WO2024090548A1 - Hydroxyapatite-particle-containing material, liposome having enclosed hydroxyapatite, and liposome-containing composition - Google Patents
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Abstract
Provided are novel composite materials which contain hydroxyapatite particles and which make it possible to more effectively utilize the activity of the hydroxyapatite particles. An embodiment of the present invention is a hydroxyapatite-particle-containing material characterized by comprising hydroxyapatite particles, a phospholipid, and a dispersant.
Description
本発明は、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料、ハイドロキシアパタイト内包リポソーム及びリポソーム含有組成物に関する。
The present invention relates to a material containing hydroxyapatite particles, a liposome containing hydroxyapatite, and a liposome-containing composition.
ハイドロキシアパタイト粒子は、生体親和性や生理活性等を有することが知られている。
Hydroxyapatite particles are known to have biocompatibility and physiological activity.
例えば、特許文献１においては、１００ｎｍ以下の非晶質ハイドロキシアパタイトは、皮膚内の表皮角化細胞に働きかけて、細胞の新陳代謝を促し、外界からの刺激による皮膚細胞の損傷を回復させ、若々しい肌の状態を維持する優れた化粧効果を奏する化粧料や、頭髪毛乳頭に作用して、細胞を活性化させ脱毛予防や育毛作用を促す優れた頭髪化粧品として適することが開示されている。
For example, Patent Document 1 discloses that amorphous hydroxyapatite of 100 nm or less acts on epidermal keratinocytes in the skin, promoting cell metabolism, repairing damage to skin cells caused by external stimuli, and is suitable as a cosmetic with excellent cosmetic effects that maintain a youthful skin condition, and as an excellent hair cosmetic that acts on the hair papilla, activating cells, preventing hair loss, and promoting hair growth.
しかしながら、従来技術に係るハイドロキシアパタイト粒子を含む組成物において、ハイドロキシアパタイト粒子の活性が十分に発揮されない場合があることが知見された。
However, it has been found that in compositions containing hydroxyapatite particles according to conventional technology, the activity of the hydroxyapatite particles may not be fully exerted.
そこで、本発明は、ハイドロキシアパタイト粒子の活性をより有効に活用することが可能な、ハイドロキシアパタイト粒子を含む新規複合材料の提供を課題とする。
The present invention aims to provide a new composite material containing hydroxyapatite particles that can more effectively utilize the activity of the hydroxyapatite particles.
本発明の態様（１）は、
ハイドロキシアパタイト粒子、リン脂質、分散剤を含有することを特徴とするハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（２）は、
前記分散剤が、酢酸、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、及び、クエン酸三ナトリウムからなる群より選択される１種以上である、態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（３）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子がリポソームに内包されていることを特徴とする態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（４）は、
前記リン脂質が前記ハイドロキシアパタイト粒子に吸着されていることを特徴とする態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（５）は、
前記リン脂質がレシチンであること特徴とする、態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（６）は、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（７）は、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（８）は、
態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む組成物である。
本発明の態様（９）は、
医薬品組成物である、態様（８）の組成物である。
本発明の態様（１０）は、
化粧品組成物である、態様（８）の組成物である。
本発明の態様（１１）は、
少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１２）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、態様（１１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１３）は、
少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ハイドロキシアパタイト粒子を内包し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１４）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、態様（１３）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１５）は、
態様（１２）又は（１４）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む、リポソーム含有組成物である。
本発明の態様（１６）は、
医薬品組成物である、態様（１５）のリポソーム含有組成物である。
本発明の態様（１７）は、
化粧品組成物である、態様（１５）のリポソーム含有組成物である。 Aspect (1) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized by containing hydroxyapatite particles, phospholipids, and a dispersing agent.
Aspect (2) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of aspect (1), the dispersing agent is one or more selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
Aspect (3) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (1) is characterized in that the hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes.
Aspect (4) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to aspect (1) is characterized in that the phospholipid is adsorbed onto the hydroxyapatite particles.
Aspect (5) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (1) is characterized in that the phospholipid is lecithin.
Aspect (6) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5) is characterized in that it has two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum.
Aspect (7) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5) is characterized in that in an FT-IR spectrum, the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
Aspect (8) of the present invention is
A composition comprising the hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5).
Aspect (9) of the present invention is
The composition of embodiment (8) is a pharmaceutical composition.
Aspect (10) of the present invention is
The composition of embodiment (8) is a cosmetic composition.
Aspect (11) of the present invention is
Contains at least hydroxyapatite particles,
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized by having two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum.
Aspect (12) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of embodiment (11), the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome containing a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
Aspect (13) of the present invention is
Contains at least hydroxyapatite particles,
Hydroxyapatite particles are included.
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized in that the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 in an FT-IR spectrum is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
Aspect (14) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of embodiment (13), the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome containing a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
Aspect (15) of the present invention is
A liposome-containing composition comprising the hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (12) or (14).
Aspect (16) of the present invention is
The liposome-containing composition of embodiment (15) is a pharmaceutical composition.
Aspect (17) of the present invention is
The liposome-containing composition of embodiment (15) is a cosmetic composition.
ハイドロキシアパタイト粒子、リン脂質、分散剤を含有することを特徴とするハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（２）は、
前記分散剤が、酢酸、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、及び、クエン酸三ナトリウムからなる群より選択される１種以上である、態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（３）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子がリポソームに内包されていることを特徴とする態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（４）は、
前記リン脂質が前記ハイドロキシアパタイト粒子に吸着されていることを特徴とする態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（５）は、
前記リン脂質がレシチンであること特徴とする、態様（１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（６）は、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（７）は、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（８）は、
態様（１）～（５）のいずれかのハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む組成物である。
本発明の態様（９）は、
医薬品組成物である、態様（８）の組成物である。
本発明の態様（１０）は、
化粧品組成物である、態様（８）の組成物である。
本発明の態様（１１）は、
少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１２）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、態様（１１）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１３）は、
少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ハイドロキシアパタイト粒子を内包し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１４）は、
前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、態様（１３）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。
本発明の態様（１５）は、
態様（１２）又は（１４）のハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む、リポソーム含有組成物である。
本発明の態様（１６）は、
医薬品組成物である、態様（１５）のリポソーム含有組成物である。
本発明の態様（１７）は、
化粧品組成物である、態様（１５）のリポソーム含有組成物である。 Aspect (1) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized by containing hydroxyapatite particles, phospholipids, and a dispersing agent.
Aspect (2) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of aspect (1), the dispersing agent is one or more selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
Aspect (3) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (1) is characterized in that the hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes.
Aspect (4) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to aspect (1) is characterized in that the phospholipid is adsorbed onto the hydroxyapatite particles.
Aspect (5) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (1) is characterized in that the phospholipid is lecithin.
Aspect (6) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5) is characterized in that it has two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum.
Aspect (7) of the present invention is
The hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5) is characterized in that in an FT-IR spectrum, the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
Aspect (8) of the present invention is
A composition comprising the hydroxyapatite particle-containing material according to any one of aspects (1) to (5).
Aspect (9) of the present invention is
The composition of embodiment (8) is a pharmaceutical composition.
Aspect (10) of the present invention is
The composition of embodiment (8) is a cosmetic composition.
Aspect (11) of the present invention is
Contains at least hydroxyapatite particles,
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized by having two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum.
Aspect (12) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of embodiment (11), the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome containing a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
Aspect (13) of the present invention is
Contains at least hydroxyapatite particles,
Hydroxyapatite particles are included.
The hydroxyapatite particle-containing material is characterized in that the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 in an FT-IR spectrum is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
Aspect (14) of the present invention is
In the hydroxyapatite particle-containing material of embodiment (13), the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome containing a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
Aspect (15) of the present invention is
A liposome-containing composition comprising the hydroxyapatite particle-containing material according to embodiment (12) or (14).
Aspect (16) of the present invention is
The liposome-containing composition of embodiment (15) is a pharmaceutical composition.
Aspect (17) of the present invention is
The liposome-containing composition of embodiment (15) is a cosmetic composition.
本発明によれば、ハイドロキシアパタイト粒子の活性をより有効に活用することが可能な、ハイドロキシアパタイト粒子を含む新規複合材料を提供可能である。
The present invention makes it possible to provide a novel composite material containing hydroxyapatite particles that can more effectively utilize the activity of the hydroxyapatite particles.
本明細書において、複数の上限値と複数の下限値とが別々に記載されている場合、これらの上限値と下限値を自由に組み合わせて設定可能な全ての数値範囲が本明細書に記載されているものと解するべきである。
In this specification, when multiple upper limits and multiple lower limits are separately described, it should be understood that all numerical ranges that can be set by freely combining these upper and lower limits are described in this specification.
本明細書において分類された各成分は、特に断らない限り、単独で又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
Unless otherwise specified, each component classified in this specification can be used alone or in combination of two or more types.
＜＜＜＜第１の形態＞＞＞＞
本開示に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含む。別の表現によれば、本開示に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子と、ハイドロキシアパタイト粒子以外の成分（第２成分）とが複合化された、ハイドロキシアパタイト粒子複合材料である。ハイドロキシアパタイト粒子との複合の形態としては、例えば、（形態Ａ）第２成分によって形成された、一つ又は複数のハイドロキシアパタイト粒子を覆う外郭を有し、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態や、（形態Ｂ）ハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子との間に第２成分が介在してハイドロキシアパタイト粒子同士が結合或いは凝集して、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態等が考えられる。
形態Ａの具体例としては、ハイドロキシアパタイト粒子が、リン脂質によって形成されたリポソームに内包されている構造が挙げられる。
形態Ｂの具体例としては、リン脂質がハイドロキシアパタイト粒子に吸着されている構造が挙げられる。 <<<<First Form>>>>
The hydroxyapatite particle-containing material according to the present disclosure includes at least hydroxyapatite particles. In other words, the hydroxyapatite particle-containing material according to the present disclosure is a hydroxyapatite particle composite material in which hydroxyapatite particles and a component (second component) other than hydroxyapatite particles are composited. Examples of the form of the composite with hydroxyapatite particles include (form A) a form in which the second component forms an outer shell covering one or more hydroxyapatite particles, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole, and (form B) a form in which the second component is interposed between the hydroxyapatite particles and the hydroxyapatite particles, and the hydroxyapatite particles are bonded or aggregated to form a single material (e.g., a particulate material) as a whole.
A specific example of Form A is a structure in which hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes formed by phospholipids.
A specific example of Form B is a structure in which phospholipids are adsorbed onto hydroxyapatite particles.
本開示に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含む。別の表現によれば、本開示に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子と、ハイドロキシアパタイト粒子以外の成分（第２成分）とが複合化された、ハイドロキシアパタイト粒子複合材料である。ハイドロキシアパタイト粒子との複合の形態としては、例えば、（形態Ａ）第２成分によって形成された、一つ又は複数のハイドロキシアパタイト粒子を覆う外郭を有し、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態や、（形態Ｂ）ハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子との間に第２成分が介在してハイドロキシアパタイト粒子同士が結合或いは凝集して、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態等が考えられる。
形態Ａの具体例としては、ハイドロキシアパタイト粒子が、リン脂質によって形成されたリポソームに内包されている構造が挙げられる。
形態Ｂの具体例としては、リン脂質がハイドロキシアパタイト粒子に吸着されている構造が挙げられる。 <<<<First Form>>>>
The hydroxyapatite particle-containing material according to the present disclosure includes at least hydroxyapatite particles. In other words, the hydroxyapatite particle-containing material according to the present disclosure is a hydroxyapatite particle composite material in which hydroxyapatite particles and a component (second component) other than hydroxyapatite particles are composited. Examples of the form of the composite with hydroxyapatite particles include (form A) a form in which the second component forms an outer shell covering one or more hydroxyapatite particles, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole, and (form B) a form in which the second component is interposed between the hydroxyapatite particles and the hydroxyapatite particles, and the hydroxyapatite particles are bonded or aggregated to form a single material (e.g., a particulate material) as a whole.
A specific example of Form A is a structure in which hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes formed by phospholipids.
A specific example of Form B is a structure in which phospholipids are adsorbed onto hydroxyapatite particles.
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料（ハイドロキシアパタイト粒子複合材料）を構成する第２成分（ハイドロキシアパタイト粒子と複合化される成分）としては、ハイドロキシアパタイト粒子と相互作用し得る成分であり、例えば、リン脂質、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、カルボン酸、スルホン酸、多価アルコール、ポリエーテル、エステル等が挙げられる。
The second component (component that is composited with hydroxyapatite particles) that constitutes the hydroxyapatite particle-containing material (hydroxyapatite particle composite material) is a component that can interact with the hydroxyapatite particles, and examples of such components include phospholipids, anionic surfactants, cationic surfactants, carboxylic acids, sulfonic acids, polyhydric alcohols, polyethers, esters, etc.
以下、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料として、ハイドロキシアパタイト粒子とリン脂質により形成されたリポソームとが複合化された、リポソーム複合材料について主に説明するが、本開示はこれに限定されるものではない。リポソーム以外の材料と、リン脂質以外の第２成分とが複合化されたハイドロキシアパタイト粒子含有材料についても、ハイドロキシアパタイト粒子と第２成分とが相互作用して後述するＦＴ－ＩＲスペクトル、ＴＧ－ＤＴＡ、ゼータ電位等が所定の性質を満たすことで、ハイドロキシアパタイト粒子の活性を有効に活用することが可能と考えられる。
Below, as a hydroxyapatite particle-containing material, a liposome composite material in which hydroxyapatite particles are composited with liposomes formed from phospholipids will be mainly described, but the present disclosure is not limited thereto. For hydroxyapatite particle-containing materials in which a material other than liposomes is composited with a second component other than phospholipids, it is believed that the activity of the hydroxyapatite particles can be effectively utilized by having the hydroxyapatite particles interact with the second component so that the FT-IR spectrum, TG-DTA, zeta potential, etc. described below satisfy the specified properties.
本開示における内水相とは、リポソームに内包される水相を意味する。
In this disclosure, the internal aqueous phase refers to the aqueous phase encapsulated in the liposome.
本開示における外水相とは、リポソーム分散する水溶液を意味する。例えば注射剤の場合においては、バイアル瓶又はプレフィルドシリンジ包装されて保管されたリポソームの分散液におけるリポソームの外側を占める溶液が外水相となる。また、添付された分散用液又はその他溶解液により投与時に分散した液についても同様に、リポソームの分散液におけるリポソームの外側を占める溶液が外水相となる。
In this disclosure, the external aqueous phase refers to the aqueous solution in which liposomes are dispersed. For example, in the case of an injection, the solution occupying the outside of the liposomes in the liposome dispersion packaged and stored in a vial or prefilled syringe is the external aqueous phase. Similarly, in the case of a liquid dispersed at the time of administration using the attached dispersion liquid or other dissolving liquid, the solution occupying the outside of the liposomes in the liposome dispersion is the external aqueous phase.
以下の説明において、膜構造としてのリポソームと、リポソーム及びリポソームに内包された内水相とを備えるリポソーム複合材料と、を区別せずに、単に「リポソーム」と表現する場合がある。
In the following description, there may be cases where the term "liposome" is used without distinction between a liposome as a membrane structure and a liposome composite material comprising a liposome and an internal aqueous phase encapsulated in the liposome.
以下、本開示に係るリポソームの、構造、成分、物性／性質、製造方法、用途等について説明する。
The structure, components, physical properties/characteristics, manufacturing method, uses, etc. of the liposomes disclosed herein are described below.
＜＜＜構造＞＞＞
本開示に係るリポソームは、ハイドロキシアパタイト粒子を内包する。より具体的には、リン脂質二重構造によって形成された膜がカプセル構造を成し、ハイドロキシアパタイト粒子が当該カプセル構造に内包されているものと考えられる。 <<<<Structure>>>
The liposome according to the present disclosure encapsulates hydroxyapatite particles. More specifically, it is considered that a membrane formed by a phospholipid bilayer structure forms a capsule structure, and the hydroxyapatite particles are encapsulated in the capsule structure.
本開示に係るリポソームは、ハイドロキシアパタイト粒子を内包する。より具体的には、リン脂質二重構造によって形成された膜がカプセル構造を成し、ハイドロキシアパタイト粒子が当該カプセル構造に内包されているものと考えられる。 <<<<Structure>>>
The liposome according to the present disclosure encapsulates hydroxyapatite particles. More specifically, it is considered that a membrane formed by a phospholipid bilayer structure forms a capsule structure, and the hydroxyapatite particles are encapsulated in the capsule structure.
本開示に係るリポソームは、別の表現によれば、ハイドロキシアパタイト粒子と、前記ハイドロキシアパタイト粒子を内包する、リン脂質からなる膜小胞と、を備える、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームである。
In other words, the liposome according to the present disclosure is a hydroxyapatite particle-encapsulated liposome that includes a hydroxyapatite particle and a membrane vesicle made of phospholipid that encapsulates the hydroxyapatite particle.
本開示に係るリポソームは、シングルラメラであっても多層ラメラであってもよいが、多層ラメラであることが好ましい。
The liposomes disclosed herein may be single or multilamellar, but are preferably multilamellar.
＜＜粒径＞＞
リポソームの粒径ＰＳＬは、１０ｎｍ以上、２０ｎｍ以上、３０ｎｍ以上、又は、７０ｎｍ以上であることが好ましく、また、１０００ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、２００ｎｍ以下、又は、１５０ｎｍ以下であることが好ましい。この場合、リポソームの粒径ＰＳＬの標準偏差は、２０ｎｍ以下、１５ｎｍ以下、又は、１０ｎｍ以下であることが好ましい。下限値は特に限定されないが、例えば、０ｎｍ以上、１ｎｍ以上、２ｎｍ以上、３ｎｍ以上、４ｎｍ以上、又は、５ｎｍ以上である。 <<Particle size>>
The liposome particle size PS L is preferably 10 nm or more, 20 nm or more, 30 nm or more, or 70 nm or more, and is preferably 1000 nm or less, 500 nm or less, 300 nm or less, 200 nm or less, or 150 nm or less. In this case, the standard deviation of the liposome particle size PS L is preferably 20 nm or less, 15 nm or less, or 10 nm or less. The lower limit is not particularly limited, and is, for example, 0 nm or more, 1 nm or more, 2 nm or more, 3 nm or more, 4 nm or more, or 5 nm or more.
リポソームの粒径ＰＳＬは、１０ｎｍ以上、２０ｎｍ以上、３０ｎｍ以上、又は、７０ｎｍ以上であることが好ましく、また、１０００ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、２００ｎｍ以下、又は、１５０ｎｍ以下であることが好ましい。この場合、リポソームの粒径ＰＳＬの標準偏差は、２０ｎｍ以下、１５ｎｍ以下、又は、１０ｎｍ以下であることが好ましい。下限値は特に限定されないが、例えば、０ｎｍ以上、１ｎｍ以上、２ｎｍ以上、３ｎｍ以上、４ｎｍ以上、又は、５ｎｍ以上である。 <<Particle size>>
The liposome particle size PS L is preferably 10 nm or more, 20 nm or more, 30 nm or more, or 70 nm or more, and is preferably 1000 nm or less, 500 nm or less, 300 nm or less, 200 nm or less, or 150 nm or less. In this case, the standard deviation of the liposome particle size PS L is preferably 20 nm or less, 15 nm or less, or 10 nm or less. The lower limit is not particularly limited, and is, for example, 0 nm or more, 1 nm or more, 2 nm or more, 3 nm or more, 4 nm or more, or 5 nm or more.
ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨに対するリポソームの粒径ＰＳＬの比（ＰＳＬ／ＰＳＨ）は、１．０超１０．０以下であることが好ましく、１．０超３．０以下であることがより好ましい。
The ratio of the particle size PS L of the liposome to the particle size PS H of the hydroxyapatite particle (PS L /PS H ) is preferably greater than 1.0 and less than or equal to 10.0, and more preferably greater than 1.0 and less than or equal to 3.0.
リポソームの粒径ＰＳＬをこのような範囲とすることで、ハイドロキシアパタイト粒子が本来有する物理的特性を維持することができる。
By setting the particle size PSL of the liposomes within this range, it is possible to maintain the physical properties that the hydroxyapatite particles inherently possess.
リポソームの粒径ＰＳＬは、動的光散乱粒度分布計によって測定された平均粒径とする。
The particle size PSL of the liposome is the average particle size measured by a dynamic light scattering particle size distribution meter.
＜＜＜成分＞＞＞
＜＜リン脂質＞＞
リポソームを構成するリン脂質は、公知のものを使用することができる。より具体的には、リン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール等が例示される。リン脂質は、これらの水素添加物等であってもよい。リン脂質は、天然由来のものであっても合成されたものであってもよい。 <<<Ingredients>>>
<<Phospholipids>>
The phospholipid constituting the liposome can be a known one. More specifically, the phospholipid can be exemplified by phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, etc. The phospholipid may be a hydrogenated product of these. The phospholipid may be naturally derived or synthetic.
＜＜リン脂質＞＞
リポソームを構成するリン脂質は、公知のものを使用することができる。より具体的には、リン脂質としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール等が例示される。リン脂質は、これらの水素添加物等であってもよい。リン脂質は、天然由来のものであっても合成されたものであってもよい。 <<<Ingredients>>>
<<Phospholipids>>
The phospholipid constituting the liposome can be a known one. More specifically, the phospholipid can be exemplified by phosphatidylcholine, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, etc. The phospholipid may be a hydrogenated product of these. The phospholipid may be naturally derived or synthetic.
リン脂質は、ホスファチジルコリンであることが好ましい。ホスファチジルコリンで形成されたリポソームと、ハイドロキシアパタイト粒子とを組み合わせて使用することで、ハイドロキシアパタイト粒子の活性（例えば、コラーゲン産生促進効果等）が高まると考えられる。
The phospholipid is preferably phosphatidylcholine. It is believed that the activity of the hydroxyapatite particles (e.g., the effect of promoting collagen production) is enhanced by using liposomes formed from phosphatidylcholine in combination with hydroxyapatite particles.
＜＜ハイドロキシアパタイト粒子＞＞
ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨは、１０ｎｍ以上、１５ｎｍ以上、又は、２０ｎｍ以上とすることが好ましく、１０００ｎｍ以下、７００ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、１００ｎｍ以下、又は、７０ｎｍ以下であることが好ましい。具体的には、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨは、１０～１０００ｎｍであることが好ましく、２０～７００ｎｍであることがより好ましい。この場合、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨの標準偏差は、２０ｎｍ以下、１５ｎｍ以下、又は、１０ｎｍ以下であることが好ましい。下限値は特に限定されないが、例えば、０ｎｍ以上、１ｎｍ以上、２ｎｍ以上、３ｎｍ以上、４ｎｍ以上、又は、５ｎｍ以上である。 <<Hydroxyapatite particles>>
The particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 10 nm or more, 15 nm or more, or 20 nm or more, and is preferably 1000 nm or less, 700 nm or less, 500 nm or less, 300 nm or less, 100 nm or less, or 70 nm or less. Specifically, the particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 10 to 1000 nm, and more preferably 20 to 700 nm. In this case, the standard deviation of the particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 20 nm or less, 15 nm or less, or 10 nm or less. The lower limit is not particularly limited, but is, for example, 0 nm or more, 1 nm or more, 2 nm or more, 3 nm or more, 4 nm or more, or 5 nm or more.
ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨは、１０ｎｍ以上、１５ｎｍ以上、又は、２０ｎｍ以上とすることが好ましく、１０００ｎｍ以下、７００ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、１００ｎｍ以下、又は、７０ｎｍ以下であることが好ましい。具体的には、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨは、１０～１０００ｎｍであることが好ましく、２０～７００ｎｍであることがより好ましい。この場合、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨの標準偏差は、２０ｎｍ以下、１５ｎｍ以下、又は、１０ｎｍ以下であることが好ましい。下限値は特に限定されないが、例えば、０ｎｍ以上、１ｎｍ以上、２ｎｍ以上、３ｎｍ以上、４ｎｍ以上、又は、５ｎｍ以上である。 <<Hydroxyapatite particles>>
The particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 10 nm or more, 15 nm or more, or 20 nm or more, and is preferably 1000 nm or less, 700 nm or less, 500 nm or less, 300 nm or less, 100 nm or less, or 70 nm or less. Specifically, the particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 10 to 1000 nm, and more preferably 20 to 700 nm. In this case, the standard deviation of the particle size PS H of the hydroxyapatite particles is preferably 20 nm or less, 15 nm or less, or 10 nm or less. The lower limit is not particularly limited, but is, for example, 0 nm or more, 1 nm or more, 2 nm or more, 3 nm or more, 4 nm or more, or 5 nm or more.
ハイドロキシアパタイト粒子の形状は、特に限定されないが、球状であることが好ましい。ここで、「球状」とは、対象物（粒子）のアスペクト比が、１．３５以下（より好適には１．２５以下、更に好適には、１．２以下）であることを示す。
The shape of the hydroxyapatite particles is not particularly limited, but is preferably spherical. Here, "spherical" indicates that the aspect ratio of the object (particle) is 1.35 or less (more preferably 1.25 or less, and even more preferably 1.2 or less).
ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨ及びアスペクト比は、例えば、以下の方法によって測定される。
対象物（粒子）を撮影したＳＥＭ画像において、粒子上にその両端が粒子の外周上に位置する２本の線分を引く。このとき、２本の線分のうち一方の線分は、その長さが最大となるものとする。更に、２本の線分のうち他方の線分は、当該一方の線分の中点で、互いに直交するように引かれた線分である。このようにして引かれた２本の線分のうち、短い方の線分の長さを短径、長い方の線分の長さを長径とする。
長径と短径との平均値を粒径とする。
長径と短径との比（長径／短径）をアスペクト比とする。
但し、輪郭がぼやけて見える粒子、別の粒子に接近し過ぎていて境界が曖昧な粒子、粒子の一部がその他の粒子の影に隠れている粒子等を測定対象から除外する。
ハイドロキシアパタイト粒子１００～１５０個について、粒径の平均値及びアスペクト比の平均値を求め、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨ及びアスペクト比とする。 The particle size PSH and aspect ratio of the hydroxyapatite particles are measured, for example, by the following method.
In an SEM image of a target object (particle), two line segments are drawn on the particle with both ends located on the outer periphery of the particle. At this time, one of the two line segments is assumed to have the maximum length. Furthermore, the other of the two line segments is a line segment drawn at the midpoint of the one line segment so as to be perpendicular to each other. Of the two line segments thus drawn, the length of the shorter line segment is assumed to be the minor axis, and the length of the longer line segment is assumed to be the major axis.
The average value of the major axis and the minor axis is defined as the particle diameter.
The ratio of the major axis to the minor axis (major axis/minor axis) is defined as the aspect ratio.
However, particles with blurred contours, particles that are too close to other particles and have unclear boundaries, particles that are partly hidden in the shadows of other particles, etc. are excluded from the measurement.
The average particle size and the average aspect ratio are determined for 100 to 150 hydroxyapatite particles, and these are taken as the particle size PSH and aspect ratio of the hydroxyapatite particles.
対象物（粒子）を撮影したＳＥＭ画像において、粒子上にその両端が粒子の外周上に位置する２本の線分を引く。このとき、２本の線分のうち一方の線分は、その長さが最大となるものとする。更に、２本の線分のうち他方の線分は、当該一方の線分の中点で、互いに直交するように引かれた線分である。このようにして引かれた２本の線分のうち、短い方の線分の長さを短径、長い方の線分の長さを長径とする。
長径と短径との平均値を粒径とする。
長径と短径との比（長径／短径）をアスペクト比とする。
但し、輪郭がぼやけて見える粒子、別の粒子に接近し過ぎていて境界が曖昧な粒子、粒子の一部がその他の粒子の影に隠れている粒子等を測定対象から除外する。
ハイドロキシアパタイト粒子１００～１５０個について、粒径の平均値及びアスペクト比の平均値を求め、ハイドロキシアパタイト粒子の粒径ＰＳＨ及びアスペクト比とする。 The particle size PSH and aspect ratio of the hydroxyapatite particles are measured, for example, by the following method.
In an SEM image of a target object (particle), two line segments are drawn on the particle with both ends located on the outer periphery of the particle. At this time, one of the two line segments is assumed to have the maximum length. Furthermore, the other of the two line segments is a line segment drawn at the midpoint of the one line segment so as to be perpendicular to each other. Of the two line segments thus drawn, the length of the shorter line segment is assumed to be the minor axis, and the length of the longer line segment is assumed to be the major axis.
The average value of the major axis and the minor axis is defined as the particle diameter.
The ratio of the major axis to the minor axis (major axis/minor axis) is defined as the aspect ratio.
However, particles with blurred contours, particles that are too close to other particles and have unclear boundaries, particles that are partly hidden in the shadows of other particles, etc. are excluded from the measurement.
The average particle size and the average aspect ratio are determined for 100 to 150 hydroxyapatite particles, and these are taken as the particle size PSH and aspect ratio of the hydroxyapatite particles.
ハイドロキシアパタイト粒子は、熱処理されたものであることが好ましい。より具体的には、ハイドロキシアパタイト粒子は、Ｘ線回折法（ＸＲＤ）により測定された、ｄ＝２．８１４での半値幅（２θ）が、０．２～０．９を満たすことが好ましく、０．５～０．８を満たすことがより好ましい。
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料の生体への吸収速度を高めるという観点では、ハイドロキシアパタイト粒子のｄ＝２．８１４での半値幅が、０．５以上１．２以下であることが好ましく、０．６以上１．１以下であることがより好ましく、０．７以上１．０以下であることが特に好ましい。特に、このように、ｄ＝２．８１４での半値幅が０．７以上のハイドロキシアパタイト粒子を、非結晶性（或いは低結晶）のハイドロキシアパタイト粒子と称する場合がある。
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料の安定性を高めるという観点では、ハイドロキシアパタイト粒子のｄ＝２．８１４での半値幅が、０．１以上０．８以下であることが好ましく、０．２以上０．８以下であることがより好ましく、０．２以上０．７未満であることが特に好ましい。特に、このように、ｄ＝２．８１４での半値幅が０．７未満のハイドロキシアパタイト粒子を、結晶性（或いは高結晶）のハイドロキシアパタイト粒子と称する場合がある。 The hydroxyapatite particles are preferably heat-treated. More specifically, the half-width (2θ) of the hydroxyapatite particles at d=2.814 measured by X-ray diffraction (XRD) is preferably 0.2 to 0.9, and more preferably 0.5 to 0.8.
From the viewpoint of increasing the absorption rate of the hydroxyapatite particle-containing material into the living body, the half-width of the hydroxyapatite particles at d = 2.814 is preferably 0.5 to 1.2, more preferably 0.6 to 1.1, and particularly preferably 0.7 to 1.0. In particular, such hydroxyapatite particles having a half-width of 0.7 or more at d = 2.814 may be referred to as non-crystalline (or low-crystalline) hydroxyapatite particles.
From the viewpoint of enhancing the stability of the hydroxyapatite particle-containing material, the half-width of the hydroxyapatite particles at d = 2.814 is preferably 0.1 or more and 0.8 or less, more preferably 0.2 or more and 0.8 or less, and particularly preferably 0.2 or more and less than 0.7. In particular, such hydroxyapatite particles having a half-width of less than 0.7 at d = 2.814 are sometimes referred to as crystalline (or highly crystalline) hydroxyapatite particles.
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料の生体への吸収速度を高めるという観点では、ハイドロキシアパタイト粒子のｄ＝２．８１４での半値幅が、０．５以上１．２以下であることが好ましく、０．６以上１．１以下であることがより好ましく、０．７以上１．０以下であることが特に好ましい。特に、このように、ｄ＝２．８１４での半値幅が０．７以上のハイドロキシアパタイト粒子を、非結晶性（或いは低結晶）のハイドロキシアパタイト粒子と称する場合がある。
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料の安定性を高めるという観点では、ハイドロキシアパタイト粒子のｄ＝２．８１４での半値幅が、０．１以上０．８以下であることが好ましく、０．２以上０．８以下であることがより好ましく、０．２以上０．７未満であることが特に好ましい。特に、このように、ｄ＝２．８１４での半値幅が０．７未満のハイドロキシアパタイト粒子を、結晶性（或いは高結晶）のハイドロキシアパタイト粒子と称する場合がある。 The hydroxyapatite particles are preferably heat-treated. More specifically, the half-width (2θ) of the hydroxyapatite particles at d=2.814 measured by X-ray diffraction (XRD) is preferably 0.2 to 0.9, and more preferably 0.5 to 0.8.
From the viewpoint of increasing the absorption rate of the hydroxyapatite particle-containing material into the living body, the half-width of the hydroxyapatite particles at d = 2.814 is preferably 0.5 to 1.2, more preferably 0.6 to 1.1, and particularly preferably 0.7 to 1.0. In particular, such hydroxyapatite particles having a half-width of 0.7 or more at d = 2.814 may be referred to as non-crystalline (or low-crystalline) hydroxyapatite particles.
From the viewpoint of enhancing the stability of the hydroxyapatite particle-containing material, the half-width of the hydroxyapatite particles at d = 2.814 is preferably 0.1 or more and 0.8 or less, more preferably 0.2 or more and 0.8 or less, and particularly preferably 0.2 or more and less than 0.7. In particular, such hydroxyapatite particles having a half-width of less than 0.7 at d = 2.814 are sometimes referred to as crystalline (or highly crystalline) hydroxyapatite particles.
なお、半値幅の調整においては、熱処理温度及び熱処理時間を適宜調整すればよく、上記半値幅としたい場合には、例えば、熱処理温度（最高到達温度）を３０～８００℃とし、当該温度範囲の保持時間を０超～１ｈ等とすればよい。
より詳細には、熱処理温度は、低温処理の形態であってもよいし、高温処理の形態であってもよい。
低温処理の形態としては、例えば、３０℃以上、３５℃以上、４０℃以上、又は、５０℃以上とし、また、１００℃以下、９０℃以下、又は、８０℃以下とする形態が挙げられる。
高温処理の形態としては、例えば、１００℃超、１５０℃以上、２００℃以上、又は、２５０℃以上とし、また、８００℃以下、７５０℃以下、又は、７００℃以下とする形態が挙げられる。 In addition, in adjusting the half-value width, the heat treatment temperature and the heat treatment time may be appropriately adjusted. When it is desired to obtain the above half-value width, for example, the heat treatment temperature (maximum temperature reached) may be set to 30 to 800° C., and the holding time in the temperature range may be set to more than 0 to 1 h, etc.
More specifically, the heat treatment temperature may be in the form of a low temperature treatment or a high temperature treatment.
Examples of low-temperature treatment include a treatment at 30° C. or higher, 35° C. or higher, 40° C. or higher, or 50° C. or higher, and 100° C. or lower, 90° C. or lower, or 80° C. or lower.
Examples of the high temperature treatment include a treatment at a temperature above 100° C., 150° C. or higher, 200° C. or higher, or 250° C. or higher, and 800° C. or lower, 750° C. or lower, or 700° C. or lower.
より詳細には、熱処理温度は、低温処理の形態であってもよいし、高温処理の形態であってもよい。
低温処理の形態としては、例えば、３０℃以上、３５℃以上、４０℃以上、又は、５０℃以上とし、また、１００℃以下、９０℃以下、又は、８０℃以下とする形態が挙げられる。
高温処理の形態としては、例えば、１００℃超、１５０℃以上、２００℃以上、又は、２５０℃以上とし、また、８００℃以下、７５０℃以下、又は、７００℃以下とする形態が挙げられる。 In addition, in adjusting the half-value width, the heat treatment temperature and the heat treatment time may be appropriately adjusted. When it is desired to obtain the above half-value width, for example, the heat treatment temperature (maximum temperature reached) may be set to 30 to 800° C., and the holding time in the temperature range may be set to more than 0 to 1 h, etc.
More specifically, the heat treatment temperature may be in the form of a low temperature treatment or a high temperature treatment.
Examples of low-temperature treatment include a treatment at 30° C. or higher, 35° C. or higher, 40° C. or higher, or 50° C. or higher, and 100° C. or lower, 90° C. or lower, or 80° C. or lower.
Examples of the high temperature treatment include a treatment at a temperature above 100° C., 150° C. or higher, 200° C. or higher, or 250° C. or higher, and 800° C. or lower, 750° C. or lower, or 700° C. or lower.
ハイドロキシアパタイト粒子は、炭酸カルシウムを含有しないことが好ましい。
ハイドロキシアパタイト粒子が「炭酸カルシウムを含有しない」とは、炭酸カルシウムを実質的に含有しないことであり、より具体的には、以下の（１）～（３）の基準を全て満たすことである。
（１）Ｘ線回折の測定結果より炭酸カルシウムが、炭酸カルシウム（式量：１００．０９）／ハイドロキシアパタイト（式量：１００４．６２）＝０．１／９９．９（式量換算比）以下である。
（２）熱重量示差熱分析（ＴＧ－ＤＴＡ）測定において、６５０℃～８００℃に明確な吸熱を伴う２％以上の重量減が観察されない。
（３）ＦＴ－ＩＲ測定において得られるスペクトルをクベルカムンク（ＫＭ）式で計算した吸光度を示したチャートにおいて、波数が８６０ｃｍ－１～８９０ｃｍ－１の間に現れるピークを分離し、炭酸カルシウムに帰属される８７７ｃｍ－１付近のピークが観察されない。なお、ピーク分離は、例えば、fityk 0.9.4というソフトを用いて、Function Type：Gaussian、Fitting Method：Levenberg-Marquardtという条件で処理することによって行う。 The hydroxyapatite particles preferably do not contain calcium carbonate.
The phrase "containing no calcium carbonate" means that the hydroxyapatite particles contain substantially no calcium carbonate, and more specifically, that the hydroxyapatite particles satisfy all of the following criteria (1) to (3).
(1) According to the results of X-ray diffraction measurement, calcium carbonate has a formula weight ratio of calcium carbonate (formula weight: 100.09)/hydroxyapatite (formula weight: 1004.62) of 0.1/99.9 or less (formula weight conversion ratio).
(2) In a thermogravimetric differential thermal analysis (TG-DTA) measurement, a weight loss of 2% or more accompanied by a clear endothermic reaction is not observed between 650° C. and 800° C.
(3) In a chart showing absorbance calculated by the Kubelka-Munk (KM) formula from a spectrum obtained in FT-IR measurement, peaks appearing at wave numbers between 860 cm -1 and 890 cm -1 are separated, and a peak at about 877 cm -1 which is attributable to calcium carbonate is not observed. Note that peak separation is performed, for example, by processing using software called fityk 0.9.4 under the conditions of Function Type: Gaussian and Fitting Method: Levenberg-Marquardt.
ハイドロキシアパタイト粒子が「炭酸カルシウムを含有しない」とは、炭酸カルシウムを実質的に含有しないことであり、より具体的には、以下の（１）～（３）の基準を全て満たすことである。
（１）Ｘ線回折の測定結果より炭酸カルシウムが、炭酸カルシウム（式量：１００．０９）／ハイドロキシアパタイト（式量：１００４．６２）＝０．１／９９．９（式量換算比）以下である。
（２）熱重量示差熱分析（ＴＧ－ＤＴＡ）測定において、６５０℃～８００℃に明確な吸熱を伴う２％以上の重量減が観察されない。
（３）ＦＴ－ＩＲ測定において得られるスペクトルをクベルカムンク（ＫＭ）式で計算した吸光度を示したチャートにおいて、波数が８６０ｃｍ－１～８９０ｃｍ－１の間に現れるピークを分離し、炭酸カルシウムに帰属される８７７ｃｍ－１付近のピークが観察されない。なお、ピーク分離は、例えば、fityk 0.9.4というソフトを用いて、Function Type：Gaussian、Fitting Method：Levenberg-Marquardtという条件で処理することによって行う。 The hydroxyapatite particles preferably do not contain calcium carbonate.
The phrase "containing no calcium carbonate" means that the hydroxyapatite particles contain substantially no calcium carbonate, and more specifically, that the hydroxyapatite particles satisfy all of the following criteria (1) to (3).
(1) According to the results of X-ray diffraction measurement, calcium carbonate has a formula weight ratio of calcium carbonate (formula weight: 100.09)/hydroxyapatite (formula weight: 1004.62) of 0.1/99.9 or less (formula weight conversion ratio).
(2) In a thermogravimetric differential thermal analysis (TG-DTA) measurement, a weight loss of 2% or more accompanied by a clear endothermic reaction is not observed between 650° C. and 800° C.
(3) In a chart showing absorbance calculated by the Kubelka-Munk (KM) formula from a spectrum obtained in FT-IR measurement, peaks appearing at wave numbers between 860 cm -1 and 890 cm -1 are separated, and a peak at about 877 cm -1 which is attributable to calcium carbonate is not observed. Note that peak separation is performed, for example, by processing using software called fityk 0.9.4 under the conditions of Function Type: Gaussian and Fitting Method: Levenberg-Marquardt.
また、ハイドロキシアパタイト粒子が「炭酸カルシウムを含有しない」とする場合、以下の（４）の基準を更に満たすことが好ましい。
（４）医薬部外品原料規格２００６（ヒドロキシアパタイト）に準じて試験した際、気泡発生量が０．２５ｍＬ以下である。 In addition, when the hydroxyapatite particles are deemed to be "free of calcium carbonate", it is preferable that they further satisfy the following criterion (4).
(4) When tested in accordance with the Standards for Quasi-Drug Ingredients 2006 (hydroxyapatite), the amount of bubbles generated is 0.25 mL or less.
（４）医薬部外品原料規格２００６（ヒドロキシアパタイト）に準じて試験した際、気泡発生量が０．２５ｍＬ以下である。 In addition, when the hydroxyapatite particles are deemed to be "free of calcium carbonate", it is preferable that they further satisfy the following criterion (4).
(4) When tested in accordance with the Standards for Quasi-Drug Ingredients 2006 (hydroxyapatite), the amount of bubbles generated is 0.25 mL or less.
このようなハイドロキシアパタイト粒子を使用することで、ハイドロキシアパタイト粒子由来の特性が発揮され易くなる。特に、リポソーム複合材料とした場合、リポソームの粒径を均一化させたり、リポソーム内のハイドロキシアパタイト粒子の安定性等を高めることができ、本開示の効果をより高めることができる。
The use of such hydroxyapatite particles makes it easier for the properties derived from the hydroxyapatite particles to be exhibited. In particular, when used as a liposome composite material, it is possible to make the particle size of the liposomes uniform and to increase the stability of the hydroxyapatite particles within the liposomes, thereby further enhancing the effects of the present disclosure.
このようなハイドロキシアパタイト粒子は、例えば、特開２０２０－００５９９５号公報、特開２０１８－０３５０８５号公報、特開２０１８－０３３６４０号公報、特開２０１８－０３３６３９号公報、特開２０１８－０３３６３８号公報、特開２０１８－００２５８０号公報、特開２０１６－２２２５３７号公報等に開示された方法に従って製造することができる。
Such hydroxyapatite particles can be produced, for example, according to the methods disclosed in JP 2020-005995 A, JP 2018-035085 A, JP 2018-033640 A, JP 2018-033639 A, JP 2018-033638 A, JP 2018-002580 A, JP 2016-222537 A, etc.
＜＜その他の成分＞＞
リポソームは、通常、液体媒体を含む。より具体的には、リポソームは、通常、各成分の溶液或いは分散液である内水相を含有する。なお、内水相を構成する液体媒体については後述する。 <<Other ingredients>>
Liposomes usually contain a liquid medium. More specifically, liposomes usually contain an internal aqueous phase which is a solution or dispersion of each component. The liquid medium constituting the internal aqueous phase will be described later.
リポソームは、通常、液体媒体を含む。より具体的には、リポソームは、通常、各成分の溶液或いは分散液である内水相を含有する。なお、内水相を構成する液体媒体については後述する。 <<Other ingredients>>
Liposomes usually contain a liquid medium. More specifically, liposomes usually contain an internal aqueous phase which is a solution or dispersion of each component. The liquid medium constituting the internal aqueous phase will be described later.
また、本開示に係るリポソームは、ハイドロキシアパタイト粒子、液体媒体以外の成分（その他の成分）を含有していてもよい。
The liposomes disclosed herein may also contain components other than the hydroxyapatite particles and the liquid medium (other components).
本開示に係るリポソームは、その用途等に応じて、薬物や添加剤等の適宜の成分を含んでいてもよい。本開示に係るリポソームの含有する成分としては、例えば、ビタミン類、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、アスタキサンチン、コエンザイムＱ１０、α－リポ酸、セラミド、アルブチン、ヒアルロン酸、リノール酸、トラネキサム酸、コウジ酸、酵素、ペプチド、コラーゲン、エラスチン、糖類、アルコール、油剤、酸化防止剤、防腐剤、顔料、パール化剤、増粘剤、界面活性剤、安定化剤、キレート剤、着色料、香料、緩衝剤、ｐＨ調整剤、副腎皮質ホルモン、抗炎症薬、免疫抑制剤、抗がん剤、抗菌薬、抗ウイルス薬、血管新生抑制剤、サイトカイン、抗サイトカイン抗体、分子標的薬、ステロイド剤、抗ヒスタミン、局所麻酔剤、抗炎症剤、抗菌剤、鎮痒剤、皮膚保護剤、血行促進剤等が挙げられる。これらの成分は、誘導体、類似体、加水分解物の形態、塩の形態等であってもよい。またこれらの成分は、合成物であっても、天然物抽出物であってもよい。
The liposomes according to the present disclosure may contain appropriate components such as drugs and additives depending on the application, etc. Examples of components contained in the liposomes according to the present disclosure include vitamins, glycyrrhizinic acid, astaxanthin, coenzyme Q10, α-lipoic acid, ceramide, arbutin, hyaluronic acid, linoleic acid, tranexamic acid, kojic acid, enzymes, peptides, collagen, elastin, sugars, alcohol, oils, antioxidants, preservatives, pigments, pearlizing agents, thickeners, surfactants, stabilizers, chelating agents, colorants, fragrances, buffers, pH adjusters, adrenal cortical hormones, anti-inflammatory drugs, immunosuppressants, anticancer drugs, antibacterial drugs, antiviral drugs, angiogenesis inhibitors, cytokines, anticytokine antibodies, molecular targeted drugs, steroids, antihistamines, local anesthetics, anti-inflammatory drugs, antibacterial drugs, antipruritic drugs, skin protectants, blood circulation promoters, etc. These ingredients may be in the form of derivatives, analogs, hydrolysates, salts, etc. These ingredients may also be synthetic or natural product extracts.
また、後述するように、本開示に係るリポソームの好ましい製造方法は、水相中に分散剤を含む状態にて、乳化によるリポソーム粒子の形成を行う工程を含む。従って、本開示に係るリポソームは、当該製造工程に由来する分散剤を含有（内包）する場合がある。
Furthermore, as described below, a preferred method for producing liposomes according to the present disclosure includes a step of forming liposome particles by emulsification in a state in which a dispersant is contained in an aqueous phase. Therefore, liposomes according to the present disclosure may contain (encapsulate) a dispersant derived from the production process.
なお、リポソームは、膜中（親油性領域）或いは多層ラメラにおける膜間（親水性領域）に各成分を含有していてもよい。
In addition, the liposome may contain each component in the membrane (lipophilic region) or between the membranes of the multilamellar membranes (hydrophilic region).
＜＜＜物性／性質＞＞＞
＜＜ＦＴ－ＩＲスペクトル＞＞
以下、本開示に係るリポソームの、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおける好ましい特徴について説明する。 <<<Physical properties/characteristics>>>
<<FT-IR spectrum>>
Hereinafter, preferred characteristics of the liposome according to the present disclosure in the FT-IR spectrum will be described.
＜＜ＦＴ－ＩＲスペクトル＞＞
以下、本開示に係るリポソームの、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおける好ましい特徴について説明する。 <<<Physical properties/characteristics>>>
<<FT-IR spectrum>>
Hereinafter, preferred characteristics of the liposome according to the present disclosure in the FT-IR spectrum will be described.
内包されるハイドロキシアパタイト粒子表面とリン脂質との相互作用形成という観点から、本開示に係るリポソームは、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することが好ましい。
From the viewpoint of forming an interaction between the surface of the encapsulated hydroxyapatite particle and the phospholipid, the liposome according to the present disclosure preferably has two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 .
同様に、内包されるハイドロキシアパタイト粒子表面とリン脂質との相互作用形成という観点から、本開示に係るリポソームは、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることが好ましい。
Similarly, from the viewpoint of forming an interaction between the surface of the encapsulated hydroxyapatite particle and the phospholipid, the liposome according to the present disclosure preferably has a maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 that is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
本開示に係るリポソームが、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいてこのような特徴を有することで、ハイドロキシアパタイト粒子とリン脂質とが強固に固定され、リポソーム構造の安定化が奏されているものと考えられる。
The liposomes disclosed herein have such characteristics in the FT-IR spectrum, which is believed to firmly fix the hydroxyapatite particles and phospholipids, stabilizing the liposome structure.
本開示に係るリポソームは、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲にピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have a peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
また、この場合、本開示に係るリポソームの１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲のピークの位置は、リン脂質単独で測定した場合に現れる１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲のピークの位置や、ハイドロキシアパタイト粒子単独で測定した場合に現れる１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲のピークの位置よりも、低波数側にシフトしていることが好ましい。
In this case, the position of the peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 of the liposome according to the present disclosure is preferably shifted to the lower wavenumber side than the position of the peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 that appears when the phospholipid alone is measured, or the position of the peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 that appears when the hydroxyapatite particle alone is measured.
本開示に係るリポソームは、１０００ｃｍ－１～１１５０ｃｍ－１の範囲に２つのピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have two peaks in the range of 1000 cm -1 to 1150 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１２００ｃｍ－１～１３００ｃｍ－１の範囲にピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have a peak in the range of 1200 cm -1 to 1300 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１３５０ｃｍ－１～１４１０ｃｍ－１の範囲にピークを有しないことが好ましい。
Liposomes according to the present disclosure preferably have no peak in the range of 1350 cm -1 to 1410 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１４５０ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲にピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have a peak in the range of 1450 cm -1 to 1500 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１７００ｃｍ－１～１９００ｃｍ－１の範囲にピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have a peak in the range of 1700 cm -1 to 1900 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、２８００ｃｍ－１～３０００ｃｍ－１の範囲にピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have a peak in the range of 2800 cm -1 to 3000 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、２８５０ｃｍ－１～２９５０ｃｍ－１の範囲に２つのピークを有することが好ましい。
The liposomes according to the present disclosure preferably have two peaks in the range of 2850 cm -1 to 2950 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１２００ｃｍ－１～１２２０ｃｍ－１の範囲にピークを有することがより好ましい。
More preferably, the liposomes according to the present disclosure have a peak in the range of 1200 cm -1 to 1220 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１２２０ｃｍ－１～１２４０ｃｍ－１の範囲にピークを有しないことがより好ましい。
More preferably, the liposomes according to the present disclosure do not have a peak in the range of 1220 cm -1 to 1240 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１５５０ｃｍ－１～１６１０ｃｍ－１の範囲にピークを有することがより好ましい。
More preferably, the liposomes according to the present disclosure have a peak in the range of 1550 cm -1 to 1610 cm -1 .
本開示に係るリポソームは、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲にピークを有しないことがより好ましい。
More preferably, the liposomes according to the present disclosure do not have a peak in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 .
このようなスペクトルを有するリポソームは、後述する方法に従って得ることができる。
Liposomes with such a spectrum can be obtained according to the method described below.
ＦＴ－ＩＲスペクトルの測定は、以下の方法に従って実施する。
FT-IR spectrum measurements are performed according to the following method.
＜測定方法＞
パーキンエルマー製ＦＴ－ＩＲ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ１００を用いて全反射測定法にて６５０ｃｍ－１～４０００ｃｍ－１の範囲を積算回数８回で測定した。 <Measurement method>
Using a PerkinElmer FT-IR Spectrum 100, measurements were made in the range of 650 cm -1 to 4000 cm -1 by total reflection measurement with eight accumulations.
パーキンエルマー製ＦＴ－ＩＲ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ１００を用いて全反射測定法にて６５０ｃｍ－１～４０００ｃｍ－１の範囲を積算回数８回で測定した。 <Measurement method>
Using a PerkinElmer FT-IR Spectrum 100, measurements were made in the range of 650 cm -1 to 4000 cm -1 by total reflection measurement with eight accumulations.
本測定において、ピークの有無は、８００ｃｍ－１と４０００ｃｍ－１の２点を結ぶ線分をベースライト為し、ベースラインより下に凸の有無によって判断される。
In this measurement, the presence or absence of a peak is judged by the presence or absence of a convexity below the base line, which is taken as the base light and connects the two points of 800 cm -1 and 4000 cm -1 .
＜＜ＴＧ－ＤＴＡ＞＞
以下、本開示に係るリポソームの、ＴＧ－ＤＴＡ（熱重量示差熱分析）測定における好ましい特徴について説明する。 <<TG-DTA>>
Hereinafter, preferred characteristics of the liposome according to the present disclosure as measured by TG-DTA (thermogravimetric differential thermal analysis) will be described.
以下、本開示に係るリポソームの、ＴＧ－ＤＴＡ（熱重量示差熱分析）測定における好ましい特徴について説明する。 <<TG-DTA>>
Hereinafter, preferred characteristics of the liposome according to the present disclosure as measured by TG-DTA (thermogravimetric differential thermal analysis) will be described.
本開示に係るリポソームは、２５～１５０℃の範囲に明確な吸熱を伴う４０％以上の重量減が観察されることが好ましい。
The liposomes disclosed herein preferably exhibit a weight loss of 40% or more accompanied by a clear endothermic reaction in the range of 25 to 150°C.
また、本開示に係るリポソームは、１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない２.０％以上（好ましくは５．０％以上、より好ましくは８．０％以上）の重量減が観察されることが好ましい。
Furthermore, it is preferable that the liposomes according to the present disclosure exhibit a weight loss of 2.0% or more (preferably 5.0% or more, more preferably 8.0% or more) without a clear endothermic reaction in the range of 150 to 250°C.
本開示に係るリポソームが、ＴＧ－ＤＴＡ測定においてこのような特徴を有することで、構造安定性（例えば、内水相保持）が向上するものと考えられる。
The liposomes disclosed herein are believed to have such characteristics in TG-DTA measurements, which improves their structural stability (e.g., retention of the internal aqueous phase).
このような熱的性質を有するリポソームは、後述する方法に従って得ることができる。
Liposomes with such thermal properties can be obtained according to the method described below.
ＴＧ－ＤＴＡ測定は、以下の方法に従って実施する。
TG-DTA measurements are performed according to the following method.
＜測定方法＞
熱重量示差熱分析装置（ＴＧ－ＤＴＡ）（セイコーインスツルメント社製、ＥＸＳＴＡＲ６０００）にて、窒素気流下、１０℃／ｍｉｎ．の条件で２５℃～１０００℃の温度帯を測定した。 <Measurement method>
The temperature range of 25° C. to 1000° C. was measured using a thermogravimetric differential thermal analyzer (TG-DTA) (Seiko Instruments, EXSTAR6000) under a nitrogen gas flow at a rate of 10° C./min.
熱重量示差熱分析装置（ＴＧ－ＤＴＡ）（セイコーインスツルメント社製、ＥＸＳＴＡＲ６０００）にて、窒素気流下、１０℃／ｍｉｎ．の条件で２５℃～１０００℃の温度帯を測定した。 <Measurement method>
The temperature range of 25° C. to 1000° C. was measured using a thermogravimetric differential thermal analyzer (TG-DTA) (Seiko Instruments, EXSTAR6000) under a nitrogen gas flow at a rate of 10° C./min.
＜＜ゼータ電位＞＞
ゼータ電位は、－４０ｍＶ～－１ｍＶであることが好ましく、－３０ｍＶ～－５ｍＶであることがより好ましい。 <<Zeta potential>>
The zeta potential is preferably from −40 mV to −1 mV, and more preferably from −30 mV to −5 mV.
ゼータ電位は、－４０ｍＶ～－１ｍＶであることが好ましく、－３０ｍＶ～－５ｍＶであることがより好ましい。 <<Zeta potential>>
The zeta potential is preferably from −40 mV to −1 mV, and more preferably from −30 mV to −5 mV.
ゼータ電位をこのような範囲とすることで、リポソーム分散液等にした際に、リポソームの分散安定性に優れる。
By setting the zeta potential in this range, the liposomes will have excellent dispersion stability when made into a liposome dispersion, etc.
このようなゼータ電位を有するリポソームは、後述する方法に従って得ることができる。
Liposomes with such a zeta potential can be obtained according to the method described below.
リポソームのゼータ電位は、以下の方法に従って測定する。
The zeta potential of liposomes is measured according to the following method.
＜測定方法＞
ゼータ電位測定システム（大塚電子社製、ＥＬＳＺ－２０００Ｚ）にて、０．１ｍＭ、１ｍＭの塩化ナトリウム水溶液中２５℃で測定した。 <Measurement method>
The measurements were carried out at 25° C. in 0.1 mM and 1 mM aqueous sodium chloride solutions using a zeta potential measurement system (ELSZ-2000Z, manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd.).
ゼータ電位測定システム（大塚電子社製、ＥＬＳＺ－２０００Ｚ）にて、０．１ｍＭ、１ｍＭの塩化ナトリウム水溶液中２５℃で測定した。 <Measurement method>
The measurements were carried out at 25° C. in 0.1 mM and 1 mM aqueous sodium chloride solutions using a zeta potential measurement system (ELSZ-2000Z, manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd.).
ここで、本開示に係るリポソームは、他の成分と組み合わせる等して、組成物として用いることができる。別の表現によれば、本開示に係る技術は、リポソームを含むリポソーム含有組成物とすることができる。換言すれば、本開示に係るリポソーム含有組成物は、リポソームと、外水相とを含む。なお、外水相を構成する液体媒体については後述する。
The liposomes according to the present disclosure can be used as a composition by combining with other components, etc. In other words, the technology according to the present disclosure can be a liposome-containing composition that contains liposomes. In other words, the liposome-containing composition according to the present disclosure contains liposomes and an external aqueous phase. The liquid medium that constitutes the external aqueous phase will be described later.
リポソーム含有組成物のその他の成分は、用途に応じて適宜選択すればよく、何ら限定されない。
Other components of the liposome-containing composition may be selected appropriately depending on the application and are not limited in any way.
なお、リポソーム含有組成物を医薬品組成物とする場合、好ましい他の成分としては、例えば、アルコール類、糖類、タンパク質類、アミノ酸類、水溶性ビタミン類、脂溶性ビタミン類、脂質、ムコ多糖類、界面活性剤等が挙げられる。
When the liposome-containing composition is used as a pharmaceutical composition, preferred other ingredients include, for example, alcohols, sugars, proteins, amino acids, water-soluble vitamins, fat-soluble vitamins, lipids, mucopolysaccharides, surfactants, etc.
また、リポソーム含有組成物を化粧品組成物とする場合、好ましい他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等が挙げられる。
Furthermore, when the liposome-containing composition is used as a cosmetic composition, preferred other ingredients include, for example, astringents, germicides/antibacterial agents, whitening agents, UV absorbers, moisturizers, cell activators, anti-inflammatory/anti-allergic agents, antioxidants/active oxygen scavengers, oils and fats, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, fragrances, etc.
また、リポソーム含有組成物は、本開示に係るリポソームの含有し得る成分として例示されたもの等と同様のものを含んでいてもよい。
The liposome-containing composition may also contain components similar to those exemplified as components that may be contained in the liposomes of the present disclosure.
＜＜＜リポソームの製造方法＞＞＞
本開示に係るリポソームの製造方法の具体例について説明する。 <<<<Method of manufacturing liposomes>>>
A specific example of the method for producing liposomes according to the present disclosure will be described.
本開示に係るリポソームの製造方法の具体例について説明する。 <<<<Method of manufacturing liposomes>>>
A specific example of the method for producing liposomes according to the present disclosure will be described.
本開示に係るリポソームは、例えば、以下で示される工程を実施することで製造することができる。
（ａ）油相の調製
（ｂ）水相の調製
（ｃ）乳化によるリポソーム粒子形成 The liposomes according to the present disclosure can be produced, for example, by carrying out the steps shown below.
(a) Preparation of oil phase (b) Preparation of aqueous phase (c) Formation of liposome particles by emulsification
（ａ）油相の調製
（ｂ）水相の調製
（ｃ）乳化によるリポソーム粒子形成 The liposomes according to the present disclosure can be produced, for example, by carrying out the steps shown below.
(a) Preparation of oil phase (b) Preparation of aqueous phase (c) Formation of liposome particles by emulsification
本開示に係るリポソームの製造方法においては、エクストルーダーによる整粒、無菌ろ過等が実施されてもよい。
In the method for producing liposomes according to the present disclosure, granulation using an extruder, sterile filtration, etc. may be performed.
本開示に係るリポソームの製造方法においては、透析によるリポソーム外水相液の置換、透析による外水相成分の除去等が実施されてもよい。この場合、本開示に係るリポソームの製造方法における外水相と、リポソーム含有組成物における外水相とは異なるものであってもよい。
In the method for producing liposomes according to the present disclosure, replacement of the liposome external aqueous phase liquid by dialysis, removal of external aqueous phase components by dialysis, etc. may be performed. In this case, the external aqueous phase in the method for producing liposomes according to the present disclosure may be different from the external aqueous phase in the liposome-containing composition.
更に、本開示に係るリポソームが薬物等のその他の成分を含む場合、リモートローディングによるリポソーム粒子への各成分の内包化等を実施してもよい。
Furthermore, when the liposomes according to the present disclosure contain other components such as drugs, the components may be encapsulated in the liposome particles by remote loading.
＜＜（ａ）油相の調製＞＞
（ａ）油相の調製においては、リポソームを構成するリン脂質等と有機溶媒とを混合し、混合物を加温して上記成分を溶解することにより油相を製造することができる。
油相において使用する有機溶媒は特に限定されないが、例えば、揮発性有機溶媒を用いることができる。 <<(a) Preparation of Oil Phase>>
(a) In preparing the oil phase, the phospholipids and other components constituting the liposomes are mixed with an organic solvent, and the mixture is heated to dissolve the above components, thereby producing the oil phase.
The organic solvent used in the oil phase is not particularly limited, but for example, a volatile organic solvent can be used.
（ａ）油相の調製においては、リポソームを構成するリン脂質等と有機溶媒とを混合し、混合物を加温して上記成分を溶解することにより油相を製造することができる。
油相において使用する有機溶媒は特に限定されないが、例えば、揮発性有機溶媒を用いることができる。 <<(a) Preparation of Oil Phase>>
(a) In preparing the oil phase, the phospholipids and other components constituting the liposomes are mixed with an organic solvent, and the mixture is heated to dissolve the above components, thereby producing the oil phase.
The organic solvent used in the oil phase is not particularly limited, but for example, a volatile organic solvent can be used.
揮発性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール及びｔ－ブタノール等のアルコール類、ヘキサン、ペンタン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素、ジクロロメタン、クロロホルム等の含ハロゲン炭化水素が挙げられる。これらのなかでも、含ハロゲン炭化水素であることがさらに好ましい。
Volatile organic solvents include, for example, alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, isobutanol, and t-butanol; hydrocarbons such as hexane, pentane, benzene, and toluene; and halogen-containing hydrocarbons such as dichloromethane and chloroform. Of these, halogen-containing hydrocarbons are more preferred.
リポソームを構成する各成分の濃度は、特に限定されず、適宜調整することが可能である。
The concentration of each component that makes up the liposome is not particularly limited and can be adjusted as appropriate.
＜＜（ｂ）水相の調製＞＞
水相としては、水（蒸留水、注射用水等）、生理食塩水、各種緩衝液、又は、糖類（スクロースなど）の水溶液及びこれらの混合物（水性溶媒）を使用することができる。 <<(b) Preparation of Aqueous Phase>>
As the aqueous phase, water (distilled water, water for injection, etc.), physiological saline, various buffer solutions, or aqueous solutions of sugars (sucrose, etc.), and mixtures thereof (aqueous solvents) can be used.
水相としては、水（蒸留水、注射用水等）、生理食塩水、各種緩衝液、又は、糖類（スクロースなど）の水溶液及びこれらの混合物（水性溶媒）を使用することができる。 <<(b) Preparation of Aqueous Phase>>
As the aqueous phase, water (distilled water, water for injection, etc.), physiological saline, various buffer solutions, or aqueous solutions of sugars (sucrose, etc.), and mixtures thereof (aqueous solvents) can be used.
緩衝液としては、有機系、無機系に限定されることはないが、体液に近い水素イオン濃度付近に緩衝作用を有する緩衝液が好適に用いられ、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液及びグッドバッファー等が挙げられる。
The buffer solution is not limited to being organic or inorganic, but a buffer solution that has a buffering effect at a hydrogen ion concentration close to that of body fluids is preferably used, such as phosphate buffer, Tris buffer, citrate buffer, acetate buffer, and Good's buffer.
水相に、リポソームに内包させるハイドロキシアパタイト粒子を予め分散させる。
Hydroxyapatite particles to be encapsulated in liposomes are pre-dispersed in the aqueous phase.
また、水相は、分散剤を含むことが好ましい。分散剤は、特に限定されないが、分子量（或いはＧＰＣによって測定される数平均分子量）が、１００００以下、５０００以下、２０００以下、１０００以下、又は、５００以下であることが好ましい。
The aqueous phase preferably contains a dispersant. The dispersant is not particularly limited, but it is preferable that the molecular weight (or the number average molecular weight measured by GPC) is 10,000 or less, 5,000 or less, 2,000 or less, 1,000 or less, or 500 or less.
分散剤の具体例としては、酢酸、クエン酸、ポリアクリル酸等が挙げられる。これらは、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウム等の塩の形態で添加されていてもよい。即ち、水相は、分散剤として、酢酸、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、及び、クエン酸三ナトリウムからなる群より選択される１種以上を含むことが好ましい。
Specific examples of dispersants include acetic acid, citric acid, polyacrylic acid, etc. These may be added in the form of a salt such as monosodium citrate, disodium citrate, trisodium citrate, etc. In other words, the aqueous phase preferably contains one or more dispersants selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
水相が分散剤を含むことで、ハイドロキシアパタイト粒子が適切に分散し、乳化工程におけるリポソームの形成が最適化される（リン脂質等に作用する）等の結果、本開示に係るリポソームを得やすいものと考えられる。
By including a dispersant in the aqueous phase, the hydroxyapatite particles are properly dispersed, optimizing the formation of liposomes during the emulsification process (acting on phospholipids, etc.), and it is believed that this makes it easier to obtain the liposomes disclosed herein.
分散剤の添加量としては、例えば、水相全体に対して、０．１～５０質量％等とすればよい。
The amount of dispersant added may be, for example, 0.1 to 50% by mass relative to the total aqueous phase.
また、水相のｐＨは、３以上であることが好ましく、５以上であることがより好ましい。ｐＨは、一般的なｐＨ測定器を用いて測定することができる。
The pH of the aqueous phase is preferably 3 or higher, and more preferably 5 or higher. The pH can be measured using a general pH measuring device.
リポソームの内水相は、リポソームを製造する際に、リポソームが分散する水溶液であってもよいし、新たに添加される、水、生理食塩水、各種緩衝液又は糖類の水溶液及びこれらの混合物であってもよい。外水相又は内水相として用いる水は、不純物（埃、化学物質等）を含まないことが好ましい。
The inner aqueous phase of the liposomes may be an aqueous solution in which the liposomes are dispersed when the liposomes are produced, or may be newly added water, physiological saline, various buffer solutions, or aqueous solutions of sugars, or mixtures thereof. It is preferable that the water used as the outer aqueous phase or inner aqueous phase does not contain impurities (dust, chemicals, etc.).
生理食塩水とは、人体と等張になるように調整された無機塩溶液を意味し、更に緩衝機能を持っていてもよい。生理食塩水としては、塩化ナトリウムを０．９ｗ／ｖ％（質量／体積パーセント）含有する食塩水、ＰＢＳ及びトリス緩衝生理食塩水等が挙げられる。
Physiological saline means an inorganic salt solution adjusted to be isotonic with the human body, and may further have a buffering function. Examples of physiological saline include saline containing 0.9 w/v% (mass/volume percent) sodium chloride, PBS, and Tris-buffered saline.
＜＜（ｃ）乳化によるリポソーム粒子形成＞＞
乳化工程では、油相と水相とを混合して脂質を含む水溶液を攪拌して乳化することができる。脂質が有機溶媒に溶解している油相及び水相を混合し撹拌し、乳化することで、油相及び水相がＯ／Ｗ型（水中油型）に乳化した乳化液が調製される。混合後、油相由来の有機溶媒の一部又は全部を蒸発によって除去することにより、リポソームが形成される。或いは、油相中の有機溶媒の一部又は全部が撹拌・乳化の過程で蒸発して、リポソームが形成される。 (c) Formation of liposome particles by emulsification
In the emulsification process, the oil phase and the aqueous phase can be mixed and emulsified by stirring the aqueous solution containing lipids. The oil phase and the aqueous phase in which lipids are dissolved in an organic solvent are mixed, stirred, and emulsified to prepare an emulsion in which the oil phase and the aqueous phase are emulsified into an O/W type (oil-in-water type). After mixing, liposomes are formed by removing part or all of the organic solvent from the oil phase by evaporation. Alternatively, part or all of the organic solvent in the oil phase evaporates during the stirring and emulsification process to form liposomes.
乳化工程では、油相と水相とを混合して脂質を含む水溶液を攪拌して乳化することができる。脂質が有機溶媒に溶解している油相及び水相を混合し撹拌し、乳化することで、油相及び水相がＯ／Ｗ型（水中油型）に乳化した乳化液が調製される。混合後、油相由来の有機溶媒の一部又は全部を蒸発によって除去することにより、リポソームが形成される。或いは、油相中の有機溶媒の一部又は全部が撹拌・乳化の過程で蒸発して、リポソームが形成される。 (c) Formation of liposome particles by emulsification
In the emulsification process, the oil phase and the aqueous phase can be mixed and emulsified by stirring the aqueous solution containing lipids. The oil phase and the aqueous phase in which lipids are dissolved in an organic solvent are mixed, stirred, and emulsified to prepare an emulsion in which the oil phase and the aqueous phase are emulsified into an O/W type (oil-in-water type). After mixing, liposomes are formed by removing part or all of the organic solvent from the oil phase by evaporation. Alternatively, part or all of the organic solvent in the oil phase evaporates during the stirring and emulsification process to form liposomes.
撹拌する方法としては、例えば、粒子微細化のために、超音波又は機械的せん断力が用いられる。また、粒子径の均一化のためには、一定の孔径のフィルターを通すエクストルーダー処理又はマイクロフルイダイザー処理を行うことができる。エクストルーダー等を用いれば、副次的に形成された多胞リポソームをばらして単胞リポソームにすることができる。
As a method of stirring, for example, ultrasonic waves or mechanical shearing force can be used to reduce the particle size. In addition, to make the particle size uniform, extruder processing or microfluidizer processing can be used to pass the material through a filter with a certain pore size. By using an extruder, etc., it is possible to break down the multivesicular liposomes that are formed as a by-product into univesular liposomes.
乳化工程は、乳化する工程であれば限定されることはないが、好ましくは高せん断をかけ、有機溶媒を含む乳化工程で微粒子化する工程である。高せん断は、乳化機の撹拌羽根の周速で定義され、５～３２ｍ／ｓが好ましく、特に２０～３０ｍ／ｓが好ましい。必要に応じて、乳化工程で用いた有機溶媒を蒸発させる（脱溶媒する）ことでリポソームを形成することができる。
The emulsification process is not limited as long as it is an emulsification process, but is preferably a process in which high shear is applied to form fine particles in an emulsification process that includes an organic solvent. High shear is defined as the peripheral speed of the stirring blade of the emulsifier, and is preferably 5 to 32 m/s, and particularly preferably 20 to 30 m/s. If necessary, liposomes can be formed by evaporating (desolvating) the organic solvent used in the emulsification process.
リポソームを製造する際の乳化工程の液温は、適宜調整することが可能であるが、油相と水相との混合時の液温を使用する脂質の相転移温度以上とすることが好ましく、例えば、相転移温度が３５～４０℃の脂質を使用する場合、３５℃～７０℃とすることが好ましい。
The liquid temperature during the emulsification process in producing liposomes can be adjusted as appropriate, but it is preferable that the liquid temperature when mixing the oil phase and the aqueous phase is equal to or higher than the phase transition temperature of the lipid used. For example, when using lipids with a phase transition temperature of 35 to 40°C, it is preferable that the liquid temperature is 35°C to 70°C.
乳化工程は、高圧環境に暴露されることが好ましい。より詳細には、乳化工程は、高圧乳化法が用いられることが好ましい。例えば、乳化工程において、油相及び水相を混合し撹拌し乳化液を得る際に圧力をかけることが好ましい。圧力の条件としては、例えば、０．２ＭＰａ以上、０．５ＭＰａ以上、１．０ＭＰａ以上、２．０ＭＰａ以上、５．０ＭＰａ以上、１０ＭＰａ以上、又は、１５ＭＰａ以上であることが好ましく、２５０ＭＰａ以下、２００ＭＰａ以下、１５０ＭＰａ以下、１００ＭＰａ以下、５０ＭＰａ以下、又は、４０ＭＰａ以下であることが好ましい。
The emulsification step is preferably exposed to a high-pressure environment. More specifically, the emulsification step is preferably performed using a high-pressure emulsification method. For example, in the emulsification step, pressure is preferably applied when the oil phase and the aqueous phase are mixed and stirred to obtain an emulsion. The pressure conditions are, for example, preferably 0.2 MPa or more, 0.5 MPa or more, 1.0 MPa or more, 2.0 MPa or more, 5.0 MPa or more, 10 MPa or more, or 15 MPa or more, and preferably 250 MPa or less, 200 MPa or less, 150 MPa or less, 100 MPa or less, 50 MPa or less, or 40 MPa or less.
乳化工程においては、リポソームを含む水溶液から有機溶媒と水を蒸発させてもよい。ここで言う蒸発とは、油相由来の有機溶媒と水相由来の水の一部又は全部を蒸発工程として強制的に除去してもよいし、油相由来の有機溶媒と水相由来の水の一部又は全部が撹拌・乳化の過程で自然に蒸発するものでもよい。
In the emulsification process, the organic solvent and water may be evaporated from the aqueous solution containing the liposomes. The evaporation referred to here may refer to the forced removal of part or all of the organic solvent derived from the oil phase and the water derived from the aqueous phase in an evaporation process, or it may refer to the natural evaporation of part or all of the organic solvent derived from the oil phase and the water derived from the aqueous phase during the stirring and emulsification process.
蒸発の方法は、特に限定されないが、例えば、有機溶媒と水を加熱することにより蒸発させる工程、乳化後に静置又は緩やかな撹拌を継続する工程、及び、真空脱気を行う工程の少なくとも一つを行えばよい。
The evaporation method is not particularly limited, but may be, for example, at least one of the following steps: evaporating the organic solvent and water by heating, allowing the mixture to stand or continue to be gently stirred after emulsification, and performing vacuum degassing.
＜＜＜用途＞＞＞
本開示によれば、ハイドロキシアパタイト粒子を内包する新規なリポソーム（別の表現によれば、リポソーム複合材料、或いは、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）が提供される。このようなリポソームによれば、ハイドロキシアパタイト粒子の凝集及び沈殿が防止され、且つ、リポソームの経時安定性が高いと考えられる。そのため、細胞への親和性や浸透力が向上する、ハイドロキシアパタイトの有する生理活性が十分に発揮される等の優れた機能が奏されるものと考えられる。 <<<<Applications>>>
According to the present disclosure, a novel liposome encapsulating hydroxyapatite particles (in other words, a liposome composite material, or a liposome encapsulating a hydroxyapatite particle) is provided. Such a liposome is believed to prevent aggregation and precipitation of the hydroxyapatite particles, and to have high stability over time. Therefore, it is believed that excellent functions such as improved affinity and penetration to cells, and sufficient physiological activity of hydroxyapatite are exhibited.
本開示によれば、ハイドロキシアパタイト粒子を内包する新規なリポソーム（別の表現によれば、リポソーム複合材料、或いは、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）が提供される。このようなリポソームによれば、ハイドロキシアパタイト粒子の凝集及び沈殿が防止され、且つ、リポソームの経時安定性が高いと考えられる。そのため、細胞への親和性や浸透力が向上する、ハイドロキシアパタイトの有する生理活性が十分に発揮される等の優れた機能が奏されるものと考えられる。 <<<<Applications>>>
According to the present disclosure, a novel liposome encapsulating hydroxyapatite particles (in other words, a liposome composite material, or a liposome encapsulating a hydroxyapatite particle) is provided. Such a liposome is believed to prevent aggregation and precipitation of the hydroxyapatite particles, and to have high stability over time. Therefore, it is believed that excellent functions such as improved affinity and penetration to cells, and sufficient physiological activity of hydroxyapatite are exhibited.
また、本開示に係るリポソームは、細胞膜と類似した構造を形成可能であり、その結果、細胞親和性を更に高めて線維芽細胞への作用等を強めることができる。そのため、本開示に係るリポソームを用いることで、上記効果とあわせて、ハイドロキシアパタイト粒子を単独で使用した場合と比較して、大幅なコラーゲン産生促進効果等を得ることができる。
In addition, the liposomes disclosed herein can form a structure similar to that of a cell membrane, which can further increase cell affinity and strengthen the effect on fibroblasts. Therefore, by using the liposomes disclosed herein, in addition to the above effects, it is possible to obtain a significant collagen production promotion effect, etc., compared to the use of hydroxyapatite particles alone.
本開示に係るリポソーム或いはリポソーム含有組成物は、ハイドロキシアパタイト粒子が適用される種々の用途に用いることができる。本開示に係るリポソーム或いはリポソーム含有組成物は、例えば、医薬品用（医薬品組成物）や化粧品用（化粧品組成物）として好ましく用いられる。
The liposomes or liposome-containing compositions disclosed herein can be used in various applications in which hydroxyapatite particles are used. The liposomes or liposome-containing compositions disclosed herein are preferably used, for example, for pharmaceuticals (pharmaceutical compositions) and cosmetics (cosmetic compositions).
また、本開示に係るリポソーム或いはリポソーム含有組成物は、リポソーム由来の薬物徐放性を有することから、ドラックデリバリーシステムに好ましく用いられる。
In addition, the liposomes or liposome-containing compositions disclosed herein have the sustained drug release properties derived from liposomes, and are therefore preferably used in drug delivery systems.
医薬品或いは医薬品組成物の具体的な用途としては、注入剤（ダーマルフィラー等）、抗がん剤、鎮痛剤、免疫抑制剤等が挙げられる。
Specific uses of pharmaceuticals or pharmaceutical compositions include injections (dermal fillers, etc.), anticancer drugs, painkillers, immunosuppressants, etc.
化粧品或いは化粧品組成物の具体的な用途としては、豊胸促進剤、基礎化粧品或いは化粧品（洗顔料、化粧水、美容液、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等）、育毛剤、歯磨剤等が挙げられる。
Specific uses of cosmetics or cosmetic compositions include breast enlargement promoters, basic cosmetics or cosmetics (facial cleansers, skin lotions, beauty essences, ointments, creams, milky lotions, lotions, packs, bath additives, etc.), hair growth agents, dentifrices, etc.
＜＜＜＜第２の形態＞＞＞＞
第２の形態は、ハイドロキシアパタイト粒子、リン脂質、分散剤を含有するハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。即ち、第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子を含有し、ハイドロキシアパタイト粒子以外の成分（第２成分）として、リン脂質、及び、分散剤が複合化された材料である。 <<<<<Second embodiment>>>>
The second embodiment is a hydroxyapatite particle-containing material containing hydroxyapatite particles, phospholipids, and a dispersant. That is, the hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment is a material containing hydroxyapatite particles and compounded with phospholipids and a dispersant as a component other than the hydroxyapatite particles (second component).
第２の形態は、ハイドロキシアパタイト粒子、リン脂質、分散剤を含有するハイドロキシアパタイト粒子含有材料である。即ち、第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子を含有し、ハイドロキシアパタイト粒子以外の成分（第２成分）として、リン脂質、及び、分散剤が複合化された材料である。 <<<<<Second embodiment>>>>
The second embodiment is a hydroxyapatite particle-containing material containing hydroxyapatite particles, phospholipids, and a dispersant. That is, the hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment is a material containing hydroxyapatite particles and compounded with phospholipids and a dispersant as a component other than the hydroxyapatite particles (second component).
ハイドロキシアパタイト粒子と第２成分とを複合化させる形態は、第１の形態と同様のものを例示できる。
より詳細には、ハイドロキシアパタイト粒子との複合の形態としては、例えば、（形態Ａ）第２成分によって形成された、一つ又は複数のハイドロキシアパタイト粒子を覆う外郭を有し、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態や、（形態Ｂ）ハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子との間に第２成分が介在してハイドロキシアパタイト粒子同士が結合或いは凝集して、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態等が考えられる。
形態Ａの具体例としては、ハイドロキシアパタイト粒子が、リン脂質によって形成されたリポソームに内包されている構造が挙げられる。
形態Ｂの具体例としては、リン脂質がハイドロキシアパタイト粒子に吸着されている構造が挙げられる。 The form in which the hydroxyapatite particles and the second component are composited can be exemplified by the same forms as those in the first form.
More specifically, possible composite forms with hydroxyapatite particles include, for example, (form A) a form in which the second component has an outer shell covering one or more hydroxyapatite particles, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole, and (form B) a form in which the second component is interposed between the hydroxyapatite particles, causing the hydroxyapatite particles to bond or aggregate together, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole.
A specific example of Form A is a structure in which hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes formed by phospholipids.
A specific example of Form B is a structure in which phospholipids are adsorbed onto hydroxyapatite particles.
より詳細には、ハイドロキシアパタイト粒子との複合の形態としては、例えば、（形態Ａ）第２成分によって形成された、一つ又は複数のハイドロキシアパタイト粒子を覆う外郭を有し、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態や、（形態Ｂ）ハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子との間に第２成分が介在してハイドロキシアパタイト粒子同士が結合或いは凝集して、全体として一つの材料（例えば、粒子状の材料）を形成している形態等が考えられる。
形態Ａの具体例としては、ハイドロキシアパタイト粒子が、リン脂質によって形成されたリポソームに内包されている構造が挙げられる。
形態Ｂの具体例としては、リン脂質がハイドロキシアパタイト粒子に吸着されている構造が挙げられる。 The form in which the hydroxyapatite particles and the second component are composited can be exemplified by the same forms as those in the first form.
More specifically, possible composite forms with hydroxyapatite particles include, for example, (form A) a form in which the second component has an outer shell covering one or more hydroxyapatite particles, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole, and (form B) a form in which the second component is interposed between the hydroxyapatite particles, causing the hydroxyapatite particles to bond or aggregate together, forming a single material (e.g., a particulate material) as a whole.
A specific example of Form A is a structure in which hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes formed by phospholipids.
A specific example of Form B is a structure in which phospholipids are adsorbed onto hydroxyapatite particles.
例えば、第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料がハイドロキシアパタイト内包リポソームである場合、リン脂質によってリポソームが形成され、分散剤は内水相或いは多層ラメラにおける膜間に存在する形態が考えられる。
For example, when the hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment is a liposome containing hydroxyapatite, the liposome is formed by phospholipids, and the dispersant is thought to be present in the inner aqueous phase or between the membranes of the multi-lamellar structure.
第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料を構成する、ハイドロキシアパタイト粒子、第２成分（リン脂質、分散剤及びその他の成分）等については、前述のとおりである。
The hydroxyapatite particles, the second component (phospholipid, dispersant, and other components) and the like that constitute the hydroxyapatite particle-containing material of the second embodiment are as described above.
第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、第１の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料を、別の観点で規定した材料である。第２の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、第１の形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料について説明された事項（好適な構造、成分、物性／性質、製造方法、用途等）を全て組み込むことができる。
The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment is a material defined from a different perspective than the hydroxyapatite particle-containing material according to the first embodiment. The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment can incorporate all of the matters explained for the hydroxyapatite particle-containing material according to the first embodiment (preferable structure, components, physical properties/characteristics, manufacturing method, uses, etc.).
例えば、分散剤が、酢酸、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、及び、クエン酸三ナトリウムからなる群より選択される１種以上であることが好ましい。
また、リン脂質がレシチンであることが好ましい。
ハイドロキシアパタイト粒子が非結晶であることが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲にピークを有し、且つ、１２２０ｃｍ－１～１２４０ｃｍ－１の範囲にピークを有しないことが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む組成物（例えば、医薬品組成物や化粧品組成物等）の形態であってもよい。 For example, the dispersant is preferably one or more selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
Also, the phospholipid is preferably lecithin.
It is preferred that the hydroxyapatite particles are amorphous.
The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment preferably has a peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 and does not have a peak in the range of 1220 cm -1 to 1240 cm -1 in an FT-IR spectrum.
In the hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment, the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 in the FT-IR spectrum is preferably 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment may be in the form of a composition (for example, a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, etc.) containing the hydroxyapatite particle-containing material.
また、リン脂質がレシチンであることが好ましい。
ハイドロキシアパタイト粒子が非結晶であることが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲にピークを有し、且つ、１２２０ｃｍ－１～１２４０ｃｍ－１の範囲にピークを有しないことが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることが好ましい。
第２形態に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料は、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む組成物（例えば、医薬品組成物や化粧品組成物等）の形態であってもよい。 For example, the dispersant is preferably one or more selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
Also, the phospholipid is preferably lecithin.
It is preferred that the hydroxyapatite particles are amorphous.
The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment preferably has a peak in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 and does not have a peak in the range of 1220 cm -1 to 1240 cm -1 in an FT-IR spectrum.
In the hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment, the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 in the FT-IR spectrum is preferably 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 .
The hydroxyapatite particle-containing material according to the second embodiment may be in the form of a composition (for example, a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, etc.) containing the hydroxyapatite particle-containing material.
ハイドロキシアパタイト粒子含有材料をこのような構成とすることで、ハイドロキシアパタイト粒子の活性をより有効に活用することができると考えられる。
By configuring the hydroxyapatite particle-containing material in this way, it is believed that the activity of the hydroxyapatite particles can be more effectively utilized.
以下、実施例によって本開示に係るハイドロキシアパタイト粒子含有材料（特に、ハイドロキシアパタイト内包リポソーム）について詳細に説明するが、本開示はこれには何ら限定されない。
The hydroxyapatite particle-containing material (particularly, hydroxyapatite-encapsulated liposomes) according to the present disclosure will be described in detail below with reference to examples, but the present disclosure is in no way limited thereto.
＜＜＜＜第１のハイドロキシアパタイト内包リポソーム＞＞＞＞
＜＜＜製造方法＞＞＞
＜＜第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶）＞＞
以下のようにして、第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）を得た。
脱イオン水が入った反応容器内に、撹拌しながら、硝酸カルシウム四水和物、リン酸水素二アンモニウム水溶液及びアンモニア水を添加し｛カルシウム：リン酸（モル比）＝５：３｝、ハイドロキシアパタイトの一次粒子を得た。その後、反応容器内の上澄みを廃水容器に移した後、脱イオン水を加え、攪拌器で撹拌し、上澄みを廃棄容器に移す、という作業を２回繰り返した。その後、当該沈殿物の入った反応容器ごと、－１０℃～－２５℃にて一夜冷凍した。その後、室温で解凍し、解凍後の沈殿をろ取した。その後、焼成皿に約４００ｇの沈殿を入れ、焼成炉に入れ、１時間強かけて６００℃までにし、６００℃を１時間保った後、１時間以上かけて冷却することで焼成を実施した。その後、焼成体へ脱イオン水を加え、３０分間以上超音波照射した。そして、ポッドミルへ移し、粉砕球を入れて１時間粉砕した。粉砕終了後、手付きビーカーへ移し、目開き１５０μｍ篩を用い、未粉砕焼成体を除去した。尚、この後、脱イオン水洗浄を６回繰り返した。その後、６０℃～８０℃で乾燥し、第１のハイドロキシアパタイト粒子を得た。
得られたハイドロキシアパタイト粒子の、ｄ＝２．８１４での半値幅は、０．６５であった。
得られたハイドロキシアパタイト粒子は、平均粒径及び標準偏差を算出（ＳＥＭにて９点の画像を取得し、画像１点中、１２個の粒子の粒径を計測、合計１０８個の粒子の粒径を確認し、平均値及び標準偏差を算出）したところ、平均粒径は３４ｎｍで、標準偏差は４ｎｍであった。 <<<<<First Hydroxyapatite-Encapsulating Liposome>>>>
<<<Production Method>>>
<<First Hydroxyapatite Particles (Highly Crystalline)>>
The first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles) were obtained as follows.
In a reaction vessel containing deionized water, calcium nitrate tetrahydrate, an aqueous solution of diammonium hydrogen phosphate, and aqueous ammonia were added while stirring {calcium:phosphate (molar ratio) = 5:3} to obtain primary particles of hydroxyapatite. Then, the supernatant in the reaction vessel was transferred to a waste water vessel, and then deionized water was added, stirred with a stirrer, and the supernatant was transferred to a waste vessel. This operation was repeated twice. Then, the reaction vessel containing the precipitate was frozen overnight at -10°C to -25°C. Then, it was thawed at room temperature, and the precipitate after thawing was filtered. Then, about 400g of precipitate was placed in a baking dish, placed in a baking furnace, heated to 600°C over a little over an hour, held at 600°C for an hour, and cooled over an hour or more to perform baking. Then, deionized water was added to the sintered body, and ultrasonic irradiation was performed for 30 minutes or more. Then, it was transferred to a pod mill, and crushed with crushing balls for an hour. After the grinding was completed, the mixture was transferred to a beaker with handles, and the unground sintered body was removed using a sieve with a mesh size of 150 μm. After that, washing with deionized water was repeated six times. After that, the mixture was dried at 60° C. to 80° C. to obtain first hydroxyapatite particles.
The half-width of the obtained hydroxyapatite particles at d=2.814 was 0.65.
The average particle size and standard deviation of the obtained hydroxyapatite particles were calculated (nine images were taken using SEM, and the particle sizes of 12 particles in each image were measured, confirming the particle sizes of a total of 108 particles, and calculating the average size and standard deviation), and the average particle size was 34 nm and the standard deviation was 4 nm.
＜＜＜製造方法＞＞＞
＜＜第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶）＞＞
以下のようにして、第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）を得た。
脱イオン水が入った反応容器内に、撹拌しながら、硝酸カルシウム四水和物、リン酸水素二アンモニウム水溶液及びアンモニア水を添加し｛カルシウム：リン酸（モル比）＝５：３｝、ハイドロキシアパタイトの一次粒子を得た。その後、反応容器内の上澄みを廃水容器に移した後、脱イオン水を加え、攪拌器で撹拌し、上澄みを廃棄容器に移す、という作業を２回繰り返した。その後、当該沈殿物の入った反応容器ごと、－１０℃～－２５℃にて一夜冷凍した。その後、室温で解凍し、解凍後の沈殿をろ取した。その後、焼成皿に約４００ｇの沈殿を入れ、焼成炉に入れ、１時間強かけて６００℃までにし、６００℃を１時間保った後、１時間以上かけて冷却することで焼成を実施した。その後、焼成体へ脱イオン水を加え、３０分間以上超音波照射した。そして、ポッドミルへ移し、粉砕球を入れて１時間粉砕した。粉砕終了後、手付きビーカーへ移し、目開き１５０μｍ篩を用い、未粉砕焼成体を除去した。尚、この後、脱イオン水洗浄を６回繰り返した。その後、６０℃～８０℃で乾燥し、第１のハイドロキシアパタイト粒子を得た。
得られたハイドロキシアパタイト粒子の、ｄ＝２．８１４での半値幅は、０．６５であった。
得られたハイドロキシアパタイト粒子は、平均粒径及び標準偏差を算出（ＳＥＭにて９点の画像を取得し、画像１点中、１２個の粒子の粒径を計測、合計１０８個の粒子の粒径を確認し、平均値及び標準偏差を算出）したところ、平均粒径は３４ｎｍで、標準偏差は４ｎｍであった。 <<<<<First Hydroxyapatite-Encapsulating Liposome>>>>
<<<Production Method>>>
<<First Hydroxyapatite Particles (Highly Crystalline)>>
The first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles) were obtained as follows.
In a reaction vessel containing deionized water, calcium nitrate tetrahydrate, an aqueous solution of diammonium hydrogen phosphate, and aqueous ammonia were added while stirring {calcium:phosphate (molar ratio) = 5:3} to obtain primary particles of hydroxyapatite. Then, the supernatant in the reaction vessel was transferred to a waste water vessel, and then deionized water was added, stirred with a stirrer, and the supernatant was transferred to a waste vessel. This operation was repeated twice. Then, the reaction vessel containing the precipitate was frozen overnight at -10°C to -25°C. Then, it was thawed at room temperature, and the precipitate after thawing was filtered. Then, about 400g of precipitate was placed in a baking dish, placed in a baking furnace, heated to 600°C over a little over an hour, held at 600°C for an hour, and cooled over an hour or more to perform baking. Then, deionized water was added to the sintered body, and ultrasonic irradiation was performed for 30 minutes or more. Then, it was transferred to a pod mill, and crushed with crushing balls for an hour. After the grinding was completed, the mixture was transferred to a beaker with handles, and the unground sintered body was removed using a sieve with a mesh size of 150 μm. After that, washing with deionized water was repeated six times. After that, the mixture was dried at 60° C. to 80° C. to obtain first hydroxyapatite particles.
The half-width of the obtained hydroxyapatite particles at d=2.814 was 0.65.
The average particle size and standard deviation of the obtained hydroxyapatite particles were calculated (nine images were taken using SEM, and the particle sizes of 12 particles in each image were measured, confirming the particle sizes of a total of 108 particles, and calculating the average size and standard deviation), and the average particle size was 34 nm and the standard deviation was 4 nm.
＜＜ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム＞＞
以下のようにして、高圧乳化法にて、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを得た。
第１のハイドロキシアパタイト粒子を１０重量％となるよう水中に懸濁させ、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。分別レシチン（辻製油社製、ＳＬＰ－ＰＣ７０）を２８０ｇ、クエン酸２ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製、３８ｇ）、１０重量％ハイドロキシアパタイト粒子分散液（２０００ｇ）、精製水（１５５０ｇ）、ハイソルブＥＰＨ（１８ｇ）を混合し、７０℃にて攪拌溶解した。高圧乳化装置（スギノマシン製、スターバーストミニ）にて２００ＭＰａの圧力にて高圧乳化を行い、リポソームを含む乳化分散液を得た。 <<Hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes>>
A first hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was obtained by high-pressure emulsification as follows.
The first hydroxyapatite particles were suspended in water to a concentration of 10% by weight to obtain a hydroxyapatite particle dispersion. 280 g of fractionated lecithin (Tsuji Oil Mills, SLP-PC70), 280 g of disodium citrate (FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 38 g), 10% by weight hydroxyapatite particle dispersion (2000 g), purified water (1550 g), and Hysorb EPH (18 g) were mixed and dissolved by stirring at 70° C. High-pressure emulsification was performed at a pressure of 200 MPa using a high-pressure emulsifier (Starburst Mini, Sugino Machine Co., Ltd.) to obtain an emulsion dispersion containing liposomes.
以下のようにして、高圧乳化法にて、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを得た。
第１のハイドロキシアパタイト粒子を１０重量％となるよう水中に懸濁させ、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。分別レシチン（辻製油社製、ＳＬＰ－ＰＣ７０）を２８０ｇ、クエン酸２ナトリウム（富士フイルム和光純薬社製、３８ｇ）、１０重量％ハイドロキシアパタイト粒子分散液（２０００ｇ）、精製水（１５５０ｇ）、ハイソルブＥＰＨ（１８ｇ）を混合し、７０℃にて攪拌溶解した。高圧乳化装置（スギノマシン製、スターバーストミニ）にて２００ＭＰａの圧力にて高圧乳化を行い、リポソームを含む乳化分散液を得た。 <<Hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes>>
A first hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was obtained by high-pressure emulsification as follows.
The first hydroxyapatite particles were suspended in water to a concentration of 10% by weight to obtain a hydroxyapatite particle dispersion. 280 g of fractionated lecithin (Tsuji Oil Mills, SLP-PC70), 280 g of disodium citrate (FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 38 g), 10% by weight hydroxyapatite particle dispersion (2000 g), purified water (1550 g), and Hysorb EPH (18 g) were mixed and dissolved by stirring at 70° C. High-pressure emulsification was performed at a pressure of 200 MPa using a high-pressure emulsifier (Starburst Mini, Sugino Machine Co., Ltd.) to obtain an emulsion dispersion containing liposomes.
得られた第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームのＴＥＭ画像を図１に示す。
A TEM image of the first hydroxyapatite particle-encapsulated liposome obtained is shown in Figure 1.
得られた第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームは、数平均粒径が３７ｎｍであり、標準偏差が１０ｎｍであった。
The first hydroxyapatite particle-encapsulating liposome obtained had a number average particle size of 37 nm and a standard deviation of 10 nm.
＜＜＜＜第２のハイドロキシアパタイト内包リポソーム＞＞＞＞
＜＜＜製造方法＞＞＞
＜＜第２のハイドロキシアパタイト粒子（低結晶）＞＞
以下のようにして、第２のハイドロキシアパタイト粒子（低結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）を得た。
脱イオン水が入った反応容器内に、撹拌しながら、硝酸カルシウム四水和物、リン酸水素二アンモニウム水溶液及びアンモニア水を添加し｛カルシウム：リン酸（モル比）＝５：３｝、３０℃で加温しながら１８時間撹拌することでハイドロキシアパタイトの一次粒子を得た。その後、反応容器内の上澄みを廃水容器に移した後、脱イオン水を加え、攪拌器で撹拌し、上澄みを廃棄容器に移す、という作業を２回繰り返すことで、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。
得られたハイドロキシアパタイト粒子分散液を３５℃以下の条件で乾燥させた粉体の、ｄ＝２．８１４での半値幅は、０．８４であった。
得られたハイドロキシアパタイト粒子は、平均粒径及び標準偏差を算出（ＳＥＭにて９点の画像を取得し、画像１点中、１２個の粒子の粒径を計測、合計１０８個の粒子の粒径を確認し、平均値及び標準偏差を算出）したところ、平均粒径は２９ｎｍで、標準偏差は８ｎｍであった。 <<<<<Second Hydroxyapatite-Encapsulating Liposome>>>>
<<<Production Method>>>
<<Second Hydroxyapatite Particles (Low Crystallinity)>>
The second hydroxyapatite particles (low-crystalline hydroxyapatite particles) were obtained as follows.
Calcium nitrate tetrahydrate, an aqueous solution of diammonium hydrogen phosphate, and aqueous ammonia were added to a reaction vessel containing deionized water while stirring {calcium:phosphate (molar ratio) = 5:3}, and primary particles of hydroxyapatite were obtained by stirring for 18 hours while heating at 30°C. Thereafter, the supernatant in the reaction vessel was transferred to a waste water vessel, and then deionized water was added, stirred with a stirrer, and the supernatant was transferred to a waste vessel. This process was repeated twice to obtain a hydroxyapatite particle dispersion.
The resulting hydroxyapatite particle dispersion was dried at 35° C. or less to produce a powder having a half-width of 0.84 at d=2.814.
The average particle size and standard deviation of the obtained hydroxyapatite particles were calculated (nine images were taken using SEM, and the particle sizes of 12 particles in each image were measured, confirming the particle sizes of a total of 108 particles, and calculating the average size and standard deviation). The average particle size was 29 nm, and the standard deviation was 8 nm.
＜＜＜製造方法＞＞＞
＜＜第２のハイドロキシアパタイト粒子（低結晶）＞＞
以下のようにして、第２のハイドロキシアパタイト粒子（低結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）を得た。
脱イオン水が入った反応容器内に、撹拌しながら、硝酸カルシウム四水和物、リン酸水素二アンモニウム水溶液及びアンモニア水を添加し｛カルシウム：リン酸（モル比）＝５：３｝、３０℃で加温しながら１８時間撹拌することでハイドロキシアパタイトの一次粒子を得た。その後、反応容器内の上澄みを廃水容器に移した後、脱イオン水を加え、攪拌器で撹拌し、上澄みを廃棄容器に移す、という作業を２回繰り返すことで、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。
得られたハイドロキシアパタイト粒子分散液を３５℃以下の条件で乾燥させた粉体の、ｄ＝２．８１４での半値幅は、０．８４であった。
得られたハイドロキシアパタイト粒子は、平均粒径及び標準偏差を算出（ＳＥＭにて９点の画像を取得し、画像１点中、１２個の粒子の粒径を計測、合計１０８個の粒子の粒径を確認し、平均値及び標準偏差を算出）したところ、平均粒径は２９ｎｍで、標準偏差は８ｎｍであった。 <<<<<Second Hydroxyapatite-Encapsulating Liposome>>>>
<<<Production Method>>>
<<Second Hydroxyapatite Particles (Low Crystallinity)>>
The second hydroxyapatite particles (low-crystalline hydroxyapatite particles) were obtained as follows.
Calcium nitrate tetrahydrate, an aqueous solution of diammonium hydrogen phosphate, and aqueous ammonia were added to a reaction vessel containing deionized water while stirring {calcium:phosphate (molar ratio) = 5:3}, and primary particles of hydroxyapatite were obtained by stirring for 18 hours while heating at 30°C. Thereafter, the supernatant in the reaction vessel was transferred to a waste water vessel, and then deionized water was added, stirred with a stirrer, and the supernatant was transferred to a waste vessel. This process was repeated twice to obtain a hydroxyapatite particle dispersion.
The resulting hydroxyapatite particle dispersion was dried at 35° C. or less to produce a powder having a half-width of 0.84 at d=2.814.
The average particle size and standard deviation of the obtained hydroxyapatite particles were calculated (nine images were taken using SEM, and the particle sizes of 12 particles in each image were measured, confirming the particle sizes of a total of 108 particles, and calculating the average size and standard deviation). The average particle size was 29 nm, and the standard deviation was 8 nm.
＜＜ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム＞＞
以下のようにして、高圧乳化法にて、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを得た。
第２のハイドロキシアパタイト粒子を１０重量％となるよう水中に懸濁させ、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。分別レシチン（辻製油製、ＳＬＰ－ＰＣ７０）を２８０ｇ、クエン酸２ナトリウム（富士フイルム和光純薬製、３８ｇ）、１０重量％ハイドロキシアパタイト粒子分散液（２０００ｇ）、精製水（１５５０ｇ）、ハイソルブＥＰＨ（１８ｇ）を混合し、７０℃にて攪拌溶解した。高圧乳化装置（スギノマシン製、スターバーストミニ）にて２００ＭＰａの圧力にて高圧乳化を行い、リポソームを含む乳化分散液を得た。 <<Hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes>>
A second hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was obtained by high-pressure emulsification as follows.
The second hydroxyapatite particles were suspended in water to a concentration of 10% by weight to obtain a hydroxyapatite particle dispersion. 280 g of fractionated lecithin (Tsuji Oil Mills, SLP-PC70), 280 g of disodium citrate (FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, 38 g), 10% by weight hydroxyapatite particle dispersion (2000 g), purified water (1550 g), and Hysorb EPH (18 g) were mixed and dissolved by stirring at 70° C. High-pressure emulsification was performed at a pressure of 200 MPa using a high-pressure emulsifier (Sugino Machine, Starburst Mini) to obtain an emulsion dispersion containing liposomes.
以下のようにして、高圧乳化法にて、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを得た。
第２のハイドロキシアパタイト粒子を１０重量％となるよう水中に懸濁させ、ハイドロキシアパタイト粒子分散液を得た。分別レシチン（辻製油製、ＳＬＰ－ＰＣ７０）を２８０ｇ、クエン酸２ナトリウム（富士フイルム和光純薬製、３８ｇ）、１０重量％ハイドロキシアパタイト粒子分散液（２０００ｇ）、精製水（１５５０ｇ）、ハイソルブＥＰＨ（１８ｇ）を混合し、７０℃にて攪拌溶解した。高圧乳化装置（スギノマシン製、スターバーストミニ）にて２００ＭＰａの圧力にて高圧乳化を行い、リポソームを含む乳化分散液を得た。 <<Hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes>>
A second hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was obtained by high-pressure emulsification as follows.
The second hydroxyapatite particles were suspended in water to a concentration of 10% by weight to obtain a hydroxyapatite particle dispersion. 280 g of fractionated lecithin (Tsuji Oil Mills, SLP-PC70), 280 g of disodium citrate (FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, 38 g), 10% by weight hydroxyapatite particle dispersion (2000 g), purified water (1550 g), and Hysorb EPH (18 g) were mixed and dissolved by stirring at 70° C. High-pressure emulsification was performed at a pressure of 200 MPa using a high-pressure emulsifier (Sugino Machine, Starburst Mini) to obtain an emulsion dispersion containing liposomes.
得られた第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームは、数平均粒径が３５ｎｍであり、標準偏差が８ｎｍであった。
The resulting second hydroxyapatite particle-encapsulating liposomes had a number-average particle size of 35 nm and a standard deviation of 8 nm.
＜＜＜物性／性質＞＞＞
次に、ハイドロキシアパタイト粒子単体（第１のハイドロキシアパタイト粒子）、及び、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム（第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）について、ＦＴ－ＩＲ測定、ＴＧ―ＤＴＡ測定の測定を行った。
また、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて、ゼータ電位測定を行った。
第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームのＦＴ－ＩＲ測定結果を、各々、図２－１、図２－２、図２－３に示す。
第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームのＴＧ－ＤＴＡ測定結果を、各々、図３－１、図３－２、図３－３に示す。ＴＧ－ＤＴＡ測定結果にて、第１のハイドロキシアパタイト粒子について１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１．７％の重量減が確認され、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１２．７％の重量減が確認され、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１０．７％の重量減が確認された。
ゼータ電位測定結果を表１に示す。表１における各数値の単位は、［ｍＶ］である。 <<<Physical properties/characteristics>>>
Next, FT-IR measurement and TG-DTA measurement were performed on the hydroxyapatite particles alone (first hydroxyapatite particles) and the hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes (first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes).
In addition, the zeta potential of the first hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was measured.
The results of FT-IR measurement of the first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles), the first hydroxyapatite particle-encapsulating liposomes, and the second hydroxyapatite particle-encapsulating liposomes are shown in FIG. 2-1, FIG. 2-2, and FIG. 2-3, respectively.
The TG-DTA measurement results of the first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles), the first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, and the second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes are shown in Figures 3-1, 3-2, and 3-3, respectively. In the TG-DTA measurement results, a 1.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the first hydroxyapatite particles, a 12.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, and a 10.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes.
The zeta potential measurement results are shown in Table 1. The unit of each value in Table 1 is [mV].
次に、ハイドロキシアパタイト粒子単体（第１のハイドロキシアパタイト粒子）、及び、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム（第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）について、ＦＴ－ＩＲ測定、ＴＧ―ＤＴＡ測定の測定を行った。
また、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて、ゼータ電位測定を行った。
第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームのＦＴ－ＩＲ測定結果を、各々、図２－１、図２－２、図２－３に示す。
第１のハイドロキシアパタイト粒子（高結晶性ハイドロキシアパタイト粒子）、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームのＴＧ－ＤＴＡ測定結果を、各々、図３－１、図３－２、図３－３に示す。ＴＧ－ＤＴＡ測定結果にて、第１のハイドロキシアパタイト粒子について１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１．７％の重量減が確認され、第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１２．７％の重量減が確認され、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームについて１５０～２５０℃の範囲に明確な吸熱を伴わない１０．７％の重量減が確認された。
ゼータ電位測定結果を表１に示す。表１における各数値の単位は、［ｍＶ］である。 <<<Physical properties/characteristics>>>
Next, FT-IR measurement and TG-DTA measurement were performed on the hydroxyapatite particles alone (first hydroxyapatite particles) and the hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes (first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes).
In addition, the zeta potential of the first hydroxyapatite particle-encapsulating liposome was measured.
The results of FT-IR measurement of the first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles), the first hydroxyapatite particle-encapsulating liposomes, and the second hydroxyapatite particle-encapsulating liposomes are shown in FIG. 2-1, FIG. 2-2, and FIG. 2-3, respectively.
The TG-DTA measurement results of the first hydroxyapatite particles (highly crystalline hydroxyapatite particles), the first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, and the second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes are shown in Figures 3-1, 3-2, and 3-3, respectively. In the TG-DTA measurement results, a 1.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the first hydroxyapatite particles, a 12.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, and a 10.7% weight loss without a clear endothermic phenomenon was confirmed in the range of 150 to 250°C for the second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes.
The zeta potential measurement results are shown in Table 1. The unit of each value in Table 1 is [mV].
図２、図３、表１に示すように、ハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームは、ハイドロキシアパタイト粒子単体とは異なる、特徴的な性質を有するものであった。
As shown in Figures 2 and 3 and Table 1, liposomes encapsulating hydroxyapatite particles have distinctive properties that differ from those of hydroxyapatite particles alone.
＜＜＜評価＞＞＞
次に、ハイドロキシアパタイト粒子単体（第１のハイドロキシアパタイト粒子）とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム（第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）との対比評価として、コラーゲン産生評価の試験を実施した。 <<<<Evaluation>>>
Next, a test for evaluating collagen production was conducted as a comparative evaluation between the hydroxyapatite particles alone (first hydroxyapatite particles) and the hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes (first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes).
次に、ハイドロキシアパタイト粒子単体（第１のハイドロキシアパタイト粒子）とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム（第１のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム、第２のハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム）との対比評価として、コラーゲン産生評価の試験を実施した。 <<<<Evaluation>>>
Next, a test for evaluating collagen production was conducted as a comparative evaluation between the hydroxyapatite particles alone (first hydroxyapatite particles) and the hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes (first hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes, second hydroxyapatite particle-encapsulated liposomes).
＜＜評価方法＞＞
正常ヒト線維芽細胞を試料含有１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬに加え、遠心分離（２００×ｇ、５分）を行った後、培地１０ｍＬで懸濁し、２４時間培養後、培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡにて定量した。当該実験はそれぞれの条件において３回反復して行なった（ｎ＝３）。尚、用いた試料は、ＶＣエチル（陽性対照）、製造したハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームである。培地中のハイドロキシアパタイト粒子やハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームの濃度（質量％）を変更して評価を行った。結果を表２に示した。 <<Evaluation method>>
Normal human fibroblasts were added to 10 mL of sample-containing 10% FBS-containing DMEM medium, centrifuged (200 x g, 5 minutes), suspended in 10 mL of medium, and cultured for 24 hours, after which the amount of collagen in the medium was quantified by ELISA. The experiment was repeated three times under each condition (n = 3). The samples used were VC ethyl (positive control), the prepared hydroxyapatite particles, and liposomes containing hydroxyapatite particles. The concentration (mass%) of hydroxyapatite particles and liposomes containing hydroxyapatite particles in the medium was changed and the evaluation was performed. The results are shown in Table 2.
正常ヒト線維芽細胞を試料含有１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬに加え、遠心分離（２００×ｇ、５分）を行った後、培地１０ｍＬで懸濁し、２４時間培養後、培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡにて定量した。当該実験はそれぞれの条件において３回反復して行なった（ｎ＝３）。尚、用いた試料は、ＶＣエチル（陽性対照）、製造したハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームである。培地中のハイドロキシアパタイト粒子やハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームの濃度（質量％）を変更して評価を行った。結果を表２に示した。 <<Evaluation method>>
Normal human fibroblasts were added to 10 mL of sample-containing 10% FBS-containing DMEM medium, centrifuged (200 x g, 5 minutes), suspended in 10 mL of medium, and cultured for 24 hours, after which the amount of collagen in the medium was quantified by ELISA. The experiment was repeated three times under each condition (n = 3). The samples used were VC ethyl (positive control), the prepared hydroxyapatite particles, and liposomes containing hydroxyapatite particles. The concentration (mass%) of hydroxyapatite particles and liposomes containing hydroxyapatite particles in the medium was changed and the evaluation was performed. The results are shown in Table 2.
＜＜評価結果＞＞
各濃度でハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを比較した場合、０．０１％では、Ｉ型コラーゲン量に有意な差は見られなかったが（ｐ＞０．０５（ｔ ｔｅｓｔ））、０．０５％ではハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム添加時の方がハイドロキシアパタイト粒子よりも一型コラーゲン量が多い傾向が見られ（ｐ＜０．１（ｔ ｔｅｓｔ））、０．１％ではハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム添加時の方がハイドロキシアパタイト粒子添加時よりも有意にＩ型コラーゲン量の増加が見られた（ｐ＜０．０５（ｔ ｔｅｓｔ））。なお、「ｐ(ｔ ｔｅｓｔ)」とは、「ｔ ｔｅｓｔ」により得られたｐ値｛一般的に０．０５以下であれば、差がある値であることを示し、逆に、０．０５より大きな値である場合、差がほとんどないことを示す。｝を示している。 <<Evaluation Results>>
When comparing hydroxyapatite particles and liposomes encapsulating hydroxyapatite particles at each concentration, no significant difference was observed in the amount of type I collagen at 0.01% (p>0.05 (t test)), but at 0.05%, the amount of type I collagen tended to be greater when liposomes encapsulating hydroxyapatite particles were added than when hydroxyapatite particles were added (p<0.1 (t test)), and at 0.1%, the amount of type I collagen was significantly increased when liposomes encapsulating hydroxyapatite particles were added than when hydroxyapatite particles were added (p<0.05 (t test)). Note that "p(t test)" refers to the p value obtained by the "t test" {generally, if it is 0.05 or less, it indicates that there is a difference, and conversely, if it is a value greater than 0.05, it indicates that there is almost no difference.}.
各濃度でハイドロキシアパタイト粒子とハイドロキシアパタイト粒子内包リポソームを比較した場合、０．０１％では、Ｉ型コラーゲン量に有意な差は見られなかったが（ｐ＞０．０５（ｔ ｔｅｓｔ））、０．０５％ではハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム添加時の方がハイドロキシアパタイト粒子よりも一型コラーゲン量が多い傾向が見られ（ｐ＜０．１（ｔ ｔｅｓｔ））、０．１％ではハイドロキシアパタイト粒子内包リポソーム添加時の方がハイドロキシアパタイト粒子添加時よりも有意にＩ型コラーゲン量の増加が見られた（ｐ＜０．０５（ｔ ｔｅｓｔ））。なお、「ｐ(ｔ ｔｅｓｔ)」とは、「ｔ ｔｅｓｔ」により得られたｐ値｛一般的に０．０５以下であれば、差がある値であることを示し、逆に、０．０５より大きな値である場合、差がほとんどないことを示す。｝を示している。 <<Evaluation Results>>
When comparing hydroxyapatite particles and liposomes encapsulating hydroxyapatite particles at each concentration, no significant difference was observed in the amount of type I collagen at 0.01% (p>0.05 (t test)), but at 0.05%, the amount of type I collagen tended to be greater when liposomes encapsulating hydroxyapatite particles were added than when hydroxyapatite particles were added (p<0.1 (t test)), and at 0.1%, the amount of type I collagen was significantly increased when liposomes encapsulating hydroxyapatite particles were added than when hydroxyapatite particles were added (p<0.05 (t test)). Note that "p(t test)" refers to the p value obtained by the "t test" {generally, if it is 0.05 or less, it indicates that there is a difference, and conversely, if it is a value greater than 0.05, it indicates that there is almost no difference.}.
Claims (17)
- ハイドロキシアパタイト粒子、リン脂質、分散剤を含有することを特徴とするハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 A hydroxyapatite particle-containing material characterized by containing hydroxyapatite particles, phospholipids, and a dispersant.
- 前記分散剤が、酢酸、クエン酸、クエン酸一ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、及び、クエン酸三ナトリウムからなる群より選択される１種以上であることを特徴とする請求項１記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 1, characterized in that the dispersant is one or more selected from the group consisting of acetic acid, citric acid, monosodium citrate, disodium citrate, and trisodium citrate.
- 前記ハイドロキシアパタイト粒子がリポソームに内包されていることを特徴とする請求項１記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 1, characterized in that the hydroxyapatite particles are encapsulated in liposomes.
- 前記リン脂質が前記ハイドロキシアパタイト粒子に吸着されていることを特徴とする請求項１記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 1, characterized in that the phospholipid is adsorbed onto the hydroxyapatite particles.
- 前記リン脂質がレシチンであること特徴とする、請求項１記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 1, characterized in that the phospholipid is lecithin.
- ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it has two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum.
- ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle- containing material according to any one of claims 1 to 5, characterized in that in an FT-IR spectrum, the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1.
- 請求項１～５のいずれか一項に記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む組成物。 A composition comprising a hydroxyapatite particle-containing material according to any one of claims 1 to 5.
- 医薬品組成物である、請求項８に記載の組成物。 The composition according to claim 8, which is a pharmaceutical composition.
- 化粧品組成物である、請求項８に記載の組成物。 The composition according to claim 8, which is a cosmetic composition.
- 少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１２００ｃｍ－１～１５００ｃｍ－１の範囲に２つ以上のピークを有することを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 Contains at least hydroxyapatite particles,
A hydroxyapatite particle-containing material characterized in having two or more peaks in the range of 1200 cm -1 to 1500 cm -1 in an FT-IR spectrum. - 前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、請求項１１記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 11, wherein the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome comprising a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
- 少なくともハイドロキシアパタイト粒子を含有し、
ハイドロキシアパタイト粒子を内包し、
ＦＴ－ＩＲスペクトルにおいて、１７００ｃｍ－１～１７５０ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度が、１０３０ｃｍ－１～１１００ｃｍ－１の範囲の最大吸収強度の１０％以下であることを特徴とする、ハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 Contains at least hydroxyapatite particles,
Hydroxyapatite particles are included.
A hydroxyapatite particle-containing material, characterized in that the maximum absorption intensity in the range of 1700 cm -1 to 1750 cm -1 in an FT-IR spectrum is 10% or less of the maximum absorption intensity in the range of 1030 cm -1 to 1100 cm -1 . - 前記ハイドロキシアパタイト粒子含有材料が、リポソームと、前記リポソームに内包された前記ハイドロキシアパタイト粒子とを含むハイドロキシアパタイト内包リポソームである、請求項１３記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料。 The hydroxyapatite particle-containing material according to claim 13, wherein the hydroxyapatite particle-containing material is a hydroxyapatite-encapsulating liposome comprising a liposome and the hydroxyapatite particle encapsulated in the liposome.
- 請求項１２又は１４に記載のハイドロキシアパタイト粒子含有材料を含む、リポソーム含有組成物。 A liposome-containing composition comprising the hydroxyapatite particle-containing material according to claim 12 or 14.
- 医薬品組成物である、請求項１５に記載のリポソーム含有組成物。 The liposome-containing composition according to claim 15, which is a pharmaceutical composition.
- 化粧品組成物である、請求項１５に記載のリポソーム含有組成物。
The liposome-containing composition of claim 15 which is a cosmetic composition.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2022173801 | 2022-10-28 | ||
| JP2022-173801 | 2022-10-28 | ||
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| JP2022-176393 | 2022-11-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family
ID=90831029
Family Applications (1)
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| PCT/JP2023/038860 WO2024090548A1 (en) | 2022-10-28 | 2023-10-27 | Hydroxyapatite-particle-containing material, liposome having enclosed hydroxyapatite, and liposome-containing composition |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
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-
2023
- 2023-10-27 WO PCT/JP2023/038860 patent/WO2024090548A1/en unknown
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