WO2020113527A1 - 一种检测白细胞的方法、血液细胞分析仪及存储介质 - Google Patents

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WO2020113527A1 PCT/CN2018/119614 CN2018119614W WO2020113527A1 WO 2020113527 A1 WO2020113527 A1 WO 2020113527A1 CN 2018119614 W CN2018119614 W CN 2018119614W WO 2020113527 A1 WO2020113527 A1 WO 2020113527A1
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易秋实
代勇
李进
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Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
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Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/36—Apparatus for enzymology or microbiology including condition or time responsive control, e.g. automatically controlled fermentors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood

Definitions

  • the invention relates to the field of blood sample detection, in particular to the detection of white blood cells.
  • the hematology analyzer When the hematology analyzer performs white blood cell detection, it first ruptures the red blood cells in the blood sample with a hemolytic agent and processes the white blood cells, and then passes the generated blood sample through the detection area according to the broken red blood cell fragments and white blood cells generated by the detection area. Different light signals classify the particles in the sample, which can distinguish the red blood cell debris particles (blood shadow) from the white blood cell particles, and further analyze the light signal information of the white blood cell particles to obtain the desired detection results. There are many methods for detecting leukocytes. Taking flow cytometry as an example, when measuring leukocytes, the leukocytes in the blood sample are sequentially queued through the detection area by the action of the sheath fluid. When each white blood cell passes through the detection zone, an optical pulse is generated in the corresponding detection channel. Statistics and analysis of this optical pulse can obtain the number and classification of white blood cells.
  • white blood cells can independently pass through the detection area in the form of a single cell, that is, one white blood cell can generate a pulse.
  • White blood cell aggregation usually will It leads to a decrease in the falseness of leukocytes and affects the accuracy of the diagnosis. It is necessary to raise awareness and not completely rely on the results of cytometry to try to avoid being misled by the reduction of leukocytes caused by various reasons.” Another example is that the blood contains malignant pleural mesothelioma In the case of tumor markers, white blood cells will accumulate in large amounts. Multiple white blood cells caused by different reasons overlap and pass through the detection area, resulting in a low detection result of the white blood cell count, which further affects the judgment of the clinician.
  • the present invention aims to provide a white blood cell detection method, a blood cell analyzer, and a storage of the present invention that can determine that white blood cell aggregation has occurred in the sample and then eliminate the aggregation Computer storage media for method programs.
  • a method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject for a blood cell analyzer.
  • the method includes:
  • the step of determining whether leukocyte aggregation exists in the first test sample according to the pulse width information of the first light signal information of the first leukocyte particle may include:
  • the ratio is greater than the second predetermined threshold, it is determined that there is aggregation of white blood cells in the first test sample.
  • the first predetermined threshold may be determined according to pulse width information in the optical signal information of white blood cell particles in a normal blood sample.
  • the first predetermined threshold may be determined according to the average pulse width in the first light signal information of the first leukocyte particle group.
  • the first and/or second optical signal information may include a fluorescent signal and a forward scattered optical signal.
  • the first and/or second optical signal information may further include side scattered optical signals.
  • the method may further include: alarming the leukocyte aggregation.
  • the method may further include: recording and storing the subject in association with characteristic information of the subject
  • the blood sample is the information of the white blood cell aggregation sample.
  • the method may further include: outputting classification and counting results of the first white blood cell particle group and/or the second white blood cell particle group.
  • a method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject for a blood cell analyzer comprising:
  • the leukocytes in the blood sample of the subject are detected according to the method of the aforementioned first embodiment, and
  • the particles in the blood sample are classified and counted according to the second light signal information to obtain a second leukocyte particle group.
  • the same may further include: outputting the classification and counting results of the second white blood cell particle group.
  • a blood cell analyzer is provided according to a third embodiment.
  • the blood cell analyzer includes:
  • Sampling device used to draw the blood sample of the subject
  • a pretreatment device used to pretreat the blood sample, so as to prepare a pretreated test sample
  • An optical detection device for passing the particles in the pre-processed test sample one by one through the detection zone to detect and output the optical signal information of the particles in the test sample;
  • the particles in the blood sample are classified and counted according to the second light signal information to obtain a second leukocyte particle group.
  • the processor may perform the following steps when performing the step of determining whether there is leukocyte aggregation in the first test sample according to the pulse width information of the first light signal information of the first leukocyte particle group :
  • the ratio is greater than the second predetermined threshold, it is determined that there is aggregation of white blood cells in the first test sample.
  • the first predetermined threshold may be determined according to pulse width information in the light signal information of white blood cell particles in a normal blood sample.
  • the first predetermined threshold may be determined according to the average pulse width in the first light signal information of the first white blood cell particle group.
  • the first and/or second optical signal information may include fluorescence signal information and forward scattered light information. Further, the first and/or second optical signal information may also include side scattered light information.
  • the processor may be further configured to output an alarm signal for leukocyte aggregation when it is determined that there is leukocyte aggregation in the first test sample.
  • the processor may be further used to record and store the subject in association with the subject's characteristic information when it is determined that there is aggregation of white blood cells in the first test sample
  • the blood sample of the examinee is the information of the white blood cell aggregation sample.
  • the blood cell analyzer of the present invention may further include a display device for displaying the classification and counting results of the first white blood cell particle group and/or the second white blood cell particle group output by the processor.
  • the pretreatment device of the blood cell analyzer may have a diluent inlet for diluting the blood sample.
  • a blood cell analyzer includes:
  • Sampling device used to draw the blood sample of the subject
  • a pretreatment device used to pretreat the blood sample, so as to prepare a pretreated test sample
  • the optical detection device is used to pass the particles in the pre-processed test sample one by one through the detection zone, so as to detect and output the optical signal information of the particles in the test sample;
  • the particles in the blood sample are classified and counted according to the second light signal information to obtain a second leukocyte particle group.
  • a third aspect of the present invention provides an analysis device for detecting leukocytes in a blood sample of a subject, including:
  • Memory configured to store executable instructions
  • the processor is configured to execute the method for detecting leukocytes in the blood sample of the subject as defined in the first and second embodiments of the first aspect when the executable instructions stored in the memory are executed.
  • a fourth aspect of the present invention provides a computer-readable storage medium having executable instructions stored thereon, the computer-readable storage medium being configured to cause a processor to execute the executable instructions, implementing the first of the first aspect
  • the method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject as defined in one embodiment and the second embodiment.
  • the method and blood cell analyzer of the present invention simply solve the problem of inaccurate white blood cell count caused by the presence of white blood cell aggregation in the sample by adding an in-unit dilution step during the retest.
  • characteristic information such as ID information and disease information
  • the blood can be added directly when the subject next examines the blood sample Sample dilution step to obtain accurate white blood cell classification and counting results.
  • FIG. 1 is a schematic flowchart of a first embodiment of a method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject according to the present invention
  • FIG. 2 is a schematic diagram of a pretreatment device including a reaction cell in a conventional blood cell analyzer, which also shows a sampling needle of the blood cell analyzer;
  • Fig. 3 is a pulse waveform (A) of an optical signal of a white blood cell particle of a normal blood sample passing through an optical detection device and a scatter diagram of the pulse shape distribution of the forward scattered light signal of all white blood cell particles (B);
  • FIG. 4 is a shaped pulse waveform (A) of aggregated leukocyte particles of a blood sample in the presence of leukocyte aggregation and a scattergram of the pulse shape distribution of forward scattered light signals of all leukocyte particles (B);
  • FIG. 5 is a schematic diagram of a pretreatment device including a reaction cell in the blood cell analyzer of the present invention, which also shows a sampling needle of the blood cell analyzer;
  • FIG. 6 is a scatter diagram of forward scattered light signal pulse shape distribution of all leukocyte particles obtained after re-examination of a blood sample with leukocyte aggregation according to the method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject according to the present invention
  • FIG. 7 is a schematic flowchart of a variation of the first embodiment of the method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject according to the present invention.
  • FIG. 8 is a schematic flowchart of a second embodiment of a method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject according to the present invention.
  • FIG. 9 is a schematic structural diagram of an embodiment of a blood cell analyzer according to the present invention.
  • FIG. 10 is a schematic structural diagram of an analysis device for detecting leukocytes in a blood sample of a subject according to the present invention.
  • the terms "including”, “including” or any other variants thereof are intended to cover non-exclusive inclusions, so that a method or device including a series of elements includes not only the explicitly recorded Elements, and also include other elements not explicitly listed, or include elements inherent to the implementation of the method or device.
  • the element defined by the sentence “include a" does not exclude that there are other relevant elements in the method or device including the element (such as the steps in the method or the unit in the device) ,
  • the unit here may be part of the circuit, part of the processor, part of the program or software, etc.).
  • first ⁇ second ⁇ third involved in the embodiment of the present invention is only to distinguish similar objects, and does not represent a specific order for objects. Understandably, “first ⁇ second ⁇ third” “Three” can be exchanged in a specific order or sequential order when allowed. It should be understood that the objects distinguished by “first ⁇ second ⁇ third” may be interchanged where appropriate, so that the embodiments of the present invention described herein can be implemented in an order other than those illustrated or described herein.
  • the invention provides a method for detecting white blood cells in a blood sample of a subject, which is applied to a blood cell analyzer.
  • Figure 1 shows a first embodiment of the invention.
  • the "subject" in the present invention refers to mammals, especially humans, unless otherwise stated.
  • step 101 Obtain first light signal information of particles of a first test sample when passing through an optical detection device of the blood cell analyzer, wherein the first test sample is subjected to hemolysis treatment of the blood sample and Prepared by fluorescent staining.
  • the blood samples in the present invention generally refer to whole blood samples unless otherwise stated.
  • the first light signal information includes forward scattered light information and fluorescence signal information, and may further include side scattered light information.
  • the first test sample is obtained by performing conventional hemolysis and fluorescent staining on the blood sample. After treatment, the red blood cells in the sample ruptured.
  • the particles in the first test sample include at least blood shadow particles formed by broken red blood cells and white blood cell particles.
  • a pretreatment device including at least the reaction cell 10 of the blood cell analyzer according to the present invention.
  • hemolyzing agent is added to the reaction cell 10 through the hemolytic agent inlet 40, and then the blood sample is added to the hemolytic agent bottom solution in the reaction cell 10 through the needle port 3 on the sampling needle 2 and mixed .
  • the fluorescent dye is added through the fluorescent dye addition port 50.
  • the blood sample, the hemolytic agent, and the fluorescent dye are added to the reaction cell 10 through the sampling needle 2, the hemolytic agent inlet 40, and the fluorescent dye inlet 50 at a conventional ratio (for example, conventionally 20 ⁇ L: 1000 ⁇ L: 20 ⁇ L), respectively, to prepare the first Test samples.
  • the first test sample is transferred to the optical detection device through the reaction liquid extraction port 60 for detection, thereby acquiring the first light signal information of the particles in the first test sample.
  • step 102 the particles in the first test sample are classified and counted according to the first light signal information to obtain a first leukocyte particle group.
  • the first test sample mainly includes blood shadow particles and white blood cells, wherein the size of the blood shadow particles is significantly smaller than the white blood cell particles. Therefore, in step 102, according to the forward scattered light information reflecting the particle size in the first optical signal information, or according to at least two of forward scattered light, side scattered light, and fluorescence information, the blood shadow particles and leukocytes Particles. Thus, the first light signal information of the white blood cell particles in the first test sample is obtained.
  • Step 103 Determine whether there is leukocyte aggregation in the first test sample according to the pulse width information of the first light signal information of the first leukocyte particle group.
  • FIG. 3A shows the pulse waveform of the forward scattered light signal of a normal leukocyte particle.
  • FIG. 3B shows a scatter diagram of the pulse shape distribution of the forward scattered light signal of all leukocyte particles in a normal blood sample.
  • the horizontal axis represents the width of the white blood cell forward scattered light signal pulse
  • the vertical axis represents the height of the white blood cell forward scattered light signal pulse.
  • FIG. 4A shows a waveform of an abnormal pulse in which a plurality of white blood cells aggregate through the optical detection area, and the pulse width of the abnormal pulse is significantly higher than the normal pulse formed by a single white blood cell in the normal blood sample shown in FIG. 3A through the optical detection area Should be wider.
  • the scatter diagram of the forward scattered light signal pulse morphology distribution of all leukocyte particles reflected in the abnormal blood sample, see FIG. 4B, is the formation of an abnormal pulse region with a large pulse width generated by aggregated leukocytes and a single leukocyte Normal pulse area generated.
  • step 103 in particular, according to the pulse width information in the forward scattered light information of the white blood cells, it is judged whether there is a white blood cell aggregation in the detected blood sample.
  • the total number of first leukocyte particle groups is counted according to the first optical signal information and the number of abnormal leukocyte particles whose pulse width is greater than a first predetermined threshold is counted according to the pulse width information.
  • Both the first predetermined threshold and the second predetermined threshold may be detection experience values.
  • the first predetermined threshold may also be determined according to the pulse width information in the light signal information of the white blood cell particles in the normal blood sample.
  • the first predetermined threshold may be 1.2us or 1.4us.
  • the first predetermined threshold may be determined according to the average pulse width in the first light signal information of the white blood cell particles in the detected blood sample. It should be understood that for measurement systems of different manufacturers, the pulse width of the particles will not be exactly the same. The pulse width of the particles is related to the optical path characteristics and fluid characteristics in the optical measurement system. Therefore, the first predetermined threshold can be based on actual Adjust the situation.
  • the second predetermined threshold is determined according to different first predetermined threshold determination methods, so that when the number of accumulated white blood cells will affect the detection accuracy, it is determined that there is white blood cell aggregation in the sample.
  • the second predetermined threshold may be 5%, for example.
  • step 106 is performed, and the classification and counting results of the first white blood cell particle group are directly output.
  • the blood sample is retested by the blood cell analyzer. That is, the blood sample is tested again.
  • step 104 when it is determined that there is aggregation of leukocytes in the first test sample, the second light signal information when the particles of the second test sample pass through the optical detection device is obtained, wherein the second test sample passes the blood
  • the sample was prepared by hemolysis treatment, fluorescent staining treatment and dilution treatment.
  • the difference between this step 104 and the previous step 101 is that the blood sample is diluted.
  • the pretreatment device including the reaction cell 10 of the blood cell analyzer of the present invention.
  • the analyzer first, a small amount of diluent is added to the reaction cell 10 through the diluent inlet 70, and then a blood sample is added to the diluent bottom liquid in the cell through the needle port 3 on the sampling needle 2 and mixed evenly.
  • the hemolytic agent and the fluorescent dye are added to the reaction cell 10 through the hemolytic agent addition port 40 and the fluorescent dye addition port 50, thereby preparing a second test sample.
  • the order of adding the diluent, the hemolytic agent and the fluorescent dye is not limited, wherein the ratio of the blood sample to the diluent may be a conventional ratio, or may be obtained according to experience, for example, 1:10.
  • the ratio of the added amount of blood sample, hemolytic agent, and fluorescent dye is a conventional ratio.
  • the added ratio of blood sample, diluent, hemolytic agent, and fluorescent dye may be, for example, 20 ⁇ L: 200 ⁇ L: 1000 ⁇ L: 20 ⁇ L.
  • Step 105 similar to the previous step 102, classify and count the particles in the second test sample according to the second light signal information to obtain a second leukocyte particle group.
  • the blood sample with leukocyte aggregation shown in FIG. 4 is re-examined, and the scatter diagram of the pulse shape distribution of the forward scattered light signal of the leukocyte of the second test sample is shown in FIG. 6. It can be seen from FIG. 6 that the abnormal pulse on the scatter diagram of the forward scattered light signal pulse shape of the second test sample has disappeared. This indicates that the second test sample obtained through the pre-dilution process has eliminated the phenomenon of white blood cell aggregation, so that a normal pulse morphology scattergram can be obtained, and thus a more accurate white blood cell count can be obtained.
  • step 106 is performed to output the classification and counting results of the first white blood cell particle group and/or the second white blood cell particle group before/after the re-examination blood sample.
  • the classification and counting results of the first white blood cell particle group and the second white blood cell particle group may be output, or only the classification and counting results of the rechecked second white blood cell particle group may be output.
  • FIG. 7 shows a modification of the first embodiment of the present invention.
  • steps 201 to 206 in this modified embodiment are the same as steps 101 to 106 in the first embodiment, respectively.
  • step 207 is performed, that is, an alarm is performed on the aggregation of leukocytes
  • step 208 is performed, which is to record and store all the information associated with the subject's characteristic information
  • the subject's blood sample is the information of the leukocyte aggregation sample.
  • an alarm is issued.
  • the method of alarm is not particularly limited, including but not limited to: visual alarm (such as flash, display text, display warning icon, display warning color, etc.), audible alarm (such as buzzer, voice alarm, other alarm sounds, etc.), tactile alarm (such as vibration, etc.).
  • the alarm may be one of the above methods, or a combination of two or more methods.
  • the subject's characteristic information may include, but is not limited to, the subject's identity information (such as ID number, age (or date of birth), gender, name, etc.), the subject's physical condition information (such as the current Disease, medication, etc.), the subject’s medical history, the subject’s family history, etc.
  • a plurality of information in the above-mentioned subject's characteristic information can be recorded, including at least information for determining the subject's identity and disease information related to the production of leukocyte aggregation. This embodiment is particularly advantageous when the blood sample of the subject has accumulated white blood cells due to a certain disease.
  • the present invention also includes other modified embodiments.
  • a specific embodiment when it is determined that there is aggregation of white blood cells in the first test sample, only an alarm is issued.
  • Another specific embodiment is that when it is determined that there is aggregation of white blood cells in the first test sample, only information of the subject is recorded and stored in association with the characteristic information of the subject.
  • FIG. 7 only shows the manner in which steps 207 and 208 are sequentially executed before step 204, but the specific embodiment of the present invention is not limited thereto.
  • steps 207 and/or 208 may be performed sequentially, or may be performed in reverse order or simultaneously.
  • steps 207/208 are not limited to be performed before step 204, for example, either or both may be performed between steps 205 and 206, or performed after step 206, and so on.
  • FIG. 8 there is shown a second embodiment of the method of the present invention for detecting leukocytes in a blood sample of a subject.
  • step 310 acquiring the subject characteristic information
  • step 320 comparing the acquired subject characteristic information with the stored previous detection
  • the matching is performed to the characteristic information of the subject where there is aggregation of white blood cells; and when no matching information is found, the detecting step 330 is performed, and when matching information is found, the detecting step 340 is performed.
  • the characteristic information of the subject is first obtained (step 310).
  • the subject's characteristic information is as defined above.
  • the identification information and necessary disease information related to the subject can be obtained, such as by input, or by reading code information or a chip.
  • the acquired subject characteristic information is matched with the already stored subject characteristic information that has detected the presence of white blood cell aggregation (step 320). Specifically, it may include matching the subject's identity information with the stored subject's identity information, and matching the subject's disease information, especially disease information related to leukocyte aggregation, with the stored subject Match disease information.
  • step 330 the same steps as the first embodiment of the present invention described above (step 330) are performed.
  • step 330 the following steps may be specifically included:
  • Step 331 Obtain first light signal information of particles of the first test sample when passing through the optical detection device of the blood cell analyzer, wherein the first test sample is subjected to hemolysis treatment and fluorescent staining treatment of the blood sample preparation.
  • Step 332 Classify and count the particles in the blood sample according to the first light signal information to obtain a first leukocyte particle group.
  • Step 333 Determine whether there is leukocyte aggregation in the first test sample according to the pulse width information of the first light signal information of the first leukocyte particle group.
  • step 336 is performed to output the results of the classification of the white blood cells of the first test sample.
  • step 334 is performed to obtain second light signal information when the particles of the second test sample pass through the optical detection device, wherein the second test sample is subjected to hemolysis treatment, fluorescent staining treatment and Prepared by dilution processing;
  • Step 335 classify and count the particles in the second test sample according to the second light signal information to obtain a second leukocyte particle group;
  • Step 336 output the first cell particle group And the classification and counting results of the second white blood cell particle group, or output only the classification and counting results of the second white blood cell particle group.
  • steps 331 to 336 are basically the same as the steps 101 to 106 in the foregoing first embodiment, and will not be repeated here.
  • the detection step 330 may further include the step of alarming and/or recording and storing information that the blood sample of the subject is a white blood cell aggregation sample in association with the characteristic information of the subject ( (Not shown).
  • the detection step 340 is executed, that is, directly Perform a test step of diluting the blood sample of the subject.
  • Step 340 specifically includes steps 344, 345, and 346. Steps 344, 345, and 346 are the same as the aforementioned steps 334, 335, and 336, and will not be repeated here.
  • the invention further provides a blood cell analyzer.
  • the method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject can be applied.
  • the blood cell analyzer 500 of the present invention includes a sampling device, such as a sampling needle (not shown); a pretreatment device 510, the pretreatment device includes at least one reaction cell 511; optical Detection device 520; and processor 530.
  • the sampling device is used to draw blood samples. After the sampling device sucks the blood sample, it is transferred to the pretreatment device 510 through the transfer device (ie, pipeline).
  • the transfer device ie, pipeline
  • the pretreatment device is used to pretreat the blood sample to prepare a pretreated test sample.
  • the pretreatment device includes at least one reaction cell 511 for providing a reaction site for blood samples and processing reagents.
  • An example of the pretreatment device used in the present invention is shown in FIG. 5.
  • the pretreatment device shown therein includes at least the reaction cell 10.
  • the sampling needle 2 can inject the drawn blood sample into the reaction cell 10 through the hole provided in the needle.
  • a plurality of openings are arranged on the lower side wall of the reaction cell 10, and the plurality of openings are respectively communicated with storage containers of different sample processing reagents through pipes.
  • the opening 70 is a diluent injection port, which is used to react to Add diluent to the tank 10.
  • the openings 40 and 50 are a hemolytic agent addition port and a fluorescent dye addition port, respectively, for adding an appropriate hemolytic agent and a fluorescent dye to perform hemolysis treatment and fluorescent staining treatment on the sample.
  • the opening 60 is a reaction liquid extraction port, and the prepared test sample is transferred to the optical detection device 520 for detection.
  • the reaction cell 10 of the pretreatment device of the present invention is different from the reaction cell of the conventional pretreatment device.
  • Fig. 2 shows a reaction cell 1 of a conventional pretreatment device.
  • a plurality of openings are also arranged on the lower side wall of the reaction cell 1, and the more than one openings are respectively communicated with liquid storage containers of different sample processing reagents through pipes.
  • the openings 4 and 5 are a hemolytic agent addition port and a fluorescent dye addition port, respectively, for adding an appropriate hemolytic agent and a fluorescent dye to perform hemolysis treatment and fluorescent staining treatment on the sample.
  • the opening 6 is a reaction liquid extraction port, and the prepared test sample is transferred to an optical detection device for detection.
  • the reaction cell 10 of the present invention also has a diluent addition port 70, so that when the sample is determined to have white blood cell aggregation, the sample is diluted in the machine to obtain Accurate white blood cell test results.
  • the optical detection device 520 is used to pass the particles in the pre-processed test sample one by one through the detection zone, so as to detect and output the optical signal information of the particles in the test sample. Specifically, the optical detection device 520 is used to irradiate the blood sample processed by the processing reagent, that is, the above-mentioned test sample, to collect the optical signal generated by each particle in the sample and convert it into an electrical signal to output optical signal information .
  • the light signal here may be a forward scattered light signal (FSC), a side scattered light signal (SSC), and a fluorescent signal (FL).
  • the optical detection device 520 generally includes a light source 521 and a sheath flow chamber 522 with an orifice 5221.
  • Particles in the blood sample can flow in the sheath flow chamber 522 and pass through the orifice 5221 one by one.
  • the light emitted by the light source 521 can The particles irradiated into the orifice 5221 correspondingly generate scattered light signals and/or fluorescent signals.
  • the optical detection device 520 may further include a lens group 523, a photoelectric sensor 524 (such as a photodiode, a photomultiplier tube, etc.) and an A/D converter provided in front and side of the aperture respectively
  • a lens group 523 can capture the corresponding scattered light signal and fluorescence signal
  • the photoelectric sensor 524 can convert the captured light signal (referred to as scattered light signal and fluorescence signal, etc.) into an electrical signal.
  • the A/D converter processes the electric signal to obtain a digital signal through A/D conversion, and the digital signal can be output as optical signal information.
  • the processor 530 is configured to receive and process the optical signal information output by the optical detection device 520 to obtain the cell parameters of the blood sample.
  • the processor 530 is used to execute each step in the method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject of the present invention. According to a specific embodiment, the processor 530 is used to perform the steps in the first and second embodiments described above. I will not repeat them here.
  • the blood cell analyzer of the present invention further includes a memory (not shown).
  • the memory may be implemented by any type of volatile or non-volatile storage device, or a combination thereof.
  • Various types of data may be stored in the memory to support the operation of the blood cell analyzer 500. Examples of these data include acquisition of optical/electrical signal information, subject information, detection results obtained after processing by the processor 520, and/or thresholds of various parameters for comparison with detection results/optical/electrical signal information or Normal value range, etc., but not limited to this.
  • the blood cell analyzer of the present invention may further include a display device (not shown) for displaying the detection result output by the processor.
  • the present invention further provides an analysis device for an analysis device for detecting leukocytes in a blood sample of a subject.
  • FIG. 10 is a schematic structural diagram of an analysis device 600 according to an embodiment of the present application.
  • the analysis device 600 includes at least one processor 601 and a memory 602, and the memory 602 stores instructions executable by the at least one processor 601. When executed by the at least one processor 601, the above method of detecting white blood cells in a blood sample of a subject.
  • the analysis device 600 may further include at least one network interface 604 and user interface 603.
  • the various components in the control device 600 are coupled together via a bus system 605. Understandably, the bus system 605 is used to implement connection and communication between these components.
  • the bus system 605 also includes a power bus, a control bus, and a status signal bus. However, for clarity, various buses are marked as the bus system 605 in FIG. 10.
  • the user interface 603 may include a display, a keyboard, a mouse, a trackball, a click wheel, buttons, buttons, a touch panel, or a touch screen.
  • the memory 602 may be a volatile memory or a non-volatile memory, and may also include both volatile and non-volatile memory.
  • the non-volatile memory can be read-only memory (ROM, Read Only Memory), programmable read-only memory (PROM, Programmable Read-Only Memory), erasable programmable read-only memory (EPROM, Erasable Programmable Read- Only Memory), Electrically Erasable Programmable Read-Only Memory (EEPROM, Electrically Erasable Programmable Read-Only Memory), Magnetic Random Access Memory (FRAM, Ferromagnetic Random Access Memory), Flash Memory (Flash Memory), Magnetic Surface Memory , Compact disc, or read-only compact disc (CD-ROM, Compact, Read-Only Memory); the magnetic surface memory can be a disk storage or a tape storage.
  • the volatile memory may be a random access memory (RAM, Random Access Memory), which is used as an external cache.
  • RAM random access memory
  • SRAM static random access memory
  • SSRAM synchronous static random access memory
  • DRAM Dynamic Random Access Memory
  • SDRAM Synchronous Dynamic Random Access Memory
  • DDRSDRAM Double Data Rate Synchronous Dynamic Random Access Memory
  • ESDRAM Double Data Rate Synchronous Dynamic Random Access Memory
  • ESDRAM Double Data Rate Synchronous Dynamic Random Access Memory
  • ESDRAM Enhanced Synchronous Dynamic Random Access Memory
  • SLDRAM SyncLink Dynamic Random Access Memory
  • DRRAM Direct Rambus Random Access Random Access Memory
  • DRRAM Direct Rambus Random Access Random Access Memory
  • the memory 602 described in the embodiments of the present application is intended to include these and any other suitable types of memory.
  • the memory 602 includes but is not limited to: tri-state content addressable memory, static random access memory capable of storing received sensor signals and other types of data to support the operation of the analysis device 600.
  • the processor 601 may be a central processing unit (Central Processing Unit, CPU), or other general-purpose processors, digital signal processors (Digital Signal Processors, DSPs), application specific integrated circuits (Application Specific Integrated Circuit, ASIC), and ready-made programmable Field-Programmable Gate Array (FPGA) or other programmable logic devices, discrete gate or transistor logic devices, discrete hardware components, etc.
  • a general-purpose processor can be a microprocessor or the processor can also be any conventional processor Wait.
  • the present invention further provides a computer-readable storage medium.
  • the computer-readable storage medium stores executable instructions, which when executed by the processor 601, implement the steps of the foregoing method for detecting leukocytes in a blood sample of a subject.
  • the computer-readable storage medium may be the aforementioned memory or a component thereof, in which the computer program is stored and executed by the processor 601 of the hematology analyzer to complete the aforementioned method steps.
  • the computer-readable storage medium may be FRAM, ROM, PROM, EPROM, EEPROM, Flash Memory, magnetic surface memory, optical disk or CD-ROM, etc., or it may be various devices including one or any combination of the above storage media.

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Abstract

一种检测白细胞的方法、血液细胞分析仪及存储介质。检测白细胞的方法用于血液细胞分析仪，包括：获取第一测试样本的粒子的第一光信号信息，其中第一测试样本通过对血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备（101）；根据第一光信号信息对血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群（102）；根据第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在第一测试样本中是否存在白细胞聚集（103）；和当判定在第一测试样本中存在白细胞聚集时，对血液样本进行复检（104）。

Description

一种检测白细胞的方法、血液细胞分析仪及存储介质 技术领域
本发明涉及血液样本检测领域，特别涉及白细胞的检测。
背景技术
血细胞分析仪在进行白细胞检测时，首先用溶血剂使血液样本中的红细胞破裂，并对白细胞进行处理，然后使生成的血液样本通过检测区根据已经破裂的红细胞碎片与白细胞经过检测区所产生的不同的光信号对样本中的粒子进行分类，能够将红细胞碎片粒子(血影)和白细胞粒子区分开，并进而对白细胞粒子的光信号信息进行进一步的分析得到所需的检测结果。白细胞的检测方法学有多种，以流式细胞术为例，在测量白细胞时，通过鞘液的作用，使血液样本中的白细胞依次排队通过检测区。当每个白细胞通过检测区的时候，都会在对应的检测通道生成一个光学脉冲。对此光学脉冲进行统计和分析，可以得到白细胞的数量与分类。
对正常样本而言，绝大多数白细胞都能够独立地以单个细胞形式通过检测区，即一个白细胞可产成一个脉冲。然而，已发现在血样的采集及制备过程中，可能会出现样本中存在多个白细胞重叠在一起通过检测区的情况。在这种情况下，多个聚集的白细胞仅会形成一个异型脉冲，使得多个白细胞被识别成一个白细胞，造成白细胞计数不准确。
这种情况在正常样本中非常少见，但是，对于某些异常样本，其中会出现较为严重的白细胞会聚集的情况。在《50例白细胞聚集导致血常规检测时白细胞假性降低分析》(杨坚，贵州省惠水县人民医院，吉林医学2014年7月第35卷第20期)中也指出：“EDTA抗凝血可导致白细胞之间或白细胞与血小板之间发生聚集，传染性单核细胞增多症以及急性细菌感染使 得白细胞之间的排斥力减弱等都可以导致白细胞的聚集，造成白细胞假性降低。白细胞聚集通常会导致白细胞假性降低，影响诊断的正确性，必须提高认识，不能完全依赖细胞仪检测的结果，尽量避免被各种原因导致的白细胞降低所误导。”再如，血液中含有恶性胸膜间皮瘤的肿瘤标记物的情况下，白细胞会大量聚集。不同原因造成的多个白细胞重叠在一起通过检测区，导致白细胞计数的检测结果偏低，进而影响临床医生的判断。
发明内容
针对白细胞检测中可能存在白细胞聚集进而影响白细胞计数准确性的问题，本发明旨在提供一种能够判断样本中发生了白细胞聚集并进而消除聚集的白细胞检测方法、血液细胞分析仪及存储有本发明方法程序的计算机存储介质。
为此，本发明的第一方面，根据第一实施方式提供一种检测受试者的血液样本中的白细胞的方法，用于血液细胞分析仪，所述方法包括：
获取第一测试样本中的粒子的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备；
根据所述第一光信号信息对所述第一测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群；
根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集；和
当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，
获取第二测试样本中的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
根据所述第二光信号信息对所述第二测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
根据本发明方法的一种实施方式，根据所述第一白细胞粒子的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集的步骤可以包括：
根据所述第一光信号信息统计第一白细胞粒子群的总数和根据所述脉宽信息统计脉宽大于第一预定阈值的异常白细胞粒子的数量；
判断所述异常白细胞粒子的数量与所述第一白细胞粒子群的总数的比值是否大于第二预定阈值；和
当所述比值大于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集。
根据一种实施方式，所述第一预定阈值可以根据正常血液样本中的白细胞粒子的光信号信息中的脉宽信息来确定。
根据另一种实施方式，所述第一预定阈值可以根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息中的脉宽平均值来确定。
本发明的方法中，所述第一和/或第二光信号信息可以包括荧光信号和前向散射光信号。此外，第一和/或第二光信号信息可进一步包括侧向散射光信号。
根据一种具体的实施方式，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，所述方法进一步可以包括：对白细胞聚集进行报警。
根据进一步的具体的实施方式，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，所述方法进一步可以包括：与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。
根据一种实施方式，所述方法进一步可以包括：输出所述第一白细胞粒子群和/或第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
根据本发明的第一方面的第二实施方式，还提供一种检测受试者的血液样本中的白细胞的方法，用于血液细胞分析仪，所述方法包括：
获取所述受试者的信息；
将所获取的所述受试者的信息与已存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者信息进行匹配；和
当未发现匹配信息时，按照前述第一实施方式的方法检测该受试者的血液样本中的白细胞，以及
当发现匹配信息时，进行以下步骤：
获取第二测试样本的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
当发现匹配信息并进行上述步骤后，同样的，还进一步可以包括：输出所述第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
本发明的第二方面，根据第三实施方式提供一种血液细胞分析仪。所述血液细胞分析仪包括：
采样装置，用于吸取受试者的血液样本；
预处理装置，用于对所述血液样本进行预处理，以便制备预处理过的测试样本；
光学检测装置，用于使预处理过的测试样本中的粒子逐个通过检测区，以便检测和输出所述测试样本中的粒子的光信号信息；和
处理器，用于执行以下步骤：
获取第一测试样本的粒子的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备；
根据所述第一光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群；
根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集；和
当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，
获取第二测试样本的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
根据一种实施方式，所述处理器在执行根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集的步骤时可以执行以下步骤：
根据所述第一光信号信息统计第一白细胞粒子群的总数和根据所述脉宽信息统计脉宽大于第一预定阈值的异常白细胞粒子的数量；
判断所述异常白细胞粒子的数量与所述第一白细胞粒子群的总数的比值是否大于第二预定阈值；和
当所述比值大于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集。
根据本发明血液细胞分析仪的一种实施方式，所述第一预定阈值可以根据正常血液样本中的白细胞粒子的光信号信息中的脉宽信息来确定。
根据本发明血液细胞分析仪的另一种实施方式，其中所述第一预定阈值可以根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息中的脉宽平均值来确定。
本发明的血液细胞分析仪中，所述第一和/或第二光信号信息可以包括荧光信号信息和前向散射光信息。进一步地，所述第一和/或第二光信号信息还可以包括侧向散射光信息。
根据一种具体实施方式，所述处理器进一步可以用于当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时输出白细胞聚集的报警信号。
根据另一具体实施方式，其中，所述处理器进一步可以用于当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。
本发明的血液细胞分析仪还可以包括显示装置，用于显示由所述处理器输出的所述第一白细胞粒子群和/或第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
根据本发明的一种具体实施方式，所述血液细胞分析仪的预处理装置可以具有稀释液加入口，用于对所述血液样本进行稀释处理。
本发明的第二方面，根据第四实施方式还提供一种血液细胞分析仪，包括：
采样装置，用于吸取受试者血液样本；
预处理装置，用于对所述血液样本进行预处理，以便制备预处理过的测试样本；
光学检测装置，用于使预处理过的测试样本中的粒子逐个通过检测区，以便检测和输出所述测试样本中的粒子的光信号信息；
处理器，用于执行以下步骤：
获取所述受试者的信息；
将所获取的所述受试者的信息与已存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者信息进行匹配，当未发现匹配信息时，根据前述第一实施方式所定义的方法检测该受试者的血液样本中的白细胞，以及当发现匹配信息时，进行以下步骤：
获取第二测试样本中的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和 稀释处理而制备；和
根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
本发明的第三方面提供一种检测受试者的血液样本中的白细胞的分析装置，包括：
存储器，配置为存储可执行指令；
处理器，配置为运行所述存储器存储的可执行指令时，执行前述第一方面的第一实施方式及第二实施方式所定义的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法。
本发明的第四方面提供一种计算机可读存储介质，其上存储有可执行指令，所述计算机可读存储介质配置为引起处理器执行所述可执行指令时，实现前述第一方面的第一实施方式及第二实施方式所定义的检测受试者的血液样本中的白细胞方法。
本发明的方法及血液细胞分析仪在判断出现白细胞聚集现象时通过在复检时增加机内稀释步骤简单地解决了样本中存在白细胞聚集导致白细胞计数不准确的问题。此外，通过将受试者的特征信息、例如ID信息和疾病信息与血液样本被初次检测为白细胞聚集样本的信息相关联，能够在该受试者下一次去检查血液样本时直接增加对该血液样本的稀释步骤，以获得准确的白细胞分类和计数结果。
附图说明
图1为根据本发明的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法的第一实施方式的示意流程图；
图2为常规血液细胞分析仪中的包括反应池的预处理装置的示意图，其中还示出了血液细胞分析仪的采样针；
图3为正常血液样本的一个白细胞粒子经过光学检测装置的光信号的 脉冲波形(A)以及所有白细胞粒子的前向散射光信号脉冲形态分布散点图(B)；
图4为存在白细胞聚集情况的血液样本的聚集白细胞粒子的异形脉冲波形(A)以及所有白细胞粒子的前向散射光信号脉冲形态分布散点图(B)；
图5为本发明的血液细胞分析仪中的包括反应池的预处理装置的示意图，其中还示出了血液细胞分析仪的采样针；
图6为根据本发明的检测受试者血液样本中的白细胞的方法针对存在白细胞聚集情况的血液样本进行复检后得到的所有白细胞粒子的前向散射光信号脉冲形态分布散点图；
图7为根据本发明的检测受试者血液样本中的白细胞的方法的第一实施方式的一种变化实施方式的示意流程图；和
图8为根据本发明的检测受试者血液样本中的白细胞的方法的第二实施方式的示意流程图。
图9为根据本发明的血液细胞分析仪的一种实施方式的结构示意图。
图10为根据本发明的检测受试者血液样本中的白细胞的分析装置的结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所提供的实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。另外，以下所提供的实施例是用于实施本发明的部分实施例，而非提供实施本发明的全部实施例，在不冲突的情况下，本发明实施例记载的技术方案可以任意组合的方式实施。
需要说明的是，在本发明实施例中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的方法或者装置不仅包括所明确记载的要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或 者是还包括为实施方法或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的方法或者装置中还存在另外的相关要素(例如方法中的步骤或者装置中的单元，这里的单元可以是部分电路、部分处理器、部分程序或软件等等)。
需要说明的是，本发明实施例所涉及的术语“第一\第二\第三”仅仅是区别类似的对象，不代表针对对象的特定排序，可以理解地，“第一\第二\第三”在允许的情况下可以互换特定的顺序或先后次序。应该理解“第一\第二\第三”区分的对象在适当情况下可以互换，以使这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。
本发明提供了一种检测受试者血液样本中的白细胞的方法，应用于血液细胞分析仪。图1示出了本发明的第一实施方式。
本发明中的“受试者”，除非另有说明，是指哺乳动物，尤其是人类。
参照图1，步骤101：获取第一测试样本的粒子经过所述血液细胞分析仪的光学检测装置时的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备。
本发明中的血液样本，除非另有说明通常指全血样本。
第一光信号信息包括前向散射光信息和荧光信号信息，进一步地还可以包括侧向散射光信息。
该步骤101中，第一测试样本是对血液样本进行常规的溶血和荧光染色处理获得。经处理后，样本中的红细胞破裂。第一测试样本中的粒子至少包括破裂的红细胞形成的血影粒子以及包括白细胞粒子。
具体地，参考图5，其中示出了按照本发明的血液细胞分析仪的至少包括反应池10的预处理装置。在检测仪中，首先，通过溶血剂加入口40向反应池10加入溶血剂，然后通过采样针2上的针口3向反应池10中的溶血剂底液中加入血液样本，并进行混匀。接着通过荧光染料加入口50加入 荧光染料。其中，血液样本、溶血剂、荧光染料以常规比例(例如常规地为20μL:1000μL:20μL)分别通过采样针2、溶血剂加入口40和荧光染料加入口50加入反应池10，以制备第一测试样本。经过一段时间的孵育后，第一测试样本通过反应液抽取口60被转移到光学检测装置进行检测，从而获取第一测试样本中的粒子的第一光信号信息。
步骤102中，根据所述第一光信号信息对所述第一测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群。
在步骤101中，第一测试样本中主要包含血影粒子和白细胞，其中血影粒子的尺寸显著小于白细胞粒子。因而，在步骤102中可以根据第一光信号信息中反映粒子尺寸的前向散射光信息，或者根据前向散射光、侧向散射光和荧光信息中的至少两种，对血影粒子和白细胞粒子进行区分。由此获取第一测试样本中白细胞粒子的第一光信号信息。
步骤103，根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集。
正常血液样本中绝大多数白细胞都可以单个细胞的形式通过检测区，即一个白细胞可生成一个脉冲。参见图3，图3A显示了一个正常白细胞粒子的前向散射光信号脉冲波形。图3B显示了正常血液样本的所有白细胞粒子的前向散射光信号脉冲形态分布散点图。在图3B的前向散射光信号脉冲形态分布散点图中，横轴代表白细胞的前向散射光信号脉冲的宽度，纵轴代表白细胞的前向散射光信号脉冲的高度。如正常血液样本的白细胞区所示，大量的白细胞脉冲特征是脉冲高度各不相同，但脉冲宽度接近，从而形成狭长的散点形状。
进一步参考图4，其中显示了一个包含大量聚集的白细胞的异常血液样本的检测结果。图4A示出了一个多个白细胞聚集在一起通过光学检测区的异常脉冲的波形，该异常脉冲的脉冲宽度明显比图3A所示的正常血液样本 中的单个白细胞通过光学检测区形成的正常脉冲的宽度要宽。反映在异常血液样本的所有白细胞粒子的前向散射光信号脉冲形态分布散点图中，参见图4B，则是形成了由聚集的白细胞产生的具有较大脉冲宽度的异常脉冲区以及由单个白细胞产生的正常脉冲区。
基于上述现象，在步骤103中，尤其是根据白细胞的前向散射光信息中的脉宽信息来判断所检测的血液样本中是否存在白细胞聚集的情况。
根据本发明的一种具体实施方式，首先根据所述第一光信号信息统计第一白细胞粒子群的总数和根据所述脉宽信息统计脉宽大于第一预定阈值的异常白细胞粒子的数量。接着，判断所述异常白细胞粒子的数量与所述第一白细胞粒子群的总数的比值是否大于第二预定阈值。当所述比值小于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中不存在白细胞聚集(如图3B所示)；而当所述比值大于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集(如图4B所示)。
第一预定阈值和第二预定阈值均可以为检测经验值。
此外，第一预定阈值也可根据正常血液样本中的白细胞粒子的光信号信息中的脉宽信息来确定。例如，该方式下，第一预定阈值可为1.2us或1.4us。或者，第一预定阈值可根据所检测的血液样本中的白细胞粒子的第一光信号信息中的脉宽平均值来确定。应理解的是，对于不同厂家的测量系统中，粒子的脉宽并不会完全相同，粒子的脉宽与光学测量系统中的光路特征、流体特征等有关，因此，第一预定阈值可根据实际情况进行调整。
根据不同的第一预定阈值确定方式，来确定第二预定阈值，使得当聚集的白细胞数量将影响检测准确性时，判定该样品中存在白细胞聚集。第二预定阈值例如可以为5％。
当判定第一测试样本中不存在白细胞聚集时(图3所示情况)，进行步骤106，直接输出第一白细胞粒子群的分类和计数结果。
当判定在第一测试样本中存在白细胞聚集时(图4所示情况)，由血液细胞分析仪对所述血液样本进行复检。即，对该血液样本进行再次检测。
步骤104中，当判定在第一测试样本中存在白细胞聚集时，获取第二测试样本的粒子经过所述光学检测装置时的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备。
该步骤104与之前的步骤101的区别在于，对血液样本进行了稀释处理。
再次参见图5，其中示出了本发明的血液细胞分析仪的包括反应池10的预处理装置。在分析仪中，首先，通过稀释液加入口70，向反应池10中加入少量稀释液，然后通过采样针2上的针口3向池内的稀释液底液中加入血液样本，混合均匀后再通过溶血剂加入口40和荧光染料加入口50向反应池10中加入溶血剂和荧光染料，从而制备第二测试样本。在此，稀释液、溶血剂和荧光染料的加入顺序没有限制，其中，血液样本与稀释剂的比例可以为常规比例，也可根据经验得出，例如为1:10。血液样本、溶血剂、荧光染料的加入量的比例为常规比例，这样，血液样本、稀释剂、溶血剂、荧光染料的加入比例可例如为20μL:200μL:1000μL:20μL。经过一段时间的孵育后，第二测试样本通过反应液抽取口60被转移到光学检测装置进行检测，以获得第二测试样本中的粒子的第二光信号信息。
步骤105，与之前的步骤102类似，根据所述第二光信号信息对第二测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
对图4中所示存在白细胞聚集情况的血液样本进行复检，获得第二测试样本的白细胞的前向散射光信号脉冲形态分布散点图如图6所示。由图6可见，第二测试样本的前向散射光信号脉冲形态散点图上的异常脉冲已消失。说明经过预稀释处理得到的第二测试样本中已经消除了白细胞聚集的现 象，从而能够获得正常的脉冲形态散点图，进而获得更为准确的白细胞计数。
接着进行步骤106，输出该进行复检的血液样本在复检前/后的第一白细胞粒子群和/或第二白细胞粒子群的分类和计数结果。可以输出第一白细胞粒子群和第二白细胞粒子群的分类和计数结果，也可以仅输出复检的第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
图7示出了本发明第一实施方式的一种变形。如图7所示，该变形的实施方式中步骤201～206分别与第一实施方式的步骤101～106相同。区别在于当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，进行步骤207，即对白细胞聚集进行报警，并进行步骤208，即与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。
根据该方式，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，进行报警。报警的方式没有特别限定，包括但不限于：视觉报警(如闪光、显示文字、显示警告图标、显示警告颜色等)、听觉报警(如蜂鸣、语音告警、其他警报音等)、触觉报警(如振动等)等。报警可以是上述方式中的一种，也可以是两种或更多种方式的组合。
进一步地，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。所述受试者的特征信息可包括，但不限于，受试者的身份信息(如ID号、年龄(或出生日期)、性别、姓名等)、受试者的身体状况信息(如当前患病情况、服药情况等)、受试者的病史、受试者的家族史等。可记录上述受试者的特征信息中的多个信息，至少包括用于确定受试者身份的信息以及与产生白细胞聚集相关的疾病信息。当受试者的血液样本由于患有某种疾病而发生白细胞聚集时，该实施方式是特别有利的。
基于图7所示的具体方式，本发明还包括其他变形的实施方式。一种 具体实施方式是，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，仅进行报警。另一种具体实施方式是，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，仅与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的信息。
此外，图7仅示出了步骤207和208顺序在步骤204之前执行的方式，但本发明的具体实施方式不限于此。例如步骤207和/或208可以顺序进行，也可以反序或同时执行。此外，步骤207/208也不限于在步骤204之前进行，例如，二者或之一可在步骤205和206之间执行，或者在步骤206之后执行等。
进一步参考图8，其中示出了本发明的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法的第二实施方式。
如图8所示，在本发明的第二实施方式中，包括：步骤310，获取所述受试者特征信息；步骤320，将所获取的所述受试者特征信息与已存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者特征信息进行匹配；和当未发现匹配信息时，执行检测步骤330，以及当发现匹配信息时，执行检测步骤340。
在该实施方式中，在检测受试者的血液样本时，首先获取该受试者的特征信息(步骤310)。受试者的特征信息如上文所定义。可以诸如通过输入的方式，或通过读取码信息或芯片等方式，以获取与该受试者的身份信息及必要的疾病信息。
接着，将所获取的受试者特征信息与已经存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者特征信息进行匹配(步骤320)。具体地，可包括将该受试者的身份信息与已存储的受试者身份信息进行匹配，和将受试者的疾病信息、特别是与白细胞聚集相关的疾病信息与已存储的受试者疾病信息进行匹配。
当未发现匹配项时，则执行与前文所述的本发明的第一实施方式相同 的步骤(步骤330)。
在步骤330中，具体地可包括以下步骤：
步骤331，获取第一测试样本的粒子经过所述血液细胞分析仪的光学检测装置时的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备。
步骤332，根据所述第一光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群。
步骤333，根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集。
当判定在所述第一测试样本中不存在白细胞聚集时，进行步骤336，输出所述第一测试样本的白细胞分类结果。
当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，对该血液样本进行复检。即，进行步骤334，获取所述第二测试样本的粒子经过所述光学检测装置时的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；步骤335，根据所述第二光信号信息对所述第二测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群；和步骤336，输出所述第一细胞粒子群和第二白细胞粒子群的分类和计数结果，或仅输出所述第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
上述步骤331～336与前述第一实施方式中的步骤101～106基本相同，在此不再赘述。
此外，同样的，在检测步骤330中，也可进一步包括报警和/或与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储该受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息的步骤(未图示)。
当发现存储的以往受试者的信息中有与该受试者的信息相匹配的信息时，则可判定该受试者的血液样本可能存在白细胞聚集的情况，因而执行 检测步骤340，即直接执行对该受试者的血液样本进行稀释的检测步骤。
步骤340具体包括步骤344、345和346。步骤344、345和346分别与前述步骤334、335和336相同，在此不再赘述。
本发明进一步提供一种血液细胞分析仪。在本发明的血液细胞分析仪中可以应用上述检测受试者的血液样本中的白细胞的方法。
根据一种实施方式，参见图9，本发明的血液细胞分析仪500，包括采样装置、例如采样针(未示出)；预处理装置510，所述预处理装置包括至少一个反应池511；光学检测装置520；和处理器530。
采样装置用于吸取血液样本。采样装置吸取血液样本后，通过输送装置(即管路)输送到预处理装置510。
预处理装置用于对所述血液样本进行预处理，以便制备预处理过的测试样本。在当前实施例中，该预处理装置至少包括一个反应池511，用于为血液样本与处理试剂提供反应场所。用于本发明的预处理装置的一个实例如图5所示。
再次参见图5，其中示出的预处理装置至少包括反应池10。采样针2可通过针头设置的孔将吸取的血液样本注入反应池10中。在本发明的分析仪中，反应池10的下部侧壁上布置有多个开口，所述多个开口分别通过管路与不同的样本处理试剂的贮液容器连通。
其中，开口70为稀释液加入口，用于当判定血液样本存在白细胞聚集的情况时，在由血液细胞分析仪500制备测试样本(即前述各实施方式中的第二测试样本)时，向反应池10中加入稀释液。开口40和50分别为溶血剂加入口和荧光染料加入口，用于加入适当的溶血剂和荧光染料，以对所述样本进行溶血处理和荧光染色处理。开口60为反应液抽取口，用将制备好的测试样本转移到光学检测装置520进行检测。
本发明的预处理装置的反应池10与常规预处理装置的反应池有所不 同。图2示出了一种常规预处理装置的反应池1。参见图2，该反应池1下部侧壁上也布置有多个开口，所述多过个开口分别通过管路与不同的样本处理试剂的贮液容器连通。其中，开口4和5分别为溶血剂加入口和荧光染料加入口，用于加入适当的溶血剂和荧光染料，以对所述样本进行溶血处理和荧光染色处理。开口6为反应液抽取口，用将制备好的测试样本转移到光学检测装置进行检测。
对比图2和5可以看到，与常规反应池1不同，本发明的反应池10还具有稀释剂加入口70，以便在确定样本存在白细胞聚集的情况时在机内进行样本的稀释，以获得准确的白细胞检测结果。
光学检测装置520用于使预处理过的测试样本中的粒子逐个通过检测区，以便检测和输出所述测试样本中的粒子的光信号信息。具体地，光学检测装置520用于对经处理试剂处理后的血液样本、即上述的测试样本进行光照射，收集样本中各粒子所产生的光信号，并转换成电信号，以输出光信号信息。这里的光信号可以是前向散射光信号(FSC)、侧向散射光信号(SSC)、荧光信号(FL)。光学检测装置520通常包括光源521和具有孔口5221的鞘流流动室522等，血液样本中的粒子可在鞘流流动室522内流动，并逐个经过孔口5221，光源521所发出的光可照射到孔口5221中的粒子并对应产生散射光信号和/或荧光信号。光学检测装置520还可以包括分别在孔口前方和侧向设置的透镜组523、光电感应器524(如光电二极管、光电倍增管等)及A/D转换器，A/D转换器可设置在处理器530中或单独形成一个元件，从而透镜组523可捕捉对应散射光信号和荧光信号，光电感应器524可将捕捉到的光信号(指散射光信号和荧光信号等)转换为电信号，再A/D转换器将电信号经A/D转换处理得到数字信号，可以将该数字信号作为光学信号信息输出。
处理器530，用于接收并处理光学检测装置520输出的光信号信息，以 得到血液样本的细胞参数。处理器530用于执行本发明的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法中的各步骤。根据具体实施方式，处理器530用于执行上述第一和第二实施方式中各步骤。在此不再赘述。
本发明的血液细胞分析仪还包括存储器(未图示)。所述存储器可由任何类型的易失性或非易失性存储设备、或者它们的组合来实现。存储器中可存储有各种类型的数据以支持血液细胞分析仪500的操作。这些数据的示例包括获取光/电信号信息、受试者信息、经处理器520处理后获得的检测结果和/或用于与检测结果/光/电信号信息进行比较的各类参数的阈值或正常值范围等，但不限于此。
本发明的血液细胞分析仪可进一步包括显示装置(未示出)，用于显示由所述处理器输出的检测结果。
此外，本发明进一步提供一种检测受试者的血液样本中的白细胞的分析装置的分析装置。
图10为本申请实施方式的分析装置600的结构示意图，所述分析装置600包括至少一个处理器601以及存储器602，该存储器602存储所述至少一个处理器601可执行的指令，所述指令在被所述至少一个处理器601执行时上述检测受试者的血液样本中的白细胞的方法。
此外，所述分析装置600还可以包括至少一个网络接口604和用户接口603。控制装置600中的各个组件通过总线系统605耦合在一起。可理解，总线系统605用于实现这些组件之间的连接通信。总线系统605除包括数据总线之外，还包括电源总线、控制总线和状态信号总线。但是为了清楚说明起见，在图10中将各种总线都标为总线系统605。
其中，用户接口603可以包括显示器、键盘、鼠标、轨迹球、点击轮、按键、按钮、触感板或者触摸屏等。
可以理解，存储器602可以是易失性存储器或非易失性存储器，也可 包括易失性和非易失性存储器两者。其中，非易失性存储器可以是只读存储器(ROM，Read Only Memory)、可编程只读存储器(PROM，Programmable Read-Only Memory)、可擦除可编程只读存储器(EPROM，Erasable Programmable Read-Only Memory)、电可擦除可编程只读存储器(EEPROM，Electrically Erasable Programmable Read-Only Memory)、磁性随机存取存储器(FRAM，ferromagnetic random access memory)、快闪存储器(Flash Memory)、磁表面存储器、光盘、或只读光盘(CD-ROM，Compact Disc Read-Only Memory)；磁表面存储器可以是磁盘存储器或磁带存储器。易失性存储器可以是随机存取存储器(RAM，Random Access Memory)，其用作外部高速缓存。通过示例性但不是限制性说明，许多形式的RAM可用，例如静态随机存取存储器(SRAM，Static Random Access Memory)、同步静态随机存取存储器(SSRAM，Synchronous Static Random Access Memory)、动态随机存取存储器(DRAM，Dynamic Random Access Memory)、同步动态随机存取存储器(SDRAM，Synchronous Dynamic Random Access Memory)、双倍数据速率同步动态随机存取存储器(DDRSDRAM，Double Data Rate Synchronous Dynamic Random Access Memory)、增强型同步动态随机存取存储器(ESDRAM，Enhanced Synchronous Dynamic Random Access Memory)、同步连接动态随机存取存储器(SLDRAM，SyncLink Dynamic Random Access Memory)、直接内存总线随机存取存储器(DRRAM，Direct Rambus Random Access Memory)。本申请实施方式描述的存储器602旨在包括这些和任意其它适合类型的存储器。
存储器602包括但不限于：三态内容寻址存储器、静态随机存储器能够存储所接收的传感器信号等多种类数据以支持分析装置600的操作。
处理器601可以是中央处理单元(Central Processing Unit，CPU，还可以是其他通用处理器、数字信号处理器(Digital Signal Processor，DSP)、 专用集成电路(Application Specific Integrated Circuit，ASIC)、现成可编程门阵列(Field-Programmable Gate Array，FPGA)或者其他可编程逻辑器件、分立门或者晶体管逻辑器件、分立硬件组件等。通用处理器可以是微处理器或者该处理器也可以是任何常规的处理器等。
此外，本发明进一步提供一种计算机可读存储介质。所述计算机可读存储介质上存储有可执行指令，该可执行指令被处理器601执行时实现前述检测受试者血液样本中白细胞的方法的步骤。所述计算机可读存储介质可以是前述存储器或其部件，其中存储了所述计算机程序，并由血细胞分析仪的处理器601执行，以完成前述方法步骤。计算机可读存储介质可以是FRAM、ROM、PROM、EPROM、EEPROM、Flash Memory、磁表面存储器、光盘或CD-ROM等，也可以是包括上述存储介质之一或任意组合的各种设备。
以上提及的特征，只要在本发明的范围内是有意义的，均可以任意相互组合。针对本发明的方法所说明的优点和特征以相应的方式适用于本发明的血液细胞分析仪。以上所述仅为本发明的一些实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (23)

  1. 一种检测受试者的血液样本中的白细胞的方法，用于血液细胞分析仪，所述方法包括：
    获取第一测试样本中的粒子的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备；
    根据所述第一光信号信息对所述第一测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群；
    根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集；和
    当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，
    获取第二测试样本中的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
    根据所述第二光信号信息对所述第二测试样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
  2. 根据权利要求1所述的方法，其中，根据所述第一白细胞粒子的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集的步骤包括：
    根据所述第一光信号信息统计第一白细胞粒子群的总数和根据所述脉宽信息统计脉宽大于第一预定阈值的异常白细胞粒子的数量；
    判断所述异常白细胞粒子的数量与所述第一白细胞粒子群的总数的比值是否大于第二预定阈值；
    当所述比值大于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集。
  3. 根据权利要求2所述的方法，其中，所述第一预定阈值根据正常血 液样本中的白细胞粒子的光信号信息中的脉宽信息来确定。
  4. 根据权利要求2所述的方法，其中所述第一预定阈值根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息中的脉宽平均值来确定。
  5. 根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述第一和/或第二光信号信息包括荧光信号和前向散射光信号。
  6. 根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一和/或第二光信号信息进一步包括侧向散射光信号。
  7. 根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，所述方法进一步包括：对白细胞聚集进行报警。
  8. 根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，所述方法进一步包括：与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。
  9. 根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括：输出所述第一白细胞粒子群和/或第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
  10. 一种检测受试者的血液样本中的白细胞的方法，用于血液细胞分析仪，所述方法包括：
    获取所述受试者的信息；
    将所获取的所述受试者的信息与已存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者信息进行匹配；和
    当未发现匹配信息时，根据权利要求1～9中任一项所述的方法检测该受试者的血液样本中的白细胞，以及
    当发现匹配信息时，进行以下步骤：
    获取第二测试样本的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
    根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
  11. 一种血液细胞分析仪，包括：
    采样装置，用于吸取受试者的血液样本；
    预处理装置，用于对所述血液样本进行预处理，以便制备预处理过的测试样本；
    光学检测装置，用于使预处理过的测试样本中的粒子逐个通过检测区，以便检测和输出所述测试样本中的粒子的光信号信息；和
    处理器，用于执行以下步骤：
    获取第一测试样本的粒子的第一光信号信息，其中所述第一测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理和荧光染色处理而制备；
    根据所述第一光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第一白细胞粒子群；
    根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集；和
    当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，
    获取第二测试样本的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
    根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
  12. 根据权利要求11所述的血液细胞分析仪，其中，所述处理器在执 行根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息的脉宽信息判断在所述第一测试样本中是否存在白细胞聚集的步骤时执行以下步骤：
    根据所述第一光信号信息统计第一白细胞粒子群的总数和根据所述脉宽信息统计脉宽大于第一预定阈值的异常白细胞粒子的数量；
    判断所述异常白细胞粒子的数量与所述第一白细胞粒子群的总数的比值是否大于第二预定阈值；
    当所述比值大于所述第二预定阈值时，判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集。
  13. 根据权利要求12所述的血液细胞分析仪，其中，所述第一预定阈值根据正常血液样本中的白细胞粒子的光信号信息中的脉宽信息来确定。
  14. 根据权利要求12所述的血液细胞分析仪，其中所述第一预定阈值根据所述第一白细胞粒子群的第一光信号信息中的脉宽平均值来确定。
  15. 根据权利要求11至14中任一项所述的血液细胞分析仪，其中，所述第一和/或第二光信号信息包括荧光信号信息和前向散射光信息。
  16. 根据权利要求15所述的血液细胞分析仪，其中，所述第一和/或第二光信号信息进一步包括侧向散射光信息。
  17. 根据权利要求11至16中任一项所述的血液细胞分析仪，其中，所述处理器进一步用于当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时输出白细胞聚集的报警信号。
  18. 根据权利要求11至17中任一项所述的血液细胞分析仪，其中，所述处理器进一步用于当判定在所述第一测试样本中存在白细胞聚集时，与所述受试者的特征信息相关联地记录并存储所述受试者的血液样本为白细胞聚集样本的信息。
  19. 根据权利要求11至18中任一项所述的血液细胞分析仪，其中，所述血液细胞分析仪还包括显示装置，用于显示由所述处理器输出的所述 第一白细胞粒子群和/或第二白细胞粒子群的分类和计数结果。
  20. 根据权利要求11至19中任一项所述的血液细胞分析仪，其中，所述预处理装置具有稀释液加入口，用于对所述血液样本进行稀释处理。
  21. 一种血液细胞分析仪，包括：
    采样装置，用于吸取受试者血液样本；
    预处理装置，用于对所述血液样本进行预处理，以便制备预处理过的测试样本；
    光学检测装置，用于使预处理过的测试样本中的粒子逐个通过检测区，以便检测和输出所述测试样本中的粒子的光信号信息；
    处理器，用于执行以下步骤：
    获取所述受试者的信息；
    将所获取的所述受试者的信息与已存储的曾经检测到存在白细胞聚集情况的受试者信息进行匹配，当未发现匹配信息时，根据权利要求1～9中任一项所述的方法检测该受试者的血液样本中的白细胞，以及当发现匹配信息时，进行以下步骤：
    获取第二测试样本中的粒子的第二光信号信息，其中所述第二测试样本通过对所述血液样本进行溶血处理、荧光染色处理和稀释处理而制备；和
    根据所述第二光信号信息对所述血液样本中的粒子进行分类和计数以得到第二白细胞粒子群。
  22. 一种检测受试者的血液样本中的白细胞的分析装置，包括：
    存储器，配置为存储可执行指令；
    处理器，配置为运行所述存储器存储的可执行指令时，执行权利要求1至10中任一项所述的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法。
  23. 一种计算机可读存储介质，存储有可执行指令，其中，所述计算 机可读存储介质配置为引起处理器执行所述可执行指令时，实现权利要求1至10中任一项所述的检测受试者的血液样本中的白细胞的方法。
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