 99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有经由肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开的PCT号WO 99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段、由对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成的第二区段(融合至对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端)和将第一区段的C末端连接至第二区段的N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与α链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的α链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列β链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的β链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR含有第一区段(其由与β链细胞外恒定结构域序列的N末端融合的TCRβ链可变区序列构成)和第二区段(其由与序列α链细胞外恒定和跨膜序列的N末端融合的α链可变区序列构成)以及任选地接头序列(其将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端)。
在一些实施方案中，scTCR的连接所述第一和第二TCR区段的接头可以是能够形成单多肽链同时保留TCR结合特异性的任何接头。在一些实施方案中，接头序列可例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA代表氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，所述第一和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越所述第一区段的C末端与所述第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不能太长以阻断或减少所述scTCR与所述靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有为或为约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸，并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:22)。在一些实施方案中，所述接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:23)
在一些实施方案中，scTCR含有共价二硫键，其将α链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链的恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键。
在含有引入的链间二硫键的dTCR或scTCR的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，用形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸取代另一残基，如取代丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成引入的二硫键。TCR的示例性非天然二硫键描述于已公开的国际PCT号WO 2006/000830中。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合片段对靶抗原以平衡结合常数展现出亲和力，所述平衡结合常数在或在约10-5与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到合适的表达载体中。所述表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕罗奥图)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，可以使用标准重组DNA技术来制备所述重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列，如转录和翻译起始和终止密码子，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌，植物或动物)的类型具特异性，酌情并考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，载体可以含有非天然启动子，其可操作地连接至编码TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。还考虑了熟练技术人员已知的其他启动子。
在一些实施方案中，在获得T细胞克隆后，将TCRα和β链分离并克隆到基因表达载体中。在一些实施方案中，TCRα和β基因通过小核糖核酸病毒2A核糖体跳跃肽连接，使得两条链共表达。在一些实施方案中，TCR的遗传转移是通过逆转录病毒或慢病毒载体或通过转座子完成(参见例如Baum等人(2006)Molecular Therapy:The Journal of the AmericanSociety of Gene Therapy.13:1050-1063；Frecha等人(2010)Molecular Therapy:TheJournal of the American Society of Gene Therapy.18:1748-1757；和Hackett等人(2010)Molecular Therapy:The Journal of the American Society of GeneTherapy.18:674-683。
在一些实施方案中，为了产生编码TCR的载体，将α和β链从表达目标TCR的T细胞克隆分离的总cDNA进行PCR扩增，并将其克隆到表达载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆到同一载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆到不同的载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如慢病毒)载体中。
3.嵌合自身抗体受体(CAAR)
在一些实施方案中，重组受体是嵌合自身抗体受体(CAAR)。在一些实施方案中，CAAR对自身抗体具有特异性。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞(例如工程化以表达CAAR的T细胞)可以用于特异性地结合至并杀伤表达自身抗体的细胞，而不是表达正常抗体的细胞。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以用于治疗与自身抗原的表达相关的自身免疫性疾病，例如自身免疫性疾病。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以靶向最终产生自身抗体并在其细胞表面上展示所述自身抗体的B细胞，将这些B细胞标记为治疗干预的疾病特异性靶标。在一些实施方案中，CAAR表达细胞可以用于通过使用抗原特异性嵌合自身抗体受体靶向引起疾病的B细胞，有效靶向和杀伤自身免疫性疾病中的致病性B细胞。在一些实施方案中，重组受体是CAAR，例如美国专利申请公开号US 2017/0051035中所述的任何一种。
在一些实施方案中，CAAR包含自身抗体结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导区域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含主要信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区域包含次级或共刺激信号传导区域(次级细胞内信号传导区域)。
在一些实施方案中，自身抗体结合结构域包含自身抗原或其片段。自身抗原的选择可以取决于所靶向的自身抗体的类型。例如，所述自身抗原的选择可能是由于其识别与特定疾病状态(例如自身免疫性疾病，例如自身抗体介导的自身免疫性疾病)相关的靶细胞(例如B细胞)上的自身抗体。在一些实施方案中，自身免疫性疾病包括寻常型天疱疮(PV)。示例性自身抗原包括桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)和Dsg3。
4.多靶向
在一些实施方案中，细胞和方法包括多靶向策略，例如在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号WO 2014055668A1(描述激活和共刺激CAR的组合，例如，靶向单独存在于脱靶(例如正常细胞)上，但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和Fedorov等人，Sci.Transl.Medicine，5(215)(2013年12月)(描述表达激活和抑制性CAR的细胞，例如其中激活CAR结合至同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原，并且抑制性CAR结合至仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些细胞)。
例如，在一些实施方案中，所述细胞包括表达第一基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，其通常在特异性结合至由第一受体识别的抗原(例如第一抗原)后，能够诱导激活信号至所述细胞。在一些实施方案中，细胞还包括第二基因工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在特异性结合至由第二受体识别的第二抗原后，能够将共刺激信号诱导至免疫细胞。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是相同的。在一些实施方案中，第一抗原与第二抗原是不同的。
在一些实施方案中，第一和/或第二基因工程化抗原受体(例如CAR或TCR)能够诱导激活信号至所述细胞。在一些实施方案中，受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由第一受体诱导的激活涉及信号转导或细胞中蛋白质表达的变化，导致启动免疫应答(例如ITAM磷酸化)和/或启动ITAM介导的信号转导级联、形成免疫突触和/或所结合受体(例如CD4或CD8等)附近的分子的聚簇、激活一种或多种转录因子(例如NF-κB和/或AP-1)、和/或诱导因子(例如细胞因子)的基因表达、增殖和/或存活。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括共刺激受体的细胞内信号传导结构域或区域，所述共刺激受体例如CD28、CD137(4-1BB)、OX40和/或ICOS。在一些实施方案中，第一和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，第一受体含有CD28共刺激信号传导区域，并且第二受体含有4-1BB共刺激信号传导区域，或反之亦然。
在一些实施方案中，第一和/或第二受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，第一受体含有包含ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域，并且第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与在相同细胞中诱导的激活信号组合的共刺激信号是导致免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答例如为稳健且持续的免疫应答，例如增加的基因表达，细胞因子和其他因子的分泌，以及T细胞介导的效应子功能(如细胞杀伤)。
在一些实施方案中，单独的第一受体的连接和单独的第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一个受体，则细胞变得耐受抗原或对抗原无应答，或被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或实现效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接多个受体时，如在遇到表达第一和第二抗原的细胞时，实现所需应答，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或执行免疫效应子功能(如靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示的。
在一些实施方案中，两种受体分别将激活和抑制信号诱导至细胞，使得一种受体与其抗原的结合激活细胞或诱导应答，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导了抑制或减弱所述应答的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。例如，可以使用这种策略，其中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合至在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方案中，多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达，所述表达为瞬时表达(例如，在与基因工程化相关的刺激后)或永久表达。在此类情况下，通过需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，可以改善特异性、选择性和/或功效。
在一些实施方案中，多种抗原(例如第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或疾病或病症上(例如在癌细胞上)表达。在一些方面，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(例如正常或未患病细胞或组织，和/或工程化细胞本身)上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的应答，实现特异性和/或功效。
B.用于基因工程的细胞和细胞的制备
表达受体的细胞和通过所提供的方法给予的细胞是工程化细胞。基因工程通常包括将编码重组或工程化组分的核酸例如通过逆转录病毒转导、转染或转化而引入含有细胞的组合物中。
在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
细胞通常是真核细胞，例如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。细胞通常是原代细胞如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些原代细胞。在一些实施方案中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于待治疗的受试者，细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现有技术，所述细胞是多能和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞、制备、加工、培养和/或将它们工程化，并在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一受试者中。
在T细胞和/或CD4+和/或CD8+ T细胞的亚型和亚群中，有幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)，效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关不变T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助细胞T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。
在一些实施方案中，所述细胞是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程引入的一种或多种核酸，从而表达此类核酸的重组或基因工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的如自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入编码转基因受体如CAR的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如从受试者获得或来源于受试者的生物样品)分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。所述生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。
在一些方面，细胞从其中衍生或分离的样品是血液或血液衍生的样品，或者是或源自单采术或白细胞分离术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如过继细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，细胞源自于细胞系，例如，T细胞系。在一些实施方案中，细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性)分离细胞。
在一些例子中，来自受试者的循环血液的细胞例如通过单采术或白细胞分离术获得。在一些方面，所述样品含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞，例如以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或介质中以用于随后的加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述细胞。在一些实施方案中，所述洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通”离心机(例如，Cobe2991细胞加工器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将所述细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如像不含Ca++/Mg++的PBS)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将所述细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，分离方法包括基于细胞中一种或多种特定分子(如表面标记，例如表面蛋白、细胞内标记或核酸)的表达或存在来分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，所述分离包括基于所述细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。
所述分离不需要导致100％富集或去除特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。同样地，特定类型的细胞(如表达标记的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要导致所有此类细胞的完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经受另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记具特异性)一起孵育。同样地，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时阳性选择多种细胞类型。
例如，在一些方面，T细胞的特定亚群，如对一种或多种表面标记呈阳性或高水平表达的细胞(例如CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞)通过阳性或阴性选择技术来分离。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)阳性选择CD3+,CD28+T细胞。
在一些实施方案中，通过阳性选择针对特定细胞群富集或者通过阴性选择针对特定细胞群耗尽来进行分离。在一些实施方案中，通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成阳性或阴性选择，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达或以相对较高水平(标记高)(标记+)的一种或多种表面标记特异性结合。
在一些实施方案中，通过阴性选择在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞，如CD14)上表达的标记，将T细胞与PBMC样品分离。在一些方面，CD4+或CD8+选择步骤用于分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记的阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分类成亚群。
在一些实施方案中，如通过基于与相应子群体相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中枢记忆、效应子记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；Wang等人。(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含TCM的CD8+T细胞与CD4+T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。可以例如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD 127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于对表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，通过表达CD4、CD14、CD45RA的细胞的耗尽和表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行富含TCM细胞的CD8+群体的分离。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依次进行。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于生成CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在特定例子中，PBMC样品或其他白细胞样品进行CD4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分。然后所述阴性级分基于CD14和CD45RA或CD19的表达进行阴性选择，并基于中枢记忆T细胞(如CD62L或CCR7)的标记特征进行阳性选择，其中以任何顺序进行所述阳性和阴性选择。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+T辅助细胞分类为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞是CD62L+和CD45RO+。在一些实施方案中，效应CD4+细胞是CD62L-和CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合，以允许细胞分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis ResearchProtocols,第2卷:Cell Behavior In Vitro and In Vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如像Dynalbeads或MACS珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。
在一些实施方案中，所述磁性颗粒或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday,美国专利号4,452,773和在欧洲专利说明书EP 452342 B(将其通过引用特此并入)中描述的那些。胶体大小的颗粒，如在Owen美国专利号4,795,698以及Liberti等人,美国专利号5,200,084中描述的那些是其他例子。
所述孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将所述样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步加工或经受另外的分离步骤。
在某些实施方案中，所述磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒通过对一种或多种标记具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，并且然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，所述磁响应颗粒保持附着于所述细胞，所述细胞随后被孵育，培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附着于所述细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，从所述细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争的非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是经由磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本)。磁激活细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择附着有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，MACS以这样的模式操作，其中在施加外部磁场之后依次洗脱非靶标和靶标种类。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，所述非靶细胞被标记并从异质细胞群中耗尽。
在某些实施方案中，使用这样的系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、加工、孵育、培养和/或制备步骤中的一种或多种。在一些方面，所述系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号WO2009/072003或美国专利申请公开号US 20110003380 A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动或可编程方式进行分离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、评估其结果和/或调整。
在一些方面，使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)进行所述分离和/或其他步骤，例如以用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上自动分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制所述仪器的所有部件并指示所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，所述CliniMACS系统使用抗体偶联的可磁化颗粒，其在无菌，无热原的溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤所述细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞加工联合体，其允许通过离心自动化洗涤和分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，其通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成细胞养殖室，其实现细胞培养方案例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见，例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660,Terakura等人(2012)Blood.1:72–82,和Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞在流体流中载携。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分类收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(MEMS)芯片结合基于FACS的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群(参见例如，国际专利申请公开号WO 2010/033140，Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)J Biophoton.1(5):355–376)。在两种情况下，细胞可以用多种标记来标记，允许以高纯度分离明确定义的T细胞子集。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，冷冻保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，所述冷冻和后续解冻步骤去除所述细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将所述细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后将其用培养基1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，在基因工程化之前或与其相连地孵育和/或培养细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。在一些实施方案中，在刺激条件或刺激剂的存在下孵育所述组合物或细胞。这些条件包括针对以下而设计的那些条件：用于诱导群体中细胞的增殖、扩增、激活和/或存活的条件，用于模拟抗原暴露和/或用于引发细胞进行基因工程化，如以引入重组抗原受体。
条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。
在一些实施方案中，刺激条件或药剂包括一种或多种药剂(例如配体)，其能够激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域。在一些方面，所述药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可包括抗体如对于TCR具有特异性的抗体，例如抗CD3。在一些实施方案中，刺激条件包括一种或多种药剂例如配体，其能够刺激共刺激受体，例如抗CD28。在一些实施方案中，这种药剂和/或配体可结合至固体支持物如珠和/或一种或多种细胞因子。任选地，扩增方法可进一步包括向培养基中加入抗CD3和/或抗CD28抗体(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，孵育是根据多种技术来进行，例如以下文献中所述的那些技术：授予Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660,Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方法扩增T细胞：向培养起始组合物中加入饲养细胞(如非分裂外周血单核细胞(PBMC))(例如，使得所得细胞群含有至少约5、10、20或40种或更多种PBMC饲养细胞，以使初始群体中的每种T淋巴细胞进行扩增)；以及孵育培养物(例如，持续足以扩增T细胞数量的时间)。在一些方面，非分裂饲养细胞可包含γ辐射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线照射PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加T细胞群之前将饲养细胞加入到培养基中。
在一些实施方案中，所述刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常在或约在37摄氏度。任选地，所述孵育还可以包括添加非分裂EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线照射LCL。在一些方面，所述LCL饲养细胞以任何合适的量(如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。
在实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞获得抗原特异性T细胞如抗原特异性CD4+和/或CD8+ T细胞。例如，可通过从感染的受试者分离T细胞并用相同的抗原在体外刺激细胞，针对巨细胞病毒抗原生成抗原特异性T细胞系或克隆。
C.用于基因工程的载体和方法
用于引入基因工程化组分例如重组受体(例如CAR或TCR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔来进行。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒粒子(如例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移至细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29(11):550–557)。
在一些实施方案中，所述逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括源自于任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多说明性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；以及Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505中。
在一些实施方案中，经由电穿孔将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，经由转座将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传材料的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,纽约州纽约中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染、钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他途径和载体是描述于例如以下文献中的那些：国际专利申请公开号WO 2014055668和美国专利号7,446,190。
在一些实施方案中，细胞例如T细胞可在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)进行转染。例如，这种用于引入所需受体的基因的转染可以用任何合适的逆转录病毒载体进行。然后可以使基因修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如CD3/CD28刺激物)，并随后用第二种类型的刺激物例如经由从头引入的受体进行刺激。所述第二种类型的刺激物可包括肽/MHC分子形式的抗原刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如通过识别受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigen receptors for T-cellbased therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66或Barrett等人,Chimeric AntigenReceptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine第65卷:333-347(2014)。
在一些情况下，可以使用不需要激活细胞(例如T细胞)的载体。在一些这样的情况下，可以在激活之前选择和/或转导细胞。因此，可以在培养细胞之前或之后将细胞工程化，并且在一些情况下在培养的同一时间或至少一部分期间将细胞工程化。
在一些方面，进一步工程化所述细胞以促进细胞因子或其他因子的表达。另外的用于引入的核酸(例如基因)包括如通过促进所转移细胞的活力和/或功能改善疗法功效的那些；提供用于选择和/或评估细胞的遗传标记如以在体内评价存活或定位的基因；例如通过使细胞对体内阴性选择易感来提高安全性的基因，如以下文献中所述：Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)；还参见Lupton等人的PCT/US 91/08442和PCT/US 94/05601的公开案，所述公开案描述了使用源自融合显性的阳性选择标记与阴性选择标记的双功能可选融合基因。参见例如，Riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
在一些情境下，刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能对受试者有毒。因此，在一些情境下，经工程化的细胞包括导致所述细胞在体内(如在过继免疫疗法中给予时)对阴性选择易感的基因区段。例如，在一些方面，工程化所述细胞，使得它们可以由于给予它们的受试者的体内状况的改变而被消除。所述阴性选择性表型可以由赋予对所给予的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因(Wigler等人,Cell 2:223,1977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因；细菌胞嘧啶脱氨酶(Mullen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33(1992))。
在一些实施方案中，单一启动子可以指导RNA的表达，所述RNA在单个开放阅读框(ORF)中含有两个或三个基因(例如，编码参与调节代谢途径的分子和编码重组受体)，所述基因由编码自切割肽(例如2A序列)或蛋白酶识别位点(例如弗林蛋白酶(furin))的序列彼此分开。因此，所述ORF编码单个多肽，其在翻译期间(在2A的情况下)或翻译后被加工成单个蛋白质。在一些情况下，肽(如T2A)可引起核糖体跳过2A元件C末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致2A序列末端与相邻下游肽之间分开(参见，例如，de Felipe,Genetic Vaccinesand Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。许多2A元件是已知的。可以用于本文公开的方法和核酸中的2A序列的例子包括但不限于来自口蹄疫病毒的2A序列(F2A，例如SEQ ID NO:21)、来自马鼻炎A病毒的2A序列(E2A，例如SEQ ID NO:20)、来自明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)的2A序列(T2A，例如SEQ ID NO:6或17)和来自猪捷申病毒(porcine teschovirus)-1的2A序列(P2A，例如SEQ ID NO:18或19)，如美国专利公开号20070116690中所述。
III.组合物和配制品
在一些实施方案中，所述细胞疗法是作为组合物或配制品来提供，例如药物组合物或配制品。这种组合物可以根据所提供的方法如在预防或治疗疾病、病症和障碍或检测、诊断和预后方法中使用。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些实施方案中，用药学上可接受的载体配制T细胞疗法(如工程化T细胞(例如CAR T细胞))。在一些方面，载体的选择部分取决于特定细胞和/或给予方法。因此，存在多种合适的配制品。例如，所述药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。所述防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，缓冲剂被包括在所述组合物中。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。所述缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；21st ed.(2005年5月1日)中。
配制品可以包括水溶液。所述配制品或组合物还可含有可用于用细胞预防或治疗的特定适应症、疾病或病症的多于一种活性成分，包括其中活性与细胞互补和/或各自的活性不会互相造成不良影响的一种或多种活性成分。此类活性成分以有效用于既定目的的量以合适的方式组合存在。因此，在一些实施方案中，药物组合物还包括其他药物活性药剂或药物，例如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。
在一些实施方案中，药物组合物包含有效治疗或预防疾病或病症的量(例如治疗有效量或预防有效量)的细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给予，取决于病症，重复所述治疗直至出现所需疾病症状的抑制。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注给予所述组合物、通过多次推注给予所述组合物或通过连续输注给予所述组合物来递送。
可以使用标准给予技术、配制品和/或装置来给予所述细胞。提供了用于储存和给予所述组合物的配制品和装置(如注射器和小瓶)。关于细胞，给药可以是自体的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以获得自一名受试者，并且给予至同一受试者或不同的相容受试者。外周血衍生的免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以经由局部注射给予，包括导管给药、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给药。在给予治疗性组合物(例如，含有遗传修饰的免疫应答细胞的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予的那些。在一些实施方案中，肠胃外给予药剂或细胞群。如本文所用术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给予。在一些实施方案中，使用通过静脉内、腹膜内或皮下注射的外周全身递送向受试者给予药剂或细胞群。
在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，其在一些方面可以缓冲至选择的pH。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物制备起来更容易。另外地，液体组合物稍微更方便给予，特别是通过注射。在另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，其可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过将细胞掺入溶剂中来制备，例如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。所述组合物也可以是冻干的。所述组合物可以含有辅助物质，如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、调味剂、颜料等，这取决于给予途径和所需的制剂。在一些方面，可以参考标准文本来制备合适的制剂。
可以添加各种增强所述组合物的稳定性和无菌性的添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。防止微生物的作用可以通过不同的抗细菌和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸等)来确保。通过使用延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸铝和明胶)可以实现可注射药物形式的延长吸收。
用于体内给予的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌。
对于疾病的预防或治疗，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、一种或多种药剂的类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、给予药剂或细胞用于预防性目的还是治疗性目的、先前疗法、受试者的临床病史和对药剂或细胞的反应、以及主治医师的决断。在一些实施方案中，所述组合物适合一次或在一系列治疗中给予受试者。
IV.治疗和方法
在一些实施方案中，所提供的方法与细胞疗法的给予相关，例如用于治疗包括各种肿瘤的疾病或病症。所述方法包括给予表达重组受体的工程化细胞，所述重组受体被设计为识别和/或特异性地结合至与疾病或病症相关的分子并导致应答，如在结合至这种分子时针对此类分子的免疫应答。受体可包括嵌合受体例如嵌合抗原受体(CAR)和其他转基因抗原受体，包括转基因T细胞受体(TCR)，包括本文所述的任何受体。在一些实施方案中，在所提供的方法之后进行在受试者体内再扩增重组免疫细胞的方法，如通过破坏受试者中的现在存在或现在可能存在或过去存在或过去可能存在工程化细胞的区。在一些实施方案中，所述区可以是含有由工程化细胞识别的抗原表达细胞的区，如病灶(例如肿瘤)或病灶的微环境(例如肿瘤微环境)。
在一些实施方案中，将一定剂量的表达重组受体的细胞给予至受试者以治疗或预防疾病、病症和障碍，包括癌症。在一些实施方案中，将细胞、群体和组合物给予至受试者或患者，所述受试者或患者患有要例如通过过继细胞疗法(例如过继T细胞疗法)治疗的特定疾病或病症。在一些实施方案中，将细胞和组合物(例如在孵育和/或其他处理步骤后的工程化组合物和生产结束时(end-of-production)的组合物)给予至受试者，例如患有疾病或病症或具有疾病或病症的风险的受试者。在一些方面，所述方法由此治疗疾病或病症(例如，改善其一种或多种症状)，例如通过减轻表达由工程化T细胞识别的抗原的癌症中的肿瘤负荷来治疗。
用于过继细胞疗法的细胞的给予方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev ClinOncol.8(10):577-85)。参见例如Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
所治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病状况或障碍的病因学相关和/或参与其中，例如导致、加剧这种疾病、病症或障碍或以其他方式参与其中。示例性疾病和病症可以包括与恶性肿瘤或细胞转化(例如癌症)、自身免疫性疾病或炎性疾病或例如由细菌、病毒或其他病原体引起的感染性疾病相关的疾病或病症。上文描述了示例性抗原，其包括与可以治疗的各种疾病和病症相关的抗原。在具体实施方案中，所述嵌合抗原受体或转基因TCR与和所述疾病或病症相关的抗原特异性结合。
疾病、病症和障碍包括肿瘤，包括实体瘤、血液学恶性肿瘤和黑色素瘤，并且包括局部和转移性肿瘤；感染性疾病，如病毒或其他病原体的感染，例如HIV、HCV、HBV、CMV和寄生虫病；以及自身免疫和炎性疾病。在一些实施方案中，疾病或病症是肿瘤、癌症、恶性肿瘤、肿疡或其他增殖性疾病或障碍。此类疾病包括但不限于白血病、淋巴瘤(例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤、急性髓样白血病、多发性骨髓瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性B细胞淋巴瘤、B细胞恶性肿瘤)、结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、皮肤癌、黑色素瘤、骨癌和脑癌、卵巢癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺腺癌、霍奇金淋巴瘤、宫颈癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤因肉瘤、髓母细胞瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。在一些实施方案中，受试者患有急性淋巴母细胞白血病(ALL)。在一些实施方案中，受试者患有非霍奇金淋巴瘤。
在一些实施方案中，疾病或病症是感染性疾病或病症，例如但不限于病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(CMV)、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)、腺病毒、BK多瘤病毒。在一些实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫性或炎性疾病或病症，如关节炎(例如类风湿性关节炎(RA))、I型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎性肠病、银屑病、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病、克罗恩病、多发性硬化症、哮喘和/或与移植相关的疾病或病症。
在一些实施方案中，与疾病或障碍相关的抗原是或包括选自以下的抗原：αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CC基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、表皮生长因子蛋白(EGFR)、截短的表皮生长因子蛋白(tEGFR)、III型表皮生长因子受体突变(EGFRvIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样5(FCRL5；也称为Fc受体同源物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、胎儿乙酰胆碱受体、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Ra)、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富含亮氨酸的重复序列的8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、间皮素、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、天然杀伤组2成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、优先表达抗原黑色素瘤(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶像孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性抗原或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如许多已知B细胞标记中的任何一种。在一些实施方案中，受体靶向的抗原是以下项或包括以下项：CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。在一些实施方案中，抗原是或包括病原体特异性抗原或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，抗原是病毒抗原(例如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从接受细胞疗法的受试者或从来源于这种受试者的样品中分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，所述细胞来源于需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和加工后将所述细胞给予同一受试者。
在一些实施方案中，细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从将要接受或最终接受细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在这样的实施方案中，然后将所述细胞给予至相同物种的不同受试者，例如第二受试者。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者与所述第一受试者表达相同的HLA类别或超类型。
所述细胞可以通过任何合适的方式给予，例如通过推注输注，通过注射例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的单次推注给药来给予。在一些实施方案中，给定剂量通过细胞的多次推注给药例如在不超过3天的时间段内来给予，或通过细胞的连续输注给药。
为了预防或治疗疾病，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、细胞是否针对预防或治疗目的而被给予、先前的治疗、受试者的临床病史和对细胞的应答以及主治医师的决断。在一些实施方案中，所述组合物和细胞适合一次或在一系列治疗中给予受试者。
在一些实施方案中，所述细胞作为组合治疗的一部分给予，如与另一种治疗性干预如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂)同时给予或以任何顺序依次给予。在一些实施方案中，所述细胞与一种或多种另外的治疗剂共同给予或与另一种治疗性干预联合给予(同时或以任何顺序依次给予)。在一些情境下，将所述细胞与另一种疗法在时间上足够接近地共同给予，使得所述细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的效果，或反之亦然。在一些实施方案中，所述细胞在一种或多种另外的治疗剂之前给予。在一些实施方案中，所述细胞在一种或多种另外的治疗剂之后给予。在一些实施方案中，一种或多种另外的药剂包括细胞因子(例如IL-2)以例如增强持久性。在一些实施方案中，所述方法包括给予化学治疗剂。在一些情况下，此类治疗剂与所提供的用于破坏病灶的方法中使用的药剂不同。
在一些实施方案中，所述方法包括在给予之前给予化学治疗剂例如调节化学治疗剂，例如以便减轻肿瘤负荷。
在一些方面，使用免疫清除(例如，淋巴细胞清除)疗法的预处理受试者可以改善过继细胞疗法(ACT)的效果。
因此，在一些实施方案中，所述方法包括在开始细胞疗法之前向受试者给予预处理剂，例如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，例如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在开始细胞疗法之前至少2天(例如至少3、4、5、6或7天)，向受试者给予预处理剂。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前不超过7天(例如不超过6、5、4、3或2天)，向受试者给予预处理剂。
在一些实施方案中，将所述受试者用在或在约20mg/kg与100mg/kg之间、如在或在约40mg/kg与80mg/kg之间的剂量的环磷酰胺进行预处理。在一些方面，将所述受试者用60mg/kg或约60mg/kg的环磷酰胺进行预处理。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺以单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，环磷酰胺每天给予一次，持续一天或两天。
在一些实施方案中，当淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨时，向所述受试者给予剂量在或在约1mg/m2与100mg/m2之间、如在或在约10mg/m2与75mg/m2之间、15mg/m2与50mg/m2之间、20mg/m2与30mg/m2之间、或24mg/m2与26mg/m2之间的氟达拉滨。在一些情况下，向所述受试者给予25mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，氟达拉滨可以按单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天给予氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可包括任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的环磷酰胺以及任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，在第一剂量或后续剂量之前，向受试者给予60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3至5次剂量的25mg/m2氟达拉滨。
在一些实施方案中，在给予细胞后，例如通过许多已知方法中的任一种测量工程化细胞群的生物学活性。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用本领域已知的任何合适的方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在一些实施方案中，通过测定一种或多种细胞因子(例如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量细胞的生物学活性。在一些方面，通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减少)来测量生物活性。
在一些实施方案中，将工程化细胞以任何数量的方式进一步修饰，从而增加其治疗或预防功效。例如，可以将所述群体表达的工程化CAR或TCR直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物(例如，CAR或TCR)与靶向部分缀合的实践在本领域是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting 3:111(1995)和美国专利5,087,616。
A.给药
在一些实施方案中，药物组合物包含有效治疗或预防疾病或病症的量(例如治疗有效量或预防有效量)的细胞。在一些实施方案中，组合物包括有效减少疾病或病症负荷的量的细胞。
在过继细胞疗法的背景下，给定“剂量”的给予包括以单一组合物和/或单次不间断给药的方式(例如以单次注射或连续输注的方式)给予给定量或数量的细胞，并且还包括在不超过3天的指定时间段内以在多个单独组合物或输注中提供的分割剂量的方式给予给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，剂量是指定数量的细胞的单次或连续给药，在单个时间点给予或开始。然而，在一些情况下，剂量在不超过三天的时间段内以多次注射或输注的方式给予，如每天一次持续三天或两天或者通过在一天的时间内多次输注。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞以单一药物组合物给予。在一些实施方案中，所述剂量的细胞以共同含有第一剂量的细胞的多种组合物给予。
术语“分割剂量”是指分割的剂量，使其在超过一天的时间内给予。这种类型的给药包括在本方法中并且被认为是单一剂量。
因此，在一些方面，所述剂量可作为分割剂量给予。例如，在一些实施方案中，剂量可以在2天或3天内给予受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量并在第二天给予剩余的75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天给予33％的第一剂量，并且在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过给予多个组合物或溶液(例如第一和第二，任选地更多)来给予，各自含有所述剂量的一些细胞。在一些方面，任选地在一定时间段内，分开地或独立地给予多个组合物，每个组合物含有不同细胞群和/或细胞亚型。例如，细胞群或细胞亚型可以分别包括CD8+和CD4+T细胞，和/或分别包含富集CD8+和CD4+的群体，例如CD4+和/或CD8+ T细胞，其各自单独地包括基因工程化以表达重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述剂量的给予包括给予第一组合物，其包含一定剂量的CD8+ T细胞或一定剂量的CD4+ T细胞，以及给予第二组合物，其包含另一剂量的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，组合物或剂量的给予(例如多个细胞组合物的给予)涉及分开给予所述细胞组合物。在一些方面，分开给予是同时或以任何顺序依次进行。在一些实施方案中，所述剂量包括第一组合物和第二组合物，并且所述第一组合物和第二组合物的给予相隔0至12小时，相隔0至6小时或相隔0至2小时。在一些实施方案中，第一组合物的给予的启动和第二组合物的给予的启动相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在一些实施方案中，第一组合物的给予的启动和/或完成以及第二组合物的给予的完成和/或启动相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
在一些组合物中，第一组合物(例如所述剂量的第一组合物)包含CD4+ T细胞。在一些组合物中，第一组合物(例如所述剂量的第一组合物)包含CD8+ T细胞。在一些实施方案中，第一组合物是在第二组合物之前给予。
在一些实施方案中，细胞的剂量或组合物包括表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或CD4+细胞与CD8+细胞的定义的或目标比率，所述比率任选地为约1:1，或者在大约1:3与大约3:1之间，例如大约1:1。在一些方面，具有目标或所需比率的不同细胞群(例如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如1:1)的组合物或剂量的给予涉及给予含有一个所述群体的细胞组合物，和随后给予包含另一所述群体的单独细胞组合物，其中所述给予是以或大约以目标或所需比率来进行。
在一些实施方案中，可以向受试者给予一个或多个连续或后续剂量的细胞。在一些实施方案中，在开始给予第一剂量的细胞后大于或大于约7天、14天、21天、28天或35天给予连续或后续剂量的细胞。细胞的连续或后续剂量可以大于、大致等于或小于第一剂量。在一些实施方案中，可以重复T细胞疗法的给予(如第一和/或第二细胞剂量的给予)。
在一些实施方案中，根据所提供的方法将一剂细胞给予受试者。在一些实施方案中，剂量的大小或时间安排根据受试者的特定疾病或病症确定。熟练技术人员可以熟练地根据经验确定用于特定疾病的剂量的大小或时间安排。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在某些实施方案中，向所述受试者给予约10万至约1000亿个细胞和/或每公斤受试者体重所述细胞量的范围的细胞或单独细胞亚型群体，如例如10万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)、100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下，约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或这些范围之间的任何值和/或每公斤受试者体重。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。在一些实施方案中，这些值是指重组受体表达细胞的数量；在其他实施方案中，它们是指给予的T细胞或PBMC或总细胞的数量。
例如，在一些实施方案中，如果受试者是人，那么剂量包括少于约5x 108个总重组受体(例如CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在约1x 106到5x 108个此类细胞的范围内，例如2x 106、5x 106、1x 107、5x 107、1x 108或5x 108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。
在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至5x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，为或为约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或者为或为约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括使用一定剂量的细胞，所述剂量包含以下细胞数量：至少或至少约1x 105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x 106、至少或至少约1x 107、至少或至少约1x 108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如CAR+)细胞。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至5x 108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、为或为约5x 105至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、或者为或为约1x 106至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至5x 108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、为或为约5x 105至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、或者为或为约1x 106至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，剂量的T细胞包括CD4+ T细胞、CD8+ T细胞或CD4+和CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，例如，如果受试者是人，那么所述剂量的CD8+ T细胞(包括在剂量中包括CD4+和CD8+ T细胞)包括在约1x 106与5x 108个之间的总重组受体(例如CAR)表达CD8+细胞，例如，在约5x 106至1x 108个此类细胞的范围内，例如1x 107、2.5x 107、5x107、7.5x 107、1x 108或5x 108个总此类细胞，或在任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，给予患者多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞剂量包括给予为或为约1x 107至0.75x 108个表达重组受体的总CD8+ T细胞、1x107至2.5x 107个表达重组受体的总CD8+ T细胞、为或为约1x 107至0.75x 108个表达重组受体的总CD8+ T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的剂量包含给予或给予约1x 107、2.5x 107、5x 107、7.5x 107、1x 108或5x 108个总重组受体表达CD8+ T细胞。
在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，为或为约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或为或为约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括给予一定剂量的细胞，所述剂量包含以下细胞数量：至少或约至少1x 105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x 106个、至少或约至少1x 107个、至少或约至少1x 108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如CAR+)细胞。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至1x 108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、为或为约5x 105至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、或为或为约1x106至1x 107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包含给予一定剂量，所述剂量包含以下细胞数量：为或为约1x 105至1x 108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、为或为约5x 105至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、或为或为约1x 106至1x 107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在某些实施方案中，向所述受试者给予约10万至约1000亿个细胞和/或每公斤受试者体重所述细胞量的范围的细胞或单独细胞亚型群体，如例如10万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)、100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下，约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或这些范围之间的任何值和/或每公斤受试者体重。剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。在一些实施方案中，这些值是指重组受体表达细胞的数量；在其他实施方案中，它们是指给予的T细胞或PBMC或总细胞的数量。
在一些实施方案中，细胞疗法包括给予包含许多细胞的剂量，所述剂量为至少或至少约0.1x 106个细胞/kg受试者体重、0.2x 106个细胞/kg、0.3x 106个细胞/kg、0.4x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg、1x 106个细胞/kg、2.0x106个细胞/kg、3x 106个细胞/kg或5x 106个细胞/kg或至少约0.1x 106个细胞/kg、0.2x 106个细胞/kg、0.3x 106个细胞/kg、0.4x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg、1x 106个细胞/kg、2.0x 106个细胞/kg、3x 106个细胞/kg或5x 106个细胞/kg，或者为0.1x 106个细胞/kg、0.2x 106个细胞/kg、0.3x 106个细胞/kg、0.4x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg、1x 106个细胞/kg、2.0x 106个细胞/kg、3x 106个细胞/kg或5x 106个细胞/kg或约0.1x 106个细胞/kg、0.2x 106个细胞/kg、0.3x106个细胞/kg、0.4x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg、1x 106个细胞/kg、2.0x 106个细胞/kg、3x 106个细胞/kg或5x 106个细胞/kg。
在一些实施方案中，细胞疗法包括给予包含许多细胞的剂量，所述剂量在或在约0.1x 106个细胞/kg受试者体重和1.0x 107个细胞/kg之间、在或在约0.5x 106个细胞/kg和5x 106个细胞/kg之间、在或在约0.5x 106个细胞/kg和3x 106个细胞/kg之间、在或在约0.5x 106个细胞/kg和2x 106个细胞/kg之间、在或在约0.5x 106个细胞/kg和1x 106个细胞/kg之间、在或在约1.0x 106个细胞/kg受试者体重和5x 106个细胞/kg之间、在或在约1.0x 106个细胞/kg和3x 106个细胞/kg之间、在或在约1.0x 106个细胞/kg和2x 106个细胞/kg之间、在或在约2.0x 106个细胞/kg受试者体重和5x 106个细胞/kg之间、在或在约2.0x 106个细胞/kg和3x 106个细胞/kg之间或者在或在约3.0x 106个细胞/kg受试者体重和5x 106个细胞/kg之间，每个都包含端值。
在一些实施方案中，细胞剂量包含在2x 105或约2x 105个细胞/kg和2x 106或约2x106个细胞/kg之间，如在4x 105或约4x 105个细胞/kg和1x 106或约1x 106个细胞/kg之间或在6x 105或约6x 105个细胞/kg和8x 105或约8x 105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，细胞剂量包含不超过2x 105个细胞(例如表达抗原的细胞，如表达CAR的细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x 105个细胞/kg、不超过或不超过约4x 105个细胞/kg、不超过或不超过约5x 105个细胞/kg、不超过或不超过约6x 105个细胞/kg、不超过或不超过约7x 105个细胞/kg、不超过或不超过约8x 105个细胞/kg、不超过或不超过约9x 105个细胞/kg、不超过或不超过约1x 106个细胞/kg或者不超过或不超过约2x 106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞剂量包含至少2x 105个细胞或至少约2x 105个细胞或2x 105个细胞或约2x 105个细胞(例如表达抗原的细胞，如表达CAR的细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少3x 105个细胞/kg或至少约3x 105个细胞/kg或3x 105个细胞/kg或约3x 105个细胞/kg、至少4x 105个细胞/kg或至少约4x 105个细胞/kg或4x 105个细胞/kg或约4x 105个细胞/kg、至少5x 105个细胞/kg或至少约5x 105个细胞/kg或5x 105个细胞/kg或约5x 105个细胞/kg、至少6x 105个细胞/kg或至少约6x 105个细胞/kg或6x 105个细胞/kg或约6x 105个细胞/kg、至少7x 105个细胞/kg或至少约7x 105个细胞/kg或7x 105个细胞/kg或约7x105个细胞/kg、至少8x 105个细胞/kg或至少约8x 105个细胞/kg或8x 105个细胞/kg或约8x105个细胞/kg、至少9x 105个细胞/kg或至少约9x 105个细胞/kg或9x 105个细胞/kg或约9x105个细胞/kg、至少1x 106个细胞/kg或至少约1x 106个细胞/kg或1x 106个细胞/kg或约1x106个细胞/kg或者至少2x 106个细胞/kg或至少约2x 106个细胞/kg或2x 106个细胞/kg或约2x 106个细胞/kg。
在一些实施方案中，细胞以所需剂量给予，所述所需剂量在一些方面包括所需剂量或数量的细胞或一种或多种细胞类型和/或所需比率的细胞类型。因此，在一些实施方案中，细胞剂量基于细胞总数(或每kg体重的细胞数量)和所需的单独群体或亚型的比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞剂量基于所需的单独群体中的细胞或单独细胞类型的总数(或每kg体重的细胞数量)。在一些实施方案中，剂量基于这种特征的组合，如所需的总细胞数量、所需比率和所需的单独群体中的细胞总数。
在一些实施方案中，以所需剂量的总细胞(如期望剂量的T细胞)的耐受差异或在所述耐受差异之内给予细胞的群体或亚型如CD8+和CD4+T细胞。在一些方面，所需剂量是所需细胞数量或被给予所述细胞的受试者的每单位体重的所需细胞数量(例如，细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于最小细胞数量或每单位体重的最小细胞数量。在一些方面，在以所需剂量给予的总细胞中，单独群体或亚型以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+比率)存在，例如在这种比率的一定耐受差异或误差内。
在一些实施方案中，细胞以所需剂量的一种或多种单独细胞群体或亚型的耐受差异或在所述耐受差异之内给予，如所需剂量的CD4+细胞和/或所需剂量的CD8+细胞。在一些方面，所需剂量是所需的亚型或群体的细胞数量或所需的被给予所述细胞的受试者的每单位体重的此类细胞数量(例如，细胞/kg)。在一些方面，所需剂量等于或高于最小的群体或亚型的细胞数量或每单位体重的最小的群体或亚型的细胞数量。
因此，在一些实施方案中，剂量基于所需的总细胞的固定剂量和所需比率，和/或基于所需的一种或多种单独亚型或亚群(例如，各自)的固定剂量。因此，在一些实施方案中，剂量基于所需的T细胞的固定或最小剂量和所需的CD4+与CD8+细胞的比率，和/或基于所需的CD4+和/或CD8+细胞的固定或最小剂量。
在一些实施方案中，细胞在多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比率的耐受范围下或耐受范围内给予。在一些方面，所需比率可以是特定比率或可以是一系列比率。例如，在一些实施方案中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在1:5或约1:5和5:1或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或在1:3或约1:3和3:1或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如在2:1或约2:1和1:5或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1，如5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5或者约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5)。在一些方面，耐受差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％，包括这些范围之间的任何值。
在具体实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指表达重组受体(例如，CAR)的细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指给予的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，剂量的大小基于一个或多个标准来确定，如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、尺寸或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
B.破坏和/或治疗
与给予基因工程化细胞(如重组受体表达细胞，例如CAR+ T细胞)的剂量相结合，可以使用用于破坏存在或可能存在所述细胞的区(例如病灶)和/或实现包括物理或机械操纵病灶或其部分、辐射、或者给予免疫调节剂中的一种或多种在内的治疗的任何方法，如B部分中所述的方法。在一些实施方案中，在给予基因工程化细胞后进行破坏和/或治疗。在一些实施方案中，破坏和/或治疗在给予基因工程化细胞(例如CAR-T细胞)后大于或大于约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年或更长时间进行。
在一些实施方案中，在受试者对基因工程化细胞展现出部分反应(PR)之后和/或受试者在特定时间内(例如14-28天)对基因工程化细胞没有反应之后的某个时间进行治疗和/或破坏，以改善反应结果。在某些实施方案中，治疗和/或破坏是在受试者展现出部分反应后的某个时间进行。在某些实施方案中，破坏是在受试者展现出PR之后大于或大于约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年或更长时间进行。在某些实施方案中，破坏是在受试者展现出PR之后大于或大于约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年或更长时间进行。在一些实施方案中，通过所提供的方法观察到对治疗的完全反应(CR)。在一些实施方案中，针对现有疗法或者针对基因工程化细胞(如重组受体表达细胞，例如CAR+ T细胞)受试者先前未实现缓解(如CR)。
在一些实施方案中，在所述治疗和/或破坏时或紧接所述破坏和/或治疗时之前，所述受试者在响应于基因工程化细胞的给予而缓解后已复发。在一些实施方案中，复发是在对给予基因工程化细胞(如重组受体表达细胞，例如细胞CAR+ T细胞)完全反应(CR)或PR之后的某个时间(例如1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年或更长时间)发生。在一些实施方案中，治疗和/或破坏是在复发后或者检测或观察到复发后在或在约12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或一周内进行。在某些实施方案中，治疗和/或破坏是在受试者被确定为复发或怀疑经历复发之后在或在约12小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天或一周内进行。
在一些实施方案中，当受试者的血液中可检测的工程化细胞的数量与在给予工程化细胞之后的前一时间点的受试者中相比减少时，进行治疗和/或破坏。在一些实施方案中，在当血液中可检测的T细胞疗法的细胞的数量是开始给予T细胞疗法后受试者的血液中可检测的T细胞疗法的细胞的数量峰值或最大值的少于或少于约1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍或100倍或更少时的某个时间；和/或在受试者的血液中可检测到T细胞疗法的细胞的水平峰值或最大值之后，在来自受试者的血液中可检测的T细胞疗法的细胞的数量是受试者的血液中总外周血单核细胞(PBMC)的少于10％、少于5％、少于1％或少于0.1％后的某个时间，进行治疗和/或破坏。在一些实施方案中，当血液中可检测的T细胞疗法的细胞数量比开始给予T细胞疗法后受试者血液中可检测的T细胞疗法的细胞的数量峰值或最大值少或少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％或99.9％时，进行治疗和/或破坏。
在一些实施方案中，在存在(i)少于或少于约10个工程化细胞/微升，(ii)外周血单核细胞(PBMC)总数量的少于或少于约20％、30％、40％或50％，(iii)少于或少于约1x105个工程化细胞或者(iv)少于或少于约5,000个重组受体编码DNA拷贝/微克DNA的某个时间时，进行治疗和/或破坏。
在一些实施方案中，破坏和/或治疗作为涉及单一治疗、程序或操纵的治疗方案的一部分进行。在特定实施方案中，破坏和/或治疗作为涉及多于多种治疗、程序或操纵的治疗方案的一部分进行。在某些实施方案中，治疗和/或破坏采用涉及在约一小时、约6小时、约12小时、约24小时、约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月或约6个月的治疗跨度内的多次治疗的治疗方案进行。在一些实施方案中，治疗和/或破坏采用在长度为约1分钟与约1小时之间、1小时与12小时之间、约12小时与约24小时之间、约1天与约2天之间、约1天与约5天之间、约1天与约7天之间、约1周与约4周之间、约1个月与约2个月之间的治疗跨度内的多次治疗进行。在一些实施方案中，多次治疗是在治疗跨度内每小时、每天、每隔一天、每两天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每周七次、每周八次、每周九次、每周十次、每周十一次、每周十二次、每周十三次、每周十四次、每月一次、每月二次、每月三次、每月四次、每月五次、每月六次、每月七次、每月八次、每月九次、每月十次、每月十一次、每月十二次、每月十三次、每月十四次、每两个月一次或每三个月一次进行。
在某些实施方案中，通过在治疗周期期间涉及多次治疗(或程序或操纵)的治疗方案来治疗和/或破坏所述区(例如，受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)。治疗周期是按规律的时间表重复的治疗过程。在一些实施方案中，治疗周期可以包括治疗几天，然后休息几天(即休药期)。例如，在28天治疗周期中治疗可以每天进行持续三周，然后一周不治疗，或者治疗可以在前三周每周进行五次，然后一周不治疗。在特定实施方案中，在一个或多个治疗周期中进行治疗以治疗和/或破坏病灶。治疗周期可以为至少两天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、至少14天、至少21天、至少28天、至少48天、或至少96天或更长时间。在一个实施方案中，治疗周期为28天。在各种实施方案中，治疗周期由医疗保健专业人员根据受试者的条件和需求确定。在一些实施方案中、在28天治疗周期的至少一天、至少两天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天、至少七天、至少八天、至少九天、至少十天、至少十一天、至少十二天、至少13天、至少14天、至少21天或全部28天进行治疗。
在一些实施方案中，用机械治疗和/或破坏(例如活检)治疗和/或破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)。在某些实施方案中，采用单一治疗、程序或操纵对病灶进行机械治疗和/或破坏。在特定实施方案中，机械治疗和/或破坏包括多于一种治疗、程序或操纵，例如活检。在一些实施方案中，治疗和/或破坏受试者中的多于一个病灶。
在特定实施方案中，用热疗法(例如冷冻疗法或高温疗法)治疗和/或破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)。可以根据本领域技术人员已知的对于治疗和/或破坏病灶有效的任何时间表、剂量或方法给予热疗法。在一些实施方案中，通过热疗法的单一治疗来治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，用不只是热疗法来治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，热疗法可以是冷冻消融疗法。在一些实施方案中，热疗法可以是高温疗法。在一些实施方案中，热疗法是一种将肿瘤温度升高到高于高温疗法的疗法。
在一些实施方案中，通过辐照和/或采用辐射疗法治疗和/或破坏病灶。给药是基于国际单位已知的Gray(Gy，也表示为cGy，其中100cGy＝1Gy)，并且在一个治疗环节期间递送的剂量被称为级分。例如，表面辐射疗法(SRT)的典型给药时间表可以是以300cGy剂量递送的4,500cGy(45Gy)的总剂量，总共15个级分。辐射疗法可以在数周内递送，其中在特定日期(例如，周一至周五)给予级分。替代给药时间表也用于临床实践，其包括每周2至3个级分(即，周一、周三、周五时间表)。患者的给药由熟练的临床医生包括在技术人员(例如辐射物理学家)的帮助下确定，并且患者的给药是基于受试者的病灶的大小以及年龄和健康。
在某些实施方案中，通过用辐射进行一次或多次治疗来治疗和/或破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)。在特定实施方案中，用多于一种治疗或辐射剂量来治疗和/或破坏病灶，并且总剂量为约5Gy、约10Gy、约15Gy、约20Gy、约25Gy、约30Gy、约35Gy、约40Gy、约41Gy、约42Gy、约43Gy、约44Gy、约45Gy、约46Gy、约47Gy、约48Gy,49Gy、约50Gy、约51Gy、约52Gy、约53Gy、约54Gy、约55Gy、约56Gy、约57Gy、约58Gy、约59Gy、约60Gy、约61Gy、约62Gy、约63Gy、约64Gy、约65Gy、约70Gy、约80Gy、约90Gy或约100Gy。在一些实施方案中，总剂量在约0.01Gy与约1Gy之间、约1Gy与约30Gy之间、约1Gy与约15Gy之间、约15Gy与约30Gy之间、约30Gy至约90Gy之间、约30Gy至约45Gy之间、约40Gy与约70Gy之间或约45Gy至约60Gy之间。
在一些实施方案中，通过用辐射进行两次或更多次分次治疗来治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案，分次剂量为约100cGy、约200cGy、约300cGy、约400cGy、约500cGy、约600cGy、约700cGy、约800cGy、约900cGy、约1Gy、约2Gy、约3Gy、约4Gy或约5Gy。在特定实施方案中，分次剂量在约10cGy与约100cGy之间、约100cGy与约500cGy之间、约500cGy与约1Gy或约1Gy与约5Gy之间。
在一些实施方案中，通过单一辐射治疗来治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案，单一剂量为约100cGy、约200cGy、约300cGy、约400cGy、约500cGy、约600cGy、约700cGy、约800cGy、约900cGy、约1Gy、约2Gy、约3Gy、约4Gy或约5Gy。在特定实施方案中，单一剂量为约10cGy与约100cGy之间、约100cGy与约500cGy之间、约500cGy与约1Gy或约1Gy与约5Gy之间。
在某些实施方案中，用外射束辐射疗法(EBT)治疗和/或破坏病灶。为了治疗和/或破坏病灶，可以根据本领域技术人员已知的在治疗或改善过度增殖性障碍中有效的任何时间表、剂量或方法(但不限于此)给予EBT。在一些实施方案中，通过给予低于本领域技术人员所理解的对于治疗或改善过度增殖性障碍有效的剂量来治疗和/或破坏病灶。通常，外射束辐射疗法包括用高能射束辐照受试者体内的限定体积，从而导致所述体积内的细胞死亡。在一些实施方案中，辐照的体积包含有待治疗和/或破坏的病灶，并且优选包含尽可能小的健康和/或非病灶组织。在某些实施方案中，辐照的体积包含大部分或全部病灶。在一些实施方案，给予方法以及用于外射束辐射疗法的设备和组合物的方法可见于美国专利号6,449,336、6,398,710、6,393,096、6,335,961、6,307,914、6,256,591、6,245,005、6,038,283、6,001,054、5,802,136、5,596,619和5,528,652。
在一些实施方案中，采用近距离放射疗法来治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，可以根据本领域技术人员已知的在治疗或改善过度增殖性障碍中有效的任何时间表、剂量或方法(但不限于此)给予近距离放射疗法以治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，与在治疗或改善过度增殖性障碍中有效的时间表、剂量或方法相比，可以根据本领域技术人员已知的较少的时间表、剂量或方法给予近距离放射疗法。一般而言，近距离放射疗法包括将放射源插入待治疗癌症的受试者体内，如肿瘤本身内部，使得肿瘤最大程度地暴露于放射源，并使健康组织的暴露最小化。可以在近距离放射疗法中给予的代表性放射性同位素包括但不限于磷32、钴60、钯103、钌106、碘125、铯137、铟192、氙133、镭226、锎252或金198。给予方法以及用于近距离放射疗法的设备和组合物描述于Mazeron等人,Sem.Rad.One.12:95-108(2002),Kovacs J.Contemp.Brachytherapy.6(4):404-416(2015)和美国专利号6,319,189、6,179,766、6,168,777、6,149,889和5,611,767。
在一些实施方案中，进行一次或多种治疗，例如给予药物药剂(如治疗剂)以治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，治疗包括给予一定剂量的药物药剂，如所述的任何药物药剂，例如免疫调节剂或化合物。在特定实施方案中，将药物药剂给予一次以治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，将药物药剂给予不止一次以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，将药物药剂以这样的剂量给予，所述剂量的范围为约0.0001至约100mg/kg体重，如约0.0005至约50mg/kg体重，如约0.001至约10mg/kg体重，例如约0.01至约1mg/kg体重。在特定实施方案中，将药物药剂以约0.001mg至约100mg、约0.05mg至约50mg、约0.01mg至约1mg、约1mg至约20mg或约5mg至约15mg之间的剂量给予至受试者。在一些实施方案中，将药物药剂全身给予。在某些实施方案中，将药剂局部给予至病灶。在特定实施方案中，将药物药剂口服、局部、舌下、静脉内、皮下、肠内、肠胃外、通过吸入和/或通过注射给予。
在一些实施方案中，药物药剂是化学治疗剂。在一些实施方案中，可以将化学治疗剂以本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性障碍有效的一个剂量或多个剂量给予。在某些实施方案中，可以将化学治疗剂以低于公认对于治疗过度增殖性障碍有效的本领域中使用的剂量给予。在一些实施方案中，给予单一剂量的化学治疗剂以治疗和/或破坏病灶。在某些实施方案中，在治疗跨度(例如一个或多个治疗周期)内向受试者给予多于一个剂量的化学治疗剂，以治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，化学治疗剂的治疗或给予的量是本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性障碍有效的量。在一些实施方案中，治疗的量低于本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性障碍有效的数量。
在某些实施方案中，药物药剂是免疫调节剂，例如检查点抑制剂。在某些实施方案中，可以将免疫调节剂以本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性疾病有效的一个剂量或多个剂量给予。在某些实施方案中，可以将免疫调节剂以低于公认对于治疗过度增殖性障碍有效的本领域中使用的剂量给予。在某些实施方案中，给予单一剂量的免疫调节剂以治疗和/或破坏病灶。在一些实施方案中，在治疗跨度(例如一个或多个治疗周期)内向受试者给予多于一个剂量的免疫调节剂，以治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，免疫调节剂的治疗或给予的量是本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性障碍有效的量。在一些实施方案中，治疗的量低于本领域技术人员公认的对于治疗过度增殖性障碍有效的数量。
在某些实施方案中，药物药剂是来那度胺或沙利度胺衍生物。在特定实施方案中，药物药剂是来那度胺。在一些实施方案中，将来那度胺或沙利度胺衍生物以约1mg至约20mg，例如约1mg至约10mg、约2.5mg至约7.5mg、约5mg至约15mg，如约5mg、10mg、15mg或20mg的剂量给予。在一些实施方案中，将来那度胺以约10μg/kg至5mg/kg，例如约100μg/kg至约2mg/kg、约200μg/kg至约1mg/kg、约400μg/kg至约600μg/kg，如约500μg/kg的剂量给予。在特定实施方案中，来那度胺的剂量为或为约10mg。在某些实施方案中，通过向受试者给予单一剂量的来那度胺来治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案中，通过向受试者给予多剂量的来那度胺来治疗和/或破坏病灶。在特定实施方案，将多剂量的来那度胺在一个或多个治疗周期内给予。在一些实施方案中，治疗周期包含休药期。在某些实施方案中，来那度胺在21天治疗周期内每天给予一次，持续14天。在某些实施方案中，来那度胺在28天治疗周期内每天给予一次，持续21天。
在一些实施方案中，治疗和/或破坏重复一次或多次，如通过在之前或先前的治疗和/或破坏之后实现一次或多次后续治疗和/或破坏。在一些实施方案中，在先前治疗和/或破坏之后且在后续治疗和/或破坏之前基因工程化细胞在受试者中已经扩增或被观察到已经扩增之后，进行后续或重复的治疗和/或破坏。在一些情况下，后续治疗和/或破坏在这样的时间进行，其中在后续治疗和/或破坏时、或紧接所述后续治疗和/或破坏时之前，受试者处于缓解期。在一些例子中，后续治疗和/或破坏在这样的时间进行，其中在所述时间或紧接其之前，血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少或不可检测。在一些情况下，后续治疗和/或破坏在这样的时间进行，其中在后续治疗和/或破坏时、或紧接所述后续治疗和/或破坏时之前，在受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的数量与先前治疗和/或破坏开始后的前一时间点相比减少。在一些情况下，后续治疗和/或破坏在这样的时间进行，其中在后续治疗和/或破坏时、或紧接所述后续治疗和/或破坏时之前，受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的细胞的数量与开始先前治疗和/或破坏之后受试者血液中可检测或检测到的基因工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与开始先前治疗和/或破坏之后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的某个时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
在一些实施方案中，方法包括任选地在先前治疗和/或破坏之后受试者已经复发后和/或在先前治疗和/或破坏之后未曾实现完全反应后，实现后续治疗和/或破坏。在一些情况下，受试者过去在一次或多次先前治疗和/或破坏之后已对基因工程化细胞有反应，并且随后在后续治疗和/或破坏之前已停止反应和/或已复发。在一些方面，在先前治疗和/或破坏之后且在后续治疗和/或破坏之前，基因工程化细胞在受试者中已经扩增或被观察到已经扩增。
C.监测细胞的扩增
在一些实施方案中，所述方法包括评估T细胞(例如针对基于T细胞的疗法所给予的T细胞)的暴露、持久性和增殖。在一些实施方案中，在本文所提供的方法中，细胞(例如，出于免疫疗法(例如T细胞疗法)给予的细胞)的暴露、或延长的扩增和/或持久性，和/或所述细胞的细胞表型或功能活性的变化可以通过在体外或离体评估T细胞的特征来测量。在一些实施方案中，可以在给予本文所提供的细胞疗法之前或之后使用此类测定来确定或确认用于免疫疗法(例如T细胞疗法)的T细胞的功能。
在一些实施方案中，检测在给予T细胞后且在给予所述疗法之前、期间和/或之后，受试者中表达重组受体的细胞(例如，出于基于T细胞的疗法给予的表达CAR的细胞)的存在和/或数量。在特定实施方案中，检测在给予T细胞后以及在破坏之前、期间和/或之后受试者中表达重组受体的细胞的存在和/或量。在一些方面，细胞的存在和/或量(如用于监测持久性的)被定量为每微克的DNA中编码受体(例如CAR)的DNA或质粒的拷贝，或定量为每微升样品(例如血液或血清)中表达受体的(例如表达CAR的)细胞的数量，或每微升样品中外周血单核细胞(PBMC)或白细胞或T细胞的总数量。在一些情况下，可以在其他生物样品(如受试者的器官或组织样品(例如疾病部位，例如肿瘤样品))中检测或监测工程化细胞(例如重组受体表达细胞)的存在。
在一些方面，使用定量PCR(qPCR)来评估受试者的血液或血清或器官或组织样品(例如，疾病部位例如肿瘤样品)中表达重组受体的细胞(例如，出于基于T细胞的疗法给予的表达CAR的细胞)的量。在一些情况下，用于评估表达重组受体的细胞的存在或量的方法可以包括从已给予工程化细胞的受试者中抽取外周血(或其他生物样品)，以及确定外周血或生物样品中工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的途径可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013 Mar；5(177):177ra38)蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012 Feb；10:29)，直接引入CAR中特异性位点中的表位标签如Strep-标签序列，其中Strep-标签的结合试剂用于直接评估CAR(Liu等人(2016)Nature Biotechnology,34:430；国际专利申请公开号WO 2015095895)以及与CAR多肽特异性地结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。在一些情况下，外在标记基因可以结合工程化细胞疗法用于允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还可以用于促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(EGFRt)可以与转导细胞中感兴趣的转基因(CAR或TCR)共表达(参见例如美国专利号8,802,374)。EGFRt可含有由抗体西妥昔单抗或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以用于鉴定或选择已经用EGFRt构建体和另一个重组受体(例如嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达受体的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,NatureBiotech.2016年4月；34(4):430-434)。
在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)之后，在或至少在4、14、15、27或28天，在受试者中检测细胞。在一些方面，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后，在或至少在2、4或6周，或3、6或12、18或24或30或36个月，或1、2、3、4、5年或更长时间，检测所述细胞。在某些实施方案中，在破坏受试者中的区如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分后在或至少在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天检测受试者中的细胞。在一些实施方案中，在治疗和/或破坏受试者中的区如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分后，在或至少在第2、4或6周，或者第3、6或12、18或24或30或36个月，或者第1、2、3、4、5年或更多年检测细胞。
在一些实施方案中，已在治疗跨度内用多于一次治疗、程序或操纵治疗和/或破坏受试者中的区如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分后一定的时间量之后，检测细胞的存在和/或量，并且从第一次治疗、程序或操纵的起点测量时间量。在特定实施方案中，已在治疗跨度内用多于一次治疗、程序或操纵治疗和/或破坏受试者中的区如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分后一定的时间量之后，检测细胞的存在和/或量，并且从最后一次治疗、程序或操纵的终点测量时间量。
指示扩增和/或持久性的细胞(例如，T细胞疗法给予的T细胞)的暴露(例如，数量)可以根据以下各项来陈述：暴露至受试者的细胞的最大数量、可检测细胞或高于某一数量或百分比的细胞的持续时间、细胞数量相对于时间的曲线下面积和/或其组合和其指示物。此类结果可以使用已知方法来评估，例如使用qPCR来检测与特定样品(例如血液、血清、血浆或组织，例如肿瘤样品)中核酸或DNA的总量相比，编码重组受体的核酸的拷贝数；和/或使用流式细胞术测定，通常使用对受体具有特异性的抗体来检测表达受体的细胞。还可以使用基于细胞的测定来检测功能细胞的数量或百分比，所述功能细胞例如为能够结合至和/或中和和/或诱导针对疾病或病症的细胞或表达由受体识别的抗原的细胞的应答(例如细胞毒性应答)的细胞。
在一些方面，增加的受试者对细胞的暴露包括增加的细胞扩增。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后，表达受体的细胞(例如，表达CAR的细胞)在受试者中扩增。在特定实施方案中，将区破坏(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)导致对于受体表达细胞(例如表达CAR的细胞)增加的暴露，如与在紧接破坏之前细胞的扩增相比或与破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)之前受试者中细胞扩增的峰值相比受试者中所述细胞增加的扩增。
在一些方面，方法例如破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)导致给予的细胞的高体内增殖，例如通过流式细胞术测量的。在一些方面，检测细胞的高峰比例。例如，在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)之后，在受试者的血液或疾病部位或其白细胞级分(例如，PBMC级分或T细胞级分)中的水平峰值或最大值下，至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的细胞表达重组受体，例如CAR。
在一些实施方案中，方法例如破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)导致受试者的血液或血清或其他体液或器官或组织中如下浓度最大值：编码受体(例如CAR)的核酸的至少100、500、1000、1500、2000、5000、10,000或15,000个拷贝/微克DNA，或至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9个表达受体的(例如表达CAR的)细胞/外周血单核细胞总数量、单核细胞总数量、T细胞总数量或微升总数量。在一些实施方案中，表达受体的细胞被检测为受试者血液中总PBMC的至少10％、20％、30％、40％、50％或60％，和/或在开始给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后在这个水平下保持至少1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、24周、36周、48或52周，或在这种给予后保持1年、2年、3年、4或5年或更长时间。
在一些方面，所述方法导致例如受试者的血清、血浆、血液或组织(例如肿瘤样品)中，每微克DNA中编码重组受体(例如CAR)的核酸的拷贝数增加至少2倍、至少4倍、至少10倍或至少20倍。
在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后至少20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58天、59天或60天或更长时间，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后至少或至少约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22周、23周或24周或更长时间中，表达受体的细胞在受试者的血清、血浆、血液或组织(例如肿瘤或病灶样品)中是可检测的，例如通过指定方法(例如基于qPCR或流式细胞术的检测方法)检测。在特定实施方案中，在治疗和/或破坏所述区(例如受试者的组织、器官、肿块或病灶区或其区域或部分)后至少20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38天、39天、40天、41天、42天、43天、44天、45天、46天、47天、48天、49天、50天、51天、52天、53天、54天、55天、56天、57天、58、59或60天或更多天，受试者的血清、血浆、血液或组织中表达受体的细胞在治疗和/或破坏病灶后至少或至少约2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、17周、18周、19周、20周、21周、22、23或24周或更多周内是可检测的。
在一些方面，在受试者或其体液、血浆、血清、组织或隔室中，例如在其血液(例如外周血)或疾病部位(例如病灶肿瘤)中，至少约1x 102、至少约1x 103、至少约1x 104、至少约1x 105、或至少约1x 106、或至少约5x 106、或至少约1x 107、或至少约5x 107、或至少约1x108个表达重组受体(例如表达CAR)的细胞，和/或每微升至少10、25、50、100、200、300、400或500或1000个表达受体的细胞(例如每微升至少10个细胞)是可检测或存在的。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后至少约20天、至少约40天、或至少约60天，或至少约3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，或至少2或3年中，细胞的所述数量或浓度在受试者中是可检测的。在某些实施方案中，在治疗和/或破坏病灶后至少约20天、至少约40天或至少约60天或至少约3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年内，受试者中此类细胞数量或浓度是可检测的。此类细胞数量可以如通过基于流式细胞术或基于定量PCR的方法来检测，并使用已知方法外推至总细胞数量。参见，例如，Brentjens等人,Sci TranslMed.2013 5(177)；Park等人,Molecular Therapy 15(4):825–833(2007)；Savoldo等人,JCI 121(5):1822-1826(2011)；Davila等人,(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Davila等人,Oncoimmunology 1(9):1577-1583(2012)；Lamers,Blood 2011 117:72-82；Jensen等人,Biol Blood Marrow Transplant 2010年9月；16(9):1245–1256；Brentjens等人,Blood2011 118(18):4817-4828。
在一些方面，如通过免疫组织化学、PCR和/或流式细胞术所测量，在给予细胞(例如，表达CAR的T细胞)后在约1周、约2周、约3周、约4周、约5周或至少约6周，或至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年，例如在外周血或骨髓或其他隔室中，每100个细胞中编码重组受体的核酸的拷贝数(例如载体拷贝数)是至少0.01、至少0.1、至少1或至少10。在一些实施方案中，在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后约1周、约2周、约3周或至少约4周，或在这种给予后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年的时间，每微克基因组DNA中表达受体(例如，CAR)的载体的拷贝数是至少100、至少1000、至少5000、或至少10,000、或至少15,000或至少20,000。
在某些实施方案中，在治疗和/或破坏病灶后约1周、约2周、约3周、约4周、约5周或至少约6周或至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年，如通过免疫组织化学、PCR和/或流式细胞数所测量的，每100个细胞中编码重组受体的核酸的拷贝数如载体拷贝数为至少0.01、至少0.1、至少1或至少10。在一些实施方案中，在治疗和/或破坏病灶后约1周、约2周、约3周或至少约4周和/或在治疗和/或破坏病灶后至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或至少2或3年时，每微克基因组DNA中表达受体(例如CAR)的载体的拷贝数为至少100、至少1000、至少5000或至少10,000或至少15,000或至少20,000。
在一些方面，在给予细胞后(例如在开始给予T细胞后)至少约3个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年、或超过3年的时间，细胞表达的受体(例如CAR)可通过定量PCR(qPCR)或通过流式细胞术在受试者、血浆、血清、血液、组织和/或其疾病部位(例如肿瘤部位)中检测。在特定实施方案中，在治疗和/或破坏病灶后至少约3个月、至少约6个月、至少约12个月、至少约1年、至少约2年、至少约3年或超过3年时，在受试者、血浆、血清、血液、组织和/或疾病部位(例如病灶或肿瘤部位)中由细胞表达的受体是可检测的。在一些实施方案中，测量在给予T细胞(例如，表达CAR的T细胞)后，受试者的体液、血浆、血清、血液、组织、器官和/或疾病部位(例如肿瘤部位)中表达受体(例如CAR)的细胞随时间的浓度的曲线下面积(AUC)。
D.反应、功效和存活
在一些实施方案中，给予有效地治疗受试者，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性和/或在给予基因工程化细胞(如重组受体表达细胞例如CAR+ T细胞)后已经复发。在一些实施方案中，至少或约至少50％的根据所述方法治疗的受试者、至少或约至少60％的受试者、至少或约至少70％的受试者、至少或约至少80％的受试者或至少或约至少90％的受试者实现完全缓解(CR)和/或实现客观反应(OR)。
在一些实施方案中，与涉及给予基因工程化细胞(如重组受体表达细胞)但不涉及如本文所述的治疗和/或破坏所述区或病灶的方法相比，根据所提供的例如涉及在给予基因工程化细胞后破坏所述区或病灶的方法治疗的受试者实现更持久的反应，或者在多个这样治疗的受试者中平均实现更持久的反应。在一些情况下，反应持续时间(DOR)的度量包括从记录肿瘤反应到疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久的反应，例如在开始疗法后观察到反应后一段时间后或在开始基因工程化细胞后治疗和/或破坏所述区或病灶之后持续的反应。在一些实施方案中，持久的反应通过在开始疗法之后或开始给予基因工程化细胞后治疗和/或破坏所述区或病灶之后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月时的反应率来表示。在一些实施方案中，反应持续超过3个月、超过6个月、超过12个月、超过18个月、超过24个月、超过30个月、超过36个月或更长时间。在一些特定实施方案中，在受试者先前在响应于基因工程化细胞的给予缓解后复发之后，根据所述方法治疗的受试者实现持久的反应。
在一些方面，受试者(例如患有CLL的受试者)的反应率是基于国际慢性淋巴细胞白血病研讨会(IWCLL)反应标准(Hallek等人,Blood 2008年6月15日；111(12):5446-5456)。在一些方面，这些标准描述如下：完全缓解(CR)，其在一些方面要求不存在通过免疫表型分析的外周血克隆淋巴细胞、不存在淋巴结病、不存在肝肿大或脾肿大、不存在全身症状和令人满意的血细胞计数；完全缓解伴随不完全骨髓恢复(CRi)，其在一些方面被描述为上述CR但没有正常的血细胞计数；部分缓解(PR)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数下降≥50％、淋巴结病减少≥50％或肝或脾减少≥50％以及外周血细胞计数改善；进展性疾病(PD)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数增加≥50％至≥5x109/L、淋巴结病增加≥50％、肝或脾尺寸增加≥50％、Richter转化或由于CLL导致新的血细胞减少；和稳定疾病，其在一些方面被描述为不符合CR、CRi、PR或PD的标准。
在一些实施方案中，如果在给予所述剂细胞的1个月内受试者中的淋巴结的尺寸小于或小于约20mm、小于或小于约10mm、或小于或小于约10mm，则受试者展现出CR或OR。在特定实施方案中，如果在给予病灶的治疗和/或破坏的1个月内受试者中的淋巴结的尺寸小于或小于约20mm、小于或小于约10mm、或者小于或小于约10mm，则受试者展现出CR或OR。
在一些实施方案中，在受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)未检测到CLL的指标克隆。在一些实施方案中，通过IgH深度测序评估CLL的指标克隆。在一些实施方案中，在给予细胞之后或给予细胞之后1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或者至少1、2、3、4、5、6、12、18或24个月或约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间未检测到指标克隆。
在一些方面，反应评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任何一种。在一些方面，使用卢加诺标准评估反应(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323–338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些方面，反应评估利用临床、血液学和/或分子方法中的任何一种。在一些方面，使用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用正电子发射断层成像(PET)-计算机断层成像(CT)和/或CT。PET-CT评价还可包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)用于嗜FDG淋巴瘤。在一些方面，如果将使用PET-CT来评估嗜FDG组织学中的反应，则可以使用5分量表。在一些方面，5分量表包含以下标准：1，没有高于背景的摄取；2，摄取≤纵隔；3，摄取>纵隔但≤肝脏；4，摄取适度>肝脏；5，摄取显著高于肝脏和/或新病灶；X，新的摄取区域不可能与淋巴瘤有关。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的完全反应涉及在不同可测量部位处的完全代谢反应和完全放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中当使用PET-CT时，在5分量表上CR被描述为得分为1、2或3，其具有或不具有残余质量。在一些方面，在脾或骨髓内具有高生理摄取或激活的Waldeyer环或结节外部位中(例如，对于化学疗法或骨髓集落刺激因子)，摄取可能大于正常纵隔和/或肝脏。在这种情况下，如果初始侵犯部位的吸收不大于周围正常组织，即使组织具有高生理吸收，也可以推断完全代谢反应。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中CR被描述为没有患病的淋巴外部位，并且靶淋巴结/淋巴结肿块的病灶的最长横径(LDi)必须恢复至≤1.5cm。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应表明在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应表明正常形态，如果不确定则应是IHC阴性。其他部位可能包括器官增大的评估，其应恢复正常。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在CR的情况下应不存在。(Cheson等人,(2014)JCO32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323–338；Cheson,B.D.(2015)ChinClin Oncol 4(1):5)。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的部分反应(PR)涉及在不同可测量部位的部分代谢和/或放射学反应。在一些方面，这些部位包括淋巴结和淋巴外部位，其中在使用PET-CT时，与基线和任何大小的一种或多种残余质量相比，将PR描述为4分或5分，具有降低的摄取。在中间时期，此类发现可以指示反应中的疾病。在治疗结束时，此类发现可以指示残留疾病。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中将PR描述为多达6个靶标可测量结节和结节外部位的SPD减小≥50％。如果病灶太小而无法在CT上测量，则将5mm×5mm指定为默认值；如果病灶不再可见，则所述值为0mm×0mm；对于>5mm×5mm但小于正常的结节，使用实际测量值进行计算。其他评估部位包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应指示残留摄取，所述残留摄取高于正常骨髓中的摄取，但与基线相比有所降低(弥漫性摄取与来自所允许的化学疗法的反应性变化相容)。在一些方面，如果在结节反应的情况下在骨髓中存在持续的局灶性变化，则应考虑用MRI或活组织检查或间隔扫描进一步评价。在一些方面，其他部位可以包括对器官肥大的评估，其中脾脏的超过正常的长度必须已经复原>50％。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在PR的情况下应不存在/正常、复原但不增加。也可以使用基于PET-CT和/或CT的评估来测量无反应/稳定疾病(SD)或进行性疾病(PD)。(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323–338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。
在一些方面，无进展生存期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后受试者伴随疾病生存但疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观反应(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总生存期(OS)被描述为从诊断或开始治疗疾病(如癌症)的日期到被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活时的时间长度。在一些方面，无事件生存期(EFS)被描述为癌症治疗结束后受试者保持没有所述治疗旨在预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些方面，使用RECIST标准确定客观肿瘤反应；在一些方面，在实体瘤中确定。(Eisenhauer等人,European Journal of Cancer 45(2009)228-247.)在一些方面，使用RECIST标准确定靶病灶的客观肿瘤反应。在一些方面，使用RECIST标准确定的完全反应被描述为所有靶病灶的消失，并且任何病理性淋巴结(无论是靶标还是非靶标)必须在短轴上减少至<10mm。在其他方面，使用RECIST标准确定的部分反应被描述为以基线总和直径为参考，靶病灶的直径总和减少至少30％。在其他方面，进行性疾病(PD)被描述为以研究中的最小总和作为参考(这包括基线总和，如果这是研究中最小的)，靶病灶直径总和增加至少20％。除了相对增加20％之外，总和还必须证明至少5mm的绝对增加(在一些方面，一个或多个新病灶的外观也被认为是进展)。在其他方面，稳定疾病(SD)被描述为既没有足够的收缩以符合PR，也没有足够的增加以符合PD，在研究时将最小总直径作为参考。
在一些方面，根据所提供的方法的给予或治疗通常减少或防止受试者的疾病或病症的扩展或负荷。例如，在疾病或病症是肿瘤时，所述方法通常减小肿瘤大小、体积、转移、骨髓中原始细胞的百分比或可分子检测的癌症，和/或改善预后或存活或其他与肿瘤负荷相关的症状。
疾病负荷可以包括受试者或受试者的器官、组织或体液(例如肿瘤或其他位置(例如，其可指示转移)的器官或组织)中疾病细胞的总数。例如，可以在某些血液恶性肿瘤环境中在血液或骨髓中检测和/或定量肿瘤细胞。在一些实施方案中，疾病负荷可包括肿瘤的质量、转移的数量或程度和/或骨髓中存在的原始细胞的百分比。
在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残留白血病来确定。
在一些实施方案中，如果骨髓中存在例如通过光学显微镜检测的大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现出形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现出完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者可展现出完全缓解，但存在一小部分形态学上(通过光学显微镜技术)不可检测的残留白血病细胞。如果受试者展现在骨髓中小于5％原始细胞并且展现可分子检测的癌症，则称受试者展现最小残留疾病(MRD)。在一些实施方案中，可以使用允许灵敏检测少量细胞的各种分子技术中的任何一种来评估可分子检测的癌症。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可确定由染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，流式细胞术可用于基于白血病特异性免疫表型鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可以检测100,000个正常细胞中的少至1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果如通过PCR或流式细胞术检测到100,000个细胞中的至少或大于1个白血病细胞，则受试者展现出可分子检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是分子不可检测的或MRD-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术不能检测到受试者中的白血病细胞。
在一些方面，疾病或病症在给予第一剂量后持续和/或给予第一剂量不足以根除受试者中的疾病或病症。在一些实施方案中，在破坏如本文所述的区或病灶后根据所提供的方法观察到对治疗的反应，如疾病的消退和/或缓解。
在一些实施方案中，与使用替代给药方案如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的替代给药方法和/或受试者未接受根据所提供的方法治疗和/或破坏受试者中区(其中工程化细胞现在存在或现在可能存在或过去存在或过去可能存在)的可比较方法所观察到的减轻相比，所述方法在更大的程度上和/或在更长的时间段内减轻疾病或病症的负荷，例如，肿瘤细胞的数量、肿瘤的尺寸、患者存活或无事件存活的持续时间。在一些实施方案中，检测、评估或测量受试者中疾病或病症的负荷。可以在一些方面通过检测受试者中或受试者的器官、组织或体液(如血液或血清)中的疾病或疾病相关细胞例如肿瘤细胞的总数来检测疾病负荷。在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，指定疾病或病症负荷的量度。
在一些实施方案中，与其他方法例如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的方法和/或其中受试者未接受根据所提供方法治疗和/或破坏受试者中的区(其中工程化细胞现在存在或现在可能存在或过去存在或过去可能存在)的方法相比，通过本文所述的方法改善了受试者的无事件存活率或总存活率。例如，在一些实施方案中，在所述剂量后6个月时通过所述方法治疗的受试者的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用所述方法治疗的受试者展现出无事件存活、无复发存活或存活达至少6个月或至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9或10年。在一些实施方案中，进展的时间得到改善，如进展的时间大于6个月或大于约6个月或至少1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9或10年。
在一些实施方案中，与其他方法例如其中受试者接受一种或多种替代治疗剂的方法和/或其中受试者未接受根据所提供方法治疗和/或破坏受试者中的区(在所述区中工程化细胞现在存在或现在可能存在或过去存在或过去可能存在)的方法相比，在通过本文所述的方法治疗后复发的概率降低。例如，在一些实施方案中，在第一剂量后6个月时复发的概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。
V.定义
除非另外定义，否则本文使用的所有领域术语、符号和其他技术和科学术语或命名旨在具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不应被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，向其给予免疫调节多肽、工程化细胞或组合物的受试者(例如患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，所述灵长类动物是猴或猿。所述受试者可以是雄性或雌性，并且可以处于任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，所述受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效果或结果或表型的完全或部分改善或减轻。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓解、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或缓解疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不暗示完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的影响。
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减慢、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发展。此延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。对于本领域技术人员显而易见的是，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发展或延缓疾病的进展。
如本文所用，“抑制”功能或活性是当与除了感兴趣的条件或参数以外的原本相同的条件相比时，或者与另一种条件相比时，减少功能或活性。例如，与不存在所述细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速率。
在给药的情况下，药剂(例如药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如药物配制品或工程化细胞)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。所述治疗有效量可以根据诸如疾病状态、受试者的年龄、性别和体重以及给予的免疫调节多肽或工程化细胞等因素而变化。在一些实施方案中，所提供的方法涉及给予有效量(例如治疗有效量)的免疫调节多肽、工程化细胞或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需预防结果的量。通常但不是必要地，因为在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，所以预防有效量将小于治疗有效量。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对给予配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
如本文所用，叙述核苷酸或氨基酸位置“对应于”所公开序列中的核苷酸或氨基酸位置(例如序列表中所述)是指，在使用标准比对算法(例如GAP算法)与所公开序列比对以使同一性最大化之后，所鉴定的核苷酸或氨基酸位置。通过比对序列，本领域技术人员可以例如使用保守和相同的氨基酸残基作为指导来鉴定相应的残基。通常，为了鉴定对应位置，比对氨基酸序列使得获得最高阶匹配(参见，例如：Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.编辑,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informaticsand Genome Projects,Smith,D.W.编辑,Academic Press,New York,1993；ComputerAnalysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编辑,Humana Press,New.Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,AcademicPress,1987；和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编辑,M StocktonPress,New York,1991；Carrillo等人(1988)SIAM J Applied Math 48:1073)。
如本文所用的术语“载体”是指能传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。载体包括病毒载体，例如逆转录病毒(例如γ逆转录病毒和慢病毒)载体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和源自其的后代，不考虑传代次数。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择，具有相同功能或生物活性的突变体后代。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阳性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中的可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平相似，和/或所述水平基本上高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指特定标记(通常为表面标记)在细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。
如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较序列的全长中实现最大比对所需的任何算法。
如本文所用的，单数形式“一种/个(a/an)”和“所述(the)”包括复数种/个指示物，除非上下文另外明确说明。例如，“一种/个(a或an)”意指“至少一种/个”或“一种/个或多种/个”。应理解，本文描述的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“基本上由方面和变化组成”。
贯穿本公开内容，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应当认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及所述范围内的各个数值。例如，在提供一系列值的情况下，应当理解，在所述范围的上限和下限之间的每个中间值以及在所述范围内的任何其他所述或中间值包含在所要求保护的主题内。这些更小范围的上限和下限可以独立地被包括在更小范围之内，并且也被涵盖在所要求保护地主题之内，服从于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述的范围包括一个或两个限制时，排除了那些被包括的限制的任一个或两者的范围也被包括在所要求保护的主题之内。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约X”的描述包括“X”的描述。在一些实施方案中，术语约是指±25％、±20％、±10％、±5。
如本文所用的，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其整体并入，在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开的申请和其他出版物中所述的定义相反或在其他方面不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
VI.示例性实施方案
所提供的实施方案为：
1.一种用于扩增基因工程化细胞的方法，其包括实现受试者中现在存在或现在可能存在或者过去存在或过去可能存在所述基因工程化细胞的区的破坏，所述受试者先前已经接受基因工程化细胞的给予以便治疗疾病或病症，其中所述方法导致所述受试者中、所述区中和/或所述受试者的组织或器官或流体中基因工程化细胞的扩增，和/或导致所述区、组织或器官或流体中基因工程化细胞数量的增加。
2.实施方案1的方法，其中所述方法不包括基因工程化细胞的后续给予，和/或在没有基因工程化细胞的这种后续给予的情况下实现扩增。
3.一种治疗方法，其包括向受试者给予治疗方案，其中先前已经向所述受试者给予基因工程化细胞以便治疗疾病或病症，其中所述方法导致在所述受试者中、所述区中和/或所述受试者的组织或器官或流体中所述基因工程化细胞的扩增，和/或导致在所述区、组织或器官或流体中所述基因工程化细胞的数量的增加。
4.实施方案4的方法，其中所述治疗方案包括破坏受试者中的区，在所述区中存在、怀疑存在或已经存在或可能存在所述工程化细胞。
5.实施方案3或4的方法，其中所述治疗方案和/或所述方法不包括基因工程化细胞的后续给予，和/或在没有这种后续给予的情况下实现扩增。
6.实施方案3-5中任一项的方法，其中所述治疗方案以亚治疗剂量给予和/或经由所述基因工程化细胞的扩增获得其治疗效果。
7.实施方案1、2和4-6中任一项的方法，其中所述区是或者包含病灶或其部分。
8.实施方案7的方法，其中所述病灶是肿瘤。
9.实施方案8的方法，其中所述肿瘤是原发性或继发性肿瘤。
10.实施方案1、2和4-6中任一项的方法，其中所述区是或包含骨髓组织。
11.实施方案1、2和4-10中任一项的方法，其中在破坏时或紧接在所述破坏时之前，受试者在反应之后，任选地在缓解之后已复发，和/或过去对所述基因工程化细胞的给予没有反应。
12.实施方案1-11中任一项的方法，其中所述受试者在对基因工程化细胞的先前给予有反应后已复发，和/或过去对基因工程化细胞的先前给予没有反应。
13.实施方案1-12中任一项的方法，其中所述受试者过去已对基因工程化细胞有反应并且随后在破坏之前已停止反应和/或已复发。
14.实施方案1-13中任一项的方法，其中基因工程化细胞先前已经在受试者中扩增或被观察到在破坏之前已经扩增。
15.实施方案1-14中任一项的方法，其中在破坏时或紧接在破坏时之前：
所述受试者处于缓解期；
血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少或无法检测到；
与给予所述基因工程化细胞之后的先前时间点相比，来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少；和/或
来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的所述基因工程化细胞的细胞数量与开始给予所述基因工程化细胞之后所述受试者血液中可检测或检测到的所述基因工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与给予所述基因工程化细胞后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的某个时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
16.实施方案1-15中任一项的方法，其中所述破坏在开始给予所述基因工程化细胞之后或在所述基因工程化细胞的最后一次给药之后在、在约、或大于、或大于约2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年或更长时间时进行。
17.实施方案1-16中任一项的方法，其中所述破坏直接或间接地调节所述受试者中体内所述基因工程化T细胞的活性或功能。
18.实施方案1-17中任一项的方法，其中所述破坏包括给予免疫调节剂、辐射或物理或机械操纵所述区或病灶中的一种或多种。
19.实施方案1-18中任一项的方法，其中所述破坏包括给予免疫调节剂。
20.实施方案19的方法，其中所述免疫调节剂是或包含免疫抑制分子，是或包含免疫检查点分子或免疫检查点途径的成员，和/或是或包含免疫检查点分子或途径的调节剂。
21.实施方案20的方法，其中所述免疫检查点分子或途径是或包含PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷受体、CD73、CD39、腺苷2A受体(A2AR)、或腺苷或涉及任何前述项的途径。
22.实施方案1-20中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是BY55、MSB0010718C、伊匹单抗、达珠单抗、贝伐单抗、巴利昔单抗、伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、MPDL3280A、匹利珠单抗、MK-3475、BMS-936559、阿特珠单抗、曲美木单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗、鲁卡木单抗、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、阿维单抗、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗、BKT140、伐立鲁单抗、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗、CC-90002、和MNRP1685A、或其抗体结合片段。
23.实施方案1-22中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是抗PD-L1抗体。
24.实施方案1-23的方法，其中所述抗PD-L1抗体是MEDI14736、MDPL3280A、BMS-936559、LY3300054、阿特珠单抗、或阿维单抗、或其抗原结合片段。
25.实施方案19的方法，其中所述免疫调节剂是沙利度胺或是沙利度胺的衍生物或类似物。
26.实施方案19或25的方法，其中所述免疫调节剂是来那度胺或泊马度胺，阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。
27.实施方案19、25和26中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是来那度胺，来那度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。
28.实施方案1-27中任一项的方法，其中在所述复发之后并且在所述破坏之前，未曾向所述受试者给予外源药剂或重组药剂以便治疗所述疾病或病症或以便调节所述基因工程化细胞的活性。
29.实施方案1-19和28中任一项的方法，其中所述破坏包括辐射。
30.实施方案1-19和28中任一项的方法，其中所述破坏包括对所述区或病灶的物理或机械操纵，任选地包括探查、戳刺或穿透所述区或病灶。
31.实施方案30的方法，其中所述物理或机械操纵包括活检。
32.实施方案31的方法，其中所述活检是通过针或套管针进行的。
33.实施方案31或实施方案32的方法，其中所述活检包括切开活检。
34.实施方案1-34中任一项的方法，其中与在刚要进行所述破坏之前时相比，所述方法导致所述基因工程化细胞的扩增或所述基因工程化细胞的数量的增加。
35.实施方案1-34中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞的扩增发生在所述破坏后在或在约24小时、48小时、96小时、7天、14天或28天内。
36.实施方案1-35中任一项的方法，其中：
所述扩增导致与刚要进行所述破坏之前相比在所述血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的基因工程化细胞；或者
所述扩增导致与所述破坏之前在所述血液中先前的工程化细胞水平峰值相比在所述血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的基因工程化细胞。
37.实施方案1-36中任一项的方法，其中在所述破坏后的某个时间血液中可检测的基因工程化细胞的数量是：
与所述破坏之前的先前时间点的基因工程化细胞数量相比有所增加(例如增加了1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或增加更多倍)；
比在所述破坏之前在所述受试者血液中可检测的基因工程化细胞的数量峰值或最大值多1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更多倍；
在已在血液中检测到此类细胞的最大值水平的峰值后的某个时间在血液中可检测到多于或大约多于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的所述基因工程化细胞。
38.实施方案1-37中任一项的方法，其中所述工程化细胞表达重组受体，所述重组受体特异性地结合与所述疾病或病症相关的抗原或在所述环境或所述区任选病灶的细胞中表达的抗原。
39.实施方案1-38中任一项的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
40.实施方案1-39中任一项的方法，其中所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
41.实施方案1-40中任一项的方法，其中所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
42.实施方案1-41中任一项的方法，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
43.实施方案1-42中任一项的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
44.实施方案43的方法，其中所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
45.实施方案38-44中任一项的方法，其中所述抗原是CD19。
46.实施方案44或实施方案45的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域。
47.实施方案43-46中任一项的方法，其中CAR还包含共刺激信号传导区域。
48.实施方案35的方法，其中所述共刺激信号传导结构域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
49.实施方案1-48中任一项的方法，其中所述工程化细胞是CD4+或CD8+ T细胞。
50.实施方案1-49中任一项的方法，其中所述T细胞疗法包括源自受试者的原代细胞。
51.实施方案1-49中任一项的方法，其中所述工程化细胞对于所述受试者是自体的。
52.实施方案1-49中任一项的方法，其中所述工程化细胞对于所述受试者是同种异体的。
53.实施方案1-52中任一项的方法，其中所述受试者是人。
54.实施方案1-53中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的剂量为从或从约1x 105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
55.实施方案1-54中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的剂量不多于1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
56.实施方案1-53中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的剂量在约0.25x 106个细胞/kg受试者体重与5x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg受试者体重与3x106个细胞/kg、约0.75x 106个细胞/kg与2.5x 106个细胞/kg、或约1x 106个细胞/kg与2x106个细胞/kg之间，每个都包含端值。
57.实施方案1-56中任一项的方法，其中将基因工程化细胞的所述剂量以包含所述细胞的单一药物组合物或以包含所述细胞的多种组合物给予。
58.在实施方案1-57中任一项的方法，其中所给予的工程化细胞是分割剂量，其中将所述剂量的细胞以共同包含所述剂量的细胞的多种组合物经不超过三天的时间段给予。
59.实施方案1-58中任一项的方法，其中所述方法包括任选地在所述受试者在先前破坏之后的反应后已复发和/或在先前破坏之后未曾实现完全反应之后，实现后续破坏。
60.实施方案59的方法，其中所述受试者过去在先前破坏之后已对所述基因工程化细胞有反应，并且随后在所述后续破坏之前已停止反应和/或已复发。
61.实施方案59或实施方案60的方法，其中所述基因工程化细胞已在受试者中扩增或被观察到在先前破坏后且在所述后续破坏之前已经扩增。
62.实施方案59-61中任一项的方法，其中在后续破坏时或紧接在后续破坏时之前：
所述受试者处于缓解期；
血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少或无法检测到；
与开始先前破坏之后的先前时间点相比，来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少；和/或
来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的所述基因工程化细胞的细胞数量与开始先前破坏之后所述受试者血液中可检测或检测到的所述基因工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与开始先前破坏后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的某个时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
63.实施方案1-62中任一项的方法，其中与在没有所述破坏的情况下向所述受试者给予所述基因工程化细胞的方法相比，所述基因工程化细胞在所述受试者中展现出增加的或延长的扩增和/或持久性。
64.实施方案1-63中任一项的方法，其中任选地以相同剂量或给药时间表，所述方法与使用其中在没有所述破坏的情况下向所述受试者给予所述基因工程化细胞和/或其中在不存在所述基因工程化细胞的情况下给予治疗方案或实施破坏的可比方法所观察到的降低相比，在更大程度上和/或在更长的时间段内降低肿瘤负荷。
VII.实施例
以下实施例被包括在内仅用于说明目的，并不旨在限制本发明的范围。
实施例1：向受试者给予表达抗CD19 CAR的细胞
向患有复发或难治性(R/R)非霍奇金淋巴瘤(NHL)的二十八名受试者给予表达抗CD19嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞。受试者的人口统计学和基线特征列于表1中。CAR含有源自鼠类抗体的抗CD19 scFv、源自免疫球蛋白的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。为了产生表达CAR的自体T细胞，通过基于免疫亲和力的富集从来自单独受试者的白细胞分离术样品分离T细胞，用编码抗CD19CAR的病毒载体激活并转导，然后进行扩增。通常将细胞以约1:1的靶CAR+CD4+T细胞与CAR+CD8+T细胞比率给予至受试者。
*到最后一次治疗<CR
到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
在给予表达CAR的T细胞(d＝0)之前，将受试者每天用30mg/m2的氟达拉滨治疗3天，并且用每日300mg/m2的环磷酰胺治疗3天。在静脉内给予之前将冷冻保存的细胞组合物解冻。通过给予以约1:1的目标比率给予的经配制CD4+ CAR+细胞群和经配制CD8+ CAR+群体，将治疗性T细胞剂量作为定义的细胞组合物来给予。在d＝0时，用单一剂量或双剂量时间表以两种剂量水平中的一种(剂量水平1(DL-1)或剂量水平2(DL-2))开始通过静脉输注对受试者治疗。给予的每种剂量包括5x 107(DL-1)或1x 108(DL-2)个表达CAR的T细胞(靶标1:1 CD4+:CD8+比率)。所述实施例中的结果是指在正在进行的研究中直到和在特定时间点观察到的一个或多个指定受试者组的那些结果。
在用CAR-T细胞疗法的各种剂量时间表治疗的受试者中评估各种治疗紧急不良事件的存在或不存在(表2)。如表3中所示，未观察到严重细胞因子释放综合征(sCRS)(3-5级)；在36％(10/28)的受试者中观察到细胞因子释放综合征(CRS)。在14％(4/28)的受试者中观察到3-4级神经毒性，并且18％(5/28)的受试者展现任何等级的神经毒性。对于早发性2级CRS或神经毒性，一名受试者用托西利珠单抗治疗，并且四名患者接受地塞米松。6名受试者接受预防性抗癫痫药。
*1例5级呼吸衰竭，评估为可能与CAR-T细胞疗法相关，出现于有进展并开始后续治疗的MCL患者中
*包括：脑病、意识错乱状态、意识水平低下、嗜睡或癫痫发作
针对在单一剂量DL1的最后一次CAR+ T细胞输注后在正在进行的研究中在直至特定时间点的时间段内观察到的最佳总体反应评估所述组中的受试者。总体反应的结果显示在表4中。在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)群组中用单一剂量DL1治疗的20名受试者中，观察到总体反应率(ORR)为80％(16/20)，并且60％(12/20)的受试者显示完全缓解(CR)的证据。20％(4/20)的受试者显示部分反应(PR)的证据，并且20％(4/20)的受试者显示进行性疾病(PD)的证据。在CAR+ T细胞给予之前已经是化疗难治(在最后一次含化疗方案后展现稳定或进展性疾病，或在自体SCT后不到12个月复发)的受试者中，总体反应率为83％(10例ORR，7例CR、3例PR、2例PD，n＝12)。在曾是难治性(在最后一次治疗后展现不完全缓解，但未被视为化疗难治)的受试者中，总体反应率为77％(13例ORR，9例CR、4例PR、4例PD，n＝17)。
*到最后一次治疗<CR
到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
在评估时已经用两剂量DL-1治疗的三名DLBCL受试者中，两名展现部分反应(PR)并且1名展现进行性疾病(PD)。在评估时已经用单一剂量DL-2治疗的2名DLBCL受试者中，观察到两名受试者均实现CR。在评估时用单一剂量DL-1治疗的总共两名受试者的MCL群组中，观察到1例PR和1例PD。治疗两名具有双重命中的受试者、三名具有三重命中的受试者和四名患有双表达子DLBCL的受试者，并且均实现反应(7例CR、2例PR)。
在治疗后的某些时间点，通过将细胞与转基因特异性试剂一起孵育，确定外周血中的CAR+T细胞数量。图1A中显示对于依据最佳总体反应分组的受试者，在输注后的某些时间点测量的外周血中CD3+/CAR+T细胞的数量。在反应者(CR/PR)中观察到高于PD的峰值CD3+/CAR+T细胞。图1B至图1D显示在依据反应持久性即在3个月时的持续反应(CR/PR)或PD分组的实现反应的受试者中的CD3+/CAR+T细胞水平、CD4+/CAR+T和CD8+/CAR+T细胞水平(细胞/μL血液；平均值±SEM)。确定反应者(CR/PR)和PD的Cmax(CAR+细胞/μL血液)和曲线下面积(AUC)，并显示于表5中。结果与以下结论一致：随时间和在峰值扩增时，持久反应与血液中的较高CD3+/CAR+T细胞水平相关。
实施例2：表达抗CD19 CAR的细胞的再扩增
对于已经根据如在实施例1中所讨论的DL-1时间表给予CAR+ T细胞的具有化疗难治性转化DLBCL(具有BCL2重排和MYC和BCL6的多个拷贝的生发中心亚型)的一名受试者，在某些时间点测量的外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+ T细胞的数量显示在图2A中。受试者先前已经接受五个先前治疗线并且难以治疗，所述先前治疗线包括剂量调整的依托泊苷、多柔比星和环磷酰胺与长春新碱和泼尼松加利妥昔单抗(DA-EPOCH-R)以及从8/8 HLA匹配的无关供体的中等强度同种异体干细胞移植。在同种异体干细胞移植后且接受CAR+ T细胞之前，受试者在所有血液谱系中显示100％供体嵌合转台，已经停止服用免疫抑制疗法，并且没有移植物抗宿主病(GVHD)。在给予CAR+ T细胞之前，受试者患有通过正电子发射断层成像和计算机断层成像(PET-CT)(图2B)观察和通过磁共振成像(MRI)(图2D)确认的耳周肿块和右颞叶脑病灶。
在接受抗CD19 CAR-T细胞治疗后，如PET-CT(图2C)和脑MRI(图2E)所示，受试者在输注后28天实现CR，并且没有观察到神经毒性或CRS的体征。输注CAR-T细胞后三个月，在所述受试者中注意到耳周肿块的复发(图2F)，并进行切开活检。如图2A所示，在活检后可见的肿瘤消退，无需进一步治疗。药代动力学分析显示外周血中CAR-T细胞的显著再扩增(达到高于观察到的初始扩增的水平，在输注后约113天观察到水平峰值)，这与肿瘤消退是一致的。然后受试者继续实现第二次CR，如通过活检后一个月再分期PET-CT所证实的(图2G)，并且在CAR-T细胞输注后6个月保持CR。对受试者的进一步评估显示CNS反应持久且受试者在12个月时保持CR。
结果与以下结论一致：可以在功能性或活性CAR+ T细胞减少或损失和/或对CAR-T细胞疗法的抗肿瘤反应后复发后在体内开始CAR+ T细胞的再扩增和激活。此外，在初始CAR+ T细胞输注后晚期在体内再扩增后，CAR+ T细胞能够重新发挥抗肿瘤活性。所述结果支持CAR+ T细胞再扩增和激活可在体内触发，并且再激活CAR+ T细胞的方法可以进一步扩大其功效。
实施例3：向患有复发和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予表达抗CD19 CAR的细胞
A.受试者和治疗
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物给予至患有B细胞恶性肿瘤的受试者。
实施例3.A.1
所述实施例3.A.1中描述了通过特定时间点(3.A.1)在向患有B细胞恶性肿瘤的患者给予此类疗法的正在进行的临床研究中进行评价的结果。具体地，群组(完整群组)(在所述时间点，五十五名(55))成年人受试者患有复发或难治性(R/R)侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括从头或从惰性淋巴瘤转化(NOS)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)和2个治疗线失败后的3b级滤泡性淋巴瘤(FLG3B)。所治疗的受试者包括东部肿瘤协作组(ECOG)得分在0与2之间的那些(中值随访期为3.2个月)。完整群组不包括患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者。基于先前的同种异体干细胞移植(SCT)继发中枢神经系统(CNS)受累或ECOG评分为2不排除受试者，并且对于单采术不需要最小绝对淋巴细胞计数(ALC)。
对完整群组内受试者的核心子集分别评估结果(完整群组内的受试者不包括体力状态不佳(ECOG 2)、从边缘区淋巴瘤(MZL)和/或慢性淋巴细胞白血病(CLL，Richter's)转化的DLBCL)的受试者(核心群组))。在实施例3.A.1的时间点，分别评估所述核心群组内44名受试者的结果。
在所述实施例3.A.1中的时间点评估的完整和核心群组受试者的人口统计学和基线特征列于表6中。
*到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
所给予的治疗性T细胞组合物是通过包括从来自待治疗的单独受试者的白细胞分离术样品对CD4+和CD8+细胞进行基于免疫亲和力的富集的过程产生的。用编码抗CD19 CAR的病毒载体激活并转导所分离的CD4+和CD8+T细胞，然后对工程化细胞群进行扩增和冷冻保存。CAR含有源自鼠类抗体的抗CD19 scFv、源自免疫球蛋白的间隔子、源自CD28的跨膜结构域、源自4-1BB的共刺激区域和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。
在静脉内给予之前将冷冻保存的细胞组合物解冻。通过给予以约1:1的目标比率给予的经配制CD4+ CAR+细胞群和经配制CD8+ CAR+群体，将治疗性T细胞剂量作为定义的细胞组合物来给予。向受试者给予表达CAR的T细胞的单一或双剂量(每个单一剂量分别经由CD4+表达CAR的T细胞和CD8+表达CAR的T细胞单独输注来给予)，如下：含有5x 107个表达CAR的T细胞的剂量水平1(DL-1)的单一剂量(n＝30，针对实施例3.A.1中评估的受试者)；DL1的双剂量，其中每个剂量相隔约十四(14)天给予(n＝6，针对实施例3.A.1中评估的受试者，包括一名由于给药错误而无意中通过二剂量时间表接受两次DL2剂量的受试者)；或含有1x 108个(DL-2)表达CAR的总T细胞的剂量水平2(DL-2)的单一剂量(n＝18，针对实施例3.A.1中评估的受试者)。在CAR+ T细胞输注前三(3)天开始，受试者接受采用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
实施例3.A.2
对于实施例3.A.2，在上述实施例3中描述的临床研究中的后续时间点分析结果。在所述分析时间点，已经共治疗74名患者(男性51名，女性23名)。受试者包括完整DLBCL群组(包括67名DLBCL NOS(45名从头形成，14名从FL转化，8名从CLL或MZL转化)，1名FL 3B级，1名PMBCL)中的六十九(69)名受试者和MCL群组中的5名受试者。在完整(DLBCL)群组的受试者中，中值年龄为61岁(范围26，82)，中值先前疗法为3(范围1，12)，46名(67％)为化疗难治性，32名(46％)有任何先前的移植，并且至少16名(23％)患者有双重/三重命中淋巴瘤。核心群组中的四十九(49)名受试者在3.A.2中在此时间点进行评估。
B.安全性
评估了在给予CAR-T细胞疗法之后的治疗紧急不良事件(TEAE)的存在或不存在。还评估并监测受试者的神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语症、脑病、肌阵挛癫痫、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表评级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见美国卫生和公共服务部的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，公开于：2009年5月28日(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。还确定并监测细胞因子释放综合征(CRS)，并基于严重性进行评级。参见Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95。
实施例3.B.1
实施例3.B.1描述了基于实施例3.A.1中的分析时间点的结果。
图3描绘观察到已经历实验室异常和在≥20％的受试者中发生的TEAE的此类受试者的百分比。除了图3中所示的TEAE之外，还在≥5％的患者中观察到以下3-4级事件项：白细胞计数下降(13.6％)、脑病(12％)、高血压(7％)。所观察到的毒性程度在剂量水平1与2之间一致。
在实施例3.B.1分析中在84％的完整群组受试者中，未观察到严重(3级或更高级)细胞因子释放综合征(CRS)和严重神经毒性。此外，据观察，完整群组受试者中的60％未发生任何等级的CRS或神经毒性。在剂量水平之间没有观察到CRS、神经毒性(NT)、sCRS或严重神经毒性(sNT)的发生率的差异。表7汇总了在接受至少一个剂量的CAR-T细胞后28天，患者中细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性不良事件的发生率。如表7中所示，在接受单剂量DL2或双剂量DL1的任何受试者中均未观察到sCRS(3-4级)。在完整群组受试者中的16％(9/55)和核心子集受试者中的18％(8/44)中观察到严重神经毒性或严重CRS(3-4级)。11％(n＝6)的受试者接受托西利珠单抗，24％(n＝13)的受试者接受地塞米松。在完整群组内的ECOG2受试者中，所观察到的CRS和神经毒性的比率分别为71％和29％。
包括一名由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的患者
图4显示描绘所观察到的至CRS和/或神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线，用于在3.B.1中分析。如图所示，所观察到的到CRS发作和神经毒性发作的中值时间分别为5天和11天，其中在开始给予细胞疗法后不到72小时，仅11％的患者经历CRS发作。到CRS和神经毒性消退至1级或更佳的中值时间分别为5天和7天。到CRS和神经毒性完全消退的中值时间分别为5天和11天。结果与以下结论一致：受试者中任何CRS或神经毒性的早期发作率都较低。
实施例3.B.2
实施例3.B.2描述了在实施例3.B.2中时间点的评估。到此时间点，从淋巴细胞清除(LD)至给予表达CAR的T细胞后90天收集不良事件(AE)数据。在第二时间点，评价了DLBCL群组(完整群组)中的69名受试者的安全性，其中38名接受DL1单一剂量，25名接受DL2单一剂量，以及6名接受DL1双剂量时间表。CRS或NT以外最常见的TEAE包括嗜中性粒细胞减少症(41％，28/69)、疲劳(30％，21/69)、血小板减少症(30％，21/69)和贫血(26％，18/69)。观察到一名5级TEAE弥漫性肺泡损伤。
在完整群组中没有观察到急性输注毒性，并且观察到大多数受试者(64％(44/69))没有CRS或NT，这表明可以在门诊递送表达CAR的T细胞。CAR T细胞相关毒性(包括CRS和NT)的比率在剂量水平之间没有差异。观察到跨越群组和剂量水平的安全性特征是相似的。在完整群组中经历过任何等级CRS或NT的25名受试者(36％)中，21名(30％)具有CRS且14名(20％)具有NT。没有受试者具有3级CRS，并且只有1名(1％，1/69)具有4级CRS且需要ICU护理；另外29％(20/69)具有1-2级CRS。在20％的NT患者中，6％(4/69)具有1-2级且14％(10/69)具有3-4级；2名(3％)有癫痫发作。未观察到5级CRS或5级NT。未观察到脑水肿的发生。所有CRS和NT事件均得到消退，但一例1级震颤除外，所述震颤在分析时正在进行。首次CRS和NT发病的中值时间分别为5天(范围2，12)和10天(范围5，23)。在输注后的前72小时内，没有观察到受试者具有NT，并且观察到仅10％(7/69)具有CRS(所有均为1级)；在>70％的受试者中，CRS在NT之前。总之，十三(13)名受试者(19％)需要使用抗细胞因子疗法干预CRS或NT(1名(1％)单独使用托西利珠单抗，6名(9％)单独使用地塞米松或6名(9％)使用此二者)且只有一名需要任何血管加压药支持。托西利珠单抗和地塞米松的中值剂量分别为1和6。中值CRS和NT持续时间分别为5天和11天。核心群组(n＝49)的分析也显示出类似的CRS和NT的比率。
在所述评估中，观察到CRS和/或NT的低发生率和晚期发作，在两种剂量水平下支持门诊输注的可行性，如在首次发热体征或持续超过特定时间段的发热时住院。未观察到5级CRS或5级NT，并且所有严重CRS和严重NT均得到消退。此外，3名患者中约有2名没有CRS或NT，从而支持可以在门诊基础上给予细胞。在3.B.2中评估时，四名受试者已经在门诊环境中接受治疗。此外，在接受DL1或DL2的受试者中未观察到毒性的显著差异，这表明在不增加毒性或安全性问题的风险的情况下实现了更高的反应率。
C.治疗后的反应结果
监测受试者的反应，包括通过在给予CAR+ T细胞后1、3、6、7、12、18和24个月时评估肿瘤负荷。
实施例3.C.1
实施例3.C.1描述了基于实施例3.A.1和3.B.1中的分析时间点的结果。
反应率列于表8中。在受试者群组中观察到高持久反应率，所述群组包括过度预治疗或具有较差预后和/或具有复发或难治性疾病的受试者。对于核心(n＝44)群组中所有剂量的受试者，所观察到的总体反应率(ORR)为86％，并且所观察到的完全反应(CR)率为59％。对于核心群组，在三个月时，总体反应率(ORR)为66％；在核心群组中三个月的CR率为50％。在核心群组中，3个月的ORR在剂量水平1下为58％(11/19)，在剂量水平2下为78％；剂量水平1的3个月CR率为42％(8/19)，并且剂量水平2为56％(5/9)，与所提出的对治疗结果的剂量反应效应一致。另外，所述结果符合剂量与反应持久性之间的关系。
DL1S：DL1 1-剂量时间表；DL2S：DL2 1-剂量时间表；DL1D：DL1 2-
剂量时间表；
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描(restaging scan)事件的患者。
不包括在数据快照前<28天治疗的患者。
b分母是在数据快照日期之前(在第3个月进行功效评估或者先前的PD
或死亡评估)，在≥3个月前接受CAR T细胞疗法的患者数量。
c包括一名由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的患者
完整和核心群组中各个亚组的受试者之间的总体反应率分别显示于图5A和5B中。在风险较低的DLBCL亚组中，反应率总体上较高。在具有双重/三重命中分子亚型的患者中，在3个月时观察到大于50％的ORR，所述患者患有原发性难治性或化疗难治性DLBCL或从未实现过CR。在2名患者中观察到淋巴瘤的CNS受累的完全消退。
在评价的特定时间点之前六个月或更长时间治疗的受试者中，十(10)名患者在三个月时已经处于反应中，9名(90％)在六个月时仍有反应。在评价时间点，核心子集中97％已经反应的受试者存活并且处于随访中，中值随访时间为3.2个月。
对于受试者的完整和核心群组，反应持续时间和总体存活的结果(按最佳总体反应(无反应者、CR/PR、CR和/或PR)分组)分别显示于图6A和6B中。如图所示，在反应者中观察到延长的存活，且在具有CR的受试者中观察到反应持久性增加。虽然5/6的具有较差表现状态(ECOG 2)的受试者已经期满，但所有在三个月时处于反应中的患者在评价时都保持存活。
实施例3.C.2
实施例3.C.2描述了基于实施例3.A.2和3.B.2中的分析时间点的结果。
直到实施例3.C.2中的时间点，评价完整DLBCL群组中的68名受试者的反应。总体或客观反应(OR)、3个月和6个月的客观反应率分别为75％(51/68)、49％(27/55)和40％(14/35)。完全反应(CR)率、3个月CR率和6个月CR率分别为56％(38/68)、40％(22/55)和37％(13/35)。在DL2下治疗的受试者中观察到3个月时反应率提高的趋势(与DL1相比)：对于ORR，63％(12/19；95％CI 38，84)相对于40％(12/30；95％CI 23，59)CR，p＝0.148；以及对于CR，58％(11/19；95％CI 34，80)相对于27％(8/30；95％CI：12，46)，p＝0.0385。在16名双重/三重命中淋巴瘤受试者中，ORR为81％并且3个月CR率为60％。
在核心群组(对于实施例1.C.2中的时间点，n＝49)中，OR、3个月和6个月OR率分别为84％(41/49)、65％(26/40)和57％(13/23)。CR率、3个月CR率和6个月CR率分别为61％(30/49)、53％(21/40)和52％(12/23)。观察到在较高剂量下3个月时持久的ORR和CR类似的改善趋势。具体地，与给予DL1的核心群组受试者中52％(11/21；95％CI 30，74)和33％(7/21；95％CI 15，57)的3个月ORR和CR相比，对于给予DL2的核心群组中的受试者，3个月ORR为80％(12/15；95％CI 52，96)并且3个月CR为73％(11/15；95％CI 45，92)，其中分别为p＝0.159和p＝0.0409。在已经接受DL2和3个月随访(n＝15)的CORE群组受试者中，3个月ORR为80％并且3个月CR为73％。
在1.C.2中所述时间点完整群组和核心群组中的中值DOR分别为5.0和9.2个月；在完整群组中，CR的中值持续时间为9.2个月。核心群组中尚未达到CR的中值持续时间。完整群组中的中值总生存期(OS)为13.7个月，并且核心群组尚未达到。完整群组中的6个月OS为75％，其中中值随访时间为5.8个月。核心群组的6个月OS为88％，其中中值随访时间为5.6个月。
D.评估血液中的CAR+T细胞
基于来自实施例3.A.1、3.B.1和3.C.1中描述的时间点的数据，进行药代动力学分析以评估在治疗后不同时间点的外周血中CAR+T细胞的数量。分析了来自在实施例3.A.1中的时间点在DLBCL群组中评估的五十五(55)名受试者和以下实施例4中所述的套细胞淋巴瘤(MCL)中的四(4)名受试者(在相同时间点评估)的结果。使用经验证的流式细胞术进行药代动力学(PK)测量，以检测CAR构建体中表达的标记，以及使用基于定量PCR的测定法以检测CAR构建体的整合。使用抗CD19抗体通过流式细胞术评估B细胞发育不良。如图7A中所示，在两个所给予剂量水平下，在整个评估过程中检测表达CAR的CD4+和CD8+细胞，如通过在对数标度上标绘的细胞数量/μL血液(中值±四分位数)所测量。相对于接受DL1，接受DL2的受试者在外周血中具有更高的对于CD3+/CAR+、CD4+/CAR+和CD8+/CAR+T细胞子集的中值Cmax和中值AUC0-28(对于CD3+、CD4+和CD8+，AUC0-28：DL2相对于DL1分别为1836相对于461、350相对于182以及1628相对于114；对于CD8+，p<0.05；Cmax；DL2相对于DL1分别为99.8相对于27.9、15.1相对于5.2以及73.1相对于5.5个细胞/μL)。达到CD3+CAR+T细胞扩增最大值的中值时间为15天(范围8-29)，并且剂量水平之间没有差异。表达CAR的CD4+和CD8+T细胞以相对相似的水平定位于骨髓。
与较低剂量水平相比，在没有观察到毒性增加的情况下在给予较高剂量水平的受试者中观察到中值曲线下面积(AUC)(在血液中随着时间的CD8+CAR+T细胞数量)增加。在反应者(CR/PR)中观察到高于非反应者(PD)的峰值CD8+/CAR+T细胞暴露；即使在疾病已经进展的受试者中，也观察到在评估期间(包括至3个月和6个月时)细胞的持久性(图7B)。CD8+CAR+T细胞的中值Cmax和中值AUC0-28在反应受试者中更高且在第3个月时具有持久的反应(在第3个月时CR/PR中相对于在第3个月时PD中，CD8+Cmax中值＝20.8相对于5.5；CD8+AUC0-28中值＝235相对于55)。在被评价CAR T细胞持久性的受试者中，29名受试者中的90％和93％在第3个月时分别具有可检测的CD8+和CD4+CAR+T细胞；19名受试者中的63％和58％在第6个月时分别具有可检测的CD8+和CD4+CAR+T细胞。在第3个月和第6个月时，在具有持久反应或复发的受试者之间未观察到CAR+T细胞持久性的统计学显著差异。尽管在第3个月时几乎所有受试者97％(34/35)且在第6个月时100％(24/24)被证明B细胞发育不良(<1个细胞/μl)，但在11名受试者的89％中在复发时CAR+T细胞的PK是可检测的。
未观察到与DL1相比DL2下更高的Cmax和AUC0-28与增加的CRS或NT相关。对于任何NT或>2级CRS，CD4+/CAR+和CD8+/CAR+T细胞的中值AUC比对于DL2的中值AUC分别高5至10倍和3至5倍。观察到较高的疾病负荷和炎性细胞因子的基线水平与较高的CAR+T细胞水平峰值、较高的细胞因子水平峰值和较高的CRS和NT发生率相关。结果与以下结论一致：DL2下的较高Cmax和中值AUC0-28没有增加CRS或NT。
结果与以下结论一致：即使在具有较差反应的受试者中，治疗也导致工程化细胞的暴露和持久性延长。在一些实施方案中，使用组合途径，例如在工程化细胞持续存在于受试者中的时间(例如，如通过外周血中的细胞水平所测量)，例如在复发或疾病进展后，例如可给予免疫检查点调节剂或其他免疫调节剂。在一些方面，在给予其他药剂或治疗之后，已经持续延长时间的细胞再次扩增或被激活和/或展现抗肿瘤功能。通常在发生神经毒性的受试者的血液中随时间观察到较高的中值CD4+和CD8+ CAR+ T细胞数量(图7C)。结果表明，CAR+T细胞展现出在较高剂量水平下扩增和持久性、3个月时的反应持久性增加，毒性没有增加。观察到的结果与以下提议是一致的：血液中CAR+T细胞和细胞因子的高水平峰值可能与NT和CRS相关并且可能受基线受试者因素的影响。观察到CAR+T细胞在复发时是存在的，这表明组合或再治疗途径可以提供某些优势。
E.血液分析物和神经毒性、CRS和反应
在给予CAR+ T细胞之前，测量受试者的血清中各种治疗前血液分析物(在实施例3.A.1中的时间点评估的那些)，包括细胞因子。使用多重细胞因子测定来测量细胞因子。使用基于单变量非参数检验的统计分析来评估与发展神经毒性的风险的潜在相关性。
图8显示在CAR+ T细胞疗法后未发生神经毒性的受试者与发生神经毒性的受试者中，以单位(LDH，U/L；铁蛋白，ng/mL；CRP，mg/L；细胞因子，pg/mL)表示的所评估分析物的中值水平。观察到某些血液分析物(包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的水平与发生神经毒性的风险水平相关(Wilcoxon p值<0.05，不进行多重数调节)。具体而言，所述结果与以下结论一致：LDH(其在一些实施方案中是疾病负荷的替代物)的治疗前水平可用于潜在神经毒性风险评估和/或对某些受试者的治疗的风险适应性给药或调整。此外，在给予CAR-T细胞组合物之前测量的肿瘤负荷与发生神经毒性的风险相关(Spearman p值<0.05)。在一些方面，LDH水平可以单独评估和/或与另一种治疗前参数组合评估，所述另一种治疗前参数例如为疾病负荷的另一种量度或指示物，例如肿瘤体积测量值，例如尺寸乘积之和(SPD)或疾病负荷的其他基于CT或基于MRI的体积测量值。在一些方面，对指示疾病负荷的一个或多个参数进行评估，并且在一些情况下所述一个或多个参数可以指示在T细胞疗法后发生神经毒性的风险的存在、不存在或程度。在一些方面，所述一个或多个参数包括LDH和/或体积肿瘤测量值。
在另外的分析中，在采用安全性评价的相关性分析中包括实施例3.A.1中的时间点的DLBCL群组中的五十五(55)名受试者和以下实施例4中所述的套细胞淋巴瘤(MCL)中的四(4)名受试者。在被评价安全性的59名受试者中，观察到CRS为32％(30％为1-2级，0％为3级，2％为4级)；在20％(5％为1-2级，10％为3级，5％为4级)中观察到NT。剂量水平与CRS或NT无关(分别为p＝0.565和p＝1.00)。与任何CRS和NT等级相关的受试者因素是较差的体力状态(例如ECOG状态2)(p＝0.03)和较高的疾病负荷(p<0.05)，如通过基于成像结果的直径乘积之和(SPD)所测量的。观察到与任何NT等级的发生相关的前CAR+ T细胞输注临床实验室参数和对于前CAR+ T细胞输注的细胞因子测量包括更高的血清LDH、铁蛋白和CRP以及更高的血浆IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β(对于每一种，p<0.05)。IL-8、IL-10和CXCL10的更高的前CAR+ T细胞输注血浆水平也与3-4级NT相关(对于每一种，p<0.05)。
在被评价反应的DLBCL群组中的54名受试者中，更高的ECOG评分和从CLL或MZL转化的DLBCL与在第3个月时更低的持久反应相关(对于每一种，p＝0.02)。与最佳ORR相关的前CAR+ T细胞输注参数包括更低的铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10值，并且与在3个月时持久反应相关的那些参数包括更低的铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β、TNF-α和更高的前CAR+ T输注血红蛋白和白蛋白(对于每一种，p<0.05)。
在一些情况下，对单采术样品和用于给予的CAR+ T细胞组合物进行了评估并将其与临床结果相关。结果显示T细胞记忆子集和T细胞功能可能与某些临床结果相关。
结果显示，某些基线患者特征(包括治疗前的炎性状态和高肿瘤负荷)可以用于鉴定给予表达CAR的T细胞后具有增加的毒性风险的患者。观察到低肿瘤负荷和低炎性状态与改善的毒性特征和更好的反应持久性相关。所述结果支持在治疗过程中较早地治疗受试者和/或评估一组临床和实验室生物标记以对受试者进行针对潜在早期干预的风险分层，所述结果可以降低毒性风险并改善反应的持久性。
图9显示标绘完整和核心群组内单独受试者的无进展时间(月)的图。每个条形代表单个患者。阴影指示最佳总体反应(在每种情况下，除非另有指示，否则是在1个月时实现)；纹理指示剂量(实心＝剂量水平1，单一剂量；交叉阴影线，剂量水平2，单一剂量；竖直阴影线＝剂量水平1，双剂量)。水平箭头指示正在进行中的反应。某些单独受试者最初(例如，在1个月时)被评估为展现稳定疾病(SD)或部分反应(PR)，并且随后观察到已经实现PR(例如，SD转化为PR)或CR。在此类情况下，如图所示，单独患者条形的阴影指示最佳总体反应，并且沿着每个单独受试者条形的点(与阴影同样对应于所实现的反应)指示在受试者中观察到每例SD、PR和/或CR发生的时间。在两名患者中观察到淋巴瘤的CNS受累的完全消退。观察到一名受试者中的CAR+细胞在复发后在活组织检查后扩增。
实施例4：向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者给予表达抗CD19 CAR的细胞
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物(如实施例1中所述来产生)给予至四(4)名患有套细胞淋巴瘤(MCL)且1线治疗已经失败的人受试者。在静脉内给予之前将冷冻保存的细胞组合物解冻。将治疗性T细胞组合物作为定义的组合物细胞产物来给予，其具有源自相同受试者的CAR+工程化T细胞的经配制CD4+和CD8+群体，以约1:1的目标比率来给予。以含有5x 107个表达CAR的T细胞的剂量水平1(DL1)的单一剂量向受试者给予表达CAR的T细胞的剂量(作为表达CAR的CD4+和CD8+T细胞的分割剂量)。在CAR+ T细胞输注前三(3)天开始，受试者接受采用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
如实施例1中所述监测受试者的反应和毒性。在任何受试者中均未观察到CRS或神经毒性。在所治疗的4名受试者中，两(2)名受试者实现PR(非持久)，且两(2)名受试者患有进行性疾病。
实施例5：针对表达抗CD19 CAR的细胞的给予，对来自患有复发和难治性非霍奇金 淋巴瘤(NHL)的受试者的给予前后肿瘤活检进行生物标记评估
在表达CAR的细胞的给予之前和/或之后在从受试者收集的肿瘤活检中评估几种生物标记的表达。
A.肿瘤活检样品
从选择的具有复发或难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者收集肿瘤活检，所述受试者接受基于实施例3.A.2中的评估时间点的采用以上实施例3和4中所述的治疗性CAR+T细胞组合物的治疗，所述治疗性CAR+T细胞组合物含有表达对于CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞。在给予CAR+T细胞之前(治疗前)和在给予之后7至20天(治疗后)获得肿瘤活检。所述实施例中描述了通过实施例3.A.2中的时间点在正在进行的研究中进行评价的结果。检查了来自总计28名受试者(25名DLBCL和3名MCL)的43个活检(26个治疗前；17个治疗后和15个匹配对)的结果。
B.评估生物标记、反应和安全性结果
使用对编码抗CD19 CAR的mRNA特异性的原位杂交(ISH)探针定量CAR+T细胞在肿瘤活检中的浸润。使用多重免疫荧光(IF)测定对CAR+T细胞、非CAR T细胞和B细胞计数，所述多重免疫荧光测定可检测表达CAR的细胞的细胞表面替代标记：CD4、CD8、CD19、CD20、CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1。将肿瘤活检切片用苏木精和伊红(H&E)染色，并评估组织质量和肿瘤鉴定。使用图像分析软件分析免疫荧光图像。使用基于单变量t检验的统计分析评估与反应结果的潜在相关性，并且p值是双侧的，不进行多重数调节。
评估受试者的反应和安全性结果，包括通过评估给予CAR+T细胞之后多个时间点(包括在给予之后3个月)时的肿瘤负荷，以及确定受试者是否具有进展疾病(PD)、稳定疾病(SD)、部分反应(PR)或完全反应(CR)。评价的安全性结果包括神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语症、脑病、肌阵挛癫痫、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表评级。
C.结果
在被评估活检的受试者中观察到的客观反应率(ORR；包括CR和PR)为71％(20/28)。在被评估活检的受试者的36％(10/28；1级、2级)中观察到1级、2级CRS，并且在被评估的受试者的18％(5/28)中观察到2-4级NT。
观察到治疗前肿瘤活检含有不同的细胞组成：肿瘤细胞(中值：77％；范围5％-96％)，CD4+细胞(0.90％；0.02％-15％)和CD8+细胞(1.5％；0％-23％)。结果显示，在CAR+ T细胞给予后3个月时CR或PR的受试者与PD受试者相比在治疗前肿瘤中具有更高百分比的内源性CD4+细胞(CR，PR中值：7.9％；PD中值：0.38％；p<0.0001)。治疗前肿瘤中CD8+细胞的百分比在3个月反应组之间没有差异(CR，PR中值：1.9％；PD中值：0.47％；p＝0.6496)。
在治疗后活检中，观察到CAR+ T细胞已浸润肿瘤，并且在活检样品中构成高达22％的细胞。观察到与继续实现SD或PD(中值：0.51％)的最佳总体反应(BOR)的受试者相比，在继续实现CR(中值：3.9％)或PR(中值：1.1％)的受试者中治疗后样品(给予后7至20天)中的肿瘤浸润水平更高。虽然观察到CD4+和CD8+CAR T细胞二者在治疗后时间点(给予后7至20天)已浸润肿瘤区，但观察到与继续实现SD或PD的BOR(CR中值：0.83；SD，PD中值：0.14；p＝0.0097)的受试者相比，在所述治疗后时间点继续实现CR的受试者具有较高的CD8+CAR+T细胞与CD4+CAR+T细胞的比率。。
比较来自单独受试者的匹配的治疗前和治疗后活检，结果显示这样的趋势，即与最终实现SD或PD的BOR(CR，PR中值变化：+5.3％；SD，PD中值变化：+0.06％；p＝0.1225)的受试者相比，最终实现CR或PR的BOR的受试者在肿瘤中具有更大的CD8+细胞(CAR+T和非CART)的治疗后增加。
免疫抑制因子(包括CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1)的表达在治疗前(CD73(中值：1.5％；范围为0％-42％)、FOXP3(0.10％；0％-1.5％)、IDO(0.06％；0％-11％)、CD163(1.2％；0-24％)和PD-L1(0.16％；0％-56％))和治疗后(CD73(1.6％；0％-53％)、FOXP3(0.09％；0％-4.3％)、IDO(0.28％；0-15％)、CD163(3.6％；0％-22％)和PD-L1(3.3％；0％-65％))的受试者中变化。观察到匹配的活检中CD8+细胞的治疗后增加与IDO(R2＝0.64)和PD-L1(R2＝0.61)表达的治疗后增加相关。所述结果与以下结论一致：在评估时CD8+ CAR+细胞的浸润可能指示实现一定程度的反应或反应持续时间的潜在可能性，并且此类细胞的存在和/或活性可导致TME因子的上调。
D.结论
在观察到CAR+ T细胞给予后第3个月时持久的反应与治疗前肿瘤中较高水平的CD4+细胞相关后。在治疗后的肿瘤细胞中，观察到CAR+ T细胞(CD4+和CD8+二者)浸润肿瘤和邻近组织。ORR与肿瘤活检中CAR+ T细胞的增加相关。与治疗前肿瘤活检中的CD8+水平相比，治疗后肿瘤活检中CD8+水平的增加与IDO和PD-L1表达的增加相关。在一些实施方案中，靶向这些途径的疗法(如在CAR-T细胞的给予时或给予之后给予的疗法)可以在CAR+T细胞给予后增强一种或多种治疗结果或其持续时间。
实施例6：在给予表达抗CD19 CAR的细胞之后评估具有复发和难治性非霍奇金淋 巴瘤(NHL)的受试者中的持久性
在以上实施例3中描述的临床研究中的后续时间点，在患者中评估持久性和扩增。
A.受试者、反应和安全性
在这个实施例中呈现的这个时间点的分析是基于对完整的DLBCL群组(评估88名(34名来自核心群组)的反应并评估91名的安全性)中总计91名受试者的评估，已经向所述受试者给予表达抗CD19 CAR的细胞。如表9中所示。客观反应率(ORR)为74％，包括52％的显示完全反应(CR)的受试者。任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)的发生率为35％，其中严重CRS为1％；并且任何等级的神经毒性(NT)的发生率为19％，其中严重NT为1％。
a四名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有相似结果。
b包括具有PD、死亡或28天重分期扫描的事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
c包括所有在数据快照日期前28天已经接受至少一个剂量的表达CAR的合规细胞产物或死亡的受试者。
B.持久性
分别基于可检测的表达CAR的CD3+、CD4+或CD8+细胞水平和在血液中检测到的CD19+B细胞水平，在已经给予CAR+ T细胞的患有DLBCL的可评价受试者中于不同时间点评估表达CAR的细胞和CD19+ B细胞发育不良(CD19+ B细胞数量低或不存在)的持久性。结果列于表10中。在进展时评价的受试者(n＝37)中，在进展时观察到中值为0.17个CD4+ CAR+表达细胞/μL(范围，0-65.5个细胞/μL)，并在进展时观察到中值为0.15个CD8+ CAR+细胞/μL(范围，0-131.8个细胞/μL)。在复发(在实现CR/PR后进展)时评价的受试者(n＝12)中，观察到中值0.17个表达CAR的CD4+细胞/μL(范围，0-35.1个细胞/μL)和中值0.20个细胞/μL(范围，0-131.8个细胞/μL)。在复发时观察到表达CAR的CD8+细胞。在12个月时在75％的患有DLBCL的可评价受试者中观察到表达CAR的细胞的长期持久性。还在12个月时在75％的受试者中以及在不论何种复发状态的受试者中观察到B细胞发育不良的长期持久性。所述结果与以下结论一致：表达抗CD19 CAR的细胞在大多数受试者中展现长期持久性，并且表明即使在复发患者中也有持续进行低水平疾病控制的潜力。
在复发的受试者中，91.7％(11/12)在复发时在血液中具有可检测的表达CAR的细胞。这个结果与以下结论一致：在一些实施方案中，组合疗法或其他干预可以用于扩大和/或加强表达CAR的细胞(例如可被消耗的那些)。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践这些变化，并且这些变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
序列表
<110> 朱诺治疗有限公司(Juno Therapeutics, Inc.)
ALBERTSON, Tina
<120> 调节基因工程化细胞的方法
<130> 735042009140
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 62/580,414
<151> 2017-11-01
<150> 62/549,391
<151> 2017-08-23
<150> 62/515,512
<151> 2017-06-05
<150> 62/514,777
<151> 2017-06-02
<150> 62/492,950
<151> 2017-05-01
<150> 62/444,784
<151> 2017-01-10
<150> 62/429,740
<151> 2016-12-03
<160> 56
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 间隔子(IgG4铰链)
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 间隔子(IgG4铰链)
<400> 2
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<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 铰链-CH3 间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3 间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 4-1BB
<300>
<308> UniProt Q07011.1
<309> 1995-02-01
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro
1 5 10
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 24
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 25
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> scFv
<400> 25
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa4 is cysteine or threonine
<400> 26
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 46
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1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120
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20 25 30
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35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
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85 90 95
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
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<223> FMC63 CDR L3
<400> 56
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5

Claims (63)

1.一种用于扩增基因工程化细胞的方法，其包括对患有疾病或病症的受试者实现治疗，其中所述治疗包括给予免疫调节剂、辐射、或者物理或机械操纵病灶或其部分中的一种或多种，所述受试者先前已经接受基因工程化细胞的给予以便治疗疾病或病症，其中所述方法导致所述受试者中、所述病灶中、和/或所述受试者的组织或器官或流体中所述基因工程化细胞的扩增，和/或导致所述病灶、组织或器官或流体中所述基因工程化细胞数量的增加。
2.权利要求1的方法，其中所述方法不包括基因工程化细胞的后续给予，和/或在没有基因工程化细胞的这种后续给予的情况下实现扩增。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中，在所述病灶或其部分中，所述工程化细胞现在存在或现在可能存在或者过去存在或过去可能存在。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述病灶是肿瘤。
5.权利要求4的方法，其中所述肿瘤是原发性或继发性肿瘤。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述病灶是或包含骨髓组织。
7.权利要求1、2和4-6中任一项的方法，其中在所述治疗时或紧接所述治疗时之前，所述受试者在对所述基因工程化细胞有反应后，任选地在缓解后已复发，和/或过去对所述基因工程化细胞的给予没有反应。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述受试者在对所述基因工程化细胞的先前给予有反应后已复发，和/或过去对所述基因工程化细胞的先前给予没有反应。
9.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述受试者过去已对所述基因工程化细胞有反应并且随后在所述治疗之前已停止反应和/或已复发。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞先前已经在所述受试者中扩增或被观察到在治疗之前已经扩增。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中在治疗时或紧接治疗时之前：
所述受试者处于缓解期；
血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少或无法检测到；
与给予所述基因工程化细胞之后的先前时间点相比，来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少；和/或
来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的所述基因工程化细胞的细胞数量与开始给予所述基因工程化细胞之后所述受试者血液中可检测或检测到的所述基因工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与给予所述基因工程化细胞后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的某个时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述治疗在开始给予所述基因工程化细胞之后或在所述基因工程化细胞的最后一次给药之后在、在约、或大于、或大于约2周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年或更长时间时进行。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述治疗直接或间接地调节所述受试者中体内所述基因工程化T细胞的活性或功能。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述治疗包括给予免疫调节剂。
15.权利要求14的方法，其中所述免疫调节剂是或包含免疫抑制分子，是或包含免疫检查点分子或免疫检查点途径的成员，和/或是或包含免疫检查点分子或途径的调节剂。
16.权利要求15的方法，其中所述免疫检查点分子或途径是或包含PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷受体、CD73、CD39、腺苷2A受体(A2AR)、或腺苷或涉及任何前述项的途径。
17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是BY55、MSB0010718C、伊匹单抗、达珠单抗、贝伐单抗、巴利昔单抗、伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、MPDL3280A、匹利珠单抗、MK-3475、BMS-936559、阿特珠单抗、曲美木单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗、鲁卡木单抗、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、阿维单抗、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗、BKT140、伐立鲁单抗、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗、CC-90002、和MNRP1685A、或其抗体结合片段。
18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是抗PD-L1抗体。
19.权利要求1-18的方法，其中所述抗PD-L1抗体是MEDI14736、MDPL3280A、BMS-936559、LY3300054、阿特珠单抗、或阿维单抗、或其抗原结合片段。
20.权利要求14的方法，其中所述免疫调节剂是沙利度胺或是沙利度胺的衍生物或类似物。
21.权利要求14或20的方法，其中所述免疫调节剂是来那度胺或泊马度胺，阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。
22.权利要求14、20和21中任一项的方法，其中所述免疫调节剂是来那度胺，来那度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。
23.权利要求8-22中任一项的方法，其中在所述复发之后并且在所述治疗之前，未曾向所述受试者给予外源药剂或重组药剂以便治疗所述疾病或病症或以便调节所述基因工程化细胞的活性。
24.权利要求1-14和23中任一项的方法，其中所述治疗包括辐射。
25.权利要求1-14和23中任一项的方法，其中所述治疗包括对所述病灶或其部分进行物理或机械操纵，任选地其中所述物理或机械操纵包括穿透所述病灶或其部分的区。
26.权利要求25的方法，其中所述物理或机械操纵包括活检。
27.权利要求26的方法，其中所述活检是通过针或套管针进行的。
28.权利要求26或权利要求27的方法，其中所述活检包括切开活检。
29.权利要求1-28中任一项的方法，其中与在刚要进行所述治疗之前时相比，所述方法导致所述基因工程化细胞的扩增或所述基因工程化细胞的数量的增加。
30.权利要求1-29中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞的扩增发生在所述治疗后在或在约24小时、48小时、96小时、7天、14天或28天内。
31.权利要求1-30中任一项的方法，其中：
所述扩增导致与刚要进行所述治疗之前相比在血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的基因工程化细胞；或者
所述扩增导致与所述治疗之前在血液中先前的工程化细胞水平峰值相比在血液中大于或大于约1.5倍、2.0倍、5.0倍、10倍、100倍、200倍或更多倍的可检测的基因工程化细胞。
32.权利要求1-31中任一项的方法，其中其中在所述治疗后的某个时间血液中可检测的基因工程化细胞的数量是：
与所述治疗之前的先前时间点的所述基因工程化细胞数量相比有所增加，任选地增加了1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更多倍；
比在所述治疗之前在所述受试者血液中可检测的基因工程化细胞的数量峰值或最大值多1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍或更多倍；
在已在血液中检测到此类细胞的最大值水平的峰值后的某个时间在血液中可检测到多于或大约多于10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的所述基因工程化细胞。
33.权利要求1-32中任一项的方法，其中所述工程化细胞表达重组受体。
34.权利要求33的方法，其中所述重组受体特异性地结合与所述疾病或病症相关的抗原或在所述病灶或其部分的细胞中表达的抗原。
35.权利要求34的方法，其中所述抗原选自5T4、8H9、avb6整合素、B7-H6、B细胞成熟抗原(BCMA)、CA9、癌症-睾丸抗原、碳酸酐酶9(CAIX)、CCL-1、CD19、CD20、CD22、CEA、乙型肝炎表面抗原、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、癌胚抗原(CEA)、CE7、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、c-Met、双重抗原、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、肝配蛋白B2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、雌激素受体、胎儿AchR、叶酸受体α、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、G250/CAIX、GD2、GD3、gp100、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MART-1、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、NCAM、NKG2D、NKG2D配体、NY-ESO-1、O-乙酰化GD2(OGD2)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、PSCA、孕酮受体、存活蛋白、ROR1、TAG72、tEGFR、VEGF受体、VEGF-R2、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性抗原。
36.权利要求1-35中任一项的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
37.权利要求1-36中任一项的方法，其中所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
38.权利要求1-37中任一项的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤。
39.权利要求1-38中任一项的方法，其中所述疾病或病症是成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、或弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、或任何前述项的亚型。
40.权利要求33-39中任一项的方法，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
41.权利要求34-40中任一项的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
42.权利要求41的方法，其中所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域。
43.权利要求34-42中任一项的方法，其中所述抗原是CD19。
44.权利要求42或权利要求43的方法，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域。
45.权利要求41-44中任一项的方法，其中所述CAR还包含共刺激信号传导区域。
46.权利要求45的方法，其中所述共刺激信号传导结构域包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
47.权利要求1-46中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞包括T细胞或NK细胞。
48.权利要求1-46中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞是T细胞并且所述T细胞是CD4+或CD8+T细胞。
49.权利要求1-48中任一项的方法，其中所述基因工程化T细胞的治疗细胞包含源自受试者的原代细胞。
50.权利要求1-49中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞的细胞对于所述受试者是自体的。
51.权利要求1-49中任一项的方法，其中所述基因工程化细胞的细胞对于所述受试者是同种异体的。
52.权利要求1-51中任一项的方法，其中所述受试者是人。
53.权利要求1-52中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的所述剂量包含如下剂量：从或从约1x 105至5x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约1x 105至1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x 105至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或者从或从约1x 106至1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
54.权利要求1-53中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的所述剂量为不多于5x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于1x 108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于1x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于0.5x 107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于1x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不多于0.5x 106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
55.权利要求1-54中任一项的方法，其中先前给予的基因工程化细胞的所述剂量包含如下剂量：在约0.25x 106个细胞/kg受试者体重与5x 106个细胞/kg、0.5x 106个细胞/kg受试者体重与3x 106个细胞/kg、约0.75x 106个细胞/kg与2.5x 106个细胞/kg、或约1x 106个细胞/kg与2x 106个细胞/kg之间，每个都包含端值。
56.权利要求1-55中任一项的方法，其中将基因工程化细胞的所述剂量以包含所述细胞的单一药物组合物或以包含所述细胞的多种组合物给予。
57.权利要求1-56中任一项的方法，其中所给予的基因工程化细胞是分割剂量，其中将所述剂量的细胞以共同包含所述剂量的细胞的多种组合物经不超过三天的时间段给予。
58.权利要求1-57中任一项的方法，其中所述方法包括实现后续治疗，其中所述后续治疗包括给予免疫调节剂、辐射、或者物理或机械操纵病灶或其部分中的一种或多种，任选地其中所述后续治疗是在所述受试者在先前治疗后的反应后已经复发和/或在先前治疗后未曾实现完全反应之后来实现。
59.权利要求58的方法，其中所述受试者过去在先前治疗之后已对所述基因工程化细胞有反应，并且随后在所述后续治疗之前已停止反应和/或已复发。
60.权利要求58或权利要求59的方法，其中所述基因工程化细胞已在受试者中扩增或被观察到在先前治疗后且在所述后续治疗之前已经扩增。
61.权利要求58-60中任一项的方法，其中在所述后续治疗时或紧接所述后续治疗之前：
所述受试者处于缓解期；
血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少或无法检测到；
与开始先前治疗之后的先前时间点相比，来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的基因工程化细胞的数量减少；和/或
来自所述受试者的流体或组织或样品任选血液中可检测的所述基因工程化细胞的细胞数量与开始先前治疗之后所述受试者血液中可检测或检测到的所述基因工程化细胞的数量峰值或最大值相比，和/或与开始先前治疗后1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天或28天内的某个时间点的水平相比，减少了或减少了多于1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、10倍或更多倍。
62.权利要求1-61中任一项的方法，其中与在没有所述治疗的情况下向所述受试者给予所述基因工程化细胞的方法相比，所述基因工程化细胞在所述受试者中展现出增加的或延长的扩增和/或持久性。
63.权利要求1-62中任一项的方法，其中任选地以相同剂量或给药时间表，所述方法与使用其中在没有所述治疗的情况下向所述受试者给予所述基因工程化细胞和/或其中在不存在所述基因工程化细胞的情况下实现所述治疗的可比方法所观察到的降低相比，在更大程度上和/或在更长的时间段内降低肿瘤负荷。
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PCT/US2017/064363 WO2018102786A1 (en) 2016-12-03 2017-12-01 Methods for modulation of car-t cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110248678A true CN110248678A (zh) 2019-09-17

Family

ID=60923893

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780085445.6A Pending CN110248678A (zh) 2016-12-03 2017-12-01 调节car-t细胞的方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20190358262A1 (zh)
EP (1) EP3548083A1 (zh)
JP (2) JP2019536460A (zh)
KR (2) KR20190104529A (zh)
CN (1) CN110248678A (zh)
AU (1) AU2017368332A1 (zh)
BR (1) BR112019011025A2 (zh)
CA (1) CA3045508A1 (zh)
MA (1) MA46961A (zh)
MX (1) MX2019006285A (zh)
WO (1) WO2018102786A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111182909A (zh) * 2017-05-01 2020-05-19 朱诺治疗学股份有限公司 细胞疗法与免疫调节化合物的组合

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2939646T3 (es) 2016-10-13 2023-04-25 Juno Therapeutics Inc Métodos y composiciones de inmunoterapia que comprenden moduladores de la vía metabólica del triptófano
WO2019090003A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen (bcma)
US11851679B2 (en) 2017-11-01 2023-12-26 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
SG11202011541SA (en) * 2018-06-01 2020-12-30 Kite Pharma Inc Chimeric antigen receptor t cell therapy
WO2019232648A1 (en) * 2018-06-08 2019-12-12 Atomic Energy Of Canada Limited / Énergie Atomique Du Canada Limitée Use of a checkpoint inhibitor in combination with ultralow dose whole body irradiation
WO2020123388A1 (en) * 2018-12-11 2020-06-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Radiotherapies and uses thereof
CN114025775A (zh) * 2019-04-30 2022-02-08 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 联合疗法
GB201906202D0 (en) * 2019-05-02 2019-06-19 Autolus Ltd Cell
EP4055383A1 (en) 2019-11-05 2022-09-14 Juno Therapeutics, Inc. Methods of determining attributes of therapeutic t cell compositions
IL294715A (en) 2020-01-23 2022-09-01 Childrens Medical Ct Corp Inducible t-cell differentiation from human pluripotent stem cells
EP4150640A1 (en) 2020-05-13 2023-03-22 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015142675A2 (en) * 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor

Family Cites Families (155)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
IN165717B (zh) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5565566A (en) 1987-04-24 1996-10-15 Discovery Therapeutics, Inc. N6 -substituted 9-methyladenines: a new class of adenosine receptor antagonists
US5298508A (en) 1988-07-19 1994-03-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Irreversible inhibitors of adenosine receptors
US5147355A (en) 1988-09-23 1992-09-15 Brigham And Womens Hospital Cryoablation catheter and method of performing cryoablation
AU4746590A (en) 1988-12-28 1990-08-01 Stefan Miltenyi Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5452720A (en) 1990-09-05 1995-09-26 Photoelectron Corporation Method for treating brain tumors
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5429582A (en) 1991-06-14 1995-07-04 Williams; Jeffery A. Tumor treatment
US5424297A (en) 1992-04-27 1995-06-13 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Adenosine dextran conjugates
US5596619A (en) 1992-08-21 1997-01-21 Nomos Corporation Method and apparatus for conformal radiation therapy
JP3429761B2 (ja) 1992-09-16 2003-07-22 株式会社 日立製作所 超音波照射装置及びそれによる処理装置
US5620479A (en) 1992-11-13 1997-04-15 The Regents Of The University Of California Method and apparatus for thermal therapy of tumors
US5437673A (en) 1993-02-04 1995-08-01 Cryomedical Sciences, Inc. Closed circulation tissue warming apparatus and method of using the same in prostate surgery
US5629327A (en) 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
WO1994025462A1 (en) 1993-05-03 1994-11-10 The United States Of America, Represented By The 8-substituted 1,3,7-trialkyl-xanthine derivatives as a2-selective adenosine receptor antagonists
IL108918A (en) 1994-03-10 1997-04-15 Medic Lightech Ltd Apparatus for efficient photodynamic treatment
US5504090A (en) 1994-03-30 1996-04-02 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for the prevention and treatment of ischemia-reperfusion organ injury
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5670501A (en) 1994-09-01 1997-09-23 Discovery Therapeutics, Inc. N-substituted 9-alkyladenines
US5549639A (en) 1994-09-16 1996-08-27 Sandia Corporation Non-invasive hyperthermia apparatus including coaxial applicator having a non-invasive radiometric receiving antenna incorporated therein and method of use thereof
WO1996013593A2 (en) 1994-10-26 1996-05-09 Procept, Inc. Soluble single chain t cell receptors
WO1996018105A1 (en) 1994-12-06 1996-06-13 The President And Fellows Of Harvard College Single chain t-cell receptor
US20020150914A1 (en) 1995-06-30 2002-10-17 Kobenhavns Universitet Recombinant antibodies from a phage display library, directed against a peptide-MHC complex
US5658234A (en) 1995-07-24 1997-08-19 J. D. Technologies, Inc. Method for treating tumors
US5776175A (en) 1995-09-29 1998-07-07 Esc Medical Systems Ltd. Method and apparatus for treatment of cancer using pulsed electromagnetic radiation
WO1997027177A2 (en) 1996-01-29 1997-07-31 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Dihydropyridine-, pyridine-, benzopyran-4-one- and triazoloquinazoline derivatives, their preparation and their use as adenosine receptor antagonists
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
WO1997034634A1 (en) 1996-03-20 1997-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain fv constructs of anti-ganglioside gd2 antibodies
US5654279A (en) 1996-03-29 1997-08-05 The Regents Of The University Of California Tissue destruction in cryosurgery by use of thermal hysteresis
SK9199A3 (en) 1996-07-24 1999-07-12 Celgene Corp 2,6-dioxopiperidines, pharmaceutical composition them containing and their use
US5798368A (en) 1996-08-22 1998-08-25 Celgene Corporation Tetrasubstituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolines and method of reducing TNFα levels
US6281230B1 (en) 1996-07-24 2001-08-28 Celgene Corporation Isoindolines, method of use, and pharmaceutical compositions
HU228769B1 (en) 1996-07-24 2013-05-28 Celgene Corp Substituted 2(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phthalimides and -1-oxoisoindolines and their use for production of pharmaceutical compositions for mammals to reduce the level of tnf-alpha
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
US6038283A (en) 1996-10-24 2000-03-14 Nomos Corporation Planning method and apparatus for radiation dosimetry
US5786360A (en) 1996-11-19 1998-07-28 Link Technology Incorporated A1 adenosine receptor antagonists
JP3784419B2 (ja) 1996-11-26 2006-06-14 三菱電機株式会社 エネルギー分布を形成する方法
US6099554A (en) 1997-04-02 2000-08-08 Wound Healing Of Oklahoma Laser light delivery method
US6027499A (en) 1997-05-23 2000-02-22 Fiber-Tech Medical, Inc. (Assignee Of Jennifer B. Cartledge) Method and apparatus for cryogenic spray ablation of gastrointestinal mucosa
US6165440A (en) 1997-07-09 2000-12-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Radiation and nanoparticles for enhancement of drug delivery in solid tumors
US6009351A (en) 1997-07-14 1999-12-28 Urologix, Inc. System and method for transurethral heating with rectal cooling
CA2305630C (en) 1997-10-02 2012-11-06 Sunol Molecular Corporation Soluble single-chain t-cell receptor proteins
US6015541A (en) 1997-11-03 2000-01-18 Micro Therapeutics, Inc. Radioactive embolizing compositions
US5885276A (en) 1997-12-02 1999-03-23 Galil Medical Ltd. Method and device for transmyocardial cryo revascularization
TW496741B (en) 1998-03-12 2002-08-01 Dept Of Health R O C Radioactive particles and method for producing the same
JP3053389B1 (ja) 1998-12-03 2000-06-19 三菱電機株式会社 動体追跡照射装置
SK13642000A3 (sk) 1998-03-16 2001-04-09 Celgene Corporation 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)izoindolínové deriváty, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
ES2246567T3 (es) 1998-04-15 2006-02-16 Brigham & Womens Hospital Composiciones para receptores inhibidores de celulas t y usos de las mismas.
TR200003391T2 (tr) 1998-05-19 2001-02-21 Avidex Limited Çözünür T hücresi reseptörü
US6001054A (en) 1998-05-19 1999-12-14 Regulla; D. F. Method and apparatus for differential energy application for local dose enhancement of ionizing radiation
US6393096B1 (en) 1998-05-27 2002-05-21 Nomos Corporation Planning method and apparatus for radiation dosimetry
DE69933504T2 (de) 1998-05-28 2007-06-14 Terumo K.K. Apparat zur Gewebebestrahlung
US6326390B1 (en) 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth
JP2002524081A (ja) 1998-09-04 2002-08-06 スローン − ケッタリング インスティチュート フォー キャンサー リサーチ 前立腺−特異的膜抗原に特異的な融合受容体およびその使用
US6163726A (en) 1998-09-21 2000-12-19 The General Hospital Corporation Selective ablation of glandular tissue
US6335961B1 (en) 1998-10-06 2002-01-01 Siemens Medical Systems, Inc. Integrated high definition intensity multileaf collimator system which provides improved conformal radiation therapy while minimizing leakage
AU2472400A (en) 1998-10-20 2000-05-08 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
US6398710B1 (en) 1999-01-06 2002-06-04 Ball Semiconductor, Inc. Radiation dosimetry system
US6383180B1 (en) 1999-01-25 2002-05-07 Cryocath Technologies Inc. Closed loop catheter coolant system
US6179766B1 (en) 1999-01-28 2001-01-30 Gregg A. Dickerson Methods of breast cancer treatment
US6232297B1 (en) 1999-02-01 2001-05-15 University Of Virginia Patent Foundation Methods and compositions for treating inflammatory response
US6313131B1 (en) 1999-02-16 2001-11-06 Upsher-Smith Laboratories, Inc. Method of kidney treatment
CN1342146A (zh) 1999-03-18 2002-03-27 塞尔基因公司 取代的1－氧代－和1,3－二氧代异吲哚啉及其在用于减少炎性细胞因子含量的药物组合物中的用途
US6322771B1 (en) 1999-06-18 2001-11-27 University Of Virginia Patent Foundation Induction of pharmacological stress with adenosine receptor agonists
US6245005B1 (en) 1999-07-16 2001-06-12 International Business Machines Corporation Method and apparatus for facilitating radiation treatment of deep tumors
US6319189B1 (en) 1999-09-13 2001-11-20 Isotron, Inc. Methods for treating solid tumors using neutron therapy
US20040191260A1 (en) 2003-03-26 2004-09-30 Technion Research & Development Foundation Ltd. Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof
US6470217B1 (en) 2000-04-13 2002-10-22 Celsion Corporation Method for heating ductal and glandular carcinomas and other breast lesions to perform thermal downsizing and a thermal lumpectomy
US6449336B2 (en) 2000-05-19 2002-09-10 Siyong Kim Multi-source intensity-modulated radiation beam delivery system and method
CA2410510A1 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
AU2001297703B2 (en) 2000-11-07 2006-10-19 City Of Hope CD19-specific redirected immune cells
US6458810B1 (en) 2000-11-14 2002-10-01 George Muller Pharmaceutically active isoindoline derivatives
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US7091353B2 (en) 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
GB0100624D0 (en) 2001-01-10 2001-02-21 Vernalis Res Ltd Chemical compounds VII
CA2439410C (en) 2001-02-27 2011-09-06 William D. Figg Analogs of thalidomide as potential angiogenesis inhibitors
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
PL208712B1 (pl) 2001-08-31 2011-05-31 Avidex Ltd Rozpuszczalny receptor komórek T (sTCR), rozpuszczalna αβ-postać receptora komórek T (sTCR), wielowartościowy kompleks receptora komórek T (TCR), sposób wykrywania kompleksów MHC-peptyd, środek farmaceutyczny zawierający sTCR i/lub wielowartościowy kompleks TCR, cząsteczka kwasu nukleinowego, wektor, komórka gospodarz, sposób otrzymywania całości lub części łańcucha α TCR albo całości lub części łańcucha β TCR, sposób otrzymywania rozpuszczalnego receptora komórek T (sTCR), sposób otrzymywania rozpuszczalnej αβ-postaci receptora komórek T (sTCR) oraz sposób wykrywania kompleksów MHC-peptyd
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
AU2002356962C1 (en) 2001-12-12 2008-05-01 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for using extracellular adenosine inhibitors and adenosine receptor inhibitors to enhance immune response and inflammation
US6992176B2 (en) 2002-02-13 2006-01-31 Technion Research & Development Foundation Ltd. Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease
CA2476625A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Dyax Corp. Mhc-peptide complex binding ligands
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
US20040047858A1 (en) 2002-09-11 2004-03-11 Blumberg Richard S. Therapeutic anti-BGP(C-CAM1) antibodies and uses thereof
AU2003271904B2 (en) 2002-10-09 2009-03-05 Adaptimmune Limited Single chain recombinant T cell receptors
AU2003288675B2 (en) 2002-12-23 2010-07-22 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses therefor
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
US20090226474A1 (en) 2004-05-27 2009-09-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
EP1773383B1 (en) 2004-05-27 2012-09-12 Jon A. Weidanz Antibodies as t cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
US20090304679A1 (en) 2004-05-27 2009-12-10 Weidanz Jon A Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof
JP5563194B2 (ja) 2004-06-29 2014-07-30 イムノコア リミテッド 改変ｔ細胞レセプターを発現する細胞
US7244759B2 (en) 2004-07-28 2007-07-17 Celgene Corporation Isoindoline compounds and methods of making and using the same
CN109485727A (zh) 2005-05-09 2019-03-19 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
MX2007015942A (es) 2005-07-01 2008-03-07 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales humanos para ligandos 1 (pd-l1) de muerte programada.
EP2111231A4 (en) 2007-02-13 2010-12-15 Univ Northeastern METHODS AND COMPOSITIONS FOR IMPROVING IMMUNE RESPONSES
WO2008121420A1 (en) 2007-03-30 2008-10-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred t lymphocytes
US7615883B2 (en) 2007-06-06 2009-11-10 Meheen H Joe Wind driven venturi turbine
DK2170959T3 (da) 2007-06-18 2014-01-13 Merck Sharp & Dohme Antistoffer mod human programmeret dødsreceptor pd-1
CA2703947C (en) 2007-10-26 2018-12-04 Governing Council Of The University Of Toronto Therapeutic and diagnostic methods using tim-3
ES2640216T3 (es) 2007-12-07 2017-11-02 Miltenyi Biotec Gmbh Sistemas y métodos para procesamiento de células
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
ES2639857T3 (es) 2008-02-11 2017-10-30 Cure Tech Ltd. Anticuerpos monoclonales para el tratamiento del tumor
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
GB0906579D0 (en) 2009-04-16 2009-05-20 Vernalis R&D Ltd Pharmaceuticals, compositions and methods of making and using the same
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CA2734908A1 (en) 2008-08-25 2010-03-11 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
AU2009288289B2 (en) 2008-08-25 2012-11-08 Amplimmune, Inc. PD-1 antagonists and methods of use thereof
ES2961498T3 (es) 2008-08-26 2024-03-12 Hope City Método y composiciones para el funcionamiento mejorado del efecto antitumoral de las células T
WO2010065959A1 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Northeastern University Method of preparing adenosine-resistant anti-tumor t lymphocytes for adoptive immunotherapy
TWI686405B (zh) 2008-12-09 2020-03-01 建南德克公司 抗ｐｄ-ｌ１抗體及其於增進ｔ細胞功能之用途
EP3192811A1 (en) 2009-02-09 2017-07-19 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
RU2598710C2 (ru) 2009-04-30 2016-09-27 Тел Хашомер Медикал Рисерч Инфрастракче Энд Сервисиз Лтд. Антитела к сеасам1 и способы их использования
CA2777053A1 (en) 2009-10-06 2011-04-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Human single-chain t cell receptors
JP5956342B2 (ja) 2009-11-03 2016-07-27 シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ 形質導入Ｔ細胞選択のためのトランケート上皮増殖因子レセプタ（ＥＧＦＲｔ）
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
RS60033B1 (sr) 2009-11-24 2020-04-30 Medimmune Ltd Ciljano vezujući agensi usmereni na b7-h1
WO2011159877A2 (en) 2010-06-18 2011-12-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
BR122021026169B1 (pt) 2010-12-09 2023-12-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Uso de uma célula
ES2841983T3 (es) 2011-03-23 2021-07-12 Hutchinson Fred Cancer Res Método y composiciones para inmunoterapia celular
KR20140033029A (ko) 2011-04-01 2014-03-17 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 에이치엘에이 에이2에 의해 제공된 더블유티1 펩타이드에 특이적인 티 세포 수용체 유사 항체
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
US8841418B2 (en) 2011-07-01 2014-09-23 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to TIM3
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
BR112014011417B1 (pt) 2011-11-11 2021-10-13 Fred Hutchinson Cancer Research Center Polipeptídeo isolado capaz de elicitar uma resposta de célula t antígeno-específica para ciclina a1 humana, composição imunogênica compreendendo o referido polipeptídeo, bem como método para preparar células apresentadoras de antígeno, antígeno-pulsadas,e uso destas para superexpressão de ccna1
BR112014012819B1 (pt) 2011-11-28 2022-08-16 Merck Patent Gmbh Anticorpo anti-pd-l1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e composição
CA2892371C (en) 2011-12-01 2021-01-19 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Anti-ceacam1 recombinant antibodies for cancer therapy
WO2013109759A1 (en) 2012-01-17 2013-07-25 Northeastern University Methods and compositions for expanding immunosuppressive t regulatory cells in vitro and uses thereof
EP2814846B1 (en) 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
KR20150009556A (ko) 2012-05-03 2015-01-26 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 증강된 친화성 t　세포 수용체 및 이의 제조 방법
EP3698809A1 (en) 2012-07-31 2020-08-26 The Brigham & Women's Hospital, Inc. Modulation of the immune response using agents binding tim-3 and ceacam-1
WO2014031687A1 (en) 2012-08-20 2014-02-27 Jensen, Michael Method and compositions for cellular immunotherapy
CN112430580A (zh) 2012-10-02 2021-03-02 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于免疫疗法的组合物和方法
EP2906241B1 (en) 2012-10-12 2020-01-08 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Enhancement of the immune response
CN104781789B (zh) 2012-12-20 2018-06-05 三菱电机株式会社 车载装置
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
CA2913052A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
MX2016007239A (es) 2013-12-06 2017-01-05 Celgene Corp Metodos para determinar la eficacia del farmaco para el tratamiento de linfoma difuso de celulas b grandes, mieloma multiple, y canceres mieloides.
SG10201804439PA (en) 2013-12-20 2018-06-28 Hutchinson Fred Cancer Res Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
US10301370B2 (en) 2014-05-02 2019-05-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor T cells
JP6815992B2 (ja) * 2014-10-08 2021-01-20 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体療法に対する治療応答性を予測するバイオマーカーおよびその使用
US9713375B1 (en) 2015-02-26 2017-07-25 Brett Einar Rahm Collapsible portable table
AR105654A1 (es) 2015-08-24 2017-10-25 Lilly Co Eli Anticuerpos pd-l1 (ligando 1 de muerte celular programada)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015142675A2 (en) * 2014-03-15 2015-09-24 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEONID CHERKASSKY等: "Human CAR T cells with cell-intrinsic PD-1 checkpoint blockade resist tumor-mediated inhibition", 《THE JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION》 *
REBECCA GARDNER等: "CD19CAR T Cell Products of Defined CD4:CD8 Composition and Transgene Expression Show Prolonged Persistence and Durable MRD-Negative Remission in Pediatric and Young Adult B-Cell ALL", 《BLOOD》 *
RYAN P LARSON等: "Preclinical Analyses Support Clinical Investigation of Combined PD-L1 Blockade and Anti-CD19 CAR T Cell Therapy for the Treatment of NHL", 《BLOOD》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111182909A (zh) * 2017-05-01 2020-05-19 朱诺治疗学股份有限公司 细胞疗法与免疫调节化合物的组合

Also Published As

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