WO2023135397A1 - Process for the preparation of antibody-drug conjugates - Google Patents

Process for the preparation of antibody-drug conjugates Download PDF

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WO2023135397A1
WO2023135397A1 PCT/FR2023/050050 FR2023050050W WO2023135397A1 WO 2023135397 A1 WO2023135397 A1 WO 2023135397A1 FR 2023050050 W FR2023050050 W FR 2023050050W WO 2023135397 A1 WO2023135397 A1 WO 2023135397A1
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compound
formula
nhco
conh
reaction
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PCT/FR2023/050050
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Ludovic S. JUEN
Estelle R. HUET
Camille R. GELY
Christine BALTUS
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Mc Saf
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    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates (in English “Antibody Drug Conjugate” or “ADC”) and the conjugates capable of being obtained by this process.
  • ADC Antibody Drug Conjugate
  • antibody-drug conjugates in English “Antibody Drug Conjugate” or “ADC”), these conjugates potentially representing an alternative or a complement to “conventional” therapies to deliver in a targets an active ingredient, in particular a cytotoxic drug.
  • ADC Antibody Drug Conjugate
  • the antibody-drug conjugate therefore makes it possible to combine the specificity of the targeting by the antibodies with new powerful effector functions by the agents which are conjugated to them.
  • an antibody-drug conjugate typically consists of an antibody bound to the drug by a molecule one part of which will bind the antibody and another part will couple to the drug, usually via a spacer arm (or linker) of variable length and nature.
  • the antibody After binding to its target antigen, the antibody is most often internalized in the cell by receptor-mediated endocytosis.
  • the vesicles fuse with lysosomes where the drug is released from the antibody via different mechanisms.
  • the active drug then acts directly on the cell by inducing its death and sometimes on neighboring cancer cells by transport or diffusion in the environment.
  • the antibody is therefore mainly used as a vector and brings the drug to the targeted cell.
  • Antibody-drug conjugates are described in application WO 2015/004400. Furthermore, application WO 2022/018371 describes attachment heads which make it possible to obtain compounds which, when conjugated to proteins, in particular antibodies, make it possible to obtain a "structure" such that on average, the number of conjugated hookheads per protein (antibody) is controlled: the majority conjugate referred to carrying either 1 molecule per protein (antibody) or 2 molecules per protein (antibody), the term “molecule” designating in this document either a compound of formula (I), either a compound of formula (II) or the click reaction product between a compound of formula (I) and a compound of formula (V). Summary of the invention
  • the present invention relates to a method for preparing a mixture of conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B), or a conjugate of structure (C), these conjugates being as defined above. - After.
  • the present invention also relates to a mixture of conjugates which can be obtained by the aforementioned method.
  • the present invention also relates to a composition containing such a mixture of conjugates, and the use of this composition as a medicament, in particular for the treatment of cancer.
  • antibody refers to a heterotetramer consisting of two heavy chains of approximately 50-70 kDa each (called the H chains for Heavy) and two light chains of approximately 25 kDa each (called the L chains for Light), linked between them by intercatenary disulphide bridges.
  • Each chain is made up, in the N-terminal position, of a region or variable domain, called VL for the light chain, VH for the heavy chain, and in the C-terminal position, of a constant region, made up of a single domain called CL for the light chain and three or four domains called CH1, CH2, CH3, CH4, for the heavy chain.
  • F(ab′) 2 denotes an antibody fragment which retains the capacity of said antibody to bind an antigen.
  • the F(ab') 2 fragment is obtained by enzymatic digestion of immunoglobulins with pepsin or with IdeS.
  • F(ab') 2 is formed of two Fab' fragments linked by interchain disulphide bridges.
  • the Fab' fragment is made up of the Fab region (made up of the variable regions and the CH1 and CL domains) and a hinge region.
  • the term “antibody” means both a heterotetramer as defined above and an F(ab′) 2 fragment of said heterotetramer.
  • this reaction encompasses the reaction of the F(ab′) 2 fragment of the antibody with said compound of formula (X).
  • mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (A) means the product resulting from the implementation of the process in accordance with the invention, comprising more than 50% by mass of conjugate of structure (A), the remainder of the mixture consisting of by-product(s) of the reaction (mainly leading to obtaining of said conjugate of structure (A)).
  • Such a mixture comprises neither the conjugate of structure (B) nor the conjugate of structure (C).
  • the same definition applies by analogy to the expressions “mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (B)” and “mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (C)”.
  • Figures 1A, 1B and 1C respectively represent the structure of the conjugates of structure (A), (B) and (C) obtained by the process in accordance with the invention.
  • the black circle represents a hook head
  • the gray square represents a connecting arm
  • the gray oval represents a spacer
  • the ovoid shape comprising the letter M represents an active ingredient.
  • the structures represented in these figures include both a whole antibody and an F(ab')2 fragment of this antibody.
  • the invention relates to a process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A) as represented in FIG. 1A, or a conjugate of structure (B) as represented in FIG. 1 B, or a conjugate of structure (C) as represented in FIG. 1 C; structures in which: the symbol • represents an attachment head of formula (IIa), (Ilb), (Ile) or (Ild): in which :
  • - T represents -(CH 2 ) y - , y being an integer ranging from 0 to 6;
  • - W is -ORa, -COR 2 , -CONR 3 R 4 OR -NR 3 COR 4 ;
  • R a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , ⁇ OR b , -(CR c R d ) r -NHCO- (CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R5;
  • R b is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 ,
  • R 2 is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -Rs, -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -R 5 ,
  • R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
  • R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , - (CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r
  • each R 5 is -(CH 2 ) s R 6 ;
  • each R 6 is chosen from:
  • each R d is chosen from -H, -CH 2 -SO 3 H or -SO 3 H;
  • R 7 is -H or -CH 3 ; - each q is an integer ranging from 1 to 24;
  • each r is an integer ranging from 1 to 8;
  • each s is an integer ranging from 0 to 6;
  • each v is an integer ranging from 1 to 6; the symbol represents a link arm which is a direct link; an -SS- bridge; or a group of formula -R 11 -(A) Z -;
  • Ru is a direct bond, a group R 6 -(CR c R d ) r -CO-, R 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R 6 -(CR c R d X-NH-, where R 6 , R c , R d , q, r and s are as defined above;
  • - A is an amino acid residue
  • - z is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; the symbol represents a spacer which is a direct bond or a group of formula:
  • - G is a sulfate, a sugar, a glucuronide, or a galactoside, said sugar being a saccharide group preferably chosen from a beta-glucuronic acid, a beta-D-galactose, a beta-D-glucose, an alpha-D -mannose, N-acetyl-D-glucosaminyl, N-acetyl-D-galactosaminyl, D-glucuronyl, L-iduronyl, D-glucopyranosyl, D-galactopyranosyl, D-mannopyranosyl or L-fucopyranosyl , preferably G is sulfate, beta-glucuronic acid, or beta-D-galactose;
  • - Ri2 is -H or -NO 2 ;
  • each conjugate comprises at least one attachment head of formula (Ha) or (IIb), in each of the aforementioned conjugates, at least one of the connecting arm and of the spacer is present; said method of preparation comprising: al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb): b1) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (II'a) or with a compound of formula (II'b), or else with a compound of formula (II'c) or with a compound of formula (ll'd): in which T and W are as defined above; Being heard that :
  • step al if a compound (II'a) is used in step al) and a compound (II'a) is used in step bl), the two compounds (II'a) have a different structure;
  • step al if a compound (ITb) is used in step al) and a compound (ITb) is used in step bl), the two compounds (II'b) have a different structure; cl) the reaction of the compound obtained in step b1) with two compounds, which may or may not be identical, each corresponding to the formula (III): in which :
  • R 8 is R 6 -(CR c R d ) r -CO-, R 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R 6 -(CR c R d ) r - NH-, where R 6 , R c , R d , q, r and s are as defined above;
  • the connecting arm, the spacer and M are as defined below above, M being identical or not in each compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (II'b); b2) reaction of the compound obtained in step a1) with a compound of formula (IV): in which: i) the grip head is a compound of formula (II"a), (II"b), (II"c), or (II"d):
  • -Y is -OR'a, -COR' 2 , -CONR'3R'4 or -NR'3COR'4
  • R' a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d X-R' 5 , -COR' b , -(CR c R d ) r -NHCO -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R′5;
  • R' b is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d kR' 5 ,
  • R' 2 is -OH, -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d X-R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -( CH 2 ) r -R' 5 , -O(CR c R d ) r - R' 5 , -O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5 or -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r
  • R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R′ 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
  • R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R' 5 , -(CR c R r )R' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5, -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5, -CH-[(CR c R d ) r -CONH-( CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R' 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d )
  • each R′ 5 is —(CH 2 ) S R′ 6 or —(CH 2 ) S R′ 7 ;
  • - R′ 6 is chosen from:
  • - R' 7 is -COOH or -NR' 8 R' 9 ;
  • - R' 8 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl
  • - R' 9 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl
  • R' 10 is -H or -CH 3 ; where R c , R d , q, r and s are as defined above; and ii) the link arm is a direct link; an -SS- bridge; or a group of formula - R'ii-(A) Z -; - R' 11 - is a direct bond, a group R' 6 -(CR c R d ) r -CO-, R' 6 -(CH2CH 2 O) q -(CH2) s -CO-, R' 6 -
  • - A is an amino acid residue
  • step c1 is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; and iii) the spacer and M are as defined in step c1), it being understood that the connecting arm and the spacer cannot simultaneously be a direct connection; c2) the reaction of the compound obtained in step b2) with a compound of formula (III) as defined in step cl), the molecule of interest M of the compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (IV); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb); b3) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III) as defined above; c3) the reaction of the compound obtained in step b3) with a compound of formula (IV) as defined above, the molecule of interest M of the compound (IV) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb); b3) reacting
  • the antibody-drug conjugates of formula (I) can also be prepared by a process comprising: a2) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the hook head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b4) reaction of the compound obtained in step a2) with a compound of formula (IV) as defined above, M being identical or not in each compound (IV), it being understood that:
  • step b4) if a compound (II"a) is used in step a2) and a compound (II"a) is used in step b4), the two compounds (II"a) have a different structure;
  • step b4) if a compound (II"b) is used in step a2) and a compound (II"b) is used in step b4), the two compounds (II"b) have a different structure; or else a2 ) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the attachment head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b5) reacting the compound obtained in step a2) with a compound of formula (II'a), (II'b), (II'c) or (II'd) as defined above; c5) the reaction of the compound obtained in step b5) with a compound of formula (III) as defined above, the molecule of interest M of the compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (IV).
  • Step a1) of the process of the invention consists in reacting an antibody (term which includes, as indicated above, the F(ab') 2 fragment of said antibody) with a hook head of formula (II' a) or (II'b).
  • the antibody binds to the hook head by a substitution reaction of the Br groups present in the formula (II'a) or (II'b).
  • the antibody is reacted with the hook head, in the presence of a reducing agent.
  • the hook head and the reducing agent are present in excess, relative to the antibody.
  • excess is meant (and this is applicable for the description and the claims) a quantity (expressed in equivalent) at least 2 times greater, for example at least 5 times, at least 10 times or at least 15 times greater.
  • the grip head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step a1) a “compound” of structure as shown in FIG. 2 is obtained.
  • Step bl) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step al) with a second attachment head, distinct from that used in step al), of formula (II'a) , (Il'b), (II'c) or (Il'd). Similarly to what is indicated for step al), the antibody binds to the second hook head by a substitution reaction of the Br groups present in the formula (II'a), (II'b) , (II'c) or (Il'd).
  • the compound obtained in step a1) is reacted with the second attachment head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of second attachment head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a1). In certain embodiments, the compound obtained in step a1) is first reacted with the reducing agent, then the second attachment head is added. In certain embodiments, the second gripping head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • Step c1) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained at the end of step b1) with two identical or different compounds of formula (III).
  • an excess of each of the compounds of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b1).
  • the compounds of formula (III) are each in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the two compounds of formula (III) are added concomitantly. In some embodiments, the two compounds of formula (III) are added sequentially.
  • the reaction between the compound obtained in step b1) and the two compounds of formula (III) is carried out by “click” chemistry.
  • This reaction takes place between an R 6 group carried by each of the attachment heads and an R 6 group carried by each of the compounds of formula (III). More specifically, the click reaction takes place between a diene (for example an azide or a diazo) and a dienophile (for example an alkene or an alkyne), each of these functions being provided by an R 6 group.
  • a diene for example an azide or a diazo
  • a dienophile for example an alkene or an alkyne
  • the click reaction can take place between a diene provided by the R 6 group of each of the attachment heads and a dienophile provided by the R 6 group of compound (III), or else between a dienophile provided by the group R 6 of each of the attachment heads and a diene provided by the R 6 group of compound (III).
  • These click reactions are well known to those skilled in the art, it being understood that the R 6 groups are judiciously chosen to be mutually compatible.
  • the click reaction is carried out in a single step.
  • the two compounds of formula (III) are added sequentially, two successive click reactions are implemented, the order of addition of the compounds of formula (III) being a function of the compatibility of the click functions (R 6 ) used .
  • the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b1) can be purified before being used in the next step.
  • the mixture of conjugates obtained at the end of step c1) can also be purified.
  • a purification can take place at the end of one or the other click reaction (or of both). The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B, or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Step b2) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (IV).
  • the compound obtained in step a1) is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent.
  • a reducing agent In certain embodiments, an excess of compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a1).
  • the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step b2) a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 4 is obtained.
  • Step c2) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b2) with a compound of formula (III). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
  • an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b2).
  • the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b2) can be purified before being used in the following step.
  • the mixture of conjugates obtained at the end of step c2) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • step c2) a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C.
  • This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Step b3) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III).
  • This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
  • an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step a1).
  • the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step b3) a “compound” of structure as shown in FIG. 5 is obtained.
  • Step c3) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b3) with a compound of formula (IV).
  • the compound obtained in step b3) is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent.
  • a reducing agent In certain embodiments, an excess of compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step b3).
  • the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b3) can be purified before being used in the next step.
  • the mixture of conjugates obtained at the end of step c3) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • step c3) a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C.
  • This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Step c4) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b3) with a second attachment head, of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (ITd).
  • the compound obtained in step b3) is reacted with the second attachment head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of second attachment head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step b3). In certain embodiments, the compound obtained in step b3) is first reacted with the reducing agent, then the second attachment head is added. In certain embodiments, the second gripping head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step c4) a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 6 is obtained.
  • Step dl) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step c4) with a compound of formula (III). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
  • an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step c4).
  • the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b3) and/or the compound obtained in step c4) can be purified before be used in the next step.
  • the mixture of conjugates obtained at the end of step d1) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • step d1) a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C.
  • This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Step a2) of the process of the invention consists in reacting an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the attachment head corresponds only to formula (II"a) or (II"b).
  • the antibody binds to the hook head of compound (IV) by a substitution reaction of the Br groups present in formula (II"a) or (II"b).
  • the antibody is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent.
  • a reducing agent In some embodiments, an excess of compound of formula (IV) and reducing agent is used relative to the antibody.
  • the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step a2) a “compound” with a structure as shown in FIG. 7 is obtained.
  • Step b4) consists in reacting the compound obtained in step a2) with a second compound of formula (IV).
  • the compound obtained in step a2) is reacted with the second compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent.
  • an excess of second compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a2).
  • the second compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the compound obtained in step a2) can be purified before being used in the next step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step b4) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • step b4) a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Step b5) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a2) with an attachment head of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (ITd ).
  • the compound obtained in step a2) is reacted with the grip head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of hook head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a2). In certain embodiments, the compound obtained in step a2) is first reacted with the reducing agent, then the attachment head is added. In certain embodiments, the grip head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • step b5) a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 8 is obtained.
  • Step c5) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b5) with a compound of formula (III).
  • This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
  • an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b5).
  • the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
  • the compound obtained in step a2) and/or the compound obtained in step b5) can be purified before being used in the following step.
  • the mixture of conjugates obtained at the end of step c5) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
  • step c5) a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C.
  • This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
  • Some of the embodiments described above involve a reducing agent.
  • a person skilled in the art will be able to choose such an agent judiciously from the compounds used in the conventional manner in bioconjugation reactions, by way of example one can mention: dithiothreitol, beta-mercaptoethanol, tris(2-carboxyethyljphosphine or tris(hydroxypropryl)phosphine.
  • the method in accordance with the invention comprises steps a1), b1) and c1).
  • the attachment head used in step a1) corresponds to one of the formulas (II'a) or (II'b), and the attachment head used in step b1) corresponds to one of the formulas (II'a), (II'b), (II'c) or (II'd), in which:
  • - W is -CONR 3 R 4 or -NR3COR 4 , preferably W is -CONR3R 4 ;
  • R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl
  • R 4 is -(CH2CH2O)q-(CH2) r _ R5, or -(CR c j) r - 5
  • - R 6 is chosen from:
  • R c R d are as defined above;
  • - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
  • the hook head is a compound of formula (II'al),
  • the method in accordance with the invention comprises steps a1), b2) and c2).
  • the attachment head used in step b2) corresponds to one of the formulas (II"a), (II"b), (II"c) or (II"d) in which :
  • - Y is -CONR' 3 R' 4 OR -NR' 3 COR' 4 , preferably Y is -CONR' 3 R' 4 ;
  • R' 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl
  • R' 4 is -(CH 2 CH 2 O)q _ (CH2) r -R'5, or -(CR c R d ) r -R'5;
  • - R' 5 is -(CH 2 ) S R' 6 ;
  • - R′ 6 is chosen from:
  • R c R d are as defined above;
  • - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
  • the attachment head is a compound of formula (IT'al), (II"a2), (II"a3), (II"a4) , (II"a5), (II"a6), (II"a7), (II"a8) or (II"bl):
  • the connecting arm is a direct connection (it being understood in this case that the spacer is not a direct connection).
  • the linker is a group of formula -Rn-(A) Z- wherein Ru and A are as defined above, and z is 2, 3 or 4.
  • A is an amino acid residue which may be selected from the group consisting of: valine, citrulline, phenylalanine, lysine, aspartic acid, methionine, asparagine, proline, isoleucine, alanine, arginine, a glycine or a glutamic acid.
  • z is equal to 2 or 3, preferably 2 and -(A) z - is an amino acid residue chosen from the residue of: valine-citrulline; phenylalanine-lysine; valine-alanine; valine-aspartic acid; lysine-methionine; lysine-asparagine; proline-isoleucine; proline-lysine; valine-lysine; alanine-lysine; phenylalanine-phenylalanine-lysine; phenylalanine-phenylalanine-alanine; arginine-arginine; lysine-arginine; lysine-glutamic acid; glycine-arginine; or glycine-glycine-arginine (the order of the amino acids is given here as an indication, for example a residue of citrulline-valine is also included in the definition of -(A) z -).
  • the spacer is a direct bond (it being understood in this case that the link arm is not a direct bond) or a group of formula: preferably a direct bond or a group of formula:
  • M is an active ingredient.
  • active principle capable of being used in the context of the invention, mention may be made of the active principles of medicinal products already authorized and the molecules undergoing therapeutic evaluation, in particular:
  • - alkylating agents such as: chlorambucil, chlornaphazine, cyclophosphamide, dacarbazine, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, mannomustine, mitobronitol, melphalan, mitolactol, pipobroman, novembichine, phenesterine, prednimustine, thiotepa, trofosfamide, mustard uracil, CC-1065 (including its synthetic analogs adozelesin, carzelesin and bizelesin), duocarmycin (including the synthetic analogs KW-2189 and CBI-TMI), benzodiazepine dimers (for example, pyrrolobenzodiazepine (PBD) dimers or tomaymycin, indolinobenzodiazepines, imidazobenzothiadiazepines, or oxazolidino-benzodiazep
  • - plant alkaloids such as: Vinca alkaloids (vincristine, vinblastine, vindesine, vinorelbine, navelbine), taxoids (paclitaxel, docetaxol) and their analogues, maytansinoids (DM1, DM2, DM3, DM4, maytansine and ansamitocins) and their analogues, cryptophycins (in particular cryptophycin 1 and cryptophycin 8), epothilones, eleutherobin, discodermolide, bryostatins, dolastatins, auristatins, tubulysins, cephalostatins, pancratistatins, sarcodictyin, spongistatins;
  • Vinca alkaloids vincristine, vinblastine, vindesine, vinorelbine, navelbine
  • taxoids paclitaxel, docetaxol
  • maytansinoids DM1, DM2, DM3,
  • DNA topoisomerase inhibitors such as: epipodophyllin (9-aminocamptothecin, camptothecin, crisnatol, daunomycin, etoposide, etoposide phosphate, irinotecan, mitoxantrone, novantrone, retinoic acids (retinols), teniposide, topotecan, 9-nitrocamptothecin (RFS 2000) , mitomycins (mitomycin C), bortezomib;
  • epipodophyllin (9-aminocamptothecin, camptothecin, crisnatol, daunomycin, etoposide, etoposide phosphate, irinotecan, mitoxantrone, novantrone, retinoic acids (retinols), teniposide, topotecan, 9-nitrocamptothecin (RFS 2000) , mitomycins (mit
  • anti-folates DHFR inhibitors (methotrexate, trimetrexate, denopterin, pteropterin, aminopterin (4-aminopteroic acid) and other analogues of folic acid), inhibitors of IMP dehydrogenase (acid mycophenolic acid, tiazofurin, ribavirin, EICAR), ribonucleotide reductase inhibitors (hydroxyurea, deferoxamine), pyrimidine analogues such as: uracil analogues (ancitabine, azacitidine, 6-azauridine, capecitabine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxifluridine, enocitabine, 5-fluorouracil, floxuridine, ratitrexed), cytosine analogs (cytarabine, cytosine arabinoside, fludarabine), purine analogs (azathiolates)
  • hormonal agents such as: anti-estrogens (megestrol, raloxifene, tamoxifen), LHRH agonists (goserelin, leuprolide acetate), anti-androgens (bicalutamide, flutamide, calusterone, dromostanolone propionate, epitiostanol, goserelin, leuprolide, mepitiostane, nilutamide, testolactone, trilostane), vitamin D3 analogues (CB 1093, EB 1089, KH 1060, cholecalciferol, ergocalciferol), photodynamic therapies (verteporfin, phthalocyanine, photosensitizer Pc4), cytokines (interferon-alpha, interferon-gamma, tumor necrosis (TNF), human proteins containing a TNF domain); - kinase inhibitors such as: BIBW 2992, CYP
  • PARP poly(ADP-ribose)polymerase
  • - immunomodulators such as: thalidomide, lenalidomide, pomalidomide;
  • toxin such as pseudomonas exotoxin (PE), deBouganin, Bouganin;
  • the active principle is chosen from methotrexate, an immunomodulator, duocarmycin, combretastatin, calicheamicin, monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), maytansine, DM1, DM4 , SN38, amanitine and its analogues, pyrrolobenzodiazepine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, pyrrolopyridodiazepine, a pyrrolopyridodiazepine dimer, a histone deacetylase inhibitor, a tyrosine kinase inhibitor, and ricin, preferably the active principle is amanitine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, MMAF or MMAE, the latter two being represented by the following formulas:
  • M is a radionuclide chelator.
  • a radionuclide chelator capable of being used in the context of the invention it is possible cite sarcophagine, DOTA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-A(/V,/V',/V"-tetraacetic acid), DOTAGA (tetraazacyclododecane triacetic acid glutaric acid), NODA (1,4, 7-triazacyclononane-l,4-diacetic acid), NODAGA (triazacyclononane diacetic acid glutaric acid), NOTA (l,4,7-triazacyclononane-l,4,7-triacetic acid) and MANOTA (methyl amino triazacyclononane triacetic acid). acid).
  • the antibody or FCatQz fragment of said antibody binds to a cancer-specific antigen.
  • the cancer-specific antigen can be, for example, CDla, CD3, CD4, CD13, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD30, CD33, CD34, CD37, CD39, CD40, CD44, CD47, CD52, CD56, CD66e, CD70, CD72, CD73, CD74, CD79, CD80, CD86, CD117, CD138, CD194, CD205, CD227, VEGF, EpCAM, GPIIb, GPIIIa, TNF alpha, TNFR, TNT, Lewis Y, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, AXL, Protein F, IgE-Fc, C5, IL-6R, IL12, IL15, IL18, IL23, IL-1, TPO-R, GPNMB, PSMA, PSA, PAP, PSM, Cripto , Folate receptor
  • the antibody can be of mammalian (eg human or mouse), murine, chimeric, humanized or human origin. It is preferably a monoclonal antibody produced recombinantly by genetically modified cells according to techniques widely described in the literature.
  • the antibody is of the IgG type, for example IgG1, IgG2,
  • the compounds of formula (III): can be obtained in a conventional manner, for example by coupling of the peptide type between on the one hand the connecting arm (carrying the Rs group) and the spacer, and on the other hand between the spacer and M.
  • Such a coupling s is carried out in a conventional manner between a carboxylic group carried by the connecting arm (respectively, the spacer), and an amine group carried by the spacer (respectively M).
  • the compounds of formula (IV) can be purchased or obtained for example as described in application WO 2022/018371 or in application WO 2020/234541.
  • the preparation process of the invention makes it possible to obtain a mixture of antibody-drug conjugates comprising mainly (i.e. > 50% by mass) either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B ), or a conjugate of structure (C).
  • This mixture of conjugates is therefore characterized in that it mainly contains either a conjugate which comprises 2 molecules of interest M attached to the antibody, or a conjugate which comprises 3 molecules of interest M attached to the antibody, or a conjugate which comprises 5 molecules of interest M attached to the antibody.
  • the molecules of interest M attached to each antibody can be identical or different.
  • a mixture mainly comprising a conjugate of structure (A) does not comprise either a conjugate of structure (B) or a conjugate of structure (C), but comprises in a minor way ( ⁇ 50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (A).
  • a mixture mainly comprising a conjugate of structure (B) does not comprise either a conjugate of structure (A) or a conjugate of structure (C), but comprises in a minor way ( ⁇ 50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (B).
  • a mixture mainly comprising a conjugate of structure (C) does not comprise either a conjugate of structure (A) or a conjugate of structure (B), but comprises in a minor way ( ⁇ 50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (C).
  • the proportion of the expected species (2, 3 or 5 molecules of interest M) is determined by HRMS (High Resolution Mass Spectrometry) analysis under denaturing conditions.
  • HRMS High Resolution Mass Spectrometry
  • the conjugates of structure (A), (B) or (C) comprise a whole antibody, the analysis is carried out either on the compound as such, or after digestion of the conjugates with IdeS, on the FCab ⁇ fragment.
  • the mixture of conjugates obtained by the method of the invention may be present in a composition, which may for example be a pharmaceutical composition containing one or more pharmaceutically acceptable excipients and/or vehicles.
  • the invention relates to a composition
  • a composition comprising a mixture of antibody-drug conjugates, as defined above, capable of being obtained by the method described above.
  • this mixture contains predominantly an antibody-drug conjugate which comprises 2, 3 or 5 molecules of interest M attached to the antibody.
  • the 2 molecules M attached to the antibody are different from each other.
  • the invention relates to a composition as defined above for use as a medicament.
  • DIPEA A(/V-diisopropylethylamine
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • HOBt hydroxybenzotriazole
  • MMAF Monomethyl Auristatin F
  • TFA trifluoroacetic acid
  • NMR Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy
  • the exact mass of the synthesized compounds was determined by high resolution mass spectrometry (HRMS) in positive or negative mode with the ESI electrospray ionization technique, on a Bruker maXis mass spectrometer coupled to a Dionex Ultimate 3000 RSLC system from the ICOA/CBM “Research Federation” platform (FR2708)).
  • HRMS high resolution mass spectrometry
  • the Fc parts of the antibodies to be analyzed were cut using the IdeS protease.
  • the analysis of the conjugates was therefore carried out on a sample previously cleaved with the IdeS protease: to 10 pL of sample was added 1 pL of IdeS at a concentration of 0.8 g/L then the sample was incubated at 37°C for at least 16 h.
  • the spectrometric analysis of the conjugates was carried out on a Bruker maXis mass spectrometer coupled to a Dionex Ultimate 3000 RSLC system.
  • MS analysis Prior to MS analysis, samples (5 ⁇ g) were desalted on a MassPREP desalting column (2.1x10 mm, Waters), heated to 80°C using 0.1% aqueous formic acid solution as solvent A and a 0.1% solution of formic acid in acetonitrile as solvent B at 500 ⁇ L/min. After 1 min, a linear gradient from 5 to 90% B in 1.5 min was applied. MS data was acquired in positive mode with an ESI source over an m/z range of 900 to 5000 at 1 Hz and analyzed using DataAnalysis 4.4 software (Bruker) and the MaxEnt algorithm for deconvolution. The proportion of species of interest obtained was determined using the intensity of the peaks of the species observed on the F(ab′) 2 fragment.
  • Buffer 1 1 X phosphate buffer (1 mM KH 2 PO 4 , 180 mM NaCl and 3 mM
  • Buffer 2 1 X phosphate buffer (1 mM KH 2 PO 4 , 180 mM NaCl and 3 mM
  • Reducing agent Solution of tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP.HCI) at a concentration of 1 mM in buffer 1.
  • the antibody solution in Buffer 1 (1.0 eq) was placed under argon.
  • the solution of the compound of formula (II'a), (IIb), (II'a) or (ITb) (1.0-15.0 eq, preferably 3.0-12.0 eq) then the solution of reducing agent (1.0-12.0 eq, preferably 3.0-8.0 eq) were added and the reaction medium was stirred under argon at 25° C. or 37° C. for 2h30.
  • the compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 was purified by Sephadex® with buffer 2.
  • the fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop) were combined then concentrated by Vivaspin® (10 kDa) .
  • Vivaspin® (10 kDa) On the concentrated solution, a buffer exchange was carried out by Vivaspin® (10 kDa) to obtain the compound which was used in buffer 1 in the next step.
  • the optionally purified compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 (1.0 eq) was placed under argon.
  • the reducing agent (7.0-30.0 eq, preferably 8.0-15.0 eq) was then added and the reaction medium was incubated at 37° C. for 2 h.
  • the solution of compound (Ha), (IIb), (Ile), (Ild), or (IV) (5.0-30.0 eq, preferably 12.0-15.0 eq) was added under argon and the reaction medium was stirred at 37° C. for 2h30.
  • the optionally purified compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 (1.0 eq) was placed under argon.
  • the solution of the compound of formula (Ha), (IIb), (Ile), (Ild), or (IV) (5.0-30.0 eq, preferably 12.0-15.0 eq) and the solution of reducing agent (7.0-30.0 eq, preferably 8.0-15.0 eq) were added and the reaction medium was stirred under argon at 37° C. for 1 to 5 h, preferably 2 h 30 min.
  • the compound obtained at the end of the 2, 2' bioconjugation reaction or at the end of the one-step click reaction was purified by Sephadex® with buffer 2. fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop®) were collected to be used in the next step.
  • the compound obtained at the end of the first click reaction was advantageously purified by Sephadex® with buffer 2.
  • the fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop®) were pooled and then concentrated by Vivaspin® (10 kDa) to be used in the second click reaction.
  • Example 1 4-Nitrophenyl l-[4-(6-methyl-1,2,4,5-tetrazin-3-yl)phenoxy]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oate (1)
  • Example 3 Compound (14): Trastuzumab - compound (6) clicked compound (10) - compound (7) clicked compound (9)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (7.0 eq), compound (6) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 4 Compound (14): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (11)
  • Bioconjugation reaction 1 then purification 1 at 37°C.
  • Example 5 Compound (16): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (12)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 6 Compound (17): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (13)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 10 Compound (22): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (20)
  • Reagents Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 11 Compound (23): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (20) - compound (12)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 12 Compound (24): Trastuzumab - compound (13) - compound (3) clicked compound (8)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (7.0 eq), compound (13) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
  • Example 13 Compound (25): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (12)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
  • Reagents Compound from b2) at 3.1 mg/mL in buffer 1, compound (2) (10.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
  • Example 14 Compound (26): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (11)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
  • Example 15 Compound (27): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (13)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
  • Example 16 Compound (28): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (5) clicked compound (8)
  • trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.

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Abstract

The invention relates to a process for preparing a mixture of conjugates predominantly comprising a conjugate of structure (A), (B) or (C), said process comprising a step of reacting an antibody and a compound of formula (IIa), (II'b), (II'c), (II'd), (III) or (IV) as defined in the description.

Description

Procédé de préparation de conjugués anticorps-médicament Method for preparing antibody-drug conjugates
Domaine Technique Technical area
La présente invention concerne un procédé de préparation d'un mélange de conjugués anticorps-médicament (en anglais « Antibody Drug Conjugate » ou « ADC ») et les conjugués susceptibles d'être obtenus par ce procédé. The present invention relates to a process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates (in English “Antibody Drug Conjugate” or “ADC”) and the conjugates capable of being obtained by this process.
Etat de la technique State of the art
Le début des années 2000 a vu une intensification de la recherche sur des conjugués anticorps-médicament (en anglais « Antibody Drug Conjugate » ou « ADC »), ces conjugués représentant potentiellement une alternative ou un complément aux thérapies « classiques » pour délivrer de manière ciblée un principe actif, notamment un médicament cytotoxique. Le conjugué anticorps-médicament permet donc de combiner la spécificité du ciblage par les anticorps avec de nouvelles fonctions effectrices puissantes par les agents qui leur sont conjugués. The beginning of the 2000s saw an intensification of research on antibody-drug conjugates (in English “Antibody Drug Conjugate” or “ADC”), these conjugates potentially representing an alternative or a complement to “conventional” therapies to deliver in a targets an active ingredient, in particular a cytotoxic drug. The antibody-drug conjugate therefore makes it possible to combine the specificity of the targeting by the antibodies with new powerful effector functions by the agents which are conjugated to them.
La structure d'un conjugué anticorps-médicament consiste typiquement en un anticorps lié au médicament par une molécule dont une partie va fixer l'anticorps et une autre partie va se coupler au médicament, généralement par l'intermédiaire d'un bras d'espacement (ou linker) de longueur et nature variables. The structure of an antibody-drug conjugate typically consists of an antibody bound to the drug by a molecule one part of which will bind the antibody and another part will couple to the drug, usually via a spacer arm (or linker) of variable length and nature.
Après fixation sur son antigène cible, l'anticorps est le plus souvent internalisé dans la cellule par endocytose médiée par des récepteurs. Les vésicules fusionnent avec des lysosomes où le médicament est libéré de l'anticorps via différents mécanismes. Le médicament actif agit ensuite directement sur la cellule en induisant sa mort et parfois sur les cellules cancéreuses voisines par transport ou diffusion dans l'environnement. L'anticorps est donc principalement utilisé comme vecteur et apporte le médicament dans la cellule ciblée. After binding to its target antigen, the antibody is most often internalized in the cell by receptor-mediated endocytosis. The vesicles fuse with lysosomes where the drug is released from the antibody via different mechanisms. The active drug then acts directly on the cell by inducing its death and sometimes on neighboring cancer cells by transport or diffusion in the environment. The antibody is therefore mainly used as a vector and brings the drug to the targeted cell.
Des conjugués anticorps-médicament sont décrits dans la demande WO 2015/004400. Par ailleurs, la demande WO 2022/018371 décrit des têtes d'accroche qui permettent l'obtention de composés qui, lorsqu'ils sont conjugués à des protéines, notamment des anticorps, permettent l'obtention d'une « structure » telle qu'en moyenne le nombre de tête d'accroche conjuguée par protéine (anticorps) est contrôlé : le conjugué majoritaire visé portant soit 1 molécule par protéine (anticorps) soit 2 molécules par protéine (anticorps), le terme « molécule » désignant dans ce document soit un composé de formule (I), soit un composé de formule (II) soit le produit de réaction click entre un composé de formule (I) et un composé de formule (V). Résumé de l'invention Antibody-drug conjugates are described in application WO 2015/004400. Furthermore, application WO 2022/018371 describes attachment heads which make it possible to obtain compounds which, when conjugated to proteins, in particular antibodies, make it possible to obtain a "structure" such that on average, the number of conjugated hookheads per protein (antibody) is controlled: the majority conjugate referred to carrying either 1 molecule per protein (antibody) or 2 molecules per protein (antibody), the term “molecule” designating in this document either a compound of formula (I), either a compound of formula (II) or the click reaction product between a compound of formula (I) and a compound of formula (V). Summary of the invention
La présente invention concerne un procédé de préparation d'un mélange de conjugués comprenant majoritairement soit un conjugué de structure (A), soit un conjugué de structure (B), soit un conjugué de structure (C), ces conjugués étant tels que définis ci- après. The present invention relates to a method for preparing a mixture of conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B), or a conjugate of structure (C), these conjugates being as defined above. - After.
La présente invention concerne également un mélange de conjugués susceptible d'être obtenu par le procédé susmentionné. The present invention also relates to a mixture of conjugates which can be obtained by the aforementioned method.
La présente invention concerne également une composition contenant un tel mélange de conjugués, et l'utilisation de cette composition comme médicament, notamment pour le traitement du cancer. The present invention also relates to a composition containing such a mixture of conjugates, and the use of this composition as a medicament, in particular for the treatment of cancer.
Définitions Definitions
Le terme « anticorps » désigne un hétérotétramère constitué de deux chaînes lourdes d'environ 50-70 kDa chacune (dites les chaînes H pour Heavy) et de deux chaînes légères d'environ 25 kDa chacune (dites les chaînes L pour Light), liées entre elles par des ponts disulfures intercaténaires. Chaque chaîne est constituée, en position N-terminale, d'une région ou domaine variable, dit VL pour la chaîne légère, VH pour la chaîne lourde, et en position C-terminale, d'une région constante, constituée d'un seul domaine dit CL pour la chaîne légère et de trois ou quatre domaines nommés CHI, CH2, CH3, CH4, pour la chaîne lourde. The term "antibody" refers to a heterotetramer consisting of two heavy chains of approximately 50-70 kDa each (called the H chains for Heavy) and two light chains of approximately 25 kDa each (called the L chains for Light), linked between them by intercatenary disulphide bridges. Each chain is made up, in the N-terminal position, of a region or variable domain, called VL for the light chain, VH for the heavy chain, and in the C-terminal position, of a constant region, made up of a single domain called CL for the light chain and three or four domains called CH1, CH2, CH3, CH4, for the heavy chain.
Le terme « F(ab')2 » désigne un fragment d'anticorps qui conserve la capacité dudit anticorps à se lier un antigène. Le fragment F(ab')2 est obtenu par digestion enzymatique des immunoglobulines par la pepsine ou par IdeS. F(ab')2 est formé de deux fragments Fab' liés par des ponts disulfures intercaténaires. Le fragment Fab' est constitué de la région Fab (constituée des régions variables et des domaines CH1 et CL) et d'une région charnière. The term “F(ab′) 2 ” denotes an antibody fragment which retains the capacity of said antibody to bind an antigen. The F(ab') 2 fragment is obtained by enzymatic digestion of immunoglobulins with pepsin or with IdeS. F(ab') 2 is formed of two Fab' fragments linked by interchain disulphide bridges. The Fab' fragment is made up of the Fab region (made up of the variable regions and the CH1 and CL domains) and a hinge region.
Dans le contexte de la présente divulgation, on entend par « anticorps » aussi bien un hétérotétramère tel que défini ci-dessus qu'un fragment F(ab')2 dudit hétérotétramère. Ainsi lorsqu'il est question de la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (X), cette réaction englobe la réaction du fragment F(ab')2 de l'anticorps avec ledit composé de formule (X). In the context of the present disclosure, the term “antibody” means both a heterotetramer as defined above and an F(ab′) 2 fragment of said heterotetramer. Thus, when it is a question of the reaction of an antibody with a compound of formula (X), this reaction encompasses the reaction of the F(ab′) 2 fragment of the antibody with said compound of formula (X).
On entend par « mélange de conjugués comprenant majoritairement un conjugué de structure (A) » le produit issu de la mise en œuvre du procédé conforme à l'invention, comprenant plus de 50% en masse de conjugué de structure (A), le reste du mélange étant constitué de sous-produit(s) de la réaction (conduisant majoritairement à l'obtention dudit conjugué de structure (A)). Un tel mélange ne comprend ni le conjugué de structure (B), ni le conjugué de structure (C). La même définition s'applique par analogie aux expressions « mélange de conjugués comprenant majoritairement un conjugué de structure (B) » et « mélange de conjugués comprenant majoritairement un conjugué de structure (C) ». The term "mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (A)" means the product resulting from the implementation of the process in accordance with the invention, comprising more than 50% by mass of conjugate of structure (A), the remainder of the mixture consisting of by-product(s) of the reaction (mainly leading to obtaining of said conjugate of structure (A)). Such a mixture comprises neither the conjugate of structure (B) nor the conjugate of structure (C). The same definition applies by analogy to the expressions “mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (B)” and “mixture of conjugates mainly comprising a conjugate of structure (C)”.
Brève description des figures Brief description of figures
Les Figures 1A, 1 B et 1 C représentent respectivement la structure des conjugués de structure (A), (B) et (C) obtenus par le procédé conforme à l'invention. Dans ces figures, le rond noir représente une tête d'accroche, le carré gris représente un bras de liaison, l'ovale gris représente un espaceur, et la forme ovoïde comportant la lettre M représente un principe actif. Figures 1A, 1B and 1C respectively represent the structure of the conjugates of structure (A), (B) and (C) obtained by the process in accordance with the invention. In these figures, the black circle represents a hook head, the gray square represents a connecting arm, the gray oval represents a spacer, and the ovoid shape comprising the letter M represents an active ingredient.
Pour les raisons indiquées ci-dessus, les structures représentées sur ces figures incluent aussi bien un anticorps entier qu'un fragment F(ab')2 de cet anticorps. For the reasons indicated above, the structures represented in these figures include both a whole antibody and an F(ab')2 fragment of this antibody.
Description détaillée de l'invention Detailed description of the invention
Selon un premier aspect, l'invention concerne un procédé de préparation d'un mélange de conjugués anticorps-médicament comprenant majoritairement soit un conjugué de structure (A) telle que représentée figure 1A, soit un conjugué de structure (B) telle que représentée figure 1 B, soit un conjugué de structure (C) telle que représentée figure 1 C; structures dans lesquelles : le symbole • représente une tête d'accroche de formule (IIa), (Ilb), (Ile) ou (Ild) :
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000005_0001
dans lesquelles : According to a first aspect, the invention relates to a process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A) as represented in FIG. 1A, or a conjugate of structure (B) as represented in FIG. 1 B, or a conjugate of structure (C) as represented in FIG. 1 C; structures in which: the symbol • represents an attachment head of formula (IIa), (Ilb), (Ile) or (Ild):
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000005_0001
in which :
- T représente -(CH2)y- , y étant un entier allant de 0 à 6 ; - T represents -(CH 2 ) y - , y being an integer ranging from 0 to 6;
- W est -ORa, -COR2, -CONR3R4 OU -NR3COR4 ; - W is -ORa, -COR 2 , -CONR 3 R 4 OR -NR 3 COR 4 ;
- Ra est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-R5, <ORb, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; - R a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , <OR b , -(CR c R d ) r -NHCO- (CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R5;
Rb est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-R5,R b is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 ,
-O(CRcRd)r-R5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 OU -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; -O(CR c R d ) r -R5, -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r - CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R5 OR -( CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R5;
- R2 est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-Rs, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CRcRd)r-R5,- R 2 is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -Rs, -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -R 5 ,
-O(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5,-O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 ,
-O(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 ou -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 or -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-( CR c R d ) r -R 5 ;
- R3 est -H, -(C1-C6)alkyle ou -(CH2)V-SO3H, de préférence R3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
R4 est -(CH2CH2O)qR5, -(CRcRd)rR5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R5]2, -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R5]2, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-R5]2, ou -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-R5]2, de préférence R4 est -(CH2CH2O)qR5, -(CRcRd)rR5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5, ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , - (CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ] 2 , or -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r - R 5 ] 2 , preferably R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O ) q -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ;
- chaque R5 est -(CH2)sR6 ; - each R 5 is -(CH 2 ) s R 6 ;
- chaque R6 est choisi parmi : - each R 6 is chosen from:
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0001
- Rc est H ; - R c is H;
- chaque Rd est choisi parmi -H, -CH2-SO3H ou -SO3H ; - each R d is chosen from -H, -CH 2 -SO 3 H or -SO 3 H;
- R7 est -H ou -CH3 ; - chaque q est un entier allant de 1 à 24 ; - R 7 is -H or -CH 3 ; - each q is an integer ranging from 1 to 24;
- chaque r est un entier allant de 1 à 8 ; - each r is an integer ranging from 1 to 8;
- chaque s est un entier allant de 0 à 6 ; - each s is an integer ranging from 0 to 6;
- chaque v est un entier allant de 1 à 6 ; le symbole représente un bras de liaison qui est une liaison directe ; un pont -S-S- ;
Figure imgf000007_0002
ou un groupe de formule -R11-(A)Z- ; - each v is an integer ranging from 1 to 6; the symbol represents a link arm which is a direct link; an -SS- bridge;
Figure imgf000007_0002
or a group of formula -R 11 -(A) Z -;
- Ru est une liaison directe, un groupe R6-(CRcRd)r-CO-, R6-(CH2CH2O)q-(CH2)s-CO-, R6-(CRcRdX-NH-, où R6, Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - Ru is a direct bond, a group R 6 -(CR c R d ) r -CO-, R 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R 6 -(CR c R d X-NH-, where R 6 , R c , R d , q, r and s are as defined above;
- A est un résidu d'acide aminé ; - A is an amino acid residue;
- z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; le symbole représente un espaceur qui est une liaison directe ou un groupe de formule :
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000008_0001
- z is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; the symbol represents a spacer which is a direct bond or a group of formula:
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000008_0001
- G est un sulfate, un sucre, un glucuronide, ou un galactoside, ledit sucre étant un groupe saccharide choisi de préférence parmi un acide bêta-glucuronique, un bêta-D- galactose, un bêta-D-glucose, un alpha-D-mannose, un N-acétyl-D-glucosaminyle, un N- acétyl-D-galactosaminyle, un D-glucuronyle, un L-iduronyle, un D-glucopyranosyle, un D- galactopyranosyle, un D-mannopyranosyle ou un L-fucopyranosyle, de préférence G est un sulfate, un acide bêta-glucuronique, ou un bêta-D-galactose ; - G is a sulfate, a sugar, a glucuronide, or a galactoside, said sugar being a saccharide group preferably chosen from a beta-glucuronic acid, a beta-D-galactose, a beta-D-glucose, an alpha-D -mannose, N-acetyl-D-glucosaminyl, N-acetyl-D-galactosaminyl, D-glucuronyl, L-iduronyl, D-glucopyranosyl, D-galactopyranosyl, D-mannopyranosyl or L-fucopyranosyl , preferably G is sulfate, beta-glucuronic acid, or beta-D-galactose;
- Ri2 est -H ou -NO2 ; - Ri2 is -H or -NO 2 ;
M est une molécule d'intérêt ; étant entendu que : chaque conjugué comprend au moins une tête d'accroche de formule (Ha) ou (Ilb), dans chacun des conjugués susmentionnés, l'un au moins du bras de liaison et de l'espaceur est présent ; ledit procédé de préparation comprenant : al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (ITb):
Figure imgf000008_0002
bl) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (II'a) ou avec un composé de formule (II'b), ou bien avec un composé de formule (II'c) ou avec un composé de formule (ll'd) :
Figure imgf000009_0002
dans lesquelles T et W sont tels que définis ci-dessus ; étant entendu que : M is a molecule of interest; it being understood that: each conjugate comprises at least one attachment head of formula (Ha) or (IIb), in each of the aforementioned conjugates, at least one of the connecting arm and of the spacer is present; said method of preparation comprising: al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb):
Figure imgf000008_0002
b1) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (II'a) or with a compound of formula (II'b), or else with a compound of formula (II'c) or with a compound of formula (ll'd):
Figure imgf000009_0002
in which T and W are as defined above; Being heard that :
- si un composé (II'a) est utilisé à l'étape al) et un composé (II'a) est utilisé à l'étape bl), les deux composés (II'a) ont une structure différente ; - if a compound (II'a) is used in step al) and a compound (II'a) is used in step bl), the two compounds (II'a) have a different structure;
- si un composé (ITb) est utilisé à l'étape al) et un composé (ITb) est utilisé à l'étape bl), les deux composés (Il'b) ont une structure différente ; cl) la réaction du composé obtenu à l'étape bl) avec deux composés identiques ou non, répondant chacun à la formule (III) :
Figure imgf000009_0001
dans laquelle : - if a compound (ITb) is used in step al) and a compound (ITb) is used in step bl), the two compounds (II'b) have a different structure; cl) the reaction of the compound obtained in step b1) with two compounds, which may or may not be identical, each corresponding to the formula (III):
Figure imgf000009_0001
in which :
- R8 est R6-(CRcRd)r-CO-, R6-(CH2CH2O)q-(CH2)s-CO-, R6-(CRcRd)r-NH-, où R6, Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - R 8 is R 6 -(CR c R d ) r -CO-, R 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R 6 -(CR c R d ) r - NH-, where R 6 , R c , R d , q, r and s are as defined above;
- le bras de liaison l'espaceur et M sont tels que définis ci-
Figure imgf000009_0004
Figure imgf000009_0005
dessus, M étant identique ou non dans chaque composé (III) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (II'b) ; b2) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (IV) :
Figure imgf000009_0003
dans laquelle : i) la tête d'accroche est un composé de formule (II"a), (II"b), (II"c), ou (II"d) : - the connecting arm, the spacer and M are as defined below
Figure imgf000009_0004
Figure imgf000009_0005
above, M being identical or not in each compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (II'b); b2) reaction of the compound obtained in step a1) with a compound of formula (IV):
Figure imgf000009_0003
in which: i) the grip head is a compound of formula (II"a), (II"b), (II"c), or (II"d):
Figure imgf000010_0001
dans lesquelles :
Figure imgf000010_0001
in which :
- T est tel que défini ci-dessus ; - T is as defined above;
- Y est -OR'a, -COR'2, -CONR'3R'4 ou -NR'3COR'4 -Y is -OR'a, -COR' 2 , -CONR'3R'4 or -NR'3COR'4
- R'a est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRdX-R'5, -COR'b, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; - R' a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d X-R' 5 , -COR' b , -(CR c R d ) r -NHCO -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R′5;
R'b est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRdkR'5,R' b is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d kR' 5 ,
-O(CRcRd)r-R'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 OU -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ;-O(CR c R d ) r -R'5, -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r - R'5 OR -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- R'2 est -OH, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRdX-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CRcRd)r- R'5, -O(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 ou -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; - R' 2 is -OH, -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d X-R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -( CH 2 ) r -R' 5 , -O(CR c R d ) r - R' 5 , -O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5 or -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- R3 est -H, -(C1-C6)alkyle ou -(CH2)V-SO3H, de préférence R'3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R′ 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
R4 est -(CH2CH2O)qR'5, -(CRcRr)R'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R'5]2, -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R'5]2, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-R'5]2, ou -CH-[(CRcRd),- NHCO-(CRcRd)r-R'5]2, de préférence R'4 est -(CH2CH2O)qR'5, -(CRcRd)rR'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5, OU -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R' 5 , -(CR c R r )R' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R'5, -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5, -CH-[(CR c R d ) r -CONH-( CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R' 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R' 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R' 5 ] 2 , or -CH-[(CR c R d ),-NHCO- (CR c R d ) r -R' 5 ] 2 , preferably R' 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R' 5 , -(CR c R d ) r R' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R' 5 , OR -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- chaque R'5 est -(CH2)SR'6 ou -(CH2)SR'7 ; - each R′ 5 is —(CH 2 ) S R′ 6 or —(CH 2 ) S R′ 7 ;
- R'6 est choisi parmi :
Figure imgf000011_0001
- R′ 6 is chosen from:
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0001
- R'7 est -COOH ou -NR'8R'9 ; - R' 7 is -COOH or -NR' 8 R'9;
- R'8 est -H, -(C1-C6)alkyle ; - R'9 est -H, -(C1-C6)alkyle ; - R' 8 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl; - R' 9 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R'10 est -H ou -CH3 ; où Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; et ii) le bras de liaison est une liaison directe ; un pont -S-S- ; ou un groupe de formule - R'ii-(A)Z- ; - R'11- est une liaison directe, un groupe R'6-(CRcRd)r-CO-, R'6-(CH2CH2O)q-(CH2)s-CO-, R'6-- R' 10 is -H or -CH 3 ; where R c , R d , q, r and s are as defined above; and ii) the link arm is a direct link; an -SS- bridge; or a group of formula - R'ii-(A) Z -; - R' 11 - is a direct bond, a group R' 6 -(CR c R d ) r -CO-, R' 6 -(CH2CH 2 O) q -(CH2) s -CO-, R' 6 -
(CRcRd)r-NH-, où R'6, RC, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; (CR c R d ) r -NH-, where R′ 6 , RC, R d , q, r and s are as defined above;
- A est un résidu d'acide aminé ; - A is an amino acid residue;
- z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; et iii) l'espaceur et M sont tels que définis à l'étape cl), étant entendu que le bras de liaison et l'espaceur ne peuvent pas être simultanément une liaison directe ; c2) la réaction du composé obtenu à l'étape b2) avec un composé de formule (III) tel que défini à l'étape cl), la molécule d'intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (IV) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (ITb) ; b3) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c3) la réaction du composé obtenu à l'étape b3) avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, la molécule d'intérêt M du composé (IV) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (III) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (ITb) ; b3) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c4) la réaction du composé obtenu à l'étape b3) avec un composé de formule (II'a), (ITb), (II'c) ou (ITd) tel que défini ci-dessus ; dl) la réaction du composé obtenu à l'étape c4) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus, la molécule d'intérêt M étant identique ou non dans chaque composé (III). - z is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; and iii) the spacer and M are as defined in step c1), it being understood that the connecting arm and the spacer cannot simultaneously be a direct connection; c2) the reaction of the compound obtained in step b2) with a compound of formula (III) as defined in step cl), the molecule of interest M of the compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (IV); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb); b3) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III) as defined above; c3) the reaction of the compound obtained in step b3) with a compound of formula (IV) as defined above, the molecule of interest M of the compound (IV) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb); b3) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III) as defined above; c4) reacting the compound obtained in step b3) with a compound of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (ITd) as defined above; dl) the reaction of the compound obtained in step c4) with a compound of formula (III) as defined above, the molecule of interest M being identical or not in each compound (III).
Les conjugués anticorps-médicament de formule (I) peuvent également être préparés par un procédé comprenant : a2) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, dans laquelle la tête d'accroche est uniquement un composé de formule (II"a) ou (II"b) ; b4) la réaction du composé obtenu à l'étape a2) avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, M étant identique ou non dans chaque composé (IV), étant entendu que : The antibody-drug conjugates of formula (I) can also be prepared by a process comprising: a2) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the hook head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b4) reaction of the compound obtained in step a2) with a compound of formula (IV) as defined above, M being identical or not in each compound (IV), it being understood that:
- si un composé (II"a) est utilisé à l'étape a2) et un composé (II"a) est utilisé à l'étape b4), les deux composés (II"a) ont une structure différente ; - if a compound (II"a) is used in step a2) and a compound (II"a) is used in step b4), the two compounds (II"a) have a different structure;
- si un composé (II"b) est utilisé à l'étape a2) et un composé (II"b) est utilisé à l'étape b4), les deux composés (II"b) ont une structure différente ; ou bien a2) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, dans laquelle la tête d'accroche est uniquement un composé de formule (II"a) ou (II"b) ; b5) la réaction du composé obtenu à l'étape a2) avec un composé de formule (II'a), (Il'b), (II'c) ou (Il'd) tels que définis ci-dessus ; c5) la réaction du composé obtenu à l'étape b5) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus, la molécule d'intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (IV). - if a compound (II"b) is used in step a2) and a compound (II"b) is used in step b4), the two compounds (II"b) have a different structure; or else a2 ) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the attachment head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b5) reacting the compound obtained in step a2) with a compound of formula (II'a), (II'b), (II'c) or (II'd) as defined above; c5) the reaction of the compound obtained in step b5) with a compound of formula (III) as defined above, the molecule of interest M of the compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (IV).
L'étape al) du procédé de l'invention consiste à faire réagir un anticorps (terme qui inclut, comme indiqué ci-dessus, le fragment F(ab')2 dudit anticorps) avec une tête d'accroche de formule (II'a) ou (Il'b). L'anticorps, se lie à la tête d'accroche par une réaction de substitution des groupes Br présents dans la formule (II'a) ou (Il'b). Step a1) of the process of the invention consists in reacting an antibody (term which includes, as indicated above, the F(ab') 2 fragment of said antibody) with a hook head of formula (II' a) or (II'b). The antibody binds to the hook head by a substitution reaction of the Br groups present in the formula (II'a) or (II'b).
Dans certains modes de réalisation, l'anticorps est mis à réagir avec la tête d'accroche, en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche et l'agent réducteur sont présents en excès, par rapport à l'anticorps. On entend par « excès » (et ceci est applicable pour la description et les revendications) une quantité (exprimée en équivalent) au moins 2 fois supérieure, par exemple au moins 5 fois, au moins 10 fois ou au moins 15 fois supérieure. Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In some embodiments, the antibody is reacted with the hook head, in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, the hook head and the reducing agent are present in excess, relative to the antibody. By “excess” is meant (and this is applicable for the description and the claims) a quantity (expressed in equivalent) at least 2 times greater, for example at least 5 times, at least 10 times or at least 15 times greater. In certain embodiments, the grip head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape al) un « composé » de structure telle que représentée figure 2. At the end of step a1), a “compound” of structure as shown in FIG. 2 is obtained.
L'étape bl) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape al) avec une seconde tête d'accroche, distincte de celle utilisée à l'étape al), de formule (II'a), (Il'b), (II'c) ou (Il'd). De manière similaire à ce qui est indiqué pour l'étape al), l'anticorps se lie à la seconde tête d'accroche par une réaction de substitution des groupes Br présents dans la formule (II'a), (Il'b), (II'c) ou (Il'd). Step bl) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step al) with a second attachment head, distinct from that used in step al), of formula (II'a) , (Il'b), (II'c) or (Il'd). Similarly to what is indicated for step al), the antibody binds to the second hook head by a substitution reaction of the Br groups present in the formula (II'a), (II'b) , (II'c) or (Il'd).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape al) est mis à réagir avec la seconde tête d'accroche en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de seconde tête d'accroche et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape al). Dans certains modes de réalisation, on fait d'abord réagir le composé obtenu à l'étape al) avec l'agent réducteur, puis on ajoute la seconde tête d'accroche. Dans certains modes de réalisation, la seconde tête d'accroche est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) is reacted with the second attachment head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of second attachment head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a1). In certain embodiments, the compound obtained in step a1) is first reacted with the reducing agent, then the second attachment head is added. In certain embodiments, the second gripping head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape bl) un « composé » de structure telle que représentée figure 3. L'étape cl) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'issue de l'étape bl) avec deux composés identiques ou non de formule (III). At the end of step b1), a “compound” of structure as shown in FIG. 3 is obtained. Step c1) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained at the end of step b1) with two identical or different compounds of formula (III).
Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de chacun des composés de formule (III), par rapport au composé obtenu à l'étape bl). Dans certains modes de réalisation, les composés de formule (III) sont chacun en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. Dans certains modes de réalisation, les deux composés de formule (III) sont ajoutés concomitamment. Dans certains modes de réalisation, les deux composés de formule (III) sont ajoutés séquentiellement. In certain embodiments, an excess of each of the compounds of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b1). In certain embodiments, the compounds of formula (III) are each in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents. In certain embodiments, the two compounds of formula (III) are added concomitantly. In some embodiments, the two compounds of formula (III) are added sequentially.
La réaction entre le composé obtenu à l'étape bl) et les deux composés de formule (III) est mise en œuvre par chimie « click ». Cette réaction a lieu entre un groupe R6 porté par chacune des têtes d'accroches et un groupe R6 porté par chacun des composés de formule (III). De manière plus précise, la réaction de click s'effectue entre un diène (par exemple un azoture ou un diazo) et un diénophile (par exemple un alcène ou un alcyne), chacune de ces fonctions étant apportée par un groupe R6. Ainsi, la réaction de click peut s'effectuer entre un diène apporté par le groupe R6 de chacune des têtes d'accroche et un diénophile apporté par le groupe R6 du composé (III), ou bien entre un diénophile apporté par le groupe R6 de chacune des têtes d'accroche et un diène apporté par le groupe R6 du composé (III). Ces réactions de click sont bien connues de la personne du métier, étant entendu que les groupes R6 sont judicieusement choisis compatibles entre eux. Lorsque les deux composés de formule (III) sont ajoutés concomitamment, la réaction de click est effectuée en une seule étape. Lorsque les deux composés de formule (III) sont ajoutés séquentiellement, deux réactions de click successives sont mises en œuvre, l'ordre d'ajout des composés de formule (III) étant fonction de la compatibilité des fonctions de click (R6) utilisées. The reaction between the compound obtained in step b1) and the two compounds of formula (III) is carried out by “click” chemistry. This reaction takes place between an R 6 group carried by each of the attachment heads and an R 6 group carried by each of the compounds of formula (III). More specifically, the click reaction takes place between a diene (for example an azide or a diazo) and a dienophile (for example an alkene or an alkyne), each of these functions being provided by an R 6 group. Thus, the click reaction can take place between a diene provided by the R 6 group of each of the attachment heads and a dienophile provided by the R 6 group of compound (III), or else between a dienophile provided by the group R 6 of each of the attachment heads and a diene provided by the R 6 group of compound (III). These click reactions are well known to those skilled in the art, it being understood that the R 6 groups are judiciously chosen to be mutually compatible. When the two compounds of formula (III) are added concomitantly, the click reaction is carried out in a single step. When the two compounds of formula (III) are added sequentially, two successive click reactions are implemented, the order of addition of the compounds of formula (III) being a function of the compatibility of the click functions (R 6 ) used .
Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape al) et/ou le composé obtenu à l'étape bl) peu(ven)t être purifié(s) avant d'être utilisé(s) à l'étape suivante. De la même manière, lorsque la réaction de click est effectuée en une seule étape, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape cl) peut également être purifié. Lorsque deux réactions de click successives sont mises en œuvre à l'étape cl), une purification peut avoir lieu à l'issue de l'une ou l'autre réaction de click (ou bien des deux). La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. On obtient à l'issue de l'étape cl) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1B, ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b1) can be purified before being used in the next step. In the same way, when the click reaction is carried out in a single step, the mixture of conjugates obtained at the end of step c1) can also be purified. When two successive click reactions are implemented in step c1), a purification can take place at the end of one or the other click reaction (or of both). The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art. At the end of step c1), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B, or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
L'étape b2) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (IV). Step b2) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (IV).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape al) est mis à réagir avec le composé de formule (IV) en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (IV) et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape al). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (IV) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a1). In certain embodiments, the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape b2) un « composé » ayant l'une des structures telles que représentées figure 4. At the end of step b2), a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 4 is obtained.
L'étape c2) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape b2) avec un composé de formule (III). Cette étape s'effectue par réaction de click selon une méthode similaire à celle décrite pour l'étape cl). Step c2) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b2) with a compound of formula (III). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (III), par rapport au composé obtenu à l'étape b2). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (III) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b2). In certain embodiments, the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape al) et/ou le composé obtenu à l'étape b2) peu(ven)t être purifié(s) avant d'être utilisées) à l'étape suivante. De la même manière, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape c2) peut également être purifié. La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b2) can be purified before being used in the following step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step c2) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
On obtient à l'issue de l'étape c2) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1 B ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. At the end of step c2), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
L'étape b3) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (III). Step b3) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III).
Cette étape s'effectue par réaction de click selon une méthode similaire à celle décrite pour l'étape cl). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (III), par rapport au composé obtenu à l'étape al). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (III) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step a1). In some embodiments, the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape b3) un « composé » de structure telle que représentée figure 5. At the end of step b3), a “compound” of structure as shown in FIG. 5 is obtained.
L'étape c3) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape b3) avec un composé de formule (IV). Step c3) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b3) with a compound of formula (IV).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape b3) est mis à réagir avec le composé de formule (IV) en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (IV) et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape b3). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (IV) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, the compound obtained in step b3) is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step b3). In certain embodiments, the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape al) et/ou le composé obtenu à l'étape b3) peu(ven)t être purifié(s) avant d'être utilisées) à l'étape suivante. De la même manière, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape c3) peut également être purifié. La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b3) can be purified before being used in the next step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step c3) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
On obtient à l'issue de l'étape c3) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1 B ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. At the end of step c3), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
L'étape c4) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape b3) avec une seconde tête d'accroche, de formule (Il'a), (ITb), (II'c) ou (ITd). Step c4) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b3) with a second attachment head, of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (ITd).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape b3) est mis à réagir avec la seconde tête d'accroche en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de seconde tête d'accroche et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape b3). Dans certains modes de réalisation, on fait d'abord réagir le composé obtenu à l'étape b3) avec l'agent réducteur, puis on ajoute la seconde tête d'accroche. Dans certains modes de réalisation, la seconde tête d'accroche est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, the compound obtained in step b3) is reacted with the second attachment head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of second attachment head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step b3). In certain embodiments, the compound obtained in step b3) is first reacted with the reducing agent, then the second attachment head is added. In certain embodiments, the second gripping head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape c4) un « composé » ayant l'une des structures telles que représentées figure 6. At the end of step c4), a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 6 is obtained.
L'étape dl) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape c4) avec un composé de formule (III). Cette étape s'effectue par réaction de click selon une méthode similaire à celle décrite pour l'étape cl). Step dl) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step c4) with a compound of formula (III). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (III), par rapport au composé obtenu à l'étape c4). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (III) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step c4). In certain embodiments, the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape al) et/ou le composé obtenu à l'étape b3) et/ou le composé obtenu à l'étape c4) peu(ven)t être purifîé(s) avant d'être utilisé(s) à l'étape suivante. De la même manière, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape dl) peut également être purifié. La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. In certain embodiments, the compound obtained in step a1) and/or the compound obtained in step b3) and/or the compound obtained in step c4) can be purified before be used in the next step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step d1) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
On obtient à l'issue de l'étape dl) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1 B ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. At the end of step d1), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
L'étape a2) du procédé de l'invention consiste à faire réagir un anticorps avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, dans lequel la tête d'accroche répond uniquement à la formule (II"a) ou (II"b). L'anticorps se lie à la tête d'accroche du composé (IV) par une réaction de substitution des groupes Br présents dans la formule (II"a) ou (II"b).Step a2) of the process of the invention consists in reacting an antibody with a compound of formula (IV) as defined above, in which the attachment head corresponds only to formula (II"a) or (II"b). The antibody binds to the hook head of compound (IV) by a substitution reaction of the Br groups present in formula (II"a) or (II"b).
Dans certains modes de réalisation, l'anticorps est mis à réagir avec le composé de formule (IV) en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (IV) et d'agent réducteur, par rapport à l'anticorps. Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (IV) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In some embodiments, the antibody is reacted with the compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent. In some embodiments, an excess of compound of formula (IV) and reducing agent is used relative to the antibody. In certain embodiments, the compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape a2) un « composé » de structure telle que représentée figure 7. At the end of step a2), a “compound” with a structure as shown in FIG. 7 is obtained.
L'étape b4) consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape a2) avec un second composé de formule (IV). Step b4) consists in reacting the compound obtained in step a2) with a second compound of formula (IV).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape a2) est mis à réagir avec le second composé de formule (IV) en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de second composé de formule (IV) et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape a2). Dans certains modes de réalisation, le second composé de formule (IV) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape a2) peut être purifié avant d'être utilisé à l'étape suivante. De la même manière, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape b4) peut également être purifié. La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. In certain embodiments, the compound obtained in step a2) is reacted with the second compound of formula (IV) in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of second compound of formula (IV) and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a2). In certain embodiments, the second compound of formula (IV) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents. In certain embodiments, the compound obtained in step a2) can be purified before being used in the next step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step b4) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
On obtient à l'issue de l'étape b4) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1 B ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. At the end of step b4), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody.
L'étape b5) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape a2) avec une tête d'accroche de formule (II'a), (ITb), (II'c) ou (ITd). Step b5) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step a2) with an attachment head of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (ITd ).
Dans certains modes de réalisation, le composé obtenu à l'étape a2) est mis à réagir avec la tête d'accroche en présence d'un agent réducteur. Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de tête d'accroche et d'agent réducteur, par rapport au composé obtenu à l'étape a2). Dans certains modes de réalisation, on fait d'abord réagir le composé obtenu à l'étape a2) avec l'agent réducteur, puis on ajoute la tête d'accroche. Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In some embodiments, the compound obtained in step a2) is reacted with the grip head in the presence of a reducing agent. In certain embodiments, an excess of hook head and of reducing agent is used, relative to the compound obtained in step a2). In certain embodiments, the compound obtained in step a2) is first reacted with the reducing agent, then the attachment head is added. In certain embodiments, the grip head is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
On obtient à l'issue de l'étape b5) un « composé » ayant l'une des structures telles que représentées figure 8. At the end of step b5), a “compound” having one of the structures as represented in FIG. 8 is obtained.
L'étape c5) du procédé de l'invention consiste à faire réagir le composé obtenu à l'étape b5) avec un composé de formule (III). Step c5) of the process of the invention consists in reacting the compound obtained in step b5) with a compound of formula (III).
Cette étape s'effectue par réaction de click selon une méthode similaire à celle décrite pour l'étape cl). This step is carried out by click reaction according to a method similar to that described for step c1).
Dans certains modes de réalisation, on utilise un excès de composé de formule (III), par rapport au composé obtenu à l'étape b5). Dans certains modes de réalisation, le composé de formule (III) est en solution dans un solvant miscible à l'eau ou un mélange de solvants miscibles à l'eau. In certain embodiments, an excess of compound of formula (III) is used, relative to the compound obtained in step b5). In certain embodiments, the compound of formula (III) is in solution in a water-miscible solvent or a mixture of water-miscible solvents.
Dans certains modes de réalisation le composé obtenu à l'étape a2) et/ou le composé obtenu à l'étape b5) peu(ven)t être purifié(s) avant d'être utilisé(s) à l'étape suivante. De la même manière, le mélange de conjugués obtenu à l'issue de l'étape c5) peut également être purifié. La purification s'effectue selon des techniques bien connues de la personne du métier. In certain embodiments, the compound obtained in step a2) and/or the compound obtained in step b5) can be purified before being used in the following step. In the same way, the mixture of conjugates obtained at the end of step c5) can also be purified. The purification is carried out according to techniques well known to those skilled in the art.
On obtient à l'issue de l'étape c5) un mélange de conjugués dont le conjugué majoritaire est tel que représenté sur la Figure 1A, 1 B ou 1C. Ce conjugué majoritaire possède 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M portées par l'anticorps. Certains des modes de réalisation décrits ci-dessus font intervenir un agent réducteur. La personne du métier saura choisir judicieusement un tel agent parmi les composés utilisés de manière conventionnelle dans les réactions de bioconjugaison, à titre d'exemple on peut mentionner : le dithiothréitol, le bêta-mercaptoéthanol, l'hydrochlorure de tris(2- carboxyéthyljphosphine ou la tris(hydroxypropryl)phosphine. At the end of step c5), a mixture of conjugates is obtained, the majority conjugate of which is as represented in FIG. 1A, 1B or 1C. This majority conjugate has 2, 3 or 5 molecules of interest M carried by the antibody. Some of the embodiments described above involve a reducing agent. A person skilled in the art will be able to choose such an agent judiciously from the compounds used in the conventional manner in bioconjugation reactions, by way of example one can mention: dithiothreitol, beta-mercaptoethanol, tris(2-carboxyethyljphosphine or tris(hydroxypropryl)phosphine.
Dans certains modes de réalisation, le procédé conforme à l'invention comprend les étapes al), bl) et cl). In certain embodiments, the method in accordance with the invention comprises steps a1), b1) and c1).
Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche utilisée à l'étape al) répond à l'une des formules (II'a) ou (II'b), et la tête d'accroche utilisée à l'étape bl) répond à l'une des formules (II'a), (II'b), (II'c) ou (II'd), dans lesquelles : In certain embodiments, the attachment head used in step a1) corresponds to one of the formulas (II'a) or (II'b), and the attachment head used in step b1) corresponds to one of the formulas (II'a), (II'b), (II'c) or (II'd), in which:
- W est -CONR3R4 ou -NR3COR4, de préférence W est -CONR3R4 ; - W is -CONR 3 R 4 or -NR3COR 4 , preferably W is -CONR3R 4 ;
- R3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R4 est -(CH2CH2O)q-(CH2)r _R5, ou -(CRc j)r- 5 - R 4 is -(CH2CH2O)q-(CH2) r _ R5, or -(CR c j) r - 5
- R6 est choisi parmi :
Figure imgf000020_0001
- R 6 is chosen from:
Figure imgf000020_0001
- Rc, Rd sont tels que définis ci-dessus ; - R c , R d are as defined above;
- q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
- r est un entier allant de 1 à 6. Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche est un composé de formule (II'al),- r is an integer ranging from 1 to 6. In certain embodiments, the hook head is a compound of formula (II'al),
(II'a2), (II'a3), (II'a4), (II'a5), ou (II'a6) :
Figure imgf000021_0001
(II'a2), (II'a3), (II'a4), (II'a5), or (II'a6):
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0001
Dans certains modes de réalisation, le procédé conforme à l'invention comprend les étapes al), b2) et c2). Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche utilisé à l'étape b2) répond à l'une des formules (II"a), (II"b), (II"c) ou (II"d) dans lesquelles : In certain embodiments, the method in accordance with the invention comprises steps a1), b2) and c2). In certain embodiments, the attachment head used in step b2) corresponds to one of the formulas (II"a), (II"b), (II"c) or (II"d) in which :
- Y est -CONR'3R'4 OU -NR'3COR'4, de préférence Y est -CONR'3R'4 ; - Y is -CONR' 3 R' 4 OR -NR' 3 COR' 4 , preferably Y is -CONR' 3 R'4;
- R'3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R' 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R'4 est -(CH2CH2O)q_(CH2)r-R'5, ou -(CRcRd)r-R'5 ; - R'5 est -(CH2)SR'6 ; - R' 4 is -(CH 2 CH 2 O)q _ (CH2) r -R'5, or -(CR c R d ) r -R'5; - R' 5 is -(CH 2 ) S R'6;
- R'6 est choisi parmi : - R′ 6 is chosen from:
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0001
- Rc, Rd sont tels que définis ci-dessus ; - R c , R d are as defined above;
- q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
- r est un entier allant de 1 à 6. Dans certains modes de réalisation, la tête d'accroche est un composé de formule (IT'al), (II"a2), (II"a3), (II"a4), (II"a5), (II"a6), (II"a7), (II"a8) ou (II"bl) :
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000024_0001
- r is an integer ranging from 1 to 6. In certain embodiments, the attachment head is a compound of formula (IT'al), (II"a2), (II"a3), (II"a4) , (II"a5), (II"a6), (II"a7), (II"a8) or (II"bl):
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000025_0001
Dans certains modes de réalisation, le bras de liaison est une liaison directe (étant entendu dans ce cas que l'espaceur n'est pas une liaison directe). In certain embodiments, the connecting arm is a direct connection (it being understood in this case that the spacer is not a direct connection).
Dans certains modes de réalisation, le bras de liaison est un groupe de formule -Rn-(A)Z- dans laquelle Ru et A sont tels que définis ci-dessus, et z est égal à 2, 3 ou 4. In some embodiments, the linker is a group of formula -Rn-(A) Z- wherein Ru and A are as defined above, and z is 2, 3 or 4.
A est un résidu d'acide aminé qui peut être choisi dans le groupe constitué de : une valine, une citrulline, une phénylalanine, une lysine, un acide aspartique, une méthionine, une asparagine, une proline, une isoleucine, une alanine, une arginine, une glycine ou un acide glutamique. Avantageusement, z est égal à 2 ou 3, de préférence 2 et -(A)z- est un résidu d'acides aminés choisi parmi le résidu de : valine-citrulline ; phénylalanine-lysine ; valine-alanine ; valine-acide aspartique ; lysine-méthionine ; lysine-asparagine ; proline- isoleucine ; proline-lysine ; valine-lysine ; alanine-lysine ; phénylalanine-phénylalanine- lysine ; phénylalanine-phénylalanine-alanine ; arginine-arginine ; lysine-arginine ; lysine- acide glutamique ; glycine-arginine ; ou glycine-glycine-arginine (l'ordre des acides aminés est donné ici à titre indicatif, par exemple un résidu de citrulline-valine est également compris dans la définition de -(A)z-). A is an amino acid residue which may be selected from the group consisting of: valine, citrulline, phenylalanine, lysine, aspartic acid, methionine, asparagine, proline, isoleucine, alanine, arginine, a glycine or a glutamic acid. Advantageously, z is equal to 2 or 3, preferably 2 and -(A) z - is an amino acid residue chosen from the residue of: valine-citrulline; phenylalanine-lysine; valine-alanine; valine-aspartic acid; lysine-methionine; lysine-asparagine; proline-isoleucine; proline-lysine; valine-lysine; alanine-lysine; phenylalanine-phenylalanine-lysine; phenylalanine-phenylalanine-alanine; arginine-arginine; lysine-arginine; lysine-glutamic acid; glycine-arginine; or glycine-glycine-arginine (the order of the amino acids is given here as an indication, for example a residue of citrulline-valine is also included in the definition of -(A) z -).
Dans certains modes de réalisation, l'espaceur est une liaison directe (étant entendu dans ce cas que le bras de liaison n'est pas une liaison directe) ou un groupe de formule :
Figure imgf000026_0001
de préférence une liaison directe ou un groupe de formule :
Figure imgf000026_0002
In certain embodiments, the spacer is a direct bond (it being understood in this case that the link arm is not a direct bond) or a group of formula:
Figure imgf000026_0001
preferably a direct bond or a group of formula:
Figure imgf000026_0002
Dans certains modes de réalisation, M est un principe actif. A titre de principe actif susceptible d'être utilisé dans le cadre de l'invention, on peut citer les principes actifs de médicaments déjà autorisés et les molécules en cours d'évaluation thérapeutique, en particulier : In some embodiments, M is an active ingredient. By way of active principle capable of being used in the context of the invention, mention may be made of the active principles of medicinal products already authorized and the molecules undergoing therapeutic evaluation, in particular:
- les agents alkylants tels que : chlorambucile, chlornaphazine, cyclophosphamide, dacarbazine, estramustine, ifosfamide, méchloréthamine, chlorhydrate d'oxyde de méchloréthamine, mannomustine, mitobronitol, melphalan, mitolactol, pipobroman, novembichine, phénesterine, prednimustine, thiotépa, trofosfamide, moutarde à l'uracile, CC-1065 (y compris ses analogues synthétiques adozélésine, carzélésine et bizélésine), duocarmycine (y compris les analogues synthétiques KW-2189 et CBI-TMI), dimères de benzodiazépine (par exemple, dimères de pyrrolobenzodiazépine (PBD) ou tomaymycine, indolinobenzodiazépines, imidazobenzothiadiazépines, ou oxazolidino-benzodiazépines), nitro-urées (carmustine, lomustine, chlorozotocine, fotemustine, nimustine, ranimustine), alkylsulfonates (busulfan, tréosulfan, improsulfan et piposulfan), triazènes (dacarbazine), composés à base de platine (carboplatine, cisplatine, oxaliplatine), aziridines (benzodopa, carboquone, meturedopa, et uredopa), éthylène-imines et mélamines (incluant altrétamine, triéthylènemélamine, triéthylenephosphoramide, triéthylènethio- phosphaoramide et triméthylolomelamine) ; - alkylating agents such as: chlorambucil, chlornaphazine, cyclophosphamide, dacarbazine, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, mannomustine, mitobronitol, melphalan, mitolactol, pipobroman, novembichine, phenesterine, prednimustine, thiotepa, trofosfamide, mustard uracil, CC-1065 (including its synthetic analogs adozelesin, carzelesin and bizelesin), duocarmycin (including the synthetic analogs KW-2189 and CBI-TMI), benzodiazepine dimers (for example, pyrrolobenzodiazepine (PBD) dimers or tomaymycin, indolinobenzodiazepines, imidazobenzothiadiazepines, or oxazolidino-benzodiazepines), nitroureas (carmustine, lomustine, chlorozotocin, fotemustine, nimustine, ranimustine), alkylsulfonates (busulfan, treosulfan, improsulfan, and piposulfan), triazenes (dacarbazine), platinum compounds (carboplatin, cisplatin, oxaliplatin), aziridines (benzodopa, carboquone, meturedopa, and uredopa), ethyleneimines, and melamines (including altretamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphaoramide and trimethylolomelamine);
- les alcaloïdes végétaux tels que : alcaloïdes de Vinca (vincristine, vinblastine, vindésine, vinorelbine, navelbine), les taxoïdes (paclitaxel, docetaxol) et leurs analogues, les maytansinoïdes (DM1, DM2, DM3, DM4, maytansine et ansamitocines) et leurs analogues, les cryptophycines (en particulier la cryptophycine 1 et la cryptophycine 8), les épothilones, eleuthérobine, discodermolide, bryostatines, dolastatines, auristatines, tubulysines, céphalostatines, pancratistatines, sarcodictyine, spongistatines ; - plant alkaloids such as: Vinca alkaloids (vincristine, vinblastine, vindesine, vinorelbine, navelbine), taxoids (paclitaxel, docetaxol) and their analogues, maytansinoids (DM1, DM2, DM3, DM4, maytansine and ansamitocins) and their analogues, cryptophycins (in particular cryptophycin 1 and cryptophycin 8), epothilones, eleutherobin, discodermolide, bryostatins, dolastatins, auristatins, tubulysins, cephalostatins, pancratistatins, sarcodictyin, spongistatins;
- les inhibiteurs d'ADN topoisomérase tels que : épipodophylline (9-aminocamptothécine, camptothécine, crisnatol, daunomycine, étoposide, étoposide phosphate, irinotécan, mitoxantrone, novantrone, acides rétinoïques (rétinols), téniposide, topotecan, 9- nitrocamptothécine (RFS 2000), mitomycines (mitomycine C), bortezomib ; - DNA topoisomerase inhibitors such as: epipodophyllin (9-aminocamptothecin, camptothecin, crisnatol, daunomycin, etoposide, etoposide phosphate, irinotecan, mitoxantrone, novantrone, retinoic acids (retinols), teniposide, topotecan, 9-nitrocamptothecin (RFS 2000) , mitomycins (mitomycin C), bortezomib;
- les anti-métabolites tels que : les anti-folates (inhibiteurs DHFR (méthotrexate, trimétrexate, dénopterine, ptéroptérine, aminoptérine (acide 4-aminoptéroïque) et autres analogues de l'acide folique), les inhibiteurs de l'IMP déshydrogénase (acide mycophénolique, tiazofurine, ribavirine, EICAR), les inhibiteurs de ribonucléotide réductase (hydroxyurée, déferoxamine), les analogues de pyrimidine tels que : analogues d'uracile (ancitabine, azacitidine, 6-azauridine, capécitabine, carmofur, cytarabine, didésoxyuridine, doxifluridine, enocitabine, 5-fluorouracile, floxuridine, ratitrexed), analogues de cytosine (cytarabine, cytosine arabinoside, fludarabine), analogues de purine (azathioprine, fludarabine, mercaptopurine, thiamiprine, thioguanine), acide folinique ; - anti-metabolites such as: anti-folates (DHFR inhibitors (methotrexate, trimetrexate, denopterin, pteropterin, aminopterin (4-aminopteroic acid) and other analogues of folic acid), inhibitors of IMP dehydrogenase (acid mycophenolic acid, tiazofurin, ribavirin, EICAR), ribonucleotide reductase inhibitors (hydroxyurea, deferoxamine), pyrimidine analogues such as: uracil analogues (ancitabine, azacitidine, 6-azauridine, capecitabine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxifluridine, enocitabine, 5-fluorouracil, floxuridine, ratitrexed), cytosine analogs (cytarabine, cytosine arabinoside, fludarabine), purine analogs (azathioprine, fludarabine, mercaptopurine, thamiprine, thioguanine), folinic acid;
- les agents hormonaux tels que : anti-estrogènes (mégestrol, raloxifène, tamoxifène), agonistes LHRH (goséréline, acétate de leuprolide), anti-androgènes (bicalutamide, flutamide, calustérone, propionate de dromostanolone, épitiostanol, goséréline, leuprolide, mépitiostane, nilutamide, testolactone, trilostane), analogues de la vitamine D3 (CB 1093, EB 1089, KH 1060, cholécalciférol, ergocalciférol), thérapies photodynamiques (verteporfine, phthalocyanine, photosensibilisateur Pc4), cytokines (interféron-alpha, interféron-gamma, facteur de nécrose tumorale (TNF), protéines humaines contenant un domaine TNF) ; - les inhibiteurs de kinase tels que : BIBW 2992, CYT387, E7080, axitinib, bafetinib, bosutinib, cabozantinib, dasatinib, erlotinib, gefitinib, imatinib, iniparib, ispinesib, lapatinib, masitinib, mubritinib, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, ponatinib, ruxolitinib, sorafénib, sunitinib, tivozanib, vandetanib, vismodegib ; - hormonal agents such as: anti-estrogens (megestrol, raloxifene, tamoxifen), LHRH agonists (goserelin, leuprolide acetate), anti-androgens (bicalutamide, flutamide, calusterone, dromostanolone propionate, epitiostanol, goserelin, leuprolide, mepitiostane, nilutamide, testolactone, trilostane), vitamin D3 analogues (CB 1093, EB 1089, KH 1060, cholecalciferol, ergocalciferol), photodynamic therapies (verteporfin, phthalocyanine, photosensitizer Pc4), cytokines (interferon-alpha, interferon-gamma, tumor necrosis (TNF), human proteins containing a TNF domain); - kinase inhibitors such as: BIBW 2992, CYT387, E7080, axitinib, bafetinib, bosutinib, cabozantinib, dasatinib, erlotinib, gefitinib, imatinib, iniparib, ispinesib, lapatinib, masitinib, mubritinib, nilotinib, pazopanib, pegaptanib, ponatinib, ruxolitinib , sorafenib, sunitinib, tivozanib, vandetanib, vismodegib;
- les inhibiteurs de poly(ADP-ribose)polymérase (PARP) tels que : BGB-290, CEP 9722,- poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) inhibitors such as: BGB-290, CEP 9722,
E7016, 3-aminobenzamide, niraparib, olaparib, talazoparib, veliparib ; E7016, 3-aminobenzamide, niraparib, olaparib, talazoparib, veliparib;
- les immunomodulateurs tels que : thalidomide, lénalidomide, pomalidomide ; - immunomodulators such as: thalidomide, lenalidomide, pomalidomide;
- une toxine telle que l'exotoxine de pseudomonas (PE), la deBouganin, la Bouganin ;- a toxin such as pseudomonas exotoxin (PE), deBouganin, Bouganin;
- l'anthracycline et les dérivés de ce principe actif ; - anthracycline and derivatives of this active ingredient;
- les oligonucléotides. - oligonucleotides.
Dans un mode de réalisation particulier, le principe actif est choisi parmi le méthotrexate, un immunomodulateur, la duocarmycine, la combrétastatine, la calichéamicine, la monométhyle auristatine E (MMAE), la monométhyle auristatine F (MMAF), la maytansine, DM1, DM4, SN38, l'amanitine et ses analogues, la pyrrolobenzodiazépine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la pyrrolopyridodiazépine, un dimère de pyrrolopyridodiazépine, un inhibiteur de l'histone désacétylase, un inhibiteur de tyrosine kinase, et la ricine, de préférence le principe actif est l'amanitine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la MMAF ou la MMAE, ces deux dernières étant représentées par les formules suivantes :
Figure imgf000028_0001
In a particular embodiment, the active principle is chosen from methotrexate, an immunomodulator, duocarmycin, combretastatin, calicheamicin, monomethyl auristatin E (MMAE), monomethyl auristatin F (MMAF), maytansine, DM1, DM4 , SN38, amanitine and its analogues, pyrrolobenzodiazepine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, pyrrolopyridodiazepine, a pyrrolopyridodiazepine dimer, a histone deacetylase inhibitor, a tyrosine kinase inhibitor, and ricin, preferably the active principle is amanitine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, MMAF or MMAE, the latter two being represented by the following formulas:
Figure imgf000028_0001
Dans certains modes de réalisation, M est un chélateur de radionucléide. A titre de chélateur de radionucléide susceptible d'être utilisé dans le cadre de l'invention, on peut citer la sarcophagine, le DOTA (l,4,7,10-tétraazacyclododécane-A(/V,/V',/V"-tétraacétique acide), DOTAGA (tétraazacyclododécane triacétique acide glutarique acide), le NODA (l,4,7-triazacyclononane-l,4-diacétique acide), le NODAGA (triazacyclononane diacétique acide glutarique acide), le NOTA (l,4,7-triazacyclononane-l,4,7-triacétique acide) et le MANOTA (méthyle amino triazacyclononane triacétique acide). In some embodiments, M is a radionuclide chelator. As a radionuclide chelator capable of being used in the context of the invention, it is possible cite sarcophagine, DOTA (1,4,7,10-tetraazacyclododecane-A(/V,/V',/V"-tetraacetic acid), DOTAGA (tetraazacyclododecane triacetic acid glutaric acid), NODA (1,4, 7-triazacyclononane-l,4-diacetic acid), NODAGA (triazacyclononane diacetic acid glutaric acid), NOTA (l,4,7-triazacyclononane-l,4,7-triacetic acid) and MANOTA (methyl amino triazacyclononane triacetic acid). acid).
Dans certains modes de réalisation, l'anticorps ou le fragment FCatQz dudit anticorps se lie à un antigène spécifique d'un cancer. L'antigène spécifique du cancer peut être, par exemple, CDla, CD3, CD4, CD13, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD30, CD33, CD34, CD37, CD39, CD40, CD44, CD47, CD52, CD56, CD66e, CD70, CD72, CD73, CD74, CD79, CD80, CD86, CD117, CD138, CD194, CD205, CD227, VEGF, EpCAM, GPIIb, GPIIIa, TNF alpha, TNFR, TNT, Lewis Y, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, AXL, Protéine F, IgE-Fc, C5, IL- 6R, IL12, IL15, IL18, IL23, IL-1, TPO-R, GPNMB, PSMA, PSA, PAP, PSM, Cripto, Récepteur 1 des folates, récepteurs de l'endothéline ETB, STEAP1, SLC44A4 (AGS-5), AGS-16, Guanylyl cyclase C, EGFRvIII, Mésothéline, IL2R, A33, Can, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR-3, TGFbeta, TGFbetaR, FGF, FGFR, PDGF, PDGFR, Ang-1, Ang-2, intégrine, RANK-L, BLyS, c- MET, DR, TCRalpha,beta, ICOS, EphA2, CA6, ENPP3, FOLR1, Nectine-4, TIM-1, facteur tissulaire, LIV-1, TLR-7, AFP, HLA-DR, antigène carcinoembryonnaire (ACE), TAG-72, protéine de liaison des folates, G250, gangliosides, collagène de type 4 (collagène IV), collagène de type 18 (collagène XVIII), CA19-9, pl85HER2, protéine d'activation des fibroblastes (FAP), ténascine, métalloprotéinases, l'endosialine, anhydrase carbonique, Galectine 9, Aldolase A, eIFgamma4, Galectine 4, HERKV-K10, p53, NY-LU-12, Restin, NY- CO-38, SSX2, NY-ESO-1, SCP-1, HGFR, PTK 7, CCK-4, PTP-LAR, CDCP1, CADM1, IGSF4, BCAM, CEACAM6, JAM-A, PTGFRN (CD9P-1), MCAM, MCP, EMMPRIN, TfR, ClqR, hTERT, Survivine, MDM2, CYP1B1, MART-1, MART-2, protéines mélanosomales, gplOO, CDC27, MAGEs, WT1, MUM-1, MUM-2, MUM-3, BRAF, TPI, fibronectine, K-ras, beta-caténine, CDK4, caspase-8, pl4ARF, pl6INK4a, bcr-abl, SYT-SSX, TRP-1, TRP-2, GnT-V, tyrosinase, TEL-AML1, protéinase 3, EBV-EBNA, HTLV-1 tax, HPV16-E7, HLA-A2 muté, HAÏ, SART3, CEACAM5, ESAT-6, RANK, fibrine, TF, PRAME, CA19-9, CA50, CA195, CAM17.1/WGA, beta-MG, DU-PAN2, HE4, transferrine, transthyrétine, ApoAl, TROP-2, CTLA-4, GITR, PD- 1, PD-L1, c-KIT, CDllb-CD18 intégrine hétérodimère, DNA/Histone Hl, protéoglycane, fibrinogène, le grand antigène T SV40, SC-Ag, ESA, mucine, CCR4, MTX1, MTX2, PECAM, Tn, cathepsine D, TYRO-3, MER, ou un complexe PF4/héparine. Dans certains modes de réalisation, l'anticorps se lie à HER2, CD30 ou CD56. Il peut donc par exemple s'agir d'un anticorps anti-HER2, d'un anticorps anti-CD30 ou d'un anticorps anti-CD56. In some embodiments, the antibody or FCatQz fragment of said antibody binds to a cancer-specific antigen. The cancer-specific antigen can be, for example, CDla, CD3, CD4, CD13, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD30, CD33, CD34, CD37, CD39, CD40, CD44, CD47, CD52, CD56, CD66e, CD70, CD72, CD73, CD74, CD79, CD80, CD86, CD117, CD138, CD194, CD205, CD227, VEGF, EpCAM, GPIIb, GPIIIa, TNF alpha, TNFR, TNT, Lewis Y, EGFR, HER-2, HER-3, HER-4, AXL, Protein F, IgE-Fc, C5, IL-6R, IL12, IL15, IL18, IL23, IL-1, TPO-R, GPNMB, PSMA, PSA, PAP, PSM, Cripto , Folate receptor 1, ETB endothelin receptors, STEAP1, SLC44A4 (AGS-5), AGS-16, Guanylyl cyclase C, EGFRvIII, Mesothelin, IL2R, A33, Can, VEGFR-1, VEGFR-2, VEGFR- 3, TGFbeta, TGFbetaR, FGF, FGFR, PDGF, PDGFR, Ang-1, Ang-2, integrin, RANK-L, BLyS, c-MET, DR, TCRalpha,beta, ICOS, EphA2, CA6, ENPP3, FOLR1, Nectin-4, TIM-1, tissue factor, LIV-1, TLR-7, AFP, HLA-DR, carcinoembryonic antigen (CEA), TAG-72, folate binding protein, G250, gangliosides, collagen type 4 ( collagen IV), collagen type 18 (collagen XVIII), CA19-9, pl85HER2, fibroblast activating protein (FAP), tenascin, metalloproteinases, endosialin, carbonic anhydrase, Galectin 9, Aldolase A, eIFgamma4, Galectin 4 , HERKV-K10, p53, NY-LU-12, Restin, NY-CO-38, SSX2, NY-ESO-1, SCP-1, HGFR, PTK 7, CCK-4, PTP-LAR, CDCP1, CADM1, IGSF4, BCAM, CEACAM6, JAM-A, PTGFRN (CD9P-1), MCAM, MCP, EMMPRIN, TfR, ClqR, hTERT, Survivin, MDM2, CYP1B1, MART-1, MART-2, melanosomal proteins, gplOO, CDC27, MAGEs, WT1, MUM-1, MUM-2, MUM-3, BRAF, TPI, fibronectin, K-ras, beta-catenin, CDK4, caspase-8, pl4ARF, pl6INK4a, bcr-abl, SYT-SSX, TRP- 1, TRP-2, GnT-V, tyrosinase, TEL-AML1, proteinase 3, EBV-EBNA, HTLV-1 tax, HPV16-E7, mutated HLA-A2, HAI, SART3, CEACAM5, ESAT-6, RANK, fibrin , TF, PRAME, CA19-9, CA50, CA195, CAM17.1/WGA, beta-MG, DU-PAN2, HE4, transferrin, transthyretin, ApoAl, TROP-2, CTLA-4, GITR, PD-1, PD -L1, c-KIT, CDllb-CD18 heterodimeric integrin, DNA/Histone Hl, proteoglycan, fibrinogen, large T antigen SV40, SC-Ag, ESA, mucin, CCR4, MTX1, MTX2, PECAM, Tn, cathepsin D, TYRO -3, MER, or a PF4/heparin complex. In some embodiments, the antibody binds to HER2, CD30 or CD56. It can therefore for example be an anti-HER2 antibody, an anti-CD30 antibody or an anti-CD56 antibody.
L'anticorps peut être d'origine mammifère (par exemple humain ou de souris), murine, chimérique, humanisé ou humain. Il s'agit de préférence d'un anticorps monoclonal produit de manière recombinante par des cellules génétiquement modifiées selon des techniques largement décrites dans la littérature. The antibody can be of mammalian (eg human or mouse), murine, chimeric, humanized or human origin. It is preferably a monoclonal antibody produced recombinantly by genetically modified cells according to techniques widely described in the literature.
Dans certains modes de réalisation, l'anticorps est de type IgG, par exemple IgGl, IgG2,In certain embodiments, the antibody is of the IgG type, for example IgG1, IgG2,
IgG3 ou IgG4. IgG3 or IgG4.
Les composés de formule (III) :
Figure imgf000030_0001
peuvent être obtenus de manière conventionnelle, par exemple par couplage de type peptidique entre d'une part le bras de liaison (portant le groupe Rs) et l'espaceur, et d'autre part entre l'espaceur et M. Un tel couplage s'effectue de manière classique entre un groupe carboxylique porté par le bras de liaison (respectivement, l'espaceur), et un groupe amine porté par l'espaceur (respectivement M). The compounds of formula (III):
Figure imgf000030_0001
can be obtained in a conventional manner, for example by coupling of the peptide type between on the one hand the connecting arm (carrying the Rs group) and the spacer, and on the other hand between the spacer and M. Such a coupling s is carried out in a conventional manner between a carboxylic group carried by the connecting arm (respectively, the spacer), and an amine group carried by the spacer (respectively M).
Les composés de formule (IV) :
Figure imgf000030_0002
peuvent être achetés ou obtenus par exemple comme décrit dans la demande WO 2022/018371 ou dans la demande WO 2020/234541. En particulier, lorsque la tête d'accroche de formule (II"a), (II"b), (II"c) ou (II"d) comprend un substituant Y = COR'2 avec R'2 = OH, son couplage avec le bras de liaison peut intervenir lorsque ce dernier est un groupe de formule -R'n-(A)Z- (et R'11- = liaison directe), via une liaison peptidique entre le groupe carboxylique provenant de Y et un groupe amino provenant de A (résidu d'acide aminé). Lorsque le bras de liaison est absent et que la tête d'accroche de formule (II"a), (II"b), (II"c) ou (II"d) comprend un substituant Y = COR'2 avec R'2 = OH, le couplage de la tête d'accroche avec l'espaceur intervient, toujours via une liaison peptidique, entre le groupe carboxylique provenant de Y et un groupe amino provenant de l'espaceur. The compounds of formula (IV):
Figure imgf000030_0002
can be purchased or obtained for example as described in application WO 2022/018371 or in application WO 2020/234541. In particular, when the attachment head of formula (II"a), (II"b), (II"c) or (II"d) comprises a substituent Y = COR' 2 with R' 2 = OH, its coupling with the linker can occur when the latter is a group of formula -R'n-(A) Z - (and R' 11 - = direct link), via a peptide bond between the carboxylic group coming from Y and a amino group from A (amino acid residue). When the connecting arm is absent and the attachment head of formula (II"a), (II"b), (II"c) or (II"d) comprises a substituent Y = COR' 2 with R' 2 = OH, the coupling of the attachment head with the spacer occurs, still via a peptide bond, between the carboxylic group coming from Y and an amino group coming from the spacer.
De manière similaire le couplage entre la tête d'accroche et le bras de liaison (ou le cas échéant, l'espaceur) peut intervenir via une liaison peptidique quand R'5 est -(CH2)SR'7 avec R'7 = -COOH, comme expliqué ci-dessus. Le couplage entre la tête d'accroche et l'espaceur, quand R'5 est -(CH2)SR'7 avec R'7 = -NR'5R9g peut intervenir via une liaison peptidique entre le groupe amino provenant de R'7 et un groupe carboxylique provenant de l'espaceur. Similarly, the coupling between the attachment head and the connecting arm (or, where appropriate, the spacer) can occur via a peptide bond when R' 5 is -(CH 2 ) S R' 7 with R' 7 = -COOH, as explained above. The coupling between the attachment head and the spacer, when R' 5 is -(CH 2 ) S R'7 with R' 7 = -NR' 5 R 9 g can occur via a peptide bond between the amino group coming from of R' 7 and a carboxylic group originating from the spacer.
Le procédé de préparation de l'invention permet d'obtenir un mélange de conjugués anticorps-médicament comprenant majoritairement (c.à.d. > 50% en masse) soit un conjugué de structure (A), soit un conjugué de structure (B), soit un conjugué de structure (C). Ce mélange de conjugués est donc caractérisé en ce qu'il contient majoritairement soit un conjugué qui comprend 2 molécules d'intérêt M fixées sur l'anticorps, soit un conjugué qui comprend 3 molécules d'intérêt M fixées sur l'anticorps, soit un conjugué qui comprend 5 molécules d'intérêt M fixées sur l'anticorps. Les molécules d'intérêt M fixées sur chaque anticorps peuvent être identiques ou différentes. Un mélange comprenant majoritairement un conjugué de structure (A) ne comprend ni conjugué de structure (B) ni conjugué de structure (C), mais comprend de façon minoritaire (< 50% en masse) un ou plusieurs sous-produit de la réaction ayant conduit à l'obtention du conjugué de structure (A). Un mélange comprenant majoritairement un conjugué de structure (B) ne comprend ni conjugué de structure (A) ni conjugué de structure (C), mais comprend de façon minoritaire (< 50% en masse) un ou plusieurs sous-produit de la réaction ayant conduit à l'obtention du conjugué de structure (B). Un mélange comprenant majoritairement un conjugué de structure (C) ne comprend ni conjugué de structure (A) ni conjugué de structure (B), mais comprend de façon minoritaire (< 50% en masse) un ou plusieurs sous-produit de la réaction ayant conduit à l'obtention du conjugué de structure (C). La proportion de l'espèce attendue (2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M) est déterminée par analyse SMHR (Spectrométrie de Masse Haute Résolution) en conditions dénaturantes. Lorsque les conjugués de structure (A), (B) ou (C) comprennent un anticorps entier, l'analyse est réalisée soit sur le composé tel quel, soit après digestion des conjugués par IdeS, sur le fragment FCab^. Le mélange de conjugués obtenu par le procédé de l'invention peut être présent dans une composition, qui peut être par exemple une composition pharmaceutique contenant un ou plusieurs excipients et/ou véhicules pharmaceutiquement acceptables. The preparation process of the invention makes it possible to obtain a mixture of antibody-drug conjugates comprising mainly (i.e. > 50% by mass) either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B ), or a conjugate of structure (C). This mixture of conjugates is therefore characterized in that it mainly contains either a conjugate which comprises 2 molecules of interest M attached to the antibody, or a conjugate which comprises 3 molecules of interest M attached to the antibody, or a conjugate which comprises 5 molecules of interest M attached to the antibody. The molecules of interest M attached to each antibody can be identical or different. A mixture mainly comprising a conjugate of structure (A) does not comprise either a conjugate of structure (B) or a conjugate of structure (C), but comprises in a minor way (<50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (A). A mixture mainly comprising a conjugate of structure (B) does not comprise either a conjugate of structure (A) or a conjugate of structure (C), but comprises in a minor way (<50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (B). A mixture mainly comprising a conjugate of structure (C) does not comprise either a conjugate of structure (A) or a conjugate of structure (B), but comprises in a minor way (<50% by mass) one or more by-products of the reaction having leads to obtaining the conjugate of structure (C). The proportion of the expected species (2, 3 or 5 molecules of interest M) is determined by HRMS (High Resolution Mass Spectrometry) analysis under denaturing conditions. When the conjugates of structure (A), (B) or (C) comprise a whole antibody, the analysis is carried out either on the compound as such, or after digestion of the conjugates with IdeS, on the FCab^ fragment. The mixture of conjugates obtained by the method of the invention may be present in a composition, which may for example be a pharmaceutical composition containing one or more pharmaceutically acceptable excipients and/or vehicles.
Ainsi, selon un autre aspect, l'invention concerne une composition comprenant un mélange de conjugués anticorps-médicament, tel que défini ci-dessus, susceptible d'être obtenu par le procédé décrit ci-dessus. Comme indiqué ci-dessus, ce mélange contient majoritairement un conjugué anticorps-médicament qui comprend 2, 3 ou 5 molécules d'intérêt M fixées sur l'anticorps. Thus, according to another aspect, the invention relates to a composition comprising a mixture of antibody-drug conjugates, as defined above, capable of being obtained by the method described above. As stated above, this mixture contains predominantly an antibody-drug conjugate which comprises 2, 3 or 5 molecules of interest M attached to the antibody.
Dans certains modes de réalisation, lorsque le mélange contient majoritairement un conjugué de structure (A), les 2 molécules M fixées sur l'anticorps sont différentes l'une de l'autre. In certain embodiments, when the mixture mainly contains a conjugate of structure (A), the 2 molecules M attached to the antibody are different from each other.
Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition telle que définie ci-dessus pour utilisation comme médicament. According to another aspect, the invention relates to a composition as defined above for use as a medicament.
L'invention est illustrée par les exemples ci-après, donnés à titre purement illustratif. Dans ces exemples, on utilise les abréviations suivantes : The invention is illustrated by the examples below, given purely by way of illustration. In these examples, the following abbreviations are used:
DAR = ratio drogue - anticorps DAR = drug-antibody ratio
DCC = dicyclohexylcarbodiimide DCC = dicyclohexylcarbodiimide
DIPEA = A(/V-diisopropyléthylamine DIPEA = A(/V-diisopropylethylamine
DMAP = 4-diméthylaminopyridine DMAP = 4-dimethylaminopyridine
DMF = A(/V-diméthylformamide DMF = A(/V-dimethylformamide
DM SO = diméthyl sulfoxyde DM SO = dimethyl sulfoxide
EDTA = acide éthylènediaminetétraacétique EDTA = ethylenediaminetetraacetic acid
ESI : Ionisation par electrospray ESI: Electrospray Ionization
HCl = acide chlorhydrique HCl = hydrochloric acid
HOBt = hydroxybenzotriazole HOBt = hydroxybenzotriazole
MeCN = acétonitrile MeCN = acetonitrile
MeOH = méthanol MeOH = methanol
MMAE = monométhyle auristatine E MMAE = Monomethyl Auristatin E
MMAF = monométhyle auristatine F MMAF = Monomethyl Auristatin F
NaCI = chlorure de sodium NaCI = sodium chloride
RMN : Résonnance magnétiquer nucléaire NMR: Nuclear Magnetic Resonance
SMHR : Spectrométrie de masse haute résolution HRMS: High Resolution Mass Spectrometry
TA = température ambiante (20 °C sauf indication contraire) TA = ambient temperature (20°C unless otherwise specified)
TFA = acide trifluoroacétique tR = temps de rétention TFA = trifluoroacetic acid tR = retention time
UV = ultra-violet v/v = rapport volume sur volume UV = ultra-violet v/v = volume to volume ratio
Méthodes d'analyse Analytical methods
Spectroscopie de résonance magnétique nucléaire (RMN) Les spectres de résonance magnétique nucléaire (RMN) du proton 1H ont été réalisés sur un appareil Bruker Ultrashield 300 (300 MHz ^H)). Les analyses ont été réalisées dans le méthanol deutéré (CD3OD). Les déplacements chimiques (5) sont mesurés en parties par million (ppm) par rapport au signal résiduel du méthanol deutéré (^H = 3,31 ppm). Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) The 1 H proton nuclear magnetic resonance (NMR) spectra were carried out on a Bruker Ultrashield 300 apparatus (300 MHz ^H)). The analyzes were carried out in deuterated methanol (CD 3 OD). Chemical shifts (5) are measured in parts per million (ppm) relative to the residual signal of deuterated methanol (^H = 3.31 ppm).
Les constantes de couplage ( ) sont exprimées en Hertz (Hz) et la multiplicité est décrite de la façon suivante : m = multiplet, s = singulet, t = triplet. The coupling constants ( ) are expressed in Hertz (Hz) and the multiplicity is described as follows: m = multiplet, s = singlet, t = triplet.
Spectrométrie de masse à haute résolution (SMHR) High Resolution Mass Spectrometry (HRMS)
La masse exacte des composés synthétisés a été déterminée par spectrométrie de masse haute résolution (SMHR) en mode positif ou négatif avec la technique d'ionisation par électronébulisation ESI, sur un spectromètre de masse Bruker maXis couplé à un système Dionex Ultimate 3000 RSLC de la plateforme « Fédération de Recherche » de l'ICOA/CBM (FR2708)). The exact mass of the synthesized compounds was determined by high resolution mass spectrometry (HRMS) in positive or negative mode with the ESI electrospray ionization technique, on a Bruker maXis mass spectrometer coupled to a Dionex Ultimate 3000 RSLC system from the ICOA/CBM “Research Federation” platform (FR2708)).
Spectrométrie de masse à haute résolution (SMHR) dénaturante Denaturing High Resolution Mass Spectrometry (HRMS)
Afin d'éliminer l'hétérogénéité liée aux sucres et d'augmenter la réponse en masse, dans certains cas, les parties Fc des anticorps à analyser ont été coupées à l'aide de la protéase IdeS. L'analyse des conjugués a donc été réalisée sur un échantillon préalablement clivé par la protéase IdeS : à 10 pL d'échantillon a été ajouté 1 pL d'IdeS à une concentration de 0,8 g/L puis l'échantillon a été incubé à 37 °C pendant au moins 16 h. L'analyse spectrométrique des conjugués a été réalisée sur un spectromètre de masse Bruker maXis couplé à un système Dionex Ultimate 3000 RSLC. Avant l'analyse MS, les échantillons (5 pg) ont été dessalés sur une colonne de dessalage MassPREP (2,1x10 mm, Waters), chauffés à 80 °C en utilisant une solution aqueuse d'acide formique à 0,1% comme solvant A et une solution à 0,1% d'acide formique dans l'acétonitrile comme solvant B à 500 pL/min. Après 1 min, un gradient linéaire de 5 à 90% de B en 1,5 min a été appliqué. Les données MS ont été acquises en mode positif avec une source ESI sur une gamme m/z de 900 à 5000 à 1 Hz et analysées en utilisant le logiciel DataAnalysis 4.4 (Bruker) et l'algorithme MaxEnt pour la déconvolution. La proportion d'espèce d'intérêt obtenue a été déterminé à l'aide de l'intensité des pics des espèces observés sur le fragment F(ab')2.In order to eliminate sugar-related heterogeneity and to increase the mass response, in some cases the Fc parts of the antibodies to be analyzed were cut using the IdeS protease. The analysis of the conjugates was therefore carried out on a sample previously cleaved with the IdeS protease: to 10 pL of sample was added 1 pL of IdeS at a concentration of 0.8 g/L then the sample was incubated at 37°C for at least 16 h. The spectrometric analysis of the conjugates was carried out on a Bruker maXis mass spectrometer coupled to a Dionex Ultimate 3000 RSLC system. Prior to MS analysis, samples (5 µg) were desalted on a MassPREP desalting column (2.1x10 mm, Waters), heated to 80°C using 0.1% aqueous formic acid solution as solvent A and a 0.1% solution of formic acid in acetonitrile as solvent B at 500 µL/min. After 1 min, a linear gradient from 5 to 90% B in 1.5 min was applied. MS data was acquired in positive mode with an ESI source over an m/z range of 900 to 5000 at 1 Hz and analyzed using DataAnalysis 4.4 software (Bruker) and the MaxEnt algorithm for deconvolution. The proportion of species of interest obtained was determined using the intensity of the peaks of the species observed on the F(ab′) 2 fragment.
Réactions de bioconjugaison Bioconjugation reactions
Préparation des solutions Preparation of solutions
Tampon 1 : Tampon phosphate 1 X (1 mM KH2PO4, 180 mM NaCI et 3 mM deBuffer 1: 1 X phosphate buffer (1 mM KH 2 PO 4 , 180 mM NaCl and 3 mM
Na2HPO4.7H2O) à un pH de 8,3 et une concentration finale en EDTA de 1 mM. Na 2 HPO 4 .7H 2 O) at a pH of 8.3 and a final EDTA concentration of 1 mM.
Tampon 2 : Tampon phosphate 1 X (1 mM KH2PO4, 180 mM NaCI et 3 mM deBuffer 2: 1 X phosphate buffer (1 mM KH 2 PO 4 , 180 mM NaCl and 3 mM
Na2HPO4.7H2O) à un pH de 7,4. Réducteur : Solution de chlorhydrate de tris(2-carboxyéthyl)phosphine (TCEP.HCI) à une concentration de 1 mM dans le tampon 1. Na 2 HPO 4 .7H 2 O) at a pH of 7.4. Reducing agent: Solution of tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP.HCI) at a concentration of 1 mM in buffer 1.
Réaction de bioconiuaaison 1 Bioconjugation reaction 1
La solution d'anticorps dans le tampon 1 (1,0 éq) a été placée sous argon. La solution du composé de formule (II'a), (Ilb), (II'a) ou (ITb) (1,0-15,0 éq, de préférence 3,0-12,0 éq) puis la solution de réducteur (1,0-12,0 éq, de préférence 3, 0-8,0 éq) ont été ajoutées et le milieu réactionnel a été agité sous argon à 25 °C ou 37 °C pendant 2h30. The antibody solution in Buffer 1 (1.0 eq) was placed under argon. The solution of the compound of formula (II'a), (IIb), (II'a) or (ITb) (1.0-15.0 eq, preferably 3.0-12.0 eq) then the solution of reducing agent (1.0-12.0 eq, preferably 3.0-8.0 eq) were added and the reaction medium was stirred under argon at 25° C. or 37° C. for 2h30.
Purification 1 Cleanse 1
Si nécessaire, le composé obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 1 a été purifié par Sephadex® avec le tampon 2. Les fractions contenant le composé purifié (dosage par NanoDrop) ont été rassemblées puis concentrées par Vivaspin® (10 kDa). Sur la solution concentrée, un échange de tampon a été réalisé par Vivaspin® (10 kDa) pour obtenir le composé qui a été utilisé en tampon 1 à l'étape suivante. If necessary, the compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 was purified by Sephadex® with buffer 2. The fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop) were combined then concentrated by Vivaspin® (10 kDa) . On the concentrated solution, a buffer exchange was carried out by Vivaspin® (10 kDa) to obtain the compound which was used in buffer 1 in the next step.
Réaction de bioconiuqaison 2 Bioconiuqation reaction 2
Le composé éventuellement purifié obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 1 (1,0 éq) a été placé sous argon. Le réducteur (7,0-30,0 éq, de préférence 8,0-15,0 éq) a ensuite été ajouté et le milieu réactionnel a été incubé à 37 °C pendant 2 h. Puis la solution du composé (Ha), (Ilb), (Ile), (Ild), ou (IV) (5,0-30,0 éq, de préférence 12,0- 15,0 éq) a été ajoutée sous argon et le milieu réactionnel a été agité à 37 °C pendant 2h30. The optionally purified compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 (1.0 eq) was placed under argon. The reducing agent (7.0-30.0 eq, preferably 8.0-15.0 eq) was then added and the reaction medium was incubated at 37° C. for 2 h. Then the solution of compound (Ha), (IIb), (Ile), (Ild), or (IV) (5.0-30.0 eq, preferably 12.0-15.0 eq) was added under argon and the reaction medium was stirred at 37° C. for 2h30.
Réaction de bioconiuqaison 2' 2' bioconfusion reaction
Le composé éventuellement purifié obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 1 (1,0 éq) a été placé sous argon. La solution du composé de formule (Ha), (Ilb), (Ile), (Ild), ou (IV) (5,0-30,0 éq, de préférence 12,0-15,0 éq) et la solution de réducteur (7,0- 30,0 éq, de préférence 8,0-15,0 éq) ont été ajoutées et le milieu réactionnel a été agité sous argon à 37 °C pendant 1 à 5 h, de préférence 2h30. The optionally purified compound obtained at the end of the bioconjugation reaction 1 (1.0 eq) was placed under argon. The solution of the compound of formula (Ha), (IIb), (Ile), (Ild), or (IV) (5.0-30.0 eq, preferably 12.0-15.0 eq) and the solution of reducing agent (7.0-30.0 eq, preferably 8.0-15.0 eq) were added and the reaction medium was stirred under argon at 37° C. for 1 to 5 h, preferably 2 h 30 min.
Purification 2 Cleanse 2
Si nécessaire, le composé obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 2, 2' ou à l'issue de la réaction de click en une étape (voir ci-dessous) a été purifié par Sephadex® avec le tampon 2. Les fractions contenant le composé purifié (dosage par NanoDrop®) ont été rassemblées pour être utilisées à l'étape suivante. If necessary, the compound obtained at the end of the 2, 2' bioconjugation reaction or at the end of the one-step click reaction (see below) was purified by Sephadex® with buffer 2. fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop®) were collected to be used in the next step.
Réaction de click click reaction
En une étape : ajout d'un seul composé (III) ou ajout concomitant de deux composés (III) Au composé éventuellement purifié obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 2 ou 2' (1,0 éq) a été ajouté la ou les solutions du ou des composés (III) (5,0-30,0 éq, de préférence 15,0-30,0 éq) et le milieu réactionnel a été agité à 25 °C ou 37 °C pendant au moins 16 h. In one step: addition of a single compound (III) or simultaneous addition of two compounds (III) To the optionally purified compound obtained at the end of the 2 or 2' bioconjugation reaction (1.0 eq) was added the solution(s) of the compound(s) (III) (5.0-30.0 eq, preferably 15.0-30.0 eq) and the reaction medium was stirred at 25°C or 37°C for at least 16 h.
En deux étapes : ajout séquentiel de deux composés (III) In two steps: sequential addition of two compounds (III)
Au composé éventuellement purifié obtenu à l'issue de la réaction de bioconjugaison 2 ou 2' (1,0 éq) a été ajouté une solution du premier composé (III) (5,0-30,0 éq, de préférence 15,0-30,0 éq) et le milieu réactionnel a été agité à 37 °C ou 25 °C pendant au moins 16 h. Le composé intermédiaire obtenu est éventuellement purifié (voir ci-dessous). Puis une solution du deuxième composé (III) a été ajoutée (5,0-30,0 éq, de préférence 15,0-30,0 éq) et le milieu réactionnel a été agité à 37 °C ou 25 °C pendant au moins 16 h. To the optionally purified compound obtained at the end of the 2 or 2' bioconjugation reaction (1.0 eq) was added a solution of the first compound (III) (5.0-30.0 eq, preferably 15.0 -30.0 eq) and the reaction medium was stirred at 37° C. or 25° C. for at least 16 h. The intermediate compound obtained is optionally purified (see below). Then a solution of the second compound (III) was added (5.0-30.0 eq, preferably 15.0-30.0 eq) and the reaction medium was stirred at 37° C. or 25° C. for at less than 4 p.m.
Purification 3 Cleanse 3
Lorsque deux réactions de click ont été mises en œuvre séquentiellement, le composé obtenu à l'issue de la première réaction de click a été avantageusement purifié par Sephadex® avec le tampon 2. Les fractions contenant le composé purifié (dosage par NanoDrop®) ont été rassemblées puis concentrées par Vivaspin® (10 kDa) pour être utilisées dans la deuxième réaction de click. When two click reactions were implemented sequentially, the compound obtained at the end of the first click reaction was advantageously purified by Sephadex® with buffer 2. The fractions containing the purified compound (assayed by NanoDrop®) were were pooled and then concentrated by Vivaspin® (10 kDa) to be used in the second click reaction.
Exemples Examples
Exemple 1 : 4-nitrophényl l-[4-(6-méthyl-l,2,4,5-tétrazin-3-yl)phénoxy]- 3,6,9,12-tétraoxapentadécan-15-oate (1) Example 1: 4-Nitrophenyl l-[4-(6-methyl-1,2,4,5-tetrazin-3-yl)phenoxy]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oate (1)
[Chem40]
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[Chem40]
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L'acide 4-méthyletéatrazinylphénoxy-3,6,9,12-tétraoxapentadécan-15-oïque (12,2 mg ; 0,028 mmol ; 1,0 éq) a été dissous dans le DMF anhydre (250 pL) puis le 4-nitrophénol (5,1 mg ; 0,036 mmol ; 1,3 éq), le DCC (7,5 mg ; 0,036 mmol ; 1,3 éq) et la DMAP (1,0 mg ; 0,008 mmol ; 0,3 éq) ont été ajoutés. Le milieu réactionnel a été placé sous agitation, sous argon à TA pendant 18h30. Le mélange a été purifié par chromatographie liquide haute pression semi-préparative (tR = 26,01 min ; sur le système Gilson PLC 2050 [ARMEN V2 (pompe) et ECOM TOYDAD600 (détecteur UV)] détection UV à 254 nm à 25 °C ; colonne Waters XBridge™ C-18 ; 5 pm (250 mm x 19,00 mm) ; élution réalisée avec 0,1% de TFA (en volume) dans l'eau (solvant A), et du MeCN (solvant B) ; gradient 20 à 100% de B sur 32 min puis 100% de B sur 6 min à 17,1 mL/min) pour donner (1) (7,8 mg ; 50%) sous la forme d'une huile rose. 4-methyleteatrazinylphenoxy-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oic acid (12.2 mg; 0.028 mmol; 1.0 eq) was dissolved in anhydrous DMF (250 µL) then 4-nitrophenol (5.1 mg; 0.036 mmol; 1.3 eq), DCC (7.5 mg; 0.036 mmol; 1.3 eq) and DMAP (1.0 mg; 0.008 mmol; 0.3 eq) were added. The reaction medium was placed under stirring, under argon at RT for 18h30. The mixture was purified by semi-preparative high-pressure liquid chromatography (t R = 26.01 min; on the Gilson PLC 2050 system [ARMEN V2 (pump) and ECOM TOYDAD600 (UV detector)] UV detection at 254 nm at 25 ° C; Waters XBridge™ C-18 column; 5 µm (250 mm x 19.00 mm); elution performed with 0.1% TFA (by volume) in water (solvent A), and MeCN (solvent B ); gradient 20 to 100% B over 32 min then 100% B over 6 min at 17.1 mL/min) to give (1) (7.8 mg; 50%) in the form of a pink oil.
RMN (300 MHz, CD3OD) 5 8,53 - 8,42 (m ; 2H) ; 8,32 - 8,21 (m ; 2H) ; 7,42 - 7,31 (m ; 2H) ; 7,21 - 7,11 (m ; 2H) ; 4,29 - 4,20 (m ; 2H) ; 3,93 - 3,80 (m ; 4H) ; 3,75 - 3,66 (m ; 4H) ; 3,66 - 3,63 (m ; 8H) ; 3,00 (s ; 3H) ; 2,87 (t ; J= 6,0 Hz ; 2H). SMHR (ESI) : m/z calculé pour C26H32N5O9 [M+H]+ : 558,2195 ; observé 558,2203. NMR (300 MHz, CD 3 OD) δ 8.53 - 8.42 (m; 2H); 8.32-8.21 (m; 2H); 7.42-7.31 (m; 2H); 7.21-7.11 (m; 2H); 4.29-4.20 (m; 2H); 3.93-3.80 (m; 4H); 3.75-3.66 (m; 4H); 3.66-3.63 (m; 8H); 3.00 (s; 3H); 2.87 (t; J=6.0Hz; 2H). HRMS (ESI): m/z calculated for C 2 6H 3 2N 5 O 9 [M+H] + : 558.2195; observed 558.2203.
Exemple 2 : acide (2R)-2-[(2S)-2-[(S)-[(2R)-l-[(3S,4R,5R)-4-[(2R)-N,3- diméthyl-2-[(2R)-3-méthyl-2-{N-méthyl-l-[4-(6-méthyl-l,2,4,5-tétrazin-3- yl)phénoxy]-3,6,9,12-tétraoxapentadécan-15-amido}butanamido] butanamido]-3-méthoxy-5-méthylheptanoyl]pyrrolidin-2- yl](méthoxy)methyl]propanamido]-3-phénylpropanoïque (2) Example 2: (2R)-2-[(2S)-2-[(S)-[(2R)-1-[(3S,4R,5R)-4-[(2R)-N,3-dimethyl acid -2-[(2R)-3-methyl-2-{N-methyl-1-[4-(6-methyl-1,2,4,5-tetrazin-3-yl)phenoxy]-3,6, 9,12-tetraoxapentadecan-15-amido}butanamido] butanamido]-3-methoxy-5-methylheptanoyl]pyrrolidin-2-yl](methoxy)methyl]propanamido]-3-phenylpropanoic acid (2)
[Chem41]
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[Chem41]
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A une solution de HOBt (2,0 mg ; 0,0151 mmol ; 2,1 éq), solubilisé dans du DMF anhydre (100 pL) en présence de DIPEA anhydre (2,5 pL ; 0,0144 mmol ; 2,0 éq) a été ajouté le l-[4-(6-méthyl-l,2,4,5-tétrazin-3-yl)phénoxy]-3,6,9,12-tétraoxapentadécan-15-oate de 4- nitrophényle (1) (7,1 mg ; 0,0128 mmol ; 1,8 éq). Puis une solution de sel d'acide trifluoroacétique de MMAF (6,1 mg ; 0,0072 mmol ; 1,0 éq), solubilisé dans le DMF anhydre (100 pL), a été ajoutée au milieu réactionnel placé sous agitation, sous argon à 25°C pendant 19h. Le mélange a été purifié par chromatographie liquide haute pression semi-préparative (tR = 27,44 min ; sur le système Gilson PLC 2050 [ARMEN V2 (pompe) et ECOM TOYDAD600 (détecteur UV)J détection UV à 254 nm à 25 °C ; colonne Waters XBridge™ C-18 ; 5 pm (250 mm x 19,00 mm) ; élution réalisée avec 0,1% de TFA (en volume) dans l'eau (solvant A), et du MeCN (solvant B) ; gradient 20 à 90% de B sur 32 min puis 90% de B sur 6 min à 17,1 mL/min) pour donner (2) (1,4 mg ; 17%) sous la forme d'une huile violette. To a solution of HOBt (2.0 mg; 0.0151 mmol; 2.1 eq), dissolved in anhydrous DMF (100 pL) in the presence of anhydrous DIPEA (2.5 pL; 0.0144 mmol; 2.0 eq) was added 4-nitrophenyl l-[4-(6-methyl-1,2,4,5-tetrazin-3-yl)phenoxy]-3,6,9,12-tetraoxapentadecan-15-oate (1) (7.1 mg; 0.0128 mmol; 1.8 eq). Then a solution of trifluoroacetic acid salt of MMAF (6.1 mg; 0.0072 mmol; 1.0 eq), dissolved in anhydrous DMF (100 μL), was added to the reaction medium placed under stirring, under argon at 25°C for 19 h. The mixture was purified by semi-preparative high-pressure liquid chromatography (t R = 27.44 min; on the Gilson PLC 2050 system [ARMEN V2 (pump) and ECOM TOYDAD600 (UV detector)J UV detection at 254 nm at 25° C; Waters XBridge™ C-18 column; 5 µm (250 mm x 19.00 mm); elution performed with 0.1% TFA (by volume) in water (solvent A), and MeCN (solvent B ); gradient 20 to 90% B over 32 min then 90% B over 6 min at 17.1 mL/min) to give (2) (1.4 mg; 17%) as a purple oil .
RMN JH (300 MHz, CD3OD) 5 8,57 - 8,45 (m ; 2H) ; 8,41 - 8,08 (m ; 1H) ; 8,08 - 7,79 (m ; 1H) ; 7,37 - 7,06 (m ; 8H) ; 4,78 - 4,59 (m ; 1H) ; 4,32 - 4,22 (m ; 2H) ; 4,14 - 3,96 (m ; 2H) ; 3,96 - 3,85 (m ; 2H) ; 3,84 - 3,52 (m ; 13H) ; 3,48 - 3,35 (m ; 5H) ; 3,21 - 3,15 (m ; 2H) ; 3,14 - 3,03 (m ; 4H) ; 3,00 (s ; 3H) ; 2,97 - 2,89 (m ; 1H) ; 2,83 - 2,63 (m ; 1H) ; 2,61 - 2,40 (m ; 2H) ; 2,41 - 2,15 (m ; 2H) ; 2,15 - 1,67 (m ; 8H) ; 1,50 - 1,12 (m ; 3H) ; 1,12 - 0,76 (m ; 28H). J H NMR (300 MHz, CD 3 OD) δ 8.57 - 8.45 (m; 2H); 8.41-8.08 (m; 1H); 8.08-7.79 (m; 1H); 7.37-7.06 (m; 8H); 4.78-4.59 (m; 1H); 4.32-4.22 (m; 2H); 4.14-3.96 (m; 2H); 3.96-3.85 (m; 2H); 3.84-3.52 (m; 13H); 3.48-3.35 (m; 5H); 3.21-3.15 (m; 2H); 3.14-3.03 (m; 4H); 3.00 (s; 3H); 2.97-2.89 (m; 1H); 2.83 - 2.63 (m; 1H); 2.61-2.40 (m; 2H); 2.41-2.15 (m; 2H); 2.15-1.67 (m; 8H); 1.50-1.12 (m; 3H); 1.12-0.76 (m; 28H).
SMHR (ESI) : m/z calculé pour C59H92N9O1 [M+H]+ : 1150,6758 ; observé 1150,6754. Les composés commerciaux, et ceux issus de la demande WO 2022/018371 ou de la demande WO 2020/234541, utilisés pour les réactions de bioconjugaison sont résumés dans le Tableau 1 ci-dessous. HRMS (ESI): m/z calculated for C59H92N9O1 [M+H] + : 1150.6758; observed 1150.6754. The commercial compounds, and those resulting from application WO 2022/018371 or from application WO 2020/234541, used for the bioconjugation reactions are summarized in Table 1 below.
Tableau 1
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Figure imgf000038_0001
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Table 1
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Exemple 3 : Composé (14) : Trastuzumab - composé (6) clické composé (10) - composé (7) clické composé (9) Example 3: Compound (14): Trastuzumab - compound (6) clicked compound (10) - compound (7) clicked compound (9)
Etape al Step al
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (6) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (7.0 eq), compound (6) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C. Bioconjugation reaction 1 at 37°C.
Etape bl) Step b)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 3,2 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (8,0 éq) et composé (7) (15,0 éq) à une concentration de 10 mM dans le MeOH. Compound from a1) at 3.2 mg/mL in buffer 1, reducer (8.0 eq) and compound (7) (15.0 eq) at a concentration of 10 mM in MeOH.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C. Bioconjugation reaction 2 to 37°C.
Etape cl) Step c1)
Réactifs Reagents
Composé issu de bl) à 2,6 mg/mL dans le tampon 1, composé (9) (16,5 éq) et composé (10) (11,6 éq) à une concentration de 10 mM dans le DMSO. Compound from b1) at 2.6 mg/mL in buffer 1, compound (9) (16.5 eq) and compound (10) (11.6 eq) at a concentration of 10 mM in DMSO.
Méthode Réaction de click à 25 °C pendant 17 h. Dans ce cas les composés (9) et (10) ont été ajoutés concomitamment. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci- dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (14) : DAR 1 composé (6) clické avec le composé (10) et DAR 1 composé (7) clické avec le composé (9) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Method Click reaction at 25°C for 17 h. In this case the compounds (9) and (10) were added concomitantly. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (14): DAR 1 compound (6) clicked with compound (10) and DAR 1 compound (7) clicked with the compound (9) whose structure is as shown in Figure 1A.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS Analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 2 ci-dessous. The results are shown in Table 2 below.
Tableau 2
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Table 2
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Exemple 4 : Composé (14) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (2) - composé (11) Example 4: Compound (14): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (11)
Etape a T) Step a T)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (3) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Méthode Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH . Method
Réaction de bioconjugaison 1 puis purification 1 à 37 °C. Bioconjugation reaction 1 then purification 1 at 37°C.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (11) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Compound from al) at 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (11) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C puis purification 2. Bioconjugation reaction 2 at 37°C then purification 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 1,3 mg/mL dans le tampon 2 et composé (2) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO. Compound from b2) at 1.3 mg/mL in buffer 2 and compound (2) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 23 h puis purification 2. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (15) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (2) et DAR 2 composé (11) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1B. Click reaction at 25°C for 23 h then purification 2. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (15): DAR 1 compound (3) clicked with compound (2) and DAR 2 compound (11) whose structure is as represented in FIG. 1B.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 3 ci-dessous. The results are shown in Table 3 below.
Tableau 3
Figure imgf000042_0001
Table 3
Figure imgf000042_0001
Exemple 5 : Composé (16) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (2) - composé (12) Example 5: Compound (16): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (12)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (3) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (12) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans le DMSO. Compound from a1) at 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (12) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C puis purification 2. Bioconjugation reaction 2 at 37°C then purification 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 0,7 mg/mL dans le tampon 2 et composé (2) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO. Compound from b2) at 0.7 mg/mL in buffer 2 and compound (2) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 23 h puis purification 2. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (16) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (2) et DAR 4 composé (12) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1C. Click reaction at 25°C for 23 h then purification 2. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (16): DAR 1 compound (3) clicked with compound (2) and DAR 4 compound (12) whose structure is as represented in FIG. 1C.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 4 ci-dessous. Tableau 4
Figure imgf000043_0001
The results are shown in Table 4 below. Table 4
Figure imgf000043_0001
Exemple 6 : Composé (17) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (2) - composé (13) Example 6: Compound (17): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (13)
Etape al Step al
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (3) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (13) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans le DMF. Compound from a1) at 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (13) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C puis purification 2. Bioconjugation reaction 2 at 37°C then purification 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 0,9 mg/mL dans le tampon 2 et composé (2) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO. Compound from b2) at 0.9 mg/mL in buffer 2 and compound (2) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 23 h puis purification 2. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (17) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (2) et DAR 1 composé (13) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Click reaction at 25°C for 23 h then purification 2. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (17): DAR 1 compound (3) clicked with compound (2) and DAR 1 compound (13) whose structure is as shown in Figure 1A.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 5 ci-dessous. The results are shown in Table 5 below.
Tableau 5
Figure imgf000043_0002
Exemple 7 : Composé (18) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (8) - composé (4) clické composé (2) Table 5
Figure imgf000043_0002
Example 7: Compound (18): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (8) - compound (4) clicked compound (2)
Etape al Step al
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (3) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Méthode Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH . Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape bl) Step b)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (4) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans le DMF. Compound from a1) at 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (4) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C puis purification 2. Bioconjugation reaction 2 at 37°C then purification 2.
Etape cl) Step c1)
Réactifs Reagents
Composé issu de bl) à 0,6 mg/mL dans le tampon 2, composé (8) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO (« click 1 »), puis composé issu de de « click 1 » à 1,8 mg/mL dans le tampon 2, composé (2) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans le DMSO (« click 2 »). Compound from bl) at 0.6 mg/mL in buffer 2, compound (8) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO (“click 1”), then compound from “click 1” at 1.8 mg/mL in buffer 2, compound (2) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO (“click 2”).
Méthode Method
Click séquentielle. Sequential click.
Click 1 : réaction de click à 37 °C pendant 23 h puis purification 3. Click 1: click reaction at 37°C for 23 h then purification 3.
Click 2 : réaction de click à 37 °C pendant 18 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (18) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (8) et DAR 1 composé (4) clické avec le composé (2) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Analyse SMHR dénaturante Click 2: click reaction at 37°C for 18 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (18): DAR 1 compound (3) clicked with compound (8) and DAR 1 compound (4) clicked with the compound (2) whose structure is as shown in Figure 1A. Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 6 ci-dessous. The results are shown in Table 6 below.
Tableau 6
Figure imgf000044_0001
Exemple 8 : Composé (19) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (2) - composé (5) clické composé (8) Table 6
Figure imgf000044_0001
Example 8: Compound (19): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (2) - compound (5) clicked compound (8)
Etape al Step al
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (3) (10,6 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Méthode Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (7.0 eq), compound (3) (10.6 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH . Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape bl) Step b)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (5) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans le DMF. Compound from a1) at 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (5) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2 à 37 °C puis purification 2. Bioconjugation reaction 2 at 37°C then purification 2.
Etape cl) Step c1)
Réactifs Reagents
Composé issu de bl) à 1,0 mg/mL dans le tampon 2 et composé (2) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO (« click 1 »), puis composé issu de de « click 1 » à 1,2 mg/mL dans le tampon 2 et composé (8) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans le DMSO (« click 2 »). Compound from bl) at 1.0 mg/mL in buffer 2 and compound (2) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO (“click 1”), then compound from “click 1” at 1.2 mg/mL in buffer 2 and compound (8) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMSO (“click 2”).
Méthode Method
Click séquentielle. Sequential click.
Click 1 : réaction de click à 25 °C pendant 23 h puis purification 3. Click 1: click reaction at 25°C for 23 h then purification 3.
Click 2 : réaction de click à 37 °C pendant 18 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (19) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (2) et DAR 1 composé (5) clické avec le composé (8) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Analyse SMHR dénaturante Click 2: click reaction at 37°C for 18 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (19): DAR 1 compound (3) clicked with compound (2) and DAR 1 compound (5) clicked with the compound (8) whose structure is as shown in Figure 1A. Denaturing HRMS Analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 7 ci-dessous. The results are shown in Table 7 below.
Tableau 7
Figure imgf000045_0001
Exemple 9 : Composé (21) : Trastuzumab - composé (3) - composé (20) clické composé (13) Table 7
Figure imgf000045_0001
Example 9: Compound (21): Trastuzumab - compound (3) - compound (20) clicked compound (13)
Etape al Step al
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (4,0 éq), composé (3) (3,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 2,3 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (13) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange 20% de MeOH et 80% de DMF. Compound from al) at 2.3 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (13) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 20% MeOH and 80 % DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2' pendant 2h30 à 37 °C. 2' bioconjugation reaction for 2h30 at 37°C.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 1,5 mg/mL dans le tampon 1, composé (20) (30,0 éq) à une concentration de 10 mM dans du DMSO. Compound from b2) at 1.5 mg/mL in buffer 1, compound (20) (30.0 eq) at a concentration of 10 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 37 °C pendant 24 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (21) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (20) et DAR 1 composé (13) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Click reaction at 37°C for 24 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (21): DAR 1 compound (3) clicked with compound (20) and DAR 1 compound (13) whose structure is as shown in Figure 1A.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS Analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 8 ci-dessous. The results are shown in Table 8 below.
Tableau 8
Figure imgf000046_0001
Table 8
Figure imgf000046_0001
Exemple 10 : Composé (22) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (20)Example 10: Compound (22): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (20)
- composé (11) - compound (11)
Etape al) Step al)
Réactifs Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (4,0 éq), composé (3) (3,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Reagents Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 37°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 2,3 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (11) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange 20% de MeOH et 80% de DMF. Compound from al) at 2.3 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (11) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 20% MeOH and 80 % DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2' pendant 2h30 à 37 °C. 2' bioconjugation reaction for 2h30 at 37°C.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 1,5 mg/mL dans le tampon 1, composé (20) (30,0 éq) à une concentration de 10 mM dans du DMSO. Compound from b2) at 1.5 mg/mL in buffer 1, compound (20) (30.0 eq) at a concentration of 10 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 37 °C pendant 24 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (22) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (20) et DAR 2 composé (11) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1B. Click reaction at 37°C for 24 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (22): DAR 1 compound (3) clicked with compound (20) and DAR 2 compound (11) whose structure is as shown in Figure 1B.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 9 ci-dessous. The results are shown in Table 9 below.
Tableau 9
Figure imgf000047_0001
Table 9
Figure imgf000047_0001
Exemple 11 : Composé (23) : Trastuzumab - composé (3) clické composé (20) - composé (12) Example 11: Compound (23): Trastuzumab - compound (3) clicked compound (20) - compound (12)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (4,0 éq), composé (3) (3,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducer (4.0 eq), compound (3) (3.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 (pendant 2h30) à 37 °C puis purification 1. Etape b2) Bioconjugation reaction 1 (for 2h30) at 37°C then purification 1. Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 2,3 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (12) (20,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange 20% de MeOH et 80% de DMF. Compound from al) at 2.3 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (12) (20.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 20% MeOH and 80 % DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2' pendant 2h30 à 37 °C. 2' bioconjugation reaction for 2h30 at 37°C.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 1,5 mg/mL dans le tampon 1, composé (20) (30,0 éq) à une concentration de 10 mM dans du DMSO. Compound from b2) at 1.5 mg/mL in buffer 1, compound (20) (30.0 eq) at a concentration of 10 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 37 °C pendant 24 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (23) : DAR 1 composé (3) clické avec le composé (20) et DAR 4 composé (12) la structure est telle que représentée dans la Figure 1C. Click reaction at 37°C for 24 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (23): DAR 1 compound (3) clicked with compound (20) and DAR 4 compound (12) the structure is as shown in Figure 1C.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 10 ci-dessous. The results are shown in Table 10 below.
Tableau 10
Figure imgf000048_0001
Table 10
Figure imgf000048_0001
Exemple 12 : Composé (24) : Trastuzumab - composé (13) - composé (3) clické composé (8) Example 12: Compound (24): Trastuzumab - compound (13) - compound (3) clicked compound (8)
Etape a2) Step a2)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (7,0 éq), composé (13) (4,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange de 80% de DMF et 20% de MeOH. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (7.0 eq), compound (13) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 80% DMF and 20% MeOH .
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 pendant 1 h à 37 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 for 1 h at 37°C then purification 1.
Etape b5) Step b5)
Réactifs Reagents
Composé issu de a2) à 2,3 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (15,0 éq) et composé (3) (15,0 éq) à une concentration de 1 mM dans un mélange 20% de MeOH et 80% de DMF. Méthode Compound from a2) at 2.3 mg/mL in buffer 1, reducer (15.0 eq) and compound (3) (15.0 eq) at a concentration of 1 mM in a mixture of 20% MeOH and 80 % DMF. Method
Réaction de bioconjugaison 2', pendant 2h30 à 37°C. 2' bioconjugation reaction, for 2h30 at 37°C.
Etape c5) Step c5)
Réactifs Reagents
Composé issu de b5) à 1,5 mg/mL dans le tampon 1, composé (8) (5,0 éq) à une concentration de 10 mM dans du DMSO. Compound from b5) at 1.5 mg/mL in buffer 1, compound (8) (5.0 eq) at a concentration of 10 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 17 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (24) : DAR 1 composé (13) et DAR 1 composé (3) clické avec le composé (8) dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Click reaction at 25°C for 17 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (24): DAR 1 compound (13) and DAR 1 compound (3) clicked with compound (8) whose structure is as shown in Figure 1A.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 11 ci-dessous. The results are shown in Table 11 below.
Tableau 11
Figure imgf000049_0001
Table 11
Figure imgf000049_0001
Exemple 13 : Composé (25) : Trastuzumab - composé (4) clické composé (2) - composé (12) Example 13: Compound (25): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (12)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (3,0 éq), composé (4) (4,0 éq) à une concentration de 1 mM dans du DMF. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 25 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 25°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,1 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (12,0 éq) et composé (12) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Compound from a1) at 5.1 mg/mL in buffer 1, reducer (12.0 eq) and compound (12) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2. Bioconjugation reaction 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Composé issu de b2) à 3,1 mg/mL dans le tampon 1, composé (2) (10,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Reagents Compound from b2) at 3.1 mg/mL in buffer 1, compound (2) (10.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 16 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (25) : DAR 1 composé (4) clické avec le composé (2) et DAR 4 composé (12), dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1C. Click reaction at 25°C for 16 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (25): DAR 1 compound (4) clicked with compound (2) and DAR 4 compound (12), of which the structure is as shown in Figure 1C.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 12 ci-dessous. The results are shown in Table 12 below.
Tableau 12
Figure imgf000050_0001
Table 12
Figure imgf000050_0001
Exemple 14 : Composé (26) : Trastuzumab - composé (4) clické composé (2) - composé (11) Example 14: Compound (26): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (11)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (3,0 éq), composé (4) (4,0 éq) à une concentration de 1 mM dans du DMF. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 25 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 25°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,1 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (12,0 éq) et composé (11) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans un mélange 80% de MeOH et 20% de DMF. Compound from al) at 5.1 mg/mL in buffer 1, reducer (12.0 eq) and compound (11) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in a mixture of 80% MeOH and 20 % DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2. Bioconjugation reaction 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 4,3 mg/mL dans le tampon 1, composé (2) (10,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Compound from b2) at 4.3 mg/mL in buffer 1, compound (2) (10.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Réaction de click à 25 °C pendant 16 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (26) : DAR 1 composé (4) clické avec le composé (2) et DAR 2 composé (11), dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1B. Method Click reaction at 25°C for 16 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (26): DAR 1 compound (4) clicked with compound (2) and DAR 2 compound (11), of which the structure is as shown in Figure 1B.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 13 ci-dessous. The results are shown in Table 13 below.
Tableau 13
Figure imgf000051_0001
Table 13
Figure imgf000051_0001
Exemple 15 : Composé (27) : Trastuzumab - composé (4) clické composé (2) - composé (13) Example 15: Compound (27): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (13)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (3,0 éq), composé (4) (4,0 éq) à une concentration de 1 mM dans du DMF. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 25 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 25°C then purification 1.
Etape b2) Step b2)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 5,1 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (12,0 éq) et composé (13) (15,0 éq) à une concentration de 2 mM dans un mélange 80% de MeOH et 20% de DMF. Compound from al) at 5.1 mg/mL in buffer 1, reducer (12.0 eq) and compound (13) (15.0 eq) at a concentration of 2 mM in a mixture of 80% MeOH and 20 % DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2. Bioconjugation reaction 2.
Etape c2) Step c2)
Réactifs Reagents
Composé issu de b2) à 4,3 mg/mL dans le tampon 1, composé (2) (10,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Compound from b2) at 4.3 mg/mL in buffer 1, compound (2) (10.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 16 h. On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (27) : DAR 1 composé (4) clické avec le composé (2) et DAR 1 composé (13), dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. Analyse SMHR dénaturante Click reaction at 25°C for 16 h. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (27): DAR 1 compound (4) clicked with compound (2) and DAR 1 compound (13), of which the structure is as shown in Figure 1A. Denaturing HRMS analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 14 ci-dessous. The results are shown in Table 14 below.
Tableau 14
Figure imgf000052_0001
Table 14
Figure imgf000052_0001
Exemple 16 : Composé (28) : Trastuzumab - composé (4) clické composé (2) - composé (5) clické composé (8) Example 16: Compound (28): Trastuzumab - compound (4) clicked compound (2) - compound (5) clicked compound (8)
Etape al) Step al)
Réactifs Reagents
Trastuzumab à 5,0 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (3,0 éq), composé (4) (4,0 éq) à une concentration de 1 mM dans du DMF. Trastuzumab 5.0 mg/mL in buffer 1, reducing (3.0 eq), compound (4) (4.0 eq) at a concentration of 1 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 1 à 25 °C puis purification 1. Bioconjugation reaction 1 at 25°C then purification 1.
Etape b3) Step b3)
Réactifs Reagents
Composé issu de al) à 4,7 mg/mL dans le tampon 1, composé (2) (6,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Compound from a1) at 4.7 mg/mL in buffer 1, compound (2) (6.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 16 h. Click reaction at 25°C for 16 h.
Etape c4) Step c4)
Réactifs Reagents
Composé issu de b3) à 4,7 mg/mL dans le tampon 1, réducteur (10,0 éq) et composé (5) (12,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMF. Compound from b3) at 4.7 mg/mL in buffer 1, reducer (10.0 eq) and compound (5) (12.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMF.
Méthode Method
Réaction de bioconjugaison 2. Bioconjugation reaction 2.
Etape dl) Step dl)
Réactifs Reagents
Composé issu de c4) à 2,0 mg/mL dans le tampon 1, composé (8) (10,0 éq) à une concentration de 2 mM dans du DMSO. Compound from c4) at 2.0 mg/mL in buffer 1, compound (8) (10.0 eq) at a concentration of 2 mM in DMSO.
Méthode Method
Réaction de click à 25 °C pendant 16 h. Click reaction at 25°C for 16 h.
On a obtenu un mélange de conjugués dont l'analyse SMHR ci-dessous a permis de déterminer la présence majoritaire du conjugué (28) : DAR 1 composé (4) clické avec le composé (2) et DAR 1 composé (5) clické avec le composé (8), dont la structure est telle que représentée dans la Figure 1A. A mixture of conjugates was obtained, the HRMS analysis of which below made it possible to determine the majority presence of the conjugate (28): DAR 1 compound (4) clicked with the compound (2) and DAR 1 compound (5) clicked with compound (8), the structure of which is as represented in FIG. 1A.
Analyse SMHR dénaturante Denaturing HRMS Analysis
Les résultats sont présentés dans le Tableau 15 ci-dessous. Tableau 15
Figure imgf000053_0001
The results are shown in Table 15 below. Table 15
Figure imgf000053_0001

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de préparation d'un mélange de conjugués anticorps-médicament comprenant majoritairement soit un conjugué de structure (A) telle que représentée figure 1 A, soit un conjugué de structure (B) telle que représentée figure 1 B, soit un conjugué de structure (C) telle que représentée figure 1C ; structures dans lesquelles : i) le symbole • représente une tête d'accroche de formule (Ha), (Ilb), (Ile) ou (Ild) : 1. Process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A) as represented in FIG. 1 A, or a conjugate of structure (B) as represented in FIG. 1 B, or a conjugate of structure (C) as represented in FIG. 1C; structures in which: i) the symbol • represents a hook head of formula (Ha), (Ilb), (Ile) or (Ild):
O O
(Ha) (Ha)
- T représente -(CH2)y- , y étant un entier allant de 0 à 6 ; - T represents -(CH 2 ) y - , y being an integer ranging from 0 to 6;
- W est -ORa, -COR2, -CONR3R4 OU -NR3COR4 ; - W is -ORa, -COR 2 , -CONR 3 R 4 OR -NR 3 COR 4 ;
- Ra est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd-R5, -CORb, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; - R a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d -R 5 , -COR b , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r - R5 ;
Rb est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd -R5, -O(CRcRdX-R5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; - R2 est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -(CRcRd)r-R5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CRcRd)r-R5,Rb is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d -R 5 , -O(CR c R d XR 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 or -( CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R5; - R 2 is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -R 5 ,
-O(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, -O(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5,-O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 ,
-O(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5 ou -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 or -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-( CR c R d ) r -R 5 ;
- R3 est -H, -(C1-C6)alkyle ou -(CH2)V-SO3H, de préférence R3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R4 est -(CH2CH2O)qR5, -(CRcRd)rR5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R5,- R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl; - R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 ,
-(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R5]2, -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R5]2, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-R5]2, ou -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-R5]2, de préférence R4 est -(CH2CH2O)qR5, -(CRcRd)rR5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R5, -(CRcRd)r<ONH-(CH2CH2O)q-R5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R5, ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R5 ; -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ] 2 , or -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -R5]2, preferably R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O ) q -R 5 , -(CR c R d ) r <ONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R5;
- chaque R5 est -(CH2)sR6 ; - each R 5 is -(CH 2 ) s R 6 ;
- chaque R6 est choisi parmi :
Figure imgf000055_0001
- each R 6 is chosen from:
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000056_0001
- Rc est H ; - R c is H;
- chaque Rd est choisi parmi -H, -CH2-SO3H ou -SO3H ; - each R d is chosen from -H, -CH 2 -SO 3 H or -SO 3 H;
- R7 est -H ou -CH3 ; - chaque q est un entier allant de 1 à 24 ; - R 7 is -H or -CH 3 ; - each q is an integer ranging from 1 to 24;
- chaque r est un entier allant de 1 à 8 ; - each r is an integer ranging from 1 to 8;
- chaque s est un entier allant de 0 à 6 ; - each s is an integer ranging from 0 to 6;
- chaque v est un entier allant de 1 à 6 ; ii) le symbol représente un bras de liaison qui est une liaison directe ; un pont -S-S- ;
Figure imgf000056_0003
ou un groupe de formule -R11-(A)Z-- each v is an integer ranging from 1 to 6; ii) the symbol represents a link arm which is a direct link; an -SS- bridge;
Figure imgf000056_0003
or a group of formula -R11-(A) Z-
- Ru est une liaison directe, un groupe R6-(CRcRd)r-CO-, R6-(CH2CH2O)q-(CH2)s-CO-, ou R6-CCRcRdX-NH-, où R6, Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - Ru is a direct bond, a group R6-(CR c R d ) r -CO-, R6-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, or R 6 -CCR c R d X-NH-, where R 6 , R c , R d , q, r and s are as defined above;
- A est un résidu d'acide aminé ; - A is an amino acid residue;
- z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; iii) le symbole représente un espaceur qui est une liaison directe ou un groupe de formule :
Figure imgf000056_0002
Figure imgf000057_0001
- z is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; iii) the symbol represents a spacer which is a direct bond or a group of formula:
Figure imgf000056_0002
Figure imgf000057_0001
- G est un sulfate, un sucre, un glucuronide, ou un galactoside, ledit sucre étant un groupe saccharide choisi de préférence parmi un acide bêta-glucuronique, un bêta-D- galactose, un beta-D-glucose, un alpha-D-mannose, un N-acétyl-D-glucosaminyle, un N- acétyl-D-galactosaminyle, un D-glucuronyle, un L-iduronyle, un D-glucopyranosyle, un D- galactopyranosyle, un D-mannopyranosyle ou un L-fucopyranosyle, de préférence G est un sulfate, un acide bêta-glucuronique, ou un bêta-D-galactose ; - G is a sulfate, a sugar, a glucuronide, or a galactoside, said sugar being a saccharide group preferably chosen from a beta-glucuronic acid, a beta-D-galactose, a beta-D-glucose, an alpha-D -mannose, N-acetyl-D-glucosaminyl, N-acetyl-D-galactosaminyl, D-glucuronyl, L-iduronyl, D-glucopyranosyl, D-galactopyranosyl, D-mannopyranosyl or L-fucopyranosyl , preferably G is sulfate, beta-glucuronic acid, or beta-D-galactose;
- Ri2 est -H ou -NO2 ; et iv) M est une molécule d'intérêt ; étant entendu que : chaque conjugué comprend au moins une tête d'accroche de formule (Ha) ou (Ilb), dans chacun des conjugués susmentionnés, l'un au moins du bras de liaison et de l'espaceur est présent ; ledit procédé comprenant : al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (ITb) :
Figure imgf000057_0002
bl) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (II'a) ou (Il'b) tel que défini ci-dessus, ou avec un composé de formule (II'c) ou (Il'd) :
Figure imgf000058_0001
dans lesquelles T et W sont tels que définis ci-dessus ; étant entendu que : - Ri2 is -H or -NO 2 ; and iv) M is a molecule of interest; it being understood that: each conjugate comprises at least one attachment head of formula (Ha) or (IIb), in each of the aforementioned conjugates, at least one of the connecting arm and of the spacer is present; said method comprising: al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (ITb):
Figure imgf000057_0002
b1) the reaction of the compound obtained in step a1) with a compound of formula (II'a) or (II'b) as defined above, or with a compound of formula (II'c) or (II 'd):
Figure imgf000058_0001
in which T and W are as defined above; Being heard that :
- si un composé (II'a) est utilisé à l'étape al) et un composé (II'a) est utilisé à l'étape bl), les deux composés (II'a) ont une structure différente ; - if a compound (II'a) is used in step al) and a compound (II'a) is used in step bl), the two compounds (II'a) have a different structure;
- si un composé (Il'b) est utilisé à l'étape al) et un composé (Il'b) est utilisé à l'étape bl), les deux composés (Il'b) ont une structure différente ; cl) la réaction du composé obtenu à l'étape bl) avec deux composés identiques ou non, répondant chacun à la formule (III) :
Figure imgf000058_0002
dans laquelle :
Figure imgf000058_0003
et s sont tels que définis ci-dessus ; - if a compound (II'b) is used in step al) and a compound (II'b) is used in step bl), the two compounds (II'b) have a different structure; cl) the reaction of the compound obtained in step b1) with two compounds, which may or may not be identical, each corresponding to the formula (III):
Figure imgf000058_0002
in which :
Figure imgf000058_0003
and s are as defined above;
- le bras de liaison l'espaceur et M sont tels que définis ci-
Figure imgf000058_0004
Figure imgf000058_0005
dessus, M étant identique ou non dans chaque composé (III) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (Il'b) ; b2) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (IV) :
Figure imgf000058_0006
dans laquelle : i) la tête d'accroche est un composé de formule (II"a), (II"b), (II"c), ou (II"d) : - the connecting arm, the spacer and M are as defined below
Figure imgf000058_0004
Figure imgf000058_0005
above, M being identical or not in each compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (II'b); b2) reaction of the compound obtained in step a1) with a compound of formula (IV):
Figure imgf000058_0006
in which: i) the grip head is a compound of formula (II"a), (II"b), (II"c), or (II"d):
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000059_0001
- T est tel que défini ci-dessus ; - T is as defined above;
- Y est “OR'a, -COR'2, -CONR'3R^ ou -NR'3COR^ , - Y is “OR'a, -COR' 2 , -CONR'3R^ or -NR'3COR^ ,
- R'a est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRd)r-R'5, -COR'b, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 ou -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; - R' a is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d ) r -R' 5 , -COR' b , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R ' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R' 5 or -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH -(CR c R d ) r -R'5;
R'b est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRJr-R'5,R' b is -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c RJr -R' 5 ,
-O(CRcRd)r-R'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r- R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 OU -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ;-O(CR c R d ) r -R' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r - R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r - R' 5 OR -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- R'2 est -OH, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -(CRcRd)r-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -OCCRcRd),- R'5, -O(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-(CH2)r-R'5, -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5 ou -O(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; - R' 2 is -OH, -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -(CR c R d ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -OCCR c R d ),- R' 5 , -O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R' 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R' 5 or -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- R3 est -H, -(C1-C6)alkyle ou -(CH2)V-SO3H, de préférence R3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R 3 is -H, -(C 1 -C 6 )alkyl or -(CH 2 ) V -SO 3 H, preferably R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
R4 est -(CH2CH2O)qR'5, -(CRcRJrR'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R'5, -(CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5, -(CH2CH2O)q- (CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R'5]2, -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-(OCH2CH2)q-R'5]2, -CH-[(CRcRd)r-CONH-(CRcRd)r-R'5]2, ou -CH-[(CRcRd)r- NHCO-(CRcRd)r-R'5]2, de préférence R'4 est -(CH2CH2O)qR'5, -(CRcRd)rR'5, -(CRcRd)r-NHCO-(CH2CH2O)q-R'5, -(CRcRd)r-CONH-(CH2CH2O)q-R'5, (CH2CH2O)q-(CH2)r-NHCO-(CRcRd)r-R'5, OU -(CH2CH2O)q-(CH2)r-CONH-(CRcRd)r-R'5 ; R 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R' 5 , -(CR c RJrR' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -( CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R' 5, -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5, -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R' 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R' 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5]2, or -CH-[(CR c R d ) r - NHCO-(CR c R d ) r -R'5]2, preferably R' 4 is -(CH 2 CH 2 O) q R' 5 , -(CR c R d ) r R' 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R' 5 , (CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R' 5 , OR -(CH 2 CH 2 O) q - (CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R'5;
- chaque R'5 est -(CH2)SR'6 ou -(CH2)SR'7 ; - each R′ 5 is —(CH 2 ) S R′ 6 or —(CH 2 ) S R′ 7 ;
- R'6 est choisi parmi :
Figure imgf000060_0001
- R′ 6 is chosen from:
Figure imgf000060_0001
Figure imgf000061_0001
Figure imgf000061_0001
- R'7 est -COOH ou -NR'gR'g ; - R' 7 is -COOH or -NR'gR'g;
- R'8 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R' 8 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R'9 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R'IO est -H ou -CH3 ; - R' 9 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl; - R'IO is -H or -CH 3 ;
- Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; et ii) le bras de liaison est une liaison directe ; un pont -S-S- ; ou un groupe de formule -R'11-(A)Z- ; - R c , R d , q, r and s are as defined above; and ii) the link arm is a direct link; an -SS- bridge; or a group of formula -R' 11 -(A) Z -;
- R'11- est une liaison directe, un groupe R'6-(CRcRd)r-CO-, R'6-(CH2CH2O)q-(CH2)s-CO-, ou R'6-(CRcRd)r-NH-, où R'6-, Rc, Rd, q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - R' 11 - is a direct bond, a group R' 6 -(CR c R d ) r -CO-, R'6-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, or R'6-(CR c R d ) r -NH-, where R' 6 -, R c , R d , q, r and s are as defined above;
- A est un résidu d'acide aminé ; - A is an amino acid residue;
- z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; et iii) l'espaceur et M sont tels que définis à l'étape cl), étant entendu que le bras de liaison et l'espaceur ne peuvent pas être simultanément une liaison directe ; c2) la réaction du composé obtenu à l'étape b2) avec un composé de formule (III) tel que défini à l'étape cl), la molécule d'intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (IV) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (Il'b) ; b3) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c3) la réaction du composé obtenu à l'étape b3) avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, la molécule d'intérêt M du composé (IV) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (III) ; ou bien al) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (II'a) ou (Il'b) ; b3) la réaction du composé obtenu à l'étape al) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c4) la réaction du composé obtenu à l'étape b3) avec un composé de formule (II'a), (Il'b), (II'c) ou (ITd) tel que défini ci-dessus ; dl) la réaction du composé obtenu à l'étape c4) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus, la molécule d'intérêt M étant identique ou non dans chaque composé (III). - z is equal to 1, 2, 3, 4 or 5; and iii) the spacer and M are as defined in step c1), it being understood that the connecting arm and the spacer cannot simultaneously be a direct connection; c2) the reaction of the compound obtained in step b2) with a compound of formula (III) as defined in step cl), the molecule of interest M of the compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (IV); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (II'b); b3) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III) as defined above; c3) the reaction of the compound obtained in step b3) with a compound of formula (IV) as defined above, the molecule of interest M of the compound (IV) being identical to or different from the molecule of interest M of compound (III); or alternatively al) the reaction of an antibody with a compound of formula (II'a) or (II'b); b3) reacting the compound obtained in step a1) with a compound of formula (III) as defined above; c4) reacting the compound obtained in step b3) with a compound of formula (II'a), (II'b), (II'c) or (ITd) as defined above; dl) the reaction of the compound obtained in step c4) with a compound of formula (III) as defined above, the molecule of interest M being identical or not in each compound (III).
2. Procédé de préparation selon la revendication 1, qui comprend les étapes al), bl) et cl). 2. Preparation process according to claim 1, which comprises steps a1), b1) and c1).
3. Procédé de préparation selon la revendication 2, dans lequel la tête d'accroche utilisée à l'étape al) répond à l'une des formules (II'a) ou (Il'b), et la tête d'accroche utilisée à l'étape bl) répond à l'une des formules (II'a), (Il'b), (II'c) ou (Il'd) dans lesquelles : 3. Preparation process according to claim 2, in which the attachment head used in step a1) corresponds to one of the formulas (II'a) or (II'b), and the attachment head used in step b1) corresponds to one of the formulas (II'a), (II'b), (II'c) or (II'd) in which:
- W est -CONR3R4 OU -NR3COR4, de préférence W est -CONR3R4 ; - W is -CONR 3 R 4 OR -NR 3 COR 4 , preferably W is -CONR 3 R 4 ;
- R3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R4 est -(CH2CH2O)q-(CH2)r-R5, ou -(CRcRd)r-R5 ; - R 4 is -(CH2CH2O)q-(CH2) r -R 5 , or -(CR c R d ) r -R5;
- chaque R5 est -(CH2)SR6 ; - each R 5 is -(CH 2 ) S R 6 ;
- R6 est choisi parmi : - R 6 is chosen from:
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26) SUBSTITUTE SHEET (RULE 26)
Figure imgf000063_0002
Figure imgf000063_0002
- Rc, Rd sont tels que définis à la revendication 1 ; - R c , R d are as defined in claim 1;
- q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
- r est un entier allant de 1 à 6. - r is an integer ranging from 1 to 6.
4. Procédé de préparation selon la revendication 3, dans lequel la tête d'accroche est un composé de formule (II'al), (II'a2), (II'a3), (II'a4), (II'a5), ou (II'a6) :
Figure imgf000063_0001
Figure imgf000064_0001
4. Preparation process according to claim 3, in which the attachment head is a compound of formula (II'al), (II'a2), (II'a3), (II'a4), (II'a5 ), or (II'a6):
Figure imgf000063_0001
Figure imgf000064_0001
Figure imgf000065_0001
Figure imgf000065_0001
5. Procédé de préparation selon la revendication 1, qui comprend les étapes al), b2) et c2). 5. Preparation process according to claim 1, which comprises steps a1), b2) and c2).
6. Procédé de préparation selon la revendication 5, dans lequel la tête d'accroche utilisé à l'étape b2) répond à l'une des formules (II"a), (II"b), (II"c) ou (II"d) dans lesquelles : 6. Preparation process according to claim 5, in which the attachment head used in step b2) corresponds to one of the formulas (II"a), (II"b), (II"c) or ( II"d) in which:
- Y est -CONR'3R'4 OU -NR'3COR'4, de préférence Y est -CONR'3R'4 ; - Y is -CONR' 3 R' 4 OR -NR' 3 COR' 4 , preferably Y is -CONR' 3 R'4;
- R'3 est -H ou -(C1-C6)alkyle ; - R' 3 is -H or -(C 1 -C 6 )alkyl;
- R'4 est -(CH2CH2O)q_(CH2)r-R'5, ou -(CRcRd)r-R'5 - R' 4 is -(CH2CH2O)q _ (CH2) r -R'5, or -(CR c R d ) r -R'5
- R'5 est _(CH2)SR'6 - R' 5 is _ (CH2) S R'6
- R'6 est choisi parmi : - R′ 6 is chosen from:
Figure imgf000066_0001
Figure imgf000066_0001
- Rc, Rd sont tels que définis à la revendication 1 ; - R c , R d are as defined in claim 1;
- q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - q is an integer ranging from 1 to 12, preferably q is an integer ranging from 1 to 8;
- r est un entier allant de 1 à 6. - r is an integer ranging from 1 to 6.
7. Procédé de préparation selon la revendication 6, dans lequel la tête d'accroche est un composé de formule (IT'al), (II"a2), (II"a3), (II"a4), (II"a5), (II"a6), (II"a7), 7. Preparation process according to claim 6, in which the attachment head is a compound of formula (IT'al), (II"a2), (II"a3), (II"a4), (II"a5 ), (II"a6), (II"a7),
(II"a8) ou (II'bl) :
Figure imgf000066_0002
Figure imgf000067_0001
(II"a8) or (II'bl):
Figure imgf000066_0002
Figure imgf000067_0001
Figure imgf000068_0001
8. Procédé de préparation d'un mélange de conjugués anticorps-médicament comprenant majoritairement soit un conjugué de structure (A), soit un conjugué de structure (B), soit un conjugué de structure (C), ces structures étant telles que définies à la revendication 1, qui comprend : a2) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, dans laquelle la tête d'accroche est uniquement un composé de formule (II"a) ou (II"b) ; b4) la réaction du composé obtenu à l'étape a2) avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, M étant identique ou non dans chaque composé (IV), étant entendu que :
Figure imgf000068_0001
8. Process for the preparation of a mixture of antibody-drug conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B), or a conjugate of structure (C), these structures being as defined in claim 1, which includes: a2) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined in claim 1, in which the attachment head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b4) the reaction of the compound obtained in step a2) with a compound of formula (IV) as defined in claim 1, M being identical or not in each compound (IV), it being understood that:
- si un composé (II"a) est utilisé à l'étape a2) et un composé (II"a) est utilisé à l'étape b4), les deux composés (II"a) ont une structure différente ; - if a compound (II"a) is used in step a2) and a compound (II"a) is used in step b4), the two compounds (II"a) have a different structure;
- si un composé (II"b) est utilisé à l'étape a2) et un composé (II"b) est utilisé à l'étape b4), les deux composés (II"b) ont une structure différente ; ou bien a2) la réaction d'un anticorps avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, dans laquelle la tête d'accroche est uniquement un composé de formule (II"a) ou (II"b) ; b5) la réaction du composé obtenu à l'étape a2) avec un composé de formule (II'a), (ITb), (II'c) ou (Il'd) tel que défini à la revendication 1 ; c5) la réaction du composé obtenu à l'étape b5) avec un composé de formule (III) tel que défini à la revendication 1, la molécule d'intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d'intérêt M du composé (IV). - if a compound (II"b) is used in step a2) and a compound (II"b) is used in step b4), the two compounds (II"b) have a different structure; or else a2 ) the reaction of an antibody with a compound of formula (IV) as defined in claim 1, in which the attachment head is only a compound of formula (II"a) or (II"b); b5) the reaction of the compound obtained in step a2) with a compound of formula (II'a), (ITb), (II'c) or (II'd) as defined in claim 1; c5) the reaction of the compound obtained in step b5) with a compound of formula (III) as defined in claim 1, the molecule of interest M of compound (III) being identical to or different from the molecule of interest M of compound ( IV).
9. Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le bras de liaison est une liaison directe ou un groupe de formule -Rn-(A)Z- dans laquelle Ru et A sont tels que définis à la revendication 1, et z est égal à 2, 3 ou 4. 9. Process of preparation according to any one of the preceding claims, in which the connecting arm is a direct bond or a group of formula -Rn-(A) Z - in which Ru and A are as defined in claim 1 , and z is equal to 2, 3 or 4.
10. Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'espaceur est une liaison directe ou un groupe de formule :
Figure imgf000069_0001
de préférence une liaison directe ou un groupe de formule : 10. Preparation process according to any one of the preceding claims, in which the spacer is a direct bond or a group of formula:
Figure imgf000069_0001
preferably a direct bond or a group of formula:
Figure imgf000070_0001
Figure imgf000070_0001
11. Procédé de préparation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel M est un principe actif choisi parmi : le méthotrexate, un immunomodulateur, la duocarmycine, la combrétastatine, la calichéamicine, la monométhylauristatine E (MMAE), la monométhylauristatine F (MMAF), la maytansine, le DM1, le DM4, le SN38, l'amanitine et ses analogues, la pyrrolobenzodiazépine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la pyrrolopyridodiazépine, un dimère de pyrrolopyridodiazépine, un inhibiteur de l'histone désacétylase, un inhibiteur de tyrosine kinase, la ricine ; de préférence M est l'amanitine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la MMAF ou la MMAE. 11. Process of preparation according to any one of the preceding claims, in which M is an active ingredient chosen from: methotrexate, an immunomodulator, duocarmycin, combretastatin, calicheamicin, monomethylauristatin E (MMAE), monomethylauristatin F ( MMAF), maytansine, DM1, DM4, SN38, amanitine and its analogues, pyrrolobenzodiazepine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, pyrrolopyridodiazepine, a pyrrolopyridodiazepine dimer, a histone deacetylase inhibitor, a tyrosine inhibitor kinase, ricin; preferably M is amanitine, a pyrrolobenzodiazepine dimer, MMAF or MMAE.
12. Mélange de conjugués anticorps-médicament comprenant majoritairement soit un conjugué de structure (A), soit un conjugué de structure (B), soit un conjugué de structure (C), qui est susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, étant entendu que lorsque le mélange contient majoritairement un conjugué de structure (A), les deux molécules d'intérêt M fixées sur l'anticorps sont différentes l'une de l'autre. 12. Mixture of antibody-drug conjugates mainly comprising either a conjugate of structure (A), or a conjugate of structure (B), or a conjugate of structure (C), which is capable of being obtained by the method according to any one of the preceding claims, it being understood that when the mixture mainly contains a conjugate of structure (A), the two molecules of interest M attached to the antibody are different from each other.
13. Composition comprenant un mélange de conjugués anticorps-médicament selon la revendication 12. 13. A composition comprising a mixture of antibody-drug conjugates according to claim 12.
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2708E (en) 1902-08-14 1904-10-05 Jean Marie Lallemand Process and product called phospho-zinco-alumino-magnesian applicable to the treatment of sewage and all water containing organic matter and unsanitary albuminoids
WO2015004400A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Universite Francois Rabelais Novel antibody-drug conjugates and the use of same in therapy
WO2015179734A1 (en) * 2014-05-23 2015-11-26 Novartis Ag Methods for making conjugates from disulfide-containing proteins
WO2020234541A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Mc Saf Antibody-drug conjugates and their use in therapy
WO2021170961A1 (en) * 2020-02-27 2021-09-02 Mc Saf Anti-cd56 antibody-drug conjugates and their use in therapy
WO2022018371A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 Mc Saf Compounds capable of binding to proteins and conjugates obtained from these compounds

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2708E (en) 1902-08-14 1904-10-05 Jean Marie Lallemand Process and product called phospho-zinco-alumino-magnesian applicable to the treatment of sewage and all water containing organic matter and unsanitary albuminoids
WO2015004400A1 (en) 2013-07-11 2015-01-15 Universite Francois Rabelais Novel antibody-drug conjugates and the use of same in therapy
WO2015179734A1 (en) * 2014-05-23 2015-11-26 Novartis Ag Methods for making conjugates from disulfide-containing proteins
WO2020234541A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 Mc Saf Antibody-drug conjugates and their use in therapy
WO2021170961A1 (en) * 2020-02-27 2021-09-02 Mc Saf Anti-cd56 antibody-drug conjugates and their use in therapy
WO2022018371A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 Mc Saf Compounds capable of binding to proteins and conjugates obtained from these compounds

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MAXIMILLIAN T. W. LEE ET AL: "Enabling the controlled assembly of antibody conjugates with a loading of two modules without antibody engineering", CHEMICAL SCIENCE, vol. 8, no. 3, 1 January 2017 (2017-01-01), United Kingdom, pages 2056 - 2060, XP055434935, ISSN: 2041-6520, DOI: 10.1039/C6SC03655D *

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