WO2018069597A1 - Association de composes antibiotiques efficace contre des entérobactéries - Google Patents

Association de composes antibiotiques efficace contre des entérobactéries Download PDF

Info

Publication number
WO2018069597A1
WO2018069597A1 PCT/FR2017/052635 FR2017052635W WO2018069597A1 WO 2018069597 A1 WO2018069597 A1 WO 2018069597A1 FR 2017052635 W FR2017052635 W FR 2017052635W WO 2018069597 A1 WO2018069597 A1 WO 2018069597A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
colistin
combination
sulfadiazine
use according
association
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2017/052635
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Marc Rolain
Stéphanie LE PAGE
Liliane OKDAH
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aix Marseille Universite
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Assistance Publique Hopitaux de Marseille APHM
Fondation Mediterranee Infection
Original Assignee
Aix Marseille Universite
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Assistance Publique Hopitaux de Marseille APHM
Fondation Mediterranee Infection
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aix Marseille Universite, Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM, Assistance Publique Hopitaux de Marseille APHM, Fondation Mediterranee Infection filed Critical Aix Marseille Universite
Publication of WO2018069597A1 publication Critical patent/WO2018069597A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/63—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide
    • A61K31/635—Compounds containing para-N-benzenesulfonyl-N-groups, e.g. sulfanilamide, p-nitrobenzenesulfonyl hydrazide having a heterocyclic ring, e.g. sulfadiazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a novel combination of antibiotics having a synergistic bactericidal effect against Enterobacteriaceae. More specifically, this combination is a synergistic association of known old antibiotics, said combination being effective in the fight against multidrug-resistant enterobacteria having acquired a multi-resistance, or at least an effective resistance against enterobacteria resistant to at least one of the two antibiotics concerned, and / or to prevent the appearance of resistance of said enterobacteria against said antibiotics.
  • the bacteria are called "multidrug-resistant” (BMR) antibiotics due to the accumulation of resistance acquired vis-à-vis at least 3 families of antibiotics.
  • BMR multidrug-resistant
  • Enterobacteriaceae (the family Enterobacteriaceae) are one of the most important families of bacteria, both quantitatively (more than 40 genus) and qualitatively. They group together many genera, very ubiquitous, and these are frequently encountered in infectious pathology. They are the hosts of the man and the animals in which they reside mainly in the intestine. However, they can be found in the oral cavity, the moist regions of the skin, particularly the perineum, the nasal fossae and the female genital tract, where they can constitute a transient flora. The species Escherichia coli plays a predominant role because of its constant presence and its large predominance over other species.
  • enterobacteria is based on the following criteria: Gram-negative and fermenting bacilli (fermentative glucose attack), free from oxidase and reducing nitrates.
  • Pathogenic species have great variability in their behavior and their aggressiveness in the host. There are two groups of pathogenic enterobacteria: strict pathogens and opportunistic pathogens.
  • Strict pathogenic Enterobacteriaceae often result in an infection whose severity depends on their point of entry. Introduced by a contaminated food, they will cause intestinal disorders by adhering to the intestinal mucosa and then crossing the enterocyte barrier. Symptoms are often characterized by severe diarrhea followed by dehydration (severe in infants).
  • Enterobacterial opportunistic pathogens do not have sufficient pathogenicity to trigger pathology in a healthy host.
  • they are capable of triggering infections in immunocompromised individuals such as septicemia, especially in hospitals (for example, Klebsiella), which are responsible for respiratory, urinary and abdominal infections, in particular iatrogenic infections postoperatively.
  • the species Klebsiella pneumoniae is most often responsible for respiratory infections. They can be present in the intestine and be an integral part of its commensal flora, this is how the species Escherichia coli is responsible for urinary tract infection (especially in women) as well as responsible for childhood gastroenteritis.
  • Colistin a product obtained by fermentation of Paenibacillus polymyxa consists of polycationic peptide compounds namely Colistin A of formula (la) which comprises a fatty acid chain: (S) -6-methyloctanoyl and / or colistin B of formula (Ib) below which comprises (fatty acid chain: 6-methylheptanoyl) [1].
  • Colistin A of formula (la) which comprises a fatty acid chain: (S) -6-methyloctanoyl and / or colistin B of formula (Ib) below which comprises (fatty acid chain: 6-methylheptanoyl) [1].
  • This is a class of antibiotic developed in the 1950s.
  • Colistin A also called polymyxin B
  • Colistin is administered either parenterally in the form of an inactive prodrug: sodium colistimethate (CMS), or orally or topically as Colistin sulfate.
  • CMS sodium colistimethate
  • Colistin has been used to treat enterobacteria that are not naturally inherently resistant, particularly on E. coli and Klebsiella pneumoniae strains. However, the emergence of resistances acquired by spontaneous chromosomal mutation with respect to Colistin has been observed. Colistine is an antibiotic that has a strong ability to induce spontaneous resistant mutants within the same bacterial population.
  • Polymyxin B an antibiotic that is no longer manufactured - was also tested in combination with Sulfadiazine against a non-fermenting bacterium Serratia maroesen, a bacterium naturally inherently resistant to Polymyxin B in 1970 by Greenfield et al. [4]. Again, only strains intrinsically resistant to Polymyxin B were tested, and not strains that were not intrinsically resistant to Colistin but were colistin-resistant.
  • Sulfadiazine (4-amino-N- (pyrimidin-2-yl) benzenesulfonamide) of formula (II) is an antibiotic of the sulphonamide family which has antibacterial activity used inter alia to disinfect burns but especially used in combination with pyrimethamine as a parasita ire to treat Toxoplasma gond // infections the toxoplasmosis agent.
  • Sulfadiazine although active in vitro on Enterobacteriaceae, is never used separately in therapeutics because it systematically selects resistant mutants.
  • Proteus bacteria with the Colistin-Sulfadiazine combination has been described [12], the treated proteus bacteria being enterobacteria intrinsically resistant to Colistin and not to acquired resistance to Colistin.
  • the genome of Proteus bacteria is very different from that of other Enterobacteriaceae, in particular with a GC level of less than 38% compared with a GC level of more than 50% in other Enterobacteriaceae.
  • This intrinsic resistance of Proteus strains is caused by the activation of an operon called operon arn which codes for a sugar, amino arabinose on the LPS of the outer membrane. Nevertheless, the precise molecular support of the activation of this operon remains unknown to this day.
  • the Klebsiella pneumoniae strain was a laboratory strain initially sensitive to Colistin and artificially resistant to colistin in the laboratory by creating colistin-resistant spontaneous mutants from agar plates enriched with increasing concentrations of colistin by a known mechanism. It is thus a mechanism of resistance different from that of the strains having acquired a resistance by spontaneous chromosomal mutation or by the acquisition of a plasmid.
  • Fusidic acid (formula III) is an antibiotic active against Gram + bacteria, including anti-staphylococcal fungi synthesized by Fusidium coccineum which has been used in Europe for more than 40 years to treat infections of the skin and infections bone and chronic joints [7]. It is a steroid antibiotic and the only marketed member of the fusidane class.
  • Fusidic acid inhibits protein synthesis by binding to the elongation factor: EF-G-PIB, blocking translocation of ribosomal transfer RNAs as well as ribosome progression on messenger RNA.
  • Numerous mutations can occur in the FuSa gene that codes for the EF-G elongation factor, and some of these mutations can lead to high-level resistance (minimal inhibitory concentration [MIC]> 64mg / L).
  • Low level resistance ⁇ 8mg / L
  • fusB, fusC and fusD genes that encode small proteins that protect EF-G-PIB.
  • the genes encoding these proteins are propagated by plasmids and can be selected primarily by the use of topical antibiotic.
  • Fusidic acid in the form of sodium fusidate is well absorbed after administration with a bioavailability ⁇ 90%. It has a long plasma half-life of 10-14h.
  • a recent study (8) shows a synergistic effect of the combination of Colistin and fusidic acid against a strain of a bacterium Acinetobacter baumannii resistant to colistin, a non-fermenting bacterium not belonging to the enterobacteria class.
  • the strains tested are not clinical strains but strains made artificially resistant to colistin in the laboratory without the mutated gene being indicated.
  • the resistance gene for Colistin is most often the pmra / pmrb gene, whereas in enterobacteria, it is mainly the mgrB genes for chromosomal mutations and a plasmid carrying a mcr-1 gene for plasmid mutations that are involved in resistance to Colistin.
  • GB 2 128 617 describes the use of hydrolysed derivatives of Colistin, namely a nanopeptdide lacking the terminal diamino-butyric acid substituted with a fatty acid chain in combination with fusidic acid to treat Enterobacteriaceae Salmonella typhimurium and E coli sensitive to Colistin (see Table 1).
  • P. aeruginosa is a non-fermenting bacterium that does not belong to Enterobacteriaceae, on the one hand and, on the other hand, these P. aeruginosa strains exhibit acquired resistance through chromosomal mutations in phoQ and pmrB genes.
  • the phoQ and pmrB genes of Enterobacteriaceae have important genomic distinctions with respect to similar genes in Pseudomonas aeruginosa.
  • enterobacteria having acquired resistance to Colistin, it has been shown that it is mainly the mgrB genes for chromosomal mutations and a plasmid carrying a mcr-1 gene for plasmid mutations which are involved in the resistance to Colistin.
  • a concentration X of Colistin and Y of Sulfadiazine show inhibitory and bactericidal effects in combination which do not exist for the same concentrations X and Y for each molecule taken separately, and this on all enterobacteria tested.
  • Colistin and fusidic acid has never been reported as active against isolated multidrug-resistant clinical strains, particularly resistant to Colistin against non-naturally inherently resistant but resistant strains by acquisition of this resistance by spontaneous chromosomal mutation or by acquisition of a plasmid and / or to prevent or reduce the appearance of resistance against said antibiotics for sensitive strains.
  • the present invention provides a combination of a first antibiotic compound Colistin and a second antibiotic compound selected from Sulfadiazine and fusidic acid for use in a therapeutic treatment against pathogenic enterobacteria.
  • the present invention provides a combination of Colistin and Sulfadiazine against enterobacteria not naturally inherently resistant but having acquired resistance against at least Colistin and / or Sulfadiazine, especially against a multi-resistant bacterium.
  • the present invention provides a combination of colistin and fusidic acid against enterobacteria, in particular pathogenic enterobacteria, preferably against enterobacteria which are not naturally intrinsically resistant but which have acquired resistance against at least colistin, in particular against a multi-resistant bacterium. .
  • enterobacteria the following bacteria are more particularly mentioned: Escherichia, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Providencia, Morganella, Citrobacter, Haifia and Yersinia.
  • Colistine is in the form of Colistin sulfate.
  • the combination of Colistin sulfate and Sulfadiazine according to the present invention is for oral or topical application.
  • oral route is understood to mean here: (a) orally, in particular in solid form, in particular tablet or in liquid form, or (b) nasogastric (that is to say, through a probe passing through the nose and joining the digestive tract) especially in liquid form.
  • Colistin is in the form of a prodrug inactive sodium colistimethate (also known as sodium colistin methanesulfonate or sodium colistin sulfomethate). Even more particularly, the combination comprising colistimethate sodium is for parenteral or oral application.
  • a prodrug inactive sodium colistimethate also known as sodium colistin methanesulfonate or sodium colistin sulfomethate.
  • Colistin sulphate or sodium colistimethate is used at a concentration of 0.25 to 2.5 million molecular units. every 6 hours, ie about 1 to 10 million molecular units / 24h, preferably 2 to 5 million molecular units / 24h and Sulfadiazine is used at a concentration of 1 to 3 g / 24h.
  • Colistin sulfate or colistimethate sodium is used at a dosage of 2.5 to 50 million molecular units per day and Sulfadiazine is used at a dosage of 500 mg to 2.5g per day, the combination being administered for 4 days prior to transplantation.
  • Colistin sulphate or sodium colistimethate is used at a concentration of 0.25 to 2.5 million molecular units. the 6 hours, ie approximately 1 to 10 million units / 24h, preferably 2 to 5 million molecular units / 24h and the fusidic acid in the form of sodium fusidate is used at a concentration of 1 to 3 g / 24h, preferably 2 to 2.5 g / 24h.
  • Colistin sulfate or colistimethate sodium is used at a dosage of 2.5 to 50 million molecular units per day and fusidic acid in the form of sodium fusidate is used at a dosage of 1 to 5 g per day, preferably 2 to 3 g / day, the combination being administered for 4 days before the transplant.
  • the combination according to the present invention is implemented for use in a therapeutic treatment against enterobacteria selected from bacteria of the genera Klebsiella and Escherichia.
  • the combination according to the present invention is implemented for use in a therapeutic treatment against enterobacteria selected from bacteria Klebsiella pneumoniae and Escherichia coll.
  • the combination of Colistin and Sulfadiazine is more active against said Colistin-acquired enterobacteriaceae than the combination of Colistin and Sulfamethoxazole as well as the combination of Colistin and Acid. fusidic.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a combination of at least two so-called antibiotic compounds in therapeutically effective amounts for use according to the invention.
  • the pharmaceutical composition is in the form that can be administered parenterally, orally or topically.
  • parenterally or orally administrable pharmaceutical composition is (a) in the form of a tablet or (b) powder to be administered as a solution or (c) as an aerosol.
  • FIG. 2 shows the positioning of the E-test strips for the "crossed E-test" with the CMI of A alone and CMI of B alone and CMI of the combination A + B (with two antibiotics A and B), the graduations reflect concentrations (high / low concentrations at the top / bottom of the vertical graduation and left / right of the horizontal graduation;
  • FIG. 5A represents photos presenting the MICs of Colistin following the deposit of Colistine E-tests on agars pretreated with antibiotics with: A) E-test strip of Colistin alone (A)) and with Sulfadiazine in the medium with different concentrations (B) to E)), after 18 h of incubation on a strain of Klebsiella pneumoniaeTH 21;
  • FIG. 5B represents photos showing the results of a synergistic action of a combination of antibiotics by reading the fusidic acid inhibition diameters on agars pretreated with colistin on a strain of Klebsiella pneumoniae with fusidic acid alone (A) and on agar supplemented with Colistin (B and C).
  • FIG. 6 represents photos of results of the E-tests for obtaining MICs of: A) Colistin, B) Trimethoprim-Sulfamethoxazole, C) Sulfamethoxazole, D) Trimethoprim, and the reading of the E-tests.
  • FIG. 7 is an example of a test plate result. micro dilution in plate on a strain of Klebsiella pneumoniae TH 21 evidenced by a dye (appearing in gray in Figure 7) in the presence of living bacteria;
  • FIG. 8 is an example of an isobologram for Klebsiella pneumoniae strains that have shown synergism by the microdilution technique between Colistin and Sulfadiazine; and FIGS. 9A and 9B show the bactericidal kinetics curves for the Colistin and Sulfadiazine combination on a strain of Klebsiella pneumoniae (FIG. 9A) and E. coli (FIG. 9B) and FIG. 9C for the Colistin and Fusidic acid on a strain of Klebsiella pneumoniae; the bacterial concentration (C) is given on the ordinate as log10 in CFu / mc and the time is given in hours below.
  • E. coli Escherichia coli 2 strains of Escherichia coli (E. coli) were sensitive to Colistin, and
  • strains were resistant to Sulfadiazine including 13 strains Klebsiella pneumoniae and 23 strains of Escherichia coli and 17 susceptible to Sulfadiazine including 16 strains Klebsiella pneumoniae and 1 strains of Escherichia coli, and
  • Colistine sulphate, fusidic acid and Sulfadiazine were purchased from Sigma-Aldrich (Saint Quentin Fallavier, France).
  • Colistin sulphate is freshly prepared according to EUCAST guidelines (European committee on antimicrobial susceptibility testing) in a suitable solvent. Sulfadiazine was dissolved in DMSO (dimethysulfoxide).
  • E-assay strips of Colistin (CT), Sulfamethoxazole (SMX) and Trimethoprim-Sulfamethoxazole (SXT) were used (Biomerieux, Craponne, France).
  • the concentrations present on the E-test strip are between 0.016 and 256 pg / ml for Colistin, 0.064 and 1024 ⁇ g / ml for Sulfamethoxazole, 0.002 and 32 ⁇ g / ml for Trimethoprim-Sulfamethoxazole, and 0.002 to 32 ⁇ g / ml for Trimethoprim.
  • Fusidic acid was dissolved in sterile distilled water. Strips of E-tests of colistin (CT), fusidic acid were used (Biomerieux, Craponne, France). The concentrations present on the E-test strips are between 0.016 and 256 ⁇ g / ml for colistin and between 0.016 and 256 ⁇ g / ml for fusidic acid.
  • the minimal inhibitory concentrations (MIC) of Colistin, fusidic acid, Sulfamethoxazole, Trimethoprim and Sulfamethoxazole-Trimethoprim were determined by the E-assay diffusion method on agar medium in accordance with EUCAST recommendations.
  • the inoculum is obtained from fresh cultures on TSA medium (Trypticase Soy Agar) after 18-24h of growth in a drying oven at 37 °.
  • a bacterial suspension is then carried out by putting a quantity of bacteria in a tube of sterile water until an opacity of 0.5 McFarland corresponding to a bacterial concentration of 1x10 8 CFU / mL is obtained. This suspension is then seeded. on Mueller-Hinton agar (Biomerieux, Marcy l'Etoile, France) by sampling (manual reference technique) always in accordance with the recommendations of EUCAST.
  • This technique consists in dipping a sterile swab in the suspension, removing the excess inoculum by pressure on the edge of the tube, regularly swab the agar plate by turning the plate 60 ° (in at least 3 different directions) until seeding of the entire surface.
  • the E-test strip is then deposited and contains an increasing antibiotic gradient from one end to the other. Antibiotic concentrations are written directly on this strip for easy reading.
  • the agar is then incubated for 24 hours in an oven at 37 ° C. The reading of the MIC is visible at the intersection of the border of the inhibition zone on the strip. For Sulfadiazine the determination of the MIC was determined in a liquid medium. This technique is presented on 96-well plates.
  • the dilution range of Sulfadiazine On one side of the plate is the dilution range of Sulfadiazine and on the other side the bacterial inoculum is prepared in a Mueller-Hinton liquid solution having a bacterial concentration of 5x10 5 CFU / ml. Each tube of the range is seeded so as to obtain 50% of antibiotic suspension in 50% of bacterial suspension. The tubes are then incubated at 37 ° C for 24 hours. The MIC is determined by evaluating bacterial growth in the individual tubes by measuring the absorbance of the solution (after shaking) in each tube using a spectrophotometer at a wavelength of 630 nm. 2.2. Synergy test.
  • the Champagne cork test consists of checking whether there exists on a solid medium a synergistic action between 2 given molecules. This synergy is observed by the appearance of an additional zone of inhibition between 2 disks of antibiotics.
  • the strains to be tested must be freshly obtained on TSA medium after 18 to 24 hours of growth in an oven at 37 ° C. Bacterial colonies are removed and suspended in sterile physiological water until an opacity of 0.5 McFarland is obtained. Seeding is then carried out on Mueller-Hinton square agar plates (Biomérieux, Marcy l'Etoile, France) as for the production of a standard antibiogram.
  • Colistine disks (impregnated at 50pg) are deposited using a sterile forceps, then blank disks are deposited at a variable distance from the first disk. The distance between the disks varies from 0 mm to 30 mm as shown in FIG. 1.
  • a solution of Sulfadiazine at 3 ⁇ 10 4 ⁇ g / ml is then prepared and with a pipette 10 ⁇ l of the Sulfadiazine solution is deposited on the blank discs. They are incubated in the oven at 37 ° C for 24 hours.
  • Colistine (CT) + fusidic acid (FA) fusidic acid discs (impregnated at 10pg) are deposited at a variable distance from the first disc of colistin.
  • E-test method or antibiotic discs deposited on agar plates pre-treated with antibiotics. This test involves adding an antibiotic to the agar plate and testing the activity of another antibiotic by determining its MIC (Minimum Inhibitory Concentration) by the E-test method or determining the increase in the area of the antibiotic. inhibition in mm by the disk diffusion method.
  • MIC Minimum Inhibitory Concentration
  • An agar solution is prepared using a Mueller-Hinton powder to make Mueller-Hinton agar plates according to the supplier's instructions (Biomérieux, Craponne, France). This medium is autoclaved; then the bottles are placed in a water bath at a temperature of 45-50 ° C to obtain a liquid solution. Meanwhile, Solutions containing different concentrations of Sulfadiazine and others of Colistin are performed (Sulfadiazine dissolves in DMSO, Colistin dissolves in water). The bottles once removed from the water bath are placed under the PSM (Microbiological Safety Station) to preserve sterility. A waiting time is then necessary for the medium to drop in temperature.
  • PSM Mericrobiological Safety Station
  • a certain volume of the medium is deposited as well as a specific volume of antibiotic to obtain a solution containing the desired final concentration of antibiotic.
  • the mixture is then homogenized to obtain a homogeneous solution, then poured into petri dishes of 90 mm and then dried. The same steps are repeated for the preparation of the different concentrations. It can be noted that DMSO does not interfere in the results since its percentage does not exceed 10% in the medium and boxes pretreated with DMSO have been prepared and will be used as controls.
  • This method has been used to show whether there is any synergy between Colistin (CT) and Sulfamethoxazole (SMX) or Colistin and Trimethoprim (TMP) or Colistin and Trimethoprim-Sulfamethoxazole (SXT). This method has also been used to show if there is a possible synergy between Colistin (CT) and fusidic acid (FA).
  • CT Colistin
  • SMX Sulfamethoxazole
  • TMP Colistin and Trimethoprim
  • SXT Colistin and Trimethoprim-Sulfamethoxazole
  • the first step in this method is to determine the MIC for each antibiotic taken separately for the given strains using the standard E-test method (see section 2.1). An E-test strip corresponding to each antibiotic is tested and the MIC is then determined by direct reading.
  • inoculum and inoculation of Mueller-Hinton agar plates was performed in the same manner as before.
  • Two E-test strips are placed on the agar cross with a 90 ° angle.
  • the E-test strip of Colistine is placed first then the strip of the other antibiotic is placed at the crossing of the respective MICs of the two antibiotics (MICs were determined in advance in the first part).
  • the dishes are then incubated for 24 hours at 37 ° C. After incubation, the new MICs are then read directly on agar plates according to the same rules of EUCAST [5].
  • Figure 2 shows the positioning of the E-test strips for the "Cross E-test”.
  • the bacterial inoculum was prepared at a final concentration equal to 5 ⁇ 10 5 CFU / ml and then 100 ⁇ l of this inoculum is inoculated into each of the wells of the plate.
  • Colistin concentrations range from 0 to 100 ⁇ g / ml and are deposited in the vertical wells. Sulfadiazine and fusidic acid are deposited in the horizontal wells and the concentrations vary between 0 and 64 ⁇ g / ml. After 24 hours of incubation at 37 ° C, bacterial growth is evaluated by measuring the absorbance of the solution (after shaking) in each well using a spectrophotometer at a wavelength of 630 nm.
  • the activity of each antimicrobial combination is estimated using the maximum fractional inhibitory concentration index (FIC).
  • the FIC values were interpreted according to the following criterion: the combination of antibiotics has a synergistic effect when the value of the FIC ⁇ 0.5. All experiments are performed in duplicate to ensure reproducibility of results [6].
  • the assays for bactericidal determination of the different associations were carried out on a representative strain of each species.
  • the isolates were selected for testing against Colistin alone, Sulfadiazine alone and Colistin-Sulfadiazine combination at concentrations equal to the MIC.
  • Solutions of Colistine and Sulfadiazine were freshly prepared as well as bacterial suspensions (concentration of 5 ⁇ 10 5 CFU / ml in liquid Mueller-Hinton culture medium (MH)).
  • 4 vials (tubes) were implemented as follows:
  • the second contains a volume of the bacterial suspension + 1/2 volume of Colistine solution + 1/2 volume of MH medium.
  • the third contains a volume of the bacterial suspension + 1/2 volume of Sulfadiazine solution + 1/2 volume of MH medium.
  • the fourth contains a volume of the bacterial suspension + 1/2 volume of Sulfadiazine solution + 1/2 volume of Colistine solution.
  • 100 ⁇ samples from each condition are taken every 0- 2-4-6 and 24 hours. Cascade dilutions ranging from 10 "1 to 10 " 8 are made for each sample taken. Then, a 100 ⁇ sample of each dilution is spread on Mueller-Hinton agar and incubated for 18-24 hours at 37 ° C. After 24h, the number of colonies present on the agar is counted, knowing that a box is taken into account only if the number of colonies is between 30 and 300.
  • Synergy is defined as a decrease> 2 log10 of the number of colonies at 24 h for the combination with respect to the most active agent alone.
  • Indifference is defined as ⁇ 2 log10 decrease in the number of colonies at 24 hours for the combination versus the most active drug alone.
  • Antagonism is defined as a> 2 log10 increase in the number of colonies at 24 hours for combination over the most active drug alone.
  • FIG. 4A illustrates the test of the so-called Champagne plug screening method between Colistin and Sulfadiazine (300 ⁇ g).
  • Part A of Figure 4 represents an area where there is no visible synergy because the distance between CT and SUL is too great. But if we compare the discs as in Part B, there is a synergy zone present between the 2 discs for 5, 10 and 15 mm.
  • FIG. 4B illustrates the test of the so-called cap screening method. of Champagne between colistin and fusidic acid on a strain of Klebsiella pneumoniae TH54.
  • a decrease in the MIC of Colistin was observed in the presence of different concentrations of Sulfadiazine: 8, 16, 32, 64, 128, 150, 200, 300 ⁇ g / ml, including Colistin resistant strains and strains. sensitive to Colistine.
  • Sulfadiazine 88,000, 16 32, 64, 128, 150, 200, 300 ⁇ g / ml, including Colistin resistant strains and strains. sensitive to Colistine.
  • the 55 strains there are 48 strains whose MIC decreased by 1/2 dilution to 14 dilutions. However, for 3 strains the MIC did not change.
  • 25 strains had a decrease in colistin MIC at least greater than 2 dilutions while for other sulfonamides the combination was less effective.
  • Sulfamethoxazole, Trimethoprim, and Trimethoprime Sulfomethoxazole-sensitive strains show greater decreases in MIC of up to 3 to 14 dilutions, whereas Sulfamethoxazole and Trimethoprim-Sulfomethoxazole-resistant strains show greater decreases in MIC than
  • the MIC decreases between 0.5 and 2 dilutions (eg Klebsiella pneumoniae H5500, Klebsiella pneumoniae TH114, Klebsiella pneumoniae CI2, Klebsiella pneumoniae CI3, Escherichia coli PIOS, Escherichia coli FHM 19).
  • the results are shown in Tables 1 and 2 below.
  • FIG. 5A shows photos presenting the MICs of Colistin following the deposition of Colistine E-assays (0.016-256 ⁇ g / ml) on agar pretreated with antibiotics with: A) E-test strip of Colistin alone without Sulfadiazine in the medium , MIC: 32 ⁇ g / ml B) E-test of Colistin and 8 ⁇ g / ml of Sulfadiazine, MIC: 4 ⁇ g / ml C) Colistine E-test and 16 ⁇ g / ml of Sulfadiazine, MIC: 0.19 ⁇ g / ml D ) E-assay of Colistin and 32 ⁇ g / ml of Sulfadiazine, MIC: 0.125 ⁇ g / ml and E) E-test of Colistin and 64 ⁇ g / ml of Sulfadiazine in the medium, MIC: 0.125 ⁇ g / m
  • Figure 5B shows photos showing the results of a synergistic action of a combination of antibiotics by reading the fusidic acid inhibition diameters on agar pretreated with colistin on a Klebsiella pneumoniae LH102 strain.
  • FA single fusidic acid disk
  • FIG. 6 represents photos showing the results of the E-tests for obtaining MICs of: A) Colistin, B) Trimethoprim-Sulfamethoxazole, C) Sulfamethoxazole, D) Trimethoprim, and the reading of the E-tests crossed for the following combinations: E) Colistin + Trimethoprim-Sulfamethoxazole, F) Colistin + Sulfamethoxazole and G) Colistin + Trimethoprim on a strain of Klebsiella pneumoniae TH 21.
  • test For the micro dilution plate test ("checkerboard test"), all strains tested showed synergy with the combination of antibiotics. Indeed, it is found that the growth inhibitory effect is observed at lower concentrations when the two molecules are in combination with respect to each antibiotic taken separately.
  • FIG. 7 is an example of a result of a plate of the micro dilution dilution test on a strain of Klebsiella pneumoniae TH 21. The result is highlighted after the use of a vital dye: iodonitrotetrazolium, which gives a red color (appearing in gray in Figure 7) in the presence of living bacteria.
  • a vital dye iodonitrotetrazolium
  • a concentration X of Colistin and Y of Sulfadiazine or fusidic acid show a combination inhibitory effect which does not exist for the same X and Y concentrations for each molecule taken alone. This result was observed in all the strains tested.
  • Another way to analyze this kind of test is to draw an isobologram using fractional inhibitory concentration (FIC) calculations. Obtaining a concave curve is a synergy index, which is the case for the 4 strains present in FIG. 8.
  • Figure 8 is an example of an isobologram for strains of Klebsiella pneumoniae TH20, PTH166, LH70 and LH17 that have shown synergism by the microdilution technique in plate between Colistin and Sulfadiazine.
  • Colistine-Sulfadiazine inhibits the growth of all the strains tested in this study, even those resistant to Colistin.
  • the results on two strains resistant to Colistin Klebsiella pneumoniae E coli are explained.
  • the concentrations to be tested were chosen according to the MICs of each molecule, established by the micro dilution plate method.
  • the Colistin concentration 100 ⁇ g / ml
  • the Sulfadiazine concentration 200 ⁇ g / ml
  • the Colistin concentration 100 ⁇ g / ml
  • the Sulfadiazine concentration 100 ⁇ g / ml
  • the concentrations of the combination they were chosen by the lowest concentration of the combination that can inhibit growth.
  • these values are: 16 ⁇ g / ml of Colistin + 8 ⁇ g / ml of Sulfadiazine and for E coli these values are: 12 ⁇ g / ml of Colistin + 4 ⁇ g / ml of Sulfadiazine.
  • FIG. 9A and 9B show the kinetic curves of the bactericidal study for Klebsiella pneumoniae LH 70 ( Figure 9A) and E. coli FHM19 (FIG. 9B) with the bacterial concentration on the ordinate and the duration in hours on the abscissa.
  • Figure 9C shows the kinetic curve of the bactericidal study for Klebsiella pneumoniae TH54 with the combination Colistin and Fusidic acid with the bacterial concentration on the ordinate and on the abscissa the duration in hours.
  • Fusidic Acid A Bacterial Elongation Factor Inhibitor for the Oral Treatment of Acute and Chronic Staphylococcal Infections. Prabhavathi Fernandes. CSH perspectives 2016 Fernandes P
  • Colistin and Fusidic Acid A Novel Potent Synergistic Combination for Multi-Drug Resistant Treatment of Acinetobacter Baumannii Infections. Antimicrob. Agents Chemother.2015 Aug: 59 (8): 4544-50.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

La présente invention concerne une association d'un premier composé antibiotique la Colistine et un second composé antibiotique choisi parmi la Sulfadiazine et l'acide fusidique pour une utilisation dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine.

Description

Association de composés antibiotiques efficace contre des entérobactéries
La présente invention concerne une nouvelle combinaison d'antibiotiques ayant un effet bactéricide synergique contre des entérobactéries. Plus précisément, cette association est une association synergique d'anciens antibiotiques connus, ladite association étant efficace dans la lutte contre les entérobactéries multirésistantes ayant acquis une multirésistance, ou au moins efficace contre les entérobactéries résistantes à au moins l'un des deux antibiotiques concernés, et/ou pour empêcher l'apparition de résistance des dites entérobactéries contre les dits antibiotiques.
Les bactéries sont dites « multirésistantes » (BMR) aux antibiotiques du fait de l'accumulation de résistances acquises vis-à-vis d'au moins 3 familles d'antibiotiques.
Les infections causées par des entérobactéries multi-résistantes représentent un problème de santé majeur à travers le monde.
Les Entérobactéries (à savoir le famille des Enterobacteriaceaé) constituent l'une des plus importantes familles de bactéries, autant du point de vue quantitatif (plus d'une quarantaine de genres) que du point de vue qualitatif. Elles regroupent ainsi de nombreux genres, très ubiquitaires, et ceux-ci sont fréquemment rencontrés en pathologie infectieuse. Elles sont les hôtes de l'homme et des animaux chez lesquels elles résident principalement au niveau de l'intestin. On peut cependant les retrouver dans la cavité buccale, les régions humides de la peau en particulier le périnée, les fosses nasales et les voies génitales féminines dans lesquelles elles peuvent constituer une flore transitaire. L'espèce Escherichia coli y joue un rôle prépondérant en raison de sa présence constante et de sa large prédominance sur les autres espèces. D'autres espèces ont une présence moins marquée tel que des bactéries des genres Proteuset Klebsiella ainsi que Citrobacter, Hafnia, Providencia, Enterobacterà la présence plus irrégulière. La définition des entérobactéries repose sur les critères suivants : bacilles Gram négatifs et fermentantes (attaquant le glucose par voie fermentaire), dépourvus d'oxydase et réduisant les nitrates.
Leur pathologie est non spécifique mais tient surtout du « terrain » : un sujet immunodéprimé ne réagit pas comme un sujet sain. La polyrésistance aux antibiotiques que ces bactéries provient de mutations chromosomiques ou de plasmides de résistance.
Les espèces pathogènes possèdent une grande variabilité dans leur comportement et leur agressivité chez l'hôte. On distingue alors deux groupes d'entérobactéries pathogènes : Les pathogènes strictes et les pathogènes opportunistes.
Les entérobactéries pathogènes strictes entraînent souvent une infection dont la gravité dépend de leur point d'entrée. Introduites par un aliment contaminé, elles provoqueront des troubles intestinaux en adhérant sur la muqueuse intestinale puis en traversant la barrière entérocytaire. Les symptômes se caractérisent souvent par des diarrhées importantes suivies d'une déshydratation (grave chez le nourrisson).
Les entérobactéries pathogènes opportunistes ne disposent pas d'un pouvoir pathogène suffisant pour déclencher une pathologie chez un hôte sain. Elles sont en revanche susceptibles de déclencher des infections chez des sujets immunodéprimés comme des septicémies surtout en milieu hospitalier (par exemple, Klebsiella), responsables d'infections respiratoires, urinaires, abdominales en particulier iatrogènes en postopératoire. L'espèce Klebsiella pneumoniae est le plus souvent responsable d'infections respiratoires. Elles peuvent être présentes dans l'intestin et faire partie intégrante de sa flore commensale, c'est ainsi que l'espèce Escherichia coli est responsable d'infection urinaire (en particulier chez la femme) ainsi que responsable de gastro-entérite infantile.
Klebsiella pneumoniae et Escherichia coli à elles deux représentent 90% des infections par des entérobactéries. La Colistine un produit obtenu par fermentation de Paenibacillus polymyxa est constituée de composés peptidiques polycationiques à savoir la Colistine A de formule (la) laquelle comprend une chaîne d'acide gras: (S)-6-methyloctanoyl et/ou la colistine B de formule (Ib) ci-après laquelle comprend (chaîne d'acide gras: 6-methylheptanoyl)[l]. Il s'agit d'une classe d'antibiotique développé dans les années 1950.
Figure imgf000003_0001
(la) : Colistine A (aussi dénommée polymyxine B)
Figure imgf000004_0001
La Colistine est administrée soit par voie parentérale sous la forme d'une prodrogue inactive : le Colistiméthate de sodium (CMS), soit par voie orale ou topique sous forme de sulfate de Colistine.
La Colistine a été utilisée pour traiter des entérobactéries non naturellement intrinsèquement résistantes, notamment sur des souches E coli et Klebsiella pneumoniae. Mais, on a constaté l'émergence de résistances acquise par mutation chromosomique spontanée vis à vis de la Colistine. La Colistine est un antibiotique qui possède un fort pouvoir d'induction de mutants résistants spontanés au sein d'une même population bactérienne.
Une synergie d'action entre la Colistine et le Sulfafurazole, contre certaines bactéries Proteus sp naturellement intrinsèquement résistantes à la Colistine et au Sulfafurazole a été rapportée en 1963 par Russel et coll. [3]. Mais le sulfafurazole n'est plus disponible dans le commerce. D'autre part, le mécanisme de résistance des souches intrinsèquement résistantes à la Colistine est différent de celui de souches non intrinsèquement résistantes à la Colistine mais résistantes à la Colistine de façon acquise par mutation chromosomique spontanée (non transférable) notamment dans le gène mgrB ou par l'acquisition d'un plasmide de résistance (transférable de bactérie à bactérie) notamment un plasmide portant le gène mcr-1. La Polymyxine B - un antibiotique qui n'est plus fabriqué- a aussi été testée en combinaison avec la Sulfadiazine contre une bactérie non fermentante Serratia marœsœns, une bactérie naturellement intrinsèquement résistante à la Polymyxine B en 1970 par Greenfield et col. [4]. Là encore, n'ont été testées que des souches intrinsèquement résistantes à la Polymyxine B et pas des souches non intrinsèquement résistantes à la Colistine mais résistantes à la Colistine de façon acquise.
La Sulfadiazine (4-amino-N-(pyrimidin-2-yl) benzène sulfonamide) de formule (II) est un antibiotique de la famille des sulfamides qui possède une activité antibactérienne utilisée entre autre pour désinfecter les brûlures mais surtout utilisée en association avec la pyriméthamine comme a nti parasita ire pour traiter les infections à Toxoplasma gond// l'agent de la toxoplasmose.
Figure imgf000005_0001
La Sulfadiazine, bien qu'active in vitro sur les entérobactéries, n'est jamais utilisée séparément en thérapeutique car elle sélectionne systématiquement des mutants résistants.
Le traitement de veaux infectés par une bactérie Eco// sensible à la Colistine mais ayant acquis une résistance contre la Sulfadiazine, par une association de Colistine et Sulfadiazine a été décrit [11].
Le traitement de bactéries Proteus par l'association Colistine-Sulfadiazine a été décrit [12], les bactéries proteus traitées étant des entérobactéries intrinsèquement résistantes à la Colistine et non pas à résistance acquise à la Colistine. Le génome des bactéries Proteus est très différent de celui des autres entérobactéries avec notamment un taux de GC inférieur à 38% contre un taux de GC supérieur à 50% chez les autres entérobactéries. Des études récentes montrent que cette résistance intrinsèque des souches de Proteus est causée par l'activation d'un opéron dénommé opéron arn qui code pour un sucre, l'amino arabinose sur le LPS de la membrane externe. Néanmoins, le support moléculaire précis de l'activation de cet opéron reste inconnu à ce jour. Mais aucune mutation chromosomique n'a été déterminée contrairement au cas des entérobactéries à résistance acquises. Une synergie d'activité de la Colistine en combinaison avec la Triméthoprime- Sulfaméthoxazole (SXT), ou la Triméthoprime (TMP) (TMP n'est pas un antibiotique) contre des isolats d'une souche de Klebsiella pneumoniae de laboratoire rendue artificiellement résistante à la Colistine a été rapportée par Vidaillac et col. En 2012 [2]. Mais, la souche testée n'était pas résistante au Triméthoprime-Sulfaméthoxazole (SXT) et au Triméthoprime seul (TMP). La souche de Klebsiella pneumoniae était une souche de laboratoire initialement sensible à la Colistine et rendue artificiellement résistante à la Colistine en laboratoire par création de mutants spontanés résistant à la colistine à partir de géloses enrichies avec des concentrations croissantes de colistine selon un mécanisme connu. Il s'agit donc d'un mécanisme de résistance différent de celui des souches ayant acquis une résistance par mutation chromosomique spontanée ou par l'acquisition d'un plasmide.
L'acide fusidique (formule III) est un antibiotique actif contre les bactéries Gram+, notamment anti-staphylococcique synthétisé par des champignons : Fusidium coccineum qui a été utilisé en Europe depuis plus de 40 ans pour traiter les infections de la peau ainsi que les infections de l'os et des articulations chroniques [7]. C'est un antibiotique stéroïdien et le seul membre commercialisé de la classe des fusidanes.
Figure imgf000006_0001
L'acide fusidique inhibe la synthèse des protéines en se liant au facteur d'élongation : EF-G-PIB, bloquant la translocation des ARN de transfert sur le ribosome ainsi que la progression du ribosome sur l'ARN messager. De nombreuse mutations peuvent se produire au niveau du gène FuSa qui code pour le facteur d'élongation EF-G, et certaines de ces mutations peuvent conduire à une résistance de haut niveau (concentration minimale inhibitrice [CMI] > 64mg/L). La résistance de bas niveau (<8mg/L) est plus fréquente et elle est médiée par des gènes fusB, fusC et fusD qui codent pour des petites protéines qui protègent le EF-G-PIB. Les gènes codant pour ces protéines sont propagés par des plasmides et peuvent être sélectionnés principalement par l'utilisation d'antibiotique topique.
L'acide fusidique sous forme de fusidate de sodium est bien absorbé après administration avec une biodisponibilité <90%. Il possède une longue demi-vie plasmatique „ 10-14h.
Une étude récente (8) montre un effet synergique de la combinaison de Colistine et acide fusidique contre une souche d'une bactérie Acinetobacter baumannii résistante à la colistine, bactérie non fermentante n'appartenant pas à la classe des entérobactéries. D'autre part, les souches testées ne sont pas des souches cliniques mais des souches rendues artificiellement résistantes à la Colistine en laboratoire sans que le gène muté ne soit indiqué. Dans une autre étude récente [10], il a été montré que chez les bactéries Acinetobacter, le gène de résistance à la Colistine est le plus souvent le gène pmra/pmrb, alors que dans les entérobactéries, ce sont principalement les gènes mgrB pour les mutations chromosomiques et un plasmide portant un gène mcr-1 pour les mutations plasmidiques qui sont impliqués dans la résistance à la Colistine.
GB 2 128 617 décrit l'utilisation de dérivés hydrolysés de la Colistine, à savoir un nanopeptdide dépourvu de l'acide diamino-butyrique terminal substitué par une chaîne d'acide gras en combinaison avec l'acide fusidique pour traiter des entérobactéries Salmonella typhimurium et E Coli sensibles à la Colistine (voir tableau 1).
L'association synergique de Colistine et acide fusidique a été décrite [9] pour le traitement d'une bactérie non fermentante, souche P.aeruginosa, résistante à la Colistine. P.aeruginosa est une bactérie non fermentante qui n'appartient pas aux entérobactéries, d'une part et d'autre part, ces souches P.aeruginosa présentent une résistance acquise par des mutations chromosomiques dans des gènes phoQ et pmrB. Les gènes phoQ et pmrB des entérobactéries présentent des distinctions génomiques importantes par rapport aux gènes analogues dans Pseudomonas aeruginosa. En outre, et surtout, dans les entérobactéries ayant acquis une résistance à la Colistine, il a été montré que ce sont principalement les gènes mgrB pour les mutations chromosomiques et un plasmide portant un gène mcr-1 pour les mutations plasmidiques qui sont impliqués dans la résistance à la Colistine.
Selon la présente invention, il a été possible à l'aide d'une nouvelle méthodologie de « criblage » décrite ci-après de détecter des synergies d'action entre 2 antibiotiques vis à vis d'entérobactéries ayant acquis une résistance aux deux antibiotiques par mutation chromosomique spontanée ou par l'acquisition d'un plasmide, ainsi que vis à vis d'entérobactéries sensibles aux deux antibiotiques, notamment par la méthode dite du bouchon de Champagne, mise en œuvre sur un large panel de bactéries, en testant plusieurs combinaisons d'antibiotiques dont des combinaisons de Colistine et de plusieurs dérivés des sulfamides dont la Sulfadiazine et la combinaison de Colistine et acide fusidique.
Ainsi, selon la présente invention, on a découvert que l'association de Colistine et Sulfadiazine, molécules encore disponibles dans le commerce possédant des mécanismes d'action différents, présentent une activité synergique supérieure aux associations de Colistine et d'autres sulfamides testés contre des bactéries multirésistantes du type entérobactéries Gram négative fermentantes, non naturellement intrinsèquement résistantes à la Colistine et à la Sulfadiazine mais ayant acquis cette résistance, notamment Klebsiella pneumoniae et Escherichia coll.
Cette combinaison de Colistine et Sulfadiazine n'a jamais été rapportée comme active contre des souches cliniques isolées multi-résistantes, notamment résistantes à la Colistine et/ou aux Sulfamides contre des souches non naturellement intrinsèquement résistantes mais résistantes par acquisition de cette résistance par mutation chromosomique spontanée ou par l'acquisition d'un plasmide et/ou pour empêcher ou réduire l'apparition de résistance contre les dits antibiotiques pour des souches sensibles. On constate que les effets bactériostatique (inhibiteur de croissance) et bactéricide de cette association s'observent à des concentrations plus faibles quand les 2 molécules antibiotiques se trouvent en combinaison par rapport à chaque molécule antibiotique prise séparément. Autrement dit, une concentration X de Colistine et Y de Sulfadiazine montrent des effets inhibiteurs et bactéricides en combinaison qui n'existent pas pour les mêmes concentrations X et Y pour chaque molécule prise séparément, et ce sur toutes les entérobactéries testées.
Il ne découlait pas de l'Etat de la technique que l'association de Colistine et Sulfadiazine pouvait présenter une synergie sur des entérobactéries à résistances acquises qui sont des bactéries dont la similitude des génomes (vis-à-vis des bactéries Proteus à résistance intrinsèque) d'une part et/ou des mécanismes de résistances à la Colistine (vis-à- vis de la bactérie E Coli sensibles à la Colistine) sont substantiellement différents De même, alors que l'acide fusidique n'est pas actif contre les entérobactéries, selon la présente invention, on a découvert que l'association de Colistine et acide fusidique présente une activité synergique contre des bactéries multi résistantes du type entérobactéries Gram négative fermentantes, non naturellement intrinsèquement résistantes à la Colistine mais ayant acquis cette résistance, notamment Klebsiella pneumoniae et Escherichia .coll.
La combinaison de Colistine et acide fusidique n'a jamais été rapportée comme active contre des souches cliniques isolées multi-résistantes, notamment résistantes à la Colistine contre des souches non naturellement intrinsèquement résistantes mais résistantes par acquisition de cette résistance par mutation chromosomique spontanée ou par l'acquisition d'un plasmide et/ou pour empêcher ou réduire l'apparition de résistance contre les dits antibiotiques pour des souches sensibles.
Plus précisément la présente invention fournit une association d'un premier composé antibiotique la Colistine et un second composé antibiotique choisi parmi la Sulfadiazine et l'acide fusidique, pour une utilisation dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes
Plus particulièrement, la présente invention fournit une association de Colistine et Sulfadiazine contre les entérobactéries non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine et/ou la Sulfadiazine, notamment contre une bactérie multi résistante.
Plus particulièrement encore, la présente invention fournit une association de Colistine et acide fusidique contre les entérobactéries, notamment les entérobactéries pathogènes, de préférence contre des entérobactéries non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine, notamment contre une bactérie multi résistante.
Parmi les entérobactéries pathogènes, on cite plus particulièrement les bactéries suivantes Escherichia, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Providencia, Morganella, Citrobacter, Ha f nia et Yersinia.
Plus particulièrement, dans l'association la Colistine est sous forme de sulfate de Colistine. Plus particulièrement encore, l'association de sulfate de Colistine et de Sulfadiazine selon la présente invention est pour une application par voie orale ou par voie topique. On entend ici par « voie orale » : (a) par voie buccale notamment sous forme solide notamment de comprimé ou sous forme liquide ou (b) par voie naso-gastrique (c'est-à-dire à travers une sonde passant par le nez et rejoignant le tube digestif) notamment sous forme liquide.
Dans un autre mode de réalisation d'une association pour une utilisation selon la présente invention, la Colistine est sous forme d'une prodrogue inactive le colistiméthate de sodium (aussi dénommée méthanesulfonate de colistine sodique ou sulfomethate de colistine sodique). Plus particulièrement encore, l'association comprenant le colistiméthate de sodium est pour une application par voie parentérale ou voie orale.
Plus particulièrement encore, pour le traitement d'une infection, dans l'association de sulfate de Colistine et de Sulfadiazine selon la présente invention la sulfate de Colistine ou le colistiméthate de sodium est utilisée à une concentration de 0.25 à 2.5 millions d'unités moléculaires toutes les 6 heures, soit environ 1 à 10 millions d'unités moléculaires /24h, de préférence de 2 à 5 millions d'unités moléculaires /24h et la Sulfadiazine est utilisée à une concentration de 1 à 3 g/24h.
Pour un traitement par voie orale de décontamination digestive avant une greffe fécale pour les patients présentant des bactéries multi-résistantes, le sulfate de Colistine ou la colistiméthate de sodium est utilisé à un dosage de 2,5 à 50 millions d'unités moléculaires par jour et la Sulfadiazine est utilisée à un dosage de 500 mg à 2,5g par jour, l'association étant administrée pendant 4 jours avant la greffe.
Plus particulièrement encore, pour le traitement d'une infection, dans l'association de sulfate de Colistine et acide fusidique selon la présente invention la sulfate de Colistine ou le colistiméthate de sodium est utilisée à une concentration 0.25 à 2.5 millions d'unités moléculaires toutes les 6 heures, soit environ 1 à 10 millions d'unité /24h, de préférence de 2 à 5 millions d'unités moléculaires /24h et l'acide fusidique sous forme de fusidate de sodium est utilisée à une concentration de 1 à 3 g/24h, de préférence 2 à 2,5 g/24h.
Pour un traitement par voie orale de décontamination digestive avant une greffe fécale pour les patients présentant des bactéries multi-résistantes, le sulfate de Colistine ou la colistiméthate de sodium est utilisé à un dosage de 2,5 à 50 millions d'unités moléculaires par jour et l'acide fusidique sous forme de fusidate de sodium est utilisé à un dosage de 1 à 5 g par jour, de préférence 2 à 3 g/jour, l'association étant administrée pendant 4 jours avant la greffe.
Plus particulièrement encore, l'association selon la présente invention est mise en œuvre pour une utilisation dans un traitement thérapeutique contre des entérobactéries choisies parmi les bactéries des genres Klebsiella et Escherichia.
Plus particulièrement encore, l'association selon la présente invention est mise en œuvre pour une utilisation dans un traitement thérapeutique contre des entérobactéries choisies parmi les bactéries Klebsiella pneumoniae et Escherichia coll.
Comme rapporté dans la description détaillée de la présente demande de brevet, l'association de Colistine et Sulfadiazine est davantage active contre lesdites entérobactéries bactéries à résistance acquise contre la Colistine que l'association de Colistine et sulfaméthoxazole ainsi que l'association de Colistine et acide fusidique.
La présente invention fournit également une composition pharmaceutique comprenant une association d'au moins deux dits composés antibiotiques en quantités thérapeutiquement efficaces pour une utilisation selon l'invention.
Plus particulièrement encore, la composition pharmaceutique se présente sous forme administrable par voie parentérale, par voie orale ou par voie topique.
Plus particulièrement encore, la composition pharmaceutique administrable par voie parentérale ou par voie orale se présente (a) sous forme de comprimé ou (b) de poudre pour être administrée sous forme de solution ou (c) sous forme d'aérosol.
D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lumière de la description détaillée qui va suivre faite en référence aux figures dans lesquelles :
- la figure 1 illustre la méthode de criblage à haut débit permettant de voir l'apparition d'un phénomène de synergie entre 2 molécules anciennes possédant des mécanismes d'action différents par le test dit du bouchon de Champagne (rond vide= CT (colistine), rond noir= SUL ('sulfadiazine) ou FA ( acide fusidique);
- la figure 2 représente le positionnement des bandelettes E-test pour le « E-test croisé » avec les CMI de A seule et CMI de B seul et CMI de la combinaison A+B (avec deux antibiotiques A et B), les graduations reflètent les concentrations (fortes/faibles concentrations en haut/bas de la graduation verticale et à gauche/droite de la graduation horizontale ;
- les figures 3A et 3B sont des exemples d'un plan de microplaques permettant de voir, figure 3A si la combinaison Colistine-Sulfadiazine (figure 3A) et la combinaison Colistine-acide fusidique (figure 3B) possèdent une activité (MH : milieu de culture Mueller- Hinton seul, BA+MH= MH+bactérie, SUL : Sulfadiazine, CT : Colistine, FA : acide fusidique) par la méthode de micro dilution en plaque ou méthode de l'échiquier (Checkerboard) ;
- les figures 4A et4B représente un résultat de test de la méthode de criblage dit du bouchon de Champagne entre la Colistine et la Sulfadiazine sur une souche de Proteus vulgaris (figure 4A) et entre la Colistine et l'acide fusidique sur une souche de Klebsiella pneumoniae (A=pas de synergie, B= effet synergique) ;
- la figure 5A représente des photos présentant les CMI de Colistine suite au dépôt des E-test de Colistine sur des géloses prétraités par des antibiotiques avec: A) bandelette E-test de Colistine seule (A)) et avec Sulfadiazine dans le milieu à différentes concentrations (B) àE)), après 18 h d'incubation sur une souche de Klebsiella pneumoniaeTH 21 ;
- la figure 5B représente des photos présentant les résultats d'une synergie d'action d'une combinaison d'antibiotiques par lecture des diamètres d'inhibition de l'acide fusidique sur des géloses prétraités avec de la colistine sur une souche de Klebsiella pneumoniae avec l'acide fusidique seul (A) et sur gélose supplémentée avec de la Colistine (B et C). - la figure 6 représente des photos de résultats des E-test pour l'obtention des CMI de: A) la Colistine, B) le Triméthoprime-Sulfaméthoxazole, C) le Sulfaméthoxazole, D) le Triméthoprime, et la lecture des E-test croisés pour les associations suivantes: E) la Colistine+ Triméthoprime-Sulfaméthoxazole, F) la Colistine + Sulfaméthoxazole et G) la Colistine + Triméthoprime sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH 21 - la figure 7 est un exemple de résultat d'une plaque du test de micro dilution en plaque sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH 21 mis en évidence par un colorant (apparaissant en grisé sur la figure 7) en présence de bactéries vivantes ;
- la figure 8 est un exemple d'un isobologramme pour des souches de Klebsiella pneumoniae ayant montrées une synergie par la technique de microdilution en plaque entre la Colistine et la Sulfadiazine ; et - les figures 9A et 9B représentent les courbes de cinétiques de bactéricidie pour l'association Colistine et Sulfadiazine sur une souche de Klebsiella pneumoniae (figure 9A) et E co/i (figure 9B) et -la figure 9C pour l'association Colistine et Acide fusidique sur une souche de Klebsiella pneumoniae ; la concentration bactérienne (C) est donnée en ordonnée sous la forme loglO en CFu/mc et le temps est donné en heures en dessous.
1. Matériels.
1.1) Souches bactériennes.
- 55 souches cliniques ont été utilisées présentes dans le laboratoire (URMITE UM 63 CNRS 7278 IRD 198 INSERM U1905, Méditerranée Infection, Facultés de Médecine et de Pharmacie) et de différentes origines : Laos, Thaïlande et France. Ces souches comprennent -53 souches cliniques résistantes à la Colistine : 29 souches de Klebsiella pneumoniae (KP), et 24 souches d' Escherichia coli{E.coli), et
- 2 souches d'Escherichia coli (E.Coli) étaient sensibles à la Colistine, et
- 36 souches étaient résistantes à la Sulfadiazine dont 13 souches Klebsiella pneumoniae et 23 souches d'Escherichia coli et 17 sensibles à la Sulfadiazine dont 16 souches Klebsiella pneumoniae et 1 souches d'Escherichia coli, et
- 36 souches étaient résistantes à la Colistine et à la Sulfadiazine dont 13 souches Klebsiella pneumoniae et 23 souches d'Escherichia coli.
- Toutes les souches étaient résistantes à l'acide fusidique. 1.2) Antibiotiques.
Le sulfate de Colistine, l'acide fusidique et la Sulfadiazine ont été achetés auprès de la société Sigma-AIdrich (Saint Quentin Fallavier, France).
Le sulfate de Colistine est fraîchement préparé selon les directives de l'EUCAST (European committee on antimicrobial susceptibility testing) dans un solvant approprié. La Sulfadiazine a été dissoute dans du DMSO (diméthysulfoxide).
Des Bandelettes d'E-tests de Colistine (CT), de Sulfaméthoxazole (SMX) et de Triméthoprime-Sulfaméthoxazole (SXT) ont été utilisées (Biomerieux, Craponne, France). Les concentrations présentes sur les bandelette d'E-test sont comprises entre 0,016 et 256 pg / ml pour la Colistine, 0,064 et 1024 pg / ml pour le Sulfaméthoxazole, 0,002 et 32 pg / ml pour le Triméthoprime-Sulfaméthoxazole, et 0,002 à 32 pg / ml pour le Triméthoprime.
L'acide fusidique a été dissout dans l'eau distillée stérile. Des Bandelettes d'E-tests de colistine (CT), d'acide fusidique ont été utilisées (Biomerieux, Craponne, France). Les concentrations présentes sur les bandelettes d'E-test sont comprises entre 0,016 et 256 pg / ml pour la colistine et entre 0.016 à 256 pg / ml pour l'acide fusidique.
2. Méthodes.
2.1) Test de sensibilité.
Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) des Colistine, acide fusidique, Sulfaméthoxazole, Triméthoprime et Sulfaméthoxazole-Triméthoprime ont été déterminées par la méthode des E-test par diffusion sur milieu gélosé en accord avec les recommandations de l'EUCAST.
Pour une souche testée, l'inoculum est obtenu à partir de cultures fraîches sur milieu TSA (Trypticase Soy Agar) après 18-24h de pousse dans une étuve à 37°. Une suspension bactérienne est ensuite réalisée en mettant une quantité de bactéries dans un tube d'eau stérile jusqu'à l'obtention d'une opacité de 0,5 McFarland correspondant à une concentration bactérienne de lxl08 UFC/mL Cette suspension est ensuite ensemencée sur gélose Mueller- Hinton (Biomerieux, Marcy l'Etoile, France) par écouvîllonnage (technique manuelle de référence) toujours en accord avec les recommandations de l'EUCAST. Cette technique consiste à tremper un écouvillon stérile dans la suspension, d'enlever l'excès d'inoculum par pression sur le bord du tube, d'écouvillonner régulièrement la gélose en tournant la plaque de 60° (dans au moins 3 directions différentes) jusqu' à ensemencement de la totalité de la surface. On vient ensuite déposer la bandelette d'E-test qui contient un gradient croissant d'antibiotique d'une extrémité à l'autre. Les concentrations d'antibiotiques sont écrites directement sur cette bandelette afin d'en faciliter la lecture. La gélose est ensuite incubée pendant 24h dans une étuve à 37°C. La lecture de la CMI se fait à l'œil au niveau de l'intersection de la bordure de la zone d'inhibition sur la bandelette. Pour la Sulfadiazine la détermination de la CMI a été déterminée en milieu liquide. Cette technique se présente sur des plaques 96 puits. D'un côté de la plaque se trouve la gamme de dilution de la Sulfadiazine et de l'autre côté on prépare l'inoculum bactérien dans une solution liquide de Mueller-Hinton possédant une concentration en bactéries de 5xl05 UFC/ml. On ensemence chaque tube de la gamme de façon à obtenir 50% de suspension d'antibiotique dans 50% de suspension bactérienne. Les tubes sont alors incubés à 37°C pendant 24 heures. La CMI est déterminée par évaluation de la croissance bactérienne dans les différents tubes par mesure de l'absorbance de la solution (après agitation) dans chaque tube en utilisant un spectrophotomètre à une longueur d'onde de 630 nm. 2.2. Test de Synergie.
2.2.1 Test du « bouchon du Champagne »
Le test du bouchon de Champagne consiste à vérifier s'il existe sur milieu solide une action synergique entre 2 molécules données. Cette synergie s'observe par l'apparition d'une zone d'inhibition supplémentaire entre 2 disques d'antibiotiques. Pour la réalisation de ce test, les souches à tester doivent-être fraîches obtenues sur milieu TSA après 18 à 24 h de pousse dans une étuve à 37°C. Des colonies bactériennes sont prélevées et mises en suspension dans de l'eau physiologique stérile jusqu'à l'obtention d'une opacité de 0.5 McFarland. L'ensemencement est alors réalisé sur des géloses carrées Mueller-Hinton (Biomérieux, Marcy l'Etoile, France) comme pour la réalisation d'un antibiogramme standard. Des disques de Colistine (imprégnés à 50pg) sont déposés a l'aide d'une pince stérile, puis des disques vierges sont déposés à distance variable du premier disque. La distance entre les disques varie de 0 mm à 30 mm comme représenté figure 1. On prépare ensuite une solution de Sulfadiazine à 3xl04 μg/ml et à l'aide d'une pipette on dépose 10 μΙ de la solution de Sulfadiazine sur les disques vierges. On les met à incuber dans l'étuve à 37°C pendant 24 heures. Pour la combinaison Colistine (CT) +acide fusidique (FA), des disques d'acide fusidique (imprégnés à 10pg) sont déposés à distance variable du premier disque de colistine.
2.2.2. Méthode des E-tests ou des disques d'antibiotiques déposés sur des géloses prétraitées par des antibiotiques. Ce test consiste à rajouter un antibiotique au sein de la gélose et de tester l'activité d'un autre antibiotique en déterminant sa CMI (Concentration Minimale Inhibitrice) par la méthode des E-test ou de déterminer l'augmentation de la zone d'inhibition en mm par la méthode de diffusion par disques.
Une solution d'agar est préparée à l'aide d'une poudre de Mueller-Hinton pour réaliser des géloses Mueller-Hinton selon les instructions du fournisseur (Biomérieux, Craponne, France). Ce milieu est autoclavé ; puis les bouteilles sont placées au bain marie à une température de 45-50°C pour obtenir une solution bien liquide. Entre temps, des solutions contenant des concentrations différentes de Sulfadiazine et d'autres de Colistine sont réalisées (la Sulfadiazine se dissout dans le DMSO, la Colistine se dissout dans l'eau). Les bouteilles une fois retirées du bain marie sont placées sous le PSM (Poste de Sécurité Microbiologique) afin de préserver la stérilité. Un temps d'attente est alors nécessaire pour que le milieu baisse en température. Dans une flasque, un certain volume du milieu est déposé ainsi qu'un volume spécifique d'antibiotique afin d'obtenir une solution contenant la concentration finale en antibiotique souhaitée. Le mélange est ensuite homogénéisé afin d'obtenir une solution homogène, puis coulé dans des boites de Pétri de 90mm puis séché. Les mêmes étapes sont répétées pour la préparation des différentes concentrations. On peut noter que le DMSO n'interfère pas dans les résultats puisque son pourcentage ne dépasse pas 10 % dans le milieu et des boites prétraités au DMSO ont été préparées et seront utilisées comme contrôles.
2.2.3. E-test croisé.
Cette méthode a été utilisée pour montrer s'il existe une éventuelle synergie entre la Colistine (CT) et le Sulfaméthoxazole (SMX) ou la Colistine et le Triméthoprime (TMP) ou la Colistine et l'association Triméthoprime-Sulfaméthoxazole (SXT). Cette méthode a également été utilisée pour montrer s'il existe une éventuelle synergie entre la Colistine (CT) et l'acide fusidique (FA).
La première étape de cette méthode consiste à déterminer la CMI pour chaque antibiotique pris séparément pour les souches données en utilisant la méthode classique des E-test (cf partie 2.1). Une bandelette E-test correspondant à chaque antibiotique est testée et la CMI est alors déterminée par lecture directe.
Pour la deuxième étape, l'inoculum et l'ensemencement des géloses Mueller-Hinton a été réalisé de la même façon que précédemment. Deux bandelettes E-test sont placées sur la gélose en croix avec un angle de 90°. La bandelette E-test de Colistine est placée en premier puis la bandelette de l'autre antibiotique est placée au niveau du croisement des CMI respectives des deux antibiotiques (les CMI ayant été déterminées au préalable dans la première partie). Les boites sont alors incubées pendant 24 heures à 37°C. Après incubation, les nouvelles CMI sont alors lues directement sur les géloses suivant les mêmes règles de l'EUCAST [5].
La Figure 2 représente le positionnement des bandelettes E-test pour le « E-test croisé ». 2.2.4. Micro dilution en plaque ou méthode de l'échiquier (CheckerboarcO:
La sensibilité des bactéries à la Sulfadiazine, à la Colistine et à l'acide fusidique ainsi que des combinaisons de deux antibiotiques a été évaluée par une méthode de titrage en échiquier réalisée sur des micro-plaques de 96 puits[6].
Dans un premier temps, l'inoculum bactérien a été préparé à une concentration finale égale à 5 xl05 CFU/ml puis 100 μΙ de cet inoculum est inoculé dans chacun des puits de la plaque.
Des exemples de plans de plaques permettant de voir si les combinaisons Colistine- Sulfadiazine et Colistine-acide fusidique possèdent une activité sont représentés figure 3A pour Colistine-Sulfadiazine et figure 3B pour Colistine-acide fusique.
Pour la réalisation de l'échiquier, une série de dilutions a été préparé pour la Colistine. Les concentrations en Colistine varient de 0 à 100 pg / ml et sont déposées au niveau des puits verticaux. La Sulfadiazine et acide fusidique sont déposés dans les puits horizontaux et les concentrations varient entre 0 et 64 pg / ml. Après 24 heures d'incubation à 37 ° C, la croissance bactérienne est évaluée par mesure de l'absorbance de la solution (après agitation) dans chaque puits en utilisant un spectrophotomètre à une longueur d'onde de 630 nm.
L'activité de chaque combinaison antimicrobienne est estimée en utilisant l'indice de concentration inhibitrice fractionnaire (FIC) maximale.
Figure imgf000017_0001
Les valeurs FIC ont été interprétées selon le critère suivant: l'association d'antibiotiques possède un effet synergique lorsque la valeur de la FIC < 0,5. Toutes les expériences sont effectuées en double afin d'assurer la reproductibilité des résultats [6].
2.2.5. Etude de la bactéricidie
Les dosages pour déterminer la bactéricidie des différentes associations ont été effectués sur une souche représentative de chaque espèce. Les isolats ont été choisis pour être testés contre la Colistine seule, la Sulfadiazine seule et la combinaison Colistine- Sulfadiazine à des concentrations égales à la CMI. Les solutions de Colistine et de Sulfadiazine ont été fraîchement préparées ainsi que les suspensions bactériennes (concentration de 5 xlO5 CFU/ml dans du milieu de culture Mueller-Hinton liquide (MH)). Pour réaliser cette technique, 4 flacons (tubes) ont été mis en œuvre comme suit :
- le premier contenant uniquement la suspension bactérienne et qui va servir de contrôle.
- le deuxième contient un volume de la suspension bactérienne + 1/2 volume de solution de Colistine + 1/2 volume de milieu MH.
- le troisième contient un volume de la suspension bactérienne + 1/2 volume de solution de Sulfadiazine + 1/2 volume de milieu MH.
- le quatrième contient un volume de la suspension bactérienne + 1/2 volume de solution de Sulfadiazine + 1/2 volume de solution de Colistine.
Des échantillons de 100 μΙ provenant de chaque condition sont prélevés toutes les 0- 2-4-6 et 24 heures. Des dilutions en cascades allant de 10"1 à 10"8 sont réalisées pour chaque échantillon prélevé. Puis, un échantillon de 100 μΙ de chaque dilution est étalé sur une gélose Mueller-Hinton et incubé pendant 18 à 24 heures à 37°C. Après 24h, le nombre de colonies présentes sur la gélose est compté, sachant qu'une boite est prise en compte uniquement si le nombre de colonies est compris entre 30 et 300.
La synergie est définie comme étant une diminution > 2 loglO du nombre de colonies à 24 h pour la combinaison par rapport à l'agent le plus actif seul.
L'indifférence est définie comme étant diminution < 2 loglO du nombre des colonies à 24 h pour la combinaison par rapport au médicament le plus actif seul.
L'antagonisme est défini comme étant une augmentation > 2 loglO du nombre de colonies à 24 h pour la combinaison par rapport au médicament le plus actif seul.
3. Résultats:
3.1. Test de sensibilité Les CMIs des souches vis à vis des différents antibiotiques testés ont été mesurées
(CMI de : la Colistine, la Sulfadiazine, le Sulfaméthoxazole, le Triméthoprime et du Sulfaméthoxazole-Triméthoprime) et sont présentées dans les tableaux 1 et 2 ci-après.
53 souches présentent une résistance à la Colistine (CT), 2 souches sont sensibles (2 souches d' Escherichia coli). 18 souches parmi les 55 sont sensibles au Sulfaméthoxazole (SMX), au Triméthoprime-Sulfaméthoxazole (SXT), 17 sont sensible à la Sulfadiazine (SUL) et 21 souches sont sensibles au Triméthoprime (TMP).
Toutes les souches ont une résistance à l'acide fusiodisue (CMI d'au moins 256 microg/ml). 3.2. Test du bouchon du Champagne.
Dans une première étape de « criblage », des tests du bouchon de Champagne ont été réalisés entre la Colistine et la Sulfadiazine et entre la Colistine et le Triméthoprime- Sulfaméthoxazole. Toutes les souches ont été testées. Après incubation des boites 24h à 37°C, un effet synergique a été recherché (apparition d'une zone d'inhibition entre les 2 disques) entre la Colistine et le Sulfaméthoxazole-Triméthoprime en plaçant les disques à différentes distances l'un de l'autre, à savoir 5, 10, 15, 20 et 25 mm (figure 4). Pour la combinaison Colistine-Sulfadiazine, une zone de synergie (à savoir une zone d'inhibition supplémentaire entre les 2 disques d'antibiotique) est apparue pour des distances comprises entre 5 ,10 et 15 mm. La figure 4A illustre le test de la méthode de criblage dit du bouchon de Champagne entre la Colistine et la Sulfadiazine (300pg). La partie A de la figure 4 représente une zone ou il n'y a pas de synergie visible car la distance entre CT et SUL est trop grande. Mais si l'on rapproche les disques comme dans la partie B, il y a bien une zone de synergie présente entre les 2 disques pour 5 ,10 et 15 mm.
Pour la combinaison entre la Colistine et l'acide fusidique, une zone de synergie apparaît lorsque les disques sont à une distance de : 5, 10, 15, 20 et 25 mm La figure 4B illustre le test de la méthode de criblage dit du bouchon de Champagne entre la colistine et acide fusidique sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH54.
3.3. Méthode des E-tests ou des disques d'antibiotiques déposés sur des géloses prétraitées par des antibiotiques. 3.3.1 CT+SUL
Une diminution de la CMI de la Colistine a été observée en présence de différentes concentrations de Sulfadiazine: 8, 16, 32, 64, 128, 150, 200 ,300 μg/ml, y compris chez les souches résistantes à la Colistine et les souches sensibles à la Colistine. Sur les 55 souches, il y a 48 souches dont la CMI a diminué d'une 1/2 dilution à 14 dilutions. Cependant, pour 3 souches la CMI n'a pas changé. Concernant les 48 souches présentant une diminution de la CMI, 25 souches ont eu une diminution de la CMI à la colistine au moins supérieur à 2 dilutions alors que pour les autres sulfamides la combinaison est moins efficace.
On note que les souches sensibles au Sulfaméthoxazole, au Triméthoprime et au Triméthoprime sulfométhoxazole présentent de plus fortes diminutions de la CMI pouvant aller jusqu'à une diminution de 3 à 14 dilutions, tandis que les souches résistantes au Sulfaméthoxazole et au Triméthoprime-sulfométhoxazole, la diminution de la CMI varie entre 0,5 et 2 dilutions (Ex: Klebsiella pneumoniae H5500, Klebsiella pneumoniae TH114, Klebsiella pneumoniae CI2, Klebsiella pneumoniae CI3, Escherichia coli PIOS, Escherichia coli FHM 19). Les résultats sont présentés dans les tableaux 1 et 2 ci-après.
La figure 5A représente des photos présentant les CMIs de Colistine suite au dépôt des E-test de Colistine (0.016-256μg/ml) sur des gélose prétraités par des antibiotiques avec: A) bandelette E-test de Colistine seule sans Sulfadiazine dans le milieu, CMI : 32 μg/ml B) E-test de Colistine et 8 μg/ml de Sulfadiazine, CMI : 4 μg/ml C) E-test de Colistine et 16 Mg/ml de Sulfadiazine, CMI :0.19 μg/ml D) E-test de Colistine et 32 μg/ml de Sulfadiazine , CMI : 0.125 μg/ml et E) E-test de Colistine et 64 μg/ml de Sulfadiazine dans le milieu, CMI : 0.125 μg/ml après 18 h d'incubation sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH 21.
3.3.2 CT+FA Une augmentation du diamètre d'inhibition a été observée par la méthode : dépôt de
10μΙ de colistine à 50pg sur les disques d'acide fusidique directement. Sur les 36 souches, 18 souches (50%) présentent un diamètre augmenté >5mm.
De même, par la méthode du dépôt de disques d'acide fusidique sur les géloses Muller Hinton préparés avec 50 pg de colistine une augmentation beaucoup plus importante des diamètres d'inhibition a été observée allant jusqu'à l'augmentation du diamètre à 28 mm.
Les résultats sont résumés dans le tableau 3 ci-après.
La Figure 5B représente des photos présentant les résultats d'une synergie d'action d'une combinaison d'antibiotiques par lecture des diamètres d'inhibition de l'acide fusidique sur des gélose prétraités avec de la colistine sur une souche de Klebsiella pneumoniae LH102 avec: A) utilisation d'un disque d'acide fusidique seul (FA, 10pg) sur K.pneumoniae LH102 sur une gélose non supplémentée ; B) K.pneumoniae LH102 cultivée sur gélose MH supplémentée avec 50 pg de colistine ; C) utilisation un disque d'acide fusidique sur une souche de K. pneumoniae LH102 cultivée sur gélose MH supplémentée avec 50 pg de colistine. 3.4. E-test croisé
Les E-test croisés entre la Colistine et le Sulfaméthoxazole montrent une diminution de la CMI de la Colistine de 0 à 4 dilutions. De même, la Colistine et le Sulfaméthoxazole- Triméthoprime d'une part et la Colistine et le Triméthoprime d'autre part montrent une diminution des CMIs de la Colistine de 0 à 4 dilutions à l'exception de Serratia marcescens où la CMI de la Colistine a diminué de 8 dilutions.
L'ensemble des résultats est présenté dans les tableaux 1, 2 et 4.
La figure 6 représente des photos présentant les résultats des E-test pour l'obtention des CMI de: A) la Colistine, B) le Triméthoprime-Sulfaméthoxazole, C) le Sulfaméthoxazole, D) le Triméthoprime, et la lecture des E-test croisés pour les associations suivantes: E) la Colistine + Triméthoprime-Sulfaméthoxazole, F) la Colistine + Sulfaméthoxazole et G) la Colistine + Triméthoprime sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH 21.
3.5. Microdilution en plaque ou "test du Checkerboard" :
Pour le test de micro dilution en plaque (« test du checkerboard »), toutes les souches testées ont montré une synergie vis à vis de la combinaison d'antibiotiques. En effet, on constate que l'effet inhibiteur de croissance s'observe à des concentrations plus faibles quand les 2 molécules se trouvent en combinaison par rapport à chaque antibiotique pris séparément.
La figure 7 est un exemple de résultat d'une plaque du test de micro dilution en plaque sur une souche de Klebsiella pneumoniae TH 21. Le résultat est mis en évidence après l'utilisation d'un colorant vital : l'iodonitrotetrazolium, qui donne une coloration rouge (apparaissant en grisé sur la figure 7) en présence de bactéries vivantes.
Pour la combinaison CT+FA, on constate la persistance des bactéries en présence de Colistine et même à une concentration de 25 μg/ml. De même pour l'acide fusidique, la présence de bactéries vivantes est observée aux différentes concentrations d'acide fusidique: 256 μ/ml. Pour la combinaison CT+SUL, on constate la persistance des bactéries en présence de Colistine et même à une concentration de 100 μg/ml. De même pour la Sulfadiazine, la présence de bactéries vivantes est observée aux différentes concentrations de Sulfadiazine: 8, 16, 32,64 μ/ml. Par contre, en présence de la combinaison, une inhibition de la croissance bactérienne est observée a différents niveaux de la plaque. Autrement dit, une concentration X de Colistine et Y de Sulfadiazine ou acide fusidique montrent un effet inhibiteur en combinaison qui n'existe pas pour les mêmes concentrations X et Y pour chaque molécule prise seule. Ce résultat a été observé chez toutes les souches testées. Une autre façon d'analyser ce genre de test consiste à tracer un isobologramme grâce aux calculs des FIC (fractional inhibitory concentration). L'obtention d'une courbe concave est un indice de synergie ce qui est le cas pour les 4 souches présentes sur la figure 8.
La figure 8 est un exemple d'un isobologramme pour des souches de Klebsiella pneumoniae TH20,PTH166,LH70 et LH17 ayant montrées une synergie par la technique de microdilution en plaque entre la Colistine et la Sulfadiazine.
Les résultats sont présentés au tableau 4.
3.6. Etude de la bactéricidie:
La combinaison Colistine-Sulfadiazine inhibe la croissance de toutes les souches testées dans cette étude même celles résistantes à la Colistine. Comme illustration de l'activité bactéricide de cette combinaison d'antibiotiques, les résultats sur 2 souches résistantes a la Colistine: Klebsiella pneumoniae E coli sont explicités. Pour cette étude, les concentrations à tester ont été choisies en fonction des CMI de chaque molécule, établies par la méthode de micro dilution en plaque. Pour Klebsiella pneumoniae, la concentration en Colistine = lOOμg/ml, la concentration en Sulfadiazine = 200 μg/ml et pour E coli: la concentration en Colistine = lOOμg/ml, la concentration en Sulfadiazine= 100 μg/ml. Par contre, pour les concentrations de la combinaison, elles ont été choisies par la concentration la plus basse de la combinaison pouvant inhiber la croissance. Pour Klebsiella pneumoniae ces valeurs sont: 16μg/ml de Colistine + 8μg/ml de Sulfadiazine et pour E coli ces valeurs sont : 12μg/ml de Colistine + 4μg/ml de Sulfadiazine. Pour Klebsiella pneumoniae, la croissance bactérienne diminue de 1,5 log en présence de Colistine et de 2 log en présence de Sulfadiazine au bout de 24 h ; mais l'inhibition totale ne s'observe qu'au bout de 24h avec la combinaison. Pour E coli, il n'y a pas de diminution observée en présence de Colistine ou de Sulfadiazine seule voir même on a une augmentation de la croissance bactérienne. Par contre, on observe une diminution de 6 log (presque 100% d'inhibition) avec l'association Colistine-Sulfadiazine. Ces résultats sont présentés dans la figure ci-dessous. Les Figures 9 A et 9B représentent les courbes de cinétiques de l'étude de la bactéricidie pour Klebsiella pneumoniae LH 70 (figure 9A) etE. coli FHM19 (figure 9B) avec la concentration bactérienne en ordonnées et la durée en heures en abscisses.
La Figure 9C représente la courbe de cinétique de l'étude de la bactéricidie pour Klebsiella pneumoniae TH54 avec l'association Colistine et Acide Fusidique avec la concentration bactérienne en ordonnées et en abscisses la durée en heures.
Tous ces résultats prouvent que les combinaisons Colistine-Sulfadiazine et Colistine- Acide fusidique possèdent une activité bactéricide car l'inhibition bactérienne est totale après 24 heures d'incubation contre des bactéries multirésitantes. Ces bactéries présentent une résistance à la Colistine, à la Sulfadiazine et à l'Acide Fusidique seul, car on peut observer qu'après 24 heures la courbe de croissance bactérienne est presque identique à la concentration bactérienne de départ alors qu'avec l'association la diminution est très importante.
Dans les tableaux 2A-2B et 3 « avant » signifie : la CMI prise séparément pour chaque antibiotique, et « après » signifie : nouvelles CMI lu au niveau du croisement des E- tests au niveau de la synergie d'action.
Tableau 1. Présentation des CMI obtenues pour la Colistine (CT), la Sulfadiazine (SUL), le sulfaméthoxazole (SMX), le triméthoprime (TMP), le triméthoprime- sulfaméthoxazole (SXT)
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
Tableau 4. Détermination de la diminution de la CMI de la Colistine en dilution si la diminution est supérieure à 2 ou inférieure à 2 dilutions, b = Nombre de dilution de raison 2 (1 dilution= division par 2 de la concentration))
Figure imgf000030_0002
Références
[1] Y. Cai, W. Lee, and A. L. Kwa, "Polymyxin B versus colistin: an update.," Expert Rev.
Anti. Infect. Ther., vol. 13, no. 12, pp. 1-17, Oct. 2015.
[2] Vidaillac et al , Antimicrobial Agents and Chemotherapy, september 2012, Vol.56, N°9, p.4856-4861
[3] F. E. RUSSELL, "SYNERGISM BETWEEN SULPHONAMIDE DRUGS AND ANTIBIOTICS OF THE POLYMYXIN GROUP AGAINST PROTEUS SP. IN VITRO.," J. Clin. Pathol., vol. 16, pp. 362-6, Jul. 1963.
[4] S. Greenfield and D. S. Feingold, "The synergistic action of the sulfonamides and the polymyxins against Serratia marcescens.," J. Infect. Dis., vol. 121, no. 5, pp. 555-8, May 1970.
[5] R. L. White, D. S. Burgess, M. Manduru, and J. A. Bosso, "Comparison of three différent in vitro methods of detecting synergy: time-kill, checkerboard, and E test.," Antimicrob. Agents Chemother., vol. 40, no. 8, pp. 1914-8, Aug. 1996.
[6] M. J. Hall, R. F. Middleton, and D. Westmacott, "The fractional inhibitory concentration (FIC) index as a measure of synergy.," J. Antimicrob. Chemother., vol. 11, no. 5, pp. 427-33, May 1983.
[7] Fusidic Acid: A Bacterial Elongation Factor Inhibitor for the Oral Treatment of Acute and Chronic Staphylococcal Infections. Prabhavathi Fernandes. CSH perspectives 2016 Fernandes P
[8] Colistin and Fusidic Acid: A Novel Potent synergistic Combination for multi-drug résistant treatment of Acinetobacter baumannii infections. Antimicrob. agents Chemother.2015 Aug : 59(8) :4544-50.
[9] Wane H. et al, abstract de présentation orale dans Journal of Cystic Fibrosis vol.15 (5 juin 2016) ePS06.7 (« antibiotic treatment strategy with fusidic acid on colistin reistant pseudomonas aeruginosain cystic fibrosis»)
[10] Real-time sequencing to decipher the molecular mechanism of résistance of a clinical pan-drug-resistant Acinetobacter baumannii isolate from Marseille, France, Rolain JM Diene SM, Kempf M, Gimenez G, Robert C, Raoult D dans AAC (Antimicrobial Agents Chemotherapy) 2013 Jan 57(l):592-6
[11] De Rycke et al, Annales de recherches vétérinaires, 1982, volume 12, n°4, pages 403- 411 [12] Handiey P S et al, Microbios 1974, vol 10 n°40 pages 211-223

Claims

REVENDICATIONS
1. Association d'un premier composé antibiotique la Colistine et un second composé antibiotique choisi parmi la Sulfadiazine et l'Acide Fusidique pour une utilisation dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine.
2. Association de Colistine et sulfadiazine pour une utilisation selon la revendication 1 dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine.
3. Association de Colistine et sulfadiazine pour une utilisation selon la revendication 2 dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine et la Sulfadiazine.
4. Association de Colistine et Acide Fusidique pour une utilisation selon la revendication 1 dans un traitement thérapeutique contre les entérobactéries pathogènes non naturellement intrinsèquement résistantes mais ayant acquis une résistance contre au moins la Colistine.
5. Association pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 dans laquelle la Colistine est sous forme de sulfate de Colistine.
6. Association pour une utilisation selon la revendication 5 pour une application par voie orale ou par voie topique.
7. Association pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 dans laquelle la Colistine est sous forme de colistiméthate de sodium.
8. Association pour une utilisation selon la revendication 7 pour une application par voie parentérale ou orale.
9. Association pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 8 dans un traitement thérapeutique contre des entérobactéries choisies parmi les bactéries des genres Escherichia, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Providencia, Morganella, Citrobacter, Ha f nia et Yersinia.
10. Association pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 9 dans un traitement thérapeutique contre des entérobactéries choisies parmi les bactéries des genres Klebsiella et Escherichia.
11. Association pour une utilisation selon la revendication 10 dans un traitement thérapeutique contre des entérobactéries choisies parmi Klebsiella pneumoniae et
Escherichia coll.
12. Association pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 10 dans un traitement par voie orale de décontamination digestive avant une greffe fécale.
13. Composition pharmaceutique comprenant une association d'au moins deux dits composés antibiotiques en quantités thérapeutiquement efficaces pour une utilisation selon l'une des revendications 1 à 12.
14. Composition pharmaceutique comprenant une association pour une utilisation selon la revendication 13 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme administrable par voie parentérale, par voie orale ou par voie topique.
15. Composition pharmaceutique comprenant une association pour une utilisation selon la revendication 14 caractérisée en ce qu'elle se présente (a) sous forme de comprimé ou (b) de poudre pour être administrée sous forme de solution ou (c) sous forme d'aérosol.
PCT/FR2017/052635 2016-10-13 2017-09-28 Association de composes antibiotiques efficace contre des entérobactéries Ceased WO2018069597A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1659884A FR3057463B1 (fr) 2016-10-13 2016-10-13 Association de composes antibiotiques efficace contre des enterobacteries
FR1659884 2016-10-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018069597A1 true WO2018069597A1 (fr) 2018-04-19

Family

ID=57485769

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2017/052635 Ceased WO2018069597A1 (fr) 2016-10-13 2017-09-28 Association de composes antibiotiques efficace contre des entérobactéries

Country Status (2)

Country Link
FR (1) FR3057463B1 (fr)
WO (1) WO2018069597A1 (fr)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112089824A (zh) * 2020-11-09 2020-12-18 深圳市人民医院 含多粘菌素的药物组合物及其应用
CN118956642A (zh) * 2024-06-17 2024-11-15 山东大学 一种可降解磺胺嘧啶的细菌株及其与黑麦草的联合应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2128617A (en) 1982-10-06 1984-05-02 Martti Vaara Polypeptides for use in antibacterial therapy

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2128617A (en) 1982-10-06 1984-05-02 Martti Vaara Polypeptides for use in antibacterial therapy

Non-Patent Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Colistin and Fusidic Acid: A Novel Potent synergistic Combination for multi-drug résistant treatment of Acinetobacter baumannii infections", ANTIMICROB. AGENTS CHEMOTHER., vol. 59, no. 8, August 2015 (2015-08-01), pages 4544 - 50
ANONYMOUS: "Eradication of Antibiotic-resistant Bacteria Through Antibiotics and Fecal Bacteriotherapy - Full Text View - ClinicalTrials.gov", 29 September 2016 (2016-09-29), XP055359163, Retrieved from the Internet <URL:https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02472600> [retrieved on 20170327] *
C. VIDAILLAC ET AL: "In Vitro Synergy of Colistin Combinations against Colistin-Resistant Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, and Klebsiella pneumoniae Isolates", ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, vol. 56, no. 9, 1 September 2012 (2012-09-01), pages 4856 - 4861, XP055358414, ISSN: 0066-4804, DOI: 10.1128/AAC.05996-11 *
DE RYCKE ET AL., ANNALES DE RECHERCHES VÉTÉRINAIRES, vol. 12, no. 4, 1982, pages 403 - 411
F. E. RUSSELL: "SYNERGISM BETWEEN SULPHONAMIDE DRUGS AND ANTIBIOTICS OF THE POLYMYXIN GROUP AGAINST PROTEUS SP. IN VITRO.", J. CLIN. PATHOL., vol. 16, July 1963 (1963-07-01), pages 362 - 6
HANDLEY P S ET AL., MICROBIOS, vol. 10, no. 40, 1974, pages 211 - 223
LYNETTE M. PHEE ET AL: "Colistin and Fusidic Acid, a Novel Potent Synergistic Combination for Treatment of Multidrug-Resistant Acinetobacter baumannii Infections", ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, vol. 59, no. 8, 1 August 2015 (2015-08-01), pages 4544 - 4550, XP055358411, ISSN: 0066-4804, DOI: 10.1128/AAC.00753-15 *
M. J. HALL; R. F. MIDDLETON; D. WESTMACOTT: "The fractional inhibitory concentration (FIC) index as a measure of synergy", J. ANTIMICROB. CHEMOTHER., vol. 11, no. 5, May 1983 (1983-05-01), pages 427 - 33, XP008091249, DOI: doi:10.1093/jac/11.5.427
PRABHAVATHI FERNANDES: "Fusidic Acid: A Bacterial Elongation Factor Inhibitor for the Oral Treatment of Acute and Chronic Staphylococcal Infections", CSH PERSPECTIVES, 2016
QUESNEL L B ET AL: "Synergism between polymyxins, polysorbate and antimetabolites of folic acid synthesis, and a paper disc technique for routine testing for synergism", MICRO, CAMBRIDGE, GB, vol. 10, no. 40, 1 January 1974 (1974-01-01), pages 199 - 210, XP009193872, ISSN: 0026-2633 *
R MICHAEL ET AL: "Investigation of Synergism between Combinations of Ciprofloxacin, Polymyxin, Sulphadiazine and p -Aminobenzoic acid", J. PHARM. PHARMACOL. J. PHARM. PHARMACOL, 1 March 1993 (1993-03-01), pages 171 - 175, XP055358701, Retrieved from the Internet <URL:http://onlinelibrary.wiley.com/store/10.1111/j.2042-7158.1993.tb05527.x/asset/j.2042-7158.1993.tb05527.x.pdf?v=1&t=j0nwdxyv&s=54461d172eacf75c4d08d7ea0a21be2e79b3e3ea> [retrieved on 20170324] *
R. L. WHITE; D. S. BURGESS; M. MANDURU; J. A. BOSSO: "Comparison of three différent in vitro methods of detecting synergy: time-kill, checkerboard, and E test", ANTIMICROB. AGENTS CHEMOTHER., vol. 40, no. 8, August 1996 (1996-08-01), pages 1914 - 8, XP055052950
ROLAIN JM; DIENE SM; KEMPF M; GIMENEZ G; ROBERT C; RAOULT D: "Real-time sequencing to decipher the molecular mechanism of résistance of a clinical pan-drug-resistant Acinetobacter baumannii isolate from Marseille", AAC (ANTIMICROBIAL AGENTS CHEMOTHERAPY, vol. 7, no. 1, 5 January 2013 (2013-01-05), pages 592 - 6
S. GREENFIELD; D. S. FEINGOLD: "The synergistic action of the sulfonamides and the polymyxins against Serratia marcescens", J. INFECT DIS., vol. 121, no. 5, May 1970 (1970-05-01), pages 555 - 8, XP009193871
VIDAILLAC ET AL., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, vol. 56, no. 9, September 2012 (2012-09-01), pages 4856 - 4861
WANE H ET AL: "ePS06.7 Antibiotic treatment strategy with fusidic acid on colistin resistantPseudomonas aeruginosain cystic fibrosis", JOURNAL OF CYSTIC FIBROSIS, vol. 15, 5 June 2016 (2016-06-05), XP029572114, ISSN: 1569-1993, DOI: 10.1016/S1569-1993(16)30237-5 *
WANE H. ET AL.: "antibiotic treatment strategy with fusidic acid on colistin reistant pseudomonas aeruginosain cystic fibrosis", JOURNAL OF CYSTIC FIBROSIS, vol. 15, 5 June 2016 (2016-06-05), pages ePS06.7
Y. CAI; W. LEE; A. L. KWA: "Polymyxin B versus colistin: an update.", EXPERT REV. ANTI. INFECT. THER., vol. 13, no. 12, October 2015 (2015-10-01), pages 1 - 17

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112089824A (zh) * 2020-11-09 2020-12-18 深圳市人民医院 含多粘菌素的药物组合物及其应用
CN112089824B (zh) * 2020-11-09 2023-09-05 科辉智药生物科技（无锡）有限公司 含多粘菌素的药物组合物及其应用
CN118956642A (zh) * 2024-06-17 2024-11-15 山东大学 一种可降解磺胺嘧啶的细菌株及其与黑麦草的联合应用

Also Published As

Publication number Publication date
FR3057463A1 (fr) 2018-04-20
FR3057463B1 (fr) 2019-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shahzad et al. Utilising polyphenols for the clinical management of Candida albicans biofilms
EP2437737B1 (fr) Composition comprenant au moins du trans-cinnamaldehyde et son utilisation dans le traitement des infections bacteriennes plus particulierement dans le traitement des maladies nosocomiales
Banu et al. Effects of patchouli and cinnamon essential oils on biofilm and hyphae formation by Candida species
Ryan et al. Activity of potent and selective host defense peptide mimetics in mouse models of oral candidiasis
FR2918571A1 (fr) Compositions antibiotiques a base d&#39;huiles essentielles prophylaxie et traitement d&#39;infections nosocomiales
Jiang et al. Antimicrobial activities of peptide Cbf-K16 against drug-resistant Helicobacter pylori infection in vitro and in vivo
CN108348453B (zh) 包含莫匹罗星及新霉素的抗微生物组合物
Wang et al. The membrane-active polyaminoisoprenyl compound NV716 re-sensitizes Pseudomonas aeruginosa to antibiotics and reduces bacterial virulence
Okdah et al. New therapy from old drugs: synergistic bactericidal activity of sulfadiazine with colistin against colistin-resistant bacteria, including plasmid-mediated colistin-resistant mcr-1 isolates
Velasco et al. Antibacterial activity of the essential oil of Lippia oreganoides against multiresistant bacterial strains of nosocomial origin
Rodgers Resistance of Yersinia ruckeri to antimicrobial agents in vitro
Dubey et al. Healing wounds, defeating biofilms: Lactiplantibacillus plantarum in tackling MRSA infections
WO2018069597A1 (fr) Association de composes antibiotiques efficace contre des entérobactéries
Murugan et al. Antibiofilm activity of Andrographis paniculata against cystic fibrosis clinical isolate Pseudomonas aeruginosa
EP3193936A1 (fr) Antimicrobiens potentialises
EL-Zawawy et al. Evaluation and comparison of antimicrobial efficacy of snail mucus of Egyptian Eremina desertorum and Helix aspersa with novel approach of their anti-inflammatory and wound healing potencies
Liu et al. A novel indolylbenzoquinone compound HL-J6 suppresses biofilm formation and α-toxin secretion in methicillin-resistant Staphylococcus aureus
US10322153B2 (en) Anti-microbial seaweed extracts, compositions and uses thereof
Li et al. Triple combination of SPR741, clarithromycin, and erythromycin against Acinetobacter baumannii and its tolerant phenotype
US8796323B2 (en) Defensin-like molecules as novel antimicrobial agents
Alharbi et al. Novel circular antimicrobial peptides to combat a critical listed bacterial pathogen multi drug resistant Acinetobacter baumannii
AL-Sabagh et al. Sh. AL-Dabbagh A H. The antibacterial activity of LL-37 peptide against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from burn infections
WO2023065526A1 (fr) Applications de bms-833923 et son dérivé, et médicament
EP2696863B1 (fr) Utilisation de calixarenes associes avec un antibiotique dans le traitement des infections bacteriennes
Nosair et al. Deciphering the efficacy of staphyloxanthin-encapsulated niosomal nanovesicles to attenuate biofilm formation, quorum sensing, and meropenem persistence in Acinetobacter baumannii

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17787492

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17787492

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1