WO2021096388A1 - Композиция с пролонгированным эффектом антибактериального действия - Google Patents

Композиция с пролонгированным эффектом антибактериального действия Download PDF

Info

Publication number
WO2021096388A1
WO2021096388A1 PCT/RU2020/000281 RU2020000281W WO2021096388A1 WO 2021096388 A1 WO2021096388 A1 WO 2021096388A1 RU 2020000281 W RU2020000281 W RU 2020000281W WO 2021096388 A1 WO2021096388 A1 WO 2021096388A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
ficin
maltodextrin
lysozyme
extract
activity
Prior art date
Application number
PCT/RU2020/000281
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Елена Юрьевна БЕЛОУС
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Сплат Глобал"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Сплат Глобал" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Сплат Глобал"
Publication of WO2021096388A1 publication Critical patent/WO2021096388A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses

Definitions

  • the invention relates to the cosmetic industry and can be used for
  • Oral health is one of the key indicators of the health of the body, which has a direct impact on the quality of human life and social integration. According to the World Health Organization's Global Burden of Disease Survey, at least 3.58 billion people worldwide suffer from oral diseases. The most common diseases of the oral cavity are seven conditions: dental caries, periodontal (gum) diseases, oral cancers, intraoral manifestations of HIV infection, trauma to the oral cavity and teeth, cleft lip and palate and noma. (Oral Health. Web Article. World Health Organization. Published September 24, 2018 URL: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/oral-health ).
  • the mechanism of caries formation is due to the formation of a microbial biofilm on the surface of the tooth enamel. Unlike typical infectious diseases caused by pathogenic bacteria, caries can be triggered by the vital activity of opportunistic and resident bacteria that are constantly present in the oral cavity. As a rule, the human immune system does not resist the appearance and vital activity of these bacteria.
  • anti-caries agents in oral care products, keep in mind the balance of the oral microflora. Due to the existence of resistant bacterial strains and horizontal gene transfer, the anti-caries effect of such substances can cause a change in the qualitative and quantitative composition of microflora, a sharp change in the composition of which is regarded as a local ecological disaster (Banerjee, 2004 GIVE REFERENCE). Therefore, the main target of anti-caries therapy should be the bacterial biofilm.
  • Biofilms consist of microbial cells and their associated extracellular matrix of its own production, which consists of polysaccharides, proteins and DNA. Bacterial biofilms are resistant to various stresses, including antibiotics and disinfecting chemicals. In biofilms, bacteria are protected from phagocytosis and other components of innate and acquired immunity. Biofilms can also be very dangerous, since they are often formed in various infectious pathologies. The course of infectious diseases can proceed with complications precisely because of the formation of microbial biofilms in the body. Many chronic diseases are associated with biofilm infections - cystic fibrosis pneumonia, otitis media, pathology of teeth and periodontal tissues, osteomyelitis, urinary tract infections, and others.
  • the process of appearance and removal of biofilms and bacteria in the oral cavity is cyclical; this means that periods of acid attack and demineralization are followed by periods of remineralization and serious tooth decay occurs only if the loss of mineral content is greater than recovery (Rugg-Gunn, 2013 GIVE REFERENCE).
  • the physiological liquid for permanent restoration of enamel is saliva, which is oversaturated with respect to calcium cations.
  • hydrolases are present in saliva, for example, lysozyme, which also has the ability to inhibit biofilm formation even at a concentration of 30 ⁇ g / ml. With a lack of saliva, the physiological process of enamel restoration and the fight against the potential development of calcium ceases.
  • Streptococcus mutans (Kenneth & Ray, 2004 GIVE REFERENCE). This type of streptococcus has been confirmed to be the most common in the oral cavity (Ekeda & Sandham, 1971 REFERENCE). In addition to the fact that this bacterium metabolizes, like many other sugars, into acids, and also has the ability to adhere to the surface of the teeth (Ray, Gfell, Buller, & Gregory, 1999 GIVE REFERENCE). Bromelain has been shown to be able to inhibit the growth of isolated S. mutans strains (Praveen et al., 2014 GIVE REFERENCE).
  • Lactic acid fermentation of carbohydrate food residues contributes to the formation of lactic acid in the oral cavity, the result of which is the dissolution of inorganic substances of enamel and dentin and the subsequent destruction of dentin organic matter by proteolytic enzymes of microorganisms (S. Fishchev, A. Klimov, I. Berezkina, A. Sevastyanov, I. Orlova, T. Shishko. Tooth decay. Liters, 2018 GIVE MORE FULL REFERENCE).
  • biofilms and the physiological features of film bacteria provide many times higher resistance of the bacterial community in comparison with planktonic cultures to antibacterial drugs.
  • Microorganisms that make up biofilms are 100-1000 times less sensitive to most antibiotics and other biocidal substances than plankton bacteria.
  • the nature of this stability is being actively investigated. It is assumed that such resistance may be due to different mechanisms: 1) the difficulty or inability of antibiotics to penetrate deep into the matrix; 2) binding and inactivation of the antibiotic by polymers or matrix proteins; 3) a slower rate of division of bacteria in biofilms; 4) the presence in biofilms of metabolically inactive cells that are insensitive to antibiotics.
  • cells are able to leave the biofilm and transform into a planktonic form, which is called dispersion (release of bacteria) (Mardanova A.M., 2016).
  • Resistance can be defined as the ability of a microorganism to multiply in the presence of a toxic substance (antibiotic or antiseptic) and can be applied to bactericidal and bacteriostatic drugs (K. Lewis, 2001 GIVE REFERENCE).
  • tolerance can only be used in relation to bactericidal antibiotics that kill 99.9% of bacteria during their duration of action and at a minimum bactericidal concentration (K. Lewis, 2001 GIVE REFERENCE).
  • Tolerance can be defined as a lack of growth, but the existence of surviving bacteria in the presence of a bactericidal antibiotic (Kim Lewis, 2007 GIVE REFERENCE).
  • Chlorhexidine is an antiseptic and its use in toothpastes is limited, moreover, it leads to a change in the microbiota of the oral cavity, which adversely affects the state of the mucous membrane, and can also provoke the occurrence of various diseases.
  • Other antibacterial agents stannous fluorides, triclosan
  • antibacterial agents are not only unable to destroy biofilms, but they can also be absorbed and released from them at therapeutic concentrations for action on planktonic forms of bacteria in the oral cavity for a long time (Often et al., 2012 GIVE REFERENCE).
  • composition of biologically active substances including ficin, egg white lysozyme, bromelain obtained from pineapple trunk tissues.
  • Lysozyme (muramidase; N-acetylmuramic hydrolase) is a small monomeric protein stabilized by 4 disulfide bonds of eight cysteines. Opening Lysozyme belongs to Alexander Fleming, who accidentally discovered that a drop of his nasal mucus could lyse bacteria on the plate, which allowed him to detect a "remarkable bacteriolytic element" later called lysozyme (Fleming & Allison, 1922 GIVE REFERENCE).
  • Lysozyme a 15 kDa single-stranded protein, lyses susceptible bacteria by hydrolysis of b-1,4-bonds between N-acetylmuramic acid and 2-acetylamino-2-deoxy-c1-glucose residues in cell walls.
  • lysozymes Based on several characteristics (structure, catalysis, immunization), lysozymes are divided into three dominant families: chicken (c-type), goose (g-type) and invertebrate (i-type). In addition, other types of lysozymes are distinguished: phage, bacterial and plant (Cao et al., 2015 GIVE REFERENCE).
  • LSP Egg white lysozyme
  • It is positively charged below pKa ( ⁇ 11), due to the presence of 17 positively charged (6 Lys, 11 Arg) and 9 negatively charged (7 Asp, 2 Glu) amino acid residues, which makes LNB an ideal candidate for studying interactions with substances (drugs, metals ).
  • Lysozyme is not an antibiotic, but it has an antimicrobial effect, due to the cleavage of the beta-1-4-glycosidic bond between N-acetylmuramic acid and N-acetylglucosamine.
  • there is a prolysis mechanism explained by cationic and hydrophobic properties, leading to the autolysis of bacterial cells (Humann & Lenz, 2009 GIVE REFERENCE).
  • lysozyme when describing lysozyme as a pharmacological substance of an antibiotic nature, its effectiveness would be low in comparison with the drugs used. Bacteria have two mechanisms to counteract the work of lysozyme.
  • the first is based on the protection of the outer membrane, and the second - on the production of special chemical variations of peptidoglycan, which excludes the addition of lysozyme to it.
  • the second option for protecting bacterial cells we can cite the resistance to lysozyme of the standard human pathogen S. aureus due to the modification of peptidoglycan with O-acetyltransferase.
  • the gene encoding this enzyme (oatA) which is widespread among pathogenic strains, can be transmitted by horizontal transfer to both pathogenic and non-pathogenic bacteria, and then further. But, despite the fact that any effect of suppressing bacterial infection deserves to be studied precisely today, when the world is faced with an increasing number of resistant microorganisms and resistant biofilms.
  • Antibacterial chemotherapy leads to recurrent infection in more than 30% of cases after 3-6 months and in more than 50% of cases after a year (Bradshaw et al., 2006 GIVE REFERENCE).
  • Biofilms actually exhibit the ability to trap antibiotics on their matrix components (Anderson &O'Toole, 2008 REFERENCE), thereby reducing their availability within the biofilm and decreasing efficacy. It can also cause resistance.
  • the bacteria within the biofilm are dormant and less sensitive to antibiotics (Kwan, Valenta, Benedik, & Wood, 2013 GIVE REFERENCE).
  • treatment can lead to the destruction of microorganisms inside the film, but not at all affect the film, which in the future may become a new home for other bacteria.
  • Ficin (EU Enzyme Classification Code 3.4.22.3) is a protease enzyme obtained from the milky juice of ficus plants. It is classified as a sulfhydryl protease enzyme based on its chemical properties. (Pourmorad, Honary, Azadbakht, Asgarirad, & Golmohammadzadeh, 2011 GIVE REFERENCE)
  • proteases are one of the most effective enzymes for destroying biofilms by hydrolysis of both matrix proteins and adhesins (proteins for attaching cells to a solid surface and other bacteria), as well as by cleaving signal peptides of intercellular communication of gram-positive bacteria (Baidamshina et al., 2017 GIVE REFERENCE).
  • ficin destroys bacterial films formed by S. aureus and S. epidermidis, which are bacteria that colonize wounds and slow down wound healing.
  • Ficin is believed to be a safe and effective treatment for external wounds by suppressing biofilm formation and reducing the risk of re-infection. Ficin also has peroxidase-like activity. According to Yang, Shen, Long, Xie, & Zheng, 2017 GIVE REFERENCE, evidence of intrinsic peroxidase activity of ficin was found. This activity consists in catalyzing the reaction of various peroxidase substrates in the presence of H2O2. It was also shown that the site of protease activity differs from that for peroxidase-like. Consequently, this enzyme can catalyze several substrates to carry out different types of reactions.
  • K m (H 2 C> 2 ) 0.35 tM.
  • the catalytic mechanism is as follows: ficin binds and reacts with one substrate, then releases the first product, and only then reacts with the second substrate.
  • ficin as a detector of the appearance of H2O2 from cells or other sources has also been shown. Since the color change of TMB oxidation catalyzed by ficin turned out to be dependent on the ⁇ 2 ⁇ 2 concentration, respectively, the change in optical density can be used to detect hydrogen peroxide.
  • the peroxidase-like activity of ficin plays a role in protecting against pathogens and reducing the toxicity of certain organic compounds.
  • the use of ficin in biochemistry can be expanded, at least it will be useful as an enzyme mimic in biotechnology, environmental monitoring, ecology and hygiene.
  • Bromelain is a complex of enzymes that digest proteins and clot milk contained in pineapple juice and trunk tissues.
  • the enzymes from these two sources are referred to respectively as fetal bromelain and stem bromelain.
  • Bromelain as a chemical substance has been known since 1875 and is used as a herbal remedy.
  • the concentration of bromelain in the trunk of the tree, which is a waste, is quite high, which is exactly what is required for extraction.
  • But bromelain obtained from tree trunk (EC.3.4.22.32) differs in its effectiveness from bromelain from fruit (EC.3.4.22.33). (Rowan & Buttle, 1994 GIVE REFERENCE)
  • bromelain For bromelain, a wide range of therapeutic applications has been declared: reversible inhibition of platelet aggregation, sinusitis, surgical trauma, thrombophlebitis, pyelonephritic angina pectoris, bronchitis and improved absorption of drugs, especially antibiotics.
  • reversible inhibition of platelet aggregation sinusitis, surgical trauma, thrombophlebitis, pyelonephritic angina pectoris, bronchitis and improved absorption of drugs, especially antibiotics.
  • the interaction of bromelain with fibrinogen results in products that are somehow similar to the products of interaction of fibrinogen with plasmin.
  • Bromelain is considered a dietary supplement and is commercially available in stores and pharmacies in the United States and Europe.
  • Bromelain may be a promising candidate for the development of future enzyme drugs for cancer patients.
  • Bromelain can be absorbed in the human body unchanged and without loss of its biological activity. (Pavan et al., 2012 GIVE REFERENCE)
  • Bromelain is mainly composed of various mixtures of thiolendopeptidases and other substances such as carbohydrates of glycoprotein phosphatases, glucosidases, peroxidases, cellulases and some protease inhibitors.
  • It is used in dental treatment as an anti-inflammatory and analgesic agent.
  • its use as an antibacterial agent still needs confirmation. Therefore, a qualitative in vitro assay was performed to test the antibacterial activity of bromelain against isolated strains of S. mutans (ATCC. No. 25175), E. fecalis (ATCC. No. 35550), Aa (ATCC. No. 29523) and Pg (ATCC. No. 25175).
  • Bromelain is a natural product with anti-inflammatory properties used in traditional medicine to improve conditions during fevers, pains, migraines and arthritis.
  • this enzyme since its inception in 1957 has shown practical efficacy in the therapeutic management of soft tissue inflammation and injuries complicated by local inflammatory processes, especially in edematous complications and postoperative tissue reactions.
  • this enzyme since its inception in 1957 has shown practical efficacy in the therapeutic management of soft tissue inflammation and injuries complicated by local inflammatory processes, especially in edematous complications and postoperative tissue reactions. (Kelly, 2010 GIVE REFERENCE)
  • bromelain has already been investigated, also for analgesic activity, for example, in the management of patients after surgical tooth extractions.
  • analgesic activity for example, in the management of patients after surgical tooth extractions.
  • Sebomine SB 12 is a hydroglycolic solution containing lactoferrin and lactenin (glucose oxidase, lactoperoxidase, potassium thiocyanate) systems active against yeast and mold bacteria, partially responsible for hypersecretion of the sebaceous glands.
  • INCI Water, Glycerin, Potassium Thiocyanate, Lactoferrin, Lactoperoxidase, Glucose Oxidase, Glucose Pentaacetate.
  • Lactoferrin (lactotransferrin; Lf) is a glycoprotein from the transferrin family. Was first identified in bovine milk in 1939. (SORENSEN & Sorensen, 1940 GIVE REFERENCE) Human lactoferrin (hLf) contains 691 amino acids ( ⁇ 78 Na), is expressed and secreted by epithelial cells into many exocrine secretions, including saliva, tears, and milk.
  • Lf The first function assigned to Lf is antimicrobial activity.
  • the bacteriostatic effect of lactoferrin is usually iron dependent, as iron supplementation reverses its effect.
  • Lf's antibacterial action counteracts three major mechanisms created by bacterial pathogens: (i) synthesis of high affinity iron ion chelating substances called siderophores that compete with proteins that bind iron for harvest and delivery of bacteria into the interior using specific receptors; (i) the absorption of iron through binding to lactoferrin or transferrin is mediated by their specific receptor on the surface; the assimilation of iron, which is associated with hemoglobin, haptoglobin and hemopexin, is mediated by surface hemoprotein receptors; the assimilation of iron bound to heme is mediated by the surface hemophoric receptor; (iii) assimilation of iron through bacterial reductase capable of reducing Fe
  • LPS lipopolysaccharide
  • Lactoferrin has a powerful synergy with lysozyme in killing gram-negative bacteria.
  • Lf allows lysozyme access to the proteoglycans of the inner membrane, where it breaks down bonds and kills bacteria (Ellison & Giehl, 1991 GIVE REFERENCE).
  • the same mechanism of action works against gram-positive bacteria. (Valenti & Antonini, 2005 GIVE REFERENCE)
  • lactoferrin has a direct inhibitory effect on viruses and other microorganisms. Against viruses, such effects can be manifested due to the attachment of lactoferrin to proteoglycans located on the cell surface, for which Lf has a high affinity through the N-terminal glucosaminoglycan-binding domains. By such mechanisms, the penetration of certain viruses is blocked (example: HSV - Herpes simplex vims) (H. F. Wu, Monroe, & Church, 1995 GIVE REFERENCE). Against fungi such as Candida, Lf has also been shown to be effective in disturbing the cell wall with superficial blistering, bulging and collapse (Xu, Samaranayake, Samaranayake, & Nikawa, 1999 REFERENCE).
  • the described complex of active molecules gets onto the surface of dental plaque within 2-3 minutes. Due to the structure of the foam and the high concentration of the elements of the complex in the composition of the toothpaste, an extensive coverage of the biofilm surface occurs and the action begins everywhere. Ficin, which is a component of the complex due to its peroxidase activity, increases the amount of reactive oxygen species (ROS) on the entire surface of the film. From this point on, due to the high oxidation potential of ROS, even a minimal amount appearing at the interface between the foam and the film oxidizes the proteins of the film matrix. Consequently, a nonspecific rupture of bonds occurs, which helps all active elements of the bioactive complex to penetrate into the bacterial film.
  • ROS reactive oxygen species
  • the mechanical action mediated by the movements of the toothbrush removes the remnants of molecules cleaved during the oxidation of the ROS biofilm surface.
  • the peroxidase attack on the biofilm surface is not the only effect that occurs on its surface. Since bromelain in its composition includes carbonhydrates of glycoprotein phosphatases, glucosidases, peroxidases and cellulases, and the surface of the protein matrix can be protected and limited by nonspecific metabolites and other organic molecules, its constituents become effective. After entering the biofilm, the action of the active complex is divided.
  • Ficin manifests itself as a protease and breaks down proteins of intercellular communication of gram-positive bacteria, which helps to reduce the transmitted information within the biocenosis of the oral cavity and allows it to act on each biofilm without further possible changes in the structure of colonies mediated by active communication of microorganisms from different parts of dental plaque.
  • the action of ficin is also manifested in the case of adhesins, which it breaks down, isolating bacterial cells.
  • adhesins when the complex reaches the back surface of the biofilm associated with the tooth tissues, adhesins also attack them, thereby reducing the degree of film attachment. The manifestation of this property is possible with prolonged systemic use of the active complex.
  • Each individual bacterium is affected by lysozyme due to its ability to cleave the beta-1-4-glycosidic bond between N-acetylmuramic acid and N-acetylglucosamine. Consequently, the cell wall of each bacterium loses its properties and opens the way into the cell for the active complex. All protease and lytic properties of the components of the complex now appear nonspecifically, depending on the bacteria represented. During the lysis of bacterial cells, infection with pyrogenic molecules of the tissues of the oral cavity is possible.
  • bromelain which has nonspecific lytic and anti-inflammatory properties, acts not only inside the biofilm, but also directly at the site of inflammation, destroying the centers of pyrogenicity and reducing the production of COX. Lysozyme has the ability to accumulate in tissues and be secreted for a long time. Therefore, its activity against bacteria will continue.
  • Example 1 cleaning, action on bio lenki, prolongation of the cleansing effect due to long-term antibacterial action
  • the aim of a randomized clinical study was to prove the cleansing properties of the claimed composition.
  • the study involved men and women aged 18-45 years without chronic diseases. A total of 200 people participated in the study, 20 subjects in each group.
  • compositions were used that, as active ingredients, included the claimed complex containing lysozyme - 0.02%, bromelain - 0.07%, ficin - 0.075%, or these active ingredients one by one (Table 1).
  • composition of the base composition of the toothpaste is the composition of the base composition of the toothpaste
  • a comparative clinical study was performed on 200 subjects, the comparison was carried out with the initial parameters.
  • the patients applied the toothpaste compositions 2 times a day for 4 weeks.
  • Patients were randomly assigned to 5 groups of 20 participants each to evaluate cleansing and 5 groups of 20 participants each to assess the prolongation of the cleansing effect.
  • Each patient received the appropriate toothpaste, the same toothbrush, and instructions for brushing their teeth.
  • the distribution of participants into groups is presented in Table 3.
  • the parameter for assessing the effectiveness of the drugs was the Green-Vermillion Index (OHI-S), determined by the dentist.
  • OI-S Green-Vermillion Index
  • the index was measured at visit 1 before and after 2 minutes of brushing, at visits 2 and 3 after 24 hours of product use and after 2 minutes of brushing.
  • the index allows you to separately assess the amount of plaque and tartar. To determine the index, 6 teeth were examined: 16, 11, 26, 31 - vestibular surfaces 36, 46 - lingual surfaces. Plaque assessment was carried out using erythrosine staining solutions.
  • Determination of supra- and subgingival calculus is carried out using a dental probe.
  • the calculation of the index consists of the values obtained for each component of the index, dividing by the number of examined surfaces by summing both values.
  • GAMES SUM OF FLIGHT VALUES / NUMBER OF SURFACES + SUM OF VALUES OF STONE / NUMBER OF SURFACES
  • the OHI-S index at the end of the study was 1.13 ⁇ 0.05, which is 3.4 times less than the initial indicator (3.84 ⁇ 0.07; P ⁇ 0.05 ).
  • the OHI-S index at the end of the study was 1.34 ⁇ 0.06, which is 2.8 times less than the initial indicator (3.79 ⁇ 0.03; P ⁇ 0.05 ).
  • the value of the OHI-S index at the end of the study was 2.80 ⁇ 0.04, which is less than the initial indicator, but insignificantly (3.83 ⁇ 0.04; P ⁇ 0.05).
  • the control group experienced a 42% increase in soft plaque from the original value.
  • groups 2-4 using the composition with only one enzyme, up to 16% of dental plaque was formed, and in the group using the toothpaste with the claimed composition, the amount of soft dental plaque was only 4%.
  • in vitro testing of the composition of the toothpaste was carried out according to the PAV and FT indicators, which are necessary to determine the cleaning ability of the products. As a result, the composition has a PAV value of 23.6 and an FT value of 90, which confirms the high cleaning properties of the products.
  • the use of a paste with a complex of enzymes lysozyme - 0.02%, bromelain - 0.07%, ficin - 0.075% led to the enamel purification by 100%, i.e. complete breakdown of biofilms and protein plaque, while the level of hygiene moved from a poor level to a good one, the PAV index was 23.6 units, the FT cleansing index will be 90 units, which indicates the incredibly high cleaning properties of the composition and the synergism of the action of the components included in the complex ...
  • the claimed composition has a prolonged cleansing effect, i. E. prevents the formation of bacterial biofilms by 96%.
  • the aim of a randomized clinical trial was to prove the whitening properties of the claimed composition.
  • the study involved men and women aged 18-45 years without chronic diseases. A total of 40 people participated in the study, with 20 subjects in each group.
  • Group 1 used a composition that included the claimed complex containing lysozyme - 0.02%, bromelain - 0.07%, ficin - 0.075% as active ingredients
  • group 2 used the base composition of the toothpaste. (Table 1).
  • a toothpaste with the composition given in Table N ° 2 was used.
  • the abrasiveness value (RDA index) of the product was no more than 50.
  • composition of the base composition of the toothpaste is the composition of the base composition of the toothpaste
  • a comparative clinical study was conducted on 40 subjects.
  • the patients applied the toothpaste compositions 2 times a day for 4 weeks. Patients were randomly assigned to 2 groups of 20 participants each. Each patient received the appropriate toothpaste, the same toothbrush, and instructions for brushing their teeth.
  • the indicator on the Bleachedguide 3D-Master color scale after 1, 2 and 4 weeks of use was used as a parameter for assessing the whitening effect of the preparations. All patients had dark tooth enamel before the study (19 or more points on the Vita Bleachedguide scale).
  • the aim of the randomized study was to establish the level of enhancement of the remineralizing effect of the toothpaste containing the composition, as well as its effect on the sensitivity of the enamel.
  • the study involved men and women aged 18-45 years without chronic diseases. A total of 40 people participated in the study, 20 subjects each in the study group and the comparison group.
  • the subjects used toothpaste which, as active ingredients, included the claimed complex containing lysozyme - 0.02%, bromelain - 0.07%, ficin - 0.075%, and the comparison group (group 2) used the base composition of the toothpaste.
  • Toothpaste with the composition shown in Table JVs 2 was used as a base for the inclusion of the components.
  • composition of the base composition of the toothpaste is the composition of the base composition of the toothpaste
  • the parameter for assessing the remineralizing effect of drugs was the TER test. The procedure was performed at 1, 2, 3 and 4 visits. Additionally, the Schiff index was evaluated to determine the degree of desensitization before and after the use of the gel.
  • the vestibular surface of one of the upper central incisors was cleaned of plaque using a cotton ball moistened with hydrogen peroxide solution.
  • the tooth was dried with a cotton ball.
  • the tooth was isolated from saliva with cotton rolls.
  • a drop of 1% HC1 solution with a diameter of 1.5-2 mm was applied to the center of the vestibular surface of the tooth with a micropipette. After 5 seconds, the drop was washed off with distilled water.
  • the tooth surface was dried with a cotton ball. 1 drop of 1% methylene blue solution was applied to the area of the enamel that had been etched. The dye was immediately removed with a dry cotton ball in one motion, pressing the ball tightly to the tooth surface.
  • the patient was classified into one of 4 dispensary groups:
  • the change in enamel sensitivity was assessed by the results of determining the Schiff index, based on the determination of the tooth sensitivity threshold using an air jet according to Schiff in all groups.
  • the Schiff air test is carried out as follows: air from a pistol of the dental unit is supplied perpendicular to the cervical surface of the tooth from a distance of 1 cm for a second (under a pressure of 40 - 60 psi) at a temperature of 21 degrees Celsius (Fig. 9). Tooth sensitivity is assessed using the following criteria: 0 - no response; 1 - a feeling of discomfort, but the patient does not agree on stopping the test; 2 - discomfort accompanied by a request to stop the test; 3 - severe pain reaction with pronounced motor reactions aimed at immediate termination of the test.
  • the determination of the Schiff index was carried out in the patients of the groups after 2 weeks and 4 weeks.
  • the aim of this clinical study was to determine the degree of effect of the composition on gum health.
  • the study involved men and women aged 18-45 years without chronic diseases, but with non-chronic gum disease. A total of 40 people participated in the study, 20 subjects each in the study group and the comparison group.
  • the subjects used toothpaste, which as active ingredients included the claimed complex containing ficin - 0.075%, lysozyme - 0.02%, bromelain - 0.07%, and the comparison group (group 2) used the basic composition of the toothpaste.
  • composition of the base composition of the toothpaste is the composition of the base composition of the toothpaste
  • the parameter for assessing the effectiveness of the drugs was the average gingival bleeding index (SBI), the anti-inflammatory efficacy was assessed by the PMA index.
  • SBI gingival bleeding index
  • PMA index The indices were determined by the dentist.
  • the PMA index was measured up to 2 minutes of brushing, after 2 and 4 weeks of use of the test product.
  • the PMA index is assessed according to the following codes and criteria:
  • the PMA index is calculated by the formula:
  • the PMA index is 0. The higher the digital value of the index, the higher the intensity of gingivitis.
  • the SBI was measured up to 2 minutes of brushing and after 2 and 4 weeks of use of the test product.
  • the degree of bleeding of the gingival sulcus is determined 30 s after careful probing with a periodontal probe. This index shows six degrees of inflammation:
  • Grade 3 similar to Grade 2, in addition there is a slight swelling of the gums;
  • Grade 4 similar to grade 3, severe inflammatory edema may occur
  • Grade 5 similar to grade 4, spontaneous bleeding and erosion of the gingival epithelium may occur.
  • the PMA index 4 weeks after the start of the study was 0.00 ⁇ 0.01 in group N ° 1 with an initial value of 0.26 ⁇ 0.02; P ⁇ 0.05.
  • group N ° 2 the index did not change, remaining at the same level 0.27 ⁇ 0.01; P> 0.05.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Заявлено средство для ухода за зубами и полостью рта, содержащее фицин. В другом аспекте средство содержит: фицин, лизоцим, экстракт Ananas sativus, содержащий бромелаин, экстракт корня Glycyrrhiza glabra, содержащий по меньшей мере 0,6% масс, глабридина, при определенном количественном соотношении компонентов. Средство обладает окислительным влиянием на зубной налет и биопленку на поверхности зубной эмали, отбеливающим, бактериостатическим и неспецифическим противовоспалительным действием.

Description

КОМБИНАЦИЯ С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ ЭФФЕКТОМ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ
Область техники
Изобретение относится к косметической промышленности и может использоваться для
Предшествующий уцровень техники
Здоровье полости рта является одним из ключевых индикаторов здоровья организма, оказывающим прямое влияние на качество жизни человека и его социальную интеграцию. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения Глобального исследования бремени болезней, по меньшей мере, 3,58 миллиарда людей в мире страдают от заболеваний полости рта. Наиболее распространенными заболеваниями полости рта являются семь состояний: зубной кариес, заболевания пародонта (десен), онкологические заболевания полости рта, внутриротовые проявления ВИЧ-инфекции, травмы полости рта и зубов, расщелина губы и нёба и нома. («Здоровье полости рта». Статья в сети Интернет. Всемирная организация здравоохранения. Опубл. 24 сентября 2018 г. URL: https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/oral-health).
Часть нарушений нормального состояния полости рта поддается профилактике и лечению. Однако, несмотря на активные мероприятия со стороны правительств ряда стран, международных органов и медицинских учреждений по сокращению факторов, подрывающих здоровье общества, распространение заболеваний полости рта по- прежнему носит масштабный характер и является прогрессирующей эпидемией.
Самым распространенным патологическим состоянием полости рта является кариес постоянных зубов. Установлено, что от кариеса постоянных зубов страдают 2,4 миллиарда человек, а кариес молочных зубов имеют 486 миллионов детей. Средний мировой показатель для людей в возрасте 65 лет и более составляет 22 разрушенных, отсутствующих или запломбированных зуба (из 32) (Petersen, Kandelman, Arpin, & Ogawa, 2010 ДАТЬ ПОЛНУЮ ССЫЛКУ ПРИ ПЕРВОМ ЦИТИРОВАНИИ. ПОТОМ ДАВАТЬ СОКРАЩЕННЫЕ). Кариес зубов встречался в течении всей жизни человеческой цивилизации, тем не менее, он считается современной болезнью (Rugg- Gunn, 2013 ДАТЬ ССЫЛКУ). Помимо эстетической непривлекательности и болезненных ощущений, встречающихся на начальных стадиях развития патологии, разрушительное воздействие кариеса может привести к эдентулизму (отсутствие естественных зубов), воспалительным процессам в тканях лицевой области, а также способно спровоцировать хронические аллергические реакции, развить риск развития заболеваний сердечно-сосудистой и суставной систем.
Появление и развитие кариеса связано с недостаточно эффективной гигиеной полости рта и может быть усугублено социально-экономическими детерминантами, что, в свою очередь, приводит к повышению биохимической активности стрептококков и лактобацилл, расположенных на внешней стороне зубной эмали.
Механизм образования кариеса обусловлен формированием микробной биопленки на поверхности зубной эмали. В отличие от типично протекающих инфекционных заболеваний, вызванных патогенными бактериями, кариес может быть спровоцирован жизнедеятельностью условно-патогенных и резидентарных бактерий, постоянно присутствующих в ротовой полости. Как правило, иммунная система человека не сопротивляется появлению и жизнедеятельности указанных бактерий. При использовании противокариесных агентов в продуктах по уходу за полостью рта, необходимо помнить об балансе микрофлоры ротовой полости. Благодаря существованию устойчивых штаммов бактерий и горизонтальному переносу генов, противокариесное влияние таких веществ может вызвать изменение качественного и количественного состава микрофлоры, резкое изменение состава которой расценивается как местная экологическая катастрофа (Banerjee, 2004 ДАТЬ ССЫЛКУ). Поэтому в качестве основной мишени противокариесной терапии должна выступать бактериальная биопленка.
Биопленки состоят из микробных клеток и ассоциированного с ними внеклеточного матрикса собственного производства, который состоит из полисахаридов, белков и ДНК. Бактериальные биопленки устойчивы к действию различных стрессов и в том числе к действию антибиотиков, дезинфицирующих химических веществ. В биопленках бактерии защищены от фагоцитоза и других компонентов врожденного и приобретенного иммунитета. Биопленки могут оказаться и очень опасными, поскольку они часто образуются при различных инфекционных патологиях. Течение инфекционных болезней может протекать с осложнениями именно из-за формирования в организме микробных биопленок. С биопленочными инфекциями связаны многие хронические заболевания - муковисцидозная пневмония, средний отит, патология зубов и околозубных тканей, остеомиелит, инфекции мочевыводящих путей и другие. Считается, что до 80 % всех бактериальных инфекций человека связаны с образованием биопленок (Марданова А.М. Биопленки: основные принципы организации и методы исследования: учебно-методическое пособие. Казань: Центр печати «Линк», 2016). В настоящее время в литературе можно встретить упоминание термина «зубной налет», однако более верным является определение «зубная биопленка». Данную биопленку образуют около 70% бактерий в течение нескольких суток, если не производится их своевременное удаление. Описанные биопленки обладают высокой степенью адгезии к поверхности зубов, таким образом сохраняя метаболиты жизнедеятельности бактерий (например, кислоты) в непосредственной близости к эмали. Процесс появления и удаления биопленок и бактерий в полости рта носит циклический характер; это означает, что периоды кислотной атаки и деминерализации сменяются периодами реминерализации и серьезное разрушение зуба происходит только в том случае, если потеря минеральной составляющей больше, чем восстановление (Rugg- Gunn, 2013 ДАТЬ ССЫЛКУ). Физиологической жидкостью для постоянного восстановления эмали является слюна, которая перенасыщена в отношении катионов кальция. Кроме того, в слюне присутствуют гидролазы, например, лизоцим, который также обладает способностью ингибировать образование биопленок уже при концентрации 30 мкг/мл. При недостатке слюны физиологический процесс восстановления эмали и борьба против потенциального развития кальция прекращается.
Одним из наиболее опасных микроорганизмов, вызывающих кариес, является Streptococcus mutans (Kenneth & Ray, 2004 ДАТЬ ССЫЛКУ). Этот вид стрептококка, согласно подтвержденным данным, является наиболее распространенным в ротовой полости (Ekeda & Sandham, 1971 ДАТЬ ССЫЛКУ). Кроме того, что указанная бактерия метаболизирует, как и многие другие сахара, в кислоты, а также обладает способностью к адгезии на поверхности зубов (Ray, Gfell, Buller, & Gregory, 1999 ДАТЬ ССЫЛКУ). Было показано, что бромелаин способен ингибировать рост изолированных штаммов S. Mutans (Praveen et al., 2014 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Молочнокислое брожение углеводистых остатков пищи способствует образованию в полости рта молочной кислоты, результатом активности которой является растворение неорганических веществ эмали и дентина и последующего разрушения органического вещества дентина протеолитическими ферментами микроорганизмов (С. Фищев, А. Климов, И. Березкина, А. Севастьянов, И. Орлова, Т. Шишко. Кариес зубов. ЛитРес, 2018 ДАТЬ БОЛЕЕ ПОЛНУЮ ССЫЛКУ).
Структура биопленок и особенности физиологии пленочных бактерий обеспечивает многократно повышенную устойчивость бактериального сообщества по сравнению с планктонными культурами к антибактериальным препаратам. Микроорганизмы, входящие в состав биопленок, в 100-1000 раз менее чувствительны к большинству антибиотиков и другим биоцидным веществам, чем планктонные бактерии. Природа этой устойчивости активно исследуется. Предполагают, что такая устойчивость может быть обусловлена разными механизмами: 1) затруднением или неспособностью антибиотиков проникать вглубь матрикса; 2) связыванием и инактивацией антибиотика полимерами или белками матрикса; 3) замедленной скоростью деления бактерий в биопленках; 4) наличием в биопленках метаболически неактивных клеток, нечувствительных к антибиотикам. Также, особенно при низком содержании питательных веществ, клетки способны покидать биопленку и переходить в планктонную форму, что называется дисперсией (выброс бактерий) (Марданова А.М., 2016).
В результате дисперсии от биопленки периодически отрываются отдельные клетки, способные через некоторое время прикрепиться к поверхности и образовать новую колонию. Внутри зрелых биопленок выделяют популяцию персистеров - клеток с особой устойчивостью к антибиотикам.
Исследования in vitro того, как бактерии избегают лечение антибиотиками, привело к появлению двух концепций: резистентности и толерантности. Резистентность можно определить как способность микроорганизма размножатся в присутствии токсического вещества (антибиотика или антисептика) и может быть применено к бактерицидным и бактериостатическим ЛП (К. Lewis, 2001 ДАТЬ ССЫЛКУ). Напротив, термин толерантность может быть использован только в отношении бактерицидных антибиотиков, убивающих 99,9% бактерий в течении своего времени действия и при минимальной бактерицидной концентрации (К. Lewis, 2001 ДАТЬ ССЫЛКУ). Толерантность может быть определена как отсутствие роста, но существование выживших бактерий в присутствии бактерицидного антибиотика (Kim Lewis, 2007 ДАТЬ ССЫЛКУ). Если говорить о биопленках, выживаемость бактерий часто проявляется после воздействия антибиотиками. Описанный факт больше говорит о толерантности, чем о резистентности, так как бактерии не растут, но существует подмножество бактерий, которое имеет способность выживать в присутствии высоких концентраций антибиотика (вплоть до 1000 х минимальную ингибиторную концентрацию) (Ceri et al., 1999 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Зубной налет при обычной механической чистке невозможно удалить до конца. Следовательно, необходимы другие возможные механизмы влияния на биопленки. Многие зубные пасты и ополаскиватели содержат антибактериальные компоненты для воздействия на биопленки. Сила антибактериального эффекта зависит не только от мощности антибактериальной составляющей, но и от их химических, биологических и физических свойств (субстантивности). Субстантивный антибактериальный агент задерживается на поверхностях внутри полости рта и выделяется в терапевтических концентрациях в течение длительного времени (Otten, Busscher, Abbas, van der Mei, & van Hoogmoed, 2012 ДАТЬ ССЫЛКУ). Одним из субстантивных антибактериальных агентов является хлоргексидин. Антибактериальные свойства хлоргексидина в слюне проявляются через 7 часов после использования ополаскивателя содержащего его (Cousido et al., 2010 ДАТЬ ССЫЛКУ). Хлоргексидин является антисептиком и его использование в зубных пастах ограничено, более того, он приводит к изменению микробиоты полости рта, что пагубно влияет на состояние слизистой, а также может спровоцировать возникновение различных заболеваний. Другие противобактериальные агенты (фториды олова, триклозан) не проявляют достаточного эффекта на биопленки. Кроме того, антибактериальные агенты не только не способны уничтожать биопленки, но также могут абсорбироваться ими и выделятся из них в терапевтических концентрациях для действия на планктонные формы бактерий в полости рта в течении длительного времени (Often et al., 2012 ДАТЬ ССЫЛКУ).
В настоящее время способы профилактики и лечения бактериальных инфекций постоянно совершенствуются. Учитывая, что организмы, на которые направлена химиотерапия, также имеют огромный потенциал для мутации и совершенствования, рекомендуется использование средств для усиления их бактерицидных и бактериостатических свойств.
Несмотря на то, что современная фармакология достигла высоких результатов в борьбе с бактериями по отдельности, анализ научной литературы показывает, что против биопленок она, в настоящий момент, еще недостаточно эффективна, по причине постоянных изменений свойств бактериального сообщества внутри самой биопленки. При невозможности фармакотерапии инфекции, связанной с образованием биопленки, в стандартном случае производят замену лекарственного препарата, способа его ввода, добавлением препарата в комбинацию лекарственных средств. Такие действия должны быть максимально обоснованы, так как могут привести к реинфекции, суперинфекции, не удалению собственно биопленки и заселению ее другими патогенами.
В качестве инновационного изобретения предлагается композиция биологически активных веществ, включающих фицин, лизоцим яичного белка, бромелаин, получаемый из тканей ствола ананаса. Данные вещества во время исследования их свойств авторами настоящего изобретения показали заметное влияние на бактериальную флору.
Лизоцим (мурамидаза; N-ацетилмурамовая гидролаза) - небольшой мономерный белок, стабилизированный 4 дисульфидными связями восьми цистеинов. Открытие лизозима принадлежит Александру Флемингу, который случайно обнаружил, что капля его носовой слизи может вызывать лизис бактерий находящихся на тарелке, что позволило ему детектировать «замечательный бактериолитический элемент», позже названный лизоцимом (Fleming & Allison, 1922 ДАТЬ ССЫЛКУ). Позднее лизоцимы были обнаружены в человеческих органах, тканях и секретах (селезенка, плацента, слезы, слюна, серозная жидкость) вместе с другими похожими литическими ферментами, изолированными из органов и секретов различных позвоночных, беспозвоночных, бактерий и даже растений (млечный сок папайи; папаин), что делает лизоцимы широко распространенными веществами. (Ogawa, Miyazaki, & Kimura, 1971 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Лизоцим, одноцепочечный белок массой 15 кДа, лизирует восприимчивые бактерии путем гидролиза b- 1,4-связей между остатками N-ацетилмурамовой кислоты и 2-ацетиламино-2-дезокси-с1-глюкозы в клеточных стенках. (Antibiotic Resistance, 2016 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Основываясь на нескольких характеристиках (структура, катализ, иммунизация) лизоцимы разделены на три доминантных семейства: куриное (c-type), гусиное (g-type) и беспозвоночное (i-type). Кроме того, выделяют другие типы лизоцимов: фаготип, бактериальный и растительный (Cao et al., 2015 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Лизоцим яичного белка (ЛЯБ), принадлещий к c-type, недавно приобрел большую популярность в связи со своей легкодоступностью и функциональными характеристиками (Т. Wu et al., 2018 ДАТЬ ССЫЛКУ). Он положительно заряжен ниже рКа (~11), благодаря присутствию 17 положительно заряженных (6 Lys, 11 Arg) и 9 отрицательно заряженных (7 Asp, 2 Glu) аминокислотных остатка, что делает ЛЯБ идеальным кандидатом для исследования взаимодействия с веществами (лекарства, металлы). Благодаря способности расщеплять b-( 1 ,4)-гликози дную связь между N- ацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглюкозамином пептидогликана бактериальных клеток, антибактериальная эффективность ЛЯБ против грам-положительных бактерий не оспорима и доказывалось неоднократно (Huopalahti et al., 2007 ДАТЬ ССЫЛКУ). На данный момент ЛЯБ - единственный лизоцим разрешенный для применения в пищевой промышленности (Silvetti, Morandi, Hintersteiner, & Brasca, 2017 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Лизоцим не является антибиотиком, но обладает противомикробным эффектом, за счет расщепления бета-1-4-гликозидной связи между N-ацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглюкозамином. В дополнение к этому существует про-лизисный механизм, объясняемый катионными и гидрофобными свойствами, приводящий к аутолизису бактериальных клеток (Humann & Lenz, 2009 ДАТЬ ССЫЛКУ). Кроме того, при описании лизоцима как фармакологической субстанции антибиотического характера, его эффективность была бы низкой, в сравнении с используемыми ЛП. У бактерий существует два механизма противодействию работе лизоцима. Первый основан на защите внешней мембраны, а второй - на продукции специальных химических вариаций пептидогликана, который исключает присоединение к нему лизоцима. В качестве примера второго варианта защиты бактериальных клеток, можно привести резистентность к лизоциму стандартного человеческого патогена S. aureus благодаря модификации пептидогликана О-ацетилтрансферазой. Широко распространенный среди патогенных штаммов ген, кодирующий этот фермент (oatA) может быть передан путем горизонтального переноса как патогенным, так и непатогенным бактериям, а затем далее. Но, несмотря на то, что любой эффект подавления бактериальной инфекции заслуживает изучения именно сегодня, когда мир сталкивается с увеличивающимся количеством резистентных микроорганизмов и устойчивых биопленок.
Влияние лизоцима на формирование биопленок патогенной флоры человека в последнее время активно изучается. Согласно исследованию европейских ученых (Hukic et al., 2018 ДАТЬ ССЫЛКУ) достаточно концентрации 30 мкг/мл чтобы ингибировать образование биопленок тестированных штаммов (G. Vaginalis , MSSA, MRSA, Р. aeruginosa). Это исследование было первым, которое обобщает информацию насчет эффектов лизоцима на широкий спектр больничных и эталонных штаммов микроогранизмов. По-видимому, какое-то время лизоцим игнорировался исследователями, но постоянная необходимость поиска новых антибактериальных агентов позволяет обнаружить не только видимые антибактериальные свойства, но и литические, как у индивидуальных веществ, так и у комбинаций для профилактики и/или лечения бактериальных инфекций.
Противобактериальная химиотерапия в более чем 30% случаев приводит к возвратному заражению спустя 3-6 месяцев и в более 50% случаев спустя год (Bradshaw et al., 2006 ДАТЬ ССЫЛКУ). Биопленки в действительности проявляют возможность захватывать антибиотики на своих матриксных компонентах (Anderson & O’Toole, 2008 ДАТЬ ССЫЛКУ), тем самым уменьшая их доступность внутри биопленки и уменьшая эффективность. Также это может являться причиной резистентности. В дополнении, бактерия внутри биопленки находится в пассивном состоянии и менее чувствительна к антибиотикам (Kwan, Valenta, Benedik, & Wood, 2013 ДАТЬ ССЫЛКУ). Также лечение может приводить к уничтожению микроорганизмов внутри пленки, но вообще не затрагивать пленку, которая в будущем может стать новым домом для других бактерий. Ферментативная атака биопленок лизоцимом приводит к деградации пленок, продуцируемых несколькими видами бактерий. Такой эффект лизоцима был показан для ультразащитных пленок G. vaginalis (Thellin et al., 2016 ДАТЬ ССЫЛКУ), которые могут быть заселены не только образовавшими их бактериями, но также и новыми микроорганизмами, которые появляются там, после 100% уничтожения хозяев. В этом исследовании также было продемонстрированного, что комбинационная терапия клиндамицином и метронидазолом менее эффективна, чем использование метронидазола в комбинации с лизоцимом. Такие данные указывают на то, что существует необходимость применения комплексных подходов для лечения любых бактериальных инфекций.
Фицин (Шифр классификации ферментов ЕС 3.4.22.3) - протеазный фермент, получаемый из млечного сока фикусовых растений. На основании химических свойств классифицируется как сульфгидрильный протеазный фермент. (Pourmorad, Honary, Azadbakht, Asgarirad, & Golmohammadzadeh, 2011 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Считается, что протеазы являются одним из наиболее эффективных ферментов для уничтожения биопленок путем гидролиза как матричных белков, так и адгезинов (белки для прикрепления клеток к твердой поверхности и другим бактериям), а также путем расщепления сигнальных пептидов межклеточной коммуникации грам- положительных бактерий (Baidamshina et al., 2017 ДАТЬ ССЫЛКУ). В указанном исследовании показано, что фицин разрушает бактериальные пленки сформированные S. aureus и S. epidermidis, которые являются бактериями колонизирующими раны и замедляющими заживление ран. Для проверки гидролиза белковых компонентов биопленки, проводилось исследование с окрашиванием конго красным: контрольные лунки были ярко окрашены, а в присутствии фицина наблюдалось значительное снижение интенсивности окрашивания для обоих изучаемых бактерий, что указывает на деградацию белкового остова биопленки. Присутствие протеазы приводило как минимум к двукратному снижению концентраций антибиотиков (ципрофлоксацин и бензалконий хлорид), необходимых для уменьшения количества жизнеспособных биопленочных клеток. Фицин не является цитотоксичным, как было подтверждено, используя анализы жизнеспособности стволовых клеток жирового происхождения и клеток карциномы MCF7. Важно отметить, что фицин не влиял на скорость роста и морфологию обеих клеточных линий. Считается, что фицин является безопасным и эффективным средством для лечения наружных ран, подавляя образование биопленки и снижая риск повторного заражения. Фицин также имеет пероксидазоподобную активность. Согласно Yang, Shen, Long, Xie, & Zheng, 2017 ДАТЬ ССЫЛКУ обнаружены доказательства внутренней пероксидазной активности фицина. Эта активность заключается в том, что катализирует реакцию различных пероксидазных субстратов в присутствии Н2О2. Также было показано, что сайт протеазной активности отличается от такового для пероксидазоподобной. Следовательно, этот фермент может катализировать несколько субстратов, для осуществления различных типов реакций.
Для определения каталитического механизма фицина были измерены параметры стационарного состояния окисления тетраметилбензидина (ТМВ), а результаты были помещены в кинетическую модель Михаэлиса-Ментен. [eText ISBN: 9780123786081 ДАТЬ ССЫЛКУ] В подходящем диапазоне субстратов (ТМВ и Н2О2) для фицина были получены типичные кривые Михаэлиса-Ментен. В результате были установлены ферментативные кинетические параметры фицина: Km(TMB)=0.19mM;
Km(H2C>2)=0.35 тМ. Каталитическая эффективность хъ фицина (Kcat/Km(TMB)=5.89 шМ V1; Kcat/Km(H202)=2.31 mM V1) оказалась на 3 порядка ниже, чем у HRP, но это объясняется тем, что фицин - простой фермент, тогда как HRP является конъюгированным, и содержит ферропротопорфириновую группировку. Для дальнейшего анализа была измерена начальная скорость каталитического механизма. Двойные обратные графики начальной скорости в зависимости от концентрации одного субстрата, полученные в диапазоне концентраций второго субстрата оказались взаимно паралельными, что является характеристикой Ping-Pong механизма. (Porter & Bright, 1983 ДАТЬ ССЫЛКУ) Эти данные говорят, о том, что каталитический механизм таков: фицин связывается и реагирует с одним субстратом, потом высвобождает первый продукт и только после этого реагирует со вторым субстратом. Кроме того, проводилось измерение каталитической активности после выдерживания фермента в условиях (рН=3- 14; t=0-90 °С) отличающихся от физиологических в течении 2 часов. Полученные результаты говорят о том, что высокая пероксидазоподобная активность фицина остается при рН=3-14, и при температуре 0-70 °С. Следовательно, фицин может использоваться в очень широком диапазоне физических условий, не теряя свою эффективность.
Также было показано возможное применение фицина в качестве детектора появления Н2О2 из клеток или других источников. Поскольку изменение цвета окисления ТМВ катализируемого фицином оказалось зависимым от концентрации Н2О2 соответственно, изменение оптической плотности может быть использовано для обнаружения перекиси водорода. Пероксидазноподобная активность фицина играет роль в защите от патогенов и снижении токсичности некоторых органических соединений. Применение фицина в биохимии может быть расширено, как минимум, он будет полезен в качестве имитатора ферментов в биотехнологии, мониторинге окружающей среды, экологии и гигиене.
Бромелаин - комплекс ферментов, переваривающих белки и свертывающих молоко, содержащихся в соке плодов ананаса и тканях ствола. Ферменты из этих двух источников называются соответственно, бромелаин плода и бромелаин ствола. Бромелаин как химическая субстанция известна с 1875 года и используется в качестве фитопрепарата. Концентрация бромелаина в стволе дерева, которое является отходом, достаточно высока, что как раз требуется для экстракции. Но бромелаин, получаемый из ствола дерева (ЕС.3.4.22.32), отличается по своей эффективности от бромелаина из плодов (ЕС.3.4.22.33). (Rowan & Buttle, 1994 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Для бромелаина заявлен широкий спектр терапевтических назначений: обратимое ингибирование агрегации тромбоцитов, синусит, хирургические травмы, тромбофлебит, пиелонефритная стенокардия, бронхит и улучшение всасывания ЛП, особенно антибиотиков. (Pavan, Jain, Shraddha, & Kumar, 2012 ДАТЬ ССЫЛКУ) Результатом взаимодействия бромелаина с фибриногеном являются продукты, так или иначе схожие с продуктами взаимодействия фибриногена с плазмином.
Бромелаин считается пищевой добавкой и является коммерчески доступным в магазинах и аптеках в США и Европе. (Ley, Tsiami, Ni, & Robinson, 2011 ДАТЬ ССЫЛКУ) Существующие данные говорят о том, что бромелаин может стать перспективным кандидатом для разработки будущих ферментных ЛП для онкологических пациентов. Бромелаин может абсорбироваться в человеческом организме без изменений и без потери его биологической активности. (Pavan et al., 2012 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Бромелаин в основном состоит из различных смесей тиолендопептидаз и других веществ таких как карбонгидраты гликопротеиновых фосфатаз, глюкозидаз, пероксидаз, целлюлаз и некоторых ингибиторов протеаз. (Bhattacharyya, 2008 ДАТЬ ССЫЛКУ) Он используется при лечении зубов как противовоспалительный и анальгетический агент. Однако его использование в качестве антибактериального средства все еще нуждается в подтверждениях. Поэтому был произведен качественный анализ in vitro для проверки антибактериальной активности бромелаина против изолированных штаммов S. mutans (АТСС. No. 25175), E.fecalis (АТСС. No. 35550), Аа (АТСС. No. 29523) and Pg (АТСС. No. 33277). Гипотеза была подтверждена, но может быть дополнительно валидирована исходя из дополнительных исследований. (Praveen et al., 2014 ДАТЬ ССЫЛКУ) Причем в этой работе также была получена минимальная ингибиторная концентрация для аэробных (S. mutans 2мг/мл и Е.соЫ 31,25 мг/мл) и анаэробных {Enterococcus fecalis Aggregatibacter actinomycetemcomitans 16,6 мг/мл и Porphyromonas gingivalis 4,15 мг/мл).
Бромелаин является натуральным продуктом с противовоспалительными свойствами, использующийся в народной медицине для улучшения состояния во время лихорадок, болей, мигрени и артрита. (Yuan, Wahlqvist, Не, Yang, & Li, 2006 ДАТЬ ССЫЛКУ) В традиционной медицине этот фермент с начала своего использования в 1957 году показал практическую эффективность при терапевтическом ведении воспалений мягких тканей и травмах, осложненных местными воспалительными процессами, особенно при отечных осложнениях и послеоперационных тканевых реакциях. (Kelly, 2010 ДАТЬ ССЫЛКУ)
В настоящее время бромелаин уже был исследован, также и на анальгетическую активность, например, при ведении пациентов после хирургических удалений зубов. (Ghensi et al., 2017 ДАТЬ ССЫЛКУ) В этом исследовании, чтобы не потерять возможные влияния бромелаина был добавлен фактор исключения пациентов при применении в течении 2 недель до исследования НПВС. Сравнивалась не только контрольная группа, но также лечение дексаметозоном. В течении недели лечение отека путем внутрищечного применения дексаметазона и дополнительного перорального введения бромелаина показало статистически значимое различие при Р=0,08. Также было обнаружено изменение восприятия боли у пациентов, получавших комбинированное лечение, в отличие от лечения отдельными препаратами (Р=0,01). При использовании бромелаина для уменьшения отека проявлялся незначительный эффект. Но зато имеется вывод о комбинации препаратов, что делает бромелаин хорошей поддерживающей БАД к препаратам назначающихся для ведения длительных неблагоприятных послеоперационных периодов.
Sebomine SB 12 - это гидрогликолиевый раствор, содержащий лактоферриновую и лактениновую (клюкозооксидаза, лактопероксидаза, тиоцианат калия) системы активные в отношении бактерий дрожжей и плесени, частично ответственные за гиперсекрецию сальных желез.
INCI: вода, глицерин, тиоцианат калия, лактоферрин, лактопероксидаза, оксидаза глюкозы, пентаацетат глюкозы.
Лактоферрин (лактотрансферрин; Lf) - гликопротеин из трансферринового семейства. Впервые был идентифицирован в бычьем молоке в 1939. (SORENSEN & Sorensen, 1940 ДАТЬ ССЫЛКУ) Человеческий лактоферрин (hLf) содержит 691 аминокислот (~78 Ша), экспрессируется и секретируется эпителиальными клетками во многие экзокринные секреты, включая слюну, слезы и молоко.
Первая функция, приписанная Lf - антимикробная активность. Бактериостатическое действие лактоферрина обычно железозависимо, так как дополнение железа ревертирует его эффект. (Rosa, Cutone, Lepanto, Paesano, & Valenti, 2017 ДАТЬ ССЫЛКУ) Противобактериальное действие Lf противодействует трем главным механизмам создаваемым бактериальными патогенами: (i) синтез высокоаффиных хелатирующих ионы железа веществ, названных сидерофорами, которые конкурируют с белками, связывающими железо для сбора и доставки внутрь бактерий используя специфические рецепторы; (и) усвоение железа через связывание с лактоферрином или трансферрином опосредуется их специфическим рецептором на поверхности; усвоение железа, которое связано гемоглобином, гаптоглобином и гемопексином опосредуется поверхностными рецепторами гемопротеинов; усвоение железа связанного с гемом опосредуется поверхностным гемофорным рецептором; (ш) усвоение железа через бактериальную редуктазу, способную восстанавливать Fe3+ до Fe2+, тем самым убирая субстрат реакции Фентона и собирая катионы железа (II), которые потом пассивно проходят в бактериальные клетки.
Железо-зависимые антимикробные эффекты Lf наблюдались против целого ряда патогенов, включая S. mutans, V. cholerae, Р. aeruginosa, где было показано, что хелатирование железа лактоферрином стимулирует формы подвижности клеток, которые замедляют образование биопленки этими бактериями. (Telang, 2018 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Несколько исследований демонстрируют, что независимо от того лактоферрин связан или нет с железом, он все равно является бактерицидным по отношению к нескольким патогенам, благодаря взаимодействию с липополисахаридом (ЛПС) грамотрицательных и липотейхоевой кислотой грамположительных бактерий. У E.coli Lf ингибирует адгезию и формирование биопленки потенциально прикрепляясь к липидным частям ЛПС-слоя, в результате увеличивая проницаемость мембраны и разрушению вирулентных белков заякоренных на внешней мембране.(Ос1юа et al., 2006 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Кроме того, был предложен дополнительный потенциальный антибактериальный механизм для Lf, согласно которому он может усиливать аноикиз инфицированных энтероцитов, но эта активность требует значительного дальнейшего изучения (Sherman & Petrak, 2005 ДАТЬ ССЫЛКУ). Взятые вместе, эти данные указывают на то, что способность Lf влиять на прикрепление бактерий и белки инвазии может играть роль в защите млекопитающих от инфекции путем предотвращения прикрепления и колонизации бактерий в кишечном эпителии. В подтверждение этой гипотезы исследования показали, что у новорожденных грызунов, получавших предлечение лактоферрином, меньше проявлялась бактериемия и течение заболевания было легче из- за кишечной инфекции Е. coli. (Edde et al., 2001 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Лактоферрин обладает мощной синергией с лизоцимом при уничтожении грамотрицательных бактерий. Связывая LPS и удаляя его с внешней клеточной мембраны, Lf открывает лизоциму доступ к протеогликанам внутренней мембраны, где тот разрушает связи и убивает бактериим (Ellison & Giehl, 1991 ДАТЬ ССЫЛКУ). Судя по всему такой же механизм действия работает и против грамположительных бактерий. (Valenti & Antonini, 2005 ДАТЬ ССЫЛКУ)
Существуют данные о том, лактоферрин оказывает прямое ингибирующее действие на вирусы и другие микроорганизмы. Против вирусов, такие эффекты могут проявляться благодаря прикреплению лактоферрина к протеогликанам находящимся на поверхности клеток, к ним Lf обладает высоким сродством через N-концевые глюкозаминогликан-связывающие домены. По таким механизмам блокируется проникновение определенных вирусов (пример: HSV - Herpes simplex vims) (Н. F. Wu, Monroe, & Church, 1995 ДАТЬ ССЫЛКУ). Против грибов, таких как Candida, Lf также показывает эффективность, вызывая возмущение клеточной стенки с формированием поверхностных пузырей, выпячиваний и приводя к коллапсу (Xu, Samaranayake, Samaranayake, & Nikawa, 1999 ДАТЬ ССЫЛКУ).
Имеющиеся научные данные демонстрируют широко распространенные ингибирующие эффекты Lf на пролиферацию и выживание патогенных микроорганизмов различными путями: секвестрация железа, прямая активность в отношении факторов вирулентности.
При стандартной чистке зубов в течении 2-3 минут описываемый комплекс активных молекул попадает на поверхность зубного налета. Благодаря структуре пены и высокой концентрации элементов комплекса в составе зубной пасты происходит обширный охват поверхности биопленки и действие начинается повсеместно. Фицин, являющийся компонентом комплекса благодаря своей пероксидазной активности, увеличивает количество активных форм кислорода (АФК) на всей поверхности пленки. С этого момента, благодаря высокому окислительному потенциалу АФК даже минимальное количество, появляющееся на поверхности раздела фаз между пеной и пленкой, окисляет белки пленочного матрикса. Следовательно, происходит неспецифический разрыв связей, помогающий всем активным элементам биоактивного комплекса проникнуть внутрь бактериальной пленки. Дополнительно, механическое воздействие, опосредованное движениями зубной щетки, удаляет остатки молекул, отщепленные при окислении поверхности биопленки АФК. Пероксидазная атака на поверхность биопленки не единственное влияние, происходящее на ее поверхности. Так как бромелаин в своем составе включает карбонгидраты гликопротеиновых фосфатаз, глюкозидаз, пероксидаз и целлюлаз, а поверхность белкового матрикса может быть защищена и ограничена неспецифическими метаболитами и другими органическими молекулами его составные части становятся эффективными. После попадания внутрь биопленки действие активного комплекса разделяется. Фицин, проявляет себя в качестве протеазы и расщепляет белки межклеточной коммуникации грамположительных бактерий, что способствует уменьшению передаваемой информации внутри биоценоза полости рта и позволяет действовать на каждую биопленку без дальнейшего возможного изменения структуры колоний опосредованного активной коммуникацией микроорганизмов разных частей зубного налета. Действие фицина также проявляется и в случае адгезинов, которые он расщепляет, изолируя бактериальные клетки. Кроме того, при достижении комплексом обратной поверхности биопленки, связанной с тканями зуба также адгезинами атака происходит и на них, тем самым уменьшая степень прикрепления пленки. Проявление данного свойства возможно при длительном системном применении активного комплекса. На каждую отдельную бактерию действует лизоцим благодаря своей способности расщеплять бета-1-4-гликозидную связь между N-ацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглюкозамином. Следовательно, клеточная стенка каждой бактерии теряет свои свойства и открывает путь внутрь клетки для активного комплекса. Все протеазные и литические свойства компонентов комплекса теперь проявляются неспецифически, в зависимости от представленных бактерий. При лизисе бактериальных клеток возможно заражение пирогенными молекулами тканей ротовой полости. В этом случае бромелаин, обладающий неспецифическими литическими и противовоспалительными свойствами действует не только внутри биопленки, но и непосредственно в месте воспаления, разрушая центры пирогенности и уменьшая продукцию ЦОГ. Лизоцим обладает свойством накапливаться в тканях и выделяться в течении длительного времени. Следовательно, его активность против бактерий будет продолжаться.
Свойства изобретения:
1. Окислительное влияние на зубной налет, за счет пероксидазной активности фицина. 2. Бактериостатический эффект за счет действия лизоцима, бромелаина и фицина.
3. Бактерицидный эффект за счет действия лизоцима на клеточную стенку бактерий.
4. Эффект расщепления биопленки на поверхности зубной эмали и разделения бактериальных клеток за счет гидролиза адгезинов фицином.
5. Неспецифический противовоспалительный эффект за счет одновременного действия бромелаина и фицина.
6. Неспецифический анальгетический эффект за счет действия фицина.
7. Общеукрепляющий эффект за счет воздействия всего ферментного комплекса на продукты метаболизма как бактерий, так и человека.
8. Профилактический антибактериальный эффект за счет накопления лизоцима в тканях полости рта.
9. Отбеливающий эффект за счет пероксидазной активности фицина.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Нижеследующее описание изобретения призвано раскрыть его существенные аспекты с учетом того, что специалист в данной области техники самостоятельно может реализовать различные воплощения заявленного изобретения.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Пример 1. ( очищение , действие на био ленки, пролонгация эффекта очищения за счет длительного антибактериального воздействия)
Целью рандомизированного клинического исследования было доказательство очищающих свойств заявленной композиции. В исследовании принимали участие мужчины и женщины в возрасте 18-45 лет без хронических заболеваний. Всего в исследовании участвовало 200 человек, по 20 субъектов в каждой группе.
В экспериментальных группах с участием пациентов использовали композиции, которые в качестве активных ингредиентов включали заявленный комплекс, содержащий лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075%, либо данные активные ингредиенты по одному (Таблица 1).
Таблица
Figure imgf000016_0001
Исследуемые группы
Figure imgf000016_0002
Figure imgf000017_0001
В качестве базы для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице N° 2.
Таблица N° 2
Состав базовой композиции зубной пасты
Figure imgf000017_0002
Проведено сравнительное клиническое исследование на 200 субъектах, сравнение проводилось с изначальными параметрами. Пациенты применяли композиции в виде зубной пасты 2 раза в день на протяжении 4 недель. Пациенты были рандомизированного распределены на 5 групп по 20 участников в каждой для оценки очищения и на 5 групп по 20 участников в каждой для оценки пролонгации эффекта очищения. Каждый пациент получал соответствующую зубную пасту, одинаковую зубную щетку и инструкцию по чистке зубов. Распределение участников по группам представлено в Таблице 3.
Таблица 3
Распределение добровольцев по группам
Figure imgf000018_0001
Параметром для оценки эффективности действия препаратов выступал индекс Грина-Вермиллиона (OHI-S), определяемый врачом-стоматологом. Кроме этого, оценивали пролонгированное очищение в течение 24 часов после использования зубной пасты с заявленной композицией.
Индекс измеряли на визите 1 до и после 2-минутной чистки, на визитах 2 и 3 после 24 часов использования продукта и после 2-минутной чистки.
Индекс позволяет раздельно оценить количество зубного налета и зубного камня. Для определения индекса обследовали 6 зубов: 16, 11, 26, 31 - вестибулярные поверхности 36, 46 - язычные поверхности. Оценка зубного налета проводилась с помощью окрашивающих растворов эритрозина.
Коды и критерии оценки зубного налета:
0 - зубной налет не выявлен;
1 - мягкий зубной налет, покрывающий не более 1/3 поверхности зуба, или наличие любого количества окрашенных отложений (зеленых, коричневых и др.);
2 - мягкий зубной налет, покрывающий более 1/3, но менее 2/3 поверхности зуба;
3 - мягкий зубной налет, покрывающий более 2/3 поверхности зуба.
Определение над- и поддесневого зубного камня проводят с помощью стоматологического зонда.
Коды и критерии оценки зубного камня:
0 - зубной камень не выявлен;
1 - наддесневой зубной камень, покрывающий не более 1/3 поверхности зуба;
2 - наддесневой зубной камень, покрывающий более 1/3, но менее 2/3 поверхности зуба, или наличие отдельных отложений поддесневого зубного камня в пришеечной области зуба;
3 - наддесневой зубной камень, покрывающий более 2/3 поверхности зуба, или значительные отложения поддесневого камня вокруг пришеечной области зуба. Расчет индекса складывается из значений, полученных для каждого компонента индекса с делением на количество обследованных поверъхно-стей суммированием обоих значений.
Формула для расчета:
ИГР-У = СУММА ЗНАЧЕНИЙ НАЛЕТА / КОЛИЧЕСТВО ПОВЕРХНОСТЕЙ + СУММА ЗНАЧЕНИЙ КАМНЯ / КОЛИЧЕСТВО ПОВЕРХНОСТЕЙ
Интерпретация индекса (значения OHIS-S уровень гигиены):
• 0, 0-1, 2 хороший
• 1 ,3 -3 ,0 удовлетворительный
• 3,1 -6,0 плохой
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM), интерквартильные размахи, 90%ДИ. Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в группах определяли с использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты.
В начале исследование у всех пациентов был плохой уровень гигиены, что представлено в таблице 4.
Таблица 4
Динамика индекса OHI-S.
Figure imgf000019_0001
Через 4 недели после начала исследования наблюдали выраженные изменения оцениваемого показателя индекса гигиены в группах исследования. В группе 1, применявшей композицию с комплексом лизоцим-бромелаин-фицин значение индекса OHI-S составило на конец исследования 0,01 ±0,06, что меньше по сравнению с начальным показателем на 100% (3,90±0,05; Р<0,05). В группе 2, применявшей композицию только с лизоцимом значение индекса OHI-S составило на конец исследования 1,84±0.05, что меньше по сравнению с начальным показателем в 2 раза (3,80±0,04; Р<0,05). В группе 3, применявшей композицию только с фицином значение индекса OHI-S составило на конец исследования 1,13±0.05, что меньше по сравнению с начальным показателем в 3,4 раза (3,84±0,07; Р<0,05). В группе 4, применявшей композицию только с бромелаином значение индекса OHI-S составило на конец исследования 1,34±0.06, что меньше по сравнению с начальным показателем в 2,8 раза (3,79±0,03; Р<0,05). В контрольной группе значение индекса OHI-S составило на конец исследования 2,80±0.04, что меньше по сравнению с начальным показателем, но незначительно (3,83±0,04; Р<0,05).
Так как данный комплекс влияет не только на расщепление биопленок, но и на пролонгацию данного эффекта за счет антибактериального действия, была изучена степень образования налета в течение 24 часов после использования продукта.
Добровольцы чистили зубы зубной пастой на утреннем визите, далее не пользовались никакими средствами гигиены и приходили на следующий день на прием к стоматологу для оценки степени образования налета за 24 часа.
Таблица 4
Динамика индекса OHI-S после 24 часов (Р<0,05)
Figure imgf000020_0001
Через 24 часа после использования продукта в контрольной группе наблюдалось увеличение количество мягкого зубного налета на 42% по сравнению с первоначальным значением. При этом в группах 2-4, использовавших композицию только с одним ферментом образовывалось до 16% зубного налета, а в группе, использующей зубную пасту с заявленной композицией количество мягкого зубного налета составило всего 4%. Дополнительно было проведено in vitro тестирование состава зубной пасты по показателям PAV и FT, которые необходимы для определения очищающей способности продуктов. В результате композиция обладает значением PAV 23,6 и значением FT 90, что подтверждает высокие очищающие свойства продуктов.
Таким образом, использование пасты с комплексом ферментов лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075% привело к очищению эмали на 100%, т.е. полному расщеплению биопленок и белкового налета, при этом уровень гигиены переместился из плохого уровня в хороший, в индекс PAV составил 23,6 единиц, индекс очищения FT составит 90 единиц, что говорит о невероятно высоких очищающих свойствах композиции и о синергизме действия входящих в комплекс компонентов. Более того, заявленная композиция обладает пролонгированным эффектом очищения, т.е. препятствует образованию бактериальной биопленки на 96%.
Пример 2. (отбеливание)
Целью рандомизированного клинического исследования было доказательство отбеливающих свойств заявленной композиции. В исследовании принимали участие мужчины и женщины в возрасте 18-45 лет без хронических заболеваний. Всего в исследовании участвовало 40 человек, по 20 субъектов в каждой группе. Группа 1 использовала композицию, которая в качестве активных ингредиентов включала заявленный комплекс, содержащий лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075%, группа 2 использовала базовый состав зубной пасты. (Таблица 1).
Таблица s 1 Исследуемые группы
Figure imgf000021_0001
В качестве базы для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице N° 2. При этом для того, чтобы оценить действие именно комплекса, а не абразивной системы силики значение абразивности (индекс RDA) продукта было не более 50.
Таблица N° 2
Состав базовой композиции зубной пасты
Figure imgf000021_0002
Figure imgf000022_0001
Было проведено сравнительное клиническое исследование на 40 субъектах. Пациенты применяли композиции в виде зубной пасты 2 раза в день на протяжении 4 недель. Пациенты были рандомизированного распределены на 2 группы по 20 участников в каждой. Каждый пациент получал соответствующую зубную пасту, одинаковую зубную щетку и инструкцию по чистке зубов.
Параметром для оценки отбеливающего действия препаратов выступал индикатор на цветовой шкале Bleachedguide 3D-Master спустя 1, 2 и 4 недели применения. Все пациенты имели темную зубную эмаль до начала исследование (19 и более баллов по шкале Vita Bleachedguide).
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM), интерквартильные размахи, 90%ДИ. Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в группах определяли с использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты.
Таблица 3
Отбеливающая эффективность комплекса (Р<0,05)
Figure imgf000022_0002
Figure imgf000023_0001
Через 1 неделю использования наблюдался эффект осветления в 0,5 тона, который за 4 недели использования зубной пасты с заявленной композицией вырос до 2,34 тона.
Таким образом, использование пасты с комплексом ферментов лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075% привело к отбеливанию эмали на 2,34 тона, при этом паста без комплекса не обладала ни отбеливающим, ни осветляющим действием. Полученный эффект говорит о высоких отбеливающих свойствах заявленной композиции.
Пример 3. (укрепление эмали)
Целью рандомизированного исследования было установление уровня усиления реминерализующего действия зубной пасты, содержащей композицию, а также ее влияние на чувствительность эмали. В исследовании принимали участие мужчины и женщины в возрасте 18-45 лет без хронических заболеваний. Всего в исследовании участвовало 40 человек, по 20 субъектов в исследуемой группе и группе сравнения. В исследуемой группе субъекты использовали зубную пасту, которая в качестве активных ингредиентов включала заявленный комплекс, содержащий лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075%, а группа сравнения (группа 2) использовала базовый состав зубной пасты.
Таблица JV° 1 Исследуемые группы
Figure imgf000023_0002
В качестве базы для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице JVs 2.
Таблица JVs 2.
Состав базовой композиции зубной пасты
Figure imgf000023_0003
Figure imgf000024_0001
Участники исследования использовали зубную пасту 2 раза в день. Каждый пациент получал соответствующую зубную пасту, одинаковую зубную щетку и инструкцию по чистке зубов.
Параметром для оценки реминерализующего действия препаратов выступал ТЭР- тест. Процедура проводилась на 1, 2, 3 и 4 визите. Дополнительно оценивался индекс Шиффа для определения степени снижения чувствительности до и после использования геля.
Для проведения ТЭР-теста вестибулярную поверхность одного из верхних центральных резцов очищали от налета с помощью ватного шарика, смоченного раствором перекиси водорода. Высушивали зуб ватным шариком. Изолировали зуб от слюны ватными валиками. В центр вестибулярной поверхности зуба микропипеткой наносили каплю 1% раствора НС1 диаметром 1,5-2 мм. Через 5 секунд каплю смывали дистиллированной водой. Поверхность зуба высушивали ватным шариком. На участок эмали, которая была протравлена, наносили 1 каплю 1% раствора метиленового синего. Краситель сразу снимали сухим ватным шариком одним движением, плотно прижимая шарик к поверхности зуба.
При дневном освещении цвет участка окраски сравнивали с оттенками стандартной 10-бальной шкалы. Оценивали кислотостойкость эмали в баллах от 1 до 10 (от бледно-голубого до темно-синего).
Соответственно полученному результату классифицировали пациента в одну из 4 диспансерных групп:
• 1 гр. - 1-3 балла - высокая кислотостойкость эмали.
• 2 гр. - 4-5 баллов - умеренная кислотостойкость эмали. • 3 гр. - 6-7 баллов - низкая кислотостойкость эмали.
• 4 гр. - Более 7 баллов - очень низкая кислотостойкость эмали.
Оценка риска кариеса по ТЭР-тесту:
• 1 гр. по ТЭР - высокая устойчивость к кариесу, пациенты не нуждаются в активных мерах, необходим гигиенический уход за полостью рта.
• 2 гр. по ТЭР - ожидаются единичные кариозные поражения, проводят традиционные профилактические мероприятия (местные и общие) 1 раз в год.
• 3-4 гр. по ТЭР - высокий и очень высокий риск кариеса зубов, профилактические мероприятия (местные и общие) проводят 2-3 раза в год.
Изменение чувствительности эмали оценивали по результатам определения индекса Шиффа, основанного на выявлении порога чувствительности зуба с использованием воздушной струи по Schiff у всех групп. Воздушную пробу Шиффа проводят следующим образом: воздух из пистолета стоматологической установки подают перпендикулярно пришеечной поверхности зуба с расстояния 1 см в течение секунды (под давлением 40 - 60 psi) при температуре 21 градус Цельсия (рис.9). Оценку чувствительности зуба проводят с использованием следующих критериев: 0 - отсутствие реакции; 1 - ощущение дискомфорта, но при этом пациент не настаивает на прекращении пробы; 2 - дискомфорт, сопровождающийся просьбой о прекращении теста; 3 - выраженная болевая реакция с выраженными моторными реакциями, направленными на немедленное прекращение теста.
Определение индекса Шиффа было проведено у пациентов групп через 2 неделю и 4 недели.
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM), интерквартильные размахи, 90%ДИ. Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в группах определяли с использованием критерия Манна- Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты:
В результате оценки динамики кислотоустойчивости эмали у пациентов всех групп было выявлено, что при ежедневном использовании зубной пасты с заявленной композицией в течение месяца происходило повышение кислотоустойчивости эмали зубов. Так у группы N°l, ТЕР в начале исследования составил 3,0±0,1, у группы Ns 2 - 2,8±0,2. Различия между группами были статистически значимы (р= р=0,004). Через 1 месяц от начала исследования среднее значение ТЕР в группе 1 составило 2,3±0,1, а в группе 2 2,7±0,1; различия между группами были статистически значимы (р=0,001). Проведенный тест показал реминерализующей действие зубной пасты с заявленной композицией на 23%, при том, что в контрольной группе кислотоустойчивость эмали практически не изменилась.
Индекс Шиффа до начала лечения составил в группе N°1-2,9±0,1, в группе N°2- 2,7±0,1. Различия между группами были статистически значимы (р=0,005). Через 2 недели индекс Шиффа в группе N° 1 -2,8±0,2, в группе Х°2- 2,7±0, 1. Индекс Шиффа через 1 месяц не изменился и составил в группе J4°l-2,8±0,2, в группе N°2- 2,7±0,1. Различия между группами через 1 месяц были статистически значимы (р=0,001). Во всех группах чувствительность не изменилась.
Таким образом, использование пасты с комплексом ферментов лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07% фицин - 0,075% не привело к повышению чувствительности эмали, несмотря на высокую отбеливающую эффективность. Данный эффект подтверждает безопасность использования комплекса для отбеливания даже чувствительной эмали, в отличие от аналогов на рынке. Также за счет высокого очищающего действия в результате эксперимента статистически достоверно усилилась реминерализация на 23% по сравнению с первоначальным значением, что вызвано высоким очищающим действием продукта, что позволяет усиливать доставку минералов слюны в эмаль. Данный эффект был достоверно выражен по сравнению с использованием зубной пасты без включения в состав заявленной композиции.
Пример 4. (противовоспалительное и кровоостанавливающее действие)
Целью данного клинического исследования было установление степень воздействия композиции на состояние десен. В исследовании принимали участие мужчины и женщины в возрасте 18-45 лет без хронических заболеваний, но имеющие заболевания десен не в хронической форме. Всего в исследовании участвовало 40 человек, по 20 субъектов в исследуемой группе и группе сравнения. В исследуемой группе субъекты использовали зубную пасту, которая в качестве активных ингредиентов включала заявленный комплекс, содержащий фицин - 0,075%, лизоцим - 0,02%, бромелаин - 0,07%, а группа сравнения (группа 2) использовала базовый состав зубной пасты.
Таблица М> 1 Исследуемые группы
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
В качестве базы для включения компонентов применялась зубная паста с составом, приведенным в Таблице N° 2.
Таблица Ns 2
Состав базовой композиции зубной пасты
Figure imgf000027_0002
Участники исследования использовали зубную пасту 2 раза в день. Каждый пациент получал соответствующую зубную пасту, одинаковую зубную щетку и инструкцию по чистке зубов.
Параметром для оценки эффективности действия препаратов выступал средний индекс кровоточивости десен (SBI), противовоспалительную эффективность оценивали по индексу РМА. Индексы определялись врачом-стоматологом.
Индекс РМА измерялся до 2-минутной чистки, спустя 2 и 4 недели применения исследуемого продукта.
Подготовка необходимых инструментов и красителей:
— Подготовить набор стоматологического инструментария, ватные шарики, раствор Шиллера - Писарева.
Нанесение красителя на поверхность десен: — Ватный шарик, удерживающийся пинцетом, увлажнить раствором
Шиллера - Писарева.
— Шариком смазать поверхность десен.
Определение наличия воспаления десен:
— При светло-желтой расцветке десен - проба отрицательная.
— При наличии скрытого воспаления десны окрашиваются в желто-бурый цвет различной интенсивности.
Оценка индекса РМА проводится по следующим кодам и критериям:
0 — отсутствие воспаления;
1 — воспаление только десневого сосочка (Р);
2 — воспаление маргинальной десны (М);
3 — воспаление альвеолярной десны (А).
Индекс РМА рассчитывают по формуле:
РМА = сумма баллов / 3 х число зубов х 100%
Количество зубов (при сохранении целостности зубных рядов) учитывается в зависимости от возраста:
• 6 - 11 лет - 24 зуба,
• 12 - 14 лет - 28 зубов,
• 15 лет и старше - 30 зубов.
Если есть отсутствующие зубы, то делят на число имеющихся в полости рта зубов.
В норме индекс РМА равен 0. Чем больше цифровое значение индекса, тем выше интенсивность гингивита.
Оценочные критерии индекса РМА:
• 30% и менее — легкая степень тяжести гингивита;
• 31 — 60 % — средняя степень тяжести;
• 61 % и выше — тяжелая степень.
Индекс SBI измерялся до 2-минутной чистки и спустя 2 и 4 недели применения исследуемого продукта.
Степень кровоточивости десневой борозды определяют через 30 с после осторожного зондирования пародонтальным зондом. В этом индексе отображены шесть степеней воспаления:
• 0 степень: внешний вид десны не изменен, при зондировании кровоточивость отсутствует; • 1 степень: внешний вид десны не изменен, при зондировании возникает кровоточивость;
• 2 степень: появление изменений окраски десны вследствие воспаления, при зондировании возникает кровоточивость;
• 3 степень: аналогично 2 степени, кроме этого появляется легкая отечность десны;
• 4 степень: аналогично 3 степени, возможно возникновение выраженного воспалительного отека;
• 5 степень: аналогично 4 степени, возможно возникновение спонтанных кровотечений и эрозий эпителия десны.
Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое (М), медиану (Me), стандартное отклонение (SD) и стандартную ошибку среднего (SEM), интерквартильные размахи, 90% ДИ. Полученные результаты обрабатывали с помощью ПО IBM SPSS Statistics 22.0 (StatSoft, Россия). Вероятность различий показателей средних в группах определяли с использованием критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости р<0,05.
Результаты.
Через 4 недели после начала исследования наблюдали выраженные изменения оцениваемых показателей в группах исследования. В группе 1, применявшей композицию с комплексом лизоцим-фицин-бромелаин значение SBI на конец исследования его значение составило 0,01 ±0,01, что меньше по сравнению с начальными показателями (0,26±0,02; Р<0,05). В группе 2, применявшей базовую композицию зубной пасты, было отмечено слабо выраженное изменение SBI, на конец исследования его значение составило 0,25±0,01 по сравнению с начальными показателями (0,27±0,01; Р>0,05).
Индекс РМА через 4 недели после начала исследования составил 0,00±0,01 в группе N°1 при начальном показателе 0,26±0,02; Р<0,05. В группе N°2 индекс не изменился, оставшись на прежнем уровне 0,27±0,01; Р>0,05.
Таким образом, использование зубной пасты с комплексом лизоцим-фицин- бромелаин привело к уменьшению выраженности гингивита и кровоточивости десен, причем данный эффект был достоверно выражен по сравнению с использованием зубной пасты без заявленной композиции, что говорит о синергизме действия входящих в комплекс компонентов.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Средство для ухода за зубами и полостью рта, обладающее окислительным влиянием на зубной налет и биопленки на поверхности зубной эмали, отбеливающим, бактериостатическим и неспецифическим противовоспалительным действием, содержащее фицин.
2. Синергетическая четырехкомпонентная комбинация, обладающая окислительным влиянием на зубной налет и биопленки на поверхности зубной эмали, отбеливающим, бактериостатическим, бактерицидным и неспецифическим противовоспалительным действием, предназначенная для включения в средство для ухода за зубами и полостью рта, состоящая из:
(а) лизоцима, характеризующегося активностью по меньшей мере 35 FIP/г,
(б) экстракта Ananas sativus, нанесенного на мальтодекстрин, характеризующегося активностью бромелаина по меньшей мере 120 GDU/r,
(в) фицина из латекса Ficus carica, нанесенного на мальтодекстрин, с массовым соотношением фицин :мальто декстрин (Ю- 30):(70-Н ),
(г) экстракта корня Glycyrrhiza glabra , нанесенного на мальтитол, характеризующегося содержанием глабридина по меньшей мере 0,6 %масс. при массовом соотношении экстракт:мальтитол (1^-5):(95^-99), где компоненты (а), (б), (в), (г) находятся в массовом соотношении
(0, 5-Н, 5):(7, 0 8, 0):(2, 0-^-3, 0):(0, КЗ ,0) соответственно.
3. Средство для ухода за зубами и полостью рта, содержащее синергетическую четырехкомпонентную комбинацию по п. 2.
4. Средство по п. 3, представляющее собой зубную пасту.
5. Средство по п. 4, содержащее компоненты синергетической четырехкомпонентной комбинации, в следующих количествах %масс.:
(а) лизоцим, характеризующийся активностью по меньшей мере 35 FIP/г 0,01-0,03,
(б) экстракт Ananas sativus , нанесенный на мальтодекстрин, характеризующийся активностью бромелаина по меньшей мере 120 GDU/r 0, 1-0,2, (в) фицин из латекса Ficus carica , нанесенный на мальтодекстрин, с массовым соотношением фицин :мальтодекстрин (10-^30): (70^-90) 0,02-0,08,
(г) экстракт корня Glycyrrhiza glabra, нанесенный на мальтитол, характеризующийся содержанием глабридина по меньшей мере 0,6 %масс. при массовом соотношении экстракт:мальтитол (Н5):(95^-99) 0,02-0,08.
6. Средство по п. 5, содержащее компоненты синергетической четырехкомпонентной комбинации, в следующих количествах %масс.:
(а) лизоцим, характеризующийся активностью по меньшей мере 35 FIP/г примерно 0,02,
(б) экстракт Ananas sativus, нанесенный на мальтодекстрин, характеризующийся активностью бромелаина по меньшей мере 120 GDU/r примерно 0,15,
(в) фицин из латекса Ficus carica, нанесенный на мальтодекстрин, с массовым соотношением фицин :мальтодекстрин ( 10-^30) : (7 СН-90) примерно 0,05,
(г) экстракт корня Glycyrrhiza glabra , нанесенный на мальтитол, характеризующийся содержанием глабридина по меньшей мере 0,6 %масс. при массовом соотношении экстракт:мальтитол (1-^5):(95-^99) примерно 0,05.
7. Средство по п. 6, содержащее компоненты синергетической четырехкомпонентной комбинации, в следующих количествах %масс.:
(а) лизоцим, характеризующийся активностью по меньшей мере 35 FIP/г 0,02,
(б) экстракт Ananas sativus, нанесенный на мальтодекстрин, характеризующийся активностью бромелаина по меньшей мере 120 GDU/r 0,15,
(в) фицин из латекса Ficus carica, нанесенный на мальтодекстрин, с массовым соотношением фицин :мальтодекстрин ( 10^-30):(7СН-90) 0,05,
(г) экстракт корня Glycyrrhiza glabra, нанесенный на мальтитол, характеризующийся содержанием глабридина по меньшей мере 0,6 %масс. при массовом соотношении экстракт:мальтитол (1н-5):(95^-99) 0,05.
PCT/RU2020/000281 2019-07-31 2020-07-17 Композиция с пролонгированным эффектом антибактериального действия WO2021096388A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019124309 2019-07-31
RU2019124309 2019-07-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021096388A1 true WO2021096388A1 (ru) 2021-05-20

Family

ID=75912262

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2020/000281 WO2021096388A1 (ru) 2019-07-31 2020-07-17 Композиция с пролонгированным эффектом антибактериального действия

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2021096388A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118217180A (zh) * 2024-05-20 2024-06-21 广州舒客实业有限公司 一种缓释的植物蛋白酶组合物及其在牙膏上的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096307A (en) * 1997-12-11 2000-08-01 A. Glenn Braswell Compositions for immunostimulation containing Echinacea angustofolia, bromelain, and lysozyme
WO2006065513A2 (en) * 2004-12-16 2006-06-22 Colgate-Palmolive Company Oral treatment compositions containing an anti-adhesion agent, antibacterial agent and incompatible compound
RU2416391C1 (ru) * 2009-09-03 2011-04-20 Общество с ограниченной ответственностью "СПЛАТ-КОСМЕТИКА" Композиция для ухода за полостью рта
WO2016125020A2 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 Nataurex Sa Antimicrobial compositions

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096307A (en) * 1997-12-11 2000-08-01 A. Glenn Braswell Compositions for immunostimulation containing Echinacea angustofolia, bromelain, and lysozyme
WO2006065513A2 (en) * 2004-12-16 2006-06-22 Colgate-Palmolive Company Oral treatment compositions containing an anti-adhesion agent, antibacterial agent and incompatible compound
RU2416391C1 (ru) * 2009-09-03 2011-04-20 Общество с ограниченной ответственностью "СПЛАТ-КОСМЕТИКА" Композиция для ухода за полостью рта
WO2016125020A2 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 Nataurex Sa Antimicrobial compositions

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN118217180A (zh) * 2024-05-20 2024-06-21 广州舒客实业有限公司 一种缓释的植物蛋白酶组合物及其在牙膏上的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Allaker et al. Novel anti-microbial therapies for dental plaque-related diseases
Suzuki et al. Induction and inhibition of oral malodor
Holmes Clinical reversal of root caries using ozone, double‐blind, randomised, controlled 18‐month trial
Kayaoglu et al. Virulence factors of Enterococcus faecalis: relationship to endodontic disease
Li et al. Tea polyphenols: application in the control of oral microorganism infectious diseases
US10687975B2 (en) Method and system to facilitate the growth of desired bacteria in a human&#39;s mouth
Paranhos et al. Complete denture biofilm after brushing with specific denture paste, neutral soap and artificial saliva
Tamura et al. Exploring the possible applications of catechin (gel) for oral care of the elderly and disabled individuals
Tonon et al. Antibiofilm effect of ozonized physiological saline solution on peri‐implant–related biofilm
Wuersching et al. Targeting antibiotic tolerance in anaerobic biofilms associated with oral diseases: Human antimicrobial peptides LL-37 and lactoferricin enhance the antibiotic efficacy of amoxicillin, clindamycin and metronidazole
Lamfon Denture biofilm and dentureassociated stomatitis, A literature review
US9546407B2 (en) Mixture to increase the effectiveness of antiseptics and/or disinfectants, an agent containing the mixture, and the use of this mixture
WO2021096388A1 (ru) Композиция с пролонгированным эффектом антибактериального действия
Hatti et al. Biofilm inhibition and antimicrobial activity of a dentifrice containing salivary substitutes
Porwal et al. Comparative evaluation of the effect of Chlorhexidine Gluconate, raw Propolis and hydrogen peroxide on dental plaque and gingival inflammation
Anand et al. A comparative analysis of antimicrobial property of wine and ozone with calcium hydroxide and chlorhexidine
KR20170038195A (ko) D-갈락토오스를 포함하는 쿼럼센싱 저해제
Xin et al. Biofilm and dental caries
Sofrata Salvadora persica (MISWAK): An effective way of killing oral pathogens
KR100519477B1 (ko) 트리크로산, 우르소데스옥시콜린산계 유도체 및 유백피추출물을함유한 치주질환 예방 및 치료제 조성물
Prasanth et al. Antimicrobial Effect of Mouthwashes: An In vitro study.
JP2011068630A (ja) 歯周病の予防と治療に用する組成物
Moussa et al. Evaluation of the Antibacterial Effect of Garlic with Lime on Streptococcus Mutans in Children
Meenapriya et al. Comparative evaluation of antimicrobial efficacy of herbal mouthwash versus commercially available mouthwash 2% chlorhexidine.
Poluan et al. The effectiveness test of 0.9 m nacl solution and 0.2% chlorhexidine gluconate on bacterial growth in the oral cavity of students batch 2018 at medical faculty, Universitas Kristen Indonesia

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20887079

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20887079

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1