WO2017179744A1 - Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법 - Google Patents

Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2017179744A1
WO2017179744A1 PCT/KR2016/003833 KR2016003833W WO2017179744A1 WO 2017179744 A1 WO2017179744 A1 WO 2017179744A1 KR 2016003833 W KR2016003833 W KR 2016003833W WO 2017179744 A1 WO2017179744 A1 WO 2017179744A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
pdk4
protein
release
activity
test substance
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2016/003833
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
이인규
박근규
배귀현
고영훈
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Original Assignee
Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Industry Academic Cooperation Foundation of KNU filed Critical Industry Academic Cooperation Foundation of KNU
Priority to PCT/KR2016/003833 priority Critical patent/WO2017179744A1/ko
Publication of WO2017179744A1 publication Critical patent/WO2017179744A1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormones and release, including PDK4 activity inhibitors as an active ingredient, and a method for screening the same, more specifically, to inhibit the expression of mRNA or protein of PDK4 It relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by over-release of steroid hormones comprising a substance as an active ingredient and a method for screening the same.
  • the adrenal gland is an endocrine organ that is located above both kidneys and secretes hormones that are important for the life support of our bodies.
  • the adrenal gland is 4-5 cm long, 2-3 cm high, and 7-8 g in weight, and has a triangular shape on the right side and a half-moon shape on the left side.
  • the outside of the adrenal gland is called the cortex and the inside is called the medulla, each of which has a genetically different origin, and hormones secrete different hormones.
  • Representative hormones of the adrenal cortex include cortisol, aldosterone and adrenal androgen.
  • ganglion cells are distributed, producing epinephrine and norepinephrine, both of which are catecholamines.
  • the regulation of corticosteroid secretion is controlled by the adrenocort icotropic hormone (ACTH), which is released from the pituitary gland of the brain.
  • Adrenal cortical stimulating hormone is also regulated by cort i cotrophin releasing hormone (CRH), which is secreted by the hypothalamus of the brain.
  • CSH cort i cotrophin releasing hormone
  • hormone secretion of the adrenal cortex is regulated by signaling leading to the hypothalamus-pituitary-adrenal cortex.
  • Adrenal cortical stimulating hormones released from the hypothalamus and pituitary gland, corticosteroids and corticosteroids are secreted pulsatingly and are highest in the morning and decrease in the afternoon. Seems to fluctuate.
  • corticosteroids and corticosteroids are secreted pulsatingly and are highest in the morning and decrease in the afternoon. Seems to fluctuate.
  • Cortisol also regulates the secretion of these two hormones.
  • cortisol secretion increases the hypothalamus and pituitary gland to detect the cortisol concentrations of the adrenal cortical stimulating hormone free hormone and adrenal cortical stimulating hormone secretion mechanism has a negative feedback mechanism. This negative feedback maintains constant cortisol levels in normal conditions, thereby regulating steroid hormone release from the adrenal cortex.
  • Steroid hormones refer to steroids that function like hormones, and steroid hormones are classified according to the type of receptors they act on. Steroid hormones work to protect the body from the stress of various widow environments, as well as metabolism, inflammation, immune responses, balance of salts and moisture, and expression of sexual characteristics.
  • the inventors of the present invention have been researching to find a therapeutic target that can inhibit the excessive release of steroid hormones, and when the expression of the pyruvate dehydrogenase kinasse 4 (PDK4) and / or PDK2 raRNA or protein is inhibited, The release of mons was found to be inhibited and the present invention was completed. Accordingly, it is an object of the present invention to provide a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone overrelease, comprising the following steps:
  • Another object of the present invention is to provide a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone over-release, comprising the following steps:
  • test substance which reduces the expression level or activity of the mRNA or protein of PDK2 and PDK4 as a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone over-release compared to the cells not treated with the test substance.
  • Another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormone over-release containing an active inhibitor of PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a use of a pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) inhibitor for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormone over-release.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing and treating a disease caused by steroid hormone over-release, characterized by administering a PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) activity inhibitor in an effective amount to a subject in need thereof.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • the present invention provides a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone over-release, comprising the following steps: (a) treating a test substance to a cell expressing mRNA or protein of pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4);
  • the present invention provides a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for diseases caused by steroid hormone over-release, comprising the following steps:
  • test substance which reduces the expression level or activity of the mRNA or protein of PDK2 and PDK4 as a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone over-release compared to the cells not treated with the test substance.
  • Another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormone over-release containing an active inhibitor of PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a use of a pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) inhibitor for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormone over-release.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing and treating a disease caused by steroid hormone over-release, characterized by administering a PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) activity inhibitor in an effective amount to a subject in need thereof.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • the present invention provides a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone overrelease, comprising the following steps:
  • test substance which reduces the expression level or activity of the mRNA or protein of PDK4 as a prophylactic and therapeutic agent for a disease caused by steroid hormone over-release compared to the cells which have not been treated with the test substance.
  • the present invention also comprises the steps of (d) treating the cells expressing PDK2 selected from the step (c);
  • the method further comprises the step of selecting a test substance that reduced the expression level or activity of the mRNA or protein of PDK2 compared to the cells not treated with the test substance.
  • a test substance that reduced the expression level or activity of the mRNA or protein of PDK2 compared to the cells not treated with the test substance.
  • the cells expressing the PDK4 and the mRNA or protein include cells in which the mRNA or protein of PDK4 is endogenous expressed or temporarily high, or by introducing a nucleic acid encoding PDK4 into the cell It can be used to overexpress by switching, but is not particularly limited thereto.
  • 'protein' is used interchangeably with 'polypeptide (ide)' or 'peptide (ide)', for example, refers to a polymer of amino acid residues as commonly found in natural proteins.
  • the term 'polynucleotide' or 'nucleic acid' refers to deoxyribonucleotide (DNA) or ribonucleotide (RNA) in the form of a single- or double-strand.
  • DNA deoxyribonucleotide
  • RNA ribonucleotide
  • known analogues of natural nucleotides that are localized to nucleic acids in a manner similar to naturally occurring nucleotides are also included.
  • test material refers to an unknown material used in screening to examine whether it affects the expression of PDK2 and / or PDK4 of the present invention.
  • the test substance is siRNA (smal l interference RNA), sh NA (short hairpin RNA), miRNA (microRNA), ribozyme (ribozyme), DNAzyme, pep tide nucleic acids (PNA), antisense oligonucleotides, antibodies , 3 ⁇ 4 tamers, natural extracts or chemicals, including but not limited to.
  • the cells used in the step (a) may be provided in the form of an experimental animal, in this case the screening method of the present invention further comprises the step of inducing over-release of steroid hormones in the experimental animal,
  • Contact with the test substance includes, but is not limited to, parenteral or parenteral administration, orthopedic injection, and one of ordinary skill in the art will be able to select an appropriate method for testing the test substance in animals. Treating a test substance means adding the test substance to a cell or tissue culture medium and then culturing the cells for some time.
  • contact with the test substance is not limited to those involving parenteral or oral administration or stereotactic injection, and those skilled in the art will select appropriate methods for testing the test substance in animals.
  • the disease caused by the steroid hormone over-release is Cushing's syndrome, Primary aldosteronisis and adrenal gland It may be characterized by any one selected from the group consisting of the syndrome (adrenogeni tal syndrome), but is not limited thereto.
  • the mRNA expression level of PDK4 in step (b) of the present invention is RT-PCR, quantitative or semi-quantitative RT-PCR (Quent itat ive or semi-Quent itat ive RT-PCR), quantitative or semi-quantitative real time RT Can be measured using, but not limited to, Quant itive or semi-Quent i real real-time RT-PCR (PCR), Northern blot, and DNA or RNA chips .
  • the protein expression level of PDK4 is measured by Western blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunoassay, Ochterlony immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, immunohistochemical staining, immunity It can be measured using any one method selected from the group consisting of precipitation analysis, complement fixation analysis, FACS and protein chips, but is not limited thereto.
  • the material selected in step (c) is a substance that inhibits the activity of PDK4, and has an effect of inhibiting the overproduction of steroid hormones, but in order to select a therapeutic agent material that exhibits a superior effect, the (c) A substance that inhibits the activity of PDK2 may be further selected from the substance selected in the step.
  • the present invention also provides a method for screening a prophylactic and therapeutic agent for diseases caused by steroid hormone over-release, comprising the following steps:
  • both PDK2 and PDK4 are missing in the mouse Compared to normal wild type mice, it was confirmed that the release of steroid hormones by external stimulation or ACTH stimulation was significantly reduced, and this effect was better even when compared to mice lacking PDK4 alone.
  • the cells expressing the mRNA or protein of PDK2 and PDK4 include cells in which the mRNA or protein of PDK2 and PDK4 is endogenous or transiently expressed, or encodes PDK2 and PDK4. Nucleic acid may be introduced into each cell and transformed so as to be overexpressed, but is not particularly limited thereto. Steps (a) to (c) are as described above.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by steroid hormone over-release comprising an active inhibitor of pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition may be characterized by further comprising an activity inhibitor of PDK2.
  • the release of steroid hormones by stimulation by external stress or stimulation of adrenal cortical stimulating hormone in PDK4 or PDK2 and PDK4 mice is significantly lower than in wild-type mice. It was confirmed that the reduction was made (Example 4).
  • the expression of genes related to the synthesis of steroid hormones increased by corticosteroid treatment is increased in PDK4-deficient mice. It was confirmed that it was inhibited in (Example 4).
  • the activity inhibitor of PDK4 or PDK2 and PDK4 may be selected from the group consisting of a substance which inhibits the expression of mRNA or protein of PDK4 or PDK2 and PDK4 and a substance which inhibits the activity of PDK2 and / or PDK4 protein.
  • the activity inhibitor of PDK4 is siRNA, shRNA, miRNA, ribozyme (ribozyme), DNAzyme, ⁇ (ept ide nucleic acids), antisense oligonucleotides, peptides, antibodies specific to PDK4 protein , but may be selected from the group consisting of aptamers, natural extracts and chemicals, but is not limited thereto.
  • the disease caused by steroid hormone over-release may be Cushing's syndrome, primary aldosteronism, or adrenogenital syndrome, but is not limited thereto.
  • Cush syndrome diseases caused by steroid hormone over-release are caused by the excessive production of different steroid hormones, Cortisol, aldosterone and androgen, respectively.
  • the most common cause of Cush syndrome is exogenous Cushing syndrome caused by long-term use of steroid drugs for the treatment of arthritis or autoimmune diseases. Sexual syndrome is also called.
  • the endogenous Cush syndrome can be divided into endogenous Cushing syndrome, which is caused by excessive release of corticosteroid-stimulating hormone (ACTH), which stimulates cortisol production, or by the production of high cortisol in the adrenal glands, regardless of the concentration of corticosteroids. Can be.
  • ACTH corticosteroid-stimulating hormone
  • Cushing's syndrome which is a pituitary tumor that secretes excessive corticosteroids, is called Cushing's disease. It is the most common cause of endogenous Cushing syndrome (approximately 68-803 ⁇ 4).
  • aldosterone is a hormone that regulates the amount of fluid (water) and electrolyte concentration in the human body, also known as salt corticosteroids. When too much secretion, high blood pressure and abnormal electrolyte concentrations are brought about.
  • the most common cause of primary aldosteroneism is aldosterone-secreted adenoma, the most common being bilateral or unilateral adrenal hyperplasia, and rarely aldosterone-secreting cancer.
  • the adrenal gland syndrome also called parasignal dysgenital syndrome, is an excessive secretion of testosterone secreted by the adrenal cortex, which is characterized by the masculinity of genitals and secondary sexual symptoms in women, and in men, sexual maturity.
  • the main cause of adrenal gland syndrome is due to congenital adrenal hyperplasia or increased adrenal gland hormone production.
  • the disease caused by steroid hormone over-release is Cushing's syndrome, which is a condition in which excessive formation of cortisol, aldosterone and androgen in the adrenal cortex, respectively, and primary aldosteronism (Pr imary aldosteroni sm) It may also be an adrenogeni tal syndrome, and can be understood as a concept that includes all syndromes or diseases caused by over-release of steroid hormones.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention may contain the therapeutic candidate of the present invention alone or may further contain one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration.
  • Carriers for oral administration include lactose, starch and salose oil. Conductors, magnesium stearate, stearic acid, and the like.
  • carriers for parenteral administration may include water, suitable oils, saline, aqueous glucose and glycols, and the like, and may further include stabilizers and preservatives. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium bisulfite, sodium sulfite or ascorbic acid. Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-parabens and chlorobutane.
  • compositions of the present invention can be administered to any mammal, including humans.
  • it can be administered orally or parenterally.
  • Parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal, topical, sublingual, or rectal May be administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared by injectable formulation and administered by lightly applying a 30 gauge thin injection needle to the skin, or by directly applying it to the skin.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a preparation for oral or parenteral administration according to the route of administration as described above.
  • the compositions of the present invention are formulated using powders, granules, tablets, pills, sugar tablets, capsules, liquids, gels, syrups, slurries, suspensions, etc. using methods known in the art.
  • oral formulations can be obtained by tablets or dragees by combining the active ingredient with a solid brother and then grinding it, adding suitable auxiliaries and processing it into a granular mixture.
  • excipients examples include sugar and corn starch, wheat starch, rice starch and potato starch, including lactose, dextrose, sucrose, solbi, manny, xili, erysri and malty.
  • Layered agents such as starch, salose, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose and hydroxypropylmethyl-cellulose, including cellulose, gelatin, polyvinylpyridone, and the like.
  • crosslinked polyvinylpyridone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrant.
  • the pharmaceutical composition may further comprise an anticoagulant, a lubricant, a humectant, a perfume, an emulsifier and a preservative.
  • Formulations for parenteral administration may be formulated by methods known in the art in the form of injections, creams, lotions, external ointments, oils, humectants, gels, aerosols and nasal inhalants. These formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edison, 1975. Mack Publishing Company, East on, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription commonly known in all pharmaceutical chemistry. It is.
  • the total effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a patient in a single dose, and administered by a fract ionated treatment protocol which is administered for a long time in a multiple iple dose.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may vary the content of the active ingredient depending on the extent of the disease.
  • the preferred total dose of the glycoprotein fraction of the present invention may be from about O.Olug to 1,000 mg, most preferably 0.1 ug to 100 mg per kg of patient body weight per day.
  • the dose of the therapeutic agent candidate of the present invention may be adjusted to the patient in consideration of various factors such as the age, weight, health condition, sex, severity of the disease, diet, and excretion rate, as well as the route of administration and the frequency of treatment of the pharmaceutical composition.
  • the appropriate effective dosage for the specific use of the pharmaceutical composition of the present invention as a therapeutic agent for diseases caused by steroid hormone over-release. could be.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited to the formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is shown.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in parallel with a known compound having a prophylactic and therapeutic effect of a disease due to over-release of steroid hormones.
  • the present invention provides a use for the preparation of a prophylactic and therapeutic agent for diseases caused by steroid hormone over-release of a pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) activity inhibitor.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • the present invention provides a steroid hormone overdose, characterized in that an effective amount of PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) activity inhibitor is administered to an individual in need thereof. It provides a method for preventing and treating diseases caused by exudation.
  • the pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) inhibitor of the present invention may be administered in an effective amount via various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular.
  • the term 'effective amount' refers to an amount showing a therapeutic effect of a disease due to over-release of steroid hormones.
  • the term 'subject' refers to an animal, preferably a mammal, particularly a human. It may be an animal, or may be a cell, tissue, organ or the like derived from an animal. The subject may be a patient in need of treatment.
  • the pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) activity inhibitor of the present invention may be administered by itself or may be prepared and administered in various formulations as described above, and preferably, a desired effect, ie prevention of diseases due to over-release of steroid hormones. And until a therapeutic effect is obtained.
  • the compounds of the present invention and their pharmaceutically acceptable salts can be administered by various routes according to methods known in the art. That is, oral or parenteral, such as oral, intramuscular, intravenous, intradermal, intraarterial, intramedullary, intradural, intramural, intranasal, intravaginal, rectal, sublingual or subcutaneous, gastrointestinal tract, mucosal or respiratory May be administered.
  • the compounds of the present invention and pharmaceutically acceptable salts thereof may be administered in a form that is bound to or encapsulated within a molecule that induces high affinity binding to a target cell or tissue.
  • PDK4 activity inhibitors of the invention can be prepared using techniques known in the art, such as sterols (eg cholester), lipids (eg cationic lipids, virosomes or liposomes), or target cell specific binding agents (eg target cells). Ligands recognized by specific receptors).
  • Suitable coupling or crosslinking agents can include, for example, Protein A, carbodiimide, N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propiotate (SPDP) and the like. These formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edion, 1975, Mack Pub 1 shng Company, East on, Pennsylvania, a prescription generally known in pharmaceutical chemistry.
  • SPDP N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propiotate
  • the present invention provides a new target for the treatment of diseases caused by steroid hormone over-release.
  • the present invention finds that pyruvate dehydrogenase kinase 4 (PDK4) can be used and provides a method for screening candidates for preventing and treating diseases caused by steroid hormone over-release.
  • PDK4 pyruvate dehydrogenase kinase 4
  • it is possible to effectively select a new candidate material capable of preventing and / or treating a disease caused by over-release of steroid hormones, and over-release of steroid hormones using a material selected according to the screening method of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing changes in blood glucose (A), blood steroid hormones (B), body weight (C) and weight gain (D) after administration of DCA, a PDK inhibitor, to an steroid hormone over-release animal model.
  • 2 is a diagram showing the improvement of clinical symptoms after the administration of DCA, a PDK inhibitor, to a steroid hormone over-release animal model (A: body weight, B: body fat, C: body fat to body weight, D: lean body fat, E:
  • Figure 3 is a diagram confirming the increase or decrease of fat after administration of PDK inhibitor DCA to the steroid hormone over-release animal model by CT scan (A: normal animals, B: steroid hormone over-release animal model sal ine administration group, C: steroid hormone over-release animal model DCA administration group)
  • Figure 4 is a rat adrenal detachment after stimulating the secretion of steroid hormones by ACTH, the result of measuring the hormone secretion changes when DCA treatment.
  • FIG. 5 shows the changes in urinary corticosterone concentration (A) in PDK4 and / or PDK2 deficient mouse animal models and changes in blood corticosterone concentration (B) and stress-induced stress in mice This is the result of observing the change in the concentration of corticosteroid in the blood (C).
  • 6 is a result of stimulating ACTH in wild type mice and PDK4 deficient mice and confirming the expression level of genes related to steroid hormone synthesis (A: blood corticosteroids) Theron, B: changes in expression levels of steroid hormone synthesis genes, WT: wild type, PDK4K0: PDK4 deficient animals).
  • Cort icotropin—releasing hormone transgenic mice a mouse model of the cumulative syndrome, were purchased from The Jackson Laboratory (USA) and raised in Speci fic Pathogen Free (SPF) animals.
  • SPF Speci fic Pathogen Free
  • persistent overexpression of CRH leads to increased secretion of ACTH, resulting in over-release of steroid hormones in the adrenal glands, resulting in chronic steroid hormone over-release-hyperglycemia, insulin resistance, central obesity ) Is known to cause weakening of connective tissues including skin, muscular atrophy and osteoporosis.
  • Cushing's syndrome which is caused by excessive release of Cortisol (Cort isol), which is a type of steroid hormone due to various causes.
  • the excess cortisol in Cushing's syndrome affects the various systems in our body, which increases the breakdown of proteins and promotes fat migration, which breaks down the collagen and muscle proteins that make up skin and capillaries, and the reconstituting of fat in the body. Distribution occurs.
  • insulin resistance increases, blood sugar rises, sex hormone secretion is suppressed, calcium absorption is suppressed, and osteoblasts making bones are shortened.
  • the activity of immune cells is suppressed, making them vulnerable to infection, and excessive cortisol constricts blood vessels with the action of salt corticoids that maintain blood pressure. Increase blood pressure. Symptoms of Cushing's syndrome usually appear from weeks to months, including the following clinical signs:
  • dichloroacetate dichloroacetate
  • PDK inhibitor a PDK inhibitor
  • a steroid hormone-releasing animal model that is, a Cushing syndrome animal model
  • blood glucose and blood steroid hormones which are representative clinical symptoms of Cushing syndrome. The concentration, body weight and growth rate of were evaluated.
  • DCA was administered once a day at a concentration of 300 mg / kg for 10 days, and then blood was collected from animals to measure the concentrations of blood sugar and corticosteroids. The increase rate was recorded. The results are shown in FIG. 1.
  • body weight and blood glucose were measured after intraperitoneal administration of dichloroacetate (DCA), a PDK inhibitor (dichloroacetate, DCA), at a concentration of 300 mg / kg once daily in an animal model of Kusu syndrome.
  • DCA dichloroacetate
  • DCA a PDK inhibitor
  • LF50 Bruker, Germany
  • CT imaging was performed using Triumph LabPET / CT (TriFoi, USA) imaging equipment to confirm the image. The results are shown in FIG. 2.
  • the weight gain was increased in the animal group administered sal ine to CRH Tg mice, but the weight loss was reduced to the same level as the normal group in the DCA administered group.
  • the amount of fat in the animals treated with sal ine in CRH Tg mice was significantly increased compared to the control group, but the amount of fat in the DCA group was reduced by about 50% compared with the control group with sal ine.
  • Fat to body weight (Fat / BW) decreased more significantly.
  • Lean body mass was decreased in CRH Tg mice and significantly increased in the DCA group, and lean body mass (Lean / BW) divided by this was significantly increased. Confirmed.
  • PDK2 and PDK4 deficient mice were generated by genetic modification between exons and introns and were donated by Dr. Robert A. Harris of the Indiana University.
  • PDK2 / PDK4 deficient mice were made by crossing PDK2 K0 and PDK4 K0. All animal experiments were performed in the SPF laboratory.
  • Example ⁇ 1-1> the concentration of corticosteroid in urine for 24 hours, stressed Mau i for 30 minutes to stimulate steroid hormone secretion.
  • the blood corticosteroid concentration and the adrenal cortical stimulating hormone (ACTH) stimulation was confirmed, changes in the blood corticosteroid concentration were confirmed.
  • the concentration of corticosteroids in the urine of the mice was measured for 24 hours, and the amount of corticosterone in the PDK4 deficient mice and the PDK2 / PDK4 deficient mice was statistically significantly reduced compared to the control mice. Confirmed.
  • the mice were subjected to stress for 30 minutes to stimulate the secretion of steroid hormones.
  • the amount of corticosteroid in the blood was significantly increased in all mice compared to before the stress.
  • the response to stress starts in the central nervous system and increases the secretion of the corticosteroid hormone free hormone in the hypothalamus, which affects the secretion of the corticosteroids in the pituitary gland, resulting in increased secretion of steroid hormones in the adrenal cortex. It is done.
  • the increase in secretion of corticosteroids by stress stimulation was found to be statistically significant in PDK4 or PDK2 / PDK4 defective mice compared to the control group.
  • Fig. 5C after treatment with corticosteroid hormone (ACTH) to directly stimulate the release of steroid hormones, the concentration of blood corticosterone was measured for 1 hour. The amount was increased, but the increase was significantly smaller in PDK4 or PDK2 / PDK4 deficient mice compared to the normal control. The above results indicate that inhibition of PDK4 or PDK2 / PDK4 reduces the release of steroid hormones in the adrenal cortex, thus preventing or treating diseases caused by over-release of steroid hormones.
  • ACTH corticosteroid hormone
  • Example ⁇ 4-2> an expression inhibition of PDK4's Experiments were conducted to determine the effects on the expression of StAR, pStAR, pCREB and pPKA, genes involved in the synthesis of steroid hormones.
  • the steroidogenic acute regulatory protein is a transport protein that regulates the transport of cholesters in the mitochondria. This is the most important step in regulating the synthesis of steroids, that is, the rate-regulating step. rate-l imiting step). Thus, StAR is mainly expressed on cells that produce steroids.
  • pPKA intracellular signaling system
  • ACTH binds to receptors on the adrenal surface, which increases the amount of cAMP in the cell, thereby phosphorylating (activating) PKA, thereby phosphorylating CREB to enter the nucleus.
  • PCREB which enters the nucleus, increases StAR transcription as a major transcr ipt ion factor.
  • StAR is activated by phosphorylation
  • the amount of mR A and protein are also important in steroid synthesis, but pStAR, that is, the activation of StAR also plays an important role, so it is also measured and identified to phosphorylate StAR. It is important.
  • the best known factor to regulate the phosphorylation factor of StAR is that it is phosphorylated by pPKA.
  • the signaling system components that regulate StAR transcription are (pPKA, pCREB) phosphorylated proteins, and since activated StAR is also phosphorylated with pStAR, it is necessary to measure "phosphorylated proteins" rather than measuring mRNA levels.
  • the taste was measured by Western blot.
  • the present invention reveals that PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) may be used as a new target for the treatment of diseases caused by steroid hormone over-release, and based on this, screening candidates for preventing and treating diseases caused by steroid hormone over-release Provide a method.
  • the screening method of the present invention it is possible to effectively select a new candidate material capable of preventing and / or treating a disease caused by over-release of steroid hormones, and over-release of steroid hormones using a material selected according to the screening method of the present invention. There is an effect that can provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by the industrial availability is very excellent.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 PDK4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, PDK4의 mRNA 또는 단백질의 발현을 억제하는 물질을 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 치료의 새로운 타켓으로 PDK4 (pyruvate dehydrogenase kinase 4) 가 이용될 수 있음을 밝히고, 이에 기초하여 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 후보물질을 스크리닝 하는 방법을 제공한다. 본 발명의 스크리닝 방법에 의하면 스테로이드 호르몬 과방 출로 인한 질환을 예방 및 /또는 치료할 수 있는 새로운 후보물질을 효과적으로 선별할 수 있으며, 본 발명의 스크리닝 방법에 따라 선별된 물질을 이용하여 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있는 효과가 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
PDK4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인 한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법
【기술분야】
본 발명은 PDK4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과 방출로 인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법에 관한 것으로， 보다 상세하게는， PDK4의 mRNA 또는 단백질의 발현을 억제하는 물질 을 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.
【배경기술】
부신 (adrenal gland)은 양측 신장 위에 각각 위치하며 우리 몸의 생명유지에 중요한 호르몬을 분비하는 내분비 기관이다. 부신은 좌우에 각각 길이 4~5cm, 높이 2~3cm, 무게 7~8g의 작은 기관이며 우측은 삼각형， 좌측은 반달형의 모양을 이루고 있다. 부신의 바깥쪽을 피질, 안쪽을 수질이라고 하며 각각 발생학적으로 다른 기 원을 가지고 있으며， 호르몬도 각각 다른 호르몬을 분비하고 있다.
부신의 바깥쪽을 이루는 피질에서는 여러 가지 스테로이드 호르몬을 분비한 다. 부신 피질의 대표적인 호르몬으로는 코르티졸， 알도스테론 및 부신 안드로겐 등을 들 수 있다. 반면 부신수질에서는 신경절 세포들이 분포하고 있으며 카테콜아 민에 속하는 에피네프린과 노르에피네프린을 생산한다. 부신피질 호르몬 분비의 조절은 두뇌의 뇌하수체 (pi tui tary gland)에서 분비 되는 부신피질자극호르몬 (adrenocort icotropic hormone , ACTH)에 의해 조절된다. 또한 부신피질자극 호르몬은 두뇌의 시상하부 (hypothalamus)에서 분비되는 부신피 질자극호르몬유리호르몬 (cort i cotrophin releasing hormone , CRH)에 의해 조절 받 는다. 즉， 시상하부-뇌하수체 -부신피질로 이어지는 신호전달에 의해 부신피질의 호 르몬 분비가조절된다. 시상하부와 ,뇌하수체에서 각각 분비되는 부신피질자극호르몬 유리호르몬과 부신피질자극호르몬은 박동성으로 분비되며 아침에 가장 높고 오후에 감소하는 일 중 변동을 보인다. 이 두 가지 호르몬은 통증， 외상， 저혈당 등의 물리적， 화학적 인 스트레스 이외에도 정신적인 스트레스에 의해 분비가 조절된다. 또한 코르티졸 에 의해서도 위 두 가지 호르몬의 분비가 조절된다. 즉， 코르티졸의 분비가 많아지 면 시상하부와 뇌하수체에서 코르티졸 농도를 감지해서 부신피질자극호르몬 유리호 르몬과 부신피질자극호르몬의 분비가 억제되는 음성되먹이기 기전을 갖고 있다. 위 와 같은 음성되먹이기를 통해서 정상적인 상태에서는 일정한 코르티졸 농도를 유지 하여 부신피질에서의 스테로이드 호르몬 방출이 정상적으로 조절된다.
스테로이드 호르몬은 호르몬과 같은 기능을 담당하는 스테로이드를 의미하 며， 스테로이드 호르몬은 작용하는 수용체의 종류에 따라 그 종류가 구분된다. 스 테로이드 호르몬은 대사， 염증, 면역반응, 염 및 수분의 균형, 성적 특성들의 발현 뿐만 아니라 다양한 와부 환경의 스트레스로부터 신체를 보호하는 작용을 나타낸 다.
그러나， 여러 가지 원인에 의해 부신피질에서 스테로이드 호르몬의 방출이 과다하게 되면 이로 인한 비정상적인 생리학적 작용이 나타나게 된다. 대표적인 스 테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질환은 쿠싱 증후군 (Cushing' s syndrome) , 원발 성 알도스테론증 (Pr imary aldosteronism) 및 부신성기증후군 (adrenogenital syndrome)이 알려져 있다. 이러한， 스테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질환을 효과적으로 치료하기 위 해서 스테로이드 호르몬의 방출을 억제할 수 있는 타겟을 발굴하는 것이 필요하다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
이에， 본 발명자들은 스테로이드 호르몬의 과다한 방출을 저해할 수 있는 치 료 타겟을 발굴하기 위해 연구를 거듭하던 중， PDK4(pyruvate dehydrogenase kinasse 4) 및 /또는 PDK2의 raRNA 또는 단백질의 발현을 저해하면 스테로이드 호르 몬의 방출이 저해됨을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다. 따라서, 본 발명의 목적은 하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출 로 인한 질환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다:
(a) PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계; (b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK4의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계. 본 발명의 다른 목적은 하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다:
(a) PDK2 및 PDK4의 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하 는 단계 ;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계 ; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 활성 억제 제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치 료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제 의 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 제조를 위한 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제 를 이를 필요로 하는 개체에 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 방법을 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법】
상기한본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공 한다: (a) PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK4의 mRNA또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK4의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계 . 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하기 단계를 포함하는 스 테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공한 다:
(a) PDK2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하 는 단계 ;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계 ; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 활성 억제 제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치 료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제 의 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 제조를 위한 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제 를 이를 필요로 하는 개체에 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 방법을 제공하는 것이다. 이하 본 발명에 대해 상세히 설명한다. 본 발명은 하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다:
(a) PDK4( yruvate dehydrogenase kinase 4)의 mRNA또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계 ;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK4의 mRNA또 는 단백질의 발현량 또는 활성을측정하는 단계; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK4의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계 . 본 발명은 또한 (d) 상기 (c) 단계에서 선별된 물질올 PDK2를 발현하는 세포 에 처리하는 단계;
(e) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계; 및
( f ) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 선별하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일실시예에 따르면， PDK4가 결손된 동물군에서 야생형 동물군과 비교해 혈중 스테로이드 호르몬의 수치가 유의적으로 낮아진 것을 확인하였으며， PDK2 및 PDK4가 모두 결손되어 있는 동물군에서는 혈중 스테로이드 호르몬 수치의 감소가 더 현저한 것을 확인하였다.
따라서， PDK4 또는 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또는 단백질의 발현을 저해하는 물 질은 부신괴질에서 스테로이드 호르몬의 방출을 감소시킬 수 있기 때문에， 스테로 이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 사용될 수 있는 것이다. 본 발명에서 상기 PDK4 와 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포는 PDK4 의 mRNA 또는 단백질이 내인적으로 (endogenous) 발현 또는 일시적으로 고발현된 세포 를 포함하며， 또는 PDK4를 암호화하는 핵산을 세포 내에 도입하여 형질전환시킴으 로써 과발현 되도록 하여 사용할 수 있으나, 이에 특별히 제한되지 않는다. 본 발명에서 '단백질' 은 '폴리펩타이드 (polypept ide)' 또는 '펩타이드 (pept ide)' 와 호환성있게 사용되며, 예컨대， 자연 상태의 단백질에서 일반적으로 발견되는 바와 같이 아미노산 잔기의 중합체를 말한다. 상기 '폴리뉴클레오티드 (polynucleot ide)' 또는 '핵산' 은 단일 -또는 이중-가닥의 형태로 된 데옥시리보 뉴클레오티드 (DNA) 또는 리보뉴클레오티드 (RNA)를 말한다. 다른 제한이 없는 한, 자연적으로 생성되는 뉴클레오티드와 비슷한 방법으로 핵산에 흔성화되는 자연적 뉴클레오티드의 공지된 아날로그도 포함된다. 'mRNA'는 단백질 합성 과정에서 특정 유전자의 염기서열의 유전 정보를 폴리펩티드를 형성하는 리보솜으로 전달하는 R A 이다. 본 발명 스크리닝 방법을 언급하면서 사용되는 용어 "시험물질" 은 본 발명 의 PDK2 및 /또는 PDK4의 발현에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝 에서 이용되는 미지의 물질을 의미한다. 상기 시험물질은 siRNA(smal l interference RNA) , sh NA( short hairpin RNA) , miRNA(microRNA) , 리보자임 (ribozyme) , DNAzyme, PNA( pep t ide nucleic acids) , 안티센스 올리고뉴클레오타이 드, 항체， ¾타머, 천연추출물 또는 화학물질을 포함하나， 이에 한정되는 것은 아 니다. 또한， 상기 (a) 단계에서 사용되는 세포는 실험동물의 형태로 제공될 수 있 으며， 이 경우 본 발명의 스크리닝 방법은 상기 실험동물에게 스테로이드 호르몬의 과방출을 유도하는 단계를 추가로 포함하며， 시험물질과의 접촉은 비경구 또는 경 구투여 , 정위주사를 포함하나， 이로 제한하는 것은 아니며， 당업자라면 시험물질을 동물에게 테스트하기 위해 적절한 방법을 선택할 수 있을 것이다. 시험물질을 처리하는 것은 시험물질을 세포 또는 조직 배양 배지에 추가한 후 세포를 일정 시간 배양하는 것을 의미한다. 상기 세포가 실험동물 형태로 제공 될 때， 시험물질과의 접촉은 비경구 또는 경구 투여， 정위주사를 포함하는 이로 제 한되는 것은 아니며， 당업자라면 시험물질을 동물에게 테스트하기 위해 적절한 방 법을 선택할 수 있을 것이다. 본 발명에서 상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환은 쿠싱 증후군 (Cushing' s syndrome) , 원발성 알도스테론증 (Primary aldosteroni sm) 및 부신성기 증후군 (adrenogeni tal syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특 징으로 할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 상기 (b) 단계에서 PDK4의 mRNA 발현량 측정은 RT-PCR, 정량적 또 는 반정량적 RT-PCR(Quent itat ive or semi-Quent itat ive RT-PCR) , 정량적 또는 반 정량적 리얼 타임 RT-PCR(Quent itat ive or semi-Quent i tat ive real-t ime RT-PCR) , 노던 블롯 (northern blot ) 및 DNA 또는 RNA 칩 (chip)을 이용하여 측정될 수 있으 나， 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 상기 (b) 단계에서 PDK4의 단백질 발현량 측정은 웨스턴 블롯， ELISA, 방사선면역분석법， 방사면역확산법， 오우크레로니 (Ouchterlony) 면역확산 법， 로케트 면역전기영동, 면역조직화학염색, 면역침전분석， 보체고정분석, FACS 및 단백질 칩으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 방법을 이용하여 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 상기 (c) 단계에서 선별된 물질은 PDK4의 활성을 저해하는 물질 로 스테로이드 호르몬의 과다생성을 억제할 수 있는 효과가 있으나， 보다 우수한 효과를 나타내는 치료제 물질을 선별하기 위하여 상기 (c) 단계에서 선별된 물질을 대상으로 추가적으로 PDK2의 활성을 저해하는 물질을 선별하는 단계를 거칠 수 있 다. 본 발명은 또한 하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다:
(a) PDK2 및 PDK4의 mRNA 또는 단백질올 발현하는 세포에 시험물질을 처리하 는 단계;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계 ; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계. 본 발명의 일실시예에 따르면， PDK2 및 PDK4가 모두 결손되어 있는 마우스에 서 정상 야생형 마우스와 비교해 외부 자극 또는 ACTH의 자극에 의한 스테로이드 호르몬의 방출이 현저하게 감소되어 있는 것을 확인하였으며, 이러한 효과는 PDK4 만을 결손한 마우스와 비교해도 더 우수한 것이었다. 따라서， PDK2 및 PDK4를 동시에 발현하는 세포에 시험물질을 처리하여， PDK2 및 PDK4의 mRNA 및 /또는 단백질의 발현을 저해하는 물질은 스테로이드 호르몬의 과 방출로 인한 질환에 보다 효과적으로 사용될 수 있다. 본 발명에서 상기 PDK2 및 PDK4 의 mRNA 또는 단백질을 발현하는 세포는 PDK2 및 PDK4 의 mRNA 또는 단백질이 내인적으로 (endogenous) 발현 또는 일시적으 로 고발현된 세포를 포함하며， 또는 PDK2 및 PDK4를 암호화하는 핵산을 각각 세포 내에 도입하여 형질전환시킴으로써 과발현 되도록 하여 사용할 수 있으나， 이에 특 별히 제한되지 않는다. 상기 (a) 내지 (c)단계는 전술한 바와 같다. 본 발명은 또한 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 활성 억제제를 유 효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료용 약 학적 조성물을 제공한다. 본 발명에서 상기 약학적 조성물은 PDK2의 활성 억제제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 할 수 았다. 본 발명의 일실시예에 따르면， PDK4 또는 PDK2 및 PDK4를 결손 (knock-out )시 킨 마우스에서 외부 스트레스에 의한 자극 또는 부신피질자극 호르몬의 자극에 의 한 스테로이드 호르몬의 방출이 야생형 마우스와 비교해 현저하게 감소되는 것을 확인하였다 (실시예 4) . 특히 PDK4만을 결손시킨 동물군보다 PDK2 및 PDK4를 모두 결손시킨 동물군에서 스테로이드 호르몬의 방출 감소가 더 현저하게 나타났다. 이 를 통해 PDK2 및 PDK4가 모두 부신피질에서 스테로이드 호르몬의 방출에 관여하고 있다는 것을 알 수 있었다.
또한， 본 발명의 다른 일실시예에 따르면 부신피질자극호르몬 처리에 의해 증가된 스테로이드 호르몬의 합성과 관련된 유전자의 발현증가가 PDK4 결손 마우스 에서 저해되어 있음을 확인하였다 (실시예 4) .
따라서， PDK4 또는 PDK2 및 PDK4의 활성을 억제할 수 있는 물질은 스테로이 드 호르몬의 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 사용될 수 있다. 본 발명에서 상기 PDK4 또는 PDK2 및 PDK4의 활성 억제제는 PDK4 또는 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또는 단백질의 발현을 억제하는 물질 및 PDK2 및 /또는 PDK4 단백질 의 활성을 억제하는 물질로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 한편， 본 발명에서 상기 PDK4의 활성 억제제는 siRNA, shRNA, miRNA, 리보자 임 (ribozyme) , DNAzyme , ΡΝΑ( ept ide nucleic acids) , 안티센스 을리고뉴클레오타 이드， 펩타이드， PDK4 단백질에 특이적인 항체， 앱타머， 천연추출물 및 화학물질로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환은 쿠싱 증후군 (Cushing' s syndrome) , 원발성 알도스테론증 (Primary aldosteroni sm) 또는 부신성 기증후군 (adrenogenital syndrome)일 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환들은 각기 다른 스테로이드 호르 몬들의 과다한 생성에 의해 유발이 되는 것으로， 각각 코티솔， 알도스테론 및 안드 로겐이.이에 해당한다. 상기 쿠성증후군의 가장 흔한 원인으로는 관절염 또는 자가면역질환 등의 치 료를 위해 스테로이드 약을 장기간 복용한 경우 발생하는 외인성 (外因性) 쿠싱증후 군이며 약물에 의해 발생한다는 의미에서 의인성 (醫因性) 쿠성증후군이라고 부르기 도 한다. 내인성 (內因性) 쿠성증후군으로는 코르티졸의 생성을 자극하는 부신피질 자극호르몬 (ACTH)이 과도하게 분비되거나 혹은 부신피질자극호르몬의 농도와 관계 없이 부신에서 코르티졸을 많이 생산하여 일어나는 내인성 쿠싱증후군으로 나눌 수 있다.
부신피질자극호르몬을 과다 분비하는 뇌하수체 종양으로 인한 쿠싱증후군을 쿠싱병이라고 한다. 이는 내인성 쿠싱증후군의 원인 중 가장 높은 빈도 (약 68~80¾)를 차지한다.
뇌하수체 이외의 다른 부분, 예를 들면 폐암이나 유암종 (carcinoid) , 갈색세 포종 등에서 부신피질자극호르몬이 과다하게 생산되어 유발되는 경우는 이소성 (異 所性， 원래 있어야 할 부위가 아닌 곳에 있는 것) 쿠싱증후군이라고 한다.
부신 종양이나 증식증에서도 당질 코르티코이드를 과도하게 많이 생산할 수 있어 쿠싱증후군이 발생한다 . 상기 원발성 알도스테론증은 부신 피질에서 스테로이드 호르몬의 한 종류인 알도스테론을 지나치게 많이 분비하여 고혈압과 체내 칼륨의 부족을 일으키는 질환 으로， 이차성 고혈압의 중요한 원인 중 하나이다. 알도스테론은 인체의 체액량 (수 분량)과 전해질 농도를 조절하는 호르몬으로 염류코르티코이드라고도 하는데 , 지나 치게 많이 분비되면 고혈압과 전해질 농도의 이상을 가져오게 된다.
원발성 알도스테론증의 원인은 알도스테론분비선종이 있는 경우가 60%로 가 장 흔하며， 나머지는 양측성 혹은 일측성 부신피질증식증 등이 있고， 드물게는 알 도스테론 분비 암이 있을 수 있다. 상기 부신성기증후군은 부신호르몬성 이상생식기증후군이라고도 불리는 질환 으로, 부신피질에서 분비되는 남성 호르몬의 과잉분비로 여자에서는 성기, 2차 성 징의 남성화 경향이 나타나며， 남성에서는 성조숙을 나타내는 증후군이다. 부신성 기증후군이 나타나는 원인은 선천성 부신 과형성 또는 부신종양에 의한 남성호르몬 의 생산 증가가주요한 원인으로 알려져 있다. 즉， 본 발명에서 상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환은부신피질에 서 각각 코티솔， 알도스테론 및 안드로겐이 과다하게 형성되어 나타나는 질환인 쿠 싱 증후군 (Cushing ' s syndrome) , 원발성 알도스테론증 (Pr imary aldosteroni sm) 또 는 부신성기증후군 (adrenogeni tal syndrome)일 수 있으며, 이외에도 스테로이드 호 르몬의 과방출로 인해 나타나는 모든 증후군 또는 질환을 포함하는 개념으로 이해 할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 치료제 후보물질을 단독으로 함 유하거나 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체， 부형제 또는 회석제를 추가 로 함유할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대， 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여 용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스， 전분， 샐를로스 유 도체， 마그네슘 스테아레이트， 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한， 비경구 투 여용 담체는 물, 적합한 오일， 식염수， 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며， 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황 산수소나트륨， 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄을이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington ' s Pharmaceut i cal Sciences , 19th ed. , Mack Publ i shing Company, East on, PA, 1995) . 본 발명의 약학적 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투 여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투 여방법으로는 이에 한정되지는 않으나， 정맥내, 근육내， 동맥내， 골수내， 경막내， 심장내， 경피， 피하， 복강내， 비강내， 장관， 국소， 설하 또는 직장내 투여일 수 있 다. 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 경구투여될 수 있다. 예컨대, 본 발 명의 약학적 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘 로 피부를 가볍게 단자 (pri ck)하는 방법， 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으 로 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립， 정제， 환제, 당 의정제， 캡슐제， 액제， 겔제， 시럽제， 슬러리제， 현탁액 등으로 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어， 경구용 제제는 활성성분을 고체 부 형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 흔합물로 가공 함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈， 덱스트로즈， 수크로즈， 솔비를, 만니를， 자일리를， 에리스리를 및 말티를 등을 포 함하는 당류와 옥수수 전분， 밀 전분， 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분 류， 샐를로즈， 메틸 셀를로즈， 나트륨 카르복시메틸셀를로오즈 및 하이드록시프로 필메틸-셀를로즈 등을 포함하는 셀를로즈류， 젤라틴， 폴리비닐피를리돈 등과 같은 층전제가 포함될 수 있다. 또한， 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피를리돈， 한천， 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제， 향료， 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제， 크림제， 로션제， 외용연고제, 오일 제， 보습제， 겔제， 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문 헌 (Remington ' s Pharmaceut ical Science , 15th Edi t ion, 1975. Mack Publ ishing Company, East on, Pennsylvania 18042 , Chapter 87： Blaug, Seymour)에 기재되어 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량 (single dose)으로 환자 에게 투여될 수 있으며， 다중 투여량 (mult iple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치 료 방법 (fract ionated treatment protocol )에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약 학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 바람직하게 는 본 발명의 당단백 분획의 바람직한 전체 용량은 1일당 환자 체중 1 kg 당 약 O.Olug 내지 1 ,000 mg, 가장 바람직하게는 0.1 ug 내지 100 mg일 수 있다. 그러나 상기 본 발명의 치료제 후보물질의 용량은 약학적 조성물의 투여 경로 및 치료 횟 수뿐만 아니라 환자의 연령， 체중， 건강 상태, 성별， 질환의 중증도， 식이 및 배설 율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로， 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 본 발명의 약 학적 조성물을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 치료제로서의 특정한 용도 에 따른 적절한 유효 투여량올 결정할 수 있을 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조 성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형， 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제 한되지 아니한다. 나아가， 본 발명의 약학적 조성물은 스테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다. 본 발명은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제의 스테로이 드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 제조를 위한 용도를 제공한다. 본 발명은 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제를 이를 필요 로 하는 개체에 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 호르몬 과방 출로 인한 질환의 예방 및 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제는 유효량으 로 경구， 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 상기에서 '유효량' 이란 환자에게 투여하였을 때， 스테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질환올 치료효과를 나타내는 양을 말하며， 상기 '개체 (subject )' 란 동물, 바람직하게는 포유동물， 특히 인간을 포함하는 동물일 수 있으며， 동물에서 유래한 세포， 조직， 기관 등일 수도 있다. 상기 개체는 치료가 필요한 환자 (pat ient )일 수 있다. 상기 본 발명의 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제는 그 자체를 투여하거나 상술한 바와 같은 여러 제형으로 제조되어 투여될 수 있으며， 바람직하게는 원하는 효과 즉, 스테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 효과가 도출될 때까지 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에 공지된 방법에 따라 다양한 경로로 투여될 수 있다. 즉， 경구 또는 비경구， 예컨대 구강， 근육내， 정맥내, 피내， 동맥내， 골수내， 경막내， 목강내， 비강내, 질내， 직장내， 설하 또는 피하 투여되거나， 위장관， 점막 또는 호 흡기로 투여될 수 있다. 바람직하게는 피부에 직접 도포될 수 있다. 또한 본 발명 의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염은 표적 세포나 조직에 고친화성 결합 을 유발하는 분자와 결합되거나 상기 분자 내에 캡슐화된 형태로 투여될 수 있다. 본 발명의 PDK4 활성 억제제는 당업계에 공지된 기술을 이용하여 스테를 (예: 콜레 스테를)， 지질 (예: 양이온 지질， 비로좀 또는 리포좀) 또는 표적 세포 특이적 결합 제 (예: 표적세포 특이적 수용체에 의해 인지되는 리간드)와 결합될 수 있다. 적합 한 커플링제 또는 가교제로는 예컨대 단백질 A, 카보디이미드, N-숙신이미딜 -3-(2- 피리딜디티오)프로피오테이트 (SPDP) 등을 포함할 수 있다. 이들 제형은 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌 (Remington' s Pharmaceut ical Science, 15th Edi t ion, 1975, Mack Pub 1 i shng Company , East on, Pennsylvania)에 기술되어 있다.
【유리한 효과】
본 발명은 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 치료의 새로운 타켓으로 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)가 이용될 수 있음을 밝히고， 이에 기초하 여 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 후보물질을 스크리닝 하는 방법을 제공한다. 본 발명의 스크리닝 방법에 의하면 스테로이드 호르몬 과방 출로 인한 질환을 예방 및 /또는 치료할 수 있는 새로운 후보물질을 효과적으로 선 별할 수 있으며， 본 발명의 스크리닝 방법에 따라 선별된 물질을 이용하여 스테로 이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있는 효과가 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델에 PDK 저해제인 DCA를 투여한 후 혈당 (A) , 혈중 스테로이드 호르몬 (B) , 체중 (C) 및 증체율의 변화 (D)를 나타낸 도면 이다. 도 2는 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델에 PDK 저해제인 DCA를 투여한 후 임상증상의 개선효과를 확인한 도면이다 (A: 체중， B : 체지방， C:체중대비 체지방 량， D: 제지방, E: 체중대비 제지방량) 도 3은 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델에 PDK 저해제인 DCA를 투여한 후 지방의 증감여부를 CT 촬명을 통해 확인한 도면이다 (A: 정상동물군， B: 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델 sal ine 투여군， C : 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델 DCA투여군) 도 4는 랫드 부신을 떼어내어 ACTH로 스테로이드 호르몬 분비를 자극한 후， DCA를 처리하였을 때 호르몬 분비량 변화를 측정한 결과이다. 도 5는 PDK4 및 /또는 PDK2 결손 마우스 동물모델의 뇨중 코르티코스테론의 농도 (A)와 마우스에 스트레스를 주어 스트레스 호르몬 분비를 자극하였을 때 혈중 코르티코스테론 농도의 변화 (B) 및 ACTH 자극을 통한 혈중 코르티코스테론의 농도 변화 (C)를 관찰한 결과이다,. 도 6은 야생형 마우스 및 PDK4 결손 마우스에 ACTH를 자극한 후， 스테로이드 호르몬 합성과 관련된 유전자들의 발현정도를 확인한 결과이다 (A: 혈중 코르티코스 테론， B: 스테로이도 호르몬 합성조절 유전자들의 발현량 변화, WT: 야생형， PDK4K0: PDK4 결손동물) .
【발명의 실시를 위한 형태】
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
단， 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용이 하기 실 시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
스테로이드 호르몬 과방출 동물모델에서 PDK의 저해에 따른 효과 <1-1> 동물모델
쿠성증후군 마우스 모델인 Cort icotropin— releasing hormone transgenic (CRH Tg)마우스는 The Jackson Laboratory (USA)에서 구입하였으며 Speci f ic Pathogen Free (SPF) 동물사육실에서 사육올 하였다. 이 마우스 모델의 경우 과도 한 CRH의 지속적인 과발현으로 ACTH의 분비가 증가되어 부신에서 스테로이드 호르 몬을 과방출하도록 함으로서 만성적인 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 양상들 - 고혈당， 인술린 저항성, 중심성 비만 (central obesity) , 피부를 비롯한 결체조직의 약화， 근위측증 (muscular atrophy) 및 골다공증 등이 유발되는 ^으로 잘 알려져 있다.
<1-2> PDK 저해제 투여에 따른 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 임상증상 개선효과 (1)
다양한 원인에 의해 스테로이드 호르몬의 한 종류인 코르티솔 (Cort isol )의 과다한 방출로 인해 나타나는 질환올 쿠싱증후군이라 한다.
쿠싱증후군에서 나타나는 코르티졸의 과잉은 우리 몸의 여러 시스템에 영향 을 미치게 되는데 단백질의 분해가 증가하고 지방 이동이 촉진되므로 피부 및 모세 혈관을 구성하는 콜라겐과 근육을 구성하는 단백질이 분해되고 체내 지방의 재분포 가 일어나게 된다. 그 외에 인슐린 저항성을 증가시키므로 혈당이 상승하고 성호르 몬 분비가 억제되며 칼슘 흡수가 억제 되고 뼈를 만드는 조골세포의 생존을 단축시 키게 된다. 뿐만 아니라 면역 세포의 활성이 억제되어 감염에 취약한 상태가 되며 과도한 코르티졸은 혈압을 유지하는 염류 코르티코이드의 작용과 함께 혈관을 수축 시켜 혈압을 상승시키게 된다. 쿠싱증후군의 증상은 수주에서 수개월에 걸쳐 서서 히 나타나는데 다음과 같은 임상 증상이 대표적으로 알려져 있다:
- 체중이 증가하는데， 주로 가슴과 배 주위에 살이 찌고 팔다리는 오히려 가늘어진다 (가장흔함) .
- 얼굴이 붉어지고 등그렇게 된다 (月狀顔， moon face) .
- 뒷목 바로 밑 견갑골 사이에 지방이 축적된다 (물소 등， buf falo hump) .
- 얼굴과 몸에 체모가 증가한다 (특히 여성들에게 많이 관찰된다) .
- 붉은 자색의 선조가 배， 허벅지 , 팔에 나타난다.
- 다리 근육이 위축되고 약해지면서 계단을 오르기가 힘들어진다. 팔에서도 같은 증세가 나타날 수 있다.
-사지에 멍이 잘 든다.
- 피부가 얇아지고 여드름이 생긴다.
- 피부와 점막의 진균 (곰광이) 감염 ： 체부백선 (어루러기) , 손롭과 발톱의 무좀인 조갑진균증
- 여성의 경우， 월경 주기가 불규칙해지며 나중에는 무월경이 된다.
- 성욕이 감퇴한다 (발기 부전) .
- 우울증과 심한 감정 변화， 정신병
- 쿠싱증후군을 치료하지 않고 방치할 경우에는 고혈압， 골다공증， 당뇨병 과 만성 심부전 등의 합병증이 일어날 수 있다. 이에， 본 발명자들은 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델, 즉 쿠싱증후군 동 물모델에서 PDK 저해제인 디클로로아세테이드 (dichloroacetate , DCA)를 투여하고, 쿠싱증후군의 대표적인 임상증상이라 할 수 있는 혈당， 혈중 스테로이드 호르몬의 농도， 체중 및 체증증가율을 평가하였다.
구체적으로， DCA를 300 mg/kg의 농도로 1일 1회 , 총 10일간 복강투여한 뒤 동물의 혈액을 채취하여 혈당 및 코르티코스테론의 농도를 측정하였으며, 매일 체 중을 측정하여 체중 변화 및 증체율 을 기록하였다. 이에 대한 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이， 스테로이드 호르몬 과방출 동물모델인 CRfi Tg mice에 PDK 저해제인 DCA를 투여한 결과， 혈당, 혈중 스테로이드 호르몬, 체중 및 증체율이 미투여 대조군과 비교해 현저히 감소하는 것을 확인하였다. <l-3> PDK 저해제 투여에 따른 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 임상증상 개선효과 (2)
상기 실시예 <1-2>에서 평가한 DCA의 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 임상 증상 개선효과 중 체중증가 및 체지방량 증가에 대한 개선효과를 동일한 동물모델 에서 평가하였다.
구체적으로， 쿠성증후군 동물모델에서 PDK 저해제인 디클로로아세테이드 (dichloroacetate , DCA)를 300 mg/kg의 농도로 1일 1회 복강 내 투여를 한 후 체중 및 혈당을 측정하였으며 소동물체성분 분석기 (Minispec LF50 , Bruker , Germany)를 이용하여 체지방 및 근육량을 측정하였다. 또한 영상을 확인하기 위하여 Triumph LabPET/CT (TriFoi l , USA)영상장비를 통하여 CT 촬영을 수행하였다. 이에 대한 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이， CRH Tg mice에 sal ine을 투여한 동물군에서는 체 중이 증가하였으나， DCA를 투여한 군에서 정상군과 동등한 수치까지 체중이 감소하 는 것을 확인하였다. 또한， CRH Tg mice에 sal ine을 투여한 동물군에서는 대조군과 비교해 체지방 (Fat)량이 현저히 증가하였으나， DCA를 투여한 군에서는 sal ine 투여 대조군과 비교해 약 50% 체지방량이 감소하는 것을 확인하였다. 체중대비 체지방량 (Fat/BW)은 더욱 현저하게 감소하는 소견을 보였다. 제지방 ( lean body mass) 수치 는 CRH Tg mice에서 감소하였다가 DCA투여한 군에서 유의하게 증하가는 것을 확인 하였고， 이를 중으로 나눈 체중대비 제지방량 (Lean/BW)은 더욱더 현저하게 증가하 는 것을 확인하였다. 한편, 도 3에 나타낸 바와 같이 CT촬영을 통해 지방의 증감을 영상으로 확인 한 결과, CRH Tg mice에서 피하 및 내장지방의 현저한 증가소견을 보였고， CRH Tg mice에 DCA를 투여한 군에서는 야생형 mice와 비교하여 비슷한 소견을 였다. 이 를 통해 DCA에 의해 CRH Tg mice의 특징적인 체지방증가가 억제됨을 추정할 수 있 었다.
<실시예 2>
부신피질자극호르몬 (Acra) 자극에 의한부신피질에서의 호르몬분비 변화평 가 (Exᅳ vivo) 5 주령 랫드를 구입하여 1주일 간 안정화를 시킨 후 경추 탈골을 통하여 안 락사를 시킨 후 부신을 적출하며 부신 주위의 지방조직을 제거 한 후 실험을 수행 하였다. 약물 효과를 확인하기 위하여 DCA를 2시간 전에 미리 처리하였으며， 그 후 ACTH를 처리한 후 2시간 뒤에 부신에서 분비되는 코르티코스테론 배지에서 양을 측 정하였다. 이에 대한 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이， 랫드 부신피질을 때어내어 ACTH로 스테로이드 호 르몬 분비를 자극한 결과， 코르티코스테론의 분비량이 현저히 증가하였으며， ACTH 자극에 의한 코르티코스테론 분비량 증가는 DCA 처리에 의해 유의적으로 저해되는 것으로 확인되었다.
<실시예 3>
PDK4 및 /또는 PDK2 유전자 발현 결손 (Knock-out) 마우스 in vivo 실험 <3-1> 동물모델
엑손과 인트론 사이를 유전자 변형기법으로 통하여 PDK2 결손 및 PDK4 결손 마우스를 만들었으며 미국 인디애나 대학의 Robert A. Harris박사에게서 공여 받았 다. PDK2 K0와 PDK4 K0의 교배를 통하여 PDK2/PDK4 결손 마우스를 만들었으며 모든 동물실험은 SPF실험실에서 수행하였다.
<3-2> 혈중 코르티코스테론 (cort icosterone) 측정
상기 실시예 <1-1>에서 수득한 PDK4 및 /또는 PDK2 결손 (knock-out ) 마우스 모델에서 24시간 동안 뇨중 코르티코스테론의 농도， 30분간 마우 i에 스트레스를 주어 스테로이드 호르몬 분비를 ¼극하였을 때 혈중 코르티코스테론 농도 및 부신 피질자극호르몬 (ACTH) 자극을 통한 혈중 코르티코스테론의 농도 변화를 확인하였 다. 구체적으로，
( i ) 뇨중 코트티코스테론을 측정하기 위하여 모든 마우스를 24시간 전에 '뇨 를 수집할 수 있는 대사케이지에 넣어서 안정화를 시킨 후 그 후 24 시간 동안 뇨 를 수집하여 측정하였다. ( i i ) 마우스에게 스트레스를 주기 위하여 50ml comical tube에 넣어서 30분 간 움직이지 못하게 한 후 꼬리에서 혈액을 채취한 후 코르티코스테론 양을 측정하 였다.
( i i i ) ACTH 자극에 의한 코르티코스테론 분비를 in vivo에서 확인하기 위하 여 각각의 마우스에 오전 8시에 ACTH를 lmg/kg의 농도로 복강 주사로 주입한 후 시 간별로 혈액을 채취하여 측정하였다. 이에 대한 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5A 에 나타낸 바와 같이， 24시간 동안 마우스 뇨중 코르티코스테론의 농 도를 측정한 결과 PDK4 결손 마우스 및 PDK2/PDK4 결손 마우스에서 코르티코스테론 의 양이 대조군 마우스와 비교해 통계학적으로 유의성 있게 감소되어 있는.것을 확 인하였다.
도 5B 에 나타낸 바와 같이， 마우스에 30분간 스트레스를 가해 스테로이드 호르몬의 분비를 자극한 결과 모든 마우스군에서 스트레스를 가하기 전과 비교해 혈중 코르티코스테론의 양이 현저히 증가하였다. 스트레스에 대한 반응은 중추신경 계에서 시작하여 시상하부의 부신피질 자극호르몬 유리 호르몬의 분비를 증가시켜 뇌하수체의 부신피질자극 호르몬 분비에 영향을 주게 되고， 결과적으로 부신피질에 서 스테로이드 호르몬의 분비가 증가하게 되는 것이다. 한편， 스트레스의 자극에 의한 코르티코스테론의 분비 증가는 대조군과 비교해 PDK4 결손 또는 PDK2/PDK4 결 손 마우스에서 통계학적으로 유의성 있게 감소하는 것으로 확인되었다.
도 5C 에 나타낸 바와 같이， 부신피질자극호르몬 (ACTH)를 처리하여 직접적으 로 스테로이드 호르몬의 방출을 자극한 후 1시간 동안 혈중 코르티코스테론의 농도 를 측정한 결과， 모든 투여군에서 혈중 코르티코스테론의 양이 증가하였으나 정상 대조군과 비교해 PDK4 또는 PDK2/PDK4 결손 마우스에서 그 증가량이 현저히 적은 것으로 확인되었다. 상기한 결과를 통해, PDK4 또는 PDK2/PDK4를 저해하면 부신피질에서 스테로 이드 호르몬의 방출이 감소되어 스테로이드 호르몬의 과방출로 인한 질환을 예방 또는 치료할 수 있다는 것을 알 수 있었다.
<3-3> 스테로이드 호르몬 합성관련 유전자의 발현 평가
' 본 발명자들은 상기 실시예 <4-2>의 결과를 토대로， PDK4의 발현 저해가 스 테로이드 호르몬의 합성과 관련된 유전자인 StAR, pStAR, pCREB 및 pPKA의 발현에 어떤 영향을 미치는지 알아보기 위한 실험을 진행하였다.
St AR( steroidogenic acute regulatory protein)은 미토콘드리아 내에서 콜레 스테를의 수송을 조절하는 수송 단백질 (transport protein)로, 이 단계는 스테로이 드의 합성올 조절함에 있어서 가장 중요한 단계， 즉 속도 -조절 단계 (rate-l imi t ing step)에 해당한다. 따라서, StAR는 스테로이드를 생산하는 세포에 주로 발현한다.
StAR의 전사조절 및 활성조절에 미치는 인자들에 대해서는 밝혀진 바가 많지 않아서 아직까지 많은 연구가 필요한 분야 중 하나이다. 가장 잘 알려져 있는 신호 전달체계는 ACTH에 의해 자극을 받게됨으로써 활성화되는 세포내 pPKA 신호전달체 계이다. 부신표면에 있는 수용체에 ACTH가 결합하여 세포내 cAMP의 양이 증가하고， 이에 따라 PKA가 인산화 (활성화)됨으로써 CREB를 인산화시켜 핵 속으로 들어갈 수 있도록 한다. 핵속으로 들어간 pCREB는 StAR의 주요 전사인자 (transcr ipt ion factor)로써 StAR의 전사를 증가시키게 된다.
StAR는 인산화가 되면 활성화되므로， 스테로이드 합성에 있어서 mR A의 양과 단백질의 양도 중요하지만, pStAR, 즉 StAR의 활성화도 중요한 인자로 작용하기 때 문에 이를 측정하고, StAR를 인산화시키는 인자를 확인하는것도 중요하다. StAR의 인산화 인자를 조절하는 인자로 가장 잘 알려진것은 pPKA에 의하여 인산화되는 것 이다. 따라서 현재까지 StAR의 전사 및 활성도를 조절하는 중요한 인자들은 ACTH에 의하여 활성화되는 pPKA신호전달체계라고 할 수 있다. 구체적으로， StAR의 전사를 조절하는 신호전달체계 구성요소들은 (pPKA, pCREB) 인산화단백이며， 활성화된 StAR 역시 pStAR으로 인산화되어 있기 때문에 mRNA의 양을 측정하는 것보다 "인산화된 단백질" 을 측정해야꾀미가 있어 웨스턴 블롯으로 이를 측정하였다.
PDK4가 코르티코스테론 분비에 영향을 미치는지 확인하기 위하여 야생형 마 우스와 PDK4 결손 마우스를 경추탈골을 통하여 안락사 시킨 후 부신을 분리하여 2 시간 동안 750 nM ACTH를 처리하여 식간별로 분비되는 코르티코스테론 양을 배양배 지를 수집하여 측정하였으며， 부신에서 단백질신호전달 변화를 확인하기 위하여 웨 스턴 블롯을 통하여 단백질 발현을 확인하였다. 이에 대한 결과를 도 6에 나타내었다. 도 6에 나타낸 바와 같이， 야생형 마우스에서는 ACTH의 자극에 의해 PDK4 , pStAR, StAR, pCREB 및 pPKA substrate의 단백 발현량이 증가하였으나, PDK4 결손 마우스에서는 이러한 증가경향이 현저히 감소되는 것으로 확인하였다.
즉, PDK4의 발현 저하는 스테로이드 합성에 관여하는 주요 유전자들의 발현 을 억제시키는 기전을 통해 스테로이드 호르몬의 합성을 저해한다는 것을 알 수 있 었다.
【산업상 이용가능성】
본 발명은 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 치료의 새로운 타켓으로 PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)가 이용될 수 있음을 밝히고, 이에 기초하 여 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 후보물질을 스크리닝 하는 방법을 제공한다. 본 발명의 스크리닝 방법에 의하면 스테로이드 호르몬 과방 출로 인한 질환을 예방 및 /또는 치료할 수 있는 새로운 후보물질을 효과적으로 선 별할 수 있으며， 본 발명의 스크리닝 방법에 따라 선별된 물질을 이용하여 스테로 이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있는 효과가 있어 산업상 이용가능성이 매우 우수하다.

Claims

【청구의 범위】
【청구항 11
하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치 료제의 스크리닝 방법 :
(a) PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 mRNA또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하는 단계;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK4의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질올 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질 환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계.
【청구항 2]
제 1항에 있어서， (d) 상기 (C) 단계에서 선별된 물질을 PDK2를 발현하는 세 포에 처리하는 단계 ;
(e) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2의 mRNA또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계; 및
(f) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2의 mRNA 또는 단백질 의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 선별하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법 .
【청구항 3】
제 1항에 있어서， 상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환은 쿠싱 증후군 (Cushing' s syndrome), 원발성 알도스테론증 (Primary aldosteronism) 및 부신성기 증후군 (adrenogenital syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특 징으로 하는 방법 .
【청구항 4】
제 1항에 있어서，상기 PDK4의 mRNA 발현량 측정은 RT-PCR, 정량적 또는 반정 량적 RT-PCR(Quentitative or semi-Quentitative RT-PCR) , 정량적 또는 반정량적 리얼 타임 RT-PCR(Quentitative or semi-Quentitative real-time RT-PCR), 노던 블 롯 (northern blot) 및 DNA 또는 RNA 칩 (chip)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나의 방법을 이용하여 측정되는 것을 특징으로 하는 방법.
【청구항 5】
제 1항에 있어서， 상기 PDK4의 단백질 발현량 측정은 웨스턴 블롯， ELISA, 방 사선면역분석법， 방사면역확산법， 오우크레로니 (Ouchterlony) 면역확산법, 로케트 면역전기영동, 면역조직화학염색， 면역침전분석, 보체고정분석， FACS 및 단백질 칩 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 방법을 이용하여 측정되는 것을 특징으 로 하는 방법ᅳ
【청구항 6]
하기 단계를 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치 료제의 스크리닝 방법 :
(a) PD 2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질을 발현하는 세포에 시험물질을 처리하 는 단계 ;
(b) 시험물질을 처리한 세포와 처리하지 않은 세포에서 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA또는 단백질의 발현량 또는 활성을 측정하는 단계 ; 및
(c) 시험물질을 처리하지 않은 세포와 비교해 상기 PDK2 및 PDK4의 mRNA 또 는 단백질의 발현량 또는 활성을 감소시킨 시험물질을 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제로 선별하는 단계.
【청구항 7】
PD 4(pyruvate dehydrogenase kinase 4)의 활성 억제제를 유효성분으로 포함 하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 8】
제 7항에 있어서， PDK2의 활성 억제제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 9】
제 7항 또는 계 8항에 있어서, 상기 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환은 쿠싱 증후군 (Cushing' s syndrome) , 원발성 알도스테론증 (Primary aldosteronism) 및 부신성기증후군 (adrenogeni tal syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하 나인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 10】
제 7항 또는 제 8항에 있어서， 상기 PDK4의 활성 억제제는 PDK4의 raRNA 또는 단백질의 발현을 억제하는 물질 및 PDK4 단백질의 활성을 억제하는 물질로 이루어 진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 11】
제 7항 또는 제 8항에 있어서， 상기 PDK4의 활성 억제제는 siR A, shR A, miRNA, 리보자임 (ribozyme) , DNAzyme, PNA( ept ide nucleic acids) , 안티센스 을리 고뉴클레오타이드， 펩타이드， PDK4 단백질에 특이적인 항체， 앱타머， 천연추출물 및 화학물질로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
【청구항 12】
PD 4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제의 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료제 제조를 위한 용도.
【청구항 13】
PDK4(pyruvate dehydrogenase kinase 4) 활성 억제제를 이를 필요로 하는 개 체에 유효량으로 투여하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환의 예방 및 치료 방법.
PCT/KR2016/003833 2016-04-12 2016-04-12 Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법 Ceased WO2017179744A1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2016/003833 WO2017179744A1 (ko) 2016-04-12 2016-04-12 Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2016/003833 WO2017179744A1 (ko) 2016-04-12 2016-04-12 Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017179744A1 true WO2017179744A1 (ko) 2017-10-19

Family

ID=60041819

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2016/003833 Ceased WO2017179744A1 (ko) 2016-04-12 2016-04-12 Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2017179744A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116103210A (zh) * 2023-04-13 2023-05-12 百葵锐(天津)生物科技有限公司 一种高效无细胞体外表达蛋白的体系

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101040486B1 (ko) * 2008-08-25 2011-06-09 경북대학교 산학협력단 Ｐｄｋ4의 신규 용도
JP2013006783A (ja) * 2011-06-22 2013-01-10 Nagasaki Univ 荷重感知遺伝子
KR20150143190A (ko) * 2014-06-13 2015-12-23 경북대학교 산학협력단 Pdk 억제제의 스크리닝 방법 및 pdk 억제제의 용도
KR20160032386A (ko) * 2014-09-15 2016-03-24 경북대학교 산학협력단 Pdk 억제제를 유효성분으로 함유하는 만성 염증성 통증 치료용 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101040486B1 (ko) * 2008-08-25 2011-06-09 경북대학교 산학협력단 Ｐｄｋ4의 신규 용도
JP2013006783A (ja) * 2011-06-22 2013-01-10 Nagasaki Univ 荷重感知遺伝子
KR20150143190A (ko) * 2014-06-13 2015-12-23 경북대학교 산학협력단 Pdk 억제제의 스크리닝 방법 및 pdk 억제제의 용도
KR20160032386A (ko) * 2014-09-15 2016-03-24 경북대학교 산학협력단 Pdk 억제제를 유효성분으로 함유하는 만성 염증성 통증 치료용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BYUN ET AL.: "Retinoic Acid-related Orphan Receptor Alpha Reprograms Glucose Metabolism in Glutamine-deficient Hepatoma Cells", HEPATOLOGY, vol. 61, no. 3, March 2015 (2015-03-01), pages 953 - 964, XP055429782 *
HUANG ET AL.: "Regulation of Pyruvate Dehydrogenase Kinase Expression by Eeroxisome Proliferator-activated Receptor-alpha Ligands, Glucocorticoids, and Insulin", DIABETES, vol. 51, no. 2, February 2002 (2002-02-01), pages 276 - 283, XP002337020 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116103210A (zh) * 2023-04-13 2023-05-12 百葵锐(天津)生物科技有限公司 一种高效无细胞体外表达蛋白的体系

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gupta et al. Mechanisms of pain modulation by sex hormones in migraine
Rodriguez et al. Myostatin and the skeletal muscle atrophy and hypertrophy signaling pathways
Patterson et al. Ghrelin and appetite control in humans—potential application in the treatment of obesity
Coronel et al. Progesterone prevents allodynia after experimental spinal cord injury
US9751950B2 (en) Methods of reducing skeletal muscle loss using an antibody against Fn14
KUROSAKI et al. Expression of xanthine oxidoreductase in mouse mammary epithelium during pregnancy and lactation: regulation of gene expression by glucocorticoids and prolactin
EP3081228B1 (en) Irisin for care and prevention of osteoporosis
Tian et al. Electroacupuncture suppresses expression of gastric ghrelin and hypothalamic NPY in chronic food restricted rats
Shrestha et al. Effect of reducing hypothalamic ghrelin receptor gene expression on energy balance
WO2017179744A1 (ko) Pdk4 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 스테로이드 호르몬 과방출로 인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 이를 스크리닝하는 방법
KR102122970B1 (ko) 금제제를 유효성분으로 포함하는 파골세포 분화 억제용 조성물
Amaral et al. Metoclopramide-induced hyperprolactinemia effects on the pituitary and uterine prolactin receptor expression
Dumont et al. Evidence for direct actions of melanocortin peptides on bone metabolism
US9241973B2 (en) Composition for treatment or prevention of erectile dysfunction including DKK2 protein or DKK2 gene thereof and use of the composition
KR102701258B1 (ko) Igfbp5의 발현 또는 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 발기부전 예방 또는 치료용 약학 조성물
Przybył et al. Brain-derived neurotrophic factor affects mRNA and miRNA expression of the appetite regulating centre in the sheep arcuate nucleus
US20240102021A1 (en) Methods and compositions for treating, preventing or reversing obesity and obesity-related disorders by opsin 3 regulation of hypothalamic melanocortin receptors
Du et al. S1P1 gene transfection improves erectile function in spontaneously hypertensive rats
KR101978277B1 (ko) Pdk2를 이용한 여성 갱년기 질환 예방 또는 치료제의 스크리닝 방법 및 상기 방법으로 스크리닝 된 치료제를 유효성분으로 포함하는 여성 갱년기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN109913541B (zh) Gpr1靶点及其拮抗剂在不孕相关疾病的应用
Saul et al. Why age matters: inflammation, cancer and hormones in the development of sarcopenia
Hasiec et al. The stimulatory effect of salsolinol on prolactin gene expression within the anterior pituitary of lactating sheep: in vivo and in vitro study
KR102217986B1 (ko) Taz에 의한 스테로이드 호르몬의 조절
US20200155638A1 (en) Enhancing Oxytocin Receptor Expression Using an Oxytocin Receptor Agonist and an Alk5 Antagonist
Lok et al. Expression of G protein β subunits in rat skeletal muscle after nerve injury: Implication in the regulation of neuregulin signaling

Legal Events

Date Code Title Description
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16898707

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 16898707

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1