WO2025258656A1

WO2025258656A1 - 肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子および医薬組成物

Info

Publication number: WO2025258656A1
Application number: PCT/JP2025/021274
Authority: WO
Inventors: 親正山下; 智后秋田; 孝一郎神尾; 正博清家; 耕太丹下; 悠太中井; 香澄伊藤
Original assignee: Tokyo University of Science; NOF Corp; Nippon Medical School Foundation
Current assignee: Tokyo University of Science; NOF Corp; Nippon Medical School Foundation
Priority date: 2024-06-14
Filing date: 2025-06-12
Publication date: 2025-12-18
Anticipated expiration: 2026-12-14

Abstract

本発明は、下記式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、コレステロール、ＰＥＧ脂質、およびｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含み、並びに下記式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、下記式（１）で表されるイオン性脂質の量が２０～６０ｍｏｌ％であり、リン脂質の量が７．５～５０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量が１０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質の量が０．５～１５ｍｏｌ％である、肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を提供する（下記式（１）中の記号の定義は明細書に記載した通りである）。

Description

肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子および医薬組成物

　本発明は、肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子、およびこれを含む医薬組成物に関する。

　ｓｉＲＮＡやｍｉＲＮＡ等のオリゴ核酸を用いた核酸治療、またはｍＲＮＡ若しくはｐＤＮＡ等を用いた遺伝子治療を実用化するために、効果的で安全な核酸送達キャリアが求められている。ウイルスベクターは、発現効率のよい核酸送達キャリアであるが、安全性の観点から実用上問題がある。そのため、より安全に使用できる非ウイルス核酸送達キャリアの開発が進められている。そのなかでもイオン性脂質を用いたキャリアである脂質ナノ粒子は、現在最も一般的に使用されている非ウイルス核酸送達キャリアである。

　イオン性脂質は、大別してアミン部位と脂質部位とから構成されている。例えば、イオン性脂質は、酸性条件下でプロトン化するアミン部位とポリアニオンである核酸とが静電的に相互作用し、脂質ナノ粒子を形成することで、細胞への取り込みを促進し、核酸を細胞内へ送達するものである。

　一般に広く用いられている公知のイオン性脂質としては、例えば、１，２－ジオレオイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＡＰ）が挙げられる。このような公知のイオン性脂質と、リン脂質、コレステロールおよびＰＥＧ脂質とを組み合わせることによって、脂質ナノ粒子を形成し、細胞内に核酸を送達し得ることが知られている（例えば、非特許文献１参照）。

　特許文献１では、一つまたは二つのアミン部位と一つの脂質部位とからなる化合物同士を、生分解性を示すジスルフィド結合で繋いだ構造を有するイオン性脂質が示されている。この特許文献１では、当該イオン性脂質が血中安定性や腫瘍標的性等の体内動態を改善することが示されている。また、アミン部位周辺の構造を変更することで、脂質膜構造体としてのｐＫａを細胞内でのエンドソーム脱出に有利な値に調整できる他、細胞内でジスルフィド結合が切断されることを利用し、核酸を脂質膜構造体から解離させる効果を有することが示されている。実際、公知のイオン性脂質であるＤＯＤＡＰと比較して、高い核酸送達効率を示すことから、当該イオン性脂質は核酸の細胞質内への送達効率の向上等の細胞内動態を改善できることが明らかとなっている。

　特許文献２では、３級アミン部位、ジスルフィド結合に加えて、脂質部位近傍に芳香環を導入したイオン性脂質を用いることで、エンドソーム膜との融合能を高め、細胞質への核酸送達効率をさらに高めた脂質膜構造体が示されている。

　上述のようにエンドソーム脱出効率や膜融合能を高めることで、細胞内動態を改善したイオン性脂質が開発されている。一方で、イオン性脂質を含む脂質ナノ粒子が、核酸送達キャリアとして生体内でより実用的な効果を発揮するためには、標的とする臓器や細胞へ良好に核酸を送達することが求められている。このような標的部位の例としては、肝臓、肺、脾臓等が挙げられる。

　核酸内封脂質ナノ粒子が肺疾患の治療に用いられた例としては、いくつか報告されている。例えば、非特許文献２は、イオン性脂質およびその構造中に第４級アンモニウムカチオンを有する脂質を用いたｍＲＮＡ内封脂質ナノ粒子を作製および投与したことが示されている。この非特許文献２では、構造中に第４級アンモニウムカチオンを有する脂質を用いたｍＲＮＡ内封脂質ナノ粒子を用いた肺疾患の治療が記載されている。また、肺疾患の治療に有効な核酸種はいくつかあるが、例えば、非特許文献３では、ｍｉＲＮＡのうちｍｉＲ－１６が肺疾患の治療に効果的であることが示されている。

　また、非特許文献４では、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド内封脂質ナノ粒子の処方検討が行われ、遺伝子のノックダウン効率が評価されている。

ＷＯ　２０１３／０７３４８０　Ａ１ＷＯ　２０１９／１８８８６７　Ａ１

Molecular Therapy Vol. 25 No. 7 July 2017, 1467-1475 Journal of Controlled Release 345 (2022), 819-831 Experimental Cell Research 398 (2021), 112416 Pharmaceutics 2021, 13, 544

　上述のように、非特許文献２では、構造中に第４級アンモニウムカチオンを有する脂質を用いたｍＲＮＡ内封脂質ナノ粒子を用いた肺疾患の治療が記載されている。しかし、構造中に第４級アンモニウムカチオンを有する脂質は細胞および生体への毒性に関与することがわかっているため、使用しないことが望ましい。

　また、非特許文献４には、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドに応じて、脂質ナノ粒子の脂質組成の最適化が必要であることが示されている。このように、内封する核酸種に応じて、脂質ナノ粒子の脂質組成の最適化が必要である。

　本発明は、上記状況に鑑み、肺疾患を効率的に治療できるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を提供することを目的とする。

　本発明者らは、第４級アンモニウムカチオンを有する脂質を用いず、且つｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の脂質組成を最適化する検討を行った結果、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを効率的に肺に送達することが可能な脂質組成を見出した。この知見に基づく本発明は、以下の通りである。

　［１］　（Ａ）式（１）：

（式（１）中、
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基を表し、
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基を表し、
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基または炭素数２～８のオキシジアルキレン基を表し、
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂは、それぞれ独立して、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合またはウレア結合を表し、
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基を表し、
　ｎ^ａおよびｎ^ｂは、それぞれ独立して、０または１を表し、
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、２～１０の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、並びに
　Ｒ^１０は、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、炭素数２～２０のアルキニル基、または炭素数３～１２の炭化水素環基を表し、並びにＲ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい。）
で表される基、
式（４）：

（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基を表し、およびＲ^１１は、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基を表し、Ｒ^１２中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、Ｒ^１３中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、並びにＲ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子、ＮＨ、または硫黄原子を表す。）
で表される基、または
式（５）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、およびＲ^１５～Ｒ^１７は、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキル基またはフェニル基を表す。）を表す。）
で表される基、
を表す。）
で表されるイオン性脂質、
　（Ｂ）リン脂質、
　（Ｃ）コレステロール、
　（Ｄ）ＰＥＧ脂質、および
　（Ｅ）ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ
を含み、並びに
　式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、式（１）で表されるイオン性脂質の量が２０～６０ｍｏｌ％であり、リン脂質の量が７．５～５０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量が１０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質の量が０．５～１５ｍｏｌ％である、肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。

　［２］　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、または
式（２）で表される基
であり、並びに
　式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、リン脂質の量が１０～５０ｍｏｌ％である前記［１］に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　［３］　式（１）で表されるイオン性脂質が、下記式：

で表されるイオン性脂質、下記式：

（式中、ＴＢＳは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基を表す。）
で表されるイオン性脂質、下記式：

で表されるイオン性脂質
からなる群から選ばれる一つである前記［１］または［２］に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　［４］　式（１）で表されるイオン性脂質が、下記式：

で表されるイオン性脂質である前記［１］または［２］に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。

　［５］　リン脂質が、１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンおよび１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［１］～［４］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　［６］　リン脂質が、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、および１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［１］～［４］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　［７］　リン脂質が、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［１］～［４］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。

　［８］　ＰＥＧ脂質が、式（６）：
ＣＨ_２（ＯＲ^６）－ＣＨ（ＯＲ^７）－ＣＨ_２（ＯＲ^８）　　　（６）
（式（６）中、
　Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８のいずれか二つはミリストイル基を表し、残りの一つは数平均分子量１，０００～３，０００のポリエチレングリコール鎖を介して連結される炭素数１～６のアルキル基を表す。）
で表されるジミリストイルグリセロールＰＥＧである前記［１］～［７］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。

　［９］　ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃが、ｍｉＲ－１６またはｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃである前記［１］～［８］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。

　［１０］　前記［１］～［９］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を含む、肺疾患の治療に用いられる医薬組成物。
　［１１］　前記［１］～［９］のいずれか一つに記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む、肺疾患の治療方法。

　本発明のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子は、肺細胞へ効率よくｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを送達できる。従って、本発明のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を用いることで肺疾患を効率的に治療できる。

　以下、本発明の実施形態を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、本明細書の各記載は、組み合わせられないことが明確である場合を除いて、互いに組み合わせることができる。

　本発明は、
　（Ａ）上記式（１）で表されるイオン性脂質（即ち、３級アミノ基、脂質部位、そして生分解性基であるジスルフィド結合を有するイオン性脂質）、
　（Ｂ）リン脂質、
　（Ｃ）コレステロール、
　（Ｄ）ＰＥＧ脂質、および
　（Ｅ）ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ
を含み、式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、式（１）で表されるイオン性脂質の量が２０～６０ｍｏｌ％であり、リン脂質の量が７．５～５０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量が１０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質の量が０．５～１５ｍｏｌ％である、肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子（以下、「本発明の脂質ナノ粒子」と略称することがある）、および本発明の脂質ナノ粒子を含む肺疾患の治療に用いられる医薬組成物に関するものである。

肺疾患
　肺疾患としては特に限定されないが、例えば、特発性肺線維症、非特異的間質性肺炎、呼吸細気管支炎を伴う間質性肺炎、剥離性間質性肺炎、特発性器質化肺炎、急性間質性肺炎等が挙げられる。

脂質ナノ粒子
　本明細書中、「脂質ナノ粒子」（Lipid Nano Particle、本明細書中「ＬＮＰ」と略称することがある）とは、両親媒性脂質の親水性基が界面の水相側に向かって配列した膜構造を有し、粒子径が１μｍ未満である粒子を意味し、「両親媒性脂質」とは、親水性基および疎水性基の両方を有する脂質を意味する。

　両親媒性脂質としては、例えば、イオン性脂質、リン脂質、ＰＥＧ脂質等を挙げることができる。本明細書中、「ＰＥＧ」とは、ポリエチレングリコールを意味し、「ＰＥＧ脂質」とは、ＰＥＧで修飾した脂質を意味し、「Ｘで修飾したＹ」（例えば、Ｘ：ＰＥＧ、Ｙ：脂質）とは、Ｘが結合したＹを意味する。言い換えると、「ＰＥＧ脂質」とは、ＰＥＧが結合した脂質を意味する。

　本明細書中、「ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子」とは、脂質ナノ粒子の内部にｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃが封入された脂質ナノ粒子を意味する。

　本発明の脂質ナノ粒子は、膜の構成物質として上記式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、コレステロール、およびＰＥＧ脂質を含む。

　本明細書中、「総脂質」とは、全ての脂質を意味する。脂質としては、例えば、イオン性脂質、コレステロール、ＰＥＧ脂質、リン脂質等が挙げられる。

　本発明の脂質ナノ粒子の粒子径は、好ましくは１０ｎｍ～５００ｎｍであり、より好ましくは３０ｎｍ～２００ｎｍである。粒子径の測定は、例えばELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）等の粒度分布測定装置を用いて行うことができる。ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の粒子径は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の製造方法により、適宜調整することができる。本明細書中、「粒子径」とは、動的光散乱法により測定した平均粒子径（ゼータ平均）を意味する。

　本発明の脂質ナノ粒子の表面電位（ゼータ電位）は、好ましくは－２０ｍＶ～＋２０ｍＶ、さらに好ましくは－１５ｍＶ～１５ｍＶである。表面電位（ゼータ電位）の測定は、例えばELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）等のゼータ電位測定装置を用いて行うことができる。ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の表面電位（ゼータ電位）は、その構成成分の組成により、調整することができる。

イオン性脂質
　本発明で使用するイオン性脂質は、下記式（１）で表されるイオン性脂質（本明細書中「イオン性脂質（１）」と略称することがある）である。イオン性脂質（１）は、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

（式（１）中、
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基を表し、
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基を表し、
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基または炭素数２～８のオキシジアルキレン基を表し、
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂは、それぞれ独立して、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合またはウレア結合を表し、
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基を表し、
　ｎ^ａおよびｎ^ｂは、それぞれ独立して、０または１を表し、
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは２～１０の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基を表し、およびＲ^１１は、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基を表し、Ｒ^１２中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、Ｒ^１３中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、並びにＲ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子、ＮＨ、または硫黄原子を表す。）
で表される基、
式（５）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、およびＲ^１５～Ｒ^１７は、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキル基またはフェニル基を表す。）を表す。）
で表される基、
を表す。）

　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基を表し、直鎖状であってもよく、分岐を有していてもよいが、好ましくは直鎖状である。該アルキレン基の炭素数は、好ましくは１～４であり、より好ましくは１～２である。炭素数１～６のアルキレン基としては、具体的にはメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、イソプロピレン基、テトラメチレン基、イソブチレン基、ペンタメチレン基、ネオペンチレン基等を挙げることができる。Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、好ましくは、それぞれ独立して、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、イソプロピレン基またはテトラメチレン基であり、より好ましくはそれぞれエチレン基である。

　Ｒ^１ａはＲ^１ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｒ^１ａはＲ^１ｂと同一の基である。

　Ｘ^ａおよびＸ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基を表し、好ましくは、それぞれ独立して、炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基である。

　炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基中の炭素数１～６のアルキル基は、直鎖状であっても分岐状であっても環状であってもよい。該アルキル基の炭素数は、好ましくは１～３である。炭素数１～６のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、１，２－ジメチルプロピル基、２－メチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、シクロヘキシル基等を挙げることができ、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基であり、より好ましくはメチル基である。

　炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基の好ましい具体的な構造は、Ｘ^１で示される。

　Ｘ^１のＲ^５は炭素数１～６のアルキル基を表し、直鎖状であっても分岐状であっても環状であってもよい。該アルキル基の炭素数は、好ましくは１～３である。炭素数１～６のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、１，２－ジメチルプロピル基、２－メチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、シクロヘキシル基等を挙げることができ、好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基であり、より好ましくはメチル基である。

　炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基中の炭素数は、好ましくは４～５である。炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基としては、具体的にはアジリジレン基、アゼチジレン基、ピロリジレン基、ピペリジレン基、イミダゾリジレン基、ピペラジレン基であり、好ましくはピロリジレン基、ピペリジレン基、ピペラジレン基であり、より好ましくはピペリジレン基である。

　炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１の環状のアルキレン３級アミノ基の好ましい具体的な構造はＸ^２で示される。

　Ｘ^２のｐは１または２である。ｐが１のときＸ２はピロリジレン基であり、ｐが２のときＸ^２はピペリジレン基である。好ましくは、ｐは２である。なお、Ｘ^２の窒素原子（Ｎ）と、式（１）中のＲ^１ａまたはＲ^１ｂの炭素原子とが結合する。

　炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が２の環状のアルキレン３級アミノ基の好ましい具体的な構造はＸ^３で示される。

　Ｘ^３のｗは１または２である。ｗが１のときＸ^３はイミダゾリジレン基であり、ｗが２のときＸ^３はピペラジレン基である。

　Ｘ^ａはＸ^ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｘ^ａはＸ^ｂと同一の基である。

　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基または炭素数２～８のオキシジアルキレン基を表し、好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基である。

　炭素数１～８のアルキレン基は、直鎖状であっても、分岐を有していてもよいが、好ましくは直鎖状である。該アルキレン基に含まれる炭素数は、好ましくは１～６であり、より好ましくは１～４である。炭素数１～８のアルキレン基としては、具体的にはメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、イソプロピレン基、テトラメチレン基、イソブチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基、ヘプタメチレン基、オクタメチレン基等を挙げることができ、好ましくはメチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基であり、より好ましくはエチレン基である。

　本明細書中、「炭素数２～８のオキシジアルキレン基」とは、エーテル結合を介したアルキレン基（アルキレン－Ｏ－アルキレン、言い換えると「アルキレンオキシアルキレン基」）であって、二つ存在するアルキレン基の炭素数の合計が２～８である基を意味する。ここで、二つ存在するアルキレンは同一でも異なっていてもよいが、好ましくは同一である。炭素数２～８のオキシジアルキレン基としては、具体的にはオキシジメチレン基、オキシジエチレン基、オキシジ（トリメチレン）基（即ち、トリメチレンオキシトリメチレン基）、オキシジ（テトラメチレン）基（即ち、テトラメチレンオキシテトラメチレン基）等を挙げることができる。好ましくは、オキシジメチレン基、オキシジエチレン基、オキシジ（トリメチレン）基であり、より好ましくはオキシジエチレン基である。

　Ｒ^２ａはＲ^２ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｒ^２ａはＲ^２ｂと同一の基である。

　Ｙ^ａおよびＹ^ｂは、それぞれ独立して、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合またはウレア結合であり、好ましくは、それぞれ独立して、エステル結合、アミド結合またはカーバメート結合であり、より好ましくは、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり、さらに好ましくはそれぞれエステル結合である。Ｙ^ａおよびＹ^ｂの結合の向きは制限されないが、Ｙ^ａおよびＹ^ｂがエステル結合の場合、好ましくは、－Ｚ^ａ－ＣＯ－Ｏ－Ｒ^２ａ－および－Ｚ^ｂ－ＣＯ－Ｏ－Ｒ^２ｂ－の構造を呈する。

　Ｙ^ａはＹ^ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｙ^ａはＹ^ｂと同一の基である。

　Ｚ^ａおよびＺ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基を表す。該芳香族化合物に含まれる炭素数は好ましくは６～１２であり、より好ましくは６～７である。また、該芳香族化合物に含まれる芳香環は、好ましくは一つである。

　炭素数３～１６の芳香族化合物に含まれる芳香環の種類として、芳香族炭化水素環については、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、芳香族ヘテロ環についてはイミダゾール環、ピラゾール環、オキサゾール環、イソオキサゾール環、チアゾール環、イソチアゾール環、トリアジン環、ピロール環、フラン環、チオフェン環、ピリミジン環、ピリダジン環、ピラジン環、ピリジン環、プリン環、プテリジン環、ベンズイミダゾール環、インドール環、ベンゾフラン環、キナゾリン環、フタラジン環、キノリン環、イソキノリン環、クマリン環、クロモン環、ベンゾジアゼピン環、フェノキサジン環、フェノチアジン環、アクリジン環等を挙げることができ、好ましくは、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環であり、より好ましくは、ベンゼン環である。

　芳香環は置換基を有してもよく、その置換基としては、炭素数２～４のアシル基、炭素数２～４のアルコキシカルボニル基、炭素数２～４のアルキルカルバモイル基、炭素数２～４のアシルオキシ基、炭素数２～４のアシルアミノ基、炭素数２～４のアルコキシカルボニルアミノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、炭素数１～４のアルキルスルファニル基、炭素数１～４のアルキルスルホニル基、炭素数６～１０のアリールスルホニル基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、シアノ基、炭素数１～４のアルキル基、ウレイド基、炭素数１～４のアルコキシ基、炭素６～１０のアリール基、炭素数６～１０のアリールオキシ基等を挙げることができ、好ましい例としてはアセチル基、メトキシカルボニル基、メチルカルバモイル基、アセトキシ基、アセトアミド基、メトキシカルボニルアミノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、メチルスルファニル基、フェニルスルホニル基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、シアノ基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ウレイド基、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、フェニル基およびフェノキシ基等が挙げられる。

　Ｚ^ａおよびＺ^ｂの好ましい具体的な構造としては、Ｚ^１が挙げられる。

　式中、ｓは０～３の整数を表し、ｔは０～３の整数を表し、ｕは０～４の整数を表し、ｕ個のＲ^４はそれぞれ独立して置換基を表す。本明細書中、「ｓが０である」とは、Ｚ^１中の（ＣＨ_２）_ｓが存在しないことを意味し、「ｔが０」であるとはＺ^１中の（ＣＨ_２）_ｔが存在しないことを意味し、「ｕが０である」とは、Ｚ^１中の（Ｒ^４）_ｕが存在しないことを意味する。なお、Ｚ^１の向きは、式（１）の向きと一致する。即ち、Ｚ^１は、その左側（－（ＣＨ_２）_ｓ）で式（１）中のＯと結合し、その右側（（ＣＨ_２）_ｔ－）で式（１）中のＹ^ａまたはＹ^ｂと結合する。

　Ｚ^１中のｓは、好ましくは０～１の整数であり、より好ましくは０である。
　Ｚ^１中のｔは、好ましくは０～２の整数であり、より好ましくは１である。
　Ｚ^１中のｕは、好ましくは０～２の整数であり、より好ましくは０または１であり、さらに好ましくは０である。

　Ｚ^１中のＲ^４は、該イオン性脂質の合成過程における反応を阻害しない、炭素数３～１６の芳香族化合物に含まれる芳香環の置換基である。該置換基としては、炭素数２～４のアシル基、炭素数２～４のアルコキシカルボニル基、炭素数２～４のアルキルカルバモイル基、炭素数２～４のアシルオキシ基、炭素数２～４のアシルアミノ基、炭素数２～４のアルコキシカルボニルアミノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、炭素数１～４のアルキルスルファニル基、炭素数１～４のアルキルスルホニル基、炭素数６～１０のアリールスルホニル基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、シアノ基、炭素数１～４のアルキル基、ウレイド基、炭素数１～４のアルコキシ基、炭素６～１０のアリール基、炭素数６～１０のアリールオキシ基等を挙げることができ、好ましい例としてはアセチル基、メトキシカルボニル基、メチルカルバモイル基、アセトキシ基、アセトアミド基、メトキシカルボニルアミノ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、メチルスルファニル基、フェニルスルホニル基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、シアノ基、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ウレイド基、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、フェニル基およびフェノキシ基等が挙げられる。Ｒ^４が複数個存在する場合、各Ｒ^４は同一であっても異なっていてもよい。

　Ｚ^ａはＺ^ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｚ^ａはＺ^ｂと同一の基である。

　ｎ^ａおよびｎ^ｂは、それぞれ独立して、０または１であり、好ましくは共に１である。本明細書中、「ｎ^ａが０である」とは、式（１）中の（Ｚ^ａ－Ｙ^ａ）_ｎａが存在しないことを意味し、「ｎ^ｂが０である」とは、式（１）中の（Ｚ^ｂ－Ｙ^ｂ）_ｎｂが存在しないことを意味する。
　ｎ^ａはｎ^ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、ｎ^ａはｎ^ｂと同一である。

　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、
　前記式（２）で表される基、
　前記式（３）で表される基、
　前記式（４）で表される基、または
　前記式（５）で表される基、
を表す。以下、「水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基」等について、順に説明する。

　水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基とは、水酸基を有する脂溶性ビタミンの水酸基が＊－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－または＊－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－に置き換えられた構造を有する基を表す（前記式中、＊は脂溶性ビタミンとの結合位置を表す）。

　水酸基を有する脂溶性ビタミンとしては、例えばレチノール、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、カルシフェロール、コレカルシフェロール、ジヒドロエルゴカルシフェロール、ジヒドロタキステロール、トコフェロール、トコトリエノール等を挙げることができる。水酸基を有する脂溶性ビタミンは、好ましくはトコフェロールである。

　水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基とは、水酸基を有するステロール誘導体の水酸基が＊－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－または＊－Ｏ－ＣＯ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－に置き換えられた構造を有する基を表す（前記式中、＊はステロール誘導体との結合位置を表す）。

　水酸基を有するステロール誘導体としては、例えばコレステロール、コレスタノール、スチグマステロール、β－シトステロール、ラノステロール、およびエルゴステロール等が挙げられ、好ましくはコレステロール、またはコレスタノールである。

　炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基は、直鎖状であっても、分岐を有していてもよい。該脂肪族炭化水素基は、飽和であっても不飽和であってもよい。不飽和脂肪族炭化水素基の場合、該脂肪族炭化水素基に含まれる不飽和結合の数は通常１～６個、好ましくは１～３個、より好ましくは１～２個である。不飽和結合には炭素－炭素二重結合および炭素－炭素三重結合が含まれるが、好ましくは炭素－炭素二重結合である。該脂肪族炭化水素基に含まれる炭素数は、好ましくは８～２２であり、より好ましくは１３～１９であり、さらに好ましくは１３～１７である。脂肪族炭化水素基には、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が含まれるが、好ましくはアルキル基またはアルケニル基である。炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基としては、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基、ヘンイコシル基、ドコシル基、トリコシル基、テトラコシル基、ペンタコシル基、ヘキサコシル基、ヘプタコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基、テトラコンチル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基、ノナデセニル基、イコセニル基、ヘンイコセニル基、ドコセニル基、ドデカジエニル基、トリデカジエニル基、テトラデカジエニル基、ペンタデカジエニル基、ヘキサデカジエニル基、ヘプタデカジエニル基、オクタデカジエニル基、ノナデカジエニル基、イコサジエニル基、ヘンイコサジエニル基、ドコサジエニル基、オクタデカトリエニル基、イコサトリエニル基、イコサテトラエニル基、イコサペンタエニル基、ドコサヘキサエニル基、イソステアリル基、１－ヘキシルヘプチル基、１－ヘキシルノニル基、１－オクチルノニル基、１－オクチルウンデシル基、１－デシルウンデシル基等を挙げることができる。炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基は、好ましくはオクチル基、トリデシル基、ペンタデシル基、ヘプタデシル基、ノナデシル基、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基であり、特に好ましくはトリデシル基、ヘプタデシル基、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基である。

　本発明の一態様において、Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂで表される炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基は、好ましくは脂肪酸由来である。この場合、脂肪酸由来のカルボニル炭素は式（１）中の－ＣＯ－Ｏ－に含まれる。脂肪族炭化水素基の具体例としては、脂肪酸としてリノール酸を用いた場合ではヘプタデカジエニル基となり、脂肪酸としてオレイン酸を用いた場合ではヘプタデセニル基となる。

　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂにおける「シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基」は、アルキル鎖中に少なくとも一つのシクロプロパン環を有する、炭素数３～４０のアルキル基を意味する。アルキル基の炭素数３～４０はシクロプロパン環の炭素数を含まない。該アルキル基が有するシクロプロパン環の数は、好ましくは一つである。Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂにおけるシクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基は、好ましくは式（７）：

（式（７）中、
　＊は、結合位置を表し、
　ｂおよびｃは、それぞれ独立して整数を表し、並びに
　ｂおよびｃの合計が２～３９の整数である。）
で表される基である。

　好ましくは、ｂは１～２０の整数であり、ｃは１～１９の整数である。ｂは、より好ましくは２～１８の整数であり、さらに好ましくは３～１７の整数である。ｃは、より好ましくは３～１５の整数であり、さらに好ましくは３～１１の整数である。式（７）で表される基としては、例えば、７－（２－オクチルシクロプロピル）ヘプチル等が挙げられる。

　式（２）において＊は、上記の通り、炭素原子ではなく、結合位置を表す。そのため式（２）中の「－＊」は、単結合を表す。他の式における＊も同様の意味である。

　式（２）において、Ｒ^９で表される炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基は、直鎖状であっても、分岐を有していてもよい。該脂肪族炭化水素基は、飽和であっても不飽和であってもよい。不飽和脂肪族炭化水素基の場合、該脂肪族炭化水素基に含まれる不飽和結合の数は通常１～６個、好ましくは１～３個、より好ましくは１～２個である。不飽和結合には炭素－炭素二重結合および炭素－炭素三重結合が含まれるが、好ましくは炭素－炭素二重結合である。該脂肪族炭化水素基に含まれる炭素数は、好ましくは８～２０であり、より好ましくは９～１９であり、さらに好ましくは９～１７である。

　脂肪族炭化水素基には、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基等が含まれるが、好ましくはアルキル基またはアルケニル基であり、より好ましくはアルキル基である。炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基としては、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基、ノナデセニル基、イコセニル基、ドデカジエニル基、トリデカジエニル基、テトラデカジエニル基、ペンタデカジエニル基、ヘキサデカジエニル基、ヘプタデカジエニル基、オクタデカジエニル基、ノナデカジエニル基、イコサジエニル基、イコサトリエニル基、イコサテトラエニル基、イコサペンタエニル基、イソステアリル基、１－ヘキシルヘプチル基、１－エチルノニル基、１－ブチルノニル基、１－ヘキシルノニル基、１－オクチルノニル基、１－オクチルウンデシル基、３－オクチルウンデシル基等を挙げることができる。炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基は、好ましくはトリデシル基、ペンタデシル基、ヘプタデシル基、ノナデシル基、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基であり、特に好ましくはトリデシル基、ヘプタデシル基、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基である。

　式（２）においてａは、好ましくは３～９の整数であり、より好ましくは３～７の整数であり、さらに好ましくは５～７の整数である。

　式（３）において＊は、上記の通り、炭素原子ではなく、結合位置を表す。
　式（３）においてＲ^１０は、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、炭素数２～２０のアルキニル基、または炭素数３～１２の炭化水素環基を表し、並びにＲ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい。

　本明細書中、アルキル基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、１－オクチルノニル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基、ヘンイコシル基、ドコシル基、トリコシル基、テトラコシル基、ペンタコシル基、ヘキサコシル基、ヘプタコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基、ヘントリアコンチル基、ドトリアコンチル基、トリトリアコンチル基、テトラトリアコンチル基、ペンタトリアコンチル基、ヘキサトリアコンチル基、テトラコンチル基、ヘンテトラコンチル基、ドテトラコンチル基、トリテトラコンチル基、テトラテトラコンチル基が挙げられる。

　本明細書中、アルケニル基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。また、本明細書中、アルケニル基中のオレフィン性炭素－炭素２重結合の数は、１のみでもよく、２以上でもよい。アルケニル基としては、例えば、エテニル基、プロペニル基、ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、１－エテニルヘキシル基、ノネニル基、デセニル基、ウンデセニル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基、ノナデセニル基、イコセニル基、ヘンイコセニル基、ドコセニル基、トリコセニル基、テトラコセニル基、ペンタコセニル基、ヘキサコセニル基、ヘプタコセニル基、オクタコセニル基、ノナコセニル基、トリアコンテニル基、ヘントリアコンテニル基、ドトリアコンテニル基が挙げられる。

　本明細書中、アルキニル基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。また、本明細書中、アルキニル基の炭素－炭素３重結合の数は、１のみでもよく、２以上でもよい。アルキニル基としては、例えば、エチニル基、プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基、ヘプチニル基、オクチニル基、ノニニル基、デシニル基、ウンデシニル基、ドデシニル基、トリデシニル基、テトラデシニル基、ペンタデシニル基、ヘキサデシニル基、ヘプタデシニル基、オクタデシニル基、ノナデシニル基、イコシニル基、ヘンイコシニル基、ドコシニル基、トリコシニル基、テトラコシニル基、ペンタコシニル基、ヘキサコシニル基、ヘプタコシニル基、オクタコシニル基、ノナコシニル基、トリアコンチニル基、ヘントリアコンチニル基、ドトリアコンチニル基が挙げられる。

　本明細書中、「Ｒ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい」とは、Ｒ^１０の前記アルキル基、前記アルケニル基、前記アルキニル基、または前記炭化水素環基が、それぞれ独立して、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよいことを意味する。「Ｒ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい」と同様の他の表現も、「Ｒ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい」と同様の意味である。なお、本明細書中、置換基について特段の記載がない「アルキル基」、「アルケニル基」、「アルキニル基」、「アルキレン基」、「アルケンジイル基」、「アルキンジイル基」等は、非置換のものを表す。

　本明細書中、「炭素数３～１２の炭化水素環基」とは、環状の基であって、環が３～１２個の炭素原子で構成されている基を意味する。炭素数３～１２の炭化水素環基としては、例えば炭素数３～８のシクロアルキル基、フェニル基、ナフチル基、アダマンチル基が挙げられる。炭素数３～８のシクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基が挙げられる。炭素数３～１２の炭化水素環基は、好ましくは炭素数３～１２の非芳香族炭化水素環基であり、より好ましくは炭素数３～８のシクロアルキル基またはアダマンチル基であり、さらに好ましくはシクロヘキシル基またはアダマンチル基である。

　本明細書中、「３～１４員の複素環基」とは、環構成原子の数が３～１４個である複素環基を意味する。３～１４員の複素環基としては、例えば、５～１４員の芳香族複素環基、３～１４員の非芳香族複素環基が挙げられる。３～１４員の複素環基は、好ましくは３～１４員の非芳香族複素環基である。

　本明細書中、５～１４員の芳香族複素環基としては、例えば、以下のものが挙げられる：
　（ｉ）チエニル基、フリル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、１，２，４－オキサジアゾリル基、１，３，４－オキサジアゾリル基、１，２，４－チアジアゾリル基、１，３，４－チアジアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、トリアジニル基、などの５～６員の単環式芳香族複素環基；
　（ｉｉ）ベンゾチオフェニル基、ベンゾフラニル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾイソオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、イミダゾピリジニル基、チエノピリジニル基、フロピリジニル基、ピロロピリジニル基、ピラゾロピリジニル基、オキサゾロピリジニル基、チアゾロピリジニル基、イミダゾピラジニル基、イミダゾピリミジニル基、チエノピリミジニル基、フロピリミジニル基、ピロロピリミジニル基、ピラゾロピリミジニル基、オキサゾロピリミジニル基、チアゾロピリミジニル基、ピラゾロトリアジニル基、ナフト［２，３－ｂ］チエニル基、フェノキサチイニル基、インドリル基、イソインドリル基、１Ｈ－インダゾリル基、プリニル基、イソキノリル基、キノリル基、フタラジニル基、ナフチリジニル基、キノキサリニル基、キナゾリニル基、シンノリニル基、カルバゾリル基、β－カルボリニル基、フェナントリジニル基、アクリジニル基、フェナジニル基、フェノチアジニル基、フェノキサジニル基などの８～１４員の縮合多環式芳香族複素環基。

　本明細書中、３～１４員の非芳香族複素環基としては、例えば、以下のものが挙げられる：
　（ｉ）アジリジニル基、オキシラニル基、チイラニル基、アゼチジニル基、オキセタニル基、チエタニル基、テトラヒドロチエニル基、テトラヒドロフラニル基、ピロリニル基、ピロリジニル基、イミダゾリニル基、イミダゾリジニル基、オキサゾリニル基、オキサゾリジニル基、ピラゾリニル基、ピラゾリジニル基、チアゾリニル基、チアゾリジニル基、テトラヒドロイソチアゾリル基、ジチオラニル基（例、１，２－ジチオラン－３－イル基）、テトラヒドロオキサゾリル基、テトラヒドロイソオキサゾリル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、テトラヒドロピリジニル基、ジヒドロピリジニル基、ジヒドロチオピラニル基、テトラヒドロピリミジニル基、テトラヒドロピリダジニル基、ジヒドロピラニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、アゼパニル基、ジアゼパニル基、アゼピニル基、オキセパニル基、アゾカニル基、ジアゾカニル基などの３～８員の単環式非芳香族複素環基；
　（ｉｉ）ジヒドロベンゾフラニル基、ジヒドロベンゾイミダゾリル基、ジヒドロベンゾオキサゾリル基、ジヒドロベンゾチアゾリル基、ジヒドロベンゾイソチアゾリル基、ジヒドロナフト［２，３－ｂ］チエニル基、テトラヒドロイソキノリル基、テトラヒドロキノリル基、４Ｈ－キノリジニル基、インドリニル基、イソインドリニル基、テトラヒドロチエノ［２，３－ｃ］ピリジニル基、テトラヒドロベンゾアゼピニル基、テトラヒドロキノキサリニル基、テトラヒドロフェナントリジニル基、ヘキサヒドロフェノチアジニル基、ヘキサヒドロフェノキサジニル基、テトラヒドロフタラジニル基、テトラヒドロナフチリジニル基、テトラヒドロキナゾリニル基、テトラヒドロシンノリニル基、テトラヒドロカルバゾリル基、テトラヒドロ－β－カルボリニル基、テトラヒドロアクリジニル基、テトラヒドロフェナジニル基、テトラヒドロチオキサンテニル基、オクタヒドロイソキノリル基などの９～１４員の縮合多環非芳香族複素環基。

　Ｒ^１０は、
好ましくは炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、または炭素数２～２０のアルキニル基であり、前記アルキル基は、炭素数３～１２の炭化水素環基または３～１４員の非芳香族複素環基で置換されていてもよく、
より好ましくは炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、または炭素数２～２０のアルキニル基であり、
さらに好ましくは炭素数１～１０のアルキル基または炭素数２～１０のアルキニル基である。

　式（４）において＊は、上記の通り、炭素原子ではなく、結合位置を表す。
　式（４）においてＲ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基を表し、およびＲ^１１は、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい。

　本明細書中、アルキレン基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。
　本明細書中、「アルケンジイル基」とは、アルケンから２個の水素原子を除去することによって得られる構造を有する２価の基を意味する。本明細書中、アルケンジイル基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。また、本明細書中、アルケンまたはアルケンジイル基中のオレフィン性炭素－炭素２重結合の数は、いずれも、１のみでもよく、２以上でもよい。アルケンジイル基としては、例えば、エテンジイル基、プロペンジイル基、ブテンジイル基、ペンテンジイル基、ヘキセンジイル基、ヘプテンジイル基、オクテンジイル基、ノネンジイル基、デセンジイル基が挙げられる。

　本明細書中、「アルキンジイル基」とは、アルキンから２個の水素原子を除去することによって得られる構造を有する２価の基を意味する。本明細書中、アルキンジイル基は、直鎖状または分岐鎖状のいずれでもよい。また、本明細書中、アルキンまたはアルキンジイル基中の炭素－炭素３重結合の数は、いずれも、１のみでもよく、２以上でもよい。アルキンジイル基としては、例えば、エチンジイル基、プロピンジイル基、ブチンジイル基、ペンチンジイル基、ヘキシンジイル基、ヘプチンジイル基、オクチンジイル基、ノニンジイル基、デシンジイル基が挙げられる。

　式（４）においてＲ^１１は、好ましくは炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基であり、より好ましくは炭素数２～９のアルキレン基であり、さらに好ましくは炭素数２または３のアルキレン基であり、特に好ましくはトリメチレン基である。

　式（４）中において、Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基を表し、Ｒ^１２中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、Ｒ^１３中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、並びにＲ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい。

　Ｒ^１２およびＲ^１３は、好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基であり、より好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基であり、さらに好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１～１０のアルキル基であり、特に好ましくは、共にヘキシル基である。

　式（４）においてＬ^１は、酸素原子、ＮＨ、または硫黄原子を表す。Ｌ^１は、好ましくは酸素原子またはＮＨであり、より好ましくは酸素原子である。

　式（５）において＊は、上記の通り、炭素原子ではなく、結合位置を表す。
　式（５）においてＲ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、およびＲ^１５～Ｒ^１７は、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキル基またはフェニル基を表す。）を表す。

　Ｒ^１４は、
好ましくは水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）であり、
より好ましくは水素原子または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）であり、
さらに好ましくは＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）であり、
特に好ましくはｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基である。

　本発明の一態様において、
（Ｉ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数８～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～９の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１０は、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、または炭素数２～２０のアルキニル基を表し、前記アルキル基は、炭素数３～１２の炭化水素環基または３～１４員の非芳香族複素環基で置換されていてもよい。）
で表される基、
式（４）：

（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基を表し、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基を表し、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子またはＮＨを表す。）
で表される基、または
式（５）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）である。）
で表される基
であり、
（ＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、より好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１９の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～７の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１０は、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、または炭素数２～２０のアルキニル基を表す。）
で表される基、
式（４）：

（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基を表し、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基を表し、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子を表す。）
で表される基、または
式（５）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）を表す。）で表される基
であり、
（ＩＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、さらに好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１０は、炭素数１～１０のアルキル基または炭素数２～１０のアルキニル基を表す。）
で表される基、
式（４）：

（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２または３のアルキレン基を表し、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１０のアルキル基（例、ヘキシル基）を表し、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子を表す。）
で表される基、または
式（５）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）（例、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基）を表す。）
で表される基
である。

　本発明の別の一態様において、
（Ｉ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基、
式（３）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）である。）
で表される基
であり、
（ＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、より好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基、
式（３）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）を表す。）で表される基
であり、
（ＩＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、さらに好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基、
式（３）：

　本発明の別の一態様において、
（Ｉ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数８～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～９の整数を表す。）
で表される基
であり、
（ＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、より好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数９～１９の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～７の整数を表す。）
で表される基
であり、
（ＩＩＩ）Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、さらに好ましくは、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基
である。

　本発明の別の一態様において、Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、
好ましくは、それぞれ独立して、炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基であり、
より好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基であり、
さらに好ましくは、それぞれ独立して、炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基である。

　Ｒ^３ａはＲ^３ｂと同一であっても異なっていてもよいが、好ましくは、Ｒ^３ａはＲ^３ｂと同一の基である。

　本発明の一態様において、Ｒ^１ａはＲ^１ｂと同一であり、Ｘ^ａはＸ^ｂと同一であり、Ｒ^２ａはＲ^２ｂと同一であり、Ｙ^ａはＹ^ｂと同一であり、Ｚ^ａはＺ^ｂと同一であり、Ｒ^３ａはＲ^３ｂと同一である。

　イオン性脂質（１）の好適な例としては、以下のイオン性脂質が挙げられる。
［イオン性脂質（１－１ａ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数８～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～９の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－１ｂ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（３）：

［イオン性脂質（１－１ｃ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数８～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～９の整数を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－１ｄ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、炭素数８～２２の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－２ａ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～３であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が６～１２であり、一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１９の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～７の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－２ｂ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～３であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が６～１２であり、一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（３）：

［イオン性脂質（１－２ｃ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～３であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が６～１２であり、一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１９の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、３～７の整数を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－２ｄ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が１～３であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基（例、－Ｎ（ＣＨ_３）－）、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１の環状のアルキレン３級アミノ基（例、ピペリジレン基）であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、炭素数が６～１２であり、一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基（例、－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＣＨ_２－）であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、炭素数１３～１９の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－３ａ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^１：

（式中、Ｒ^５は、炭素数１～３のアルキル基（例、メチル基）を表す。）、またはＸ^２：

（式中、ｐは、１または２を表す。）
であり（好ましくは、Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^２であり）；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合またはアミド結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、Ｚ^１：

（式中、ｓは０～１の整数を表し、ｔは０～２の整数を表し、ｕは０～２の整数（好ましくは０）を表し、およびｕ個のＲ^４は、それぞれ独立して、置換基を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１０は、炭素数１～１０のアルキル基または炭素数２～１０のアルキニル基を表す。）で表される基、
式（４）：

（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、Ｒ^１５は、ｔｅｒｔ－ブチル基を表し、並びにＲ^１６およびＲ^１７は、共にメチル基またはフェニル基を表す。）（例、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基）を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－３ｂ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^１：

（式中、ｓは０～１の整数を表し、ｔは０～２の整数を表し、ｕは０～２の整数（好ましくは０）を表し、およびｕ個のＲ^４は、それぞれ独立して、置換基を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（３）：

［イオン性脂質（１－３ｃ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^１：

（式中、ｓは０～１の整数を表し、ｔは０～２の整数を表し、ｕは０～２の整数（好ましくは０）を表し、およびｕ個のＲ^４は、それぞれ独立して、置換基を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－３ｄ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^１：

（式中、ｓは０～１の整数を表し、ｔは０～２の整数を表し、ｕは０～２の整数（好ましくは０）を表し、およびｕ個のＲ^４は、それぞれ独立して、置換基を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、それぞれ独立して、０または１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－４ａ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^２：

（式中、ｐは、２を表す。）
であり；
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキレン基（例、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基）であり；
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂが、それぞれ独立して、エステル結合であり；
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂが、それぞれ独立して、Ｚ^１：

（式中、ｓは０を表し、ｔは１を表し、およびｕは０を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、共に１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：

［イオン性脂質（１－４ｂ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^２：

（式中、ｓは０を表し、ｔは１を表し、およびｕは０を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、共に１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、
式（３）：

［イオン性脂質（１－４ｃ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^２：

（式中、ｓは０を表し、ｔは１を表し、およびｕは０を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、共に１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－　　　（２）
（式（２）中、
　Ｒ^９は、炭素数９～１７の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、５～７の整数を表す。）
で表される基
である；
イオン性脂質（１）。

［イオン性脂質（１－４ｄ）］
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂが、それぞれ独立して、炭素数１～２のアルキレン基（即ち、メチレン基またはエチレン基）であり；
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂが、それぞれ独立して、Ｘ^２：

（式中、ｓは０を表し、ｔは１を表し、およびｕは０を表す。）
であり；
　ｎ^ａおよびｎ^ｂが、共に１であり；並びに
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、炭素数１３～１７の脂肪族炭化水素基（例、ヘプタデセニル基、ヘプタデカジエニル基、１－ヘキシルノニル基）である；
イオン性脂質（１）。

　イオン性脂質（１）の具体例として、以下の表１－１および表１－２に記載のＯ－Ｐｈ－Ｐ３Ｃ１、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ１、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｂｎ－Ｐ４Ｃ２、Ｌ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、ＨＤ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－ａｍｉｄｅ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－Ｃ３Ｍ、Ｏ－Ｐ４Ｃ２を挙げることができる。なお、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２はＳＳ－ＯＰと記載することがあり、Ｏ－Ｐ４Ｃ２はＳＳ－ＯＣと記載することがある。

　また、イオン性脂質（１）の具体例として、ＷＯ　２０２１／１９５５２９　Ａ２に記載のＬｉｐｉｄ１からＬｉｐｉｄ２０を挙げることができる。これらの中で、以下の表１－３に記載のＬｉｐｉｄ１、Ｌｉｐｉｄ５、およびＬｉｐｉｄ８が好ましい。

　さらに、イオン性脂質（１）の具体例として、ＷＯ　２０２４／２０３５７７　Ａ１に記載の化合物を挙げることができる。これらの中で、以下の表１－４に記載の化合物１（＝前記公報に記載の化合物１６２）、化合物２（＝前記公報に記載の化合物３３）、化合物３（＝前記公報に記載の化合物１２７ａ）、および化合物４（＝前記公報に記載の化合物３１）が好ましい。

　本発明の一態様においてイオン性脂質（１）は、
好ましくはＯ－Ｐｈ－Ｐ３Ｃ１、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ１、ＳＳ－ＯＰ、Ｏ－Ｂｎ－Ｐ４Ｃ２、Ｌ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、ＨＤ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－、ａｍｉｄｅ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－Ｃ３Ｍ、ＳＳ－ＯＣ、Ｌｉｐｉｄ　１、Ｌｉｐｉｄ　５、およびＬｉｐｉｄ　８からなる群から選ばれる少なくとも一つであり、
より好ましくはＯ－Ｐｈ－Ｐ３Ｃ１、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ１、ＳＳ－ＯＰ、Ｏ－Ｂｎ－Ｐ４Ｃ２、Ｌ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、ＨＤ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－、ａｍｉｄｅ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－Ｃ３Ｍ、およびＳＳ－ＯＣからなる群から選ばれる少なくとも一つであり、さらに好ましくはＯ－Ｐｈ－Ｐ３Ｃ１、Ｏ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ１、ＳＳ－ＯＰ、Ｏ－Ｂｎ－Ｐ４Ｃ２、Ｌ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、ＨＤ－Ｐｈ－Ｐ４Ｃ２、Ｏ－Ｐｈ－、ａｍｉｄｅ－Ｐ４Ｃ２、およびＳＳ－ＯＣからなる群から選ばれる少なくとも一つ
である。

　本発明の別の一態様においてイオン性脂質（１）は、好ましくは、ＳＳ－ＯＰ、化合物１、化合物２、化合物３、および化合物４からなる群から選ばれる少なくとも一つである。

　イオン性脂質（１）の具体例の中でも、ＳＳ－ＯＰが好ましい。即ち、イオン性脂質（１）は、好ましくは下記式で表されるイオン性脂質である。

　本発明の脂質ナノ粒子中のイオン性脂質（１）の量は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの内封効率、細胞内でのｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの放出効率および脂質ナノ粒子の安定性の観点から、イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、好ましくは２０～６０ｍｏｌ％、より好ましくは２５～５５ｍｏｌ％、さらに好ましくは３０～５０ｍｏｌ％である。なお、本明細書中、「Ａに対するＢの量（ｍｏｌ％）」とは、「１００×Ｂの量（ｍｏｌ）／Ａの量（ｍｏｌ）」を意味する。そのため、「イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計に対するイオン性脂質（１）の量」とは、「１００×イオン性脂質（１）の量（ｍｏｌ）／イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計の量（ｍｏｌ）」を意味する。

　イオン性脂質（１）は、公知の方法（例えば、ＷＯ　２０１９／１８８８６７　Ａ１、ＵＳ　９７０８６２８　Ｂ２、ＷＯ　２０２１／１９５５２９　Ａ２、ＷＯ　２０２４／２０３５７７　Ａ１に記載の方法）によって製造することができる。

リン脂質
　本発明の脂質ナノ粒子は、リン脂質を含む。リン脂質は、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

　リン脂質の例としては、１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＣ）、１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ）、これらのリゾ体等が挙げられる。なお、本明細書中、リン脂質を略号で表すことがある。例えば、１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンをＰＣと表し、１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンをＤＤＰＣと表すことがある。

　本発明の一態様において、リン脂質は、好ましくはＰＣおよびＰＥからなる群から選ばれる少なくとも一つであり、より好ましくはＰＣまたはＰＥである。

　１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＣ）の具体例としては、
１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＤＰＣ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬｏＰＣ）、
１，２－ジアラキドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＡＰＣ）
１，２－ジエイコセノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＥｉＰＣ）、
１，２－ジベヘノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＢＰＣ）、
１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、
１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、
１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、
１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、
１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＳＯＰＣ）
が挙げられる。

　１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＥ）の具体例としては、
１，２－ジデカノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＤＰＥ）、
１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＬｏＰＥ）、
１，２－ジエルコイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、
１－ミリストイル－２－パルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＰＰＥ）、
１－ミリストイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＳＰＥ）、
１－パルミトイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＭＰＥ）、
１－パルミトイル－２－ステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＳＰＥ）、
１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、
１－ステアロイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＳＯＰＥ）
が挙げられる。

　本発明の一態様において、リン脂質は、好ましくはＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ、およびＰＯＰＥからなる群から選ばれる少なくとも一つであり、より好ましくはＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、およびＤＯＰＥからなる群から選ばれる少なくとも一つであり、さらに好ましくはＤＯＰＥである。これらのリン脂質は、類似のアシル鎖構造であることから同様の効果を奏すると考えられる。

　本発明の脂質ナノ粒子中のリン脂質の量は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの内封効率、細胞内でのｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの放出効率および脂質ナノ粒子の安定性の観点から、イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、好ましくは７．５～５０ｍｏｌ％、より好ましくは１０～５０ｍｏｌ％、さらに好ましくは１０～４５ｍｏｌ％、特に好ましくは１５～４０ｍｏｌ％である。

コレステロール
　本発明の脂質ナノ粒子は、コレステロールを含む。本発明の脂質ナノ粒子中のコレステロールの量は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの内封効率、細胞内でのｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの放出効率および脂質ナノ粒子の安定性の観点から、イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、好ましくは１０～４０ｍｏｌ％、より好ましくは１０～３５ｍｏｌ％、さらに好ましくは１５～３５ｍｏｌ％である。

ＰＥＧ脂質
　本発明の脂質ナノ粒子は、ＰＥＧ脂質を含む。ＰＥＧ脂質は、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

　ＰＥＧ脂質は、好ましくは式（６）：
ＣＨ_２（ＯＲ^６）－ＣＨ（ＯＲ^７）－ＣＨ_２（ＯＲ^８）　　　（６）
（式（６）中、
　Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８のいずれか二つはミリストイル基を表し、残りの一つは数平均分子量１，０００～３，０００のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖を介して連結される炭素数１～６のアルキル基を表す。）
で表されるジミリストイルグリセロールＰＥＧ（以下「ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）」と略称することがある）である。

　式（６）中のＰＥＧ鎖の数平均分子量は１，０００～３，０００であり、好ましくは１，５００～２，５００である。このＰＥＧ鎖を形成するために用いられるＰＥＧの数平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって測定することができる。

　炭素数１～６のアルキル基は、直鎖状であっても分岐状であっても環状であってもよい。該アルキル基の炭素数は、好ましくは１～３である。炭素数１～６のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、１，２－ジメチルプロピル基、２－メチルブチル基、２－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２，２－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、シクロヘキシル基等を挙げることができる。好ましくはメチル基である。

　本発明の脂質ナノ粒子中のＰＥＧ脂質の量は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの内封効率、細胞内でのｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの放出効率および脂質ナノ粒子の安定性の観点から、イオン性脂質（１）、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、好ましくは０．５～１５ｍｏｌ％、より好ましくは０．５～１０ｍｏｌ％、さらに好ましくは１～１０ｍｏｌ％である。

他の脂質
　本発明の脂質ナノ粒子は、イオン性脂質（１）、コレステロール、ＰＥＧ脂質、およびリン脂質以外の脂質（以下「他の脂質」と記載することがある）を含んでいてもよい。他の脂質としては、例えば、コレステロール以外のステロール等が挙げられる。他の脂質は、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。しかし、本発明において他の脂質を使用しないことが好ましい。言い換えると、本発明の脂質ナノ粒子を構成する脂質は、好ましくは、イオン性脂質（１）、リン脂質、コレステロール、およびＰＥＧ脂質からなる。

脂質組成
　本発明の脂質ナノ粒子において、イオン性脂質（１）：リン脂質：コレステロール：ＰＥＧ脂質のモル比は、
好ましくは２０～６０：１０～５０：１０～４０：０．５～１５であり、
より好ましくは２５～５５：１０～４５：１０～３５：０．５～１０であり、
さらに好ましくは３０～５０：１５～４０：１０～３０：１～１０である。

好ましい脂質の組合せ
　本発明の一態様において、イオン性脂質（１）は、好ましくはＳＳ－ＯＰであり、リン脂質は、好ましくはＤＯＰＣまたはＤＳＰＣであり、およびＰＥＧ脂質は、好ましくはジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）である。前記態様において、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）、リン脂質（即ち、ＤＯＰＣまたはＤＳＰＣ）、およびコレステロールの合計に対して、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）の量は、好ましくは４５～５５ｍｏｌ％であり、リン脂質（即ち、ＤＯＰＣまたはＤＳＰＣ）の量は、好ましくは７．５～１５ｍｏｌ％であり、コレステロールの量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質（即ち、ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６））の量は、１～２ｍｏｌ％である。

　本発明の一態様において、イオン性脂質（１）は、好ましくはＳＳ－ＯＰであり、リン脂質は、好ましくはＤＯＰＥであり、およびＰＥＧ脂質は、好ましくはジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）である。前記態様において、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）、リン脂質（即ち、ＤＯＰＥ）、およびコレステロールの合計に対して、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）の量は、好ましくは２０～６０ｍｏｌ％であり、リン脂質（即ち、ＤＯＰＥ）の量は、好ましくは１５～５０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量は、好ましくは１０～３０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質（即ち、ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６））の量は、好ましくは０．５～１０ｍｏｌ％である。

　本発明の一態様において、イオン性脂質（１）は、好ましくはＳＳ－ＯＰであり、リン脂質は、好ましくはＰＯＰＥであり、およびＰＥＧ脂質は、好ましくはジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）である。前記態様において、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）、リン脂質（即ち、ＰＯＰＥ）、およびコレステロールの合計に対して、イオン性脂質（１）（即ち、ＳＳ－ＯＰ）の量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、リン脂質（即ち、ＰＯＰＥ）の量は、好ましくは１５～３０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量は、好ましくは２０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質（即ち、ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６））の量は、好ましくは１～２ｍｏｌ％である。

　本発明の一態様において、イオン性脂質（１）は、好ましくは化合物１、化合物２、化合物３、および化合物４からなる群から選ばれる少なくとも一つであり、リン脂質は、好ましくはＤＯＰＥであり、およびＰＥＧ脂質は、好ましくはジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）である。前記態様において、イオン性脂質（１）（即ち、前記群から選ばれる少なくとも一つ）、リン脂質（即ち、ＤＯＰＥ）、およびコレステロールの合計に対して、イオン性脂質（１）（即ち、前記群から選ばれる少なくとも一つ）の量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、リン脂質（即ち、ＤＯＰＥ）の量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質（即ち、ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６））の量は、好ましくは１～２ｍｏｌ％である。

　本発明の一態様において、イオン性脂質（１）は、好ましくは化合物２であり、リン脂質は、好ましくはＰＯＰＥであり、およびＰＥＧ脂質は、好ましくはジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６）である。前記態様において、イオン性脂質（１）（即ち、化合物２）、リン脂質（即ち、ＰＯＰＥ）、およびコレステロールの合計に対して、イオン性脂質（１）（即ち、化合物２）の量は、好ましくは４０～５５ｍｏｌ％であり、リン脂質（即ち、ＰＯＰＥ）の量は、好ましくは１５～３０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量は、好ましくは３０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質（即ち、ジミリストイルグリセロールＰＥＧ（６））の量は、好ましくは１～２ｍｏｌ％である。

ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ
　本発明の脂質ナノ粒子は、ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）またはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含む。本明細書中、「ｍｉＲＮＡ」とは、約１７～２５塩基（ｎｔ）長の一本鎖ＲＮＡ分子であって、遺伝子の転写後発現調節に関与するＲＮＡを意味する。ｍｉＲＮＡは、その標的のｍＲＮＡに対して不完全な相同性をもって結合し、標的のｍＲＮＡの３’－非翻訳領域を認識することによって、標的のｍＲＮＡを不安定化するとともに、翻訳抑制を行うことで、タンパク質産生を抑制する。ｍｉＲＮＡが介する転写抑制は、発生、細胞増殖および細胞分化、アポトーシスまたは代謝といった広範な生物学的プロセスで重要な役割を担う。「ｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ」とは、ｍｉＲＮＡを模して合成されたＲＮＡを意味する。ｍｉＲＮＡおよびｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃは、いずれも１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

　これまで数多くのｍｉＲＮＡ配列が同定され、且つ同定されたｍｉＲＮＡ配列の数は絶えず増加している。ｍｉＲＮＡ配列は、例えば、“miRBase: microRNA sequences, targets and gene nomenclature”, Sam Griffiths-Jones et al, Nucleic Acids Research, 2006, Vol. 34, Database Issue, D140-D144 に記載されている。

　本発明において用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃは、当業者が通常用いる方法により精製されていることが好ましい。

　本発明の脂質ナノ粒子に内封されるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃは、ある所定の疾患に対してタンパク質の発現を調節することで治療効果を示すものが好ましい。そのようなｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃとしては、例えば、いわゆる核酸医薬に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃが挙げられる。

　ｍｉＲＮＡの中でも、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２９、ｍｉＲ－３１、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－２００、ｍｉＲ－３２６、およびｍｉＲ－１３４３は肺組織で抗線維化効果を示すことが明らかとなっている。ここで、「ｍｉＲ－１６」とは、１６番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－２９」とは、２９番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－３１」とは、３１番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１５３」とは、１５３番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－２００」とは、２００番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－３２６」とは、３２６番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１３４３」とは、１３４３番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味する。

　ｍｉＲＮＡの中でも、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１８５、ｍｉＲ－２０２、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－５０６、およびｍｉＲ－５４５は肺癌の抑制効果を示すことが明らかとなっている。ここで、「ｍｉＲ－１０７」とは、１０７番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１３７」とは、１３７番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１４３」とは、１４３番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１８５」とは、１８５番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－２０２」とは、２０２番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－２２３」とは、２２３番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－５０６」とは、５０６番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－５４５」とは、５４５番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味する。

　ｍｉＲＮＡの中でも、ｍｉＲ－１５、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－１３８、ｍｉＲ－１４４、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１８６、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－３３０、およびｍｉＲ－６１３は非小細胞肺癌の抑制効果を示すことが明らかとなっている。ここで、「ｍｉＲ－１５」とは、１５番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１３８」とは、１３８番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１４４」とは、１４４番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１４５」とは、１４５番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－１８６」とは、１８６番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－２０６」とは、２０６番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－３３０」とは、３３０番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味し、「ｍｉＲ－６１３」とは、６１３番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味する。

　ｍｉＲＮＡの中でも、ｍｉＲ－１５０は急性肺障害の緩和効果を示すことが明らかとなっている。ここで、「ｍｉＲ－１５０」とは、１５０番目に同定されたｍｉＲＮＡを意味する。

　ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃは、好ましくはｍｉＲ－１６またはｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃである。本明細書中、「ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ」とは、ｍｉＲ－１６を模して合成されたＲＮＡを意味する。

　本発明の脂質ナノ粒子中のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ量はＬ／Ｒ比（＝総脂質量（ｎｍｏｌ）／ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ量（μｇ））で定められる。Ｌ／Ｒ比は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃの内封効率や毒性低下の観点から、好ましくは２５～５００ｎｍｏｌ／μｇ、より好ましくは５０～４００ｎｍｏｌ／μｇ、さらに好ましくは７５～３５０ｎｍｏｌ／μｇである。

他の成分
　本発明の効果を阻害しない範囲で、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ、および脂質以外の他の成分を含有していてもよい。他の成分は、１種のみを使用してもよく、２種以上を併用してもよい。

ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の製造方法
　例えば、ボルテックスミキサーで撹拌している脂質を含むアルコール溶液中に、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含む溶液を添加し、得られた混合物をボルテックスミキサーで撹拌することによって、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を含む懸濁液を製造することができる。脂質を含むアルコール溶液の溶媒は、好ましくはエタノールである。ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含む溶液の溶媒は、好ましくはバッファー、より好ましくは酸性リンゴ酸バッファーである。なお、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子の懸濁液は、別の方法（例えば、マイクロ流路を含む装置（例、NanoAssemblr（登録商標）（Precision NanoSystems製））で、脂質を含むアルコール溶液とｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含む溶液とを混合する方法）によっても製造することができる。

　本発明の脂質ナノ粒子中のＬ／Ｒ比（＝総脂質量（ｎｍｏｌ）／ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ量（μｇ））が上述の範囲になるように、脂質を含むアルコール溶液と、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを含む溶液とを混合することが好ましい。

　上述の方法で製造した懸濁液は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子と、分散媒（好ましくはエタノールおよびバッファー）とを含むが、限外濾過、透析、希釈等の操作によって分散媒（特にエタノール）の除去、分散媒（特にバッファー）の交換等を行うことができる。

医薬組成物
　本発明は、本発明の脂質ナノ粒子（即ち、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子）を含む、肺疾患の治療に用いられる医薬組成物も提供する。本発明の医薬組成物は、本発明の脂質ナノ粒子に加えて、通常、薬学的に許容される担体を含む。本発明の脂質ナノ粒子の量は、本発明の医薬組成物全体に対して、好ましくは０．０１～２０重量％、より好ましくは０．５～１０重量％である。

　薬学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用されているものが用いられる。例えば、固形製剤においては、賦形剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤等が用いられ、液状製剤においては、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、および無痛化剤等が用いられる。また、本発明の医薬組成物は、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の製剤添加物を含んでいてもよい。

肺疾患の治療方法
　本発明の脂質ナノ粒子は、肺疾患の治療方法に使用することができる。この治療方法は、本発明の脂質ナノ粒子（即ち、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子）を対象に投与することを含む。

　本発明の脂質ナノ粒子を対象に投与することにより当該脂質ナノ粒子に内封されたｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃが肺細胞に送達される。本発明の脂質ナノ粒子を投与可能な対象としては、特に限定されず、例えば、哺乳類（例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、ハムスター、ウシ等）、鳥類（例えば、ニワトリ、ダチョウ等）、両生類（例えば、カエル等）等を挙げることができる。本発明の脂質ナノ粒子を投与する対象は、好ましくはヒトまたは他の哺乳類である。

　本発明の脂質ナノ粒子の対象への投与方法としては、本発明の脂質ナノ粒子が肺細胞にｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを送達できれば特に限定はされず、自体公知の投与方法（例えば、経口投与、非経口投与（例えば、経肺投与、経鼻投与、静脈内投与、筋肉内投与、局所投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、スプレー等）等）を適宜選択することができる。本発明の脂質ナノ粒子の投与量は、投与対象の種類、投与方法等を考慮して適宜選択することができる。剤形としては、特に限定されないが、例えば、吸入剤（例、吸入粉末剤、吸入エアゾール剤、ネブライザーを用いた吸入液剤）等が挙げられる。

　以下の実施例等を用いて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例等に何ら限定されない。

　以下の実施例等では、イオン性脂質（１）を上述の表に記載の名称で示した。また、以下の実施例等において使用する略号の意味は、それぞれ以下の通りである。
１×ＰＢＳ：１倍希釈リン酸緩衝生理食塩水
ＡＣＴＡ１：アクチンα１
ＡｐｏＥ：アポリポプロテインＥ
ＢＣＡ：ビシンコニン酸
ＢＰＢ：ブロモフェノールブルー
Ｃｈｏｌ：コレステロール
ＣＯＬ１Ａ１：Ｉ型コラーゲンα１鎖
ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００：１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＰＥＧの数平均分子量（Ｍｎ）：２０００）
ＤＯＰＣ：１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＤＯＰＥ：１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン
ＤＳＰＣ：１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン
ＦＮ１：フィブロネクチン
ＬＮＰ：脂質ナノ粒子
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
ＰＦＡ：パラホルムアルデヒド
ＰＯＰＥ：１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン
ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウム
ＴＧＦ－β：形質転換増殖因子β
Ｔｒｉｓ：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩

［実施例１］エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
（１）脂質エタノール溶液の調製
　各脂質をエタノールで溶解して、５ｍＭのＳＳ－ＯＰ溶液、５ｍＭのＤＯＰＥ溶液、５ｍＭのＣｈｏｌ溶液、および１ｍＭのＤＭＧ－ＰＥＧ２０００溶液を調製した。

　得られた各脂質の溶液を、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥ、Ｃｈｏｌ、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の合計が１６３２ｎｍｏｌまたは１６４８ｎｍｏｌとなるように混合して、処方ＡまたはＢの希釈前の脂質エタノール溶液を調製した。

　処方Ａの希釈前の脂質エタノール溶液では、ＳＳ－ＯＰ：ＤＯＰＥ：Ｃｈｏｌのモル比＝３０：４０：３０であり、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥおよびＣｈｏｌの合計に対して、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量は２ｍｏｌ％であった。

　処方Ｂの希釈前の脂質エタノール溶液では、ＳＳ－ＯＰ：ＤＯＰＥ：Ｃｈｏｌのモル比＝５０：１５：３５であり、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥおよびＣｈｏｌの合計に対して、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量は３ｍｏｌ％であった。

　処方Ａまたは処方Ｂの希釈前の脂質エタノール溶液に、全量が１６００μＬとなるようにエタノールを加えることで、処方ＡまたはＢの脂質エタノール溶液（処方Ａの総脂質濃度：１．０２ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：１．０３ｍＭ）を調製した。

（２）ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液の調製
　ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ濃度が０．００６８３μｇ／μＬとなるように、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ（ｍｍｕ－ｍｉＲ－１６－５ｐ、味の素バイオファーマサービス　株式会社ジーンデザインから入手）を、３０ｍＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭの酸性リンゴ酸バッファー（ｐＨ：３．０）に混合して、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液を調製した。

（３）エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
　上記（１）で調製した処方ＡまたはＢの脂質エタノール溶液、上記（２）で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液、および生理食塩水を、それぞれ氷冷し、温度平衡に達するまで静置した。ボルテックスミキサーで撹拌している脂質エタノール溶液中へ、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液１６００μＬを加えた。続いて、生理食塩水１１ｍＬを加え、得られた混合物をボルテックスミキサーで撹拌した。得られた混合物の全量（約１４ｍＬ）を限外濾過ユニット Amicon Ultra 15 filter 100 kDa（Merck Millipore Co., Massachusetts, USA）へ移し、２５℃および２，５００ｒｐｍの条件で限外濾過し、３分おきに転倒混和しながら、分散媒を除いて、２．５ｍＬ程度まで濃縮した。濃縮物へ１０ｍＬの生理食塩水を加え、限外濾過を行って、２．５ｍＬ程度まで濃縮した。濃縮物へ１０ｍＬの生理食塩水を加え、限外濾過を行って、数百μＬ程度まで濃縮した。得られた混合物に生理食塩水を加えて、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの懸濁液（体積：８００μＬ、Ｌ／Ｒ比（＝総脂質量（ｎｍｏｌ）／ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ量（μｇ））：１５０ｎｍｏｌ／μｇ、処方Ａの総脂質濃度：２．０４ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：２．０６ｍＭ）を得た。

［比較例１］ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃを含まないＬＮＰの調製
（１）脂質エタノール溶液の調製
　各脂質をエタノールで溶解して、５ｍＭのＳＳ－ＯＰ溶液、５ｍＭのＤＯＰＥ溶液、５ｍＭのＣｈｏｌ溶液、および１ｍＭのＤＭＧ－ＰＥＧ２０００溶液を調製した。

　処方Ｂの希釈前の脂質エタノール溶液では、ＳＳ－ＯＰ：ＤＯＰＥ：Ｃｈｏｌ＝５０：１５：３５であり、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥおよびＣｈｏｌの合計に対して、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量は３ｍｏｌ％であった。

（２）エタノール希釈法による核酸を含まないＬＮＰの調製
　上記（１）で調製した脂質エタノール溶液、核酸を含まない酸性バッファー溶液、および生理食塩水を、それぞれ氷冷し、温度平衡に達するまで静置した。ボルテックスミキサーで撹拌している脂質エタノール溶液中へ、酸性バッファー溶液１６００μＬを加え、続いて、生理食塩水１１ｍＬを加え、得られた混合物をボルテックスミキサーで撹拌した。得られた混合物の全量（約１４ｍＬ）を限外濾過ユニットAmicon Ultra 15 filter 100 kDa（Merck Millipore Co., Massachusetts, USA）へ移し、２５℃および２，５００ｒｐｍの条件で限外濾過し、３分おきに転倒混和しながら、分散媒を除いて、２．５ｍＬ程度まで濃縮した。濃縮物へ１０ｍＬの生理食塩水を加え、限外濾過を行って、２．５ｍＬ程度まで濃縮した。濃縮物へ１０ｍＬの生理食塩水を加え、限外濾過を行って、数百μＬ程度まで濃縮した。得られた混合物に生理食塩水を加えて、ＬＮＰの懸濁液（体積：８００μＬ、処方Ａの総脂質濃度：２．０４ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：２．０６ｍＭ）を得た。

［試験例１］ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの物性評価
　実施例１で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの粒子径、Polydispersity Index（ＰｄＩ）、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を測定した。詳しくは、前記ＬＮＰの粒子径（ゼータ平均）およびＰｄＩを、ELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）を用いた動的散乱法により測定した。前記ＬＮＰの表面電位を、ELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）を用いた電気泳動光散乱法により測定した。前記ＬＮＰのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を、Ribogreen アッセイにより測定した。結果を表２に示す。いずれのＬＮＰも、好ましい粒子径、ＰｄＩ、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を有していた。

［試験例２］インビトロにおけるヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１へのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ送達によるノックダウン活性評価
　ヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を２．０×１０^５細胞／ウェルとなるように、６ウェルプレートに播種した。その４８時間後に、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ処理濃度が１ウェルあたり５０ｎｍｏｌ／Ｌになるように、実施例１で調製した処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰまたは比較例１で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃを含まないＬＮＰをＨＦＬ－１細胞に添加した（ＡｐｏＥの添加なし）。なお、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰを使用した場合、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃの添加量は、１ウェルあたり１．６μｇであった。

　ヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を２．０×１０^５細胞／ウェルとなるように、６ウェルプレートに播種した。また、実施例１で調製した処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰまたは比較例１で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃを含まないＬＮＰ、およびＡｐｏＥを含む混合物を、予め３７℃で６０分インキュベートした。ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ処理濃度が１ウェルあたり５０ｎｍｏｌ／Ｌ、およびＡｐｏＥの投与量が１μｇ／ｍＬとなるように、インキュベート後の前記混合物を培地で希釈し、その希釈物を、ＨＦＬ－１細胞の播種から４８時間後にＨＦＬ－１細胞に添加した（ＡｐｏＥの添加あり）。なお、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰを使用した場合、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃの添加量は、１ウェルあたり１．６μｇであった。

　ＬＮＰを添加した細胞を４８時間インキュベートしたのち、氷冷下で培地を吸引除去し、冷却した１×ＰＢＳ（２ｍＬ）で細胞を２回洗浄した。その後、冷却したサンプリングバッファー（０．５Ｍ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ水溶液（ｐＨ：６．８）：１．２５ｍＬ、１０ｗ／ｖ％　ＳＤＳ水溶液：２．０ｍＬ、純水：１．７５ｍＬ）１５０μＬを各ウェルに加え、細胞懸濁液を回収した。

　得られた細胞懸濁液を、Pierce BCA Protein Assay Kit（Thermo Fisher Scientific, USA）を用いてＢＣＡタンパクアッセイにてサンプル濃度を定量した。１×ＰＢＳを用いてサンプル濃度を２００μｇ／Ｌに揃えたサンプルと、サンプリングバッファー（０．５Ｍ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ水溶液（ｐＨ：６．８）：０．１２５ｍＬ、１０ｗ／ｖ％　ＳＤＳ水溶液：０．２ｍＬ、純水：０．２７５ｍＬ、グリセリン：０．２ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ　ＢＰＢ水溶液：０．１ｍＬ、２－メルカプトエタノール：０．１ｍＬ）とを、互いに等しい体積で混合した後に、得られた混合物を９５℃で３分加温し、泳動用サンプルを調製した。

　ウエスタンブロッティングゲルに泳動用サンプル２０μＬをアプライし、泳動バッファー（０．０２５Ｍ　Ｔｒｉｓ水溶液、０．１９２Ｍ　グリシン水溶液、０．１ｗ／ｖ％　ＳＤＳ水溶液）に浸して、泳動装置 Power Pac Basic（BIO-RAD, California, US）を使用して２００Ｖで、β－アクチン検出用では６０分、Rictor 検出用では８０分、それぞれ泳動を行った。泳動終了後、４℃で２０分ゲルを冷却した。Immobilon-P PVDF membrane（MERCK Millipore Co., Massachusetts, USA）を、メタノールに１０秒、純水に２分、転写バッファー（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ：２．９１ｇ、グリシン：１．４６ｇ、メタノール水溶液（β－アクチン検出用のメタノール濃度：１５ｖ／ｖ％、Rictor 検出用のメタノール濃度：２０ｖ／ｖ％の）：５００ｍＬ、Rictor 検出用の転写バッファーには、さらに０．０５ｗ／ｖ％　ＳＤＳが添加）に５分、順に浸して、親水化処理を行った。

　転写装置 TRANS-BLOT SDSEMI-DRYTRANSFER CELL（BIO-RAD, California, USA）を用いて転写を行った（β－アクチン検出用の条件：１５Ｖおよび３０分、Rictor 検出用の条件：５Ｖおよび１２０分）。０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水を作製し、ブロッキングバッファー（０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水中に０．３ｗ／ｖ％の濃度となるようにnon fat dry milkを溶かした溶液）を用いてメンブレンを室温で１時間ブロッキングした。

　１次抗体（（１）beta Actin Polyclonal Antibody（bs-0061R; Bioss Antibodies, Massachusetts, USA）または（２）Rictor (D16H9) Rabbit mAb（#9476; Cell signaling Technology Co., Massachusetts, USA））をブロッキングバッファーで５，０００倍に希釈して得られた各溶液に、各メンブレンを浸し、４℃で一晩振盪させた。

　１次抗体溶液中で振盪させた後のメンブレンを、０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で１５分×１回および１０分×２回洗浄した後、２次抗体（Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody（#7074S; Cell signaling Technology Co., Massachusetts, USA）をブロッキングバッファーで５，０００倍に希釈して得られた溶液に、メンブレンを浸し、室温で１時間振盪させた。振盪後のメンブレンを、０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で１５分×１回および１０分×３回洗浄した後、常温のImmobilon Western chemiluminescent HRP Substrate（Merck Millipore Co., Massachusetts, USA）と５分反応させ、ChemiDoc MP（BIORAD, CA, USA）でシグナルを検出した。結果を表３に示す。

　表３に示されるように、実施例１の処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰを投与した場合、Rictor の発現強度が低減した。特に、ＡｐｏＥを添加することで、さらにRictor の発現強度が有意に低下することが示された。

［実施例２］エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
（１）脂質エタノール溶液の調製
　各脂質をエタノールで溶解して、５ｍＭのＳＳ－ＯＰ溶液、５ｍＭのＤＯＰＥ溶液、５ｍＭのＣｈｏｌ溶液、および１ｍＭのＤＭＧ－ＰＥＧ２０００溶液を調製した。

　得られた各脂質の溶液を、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥ、Ｃｈｏｌ、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の合計が処方Ａでは８８０、１７６０、または３５２０ｎｍｏｌ、或いは処方Ｂでは８０８、１６１６、または３２３２ｎｍｏｌとなるように変更したこと、およびこの時のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量を、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥおよびＣｈｏｌの合計に対して処方Ａでは１０ｍｏｌ％または処方Ｂでは１ｍｏｌ％となるように変更したこと以外は実施例１と同様にして、処方Ａまたは処方Ｂの脂質エタノール溶液を調製した（処方Ａの総脂質濃度：０．５５ｍＭ、１．１ｍＭ、または２．２ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：０．５０５ｍＭ、１．０１ｍＭ、または２．０２ｍＭ）。

（２）ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液の調製
　ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ濃度が０．００６８３μｇ／μＬとなるように、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ（ｍｍｕ－ｍｉＲ－１６－５ｐ、味の素バイオファーマサービス　株式会社ジーンデザインから入手）を、処方Ａでは１２５０ｍＭのＮａＣｌまたは処方Ｂでは３０ｍＭのＮａＣｌを含む２０ｍＭの酸性リンゴ酸バッファー（ｐＨ：３．０）に混合して、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液を調製した。

（３）エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
　実施例１と同様にして、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの懸濁液（体積：８００μＬ、Ｌ／Ｒ比（＝総脂質量（ｎｍｏｌ）／ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ量（μｇ）：７５ｎｍｏｌ／μｇ、１５０ｎｍｏｌ／μｇ、または３００ｎｍｏｌ／μｇ、処方Ａの総脂質濃度：１．１ｍＭ、２．２ｍＭ、または４．４ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：１．０１ｍＭ、２．０２ｍＭ、または４．０４ｍＭ）を得た。

［比較例２］ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃを含まないＬＮＰの調製
（１）脂質エタノール溶液の調製
　各脂質をエタノールで溶解して、５ｍＭのＳＳ－ＯＰ溶液、５ｍＭのＤＯＰＥ溶液、５ｍＭのＣｈｏｌ溶液、１ｍＭのＤＭＧ－ＰＥＧ２０００溶液を調製した。

　得られた各脂質の溶液を、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥ、Ｃｈｏｌ、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の合計が、処方Ａでは８８０、１７６０、または３５２０ｎｍｏｌ、或いは処方Ｂでは８０８、１６１６、または３２３２ｎｍｏｌとなるように変更したこと、およびこの時のＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量を、ＳＳ－ＯＰ、ＤＯＰＥおよびＣｈｏｌの合計に対して処方Ａでは１０ｍｏｌ％または処方Ｂでは１ｍｏｌ％となるように変更したこと以外は比較例１と同様にして、処方Ａまたは処方Ｂの脂質エタノール溶液を調製した（処方Ａの総脂質濃度：０．５５ｍＭ、１．１ｍＭ、または２．２ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：０．５０５ｍＭ、１．０１ｍＭ、または２．０２ｍＭ）。

（２）エタノール希釈法による核酸を含まないＬＮＰの調製
　比較例１と同様にして、核酸を含まないＬＮＰの懸濁液（体積：８００μＬ、処方Ａの総脂質濃度：１．１ｍＭ、または２．２ｍＭ、４．４ｍＭ、処方Ｂの総脂質濃度：１．０１ｍＭ、２．０２ｍＭ、または４．０４ｍＭ）を得た。

［試験例３］ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの物性評価
　実施例２で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの粒子径、Polydispersity Index（ＰｄＩ）、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を測定した。詳しくは、前記ＬＮＰの粒子径（ゼータ平均）およびＰｄＩを、ELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）を用いた動的散乱法により測定した。前記ＬＮＰの表面電位をELSZ-2000（Otsuka Electronics Co., Osaka, Japan）を用いた電気泳動光散乱法により測定した。前記ＬＮＰのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を、Ribogreen アッセイにより測定した。結果を表４に示す。いずれのＬＮＰも好ましい粒子径、ＰｄＩ、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を有していた。

［試験例４］インビトロにおけるヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を用いた、Ｌ／Ｒ比の検討
　ヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を、２．０×１０^５細胞／ウェルとなるように、６ウェルプレートに播種した。その４８時間後に、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ処理濃度として１ウェルあたり５０ｎｍｏｌ／Ｌになるように、実施例２で調製した処方Ａまたは処方ＢのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ、または比較例２で調製した、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃを含まないＬＮＰをＨＦＬ－１細胞に添加した。なお、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰを使用した場合、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃの添加量は、１ウェルあたり１．６μｇであった。

　ウエスタンブロッティングゲルに泳動用サンプル２０μＬをアプライし、泳動バッファー（０．０２５Ｍ　Ｔｒｉｓ水溶液、０．１９２Ｍ　グリシン水溶液、０．１ｗ／ｖ％　ＳＤＳ水溶液）に浸して、泳動装置 Power Pac Basic（BIO-RAD, California, US）を使用して２００Ｖでβ－アクチン検出用では６０分、Rictor 検出用では８０分、それぞれ泳動を行った。泳動終了後、４℃で２０分ゲルを冷却した。Immobilon-P PVDF membrane（MERCK Millipore Co., Massachusetts, USA）を、メタノールに１０秒、純水に２分、転写バッファー（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ；２．９１ｇ、グリシン：１．４６ｇ、メタノール水溶液（β－アクチン検出用のメタノール濃度：１５ｖ／ｖ％、Rictor 検出用のメタノール濃度：２０ｖ／ｖ％）：５００ｍＬ、Rictor 検出用の転写バッファーには、さらに０．０５ｗ／ｖ％　ＳＤＳが添加）に５分、順に浸して、親水化処理を行った。

　転写装置 TRANS-BLOT SDSEMI-DRYTRANSFER CELL（BIO-RAD, California, USA）を用いて転写を行った（β－アクチン検出用の条件：１５Ｖおよび３０分、Rictor 検出用の条件：５Ｖおよび１２０分）。０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水を作製し、ブロッキングバッファー（０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈トリス緩衝生理食塩水中に０．３ｗ／ｖ％の濃度となるようにnon fat dry milkを溶かした溶液）を用いてメンブレンを室温で１時間ブロッキングした。

　１次抗体溶液中で振盪させた後のメンブレンを、０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で１５分×１回および１０分×２回洗浄した後、２次抗体（Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody（#7074S; Cell signaling Technology Co., Massachusetts, USA））をブロッキングバッファーで５，０００倍に希釈して得られた溶液に、メンブレンを浸し、室温で１時間振盪させた。振盪後のメンブレンを、０．１ｖ／ｖ％のＴｗｅｅｎ２０を含有する１倍希釈Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水で１５分×１回および１０分×３回洗浄した後、常温のImmobilon Western chemiluminescent HRP Substrate（Merck Millipore Co., Massachusetts, USA）と５分反応させ、ChemiDoc MP（BIORAD, CA, USA）でシグナルを検出した。結果を表５に示す。

　表５に示されるように、実施例２の処方ＡまたはＢのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの投与群では、いずれも、Rictorの発現強度が低下した。特に、Ｌ／Ｒ比が１５０および３００のとき、Rictorの発現強度が有意に低下することが示された。

［試験例５］インビボにおける抗線維化作用の評価（ヒドロキシプロリンの定量）
（１）マウス肺の線維化誘導
　肺の線維化を誘導するため、マウスにブレオマイシンを局所投与した（２．０ｍｇ／ｋｇ）。

（２）マウスへのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ等の投与
　肺が線維化したマウスに対し、実施例１で調製した処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ、ＬＮＰに内封していないｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃそのもの、または生理食塩水を肺に局所投与した。投与は、ブレオマイシン投与日を０日目として、１２日目、１３日目、および１４日目に行った（各回のｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃの投与量は、マウス１匹あたり０．１ｎｍｏｌ）。

（３）マウス肺の摘出およびヒドロキシプロリンの定量
　ブレオマイシン投与後２８日目にマウスをイソフルラン過剰麻酔により安楽死させ、肺組織を摘出した。Power Masher II（Nippi, Incorporated, Tokyo, Japan）およびBio Masher SP（Nippi, Incorporated, Tokyo, Japan）を用いて、右肺組織１０ｍｇ当たり１００μＬの滅菌精製水でホモジナイズした。得られたサンプルと、１２Ｎ　塩酸とを、互いに等しい体積で混合し、１２０℃で３時間加温することで酸加水分解を行った。室温にて静置後、加水分解サンプルをMillex-GV Syringe Filter Unit, 0.22μm, PVDF, 33mm, gamma sterilized（Merck Millipore Co., Massachusetts, USA）に通過させ、４℃で保存した。得られたサンプルをHydroxyproline Assay Kit（Cell Biolabs.Inc., San Diego, USA）および分光光度計ARVO（PerkinElmer, Massachusetts, USA）を用いて、吸収波長５４０～５６０ｎｍを測定することにより、右肺当たりのヒドロキシプロリンの発現量を算出した。結果を表６に示す。

　表６に示されるように、実施例１の処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの投与群では、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ投与群と比較して、ヒドロキシプロリンの発現量が低減しており、マウス肺での線維化の進行を有意に抑制できることが示された。

［試験例６］インビボにおける抗線維化作用の評価（Ashcroft スコア評価）
（１）マウス肺の線維化誘導
　肺の線維化を誘導するため、マウスにブレオマイシンを局所投与した（２．０ｍｇ／ｋｇ）。

（２）マウスへのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ等の投与
　肺が線維化したマウスに対し、実施例１で調製した処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ、ＬＮＰに内封していないｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃそのもの、または生理食塩水を肺に局所投与した。投与は、ブレオマイシン投与日を０日目として、１２日目、１３日目、１４日目に行った（各回のｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃの投与量は、マウス１匹あたり０．１ｎｍｏｌ）。

（３）マウス肺の摘出およびAshcroft スコア評価
　ブレオマイシン投与後２８日目にマウスをイソフルラン過剰麻酔により安楽死させ、肺組織を摘出した。左肺を４ｗ／ｖ％　ＰＦＡ／ＰＢＳを用いて一晩固定し、Tissue-Tek O.C.T.Compound（Sakura Finetek Japan Co., Tokyo, Japan）を用いて包埋した。クライオスタット CM3050S（Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany）を用いて、切片支持用粘着フィルム Cryofilm Type II C (9)（Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Germany）上で厚さ１０μｍの凍結切片を作製した。６０℃に加温したBouin's Fluid（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）で６０分固定を行い、１０分冷却して、水道水、精製水の順に切片を洗浄した。切片を、Hematoxylin, Weigert's Iron Kit（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）で５分染色し、水道水で洗浄した。切片を、Biebrich Scarlet/Acid Fuchsin（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）で１５分染色し、精製水で洗浄した。Phosphomolybdic/ Phosphotungstic Acid Solution（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）に１５分浸し、６０℃に加温したAniline Blue Solution（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）で６０分染色して精製水で洗浄した。上記操作で切片のマッソン・トリクローム染色を行い、染色された切片をAcetic Acid Solution (1%)（ScyTek Laboratories, Inc., Utah, USA）（酢酸濃度：１ｖ／ｖ％）で洗浄し、７０ｖ／ｖ％　エタノール水溶液、９０ｖ／ｖ％　エタノール水溶液、および無水エタノールを順に用いて脱水を行って、撮影用の肺組織切片を作製した。作製した肺組織切片はBZ-9000 蛍光顕微鏡（Keyence, Osaka, Japan）にて撮影を行い、マウス一匹当たり３０枚ランダムに撮影した肺組織切片の画像を用いて、線維化の程度をAshcroft らの方法（J Clin Pathol. 1988 Apr; 41(4): 467-470）に準じて０（正常組織）から８（完全な線維性組織）の範囲内でスコア付けし、Ashcroft スコアを算出した。結果を表７に示す。

　表７に示されるように、実施例１の処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ投与群では、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ投与群と比較して、Ashcroft スコアが低減しており、マウス肺での線維化の進行を有意に抑制できることが示された。

［実施例３］エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
（１）脂質エタノール溶液の調製
　各脂質をエタノールで溶解して、表８に示すイオン性脂質の溶液、表８に示すリン脂質の溶液（１０ｍＭ）、Ｃｈｏｌ溶液（１０ｍＭ）、およびＤＭＧ－ＰＥＧ２０００溶液（１ｍＭ）を調製した。

　表８に示すイオン性脂質：リン脂質：Ｃｈｏｌのモル比、並びにイオン性脂質、リン脂質およびＣｈｏｌの合計に対するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量になるように、得られた各脂質の溶液を混合した（イオン性脂質、リン脂質およびＣｈｏｌの合計３０００ｎｍｏｌに対するＤＭＧ－ＰＥＧ２０００の量：３０ｎｍｏｌ、または４５ｎｍｏｌ、または６０ｎｍｏｌ）。得られた混合溶液に、その全量が１８００μＬとなるようにエタノールを加えることで、処方Ｃ～処方Ｒの脂質エタノール溶液（総脂質濃度：５ｍＭ）を調製した。

（２）ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液の調製
　ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ濃度が０．０１１１μｇ／μＬとなるように、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ（ｍｍｕ－ｍｉＲ－１６－５ｐ、味の素バイオファーマサービス　株式会社ジーンデザインから入手）を、２０ｍＭのクエン酸バッファー（ｐＨ：５．０）に混合して、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液を調製した。

（３）エタノール希釈法によるｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの調製
　ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液２２００μＬおよび脂質のエタノール溶液８００μＬをそれぞれシリンジにはかり取った。NanoAssemblr（登録商標）超高速ナノ医薬作製装置（Precision NanoSystems製）を用いて、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液：脂質エタノール溶液の流量比（体積比）を３：１、総流速：１２ｍＬ／分の条件にて、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ溶液および脂質のエタノール溶液を混合して、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの懸濁液を調製した。

　前記懸濁液へＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（Ｔｒｉｓおよびその塩の合計濃度：５０ｍＭ、ＮａＣｌ濃度：１５０ｍＭ、ｐＨ：７．６）を７２００μＬ加えた後、得られた混合物を、Ａｍｉｃｏｎ　Ｕｌｔｒａ　１５へ移し、遠心条件（２５℃、１０００ｇ、３分）で限外濾過を行って、約１０００μＬまで濃縮した。

　得られた濃縮物を、前記Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水を用いて１５ｍＬまで希釈し、再度、遠心条件（２５℃、１０００ｇ、３分）で限外濾過を行って約１０００μＬまで濃縮した。この希釈および濃縮の操作を、さらに１回行った後、濃縮物に前記Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水１０００μＬ加えて、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの懸濁液（体積：２０００μＬ、Ｌ／Ｒ比（＝総脂質量（ｎｍｏｌ）／ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ量（μｇ））：１５０ｎｍｏｌ／μｇ、総脂質濃度：１．５ｍＭ）を得た。

［試験例７］ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの物性評価
　実施例３で調製したｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰの粒子径、Polydispersity Index（ＰｄＩ）、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を測定した。詳しくは、前記ＬＮＰの粒子径（ゼータ平均）およびＰｄＩを、Zetasizer（登録商標）を用いた動的散乱法により測定した。前記ＬＮＰの表面電位を、Zetasizer（登録商標）を用いた電気泳動光散乱法により測定した。前記ＬＮＰのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を、Ribogreen（登録商標）アッセイにより測定した。結果を表９に示す。いずれのＬＮＰも、好ましい粒子径、ＰｄＩ、表面電位、およびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封率を有していた。

［試験例８］インビトロにおけるヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を用いた、線維化関連マーカー（ＡＣＴＡ１、ＦＮ１、またはＣＯＬ１Ａ１）発現抑制の確認
　ヒト肺線維芽細胞ＨＦＬ－１を、１．０×１０^５細胞／ウェルとなるように、２４ウェルプレートに播種した。その２４時間後に、５ｎｇ／ｍＬとなるようにＴＧＦ－βを添加し、ＨＦＬ－１に刺激を与えた。さらに２４時間培養したのちに、５ｎｇ／ｍＬとなるようにＴＧＦ－βを添加し、ＨＦＬ－１に刺激を与え、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰをｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ処理濃度として１ウェルあたり５０ｎｍｏｌ／Ｌになるように、実施例１で調製した処方ＡのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰ、または実施例３で調製した処方Ｃ～処方ＲのｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰをＨＦＬ－１細胞に添加した。これらの細胞を、それぞれ、以下「実施例１の処方Ａの細胞」～「実施例３の処方Ｒの細胞」と記載する。また、上述のようにＴＧＦ－βを２回添加したが、ｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰを添加しなかった細胞、並びにＴＧＦ－βおよびｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃ内封ＬＮＰのいずれも添加しなかった細胞を、後述の操作で用いた。これらの細胞を、それぞれ、以下「ＴＧＦ－β処理のみの細胞」および「ＴＧＦ－βおよびＬＮＰ処理なしの細胞」と記載する。

　前記細胞を４８時間インキュベートしたのち、RNAiso plus（Takara Bio Inc., Shiga, Japan）を用いて細胞を回収し、室温で５分間静置後、クロロホルム１００μＬ（Fujifilm Wako Pure Chemistry Co., Osaka, Japan）と混合した。得られた混合物を、１２，０００ｇ、４℃で１５分間遠心分離した後、上層の水層１５０μＬと２－プロパノール１５０μＬ（NACALAI TESQUE, INC., Kyoto, Japan）を混合し、１０分間静置した。得られた混合物を、１２，０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離して、上清を捨て、残りの沈殿物へ７５ｖ／ｖ％エタノール水溶液を５００μＬ加え、タッピングした。得られた混合物を、７，５００ｇ、４℃で５分間遠心分離して上清を捨て、残りの沈殿物へ７５ｖ／ｖ％　エタノール水溶液を５００μＬ加え、タッピングし、得られた混合物を、再度７，５００ｇ、４℃で５分間遠心分離した。上清を捨て、残りの沈殿物を３０分間乾燥させた後、RNase Free waterに溶解させ、微量分光光度計NanoVue（GE HealthCare., Tokyo, Japan）を用いて、得られた溶液中のｍＲＮＡ量を測定した。

　Takara PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)（Takara, Shiga, Japan）の取扱説明書に基づいてＫｉｔ内の試薬を混合し、Takara PCR Thermal Cycler MP（Takara, Shiga, Japan）を用いて逆転写反応を行い、得られたＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。

　合成したｃＤＮＡ溶液（１ｎｇ／μＬ）を用いて、TB Green(登録商標) Premix Ex TaqTM II (Tli RNaseH Plus)（Takara Bio Inc., Shiga, Japan）の取扱説明書に基づき、各遺伝子のプライマーを使用して、CFX Connect（Bio-Rad Laboratories, Inc., California, USA）またはCFX Duet（Bio-Rad Laboratories, Inc., California, USA）にてリアルタイムＰＣＲを行った。得られた結果から、ＧＡＰＤＨをハウスキーピング遺伝子とする線維化関連マーカー（ＡＣＴＡ１、ＦＮ１、またはＣＯＬ１Ａ１）の発現量をΔΔＣｔ法により算出した。

　ＡＣＴＡ１、ＦＮ１、またはＣＯＬ１Ａ１のそれぞれについて、各細胞（「ＴＧＦ－β処理のみの細胞」、「ＴＧＦ－βおよびＬＮＰ処理なしの細胞」、または「実施例１の処方Ａの細胞」～「実施例３の処方Ｒの細胞」）の線維化関連マーカーの相対発現量を、下記式：　線維化関連マーカーの相対発現量（％）
＝１００×各細胞の線維化関連マーカーの発現量／ＴＧＦ－β処理のみの細胞の線維化関連マーカーの発現量
から算出した。結果を下記表１０に記載する。

　各遺伝子のプライマーは、以下の配列のものを用いた。
ＧＡＰＤＨ：
（Ｆ）５’－ＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＡＡＣ－３’（配列番号１）
（Ｒ）５’－ＴＧＧＴＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＧＴＧＧＡ－３’（配列番号２）

ＡＣＴＡ２：
（Ｆ）５’－ＣＧＴＧＧＧＴＧＡＣＧＡＡＧＣＡＣＡＧ－３’（配列番号３）
（Ｒ）５’－ＧＧＴＧＧＧＡＴＧＣＴＣＴＴＣＡＧＧＧ－３’（配列番号４）

ＦＮ１：
（Ｆ）５’－ＧＡＣＧＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＡＣＴＴＣＴ－３’（配列番号５）
（Ｒ）５’－ＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＴＴＴＣ－３’（配列番号６）

ＣＯＬ１Ａ１：
（Ｆ）５’－ＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＡＣ－３’（配列番号７）
（Ｒ）５’－ＧＣＧＧＧＡＧＧＡＣＴＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴ－３’（配列番号８）

ＩＳＬＲ：
（Ｆ）５’－ＡＧＡＧＧＣＴＣＣＧＣＴＴＧＡＣＴＡＡＧＡ－３’（配列番号９）
（Ｒ）５’－ＡＣＡＧＴＣＧＧＣＧＡＴＣＴＧＧＡＡＧＣ－３’（配列番号１０）

ＴＧＦ－β１：
（Ｆ）５’－ＴＡＣＣＴＧＡＡＣＣＣＧＴＧＴＴＧＣＴＣＴＣ－３’（配列番号１１）
（Ｒ）５’－ＧＴＴＧＣＴＧＡＧＧＴＡＴＣＧＣＣＡＧＧＡＡ－３’（配列番号１２）

ＭＭＰ－１：
（Ｆ）５’－ＧＣＴＡＡＣＣＴＴＴＧＡＴＧＣＴＡＴＡＡＣＴＡＣＧＡ－３’（配列番号１３）
（Ｒ）５’－ＧＧＡＴＴＴＧＴＧＣＧＣＡＴＧＴＡＧＡＡ－３’（配列番号１４）

　表１０に示されるように、実施例１の処方Ａの細胞～実施例３の処方Ｒの細胞では、ＴＧＦ－β処理のみの細胞よりも、ＡＣＴＡ１、またはＦＮ１、またはＣＯＬ１Ａ１の発現量が低下した。

　本発明のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子は、ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃを肺に送達するために有用である。

　本願は、日本で出願された特願２０２４－０９６９５０号を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含される。

Claims

　（Ａ）式（１）：
（式（１）中、
　Ｒ^１ａおよびＲ^１ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキレン基を表し、
　Ｘ^ａおよびＸ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が１～６であり、且つ３級アミノ基の数が１の非環状のアルキル３級アミノ基、または炭素数が２～５であり、且つ３級アミノ基の数が１～２の環状のアルキレン３級アミノ基を表し、
　Ｒ^２ａおよびＲ^２ｂは、それぞれ独立して、炭素数１～８のアルキレン基または炭素数２～８のオキシジアルキレン基を表し、
　Ｙ^ａおよびＹ^ｂは、それぞれ独立して、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、エーテル結合またはウレア結合を表し、
　Ｚ^ａおよびＺ^ｂは、それぞれ独立して、炭素数が３～１６であり、少なくとも一つの芳香環を有し、且つヘテロ原子を有していてもよい芳香族化合物から誘導される２価の基を表し、
　ｎ^ａおよびｎ^ｂは、それぞれ独立して、０または１を表し、
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂは、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、または
式（２）：
Ｒ^９－Ｏ－ＣＯ－（ＣＨ_２）_ａ－＊　　　（２）
（式（２）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^９は、炭素数２～２０の脂肪族炭化水素基を表し、および
　ａは、２～１０の整数を表す。）
で表される基、
式（３）：
（式（３）中、
　＊は、結合位置を表し、並びに
　Ｒ^１０は、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、炭素数２～２０のアルキニル基、または炭素数３～１２の炭化水素環基を表し、並びにＲ^１０は、３～１４員の複素環基および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよい。）
で表される基、
式（４）：
（式（４）中、
　＊は、結合位置を表し、
　Ｒ^１１は、炭素数２～９のアルキレン基、炭素数２～９のアルケンジイル基、または炭素数２～９のアルキンジイル基を表し、およびＲ^１１は、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、
　Ｒ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～１７のアルキル基、炭素数２～１７のアルケニル基、または炭素数２～１７のアルキニル基を表し、Ｒ^１２中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、Ｒ^１３中の少なくとも一つのエチレン基または少なくとも一つのトリメチレン基は、エステル結合、アミド結合、カーバメート結合、およびカーボネート結合からなる群から選ばれる少なくとも一つの結合で置き換えられていてもよく、並びにＲ^１２およびＲ^１３は、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、および炭素数３～１２の炭化水素環基からなる群から選ばれる置換基で置換されていてもよく、並びに
　Ｌ^１は、酸素原子、ＮＨ、または硫黄原子を表す。）
で表される基、または
式（５）：
（式（５）中、
　＊は、結合位置を表し、および
　Ｒ^１４は、水素原子、ベンジル基、または＊－Ｓｉ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）（Ｒ^１７）基（前記式中、＊は結合位置を表し、およびＲ^１５～Ｒ^１７は、それぞれ独立して、炭素数１～４のアルキル基またはフェニル基を表す。）を表す。）
で表される基、
を表す。）
で表されるイオン性脂質、
　（Ｂ）リン脂質、
　（Ｃ）コレステロール、
　（Ｄ）ＰＥＧ脂質、および
　（Ｅ）ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ
を含み、並びに
　式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、式（１）で表されるイオン性脂質の量が２０～６０ｍｏｌ％であり、リン脂質の量が７．５～５０ｍｏｌ％であり、コレステロールの量が１０～４０ｍｏｌ％であり、およびＰＥＧ脂質の量が０．５～１５ｍｏｌ％である、肺疾患の治療に用いられるｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　Ｒ^３ａおよびＲ^３ｂが、それぞれ独立して、
水酸基を有する脂溶性ビタミンとコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
水酸基を有するステロール誘導体とコハク酸無水物またはグルタル酸無水物との反応物由来の残基、
炭素数１～４０の脂肪族炭化水素基、
シクロプロパン環を有する炭素数３～４０のアルキル基、または
式（２）で表される基
であり、並びに
　式（１）で表されるイオン性脂質、リン脂質、およびコレステロールの合計に対して、リン脂質の量が１０～５０ｍｏｌ％である請求項１に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　式（１）で表されるイオン性脂質が、下記式：
で表されるイオン性脂質、下記式：
で表されるイオン性脂質、下記式：
で表されるイオン性脂質、下記式：
（式中、ＴＢＳは、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基を表す。）
で表されるイオン性脂質、下記式：
で表されるイオン性脂質
からなる群から選ばれる一つである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　式（１）で表されるイオン性脂質が、下記式：
で表されるイオン性脂質である請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　リン脂質が、１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンおよび１，２－ジアシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　リン脂質が、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、および１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　リン脂質が、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、および１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミンからなる群から選ばれる少なくとも一つである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　ＰＥＧ脂質が、式（６）：
ＣＨ_２（ＯＲ^６）－ＣＨ（ＯＲ^７）－ＣＨ_２（ＯＲ^８）　　　（６）
（式（６）中、
　Ｒ^６、Ｒ^７およびＲ^８のいずれか二つはミリストイル基を表し、残りの一つは数平均分子量１，０００～３，０００のポリエチレングリコール鎖を介して連結される炭素数１～６のアルキル基を表す。）
で表されるジミリストイルグリセロールＰＥＧである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃが、ｍｉＲ－１６またはｍｉＲ－１６　ｍｉｍｉｃである請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子。
　請求項１または２に記載のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ　ｍｉｍｉｃ内封脂質ナノ粒子を含む、肺疾患の治療に用いられる医薬組成物。