WO2022210833A1 - 疾患を有する対象において低代謝状態を誘発する方法およびそのための装置 - Google Patents
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Classifications
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/01—Measuring temperature of body parts ; Diagnostic temperature sensing, e.g. for malignant or inflamed tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/08—Detecting, measuring or recording devices for evaluating the respiratory organs
- A61B5/083—Measuring rate of metabolism by using breath test, e.g. measuring rate of oxygen consumption
-
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- A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
- A61N1/00—Electrotherapy; Circuits therefor
- A61N1/18—Applying electric currents by contact electrodes
- A61N1/32—Applying electric currents by contact electrodes alternating or intermittent currents
- A61N1/36—Applying electric currents by contact electrodes alternating or intermittent currents for stimulation
Definitions
- the present invention provides a method and apparatus for inducing a hypometabolic state in a subject with disease.
- hypothermia has been developed for disease.
- the efficacy of hypothermia for neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy has been disclosed 41 .
- hypothermia after cardiac arrest does not improve prognosis compared with thermoregulatory therapy (maintaining 36°C) 42 .
- hypothermia in adults has become less aggressive.
- Low metabolic states include hibernation-like states. Warmotherms, birds, and mammals expend most of their body energy for heat production in order to maintain internal body temperature (T B ) within a narrow range above ambient temperature (T A ). However, some mammals actively slow down their metabolism and enter a state known as hibernation to survive winter food shortages. Animals return to normal without obvious tissue damage 1,2 . Mice do not hibernate, but exhibit a short-term hypometabolic state known as diurnal diapause when they can benefit from a reduced basal metabolic rate.
- TR setpoint temperature
- H negative feedback gain of heat production
- the present invention provides a method and apparatus for inducing a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state) in a diseased subject.
- hypothalamic anteroventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe) of the hypothalamus contain
- AVPe hypothalamic anteroventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- a device for monitoring hypometabolism in a controlled hypometabolic state (preferably hibernation-like state) subject with a disease comprising: a measurement unit that measures oxygen concentrations in exhaled air and inhaled air from a subject; a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; Equipped with an oxygen monitoring unit that monitors the oxygen consumption of the subject over time, It may further include a display showing the results of oxygen monitoring, or indicating that the subject is in a hypometabolic state (preferably in a hibernation-like state) when oxygen consumption is reduced compared to before the hypometabolic state.
- the apparatus may further include a hypometabolic state monitoring section that estimates that the subject has died or may have died when oxygen consumption is zero.
- a device for monitoring a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) in a controlled hypometabolic state (preferably hibernation-like state) subject with a disease comprising: a measurement unit that measures oxygen concentrations in exhaled air and inhaled air from a subject; a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; a reduction in oxygen consumption (and preferably a theoretical setpoint temperature) compared to the subject's oxygen consumption (and preferably a theoretical setpoint temperature) prior to entering a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state)
- a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) that presumes, at least based on state) probability estimator; a probability-of-mortality estimation unit that estimates that a subject has died or may have died when oxygen consumption becomes zero
- (1'') a device for monitoring a hibernation-like state in a hibernation-like subject with a disease comprising: a measurement unit that measures oxygen concentrations in exhaled air and inhaled air from a subject; a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; the subject hibernating based at least on a reduction in oxygen consumption (and preferably the theoretical setpoint temperature) compared to the subject's oxygen consumption (and preferably the theoretical setpoint temperature) prior to entering a hibernation-like state; a hibernation-like state probability estimator that estimates that the user has entered a hibernation-like state or may have entered a hibernation-like state; a probability-of-mortality estimation unit that estimates that a subject has died or may have died when oxygen consumption becomes zero.
- a device for monitoring hibernation-like states in a hibernation-like subject with a disease comprising: a measurement unit that measures oxygen concentrations in exhaled air and inhaled air from a subject; a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; the subject has entered a hibernation-like state at least based on a decrease in both the oxygen consumption and the theoretical setpoint temperature compared to the subject's oxygen consumption and the theoretical setpoint temperature prior to entering the hibernation-like state; or a hibernation-like state possibility estimation unit that estimates that the hibernation-like state may have been entered; a death possibility estimation unit that estimates that the subject has died or may have died when the oxygen consumption becomes zero ⁇ preferably, outputting the estimation result by the estimation unit It may further have an output device (preferably a display device, preferably a display or a speaker).
- an output device preferably a display device, preferably a display or a
- the device according to (1) above wherein the controlled hypometabolic state is a hibernation-like state.
- an output device outputting to the output device that if the oxygen consumption exceeds the upper limit of the defined range, the subject may be waking up from a controlled hypometabolic state;
- An output device preferably a display device, preferably a display
- An output device indicating that the subject may be transitioning from a controlled hypometabolism to a more hypometabolism when the oxygen consumption falls below the lower limit of the defined range.
- output to an output device preferably a display device, preferably a display or a speaker
- the device according to any one of (3).
- thermometer further comprising a core thermometer and a body temperature storage unit for storing body temperature measured by the thermometer, a calculation unit for calculating a theoretical set temperature, and a calculation unit for calculating a feedback gain (H) for heat generation.
- the device according to any one of (1''') and (2) to (4).
- AVPe anterior ventricular periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- a device for stimulating pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons wherein the subject preferably has a disease
- the device comprises: a control unit that transmits a control signal for controlling voltage generation; a voltage generator that receives a control signal from the controller and generates a voltage; a stimulation probe electrically connected proximally to said voltage generator and having an electrical stimulation electrode distally, said voltage generator having a length sufficient to access QRFP-producing neurons from the brain surface; a stimulation probe that generates electrical stimulation at a distal electrical stimulation electrode with a voltage from the body; outside temperature gauge and a core thermometer and an exhaled gas analyzer for measuring oxygen concentration in exhaled gas; a recording unit that records the measured outside temperature and at least one numerical value selected from the group consisting of core body temperature and oxygen concentration; a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; a hypometabolic state (preferably a hibernation
- a device for stimulating pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons wherein the subject preferably has a disease,
- the device comprises: a control unit that transmits a control signal that controls the release of the QRFP-producing neuron-stimulating compound; a reservoir of said compound; a compound delivery unit that receives a control signal from the control unit and delivers the compound from a compound storage unit; a guide comprising a compound outlet and a channel for the compound to the outlet and delivering the compound to QRFP-producing neurons; outside temperature gauge and a core thermometer and an exhaled gas analyzer for measuring oxygen concentration in exhaled gas; a recording unit that records the measured outside temperature and at least one numerical value selected from the group consisting of core body temperature and oxygen concentration;
- a hibernation potential determiner for determining that a state may have been entered; and a probability-of-mortality determiner that presumes that a subject has died or may have died based at least on zero oxygen consumption.
- the apparatus according to (6) or (7) above further comprising a determination unit that determines whether the subject is hypothermic based on the outside air temperature and core body temperature recorded in the recording unit.
- the hibernation possibility determination unit further includes a determination unit that determines whether the subject is in a hibernation-like state based on the outside air temperature, core body temperature, and oxygen concentration recorded in the recording unit.
- the apparatus according to any one of (6) to (9) above, comprising: (11) GRFP continuously or intermittently until the control unit determines that the subject is in any one state selected from the group consisting of a hypothermic state, a hypometabolic state, and a hibernation-like state
- the apparatus according to any one of (8) to (10) above, which transmits control signals for stimulating production neurons.
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- the QRFP-producing neurons are neurons in one or more regions selected from the group consisting of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), the medial preoptic area (MPA), and the periventricular nucleus (Pe); The method according to (12) above.
- the excitatory stimulus is a stimulus selected from the group consisting of chemical stimulation, magnetic stimulation and electrical stimulation.
- a method for screening a substance that gives an excitatory stimulus to amide peptide (QRFP)-producing neurons comprising: contacting the test compound with the QRFP-producing neurons; measuring the excitation of the QRFP-producing neurons; selecting a test compound that provides an excitatory stimulus to the QRFP-producing neurons;
- a method for screening a substance that specifically gives an excitatory stimulus to amide peptide (QRFP)-producing neurons comprising: causing the cell to express a receptor specifically expressed in QRFP-producing
- a method of testing a test compound or composition e.g., pharmaceutical formulations, pharmaceutical compositions, etc.
- a test compound or composition of interest is administered to regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA), and periventricular nucleus (Pe) of a mammal (e.g., a non-human mammal) and confirming that the mammal hibernates;
- a method including (15e) The method according to (15d) above, From the correlation between the deep body temperature (e.g., intestinal temperature) and the oxygen consumption of the mammal (e.g., non-human mammal), the deep body temperature (theoretical set temperature) when the oxygen consumption is 0 and ⁇ VO 2 / ⁇ T B (heat production feedback gain); Both the theoretical set temperature and the negative feedback gain of heat generation were reduced by administration of the
- a method of indicating that said mammal has hibernated (15f) testing whether the test compound or compositions (e.g., pharmaceutical formulations, pharmaceutical compositions, etc.) containing the compound induce hibernation in a mammal such as a human, preferably a mammal with a disease; a method, Estimates of the theoretical setpoint temperature for humans in whom the test compound or composition was administered to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe) providing an estimate of the heat production feedback gain and an estimate of the theoretical set temperature of the human prior to administration and an estimate of the heat production feedback gain; Estimated theoretical set temperature and feedback gain for heat production after administration compared to estimated theoretical set temperature and feedback gain for heat production prior to administration of the test compound or composition.
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- a decrease in the estimated theoretical setpoint temperature and the estimated feedback gain of heat production after administration than before administration indicates that the mammal has hibernated.
- a test compound or a composition containing the compound e.g., pharmaceutical formulations, pharmaceutical compositions, etc.
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- test compound or a composition containing the compound e.g., pharmaceutical formulations, pharmaceutical compositions, etc.
- a mammal such as a human, preferably a mammal with a disease
- a method of (predicting, estimating, computing scientifically) In a mammal, such as a human, to which the test compound or composition is administered to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA), and periventricular nucleus (Pe), prior to administration and recording oxygen consumption and core body temperature under at least two different ambient temperature conditions, each post-administration; estimating the correlation between oxygen consumption and core body temperature before and after administration, respectively; Determining from the estimated correlation whether the degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature is decreased is decreased after administration compared to
- a test compound or a composition containing the compound induces hibernation in a mammal such as a human, preferably a mammal with a disease
- a method of (examining, predicting, estimating, computing scientifically), In a mammal, such as a human, to which the test compound or composition is administered to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA), and periventricular nucleus (Pe), prior to administration and providing (or recording) oxygen consumption and core body temperature recorded under at least two different ambient temperature conditions each after administration; estimating the correlation between oxygen consumption and core body temperature before and after administration, respectively; Determining from the estimated correlation whether the degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature is decreased is decreased after administration compared to before administration, and when oxygen consumption is 0 determining whether the estimate of core body temperature, assuming that the The degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature decreases is lower
- a device for monitoring hibernation comprising: A test compound or a composition containing the compound (e.g., a pharmaceutical preparation, a pharmaceutical composition, etc.) of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), the medial preoptic area (MPA), and the periventricular nucleus (Pe)
- a test compound or a composition containing the compound e.g., a pharmaceutical preparation, a pharmaceutical composition, etc.
- the anterior ventral periventricular nucleus AVPe
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- a mammal such as a human, preferably a diseased mammal
- recording oxygen consumption and core body temperature recorded under at least two different ambient temperature conditions before and after administration, respectively.
- a recording unit that Before and after administration, the correlation between oxygen consumption and core body temperature was estimated. and whether the estimated core body temperature, assuming zero oxygen consumption, is reduced post-dosing compared to pre-dosing.
- a method of treating a mammal having a disease comprising: A method comprising inducing a controlled hypometabolic state in said animal. (19) The method according to (18) above, A method, wherein inducing a controlled hypometabolic state in said mammal is performed to slow disease progression in said mammal.
- observing progress includes observing progression of the disease in the animal.
- observing the course of the animal is carried out while the animal is being transported to a medical institution or in an intensive care unit of the medical institution. .
- a method of testing the efficacy of a treatment comprising: subjecting a mammal having the disease to the treatment; and determining whether the treatment slows the rate of disease progression, reduces mortality, and survival compared to a group of subjects not receiving the treatment. and determining which one of whether to extend the period of time.
- FIG. 1a shows a strategy for chemogenetic excitation of iCre-positive neurons in Qrfp-iCre mice.
- Chemical excitation of iCre-positive cells in Qrfp-iCre mice was found to induce hypothermia as measured by infrared thermography.
- Heterozygous (Q-het) or homozygous (Q-homo) Qrfp-iCre mice carrying heterozygous Rosa26 dreaddm3 (M3) and/or Rosa26 dreaddm4 (M4) alleles were subjected to experiments. Distribution of Q neurons in Qrfp-iCre mice.
- 3-ventricular optic nucleus Representative thermometry results showing surface body temperature of Q-hM3D mice. CNO was injected intraperitoneally at 0 hours. Note the temperature rise in the tail at 0.5 hours (arrow). Fos immunostaining of slices from Q-hM3D mice 90 minutes after CNO IP. Scale bar, 100 ⁇ m. Procedure for metabolic analysis by chemogenetic activation of Q neurons in Q-hM3D mice. Chronological progression of hypothermia/hypometabolism after activation of Cre-positive neurons by DREADD.
- FIG. 2a shows the strategy of injecting AAV-DIO-GFP into Qrfp-iCre mice to delineate the axonal projection pattern of Q neurons delineated by expressing GFP in Q neurons.
- AVPe, MPA and Pe Distribution of GFP-positive Q neurons in scale bar, 100 ⁇ m. Distribution of axons arising from Q neurons. Scale bar, 100 ⁇ m. Cropped images of images taken with the brain using the ScaleS method were revealed by the ScaleS method, showing AVPe Q neurons and DMH fibers. In situ hybridization analysis showing that populations of Q neurons express Vgat and/or Vglut2 in Q-hM3D mice. Scale bar, 100 ⁇ m. High magnification image of the rectangular area shown in Fig.
- FIG. 2e A single-color image of the rectangular area in Fig. 2e. Higher magnification images of rectangular areas 1-3 shown in FIG. 2f showing Q neurons expressing Vgat, Vglut2 or both.
- Vgat + mCherry + ;
- Vglt2 + mCherry + ;
- Vgat + Vglt2 + mCherry + .
- Pelvis periventricular nucleus; AVPe, anterior chamber Pe; VOLT, vascular organ of the septum septum; MPA, medial preoptic area; VLPO, ventrolateral hypothalamic area; PVN, hypothalamic paraventricular nucleus; MM, medial papillary nucleus; LC, locus coeruleus; PAG, periaqueductal gray matter; LPB, lateral paranucleus; RVLM, paraventricular nucleus; 3 globus pallidus; nucleus pallidus; chamber.
- Q neuron-induced hypometabolism is accompanied by a reduction in body temperature set point. Evolution of TB and VO2 of QIH at various TA.
- Metabolic translocation of QIH within an individual The upper row shows the transition of animal posture at various TAs during QIH .
- Figures 4a-g show that Q neurons play a role in inducing fasting-induced diapause in mice.
- Figure 4a shows a strategy for suppressing Q neuron function.
- FIG. 5 shows a schematic of the apparatus of the first embodiment.
- FIG. 6 shows a schematic of the apparatus of the first embodiment.
- FIG. 7 shows a schematic of the apparatus of the second embodiment.
- FIG. 8 shows a schematic of additional configurations of the apparatus of the first and second embodiments.
- FIG. 9B shows an experimental scheme of observing sepsis model animals for 48 hours with or without induction of hibernation (QIH).
- FIG. 9B shows changes over time in the survival rates of sepsis model animals that were induced to hibernate (QIH) and sepsis model animals that were not induced to hibernate.
- FIG. 10 shows oxygen consumption graphs for the sepsis model, the hypometabolism-induced sepsis model, and the typical QIH (hibernation) model.
- FIG. 11A shows a scheme of an experiment in which an animal model of acute renal failure is observed for 48 hours with or without induction of hibernation (QIH).
- FIG. 11B shows changes over time in the survival rate of acute renal failure model animals with induced hibernation (QIH) and acute renal failure model animals without hibernation induction.
- FIG. 12A shows an example of the configuration of the device (C) of the present invention.
- FIG. 12B shows an example of the configuration of the device (C) of the present invention.
- FIG. 12C shows a flow chart for determining the possibility of a hibernation-like state and determining a dead state in the present invention.
- FIG. 12D is a flow chart for determining whether a specified range is determined from fluctuations in oxygen consumption in a subject in a stable metabolic state, and whether the subject's oxygen consumption is within or outside the range, according to the present invention. show.
- FIG. 12E shows an example of the configuration of the device (C) of the present invention.
- subject refers to humans and non-human mammals, e.g., rodents such as mice, rats, guinea pigs, gerbils and hamsters, laboratory animals such as ferrets, rabbits, dogs and minipigs, monkeys, It refers to non-human primates such as gorillas, chimpanzees, orangutans and bonobos.
- rodents such as mice, rats, guinea pigs, gerbils and hamsters
- laboratory animals such as ferrets, rabbits, dogs and minipigs, monkeys
- non-human primates such as gorillas, chimpanzees, orangutans and bonobos.
- the subject has a disease. In some embodiments, the subject has a chronic disease. In some embodiments, the subject has an acute illness. In some embodiments, the disease, chronic disease or acute disease is a serious disease. In all aspects of the invention the subject is preferably a subject with a disease.
- An acute disease refers to a disease in which symptoms occur rapidly and progress rapidly. Examples of acute diseases include sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases refer to diseases other than acute diseases. Chronic diseases include tumors, autoimmune diseases, aging and the like.
- the "hypothalamus” is a center that exists in the diencephalon and regulates endocrine and autonomic functions.
- Q-neurons are nerves located in the medial regions of the hypothalamus, namely the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe).
- Pyroglutaminated RF-amide peptide (QRFP) is a neuropeptide identified as an endogenous ligand for the GPR103 receptor. QRFP is strongly expressed in the hypothalamus and is thought to be involved in the regulation of sleep and wakefulness, as it has been shown to have the effect of enhancing the wakefulness system.
- T A means ambient temperature of the subject (° C.)
- T B means core body temperature (° C.)
- T R means theoretical setpoint temperature (° C.).
- VO2 means oxygen consumption of a subject.
- T R is the body temperature determined as T B when VO 2 is zero by determining the correlation between T B and VO 2 when T A is varied.
- T B is the internal body temperature, not the body surface temperature, which is affected by the outside air temperature.
- TB in humans can be defined by rectal, intraesophageal, intravesical, or intrapulmonary blood temperature.
- hypometabolic state is a controlled low metabolic state and includes hibernation-like states.
- a controlled hypometabolic state can be induced by hypometabolic therapy.
- Hypometabolic therapy induces a state of hypometabolism by lowering the oxygen consumption required by tissues.
- the hypometabolic state is preferably controlled by the brain.
- a brain-controlled hypometabolic state can be induced by stimulating Q neurons in the brain.
- a brain-controlled hypometabolic state can also be induced by the methods of the present invention.
- Hypometabolic therapies include, for example, the induction of natural dormancy (eg, diurnal dormancy, hibernation, Q neuron-induced hypometabolism (QIH)) and similar states.
- a short-term hypometabolic state can preferably be induced in rodents such as mice and Syrian hamsters.
- Methods of inducing a longer term low metabolic state include methods of stimulating Q neurons. Stimulation of Q neurons can be effective to induce a hypometabolic state in mammals that do not hibernate in nature (non-hibernating mammals). Hypothermia is secondary in hypometabolic therapy.
- Hypothermia lowers body temperature by a method that lowers body temperature directly.
- Hypothermia is a therapy that directly lowers body temperature, for example, by rapid intravenous injection of a drug cooled to 4° C., and is therefore essentially different from hypometabolism. Mammals in particular try to keep their body temperature constant, so cooling the body like hypothermia requires extra metabolism and tends to increase metabolism unless muscle relaxants are used to suppress shivering. . Therefore, hypothermia is fundamentally different from hypometabolism.
- “hibernation” is a state of hypothermia and low metabolism found in mammals.
- “Daily torpor” is a short-term state of low metabolism.
- Hibernation and circadian dormancy differ in that circadian dormancy causes a decrease in H with little decrease in TR, whereas hibernation causes a significant decrease in both TR and H.
- hibernation-like state means a state in which both TR and H are significantly decreased with decreasing TA .
- non-hibernating animal refers to an animal that does not have a habit of hibernating in winter or during fasting.
- exhaled breath is breath exhaled by a subject.
- the oxygen concentration is an index indicating the amount of oxygen per volume.
- the units of oxygen concentration can be, for example, % or mmHg.
- oxygen consumption ( VO2) is the oxygen consumption per hour calculated from the oxygen concentration contained in exhaled and inspired air. Since oxygen consumption varies with body weight, it may be corrected and calculated per unit body weight (eg, per kg and per g). Oxygen consumption can be calculated per unit time (eg, per minute or per hour).
- hypothalamus in the brain of a living, non-hibernating animal subject, the hypothalamus consists of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), the medial preoptic area (MPA) and the periventricular nucleus (Pe). It has been found that a hibernation-like state can be induced in the subject by applying an excitatory stimulus to pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons within one or more regions selected from the group. The inventors have also found that induction of a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state) improves the survival rate of a subject when the subject has the disease.
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- a subject By inducing a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state), a subject's metabolism can be lowered, thereby slowing all vital activities, including disease progression.
- a subject is a subject with a disease, particularly a disease affecting survival (eg, a serious disease).
- inducing a hypometabolic state in peripheral tissues refers to inducing a hypometabolic state in peripheral tissues to reduce oxygen demand and nutrient demand in the peripheral tissues.
- Induction of hypometabolic state in an individual of the invention may involve induction of peripheral tissue hypometabolic state.
- QIH is associated with the induction of a hypometabolic state in peripheral tissues such that in QIH, an individual's oxygen consumption decreases, breathing decreases, and heart rate decreases. Without being bound by theory, this reduction in respiration and heart rate may be achieved by the brain controlling respiration and heart rate to meet the oxygen and nutritional needs of peripheral tissues.
- hypothermia the body temperature of a mammal is forcibly lowered. Hypothermia can induce hypometabolism in peripheral tissues due to forced hypothermia induction, but it cannot lower metabolism as much as hypometabolism. In addition, hypothermia is known to cause tremors in muscle tissue and increase metabolism in the absence of a muscle relaxant. In contrast, the hypometabolic state of hypometabolism results in decreased peripheral tissue oxygen consumption, which causes the brain to slow down respiration and circulation, which can slow metabolism beyond what is possible with hypothermia. . Thus, hypometabolism due to hypometabolism is associated with anesthesia without brain control, in that active control by the brain produces hypometabolism and hypothermia to peripheral tissues. This is different from hypometabolism caused by hypothermia or hypothermia.
- a method of inducing a hibernation-like state in a living non-hibernating animal subject comprising: and periventricular nucleus (Pe).
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- a serious disease is one that is life-threatening if treatment is delayed.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- Excitatory stimulation can be induced by stimulating with deep brain electrodes or by stimulating with an activator of QRFP-producing neurons.
- the device of the present invention for stimulating pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons in a region.
- the device of the present invention is a control unit that transmits a control signal for controlling voltage generation; a voltage generator that receives a control signal from the controller and generates a voltage; a stimulation probe electrically connected proximally to said voltage generator and having an electrical stimulation electrode distally, said voltage generator having a length sufficient to access QRFP-producing neurons from the brain surface; and a stimulation probe for generating electrical stimulation at a distal electrical stimulation electrode with voltage from the body.
- the device of the present invention can electrically provide excitatory stimulation to QRFP-producing neurons.
- the device of the present invention is a control unit that transmits a control signal that controls the release of the QRFP-producing neuron-stimulating compound; a reservoir of said compound; and a compound release unit that receives a control signal from the control unit and releases the compound from the compound reservoir.
- the device of the present invention comprises: outside temperature gauge and a core thermometer and an exhaled gas analyzer for measuring oxygen concentration in exhaled gas; a recording unit that records the measured outside temperature and at least one numerical value selected from the group consisting of core body temperature and oxygen concentration; may further include
- the subject can check whether the core body temperature (T B ) decreases as the outside temperature (T A ) decreases, and the exhaled gas analysis result , the theoretical setpoint temperature (T R ) and negative feedback gain (H) for heat production can be determined. This allows the device of the present invention to determine whether or not the subject has induced a hibernation-like state.
- the device (C) of the present invention as shown in FIG. 12A, a computing unit 205 that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject;
- the subject entering a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) based at least on a reduction in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hypometabolic state (preferably hibernation-like state).
- a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) possibility determination unit 206 which determines that a low metabolic state (preferably hibernation-like state) may have been entered; and/or The subject has died or is likely to have died based at least on the subject's oxygen consumption, the subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiogram waveform, or the subject's blood pressure being zero.
- a mortality determination unit 207 that determines that there is; may further include The subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiogram waveform, or the subject's blood pressure data may be input to the apparatus of the present invention by an emergency monitor that acquires the subject's electrocardiogram and blood pressure.
- the exhaled carbon dioxide concentration of the subject may be input into the apparatus of the present invention by means of an exhaled carbon dioxide partial pressure monitor.
- the device (C) further inputs the determinations from the hypometabolic state (preferably hibernation-like state) possibility determination unit 206 and the death possibility determination unit 207 to determine whether the subject is hibernating or dead.
- a determination unit 240 may be provided to determine whether the state is the state.
- the determination unit 240 is connected to an output device 250 (eg, display or speaker), and the results can be output from the output device 250 . Therefore, the device (C) may further include an exhalation measuring section 201 for measuring the oxygen concentration in exhaled air and an inspiratory measuring section 202 for measuring the oxygen concentration in inspired air.
- the determination unit 240 may determine the target state according to, for example, the flowchart shown in FIG. 12C.
- the device (C) of the present invention records fluctuations in oxygen consumption over a period of time in a subject in a stable hypometabolism state (preferably hibernation-like state), and when the fluctuations fall outside the specified range, the output device 250 Notifications may be output from
- a stable hypometabolism state preferably hibernation-like state
- the output device 250 Notifications may be output from
- the prescribed range can be determined based on fluctuations in oxygen consumption over a period of time.
- the lower default value can be, for example, 0.7 or less, 0.6 or less, 0.5 or less, 0.4 or less, 0.3 or less, 0.2 or less, or 0.1 or less.
- the upper default value may also be, for example, greater than or equal to 1.3, greater than or equal to 1.4, greater than or equal to 1.5, greater than or equal to 1.6, greater than or equal to 1.7, greater than or equal to 1.8, greater than or equal to 1.9, greater than or equal to 2, greater than or equal to 2.1 , 2.2 or greater, 2.3 or greater, 2.4 or greater, 2.5 or greater, 2.6 or greater, 2.7 or greater, 2.8 or greater, 2.9 or greater, or 3 or greater.
- the lower and upper default values are respectively 0.7 and 1.3, 0.6 and 1.4, 0.5 and 1.5, 0.4 and 1.6, 0.3 and 1.7, 0.2 and 1.8, and 0.1 and 1.9.
- the device (C) records changes in oxygen consumption over a period of time in a subject in a stable hypometabolism state (preferably hibernation-like state), and based on the changes in oxygen consumption over that period of time (e.g. , the upper limit value and the lower limit value of the oxygen consumption in the certain period, or the average value) is set, and the determination unit 241 that determines whether the oxygen consumption is within or outside the specified range.
- the upper limit of the defined range can be determined based on the upper limit of variation in oxygen consumption during the certain period of time.
- the upper limit of the prescribed range can be set by a first percentage higher than the upper limit of fluctuation in oxygen consumption during the certain period of time, and the first percentage is 5% or more, 10% or more, 15%. 20% or more, 25% or more, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% or more, 80% or more, 90% or more, or 100% or more.
- the lower limit of the prescribed range can be determined based on the lower limit of variation in oxygen consumption during the fixed period.
- the lower limit of the defined range can be set by a second percentage lower than the lower limit of fluctuation in oxygen consumption during the predetermined period, and the second percentage is 5% or more, 10% or more, 15% or more, and 15% or more.
- the oxygen consumption exceeds the upper limit of the specified range, it means that the subject may be waking up from a controlled hypometabolic state, if the oxygen consumption falls below the lower limit of the specified range.
- the determination result of whether the oxygen consumption is within or out of the specified range in the determination unit 241 is output to the output device 250 .
- the determination unit 241 may determine the target state according to, for example, the flowchart shown in FIG. 12D.
- the determination result of the determination unit 240 and the determination result of the determination unit 241 may be displayed on the output device 250 at the same time.
- the change in oxygen consumption of the hypometabolic subject is within the range of the change in oxygen consumption during the above-mentioned fixed period of time within ⁇ 20%, within ⁇ 15%, within ⁇ 10%, or within ⁇ 5%.
- the subject can be assessed as being in a stable hypometabolic state.
- the device (C) comprises A program for calculating the oxygen consumption of a target based on the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; The subject entering a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) based at least on a reduction in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hypometabolic state (preferably hibernation-like state).
- the subject has died or is likely to have died based at least on the subject's oxygen consumption, the subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiographic waveform, or the subject's blood pressure being zero.
- It has an arithmetic circuit 260 (eg, a processor) capable of executing a program for determining the probability of death.
- the device (C) can transmit the determination result from the arithmetic circuit to the output device 250, and the output device 250 can output the result.
- the output device 250 can output the result.
- the arithmetic circuit 260 of the device (C) measures the fluctuations in oxygen consumption over a period of time in a subject in a stable hypometabolism state (preferably hibernation-like state).
- a further program may be run to record, determine the prescribed range, and then determine if the oxygen consumption is within or outside the prescribed range.
- the arithmetic circuit 260 of the device (C) can output from the output device 250 the judgment result of the program for judging whether the oxygen consumption is within or outside the specified range.
- the output result is, for example, displayed on a display, output as a sound (eg, warning sound) from a speaker, or displayed on a display and output as a sound (eg, warning sound) from a speaker.
- These programs can be executed by one or more arithmetic circuits.
- the device (C) comprises One or more processors, a memory, and one or more programs, wherein the one or more programs are stored in the memory and configured to be executable by the one or more processors, and the one or more programs are A program for calculating the oxygen consumption of a target based on the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; The subject entering a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) based at least on a reduction in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hypometabolic state (preferably hibernation-like state).
- a hypometabolic state preferably hibernation-like state
- the subject has died or is likely to have died based at least on the subject's oxygen consumption, the subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiographic waveform, or the subject's blood pressure being zero.
- It can be a device that includes a program that determines the likelihood of death.
- (C′) The device of the present invention, as shown in FIG. 12B, a computing unit 205 that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; A subject has entered a hibernation-like state or has entered a hibernation-like state based at least on a reduction in both oxygen consumption and the theoretical setpoint temperature compared to the subject's oxygen consumption and theoretical setpoint temperature in a non-hibernation-like state.
- a hibernation potential determiner 206 that determines that a state may have been entered; and/or Determining that the subject has died or may have died based at least on the oxygen consumption, the exhaled carbon dioxide concentration of the subject, the electrocardiogram waveform of the subject, or the subject's blood pressure being zero. and a mortality determination unit 207; may further include
- the device (C) may further include a calculator 220 for calculating the theoretical set temperature.
- the theoretical setpoint temperature of body temperature (T R ) is a change in core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) while varying (eg, decreasing) the outside temperature (or subject's ambient temperature) (T A ).
- the device (C) may further include a core thermometer 210 and a body temperature storage unit 210a for storing body temperature measured by the thermometer.
- the calculation unit 220 that calculates the theoretical set temperature is the core body temperature ( An estimate of T B ) can be calculated as the theoretical set temperature of interest.
- the relationship between core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) is determined by curve fitting a fitted curve, which in some embodiments may be linear.
- the device (C) may further include a calculator 230 that calculates the heat generation feedback gain (H).
- the apparatus (C) further includes a determination unit 240 that inputs the determinations from the hibernation possibility determination unit 206 and the death possibility determination unit 207 and determines whether the target is in a hibernation state or a dead state. may be provided.
- the determination unit 240 is connected to the output device 250 and the result can be output from the output device 250 . Therefore, in one aspect, the device (C) includes a core thermometer and a body temperature storage unit that stores the body temperature measured by the thermometer, a calculation unit that calculates the theoretical set temperature, and a feedback gain (H) for heat generation. may further include a calculation unit for calculating
- the device (C) may further include an expiration measurement unit 201 for measuring the oxygen concentration in expiration and an inspiration measurement unit 202 for measuring the oxygen concentration in inspiration.
- the device of the present invention will be specifically described below.
- the device of the present invention has the configuration (A1) above.
- the device of the present invention thereby induces a hibernation-like state in a subject by electrically stimulating QRFP-producing neurons in the brain of a living subject.
- a first embodiment is described with reference to FIGS. 5 and 6.
- FIG. 5 a first embodiment is described with reference to FIGS. 5 and 6.
- the device 1 of the present invention comprises: a control unit 10 that transmits a control signal for controlling voltage generation; a voltage generator 20 that receives a control signal from the controller and generates a voltage; a stimulation probe electrically connected proximally to said voltage generator and having an electrical stimulation electrode distally, said voltage generator having a length sufficient to access QRFP-producing neurons from the brain surface; and a stimulation probe 30 for generating electrical stimulation at a distal electrical stimulation electrode 40 with voltage from the body.
- the control section 10 transmits a control signal for controlling voltage generation.
- the control unit 10 may include control elements (microprocessor and power supply or battery).
- the control signals can control one or more voltage generations with one control signal. Alternatively, this control signal can be sent multiple times to control multiple voltage generations.
- the control signal can apply a first-order voltage stimulus, but may control voltage generation, for example, to apply multiple stimuli until a hibernation-like state is induced in the subject ⁇ however, hibernation A stimulus may or may not be added after induction of the like state ⁇ .
- the voltage generating section 20 is electrically connected to the control section 10 by the wiring 15, and can receive a control signal from the control section 10 and generate a voltage.
- the voltage can be, for example, a voltage between 0 and 5 volts (V), and can vary, for example, in 0.1 volt increments.
- the voltage can be pulsed, for example, with a pulse width of, for example, tens of microseconds, and a stimulation frequency of, for example, tens to hundreds of pps.
- the voltage may be adjusted, for example, starting at 1 volt and increasing until an effect is observed.
- the control unit 10 and the voltage generation unit 20 are connected by the wiring 15
- wireless communication may be enabled between the control signal transmitter 11 included in the controller 10 and the control signal receiver 21 included in the voltage generator.
- the voltage generator 20 can have a battery 20a.
- Battery 20a may be chargeable in a contactless manner. If the battery 20a can be charged in a non-contact manner, the battery 20a can be charged from outside the body even if it exists inside the body.
- the voltage generator 20 transmits the voltage generated by the voltage generator 20 to the stimulation probe 30 and the stimulation electrode 40 at the tip through the extension cable 25 .
- the distal (ie, tip) of the stimulation probe 30 has a stimulation electrode 40 that can apply a voltage to brain tissue.
- the stimulation probe 30 can be inserted into the brain by stereotactic neurosurgery in order to accurately reach the QRFP-producing neurons with the stimulation electrode 40 .
- the head is fixed in a measurement frame, and electrodes are inserted into positions determined by CT scan or MRI with an accuracy of 1 mm or less.
- the stimulation probe 30 is made of a hard material (for example, a hard material such as tungsten) to the extent that it does not bend or stretch when puncturing deep into the brain.
- the stimulation probe 30 may have a diameter of, but not limited to, approximately 1 ⁇ m to 1 mm, or approximately 1 mm to 2.5 mm.
- Stimulation probe 30 has one or more (eg, two, three, or four) stimulation electrodes 40 distally.
- the stimulation electrode 40 can have a length of about 1-5 mm in the long axis direction of the stimulation probe 30 .
- the stimulation electrodes 40 can be arranged at intervals of about 1 mm to 1.5 mm, although not particularly limited.
- Each of the stimulation electrodes 40 may be collectively controlled by a single control signal, or preferably each may be separately controlled by individual control signals. By separately controlling each by an individual control signal, it is possible to selectively generate a voltage to the optimum electrode in relation to the insertion position of the electrode to stimulate the brain.
- the device 1 of the present invention induces a hibernation-like state in the subject, and does not need to be portable.
- Portable here means moving with the object relative to the footing where the object is located (eg, the ground, or the floor of the vehicle if in a vehicle).
- the device of the invention can be fixed in place. Since the device of the invention can be connected to a power source, it can, for example, have no batteries or rechargeable batteries.
- the device 1 of the present invention induces a hibernation-like state in a subject with a disease, and does not need to be portable, but it is portable from the viewpoint of treating the disease on the spot when the disease is an acute disease. preferable. Since the device of the present invention can be connected to a power source, for example, it may not have a battery or a rechargeable battery. or a rechargeable battery.
- the device 100 of the invention comprises a control unit 110 that transmits a control signal that controls the release of the QRFP-producing neuron-stimulating compound; a reservoir 125 of said compound; a compound delivery unit 120 that receives a control signal from the control unit and delivers the compound from a compound storage unit 125; a guide 130 comprising a compound outlet 140 and a channel for the compound to the outlet 140 and delivering the compound to QRFP-producing neurons; have
- the control section 110 is electrically connected to the compound delivery section 120 through the wiring 115 .
- Compound delivery unit 120 receives a control signal from control unit 110, and in response to the control signal, releases the compound accumulated in storage unit 125 from storage unit 125 through channel 126, channel 121, and guide 130 to the compound outlet. Released from 140 into the brain.
- the compound may be in the form of a solution dissolved in a solvent, and may be delivered to the compound outlet 140 by the liquid delivery mechanism of the compound delivery section 120 .
- the compound storage unit 125 may have a compound introduction port 125a for introducing a compound from the outside. Compound inlet 125a can supply compound to the compound reservoir.
- Compound reservoir 125 may be exposed to the outside of the body. However, when compound reservoir 125 is exposed to the outside of the body, compound reservoir 125 is maintained under sterile conditions.
- the control unit 110 transmits a control signal to the compound delivery unit 120 so that, for example, 1 ⁇ L to 100 ⁇ L of liquid is delivered per compound delivery.
- the guide 130 can be inserted into the brain by stereotactic neurosurgery to allow the compound outlet 140 to reach the QRFP-producing neurons accurately.
- the head is fixed in a measurement frame, and electrodes are inserted into positions determined by CT scan or MRI with an accuracy of 1 mm or less.
- the guide 130 is made of a hard material (for example, a hard material such as tungsten) that does not bend or stretch when the guide is punctured into the deep part of the brain.
- Stimulation probe 30 may, for example, have a diameter on the order of 1 mm to 2.5 mm.
- the device 100 of the present invention induces a hibernation-like state in the subject and does not need to be portable.
- Portable here means moving with the object relative to the footing where the object is located (eg, the ground, or the floor of the vehicle if in a vehicle).
- the device of the present invention can be fixed to the installation site (eg, the bed on which the subject lies or the floor on which the bed is arranged). Since the device of the invention can be connected to a power source, it can, for example, have no batteries or rechargeable batteries.
- the device 100 of the present invention induces a hibernation-like state in a subject with a disease and does not need to be portable, but it can be portable from the point of view of treating the disease on the spot if the disease is an acute disease. preferable. Since the device of the present invention can be connected to a power source, for example, it may not have a battery or a rechargeable battery. or a rechargeable battery.
- the device 1 of the first embodiment and the device 100 of the second embodiment are Configuration of (B): an outside temperature gauge 50; a thermometer 60; a calculation unit 70 for calculating the oxygen consumption of the target from the difference in oxygen concentration between the exhaled air and the inhaled air from the subject; It may further have a recording unit 80 that records the measured outside temperature and at least one numerical value selected from the group consisting of body temperature and oxygen consumption ⁇ here, the thermometer preferably measures the subject's core body temperature It may be a core thermometer that measures the . ⁇ .
- the above (B) may be included in the control unit 10 or the control unit 110, for example, as shown in FIG.
- each of them is connected to the voltage generator 20 by wire or wirelessly, as described in the first embodiment and the second embodiment ⁇ .
- the ambient temperature or ambient temperature of the subject
- T A the ambient temperature
- T B the subject's core body temperature
- the device of the present invention can measure the target's body temperature (preferably, the core temperature) It becomes possible to monitor the relationship with temperature.
- the device 1 of the first embodiment and the device 100 of the second embodiment have the configuration (C), a computing unit 205 that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject;
- the subject entering a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) based at least on a reduction in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hypometabolic state (preferably hibernation-like state).
- a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) possibility determination unit 206 which determines that a low metabolic state (preferably hibernation-like state) may have been entered; and/or Determining that the subject has died or may have died based at least on oxygen consumption, the subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiographic waveform, or the subject's blood pressure being zero. and a mortality determination unit 207; may further include The device having the above configuration (C) can be used, for example, to determine whether the subject is in a hibernation-like state or possibly died when the subject has a serious disease.
- the device (C) further inputs the respective determinations from the hypometabolism state (preferably hibernation-like state) possibility determination unit 206 and the death possibility determination unit 207 to determine whether the subject is hibernating or dead.
- a determination unit 240 may be provided to determine whether the state is the state.
- the determination unit 240 is connected to the output device 250 and the result can be output from the output device 250 . Therefore, the device (C) may further include an expiration measuring section 201 for measuring the oxygen concentration in expiration and an inspiration measurement section 202 for measuring the oxygen concentration in inspiration.
- the device 1 of the first embodiment and the device 100 of the second embodiment have the configuration (C) in addition to the configuration (B): a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; A subject has entered a hibernation-like state or has entered a hibernation-like state based at least on a reduction in both oxygen consumption and the theoretical setpoint temperature as compared to the subject's oxygen consumption and theoretical setpoint temperature in a non-hibernation-like state.
- a hibernation potential determiner that determines that a state may have been entered; and/or Determining that the subject has died or may have died based at least on oxygen consumption, the subject's exhaled carbon dioxide concentration, the subject's electrocardiographic waveform, or the subject's blood pressure being zero.
- a probability-of-mortality determination unit may further include
- the device having the above configuration (C) can be used, for example, to determine whether the subject is in a hibernation-like state or possibly died when the subject has a serious disease.
- the device having the above configuration (C) may further include a core thermometer and a body temperature storage unit that stores the body temperature measured by the thermometer.
- the apparatus having the configuration (C) above may further include a computing unit that calculates the theoretical set temperature.
- the apparatus having the configuration (C) above may further include a calculation unit that calculates a feedback gain (H) for heat generation.
- the device having the above configuration (C) includes a core thermometer, a body temperature storage unit that stores the body temperature measured by the thermometer, a calculation unit that calculates the theoretical set temperature, and a feedback gain (H) for heat generation. You may further have a calculating part which carries out.
- the hibernation potential determination component is the feedback gains in oxygen consumption, theoretical set temperature, and heat production compared to the feedback gains in oxygen consumption, theoretical set temperature, and heat production for a subject in a non-hibernation-like state. may be determined that the subject has entered a hibernation-like state, or may have entered a hibernation-like state, based at least on the fact that both are reduced.
- the device of the present invention can estimate the oxygen consumption (VO 2 ) by the subject by providing the breath gas analyzer 70 for measuring the oxygen concentration in the breath gas, and the oxygen consumption (VO 2 ) can be used to estimate the metabolic state of a subject.
- the theoretical setpoint temperature of body temperature (T R ) is the variation of core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) while changing (e.g., decreasing) the ambient temperature (or subject's ambient temperature) (T A ).
- a relationship is determined and determined as an estimate of core body temperature (T B ) when oxygen consumption (VO 2 ) is zero.
- the relationship between core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) can be determined, for example, by linear regression.
- the device of the present invention may further include a recording unit 80 that records the measured outside air temperature and at least one numerical value selected from the group consisting of body temperature (preferably core body temperature) and oxygen concentration.
- the apparatus of the present invention may further comprise an oxygen consumption determiner 90 for determining the subject's oxygen consumption from the oxygen concentration in the exhaled gas.
- the apparatus of the present invention may further comprise an estimator 91 for estimating the theoretical set temperature of body temperature (T R ) and the feedback gain of heat production (H).
- the device of the present invention determines whether a subject has induced a hibernation-like state based at least on the theoretical setpoint temperature of body temperature (T R ) and the feedback gain of heat production (H), and/or the oxygen consumption is zero.
- a determination unit 92 may further comprise a determination unit 92 for determining whether the subject has died based at least on the fact that The hibernation probability determination part and mortality probability determination part described above may be the same, but may be separately provided in the device as separate bodies.
- the device of the invention may further comprise an output 93 of information as to whether a hibernation-like state has been induced and/or whether the subject has died. Examples of the output unit 93 include a display that displays the information and/or a printer that prints the information.
- Information on whether or not the hibernation-like state has been induced includes information that the hibernation-like state has been induced and information that the hibernation-like state has not been induced, and can be output by the output unit 93 .
- the information about whether or not the person has died includes information that the person has died and information that the person has not died, and can be output by the output unit 93 .
- a device for determining hibernation comprising: In a mammal, such as a human, to which the test compound was administered to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe), pre- and post-administration, respectively a recorder for recording oxygen consumption (VO 2 ) and core body temperature (T B ) recorded under at least two different ambient temperature (T A ) conditions, respectively, at Before and after administration, the correlation between oxygen consumption and core body temperature was estimated. and whether the estimate of core body temperature, assuming zero oxygen consumption, is reduced post-dosing compared to pre-dosing.
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- pre- and post-administration respectively a recorder for recording oxygen consumption (VO 2 ) and core body temperature (T B ) recorded under at least two different ambient temperature (T A ) conditions, respectively, at Before
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- the recorder records oxygen consumption (VO 2 ) and core body temperature (T B ) recorded under at least two different ambient ambient temperature (T A ) conditions.
- the recording unit associates and stores one VO 2 and one TB with one TA .
- the recorded oxygen consumption (VO 2 ) and core body temperature (T B ) are read from the recording unit and sent to the computing unit, where the correlation between oxygen consumption and core body temperature is estimated. .
- the correlation is linear.
- the computing unit determines whether the degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature is decreased is decreased after administration compared to before administration, and Determine whether the estimate of core body temperature, assuming zero consumption, is lower after dosing compared to before dosing.
- the determination unit determines that the degree of decrease in oxygen consumption when the core body temperature decreases is lower after administration than before administration, and that oxygen consumption is 0. It can be determined that the mammal has hibernated when the hypothetical estimate of core body temperature is reduced after administration compared to before administration. The determination unit determines whether the degree of decrease in oxygen consumption when the core body temperature decreases does not decrease after administration compared to before administration, or the core body temperature when it is assumed that the oxygen consumption is 0. If the estimated value does not decrease after administration compared to before administration, it can be determined that the mammal has not hibernated (or it can be determined that it has not hibernated).
- the device for determining hibernation in the third embodiment of the present invention may further include a deep body thermometer and an exhaled gas analyzer that measures the oxygen concentration in exhaled gas.
- the device according to the third embodiment may further include an output unit that receives information on determination regarding hibernation from the determination unit and outputs the information.
- the information output unit can be a user interface such as a display, can be a recording device to a non-volatile memory such as a USB memory and an SD card, can be an information transmission device for wireless communication to the outside, or can be a printer It can be a printing device for media such as paper.
- the device of the first embodiment or the second embodiment may further include a device for determining hibernation in the third embodiment.
- a method of inducing a hibernation-like state in a subject is provided.
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- it comprises providing an excitatory stimulus to pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons in a subject.
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- the present invention also provides a method of reducing the feedback gain of heat production in a subject, comprising providing an excitatory stimulus to pyroglutaminated RF-amidopeptide (QRFP)-producing neurons.
- Also in accordance with the present invention is a method of reducing the theoretical set point of body temperature and the feedback gain of heat production in a subject, comprising providing an excitatory stimulus to pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons.
- a method is provided.
- the present invention also provides a method of inducing a hibernation-like state in a subject, comprising providing an excitatory stimulus to pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons using a drug or the like.
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons of the subject can be stimulated using, for example, the device of the present invention.
- the QRFP-producing neurons can be stimulated by applying a voltage to the QRFP-producing neurons.
- a receptor e.g., hM3Dq
- QRFP pyroglutaminated RF amide peptide
- a ligand for the receptor e.g., clozapine QRFP-producing neurons can be stimulated by administering -N-oxide (CNO).
- hM3Dq can be expressed in QRFP-producing neurons by infecting the subject's QRFP-producing neurons with a virus (e.g., adenovirus, adeno-associated virus, etc.) having a gene encoding hM3Dq operably linked to the QRFP promoter.
- CNO can be administered to the brain, for example, by the device of the invention.
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons in a subject can also be stimulated using an activator of the neurons.
- Activators can be screened using QRFP neurons or searched using cultured cells in which receptors expressed in QRFP neurons are forced to express.
- Neuronal activators may be administered locally to QRFP-producing neurons using an applicator.
- QRFP-producing neuron-specific activators may be administered by systemic administration, such as intracerebroventricular, intrathecal, and intravenous administration.
- the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- the method of the invention may further comprise reducing the ambient temperature. This can reduce the TB of the target. It is thought that a decrease in TB in a hibernation-like state leads to a hypometabolism state, which makes it possible to maintain life by reducing energy consumption.
- the method of the invention may further comprise measuring the core body temperature (T B ) of the subject.
- the method of the invention may further comprise measuring oxygen concentration in the subject's exhaled breath.
- Methods of the invention may further comprise estimating the subject's oxygen consumption (VO 2 ).
- a subject's oxygen consumption (VO 2 ) can be estimated, for example, from the difference in inspired and expired oxygen concentrations.
- the method of the present invention is a method of administering a test compound in a mammal, such as a human, to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), the medial preoptic area (MPA) and the periventricular nucleus (Pe).
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- the method can be such that a decrease after administration compared to before indicates that the mammal has hibernated.
- the mammal has the disease.
- the mammal has a chronic disease. In one preferred embodiment, the mammal has an acute disease. In one preferred aspect, the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- the method of the invention may further comprise estimating a theoretical set point (T R ) for the subject's body temperature.
- the theoretical setpoint temperature (T R ) is the relationship between core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) while varying (e.g., decreasing) the ambient temperature (or subject's ambient temperature) (T A ). and taken as an estimate of core body temperature (T B ) when oxygen consumption (VO 2 ) is zero.
- the relationship between core body temperature (T B ) and oxygen consumption (VO 2 ) can be determined, for example, by linear regression.
- the method of the present invention may further comprise estimating the subject's heat production feedback gain (H).
- Methods of the invention may further comprise determining whether the subject is in a hibernation-like state. Whether or not a subject is in a hibernation-like state can be determined by whether both the theoretical setpoint temperature of body temperature (T R ) and the feedback gain of heat production (H) decrease when the ambient temperature is decreased. can. A subject can be determined to be in a hibernation-like state if both the theoretical setpoint temperature of body temperature (T R ) and the feedback gain of heat production (H) decrease when the ambient temperature is decreased. A hibernation-like state can be beneficial in improving life-preserving functions by slowing down the body's metabolism.
- the subject has a disease. In one preferred aspect, the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- pyroglutaminated RF amide peptide (QRFP)-producing neurons present in the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe).
- a method for screening a substance that provides an excitatory stimulus comprising: contacting the isolated QRFP-producing neurons with a test compound; measuring the excitation of the QRFP-producing neurons; selecting a test compound that provides an excitatory stimulus to the QRFP-producing neurons;
- a method is provided, comprising: The method can be an in vitro method. Screening can be performed on a subject. In one preferred aspect, the subject has a disease.
- the subject has a chronic disease.
- the subject has an acute illness.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- the subject is a disease model.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- the excitation of QRFP-producing neurons can be measured electrically. Electrical measurement of neuronal excitation can be performed, for example, by an electrophysiological technique using a conventional method, using membrane potential depolarization as an index. Membrane potential can be measured, for example, by a nerve recording method such as a microelectrode method or a patch clamp method, or may be measured using a fluorescent probe for measuring membrane potential.
- the fluorescent probe for membrane potential measurement is not particularly limited, but 4-(4-(didecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide (4-Di-10-ASP), bis-(1,3-dibutylbarbi trimethine oxonol turic acid (DiSBAC2(3)), 3,3′-dipropylthiadicarbocyanine iodide (DiSC3(5)), 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′ , 3,3′,-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide (JC-1) and rhodamine 123. Neuronal excitation can also be measured chemically.
- Intracellular calcium concentration is increased.
- neuronal excitation can be measured using a calcium concentration indicator.
- a calcium concentration indicator 1-[6-amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl )-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester (Fura 2-AM), etc.
- Probes are known and can be used in the present invention.
- QRFP-producing neurons are neurons present in the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA), and periventricular nucleus (Pe), and can be regarded as established neurons. can.
- AVPe anterior ventral periventricular nucleus
- MPA medial preoptic area
- Pe periventricular nucleus
- As the established neuron strain a strain obtained by selecting a strain in which neurons produce QRFP can be used. Whether a neuron produces QRFP can be confirmed by a conventional method using an antibody against QRFP.
- the method for determining hibernation of the present invention analyzes the effect of a drug that induces, is expected to induce, or has the potential to induce hibernation in a subject. If the subject enters a hibernation-like state, it can be maintained or released. If the subject does not enter hibernation, further treatment can be given or treatment can be discontinued.
- the subject has a disease. In one preferred aspect, the subject has a chronic disease. In one preferred aspect, the subject has an acute illness. In one preferred aspect, the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- the hibernation determination method of the present invention can be a computational scientific method.
- the hibernation determination method of the present invention may not include medical procedures.
- the hibernation determination method of the present invention can, for example, make determinations based on input of measured values without including the measurement itself.
- the determination result can be basic information for diagnosis by medical professionals including doctors.
- the method for determining hibernation of the present invention can be used to distinguish between hibernation and death in one aspect. If the subject becomes deceased, medical personnel can expedite resuscitation and exit from a hibernation-like state.
- the method for determining hibernation of the present invention comprises: A method for determining whether or not a test compound induces hibernation in a mammal such as a human or the possibility thereof (examination, prediction, estimation, computer scientific determination), In a mammal, such as a human, to which the test compound was administered to the regions of the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and periventricular nucleus (Pe), pre- and post-administration, respectively providing (or recording) recorded oxygen consumption and core body temperature under at least two different ambient temperature conditions, respectively, in estimating the correlation between oxygen consumption and core body temperature before and after administration, respectively; Determining from the estimated correlation whether the degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature is decreased is decreased after administration compared to before administration, and when oxygen consumption is 0 determining whether the estimate of core body temperature, assuming that the The degree of decrease in oxygen consumption when core body temperature decreases is lower after administration than before administration, and the estimated value of core body temperature when
- a mammal can be a non-human mammal.
- the mammal has the disease.
- the mammal has a chronic disease.
- the mammal has an acute disease.
- the disease, chronic disease or acute disease is a severe disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- Oxygen consumption and core body temperature can be determined by a breath gas analyzer and core thermometer, respectively.
- breath gas analyzer and core thermometer those provided in the device of the first embodiment or the second embodiment can be used.
- a method of treating a subject having a disease or a disease comprising inducing a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state) in a subject having the disease.
- a hypometabolic state can halt or slow the progression of symptoms of any disease.
- a hypometabolic state can be induced, for example, by hypometabolic therapy.
- Hibernation can also render a subject hypothermic and hypometabolic, while at the same time halting or slowing the progression of any disease symptoms. This may slow the progression of chronic diseases or allow time for further treatment in acute diseases, eg, time for medical transport.
- Hibernation can be induced in a subject by exciting the QRFP nerve.
- hibernation can be induced in a subject by the methods described above.
- hibernation can be induced using the device.
- a disease can be, for example, an acute disease.
- Acute diseases can be, for example, one or more selected from the group consisting of sepsis, acute renal failure, acute pneumonia, myocardial infarction, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, and hemorrhagic shock.
- the acute disease is preferably a disease in which blood circulation is maintained.
- a disease can be, for example, a chronic disease or condition.
- Chronic diseases can be one or more selected from the group consisting of tumors, autoimmune diseases, and aging.
- a compound or candidate thereof that induces hibernation can be obtained by administering the compound to a subject and then testing whether it induces hibernation in the subject. Therefore, according to the present invention, there is provided a method for selecting a compound or candidate for inducing hibernation, comprising administering the compound to a subject and then testing whether or not it induces hibernation in the subject. and selecting a compound that induces hibernation.
- Also according to the invention is a method of testing a compound or composition comprising such compound (e.g., pharmaceutical formulations, pharmaceutical compositions, etc.), comprising administering said compound or said composition to a subject; Methods are provided that include determining whether to induce hibernation in a subject and obtaining a compound or composition that induces hibernation.
- the resulting compound can then be formulated as a pharmaceutical composition.
- the resulting compound is contained in a composition formulated as a pharmaceutical formulation.
- the subject can be a subject with a disease, particularly a subject with a severe disease, such as a patient with a severe acute or chronic disease. Examples of diseases can be as described above.
- the present invention provides pharmaceutical compositions comprising such selected compounds. Pharmaceutical compositions can be used to induce hibernation, which is used in the treatment of disease.
- a device for the treatment of diseases caused by hibernation.
- the device for the treatment of diseases due to hibernation can be the device of the first, second or third embodiment above.
- the device for the treatment of diseases due to hibernation is such that a subject has died or may have died based at least on zero oxygen consumption (e.g., when the subject's oxygen consumption has disappeared). It may further include a determination unit that estimates or determines that there is a possibility.
- a device for the treatment of diseases caused by hibernation is installed in a motor vehicle.
- a motor vehicle equipped with a device for the treatment of diseases caused by hibernation The automobile may be an ambulance transport vehicle (eg, an ambulance).
- the automobile can be equipped with a bed for laying the patient.
- the automobile may be capable of carrying a stretcher.
- the automobile may be equipped with fixtures on the bottom of the interior to secure the stretcher.
- the fixture can be an anti-vibration mount.
- the stretcher may be a folding leg stretcher.
- the target's ambient temperature can be adjusted to the same degree as the theoretical set temperature (eg, ⁇ 5° C., ⁇ 4° C., ⁇ 2° C., or ⁇ 1° C. of the theoretical set temperature), such as by air conditioning.
- the device for the treatment of diseases due to hibernation can be installed in medical or non-medical institutions, preferably medical institutions. Among medical institutions, it can be preferably installed in high care units (HCU) and intensive care units (ICU).
- the target's ambient temperature can be adjusted to the same degree as the theoretical set temperature (eg, ⁇ 5° C., ⁇ 4° C., ⁇ 2° C., or ⁇ 1° C. of the theoretical set temperature), such as by air conditioning.
- hypometabolic states preferably hibernation-like states
- Monitoring of oxygen consumption can be performed, for example, by measuring the oxygen concentration contained in each of inspired air and expired air, and comparing the measured values of expired air and the measured values of inspired air.
- oxygen consumption is lower than before the hypometabolic state (preferably hibernation-like state) and the difference between measured exhaled and inspiratory oxygen concentrations is smaller, but patients The difference between exhaled and inspiratory oxygen concentration measurements disappears when a person dies.
- a device that allows for hypometabolic (preferably hibernation-like) and viability monitoring of a patient based on oxygen consumption.
- hypometabolic preferably hibernation-like
- viability monitoring of a patient based on oxygen consumption when entering a low metabolic state (preferably hibernation-like state) as described above, the amount of oxygen consumption is reduced compared to before the low metabolic state (preferably hibernation-like state), and the exhaled and inspiratory oxygen concentrations are reduced. The difference between the measurements becomes smaller, and when the patient dies, the difference between the exhaled and inspiratory oxygen concentration measurements disappears.
- a device for monitoring a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) in a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) in a diseased subject comprising: a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; the subject entering a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) based at least on a decrease in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hypometabolic state (preferably hibernation-like state); a hypometabolic state (preferably hibernation-like state) possibility estimating unit that presumes that it may have entered a low metabolic state (preferably hibernation-like state); and a likelihood-of-mortality estimator for estimating that a subject has died or may have died based at least on zero oxygen consumption.
- a device for monitoring hibernation-like state in a hibernation-like subject with a disease comprising: a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; A determination that a subject has entered a hibernation-like state or may have entered a hibernation-like state based at least on a decrease in oxygen consumption compared to the subject's oxygen consumption prior to entering the hibernation-like state.
- a device for monitoring hibernation-like state in a hibernation-like subject with a disease comprising: a calculation unit that calculates the oxygen consumption of the target from the oxygen concentration difference between the exhaled air and the inhaled air from the subject; A subject has entered a hibernation-like state or has entered a hibernation-like state based at least on a reduction in both oxygen consumption and the theoretical setpoint temperature compared to the subject's oxygen consumption and theoretical setpoint temperature in a non-hibernation-like state.
- a hibernation probability estimation unit for estimating that the state may have been entered; and a likelihood-of-mortality estimator for estimating that a subject has died or may have died based at least on zero oxygen consumption.
- a device for monitoring a hypometabolic state preferably a hibernation-like state in a subject having a disease and a hypometabolism state (preferably a hibernation-like state), wherein an expiration measurement unit that measures the breath oxygen concentration over time; a unit (e.g., processor), a memory (e.g., volatile or non-volatile memory) that stores oxygen consumption calculated over time, and at least based on changes in oxygen consumption over time (preferably A state determiner (e.g., A processor is provided.
- a unit e.g., processor
- a memory e.g., volatile or non-volatile memory
- a device for monitoring a hibernation-like state in a subject with a disease who is in a hibernation-like state comprising: an intake measuring unit that measures over time; a computing unit (e.g., a processor) that computes the oxygen consumption over time from the inspiratory oxygen concentration and the exhaled oxygen concentration obtained at the same time; A memory (e.g., volatile or non-volatile memory) that stores the oxygen consumption and based at least on changes in oxygen consumption over time (preferably also based on a decrease in the theoretical set temperature of the subject) and a state determiner (eg, processor) that determines that a subject may have hibernated or died.
- an intake measuring unit measures over time
- a computing unit e.g., a processor
- a memory e.g., volatile or non-volatile memory
- stores the oxygen consumption and based at least on changes in oxygen consumption over time preferably also based on a decrease in the theoretical set temperature of the subject
- a state determiner e
- the oxygen consumption monitoring device can further have an output (eg, a display) that outputs the oxygen consumption or its change over time.
- the calculation unit calculates a graph including changes in oxygen consumption over time, and the output unit outputs the graph.
- the graph may, for example, have the oxygen consumption on the vertical axis and the time on the horizontal axis.
- the output unit may output a graph showing changes in oxygen consumption over time and the likelihood of hibernation and/or mortality of the subject.
- the output unit is, for example, a display, which can display a graph showing changes in oxygen consumption over time and the likelihood of hibernation and/or death of the subject. Physicians and other medical personnel can identify the subject and administer first aid, treatment, or resuscitation if necessary in the event of a potentially fatal condition.
- a device for monitoring a patient's condition by measuring oxygen consumption (the hibernation monitoring device of the present invention) is incorporated into the device for determining hibernation of the third embodiment of the present invention and is connected to can be operated in conjunction with or in conjunction with each other.
- a hibernation monitoring device of the present invention incorporated into, or coupled to or associated with, a device for determining hibernation of the third embodiment of the present invention.
- the oxygen consumption monitoring device further comprises a receiver for receiving the subject's theoretical set temperature obtained from the device for determining hibernation of the third embodiment of the present invention.
- a state determination unit eg, processor
- a device that enables low metabolic state (preferably hibernation-like state) and viability monitoring of a patient based on oxygen consumption a program capable of causing a processor to perform such monitoring and a program that allows the processor to perform such monitoring. and methods and programs for controlling the apparatus are provided.
- a method of controlling a device that enables hypometabolic state (preferably hibernation-like state) and viability monitoring of a patient based on oxygen consumption is to acquire the oxygen concentration in exhaled breath of the subject (e.g., in an exhaled breath measurement unit).
- This aspect may further include outputting oxygen consumption or its change over time. Whether the oxygen consumption is lower than normal should be used by medical professionals including physicians as information for determining whether the subject is in a hypometabolic state (preferably hibernation-like state). can be done.
- the likelihood that the subject is in a hypometabolic state (preferably a hibernation-like state) and/or the likelihood that the subject has died is determined based on the estimated or determined oxygen consumption (e.g., state determination (eg, at a processor) and outputting the results (eg, by a display device, such as a display).
- Medical personnel including physicians, can use the output results as information for determining whether the subject is hibernating and/or whether the subject is dead.
- a program is provided for causing the device of the present invention to execute this method.
- a method of inducing a hypometabolic state in a mammal is provided.
- methods are provided for inducing a hypometabolic state in peripheral tissues in a diseased mammal.
- a method of inducing hypometabolic state in peripheral tissues in a mammal having a disease comprising inducing hypometabolic state in said mammal, thereby inducing hypometabolic state in peripheral tissues.
- a method is provided, comprising:
- the mammal can be non-human.
- a method of treating a mammal having a disease comprising inducing a hypometabolic state in said mammal.
- inducing a hypometabolic state in the mammal can reduce the rate of disease progression in the mammal.
- inducing a hypometabolic state in the mammal can prolong survival (or time to death) in the mammal.
- inducing a hypometabolic state in the mammal may reduce mortality in the mammal.
- a hypometabolic state can be induced by hypometabolic therapy.
- the hypometabolic state may be a hibernation-like state.
- a hibernation-like state can be induced by the method according to the invention.
- a hibernation-like state can be induced by stimulating QRFP neurons. Stimulation of QRFP neurons can be performed using the device of the present invention.
- Mammals with hypometabolism can be followed up.
- Follow-up can be performed by monitoring changes in oxygen consumption over time.
- treatment can be emergency or life-prolonging therapy.
- treatment may be performed while the animal is being transported to a medical facility (eg, a hospital) (eg, during an ambulance) or in the intensive care unit of a medical facility.
- a method of testing efficacy of treatment comprising: subjecting a mammal having the disease to the treatment; and determining whether the treatment slows the rate of disease progression, reduces mortality, and survival compared to a group of subjects not receiving the treatment. and determining which one of whether to extend the time period.
- the method comprises at least one selected from reducing the rate of disease progression, reducing mortality, and prolonging survival with the treatment compared to a group of subjects not receiving the treatment. It can further include determining that treatment is effective based on the above being true.
- a treatment can be, for example, a treatment that induces a hypometabolic state, preferably a hibernation-like state, in which case the treatment can be shown to be efficacious.
- mice All animal experiments were performed in accordance with animal experiment guidelines at the International Institute of Sleep Medicine (IIIS), University of Tsukuba, and RIKEN Biosystems Dynamics Research Center (BDR). NIH guidelines were followed as approval was obtained from the respective institutional animal care committees. Mice were fed and watered ad libitum, except for diapause induction experiments, and were maintained at a T A of 22° C., 50% relative humidity, and a 12 h light/12 h dark cycle. Mice weighing >34 g were found not to exhibit reproducible FIT, so heavy mice >34 g were excluded from diapause experiments.
- IIIS International Institute of Sleep Medicine
- BDR RIKEN Biosystems Dynamics Research Center
- Qrfp-iCre mice were generated by homologous recombination in C57BL/6N embryonic stem cells and transplantation in 8-cell stage embryos (ICR).
- a targeting vector was designed to replace the entire coding region of the prepro-Qrfp sequence in exon 2 of the Qrfp gene with the iCre and pgk-Neo cassettes so that the endogenous Qrfp promoter drives iCre expression.
- Chimeric mice were bred to C57BL/6J females (Jackson Labs).
- the pgk-Neo cassette was deleted by mating FLP66 mice that were backcrossed to C57BL/6J mice at least 10 times.
- F1 hybrids from mating heterozygotes with heterozygotes were made. These mice were backcrossed to C57BL/6J mice at least 8 times.
- Rosa26 dreaddm3 and Rosa26 dreaddm4 mice were generated by homologous recombination in C57BL/6N embryonic stem cells followed by the same procedure as in Qrfp-iCre mice above.
- Virus AAV was produced using a triple transfection, helper -free method as previously described33. The final purified virus was stored at -80°C.
- Recombinant AAV vector titers were determined by quantitative PCR.
- AAV 2/9 - mCherry 1.44 x 10 12 ; hsyn-DIO-GFP, 4 ⁇ 10 12 genome copies/ml.
- Recombinant rabies vectors have been generated by previously reported methods 22,34 .
- Qrfp-iCre mice were injected with AAV 10 -EF1 ⁇ -DIO-hM3Dq-mCherry at a rate of 0.1 ⁇ m/min using a Hamilton needle and hypothalamic (for MB injection, anteroposterior ( medial lateral (ML), ⁇ 0.25 mm; dorsoventral (DV), ⁇ 5.75 mm; 0.50 ⁇ l each site; LH injection; AP, ⁇ 1.00 mm; ⁇ 1.00 mm; DV, ⁇ 5.00 mm; 0.30 ⁇ l each site). The needle was held for 10 minutes after injection.
- hypothalamic for MB injection, anteroposterior ( medial lateral (ML), ⁇ 0.25 mm; dorsoventral (DV), ⁇ 5.75 mm; 0.50 ⁇ l each site; LH injection; AP, ⁇ 1.00 mm; ⁇ 1.00 mm; DV, ⁇ 5.00 mm; 0.30 ⁇ l each site.
- the needle
- AVPe (AP, 0.38 mm; ML, 0.25 mm; DV, ⁇ 5.50 mm from bregma) was unilaterally injected with AAV10-EF1 ⁇ -DIO-SSFO-EYFP. Then, on both sides above the AVPe (AP: 0.38 mm, ML: ⁇ 0.25 mm, DV: -5.20 mm) and on both sides of the DMH (AP: -1.70 mm, ML: ⁇ 0.25 mm, DV: ⁇ 4.75 mm) or on one side of RPa (AP: ⁇ 6.00 mm, ML: 0.00 mm, DV: ⁇ 5.50 mm) (Fig. 2j). After a recovery period of at least 2 weeks in individual cages post-injection, mice were subjected to infrared thermal imaging experiments. Behavioral data were included only when these viruses were specifically targeted to Q neurons and the fiber optic implants were precisely placed.
- mice were placed in experimental cages (25 ⁇ 15 ⁇ 10 cm) and an infrared thermal imaging camera (InfReC R500EX; NIPPON AVIONICS) placed 30 cm above the cage floor. monitored using One day before the start of the experiment, the dorsal hair was removed with a shear for clear detection of the surface temperature. Thermograms of DREADD and light generation experiments were collected at 0.5 Hz and 1 Hz, respectively, and analyzed with the InfReC Analyzer NS9500 professional software (NIPPON AVIONICS). The maximum temperature of one frame was used as the animal's TS (Fig. 1d).
- Each animal was housed in a temperature-controlled chamber (HC-100, Shin Factory or LP-400P-AR, Nihon Ika Kikai Seisakusho Co., Ltd.) to record core body temperature, oxygen consumption, EEG, ECG, and respiratory patterns.
- a telemetry temperature sensor (TA11TA-F10, DSI) was implanted into the abdominal cavity of animals under general inhalation anesthesia at least 7 days prior to recording.
- Animals' VO2 and carbon dioxide excretion rate ( VCO2) were recorded continuously with a respiratory gas analyzer (ARCO-2000 mass spectrometer, ARCO Systems). The respiratory index was calculated from the VCO2 /VO2 ratio.
- EEG and ECG were recorded by an implantable telemetry transmitter (F20-EET or HD-X02, DSI).
- F20-EET or HD-X02, DSI implantable telemetry transmitter
- AP wires of the telemetry transmitter
- cranial cortex AP, 1.00 mm; right, 1.50 mm from bregma or lambda
- AP cranial cortex
- ECG ECG was recorded. Allow at least 10 days to recover from surgery.
- the EEG/ECG data acquisition system consisted of a transmitter, an analog-to-digital converter, and a recording computer with software Ponemah Physiology Platform (version 6.30, DSI). The sampling rate was 500 Hz for both EEG and ECG and the data were converted to ASCII format for review. Heart rate was evaluated by visual observation of waveforms.
- Respiratory flow was recorded by a non-invasive respiratory flow recording system 35 .
- mice were placed in a metabolic chamber (TMC-1213-PMMA, Minamiderika Shokai) with an airflow of at least 0.3 L/min.
- the chamber was connected to a pressure sensor (PMD-8203-3G, Biotex) to detect the pressure difference between the outside and inside of the chamber.
- PMD-8203-3G a pressure sensor
- the analog signal output from the sensor was digitized at 250 Hz by an AD converter (NI-9205, National Instruments) and stored in a computer by data logging software developed by Biotex.
- FIT Induction Induction experiments of circadian dormancy were designed to record the animal's metabolism for at least 3 days. Animals were introduced into the chambers the day before the start of recording (day 0). Food and water were available ad libitum. TA was set as indicated on day 0 and kept constant throughout the experiment. The telemetry temperature sensor implanted in the mouse was turned on before entering the chamber. The standard experimental design was as follows. On day 2, ZT-0, food was removed to induce diurnal torpor. After 24 hours, on day 3, each animal was returned to food at ZT-0.
- the DREADD agonist CNO (clozapine N-oxide, Abcam, ab141704) was dissolved in saline at a dose of 100 ⁇ g/mL and frozen at -20°C. The CNO solution was thawed on site and mice were administered the solution intraperitoneally at a dose of 1 mg/kg.
- CHA N 6 -cyclohexyladenosine, Sigma-Aldrich, C9901), an adenosine A1 receptor agonist, was dissolved in saline at a concentration of 250 ⁇ g/mL and intraperitoneally administered to mice at a dose of 2.5 mg/kg.
- CM1860, Leica Using a cryostat (CM1860, Leica), cells were coronal sliced into 4 equal series every 50 ⁇ m, collected in a 6-well plate filled with ice-cold PBS, and washed 3 times with PBS at room temperature (RT). The following incubation steps were performed with gentle shaking on an orbital shaker unless otherwise noted. Brain slices were incubated in 1% Triton X-100 in PBS for 1 hour at room temperature. Sections were blocked with 10% Blocking One (NACALAI TESQUE) in 0.3% Triton X-100-treated PBS (blocking solution) for 1 hour at room temperature without shaking.
- NACALAI TESQUE Blocking One
- Sections were incubated overnight at 4°C in primary antibody diluted in blocking solution (diluent and type of each antibody listed below), then washed three times and incubated with secondary antibody overnight at 4°C. , PBS, then mounted and coverslipped with HardSet Antifade Mounting Medium containing DAPI (VECTASHIELD).
- the initial antibodies used in this study were rabbit anti-cFos (1:4000, ABE457, Millipore), goat anti-mCherry (1:15000, AB0040-200, SICGEN), rat anti-GFP (1:5000, 04404-84, NACALAI TESQUE), mouse anti-TH (1:1000, sc-25269, Santa Cruz Biotechnology), mouse anti-orexin A (1:200, sc-80263, Santa Cruz Biotechnology), and rabbit anti-MCH (1:2000, M8440, SIGMA). Secondary antibodies are as follows.
- Alexa Fluor 488 donkey anti-rat, 488 donkey anti-rabbit, 594 donkey anti-rabbit, 594 donkey anti-goat, 647 donkey anti-mouse, and 647 donkey anti-rabbit (1:1000, Invitrogen).
- In situ hybridization Fluorescent in situ hybridization is performed using RNAscope Fluorescent Multiplex Kit (Advanced Cell Diagnostics), using a probe designed for RNAscope Fluorescent Multiplex in situ hybridization (ACDBio RNAscope 6-M3-Mr4Prob4#1#1 , mCherry#43201, Mm-Slc32a1#319191, Mm-Slc17a6#319171). Brains were dissected and immediately frozen in 2-methylbutane on dry ice and stored in freezing embedding medium at -80°C. Brains were cooled to -16°C in a cryostat for 1 hour prior to sectioning.
- RNAsope Assay Guide (document numbers 320513 and 320293, respectively).
- Horizontal brain slices (250 ⁇ m thick) containing the hypothalamus were prepared with a vibratome (VT1200S, Leica) and maintained for 1 hour at room temperature in artificial CSF (ACSF) containing (mM): 125 mM NaCl, 26 mM NaHCO 3 , 10 mM D(+)-glucose, 2.5 mM KCl, 2 mM CaCl 2 , 1 mM MgSO 4 bubbled with O 2 (95%) and CO 2 (5%).
- CSF artificial CSF
- Electrodes (5-8 M ⁇ ) were filled with an internal solution containing (in mM): 125 mM K-gluconate, 10 mM HEPES, 10 mM phosphocreatine, 0.05 mM tolbutamide, 4 mM NaCl. , 4 mM ATP, 2 mM MgCl2, 0.4 mM GTP, and 0.2 mM EGTA, pH 7.3, adjusted with KOH).
- Firing of hM3Dq-mCherry expressing neurons was recorded in current-clamp mode at a temperature of 30°C.
- CNO (1 ⁇ M) was applied in bath and the effect was investigated.
- a combination of a MultiClamp 700B amplifier, Digidata 1440A A/D converter and Clampex 10.3 software was used to control membrane voltage and data acquisition.
- Bayesian statistics were applied to evaluate our hypotheses and experimental results.
- the inventors designed a statistical model with parameters representing the hypothetical structure and fitted the model to the experimental results.
- Bayesian inference estimates the posterior probability distribution of model parameters from the likelihood distribution and prior probability distribution of the parameters.
- the posterior distribution provides information about how the model can explain the hypothesis from the experimental results.
- a Bayesian model can explicitly include all types of uncertainty, so it can handle data about noise in the observations, or it can handle a few of samples can be fully utilized.
- it uses a hierarchical model and can handle multiple layers of multiple groups with different numbers of samples. All of these advantages of Bayesian inference make it well-suited to address problems commonly encountered in animal experiments. Model fitting was performed using Hamiltonian Monte Carlo with non-U-turn sampler, adaptive variant, as run in version 2.18.0 of Stan with RStan library 38 in version 3.5239 of R. did. inspecting trace plots,
- the prior probability density function of the model is defined with weak informationality and conservativeness and is specified in the following sections.
- the basic principles and techniques for designing statistical models are based on the book Statistical Rethinking40 . Both the model and the data source code used for the analysis are available at https://briefcase. liken. Available from jp/public/JjtgwAnqQ81AgyI. (Will be protected with password 'qih' and made public for evaluation).
- the spike frequency of Qrfp-positive neurons in brain slices was modeled by parameterizing the difference in spike frequency when neurons were activated by CNO (code folder Patch_M3_CNO). If the total number of slices is K and the observed spike frequencies of control and CNO-dosing recordings in the i-th slice are B i and C i , respectively, then B i is modeled by ⁇ BASE with observational error and C i is modeled by the sum of ⁇ BASE and ⁇ CNO with observation error. Since the spiking frequency is a positive real number, the error can be modeled by a lognormal distribution, so B i and C i can be written as
- the TS of photostimulated animals was modeled with a hierarchical multi-layer model (Fig. 21, code folder SSFO_Opto). Four groups of animals were included in this experiment. TS was recorded at 1 Hz and median values were saved every 10 seconds for further analysis. All T s recorded 115-125 minutes after the first photostimulation were included in the analysis.
- K is the total number of animals and Y is the TS during the time of interest for mouse j belonging to i, Y is the global mean parameter ⁇ , the group parameter ⁇ GROUP , and the individual mouse parameter ⁇ MOUSE .
- ⁇ were sampled from a standard semi-normal distribution. Between-group differences in TS were compared by estimating the mean TS of each group from the posterior distribution, which is the sum of ⁇ and ⁇ GROUP with normally distributed noise at the standard deviation of ⁇ MOUSE .
- thermoregulatory system under QIH and normal conditions animal heat loss and heat production were described in a hierarchical multilayer model (Fig. 3c-k, code folder QIH_GTRH).
- Three parameters G, TR and H in two metabolic conditions, normal and QIH were estimated from the metabolically stable state of animals at different TA .
- the detailed method was previously described 3 .
- a linear model consisting of controllable and observable parameters TB and VO2 was fitted to experimental results for both TB and VO2 , using TA as a predictor with normally distributed noise.
- the posterior distributions of the slope and intercept coefficients of each model were then used to estimate G, T R , and H.
- the prior probability density function of the standard deviation of the noise has a standard semi-normal distribution
- the other parameters have a uniform distribution except for the intercept coefficient of T B , which uses a uniform distribution due to negative values. used the positive region of .
- Circadian changes in metabolism in Q-TeTxLC mice were analyzed by modeling metabolism by clustering recorded values into L and D phases (code folder TeTxLC_LD).
- Y is the observed TB of group i in phase j
- Y can be expressed as the sum of the differences between basal metabolism (L-phase metabolism) and D-phase, with a normally distributed observation noise of become.
- Mouse identity was included as a predictor of observed Y values to model metabolic variance.
- Y for a given group of a SECTION is modeled as a normal distribution, which averages the mouse-dependent mean ⁇ MOUSE and the group- and section-dependent parameters ⁇ GROUP,SECTION as: ⁇ GROUP, SECTION was used as standard deviation.
- Example 1 Induction of hypometabolism by a chemically defined population of hypothalamic neurons
- the hypothalamic neuropeptide pyroglutaminated RF-amide peptide (QRFP) was originally aimed at discovering new RF-amide peptides. discovered through bioinformatics approaches 9,10 .
- a Qrfp peptide was also identified and purified from rat brain as an endogenous ligand for the orphan G-protein coupled receptor hGPR103 11 .
- the prepro-Qrfp mRNA is localized only to the hypothalamus and is distributed in the periventricular nucleus (Pe), lateral hypothalamic area (LHA), and ridge gray (TC) 11 .
- Qrfp has been implicated in food intake, sympathetic modulation, and anxiety 11,12 .
- the inventors generated mice in which codon-improving Cre recombinase (iCre) was knocked into the Qrfp gene (Qrfp-iCre mice).
- iCre codon-improving Cre recombinase
- Qrfp-iCre mice mice in which codon-improving Cre recombinase
- T S surface body temperature
- Qrfp was identified as a chemical marker of hypothermia-induced neurons. Since iCre-positive neurons are only observed in the hypothalamus but are distributed in several discrete hypothalamic regions in Qrfp-iCre mice, we next attempted to identify hypothermic-inducing hypothalamic regions. Cre-activating AAV vectors with flip-excision (FLEX) switch 13 were injected into the thalamus of Qrfp-iCre mice using two different stereotaxic coordinates; medial-basal (MB) or lateral (LH) injection (see Methods). iCre-positive neurons in the lateral and medial regions of the hypothalamus were separately manipulated by injecting into the hypothalamus.
- FLEX flip-excision
- MB injection of Cre-dependent AAV vectors can express specific genes in iCre-positive neurons in the medial regions of the hypothalamus: the anterior ventral periventricular nucleus (AVPe), medial preoptic area (MPA) and Pe. It could, but could not be expressed in LHA (Fig. 1c). Multicolor fluorescence in situ hybridization analysis confirmed that the majority of mCherry-positive cells in these regions expressed Qrfp mRNA.
- iCre-positive neurons in the AVPe/MPA and Pe of Qrfp-iCre mice are primarily responsible for the induced hypothermic state.
- Qrfp-iCre mice with MB injection of AAV 10 -EF1a-DIO-hM3Dq-mCherry (referred to as Q-hM3D mice) for induction of hypothermia, unless otherwise stated. was basically used.
- Example 2 Q neurons act on the dorsomedial hypothalamus to induce QIH To clarify the mechanism of QIH induction, the axonal projection of Q neurons was analyzed. After Qrfp-iCre mice were injected with AAV 10 -EF1a-DIO-GFP to express GFP specifically in Q neurons (Fig.
- thermogenic neurons were previously identified in DMH 15 .
- An optogenetic approach was used to clarify the function of Q-neuron axonal projections to the DMH. Injection of AAV 10 -DIO-SSFO-eYFP into Qrfp-iCre mice (Q-SSFO mice) resulted in expression of stabilized step function opsin (SSFO) 16 in Q neurons (Fig. 2j). SSFO was confirmed to be expressed in AVPe, MPA and Pe.
- SSFO was confirmed to be expressed in AVPe, MPA and Pe.
- Q-SSFO mice were then bilaterally implanted with optical fibers in the DMH and light stimulation was applied to the axonal fibers.
- This manipulation effectively reduced TS , but slightly weaker than that induced by somatic stimulation of AVPe/MPA (Fig. 2k,l).
- Fig. 2k,l we also examined the effects of light stimulation of Q neuron fibers in RPa, as RPa is known to contain sympathetic premotor neurons for heat production via brown adipose tissue regulation.
- We also observed subtle effects of photogenetic excitation of Q neuron fibers in RPa on TS (Fig. 2k, l). From these results, we hypothesized that Q neurons act primarily on DMH and to a lesser extent on RPa, inducing QIH.
- Example 3 Theoretical Set Temperature Decreases During QIH A temperature rise in the mouse tail was observed immediately after QIH induction and was induced by optogenetic or pharmacogenetic excitation of Q neurons, suggesting that TB It was suggested that peripheral vessels dilate and release heat during depletion (Fig. 1d, Fig. 2k). A telangiectasia without an increase in T B suggests a resetting of the theoretical body temperature set point (T R ) below normal, as seen in the hibernating state of hibernating animals. To assess this, a characterization of the mouse thermoregulatory system during QIH was performed.
- thermal conductance G
- H and TR can be estimated from T B and VO2 under multiple ambient temperatures (T A ).
- Can 3 Q-hM3D mice were prepared and T B and VO 2 were recorded during QIH under different T A (8, 12, 16, 20, 24, 28 and 32° C.) (FIG. 3a).
- T A 8, 12, 16, 20, 24, 28 and 32° C.
- FIG. 3a We compared the 11 h mean TB and VO2 after IP injection of saline or CNO.
- animals exhibited lower TB and VO2 at all TAs compared to matched controls ( Fig . 3b).
- G was estimated from the relationship between T B ⁇ T A and VO 2 (Fig. 3d).
- the 89% highest posterior density interval (HPDI) of G was [0.212, 0.221] ml/g/hr/°C and [0.182, 0.220] ml/g under normal and QIH conditions, respectively. /hr/°C (Fig. 3e; below 89% HPDI is shown in square brackets with two numbers).
- the posterior distribution ( ⁇ G) of the difference between both Gs was [ ⁇ 0.0040, 0.0348] ml/g/hr/°C (Fig. 3f), including 0, between normal conditions and QIH. This suggests that G under the condition is indistinguishable. This was in contrast to diurnal dormancy (torpor), which exhibits a lower G than normal conditions 3 .
- H was [3.43, 8.72] ml/g/hr/°C in the normal state and [0.181, 0.369] ml/g/hr/°C in QIH (Fig. 3h), and each median was a decrease of 95.3%.
- the posterior distribution of the difference ( ⁇ H) was [3.17, 8.48] ml/g/hr/°C (Fig. 3i) and was positive, suggesting that the probability of these conditions being different is greater than or equal to 89%. was done.
- This H-drop was similar to that during fasting-induced diapause (FIT) 3 .
- TR was estimated to be [36.04, 36.60 ] °C in normal conditions and [26.83, 29.13] °C in QIH (Fig. 3j).
- the difference in TR was 8.41°C at each median, and the posterior distribution of the difference ( ⁇ T R ) was [7.18, 9.57]° C , clearly demonstrating the drop in TR during QIH .
- Fig. 3k Given the very small theoretical setpoint shift of 3 in FIT, this observation highlights the similarities between QIH and hibernation, as well as the differences between QIH and diurnal torpor.
- Example 4 Q neurons are involved in normal fasting-induced circadian dormancy (torpor). Because of this possibility, we investigated whether Q neurons are also involved in circadian dormancy (torpor). A common or similar mechanism may also play a role in inducing hibernation and diurnal dormancy (torpor) 20 . To investigate the role of Q neurons in circadian dormancy (torpor), Qrfp-iCre mice (Q-TeTxLC mice) were injected with AAV 2/9 -hSyn-DIO-TeTxLC-eYFP to tetanus toxin specifically in Q neurons.
- PVH neurons have been shown to receive abundant inputs from the ARC 23 , inputs from PVH to Q neurons may play a role in conveying information about trophic status. PVH input may also convey circadian information from the suprachiasmatic nucleus (SCN).
- SCN suprachiasmatic nucleus
- VMPO ventromedial preoptic nucleus
- PACAP BDNF
- BDNF ventromedial preoptic nucleus
- Q neuron excitation there may be a functional interaction of VMPO PACAP/BDNF neurons and Q neurons.
- DREADD excitation of TRPM2-positive cells in POA induces hypothermia. Since TRPM2 is ubiquitously highly expressed in the POA, including the AVPe/MPA and areas containing input neurons to Q neurons, TRPM2-induced hypothermia is induced by direct and/or indirect activation of Q neurons.
- Q neurons are localized along the third ventricle (3V) and the dendrites of these neurons extend along the ependymal and periventricular organ-proximal regions of the 3V (Fig. 1c), tanisites and ependymal Humoral factors released by cells, factors in cerebrospinal fluid, or capillaries may also be sensed.
- AAV 10 -CaMKII ⁇ -hM3Dq-mCherry was injected into AVPe/MPA in rat brain.
- Addition of CNO activated left and right AVPe/MPA containing Q neurons and induced QIH with hypothermia and hypometabolism in rats.
- Rats with the QIH exhibited an extended posture with a decrease in VO2. These were similar to QIH status in mice.
- Selective activation of Q neurons also induced QIH in mammals that do not normally hibernate, such as rats.
- Example 5 Treatment of Acute Illnesses by Hibernation
- the effect of treating subjects with acute illnesses by hibernation was confirmed.
- acute diseases sepsis and acute renal failure were tested.
- Sepsis was induced in the cecal ligation and puncture (CLP) model (see Figure 9A).
- Mice were anesthetized with isoflurane. Taking care not to enter the peritoneal cavity, a scalpel was made in the longitudinal midline of the skin. After the initial incision, the incision was widened with small scissors. The cecum was removed and ligated in place. Prior to cecal perforation, the contents of the cecum were gently pushed toward the distal cecum, and during cecal perforation, trapped air or gas was gently aspirated. The cecum was punctured with a single through-puncture in a mesenteric to anti-mesenteric direction at the midpoint between the ligature and the tip of the cecum.
- Figure 10 shows the time course of oxygen consumption in the sepsis model, the time course of oxygen consumption in the model in which hibernation was induced immediately after sepsis was induced, and the time course of oxygen consumption in typical QIH.
- oxygen consumption decreases over about 10 hours, whereas in hibernation induction, oxygen consumption decreases in about 1 to 2 hours.
- Hypometabolism induced in sepsis leads to decreased oxygen consumption in the order of 1-2 hours, supporting QIH.
- Acute renal failure was induced in a renal pedicle clamp model. Mice were anesthetized with inhalation anesthesia as shown in FIG. 11A. A skin incision and abdominal muscle incision were made to expose the kidney. The adipose tissue surrounding the kidney was stripped to expose the renal pedicle and the renal pedicle was ligated. The wound was then closed. After renal pedicle ligation, the mice were induced to hibernate (QIH). Negative treatment did not induce hibernation. Survival of mice was observed for 48 hours from CLP. The results were as shown in FIG. 11B. As shown in FIG. 11B, the hibernation-induced group showed prolonged survival compared to the negative control.
- a neuropeptide ligand of the G protein-coupled receptor GPR103 regulates feeding, behavioral arousal, and blood pressure in mice. Proc Natl Acad Sci U S A 103, 74387443 (2006). 12. Okamoto, K. et al. QRFP-Deficient Mice Are Hypophagic, Lean, Hypoactive and Exhibit Increased Anxiety-Like Behavior. PLoS One 11, e0164716 (2016). 13. Atasoy, D., Aponte, Y., Su, H. H. & Sternson, S. M. A FLEX switch targets Channelrhodopsin-2 to multiple cell types for imaging and long-range circuit mapping. J. Neurosci. 28, 702530 (2008). 14.
- A1 adenosine receptor A1AR
- A1AR A1 adenosine receptor
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Abstract
Description
(1)疾患を有する制御された低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の対象において低代謝状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度をそれぞれ測定する測定部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
経時的に当該対象の酸素消費量をモニタリングする酸素モニタリング部を備え、
酸素モニタリングの結果を示す表示部をさらに含んでいてもよく、または酸素消費量が低代謝状態前と比較して低下しているときには、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)であると推定し、酸素消費量がゼロであるときには対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、低代謝状態のモニタリング部をさらに含んでいてもよい、装置。
(1’)疾患を有する制御された低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の対象において低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度をそれぞれ測定する測定部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入る前の対象の酸素消費量(および好ましくは理論的設定温度)と比較して、酸素消費量(および好ましくは理論的設定温度)が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると推定する、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロになったときに、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置。
(1’’)疾患を有する冬眠様状態の対象において冬眠様状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度をそれぞれ測定する測定部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
冬眠様状態に入る前の対象の酸素消費量(および好ましくは理論的設定温度)と比較して、酸素消費量(および好ましくは理論的設定温度)が低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠様状態の可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロになったときに、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置。
(1’’’)疾患を有する冬眠様状態の対象において冬眠様状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度をそれぞれ測定する測定部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
冬眠様状態に入る前の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量および理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠様状態の可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロになったときに、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置{好ましくは、前記推定部による推定結果を出力する出力装置(好ましくは表示装置、好ましくはディスプレイまたはスピーカー)をさらに有していてもよい}。
(2)制御された低代謝状態が、冬眠様状態である、上記(1)に記載の装置。
(3)安定した低代謝状態の対象の一定期間の酸素消費量の変動を記録し、その一定期間における酸素消費量の変動に基づいて規定範囲を設定して、酸素消費量が当該規定範囲内であるか外であるかを判定する判定部をさらに有する、上記(1)または(2)に記載の装置。
(4)出力装置をさらに備え、酸素消費量が、規定範囲の上限を超えた場合には、対象が制御された低代謝状態から覚めようとしている可能性があることを出力装置に出力し;酸素消費量が規定範囲の下限より低下した場合には、対象が制御された低代謝状態よりさらに低代謝に移行しようとしている可能性があることを出力装置(好ましくは表示装置、好ましくはディスプレイ)に出力し;かつ、酸素消費量が、規定範囲内であるときには、制御された低代謝状態であることを出力装置(好ましくは表示装置、好ましくはディスプレイまたはスピーカー)に出力する、上記(1)~(3)のいずれかに記載の装置。
(5)深部体温計と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部、理論的設定温度を算出する演算部、および熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部をさらに含む、上記(1’’’)および(2)~(4)のいずれかに記載の装置。
(6)生きている対象の脳において、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域内のピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンを刺激する装置であって、対象は好ましくは疾患を有し、
前記装置は、
電圧の発生を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記制御部からの制御信号を受信して電圧を発生する電圧発生部と、
前記電圧発生部と近位で電気的に接続され、遠位に電気刺激電極を有する刺激プローブであって、脳表面からQRFP産生ニューロンにアクセスするために十分な長さを有し、前記電圧発生部からの電圧により遠位の電気刺激電極において電気刺激を発生させる刺激プローブと、
外気温計と、
深部体温計と、
呼気ガス中の酸素濃度を測定する呼気ガス分析部と、
測定された外気温と、深部体温および酸素濃度からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入る前の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると決定する、冬眠可能性の決定部と、
酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性の決定部と
を含む、装置。
(7)生きている対象の脳において、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域内のピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンを刺激する装置であって、対象は好ましくは疾患を有し、
前記装置は、
QRFP産生ニューロン刺激性化合物の放出を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記化合物の貯蔵部と、
前記制御部からの制御信号を受信して化合物の貯蔵部から前記化合物を貯蔵部から送出する化合物送出部と、
化合物放出口と放出口までの化合物の流路を備え、前記化合物をQRFP産生ニューロンにまで送達するガイドと、
外気温計と、
深部体温計と、
呼気ガス中の酸素濃度を測定する呼気ガス分析部と、
測定された外気温と、深部体温および酸素濃度からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると決定する、冬眠可能性の決定部と、
酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の決定部と
を含む、装置。
(8)前記記録部に記録された外気温と深部体温とから、対象が低体温状態であるかを決定する決定部をさらに含む、上記(6)または(7)に記載の装置。
(9)前記記録部に記録された外気温と、深部体温、および酸素濃度とから対象が低代謝状態であるか否かを決定する決定部をさらに含む、上記(6)~(8)のいずれかに記載の装置。
(10)冬眠可能性の決定部が、前記記録部に記録された外気温と、深部体温、および酸素濃度とに基づいて、対象が冬眠様状態であるか否かを決定する決定部をさらに含む、上記(6)~(9)のいずれかに記載の装置。
(11)前記制御部が、対象が、低体温状態、低代謝状態、および冬眠様状態からなる群から選択されるいずれか1つの状態であると決定されるまで連続的にまたは間欠的にGRFP産生ニューロンを刺激するための制御信号を送信する、上記(8)~(10)のいずれかに記載の装置。
(12)ほ乳類の対象において体温の理論的設定温度を低下させる方法であって、ピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含み、前記哺乳動物は疾患に罹患している、方法。
(13)QRFP産生ニューロンが、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域のニューロンである、上記(12)に記載の方法。
(14)興奮性刺激が、化学的刺激、磁気的刺激および電気的刺激からなる群から選択される刺激である、上記(12)または(13)に記載の方法。
(15)哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与える物質をスクリーニングする方法であって、
被検化合物と前記QRFP産生ニューロンとを接触させることと、
前記QRFP産生ニューロンの興奮を測定することと、
前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与える被検化合物を選択することと、
を含む、方法。
(15a)哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに特異的に興奮性刺激を与える物質をスクリーニングする方法であって、
細胞にQRFP産生ニューロンに特異的に発現する受容体を発現させることと、
被検化合物と前記細胞とを接触させることと、
前記QRFP産生ニューロンの興奮を測定することと、
前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与える被検化合物を選択することと、
を含む、方法。
(15b)哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに特異的に興奮性刺激を与える物質または当該物質を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)を検査する方法であって、
ピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンを提供することと、
被検化合物または前記組成物と前記細胞とを接触させることと、
前記QRFP産生ニューロンの興奮を測定することと、
前記被検化合物との接触前後のQRFP産生ニューロンの興奮を比較することにより、被検化合物または前記組成物が、前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与えるかを決定することと
を含む、方法。
(15c)哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに特異的に興奮性刺激を与える物質または当該物質を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)を検査する方法であって、
被検化合物を哺乳動物の前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与することと、
QRFP産生ニューロンの興奮(例えば、電位)を測定することと、
前記被検化合物または前記組成物との接触前後のQRFP産生ニューロンの興奮を比較することにより、被検化合物または前記組成物が、前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与えるかを決定することと
を含む、方法。
(15d)哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において冬眠を誘発する被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)を検査する方法であって、
被検化合物または当該組成物を哺乳動物(例えば、非ヒト哺乳動物)の前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与することと、
前記哺乳動物が冬眠することを確認することと、
を含む、方法。
(15e)上記(15d)に記載の方法であって、
前記哺乳動物(例えば、非ヒト哺乳動物)の深部体温(例えば、腸内温度)と酸素消費量との相関関係から、酸素消費量が0であるとしたときの深部体温(理論的設定温度)とΔVO2/ΔTB(熱生成のフィードバックゲイン)とを推定することと、
理論的設定温度と熱生成の負のフィードバックゲインの両方が、被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)の投与によって投与前よりも低下したことは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。
(15f)ヒトなどの哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)が冬眠を誘発するか否かを試験する方法であって、
被検化合物または当該組成物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトの理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値、および投与される前の当該ヒトの理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値を提供することと、
前記被検化合物または当該組成物の投与の前の理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値と比較して、投与の後の理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値の両方が低下するかを確認することとを含み、
理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値が、投与前よりも投与後において低下したことは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。
(15g)ヒトなどの哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)が冬眠を誘発しているか否かを決定(予測、推定、計算科学的に算出)する方法であって、
被検化合物または当該組成物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトの理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値、および投与される前の当該ヒトの理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値を提供することと、
前記被検化合物または当該組成物の投与の前の理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値と比較して、投与の後の理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値の両方が低下するかを確認することとを含み、
理論的設定温度の推定値と熱生成のフィードバックゲインの推定値が、投与前よりも投与後において低下したことは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。
(15h)ヒトなどの哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)が冬眠を誘発しているか否かを決定(予測、推定、計算科学的に算出)する方法であって、
被検化合物または当該組成物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいて、少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において酸素消費量および深部体温を記録することと、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定することと、
推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定することを含み、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下したことは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。
(16)ヒトなどの哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)が冬眠を誘発しているか否かを決定(検査、予測、推定、計算科学的に算出)する方法であって、
被検化合物または当該組成物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において記録された酸素消費量および深部体温を提供(または記録)することと、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定することと、
推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定することを含み、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下したことは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。
(17)冬眠状態をモニタリングする装置であって、
被検化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物、好ましくは疾患を有する哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において記録された酸素消費量および深部体温を記録する記録部と、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定し、推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定する演算部とを備え、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下した場合に、前記哺乳動物が冬眠したと判定する判定部と
を備えた装置。
(18)疾患を有する哺乳動物を処置する方法であって、
当該動物に制御された低代謝状態を誘発させることを含む、方法。
(19)上記(18)に記載の方法であって、
当該哺乳動物に制御された低代謝状態を誘発させることが、当該哺乳動物において疾患の進行を遅延させるように行われる、方法。
(20)上記(18)に記載の方法であって、
当該哺乳動物に制御された低代謝状態を誘発させることが、当該哺乳動物においてその死亡率を低下させるように行われる、方法。
(21)制御された低代謝状態が、冬眠様状態である、上記(18)~(20)のいずれかに記載の方法。
(22)制御された低代謝状態を誘発させることが、QRFPニューロンを刺激することにより実施される、上記(18)~(21)のいずれかに記載の方法。
(23)疾患が、重篤な急性疾患である、上記(18)~(22)のいずれかに記載の方法。
(24)当該動物の経過を観察することをさらに含む、上記(18)~(23)のいずれかに記載の方法。
(25)経過を観察することが、当該動物の酸素消費量の経時的変化を測定することを含む、上記(24)に記載の方法。
(26)経過を観察することが、当該動物の疾患の進行を観察することを含む、上記(24)または(25)に記載の方法。
(27)当該動物の経過を観察することが、当該動物の医療機関への搬送中に、または医療機関の集中治療室において行われる、上記(24)~(26)のいずれかに記載の方法。
(28)処置(例えば、低代謝状態を誘発させる処置)の有効性を試験する方法であって、
疾患を有する哺乳動物を当該処置に供することと、
処置された哺乳動物を経過観察することと
当該処置がなされなかった対象群と比較して、当該処置により疾患の進行速度が低下するか否か、死亡率を低下させるか否か、および、生存期間を延長させるか否かから選択されるいずれかを決定することと
を含む、方法。
(29)疾患が、急性疾患である、上記(1)~(6)、(7)~(11)および(17)のいずれかに記載の装置、または上記(12)~(16)および(18)~(28)のいずれかに記載の方法。
(30)疾患が、慢性疾患である、上記(1)~(6)、(7)~(11)および(17)のいずれかに記載の装置、または上記(12)~(16)および(18)~(28)のいずれかに記載の方法。
(31)疾患が、重篤な疾患である、上記(29)に記載の装置、または方法。
(32)疾患が、重篤な疾患である、上記(30)に記載の装置、または方法。
(33)上記(1)~(6)、(7)~(11)および(17)のいずれかに記載の装置を搭載した車両。
(34)上記(1)~(6)、(7)~(11)および(17)のいずれかに記載の装置を搭載した救急搬送用車両。
本明細書では、「冬眠」とは、哺乳動物で認められる低体温かつ低代謝状態である。「日内休眠」(daily torpor)とは、短期の低代謝状態である。冬眠と日内休眠とは、日内休眠では、TRの低下がほとんど無くHの低下が起こるのに対して、冬眠ではTRとHの両方が有意に低下する点で異なる。本明細書では、「冬眠様状態」とは、TAの減少に伴ってTRとHの両方が有意に低下した状態を意味する。本明細書では、「非冬眠動物」とは、冬季あるいは絶食時に冬眠をする生態を有しない動物をいう。
(A1)本発明の装置は、
電圧の発生を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記制御部からの制御信号を受信して電圧を発生する電圧発生部と、
前記電圧発生部と近位で電気的に接続され、遠位に電気刺激電極を有する刺激プローブであって、脳表面からQRFP産生ニューロンにアクセスするために十分な長さを有し、前記電圧発生部からの電圧により遠位の電気刺激電極において電気刺激を発生させる刺激プローブと
を含み得る。これにより本発明の装置は、電気的にQRFP産生ニューロンに対して興奮性刺激を与えることができる。あるいは、電気的刺激の代わりに化学的刺激を与える観点で、
(A2)本発明の装置は、
QRFP産生ニューロン刺激性化合物の放出を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記化合物の貯蔵部と、
前記制御部からの制御信号を受信して化合物の貯蔵部から前記化合物を放出する化合物放出部と
を含み得る。
(B)本発明の装置は、
外気温計と、
深部体温計と、
呼気ガス中の酸素濃度を測定する呼気ガス分析部と、
測定された外気温と、深部体温および酸素濃度からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部と、
をさらに含んでいてもよい。本発明の装置の(B)の構成において、上記対象が外気温(TA)の減少に伴って、深部体温(TB)が低下するかいなかを調べることができ、かつ、呼気ガス分析結果から対象の酸素消費量を求め、理論的設定温度(TR)および熱生成の負のフィードバックゲイン(H)を求めることができる。これによって、本発明の装置は、対象が冬眠様状態を誘発したかいなかを決定することができる。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部205と;
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)になる前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると決定する、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の決定部206;および/または、
前記対象の酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性の決定部207と;
をさらに含んでいてもよい。前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧のデータは、対象の心電図および血圧を取得する救急モニタにより本発明の装置に入力され得る。また、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度は、呼気炭酸ガス分圧モニタにより本発明の装置に入力され得る。上記装置(C)はさらに、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の決定部206と死亡可能性の決定部207からのそれぞれの決定を入力して対象が冬眠状態であるか死亡状態であるかを決定する判定部240を備えていてもよい。判定部240は、出力装置250(例えば、ディスプレイまたはスピーカー)と接続され、結果は、出力装置250から出力され得る。したがって、上記装置(C)は、呼気中の酸素濃度を測定する呼気測定部201と吸気中の酸素濃度を測定する吸気測定部202とをさらに有していてもよい。判定部240は、例えば、図12Cに示されるフローチャートにしたがって対象の状態を決定してもよい。本発明の装置(C)は、安定した低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の対象の一定期間の酸素消費量の変動を記録し、変動が規定範囲外となった場合に、出力装置250から通知を出力してもよい。ここで、変動が規定範囲内であるときには、安定した低代謝状態が維持されていると評価することができ、規定範囲外であるときには、対象が安定した低代謝状態から脱したと評価することができる。規定範囲は、一定期間の酸素消費量の変動に基づいて決定することができる。例えば、一定期間の酸素消費量の変動の平均値を取得し、平均値×下方既定値と平均値×上方既定値の範囲を規定範囲とすることができる。下方既定値は、例えば、0.7以下、0.6以下、0.5以下、0.4以下、0.3以下、0.2以下または0.1以下とすることができる。上方既定値はまた、例えば、1.3以上、1.4以上、1.5以上、1.6以上、1.7以上、1.8以上、1.9以上、2以上、2.1以上、2.2以上、2.3以上、2.4以上、2.5以上、2.6以上、2.7以上、2.8以上、2.9以上、または3以上とすることができる。下方既定値および上方既定値はそれぞれ、0.7および1.3、0.6および1.4、0.5および1.5、0.4および1.6、0.3および1.7、0.2および1.8、並びに、0.1および1.9とすることができる。このため上記装置(C)は、安定した低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の対象の一定期間の酸素消費量の変動を記録し、その一定期間における酸素消費量の変動に基づいて(例えば、その一定期間における酸素消費量の上限値および下限値、または平均値に基づいて)規定範囲を設定して、酸素消費量が当該規定範囲内であるか外であるかを判定する判定部241をさらに備えていてもよい。例えば、規定範囲の上限値は、前記一定期間の酸素消費量の変動の上限値に基づいて決定され得る。例えば、規定範囲の上限値は、前記一定期間の酸素消費量の変動の上限値よりも第1の割合高く設定することができ、第1の割合は、5%以上、10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、または100%以上とすることができる。例えば、規定範囲の下限値は、前記一定期間の酸素消費量の変動の下限値に基づいて決定され得る。例えば、規定範囲の下限値は、前記一定期間の酸素消費量の変動の下限値よりも第2の割合だけ低く設定することができ、第2の割合は、5%以上、10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上、90%以上、または100%以上とすることができる。酸素消費量が、規定範囲の上限を超えた場合には、対象が制御された低代謝状態から覚めようとしている可能性があることを意味し、酸素消費量が規定範囲の下限より低下した場合には、対象が制御された低代謝状態よりさらに低代謝に移行しようとしている(例えば、死亡しようとしている)可能性を意味する。したがって、判定部241における酸素消費量が当該規定範囲内であるか外であるかの判定の結果は、出力装置250に出力されることが好ましい。判定部241は、例えば、図12Dに示されるフローチャートにしたがって対象の状態を決定してもよい。判定部240の判定結果と判定部241の判定結果は、出力装置250に同時に表示されてもよい。ここで、低代謝状態である対象の酸素消費量の変動が、上記一定期間の酸素消費量の変動の範囲±20%以内、±15%以内、±10%以内、または±5%以内である場合には、対象は安定した低代謝状態であると評価され得る。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する酸素消費量を算出する、酸素消費量を算出するプログラムと、
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)になる前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると決定する、低代謝状態の可能性を決定するプログラムと、
前記対象の酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性を決定するプログラム
を実行可能な演算回路260(例えば、プロセッサ)を有する。上記装置(C)は、演算回路からの決定結果を出力装置250に送信し、出力装置250は、結果を出力することができる。好ましいある態様では、例えば、図12Dに示されるように、上記装置(C)の演算回路260は、安定した低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の対象の一定期間の酸素消費量の変動を記録し、規定範囲を決定し、その後、酸素消費量が規定範囲内であるか外であるかを判定するプログラムをさらに実行してもよい。上記装置(C)の演算回路260は、酸素消費量が規定範囲内であるか外であるかを判定するプログラムの判定結果を出力装置250から出力することができる。出力結果は、例えば、ディスプレイに表示され、もしくはスピーカーから音(例えば、警告音)として出力され、または、ディスプレイに表示されると共に、スピーカーから音(例えば、警告音)として出力される。これらのプログラムは、1以上の演算回路により実行され得る。
1以上のプロセッサと
メモリと
1以上のプログラムを備えており、前記1以上のプログラムは、前記メモリに保存され、前記1以上のプロセッサにより実行可能に構成されており、前記1以上のプログラムは、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する酸素消費量を算出する、酸素消費量を算出するプログラムと、
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)になる前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると決定する、低代謝状態の可能性を決定するプログラムと、
前記対象の酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性を決定するプログラム
を含む、装置であり得る。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部205と;
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると決定する、冬眠可能性の決定部206;および/または、
酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性の決定部207と;
をさらに含んでいてもよい。上記装置(C)は、理論的設定温度を算出する演算部220をさらに有していてもよい。体温の理論的設定温度(TR)は、外気温(または対象の周囲温度)(TA)を変化(例えば低下)させながら、深部体温(TB)と酸素消費量(VO2)との関係を求め、酸素消費量(VO2)が0であるときの深部体温(TB)の推定値として求められる。したがって、上記装置(C)は、深部体温計210と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部210aをさらに有していてもよい。上記装置(C)において、理論的設定温度を算出する演算部220は、保存された対象の深部体温と酸素消費量との関係から酸素消費量(VO2)が0であるときの深部体温(TB)の推定値を対象の理論的設定温度として算出することができる。深部体温(TB)と酸素消費量(VO2)との関係は、近似曲線にカーブフィットすることにより求められ、ある態様では近似曲線は線型であり得る。また、本発明によれば、熱生成のフィードバックゲイン(H)は、H=ΔVO2/ΔTBとして求めることができる。したがって、上記装置(C)は、熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部230をさらに含んでいてもよい。上記装置(C)はさらに、冬眠可能性の決定部206と死亡可能性の決定部207からのそれぞれの決定を入力して対象が冬眠状態であるか死亡状態であるかを決定する判定部240を備えていてもよい。判定部240は、出力装置250と接続され、結果は、出力装置250から出力され得る。したがって、ある態様では、上記装置(C)は、深部体温計と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部、理論的設定温度を算出する演算部、および熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部をさらに含んでいてもよい。上記装置(C)は、呼気中の酸素濃度を測定する呼気測定部201と吸気中の酸素濃度を測定する吸気測定部202とをさらに有していてもよい。
(第一の実施形態)
第一の実施形態では、本発明の装置は、上記(A1)の構成を有する。本発明の装置はこれにより、生きている対象の脳のQRFP産生ニューロンを電気的に刺激することにより、対象に冬眠様状態を誘発させる。以下では、図5および6を参照しながら第一の実施形態を説明する。
電圧の発生を制御する制御信号を送信する制御部10と、
前記制御部からの制御信号を受信して電圧を発生する電圧発生部20と、
前記電圧発生部と近位で電気的に接続され、遠位に電気刺激電極を有する刺激プローブであって、脳表面からQRFP産生ニューロンにアクセスするために十分な長さを有し、前記電圧発生部からの電圧により遠位の電気刺激電極40において電気刺激を発生させる刺激プローブ30と
を有する。
第一の実施形態では、脳深部を電気刺激する装置が開示されたが、第二の実施形態では、脳深部を化学的に刺激する装置に関する。以下では、図7を参照しながら、第二の実施形態を説明する。
QRFP産生ニューロン刺激性化合物の放出を制御する制御信号を送信する制御部110と、
前記化合物の貯蔵部125と、
前記制御部からの制御信号を受信して化合物の貯蔵部125から前記化合物を送出する化合物送出部120と、
化合物放出口140と放出口140までの化合物の流路を備え、前記化合物をQRFP産生ニューロンにまで送達するガイド130と、
を有する。本発明の装置100においては、制御部110は化合物送出部120と配線115を通じて電気的に接続されている。化合物送出部120は、制御部110から制御信号を受信し、その制御信号に応じて貯蔵部125に蓄積された化合物を貯蔵部125から流路126および流路121、およびガイド130を通じて化合物放出口140から脳内へ放出する。化合物は溶媒に溶解した溶液の形態であってよく、化合物送出部120による送液機構によって化合物放出口140へ送液され得る。化合物の貯蔵部125は、外部から化合物を導入する化合物導入口125aを有していてもよい。化合物導入口125aは、化合物を化合物貯蔵庫に供給することができる。化合物貯蔵部125は、体外に露出していてもよい。但し、化合物貯蔵部125が体外に露出する場合には、化合物貯蔵部125は無菌条件下で維持される。制御部110は、化合物送出部120に対して、例えば、1回の化合物送出につき、1μL~100μLの送液を行うように制御信号を送信する。
第一の実施形態の装置1および第二の実施形態の装置100は、
(B)の構成:
外気温計50と、
体温計60と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部70と、
測定された外気温と、体温および酸素消費量からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部80と
をさらに有し得る{ここで、体温計は、好ましくは、対象の深部体温を測定する深部体温計であり得る}。上記(B)は、例えば図8に示されるように、制御部10または制御部110が備えていてもよい{ここで、図8中では描画が省略されているが、制御部10および110はそれぞれ、第一の実施形態および第2の実施形態において説明したように、有線または無線で電圧発生部20に接続されている}。対象において冬眠様状態を誘発させる際には、外気温(または対象の周囲温度)(TA)を低下させると共に、対象の深部体温(TB)と代謝を低下させる。従って、外気温(または対象の周囲温度)を計測する外気温計と、体温計(好ましくは、深部体温計)を備えることにより、本発明の装置は、対象の体温(好ましくは、深部体温)と外気温との関係をモニターすることが可能となる。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部205と;
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)になる前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると決定する、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の決定部206;および/または、
酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性の決定部207と;
をさらに含んでいてもよい。上記(C)の構成を有する装置は、対象が重篤な疾患を有する対象である場合に、冬眠様状態であるか死亡した可能性があるかを決定することなどに用いられ得る。上記装置(C)はさらに、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の決定部206と死亡可能性の決定部207からのそれぞれの決定を入力して対象が冬眠状態であるか死亡状態であるかを決定する判定部240を備えていてもよい。判定部240は、出力装置250と接続され、結果は、出力装置250から出力され得る。したがって、上記装置(C)は、呼気中の酸素濃度を測定する呼気測定部201と吸気中の酸素濃度を測定する吸気測定部202とをさらに有していてもよい。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と;
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると決定する、冬眠可能性の決定部;および/または、
酸素消費量、前記対象の呼気中の二酸化炭素濃度、前記対象の心電図の波形、または前記対象の血圧がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると決定する、死亡可能性の決定部と;
をさらに含んでいてもよい。上記(C)の構成を有する装置は、対象が重篤な疾患を有する対象である場合に、冬眠様状態であるか死亡した可能性があるかを決定することなどに用いられ得る。上記(C)の構成を有する装置は、深部体温計と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部をさらに有していてもよい。上記(C)の構成を有する装置は、理論的設定温度を算出する演算部をさらに有していてもよい。上記(C)の構成を有する装置は、熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部をさらに有していてもよい。上記(C)の構成を有する装置は、深部体温計と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部、理論的設定温度を算出する演算部、および熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部をさらに有していてもよい。冬眠可能性の決定部は、非冬眠様状態の対象の酸素消費量、理論的設定温度、および熱生成のフィードバックゲインと比較して、酸素消費量、理論的設定温度、および熱生成のフィードバックゲインが共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると決定してもよい。
本発明によれば、
冬眠を判定する装置であって、
被検化合物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度(TA)条件下において記録された酸素消費量(VO2)および深部体温(TB)を記録する記録部と、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定し、推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定し、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定する演算部とを備え、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下したことに少なくとも基づいて、前記哺乳動物が冬眠したと判定する判定部と
を備えた装置
が提供される。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明によれば、対象において、体温の理論的設定温度および/または熱生成のフィードバックゲインを低下させる方法が提供される。本発明によれば、対象に冬眠様状態を誘発させる方法が提供される。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明の方法によれば、対象においてピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含む。本発明によればまた、対象において、熱生成のフィードバックゲインを低下させる方法であって、ピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含む、方法が提供される。本発明によればまた、対象において、体温の理論的設定温度および熱生成のフィードバックゲインを低下させる方法であって、ピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含む、方法が提供される。本発明によればまた、対象において冬眠様状態を誘発させる方法であって、薬物などを用いてピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含む、方法が提供される。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定することと、
推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定することを含み、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下したことを、前記哺乳動物が冬眠したと示す、方法であり得る。ある好ましい態様では、哺乳動物は、疾患を有する。ある好ましい態様では、哺乳動物は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、哺乳動物は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
この態様において、本発明の方法は、対象の体温の理論的設定温度(TR)を推定することをさらに含み得る。理論的設定温度(TR)は、外気温(または対象の周囲温度)(TA)を変化(例えば低下)させながら、深部体温(TB)と酸素消費量(VO2)との関係を求め、酸素消費量(VO2)が0であるときの深部体温(TB)の推定値として求められる。深部体温(TB)と酸素消費量(VO2)との関係は、例えば、線形回帰により求め得る。
冬眠様状態は、生体の代謝を低下させることにより、生命保護機能を向上させる点で有益であり得る。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明によれば、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与える物質をスクリーニングする方法であって、
被検化合物と単離した前記QRFP産生ニューロンとを接触させることと、
前記QRFP産生ニューロンの興奮を測定することと、
前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与える被検化合物を選択することと、
を含む、方法が提供される。方法は、インビトロの方法であり得る。スクリーニングは、対象において行われ得る。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。ある好ましい態様では、対象は、疾患モデルである。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明の冬眠の判定方法は、対象において、冬眠を誘導する薬または誘導すると期待される薬、もしくは誘導する可能性のある薬の効果を分析する。対象が冬眠様状態に入った場合には、それを維持する、または解除することができる。対象が冬眠状態に入らない場合には、さらなる処置をする、または処置を中断することができる。ある好ましい態様では、対象は、疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、対象は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明の冬眠の判定方法は、計算科学的な方法であり得る。本発明の冬眠の判定方法は、医療行為を含まないことができる。本発明の冬眠の判定方法は、例えば、測定自体を含まず、測定された値の入力に基づいて判定することができる。判定結果は、医師を含む医療従事者の診断のための基礎情報であり得る。
冬眠様状態と死亡状態を外観のみに基づいて迅速に区別することは容易ではない場合がある。本発明の冬眠の判定方法は、ある態様では、冬眠と死亡とを区別することに用いることができる。対象が死亡状態になった場合には、医療従事者等は迅速に蘇生処置や冬眠様状態からの離脱を促進させ得る。
ヒトなどの哺乳動物において被検化合物が冬眠を誘発しているか否かまたはその可能性を決定(検査、予測、推定、計算機科学的に決定)する方法であって、
被検化合物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において記録された酸素消費量および深部体温を提供(または記録)することと、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定することと、
推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定することを含み、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下したことを、前記哺乳動物が冬眠したと示す、方法
であり得る。哺乳動物は、非ヒト哺乳動物であり得る。ある好ましい態様では、哺乳動物は、疾患を有する。ある好ましい態様では、哺乳動物は、慢性疾患を有する。ある好ましい態様では、哺乳動物は急性疾患を有する。ある好ましい態様では、疾患、慢性疾患または急性疾患は、重篤な疾患である。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明によれば、疾患を有する対象に低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)を誘発させることを含む、前記対象または疾患の処置方法が提供される。低代謝状態は、あらゆる疾患の症状の進行を停止させ、または遅延させることができる。低代謝状態は、例えば、低代謝療法により誘発できる。また、冬眠は、対象を低体温かつ低代謝状態にするが、同時にあらゆる疾患の症状の進行を停止させ、または遅延させることができる。これにより、慢性疾患の進行を遅らせ、または急性疾患において更なる処置までの時間の確保、例えば、医療搬送のための時間確保を可能とし得る。また、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)を誘発させることにより、病状進行を遅延させることで患者の生命維持を可能とする。対象において、冬眠は、QRFP神経を興奮させることで誘発させ得る。例えば、対象において、冬眠は、上記方法によって誘発させることができる。対象において、冬眠は、上記装置を用いて誘発させることができる。疾患は、例えば、急性疾患であり得る。急性疾患は、例えば、敗血症、急性腎不全、急性肺炎、心筋梗塞、脳梗塞、脳出血、および出血性ショックからなる群から選択される1以上であり得る。急性疾患は、投与した化合物をQRFP神経に到達させることを促進させる観点では、血液循環が保たれる疾患であると好ましい。疾患は、例えば、慢性疾患または状態であり得る。慢性疾患は、腫瘍、自己免疫性疾患、および加齢からなる群から選択される1以上であり得る。
本発明によれば、冬眠を誘発させる化合物またはその候補は、対象に化合物を投与し、その後、当該対象に冬眠を誘発させるか否かを試験することによって得られ得る。したがって、本発明によれば、冬眠を誘発させる化合物またはその候補を選択する方法であって、対象に化合物を投与することと、その後、当該対象に冬眠を誘発させるか否かを試験することと、冬眠を誘発する化合物を選択することとを含む、方法が提供される。
本発明によればまた、化合物または当該化合物を含む組成物(例えば、医薬製剤、および医薬組成物等)を試験する方法であって、前記化合物または前記組成物を対象に投与することと、当該対象に冬眠を誘発させるか否かを決定することと、冬眠を誘発させる化合物または組成物を得ることと、を含む方法が提供される。得られた化合物は、その後、医薬組成物として製剤化され得る。あるいは、得られた化合物は、医薬製剤として製剤化された組成物中に含まれている。対象は、疾患を有する対象、特に重篤な疾患を有する対象、例えば、重篤な急性疾患または慢性疾患を有する患者であり得る。疾患の例は、上述の通りであり得る。本発明によれば、そのように選択された化合物を含む、医薬組成物が提供される。医薬組成物は、疾患の処置において用いられる冬眠を誘発させることに用いられ得る。
本発明によれば、冬眠による疾患の処置のための装置が提供される。本発明によれば、例えば、冬眠による疾患の処置のための装置は、上記第1の実施態様、第2の実施態様、または第3の実施態様の装置であり得る。この態様において、冬眠による疾患の処置のための装置は、酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて(例えば、対象の酸素消費量が消失した場合に)、対象が死亡したまたは死亡した可能性があると推定または決定する決定部をさらに含んでいてもよい。
疾患が重篤である場合などの特定の場合に、患者の生存を確認するために低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)時の微細な酸素消費量をモニタリングすることが有益である。酸素消費量のモニタリングは、例えば、吸気と呼気のそれぞれに含まれる酸素濃度を測定し、呼気の測定値と吸気の測定値を比較することにより実施できる。低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入ると低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)前よりも酸素消費量が低減して呼気と吸気の酸素濃度の測定値の差が小さくなるが、患者が死亡すると呼気と吸気の酸素濃度の測定値の差が消失する。このようにして患者の呼吸をモニタリングすることにより、患者(例えば、重篤な疾患または状態を有する患者、例えば、重篤な急性疾患または慢性疾患を有する患者)の状態をモニタリングすることができる。
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入る前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った、または低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)に入った可能性があると推定する、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)の可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置
が提供される。また、本発明によれば、疾患を有する冬眠様状態の対象において冬眠様状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
冬眠様状態に入る前の対象の酸素消費量と比較して、酸素消費量が低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置
が提供される。本発明によれば、疾患を有する冬眠様状態の対象において冬眠様状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロとなることに少なくとも基づいて、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置
が提供される。
本発明によれば、哺乳動物において低代謝状態を誘発する方法が提供される。本発明によれば、疾患を有する哺乳動物において末梢組織に低代謝状態を誘発する方法が提供される。本発明によれば、疾患を有する哺乳動物において末梢組織に低代謝状態を誘発する方法であって、当該哺乳動物に低代謝状態を誘発させ、これにより末梢組織に低代謝状態を誘発することを含む、方法が提供される。ある態様では、哺乳動物は、非ヒトであり得る。
疾患を有する哺乳動物を当該処置に供することと、
処置された哺乳動物を経過観察することと
当該処置がなされなかった対象群と比較して、当該処置により疾患の進行速度が低下するか否か、死亡率を低下させるか否か、および、生存期間を延長させるか否かから選択されるいずれかを決定することと
を含む、方法が提供される。この方法は、当該処置がなされなかった対象群と比較して、当該処置により疾患の進行速度が低下すること、死亡率を低下させること、および、生存期間を延長させることから選択される少なくとも1以上に該当することに基づいて処置が有効であると決定することをさらに含み得る。処置は、例えば、低代謝状態(好ましくは冬眠様状態)を誘発させる処置であり得、この場合、当該処置は、有効であると示され得る。
(1)動物
動物実験はすべて、国際総合睡眠医学研究所(IIIS)、筑波大学、理研バイオシステムズダイナミクス研究センター(BDR)において、動物実験ガイドラインに従って実施した。各機関の動物実験委員会の承認を得たので、NIHのガイドラインに従った。休眠誘発実験を除き、マウスに自由に摂餌及び水を与え、TA22℃、相対湿度50%、12時間の明期/12時間の暗期周期で維持した。体重34g以上のマウスは再現性のあるFITを示さないことが判明したため、休眠実験では34g以上の重いマウスを除外した。
AAVは、先に述べた33ように、三重トランスフェクション、ヘルパーフリー法を用いて作製した。最終精製ウイルスを-80℃で保存した。組換えAAVベクターの力価を定量PCRにより測定した。AAV10- EF1α-DIO-TVA-mCherry, 4 x1013; AAV10-CAG-DIO-RG, 1x1013; AAV10- EF1α-DIO-hM3Dq-mCherry, 1.64 x1012; AAV10- EF1α-DIO-mCherry, 1.44 x1012; AAV10-EF1α-DIO-SSFO-EYFP, 1.35 x1012; AAV2/9-hsyn-DIO-TeTxLC-GFP, 6.24 x1014; AAV2/9-hsyn-DIO-GFP, 4 x1012ゲノムコピー/ml。既に報告されている方法により、組換え狂犬病ベクターが作製された22,34。SADΔG-GFP(EnvA)の力価は4.2×108感染単位/mlであった。
AAVベクターの注射のために、雄Qrfp‐iCreヘテロ接合性マウス(8~12週齢)をイソフルランで麻酔し、定位フレーム(David Kopf Instruments)に置いた。
サーモグラフィー解析のために、マウスを実験ケージ(25×15×10cm)に入れ、ケージ床の30cm上に置いた赤外線熱画像化カメラ(InfReC R500EX;NIPPON AVIONICS)を用いてモニターした。表面温度を明確に検出するために、実験開始の1日前に、背毛を毛刈り機で除去した。DREADDおよび光発生実験のサーもグラムをそれぞれ0.5Hzおよび1Hzで収集し、InfReC Analyzer NS9500プロフェッショナルソフトウェア(NIPPON AVIONICS)で分析した。1つのフレームの最高温度を動物のTSとして用いた(図1d)。
日内休眠(torpor)の誘発実験は、少なくとも3日間、動物の代謝を記録するように設計された。記録開始前日(0日)に動物をチャンバーに導入した。食餌と水は自由に摂取できた。TAは0日目に示したように設定し、実験中一定に維持した。マウスに移植したテレメトリー温度センサーをチャンバーに入れる前に電源を入れた。標準的な実験デザインは以下の通りであった。第2日、ZT-0に、日内休眠(torpor)を誘発するために食物を除去した。24時間後、3日目、ZT-0で各動物に食餌を戻した。
DREADDアゴニストであるCNO(クロザピンN-オキシド、Abcam、ab141704)を100μg/mLの用量で生理食塩水に溶解し、-20℃で凍結した。CNO溶液を現場で解凍し、マウスに1mg/kgの用量で溶液を腹腔内投与した。アデノシンA1受容体アゴニストであるCHA(N6-シクロヘキシルアデノシン、Sigma-Aldrich、C9901)を250μg/mLの濃度で生理食塩水に溶解し、マウスに2.5mg/kgの用量で腹腔内投与した。
上述のTB、VO2およびビデオ記録(「生物学的シグナルの記録」を参照)に加えて、代謝チャンバーの入口を吸入麻酔器の出口(NARCOBIT-E、株式会社夏目製作所)に直接接続した。1%のイソフルランをTA=28℃で30分間与え、その後90分間のTA=12℃とした。実験後、動物をホットプレート上で加温し、回復を確認した。
マウスをイソフルランで深く麻酔し、水中の10%スクロースで経心的に潅流し、続いて0.1Mリン酸緩衝液pH7.4中の氷冷した4%パラホルムアルデヒド(4%PFA)で潅流し、脳を除去した。脳を4%PFA中、4℃で一晩後固定し、0.1Mリン酸緩衝生理食塩水pH7.4(PBS)中、30%ショ糖中、4℃で一晩インキュベートし、クライオモルド中のTissue-Tek O.C.T. 化合物(Sakura)に浸漬し、切片化するまで-80℃で凍結した。クライオスタット(CM1860、Leica)を用い、50μm毎に4つの等しいシリーズに冠状にスライスし、氷冷PBSを充填した6ウェルプレートに収集し、室温(RT)で3回PBSで洗浄した。特に断りのない限り、軌道振盪機上で穏やかに振盪しながら、以下のインキュベーション工程を実施した。脳切片を、PBS中1%Triton X-100中で室温で1時間インキュベートした。0.3% Triton X-100-処理PBS(ブロック溶液)中の10% Blocking One(NACALAI TESQUE)で切片を振盪することなく室温で1時間ブロックした。切片をブロッキング溶液(希釈液および各抗体の種類を下記に示す)で希釈した1次抗体中で4℃で一晩インキュベートし、次いで3回洗浄し、2次抗体と共に4℃で一晩インキュベートし、PBSで洗浄し、次いでマウントし、DAPIを含むHardSet Antifade Mounting Medium(VECTASHIELD)を用いてカバーガラスをかぶせた。
蛍光in situハイブリダイゼーションは、RNAscope Fluorescent Multiplex Kit(Advanced Cell Diagnostics)を用いて、RNAscope Fluorescent Multiplex in situハイブリダイゼーション用に設計されたプローブ(ACDBio RNAscope Probe-Mm-Qrfp#4643411、mCherry#43201、Mm-Slc32a1#319191、Mm-Slc17a6#319171)を用いて実施した。脳を切開し、直ちにドライアイス上で2-メチルブタン中で凍結し、-80℃で凍結包埋培地中に保存した。切断に先立ち、脳をクライオスタット中で-16℃に1時間冷却した。クライオスタット(Leica CM1860UV)を用いて脳を20μmの切片に冠状切片に切断し、Superfrost Plus Microscope slides(Fisherbrand)にマウントした。前処理法およびRNAscope Fluorescent Multiplex Assayは、RNAsope Assay Guide(それぞれ文書番号320513および320293)に準じて正確に実施した。
雄のQrfp‐iCreマウス(10~12週齢)に下記のウイルスを注射した。AAV10-DIO-TVA-mCherryおよびAAV10-DIO-RGを送達して、TVA-mCherryおよびRGをMB領域のQニューロンに発現させた(手順および座標については上記参照)。2週間後、SADΔG‐GFP(EnvA)を同じ部位に注射した。Leica TCS SP8レーザ共焦点顕微鏡とZeiss Axio Zoom.V16をそれぞれ用いて、全脳切片でスターターニューロンと入力(単一GFP陽性)ニューロンを検出した。
麻酔下のマウスから25ゲージ針を用いて左室穿刺により血液を採取した。採取した血液は氷上に2時間以上保存しなかった。サンプルを2,000Gで10分間4℃で遠心分離し、上清を収集し、-30℃で凍結した。FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporationに凍結血清検体を送付し、Na(mEq/L)、K(mEq/L)、Cl(mEq/L)、AST(IU/L)、ALT(IU/L)、LDH(IU/L)、CK(IU/L)、GLU(mg/dL)および総ケトン体(μmol/L)濃度を測定した。
マウスはイソフルラン(Pfizer)による深麻酔下で断頭した。脳を抽出し、以下の(mM)を含む氷冷切削溶液中で冷却した:125mMの塩化コリン、25mMのNaHCO3、10mMのD(+)-グルコース、7mMのMgCl2、2.5mMのKCl、1.25mMのNaH2PO4、およびO2(95%)とCO2(5%)でバブルした0.5mMのCaCl2。視床下部を含む水平脳スライス(250μm厚)をビブラトーム(VT1200S、Leica)で調製し、以下の(mM)を含む人工CSF(ACSF)中で室温で1時間維持した:125 mMのNaCl、26 mMのNaHCO3、10 mMのD(+)-グルコース、2.5 mMのKCl、2 mMのCaCl2、をO2(95%)とCO2(5%)でバブルした1 mMのMgSO4。電極(5~8MΩ)を、以下の(mM)を含む内部溶液で充填した:125 mMのK-グルコナート、10 mMのHEPES、10 mMのホスホクレアチン、0.05 mMのトルブタミド、4 mMのNaCl、4 mMのATP、2 mMのMgCl2、0.4 mMのGTP、および0.2 mMのEGTA、pH7.3、KOHで調整)。hM3Dq-mCherry発現ニューロンの発火を30℃の温度で電流-クランプモードで記録した。CNO(1μM)を浴中適用し、効果を調べた。MultiClamp 700B増幅器、Digidata 1440A A/D変換器およびClampex 10.3ソフトウェア(Molecular Devices)の組み合わせを用いて、膜電圧およびデータ取得を制御した。
透明なマウス脳を、既に述べたように37、ScaleS法により作製した。尿素結晶(和光純薬工業、217-00615)、D(-)-ソルビトール(和光純薬工業、199-14731)、メチル-β-シクロデキストリン(東京化学工業、M1356)、γ-シクロデキストリン(和光純薬工業、037-10643)、N-アセチル-L-ヒドロキシプロリン(Skin Essential Actives、台湾)、ジメチルスルホキシド(DMSO)(和光純薬工業、043-07216)、グリセロール(Sigma, G9012)およびTriton X-100(Nacalai Tesque, 35501-15)を用いてスケール溶液を作製した。AAV‐DIO‐GFPを注射したQrfp‐iCreマウスの脳を固定し、ScaleSで透明化した。画像はレーザー共焦点顕微鏡(オリンパス、XLSLPN25XGMP(NA 1.00,WD:8mm)(RI:1.41~1.52))で得られた。
本研究では、ベイズ統計学を適用して、発明者らの仮説および実験結果を評価した。発明者らは、仮説の構造を表すパラメーターを有する統計モデルを設計し、実験結果にモデルをフィットさせた。ベイズ推論はパラメータの尤度分布と事前確率分布からモデルパラメータの事後確率分布を推定する。事後分布は、モデルが実験結果から仮説をどのように説明できるかに関する情報を提供する。ベイズモデルはすべてのタイプの不確実性を明示的に含むことができ、従って、それは観測におけるノイズに関するデータを扱うことができるか、または、それは広い範囲の不確実性を有する可能性のある少数の試料からの情報を十分に利用することができる。さらに、これは階層モデルを用いて、異なる数のサンプルを持つ複数のグループの複数の層を扱うことができる。ベイズ推論のこれらの利点はすべて、動物実験でよく見られる問題に対処するのに適している。モデルフィッティングは、Rのバージョン3.5239のRStanライブラリー38を有するStanのバージョン2.18.0で実行されるように、適応バリアントである非Uターンサンプラーを有するHamiltonian Monte Carloを用いて実施した。トレースプロットの検査、
Q-TeTxLCマウスにおけるFIT中の代謝は、階層的多層モデル(図4d、コードフォルダTeTxLC_FIT)でモデル化した。セクションjにおけるあるグループiの最小値Yは、グループβ0[i]の平均代謝と差異パラメータβ1[i,j]の合計として表すことができる。
視床下部神経ペプチドであるピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)は、もともと新しいRF‐アミドペプチドを発見することを目的としたバイオインフォマティクスアプローチを通して発見された9,10。Qrfpペプチドはまた、オーファンG-タンパク質結合受容体hGPR103の内因性リガンドとしてラット脳から同定および精製された11。prepro‐Qrfp mRNAは視床下部にのみ局在し、脳室周囲核(Pe)、視床下部外側野(LHA)、および灰白隆起(TC)11に分布する。Qrfpは、食物摂取、交感神経調節、および不安に関係するとされてきた11,12。発明者らは、Qrfp遺伝子にコドン改良Creリコンビナーゼ(iCre)をノックインしたマウス(Qrfp-iCreマウス)を作製した。発明者らは、iCre発現ニューロンにのみhM3Dq-mCherryを発現するマウス(Qrfp-iCre;Rosa26dreaddm3 マウス)を得るために、CAG-hM3Dq-mCherryをRosa26遺伝子座に上流のfloxed転写停止エレメントを挿入したRosa26ddreadm3 マウスと交配した。Qrfp‐iCre;Rosa26dreaddm3マウスを用いた興奮性化学遺伝学的実験中に、これらのマウスは運動活性の顕著な低下を示し、最終的にクロザピン‐N‐オキシド(CNO)の腹腔内(IP)注射から約30分後に始まる重度で持続的な不動状態となった。これらのマウスの姿勢は日内休眠(tropor)中に観察された姿勢と類似していることに気づいたので、Qrfp‐iCreマウスにおけるiCre陽性細胞の活性化は日内休眠(tropor)様状態を誘発し、不動性と低いTBを特徴とすると最初に仮説した(後述するように、ここで誘導された低体温は日内休眠ではなく、冬眠様状態であることが明らかとなっている)。この仮説を評価するために、サーモグラフィーカメラを用いて表面体温(TS)を測定し、Qrfp‐iCre;Rosa26dreaddm3マウスにおけるCNO誘発性不動状態が、顕著で持続性の低体温を伴うことを見出した(図1b)。TSの減少はCNO投与の約5分後から始まり、ほぼ12時間持続した。その後、マウスは外部からの再加温なしに低体温状態から自発的に回復した。
QIHを誘導する機構を明らかにするために、Qニューロンの軸索投射を解析した。Qrfp-iCreマウスにAAV10-EF1a-DIO-GFPを注射してQニューロンに特異的にGFPを発現させた後(図2a、b)、MPA、VOLT、室傍核(PVN)、視索上核(SON)、視床下部背内側(DMH)、LHA、結節乳頭核(TMN)、内側乳頭核(MM)、中脳水道周囲灰白質(PAG)、外側結合腕傍核(LPB)、青斑核(LLC)、延髄吻側腹外側野(RVLM)、および淡蒼縫線核(RPa)(体温調節調節および交感神経制御に関わる領域)におけるGFP陽性線維を観察した(図2c)14。発明者らは、DMHが特に豊富な投射を受けたことを見出した。ScaleS法で明らかになった脳の解析から、QニューロンとDMHへの投射の位置がさらに示唆された(図2d)。
次に、Qニューロンの三重カラーin situハイブリダイゼーションを用いて、これらのQニューロンが抑制性か興奮性かを確認した。CNO注射がQ‐hM3DマウスにおいてQIHを効果的に誘導することを確認した後、これらのマウスをin situハイブリダイゼーション組織化学的検査に供した。興奮性および抑制性マーカーであるmCherryをコードする転写産物、小胞性グルタミン酸トランスポーター2(Vglut2)および小胞性GABAトランスポーター(Vgat)をコードするプローブを用いた。われわれは、Qニューロンの約2/3がVgat陽性であり、約2/5がVglut2陽性であることを見出した(図2e-i)。
QIH誘発直後にマウス尾部の温度上昇が観察され、Qニューロンの光遺伝学的または薬理遺伝学的興奮によって誘発されたことから、TBの減少中に末梢血管が拡張して熱を放出することが示唆された(図1d、図2k)。TBの増加を伴わない末梢血管拡張は、冬眠動物の冬眠状態で見られるように、理論体温設定値(TR)を正常状態より低い値に再設定されていることを示唆する。これを評価するために、QIH中のマウスの体温調節系の特徴分析を行った。動物が外部仕事を持たず、代謝が安定している条件下では、複数の周囲温度(TA)下で、TBおよびVO2から熱コンダクタンス(G)、HおよびTRを推定することができる3。Q‐hM3Dマウスを調製し、種々のTA(8、12、16、20、24、28および32℃)下でQIH中にTBおよびVO2を記録した(図3a)。生理食塩水またはCNOのIP注射後の11時間平均TBおよびVO2を比較した。QIH中、動物は対応する対照と比較して、全てのTAで低いTBとVO2を示した(図3b)。熱産生システムが適切に機能しているとき、すなわち、TRがTBより高く、体温調節システムがVO2を増加させてTRに到達しようとしているとき(図3c)、TAが増加するとTBは増加し、VO2は減少する。TBとVO2はそれぞれ異なるTAで最小値を示し、TAでは16~24℃の範囲の協調した熱生成特性のみを示した(図3b)。したがって、QIH中のTA=16、20、および24℃の代謝データを用いてさらに分析した。まず、TB-TAとVO2の関係からGを推定した(図3d)。Gの89%の最高後部密度間隔(HPDI)は、正常及びQIH条件下でそれぞれ[0.212,0.221]ml/g/hr/℃及び[0.182,0.220]ml/g/hr/℃(図3e;以下89%HPDIは2つの数字で四角括弧で示す)であった。量的に、両Gの差の後方分布(ΔG)は[-0.0040,0.0348]ml/g/hr/℃(図3f)であり、0を含んでおり、正常条件下とQIH条件下のGが区別できないことを示唆している。これは通常の条件よりも低いGを示す日内休眠(torpor)とは異なっていた3。第二に、TBとVO2からHとTRを推定した(図3g)。Hは正常状態で[3.43、8.72]ml/g/hr/℃、QIHで[0.181、0.369]ml/g/hr/℃(図3h)であり、各中央値で95.3%の減少であった。差の事後分布(ΔH)は[3.17,8.48]ml/g/hr/℃(図3i)であり、陽性であり、これらの条件が異なる確率が89%以上であることが示唆された。このH低下は、空腹時誘発日内休眠(FIT)時のH低下と類似していた3。特に、TRは正常状態で[36.04、36.60]℃、QIHで[26.83、29.13]℃と推定された(図3j)。TRの差は各中央値で8.41℃であり、差の後方分布(ΔTR)は[7.18,9.57]℃であり、QIH中のTRの低下を明確に示している(図3k)。FITにおける非常に小さな理論的設定温度シフト3を考慮すると、この観察は、QIHと冬眠の間の類似性、ならびにQIHと日内休眠(torpor)の間の差を強調する。
QIHは日内休眠(torpor)よりも冬眠に似ているが、日内休眠(torpor)は冬眠の軽い状態と考えられることがあるため、Qニューロンが日内休眠(torpor)にも関与しているかどうかを検討した。また、共通または類似のメカニズムが冬眠および日内休眠(torpor)を誘導する役割を果たしているかもしれない20。日内休眠(torpor)におけるQニューロンの役割を調べるため、Qrfp-iCreマウス(Q-TeTxLCマウス)にAAV2/9-hSyn-DIO-TeTxLC-eYFPを注入することによりQニューロンに特異的に破傷風毒素軽鎖(TeTxLC)を発現させ、QニューロンのSNARE複合体介在性神経伝達の遮断がFITに影響を及ぼすかどうかを調べた(図4b)。AAV2/9‐hSyn‐DIO‐TeTxLC‐eYFPとAAV10‐EF1a‐DIO‐hM3Dq‐mCherryの同時注入はTBに対するCN
Oの作用を完全に消失させ、SNARE複合体の遮断がQニューロンのQIH誘導能を消失させることを示唆した。われわれは、すべてのQ-TeTxLCマウスにおいて、FITの正常な構造が崩壊することを見出した。絶食中のこれらのマウスでは、代謝の急速な振動変動は見られなかった(図4c,d)。このことは、Qニューロンの機能がFIT中のTBの急速な低下を誘発するために必要であることを示唆する。興味深いことに、これらのマウスで観察されたTBの漸減は、FIT中にQニューロン非依存性の代謝低下機構が存在することを意味する。加えて、Q‐TeTxLCマウスは対照マウスよりもTBの概日変動が少なく、TBの概日調節におけるQニューロンの主要な役割を示唆した。特に、QRFPペプチドを欠くホモ接合のQrfp-iCreマウスは、正常なFITを示した(図4e)。これらの観察は、Qニューロンは日内休眠(torpor)を誘導する必須の構成要素であり、日内休眠(torpor)における体温の急速なシフトに重要な役割を果たしているが、QRFPは果たしていないことを示唆する。
ここでは、マウスにおける特定の化学的(=Qrfpを発現する)および組織的(AVPe/MPA)特徴を有する新規視床下部ニューロン集団の存在を示し、この集団の興奮は冬眠と非常に類似した能動的代謝低下を誘発する。この状態であるQIHは、冬眠と2つの主要な性質を共有している。1つはTRの減少であり、もう1つは活発に調節される低代謝である。QIHの間、マウスは外界環境に従って身体機能を活発に調節する。心拍数の減少、呼吸の弱さ、低電位脳波などの他の多くの生理学的パラメータは、QIHと冬眠との類似性を示唆する29。Fos発現解析により、ジュウサンセンジリス30において3V付近の細胞が冬眠中に活性化されることが以前の研究で示された。この活性化パターンはQニューロンが局在する領域と非常によく似ており、冬眠神経もまたQニューロンを利用して冬眠を誘導する可能性を示唆している。
できた43。具体的には、AAV10-CaMKIIα-hM3Dq-mCherryをラット脳のAVPe/MPAに注入した。CNOを添加するとQニューロンを含む左右のAVPe/MPAが活性化し、ラットにおいて、低体温と低代謝を伴うQIHが誘導された。当該QIHを有するラットでは、VO2の低下を伴い、伸びた姿勢が認められた。これらはマウスのQIH状態と類似したものであった。Qニューロンの選択的な活性化は、ラットなどの通常は冬眠をしない哺乳動物においてもQIHを誘導した。
本発明では、急性疾患を有する対象を冬眠により処置することによる効果を確認した。急性疾患としては、敗血症と急性腎不全を試験した。
マウスをイソフルランによって麻酔した。腹膜腔内に侵入しないように注意しながら、メスで皮膚の縦方向の正中線を切開した。最初の切開後、小さなハサミで切開部を拡張した。盲腸を取り出し、所定の位置で結紮した。盲腸穿孔の前に、盲腸の内容物を穏やかに遠位盲腸に向かって押し、盲腸穿孔の際には、トラップされた空気やガスを穏やかに吸引した。結紮部と盲腸先端部の間の中間地点で、腸間膜から反腸間膜方向に単回の貫通穿刺で盲腸を穿孔した。針を抜いた後、腸間膜貫通孔と反腸間膜貫通孔の両方から少量の排泄物(液滴)を押し出し、開存性を確認した。盲腸からの糞便を腹壁創縁に広げずに腹腔内に再配置した。腹膜、筋膜、腹筋膜を簡単なランニング縫合で閉じた。手術は適切な体温管理下で行われた。
図11Aに示されるように、マウスを吸入麻酔で全身麻酔に付した。皮膚切開と腹壁筋切開を行って、腎臓を暴露した。腎臓の周りの脂肪組織を剥離して腎茎を暴露して腎茎を結紮した。その後、傷を閉じた。腎茎結紮術の後で、当該マウスに冬眠(QIH)を誘導させた。陰性対処では、冬眠を誘導させなかった。CLPから48時間にわたってマウスの生存率を観察した。結果は図11Bに示される通りであった。図11Bに示されるように、冬眠を誘発させた群では、陰性対照と比較して、生存期間の延長を認めた。
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Claims (28)
- 疾患を有する制御された低代謝状態の対象において低代謝状態をモニタリングする装置であって、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度をそれぞれ測定する測定部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差から対象の酸素消費量を算出する演算部と、
経時的に酸素消費量をモニタリングして、酸素消費量が低代謝状態前と比較して低下しているときには、対象が低代謝状態であると推定し、酸素消費量がゼロであるときには対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、低代謝状態のモニタリング部とを含む、装置。 - 制御された低代謝状態が、冬眠様状態である、請求項1に記載の装置。
- 安定した低代謝状態の対象の一定期間の酸素消費量の変動を記録し、その一定期間における酸素消費量の変動に基づいて規定範囲を設定して、酸素消費量が当該規定範囲内であるか外であるかを判定する判定部をさらに有する、請求項1または2に記載の装置。
- 出力装置をさらに備え、酸素消費量が、規定範囲の上限を超えた場合には、対象が制御された低代謝状態から覚めようとしている可能性があることを出力装置に出力し;酸素消費量が規定範囲の下限より低下した場合には、対象が制御された低代謝状態よりさらに低代謝に移行しようとしている可能性があることを出力装置に出力し;かつ、酸素消費量が、規定範囲内であるときには、制御された低代謝状態であることを出力装置に出力する、請求項1~3のいずれか一項に記載の装置。
- 深部体温計と当該体温計により測定された体温を保存する体温の保存部、理論的設定温度を算出する演算部、および熱生成のフィードバックゲイン(H)を算出する演算部をさらに含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の装置。
- 生きている対象の脳において、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域内のピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンを刺激する装置であって、対象は疾患を有し、
前記装置は、
電圧の発生を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記制御部からの制御信号を受信して電圧を発生する電圧発生部と、
前記電圧発生部と近位で電気的に接続され、遠位に電気刺激電極を有する刺激プローブであって、脳表面からQRFP産生ニューロンにアクセスするために十分な長さを有し、前記電圧発生部からの電圧により遠位の電気刺激電極において電気刺激を発生させる刺激プローブと、
外気温計と、
深部体温計と、
呼気ガスおよび吸気ガス中の酸素濃度を測定するガス分析部と、
測定された外気温と、深部体温および酸素濃度からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差からから対象の酸素消費量を算出する演算部と、
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロになったときに、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置。 - 生きている対象の脳において、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域内のピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンを刺激する装置であって、対象は疾患を有し、
前記装置は、
QRFP産生ニューロン刺激性化合物の放出を制御する制御信号を送信する制御部と、
前記化合物の貯蔵部と、
前記制御部からの制御信号を受信して化合物の貯蔵部から前記化合物を貯蔵部から送出する化合物送出部と、
化合物放出口と放出口までの化合物の流路を備え、前記化合物をQRFP産生ニューロンにまで送達するガイドと、
外気温計と、
深部体温計と、
呼気ガスおよび吸気ガス中の酸素濃度を測定するガス分析部と、
測定された外気温と、深部体温および酸素濃度からなる群から選択される少なくとも1つの数値とを記録する記録部と、
対象からの呼気と吸気の酸素濃度差からから対象の酸素消費量を算出する演算部と、
非冬眠様状態の対象の酸素消費量および理論的設定温度と比較して、酸素消費量と理論的設定温度が共に低下したことに少なくとも基づいて、対象が冬眠様状態に入った、または冬眠様状態に入った可能性があると推定する、冬眠可能性の推定部と、
酸素消費量がゼロになったときに、対象が死亡した、または死亡した可能性があると推定する、死亡可能性の推定部と
を含む、装置。 - 前記記録部に記録された外気温と深部体温とから、対象が低体温状態であるかを決定する決定部をさらに含む、請求項6または7に記載の装置。
- 前記記録部に記録された外気温と、深部体温、および酸素濃度とから対象が低代謝状態であるか否かを決定する決定部をさらに含む、請求項6~8のいずれか一項に記載の装置。
- 冬眠可能性の決定部が、前記記録部に記録された外気温と、深部体温、および酸素濃度とに基づいて、対象が冬眠様状態であるか否かを決定する決定部をさらに含む、請求項6~9のいずれか一項に記載の装置。
- 前記制御部が、対象が、低体温状態、低代謝状態、および冬眠様状態からなる群から選択されるいずれか1つの状態であると決定されるまで連続的にまたは間欠的にQRFP産生ニューロンを刺激するための制御信号を送信する、請求項8~10のいずれか一項に記載の装置。
- 哺乳動物の対象において体温の理論的設定温度を低下させる方法であって、ピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与えることを含み、前記哺乳動物は疾患に罹患している、方法。
- QRFP産生ニューロンが、前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)からなる群から選択される1以上の領域のニューロンである、請求項12に記載の方法。
- 興奮性刺激が、化学的刺激、磁気的刺激および電気的刺激からなる群から選択される刺激である、請求項12または13に記載の方法。
- 疾患を有する哺乳動物において前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域内に存在するピログルタミン化RFアミドペプチド(QRFP)産生ニューロンに興奮性刺激を与える物質をスクリーニングする方法であって、
被検化合物と前記QRFP産生ニューロンとを接触させることと、
前記QRFP産生ニューロンの興奮を測定することと、
前記QRFP産生ニューロンに興奮性刺激を与える被検化合物を選択することと、
を含む、方法。 - 疾患を有する哺乳動物において被検化合物が冬眠を誘発しているか否かを決定する方法であって、
被検化合物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において記録された酸素消費量および深部体温を提供することと、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定することと、
推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定することを含み、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下することは、前記哺乳動物が冬眠したことを示す、方法。 - 冬眠状態をモニタリングする装置であって、
被検化合物が前腹側脳室周囲核(AVPe)、内側視索前野(MPA)および脳室周囲核(Pe)の領域に投与されたヒトなどの疾患を有する哺乳動物において、投与前および投与後のそれぞれにおいてそれぞれ少なくとも2つの異なる周辺環境温度条件下において記録された酸素消費量および深部体温を記録する記録部と、
投与前および投与後のそれぞれにおいて、酸素消費量と深部体温との相関関係を推定し、推定された相関関係から、深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定すること、および、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下するか否かを決定する演算部とを備え、
深部体温が低下したときの酸素消費量の低下の程度が、投与前と比較して投与後において低下し、かつ、酸素消費量が0であると仮定したときの深部体温の推定値が、投与前と比較して投与後において低下した場合に、前記哺乳動物が冬眠したと判定する判定部と
を備えた装置。 - 疾患を有する哺乳動物を処置する方法であって、
当該動物に制御された低代謝状態を誘発させることを含む、方法。 - 請求項18に記載の方法であって、
当該哺乳動物に制御された低代謝状態を誘発させることが、当該哺乳動物において疾患の進行を遅延させるように行われる、方法。 - 請求項18に記載の方法であって、
当該哺乳動物に制御された低代謝状態を誘発させることが、当該哺乳動物においてその死亡率を低下させるように行われる、方法。 - 制御された低代謝状態が、冬眠様状態である、請求項18~20のいずれか一項に記載の方法。
- 制御された低代謝状態を誘発させることが、QRFPニューロンを刺激することにより実施される、請求項18~21のいずれか一項に記載の方法。
- 疾患が、重篤な急性疾患である、請求項18~22のいずれか一項に記載の方法。
- 当該動物の経過を観察することをさらに含む、請求項18~23のいずれか一項に記載の方法。
- 経過を観察することが、当該動物の酸素消費量の経時的変化を測定することを含む、請求項24に記載の方法。
- 経過を観察することが、当該動物の疾患の進行を観察することを含む、請求項24または25に記載の方法。
- 当該動物の経過を観察することが、当該動物の医療機関への搬送中に、または医療機関の集中治療室において行われる、請求項24~26のいずれか一項に記載の方法。
- 処置の有効性を試験する方法であって、
疾患を有する哺乳動物を当該処置に供することと、
処置された哺乳動物を経過観察することと
当該処置がなされなかった対象群と比較して、当該処置により疾患の進行速度が低下するか否か、死亡率を低下させるか否か、および、生存期間を延長させるか否かから選択されるいずれかを決定することと
を含む、方法。
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