WO2022264971A1 - Method for evaluating quality of sperm - Google Patents

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WO2022264971A1
WO2022264971A1 PCT/JP2022/023655 JP2022023655W WO2022264971A1 WO 2022264971 A1 WO2022264971 A1 WO 2022264971A1 JP 2022023655 W JP2022023655 W JP 2022023655W WO 2022264971 A1 WO2022264971 A1 WO 2022264971A1
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sperm
nitroxyl
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文紀 兵藤
政之 松尾
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国立大学法人東海国立大学機構
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    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
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    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • G—PHYSICS
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing

Definitions

  • the present disclosure relates to methods of evaluating sperm quality, compounds and kits therefor, and methods of testing or diagnosing male infertility.
  • Male sperm abnormalities are thought to be one of the causes of infertility, and in general, it is necessary to conduct tests to determine whether sperm are normal or not at a specialized medical institution.
  • the present disclosure provides a method of assessing sperm quality.
  • the present disclosure also provides methods of testing or diagnosing male infertility through such evaluation methods.
  • the present disclosure provides: (Item 1) A method of assessing sperm quality comprising: a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution; measuring a signal obtained from the mixture; and assessing sperm quality based on said signal.
  • (Item 1C) The method according to any one of the preceding items, wherein the nitrogen radical compound is 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl or 2,2-di(alkyl-substituted phenyl)-1-picrylhydrazyl. .
  • (Item 2) A method of assessing sperm quality comprising: a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution; measuring a signal obtained from the mixture; and assessing sperm quality based on said signal.
  • the nitroxyl radical compound is a 5- or 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  • the nitroxyl radical compound has the following formula wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-, E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently hydrogen, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, an optionally substituted alkynyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, optionally substituted heterocycloalkyl group, is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which
  • the nitroxyl radical compound has the following formula 5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A method according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
  • the five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula A method according to any one of the preceding items, represented by: (Item 6) A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group. (Item 6A) A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an alkyl group. (Item 6B) A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
  • R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A method according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
  • the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound is 3-(carboxy)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-cyano-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-(2-isothiocyanatoethylcarbamoyl)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-(2-iodoacetamido)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical, 3-maleimido-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyloxy
  • the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is 4-acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-(2-chloroacetamido)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-cyano-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 2,2,6,6-tetramethyl-4-(propargyloxy)piperidine 1-oxyl free radical, 4-trimethylammonium-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical 4-oxo-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-carboxy-2,2, 6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-hydroxy-2,
  • the nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
  • the test solution further comprises a reducing agent.
  • the reducing agent comprises NADH or GSH.
  • the sperm quality comprises sperm motility.
  • (Item 12) A method according to any one of the preceding items, wherein the signal comprises a signal detected from the mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) or electron spin resonance (ESR) methods.
  • DNP dynamic nuclear polarization
  • ESR electron spin resonance
  • (Item 13) A method according to any one of the preceding items, wherein the step of assessing sperm quality is performed by comparing the signal or a value derived therefrom with a reference value for assessing sperm quality.
  • the step of evaluating the quality of the sperm is performed by comparing the number and/or motility of the sperm calculated from the signal with a reference value for evaluating the quality of the sperm. or the method described in paragraph 1.
  • the step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein a decrease in the mitochondrial metabolism or the energy production is associated with a decrease in motility and/or function of the sperm.
  • a method according to any one of the preceding items, which means The step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein the mitochondrial metabolism or energy production value is observed in a normal semen test.
  • sperm motility and/or function is determined to be abnormal when compared to production and deviating from said normal values.
  • (Item 17A) A method for treating or preventing sperm or a sperm carrier comprising: If the evaluation by the method according to any one of items 1 to 17 determines that the sperm quality requires treatment or prevention, the treatment or prevention is given to the sperm or the sperm holder. A method comprising the step of applying.
  • (Item 18) A nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for evaluating sperm quality.
  • (Item 19) A nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
  • the nitroxyl radical compound has the following formula wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-, E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, an optionally substituted alkynyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, optionally substituted heterocycloalkyl group, is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle, R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached; R 1 and R 3 may together
  • the nitroxyl radical compound has the following formula 5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A compound or a salt thereof according to any one of the above items, each independently as described in any one of the above items.
  • the five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
  • R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted
  • (Item 23A) The compound or salt thereof according to any one of the preceding items, wherein R 9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  • (Item 23B) The compound or salt thereof according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  • (Item 25) 3-[2-(2-Iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or a salt thereof for assessing sperm quality.
  • (Item 26) 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or salt thereof for assessing sperm quality.
  • a kit for assessing sperm quality comprising: A kit comprising a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof.
  • a kit for assessing sperm quality comprising: A kit containing a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof.
  • nitroxyl radical compound is a 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  • the test solution further contains a reducing agent.
  • Item 30 A kit according to any one of the preceding items, further comprising a DNP-MRI device.
  • the nitroxyl radical compound has the following formula wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-, E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, an optionally substituted alkynyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, optionally substituted heterocycloalkyl group, is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle, R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached; R 1 and R 3 may together
  • the nitroxyl radical compound has the following formula 5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A kit according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
  • the five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
  • a kit according to any one of the preceding items, represented by (Item 32) The kit according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  • R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A kit according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
  • (Item 35) A kit according to any one of the preceding items, wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  • (Item 35A) A kit according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  • the nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
  • the reducing agent comprises NADH or GSH.
  • a device for assessing sperm quality comprising: a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixed liquid in which a population of spermatozoa is mixed with a test liquid containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof; sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
  • (Item 41A) The compound or salt thereof according to any one of the above items, wherein the oxygen radical of the oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
  • (Item 42) A device for assessing sperm quality, comprising: a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixed solution in which a population of spermatozoa and a test solution containing a nitroxyl radical compound are mixed; sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
  • the nitroxyl compound is a 5-membered cyclic nitroxyl compound.
  • nitroxyl compound is a 6-membered cyclic nitroxyl compound.
  • the nitroxyl radical compound has the following formula wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-, E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, an optionally substituted alkynyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, optionally substituted heterocycloalkyl group, is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may
  • the nitroxyl radical compound has the following formula 5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A device according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
  • the five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula A device according to any one of the preceding items, represented by: (Item 44) A device according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  • R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A device according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
  • (Item 45B) A device according to any one of the preceding items, wherein R 9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  • (Item 46) A device according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  • the nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
  • the test liquid further comprises a reducing agent.
  • (Item 49) A device according to any one of the preceding items, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH.
  • the sperm quality comprises sperm motility.
  • the signal comprises a signal detected from the mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) or electron spin resonance (ESR) methods.
  • the sperm quality assessment means compares the signal or a value derived therefrom with a reference value for assessing sperm quality.
  • the reference value includes a value indicating the quality of sperm obtained from sperm derived from a healthy subject.
  • reaction stopping means for performing a reaction stopping process for stopping the reaction between the test liquid and the sperm population on the mixed liquid.
  • the quenching treatment comprises addition of a surfactant or organic solvent, or heat treatment.
  • a method of testing or diagnosing male infertility in a subject comprising: a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution; measuring a signal obtained from the mixture; and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
  • a method of testing or diagnosing male infertility in a subject comprising: a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution; measuring a signal obtained from the mixture; and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
  • a test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof; a container containing the test solution; If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject; and instructions for use, the instructions comprising: A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitrogen radical compound or the oxygen radical compound or a salt thereof, Measuring a signal obtained from the mixed solution, A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
  • a test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject a test solution containing a nitroxyl radical compound; a container containing the test solution; If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject; and instructions for use, the instructions comprising: A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitroxyl radical compound or a salt thereof, Measuring a signal obtained from the mixed solution, A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
  • (Item B1) A composition comprising a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for evaluating sperm quality.
  • (Item B2) The composition of item B1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
  • (Item C1) Use of a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for evaluating sperm quality.
  • (Item C2) Use according to item C1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item D1) A composition comprising a nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
  • (Item D2) The composition of item D1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
  • (Item E1) Use of a nitroxyl radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for evaluating sperm quality.
  • (Item E2) Use according to item E1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item F1) Use of a nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
  • (Item F2) Use according to item F1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item G1) A composition comprising a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
  • (Item H1) Use of a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for testing or diagnosing male infertility in a subject.
  • (Item H2) Use according to item H1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item I1) Use of a nitrogen or oxygen radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
  • Item I2) Use according to item I1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item J1) A composition comprising a nitroxyl radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
  • (Item J2) The composition of item J1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
  • (Item K1) Use of a nitroxyl radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for testing or diagnosing male infertility in a subject.
  • (Item K2) Use according to item K1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • (Item L1) Use of a nitroxyl radical compound or salt thereof to test or diagnose male infertility in a subject.
  • (Item L2) Use according to item L1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
  • the quality of sperm can be evaluated by a simple method, and a simple sperm test can be easily performed at home or the like.
  • a simple sperm test can be easily performed at home or the like.
  • FIG. 1 is a graph showing reactivity of nitroxyl radical compounds to mitochondria and cytosol (including cytosol).
  • CMP is 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy (trade name: 3-carbamoyl-PROXYL).
  • homoge indicates the liver homogenate solution
  • home+kcn indicates the homogenate plus the liver-stopping drug potassium cyanide KCN
  • cytosol indicates the cytosol.
  • FIG. 2A is an image of sperm without and after heat treatment taken by a clinical sperm motility tester (CASA: computer-assisted sperm analysis). In FIG. 2A (left), sperm without heat treatment (37° C.) are active, while in FIG.
  • FIG. 2A (right), sperm after heat treatment (60° C.) have stopped motile.
  • FIG. 2B (left) shows a graph of sperm motility without and after heat treatment.
  • FIG. 2B (right) is a graph showing the difference in reactivity between sperm without and after heat treatment and the probe (nitroxyl radical compound).
  • FIG. 3A is an image of sperm without and after KCN addition taken by CASA. In FIG. 2A (left, no KCN addition), sperm motility was 92%, while in FIG. 2B (right, KCN addition), probe reaction rate was significantly reduced when KCN addition stopped mitochondrial function. .
  • FIG. 5 is a schematic diagram of a current sperm diagnostic system (top) and a diagnostic system according to the present disclosure (bottom).
  • group means a monovalent group unless otherwise specified. Examples of non-univalent groups include alkylene groups (divalent) and the like. In addition, in the following description of substituents and the like, the term “group” may be omitted.
  • substituents defined by “optionally substituted” or “substituted” is not particularly limited as long as it can be substituted, and 1 or Multiple. Also, unless otherwise indicated, the description of each substituent also applies when that substituent is part or a substituent of another substituent.
  • any portion of the group modified by "optionally substituted” or “substituted” in this specification may be substituted.
  • “optionally substituted arylalkyl” and “substituted arylalkyl” can be substituted on the aryl portion or substituted on the alkyl portion, and both the aryl and alkyl portions can be may be substituted.
  • the substituents in the case of "optionally substituted” may be one or more identical or different substituents selected from Substituent Group I below.
  • the types of atoms in the substituents involved in bonding are not particularly limited by the types of substituents, it is preferred that the compound formed by substitution exists stably.
  • the atom to which the substituent is attached is an oxygen atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • the attachment point in the substituent below is generally limited to a carbon atom and selected from them.
  • Substituent Group I includes halogen, hydroxy, oxo, carboxy, amino, imino, hydroxyamino, hydroxyimino, formyl, formyloxy, carbamoyl, sulfamoyl, sulfanyl, sulfino, sulfo, thioformyl, thiocarboxy, dithiocarboxy, thiocarbamoyl, cyano, nitro, nitroso, azide, hydrazino, ureido, amidino, amidinoamino, unsubstituted or substituted alkyl, unsubstituted or substituted alkenyl, unsubstituted or substituted alkynyl, unsubstituted or substituted aryl, unsubstituted or substituted cycloalkyl, unsubstituted or substituted heteroaryl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl,
  • C 1-6 means having 1 to 6 carbon atoms.
  • C 1-4 means that the number of carbon atoms is 1 to 4
  • C 1-3 means that the number of carbon atoms is 1 to 3. means.
  • the description with a carbon number limitation is only a preferred numerical range, and the present disclosure is intended to include groups having substituents with a carbon number other than the specified carbon number within the scope of the present disclosure. .
  • heteroatom refers to atoms other than carbon atoms and hydrogen atoms, such as oxygen atoms, nitrogen atoms, sulfur atoms, and the like.
  • a group containing a heteroatom is a hetero group (e.g., a heteroaryl group (meaning that an aryl group contains at least a heteroatom)) or a hetero group (e.g., a heterocyclic group (a ring group ( It means that the carbocyclic group) contains at least one heteroatom.)) and the like.
  • nitrogen radical compound means a compound in which one or more nitrogen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons.
  • stable nitrogen radical compounds include, but are not limited to, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and the like.
  • DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
  • nitrogen radical compound it is sufficient that "one or more nitrogen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons", and other atoms ( For example, oxygen) may or may not have an unpaired electron.
  • oxygen radical compound means a compound in which one or more oxygen atoms among atoms constituting the compound have unpaired electrons.
  • stable oxygen radical compounds include the galvinoxyl free radical (aka 2,6-di-tert-butyl- ⁇ -(3,5-di-tert-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadiene-1 -ylidene)-p-tolyloxy, free radical), and nitroxyl radical compounds.
  • oxygen radical compound when the term “oxygen radical compound” is used, it is sufficient that "one or more oxygen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons", and other atoms ( nitrogen) may or may not have an unpaired electron.
  • nitroxyl radical compound means a compound containing a nitroxyl radical group, and the nitroxyl radical group (>N—O.) forms a nitroxide group in which an oxygen atom and a nitrogen atom are bonded. It is a group characterized in that the oxygen atom having an unpaired electron.
  • the nitroxyl radical compound of the present disclosure is not particularly limited as long as it has a nitroxyl radical group and can exhibit the functions of the present disclosure.
  • a "cyclic nitroxyl radical compound” means that the nitrogen atom of the nitroxyl radical is a ring (e.g., non-aromatic or aromatic carbocycle, non-aromatic or It is a compound that is one of the constituent atoms.
  • cyclic nitroxyl radical compounds include five-membered cyclic nitroxyl radical compounds (eg, 2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy and derivatives thereof such as 3-(carboxy) -2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy), and 6-membered cyclic nitroxyl radical compounds (e.g., TEMPO (2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl), AZADO (2-azaadamantane-N-oxyl), Me-AZADO (1-methyl-2-azaadamantane-N-oxyl), nor-AZADO (9-azanoradamantane-N-oxyl)), It is not limited to these.
  • TEMPO 2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl
  • AZADO 2-azaadamantane-N-oxyl
  • Me-AZADO 1-methyl-2-azaadamantane-N-oxyl
  • halogen-free anions include carbonate, hydrogen carbonate, nitrate, sulfate, phosphate, acetate, propionate, butyrate, formate, maleate, fumarate, tartrate, citrate, stearate, succinate, ethylsuccinate, malonate, lactobionate, gluconate, glucoheptonate, benzoate, methanesulfonate, benzenesulfonic acid, paratoluenesulfonate (tosylate ion), lauryl sulfate ion, malate ion, ascorbate ion, mandelate ion, saccharinate ion, xinafoate ion, pamoate ion, cinnamate ion, adipate ion, cysteine ion, N-acetylcysteine ion , ionic acid ion, nicotinate i
  • radical compounds are highly reactive chemical species, and many of them are unstable and disappear after a certain amount of life due to interactions with surrounding substances.
  • nitroxyl radical compounds the electron-withdrawing property of the nitrogen atom stabilizes the unpaired electrons on the oxygen.
  • This nitroxy radical is P-type, that is, the type that releases electrons from the nitroxy radical and becomes an oxoammonium cation. It is divided into types in which type reactions are stably performed.
  • P-type can be used as a positive electrode active material, N, and a negative electrode active material.
  • an alkyl group refers to an atomic group obtained by removing one hydrogen atom from an aliphatic saturated hydrocarbon.
  • the alkyl group is, for example, a saturated aliphatic hydrocarbon group such as methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, and has a substituent. It may or may not have
  • the substituent is not particularly limited, and examples thereof include an alkoxy group, an aryl group, and a heteroaryl group. These substituents may further have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the alkyl group is not particularly limited, but from the viewpoint of availability and cost, It can be 8, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, or 1.
  • the alkenyl group refers to, for example, a vinyl group, an allyl group, an unsaturated aliphatic hydrocarbon group containing a double bond such as a butadienyl group, and may or may not have a substituent. good.
  • the number of carbon atoms in the alkenyl group is not particularly limited, but 2 to 20, 2 to 18, 2 to 16, 2 to 14, 2 to 12, 2 to 10, 2 to 8, 2 to 6, 2 to 5, 2 to It can be 4, 2-3, or 2.
  • the alkoxy group refers to a functional group in which one of the ether bonds is substituted with an aliphatic hydrocarbon group, such as a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, and the aliphatic hydrocarbon group has a substituent. may or may not have.
  • the number of carbon atoms in the alkoxy group is not particularly limited, but is 1-20, 1-18, 1-16, 1-14, 1-12, 1-10, 1-8, 1-6, 1-5, 1- It can be 4, 1-3, 1-2, or 1.
  • the aryl group refers to, for example, an aromatic hydrocarbon group such as a phenyl group, a naphthyl group, a biphenyl group, an anthracenyl group, a phenanthryl group, a terphenyl group, and a pyrenyl group. It does not have to be.
  • the number of carbon atoms in the aryl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 6-18.
  • the arylalkyl group is an alkyl group having an aromatic hydrocarbon as a substituent, and specific examples include a phenylmethyl group (benzyl group), ⁇ , ⁇ -dimethylbenzyl group, 1- phenylethyl group, 2-phenylethyl group, 1-phenylpropyl group, 2-phenylpropyl group, 3-phenylpropyl group, naphthalen-1-ylmethyl group, naphthalen-2-ylmethyl group, naphthalen-1-ylethyl group, naphthalene -2-ylethyl group, anthracen-1-ylmethyl group, anthracen-2-ylmethyl group and anthracen-9-ylmethyl group.
  • the number of carbon atoms in the arylalkyl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 7-19.
  • the heteroaryl group refers to an aromatic group having one or more atoms other than carbon in the ring, such as furanyl, thiophenyl, benzofuranyl, dibenzofuranyl, pyridyl, quinolinyl, etc. It may or may not have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the heteroaryl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 3-18.
  • Halogen as used herein means an atom selected from fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • a hydroxy group refers to an atomic group —OH in which one oxygen atom and one hydrogen atom are bonded.
  • a "cyano group” is a -CN monovalent group.
  • an amino group refers to a monovalent group represented by —NH 2 or a group in which H is substituted with another substituent.
  • Substituents for substitution include, for example, aryl groups, heteroaryl groups, linear alkyl groups, branched alkyl groups, and the like.
  • aryl group and the heteroaryl group a phenyl group, a naphthyl group, a pyridyl group and a quinolinyl group are preferable. These substituents may be further substituted.
  • the number of carbon atoms is not particularly limited, but is preferably 2 or more and 50 or less, more preferably 6 or more and 40 or less, and particularly preferably 6 or more and 30 or less.
  • an alkylamino group refers to a functional group in which an aliphatic hydrocarbon group such as a methyl group, an ethyl group, or an n-propyl group is bonded to an amino group.
  • the alkylamino group may or may not have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the alkylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
  • a dialkylamino group as used herein refers to a functional group in which two aliphatic hydrocarbon groups such as a dimethyl group and a diethyl group are bonded to an amino group.
  • the two aliphatic hydrocarbon groups may be the same or different.
  • a dialkylamino group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the dialkylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
  • the arylamino group refers to, for example, phenylamino, p-tolylamino, 2-naphthylamino groups, and the like.
  • a diarylamino group refers to a substituent such as a diphenylamino group or a dinaphthylamino group, and the aromatic ring in these substituents may be substituted with an alkyl group, an alkoxy group, or the like.
  • an alkylcarbonyloxy group refers to a functional group such as an acetoxy group in which one side of an ether bond is substituted with an alkylcarbonyl group.
  • An alkylcarbonyloxy group may or may not have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the alkylcarbonyloxy group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
  • an arylcarbonyloxy group refers to a functional group such as a benzoyloxy group in which one side of an ether bond is substituted with an arylcarbonyl group.
  • An arylcarbonyloxy group may or may not have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the arylcarbonyloxy group is not particularly limited, it is preferably in the range of 6 or more and 40 or less.
  • an alkylcarbonylamino group refers to a functional group in which an alkylcarbonyl group such as an acetyl group is bonded to an amino group.
  • An alkylcarbonylamino group may or may not have a substituent.
  • the number of carbon atoms in the alkylcarbonylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
  • an arylcarbonylamino group represents a carbonylamino group substituted with a 5- to 10-membered monocyclic or bicyclic carboaryl group such as benzoylamino or naphthoylamino.
  • cycloalkyl means a non-aromatic saturated hydrocarbon ring group, which has a partially bridged structure, a partially spirolated structure, and one or two or more carbonyl structures. Also includes those with “C 3-20 cycloalkyl” means monocyclic or bicyclic cycloalkyl having 3 to 20 carbon atoms. “C 3-6 cycloalkyl” means monocyclic cycloalkyl having 3 to 6 carbon atoms. Specific examples of C 3-6 cycloalkyl include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl.
  • C 3-10 cycloalkyl means monocyclic or bicyclic cycloalkyl having 3 to 10 carbon atoms. Specific examples of C 3-10 cycloalkyl include C 3-6 cycloalkyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, bicyclo[4.1.0]heptyl, bicyclo[3.3.0]octyl, bicyclo Examples include, but are not limited to, [4.2.0]octyl, bicyclo[4.3.0]nonyl, decahydronaphthyl, and the like.
  • a cycloalkyl group as a substituent or part thereof may be fused with an aryl and/or heteroaryl ring.
  • a cyclohexyl group may be fused with a benzene ring to form a 1,2,3,4-tetrahydronaphthalenyl group, where any of the possible carbon atoms on the cyclohexane ring are Or it binds to a group or an atom thereof close to the mother skeleton.
  • Cycloalkyl groups are 1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl, 1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl, indan-1-yl, indan-2-yl, 5,6 , 7,8-tetrahydroquinolin-5-yl, 5,6,7,8-tetrahydroquinolin-6-yl.
  • heterocycloalkyl is composed of 3 or more atoms, including the same or different 1 or 2 or more heteroatoms selected from the group consisting of oxygen, nitrogen and sulfur atoms. means a non-aromatic saturated or partially unsaturated heterocyclic ring, including those with partially bridged structures and those that are partially spiroified. Heterocycloalkyls can have structures in which a non-aromatic heterocyclic ring is fused with an aryl ring and/or a heteroaryl ring.
  • R acyl is hydrogen, optionally substituted alkyl, optionally substituted alkenyl , optionally substituted alkynyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, or optionally substituted heterocycloalkyl.
  • Specific examples of acyl include, but are not limited to, formyl, and the illustrated groups of alkylcarbonyl, arylcarbonyl, and heteroarylcarbonyl, and the like.
  • haloacyl include, but are not limited to, fluoroacetyl, chloroacetyl, bromoacetyl, iodoacetyl and the like.
  • alkoxy is a monovalent radical of -O-alkyl.
  • Preferred examples of alkoxy include C 1-6 alkoxy (ie C 1-6 alkyl-O-), C 1-4 alkoxy (ie C 1-4 alkyl-O-) and the like.
  • C 1-4 alkoxy examples include methoxy (CH 3 O—), ethoxy (CH 3 CH 2 O—), n-propoxy (CH 3 (CH 2 ) 2 O—), isopropoxy ((CH 3 ) 2 CHO-), n-butoxy (CH 3 (CH 2 ) 3 O-), isobutoxy ((CH 3 ) 2 CHCH 2 O-), tert-butoxy ((CH 3 ) 3 CO-), sec-butoxy (CH 3 CH 2 CH(CH 3 )O—) and the like.
  • C 1-6 alkoxy examples include C 1-4 alkoxy, n-pentyloxy (CH 3 (CH 2 ) 4 O-), isopentyloxy ((CH 3 ) 2 CHCH 2 CH 2 O-), neopentyloxy ((CH 3 ) 3 CCH 2 O—), tert-pentyloxy (CH 3 CH 2 C(CH 3 ) 2 O—), 1,2-dimethylpropoxy (CH 3 CH(CH 3 )CH( CH 3 )O—) and the like, but are not limited thereto.
  • haloalkyl refers to a monovalent halogenated alkyl group in which one or more hydrogens on the alkyl group have been replaced with a halogen.
  • perhaloalkyl also means a haloalkyl in which all hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogens.
  • perfluoroethyl is --CF 2 CF 3
  • perchloro-n-propyl is --CCl 2 CCl 2 CCl 3 .
  • haloalkyl include C 1-6 haloalkyl, C 1-4 haloalkyl, C 1-3 haloalkyl and the like.
  • C 1-3 alkyl include fluoromethyl, chloromethyl, bromomethyl, difluoromethyl, dichloromethyl, dibromomethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, tribromomethyl, fluorochloromethyl, difluorochloromethyl, fluorodichloromethyl , fluoroethyl, chloroethyl, bromoethyl, trifluoroethyl, trichloroethyl, tribromoethyl, perfluoroethyl, perchloroethyl, perbromoethyl, perfluoropropyl, perchloropropyl, perbromopropyl, perfluoroisopropyl, perchloroisopropyl, perbromo Examples include, but are not limited to, isopropyl and the like.
  • C 1-4 alkyl include, but are not limited to, C 1-3 haloalkyl, perfluorobutyl, perchlorobutyl, perbromobutyl, perfluoroisobutyl, perfluoro-t-butyl and the like.
  • C 1-6 alkyl include C 1-4 haloalkyl, perfluoro-n-pentyl, perfluoroisopentyl, perfluoroneopentyl, perfluorotert-pentyl, perfluoro-1,2-dimethylpropyl, etc. It is not limited to these.
  • haloalkoxy and haloalkyloxy are —O-haloalkyl monovalent radicals in which one or more hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogen.
  • perhaloalkoxy means a haloalkoxy in which all hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogens.
  • perfluoroethoxy is -OCF 2 CF 3
  • perchloro-n-propoxy is -OCCl 2 CCl 2 CCl 3 .
  • Preferred examples of haloalkoxy include C 1-6 haloalkoxy, C 1-4 haloalkoxy, C 1-3 haloalkoxy and the like.
  • C 1-3 alkoxy include fluoromethoxy, chloromethoxy, bromomethoxy, difluoromethoxy, dichloromethoxy, dibromomethoxy, trifluoromethoxy, trichloromethoxy, tribromomethoxy, fluorochloromethoxy, difluorochloromethoxy, fluorodichloro Methoxy, fluoroethoxy, chloroethoxy, bromoethoxy, trifluoroethoxy, trichloroethoxy, tribromoethoxy, perfluoroethoxy, perchloroethoxy, perbromoethoxy, perfluoropropoxy, perchloropropoxy, perbromopropoxy, perfluoroisopropoxy, perchloro Examples include, but are not limited to, isopropoxy, perbromoisopropoxy, and the like.
  • C 1-4 alkoxy examples include, but are not limited to, C 1-3 haloalkoxy, perfluorobutoxy, perchlorobutoxy, perbromobutoxy, perfluoroisobutoxy, perfluoro-t-butoxy and the like.
  • C 1-6 alkoxy examples include C 1-4 haloalkoxy, perfluoro-n-pentyloxy, perfluoroisopentyloxy, perfluoroneopentyloxy, perfluorotert-pentyloxy, perfluoro-1,2-dimethylpropoxy and the like. include, but are not limited to:
  • alkylsulfonyl means a sulfonyl group substituted with the above “alkyl”.
  • C 1-6 alkylsulfonyl is preferably “C 1-4 alkylsulfonyl”. Specific examples of “C 1-6 alkylsulfonyl” include, but are not limited to, methylsulfonyl, propionylsulfonyl, butyrylsulfonyl and the like.
  • Protecting group refers to a group of atoms that, when attached to a reactive functional group in a molecule, masks, reduces or prevents the reactivity of the functional group.
  • the compounds of the present disclosure may be substituted with protecting groups as appropriate or necessary at any position such as any of R 1 to R 4 or substituents thereof or other substituents thereof, and the protecting groups are Compounds containing are also within the scope of this disclosure.
  • protecting groups can be selectively removed during the synthetic process, if desired. Examples of protecting groups are in Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 5th Edition, 2014, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, vols.
  • nitrogen protecting groups include formyl, acetyl, trifluoroacetyl, benzyl, benzyloxycarbonyl (“CBZ”), tert-butoxycarbonyl (“Boc”), trimethylsilyl (“TMS”), 2-trimethylsilylethanesulfonyl. (“TES”), trityl and substituted trityl groups, allyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (“FMOC”), nitro-veratryloxycarbonyl (“NVOC”), etc. not.
  • hydroxyl protecting groups are those in which the hydroxyl group is acylated (esterified) or alkylated, such as benzyl and trityl ethers, as well as alkyl ethers, tetrahydropyranyl ethers, trialkylsilyl ethers such as TMS, triethylsilyl, t-butyldimethylsilyl (TBDMS), triisopropylsilyl (TIPS)), alkyldiarylsilyl ethers (eg t-butyldiphenylsilyl (TBDPS)), triarylsilyl ethers (eg triphenylsilyl), glycol Ethers (eg, ethylene glycol ether, propylene glycol ether, etc.), and allyl ethers include, but are not limited to.
  • the amino group possessed by the compound of the present disclosure may be protected with a nitrogen protecting group.
  • An amino group in the substituents listed in the substituent group may be further protected with a nitrogen protecting group, and the protected substituent may be used as the substituent.
  • a hydroxy group possessed by the compound of the present disclosure (e.g., a hydroxy group as a substituent, a hydroxy group in the substituent possessed by the compound, a hydroxy group in the above substituent groups, etc.) is also protected with a hydroxy-protecting group.
  • a hydroxy group in a substituent listed in a substituent group may be further protected with a hydroxyl protecting group (such as a silyl ether) described herein, and the protected substituent may be may be used.
  • the nitroxyl radical compound has the formula wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-, E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-; R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted alkenyl group, an optionally substituted alkynyl group, an optionally substituted cycloalkyl group, optionally substituted heterocycloalkyl group, is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle, R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which
  • the nitroxyl radical compound has the formula 5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A , and R 10B are , as defined herein (eg, Section 1).
  • the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound has the formula wherein said 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 6A , and R 10A are as defined herein (eg, item 1).
  • the nitroxyl radical compounds of the present disclosure are molecular be.
  • Such nitroxyl radical compounds include TEMPO (2,2,6,6-tetramethylpiperidinooxyl) moieties or PROXYL (2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy) moieties is a molecule having
  • the oxidizing agent is not particularly limited as long as it is an oxidizing agent that oxidizes nitroxyl radicals, and known oxidizing agents can be used. Specific examples of such oxidizing agents include hypochlorite, iodobenzene diacetate, oxygen and the like.
  • hypochlorites include sodium hypochlorite, potassium hypochlorite, calcium hypochlorite (bleaching powder), and the like.
  • the hypochlorite may be in a solid state or in the form of an aqueous solution, and even a hydrate can be suitably used.
  • these hypochlorites may be used singly or in combination with a plurality of hypochlorites.
  • R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted amino group.
  • R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  • R 6A and R 10A are hydrogen.
  • the nitroxyl radical compound has the formula wherein Q is any n-valent group, n is an integer greater than or equal to 1, and RF is any one hydrogen atom in the nitroxyl radical compound of Formula I. is the resulting monovalent group.
  • Q is any n-valent group
  • n is an integer greater than or equal to 1
  • RF is any one hydrogen atom in the nitroxyl radical compound of Formula I. is the resulting monovalent group.
  • multiple RF may be the same or different from each other, and the points of attachment to Q may also be the same or different.
  • Q can also be a polymer chain, examples of which include ethylene glycol poly(meth)acrylic acid, poly(meth)acrylic acid esters, poly(meth)acrylic acid amides, polyacrylonitrile, polyamides, polyesters, polystyrenes, polyurethanes, etc. include, but are not limited to.
  • R F attached to Q include: include, but are not limited to.
  • At least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group. In one embodiment, at least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, at least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
  • At least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently optionally substituted alkyl groups. In one embodiment, at least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, at least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
  • R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group. In one embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
  • R 1 and R 2 together may form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached.
  • R3 and R4 together may form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached.
  • R 1 and R 3 may together form a heterocycle (eg, a pyrrolidine or piperidine ring) containing the nitrogen of the nitroxyl group.
  • a heterocycle eg, a pyrrolidine or piperidine ring
  • R5A is hydrogen, cyano group, isothiocyano group, optionally substituted alkyl group, optionally substituted hydroxy group, optionally substituted carboxyl group, optionally substituted carbamoyl or an optionally substituted amino group
  • R 5B is hydrogen or an optionally substituted alkyl group, or R 5A and R 5B together are an oxo group, or a substituted It is a benzoylmethylidene group which may be substituted.
  • R5A is hydrogen, cyano group, isothiocyano group, haloacylaminoalkyl group, amino group, dialkylamino group, trialkylammonium group, acylamino group, haloacylamino group, maleimido group, acyloxy group, alkyl an oxy group, an alkynyloxy group, a phosphonooxy group, an alkylsulfonyloxy group, -COOH, a carbamoyl group, a substituted carbamoyl group, -OH, or an acyl group, and R 5B is hydrogen or an alkyl group, or R 5A and R5B together are an oxo group or a benzoylmethylidene group.
  • R5A is hydrogen, amino group, dimethylamino group, trimethylammonium group, acetylamino group, chloroacetylamino group, bromoacetylamino group, haloacetylamino group, haloacetylaminoacetylamino group, cyano group , isothiocyano group, methacryloxy group, benzoyloxy group, 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzoyloxy group, methoxy group, propargyloxy group, phosphonooxy group, methylsulfonyloxy group, -COOH group, carbamoyl group , an isothiocyanatoalkylcarbamoyl group, —OH, a haloacetylaminomethyl group, a maleimido group, or an acetyl group, and R 5B is hydrogen or a methyl group, or R 5A and R 5B together are It
  • R 9 is preferably bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  • nitrogen radical compounds and oxygen radical compounds are 2,2-di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical, 3-(aminomethyl)-PROXYL free radical 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-3-pyrroline-1-oxyl free radical, 16-DOXYL-stearic acid free radical, 16-DOXYL-methyl stearate free radical, 4-acetoxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl free radical 2-(4-methoxy-4-oxobutyl)-4,4-dimethyl-2-tridecyl-3-oxazolidinyloxy free radicals (aka Methyl 5-DOXYL-stearate, free radicals), 4′,4′-dimethylspiro(5 ⁇ -cholestane-3,2′-oxazolidin)-3′-yloxy free radical (aka 3 ⁇ -DOXY
  • the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound may have R 1 , R 2 , R 3 and R 4 as methyl groups, and in another embodiment R 5A as a cyano group, even if substituted It may be an alkyl group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group, or an optionally substituted amino group.
  • R 9 is preferably bromoacetamide or iodoacetamide.
  • Z is -N(R 6C )-
  • the compounds of formula I are AZADO (2-azaadamantane-N-oxyl), Me-AZADO ( 1-methyl-2-azaadamantane-N-oxyl), or nor-AZADO (9-azanoradamantane-N-oxyl).
  • a "pharmaceutically acceptable salt” is a disclosed compound in which a parent compound, such as a compound of the disclosure, is modified by converting an existing acid or base moiety to its salt form. (eg, reacting the free base group with a suitable organic acid).
  • pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, mineral or organic acid salts of basic residues such as amines; alkali or organic salts of acidic residues such as carboxylic acids; not something.
  • representative acid addition salts include acetate, acetate, adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzenesulfonic acid, benzoate, bisulfate, boric acid.
  • alkali or alkaline earth metal salts examples include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, etc., and non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations, examples of which include ammonium , tetramethylammonium, tetraethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, triethylamine, ethylamine, and the like.
  • Pharmaceutically acceptable salts of the present disclosure include conventional non-toxic salts of the parent compounds formed, for example, from non-toxic inorganic or organic acids.
  • Pharmaceutically acceptable salts of the disclosure can be synthesized from the parent compound, which contains a basic or acidic moiety, by conventional chemical methods.
  • such salts are formed by reacting the free acid or base form of these compounds with a stoichiometric amount of the appropriate base or acid in water or an organic solvent, or in a mixture of the two. can be prepared.
  • non-aqueous media like ether, ethyl acetate, ethanol, isopropanol or acetonitrile are preferred. See below for a list of suitable salts. Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed . , Mack Publishing Company, Easton, Pa.; , 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.M. H. Stahl and C.I. G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, and Berge et al. , Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); the contents of each of these are hereby incorporated by reference in their entirety.
  • solvate means a compound of the present disclosure that has molecules of a suitable solvent incorporated in the crystal lattice.
  • a suitable solvent is physiologically tolerable at the dosage administered.
  • solvates may be prepared by crystallization, recrystallization, or precipitation from solutions containing organic solvents, water, or mixtures thereof.
  • Suitable solvents are ethanol, water (eg monohydrate, dihydrate and trihydrate), N-methylpyrrolidone (NMP), dimethylsulfoxide (DMSO), N,N'-dimethylformamide (DMF), N,N′-dimethylacetamide (DMAC), 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone (DMEU), 1,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H )-pyrimidinone (DMPU), acetonitrile (ACN), propylene glycol, ethyl acetate, benzyl alcohol, 2-pyrrolidone, benzyl benzoate and the like.
  • NMP N-methylpyrrolidone
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • DMF N,N'-dimethylformamide
  • DMAC N,N′-dimethylacetamide
  • DMEU 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone
  • DMPU 1,3-dimethyl
  • the term "subject” or “subject (person)” refers to an entity that is the target of diagnosis, detection, treatment, etc. of the present invention (e.g., organisms such as humans or cells taken from organisms, blood, serum, etc.). etc.). When an organism is intended, it is referred to as a subject.
  • specimen refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, cells, serum, and the like.
  • samples refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, cells, serum, and the like.
  • a person skilled in the art can appropriately select a preferable specimen or sample based on the description of this specification.
  • agent As used herein, “agent”, “agent” or “factor” (both equivalent to the English equivalent of agent) are used broadly and interchangeably to describe any agent capable of achieving its intended purpose. It may be matter or other elements (eg, energy such as light, radiation, heat, electricity, etc.).
  • Such substances include, for example, proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (including DNA such as cDNA and genomic DNA, RNA such as mRNA), poly Saccharides, oligosaccharides, lipids, organic small molecules (e.g., hormones, ligands, signaling substances, organic small molecules, molecules synthesized by combinatorial chemistry, small molecules that can be used as pharmaceuticals (e.g., small molecule ligands, etc.), etc.) , including but not limited to these complex molecules.
  • proteins proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (including DNA such as cDNA and genomic DNA, RNA such as mRNA), poly Saccharides, oligosaccharides, lipids, organic small
  • diagnosis refers to the identification of various parameters associated with a disease, disorder, condition (e.g., mitochondrial-associated disease), etc. in a subject to determine the current or future status of such disease, disorder, condition. means to judge.
  • conditions within the body can be investigated, and such information can be used to determine the disease, disorder, condition, treatment or prophylactic formulation to be administered in a subject.
  • various parameters such as method can be selected.
  • diagnosis in a narrow sense means diagnosing the current situation, but in a broader sense it includes “early diagnosis”, “predictive diagnosis”, “pre-diagnosis” and the like.
  • the diagnostic method of the present invention is industrially useful because, in principle, it is possible to use what comes out of the body, and it can be performed without the hands of medical professionals such as doctors.
  • "predictive diagnosis, preliminary diagnosis or diagnosis” is sometimes referred to as "assisting”.
  • detection agent assay agent
  • test agent assay agent
  • diagnostic agent broadly refers to any agent capable of diagnosing a target condition (for example, a disease such as a mitochondrial-related disease).
  • an “agent” or agent, detection agent, etc. that "specifically” interacts (or binds) to a biological agent, such as an intracellular component
  • a biological agent e.g., mitochondrial-associated components
  • the biological agent e.g., mitochondrial-associated components
  • the affinity for other unrelated components e.g., non-mitochondrial components, e.g., non-mitochondrial cytosolic components, etc.
  • label refers to an entity (for example, substance, energy, electromagnetic waves, etc.) that distinguishes a target molecule or substance from others. Examples of such labeling methods include RI (radioisotope) method, fluorescence method, biotin method, chemiluminescence method and the like. Reagents, compositions of the present disclosure can be labeled as such.
  • in vivo refers to the inside of a living organism. In certain contexts, “in vivo” refers to a location where a substance of interest is to be placed.
  • in vitro refers to a state in which a part of a living body is "outside the body” (for example, into a test tube) or released for various research purposes. It is a term in contrast to in vivo.
  • contacting means arranging a plurality of substances such that interaction or binding between the substances occurs. This can be accomplished by bringing the (eg, compounds of the present disclosure) into physical proximity, either directly or indirectly, to the sample containing the mitochondrial associated target.
  • the compounds of this disclosure can exist in many buffers, salts, solutions, and the like. Contacting includes, for example, placing a compound in a beaker, microtiter plate, cell culture flask, microarray (eg, gene chip), or the like.
  • any sample may be used as long as it is considered to contain components related to the mitochondrial redox system, and for example, serum can be used. Serum can be obtained by conventional methods.
  • kits refers to a unit in which parts to be provided (for example, test drugs, diagnostic drugs, drugs, labels, instructions, etc.) are provided, usually divided into two or more compartments.
  • This kit form is preferred when the purpose is to provide a composition that should not be provided in a mixed form for reasons such as stability, and is preferably used in a mixed form immediately before use.
  • kits preferably include the parts provided (e.g., instructions or instructions describing how to use the reagents, diagnostic agents, agents, or how the reagents should be handled).
  • the kit When the kit is used as a reagent kit in the present specification, the kit usually includes instructions describing how to use test agents, diagnostic agents, drugs, and the like.
  • the term "instructions" refers to instructions for physicians or other users on how to use the present invention.
  • the instructions include words instructing the detection method of the present invention, how to use the diagnostic agent, or the administration of a medicine or the like.
  • the instructions may include words that instruct oral administration or esophageal administration (for example, by injection) as the administration site.
  • This instruction is prepared in accordance with the format prescribed by the regulatory authority of the country in which the invention is implemented (for example, the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan, the Food and Drug Administration (FDA) in the United States, etc.), and is approved by the regulatory authority.
  • FDA Food and Drug Administration
  • package inserts which are usually provided in paper form, but are not limited to that, for example, in the form of electronic media (e.g., homepages provided on the Internet, e-mail). can also be provided.
  • the nitroxyl radical compound of the present disclosure can be prepared by the production method described below or by known literatures and methods, such as Molecules 2021, 26, 677, NATURE COMMUNICATIONS 6:6070, Chem.Pharm.Bull. 61(12) 1197. -1213 (2013), Can. J. Chem. 52, 3381 (1974), Current Organic Chemistry, 2014, 18, 459-474, WO 2008/093881, which are incorporated herein by reference in their entirety. It can be produced by the methods described or with reference to them, but is not limited to these. These production methods can be appropriately improved based on the knowledge of those skilled in organic synthetic chemistry.
  • the object compound can be obtained by protecting the site other than the reaction site as necessary and deprotecting after the reaction is completed or after a series of reactions.
  • Protective groups used in these processes include literature (Peter G. M. Wuts, "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", 5th Ed., John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey (2014)), etc.
  • the usual protecting groups described in can be used.
  • introduction and removal of a protecting group can be carried out by methods commonly used in organic synthetic chemistry (eg, methods described in the above literature) or methods based thereon.
  • the starting materials and intermediates in the production method below can be purchased as commercial products, or can be obtained by synthesizing from known compounds according to methods described in known literature or known methods. Moreover, these starting materials and intermediates may be salts thereof as long as they do not interfere with the reaction.
  • the inert solvent in the following production method means a solvent that does not react with raw materials, reagents, bases, acids, catalysts, ligands, etc. used in the reaction (hereinafter sometimes referred to as "raw materials used in the reaction, etc.”). means.
  • raw materials used in the reaction etc.
  • the solvent used in each step reacts with the raw materials used in the reaction, it can be used as an inert solvent as long as the desired reaction proceeds to obtain the desired compound.
  • Synthetic scheme 1 (1) Route 1 Synthesis of Compound XII and Compound XIV wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are as defined herein.
  • an oxidizing agent is used, which can be anything as long as it can oxidize the secondary nitrogen of the piperidine or pyrrolidine ring to a nitroxyl radical.
  • a reducing agent is used, which can be any reagent as long as it can reduce a carbonyl group to a hydroxy group.
  • Synthetic scheme 2 (1) Route 2 Synthesis of compound XX wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are as defined herein.
  • Nu — is any nucleophile, including but not limited to OH, OR, NH 2 , NHR.
  • a reducing agent is used, which can be any reagent as long as it is capable of saturating (eg, hydrogenating, etc.) the double bonds.
  • the intermediates and target compounds in the above production method can be purified by purification methods commonly used in synthetic organic chemistry (e.g., neutralization, filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, various chromatography, etc.). It can be isolated and purified. Further, each intermediate can be subjected to the next reaction without particular purification.
  • purification methods commonly used in synthetic organic chemistry e.g., neutralization, filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, various chromatography, etc.
  • An optically active form of the compound of the present disclosure can be produced by using an optically active starting material or intermediate, or by optically resolving the intermediate or final product racemate.
  • Examples of the optical resolution method include, but are not limited to, a separation method using an optically active column, a separation method such as a fractional crystallization method, and the like.
  • Diastereomers of the compounds of the present disclosure can be prepared by separation methods such as, but not limited to, column chromatography and fractional crystallization.
  • a salt of the nitroxyl radical compound of the present disclosure can be produced from a nitroxyl radical by a method known to those skilled in the art.
  • oxoammonium salts can be produced by reacting a nitroxyl radical compound with nitrogen dioxide.
  • sperm quality indicates the characteristics and attributes of sperm, and means, for example, an index that indicates the function of sperm.
  • sperm quality refers to any molecular biological or biochemical factors such as sperm motility, fertility, sperm viability, mitochondrial activity, normality of sperm morphology, normality of sperm constituent proteins, etc. Indices that can chemically assess cells are included.
  • sperm motility is an index that indicates the motility of sperm and includes movement speed, movement time, kinetic energy, and the like.
  • VSL linear progression velocity, ⁇ m/sec
  • VAP cell pathway average velocity, ⁇ m/sec
  • VCL forward curve velocity, ⁇ m/sec
  • ALH head amplitude, ⁇ m
  • STR linear linearity, VSL/VAP
  • LIN linearity, VSL/VCL
  • BCF head frequency, Hz
  • a method for evaluating sperm quality comprising the step of mixing a sperm population and a test solution containing a nitroxyl radical compound to obtain a mixed solution; A method is provided comprising measuring a signal obtained from the mixture and assessing sperm quality based on the signal.
  • the method of the present disclosure is specifically implemented as follows. That is, a bottle or tube containing a nitroxyl radical and a reducing agent is prepared, and semen is added thereto and mixed. After reacting a population of spermatozoa with a test solution containing a nitroxyl radical compound, reaction termination treatment is performed as necessary.
  • the reaction time between the sperm population and the test solution containing the nitroxyl radical compound may be any time, for example, from immediately after mixing to 120 minutes, preferably from about 1 to about 60 minutes.
  • the signal obtained by the DNP-MRI/electron spin resonance method can be read from this mixed solution, the rate of change from the signal value before the reaction can be calculated, and the sperm quality can be evaluated.
  • Any animal-derived sperm can be used as the sperm to be subjected to the method of the present disclosure.
  • animals include, but are not limited to, humans, cows, pigs, goats, horses, sheep, dogs, cats, rabbits, mice, hamsters, rats, and chickens.
  • Any sperm derived from the testis, epididymis, sperm ejaculate, stem cells, testicular stem cells, iPS cells, cultured cells, or the like can be used as the sperm.
  • the sperm may be refrigerated or cryopreserved. Fresh semen and frozen semen are preferable, and the sperm reflects the quality immediately before being subjected to artificial insemination, in vitro fertilization, microinsemination, or the like.
  • human-derived sperm can be ejaculated sperm, and when obtaining non-human sperm, for example, if the sperm is testis-derived, a method of collecting the testis and aspirating the sperm, etc. If the sperm is derived from the epididymis, the epididymis is collected and the sperm is aspirated or scraped out. If the sperm is derived from the ejaculated semen, it is collected after ejaculation into the female body, electrical stimulation, or an artificial vagina. and the like can be used. Stem cells, testicular stem cells, iPS cells, and cultured cells can also be collected by performing cell culture. The obtained sperm may be suspended in seminal plasma immediately after obtaining, or may be further diluted or washed with an aqueous solution or the like.
  • the population of spermatozoa of the present disclosure can contain multiple spermatozoa.
  • the sperm is obtained as described above, it is usually collected not as a single sperm, but as a group of sperm.
  • the sperm population is selected from the sperm population obtained as described above, depending on the purpose or quality to be evaluated, for example, a population excluding dead sperm, It is also possible to select a population or the like from which spermatozoa whose constituent protein quality is outside a certain range are excluded.
  • Sperm motility can be mentioned as sperm quality evaluated by the method of the present disclosure.
  • the test solution of the present disclosure contains a nitroxyl radical compound, and any solution can be used as long as it allows quality evaluation of individual sperm in a sperm population.
  • nitroxyl radical compounds as a result of comprehensively examining the reactivity with mitochondria and cytoplasm for 37 kinds of nitroxyl radical compounds (functional contrast agents) shown in Table 1, it was found that nitroxyl radical compounds with a five-membered ring structure are mitochondria. It has been found to tend to detect metabolism well.
  • nitroxyl radical compounds include 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidine-N-oxyl (carboxyl-PROXYL), 3- Carboxy-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolinyloxy, 2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidinol-N-oxyl (Tempol), N-d16-triacetoneamine-N -oxyl and triacetoneamine-N-oxyl, methoxycarbonyl-PROXYL, carboxy-PROXYL, etc.
  • nitroxyl radical compound can be mentioned, preferably a five-membered cyclic nitroxyl radical compound can be used, more preferably in the method of the present disclosure
  • the nitroxyl radical compound used is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-proxyl or carbamoylproxyl.
  • the test solution of the present disclosure can further contain a reducing agent.
  • a reducing agent Any reducing agent may be used as long as it reacts with sperm mitochondria together with a nitroxyl radical compound and is metabolized.
  • the reducing agent of the present disclosure include, but are not limited to, NADH, GSH, and the like.
  • the test liquid of the present disclosure is typically an aqueous solution. If the sperm is derived from the testis, epididymis, ejaculate, stem cells, testicular stem cells, iPS cells, cultured cells, etc., it is also possible to mix a nitroxyl radical compound with the liquid itself collected with the sperm and use it as a test solution. can.
  • the test solution can also include buffering agents, egg yolk components, glycerin, and the like.
  • the pH of the test solution of the present disclosure may be any pH as long as the quality of sperm can be evaluated, and is usually about 6.0 to about 9.0. Preferably it is about 6.8 to 7.5.
  • the component concentration in the test solution of the present disclosure is determined so that the pH of the aqueous solution falls within the above range.
  • the test solution of the present disclosure can contain any buffer as long as it achieves the above desired pH.
  • any buffering agent having a buffering action near neutrality can be selected. liquid, citrate buffer, acetate buffer, carbonate buffer and the like.
  • acids or bases can be used to achieve the desired pH.
  • tris(hydroxymethyl)aminomethane, citrate, or phosphate buffers are used.
  • the test solution of the present disclosure can also contain any sugar or energy source as an energy source for sperm.
  • sugars and energy sources include glucose, xylose, fructose, mannose, galactose, sucrose, lactose, maltose, trehalose, dextrin, ATP, ADP, succinic acid and NADH.
  • the test solution of the present disclosure can contain any antibiotic for the purpose of preventing bacterial growth.
  • antibiotics include penicillin, streptomycin, gentamicin, dibekacin and the like.
  • sterilization may be performed to prevent bacterial growth.
  • any mixing method can be used, for example, manual pipette, automatic pipette, dispenser etc. can be used.
  • the temperature at which the population of sperm and the test solution of the present disclosure are mixed may be any temperature as long as the quality of the sperm can be evaluated.
  • it can be mixed at about 15 to 45° C., preferably about 25 to about 45° C., which is a temperature near the body temperature of the animal from which the sperm is derived, more preferably about 28 to about 42° C., particularly preferably about It can be from 30°C to about 38°C.
  • the reaction in the method of the present disclosure, can be stopped as necessary after mixing the population of spermatozoa with the test solution containing the nitroxyl radical compound.
  • the reaction termination treatment is not particularly limited as long as it can dissolve cells or terminate mitochondrial function. can contain.
  • DNP-MRI or electron spin is performed from the mixture.
  • the signal obtained by the resonance (ESR) method can be read.
  • ESR resonance
  • DNP is an abbreviation for Dynamic Nuclear Polarization, and unless otherwise defined, a method of increasing the polarization of nuclear spins by transferring the energy of excited electron spins to nuclear spins. That's what I mean.
  • MRI refers to Magnetic Resonance Imaging without hyperpolarization, such as dynamic nuclear polarization (DNP).
  • the nitroxyl radical compound functions as a contrast agent (also referred to as a probe) for DNP, and free radical concentration data can be obtained.
  • a contrast agent also referred to as a probe
  • free radical concentration data can be obtained.
  • the free radical concentration can be imaged quantitatively, so information on the free radical consumption rate, which serves as an index for evaluating sperm quality, can be obtained more accurately.
  • the percentage change from the pre-reaction signal value can be calculated to assess sperm quality.
  • the signal obtained from the mixture can be measured, and the sperm quality can be evaluated based on the signal. Since the method of the present disclosure is an evaluation based on the mitochondrial metabolism (energy production) of sperm, in one embodiment, the energy production of mitochondria is predicted from the signal obtained from the mixed solution, thereby improving sperm motility, function, etc. Quality can be evaluated. For example, the signal obtained from the mixed solution or its value may be compared with a reference value for evaluating the quality of sperm. good too. In this case, the sperm function can be evaluated by comparison with the reaction rate of normal sperm (including sperm motility and mitochondrial metabolic capacity that reflect mitochondrial function). For example, when the response rate is at least about 5% lower, preferably at least about 10% lower, and more preferably about 20% lower than the reaction rate of normal sperm, it can be evaluated as having decreased function.
  • the reference values for evaluating the quality of sperm are, for example, semen volume of 1.5 ml or more, sperm concentration of 15 million / ml or more, total sperm count of 39 million or more, motility of 40% or more, normal morphology rate of 4% or more. (malformation rate less than 96%), total motile sperm count (total sperm count x motility rate) 15,600,000 or more, and the like can also be used.
  • the number and/or motility of sperm calculated from the signal obtained from the mixture can be compared with a reference value for evaluating the quality of sperm.
  • Sperm count can also be used as a correction parameter if necessary.
  • a method for testing or diagnosing male infertility can be provided by evaluating sperm quality as described above. That is, the present disclosure provides a method for testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising the step of mixing a population of spermatozoa obtained from the subject with a test solution containing a nitroxyl radical compound to obtain a mixed solution; A method is provided comprising measuring a signal obtained from the mixture and determining whether and/or the degree of male infertility in the subject based on the signal.
  • the degree of normality and/or abnormality of sperm function through evaluating sperm quality.
  • the degree is preferably evaluated in stages, more preferably in 3 to 6 stages. can.
  • kits for evaluating sperm quality including a test solution containing a nitroxyl radical compound.
  • a test/diagnosis kit for testing or diagnosing male infertility in a subject comprising a test solution containing a nitroxyl radical compound, a container containing the test solution, and optionally the test a reaction stopping solution for stopping the reaction between the solution and the sperm population obtained from the subject; and instructions describing a method of use, wherein the instructions include the sperm population obtained from the subject
  • a test solution containing a nitroxyl radical compound is mixed to obtain a mixed solution, a signal obtained from the mixed solution is measured, and based on the signal, whether or not the subject is male infertile and/or the degree thereof Kits are provided that are instructed to determine the
  • the use of the method and kit of the present disclosure enables stepwise evaluation of sperm quality and whether or not a subject is male infertile.
  • semen is collected using the kit at home, the collected semen is sent to a testing company for testing, the diagnostic results are fed back, and if the sperm function declines If it is evaluated that the patient is in good health, it may be possible to set up a system that promotes consultation with a urologist.
  • a small DNP-MRI device in the kit it is possible to easily obtain test results at home.
  • by installing a high-precision DNP-MRI apparatus in a urology department, etc. it is possible to perform high-precision diagnosis using the method and apparatus of the present disclosure in addition to conventional microscopic examination.
  • an apparatus for evaluating the quality of sperm wherein a signal for measuring a signal obtained from a mixed liquid in which a population of sperm and a test liquid containing a nitroxyl radical compound are mixed.
  • An apparatus comprising measuring means and sperm quality evaluating means for evaluating sperm quality based on the signal.
  • the signal measurement means performs a step of measuring a signal obtained from a mixed solution in which the population of spermatozoa and the test solution containing the nitroxyl radical compound are mixed in the above-described method of the present disclosure.
  • the signal measuring means is a component for measuring the value of the individual sperm quality index of the sperm population mixed with the test liquid.
  • the signal measuring means can be provided with various devices and devices that are provided in a normal DNP-MRI apparatus.
  • the sperm quality evaluation means performs the step of evaluating sperm quality in the method of the present disclosure described above.
  • the sperm quality evaluation means is a constituent part for evaluating sperm quality based on the signal obtained by the signal measurement means. For this purpose, various arithmetic processes are performed on data stored in a storage unit or the like. Arithmetic processing is performed by the CPU included in the device of the present disclosure.
  • This CPU includes functional modules for controlling the signal measuring means, the sperm quality evaluating means, and the like of the device of the present disclosure, and can perform various controls. Each of these units may be composed of an independent integrated circuit, microprocessor, firmware, or the like.
  • the drug and composition of the present disclosure can be provided as follows.
  • formulations of the pharmaceutical compositions described herein can be prepared by any method known or later developed in the field of pharmacy. Generally, such methods of preparation include the step of bringing into association the active ingredient with the excipients and/or one or more other accessory ingredients.
  • a pharmaceutical composition according to the present disclosure may be prepared, packaged, and/or sold in bulk, as a single unit dose, and/or as multiple single unit doses.
  • unit dose refers to discrete amount of the pharmaceutical composition comprising a predetermined amount of the active ingredient.
  • the amount of active ingredient will generally be the dose of active ingredient used in a subject or subject and/or a fraction (e.g., half or one-third of such dose) to meet the specific needs of such dose. be equivalent to.
  • compositions according to the present disclosure will vary depending on the identity, size and/or condition of the subject being treated. and will also vary depending on the route by which the composition is administered.
  • the composition can consist of from about 0.1% to about 99% (w/w) active ingredient.
  • the composition contains about 0.1% to about 100% (eg, about 0.5 to about 50%, about 1 to about 30%, about 5 to about 80%, at least about 80% (w/w ))).
  • the pharmaceutically acceptable excipient is at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, or about 100% pure. you can In some embodiments, the excipient is approved for use in human and veterinary medicine. In some embodiments, the excipient is approved by the US Food and Drug Administration. In some embodiments, the excipients are of pharmaceutical grade. In some embodiments, the excipient meets the standards of the United States Pharmacopoeia (USP), European Pharmacopoeia (EP), British Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia and/or International Pharmacopoeia.
  • USP United States Pharmacopoeia
  • EP European Pharmacopoeia
  • British Pharmacopoeia Japanese Pharmacopoeia and/or International Pharmacopoeia.
  • excipients include any and all solvents, dispersion media, diluents, or other liquid vehicles, dispersing or suspending aids, as long as they are suitable for the particular dosage form desired; Including, but not limited to, surfactants, isotonic agents, thickening or emulsifying agents, preservatives and the like.
  • Various excipients for preparing pharmaceutical compositions and techniques for preparing the compositions are known in the art (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, AR Gennaro , See Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; incorporated herein by reference in its entirety).
  • Any conventional excipient medium may interact with a substance or derivative thereof by producing any undesired biological effect or by adversely interacting with other component(s) of the pharmaceutical composition. Unless incompatible, use of conventional excipient vehicles is contemplated within the scope of the present disclosure.
  • diluents include calcium carbonate, sodium carbonate, calcium phosphate, dicalcium phosphate, calcium sulfate, calcium hydrogen phosphate, sodium lactose phosphate, sucrose, cellulose, microcrystalline cellulose, kaolin, mannitol, sorbitol, inositol. , sodium chloride, dried starch, corn starch, powdered sugar, etc., and/or combinations thereof.
  • formulations may include at least one inactive ingredient.
  • inactive ingredient refers to one or more inert agents included in the formulation.
  • all or part of the inactive ingredients that can be used in the formulations of the present invention are approved by the Ministry of Health, Labor and Welfare of Japan or by PMDA as its reviewing agency, the United States Food and Drug Administration (FDA), etc. , or not approved.
  • the detection, testing or diagnostic agents of the present invention have other substances (e.g., labels, etc.) attached to moieties (e.g., compounds of the present disclosure, etc.) that enable detection, testing, or diagnosis.
  • moieties e.g., compounds of the present disclosure, etc.
  • complexes or complex molecules means any construct comprising two or more moieties.
  • the other portion may be any other substance (eg, low-molecular compounds, sugars, lipids, nucleic acids, other carbohydrates, etc.).
  • two or more moieties that constitute a complex may be covalently bonded or otherwise bonded (e.g., hydrogen bond, ionic bond, hydrophobic interaction, van der Waals force, etc.).
  • complex includes molecules formed by linking multiple types of molecules such as polypeptides, polynucleotides, lipids, sugars, and small molecules.
  • kits for detection, testing and/or diagnosis for performing methods for detection, testing and/or diagnosis according to the present disclosure comprises a detection agent, test agent and/or diagnostic agent of the disclosure or a compound of the disclosure.
  • the embodiment can use any of the embodiments described herein alone or in combination.
  • the means used are mass spectrometer, nuclear magnetic resonance spectrometer, X-ray spectrometer, SPR, chromatography (e.g. HPLC, thin layer chromatography, gas chromatography), immunological chemical means (e.g. Western blotting, EIA (enzyme immunoassay), RIA (radioimmunoassay), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)), biochemical means (e.g.
  • pI electrophoresis Southern blotting, two-dimensional electrophoresis), electrophoresis equipment, chemical analysis equipment, fluorescence two-dimensional differential electrophoresis (2DE-DIGE), isotope labeling method (ICAT), tandem affinity purification method (TAP method), physical means, laser microdissection and these is selected from the group consisting of combinations of
  • a standard curve can be drawn and quantified based thereon.
  • Quantification means that may be used in such quantification include determination means that compares the standard curve and the measurement results to determine whether the values obtained with the agents of the present disclosure are within normal values.
  • determination means can be realized using a computer.
  • Evaluation of sperm quality in the present disclosure is based on sperm mitochondrial metabolism or energy production, and the mitochondrial metabolism or energy production value is observed in a normal semen test mitochondrial metabolism or energy production and if it deviates from the normal value, it is determined that there is an abnormality in sperm motility and/or function.
  • abnormalities are determined by observing the speed and direction of sperm migration and the normal morphology rate (malformation rate) under a microscope. Since it is an evaluation based on the basics, if the energy production decreases, the motility rate and function can also decrease.
  • the normal value of the semen test is generally specified using a microscope, and can be separately referred to when evaluating with the method of the present disclosure.
  • the World Health Organization (WHO) semen test normal values are as follows. (2010 latest version) ⁇ Semen volume 1.5ml or more ⁇ Sperm concentration 15 million/ml or more ⁇ Total sperm count 39 million or more ⁇ Motility rate 40% or more ⁇ Total motile sperm count (total sperm count x motility rate) 15.6 million or more
  • a reference value for normal spermatozoa for mitochondrial metabolism or energy production measured in the present disclosure is created from spermatozoa having the above normal values, and diagnosis can be made based on this reference value.
  • a liver homogenate solution, cytosol was prepared.
  • a homogenate solution, a cytosol, and a mixture of a mitochondrial blocking drug (KCN) in the homogenate were prepared, and each nitroxyl radical (probe) was added and allowed to react for 5 minutes.
  • the radical intensity after the reaction was measured by electron spin resonance ESR.
  • Nitroxyl radicals with a 5-membered ring structure tended to detect mitochondrial metabolism well overall. It was also found that the nitroxyl radical (functional contrast agent) at No. 22 is the most metabolized nitroxyl radical (functional contrast agent) by mitochondria.
  • Example 2 Measurement of sperm motility
  • bovine sperm motility measured using a sperm motility analyzer (CASA) and It was compared with the data obtained by adding a xyl radical compound and measuring the radical change by ESR.
  • the left micrograph of FIG. 2A shows the activity state of bovine spermatozoa at 37°C
  • the right micrograph shows the activity state of bovine spermatozoa at 60°C.
  • signals shown in pink and blue represent active sperm
  • yellow represents non-motile sperm.
  • the left graph in FIG. 2B is a bar graph of the sperm motility obtained from this micrograph. As can be seen from this bar graph, it was found that the heat treatment at 60° C. resulted in almost zero sperm motility.
  • the graph on the right of Figure 2B is the result of adding nitroxyl radicals to bovine sperm and measuring radical changes with ESR. Radical signals obtained by ESR measurement were plotted with time on the horizontal axis and radical concentration (logarithmic display) on the vertical axis. The slope of this graph indicates the metabolic rate. As can be seen from this graph, nitroxyl radicals are metabolized without heat treatment, whereas the reaction rate (metabolism) of nitroxyl radicals stops with heat treatment. From this, it was found that sperm activity can be evaluated by using nitroxyl radicals.
  • Example 3 Effect of mitochondrial function inhibitor on sperm motility It was confirmed whether sperm motility can be evaluated by the method using the nitroxyl radical compound of the present disclosure when a mitochondrial function inhibitor (KCN) is added to bovine sperm to reduce motility.
  • KCN mitochondrial function inhibitor
  • the micrograph on the left of Fig. 3A is the result of measuring the motility of normal bovine sperm using CASA, which showed a motility of 92%.
  • mitochondrial function inhibitor KCN
  • KCN mitochondrial function inhibitor
  • the graph in Fig. 3B is the result of adding nitroxyl radicals to bovine sperm and measuring radical changes with ESR.
  • nitroxyl radicals probes
  • bovine spermatozoa and nitroxyl radicals were mixed
  • nitroxyl radicals were metabolized when KCN was not added. It has been found that stopping mitochondrial function with KCN stops the metabolism of nitroxyl radicals.
  • Example 4 Relationship between sperm quality or number and nitroxyl radical metabolic rate
  • sperm quality or number and nitroxyl radical (probe) metabolic rate was investigated.
  • the graph on the left side of FIG. 4 shows the results of preparing spermatozoa having different motility rates and reacting them with nitroxyl radicals.
  • Sperm with different motility were prepared by measuring the motility of sperm at 0, 2, and 4 hours after thawing with CASA, and reactions with nitroxyl radicals were observed at each time. From this graph, it was found that the metabolic rate of nitroxyl radicals also changed in proportion to the motility of sperm.
  • the graph on the right side of FIG. 4 is a graph showing the relationship between sperm count and nitroxyl radical metabolism.
  • Thawed bovine sperm was diluted 2-fold, 4-fold, and 8-fold with a buffer solution to prepare solutions with different numbers of sperm cells, which were then mixed with nitroxyl radicals to confirm reactivity. From this graph, it was found that diluting the bovine sperm to reduce the number decreased the metabolic rate of nitroxyl radicals proportionally.
  • Example 5 Diagnostic system
  • a test kit containing a test solution containing a nitroxyl radical compound is sent to a person's home or the like.
  • the test subject himself/herself mixes the sperm into the tube containing the test drug and leaves it for a certain period of time.
  • the tube is mixed with a reaction terminating agent to stop the reaction.
  • the tube containing the mixed sperm solution is returned to the testing institution, and the nitroxyl radical metabolism is measured by ESR or DNP to test or diagnose male infertility in the subject.
  • This disclosure is useful when performing a simple sperm test easily at home.

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Abstract

The present disclosure provides a method for evaluating the quality of sperm.　The present disclosure provides a method for evaluating the quality of sperm, said method comprising: a step for obtaining a mixed solution by mixing a sperm population and an inspection liquid containing a nitroxyl radical compound; a step for measuring a signal obtained from the mixed liquid; and a step for evaluating the quality of the sperm on the basis of the signal.

Description

精子の品質を評価する方法How to assess sperm quality
　本開示は、精子の品質を評価する方法、そのための化合物、キット、及び男性不妊を検査または診断する方法に関する。 The present disclosure relates to methods of evaluating sperm quality, compounds and kits therefor, and methods of testing or diagnosing male infertility.
　不妊の原因の一つとして男性の精子の異常が考えられ、一般的に精子が正常か否かの検査は専門の医療機関で行う必要がある。 　Male sperm abnormalities are thought to be one of the causes of infertility, and in general, it is necessary to conduct tests to determine whether sperm are normal or not at a specialized medical institution.
　すべての動物の精子において、簡易な方法で受胎性を予測することができることは、労力やコストの面から極めて有用である。そこで本開示は、精子の品質を評価する方法を提供する。また本開示は、このような評価方法を通じて、男性不妊を検査または診断する方法を提供する。 The ability to predict the fertility of all animal sperm using a simple method is extremely useful in terms of labor and cost. Accordingly, the present disclosure provides a method of assessing sperm quality. The present disclosure also provides methods of testing or diagnosing male infertility through such evaluation methods.
　したがって、本開示は以下を提供する。
（項目１）
　精子の品質を評価する方法であって、
　精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
　該信号に基づいて精子の品質を評価する工程と
を含む、方法。
（項目１Ａ）
　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、上記項目に記載の方法。
（項目１Ｂ）
　前記窒素ラジカル化合物が、置換されていてもよい２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジルである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１Ｃ）
　前記窒素ラジカル化合物が、２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジルまたは２，２－ジ（アルキル置換フェニル）－１－ピクリルヒドラジルである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２）
　精子の品質を評価する方法であって、
　精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
　該信号に基づいて精子の品質を評価する工程と
を含む、方法。
（項目２Ａ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、５員環式または６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、または
Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
水素、
シアノ基、
イソチオシアノ基、
置換されていてもよいカルボキシル基、
置換されていてもよいカルバモイル基、
置換されていてもよいヒドロキシ基、
置換されていてもよいアミノ基、
置換されていてもよいアシル基、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、
置換されていてもよいヘテロアリール基、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
上記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、上記項目のいずれか一項に記載のとおりである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
により表される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６Ａ）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、アルキル基である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目６Ｂ）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメチル基である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７Ａ）
　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、または－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
　Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目７Ｂ）
　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８Ａ）
　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物は、
３－（カルボキシ）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－シアノ－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－（２－イソチオシアナトエチルカルバモイル）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
３－マレイミド－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
メトキシカルボニル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
４－フェナシリデン－２，２，５，５－テトラメチルイミダゾリジン－１－イルオキシル
　フリーラジカル、または
３－（２－ブロモアセトアミド）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル
である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８Ｂ）
　前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物は、
４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－（２－クロロアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－シアノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－イソチオシアナト－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－メタクリロイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
２，２，６，６－テトラメチル－４－（プロパルギルオキシ）ピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－トリメチルアンモニウム－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン　１－オキシル　フリーラジカル
４－オキソ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－カルボキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－ヒドロキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－ベンゾイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－メトキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
１－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル　３，５－ジｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシベンゾエート　フリーラジカル、
２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ　フリーラジカル、
４－ホスホノオキシ－２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ　フリーラジカル、
４－マレイミド－２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ　フリーラジカル、
４－（２－ブロモアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
４－アミノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－［２－［２－（４－ヨードフェノキシ）エトキシ］カルボニル］ベンゾイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル
４－グリシジルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
ビス（１－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル）オキサレート　フリーラジカル、
トリス（１－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル）ホスフィントリカルボキシレート　フリーラジカル、
ポリ（エチレングリコール）－ビス－ＴＥＭＰＯ、または
ポリマーに結合したＴＥＭＰＯ、
である、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目８Ｃ）
　前記ニトロキシル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
　前記検査液がさらに還元剤を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。（項目１１）
　前記精子の品質が精子運動性を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
　前記信号が、動的核偏極（ＤＮＰ）法または電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によって前記混合液から検出される信号を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
　前記精子の品質を評価する工程が、前記信号またはそれから得られる値と、精子の品質を評価するための基準値とを比較することによって行われる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
　前記精子の品質を評価する工程が、前記信号から算出される精子の数及び／またはその運動率と、精子の品質を評価するための基準値とを比較することによって行われる、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４Ａ）
　前記精子の品質を評価する工程が、精子のミトコンドリア代謝またはエネルギー産生に基づいて評価することを含み、前記ミトコンドリア代謝または前記エネルギー産生が低下することは、前記精子の運動率および／または機能が低下することを意味する、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４Ｂ）
　前記精子の品質を評価する工程が、精子のミトコンドリア代謝またはエネルギー産生に基づいて評価することを含み、前記ミトコンドリア代謝または前記エネルギー産生の値が、精液検査の正常値において観察されるミトコンドリア代謝またはエネルギー産生と比較し、前記正常値を逸脱する場合、精子の運動率および／または機能に異常があると判定される、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
　前記基準値が、健常者由来の精子から得られる精子の品質を示す値を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
　さらに、前記混合液に対して、前記検査液と前記精子の集団との反応を停止する反応停止処理を行う工程を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
　前記反応停止処理が、界面活性剤もしくは有機溶剤の添加、または熱処理を含む、上記項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７Ａ）
　精子または精子の保有者を治療または予防するため方法であって、
　項目１～項目１７のいずれか一項に記載の方法による前記評価により、精子の品質に治療または予防が必要と判断された場合、前記治療または予防を前記精子または前記精子の保有者に対して施す工程を包含する、方法。
（項目１８）
　精子の品質を評価するための窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩。
（項目１８Ａ）
　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目１９）
　精子の品質を評価するためのニトロキシルラジカル化合物またはその塩。
（項目１９Ａ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が５員環式ニトロキシルラジカル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目１９Ｂ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２０）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、または
Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
水素、
シアノ基、
イソチオシアノ基、
置換されていてもよいカルボキシル基、
置換されていてもよいカルバモイル基、
置換されていてもよいヒドロキシ基、
置換されていてもよいアミノ基、
置換されていてもよいアシル基、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、
置換されていてもよいヘテロアリール基、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２０Ａ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、上記項目のいずれか一項に記載のとおりである、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２０Ｂ）
　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
により表される、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２１）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２２）
　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２３）
　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２３Ａ）
　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２３Ｂ）
　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目２５）
　精子の品質を評価するための３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたはその塩。
（項目２６）
　精子の品質を評価するための３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたはその塩。
（項目２７）
　精子の品質を評価するためのキットであって、
　窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液
を含む、キット。
（項目２７Ａ）
　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目２８）
　精子の品質を評価するためのキットであって、
　ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液
を含む、キット。
（項目２８Ａ）
　前記ニトロキシル化合物が５員環式ニトロキシル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目２８Ｂ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目２９）
　前記検査液がさらに還元剤を含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３０）
　さらに、ＤＮＰ－ＭＲＩ装置を含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３１）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、または
Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
水素、
シアノ基、
イソチオシアノ基、
置換されていてもよいカルボキシル基、
置換されていてもよいカルバモイル基、
置換されていてもよいヒドロキシ基、
置換されていてもよいアミノ基、
置換されていてもよいアシル基、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、
置換されていてもよいヘテロアリール基、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３１Ａ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、上記項目のいずれか一項に記載のとおりである、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３１Ｂ）
　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
により表される、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３２）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３３）
　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３４）
　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３５）
　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３５Ａ）
　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３６）
　前記ニトロキシル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３７）
　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３８）
　前記精子の品質が精子運動性を含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目３９）
　前記検査液と精子との反応を停止する反応停止剤をさらに含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目４０）
　前記反応停止剤が、界面活性剤もしくは有機溶剤を含む、上記項目のいずれか一項に記載のキット。
（項目４１）
　精子の品質を評価するための装置であって、
　精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する信号測定手段と、
　該信号に基づき、精子の品質を評価する精子品質評価手段と
を備える、装置。
（項目４１Ａ）
　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。
（項目４２）
　精子の品質を評価するための装置であって、
　精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する信号測定手段と、
　該信号に基づき、精子の品質を評価する精子品質評価手段と
を備える、装置。
（項目４２Ａ）
　前記ニトロキシル化合物が５員環式ニトロキシル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４２Ｂ）
　前記ニトロキシル化合物が６員環式ニトロキシル化合物である、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４３）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、または
Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
水素、
シアノ基、
イソチオシアノ基、
置換されていてもよいカルボキシル基、
置換されていてもよいカルバモイル基、
置換されていてもよいヒドロキシ基、
置換されていてもよいアミノ基、
置換されていてもよいアシル基、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、
置換されていてもよいヘテロアリール基、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４３Ａ）
　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、上記項目のいずれか一項に記載のとおりである、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４３Ｂ）
　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
により表される、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４４）
　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４５）
　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４５Ａ）
　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
　Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４５Ｂ）
　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４６）
　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４７）
　前記ニトロキシル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４８）
　前記検査液がさらに還元剤を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目４９）
　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。（項目５０）
　前記精子の品質が精子運動性を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５１）
　前記信号が、動的核偏極（ＤＮＰ）法または電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によって前記混合液から検出される信号を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５２）
　前記精子品質評価手段が、前記信号またはそれから得られる値と、精子の品質を評価するための基準値とを比較する、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５３）
　前記精子品質評価手段が、前記信号から算出される精子の数及び／またはその運動率と、精子の品質を評価するための基準値とを比較する、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５４）
　前記基準値が、健常者由来の精子から得られる精子の品質を示す値を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５５）
　さらに、前記混合液に対して、前記検査液と前記精子の集団との反応を停止する反応停止処理を行う反応停止手段を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５６）
　前記反応停止処理が、界面活性剤もしくは有機溶剤の添加、または熱処理を含む、上記項目のいずれか一項に記載の装置。
（項目５７）
　被験者における男性不妊を検査または診断する方法であって、
　被験者から得られた精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する工程と
を含む、方法。
（項目５７Ａ）
　被験者における男性不妊を検査または診断する方法であって、
　被験者から得られた精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する工程と
を含む、方法。
（項目５８）
　被験者における男性不妊を検査または診断する検査・診断キットであって、
　窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液と、
　該検査液を収容する容器と、
　必要に応じて、該検査液と被験者から得られた精子の集団との反応を停止する反応停止液と、
　使用方法が記載された指示書と
を含み、該指示書は、
　該被験者から得られた精子の集団と、該窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得、
　該混合液から得られる信号を計測し、
　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する
ことを指示する、キット。
（項目５８Ａ）
　被験者における男性不妊を検査または診断する検査・診断キットであって、
　ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液と、
　該検査液を収容する容器と、
　必要に応じて、該検査液と被験者から得られた精子の集団との反応を停止する反応停止液と、
　使用方法が記載された指示書と
を含み、該指示書は、
　該被験者から得られた精子の集団と、該ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得、
　該混合液から得られる信号を計測し、
　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する
ことを指示する、キット。
（項目Ｂ１）
　精子の品質を評価するための、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む組成物。
（項目Ｂ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｂ１に記載の組成物。
（項目Ｃ１）
　精子の品質を評価するための医薬組成物を製造するための、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｃ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｃ１に記載の使用。
（項目Ｄ１）
　精子の品質を評価するための、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む組成物。
（項目Ｄ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｄ１に記載の組成物。
（項目Ｅ１）
　精子の品質を評価するための医薬組成物を製造するための、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｅ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｅ１に記載の使用。
（項目Ｆ１）
　精子の品質を評価するための、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｆ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｆ１に記載の使用。
（項目Ｇ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するための、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む組成物。
（項目Ｇ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｇ１に記載の組成物。
（項目Ｈ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するための医薬組成物を製造するための、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｈ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｈ１に記載の使用。
（項目Ｉ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するための、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｉ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｉ１に記載の使用。
（項目Ｊ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するための、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む組成物。
（項目Ｊ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｊ１に記載の組成物。
（項目Ｋ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するための医薬組成物を製造するための、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｋ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｋ１に記載の使用。
（項目Ｌ１）
　被験者における男性不妊を検査または診断するため、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩の使用。
（項目Ｌ２）
　項目１～５８Ａのいずれか一項または複数の項に記載の少なくとも１つの特徴をさらに含む、項目Ｌ１に記載の使用。 Accordingly, the present disclosure provides:
(Item 1)
A method of assessing sperm quality comprising:
a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
measuring a signal obtained from the mixture;
and assessing sperm quality based on said signal.
(Item 1A)
The method according to the above items, wherein the oxygen radical of the oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
(Item 1B)
The method according to any one of the preceding items, wherein the nitrogen radical compound is optionally substituted 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl.
(Item 1C)
The method according to any one of the preceding items, wherein the nitrogen radical compound is 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl or 2,2-di(alkyl-substituted phenyl)-1-picrylhydrazyl. .
(Item 2)
A method of assessing sperm quality comprising:
a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
measuring a signal obtained from the mixture;
and assessing sperm quality based on said signal.
(Item 2A)
The method according to any one of the preceding items, wherein the nitroxyl radical compound is a 5- or 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
(Item 3)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
hydrogen,
cyano group,
an isothiocyano group,
an optionally substituted carboxyl group,
an optionally substituted carbamoyl group,
an optionally substituted hydroxy group,
an optionally substituted amino group,
an optionally substituted acyl group,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
R 7A and R 7B are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
an optionally substituted aryl group,
optionally substituted heteroaryl group,
-C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
-C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
A composition according to any one of the preceding items.
(Item 4)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A method according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
(Item 5)
The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
A method according to any one of the preceding items, represented by:
(Item 6)
A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
(Item 6A)
A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an alkyl group.
(Item 6B)
A method according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
(Item 7)
R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A method according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
(Item 7A)
R 5A is —COOH, —R 9 , —CH 2 —R 9 , or —NHC(=O)—CH 2 —R 9 ;
A method according to any one of the preceding items, wherein R9 is haloacetylamino.
(Item 7B)
A method according to any one of the preceding items, wherein R 9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
(Item 8)
A method according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
(Item 8A)
The 5-membered cyclic nitroxyl radical compound is
3-(carboxy)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-cyano-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-(2-isothiocyanatoethylcarbamoyl)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-(2-iodoacetamido)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
3-maleimido-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
methoxycarbonyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
4-phenacylidene-2,2,5,5-tetramethylimidazolidin-1-yloxyl free radical or 3-(2-bromoacetamido)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl A method according to any one of the preceding items, which is a free radical.
(Item 8B)
The 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is
4-acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-(2-chloroacetamido)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-cyano-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
2,2,6,6-tetramethyl-4-(propargyloxy)piperidine 1-oxyl free radical,
4-trimethylammonium-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical 4-oxo-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-carboxy-2,2, 6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-benzoyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-methoxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-(2-iodoacetamide)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzoate free radical,
2,2,6,6-tetramethyl-4-(methylsulfonyloxy)-1-piperidinooxy free radical,
4-phosphonooxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy free radical,
4-maleimido-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy free radical,
4-(2-bromoacetamido)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-(2-iodoacetamide)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-[2-[2-(4-iodophenoxy)ethoxy]carbonyl]benzoyloxy-2,2,6,6- tetramethylpiperidine-1-oxyl 4-glycidyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
bis(1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl)oxalate free radical,
tris(1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl)phosphinetricarboxylate free radical,
poly(ethylene glycol)-bis-TEMPO, or TEMPO bound to a polymer,
The method according to any one of the above items.
(Item 8C)
The nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
(Item 9)
A method according to any one of the preceding items, wherein the test solution further comprises a reducing agent.
(Item 10)
A method according to any one of the preceding items, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH. (Item 11)
The method of any one of the preceding items, wherein the sperm quality comprises sperm motility.
(Item 12)
A method according to any one of the preceding items, wherein the signal comprises a signal detected from the mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) or electron spin resonance (ESR) methods.
(Item 13)
A method according to any one of the preceding items, wherein the step of assessing sperm quality is performed by comparing the signal or a value derived therefrom with a reference value for assessing sperm quality.
(Item 14)
Any of the above items, wherein the step of evaluating the quality of the sperm is performed by comparing the number and/or motility of the sperm calculated from the signal with a reference value for evaluating the quality of the sperm. or the method described in paragraph 1.
(Item 14A)
The step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein a decrease in the mitochondrial metabolism or the energy production is associated with a decrease in motility and/or function of the sperm. A method according to any one of the preceding items, which means
(Item 14B)
The step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein the mitochondrial metabolism or energy production value is observed in a normal semen test. A method according to any one of the preceding items, wherein sperm motility and/or function is determined to be abnormal when compared to production and deviating from said normal values.
(Item 15)
The method according to any one of the above items, wherein the reference value includes a value indicating the quality of sperm obtained from sperm from a healthy subject.
(Item 16)
The method according to any one of the above items, further comprising the step of performing a reaction stopping treatment on the mixed solution to stop the reaction between the test solution and the sperm population.
(Item 17)
A method according to any one of the preceding items, wherein the quenching treatment comprises addition of a surfactant or organic solvent, or heat treatment.
(Item 17A)
A method for treating or preventing sperm or a sperm carrier comprising:
If the evaluation by the method according to any one of items 1 to 17 determines that the sperm quality requires treatment or prevention, the treatment or prevention is given to the sperm or the sperm holder. A method comprising the step of applying.
(Item 18)
A nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for evaluating sperm quality.
(Item 18A)
The compound or salt thereof according to any one of the above items, wherein the oxygen radical of the oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
(Item 19)
A nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
(Item 19A)
The compound or a salt thereof according to any one of the above items, wherein the nitroxyl radical compound is a five-membered cyclic nitroxyl radical compound.
(Item 19B)
The compound or a salt thereof according to any one of the above items, wherein the nitroxyl radical compound is a 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
(Item 20)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
hydrogen,
cyano group,
an isothiocyano group,
an optionally substituted carboxyl group,
an optionally substituted carbamoyl group,
an optionally substituted hydroxy group,
an optionally substituted amino group,
an optionally substituted acyl group,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
R 7A and R 7B are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
an optionally substituted aryl group,
optionally substituted heteroaryl group,
-C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
-C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
A compound or a salt thereof according to any one of the above items.
(Item 20A)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A compound or a salt thereof according to any one of the above items, each independently as described in any one of the above items.
(Item 20B)
The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
The compound or a salt thereof according to any one of the above items, represented by
(Item 21)
The compound or a salt thereof according to any one of the above items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
(Item 22)
R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted The compound or a salt thereof according to any one of the above items, which is a good amino group.
(Item 23)
R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
The compound or a salt thereof according to any one of the preceding items, wherein R9 is haloacetylamino.
(Item 23A)
The compound or salt thereof according to any one of the preceding items, wherein R 9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
(Item 23B)
The compound or salt thereof according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
(Item 25)
3-[2-(2-Iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or a salt thereof for assessing sperm quality.
(Item 26)
3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or salt thereof for assessing sperm quality.
(Item 27)
A kit for assessing sperm quality, comprising:
A kit comprising a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof.
(Item 27A)
The kit according to any one of the above items, wherein the oxygen radical of the oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
(Item 28)
A kit for assessing sperm quality, comprising:
A kit containing a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof.
(Item 28A)
The kit according to any one of the preceding items, wherein the nitroxyl compound is a five-membered cyclic nitroxyl compound.
(Item 28B)
The kit according to any one of the preceding items, wherein the nitroxyl radical compound is a 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
(Item 29)
The kit according to any one of the above items, wherein the test solution further contains a reducing agent.
(Item 30)
A kit according to any one of the preceding items, further comprising a DNP-MRI device.
(Item 31)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
hydrogen,
cyano group,
an isothiocyano group,
an optionally substituted carboxyl group,
an optionally substituted carbamoyl group,
an optionally substituted hydroxy group,
an optionally substituted amino group,
an optionally substituted acyl group,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
R 7A and R 7B are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
an optionally substituted aryl group,
optionally substituted heteroaryl group,
-C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
-C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
A kit according to any one of the above items.
(Item 31A)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A kit according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
(Item 31B)
The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
A kit according to any one of the preceding items, represented by
(Item 32)
The kit according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
(Item 33)
R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A kit according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
(Item 34)
R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
A kit according to any one of the preceding items, wherein R9 is haloacetylamino.
(Item 35)
A kit according to any one of the preceding items, wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
(Item 35A)
A kit according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
(Item 36)
The nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
(Item 37)
A kit according to any one of the preceding items, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH.
(Item 38)
The kit of any one of the preceding items, wherein the sperm quality comprises sperm motility.
(Item 39)
The kit according to any one of the above items, further comprising a reaction stopping agent that stops the reaction between the test solution and the sperm.
(Item 40)
The kit according to any one of the above items, wherein the reaction terminator comprises a surfactant or an organic solvent.
(Item 41)
A device for assessing sperm quality, comprising:
a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixed liquid in which a population of spermatozoa is mixed with a test liquid containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof;
sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
(Item 41A)
The compound or salt thereof according to any one of the above items, wherein the oxygen radical of the oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
(Item 42)
A device for assessing sperm quality, comprising:
a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixed solution in which a population of spermatozoa and a test solution containing a nitroxyl radical compound are mixed;
sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
(Item 42A)
A device according to any one of the preceding items, wherein the nitroxyl compound is a 5-membered cyclic nitroxyl compound.
(Item 42B)
A device according to any one of the preceding items, wherein the nitroxyl compound is a 6-membered cyclic nitroxyl compound.
(Item 43)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
hydrogen,
cyano group,
an isothiocyano group,
an optionally substituted carboxyl group,
an optionally substituted carbamoyl group,
an optionally substituted hydroxy group,
an optionally substituted amino group,
an optionally substituted acyl group,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , may form a fused polycyclic ring,
R 7A and R 7B are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
an optionally substituted aryl group,
optionally substituted heteroaryl group,
-C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
-C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
A device according to any one of the preceding items.
(Item 43A)
The nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are A device according to any one of the preceding items, each independently as described in any one of the preceding items.
(Item 43B)
The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
A device according to any one of the preceding items, represented by:
(Item 44)
A device according to any one of the preceding items, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
(Item 45)
R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A device according to any one of the preceding items, which is a good amino group.
(Item 45A)
R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
A device according to any one of the preceding items, wherein R9 is haloacetylamino.
(Item 45B)
A device according to any one of the preceding items, wherein R 9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
(Item 46)
A device according to any one of the preceding items, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
(Item 47)
The nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
(Item 48)
A device according to any one of the preceding items, wherein the test liquid further comprises a reducing agent.
(Item 49)
A device according to any one of the preceding items, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH. (Item 50)
A device according to any one of the preceding items, wherein the sperm quality comprises sperm motility.
(Item 51)
A device according to any one of the preceding items, wherein the signal comprises a signal detected from the mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) or electron spin resonance (ESR) methods.
(Item 52)
A device according to any one of the preceding items, wherein the sperm quality assessment means compares the signal or a value derived therefrom with a reference value for assessing sperm quality.
(Item 53)
The apparatus according to any one of the above items, wherein the sperm quality evaluation means compares the number and/or motility of sperm calculated from the signal with a reference value for evaluating sperm quality. .
(Item 54)
The apparatus according to any one of the above items, wherein the reference value includes a value indicating the quality of sperm obtained from sperm derived from a healthy subject.
(Item 55)
The apparatus according to any one of the above items, further comprising reaction stopping means for performing a reaction stopping process for stopping the reaction between the test liquid and the sperm population on the mixed liquid.
(Item 56)
An apparatus according to any one of the preceding items, wherein the quenching treatment comprises addition of a surfactant or organic solvent, or heat treatment.
(Item 57)
A method of testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising:
a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
measuring a signal obtained from the mixture;
and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
(Item 57A)
A method of testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising:
a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
measuring a signal obtained from the mixture;
and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
(Item 58)
A test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject,
a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof;
a container containing the test solution;
If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject;
and instructions for use, the instructions comprising:
A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitrogen radical compound or the oxygen radical compound or a salt thereof,
Measuring a signal obtained from the mixed solution,
A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
(Item 58A)
A test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject,
a test solution containing a nitroxyl radical compound;
a container containing the test solution;
If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject;
and instructions for use, the instructions comprising:
A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitroxyl radical compound or a salt thereof,
Measuring a signal obtained from the mixed solution,
A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
(Item B1)
A composition comprising a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for evaluating sperm quality.
(Item B2)
The composition of item B1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
(Item C1)
Use of a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for evaluating sperm quality.
(Item C2)
Use according to item C1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item D1)
A composition comprising a nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
(Item D2)
The composition of item D1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
(Item E1)
Use of a nitroxyl radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for evaluating sperm quality.
(Item E2)
Use according to item E1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item F1)
Use of a nitroxyl radical compound or salt thereof for assessing sperm quality.
(Item F2)
Use according to item F1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item G1)
A composition comprising a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
(Item G2)
The composition of item G1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
(Item H1)
Use of a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for testing or diagnosing male infertility in a subject.
(Item H2)
Use according to item H1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item I1)
Use of a nitrogen or oxygen radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
(Item I2)
Use according to item I1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item J1)
A composition comprising a nitroxyl radical compound or a salt thereof for testing or diagnosing male infertility in a subject.
(Item J2)
The composition of item J1, further comprising at least one feature of any one or more of items 1-58A.
(Item K1)
Use of a nitroxyl radical compound or a salt thereof for manufacturing a pharmaceutical composition for testing or diagnosing male infertility in a subject.
(Item K2)
Use according to item K1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
(Item L1)
Use of a nitroxyl radical compound or salt thereof to test or diagnose male infertility in a subject.
(Item L2)
Use according to item L1, further comprising at least one feature according to any one or more of items 1-58A.
　本開示において、上記の１つまたは複数の特徴は、明示された組み合わせに加え、さらに組み合わせて提供され得ることが意図される。なお、本開示のさらなる実施形態および利点は、必要に応じて以下の詳細な説明を読んで理解すれば、当業者に認識される。 In the present disclosure, it is intended that one or more of the above features may be provided in further combinations in addition to the explicit combinations. Still further embodiments and advantages of the present disclosure will be appreciated by those skilled in the art upon reading and understanding the following detailed description, if necessary.
　なお、上記した以外の本開示の特徴及び顕著な作用・効果は、以下の発明の実施形態の項及び図面を参照することで、当業者にとって明確となる。 It should be noted that features and remarkable actions and effects of the present disclosure other than those described above will become clear to those skilled in the art by referring to the following embodiments of the invention and the drawings.
　本開示の方法によれば、簡易な方法で精子の品質を評価することができ、精子の簡易検査を自宅等でも簡単に行えることとなる。また従来のように、病院等で精液を採取し、または採取した精液を病院等に提出する必要がなく、そのため、男性不妊検査を気軽に行うことができ、精子の異常を早期に発見できる点で重要である。 According to the method of the present disclosure, the quality of sperm can be evaluated by a simple method, and a simple sperm test can be easily performed at home or the like. In addition, there is no need to collect semen at a hospital, etc., or submit the collected semen to a hospital, etc., as in the past, so male infertility tests can be easily performed, and abnormalities in sperm can be detected early. important in
図１は、ニトロキシルラジカル化合物の、ミトコンドリアおよび細胞質ゾル（細胞質基質を含む）に対する反応性を示すグラフである。ＣＭＰは、３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ（商品名：３－カルバモイル－ＰＲＯＸＹＬ）である。ｈｏｍｏｇｅは肝臓のホモジネート溶液を示し、ｈｏｍｅ＋ｋｃｎはホモジネートに肝臓機能停止薬であるシアン化カリウムＫＣＮを加えたものを示し、ｃｙｔｏｓｏｌは細胞質ゾルを示す。FIG. 1 is a graph showing reactivity of nitroxyl radical compounds to mitochondria and cytosol (including cytosol). CMP is 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy (trade name: 3-carbamoyl-PROXYL). homoge indicates the liver homogenate solution, home+kcn indicates the homogenate plus the liver-stopping drug potassium cyanide KCN, and cytosol indicates the cytosol. 図２Ａは、臨床用精子運動機能検査装置（ＣＡＳＡ：Ｃｏｍｐｕｔｅｒ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｓｐｅｒｍ　ａｎａｌｙｓｉｓ）により撮影した、熱処理なしおよび後の精子の画像である。図２Ａ（左）において、熱処理無し（３７℃）の精子は活動している一方で、図２Ａ（右）は、熱処理後（６０℃）の精子は、運動を停止している。図２Ｂ（左）は、熱処理なしおよび後の精子運動率のグラフを示す。図２Ｂ（右）は、熱処理なしおよび後の精子と、プローブ（ニトロキシルラジカル化合物）との反応性の差を示すグラフである。FIG. 2A is an image of sperm without and after heat treatment taken by a clinical sperm motility tester (CASA: computer-assisted sperm analysis). In FIG. 2A (left), sperm without heat treatment (37° C.) are active, while in FIG. 2A (right), sperm after heat treatment (60° C.) have stopped motile. FIG. 2B (left) shows a graph of sperm motility without and after heat treatment. FIG. 2B (right) is a graph showing the difference in reactivity between sperm without and after heat treatment and the probe (nitroxyl radical compound). 図３Ａは、ＣＡＳＡにより撮影した、ＫＣＮ添加なしおよび添加後の精子の画像である。図２Ａ（左、ＫＣＮ添加なし）において、精子運動率は９２％である一方、図２Ｂ（右、ＫＣＮ添加）において、ＫＣＮ添加によりミトコンドリア機能を停止させた場合、プローブ反応速度は有意に低下した。FIG. 3A is an image of sperm without and after KCN addition taken by CASA. In FIG. 2A (left, no KCN addition), sperm motility was 92%, while in FIG. 2B (right, KCN addition), probe reaction rate was significantly reduced when KCN addition stopped mitochondrial function. . 図４の左の棒グラフは、プローブ（ニトロキシルラジカル化合物）の反応速度を、精子の保温時間（０、２、４時間）ごとに示す。右の棒グラフは、プローブの反応速度を、精子の希釈倍率（０、２分の１、４分の１、８分の１）ごとに示す。The bar graph on the left side of FIG. 4 shows the reaction rate of the probe (nitroxyl radical compound) for each sperm incubation time (0, 2, 4 hours). The bar graph on the right shows the reaction rate of the probe for each sperm dilution (0, 1/2, 1/4, 1/8). 図５は、現在の精子の診断システム（上側）および本開示による診断システム（下側）の模式図である。FIG. 5 is a schematic diagram of a current sperm diagnostic system (top) and a diagnostic system according to the present disclosure (bottom).
　以下、本開示を最良の形態を示しながら説明する。
　本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本開示の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。 Hereinafter, the present disclosure will be described while showing the best mode.
It should be understood that throughout this specification, expressions in the singular also include the concept of the plural unless specifically stated otherwise. Thus, articles in the singular (eg, “a,” “an,” “the,” etc. in the English language) should be understood to include their plural concepts as well, unless specifically stated otherwise. Also, it should be understood that the terms used in this specification have the meanings commonly used in the art unless otherwise specified. Thus, unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this disclosure belongs. In case of conflict, the present specification (including definitions) will control.
　以下に本明細書において特に使用される用語の定義および／または基本的技術内容を適宜説明する。 Definitions of terms and/or basic technical contents particularly used in this specification are explained below as appropriate.
　本明細書において、「約」とは、後に続く数値の±１０％を意味する。 As used herein, "about" means ±10% of the following numerical value.
　本明細書において「基」なる用語は、別途指定されない限り、一価基を意味する。一価基でない例としては、アルキレン基（２価）等が挙げられる。また、下記の置換基等の説明において、「基」なる用語を省略する場合もある。 The term "group" as used herein means a monovalent group unless otherwise specified. Examples of non-univalent groups include alkylene groups (divalent) and the like. In addition, in the following description of substituents and the like, the term "group" may be omitted.
　本明細書において、「置換されていてもよい」もしくは「置換されている」で定義される場合における置換基の数は、特に限定がない場合、置換可能であれば特に制限はなく、１または複数である。また、特に指示した場合を除き、各々の置換基の説明はその置換基が他の置換基の一部分または置換基である場合にも該当する。 In the present specification, the number of substituents defined by "optionally substituted" or "substituted" is not particularly limited as long as it can be substituted, and 1 or Multiple. Also, unless otherwise indicated, the description of each substituent also applies when that substituent is part or a substituent of another substituent.
　本明細書において「置換されていてもよい」もしくは「置換されている」で修飾されている基において、該基のいずれの部分が置換されていてもよい。例えば、「置換されていてもよいアリールアルキル」および「置換されているアリールアルキル」は、アリール部分が置換されていても、アルキル部分が置換されていてもよく、アリール部分およびアルキル部分の両方が置換されていてもよい。 Any portion of the group modified by "optionally substituted" or "substituted" in this specification may be substituted. For example, "optionally substituted arylalkyl" and "substituted arylalkyl" can be substituted on the aryl portion or substituted on the alkyl portion, and both the aryl and alkyl portions can be may be substituted.
　本明細書において「置換されていてもよい」場合における置換基は、下記置換基群Ｉから選択される１個またはそれより多くの同一または異なる置換基であり得る。結合に関与する置換基内の原子の種類は、置換基の種類によって特に制限されないが、置換されて生じる化合物が安定して存在することが好ましい。置換基が結合する原子が酸素原子、窒素原子、硫黄原子の場合は、概して、下記の置換基における結合点が炭素原子であるものに限定され、それらから選択される。 In the present specification, the substituents in the case of "optionally substituted" may be one or more identical or different substituents selected from Substituent Group I below. Although the types of atoms in the substituents involved in bonding are not particularly limited by the types of substituents, it is preferred that the compound formed by substitution exists stably. When the atom to which the substituent is attached is an oxygen atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom, the attachment point in the substituent below is generally limited to a carbon atom and selected from them.
　置換基群Ｉは、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ヒドロキシイミノ、ホルミル、ホルミルオキシ、カルバモイル、スルファモイル、スルファニル、スルフィノ、スルホ、チオホルミル、チオカルボキシ、ジチオカルボキシ、チオカルバモイル、シアノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、ヒドラジノ、ウレイド、アミジノ、アミジノアミノ、非置換もしくは置換アルキル、非置換もしくは置換アルケニル、非置換もしくは置換アルキニル、非置換もしくは置換アリール、非置換もしくは置換シクロアルキル、非置換もしくは置換ヘテロアリール、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル、非置換もしくは置換アルキルオキシ、非置換もしくは置換アルケニルオキシ、非置換もしくは置換アルキニルオキシ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－オキシ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－オキシ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－オキシ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシ、非置換もしくは置換アルキルオキシアルキル、非置換もしくは置換アルケニルオキシアルキル、非置換もしくは置換アルキニルオキシアルキル、非置換もしくは置換アリールオキシアルキル、非置換もしくは置換シクロアルキルオキシアルキル、非置換もしくは置換ヘテロアリールオキシアルキル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキルオキシアルキル、非置換もしくは置換アルキルオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換アルケニルオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換アルキニルオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換アリールオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換シクロアルキルオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換ヘテロアリールオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキルオキシアルキルオキシ、非置換もしくは置換アルキルカルボニル、非置換もしくは置換アルケニルカルボニル、非置換もしくは置換アルキニルカルボニル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルボニル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルボニル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニル、非置換もしくは置換アルキルカルボニルオキシ、非置換もしくは置換アルケニルカルボニルオキシ、非置換もしくは置換アルキニルカルボニルオキシ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルボニルオキシ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルオキシ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルオキシ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルオキシ、非置換もしくは置換アルキルカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルケニルカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルキニルカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルボニルアミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルキルカルボニルチオ、非置換もしくは置換アルケニルカルボニルチオ、非置換もしくは置換アルキニルカルボニルチオ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルボニルチオ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルチオ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルチオ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルチオ、非置換もしくは置換アルキルカルボニルイミノ、非置換もしくは置換アルケニルカルボニルイミノ、非置換もしくは置換アルキニルカルボニルイミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルボニルイミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルイミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルイミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルイミノ、非置換もしくは置換アルキルチオ、非置換もしくは置換アルケニルチオ、非置換もしくは置換アルキニルチオ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－チオ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－チオ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－チオ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－チオ、非置換もしくは置換アルキルアミノ、非置換もしくは置換アルケニルアミノ、非置換もしくは置換アルキニルアミノ、非置換もしくは置換アルキニルアミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－アミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－アミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－アミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－アミノ、非置換もしくは置換アルキルスルホニル、非置換もしくは置換アルケニルスルホニル、非置換もしくは置換アルキニルスルホニル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－スルホニル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－スルホニル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－スルホニル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルホニル、非置換もしくは置換アルキルスルホニルアミノ、非置換もしくは置換アルケニルスルホニルアミノ、非置換もしくは置換アルキニルスルホニルアミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－スルホニルアミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－スルホニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－スルホニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルホニルアミノ、非置換もしくは置換アルキルイミノ、非置換もしくは置換アルケニルイミノ、非置換もしくは置換アルキニルイミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－イミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－イミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－イミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－イミノ、非置換もしくは置換アルキルオキシイミノ、非置換もしくは置換アルケニルオキシイミノ、非置換もしくは置換アルキニルオキシイミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－オキシイミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－オキシイミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－オキシイミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシイミノ、非置換もしくは置換アルキルオキシカルボニル、非置換もしくは置換アルケニルオキシカルボニル、非置換もしくは置換アルキニルオキシカルボニル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－オキシカルボニル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－オキシカルボニル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニル、非置換もしくは置換アルキルオキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルケニルオキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルキニルオキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、非置換もしくは置換アルキルスルファニル、非置換もしくは置換アルケニルスルファニル、非置換もしくは置換アルキニルスルファニル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－スルファニル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－スルファニル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－スルファニル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルファニル、非置換もしくは置換アルキルスルフィニル、非置換もしくは置換アルケニルスルフィニル、非置換もしくは置換アルキニルスルフィニル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－スルフィニル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－スルフィニル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－スルフィニル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルフィニル、非置換もしくは置換アルキルカルバモイル、非置換もしくは置換アルケニルカルバモイル、非置換もしくは置換アルキニルカルバモイル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－カルバモイル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－カルバモイル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－カルバモイル、非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルバモイル、非置換もしくは置換アルキルスルファモイル、非置換もしくは置換アルケニルスルファモイル、非置換もしくは置換アルキニルスルファモイル、非置換もしくは置換アリール－ＬＸ－スルファモイル、非置換もしくは置換シクロアルキル－ＬＸ－スルファモイル、非置換もしくは置換ヘテロアリール－ＬＸ－スルファモイル、および非置換もしくは置換ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルファモイルからなり、ここで、ＬＸは、単結合または非置換もしくは置換アルキレンであり、前記置換基群中の、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、置換アリール、置換シクロアルキル、置換ヘテロアリール、置換ヘテロシクロアルキル、および置換アルキレン部分（全体または一部として）は各々独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、カルボキシ、アミノ、イミノ、ヒドロキシアミノ、ヒドロキシイミノ、ホルミル、ホルミルオキシ、カルバモイル、スルファモイル、スルファニル、スルフィノ、スルホ、チオホルミル、チオカルボキシ、ジチオカルボキシ、チオカルバモイル、シアノ、ニトロ、ニトロソ、アジド、ヒドラジノ、ウレイド、アミジノ、アミジノアミノ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、アルキルオキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリール－ＬＸ－オキシ、シクロアルキル－ＬＸ－オキシ、ヘテロアリール－ＬＸ－オキシ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシ、アルキルオキシアルキル、アルケニルオキシアルキル、アルキニルオキシアルキル、アリールオキシアルキル、シクロアルキルオキシアルキル、ヘテロアリールオキシアルキル、ヘテロシクロアルキルオキシアルキル、アルキルオキシアルキルオキシ、アルケニルオキシアルキルオキシ、アルキニルオキシアルキルオキシ、アリールオキシアルキルオキシ、シクロアルキルオキシアルキルオキシ、ヘテロアリールオキシアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシアルキルオキシ、アルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、アリール－ＬＸ－カルボニル、シクロアルキル－ＬＸ－カルボニル、ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アルキニルカルボニルオキシ、アリール－ＬＸ－カルボニルオキシ、シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルオキシ、ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルオキシ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アルキニルカルボニルアミノ、アリール－ＬＸ

－カルボニルアミノ、シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルアミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルアミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルアミノ、アルキルカルボニルチオ、アルケニルカルボニルチオ、アルキニルカルボニルチオ、アリール－ＬＸ－カルボニルチオ、シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルチオ、ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルチオ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルチオ、アルキルカルボニルイミノ、アルケニルカルボニルイミノ、アルキニルカルボニルイミノ、アリール－ＬＸ－カルボニルイミノ、シクロアルキル－ＬＸ－カルボニルイミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－カルボニルイミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルボニルイミノ、アルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、アリール－ＬＸ－チオ、シクロアルキル－ＬＸ－チオ、ヘテロアリール－ＬＸ－チオ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－チオ、アルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アルキニルアミノ、アリール－ＬＸ－アミノ、シクロアルキル－ＬＸ－アミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－アミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－アミノ、アルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、アリール－ＬＸ－スルホニル、シクロアルキル－ＬＸ－スルホニル、ヘテロアリール－ＬＸ－スルホニル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アルケニルスルホニルアミノ、アルキニルスルホニルアミノ、アリール－ＬＸ－スルホニルアミノ、シクロアルキル－ＬＸ－スルホニルアミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－スルホニルアミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルホニルアミノ、アルキルイミノ、アルケニルイミノ、アルキニルイミノ、アリール－ＬＸ－イミノ、シクロアルキル－ＬＸ－イミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－イミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－イミノ、アルキルオキシイミノ、アルケニルオキシイミノ、アルキニルオキシイミノ、アリール－ＬＸ－オキシイミノ、シクロアルキル－ＬＸ－オキシイミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－オキシイミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシイミノ、アルキルオキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキニルオキシカルボニル、アリール－ＬＸ－オキシカルボニル、シクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニル、ヘテロアリール－ＬＸ－オキシカルボニル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニル、アルキルオキシカルボニルアミノ、アルケニルオキシカルボニルアミノ、アルキニルオキシカルボニルアミノ、アリール－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、シクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、ヘテロアリール－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－オキシカルボニルアミノ、アルキルスルファニル、アルケニルスルファニル、アルキニルスルファニル、アリール－ＬＸ－スルファニル、シクロアルキル－ＬＸ－スルファニル、ヘテロアリール－ＬＸ－スルファニル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルファニル、アルキルスルフィニル、アルケニルスルフィニル、アルキニルスルフィニル、アリール－ＬＸ－スルフィニル、シクロアルキル－ＬＸ－スルフィニル、ヘテロアリール－ＬＸ－スルフィニル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルフィニル、アルキルカルバモイル、アルケニルカルバモイル、アルキニルカルバモイル、アリール－ＬＸ－カルバモイル、シクロアルキル－ＬＸ－カルバモイル、ヘテロアリール－ＬＸ－カルバモイル、ヘテロシクロアルキル－ＬＸ－カルバモイル、アルキルスルファモイル、アルケニルスルファモイル、アルキニルスルファモイル、アリール－ＬＸ－スルファモイル、シクロアルキル－ＬＸ－スルファモイル、ヘテロアリール－ＬＸ－スルファモイル、およびヘテロシクロアルキル－ＬＸ－スルファモイルからなる群より選択される１個から最大置換可能数までの同一または異なる置換基を有する。 Substituent Group I includes halogen, hydroxy, oxo, carboxy, amino, imino, hydroxyamino, hydroxyimino, formyl, formyloxy, carbamoyl, sulfamoyl, sulfanyl, sulfino, sulfo, thioformyl, thiocarboxy, dithiocarboxy, thiocarbamoyl, cyano, nitro, nitroso, azide, hydrazino, ureido, amidino, amidinoamino, unsubstituted or substituted alkyl, unsubstituted or substituted alkenyl, unsubstituted or substituted alkynyl, unsubstituted or substituted aryl, unsubstituted or substituted cycloalkyl, unsubstituted or substituted heteroaryl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl, unsubstituted or substituted alkyloxy, unsubstituted or substituted alkenyloxy, unsubstituted or substituted alkynyloxy, unsubstituted or substituted aryl-L X -oxy, unsubstituted or substituted cyclo Alkyl-L X -oxy, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -oxy, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -oxy, unsubstituted or substituted alkyloxyalkyl, unsubstituted or substituted alkenyloxyalkyl, unsubstituted or substituted alkynyloxyalkyl, unsubstituted or substituted aryloxyalkyl, unsubstituted or substituted cycloalkyloxyalkyl, unsubstituted or substituted heteroaryloxyalkyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyloxyalkyl, unsubstituted or substituted alkyloxyalkyloxy , unsubstituted or substituted alkenyloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted alkynyloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted aryloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted cycloalkyloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted heteroaryloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted heterocycloalkyloxyalkyloxy, unsubstituted or substituted alkylcarbonyl, unsubstituted or substituted alkenylcarbonyl, unsubstituted or substituted alkynylcarbonyl, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbonyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -carbonyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbonyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbonyl, unsubstituted or substituted alkylcarbonyloxy, unsubstituted or substituted alkenylcarbonyloxy , unsubstituted or substituted alkynylcarbonyloxy, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbonyloxy, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -carbonyloxy, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbonyloxy, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbonyloxy, unsubstituted or substituted alkylcarbonylamino, unsubstituted or substituted alkenylcarbonylamino, unsubstituted or substituted alkynylcarbonylamino, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbonylamino, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -carbonylamino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbonylamino, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbonylamino, unsubstituted or substituted alkylcarbonylthio, unsubstituted or substituted alkenyl carbonylthio, unsubstituted or substituted alkynylcarbonylthio, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbonylthio, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -carbonylthio, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbonylthio, non substituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbonylthio, unsubstituted or substituted alkylcarbonylimino, unsubstituted or substituted alkenylcarbonylimino, unsubstituted or substituted alkynylcarbonylimino, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbonylimino, unsubstituted substituted or substituted cycloalkyl-L X -carbonylimino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbonylimino, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbonylimino, unsubstituted or substituted alkylthio, unsubstituted or substituted alkenyl thio, unsubstituted or substituted alkynylthio, unsubstituted or substituted aryl-L X -thio, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -thio, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -thio, unsubstituted or substituted heterocyclo Alkyl-L X -thio, unsubstituted or substituted alkylamino, unsubstituted or substituted alkenylamino, unsubstituted or substituted alkynylamino, unsubstituted or substituted alkynylamino, unsubstituted or substituted aryl-L X -amino, unsubstituted or substituted Cycloalkyl-L X -amino, unsubstituted or substituted heteroaromatic aryl-L X -amino, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -amino, unsubstituted or substituted alkylsulfonyl, unsubstituted or substituted alkenylsulfonyl, unsubstituted or substituted alkynylsulfonyl, unsubstituted or substituted aryl-L X - sulfonyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -sulfonyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -sulfonyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -sulfonyl, unsubstituted or substituted alkylsulfonylamino, unsubstituted or substituted alkenylsulfonylamino, unsubstituted or substituted alkynylsulfonylamino, unsubstituted or substituted aryl-L X -sulfonylamino, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -sulfonylamino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -sulfonylamino , unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -sulfonylamino, unsubstituted or substituted alkylimino, unsubstituted or substituted alkenylimino, unsubstituted or substituted alkynylimino, unsubstituted or substituted aryl-L X -imino, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -imino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -imino, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -imino, unsubstituted or substituted alkyloxyimino, unsubstituted or substituted alkenyloxyimino, unsubstituted or substituted alkynyloxyimino, unsubstituted or substituted aryl-L X -oximino, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -oximino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -oximino, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl -L X -oximino, unsubstituted or substituted alkyloxycarbonyl, unsubstituted or substituted alkenyloxycarbonyl, unsubstituted or substituted alkynyloxycarbonyl, unsubstituted or substituted aryl-L X -oxycarbonyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -oxycarbonyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -oxycarbonyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -oxycarbonyl, unsubstituted or substituted alkyloxycarbonylamino, unsubstituted or substituted alkenyloxycarbonylamino, unsubstituted or substituted alkynyloxy carbonylamino, unsubstituted or substituted aryl-L X -oxycarbonylamino, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -oxycarbonylamino, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -oxycarbonylamino, unsubstituted or substituted heterocyclo Alkyl-L X -oxycarbonylamino, unsubstituted or substituted alkylsulfanyl, unsubstituted or substituted alkenylsulfanyl, unsubstituted or substituted alkynylsulfanyl, unsubstituted or substituted aryl-L X -sulfanyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -sulfanyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -sulfanyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -sulfanyl, unsubstituted or substituted alkylsulfinyl, unsubstituted or substituted alkenylsulfinyl, unsubstituted or substituted alkynylsulfinyl, unsubstituted substituted or substituted aryl-L X -sulfinyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -sulfinyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -sulfinyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -sulfinyl, unsubstituted or substituted alkylcarbamoyl, unsubstituted or substituted alkenylcarbamoyl, unsubstituted or substituted alkynylcarbamoyl, unsubstituted or substituted aryl-L X -carbamoyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -carbamoyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -carbamoyl, unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -carbamoyl, unsubstituted or substituted alkylsulfamoyl, unsubstituted or substituted alkenylsulfamoyl, unsubstituted or substituted alkynylsulfamoyl, unsubstituted or substituted aryl-L X -sulfamoyl, unsubstituted or substituted cycloalkyl-L X -sulfamoyl, unsubstituted or substituted heteroaryl-L X -sulfamoyl, and unsubstituted or substituted heterocycloalkyl-L X -sulfamoyl, where L X is , a single bond or unsubstituted or substituted alkylene, and substituted alkyl, substituted alkenyl, substituted alkynyl, substituted aryl, substituted cycloalkyl, substituted heteroaryl, substituted heterocycloalkyl, and substituted alkylene moieties (all or as part of are each independently halogen, hydroxy, oxo, carboxy, amino, imino, hydroxyamino, hydroxyimino, formyl, formyloxy, carbamoyl, sulfamoyl, sulfanyl, sulfino, sulfo, thioformyl, thiocarboxy, dithiocarboxy, thiocarbamoyl, cyano, nitro, nitroso, azide, hydrazino, ureido, amidino, amidinoamino, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, cycloalkyl, heteroaryl, heterocycloalkyl, alkyloxy, alkenyloxy, alkynyloxy, aryl-L X -oxy , cycloalkyl-L X -oxy, heteroaryl-L X -oxy, heterocycloalkyl-L X -oxy, alkyloxyalkyl, alkenyloxyalkyl, alkynyloxyalkyl, aryloxyalkyl, cycloalkyloxyalkyl, heteroaryloxy alkyl, heterocycloalkyloxyalkyl, alkyloxyalkyloxy, alkenyloxyalkyloxy, alkynyloxyalkyloxy, aryloxyalkyloxy, cycloalkyloxyalkyloxy, heteroaryloxyalkyloxy, heterocycloalkyloxyalkyloxy, alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, alkynylcarbonyl, aryl-L X -carbonyl, cycloalkyl-L X -carbonyl, heteroaryl-L X -carbonyl, heterocycloalkyl-L X -carbonyl, alkylcarbonyloxy, alkenylcarbonyloxy, alkynylcarbonyloxy, Aryl-L X -carbonyloxy, cycloalkyl-L X -carbonyloxy, heteroaryl-L X -carbonyloxy, heterocycloalkyl-L X -carbonyloxy, alkylcarbonylamino, alkenylcarbonylamino, alkynylcarbonylamino, aryl- LX

-carbonylamino, cycloalkyl-L X -carbonylamino, heteroaryl-L X -carbonylamino, heterocycloalkyl-L X -carbonylamino, alkylcarbonylthio, alkenylcarbonylthio, alkynylcarbonylthio, aryl-L X -carbonyl thio, cycloalkyl-L X -carbonylthio, heteroaryl-L X -carbonylthio, heterocycloalkyl-L X -carbonylthio, alkylcarbonylimino, alkenylcarbonylimino, alkynylcarbonylimino, aryl-L X -carbonylimino, Cycloalkyl-L X -carbonylimino, heteroaryl-L X -carbonylimino, heterocycloalkyl-L X -carbonylimino, alkylthio, alkenylthio, alkynylthio, aryl-L X -thio, cycloalkyl-L X -thio , heteroaryl-L X -thio, heterocycloalkyl-L X -thio, alkylamino, alkenylamino, alkynylamino, alkynylamino, aryl-L X -amino, cycloalkyl-L X -amino, heteroaryl-L X -amino, heterocycloalkyl-L X -amino, alkylsulfonyl, alkenylsulfonyl, alkynylsulfonyl, aryl-L X -sulfonyl, cycloalkyl-L X -sulfonyl, heteroaryl-L X -sulfonyl, heterocycloalkyl-L X -sulfonyl, alkylsulfonylamino, alkenylsulfonylamino, alkynylsulfonylamino, aryl-L X -sulfonylamino, cycloalkyl-L X -sulfonylamino, heteroaryl-L X -sulfonylamino, heterocycloalkyl-L X -sulfonylamino , alkylimino, alkenylimino, alkynylimino, aryl-L X -imino, cycloalkyl-L X -imino, heteroaryl-L X -imino, heterocycloalkyl-L X -imino, alkyloxyimino, alkenyloxyimino, alkynyloxyimino, aryl-L X -oximino, cycloalkyl-L X -oximino, heteroaryl-L X -oximino, heterocycloalkyl-L X -oximino, alkyloxycarbonyl, alkenyloxycarbonyl, alkynyloxy cycarbonyl, aryl-L X -oxycarbonyl, cycloalkyl-L X -oxycarbonyl, heteroaryl-L X -oxycarbonyl, heterocycloalkyl-L X -oxycarbonyl, alkyloxycarbonylamino, alkenyloxycarbonylamino, alkynyl oxycarbonylamino, aryl-L X -oxycarbonylamino, cycloalkyl-L X -oxycarbonylamino, heteroaryl-L X -oxycarbonylamino, heterocycloalkyl-L X -oxycarbonylamino, alkylsulfanyl, alkenylsulfanyl, alkynylsulfanyl, aryl-L X -sulfanyl, cycloalkyl-L X -sulfanyl, heteroaryl-L X -sulfanyl, heterocycloalkyl-L X -sulfanyl, alkylsulfinyl, alkenylsulfinyl, alkynylsulfinyl, aryl-L X -sulfinyl , cycloalkyl-L X -sulfinyl, heteroaryl-L X -sulfinyl, heterocycloalkyl-L X -sulfinyl, alkylcarbamoyl, alkenylcarbamoyl, alkynylcarbamoyl, aryl-L X -carbamoyl, cycloalkyl-L X -carbamoyl, heteroaryl-L X -carbamoyl, heterocycloalkyl-L X -carbamoyl, alkylsulfamoyl, alkenylsulfamoyl, alkynylsulfamoyl, aryl-L X -sulfamoyl, cycloalkyl-L X -sulfamoyl, heteroaryl- It has from one to the maximum possible number of the same or different substituents selected from the group consisting of L X -sulfamoyl and heterocycloalkyl-L X -sulfamoyl.
　本明細書において「Ｃ１－６」とは、炭素原子数が１～６であることを意味する。他の数字の場合も同様であり、例えば、「Ｃ１－４」とは炭素原子数が１～４であること、「Ｃ１－３」とは炭素原子数が１～３であることを意味する。本明細書において炭素数の限定がある記載はあくまで好ましい数値範囲であり、本開示は規定される炭素数以外の炭素数の置換基を有する基も本開示の範囲内であることが意図される。 As used herein, “C 1-6 ” means having 1 to 6 carbon atoms. The same applies to other numbers. For example, “C 1-4 ” means that the number of carbon atoms is 1 to 4, and “C 1-3 ” means that the number of carbon atoms is 1 to 3. means. In the present specification, the description with a carbon number limitation is only a preferred numerical range, and the present disclosure is intended to include groups having substituents with a carbon number other than the specified carbon number within the scope of the present disclosure. .
　本明細書において「ヘテロ原子」は、炭素原子および水素原子以外の原子をいい、例えば、酸素原子、窒素原子、硫黄原子等を意味する。ヘテロ原子を含む基は、ヘテロ・・・基（例えば、ヘテロアリール基（アリール基に少なくともヘテロ原子を含むことを意味する。））または複素・・・基（例えば、複素環基（環基（炭素環基）に少なくとも１つのヘテロ原子を含むことを意味する。））などと称することがある。 As used herein, the term "heteroatom" refers to atoms other than carbon atoms and hydrogen atoms, such as oxygen atoms, nitrogen atoms, sulfur atoms, and the like. A group containing a heteroatom is a hetero group (e.g., a heteroaryl group (meaning that an aryl group contains at least a heteroatom)) or a hetero group (e.g., a heterocyclic group (a ring group ( It means that the carbocyclic group) contains at least one heteroatom.)) and the like.
　本明細書において「窒素ラジカル化合物」とは、その化合物を構成する原子のうちの一つまたはそれより多くの窒素原子が不対電子を有する化合物を意味する。安定な窒素ラジカル化合物の例としては、２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）などが挙げられるが、これに限定されない。本明細書において、「窒素ラジカル化合物」というときは、「その化合物を構成する原子のうちの一つまたはそれより多くの窒素原子が不対電子を有」していればよく、その他の原子（例えば、酸素）が不対電子を有していてもよく有していなくてもよい。 As used herein, the term "nitrogen radical compound" means a compound in which one or more nitrogen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons. Examples of stable nitrogen radical compounds include, but are not limited to, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and the like. In the present specification, when the term "nitrogen radical compound" is used, it is sufficient that "one or more nitrogen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons", and other atoms ( For example, oxygen) may or may not have an unpaired electron.
　本明細書において「酸素ラジカル化合物」とは、その化合物を構成する原子のうちの一つまたはそれより多くの酸素原子が不対電子を有する、化合物を意味する。安定な酸素ラジカル化合物の例としては、ガルビノキシル　フリーラジカル（別名２，６－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－α－（３，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－オキソ－２，５－シクロヘキサジエン－１－イリデン）－ｐ－トリルオキシ，　フリーラジカル）、およびニトロキシルラジカル化合物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書において、「酸素ラジカル化合物」というときは、「その化合物を構成する原子のうちの一つまたはそれより多くの酸素原子が不対電子を有」していればよく、その他の原子（例えば、窒素）が不対電子を有していてもよく有していなくてもよい。 As used herein, the term "oxygen radical compound" means a compound in which one or more oxygen atoms among atoms constituting the compound have unpaired electrons. Examples of stable oxygen radical compounds include the galvinoxyl free radical (aka 2,6-di-tert-butyl-α-(3,5-di-tert-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadiene-1 -ylidene)-p-tolyloxy, free radical), and nitroxyl radical compounds. In this specification, when the term "oxygen radical compound" is used, it is sufficient that "one or more oxygen atoms among the atoms constituting the compound have unpaired electrons", and other atoms ( nitrogen) may or may not have an unpaired electron.
　本明細書において、「ニトロキシルラジカル化合物」とは、ニトロキシルラジカル基を含む化合物を意味し、ニトロキシルラジカル基（＞Ｎ－Ｏ・）は、酸素原子と窒素原子の結合したニトロキシド基を形成する酸素原子が不対電子を有していることを特徴とする基である。本開示のニトロキシルラジカル化合物は、ニトロキシルラジカル基を有し、本開示に係る機能を発揮できるものであれば特に制限されない。 As used herein, the term “nitroxyl radical compound” means a compound containing a nitroxyl radical group, and the nitroxyl radical group (>N—O.) forms a nitroxide group in which an oxygen atom and a nitrogen atom are bonded. It is a group characterized in that the oxygen atom having an unpaired electron. The nitroxyl radical compound of the present disclosure is not particularly limited as long as it has a nitroxyl radical group and can exhibit the functions of the present disclosure.
　本明細書において「環式ニトロキシルラジカル化合物」は、ニトロキシルラジカルの窒素原子が、化合物中に存在する環（例えば、非芳香族もしくは芳香族炭素環、非芳香族もしくは芳香族複素環）の構成原子の一つである、化合物である。環式ニトロキシルラジカル化合物の例としては、５員環式ニトロキシルラジカル化合物（例えば、２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシおよびその誘導体、例えば、３－（カルボキシ）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）、および６員環式ニトロキシルラジカル化合物（例えば、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６－テトラメチルピペリジン
　１－オキシル）、ＡＺＡＤＯ（２－アザアダマンタン－Ｎ－オキシル）、Ｍｅ－ＡＺＡＤＯ（１－メチル－２－アザアダマンタン－Ｎ－オキシル）、ｎｏｒ－ＡＺＡＤＯ（９－アザノルアダマンタン－Ｎ－オキシル））が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, a "cyclic nitroxyl radical compound" means that the nitrogen atom of the nitroxyl radical is a ring (e.g., non-aromatic or aromatic carbocycle, non-aromatic or It is a compound that is one of the constituent atoms. Examples of cyclic nitroxyl radical compounds include five-membered cyclic nitroxyl radical compounds (eg, 2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy and derivatives thereof such as 3-(carboxy) -2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy), and 6-membered cyclic nitroxyl radical compounds (e.g., TEMPO (2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl), AZADO (2-azaadamantane-N-oxyl), Me-AZADO (1-methyl-2-azaadamantane-N-oxyl), nor-AZADO (9-azanoradamantane-N-oxyl)), It is not limited to these.
　本明細書において「ニトロキシルラジカル化合物の塩」は、そのオキソアンモニウムカチオン（＞Ｎ＋＝Ｏ）を含む塩であり得る。例えば、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
で表されるニトロキシルラジカル化合物の塩は、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
によって表される塩（式中、Ｚ、Ｅ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、およびＲ５Ｂは、本明細書中で定義されるとおりである）であり得、式中、Ｙ－は、任意のハロゲン不含アニオンである。ハロゲン不含アニオンの例としては、炭酸イオン、炭酸水素イオン、硝酸イオン、硫酸イオン、リン酸イオン、酢酸イオン、プロピオン酸イオン、酪酸イオン、ギ酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、酒石酸イオン、クエン酸イオン、ステアリン酸イオン、コハク酸イオン、エチルコハク酸イオン、マロン酸イオン、ラクトビオン酸イオン、グルコン酸イオン、グルコヘプトン酸イオン、安息香酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸イオン（トシル酸イオン）、ラウリル硫酸イオン、リンゴ酸イオン、アスコルビン酸イオン、マンデル酸イオン、サッカリン酸イオン、キシナホ酸イオン、パモ酸イオン、ケイヒ酸イオン、アジピン酸イオン、システインイオン、Ｎ－アセチルシステインイオン、イオン酸イオン、ニコチン酸イオン、シュウ酸イオン、ピクリン酸イオン、チオシアン酸イオン、ウンデカン酸イオン、アクリル酸ポリマーイオン、カルボキシビニルポリマーイオン等が挙げられる。 As used herein, "a salt of a nitroxyl radical compound" may be a salt containing its oxoammonium cation (>N + =O). For example, the expression
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
The salt of the nitroxyl radical compound represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
wherein Z, E, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , and R 5B are as defined herein, and can be a salt represented by the formula In, Y − is any halogen-free anion. Examples of halogen-free anions include carbonate, hydrogen carbonate, nitrate, sulfate, phosphate, acetate, propionate, butyrate, formate, maleate, fumarate, tartrate, citrate, stearate, succinate, ethylsuccinate, malonate, lactobionate, gluconate, glucoheptonate, benzoate, methanesulfonate, benzenesulfonic acid, paratoluenesulfonate (tosylate ion), lauryl sulfate ion, malate ion, ascorbate ion, mandelate ion, saccharinate ion, xinafoate ion, pamoate ion, cinnamate ion, adipate ion, cysteine ion, N-acetylcysteine ion , ionic acid ion, nicotinate ion, oxalate ion, picrate ion, thiocyanate ion, undecanoate ion, acrylic acid polymer ion, carboxyvinyl polymer ion and the like.
　一般に、ラジカル化合物は反応性に富んだ化学種であり、周囲の物質との相互作用によって、ある程度の寿命をもって消失する不安定なものが多い。しかしニトロキシルラジカル化合物の場合は、窒素原子の電子吸引性によって酸素上にある不対電子が安定化されているのが特徴である。このニトロキシラジカルはＰ型、つまり、ニトロキシラジカルから電子を放出しオキソアンモニウムカチオンになるタイプの反応が安定に行われるタイプとＮ型、つまりニトロキシラジカルから電子をもらい、アミノキシイオンになるタイプの反応が安定に行われるタイプに分けられる。Ｐ型は、正極活物質、Ｎ、負極活物質として利用できる。 In general, radical compounds are highly reactive chemical species, and many of them are unstable and disappear after a certain amount of life due to interactions with surrounding substances. However, in the case of nitroxyl radical compounds, the electron-withdrawing property of the nitrogen atom stabilizes the unpaired electrons on the oxygen. This nitroxy radical is P-type, that is, the type that releases electrons from the nitroxy radical and becomes an oxoammonium cation. It is divided into types in which type reactions are stably performed. P-type can be used as a positive electrode active material, N, and a negative electrode active material.
　本明細書においてアルキル基とは、脂肪族飽和炭化水素から水素原子１個を除いた原子団をいう。アルキル基は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基などの飽和脂肪族炭化水素基を示し、置換基を有していても有していなくてもよい。置換基としては、特に制限はなく、例えば、アルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基等を挙げることができる。これらの置換基はさらに置換基を有していてもよい。また、アルキル基の炭素数は、特に限定されないが、入手の容易性やコストの点から、１～２０、１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～８、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、または１であり得る。 As used herein, an alkyl group refers to an atomic group obtained by removing one hydrogen atom from an aliphatic saturated hydrocarbon. The alkyl group is, for example, a saturated aliphatic hydrocarbon group such as methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, and has a substituent. It may or may not have The substituent is not particularly limited, and examples thereof include an alkoxy group, an aryl group, and a heteroaryl group. These substituents may further have a substituent. In addition, the number of carbon atoms in the alkyl group is not particularly limited, but from the viewpoint of availability and cost, It can be 8, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, or 1.
　本明細書においてアルケニル基とは、例えば、ビニル基、アリル基、ブタジエニル基などの二重結合を含む不飽和脂肪族炭化水素基を示し、置換基を有していても有していなくてもよい。アルケニル基の炭素数は、特に限定されないが、２～２０、２～１８、２～１６、２～１４、２～１２、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、２～３、または２であり得る。 As used herein, the alkenyl group refers to, for example, a vinyl group, an allyl group, an unsaturated aliphatic hydrocarbon group containing a double bond such as a butadienyl group, and may or may not have a substituent. good. The number of carbon atoms in the alkenyl group is not particularly limited, but 2 to 20, 2 to 18, 2 to 16, 2 to 14, 2 to 12, 2 to 10, 2 to 8, 2 to 6, 2 to 5, 2 to It can be 4, 2-3, or 2.
　本明細書においてアルコキシ基とは、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基など、エーテル結合の一方を脂肪族炭化水素基で置換した官能基を示し、この脂肪族炭化水素基は置換基を有していても有していなくてもよい。アルコキシ基の炭素数は、特に限定されないが、１～２０、１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～８、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、または１であり得る。 As used herein, the alkoxy group refers to a functional group in which one of the ether bonds is substituted with an aliphatic hydrocarbon group, such as a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, and the aliphatic hydrocarbon group has a substituent. may or may not have. The number of carbon atoms in the alkoxy group is not particularly limited, but is 1-20, 1-18, 1-16, 1-14, 1-12, 1-10, 1-8, 1-6, 1-5, 1- It can be 4, 1-3, 1-2, or 1.
　本明細書においてアリール基とは、例えば、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントラセニル基、フェナントリル基、ターフェニル基、ピレニル基などの芳香族炭化水素基を示し、置換基を有していても有していなくてもよい。アリール基の炭素数は、特に限定されないが、６～１８の範囲が好ましい。 As used herein, the aryl group refers to, for example, an aromatic hydrocarbon group such as a phenyl group, a naphthyl group, a biphenyl group, an anthracenyl group, a phenanthryl group, a terphenyl group, and a pyrenyl group. It does not have to be. The number of carbon atoms in the aryl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 6-18.
　本明細書においてアリールアルキル基とは、芳香族炭化水素を置換基として有するアルキル基であり、その具体例としては、例えば、フェニルメチル基（ベンジル基）、α、α－ジメチルベンジル基、１－フェニルエチル基、２－フェニルエチル基、１－フェニルプロピル基、２－フェニルプロピル基、３－フェニルプロピル基、ナフタレン－１－イルメチル基、ナフタレン－２－イルメチル基、ナフタレン－１－イルエチル基、ナフタレン－２－イルエチル基、アントラセン－１－イルメチル基、アントラセン－２－イルメチル基、アントラセン－９－イルメチル基が挙げられる。アリールアルキル基の炭素数は、特に限定されないが、７～１９の範囲が好ましい。 As used herein, the arylalkyl group is an alkyl group having an aromatic hydrocarbon as a substituent, and specific examples include a phenylmethyl group (benzyl group), α,α-dimethylbenzyl group, 1- phenylethyl group, 2-phenylethyl group, 1-phenylpropyl group, 2-phenylpropyl group, 3-phenylpropyl group, naphthalen-1-ylmethyl group, naphthalen-2-ylmethyl group, naphthalen-1-ylethyl group, naphthalene -2-ylethyl group, anthracen-1-ylmethyl group, anthracen-2-ylmethyl group and anthracen-9-ylmethyl group. The number of carbon atoms in the arylalkyl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 7-19.
　本明細書においてヘテロアリール基とは、例えば、フラニル基、チオフェニル基、ベンゾフラニル基、ジベンゾフラニル基、ピリジル基、キノリニル基など、炭素以外の原子を一個または複数個環内に有する芳香族基を示し、置換基を有していても有していなくてもよい。ヘテロアリール基の炭素数は、特に限定されないが、３～１８の範囲が好ましい。 As used herein, the heteroaryl group refers to an aromatic group having one or more atoms other than carbon in the ring, such as furanyl, thiophenyl, benzofuranyl, dibenzofuranyl, pyridyl, quinolinyl, etc. It may or may not have a substituent. The number of carbon atoms in the heteroaryl group is not particularly limited, but is preferably in the range of 3-18.
　本明細書においてアミド基とは、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２である。 As used herein, an amide group is -C(=O) NH2 .
　本明細書においてハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選ばれる原子を示す。 "Halogen" as used herein means an atom selected from fluorine, chlorine, bromine and iodine.
　本明細書においてヒドロキシ基とは、酸素原子１個と水素原子１個が結合している原子団－ＯＨをいう。 As used herein, a hydroxy group refers to an atomic group —OH in which one oxygen atom and one hydrogen atom are bonded.
　本明細書において「カルバモイル」は、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ２の一価基である。 As used herein, "carbamoyl" is a monovalent group of -C(=O) -NH2 .
　本明細書において「シアノ基」は、－ＣＮの一価基である。 As used herein, a "cyano group" is a -CN monovalent group.
　本明細書においてアミノ基とは、－ＮＨ２で表わされる１価の基またはそのＨが他の置換基で置換されたものをいう。置換する場合の置換基としては、例えば、アリール基、ヘテロアリール基、直鎖アルキル基、分岐アルキル基等が挙げられる。アリール基、ヘテロアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、ピリジル基、キノリニル基が好ましい。これら置換基は、さらに置換されていてもよい。炭素数は、特に限定されないが、好ましくは、２以上５０以下、より好ましくは６以上４０以下、特に好ましくは６以上３０以下の範囲である。 As used herein, an amino group refers to a monovalent group represented by —NH 2 or a group in which H is substituted with another substituent. Substituents for substitution include, for example, aryl groups, heteroaryl groups, linear alkyl groups, branched alkyl groups, and the like. As the aryl group and the heteroaryl group, a phenyl group, a naphthyl group, a pyridyl group and a quinolinyl group are preferable. These substituents may be further substituted. The number of carbon atoms is not particularly limited, but is preferably 2 or more and 50 or less, more preferably 6 or more and 40 or less, and particularly preferably 6 or more and 30 or less.
　本明細書においてアルキルアミノ基とは、アミノ基にメチル基、エチル基、ｎ－プロピル基などの脂肪族炭化水素基が結合した官能基を示す。アルキルアミノ基は、置換基を有していても有していなくてもよい。アルキルアミノ基の炭素数は特に限定されないが、２以上２０以下の範囲が好ましい。 In this specification, an alkylamino group refers to a functional group in which an aliphatic hydrocarbon group such as a methyl group, an ethyl group, or an n-propyl group is bonded to an amino group. The alkylamino group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the alkylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
　本明細書においてジアルキルアミノ基とは、アミノ基にジメチル基、ジエチル基などの脂肪族炭化水素基が２つ結合した官能基を示す。２つの脂肪族炭化水素基は同じであっても異なっていてもよい。ジアルキルアミノ基は、置換基を有していても有していなくてもよい。ジアルキルアミノ基の炭素数は特に限定されないが、２以上２０以下の範囲が好ましい。 A dialkylamino group as used herein refers to a functional group in which two aliphatic hydrocarbon groups such as a dimethyl group and a diethyl group are bonded to an amino group. The two aliphatic hydrocarbon groups may be the same or different. A dialkylamino group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the dialkylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
　本明細書においてアリールアミノ基とは、例えば、フェニルアミノ、ｐ－トリルアミノ、および２－ナフチルアミノ基などを示す。 As used herein, the arylamino group refers to, for example, phenylamino, p-tolylamino, 2-naphthylamino groups, and the like.
　本明細書においてジアリールアミノ基とは、ジフェニルアミノ基やジナフチルアミノ基などの置換基を示し、これらの置換基中の芳香環はアルキル基やアルコキシ基などによって置換されていても良い。 As used herein, a diarylamino group refers to a substituent such as a diphenylamino group or a dinaphthylamino group, and the aromatic ring in these substituents may be substituted with an alkyl group, an alkoxy group, or the like.
　本明細書においてアルキルカルボニルオキシ基とは、例えば、アセトキシ基など、エーテル結合の一方をアルキルカルボニル基で置換した官能基を示す。アルキルカルボニルオキシ基は、置換基を有していても有していなくてもよい。アルキルカルボニルオキシ基の炭素数は特に限定されないが、２以上２０以下の範囲が好ましい。 In the present specification, an alkylcarbonyloxy group refers to a functional group such as an acetoxy group in which one side of an ether bond is substituted with an alkylcarbonyl group. An alkylcarbonyloxy group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the alkylcarbonyloxy group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
　本明細書においてアリールカルボニルオキシ基とは、例えば、ベンゾイルオキシ基など、エーテル結合の一方をアリールカルボニル基で置換した官能基を示す。アリールカルボニルオキシ基は、置換基を有していても有していなくてもよい。アリールカルボニルオキシ基の炭素数は特に限定されないが、６以上４０以下の範囲が好ましい。 As used herein, an arylcarbonyloxy group refers to a functional group such as a benzoyloxy group in which one side of an ether bond is substituted with an arylcarbonyl group. An arylcarbonyloxy group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the arylcarbonyloxy group is not particularly limited, it is preferably in the range of 6 or more and 40 or less.
　本明細書においてアルキルカルボニルアミノ基とは、アミノ基にアセチル基などのアルキルカルボニル基が結合した官能基を示す。アルキルカルボニルアミノ基は、置換基を有していても有していなくてもよい。アルキルカルボニルアミノ基の炭素数は特に限定されないが、２以上２０以下の範囲が好ましい。 As used herein, an alkylcarbonylamino group refers to a functional group in which an alkylcarbonyl group such as an acetyl group is bonded to an amino group. An alkylcarbonylamino group may or may not have a substituent. Although the number of carbon atoms in the alkylcarbonylamino group is not particularly limited, it is preferably in the range of 2 to 20.
　本明細書においてアリールカルボニルアミノ基とは、例えばベンゾイルアミノ、ナフトイルアミノ等の５～１０員の単環式またはニ環式炭素アリール基が置換したカルボニルアミノ基を表す。 As used herein, an arylcarbonylamino group represents a carbonylamino group substituted with a 5- to 10-membered monocyclic or bicyclic carboaryl group such as benzoylamino or naphthoylamino.
　本明細書において「シクロアルキル」は、非芳香族の飽和炭化水素環基を意味し、一部架橋構造を有するもの、一部スピロ化されたものおよび１もしくは２個またはそれより多くのカルボニル構造を有するものも含む。「Ｃ３－２０シクロアルキル」は、炭素原子数３から２０の単環式または二環式シクロアルキルを意味する。「Ｃ３－６シクロアルキル」は、炭素原子数３から６の単環式シクロアルキルを意味する。Ｃ３－６シクロアルキルの具体例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ３－１０シクロアルキル」は、炭素原子数３から１０の単環式または二環式シクロアルキルを意味する。Ｃ３－１０シクロアルキルの具体例としては、Ｃ３－６シクロアルキル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、ビシクロ［４．１．０］ヘプチル、ビシクロ［３．３．０］オクチル、ビシクロ［４．２．０］オクチル、ビシクロ［４．３．０］ノニル、デカヒドロナフチル等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "cycloalkyl" means a non-aromatic saturated hydrocarbon ring group, which has a partially bridged structure, a partially spirolated structure, and one or two or more carbonyl structures. Also includes those with “C 3-20 cycloalkyl” means monocyclic or bicyclic cycloalkyl having 3 to 20 carbon atoms. “C 3-6 cycloalkyl” means monocyclic cycloalkyl having 3 to 6 carbon atoms. Specific examples of C 3-6 cycloalkyl include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl. “C 3-10 cycloalkyl” means monocyclic or bicyclic cycloalkyl having 3 to 10 carbon atoms. Specific examples of C 3-10 cycloalkyl include C 3-6 cycloalkyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclononyl, cyclodecyl, bicyclo[4.1.0]heptyl, bicyclo[3.3.0]octyl, bicyclo Examples include, but are not limited to, [4.2.0]octyl, bicyclo[4.3.0]nonyl, decahydronaphthyl, and the like.
　置換基またはその一部としてのシクロアルキル基は、アリールおよび／またはヘテロアリール環と縮合していてもよい。例えば、シクロヘキシル基が、ベンゼン環と縮合して１，２，３，４－テトラヒドロナフタレニル基を形成してもよく、この場合、シクロヘキサン環上の可能な炭素原子のいずれかが、母骨格または母骨格に近い基もしくはその原子に結合する。シクロアルキル基は、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－１－イル、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－２－イル、インダン－１－イル、インダン－２－イル、５，６，７，８－テトラヒドロキノリン－５－イル、５，６，７，８－テトラヒドロキノリン－６－イルを包含する。 A cycloalkyl group as a substituent or part thereof may be fused with an aryl and/or heteroaryl ring. For example, a cyclohexyl group may be fused with a benzene ring to form a 1,2,3,4-tetrahydronaphthalenyl group, where any of the possible carbon atoms on the cyclohexane ring are Or it binds to a group or an atom thereof close to the mother skeleton. Cycloalkyl groups are 1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl, 1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-2-yl, indan-1-yl, indan-2-yl, 5,6 , 7,8-tetrahydroquinolin-5-yl, 5,6,7,8-tetrahydroquinolin-6-yl.
　本明細書において「ヘテロシクロアルキル」は、酸素原子、窒素原子および硫黄原子からなる群より選択される同一または異なる１もしくは２個またはそれより多くのヘテロ原子を含む、３個以上の原子で構成される非芳香族の飽和もしくは一部不飽和ヘテロ環を意味し、一部架橋された構造を有するものおよび一部スピロ化されたものを含む。ヘテロシクロアルキルは、非芳香族複素環が、アリール環および／またはヘテロアリール環と縮合した構造を有し得る。 As used herein, "heterocycloalkyl" is composed of 3 or more atoms, including the same or different 1 or 2 or more heteroatoms selected from the group consisting of oxygen, nitrogen and sulfur atoms. means a non-aromatic saturated or partially unsaturated heterocyclic ring, including those with partially bridged structures and those that are partially spiroified. Heterocycloalkyls can have structures in which a non-aromatic heterocyclic ring is fused with an aryl ring and/or a heteroaryl ring.
本明細書において「アシル」は、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒａｃｙｌの一価基を意味し、ここで、Ｒａｃｙｌは、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、または置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである。アシルの具体例としては、ホルミル、ならびにアルキルカルボニル、アリールカルボニル、およびヘテロアリールカルボニルの例示されている基等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "acyl" means a monovalent group -C(=O)-R acyl , where R acyl is hydrogen, optionally substituted alkyl, optionally substituted alkenyl , optionally substituted alkynyl, optionally substituted aryl, optionally substituted heteroaryl, or optionally substituted heterocycloalkyl. Specific examples of acyl include, but are not limited to, formyl, and the illustrated groups of alkylcarbonyl, arylcarbonyl, and heteroarylcarbonyl, and the like.
本明細書において「ハロアシル」は、アシル基の１個またはそれより多くの水素がハロゲンで置き換えられている、アシル基を意味するが、－Ｃ（＝Ｏ）－ハロゲンではない。ハロアシルの具体例としては、フルオロアセチル、クロロアセチル、ブロモアセチル、ヨードアセチル等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "haloacyl" means an acyl group in which one or more hydrogens of the acyl group are replaced with halogen, but not -C(=O)-halogen. Specific examples of haloacyl include, but are not limited to, fluoroacetyl, chloroacetyl, bromoacetyl, iodoacetyl and the like.
　本明細書において「アルコキシ」は、－Ｏ－アルキルの一価基である。アルコキシの好ましい例としては、Ｃ１－６アルコキシ（即ち、Ｃ１－６アルキル－Ｏ－）、Ｃ１－４アルコキシ（即ち、Ｃ１－４アルキル－Ｏ－）等が挙げられる。Ｃ１－４アルコキシの具体例としては、メトキシ（ＣＨ３Ｏ－）、エトキシ（ＣＨ３ＣＨ２Ｏ－）、ｎ－プロポキシ（ＣＨ３（ＣＨ２）２Ｏ－）、イソプロポキシ（（ＣＨ３）２ＣＨＯ－）、ｎ－ブトキシ（ＣＨ３（ＣＨ２）３Ｏ－）、イソブトキシ（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２Ｏ－）、ｔｅｒｔ－ブトキシ（（ＣＨ３）３ＣＯ－）、ｓｅｃ－ブトキシ（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－）等が挙げられる。Ｃ１－６アルコキシの具体例としては、Ｃ１－４アルコキシ、ｎ－ペンチルオキシ（ＣＨ３（ＣＨ２）４Ｏ－）、イソペンチルオキシ（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）、ネオペンチルオキシ（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２Ｏ－）、ｔｅｒｔ－ペンチルオキシ（ＣＨ３ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２Ｏ－）、１，２－ジメチルプロポキシ（ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ－）等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "alkoxy" is a monovalent radical of -O-alkyl. Preferred examples of alkoxy include C 1-6 alkoxy (ie C 1-6 alkyl-O-), C 1-4 alkoxy (ie C 1-4 alkyl-O-) and the like. Specific examples of C 1-4 alkoxy include methoxy (CH 3 O—), ethoxy (CH 3 CH 2 O—), n-propoxy (CH 3 (CH 2 ) 2 O—), isopropoxy ((CH 3 ) 2 CHO-), n-butoxy (CH 3 (CH 2 ) 3 O-), isobutoxy ((CH 3 ) 2 CHCH 2 O-), tert-butoxy ((CH 3 ) 3 CO-), sec-butoxy (CH 3 CH 2 CH(CH 3 )O—) and the like. Specific examples of C 1-6 alkoxy include C 1-4 alkoxy, n-pentyloxy (CH 3 (CH 2 ) 4 O-), isopentyloxy ((CH 3 ) 2 CHCH 2 CH 2 O-), neopentyloxy ((CH 3 ) 3 CCH 2 O—), tert-pentyloxy (CH 3 CH 2 C(CH 3 ) 2 O—), 1,2-dimethylpropoxy (CH 3 CH(CH 3 )CH( CH 3 )O—) and the like, but are not limited thereto.
　本明細書において「ハロアルキル」は、ハロゲン化アルキルの一価基であり、アルキル基上の１個または複数の水素がハロゲンで置換されている。また、用語「ペルハロアルキル」は、アルキル基上の全ての水素がハロゲンで置換されたハロアルキルを意味する。例えば、ペルフルオロエチルは、－ＣＦ２ＣＦ３であり、ペルクロロ－ｎ－プロピルは、－ＣＣｌ２ＣＣｌ２ＣＣｌ３である。ハロアルキルの例としては、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ１－４ハロアルキル、Ｃ１－３ハロアルキル等が挙げられる。Ｃ１－３アルキルの具体例としては、フルオロメチル、クロロメチル、ブロモメチル、ジフルオロメチル、ジクロロメチル、ジブロモメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、フルオロクロロメチル、ジフルオロクロロメチル、フルオロジクロロメチル、フルオロエチル、クロロエチル、ブロモエチル、トリフルオロエチル、トリクロロエチル、トリブロモエチル、ペルフルオロエチル、ペルクロロエチル、ペルブロモエチル、ペルフルオロプロピル、ペルクロロプロピル、ペルブロモプロピル、ペルフルオロイソプロピル、ペルクロロイソプロピル、ペルブロモイソプロピル等が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１－４アルキルの具体例としては、Ｃ１－３ハロアルキル、ペルフルオロブチル、ペルクロロブチル、ペルブロモブチル、ペルフルオロイソブチル、ペルフルオロ－ｔ－ブチル等が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１－６アルキルの具体例としては、Ｃ１－４ハロアルキル、ペルフルオロ－ｎ－ペンチル、ペルフルオロイソペンチル、ペルフルオロネオペンチル、ペルフルオロｔｅｒｔ－ペンチル、ペルフルオロ－１，２－ジメチルプロピル等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "haloalkyl" refers to a monovalent halogenated alkyl group in which one or more hydrogens on the alkyl group have been replaced with a halogen. The term "perhaloalkyl" also means a haloalkyl in which all hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogens. For example, perfluoroethyl is --CF 2 CF 3 and perchloro-n-propyl is --CCl 2 CCl 2 CCl 3 . Examples of haloalkyl include C 1-6 haloalkyl, C 1-4 haloalkyl, C 1-3 haloalkyl and the like. Specific examples of C 1-3 alkyl include fluoromethyl, chloromethyl, bromomethyl, difluoromethyl, dichloromethyl, dibromomethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, tribromomethyl, fluorochloromethyl, difluorochloromethyl, fluorodichloromethyl , fluoroethyl, chloroethyl, bromoethyl, trifluoroethyl, trichloroethyl, tribromoethyl, perfluoroethyl, perchloroethyl, perbromoethyl, perfluoropropyl, perchloropropyl, perbromopropyl, perfluoroisopropyl, perchloroisopropyl, perbromo Examples include, but are not limited to, isopropyl and the like. Specific examples of C 1-4 alkyl include, but are not limited to, C 1-3 haloalkyl, perfluorobutyl, perchlorobutyl, perbromobutyl, perfluoroisobutyl, perfluoro-t-butyl and the like. Specific examples of C 1-6 alkyl include C 1-4 haloalkyl, perfluoro-n-pentyl, perfluoroisopentyl, perfluoroneopentyl, perfluorotert-pentyl, perfluoro-1,2-dimethylpropyl, etc. It is not limited to these.
　本明細書において「ハロアルコキシ」および「ハロアルキルオキシ」は、アルキル基上の１個または複数の水素がハロゲンで置換された、－Ｏ－ハロアルキルの一価基である。また、用語「ペルハロアルコキシ」は、アルキル基上の全ての水素がハロゲンで置換されたハロアルコキシを意味する。例えば、ペルフルオロエトキシは、－ＯＣＦ２ＣＦ３であり、ペルクロロ－ｎ－プロポキシは、－ＯＣＣｌ２ＣＣｌ２ＣＣｌ３である。ハロアルコキシの好ましい例としては、Ｃ１－６ハロアルコキシ、Ｃ１－４ハロアルコキシ、Ｃ１－３ハロアルコキシ等が挙げられる。Ｃ１－３アルコキシの具体例としては、フルオロメトキシ、クロロメトキシ、ブロモメトキシ、ジフルオロメトキシ、ジクロロメトキシ、ジブロモメトキシ、トリフルオロメトキシ、トリクロロメトキシ、トリブロモメトキシ、フルオロクロロメトキシ、ジフルオロクロロメトキシ、フルオロジクロロメトキシ、フルオロエトキシ、クロロエトキシ、ブロモエトキシ、トリフルオロエトキシ、トリクロロエトキシ、トリブロモエトキシ、ペルフルオロエトキシ、ペルクロロエトキシ、ペルブロモエトキシ、ペルフルオロプロポキシ、ペルクロロプロポキシ、ペルブロモプロポキシ、ペルフルオロイソプロポキシ、ペルクロロイソプロポキシ、ペルブロモイソプロポキシ等が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１－４アルコキシの具体例としては、Ｃ１－３ハロアルコキシ、ペルフルオロブトキシ、ペルクロロブトキシ、ペルブロモブトキシ、ペルフルオロイソブトキシ、ペルフルオロ－ｔ－ブトキシ等が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１－６アルコキシの具体例としては、Ｃ１－４ハロアルコキシ、ペルフルオロ－ｎ－ペンチルオキシ、ペルフルオロイソペンチルオキシ、ペルフルオロネオペンチルオキシ、ペルフルオロｔｅｒｔ－ペンチルオキシ、ペルフルオロ－１，２－ジメチルプロポキシ等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “haloalkoxy” and “haloalkyloxy” are —O-haloalkyl monovalent radicals in which one or more hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogen. Also, the term "perhaloalkoxy" means a haloalkoxy in which all hydrogens on the alkyl group have been replaced with halogens. For example, perfluoroethoxy is -OCF 2 CF 3 and perchloro-n-propoxy is -OCCl 2 CCl 2 CCl 3 . Preferred examples of haloalkoxy include C 1-6 haloalkoxy, C 1-4 haloalkoxy, C 1-3 haloalkoxy and the like. Specific examples of C 1-3 alkoxy include fluoromethoxy, chloromethoxy, bromomethoxy, difluoromethoxy, dichloromethoxy, dibromomethoxy, trifluoromethoxy, trichloromethoxy, tribromomethoxy, fluorochloromethoxy, difluorochloromethoxy, fluorodichloro Methoxy, fluoroethoxy, chloroethoxy, bromoethoxy, trifluoroethoxy, trichloroethoxy, tribromoethoxy, perfluoroethoxy, perchloroethoxy, perbromoethoxy, perfluoropropoxy, perchloropropoxy, perbromopropoxy, perfluoroisopropoxy, perchloro Examples include, but are not limited to, isopropoxy, perbromoisopropoxy, and the like. Specific examples of C 1-4 alkoxy include, but are not limited to, C 1-3 haloalkoxy, perfluorobutoxy, perchlorobutoxy, perbromobutoxy, perfluoroisobutoxy, perfluoro-t-butoxy and the like. Specific examples of C 1-6 alkoxy include C 1-4 haloalkoxy, perfluoro-n-pentyloxy, perfluoroisopentyloxy, perfluoroneopentyloxy, perfluorotert-pentyloxy, perfluoro-1,2-dimethylpropoxy and the like. include, but are not limited to:
　本明細書において「アルキルスルホニル」とは、上記「アルキル」で置換されたスルホニル基を意味する。「Ｃ１－６アルキルスルホニル」として、好ましくは「Ｃ１－４アルキルスルホニル」である。「Ｃ１－６アルキルスルホニル」の具体例としては、メチルスルホニル、プロピオニルスルホニル、ブチリルスルホニル等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, "alkylsulfonyl" means a sulfonyl group substituted with the above "alkyl". “C 1-6 alkylsulfonyl” is preferably “C 1-4 alkylsulfonyl”. Specific examples of “C 1-6 alkylsulfonyl” include, but are not limited to, methylsulfonyl, propionylsulfonyl, butyrylsulfonyl and the like.
　「保護基」は、分子内の反応性官能基に結合した場合、官能基の反応性を遮蔽するか、減少させるか、または防止する原子群を指す。本開示の化合物は、任意のＲ１～Ｒ４またはそれらの置換基あるいはそれら以外の置換基等の任意の位置において適切または必要な場合保護基で置換されていてもよく、それらの保護基を含む化合物も本開示の範囲内である。典型的には、保護基は、所望する場合、合成過程の最中に選択的に除去され得る。保護基の例は、GreeneおよびWuts、Protective　Groups　in　Organic　Chemistry、第５版、2014年、John　Wiley　＆　Sons、NYおよびHarrisonら、Compendium　of　Synthetic　Organic　Methods、1～8巻、John　Wiley　＆　Sons、NY等に見出すことができる。代表的な窒素保護基としては、ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（「ＣＢＺ」）、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）、トリメチルシリル（「ＴＭＳ」）、２－トリメチルシリルエタンスルホニル（「ＴＥＳ」）、トリチルおよび置換トリチル基、アリルオキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（「ＦＭＯＣ」）、ニトロ－ベラトリルオキシカルボニル（「ＮＶＯＣ」）などが挙げられるが、これらに限定されない。代表的なヒドロキシル保護基として、ヒドロキシル基が、アシル化（エステル化）またはアルキル化されるもの、例えば、ベンジルおよびトリチルエーテルなど、ならびにアルキルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテル（例えば、ＴＭＳ、トリエチルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ））、アルキルジアリールシリルエーテル（例えば、ｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ））、トリアリールシリルエーテル（例えば、トリフェニルシリル）、グリコールエーテル（例えば、エチレングリコールエーテル、プロピレングリコールエーテルなど）、およびアリルエーテルが挙げられるが、これらに限定されない。 "Protecting group" refers to a group of atoms that, when attached to a reactive functional group in a molecule, masks, reduces or prevents the reactivity of the functional group. The compounds of the present disclosure may be substituted with protecting groups as appropriate or necessary at any position such as any of R 1 to R 4 or substituents thereof or other substituents thereof, and the protecting groups are Compounds containing are also within the scope of this disclosure. Typically, protecting groups can be selectively removed during the synthetic process, if desired. Examples of protecting groups are in Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 5th Edition, 2014, John Wiley & Sons, NY and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, vols. 1-8, John Wiley & Sons, NY etc. can be found. Representative nitrogen protecting groups include formyl, acetyl, trifluoroacetyl, benzyl, benzyloxycarbonyl (“CBZ”), tert-butoxycarbonyl (“Boc”), trimethylsilyl (“TMS”), 2-trimethylsilylethanesulfonyl. (“TES”), trityl and substituted trityl groups, allyloxycarbonyl, 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (“FMOC”), nitro-veratryloxycarbonyl (“NVOC”), etc. not. Representative hydroxyl protecting groups are those in which the hydroxyl group is acylated (esterified) or alkylated, such as benzyl and trityl ethers, as well as alkyl ethers, tetrahydropyranyl ethers, trialkylsilyl ethers such as TMS, triethylsilyl, t-butyldimethylsilyl (TBDMS), triisopropylsilyl (TIPS)), alkyldiarylsilyl ethers (eg t-butyldiphenylsilyl (TBDPS)), triarylsilyl ethers (eg triphenylsilyl), glycol Ethers (eg, ethylene glycol ether, propylene glycol ether, etc.), and allyl ethers include, but are not limited to.
　本開示の化合物が有するアミノ基（例えば、母骨格が有するアミノ基、置換基としてのアミノ基、該化合物が有する置換基中のアミノ基など）は、窒素保護基で保護されていてもよい。置換基群中に列挙される置換基中のアミノ基が、窒素保護基でさらに保護されていてもよく、保護された置換基が、置換基として利用されてもよい。 The amino group possessed by the compound of the present disclosure (for example, the amino group possessed by the backbone, the amino group as a substituent, the amino group in the substituent possessed by the compound, etc.) may be protected with a nitrogen protecting group. An amino group in the substituents listed in the substituent group may be further protected with a nitrogen protecting group, and the protected substituent may be used as the substituent.
　本開示の化合物が有するヒドロキシ基（例えば、置換基としてのヒドロキシ基、該化合物が有する置換基中のヒドロキシ基、上記置換基群中のヒドロキシ基など）も、ヒドロキシ基の保護基で保護されていてもよい。置換基群中に列挙される置換基中のヒドロキシ基が、本明細書中に記載のヒドロキシル保護基（シリルエーテルなど）でさらに保護されていてもよく、保護された置換基が、置換基として利用されてもよい。 A hydroxy group possessed by the compound of the present disclosure (e.g., a hydroxy group as a substituent, a hydroxy group in the substituent possessed by the compound, a hydroxy group in the above substituent groups, etc.) is also protected with a hydroxy-protecting group. may A hydroxy group in a substituent listed in a substituent group may be further protected with a hydroxyl protecting group (such as a silyl ether) described herein, and the protected substituent may be may be used.
　（好ましい実施形態）
　以下に本開示の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本開示のよりよい理解のために提供されるものであり、本開示の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本開示の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。また、本開示の以下の実施形態は単独でも使用されあるいはそれらを組み合わせて使用することができることが理解される。 (preferred embodiment)
Preferred embodiments of the present disclosure are described below. The embodiments provided below are provided for a better understanding of the disclosure, and it is understood that the scope of the disclosure should not be limited to the following description. Therefore, it is clear that a person skilled in the art can make appropriate modifications within the scope of the present disclosure in light of the description in this specification. It is also understood that the following embodiments of the disclosure can be used singly or in combination.
　（本開示の化合物）
　本開示の一実施形態において、ニトロキシルラジカル化合物は、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、または
Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
水素、
シアノ基、
イソチオシアノ基、
置換されていてもよいカルボキシル基、
置換されていてもよいカルバモイル基、
置換されていてもよいヒドロキシ基、
置換されていてもよいアミノ基、
置換されていてもよいアシル基、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、および
置換されていてもよいヘテロアリール基
からなる群から選択され、
ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
水素、
置換されていてもよいアルキル基、
置換されていてもよいアルケニル基、
置換されていてもよいアルキニル基、
置換されていてもよいシクロアルキル基、
置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
置換されていてもよいアリール基、
置換されていてもよいヘテロアリール基、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
－Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい。 (compounds of the present disclosure)
In one embodiment of the present disclosure, the nitroxyl radical compound has the formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
hydrogen,
cyano group,
an isothiocyano group,
an optionally substituted carboxyl group,
an optionally substituted carbamoyl group,
an optionally substituted hydroxy group,
an optionally substituted amino group,
an optionally substituted acyl group,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
R 7A and R 7B are each independently
hydrogen,
an optionally substituted alkyl group,
an optionally substituted alkenyl group,
an optionally substituted alkynyl group,
an optionally substituted cycloalkyl group,
optionally substituted heterocycloalkyl group,
an optionally substituted aryl group,
optionally substituted heteroaryl group,
-C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
-C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
-C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
-C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, An optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group may be formed.
　一実施形態において、ニトロキシルラジカル化合物は、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり得、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、本明細書中（例えば、項１）に定義されるとおりである。 In one embodiment, the nitroxyl radical compound has the formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A , and R 10B are , as defined herein (eg, Section 1).
　一実施形態において、前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
により表され得、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
により表され得、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ６Ａ、およびＲ１０Ａは、本明細書中（例えば、項目１）に定義されるとおりである。 In one embodiment, the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound has the formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
wherein said 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 6A , and R 10A are as defined herein (eg, item 1).
　一実施形態において、本開示のニトロキシルラジカル化合物は、酸化剤の存在下で、カルボキシル基へ過酸化することなく第一級アルコールを選択的に酸化してアルデヒド基を生じる能力を有する、分子である。そのようなニトロキシルラジカル化合物としては、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６－テトラメチルピペリジノオキシル）部分またはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を有する分子である。ここで、前記酸化剤は、ニトロキシルラジカルを酸化する酸化剤であれば特に制限されず、公知の酸化剤を用いることができる。かかる酸化剤として具体的には、次亜塩素酸塩、ヨードベンゼンジアセタート、酸素等が挙げられる。次亜塩素酸塩として具体的には、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カリウム、次亜塩素酸カルシウム（サラシ粉）等が挙げられる。該次亜塩素酸塩は、固体状であっても、或いは水溶液であっても良く、さらに水和物であっても好適に用いることができる。また、これらの次亜塩素酸塩を単独で、或いは、複数の次亜塩素酸塩を組み合わせて用いても良い。これらの次亜塩素酸塩の中でも。工業的に安価で入手可能な点、反応収率の点から、次亜塩素酸ナトリウム、次亜塩素酸カルシウムより選択される少なくとも１種から選択することが特に好適である。 In one embodiment, the nitroxyl radical compounds of the present disclosure are molecular be. Such nitroxyl radical compounds include TEMPO (2,2,6,6-tetramethylpiperidinooxyl) moieties or PROXYL (2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy) moieties is a molecule having Here, the oxidizing agent is not particularly limited as long as it is an oxidizing agent that oxidizes nitroxyl radicals, and known oxidizing agents can be used. Specific examples of such oxidizing agents include hypochlorite, iodobenzene diacetate, oxygen and the like. Specific examples of hypochlorites include sodium hypochlorite, potassium hypochlorite, calcium hypochlorite (bleaching powder), and the like. The hypochlorite may be in a solid state or in the form of an aqueous solution, and even a hydrate can be suitably used. Moreover, these hypochlorites may be used singly or in combination with a plurality of hypochlorites. Among these hypochlorites. It is particularly preferable to select from at least one selected from sodium hypochlorite and calcium hypochlorite in terms of industrial availability at low cost and reaction yield.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが、シアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である。 In one embodiment, R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted amino group.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、または－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、Ｒ９が、ハロアセチルアミノである。 In one embodiment, R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , or -NHC(=O)-CH 2 -R 9 and R 9 is haloacetylamino.
　一実施形態において、Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである。　 In one embodiment, R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
　一実施形態において、Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である。 In one embodiment, R 6A and R 10A are hydrogen.
一実施形態において、ニトロキシルラジカル化合物は、以下の式
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
により表され、Ｑは、ｎ価の任意の基であり、ｎは、１以上の整数であり、ＲＦは、式Ｉのニトロキシルラジカル化合物中の任意の１個の水素原子を除くことで生じる一価の基である。複数のＲＦが存在する場合、それらは互いに同一であっても、異なっていてもよく、Ｑへの結合点もまた、同一であっても、異なっていてもよい。式Ｖの化合物の例としては、ＲＦＯ－（ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ）ｍ－ＲＦ、ＲＦＯ－（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ）ｍ－ＲＦ、ＲＦ－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－ＲＦ、ＲＦＯ－｛Ｐ（＝Ｏ）｝（－ＯＲＦ）２、ＲＦＯ－｛Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）｝－ＯＲＦ、Ｈ－｛ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（－ＯＲＦ）｝ｍ－Ｈ、Ｈ－｛ＣＨ２－Ｃ（ＣＨ３）（－ＯＲＦ）｝ｍ－Ｈ（ここで、各ｍは独立して、１以上の整数である）などが挙げられるが、これらに限定されない。Ｑはまた、ポリマー鎖であり得、その例として、エチレングリコールポリ（メタ）アクリル酸、ポリ（メタ）アクリル酸エステル、ポリ（メタ）アクリル酸アミド、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエステル、ポリスチレン、ポリウレタンなどが挙げられるが、これらに限定されない。Ｑに結合しているＲＦの例としては、以下の
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
が挙げられるが、これらに限定されない。 In one embodiment, the nitroxyl radical compound has the formula
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
wherein Q is any n-valent group, n is an integer greater than or equal to 1, and RF is any one hydrogen atom in the nitroxyl radical compound of Formula I. is the resulting monovalent group. When multiple RF are present, they may be the same or different from each other, and the points of attachment to Q may also be the same or different. Examples of compounds of Formula V include R F O-(CH 2 CH 2 -O) m -R F , R F O-(CH 2 CH(CH 3 )-O) m -R F , R F -OC (=O)-C(=O)OR F , R F O-{P(=O)}(-OR F ) 2 , R F O-{P(=O)(OH)}-OR F , H—{CH 2 —C(H)(—OR F )} m —H, H—{CH 2 —C(CH 3 )(—OR F )} m —H, where each m is independently is an integer of 1 or more), but is not limited to these. Q can also be a polymer chain, examples of which include ethylene glycol poly(meth)acrylic acid, poly(meth)acrylic acid esters, poly(meth)acrylic acid amides, polyacrylonitrile, polyamides, polyesters, polystyrenes, polyurethanes, etc. include, but are not limited to. Examples of R F attached to Q include:
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
include, but are not limited to.
　一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも２つが、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも２つが、それぞれ独立して、アルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも２つがメチル基である。 In one embodiment, at least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group. In one embodiment, at least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, at least two of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
　一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも３つが、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも３つが、それぞれ独立して、アルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも３つがメチル基である。 In one embodiment, at least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently optionally substituted alkyl groups. In one embodiment, at least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, at least three of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
　一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、アルキル基である。一実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメチル基である。 In one embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group. In one embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently alkyl groups. In one embodiment, R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
　一実施形態において、Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成し得る。一実施形態において、Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成し得る。 In one embodiment, R 1 and R 2 together may form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached. In one embodiment, R3 and R4 together may form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached.
　一実施形態において、Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環（例えば、ピロリジン環またはピペリジン環）を形成し得る。 In one embodiment, R 1 and R 3 may together form a heterocycle (eg, a pyrrolidine or piperidine ring) containing the nitrogen of the nitroxyl group.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが水素、シアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基、または置換されていてもよいアミノ基であり、Ｒ５Ｂが水素または置換されていてもよいアルキル基であるか、または、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂが、一緒になって、オキソ基、または置換されていてもよいベンゾイルメチリデン基である。 In one embodiment, R5A is hydrogen, cyano group, isothiocyano group, optionally substituted alkyl group, optionally substituted hydroxy group, optionally substituted carboxyl group, optionally substituted carbamoyl or an optionally substituted amino group, and R 5B is hydrogen or an optionally substituted alkyl group, or R 5A and R 5B together are an oxo group, or a substituted It is a benzoylmethylidene group which may be substituted.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが、水素、シアノ基、イソチオシアノ基、ハロアシルアミノアルキル基、アミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基、アシルアミノ基、ハロアシルアミノ基、マレイミド基、アシルオキシ基、アルキルオキシ基、アルキニルオキシ基、ホスホノオキシ基、アルキルスルホニルオキシ基、－ＣＯＯＨ、カルバモイル基、置換カルバモイル基、－ＯＨ、またはアシル基であり、Ｒ５Ｂが水素またはアルキル基であるか、または、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂが、一緒になって、オキソ基、またはベンゾイルメチリデン基である。 In one embodiment, R5A is hydrogen, cyano group, isothiocyano group, haloacylaminoalkyl group, amino group, dialkylamino group, trialkylammonium group, acylamino group, haloacylamino group, maleimido group, acyloxy group, alkyl an oxy group, an alkynyloxy group, a phosphonooxy group, an alkylsulfonyloxy group, -COOH, a carbamoyl group, a substituted carbamoyl group, -OH, or an acyl group, and R 5B is hydrogen or an alkyl group, or R 5A and R5B together are an oxo group or a benzoylmethylidene group.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが、水素、アミノ基、ジメチルアミノ基、トリメチルアンモニウム基、アセチルアミノ基、クロロアセチルアミノ基、ブロモアセチルアミノ基、ハロアセチルアミノ基、ハロアセチルアミノアセチルアミノ基、シアノ基、イソチオシアノ基、メタクリルオキシ基、ベンゾイルオキシ基、３，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシベンゾイルオキシ基、メトキシ基、プロパルギルオキシ基、ホスホノオキシ基、メチルスルホニルオキシ基、－ＣＯＯＨ基、カルバモイル基、イソチオシアナトアルキルカルバモイル基、－ＯＨ、ハロアセチルアミノメチル基、マレイミド基、またはアセチル基であり、Ｒ５Ｂが、水素またはメチル基であるか、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂが、一緒になって、
オキソ基、またはベンゾイルメチリデン基であってもよい。 In one embodiment, R5A is hydrogen, amino group, dimethylamino group, trimethylammonium group, acetylamino group, chloroacetylamino group, bromoacetylamino group, haloacetylamino group, haloacetylaminoacetylamino group, cyano group , isothiocyano group, methacryloxy group, benzoyloxy group, 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzoyloxy group, methoxy group, propargyloxy group, phosphonooxy group, methylsulfonyloxy group, -COOH group, carbamoyl group , an isothiocyanatoalkylcarbamoyl group, —OH, a haloacetylaminomethyl group, a maleimido group, or an acetyl group, and R 5B is hydrogen or a methyl group, or R 5A and R 5B together are
It may be an oxo group or a benzoylmethylidene group.
　一実施形態において、Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、Ｒ９が、ハロアセチルアミノである。この場合、Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノであることが好ましい。 In one embodiment, R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 and R 9 is haloacetylamino. In this case R 9 is preferably bromoacetylamino or iodoacetylamino.
　ニトロキシルラジカル化合物を含む、窒素ラジカル化合物および酸素ラジカル化合物の例としては、
２，２－ジ（４－ｔｅｒｔ－オクチルフェニル）－１－ピクリルヒドラジル　フリーラジカル、
３－（アミノメチル）－ＰＲＯＸＹＬ　フリーラジカル
３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－３－ピロリン－１－オキシル　フリーラジカル、
１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸　フリーラジカル、
１６－ＤＯＸＹＬ－ステアリン酸メチル　フリーラジカル、
４－アセトキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル　フリーラジカル
２－（４－メトキシ－４－オキソブチル）－４，４－ジメチル－２－トリデシル－３－オキサゾリジニルオキシ　フリーラジカル（別名Ｍｅｔｈｙｌ　５－ＤＯＸＹＬ－ｓｔｅａｒａｔｅ，　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ）、
４’，４’－ジメチルスピロ（５α－コレスタン－３，２’－オキサゾリジン）－３’－イルオキシ　フリーラジカル（別名３β－ＤＯＸＹＬ－５α－ｃｈｏｌｅｓｔａｎｅ，　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ）、
４－［２－［２－（４－ヨードフェノキシ）エトキシ］カルボニル］ベンゾイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル　フリーラジカル、
４－グリシジルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン　１－オキシル　フリーラジカル、および
セバシン酸ビス（２，２，６，６－テトラメチル－４－ピペリジル－１－オキシル）、
ならびに以下の表１に示すものを挙げることができるが、これらに限定されない。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000050
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
 Examples of nitrogen radical compounds and oxygen radical compounds, including nitroxyl radical compounds, are
2,2-di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical,
3-(aminomethyl)-PROXYL free radical 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-3-pyrroline-1-oxyl free radical,
16-DOXYL-stearic acid free radical,
16-DOXYL-methyl stearate free radical,
4-acetoxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl free radical 2-(4-methoxy-4-oxobutyl)-4,4-dimethyl-2-tridecyl-3-oxazolidinyloxy free radicals (aka Methyl 5-DOXYL-stearate, free radicals),
4′,4′-dimethylspiro(5α-cholestane-3,2′-oxazolidin)-3′-yloxy free radical (aka 3β-DOXYL-5α-cholestane, free radical),
4-[2-[2-(4-iodophenoxy)ethoxy]carbonyl]benzoyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl free radical,
4-glycidyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical and bis(2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidyl-1-oxyl) sebacate,
and those shown in Table 1 below, but not limited thereto.
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000050
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
　一実施形態において、５員環式ニトロキシルラジカル化合物は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメチル基であり得、他の実施形態において、Ｒ５Ａがシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基、または置換されていてもよいアミノ基であり得る。 In one embodiment, the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound may have R 1 , R 2 , R 3 and R 4 as methyl groups, and in another embodiment R 5A as a cyano group, even if substituted It may be an alkyl group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group, or an optionally substituted amino group.
　一実施形態において、５員環式ニトロキシルラジカル化合物は、Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり得、ここにおいてＲ９は、ハロアセチルアミノであり得る。この場合、Ｒ９が、ブロモアセトアミドまたはヨードアセトアミドであることが好ましい。 In one embodiment, the 5-membered cyclic nitroxyl radical compound, wherein R 5A can be -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 , wherein in can be haloacetylamino . In this case R 9 is preferably bromoacetamide or iodoacetamide.
　一実施形態において、Ｚは－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、Ｅは結合であり、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）であり、好ましくは、Ｒ６Ｃは水素であり、Ｒ７Ａはベンゾイル基であり、Ｒ７Ｂは水素である。 In one embodiment, Z is -N(R 6C )-, E is a bond and R 5A and R 5B together are =C(R 7A )(R 7B ), preferably , R 6C is hydrogen, R 7A is a benzoyl group and R 7B is hydrogen.
　一実施形態において、Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成する場合、式Ｉの化合物は、ＡＺＡＤＯ（２－アザアダマンタン－Ｎ－オキシル）、Ｍｅ－ＡＺＡＤＯ（１－メチル－２－アザアダマンタン－Ｎ－オキシル）、またはｎｏｒ－ＡＺＡＤＯ（９－アザノルアダマンタン－Ｎ－オキシル）であり得る。 In one embodiment, when R 1 and R 3 and R 5B together form a fused polycyclic ring, the compounds of formula I are AZADO (2-azaadamantane-N-oxyl), Me-AZADO ( 1-methyl-2-azaadamantane-N-oxyl), or nor-AZADO (9-azanoradamantane-N-oxyl).
　本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、本開示の化合物などの親化合物が既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって修飾される開示化合物の誘導体を指す（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させる）。薬学的に許容される塩の例としては、アミンのような塩基性残基の無機または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩；等が含まれるが、それらに限定されるものではない。代表的な酸付加塩の例としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩の例には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンがあり、それらの例には、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の薬学的に許容される塩には、例えば非毒性無機または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、従来の化学的方法によって合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、適切な塩基または酸の化学量論量と、水中または有機溶媒中で、またはその２種の混合物中で反応させることによって調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、次を参照のこと。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ　ｅｄ．，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ　ａｎｄ　Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８，ａｎｄ　Ｂｅｒｇｅ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）；これらの各々の内容は、その全体が参考として本明細書において援用される。 As used herein, a "pharmaceutically acceptable salt" is a disclosed compound in which a parent compound, such as a compound of the disclosure, is modified by converting an existing acid or base moiety to its salt form. (eg, reacting the free base group with a suitable organic acid). Examples of pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, mineral or organic acid salts of basic residues such as amines; alkali or organic salts of acidic residues such as carboxylic acids; not something. Examples of representative acid addition salts include acetate, acetate, adipate, alginate, ascorbate, aspartate, benzenesulfonate, benzenesulfonic acid, benzoate, bisulfate, boric acid. salt, butyrate, camphorate, camphorsulphonate, citrate, cyclopentanepropionate, digluconate, dodecylsulphate, ethanesulphonate, fumarate, glucoheptanoate, glycerophosphate, hemisulfate, heptonate, hexanoate, hydrobromide, hydrochloride, hydroiodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactobionate, lactate, laurate, lauryl sulfate, malate, maleate, malonate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, nitrate, oleate, oxalate, palmitate, pamoate, pectate, persulfate, 3-phenylpropionate, phosphate, picrate, pivalate, propionate, stearate, succinate, sulfate, tartrate, thiocyanate, toluenesulfonate, undecanoate, valerate and the like. Examples of representative alkali or alkaline earth metal salts include sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, etc., and non-toxic ammonium, quaternary ammonium, and amine cations, examples of which include ammonium , tetramethylammonium, tetraethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, triethylamine, ethylamine, and the like. Pharmaceutically acceptable salts of the present disclosure include conventional non-toxic salts of the parent compounds formed, for example, from non-toxic inorganic or organic acids. Pharmaceutically acceptable salts of the disclosure can be synthesized from the parent compound, which contains a basic or acidic moiety, by conventional chemical methods. Generally, such salts are formed by reacting the free acid or base form of these compounds with a stoichiometric amount of the appropriate base or acid in water or an organic solvent, or in a mixture of the two. can be prepared. Generally, non-aqueous media like ether, ethyl acetate, ethanol, isopropanol or acetonitrile are preferred. See below for a list of suitable salts. Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed . , Mack Publishing Company, Easton, Pa.; , 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.M. H. Stahl and C.I. G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, and Berge et al. , Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); the contents of each of these are hereby incorporated by reference in their entirety.
　本明細書で使用する用語「薬学的に許容される溶媒和物」は、適切な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている本開示の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与される投与量で生理学的に許容される。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、またはそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化、または沈殿によって調製することができる。適切な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一水和物、二水和物および三水和物）、Ｎ－メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２－（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２－ピロリドン、安息香酸ベンジル等が挙げられる。水が溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と呼ばれる。 As used herein, the term "pharmaceutically acceptable solvate" means a compound of the present disclosure that has molecules of a suitable solvent incorporated in the crystal lattice. A suitable solvent is physiologically tolerable at the dosage administered. For example, solvates may be prepared by crystallization, recrystallization, or precipitation from solutions containing organic solvents, water, or mixtures thereof. Examples of suitable solvents are ethanol, water (eg monohydrate, dihydrate and trihydrate), N-methylpyrrolidone (NMP), dimethylsulfoxide (DMSO), N,N'-dimethylformamide (DMF), N,N′-dimethylacetamide (DMAC), 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone (DMEU), 1,3-dimethyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H )-pyrimidinone (DMPU), acetonitrile (ACN), propylene glycol, ethyl acetate, benzyl alcohol, 2-pyrrolidone, benzyl benzoate and the like. When water is the solvent, the solvate is called a "hydrate".
　本明細書において「対象」または「被験体（者）」とは、本発明の診断または検出、あるいは治療等の対象となる実体（例えば、ヒト等の生物または生物から取り出した細胞、血液、血清等）をいう。生物体を意図する場合は被験体と称する。 As used herein, the term "subject" or "subject (person)" refers to an entity that is the target of diagnosis, detection, treatment, etc. of the present invention (e.g., organisms such as humans or cells taken from organisms, blood, serum, etc.). etc.). When an organism is intended, it is referred to as a subject.
　本明細書において「検体」または「試料」とは、被験体等から得られた任意の物質をいい、例えば、細胞、血清等が含まれる。当業者は本明細書の記載をもとに適宜好ましい検体または試料を選択することができる。 As used herein, the term "specimen" or "sample" refers to any substance obtained from a subject or the like, and includes, for example, cells, serum, and the like. A person skilled in the art can appropriately select a preferable specimen or sample based on the description of this specification.
　本明細書において「薬剤」、「剤」または「因子」（いずれも英語ではａｇｅｎｔに相当する）は、広義には、交換可能に使用され、意図する目的を達成することができる限りどのような物質または他の要素（例えば、光、放射能、熱、電気などのエネルギー）でもあってもよい。そのような物質としては、例えば、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、核酸（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡのようなＤＮＡ、ｍＲＮＡのようなＲＮＡを含む）、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、脂質、有機低分子（例えば、ホルモン、リガンド、情報伝達物質、有機低分子、コンビナトリアルケミストリで合成された分子、医薬品として利用され得る低分子（例えば、低分子リガンドなど）など）、これらの複合分子が挙げられるがそれらに限定されない。 As used herein, "agent", "agent" or "factor" (both equivalent to the English equivalent of agent) are used broadly and interchangeably to describe any agent capable of achieving its intended purpose. It may be matter or other elements (eg, energy such as light, radiation, heat, electricity, etc.). Such substances include, for example, proteins, polypeptides, oligopeptides, peptides, polynucleotides, oligonucleotides, nucleotides, nucleic acids (including DNA such as cDNA and genomic DNA, RNA such as mRNA), poly Saccharides, oligosaccharides, lipids, organic small molecules (e.g., hormones, ligands, signaling substances, organic small molecules, molecules synthesized by combinatorial chemistry, small molecules that can be used as pharmaceuticals (e.g., small molecule ligands, etc.), etc.) , including but not limited to these complex molecules.
　本明細書において「診断」とは、被験体における疾患、障害、状態（例えば、ミトコンドリア関連の疾患）などに関連する種々のパラメータを同定し、そのような疾患、障害、状態の現状または未来を判定することをいう。本発明の方法、装置、システムを用いることによって、体内の状態を調べることができ、そのような情報を用いて、被験体における疾患、障害、状態、投与すべき処置または予防のための処方物または方法などの種々のパラメータを選定することができる。本明細書において、狭義には、「診断」は、現状を診断することをいうが、広義には「早期診断」、「予測診断」、「事前診断」等を含む。本発明の診断方法は、原則として、身体から出たものを利用することができ、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることから、産業上有用である。本明細書において、医師などの医療従事者の手を離れて実施することができることを明確にするために、特に「予測診断、事前診断もしくは診断」を「支援」すると称することがある。 As used herein, "diagnosis" refers to the identification of various parameters associated with a disease, disorder, condition (e.g., mitochondrial-associated disease), etc. in a subject to determine the current or future status of such disease, disorder, condition. means to judge. By using the methods, devices, and systems of the present invention, conditions within the body can be investigated, and such information can be used to determine the disease, disorder, condition, treatment or prophylactic formulation to be administered in a subject. Alternatively, various parameters such as method can be selected. In the present specification, "diagnosis" in a narrow sense means diagnosing the current situation, but in a broader sense it includes "early diagnosis", "predictive diagnosis", "pre-diagnosis" and the like. INDUSTRIAL APPLICABILITY The diagnostic method of the present invention is industrially useful because, in principle, it is possible to use what comes out of the body, and it can be performed without the hands of medical professionals such as doctors. In this specification, in order to clarify that it can be performed without the hands of medical personnel such as doctors, "predictive diagnosis, preliminary diagnosis or diagnosis" is sometimes referred to as "assisting".
　本明細書において「検出薬（剤）」または「検査薬（剤）」とは、広義には、目的の対象を検出または検査することができるあらゆる薬剤をいう。 As used herein, the term "detection agent (agent)" or "test agent (agent)" broadly refers to any agent that can detect or inspect a target object.
　本明細書において「診断薬（剤）」とは、広義には、目的の状態（例えば、ミトコンドリア関連の疾患等の疾患など）を診断できるあらゆる薬剤をいう。 As used herein, the term "diagnostic agent (agent)" broadly refers to any agent capable of diagnosing a target condition (for example, a disease such as a mitochondrial-related disease).
　本明細書において細胞内成分などの生物学的因子に対して「特異的に」相互作用する（または結合する）「因子」（または、薬剤、検出剤等）とは、その生物学的因子（例えば、ミトコンドリアに関連する成分）に対する親和性が、他の無関連の成分（例えば、ミトコンドリア以外の成分（例えば、ミトコンドリア以外の細胞質基質成分など）に対する親和性よりも、代表的には同等またはより高いか、好ましくは有意に（例えば、統計学的に有意に）高いものを包含する。そのような親和性は、例えば、結合アッセイなどによって測定することができる。 As used herein, an "agent" (or agent, detection agent, etc.) that "specifically" interacts (or binds) to a biological agent, such as an intracellular component, refers to the biological agent ( e.g., mitochondrial-associated components) is typically equal to or greater than the affinity for other unrelated components (e.g., non-mitochondrial components, e.g., non-mitochondrial cytosolic components, etc.). It includes high, preferably significantly (eg, statistically significant) high, Such affinities can be measured, for example, by binding assays.
　本明細書において「標識」とは、目的となる分子または物質を他から識別するための存在（例えば、物質、エネルギー、電磁波など）をいう。そのような標識方法としては、ＲＩ（ラジオアイソトープ）法、蛍光法、ビオチン法、化学発光法等を挙げることができる。本開示の試薬、組成物は、このような標識を付することができる。 As used herein, the term "label" refers to an entity (for example, substance, energy, electromagnetic waves, etc.) that distinguishes a target molecule or substance from others. Examples of such labeling methods include RI (radioisotope) method, fluorescence method, biotin method, chemiluminescence method and the like. Reagents, compositions of the present disclosure can be labeled as such.
　本明細書において「インビボ」（ｉｎ　ｖｉｖｏ）とは、生体の内部をいう。特定の文脈において、「生体内」は、目的とする物質が配置されるべき位置をいう。 As used herein, "in vivo" refers to the inside of a living organism. In certain contexts, "in vivo" refers to a location where a substance of interest is to be placed.
　本明細書において「インビトロ」（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）とは、種々の研究目的のために生体の一部分が「生体外に」（例えば、試験管内に）摘出または遊離されている状態をいう。インビボと対照をなす用語である。 As used herein, the term "in vitro" refers to a state in which a part of a living body is "outside the body" (for example, into a test tube) or released for various research purposes. It is a term in contrast to in vivo.
　本発明において「接触」は、複数の物質の間の相互作用または結合が生じるようにその複数の物質を配置することであり、本発明では、検出剤、検査剤、診断剤として機能し得る物質（たとえば、本開示の化合物）を、直接的または間接的のいずれかで、ミトコンドリアに関連する対象を含む試料に対して物理的に近接させることによって達成することができる。本開示の化合物は、多くの緩衝液、塩、溶液などに存在させることができる。接触とは、例えば、ビーカー、マイクロタイタープレート、細胞培養フラスコまたはマイクロアレイ（例えば、遺伝子チップ）などに化合物を置くことが挙げられる。ここで、試料として使用されるものとしては、ミトコンドリアのレドックス系に関連する成分を含むと考えられる試料であればよく、例えば、血清を用いることができる。血清は慣用の方法により取得することができる。 In the present invention, "contacting" means arranging a plurality of substances such that interaction or binding between the substances occurs. This can be accomplished by bringing the (eg, compounds of the present disclosure) into physical proximity, either directly or indirectly, to the sample containing the mitochondrial associated target. The compounds of this disclosure can exist in many buffers, salts, solutions, and the like. Contacting includes, for example, placing a compound in a beaker, microtiter plate, cell culture flask, microarray (eg, gene chip), or the like. Here, any sample may be used as long as it is considered to contain components related to the mitochondrial redox system, and for example, serum can be used. Serum can be obtained by conventional methods.
　本明細書において「キット」とは、通常２つ以上の区画に分けて、提供されるべき部分（例えば、検査薬、診断薬、薬剤、標識、説明書など）が提供されるユニットをいう。安定性等のため、混合されて提供されるべきでなく、使用直前に混合して使用することが好ましいような組成物の提供を目的とするときに、このキットの形態は好ましい。そのようなキットは、好ましくは、提供される部分（例えば、検査薬、診断薬、薬剤をどのように使用するか、あるいは、試薬をどのように処理すべきかを記載する指示書または説明書を備えていることが有利である。本明細書においてキットが試薬キットとして使用される場合、キットには、通常、検査薬、診断薬、薬剤等の使い方などを記載した指示書などが含まれる。 As used herein, the term "kit" refers to a unit in which parts to be provided (for example, test drugs, diagnostic drugs, drugs, labels, instructions, etc.) are provided, usually divided into two or more compartments. This kit form is preferred when the purpose is to provide a composition that should not be provided in a mixed form for reasons such as stability, and is preferably used in a mixed form immediately before use. Such kits preferably include the parts provided (e.g., instructions or instructions describing how to use the reagents, diagnostic agents, agents, or how the reagents should be handled). When the kit is used as a reagent kit in the present specification, the kit usually includes instructions describing how to use test agents, diagnostic agents, drugs, and the like.
　本明細書において「指示書」は、本発明を使用する方法を医師または他の使用者に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の検出方法、診断薬の使い方、または医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、投与部位として、経口、食道への投与（例えば、注射などによる）することを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ　ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。 As used herein, the term "instructions" refers to instructions for physicians or other users on how to use the present invention. The instructions include words instructing the detection method of the present invention, how to use the diagnostic agent, or the administration of a medicine or the like. In addition, the instructions may include words that instruct oral administration or esophageal administration (for example, by injection) as the administration site. This instruction is prepared in accordance with the format prescribed by the regulatory authority of the country in which the invention is implemented (for example, the Ministry of Health, Labor and Welfare in Japan, the Food and Drug Administration (FDA) in the United States, etc.), and is approved by the regulatory authority. It is stated that it has received Instructions are so-called package inserts, which are usually provided in paper form, but are not limited to that, for example, in the form of electronic media (e.g., homepages provided on the Internet, e-mail). can also be provided.
　（本開示のニトロキシルラジカル化合物の製造法）
　以下に、本開示の化合物の製造法について、例を挙げて説明するが、本開示はもとよりこれらに限定されるものではない。 (Method for producing nitroxyl radical compound of the present disclosure)
Methods for producing the compounds of the present disclosure are described below by way of examples, but the present disclosure is by no means limited to these.
　本開示のニトロキシルラジカル化合物は、下記に記した製造法によって、あるいは公知の文献および方法、例えば、Molecules　2021,　26,　677、NATURE　COMMUNICATIONS　6:6070、Chem.Pharm.Bull. 61(12) 1197-1213 (2013)、Can. J. Chem. 52, 3381 (1974)、CurrentOrganicChemistry, 2014, 18, 459-474、WO 2008/093881（これらは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の方法などにより、またはそれらを参考にして製造することができるが、これらに限定されない。これらの製造法は、有機合成化学を習熟している者の知識に基づき、適宜改良することができる。 The nitroxyl radical compound of the present disclosure can be prepared by the production method described below or by known literatures and methods, such as Molecules 2021, 26, 677, NATURE COMMUNICATIONS 6:6070, Chem.Pharm.Bull. 61(12) 1197. -1213 (2013), Can. J. Chem. 52, 3381 (1974), Current Organic Chemistry, 2014, 18, 459-474, WO 2008/093881, which are incorporated herein by reference in their entirety. It can be produced by the methods described or with reference to them, but is not limited to these. These production methods can be appropriately improved based on the knowledge of those skilled in organic synthetic chemistry.
　下記製造法において、具体的に保護基の使用を明示していなくても、反応点以外のいずれかの官能基が反応条件で変化する場合、または反応後の処理を実施するのに不適当な場合には、反応点以外を必要に応じて保護し、反応終了後または一連の反応を行った後に脱保護することにより目的化合物を得ることができる。これらの過程で用いられる保護基としては、文献（Peter　G.　M.　Wuts,　“Greene's　Protective　Groups　in　Organic　Synthesis”,　5th　Ed.,　John　Wiley　&　Sons,　Inc.,　Hoboken,　New　Jersey　(2014)）等に記載されている通常の保護基を用いることができる。また、保護基の導入および除去は、有機合成化学で常用される方法（例えば、上記文献に記載の方法等）またはそれらに準じた方法により行うことができる。 In the following production methods, even if the use of a protecting group is not specifically specified, if any functional group other than the reaction site changes under the reaction conditions, or if it is inappropriate to carry out post-reaction treatments In some cases, the object compound can be obtained by protecting the site other than the reaction site as necessary and deprotecting after the reaction is completed or after a series of reactions. Protective groups used in these processes include literature (Peter G. M. Wuts, "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", 5th Ed., John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey (2014)), etc. The usual protecting groups described in can be used. In addition, introduction and removal of a protecting group can be carried out by methods commonly used in organic synthetic chemistry (eg, methods described in the above literature) or methods based thereon.
　下記製造法における出発原料および中間体は、市販品として購入可能であるか、または公知文献に記載された方法もしくは公知化合物から公知の方法に準じて合成することにより入手可能である。また、これらの出発原料および中間体は、反応に支障をきたさない限り、それらの塩を用いてもよい。 The starting materials and intermediates in the production method below can be purchased as commercial products, or can be obtained by synthesizing from known compounds according to methods described in known literature or known methods. Moreover, these starting materials and intermediates may be salts thereof as long as they do not interfere with the reaction.
　下記製造法における中間体および目的化合物は、それらの官能基を適宜変換することによって、本開示に含まれる別の化合物へ変換することもできる。その際の官能基の変換は、有機合成化学で常用される方法（例えば、R.　C.　Larock,　“Comprehensive　Organic　Transformations”,　2nd　Ed.,　John　Wiley　and　Sons,　Inc.,　New　York　(1999)に記載されている方法等）またはそれらに準じた方法により行うことができる。 Intermediates and target compounds in the production methods below can also be converted into other compounds included in the present disclosure by appropriately converting their functional groups. The transformation of the functional group at that time is a method commonly used in organic synthetic chemistry (for example, described in R. C. Larock, "Comprehensive Organic Transformations", 2nd Ed ., John Wiley and Sons, Inc., New York (1999). method, etc.) or a method based on them.
　下記製造法における不活性溶媒とは、反応で用いられる原料、試薬、塩基、酸、触媒、配位子等（以下、「反応で用いられる原料等」と称することもある）と反応しない溶媒を意味する。また、各工程で使用する溶媒が、反応で用いられる原料等と反応する場合であっても、目的の反応が進行して目的化合物が得られる限り、不活性溶媒として使用することができる。 The inert solvent in the following production method means a solvent that does not react with raw materials, reagents, bases, acids, catalysts, ligands, etc. used in the reaction (hereinafter sometimes referred to as "raw materials used in the reaction, etc."). means. In addition, even if the solvent used in each step reacts with the raw materials used in the reaction, it can be used as an inert solvent as long as the desired reaction proceeds to obtain the desired compound.
　本開示に関わる化合物合成の全体像を以下に示した。出発原料である化合物は、市販されているものを用いるか、または公知の方法で製造されたものを用いることができる。 An overview of the compound synthesis related to this disclosure is shown below. As the starting material compounds, commercially available ones or those produced by known methods can be used.
　合成スキーム１
　（１）経路１　化合物ＸＩＩおよび化合物ＸＩＶの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056

ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、本明細書中で定義されるとおりである。「Ｏｘｉｄａｔｉｏｎ」工程では、酸化剤が使用され、この酸化剤は、ピペリジン環またはピロリジン環の第２級窒素を、ニトロキシルラジカルに酸化することができる限り、いずれのものであってよい。スキーム１における「Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ」工程では、還元剤が使用され、この還元剤は、カルボニル基をヒドロキシ基に還元することができる限り、いずれの試薬であってよい。 Synthetic scheme 1
(1) Route 1 Synthesis of Compound XII and Compound XIV
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056

wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are as defined herein. In the "Oxidation" step, an oxidizing agent is used, which can be anything as long as it can oxidize the secondary nitrogen of the piperidine or pyrrolidine ring to a nitroxyl radical. In the "Reduction" step in Scheme 1, a reducing agent is used, which can be any reagent as long as it can reduce a carbonyl group to a hydroxy group.
　合成スキーム２
　（１）経路２　化合物ＸＸの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057

ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、本明細書中で定義されるとおりである。Ｎｕ－は、任意の求核剤であり、例えば、ＯＨ、ＯＲ、ＮＨ２、ＮＨＲであるが、これらに限定されない。スキーム２における「Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ」工程では、還元剤が使用され、この還元剤は、二重結合を飽和すること（例えば、水素化など）ができる限り、いずれの試薬であってよい。 Synthetic scheme 2
(1) Route 2 Synthesis of compound XX
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057

wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are as defined herein. Nu — is any nucleophile, including but not limited to OH, OR, NH 2 , NHR. In the "Reduction" step in Scheme 2, a reducing agent is used, which can be any reagent as long as it is capable of saturating (eg, hydrogenating, etc.) the double bonds.
　上記製造法における中間体および目的化合物は、有機合成化学で常用される精製法（例えば、中和、濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等）に付することにより単離精製することができる。また、各中間体においては、特に精製することなく次の反応に供することも可能である。 The intermediates and target compounds in the above production method can be purified by purification methods commonly used in synthetic organic chemistry (e.g., neutralization, filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, various chromatography, etc.). It can be isolated and purified. Further, each intermediate can be subjected to the next reaction without particular purification.
　光学活性な出発原料や中間体を用いること、または中間体や最終品のラセミ体を光学分割することにより、本開示の化合物の光学活性体を製造することができる。光学分割の方法としては、これらに限定されないが、例えば、光学活性カラムを用いた分離方法、分別結晶化法等の分離方法が挙げられる。本開示の化合物のジアステレオマーは、これらに限定されないが、例えば、カラムクロマトグラフィーや分別結晶化法等の分離方法によって、製造することができる。 An optically active form of the compound of the present disclosure can be produced by using an optically active starting material or intermediate, or by optically resolving the intermediate or final product racemate. Examples of the optical resolution method include, but are not limited to, a separation method using an optically active column, a separation method such as a fractional crystallization method, and the like. Diastereomers of the compounds of the present disclosure can be prepared by separation methods such as, but not limited to, column chromatography and fractional crystallization.
　本開示のニトロキシルラジカル化合物の塩は、当業者であれば公知の方法によりニトロキシルラジカルから製造することができる。例えば、オキソアンモニウム塩は、ニトロキシルラジカル化合物を二酸化窒素と反応させることにより製造することができる。 A salt of the nitroxyl radical compound of the present disclosure can be produced from a nitroxyl radical by a method known to those skilled in the art. For example, oxoammonium salts can be produced by reacting a nitroxyl radical compound with nitrogen dioxide.
　本明細書において、「精子の品質」とは、精子としての特性や属性を示すものであり、例えば、精子の機能を表す指標を意味する。具体的に、「精子の品質」とは、例えば、精子運動性、受胎性、精子生存率、ミトコンドリア活性、精子形態の正常性、精子構成タンパク質の正常性などの任意の分子生物学的や生化学的に細胞を評価できる指標が含まれる。 As used herein, the term "sperm quality" indicates the characteristics and attributes of sperm, and means, for example, an index that indicates the function of sperm. Specifically, the term "sperm quality" refers to any molecular biological or biochemical factors such as sperm motility, fertility, sperm viability, mitochondrial activity, normality of sperm morphology, normality of sperm constituent proteins, etc. Indices that can chemically assess cells are included.
　また「精子運動性」とは、精子の運動能を示す指標であり、運動速度、運動時間、運動エネルギーなどを含む。例えば、ＶＳＬ（直線進行速度、μｍ／秒）、ＶＡＰ（細胞経路の平均速度、μｍ／秒）、ＶＣＬ（前進曲線速度、μｍ／秒）、ＡＬＨ（頭部の振幅、μｍ）、ＳＴＲ（直進性、ＶＳＬ／ＶＡＰ）、ＬＩＮ（直線性、ＶＳＬ／ＶＣＬ）及び／又はＢＣＦ（頭部の振動数、Ｈｚ）といった、精子運動解析装置（ＣＡＳＡ）や高速カメラ等で測定できるものを挙げることができる。 In addition, "sperm motility" is an index that indicates the motility of sperm and includes movement speed, movement time, kinetic energy, and the like. For example, VSL (linear progression velocity, μm/sec), VAP (cell pathway average velocity, μm/sec), VCL (forward curve velocity, μm/sec), ALH (head amplitude, μm), STR (linear linearity, VSL/VAP), LIN (linearity, VSL/VCL) and/or BCF (head frequency, Hz), which can be measured by a sperm motility analyzer (CASA), a high-speed camera, or the like. can.
　精子の品質を評価する方法
　本開示の一局面において、精子の品質を評価する方法であって、精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、該混合液から得られる信号を計測する工程と、該信号に基づいて精子の品質を評価する工程とを含む、方法が提供される。 Method for Evaluating Sperm Quality In one aspect of the present disclosure, a method for evaluating sperm quality, comprising the step of mixing a sperm population and a test solution containing a nitroxyl radical compound to obtain a mixed solution; A method is provided comprising measuring a signal obtained from the mixture and assessing sperm quality based on the signal.
　一実施形態において、本開示の方法は、具体的には以下のようにして実施される。すなわち、ニトロキシルラジカルおよび還元剤が含まれる瓶または管を用意し、これに精液を入れて混合する。精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを反応させたのち、必要に応じて反応停止処理を行う。精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液との反応時間は、任意の時間であってもよく、例えば、混合直後～１２０分間であり、好ましくは約１～約６０分間である。 In one embodiment, the method of the present disclosure is specifically implemented as follows. That is, a bottle or tube containing a nitroxyl radical and a reducing agent is prepared, and semen is added thereto and mixed. After reacting a population of spermatozoa with a test solution containing a nitroxyl radical compound, reaction termination treatment is performed as necessary. The reaction time between the sperm population and the test solution containing the nitroxyl radical compound may be any time, for example, from immediately after mixing to 120 minutes, preferably from about 1 to about 60 minutes.
　反応の停止後、この混合液からＤＮＰ－ＭＲＩ／電子スピン共鳴法によって得られる信号を読み取り、反応前の信号値からの変化率を算出し、精子の品質を評価することができる。 After stopping the reaction, the signal obtained by the DNP-MRI/electron spin resonance method can be read from this mixed solution, the rate of change from the signal value before the reaction can be calculated, and the sperm quality can be evaluated.
　本開示の方法に供する精子は、任意の動物由来の精子を用いることができる。動物としては、例えば、ヒト、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ハムスター、ラット、ニワトリなどを挙げることができるが、これらに限られるものではない。精子は、精巣、精巣上体、射出精液、幹細胞、精巣幹細胞、ｉＰＳ細胞、培養細胞等由来の任意の精子を用いることができる。また、精子は、冷蔵保存や凍結保存したものでもよい。好ましくは新鮮精液及び凍結精液であり、人工授精、体外受精、顕微授精等に供される直前の品質が反映される精子である。 Any animal-derived sperm can be used as the sperm to be subjected to the method of the present disclosure. Examples of animals include, but are not limited to, humans, cows, pigs, goats, horses, sheep, dogs, cats, rabbits, mice, hamsters, rats, and chickens. Any sperm derived from the testis, epididymis, sperm ejaculate, stem cells, testicular stem cells, iPS cells, cultured cells, or the like can be used as the sperm. In addition, the sperm may be refrigerated or cryopreserved. Fresh semen and frozen semen are preferable, and the sperm reflects the quality immediately before being subjected to artificial insemination, in vitro fertilization, microinsemination, or the like.
　一実施形態において、ヒト由来の精子は射精された精子を用いることができ、ヒト以外の精子を取得する場合には、例えば、精巣由来の精子であれば精巣を採取し精子を吸い出す方法等、精巣上体由来の精子であれば精巣上体を採取し精子を吸い出す若しくは掻き出す方法等、射出精液由来の精子であれば雌体内への射精後に回収する方法や電気刺激や人工腟を用いて採取する方法等を用いることができる。また幹細胞、精巣幹細胞、ｉＰＳ細胞、培養細胞であれば細胞培養を行って回収することもできる。取得した精子は、取得直後の精漿に浮遊した状態でも、水溶液等でさらに希釈又は洗浄されていてもよい。 In one embodiment, human-derived sperm can be ejaculated sperm, and when obtaining non-human sperm, for example, if the sperm is testis-derived, a method of collecting the testis and aspirating the sperm, etc. If the sperm is derived from the epididymis, the epididymis is collected and the sperm is aspirated or scraped out.If the sperm is derived from the ejaculated semen, it is collected after ejaculation into the female body, electrical stimulation, or an artificial vagina. and the like can be used. Stem cells, testicular stem cells, iPS cells, and cultured cells can also be collected by performing cell culture. The obtained sperm may be suspended in seminal plasma immediately after obtaining, or may be further diluted or washed with an aqueous solution or the like.
　本開示の精子の集団は、複数の精子を含むことができる。上記のようにして精子を取得した場合は、通常は単一の精子ではなく、精子の集団として回収される。一実施形態において、精子の集団は、目的に応じて、または評価される品質に応じて、上記のようにして取得された精子の集団から、例えば、死滅している精子を除外した集団や、構成タンパク質の品質が一定の範囲外となっている精子を除外した集団などを選択することもできる。 The population of spermatozoa of the present disclosure can contain multiple spermatozoa. When the sperm is obtained as described above, it is usually collected not as a single sperm, but as a group of sperm. In one embodiment, the sperm population is selected from the sperm population obtained as described above, depending on the purpose or quality to be evaluated, for example, a population excluding dead sperm, It is also possible to select a population or the like from which spermatozoa whose constituent protein quality is outside a certain range are excluded.
　本開示の方法によって評価される精子の品質としては、精子運動性を挙げることができる。 Sperm motility can be mentioned as sperm quality evaluated by the method of the present disclosure.
　本開示の検査液は、ニトロキシルラジカル化合物を含むものであり、精子の集団の個々の精子に対して品質評価ができるものであれば任意の溶液を用いることができる。ニトロキシルラジカル化合物については、表１に示す３７種類のニトロキシルラジカル化合物（機能造影剤）についてミトコンドリアや細胞質との反応性を網羅的に調べた結果、５員環構造のニトロキシルラジカル化合物はミトコンドリア代謝をよく検出する傾向があることが判明している。したがって、本開示の方法においては、ニトロキシルラジカル化合物の具体的な例としては３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジン－Ｎ－オキシル（カルボキシル－ＰＲＯＸＹＬ）、３－カルボキシ－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリニルオキシ、２，２，６，６－テトラメチル－４－ピペリジノール－Ｎ－オキシル（Ｔｅｍｐｏｌ）、Ｎ－ｄ１６－トリアセトンアミン－Ｎ－オキシル及びトリアセトンアミン－Ｎ－オキシル、メトキシカルボニル－ＰＲＯＸＹＬ、カルボキシ－ＰＲＯＸＹＬ等を挙げることができ、好ましくは５員環式ニトロキシルラジカル化合物を用いることができ、さらに好ましくは本開示の方法において用いるニトロキシルラジカル化合物は３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－プロキシルまたはカルバモイルプロキシルである。 The test solution of the present disclosure contains a nitroxyl radical compound, and any solution can be used as long as it allows quality evaluation of individual sperm in a sperm population. Regarding nitroxyl radical compounds, as a result of comprehensively examining the reactivity with mitochondria and cytoplasm for 37 kinds of nitroxyl radical compounds (functional contrast agents) shown in Table 1, it was found that nitroxyl radical compounds with a five-membered ring structure are mitochondria. It has been found to tend to detect metabolism well. Accordingly, in the methods of the present disclosure, specific examples of nitroxyl radical compounds include 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidine-N-oxyl (carboxyl-PROXYL), 3- Carboxy-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolinyloxy, 2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidinol-N-oxyl (Tempol), N-d16-triacetoneamine-N -oxyl and triacetoneamine-N-oxyl, methoxycarbonyl-PROXYL, carboxy-PROXYL, etc. can be mentioned, preferably a five-membered cyclic nitroxyl radical compound can be used, more preferably in the method of the present disclosure The nitroxyl radical compound used is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-proxyl or carbamoylproxyl.
　一実施形態において、本開示の検査液はさらに還元剤を含むことができる。還元剤は、ニトロキシルラジカル化合物とともに精子のミトコンドリアと反応し代謝されるものであればよい。本開示の還元剤としては、これらに限られるものではないが、例えばＮＡＤＨやＧＳＨ等を挙げることができる。 In one embodiment, the test solution of the present disclosure can further contain a reducing agent. Any reducing agent may be used as long as it reacts with sperm mitochondria together with a nitroxyl radical compound and is metabolized. Examples of the reducing agent of the present disclosure include, but are not limited to, NADH, GSH, and the like.
　一実施形態において、本開示の検査液は、通常は水溶液である。精巣、精巣上体、射出精液、幹細胞、精巣幹細胞、ｉＰＳ細胞、培養細胞等由来の精子であれば、精子と共に回収された液そのものに、ニトロキシルラジカル化合物を混合して検査液として用いることもできる。一実施形態において、検査液はさらに緩衝剤、卵黄成分、グリセリンなどを含むこともできる。 In one embodiment, the test liquid of the present disclosure is typically an aqueous solution. If the sperm is derived from the testis, epididymis, ejaculate, stem cells, testicular stem cells, iPS cells, cultured cells, etc., it is also possible to mix a nitroxyl radical compound with the liquid itself collected with the sperm and use it as a test solution. can. In one embodiment, the test solution can also include buffering agents, egg yolk components, glycerin, and the like.
　本開示の検査液のｐＨは、精子の品質を評価することができるｐＨであれば任意のｐＨであってもよく、通常は約６．０～約９．０である。好ましくは約６．８～７．５である。本開示の検査液における成分濃度は、水溶液のｐＨが上記範囲となるように決定される。 The pH of the test solution of the present disclosure may be any pH as long as the quality of sperm can be evaluated, and is usually about 6.0 to about 9.0. Preferably it is about 6.8 to 7.5. The component concentration in the test solution of the present disclosure is determined so that the pH of the aqueous solution falls within the above range.
　本開示の検査液には、上記の所望のｐＨを達成するものであれば、任意の緩衝剤を含めることができる。緩衝剤として、中性付近に緩衝作用を持つ緩衝剤であれば任意のものを選択でき、例えば、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、メス、ヘペス、テス、トリシン等のグッド緩衝剤、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸緩衝液等が挙げられる。また、所望のｐＨを達成するため酸または塩基を用いることができる。好ましくは、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、クエン酸、またはリン酸緩衝液を用いる。 The test solution of the present disclosure can contain any buffer as long as it achieves the above desired pH. As the buffering agent, any buffering agent having a buffering action near neutrality can be selected. liquid, citrate buffer, acetate buffer, carbonate buffer and the like. Also, acids or bases can be used to achieve the desired pH. Preferably, tris(hydroxymethyl)aminomethane, citrate, or phosphate buffers are used.
　一実施形態において、本開示の検査液には、精子のエネルギー源として、任意の糖やエネルギー源を含めることもできる。糖やエネルギー源として、例えば、グルコース、キシロース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、デキストリン、ＡＴＰ、ＡＤＰ、コハク酸、ＮＡＤＨなどを挙げることができる。 In one embodiment, the test solution of the present disclosure can also contain any sugar or energy source as an energy source for sperm. Examples of sugars and energy sources include glucose, xylose, fructose, mannose, galactose, sucrose, lactose, maltose, trehalose, dextrin, ATP, ADP, succinic acid and NADH.
　一実施形態において、本開示の検査液には、細菌の繁殖を防ぐ目的で任意の抗生物質を含めることができる。抗生物質として、例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、ジベカシン等が挙げられる。一実施形態において、本開示の検査液を調製する場合には、細菌の繁殖を防ぐため滅菌操作を施してもよい。 In one embodiment, the test solution of the present disclosure can contain any antibiotic for the purpose of preventing bacterial growth. Examples of antibiotics include penicillin, streptomycin, gentamicin, dibekacin and the like. In one embodiment, when preparing the test solution of the present disclosure, sterilization may be performed to prevent bacterial growth.
　一実施形態において、精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合して混合液を得る場合には、任意の混合方法を用いることができ、例えば、手動ピペット、自動ピペット、ディスペンサー等を用いて行うことができる。 In one embodiment, when a population of spermatozoa and a test solution containing a nitroxyl radical compound are mixed to obtain a mixed solution, any mixing method can be used, for example, manual pipette, automatic pipette, dispenser etc. can be used.
　一実施形態において、精子の集団と本開示の検査液を混合する際の温度は、精子の品質を評価できる温度であれば任意の温度であってもよい。例えば、約１５～４５℃で混合することができ、好ましくは、精子の由来する動物の体温付近の温度である約２５～約４５℃、さらに好ましくは約２８～約４２℃、特に好ましくは約３０～約３８℃とすることができる。 In one embodiment, the temperature at which the population of sperm and the test solution of the present disclosure are mixed may be any temperature as long as the quality of the sperm can be evaluated. For example, it can be mixed at about 15 to 45° C., preferably about 25 to about 45° C., which is a temperature near the body temperature of the animal from which the sperm is derived, more preferably about 28 to about 42° C., particularly preferably about It can be from 30°C to about 38°C.
　一実施形態において、本開示の方法において、精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合した後、必要に応じて反応を停止させることができる。反応停止処理は、細胞を溶解し、またはミトコンドリア機能を停止させることができるものであれば特に限られるものではなく、例えば、界面活性剤もしくは有機溶剤（クロロフォルムやオクタノールなど）の添加や、熱処理を含むことができる。 In one embodiment, in the method of the present disclosure, the reaction can be stopped as necessary after mixing the population of spermatozoa with the test solution containing the nitroxyl radical compound. The reaction termination treatment is not particularly limited as long as it can dissolve cells or terminate mitochondrial function. can contain.
　一実施形態において、本開示の方法において、精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合した混合液から得られる信号を計測する場合には、混合液からＤＮＰ－ＭＲＩや電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によって得られる信号を読み取ることができる。「ＤＮＰ」とは、動的核偏極（Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）の略であり、他に定義されない限り、励起された電子スピンのエネルギーを核スピンに遷移させて核スピンの偏極を上昇させる手法のことをいう。また「ＭＲＩ」とは、他に定義されない限り、動的核偏極（ＤＮＰ）等の超偏極を用いない磁気共鳴画像法（Ｍａｇｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　Ｉｍａｇｉｎｇ）のことをいう。本開示の方法においては、ニトロキシルラジカル化合物がＤＮＰ用造影剤（プローブともいう）として機能し、フリーラジカル濃度のデータを得ることができる。これらの磁気共鳴法を用いることで、より正確な計測画像を得ることができる。例えば、ＤＮＰ－ＭＲＩ法であれば、フリーラジカル濃度を定量的に画像化できるので、精子の品質を評価する指標となるフリーラジカル消費速度の情報をより正確に取得することができる。一実施形態において、反応前の信号値からの変化率を算出し、精子の品質を評価することができる。 In one embodiment, in the method of the present disclosure, when measuring a signal obtained from a mixture obtained by mixing a sperm population and a test solution containing a nitroxyl radical compound, DNP-MRI or electron spin is performed from the mixture. The signal obtained by the resonance (ESR) method can be read. "DNP" is an abbreviation for Dynamic Nuclear Polarization, and unless otherwise defined, a method of increasing the polarization of nuclear spins by transferring the energy of excited electron spins to nuclear spins. That's what I mean. Also, "MRI", unless otherwise defined, refers to Magnetic Resonance Imaging without hyperpolarization, such as dynamic nuclear polarization (DNP). In the method of the present disclosure, the nitroxyl radical compound functions as a contrast agent (also referred to as a probe) for DNP, and free radical concentration data can be obtained. By using these magnetic resonance methods, more accurate measurement images can be obtained. For example, with the DNP-MRI method, the free radical concentration can be imaged quantitatively, so information on the free radical consumption rate, which serves as an index for evaluating sperm quality, can be obtained more accurately. In one embodiment, the percentage change from the pre-reaction signal value can be calculated to assess sperm quality.
　本開示の精子の品質を評価する工程では、混合液から得られる信号を計測して、その信号に基づいて精子の品質を評価することができる。本開示の方法は精子のミトコンドリア代謝（エネルギー産生）に基づく評価となるため、一実施形態において、混合液から得られる信号から、ミトコンドリアのエネルギー産生を予測することで精子の運動率や機能などの品質を評価することができる。例えば、混合液から得られる信号またはその値と、精子の品質を評価するための基準値とを比較してもよく、基準値としては健常者由来の精子から得られる精子の品質を示す値としてもよい。この場合には、正常精子の反応率（ミトコンドリア機能を反映する精子の運動性やミトコンドリア代謝能力を含む）との比較により精子機能を評価することができる。例えば、正常精子の反応率より、少なくとも約５％以上低い場合、好ましくは少なくとも約１０％以上低い場合、さらに好ましく約２０％以上低い場合には機能が低下していると評価することができる。 In the sperm quality evaluation step of the present disclosure, the signal obtained from the mixture can be measured, and the sperm quality can be evaluated based on the signal. Since the method of the present disclosure is an evaluation based on the mitochondrial metabolism (energy production) of sperm, in one embodiment, the energy production of mitochondria is predicted from the signal obtained from the mixed solution, thereby improving sperm motility, function, etc. Quality can be evaluated. For example, the signal obtained from the mixed solution or its value may be compared with a reference value for evaluating the quality of sperm. good too. In this case, the sperm function can be evaluated by comparison with the reaction rate of normal sperm (including sperm motility and mitochondrial metabolic capacity that reflect mitochondrial function). For example, when the response rate is at least about 5% lower, preferably at least about 10% lower, and more preferably about 20% lower than the reaction rate of normal sperm, it can be evaluated as having decreased function.
　また精子の品質を評価するための基準値としては、例えば、精液量１．５ｍｌ以上、精子濃度１５００万／ｍｌ以上、総精子数３９００万以上、運動率４０％以上、正常形態率４％以上（奇形率９６％未満）、総運動精子数（総精子数×運動率）１５６０万以上などを用いることもできる。 In addition, the reference values for evaluating the quality of sperm are, for example, semen volume of 1.5 ml or more, sperm concentration of 15 million / ml or more, total sperm count of 39 million or more, motility of 40% or more, normal morphology rate of 4% or more. (malformation rate less than 96%), total motile sperm count (total sperm count x motility rate) 15,600,000 or more, and the like can also be used.
　一実施形態において、混合液から得られる信号から算出される精子の数及び／またはその運動率と、精子の品質を評価するための基準値とを比較することもできる。精子数のカウントは必要に応じて補正用パラメーターとすることもできる。 In one embodiment, the number and/or motility of sperm calculated from the signal obtained from the mixture can be compared with a reference value for evaluating the quality of sperm. Sperm count can also be used as a correction parameter if necessary.
　本開示の一局面において、上記のようにして精子の品質を評価することを通じて、男性不妊を検査または診断する方法を提供することができる。すなわち、本開示は、被験者における男性不妊を検査または診断する方法であって、被験者から得られた精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、該混合液から得られる信号を計測する工程と、該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する工程とを含む、方法を提供する。 In one aspect of the present disclosure, a method for testing or diagnosing male infertility can be provided by evaluating sperm quality as described above. That is, the present disclosure provides a method for testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising the step of mixing a population of spermatozoa obtained from the subject with a test solution containing a nitroxyl radical compound to obtain a mixed solution; A method is provided comprising measuring a signal obtained from the mixture and determining whether and/or the degree of male infertility in the subject based on the signal.
　本開示の一実施形態において、精子の品質を評価することを通じて、精子機能の正常度及び／または異常度を明らかにすることができる。一実施形態において、被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する際には、好ましくは段階的に、さらに好ましくは３～６段階に分類してその程度を評価することができる。 In one embodiment of the present disclosure, it is possible to clarify the degree of normality and/or abnormality of sperm function through evaluating sperm quality. In one embodiment, when determining whether or not a subject is male infertility and/or the degree thereof, the degree is preferably evaluated in stages, more preferably in 3 to 6 stages. can.
　本開示の一局面において、精子の品質を評価するためのキットであって、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液を含む、キットが提供される。 In one aspect of the present disclosure, a kit for evaluating sperm quality is provided, the kit including a test solution containing a nitroxyl radical compound.
　本開示の一局面において、被験者における男性不妊を検査または診断する検査・診断キットであって、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液と、該検査液を収容する容器と、必要に応じて、該検査液と被験者から得られた精子の集団との反応を停止する反応停止液と、使用方法が記載された指示書とを含み、該指示書は、該被験者から得られた精子の集団と、該ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とを混合して混合液を得、該混合液から得られる信号を計測し、該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定することを指示する、キットが提供される。 In one aspect of the present disclosure, a test/diagnosis kit for testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising a test solution containing a nitroxyl radical compound, a container containing the test solution, and optionally the test a reaction stopping solution for stopping the reaction between the solution and the sperm population obtained from the subject; and instructions describing a method of use, wherein the instructions include the sperm population obtained from the subject A test solution containing a nitroxyl radical compound is mixed to obtain a mixed solution, a signal obtained from the mixed solution is measured, and based on the signal, whether or not the subject is male infertile and/or the degree thereof Kits are provided that are instructed to determine the
　本開示の一実施形態において、本開示の方法やキットを用いることにより、精子の品質や、被験者が男性不妊であるかどうかを段階的に評価することが可能となる。例えば、本開示の方法やキットを用いることにより、在宅でキットを使って精液を採取し、採取した精液を検査会社に送付して検査し、診断結果をフィードバックして、もし精子機能が低下していると評価される場合には、泌尿器科の受診を進めるようなシステムとしてもよい。他の実施形態において、小型のＤＮＰ－ＭＲＩ装置をキットに同封することにより、自宅において簡易的に検査結果を得ることも可能である。他の実施形態において、高精度なＤＮＰ－ＭＲＩ装置を泌尿器科などに設置することにより、従来の顕微鏡での検査に加え、本開示の方法や装置を用いて高精度に診断することもできる。 In one embodiment of the present disclosure, the use of the method and kit of the present disclosure enables stepwise evaluation of sperm quality and whether or not a subject is male infertile. For example, by using the method and kit of the present disclosure, semen is collected using the kit at home, the collected semen is sent to a testing company for testing, the diagnostic results are fed back, and if the sperm function declines If it is evaluated that the patient is in good health, it may be possible to set up a system that promotes consultation with a urologist. In another embodiment, by enclosing a small DNP-MRI device in the kit, it is possible to easily obtain test results at home. In another embodiment, by installing a high-precision DNP-MRI apparatus in a urology department, etc., it is possible to perform high-precision diagnosis using the method and apparatus of the present disclosure in addition to conventional microscopic examination.
　本開示の他の局面においては、精子の品質を評価するための装置であって、精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する信号測定手段と、該信号に基づき、精子の品質を評価する精子品質評価手段とを備える、装置が提供される。 In another aspect of the present disclosure, there is provided an apparatus for evaluating the quality of sperm, wherein a signal for measuring a signal obtained from a mixed liquid in which a population of sperm and a test liquid containing a nitroxyl radical compound are mixed. An apparatus is provided comprising measuring means and sperm quality evaluating means for evaluating sperm quality based on the signal.
　信号測定手段は、上述した本開示の方法における精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する工程を行う。信号測定手段は検査液に混合された精子の集団の個々の精子の品質指標の値を測定するための構成部位である。具体的に、信号測定手段は通常のＤＮＰ－ＭＲＩ装置に備えられる各種装置や機器を備えることができる。 The signal measurement means performs a step of measuring a signal obtained from a mixed solution in which the population of spermatozoa and the test solution containing the nitroxyl radical compound are mixed in the above-described method of the present disclosure. The signal measuring means is a component for measuring the value of the individual sperm quality index of the sperm population mixed with the test liquid. Specifically, the signal measuring means can be provided with various devices and devices that are provided in a normal DNP-MRI apparatus.
　精子品質評価手段は、上述した本開示の方法における精子の品質を評価する工程を行う。精子品質評価手段は、信号測定手段によって得られた信号をもとに、精子の品質を評価するための構成部位である。このために、記憶部などに記憶されたデータに対して、各種の演算処理を実行する。演算処理は、本開示の装置に含まれるＣＰＵによりおこなわれる。このＣＰＵは、本開示の装置の信号測定手段や精子品質評価手段などを制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェアなどで構成されてもよい。 The sperm quality evaluation means performs the step of evaluating sperm quality in the method of the present disclosure described above. The sperm quality evaluation means is a constituent part for evaluating sperm quality based on the signal obtained by the signal measurement means. For this purpose, various arithmetic processes are performed on data stored in a storage unit or the like. Arithmetic processing is performed by the CPU included in the device of the present disclosure. This CPU includes functional modules for controlling the signal measuring means, the sperm quality evaluating means, and the like of the device of the present disclosure, and can perform various controls. Each of these units may be composed of an independent integrated circuit, microprocessor, firmware, or the like.
　本開示の薬剤、組成物は、以下のようにして提供され得る。 The drug and composition of the present disclosure can be provided as follows.
　本明細書に記載された医薬組成物の製剤は、薬学の分野において既知または今後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製方法は、有効成分を賦形剤および／または１つまたはそれ以上の他の補助成分と会合させる工程を含む。 The formulations of the pharmaceutical compositions described herein can be prepared by any method known or later developed in the field of pharmacy. Generally, such methods of preparation include the step of bringing into association the active ingredient with the excipients and/or one or more other accessory ingredients.
　本開示による医薬組成物は、バルクで、単一の単位用量として、および／または複数の単一単位用量として調製、包装および／または販売されてよい。本明細書では、「単位用量」という語は、所定量の活性成分からなる医薬組成物の個別の量を指す。活性成分の量は、一般的に、対象または検体に使用される活性成分の用量および／またはこのような用量の特定のニーズを満たす一部分（例えば、そのような用量の半分または三分の一）に等しい。 A pharmaceutical composition according to the present disclosure may be prepared, packaged, and/or sold in bulk, as a single unit dose, and/or as multiple single unit doses. As used herein, the term "unit dose" refers to discrete amount of the pharmaceutical composition comprising a predetermined amount of the active ingredient. The amount of active ingredient will generally be the dose of active ingredient used in a subject or subject and/or a fraction (e.g., half or one-third of such dose) to meet the specific needs of such dose. be equivalent to.
　本開示による組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤および／または任意の追加の成分の相対量は、処置される対象の同一性、サイズおよび／または状態に依存して変化し、さらに組成物が投与されるルートに依存して変化する。例えば、組成物は、約０．１％～約９９％（ｗ／ｗ）の有効成分から構成され得る。一例として、組成物は、約０．１％～約１００％（例えば、約０．５～約５０％、約１～約３０％、約５～約８０％、少なくとも約８０％（ｗ／ｗ））の活性成分から構成され得る。 The relative amounts of active ingredient, pharmaceutically acceptable excipients and/or any additional ingredients in compositions according to the present disclosure will vary depending on the identity, size and/or condition of the subject being treated. and will also vary depending on the route by which the composition is administered. For example, the composition can consist of from about 0.1% to about 99% (w/w) active ingredient. By way of example, the composition contains about 0.1% to about 100% (eg, about 0.5 to about 50%, about 1 to about 30%, about 5 to about 80%, at least about 80% (w/w ))).
　いくつかの実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％純粋であってよい。いくつかの実施形態において、賦形剤は、ヒトおよび獣医学のための使用が承認されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態において、賦形剤は、医薬グレードのものである。いくつかの実施形態において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、日本国薬局方および／または国際薬局方の基準を満たす。 In some embodiments, the pharmaceutically acceptable excipient is at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, or about 100% pure. you can In some embodiments, the excipient is approved for use in human and veterinary medicine. In some embodiments, the excipient is approved by the US Food and Drug Administration. In some embodiments, the excipients are of pharmaceutical grade. In some embodiments, the excipient meets the standards of the United States Pharmacopoeia (USP), European Pharmacopoeia (EP), British Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia and/or International Pharmacopoeia.
　本明細書では、賦形剤は、所望の特定の剤形に適したものである限り、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤などを含むが、これらに限定されない。医薬組成物を調製するための様々な賦形剤および組成物を調製するための技術は、当該分野で公知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照せよ；その全体が参考として本明細書において援用される）。任意の従来の賦形剤媒体が、任意の望ましくない生物学的効果を生じさせることによって、あるいは医薬組成物の他の成分（群）と有害に相互作用することによって、ある物質またはその誘導体と不適合でない限りにおいては、従来の賦形剤媒体の使用は、本開示の範囲内で考えられ得る。 As used herein, excipients include any and all solvents, dispersion media, diluents, or other liquid vehicles, dispersing or suspending aids, as long as they are suitable for the particular dosage form desired; Including, but not limited to, surfactants, isotonic agents, thickening or emulsifying agents, preservatives and the like. Various excipients for preparing pharmaceutical compositions and techniques for preparing the compositions are known in the art (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, AR Gennaro , See Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; incorporated herein by reference in its entirety). Any conventional excipient medium may interact with a substance or derivative thereof by producing any undesired biological effect or by adversely interacting with other component(s) of the pharmaceutical composition. Unless incompatible, use of conventional excipient vehicles is contemplated within the scope of the present disclosure.
　希釈剤の例には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム乳糖、ショ糖、セルロース、微晶質セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉末糖等、および／またはそれらの組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。 Examples of diluents include calcium carbonate, sodium carbonate, calcium phosphate, dicalcium phosphate, calcium sulfate, calcium hydrogen phosphate, sodium lactose phosphate, sucrose, cellulose, microcrystalline cellulose, kaolin, mannitol, sorbitol, inositol. , sodium chloride, dried starch, corn starch, powdered sugar, etc., and/or combinations thereof.
　いくつかの実施形態において、製剤は、少なくとも１つの不活性成分を含み得る。本明細書中では、「不活性成分」という語は、製剤に含まれる１つ以上の不活性薬剤を指す。いくつかの実施形態では、本発明の製剤において使用され得る不活性成分の全てまたは一部は、日本国厚生労働省またはその審査機関としてのＰＭＤＡ、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）等によって承認されているか、あるいは承認されていない。 In some embodiments, formulations may include at least one inactive ingredient. As used herein, the term "inert ingredient" refers to one or more inert agents included in the formulation. In some embodiments, all or part of the inactive ingredients that can be used in the formulations of the present invention are approved by the Ministry of Health, Labor and Welfare of Japan or by PMDA as its reviewing agency, the United States Food and Drug Administration (FDA), etc. , or not approved.
　１つの実施形態では、本発明の検出剤、検査剤または診断剤は、検出、検査または診断可能とする部分（例えば、本開示の化合物等）に他の物質（例えば、標識等）を結合させた複合体または複合分子であってもよい。本明細書において使用される場合、「複合体」または「複合分子」とは、２以上の部分を含む任意の構成体を意味する。例えば、一方の部分が化合物の場合、他方は任意の他の物質（例えば、低分子化合物、糖、脂質、核酸、他の炭化水素等）であってもよい。本明細書において複合体を構成する２以上の部分は、共有結合で結合されていてもよくそれ以外の結合（例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、ファンデルワールス力等）で結合されていてもよい。従って、本明細書において「複合体」は、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、脂質、糖、低分子などの分子が複数種連結してできた分子を含む。 In one embodiment, the detection, testing or diagnostic agents of the present invention have other substances (e.g., labels, etc.) attached to moieties (e.g., compounds of the present disclosure, etc.) that enable detection, testing, or diagnosis. complexes or complex molecules. As used herein, "complex" or "composite molecule" means any construct comprising two or more moieties. For example, if one portion is a chemical compound, the other portion may be any other substance (eg, low-molecular compounds, sugars, lipids, nucleic acids, other carbohydrates, etc.). As used herein, two or more moieties that constitute a complex may be covalently bonded or otherwise bonded (e.g., hydrogen bond, ionic bond, hydrophobic interaction, van der Waals force, etc.). may have been Accordingly, the term "complex" as used herein includes molecules formed by linking multiple types of molecules such as polypeptides, polynucleotides, lipids, sugars, and small molecules.
　別の局面において、本開示は、本開示による検出、検査および／または診断のための方法を実施するための検出、検査および／または診断のためのキットが提供される。このキットは、本開示の検出剤、検査剤および／または診断剤あるいは本開示の化合物を含む。その実施形態としては、本明細書において記載された任意の実施形態を単独または組み合わせ用いることができる。 In another aspect, the present disclosure provides kits for detection, testing and/or diagnosis for performing methods for detection, testing and/or diagnosis according to the present disclosure. The kit comprises a detection agent, test agent and/or diagnostic agent of the disclosure or a compound of the disclosure. The embodiment can use any of the embodiments described herein alone or in combination.
　本開示の好ましい実施形態において、使用される手段は、質量分析装置、核磁気共鳴測定装置、Ｘ線解析装置、ＳＰＲ、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ、薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー）、免疫学的手段（例えば、ウェスタンブロッティング、ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素連結イムノソルベントアッセイ））、生化学的手段（例えば、ｐＩ電気泳動、サザンブロッティング、二次元電気泳動）、電気泳動機器、化学的分析機器、蛍光二次元ディファレンシャル電気泳動法（２ＤＥ－ＤＩＧＥ）、同位体標識法（ＩＣＡＴ）、タンデムアフィニティ精製法（ＴＡＰ法）、物理学的手段、レーザーマイクロダイセクションおよびこれらの組み合わせからなる群より選択される。 In a preferred embodiment of the present disclosure, the means used are mass spectrometer, nuclear magnetic resonance spectrometer, X-ray spectrometer, SPR, chromatography (e.g. HPLC, thin layer chromatography, gas chromatography), immunological chemical means (e.g. Western blotting, EIA (enzyme immunoassay), RIA (radioimmunoassay), ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)), biochemical means (e.g. pI electrophoresis, Southern blotting, two-dimensional electrophoresis), electrophoresis equipment, chemical analysis equipment, fluorescence two-dimensional differential electrophoresis (2DE-DIGE), isotope labeling method (ICAT), tandem affinity purification method (TAP method), physical means, laser microdissection and these is selected from the group consisting of combinations of
　１つの実施形態では、本開示の実施に際し、標準曲線を描き、これに基づき定量することができる。このような定量の際に使用され得る定量手段は、標準曲線と測定結果とを比較して本開示の薬剤によって得られた値が正常値の範囲内かどうかを判定する判定手段を含む。このような判定手段は、コンピュータを用いて実現することができる。 In one embodiment, in practicing the present disclosure, a standard curve can be drawn and quantified based thereon. Quantification means that may be used in such quantification include determination means that compares the standard curve and the measurement results to determine whether the values obtained with the agents of the present disclosure are within normal values. Such determination means can be realized using a computer.
　（品質評価）
　本開示における精子の品質の評価は、精子のミトコンドリア代謝またはエネルギー産生に基づいて評価する際に、前記ミトコンドリア代謝または前記エネルギー産生の値が、精液検査の正常値において観察されるミトコンドリア代謝またはエネルギー産生と比較し、前記正常値を逸脱する場合、精子の運動率および／または機能に異常があると判定される。 (quality evaluation)
Evaluation of sperm quality in the present disclosure is based on sperm mitochondrial metabolism or energy production, and the mitochondrial metabolism or energy production value is observed in a normal semen test mitochondrial metabolism or energy production and if it deviates from the normal value, it is determined that there is an abnormality in sperm motility and/or function.
　一般的な臨床では、顕微鏡で精子の移動する速度や方向や正常形態率（奇形率）観察して異常を判断するところ、本開示の技術で評価する方法は精子のミトコンドリア代謝（エネルギー産生）に基づく評価であることから、エネルギー産生が低下すれば運動率や機能も低下することができ、それゆえ、簡便かつ総合的に評価する技術であるといえる。 In general clinical practice, abnormalities are determined by observing the speed and direction of sperm migration and the normal morphology rate (malformation rate) under a microscope. Since it is an evaluation based on the basics, if the energy production decreases, the motility rate and function can also decrease.
　ここで、精液検査の正常値は、一般的には顕微鏡を用いた規定があり、本開示の方法での評価の際に別途参照することができる。例えば、世界保健機関（ＷＨＯ）の精液検査の正常値（自然妊娠が可能とされる下限値）は以下のとおりである。
（２０１０年最新版）
・精液量１．５ｍｌ以上
・精子濃度１５００万／ｍｌ以上
・総精子数３９００万以上
・運動率４０％以上
・正常形態率４％以上（奇形率９６％未満）
・総運動精子数（総精子数×運動率）１５６０万以上 Here, the normal value of the semen test is generally specified using a microscope, and can be separately referred to when evaluating with the method of the present disclosure. For example, the World Health Organization (WHO) semen test normal values (lower limits at which natural pregnancy is possible) are as follows.
(2010 latest version)
・Semen volume 1.5ml or more ・Sperm concentration 15 million/ml or more ・Total sperm count 39 million or more ・Motility rate 40% or more
・Total motile sperm count (total sperm count x motility rate) 15.6 million or more
　一実施形態において、以上の正常値を持つ精子から、本開示で測定されるミトコンドリア代謝またはエネルギー産生の正常精子の基準値を作成し、これを基準として診断することができる。 In one embodiment, a reference value for normal spermatozoa for mitochondrial metabolism or energy production measured in the present disclosure is created from spermatozoa having the above normal values, and diagnosis can be made based on this reference value.
　本明細書において「または」は、文章中に列挙されている事項の「少なくとも１つ以上」を採用できるときに使用される。「もしくは」も同様である。本明細書において「２つの値」の「範囲内」と明記した場合、その範囲には２つの値自体も含む。
　本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。 In this specification, "or" is used when "at least one or more" of the items listed in the sentence can be employed. The same applies to "or". When we say "within a range" of "two values" herein, the range includes the two values themselves.
All references, such as scientific articles, patents, patent applications, etc., cited herein are hereby incorporated by reference in their entireties to the same extent as if each were specifically set forth.
　以上、本開示を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本開示を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本開示を限定する目的で提供したのではない。従って、本開示の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。 In the above, the present disclosure has been described by showing preferred embodiments for easy understanding. While the present disclosure will now be described based on the examples, the foregoing description and the following examples are provided for illustrative purposes only and not for the purpose of limiting the present disclosure. Accordingly, the scope of the present disclosure is not limited to the embodiments or examples specifically described herein, but only by the claims.
（実施例１：ニトロキシルラジカル類の網羅的解析）
　３７種のニトロキシルラジカル（機能造影剤）のミトコンドリアや細胞質との反応性を網羅的に調べた。 (Example 1: Comprehensive analysis of nitroxyl radicals)
We comprehensively investigated the reactivity of 37 kinds of nitroxyl radicals (functional contrast agents) with mitochondria and cytoplasm.
　まず、肝臓のホモジネート溶液、サイトゾルを作製した。ホモジネート溶液、サイトゾル、およびホモジネートにミトコンドリア機能停止薬（ＫＣＮ）を混合したものを準備し、各ニトロキシルラジカル（プローブ）を添加し、５分間反応させた。反応後のラジカル強度を電子スピン共鳴法ＥＳＲにて計測した。 First, a liver homogenate solution, cytosol, was prepared. A homogenate solution, a cytosol, and a mixture of a mitochondrial blocking drug (KCN) in the homogenate were prepared, and each nitroxyl radical (probe) was added and allowed to react for 5 minutes. The radical intensity after the reaction was measured by electron spin resonance ESR.
　その結果を図１に示す。５員環構造のニトロキシルラジカル（機能造影剤）は全体的にミトコンドリア代謝をよく検出する傾向が見られた。また２２番のニトロキシルラジカル（機能造影剤）は最もミトコンドリアによって代謝されるニトロキシルラジカル（機能造影剤）であることがわかった。 The results are shown in Figure 1. Nitroxyl radicals with a 5-membered ring structure (functional contrast agents) tended to detect mitochondrial metabolism well overall. It was also found that the nitroxyl radical (functional contrast agent) at No. 22 is the most metabolized nitroxyl radical (functional contrast agent) by mitochondria.
（実施例２：精子運動率の測定）
　本開示のニトロキシルラジカル化合物を用いた方法によって、精子運動率を評価し得るかどうかを確認するため、精子運動解析装置（ＣＡＳＡ）を用いて測定したウシ精子の運動率と、ウシ精子にニトロキシルラジカル化合物を添加してＥＳＲでラジカル変化を計測したデータとを比較した。 (Example 2: Measurement of sperm motility)
In order to confirm whether sperm motility can be evaluated by the method using the nitroxyl radical compound of the present disclosure, bovine sperm motility measured using a sperm motility analyzer (CASA) and It was compared with the data obtained by adding a xyl radical compound and measuring the radical change by ESR.
　図２Ａの左の顕微鏡写真は、３７℃でのウシ精子の活動状態を示し、右の顕微鏡写真は、６０℃でのウシ精子の活動状態を示す。ＣＡＳＡではピンクや青で示される信号が活動している精子を表し、黄色は運動停止している精子を表す。この顕微鏡写真から得られる精子運動率を棒グラフとしたものが図２Ｂの左のグラフである。この棒グラフからわかるとおり、６０℃の熱処理で精子の運動がほぼゼロとなることがわかった。 The left micrograph of FIG. 2A shows the activity state of bovine spermatozoa at 37°C, and the right micrograph shows the activity state of bovine spermatozoa at 60°C. In CASA, signals shown in pink and blue represent active sperm, and yellow represents non-motile sperm. The left graph in FIG. 2B is a bar graph of the sperm motility obtained from this micrograph. As can be seen from this bar graph, it was found that the heat treatment at 60° C. resulted in almost zero sperm motility.
　図２Ｂの右のグラフは、ウシ精子にニトロキシルラジカルを添加してＥＳＲでラジカル変化を計測した結果となる。ＥＳＲ計測にて得られたラジカルの信号について、横軸を時間、縦軸をラジカル濃度（対数表示）としてプロットした。このグラフの傾きは代謝速度を示している。このグラフからわかるとおり、熱処理をしない場合には、ニトロキシルラジカルは代謝するのに対し、熱処理をした場合には、ニトロキシルラジカルの反応速度（代謝）が停止している。このことから、ニトロキシルラジカルを用いることで精子の活動を評価できることがわかった。 The graph on the right of Figure 2B is the result of adding nitroxyl radicals to bovine sperm and measuring radical changes with ESR. Radical signals obtained by ESR measurement were plotted with time on the horizontal axis and radical concentration (logarithmic display) on the vertical axis. The slope of this graph indicates the metabolic rate. As can be seen from this graph, nitroxyl radicals are metabolized without heat treatment, whereas the reaction rate (metabolism) of nitroxyl radicals stops with heat treatment. From this, it was found that sperm activity can be evaluated by using nitroxyl radicals.
（実施例３：ミトコンドリア機能阻害剤の精子運動率への影響）
　ウシ精子にミトコンドリア機能阻害剤（ＫＣＮ）を添加して運動率を低下させた場合に、本開示のニトロキシルラジカル化合物を用いた方法によって、精子運動率を評価し得るかどうかを確認した。 (Example 3: Effect of mitochondrial function inhibitor on sperm motility)
It was confirmed whether sperm motility can be evaluated by the method using the nitroxyl radical compound of the present disclosure when a mitochondrial function inhibitor (KCN) is added to bovine sperm to reduce motility.
　図３Ａの左の顕微鏡写真は、ＣＡＳＡを用いて通常のウシ精子の運動率を測定した結果であり、運動率は９２％を示した。また図３Ａの右の顕微鏡写真は、解凍したウシ精子に終濃度が５ｍＭになるようにミトコンドリア機能阻害剤（ＫＣＮ）を添加し、１０分間３７℃で反応させたものについて、ＣＡＳＡを用いて運動率を測定した結果であり、運動率は６％まで低下していることがわかる。 The micrograph on the left of Fig. 3A is the result of measuring the motility of normal bovine sperm using CASA, which showed a motility of 92%. In the micrograph on the right side of FIG. 3A, mitochondrial function inhibitor (KCN) was added to thawed bovine sperm to a final concentration of 5 mM, and reacted at 37° C. for 10 minutes. This is the result of measuring the rate, and it can be seen that the motility rate has decreased to 6%.
　図３Ｂのグラフは、ウシ精子にニトロキシルラジカルを添加してＥＳＲでラジカル変化を計測した結果である。この結果、ＣＡＳＡでの測定と同様に、ニトロキシルラジカル（プローブ）を用いた場合も、ウシ精子とニトロキシルラジカルを混合した場合、ＫＣＮを添加しない場合にはニトロキシルラジカルは代謝されるが、ＫＣＮでミトコンドリアの機能を停止すると、ニトロキシルラジカルの代謝が停止することがわかった。 The graph in Fig. 3B is the result of adding nitroxyl radicals to bovine sperm and measuring radical changes with ESR. As a result, similarly to the CASA measurement, when nitroxyl radicals (probes) were used, when bovine spermatozoa and nitroxyl radicals were mixed, nitroxyl radicals were metabolized when KCN was not added. It has been found that stopping mitochondrial function with KCN stops the metabolism of nitroxyl radicals.
（実施例４：精子の品質または数とニトロキシルラジカルの代謝速度の関係）
　本実施例では、精子の品質または数とニトロキシルラジカル（プローブ）の代謝速度の関係を調べた。図４の左側のグラフは、それぞれ運動率の異なる精子を用意してニトロキシルラジカルと反応させた結果である。運動率の異なる精子は、解凍後０時間、２時間、４時間における精子をＣＡＳＡで運動率を計測することで準備し、それぞれの時間におけるニトロキシルラジカルとの反応を観測した。このグラフから、精子の運動率に比例してニトロキシルラジカルの代謝速度も変化することがわかった。 (Example 4: Relationship between sperm quality or number and nitroxyl radical metabolic rate)
In this example, the relationship between sperm quality or number and nitroxyl radical (probe) metabolic rate was investigated. The graph on the left side of FIG. 4 shows the results of preparing spermatozoa having different motility rates and reacting them with nitroxyl radicals. Sperm with different motility were prepared by measuring the motility of sperm at 0, 2, and 4 hours after thawing with CASA, and reactions with nitroxyl radicals were observed at each time. From this graph, it was found that the metabolic rate of nitroxyl radicals also changed in proportion to the motility of sperm.
　また図４の右側のグラフは、精子数とニトロキシルラジカルの代謝との関係を示すグラフである。解凍したウシ精子について、緩衝液を用いて２倍、４倍、８倍に希釈して精子細胞数の異なる溶液を準備し、その後、ニトロキシルラジカルと混合して反応性を確認した。このグラフから、ウシ精子を希釈して数を低下させると、それに比例してニトロキシルラジカルの代謝速度も低下することがわかった。 The graph on the right side of FIG. 4 is a graph showing the relationship between sperm count and nitroxyl radical metabolism. Thawed bovine sperm was diluted 2-fold, 4-fold, and 8-fold with a buffer solution to prepare solutions with different numbers of sperm cells, which were then mixed with nitroxyl radicals to confirm reactivity. From this graph, it was found that diluting the bovine sperm to reduce the number decreased the metabolic rate of nitroxyl radicals proportionally.
（実施例５：診断システム）
　本開示の方法を用いて、自宅において男性不妊を検査または診断する例を説明する。
　図５に示すように、まずニトロキシルラジカル化合物を含む検査液を含む検査キットを自宅などに送付する。被験者が自ら、上記検査薬を含むチューブに精子を混合させ、一定時間放置する。その後、このチューブに反応停止剤を混合し、反応を停止させる。精子混合液を含むチューブを検査機関に返送し、ＥＳＲやＤＮＰによってニトロキシルラジカルの代謝を計測し、被験者の男性不妊を検査または診断する。 (Example 5: Diagnostic system)
An example of testing or diagnosing male infertility at home using the methods of the present disclosure is described.
As shown in FIG. 5, first, a test kit containing a test solution containing a nitroxyl radical compound is sent to a person's home or the like. The test subject himself/herself mixes the sperm into the tube containing the test drug and leaves it for a certain period of time. After that, the tube is mixed with a reaction terminating agent to stop the reaction. The tube containing the mixed sperm solution is returned to the testing institution, and the nitroxyl radical metabolism is measured by ESR or DNP to test or diagnose male infertility in the subject.
　（注記）
　以上のように、本開示の好ましい実施形態を用いて本開示を例示してきたが、本開示は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願及び他の文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。本願は、日本国特許庁に２０２１年６月１４日に出願された特願２０２１－９８６７２に対して優先権主張をするものであり、その内容はその全体があたかも本願の内容を構成するのと同様に参考として援用される。 (Note)
While the disclosure has been illustrated using the preferred embodiments thereof, it is understood that the disclosure is to be construed in scope only by the claims. The patents, patent applications, and other documents cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety to the same extent as if the content itself were specifically set forth herein. It is understood. This application claims priority to Japanese Patent Application No. 2021-98672 filed on June 14, 2021 with the Japan Patent Office, and the content thereof constitutes the content of this application in its entirety. Also incorporated by reference.
　本開示は精子の簡易検査を自宅等でも簡単に行う際に有用である。 This disclosure is useful when performing a simple sperm test easily at home.

Claims (92)

  1. 　精子の品質を評価する方法であって、
    　精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
    　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
    　該信号に基づいて精子の品質を評価する工程と
    を含む、方法。     A method of assessing sperm quality comprising:
    a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
    measuring a signal obtained from the mixture;
    and assessing sperm quality based on said signal.
  2. 　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、請求項１に記載の方法。 The method according to claim 1, wherein the oxygen radical of said oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
  3. 　前記窒素ラジカル化合物が、置換されていてもよい２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジルである、請求項１に記載の方法。 The method according to claim 1, wherein the nitrogen radical compound is optionally substituted 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl.
  4. 　前記窒素ラジカル化合物が、２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジルまたは２，２－ジ（アルキル置換フェニル）－１－ピクリルヒドラジルである、請求項１に記載の方法。 The method according to claim 1, wherein the nitrogen radical compound is 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl or 2,2-di(alkyl-substituted phenyl)-1-picrylhydrazyl.
  5. 　精子の品質を評価する方法であって、
    　精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
    　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
    　該信号に基づいて精子の品質を評価する工程と
    を含む、方法。     A method of assessing sperm quality comprising:
    a step of mixing a population of spermatozoa with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
    measuring a signal obtained from the mixture;
    and assessing sperm quality based on said signal.
  6. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、５員環式または６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、請求項５に記載の方法。 The method according to claim 5, wherein the nitroxyl radical compound is a 5- or 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  7. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
    Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
    水素、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、または
    Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
    水素、
    シアノ基、
    イソチオシアノ基、
    置換されていてもよいカルボキシル基、
    置換されていてもよいカルバモイル基、
    置換されていてもよいヒドロキシ基、
    置換されていてもよいアミノ基、
    置換されていてもよいアシル基、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、
    ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
    Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
    Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
    水素、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、
    置換されていてもよいヘテロアリール基、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
    からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
    請求項５または６に記載の組成物。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
    E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
    R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
    hydrogen,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
    R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
    R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
    R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
    hydrogen,
    cyano group,
    an isothiocyano group,
    an optionally substituted carboxyl group,
    an optionally substituted carbamoyl group,
    an optionally substituted hydroxy group,
    an optionally substituted amino group,
    an optionally substituted acyl group,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
    wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
    R 7A and R 7B are each independently
    hydrogen,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    an optionally substituted aryl group,
    optionally substituted heteroaryl group,
    -C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
    or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
    7. A composition according to claim 5 or 6.
  8. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、請求項７に記載のとおりである、請求項５～７のいずれか一項に記載の方法。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
    wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are The method of any one of claims 5-7, each independently as claimed in claim 7.
  9. 　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
    により表される、請求項８に記載の方法。     The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
    wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
    9. The method of claim 8, represented by:
  10. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 7 to 9, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  11. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、アルキル基である、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。 A method according to any one of claims 7 to 10, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an alkyl group.
  12. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４がメチル基である、請求項７～１１のいずれか一項に記載の方法。 A method according to any one of claims 7 to 11, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are methyl groups.
  13. 　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、請求項７～１２のいずれか一項に記載の方法。 R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted The method according to any one of claims 7 to 12, which is a good amino group.
  14. 　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、または－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
    　Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、請求項７～１３のいずれか一項に記載の方法。     R 5A is —COOH, —R 9 , —CH 2 —R 9 , or —NHC(=O)—CH 2 —R 9 ;
    A method according to any one of claims 7 to 13, wherein R 9 is haloacetylamino.
  15. 　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、請求項１４に記載の方法。 15. The method of claim 14 , wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  16. 　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、請求項７～１３のいずれか一項に記載の方法。 A method according to any one of claims 7 to 13, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  17. 　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物は、
    ３－（カルボキシ）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－シアノ－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－（２－イソチオシアナトエチルカルバモイル）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ３－マレイミド－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    メトキシカルボニル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル、
    ４－フェナシリデン－２，２，５，５－テトラメチルイミダゾリジン－１－イルオキシル
    　フリーラジカル、または
    ３－（２－ブロモアセトアミド）－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシル　フリーラジカル
    である、請求項８に記載の方法。     The 5-membered cyclic nitroxyl radical compound is
    3-(carboxy)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-cyano-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-(2-isothiocyanatoethylcarbamoyl)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-(2-iodoacetamido)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    3-maleimido-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    methoxycarbonyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl free radical,
    4-phenacylidene-2,2,5,5-tetramethylimidazolidin-1-yloxyl free radical or 3-(2-bromoacetamido)-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxyl 9. The method of claim 8, which is a free radical.
  18. 　前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物は、
    ４－アセトアミド－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－（２－クロロアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－シアノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－イソチオシアナト－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－メタクリロイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ２，２，６，６－テトラメチル－４－（プロパルギルオキシ）ピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－トリメチルアンモニウム－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン　１－オキシル
    　フリーラジカル
    ４－オキソ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－カルボキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－ヒドロキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－ベンゾイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－メトキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    １－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル　３，５－ジｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシベンゾエート　フリーラジカル、
    ２，２，６，６－テトラメチル－４－（メチルスルホニルオキシ）－１－ピペリジノオキシ　フリーラジカル、
    ４－ホスホノオキシ－２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ　フリーラジカル、
    ４－マレイミド－２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ　フリーラジカル、
    ４－（２－ブロモアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－（２－ヨードアセトアミド）－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ４－アミノ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、４－［２－［２－（４－ヨードフェノキシ）エトキシ］カルボニル］ベンゾイルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン－１－オキシル
    ４－グリシジルオキシ－２，２，６，６－テトラメチルピペリジン１－オキシル　フリーラジカル、
    ビス（１－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル）オキサレート　フリーラジカル、
    トリス（１－ヒドロキシ－２，２，４，６，６－ペンタメチル－４－ピペリジニル）ホスフィントリカルボキシレート　フリーラジカル、
    ポリ（エチレングリコール）－ビス－ＴＥＭＰＯ、または
    ポリマーに結合したＴＥＭＰＯ、
    である、請求項８に記載の方法。     The 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is
    4-acetamido-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-(2-chloroacetamido)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-cyano-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-isothiocyanato-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-methacryloyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    2,2,6,6-tetramethyl-4-(propargyloxy)piperidine 1-oxyl free radical,
    4-trimethylammonium-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical 4-oxo-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-carboxy-2,2, 6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-benzoyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-methoxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-(2-iodoacetamide)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzoate free radical,
    2,2,6,6-tetramethyl-4-(methylsulfonyloxy)-1-piperidinooxy free radical,
    4-phosphonooxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy free radical,
    4-maleimido-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy free radical,
    4-(2-bromoacetamido)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-(2-iodoacetamide)-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical, 4-[2-[2-(4-iodophenoxy)ethoxy]carbonyl]benzoyloxy-2,2,6,6- tetramethylpiperidine-1-oxyl 4-glycidyloxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl free radical,
    bis(1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl)oxalate free radical,
    tris(1-hydroxy-2,2,4,6,6-pentamethyl-4-piperidinyl)phosphinetricarboxylate free radical,
    poly(ethylene glycol)-bis-TEMPO, or TEMPO bound to a polymer,
    9. The method of claim 8, wherein
  19. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、請求項７に記載の方法。 The nitroxyl radical compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5 , 5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical.
  20. 　前記検査液がさらに還元剤を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 19, wherein the test solution further contains a reducing agent.
  21. 　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、請求項２０に記載の方法。 The method according to claim 20, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH.
  22. 　前記精子の品質が精子運動性を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 21, wherein the sperm quality comprises sperm motility.
  23. 　前記信号が、動的核偏極（ＤＮＰ）法または電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によって前記混合液から検出される信号を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 22, wherein said signal comprises a signal detected from said mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) method or electron spin resonance (ESR) method.
  24. 　前記精子の品質を評価する工程が、前記信号またはそれから得られる値と、精子の品質を評価するための基準値とを比較することによって行われる、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。 24. A method according to any one of claims 1 to 23, wherein the step of assessing sperm quality is performed by comparing the signal or a value derived therefrom with a reference value for assessing sperm quality. the method of.
  25. 　前記精子の品質を評価する工程が、前記信号から算出される精子の数及び／またはその運動率と、精子の品質を評価するための基準値とを比較することによって行われる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。 wherein the step of evaluating the sperm quality is performed by comparing the sperm count and/or its motility calculated from the signal with a reference value for evaluating the quality of the sperm, according to claims 1- 25. The method of any one of 24.
  26. 　前記精子の品質を評価する工程が、精子のミトコンドリア代謝またはエネルギー産生に基づいて評価することを含み、前記ミトコンドリア代謝または前記エネルギー産生が低下することは、前記精子の運動率および／または機能が低下することを意味する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。 The step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein a decrease in the mitochondrial metabolism or the energy production is associated with a decrease in motility and/or function of the sperm. A method according to any one of claims 1 to 25, which means that
  27. 　前記精子の品質を評価する工程が、精子のミトコンドリア代謝またはエネルギー産生に基づいて評価することを含み、前記ミトコンドリア代謝または前記エネルギー産生の値が、精液検査の正常値において観察されるミトコンドリア代謝またはエネルギー産生と比較し、前記正常値を逸脱する場合、精子の運動率および／または機能に異常があると判定される、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。 The step of evaluating the quality of the sperm comprises evaluating based on the mitochondrial metabolism or energy production of the sperm, wherein the mitochondrial metabolism or energy production value is observed in a normal semen test. A method according to any one of claims 1 to 25, wherein sperm motility and/or function is determined to be abnormal when compared to production and deviating from said normal values.
  28. 　前記基準値が、健常者由来の精子から得られる精子の品質を示す値を含む、請求項２４または２５に記載の方法。 　The method according to claim 24 or 25, wherein the reference value includes a value indicating the quality of sperm obtained from sperm derived from a healthy subject.
  29. 　さらに、前記混合液に対して、前記検査液と前記精子の集団との反応を停止する反応停止処理を行う工程を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 28, further comprising the step of performing a reaction stopping treatment on the mixed solution to stop the reaction between the test solution and the sperm population.
  30. 　前記反応停止処理が、界面活性剤もしくは有機溶剤の添加、または熱処理を含む、請求項２９に記載の方法。 The method according to claim 29, wherein the reaction termination treatment includes addition of a surfactant or organic solvent, or heat treatment.
  31. 　精子の品質を評価するための窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩。 A nitrogen radical compound or oxygen radical compound or a salt thereof for evaluating sperm quality.
  32. 　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、請求項３１に記載の化合物またはその塩。 The compound or its salt according to claim 31, wherein the oxygen radical of said oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
  33. 　精子の品質を評価するためのニトロキシルラジカル化合物またはその塩。 A nitroxyl radical compound or its salt for evaluating sperm quality.
  34. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が５員環式ニトロキシルラジカル化合物である、請求項３３に記載の化合物またはその塩。 The compound or salt thereof according to claim 33, wherein the nitroxyl radical compound is a five-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  35. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、請求項３３に記載の化合物またはその塩。 The compound or salt thereof according to claim 33, wherein the nitroxyl radical compound is a 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  36. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
    で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
    Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、または
    Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
    水素、
    シアノ基、
    イソチオシアノ基、
    置換されていてもよいカルボキシル基、
    置換されていてもよいカルバモイル基、
    置換されていてもよいヒドロキシ基、
    置換されていてもよいアミノ基、
    置換されていてもよいアシル基、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、
    ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
    Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
    Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
    水素、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、
    置換されていてもよいヘテロアリール基、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
    からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
    請求項３２または３３に記載の化合物またはその塩。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
    wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
    E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
    R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
    R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
    R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
    R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
    hydrogen,
    cyano group,
    an isothiocyano group,
    an optionally substituted carboxyl group,
    an optionally substituted carbamoyl group,
    an optionally substituted hydroxy group,
    an optionally substituted amino group,
    an optionally substituted acyl group,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
    wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
    R 7A and R 7B are each independently
    hydrogen,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    an optionally substituted aryl group,
    optionally substituted heteroaryl group,
    -C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
    or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
    34. A compound or a salt thereof according to claim 32 or 33.
  37. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
    により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
    により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、請求項３に記載のとおりである、請求項１９に記載の化合物またはその塩。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
    5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
    wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are 20. A compound according to claim 19, or a salt thereof, each independently as defined in claim 3.
  38. 　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
    により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    により表される、請求項３７に記載の化合物またはその塩。     The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
    wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    38. The compound of claim 37, represented by or a salt thereof.
  39. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。 39. The compound or salt thereof according to any one of claims 36 to 38, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  40. 　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、請求項３６～３９のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。 R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted The compound or a salt thereof according to any one of claims 36 to 39, which is a good amino group.
  41. 　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
    Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、請求項３６～４０のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。     R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
    41. The compound or salt thereof according to any one of claims 36 to 40, wherein R 9 is haloacetylamino.
  42. 　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、請求項４１に記載の化合物またはその塩。 42. The compound or salt thereof of claim 41, wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  43. 　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、請求項３６～４１のいずれか一項に記載の化合物またはその塩。 42. The compound or salt thereof of any one of claims 36-41, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  44. 　精子の品質を評価するための３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたはその塩。 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamide]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or its salt for evaluating sperm quality.
  45. 　精子の品質を評価するための３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたはその塩。 3-carbamoyl-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or its salt for evaluating sperm quality.
  46. 　精子の品質を評価するためのキットであって、
    　窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液
    を含む、キット。     A kit for assessing sperm quality, comprising:
    A kit comprising a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof.
  47. 　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、請求項４６に記載のキット。 The kit according to claim 46, wherein the oxygen radical of said oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
  48. 　精子の品質を評価するためのキットであって、
    　ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液
    を含む、キット。     A kit for assessing sperm quality, comprising:
    A kit containing a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof.
  49. 　前記ニトロキシル化合物が５員環式ニトロキシル化合物である、請求項４６～４８のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 48, wherein the nitroxyl compound is a five-membered cyclic nitroxyl compound.
  50. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が６員環式ニトロキシルラジカル化合物である、請求項４６～４９のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 49, wherein said nitroxyl radical compound is a 6-membered cyclic nitroxyl radical compound.
  51. 　前記検査液がさらに還元剤を含む、請求項４６～５０のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 50, wherein the test solution further contains a reducing agent.
  52. 　さらに、ＤＮＰ－ＭＲＩ装置を含む、請求項４６～５１のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 51, further comprising a DNP-MRI device.
  53. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
    Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、または
    Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
    水素、
    シアノ基、
    イソチオシアノ基、
    置換されていてもよいカルボキシル基、
    置換されていてもよいカルバモイル基、
    置換されていてもよいヒドロキシ基、
    置換されていてもよいアミノ基、
    置換されていてもよいアシル基、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、
    ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
    Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
    Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
    水素、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、
    置換されていてもよいヘテロアリール基、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
    からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
    請求項４７～５２のいずれか一項に記載のキット。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
    E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
    R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
    R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
    R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
    R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
    hydrogen,
    cyano group,
    an isothiocyano group,
    an optionally substituted carboxyl group,
    an optionally substituted carbamoyl group,
    an optionally substituted hydroxy group,
    an optionally substituted amino group,
    an optionally substituted acyl group,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
    wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
    R 7A and R 7B are each independently
    hydrogen,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    an optionally substituted aryl group,
    optionally substituted heteroaryl group,
    -C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
    or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
    A kit according to any one of claims 47-52.
  54. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
    により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
    により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、請求項３に記載のとおりである、請求項５３に記載のキット。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
    5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
    wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are 54. The kit of claim 53, each independently as set forth in claim 3.
  55. 　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
    により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
    により表される、請求項５４または５５に記載のキット。     The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
    wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
    56. The kit of claim 54 or 55, represented by:
  56. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、請求項５３～５５のいずれか一項に記載のキット。 56. The kit of any one of claims 53-55, wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  57. 　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、請求項５３～５６のいずれか一項に記載のキット。 R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted A kit according to any one of claims 53 to 56, which is a good amino group.
  58. 　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
    Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、請求項５３～５７のいずれか一項に記載のキット。     R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
    58. The kit of any one of claims 53-57 , wherein R9 is haloacetylamino.
  59. 　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、請求項５８に記載のキット。 59. The kit of claim 58, wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  60. 　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、請求項５３～５９のいずれか一項に記載のキット。 60. The kit of any one of claims 53-59, wherein R 6A and R 10A are hydrogen.
  61. 　前記ニトロキシル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、請求項４７～６０のいずれか一項に記載のキット。 The nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical, kit according to any one of claims 47 to 60.
  62. 　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、請求項５１～６１のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 51 to 61, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH.
  63. 　前記精子の品質が精子運動性を含む、請求項４６～６２のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 62, wherein said sperm quality comprises sperm motility.
  64. 　前記検査液と精子との反応を停止する反応停止剤をさらに含む、請求項４６～６３のいずれか一項に記載のキット。 The kit according to any one of claims 46 to 63, further comprising a reaction stopping agent that stops the reaction between the test solution and sperm.
  65. 　前記反応停止剤が、界面活性剤もしくは有機溶剤を含む、請求項６４に記載のキット。 The kit according to claim 64, wherein the reaction terminator contains a surfactant or an organic solvent.
  66. 　精子の品質を評価するための装置であって、
    　精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する信号測定手段と、
    　該信号に基づき、精子の品質を評価する精子品質評価手段と
    を備える、装置。     A device for assessing sperm quality, comprising:
    a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixture obtained by mixing a population of spermatozoa and a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof;
    sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
  67. 　前記酸素ラジカル化合物の酸素ラジカルが、ニトロキシルラジカルである、請求項６６に記載の装置。 The device according to claim 66, wherein the oxygen radical of said oxygen radical compound is a nitroxyl radical.
  68. 　精子の品質を評価するための装置であって、
    　精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液とが混合された混合液から得られる信号を測定する信号測定手段と、
    　該信号に基づき、精子の品質を評価する精子品質評価手段と
    を備える、装置。     A device for assessing sperm quality, comprising:
    a signal measuring means for measuring a signal obtained from a mixed solution in which a population of spermatozoa and a test solution containing a nitroxyl radical compound are mixed;
    sperm quality evaluation means for evaluating sperm quality based on the signal.
  69. 　前記ニトロキシル化合物が５員環式ニトロキシル化合物である、請求項６８に記載の装置。 The device according to claim 68, wherein said nitroxyl compound is a five-membered cyclic nitroxyl compound.
  70. 　前記ニトロキシル化合物が６員環式ニトロキシル化合物である、請求項６８に記載の装置。 The device according to claim 68, wherein said nitroxyl compound is a 6-membered cyclic nitroxyl compound.
  71. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
    で表され、式中、Ｚは－Ｃ（Ｒ６Ａ）（Ｒ６Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ６Ｃ）－であり、
    Ｅは、結合、－Ｃ（Ｒ１０Ａ）（Ｒ１０Ｂ）－または－Ｎ（Ｒ１０Ｃ）－であり、
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、それぞれ独立して、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、または
    Ｒ１とＲ２が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ３とＲ４が、一緒になって、それらが結合する炭素原子と一緒に炭素環またはヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ１およびＲ３が、一緒になって、ニトロキシル基の窒素を含むヘテロ環を形成してもよく、
    Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６Ｃ、Ｒ１０Ａ、Ｒ１０Ｂ、およびＲ１０Ｃは、それぞれ独立して、
    水素、
    シアノ基、
    イソチオシアノ基、
    置換されていてもよいカルボキシル基、
    置換されていてもよいカルバモイル基、
    置換されていてもよいヒドロキシ基、
    置換されていてもよいアミノ基、
    置換されていてもよいアシル基、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、および
    置換されていてもよいヘテロアリール基
    からなる群から選択され、
    ここで、Ｒ５ＡおよびＲ５Ｂは、一緒になって、＝Ｃ（Ｒ７Ａ）（Ｒ７Ｂ）または＝Ｏを形成してもよく、または
    Ｒ１およびＲ３およびＲ５Ｂが、一緒になって、縮合多環を形成してもよく、
    Ｒ７ＡおよびＲ７Ｂは、それぞれ独立して、
    水素、
    置換されていてもよいアルキル基、
    置換されていてもよいアルケニル基、
    置換されていてもよいアルキニル基、
    置換されていてもよいシクロアルキル基、
    置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、
    置換されていてもよいアリール基、
    置換されていてもよいヘテロアリール基、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルケニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアルキニル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基）、
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいアリール基）、および
    －Ｃ（＝Ｏ）－（置換されていてもよいヘテロアリール基）
    からなる群から選択されるか、またはＲ７ＡおよびＲ７Ｂは、それらが結合する炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいシクロアルキル基、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル基、置換されていてもよいアリール基、または置換されていてもよいヘテロアリール基を形成してもよい、
    請求項６７または６８に記載の装置。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
    wherein Z is -C(R 6A )(R 6B )- or -N(R 6C )-,
    E is a bond, -C(R 10A )(R 10B )- or -N(R 10C )-;
    R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are each independently
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group, or R 1 and R 2 taken together are carbocyclic with the carbon atom to which they are attached; or may form a heterocycle,
    R3 and R4 may together form a carbocyclic or heterocyclic ring with the carbon atom to which they are attached;
    R 1 and R 3 may together form a heterocycle containing the nitrogen of the nitroxyl group;
    R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 6C , R 10A , R 10B and R 10C are each independently
    hydrogen,
    cyano group,
    an isothiocyano group,
    an optionally substituted carboxyl group,
    an optionally substituted carbamoyl group,
    an optionally substituted hydroxy group,
    an optionally substituted amino group,
    an optionally substituted acyl group,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    is selected from the group consisting of an optionally substituted aryl group and an optionally substituted heteroaryl group;
    wherein R 5A and R 5B together may form =C(R 7A )(R 7B ) or =O, or R 1 and R 3 and R 5B together , which may form a fused polycyclic ring,
    R 7A and R 7B are each independently
    hydrogen,
    an optionally substituted alkyl group,
    an optionally substituted alkenyl group,
    an optionally substituted alkynyl group,
    an optionally substituted cycloalkyl group,
    optionally substituted heterocycloalkyl group,
    an optionally substituted aryl group,
    optionally substituted heteroaryl group,
    -C(=O)-(optionally substituted alkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkenyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted alkynyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted cycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted heterocycloalkyl group),
    -C(=O)-(optionally substituted aryl group), and -C(=O)-(optionally substituted heteroaryl group)
    or R 7A and R 7B together with the carbon atom to which they are attached are an optionally substituted cycloalkyl group, an optionally substituted heterocycloalkyl group, may form an optionally substituted aryl group or an optionally substituted heteroaryl group,
    69. Apparatus according to claim 67 or 68.
  72. 　前記ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
    により表される５員環式ニトロキシルラジカル化合物、または以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
    により表される６員環式ニトロキシルラジカル化合物であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ６Ａ、Ｒ６Ｂ、Ｒ１０Ａ、およびＲ１０Ｂは、それぞれ独立して、請求項３に記載のとおりである、請求項７１に記載の装置。     The nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
    5-membered cyclic nitroxyl radical compound represented by or the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
    wherein R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5A , R 5B , R 6A , R 6B , R 10A and R 10B are 72. The apparatus of claim 71, each independently as claimed in claim 3.
  73. 　前記５員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
    により表され、前記６員環式ニトロキシルラジカル化合物が、以下の式
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
    により表される、請求項７２に記載の装置。     The five-membered cyclic nitroxyl radical compound has the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
    wherein the 6-membered cyclic nitroxyl radical compound is represented by the following formula
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
    73. The apparatus of claim 72, represented by .
  74. 　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４が、それぞれ独立して、置換されていてもよいアルキル基である、請求項７１に記載の装置。 72. The device of claim 71, wherein R1 , R2 , R3 and R4 are each independently an optionally substituted alkyl group.
  75. 　Ｒ５Ａがシアノ基、イソチオシアノ基、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよいヒドロキシ基、置換されていてもよいカルボキシル基、置換されていてもよいカルバモイル基または置換されていてもよいアミノ基である、請求項７４に記載の装置。 R 5A is a cyano group, an isothiocyano group, an optionally substituted alkyl group, an optionally substituted hydroxy group, an optionally substituted carboxyl group, an optionally substituted carbamoyl group or an optionally substituted 75. The device of claim 74, which is a good amino group.
  76. 　Ｒ５Ａが、－ＣＯＯＨ、－Ｒ９、－ＣＨ２－Ｒ９、－ＮＨＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｒ９であり、
    　Ｒ９が、ハロアセチルアミノである、請求項７５に記載の装置。     R 5A is -COOH, -R 9 , -CH 2 -R 9 , -NHC(=O)-CH 2 -R 9 ,
    76. The device of claim 75, wherein R9 is haloacetylamino.
  77. 　Ｒ９が、ブロモアセチルアミノまたはヨードアセチルアミノである、請求項７６に記載の装置。 77. The device of claim 76, wherein R9 is bromoacetylamino or iodoacetylamino.
  78. 　Ｒ６ＡおよびＲ１０Ａが水素である、請求項７５に記載の装置。 76. The device of claim 75, wherein R6A and R10A are hydrogen.
  79. 　前記ニトロキシル化合物が、３－［２－（２－ヨードアセトアミド）アセトアミド］－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルまたは３－カルバモイル－２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ　フリーラジカルである、請求項６７または６８に記載の装置。 The nitroxyl compound is 3-[2-(2-iodoacetamido)acetamido]-2,2,5,5-tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical or 3-carbamoyl-2,2,5,5 -tetramethyl-1-pyrrolidinyloxy free radical, according to claim 67 or 68.
  80. 　前記検査液がさらに還元剤を含む、請求項６６～７９のいずれか一項に記載の装置。 The device according to any one of claims 66 to 79, wherein the test liquid further contains a reducing agent.
  81. 　前記還元剤が、ＮＡＤＨまたはＧＳＨを含む、請求項８０に記載の装置。 The device according to claim 80, wherein the reducing agent comprises NADH or GSH.
  82. 　前記精子の品質が精子運動性を含む、請求項６６～８１に記載の装置。 The apparatus according to claims 66-81, wherein said sperm quality comprises sperm motility.
  83. 　前記信号が、動的核偏極（ＤＮＰ）法または電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によって前記混合液から検出される信号を含む、請求項６６～８２のいずれか一項に記載の装置。 The apparatus according to any one of claims 66 to 82, wherein said signal comprises a signal detected from said mixture by dynamic nuclear polarization (DNP) or electron spin resonance (ESR) methods.
  84. 　前記精子品質評価手段が、前記信号またはそれから得られる値と、精子の品質を評価するための基準値とを比較する、請求項６６～８３のいずれか一項に記載の装置。 The apparatus according to any one of claims 66 to 83, wherein said sperm quality evaluation means compares said signal or a value derived therefrom with a reference value for evaluating sperm quality.
  85. 　前記精子品質評価手段が、前記信号から算出される精子の数及び／またはその運動率と、精子の品質を評価するための基準値とを比較する、請求項６６～８４のいずれか一項に記載の装置。 The sperm quality evaluation means compares the number and / or motility of sperm calculated from the signal with a reference value for evaluating sperm quality, according to any one of claims 66 to 84 Apparatus as described.
  86. 　前記基準値が、健常者由来の精子から得られる精子の品質を示す値を含む、請求項６６～８５のいずれか一項に記載の装置。 The device according to any one of claims 66 to 85, wherein the reference value includes a value indicating the quality of sperm obtained from sperm derived from a healthy subject.
  87. 　さらに、前記混合液に対して、前記検査液と前記精子の集団との反応を停止する反応停止処理を行う反応停止手段を含む、請求項６６～８６のいずれか一項に記載の装置。 The apparatus according to any one of claims 66 to 86, further comprising reaction stopping means for performing a reaction stopping process for stopping the reaction between the test liquid and the sperm population on the mixed liquid.
  88. 　前記反応停止処理が、界面活性剤もしくは有機溶剤の添加、または熱処理を含む、請求項８７に記載の装置。 The device according to claim 87, wherein the reaction termination treatment includes addition of a surfactant or organic solvent, or heat treatment.
  89. 　被験者における男性不妊を検査または診断する方法であって、
    　被験者から得られた精子の集団と、窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
    　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
    　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する工程と
    を含む、方法。     A method of testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising:
    a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
    measuring a signal obtained from the mixture;
    and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
  90. 　被験者における男性不妊を検査または診断する方法であって、
    　被験者から得られた精子の集団と、ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得る工程と、
    　該混合液から得られる信号を計測する工程と、
    　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する工程と
    を含む、方法。     A method of testing or diagnosing male infertility in a subject, comprising:
    a step of mixing a population of spermatozoa obtained from a subject with a test solution containing a nitroxyl radical compound or a salt thereof to obtain a mixed solution;
    measuring a signal obtained from the mixture;
    and determining whether and/or the extent to which the subject is male infertile based on the signal.
  91. 　被験者における男性不妊を検査または診断する検査・診断キットであって、
    　窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液と、
    　該検査液を収容する容器と、
    　必要に応じて、該検査液と被験者から得られた精子の集団との反応を停止する反応停止液と、
    　使用方法が記載された指示書と
    を含み、該指示書は、
    　該被験者から得られた精子の集団と、該窒素ラジカル化合物もしくは酸素ラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得、
    　該混合液から得られる信号を計測し、
    　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する
    ことを指示する、キット。     A test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject,
    a test solution containing a nitrogen radical compound or an oxygen radical compound or a salt thereof;
    a container containing the test solution;
    If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject;
    and instructions for use, the instructions comprising:
    A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitrogen radical compound or the oxygen radical compound or a salt thereof,
    Measuring a signal obtained from the mixed solution,
    A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
  92. 　被験者における男性不妊を検査または診断する検査・診断キットであって、
    　ニトロキシルラジカル化合物を含む検査液と、
    　該検査液を収容する容器と、
    　必要に応じて、該検査液と被験者から得られた精子の集団との反応を停止する反応停止液と、
    　使用方法が記載された指示書と
    を含み、該指示書は、
    　該被験者から得られた精子の集団と、該ニトロキシルラジカル化合物またはその塩を含む検査液とを混合して混合液を得、
    　該混合液から得られる信号を計測し、
    　該信号に基づいて、該被験者が男性不妊であるかどうか、及び／またはその程度を判定する
    ことを指示する、キット。     A test/diagnostic kit for testing or diagnosing male infertility in a subject,
    a test solution containing a nitroxyl radical compound;
    a container containing the test solution;
    If necessary, a reaction stopping solution for stopping the reaction between the test solution and the population of spermatozoa obtained from the subject;
    and instructions for use, the instructions comprising:
    A mixed solution is obtained by mixing a population of spermatozoa obtained from the subject and a test solution containing the nitroxyl radical compound or a salt thereof,
    Measuring a signal obtained from the mixed solution,
    A kit directed to determining whether and/or the extent of male infertility in said subject based on said signal.
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