WO2019181436A1 - 血液中の血液成分の量を測定する方法 - Google Patents

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WO2019181436A1
WO2019181436A1 PCT/JP2019/008078 JP2019008078W WO2019181436A1 WO 2019181436 A1 WO2019181436 A1 WO 2019181436A1 JP 2019008078 W JP2019008078 W JP 2019008078W WO 2019181436 A1 WO2019181436 A1 WO 2019181436A1
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electrode
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blood
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藤原雅樹
高原佳史
藤井孝昌
矢野節子
忽那史徳
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Ｐｈｃホールディングス株式会社
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    • G01N27/3271—Amperometric enzyme electrodes for analytes in body fluids, e.g. glucose in blood
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood

Definitions

  • the present invention relates to a method for measuring the amount of blood components in blood.
  • Such a sensor has, for example, a configuration in which a cover is disposed via a spacer on an insulating substrate having a working electrode and a counter electrode formed on the surface thereof. Reagents including an oxidoreductase and a mediator (electron carrier) are disposed on the working electrode and the counter electrode, and this portion serves as an analysis unit. One end of a flow channel for introducing blood is communicated with the analysis unit, and the other end of the flow channel is open to the outside, which serves as a blood supply port.
  • Analysis for example, blood glucose level
  • a component of a biological sample for example, blood
  • a biological sample for example, blood
  • a sensor is set in a dedicated measuring device (meter). And a fingertip etc. are injured with a lancet, it is made to bleed, and the blood supply port of the said sensor is made to contact this.
  • the blood is sucked into the flow path of the sensor by capillary action, and is introduced into the analysis section through this, where it comes into contact with the reagent.
  • a component in the blood and the oxidoreductase react to cause an oxidation-reduction reaction, whereby an electric current flows through the mediator. This current is detected, and based on this current value, the blood component amount is calculated in the measuring device and displayed.
  • ISO 15197 in-vitro inspection system-requirement for blood glucose monitoring system for measuring accidents in diabetes management
  • ISO 15197 effective in May 2013 has stricter standards than ISO 15197 effective in 2003.
  • a reagent layer 39 is provided on the electrode system of the working electrode 32 and the counter electrode 36, and another reagent layer 40 is provided on the electrode system of the working electrode 33 and the counter electrode 35.
  • An arranged biosensor has been reported (Patent Document 1).
  • Another electrode 37 is an electrode for measuring a hematocrit value, and the reagent layer 39 and the reagent layer 40 are not in contact with each other.
  • the reagent layer 39 includes an oxidoreductase and a mediator, and the reagent layer 40 includes a mediator.
  • a hematocrit value can be measured by applying a voltage to such an electrode 37 and any one of the working electrode 32, the counter electrode 36, the working electrode 33, and the counter electrode 35.
  • Patent Document 2 a biosensor in which a reagent is arranged on three electrodes (working electrodes W1, W2 and reference electrode R) has been reported (Patent Document 2).
  • An oxidized redox mediator is disposed on the working electrode W1 and the reference electrode R, and an oxidized redox mediator and an enzyme are disposed on the working electrode W2.
  • hematocrit (Hct) value of blood introduced into a capillary of a biosensor is measured, and the amount of the blood component is corrected according to this value.
  • FIG. 1 is an image showing variation in blood distribution in the biosensor when blood is introduced into a biosensor having two reagent parts.
  • the left side is the blood spotting side and the right side is the air hole side in the figure.
  • the blood progresses from left to right as viewed in the figure.
  • a portion where many red blood cells are present is colored black, and a portion where few red blood cells are present is colored gray.
  • FIG. 1 a portion where many red blood cells are present is colored black, and a portion where few red blood cells are present is colored gray.
  • the reagent part on the blood spotting side is colored gray, and it can be understood that there are many plasma components and few red blood cells in that place.
  • FIG.1 (b) in the reagent part by the side of an air hole, it is colored gray, and it can understand that there are many plasma components and few red blood cells in the place.
  • the present inventors have provided a method for measuring the amount of blood components in blood with high accuracy using a biosensor having a specific configuration, including a specific measurement step.
  • an electrode system for measuring the hematocrit value is provided in the capillary of the biosensor, and the hematocrit value is measured using the electrode system.
  • the measurement method of the present invention is characterized in that a plurality of hematocrit values are measured in a capillary of a biosensor, and the hematocrit values are measured at different positions in the capillary.
  • the present invention A first electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a first working electrode and a first counter electrode; A second electrode system for measuring a current value dependent on the amount of blood component having a second working electrode and a second counter electrode; A method for measuring the amount of blood components in blood using a biosensor having a third electrode system for measuring a current value depending on a hematocrit value having a third working electrode and a third counter electrode.
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the second electrode system;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, As the third working electrode, at least one of the first counter electrode, the second working electrode, and the second counter electrode is used, As the third counter electrode, at least one of the first working electrode, the first counter electrode, and the second counter electrode is used,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • the present invention also provides: A first electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a first working electrode and a first counter electrode; A third electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a third working electrode and a third counter electrode; A method for measuring the amount of blood components in blood using a biosensor having a fourth electrode system for measuring a current value depending on a hematocrit value having a fourth working electrode and a fourth counter electrode.
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the fourth counter electrode and the third working electrode;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, Using the first counter electrode as the fourth working electrode, Using the first working electrode as the third counter electrode,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • the present invention also provides: A first method for measuring the amount of blood components,
  • the biosensor further comprises a fourth electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a fourth working electrode and a fourth counter electrode; Using the first counter electrode as the fourth working electrode, Using the second counter electrode as the fourth counter electrode, The method A fourth step of applying a fourth voltage to the fourth electrode system and detecting a fourth current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value, And a method of calculating the amount of the blood component using a fourth current value that depends on the hematocrit value (in the text, it may be referred to as “third method for measuring the amount of blood component”). is there.
  • the present invention also provides: A first electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a first working electrode and a first counter electrode; A third electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a third working electrode and a third counter electrode; A fifth electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a fifth working electrode and a fifth counter electrode; A method for measuring the amount of blood components in blood using a biosensor having a sixth electrode system for measuring a current value depending on a hematocrit value having a sixth working electrode and a sixth counter electrode.
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the fifth counter electrode of the fifth electrode system;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the reagent layer is not disposed on the fifth working electrode of the fifth electrode system and the sixth working electrode of the sixth electrode system,
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, Using the fifth counter electrode as the third working electrode, Using the first working electrode as the third counter electrode, As the sixth counter electrode, any one of the first working electrode and the first counter electrode is used,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • the present invention also provides: A fourth method for measuring the amount of blood components,
  • the biosensor further comprises a seventh electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a seventh working electrode and a seventh counter electrode;
  • As the seventh working electrode any one of the fifth working electrode and the sixth working electrode is used, Using the fifth counter electrode as the seventh counter electrode,
  • the method A seventh step of applying a seventh voltage to the seventh electrode system and detecting a seventh current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a third current value that depends on the hematocrit value, a fifth current value that depends on the hematocrit value, and A method of calculating the amount of the blood component using a sixth current value that depends on the hematocrit value and a seventh current value that depends on the hematocrit value (in the text, “fifth of the amount of blood component” It may be called
  • the present invention also provides: A fourth method for measuring the amount of blood components,
  • the biosensor further comprises a second electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a second working electrode and a second counter electrode,
  • the second reagent layer is also disposed on the second electrode system;
  • the method Applying a second voltage to the second electrode system and detecting a second current value dependent on the amount of the blood component;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value, ,
  • a method of calculating the amount of the blood component using a fifth current value that depends on the hematocrit value and a sixth current value that depends on the hematocrit value in the text, “the amount of blood component It may be referred to as “sixth measurement method”).
  • the present invention also provides: A sixth method for measuring the amount of blood components,
  • the biosensor further comprises a seventh electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a seventh working electrode and a seventh counter electrode;
  • As the seventh working electrode any one of the fifth working electrode and the sixth working electrode is used, Using the fifth counter electrode as the seventh counter electrode,
  • the method A seventh step of applying a seventh voltage to the seventh electrode system and detecting a seventh current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value,
  • the reagent part and the electrode are configured so as to eliminate the problem of blood distribution variation in the biosensor. Therefore, by applying a voltage to a plurality of electrode systems. Since measurement can be performed in consideration of variation in blood distribution, even if the blood distribution varies in the biosensor, the measurement accuracy is improved.
  • FIG. 1 is an image showing variation in blood distribution in the capillary in the electrode configuration of the biosensor according to the present invention.
  • FIG. 2 is a perspective view showing an example of a measuring apparatus used in the measuring method of the present invention.
  • FIG. 3 is an exploded perspective view showing an example of a biosensor used in the measurement method of the present invention.
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG.
  • FIG. 5A is a plan view of the biosensor of FIG.
  • FIG. 5B is an enlarged view of a portion A in FIG.
  • FIG. 6 is an exploded perspective view showing another example of a biosensor used in the measurement method of the present invention.
  • FIG. 7 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG. FIG.
  • FIG. 8A is a plan view of the biosensor of FIG.
  • FIG. 8B is an enlarged view of a portion B in FIG.
  • FIG. 9 is an exploded perspective view showing another example of a biosensor used in the measurement method of the present invention.
  • FIG. 10 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG.
  • FIG. 11A is a plan view of the biosensor of FIG.
  • FIG. 11B is an enlarged view of a portion C in FIG.
  • FIG. 12 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 1A.
  • FIG. 13 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in the voltage application pattern in Embodiment 1A.
  • FIG. 14 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 1A.
  • FIG. 15 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 1B.
  • FIG. 16 is a table showing electrodes, application voltage, application timing, and application time in the voltage application pattern in Embodiment 1B.
  • FIG. 17 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 1B.
  • FIG. 18 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 1C.
  • FIG. 19 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 1C.
  • FIG. 20 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the second embodiment.
  • FIG. 21 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in the second embodiment.
  • FIG. 22 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in the second embodiment.
  • FIG. 23 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 3A.
  • FIG. 24 is a table showing electrodes, applied voltage, application timing, and application time in the voltage application pattern in Embodiment 3A.
  • FIG. 25 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 3A.
  • FIG. 26 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 3B.
  • FIG. 27 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in the voltage application pattern in Embodiment 3B.
  • FIG. 28 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 3B.
  • FIG. 29 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 3C.
  • FIG. 30 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 3C.
  • FIG. 31 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 3C.
  • FIG. 32 is a diagram illustrating a temporal change in the voltage value in the voltage application pattern in the embodiment 3D.
  • FIG. 33 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 3D.
  • FIG. 34 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 3D.
  • FIG. 35 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the fourth embodiment.
  • FIG. 36 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in the fourth embodiment.
  • FIG. 37 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in the fourth embodiment.
  • FIG. 38 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the fifth embodiment.
  • FIG. 39 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in the fifth embodiment.
  • FIG. 40 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in the fifth embodiment.
  • FIG. 41 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 6A.
  • FIG. 42 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 6A.
  • FIG. 43 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 6A.
  • FIG. 44 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 6B.
  • FIG. 45 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 6B.
  • FIG. 46 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 6B.
  • FIG. 47 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 6C.
  • FIG. 48 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 6C.
  • FIG. 49 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 6C.
  • FIG. 45 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 6B.
  • FIG. 46 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 6B.
  • FIG. 50 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 6D.
  • FIG. 51 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 6D.
  • FIG. 52 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 6D.
  • FIG. 53 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 7A.
  • FIG. 54 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 7A.
  • FIG. 55 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 7A.
  • FIG. 56 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 7B.
  • FIG. 57 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 7B.
  • FIG. 58 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 7B.
  • FIG. 59 is a diagram illustrating temporal changes in voltage values in the voltage application pattern in the embodiment 7C.
  • FIG. 60 is a table showing electrodes, applied voltages, application timings, and application times in a voltage application pattern in Embodiment 7C.
  • FIG. 61 is a table showing electrodes and electrode systems of the biosensor used in Embodiment 7C.
  • FIG. 62 is an electrical block diagram of a blood component measurement device equipped with a biosensor used in the measurement method of the present invention.
  • the measurement target components in the measurement method, the sixth measurement method of the amount of blood component, and the seventh measurement method of the amount of blood component are, for example, glucose, ketone, HbA1c, lactic acid, uric acid, bilirubin, cholesterol, and the like.
  • the enzyme included in the reagent part is appropriately selected according to the components of the biological sample to be measured.
  • the first measurement method for the amount of blood component, the second measurement method for the amount of blood component, the third measurement method for the amount of blood component, the fourth measurement method for the amount of blood component, the amount of blood component of the present invention obtain a behavior of blood in the entire capillary and improve the measurement accuracy, and a part of the measurement method
  • the present invention is not limited to these.
  • first measurement method of amount of blood component The present invention
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the second electrode system;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, As the third working electrode, at least one of the first counter electrode, the second working electrode, and the second counter electrode is used, As the third counter electrode, at least one of the first working electrode, the first counter electrode, and the second counter electrode is used,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • the third step is after the step of detecting the current value depending on the amount of the blood component is over, and therefore depends on the amount of the blood component as the counter electrode of the electrode system when detecting the third current value depending on the hematocrit value. This is because both the working electrode and the counter electrode of the first electrode system and the second electrode system used in the step of detecting the first or second current value can be used.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • the first voltage and the second voltage may be the same.
  • the first voltage and the second voltage may be different.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • the first voltage and the second voltage may be the same.
  • the first voltage and the second voltage may be different.
  • the third step may be performed after one or more times of the first step.
  • the second step may be performed once or twice or more.
  • you may perform the said 3rd process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more and the said 2nd process of 1 time or 2 times or more.
  • the third step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer preferably each include a mediator.
  • the mediator is not particularly limited, and examples thereof include ferricyanide, p-benzoquinone, p-benzoquinone derivatives, phenazine methosulfate, methylene blue, ferrocene, and ferrocene derivatives.
  • phenanthrenequinone (9,10-phenanthrenequinone), 3-phenylimino-3H-phenothiazine or ferricyanide (potassium ferricyanide) is preferred.
  • the blending amount of the mediator is not particularly limited and is, for example, 0.1 to 1000 mM, preferably 1 to 500 mM, more preferably 10 to 300 mM per measurement or per biosensor. is there.
  • glucose dehydrogenase oxygenoreductase
  • potassium ferricyanide as the mediator when measuring the glucose level (blood component) in blood (biological sample)
  • the oxidoreductase and mediator come into contact with blood and are dissolved in the blood. Then, an enzymatic reaction proceeds between Glu, which is a substrate in blood, and the oxidoreductase, and the mediator is reduced to produce a ferrocyanide. After completion of this reaction, the reduced mediator is electrochemically oxidized, and a current value depending on Glu in blood is obtained from the current obtained at this time.
  • the second reagent layer further includes an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is appropriately selected according to the blood component to be measured. Examples of the oxidoreductase include glucose oxidase, lactate oxidase, cholesterol oxidase, bilirubin oxidase, glucose dehydrogenase, and lactate dehydrogenase.
  • the oxidoreductase is preferably glucose oxidase and glucose dehydrogenase.
  • the amount of the oxidoreductase is, for example, from 0.01 to 100 U, preferably from 0.05 to 10 U, more preferably from 0.1 to 100 U per biosensor or per measurement. 1-5U.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the second voltage and the second voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the second voltage and the third voltage may have a relationship of the third voltage> the second voltage.
  • the first voltage and the second voltage have a relationship of the first voltage ⁇ the second voltage. Further, in the first method for measuring the amount of blood component, the relationship of application time of the first voltage ⁇ application time of the second voltage may be satisfied.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V
  • the third voltage is, for example, 1. 0 V to 5.0 V, preferably 1.5 V to 4.5 V, more preferably 2.0 V to 4.0 V, for example, the third voltage> the first voltage and, for example, the third voltage>
  • the second voltage is applied, and the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the voltage application time is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second. .
  • the present invention A first electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a first working electrode and a first counter electrode; A third electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a third working electrode and a third counter electrode; A method for measuring the amount of blood components in blood using a biosensor having a fourth electrode system for measuring a current value depending on a hematocrit value having a fourth working electrode and a fourth counter electrode.
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the fourth counter electrode and the third working electrode;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, Using the first counter electrode as the fourth working electrode, Using the first working electrode as the third counter electrode,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. In that case, you may perform the said 1st process of 1 time or 2 times or more after the said 3rd process. In the second method for measuring the amount of blood components, the third step may be performed twice or more.
  • the fourth step may be performed after the first step is performed once or twice or more.
  • the fourth step may be performed after the first step and the third step.
  • the fourth step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fourth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fourth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the fourth step is performed twice or more, the application time of the fourth voltage and the fourth voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fourth voltage may be in a relationship of the fourth voltage> the first voltage.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V
  • the fourth voltage is, for example, 1. 0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V, for example, the third voltage> the first voltage and, for example, the fourth voltage>
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 second, and the third voltage is applied to the third voltage.
  • the voltage application time is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1. 0.3 seconds, the application time of the fourth voltage, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the biosensor further comprises a fourth electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a fourth working electrode and a fourth counter electrode; Using the first counter electrode as the fourth working electrode, Using the second counter electrode as the fourth counter electrode, The method A fourth step of applying a fourth voltage to the fourth electrode system and detecting a fourth current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value, And a method of calculating the amount of the blood component using a fourth current value depending on the hematocrit value (third measurement method of the amount of blood component).
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. In that case, you may perform the said 1st process of 1 time or 2 times or more after the said 3rd process.
  • the third step may be performed after one or more second steps. In that case, you may perform the said 2nd process of 1 time or 2 times or more after the said 3rd process.
  • the third step may be performed twice or more.
  • the fourth step may be performed after one or more times of the first step and one or more times of the second step.
  • the fourth step may be performed after the first step, the second step, and the third step.
  • the fourth step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the second voltage and the second voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fourth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fourth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the fourth step is performed twice or more, the application time of the fourth voltage and the fourth voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fourth voltage may be in a relationship of the fourth voltage> the first voltage.
  • the second voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the fourth voltage may have a relationship of the fourth voltage> the second voltage.
  • the first voltage and the second voltage have a relationship of the first voltage ⁇ the second voltage. Further, in the third method for measuring the amount of blood component, the relationship of application time of the first voltage ⁇ application time of the second voltage may be satisfied.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V
  • the third voltage is, for example, 1. 0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V
  • the fourth voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5V.
  • the time is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 seconds, and the application time of the third voltage.
  • the application time of the fourth voltage is, for example, 0.05 to 1 Seconds, preferably 0.1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the present invention A first electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a first working electrode and a first counter electrode; A third electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a third working electrode and a third counter electrode; A fifth electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a fifth working electrode and a fifth counter electrode; A method for measuring the amount of blood components in blood using a biosensor having a sixth electrode system for measuring a current value depending on a hematocrit value having a sixth working electrode and a sixth counter electrode.
  • a first reagent layer is disposed on the first electrode system;
  • a second reagent layer is disposed on the fifth counter electrode of the fifth electrode system;
  • the first reagent layer and the second reagent layer are spaced apart;
  • the reagent layer is not disposed on the fifth working electrode of the fifth electrode system and the sixth working electrode of the sixth electrode system,
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a reagent for measuring the amount of blood components in the blood, Using the fifth counter electrode as the third working electrode, Using the first working electrode as the third counter electrode, As the sixth counter electrode, any one of the first working electrode and the first counter electrode is used,
  • the method A first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a first current value dependent on the amount of the blood component;
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • the fourth method for measuring the amount of the blood component It is preferable to perform the third step, the fifth step, and the sixth step after the first step.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. Further, the fifth step may perform the first step one or more times. Moreover, you may perform the said 6th process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more. In the first method for measuring the amount of blood components, each of the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fifth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the fifth voltage and the fifth voltage may be the same or different at each time.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the sixth voltage and the sixth voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fifth voltage preferably have a relationship of the fifth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the sixth voltage preferably have a relationship of the sixth voltage> the first voltage.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V
  • the fifth voltage is, for example, 1. 0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V
  • the sixth voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5V.
  • 4.5V, more preferably 2.0-4.0V for example, the third voltage> the first voltage, the fifth voltage> the first voltage, and the sixth voltage> the first voltage.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the voltage application time is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the present invention relates to a fourth method for measuring the amount of blood component,
  • the biosensor further comprises a seventh electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a seventh working electrode and a seventh counter electrode;
  • As the seventh working electrode any one of the fifth working electrode and the sixth working electrode is used, Using the fifth counter electrode as the seventh counter electrode,
  • the method A seventh step of applying a seventh voltage to the seventh electrode system and detecting a seventh current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a third current value that depends on the hematocrit value, a fifth current value that depends on the hematocrit value, and
  • a method for the amount of blood component that is a step of calculating the amount of the blood component using a sixth current value that depends on the hematocrit value
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • the fifth method for measuring the amount of the blood component It is preferable to perform the third step, the fifth step, and the sixth step after the first step.
  • the seventh step before the third step, the fifth step, and the sixth step.
  • the seventh step is performed, and then the first step is further performed.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. Further, the fifth step may perform the first step one or more times. Moreover, you may perform the said 6th process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more. Moreover, you may perform the said 7th process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more.
  • each of the third step, the fifth step, the sixth step, and the seventh step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fifth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the fifth voltage and the fifth voltage may be the same or different at each time.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the sixth voltage and the sixth voltage may be the same or different at each time.
  • the seventh voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the seventh voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, and more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the seventh voltage and the seventh voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fifth voltage may have a relationship of the fifth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the sixth voltage may have a relationship of the sixth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the seventh voltage may have a relationship of the seventh voltage> the first voltage.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V
  • the fifth voltage is, for example, 1. 0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V
  • the sixth voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5V.
  • the seventh voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, and more preferably 2.0 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V.
  • the third voltage> the first voltage, the fifth voltage> the first voltage, the first voltage, Voltage> the first voltage and the seventh voltage> the first voltage, and the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the time is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second, and the application time of the seventh voltage is, for example, 0.05 to The time is 1 second, preferably 0.1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the present invention relates to a fourth method for measuring the amount of blood component
  • the biosensor further comprises a second electrode system for measuring a current value depending on the amount of blood components having a second working electrode and a second counter electrode,
  • the second reagent layer is also disposed on the second electrode system;
  • the method A second step of applying a second voltage to the second electrode system and detecting a second current value depending on the amount of the blood component;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value,
  • a method of calculating the amount of the blood component using a fifth current value that depends on the hematocrit value and a sixth current value that depends on the hematocrit value (sixth method for measuring the amount of blood component) ).
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • the first voltage and the second voltage may be the same.
  • the first voltage and the second voltage may be different.
  • each first voltage may be a different voltage.
  • each first voltage may be the same voltage.
  • each second voltage may be a different voltage.
  • each second voltage may be the same voltage.
  • the first voltage and the second voltage may be the same.
  • the first voltage and the second voltage may be different.
  • the sixth method for measuring the amount of blood component it is preferable to perform the third step, the fifth step, and the sixth step after the first step and the second step.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. Further, the fifth step may perform the first step one or more times. Moreover, you may perform the said 6th process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more.
  • the third step may be performed after one or more second steps.
  • the second step may be performed once or twice or more.
  • you may perform the said 6th process after the said 2nd process of 1 time or 2 times or more.
  • each of the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the second voltage and the second voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fifth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the fifth voltage and the fifth voltage may be the same or different at each time.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the sixth voltage and the sixth voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fifth voltage preferably have a relationship of the fifth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the sixth voltage preferably have a relationship of the sixth voltage> the first voltage.
  • the second voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the fifth voltage preferably have a relationship of the fifth voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the sixth voltage preferably have a relationship of the sixth voltage> the second voltage.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V
  • the third voltage is, for example, 1. 0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V
  • the fifth voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5V.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, and more preferably 2.0 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the first voltage is For example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 seconds
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably Is 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 second
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, More preferably, it is 0.1 to 0.3 seconds
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.5 second. Is .3 seconds.
  • the biosensor further comprises a seventh electrode system for measuring a current value dependent on a hematocrit value having a seventh working electrode and a seventh counter electrode; As the seventh working electrode, any one of the fifth working electrode and the sixth working electrode is used, Using the fifth counter electrode as the seventh counter electrode, The method A seventh step of applying a seventh voltage to the seventh electrode system and detecting a seventh current value depending on the hematocrit value;
  • the step of calculating the amount of the blood component includes a first current value that depends on the amount of the blood component, a second current value that depends on the amount of the blood component, and a third current value that depends on the hematocrit value, A step of calculating the amount of the blood component using a fifth current value that depends on the hematocrit value, a sixth current value that depends on the hematocrit value, and a seventh current value that depends on
  • the seventh method for measuring the amount of the blood component It is preferable to perform the seventh step before the third step, the fifth step, and the sixth step.
  • the seventh step is performed after the first step or two or more times, and then the first step is further performed once or twice or more.
  • the third step may be performed after the first step is performed once or twice or more. Further, the fifth step may perform the first step one or more times. Moreover, you may perform the said 6th process after the said 1st process of 1 time or 2 times or more.
  • the third step may be performed after one or more of the second steps.
  • the second step may be performed once or twice or more.
  • you may perform the said 6th process after the said 2nd process of 1 time or 2 times or more.
  • the third step may be performed after one or more of the seventh steps. Further, the fifth step may perform the seventh step one or more times. Moreover, you may perform the said 6th process after the said 7th process of 1 time or 2 times or more.
  • each of the third step, the fifth step, the sixth step, and the seventh step may be performed twice or more.
  • the first reagent layer and the second reagent layer each include a mediator.
  • the mediator is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first reagent layer and the second reagent layer further include an oxidoreductase.
  • the oxidoreductase is as described in the first method for measuring the amount of blood components.
  • the first voltage is, for example, 0.1V to 1.0V, preferably 0.2V to 0.8V, and more preferably 0.3V to 0.6V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the first voltage and the first voltage may be the same or different at each time.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, and more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the second voltage and the second voltage may be the same or different at each time.
  • the third voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the third voltage and the third voltage may be the same or different at each time.
  • the fifth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the fifth voltage and the fifth voltage may be the same or different at each time.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the sixth voltage and the sixth voltage may be the same or different at each time.
  • the seventh voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0.1 to 0.3 second.
  • the application time of the seventh voltage and the seventh voltage may be the same or different at each time.
  • the first voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the fifth voltage preferably have a relationship of the fifth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the sixth voltage preferably have a relationship of the sixth voltage> the first voltage.
  • the first voltage and the seventh voltage preferably have a relationship of the seventh voltage> the first voltage.
  • the second voltage and the third voltage have a relationship of the third voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the fifth voltage preferably have a relationship of the fifth voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the sixth voltage preferably have a relationship of the sixth voltage> the second voltage.
  • the second voltage and the seventh voltage preferably have a relationship of the seventh voltage> the second voltage.
  • the relationship of application time of the first voltage> application time of the third voltage may be satisfied.
  • the application time of the first voltage may be greater than the application time of the fourth voltage.
  • the application time of the first voltage may be greater than the application time of the sixth voltage.
  • the application time of the first voltage may be greater than the application time of the seventh voltage.
  • the relationship of application time of the second voltage> application time of the third voltage may be satisfied.
  • the application time of the second voltage may be greater than the application time of the fourth voltage.
  • the application time of the second voltage may be greater than the application time of the sixth voltage.
  • the application time of the second voltage may be greater than the application time of the seventh voltage.
  • the first voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V.
  • the second voltage is, for example, 0.1 V to 1.0 V, preferably 0.2 V to 0.8 V, more preferably 0.3 V to 0.6 V
  • the third voltage is, for example, 1. 0V to 5.0V, preferably 1.5 to 4.5V, more preferably 2.0 to 4.0V
  • the fifth voltage is, for example, 1.0V to 5.0V, preferably 1.5V.
  • the sixth voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.5 V, and more preferably 2.0 to 4.5 V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the seventh voltage is, for example, 1.0 V to 5.0 V, preferably 1.5 to 4.V. V, more preferably 2.0 to 4.0 V.
  • the application time of the first voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the second voltage is, for example, 0.05 to 2 seconds, preferably 0.1 to 1 second, more preferably 0.1 to 0.3 seconds.
  • the application time of the third voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0. 1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds
  • the application time of the fifth voltage is, for example, 0.05 to 1 second. It is preferably 0.1 to 0.5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds
  • the application time of the sixth voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.00.
  • the application time of the seventh voltage is, for example, 0.05 to 1 second, preferably 0.1 to 0.5 second, more preferably 0. 5 seconds, more preferably 0.1 to 0.3 seconds. 1 to 0.3 seconds.
  • the biosensor used in the blood component measurement method of the present invention includes a predetermined electrode system as described above. Furthermore, this biosensor has an insulating substrate on which each electrode system and a channel for introducing blood into each electrode system are formed, and one end of the channel is formed outside the biosensor. It is preferable that the blood supply port is opened.
  • the blood supply port may be one, the flow channel may be branched in the middle, and the end of each branched flow channel may be in communication with the analysis unit. .
  • the electrode system may be located in the middle of the flow path, and another electrode system may be located behind the electrode system.
  • the biosensor used in the blood component measurement method of the present invention preferably further includes a spacer and a cover, and the cover is disposed on the insulating substrate via the spacer.
  • the reagent part contains a mediator, or a mediator and an oxidoreductase
  • Examples of the enzyme stabilizer include sugar alcohol.
  • Examples of the sugar alcohol include, for example, sorbitol, maltitol, xylitol, mannitol, lactitol, reduced palatinose, arabinitol, glycerol, ribitol, galactitol, sedheptitol, perseitol, boremitol, suffler, polygallitol, iditol, tallitol, allitol, isitol.
  • Reduced starch saccharified products chain polyhydric alcohols such as isilitol, and cyclic sugar alcohols. Further, these sugar alcohols may be stereoisomers, substitutes or derivatives.
  • the compounding amount of the enzyme stabilizer is, for example, in the range of 0.1 to 500 mM, preferably in the range of 0.5 to 100 mM, more preferably 1 to 1 per measurement or per sensor. It is in the range of 50 mM.
  • the crystal homogenizing agent is for homogenizing the crystal state of the reagent part, and examples thereof include amino acids.
  • the amino acids include glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, serine, threonine, methionine, asparagine, glutamine, arginine, lysine, histidine, phenylalanine, tryptophan, proline, sarcosine, betaine, taurine, salts thereof, substitution Bodies and derivatives. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, glycine, serine, proline, threonine, lysine and taurine are preferable, and taurine is more preferable.
  • the blending amount of the crystal homogenizing agent is, for example, 0.1 to 1000 mM, preferably 10 to 500 mM, more preferably 20 to 200 mM per measurement or per sensor.
  • the biosensor used in the blood component measurement method of the present invention further has a blood detection electrode, and the blood detection electrode is located behind the at least one of the electrode systems from the blood supply port, It is preferable that the blood detection electrode can reliably detect that blood has been introduced into at least one of the electrode systems. More preferably, the blood detection electrode is located at the end of each electrode system. The blood detection electrode may be used as one of the electrode systems.
  • FIG. 2 is a perspective view showing an example of a measurement apparatus in a state in which a biosensor used in the measurement method of the present invention is mounted.
  • this measuring apparatus 2 has a sensor mounting opening 5 at one end, and the sensor 3 is mounted and held therein.
  • Reference numeral 10 denotes a blood supply port of the sensor 3.
  • the measuring device 2 has a display unit 4 in the approximate center, where the measurement result is displayed.
  • FIG. 62 shows an example of an electric block diagram of a measuring apparatus in which a biosensor used in the measuring method of the present invention is mounted.
  • a voltage application unit 237 for applying a voltage and a current-voltage conversion unit 238 are connected to the input terminal unit 206 of the measurement device according to an embodiment of the present invention.
  • a voltage is applied to the voltage application unit 237 from the control unit 239, and this voltage is applied to a desired electrode among the electrode systems and blood component introduction detection electrodes of the biosensor 3 through the input terminal unit 206 for a certain period of time. Is done.
  • the current flowing between the electrodes in the biosensor 3 by this voltage application is converted into a voltage by the current-voltage converter 238, and then this voltage is digitally converted by the A / D converter 230. Is compared with the threshold value by the judging means 231.
  • the display unit 232 connected to the control unit 239 displays the amount of blood components detected by the biosensor 3 and the determination result by the determination unit 231.
  • reference numeral 233 in FIG. 62 denotes a power supply unit for supplying power to each unit.
  • Reference numeral 234 denotes a memory provided with a table composed of hematocrit values and applied voltages at the time of measuring blood components, application time, and the like, and a calibration curve and a calibration table created in advance from the environmental temperature.
  • a clock 235 is connected to the control unit 239, and the control unit 239 is configured to execute various control operations by using the time and time of the clock 235. Furthermore, a correction means 236 is provided in the control unit 239, and the measurement accuracy of the blood component amount is improved by correcting the measured blood component amount by the hematocrit value.
  • Embodiment 1A is an example of a first method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • FIG. 3, FIG. 4, FIG. 5A and FIG. 5B show an example of a biosensor (hereinafter sometimes referred to as “first biosensor”) used in the measurement method of the present invention.
  • 3 is an exploded perspective view of the first biosensor
  • FIG. 4 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG. 3
  • FIG. 5A is a plan view of the biosensor of FIG. 3
  • FIG. It is an enlarged view of the A section in FIG.
  • the same parts are denoted by the same reference numerals.
  • the first biosensor is a sensor for measuring glucose as a blood component.
  • this first biosensor has six electrodes 12, 13, 14, 15, 16 and 17 formed on an insulating substrate 101. These electrodes can be switched between a working electrode and a counter electrode.
  • the surface of the electrode 17 is covered with a polymer material such as CMC.
  • the first reagent layer 6 is disposed so as to cover a part of the electrodes 12 and 16, and the second reagent layer 7 is disposed so as to cover a part of the electrodes 13, 14 and 15.
  • the first reagent layer 6 and the second reagent layer 7 are spaced apart.
  • the second reagent layer 7 includes a reagent for measuring the amount of blood components in blood, preferably an oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), more preferably an oxidoreductase and a mediator (eg, potassium ferricyanide).
  • a mediator eg, potassium ferricyanide
  • an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer and the like are included.
  • the first reagent layer preferably includes a mediator, and includes an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer, and the like as optional components.
  • a cover 103 is disposed via a spacer 102 leaving one end (right end in the figure).
  • a flow path 8 including an insulating substrate 101, a spacer 102, and a cover 103 is formed to introduce blood into each electrode (12, 13, 14, 15, 16, and 17).
  • the front end of the flow path 8 extends to the other end (left end in the figure) of the first biosensor, and serves as a blood supply port 10 that opens to the outside.
  • Each of the six electrodes (12, 13, 14, 15, 16, and 17) is connected to a lead, and these leads extend to the one end side (right end in the figure), The tip is exposed without being covered by the cover.
  • an air hole 9 is formed in a portion corresponding to the right end portion of the flow path 8 (on the second reagent layer 7 or on the electrode 14). Further, the electrode 17, the first reagent layer 6, and the second reagent layer 7 are arranged in the flow path 8 so as to be separated from each other.
  • the material of the insulating substrate is not particularly limited, and for example, polyethylene terephthalate (PET), polycarbonate (PC), polyimide (PI), polyethylene (PE), polypropylene (PP), polystyrene (PS), poly (polystyrene). Vinyl chloride (PVC), polyoxymethylene (POM), monomer cast nylon (MC), polybutylene terephthalate (PBT), methacrylic resin (PMMA), ABS resin (ABS), glass, etc. can be used.
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • PET polyethylene terephthalate
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • the size of the insulating substrate is not particularly limited, and is, for example, a total length of 5 to 100 mm, a width of 2 to 50 mm, and a thickness of 0.05 to 2 mm, preferably a total length of 7 to 50 mm, a width of 3 to 20 mm, and a thickness of 0.1.
  • the total length is 10 to 30 mm
  • the width is 3 to 10 mm
  • the thickness is 0.1 to 0.6 mm.
  • the material and size of the insulating substrate are the same in the embodiments described later.
  • the electrodes and leads on the insulating substrate can be formed, for example, by forming a conductive layer by sputtering or vapor deposition using gold, platinum, palladium or the like as a material, and processing this into a specific electrode pattern by laser.
  • the laser for example, a YAG laser, a CO 2 laser, an excimer laser or the like can be used. This also applies to the embodiments described later.
  • the second reagent layer 7 is formed as follows. For example, 0.1 to 5 U / sensor of oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide), 1 to 50 mM of enzyme stabilizer (eg, maltitol), crystal homogenization An aqueous solution containing 20 to 200 mM of an agent (such as taurine) is dropped into the circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 7 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 7 is formed so as to cover a part of the electrodes 13, 14 and 15.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the first reagent layer 6 is formed as follows. For example, an aqueous solution containing 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide) and 20 to 200 mM of a crystal homogenizing agent (eg, taurine) is dropped into a circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 6 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 6 is formed so as to cover a part of the electrodes 12 and 16.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the material of the spacer 102 is not particularly limited, and for example, the same material as that of the insulating substrate can be used.
  • the size of the spacer is not particularly limited, and is, for example, 5 to 100 mm in total length, 2 to 50 mm in width, and 0.01 to 1 mm in thickness, and preferably 7 to 50 mm in total length, 3 to 20 mm in width, and 0.
  • the thickness is from 05 to 0.5 mm, more preferably from 10 to 30 mm in total length, from 3 to 10 mm in width, and from 0.05 to 0.25 mm in thickness.
  • the spacer of this example is formed with an I-shaped notch that serves as a flow channel for blood introduction.
  • the size of the spacer is, for example, 0.5 to 8 mm in total length, 0.1 to 5 mm in width,
  • the total length is preferably 1 to 10 mm and the width is 0.2 to 3 mm. More preferably, the total length is 1 to 5 mm and the width is 0.5 to 2 mm.
  • This notch may be formed by, for example, drilling with a laser, a drill, or the like, or may be formed by using a mold that can form a notch when the spacer is formed.
  • the material and size of the spacer and the notch are the same in the embodiments described later.
  • the material of the cover 103 is not particularly limited.
  • the same material as the insulating substrate can be used.
  • the portion of the cover corresponding to the ceiling of the channel for introducing blood is subjected to a hydrophilic treatment.
  • the hydrophilic treatment include a method of applying a surfactant and a method of introducing a hydrophilic functional group such as a hydroxyl group, a carbonyl group, or a carboxyl group into the cover surface by plasma treatment or the like.
  • a layer made of a surfactant such as lecithin may be formed on the reagent layer.
  • the size of the cover is not particularly limited.
  • the total length is 5 to 100 mm, the width is 3 to 50 mm, and the thickness is 0.01 to 0.5 mm.
  • the total length is 10 to 50 mm, the width is 3 to 20 mm, and the thickness is 0.05 to 0.25 mm, and more preferably.
  • the total length is 15 to 30 mm, the width is 5 to 10 mm, and the thickness is 0.05 to 0.1 mm.
  • Air holes 9 are preferably formed in the cover, and the shape is, for example, a circle, an ellipse, or a polygon.
  • the size is, for example, a maximum diameter of 0.01 to 10 mm, preferably a maximum diameter of 0.05 to 5 mm, and more preferably a maximum diameter of 0.1 to 2 mm.
  • the air holes may be formed by, for example, drilling with a laser or a drill, or may be formed using a mold that can form an air vent when the cover is formed.
  • the material and size of the cover and the air holes are the same in the embodiments
  • the first biosensor can be manufactured by stacking and integrating the insulating substrate 101, the spacer 102, and the cover 103 in this order.
  • the three members are integrated by bonding with an adhesive or heat fusion.
  • the adhesive include epoxy adhesives, acrylic adhesives, polyurethane adhesives, thermosetting adhesives (hot melt adhesives, etc.), UV curable adhesives, and the like. This also applies to the embodiments described later.
  • the measurement of the blood component amount, for example, the blood glucose level, using this first biosensor is performed as follows. First, puncture your fingertips with a special lancet and let it bleed. Meanwhile, the first biosensor is set in a dedicated measuring device (meter). A blood supply port of the first biosensor set in the measuring device is brought into contact with the bleeding blood, and blood is introduced into the first biosensor by capillary action. The analysis by the first biosensor is performed by the following steps.
  • electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F.
  • FIG. 14 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, and the third electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the second voltage to apply a voltage to the second electrode system. Apply (second step).
  • the blood to be measured is introduced into the first biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the second voltage is applied between the second electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode G as the counter electrode).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step.
  • This second voltage is 300 mV to 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the second current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, six times.
  • each second voltage may be a different voltage. This is because the influence of interfering substances that react at different voltages can be seen.
  • the voltage value and application time of the first voltage are controlled, and the first electrode system (including the electrode C as the working electrode, the electrode D and the electrode E as the counter electrode) is used.
  • a voltage is applied (first step).
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step.
  • This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the second step, the second step, the first step, and the second step are performed in order. In the case where the first step is performed twice or more, each first voltage may be the same voltage. This is because, for example, the transition of the response value (current value) on the time axis can be observed.
  • the first step is performed twice or more, Performing the second step twice or more, The second step and the first step may be performed alternately.
  • the first step and the second step may be interchanged. That is, in the example in FIG. 12, the second step is performed first, but the first step may be performed first.
  • the second current value depending on the amount is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and the application time of the third voltage after the current value measurement step (first step and second step) depending on the amount of blood components, A voltage (third step) is applied to the electrode system.
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • the voltage application indicated by “Hct-3” is the voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the current value depending on the third hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the electrode F on which the second reagent layer and the third reagent layer are not arranged is not used.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the blood component Get the amount of is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance.
  • the obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the first biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring device is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 1B is an example of a first method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • the electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F. Used as FIG. 17 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, and the third electrode system.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the second voltage is applied between the second electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode G as the counter electrode).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step.
  • This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the second current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, six times.
  • the voltage value and application time of the first voltage are controlled to apply a voltage to the first electrode system (first step).
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step.
  • This first voltage is 300 to 600 mV.
  • the first step of applying a first voltage to the first electrode system and detecting a current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the current value measurement process (first process and second process) depending on the amount of blood components, A voltage (third step) is applied to the electrode system.
  • This Embodiment 1B is the same as Embodiment 1A except that the current value measurement step (first step and second step) depending on the amount of blood components is performed after the third step. .
  • the electrode used as the counter electrode of the first electrode system (Glu-1) and the second electrode system (Glu-2) shown in FIG. 17 is used as the working electrode of the third electrode system (Hct-3).
  • a counter electrode a current value depending on the hematocrit value can be detected.
  • the electrode D is used as the working electrode of the third electrode system (Hct-3) and the electrode G is used as the counter electrode, but the electrode E, which is one of the counter electrodes of the first electrode system, is also used in the third electrode system. May be used as a working electrode or a counter electrode.
  • the electrode used as the counter electrode of the first electrode system (Glu-1) and the second electrode system (Glu-2) is used as the counter electrode of the third electrode system (Hct-3), it is affected by glucose measurement. Is small, and therefore, the third current value depending on the hematocrit value is detected during the first step and the second step for detecting the first and second current values depending on the amount of the blood component. A third step can be performed.
  • Embodiment 1C is an example of a first method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • FIG. 6, FIG. 7, FIG. 8A and FIG. 8B show another example of a biosensor used in the measurement method of the present invention (hereinafter sometimes referred to as “second biosensor”).
  • 6 is an exploded perspective view of the second biosensor
  • FIG. 7 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG. 6
  • FIG. 8A is a plan view of the biosensor of FIG. 6,
  • FIG. It is an enlarged view of the B section in FIG.
  • the second biosensor is a sensor for measuring glucose as a blood component.
  • this second biosensor has five electrodes 42, 43, 44, 45 and 46 formed on an insulating substrate 111. These electrodes can be switched between a working electrode and a counter electrode. The surfaces of the electrodes 42, 43, 44, 45 and 46 are coated with a polymer material such as CMC.
  • a first reagent layer 36 is disposed so as to cover a part of the electrodes 42 and 46, and a second reagent layer 37 is disposed so as to cover a part of the electrodes 43, 44 and 45.
  • the first reagent layer 36 and the second reagent layer 37 are arranged apart from each other.
  • the first reagent layer contains a reagent for measuring the amount of blood components in blood, preferably an oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), more preferably an oxidoreductase and a mediator (eg, potassium ferricyanide), As an optional component, an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer and the like are included.
  • the second reagent layer includes a reagent for measuring the amount of blood components in blood, preferably an oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), more preferably an oxidoreductase and a mediator (eg, potassium ferricyanide).
  • an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer and the like are included.
  • a cover 103 is disposed via a spacer 102, leaving one end (the right end in the figure).
  • a flow path 8 including an insulating substrate 111, a spacer 102, and a cover 103 is formed in order to introduce blood into each electrode (42, 43, 44, 45 and 46).
  • the front end of the flow path 8 extends to the other end (the left end in the figure) of the second biosensor, and serves as a blood supply port 10 that opens to the outside.
  • Each of the five electrodes (42, 43, 44, 45, and 46) is connected to a lead, and these leads extend to the one end side (the right end in the figure), and the tip of the lead Is exposed without being covered by the cover.
  • an air hole 9 is formed in a portion (on the second reagent layer 37 or on the electrode 44) corresponding to the right end portion of the flow path 8. Further, the first reagent layer 36 and the second reagent layer 37 are arranged in the channel 8 so as to be separated from each other.
  • the material of the insulating substrate is not particularly limited, and for example, polyethylene terephthalate (PET), polycarbonate (PC), polyimide (PI), polyethylene (PE), polypropylene (PP), polystyrene (PS), poly (polystyrene). Vinyl chloride (PVC), polyoxymethylene (POM), monomer cast nylon (MC), polybutylene terephthalate (PBT), methacrylic resin (PMMA), ABS resin (ABS), glass, etc. can be used.
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • PET polyethylene terephthalate
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • the size of the insulating substrate is not particularly limited, and is, for example, a total length of 5 to 100 mm, a width of 2 to 50 mm, and a thickness of 0.05 to 2 mm, preferably a total length of 7 to 50 mm, a width of 3 to 20 mm, and a thickness of 0.1.
  • the total length is 10 to 30 mm
  • the width is 3 to 10 mm
  • the thickness is 0.1 to 0.6 mm.
  • the material and size of the insulating substrate are the same in the embodiments described later.
  • the electrodes and leads on the insulating substrate can be formed, for example, by forming a conductive layer by sputtering or vapor deposition using gold, platinum, palladium or the like as a material, and processing this into a specific electrode pattern by laser.
  • the laser for example, a YAG laser, a CO 2 laser, an excimer laser or the like can be used. This also applies to the embodiments described later.
  • the second reagent layer 37 is formed as follows. For example, 0.1 to 5 U / sensor of oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide), 1 to 50 mM of enzyme stabilizer (eg, maltitol), crystal homogenization An aqueous solution containing 20 to 200 mM of an agent (such as taurine) is dropped into the circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 37 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 37 is formed so as to cover a part of the electrodes 43, 44 and 45.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the first reagent layer 36 is formed as follows. For example, an aqueous solution containing 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide) and 20 to 200 mM of a crystal homogenizing agent (eg, taurine) is dropped into a circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 36 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 36 is formed so as to cover a part of the electrodes 42 and 46.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the material of the spacer 102 is not particularly limited, and for example, the same material as that of the insulating substrate can be used.
  • the size of the spacer is not particularly limited, and is, for example, 5 to 100 mm in total length, 2 to 50 mm in width, and 0.01 to 1 mm in thickness, and preferably 7 to 50 mm in total length, 3 to 20 mm in width, and 0.
  • the thickness is from 05 to 0.5 mm, more preferably from 10 to 30 mm in total length, from 3 to 10 mm in width, and from 0.05 to 0.25 mm in thickness.
  • the spacer of this example is formed with an I-shaped notch that serves as a flow channel for blood introduction.
  • the size of the spacer is, for example, 0.5 to 8 mm in total length, 0.1 to 5 mm in width,
  • the total length is preferably 1 to 10 mm and the width is 0.2 to 3 mm. More preferably, the total length is 1 to 5 mm and the width is 0.5 to 2 mm.
  • This notch may be formed by, for example, drilling with a laser, a drill, or the like, or may be formed by using a mold that can form a notch when the spacer is formed.
  • the material and size of the spacer and the notch are the same in the embodiments described later.
  • the material of the cover 103 is not particularly limited.
  • the same material as the insulating substrate can be used.
  • the portion of the cover corresponding to the ceiling of the channel for introducing blood is subjected to a hydrophilic treatment.
  • the hydrophilic treatment include a method of applying a surfactant and a method of introducing a hydrophilic functional group such as a hydroxyl group, a carbonyl group, or a carboxyl group into the cover surface by plasma treatment or the like.
  • a layer made of a surfactant such as lecithin may be formed on the reagent layer.
  • the size of the cover is not particularly limited.
  • the total length is 5 to 100 mm, the width is 3 to 50 mm, and the thickness is 0.01 to 0.5 mm.
  • the total length is 10 to 50 mm, the width is 3 to 20 mm, and the thickness is 0.05 to 0.25 mm, and more preferably.
  • the total length is 15 to 30 mm, the width is 5 to 10 mm, and the thickness is 0.05 to 0.1 mm.
  • Air holes 9 are preferably formed in the cover, and the shape is, for example, a circle, an ellipse, or a polygon.
  • the size is, for example, a maximum diameter of 0.01 to 10 mm, preferably a maximum diameter of 0.05 to 5 mm, and more preferably a maximum diameter of 0.1 to 2 mm.
  • the air holes may be formed by, for example, drilling with a laser or a drill, or may be formed using a mold that can form an air vent when the cover is formed.
  • the material and size of the cover and the air holes are the same in the embodiments
  • the second biosensor can be manufactured by stacking and integrating the insulating substrate 111, the spacer 102, and the cover 103 in this order.
  • the three members are integrated by bonding with an adhesive or heat fusion.
  • the adhesive include epoxy adhesives, acrylic adhesives, polyurethane adhesives, thermosetting adhesives (hot melt adhesives, etc.), UV curable adhesives, and the like. This also applies to the embodiments described later.
  • the measurement of the amount of blood component, for example, blood glucose level, using this second biosensor is performed as follows. First, puncture your fingertips with a special lancet and let it bleed. On the other hand, the second biosensor is set in a dedicated measuring device (meter). A blood supply port of the second biosensor set in the measuring device is brought into contact with the blood that has bleed, and blood is introduced into the sensor by capillary action. The analysis by the second biosensor is performed by the following steps.
  • the electrode 42 in the second biosensor is used as the electrode A, the electrode 43 as the electrode C, the electrode 44 as the electrode D, the electrode 45 as the electrode E, and the electrode 46 as the electrode G.
  • FIG. 19 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, and the third electrode system.
  • FIG. 18 is a table showing the electrodes, applied voltage, application timing, and application time in the voltage application pattern in Embodiment 1C.
  • Embodiment 1C is the same as Embodiment 1B except that the second biosensor is used instead of the first biosensor, the electrode G is used as the working electrode as the third electrode system, and the electrode E is used as the counter electrode.
  • the electrode used as the counter electrode of the first electrode system (Glu-1) and the second electrode system (Glu-2) shown in FIG. 19 is used as the working electrode of the third electrode system (Hct-3).
  • a current value depending on the hematocrit value can be detected.
  • the electrode G is used as the working electrode of the third electrode system (Hct-3) and the electrode E is used as the counter electrode, but the electrode D, which is one of the counter electrodes of the first electrode system, is also used in the third electrode system. May be used as a working electrode or a counter electrode.
  • the electrode used as the counter electrode of the first electrode system (Glu-1) and the second electrode system (Glu-2) is used as the counter electrode of the third electrode system (Hct-3), it is affected by glucose measurement. Is small, and therefore, the third current value depending on the hematocrit value is detected during the first step and the second step for detecting the first and second current values depending on the amount of the blood component. A third step can be performed.
  • Embodiment 2 is an example of the 2nd measuring method of the quantity of the blood component of this invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • the electrode 12 in the first biosensor is the electrode A
  • the electrode 13 is the electrode C
  • the electrode 14 is the electrode D
  • the electrode 15 is the electrode E
  • the electrode 16 is the electrode G
  • the electrode 17 is the electrode F.
  • FIG. 22 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the fourth electrode system, and the third electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the measuring device 2 starts measuring current when blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E).
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the current value depending on the amount of blood component obtained by applying the first voltage to the first electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood component.
  • the measurement device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the current value measurement step (first step) depending on the amount of blood components, and the third electrode system (action A voltage (third step) is applied to the electrode A as the electrode and the electrode C as the counter electrode.
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system.
  • the voltage application indicated by “Hct-3” is the voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fourth voltage are controlled, and the voltage is applied to the fourth electrode system (including the electrode D as the working electrode and the electrode G as the counter electrode).
  • the voltage application indicated by “Hct-4” is the voltage application in the fourth step.
  • This fourth voltage is 2500 mV.
  • the fourth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fourth voltage to the fourth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • the electrode F on which the second reagent layer and the third reagent layer are not arranged is not used.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • Get the amount of blood components This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance.
  • the obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 3A is an example of a third method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • the electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F.
  • FIG. 25 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the fourth electrode system, and the third electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step.
  • the first voltage is 200 mV to 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • each first voltage may be a different voltage. This is because the influence of interfering substances that react at different voltages can be seen.
  • step B separately from the first step, the voltage value and application time of the second voltage are controlled to apply a voltage to the second electrode system (second step).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step.
  • This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying a second voltage to the second electrode system and detecting a current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the first step, the second step, the first step, and the second step are performed in order.
  • each second voltage may be the same voltage. This is because, for example, the transition of the response value (current value) on the time axis can be observed.
  • the first step is performed twice or more, Performing the second step twice or more, The second step and the first step may be performed alternately.
  • the first step and the second step may be interchanged. That is, in the example in FIG. 24, the first step is performed first, but the second step may be performed first.
  • the second current value depending on the amount is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the measuring device 2 includes a first current value measurement step depending on the amount of blood components (first step) and a second current value measurement step depending on the amount of blood components (second step). Thereafter, the voltage value and application time of the third voltage are controlled, and a voltage (third step) is applied to the third electrode system.
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • voltage application indicated by “Hct-3” is voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fourth voltage are controlled to apply a voltage to the fourth electrode system (fourth step).
  • voltage application indicated by “Hct-2” is voltage application in the fourth step.
  • This fourth voltage is 2500 mV.
  • the fourth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fourth voltage to the fourth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • the electrode F on which the second reagent layer and the third reagent layer are not arranged is not used.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the third current value depending on the Hct value obtained in the step C, the fourth current value depending on the Hct value, the first current value depending on the blood component obtained in the step B, and the blood component is obtained using the dependent second current value. This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance. The obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 3B is an example of a third method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • the electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F.
  • FIG. 28 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, and the fourth electrode system.
  • the measurement device 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step. This first voltage is 400 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at a timing different from the first process, and a voltage is applied to the second electrode system (second process).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step. This second voltage is 400 mV.
  • the second step of applying a second voltage to the second electrode system and detecting a current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • Embodiment 3B is the same as Embodiment 3A except that the first voltage and the second voltage are constant.
  • Embodiment 3C is an example of a third method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F.
  • FIG. 31 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, and the fourth electrode system.
  • the measurement device 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step. This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • step B simultaneously with the first step, the voltage value and application time of the second voltage are controlled to apply a voltage to the second electrode system (second step).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step. This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • Embodiment 3C is the same as Embodiment 3B except that the first step and the second step are at the same timing.
  • Embodiment 3D is an example of a third method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the first biosensor used in Embodiment 1A.
  • the electrode 12 in the first biosensor is electrode A
  • electrode 13 is electrode C
  • electrode 14 is electrode D
  • electrode 15 is electrode E
  • electrode 16 is electrode G
  • electrode 17 is electrode F.
  • FIG. 34 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, and the fourth electrode system.
  • the measuring device 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step. This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at the same time as the first process or at a different timing to apply a voltage to the second electrode system (second process).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step. This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • Embodiment 3D is the same as Embodiment 3B except that a part of the first voltage and the second voltage have the same timing.
  • Embodiment 4 is an example of the 4th measuring method of the quantity of the blood component of this invention.
  • FIG. 9, FIG. 10, FIG. 11A, and FIG. 11B show another example of a biosensor used in the measurement method of the present invention (hereinafter sometimes referred to as “third biosensor”).
  • 9 is an exploded perspective view of the third biosensor
  • FIG. 10 is a cross-sectional view of the biosensor of FIG. 9
  • FIG. 11A is a plan view of the biosensor of FIG. 9, and FIG. It is an enlarged view of the C section in FIG.
  • this biosensor is a sensor for measuring glucose as a blood component.
  • this sensor has six electrodes 72, 73, 74, 75, 76, and 77 formed on an insulating substrate 121. These electrodes can be switched between a working electrode and a counter electrode. The surfaces of the electrodes 72, 73, 74, 75, 76 and 77 are coated with a polymer material such as CMC.
  • a first reagent layer 66 is disposed so as to cover a part of the electrodes 72 and 76, and a second reagent layer 67 is disposed so as to cover a part of the electrodes 73, 74 and 75. Neither the first reagent layer 66 nor the second reagent layer 67 is disposed on the electrode 77.
  • the first reagent layer 66 and the second reagent layer 67 are arranged apart from each other.
  • the second reagent layer contains a reagent for measuring the amount of blood components in blood, preferably an oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), more preferably an oxidoreductase and a mediator (eg, potassium ferricyanide), As an optional component, an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer and the like are included.
  • the third reagent layer includes a reagent for measuring the amount of blood components in blood, preferably an oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), more preferably an oxidoreductase and a mediator (eg, potassium ferricyanide).
  • an enzyme stabilizer, a crystal homogenizer and the like are included.
  • a cover 103 is disposed via a spacer 102 leaving one end (right end in the figure).
  • a channel 8 including an insulating substrate 121, a spacer 102, and a cover 103 is formed in order to introduce blood into each electrode (72, 73, 74, 75, 76, and 77).
  • the tip of the flow path 8 extends to the other end (left end in the figure) of the third biosensor, and serves as a blood supply port 10 that opens to the outside.
  • Each of the six electrodes (72, 73, 74, 75, 76 and 77) is connected to a lead, and these leads extend to the one end side (right end in the figure), The tip is exposed without being covered by the cover.
  • an air hole 9 is formed in a portion (on the second reagent layer 67 or on the electrode 74) corresponding to the right end portion of the flow path 8. Further, the first reagent layer 66 and the second reagent layer 67 are arranged in the channel 8 so as to be separated from each other.
  • the material of the insulating substrate is not particularly limited, and for example, polyethylene terephthalate (PET), polycarbonate (PC), polyimide (PI), polyethylene (PE), polypropylene (PP), polystyrene (PS), poly (polystyrene). Vinyl chloride (PVC), polyoxymethylene (POM), monomer cast nylon (MC), polybutylene terephthalate (PBT), methacrylic resin (PMMA), ABS resin (ABS), glass, etc. can be used.
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • PET polyethylene terephthalate
  • PET polyethylene terephthalate
  • PC polycarbonate
  • PI polyimide
  • the size of the insulating substrate is not particularly limited, and is, for example, a total length of 5 to 100 mm, a width of 2 to 50 mm, and a thickness of 0.05 to 2 mm, preferably a total length of 7 to 50 mm, a width of 3 to 20 mm, and a thickness of 0.1.
  • the total length is 10 to 30 mm
  • the width is 3 to 10 mm
  • the thickness is 0.1 to 0.6 mm.
  • the material and size of the insulating substrate are the same in the embodiments described later.
  • the electrodes and leads on the insulating substrate can be formed, for example, by forming a conductive layer by sputtering or vapor deposition using gold, platinum, palladium or the like as a material, and processing this into a specific electrode pattern by laser.
  • the laser for example, a YAG laser, a CO 2 laser, an excimer laser or the like can be used. This also applies to the embodiments described later.
  • the second reagent layer 67 is formed as follows. For example, 0.1 to 5 U / sensor of oxidoreductase (eg, glucose dehydrogenase), 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide), 1 to 50 mM of enzyme stabilizer (eg, maltitol), crystal homogenization An aqueous solution containing 20 to 200 mM of an agent (such as taurine) is dropped into the circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 67 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 7 is formed so as to cover a part of the electrodes 73, 74 and 75.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the first reagent layer 66 is formed as follows. For example, an aqueous solution containing 10 to 200 mM of mediator (eg, potassium ferricyanide) and 20 to 200 mM of a crystal homogenizing agent (eg, taurine) is dropped into a circular slit and dried. By installing this slit portion, the spread of the dropped aqueous solution can be suppressed, and the reagent layer 66 can be arranged at a more accurate position. Thereby, the reagent layer 6 is formed so as to cover a part of the electrodes 72 and 76.
  • the drying may be, for example, natural drying or forced drying using warm air.
  • the material of the spacer 102 is not particularly limited, and for example, the same material as that of the insulating substrate can be used.
  • the size of the spacer is not particularly limited, and is, for example, 5 to 100 mm in total length, 2 to 50 mm in width, and 0.01 to 1 mm in thickness, and preferably 7 to 50 mm in total length, 3 to 20 mm in width, and 0.
  • the thickness is from 05 to 0.5 mm, more preferably from 10 to 30 mm in total length, from 3 to 10 mm in width, and from 0.05 to 0.25 mm in thickness.
  • the spacer of this example is formed with an I-shaped notch that serves as a flow channel for blood introduction.
  • the size of the spacer is, for example, 0.5 to 8 mm in total length, 0.1 to 5 mm in width,
  • the total length is preferably 1 to 10 mm and the width is 0.2 to 3 mm. More preferably, the total length is 1 to 5 mm and the width is 0.5 to 2 mm.
  • This notch may be formed by, for example, drilling with a laser, a drill, or the like, or may be formed by using a mold that can form a notch when the spacer is formed.
  • the material and size of the spacer and the notch are the same in the embodiments described later.
  • the material of the cover 103 is not particularly limited.
  • the same material as the insulating substrate can be used.
  • the portion of the cover corresponding to the ceiling of the channel for introducing blood is subjected to a hydrophilic treatment.
  • the hydrophilic treatment include a method of applying a surfactant and a method of introducing a hydrophilic functional group such as a hydroxyl group, a carbonyl group, or a carboxyl group into the cover surface by plasma treatment or the like.
  • a layer made of a surfactant such as lecithin may be formed on the reagent layer.
  • the size of the cover is not particularly limited.
  • the total length is 5 to 100 mm, the width is 3 to 50 mm, and the thickness is 0.01 to 0.5 mm.
  • the total length is 10 to 50 mm, the width is 3 to 20 mm, and the thickness is 0.05 to 0.25 mm, and more preferably.
  • the total length is 15 to 30 mm, the width is 5 to 10 mm, and the thickness is 0.05 to 0.1 mm.
  • Air holes 9 are preferably formed in the cover, and the shape is, for example, a circle, an ellipse, or a polygon.
  • the size is, for example, a maximum diameter of 0.01 to 10 mm, preferably a maximum diameter of 0.05 to 5 mm, and more preferably a maximum diameter of 0.1 to 2 mm.
  • the air holes may be formed by, for example, drilling with a laser or a drill, or may be formed using a mold that can form an air vent when the cover is formed.
  • the material and size of the cover and the air holes are the same in the embodiments
  • this third biosensor can be manufactured by stacking and integrating the insulating substrate 121, the spacer 102, and the cover 103 in this order.
  • the three members are integrated by bonding with an adhesive or heat fusion.
  • the adhesive include epoxy adhesives, acrylic adhesives, polyurethane adhesives, thermosetting adhesives (hot melt adhesives, etc.), UV curable adhesives, and the like. This also applies to the embodiments described later.
  • Measurement of the amount of blood components, for example, blood glucose level, using this third biosensor is performed as follows. First, puncture your fingertips with a special lancet and let it bleed. On the other hand, the sensor is set in a dedicated measuring device (meter). The blood supply port of the sensor set in the measuring device is brought into contact with the blood that has bleed, and blood is introduced into the sensor by capillary action. Analysis by this sensor is performed by the following steps.
  • the electrode 72 in the third biosensor is the electrode A
  • the electrode 73 is the electrode C
  • the electrode 74 is the electrode D
  • the electrode 75 is the electrode E
  • the electrode 76 is the electrode F
  • the electrode 77 is the electrode G.
  • FIG. 37 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, and the sixth electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the current value depending on the amount of blood component obtained by applying the first voltage to the first electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood component.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the current value measuring step (first step) depending on the amount of blood components, and the voltage is applied to the third electrode system. (Third step) is applied.
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • voltage application indicated by “Hct-3” is voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fifth voltage are controlled, and the fifth electrode system (including the electrode F as the working electrode and the electrodes A and G as the counter electrode) Is applied with a voltage (fifth step).
  • voltage application indicated by “Hct-5” is voltage application in the fifth step.
  • This fifth voltage is 2500 mV.
  • the fifth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fifth voltage to the fifth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step and the fifth step, the voltage value and application time of the sixth voltage are controlled, and the sixth electrode system (the electrode F as the working electrode, the electrode C as the counter electrode, the electrode) A voltage is applied to (including E and electrode D) (sixth step).
  • voltage application indicated by “Hct-6” is voltage application in the sixth step.
  • This sixth voltage is 2500 mV.
  • the sixth current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the sixth voltage to the sixth electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • an electrode F in which the second reagent layer and the third reagent layer are not disposed is used except for a polymer such as CMC.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the third current value depending on the Hct value obtained in the step C, the fifth current value depending on the Hct value, the sixth current value depending on the Hct value, and the blood component obtained in the step B The amount of blood component is obtained using the dependent first current value. This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance. The obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 5 is an example of a fifth method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 40 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, the sixth electrode system, and the seventh electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step. This first voltage is 400 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • each first voltage may be a different voltage. This is because the influence of interfering substances that react at different voltages can be seen.
  • the first current value depending on the amount of blood component obtained by applying the first voltage to the first electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood component.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the first current value measurement step (first step) depending on the amount of blood components, and the third electrode system. Is applied with a voltage (third step).
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • voltage application indicated by “Hct-3” is voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fifth voltage are controlled to apply a voltage to the fifth electrode system (fifth step).
  • voltage application indicated by “Hct-5” is voltage application in the fifth step.
  • This fifth voltage is 2500 mV.
  • the fifth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fifth voltage to the fifth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step and the fifth step, the voltage value and application time of the sixth voltage are controlled to apply a voltage to the sixth electrode system (sixth step).
  • voltage application indicated by “Hct-6” is voltage application in the sixth step.
  • This sixth voltage is 2500 mV.
  • the sixth current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the sixth voltage to the sixth electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • step C separately from the third step, the fifth step and the sixth step, the voltage value and application time of the seventh voltage are controlled to apply a voltage to the seventh electrode system (seventh step).
  • voltage application indicated by “Hct-7” is voltage application in the seventh step.
  • This seventh voltage is 2500 mV.
  • the seventh current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the seventh voltage to the seventh electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after the first step.
  • Step C the seventh step may be performed before the third step, the fifth step, and the sixth step.
  • the seventh step may be performed after at least one of the first steps, and then the first step may be further performed.
  • an electrode F in which the second reagent layer and the third reagent layer are not arranged except for a polymer such as CMC, that is, a bare electrode is used.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the amount of the blood component is obtained using the first current value depending on the blood component obtained in the step B. This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance. The obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 6A is an example of a sixth method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 43 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, and the sixth electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measurement device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step.
  • the first voltage is 200 mV to 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • each first voltage may be a different voltage. This is because the influence of interfering substances that react at different voltages can be seen.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled to apply a voltage to the second electrode system (second step).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step.
  • This second voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the second current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the first step, the second step, the first step, and the second step are performed in order.
  • each second voltage may be the same voltage. This is because, for example, the transition of the response value (current value) on the time axis can be observed.
  • the first step is performed twice or more, Performing the second step twice or more, The second step and the first step may be performed alternately.
  • the first step and the second step may be interchanged. That is, in the example in FIG. 41, the first step is performed first, but the second step may be performed first.
  • the second current value depending on the amount is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the first current value measuring step (first step) depending on the amount of blood components, and the third electrode system. Is applied with a voltage (third step).
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • voltage application indicated by “Hct-3” is voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fifth voltage are controlled to apply a voltage to the fifth electrode system (fifth step).
  • voltage application indicated by “Hct-5” is voltage application in the fifth step.
  • This fifth voltage is 2500 mV.
  • the fifth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fifth voltage to the fifth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step and the fifth step, the voltage value and application time of the sixth voltage are controlled to apply a voltage to the sixth electrode system (sixth step).
  • voltage application indicated by “Hct-6” is voltage application in the sixth step.
  • This sixth voltage is 2500 mV.
  • the sixth current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the sixth voltage to the sixth electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • step C the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the first steps.
  • step C the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the second steps.
  • an electrode F in which the second reagent layer and the third reagent layer are not disposed is used except for a polymer such as CMC.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the third current value depending on the Hct value obtained in the step C, the fifth current value depending on the Hct value, the sixth current value depending on the Hct value, and the blood component obtained in the step B The amount of the blood component is obtained using the first current value depending on the second current value depending on the blood component. This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance. The obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 6B is an example of a sixth method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 46 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, and the sixth electrode system.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes E and D as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step.
  • This first voltage is 400 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at a timing different from the first process, and the voltage is applied to the second electrode system (second process).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step.
  • This second voltage is 400 mV.
  • the second step of applying a second voltage to the second electrode system and detecting a current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • Embodiment 6B is the same as Embodiment 6A except that the first voltage in the first step and the second voltage in the second step are constant.
  • Embodiment 6C is an example of a sixth method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 49 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, and the sixth electrode system.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step. This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • step B simultaneously with the first step, the voltage value and application time of the second voltage are controlled to apply a voltage to the second electrode system (second step).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step. This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • Embodiment 6C is the same as Embodiment 6B except that the first step and the second step are at the same timing.
  • step C the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the first step and second step.
  • Embodiment 6D is an example of a sixth method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 52 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, and the sixth electrode system.
  • the measuring device 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step. This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at the same time as the first process or at a different timing to apply a voltage to the second electrode system (second process).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step. This second voltage is 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • Embodiment 6D is the same as Embodiment 6B except that a part of the first voltage and the second voltage have the same timing.
  • step C the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the first steps.
  • step C the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the second steps.
  • Embodiment 7A is an example of a seventh method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is electrode A
  • electrode 73 is electrode C
  • electrode 74 is electrode D
  • electrode 75 is electrode E
  • electrode 76 is electrode F
  • electrode 77 is electrode G.
  • FIG. 55 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, the sixth electrode system, and the seventh electrode system.
  • Process A Detection of specimen (blood)
  • a voltage is applied between the electrodes D and E, and the introduction of blood is detected by a change in the current value accompanying the introduction of blood. After confirming the introduction of blood, the following steps are started.
  • the applied voltage in this step A is, for example, 0.05 to 1V, preferably 0.7V.
  • glucose in blood and glucose oxidoreductase are made to react for a fixed time.
  • this process A is an arbitrary process.
  • the measuring device 2 reacts glucose in blood with glucose oxidoreductase for a certain period of time, and then controls the voltage value and application time of the first voltage to apply a voltage to the first electrode system. Apply (first step).
  • the blood to be measured is introduced into the biosensor 3 and the blood is detected by the detection electrode system (electrode D and electrode E), the measurement device 2 starts measuring current.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes D and E as the counter electrodes).
  • the voltage application indicated by “Glu-1” is the voltage application in the first step.
  • the first voltage is 200 mV to 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • each first voltage may be a different voltage. This is because the influence of interfering substances that react at different voltages can be seen.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled to apply a voltage to the second electrode system (second step).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step.
  • This second voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the second current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the first step, the second step, the first step, and the second step are performed in order.
  • each second voltage may be the same voltage. This is because, for example, the transition of the response value (current value) on the time axis can be observed.
  • the first step is performed twice or more, Performing the second step twice or more, The second step and the first step may be performed alternately.
  • the first step and the second step may be interchanged. That is, in the example in FIG. 54, the first step is performed first, but the second step may be performed first.
  • the second current value depending on the amount is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the measuring device 2 controls the voltage value and application time of the third voltage after the current value measuring step (first step and second step) depending on the amount of blood components, A voltage (third step) is applied to the electrode system.
  • step B and then step C are performed, but step C may be performed first and then step B may be performed.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing as shown in FIG.
  • the third voltage is applied between the third electrode system (including the electrode A as the working electrode and the electrode C as the counter electrode).
  • voltage application indicated by “Hct-3” is voltage application in this step.
  • This third voltage is 2500 mV.
  • the third current value depending on the hematocrit value obtained by applying the third voltage to the third electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step, the voltage value and application time of the fifth voltage are controlled to apply a voltage to the fifth electrode system (fifth step).
  • voltage application indicated by “Hct-5” is voltage application in the fifth step.
  • This fifth voltage is 2500 mV.
  • the fifth current value depending on the hematocrit value obtained by applying the fifth voltage to the fifth electrode system is used in the following blood component amount calculating step.
  • step C separately from the third step and the fifth step, the voltage value and application time of the sixth voltage are controlled to apply a voltage to the sixth electrode system (sixth step).
  • voltage application indicated by “Hct-6” is voltage application in the sixth step.
  • This sixth voltage is 2500 mV.
  • the sixth current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the sixth voltage to the sixth electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • step C separately from the third step, the fifth step and the sixth step, the voltage value and application time of the seventh voltage are controlled to apply a voltage to the seventh electrode system (seventh step).
  • voltage application indicated by “Hct-7” is voltage application in the seventh step.
  • This seventh voltage is 2500 mV.
  • the seventh current value that depends on the hematocrit value obtained by applying the seventh voltage to the seventh electrode system is used in the following step of calculating the amount of blood components.
  • the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the first steps.
  • the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the second steps.
  • Step C the seventh step may be performed before the third step, the fifth step, and the sixth step.
  • the seventh step may be performed after at least one of the first steps, and then the first step may be further performed.
  • an electrode F in which the second reagent layer and the third reagent layer are not disposed is used except for a polymer such as CMC.
  • Step D Step of calculating the amount of blood components
  • the obtained current value depending on the amount of the plurality of blood components for example, the plurality of blood components is processed as follows and used as a current value depending on the amount of the blood components.
  • a plurality of parameters (x1, x2, x3,..., X10) are calculated based on the extracted measured current values at a plurality of predetermined times, the extracted temperature information of the biological information measuring device, etc. Calculated)), a correction amount is calculated by a multiple regression equation (for example, the following equation 1), and a current value depending on the amount of blood components is calculated.
  • the amount of the blood component is obtained using the first current value depending on the blood component obtained in the step B and the second current value depending on the blood component. This is preferably performed based on a calibration curve (including a calibration table) created in advance.
  • the obtained amount of blood component is displayed or stored in the measuring device.
  • the biosensor After calculating the amount of blood component, the biosensor is discarded, the display unit and the like are turned off, the measuring instrument is also turned off, and the measurement of the component of the biological sample is completed.
  • Embodiment 7B is an example of a seventh method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • the electrode 72 in the third biosensor is the electrode A
  • the electrode 73 is the electrode C
  • the electrode 74 is the electrode D
  • the electrode 75 is the electrode E
  • the electrode 76 is the electrode F
  • the electrode 77 is the electrode G.
  • Used as FIG. 58 shows whether each electrode is used as a counter electrode or a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, the sixth electrode system, and the seventh electrode system.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • the first voltage is applied between the first electrode system (including the electrode C as the working electrode and the electrodes E and D as the counter electrodes).
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step. This first voltage is 400 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, five times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at a timing different from the first process, and the voltage is applied to the second electrode system (second process).
  • the voltage application indicated by “Glu-2” is the voltage application in the second step.
  • This second voltage is 400 mV.
  • the second step of applying a second voltage to the second electrode system and detecting a current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • Embodiment 7B is the same as Embodiment 7A except that the first voltage in the first step and the second voltage in the second step are constant.
  • Embodiment 7C is an example of a seventh method for measuring the amount of blood components of the present invention.
  • the biosensor used in this method is the same as the third biosensor used in the fourth embodiment.
  • each electrode is used as any one of a counter electrode and a working electrode of the first electrode system, the second electrode system, the third electrode system, the fifth electrode system, the sixth electrode system, and the seventh electrode system. The use is shown in FIG.
  • the measuring apparatus 2 changes the voltage application electrode, the application voltage, the application time, and the application timing, as shown in FIG.
  • voltage application indicated by “Glu-1” is voltage application in the first step. This first voltage is 500 mV.
  • the first step of applying the first voltage to the first electrode system and detecting the first current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, four times.
  • the voltage value and application time of the second voltage are controlled at a different timing from the first process, and a voltage is applied to the second electrode system (second process).
  • voltage application indicated by “Glu-2” is voltage application in the second step. This second voltage is 300 mV to 500 mV.
  • the second step of applying the second voltage to the second electrode system and detecting the current value depending on the amount of the blood component is performed a plurality of times, for example, six times.
  • Embodiment 7C is the same as Embodiment 7B except that the magnitudes of the first voltage and the second voltage are different.
  • the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the first steps.
  • the third step, the fifth step, and the sixth step may be performed after all the second steps.
  • Step C the seventh step may be performed before the third step, the fifth step, and the sixth step.
  • the seventh step may be performed after at least one of the first steps, and then the first step may be further performed.
  • the biosensor manufacturing method of the present invention can manufacture a biosensor capable of measuring a component of a biological sample with higher accuracy. Therefore, the method for producing a biosensor of the present invention can be preferably used in all fields for measuring blood components such as biology, biochemistry and medicine, and is particularly suitable for the field of clinical examination.

Abstract

キャピラリ内に導入された血液の分布に偏りがあるにもかかわらず、血液成分を正確に測定する方法を提供する。 本発明の測定方法は、バイオセンサのキャピラリ内に複数のヘマトクリット値を測定するための電極系を設け、キャピラリ内の互いに異なる位置でヘマトクリット値を測定することを特徴とする。このようにキャピラリ内の複数の箇所でヘマトクリット値を測定することにより、キャピラリ内に導入された血液の分布にばらつきにかかわらず、より正確なヘマトクリット値を測定することが可能である。

Description

血液中の血液成分の量を測定する方法
　本発明は、血液中の血液成分の量を測定する方法に関するものである。
　臨床検査や糖尿病患者の血糖値自己測定等において、生体試料の成分を測定するためのセンサが従来から使用されている。このようなセンサは、例えば、その表面に作用極および対極が形成された絶縁基板の上に、スペーサーを介してカバーが配置されている構成である。前記作用極および対極の上には、酸化還元酵素およびメディエータ（電子伝達体）等を含む試薬が配置されており、この部分が分析部となる。この分析部には、血液を導入するための流路の一端が連通しており、前記流路の他端は外部に向かって開口しており、ここが血液供給口となる。このようなセンサを用いた生体試料（例えば血液）の成分の分析（例えば、血糖値）は、例えば、次のようにして行われる。すなわち、まず、前記センサを専用の測定装置（メータ）にセットする。そして、指先等をランセットで傷つけて出血させ、これに前記センサの血液供給口を接触させる。血液は、毛細管現象によりセンサの流路に吸い込まれ、これを通って分析部に導入され、ここで、前記試薬と接触する。そして、血液中の成分と、酸化還元酵素とが反応して酸化還元反応が起こり、これによりメディエータを介して電流が流れる。この電流を検出し、この電流値に基づき、前記測定装置において血液成分量を算出し、これを表示する。
　健康管理への要求の高まりから、年々、生体試料の成分を測定するための高精度なセンサが強く求められてきている。例えば、２０１３年５月に発効したＩＳＯ１５１９７（体外検査システム－糖尿病管理における事故測定のための血糖モニターシステムに対する要求事項）においては、２００３年に発効したＩＳＯ１５１９７と比較して基準が厳しくなっている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　高精度に測定するためのバイオセンサとして、例えば、作用極３２と対極３６の電極系の上に試薬層３９が、作用極３３と対極３５の電極系の上に別の試薬層４０が、それぞれ配置されたバイオセンサが報告されている（特許文献１）。別の電極３７は、ヘマトクリット値を測定するための電極であり、試薬層３９および試薬層４０は、接触していない。試薬層３９は、酸化還元酵素とメディエータを、試薬層４０は、メディエータを含む。このような電極３７と、前記作用極３２、対極３６、作用極３３、対極３５のいずれか一つとに、電圧を印加することにより、ヘマトクリット値を測定することができる。
　また、３つの電極（作用極Ｗ１、Ｗ２、参照電極Ｒ）の上に試薬が配置されたバイオセンサが報告されている（特許文献２）。この作用極Ｗ１と参照電極Ｒの上には酸化型のレドックス媒介物、作用極Ｗ２の上には酸化型のレドックス媒介物と酵素が配置されている。このような作用極Ｗ１と参照電極Ｒとの間に電圧を印加することにより、抵抗値（ｒ値）が測定され、そのｒ値を用いてヘマトクリット値を算出することができる。
国際公開第２００５／１０３６６９号パンフレット 特許第４０６００７８号公報
　従来、高精度に血液成分を測定するため、バイオセンサのキャピラリ内に導入された血液のヘマトクリット（Ｈｃｔ）値を測定し、この値に応じて血液成分の量を補正することが行われている。
　しかしながら、従来の技術においては、キャピラリ内に導入された血液の分布に偏りがあり、従来の測定方法によっては、そのようなバイオセンサを用いて血液成分を正確に測定することは困難であった。
　本発明者らは、キャピラリ内に導入された血液の分布の偏りについて詳細に検討したところ、以下の図１に示すような知見が得られた。図１は、２つ試薬部を有するバイオセンサに血液を導入した際の、前記バイオセンサ内の血液分布のばらつきを表す画像である。図１（ａ）および図１（ｂ）において、図に向かって左側が血液点着側であり、右側が空気孔側である。血液は図に向かって左側から右側へ進行する。図１において、赤血球が多く存在する箇所は黒色、赤血球があまり存在しない箇所は灰色に色づいている。図１（ａ）において、血液点着側の試薬部において、灰色に色づいており、その場所では血漿成分が多く、赤血球が少ないことが理解できる。また、図１（ｂ）においては、空気孔側の試薬部において、灰色に色づいており、その場所では血漿成分が多く、赤血球が少ないことが理解できる。このようにバイオセンサ内の試薬部において、赤血球の分布に偏りがあり、キャピラリ内の全体のヘマトクリット値を適切に測定できないという問題がある。このような問題に対し、本発明者らは特定の構成を有するバイオセンサを用い、特定の測定工程を含み、血液中の血液成分の量を、高精度に測定する方法の提供を実現した。
　従来の測定方法では、バイオセンサのキャピラリ内にヘマトクリット値を測定するための電極系を設けて、その電極系を用いてヘマトクリット値を測定していた。本発明の測定方法は、バイオセンサのキャピラリ内に複数のヘマトクリット値を測定するための電極系を設け、キャピラリ内の互いに異なる位置でヘマトクリット値を測定することを特徴とする。このようにキャピラリ内の複数の箇所でヘマトクリット値を測定することにより、キャピラリ内に導入された血液の分布にばらつきにかかわらず、より正確なヘマトクリット値を測定することが可能である。
　本発明は、
第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第２電極系上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第３作用極として、前記第１対極、前記第２作用極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極、前記第１対極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（本文中、「血液成分の量の第１測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
　第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第４対極と前記第３作用極上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（本文中、「血液成分の量の第２測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　血液成分の量の第１測定方法であって、
　前記バイオセンサが、第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系を更に備え、
　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
　前記第４対極として、前記第２対極を用い、
　前記方法は、
　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（本文中、「血液成分の量の第３測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
　第５作用極と第５対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第５電極系と、
　第６作用極と第６対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第６電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第５電極系の第５対極上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第５電極系の第５作用極と前記第６電極系の第６作用極上には、前記試薬層は配置されず、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第３作用極として、前記第５対極を用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
　前記第６対極として、前記第１作用極および前記第１対極のいずれか一つを用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記第５電極系に第５電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値を検出する第５工程と、
　前記第６電極系に第６電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値を検出する第６工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（本文中、「血液成分の量の第４測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　血液成分の量の第４測定方法であって、
　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
　前記方法は、
　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（本文中、「血液成分の量の第５測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　血液成分の量の第４測定方法であって、
　前記バイオセンサが、第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系を更に備え、
　前記第２試薬層は、前記第２電極系上にも配置され、
　前記方法は、
　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（本文中、「血液成分の量の第６測定方法」と呼ぶことがある）である。
　また、本発明は、
　血液成分の量の第６測定方法であって、
　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
　前記方法は、
　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（本文中、「血液成分の量の第７測定方法」と呼ぶことがある）である。
　このように、本発明の血液成分の測定方法では、バイオセンサ内で血液の分布がばらつく問題を解消するよう試薬部と電極が構成されているため、複数の電極系へ電圧を印加することにより、血液の分布のばらつきを考慮した測定を行うことができるため、バイオセンサ内で血液の分布がばらついたとしても、測定精度が向上することを特徴とする。
　なお、本文中、単に「血液成分の測定方法」に言及する場合は、「血液成分の量の第１測定方法」、「血液成分の量の第２測定方法」、「血液成分の量の第３測定方法」、「血液成分の量の第４測定方法」、「血液成分の量の第５測定方法」、「血液成分の量の第６測定方法」および「血液成分の量の第７測定方法」の全てを指す。
図１は、本発明におけるバイオセンサの電極構成において、キャピラリ内の血液分布のばらつきを表す画像である。 図２は、本発明の測定方法において用いる測定装置の一例を示す斜視図である。 図３は、本発明の測定方法において用いるバイオセンサの一例を示す分解斜視図である。 図４は、図３の前記バイオセンサの断面図である。 図５Ａは、図３の前記バイオセンサの平面図である。 図５Ｂは、図３中のＡ部の拡大図である。 図６は、本発明の測定方法において用いるバイオセンサの別の一例を示す分解斜視図である。 図７は、図６の前記バイオセンサの断面図である。 図８Ａは、図６の前記バイオセンサの平面図である。 図８Ｂは、図６中のＢ部の拡大図である。 図９は、本発明の測定方法において用いるバイオセンサの別の一例を示す分解斜視図である。 図１０は、図９の前記バイオセンサの断面図である。 図１１Ａは、図９の前記バイオセンサの平面図である。 図１１Ｂは、図９中のＣ部の拡大図である。 図１２は、実施形態１Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図１３は、実施形態１Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図１４は、実施形態１Ａにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図１５は、実施形態１Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図１６は、実施形態１Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図１７は、実施形態１Ｂにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図１８は、実施形態１Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図１９は、実施形態１Ｃにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図２０は、実施形態２において、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図２１は、実施形態２において、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図２２は、実施形態２において使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図２３は、実施形態３Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図２４は、実施形態３Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図２５は、実施形態３Ａにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図２６は、実施形態３Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図２７は、実施形態３Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図２８は、実施形態３Ｂにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図２９は、実施形態３Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図３０は、実施形態３Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図３１は、実施形態３Ｃにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図３２は、実施形態３Ｄにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図３３は、実施形態３Ｄにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図３４は、実施形態３Ｄにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図３５は、実施形態４において、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図３６は、実施形態４において、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図３７は、実施形態４において使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図３８は、実施形態５において、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図３９は、実施形態５において、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図４０は、実施形態５において使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図４１は、実施形態６Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図４２は、実施形態６Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図４３は、実施形態６Ａにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図４４は、実施形態６Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図４５は、実施形態６Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図４６は、実施形態６Ｂにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図４７は、実施形態６Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図４８は、実施形態６Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図４９は、実施形態６Ｃにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図５０は、実施形態６Ｄにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図５１は、実施形態６Ｄにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図５２は、実施形態６Ｄにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図５３は、実施形態７Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図５４は、実施形態７Ａにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図５５は、実施形態７Ａにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図５６は、実施形態７Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図５７は、実施形態７Ｂにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図５８は、実施形態７Ｂにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図５９は、実施形態７Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電圧値の時間的な変化を示す図である。 図６０は、実施形態７Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。 図６１は、実施形態７Ｃにおいて使用するバイオセンサの電極と電極系とを示す表である。 図６２は、本発明の測定方法において用いるバイオセンサを装着した血液成分測定装置の電気ブロック図である。
　つぎに、本発明を詳しく説明する。
　本発明の血液成分の量の第１測定方法、血液成分の量の第２測定方法、血液成分の量の第３測定方法、血液成分の量の第４測定方法、血液成分の量の第５測定方法、血液成分の量の第６測定方法および血液成分の量の第７測定方法における測定対象の成分は、例えば、グルコース、ケトン、ＨｂＡ１ｃ、乳酸、尿酸、ビリルビンおよびコレステロール等である。本発明の測定方法において用いられるバイオセンサにおいて、前記試薬部が含む酵素は、測定対象の生体試料の成分に応じ適宜選択される。
　なお、本発明の血液成分の量の第１測定方法、血液成分の量の第２測定方法、血液成分の量の第３測定方法、血液成分の量の第４測定方法、血液成分の量の第５測定方法、血液成分の量の第６測定方法および血液成分の量の第７測定方法は、キャピラリ全体の血液の挙動を得て、測定精度を向上させるための構成ならびに測定方法の一部であり、これらに限定されるものではない。
　＜第１の実施形態：血液成分の量の第１測定方法＞
　本発明は、
第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第２電極系上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第３作用極として、前記第１対極、前記第２作用極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極、前記第１対極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（血液成分の量の第１測定方法）である。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第１工程および前記第２工程の後に、前記第３工程を行うのが好ましい。これは、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する工程が終わった後なので、ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する際の電極系の対極として、前記血液成分の量に依存する第１または第２電流値を検出する工程で用いる第１電極系および第２電極系の作用極および対極のいずれも使用することが出来るからである。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いてもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は同一であってもよい。または、各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は同一であってもよい。または、各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第２工程を行ってもよい。また、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程、および１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第３工程は、２回以上行ってもよい。
　本発明の血液成分の量の第１測定方法、血液成分の量の第２測定方法、血液成分の量の第３測定方法、血液成分の量の第４測定方法、血液成分の量の第５測定方法、血液成分の量の第６測定方法および血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータは、特に制限されず、例えば、フェリシアン化物、ｐ－ベンゾキノン、ｐ－ベンゾキノン誘導体、フェナジンメトサルフェート、メチレンブルー、フェロセン、フェロセン誘導体があげられる。この中で、フェナンスレンキノン（９，１０－フェナンスレンキノン）、３－フェニルイミノ－３Ｈ－フェノチアジンまたは、フェリシアン化物（フェリシアン化カリウム）が好ましい。前記メディエータの配合量は、特に制限されず、１回の測定当り若しくはバイオセンサ１個当り、例えば、０．１～１０００ｍＭであり、好ましくは１～５００ｍＭであり、より好ましくは、１０～３００ｍＭである。例えば、血液（生体試料）中のグルコース値（血液成分）を測定する際、酵素としてグルコースデヒドロゲナーゼ（酸化還元酵素）を用い、メディエータとしてフェリシアン化カリウムを用いたバイオセンサの場合、例えば、以下のようにしてＧｌｕに依存する電流値を得る。バイオセンサにおいて、前記酸化還元酵素とメディエータが血液と接触し、これらが血液中に溶解される。そうすると、血液中の基質であるＧｌｕと前記酸化還元酵素との間で酵素反応が進行し、前記メディエータが還元されて、フェロシアン化物が生成する。この反応終了後、還元されたメディエータを電気化学的に酸化し、このとき得られる電流から血液中のＧｌｕに依存する電流値を得る。
　本発明の血液成分の量の第１測定方法、血液成分の量の第２測定方法、血液成分の量の第３測定方法、血液成分の量の第４測定方法、血液成分の量の第５測定方法、血液成分の量の第６測定方法および血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素は、測定対象の血液成分に応じ適宜選択される。前記酸化還元酵素としては、例えば、グルコースオキシダーゼ、ラクテートオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、ラクテートデヒドロゲナーゼなどがある。測定対象の血液成分がグルコースの場合、酸化還元酵素は、グルコースオキシダーゼおよびグルコースデヒドロゲナーゼが好ましい。前記酸化還元酵素の量は、例えば、バイオセンサ１個当り、若しくは１回の測定当り、例えば、０．０１～１００Ｕであり、好ましくは、０．０５～１０Ｕであり、より好ましくは、０．１～５Ｕである。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第２工程を２回以上行う場合、前記第２電圧と前記第２電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第２電圧の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第１電圧および前記第２電圧は、前記第１電圧≧前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第１電圧の印加時間≦前記第２電圧の印加時間の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５Ｖ～４．５Ｖ、より好ましくは２．０Ｖ～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、かつ、例えば、前記第３電圧＞前記第２電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第２実施形態：血液成分の量の第２測定方法＞
　本発明は、
　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
　第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第４対極と前記第３作用極上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（血液成分の量の第２測定方法）である。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。その場合、前記第３工程の後に、さらに１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第３工程は、２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第４工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第４工程は、前記第１工程および前記第３工程の後に行ってもよい。前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第４工程は、２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、
　前記第４電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第４電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第４工程を２回以上行う場合、前記第４電圧と前記第４電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第４電圧は、前記第４電圧＞前記第１電圧の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第２測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第４電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、かつ、例えば、前記第４電圧＞前記第１電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第４電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第３実施形態：血液成分の量の第３測定方法＞
　本発明は、前記血液成分の量の第１測定方法において、
　前記バイオセンサが、第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系を更に備え、
　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
　前記第４対極として、前記第２対極を用い、
　前記方法は、
　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（血液成分の量の第３測定方法）である。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いてもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。その場合、前記第３工程の後に、さらに１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。また、前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。その場合、前記第３工程の後に、さらに１回または２回以上の前記第２工程を行ってもよい。前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第３工程は、２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第４工程は、１回または２回以上の前記第１工程および１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。また、前記第４工程は、前記第１工程、第２工程および前記第３工程の後に行ってもよい。前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第４工程は、２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第２工程を２回以上行う場合、前記第２電圧と前記第２電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、
　前記第４電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第４電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第４工程を２回以上行う場合、前記第４電圧と前記第４電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第４電圧は、前記第４電圧＞前記第１電圧の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第２電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第４電圧は、前記第４電圧＞前記第２電圧の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第１電圧および前記第２電圧は、前記第１電圧≧前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第１電圧の印加時間≦前記第２電圧の印加時間の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第３測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第４電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、かつ、前記第３電圧＞前記第２電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第４電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第４実施形態：血液成分の量の第４測定方法＞
　本発明は、
　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
　第５作用極と第５対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第５電極系と、
　第６作用極と第６対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第６電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
　前記バイオセンサにおいて、
　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
　前記第５電極系の第５対極上に第２試薬層が配置され、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
　前記第５電極系の第５作用極と前記第６電極系の第６作用極上には、前記試薬層は配置されず、
　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
　前記第３作用極として、前記第５対極を用い、
　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
　前記第６対極として、前記第１作用極および前記第１対極のいずれか一つを用い、
　前記方法は、
　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
　前記第５電極系に第５電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値を検出する第５工程と、
　前記第６電極系に第６電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値を検出する第６工程と、
　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法（血液成分の量の第４測定方法）である。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行うのが好ましい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第３工程、前記第５工程および前記６工程は、それぞれ２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第５工程を２回以上行う場合、前記第５電圧と前記第５電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第６工程を２回以上行う場合、前記第６電圧と前記第６電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第４測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、前記第５電圧＞前記第１電圧、かつ前記第６電圧＞前記第１電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第５実施形態：血液成分の量の第５測定方法＞
　本発明は、前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
　前記方法は、
　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（血液成分の量の第５測定方法）である。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行うのが好ましい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行うのが好ましい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程が行われるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第７工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。前記血液成分の量の第１測定方法において、前記第３工程、前記第５工程、前記６工程および前記第７工程は、それぞれ２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第５工程を２回以上行う場合、前記第５電圧と前記第５電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第６工程を２回以上行う場合、前記第６電圧と前記第６電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、
　前記第７電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第７電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第７工程を２回以上行う場合、前記第７電圧と前記第７電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第１電圧の関係であってもよい。また、前記第１電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第１電圧の関係であってもよい。また、前記第１電圧および前記第７電圧は、前記第７電圧＞前記第１電圧の関係であってもよい。
　前記血液成分の量の第５測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第７電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、前記第５電圧＞前記第１電圧、前記第６電圧＞前記第１電圧、かつ前記第７電圧＞前記第１電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第７電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第６実施形態：血液成分の量の第６測定方法＞
　本発明は、前記血液成分の量の第４測定方法において、
　前記バイオセンサが、第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系を更に備え、
　前記第２試薬層は、前記第２電極系上にも配置され、
　前記方法は、
　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（血液成分の量の第６測定方法）である。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いてもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は同一であってもよい。または、各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行ってもよい。この際、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。この際、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。または、この際、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は同一であってもよい。または、各第１電圧が同一電圧であり、各第２電圧が同一電圧である場合、前記第１電圧と前記第２電圧は異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第１工程および前記第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行うのが好ましい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第２工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第３工程、前記第５工程、および前記６工程は、それぞれ２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第２工程を２回以上行う場合、前記第２電圧と前記第２電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第５工程を２回以上行う場合、前記第５電圧と前記第５電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第６工程を２回以上行う場合、前記第６電圧と前記第６電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第２電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第６測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、前記第５電圧＞前記第１電圧、前記第６電圧＞前記第１電圧、前記第３電圧＞前記第２電圧、前記第５電圧＞前記第２電圧、かつ前記第６電圧＞前記第２電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　＜第７実施形態：血液成分の量の第７測定方法＞
　本発明は、前記血液成分の量の第６測定方法において、
　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
　前記方法は、
　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である方法（血液成分の量の第７測定方法）である。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行うのが好ましい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　１回または２回以上の前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に１回または２回以上の前記第１工程が行われるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第１工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第１工程の後に、行ってもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第２工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第２工程の後に、行ってもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第３工程は、１回または２回以上の前記第７工程の後に、行ってもよい。また、前記第５工程は、１回または２回以上の前記第７工程を行ってもよい。また、前記第６工程は、１回または２回以上の前記第７工程の後に、行ってもよい。
前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第３工程、前記第５工程、前記６工程および前記第７工程は、それぞれ２回以上行ってもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含むのが好ましい。前記メディエータについては、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含むのが好ましい。前記酸化還元酵素については、前記血液成分の量の第１測定方法において説明したとおりである。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第１工程を２回以上行う場合、前記第１電圧と前記第１電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖである。前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第２工程を２回以上行う場合、前記第２電圧と前記第２電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第３工程を２回以上行う場合、前記第３電圧と前記第３電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第５工程を２回以上行う場合、前記第５電圧と前記第５電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第６工程を２回以上行う場合、前記第６電圧と前記第６電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、
　前記第７電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖである。前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。前記第７工程を２回以上行う場合、前記第７電圧と前記第７電圧の印加時間は、それぞれの回で同一であっても異なっていてもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第１電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第１電圧および前記第７電圧は、前記第７電圧＞前記第１電圧の関係であるのが好ましい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第２電圧および前記第３電圧は、前記第３電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第５電圧は、前記第５電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第６電圧は、前記第６電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。また、前記第２電圧および前記第７電圧は、前記第７電圧＞前記第２電圧の関係であるのが好ましい。
　また、前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第１電圧の印加時間＞前記第３電圧の印加時間の関係であってもよい。また、前記第１電圧の印加時間＞前記第４電圧の印加時間であってもよい。また、前記第１電圧の印加時間＞前記第６電圧の印加時間であってもよい。また、前記第１電圧の印加時間＞前記第７電圧の印加時間であってもよい。
　また、前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第２電圧の印加時間＞前記第３電圧の印加時間の関係であってもよい。また、前記第２電圧の印加時間＞前記第４電圧の印加時間であってもよい。また、前記第２電圧の印加時間＞前記第６電圧の印加時間であってもよい。また、前記第２電圧の印加時間＞前記第７電圧の印加時間であってもよい。
　前記血液成分の量の第７測定方法において、前記第１電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第２電圧は、例えば、０．１Ｖ～１．０Ｖ、好ましくは０．２Ｖ～０．８Ｖ、より好ましくは０．３Ｖ～０．６Ｖであり、前記第３電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第５電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第６電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、前記第７電圧は、例えば、１．０Ｖ～５．０Ｖ、好ましくは１．５～４．５Ｖ、より好ましくは２．０～４．０Ｖであり、例えば、前記第３電圧＞前記第１電圧、前記第５電圧＞前記第１電圧、前記第６電圧＞前記第１電圧、前記第７電圧＞前記第１電圧、前記第３電圧＞前記第２電圧、前記第５電圧＞前記第２電圧、前記第６電圧＞前記第２電圧、かつ前記第７電圧＞前記第２電圧であり、前記第１電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第２電圧の印加時間は、例えば０．０５～２秒、好ましくは０．１～１秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第３電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第５電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第６電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒であり、前記第７電圧の印加時間は、例えば０．０５～１秒、好ましくは０．１～０．５秒、より好ましくは０．１～０．３秒である。
　本発明の血液成分の測定方法において用いられるバイオセンサは、前記のように、所定の電極系を備える。さらに、このバイオセンサは、絶縁基板を有し、この上に各電極系と、前記各電極系に血液を導入するための流路とが形成され、前記流路の一端は、バイオセンサ外部に開口して血液供給口となっていることが好ましい。この場合、前記血液供給口は一つであり、前記流路は、その途中で分岐しており、分岐した各流路の端部は前記各分析部に連通している構成であってもよい。その他、前記流路の途中に電極系が位置し、その後方に別の電極系が位置している構成であってもよい。
　本発明の血液成分の測定方法において用いられるバイオセンサは、さらに、スペーサーおよびカバーを有し、前記絶縁基板の上に、前記スペーサーを介して前記カバーが配置されている構成が好ましい。
　本発明の血液成分の測定方法において用いられるバイオセンサにおいて、前記試薬部がメディエータ、またはメディエータおよび酸化還元酵素を含む場合、さらに酵素安定化剤および／または結晶均質化剤を含むのが好ましい。
　前記酵素安定化剤としては、例えば、糖アルコールがあげられる。前記糖アルコールとしては、例えば、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、マンニトール、ラクチトール、還元パラチノース、アラビニトール、グリセロール、リビトール、ガラクチトール、セドヘプチトール、ペルセイトール、ボレミトール、スチラシトール、ポリガリトール、イジトール、タリトール、アリトール、イシリトール、還元澱粉糖化物、イシリトールなどの鎖状の多価アルコールや環式糖アルコールがあげられる。また、これらの糖アルコールの立体異性体、置換体または誘導体であってもよい。これらの糖アルコールは、単独で使用してもよいし、２種類以上で併用してもよい。これらの中で、好ましいのは、マルチトールである。前記酵素安定化剤の配合量は、１回の測定当り若しくは１センサ当り、例えば、０．１～５００ｍＭの範囲であり、好ましくは、０．５～１００ｍＭの範囲であり、より好ましくは１～５０ｍＭの範囲である。
　前記結晶均質化剤は、試薬部の結晶状態を均質にするためのものであり、例えば、アミノ酸があげられる。前記アミノ酸としては、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、リシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、サルコシン、ベタイン、タウリン、これらの塩、置換体および誘導体があげられる。これらは、単独で使用してもよいし、２種類以上で併用してもよい。これらのなかで、グリシン、セリン、プロリン、トレオニン、リシン、タウリンが好ましく、より好ましくは、タウリンである。前記結晶均質化剤の配合量は、１回の測定当り若しくは１センサ当り、例えば、０．１～１０００ｍＭであり、好ましくは、１０～５００ｍＭであり、より好ましくは２０～２００ｍＭである。
　本発明の血液成分の測定方法において用いられるバイオセンサは、更に、血液検知電極を有し、この血液検知電極は、前記血液供給口から前記各電極系の少なくとも一つよりも後方に位置し、この血液検知電極により、前記各電極系の少なくとも一つに確実に血液が導入されたことが検知可能であることが好ましい。より好ましくは、前記血液検知電極が、前記各電極系の最後方に位置することである。前記血液検知電極は、前記電極系の一つとしても、用いられてもよい。
　図２の斜視図に、本発明の測定方法において用いられるバイオセンサを装着した状態の測定装置の一例を示す。図示のように、この測定装置２は、その一端にセンサの装着口５を有し、ここにセンサ３を装着して保持する。なお、符号１０は、センサ３の血液供給口である。また、この測定装置２の略中央には表示部４を有し、ここに測定結果を表示する。
　図６２には、本発明の測定方法において用いられるバイオセンサを装着した状態の測定装置の電気ブロック図の一例を示す。本発明の測定装置において、本発明の一実施形態にかかる測定装置の入力端子部２０６には、電圧を印加する電圧印加部２３７と、電流－電圧変換部２３８が接続されている。電圧印加部２３７には、制御部２３９から電圧が印加され、この電圧は、入力端子部２０６を介して、バイオセンサ３の各電極系および血液成分導入検知極のうち所望の電極へ一定時間印加される。この電圧印加によりバイオセンサ３において電極間に流れる電流は、電流－電圧変換部２３８にて電圧に変換され、その後、この電圧はＡ／Ｄ変換部２３０でデジタル変換され、このデジタル変換された電圧が判定手段２３１によって閾値と比較される。
　また、制御部２３９に接続された表示部２３２には、前記バイオセンサ３で検出した血液成分の量や、前記判定手段２３１による判定結果が表示されるようになっている。なお、図６２の符号２３３は電源部で、前記各部に電源を供給するためのものである。符号２３４は、ヘマトクリット値と血液成分の測定時の印加電圧、印加時間等からなるテーブルや環境温度から予め作成した検量線および検量テーブルを備えたメモリである。
　また、前記制御部２３９には、時計２３５が接続され、制御部２３９は、この時計２３５の時刻および時間を活用して、各種制御動作を実行するように構成されている。さらに、制御部２３９内には、補正手段２３６が設けられ、測定した血液成分の量をヘマトクリット値によって補正することで、血液成分の量の測定精度を高めるものである。
　次に、本発明の血液成分の量の測定方法の実施例について、図面に基づき説明する。
　［実施形態１Ａ］
　実施形態１Ａは、本発明の血液成分の量の第１測定方法の一例である。
　図３、図４、図５Ａおよび図５Ｂに、本発明の測定方法において用いるバイオセンサ（以下、「第１バイオセンサ」と呼ぶことがある）の一例を示す。図３は、前記第１バイオセンサの分解斜視図であり、図４は図３の前記バイオセンサの断面図であり、図５Ａは図３の前記バイオセンサの平面図であり、図５Ｂは、図３中のＡ部の拡大図である。前記四図において、同一部分には同一符号を付している。この第１バイオセンサは、一例として、血液成分としてグルコースを測定するためのセンサである。
　図示のように、この第１バイオセンサは、絶縁基板１０１の上に、６個の電極１２、１３、１４、１５、１６および１７が形成されている。これらの電極は、作用極と対極に切り換え可能である。電極１７の表面は、ＣＭＣ等の高分子材料で被覆されている。電極１２および１６の一部を覆うように第１試薬層６が、電極１３、１４および１５の一部を覆うように第２試薬層７が、配置されている。前記第１試薬層６と前記第２試薬層７は、離れて配置されている。前記第２試薬層７は、血液中の血液成分の量を測定するための試薬、好ましくは酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）、より好ましくは酸化還元酵素とメディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。前記第１試薬層は、好ましくはメディエータを含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。
　前記絶縁基板１０１の上には、一方の端部（図において右側端部）を残してスペーサ１０２を介しカバー１０３が配置されている。この第１バイオセンサには、各電極（１２、１３、１４、１５、１６および１７）に血液を導入するために、絶縁基板１０１、スペーサ１０２およびカバー１０３から成る流路８が形成されている。この流路８の先端は、第１バイオセンサの他方の端部（図において左側端部）まで延伸しており、外部に対し開口すること血液供給口１０となっている。前記６個の電極（１２、１３、１４、１５、１６および１７）は各々リードと連結し、これらのリードは、前記一方の端部側（図において右側端部）に延びており、リードの先端はカバーに覆われずに露出している。前記カバー１０３において、流路８の右側端部に対応する部分（第２の試薬層７上もしくは、電極１４上）には、空気孔９が形成されている。さらに、流路８内に、前記電極１７、前記第１試薬層６、前記第２試薬層７がそれぞれ離れて配置されている。
　本発明において、前記絶縁基板の材質は、特に制限されず、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリイミド（ＰＩ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、モノマーキャストナイロン（ＭＣ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、メタクリル樹脂（ＰＭＭＡ）、ＡＢＳ樹脂（ＡＢＳ）、ガラス等が使用でき、このなかで、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）およびポリイミド（ＰＩ）が好ましく、より好ましくは、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）である。絶縁基板の大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０５～２ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．１～１ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．１～０．６ｍｍである。前記絶縁基板の材質および大きさについては、後述の実施形態においても同様である。
　絶縁基板上の電極およびリードは、例えば、金、白金、パラジウム等を材料として、スパッタリング法あるいは蒸着法により導電層を形成し、これをレーザーにより特定の電極パターンに加工することで形成できる。レーザーとしては、例えば、ＹＡＧレーザー、ＣＯ2レーザー、エキシマレーザー等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　前記第２試薬層７は、次のようにして形成する。例えば、酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）を０．１～５Ｕ／センサ、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、酵素安定化剤（例えばマルチトール等）を１～５０ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層７をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極１３、１４および１５の一部を覆うように試薬層７が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　前記第１試薬層６は、次のようにして形成する。例えば、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層６をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極１２および１６の一部を覆うように試薬層６が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　本発明において、スペーサ１０２の材質は、特に制限されず、例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。また、スペーサの大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０１～１ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０．５ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．２５ｍｍである。この例のスペーサには、血液導入のための流路となるＩ字形状の切欠部が形成されているが、その大きさは、例えば、全長０．５～８ｍｍ、幅０．１～５ｍｍ、好ましくは、全長１～１０ｍｍ、幅０．２～３ｍｍ、より好ましくは、全長１～５ｍｍ、幅０．５～２ｍｍである。この切欠部は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、スペーサの形成時に、切欠部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記スペーサの材質および大きさ並びに切欠部については、後述の実施形態においても同様である。
　本発明において、カバー１０３の材質は、特に制限されない。例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。カバーの血液を導入するための流路の天井部に相当する部分は、親水処理されることがさらに好ましい。親水処理としては、例えば界面活性剤を塗布する方法、プラズマ処理などによりカバー表面に水酸基、カルボニル基、カルボキシル基などの親水性官能基を導入する方法等がある。また、試薬層上にレシチン等の界面活性剤からなる層を形成してもよい。カバーの大きさは、特に制限されない。例えば、全長５～１００ｍｍ、幅３～５０ｍｍ、厚み０．０１～０.５ｍｍであり、好ましくは、全長１０～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０.２５ｍｍであり、より好ましくは、全長１５～３０ｍｍ、幅５～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．１ｍｍである。カバーには空気孔９が形成されていることが好ましく、形状は、例えば、円形、楕円形、多角形等である。その大きさは、例えば、最大直径０．０１～１０ｍｍ、好ましくは、最大直径０．０５～５ｍｍ、より好ましくは、最大直径０．１～２ｍｍである。この空気孔は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、カバーの形成時に、空気抜き部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記カバーの材質および大きさ並びに空気孔については、後述の実施形態においても同様である。
　さらに、この第１バイオセンサは、絶縁基板１０１、スペーサ１０２およびカバー１０３をこの順序で積層し、一体化することで製造できる。前記３つの部材は、接着剤あるいは熱融着等で貼り合わせることにより一体化される。前記接着剤としては、例えば、エポキシ系接着剤、アクリル系接着剤、ポリウレタン系接着剤、また熱硬化性接着剤（ホットメルト接着剤等）、ＵＶ硬化性接着剤等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　この第１バイオセンサを用いた血液成分量、例えば、血糖値の測定は、次のようにして実施される。まず、専用のランセットで指先等を穿刺し、出血させる。一方、前記第１バイオセンサを専用の測定装置（メータ）にセットする。出血した血液に、測定装置にセットした第１バイオセンサの血液供給口を接触させ、毛細管現象により血液を第１バイオセンサ内部に導入する。この第１バイオセンサによる分析は、次のステップにより行われる。
　なお、この実施形態１Ａにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１の電極系、第２の電極系、第３の電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図１４に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図１２に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。測定装置２は、第１バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図１３に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第２電圧は、第２電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｇを含む）との間に印加させる。図１３において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、３００ｍＶ～５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、６回行う。
　前記第２工程を２回以上行う場合において、各第２電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。これは、異なる電圧で反応する妨害物質の影響をみることが出来るためである。
　この工程Ｂにおいては、第２工程の後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）に電圧を印加させる（第１工程）。図１３において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、４回行う。例えば、第２工程、第２工程、第１工程、第２工程のように、順番に行う。前記第１工程を２回以上行う場合において、各第１電圧は、同一の電圧であってもよい。これは、たとえば、時間軸における応答値（電流値）の推移をみることができるためである。
　この工程Ｂにおいては、前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第２工程と、前記第１工程を、互い違いに行ってもよい。
　この工程Ｂにおいて、第１工程と第２工程は、入れ替えてもよい。すなわち、図１２における例では、第２工程を一番先に行っているが、第１工程を一番先に行ってもよい。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第１電流値と、前記第２電極系に前記第２電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第２電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図１２に示すように血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程および第２工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図１３に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図１３において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られた第３ヘマトクリット値に依存する電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　なお、この実施形態においては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極は使用しない。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
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　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する電流値（第１電流値と第２電流値）とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、第１バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　この実施形態１Ａによれば、血液成分を測定するための第１電極系と第２電極系に、それぞれ異なる電圧を印加することにより、異なる電圧で反応する妨害物質の影響を、最終的に得られる血液成分の量に反映させることができる。
　［実施形態１Ｂ］
　実施形態１Ｂは、本発明の血液成分の量の第１測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態１Ｂにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系および第３電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図１７に示す。
　実施形態１Ｂにおいては、測定装置２は、図１５に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第２電圧は、第２電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｇを含む）との間に印加させる。図１６において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、６回行う。この工程Ｂにおいては、第２工程と同時に、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。図１６において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、３００～６００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、４回行う。
　測定装置２は、図１６に示すように血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程および第２工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この実施形態１Ｂにおいては、第３工程の後にも、血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程および第２工程）を行う点以外は、実施形態１Ａと同様である。
　この実施形態１Ｂにおいては、図１７に示す第１電極系（Ｇｌｕ－１）と第２電極系（Ｇｌｕ－２）の対極として用いられる電極を、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極と対極として用いて、ヘマトクリット値に依存する電流値を検出することができる。図１７においては、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極として電極Ｄ、対極として電極Ｇを用いているが、第１電極系の対極の一つである電極Ｅも、第３電極系の作用極または対極として用いてもよい。第１電極系（Ｇｌｕ－１）と第２電極系（Ｇｌｕ－２）の対極として用いられる電極を、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極と対極として用いるため、グルコース測定により受ける影響は軽微であり、よって、血液成分の量に依存する第１および第２電流値を検出する第１工程および第２工程を行っている途中で、ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程を行うことができる。
　［実施形態１Ｃ］
　実施形態１Ｃは、本発明の血液成分の量の第１測定方法の一例である。
　図６、図７、図８Ａおよび図８Ｂに、本発明の測定方法において用いるバイオセンサの別の一例（以下、「第２バイオセンサ」と呼ぶことがある）を示す。図６は、前記第２バイオセンサの分解斜視図であり、図７は図６の前記バイオセンサの断面図であり、図８Ａは図６の前記バイオセンサの平面図であり、図８Ｂは、図６中のＢ部の拡大図である。前記四図において、同一部分には同一符号を付している。この第２バイオセンサは、一例として、血液成分としてグルコースを測定するためのセンサである。
　図示のように、この第２バイオセンサは、絶縁基板１１１の上に、５個の電極４２、４３、４４、４５および４６が形成されている。これらの電極は、作用極と対極に切り換え可能である。電極４２、４３、４４、４５および４６の表面は、ＣＭＣ等の高分子材料で被覆されている。電極４２および４６の一部を覆うように第１試薬層３６が、電極４３、４４および４５の一部を覆うように第２試薬層３７が、配置されている。前記第１試薬層３６と前記第２試薬層３７は、離れて配置されている。前記第１試薬層は、血液中の血液成分の量を測定するための試薬、好ましくは酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）、より好ましくは酸化還元酵素とメディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。前記第２の試薬層は、血液中の血液成分の量を測定するための試薬、好ましくは酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）、より好ましくは酸化還元酵素とメディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。
　前記絶縁基板１１１の上には、一方の端部（図において右側端部）を残してスペーサ１０２を介しカバー１０３が配置されている。この第２バイオセンサには、各電極（４２、４３、４４、４５および４６）に血液を導入するために、絶縁基板１１１、スペーサ１０２およびカバー１０３から成る流路８が形成されている。この流路８の先端は、第２バイオセンサの他方の端部（図において左側端部）まで延伸しており、外部に対し開口すること血液供給口１０となっている。前記５個の電極（４２、４３、４４、４５、および４６）は各々リードと連結し、これらのリードは、前記一方の端部側（図において右側端部）に延びており、リードの先端はカバーに覆われずに露出している。前記カバー１０３において、流路８の右側端部に対応する部分（第２試薬層３７上もしくは、電極４４上）には、空気孔９が形成されている。さらに、流路８内に、前記第１試薬層３６、前記第２試薬層３７がそれぞれ離れて配置されている。
　本発明において、前記絶縁基板の材質は、特に制限されず、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリイミド（ＰＩ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、モノマーキャストナイロン（ＭＣ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、メタクリル樹脂（ＰＭＭＡ）、ＡＢＳ樹脂（ＡＢＳ）、ガラス等が使用でき、このなかで、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）およびポリイミド（ＰＩ）が好ましく、より好ましくは、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）である。絶縁基板の大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０５～２ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．１～１ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．１～０．６ｍｍである。前記絶縁基板の材質および大きさについては、後述の実施形態においても同様である。
　絶縁基板上の電極およびリードは、例えば、金、白金、パラジウム等を材料として、スパッタリング法あるいは蒸着法により導電層を形成し、これをレーザーにより特定の電極パターンに加工することで形成できる。レーザーとしては、例えば、ＹＡＧレーザー、ＣＯ2レーザー、エキシマレーザー等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　前記第２試薬層３７は、次のようにして形成する。例えば、酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）を０．１～５Ｕ／センサ、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、酵素安定化剤（例えばマルチトール等）を１～５０ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層３７をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極４３、４４および４５の一部を覆うように試薬層３７が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　前記第１試薬層３６は、次のようにして形成する。例えば、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層３６をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極４２および４６の一部を覆うように試薬層３６が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　本発明において、スペーサ１０２の材質は、特に制限されず、例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。また、スペーサの大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０１～１ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０．５ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．２５ｍｍである。この例のスペーサには、血液導入のための流路となるＩ字形状の切欠部が形成されているが、その大きさは、例えば、全長０．５～８ｍｍ、幅０．１～５ｍｍ、好ましくは、全長１～１０ｍｍ、幅０．２～３ｍｍ、より好ましくは、全長１～５ｍｍ、幅０．５～２ｍｍである。この切欠部は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、スペーサの形成時に、切欠部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記スペーサの材質および大きさ並びに切欠部については、後述の実施形態においても同様である。
　本発明において、カバー１０３の材質は、特に制限されない。例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。カバーの血液を導入するための流路の天井部に相当する部分は、親水処理されることがさらに好ましい。親水処理としては、例えば界面活性剤を塗布する方法、プラズマ処理などによりカバー表面に水酸基、カルボニル基、カルボキシル基などの親水性官能基を導入する方法等がある。また、試薬層上にレシチン等の界面活性剤からなる層を形成してもよい。カバーの大きさは、特に制限されない。例えば、全長５～１００ｍｍ、幅３～５０ｍｍ、厚み０．０１～０.５ｍｍであり、好ましくは、全長１０～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０.２５ｍｍであり、より好ましくは、全長１５～３０ｍｍ、幅５～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．１ｍｍである。カバーには空気孔９が形成されていることが好ましく、形状は、例えば、円形、楕円形、多角形等である。その大きさは、例えば、最大直径０．０１～１０ｍｍ、好ましくは、最大直径０．０５～５ｍｍ、より好ましくは、最大直径０．１～２ｍｍである。この空気孔は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、カバーの形成時に、空気抜き部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記カバーの材質および大きさ並びに空気孔については、後述の実施形態においても同様である。
　さらに、この第２バイオセンサは、絶縁基板１１１、スペーサ１０２およびカバー１０３をこの順序で積層し、一体化することで製造できる。前記３つの部材は、接着剤あるいは熱融着等で貼り合わせることにより一体化される。前記接着剤としては、例えば、エポキシ系接着剤、アクリル系接着剤、ポリウレタン系接着剤、また熱硬化性接着剤（ホットメルト接着剤等）、ＵＶ硬化性接着剤等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　この第２バイオセンサを用いた血液成分量、例えば、血糖値の測定は、次のようにして実施される。まず、専用のランセットで指先等を穿刺し、出血させる。一方、前記第２バイオセンサを専用の測定装置（メータ）にセットする。出血した血液に、測定装置にセットした第２バイオセンサの血液供給口を接触させ、毛細管現象により血液をセンサ内部に導入する。この第２バイオセンサによる分析は、次のステップにより行われる。
　なお、この実施形態１Ｃにおいては、第２バイオセンサにおける電極４２を電極Ａ、電極４３を電極Ｃ、電極４４を電極Ｄ、電極４５を電極Ｅ、および電極４６を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、および第３電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図１９に示す。なお、図１８は、実施形態１Ｃにおいて、電圧印加パターンにおける電極と印加電圧と印加タイミングと印加時間とを示す表である。
　実施形態１Ｃは、第１バイオセンサの代わりに第２バイオセンサを用い、第３電極系として作用極として電極Ｇ、対極として電極Ｅを用いた以外は、実施形態１Ｂと同一である。
　この実施形態１Ｃにおいては、図１９に示す第１電極系（Ｇｌｕ－１）と第２電極系（Ｇｌｕ－２）の対極として用いられる電極を、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極と対極として用いて、ヘマトクリット値に依存する電流値を検出することができる。図１９においては、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極として電極Ｇ、対極として電極Ｅを用いているが、第１電極系の対極の一つである電極Ｄも、第３電極系の作用極または対極として用いてもよい。第１電極系（Ｇｌｕ－１）と第２電極系（Ｇｌｕ－２）の対極として用いられる電極を、第３電極系（Ｈｃｔ－３）の作用極と対極として用いるため、グルコース測定により受ける影響は軽微であり、よって、血液成分の量に依存する第１および第２電流値を検出する第１工程および第２工程を行っている途中で、ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程を行うことができる。
　［実施形態２］
　実施形態２は、本発明の血液成分の量の第２測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態２においては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第４電極系および第３電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図２２に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図２０に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、前記バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図２１に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図２１において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図２０に示すように血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図２１に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系との間に印加させる。図２１において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第４電圧の電圧値および印加時間を制御し、第４電極系（作用極としての電極Ｄと、対極としての電極Ｇを含む）に電圧を印加させる（第４工程）。図２１において、「Ｈｃｔ－４」で示す電圧印加が、この第４工程における電圧印加である。この第４電圧は、２５００ｍＶである。前記第４電極系に前記第４電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第４電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　なお、この実施形態においては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極は使用しない。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000003
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第４電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、前記バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態３Ａ］
　実施形態３Ａは、本発明の血液成分の量の第３測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態３Ａにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第４電極系および第３電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図２５に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図２３に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図２４に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図２４において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、２００ｍＶ～５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１工程を２回以上行う場合において、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。これは、異なる電圧で反応する妨害物質の影響をみることが出来るためである。
　この工程Ｂにおいては、第１工程とは別に、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図２４において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、４回行う。例えば、第１工程、第２工程、第１工程、第２工程のように、順番に行う。前記第２工程を２回以上行う場合において、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。これは、たとえば、時間軸における応答値（電流値）の推移をみることができるためである。
　この工程Ｂにおいては、前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第２工程と、前記第１工程を、互い違いに行ってもよい。
　この工程Ｂにおいて、第１工程と第２工程は、入れ替えてもよい。すなわち、図２４における例では、第１工程を一番先に行っているが、第２工程を一番先に行ってもよい。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第１電流値と、前記第２電極系に前記第２電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第２電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図２３に示すように血液成分の量に依存する第１電流値の測定工程（第１工程）および血液成分の量に依存する第２電流値の測定工程（第２工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図２４に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図２４において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第４電圧の電圧値および印加時間を制御し、第４電極系に電圧を印加させる（第４工程）。図２４において、「Ｈｃｔ－２」で示す電圧印加が、この第４工程における電圧印加である。この第４電圧は、２５００ｍＶである。前記第４電極系に前記第４電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第４電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　なお、この実施形態においては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極は使用しない。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000004
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第４電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値と、血液成分に依存する第２電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態３Ｂ］
　実施形態３Ｂは、本発明の血液成分の量の第３測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態３Ｂにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系および第４電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図２８に示す。
　実施形態３Ｂにおいては、測定装置２は、図２６に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図２７において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、４００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と異なるタイミングに、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図２７において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、４００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、４回行う。
　この実施形態３Ｂにおいては、第１電圧と第２電圧が一定である点以外は、実施形態３Ａと同様である。
　［実施形態３Ｃ］
　実施形態３Ｃは、本発明の血液成分の量の第３測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態３Ｃにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系および第４電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図３１に示す。
　実施形態３Ｃにおいては、測定装置２は、図２９に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図３０において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と同時に、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図３０において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、５回行う。
　この実施形態３Ｃにおいては、第１工程と第２工程が同じタイミングである点以外は、実施形態３Ｂと同様である。
　［実施形態３Ｄ］
　実施形態３Ｄは、本発明の血液成分の量の第３測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態１Ａで用いた第１バイオセンサと同一である。なお、この実施形態３Ｄにおいては、第１バイオセンサにおける電極１２を電極Ａ、電極１３を電極Ｃ、電極１４を電極Ｄ、電極１５を電極Ｅ、電極１６を電極Ｇ、および電極１７を電極Ｆとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系および第４電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図３４に示す。
　実施形態３Ｄにおいては、測定装置２は、図３２に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図３３において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と同時または別のタイミングで、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図３３において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、５回行う。
　この実施形態３Ｄにおいては、第１電圧と第２電圧の一部が同じタイミングである点以外は、実施形態３Ｂと同様である。
　［実施形態４］
　実施形態４は、本発明の血液成分の量の第４測定方法の一例である。
　図９、図１０、図１１Ａおよび図１１Ｂに、本発明の測定方法において用いるバイオセンサの別の一例（以下、「第３バイオセンサ」と呼ぶことがある）を示す。図９は、前記第３バイオセンサの分解斜視図であり、図１０は図９の前記バイオセンサの断面図であり、図１１Ａは図９の前記バイオセンサの平面図であり、図１１Ｂは、図９中のＣ部の拡大図である。前記四図において、同一部分には同一符号を付している。このバイオセンサは、一例として、血液成分としてグルコースを測定するためのセンサである。
　図示のように、このセンサは、絶縁基板１２１の上に、６個の電極７２、７３、７４、７５、７６および７７が形成されている。これらの電極は、作用極と対極に切り換え可能である。電極７２、７３、７４、７５、７６および７７の表面は、ＣＭＣ等の高分子材料で被覆されている。電極７２および７６の一部を覆うように第１試薬層６６が、電極７３、７４および７５の一部を覆うように第２試薬層６７が、配置されている。電極７７の上には、第１試薬層６６も第２試薬層６７も配置されていない。前記第１試薬層６６と前記第２試薬層６７は、離れて配置されている。前記第２試薬層は、血液中の血液成分の量を測定するための試薬、好ましくは酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）、より好ましくは酸化還元酵素とメディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。前記第３の試薬層は、血液中の血液成分の量を測定するための試薬、好ましくは酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）、より好ましくは酸化還元酵素とメディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を含み、任意成分として、酵素安定化剤、結晶均質化剤等を含む。
　前記絶縁基板１２１の上には、一方の端部（図において右側端部）を残してスペーサ１０２を介しカバー１０３が配置されている。この第３バイオセンサには、各電極（７２、７３、７４、７５、７６および７７）に血液を導入するために、絶縁基板１２１、スペーサ１０２およびカバー１０３から成る流路８が形成されている。この流路８の先端は、第３バイオセンサの他方の端部（図において左側端部）まで延伸しており、外部に対し開口すること血液供給口１０となっている。前記６個の電極（７２、７３、７４、７５、７６および７７）は各々リードと連結し、これらのリードは、前記一方の端部側（図において右側端部）に延びており、リードの先端はカバーに覆われずに露出している。前記カバー１０３において、流路８の右側端部に対応する部分（第２試薬層６７上もしくは、電極７４上）には、空気孔９が形成されている。さらに、流路８内に、前記第１試薬層６６、前記第２試薬層６７がそれぞれ離れて配置されている。
　本発明において、前記絶縁基板の材質は、特に制限されず、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリイミド（ＰＩ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、モノマーキャストナイロン（ＭＣ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、メタクリル樹脂（ＰＭＭＡ）、ＡＢＳ樹脂（ＡＢＳ）、ガラス等が使用でき、このなかで、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリカーボネート（ＰＣ）およびポリイミド（ＰＩ）が好ましく、より好ましくは、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）である。絶縁基板の大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０５～２ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．１～１ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．１～０．６ｍｍである。前記絶縁基板の材質および大きさについては、後述の実施形態においても同様である。
　絶縁基板上の電極およびリードは、例えば、金、白金、パラジウム等を材料として、スパッタリング法あるいは蒸着法により導電層を形成し、これをレーザーにより特定の電極パターンに加工することで形成できる。レーザーとしては、例えば、ＹＡＧレーザー、ＣＯ2レーザー、エキシマレーザー等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　前記第２試薬層６７は、次のようにして形成する。例えば、酸化還元酵素（例えばグルコースデヒドロゲナーゼ等）を０．１～５Ｕ／センサ、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、酵素安定化剤（例えばマルチトール等）を１～５０ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層６７をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極７３、７４および７５の一部を覆うように試薬層７が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　前記第１試薬層６６は、次のようにして形成する。例えば、メディエータ（例えばフェリシアン化カリウム等）を１０～２００ｍＭ、結晶均質化剤（例えばタウリン等）を２０～２００ｍＭ含む水溶液を円形のスリット部に滴下し、乾燥させる。このスリット部を設置することで、滴下された水溶液の拡がりを抑制することができ、試薬層６６をより正確な位置に配置することができる。これにより、電極７２および７６の一部を覆うように試薬層６が形成される。前記乾燥は、例えば、自然乾燥でも温風を用いた強制乾燥でもよい。
　本発明において、スペーサ１０２の材質は、特に制限されず、例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。また、スペーサの大きさは、特に制限されず、例えば、全長５～１００ｍｍ、幅２～５０ｍｍ、厚み０．０１～１ｍｍであり、好ましくは、全長７～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０．５ｍｍであり、より好ましくは、全長１０～３０ｍｍ、幅３～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．２５ｍｍである。この例のスペーサには、血液導入のための流路となるＩ字形状の切欠部が形成されているが、その大きさは、例えば、全長０．５～８ｍｍ、幅０．１～５ｍｍ、好ましくは、全長１～１０ｍｍ、幅０．２～３ｍｍ、より好ましくは、全長１～５ｍｍ、幅０．５～２ｍｍである。この切欠部は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、スペーサの形成時に、切欠部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記スペーサの材質および大きさ並びに切欠部については、後述の実施形態においても同様である。
　本発明において、カバー１０３の材質は、特に制限されない。例えば、絶縁基板と同様の材料が使用できる。カバーの血液を導入するための流路の天井部に相当する部分は、親水処理されることがさらに好ましい。親水処理としては、例えば界面活性剤を塗布する方法、プラズマ処理などによりカバー表面に水酸基、カルボニル基、カルボキシル基などの親水性官能基を導入する方法等がある。また、試薬層上にレシチン等の界面活性剤からなる層を形成してもよい。カバーの大きさは、特に制限されない。例えば、全長５～１００ｍｍ、幅３～５０ｍｍ、厚み０．０１～０.５ｍｍであり、好ましくは、全長１０～５０ｍｍ、幅３～２０ｍｍ、厚み０．０５～０.２５ｍｍであり、より好ましくは、全長１５～３０ｍｍ、幅５～１０ｍｍ、厚み０．０５～０．１ｍｍである。カバーには空気孔９が形成されていることが好ましく、形状は、例えば、円形、楕円形、多角形等である。その大きさは、例えば、最大直径０．０１～１０ｍｍ、好ましくは、最大直径０．０５～５ｍｍ、より好ましくは、最大直径０．１～２ｍｍである。この空気孔は、例えば、レーザーやドリル等で穿孔して形成してもよいし、カバーの形成時に、空気抜き部が形成できるような金型を使用して形成してもよい。前記カバーの材質および大きさ並びに空気孔については、後述の実施形態においても同様である。
　さらに、この第３バイオセンサは、絶縁基板１２１、スペーサ１０２およびカバー１０３をこの順序で積層し、一体化することで製造できる。前記３つの部材は、接着剤あるいは熱融着等で貼り合わせることにより一体化される。前記接着剤としては、例えば、エポキシ系接着剤、アクリル系接着剤、ポリウレタン系接着剤、また熱硬化性接着剤（ホットメルト接着剤等）、ＵＶ硬化性接着剤等が使用できる。これについても、後述の実施形態において同様である。
　この第３バイオセンサを用いた血液成分量、例えば、血糖値の測定は、次のようにして実施される。まず、専用のランセットで指先等を穿刺し、出血させる。一方、前記センサを専用の測定装置（メータ）にセットする。出血した血液に、測定装置にセットしたセンサの血液供給口を接触させ、毛細管現象により血液をセンサ内部に導入する。このセンサによる分析は、次のステップにより行われる。
　なお、この実施形態４においては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第３電極系、第５電極系および第６電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図３７に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図３５に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図３６に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図３６において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図３５に示すように血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図３６に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図３６において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第５電圧の電圧値および印加時間を制御し、第５電極系（作用極としての電極Ｆと、対極としての電極Ａおよび電極Ｇを含む）に電圧を印加させる（第５工程）。図３６において、「Ｈｃｔ－５」で示す電圧印加が、この第５工程における電圧印加である。この第５電圧は、２５００ｍＶである。前記第５電極系に前記第５電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第５電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程および第５工程とは別に、第６電圧の電圧値および印加時間を制御し、第６電極系（作用極としての電極Ｆと、対極としての電極Ｃ、電極Ｅおよび電極Ｄを含む）に電圧を印加させる（第６工程）。図３６において、「Ｈｃｔ－６」で示す電圧印加が、この第６工程における電圧印加である。この第６電圧は、２５００ｍＶである。前記第６電極系に前記第６電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第６電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　なお、この実施形態においては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極を使用する。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000005
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第５電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第６電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態５］
　実施形態５は、本発明の血液成分の量の第５測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態５においては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第３電極系、第５電極系、第６電極系および第７電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図４０に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図３８に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図３９に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図３９において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、４００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１工程を２回以上行う場合において、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。これは、異なる電圧で反応する妨害物質の影響をみることが出来るためである。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第１電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図３８に示すように血液成分の量に依存する第１電流値の測定工程（第１工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図３９に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図３９において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第５電圧の電圧値および印加時間を制御し、第５電極系に電圧を印加させる（第５工程）。図３９において、「Ｈｃｔ－５」で示す電圧印加が、この第５工程における電圧印加である。この第５電圧は、２５００ｍＶである。前記第５電極系に前記第５電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第５電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程および第５工程とは別に、第６電圧の電圧値および印加時間を制御し、第６電極系に電圧を印加させる（第６工程）。図３９において、「Ｈｃｔ－６」で示す電圧印加が、この第６工程における電圧印加である。この第６電圧は、２５００ｍＶである。前記第６電極系に前記第６電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第６電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程、第５工程および第６工程とは別に、第７電圧の電圧値および印加時間を制御し、第７電極系に電圧を印加させる（第７工程）。図３９において、「Ｈｃｔ－７」で示す電圧印加が、この第７工程における電圧印加である。この第７電圧は、２５００ｍＶである。前記第７電極系に前記第７電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第７電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいて、前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程を行ってもよい。
　なお、この実施形態５においては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極を使用する。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000006
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第５電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第６電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第７電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態６Ａ］
　実施形態６Ａは、本発明の血液成分の量の第６測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態６Ａにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系および第６電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図４３に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図４１に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図４２に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図４２において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、２００ｍＶ～５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１工程を２回以上行う場合において、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。これは、異なる電圧で反応する妨害物質の影響をみることが出来るためである。
　この工程Ｂにおいては、第１工程とは別に、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図４２において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、４回行う。例えば、第１工程、第２工程、第１工程、第２工程のように、順番に行う。前記第２工程を２回以上行う場合において、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。これは、たとえば、時間軸における応答値（電流値）の推移をみることができるためである。
　この工程Ｂにおいては、前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第２工程と、前記第１工程を、互い違いに行ってもよい。
　この工程Ｂにおいて、第１工程と第２工程は、入れ替えてもよい。すなわち、図４１における例では、第１工程を一番先に行っているが、第２工程を一番先に行ってもよい。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第１電流値と、前記第２電極系に前記第２電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第２電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図４１に示すように血液成分の量に依存する第１電流値の測定工程（第１工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図４２に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図４２において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第５電圧の電圧値および印加時間を制御し、第５電極系に電圧を印加させる（第５工程）。図４２において、「Ｈｃｔ－５」で示す電圧印加が、この第５工程における電圧印加である。この第５電圧は、２５００ｍＶである。前記第５電極系に前記第５電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第５電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程および第５工程とは別に、第６電圧の電圧値および印加時間を制御し、第６電極系に電圧を印加させる（第６工程）。図４２において、「Ｈｃｔ－６」で示す電圧印加が、この第６工程における電圧印加である。この第６電圧は、２５００ｍＶである。前記第６電極系に前記第６電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第６電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいて、全ての第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　この工程Ｃにおいて、全ての第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　なお、この実施形態６Ａにおいては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極を使用する。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000007
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第５電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第６電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値と、血液成分に依存する第２電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態６Ｂ］
　実施形態６Ｂは、本発明の血液成分の量の第６測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態６Ｂにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系および第６電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図４６に示す。
　実施形態６Ｂにおいては、測定装置２は、図４４に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｅおよび電極Ｄを含む）との間に印加させる。図４５において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、４００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と異なるタイミングで、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図４５において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、４００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、４回行う。
　なお、この実施形態６Ｂにおいては、第１工程における第１電圧と第２工程における第２電圧が一定である以外は、実施形態６Ａと同様である。
　［実施形態６Ｃ］
　実施形態６Ｃは、本発明の血液成分の量の第６測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態６Ｃにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系および第６電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図４９に示す。
　実施形態６Ｃにおいては、測定装置２は、図４７に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図４８において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と同時に、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図４８において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、５回行う。
　この実施形態６Ｃにおいては、第１工程と第２工程が同じタイミングである点以外は、実施形態６Ｂと同様である。
　この工程Ｃにおいて、全ての第１工程および第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　［実施形態６Ｄ］
　実施形態６Ｄは、本発明の血液成分の量の第６測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態６Ｄにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系および第６電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図５２に示す。
　実施形態６Ｄにおいては、測定装置２は、図５０に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図５１において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と同時または別のタイミングで、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図５１において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、５回行う。
　この実施形態６Ｄにおいては、第１電圧と第２電圧の一部が同じタイミングである点以外は、実施形態６Ｂと同様である。
　この工程Ｃにおいて、全ての第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　この工程Ｃにおいて、全ての第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　［実施形態７Ａ］
　実施形態７Ａは、本発明の血液成分の量の第７測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態７Ａにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系、第６電極系および第７電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図５５に示す。
　（工程Ａ：検体（血液）の検知）
　電極Ｄと電極Ｅの両電極間に電圧を印加し、血液の導入に伴う電流値の変化により血液の導入を検知する。血液の導入を確認したら、以降のステップを開始する。この工程Ａでの印加電圧は、例えば、０．０５～１Ｖ、好ましくは０．７Ｖである。そして、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させる。なお、この工程Ａは任意の工程である。
　（工程Ｂ：血液成分の量に依存する電流値の測定工程）
　測定装置２は、図５３に示すように、血液中のグルコースとグルコース酸化還元酵素とを一定時間反応させた後、第１電圧の電圧値および印加時間を制御し、第１電極系に電圧を印加させる（第１工程）。測定装置２は、バイオセンサ３に測定対象の血液が導入されて検知電極系（電極Ｄと電極Ｅ）によって血液を検知すると、電流の計測を開始する。
　このとき、測定装置２は、図５４に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｄおよび電極Ｅを含む）との間に印加させる。図５４において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、２００ｍＶ～５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。
　前記第１工程を２回以上行う場合において、各第１電圧は、それぞれ異なる電圧であってもよい。これは、異なる電圧で反応する妨害物質の影響をみることが出来るためである。
　この工程Ｂにおいては、第１工程とは別に、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図５４において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、４回行う。例えば、第１工程、第２工程、第１工程、第２工程のように、順番に行う。前記第２工程を２回以上行う場合において、各第２電圧は、同一の電圧であってもよい。これは、たとえば、時間軸における応答値（電流値）の推移をみることができるためである。
　この工程Ｂにおいては、前記第１工程を２回以上行い、
　前記第２工程を２回以上行い、
　前記第２工程と、前記第１工程を、互い違いに行ってもよい。
　この工程Ｂにおいて、第１工程と第２工程は、入れ替えてもよい。すなわち、図５４における例では、第１工程を一番先に行っているが、第２工程を一番先に行ってもよい。
　前記第１電極系に前記第１電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第１電流値と、前記第２電極系に前記第２電圧を印加して得られた血液成分の量に依存する第２電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　（工程Ｃ：Ｈｃｔ値の測定工程）
　測定装置２は、図５３に示すように血液成分の量に依存する電流値の測定工程（第１工程および第２工程）の後、第３電圧の電圧値および印加時間を制御し、第３電極系に電圧（第３工程）を印加させる。なお、この例においては工程Ｂ、次いで工程Ｃを行っているが、工程Ｃを先に行い、次いで工程Ｂを行ってもよい。
　このとき、測定装置２は、図５４に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第３電圧は、第３電極系（作用極としての電極Ａと、対極としての電極Ｃを含む）との間に印加させる。図５４において、「Ｈｃｔ－３」で示す電圧印加が、この工程における電圧印加である。この第３電圧は、２５００ｍＶである。前記第３電極系に前記第３電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第３電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程とは別に、第５電圧の電圧値および印加時間を制御し、第５電極系に電圧を印加させる（第５工程）。図５４において、「Ｈｃｔ－５」で示す電圧印加が、この第５工程における電圧印加である。この第５電圧は、２５００ｍＶである。前記第５電極系に前記第５電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第５電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程および第５工程とは別に、第６電圧の電圧値および印加時間を制御し、第６電極系に電圧を印加させる（第６工程）。図５４において、「Ｈｃｔ－６」で示す電圧印加が、この第６工程における電圧印加である。この第６電圧は、２５００ｍＶである。前記第６電極系に前記第６電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第６電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいては、第３工程、第５工程および第６工程とは別に、第７電圧の電圧値および印加時間を制御し、第７電極系に電圧を印加させる（第７工程）。図３９において、「Ｈｃｔ－７」で示す電圧印加が、この第７工程における電圧印加である。この第７電圧は、２５００ｍＶである。前記第７電極系に前記第７電圧を印加して得られたヘマトクリット値に依存する第７電流値は、以下の血液成分の量を算出する工程において用いる。
　この工程Ｃにおいて、全ての前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　この工程Ｃにおいて、全ての前記第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程を行ってもよい。
　なお、この実施形態７Ａにおいては、ＣＭＣ等の高分子を除き、前記第２試薬層および前記第３試薬層が配置されていない電極Ｆ、すなわち、裸の電極を使用する。
　（工程Ｄ：血液成分の量を算出する工程）
　得られた複数、例えば複数の前記血液成分の量に依存する電流値は、以下のように処理して、前記血液成分の量に依存する電流値として用いる。
　上記抽出した複数の所定時間における測定電流値や上記抽出した生体情報測定装置の温度情報などに基づいた複数のパラメータ（ｘ１，ｘ２，ｘ３・・・，ｘ１０）を算出し（「所定のパラメータを計算する」）、重回帰式（たとえば、下記式１）により、補正量を算出し、血液成分の量に依存する電流値を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000008
　前記工程Ｃで得られたＨｃｔ値に依存する第３電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第５電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第６電流値と、Ｈｃｔ値に依存する第７電流値と、前記工程Ｂで得られた血液成分に依存する第１電流値と、血液成分に依存する第２電流値とを用いて、血液成分の量を得る。これは、予め作成した検量線（検量テーブルを含む）に基づき行うことが好ましい。得られた血液成分の量は、測定装置に表示若しくは記憶される。
　血液成分の量を算出した後、バイオセンサを廃棄し、表示部などをオフした後、測定器もオフして、生体試料の成分の測定を終了する。
　［実施形態７Ｂ］
　実施形態７Ｂは、本発明の血液成分の量の第７測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態７Ｂにおいては、第３バイオセンサにおける電極７２を電極Ａ、電極７３を電極Ｃ、電極７４を電極Ｄ、電極７５を電極Ｅ、電極７６を電極Ｆ、および電極７７を電極Ｇとして用いる。それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系、第６電極系および第７電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図５８に示す。
　実施形態７Ｂにおいては、測定装置２は、図５６に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。第１電圧は、第１電極系（作用極としての電極Ｃと、対極としての電極Ｅおよび電極Ｄを含む）との間に印加させる。図５７において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、４００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、５回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と異なるタイミングで、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図５７において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、４００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、４回行う。
　なお、この実施形態７Ｂにおいては、第１工程における第１電圧と第２工程における第２電圧が一定である以外は、実施形態７Ａと同様である。
　［実施形態７Ｃ］
　実施形態７Ｃは、本発明の血液成分の量の第７測定方法の一例である。
　この方法において用いるバイオセンサは、実施形態４で用いた第３バイオセンサと同一である。なお、この実施形態７Ｃにおいては、それぞれの電極を第１電極系、第２電極系、第３電極系、第５電極系、第６電極系および第７電極系の対極および作用極のいずれとして用いるかは、図６１に示す。
　実施形態７Ｃにおいては、測定装置２は、図５９に示すように、電圧印加電極、印加電圧、印加時間および印加タイミングを変化させる。図６０において、「Ｇｌｕ－１」で示す電圧印加が、この第１工程における電圧印加である。この第１電圧は、５００ｍＶである。また、前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程は、複数回、例えば、４回行う。この工程Ｂにおいては、第１工程と別のタイミングで、第２電圧の電圧値および印加時間を制御し、第２電極系に電圧を印加させる（第２工程）。図６９において、「Ｇｌｕ－２」で示す電圧印加が、この第２工程における電圧印加である。この第２電圧は、３００ｍＶ～５００ｍＶである。また、前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する電流値を検出する第２工程は、複数回、例えば、６回行う。
　この実施形態７Ｃにおいては、第１電圧と第２電圧の大きさが異なる点以外は、実施形態７Ｂと同様である。
　この工程Ｃにおいて、全ての前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　この工程Ｃにおいて、全ての前記第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行ってもよい。
　また、この工程Ｃにおいて、少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程を行ってもよい。
　以上のように、本発明のバイオセンサの製造方法は、生体試料の成分をさらに高精度に測定することが可能なバイオセンサを製造することができる。従って、本発明のバイオセンサの製造方法は、生物学、生化学および医学等の血液成分を測定する、あらゆる分野に好ましく使用でき、特に臨床検査の分野に好適である。
　２　　測定装置
　３　　センサ
　４　　表示部
　５　　装着口
　１０　血液供給口
　１０１、１１１、１２１　絶縁基板
　１０２　スペーサ
　１０３　カバー
　６、３６、６６　第１の試薬層
　７、３７、６７　第２の試薬層
　８　流路
　９　空気孔
　１２、４２、７２　電極Ａ
　１３、４３、７３　電極Ｃ
　１４、４４、７４　電極Ｄ
　１５、４５、７５　電極Ｅ
　１６、４６、７６　電極Ｇ
　７７　電極Ｆ
　２０６　入力端子部
　２３０　Ａ／Ｄ変換部
　２３１　判定手段
　２３２　表示部
　２３３　電源部
　２３４　メモリ
　２３５　時計
　２３６　補正手段
　２３７　電圧印加部
　２３８　電流－電圧変換部
　２３９　制御部

Claims (39)

  1. 　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
    　第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系と、
    　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
    　前記バイオセンサにおいて、
    　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
    　前記第２電極系上に第２試薬層が配置され、
    　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
    　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
    　前記第３作用極として、前記第１対極、前記第２作用極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
    　前記第３対極として、前記第１作用極、前記第１対極および前記第２対極の少なくとも一つを用い、
    　前記方法は、
    　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
    　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程と、
    　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
    　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法。
  2. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項１に記載の方法。
  3. 　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いる請求項１または２に記載の方法。
  4. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行う請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行う請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含む請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含む請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
    　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
    　第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
    　前記バイオセンサにおいて、
    　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
    　前記第４対極と前記第３作用極上に第２試薬層が配置され、
    　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
    　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
    　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
    　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
    　前記方法は、
    　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
    　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
    　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程と、
    　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法。
  9. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項８に記載の方法。
  10. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含む請求項８または９に記載の方法。
  11. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含む請求項８～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 　前記バイオセンサが、第４作用極と第４対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第４電極系を更に備え、
    　前記第４作用極として、前記第１対極を用い、
    　前記第４対極として、前記第２対極を用い、
    　前記方法は、
    　前記第４電極系に第４電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値を検出する第４工程を更に含み、
    　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第４電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む請求項１に記載の方法。
  13. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項１２に記載の方法。
  14. 　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いる請求項１２または１４に記載の方法。
  15. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行う請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行う請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
  17. 　第１作用極と第１対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第１電極系と、
    　第３作用極と第３対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第３電極系と、
    　第５作用極と第５対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第５電極系と、
    　第６作用極と第６対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第６電極系とを備えたバイオセンサを用いて、血液中の血液成分の量を測定する方法であり、
    　前記バイオセンサにおいて、
    　前記第１電極系上に第１試薬層が配置され、
    　前記第５電極系の第５対極上に第２試薬層が配置され、
    　前記第１試薬層と前記第２試薬層は、離れて配置され、
    　前記第５電極系の第５作用極と前記第６電極系の第６作用極上には、前記試薬層は配置されず、
    　前記第１試薬層および前記第２試薬層は、前記血液中の血液成分の量を測定するための試薬をそれぞれ含み、
    　前記第３作用極として、前記第５対極を用い、
    　前記第３対極として、前記第１作用極を用い、
    　前記第６対極として、前記第１作用極および前記第１対極のいずれか一つを用い、
    　前記方法は、
    　前記第１電極系に第１電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第１電流値を検出する第１工程と、
    　前記第３電極系に第３電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値を検出する第３工程と、
    　前記第５電極系に第５電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値を検出する第５工程と、
    　前記第６電極系に第６電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値を検出する第６工程と、
    　前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程を含む方法。
  18. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項１７に記載の方法。
  19. 　前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行う請求項１７または１８に記載の方法。
  20. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含む請求項１７～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含む請求項１７～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
    　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
    　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
    　前記方法は、
    　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
    　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である請求項１７に記載の方法。
  23. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項１８に記載の方法。
  24. 　前記第１工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行う請求項２２または２３に記載の方法。
  25. 　前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行う請求項２４に記載の方法。
  26. 　少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程が行われる請求項２３～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含む請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含む請求項２３～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 　前記バイオセンサが、第２作用極と第２対極とを有する血液成分の量に依存する電流値を測定するための第２電極系を更に備え、
    　前記第２試薬層は、前記第２電極系上にも配置され、
    　前記方法は、
    　前記第２電極系に第２電圧を印加し、前記血液成分の量に依存する第２電流値を検出する第２工程を更に含み、
    　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である請求項１７に記載の方法。
  30. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第１電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第１電流値を用いる請求項２９に記載の方法。
  31. 　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記血液成分の量を算出する工程における前記血液成分の量に依存する第２電流値として、得られた２つ以上の前記血液成分の量に依存する第２電流値を用いる請求項２９または３０に記載の方法。
  32. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　全ての前記第１工程と前記第２工程を同時に行う請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. 　前記第１工程を２回以上行い、
    　前記第２工程を２回以上行い、
    　前記第１工程と前記第２工程の一部を同時に行う請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
  34. 　前記第１工程および前記第２工程の後に、前記第３工程、前記第５工程、および前記第６工程を行う請求項２９～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、メディエータをそれぞれ含む請求項２９～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 　前記第１試薬層と前記第２試薬層が、酸化還元酵素を更に含む請求項２９～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 　前記バイオセンサが、第７作用極と第７対極とを有するヘマトクリット値に依存する電流値を測定するための第７電極系を更に備え、
    　前記第７作用極として、前記第５作用極および前記第６作用極のいずれか一つを用い、
    　前記第７対極として、前記第５対極を用い、
    　前記方法は、
    　前記第７電極系に第７電圧を印加し、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値を検出する第７工程を更に含み、
    　前記血液成分の量を算出する工程が、前記血液成分の量に依存する第１電流値と、前記血液成分の量に依存する第２電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第３電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第５電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第６電流値と、前記ヘマトクリット値に依存する第７電流値とを用いて、前記血液成分の量を算出する工程である請求項２９に記載の方法。
  38. 　前記第３工程、前記第５工程、前記第６工程より前に、前記第７工程を行う請求項３７に記載の方法。
  39. 　少なくとも１つの前記第１工程の後に、前記第７工程を行い、その後に更に前記第１工程が行われる請求項３７または３８に記載の方法。
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