WO2021145787A1 - Способ и устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон виллебранда - Google Patents

Способ и устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон виллебранда Download PDF

Info

Publication number
WO2021145787A1
WO2021145787A1 PCT/RU2020/000583 RU2020000583W WO2021145787A1 WO 2021145787 A1 WO2021145787 A1 WO 2021145787A1 RU 2020000583 W RU2020000583 W RU 2020000583W WO 2021145787 A1 WO2021145787 A1 WO 2021145787A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
channel
von willebrand
willebrand factor
flow chamber
degree
Prior art date
Application number
PCT/RU2020/000583
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Зуфар Ахнафович ГАББАСОВ
Иван Сергеевич МЕЛЬНИКОВ
Юлия Николаевна АВТАЕВА
Original Assignee
Зуфар Ахнафович ГАББАСОВ
Иван Сергеевич МЕЛЬНИКОВ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Зуфар Ахнафович ГАББАСОВ, Иван Сергеевич МЕЛЬНИКОВ filed Critical Зуфар Ахнафович ГАББАСОВ
Publication of WO2021145787A1 publication Critical patent/WO2021145787A1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood

Definitions

  • the invention relates to medicine and can be used in the diagnosis of diseases associated with the pathology of the von Willebrand factor.
  • Diseases associated with quantitative or qualitative pathology of von Willebrand factor are known. Weakening of the ability of von Willebrand factor molecules to bind to platelets, lack of synthesis or increased proteolysis lead to spontaneous bleeding, for example, in a spectrum of diseases known as von Willebrand disease, or cryptogenic gastrointestinal bleeding, as in Heyde syndrome.
  • the conformation of the von Willebrand factor molecules changes from globular to fibrillar, as a result of which the binding sites of the von Willebrand factor with platelets, collagen, and metalloproteinase ADAMTS13 are opened.
  • the threshold shear rate at which the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor occurs is about 5000 s 1 .
  • the values of the shear rate required to activate the von Willebrand factor can differ both in change and in a larger direction. Shear rates above 5000 C_1 are typical for sites of damage to the vascular wall and stenoses, but not for intact arteries and arterioles, where shear rates are much lower.
  • the PFA-100 consists of a system for recording test results and disposable cartridges in which the test is performed.
  • the main part of the cartridge, in which platelets are activated and microthrombus formation, is a polypropylene cup.
  • Inside the bowl is a nitrocellulose membrane that roughly halves the bowl.
  • the membrane has a central hole with a diameter of 150 ⁇ m.
  • the lower surface of the membrane is coated with either 2 ⁇ g of horse collagen type I with 10 ⁇ g of epinephrine bitartrate, or 50 ⁇ g of adenosine diphosphate, or 5 ng of prostaglandin E1 with 20 ⁇ g of adenosine diphosphate.
  • a steel capillary with an inner diameter of 200 ⁇ m enters the bowl.
  • the capillary is lowered into a polyethylene reservoir containing the blood sample to be analyzed.
  • a syringe pump is attached to the bowl to create a vacuum.
  • the research is carried out as follows. A 0.8 ml blood sample containing sodium citrate as an anticoagulant is placed in a polyethylene reservoir and then placed in the PFA-100 system, where it is heated to 37 ° C. At the beginning of the study, a vacuum suction is placed on the upper side of the polypropylene bowl. A constant vacuum with a pressure of 4 kPa below atmospheric pressure is provided by the pull-back movement of the syringe pump piston.
  • the action of the vacuum causes blood to flow from the reservoir with the test sample through the steel capillary into the bowl, where blood platelets enter in contact with the lower surface of the membrane, covered with the above activating substances, and are directed along with the blood flow to the hole in the membrane.
  • the calculated shear rates in the membrane hole are 5000-6000 s 1 .
  • the platelets passing with the blood flow through the membrane opening adhere to the collagen covering the lower surface of the membrane directly at the membrane opening.
  • the adhered platelets provide the necessary substrate for the next stage - platelet aggregation with the formation of a thrombus that clogs the opening.
  • the PFA-100 measures the time from test start to closure time.
  • the sensitivity of the method largely depends on the hematocrit, platelet count, platelet dysfunction.
  • the final result time to closing the hole is influenced by a combination of factors, and it is impossible to directly determine the value of the contribution of the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor using PFA-100.
  • ristocetin cofactor assay which is used to examine the ability of blood plasma to agglutinate platelets in the presence of the antibiotic ristocetin.
  • the blood plasma of the patient being examined is used, to which formaldehyde-fixed or frozen donor platelets are added.
  • ristocetin is added to the blood plasma, which binds the GPIb glycoprotein receptor to the von Willebrand factor (Glul239-Pro-Gly Glyl242 site).
  • the range of normal values for the ristocetin-cofactor method is considered to be 50-150 units / dl. Values below the reference values may indicate a defect in platelet receptors GP lb or a low concentration of von Willebrand factor. Values higher than the reference values may indicate a high concentration of von Willebrand factor.
  • Variations of ristocetin cofactor analysis are also used, when in order to exclude variability associated with the individual characteristics of platelets and their GPIb receptors, latex microparticles with conjugated recombinant GPIb receptors are added to a blood plasma sample. When ristocetin is added to the sample, recombinant GPIb binds to von Willebrand factor, which leads to agglutination of latex microparticles. In addition, microparticles with conjugated recombinant GPIb receptors with increased function, which react with von Willebrand factor in blood plasma in the absence of ristocetin, are used.
  • the listed methods are characterized by high variability of results and do not measure the physiological function of the von Willebrand factor, since the reaction occurs under static conditions, in which the von Willebrand factor is physiologically inactive, and the binding of the platelet GPIb receptor occurs not with their natural ligand on the von Willebrand factor, but with the ligand ristocetin, or with recombinant GPIb with enhanced function.
  • the technical problem solved by the invention is to create a method for quantifying the degree of activation and function of von Willebrand factor in blood.
  • the technical result obtained in the invention is to ensure the measurement of the degree of hydrodynamic activation of the von Willebrand factor.
  • the technical result is achieved by a method for determining the degree of hydrodynamic activation of the von Willebrand factor, which consists in the fact that the flow of the investigated biological fluid containing platelets and the von Willebrand factor is passed through a flow chamber having a channel with a cross-sectional area varying along the length with the provision of different rates of wall shear in permeable liquid having values above and below the critical value of the wall shear rate for the degree of hydrodynamic activation of the von Willebrand factor is normal, while the flow chamber has a wall made of optical material with an adhesive coating on the inner surface of the wall, ensuring platelet adhesion, direct light rays outside on the optical surface - the boundary between the optical material and the fluid flow - in the sections of the chamber with different cross-sectional areas of the channel at an angle of incidence greater than the critical angle at which a complete internal e reflection, the fluxes of light scattered and / or reflected from the optical surface are recorded separately from each section of the channel of the flow chamber, the recorded values for different sections of the
  • a flow chamber can be used, the channel of which has two or more sections with different cross-sections.
  • a flow chamber can be used, the channel of which has a continuously decreasing cross-section in the direction from the inlet to the outlet.
  • an adhesive protein coating as the adhesive coating for promoting platelet adhesion.
  • a device for determining the degree of hydrodynamic activation of the von Willebrand factor containing a means for supplying biological fluid, a flow chamber having a channel with a cross-sectional area varying along the length and a wall made of an optical material with an adhesive coating on the inner wall surface, ensuring platelet adhesion , a light source configured to direct rays of light from outside to inside a wall surface made of an optical material with an adhesive coating in sections of the chamber with different cross-sectional areas of the channel, and photosensitive elements for registering light fluxes scattered and / or reflected from the specified wall surface separately from each section of the channel of the flow chamber.
  • the flow chamber can have a channel with two or more sections with different cross-sections.
  • the flow chamber can have a channel with a continuously decreasing cross-section from the inlet to the outlet.
  • the platelet adhesion adhesive coating is preferably made of an adhesive protein.
  • FIG. 1 shows a diagram of the proposed device, a variant with a channel of a flow chamber having sections with different cross-sectional areas.
  • FIG. 2 flow chamber with continuously decreasing cross-sectional area of the flow chamber channel.
  • the device for determining the degree of activation of the von Willebrand factor contains a means for supplying a biological fluid, including a container 1 with a biological fluid and a pump 2 (Fig. 1).
  • the flow chamber 3 has a channel 4 for pumping the examined biological fluid with a variable cross-sectional area.
  • FIG. 1 shows a flow chamber 3, channel 4 of which has two sections with different cross sections.
  • FIG. 2 shows a flow chamber 4, the cross-section of the channel 4 of which is continuously, smoothly decreasing in the direction from the inlet to the outlet of the channel 4 of the flow chamber 3.
  • the channel 4 preferably has a rectangular cross-section.
  • the width of the channel 4 is constant along its entire length, and the height of the channel 4 changes stepwise or continuously. It is possible to make channel 4 with a constant height along the length and varying width, or both the height and width of channel 4 can be changing.
  • the wall 5 of the flow chamber 4 is made of an optical material, preferably glass, but can also be made of transparent plastic.
  • the inner optical surface of the wall 5 is an adhesive surface 6 with the property of platelet adhesion. From the side of the wall 5, a light source 7 and photosensitive elements 8 are installed.
  • a biological fluid which means whole blood, blood plasma, suspensions of cells and blood proteins.
  • a biological fluid means whole blood, blood plasma, suspensions of cells and blood proteins.
  • a blood sample is taken from a person in a test tube containing an anticoagulant, such as sodium citrate or hirudin. If it is necessary to obtain blood plasma, centrifugation of the sample is performed according to standard protocols.
  • the blood sample is placed in container 1 - a reservoir made of an inert material, for example, polypropylene.
  • the volume of a blood sample is required to ensure continuous blood circulation throughout the study and is determined by the capacity of the system of tubes of the device through which blood is pumped, however, the volume of 1 standard tube (3.4-4.2 ml) is sufficient for the study.
  • Blood movement along the tubing system is provided with a pump 2, for example a peristaltic or diaphragm pump.
  • Pump 2 provides continuous pumping of blood from container 1 to flow chamber 3 and back to container 1, ensuring the circulation of the sample. By controlling the operation of pump 2, you can change the flow rate of the liquid.
  • blood flows from the container 1 into the flow chamber 3.
  • a channel is made for the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor.
  • the rate of wall shear (g) in the liquid pumped through channel 4 of the flow chamber 3 is calculated by the formula (1): where Q is the liquid flow rate per unit time, W is the width of the channel 4 of the flow chamber 3, H is the height of the channel 4 of the flow chamber 3. For example, at a liquid flow rate (Q) 0.025 cm 3 / s, the channel width 4 (W) 0.3 cm, channel height 4 (H) 0.01 cm, the rate of wall shear (g) calculated by formula 1 will be 5000 s 1 .
  • the shear rate in the channel 4 of the flow chamber 3 can be changed.
  • the shear rate in the channel 4 of the flow chamber 3 can be changed by controlling the flow rate of the liquid using the pump 2.
  • the channel 4 of the flow chamber 3 has two or more sections with different cross-sectional area (Fig. 1), or has a shape with a continuously decreasing cross-sectional area (Fig. 2).
  • the cross-sectional area is calculated so that in the first part of the channel 4 the velocity of the wall shear, calculated according to formula 1 is 3000 s 1 , and in each subsequent part of channel 4 it increases by 2000 s 1 , at the same fluid flow rate.
  • Platelet adhesion occurs on the adhesive surface 6 of the wall 5 made of optical material on one side of the channel 4 of the flow chamber 3.
  • the optical material for example, mineral glass of the Ml brand can be used.
  • the adhesive surface 6 should ensure adhesion of platelets and not interfere with the interaction of the light beam passing through the optical material with platelets.
  • Such an adhesive surface can be formed by a coating of an adhesive protein such as, for example, fibrinogen or collagen or fibronectin, or by another coating or surface treatment capable of promoting platelet adhesion.
  • the adhesion of platelets to the adhesive surface 6 under flow conditions depends on the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor.
  • the light beam enters separately from the light source 7, passes through the optical material of the wall 5 and falls on the optical surface - the boundary of the optical media represented by the optical material of the wall 5 and the liquid pumped through the channel 4 of the flow chamber 3 at an angle of incidence above the critical ...
  • the critical angle of incidence at which the law of total internal reflection is fulfilled is calculated by the formula (2): where h is the critical angle of incidence, n 2 is the refractive index of the light-reflecting medium, Pi is the refractive index of the light-transmitting medium.
  • the critical angle of incidence will depend on the refractive index of the optical material (light transmission medium) and the refractive index of the biological fluid - whole blood / blood plasma (light refractive medium).
  • the refractive index of Ml glass is 1.514
  • blood plasma is 1.348.
  • the critical angle of incidence (sun) will be 62.92 °.
  • the angle of incidence of the light beam turns out to be greater than BC
  • the light passing through the light-transmitting medium is completely reflected from the boundary of the optical media.
  • light penetrates through the interface of optical media at about a wavelength. Platelets tightly adhered to the optical surface find themselves within the penetration of light and interact with it, as a result of which the light is partially scattered from the boundary of the optical media, and partially reflected. The more platelets adhere to the optical surface, the more light from the beam is scattered and the less reflected. Reflected and / or scattered light from each section of the channel 4 is recorded by photosensitive elements 8, which convert the intensity of the luminous flux into an electric current.
  • the rate of adhesion of the platelets is measured by the change in the strength of the electric current converted from the light reflected and / or scattered from the adherent platelets. The less the current from the photosensitive element 8, which records the light reflected from the border of the optical media, and / or the greater the current from the photosensitive element 8, which records the light scattered from the border of the optical media, the more intense the platelet adhesion.
  • the channel 4 of the flow chamber 3 has two or more successively located sections with different cross-sectional areas, or has a shape with a constantly decreasing cross-sectional area, separate photosensitive elements 8 are provided for each individual section, simultaneously recording the intensity of the reflected and / or scattered light.
  • the magnitude of the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor is measured in the recorded current (Ampere) converted by photosensitive elements from reflected and / or scattered light.
  • the range of values is taken as the norm, obtained from a group of healthy volunteers. For example, the normal range for a 1000 s 1 wall shear rate is 1.5-4 mA. The normal range for a 5000 s 1 wall shear rate is 14-22.5 mA. Obtaining values above the normal range as a result of the study indicate an increase in the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor at a given rate of wall shear, below the range of normal values - a weakening of the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor or the absence of the von Willebrand factor in the sample.
  • Example 1 A healthy volunteer without pathology of von Willebrand factor was examined. 3.2 ml of blood was collected in a test tube with 3.2% sodium citrate. Within 1 hour, the blood is placed in a receiving reservoir - container 1. The flow chamber 3 is connected to the tube system, the optical surface is oriented towards the beam of the light source 7. Pump 2 is activated.
  • the fluid flow rate (Q) is set such that, according to formula (1), in one of two or more sections of channel 4 with different cross-sectional area, the wall shear rate (g) when pumping liquid is 3000 s 1 , and in the other - 6000 s 1 (below and above the critical value 5000 s 1 for the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor is normal, respectively).
  • Example 2 A patient with thrombotic thrombocytopenic purpura was examined. In this disease, von Willebrand factor molecules are formed, which are active even at low rates of parietal shear, which leads to the formation of blood clots in the vessels. 3.2 ml of blood was collected in a test tube with 3.2% sodium citrate. Within 1 hour, the blood is placed in a receiving reservoir - container 1. The flow chamber 3 is connected to the tube system, the optical surface is oriented towards the beam of the light source 7. Pump 2 is activated.
  • the fluid flow rate (Q) is set such that, according to formula (1), in one of two or more sections of channel 4 with different cross-sectional area, the wall shear rate (g) when pumping liquid is 3000 s 1 , and in the other - 6000 s 1 .
  • Example 3 A patient with Heyde's syndrome was examined. Patients with this disease have severe stenosis (narrowing) of the aortic valve, where very high shear rates occur. This leads to the hydrodynamic activation of the von Willebrand factor and its consumption. As a result, in such patients, the von Willebrand factor becomes inactive even at high shear rates, since it has already been consumed at the site of aortic valve stenosis. Clinically, this is manifested by the patient's tendency to bleed, for example, from the gastrointestinal tract. 3.2 ml of blood was collected in a test tube with 3.2% sodium citrate. Within 1 hour, the blood is placed in a receiving reservoir - container 1.
  • the flow chamber 3 is connected to the tube system, the optical surface is oriented towards the beam of the light source 7.
  • Pump 2 is activated.
  • the fluid flow rate (Q) is set such that, according to formula (1), in one of two or more sections of channel 4 with different cross-sectional area, the wall shear rate (y) when pumping liquid is 3000 s 1 , and in the other - 6000 s 1 .
  • Example 4 A patient with type 3 von Willebrand disease was examined. In patients with this disease, von Willebrand factor is absent in the blood. 3.2 ml of blood was collected in a test tube with 3.2% sodium citrate. Within 1 hour, the blood is placed in a receiving reservoir - container 1. The flow chamber 3 is connected to the tube system, the optical surface is oriented towards the beam of the light source 7. Pump 2 is activated. The fluid flow rate (Q) is set such that, according to formula (1), in one of two or more sections of channel 4 with different cross-sectional area, the wall shear rate (g) when pumping liquid is 3000 s 1 , and in the other - 6000 s 1 .

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к области медицины и направлена на измерение степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда. Способ заключается в том, что пропускают поток исследуемой биологической жидкости, содержащей тромбоциты и фактор фон Виллебранда, через проточную камеру с обеспечением разных скоростей пристеночного сдвига в пропускаемой жидкости, имеющих значения выше и ниже критического значения скорости пристеночного сдвига для степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда в норме. Направляют лучи света снаружи на оптическую поверхность под углом падения, большим критического угла, при котором происходит полное внутреннее отражение. Регистрируют потоки света, рассеянного и/или отраженного от оптической поверхности отдельно от каждого участка канала проточной камеры. Сравнивают зарегистрированные значения для различных участков камеры с нормальными значениями для скорости пристеночного сдвига на соответствующем участке канала. По результатам сравнения делают вывод о степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда.

Description

СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ГИДРОДИНАМИЧЕСКОЙ АКТИВАЦИИ ФАКТОРА ФОН ВИЛЛЕБРАНДА
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при диагностике заболеваний, связанных с патологией фактора фон Виллебранда.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Фактор фон Виллебранда - один из основных белков свертывающей системы крови, принимает непосредственное участие в обеспечении гемостаза. Известны заболевания, связанные с количественной или качественной патологией фактора фон Виллебранда. Ослабление способности молекул фактора фон Виллебранда связываться с тромбоцитами, дефицит синтеза или усиление протеолиза приводят к спонтанным кровотечениям, например при спектре заболеваний, известных как болезни Виллебранда, или к криптогенным желудочно-кишечным кровотечениям, как при синдроме Heyde. В то же время, патологическое повышение активности фактора фон Виллебранда, связанное с накоплением в крови его высокомолекулярных мультимеров или снижением порога гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, приводят к развитию тромбозов, например, при тромботической тромбоцитопенической пурпуре или ишемической болезни сердца.
Исследование Schneider S.W. и соавт. (Schneider S.W. et al. Shear- induced unfolding triggers adhesion of von Willebrand factor fibers. PNAS, May 2007, vol. 104, no. 19, p. 7899-7903, www.pnas.org_cgi_doi_10.1073_pnas.0608422104 ) показало, что молекулы фактора фон Виллебранда активируются в условиях потока, то есть способны к гидродинамической активации, и многократно увеличивают свои гемостатические свойства при высоких скоростях сдвига. При этом происходит изменение конформации молекул фактора фон Виллебранда с глобулярной на фибриллярную, в результате чего открываются места связывания фактора фон Виллебранда с тромбоцитами, коллагеном, металлопротеиназой ADAMTS13. В норме пороговая скорость сдвига, при которой происходит гидродинамическая активация фактора фон Виллебранда, составляет около 5000 с 1. В случае патологии значения скорости сдвига, необходимые для активации фактора фон Виллебранда, могут отличаться как в меныпую, так и в большую сторону. Скорости сдвига выше 5000 C_1 характерны для мест повреждения сосудистой стенки и стенозов, но не для интактных артерий и артериол, где скорости сдвига значительно ниже. Используя микрофлюидное устройство, авторы визуализировали конформационные изменения фактора фон Виллебранда в условиях высоких скоростей сдвига. Они обнаружили, что фактор фон Виллебранда обратимо изменяет конформацию с глобулярной на фибриллярную при скоростях сдвига выше пороговых, даже при отсутствии адгезивной поверхности. В связи с этим, в статических условиях или условиях с низкими скоростями сдвига ключевая роль в адгезии тромбоцитов принадлежит фибриногену. При повышении скорости сдвига выше критической на первый план выходит влияние на адгезию тромбоцитов фактора фон Виллебранда.
Известны способы исследования активности фактора фон Виллебранда и адгезии тромбоцитов в потоке. Согласно описанию Rand M.L. с соавт. (Rand M.L. et al. Use of the PFA-100 in the Assessment of Primary, Platelet-Related Hemostasis in a Pediatric Setting. Seminars in Thrombosos and Hemostasis - vol. 24, no. 6, 1998, p. 523-529), PFA-100, PFA-200 (Platelet function analyzer - 100, компания Siemens) - система, предназначенная для исследования функции тромбоцитов в цельной крови. PFA-200 не имеет отличий от PFA- 100 по принципу работы. В PFA-100 симулируется повреждение стенки сосуда малого диаметра. PFA-100 состоит из системы для регистрации результатов исследования и одноразовых картриджей, в которых выполняется исследование. Основной частью картриджа, в которой происходит активация тромбоцитов и образование микротромба, является полипропиленовая чаша. Внутри чаши расположена нитроцеллюлозная мембрана, делящая чашу примерно пополам. В мембране выполнено центральное отверстие диаметром 150 мкм. Нижняя поверхность мембраны покрыта либо 2 мкг лошадиного коллагена I типа с 10 мкг эпинефрина битартрата, или 50 мкг аденозина дифосфата, либо 5 нг простагландина Е1 с 20 мкг аденозина дифосфата. С одной стороны (нижней) в чашу входит стальной капилляр с внутренним диаметром 200 мкм. Капилляр опускается в полиэтиленовый резервуар, содержащий исследуемый образец крови. С другой стороны (верхней) к чаше присоединяется шприцевой насос для создания вакуума. Исследование выполняется следующим образом. Образец крови объемом 0.8 мл, содержащей цитрат натрия в качестве антикоагулянта, помещается в полиэтиленовый резервуар и затем помещается в систему PFA-100, где нагревается до температуры 37°С. В начале исследования вакуумный отсос помещается с верхней стороны полипропиленовой чаши. Постоянный вакуум с давлением 4 кПа ниже атмосферного давления обеспечивается оттягивающим движением поршня шприцевого насоса. Действие вакуума вызывает ток крови из резервуара с исследуемым образцом по стальному капилляру в чашу, где тромбоциты крови входят в контакт с нижней поверхностью мембраны, покрытой вышеуказанными активирующими веществами, и направляются вместе с током крови к отверстию в мембране. С учетом диаметра отверстия и объема проходящей через отверстие крови в единицу времени, расчетные скорости сдвига в отверстии мембраны составляют 5000- 6000 с 1. Проходящие с током крови через отверстие мембраны тромбоциты адгезируют к коллагену, покрывающему нижнюю поверхность мембраны непосредственно у отверстия мембраны. Адгезировавшие тромбоциты обеспечивают необходимый субстрат для следующего этапа - аггрегации тромбоцитов с образованием тромба, который закупоривает отверстие. PFA-100 измеряет время от начала теста до закрытия отверсия (closure time). Чувствительность метода в значительной мере зависит от гематокрита, количества тромбоцитов, нарушений функции тромбоцитов. На конечный результат (время до закрытия отверстия) влияет совокупность факторов, и определить непосредственно величину вклада гидродинамической активации фактора фон Виллебранда при помощи PFA-100 невозможно.
Известны способы исследования способности фактора фон Виллебранда связывать гликопротеиновый рецептор GPIb тромбоцитов в статических условиях. К ним относится ристоцетин-кофакторный анализ, который используется для исследования способности плазмы крови агглютинировать тромбоциты в присутствии антибиотика ристоцетина. Используется плазма крови обследуемого пациента, в которую добавляют фиксированные формальдегидом или замороженные донорские тромбоциты. Затем в плазму крови добавляют ристоцетин, который связывает гликопротеиновый рецептор GPIb с фактором фон Виллебранда (участок Glul239-Pro-Gly Glyl242). Диапазоном нормальных значений для ристоцетин-кофакторного метода считается 50-150 единиц/дл. Значения ниже референсных могут говорить о дефекте тромбоцитарных рецепторов GP lb или низкой концентрации фактора фон Виллебранда. Значения выше референсных могут говорить о высокой концентрации фактора фон Виллебранда.
Также используют вариации ристоцетин-кофакторного анализа, когда с целью исключения вариабельности, связанной с индивидуальными особенностями тромбоцитов и их GPIb рецепторов, в пробу плазмы крови добавляют латексные микрочастицы с конъюгированными рекомбинантыми рецепторами GPIb. При добавлении ристоцетина в пробу происходит связывание рекомбинантных GPIb с фактором фон Виллебранда, что приводит к агглютинации латексных микрочастиц. Кроме того, применяют микрочастицы с конъюгированными рекомбинантными GPIb рецепторами с усилением функции, реагирующими с фактором фон Виллебранда в плазме крови в отсутствие ристоцетина.
Перечисленные способы отличаются высокой вариабельностью результатов и не измеряют физиологическую функцию фактора фон Виллебранда, так как реакция происходит в статических условиях, при которых фактор фон Виллебранда физиологически неактивен, а связывание рецептора GPIb тромбоцитов происходит не с их естественным лигандом на факторе фон Виллебранда, а с лигандом ристоцетина, либо с рекомбинантным GPIb с усилением функции.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема, решаемая изобретением, заключается в создании методики количественной оценки степени активации и функции фактора фон Виллебранда в крови. Технический результат, полученный в изобретении, заключается в обеспечении измерения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда.
Технический результат достигается способом определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, заключающимся в том, что пропускают поток исследуемой биологической жидкости, содержащей тромбоциты и фактор фон Виллебранда, через проточную камеру, имеющую канал с изменяющейся по длине площадью поперечного сечения с обеспечением разных скоростей пристеночного сдвига в пропускаемой жидкости, имеющих значения выше и ниже критического значения скорости пристеночного сдвига для степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда в норме, при этом проточная камера имеет стенку, выполненную из оптического материала с адгезивным покрытием на внутренней поверхности стенки, обеспечивающим адгезию тромбоцитов, направляют лучи света снаружи на оптическую поверхность - границу между оптическим материалом и потоком жидкости - на участках камеры с разными площадями поперечного сечения канала под углом падения большим критического угла, при котором происходит полное внутреннее отражение, регистрируют потоки света, рассеянного и/или отраженного от оптической поверхности отдельно от каждого участка канала проточной камеры, сравнивают зарегистрированные значения для различных участков камеры с нормальными значениями для скорости пристеночного сдвига на соответствующем участке канала и по результатам сравнения делают вывод о степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда. При этом в случае, когда зарегистрированное значение потока света на участке со скоростью пристеночного сдвига ниже критического значения превышает нормальные значения потока света, делают вывод о повышенной степени гидравлической активации фактора фон Виллебранда.
В случае же, когда нормальные значения потока света превышают зарегистрированное значение потока света на участке со скоростью пристеночного сдвига выше критического значения, делают вывод о снижении степени и/или отсутствии гидравлической активации фактора фон Виллебранда.
В одном варианте осуществления способа можно использовать проточную камеру, канал которой имеет два или более участка с разным поперечным сечением.
В другом варианте можно использовать проточную камеру, канал которой имеет непрерывно уменьшающееся поперечное сечение в направлении от входа к выходу.
Кроме того, в качестве адгезивного покрытия, обеспечивающего адгезию тромбоцитов, предпочтительно использовать покрытие из адгезивного белка.
Технический результат также достигается устройством для определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, содержащим средство подачи биологической жидкости, проточную камеру, имеющую канал с изменяющейся по длине площадью поперечного сечения и стенку, выполненную из оптического материала с адгезивным покрытием на внутренней поверхности стенки, обеспечивающим адгезию тромбоцитов, источник света, выполненный с возможностью направления лучей света снаружи на внутреннюю поверхность стенки из оптического материала с адгезивным покрытием на участках камеры с разными площадями поперечного сечения канала, и фоточувствительные элементы для регистрации потоков света, рассеянных и/или отраженных от указанной поверхности стенки отдельно от каждого участка канала проточной камеры.
В одном варианте выполнения устройства проточная камера может иметь канал с двумя или более участками с разным поперечным сечением.
В другом варианте проточная камера может иметь канал с непрерывно уменьшающимся поперечным сечением в направлении от входа к выходу.
Кроме того, адгезивное покрытие, обеспечивающее адгезию тромбоцитов, предпочтительно выполнять из адгезивного белка.
ПЕРЕЧЕНЬ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1 показана схема предложенного устройства, вариант с каналом проточной камеры, имеющей участки с разной площадью поперечного сечения.
На фиг. 2 - проточная камера с непрерывно уменьшающейся площадью поперечного сечения канала проточной камеры.
ПРИМЕРЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Устройство для определения степени активации фактора фон Виллебранда содержит средство подачи биологической жидкости, включающее ёмкость 1 с биологической жидкостью и насос 2 (фиг. 1). Проточная камера 3 имеет канал 4 для прокачки исследуемой биологической жидкости с переменной площадью поперечного сечения. На фиг. 1 показана проточная камера 3, канал 4 которой имеет два участка с разным поперечным сечением. На фиг. 2 показана проточная камера 4, поперечное сечение канала 4 которой непрерывно, плавно уменьшается в направлении от входа к выходу из канала 4 проточной камеры 3. Канал 4 имеет предпочтительно прямоугольное сечение. Ширина канала 4 является постоянной по всей его длине, а высота канала 4 изменяется ступенчато или непрерывно. Возможно выполнение канала 4 с постоянной высотой по длине и изменяющейся шириной, либо изменяющимися могут быть и высота, и ширина канала 4.
Стенка 5 проточной камеры 4 выполнена из оптического материала, предпочтительно из стекла, но может быть также выполнена из прозрачного пластика. Внутренняя оптическая поверхность стенки 5 является адгезивной поверхностью 6, обладающей свойством адгезии тромбоцитов. Со стороны стенки 5 установлены источник 7 света и фоточувствительные элементы 8.
Способ определения степени активации фактора фон Виллебранда осуществляется следующим образом. Для исследования используется биологическая жидкость, под которой подразумевают цельную кровь, плазму крови, суспензии клеток и белков крови. В случае исследования крови у человека отбирают пробу крови в пробирку с антикоагулянтом, например цитратом натрия или гирудином. При необходимости получения плазмы крови выполняют центрифугирование пробы согласно стандартным протоколам. Пробу крови помещают в ёмкости 1 - резервуаре из инертного материала, например, полипропилена. Объем пробы крови необходим такой, чтобы обеспечить непрерывную циркуляцию крови в течение всего исследования и определяется емкостью системы трубок устройства, через которые прокачивается кровь, однако объема 1 стандартной пробирки (3 ,4-4,2 мл) достаточно для исследования. Движение крови по системе трубок обеспечивается насосом 2, например, перистальтическим или мембранным насосом. Насос 2 обеспечивает непрерывную прокачку крови из ёмкости 1 в проточную камеру 3 и снова в ёмкость 1, обеспечивая циркуляцию пробы. Управляя работой насоса 2, можно изменять скорость расхода жидкости. По системе трубок кровь поступает из ёмкости 1 в проточную камеру 3. В проточной камере 3 выполнен канал для гидродинамической активации фактора фон Виллебранда. Скорость пристеночного сдвига (g) в жидкости, прокачиваемой через канал 4 проточной камеры 3, рассчитывается по формуле (1):
Figure imgf000012_0001
где Q - расход жидкости в единицу времени, W - ширина канала 4 проточной камеры 3, Н - высота канала 4 проточной камеры 3. Например, при расходе жидкости (Q) 0,025 см3/с, ширине канала 4 (W) 0,3 см, высоте канала 4 (Н) 0,01 см рассчитанная по формуле 1 скорость пристеночного сдвига (g) составит 5000 с 1.
Следовательно, в зависимости от нужд исследователя, скорость сдвига в канале 4 проточной камеры 3 можно изменять. Во-первых, скорость сдвига в канале 4 проточной камеры 3 можно изменять, управляя расходом жидкости с помощью насоса 2. Во-вторых, с целью создания нарастающей скорости сдвига канал 4 проточной 3 камеры имеет два или более последовательно расположенных по направлению потока участка с разной площадью поперечного сечения (фиг. 1), или имеет форму с непрерывно уменьшающейся площадью поперечного сечения (фиг. 2). Например, площадь поперечного сечения рассчитана так, что в первой части канала 4 скорость пристеночного сдвига, рассчитанная по формуле 1, составляет 3000 с 1, а в каждой последующей части канала 4 возрастает на 2000 с 1, при одной и той же скорости расхода жидкости. Таким образом, в канале 4 одной проточной камеры 3 можно исследовать гидродинамическую активацию фактора фон Виллебранда при разных последовательно нарастающих скоростях сдвига.
Адгезия тромбоцитов происходит на адгезивной поверхности 6 стенки 5 из оптического материала с одной стороны канала 4 проточной камеры 3. В качестве оптического материала может быть использовано, например, минеральное стекло марки Ml. Адгезивная поверхность 6 должна обеспечивать адгезию тромбоцитов и не препятствовать взаимодействию луча света, проходящего через оптический материал, с тромбоцитами. Такая адгезивная поверхность может быть образована покрытием из адгезивного белка, такого как, например, фибриноген, или коллаген, или фибронектин, или иным покрытием или обработкой поверхности, способной обеспечивать адгезию тромбоцитов. Адгезия тромбоцитов на адгезивную поверхность 6 в условиях потока зависит от гидродинамической активации фактора фон Виллебранда. На том участке или участках канала 4, где развивается скорость пристеночного сдвига, при которой в исследуемой пробе происходит гидродинамическая активация фактора фон Виллебранда, будет происходить интенсивная адгезия тромбоцитов на адгезивную поверхность 6 стенки 5 из оптического материала. На том участке или участках канала 4, где скорость пристеночного сдвига не достигает величины, необходимой для гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, будет происходить слабо выраженная адгезия тромбоцитов на адгезивную поверхность 6 стенки 5 из оптического материала.
Для измерения адгезии тромбоцитов регистрируется свет, отраженный и/или рассеянный от адгезировавших тромбоцитов. На каждом участке канала 4 луч света поступает отдельно из источника света 7, проходит через оптический материал стенки 5 и падает на оптическую поверхность - границу оптических сред, представленных оптическим материалом стенки 5 и прокачиваемой через канал 4 проточной камеры 3 жидкостью, под углом падения выше критического. Критической угол падения, при котором выполняется закон полного внутреннего отражения, вычисляется по формуле (2):
Figure imgf000014_0001
где вс - критический угол падения, п2 - коэффициент преломления светоотражающей среды, Pi - коэффициент преломления светопропускающей среды.
Критический угол падения будет зависеть от коэффициента преломления оптического материала (светопропускающая среда) и коэффициента преломления биологической жидкости - цельной крови/плазмы крови (светопреломляющая среда). Например, коэффициент преломления стекла марки Ml составляет 1,514, а плазмы крови 1,348. Согласно формуле 2, критический угол падения (вс) составит 62,92°.
В случае, если угол падения луча света оказывается больше вс, проходящий через светопропускающую среду свет полностью отражается от границы оптических сред. Тем не менее, свет проникает через границу оптических сред приблизительно на Уг длины волны. Плотно адгезировавшие к оптической поверхности тромбоциты оказываются в пределах проникновения света и взаимодействуют с ним, в результате чего свет частично рассеивается от границы оптических сред, а частично отражается. Чем больше тромбоцитов адгезирует на оптическую поверхность, тем больше света из луча рассеивается, и тем меньше отражается. Отраженный и/или рассеянный свет от каждого участка канала 4 регистрируется фоточувствительными элементами 8, которые преобразуют интенсивность светового потока в силу электрического тока. Изменением в силе электрического тока, преобразованного из отраженного и/или рассеянного от адгезировавших тромбоцитов света, измеряется интенсивность адгезии тромбоцитов. Чем меньше сила тока от фоточувствительного элемента 8, регистрирующего отраженный от границы оптических сред свет, и/или чем больше сила тока от фоточувствительного элемента 8, регистрирующего рассеянный от границы оптических сред свет, тем интенсивнее адгезия тромбоцитов.
Так как канал 4 проточной камеры 3 имеет два или более последовательно расположенных участка с разной площадью поперечного сечения, или имеет форму с постоянно уменьшающейся площадью поперечного сечения, для каждого отдельного участка предусмотрены отдельные фоточувствительные элементы 8, одновременно регистрирующие интенсивность отраженного и/или рассеянного света.
Величина гидродинамической активации фактора фон Виллебранда измеряется в регистрируемой силе тока (Ампер), преобразуемого фоточувствительными элементами из отраженного и/или рассеянного света. За норму принимается диапазон значений, полученных от группы здоровых добровольцев. Например, диапазоном нормальных значений для скорости пристеночного сдвига 1000 с 1 является 1,5-4 мА. Диапазоном нормальных значений для скорости пристеночного сдвига 5000 с 1 является 14-22,5 мА. Получение в результате исследования значения выше нормального диапазона указывают на усиление гидродинамической активации фактора фон Виллебранда при данной скорости пристеночного сдвига, ниже диапазона нормальных значений - на ослабление гидродинамической активации фактора фон Виллебранда или отсутствие фактора фон Виллебранда в пробе.
Осуществление предложенного способа с использованием предложенного устройства иллюстрируется приведенными ниже примерами.
Пример 1. Обследовался здоровый доброволец без патологии фактора фон Виллебранда. В пробирку с 3,2% цитратом натрия отобрано 3,2 мл крови. В течение 1 часа кровь помещена в приемный резервуар - ёмкость 1. Проточная камера 3 подключена к системе трубок, оптическая поверхность сориентирована по направлению к лучу источника 7 света. Активирован насос 2. Скорость расхода жидкости (Q) установлена такой, чтобы согласно формуле (1) на одном из двух или более участков канала 4 с разной площадью поперечного сечения скорость пристеночного сдвига (g) при прокачивании жидкости была 3000 с 1, а в другой - 6000 с 1 (ниже и выше критического значения 5000 с 1 для гидродинамической активации фактора фон Виллебранда в норме, соответственно).
Получены результаты: на участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 3000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 2,5 мА. Это свидетельствует о том, что при данной скорости сдвига в пробе не происходит гидродинамической активации фактора фон Виллебранда. На участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 6000 с 1 фоточувствительными элементами зарегистрирована сила электрического тока 16 мА. Это соответствует известным данным о том, что гидродинамическая активация фактора фон Виллебранда в норме происходит при скоростях пристеночного сдвига выше 5000 с 1 .
Пример 2. Обследовался пациент с тромботической тромбоцитопенической пурпурой. При этом заболевании образуются молекулы фактора фон Виллебранда, активные даже при низких скоростях пристеночного сдвига, что приводит к образованию тромбов в сосудах. В пробирку с 3,2% цитратом натрия отобрано 3,2 мл крови. В течение 1 часа кровь помещена в приемный резервуар - ёмкость 1. Проточная камера 3 подключена к системе трубок, оптическая поверхность сориентирована по направлению к лучу источника 7 света. Активирован насос 2. Скорость расхода жидкости (Q) установлена такой, чтобы согласно формуле (1) на одном из двух или более участков канала 4 с разной площадью поперечного сечения скорость пристеночного сдвига (g) при прокачивании жидкости была 3000 с 1, а в другой - 6000 с 1.
Получены результаты: в части канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 3000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 32 мА. На участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 6000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 46 мА. Это соответствует известным данным о том, что при тромботической тромбоцитопенической пурпуре гидродинамическая активация фактора фон Виллебранда происходит при скоростях пристеночного сдвига ниже 5000 с 1 .
Пример 3. Обследовался пациент с синдромом Heyde. У пациентов с этим заболеванием присутствует выраженный стеноз (сужение) аортального клапана, где возникают очень высокие скорости сдвига. Это приводит к гидродинамической активации фактора фон Виллебранда и его расходу. В результате у таких пациентов фактор фон Виллебранда становится неактивен даже при высоких скоростях сдвига, так как уже был израсходован в месте стеноза аортального клапана. Клинически это проявляется склонностью пациента к кровотечениям, например, из желудочно-кишечного тракта. В пробирку с 3,2% цитратом натрия отобрано 3,2 мл крови. В течение 1 часа кровь помещена в приемный резервуар - ёмкость 1. Проточная камера 3 подключена к системе трубок, оптическая поверхность сориентирована по направлению к лучу источника 7 света. Активирован насос 2. Скорость расхода жидкости (Q) установлена такой, чтобы согласно формуле (1) на одном из двух или более участков канала 4 с разной площадью поперечного сечения скорость пристеночного сдвига (у) при прокачивании жидкости была 3000 с 1, а в другой - 6000 с 1.
Получены результаты: на участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 3000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 2 мА. На участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 6000 с 1 фоточувствительными элементами 4 зарегистрирована сила электрического тока 5 мА. Это свидетельствует о том, что в исследуемой пробе степень гидравлической активации фактора фон Виллебранда резко снижена. При хирургическом лечении стеноза аортального клапана, когда восстанавливаются нормальные размеры просвета аортального клапана, устраняются высокие скорости сдвига в этом месте. В результате фактор фон Виллебранда перестает активироваться и расходоваться, его концентрация и функция в крови возвращаются к норме.
Исследовалась кровь того же пациента с синдромом Heyde после хирургического лечения стеноза аортального клапана.
Получены результаты: на участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 3000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 4 мА. На участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 6000 с 1 фоточувствительными элементами зарегистрирована сила электрического тока 15 мА. Это свидетельствует о степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда в пределах нормы и о восстановлении нормальной функции фактора фон Виллебранда.
Пример 4. Обследовался пациент с болезнью Виллебранда 3 типа. У пациентов с этим заболеванием в крови отсутствует фактор фон Виллебранда. В пробирку с 3,2% цитратом натрия отобрано 3,2 мл крови. В течение 1 часа кровь помещена в приемный резервуар - ёмкость 1. Проточная камера 3 подключена к системе трубок, оптическая поверхность сориентирована по направлению к лучу источника 7 света. Активирован насос 2. Скорость расхода жидкости (Q) установлена такой, чтобы согласно формуле (1) на одном из двух или более участков канала 4 с разной площадью поперечного сечения скорость пристеночного сдвига (g) при прокачивании жидкости была 3000 с 1, а в другой - 6000 с 1. Получены результаты: на участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 3000 с 1 фоточувствительными элементами 8 зарегистрирована сила электрического тока 2 мА. На участке канала 4 со скоростью пристеночного сдвига 6000 с 1 фоточувствительными элементами 4 зарегистрирована сила электрического тока 2 мА. Нахождение зарегистрированных значений силы тока ниже нормальных значений и отсутствие изменений в регистрируемой силе тока на участках канала со скоростью пристеночного сдвига выше и ниже критической для гидродинамической активации фактора фон Виллебранда свидетельствует об отсутствии гидродинамической активации фактора фон Виллебранда.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, заключающийся в том, что пропускают поток исследуемой биологической жидкости, содержащей тромбоциты и фактор фон Виллебранда, через проточную камеру, имеющую канал с изменяющейся по длине площадью поперечного сечения с обеспечением разных скоростей пристеночного сдвига в пропускаемой жидкости, имеющих значения выше и ниже критического значения скорости пристеночного сдвига для степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда в норме, при этом проточная камера имеет стенку, выполненную из оптического материала с адгезивной поверхностью, обеспечивающей адгезию тромбоцитов, направляют лучи света снаружи на оптическую поверхность - границу между оптическим материалом и потоком жидкости - на участках камеры с разными площадями поперечного сечения канала под углом падения большим критического угла, при котором происходит полное внутреннее отражение, регистрируют потоки света, рассеянного и/или отраженного от оптической поверхности отдельно от каждого участка канала проточной камеры, сравнивают зарегистрированные значения для различных участков камеры с нормальными значениями для скорости пристеночного сдвига на соответствующем участке канала, и по результатам сравнения делают вывод о степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда.
2. Способ по п. 1, по которому в случае, когда зарегистрированное значение потока света на участке со скоростью пристеночного сдвига ниже критического значения превышает нормальные значения потока света, делают вывод о повышенной степени гидравлической активации фактора фон Виллебранда.
3. Способ по п. 1, по которому в случае, когда нормальные значения потока света превышают зарегистрированное значение потока света на участке со скоростью пристеночного сдвига выше критического значения, делают вывод о пониженной степени или об отсутствии гидравлической активации фактора фон Виллебранда.
4. Способ по п. 1, по которому используют проточную камеру, канал которой имеет два или более участка с разным поперечным сечением.
5. Способ по п. 1, по которому используют проточную камеру, канал которой имеет непрерывно уменьшающееся поперечное сечение в направлении от входа к выходу.
6. Способ по п. 1, по которому в качестве адгезивной поверхности, обеспечивающего адгезию тромбоцитов, предпочтительно используют покрытие из адгезивного белка.
7. Устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда, содержащее средство подачи биологической жидкости, проточную камеру, имеющую канал с изменяющейся по длине площадью поперечного сечения и стенку, выполненную из оптического материала с адгезивной поверхностью, обеспечивающей адгезию тромбоцитов, источник света, выполненный с возможностью направления лучей света снаружи на внутреннюю поверхность стенки из оптического материала с адгезивным покрытием на участках камеры с разными площадями поперечного сечения канала, и фоточувствительные элементы для регистрации потоков света, рассеянных и/или отраженных от указанной поверхности стенки отдельно от каждого участка канала проточной камеры.
8. Устройство по п. 7, в котором проточная камера имеет канал с двумя или более участками с разным поперечным сечением.
9. Устройство по п. 7, в котором проточная камера имеет канал с непрерывно уменьшающимся поперечным сечением в направлении от входа к выходу.
10. Устройство по п. 7, в котором адгезивная поверхность, обеспечивающая адгезию тромбоцитов, предпочтительно образована покрытием из адгезивного белка.
PCT/RU2020/000583 2020-01-14 2020-11-02 Способ и устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон виллебранда WO2021145787A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020100934 2020-01-14
RU2020100934A RU2727753C1 (ru) 2020-01-14 2020-01-14 Способ определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда и устройство для его осуществления

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021145787A1 true WO2021145787A1 (ru) 2021-07-22

Family

ID=71741109

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2020/000583 WO2021145787A1 (ru) 2020-01-14 2020-11-02 Способ и устройство для определения степени гидродинамической активации фактора фон виллебранда

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2727753C1 (ru)
WO (1) WO2021145787A1 (ru)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2347224C2 (ru) * 2007-01-10 2009-02-20 Институт химической кинетики и горения СО РАН Способ проведения анализов крови и анализатор крови

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2347224C2 (ru) * 2007-01-10 2009-02-20 Институт химической кинетики и горения СО РАН Способ проведения анализов крови и анализатор крови

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LI MELISSA, KU DAVID N., FOREST CRAIG R.: "Microfluidic system for simultaneous optical measurement of platelet aggregation at multiple shear rates in whole blood", LAB CHIP, vol. 12, no. 7, 8 February 2012 (2012-02-08), pages 1355 - 1362, XP055842431 *
USHAKOVA O. E. ET AL.: "Primenenie protochnykh sistem v laboratornoi diagnostike dlia integralnoi otsenki sistemy gmostaza", VOPROSY GEMATOLOGII ONKOLOGII I IMMUNOPATOLOGII V PEDIATRII, vol. 17, no. 1, 2018, pages 117 - 129 *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2727753C1 (ru) 2020-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4602626B2 (ja) グローバルな止血、特に一次止血の凝固機能を検出するための装置および方法
US20180185839A1 (en) Microfluidic Device For Real-Time Clinical Monitoring And Quantitative Assessment Of Whole Blood Coagulation
Babu et al. Influence of hyperglycemia on aggregation, deformability and shape parameters of erythrocytes
JP5036547B2 (ja) 血栓観測装置および血栓観測方法
US7358091B2 (en) Device and methods for identifying and treating aspirin non-responsive patients
US4604894A (en) System for measuring bleeding time in vitro
US8895259B2 (en) Method for determination of platelet function under flow conditions
US20040131500A1 (en) Device and method for evaluating platelets
Kang et al. In vitro and ex vivo measurement of the biophysical properties of blood using microfluidic platforms and animal models
JP2005538383A (ja) 血小板機能を監視する方法および装置
US20060269978A1 (en) Method and device for monitoring platelet function
EP2010903A1 (en) Apparatus and method for the diagnosis, prognosis and pharmacological monitoring of the thrombotic-ischemic and hemorrhagic pathology of the cardiovascular apparatus
EP1581107A2 (en) System and method for in vitro bleeding time testing
US20120237960A1 (en) Devices and Methods for Determining the Platelet Function in a Centrifugal Analyzer
RU2727753C1 (ru) Способ определения степени гидродинамической активации фактора фон Виллебранда и устройство для его осуществления
Babu et al. Analysis of aggregation parameters of erythrocytes in diabetes mellitus
US20100099130A1 (en) Methods and devices for monitoring platelet function
JP4833727B2 (ja) 血管内皮細胞を用いた血栓観測方法および血栓観測装置
RU2432577C2 (ru) Устройство мониторинга образования тромба и способ мониторинга образования тромба
Jung et al. Haemocompatibility of Endovascular Coronary Stents: Wiktor GX©. Hämokompatibilität von Koronarstents: Wiktor GX©
US20110086363A1 (en) Method and apparatus to conduct kinetic analysis of platelet function in whole blood samples
WO2019099342A1 (en) Methods and systems for consistent thrombus formation and measurement thereof
Zieger et al. Development of an in-vitro model for extracorporeal blood pumps to study the effects of artificial pulsatility on human blood
Reilly Blood flow and thrombosis in arteriovenous fistulae
PT2010903E (pt) Aparelho e processo para o diagnóstico, prognóstico e monitorização farmacológica de patologia trombótico-isquémica e hemorrágica do aparelho cardiovascular

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20913571

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20913571

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1