CN104231011A

CN104231011A - 一种毛蕊花糖苷的制备方法

Info

Publication number: CN104231011A
Application number: CN201410462454.0A
Authority: CN
Inventors: 夏增华
Original assignee: SUZHOU HEYAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SUZHOU HEYAN BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-09-12
Filing date: 2014-09-12
Publication date: 2014-12-24
Anticipated expiration: 2034-09-12
Also published as: CN104231011B

Abstract

本发明涉及一种毛蕊花糖苷的制备方法，其以桂花的花和/或叶为原料，包括（1）采用选自水或碳数1~6的醇中的一种或多种的组合为溶剂，对桂花进行浸渍，过滤，浓缩，得到桂花粗提物，浸渍温度不超过40℃；（2）将桂花粗提物通过树脂进行分离纯化得到毛蕊花糖苷富集部位；（3）将毛蕊花糖苷富集部位溶于乙醇水溶液中，在不超过40℃的温度下进行真空浓缩，然后置于5℃以下进行结晶，即得。本发明以桂花为原料，通过常规的初提取、树脂分离和重结晶即可获得纯度高达98%的毛蕊花糖苷产品，工艺简单，产品得率高，成本低，适于工业化应用。

Description

一种毛蕊花糖苷的制备方法

技术领域

本发明涉及一种制备毛蕊花糖苷的方法。

背景技术

毛蕊花糖苷是我国传统中药肉苁蓉的主要活性成分，其结构式如下：

肉苁蓉药用历史悠久，主要用于治疗肾阳不足，精血亏虚，阳痿不孕，腰膝酸软等症。肉苁蓉中的主要活性成分为毛蕊花糖苷及其类似成分。根据现代研究成果，毛蕊花糖苷具有雄性激素样作用，能显著增加去势大鼠精囊前列腺的重量，且无使胸腺萎缩的性激素副作用。毛蕊花糖苷能增加包皮腺和提肛肌的重量，显著缩短“肾阳虚”模型小鼠阴茎勃起潜伏期，增加精子数量，提高性器官脏器系数。除此之外，毛蕊花糖苷还有显著的抗衰老作用，改善记忆力作用，神经保护作用以及肝和心肌保护作用。因此，毛蕊花糖苷药理作用广泛，且未见毒性报道，具有极大的市场开发潜力。

毛蕊花糖苷在植物里面的分布不是很多，仅分布在有限的几种植物中，如肉苁蓉，地黄，裸花紫珠等，并且含量较低。根据相关报道《5种不同药材中毛蕊花糖苷的含量比较，中国中药杂志，2010，35(6)739-740》，毛蕊花糖苷在肉苁蓉中的含量仅为0.16％，在鲜地黄中的含量仅为0.12％，因此提取纯化的成本非常高，这也直接影响它的进一步开发。

国内已经申请的提取分离毛蕊花糖苷的专利主要有：《一种生产毛蕊花糖苷单体化合物的方法》，专利申请号200910041647；《一种采用固定化酶生产毛蕊花糖苷的方法》，专利申请号200910041643；《一种新鲜肉苁蓉经生物催化转化生产毛蕊花糖苷的方法》，专利申请号200910041649。以上专利中的制备方法都是要先通过β-葡萄糖苷酶经生物催化转化的方法将肉苁蓉中的松果菊苷转化为毛蕊花糖苷。但是由于肉苁蓉中这两种成分含量都不高，所以成本依然很高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种毛蕊花糖苷的制备新方法，该方法工艺简单，成本低，所得毛蕊花糖苷纯度高，适于工业化生产。

为解决以上技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种毛蕊花糖苷的制备方法，该方法以桂花的花和/或叶为原料，包括如下步骤：

(1)制备粗提物：采用选自水或碳数1～6的醇中的一种或多种的组合为溶剂，对所述原料进行浸渍，过滤，浓缩，得到粗提物，其中浸渍温度不超过40℃；

(2)粗提物的分离纯化：将步骤(1)所得粗提物通过树脂进行分离纯化得到毛蕊花糖苷富集部位，所述树脂为选自D101大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂，HPD-200树脂，Diaion HP-20树脂，XAD-1600树脂中的一种或多种的组合；

(3)将步骤(2)所得毛蕊花糖苷富集部位溶于乙醇水溶液中，在不超过40℃的温度下进行真空浓缩，然后置于5℃以下进行结晶，即得毛蕊花糖苷固体。

进一步地，步骤(1)中，采用体积分数为60％～90％的醇水溶液为溶剂。

根据一个具体和优选方面，步骤(1)中，采用体积分数为70％～90％的乙醇水溶液为溶剂，更优选地，采用体积分数为80％～85％的乙醇水溶液为溶剂。

优选地，步骤(1)中，浸渍温度为30～40℃。

进一步地，步骤(2)中，将粗提物用体积分数为10％～30％的乙醇水溶液完全溶解，上树脂柱，以乙醇水溶液为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，即得毛蕊花糖苷富集部位。

进一步地，步骤(2)中，进行洗脱时，首先用体积分数为15％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4个柱体积，流速为3个柱体积/小时，然后用体积分数为25％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4～5个柱体积，流速为3个柱体积/小时。

洗脱完成后，用体积分数为95％的乙醇水溶液对树脂柱进行洗涤再生。

优选地，步骤(2)中，将25％乙醇水溶液洗脱部位合并，浓缩，得所述毛蕊花糖苷富集部位。

优选地，步骤(3)中，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为90％～95％。

进一步地，步骤(3)中，浓缩至固液重量体积比为1：4～5时停止浓缩。

根据一个具体方面，采用桂花的干花或嫩叶为原料。

根据本发明，桂花可以是任何品种，没有特别限制。例如，桂花为金桂、银桂、月桂等。

由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优势：

桂花或桂花叶中毛蕊花糖苷的含量最高可以达到7.1％。本发明以桂花或桂花叶为原料，通过常规的初提取、树脂分离和重结晶即可获得纯度高达98％的毛蕊花糖苷产品，工艺简单，此外，该方法毛蕊花糖苷产品得率高(4.2％)，成本低，适于工业化应用。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明的基本原理、主要特征和优点，而本发明不受以下实施例的限制。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。另外，没有特殊说明时，“％”为体积百分含量。

实施例中高效液相检测条件如下：

液相：Agilent 1260 DAD

色谱柱：SC04(4.6×250mm)

柱温：30℃

进样量：5μl

流速：1ml/min

检测波长：254nm

流动相：甲醇(C)-水(A)，梯度洗脱，见下表：

时间(min)	A[％]	C[％]
			0	70	30
12	5	95
			15	5	95
15.1	70	30
			20	70	30

实施例1 桂花的提取

将1kg金桂花干花放在25L的不锈钢桶中，加入15L浓度为85％的乙醇水溶液，室温下进行浸渍。因为毛蕊花糖苷在高温时容易发生转化，因此浸渍温度以不超过40℃为宜。浸渍时间为7天。浸渍提取结束后，将提取液滤出，药渣里面再加入10L浓度为85％的乙醇，继续进行浸渍提取，提取时间为7天。过滤后合并两次提取液，浓缩，得到桂花粗提物201g，得率为20.1％。这样得到的桂花提取物与高温热提相比，所提出的杂质更少，纯度更高。经过高效液相检测，桂花粗提物中，毛蕊花糖苷的纯度为32％。

对比例1 桂花的提取

将1kg金桂花干花放在25L的不锈钢桶中，加入15L浓度为85％的乙醇水溶液，75℃条件下进行提取，提取时间为1个小时。提取结束后，将提取液滤出，药渣里面再加入10L浓度为85％的乙醇水溶液，继续进行提取，提取时间1个小时。过滤后合并两次提取液，浓缩，得到桂花粗提物254g，得率为25.4％。经过高效液相检测，热提取的桂花提取物中，毛蕊花糖苷的纯度为15.3％。

实施例2 桂花叶的提取

将1kg金桂花嫩叶放在25L的不锈钢桶中，加入15L浓度为85％的乙醇水溶液，室温下进行浸渍。因为毛蕊花糖苷在高温时容易发生转化，因此浸渍温度以不超过40℃为宜。浸渍时间为7天。浸渍提取结束后，将提取液滤出，药渣里面再加入10L浓度为85％的乙醇，继续进行浸渍提取，提取时间为7天。过滤后合并两次提取液，浓缩，得到桂花叶粗提物167g，得率为16.7％。经过高效液相检测，桂花叶粗提物中，毛蕊花糖苷的纯度为21.5％。

实施例3 毛蕊花糖苷的初步富集

将实施例1所得桂花粗提物，取50g溶于15％的乙醇水溶液中，上D101大孔吸附树脂，先用15％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4个柱体积，流速为3个柱体积/小时。然后用25％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4-5个柱体积，流速为3个柱体积。最后树脂柱用95％乙醇水溶液洗涤再生。将25％乙醇水溶液洗脱部位合并，浓缩，得到毛蕊花糖苷富集部位，重量为14.3g。经过高效液相检测，毛蕊花糖苷的纯度达到85％。

本步骤的大孔吸附树脂用AB-8，HPD-200，Diaion HP-20，XAD-1600等类型树脂替换后，也可以达到同样效果。

实施例4 毛蕊花糖苷的重结晶

将实施例3所得毛蕊花糖苷富集部位14.3g溶于95％乙醇水溶液中，在不超过40℃的条件下进行真空浓缩。浓缩到固液比重量体积比在1：4～5的时候停止浓缩，转移到4℃环境下进行结晶和重结晶，得到毛蕊花糖苷固体9.8g，经过液相检测，纯度达到98％。

以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围。

Claims

1.一种毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述方法以桂花的花和/或叶为原料，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，采用体积分数为70％～90％的碳数为1-6的醇/水溶液为溶剂。

3.根据权利要求2所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，采用体积分数为70％～90％的乙醇水溶液为溶剂。

4.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，浸渍温度为30～50℃。

5.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，将粗提物用体积分数为10％～30％的乙醇水溶液完全溶解，上树脂柱，以20％-50％的乙醇水溶液为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，即得所述毛蕊花糖苷富集部位。

6.根据权利要求5所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，进行洗脱时，首先用体积分数为15％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4个柱体积，流速为3个柱体积/小时，然后用体积分数为25％的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱体积为4～5个柱体积，流速为3个柱体积/小时。

7.根据权利要求6所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，将25％乙醇水溶液洗脱部位合并，浓缩，得所述毛蕊花糖苷富集部位。

8.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为90％～95％。

9.根据权利要求1或8所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，浓缩至固液重量体积比为1：4～5时停止浓缩。

10.根据权利要求1所述的毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：采用桂花的干花或嫩叶为原料。