WO2022136766A1 - Support pour l'analyse par microscope d'une substance biologique à base liquide et système comportant un tel support et un microscope - Google Patents

Support pour l'analyse par microscope d'une substance biologique à base liquide et système comportant un tel support et un microscope Download PDF

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Agnès CAMUS
Eric Schmitt
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Definitions

  • TITLE Support for microscopic analysis of a liquid-based biological substance and system comprising such a support and a microscope
  • the invention relates to the microscopic analysis of a liquid-based biological substance, such as animal semen.
  • the invention relates more particularly to a support for such a substance, intended to be mounted in a microscope configured to carry out such an analysis, as well as a system comprising such a support and such a microscope.
  • a drop is deposited at each of the wells of the support.
  • the drops are then each driven by capillary action into the individual compartment with which the well communicates.
  • the holder is mounted in a microscope and the individual compartments are arranged one after another under its lens to observe the substance.
  • a system comprising such a support and such a microscope comprising an objective, a stage on which the support rests with the underside of the slide against the stage and one of the individual compartments aligned with the objective.
  • the microscope further comprises a frame on which the objective is mounted and on which the stage is mounted movable in translation in the left-right direction of the support in order to be able to successively align the other individual compartments with the objective.
  • the microscope further comprises a support plate and a clamping member configured to urge the support plate and the stage towards each other.
  • the support plate is hinged to the plate so that it can be moved away from the support or folded down on the support.
  • the system is further configured to focus the lens by autofocus.
  • the invention proposes, in a first aspect, a support similar to that described above but with improved performance, in particular vis-à-vis the positioning of the individual compartments with respect to the objective of the microscope.
  • the invention proposes for this purpose a support for the microscopic analysis of a liquid-based biological substance, such as animal semen, comprising a glass slide, a cover glass and lines of glue arranged between the microscope slide and the microscope slide to secure them to one another while peripherally delimiting individual compartments for receiving a sample of said biological substance;
  • the microscope slide being parallelepipedal and having two main faces, namely an upper face and a lower face, and side faces which extend from one to the other of the main faces, namely a left face, a right face, a front face and a back face, with the distance between the left face and the right face being greater than the distance between the front face and the back face being itself greater than the distance between the bottom face and the upper face;
  • said support having a left-right direction transverse to the left face and to the right face while it is parallel to the front face, to the rear face and to the main faces, a front-to-rear direction transverse to the front face and to the rear face while it is parallel to the left face,
  • the expression "uncovered” referring to the upper face of the microscope slide means that this upper face is not in no element (such as the cover glass for example) which could constitute an obstacle for another element which would be brought closer to the support in the bottom-up direction to come into contact with its upper face.
  • the invention is further based on the observation that the optical quality of the surface of the microscope slide (necessary in order to disturb as little as possible the light which passes through the slide to illuminate the sample present in the individual compartment) implies a mechanical regularity of this surface which is favorable to sliding; and that it is in particular possible to exert pressure on this surface while retaining a sliding capacity on this surface.
  • the front and rear marginal regions can thus serve as sliding tracks for at least one support element - such as for example a finger as explained later - against which the upper face would be placed in abutment by its marginal regions in order to have its mechanically determined position.
  • at least one support element - such as for example a finger as explained later - against which the upper face would be placed in abutment by its marginal regions in order to have its mechanically determined position.
  • the position of the marginal regions - namely along the front face and the rear face - means that these regions are as far apart as possible from each other, which is favorable to the precision of the mechanical determination of the position by the support elements and the stability during sliding.
  • the extension in the left-right direction is equal to the distance between the left face and the right face of the microscope slide;
  • each well has an extension in the front-rear direction which is less than the extension in the front-rear direction of each of said front marginal region and rear marginal region;
  • the distance between the left side and the right side of the microscope slide is between 74.8 mm and 75.2 mm
  • the distance between the front side and the back side of the microscope slide is between 24 .8 mm and 25.2 mm
  • the distance between the left face and the right face of the coverslip is between 31.8 mm and 32.2 mm
  • the distance between the front face and the back face of the coverslip is between 16.8 mm and 16.2 mm;
  • the invention proposes, in a second aspect, a system for the analysis of a liquid-based biological substance, comprising a support as described above and a microscope comprising an objective, a stage configured to receive the support in a first viewing position in which the underside of the microscope slide is against the stage and one of the individual compartments is aligned with the objective, a frame on which the objective is mounted in at least one fixed predetermined position and on which the plate is mounted movable in translation in the left-right direction of the support in order to be able to successively align the other individual compartments with the lens, a support plate extending at least partially opposite the support, and a clamp configured to urge the backing plate and the platen toward each other so that the carrier is clamped between the plate support and the plate; the support plate being fixedly mounted on the frame and comprising a base and support fingers projecting from the base towards the plate and the distal ends of which are in contact with the marginal regions exclusively, with at least two support fingers on one of the front marginal region and rear marginal region and at least one support finger
  • the fingers of support determine the position of the upper face relative to the frame in the bottom-top direction.
  • the position of the upper face relative to the frame does not depend on the thickness (i.e. the distance between the lower face and the upper face) of the slide.
  • the support fingers slide on the marginal regions. Since the extension in the left-right direction of the marginal regions is at least equal to the difference between the respective axes of the two individual compartments furthest apart from each other, the fingers remain in contact with the marginal regions whatever or the individual compartment aligned with the lens.
  • the position of the upper face of the microscope slide in the bottom-up direction remains determined in the same way by the support fingers regardless of the individual compartment aligned with the objective.
  • the mechanical reference surface is the surface of the plate on which the lower face of the slide is resting, so that the position of the upper face of the slide bears -Object depends on the thickness of the slide, and therefore these systems do not offer the advantages described above.
  • the support plate has four support fingers, including two support fingers in contact with the front marginal region and the other two support fingers in contact with the rear marginal region;
  • the clamping device comprises magnets fixed to the other of the plate and the support plate
  • the base has an opening through which the objective points on said individual compartment aligned with the objective in said first observation position, at least two of the support fingers which are in contact with the same region marginal being arranged on either side of the opening;
  • the frame comprises a mounting wall and the base comprises two branches each projecting transversely from the mounting wall, extending opposite one another and delimiting the opening, each branch being provided with two fingers support, including a finger in contact with the front marginal region and a finger in contact with the rear marginal region;
  • the clamping member comprises magnets housed in said branches;
  • one of the plate and of the support plate has a ramp and the other of the plate and of the support plate has a boss configured to cooperate with the ramp during the translational movement of the following plate the left-right direction so as to separate the plate from the support plate, against the force exerted by the clamping member, to a position in which the support is accessible in order to be able to be removed from the platinum;
  • the plate is mechanically connected to the frame by a sliding pivot connection comprising a cylindrical guide longitudinally oriented in the left-right direction and a barrel mounted to slide on the guide, with a clearance between the barrel and the guide; and or
  • the lens has a fixed focal length.
  • the invention also relates to the use of a system as described above in which the liquid-based biological substance is animal semen and said analysis comprises a step of counting spermatozoa.
  • FIG. 1 is a view of a support for the analysis by microscopy of a liquid-based biological substance, in accordance with the prior art.
  • FIG. 2 is a view similar to Figure 1, and to the same scale, of a support according to the invention.
  • FIG. 3 is a very schematic sectional view of a system according to the invention (illustrated in more detail in Figures 9 to 12), comprising the support illustrated in Figure 2 and a microscope, the system being in a observation configuration in which the support is clamped between a stage and the fingers of a support plate of the microscope with one of the individual compartments of the support aligned with the objective; the cut being in the front-rear direction of the support and passing through the middle of this individual compartment.
  • FIG. 4 is a sectional view of the system illustrated in Figure 3, this time following the left-right direction of the support and passing through the middle of the individual compartments.
  • Figure 5 is a view similar to Figure 4 after the stage has been moved in the left-right direction to align another of the individual compartments with the lens.
  • Figure 6 is a view similar to Figure 2 on which are marked the axes of the individual compartments, as well as the positions of the fingers of the plate support on the upper face of the specimen slide when the stage is in the position it occupies in figure 4 and when the stage is in the position it occupies in figure 5.
  • Figure 7 is a view similar to Figure 6, on which are marked the path of each of the fingers of the support plate during the passage of the plate from the position it occupies in Figure 4 to the position qu 'it occupies in Figure 5.
  • Figure 8 is a view similar to Figure 3, after the plate has been moved away from the support plate to place the system in a loading/unloading configuration in which the support is accessible to a user of the system.
  • FIG. 9 is an exploded and detailed perspective view of the system illustrated schematically in Figures 2 to 8, but without the lens.
  • FIG. 10 is a view similar to figure 9 but for the system in the assembled state, and in a cleaning configuration in which the plate is very far from the support plate.
  • FIG 11 is a sectional view of the system as illustrated in Figures 9 and 10, taken along the front-rear direction of the support and passing through one of the individual compartments, the system being in the loading / unloading configuration schematically shown in Figure 8.
  • FIG. 12 is a side view of part of the system illustrated in Figures 9 to 11, the system being in the observation configuration schematically shown in Figures 3 to 5.
  • Figure 13 is a view similar to Figure 7 for a variant of the support according to the invention.
  • the support 10 and the support 40 illustrated respectively in FIGS. 1 and 2 each comprise a microscope slide 11, a microscope slide 12 and lines of glue 13 placed between the microscope slide 11 and the microscope slide. 12 to secure them to each other while peripherally delimiting individual compartments 14. It should be noted beforehand that in this report, the same numerical references have been used for simplicity for the corresponding elements of the support 10 and the support 40.
  • the individual compartments 14 of the support 10 are each configured to receive a sample of the liquid-based biological substance, here animal semen, diluted or not.
  • the support 10 here comprises individual compartments 14.
  • Each individual compartment 14 opens exclusively on one side onto a well 15 and on the other side onto a vent 16, each well 15 and each vent 16 being delimited by the lines of glue 13.
  • a drop (not shown) of this substance is deposited in the respective well 15. This drop is then drawn by capillarity into the individual compartment 14 while the air initially present in the individual compartment 14 escapes through the vent 16.
  • the microscope slide 11 and the microscope slide 12 are here each made of float glass coated with a surfactant film (in English surfactant) promoting the entrainment of the drop in the individual compartment 14 by capillarity.
  • a surfactant film in English surfactant
  • the microscope slide 11 and the microscope slide 12 are each transparent.
  • the slide 11 is parallelepipedal and has two main faces, namely an upper face 17 and a lower face 18 (FIGS. 3 and 4), and side faces which extend from one to the other of the faces main ones, namely a left face 19, a right face 20, a front face 21 and a rear face 22.
  • the distance between the left face 19 and the right face 20 is greater than the distance between the front face 21 and the rear face 22 which is itself even greater than the distance between the lower face 18 and the upper face 19.
  • the distance between the left face 19 and the right face 20 is here between 74.8 mm and 75.2 mm.
  • the distance between the front face 21 and the rear face 22 is here between 24.8 mm and 25.2 mm.
  • the distance between the lower face 18 and the upper face 19 - that is to say the thickness of the microscope slide 11 - is here approximately 1 mm.
  • the support 10 has a left-right direction transverse to the left face 19 and to the right face 20 while it is parallel to the front face 21, to the rear face 22 and to the main faces 17 and 18, a front- rear transverse to the front face 21 and to the rear face 22 while it is parallel to the left face 19, to the right face 20 and to the main faces 17 and 18, and a low-high direction transverse to the main faces 17 and 18 while it is parallel to the side faces 19, 20, 21 and 22.
  • the coverslip 12 is parallelepipedal and has two main faces, namely an upper face 23 and a lower face 24, and side faces which extend from one to the other of the main faces, namely a face left 25, a right face 26, a front face 27 and a rear face 28.
  • the distance between the left face 25 and the right face 26 is greater than the distance between the front face 27 and the rear face 28 which is itself greater than the distance between the lower face 24 and the upper face 23.
  • the distance between the left face 25 and the right face 26 is here between 31.8 mm and 32.2 mm.
  • the distance between the front face 27 and the rear face 28 is here between 20.8 mm and 21.2 mm.
  • the distance between the lower face 24 and the upper face 23 - that is to say the thickness of the coverslip 12 - is here 0.7 mm +/- 0.05 mm.
  • the lower face 24 of the coverslip 12 faces the upper face 17 of the slide 11 while the front face 27, the rear face 28, the left face 25 and the right face 26 of the slide coverslip 12 are turned towards and at a distance respectively from the front face 21, the rear face 22, the left face 19 and the right face 20 of the slide 11.
  • the cover slip 12 is here arranged centered with respect to the slide 11 in the left-right direction.
  • Each individual compartment 14 is delimited in the bottom-top direction respectively by the upper face 17 of the slide 11 and by the lower face 24 of the slide cover 12 and peripherally delimited by the lines of glue 13.
  • the thickness of the lines of glue 13 is here 20 ⁇ m.
  • Each individual compartment 14 here has a capacity of 3 pl.
  • the individual compartments 14 follow one another in the left-right direction, here being juxtaposed to one another.
  • each individual compartment 14 opens on one side onto a well 15 and on the other side onto a vent 16, the well 15 here being turned towards the rear face 22 of the slide 11 and the vent 16 here being turned towards the front face 21 of the slide 11 .
  • Each well 15 is delimited here by a portion 29 of the lines of glue 13 shaped like a U and extending beyond the space strictly between the slide 11 and the slide cover 12 up to one end 30 located here flush with the rear face 22 of the specimen slide 11 .
  • Each vent 16 is here delimited by straight portions 31 of the lines of glue 13 extending opposite one another, each overflowing the space strictly comprised between the slide 11 and the cover slip. object 12 and up to a respective end 32 located here flush with the front face 21 of the slide 11 .
  • the support 40 illustrated in FIG. 2 is similar to the support 10, except that the respective dimensions of the coverslip 12 and of the glue lines 13 of the support 40 are smaller in the front-to-back direction and that the upper face 17 of the microscope slide 11 of the support 40 is bare and uncovered on a front marginal region 41 and on a rear marginal region 42.
  • the distance between the front face 27 and the rear face 28 of the coverslip 12 is here between 16.8 mm and 16.2 mm.
  • the length of the individual compartments 14 of the support 40 that is to say the distance separating the well 15 from the vent 16, which here corresponds to the distance between the front face 27 and the rear face 28 of the cover glass 12, is therefore also smaller than that of the individual compartments 14 of holder 10.
  • the front marginal region 41 runs along the front face 21 of the microscope slide 11, while the rear marginal region 42 runs along the rear face 22 of the microscope slide 11.
  • front marginal region 41 and the rear marginal region 42 are each directly bordered by the front face 21 and the rear face 22 of the slide 11 respectively.
  • the front marginal region 41 here has an extension along the front-rear direction equal to 2.5 mm and has an extension along the left-right direction equal to the distance between the left face 19 and the right face 20 of the door blade. object 11 .
  • the upper face 17 is coated by the lines of glue 13 and/or is opposite the lower face 24 of the cover slip 12 is n is therefore not bare and uncovered.
  • the rear marginal region 42 here has an extension along the front-rear direction equal to 2.6 mm and has an extension along the left-hand direction. right equal to the distance between the left face 19 and the right face 20 of the specimen slide 11 .
  • the upper face 17 is coated by the lines of glue 13 and/or is opposite the lower face 24 of the cover slip 12 is n is therefore not bare and uncovered.
  • each of the front marginal region 41 and rear marginal region 42 has an extension in the front-rear direction at most equal to 3 mm, or alternatively equal to more than 3 mm, for example 3.5 mm, 4 mm, 4.5 mm, 5 mm, or even more than 5 mm.
  • the extension along the front-rear direction of each of the wells 15 - that is to say the distance, measured at the level of the upper face 17, between the rear face 28 of the blade covers- object 12 and the limit 44 (which passes flush with the ends 30 of the wells 15) - is here equal to 2.4 mm, which is in particular less than both the extension in the front-rear direction of the marginal region front 41 (2.5 mm) and the extension in the front-rear direction of the rear marginal region 42 (2.6 mm).
  • FIGS. 3 to 5 and 8 illustrate a system 100 for the analysis of the liquid-based biological substance, comprising the support 40 and a microscope
  • the system is in an observation configuration in which the microscope 50 is in the process of cooperating with the support 40 in order to observe the samples of biological substance contained in the individual compartments 14.
  • the microscope 50 comprises an objective 51 and a stage 52 configured to receive the support 40 in at least one observation position in which the lower face 18 of the slide 11 against the stage 52 and one of the individual compartments 14 aligned with the objective
  • the support 40 is in a first viewing position in which the compartment 14 aligned with the objective 51 is the one seen furthest to the left in Figure 2.
  • the microscope 50 is configured to arrange the support 40 in a plurality of observation positions in each of which the stage 52 receives the support 40 with a respective individual compartment 14 aligned with the objective 51.
  • the support 40 is in a second observation position in which the compartment 14 aligned with the lens 51 is the one seen furthest to the right in figure 2.
  • the microscope 50 further comprises a frame (not shown in Figures 3 to 5 and 8 but whose mounting wall 60 is visible in Figures 9 to 11) on which the lens 51 is mounted fixed and on which the plate 52 is mounted movable in translation in the left-right direction of the support 40 in order to be able to successively align the other individual compartments 14 with the lens 51 .
  • the plate 52 is further configured to receive the support 40 in a predetermined position.
  • the plate 52 here comprises positioning stops each configured to cooperate with a respective side face of the slide 11 which it faces in order to immobilize the next support 40 the direction (left-right or front-back depending on the case) transverse this respective side face.
  • the positioning stops here comprise two front positioning stops 33 facing the front side face 21, a left positioning stop 34 facing the left side face 19, a right positioning stop 35 facing the right side face 20 and two rear positioning stops 36 facing the rear side face 22, so that the support 40 is here immobilized with respect to the plate 52 at the same time following the front-back direction in both directions and following the left-right direction in both directions.
  • the positioning stops are here formed by pins projecting from an upper face 37 of the plate 52 on which rests the lower face 18 of the slide 11.
  • the plate 52 further comprises a notch 45 which extends opposite each of the individual compartments 14 and configured to allow light from a lighting device (not shown) arranged under the plate 52 to reach each of the compartments. individual 14.
  • the microscope 50 further comprises a support plate 53 which extends at least partially opposite the support 40, as well as a clamping member configured to urge the support plate 53 and the plate 52 towards one another. other, so that the support 40 is clamped between the support plate 53 and the plate 52.
  • the clamping member here comprises magnets 54 integral with the support plate 53, while the plate 52 has magnetic properties, the magnets 54 being configured to urge the plate 52 towards the support plate 53.
  • the support plate 53 is mounted fixed on the frame and comprises a base 55 and support fingers 56 each projecting from the base 55 towards the plate 52 up to a distal end 57.
  • the distal ends 57 of the support fingers 56 are each exclusively in contact with the marginal regions 41 and 42 of the upper face 17 of the slide 11.
  • the support plate 53 here comprises four fingers 56, including two fingers 56 which are in contact with the front marginal region 41 and two other fingers 56 which are in contact with the rear marginal region 42.
  • the four support fingers 56 are here arranged so as to be each at the respective vertex of an imaginary rectangle.
  • the base 55 also has an opening 58 through which the lens 51 points to the individual compartment 14 aligned with the lens 51, the latter here being partially received in the opening 58.
  • the support fingers 56 which are in contact with the front marginal region 41 are arranged on either side of the opening 58.
  • the support fingers 56 which are in contact with the rear marginal region 42 are arranged on either side of the opening 58. and other side of opening 58.
  • Lens 51 here has a fixed focal length.
  • System 100 is configured so that focal point 59 of lens 51 is here approximately in the middle of individual compartment 14 which is aligned with lens 51 .
  • the support fingers 56 slide on the respective marginal regions 41 and 42, each remaining exclusively in contact with them.
  • the plate 52 has been moved a distance equal to the difference between the respective axes 38 of the individual compartment 14 the farthest to the left and the individual compartment 14 farthest to the right, that is to say the two individual compartments 14 furthest apart from each other on the support 40.
  • the gap between the axes 38 of two neighboring compartments is here equal to 7.8 mm and the gap between the axes 38 of the two individual compartments 14 furthest apart from each other is therefore 23.4 mm.
  • FIG. 6 four black rectangles 46 have also identified the respective positions of the support fingers 56 when the plate 52 is in the position it occupies in FIG. 4, and by four hatched rectangles 47 the respective positions of these fingers 56 when the plate 52 is in the position it occupies in Figure 5.
  • Each black 46 or hatched 47 rectangle corresponds to the portion of the upper face 17 which is in contact with the distal end 57 of a bearing finger 56, this portion here having an extension in the front-rear direction equal to approximately 1 mm and an extension along the left-right direction equal to approximately 3 mm.
  • hatched rectangles 48 also identify the path of each of the support fingers 56 when the plate 52 moves from the position it occupies in FIG. 4 to the position it occupies on the figure 5.
  • Each hatched rectangle 48 therefore corresponds to the integral of the respective rectangle 46 or 47 over the entire path of the corresponding finger 56.
  • Each rectangle 48 therefore has here an extension along the front-rear direction equal to approximately 1 mm and an extension along the left-right direction equal to approximately 3 mm added to the length of the path of the finger 56, this latter length being - as explained higher - equal to the difference between the respective axes 38 of the leftmost individual compartment 14 and the rightmost individual compartment 14, that is to say the two individual compartments 14 farthest from each other. the other on support 40.
  • each support finger 56 in order for each support finger 56 to be able to remain entirely in contact with the respective marginal region 41 or 42 which it traverses, whatever the individual compartment 14 which is aligned with the lens 51, the extension following the left-right direction of this marginal region must be at least equal to the extension along the left-right direction of the hatched rectangles 48.
  • extension in the left-right direction of the hatched rectangles 48 is in practice greater than the difference between the respective axes 38 of the two individual compartments 14 furthest apart from each other on the support 40 (since it is necessary to take into account the extension of the support fingers in the left-right direction).
  • the support has two front marginal regions and/or two rear marginal regions as described above but each with a lesser extension in the left-right direction, and with a coating interposed between these two regions. front marginal regions and/or between these two rear marginal regions.
  • the support 70 shown in Figure 13 is similar to the support 40 except that it has only two individual compartments 14, the gap between the axes 38 of these compartments being in this case equal to 15.84 mm.
  • FIG. 8 illustrates a loading/unloading configuration of the system 100, here obtained after the plate 52 has been moved away from the support plate 53, the support 40 then being accessible to a user to be removed from the plate 52 and possibly replaced by another similar support in order to analyze the samples contained in the compartments of this other support.
  • the plate 52 loaded with the support 40 is brought closer to the support plate 53 until each support finger 56 is at the contact of the marginal regions 41 and 42 in the manner previously described.
  • the frame here comprises a mounting wall 60 and the base 55 comprises two branches 61 each projecting transversely from the mounting wall 60.
  • the branches 61 extend opposite one another, delimiting the opening 58.
  • Each branch 61 is here provided with two support fingers 56, one finger 56 of which is in contact with the front marginal region 41 and one finger is in contact with the rear marginal region 42 when the system 100 is in the observation configuration (figure 12).
  • the magnets 54 of the clamping member are here housed in the branches 61, each branch 61 being here provided with three magnets 54 cylindrical.
  • the magnets 54 are here distributed between the bearing fingers 56 of this branch 61 .
  • the support plate 53 here has guide grooves 62 formed in the base 55, on the same side as the support fingers 56, each guide groove 62 being configured to receive an end portion of a respective pin forming one of the front 33, left 34 and/or right 35 positioning stops of the plate 52 when the system 100 is in observation configuration, the ends of the pins moving in the respective guide groove when the plate 52 moves in the left-right direction.
  • the guide grooves 62 thus participate in the correct positioning of the plate 52 in the front-rear direction of the support 40, that is to say so that the support fingers 56 remain exclusively in contact with the marginal regions 41 and 42 during movement of plate 52.
  • the plate 52 further has a ramp 63 and the support plate 53 has a boss 64 configured to cooperate with the ramp 63 during the translational movement of the plate 52 in the left-right direction of the support 40 so as to separate the plate 52 of the support plate 53, against the force exerted by the clamping member, here until the plate arrives in the position illustrated in FIG. 11, where the system 100 is in its loading/unloading configuration.
  • the plate 52 is here mechanically connected to the frame by a sliding pivot connection comprising a cylindrical guide 65 and a shaft 66 mounted to slide on the guide 65, the latter being longitudinally oriented in a direction parallel to the left-right direction of the support 40 when the latter is received in its predetermined position on the plate 52.
  • the guide 65 is here fixed to the mounting wall 60 while the barrel 66 is integral with the plate 52.
  • the internal diameter of the barrel 66 is here slightly greater than the external diameter of the guide 65 so that there is a clearance between them allowing the plate 52 to pivot to a certain extent both in the left-right direction in both directions. and following the front-rear direction in both directions.
  • the microscope 50 further comprises here a motorized mechanism (not shown) controlled from a user interface.
  • the mechanism is not motorized and is operated manually using a wheel.
  • the system 100 as described above is in particular suitable for an analysis comprising a step of counting the spermatozoa present in the animal semen samples, with a view to determining the concentration thereof.
  • the system 100 is coupled to a computer configured to automatically analyze the images captured by the lens in order to carry out the counting step and determine the concentration.
  • the focal point of the lens is not in the middle of the individual compartments but is - in the bottom-up direction - at a predetermined distance from the middle of the individual compartments.
  • the lens is mounted to move relative to the frame of the microscope between a plurality of fixed predetermined positions in each of which the lens is at a respective different distance from the support.
  • the term objective must be understood in a broad sense and may in particular be a simple sensor of electronic images, such as for example a CMOS sensor, used for example in so-called “lensless” microscopy methods, using for example the principle of online holography.
  • the analysis system as described above is provided with a camera equipped with such an electronic sensor, and is configured to record and process a succession of images in order to analyze the biological substance, for example to determine the motility of spermatozoa contained in animal semen samples.
  • the front marginal strip and the rear marginal strip are located at a short distance from the front face 21 or the rear face 22 respectively, that is to say for example that a coating or a coating portion is located on the upper face 17 between the front face 21 and the front marginal region and/or between the rear face 22 and the rear marginal region.
  • the support plate comprises three support fingers, with - when the system is in the holding configuration - two of the fingers which are exclusively in contact with one of the front and rear marginal regions and the last of the fingers which is exclusively in contact with each other of the front and back marginal regions.
  • the clamping member comprises magnets which are integral with the plate while the support plate has magnetic properties.
  • the positioning stops are different from pins projecting from the upper face 37 of the plate 52 and are for example formed by the edges of a recess made in this upper face 37 and configured to accommodate the blade object holder 11 .
  • the wells and the vents are arranged differently than described above, for example all the wells are turned towards the front face and all the vents are turned towards the rear face, or else compartment to another the wells and the vents are alternately turned towards the front face then towards the rear face.
  • all the wells are turned towards the front face and all the vents are turned towards the rear face, or else compartment to another the wells and the vents are alternately turned towards the front face then towards the rear face.
  • the lens has a variable focal length rather than a fixed one
  • the number of individual compartments is different from four and from two, for example three, five or more than five;
  • the clamping member comprises a number of magnets different from three per branch, for example one, two, four or more than four magnets per branch and/or the magnets have a shape other than cylindrical, for example parallelepipedic;
  • the clamping member is different from magnets housed in the branches of the support plate, and comprises for example springs arranged on the side of the plate which faces away from the support plate and configured to push the plate towards the support plate; and or
  • the ramp 63 is carried by the support plate and the boss 64 is carried by the plate.
  • the boss 64 is carried by the plate.

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Abstract

Le support comporte une lame porte-objet (11) et une lamelle couvre-objet (12) assujetties par des lignes de colle (13) délimitant périphériquement des compartiments individuels (14) de réception d'un échantillon de ladite substance biologique; caractérisé en ce que la face supérieure (17) de la lame porte-objet est à nu et à découvert sur au-moins une région marginale avant (41) et au-moins une région marginale arrière (42), ayant chacune une extension suivant la direction avant-arrière au-moins égale à 2,5 mm et une extension suivant la direction gauche-droite au moins égale à l'écart entre les axes respectifs des deux compartiments individuels les plus éloignés l'un de l'autre. Le système comporte le support (40) et un microscope configuré pour enserrer le support entre une platine et une plaque d'appui pourvue de doigts dont les extrémités distales sont au contact des régions marginales (41, 42) exclusivement.

Description

DESCRIPTION
TITRE : Support pour l’analyse par microscope d’une substance biologique à base liquide et système comportant un tel support et un microscope
Domaine technique de l’invention
L’invention a trait à l’analyse par microscope d’une substance biologique à base liquide, telle que de la semence animale. L’invention vise plus particulièrement un support pour une telle substance, destiné à être monté dans un microscope configuré pour réaliser une telle analyse, ainsi qu’un système comportant un tel support et un tel microscope.
Etat de la technique
On connaît déjà, notamment par le brevet européen EP 0 809 815, auquel correspond le brevet américain US 6,551 ,554 ainsi que par le design patent américain US D566,849 S un support pour l’analyse par microscope d’une substance biologique à base liquide, telle que de la semence animale, comportant une lame porte-objet, une lamelle couvre-objet et des lignes de colle disposées entre la lame porte-objet et la lamelle couvre-objet pour les assujettir l’une à l’autre tout en délimitant périphériquement des compartiments individuels de réception d’un échantillon de ladite substance biologique ; la lame porte-objet étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure et une face inférieure, et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche, une face droite, une face avant et une face arrière, avec la distance entre la face gauche et la face droite qui est supérieure à la distance entre la face avant et la face arrière qui est elle-même supérieure à la distance entre la face inférieure et la face supérieure ; ledit support présentant une direction gauche- droite transversale à la face gauche et à la face droite tandis qu’elle est parallèle à la face avant, à la face arrière et aux faces principales, une direction avant-arrière transversale à la face avant et à la face arrière tandis qu’elle est parallèle à la face gauche, à la face droite et aux faces principales, et une direction bas-haut transversale aux faces principales tandis qu’elle est parallèle aux faces latérales ; la lamelle couvre-objet étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure et une face inférieure, et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche, une face droite, une face avant et une face arrière ; la face inférieure de la lamelle couvre-objet étant en regard de la face supérieure de la lame porte-objet tandis que la face avant, la face arrière, la face gauche et la face droite de la lamelle couvre-objet sont tournées vers et à distance de respectivement la face avant, la face arrière, la face gauche et la face droite de la lame porte-objet ; chaque dit compartiment individuel étant délimité suivant la direction bas-haut respectivement par la face supérieure de la lame porte-objet et par la face inférieure de la lamelle couvre-objet et délimité périphériquement par lesdites lignes de colle, chaque dit compartiment individuel s’ouvrant exclusivement d’un côté sur un puits et d’un autre côté sur un évent, chaque puits et chaque évent étant délimité par lesdites lignes de colle, chaque puits étant tourné vers l’une des face avant et face arrière de la lame porte-objet et chaque évent étant tourné vers l’autre des face avant et face arrière de la lame porte-objet.
Pour analyser la substance biologique, on en dépose une goutte au niveau de chacun des puits du support. Les gouttes sont alors chacune entraînée par capillarité dans le compartiment individuel avec lequel communique le puits. Le support est monté dans un microscope et les compartiments individuels sont disposés l’un après l’autre sous son objectif pour observer la substance.
On connaît également un système comportant un tel support et un tel microscope comportant un objectif, une platine sur laquelle repose le support avec la face inférieure de la lame porte-objet contre la platine et un des compartiments individuels aligné avec l’objectif. Le microscope comporte en outre un bâti sur lequel l’objectif est monté et sur lequel la platine est montée mobile en translation suivant la direction gauche-droite du support afin de pouvoir aligner successivement les autres compartiments individuels avec l’objectif. Le microscope comporte en outre une plaque d’appui et un organe de serrage configuré pour solliciter la plaque d’appui et la platine l’une vers l’autre. La plaque d’appui est articulée à la platine pour pouvoir être écartée du support ou rabattue sur le support. Le système est en outre configuré pour effectuer la mise au point de l’objectif par autofocus.
Exposé de l’invention
L’invention propose, sous un premier aspect, un support similaire à celui décrit ci-dessus mais aux performances améliorées, notamment vis-à-vis du positionnement des compartiments individuels par rapport à l’objectif du microscope.
L’invention propose à cet effet un support pour l’analyse par microscope d’une substance biologique à base liquide, telle que de la semence animale, comportant une lame porte-objet, une lamelle couvre-objet et des lignes de colle disposées entre la lame porte-objet et la lamelle couvre-objet pour les assujettir l’une à l’autre tout en délimitant périphériquement des compartiments individuels de réception d’un échantillon de ladite substance biologique ; la lame porte-objet étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure et une face inférieure, et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche, une face droite, une face avant et une face arrière, avec la distance entre la face gauche et la face droite qui est supérieure à la distance entre la face avant et la face arrière qui est elle-même supérieure à la distance entre la face inférieure et la face supérieure ; ledit support présentant une direction gauche-droite transversale à la face gauche et à la face droite tandis qu’elle est parallèle à la face avant, à la face arrière et aux faces principales, une direction avant-arrière transversale à la face avant et à la face arrière tandis qu’elle est parallèle à la face gauche, à la face droite et aux faces principales, et une direction bas-haut transversale aux faces principales tandis qu’elle est parallèle aux faces latérales ; la lamelle couvre-objet étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure et une face inférieure, et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche, une face droite, une face avant et une face arrière ; la face inférieure de la lamelle couvre-objet étant en regard de la face supérieure de la lame porte-objet tandis que la face avant, la face arrière, la face gauche et la face droite de la lamelle couvre-objet sont tournées vers et à distance de respectivement la face avant, la face arrière, la face gauche et la face droite de la lame porte-objet ; chaque dit compartiment individuel étant délimité suivant la direction bas-haut respectivement par la face supérieure de la lame porte-objet et par la face inférieure de la lamelle couvre- objet et délimité périphériquement par lesdites lignes de colle, chaque dit compartiment individuel s’ouvrant exclusivement d’un côté sur un puits et d’un autre côté sur un évent, chaque puits et chaque évent étant délimité par lesdites lignes de colle, chaque puits étant tourné vers l’une des face avant et face arrière de la lame porte-objet et chaque évent étant tourné vers l’autre des face avant et face arrière de la lame porte-objet ; caractérisé en ce que la face supérieure de la lame porte-objet est à nu et à découvert sur au-moins une région marginale avant et sur au-moins une région marginale arrière, la région marginale avant longeant la face avant de la lame porte-objet, la région marginale arrière longeant la face arrière de la lame porte-objet, chacune desdites région marginale avant et région marginale arrière ayant une extension suivant la direction avant-arrière au-moins égale à 2,5 mm et une extension suivant la direction gauche-droite au moins égale à l’écart entre les axes respectifs des deux compartiments individuels les plus éloignés l’un de l’autre et au plus égale à la distance entre la face gauche et la face droite de la lame porte-objet.
Grâce aux régions marginales, il est possible d’effectuer un positionnement du support selon l’invention vis-à-vis d’un microscope par appui sur la face supérieure de la lame porte-objet, et non sur sa face inférieure comme cela se fait classiquement.
Cela permet un positionnement particulièrement précis suivant la direction bas-haut de l’échantillon à analyser, puisque l’on évite ainsi l’incertitude sur l’épaisseur de la lame porte-objet due aux tolérances de fabrication.
On notera que l’expression « à nu » visant la face supérieure de la lame porte-objet signifie que cette face supérieure ne porte directement sur elle aucun revêtement ajouté localement, tel que les lignes de colle ou de l’encre.
On notera également que l’expression « à découvert » visant la face supérieure de la lame porte-objet signifie que cette face supérieure n’est en regard d’aucun élément (comme par exemple la lame couvre-objet) qui pourrait constituer un obstacle pour un autre élément qui serait rapproché du support suivant la direction bas-haut pour arriver au contact de sa face supérieure.
Grâce aux régions marginales, il est possible d’accéder directement à la face supérieure de la lame porte-objet afin d’en déterminer mécaniquement la position et ainsi déterminer la position d’autres éléments dont la position est fixe et/ou connue par rapport à cette face supérieure. On notera en particulier que déterminer mécaniquement la position de la face supérieure revient à déterminer mécaniquement la position des compartiments individuels que la face supérieure délimite.
L’invention est en outre basée sur l’observation que la qualité optique de la surface de la lame porte-objet (nécessaire afin de perturber le moins possible la lumière qui traverse la lame pour illuminer l’échantillon présent dans le compartiment individuel) implique une régularité mécanique de cette surface qui est favorable au glissement ; et qu’il est notamment possible d’exercer un appui sur cette surface tout en conservant une capacité de glissement sur cette surface.
Les régions marginales avant et arrière peuvent ainsi servir de pistes de glissement pour au moins un élément d’appui - tel que par exemple un doigt comme expliqué plus loin - contre lequel la face supérieure serait mise en appui par ses régions marginales afin d’avoir sa position déterminée mécaniquement.
On notera en outre que la position des régions marginales - à savoir le long de la face avant et de la face arrière - fait que ces régions sont le plus à l’écart possible l’une de l’autre, ce qui est favorable à la précision de la détermination mécanique du positionnement par les éléments d’appui et à la stabilité lors du glissement.
S’agissant de la borne inférieure de l’extension des régions marginales suivant la direction avant-arrière - à savoir 2,5 mm -, la demanderesse a déterminé que, compte tenu des tolérances de fabrication des différents éléments du système, une valeur au-moins égale à 2,5 mm permettait de garantir que les doigts d’appui restent exclusivement au contact des régions marginales avant et arrière, quelle que soit la position de la platine suivant la direction gauche-droite.
Des caractéristiques avantageuses particulièrement simples, commodes et économiques du support selon l’invention sont présentées ci- dessous :
- pour l’une au moins de la région marginale avant et de la région marginale arrière, l’extension suivant la direction gauche-droite est égale à la distance entre la face gauche et la face droite de la lame porte-objet ;
- chaque puits a une extension suivant la direction avant-arrière qui est inférieure à l’extension suivant la direction avant-arrière de chacune desdites région marginale avant et région marginale arrière ;
- la distance entre la face gauche et la face droite de la lame porte-objet est comprise entre 74,8 mm et 75,2 mm, la distance entre la face avant et la face arrière de la lame porte-objet est comprise entre 24,8 mm et 25,2 mm, la distance entre la face gauche et la face droite de la lamelle couvre-objet est comprise entre 31 ,8 mm et 32,2 mm, et la distance entre la face avant et la face arrière de la lamelle couvre-objet est comprise entre 16,8 mm et 16,2 mm; et/ou
- tous les puits sont tournés vers l’une des face avant et face arrière de la lame porte-objet et tous les évents sont tournés vers l’autre des face avant et face arrière de la lame porte-objet.
L’invention propose, sous un deuxième aspect, un système pour l’analyse d’une substance biologique à base liquide, comportant un support tel que décrit ci- dessus et un microscope comportant un objectif, une platine configurée pour recevoir le support dans une première position d’observation dans laquelle la face inférieure de la lame porte-objet est contre la platine et un des compartiments individuels est aligné avec l’objectif, un bâti sur lequel l’objectif est monté dans au moins une position prédéterminée fixe et sur lequel la platine est montée mobile en translation suivant la direction gauche-droite du support afin de pouvoir aligner successivement les autres compartiments individuels avec l’objectif, une plaque d’appui s’étendant au moins partiellement en regard du support, et un organe de serrage configuré pour solliciter la plaque d’appui et la platine l’une vers l’autre de sorte que le support est enserré entre la plaque d’appui et la platine ; la plaque d’appui étant montée fixe sur le bâti et comportant une embase et des doigts d’appui saillant de l’embase vers la platine et dont les extrémités distales sont au contact des régions marginales exclusivement, avec au moins deux doigts d’appui sur l’une des région marginale avant et région marginale arrière et au moins un doigt d’appui sur l’autre des région marginale avant et région marginale arrière ; la platine présentant des butées de positionnement pour immobiliser le support par rapport à la platine suivant la direction gauche-droite.
Puisque la plaque d’appui est montée fixe sur le bâti et que la face supérieure de la lame porte-objet est maintenue contre les doigts d’appui par la platine, sous l’effet de l’organe de serrage, les doigts d’appui déterminent la position de la face supérieure par rapport au bâti suivant la direction bas-haut.
On notera qu’ainsi la position de la face supérieure par rapport au bâti ne dépend pas de l’épaisseur (c’est-à-dire la distance entre la face inférieure et la face supérieure) de la lame porte-objet.
Lors de la translation de la platine suivant la direction gauche-droite, les doigts d’appui glissent sur les régions marginales. Puisque l’extension suivant la direction gauche-droite des régions marginales est au moins égale à l’écart entre les axes respectifs des deux compartiments individuels les plus éloignés l’un de l’autre, les doigts restent au contact des régions marginales quel que soit le compartiment individuel aligné avec l’objectif.
Ainsi, la position de la face supérieure de la lame porte-objet suivant la direction bas-haut reste déterminée de la même manière par les doigts d’appui quel que soit le compartiment individuel aligné avec l’objectif.
Ceci permet notamment, une fois que la mise au point de l’objectif a été faite pour un compartiment individuel donné, de conserver cette mise au point pour chacun des autres compartiments individuels.
Ceci permet en outre de conserver cette mise au point pour un autre support mis en remplacement d’un premier support pour lequel la mise au point a été effectuée, puisque la position suivant la direction bas-haut de la face supérieure de cet autre support sera déterminée par les doigts d’appui de la même manière que pour le premier support. On notera qu’un telle mise au point peut alors correspondre à un réglage d’usine effectué lors de la fabrication du microscope.
On notera encore que dans les systèmes de l’art antérieur, la surface de référence mécanique est la surface de la platine sur laquelle repose la face inférieure de la lame porte-objet, de sorte que la position de la face supérieure de la lame porte-objet dépend de l’épaisseur de la lame porte-objet, et que par conséquent ces systèmes n’offrent pas les avantages exposés ci-dessus.
Des caractéristiques avantageuses particulièrement simples, commodes et économiques du système selon l’invention sont présentées ci- dessous :
- la plaque d’appui comporte quatre doigts d’appui, dont deux doigts d’appui au contact de la région marginale avant et les deux autres doigts d’appui au contact de la région marginale arrière ;
- l’un de la platine et de la plaque d’appui a des propriétés magnétiques et l’organe de serrage comporte des aimants solidaires de l’autre de la platine et de la plaque d’appui ;
- l’embase présente une ouverture au travers de laquelle l’objectif pointe sur ledit compartiment individuel aligné avec l’objectif dans ladite première position d’observation, au-moins deux des doigts d’appui qui sont au contact d’une même région marginale étant disposés de part et d’autre de l’ouverture ;
- le bâti comporte une paroi de montage et l’embase comporte deux branches saillant chacune transversalement de la paroi de montage, s’étendant en regard l’une de l’autre et délimitant l’ouverture, chaque branche étant pourvue de deux doigts d’appui, dont un doigt au contact de la région marginale avant et un doigt au contact de la région marginale arrière ;
- l’organe de serrage comporte des aimants logés dans lesdites branches ;
- l’une de la platine et de la plaque d’appui présente une rampe et l’autre de la platine et de la plaque d’appui présente un bossage configuré pour coopérer avec la rampe au cours du mouvement de translation de la platine suivant la direction gauche-droite de manière à écarter la platine de la plaque d’appui, à l’encontre de la force exercée par l’organe de serrage, jusqu’à une position dans laquelle le support est accessible pour pouvoir être retiré de la platine ; - la platine est mécaniquement reliée au bâti par une liaison pivot glissant comportant un guide cylindrique longitudinalement orienté suivant la direction gauche-droite et un fût monté à coulissement sur le guide, avec un jeu entre le fût et le guide ; et/ou
- l’objectif a une distance focale fixe.
L’invention vise également l’utilisation d’un système tel qu’exposé ci- dessus dans laquelle la substance biologique à base liquide est de la semence animale et ladite analyse comprend une étape de comptage des spermatozoïdes.
Brève description des figures
On va maintenant poursuivre l'exposé de l'invention par la description détaillée d'exemples de réalisation, donnée ci-après à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés. Sur ceux-ci :
- La figure 1 est une vue d’un support pour l’analyse par microscopie d’une substance biologique à base liquide, conforme à l’art antérieur.
- La figure 2 est une vue similaire à la figure 1 , et à la même échelle, d’un support conforme à l’invention.
- La figure 3 est une vue en coupe très schématique d’un système conforme à l’invention (illustré plus en détails sur les figures 9 à 12), comportant le support illustré sur la figure 2 et un microscope, le système étant dans une configuration d’observation dans laquelle le support est enserré entre une platine et les doigts d’une plaque d’appui du microscope avec un des compartiment individuels du support aligné avec l’objectif ; la coupe étant suivant la direction avant-arrière du support et passant par le milieu de ce compartiment individuel.
- La figure 4 est une vue en coupe du système illustré à la figure 3, cette fois suivant la direction gauche-droite du support et passant par le milieu des compartiments individuels.
- La figure 5 est une vue similaire à la figure 4 après que la platine a été déplacée suivant la direction gauche-droite pour aligner un autre des compartiments individuels avec l’objectif.
- La figure 6 est une vue similaire à la figure 2 sur laquelle sont repérés les axes des compartiments individuels, ainsi que les positions des doigts de la plaque d’appui sur la face supérieure de la lame porte-objet lorsque la platine est dans la position qu’elle occupe à la figure 4 et lorsque la platine est dans la position qu’elle occupe à la figure 5.
- La figure 7 est une vue similaire à la figure 6, sur laquelle sont repérées le trajet de chacun des doigts de la plaque d’appui lors du passage de la platine de la position qu’elle occupe sur la figure 4 à la position qu’elle occupe sur la figure 5.
- La figure 8 est une vue similaire à la figure 3, après que la platine a été écartée de la plaque d’appui pour passer le système dans une configuration de chargement/déchargement dans laquelle le support est accessible à un utilisateur du système.
- La figure 9 est une vue en perspective éclatée et détaillée du système illustré schématiquement sur les figures 2 à 8, mais sans l’objectif.
- La figure 10 est une vue semblable à la figure 9 mais pour le système à l’état assemblé, et dans une configuration de nettoyage dans laquelle la platine est très à l’écart de la plaque d’appui.
- La figure 11 est une vue en coupe du système tel qu’illustré sur les figures 9 et 10, prise suivant la direction avant-arrière du support et passant par un des compartiments individuels, le système étant dans la configuration de chargement/déchargement schématiquement représentée à la figure 8.
- La figure 12 est une vue de côté d’une partie du système illustré sur les figures 9 à 11 , le système étant dans la configuration d’observation schématiquement représentée sur les figures 3 à 5.
- La figure 13 est une vue similaire à la figure 7 pour une variante du support conforme à l’invention.
Description détaillée
Le support 10 et le support 40 illustrés respectivement sur les figures 1 et 2 comportent chacun une lame porte-objet 11 , une lamelle couvre-objet 12 et des lignes de colle 13 disposées entre la lame porte-objet 11 et la lamelle couvre-objet 12 pour les assujettir l’une à l’autre tout en délimitant périphériquement des compartiments individuels 14. On notera au préalable que dans le présent rapport, on a employé pour simplifier les mêmes références numériques pour les éléments correspondants du support 10 et du support 40.
Par conséquent, dans la description du support 10 qui suit, s’il est fait référence à un élément du support 10 qui n’est pas visible sur la figure 1 , il est possible - à des fins de compréhension - de se référer à l’une des figures illustrant le support 40 sur laquelle l’élément correspondant est visible.
Les compartiments individuels 14 du support 10 sont chacun configurés pour recevoir un échantillon de la substance biologique à base liquide, ici de la semence animale, diluée ou non.
Le support 10 comporte ici compartiments individuels 14.
Chaque compartiment individuel 14 s’ouvre exclusivement d’un côté sur un puits 15 et d’un autre côté sur un évent 16, chaque puits 15 et chaque évent 16 étant délimité par les lignes de colle 13.
Pour remplir un compartiment individuel 14 avec un échantillon de la substance biologique, une goutte (non illustrée) de cette substance est déposée dans le puits 15 respectif. Cette goutte est alors entraînée par capillarité dans le compartiment individuel 14 tandis que l’air initialement présent dans le compartiment individuel 14 s’échappe par l’évent 16.
La lame porte-objet 11 et la lamelle couvre-objet 12 sont ici chacune en verre flotté revêtu d’un film tensioactif (en anglais surfactant) favorisant l’entrainement de la goutte dans le compartiment individuel 14 par capillarité.
La lame porte-objet 11 et la lamelle couvre-objet 12 sont chacune transparente.
La lame porte-objet 11 est parallélépipédique et présente deux faces principales, à savoir une face supérieure 17 et une face inférieure 18 (figures 3 et 4), et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche 19, une face droite 20, une face avant 21 et une face arrière 22.
La distance entre la face gauche 19 et la face droite 20 est supérieure à la distance entre la face avant 21 et la face arrière 22 qui est elle- même supérieure à la distance entre la face inférieure 18 et la face supérieure 19.
La distance entre la face gauche 19 et la face droite 20 est ici comprise entre 74,8 mm et 75,2 mm.
La distance entre la face avant 21 et la face arrière 22 est ici comprise entre 24,8 mm et 25,2 mm.
La distance entre la face inférieure 18 et la face supérieure 19 - c’est-à-dire l’épaisseur de la lame porte-objet 11 - est ici d’environ 1 mm.
Le support 10 présente une direction gauche-droite transversale à la face gauche 19 et à la face droite 20 tandis qu’elle est parallèle à la face avant 21 , à la face arrière 22 et aux faces principales 17 et 18, une direction avant- arrière transversale à la face avant 21 et à la face arrière 22 tandis qu’elle est parallèle à la face gauche 19, à la face droite 20 et aux faces principales 17 et 18, et une direction bas-haut transversale aux faces principales 17 et 18 tandis qu’elle est parallèle aux faces latérales 19, 20, 21 et 22.
La lamelle couvre-objet 12 est parallélépipédique et présente deux faces principales, à savoir une face supérieure 23 et une face inférieure 24, et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche 25, une face droite 26, une face avant 27 et une face arrière 28.
La distance entre la face gauche 25 et la face droite 26 est supérieure à la distance entre la face avant 27 et la face arrière 28 qui est elle- même supérieure à la distance entre la face inférieure 24 et la face supérieure 23.
La distance entre la face gauche 25 et la face droite 26 est ici comprise entre 31 ,8 mm et 32,2 mm.
La distance entre la face avant 27 et la face arrière 28 est ici comprise entre 20,8 mm et 21 ,2 mm.
La distance entre la face inférieure 24 et la face supérieure 23 - c’est-à-dire l’épaisseur de la lamelle couvre-objet 12 - est ici de 0,7 mm +/- 0,05 mm. La face inférieure 24 de la lamelle couvre-objet 12 est en regard de la face supérieure 17 de la lame porte-objet 11 tandis que la face avant 27, la face arrière 28, la face gauche 25 et la face droite 26 de la lamelle couvre-objet 12 sont tournées vers et à distance de respectivement la face avant 21 , la face arrière 22, la face gauche 19 et la face droite 20 de la lame porte-objet 11 .
La lamelle couvre-objet 12 est ici disposée centrée par rapport à la lame porte-objet 11 suivant la direction gauche-droite.
Chaque compartiment individuel 14 est délimité suivant la direction bas-haut respectivement par la face supérieure 17 de la lame porte-objet 11 et par la face inférieure 24 de la lamelle couvre-objet 12 et délimité périphériquement par les lignes de colle 13.
L’épaisseur des lignes de colle 13 est ici de 20 pm.
On notera que sur les figures 3 à 5 et 8, l’épaisseur des lignes de colle 13 a été exagérée par souci de lisibilité.
Chaque compartiment individuel 14 a ici une contenance de 3 pl.
Les compartiments individuels 14 se succèdent suivant la direction gauche-droite, ici en étant juxtaposés l’un à l’autre.
Comme expliqué plus haut, chaque compartiment individuel 14 s’ouvre d’un côté sur un puits 15 et d’un autre côté sur un évent 16, le puits 15 étant ici tourné vers la face arrière 22 de la lame porte-objet 11 et l’évent 16 étant ici tourné vers la face avant 21 de la lame porte-objet 11 .
Ici tous les puits 15 sont tournés vers la face arrière 22 et tous les évents 16 sont tournés vers la face avant 21 .
Chaque puits 15 est ici délimité par une portion 29 des lignes de colle 13 conformée en U et s’étendant en débord de l’espace strictement compris entre la lame porte-objet 11 et la lamelle couvre-objet 12 jusqu’à une extrémité 30 située ici au raz de la face arrière 22 de la lame porte-objet 11 .
Chaque évent 16 est ici délimité par des portions droites 31 des lignes de colle 13 s’étendant en regard l’une de l’autre, chacune en débord de l’espace strictement compris entre la lame porte-objet 11 et la lamelle couvre- objet 12 et jusqu’à une extrémité 32 respective située ici au raz de la face avant 21 de la lame porte-objet 11 . Le support 40 illustré sur la figure 2 est similaire au support 10, sauf que les dimensions respectives de la lamelle couvre-objet 12 et des lignes de colle 13 du support 40 sont plus petites suivant la direction avant-arrière et que la face supérieure 17 de la lame porte-objet 11 du support 40 est à nu et à découvert sur une région marginale avant 41 et sur une région marginale arrière 42.
Plus précisément, la distance entre la face avant 27 et la face arrière 28 de la lamelle couvre-objet 12 est ici comprise entre 16,8 mm et 16,2 mm.
On notera que la longueur des compartiments individuels 14 du support 40, c’est-à-dire la distance séparant le puits 15 de l’évent 16, qui correspond ici à la distance entre la face avant 27 et la face arrière 28 de la lamelle couvre-objet 12, est par conséquent elle aussi plus petite que celle des compartiments individuels 14 du support 10.
La région marginale avant 41 longe la face avant 21 de la lame porte-objet 11 , tandis que la région marginale arrière 42 longe la face arrière 22 de la lame porte-objet 11 .
Ici, la région marginale avant 41 et la région marginale arrière 42 sont chacune directement bordée par la face avant 21 et la face arrière 22 de la lame porte-objet 11 respectivement.
La région marginale avant 41 a ici une extension suivant la direction avant-arrière égale à 2,5 mm et a une extension suivant la direction gauche- droite égale à la distance entre la face gauche 19 et la face droite 20 de la lame porte-objet 11 .
La limite de l’extension suivant la direction avant-arrière de la région marginale avant 41 est repérée sur la figure 2 par le trait interrompu 43, où elle passe au raz de chacune des extrémités 32 des évents 16.
En effet, au-delà de cette limite 43 en allant vers l’arrière, la face supérieure 17 est revêtue par les lignes de colle 13 et/ou se trouve en regard de la face inférieure 24 de la lamelle couvre-objet 12 est n’est donc pas à nu et à découvert.
La région marginale arrière 42 a ici une extension suivant la direction avant-arrière égale à 2,6 mm et a une extension suivant la direction gauche- droite égale à la distance entre la face gauche 19 et la face droite 20 de la lame porte-objet 11 .
La limite de l’extension suivant la direction avant-arrière de la région marginale arrière 42 est repérée sur la figure 2 par le trait interrompu 44, où elle passe au raz des extrémités 30 des puits 15.
En effet, au-delà de cette limite 44 en allant vers l’avant, la face supérieure 17 est revêtue par les lignes de colle 13 et/ou se trouve en regard de la face inférieure 24 de la lamelle couvre-objet 12 est n’est donc pas à nu et à découvert.
D’une manière générale, chacune des région marginale avant 41 et région marginale arrière 42 a une extension suivant la direction avant-arrière au plus égale à 3 mm, ou en variante égale à plus que 3 mm, par exemple 3,5 mm, 4 mm, 4,5 mm, 5 mm, voire plus que 5 mm.
En outre, on notera que l’extension suivant la direction avant-arrière de chacun des puits 15 - c’est-à-dire la distance, mesurée au niveau de la face supérieure 17, entre la face arrière 28 de la lame couvre-objet 12 et la limite 44 (qui passe au raz des extrémités 30 des puits 15) - est ici égale à 2,4 mm, ce qui est notamment inférieur à la fois à l’extension suivant la direction avant- arrière de la région marginale avant 41 (2,5 mm) et à l’extension suivant la direction avant-arrière de la région marginale arrière 42 (2,6 mm).
Les figures 3 à 5 et 8 illustrent un système 100 pour l’analyse de la substance biologique à base liquide, comportant le support 40 et un microscope
50.
Sur les figures 3 à 5, le système est dans une configuration d’observation dans laquelle le microscope 50 est en cours de coopération avec le support 40 afin d’observer les échantillons de substance biologique contenus dans les compartiments individuels 14.
Le microscope 50 comporte un objectif 51 et une platine 52 configurée pour recevoir le support 40 dans au-moins une position d’observation dans laquelle la face inférieure 18 de la lame porte-objet 11 contre la platine 52 et un des compartiments individuels 14 aligné avec l’objectif
51. Sur les figures 3 et 4, le support 40 est dans une première position d’observation dans laquelle le compartiment 14 aligné avec l’objectif 51 est celui que l’on voit le plus à gauche sur la figure 2.
Comme expliqué plus en détails ci-après, le microscope 50 est configuré pour disposer le support 40 dans une pluralité de positions d’observation dans chacune desquelles la platine 52 reçoit le support 40 avec un compartiment individuel 14 respectif aligné avec l’objectif 51.
Sur la figure 5 par exemple, le support 40 est dans une deuxième position d’observation dans laquelle le compartiment 14 aligné avec l’objectif 51 est celui que l’on voit le plus à droite sur la figure 2.
Le microscope 50 comporte en outre un bâti (non illustré sur les figures 3 à 5 et 8 mais dont une paroi de montage 60 est visible sur les figures 9 à 11 ) sur lequel l’objectif 51 est monté fixe et sur lequel la platine 52 est montée mobile en translation suivant la direction gauche-droite du support 40 afin de pouvoir aligner successivement les autres compartiments individuels 14 avec l’objectif 51 .
La liaison mécanique entre la platine 52 et le bâti sera décrite en détail ultérieurement, à l’appui des figures 9 à 12.
La platine 52 est en outre configurée pour recevoir le support 40 dans une position prédéterminée.
Pour positionner et immobiliser le support 40 dans cette position prédéterminée, la platine 52 comporte ici des butées de positionnement chacune configurée pour coopérer avec une face latérale respective de la lame porte-objet 11 dont elle est en regard afin d’immobiliser le support 40 suivant la direction (gauche-droite ou avant-arrière suivant le cas) transversale cette face latérale respective.
Les butées de positionnement comportent ici deux butées de positionnement avant 33 en regard de la face latérale avant 21 , une butée de positionnement gauche 34 en regard de la face latérale gauche 19, une butée de positionnement droite 35 en regard de la face latérale droite 20 et deux butées de positionnement arrière 36 en regard de la face latérale arrière 22, de sorte que le support 40 est ici immobilisé par rapport à la platine 52 à la fois suivant la direction avant-arrière dans les deux sens et suivant la direction gauche-droite dans les deux sens.
Les butées de positionnement sont ici formées par des pions saillant d’une face supérieure 37 de la platine 52 sur laquelle repose la face inférieure 18 de la lame porte-objet 11 .
La platine 52 comporte en outre une échancrure 45 qui s’étend en regard de chacun des compartiments individuels 14 et configurée pour permettre à la lumière d’un organe d’éclairage (non illustré) disposé sous la platine 52 d’atteindre chacun des compartiments individuels 14.
Le microscope 50 comporte en outre une plaque d’appui 53 qui s’étend au moins partiellement en regard du support 40, ainsi qu’un organe de serrage configuré pour solliciter la plaque d’appui 53 et la platine 52 l’une vers l’autre, de sorte que le support 40 est enserré entre la plaque d’appui 53 et la platine 52.
L’organe de serrage comporte ici des aimants 54 solidaires de la plaque d’appui 53, tandis que la platine 52 a des propriétés magnétiques, les aimants 54 étant configurés pour solliciter la platine 52 vers la plaque d’appui 53.
La plaque d’appui 53 est montée fixe sur le bâti et comporte une embase 55 et des doigts d’appui 56 saillant chacun de l’embase 55 vers la platine 52 jusqu’à une extrémité distale 57.
Les extrémités distales 57 des doigts d’appui 56 sont chacune exclusivement au contact des régions marginales 41 et 42 de la face supérieure 17 de la lame porte-objet 11 .
La lame porte-objet 11 est ainsi enserrée entre les doigts d’appui 56 et la platine 52, la lame porte-objet 11 étant au contact de la plaque d’appui 53 ici exclusivement par l’intermédiaire des doigts d’appui 56.
La plaque d’appui 53 comporte ici quatre doigts 56, dont deux doigts 56 qui sont au contact de la région marginale avant 41 et deux autres doigts 56 qui sont au contact de la région marginale arrière 42.
Les quatre doigts d’appui 56 sont ici disposés de sorte à se trouver chacun au sommet respectif d’un rectangle imaginaire. L’embase 55 présente en outre une ouverture 58 au travers de laquelle l’objectif 51 pointe sur le compartiment individuel 14 aligné avec l’objectif 51 , ce dernier étant ici partiellement reçu dans l’ouverture 58.
Les doigts d’appui 56 qui sont au contact de la région marginale avant 41 sont disposés de part et d’autre de l’ouverture 58. Les doigts d’appui 56 qui sont au contact de la région marginale arrière 42 sont disposés de part et d’autre de l’ouverture 58.
L’objectif 51 a ici une distance focale fixe.
Le système 100 est configuré de sorte que le point focal 59 de l’objectif 51 se trouve ici approximativement au milieu du compartiment individuel 14 qui est aligné avec l’objectif 51 .
Lors de la translation de la platine 52 suivant la direction gauche- droite du support 40, les doigts d’appui 56 glissent sur les régions marginales 41 et 42 respectives, en restant chacun exclusivement à leur contact.
Sur la figure 6, on a repéré les axes 38 de chacun des compartiments individuels 14.
Lorsqu’on aligne un compartiment individuel 14 avec l’objectif 51 pour observer l’échantillon reçu dans ce compartiment 14, on aligne plus précisément l’axe 38 de ce compartiment 14 avec l’axe optique de l’objectif 51 .
Par conséquent, entre la position qu’elle occupe sur la figure 4 et la position qu’elle occupe sur la figure 5, la platine 52 a été déplacée sur une distance égale à l’écart entre les axes 38 respectifs du compartiment individuel 14 le plus à gauche et le compartiment individuel 14 le plus à droite, c’est-à-dire les deux compartiments individuels 14 les plus éloignés l’un de l’autre sur le support 40.
L’écart entre les axes 38 de deux compartiments voisins est ici égal à 7,8 mm et l’écart entre les axes 38 des deux compartiments individuels 14 les plus éloignés l’un de l’autre est donc de 23,4 mm.
Sur la figure 6, on a en outre repéré par quatre rectangles noirs 46 les positions respectives des doigts d’appui 56 lorsque la platine 52 est dans la position qu’elle occupe sur la figure 4, et par quatre rectangles hachurés 47 les positions respectives de ces doigts 56 lorsque la platine 52 est dans la position qu’elle occupe sur la figure 5.
Chaque rectangle noir 46 ou hachuré 47 correspond à la portion de la face supérieure 17 qui est en contact avec l’extrémité distale 57 d’un doigt d’appui 56, cette portion ayant ici une extension suivant la direction avant- arrière égale à environ 1 mm et une extension suivant la direction gauche-droite égale à environ 3 mm.
Sur la figure 7, on a en outre repéré par des rectangles hachurés 48 le trajet de chacun des doigts d’appui 56 lorsque la platine 52 passe de la position qu’elle occupe sur la figure 4 à la position qu’elle occupe sur la figure 5.
Chaque rectangle hachuré 48 correspond donc à l’intégrale du rectangle 46 ou 47 respectif sur l’ensemble du trajet du doigt 56 correspondant. Chaque rectangle 48 a donc ici une extension suivant la direction avant-arrière égale à environ 1 mm et une extension suivant la direction gauche-droite égale à environ 3 mm additionnée de la longueur du trajet du doigt 56, cette dernière longueur étant - comme expliqué plus haut - égale à l’écart entre les axes 38 respectifs du compartiment individuel 14 le plus à gauche et le compartiment individuel 14 le plus à droite, c’est-à-dire les deux compartiments individuels 14 les plus éloignés l’un de l’autre sur le support 40.
On notera que pour que chaque doigt d’appui 56 puisse rester entièrement au contact de la région marginale 41 ou 42 respective qu’il parcourt, quel que soit le compartiment individuel 14 qui est aligné avec l’objectif 51 , l’extension suivant la direction gauche-droite de cette région marginale doit être au-moins égale à l’extension suivant la direction gauche- droite des rectangles hachurés 48.
On notera encore que l’extension suivant la direction gauche-droite des rectangles hachurés 48 est en pratique supérieure à l’écart entre les axes 38 respectifs des deux compartiments individuels 14 les plus éloignés l’un de l’autre sur le support 40 (puisqu’il faut tenir compte de l’extension des doigts d’appui suivant la direction gauche-droite).
On notera encore que sur la figure 7, les rectangles hachurés 48 d’une même région marginale 41 ou 42 ne se recoupent pas, de sorte qu’un revêtement pourrait être présent entre ces deux rectangles 48 sans être rencontré par un doigt d’appui 56 au cours de son trajet. Ainsi, dans une variante non illustrée, le support présente deux régions marginales avant et/ou deux régions marginales arrière telle que décrites ci-dessus mais chacune avec une extension moindre suivant la direction gauche-droite, et avec un revêtement interposé entre ces deux régions marginales avant et/ou entre ces deux régions marginales arrière.
Le support 70 illustré à la figure 13 est similaire au support 40 sauf qu’il ne comporte que deux compartiments individuels 14, l’écart entre les axes 38 de ces compartiments étant dans ce cas égal à 15,84 mm.
La figure 8 illustre une configuration de chargement/déchargement du système 100, ici obtenue après que la platine 52 a été écartée de la plaque d’appui 53, le support 40 étant alors accessible à un utilisateur pour être retiré de la platine 52 et éventuellement remplacé par un autre support similaire afin d’analyser les échantillons contenus dans les compartiments de cet autre support.
Inversement, pour passer le système 100 de la configuration de chargement/déchargement à la configuration d’observation, la platine 52 chargée du support 40 est rapprochée de la plaque d’appui 53 jusqu’à ce que chaque doigt d’appui 56 soient au contact des régions marginales 41 et 42 de la manière décrite précédemment.
On va maintenant décrire plus en détail le système 100 à l’appui des figures 9 à 12.
Le bâti comporte ici une paroi de montage 60 et l’embase 55 comporte deux branches 61 saillant chacune transversalement de la paroi de montage 60. Les branches 61 s’étendent en regard l’une de l’autre en délimitant l’ouverture 58.
Chaque branche 61 est ici pourvue de deux doigts d’appui 56, dont un doigt 56 est au contact de la région marginale avant 41 et un doigt est au contact de la région marginale arrière 42 lorsque le système 100 est dans la configuration d’observation (figure 12). Comme on le voit bien sur la figure 10, les aimants 54 de l’organe de serrage sont ici logés dans les branches 61 , chaque branche 61 étant ici pourvue de trois aimants 54 cylindriques. Pour chaque branche 61 , les aimants 54 sont ici répartis entre les doigts d’appui 56 de cette branche 61 .
La plaque d’appui 53 présente ici des rainures de guidage 62 ménagées dans l’embase 55, du même côté que les doigts d’appui 56, chaque rainure de guidage 62 étant configurée pour recevoir une portion d’extrémité d’un pion respectif formant l’une des butées de positionnement avant 33, gauche 34 et/ou droite 35 de la platine 52 lorsque le système 100 est en configuration d’observation, les extrémités des pions se déplaçant dans la rainure de guidage respective lorsque la platine 52 se déplace suivant la direction gauche-droite.
Les rainures de guidage 62 participent ainsi au bon positionnement de la platine 52 suivant la direction avant-arrière du support 40, c’est-à-dire afin que les doigts d’appui 56 restent exclusivement au contact des régions marginales 41 et 42 lors du déplacement de la platine 52.
La platine 52 présente en outre une rampe 63 et la plaque d’appui 53 présente un bossage 64 configuré pour coopérer avec la rampe 63 au cours du mouvement de translation de la platine 52 suivant la direction gauche-droite du support 40 de manière à écarter la platine 52 de la plaque d’appui 53, à l’encontre de la force exercée par l’organe de serrage, ici jusqu’à ce que la platine arrive dans la position illustrée sur la figure 11 , où le système 100 est dans sa configuration de chargement/déchargement.
La platine 52 est ici mécaniquement reliée au bâti par une liaison pivot glissant comportant un guide cylindrique 65 et un fût 66 monté à coulissement sur le guide 65, ce dernier étant longitudinalement orienté suivant une direction parallèle à la direction gauche-droite du support 40 lorsque ce dernier est reçu dans sa position prédéterminée sur la platine 52.
Un telle liaison mécanique permet à la fois d’éloigner et rapprocher la platine 52 de la plaque d’appui 53 et de déplacer la platine 52 suivant la direction gauche-droite. Le guide 65 est ici fixé à la paroi de montage 60 tandis que le fût 66 est solidaire de la platine 52.
Le diamètre interne du fût 66 est ici légèrement supérieur au diamètre externe du guide 65 de sorte qu’il existe entre eux un jeu permettant à la platine 52 de pivoter dans une certaine mesure à la fois suivant la direction gauche-droite dans les deux sens et suivant la direction avant-arrière dans les deux sens.
Cette capacité de la platine 52 à pivoter permet d’ajuster l’inclinaison de la face supérieure 17 de la lame porte-objet 11 par rapport aux doigts d’appui 56 afin de s’assurer que ces derniers soient tous au contact de la face supérieure 17, avec un appui équitablement réparti entre tous les doigts 56.
Pour déplacer la platine 52 suivant la direction gauche-droite, le microscope 50 comporte en outre ici un mécanisme motorisé (non illustré) commandé depuis une interface utilisateur. En variante, le mécanisme n’est pas motorisé et est actionné manuellement à l’aide d’une molette.
Le système 100 tel que décrit ci-dessus est notamment adapté pour une analyse comportant une étape de comptage des spermatozoïdes présents dans les échantillons de semence animale, en vue d’en déterminer la concentration.
Dans une variante non illustrée, le système 100 est couplé à un ordinateur configuré pour analyser automatiquement les images captées par l’objectif afin de réaliser l’étape de comptage et déterminer la concentration.
Dans une variante non illustrée, le point focal de l’objectif n’est pas au milieu des compartiments individuels mais se trouve - suivant la direction bas-haut - à une distance prédéterminée du milieu des compartiments individuels.
Dans une variante non illustrée, l’objectif est monté mobile par rapport au bâti du microscope entre une pluralité de positions prédéterminées fixes dans chacune desquelles l’objectif se trouve à une distance respective du support différente.
Il est entendu que dans la présente demande, le terme objectif doit être compris dans un sens large et peut notamment être un simple capteur d’images électronique, comme par exemple un capteur CMOS, utilisé par exemple dans les procédés de microscopie dit « sans lentille », utilisant par exemple le principe de l'holographie en ligne. Ainsi, en variante, le système d’analyse tel que décrit ci-dessus est pourvu d’une caméra équipée d’un tel capteur électronique, et est configuré pour enregistrer et traiter une succession d’image afin d’analyser la substance biologique, par exemple pour déterminer la motilité des spermatozoïdes contenus dans des échantillons de semence animale.
Dans une autre variante non illustrée, la bande marginale avant et la bande marginale arrière se trouvent à une faible distance de la face avant 21 ou de la face arrière 22 respectivement, c’est-à-dire par exemple qu’un revêtement ou une portion de revêtement se trouve sur la face supérieure 17 entre la face avant 21 et la région marginale avant et/ou entre la face arrière 22 et la région marginale arrière.
Dans encore une autre variante non illustrée, la plaque d’appui comporte trois doigts d’appui, avec - lorsque le système est en configuration de maintien - deux des doigts qui sont exclusivement au contact de l’une des régions marginales avant et arrière et le dernier des doigts qui est exclusivement au contact de l’autre des régions marginales avant et arrière.
Dans encore une autre variante non illustrée, l’organe de serrage comporte des aimants qui sont solidaires de la platine tandis que la plaque d’appui a des propriétés magnétiques.
Dans encore une autre variante non illustrée, les butées de positionnement sont différentes de pions saillant de la face supérieure 37 de la platine 52 et sont par exemple formées par les bords d’un renfoncement ménagé dans cette face supérieure 37 et configuré pour accueillir la lame porte- objet 11 .
Dans encore d’autres variantes non illustrées, les puits et les évents sont disposés différemment que décrit ci-dessus, par exemple tous les puits sont tournés vers la face avant et tous les évents sont tournés vers la face arrière, ou bien d’un compartiment à l’autre les puits et les évents sont en alternance tournés vers la face avant puis vers la face arrière. Dans d’autres variantes non illustrées :
- l’objectif a une distance focale variable plutôt que fixe ;
- le nombre de compartiments individuels est différent de quatre et de deux, par exemple trois, cinq ou plus que cinq ; - l’organe de serrage comporte un nombre d’aimants différent de trois par branche, par exemple un, deux, quatre ou plus de quatre aimants par branche et/ou les aimants ont une forme différente de cylindrique, par exemple parallélépipédique ;
- l’organe de serrage est différent d’aimants logés dans les branches de la plaque d’appui, et comporte par exemple des ressorts disposés du côté de la platine qui regarde à l’opposé de la plaque d’appui et configurés pour pousser la platine vers la plaque d’appui ; et/ou
- la rampe 63 est portée par la plaque d’appui et le bossage 64 est porté par la platine. De nombreuses autres variantes sont possibles en fonction des circonstances et l’on rappelle à cet égard que l’invention ne se limite pas aux exemples décrits et représentés.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Support pour l’analyse par microscopie d’une substance biologique à base liquide, telle que de la semence animale, comportant une lame porte-objet (11 ), une lamelle couvre-objet (12) et des lignes de colle (13) disposées entre la lame porte-objet (11 ) et la lamelle couvre-objet (12) pour les assujettir l’une à l’autre tout en délimitant périphériquement des compartiments individuels (14) de réception d’un échantillon de ladite substance biologique ; la lame porte-objet (11 ) étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure (17) et une face inférieure (18), et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche (19), une face droite (20), une face avant (21 ) et une face arrière (22), avec la distance entre la face gauche (19) et la face droite (20) qui est supérieure à la distance entre la face avant (21 ) et la face arrière (22) qui est elle-même supérieure à la distance entre la face inférieure (18) et la face supérieure (17) ; ledit support (40) présentant une direction gauche-droite transversale à la face gauche (19) et à la face droite (20) tandis qu’elle est parallèle à la face avant (21 ), à la face arrière (22) et aux faces principales, une direction avant-arrière transversale à la face avant (21 ) et à la face arrière (22) tandis qu’elle est parallèle à la face (19) gauche, à la face droite (20) et aux faces principales, et une direction bas-haut transversale aux faces principales tandis qu’elle est parallèle aux faces latérales ; la lamelle couvre-objet (12) étant parallélépipédique et présentant deux faces principales, à savoir une face supérieure (23) et une face inférieure (24), et des faces latérales qui s’étendent de l’une à l’autre des faces principales, à savoir une face gauche (25), une face droite (26), une face avant (27) et une face arrière (28) ; la face inférieure (24) de la lamelle couvre-objet (12) étant en regard de la face supérieure (17) de la lame porte-objet (11 ) tandis que la face avant (27), la face arrière (28), la face gauche (25) et la face droite (26) de la lamelle couvre-objet (12) sont tournées vers et à distance de respectivement la face avant (21 ), la face arrière (22), la face gauche (19) et la face droite (20) de la lame porte-objet (11 ) ; chaque dit compartiment individuel (14) étant délimité suivant la direction bas-haut respectivement par la face supérieure (17) de la lame porte-objet (11 ) et par la
25 face inférieure (24) de la lamelle couvre-objet (12) et délimité périphériquement par lesdites lignes de colle (13), chaque dit compartiment individuel (14) s’ouvrant exclusivement d’un côté sur un puits (15) et d’un autre côté sur un évent (16), chaque puits (15) et chaque évent (16) étant délimité par lesdites lignes de colle (13), chaque puits (15) étant tourné vers l’une des face avant (21 ) et face arrière (22) de la lame porte-objet (11 ) et chaque évent (16) étant tourné vers l’autre des face avant (21 ) et face arrière (22) de la lame porte-objet (11 ) ; caractérisé en ce que la face supérieure (17) de la lame porte-objet (11 ) est à nu et à découvert sur au-moins une région marginale avant (41 ) et sur au- moins une région marginale arrière (42), la région marginale avant (41 ) longeant la face avant (21 ) de la lame porte-objet (11 ), la région marginale arrière (42) longeant la face arrière (22) de la lame porte-objet (11 ), chacune desdites région marginale avant (41 ) et région marginale arrière (42) ayant une extension suivant la direction avant-arrière au-moins égale à 2,5 mm et une extension suivant la direction gauche-droite au moins égale à l’écart entre les axes (38) respectifs des deux compartiments individuels (14) les plus éloignés l’un de l’autre et au plus égale à la distance entre la face gauche (19) et la face droite (20) de la lame porte-objet.
2. Support selon la revendication 1 , caractérisé en ce que pour l’une au moins de la région marginale avant (41 ) et de la région marginale arrière (42), l’extension suivant la direction gauche-droite est égale à la distance entre la face gauche (19) et la face droite (20) de la lame porte-objet (11 ).
3. Support selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que chaque puits (15) a une extension suivant la direction avant-arrière qui est inférieure à l’extension suivant la direction avant-arrière de chacune desdites région marginale avant (41 ) et région marginale arrière (42).
4. Support selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la distance entre la face gauche (19) et la face droite (20) de la lame porte-objet (11 ) est comprise entre 74,8 mm et 75,2 mm, la distance entre la face avant (21 ) et la face arrière (22) de la lame porte-objet (11 ) est comprise entre 24,8 mm et 25,2 mm, la distance entre la face gauche (25) et la face droite (26) de la lamelle couvre-objet (12) est comprise entre 31 ,8 mm et 32,2 mm, et la distance entre la face avant (27) et la face arrière (28) de la lamelle couvre-objet (12) est comprise entre 16,8 mm et 16,2 mm.
5. Support selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que tous les puits (15) sont tournés vers l’une des face avant (21 ) et face arrière (22) de la lame porte-objet (11) et tous les évents (16) sont tournés vers l’autre des face avant (21 ) et face arrière (22) de la lame porte- objet (11 ).
6. Système pour l’analyse d’une substance biologique à base liquide, comportant un support (40) selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 et un microscope (50) comportant un objectif (51), une platine (52) configurée pour recevoir le support (40) dans une première position d’observation dans laquelle la face inférieure (18) de la lame porte-objet (11 ) est contre la platine
(52) et un des compartiments individuels (14) est aligné avec l’objectif (51 ), un bâti sur lequel l’objectif (51 ) est monté dans au moins une position prédéterminée fixe et sur lequel la platine (52) est montée mobile en translation suivant la direction gauche-droite du support (40) afin de pouvoir aligner successivement les autres compartiments individuels (14) avec l’objectif (51 ), une plaque d’appui (53) s’étendant au moins partiellement en regard du support (40), et un organe de serrage (54) configuré pour solliciter la plaque d’appui
(53) et la platine (52) l’une vers l’autre de sorte que le support (40) est enserré entre la plaque d’appui (53) et la platine (52) ; la plaque d’appui (53) étant montée fixe sur le bâti et comportant une embase (55) et des doigts d’appui
(56) saillant de l’embase (55) vers la platine (52) et dont les extrémités distales
(57) sont au contact des régions marginales (41 , 42) exclusivement, avec au moins deux doigts d’appui (56) sur l’une des région marginale avant (41 ) et région marginale arrière (42) et au moins un doigt d’appui (56) sur l’autre des région marginale avant (41 ) et région marginale arrière (42) ; la platine (52) présentant des butées de positionnement (34, 35) pour immobiliser le support (40) par rapport à la platine (52) suivant la direction gauche-droite.
7. Système selon la revendication 6, caractérisé en ce que la plaque d’appui (53) comporte quatre doigts d’appui (56), dont deux doigts d’appui (56) au contact de la région marginale avant (41 ) et les deux autres doigts d’appui (56) au contact de la région marginale arrière (42).
8. Système selon l'une quelconque des revendications 6 ou 7, caractérisé en ce que l’un de la platine (52) et de la plaque d’appui (53) a des propriétés magnétiques et l’organe de serrage comporte des aimants (54) solidaires de l’autre de la platine (52) et de la plaque d’appui (53).
9. Système selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que l’embase (55) présente une ouverture (58) au travers de laquelle l’objectif (51 ) pointe sur ledit compartiment individuel (14) aligné avec l’objectif (51 ) dans ladite première position d’observation, au-moins deux des doigts d’appui (56) qui sont au contact d’une même région marginale (41 , 42) étant disposés de part et d’autre de l’ouverture (58).
10. Système selon la revendication 9, caractérisé en ce que le bâti comporte une paroi de montage (60) et l’embase (55) comporte deux branches (61 ) saillant chacune transversalement de la paroi de montage (60), s’étendant en regard l’une de l’autre et délimitant l’ouverture (58), chaque branche (61 ) étant pourvue de deux doigts d’appui (56), dont un doigt (56) au contact de la région marginale avant (41) et un doigt (56) au contact de la région marginale arrière (42).
11 . Système selon la revendication 10, caractérisé en ce que l’organe de serrage comporte des aimants (54) logés dans lesdites branches (61 ).
12. Système selon l'une quelconque des revendications 6 à 11 , caractérisé en ce que l’une de la platine (52) et de la plaque d’appui (53) présente une rampe (63) et l’autre de la platine (52) et de la plaque d’appui (53) présente un bossage (64) configuré pour coopérer avec la rampe (63) au cours du mouvement de translation de la platine (52) suivant la direction gauche- droite de manière à écarter la platine (52) de la plaque d’appui (53), à l’encontre de la force exercée par l’organe de serrage (54), jusqu’à une position dans laquelle le support (40) est accessible pour pouvoir être retiré de la platine (52).
13. Système selon l'une quelconque des revendications 6 à 12, caractérisé en ce que la platine (52) est mécaniquement reliée au bâti par une
28 liaison pivot glissant comportant un guide cylindrique (65) longitudinalement orienté suivant la direction gauche-droite et un fût (66) monté à coulissement sur le guide (65), avec un jeu entre le fût (66) et le guide (65).
14. Système selon l'une quelconque des revendications 6 à 13, caractérisé en ce que l’objectif (51 ) a une distance focale fixe.
15. Utilisation d’un système selon l'une quelconque des revendications 6 à 14, caractérisé en ce que la substance biologique à base liquide est de la semence animale et ladite analyse comprend une étape de comptage des spermatozoïdes.
29
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