WO2017093698A1 - Biphotonic photosensitizing dendrimers, manufacturing method and uses - Google Patents

Biphotonic photosensitizing dendrimers, manufacturing method and uses Download PDF

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WO2017093698A1
WO2017093698A1 PCT/FR2016/053198 FR2016053198W WO2017093698A1 WO 2017093698 A1 WO2017093698 A1 WO 2017093698A1 FR 2016053198 W FR2016053198 W FR 2016053198W WO 2017093698 A1 WO2017093698 A1 WO 2017093698A1
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dendrimer
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photon
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Aude SOURDON
Olivier Mongin
Mireille Blanchard-Desce
Magali Gary-Bobo
Marcel Garcia
Marie Maynadier
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Universite De Rennes 1
Universite De Montpellier
Universite de Bordeaux
Centre National De La Recherche Scientifique
Bordeaux Inp
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Definitions

  • the invention relates to two-photon photosensitizers dendrimers, their manufacturing process and their use *.
  • the present invention more particularly relates to biphotonic photosensitizer dendrimers, their method of manufacture and their use in fluorescence imaging or for two-photon dynamic phototherapy.
  • Dynamic phototherapy is a gentle technique that can be used, for example, in the treatment of cancers, by injecting a non-toxic substance in the absence of light that has the property, once subjected to a light excitation, of to turn into poison by the formation of free radicals.
  • Photosensitizers for photodynamic therapy are now commercially available, such as Photofrin® from PINNACLE BIOLOGICS, Foscan® (Temoporfm or M-THPC) from BIOLITEC PHARMA ITD., Or Visudyne® (Verteporfin) from NOVARTIS EUROPHARM LTD. Others like Photosense® have obtained a marketing authorization. All of these compounds are porphyrinic derivatives and possess high quantum oxygen quantum yields as well as reasonable fluorescence yields.
  • Photofrin remain photosensitive for several days (or even weeks) after treatment, and should avoid during this period any exposure of the skin and eyes to light. from the sun or bright interior lights (bulbs without lampshades, neon lights ). Failure to observe these precautions may result in erythema, edema and / or blistering.
  • Two-photon absorption is a non-linear optical process that allows the simultaneous absorption of two photons.
  • the two-photon excitation quadratically dependent on the light intensity, occurs in practice only at the point where it is maximal, that is to say at the focal point.
  • This excitation localization property allows access to intrinsic three-dimensional resolutions impossible to obtain with a single-photon absorption.
  • This technique also has the advantage of penetrating deeper into the biological tissues. Fluorescent dendrimers have been previously described (M. Blanchard-Desce, M. Werts, O. Mongin, JP Majorai, AM Caminade, R. Thataverthy, PCF). Int. Appl. 2007, WO 2007080176].
  • these dendrimers exhibit a very high biphotonic response of up to about 56,000 GM for a generation 4 dendrimer.
  • these dendrimers do not have the ability to generate free radicals under two-photon excitation.
  • Quadrupole biphotonic photosensitizers have been incorporated into mesoporous silica nanoparticles and have shown in vitro and in vivo efficacy against photodynamic therapy ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PCT Int. Appl. 2011, WO 2011073054]. Incorporation of symmetrical quadrupole photosensitizers into mesoporous silica nanoparticles provides access to efficient systems under two-photon excitation.
  • silica nanoparticles are globally polydisperse particles whose diameter can range from 30 to 300 nm.
  • Silica nanoparticles are, in addition, "hard” particles whose toxicity is poorly understood, which precludes a transition to clinical trials.
  • one of the aims of the invention is the formation of biphotonic photosensitizer dendrimers.
  • Another object of the invention is to provide a method of manufacturing such dendrimers.
  • Another object of the invention is the use of biphotonic photosensitizer dendrimers in photodynamic therapy induced at two photons.
  • Another object of the invention is the use of biphotonic photosensitizers in fluorescence imaging induced at one or two photons.
  • the present invention thus relates to a biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula
  • - A represents a heart phos horé chosen among
  • n corresponding to the valence of the phosphorus core A and being a non-zero integer from 3 to 8;
  • B represents a first non-chromophoric unit directly bound to said phosphorus core and chosen from
  • n corresponding to the valence of the first pattern B and being a non-zero integer from 2 to 5; i representing the number of successive repeating units of the first pattern B grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 10, in particular from 1 to 4; C represents a second unit, chromophoric, having two-photon absorption properties, and being bound n times directly to said first pattern B when i is different from 0 or being bonded directly to said phosphor core A when i is equal to 0;
  • said second pattern C being of formula
  • p corresponding to the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2;
  • j representing the number of repetition units successive staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5; in particular from 1 to 2
  • E represents a water-solubilising group and / or a targeting function, all of these water-solubilising groups and / or targeting functions forming a peripheral layer on the dendrimer; said water-solubilizing group and / or said targeting function being directly linked p times to said staple appendix D when j is different from 0 or being directly linked q times to said second pattern C when j is equal to 0.
  • Dendrimers are highly branched functional polymers of defined structure with a tree structure. These macromolecules are polymers since they are based on the repetitiveness of one or more motifs. However, dendrimers differ fundamentally from conventional polymers in that they have their own properties due to their tree structure. The molecular weight and shape of the dendrimers can be precisely controlled. They can be end-terminated at the termination of the trees, forming a peripheral layer on the surface, making these terminal functions easily accessible.
  • the dendrimers are constructed step by step, starting from a nucleus, by the repetition of a sequence of reactions allowing the multiplication of each pattern repetitively and terminal functions. Each reaction sequence forms what is called a new "generation".
  • the biphotonic photosensitizer dendrimers of the present invention are also referred to as nano-objects.
  • the diameter of the dendrimers is from 5 nm to 20 nm.
  • the size of the photosensitizer will, among other parameters, condition its behavior in biological media.
  • photosensitizers with a size greater than 100 nm are likely to accumulate and clog the capillaries. Indeed, these small vessels have a diameter of 4 ⁇ in humans and 3 ⁇ in the mouse.
  • small markers diffuse through the walls of biological tissues (such as the endothelial wall, which has drawbacks for use in angiography).
  • chromophore refers to a chemical compound having a significant absorption of light in the range of UV- visible, that is to say in a range of 250 to 700 nm.
  • a significant abso ⁇ tion of light means a molar extinction coefficient ( ⁇ ) greater than
  • photosensitizer refers to a substance capable of absorbing light to initiate a photochemical or photophysical reaction in another molecule, without being structurally affected during the course of the reaction.
  • the photochemical reaction initiated is the generation of singlet oxygen and / or other reactive oxygen species.
  • the singlet oxygen dioxygen molecules O2) are obtained from triplet dioxygen ( 3 0 2 ) by a transfer of the excitation energy of the excited oxygenated photosensitizer to the triplet electronic state (ground state).
  • the "two-photon” term refers to two-photon absorption.
  • the "two-photon abso ⁇ tion” corresponds to a simultaneous abso ⁇ tion of two photons of identical frequency in order to excite a molecule from an electronic state (in general the ground state) to an electronic state of higher energy. The difference in energy between the two electronic states involved in the molecule is equal to the sum of the energies of each of the two photons.
  • Two-photon abso ⁇ tion is smaller by several orders of magnitude than linear absorption and is thus a rare phenomenon. It differs from linear absorption by its squared dependence of light intensity, making this phenomenon a non-linear optics process.
  • the two-photon absorption is characterized and quantified by its two-photon absorption cross section noted ⁇ 2 .
  • the term “GM” refers to the unit of the two-photon cross section.
  • GM means Gôppert- Mayer and 1 GM corresponds to 10 "50 cm 4 s photon ⁇ .
  • said dendrimer has a two-photon absorption cross section greater than 5,000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more preferably greater than 15,000 GM, preferably greater than 20,000 GM. for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
  • the two-photon absorption cross sections of the present invention are determined by the two-photon excitation fluorescence technique (TPEF; vacuum infra).
  • TPEF two-photon excitation fluorescence technique
  • the measurements are made using a titanium laser: sapphire delivering pulses of 150 femtoseconds, using the experimental protocol of Xu and Webb.
  • Xu and Webb the experimental protocol of Xu and Webb.
  • said dendrimer has a quantum yield of singlet oxygen production ranging from 5 to 30%, preferably from 10 to 20%.
  • the quantum yield of singlet oxygen production represents the number of singlet oxygen molecules generated relative to the number of photons absorbed by the photosensitizer, and is determined by comparison between the luminescence of the singlet oxygen produced by the photosensitizer. at 1272 nm and that produced by a reference photosensitizer at the same wavelength under the same conditions. (vide infra "Quantification method of singlet oxygen production").
  • said dendrimer has a fluorescence quantum yield greater than 10%, advantageously greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%.
  • the fluorescence quantum yield ( ⁇ ⁇ ) represents the number of photons emitted directly by the dendrimer relative to the number of photons absorbed and is determined by comparison with a reference. This yield corresponds to the fraction of excited molecules whose return to the ground state is accompanied by the emission of photons.
  • said dendrimer has a two-photon absorption brightness greater than 500 GM, advantageously greater than 1000 GM, more advantageously greater than 1500 GM, preferably greater than 2000 GM for at least minus a wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
  • “Two-photon absorption brightness” is defined as the product of the two-photon cross section and the fluorescence quantum yield.
  • said dendrimer is not phototoxic under an excitation of 400 to 700 nm with an illumination of 200 to 3000 Ix, preferably 1000 to 2000 lx, preferably 1 to 000 lx.
  • Lux the unit of measure of illumination, characterizes the luminous flux per unit area and 1 lx corresponds to 1 cd sr-m "2 .
  • a "phototoxic” compound designates a compound rendered harmful to its environment by a light excitation. More specifically, in the present invention, the dendrimers are rendered harmless under two-photon excitation by their ability to generate singlet oxygen but, in daylight as defined by excitation ranging from 400 to 700 nm with an included illumination of 200 to 3000 lx, the dendrimers of the invention do not generate singlet oxygen.
  • An absence of phototoxicity in the light of day is generally due to a screen effect of molecules strongly absorbing UV-visible light such as squarates (phenylaminocyclobutenedione) or the scattering of light by particles whose diameter is of the order a few hundred nanometers.
  • the present invention relies on the unexpected observation, by the inventors, of the absence of phototoxicity in the light of day despite the omission, in the structure of the dendrimers, of squarate groups (phenylaminocyclobutenedione) and in the absence of diffusion of the light.
  • the dendrimers of the present invention also have the advantage over mesoporous silica nanoparticles of the prior art ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. aehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PC Int. Appl, 2011, WO 2011073054], to be nano-objects smaller (diameter), single size and monodisperse, purely organic and perfectly characterized. These characteristics make it possible to obtain perfectly reproducible compounds whose safety of the dendrimeric platform has been demonstrated.
  • the dendrimers of the present invention can treat tumors with high spatial resolution while reducing unwanted side effects related to photo sensitization of patients to light. of the day.
  • the heart phosphorus valency m of the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m the invention is of formula Al, m being equal to 6.
  • This phosphorus core has a valence of 6 which allows access in few synthesis steps to dendrimers with a high number of chiOmophores while avoiding excessive steric hindrance.
  • the first unit B of valence n repeated i times is of formula B1, n being equal to 2 and i being equal to 1.
  • the first unit B of formula B1 makes it possible to form a first-generation dendrimer
  • the first pattern B of valence n repeated once, n being equal to 2 and i being equal to 2 is of formula B2.
  • the first unit B of valence n repeated once, n being equal to 2 and i being equal to 3, is of formula B3.
  • the first B units of formula B2 and B3 make it possible to increase the generational order of the dendrimers to form G2 and G3 dendrimers respectively.
  • the raise of the generational order has the effect of increasing the number of first peripherally available patterns B for the grafting of the second pattern C.
  • the second motif C consists of a central conjugated group linked by a saturated spacer (-CH 2 - (CH) r- and -CH 2 - (CH 2 ) U -) to groups at the periphery.
  • This second motif C has two-photon absorption properties directly related to the quadrupole nature of the central conjugated group.
  • the present invention also relies on the unexpected increase of the two-photon abso ⁇ tion effective cross-section of the second asymmetric C-pattern by at least 20%, advantageously by at least 40% relative to its symmetrical analogue (empty infra). This characteristic may be related to the effects of polarity / polarizability of the groups at the periphery.
  • the second C unit of valence q, q being equal to 1 is of formula Cl.
  • the second C unit of valency q, q being equal to 1 is of formula C2.
  • the second C unit of valency q, q being equal to 1 is of formula C3.
  • the units of general formula C combine high two-photon absorptions, a significant singlet oxygen production efficiency, while maintaining a high yield. important fluorescence quantum.
  • the units C1, C2 and C3 are the most synthetically accessible. Double bonds allow for better conjugation than triples, and generally lead to higher two-photon absorption cross-sections, but triples give stiffer structures, which often leads to higher fluorescence yields and better control interchromophoric interactions.
  • the "staple appendage" of the present invention makes it possible, by increasing the generational order of the dendrimer, to bind the second motif to all of the water-solubilizing groups and / or targeting functions.
  • This staple appendix may be missing.
  • the staple appendix D of valency p repeated j times, p being equal to 2 and j being equal to 1, is of formula D 1.
  • the staple appendix D repeated j times, j being equal to 0, is absent and is of formula D2.
  • water-solubilising group refers to any chemical function capable of bringing solubility to the dendrimers of the invention in water or biological media.
  • the water-solubilising group is preferably chosen from ethylene glycol derivatives.
  • Polyethylene glycols, PEG are generally neither toxic nor immunogenic, which makes them particularly suitable for biological applications.
  • said set of water-solubilizing groups and / or target functions e is such that all E's are identical and is of formula E1.
  • said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E2.
  • said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E3.
  • cancer cells refers to a group of cells with uncontrolled growth (division beyond the normal limit), invasion (intrusion into or destruction of adjacent tissues), and sometimes metastasis (spread to other parts of the body). coips via the lymph or blood).
  • said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E4.
  • the mannose functions can specifically target lectins in and on the surface of cancer cells.
  • Lectins are proteins that specifically recognize certain mono- or oligosaccharides and are able to bind to them reversibly. These are not enzymes or antibodies, because lectins do not exhibit catalytic activity and are not involved in the classical immune response.
  • the lectins mainly agglutinate on the cancer cells.
  • ⁇ -D-Mannose as appearing in the E4 set, in particular in the E4H set, is one of the sugars mainly recognized by lectins, thus making it possible to specifically target the cancer cells.
  • said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that not all E's are identical and is of formula E5.
  • said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is of formula E5 and the ratio E1 / E4 is 1, 4.
  • E4 comprises the protected mannose, that is to say when X is an acetate group
  • the set E is labeled E14I
  • E4 comprises the deprotected mannose, that is to say when X is a hydrogen
  • the set E is noted ⁇ 5 ⁇ / ⁇ 4 ⁇ ⁇
  • This combination of the set E comprising both water-solubilizing groups and targeting functions makes it possible to improve the solubility of the dendrimers in water and the biological media and to promote the selectivity of the dendrimers for the cancer cells.
  • the heart phosphor has the formula Al and the first unit B is of formula B1.
  • the heart A is phosphorus of formula Al and the first unit B is of formula B2.
  • the phosphorus core A is of formula Al and the first unit B is of formula B3.
  • the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (B E - (C- (Dj- (E) p) q) n) m j ⁇ e °° ur phosphorus is of formula Al and the second unit C is of faith-mule Cl.
  • the phosphorus core A is of formula A1 and the second unit C is of formula C2.
  • the phosphorus core A is of formula Al and the second unit C is of formula C3.
  • the phosphorus core A is of formula A1 and the stitching appendix D is of formula D1.
  • the phosphorus core A is of formula A1 and the staple appendix D is of formula D2.
  • the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the phosphorus core A is of formula A1 and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the heart A is phosphorus formula A1 and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E5.
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the first pattern B is of Formula B1 and the second pattern C is of Formula Cl.
  • the first unit B is of formula B2 and the second unit C is of formula Cl.
  • the first unit B is Formula B3 and the second unit C is of formula Cl.
  • the first unit B is of formula B1 and the staple appendix D is of formula D1.
  • the first unit B is of formula Bl and the staple appendix D is of formula D2.
  • the first unit B is of formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the first unit B is of formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the first pattern B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the first pattern B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the first unit B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
  • the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q ) n) m
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1.
  • the second unit C is of Cl foule and the staple appendage D is of formula D2.
  • the second C unit is of formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the second unit C is formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the biphotonic photosensitizer chemical compound constituted by a dendrimer of the general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m
  • the second unit C is of formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- ( Dj - (E) p) q) n ) m
  • the second unit C is Cl and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the second unit C is of formula Cl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
  • the stapling appendage D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the appendix of stapling D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the stapling appendix D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the stapling appendix D is of formula D1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the stapling appendix D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
  • the appendix of stapling D is of formula D2 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m
  • the heart phosphor has the formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the phosphorus core A is of formula Al
  • the first unit B is of formula B2
  • the second unit C is of formula Cl
  • the stapling appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the phosphorus core A is of formula Al
  • the first unit B is of formula B3
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula El.
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) tJ) n) m
  • the heart A is phosphorus formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C2
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the phosphorus core A is of formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C3
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
  • the phosphorus core A is of formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3 .
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) CI) n) m
  • the heart A is phosphorus formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C2
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the formula A- (B (C- (D j - (E) p) q) i) either, ie A is phosphorus heart of formula A1, the first unit B is of formula B 1, the second unit C is of formula C3, the stapling appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
  • the phosphorus core A is formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the phosphorus core A is of Formula A1
  • the first unit B is of formula B2
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the phosphorus core A is Formula A1
  • the first unit B is of formula B3
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
  • the phosphorus core A is of formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C2
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4 .
  • the phosphorus core A is of formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C3
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4 .
  • the phosphorus core A is of Formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second unit C is of formula C1
  • the staple appendix D is of formula D1
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
  • the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m
  • the heart A is phosphorus formula A1
  • the first unit B is of formula B1
  • the second C unit is of formula Cl
  • the staple appendix D is of formula D2
  • the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
  • the invention also relates to the use of an asymmetric chromophore C "for the implementation of the method of manufacturing the dendrimer of the invention; C" being of formula
  • t and u independently of one another an integer from 0 to 9;
  • X 1 and X 2 identical or different, each representing an alkyl group in Ci to C25, preferably Ci -C 2, preferably C 4, (CH2) X -S0 3 M, (CH2) x NAlk3 + ( CH 2) x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being 0 or being an integer from 1 to 12, preferably from 1 to 6, y being an integer from 1 to 25.
  • chromophore refers to a chemical compound having a significant absorption of light in the range of UV-visible, that is to say within a range of 250 to 700 nm .
  • a significant abso ⁇ tion of light means a molar extinction coefficient (s) greater than 1000 L-mol "1- cm “ 1 .
  • asymmetrical refers to the terminal functions of C ", one of these functions being a phenol group and the other a benzaldehyde group.
  • the synthesis of the asymmetric chromophore C “comprises two carbon-carbon couplings, simultaneous or sequential, preferably sequential, between
  • X and X which may be identical or different, each representing a C 1 to C 25, advantageously C 1 to C 2 , preferably C 1 (CH 2 ) x -SO 3 M alkyl group, (CH 2 ) x NAlk 3 + , (CH 2) x- (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being equal to 0 or being an integer from 1 to 12, prefer! from 1 to 6, where y is an integer from 1 to 25;
  • X 3 and X 4 identical or different, each representing a group selected from Cl, Br, I or CF 3 SO 3 , especially I; and B. fragments c; and C2 of formula
  • Z being selected from hydrogen, an acetate group, a methoxymethyl group, a tert-butyldimethylsilyl ether group or a ((2-trimethylsilyl) ethoxy) methyl group; to form the asymmetric chromophore C "when Z is hydrogen or to form a C-protected asymmetric chromophore when Z is not hydrogen; It being of formula
  • said asymmetric chromophore C being obtained by deprotection of the phenol function of said protected asymmetric chromophore C.
  • the deprotection of the phenol function is carried out according to any method known to those skilled in the art. According to a preferred mode, the deprotection is carried out by hydrolysis in an acid medium, that is to say at a pH below 7.
  • the invention also relates to a process for obtaining the dendrimer of the invention comprising
  • X 1 and X 2 which may be identical or different, each representing a C 1 to C 25 , advantageously C 1 to C 4, preferably C 4 , (CH 2 ) -SO 3 M, (CH 2 ) x NAlk 3 + alkyl group, CH 2 ) x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH 5 M being an alkali metal and x being 0 or being an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, y being an integer of 1 to 25 ; said dissymmetrization step for increasing the two-photon absorption cross section of the dissymmetrical chromophore C "by at least 20%, advantageously by at least 40% with respect to C, b, a step of grafting the asymmetric chromopead.
  • q being the valence of the second C unit and being a non-zero integer, especially equal to I;
  • j is the number of successive repeating units of the staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5, in particular from 1 to 2;
  • p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2; either ii. in a step consisting of a functionalization of the first intermediate dendrimer A- (B- (C ") n ) m by its reaction, carried out q times, with a preformed entity Dj" - (E) P ; D "corresponding to a second reactive species of the staple appendix D; j being the number of successive repeating units of the second reactive species D" and being equal to 0 or being an integer of from 1 to 5, especially from 1 to 2; q being the valence of the second pattern C and being a non-zero integer, especially equal to 1; p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2.
  • a “reactive species” is defined according to the present invention by the presence, in the structure of this species, of a chemical function containing at least one nucleophilic center, such as an oxygen atom, in particular a phenol function, or at least one electrophilic center, such as a phosphorus atom, in particular an RP (S) C1 2 function .
  • nucleophilic center such as an oxygen atom, in particular a phenol function
  • electrophilic center such as a phosphorus atom, in particular an RP (S) C1 2 function .
  • the "staple appendage" of the present invention makes it possible, by increasing the generative order of the dendrimer, to bind the second pattern to all of the water-solubilizing groups and / or targeting functions. This staple appendix may be missing.
  • water-solubilising group refers to any chemical function capable of bringing solubility to the dendrimers of the invention in water or biological media.
  • the water-solubilising group is preferably chosen from ethylene glycol derivatives.
  • Polyethylene glycols, PEG are generally neither toxic nor immunogenic, which makes them particularly suitable for biological applications.
  • cancer cells refers to a group of cells with uncontrolled growth (division beyond the normal limit), invasion (intrusion into or destruction of adjacent tissues), and sometimes metastasis (spread to other parts of the body). body via the lymph or blood).
  • the mannose functions can specifically target lectins in and on the surface of cancer cells. Lectins are proteins that specifically recognize certain mono- or oligosaccharides and are able to bind to them reversibly.
  • lectins do not show cataiytic activity and are not involved in the classical immune response.
  • the lectins mainly agglutinate on the cancer cells.
  • ⁇ -D-mannose as appearing in the variants of set E above, is one of the sugars mainly recognized by lectins, thus making it possible to specifically target cancer cells.
  • the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a two-photon absorption cross section greater than 5000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more advantageously greater than 15 000 GM, of preferably greater than 20,000 GM for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
  • the two-photon absorption cross sections of the present invention are determined by the two-photon excitation fluorescence (TPEF) technique.
  • the measurements are made using a titanium laser: sapphire delivering pulses of 150 femtoseconds, using the experimental protocol of Xu and Webb. [VS. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of fluorophore molecular witli data from 690 to 1050 nm", J Opl. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491].
  • the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a quantum yield of singlet oxygen production ranging from 5 to 30%, preferably from 10 to 20%.
  • the quantum yield of singlet oxygen represents the number of singlet oxygen molecules generated relative to the number of photons absorbed by the photosensitizer, and is determined by comparison between the luminescence of singlet oxygen produced by the photosensitizer. at 1272 nm and that produced by a reference photosensitizer at the same wavelength under the same conditions. (vide infra "Quantification method of singlet oxygen production").
  • the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a fluorescence quantum yield greater than 10%, advantageously greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%.
  • the fluorescence quantum yield ( ⁇ ) represents the number of photons emitted directly by the dendrimer relative to the number of photons absorbed and is determined by comparison with a reference. This yield corresponds to the fraction of excited molecules whose return to the ground state is accompanied by the emission of photons.
  • a surprising increase in the two-photon absorption cross section of the asymmetric chromophore C "of at least 20%, preferably at least 40% relative to its symmetrical analog C is observed.
  • the process of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a two-pilot absorption gloss greater than 500 GM, advantageously greater than 1000 GM, more advantageously greater than 1500 GM, and preferably greater than 1500 GM. at 2,000 GM for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
  • Two-photon absorption brightness is defined as the product of the two-photon cross section and the fluorescence quantum yield.
  • the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers that are not phototoxic under an excitation of between 400 and 700 nm with an illumination of between 200 and 3,000 lx, advantageously between 1,000 and 2,000. 1x, preferably 1,000 lx.
  • Lux the unit of measure of illumination, characterizes the luminous flux per unit of tallow and 1 lx corresponds to lcd sr m "2 .
  • a "phototoxic” compound designates a compound rendered harmful to its environment by a light excitation. More specifically, in the present invention, the dendrimers are rendered harmless under two-photon excitation by their ability to generate singlet oxygen but, in daylight as defined by excitation ranging from 400 to 700 nm with an illumination included from 200 to 3000 lx, the dendrimers of the invention do not generate singlet oxygen.
  • An absence of phototoxicity in the light of day is generally due to a screen effect of molecules strongly absorbing UV-visible light such as squarates (phenylaminocyclobutenedione) or the scattering of light by particles whose diameter is of the order a few hundred nanometers.
  • the present invention relies on the unexpected observation, by the inventors, of the absence of phototoxicity in the light of day despite the omission, in the structure of the dendrimers, of squarate groups (phenylaminocyclobutenedione) and in the absence of diffusion of the light.
  • the dendrimers obtained by the method of the present invention also have the advantage over mesoporous silica nanoparticles of the prior art ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as dntgs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PCT Int. Appl., 2011, WO 2011073054], to be nano-objects smaller (diameter), single size and monodisperse, purely organic and perfectly characterized. These characteristics make it possible to obtain perfectly reproducible compounds whose safety of the dendrimeric platform has been demonstrated.
  • the dendrimers obtained by the method of the present invention can treat tumors with high spatial resolution while reducing undesired side effects related to photosensitization of patients. in the light of day.
  • the invention also relates to dendrimers as obtained directly by the method described above.
  • the central entity A-Bi ') m is of formula
  • the step of grafting the asymmetrical chromophore C "on the central entity A- (Bj ') m is carried out n times, in basic medium, to obtain the first intermediate dendrimer A- (Bi- (C ") n ) i formula
  • n 2.
  • This first intermediate dendrimer is noted A- (B1- (C1 ”) 2 ) 6 ⁇
  • the step of forming a second intermediate dendrimer A- (Bi- (C- (D j ') q ) n ) m is carried out q times by the condensing the staple appendix D 'on the first intermediate dendrimer A- (Bi- (C "); the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (Dj') q ) n ) m being of formula
  • This second intermediate dendrimer is denoted by A- (B1- (Cl- (Dr) i) 2) 6.
  • the step of functionalizing the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (D j ') q ) n ) m with a water-solubilizing group and / or a targeting function E ' is carried out p times, in basic medium, to form the dendrimer A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ): n) m of formula
  • the dendrimers are then named a.
  • A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) when X is an acetate
  • A- (B1- (C1- (D1-) C1- (D1-
  • the dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5) 2) 1) 2) 0 is preferably in the form A- (B1- (1- (D1- (E5 e1 / E 4) 2) I ) 2) 6, in particular A- (B1- (1- (D1- (E5 E ⁇ / E4AC) 2) I) 2) 6 where E5 is an E1 / E4 and X is an acetate mixture, the ratio E1 / E4 of the entire E5 being equal to 1.4, or A- (BL- (Cl- (Dl (E5 E i / fi4ii) 2) i) 2) 6 where E5 is a mixture E1 / E4 and X is a hydrogen, the E1 / E4 ratio of the E5 set being equal to 1.4.
  • the invention also relates to the use of the dendrimer of formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ) m as defined above in a method or device for fluorescence imaging.
  • "Imaging” means a non-invasive technique or procedure used to create images of the human body (or parts or functions thereof) for medical reasons (medical procedure for the purpose of revealing, diagnosing or disease) or for medical science (including the study of normal and physiological anatomy).
  • the use of the dendrimer of the invention of formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m or in a method of fluorescence imaging device implements a one or two photon absorption.
  • the use of the dendrimers of the invention for imaging one or two photons is made possible by the significant fluorescence quantum yield, that is to say greater than 10%, preferably greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%, of these compounds.
  • the Dendrimer concentration is 5 to 100 g / mL, preferably 50 ⁇ g / mL.
  • the incubation time of the cancer cells with said dendi'imère is 3 to 20 h.
  • the cancer cells targeted by the present invention are breast cancer cells, such as MCF-7 and MDA-MB-231 cells, colon cancer cells such as HCT-1 16 cells, retinoblastoma cells such as than Y-79 cells and prostate cancer cells such as LNCaP cells.
  • the invention also relates to the use of the dendrimer of the formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m as defined above in a method or photodynamic therapy device.
  • Dynamic photo therapy is a gentle technique that can be used, in the treatment of cancers, by injecting a non-toxic substance in the absence of light that has the property, once subjected to a light excitation, to turn into poison by the formation of free radicals.
  • the photochemical reaction thus initiated is the generation of singlet oxygen and / or other reactive oxygen species.
  • the singlet dioxygen molecules ( ! 0 2 ) are obtained from triplet dioxygen ( 3 0 2 ) by transfer of excitation energy from the excited oxygenated photosensitizer to the triplet electronic state (ground state).
  • the use of the dendrimer of formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ), n in a photodynamic therapy method or device implements an absorption at two photons.
  • the dendrimer concentration is from 5 to 100 ⁇ g / ml, preferably from 50 ⁇ g / ml.
  • the incubation time of the cancer cells with said dendrimer is 5 to 20 hours.
  • the cancer cells targeted by the present invention are breast cancer cells, such as MCF-7 and MDA-MB-231 cells, colon cancer cells such as HCT-1 16 cells, retinoblastoma cells such as than Y-79 cells and prostate cancer cells such as LNCaP cells.
  • breast cancer cells such as MCF-7 and MDA-MB-231 cells
  • colon cancer cells such as HCT-1 16 cells
  • retinoblastoma cells such as than Y-79 cells
  • prostate cancer cells such as LNCaP cells.
  • the use of the A- (Bi- (Cl- (DI- (E4H) 2 ) 1) 2) 0 dendrimer after 5 hours of incubation of a 100 gmL solution. of said dendrimer with MCF-7 breast cancer cells in a photodynamic therapy method or device employing two-photon absorption achieves 75% cell death by two-photon excitation at 760 nm.
  • the invention also relates to a two-photon photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m as defined above for use in the treatment of cancers in association with two-photon excitation.
  • the cancers targeted by the invention are cancers of the breast, colon, prostate and retinoblastoma.
  • the ADP cross sections were determined by measuring femtosecond fluorescence induced fluorescence induced fluorescence (TPEF) and fluorescence quantum yield.
  • TPEF femtosecond fluorescence induced fluorescence induced fluorescence
  • the principle of this technique and the experimental protocol used are described in detail by Werts, Blanchard-Desce et al. [MHV Werts, N. Neramcios, D. Pélégry, Y. Le Grand, M. Blanchard-Desce, "Action cross sections of two-photon excited luminescence of some Eu (III) and Tb (III) complexes", Photochem. Photobiol Sel 2005, 4, 531-538].
  • This protocol is adapted from the original experimental protocol described by Xu and Webb [C.
  • Table 1 Reference values of ⁇ 2 ⁇ ⁇ (fluorescein in 0.01 M NaOH).
  • a MIRA-900F (Coherent) mode-locked broadband Ti sapphire laser pumped by a continuous Verdi-type laser (Nd: YLF Coherent also emitting 5 W at 532 nm) was used, thus allowing access pulses of 150 fs with a frequency of 76 MHz, and whose wavelength is tunable between 700 and 980 nm.
  • Nd YLF Coherent also emitting 5 W at 532 nm
  • the optical axis of the beam is adjusted using 2 mirrors with respect to the axis of the two diaphragms.
  • the power and the polarization angle of the laser beam are regulated by two half wave plates and a polarizer.
  • the power of the incident laser beam is measured directly on the optical path of the beam by a power meter.
  • the light intensity of the incident beam is adjusted using a filter wheel comprising several optical densities in order to ensure that it is in a pure ADP regime: the power of the incident beam on the tank is thus of the order of 50 mW.
  • the light beam is focused in the vessel containing the sample using an Olympus air lens (10x, numerical aperture of 0.25).
  • the fluorescence emission intensity is harvested back by the same objective and then separated from the incident beam using a dichroic plate (Chroma 675dcxru) and a set of filters (Chroma e650sp-2p) before being detected by a CCD spectrometer (BWTek BTC112E).
  • the total fluorescence intensity is obtained by integrating the comge emission spectrum measured by this spectrometer.
  • the quantum yields of singlet oxygen production were measured on a Fluorolog-3 (Horiba Jobin Yvon) by excitation with a Xenon lamp of 450 W.
  • the luminescence of the singlet oxygen is measured at 1272 nm.
  • Figure 2 shows the two-photon absorption spectra of Cl 'and Cl ".
  • the x-axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon abso ⁇ tion cross section. in GM.
  • Figure 3 represents the atochromic sol of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendimer with the absorption and emission spectra of the dendrimer in toluene, dichloromethane, THF and DMSO.
  • the abscissa axis corresponds to the wavelength in nm
  • the left axis of the ordinates corresponds to the normalized absorption in arbitrary unit
  • the right axis of the ordinates corresponds to the normalized intensity of fluorescence in arbitrary unit.
  • FIG. 4 shows the absorption spectra of two-photon Cl "and dendrimers A- (B1- (C1") 2) 6 and A- (B1- (1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 in THF, the axis of The abscissa corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
  • Figure 5 shows the fluorescence spectrum of Cl "with different mannose concentrations, the abscissa axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the relative intensity of fluorescence in arbitrary units.
  • Figure 6 shows the two-photon absorption spectra of Cl "and the dendrimers A- (B1- (C1") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E4 Ac ) 2 ) 1 ) 2 ) 6 in THF.
  • the x-axis corresponds to the wavelength in nm and the y-axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
  • Figure 7 shows the two-photon absorption spectra of A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2 ) I) 2) 6 in DMF and Cl- and A- (B1- (C1- ) 2 ) 6 in THF.
  • the x-axis corresponds to the wavelength in nm and the y-axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
  • Figure 8 shows the absorption spectra of two-photon dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E4H) 2) I) 2) 6 and A- (BL- (Cl- (D - (E4i 2) i) 2) 6 in the DMF
  • the abscissa axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
  • Figure 9 shows the cell viability of MCF-7 breast cancer cells incubated 4 days with different concentrations of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and the abscissa axis corresponds to the concentration of A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 in ⁇ g / ml.
  • FIG. 1 1 represents the images in confocal microscopy single-photon MCF-7 cells with A) nuclear marker excited at 405 nm, B) A- (B1- (C1- (D1- (El) 2 ) i) 2) 6 excited at 458 nm and C) superposition.
  • FIG. 13 represents in histogram form the efficacy of the two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h with the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) dendrimer)) 2 ) 6.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cell survival and each rectangle corresponds to a concentration in A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 in ⁇ ⁇ ⁇ .
  • A) Control, B) 5 mL ⁇ , C) 50 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ , D) 100 of Figure 14 represents a histogram effectiveness of photodynamic therapy with two photons on MCF-7 cells incubated for 20 h with the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) I) 2) ⁇ -
  • the y-axis corresponds to the cell survival percentage and each rectangle corresponds to an experiment:
  • Figure 15 shows transmission microscopy images of MCF-7 cells incubated with non-irradiated A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 A) and B) after two-photon irradiation. .
  • Figure 16 shows the phototoxicity on MCF-7 cells of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 1 ) 2 ) 6 dendrimer in natural light.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each rectangle corresponds to an experiment: A) exposure to natural light in the absence of incubation with a dendrimer, B) exposure to natural light after incubation with the A-dendrimer ( B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6 (incubation 5 h with A- (B1- (Cl- (M- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 to 20 ngmL), C) absence of exposure to natural light in the absence of dendrimer incubation, and D) absence of exposure to natural light after incubation with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I dendrimer 2 ) "(incubation for 5 h with A- (B1-
  • Figure 17 shows in histogram form the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h at a dendrimer concentration of 5 g / mL.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each rectangle corresponds to a dendrimer;
  • Fig. 18 shows the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h at dendrimer concentrations of 50 ⁇ g / ml and 100 g / mL.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each group of rectangle corresponds to a dendrimer: A) control (absence) incubation with a dendrimer), B) A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 , C) A- (B1- (C1- (D1- (E4 AC ) 2 ),) 2 ) 6 , D) A- (B1- (C1- (D1- (EH) 2 ) I) 2) 6 and E) A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4 H ) 2) I) 2) ".
  • Figure 19 shows the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 20 h at a concentration of dendrimers of 50 g / mL.
  • the y-axis corresponds to the percentage of cell survival and each rectangle corresponds to a dendrimer: A) control (no incubation with a dendrimer), B) A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6!
  • aldehyde 3 (1.95 g, 8.19 mmol) and phosphonium salt 2 (6.32 g, 12.29 mmol) are dissolved in freshly distilled CH 2 C1 2 (50 mL) and then tBuOK (1.84 g, 16.38 mmol) is added. The solution is stirred at ambient temperature for 15 hours. The mixture is filtered through silica and the solvent is then evaporated under reduced pressure. The crude product is purified by column chromatography on silica gel, eluting with a CH 2 Cl 2 / AcOEt mixture (98: 2 to 92: 8). A mixture of ZIE stereoisomers (2.16 g) is obtained.
  • aldehyde 3 (0.556 g, 2.34 mmol) and phosphonium salt 8 (2.09 g, 3.18 mmol) were dissolved in freshly distilled CH 2 C1 2 (25 mL), followed by tBuO (0.53 g, 4.67 mmol). ) is added. The mixture is stirred at ambient temperature for 15 hours. The mixture is filtered through a celite / silica mixture. The solvent is evaporated off under reduced pressure and the crude product is purified by chromatography on a column of silica gel, eluting with CH 2 Cl 2 . A mixture of stereo isomers 6 E / Z (45/55) is obtained.
  • This 6 E / Z mixture is dissolved in ether and a solution of I 2 in Et 2 O is added. The mixture is stirred under irradiation (tungsten lamp, 75W) for 20 hours. After washing with Na 2 S 2 O 3 , the ether phase is dried over MgSO 4 , filtered and evaporated under reduced pressure. Yellow crystals of 6 E (0.62 g) are obtained.
  • Example 12 4- [2 - [[4 - [(l J E -2- [5 - [(9,9-dibutyI-7-iodo-9H-fluoren-2-yl) ethynyl] -2-thienyl] ethenyl] phenyl] ethylamino] ethoxybenzaldehyde (13)
  • EXAMPLE 13 Acetate of 4- [2 - [[4 - [(1, ⁇ ) -2- [5- [2- [9,9- ⁇ 13 ⁇ 4 ⁇ ] -7- [2- [5 - [(1 £) 2- [4- [1- [2- [4- (Ormyl) phenoxy] ethyl] amino] phenyl] ethenyl] -2-thienyl] ethynyl] -9H-fluoren-2-yl] eth nl] - 2-thienyl] ethenylphenyl] ethylamino] ethoxy] phenyl (14)
  • Example 14 4- [2 - [[4 - [(1E) -2- [5- [2- [9,9- (13 ⁇ 4 ⁇ 1-7- [2- [5 - [(1 ⁇ -2) -acetate - [4- [N- [2- (4-hydroxyphenoxy) ethyl] amino] phenyl] ethenyl] -2-thienyl] ethynyl] -9f-fluoren-2-yl] ethynyl] -2-thienyl] ethenyl] phenylmethylamino] ethoxy] benzaldehyde (Cl ")
  • the protected photosensitizer 14 (0.46 g, 0.42 mmol) is dissolved in a mixture of EtOH (10 mL) and THF (28 mL). A solution of NaOH (0.5 M, 4 mL) is added and the mixture is stirred for 20 min at room temperature. HC1 (1M, 15 mL) is then added. The aqueous phase is extracted with CH 2 C1 2 (10 mL). The organic phase is then washed with water (5 mL), dried over MgSO 4; filtered and evaporated under vacuum. The crude product is purified chromato graphic column eluting with CH 2 C1 2. Orange crystals of Cl "are obtained (0.37 g).
  • Example 17 Dendrimer A- (B1- (C1 ”) 2 ) 6
  • Example 18 Dendrimer A- (B1- (C1- (D1 ') i) 2 ) 6
  • reaction mixture is filtered with a cannula under argon and precipitated in pentane (200 mL).
  • pentane 200 mL
  • the resulting orange solid is washed with ether to remove the excess of 17a, and then filtered.
  • the mixture is centrifuged for 4 min at 10,000 rpm to remove the cesium chloride formed during the reaction. The supernatant is recovered, and the product is precipitated in pentane, filtered under argon, and dried under reduced pressure.
  • An orange powder of A- (B1- (Cl- (M- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 (30 mg) is obtained.
  • the reaction mixture is filtered through a cannula under argon.
  • the dendrimer is precipitated in pentane (250 mL), then filtered and washed with ether to remove excess mannose 51, before being dried under vacuum.
  • the orange solid obtained is redissolved in a minimum of THF and centrifuged for 4 min at 10,000 rpm to remove the cesium chloride formed. The supernatant is recovered, and the product is precipitated in pentane, filtered under argon, and dried under reduced pressure.
  • reaction mixture is then stirred at room temperature for a further 10 days.
  • the reaction is still not completed, 17a (9.50 mg, 37. 24 ⁇ ) and CS2CO3 (24 mg, 74.48 ⁇ ) are again added, and stirring is continued for 21 days at room temperature.
  • the phosphorus NMR of the reaction medium appears to show that the reaction is complete, the dendrimer is precipitated in pentane and washed with ether and then with ethyl acetate and dried under vacuum.
  • the P-NMR analysis of the isolated product shows that the reaction is in fact not finished.
  • e maximum at 720 nm corresponds to a forbidden transition to a photon but strongly allowed to two photons. In both cases, the 720 nm band is more intense than the 830 nm band.
  • the symmetrical photosensitizer Cl ' has a ⁇ 2 of 1300 GM at 720 nm and 900 GM 820 nm
  • the asymmetrical photosensitizer Cl has a ⁇ 2 of 1900 GM at 720 nm and 1200 GM at 820 nm.
  • the presence of the phenol and benzaldehyde staple functions leads to an increase in the ADP cross sections by about 40%, which is twice the increase observed for the one-photon absorption molar extinction coefficients.
  • the photosensitizer Cl "thus has photophysical characteristics quite satisfactory, in some cases even higher than those of Cl '.
  • Example 28 Photon Absorption, Fluorescence and Photosensitization of the Water-soluble Dendrimer A- (B1- ⁇ C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6
  • the one-photon absorption, fluorescence and singlet oxygen production properties, in solution in THF, of the chromophore Cl - and the dendrimers A- (B1- (C1-) 2 ) 6 and A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 are collated in Table 2.
  • the dendrimers A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 show an almost linear increase in the molar extinction coefficient at the maximum of absorption with the number of chromophores (Table 2).
  • the grafting of the photosensitizers on the dendrimeric platform induces a slight displacement towards the red accompanied by an enlargement of the emission band , in relation with an increase in the polarity induced by the dendrimeric platform and the proximity of adjacent chromophores.
  • the A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 dendrimer maintains the same quantum fluorescence yield as the isolated chromophore C1".
  • the conformational flexibility of the chromophore and the presence of the ⁇ -conjugated connectors should facilitate the formation of aggregates, which is consistent with a biexponential fluorescence decline.
  • Figure 3 shows the dependence of the absorption and emission properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 dendrimer as a function of the polarity of the solvent.
  • the absorption of A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2) is very little affected by the polarity of the solvent whereas a positive solvatochromia is observed.
  • the emission of the dendrimer A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 is displaced towards the red in the low polar solvents such as toluene, with a changes in relative vibronic intensities and a near disappearance of the fine structure, confirming that the dendrimeric platform, the peripheral TEG chains and the proximity of the adjacent chromophores contribute to modify the polarity of the environment.
  • Example 30 Two-photon absorption of the hydrosoluble dendrimer A ⁇ (B1- (C1- (D1 ⁇
  • the two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendrimers were determined by measuring their Two-photon excitation fluorescence (TPEF) in THF.
  • ADP cross-sections greater than 5000 GM are maintained at 900 nm for-A- (B1- (C1-) 2 ) 6 and up to 4000 GM for A- (B1- (C1- Dl- (El) 2 ) i) 2 ) 6 , which is of great interest for biological applications, for two-photon PDT (where ⁇ 2 ⁇ is the merit factor) as for multiphonic tonal imaging (where ⁇ 2 ⁇ ⁇ is the merit factor).
  • A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2 ) I) 2) E has an intense absorption band from near UV to the blue part of the visible spectrum, and a yellow emission in THF . These properties are quite comparable to that of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6.
  • the molar extinction coefficient at the absorption maximum of A- (B1- (C1- (D1- (E4 AC ) 2) i) 2) 6 (1.2-10 6 M -1 cm) is substantially higher than that of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2) 6 (1.0 * 10 6 M -1 cm -1 ), however, a redshift of the emission band and a significant decrease in the fluorescence quantum yield are observed for the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4AC) 2) I) 2) 6 relative to the dendrimer A- (B1- (Cl ”) 2 ) e, indicating that the addition of a peripheral layer of mannoses acetates increases the polarity of the environment of the chromophores located inside the dendrimer, and is also likely to modify their relative positioning.
  • the quantum yield of singlet oxygen production of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 dendrimer is 0.11, which is slightly less than that of the chromophore Cl "alone (0.16), but comparable to that of the dendrimers A- (B1- (C1") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) ⁇ ; (0.10 and 0.07, respectively).
  • the two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A c ) 2) J) 2) 6 dendrimer were determined by measuring their fluorescence by two-photon excitation (TPEF) in THF. , and compared with those of the photo-sensitizer Cl "alone as well as those of the dendrimer A- (B1- (C1") 2 ) 6 .
  • A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 are even slightly higher than those of A- (B1- (C1) 2 ) 6, which seems to indicate that the presence of these mannoses makes it possible to better isolate the chromophores on
  • the ADP cross sections of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2 ) I) 2 ) 6 dendrimer are greater than 5000 GM up to at over 900 nm, which is positive for use of this dendrimer in biological applications.
  • the A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 dendrimer has an intense absorption band from near UV to the blue part of the visible spectrum, and an orange emission.
  • the molar extinction coefficient at the absorption maximum of 9.8 * 10 5 M “1 cm “ 1 for A- (B1- (C1- (D1- (E4 H ) 2 ) 1 ) 2 ) 6 is substantially equal to that the dendrimer A- (B1- (1- (D1- (El) 2) 2) 6 (1.0x10 e M "1 -cm” 1).
  • the red shift more pronounced the transmission band and significant decrease in the fluorescence quantum yield of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) 1 ) 2 ) 6 ( ⁇ 0.11) compared to other dendrimers can be explained primarily by the use of DMF, a much more polar solvent than the THF.
  • the two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 dendrimer were determined in DMF (Table 7, Figure 7), and compared to those of photosensitizer Cl "alone as well as those of the dendrimer A- (B1- (C1") 2 ) 6-
  • the differences observed between the ADP spectra of A- (B1- (C1-) 2 ) (D1- (E4 H ) 2 ) i) 2 ) 6 and A- (B1- (Cl ") 2) 6 are relatively unimportant and can be explained by the change of solvent.
  • the compound A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / J I 4 I I) 2) I) 2) O has an intense absoiption band in the portion of spectrum from near UV to the blue part of the visible, and like the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1 ⁇ 2) 2) I) 2) 6 an orange emission in DMF.
  • the molar extinction coefficient of A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E 4 H) 2) I) 2) 6 (l .OxlO 6 M "1 -cm" 1) is substantially identical than A- (B1- (1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 (9.8x10 s ⁇ '' -cm "1).
  • the fluorescence quantum yield increases significantly in DMF, from 1 1% to 15%.
  • the quantum yield of singlet oxygen production of the mixed dendrimer could not be measured because of its lack of solubility in solvents compatible with this measurement.
  • Example 37 two-photon absorption of the dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E4H) 2) I) 2) ⁇ ;
  • the two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4H) 2) I) 2 ) 6 dendrimer are very similar to those of the all-mannose A- (B1- (C1) dendrimer. - (D1- (E4H) 2 ) I) 2 ) ⁇ ( Figure 8 and Table 9).
  • the mixed dendrimer thus has an ADP cross section of 17100 GM at 730 nm.
  • Such behavior indicates that the modification of the environment induced by the replacement of half of the mannoses by TEG groups affects only very little the individual molecular responses of the chromophores located in the heart of the dendrimer. It should also be noted that ADP cross sections also exceed 5000 GM up to 950 nm, which is of great interest for biological applications.
  • Table 9 Data of the ADP dendrimer A- ⁇ B1 (1- (D1- (E5 EI / E4H) 2) I) 2) ⁇ in DMF "Wavelength where PADP is maximum.
  • MCF-7 cells come from the American ATCC cell bank. They are cultured in flasks of 175 cm 3 cultures containing DMEM / -F12 medium with Glutamax enriched with 10% fetal calf serum and 1% Penicillin / Streptomycin. They are placed in an incubator at 37 ° C. and at 5% of moisture-saturated C0 2 and multiply to form a contiguous monolayer cell mat: this is known as confluence. At this stage, a passage is made: the cells are detached to be reseeded in a new culture flask.
  • the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed and then two soft rinsings with PBS are carried out in order to eliminate all traces of medium and serum.
  • the serum contained in the medium would inactivate the enzyme, trypsin, used to take off the cells.
  • trypsin used to take off the cells.
  • 1.5 ml of trypsin are added and kept in contact with the cells for 10 seconds before being removed.
  • the culture flask was placed in the incubator at 37 ° C / 5% CO 2 . After 5 min, the cells detach and are recovered with 36 ml of fresh medium. It is from this cell suspension that the dilutions will be made to seed the culture flasks or multi-compartmented cell culture chambers.
  • a 5th dilution is performed for the subculture.
  • Example 39 Cell Viability in the Presence of the Water-Soluble Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 )! 2 ) 6 :
  • the amount of precipitate formed is proportional to the amount of living cells (but also to the metabolic activity of each cell). It is therefore sufficient after the incubation of the cells with MTT for 3 h at 37 ° C to dissolve the cells, their mitochondria and thus the violet precipitates of formazan in a DMSO / EtOH mixture (1: 1).
  • a simple spectroscopic assay of the optical density at 540 nm makes it possible to know the relative quantity of living and metabolically active cells.
  • A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 is not toxic without irradiation at these concentrations, and that THF up to 1% does not no deleterious effect on cell viability.
  • Confocal microscopy is an optical microscopy technique. It allows to study the inside of microscopic objects and to visualize them in three dimensions. Compared to conventional microscopy, confocal microscopy offers different advantages for the in situ localization of a fluorescent probe in cells and more particularly in thick tissue sections:
  • a 25th dilution is carried out on the cells for their seeding, in order to observe them (one or two photons) or to excite them (two photons) under a confocal microscope, in multi-well plates (384 or 96 wells) glass (thickness 0.17 mm), with an edge black polystyrene. It should be noted that for any series of experiments, one of the wells is kept as a control well (absence of dendrimers). It is thus verified that the autofluorescence of the cells is negligible compared to the fluorescence of the dendrimers. In addition, it also makes it possible to check the safety of the laser on the cells.
  • a stock solution of 5 mg / mL dendrimer is prepared in THF or DMSO, and sonicated. A dilution per 100 in fresh medium is carried out in order to obtain a concentration of 50 ⁇ g / ml in dendrimer.
  • the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed, and the dendrimer solution at 50 ⁇ g / mL is added (50 ⁇ , for the 384-well plates and 200 ⁇ , for the plates 96 wells).
  • the multi-well plate is placed in the incubator at 37 ° C / 5% C0 2 for a determined time (3h, 5h, or 20h).
  • the supernatant is removed and then a gentle wash with PBS is performed.
  • the cells are then incubated with Hoechst 33342 (nucleic marker) or CellMask deep red (membrane marker). Incubation with Hoechst 33342 is performed at a concentration of 2 ⁇ / ⁇ . After 30 min, the supernatant is removed, gentle washing with PBS is performed, then fresh medium without phenol red is added.
  • the multiwell plate can then be analyzed in photon confocal imaging. Incubation with CellMask deep red (membrane marker) is performed at a concentration of 1 mg / mL. After 30 min, the supernatant is removed, gentle washing with PBS is performed, then fresh medium without phenol red is added. The multiwell plate can then be analyzed in two-photon confocal imaging.
  • Example 41 Confocal Monophoton Imaging with the Water-Soluble Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 3 ⁇ 4) 6
  • the MCF-7 cells were incubated for 30 min with a nucleic marker, Hoechst 33342, at a concentration of 2 ⁇ g / ml and with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 for 24 h at 50 ⁇ g / mL ⁇ .
  • the cells are then analyzed by confocal microscopy with an x63 objective. Control with THF alone was also performed and found to be negative.
  • the nucleic marker is excited at 405 nm, and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 at 458 nm.
  • the resulting images are grouped together in Figure 11.
  • the image A corresponds to the fluorescence of the cell nuclei incubated with the Hoechst marker 33342.
  • On the image B more or less bright points are observed, corresponding to the fluorescence of small aggregates of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) É .
  • the superposition of the fluorescence of the nucleus (A) with the fluorescence of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 (B) gives the image C of FIG. 1, which shows that the dendrimers are around the nuclei.
  • dendrimers have a crescent-shaped alignment, suggesting that they are located in the lysosomes, and that they would have been inco ⁇ orated in the cells by endocytosis.
  • the internalization of the dendrimers was also studied by multiphonic confocal microscopy. This time, the cells were incubated with a membrane marker, CellMask deep red for 30 min at a concentration of 1 mg / mL and with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) For 3 h at 50 ⁇ g / mL. Both chromophores are excited at 750 nm. The result is shown in Figure 12. The cell membranes are specifically labeled by CellMask, and it is observed that the dendrimers are mostly inside the cells, which confirms that the dendrimers are well integrated after 3 hours. incubation.
  • the cells are seeded only in 384-well plates, in order to precisely excite the whole well during the laser irradiation.
  • a stock solution of 5 mg / mL dendrimer is prepared in THF or DMSO, and sonicated.
  • a dilution is performed in fresh medium to obtain the different concentrations of 5 ⁇ * / ⁇ ,, 10 ⁇ ⁇ / ⁇ , 20 ⁇ g / mL, 50 ⁇ / ⁇ , and 100 ⁇ g / mL of dendrimer.
  • the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed, and the dendrimer solution at the desired concentration is added (50 ⁇ for the 384-well plates).
  • the multi-well plate is placed in the incubator at 37 ° C / 5% C0 2 for a specified time (5 h or 20 h).
  • the supernatant is removed, then a gentle PB S wash is performed and 50 ⁇ L of fresh medium is added.
  • the cells are then ready to be irradiated.
  • the plates After irradiation, the plates are returned to the incubator at 37 ° C / 5% CO 2 for 48b. 10 ⁇ L of CellTiter 96 AQueous One Solution (aqueous solution of commercial MTS) is added to the well. A first measurement on the Multiskan FC Thermo Scientific plate spectrometer is carried out at 492 nm. The plate is then returned to the incubator for 3h and again measured at 492 nm in spectrometry.
  • CellTiter 96 AQueous One Solution aqueous solution of commercial MTS
  • the protocol is the same as for confocal microscopy.
  • the cells are seeded in 96-well plastic plates.
  • the cells are incubated with a dendrimer solution at 20 ⁇ g / ml in fresh medium and placed in the incubator at 37 ° C./5% C0 2 for 5 hours.
  • the cells are then placed in daylight (on the bench next to the window) for 4 hours.
  • a solution of MTT at 5 mg / ml in medium without serum is filtered, then 20 ⁇ l of this solution are added to the well.
  • the plate is placed in the incubator. After 3h, the supernatant is filtered gently, then 150 ⁇ of ethanol / DMSO solution (1: 1) are added and the plate is stirred for 30 min before being measured by colorimetry on the 540 Multiskan FC spectrophotometer. nm.
  • MCF-7 cells were incubated for 5 h with the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendrimer at different concentrations.
  • the irradiation is carried out on a confocal microscope with a titanium laser: sapphire delivering femtosecond pulses, (47 J.cm -2 on average at full power) with a x10 objective
  • the cells are irradiated at 760 nm by 3 scans of 1.57
  • the results are observed 48 hours after irradiation, by an MTS enzymatic test by measuring the optical density at 492 nm.
  • the MTS is a tetrazolium salt analogous to MTT, but the formed formazan is soluble directly in the middle, (The MTS is used when working with glass bottom plates, which is the case here).
  • Example 46 Evaluation of the Efficiency of the Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6 in Dual Photon PDT: Variation in Incubation Time
  • FIG. 15 makes it possible to evaluate the efficiency of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer in two-photon PDT, by comparing the images in transmission of an area where the MCF-7 cells incubated with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 were not irradiated and a two-photon irradiated area.
  • the non-irradiated zone is composed of cells at ⁇ 70% confluence, whereas on the irradiated zone there are almost no more cancerous cells, and cell debris is observed mainly.
  • the MCF-7 cells were incubated for 5 h with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 at 20 ⁇ g / mL, and then exposed or not for 4 h to natural light.
  • Cell survival is determined as previously by an MTT test measured at 540 nm. The results obtained are collated in FIG. 16 and show that the dendrimer does not exhibit phototoxicity in natural light.
  • the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 dendrimer therefore exhibits photosensitizing properties only by two-photon excitation in the near infra-red.
  • Such a result makes it possible to treat tumors with a high spatial resolution while reducing unwanted side effects related to photosensitization of patients in the light of day.
  • This large difference in efficiency between one- and two-photon phototoxicity may be related to the relatively low quantum yield of A ⁇ (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) 6, which is counterbalanced by its very high ADP cross section.
  • the merit factor ⁇ 2 ⁇ would be high enough to produce a phototoxic effect at two photons with the laser, but the merit factor ⁇ would not be so that a phototoxic effect is measurable in the light of day.
  • Another explanation may be the structure of the dendrimer itself whose dendrimeric skeleton produces a screen effect under one-photon excitation.
  • the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 5 dendrimer possessing protected mannoses in the form of acetates was tested in vitro to compare its properties with those of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer. Even if in vitro the protected mannose functions should play a more water-solubilising role than a real target, in vivo the mannose protective groups can be cleaved in the presence of esterases, and then allow efficient recognition by the lectins of the cancer cells.
  • the first series of tests was carried out with a low dendrimer concentration of 5 ⁇ 3 ⁇ 4 / ⁇ and a short incubation time of 5 hours, irradiating all the samples at 760 nm with 3 1.57 second scans with the same laser power.
  • the presence of these mannoses allows a faster internalization of the dendrimers in the tumor cells compared to the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) O not having these patterns, Moreover, it can be seen that the efficacy of the A- (B1- (Cl- (D1- (E4 H ) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer has 24 mannose functions and that of the A- (B1- (Cl-) dendrimer dl- (E5 EJ / E 4 H) 2) i) 2) c does possessing 10 are virtually identical, with a cell mortality of 43% and 42%, respectively. It is thus not necessary that the surface dendrimers is entirely covered with mannose, so it would be interesting to further reduce the number of mannose motifs, to see whether the therapeutic efficacy could be maintained with one or two mannose motives only.
  • the mannose functions contribute to reducing the solubility of the dendrimers in solvents such as THF.
  • solvents such as THF.
  • they are first dissolved in a minimum of THF (whose safety against the cells has been proven), before being diluted in the culture medium.
  • the reduction in the number of mannoses should therefore make it possible to improve the solubility of the dendrimers in THF and to avoid their aggregation in biological media.
  • the efficiency of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4AC) 2) I) 2) 6, which has 24 mannose units whose alcohol functions are protected in the form of acetates, is at an intermediate level between that of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 which has no targeting function, and that of A- (BL- (Cl- (Dl (E4 H) 2) i) 2) 6-
  • a affinity mannoses acetates for lectins is envisaged as well as improving the water-solubility dendrimer avoiding the formation of aggregates.
  • the percentage of cell survival is 58% with the dendrimer A- (B1- (C1- (DI- (E1) 2 ) ( ) 2 ) 6, against 25% with the dendrimer A- (B1 - (C1- (D1- (E4H) 2 ) 1 ) 2) 6 ⁇ It can also be noted that this concentration effect is more pronounced for dendrimers with targeting functions than for those that do not.

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Abstract

The present invention relates to a biphotonic photosensitizing chemical compound made up of a dendrimer, the manufacturing method thereof and the use thereof, in particular in fluorescence imaging and/or for two-photon dynamic phototherapy.

Description

{{
DENDR1MERES PHOTOSENSIBILISATEURS BIPHOTONIQUES, PROCEDE DE BIPHOTONIC PHOTOSENSITIZER DENDR1MERES, PROCESS FOR
FABRICATION ET UTILISATIONS  MANUFACTURING AND USES
L'invention concerne des dendrimères photosensibilisateurs biphotoniques, leur procédé de fabrication et leur* utilisation. The invention relates to two-photon photosensitizers dendrimers, their manufacturing process and their use *.
La présente invention concerne plus particulièrement des dendrimères photosensibilisateurs biphotoniques, leur procédé de fabrication et leur utilisation en imagerie de fluorescence ou pour la photothérapie dynamique à deux photons.  The present invention more particularly relates to biphotonic photosensitizer dendrimers, their method of manufacture and their use in fluorescence imaging or for two-photon dynamic phototherapy.
La photothérapie dynamique est une technique douce pouvant être utilisée, par exemple, dans le traitement de cancers, par l'injection d'une substance non toxique en l'absence de lumière qui a la propriété, une fois soumise à une excitation lumineuse, de se transformer en poison par la formation de radicaux libres.  Dynamic phototherapy is a gentle technique that can be used, for example, in the treatment of cancers, by injecting a non-toxic substance in the absence of light that has the property, once subjected to a light excitation, of to turn into poison by the formation of free radicals.
Des photosensibilisateurs pour la thérapie photodynamique sont aujourd'hui commercialisés, tels que le Photofrin® de PINNACLE BIOLOGICS, le Foscan® (Temoporfm ou M-THPC) de BIOLITEC PHARMA ITD., ou la Visudyne® (Verteporfin) de NOVARTIS EUROPHARM LTD. D'autres comme le Photosense® ont obtenu une autorisation de mise sur le marché. Tous ces composés sont des dérivés porphyriniques et possèdent des rendements quantiques d'oxygène singulet élevés ainsi que des rendements de fluorescence raisonnables. Cependant, les patients ayant été traités en thérapie photodynamique avec les photosensibilisateurs monophotoniques, tels que le Photofrin, restent photosensibles plusieurs jours (voire plusieurs semaines) après le traitement, et doivent éviter pendant cette période toute exposition de la peau et des yeux à la lumière du soleil ou aux lumières intérieures vives (ampoules sans abat-jour, lumières des néons...). Le non- respect de ces précautions peut entraîner des érythèmes, des œdèmes et/ou la formation de cloques.  Photosensitizers for photodynamic therapy are now commercially available, such as Photofrin® from PINNACLE BIOLOGICS, Foscan® (Temoporfm or M-THPC) from BIOLITEC PHARMA ITD., Or Visudyne® (Verteporfin) from NOVARTIS EUROPHARM LTD. Others like Photosense® have obtained a marketing authorization. All of these compounds are porphyrinic derivatives and possess high quantum oxygen quantum yields as well as reasonable fluorescence yields. However, patients who have been treated with Photodynamic Therapy with phototrin photosensitizers, such as Photofrin, remain photosensitive for several days (or even weeks) after treatment, and should avoid during this period any exposure of the skin and eyes to light. from the sun or bright interior lights (bulbs without lampshades, neon lights ...). Failure to observe these precautions may result in erythema, edema and / or blistering.
L'absorption biphotonique est un processus d'optique non-linéaire permettant l'absorption simultanée de deux photons. L'excitation biphotonique, dépendant de manière quadratique de l'intensité lumineuse, ne se produit en pratique qu'au point où celle-ci est maximale, c'est-à-dire au point focal. Cette propriété de localisation de l'excitation permet d'accéder à des résolutions tridimensionnelles intrinsèques impossibles à obtenir avec une absorption monophotonique. Cette technique présente également l'avantage de pénétrer plus en profondeur dans les tissus biologiques. Des dendrimères fluorescents ont été décrits précédemment ["Dendrimeric fluorescent compounds and use ofsuch compounds in multi-photon devices or processes", M. Blanchard- Desce, M. Werts, O. Mongin, J. P. Majorai, A. M. Caminade, R. Thataverthy, PCF Int. Appl. 2007, WO 2007080176]. L'innocuité de la plateforme dendrimérique utilisée pour former ces dendrimères a été démontrée. De plus, ces dendrimères présentent une réponse biphotonique très élevée pouvant atteindre jusqu'à environ 56 000 GM pour un dendrimère de génération 4. Cependant ces dendrimères ne possèdent pas la capacité de générer des radicaux libres sous excitation biphotonique. Two-photon absorption is a non-linear optical process that allows the simultaneous absorption of two photons. The two-photon excitation, quadratically dependent on the light intensity, occurs in practice only at the point where it is maximal, that is to say at the focal point. This excitation localization property allows access to intrinsic three-dimensional resolutions impossible to obtain with a single-photon absorption. This technique also has the advantage of penetrating deeper into the biological tissues. Fluorescent dendrimers have been previously described (M. Blanchard-Desce, M. Werts, O. Mongin, JP Majorai, AM Caminade, R. Thataverthy, PCF). Int. Appl. 2007, WO 2007080176]. The safety of the dendrimeric platform used to form these dendrimers has been demonstrated. In addition, these dendrimers exhibit a very high biphotonic response of up to about 56,000 GM for a generation 4 dendrimer. However, these dendrimers do not have the ability to generate free radicals under two-photon excitation.
Des photosensibilisateurs biphotoniques quadripolaires ont été incorporés dans des nanoparticules de silice mésoporeuses et ont montré une efficacité in vitro et in vivo vis-à-vis de la thérapie photodynamique ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morère, J.-O. Durand, PCT Int. Appl, 2011, WO 2011073054]. L'incorporation de photosensibilisateurs quadrupolaires symétriques dans des nanoparticules de silice mésoporeuses permet d'accéder à des systèmes efficaces sous excitation biphotonique. Cependant, ces nanoparticules de silice sont des particules globalement polydisperses dont le diamètre peut être compris de 30 à 300 nm. Les nanoparticules de silice sont, de plus, des particules « dures » dont la toxicité est mal connue ce qui exclut un passage aux essais cliniques.  Quadrupole biphotonic photosensitizers have been incorporated into mesoporous silica nanoparticles and have shown in vitro and in vivo efficacy against photodynamic therapy ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PCT Int. Appl. 2011, WO 2011073054]. Incorporation of symmetrical quadrupole photosensitizers into mesoporous silica nanoparticles provides access to efficient systems under two-photon excitation. However, these silica nanoparticles are globally polydisperse particles whose diameter can range from 30 to 300 nm. Silica nanoparticles are, in addition, "hard" particles whose toxicity is poorly understood, which precludes a transition to clinical trials.
Il existe donc un besoin en composés non toxiques pour le vivant avec une brillance à deux photons (produit de la section efficace à deux photons par le rendement quantique de fluorescence) élevée. There is therefore a need for non-toxic living compounds with a two-photon brightness (high fluorescence quantum yield product of two photons).
Il existe également un besoin en composés non toxiques pour le vivant capables d'être utilisés en imagerie de fluorescence par absorption mono- ou biphotonique.  There is also a need for non-toxic living compounds capable of being used in mono- or bi-photon absorption fluorescence imaging.
Il existe également un besoin en composés non toxiques pour le vivant avec une brillance à deux photons élevée capables d'être utilisés en thérapie photodynamique induite à deux photons et non photo toxiques à la lumière du jour.  There is also a need for non-toxic living compounds with a high two-photon brightness capable of being used in photodynamic induced two-photon and non-photo-toxic phototherapy in daylight.
C'est pourquoi l'un des buts de l'invention est la formation de dendrimères photosensibilisateurs biphotoniques . This is why one of the aims of the invention is the formation of biphotonic photosensitizer dendrimers.
Un autre but de l'invention est de fournir un procédé de fabrication de tels dendrimères. Un autre but de l'invention est l'utilisation de dendrimères photosensibilisateurs bipho toniques en thérapie photodynamique induite à deux photons. Another object of the invention is to provide a method of manufacturing such dendrimers. Another object of the invention is the use of biphotonic photosensitizer dendrimers in photodynamic therapy induced at two photons.
Un autre but de l'invention est l'utilisation de photosensibilisateurs biphotoniques en imagerie de fluorescence induite à un ou deux photons.  Another object of the invention is the use of biphotonic photosensitizers in fluorescence imaging induced at one or two photons.
La présente invention concerne ainsi un composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale The present invention thus relates to a biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula
A-(Bi-(C-(Dj-(E)p)q)n)m A- (Bi- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m
ou or
- A représente un cœur phos horé choisi parmi  - A represents a heart phos horé chosen among
Figure imgf000005_0001
Figure imgf000005_0001
m correspondant à la valence du cœur phosphoré A et étant un entier non nul compris de 3 à 8;  m corresponding to the valence of the phosphorus core A and being a non-zero integer from 3 to 8;
- B représente un premier motif, non chromophorique, directement lié m fois audit cœur phosphoré et choisi parmi B represents a first non-chromophoric unit directly bound to said phosphorus core and chosen from
Figure imgf000005_0002
Figure imgf000005_0002
n correspondant à la valence du premier motif B et étant un entier non nul compris de 2 à 5 ; i représentant le nombre d'unités de répétition successives du premier motif B greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 10, notamment de 1 à 4 ; - C représente un second motif, chromophorique, présentant des propriétés d'absorption à deux photons, et étant lié n fois directement audit premier motif B lorsque i est différent de 0 ou étant lié m fois directement audit cœur phosphoré A lorsque i est égal à 0 ; n corresponding to the valence of the first pattern B and being a non-zero integer from 2 to 5; i representing the number of successive repeating units of the first pattern B grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 10, in particular from 1 to 4; C represents a second unit, chromophoric, having two-photon absorption properties, and being bound n times directly to said first pattern B when i is different from 0 or being bonded directly to said phosphor core A when i is equal to 0;
ledit second motif C étant de formule  said second pattern C being of formula
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0001
αα,, ββ,, aa'' eett ββ'' rreepprréésseennttaanntt iinnddééppeennddaammmmeenntt lleess uunnss ddeess aauuttrreess ssooiitt uunn ggrroouuppeemmeenntt --CCHH==CCHH-- ssooiitt uunn ggrroouuppeemmeenntt --CC≡≡CC-- ;; αα ,, ββ ,, aa '' eett ββ '' rreepprréésseennttaanntt iinnddéppeennddaammmmeenntt lleess uunnss ddeess aauuttrreess ssooiitt uunn ggrroouuppeemmeenntt --CHCH
tt eett uu rreepprréésseennttaanntt iinnddééppeennddaammmmeenntt ll''uunn ddee ll''aauuttrree uunn eennttiieerr ccoommpprriiss ddee 00 àà 99 ;; tt eett uu rreepprréesseennttaanntt iinnddeeppeennddaammmmeenntt the uunn ofth eeinrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrrr
XXii eett XX22,, iiddeennttiiqquueess oouu ddiifffféérreennttss,, rreepprréésseennttaanntt cchhaaccuunn uunn ggrroouuppeemmeenntt aallkkyyllee eenn CCjj àà CC2255,, aavvaannttaaggeeuusseemmeenntt eenn CCii àà CCii22,, ddee pprrééfféérreennccee eenn CC44,, ((CCHH22))xx--SS0033MM}} ((CCHH22))xxNNAAlLkk33 ++,, ((CCHH22))xx--((OOCCHH22--CCHH22))yy--OOHH,, MM ééttaanntt uunn mmééttaall aallccaalliinn eett xx ééttaanntt ééggaall àà 00 oouu ééttaanntt LLUUII eennttiieerr ccoommpprriiss ddee 11 àà 1122,, pprrééfféérreennttiieelllleemmeenntt ddee 11 àà 66,, yy ééttaanntt uunn eennttiieerr ccoommpprriiss ddee 11 àà 2255 ;; qq ccoorrrreessppoonnddaanntt àà llaa vvaalleennccee dduu sseeccoonndd mmoottiiff CC eett ééttaanntt uunn eennttiieerr nnoonn nnuull,, nnoottaammmmeenntt ééggaall àà 11 ;; XXII and XX 22 ,, iiddeennttiiqquueess oouu ddiifffferereennttss, rreferredeennttaanntt cchhaaccuunn uunn ggrroouuppeemmeenntt aallkkyyllee eenn CCJJ to CC 2255 ,, aavvaannttaaggeeuusseemmeenntt eenn CCii to CCii 22 ,, ddreprofferereennccee eenn CC 44 ,, ((CCHH 22 )) xx --SS00 33 MM }} ((CCHH 22 )) xx NNAAlLkk 33 ++ ,, ((CCHH 22 )) x x - ((OOCCHH 22 --CHCH 22 )) yy - OOHH, MM estaanntt uunn mmééttaall aallccaalliinn eett xx éétgaannte ééggaall at ooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooooohoohhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhh qq ccoorrrrssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssss
-- DD rreepprréésseennttee uunn aappppeennddiiccee dd''aaggrraaffaaggee rraattttaacchhéé qq ffooiiss ddiirreecctteemmeenntt aauuddiitt sseeccoonndd mmoottiiff CC,, eett cchhooiissii ppaarrmmii
Figure imgf000006_0002
- DD rreepprréésseennttee uunn aappppeennddiiccee dd'aaggrraaffaaggee rraattttaacchhéé qq ffooiiss ddiirreecctteemmeemtttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttt
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Me  Me
yr-¾ N-N où z est choisi parmi JJ H2c-Ji yr-¾ NN where z is selected from JJ H 2 c-Ji
Ph' >h ph' "ph
Figure imgf000006_0003
P h '> h ph '" ph
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p correspondant à la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2 ; j représentant le nombre d'unités de répétition successives de l'appendice d'agrafage D greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5 ; notamment de 1 à 2 p corresponding to the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2; j representing the number of repetition units successive staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5; in particular from 1 to 2
- E représente un groupement hydrosolubilisant et/ou une fonction de ciblage, l'ensemble de ces groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage formant une couche périphérique sur le dendrimère ; ledit groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage étant directement liés p fois audit appendice d'agrafage D lorsque j est différent de 0 ou étant directement liés q fois audit second motif C lorsque j est égal à 0. E represents a water-solubilising group and / or a targeting function, all of these water-solubilising groups and / or targeting functions forming a peripheral layer on the dendrimer; said water-solubilizing group and / or said targeting function being directly linked p times to said staple appendix D when j is different from 0 or being directly linked q times to said second pattern C when j is equal to 0.
Les « dendrimères » sont des polymères fonctionnels hautement ramifiés de structure définie présentant une construction en arborescence. Ces macromolécules sont des polymères puisqu'elles sont basées sur la répétitivité d'un ou plusieurs motifs. Cependant, les dendrimères diffèrent fondamentalement des polymères classiques dans la mesure où ils ont des propriétés propres dues à leur construction en arborescence. Le poids moléculaire et la forme des dendrimères peuvent être contrôlés précisément. Ils peuvent être dotés de fonctions terminales situées à la terminaison des arborescences, formant une couche périphérique, en surface, rendant ces fonctions terminales facilement accessibles. "Dendrimers" are highly branched functional polymers of defined structure with a tree structure. These macromolecules are polymers since they are based on the repetitiveness of one or more motifs. However, dendrimers differ fundamentally from conventional polymers in that they have their own properties due to their tree structure. The molecular weight and shape of the dendrimers can be precisely controlled. They can be end-terminated at the termination of the trees, forming a peripheral layer on the surface, making these terminal functions easily accessible.
Les dendrimères sont construits étape par étape, en partant d'un noyau, par la répétition d'une séquence de réactions permettant la multiplication de chaque motif de façon répétitive et des fonctions terminales. Chaque séquence de réaction forme ce qui est appelé une nouvelle « génération ».  The dendrimers are constructed step by step, starting from a nucleus, by the repetition of a sequence of reactions allowing the multiplication of each pattern repetitively and terminal functions. Each reaction sequence forms what is called a new "generation".
Les dendrimères photosensibilisateurs biphotoniques de la présente invention sont également notés nano-objets.  The biphotonic photosensitizer dendrimers of the present invention are also referred to as nano-objects.
Dans la présente invention, le diamètre des dendrimères est compris de 5 nm à 20 nm. Or la taille du photosensibilisateur va, entre autres paramètres, conditionner son comportement dans les milieux biologiques. Ainsi les photosensibilisateurs d'une taille supérieure à 100 nm sont susceptibles de s'accumuler et de boucher les capillaires. En effet, ces petits vaisseaux ont un diamètre de 4 μηι chez l'homme et 3 μιη chez la souris. A l'inverse, les marqueurs de petite taille (inférieure à 1 ou 2 nm de diamètre) diffusent à travers les parois des tissus biologiques (comme la paroi endothéliale, ce qui présente des inconvénients pour une utilisation en angiographie).  In the present invention, the diameter of the dendrimers is from 5 nm to 20 nm. However, the size of the photosensitizer will, among other parameters, condition its behavior in biological media. Thus photosensitizers with a size greater than 100 nm are likely to accumulate and clog the capillaries. Indeed, these small vessels have a diameter of 4 μηι in humans and 3 μιη in the mouse. Conversely, small markers (less than 1 or 2 nm in diameter) diffuse through the walls of biological tissues (such as the endothelial wall, which has drawbacks for use in angiography).
Au sens de la présente invention, le terme « chromophore » désigne un composé chimique possédant une absorption non négligeable de la lumière dans la gamme de l'UV- visible, c'est-à-dire dans une gamme comprise de 250 à 700 nm. Une absoiption non négligeable de la lumière s'entend d'un coefficient d'extinction molaire (ε) supérieur à
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For the purposes of the present invention, the term "chromophore" refers to a chemical compound having a significant absorption of light in the range of UV- visible, that is to say in a range of 250 to 700 nm. A significant absoφtion of light means a molar extinction coefficient (ε) greater than
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Le terme « photosensibilisateur » désigne une substance capable d'absorber la lumière pour initier une réaction photochimique ou photophysique dans une autre molécule, sans être structurel lement affectée au cours de la réaction. Dans la présente invention, la réaction photochimique initiée est la génération d'oxygène singulet et/ou d'autres espèces oxygénées réactives. Les molécules de dioxygène singulet O2) sont obtenues à partir du dioxygène triplet (302) par un transfert de l'énergie d'excitation du photosensibilisateur excité au dioxygène à l'état électronique triplet (état fondamental). The term "photosensitizer" refers to a substance capable of absorbing light to initiate a photochemical or photophysical reaction in another molecule, without being structurally affected during the course of the reaction. In the present invention, the photochemical reaction initiated is the generation of singlet oxygen and / or other reactive oxygen species. The singlet oxygen dioxygen molecules O2) are obtained from triplet dioxygen ( 3 0 2 ) by a transfer of the excitation energy of the excited oxygenated photosensitizer to the triplet electronic state (ground state).
Le ternie « biphotonique » fait référence à une absorption à deux photons. L' « absoiption à deux photons » correspond à une absoiption simultanée de deux photons de fréquence identique dans le but d'exciter une molécule d'un état électronique (en général l'état fondamental) à un état électronique de plus haute énergie. La différence d'énergie entre les deux états électroniques impliqués de la molécule est égale à la somme des énergies de chacun des deux photons. L'absoiption à deux photons est plus faible de plusieurs ordres de magnitude que l'absorption linéaire et est ainsi un phénomène rare. Elle diffère de l'absorption linéaire par sa dépendance au carré de l'intensité lumineuse, rendant ce phénomène un processus d'optique non linéaire.  The "two-photon" term refers to two-photon absorption. The "two-photon absoφtion" corresponds to a simultaneous absoφtion of two photons of identical frequency in order to excite a molecule from an electronic state (in general the ground state) to an electronic state of higher energy. The difference in energy between the two electronic states involved in the molecule is equal to the sum of the energies of each of the two photons. Two-photon absoφtion is smaller by several orders of magnitude than linear absorption and is thus a rare phenomenon. It differs from linear absorption by its squared dependence of light intensity, making this phenomenon a non-linear optics process.
L'absorption à deux photons est caractérisée et quantifiée par sa section efficace d'absorption à deux photons notée σ2. Le terme « GM » correspond à l'unité de la section efficace à deux photons. « GM » signifie Gôppert-Mayer et 1 GM correspond à lû"50 cm4 s photon {. The two-photon absorption is characterized and quantified by its two-photon absorption cross section noted σ 2 . The term "GM" refers to the unit of the two-photon cross section. "GM" means Gôppert-Mayer and 1 GM corresponds to 10 "50 cm 4 s photon { .
Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit dendrimère possède une section efficace d'absorption à deux photons supérieure à 5 000 GM, avantageusement supérieure à 10 000 GM, plus avantageusement supérieure à 15 000 GM, de préférence supérieure à 20 000 GM pour au moins une valeur de longueurs d'ondes comprise de 700 à 900 nm, en particulier à 730 nm. According to one embodiment of the invention, said dendrimer has a two-photon absorption cross section greater than 5,000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more preferably greater than 15,000 GM, preferably greater than 20,000 GM. for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
Les sections efficaces d'absorption à deux photons de la présente invention sont déterminées par la technique de fluorescence par excitation à deux photons (TPEF ; vide infra). Les mesures sont effectuées à l'aide d'un laser titane: saphir délivrant des impulsions de 150 femtosecondes, en utilisant le protocole expérimental de Xu et Webb. [C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nmM, J Opt Soc. Am. B; Opt. Phys. 1996, 13, 481-491], Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit dendrimère présente un rendement quantique de production d'oxygène singulet compris de 5 à 30 %, de préférence compris de 10 à 20 %. The two-photon absorption cross sections of the present invention are determined by the two-photon excitation fluorescence technique (TPEF; vacuum infra). The measurements are made using a titanium laser: sapphire delivering pulses of 150 femtoseconds, using the experimental protocol of Xu and Webb. [VS. Xu, WW Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm M , J Opt Soc.Am.B; Opt Phys. 1996, 13, 481-491], According to one embodiment of the invention, said dendrimer has a quantum yield of singlet oxygen production ranging from 5 to 30%, preferably from 10 to 20%.
Le rendement quantique de production d'oxygène singulet (ΦΛ) représente le nombre de molécules d'oxygène singulet générées par rapport au nombre de photons absorbés par le photosensibilisateur, et est déterminé par comparaison entre la luminescence de l'oxygène singulet produit par le photosensibilisateur à 1272 nm et celle produite par un photosensibilisateur de référence à la même longueur d'onde dans les mêmes conditions. (vide infra « Méthode de quantification de la production d'oxygène singulet »).  The quantum yield of singlet oxygen production (ΦΛ) represents the number of singlet oxygen molecules generated relative to the number of photons absorbed by the photosensitizer, and is determined by comparison between the luminescence of the singlet oxygen produced by the photosensitizer. at 1272 nm and that produced by a reference photosensitizer at the same wavelength under the same conditions. (vide infra "Quantification method of singlet oxygen production").
Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit dendrimère présente un rendement quantique de fluorescence supérieur à 10 %, avantageusement supérieur ou égal à 15 %, de préférence supérieur ou égal à 30 %.  According to one embodiment of the invention, said dendrimer has a fluorescence quantum yield greater than 10%, advantageously greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%.
Le rendement quantique de fluorescence (ΦΡ) représente le nombre de photons émis directement par le dendrimère par rapport au nombre de photons absorbés et est déterminé par comparaison à une référence. Ce rendement correspond à la fraction de molécules excitées dont le retour à l'état fondamental est accompagné de l'émission de photons. The fluorescence quantum yield (Φ Ρ ) represents the number of photons emitted directly by the dendrimer relative to the number of photons absorbed and is determined by comparison with a reference. This yield corresponds to the fraction of excited molecules whose return to the ground state is accompanied by the emission of photons.
Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit dendrimère présente une brillance d'absorption à deux photons supérieure à 500 GM, avantageusement supérieure à 1 000 GM, plus avantageusement supérieure à 1 500 GM, de préférence supérieure à 2 000 GM pour au moins une valeur de longueurs d'ondes comprise de 700 à 900 nm, en particulier à 730 nm. La « brillance d'absorption à deux photons » est définie comme le produit de la section efficace à deux photons et du rendement quantique de fluorescence.  According to one embodiment of the invention, said dendrimer has a two-photon absorption brightness greater than 500 GM, advantageously greater than 1000 GM, more advantageously greater than 1500 GM, preferably greater than 2000 GM for at least minus a wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm. "Two-photon absorption brightness" is defined as the product of the two-photon cross section and the fluorescence quantum yield.
Selon un mode de réalisation de l'invention, ledit dendrimère n'est pas phototoxique sous une excitation comprise de 400 à 700 nm avec un éclairement compris de 200 à 3 000 Ix, avantageusement de 1 000 à 2 000 lx, de préférence de 1 000 lx.  According to one embodiment of the invention, said dendrimer is not phototoxic under an excitation of 400 to 700 nm with an illumination of 200 to 3000 Ix, preferably 1000 to 2000 lx, preferably 1 to 000 lx.
Le lux, unité de mesure de l'éclairement, caractérise le flux lumineux par unité de surface et 1 lx correspond à 1 cd sr-m"2. Lux, the unit of measure of illumination, characterizes the luminous flux per unit area and 1 lx corresponds to 1 cd sr-m "2 .
Au sens de l'invention, un composé « phototoxique » désigne un composé rendu nocif pour son environnement par une excitation lumineuse. Plus précisément, dans la présente invention, les dendrimères sont rendus nocifs sous excitation biphotonique par leur capacité à générer de l'oxygène singulet mais, à la lumière du jour telle que définie par une excitation comprise de 400 à 700 nm avec un éclairement compris de 200 à 3 000 lx, les dendrimères de l'invention ne génèrent pas d'oxygène singulet. Une absence de phototoxicité à la lumière du jour est généralement due à un effet écran de molécules absorbant fortement la lumière UV-visible telle que des squarates (phenylaminocyclobutenedione) ou à la diffusion de la lumière par des particules dont le diamètre est de l'ordre de quelques centaines de nanomètres. La présente invention repose cependant sur l'observation inattendue, par les Inventeurs, de l'absence de phototoxicité à la lumière du jour malgré l'omission, dans la structure des dendrimères, de groupements squarates (phenylaminocyclobutenedione) et en absence de diffusion de la lumière. For the purposes of the invention, a "phototoxic" compound designates a compound rendered harmful to its environment by a light excitation. More specifically, in the present invention, the dendrimers are rendered harmless under two-photon excitation by their ability to generate singlet oxygen but, in daylight as defined by excitation ranging from 400 to 700 nm with an included illumination of 200 to 3000 lx, the dendrimers of the invention do not generate singlet oxygen. An absence of phototoxicity in the light of day is generally due to a screen effect of molecules strongly absorbing UV-visible light such as squarates (phenylaminocyclobutenedione) or the scattering of light by particles whose diameter is of the order a few hundred nanometers. The present invention, however, relies on the unexpected observation, by the inventors, of the absence of phototoxicity in the light of day despite the omission, in the structure of the dendrimers, of squarate groups (phenylaminocyclobutenedione) and in the absence of diffusion of the light.
Cette caractéristique peut s'expliquer, a posteriori, d'une part de la présence de nombreuses sous-unités absorbant dans l'UV dans le squelette dendrimérique faisant ainsi écran à l'excitation à un photon et permettant de remplacer efficacement les groupements squarates et d'autre part à une efficacité de production d'oxygène singulet plus élevée à deux photons (σ2 · ΦΔ) qu'à un photon (8 · ΦΛ). Cette différence d'efficacité se traduit d'une section efficace élevée (supérieure à 5 000 GM, avantageusement supérieure à 10 000 GM, plus avantageusement supérieure à 15 000 GM, de préférence supérieure à 20 000 GM) et d'un rendement quantique d'oxygène singulet modéré compris de 5 à 30 %, de préférence compris de 10 à 20 %. This characteristic can be explained, a posteriori, on the one hand by the presence of numerous UV absorbing subunits in the dendrimeric backbone thus shielding the single-photon excitation and making it possible to effectively replace the squarate groups and on the other hand, singlet oxygen production efficiency is higher at two photons (σ 2 · ΦΔ) than at one photon (8 · ΦΛ). This difference in efficiency results in a high cross section (greater than 5000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more preferably greater than 15 000 GM, preferably greater than 20 000 GM) and a quantum yield of moderate singlet oxygen of 5 to 30%, preferably 10 to 20%.
Les dendrimères de la présente invention présentent aussi l'avantage, par rapport aux nanoparticules de silice mésoporeuses de l'art antérieur ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. aehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morère, J.-O. Durand, PC Int. Appl, 2011, WO 2011073054], d'être des nano-objets plus petits (diamètre), de taille unique et monodisperses, purement organiques et parfaitement caractérisés. Ces caractéristiques permettent d'obtenir des composés parfaitement reproductibles et dont l'innocuité de la plateforme dendrimérique a été démontrée.  The dendrimers of the present invention also have the advantage over mesoporous silica nanoparticles of the prior art ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as drugs", D. Brevet, L. aehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PC Int. Appl, 2011, WO 2011073054], to be nano-objects smaller (diameter), single size and monodisperse, purely organic and perfectly characterized. These characteristics make it possible to obtain perfectly reproducible compounds whose safety of the dendrimeric platform has been demonstrated.
De plus, en comparaison des photosensibilisateurs actuellement commercialisés pour des applications en photothérapie dynamique, les dendrimères de la présente invention permettent de traiter des tumeurs avec une résolution spatiale élevée tout en réduisant les effets secondaires non désirés liés à la photo sensibilisation des patients à la lumière du jour.  In addition, in comparison with currently marketed photosensitizers for dynamic phototherapy applications, the dendrimers of the present invention can treat tumors with high spatial resolution while reducing unwanted side effects related to photo sensitization of patients to light. of the day.
Selon un mode de réalisation avantageux, le cœur phosphoré A de valence m du composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m de l'invention est de formule Al, m étant égal à 6.
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According to an advantageous embodiment, the heart phosphorus valency m of the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m the invention is of formula Al, m being equal to 6.
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Ce cœur phosphoré présente une valence de 6 qui permet d'accéder en peu d'étapes de synthèse à des dendrimères possédant un nombre élevé de chiOmophores tout en évitant un encombrement stérique trop important.  This phosphorus core has a valence of 6 which allows access in few synthesis steps to dendrimers with a high number of chiOmophores while avoiding excessive steric hindrance.
Selon un mode de réalisation avantageux, le premier motif B de valence n répété i fois, est de formule Bl , n étant égal à 2 et i étant égal à 1.
Figure imgf000011_0002
According to an advantageous embodiment, the first unit B of valence n repeated i times, is of formula B1, n being equal to 2 and i being equal to 1.
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Le premier motif B de formule Bl permet de former un dendrimère de première génération, The first unit B of formula B1 makes it possible to form a first-generation dendrimer,
Gl. Gl.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, le premier motif B de valence n répété i fois, n étant égal à 2 et i étant égal à 2, est de formule B2.  According to another advantageous embodiment, the first pattern B of valence n repeated once, n being equal to 2 and i being equal to 2, is of formula B2.
Figure imgf000011_0003
Figure imgf000011_0003
Selon un autre mode de réalisation avantageux, le premier motif B de valence n répété i fois, n étant égal à 2 et i étant égal à 3, est de formule B3.  According to another advantageous embodiment, the first unit B of valence n repeated once, n being equal to 2 and i being equal to 3, is of formula B3.
Figure imgf000011_0004
Figure imgf000011_0004
Les premiers motifs B de formule B2 et B3 permettent d'augmenter l'ordre générationnel des dendrimères pour fomier des dendrimères G2 et G3 respectivement. L'augmentation de l'ordre générationnel a pour effet d'augmenter le nombre de premiers motifs B disponibles en périphérie pour le greffage du second motif C. The first B units of formula B2 and B3 make it possible to increase the generational order of the dendrimers to form G2 and G3 dendrimers respectively. The raise of the generational order has the effect of increasing the number of first peripherally available patterns B for the grafting of the second pattern C.
Le second motif C selon l'invention est constitué d'un groupement conjugué central lié par un espaceur saturé (-CH2-(CH )r- et -CH2-(CH2)U-) à des groupements en périphérie. Ce second motif C présente des propriétés d'absorption à deux photons directement liées à la nature quadripolaire du groupement conjugué central. La présente invention repose néanmoins également sur l'augmentation inattendue de la section efficace d'absoiption à deux photons du second motif C, dissymétrique, d'au moins 20 %, avantageusement d'au moins 40 % par rapport à son analogue symétrique (vide infra). Cette caractéristique peut être liée aux effets de poiarité/polarisabilité des groupements en périphérie. Bien que ceux-ci soient liés par un espaceur saturé au groupement conjugué et ne sont donc pas impliqués dans la délocalisation électronique, ils modifient l'environnement du chromophore, probablement par interactions dipôle-dipôle, ce qui peut expliquer, a posteriori^ le phénomène obseivé. Cette propriété accrue du second motif C est presque entièrement conservée dans le dendrimère. Selon un mode de réalisation avantageux, le second motif C de valence q, q étant égal à 1, est de formule Cl. The second motif C according to the invention consists of a central conjugated group linked by a saturated spacer (-CH 2 - (CH) r- and -CH 2 - (CH 2 ) U -) to groups at the periphery. This second motif C has two-photon absorption properties directly related to the quadrupole nature of the central conjugated group. The present invention, however, also relies on the unexpected increase of the two-photon absoφtion effective cross-section of the second asymmetric C-pattern by at least 20%, advantageously by at least 40% relative to its symmetrical analogue (empty infra). This characteristic may be related to the effects of polarity / polarizability of the groups at the periphery. Although these are linked by a spacer saturated with the conjugated group and are therefore not involved in the electronic delocalization, they modify the environment of the chromophore, probably by dipole-dipole interactions, which can explain, a posteriori, the phenomenon obseivé. This increased property of the second pattern C is almost entirely preserved in the dendrimer. According to an advantageous embodiment, the second C unit of valence q, q being equal to 1, is of formula Cl.
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Selon un autre mode de réalisation avantageux, le second motif C de valence q, q étant égal à 1, est de formule C2.  According to another advantageous embodiment, the second C unit of valency q, q being equal to 1, is of formula C2.
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Selon un autre mode de réalisation avantageux, le second motif C de valence q, q étant égal à 1, est de formule C3.  According to another advantageous embodiment, the second C unit of valency q, q being equal to 1, is of formula C3.
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Les motifs de formule générale C combinent des absorptions à deux photons élevées, un rendement de production d'oxygène singulet significatif, tout en conservant un rendement quantique de fluorescence important. Par rapport à la structure générale C, les motifs Cl, C2 et C3 sont les plus accessibles synthétiquement. Les doubles liaisons permettent une meilleure conjugaison que les triples, et conduisent généralement à des sections efficaces d'absorption à deux photons plus élevées, mais les triples donnent des structures plus rigides ce qui conduit souvent à des rendements de fluorescence plus élevés et permet de mieux contrôler les interactions interchromophoriques . The units of general formula C combine high two-photon absorptions, a significant singlet oxygen production efficiency, while maintaining a high yield. important fluorescence quantum. With respect to the general structure C, the units C1, C2 and C3 are the most synthetically accessible. Double bonds allow for better conjugation than triples, and generally lead to higher two-photon absorption cross-sections, but triples give stiffer structures, which often leads to higher fluorescence yields and better control interchromophoric interactions.
L' « appendice d'agrafage » de la présente invention, permet en augmentant l'ordre générationnel du dendrïmère, de lier le second motif à l'ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage. Cet appendice d'agrafage peut être absent. Selon un mode de réalisation avantageux, l'appendice d'agrafage D de valence p répété j fois, p étant égal à 2 et j étant égal à 1 , est de formule D 1.
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The "staple appendage" of the present invention makes it possible, by increasing the generational order of the dendrimer, to bind the second motif to all of the water-solubilizing groups and / or targeting functions. This staple appendix may be missing. According to an advantageous embodiment, the staple appendix D of valency p repeated j times, p being equal to 2 and j being equal to 1, is of formula D 1.
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Selon un autre mode de réalisation avantageux, l'appendice d'agrafage D répété j fois, j étant égal à 0, est absent et est de formule D2.  According to another advantageous embodiment, the staple appendix D repeated j times, j being equal to 0, is absent and is of formula D2.
Au sens de la présente invention, le terme « groupement hydrosolubilisant » désigne toute fonction chimique susceptible d'apporter de la solubilité aux dendrimères de l'invention dans l'eau ou les milieux biologiques. Le groupement hydrosolubilisant est de préférence choisi parmi des dérivés de l'éthylène glycol. Les polyéthylènes glycols, PEG, ne sont généralement ni toxiques ni immunogènes, ce qui les rend particulièrement adaptés pour des applications biologiques. For the purposes of the present invention, the term "water-solubilising group" refers to any chemical function capable of bringing solubility to the dendrimers of the invention in water or biological media. The water-solubilising group is preferably chosen from ethylene glycol derivatives. Polyethylene glycols, PEG, are generally neither toxic nor immunogenic, which makes them particularly suitable for biological applications.
Selon un mode de réalisation avantageux, ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de cibla e E est tel que tous les E sont identiques et est de formule El.
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According to an advantageous embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or target functions e is such that all E's are identical and is of formula E1.
Figure imgf000013_0002
Selon un autre mode de réalisation avantageux, ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage E est tel que tous les E sont identiques et est de formule E2.
Figure imgf000013_0003
E2 Selon un autre mode de réalisation avantageux, ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage E est tel que tous les E sont identiques et est de formule E3. According to another advantageous embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E2.
Figure imgf000013_0003
E2 According to another advantageous embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E3.
NH - PEG75o - OMe E3 NH - PEG 75 o - OMe E3
La « fonction de ciblage », permettant de cibler sélectivement les cellules cancéreuses, améliore le potentiel thérapeutique des dendrimères de l'invention, en ajoutant à la sélectivité spatiale de l'activation biphotonique, une affinité élevée pour les cellules cancéreuses. Les termes « cellules cancéreuses » désignent un groupe de cellules présentant une croissance incontrôlée (division au-delà de la limite normale), une invasion (intrusion dans ou destruction des tissus adjacents), et parfois des métastases (propagation à d'autres endroits du coips via la lymphe ou le sang). The "targeting function", which selectively targets the cancer cells, improves the therapeutic potential of the dendrimers of the invention by adding to the spatial selectivity of the two-photon activation a high affinity for the cancer cells. The term "cancer cells" refers to a group of cells with uncontrolled growth (division beyond the normal limit), invasion (intrusion into or destruction of adjacent tissues), and sometimes metastasis (spread to other parts of the body). coips via the lymph or blood).
Selon un mode de réalisation avantageux, ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage E est tel que tous les E sont identiques et est de formule E4.
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E4 ; X étant égal à H ou Ac. According to an advantageous embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that all the E's are identical and is of formula E4.
Figure imgf000014_0001
E4; X being equal to H or Ac.
Lorsque X est un hydrogène, l'ensemble E4 est noté E½ tandis que l'ensemble E4 est noté E4AC lorsque X est un groupement acétate. When X is hydrogen, the set E4 is denoted E½ whereas the set E4 is denoted E4A C when X is an acetate group.
Les fonctions mannose permettent de cibler spécifiquement les lectines dans et à la surface des cellules cancéreuses. Les lectines sont des protéines qui reconnaissent spécifiquement certains mono- ou oligosaccharides et sont capables de se lier à eux de façon réversible. Il ne s'agit pas d'enzymes ni d'anticorps, car les lectines ne présentent pas d'activité catalytique et ne sont pas impliquées dans la réponse immunitaire classique. Lors de cancers, les lectines s'agglutinent majoritairement sur les cellules cancéreuses. L'a-D-mannose, telle qu'apparaissant dans l'ensemble E4, notamment dans l'ensemble E4H, est l'un des sucres majoritairement reconnus par les lectines, permettant ainsi de cibler spécifiquement les cellules cancéreuses.  The mannose functions can specifically target lectins in and on the surface of cancer cells. Lectins are proteins that specifically recognize certain mono- or oligosaccharides and are able to bind to them reversibly. These are not enzymes or antibodies, because lectins do not exhibit catalytic activity and are not involved in the classical immune response. During cancers, the lectins mainly agglutinate on the cancer cells. Α-D-Mannose, as appearing in the E4 set, in particular in the E4H set, is one of the sugars mainly recognized by lectins, thus making it possible to specifically target the cancer cells.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, ledit ensemble des groupements hydiOsolubilisants et/ou fonctions de ciblage E est tel que tous les E ne sont pas identiques et est de formule E5. E5 According to another advantageous embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is such that not all E's are identical and is of formula E5. E5
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Figure imgf000015_0001
Selon un mode de réalisation préféré, ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage E est de formule E5 et le rapport E1/E4 est de 1 ,4. Dans ce cas, lorsque E4 comprend le mannose protégé, c'est-à-dire lorsque X est un groupement acétate, l'ensemble E est noté E5EI E4AC tandis que lorsque E4 comprend le mannose déprotégé, c'est- à-dire lorsque X est un hydrogène, l'ensemble E est noté Ε5ΕΙ/Ε4Η· According to a preferred embodiment, said set of water-solubilizing groups and / or targeting functions E is of formula E5 and the ratio E1 / E4 is 1, 4. In this case, when E4 comprises the protected mannose, that is to say when X is an acetate group, the set E is labeled E14I, while E4 comprises the deprotected mannose, that is to say when X is a hydrogen, the set E is noted Ε5ΕΙ / Ε 4 Η ·
Cette combinaison de l'ensemble E comportant à la fois des groupements hydrosolubilisants et des fonctions de ciblage permet d'améliorer la solubilité des dendrimères dans l'eau et les milieux biologiques et de favoriser la sélectivité des dendrimères pour les cellules cancéreuses.  This combination of the set E comprising both water-solubilizing groups and targeting functions makes it possible to improve the solubility of the dendrimers in water and the biological media and to promote the selectivity of the dendrimers for the cancer cells.
Selon un mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphore A est de formule Al et le premier motif B est de formule Bl. According to an advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m, the heart phosphor has the formula Al and the first unit B is of formula B1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)(1)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le premier motif B est de formule B2. According to another advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) (1) n) m, the heart A is phosphorus of formula Al and the first unit B is of formula B2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le premier motif B est de formule B3. Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(BÉ-(C- (Dj-(E)p)q)n)mj ^e cœur phosphoré A est de formule Al et le second motif C est de foi-mule Cl . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m, the phosphorus core A is of formula Al and the first unit B is of formula B3. According to another advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (B E - (C- (Dj- (E) p) q) n) m j ^ e °° ur phosphorus is of formula Al and the second unit C is of faith-mule Cl.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le second motif C est de formule C2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (Dj- (E) p) q) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1 and the second unit C is of formula C2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le second motif C est de formule C3. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n) m , the phosphorus core A is of formula Al and the second unit C is of formula C3.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(¾-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et l'appendice d'agrafage D est de formule Dl. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (¾- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1 and the stitching appendix D is of formula D1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et l'appendice d'agrafage D est de formule D2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1 and the staple appendix D is of formula D2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B,-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B, - (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C~ (Dj-(E)p)q)n)ii1, le cœur phosphoré A est de formule Al et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q ) n ) ii 1 , the phosphorus core A is of formula A1 and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E5. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula Al and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4. According to another advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the heart A is phosphorus formula A1 and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E5.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de forniule Bl et le second motif C est de formule Cl . According to another advantageous embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the first pattern B is of Formula B1 and the second pattern C is of Formula Cl.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule B2 et le second motif C est de formule Cl . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n) m , the first unit B is of formula B2 and the second unit C is of formula Cl.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B,-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule B3 et le second motif C est de formule Cl. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B, - (C- (Dj- (E) p ) q ) n ) m , the first unit B is Formula B3 and the second unit C is of formula Cl.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et l'appendice d'agrafage D est de formule Dl . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m, the first unit B is of formula B1 and the staple appendix D is of formula D1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et l'appendice d'agrafage D est de formule D2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m, the first unit B is of formula Bl and the staple appendix D is of formula D2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B,--(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B, - (C- (Dj- (E) p) q ) n) m, the first unit B is of formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B,--(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B, - (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the first unit B is of formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the first pattern B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3. According to another advantageous embodiment, in the two-photon photosensitizer chemical compound formed by a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the first pattern B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le premier motif B est de formule Bl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E5. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m , the first unit B is formula B1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de formule Cl et l'appendice d'agrafage D est de formule Dl . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q ) n) m, the second unit C is of formula C1 and the staple appendix D is of formula D1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de fo mule Cl et l'appendice d'agrafage D est de formule D2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q ) n ) m , the second unit C is of Cl foule and the staple appendage D is of formula D2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)ni, le second motif C est de fomiule Cl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q) n ) n , the second C unit is of formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de formule Cl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the second unit C is formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de fomiule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de fomiule Cl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound constituted by a dendrimer of the general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m, the second unit C is of formula C1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibiiisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de fomiule Cl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de fomiule E4. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- ( Dj - (E) p) q) n ) m, the second unit C is Cl and the water-solubilizing group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le second motif C est de formule Cl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E5. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m , the second unit C is of formula Cl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the stapling appendage D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)nl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) nl , the appendix of stapling D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q) n ) m , the stapling appendix D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q) )m, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound constituted by a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (Dj- (E) p) q)) m , the stapling appendix D is of formula D1 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E5. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q) n ) m, the stapling appendix D is of formula Dl and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, l'appendice d'agrafage D est de formule D2 et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another advantageous embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the appendix of stapling D is of formula D2 and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
Selon un mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El. According to a preferred embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, the heart phosphor has the formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q) )m, le cœur phosphore A est de formule Al , le premier motif B est de formule B2, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q )) m , the phosphorus core A is of formula Al, the first unit B is of formula B2, the second unit C is of formula Cl, the stapling appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule B3, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another preferred embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula Al, the first unit B is of formula B3, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula El.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)tJ)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule C2, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another preferred embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) tJ) n) m, the heart A is phosphorus formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C2, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule C3, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule El . According to another preferred embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C3, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E1.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)Ii)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) I i) m , the phosphorus core A is of formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3 .
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)CI)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al , le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule C2, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. According to another preferred embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) CI) n) m, the heart A is phosphorus formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C2, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B (C- (Dj-(E)p)q)i!)ni, ie cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule B l, le second motif C est de formule C3, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E3. Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. In another preferred embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the formula A- (B (C- (D j - (E) p) q) i) either, ie A is phosphorus heart of formula A1, the first unit B is of formula B 1, the second unit C is of formula C3, the stapling appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E3. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)„)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule B2, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) ") m , the phosphorus core A is of Formula A1, the first unit B is of formula B2, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule B3, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is Formula A1, the first unit B is of formula B3, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photo sensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule C2, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photo-sensitizing chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C2, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4 .
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(B;-(C- (Dj"(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule C3, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E4. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (B ;-( C- (D j "(E) p ) q ) n ) m , the phosphorus core A is of formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C3, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E4 .
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C- (Dj-(E)p)q)n}m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl , le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule Dl, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E5. According to another preferred embodiment, in the biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n } m , the phosphorus core A is of Formula A1, the first unit B is of formula B1, the second unit C is of formula C1, the staple appendix D is of formula D1, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E5.
Selon un autre mode de réalisation préféré, dans le composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C- (Dj-(E)p)q)n)m, le cœur phosphoré A est de formule Al, le premier motif B est de formule Bl, le second motif C est de formule Cl, l'appendice d'agrafage D est de formule D2, et le groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E est de formule E2. According to another preferred embodiment, the chemical compound photon photosensitizer consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m, the heart A is phosphorus formula A1, the first unit B is of formula B1, the second C unit is of formula Cl, the staple appendix D is of formula D2, and the water-solubilising group and / or said targeting function E is of formula E2.
L'invention concerne également l'utilisation d'un chromophore dissymétrique C" pour la mise en œuvre du procédé de fabrication du dendrimère de l'invention ; C" étant de formule The invention also relates to the use of an asymmetric chromophore C "for the implementation of the method of manufacturing the dendrimer of the invention; C" being of formula
Figure imgf000022_0001
α, β, a' et β' représentant indépendamment les uns des autres soit un groupement -CH=CH- soit un groupement -C≡C- ;
Figure imgf000022_0001
α, β, a 'and β' representing, independently of one another, a -CH = CH- group or a -C≡C- group;
t et u représentant indépendamment l'un de l'autre un entier compris de 0 à 9 ;  t and u independently of one another an integer from 0 to 9;
X1 et X2, identiques ou différents, représentant chacun un groupement alkyle en Ci à C25, avantageusement en Ci à Ci2, de préférence en C4, (CH2)X-S03M, (CH2)xNAlk3+, (CH2)x-(OCH2-CH2)y-OH, M étant un métal alcalin et x étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 12, préférentiel lement de 1 à 6, y étant un entier compris de 1 à 25. X 1 and X 2, identical or different, each representing an alkyl group in Ci to C25, preferably Ci -C 2, preferably C 4, (CH2) X -S0 3 M, (CH2) x NAlk3 + ( CH 2) x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being 0 or being an integer from 1 to 12, preferably from 1 to 6, y being an integer from 1 to 25.
Au sens de la présente invention, le terme « chromophore » désigne un composé chimique possédant une absorption non négligeable de la lumière dans la gamme de l'UV-visible, c'est- à-dire dans une gamme comprise de 250 à 700 nm. Une absoiption non négligeable de la lumière s'entend d'un coefficient d'extinction molaire (s) supérieur à 1 000 L- mol"1 -cm"1. Le terme « dissymétrique » se rapporte aux fonctions terminales de C", l'une de ces fonctions étant un groupement phénol et l'autre un groupement benzaldéhyde. For the purposes of the present invention, the term "chromophore" refers to a chemical compound having a significant absorption of light in the range of UV-visible, that is to say within a range of 250 to 700 nm . A significant absoφtion of light means a molar extinction coefficient (s) greater than 1000 L-mol "1- cm " 1 . The term "asymmetrical" refers to the terminal functions of C ", one of these functions being a phenol group and the other a benzaldehyde group.
Selon un mode de réalisation de l'invention, lors de l'utilisation décrite précédemment, la synthèse du chromophore dissymétrique C" comprend deux couplages carbone-carbone, simultanés ou séquentiels, de préférence séquentiels, entre  According to one embodiment of the invention, during the use described above, the synthesis of the asymmetric chromophore C "comprises two carbon-carbon couplings, simultaneous or sequential, preferably sequential, between
a. un motif fluorène c de formule
Figure imgf000022_0002
at. a fluorene unit c of formula
Figure imgf000022_0002
X et X , identiques ou différents, représentant chacun un groupement alkyle en C] à C25, avantageusement en Ci à C12, de préférence en C , (CH2)x-S03M, (CH2)xNAlk3 +, (CH2)x-(OCH2-CH2)y-OH, M étant un métal alcalin et x étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 12, préfèrent! ellement de 1 à 6, y étant un entier compris de 1 à 25 ; X and X, which may be identical or different, each representing a C 1 to C 25, advantageously C 1 to C 2 , preferably C 1 (CH 2 ) x -SO 3 M alkyl group, (CH 2 ) x NAlk 3 + , (CH 2) x- (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being equal to 0 or being an integer from 1 to 12, prefer! from 1 to 6, where y is an integer from 1 to 25;
X3 et X4, identiques ou différents, représentant chacun un groupement choisi parmi Cl, Br, I ou CF3SO3, notamment I ; et b. des fragments c; et C2 de formule X 3 and X 4 , identical or different, each representing a group selected from Cl, Br, I or CF 3 SO 3 , especially I; and B. fragments c; and C2 of formula
Figure imgf000023_0001
α, β, a' et β' représentant indépendamment les uns des autres soit un groupement -CH=CH- soit un groupement -C≡C- ;
Figure imgf000023_0001
α, β, a 'and β' representing, independently of one another, a -CH = CH- group or a -C≡C- group;
t et u représentant indépendamment l'un de l'autre un entier compris de 0 à 9 ; Z étant choisi parmi un hydrogène, un groupement acétate, un groupement méthoxyméthyle, un groupement tert-butyldiméthylsilyle éther ou un groupement ((2-triméthylsilyl)ethoxy)méthyl ; pour former le chromophore dissymétrique C" lorsque Z représente un hydrogène ou pour former un chromophore dissymétrique protégé C" lorsque Z n'est pas un hydrogène ; C" étant de formule  t and u independently of one another an integer from 0 to 9; Z being selected from hydrogen, an acetate group, a methoxymethyl group, a tert-butyldimethylsilyl ether group or a ((2-trimethylsilyl) ethoxy) methyl group; to form the asymmetric chromophore C "when Z is hydrogen or to form a C-protected asymmetric chromophore when Z is not hydrogen; It being of formula
Figure imgf000023_0002
ledit chromophore dissymétrique C" étant obtenu par déprotection de la fonction phénol dudit chromophore dissymétrique protégé C".
Figure imgf000023_0002
said asymmetric chromophore C "being obtained by deprotection of the phenol function of said protected asymmetric chromophore C".
La déprotection de la fonction phénol est réalisée selon toute méthode connue de l'homme de l'art. Selon un mode préféré, la déprotection est réalisée par une hydrolyse en milieu acide, c'est-à-dire à un pH inférieur à 7. L'invention concerne également un procédé d'obtention du dendrimère de l'invention comprenant The deprotection of the phenol function is carried out according to any method known to those skilled in the art. According to a preferred mode, the deprotection is carried out by hydrolysis in an acid medium, that is to say at a pH below 7. The invention also relates to a process for obtaining the dendrimer of the invention comprising
a. une étape de dissymétrisation du chromophore C de formule  at. a dissymmetrization step of the chromophore C of formula
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0001
X1 et X2, identiques ou différents, représentant chacun un groupement alkyle en Ci à C25, avantageusement en Ci à C , de préférence en C4, (CH2) -S0 M, (CH2)xNAlk3+, (CH2)x-(OCH2-CH2)y-OH5 M étant un métal alcalm et x étant égal à 0 ou étant un entier de 1 à 12, préférentiellement de 1 à 6, y étant un entier de 1 à 25 ; ladite étape de dissymétrisation permettant d'augmenter la section efficace d'absorption à deux photons du chromophore dissjTnétrique C" d'au moins 20 %, avantageusement d'au moins 40 % par rapport à C ; b. une étape de greffage du chromopliore dissymétrique C" sur une entité centrale A- (B;')ra de sorte à former un premier dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C")n)m ; A-(Bj')ni représentant une espèce réactive correspondant à A-(Bj)m ; m étant la valence du groupement A et étant un entier non nui compris de 3 à 8 ; n étant la valence de B' dans l'entité centrale A-(Bj')m et étant un entier non nul compris de 2 à 5 ; i étant le nombre d'unités de répétition successives du premier motif B greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 10, notamment de 1 à 4 ; c. une étape de formation du dendrimère A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m réalisée soit X 1 and X 2 , which may be identical or different, each representing a C 1 to C 25 , advantageously C 1 to C 4, preferably C 4 , (CH 2 ) -SO 3 M, (CH 2 ) x NAlk 3 + alkyl group, CH 2 ) x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH 5 M being an alkali metal and x being 0 or being an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, y being an integer of 1 to 25 ; said dissymmetrization step for increasing the two-photon absorption cross section of the dissymmetrical chromophore C "by at least 20%, advantageously by at least 40% with respect to C, b, a step of grafting the asymmetric chromopead. C "on a central entity A- (B; ') ra so as to form a first intermediate dendrimer A- (Bj- (C") n ) m ; A- (Bj') ni representing a reactive species corresponding to A- (Bj) m ; m being the valence of the group A and being an undisclosed integer from 3 to 8; n being the valence of B 'in the central entity A- (Bj') m and being a non-zero integer from 2 to 5, i being the number of successive repetition units of the first pattern B grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 10, in particular from 1 to 4, and c. of the dendrimer A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m made either
i. en plusieurs étapes consistant en :  i. in several stages consisting of:
- une étape de formation d'un second dendrimère intermédiaire A-(Bi-(C- (Dj')q)n)m par la réaction, réalisée q fois, d'un appendice d'agrafage D5 sur le premier dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C")n)m et réalisée j fois successivement ; D' correspondant à une première espèce réactive de l'appendice d'agrafage D ; q étant la valence du second motif C et étant un entier non nul, notamment égal à I ; j étant le nombre d'unités de répétition successives de l'appendice d'agrafage D greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5, notamment de 1 à 2 ; a step of forming a second intermediate dendrimer A- (Bi- (C- (Dj ') q) n) m by the reaction, carried out q times, of a stapling appendix D 5 on the first intermediate dendrimer; A- (Bj- (C ") n ) m and performed j times successively; Corresponding to a first reactive species of the staple appendix D; q being the valence of the second C unit and being a non-zero integer, especially equal to I; j is the number of successive repeating units of the staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5, in particular from 1 to 2;
- une étape de fonctionnalisation du second dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C- (Dj')q)„)m obtenu à l'étape précédente avec un ensemble de groupements hydrosoiubilisants et/ou fonctions de ciblage E' pour former le dendrimère A- (Bi-(C-(Dj-(E)p)q)n)m!> ledit ensemble de groupements hydrosoiubilisants et/ou fonctions de ciblage E' représentant une espèce réactive correspondant à E et étant de formule a step of functionalizing the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (Dj ') q ) ") m obtained in the preceding step with a set of hydrosolubilizing groups and / or targeting functions E' to form the dendrimer A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m> said set of hydrosoiubilisants groups and / or targeting functions E 'is a reactive species and corresponding to E having the formula!
Figure imgf000025_0001
Figure imgf000025_0001
❖ NH2 - PEG750 - OMe ; soit ❖ NH 2 - PEG7 5 0 - OMe; is
Figure imgf000025_0002
Figure imgf000025_0002
*t* un mélange de ceux-ci.  * t * a mixture of these.
p étant la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2 ; soit ii. en une étape consistant en une fonctionnalisation du premier dendrimère intermédiaire A-(B-(C")n)m par sa réaction, réalisée q fois, avec une entité Dj"-(E)P préformée ; D" correspondant à une seconde espèce réactive de l'appendice d'agrafage D ; j étant le nombre d'unités de répétition successives de la seconde espèce réactive D" et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5, notamment de 1 à 2 ; q étant la valence du second motif C et étant un entier non nul, notamment égal à 1 ; p étant la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2. p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2; either ii. in a step consisting of a functionalization of the first intermediate dendrimer A- (B- (C ") n ) m by its reaction, carried out q times, with a preformed entity Dj" - (E) P ; D "corresponding to a second reactive species of the staple appendix D; j being the number of successive repeating units of the second reactive species D" and being equal to 0 or being an integer of from 1 to 5, especially from 1 to 2; q being the valence of the second pattern C and being a non-zero integer, especially equal to 1; p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2.
Une « espèce réactive » est définie selon la présente invention par la présence, dans la structure de cette espèce, d'une fonction chimique contenant au moins un centre nucléophile, tel qu'un atome d'oxygène, en particulier une fonction phénol, ou au moins un centre électrophile, tel qu'un atome de phosphore, en particulier une fonction R-P(S)C12. A "reactive species" is defined according to the present invention by the presence, in the structure of this species, of a chemical function containing at least one nucleophilic center, such as an oxygen atom, in particular a phenol function, or at least one electrophilic center, such as a phosphorus atom, in particular an RP (S) C1 2 function .
L' « appendice d'agrafage » de la présente invention, permet en augmentant l'ordre génératiormel du dendrimère, de lier le second motif à l'ensemble des groupements hydrosoiubilisants et/ou fonctions de ciblage. Cet appendice d'agrafage peut être absent. The "staple appendage" of the present invention makes it possible, by increasing the generative order of the dendrimer, to bind the second pattern to all of the water-solubilizing groups and / or targeting functions. This staple appendix may be missing.
Au sens de la présente invention, le terme « groupement hydrosolubilisant » désigne toute fonction chimique susceptible d'apporter de la solubilité aux dendrimères de l'invention dans l'eau ou les milieux biologiques. Le groupement hydrosolubilisant est de préférence choisi parmi des dérivés de l'éthylène glycol. Les polyéthylènes glycols, PEG, ne sont généralement ni toxiques ni immunogènes, ce qui les rend particulièrement adaptés pour des applications biologiques. For the purposes of the present invention, the term "water-solubilising group" refers to any chemical function capable of bringing solubility to the dendrimers of the invention in water or biological media. The water-solubilising group is preferably chosen from ethylene glycol derivatives. Polyethylene glycols, PEG, are generally neither toxic nor immunogenic, which makes them particularly suitable for biological applications.
La « fonction de ciblage », permettant de cibler sélectivement les cellules cancéreuses, améliore le potentiel thérapeutique des dendrimères obtenus par le procédé de l'invention, en ajoutant à la sélectivité spatiale de l'activation bipho tonique, une affinité élevée pour les cellules cancéreuses. Les termes « cellules cancéreuses » désignent un groupe de cellules présentant une croissance incontrôlée (division au-delà de la limite normale), une invasion (intrusion dans ou destruction des tissus adjacents), et parfois des métastases (propagation à d'autres endroits du corps via la lymphe ou le sang). Les fonctions mannose permettent de cibler spécifiquement les lectines dans et à la surface des cellules cancéreuses. Les lectines sont des protéines qui reconnaissent spécifiquement certains mono- ou oligosaccharides et sont capables de se lier à eux de façon réversible. Il ne s'agit pas d'enzymes ni d'anticorps, car les lectines ne présentent pas d'activité cataiytique et ne sont pas impliquées dans la réponse immunitaire classique. Lors de cancers, les lectines s'agglutinent majoritairement sur les cellules cancéreuses. L'a-D-mannose, telle qu'apparaissant dans les variantes de l'ensemble E ci-dessus, est l'un des sucres majoritairement reconnus par les lectines, permettant ainsi de cibler spécifiquement les cellules cancéreuses.  The "targeting function", which makes it possible to selectively target the cancer cells, improves the therapeutic potential of the dendrimers obtained by the process of the invention, by adding to the spatial selectivity of the bipho tonic activation a high affinity for the cancer cells. . The term "cancer cells" refers to a group of cells with uncontrolled growth (division beyond the normal limit), invasion (intrusion into or destruction of adjacent tissues), and sometimes metastasis (spread to other parts of the body). body via the lymph or blood). The mannose functions can specifically target lectins in and on the surface of cancer cells. Lectins are proteins that specifically recognize certain mono- or oligosaccharides and are able to bind to them reversibly. It is not enzymes or antibodies, because lectins do not show cataiytic activity and are not involved in the classical immune response. During cancers, the lectins mainly agglutinate on the cancer cells. Α-D-mannose, as appearing in the variants of set E above, is one of the sugars mainly recognized by lectins, thus making it possible to specifically target cancer cells.
Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention permet d'obtenir des dendrimères possédant une section efficace d'absorption à deux photons supérieure à 5 000 GM, avantageusement supérieure à 10 000 GM, plus avantageusement supérieure à 15 000 GM, de préférence supérieure à 20 000 GM pour au moins une valeur de longueurs d'ondes comprise de 700 à 900 nm, en particulier à 730 nm. According to one embodiment, the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a two-photon absorption cross section greater than 5000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more advantageously greater than 15 000 GM, of preferably greater than 20,000 GM for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
Les sections efficaces d'absorption à deux photons de la présente invention sont déterminées par la technique de fluorescence par excitation à deux photons (TPEF ; vide infrà). Les mesures sont effectuées à l'aide d'un laser titane: saphir délivrant des impulsions de 150 femtosecondes, en utilisant le protocole expérimental de Xu et Webb. [C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores witli data from 690 to 1050 nm", J Opl. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491].  The two-photon absorption cross sections of the present invention are determined by the two-photon excitation fluorescence (TPEF) technique. The measurements are made using a titanium laser: sapphire delivering pulses of 150 femtoseconds, using the experimental protocol of Xu and Webb. [VS. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of fluorophore molecular witli data from 690 to 1050 nm", J Opl. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491].
Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention permet d'obtenir des dendrimères présentant un rendement quantique de production d'oxygène singulet compris de 5 à 30 %, de préférence compris de 10 à 20 %.  According to one embodiment, the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a quantum yield of singlet oxygen production ranging from 5 to 30%, preferably from 10 to 20%.
Le rendement quantique de production d'oxygène singulet (ΦΔ) représente le nombre de molécules d'oxygène singulet générées par rapport au nombre de photons absorbés par le photosensibilisateur, et est déterminé par comparaison entre la luminescence de l'oxygène singulet produit par le photosensibilisateur à 1272 nm et celle produite par un photosensibilisateur de référence à la même longueur d'onde dans les mêmes conditions. (vide infra « Méthode de quantification de la production d'oxygène singulet »).  The quantum yield of singlet oxygen (ΦΔ) represents the number of singlet oxygen molecules generated relative to the number of photons absorbed by the photosensitizer, and is determined by comparison between the luminescence of singlet oxygen produced by the photosensitizer. at 1272 nm and that produced by a reference photosensitizer at the same wavelength under the same conditions. (vide infra "Quantification method of singlet oxygen production").
Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention permet d'obtenir des dendrimères présentant un rendement quantique de fluorescence supérieur à 10 %, avantageusement supérieur ou égal à 15 %, de préférence supérieur ou égal à 30 %.  According to one embodiment, the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a fluorescence quantum yield greater than 10%, advantageously greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%.
Le rendement quantique de fluorescence (Φρ) représente le nombre de photons émis directement par le dendrimère par rapport au nombre de photons absorbés et est déterminé par comparaison à une référence. Ce rendement correspond à la fraction de molécules excitées dont le retour à l'état fondamental est accompagné de l'émission de photons. The fluorescence quantum yield (Φρ) represents the number of photons emitted directly by the dendrimer relative to the number of photons absorbed and is determined by comparison with a reference. This yield corresponds to the fraction of excited molecules whose return to the ground state is accompanied by the emission of photons.
Dans la présente invention, une augmentation surprenante de la section efficace d'absorption à deux photons du chromophore dissymétrique C", d'au moins 20 %, avantageusement d'au moins 40 % par rapport à son analogue symétrique C est observée. Cette caractéristique peut être liée aux effets de poiarité/polarisabilité des groupements en périphérie. Bien que ceux-ci soient liés par un espaceur saturé au groupement conjugué et ne sont donc pas impliqués dans la délocalisation électronique, ils modifient l'environnement du chromophore, probablement par interactions dipôle-dipôle, ce qui peut expliquer, a posteriori, le phénomène observé. Cette propriété accrue du chromophore dissymétrique C" est presque entièrement conservée dans le dendrimère. Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention permet d'obtenir des dendrimères présentant une brillance d'absorption à deux pilotons supérieure à 500 GM, avantageusement supérieure à 1 000 GM, plus avantageusement supérieure à 1 500 GM, de préférence supérieure à 2 000 GM pour au moins une valeur de longueurs d'ondes comprise de 700 à 900 nm, en particulier à 730 nm. In the present invention, a surprising increase in the two-photon absorption cross section of the asymmetric chromophore C "of at least 20%, preferably at least 40% relative to its symmetrical analog C is observed. may be related to the effects of polarity / polarizability of the peripheral groups.While these are linked by a saturated spacer to the conjugated group and are therefore not involved in the electronic delocalization, they modify the environment of the chromophore, probably by interactions dipole-dipole, which may explain, a posteriori, the phenomenon observed.This increased property of the asymmetrical chromophore C "is almost entirely preserved in the dendrimer. According to one embodiment, the process of the invention makes it possible to obtain dendrimers having a two-pilot absorption gloss greater than 500 GM, advantageously greater than 1000 GM, more advantageously greater than 1500 GM, and preferably greater than 1500 GM. at 2,000 GM for at least one wavelength value of 700 to 900 nm, in particular 730 nm.
La « brillance d'absorption à deux photons » est définie comme le produit de la section efficace à deux photons et du rendement quantique de fluorescence.  "Two-photon absorption brightness" is defined as the product of the two-photon cross section and the fluorescence quantum yield.
Selon un mode de réalisation, le procédé de l'invention permet d'obtenir des dendrimères n'étant pas phototoxiques sous une excitation comprise de 400 à 700 nm avec un éclairement compris de 200 à 3 000 lx, avantageusement de 1 000 à 2 000 lx, de préférence de 1 000 lx.  According to one embodiment, the method of the invention makes it possible to obtain dendrimers that are not phototoxic under an excitation of between 400 and 700 nm with an illumination of between 200 and 3,000 lx, advantageously between 1,000 and 2,000. 1x, preferably 1,000 lx.
Le lux, unité de mesure de l' éclairement, caractérise le flux lumineux par unité de suif ace et 1 lx correspond à lcd sr m"2. Lux, the unit of measure of illumination, characterizes the luminous flux per unit of tallow and 1 lx corresponds to lcd sr m "2 .
Au sens de l'invention, un composé « phototoxique » désigne un composé rendu nocif pour son environnement par une excitation lumineuse. Plus précisément, dans la présente invention, les dendrimères sont rendus nocifs sous excitation biphotonique par leur- capacité à générer de l'oxygène singulet mais, à la lumière du jour telle que définie par une excitation comprise de 400 à 700 nm avec un éclairement compris de 200 à 3 000 lx, les dendrimères de l'invention ne génèrent pas d'oxygène singulet.  For the purposes of the invention, a "phototoxic" compound designates a compound rendered harmful to its environment by a light excitation. More specifically, in the present invention, the dendrimers are rendered harmless under two-photon excitation by their ability to generate singlet oxygen but, in daylight as defined by excitation ranging from 400 to 700 nm with an illumination included from 200 to 3000 lx, the dendrimers of the invention do not generate singlet oxygen.
Une absence de phototoxicité à la lumière du jour est généralement due à un effet écran de molécules absorbant fortement la lumière UV-visible telle que des squarates (phenylaminocyclobutenedione) ou à la diffusion de la lumière par des particules dont le diamètre est de l'ordre de quelques centaines de nanomètres. La présente invention repose cependant sur l'observation inattendue, par les Inventeurs, de l'absence de phototoxicité à la lumière du jour malgré l'omission, dans la structure des dendrimères, de groupements squarates (phenylaminocyclobutenedione) et en absence de diffusion de la lumière.  An absence of phototoxicity in the light of day is generally due to a screen effect of molecules strongly absorbing UV-visible light such as squarates (phenylaminocyclobutenedione) or the scattering of light by particles whose diameter is of the order a few hundred nanometers. The present invention, however, relies on the unexpected observation, by the inventors, of the absence of phototoxicity in the light of day despite the omission, in the structure of the dendrimers, of squarate groups (phenylaminocyclobutenedione) and in the absence of diffusion of the light.
Cette caractéristique peut s'expliquer, a posteriori, d'une part de la présence de nombreuses sous-unités absorbant dans l'UV dans le squelette dendrimérique faisant ainsi écran à l'excitation à un photon et permettant de remplacer efficacement les groupements squarates et d'autre part à une efficacité de production d'oxygène singulet plus élevée à deux photons (ΟΥ ΦΛ) qu'à un photon (S-ΦΑ). Cette différence d'efficacité se traduit d'une section efficace élevée (supérieure à 5 000 GM, avantageusement supérieure à 10 000 GM, plus avantageusement supérieure à 15 000 GM, de préférence supérieure à 20 000 GM) et d'un rendement quantique d'oxygène singulet modéré compris de 5 à 30 %, de préférence compris de 10 à 20 %. This characteristic can be explained, a posteriori, on the one hand by the presence of numerous UV absorbing subunits in the dendrimeric backbone thus shielding the single-photon excitation and making it possible to effectively replace the squarate groups and on the other hand, singlet oxygen production efficiency is higher at two photons (ΟΥ ΦΛ) than at one photon (S-ΦΑ). This difference in efficiency results in a high cross-section (greater than 5,000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more preferably greater than 15,000 GM, preferably greater than 20,000 GM) and a higher cross section. moderate singlet oxygen quantum yield of 5 to 30%, preferably of 10 to 20%.
Les dendrimères obtenus par le procédé de la présente invention présentent aussi l'avantage, par rapport aux nanoparticules de silice mésoporeuses de l'art antérieur ["Biphotonic photosensitizers, nanopariicles containing the same and their use as dntgs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morère, J.-O. Durand, PCT Int. Âppl., 2011, WO 2011073054], d'être des nano-objets plus petits (diamètre), de taille unique et monodisperses, purement organiques et parfaitement caractérisés. Ces caractéristiques permettent d'obtenir des composés parfaitement reproductibles et dont l'innocuité de la plateforme dendrimérique a été démontrée.  The dendrimers obtained by the method of the present invention also have the advantage over mesoporous silica nanoparticles of the prior art ["Biphotonic photosensitizers, nanoparticles containing the same and their use as dntgs", D. Brevet, L. Raehm, M. Blanchard-Desce, O. Mongin, M. Gary-Bobo, M. Garcia, A. Morere, J.-O. Durand, PCT Int. Appl., 2011, WO 2011073054], to be nano-objects smaller (diameter), single size and monodisperse, purely organic and perfectly characterized. These characteristics make it possible to obtain perfectly reproducible compounds whose safety of the dendrimeric platform has been demonstrated.
De plus, en comparaison des photosensibilisateurs actuellement commercialisés pour des applications en photothérapie dynamique, les dendrimères obtenus par le procédé de la présente invention permettent de traiter des tumeurs avec une résolution spatiale élevée tout en réduisant les effets secondaires non désirés liés à la photosensibilisation des patients à la lumière du jour. In addition, in comparison with currently marketed photosensitizers for dynamic phototherapy applications, the dendrimers obtained by the method of the present invention can treat tumors with high spatial resolution while reducing undesired side effects related to photosensitization of patients. in the light of day.
L'invention concerne également les dendrimères tels qu'obtenus directement par le procédé décrit ci-dessus. The invention also relates to dendrimers as obtained directly by the method described above.
Selon un mode de réalisation préféré, dans le procédé de l'invention, l'entité centrale A- Bi')m est de formule According to a preferred embodiment, in the method of the invention, the central entity A-Bi ') m is of formula
Figure imgf000029_0001
; m étant égal à 6 ; i étant égal à 1.
Figure imgf000029_0001
; m being equal to 6; i being equal to 1.
Selon un mode de réalisation préféré, dans le procédé de l'invention, l'étape de greffage du chromophore dissymétrique C" sur l'entité centrale A-(Bj')m est réalisée n fois, en milieu basique, pour obtenir le premier dendrimère intermédiaire A-(Bi-(C")n)i formule
Figure imgf000030_0001
According to a preferred embodiment, in the method of the invention, the step of grafting the asymmetrical chromophore C "on the central entity A- (Bj ') m is carried out n times, in basic medium, to obtain the first intermediate dendrimer A- (Bi- (C ") n ) i formula
Figure imgf000030_0001
n étant égal à 2. n being 2.
Ce premier dendrimère intermédiaire est noté A-(B1-(C1 ")2)6· This first intermediate dendrimer is noted A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 ·
Selon un mode de réalisation préféré, dans le procédé de l'invention, l'étape de formation d'un second dendrimère intermédiaire A-(Bi-(C-(Dj')q)n)m est réalisée q fois par la condensation de l'appendice d'agrafage D' sur le premier dendrimère intermédiaire A-(Bi- (C" ; le second dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C-(Dj')q)n)m étant de formule
Figure imgf000030_0002
According to a preferred embodiment, in the method of the invention, the step of forming a second intermediate dendrimer A- (Bi- (C- (D j ') q ) n ) m is carried out q times by the condensing the staple appendix D 'on the first intermediate dendrimer A- (Bi- (C "); the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (Dj') q ) n ) m being of formula
Figure imgf000030_0002
q étant égal à 1 ; j étant égal à 1. q being 1; j being equal to 1.
Ce second dendrimère intermédiaire est noté A-(Bl-(Cl-(Dr)i)2)6.  This second intermediate dendrimer is denoted by A- (B1- (Cl- (Dr) i) 2) 6.
Selon un mode de réalisation préféré, dans le procédé de l'invention, l'étape de fonctionnalisation du second dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C-(Dj')q)n)m avec un groupement hydrosolubilisant et/ou une fonction de ciblage E' est réalisée p fois, en milieu basique, pour former le dendrimère A-(B;-(C-(Dj-(E)p)q):n)m de formule According to a preferred embodiment, in the method of the invention, the step of functionalizing the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (D j ') q ) n ) m with a water-solubilizing group and / or a targeting function E 'is carried out p times, in basic medium, to form the dendrimer A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ): n) m of formula
Figure imgf000030_0003
Figure imgf000030_0003
oit  ilo
Figure imgf000030_0004
; soit
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000030_0004
; is
Figure imgf000031_0001
étant é l à H ou Ac ; soit
Figure imgf000031_0002
being at H or Ac; is
Figure imgf000031_0002
p étant égal à 2.  p being equal to 2.
Les dendrimères sont alors nommés a. A-(B1-(C1-(D1-(E 1)2)1)2)6, b. A-(B1-(C1-(D1- (E2)2)j)2)6, c. A-(B1-(C1-(D1-(E3)2)1)2)6, d. A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ao)2)i)2)6 lorsque X est un acétate ou A-(B1-(C1-(D1 -(E4H)2) 2)6 lorsque X est un hydrogène et e. A-(B1-(C1-(D1- The dendrimers are then named a. A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) 1) 2) 6, b. A- (B1- (C1- (D1- (E2) 2 ) j) 2 ) 6, c. A- (B1- (C1- (D1- (E3) 2 ) 1 ) 2 ) 6 , d. A- (BL- (Cl- (Dl (E4 A o) 2) i) 2) 6 when X is an acetate or A- (B1- (1- (D1 - (E4 H) 2) 2) 6 when X is hydrogen and e.A- (B1- (C1- (D1-
Le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E5)2) 1)2)0 se présente préférentiellement sous le forme A- (B1-(C1-(D1-(E5e1/E4)2)I)2)6, notamment A-(B1-(C1-(D1-(E5EÏ/E4AC)2)I)2)6 lorsque E5 est un mélange E1/E4 et X étant un acétate, le ratio E1/E4 de l'ensemble E5 étant égal à 1,4, ou A- (Bl-(Cl-(Dl-(E5Ei/fi4ii)2)i)2)6 lorsque E5 est un mélange E1/E4 et X étant un hydrogène, le ratio E1/E4 de l'ensemble E5 étant égal à 1,4. The dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5) 2) 1) 2) 0 is preferably in the form A- (B1- (1- (D1- (E5 e1 / E 4) 2) I ) 2) 6, in particular A- (B1- (1- (D1- (E5 E Ï / E4AC) 2) I) 2) 6 where E5 is an E1 / E4 and X is an acetate mixture, the ratio E1 / E4 of the entire E5 being equal to 1.4, or A- (BL- (Cl- (Dl (E5 E i / fi4ii) 2) i) 2) 6 where E5 is a mixture E1 / E4 and X is a hydrogen, the E1 / E4 ratio of the E5 set being equal to 1.4.
L'invention concerne également l'utilisation du dendrimère de formule A-(Bj-(C-(Dj- (E)p)q)n)m tel que défini ci-dessus dans un procédé ou dispositif d'imagerie de fluorescence. Le terme « imagerie » désigne une technique ou un procédé non-invasif utilisé pour créer des images du corps humain (ou des parties ou fonctions de celui-ci) pour des raisons médicales (procédé médical dans le but de révéler, diagnostiquer ou examiner une maladie) ou pour la science médicale (y compris l'étude de l'anatomie normale et physiologique). The invention also relates to the use of the dendrimer of formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ) m as defined above in a method or device for fluorescence imaging. "Imaging" means a non-invasive technique or procedure used to create images of the human body (or parts or functions thereof) for medical reasons (medical procedure for the purpose of revealing, diagnosing or disease) or for medical science (including the study of normal and physiological anatomy).
Selon un mode de réalisation avantageux, l'utilisation du dendrimère de l'invention de formule A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m dans un procédé ou dispositif d'imagerie de fluorescence met en œuvre une absorption à un ou à deux photons. According to an advantageous embodiment, the use of the dendrimer of the invention of formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m or in a method of fluorescence imaging device implements a one or two photon absorption.
L'utilisation des dendrimères de l'invention pour l'imagerie à un ou deux photons est rendue possible par le rendement quantique de fluorescence non négligeable, c'est-à-dire supérieur à 10 %, avantageusement supérieur ou égal à 15 %, préférentiellement supérieur ou égal à 30 %, de ces composés.  The use of the dendrimers of the invention for imaging one or two photons is made possible by the significant fluorescence quantum yield, that is to say greater than 10%, preferably greater than or equal to 15%, preferably greater than or equal to 30%, of these compounds.
Selon un mode de réalisation avantageux, lors de l'utilisation du dendrimère de formule A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m dans un procédé ou dispositif d'imagerie de fluorescence, la concentration en dendrimère est de 5 à 100 g/mL, de préférence de 50 pg/mL. Selon un mode de réalisation avantageux, lors de l'utilisation du dendrimère de formule A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m dans un procédé ou dispositif d'imagerie de fluorescence, le temps d'incubation des cellules cancéreuses avec ledit dendi'imère est de 3 à 20 h. According to an advantageous embodiment, during the use of the dendrimer of the formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m or in a method of fluorescence imaging device, the Dendrimer concentration is 5 to 100 g / mL, preferably 50 μg / mL. According to an advantageous embodiment, during the use of the dendrimer of the formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m or in a method of fluorescence imaging device, the incubation time of the cancer cells with said dendi'imère is 3 to 20 h.
Les cellules cancéreuses visées par la présente invention sont les cellules de cancer du sein, telles que les cellules MCF-7 et MDA-MB-231, les cellules de cancer du côlon telles que les cellules HCT-1 16, les cellules du rétinoblastome telles que les cellules Y-79 et les cellules du cancer de la prostate telles que les cellules LNCaP.  The cancer cells targeted by the present invention are breast cancer cells, such as MCF-7 and MDA-MB-231 cells, colon cancer cells such as HCT-1 16 cells, retinoblastoma cells such as than Y-79 cells and prostate cancer cells such as LNCaP cells.
L'invention concerne également l'utilisation du dendrimère de formule A-(Bi-(C-(Dj- (E)p)q)n)m tel que défini ci-dessus dans un procédé ou dispositif de thérapie photo dynamique. La thérapie photo dynamique est une technique douce pouvant notamment être utilisée, dans le traitement de cancers, par l'injection d'une substance non toxique en l'absence de lumière qui a la propriété, une fois soumise à une excitation lumineuse, de se transformer en poison par la formation de radicaux libres. Dans la présente invention, la réaction photochimique ainsi initiée est la génération d'oxygène singulet et/ou d'autres espèces oxygénées réactives. Les molécules de dioxygène singulet (!02) sont obtenues à partir du dioxygène triplet (302) par un transfert de l'énergie d'excitation du photosensibilisateur excité au dioxygène à l'état électronique triplet (état fondamental). The invention also relates to the use of the dendrimer of the formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m as defined above in a method or photodynamic therapy device. Dynamic photo therapy is a gentle technique that can be used, in the treatment of cancers, by injecting a non-toxic substance in the absence of light that has the property, once subjected to a light excitation, to turn into poison by the formation of free radicals. In the present invention, the photochemical reaction thus initiated is the generation of singlet oxygen and / or other reactive oxygen species. The singlet dioxygen molecules ( ! 0 2 ) are obtained from triplet dioxygen ( 3 0 2 ) by transfer of excitation energy from the excited oxygenated photosensitizer to the triplet electronic state (ground state).
Selon un mode de réalisation avantageux, l'utilisation du dendrimère de formule A- (Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n),n dans un procédé ou dispositif de thérapie photodynamique met en œuvre une absorption à deux photons. According to an advantageous embodiment, the use of the dendrimer of formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ), n in a photodynamic therapy method or device implements an absorption at two photons.
Selon un mode de réalisation avantageux, lors de l'utilisation du dendrimère de formule A-(B;-(C-(Dj-(E)p)q)n)m dans un procédé ou dispositif de thérapie photodynamique mettant en œuvre une absorption à deux photons, la concentration en dendrimère est de 5 à 100 μg/mL, de préférence de 50 μg/mL. According to an advantageous embodiment, when using the dendrimer of formula A- (B ;-( C- (D j - (E) p ) q ) n ) m in a photodynamic therapy method or device implementing a two-photon absorption, the dendrimer concentration is from 5 to 100 μg / ml, preferably from 50 μg / ml.
Selon un mode de réalisation avantageux, lors de l'utilisation du dendrimère de formule A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m dans un procédé ou dispositif de thérapie photodynamique mettant en œuvre une absorption à deux photons, le temps d'incubation des cellules cancéreuses avec ledit dendrimère est de 5 à 20 h. According to an advantageous embodiment, during the use of the dendrimer of the formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m or in a method of photodynamic therapy device implementing a two-photon absorption, the incubation time of the cancer cells with said dendrimer is 5 to 20 hours.
Les cellules cancéreuses visées par la présente invention sont les cellules de cancer du sein, telles que les cellules MCF-7 et MDA-MB-231, les cellules de cancer du côlon telles que les cellules HCT-1 16, les cellules du rétinoblastome telles que les cellules Y-79 et les cellules du cancer de la prostate telles que les cellules LNCaP. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, l'utilisation du dendrimère A-(Bi-(Cl- (DI-(E4H)2) 1)2)0 après 5h d'incubation d'une solution à 100 g mL dudit dendrimère avec des cellules du cancer de sein MCF-7 dans un procédé ou dispositif de thérapie photodynamique mettant en œuvre une absorption à deux photons permet d'atteindre une mort cellulaire de 75 % par excitation biphotonique à 760 nm. The cancer cells targeted by the present invention are breast cancer cells, such as MCF-7 and MDA-MB-231 cells, colon cancer cells such as HCT-1 16 cells, retinoblastoma cells such as than Y-79 cells and prostate cancer cells such as LNCaP cells. According to a particular embodiment of the invention, the use of the A- (Bi- (Cl- (DI- (E4H) 2 ) 1) 2) 0 dendrimer after 5 hours of incubation of a 100 gmL solution. of said dendrimer with MCF-7 breast cancer cells in a photodynamic therapy method or device employing two-photon absorption achieves 75% cell death by two-photon excitation at 760 nm.
L'invention concerne également un composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C-(Dj-(E)p)q)n)ra tel que défini précédemment destiné à être utilisé dans le traitement de cancers en association avec une excitation biphotonique. The invention also relates to a two-photon photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bi (C- (D j - (E) p) q) n) m as defined above for use in the treatment of cancers in association with two-photon excitation.
Les cancers visés par l'invention sont les cancers du sein, du côlon, de Ja prostate et le rétinoblastome.  The cancers targeted by the invention are cancers of the breast, colon, prostate and retinoblastoma.
Méthode de quantification de l'absorption a deux photons par la mesure de la fluorescence induite à deux photons Quantification method for two-photon absorption by measuring the two-photon induced fluorescence
Les sections efficaces d'ADP ont été déterminées par mesure de la fluorescence induite par excitation à deux photons (TPEF) en régime femtoseconde et du rendement quantique de fluorescence. Le principe de cette technique et le protocole expérimental utilisé sont décrits en détail par Werts, Blanchard-Desce et coll. [M. H. V. Werts, N. Nerambourg, D. Pélégry, Y. Le Grand, M. Blanchard-Desce, "Action cross sections of two-photon excited luminescence of some Eu(III) and Tb(III) complexes", Photochem. Photobiol Sel 2005, 4, 531-538]. Ce protocole est adapté du protocole expérimental original décrit par Xu et Webb [C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm", J. Opt. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481- 491], et prend en compte les corrections des indices de réfraction des solvants. Les brillances d'absorption à deux photons (σ2·Φρ) pour des solutions de concentration 10"4 M (par chromophore) ont été mesurées en utilisant comme référence la fluorescéine (qualité spectroscopique) dans une solution de soude 0.01 M (qualité spectroscopique) pour la gamme de 700 à 980 nm [C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 11m", J Opt. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491]. Les valeurs de références de la fluorescéine utilisées de 700 à 715 nm sont celles déterminées par Blanchard-Desce et coll. [C. Katan, S. Tretiak, M. H. V. Werts, A. J. Bain, R. J. Marsh, N. Leonczek, N. Nicolaou, E. Badaeva, O. Mongin, M. Blanchard- Desce, "Two-Photon Transitions in Quadrupolar and Branched Chromophores: Experinient and Theory", J Phys. Chem. B 2007, 111, 9468-9483] tandis qu'au-delà de 715 nm, les valeurs de référence de Xu et Webb ont été utilisées [C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm", J Opt. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491], The ADP cross sections were determined by measuring femtosecond fluorescence induced fluorescence induced fluorescence (TPEF) and fluorescence quantum yield. The principle of this technique and the experimental protocol used are described in detail by Werts, Blanchard-Desce et al. [MHV Werts, N. Nerambourg, D. Pélégry, Y. Le Grand, M. Blanchard-Desce, "Action cross sections of two-photon excited luminescence of some Eu (III) and Tb (III) complexes", Photochem. Photobiol Sel 2005, 4, 531-538]. This protocol is adapted from the original experimental protocol described by Xu and Webb [C. Xu, WW Webb, "Measuring two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm", J. Opt. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491], and takes into account the corrections of the refractive indices of the solvents. Two-photon absorption shells (σ 2 · Φρ) for solutions of concentration 10 -4 M (per chromophore) were measured using as a reference fluorescein (spectroscopic quality) in a 0.01 M soda solution (spectroscopic quality). ) for the 700 to 980 nm range [C. Xu, WW Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 11m", J Opt Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491] The reference values of fluorescein used from 700 to 715 nm are those determined by Blanchard-Desce et al [C. Katan, S. Tretiak, MHV Werts, AJ Bain, RJ Marsh , N. Leonczek, N. Nicolaou, E. Badaeva, O. Mongin, M. Blanchard- Desce, "Two-Photon Transitions in Quadrupole and Branched Chromophores: Experinient and Theory," J Phys. Chem. B 2007, 111, 9468-9483] while above 715 nm, the reference values of Xu and Webb were used [C. Xu, WW Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm", J Opt. Soc. Am. B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491],
Tableau 1 : Valeurs de références de σ2·Φρ (fiuorescéine dans NaOH 0.01 M). Table 1: Reference values of σ 2 · Φρ (fluorescein in 0.01 M NaOH).
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Figure imgf000034_0001
Montage optique Optical assembly
Un laser Ti:saphir large bande "mode-locked" de type MIRA-900F (Cohérent) pompé par un laser continu de type Verdi (Nd:YLF Cohérent également et émettant 5 W à 532 nm) a été utilisé, pemiettant ainsi d'accéder à des impulsions de 150 fs avec une fréquence de 76 MHz, et dont la longueur d'onde est accordable entre 700 et 980 nm. En sortie, une partie du faisceau laser est prélevée par une lame de verre et envoyée sur un spectromètre afin de vérifier la longueur d'onde. L'axe optique du faisceau est ajusté à l'aide de 2 miroirs par rapport à l'axe des deux diaphragmes. La puissance et l'angle de polarisation du faisceau laser sont réglés par deux lames demi-onde ainsi que par un polariseur. La puissance du faisceau laser incident est mesurée directement sur le trajet optique du faisceau par un puissance- mètre. L'intensité lumineuse du faisceau incident est ajustée à l'aide d'une roue à filtres comprenant plusieurs densités optiques afin de s'assurer d'être bien en régime d'ADP pure : la puissance du faisceau incident sur la cuve est ainsi de l'ordre de 50 mW. A MIRA-900F (Coherent) mode-locked broadband Ti: sapphire laser pumped by a continuous Verdi-type laser (Nd: YLF Coherent also emitting 5 W at 532 nm) was used, thus allowing access pulses of 150 fs with a frequency of 76 MHz, and whose wavelength is tunable between 700 and 980 nm. At the output, part of the laser beam is picked up by a glass slide and sent to a spectrometer to check the wavelength. The optical axis of the beam is adjusted using 2 mirrors with respect to the axis of the two diaphragms. The power and the polarization angle of the laser beam are regulated by two half wave plates and a polarizer. The power of the incident laser beam is measured directly on the optical path of the beam by a power meter. The light intensity of the incident beam is adjusted using a filter wheel comprising several optical densities in order to ensure that it is in a pure ADP regime: the power of the incident beam on the tank is thus of the order of 50 mW.
Le faisceau lumineux est focalisé dans la cuve contenant l'échantillon à l'aide d'un objectif à air Olympus (10x, ouverture numérique de 0,25). L'intensité d'émission de fluorescence est récoltée en retour par ce même objectif puis séparée du faisceau incident à l'aide d'une lame dichroïque (Chroma 675dcxru) et d'un jeu de filtres (Chroma e650sp-2p) avant d'être détectée par un spectromètre CCD (BWTek BTC112E). L'intensité de fluorescence totale est obtenue par intégration du spectre d'émission comgé mesuré par ce spectromètre. The light beam is focused in the vessel containing the sample using an Olympus air lens (10x, numerical aperture of 0.25). The fluorescence emission intensity is harvested back by the same objective and then separated from the incident beam using a dichroic plate (Chroma 675dcxru) and a set of filters (Chroma e650sp-2p) before being detected by a CCD spectrometer (BWTek BTC112E). The total fluorescence intensity is obtained by integrating the comge emission spectrum measured by this spectrometer.
Méthode de quantification de la production d'oxygène singulet Quantification method of singlet oxygen production
Les rendements quantiques de production d'oxygène singulet ont été mesurés sur un Fluorolog-3 (Horiba Jobin Yvon) en excitant à l'aide d'une lampe Xénon de 450 W. La luminescence de l'oxygène singulet est mesurée à 1272 nm grâce à un détecteur de la société North Coast Scientific refroidi à l'azote liquide (modèle E0817L). La tetraphenylpoiphyrine (TPP) est utilisée comme molécule de référence dans le dichlorométhane ( Δ[ΤΡΡ]= 0,60) afin de déterminer les rendements quantiques de formation d'oxygène singulet des photosensibilisateurs dans le même solvant. The quantum yields of singlet oxygen production were measured on a Fluorolog-3 (Horiba Jobin Yvon) by excitation with a Xenon lamp of 450 W. The luminescence of the singlet oxygen is measured at 1272 nm. a detector from North Coast Scientific cooled with liquid nitrogen (model E0817L). The tetraphenylpoiphyrin (TPP) is used as a reference molecule in dichloromethane (Δ [ΤΡΡ] = 0.60) to determine the quantum yields of singlet oxygen formation of photosensitizers in the same solvent.
L'invention, ainsi que les différents avantages qu'elle présente, seront plus facilement compris grâce à la description qui va suivre des modes non limitatifs de réalisation de celle-ci donnés en référence aux figures, dans lesquelles : The invention, as well as the various advantages that it presents, will be more easily understood thanks to the following description of the nonlimiting embodiments thereof given with reference to the figures, in which:
- la Figure 1 représente les spectres d'absoiption et d'émission normalisés du chromophore Cl" dans des solvants de différentes polarités. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm. L'axe gauche des ordonnées correspond à l'absorption normalisée et Taxe droit des ordonnées correspond à l'intensité normalisée de fluorescence en unité arbitraire. 1 shows the normalized absoφtion and emission spectra of the Cl "chromophore in solvents of different polarities, the abscissa axis corresponds to the wavelength in nm, and the left axis of the ordinates corresponds to Normalized uptake and right yaw rate is the normalized intensity of fluorescence in arbitrary units.
la Figure 2 représente les spectres d'absorption à deux photons de Cl' et Cl". L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à la section efficace d'absoiption à deux photons en GM.  Figure 2 shows the two-photon absorption spectra of Cl 'and Cl ".The x-axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon absoφtion cross section. in GM.
la Figure 3 représente la sol atochromie du dendtimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 avec les spectres d'absorption et d'émission du dendrimère dans le toluène, le dichlorométhane, le THF et le DMSO. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm, l'axe gauche des ordonnées correspond à l'absorption normalisée en unité arbitraire et l'axe droit des ordonnées correspond à l'intensité normalisée de fluorescence en unité arbitraire. Figure 3 represents the atochromic sol of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendimer with the absorption and emission spectra of the dendrimer in toluene, dichloromethane, THF and DMSO. The abscissa axis corresponds to the wavelength in nm, the left axis of the ordinates corresponds to the normalized absorption in arbitrary unit and the right axis of the ordinates corresponds to the normalized intensity of fluorescence in arbitrary unit.
- la Figure 4 représente les spectres d'absorption à deux photons de Cl" et des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)Î)2)6 dans le THF, L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à la section efficace d'absorption à deux photons en GM. - Figure 4 shows the absorption spectra of two-photon Cl "and dendrimers A- (B1- (C1") 2) 6 and A- (B1- (1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 in THF, the axis of The abscissa corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
la Figure 5 représente le spectre de fluorescence du Cl" avec différentes concentrations de mannose. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à l'intensité relative de fluorescence en unité arbitraire.  Figure 5 shows the fluorescence spectrum of Cl "with different mannose concentrations, the abscissa axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the relative intensity of fluorescence in arbitrary units.
la Figure 6 représente les spectres d'absorption à deux photons de Cl" et des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ac)2)1)2)6 dans le THF. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à la section efficace d'absorption à deux photons en GM. Figure 6 shows the two-photon absorption spectra of Cl "and the dendrimers A- (B1- (C1") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E4 Ac ) 2 ) 1 ) 2 ) 6 in THF. The x-axis corresponds to the wavelength in nm and the y-axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
la Figure 7 représente les spectres d'absorption à deux photons de A-(B1-(C1-(D1- (E4H)2)I)2)6 dans le DMF et de Cl" et A-(B1-(C1")2)6 dans le THF. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à la section efficace d'absorption à deux photons en GM. Figure 7 shows the two-photon absorption spectra of A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2 ) I) 2) 6 in DMF and Cl- and A- (B1- (C1- ) 2 ) 6 in THF. The x-axis corresponds to the wavelength in nm and the y-axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
la Figure 8 représente les spectres d'absorption à deux photons du dendrimère A-(B1- (C1-(D1-(E5EI/E4H)2)I)2)6 et A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4i 2)i)2)6 dans le DMF. L'axe des abscisses correspond à la longueur d'onde en nm et l'axe des ordonnées correspond à la section efficace d'absorption à deux photons en GM. Figure 8 shows the absorption spectra of two-photon dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E4H) 2) I) 2) 6 and A- (BL- (Cl- (D - (E4i 2) i) 2) 6 in the DMF The abscissa axis corresponds to the wavelength in nm and the ordinate axis corresponds to the two-photon absorption cross section in GM.
la Figure 9 représente la viabilité cellulaire des cellules de cancer du sein MCF-7 incubées 4 jours avec différentes concentrations de A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et l'axe des abscisses correspond à la concentration en A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 en μg/mL. Figure 9 shows the cell viability of MCF-7 breast cancer cells incubated 4 days with different concentrations of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6. The y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and the abscissa axis corresponds to the concentration of A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 in μg / ml.
- la Figure 10 représente le principe du test au MTT.  - Figure 10 represents the principle of the MTT test.
- la Figure 1 1 représente les images en microscopie confocale monophotonique de cellules MCF-7 avec A) marqueur nucléaire excité à 405 nm, B) A-(B1-(C1-(D1- (El)2)i)2)6 excité à 458 nm et C) superposition. - Figure 1 1 represents the images in confocal microscopy single-photon MCF-7 cells with A) nuclear marker excited at 405 nm, B) A- (B1- (C1- (D1- (El) 2 ) i) 2) 6 excited at 458 nm and C) superposition.
- la Figure 12 représente une image en microscopie confocale multiphotonique de cellules MCF-7 marquées par le CellMask (marqueur membranaire) et incubées avec du A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 après excitation à 750 nm. 12 represents a multiphoton confocal microscopy image of CellMask-labeled MCF-7 cells (membrane marker) and incubated with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 after excitation at 750 nm.
la Figure 13 représente sous forme d'histogramme l'efficacité de la thérapie photodynamique à deux photons sur des cellules MCF-7 incubées 5h avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)!)2)6. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque rectangle correspond à une concentration en A-(Bl-(Cl~(Dl-(El)2)i)2)6 en μ^Γηί. A) Contrôle, B) 5 μΒ mL, C) 50 μ^ηιί, D) 100 la Figure 14 représente sous forme d'histogramme l'efficacité de la thérapie photodynamique à deux photons sur les cellules MCF-7 incubées 20 h avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)Ô- L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque rectangle correspond à une expérience : A) contrôle (absence d'irradiation à deux photons et d'incubation avec un dendrimère),FIG. 13 represents in histogram form the efficacy of the two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h with the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) dendrimer)) 2 ) 6. The y-axis corresponds to the percentage of cell survival and each rectangle corresponds to a concentration in A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 in μ ^ Γηί. A) Control, B) 5 mL μΒ, C) 50 μ ^ η ιί, D) 100 of Figure 14 represents a histogram effectiveness of photodynamic therapy with two photons on MCF-7 cells incubated for 20 h with the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) I) 2) Ô - The y-axis corresponds to the cell survival percentage and each rectangle corresponds to an experiment: A) control (absence of two-photon irradiation and incubation with a dendrimer),
B) irradiation à deux photons uniquement, C) incubation avec le dendrimère A-(B1- (Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 uniquement et D) irradiation à deux photons après incubation avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)6. B) two-photon irradiation only, C) incubation with the A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer only and D) two-photon irradiation after incubation with the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) 6 .
la Figure 15 représente des images de microscopie en transmission de cellules MCF-7 incubées avec A-(Bl-(Cl-(Dl-{El)2)i)2)6 A) non irradiées et B) après irradiation à deux photons. Figure 15 shows transmission microscopy images of MCF-7 cells incubated with non-irradiated A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 A) and B) after two-photon irradiation. .
la Figure 16 représente la phototoxicité sur les cellules MCF-7 du dendrimère A-(B1- (C1-(D1-(E1)2)1)2)6 en lumière naturelle. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque rectangle correspond à une expérience : A) exposition à la lumière naturelle en absence d'incubation avec un dendrimère, B) exposition à la lumière naturelle après incubation avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1- (El)2) 2)6 (incubation 5 h avec du A-(Bl-(Cl-(M-(El)2)i)2)6 à 20 ngmL), C) absence d'exposition à la lumière naturelle en absence d'incubation avec un dendrimère, et D) absence d'exposition à la lumière naturelle après incubation avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)« (incubation 5 h avec du A-(B1-(C1-(D1- (El)2),)2)6 à 20 μ /mL) Figure 16 shows the phototoxicity on MCF-7 cells of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 1 ) 2 ) 6 dendrimer in natural light. The y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each rectangle corresponds to an experiment: A) exposure to natural light in the absence of incubation with a dendrimer, B) exposure to natural light after incubation with the A-dendrimer ( B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6 (incubation 5 h with A- (B1- (Cl- (M- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 to 20 ngmL), C) absence of exposure to natural light in the absence of dendrimer incubation, and D) absence of exposure to natural light after incubation with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I dendrimer 2 ) "(incubation for 5 h with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ),) 2 ) 6 to 20 μ / ml)
la Figure 17 représente sous la forme d'un histogramme l'efficacité de la thérapie photodynamique à deux photons sur des cellules de MCF-7 incubées 5h à une concentration en dendrimères de 5 g/mL. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque rectangle correspond à un dendrimère ; A) contrôle (absence d'incubation avec un dendrimère), B) A-(Bl-(Cl-{Dl-(El)2)i)2)6,Figure 17 shows in histogram form the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h at a dendrimer concentration of 5 g / mL. The y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each rectangle corresponds to a dendrimer; A) control (no incubation with a dendrimer), B) A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6,
C) A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ae)2)i)2)6, D) A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6 et E) A-(B1-(C1-C) A- (BL- (Cl- (Dl (E4 Ae) 2) i) 2) 6, D) A- (BL- (Cl- (Dl (E4 H) 2) i) 2) 6 and E) A- (B1- (C1-
(D1-(E5EI E ÏI)2)I)2)6- la Figure 18 représente l'efficacité de la thérapie photodynamique à deux photons sur des cellules de MCF-7 incubées 5h à des concentrations en dendrimères de 50 μg/mL et 100 g/mL. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque groupe de rectangle correspond à un dendrimère : A) contrôle (absence d'incubation avec un dendrimère), B) A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6, C) À-(B1-(C1-(D1- (E4AC)2),)2)6, D) A-(B1-(C1-(D1-(E H)2)I)2)6 et E) A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/E4H)2)I)2)«. la Figure 19 représente l'efficacité de la thérapie photodynamique à deux photons sur des cellules de MCF-7 incubées 20h à une concentration en dendrimères de 50 g/mL. L'axe des ordonnées correspond au pourcentage de survie cellulaire et chaque rectangle correspond à un dendrimère : A) contrôle (absence d'incubation avec un dendrimère), B) A-(B1-(C1-(D1-(E1)2) 2)6! C) A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6, (B1-(C1-(M-(E4H)2)I)2)6 et E) A-(B1-(C1-(D1-(E5E1/E4H)2)Î)2)6. Fig. 18 shows the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 5 h at dendrimer concentrations of 50 μg / ml and 100 g / mL. The y-axis corresponds to the percentage of cellular survival and each group of rectangle corresponds to a dendrimer: A) control (absence) incubation with a dendrimer), B) A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 , C) A- (B1- (C1- (D1- (E4 AC ) 2 ),) 2 ) 6 , D) A- (B1- (C1- (D1- (EH) 2 ) I) 2) 6 and E) A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4 H ) 2) I) 2) ". Figure 19 shows the efficacy of two-photon photodynamic therapy on MCF-7 cells incubated for 20 h at a concentration of dendrimers of 50 g / mL. The y-axis corresponds to the percentage of cell survival and each rectangle corresponds to a dendrimer: A) control (no incubation with a dendrimer), B) A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6! C) A- (B1- (C1- (D1- (E4AC) 2 ) I) 2) 6, (B1- (C1- (M- (E4H) 2 ) I) 2) 6 and E) A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4H) 2 ) (I) 2 ) 6.
1. Synthèse du chromophore / des dendrimères Exemple 1 : 1. Synthesis of chromophore / dendrimers Example 1:
Iodure de [[4-[éthyI[(2-hydroxyéthyI)amino]phényl]méthyl]triphénylphosphonium (2)
Figure imgf000038_0001
[[4- [ethyl] [(2-hydroxyethyl) amino] phenyl] methyl] triphenylphosphonium iodide (2)
Figure imgf000038_0001
A une solution de 2-(éthylphénylamino)éthanol 1 (3 g, 18.07 mmol), de triphénylphosphine (4.76 g, 18.07 mmol) et de paraformaldéhyde (0.488 g, 5.42 mmol) dans le chloroforme (25 mL), on ajoute du Nal (3.36 g, 18.07 mmol), de l'eau (1.28 mL) et de l'acide acétique (3.6 mL), Le mélange est chauffé à reflux pendant 68 h. De l'eau (40 mL) est ajoutée et le mélange est agité pendant 10 min. La phase aqueuse est extraite avec du CH2C12 et lavée avec du NaHCOs (25 mL) puis de l'eau (25 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées, filtrées et évaporées sous pression réduite. Le résidu est lavé à l'éther pour obtenir des cristaux blancs de 2 (9.88 g). To a solution of 2- (ethylphenylamino) ethanol 1 (3 g, 18.07 mmol), triphenylphosphine (4.76 g, 18.07 mmol) and paraformaldehyde (0.488 g, 5.42 mmol) in chloroform (25 mL), Nal was added. (3.36 g, 18.07 mmol), water (1.28 mL) and acetic acid (3.6 mL), the mixture is refluxed for 68 h. Water (40 mL) is added and the mixture is stirred for 10 minutes. The aqueous phase is extracted with CH 2 Cl 2 and washed with NaHCO 3 (25 mL) and then with water (25 mL). The organic phases are combined, dried, filtered and evaporated under reduced pressure. The residue is washed with ether to give white crystals of 2 (9.88 g).
Rendement: 93% Yield: 93%
Point de fusion: 165-170 °C  Melting point: 165-170 ° C
RMN 1H (CDC13, 300.13 MHz): δ (ppm) 7.79 (m,15H), 6.78 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 2H), 6.48 (d, J=8.7 Hz, 2H), 4.81 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.42 (t, J= 6.2Hz, 2H) 3.35 (m, 2H), 2.70 (t, J= 5.4Hz, 1H), 1.06 (t, J=6.9 Hz, 3H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): δ (ppm) 7.79 (m, 15H), 6.78 (dd, J = 8.7, 2.4 Hz, 2H), 6.48 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.81 (d , J = 12.6 Hz, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.42 (t, J = 6.2Hz, 2H) 3.35 (m, 2H), 2.70 (t, J = 5.4Hz, 1H), 1.06 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): δ (ppm) 147.3 (d, J= 2.6 Hz), 134.4 (d, J= 2.3 Hz), 133.3, (d, J= 9.6 Hz), 131.8 (d, J= 5.1 Hz), 129.5 (d, J= 12.3 Hz), 1 15.3 (d, J= 85.0 Hz), 1 1 1.4, 110.3 (d, J= 8.7 Hz), 58.1, 51.4, 44.4, 29.8 (d, J= 46.3 Hz), 11.2. RMN J1P (CDC13, 121.58 MHz): δ (ppm) 20.42. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): δ (ppm) 147.3 (d, J = 2.6 Hz), 134.4 (d, J = 2.3 Hz), 133.3, (d, J = 9.6 Hz), 131.8 (d, J = 5.1 Hz), 129.5 (d, J = 12.3 Hz), 1 15.3 (d, J = 85.0 Hz), 1 1 1.4, 110.3 (d, J = 8.7 Hz), 58.1, 51.4, 44.4, 29.8 (d , J = 46.3 Hz), 11.2. NMR J1 P (CDC1 3, 121.58 MHz): δ (ppm) 20.42.
Exemple 2 : 5-Iodo-2-thiophènecarboxaldéhyde (3)
Figure imgf000039_0001
Example 2: 5-Iodo-2-thiophenecarboxaldehyde (3)
Figure imgf000039_0001
A un mélange de 2-thiophènecarboxaldéÎiyde (1.79 g, 15.92 mmol) et de diiode (2.00 g, 7.96 mmol) dans le tétrachlorure de carbone (4 mL), on ajoute de l'acide iodique (0.70 g, 3.98 mmol), de l'eau distillée (3 mL), de l'acide acétique (8 mL) et de l'acide sulfurique concentré (0.12 mL). Le mélange est agité à 80°C pendant lh puis à température ambiante pendant 12h. Les phases sont séparées, puis la phase organique est lavée avec une solution à 2% de NaHC03 puis avec une solution de Na2S203. La phase organique est séchée sur MgS04, puis évaporée sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice avec un mélange AcOEt / Heptane (1 :9) pour donner des cristaux jaunes de 3 (2.95 g). To a mixture of 2-thiophenecarboxaldehyde (1.79 g, 15.92 mmol) and diiodine (2.00 g, 7.96 mmol) in carbon tetrachloride (4 mL) was added iodic acid (0.70 g, 3.98 mmol), distilled water (3 mL), acetic acid (8 mL) and concentrated sulfuric acid (0.12 mL). The mixture is stirred at 80 ° C. for 1 hour and then at room temperature for 12 hours. The phases are separated, then the organic phase is washed with a 2% solution of NaHCO 3 and then with a solution of Na 2 S 2 O 3 . The organic phase is dried over MgSO 4 and then evaporated under reduced pressure. The crude product is purified by silica gel column chromatography with AcOEt / Heptane (1: 9) to give yellow crystals of 3 (2.95 g).
Rendement : 78% Yield: 78%
Point de fusion : 53°C Melting point: 53 ° C.
RMN 1H (CDC13, 300.13 MHz): 9.77 (s, 1H); 7.39 (s, 2H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 9.77 (s, 1H); 7.39 (s, 2H).
RMN 13C NMR (CDCI3, 75.47 MHz): 181.1, 149.6, 138.2, 137.0, 87.8. NMR 13 C NMR (CDCl3, 75.47 MHz): 181.1, 149.6, 138.2, 137.0, 87.8.
Exemple 3 : Example 3
f¾-2-[Ethyl-[4-[(lE)-2-(5-iodo-2-thiényl)éthényI]phényI]amino]éthanoI (4 £) f¾-2- [Ethyl- [4 - [(1E) -2- (5-iodo-2-thienyl) ethenyl] phenyl] amino] ethanoyl (4%)
Figure imgf000039_0002
Figure imgf000039_0002
Sous argon, on dissout l'aldéhyde 3 (1 ,95 g, 8,19 mmol) et le sel de phosphonium 2 (6.32 g, 12.29 mmol) dans du CH2C12 (50 mL) fraîchement distillé, puis tBuOK (1.84 g, 16.38 mmol) est ajouté. La solution est agitée à température ambiante pendant 15h. Le mélange est filtré sur silice, puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice, en éîuant avec un mélange CH2C12 / AcOEt (98:2 à 92:8). On obtient un mélange de stéréoisomères 4 ZIE (2.16 g). 1.34 g de ce mélange est dissous dans l'éther (50 mL) et une solution de diiode dans l'éther (1 g.L"1, 3.4 mL) est ajoutée. Le mélange est agité sous irradiation (lampe tungstène, 75W) à température ambiante pendant 20h. La couleur de la solution passe alors du jaune au vert. Après un lavage au Na2S203, la phase éthérée est séchée sur MgS0 , filtrée et évaporée sous pression réduite. On obtient des cristaux jaunes de 4 E (1.02 g). Under argon, aldehyde 3 (1.95 g, 8.19 mmol) and phosphonium salt 2 (6.32 g, 12.29 mmol) are dissolved in freshly distilled CH 2 C1 2 (50 mL) and then tBuOK (1.84 g, 16.38 mmol) is added. The solution is stirred at ambient temperature for 15 hours. The mixture is filtered through silica and the solvent is then evaporated under reduced pressure. The crude product is purified by column chromatography on silica gel, eluting with a CH 2 Cl 2 / AcOEt mixture (98: 2 to 92: 8). A mixture of ZIE stereoisomers (2.16 g) is obtained. 1.34 g of this mixture is dissolved in ether (50 ml) and a solution of diiod in ether (1 gl -1 , 3.4 ml) is added, the mixture is stirred under irradiation (tungsten lamp, 75 W) at room temperature. ambient during 20h. The color of the solution changes from yellow to green. After washing with Na 2 S 2 O 3, the ether phase is dried over MgSO 4, filtered and evaporated under reduced pressure. Yellow crystals of 4 E (1.02 g) are obtained.
Rendement: 50% Yield: 50%
Point de fusion: 93 °C. Melting point: 93 ° C.
RMN Ή (CDC13, 300.13 MHz): 7.34 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.12 (d, J=3.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 16 Hz, 1H), 6.78 (d, J=16 Hz, 1H), 6.74 (d, J=5.S Hz, 2H), 6.65 (d, J=3.7 Hz, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.52 (m, 4H), 1.65 (t, J= 5.8 Hz, 1 H), 1.24 (t, J= 7 Hz, 3H). NMR Ή (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 16Hz, 1H), 6.74 (d, J = 5.SHz, 2H), 6.65 (d, J = 3.7Hz, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.52 (m, 4H), 1.65 ( t, J = 5.8 Hz, 1H), 1.24 (t, J = 7 Hz, 3H).
RMN °C (CDCI3, 75.47 MHz): 149.7, 147.7, 137.2, 129.1, 127.5, 125.6, 124.7, 116.5, 112.3, 70.2, 60.0, 52.2, 45.4, 11.8. NMR ° C (CDCl 3 , 75.47 MHz): 149.7, 147.7, 137.2, 129.1, 127.5, 125.6, 124.7, 116.5, 112.3, 70.2, 60.0, 52.2, 45.4, 11.8.
Exemple 4 : Example 4
4- [2- [Ethyl- [4- [ (LE)-2-(5-iodo-2-thiény 1] éthényl] phényl] amino] éthoxy] b enzaldéhy de (5)  4- [2- [Ethyl- [4 - [(LE) -2- (5-iodo-2-thienyl) ethenyl] phenyl] amino] ethoxy] benzaldehyde (5)
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000040_0001
Sous argon, on dissout 4 E (0.5 g, 1.25 mmol), le 4-hydiOxybenzaldéhyde (0.31 g, 2.51 mmol) et de la triphénylphosphine (0.66 g, 2.51 mmol) dans du THF (15 mL) sous argon. Une solution de DIAD (0.5 mL, 2.51 mmol) dans le THF (3 mL) est ensuite ajoutée goutte à goutte et agitée à température ambiante pendant une nuit. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par c rromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec du CH2Ci2 pour donner des cristaux jaunes de 5 (0.51 g). Under argon, 4 E (0.5 g, 1.25 mmol), 4-hydioxybenzaldehyde (0.31 g, 2.51 mmol) and triphenylphosphine (0.66 g, 2.51 mmol) in THF (15 mL) were dissolved under argon. A solution of DIAD (0.5 mL, 2.51 mmol) in THF (3 mL) is then added dropwise and stirred at room temperature overnight. The solvents are evaporated under reduced pressure and the crude product is purified by column chromatography on silica gel eluting with CH 2 Cl 2 to give yellow crystals (0.51 g).
Rendement: 81% Yield: 81%
Point de fusion: 108 °C. Melting point: 108 ° C.
RMN 1H (CDCl3î 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J= 8.8 Hz,1 H NMR (CDCl 3, 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz,
2H), 7.12 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 7.01 (d, j= 8.7 Hz, 2H), 6.94 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 16 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 6.65 (d, J=3. 7 Hz, 1H), 4.24 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.82 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.55 (m, 2H), 1.25 (t, J= 7 Hz, 3H). 2H), 7.12 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.01 (d, j = 8.7 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 16 Hz, 1H) , 6.72 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.65 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 5.9 Hz, 2H). , 3.55 (m, 2H), 1.25 (t, J = 7 Hz, 3H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 190.9, 163.7, 149.9, 147.2, 137.5, 132.1, 130.1, 129.4, 127.9, 125.9, 124.7, 116.7, 114.8, 111.9, 70.6, 65.8, 49.4, 45.8, 12.4. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 190.9, 163.7, 149.9, 147.2, 137.5, 132.1, 130.1, 129.4, 127.9, 125.9, 124.7, 116.7, 114.8, 111.9, 70.6, 65.8, 49.4, 45.8, 12.4.
Exemple 5 : 4- [2- [Ethyl- [4- [(1 £)-2-(5-iodo-2-thiényI] éthény 1] phény 1] am in o] éthoxy] phén ol (6E) Example 5 4- [2- [Ethyl- [4 - [(1E) -2- (5-iodo-2-thienyl) ethenyl] phenyl] amino] ethoxy] phenol (6E)
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0001
Sous argon, on dissout l'aldéhyde 3 (0.556 g, 2.34 mmol) et le sel de phosphonium 8 (2.09 g, 3.18 mmol) dans du CH2C12 fraîchement distillé (25 mL), puis tBuO (0.53 g, 4.67 mmol) est ajouté. Le mélange est agité à température ambiante pendant 15h. Le mélange est filtré sur un mélange célite/silice. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec du CH2CI2. On obtient un mélange de stéréo isomères 6 E/Z (45/55). Ce mélange 6 E/Z est dissous dans Péther et une solution de I2 dans Et20 est ajoutée. Le mélange est agité sous irradiation (lampe tungstène, 75W) pendant 20 h. Après un lavage au Na2S203, la phase éthérée est séchée sur MgS04, filtrée et évaporée sous pression réduite. On obtient des cristaux jaunes de 6 E (0.62 g). Under argon, aldehyde 3 (0.556 g, 2.34 mmol) and phosphonium salt 8 (2.09 g, 3.18 mmol) were dissolved in freshly distilled CH 2 C1 2 (25 mL), followed by tBuO (0.53 g, 4.67 mmol). ) is added. The mixture is stirred at ambient temperature for 15 hours. The mixture is filtered through a celite / silica mixture. The solvent is evaporated off under reduced pressure and the crude product is purified by chromatography on a column of silica gel, eluting with CH 2 Cl 2 . A mixture of stereo isomers 6 E / Z (45/55) is obtained. This 6 E / Z mixture is dissolved in ether and a solution of I 2 in Et 2 O is added. The mixture is stirred under irradiation (tungsten lamp, 75W) for 20 hours. After washing with Na 2 S 2 O 3 , the ether phase is dried over MgSO 4 , filtered and evaporated under reduced pressure. Yellow crystals of 6 E (0.62 g) are obtained.
Rendement : 54%. Yield: 54%.
Point de fusion: 114 °C. Melting point: 114 ° C.
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 7.34 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.1 1 (d, J= 3.8 Hz, IH), 6.98 (d, J= 16 Hz, IH), 6.78 (d, J=16 Hz, IH), 6.77 (d, J= 2.5 Hz, 4H), 6.71 (d, J= 9 Hz, 2H), 6.64 (d, J= 3.8 Hz, IH), 4.53 (s, IH), 4.09 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.74 (t, J=6 Hz, 2H) 3.53 (q, 2H), 1.24 (t, J= 6.9 Hz, 3H).  1H NMR (CDCl3, 300.13 MHz): 7.34 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 16Hz, 1H), 6.78 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 2.5 Hz, 4H), 6.71 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 4.53 (s, 1H). , 4.09 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6 Hz, 2H) 3.53 (q, 2H), 1.24 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
RMN I3C (CDCI3, 75.47 MHz): 152.7, 149.9, 149.7, 147.4, 137.4, 129.4, 127.8, 125.8, 124.4, 116.5, 116.1, 115.5, 1 11.8, 70.3, 66.0, 49.6, 45.6, 12.3. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 152.7, 149.9, 149.7, 147.4, 137.4, 129.4, 127.8, 125.8, 124.4, 116.5, 116.1, 115.5, 11.8, 70.3, 66.0, 49.6, 45.6, 12.3.
Exemple 6 : 4-[2-(Ethylphénylamino)éthoxy]phénoI (7) Example 6: 4- [2- (Ethylphenylamino) ethoxy] phenol (7)
Figure imgf000041_0002
Figure imgf000041_0002
Sous argon, on dissout le 2-[éthylphényl)amino]éthanol (1) (3.00 g, 18.07 mmol), l'hydroquinone (3.98 g, 36.14 mmol) et PPh3 (9.51 g, 36.14 mmol) dans du THF (55 mL) anhydre. Une solution de DIAD (7.16 mL, 36.14 mmol) dans le THF (35 mL) est ensuite ajoutée goutte à goutte et le mélange est agité à température ambiante pendant 15 h. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec du CH2CI2. Des cristaux jaunes de 7 sont obtenusUnder argon, 2- [ethylphenyl) amino] ethanol (1) (3.00 g, 18.07 mmol), hydroquinone (3.98 g, 36.14 mmol) and PPh 3 (9.51 g, 36.14 mmol) in THF (55 mL) anhydrous. A solution of DIAD (7.16 mL, 36.14 mmol) in THF (35 mL) is then added dropwise and the mixture is stirred at room temperature for 15 h. The solvent is evaporated off under reduced pressure and the crude product is purified by chromatography on silica gel column eluting with CH 2 Cl 2 . Yellow crystals of 7 are obtained
(1.68 g). (1.68 g).
Rendement : 36%  Yield: 36%
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 7.38 (m, 2H), 6.87 (m, 7H), 6.58 (s, 1H), 4.17 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.80 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.59 (q, 2H), 1.31 (t, J= 6.9 Hz, 3H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.38 (m, 2H), 6.87 (m, 7H), 6.58 (s, 1H), 4.17 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.3). Hz, 2H), 3.59 (q, 2H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 152.6, 149.6, 147.4, 129.3, 116.1, 115.5, 111.9, 66.0, 49.6, 45.5, 12.1. 13 C NMR (CDCl3, 75.47 MHz): 152.6, 149.6, 147.4, 129.3, 116.1, 115.5, 111.9, 66.0, 49.6, 45.5, 12.1.
Exemple 7 : ïodure de [[4-[éthyl[2-(4-hydroxyphénoxy)éthyl]amino]phényl]méthyI]- triphénylphosphonium (8) Example 7: [[4- [Ethyl [2- (4-hydroxyphenoxy) ethyl] amino] phenyl] methyl] triphenylphosphonium iodide (8)
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000042_0001
Un mélange de 7 (0.600 g, 2.34 mmol), PPh3 (0.552 g, 2.34 mmol) et para-formaldéhyde (0.063 g, 0.70 mmol) est dissous dans du toluène (8 mL). Nal (0.434 g, 2.34 mmol), l'eau (0.4 mL) et l'acide acétique (1.2 mL) sont ensuite ajoutés. La solution est agitée 66h à 61°C. De l'eau (30 mL) est ajoutée et le mélange est agité 10 min. La phase aqueuse est extraite avec du CH2CÎ2 puis lavée avec du NaHC03 (20 mL) et de l'eau (20 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées et concentrées sous vide. Le résidu est lave avec de l'EtsO pour- donner des cristaux gris (1.362 g). A mixture of 7 (0.600 g, 2.34 mmol), PPh 3 (0.552 g, 2.34 mmol) and para-formaldehyde (0.063 g, 0.70 mmol) is dissolved in toluene (8 mL). Nal (0.434 g, 2.34 mmol), water (0.4 mL) and acetic acid (1.2 mL) are then added. The solution is stirred for 66 h at 61 ° C. Water (30 mL) is added and the mixture is stirred for 10 min. The aqueous phase is extracted with CH 2 Cl 2 and then washed with NaHCO 3 (20 mL) and water (20 mL). The organic phases are combined, dried and concentrated under vacuum. The residue is washed with EtsO to give gray crystals (1.362 g).
Rendement : 88% Yield: 88%
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): δ (ppm) 7.64 (m, 15H), 7.05 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 6.76 (m, 4H), 6.44 (d, J^8.7 Hz, 2H), 4.88 (d, J= 12.9 Hz, 2H), 4.05 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.77 (s,lH), 3.71 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.48 (q, 2H), 1.22 (t, 1=6.9 Hz, 3H).  1 H NMR (CDCl 3, 300.13 MHz): δ (ppm) 7.64 (m, 15H), 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.76 (m, 4H), 6.44 (d, J = 8.7 Hz, 2H). , 4.88 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 4.05 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.77 (s, 1H), 3.71 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.48 (q, 2H). , 1.22 (t, 1 = 6.9 Hz, 3H).
RMN Ï3C (DMSO, 75.47 MHz), δ (ppm) 151.2, 151.0, 147.2 (d, J - 2.7 Hz), 134.8 (d, J = 2.9 Hz), 133.9 (d, J= 9.7 Hz), 131.0 (d, J= 9.7 Hz), 129.9 (d, J= 12.2 Hz), 118.1 (d, J= 84.7 Hz), 115.6, 1 15.2, 112.4 (d, J= 8.7 Hz), 111.5, 65.7, 48.8, 44.5, 27.5 (d, J= 45.0 Hz), 11.6. RMN 31P (DMSO, 121.58 MHz): δ (ppm) 21.1. NMR 13 C (DMSO, 75.47 MHz), δ (ppm) 151.2, 151.0, 147.2 (d, J - 2.7 Hz), 134.8 (d, J = 2.9 Hz), 133.9 (d, J = 9.7 Hz), 131.0 ( d, J = 9.7 Hz), 129.9 (d, J = 12.2 Hz), 118.1 (d, J = 84.7 Hz), 115.6, 1 15.2, 112.4 (d, J = 8.7 Hz), 111.5, 65.7, 48.8, 44.5 , 27.5 (d, J = 45.0 Hz), 11.6. 31 P NMR (DMSO, 121.58 MHz): δ (ppm) 21.1.
Exemple 8 : Example 8
Acétate de 4-[2-[éthyl-[4-[(l£ -2-(5-iodo~2-thiényl]éthényl]p ényl3aminoJéthoxy]phényle
Figure imgf000043_0001
4- [2- [Ethyl- [4 - [(1β- (5-iodo-2-thienyl) ethenyl] -p-enyl-amino-ethoxy] -phenyl acetate
Figure imgf000043_0001
Sous argon, on ajoute à 0°C de la DMAP (22 mg, 0.18 mmol) à une solution de 6 £ (0.62 g, 1.26 mmol) dans le CH2Ch (36 mL). De la ùïéthylamine (0.39 mL) est ensuite ajoutée à 0°C, puis le chlorure d'acétyle (0.19 mL, 2.73 mmol) est additionné lentement. Le mélange est agité à température ambiante pendant 16 h. De la glace puis une solution aqueuse saturée de NaHC03 (20 mL) sont ajoutées. La phase aqueuse est extraite avec du CH2C12 (3 x 15 mL). Les phases organiques réunies sont séchées et évaporées sous pression réduite, et le produit brut est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec du CH2CI2 afin d'obtenir des cristaux jaunes de 9 (0.61 g). Under argon, DMAP (22 mg, 0.18 mmol) was added at 0 ° C to a solution of 6 L (0.62 g, 1.26 mmol) in CH 2 CH (36 mL). Ethylamine (0.39 mL) is then added at 0 ° C and then the acetyl chloride (0.19 mL, 2.73 mmol) is added slowly. The mixture is stirred at ambient temperature for 16 hours. Ice and then a saturated aqueous solution of NaHCO 3 (20 mL) are added. The aqueous phase is extracted with CH 2 Cl 2 (3 x 15 mL). The combined organic phases are dried and evaporated under reduced pressure, and the crude product is purified by column chromatography on silica gel eluting with CH 2 Cl 2 in order to obtain yellow crystals of 9 (0.61 g).
Rendement : 97% Yield: 97%
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 7.34 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.11 (d, J=3.7 Hz 1H), 7.01 (d, J=9 Hz, 2H), 6.98 (d, J= 16 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 9.3 Hz, 2H), 6.78 (d, J= 16 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 9 Hz, 2H), 6.64 (d, J= 4 Hz, 1H), 4.11 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.74 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.49 (q, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.22 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.34 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 3.7 Hz 1H), 7.01 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.98 (d, J). = 16 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.64 (d, J = 4) Hz, 1H), 4.11 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.49 (q, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 169.8, 156.3, 150.0, 147.3, 144.4, 137.4, 129.5, 127.8, 125.8, 124.6, 122.4, 116.6, 115.0, 111.82, 111.8, 70.3, 65.8, 49.6, 45.7, 2.3. 13 C NMR (CDCl3, 75.47 MHz): 169.8, 156.3, 150.0, 147.3, 144.4, 137.4, 129.5, 127.8, 125.8, 124.6, 122.4, 116.6, 115.0, 111.82, 111.8, 70.3, 65.8, 49.6, 45.7, 2.3.
Exemple 9 : Acétate de 4-[2-[éthyl-[4-[(l£)-2-(5-triméthyIsilyl-2- thiény 1] éthényl j phényl] amino] éthoxy] phén le (10) Example 9: 4- [2- [Ethyl- [4 - [(1 H) -2- (5-trimethylsilyl-2-thienyl) ethenyl] phenyl] amino] ethoxy] phenyl acetate (10)
Figure imgf000043_0002
Figure imgf000043_0002
L'air est purgé d'une solution de 9 (0.37 g, 0.70 mmol) et de Et3N (1 mL) dans du toluène (5 mL) par bullage d'argon pendant 20 min. La solution est chauffée à 40°C, puis du Cul (3 mg, 0.02 mmol), du Pd(PPh3)2Cl2 (12 mg, 0.02 mmol) et de l'éthynyltiiméthylsilane (0.19 mL, 1.31 mmol) sont ajoutés successivement. Le mélange est alors agité à 40°C pendant 16 h. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par colonne chromatographique en éluant avec un mélange Ώ¾02/ heptane (6:4). Des cristaux orange de 10 sont obtenus (0.33g). Rendement: 94% The air is purged with a solution of 9 (0.37 g, 0.70 mmol) and Et 3 N (1 mL) in toluene (5 mL) by bubbling argon for 20 min. The solution is heated to 40 ° C., then Cul (3 mg, 0.02 mmol), Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 (12 mg, 0.02 mmol) and ethynyltiimethylsilane (0.19 mL, 1.31 mmol) are added. successively. The mixture is then stirred at 40 ° C. for 16 hours. The solvents are evaporated under reduced pressure and the crude product is purified by chromatographic column, eluting with a Ώ¾0 2 / heptane (6: 4) mixture. Orange crystals of 10 are obtained (0.33 g). Yield: 94%
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 7.37 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.12 (d, J= S.9 Hz, IH), 7.03 (d, J=9 Hz, 2H), 6.98 (d, J= 16 Hz, IH), 6.90 (d, J= 9 Hz, 2H), 6.87 (d, J= 16 Hz, IH), 6.83 (d, J= 3.9 Hz, IH), 6.72 (d, J= 9 Hz, 2H), 4.13 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.77 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.54 (q, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.26 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.30 (s, 9 H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.37 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.12 (d, J = S.9 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.98 ( d, J = 16Hz, 1H), 6.90 (d, J = 9Hz, 2H), 6.87 (d, J = 16Hz, 1H), 6.83 (d, J = 3.9Hz, 1H), 6.72 (d, J = 9 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.77 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.54 (q, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.26 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.30 (s, 9H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 169.8, 156.4, 147.5, 145.8, 144.5, 133.4, 129.8, 128.0, 124.7, 124.3, 122.5, 120.2, 117.0, 115.1, 111.9, 99.3, 98.4, 65.9, 49.7, 45.8, 12.4, 0.0. 13 C NMR (CDCl3, 75.47 MHz): 169.8, 156.4, 147.5, 145.8, 144.5, 133.4, 129.8, 128.0, 124.7, 124.3, 122.5, 120.2, 117.0, 115.1, 111.9, 99.3, 98.4, 65.9, 49.7, 45.8, 12.4, 0.0.
Exemple 10 : 4-[2-[éthyI-[4-[(lE)-2-(5-triméthylsilyl-2- thiény 1] éthény 1] ph ényl] amino] éthox ] b enzaldéh de (11) Example 10: 4- [2- [Ethyl- [4 - [(1E) -2- (5-trimethylsilyl-2-thienyl) ethenyl] phenyl] amino] ethoxy] benzalde (11)
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0001
Une solution de 5 (0.774 g, 1.54 mmol) et de Et3N (3 mL) dans le toluène (15 mL) est dégazée sous argon pendant 20 min. La solution est chauffée à 40°C, puis Cul (6 mg, 0.03 mmol), Pd(PPh3)2CI2 (22 mg, 0.03 mmol) et de l'éthynyltriméthylsilane (0.33 mL, 2.31 mmol) sont ajoutés successivement. Le mélange est alors agité à 40°C pendant 16h. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par colonne chromatographique avec un mélange CH C12/ heptane (6/4 jusqu'à 7/3). On obtient 0.634 g du mélange de stéréoisomères 11 Z/E (10/90), sous la forme d'une huile brune. A solution of 5 (0.774 g, 1.54 mmol) and Et 3 N (3 mL) in toluene (15 mL) was degassed under argon for 20 min. The solution is heated to 40 ° C, then Cul (6 mg, 0.03 mmol), Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 (22 mg, 0.03 mmol) and ethynyltrimethylsilane (0.33 mL, 2.31 mmol) are added successively. The mixture is then stirred at 40 ° C. for 16 hours. The solvents are evaporated under reduced pressure and the crude product is purified by column chromatography with a mixture CH 2 C1 / heptane (6/4 to 7/3). 0.634 g of the mixture of stereoisomers 11 Z / E (10/90) is obtained in the form of a brown oil.
Rendement: 87% Yield: 87%
Stéréoisomère majoritaire (E) : Majority stereoisomer (E):
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): δ (ppm) 9.9 (s, IH), 7.9 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.4 (d, J= 9 Hz,1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): δ (ppm) 9.9 (s, 1H), 7.9 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.4 (d, J = 9 Hz,
2H), 7.1 (d, J=3.7 Hz, IH), 7.01 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 6.97 (d, J= 16 Hz, IH), 6.85 (d, J= 16 Hz, IH), 6.82 (d, J= 3.8 Hz, IH), 6.7 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 4.2 (t, J= 6 Hz, 2H), 3.8 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.5 (q, 2H), 1.3 (t, J= 7 Hz, 3H), 0.3 (s, 9H). 2H), 7.1 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 16Hz, 1H), 6.85 (d, J = 16Hz, 1H). , 6.82 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 6.7 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.2 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.8 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.5 (q, 2H), 1.3 (t, J = 7 Hz, 3H), 0.3 (s, 9H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): δ (ppm) 190.9, 163.8, 147.5, 145.8, 133.6, 132.2, 130.4, 129.8, 128.2, 124.6, 120.4, 117.3, 115.0, 112.1, 111.7, 99.6, 98.4, 66.1, 49.7, 46.1, 12.6, 0.1. 13 C NMR (CDCl3, 75.47 MHz): δ (ppm) 190.9, 163.8, 147.5, 145.8, 133.6, 132.2, 130.4, 129.8, 128.2, 124.6, 120.4, 117.3, 115.0, 112.1, 111.7, 99.6, 98.4, 66.1, 49.7, 46.1, 12.6, 0.1.
Exemple 11 : 9,9-Dibutyl-2,7-diiodo-9H-fluorènc (12)
Figure imgf000045_0001
Example 11: 9,9-Dibutyl-2,7-diiodo-9H-fluorene (12)
Figure imgf000045_0001
Dans un ballon de 20 mL surmonté d'un réfrigérant, on mélange du «-Bu4NBr (0.31 g, 0.96 mmol) et du OH (2.68 g, 47.8 mmol) dans de l'eau (2.7 mL) et l'on chauffe à 65°C. Puis une solution de 2,7-diiodo-9H-fluorene (2.0 g, 4.78 mmol) et de 1-bromobutane (3.93 g, 28.68 mmol) dans le toluène (5 mL) est ajoutée, et le mélange est agité à 65°C pendant 1 heure. Ensuite, la phase aqueuse est extraite avec CH2C12. Les phases organiques réunies sont séchées sur Na2SC>4, avant d'être filtrées sur silice. Les solvants sont évaporés pour obtenir 12 sous la forme de cristaux blancs (2.33 g). In a 20 ml flask surmounted by a condenser, "-Bu 4 NBr (0.31 g, 0.96 mmol) and OH (2.68 g, 47.8 mmol) are mixed in water (2.7 ml) and heated to 65 ° C. Then a solution of 2,7-diiodo-9H-fluorene (2.0 g, 4.78 mmol) and 1-bromobutane (3.93 g, 28.68 mmol) in toluene (5 mL) is added, and the mixture is stirred at 65 °. C for 1 hour. Then, the aqueous phase is extracted with CH 2 Cl 2 . The combined organic phases are dried over Na 2 SC 4, before being filtered through silica. The solvents are evaporated to give 12 as white crystals (2.33 g).
Rendement: 92% Yield: 92%
Point de fusion: 130-131 °C Melting point: 130-131 ° C
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): δ (ppm) 7.65 (dd, J= 8.3 Hz, J= 1.7 Hz, 2H), 7.64 (d, J== 1.7 Hz, 2H), 7.40 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 1.90 (m, 4H), 1.08 (m, 4H), 0.68 (t, J= 7.3 Hz, 6H), 0.56 (m, 4H).  1 H NMR (CDCl 3, 300.13 MHz): δ (ppm) 7.65 (dd, J = 8.3 Hz, J = 1.7 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.3). Hz, 2H), 1.90 (m, 4H), 1.08 (m, 4H), 0.68 (t, J = 7.3 Hz, 6H), 0.56 (m, 4H).
Exemple 12 : 4-[2-[[4-[(lJE -2-[5-[(9,9-dibutyI-7-iodo-9H-fluorèn-2-yl)éthynyl]-2- thiényl]éthényl]phényl] éthylamino] éthoxyjbenzaidéhyde (13) Example 12: 4- [2 - [[4 - [(l J E -2- [5 - [(9,9-dibutyI-7-iodo-9H-fluoren-2-yl) ethynyl] -2-thienyl] ethenyl] phenyl] ethylamino] ethoxybenzaldehyde (13)
Figure imgf000045_0002
Figure imgf000045_0002
Une solution de 11 (0.63 g, 1.34 mmol), de 9,9-dibutyl-2,7-diiodo-9H-fluorène 12 (2.13 g, 4.01 mmol) et de Et3N (2.4 mL) dans le toluène (12 mL) est dégazée sous argon pendant 20 min. La solution est chauffée à 40°C, puis le Cul (5.7 mg, 0.03 mmol) et le Pd(PPh3)2Cl2 (21 mg, 0.03 mmol) sont ajoutés. Une solution de TBAF dans le THF (1 M, 0.80 mmol) préalablement dégazée sous argon est alors ajoutée. Le mélange est agité à 40°C pendant 16h, puis les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par colonne chromatographique en éluant avec un mélange CH2Cl2/heptane (6:4). Des cristaux oranges de 13 sont obtenus (0.83 g). A solution of 11 (0.63 g, 1.34 mmol), 9,9-dibutyl-2,7-diiodo-9H-fluorene 12 (2.13 g, 4.01 mmol) and Et 3 N (2.4 mL) in toluene (12 mL) is degassed under argon for 20 min. The solution is heated to 40 ° C, then the Cul (5.7 mg, 0.03 mmol) and Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 (21 mg, 0.03 mmol) are added. A solution of TBAF in THF (1 M, 0.80 mmol) previously degassed under argon is then added. The mixture is stirred at 40 ° C. for 16 h, then the solvents are evaporated under reduced pressure and the crude product is purified by chromatographic column, eluting with a CH 2 Cl 2 / heptane (6: 4) mixture. Orange crystals of 13 are obtained (0.83 g).
Rendement: 77% Yield: 77%
Point de fusion: 146 °C. RMN JH (CDCI3, 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.68 (dd, J= 1.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, j= 1.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.18 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.01 (d, j= 8. 7 Hz, 2H), 6.96 (d, J= 16 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 15.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 5 Hz, 2Η), 4.25(t, J= 6.3 Hz, 2Η), 3.83 (t, J= 5. 7 Hz, 2Η), 3.56 (q, 2Η), 1.96 (m, 4Η), 1.26 (t, J= 7.2 Hz, 3Η), 1.14 (m, 4Η), 0.72 (t, J= 7.2 Hz, 6Η), 0.56 (m, 4Η). Melting point: 146 ° C. NMR J (CDCl3, 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.68 (dd, J = 1.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.63 ( d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, j = 1.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.01 (d, j = 8. 7 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 16 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 5 Hz, 2Η), 4.25 (t, J = 6.3 Hz, 2Η), 3.83 (t, J = 5.7 Hz, 2Η), 3.56 (q, 2Η), 1.96 (m, 4Η), 1.26 (t, J = 7.2 Hz, 3Η), 1.14 (m, 4Η), 0.72 (t, J = 7.2 Hz, 6Η), 0.56 ( m, 4Η).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 190.6, 163.4, 153.2, 150.0, 147.0, 145.5, 140.2, 139.8, 135.8, 132.5, 131.87, 131.82, 130.3, 129.9, 129.3, 127.8, 125.4, 124.7, 124.6, 121.7, 121.5, 120.2, 119.6, 116.9, 1 14.5, 111.7, 94.6, 92.9, 83.7, 65.6, 55.1, 49.3, 45.6, 39.9, 29.5, 25.7, 22.8, 13.6, 12.2. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 190.6, 163.4, 153.2, 150.0, 147.0, 145.5, 140.2, 139.8, 135.8, 132.5, 131.87, 131.82, 130.3, 129.9, 129.3, 127.8, 125.4, 124.7, 124.6, 121.7. , 121.5, 120.2, 119.6, 116.9, 1 14.5, 111.7, 94.6, 92.9, 83.7, 65.6, 55.1, 49.3, 45.6, 39.9, 29.5, 25.7, 22.8, 13.6, 12.2.
HRMS (ES+) : m/z 826.21862 calculé pour C46H46N02INaS [(M+Na)+], trouvé 826.2185.  HRMS (ES +): m / z 826.21862 calculated for C46H46NO2INaS [(M + Na) +], found 826.2185.
Exemple 13 : Acétate de 4-[2-[[4-[(1,Ε)-2-[5-[2-[9,9-<1¾αΐγ1-7-[2-[5-[(1£)-2-[4-[έ^1-[2-[4- (f ormyl)-phénoxy] éthyl] aminojphényl] éthényl] -2-thiényl] ethynyl] -9iî-fluorèn-2- yl] eth n l] -2-thién l] éthény ljphény 1] éthy lamino] éthoxy] phényle (14) EXAMPLE 13 Acetate of 4- [2 - [[4 - [(1, Ε) -2- [5- [2- [9,9- <1¾αΐγ] -7- [2- [5 - [(1 £) 2- [4- [1- [2- [4- (Ormyl) phenoxy] ethyl] amino] phenyl] ethenyl] -2-thienyl] ethynyl] -9H-fluoren-2-yl] eth nl] - 2-thienyl] ethenylphenyl] ethylamino] ethoxy] phenyl (14)
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000046_0001
(14)  (14)
Une solution de 10 (0.33 g, 0.66 mmol), de 13 (0.48 g, 0.60 mmol) et de Et3N (2.8 mL) dans le toluène (14 mL) est dégazée sous argon pendant 20 min. La solution est chauffée à 40°C, puis le Cul (2.3 mg, 12 μιηοΐ) et le Pd(PPh3)2Cl2 (8.4 mg, 12 μηιοΐ) sont ajoutés. Une solution de TBAF dans le THF (1 M, 0.42 mmol) préalablement dégazée sous argon est alors ajoutée, et le mélange est agité à 40°C pendant 16h. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit brut est purifié par colonne chromatographique en éluant avec un mélange
Figure imgf000046_0002
(7:3). Des cristaux oranges de 14 sont obtenus (0.46 g). A solution of 10 (0.33 g, 0.66 mmol), 13 (0.48 g, 0.60 mmol) and 3 N Et (2.8 mL) in toluene (14 mL) was degassed under argon for 20 min. The solution is heated to 40 ° C, then the Cul (2.3 mg, 12 μιηοΐ) and Pd (PPh 3 ) 2 Cl2 (8.4 mg, 12 μηιοΐ) are added. A solution of TBAF in THF (1 M, 0.42 mmol) previously degassed under argon is then added, and the mixture is stirred at 40 ° C. for 16 h. The solvents are evaporated under reduced pressure and the crude product is purified by chromatographic column, eluting with a mixture
Figure imgf000046_0002
(7: 3). Orange crystals of 14 are obtained (0.46 g).
Rendement: 70% Yield: 70%
Point de fusion: 160 °C. Melting point: 160 ° C.
RMN 1H (CDCI3, 300,13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.68 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.52 (m, 4H), 7.39 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.19 (d, J=4 Hz, 2H), 7.01 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.00 (2xd, J= 16 Hz, 2H), 6.90 (s, 4H), 6.89 (m, 2H), 6.85 (d, J=16 Hz, 2H), 6.73 (d, J=8.9 Hz, 2H), 6.72 (d, J=8.9 Hz, 2H), 4.24 (t, J=6 Hz, 2H), 4.14 (t, J=6 Hz, 2H), 3.82 (m, 4H), 3.53 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 2.03 (m, 4H), 1.28 (m, 6H), 1.16 (m, 4H), 0.73 (t, J= 7.2 Hz, 6H), 0.63 (m, 4H). 1 H NMR (CDCl 3, 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.52 (m, 4H), 7.39. (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 4 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.00 (2xd). , J = 16 Hz, 2H), 6.90 (s, 4H), 6.89 (m, 2H), 6.85 (d, J = 16 Hz, 2H), 6.73 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.72 (d , J = 8.9 Hz, 2H), 4.24 (t, J = 6 Hz, 2H), 4.14 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.82 (m, 4H), 3.53 (m, 4H), 2.29 (s, 3H), 2.03 (m, 4H), 1.28 (m, 6H), 1.16 (m, 4H), 0.73 (t, J = 7.2 Hz). , 6H), 0.63 (m, 4H).
RMN 13C (CDC13, 75.47 MHz): 190.9, 170.0, 163.8, 156.4, 151.2, 145.8, 144.5, 132.8, 132.2, 130.6, 130.3, 129.8, 128.1, 125.83, 125.76, 125.0, 124.0, 124.81, 124.77, 122.5, 120.6, 120.1, Π 7.3, 115.2, 114.9, 1 11.9, 65.94, 65.92, 55.3, 49.8, 49.62, 49.60, 45.96, 45.86, 26.0, 23.2, 21.1, 13.9, 12.5. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 190.9, 170.0, 163.8, 156.4, 151.2, 145.8, 144.5, 132.8, 132.2, 130.6, 130.3, 129.8, 128.1, 125.83, 125.76, 125.0, 124.0, 124.81, 124.77, 122.5. , 120.6, 120.1, Π 7.3, 115.2, 114.9, 11.9, 65.94, 65.92, 55.3, 49.8, 49.62, 49.60, 45.96, 45.86, 26.0, 23.2, 21.1, 13.9, 12.5.
HRMS (ES+): m/z 1129.46184 calculé pour C72H70N2O5NaS2 [(M+Na)+], trouvé 1129.4620.  HRMS (ES +): m / z 1129.46184 calculated for C72H70N2O5NaS2 [(M + Na) +], found 1129.4620.
Exemple 14 : Acétate de 4-[2-[[4-[(1£)-2-[5-[2-[9,9-(1¾υίγ1-7-[2-[5-[(1^-2-[4-[έ«^ί-[2-(4- hydroxyphénoxy)éthyl]amino]phényl]éthényl]-2-thiényl]ethynyl]-9if-fluorèn-2- y!]ethynyI]-2-thiényl]éthényl]phényIjéthylamino]éthoxy]benzaldéhyde (Cl") Example 14: 4- [2 - [[4 - [(1E) -2- [5- [2- [9,9- (1¾υίγ1-7- [2- [5 - [(1 ^ -2) -acetate - [4- [N- [2- (4-hydroxyphenoxy) ethyl] amino] phenyl] ethenyl] -2-thienyl] ethynyl] -9f-fluoren-2-yl] ethynyl] -2-thienyl] ethenyl] phenylmethylamino] ethoxy] benzaldehyde (Cl ")
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000047_0001
(Cl")  (Cl ")
Le photosensibilisateur protégé 14 (0.46 g, 0.42 mmol) est dissous dans un mélange d'EtOH (10 mL) et de THF (28 mL). Une solution de NaOH (0.5 M, 4 mL) est ajoutée et le mélange est agité 20 min à température ambiante. HC1 (1 M, 15 mL) est ensuite ajouté. La phase aqueuse est extraite au CH2C12 (10 mL). La phase organique est ensuite lavée à l'eau (5 mL), séchée sur MgS04; filtrée et évaporée sous vide. Le produit brut est purifié sur colonne chromato graphique en éluant avec du CH2C12. Des cristaux oranges de Cl" sont obtenus (0.37 g). The protected photosensitizer 14 (0.46 g, 0.42 mmol) is dissolved in a mixture of EtOH (10 mL) and THF (28 mL). A solution of NaOH (0.5 M, 4 mL) is added and the mixture is stirred for 20 min at room temperature. HC1 (1M, 15 mL) is then added. The aqueous phase is extracted with CH 2 C1 2 (10 mL). The organic phase is then washed with water (5 mL), dried over MgSO 4; filtered and evaporated under vacuum. The crude product is purified chromato graphic column eluting with CH 2 C1 2. Orange crystals of Cl "are obtained (0.37 g).
Rendement: 84%  Yield: 84%
Point de fusion: 94 °C. Melting point: 94 ° C.
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J= 9 Hz, 2H), 7.68 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.52 (m, 4H), 7.39 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7.19 (d, J=4 Hz, 2H), 7.01 (d, J= 9 Hz, 2H), 6.99 (2xd, J= 16 Hz, 2H), 6.89 (m, 2H), 6.87 (d, J=16 Hz, 2H), 6.77 (s, 4H), 6.73 (d, J=8.9 Hz, 2H), 6.72 (d, J=8.9 Hz, 2H), 5.19 (s, 1H), 4.24 (t, J=6 Hz, 2H), 4.10 (t, J=6 Hz, 2H), 3.80 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 3.73 (t, J=5.7 Hz, 2Η), 3.53 (m, 4Η), 2.01 (m, 4Η), 1.28 (m, 6Η), 1.16 (m, 4Η), 0.73 (t, J= 7.2 Hz, 6Η), 0.63 (m, 4Η). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 9.89 (s, 1H), 7.85 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.52 (m, 4H), 7.39 ( d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 4 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.99 ( 2xd, J = 16 Hz, 2H), 6.89 (m, 2H), 6.87 (d, J = 16 Hz, 2H), 6.77 (s, 4H), 6.73 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.72 ( d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.19 (s, 1H), 4.24 (t, J = 6 Hz, 2H), 4.10 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.73 (t, J = 5.7 Hz, 2Η), 3.53 (m, 4Η), 2.01 (m, 4Η), 1.28 (m, 6Η), 1.16 (m, 4Η), 0.73 (t, J = 7.2). Hz, 6Η), 0.63 (m, 4Η).
RMN ,3C (CDCI3, 75.47 MHz): 191.1, 163.8, 152.8, 151.2, 149.9, 147.6, 147.3, 145.9, 145.8, 140.8, 140.7, 132.8, 132.2, 130.6, 130.1, 129.8, 129.6, 128.1, 128.0, 125.7, 124.98, 124.91, 124.7, 124.6, 121.89, 121.8, 120.5, 120.3, 120.1, 117.2, 116.9, 116.1, 115.6, 114.8, 1 1 1.9, 111.8, 95.06, 94.9, 84.1, 84.0, 66.1, 65.9, 55.3, 49.8, 49.5, 45.9, 45.7, 40.3, 26.0, 23.1, 13.9, 12.46, 12.44. 3 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 191.1, 163.8, 152.8, 151.2, 149.9, 147.6, 147.3, 145.9, 145.8, 140.8, 140.7, 132.8, 132.2, 130.6, 130.1, 129.8, 129.6, 128.1, 128.0, 125.7, 124.98, 124.91, 124.7, 124.6, 121.89, 121.8, 120.5, 120.3, 120.1, 117.2, 116.9, 116.1, 115.6, 114.8, 1.9, 111.8, 95.06, 94.9, 84.1, 84.0, 66.1, 65.9, 55.3, 49.8, 49.5, 45.9, 45.7, 40.3, 26.0, 23.1, 13.9, 12.46, 12.44.
HRMS (ES+) : m/z 1065.46933 calculé pour C70H69N2O4S2 [(M+H)+], trouvé 1065.4691. ATR-FTIR (cm'1): 3363, 2926, 2189, 2037, 1685, 1596, 1507, 1446, 1397, 1349, 1256, 1221, 1182, 1158, 1136, 1074, 1020, 946, 885, 806, 751. HRMS (ES +): m / z 1065.46933 calculated for C70H69N2O4S2 [(M + H) +], found 1065.4691. ATR-FTIR (cm '1 ): 3363, 2926, 2189, 2037, 1685, 1596, 1507, 1446, 1397, 1349, 1256, 1221, 1182, 1158, 1136, 1074, 1020, 946, 885, 806, 751. .
Exemple 15 : Méthanesulfonate de 2-[2-(2-méthoxyéthoxy)éthoxy]éthyle (16) Example 15: 2- [2- (2-Methoxyethoxy) ethoxy] ethyl methanesulfonate (16)
Dans un ballon sous argon, on ajoute à 0°C Et3N (5.83 mL) à une solution de 2-[2-(2- méthoxyéthoxy)éthoxy]éthanol (15) (6.00 g, 36.58 mmol) dans le CH2C12 (10 mL). Le mélange est agité vigoureusement et une solution de chlorure de méthanesulfonyle (3.25 mL, 42.07 mmol) dans le CH2C12 (3 mL) est ajoutée goutte à goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 24 h. Le précipité blanc formé est filtré, et le filtrat est lavé avec une solution aqueuse saturée de NaHC(¾ (2x l0mL). La phase aqueuse est extraite au CH2CI2, puis les phases organiques réunies sont séchées sur Na2S04 et le solvant est évaporé sous pression réduite pour donner 16 sous la forme d'une huile jaune (8.46 g). In a flask under argon, 0 ° C and 3 N (5.83 ml) were added to a solution of 2- [2- (2-methoxyethoxy) ethoxy] ethanol (15) (6.00 g, 36.58 mmol) in CH 2 C1 2 (10 mL). The mixture is stirred vigorously and a solution of methanesulfonyl chloride (3.25 mL, 42.07 mmol) in CH 2 C1 2 (3 mL) is added dropwise. The mixture is stirred at room temperature for 24 hours. The white precipitate formed is filtered, and the filtrate is washed with a saturated aqueous solution of NaHCO (2 × 10 mL), the aqueous phase is extracted with CH 2 Cl 2 and the combined organic phases are dried over Na 2 SO 4 and the solvent was evaporated under reduced pressure to give 16 as a yellow oil (8.46 g).
Rendement : 95% Yield: 95%
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 4.36 (m, 2H), 3.74 (m, 2H), 3.64 (m, 6H), 3.51 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3.04 (s, 3H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 4.36 (m, 2H), 3.74 (m, 2H), 3.64 (m, 6H), 3.51 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.04 (s). , 3H).
RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 71.7, 70.5, 70,4, 70.3, 69.2, 68.8, 58.8, 37.5. Exemple 16 : 4-[2-[2-(2-Méthoxyéthoxy)éthoxy]éthoxy]phénol (17a)
Figure imgf000048_0001
 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 71.7, 70.5, 70.4, 70.3, 69.2, 68.8, 58.8, 37.5. Example 16: 4- [2- [2- (2-Methoxyethoxy) ethoxy] ethoxy] phenol (17a)
Figure imgf000048_0001
A une solution de 16 (8.46 g, 34.97 mmol) et d'hydroquinone (3.86 g, 34.97 mmol) dans le DMSO (25 mL) refroidie à 0 °C avec un bain de glace, est ajouté OH (5.89 g, 104.91 mmol). Le mélange est agité à 0°C puis à température ambiante pendant une nuit. De l'eau (20 mL) est alors ajoutée. La phase aqueuse est extraite à l'Et20 (3*30 mL) pour séparer le composé 16 n'ayant pas réagi et le produit disubstitué 17b. La phase aqueuse est acidifiée avec du HCl concentré et extraite avec du CHC13 (3x20 mL). Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec de l'eau jusqu'à pH neutre, séchées sur Na2S04 et le solvant est évaporé sous vide. Le composé 17a est obtenu sous la forme d'une huile marron (3.69 g). Rendement: 41% To a solution of 16 (8.46 g, 34.97 mmol) and hydroquinone (3.86 g, 34.97 mmol) in DMSO (25 mL) cooled to 0 ° C with an ice bath is added OH (5.89 g, 104.91 mmol). ). The mixture is stirred at 0 ° C and then at room temperature overnight. Water (20 mL) is then added. The aqueous phase is extracted with Et 2 0 (3 * 30 mL) to separate Compound 16 unreacted and the disubstituted product 17b. The aqueous phase is acidified with concentrated HCl and extracted with CHC1 3 (3x20 mL). The organic phases are collected, washed with water until neutral pH, dried over Na 2 SO 4 and the solvent is evaporated under vacuum. Compound 17a is obtained as a brown oil (3.69 g). Yield: 41%
RMN 1H (CDCÏ3, 300.13 MHz): 6.82 (s, 1H)5 6.73 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 9 Hz, 2H), 3.98 (t, J - 4.8 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.70 (m, 6H), 3.55 (m, 2H), 3.34 (s, 3H). RMN 13C (CDCI3, 75.47 MHz): 152.3, 150.1, 115.9, 115.5, 71.7, 70.5, 70.4, 70.3, 69.7, 67.8, 58.8. 1 H NMR (CDCl 3, 300.13 MHz): 6.82 (s, 1H) 5 6.73 (d, J = 9Hz, 2H), 6.69 (d, J = 9Hz, 2H), 3.98 (t, J - 4.8 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.70 (m, 6H), 3.55 (m, 2H), 3.34 (s, 3H). 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 152.3, 150.1, 115.9, 115.5, 71.7, 70.5, 70.4, 70.3, 69.7, 67.8, 58.8.
HRMS (ES+) : m/z 279.12029 calculé pour C13H20O5Na [( +Na)+], trouvé 279.1203. ATR-FTIR (cm"1): 3333, 2873, 1508, 1448, 1355, 1214, 1096, 1064, 824, 753. HRMS (ES +): m / z 279.12029 calcd for C13H20O5Na [(+ Na) +], found 279.1203. ATR-FTIR (cm -1 ): 3333, 2873, 1508, 1448, 1355, 1214, 1096, 1064, 824, 753.
Exemple 17 : Dendrimère A-(B1-(C1")2)6 Example 17: Dendrimer A- (B1- (C1 ") 2 ) 6
Figure imgf000049_0001
Figure imgf000049_0001
La réaction est effectuée à l'abri de la lumière. A une solution de photosensibilisateur Cl" (152 mg, 142.72 μιηοΐ) dans le THF distillé (0.75 mL), est ajouté Cs2C03 (93 mg, 285.43 μπιοΐ). La solution est agitée à 35°C pendant 2 h, puis ajoutée à une solution de dendrimère de première génération possédant des fonctions P(S)C12 terminales A-(B1')6 (20 mg, 10.95 pmoi) dans 0.75 mL de THF distillé. Le mélange est agité à 35°C pendant 7 jours. L'avancement de la réaction est suivi par RMN 3IP, en ajoutant dans le tube RMN un capillaire de C6D6. Le mélange réactionnel est filtré, et le dendrimère est précipité dans du pentane (200 mL). Le précipité orange est lavé avec de l'acétate d'éthyle, puis purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (pentane/THF 1 : 1 jusqu'à THF 100%), pour conduire à A-(B1-(C1")2)6 sous la forme d'une poudre orange (106 mg). The reaction is carried out in the dark. To a solution of photosensitizer Cl - (152 mg, 142.72 μιηοΐ) in distilled THF (0.75 mL) is added Cs 2 CO 3 (93 mg, 285.43 μπιοΐ) .The solution is stirred at 35 ° C. for 2 h, then added to a first generation dendrimer solution having functions P (S) 2 A- C1 terminal (B1 ') 6 (20 mg, 10.95 PMOI) in 0.75 ml of distilled THF. The mixture was stirred at 35 ° C for 7 The progress of the reaction is monitored by 3 H NMR, adding a capillary of C 6 D 6 to the NMR tube The reaction mixture is filtered and the dendrimer is precipitated in pentane (200 ml). orange is washed with ethyl acetate and then purified by silica gel column chromatography (pentane / THF 1: 1 to 100% THF), to yield A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 in the form of an orange powder (106 mg).
Rendement: 69% Yield: 69%
Point de fusion: 178 °C. Melting point: 178 ° C.
RMN 1H (CD2C12, 300.13 MHz) 9.86 (s,' 12H), 7.82 (d, J = 8.7 Hz, 24H), 7.67 (d, J = 7.8 Hz, 24H), 7.61 (m, 18H), 7.51 (m, 48H), 7.38 (d, J = 9 Hz, 24H), 7.30 (d, J = 8.4 Hz, 24H), 7.16 (2xd, J = 9 Hz, 24H), 7.05- 6.81 (m, 132 H), 6.73 (d, .1 = 8. 7 Hz, 48H), 6.64 (d, J = 7.5 Hz, 24H), 4.24 (t, J = 6 Hz, 24H), 3.98 (t, J - 6 Hz, 24H), 3.80 (t, J = 6 Hz, 24H), 3.62 (s br, 24H), 3.54 (q, 24H), 3.40 (s br, 24H), 3.21 (d, J = 12 Hz, 18H), 2.00 (m, 48H), 1.21-1,02 (m, 120H), 0.77-0.48 (m, 120H). RMN 13C (CD2CI2, 75.47 MHz) 191.1, 164.2, 156.7, 151.8, 148.2, 148.1, 146.5, 146.4, 144.8 (d, J = 7.5 Hz), 141.3, 133.4, 132.3, 130.9, 130.8, 130.3, 130.2, 128.8, 128.5, 126.3, 125.4, 125.1, 124.9, 122.9, 122.8, 122.3, 122.2, 121.9, 121.8, 120.8, 120.7, 120.6, 117.3, 117.2, 115.6, 115.3, 112.5, 95.4, 84.4, 84.3, 66.6, 66.5, 55.8, 50.0, 46.3, 46.2, 40.6, 33.6 (d, J = 12.07 Hz), 26.5, 23.6, 14.2, 12.6. 1 H NMR (CD 2 C1 2, 300.13 MHz) 9.86 (s, '12H), 7.82 (d, J = 8.7 Hz, 24H), 7.67 (d, J = 7.8 Hz, 24H), 7.61 (m, 18H), 7.51 (m, 48H), 7.38 (d, J = 9Hz, 24H), 7.30 (d, J = 8.4Hz, 24H), 7.16 (2xd, J = 9Hz, 24H), 7.05-6.81 (m, 132). H), 6.73 (d, .1 = 8. 7 Hz, 48H), 6.64 (d, J = 7.5 Hz, 24H), 4.24 (t, J = 6 Hz, 24H), 3.98 (t, J - 6 Hz , 24H), 3.80 (t, J = 6Hz, 24H), 3.62 (br br, 24H), 3.54 (q, 24H), 3.40 (s br, 24H), 3.21 (d, J = 12Hz, 18H). , 2.00 (m, 48H), 1.21-1.02 (m, 120H), 0.77-0.48 (m, 120H). 13 C NMR (CD 2 CI 2 , 75.47 MHz) 191.1, 164.2, 156.7, 151.8, 148.2, 148.1, 146.5, 146.4, 144.8 (d, J = 7.5 Hz), 141.3, 133.4, 132.3, 130.9, 130.8, 130.3, 130.2, 128.8, 128.5, 126.3, 125.4, 125.1, 124.9, 122.9, 122.8, 122.3, 122.2, 121.9, 121.8, 120.8, 120.7, 120.6, 117.3, 117.2, 115.6, 115.3, 112.5, 95.4, 84.4, 84.3, 66.6, 66.5, 55.8, 50.0, 46.3, 46.2, 40.6, 33.6 (d, J = 12.07 Hz), 26.5, 23.6, 14.2, 12.6.
RMN 31P (CDCI3, 121.58 MHz): 64.3, 8.5. 31 P NMR (CDCl3, 121.58 MHz): 64.3, 8.5.
LC/MS: m/z 14198.2 masse moyenne calculée pour C888H852N39O54NaP9S30 [(M+Na)+], trouvé: 14197.1.  LC / MS: m / z 14198.2 average mass calculated for C888H852N39O54NaP9S30 [(M + Na) +], found: 14197.1.
Exemple 18 : Dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl')i)2)6 Example 18: Dendrimer A- (B1- (C1- (D1 ') i) 2 ) 6
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000050_0001
La réaction est effectuée à l'abri de la lumière. Une solution de 26 (508.3 μί,, 91.5 μηιοΐ) dans le CHCI3 est ajoutée sur A-(B1-(C1 ")2)6 (86.4 mg, 6.10 μιηοΐ) à 0°C. Le mélange est agité à température ambiante pendant 5 jours, L'avancement de la réaction est suivi par RMN du proton. Le dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl')i)2)6 est précipité dans du pentane (200 mL) pour éliminer l'excès de 26, filtré sous argon puis séché sous pression réduite pour donner une poudre orange (85 mg). The reaction is carried out in the dark. A solution of 26 (508.3 μί ,, 91.5 μηιοΐ) in CHCl 3 is added to A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 (86.4 mg, 6.10 μιηοΐ) at 0 ° C. The mixture is stirred at room temperature The advancement of the reaction is monitored by proton NMR for 5 days The A- (B1- (C1- (D1 ') i) 2 ) 6 dendrimer is precipitated in pentane (200 mL) to remove excess of 26, filtered under argon and then dried under reduced pressure to give an orange powder (85 mg).
Rendement: 86% Yield: 86%
Point de fusion: 184 °C. Melting point: 184 ° C.
RMN Ή (CDCI3, 300.13 MHz) 7.68 (m, 126H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 24H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 24H), 7.16 (2*d, J = Hz, 24H), 7.08 (d, J = 7.8 Hz, 24 H), 6.95 (m, 108H), 6.73 (d, J = 7.8 Hz, 48H), 6.64 (d, J = 7.8 Hz, 24H), 4.19 (t, J = 4.5 Hz, 24H), 3.96 (s br, 24H), 3.80 (s br, 24H), 3.62 (s br, 24H), 3.53 (m, 84H), 3.19 (A, J = 9.6 Hz, 18H), 1.98 (m, 48H), 1.15 (m, 120H), 0.69 (m, 120H). NMR Ή (CDCl 3 , 300.13 MHz) 7.68 (m, 126H), 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 24H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 24H), 7.16 (2 * d, J = Hz, 24H), 7.08 (d, J = 7.8Hz, 24H), 6.95 (m, 108H), 6.73 (d, J = 7.8 Hz, 48H), 6.64 (d, J = 7.8 Hz, 24H), 4.19 (t , J = 4.5 Hz, 24H), 3.96 (br br, 24H), 3.80 (br br, 24H), 3.62 (br br, 24H), 3.53 (br, 84H), 3.19 (A, J = 9.6 Hz, 18H). ), 1.98 (m, 48H), 1.15 (m, 120H), 0.69 (m, 120H).
RMN 13C (CDC13, 75.47 MHz): 160.4, 156.2, 151.6, 151.2, 147.5, 145.8, 144.3, 141.8, 140.8, 135.9, 132.8, 130.6, 129.7, 129.1, 128.3, 128.1, 127.3, 125.7, 125.6, 124.8, 124.7, 122.4, 121.8, 121.6, 120.6, 120.5, 120.1 , 117.2, 117.1, 115.1, 114.9, 112.0, 95.1, 84.2, 84.1, 68.1, 65.9, 65.7, 55.3, 49.7, 45.9, 45.8, 40.3, 34.5, 31.9, 30.5, 28.8, 26.1, 23.2, 21.3, 14.2, 12.5, 12.4. 13 C NMR (CDCl 3 , 75.47 MHz): 160.4, 156.2, 151.6, 151.2, 147.5, 145.8, 144.3, 141.8, 140.8, 135.9, 132.8, 130.6, 129.7, 129.1, 128.3, 128.1, 127.3, 125.7, 125.6, 124.8 , 124.7, 122.4, 121.8, 121.6, 120.6, 120.5, 120.1, 117.2, 117.1, 115.1, 114.9, 112.0, 95.1, 84.2, 84.1, 68.1, 65.9, 65.7, 55.3, 49.7, 45.9, 45.8, 40.3, 34.5, 31.9 , 30.5, 28.8, 26.1, 23.2, 21.3, 14.2, 12.5, 12.4.
RMN 31P (CDCI3, 121.58 MHz): 64.3, 63.3, 8.6. Exemple 19 : Dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6
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 31 P NMR (CDCl 3 , 121.58 MHz): 64.3, 63.3, 8.6. Example 19: Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6
Figure imgf000051_0001
A-(B1-(C1-(D1-(E1)2) 2)6 A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6
La réaction est effectuée à l'abri de la lumière. A une solution de 4-[2-[2-(2- méthoxyémoxy)éthoxy]éthoxy]phénol (17a) (12 mg, 46.50 umol) dans le THF distillé (2 mL), est ajouté CS2CO3 (29 mg, 89.28 μιηοΐ). La solution est agitée à température ambiante pendant 1 nuit, puis ajoutée à une solution de dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl,)i)2)6 (30.1 mg, 1.86 μηιοΐ) dans 1.5 mL de THF. Le mélange est agité à température ambiante pendant 5 jours. L'avancement de la réaction est suivi par RMN du phosphore. Le mélange réactionnel est filtré avec une canule sous argon et précipité dans du pentane (200 mL). Le solide orange résultant est lavé à l'éther pour éliminer l'excès de 17a, puis filtré. Après avoir solubilisé le produit brut dans un minimum de THF, le mélange est centrifugé 4 min à 10000 tours/min pour éliminer le chlorure de césium formé au cours de la réaction. Le surnageant est récupéré, et le produit est précipité dans du pentane, filtré sous argon, et séché sous pression réduite. On obtient une poudre orange de A-(Bl-(Cl-(M-(El)2)i)2)6 (30 mg). The reaction is carried out in the dark. To a solution of 4- [2- [2- (2-methoxyemoxy) ethoxy] ethoxy] phenol (17a) (12 mg, 46.50 μmol) in distilled THF (2 mL) is added CS2CO3 (29 mg, 89.28 μιηοΐ). ). The solution is stirred at room temperature for 1 night, then added to a solution of dendrimer A- (BL- (Cl- (D,) i) 2) 6 (30.1 mg, 1.86 μηιοΐ) in 1.5 mL of THF. The mixture is stirred at room temperature for 5 days. The progress of the reaction is monitored by phosphorus NMR. The reaction mixture is filtered with a cannula under argon and precipitated in pentane (200 mL). The resulting orange solid is washed with ether to remove the excess of 17a, and then filtered. After solubilizing the crude product in a minimum of THF, the mixture is centrifuged for 4 min at 10,000 rpm to remove the cesium chloride formed during the reaction. The supernatant is recovered, and the product is precipitated in pentane, filtered under argon, and dried under reduced pressure. An orange powder of A- (B1- (Cl- (M- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 (30 mg) is obtained.
Rendement: 75% Yield: 75%
Point de fusion: 178 °C Melting point: 178 ° C
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 7.68-7.47 (m, 126H), 7.37 (2xd, J = 8.4 Hz, 48H), 7.13- 6.54 (m, 324H), 4.16-3.16 (m, 558H), 1.97 (m, 48H), 1.1 1 (m, 120H), 0.66 (m, 120H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.68-7.47 (m, 126H), 7.37 (2xd, J = 8.4 Hz, 48H), 7.13-6.54 (m, 324H), 4.16-3.16 (m, 558H), 1.97. (m, 48H), 1.11 (m, 120H), 0.66 (m, 120H).
RMN 31P (CDCI3, 121.58 MHz) : 64.6, 8.5. 31 P NMR (CDCl 3 , 121.58 MHz): 64.6, 8.5.
Exemple 20 : 1,2,3,4,6-Penta-O-acétyl-D-mannopyranose (50) Example 20: 1,2,3,4,6-Penta-O-acetyl-D-mannopyranose (50)
Figure imgf000051_0002
Figure imgf000051_0002
Dans un ballon sous argon, le D-(+)-mannose (5 g, 27.75 mmol) est dissous dans 15 mL de pyridine à -10°C. L'anhydride acétique (12.6 mL, 130 mmol) est ajouté goutte à goutte à - 10°C. Le mélange est ensuite agité pendant 17 h, De la glace est ajoutée à cette solution limpide, et un précipité blanc se forme, que l'on filtre sur fritté. Le solide blanc pâteux obtenu est redissous dans du DCM. Après lavage à l'eau, puis au NaHC03i la phase organique est séchée sur MgS04, filtrée et évaporée sous pression réduite. On obtient alors une poudre blanche (6.73 g) de 50, sous la forme d'un mélange d'anomères a et β dans un rapport 87/13. Rendement: 62% In a flask under argon, D - (+) - mannose (5 g, 27.75 mmol) is dissolved in 15 mL of pyridine at -10 ° C. Acetic anhydride (12.6 mL, 130 mmol) is added dropwise at -10 ° C. The mixture is then stirred for 17 hours. Ice is added to this clear solution, and a white precipitate is formed, which is sintered. The pasty white solid obtained is redissolved in DCM. After washing with water, then with NaHC0 3i The organic phase is dried over MgSO 4 , filtered and evaporated under reduced pressure. A white powder (6.73 g) of 50 is then obtained in the form of a mixture of anomers a and β in a ratio 87/13. Yield: 62%
Anomère majoritaire a : Majority anomers a:
RMN 1H (CDCI3, 300.13 MHz): 6.01 (d, J =1.8 Hz, 1 H), 5.34 - 5.15 (m, 3 H), 4.22 (dd, J ^4.8 Hz, J = 12.3 Hz 1 H), 4.03 (m, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 2.10 (s, 3 H) 2.03 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.94 (s, 3 H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 6.01 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.34 - 5.15 (m, 3H), 4.22 (dd, J 4 4.8 Hz, J = 12.3 Hz 1 H), 4.03 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.10 (s, 3H) 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.94 (s, 3H).
Exemple 21 : 2,3,4,6-Tétraacétate de 4-hydroxyphényl-a-D-mannopyranoside (51) Example 21: 2,3,4,6-Tetraacetate of 4-hydroxyphenyl-α-D-mannopyranoside (51)
Figure imgf000052_0001
Figure imgf000052_0001
A une solution de composé 50 (1 g, 2.56 mmoi) dans le DCM (5.5 mL), est ajoutée l'hydroquinone (848 mg, 7.68 mmoi). Le mélange blanc hétérogène résultant est refroidi à 0°C, et BF3.Et20 (2.6 mL, 20.48 mmoi) est ajouté goutte à goutte pendant 20 min. Le mélange devient alors jaune pâle. Le milieu réactionnel est alors agité pendant 2 jours, en laissant la température remonter à température ambiante. Le mélange devenu marron est lavé avec du NaHC03 (2x 10 mL). La phase aqueuse est rose et la phase organique est jaune. Cette phase organique est ensuite lavée avec H20 (2x 10 mL), puis avec de la saumure (2x10 mL). La phase organique est séchée sur Na2S04, filtrée et évaporée sous pression réduite. L'huile brune obtenue est purifiée par colonne chromatographique, en éluant avec AcOEt/ Heptane (1 :1). Le composé 51 est obtenu sous la fonne d'une poudre beige (400 mg). Seul l'anomère a est obtenu. To a solution of compound 50 (1 g, 2.56 mmol) in DCM (5.5 mL) is added hydroquinone (848 mg, 7.68 mmol). The heterogeneous white mixture resulting was cooled to 0 ° C, and BF 3 .And 2 0 (2.6 mL, 20.48 mmole) was added dropwise over 20 min. The mixture then becomes pale yellow. The reaction medium is then stirred for 2 days, allowing the temperature to rise to room temperature. The brown mixture is washed with NaHCO 3 (2x 10 mL). The aqueous phase is pink and the organic phase is yellow. This organic phase is then washed with H 2 O (2x 10 mL) and then with brine (2 x 10 mL). The organic phase is dried over Na 2 SO 4 , filtered and evaporated under reduced pressure. The brown oil obtained is purified by chromatographic column, eluting with AcOEt / Heptane (1: 1). Compound 51 is obtained in the form of a beige powder (400 mg). Only the anomer a is obtained.
Rendement: 30% Yield: 30%
RMN 1H (CDC13, 300.13 MHz): 6.95 (d, J =9 Hz, 2 H), 6.76 (d, J =9 Hz, 2 H), 5.54 (dd, J =3.3 Hz, J = 9.9 Hz 1H), 5.45 (m, 4 H), 4.33 (m, 1 H), 4.10 (m, 2 H), 2.19 (s, 3 H), 2.05 (s, 3 H), 2.04 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 6.95 (d, J = 9 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 9 Hz, 2H), 5.54 (dd, J = 3.3 Hz, J = 9.9 Hz 1H); ), 5.45 (m, 4H), 4.33 (m, 1H), 4.10 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.03 (s, 3H).
RMN 13C (CDC13> 75.47 MHz): 171.31, 170.73, 170.68, 170.42, 152.09, 150.16, 118.54, 13 C NMR (CDCl 3> 75.47 MHz): 171.31, 170.73, 170.68, 170.42, 152.09, 150.16, 118.54,
116.61 , 97.17, 70.06, 69.54, 69.51, 66.58, 62.79, 21.46, 21.29, 21.27, 21.26. 116.61, 97.17, 70.06, 69.54, 69.51, 66.58, 62.79, 21.46, 21.29, 21.27, 21.26.
HRMS (ES+) : m/z 463.1216 calculé pour C20H24O1 INa [M+Na]+ , trouvé 463.1212.  HRMS (ES +): m / z 463.1216 calculated for C20H24O1 INa [M + Na] +, found 463.1212.
Microanalyse calculée pour C20H24O11 (440,4) :  Microanalysis calculated for C20H24O11 (440.4):
% théorique : C : 54.55, H : 5.49  % theory: C: 54.55, H: 5.49
% expérimental : C : 54.68, H : 5.74. Exemple 22 : Dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ac)2)i)2)6
Figure imgf000053_0001
Experimental%: C: 54.68, H: 5.74. Example 22: Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4 Ac ) 2 ) i) 2 ) 6
Figure imgf000053_0001
A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ae)2)i)2)6 A- (BL- (Cl- (Dl (E4 e A) 2) i) 2) 6
La réaction est réalisée à l'abri de la lumière. A une solution de 2,3,4,6-tétraacétate de 4- hydroxyphényl-a-D-mannopyranoside (51) (65.5 mg, 148.8 μιηοΐ) dans 1 mL de THF distillé est ajouté Cs2C03 (97 mg, 297.6 μτ οΐ) à 0°C. La solution est agitée pendant 4h30 à 0°C, puis elle est ajoutée à une solution de A-(Bl-(Cl-(D )i)2)6 (50 mg, 3.1 μηιοΐ) dans 15 mL de THF. Le mélange est agité à température ambiante pendant 12 jours. L'avancement de la réaction est suivi par RMN du phosphore. Le mélange réactionnel est filtré par canule sous argon. Le dendrimère est précipité dans du pentane (250 mL), puis filtré et lavé à l'éther pour éliminer l'excès de mannose 51, avant d'être séché sous vide. Le solide orange obtenu est redissous dans un minimum de THF et centrifugé 4 min à 10000 tours/min pour éliminer le chlorure de césium formé. Le surnageant est récupéré, et le produit est précipité dans du pentane, filtré sous argon, et séché sous pression réduite. On obtient une poudre orange de A-The reaction is carried out in the absence of light. To a solution of 2,3,4,6-tetraacetate of 4-hydroxyphenyl-α-D-mannopyranoside (51) (65.5 mg, 148.8 μιηοΐ) in 1 mL of distilled THF is added Cs 2 CO 3 (97 mg, 297.6 μτ). ) at 0 ° C. The solution was stirred for 4:30 at 0 ° C, then it is added to a solution of A- (BL- (Cl- (D) i) 2) 6 (50 mg, 3.1 μ η ιοΐ) in 15 mL of THF. The mixture is stirred at room temperature for 12 days. The progress of the reaction is monitored by phosphorus NMR. The reaction mixture is filtered through a cannula under argon. The dendrimer is precipitated in pentane (250 mL), then filtered and washed with ether to remove excess mannose 51, before being dried under vacuum. The orange solid obtained is redissolved in a minimum of THF and centrifuged for 4 min at 10,000 rpm to remove the cesium chloride formed. The supernatant is recovered, and the product is precipitated in pentane, filtered under argon, and dried under reduced pressure. An orange powder of A-
(B1-(C1-(D1-(E4AC)2) 2)6 (77.5 mg). (B1- (1- (D1- (E4 AC) 2) 2) 6 (77.5 mg).
Rendement : 91% Yield: 91%
RMN 1H (CDC13, 300.13 MHz) : 7.68-7.47 (m, 126 H), 7.37 (dd, J = 8.7 Hz, 48 H),7.17 (m, 252 H), 6.70 (s br, 48 H), 6.62 (d, J = 8.1 Hz, 24 H), 5.54 (dd, J = 3.3 Hz, 24 H), 5.43 (m, 72 H), 4.28 (dd, J = 5.7 Hz, 24 H), 4.17 (m, 72 H), 3.94 (s br, 24 H), 3.78 (s br, 24 H), 3.61 (s br, 24 H), 3.51 (s br, 24 H), 3.39 (s br, 24 H), 3.32 (d, J = 10.5 Hz, 36 H), 3.19 (d, J = 9.9 Hz, 18 H), 2.18 (s, 72 H), 2.04 (m, 216 H), 1.71 (s br, 48H) , 1.26 (m, 120 H), 0.69 (m, 120 H). 1 H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.68-7.47 (m, 126H), 7.37 (dd, J = 8.7 Hz, 48H), 7.17 (m, 252H), 6.70 (br br, 48H), 6.62 (d, J = 8.1Hz, 24H), 5.54 (dd, J = 3.3Hz, 24H), 5.43 (m, 72H), 4.28 (dd, J = 5.7Hz, 24H), 4.17 (m). , 72H), 3.94 (br br, 24H), 3.78 (br br, 24H), 3.61 (br br, 24H), 3.51 (br br, 24H), 3.39 (br br, 24H), 3.32 (d, J = 10.5Hz, 36H), 3.19 (d, J = 9.9Hz, 18H), 2.18 (s, 72H), 2.04 (m, 216H), 1.71 (br, 48H), 1.26 (m, 120H), 0.69 (m, 120H).
RMN 31P (CDC13} 121.58 MHz): 64.5, 63.9, 8.6. 31 P NMR (CDCl 3) 121.58 MHz): 64.5, 63.9, 8.6.
Exemple 23 : Dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6
Figure imgf000053_0002
Example 23: Dendrimer A- (BL- (Cl- (Dl (E4 H) 2) i) 2) 6
Figure imgf000053_0002
A-(B1-(C1-(D1-(E4H)3)I)2)6 A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 3 ) I) 2) 6
A une solution de A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6 (62 mg, 2.42 μπιοι) dans un mélange de CH2C12 (2.2 mL) et de MeOH (1.2 mL), est ajoutée à 0°C une solution de MeONa (0.46 mL, 0.5 M). Le mélange est agité à 0°C pendant 2 h. Le précipité formé est filtré sous argon, lavé à Péther puis au pentane et séché sous vide. Une poudre orange de A-(B1-(C1-(D1- (E4Ac)2)i)2)<; est obtenue (42 mg). To a solution of A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2 ) I) 2) 6 (62 mg, 2.42 μπιοι) in a mixture of CH2Cl2 (2.2 mL) and MeOH (1.2 mL), a solution of MeONa (0.46 mL, 0.5 M) is added at 0 ° C. The mixture is stirred at 0 ° C for 2 h. The precipitate formed is filtered under argon, washed to ether and then to pentane and dried under vacuum. An orange powder A- (B1- (1- (D1- (E4 c A) 2) i) 2) <; is obtained (42 mg).
Rendement : 80%  Yield: 80%
RMN lH (DMSO, 300.13 MHz) : 7.86-7.12 (m, 174 H), 7.07-6.48 (m, 324 H), 5.28 (s, 24H), 5.20-2.75 (m, 462H), 1.71 (s br, 48H), 1.11 (m, 120 H), 0.47 (m, 120 H). 1 H NMR (DMSO, 300.13 MHz): 7.86-7.12 (m, 174H), 7.07-6.48 (m, 324H), 5.28 (s, 24H), 5.20-2.75 (m, 462H), 1.71 (br); , 48H), 1.11 (m, 120H), 0.47 (m, 120H).
RMN 31P (DMSO, 121.58 MHz):63.8, 8.6. 31 P NMR (DMSO, 121.58 MHz): 63.8, 8.6.
Exemple 24 : Dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(E5E]/E4Ac)2)i)2)6 Example 24: Dendrimer A- (B1- (Cl- (D1- (E5 E] / E4Ac) 2) i) 2) 6
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000054_0001
A-(Bl-(Cl-(Dl-(E5E1/E4Ac)2),)2)6 A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4Ac ) 2 ),) 2 ) 6
La réaction est réalisée à l'abri de la lumière. A une solution de 2,3,4,6-tétraacétate de 4- hydroxyphényl-a-D-mannopyranoside (SI) (0.48 g, 0.11 mrnol) dans 1 mL de THF distillé est ajouté Cs2CO (0.07 g, 0.22 mmol) à 0°C. La solution est agitée pendant 1 h à 0°C, puis elle est ajoutée à une solution de A-(Bl-(Cl-(Dl')i)2)6 (0.15 g, 9.31 μηιοΐ) dans le THF (2 mL). Le mélange est agité à température ambiante pendant î nuit. En parallèle, à une solution de 4- [2-[2-(2-méthoxyéthoxy)éthoxy]éthoxy] (17a) (0.03 g, 0.11 mmol) dans le THF (1 mL) est ajouté CS2CO3 (0.07 g, 0.22 mmol) à 0°C. La solution résultante est agitée pendant 1 h à 0°C, puis elle est ajoutée au mélange précédent. L'agitation est poursuivie à température ambiante pendant 6 jours. Le suivi de la réaction par RMN du phosphore montre que la réaction n'est pas terminée. Des quantités supplémentaires de 47 (4.00 mg, 9.31 μιηοΐ), de 17a (2.30 mg, 9.31 μηιοΐ) et de CS2CO3 (6 mg, 18.62 umol) sont alors rajoutées. Le mélange réactionnel est ensuite agité à température ambiante pendant 10 jours supplémentaires. La réaction n'étant toujours pas terminée, 17a (9.50 mg, 37. 24 μηιοΐ) et CS2CO3 (24 mg, 74.48 μηιοΐ) sont à nouveau rajoutés, et l'agitation est encore poursuivie pendant 21 jours à température ambiante. La RMN de phosphore du milieu réactionnel semblant montrer que la réaction est terminée, le dendrimère est précipité dans du pentane et lavé à Péther, puis à l'acétate d'éthyle et séché sous vide. L'analyse RMN P du produit isolé montre que la réaction n'est en fait pas finie. A une solution de 17a (29.0 mg, 0.11 mmol) dans le THF (2 mL) est ajouté Cs2C03 (0.07 g, 0.22 mmol) à 0°C. La solution est agitée pendant 4 h à 0 °C, puis elle est ajoutée à une solution du dendrimère incomplètement fonctionnalisé (0. 1 g, 9.31 μηιοΐ) dans le THF (10 mL). Le mélange est cette fois agité à 30 °C pendant 5 jours. Le mélange réactionnel est filtré par canule sous argon et le dendrimère est précipité dans du pentane (250 mL), puis filtré et lavé à l'éther puis à l'AcOEt, avant d'être séché sous vide. On obtient une poudre orange de A-(Bl-{Cl-(Dl-(E5E1/Ii4Ac)2)i)2)6 (0.20 g). The reaction is carried out in the absence of light. To a solution of 4-hydroxyphenyl-α-D-mannopyranoside (SI) 2,3,4,6-tetraacetate (0.48 g, 0.11 mmol) in 1 mL of distilled THF is added Cs 2 CO (0.07 g, 0.22 mmol) to 0 ° C. The solution is stirred for 1 h at 0 ° C, then it is added to a solution of A- (B1- (Cl- (D1 ') i) 2 ) 6 (0.15 g, 9.31 μηιοΐ) in THF (2 mL ). The mixture is stirred at room temperature overnight. In parallel, to a solution of 4- [2- [2- (2-methoxyethoxy) ethoxy] ethoxy] (17a) (0.03 g, 0.11 mmol) in THF (1 mL) is added CS2CO3 (0.07 g, 0.22 mmol) ) at 0 ° C. The resulting solution is stirred for 1 h at 0 ° C and then added to the above mixture. Stirring is continued at room temperature for 6 days. The monitoring of the reaction by NMR of phosphorus shows that the reaction is not complete. Additional amounts of 47 (4.00 mg, 9.31 μιηοΐ), 17a (2.30 mg, 9.31 μηιοΐ) and CS 2 CO3 (6 mg, 18.62 μmol) are then added. The reaction mixture is then stirred at room temperature for a further 10 days. The reaction is still not completed, 17a (9.50 mg, 37. 24 μηιοΐ) and CS2CO3 (24 mg, 74.48 μηιοΐ) are again added, and stirring is continued for 21 days at room temperature. The phosphorus NMR of the reaction medium appears to show that the reaction is complete, the dendrimer is precipitated in pentane and washed with ether and then with ethyl acetate and dried under vacuum. The P-NMR analysis of the isolated product shows that the reaction is in fact not finished. To a solution of 17a (29.0 mg, 0.11 mmol) in THF (2 mL) is added Cs 2 CO 3 (0.07 g, 0.22 mmol) at 0 ° C. The solution is stirred for 4 h at 0 ° C., then it is added to a solution of the incompletely functionalized dendrimer (0.1 g, 9.31 μηιοΐ) in THF (10 mL). The mixture is stirred at 30 ° C. for 5 days. The reaction mixture is cannulated under argon and the dendrimer is precipitated in pentane (250 mL), then filtered and washed with ether and then with AcOEt, before being dried under vacuum. An orange powder of A- (B1- {C1- (D1- (E5 E1 / II14 Ac) 2) i) 2) 6 (0.20 g) is obtained.
Rendement : 94%  Yield: 94%
RMN 1H (CDC13, 300.13 MHz) : 7.68-7.26 (m, 174 H), 7.16-6.62 (m, 324 H), 5.53 (dd, J = 3.0 Hz, 10 H), 5.43 (m, 30H), 4.17-3.15 (m, 438 H), 2.04 (s, 30H), 2.02 (m, 138 H), 1.31 (m, 120H), 0.69 (m, 120H). 1H NMR (CDCl 3 , 300.13 MHz): 7.68-7.26 (m, 174H), 7.16-6.62 (m, 324H), 5.53 (dd, J = 3.0Hz, 10H), 5.43 (m, 30H), 4.17-3.15 (m, 438H), 2.04 (s, 30H), 2.02 (m, 138H), 1.31 (m, 120H), 0.69 (m, 120H).
RM 31P (CDCI3, 121.58 MHz):64.6, 64.23, 63.9, 8.6. Exemple 25 : Dendrimère À-(B1-(C1-(D1-(E5EI/IHH)2)_)2)6
Figure imgf000055_0001
RM 31 P (CDCl 3 , 121.58 MHz): 64.6, 64.23, 63.9, 8.6. Example 25: Dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / IHH) 2) _) 2) 6
Figure imgf000055_0001
A-(B1-(C1-(D1-(E5E1/E41I)2)I)2)6 A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E41I ) 2 ) I ) 2 ) 6
A une solution de A-(B1-(C1-(D1-(E5e1 E4AC)2)I)2)6 (0.20 g, 8.78 μιηοί) dans un mélange de CH2C12 (5mL) et de MeOH (3 mL), est ajoutée à 0°C une solution de MeONa (0.70 mL, 0.5 M). Le mélange est agité à 0 °C pendant 2h. Le précipité formé est filtré sous argon, lavé au pentane puis à l'éther. Le produit est ensuite redissous dans un minimum de 0¾02 puis précipité dans le pentane et séché sous vide. Une poudre orange est obtenue (0.14 g). To a solution of A- (B1- (1- (D1- (E5 e1 E 4 AC) 2) I) 2) 6 (0.20 g, 8.78 μιηοί) in a mixture of CH 2 C1 2 (5mL) and MeOH (3 mL) is added at 0 ° C a MeONa solution (0.70 mL, 0.5 M). The mixture is stirred at 0 ° C for 2h. The precipitate formed is filtered under argon, washed with pentane and then with ether. The product is then redissolved in a minimum of 0¾0 2 and then precipitated in pentane and dried under vacuum. An orange powder is obtained (0.14 g).
Rendement : 76% Yield: 76%
RMN 1H (DMSO, 300.13 MHz) : 7.86-6.53 (m, 498H), 5.29 (s, 10H), 5.03-2.90 (m, 468H), 1.99 (m, 48H), 1.04 (m, 120H), 0.47 (m, 120H).  1 H NMR (DMSO, 300.13 MHz): 7.86-6.53 (m, 498H), 5.29 (s, 10H), 5.03-2.90 (m, 468H), 1.99 (m, 48H), 1.04 (m, 120H), 0.47 (m.p. m, 120H).
RMN3iP (DMSO, 121.58 MHz) : 64.0, 63.8, 8.5. 3i P NMR (DMSO, 121.58 MHz): 64.0, 63.8, 8.5.
2. Propriétés photophysiques 2. Photophysical properties
Exemple 26 : absorption à un photon et émission des chromophores Cl' et Cl" Example 26: Photon absorption and emission of Cl 'and Cl chromophores
Les propriétés photophysiques du photosensibilisateur greffable Cl" ont été mesurées dans le THF et comparées à celles de son analogue Cl' dans le Tableau 1. Cl' correspond à la formule générale C dans laquelle a = a' = -CH=CH- , β = β' = -C≡C- et X1 - X2 = n- butyle. A la lecture du Tableau 1, on constate que les photo sensibilisateurs Cl' et Cl" présentent tous deux une forte absoiption dans la région violette, avec des coefficients d'extinction molaires supérieurs à 100 000 M"1 cm"1, ainsi qu'une émission située dans le jaune. La présence de fonctions d'agrafage phénol et benzaldéhyde dans la molécule Cl" conduisent à un déplacement hyperchrome de la bande d'absorption ainsi qu'à un déplacement hypsochrome des bandes d'absorption et d'émission (faible en absorption, mais plus marqué en émission), ce qui indique que ces fonctions modifient légèrement l'environnement du chromophore. Les groupements éthoxyphénol et éthoxybenzaldéhyde agissent comme des molécules de solvants qui contribuent à la réorganisation de l'état excité. On observe aussi un léger élargissement de la bande d'absorption, qui pourrait être attribué à une augmentation de l'élargissement inhomogène, causé par la présence de ces deux fonctions reliées au chromophore par des espaceras flexibles, ce qui conduit à une augmentation du nombre de conformations. Des effets similaires ont déjà été observés lors du greffage de fonctions phénols sur d'autres chromophores. [C. Rouxel, M. Chariot, O. Mongin, T. R. Krishna, A. -M. Caminade, J.-P. Majorai, M. Blanchard-Desce, "From Graftable Biphotonic Chi mophores to Water-Soluble Organic Dendrimères for Biophotonics: The Importance of Environmental Effects", Chem. Eur. J. 2012, 18, 16450-16462] The photophysical properties of the Cl "graftable photosensitizer were measured in THF and compared to that of its Cl 'analogue in Table 1. Cl' corresponds to the general formula C in which a = a '= -CH = CH-, β = β '= -C≡C- and X 1 -X 2 = n-butyl In reading Table 1, it can be seen that the photo-sensitizers Cl' and Cl "both have a strong absoφtion in the violet region, with molar extinction coefficients greater than 100 000 M "1 cm " 1 , as well as an emission located in the yellow. The presence of phenol and benzaldehyde stapling functions in the Cl "molecule lead to a hyperchromic displacement of the absorption band as well as to a hypsochromic shift of the absorption and emission bands (low in absorption, but more marked in emission), indicating that these functions slightly modify the environment of the chromophore.The ethoxyphenol and ethoxybenzaldehyde groups act as solvent molecules that contribute to the reorganization of the excited state. absorption, which could be attributed to an increase in inhomogeneous enlargement, caused by the presence of these two functions connected to the chromophore by flexible spacers, which leads to an increase in the number of conformations Similar effects have already been observed during the grafting of phenol functions on other chromophores [C. Rouxel, M. Chariot, O. Mongin, TR Krishn A., M. Caminade, J.-P. Majorai, M. Blanchard-Desce, "From Graftable Biphotonic Chlorophosphors to Water-Soluble Organic Dendrimers for Biophotonics: The Importance of Environmental Effects", Chem. Eur. J. 2012, 18, 16450-16462]
Tableau 1. Propriétés photophysiques des photosensibilateurs Cl' et Cl" Table 1. Photophysical properties of photosensitizers Cl 'and Cl "
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" Coefficient d'extinction molaire à max. Rendement quantique de fluorescence déterminé en utilisant comme standard le bisulfate de quinine dans H2SO4 0.5 (Φ =0.546). c Durée de vie de fluorescence. d Constante de désexcitation radiative, kr = Φ{ I τ. e Constante de désexcitation nonradiative, knr = (1 - <Df) / τ. } Durée de vie naturelle. 8 Rendement quantique de production d'oxygène singulet dans le dichlorométhane, déterminé par rapport à la tétraphenylporphyrine dans le dichlorométhane (ΦΛ [TPP] = 0.60). Molar extinction coefficient at max fluorescence quantum yield determined using quinine bisulfate in H 2 SO 4 0.5 (Φ = 0.546) as a standard c Fluorescence lifetime d Radiation deexcitation constant k r = Φ {I τ .e Nonradiative deexcitation constant, k nr = (1 - <D f ) / τ. } Natural life span 8 Quantum yield of singlet oxygen production in dichloromethane, determined with respect to tetraphenylporphyrin in dichloromethane ( Φ Λ [TPP] = 0.60).
Les deux composés maintiemient un rendement quantique de fluorescence élevé et identique de 51%, mais on constate que la durée de vie de fluorescence de Cl" est légèrement plus faible, ce qui est lié à une augmentation des constantes de désexcitation radiative (ce qui peut être relié au déplacement hypsochrome) et non-radiative (ce qui suggère que les fonctions phénol et benzaldéhyde sont impliquées dans des processus supplémentaires de désexcitation non-radiative). La production d'oxygène singulet a été étudiée en mesurant la luminescence de l02 à 1272 mn dans le dichlorométhane, par comparaison avec la tétraphénylporphyrine (TPP) dans le même solvant. Des rendements quantiques de production d'oxygène singulet de 22% et de 16% ont été respectivement obtenus pour Cl' et Cl". Ces deux photosensibilisateurs présentent donc un rendement quanti que d'oxygène singulet non négligeable tout en conservant un rendement quantique de fluorescence assez élevé. Both compounds maintain a high and identical 51% fluorescence quantum yield, but it is found that the fluorescence lifetime of Cl "is slightly lower, which is related to an increase in the radiative de-excitation constants (which can hypsochromic displacement) and non-radiative (suggesting that phenol and benzaldehyde functions are involved in additional non-radiative deexcitation processes.) Singlet oxygen production was studied by measuring the luminescence of l 0 2 at 1272 nm in dichloromethane compared to tetraphenylporphyrin (TPP) in the same solvent Quantum yields of singlet oxygen production 22% and 16% were respectively obtained for Cl 'and Cl ".These two photosensitizers therefore have a quantum efficiency of singlet oxygen while maintaining a relatively high quantum fluorescence efficiency.
Exemple 27 : Absorption et fluorescence à deux photons de Cl' et Cl": Example 27 Absorption and two-photon fluorescence of Cl 'and Cl ":
Les spectres d'absoiption à deux photons (ADP) des composés Cl' et Cl" ont été déterminés dans le proche infra-rouge entre 700 et 950 nm, grâce à la technique de fluorescence par excitation à deux photons (TPEF). Les mesures sont effectuées à l'aide d'un laser titane :saphir délivrant des impulsions de 150 femtosecondes, en utilisant le protocole expérimental de Xu et Webb.[C. Xu, W. W. Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm", J Opt. Soc, Am, B: Opt. Phys. 1996, 13, 481-491] Pour les deux composés, on observe plusieurs bandes d'absorption intenses dans le proche infra-rouge (Figure 2). Les deux spectres d'absoiption à deux photons, présentent la même allure, avec deux bandes possédant des maxima à 720 nm et à 830 nm. Le maximum à 830 nm est situé au double de la longueur d'onde maximale d'absorption à un photon et correspond à l'état excité de plus basse énergie autorisé à un photon. Le maximum à 720 nm, de plus haute énergie que le précédent, correspond à une transition interdite à un photon mais fortement autorisée à deux photons. Dans les deux cas, la bande à 720 nm est plus intense que la bande à 830 nm. Le photosensibiîisateur symétrique Cl' possède un σ2 de 1300 GM à 720 nm et de 900 GM 820 nm, le photosensibilisateur dissymétrique Cl" possède un σ2 de 1900 GM à 720 nm et de 1200 GM à 820 nm. La désymétrisation du chromophore et la présence des fonctions d'agrafage phénol et benzaldéhyde conduisent à une augmentation des sections efficaces d'ADP d'environ 40%, soit le double de l'augmentation observée pour les coefficients d'extinction molaires en absorption à un photon. The two-photon absoφtion spectra (ADP) of the compounds Cl 'and Cl "were determined in the near infra-red between 700 and 950 nm using the two-photon excitation fluorescence (TPEF) technique. are performed using a titanium laser: sapphire delivering pulses of 150 femtoseconds, using the experimental protocol of Xu and Webb [C. Xu, WW Webb, "Measurement of two-photon excitation cross sections of molecular fluorophores with data from 690 to 1050 nm ", J Opt Soc, Am, B: Opt Phys 1996, 13, 481-491] For the two compounds, there are several intense absorption bands in the near infra-red ( Figure 2) The two two-photon absorption spectra have the same pattern, with two bands having maxima at 720 nm and at 830 nm The maximum at 830 nm is at twice the maximum wavelength d absorption at one photon and corresponds to the excited state of lower energy allowed to a photon. e maximum at 720 nm, higher energy than the previous one, corresponds to a forbidden transition to a photon but strongly allowed to two photons. In both cases, the 720 nm band is more intense than the 830 nm band. The symmetrical photosensitizer Cl 'has a σ 2 of 1300 GM at 720 nm and 900 GM 820 nm, the asymmetrical photosensitizer Cl "has a σ 2 of 1900 GM at 720 nm and 1200 GM at 820 nm. the presence of the phenol and benzaldehyde staple functions leads to an increase in the ADP cross sections by about 40%, which is twice the increase observed for the one-photon absorption molar extinction coefficients.
Le photosensibilisateur Cl" présente donc des caractéristiques photophysiques tout à fait satisfaisantes, dans certains cas mêmes supérieures à celles de Cl'.  The photosensitizer Cl "thus has photophysical characteristics quite satisfactory, in some cases even higher than those of Cl '.
Exemple 28 : Absorption à un photon, fluorescence et photosensibilisation du dendrimère hydrosoluble A-(Bl-{Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 Example 28: Photon Absorption, Fluorescence and Photosensitization of the Water-soluble Dendrimer A- (B1- {C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6
Tableau 2. Propriétés photophysiques de Cl" et des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1- (Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 dans le THF
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(nm) (nm) (M~' .cm~l) (ns) Table 2. Photophysical Properties of Cl - and A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 and A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 Dendrimers in THF
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(nm) (nm) (m ~ .cm- 1 ) (ns)
Cl" 434 1.2x 1ο5 0.51 1.3 0.16Cl "434 1.2x 1ο 5 0.51 1.3 0.16
A-(B1-(C1»)2)6 433 547 1.2x l06 0.50 H= 0.56 ; n1=63% 0.10 τ2=1.5 ; n2=37% A- (B1- (C1 ') 2) 6 433 547 0.50 1.2x l0 6 H = 0.56; n 1 = 63% 0.10 τ 2 = 1.5; n 2 = 37%
A-(B1-(C1-(D1- A- (B1 (C1 (D1
434 560 Ι .Οχ Ι Ο6 0.21 τι= 0.52 ; m=66 0.07 (El)2)i)2)6 τ2=1.4 ; η2=34% 434,560 Ι .Ο χ Ι Ο 6 0.21 τι = 0.52; m = 66 0.07 (EI) 2 ) i) 2) 6 τ 2 = 1.4; η 2 = 34%
" Coefficient d'extinction molaire à abs max. Rendement quantique de fluorescence déterminé en utilisant comme standard le bisulfate de quinine dans H2S04 0.5M (Φ =0.546). c Durée de vie de fluorescence. d Rendement quantique de production d'oxygène singulet dans le dichlorométhane, déterminé par rapport à la tétraphenylporphyrine dans le dichlorométhane (ΦΔ [ PP] = 0.60). Molar extinction coefficient at abs max Fluorescence quantum yield determined using standard quinine bisulfate in H 2 S0 4 0.5M (Φ = 0.546) as a standard c Fluorescence lifetime d Production efficiency of quantum singlet oxygen in dichloromethane, determined relative to tetraphenylporphyrin in dichloromethane (Φ Δ [PP] = 0.60).
Les propriétés d'absorption à un photon, de fluorescence et de production d'oxygène singulet, en solution dans le THF, du chromophore Cl" et des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1- (Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 sont rassemblées dans le Tableau 2. The one-photon absorption, fluorescence and singlet oxygen production properties, in solution in THF, of the chromophore Cl - and the dendrimers A- (B1- (C1-) 2 ) 6 and A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 are collated in Table 2.
Tous les composés présentent une bande d'absoiption intense allant du proche UV à la partie bleue du spectre visible, et une émission dans le visible du vert au jaune. Les dendrimères A- (B1-(C1")2)6 et A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 montrent une augmentation quasi linéaire du coefficient d'extinction molaire au maximum d'absorption avec le nombre de chromophores (Tableau 2). All compounds exhibit an intense band of absoφtion ranging from near UV to the blue part of the visible spectrum, and a visible emission from green to yellow. The dendrimers A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 show an almost linear increase in the molar extinction coefficient at the maximum of absorption with the number of chromophores (Table 2).
Le greffage des photosensibilisateurs sur la plate-forme dendrimérique (lorsque l'on compare Cl" et A-(Bl-(Cl")2)c) induit un léger déplacement vers le rouge accompagné d'un élargissement de la bande d'émission, en relation avec une augmentation de la polarité induite par la plate-forme dendrimérique et la proximité des chromophores adj cents. Malgré un confinement aussi important des chromophores dans un volume aussi réduit, le dendrimère A- (B1-(C1")2)6 maintient le même rendement quantique de fluorescence que le chromophore isolé Cl ". La flexibilité conformationnelle du chromophore et la présence des connecteurs π- conjugués doit faciliter la formation d'agrégats, ce qui est en accord avec un déclin de fluorescence biexponentiel. The grafting of the photosensitizers on the dendrimeric platform (when comparing Cl "and A- (B1- (Cl") 2 ) c) induces a slight displacement towards the red accompanied by an enlargement of the emission band , in relation with an increase in the polarity induced by the dendrimeric platform and the proximity of adjacent chromophores. Despite such a large confinement of the chromophores in such a small volume, the A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 dendrimer maintains the same quantum fluorescence yield as the isolated chromophore C1". The conformational flexibility of the chromophore and the presence of the π-conjugated connectors should facilitate the formation of aggregates, which is consistent with a biexponential fluorescence decline.
Par ailleurs, un déplacement vers le rouge plus prononcé de la bande d'émission et une diminution significative du rendement quantique de fluorescence sont observés pour le dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6, ce qui indique que l'addition d'une couche périphérique de chaînes triéthylèneglycol augmente la polarité de l'environnement des chromophores situés à l'intérieur du dendrimère, et modifie peut-être aussi leur positionnement relatif. Enfin, le rendement de production d'oxygène singulet est lui aussi légèrement réduit avec les dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1-(C1-(D1-(E1)2),)2)6. Exemple 29: Effets de l'environnement du dendrimère hydrosohible A-(B1-(C1-(D1- On the other hand, a more pronounced redshift of the emission band and a significant decrease in the fluorescence quantum yield are observed for the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) dendrimer. 6 , which indicates that the addition of a peripheral layer of triethylene glycol chains increases the polarity of the chromophore environment within the dendrimer, and may also change their relative positioning. Finally, the production yield of singlet oxygen is also slightly reduced with dendrimers A- (B1 (C1 ") 2) 6 and A- (B1 (C1 (D1 (E1) 2)) 2 ) 6 . Example 29: Effects of the environment of the hydrosoluble dendrimer A- (B1- (C1- (D1-
La Figure 3 représente la dépendance des propriétés d'absorption et d'émission du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 en fonction de la polarité du solvant. Comme pour le chromophore isolé Cl", l'absorption de A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)â est très peu affectée par la polarité du solvant alors qu'une solvatochromie positive est observée en émission. Cependant, on remarque que l'émission du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 est déplacée vers le rouge dans les solvants peu polaires comme le toluène, avec un changement des intensités vibroniques relatives et une quasi disparition de la structure fine. Ceci confirme que la plateforme dendrimérique, les chaînes TEG périphériques et la proximité des chromophores adjacents concourent à modifier la polarité de l'environnement. Figure 3 shows the dependence of the absorption and emission properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 dendrimer as a function of the polarity of the solvent. As for the isolated chromophore Cl ", the absorption of A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2) is very little affected by the polarity of the solvent whereas a positive solvatochromia is observed. However, it is noted that the emission of the dendrimer A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 is displaced towards the red in the low polar solvents such as toluene, with a changes in relative vibronic intensities and a near disappearance of the fine structure, confirming that the dendrimeric platform, the peripheral TEG chains and the proximity of the adjacent chromophores contribute to modify the polarity of the environment.
Exemple 30 : Absorption à deux photons du dendrimère hydrosohible A~(B1-(C1-(D1~ Example 30: Two-photon absorption of the hydrosoluble dendrimer A ~ (B1- (C1- (D1 ~
Les propriétés d'absorption à deux photons des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1-(C1- (Dl-(El)2)i)2)6 ont été déterminées en mesurant leur fluorescence par excitation à deux photons (TPEF) dans le THF. The two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendrimers were determined by measuring their Two-photon excitation fluorescence (TPEF) in THF.
Tableau 3 : Données d'absoiption à deux photons de Cl", A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1-(C1- (Dl-(El)2)r)2)6 Table 3: Two photon absoφtion data of Cl ", A- (B1- (C1") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) r) 2 ) 6
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Section efficace d'ADP à ADP nm. 1 GM = 10 " cm s-photon" . Effective section from ADP to ADP nm . 1 GM = 10 " cm s-photon " .
Comme on le voit sur la Figure 4 et dans le Tableau 3, les sections efficaces d'absorption à deux photons augmentent à peu près linéairement avec le nombre de chromophores greffés sur le dendrimère, conduisant à des valeurs exti'êmement élevées, jusqu'à 19200 GM à 730 nm pour le dendrimère A-(B1-(C1")2)6- Un tel comportement additif pour A-(B1-(C1")2)6 indique que les réponses moléculaires individuelles des chromophores greffés sur la plate- forme dendrimérique ne sont que légèrement affectées par le fort confinement et par la modification de Γ environnement induite par la plate-forme dendrimérique. Concernant le dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)j)2)6, bie que l'introduction de groupements hydrosolubilisants conduise à une diminution d'environ 30% des sections efficaces d'ADP par rapport au dendrimère liposoluble A-(B1-(C1")2)6, des valeurs très élevées (13200 GM à 730 nm) sont conservées. As seen in Figure 4 and Table 3, the two-photon absorption cross sections increase approximately linearly with the number of chromophores grafted onto the dendrimer, resulting in exemely high values, up to 19200 GM at 730 nm for the A- (B1- (C1 ") 2) dendrimer. 6- Such additive behavior for A- (B1- (C1") 2 ) 6 indicates that the individual molecular responses of the chromophores grafted onto the plate - dendrimeric form are only slightly affected by the strong confinement and by the modification of Γ environment induced by the dendrimeric platform. With regard to the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) (d) dendrimer, the introduction of water-solubilizing groups leads to a decrease of about 30% in the cross-sections of ADP relative to at the liposoluble dendrimer A- (B1- (C1 ") 2 ) 6 , very high values (13200 GM at 730 nm) are maintained.
De plus, des sections efficaces d'ADP supérieures à 5000 GM sont maintenues jusqu'à 900 nm pour- A-(B1-(C1")2)6 et jusqu'à 4000 GM pour A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6, ce qui est d'un grand intérêt pour les applications biologiques, pour la PDT à deux photons (où Ο2ΦΔ est le facteur de mérite) comme pour l'imagerie multipho tonique (où σ2·Φρ est le facteur de mérite). In addition, ADP cross-sections greater than 5000 GM are maintained at 900 nm for-A- (B1- (C1-) 2 ) 6 and up to 4000 GM for A- (B1- (C1- Dl- (El) 2 ) i) 2 ) 6 , which is of great interest for biological applications, for two-photon PDT (where Ο 2 ΦΔ is the merit factor) as for multiphonic tonal imaging (where σ 2 · Φρ is the merit factor).
Exemple 31 : Compatibilité du mannose avec le photosensibilisateur Example 31: Compatibility of mannose with the photosensitizer
Il est nécessaire de vérifier la compatibilité du mannose avec les propriétés d'émission du photosensibilisateur Cl". Pour cela, on étudie la fluorescence d'une solution de Cl" dans le DMSO en présence de quantités croissantes de mannose. Comme on peut le voir sur la Figure 5, l'intensité de fluorescence de Cl" ne diminue pas, même après ajout de 1760 équivalents de mannose. Le mannose n'est donc pas un inhibiteur de la fluorescence du chromophore Cl", et on peut donc conclure qu'il n'y a pas d'interaction entre le mannose et le photosensibilisateur. It is necessary to verify the compatibility of mannose with the emission properties of photosensitizer Cl ", for this purpose, the fluorescence of a solution of Cl" in DMSO is studied in the presence of increasing amounts of mannose. As can be seen in Figure 5, the fluorescence intensity of Cl "does not decrease, even after addition of 1760 mannose equivalents, so mannose is not an inhibitor of the chromophore Cl" fluorescence, and can conclude that there is no interaction between mannose and photosensitizer.
Exemple 32 : Absorption à un photon, fluorescence et photosensibilisation du dendrimère mannose acétate Example 32 Photon Absorption, Fluorescence and Photosensitization of the Mannose Acetate Dendrimer
Les propriétés d'absoiption à un photon, de fluorescence et de production d'oxygène singulet du A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)Ê ont été mesurées dans le THF et sont rassemblées dans le Tableau 4. The properties of absoiption a photon fluorescence and singlet oxygen production of A- (B1- (1- (D1- (E4A C) 2) I) 2) Ê were measured in THF and gathered in Table 4.
Le A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)É possède une bande d'absorption intense allant du proche UV à la partie bleue du spectre du visible, et une émission jaune dans le THF. Ces propriétés sont tout à fait comparables à celle du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6. Le coefficient d'extinction molaire au maximum d'absorption de A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4AC)2)i)2)6 (1.2 l06 M"1 cm ) est sensiblement plus élevé que celui de A-(B1-(C1-(D1-(E1)2) 2)6 (1.0*106 M"1 cm"1). Toutefois, un déplacement vers le rouge de la bande d'émission et une diminution significative du rendement quantique de fluorescence sont observés pour le dendrimère A- (B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6 ar rapport au dendrimère A-(Bl-(Cl")2)é, ce qui indique que l'addition d'une couche périphérique de mannoses acétates augmente la polarité de l'environnement des chromophores situés à l'intérieur du dendrimère, et est également susceptible de modifier leur positionnement relatif. A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2 ) I) 2) E has an intense absorption band from near UV to the blue part of the visible spectrum, and a yellow emission in THF . These properties are quite comparable to that of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6. The molar extinction coefficient at the absorption maximum of A- (B1- (C1- (D1- (E4 AC ) 2) i) 2) 6 (1.2-10 6 M -1 cm) is substantially higher than that of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2) 6 (1.0 * 10 6 M -1 cm -1 ), however, a redshift of the emission band and a significant decrease in the fluorescence quantum yield are observed for the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4AC) 2) I) 2) 6 relative to the dendrimer A- (B1- (Cl ") 2 ) e, indicating that the addition of a peripheral layer of mannoses acetates increases the polarity of the environment of the chromophores located inside the dendrimer, and is also likely to modify their relative positioning.
Enfin, le rendement quantique de production d'oxygène singulet du dendrimère A-(B1-(C1- (D1-(E4AC)2)I)2)6 est de 0.11, ce qui est une peu moins élevé que celui du chromophore Cl" seul (0,16), mais comparable à celui des dendrimères A-(B1-(C1")2)6 et A-(B1-(C1-(D1- (El)2)i)2)<; (0.10 et 0.07, respectivement). Finally, the quantum yield of singlet oxygen production of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 dendrimer is 0.11, which is slightly less than that of the chromophore Cl "alone (0.16), but comparable to that of the dendrimers A- (B1- (C1") 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) <; (0.10 and 0.07, respectively).
Tableau 4 : Propriétés photophysiques du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4Ac)2)I)2)6 dans le THF Table 4: Photophysical Properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A c ) 2) I) 2) 6 Dendrimer in THF
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" Coefficient d'extinction molaire à raax. Rendement quantique de fluorescence déterminé en utilisant comme standard la Rhodamine 6G dans l'éthanol (Φ =0.94). 0 Rendement quantique de production d'oxygène singulet dans le dichlorométhane, déterminé par rapport à la tétraphenylporphyrine dans le dichlorométhane (ΦΛ [TPP] = 0.60). Molar extinction coefficient at raax Fluorescence quantum yield determined using standard Rhodamine 6G in ethanol (Φ = 0.94) 0 Quantum yield of singlet oxygen production in dichloromethane, determined with respect to tetraphenylporphyrin in dichloromethane (Φ Λ [TPP] = 0.60).
Exemple 33 : Absorption à deux photons A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ac)2)i)2)6 : Example 33: Absorption A- two photons (BL- (Cl- (Dl (E4 c A) 2) i) 2) 6:
Les propriétés d'absorption à deux photons du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4Ac)2)J)2)6 ont été déterminées en mesurant leur fluorescence par excitation à deux photons (TPEF) dans le THF, et comparées à celles du photo sensibilisateur Cl" seul ainsi qu'à celles du dendrimère A-(B1-(C1")2)6. The two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A c ) 2) J) 2) 6 dendrimer were determined by measuring their fluorescence by two-photon excitation (TPEF) in THF. , and compared with those of the photo-sensitizer Cl "alone as well as those of the dendrimer A- (B1- (C1") 2 ) 6 .
Tableau 5 : Propriétés d'ADP du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4Ac)2)1)2)6 dans le THF Table 5: ADP Properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4 Ac ) 2 ) 1 ) 2 ) 6 Dendrimer in THF
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Figure imgf000061_0002
" Longueur d'onde où l'ADP est maximale.  "Wavelength where the ADP is maximum.
* Section efficace d'ADP à λΑ0Ρ™χ. 1 GM = 10 "50 cm .s.photon'\ Comme on peut le voir sur la Figure 6 et dans le Tableau 5, la section efficace d'absorption à deux photons du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)É est pratiquement proportionnelle au nombre de chromophore greffés sur le dendrimère, comme c'était le cas pour le dendrimère A-(B1-(C1")2)6, conduisant à une valeur extrêmement élevée de 21000 GM à 730 nm. Cela indique que les réponses individuelles de chaque chromophore greffé sur la plate-forme ne sont que légèrement affectées par le confinement, et même pat- la modification de renvironnement induite par la présence des mannoses protégés. Les sections efficaces d'absorption du A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6 sont même légèrement supérieures à celles du A-(B1-(C1 )2)6, ce qui semble indiquer que la présence de ces mannoses permet de mieux isoler les chromophores sur la plate-forme dendrimérique. Les sections efficaces d'ADP du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6 sont supérieures à 5000 GM jusqu'à plus de 900 nm, ce qui est positif pour une utilisation de ce dendrimère dans des applications biologiques. * Effective section of ADP at λ Α0Ρ ™ χ . 1 GM = 10 "50 cm . As can be seen in Figure 6 and Table 5, the two-photon absorption cross section of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) E dendrimer is substantially proportional to the number of chromophores grafted onto the dendrimer, as was the case for the A- (B1- (C1-) 2 ) 6 dendrimer, leading to an extremely high value of 21000 GM at 730 nm. of each chromophore grafted on the platform are only slightly affected by confinement, and even by the environmental change induced by the presence of the protected mannoses.The absorption cross-sections of A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 are even slightly higher than those of A- (B1- (C1) 2 ) 6, which seems to indicate that the presence of these mannoses makes it possible to better isolate the chromophores on The ADP cross sections of the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2 ) I) 2 ) 6 dendrimer are greater than 5000 GM up to at over 900 nm, which is positive for use of this dendrimer in biological applications.
Exemple 34 : Absorption à un photon, fluorescence et photosensibilisation de A-(B1-(C1-
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Example 34 Photon Absorption, Fluorescence and Photosensitization of A- (B1- (C1-
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Les propriétés d'absorption à un photon, de fluorescence du A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 ont été mesurées dans le DMF et sont rassemblées dans le Tableau 6. Ces mesures n'ont pas pu être réalisées dans le THF comme pour tous les autres dendrimères, car A-(B1»(C1-(D1- (E4H)2)I)2)6 est insoluble dans ce solvant. The one-photon, fluorescence absorption properties of A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 were measured in DMF and are collated in Table 6. These measurements are could not be carried out in THF as for all other dendrimers, since A- (B1) (C1- (D1- (E4H) 2 ) I) 2) 6 is insoluble in this solvent.
Tableau 6 : Propriétés photophysiques du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 dans le DMF Table 6: Photophysical Properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2 ) I) 2) 6 Dendrimer in DMF
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" Coefficient d'extinction molaire à Xn s max. Rendement quantique de fluorescence déterminé en utilisant comme standard la Rhodamine 6G dans l'éthanol (Φ =0.94). Molar extinction coefficient at Xn s max Fluorescence quantum yield determined using standard Rhodamine 6G in ethanol (Φ = 0.94).
Le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 possède une bande d'absorption intense allant du proche UV à la partie bleue du spectre du visible, et une émission orange. The A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 dendrimer has an intense absorption band from near UV to the blue part of the visible spectrum, and an orange emission.
Le coefficient d'extinction molaire au maximum d'absorption de 9.8* 105 M"1 cm"1 pour le A- (B1-(C1-(D1-(E4H)2)1)2)6 est sensiblement égal à celui du dendrimère A-(B1-(C1-(D1- (El)2) 2)6 (1.0x10e M"1 -cm"1). Le déplacement vers le rouge plus prononcé de la bande d'émission et la diminution significative du rendement quantique de fluorescence du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)1)2)6 (Φρ = 0.11) par rapport aux autres dendrimères s'expliquent avant tout par l'utilisation du DMF, solvant nettement plus polaire que le THF. La présence d'une couche périphérique de mannoses peut aussi contribuer à l'augmentation de la polarité de l'environnement des chromophores situés à l'intérieur du dendrimère. Enfin, le rendement quantique de production d'oxygène singulet de A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)Û n'a pas pu être mesuré, car ce dendrimère n'est pas soluble dans les solvants dans lesquels cette mesure peut être réalisée (toluène, chloroforme, DCM, EtOH, D20). The molar extinction coefficient at the absorption maximum of 9.8 * 10 5 M "1 cm " 1 for A- (B1- (C1- (D1- (E4 H ) 2 ) 1 ) 2 ) 6 is substantially equal to that the dendrimer A- (B1- (1- (D1- (El) 2) 2) 6 (1.0x10 e M "1 -cm" 1). the red shift more pronounced the transmission band and significant decrease in the fluorescence quantum yield of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) 1 ) 2 ) 6 (Φρ = 0.11) compared to other dendrimers can be explained primarily by the use of DMF, a much more polar solvent than the THF. The presence of a peripheral layer of mannoses can also contribute to the increase of the polarity of the environment of chromophores located inside the dendrimer. Finally, the quantum yield of singlet oxygen production of A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 0 could not be measured because this dendrimer is not soluble in the solvents in which this measurement can be carried out (toluene, chloroform, DCM, EtOH, D 2 0).
Exemple 35 : Absorption à deux photons de A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)<> Example 35: Two-photon absorption of A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) <>
Les propriétés d'absorption à deux photons du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 ont été déterminées dans le DMF (Tableau 7, Figure 7), et comparées à celles du photosensibilisateur Cl" seul ainsi qu'à celles du dendrimère A-(B1-(C1")2)6- Les différences observées entre les spectres d'ADP de A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6 et de A-(B1- (Cl")2)6 sont relativement peu importantes et peuvent s'expliquer par le changement de solvant. The two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 dendrimer were determined in DMF (Table 7, Figure 7), and compared to those of photosensitizer Cl "alone as well as those of the dendrimer A- (B1- (C1") 2 ) 6- The differences observed between the ADP spectra of A- (B1- (C1-) 2 ) (D1- (E4 H ) 2 ) i) 2 ) 6 and A- (B1- (Cl ") 2) 6 are relatively unimportant and can be explained by the change of solvent.
Tableau 7 : Données d'ADP du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4h)2)I)2)G dans le DMF Table 7: Data of the dendrimer ADP A- (B1- (1- (D1- (E4 h) 2) I) 2) G in DMF
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" Longueur d'onde où l'ADP est maximale.  "Wavelength where the ADP is maximum.
* Section efficace d'ADP à ADP'™*. 1 GM = 10 "50 cm4.s.photon '. * Effective section of ADP to ADP '™ *. 1 GM = 10 "50 cm 4 .
Exemple 36 : Absorption à un photon, fluorescence et photosensibilisation du dendrimère A-(B1-(C1~(D1-(E5E1/E4ii)2)i)2)6 Example 36 Photon Absorption, Fluorescence and Photosensitization of the Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4ii) 2) i) 2) 6
Bien que la solubilité du dendrimère mixte A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/E41I)2)I)2)Ô dans le THF soit améliorée par rapport au dendrimère tout mannose A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6, elle n'est pas suffisante pour réaliser l'ensemble des mesures photophysiques (en particulier la détermination du coefficient d'extinction molaire) dans ce solvant. Les propriétés photophysiques de A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/£4H)2)I)2)6 ont donc été mesurées dans le DMF, comme l'ont été précédemment celles du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 (Tableau 8). Tableau 8 : Propriétés photophysiques du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/E4H)2)I)2)6 dans le DMF Although the solubility of the mixed dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5EI / E41I) 2) I) 2) O in THF improved compared to the dendrimer all mannose A- (BL- (Cl- ( D1- (E4 H ) 2) i) 2) 6, it is not sufficient to carry out all the photophysical measurements (in particular the determination of the molar extinction coefficient) in this solvent. The photophysical properties of A- (B1- (1- (D1- (E5EI / £ 4 H) 2) I) 2) 6 were therefore measured in DMF, as were those previously dendrimer A- (B1 - (C1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 (Table 8). Table 8: Photophysical Properties of the A- (B1- (C1- (D1- (iclI / E4H) 2) I) 2) 6 Dendrimer in DMF
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utilisant comme standard la Rhodamine 101 dans l'éthanol (Φ =1).  using as standard Rhodamine 101 in ethanol (Φ = 1).
Comme les précédents dendrimères, le composé A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/JÎ4ÎI)2)I)2)Ô possède une bande d'absoiption intense dans la partie du spectre allant du proche UV à la partie bleue du visible, et comme le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E½)2)I)2)6 une émission orange dans le DMF. Like the previous dendrimers, the compound A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / J I 4 I I) 2) I) 2) O has an intense absoiption band in the portion of spectrum from near UV to the blue part of the visible, and like the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E½) 2) I) 2) 6 an orange emission in DMF.
Le coefficient d'extinction molaire de A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/E4H)2)I)2)6 (l .OxlO6 M"1 -cm"1) est pratiquement identique à celui de A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)6 (9.8x10s Μ'' -cm"1). Cependant, le rendement quantique de fluorescence dans le DMF augmente sensiblement, de 1 1% à 15%. The molar extinction coefficient of A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E 4 H) 2) I) 2) 6 (l .OxlO 6 M "1 -cm" 1) is substantially identical than A- (B1- (1- (D1- (E4H) 2) I) 2) 6 (9.8x10 s Μ '' -cm "1). However, the fluorescence quantum yield increases significantly in DMF, from 1 1% to 15%.
Comme pour le dendrimère tout mannose, le rendement quantique de production d'oxygène singulet du dendrimère mixte n'a pas pu être mesuré, à cause de son manque de solubilité dans les solvants compatibles avec cette mesure.  As for the all-mannose dendrimer, the quantum yield of singlet oxygen production of the mixed dendrimer could not be measured because of its lack of solubility in solvents compatible with this measurement.
Exemple 37 : Absorption à deux photons du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E5EI/E4H)2)I)2)<; Example 37: two-photon absorption of the dendrimer A- (B1- (1- (D1- (E5 E I / E4H) 2) I) 2) <;
Les propriétés d'absorption à deux photons du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E5E1/E4H)2)I)2)6 sont très proches de celles du dendrimère tout mannose A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)I)2)Û (Figure 8 et Tableau 9). Le dendrimère mixte présente ainsi une section efficace d'ADP de 17100 GM à 730 nm. Un tel comportement indique que la modification de l'environnement induite par le remplacement de la moitié des mannoses par des groupements TEG n'affecte que très peu les réponses moléculaires individuelles des chromophores situés au cœur du dendrimère. Il faut aussi noter que les sections efficaces d'ADP dépassent également les 5000 GM jusqu'à 950 nm, ce qui est d'un grand intérêt pour les applications biologiques. The two-photon absorption properties of the A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4H) 2) I) 2 ) 6 dendrimer are very similar to those of the all-mannose A- (B1- (C1) dendrimer. - (D1- (E4H) 2 ) I) 2 ) Û (Figure 8 and Table 9). The mixed dendrimer thus has an ADP cross section of 17100 GM at 730 nm. Such behavior indicates that the modification of the environment induced by the replacement of half of the mannoses by TEG groups affects only very little the individual molecular responses of the chromophores located in the heart of the dendrimer. It should also be noted that ADP cross sections also exceed 5000 GM up to 950 nm, which is of great interest for biological applications.
Tableau 9 : Données d'ADP du dendrimère A-{B1-(C1-(D1-(E5EÏ/E4H)2)I)2)Û dans le DMF
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" Longueur d'onde où PADP est maximale. Table 9: Data of the ADP dendrimer A- {B1 (1- (D1- (E5 EI / E4H) 2) I) 2) Û in DMF
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"Wavelength where PADP is maximum.
* Section efficace d'ADP à ADP™*. 1 GM = 10 "50 cm4.s.photon * Effective section from ADP to ADP ™ *. 1 GM = 10 "50 cm 4 .s.photon
3. Applications in vitrolin vivo 3. Applications in vitrolin vivo
Exemple 38 : Culture cellulaire Example 38: Cell Culture
Les cellules MCF-7 viennent de la banque cellulaire américaine ATCC. Elles sont cultivées dans des flacons de cultures de 175 cm3 contenant du milieu DMEM/-F12 avec Glutamax enrichi avec 10% de sérum de veau foetal et 1% de Pénicilline/Streptomycine. Elles sont placées dans un incubateur à 37°C et à 5% de C02 à saturation en humidité et se multiplient jusqu'à former un tapis cellulaire monocouche jointif : on parle alors de confluence. A ce stade, on procède à un passage : les cellules sont décollées pour être réensemencées dans un nouveau flacon de culture. Pour cela, le surnageant contenant le milieu de culture appauvri et les cellules mortes est retiré puis deux rinçages doux au PBS sont effectués afin d'éliminer toutes traces de milieu et de sérum. En effet, le sérum contenu dans le milieu inactiverait l'enzyme, la trypsine, utilisée pour décoller les cellules. On ajoute 1.5 mL de trypsine que l'on garde au contact des cellules pendant 10 s avant de la retirer. On place le flacon de culture dans l'incubateur à 37°C / 5% de C02. Après 5 min, les cellules se décollent et sont récupérées avec 36 mL de milieu frais. C'est à partir de cette suspension cellulaire que les dilutions seront effectuées pour ensemencer les flacons de cultures ou chambres de culture cellulaire multi-compartimentées. MCF-7 cells come from the American ATCC cell bank. They are cultured in flasks of 175 cm 3 cultures containing DMEM / -F12 medium with Glutamax enriched with 10% fetal calf serum and 1% Penicillin / Streptomycin. They are placed in an incubator at 37 ° C. and at 5% of moisture-saturated C0 2 and multiply to form a contiguous monolayer cell mat: this is known as confluence. At this stage, a passage is made: the cells are detached to be reseeded in a new culture flask. For this purpose, the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed and then two soft rinsings with PBS are carried out in order to eliminate all traces of medium and serum. Indeed, the serum contained in the medium would inactivate the enzyme, trypsin, used to take off the cells. 1.5 ml of trypsin are added and kept in contact with the cells for 10 seconds before being removed. The culture flask was placed in the incubator at 37 ° C / 5% CO 2 . After 5 min, the cells detach and are recovered with 36 ml of fresh medium. It is from this cell suspension that the dilutions will be made to seed the culture flasks or multi-compartmented cell culture chambers.
Une dilution au 5ème est effectuée pour la sous culture. A 5th dilution is performed for the subculture.
Exemple 39 : Viabilité cellulaire en présence du dendrimère hydrosoluble A-(B1-(C1- (D1-(E1)2)!)2)6 : Example 39 Cell Viability in the Presence of the Water-Soluble Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 )!) 2 ) 6 :
Afin de solubiliser les dendrimères dans les milieux biologiques, ils sont tout d'abord dissous dans un minimum de THF à 5 mg/mL, puis cette solution mère est diluée dans le milieu de culture à la concentration choisie. Les tests biologiques ont été réalisés sur des cellules MCF-7, une lignée de cellules de cancer du sein humaines. Ce sont des cellules couramment utilisées car elles sont adhérentes et prolifèrent rapidement. In order to solubilize the dendrimers in biological media, they are first dissolved in a minimum of 5 mg / mL THF, and then this stock solution is diluted in the culture medium at the chosen concentration. Biological tests were performed on MCF-7 cells, a human breast cancer cell line. These are commonly used cells because they are adherent and proliferate rapidly.
La viabilité cellulaire en présence de dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 a tout d'abord été testée (Figure 9). Les cellules MCF-7 sont incubées 4 jours à différentes concentrations de A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)j)2)6 allant de 0 à 50 g/mL. Après incubation, un test enzymatique au MTT est réalisé afin de déterminer le pourcentage de survie cellulaire. Le réactif utilisé est le sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(455-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium). Le cycle tétrazolium est réduit en formazan par la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules vivantes actives, conduisant à la formation d'un précipité de couleur violette dans la mitochondrie (Figure 10). Cell viability in the presence of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 dendrimer was first tested (Figure 9). MCF-7 cells are incubated for 4 days at different concentrations of A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) j) 2 ) 6 ranging from 0 to 50 g / mL. After incubation, an MTT enzymatic test is performed to determine the percentage of cell survival. The reagent used is the tetrazolium salt MTT (3- (4 5 5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide). The tetrazolium ring is reduced in formazan by the mitochondrial succinate dehydrogenase of active living cells, leading to the formation of a violet-colored precipitate in the mitochondria (Figure 10).
La quantité de précipité formée est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes (mais également à l'activité métabolique de chaque cellule). Il suffit donc après l'incubation des cellules avec du MTT pendant 3 h à 37 °C de dissoudre les cellules, leur mitochondries et donc les précipités violets de formazan dans un mélange DMSO/ EtOH (1 :1). Un simple dosage par spectroscopie de la densité optique à 540 nm permet de connaître la quantité relative de cellules vivantes et métaboliquement actives.  The amount of precipitate formed is proportional to the amount of living cells (but also to the metabolic activity of each cell). It is therefore sufficient after the incubation of the cells with MTT for 3 h at 37 ° C to dissolve the cells, their mitochondria and thus the violet precipitates of formazan in a DMSO / EtOH mixture (1: 1). A simple spectroscopic assay of the optical density at 540 nm makes it possible to know the relative quantity of living and metabolically active cells.
Il en ressort que le A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 n'est pas toxique sans irradiation à ces concentrations, et que le THF jusqu'à 1% n'a pas non plus d'effet délétère sur la viabilité cellulaire. It appears that A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 is not toxic without irradiation at these concentrations, and that THF up to 1% does not no deleterious effect on cell viability.
• Imagerie confocale Exemple 40 : Etudes par microscopie confocale • Confocal imaging Example 40: Confocal microscopy studies
La microscopie confocale est une technique de microscopie optique. Elle permet d'étudier l'intérieur des objets microscopiques et de les visualiser en trois dimensions. Par rapport à la microscopie conventionnelle, la microscopie confocale offre différents avantages pour la localisation in situ d'une sonde fluorescente dans les cellules et plus particulièrement dans des coupes de tissus épais : Confocal microscopy is an optical microscopy technique. It allows to study the inside of microscopic objects and to visualize them in three dimensions. Compared to conventional microscopy, confocal microscopy offers different advantages for the in situ localization of a fluorescent probe in cells and more particularly in thick tissue sections:
• élimination du signal fluorescent provenant d'autres plans que le plan focal grâce au pinhoie, • elimination of the fluorescent signal coming from other planes than the focal plane thanks to the pinhoie,
• augmentation de la résolution latérale (0.2 um) et axiale (0,4 um)  • increase in lateral resolution (0.2 μm) and axial resolution (0.4 μm)
• observation simultanée de différentes sondes fluorescentes  • simultaneous observation of different fluorescent probes
• acquisition de séries de sections optiques permettant la reconstruction 3D.  • acquisition of series of optical sections allowing 3D reconstruction.
Une dilution au 25ème est effectuée sur les cellules pour leur ensemencement, afin de les observer (un ou deux photons) ou de les exciter (deux photons) au microscope confocal, dans des plaques multi-puits (384 ou 96 puits) à fond de verre (épaisseur 0.17 mm), avec un bord noir en polystyrène. Il est à noter que pour toute série d'expériences, un des puits est conservé comme puits témoin (absence de dendrimères). On vérifie ainsi que l'autofluorescence des cellules est négligeable comparativement à la fluorescence des dendrimères. De plus, cela permet également de vérifier l'innocuité du laser sur les cellules. A 25th dilution is carried out on the cells for their seeding, in order to observe them (one or two photons) or to excite them (two photons) under a confocal microscope, in multi-well plates (384 or 96 wells) glass (thickness 0.17 mm), with an edge black polystyrene. It should be noted that for any series of experiments, one of the wells is kept as a control well (absence of dendrimers). It is thus verified that the autofluorescence of the cells is negligible compared to the fluorescence of the dendrimers. In addition, it also makes it possible to check the safety of the laser on the cells.
Une solution mère de dendrimère à 5 mg/mL est préparée dans le THF ou dans le DMSO, et soniquée. Une dilution par 100 dans du milieu frais est effectuée afin d'obtenir une concentration de 50 μg/mL en dendrimère. Dans les plaques ensemencées la veille, le surnageant contenant le milieu de culture appauvri et les cellules mortes est retiré, et la solution de dendrimère à 50 μg/mL est ajoutée (50 ΐ, pour les plaques 384 puits et 200 μΐ, pour les plaques 96 puits). La plaque multi-puits est placée à l'incubateur à 37°C/5% C02 pendant un temps déterminé (3h, 5h, ou 20h). Le surnageant est retiré, puis un lavage doux au PBS est effectué. Les cellules sont ensuite incubées avec le Hoechst 33342 (marqueur nucléique) ou avec le CellMask deep red (marqueur membranaire). L'incubation avec le Hoechst 33342 est réalisée à une concentration de 2 μ /ηΛ. Après 30 min, le surnageant est retiré, un lavage doux au PBS est effectué, puis du milieu frais sans rouge de phénol est ajouté. La plaque multi-puits peut alors être analysée en imagerie confocale à un photon. L'incubation avec le CellMask deep red (marqueur membranaire) est réalisée à une concentration de 1 mg/mL. Après 30 min, le surnageant est retiré, un lavage doux au PBS est effectué, puis du milieu frais sans rouge de phénol est ajouté. La plaque multi-puits peut alors être analysée en imagerie confocale à deux photons. A stock solution of 5 mg / mL dendrimer is prepared in THF or DMSO, and sonicated. A dilution per 100 in fresh medium is carried out in order to obtain a concentration of 50 μg / ml in dendrimer. In the plates seeded the day before, the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed, and the dendrimer solution at 50 μg / mL is added (50 ΐ, for the 384-well plates and 200 μΐ, for the plates 96 wells). The multi-well plate is placed in the incubator at 37 ° C / 5% C0 2 for a determined time (3h, 5h, or 20h). The supernatant is removed and then a gentle wash with PBS is performed. The cells are then incubated with Hoechst 33342 (nucleic marker) or CellMask deep red (membrane marker). Incubation with Hoechst 33342 is performed at a concentration of 2 μ / ηΛ. After 30 min, the supernatant is removed, gentle washing with PBS is performed, then fresh medium without phenol red is added. The multiwell plate can then be analyzed in photon confocal imaging. Incubation with CellMask deep red (membrane marker) is performed at a concentration of 1 mg / mL. After 30 min, the supernatant is removed, gentle washing with PBS is performed, then fresh medium without phenol red is added. The multiwell plate can then be analyzed in two-photon confocal imaging.
Exemple 41 : Imagerie confocale monophotonique avec le dendrimère hydrosoluble A- (B1-(C1-(D1-(E1)2) ¾)6 Example 41: Confocal Monophoton Imaging with the Water-Soluble Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) ¾) 6
Grâce à la brillance à un et à deux photons élevée du dendrimère A- Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6, il est possible d'étudier sa pénétration dans les cellules par microscopie confocale mono et/ou biphotonique. Les cellules MCF-7 ont été incubées 30 min avec un marqueur nucléique, le Hoechst 33342, à une concentration de 2 μg/mL et avec le A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 pendant 24 h à 50 μg/mL·. Les cellules sont alors analysées par microscopie confocale avec un objectif x63. Un contrôle avec du THF seul a aussi été réalisé et s'est avéré négatif. Le marqueur nucléique est excité à 405 nm, et le A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 à 458 nm. Les images obtenues sont regroupées dans la Figure 11. Thanks to the high one- and two-photon brightness of the A- B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 dendrimer, it is possible to study its penetration into the cells by mono and confocal microscopy. / or two-photon. The MCF-7 cells were incubated for 30 min with a nucleic marker, Hoechst 33342, at a concentration of 2 μg / ml and with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 for 24 h at 50 μg / mL ·. The cells are then analyzed by confocal microscopy with an x63 objective. Control with THF alone was also performed and found to be negative. The nucleic marker is excited at 405 nm, and A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 at 458 nm. The resulting images are grouped together in Figure 11.
L'image A correspond à la fluorescence des noyaux cellulaires incubés avec le marqueur Hoechst 33342, Sur l'image B, on observe des points plus ou moins brillants, correspondant à la fluorescence de petits agrégats du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)É. La superposition de la fluorescence du noyau (A) avec la fluorescence du A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 (B) permet d'obtenir l'image C de la Figure 1 1, qui montre que les dendrimères se situent autour des noyaux. La mise au point du plan z étant réalisée au niveau des noyaux cellulaires, on peut en conclure que les nano-objets se trouvent dans la cellule et ont donc bien passé la membrane cellulaire. The image A corresponds to the fluorescence of the cell nuclei incubated with the Hoechst marker 33342. On the image B, more or less bright points are observed, corresponding to the fluorescence of small aggregates of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) É . The superposition of the fluorescence of the nucleus (A) with the fluorescence of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 (B) gives the image C of FIG. 1, which shows that the dendrimers are around the nuclei. The development of the z plane being performed at the level of the cell nuclei, it can be concluded that the nano-objects are in the cell and have therefore passed well the cell membrane.
On observe aussi que les dendrimères ont un alignement en forme de croissant, ce qui laisse supposer qu'ils se situent dans les lysosomes, et qu'ils auraient donc été incoiporés dans les cellules par endocytose.  It is also observed that the dendrimers have a crescent-shaped alignment, suggesting that they are located in the lysosomes, and that they would have been incoφorated in the cells by endocytosis.
Exemple 42 : Imagerie confocale biphotonique avec le dendrimère hydrosoluble A-(B1-
Figure imgf000068_0001
Example 42: Two-photon Confocal Imaging with Water-soluble Dendrimer A- (B1-
Figure imgf000068_0001
L'intemalisation des dendrimères a aussi été étudiée en microscopie confocale multiphonique. Cette fois, les cellules ont été incubées avec un marqueur membranaire, le CellMask deep red pendant 30 min à une concentration de 1 mg/mL et avec le A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 pendant 3 h à 50 μg/mL. Les deux chromophores sont excités à 750 nm. Le résultat est présenté sur la Figure 12. Les membranes cellulaires sont spécifiquement marquées par le CellMask, et on observe que les dendrimères se trouvent pour la plupart à l'intérieur des cellules, ce qui confirme que les dendrimères sont bien inte nalisés après 3 h d'incubation. The internalization of the dendrimers was also studied by multiphonic confocal microscopy. This time, the cells were incubated with a membrane marker, CellMask deep red for 30 min at a concentration of 1 mg / mL and with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) For 3 h at 50 μg / mL. Both chromophores are excited at 750 nm. The result is shown in Figure 12. The cell membranes are specifically labeled by CellMask, and it is observed that the dendrimers are mostly inside the cells, which confirms that the dendrimers are well integrated after 3 hours. incubation.
Les deux expériences de microscopie mono- et biphotonique (Exemples 41 et 42) nous apprennent que le dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)e est efficacement intemalisé. L'intemalisation est un point important pour l'efficacité d'un photosensibilisateur en PDT. En effet, quel que soit le mécanisme de la photoréaction, l'oxygène singulet et/ou les espèces oxygénées réactives produites sont des oxydants puissants qui réagissent sur leur lieu de production. Pour qu'il puisse y avoir mort cellulaire, il faut que les espèces réactives soient produites à l'intérieur des cellules. The two mono- and two-photon microscopy experiments (Examples 41 and 42) teach us that the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) e dendrimer is efficiently internalized. Internalization is an important point for the effectiveness of a photosensitizer in PDT. Indeed, whatever the mechanism of photoreaction, singlet oxygen and / or reactive oxygen species produced are powerful oxidizers that react at their place of production. In order for cell death to occur, the reactive species must be produced inside the cells.
Exemple 43 : Expériences de thérapie photodynamique Example 43: Photodynamic Therapy Experiments
Pour ces expériences, les cellules sont ensemencées uniquement dans des plaques 384 puits, afin d'exciter de façon précise tout le puits lors de l'irradiation laser. Une solution mère de dendrimère à 5 mg/mL est préparée dans le THF ou dans le DMSO, et soniquée. Une dilution est effectuée dans du milieu frais afin d'obtenir les différentes concentrations de 5 μί*/ηιΙ,, 10 μί^/ηιΐ , 20 μg/mL, 50 μ§/ιηΙ, et 100 μg/mL en dendrimère. Dans les plaques ensemencées la veille, le surnageant contenant le milieu de culture appauvri et les cellules mortes est retiré, et la solution de dendrimère à la concentration voulue est ajoutée (50 μί pour les plaques 384 puits). La plaque multi-puits est placée à l'incubateur à 37°C/5% C02 pendant un temps déterminé (5 h ou 20h). Le surnageant est retiré, puis un lavage doux au PB S est effectué et 50 μL de milieu frais sont ajoutés. Les cellules sont alors prêtes à être irradiées. For these experiments, the cells are seeded only in 384-well plates, in order to precisely excite the whole well during the laser irradiation. A stock solution of 5 mg / mL dendrimer is prepared in THF or DMSO, and sonicated. A dilution is performed in fresh medium to obtain the different concentrations of 5 μί * / ηιΙ ,, 10 μί ^ / ηιΐ, 20 μg / mL, 50 μ§ / ιηΙ, and 100 μg / mL of dendrimer. In the plates seeded the day before, the supernatant containing the depleted culture medium and the dead cells is removed, and the dendrimer solution at the desired concentration is added (50 μί for the 384-well plates). The multi-well plate is placed in the incubator at 37 ° C / 5% C0 2 for a specified time (5 h or 20 h). The supernatant is removed, then a gentle PB S wash is performed and 50 μL of fresh medium is added. The cells are then ready to be irradiated.
Après irradiation, les plaques sont remises à l'incubateur à 37°C/5% C02 pendant 48b. 10 μL de CellTiter 96 AQueous One Solution (solution aqueuse de MTS commerciale) sont ajoutés au puits. Une première mesure sur le spectromètre de plaque Multiskan FC Thermo scientific est réalisée à 492 nm. La plaque est ensuite remise à l'incubateur pendant 3h et à nouveau mesurée à 492 nm en spectrométrie. After irradiation, the plates are returned to the incubator at 37 ° C / 5% CO 2 for 48b. 10 μL of CellTiter 96 AQueous One Solution (aqueous solution of commercial MTS) is added to the well. A first measurement on the Multiskan FC Thermo Scientific plate spectrometer is carried out at 492 nm. The plate is then returned to the incubator for 3h and again measured at 492 nm in spectrometry.
Exemple 44 : Expériences photo toxicité en lumière naturelle Example 44: Photo toxicity experiments in natural light
Le protocole est le même que pour la microscopie confocale. Les cellules sont ensemencées dans des plaques 96 puits en plastique. Les cellules sont incubées avec une solution de dendrimère à 20 μg/mL dans du milieu frais et placées à l'incubateur à 37°C/5% C02 pendant 5h. Les cellules sont ensuite placées à la lumière du jour (sur la paillasse à côté de la fenêtre) pendant 4h. The protocol is the same as for confocal microscopy. The cells are seeded in 96-well plastic plates. The cells are incubated with a dendrimer solution at 20 μg / ml in fresh medium and placed in the incubator at 37 ° C./5% C0 2 for 5 hours. The cells are then placed in daylight (on the bench next to the window) for 4 hours.
Une solution de MTT à 5 mg/mL dans du milieu sans sérum est filtrée, puis 20 μL de cette solution sont ajoutés dans le puits. La plaque est placée à l'incubateur. Après 3h, le surnageant est filtré doucement, puis 150 μΐ, d'une solution d'éthanol/DMSO (1 :1) sont ajoutés et la plaque est agitée 30 min avant d'être mesurée par colorimétrie sur le spectrophotomètre Multiskan FC à 540 nm.  A solution of MTT at 5 mg / ml in medium without serum is filtered, then 20 μl of this solution are added to the well. The plate is placed in the incubator. After 3h, the supernatant is filtered gently, then 150 μΐ of ethanol / DMSO solution (1: 1) are added and the plate is stirred for 30 min before being measured by colorimetry on the 540 Multiskan FC spectrophotometer. nm.
Exemple 45 : Evaluation de l'efficacité du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2) 2)6 en PDT biphotonique : variation de la concentration en dendrimère EXAMPLE 45 Evaluation of the Efficacy of the Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6 in Dual Photon PDT: Variation of the Dendrimer Concentration
Les cellules MCF-7 ont été incubées pendant 5 h avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1- (El)2)i)2)6 à différentes concentrations. L'irradiation est effectuée sur un microscope confocal avec un laser titane: saphir délivrant des impulsions femtosecondes, (47 J.cm"2 en moyenne à pleine puissance) avec un objectif xlO. Les cellules sont irradiées à 760 nm par 3 scans de 1.57 seconde chacun. Les résultats sont observés 48 h après l'irradiation, par un test enzymatique au MTS grâce à une mesure de la densité optique à 492 nm. Le MTS est un sel de tétrazolium analogue au MTT, mais le formazan formé est soluble directement dans le milieu, (Le MTS est utilisé lorsque l'on travaille avec des plaques à fond de verre, ce qui est le cas ici). MCF-7 cells were incubated for 5 h with the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 dendrimer at different concentrations. The irradiation is carried out on a confocal microscope with a titanium laser: sapphire delivering femtosecond pulses, (47 J.cm -2 on average at full power) with a x10 objective The cells are irradiated at 760 nm by 3 scans of 1.57 The results are observed 48 hours after irradiation, by an MTS enzymatic test by measuring the optical density at 492 nm.The MTS is a tetrazolium salt analogous to MTT, but the formed formazan is soluble directly in the middle, (The MTS is used when working with glass bottom plates, which is the case here).
Comme on peut le voir sur la Figure 13, l'augmentation de la concentration en A-(B1-(C1- (Dl~(El)2)i)2)6 a une incidence sur l'efficacité en PDT à deux photons. Le pourcentage de survie cellulaire varie en effet de 85% à 64% lorsque l'on augmente la concentration en À- (Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 de 5 μg/mL à 50 μg/mL. Lorsque l'on passe de 50 g/ mL à 100 μg/ mL, le gain en efficacité est beaucoup plus limité, puisque la survie cellulaire n'est diminuée que de 6%. II semble donc que 50 μg mL soit une concentration suffisante. As can be seen in Figure 13, increasing the concentration of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 affects the efficiency in two-photon PDT. . The percentage of cell survival varies from 85% to 64% when the concentration of Δ- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2) i) 2 ) 6 is increased from 5 μg / ml to 50%. micrograms / mL. When going from 50 g / mL to 100 μg / mL, the gain in efficiency is much more limited, since cell survival is reduced by only 6%. It therefore seems that 50 μg ml is a sufficient concentration.
Exemple 46 : Evaluation de l'efficacité du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2) 2)6 en PDT biphotonique : variation du temps d'incubation Example 46: Evaluation of the Efficiency of the Dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) 2 ) 6 in Dual Photon PDT: Variation in Incubation Time
Cette expérience a été réalisée en augmentant le temps d'incubation (20 h au lieu de 5 h) et en utilisant la concentration intermédiaire de 50 μg/mL. La phototoxicité du laser et du dendrimère, seuls ou combinés a été étudiée dans les mêmes conditions que dans l'Exemple 45. Les résultats sont observés 48 h après l'irradiation (Figure 14). On observe que rirradiation seule n'a aucun effet délétère sur les cellules, de même que les dendrimères seuls. En revanche, l'irradiation biphotonique des nano-objets permet de détruire environ 80% des cellules cancéreuses après 20 h d'incubation. L'allongement de la durée de l'incubation permet donc d'augmenter considérablement l'efficacité du dendrimère. This experiment was carried out by increasing the incubation time (20 h instead of 5 h) and using the intermediate concentration of 50 μg / mL. The phototoxicity of the laser and the dendrimer, alone or in combination, was studied under the same conditions as in Example 45. The results are observed 48 hours after the irradiation (FIG. 14). It is observed that irradiation alone has no deleterious effect on the cells, as do the dendrimers alone. In contrast, two-photon irradiation of nano-objects can destroy about 80% of cancer cells after 20 hours of incubation. The lengthening of the duration of the incubation thus makes it possible to considerably increase the efficiency of the dendrimer.
La Figure 15 permet d'apprécier l'efficacité du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 en PDT à deux photons, par la comparaison des images en transmission d'une zone où les cellules MCF-7 incubées avec A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 n'ont pas été irradiées et d'une zone irradiée à deux photons. La zone non irradiée est composée de cellules à ~70% de confluence, alors que sur la zone irradiée il ne reste presque plus de cellules cancéreuses, et l'on observe surtout des débris cellulaires. FIG. 15 makes it possible to evaluate the efficiency of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer in two-photon PDT, by comparing the images in transmission of an area where the MCF-7 cells incubated with A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 were not irradiated and a two-photon irradiated area. The non-irradiated zone is composed of cells at ~ 70% confluence, whereas on the irradiated zone there are almost no more cancerous cells, and cell debris is observed mainly.
Exemple 47 : Phototoxicité en lumière naturelle du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-Example 47 Phototoxicity in Natural Light of the Dendrimer A- (B1- (C1- (D1-
(El)2)i)2)6 (EI) 2 ) i) 2 ) 6
Actuellement, les patients ayant été traités en thérapie photodynamique avec les photosensibilisateurs sur le marché, tels que le Photofrin, restent photosensibles plusieurs jours (voire plusieurs semaines) après le traitement, et doivent éviter pendant cette période toute exposition de la peau et des yeux à la lumière du soleil ou aux lumières intérieures vives (ampoules sans abat-jour, lumières des néons...). Le non-respect de ces précautions peut entraîner des érythèmes, des œdèmes et/ou la formation de cloques. Ainsi, la phototoxicité du dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)Û à la lumière du jour a été évaluée. Pour cela, les cellules MCF-7 ont été incubées 5 h avec du A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 à 20 μg/mL, puis exposées ou non pendant 4 h à la lumière naturelle. La survie cellulaire est déterminée comme précédemment par un test au MTT mesuré à 540 nm. Les résultats obtenus sont rassemblés dans la Figure 16 et montrent que le dendrimère ne présente pas de phototoxicité en lumière naturelle. Currently, patients who have been treated in photodynamic therapy with photosensitizers on the market, such as Photofrin, remain photosensitive for several days (or even weeks) after treatment, and should avoid during this period any exposure of the skin and eyes to sunlight or bright interior lights (bulbs without lampshades, neon lights ...). Failure to observe these precautions may result in erythema, edema and / or blistering. Thus, the phototoxicity of dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2) in the light of day was evaluated. For this, the MCF-7 cells were incubated for 5 h with A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 at 20 μg / mL, and then exposed or not for 4 h to natural light. Cell survival is determined as previously by an MTT test measured at 540 nm. The results obtained are collated in FIG. 16 and show that the dendrimer does not exhibit phototoxicity in natural light.
Le dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 ne présente donc des propriétés photosensibilisatrices que par excitation à deux photons dans le proche infra-rouge. Un tel résultat permet de traiter des tumeurs avec une résolution spatiale élevée tout en réduisant les effets secondaires non désirés liés à la photosensibilisation des patients à la lumière du jour. Cette grande différence d'efficacité entre la phototoxicité à un et à deux photons pourrait être liée au rendement quantique relativement faible de A~(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)6, qui est contrebalancée par sa section efficace d'ADP très élevée. Autrement dit, le facteur de mérite Ο2ΦΛ serait suffisamment élevé pour produire un effet phototoxique à deux photons avec le laser, mais le facteur de mérite εΦΛ ne le serait pas pour qu'un effet phototoxique soit mesurable à la lumière du jour. Une autre explication peut tenir de la structure même du dendrimère dont le squelette dendrimérique produit un effet écran sous excitation à un photon. The A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2) i) 2) 6 dendrimer therefore exhibits photosensitizing properties only by two-photon excitation in the near infra-red. Such a result makes it possible to treat tumors with a high spatial resolution while reducing unwanted side effects related to photosensitization of patients in the light of day. This large difference in efficiency between one- and two-photon phototoxicity may be related to the relatively low quantum yield of A ~ (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) 6, which is counterbalanced by its very high ADP cross section. In other words, the merit factor Ο 2 ΦΛ would be high enough to produce a phototoxic effect at two photons with the laser, but the merit factor εΦΛ would not be so that a phototoxic effect is measurable in the light of day. Another explanation may be the structure of the dendrimer itself whose dendrimeric skeleton produces a screen effect under one-photon excitation.
Exemple 48 : Comparaison des Dendrimères pour la thérapie photodynamique ciblée. Example 48 Comparison of Dendrimers for Targeted Photodynamic Therapy
Bien que les fonctions alcools libres des mannoses soient nécessaires à sa reconnaissance par les lectines, le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)65 possédant des mannoses protégés sous forme d'acétates, a été testé in vitro afin de comparer ses propriétés à celles du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6. Même si in vitro les fonctions mannoses protégées devraient jouer un rôle plus hydrosolubilisant que réellement cibleur, in vivo les groupes protecteurs mannoses pourront être clivés en présence d'estérases, et permettre alors une reconnaissance efficace par les lectines des cellules cancéreuses. Although the free alcohol functions of mannoses are necessary for its recognition by lectins, the A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 5 dendrimer possessing protected mannoses in the form of acetates, was tested in vitro to compare its properties with those of the A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer. Even if in vitro the protected mannose functions should play a more water-solubilising role than a real target, in vivo the mannose protective groups can be cleaved in the presence of esterases, and then allow efficient recognition by the lectins of the cancer cells.
La présence de 24 mannoses déprotégés en périphérie du dendrimère A-(B1-(C1-(D1- (E4H)2) 1)2)6 a engendré des problèmes de solubilité et des phénomènes d'agrégation dans la plupart des solvants polaires ou apolaires, à l'exception du DMF. Nous nous sommes donc orientés vers un dendrimère possédant moins de groupements de ciblage mannoses. Dans le but de retrouver une solubilité adéquate tout en conservant un ciblage spécifique pour les lectines, nous avons décidé de décorer la périphérie du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl')i)2)6 par une alternance de groupements hydrosolubilisants de type TEG et des groupements mannoses (A-(B1-(C1-{D1-(E5E1/E4H)2)Î)2)6). L'efficacité en thérapie photodynamique à deux photons des dendrimères cibleurs A-(B1- (Cl-(Dl-(E4Ac)2)i)2k A-{Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6 et À-(B1-(C1-(D1-(E5E1/E4H)2)I)2)6 a été évaluée et comparée à celle du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 ne possédant pas de fonctions de ciblage. The presence of 24 deprotected mannoses at the periphery of the A- (B1- (C1- (D1- (E4H) 2) 1) 2) 6 dendrimer resulted in solubility problems and aggregation phenomena in most polar solvents or apolar, with the exception of DMF. We therefore turned to a dendrimer with fewer targeting groups mannoses. In order to find an adequate solubility while maintaining a specific targeting for lectins, we decided to decorate the periphery of the A- (B1- (Cl- (D1 ') i) 2 ) 6 dendrimer by alternating hydrosolubilizing groups. of TEG type and mannose groups (A- (B1- (C1- {D1- (E5 E1 / E4H) 2) (I) 2) 6 ). Efficacy in two-photon photodynamic therapy of the target dendrimers A- (B1- (Cl- (D1- (E4 Ac ) 2 ) i) 2k A- {B1- (C1- (D1- (E4 H ) 2) i 2 ) 6 and A- (B1- (C1- (D1- (E5 E1 / E4H) 2 ) I) 2 ) 6 was evaluated and compared to that of the dendrimer A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 not having targeting functions.
Comme pour les essais de PDT à deux photons réalisés dans les exemples précédents (Exemples 45 à 47), différents essais ont été réalisés sur des cellules de cancer du sein MCF- 7, en faisant varier la concentration en dendrimères et le temps d'incubation.  As for the two-photon PDT assays performed in the previous examples (Examples 45 to 47), various assays were performed on MCF-7 breast cancer cells, varying the dendrimer concentration and the incubation time. .
La première série de tests a été réalisée avec une faible concentration en dendrimères de 5 μ¾/ Λ et un temps court d'incubation de 5h, en irradiant tous les échantillons à 760 nm par 3 scans de 1.57 seconde avec la même puissance laser. The first series of tests was carried out with a low dendrimer concentration of 5 μ¾ / Λ and a short incubation time of 5 hours, irradiating all the samples at 760 nm with 3 1.57 second scans with the same laser power.
Comme nous pouvons le voir sur la Figure 17, l'irradiation laser seule (Contrôle), en l'absence de dendrimères, n'a aucun effet délétère sur les cellules. D'une manière générale, on observe que pour cette faible concentration en dendrimères, la présence des motifs mannoses permet d'améliorer l'efficacité de la 2P PDT. En effet, la présence de ces mannoses permet une internalisation plus rapide des dendrimères dans les cellules tumorales par rapport au dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E1)2)I)2)Û ne possédant pas ces motifs, Par ailleurs, on constate que l'efficacité du dendrimère A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6 possédant 24 fonctions mannoses et celle du dendrimère A-(Bl"(Cl-(Dl-(E5EJ/E4H)2)i)2)c n'en possédant que 10 sont pratiquement identiques, avec une mortalité cellulaire de 43% et 42%, respectivement. Il n'est donc pas nécessaire que la surface des dendrimères soit entièrement recouverte de mannose. Il serait donc intéressant de diminuer encore le nombre de motifs mannoses, pour regarder si l'efficacité thérapeutique pourrait être maintenue avec un ou deux motifs mannoses seulement. As can be seen in Figure 17, laser irradiation alone (Control), in the absence of dendrimers, has no deleterious effect on the cells. In general, it is observed that for this low concentration of dendrimers, the presence of mannose units makes it possible to improve the efficiency of 2P PDT. Indeed, the presence of these mannoses allows a faster internalization of the dendrimers in the tumor cells compared to the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) I) 2 ) O not having these patterns, Moreover, it can be seen that the efficacy of the A- (B1- (Cl- (D1- (E4 H ) 2 ) i) 2 ) 6 dendrimer has 24 mannose functions and that of the A- (B1- (Cl-) dendrimer dl- (E5 EJ / E 4 H) 2) i) 2) c does possessing 10 are virtually identical, with a cell mortality of 43% and 42%, respectively. It is thus not necessary that the surface dendrimers is entirely covered with mannose, so it would be interesting to further reduce the number of mannose motifs, to see whether the therapeutic efficacy could be maintained with one or two mannose motives only.
De plus, les fonctions mannoses contribuent à diminuer la solubilité des dendrimères dans des solvants tels que le THF. Or pour solubiliser les dendrimères dans les milieux biologiques, il sont tout d'abord dissous dans un minimum de THF (dont l'innocuité vis-à-vis des cellules a été prouvée), avant d'être dilués dans le milieu de culture. La diminution du nombre de mannoses devrait donc permettre d'améliorer la solubilité des dendrimères dans le THF et d'éviter leur agrégation dans les milieux biologiques.  In addition, the mannose functions contribute to reducing the solubility of the dendrimers in solvents such as THF. However, in order to solubilize the dendrimers in biological media, they are first dissolved in a minimum of THF (whose safety against the cells has been proven), before being diluted in the culture medium. The reduction in the number of mannoses should therefore make it possible to improve the solubility of the dendrimers in THF and to avoid their aggregation in biological media.
On remarque enfin que l'efficacité du dendrimère À-(B1-(C1-(D1-(E4AC)2)I)2)6, qui possède 24 motifs mannoses dont les fonctions alcools sont protégées sous forme d'acétates, se situe à un niveau intermédiaire entre celui du A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 qui ne possède aucune fonction de ciblage, et celui du A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6- Une certaine affinité des mannoses acétates pour les lectines est envisagée de même qu'une amélioration du caractère hydrosoluble du dendrimère évitant la formation d'agrégats. Note finally that the efficiency of the dendrimer A- (B1- (C1- (D1- (E4AC) 2) I) 2) 6, which has 24 mannose units whose alcohol functions are protected in the form of acetates, is at an intermediate level between that of A- (B1- (C1- (D1- (E1) 2 ) i) 2) 6 which has no targeting function, and that of A- (BL- (Cl- (Dl (E4 H) 2) i) 2) 6- A affinity mannoses acetates for lectins is envisaged as well as improving the water-solubility dendrimer avoiding the formation of aggregates.
Exemple 49 : Comparaison des dendrimères pour la thérapie photodynamique ciblée et variation de la concentration en dendrimère. Example 49 Comparison of Dendrimers for Targeted Photodynamic Therapy and Change in Dendrimer Concentration.
Deux autres séries de tests ont été effectuées sur les mêmes dendrimères, à des concentrations plus élevées de 50 μg/ mL et 100 mL, en conservant le même temps d'incubation court de 5h. Les résultats sont présentés dans la Figure 18. Globalement, on observe que l'augmentation de la concentration conduit à une augmentation de l'effet cytotoxique. On constate également qu'à concentration égale, cette efficacité augmente lorsque les dendrimères possèdent des motifs mannoses spécifiques des cellules cancéreuses, et particulièrement à la concentration la plus élevée de 100 g mL. Ainsi, à cette concentration, le pourcentage de survie cellulaire est de 58% avec le dendrimère A-(B1-(C1-(DI-(E1)2)()2)6, contre 25% avec le dendrimère A-(B1-(C1-(D1-(E4H)2)1)2)6< On peut aussi noter que cet effet de concentration est plus marqué pour les dendrimères possédant des fonctions de ciblages que pour ceux qui n'en possèdent pas. Ainsi lorsque l'on compare les pourcentages de survie cellulaire à 50 g mL et à 100 μ§/ mL pour les différents dendrimères, on constate que le gain en efficacité est modéré pour A-(Bl-(Cl-(Dl-(El)2)i)2)6 (6%) et A-(B1-(C1-(D1- (E4AC)2)I)2)6 (11%) qui ne possèdent pas de fonctions de ciblage, alors qu'il est plus important pour A-(B1-(C1-(D1-(E5EJ/E H)2)I)2)« (18%) et surtout pour A-(Bl-(Cl-(Dl-(E4H)2)i)2)6 (26%). Avec ce dernier composé, on parvient à 75% de mortalité cellulaire. On peut attribuer ce phénomène à la présence accrue des lectines à la surface des cellules tumorales, ce qui permet une internalisation plus rapide des dendrimères possédant des groupements mannoses par rapport à ceux n'en possédant pas. Two other series of tests were performed on the same dendrimers, at higher concentrations of 50 μg / mL and 100 mL, keeping the same short incubation time of 5 hours. The results are shown in Figure 18. Overall, it is observed that the increase in concentration leads to an increase in the cytotoxic effect. It is also found that at equal concentration, this efficiency increases when the dendrimers have cancer-specific mannose motifs, and particularly at the highest concentration of 100 g ml. Thus, at this concentration, the percentage of cell survival is 58% with the dendrimer A- (B1- (C1- (DI- (E1) 2 ) ( ) 2 ) 6, against 25% with the dendrimer A- (B1 - (C1- (D1- (E4H) 2 ) 1 ) 2) 6 <It can also be noted that this concentration effect is more pronounced for dendrimers with targeting functions than for those that do not. cell survival percentages are compared to 50 gmL and 100 mcf / mL for the different dendrimers, it is found that the efficiency gain is moderate for A- (B1- (Cl- (D1- (E1) 2 ) i) 2 ) 6 (6%) and A- (B1- (C1- (D1- (E4A C ) 2) I) 2) 6 (11%) which do not have targeting functions, whereas is more important for A- (B1- (C1- (D1- (6) -ArI / EH) 2) I) 2) "(18%) and especially for A- (B1- (C1- (D1- (E4 H ) 2 i) 2 ) 6 (26%) With the latter compound, 75% of cell death is achieved, and this can be attributed to the increased presence of lectins on the surface of tumor cells, allowing faster eradication of dendrimers with mannose groups compared to those without.
Exemple 50 : Comparaison des dendrimères pour la thérapie photodynamique ciblée et augmentation du temps d'incubation. Example 50 Comparison of Dendrimers for Targeted Photodynamic Therapy and Increased Incubation Time
Une dernière série de tests a été réalisée en portant le temps d'incubation à 20h, avec une concentration intermédiaire en dendrimères de 50 μg/ mL (Figure 19). Comme on peut le voir sur la Figure 19, les 4 dendrimères présentent des efficacités en PDT à deux pilotons assez similaires, qu'ils soient ou non fonctionnalisés par des groupements mannoses. Il semble donc que, même si P internalisation des dendrimères sans motifs mannoses est plus lente, 12 l'allongement de la durée de l'incubation leur permet d'arriver (in vitro) à des niveaux d'efficacité comparables à ceux des dendrimères cibleurs. A final series of tests was carried out by taking the incubation time to 20h, with an intermediate concentration of dendrimers of 50 μg / mL (Figure 19). As can be seen in FIG. 19, the 4 dendrimers exhibit PDT efficiencies with two sufficiently similar pilotiles, whether or not they are functionalized by mannose groups. It therefore seems that even if internalization of dendrimers without mannose motifs is slower, The longer the incubation period allows them to arrive (in vitro) at levels of efficacy comparable to those of the target dendrimers.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé chimique photosensibilisateur biphotonique constitué par un dendrimère de formule générale 1. A biphotonic photosensitizer chemical compound consisting of a dendrimer of general formula
A-(B (C-(D (E)p)q)n)m ou A- (B (C- (D (E) p ) q ) n ) m or
A représente un cœur phosphoré choisi parmi A represents a phosphorus core selected from
Figure imgf000075_0001
m correspondant à la valence du cœur phosphoré A et étant un entier non nul compris de 3 à 8;
Figure imgf000075_0001
m corresponding to the valence of the phosphorus core A and being a non-zero integer from 3 to 8;
- B représente un premier motif, non chromophorique, directement lié m fois audit cœur phosphoré et choisi parmi
Figure imgf000075_0002
B represents a first non-chromophoric unit directly bound to said phosphorus core and chosen from
Figure imgf000075_0002
s 11  s 11
Me N-- -Me N - -
// \\ N^N \ 0Ù z est choisi parmi {j // \\ N ^ N \ 0Ù z is chosen from {j
Ph Ph Ph Ph  Ph Ph Ph Ph
Figure imgf000075_0003
n correspondant à la valence du premier motif B et étant un entier non nul compris de 2 à 5 ; i représentant le nombre d'unités de répétition successives du premier motif B greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 10, notamment de 1 à 4 ; - C représente un second motif, chromophorique, présentant des propriétés d'absorption à deux photons, et étant lié n fois directement audit premier motif B lorsque i est différent de 0 ou étant lié m fois directement audit cœur phosphoré A lorsque i est égal à 0 ; ledit second motif C étant de formule
Figure imgf000075_0003
n corresponding to the valence of the first pattern B and being a non-zero integer from 2 to 5; i representing the number of successive repeating units of the first pattern B grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 10, in particular from 1 to 4; C represents a second unit, chromophoric, having two-photon absorption properties, and being bound n times directly to said first pattern B when i is different from 0 or being bonded directly to said phosphor core A when i is equal to 0; said second pattern C being of formula
Figure imgf000076_0001
, β, ' et β' représentant indépendamment les uns des autres soit un groupement ~CH=CH- soit un groupement -C≡C— ; t et u représentant indépendamment l'un de l'autre un entier compris de 0 à 9 ; i et X2, identiques ou différents, représentant chacun un groupement alkyle en Ci à C25, avantageusement en Ci à C12, de préférence en C4, (CE^x-SC^M, (Œb^NAlks'1', (CH2)x-(OCH2-CH2)y-OH, M étant un métal alcalin et x étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 12, préférentiellement de 1 à 6, y étant un entier compris de 1 à 25 ; q correspondant à la valence du second motif C et étant un entier non nul, notamment égal à 1 ;
Figure imgf000076_0001
, β, 'and β' representing independently of each other is a group ~ CH = CH- or a group -C≡C-; t and u independently of one another an integer from 0 to 9; i and X 2 , which may be identical or different, each representing a C 1 to C 25, advantageously C 1 to C 12, preferably C 4, alkyl group, or (C 1 -C 5) n -CH 2 x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being 0 or being an integer from 1 to 12, preferably from 1 to 6, y being an integer from 1 to 25; corresponding to the valence of the second pattern C and being a non-zero integer, in particular equal to 1;
- D représente un appendice d'agrafage rattaché q fois directement audit second motif C, et choisi parmi
Figure imgf000076_0002
D represents a staple appendage attached q times directly to said second pattern C, and selected from
Figure imgf000076_0002
s n s II  II s II
P .P  P .P
Me N  Me N
jr-^ - où z est choisi parmi Ά^ jr- ^ - where z is selected from Ά ^
Figure imgf000076_0003
p correspondant à la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2 ; j représentant le nombre d'unités de répétition successives de l'appendice d'agrafage D greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5 ; notamment de 1 à 2 ;
Figure imgf000076_0003
p corresponding to the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2; j represents the number of successive repeating units of the staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5; in particular from 1 to 2;
- E représente un groupement hydrosolubilisant et/ou une fonction de ciblage, l'ensemble de ces groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage formant une couche périphérique sur le dendrimère ; ledit groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage étant directement liés p fois audit appendice d'agrafage D lorsque j est différent de 0 ou étant directement liés q fois audit second motif C lorsque j est égal à 0. E represents a water-solubilising group and / or a targeting function, all of these water-solubilising groups and / or targeting functions forming a peripheral layer on the dendrimer; said water-solubilizing group and / or said targeting function being directly linked p times to said staple appendix D when j is different from 0 or being directly linked q times to said second pattern C when j is equal to 0.
Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon la revendication 1, dans lequel ledit dendrimère possède A two-photon photosensitizer chemical compound according to claim 1, wherein said dendrimer has
a. une section efficace d'absorption à deux photons supérieure à 5 000 GM, avantageusement supérieure à 10 000 GM, plus avantageusement supérieure à 15 000 GM, de préférence supérieure à 20 000 GM pour au moins une valeur de longueurs d'ondes comprise de 700 à 900 nm, en particulier à 730 nm ; et/ou  at. a two-photon absorption cross section greater than 5,000 GM, advantageously greater than 10,000 GM, more preferably greater than 15,000 GM, preferably greater than 20,000 GM, for at least one wavelength value of 700 at 900 nm, in particular at 730 nm; and or
b. un rendement quantique de production d'oxygène singulet compris de 5 à 30 %, de préférence compris de 10 à 20 % ; et/ou  b. a singlet oxygen production efficiency ranging from 5 to 30%, preferably from 10 to 20%; and or
c. un rendement quantique de fluorescence supérieur à 10 %.  vs. a fluorescence quantum yield greater than 10%.
Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 ou 2, dans lequel ledit dendrimère n'est pas phototoxique sous une excitation comprise de 400 à 700 nm avec un éclairement compris de 200 à 3 000 ix, avantageusement de 1 000 à 2 000 lx, de préférence de 1 000 Ix. Two-photon photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 or 2, wherein said dendrimer is not phototoxic under an excitation of 400 to 700 nm with an illumination of 200 to 3000 ix, advantageously from 1000 to 2000 1x, preferably 1000 Ix.
Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 3, constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m} dans lequel le cœur phosphore A de valence m, m étant égal à 6, est de formule Al ,
Figure imgf000078_0001
Photon photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 to 3, consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m} wherein the phosphorus heart A of valency m, m being equal to 6, is of formula Al,
Figure imgf000078_0001
5. Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 4, constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)mj dans lequel ledit premier motif B de valence n répété i fois est de formule Bl, n étant égal à 2 et i étant égal à i ; ou ledit premier motif B de valence n répété i fois est de formule B2, n étant égal à 2 et i étant égal à 2 ; ou ledit premier motif B de valence n répété i fois est de formule B3, n étant égal à 2 et i étant égal à 3. 5. A biphotonic photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 to 4, consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q) n) mj wherein said first pattern B of valence n repeated once is of formula B1, n being equal to 2 and i being equal to i; or said first N repetitive pattern B is of formula B2, where n is 2 and i is 2; or said first N repetitive pattern B is of formula B3, where n is 2 and i is 3.
Figure imgf000078_0002
, Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 5, constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m, dans lequel le second motif C de valence q, q étant égal à 1, est de formule Cl, C2 ou C3.
Figure imgf000078_0002
, Photon photosensitizer A chemical compound according to one of claims 1 to 5, consisting of a dendrimer of the general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p) q) n) m, wherein the second pattern C of valence q, q being equal to 1, is of formula Cl, C2 or C3.
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000079_0002
Figure imgf000079_0001
Figure imgf000079_0002
7. Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 6, constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)mj dans lequel ledit appendice d'agrafage D de valence p répété j fois, est de formule Dl, p étant égal à 2 et j étant égal à 1 ; ou ledit appendice d'agrafage D de valence p répété j fois est absent et est noté D2, j étant égal à 0.
Figure imgf000079_0003
7. A two-photon photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 to 6, consisting of a dendrimer of general formula A- (Bj- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) mj wherein said appendix d Staple D of valency p repeated j times, is of formula D1, p being equal to 2 and j being equal to 1; or said staple appendix D of valency p repeated j times is absent and is denoted D2, j being equal to 0.
Figure imgf000079_0003
8. Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 7, constitué par un dendrimère de formule générale A-(Bi-(C-(Dj-(E)p)q)n)m, dans lequel ledit ensemble des groupements hydrosolubilisants et/ou fonctions de ciblage E a. est tel que tous les E sont identiques et est de formule El ; ou 8. A two-photon photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 to 7, consisting of a dendrimer of general formula A- (Bi- (C- (D j - (E) p ) q ) n ) m , wherein said set water-solubilizing groups and / or targeting functions E a. is such that all E's are identical and are of formula E1; or
b. est tel que tous les E sont identiques et est de formule E2 ; ou  b. is such that all E's are identical and is of formula E2; or
c. est tel que tous les E sont identiques et est de formule E3 ; ou  vs. is such that all E's are identical and is of formula E3; or
d. est tel que tous les E sont identiques et est de formule E4 ; ou  d. is such that all E's are identical and is of formula E4; or
e. est tel que tous les E ne sont pas identiques et est de formule E5.
Figure imgf000079_0004
e. is such that all the E's are not identical and are of formula E5.
Figure imgf000079_0004
Figure imgf000080_0001
Figure imgf000080_0002
Figure imgf000080_0003
Figure imgf000080_0001
Figure imgf000080_0002
Figure imgf000080_0003
Figure imgf000080_0004
Figure imgf000080_0004
Figure imgf000080_0005
, Composé chimique photosensibilisateur biphotonique selon l'une des revendications 1 à 8, constitué par un dendiimère de formule générale
Figure imgf000080_0005
Biophotonic photosensitizer chemical compound according to one of claims 1 to 8, consisting of a dendiimer of the general formula
A-(B C-(Dj-(E)p)q)n)m dans lequel : A- (B C- (D j - (E) p ) q ) n ) m wherein:
- A est de formule Al; - A is of formula Al;
- B est choisi parmi Bl , B2 ou B3; B is selected from B1, B2 or B3;
- C est choisi parmi Cl, C2 ou C3; C is selected from Cl, C2 or C3;
- D est choisi parmi D 1 ou D2; - E est choisi parmi El , E2, E3, E4 ou E5 ; ledit dendrimère étant notamment choisi parmi - D is selected from D 1 or D 2; E is selected from E1, E2, E3, E4 or E5; said dendrimer being in particular chosen from
Figure imgf000081_0001
Figure imgf000081_0001
soit is
Figure imgf000081_0002
, X étant égal à H ou Ac ; soit
Figure imgf000081_0002
X being equal to H or Ac; is
Figure imgf000081_0003
Figure imgf000081_0003
étant égal à 2. being equal to 2.
10. Procédé d'obtention du dendrimère selon l'une des revendications 1 à 9, comprenant a. une étape de dissymétrisation d'un chromophore C de formule
Figure imgf000081_0004
pour former un chromophore dissymétrique C" de formule
Figure imgf000082_0001
10. Process for obtaining the dendrimer according to one of claims 1 to 9, comprising a. a dissymmetrization step of a chromophore C of formula
Figure imgf000081_0004
to form an asymmetric chromophore C "of formula
Figure imgf000082_0001
1 τ  1 τ
X et X , identiques ou différents, représentant chacun un groupement alkyle en Ci à C25, avantageusement en Cs à C12, de préférence en C , (CH2)x-S03M, (CH2)xNAlk3\ (CH2)x-(OCH2-CH2)y-OH, M étant un métal alcalin et x étant égal à 0 ou étant un entier de 1 à 12, préférentiellement de 1 à 6, y étant un entier de 1 à 25 ; ladite étape de dissymétrisation permettant d'augmenter la section efficace d'absoiption à deux photons du chromophore dissymétrique C" d'au moins 20 %, avantageusement d'au moins 40 % par rapport à C. b. une étape de greffage du chiOmophore dissymétrique C" sur une entité centrale A-(Bi')m de sorte à former un premier dendrimère intermédiaire A-(Bj- (C")n)m ; A-(Bi')m représentant une espèce réactive correspondant à A-(Bj)m ; m étant la valence du groupement A et étant un entier non nul compris de 3 à 8 ; n étant la valence de B' dans l'entité centrale A-(Bi')m et étant un entier non nul compris de 2 à 5 ; i étant le nombre d'unités de répétition successives du premier motif B greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 10, notamment de 1 à 4 ; X and X, same or different, each representing an alkyl group Ci-C 2 5, preferably Cs to C 12, preferably C (CH 2) x -S0 3 M, (CH 2) x 3 Nalk \ (CH 2 ) x - (OCH 2 -CH 2 ) y -OH, M being an alkali metal and x being 0 or being an integer of 1 to 12, preferably 1 to 6, y being an integer of 1 to 25; said dissymmetrization step for increasing the two-photon absoφtion cross-section of the asymmetric chromophore C "by at least 20%, advantageously by at least 40% with respect to C. b) a step of grafting the asymmetric chiOmophore C "on a central entity A- (Bi ') m so as to form a first intermediate dendrimer A- (Bj- (C") n ) m ; A- (Bi') m representing a reactive species corresponding to A- ( Bj) m ; m being the valence of the group A and being a non-zero integer from 3 to 8; n being the valence of B 'in the central entity A- (Bi') m and being a non-zero integer comprised of 2 to 5, i being the number of successive repeating units of the first pattern B grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 10, in particular from 1 to 4;
c. une étape de formation du dendrimère A-(Bi-(C-(Dj-(E)p)q)n)m réalisée soit i. en plusieurs étapes consistant en : vs. a step of forming the dendrimer A- (Bi- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ) m made either i. in several stages consisting of:
une étape de formation d'un second dendrimère intermédiaire A-(Bj-(C- (Dj')q)n)m par la réaction, réalisée q fois, d'un appendice d'agrafage D' sur le premier dendrimère intermédiaire A-(Bi-(C")n)m et réalisée j fois successivement ; D' correspondant à une première espèce réactive de l'appendice d'agrafage D ; q étant la valence du second motif C et étant un entier non nul, notamment égal à 1 ; j étant le nombre d'unités de répétition successives de l'appendice d'agrafage D greffée sur une branche et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5, notamment de 1 à 2 ; a step of forming a second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (Dj ') q) n ) m by the reaction, carried out q times, of a stapling appendix D' on the first intermediate dendrimer A - (Bi- (C ") n ) m and carried out successively; D 'corresponding to a first reactive species of the stapling appendix D; q being the valence of the second unit C and being a non-zero integer, especially equal to 1, j being the number of successive repeating units of the staple appendix D grafted onto a branch and being equal to 0 or being an integer from 1 to 5, in particular from 1 to 2;
une étape de fonctionnalisation du second dendrimère intermédiaire A-(Bj- (C-(Dj')q)n)m obtenu à l'étape précédente avec un groupement hydrosolubilisant et/ou une fonction de ciblage E' pour former le dendrimère A-(Bj-(C-(Dj-(E)p)q)n)m, ledit groupement hydrosolubilisant et/ou ladite fonction de ciblage E' représentant une espèce réactive correspondant à E et étant de formule a step of functionalization of the second intermediate dendrimer A- (Bj- (C- (Dj ') q) n ) m obtained in the preceding step with a grouping water-solubilising agent and / or a targeting function E 'to form the A- (Bj- (C- (Dj- (E) p ) q ) n ) m dendrimer, said water-solubilising group and / or said targeting function E' representing a reactive species corresponding to E and being of formula
Figure imgf000083_0001
Figure imgf000083_0001
❖ H2N - PEG750 - OMe soit ❖ H 2 N - PEG 750 - OMe be
Figure imgf000083_0002
Figure imgf000083_0002
un mélange de ceux-ci.  a mixture of these.
p étant la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2 ; soit ii. en une étape consistant en une fonctionnalisation du premier dendrimère intermédiaire A-(B-(C")n)m par sa réaction, réalisée q fois, avec une entité Dj"-(E)P préformée ; D" correspondant à une seconde espèce réactive de l'appendice d'agrafage D ; j étant le nombre d'unités de répétition successives de la seconde espèce réactive D" et étant égal à 0 ou étant un entier compris de 1 à 5, notamment de 1 à 2 ; q étant la valence du second motif C et étant un entier non nul, notamment égal à 1 ; p étant la valence de l'appendice d'agrafage D et étant un entier non nul compris de 2 à 5, notamment égal à 2. p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2; either ii. in a step consisting of a functionalization of the first intermediate dendrimer A- (B- (C ") n ) m by its reaction, carried out q times, with a preformed entity D j " - (E) P ; D "corresponding to a second reactive species of the staple appendix D; j being the number of successive repeating units of the second reactive species D" and being equal to 0 or being an integer of from 1 to 5, especially from 1 to 2; q being the valence of the second unit C and being a non-zero integer, in particular equal to 1; p being the valency of the staple appendix D and being a non-zero integer from 2 to 5, in particular equal to 2.
11. Utilisation du dendrimère selon l'une des revendications 1 à 10, dans un dispositif de thérapie photodynamique, notamment mettant en œuvre une absorption à deux photons, ou d'imagerie de fluorescence, notamment mettant en œuvre une absorption à un ou à deux photons. 11. Use of the dendrimer according to one of claims 1 to 10, in a photodynamic therapy device, in particular implementing a two-fold absorption. photons, or fluorescence imaging, in particular using a one or two-photon absorption.
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