WO2017010858A1 - Composición a base de extractos de heliopsis longipes y propolis para el control y/o eliminación de garrapatas - Google Patents

Composición a base de extractos de heliopsis longipes y propolis para el control y/o eliminación de garrapatas Download PDF

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Beatriz FLORES SAMANIEGO
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Flores Samaniego Beatriz
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    • A61K35/63—Arthropods

Definitions

  • the present invention relates to a composition based on natural extracts of Heüopsis ⁇ ongipes and Propolis for the control and / or elimination of ticks, where e! Heüopsis Iongipes extract has effects of paralysis and toxicity on the ticks, acting in synergy with the Propolis extract which has active principles of high toxicity against insects, for use in cattle and / or domestic animals.
  • tick is one of the most economically important ectoparasites worldwide, due to the losses it causes in the production of cattle, goats, sheep and horses.
  • Direct consequences of tick parasitization are weight loss due to reduced food intake and due to toxins and skin irritation, anemias caused by blood loss, transmission of hemoparasites (Babesia b ⁇ gemina, B. bovis and Anaplasnja marg ⁇ nale ) and the considerable depreciation of the skins due to the perforations produced by the pickets.
  • these perforations allow infection by bacteria, development of dermal mycoses and entry of fly larvae (myiasis).
  • ticks By injuring the skin to suck blood, many species of ticks can transmit various pathogens such as viruses, bacteria, riches and protozoa. This can lead to acute and / or chronic diseases such as piroplasmosis, Lyme disease, ehrlichiosis, tberyleriosis, Chagas disease, Q fever and uraemia, and even death.
  • pathogens such as viruses, bacteria, riches and protozoa.
  • acute and / or chronic diseases such as piroplasmosis, Lyme disease, ehrlichiosis, tberyleriosis, Chagas disease, Q fever and uraemia, and even death.
  • piroplasmosis Lyme disease
  • ehrlichiosis tberyleriosis
  • Chagas disease Chagas disease
  • Q fever and uraemia Q fever and uraemia
  • Tick infestations can be very intense, so it is not uncommon to find animals parasitized by hundreds and even thousands of specimens, which logically It multiplies the damages, both direct and derived from the transmission of diseases whose prophylaxis and treatment is an important problem facing contemporary veterinary medicine.
  • tissue destruction caused by Sos mouth appendages of ticks and the inflammatory reaction that occurs in response to the bite
  • blood exposure which can cause acute anemias in animals with intense infestations
  • paralysis caused by salivary toxins of some species of ticks, such as the neurotoxin called hofocyclotoxin of the Australian tick Ixodes oiocyclus, a single female of this species can cause paralysis and death of an animal
  • toxicosis such as s eating sickness or sweat ios disease, caused by salivary toxins of the African species Hyalo a truncatum in ruminants, this disease presents with eczemaphic skin lesions and hypersecretion of exudates and causes mortalities greater than 75% in animals young boys.
  • tick control consists in the application at specific intervals of ixodicides on the body of infested animals.
  • Most tick products contain active contact ingredients (organophosphates, pyrethroids, amidines and fipronsl) and are available as concentrates for immersion or spray baths or as "pour-on" ready for use. They are effective against larvae, nymphs and adults. Many of them also control other parasites of cattle such as flies, lice, mites, etc. However, its irrational use has caused the generation of tick strains resistant to the action of these chemicals and even combinations of them.
  • Resistance is a phenomenon that occurs in any type of population, whether insects, arthropods, bacteria, etc., when it is subjected to the constant and prolonged action of some substance, so that some individuals are generating resistance to Certain doses of the products. Once this capacity has been developed, individuals survive the treatments and when they reproduce, their offspring will also be resistant. In addition, both the discharge or elimination of Sos garrapaicic baths and Sa of the containers containing these products pollute the environment. In response to this problem and seeking to reduce the costs involved in the creation of new biologically active molecules, the insecticidal properties of pla ⁇ as have been investigated, which by popular order have been recognized in ethnobotanical studies as such.
  • Document CN10359922Q describes a composition for human acariasis containing propolis mixed with four roots of Asian origin, carbonized cabelium, four plants (three of Asian origin and one of Iberian origin) and two fruits of Asian origin; whose composition although it contains propolis, differs totally from the one presented here.
  • Document CN102670939 describes a composition for acariasis in cattle containing propolis mixed with three roots of Asian origin, three plants of Asian origin, two plants of Euro / Asian origin, a world-class plant, dried orange peel and calcium sulfate; whose composition although it contains propolis, differs totally from the one presented here
  • Document CN 102670863 describes a composition for pet acariasis containing propolis mixed with sulfur, hunger, a miner! of arsenic, two plants of world origin, a root of Asian origin and an organic compound of the group of érpenos; whose composition although it contains propolis, differs totally from the one presented here.
  • the present invention relates to a composition based on extracts of Heiiopsis longipes and Propolis, for the control and / or elimination of ticks, in which the extract of Heiiopsis longipes has effects of paralysis and toxicity on ticks, acting in synergy with the Propoüs extract and which has active ingredients of high toxicity against insects; For use in livestock and pets.
  • composition of the present invention for the control and / or elimination of ticks comprises: a) A natural extract of Heiiopsis longipes from 50 to 85% v / v
  • the extract of chilcuague (Heiiopsis longipes) in the composition works through its main active ingredient,
  • aicamide responsible for the main biological effects observed. It has insecticidal activity causing paralysis and toxicity against insects,
  • Propolis extract (Propolis) in the composition works through curnarins that are toxic to ticks, synergizing with chilcuague extract. Additionally, the propolis extract in the composition provides antibiotic protection to the animals through the action of its amphibious and antifungal components.
  • the dermal vehicle is selected from giicerina, mineral oil, petroleum jelly, etc. and / or mixtures of these.
  • Ei ch ⁇ icuague Hel ⁇ ops ⁇ s longipes S.F. Biake ⁇ is a perennial herb endemic to the Alvarez and Gorda mountains, a region where part of the territories of San Luis Potos ⁇ , Guanajuato and Guerétaro coincide, and is known as where its roots have traditional uses.
  • the genus Hel ⁇ ops ⁇ s belongs to the Heliantheae tribe of the Asteraceae family, with about 2,500 species grouped into 189 genera and divided into ten subtribes, including Zinnia, Phüactis, Sanvitalia, Acmella, Podac aenium, Squa opappus, Spilant es and Salmea, which make up the subtribe Zinn ⁇ nae. Its members share in their morphology the presence of solitary chapters, conical or hemispherical receptacles, pistillate, fertile and persistent liguia flowers, fertile disc flowers and laterally compressed or angled achenes of the disc.
  • Aicamides are synthesized by two different metabolic pathways.
  • the acidic part originates from urs fatty acid of chain length which can be from eight to eighteen carbons, generally aliphatic or linear; This, when condensed with an amino acid and in concomitant decarboxylation, results in the production of an acamide.
  • the amides, whose acidic chain is aiifatic, depending on the type of unsaturated bonds that they present can be separated into two groups: olefinic aicamides, with at least one double bond; and acetünic aicamides, with at least one tripie ligation. In the genus Heüopsis, only aiphytic and acetünic aicamides have been found.
  • Afinin is the substance responsible for the biological effects of ehilcuague among which are considered activities of local anesthetic, flavoring, insecticide, fungicide and bactericide. It accumulates in its roots in large quantities (up to 1% of the total root weight).
  • the propolis is a product of the hive formed by resins that bees collect from the buds of trees, which are mixed with the saliva, enzymes and other secretions of the bees. It is used as a natural protector against pathogenic microorganisms and fungi; protects against the cold during the winter and acts as a sealing material on the external and internal walls of the hive to reduce the entry of insects.
  • This product is highly appreciated for its biological activities: bactericidal, antiviral, fungicidal, insecticidal anti-cancer, antioxidant, healing, immunostimulatory, anesthetic and analgesic among others. These features are related to its chemical composition, botanical origin, harvest time and the species of bee to collect.
  • the chemical composition of the propo! Eo is very variable and complex, depending on the local flora near the site of the coimena. Its main components are resins and balms (50% to 55%), waxes (25% to 35%), voia ⁇ iies oils (5% to 10%), pollen (2% to 6%), minerals and organic substances (5% to 8%), Among the latter, organic acids, phenolic acids, aromatic aldehydes, coumarins, phenolic compounds such as flavonoids (flavones, flavonoids, fiavanones, flavonoies) and minerals (Ai, Ag, Ba, B, Cr, Co, have been detected Cu, Sn, Fe; iVfg, Mn, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V and Zn).
  • flavonoids The group of compounds with biological activity most commonly evaluated in propolis extracts are known as phenolic compounds. Most of these occur in the form of flavonoids. Thus, the presence of the eight routine flavonoids, myricetin, quercetin, kaempfero !, apigenin, pinocembrina, chrysin and galangina, can be used as a marker to differentiate propolis from other products in the hive. The content of these eight flavonoids has been widely used as a parameter of the quality of propolis.
  • Phenolic compounds constitute more than! 50% of its total weight
  • the process for obtaining an extract of chiicuague is carried out as follows: a) Collection and selection of roots of H. ⁇ ongipes.
  • the process for obtaining an extract of propolis is: a) Selection and collection of resins directly from hives.
  • composition showed a high percentage of control in terms of inhibition of oviposition and inhibition of hatching, as well as larval survival; It guarantees incremental results from generation to generation and could lead to the eradication of tick populations.
  • propotropic extract In the composition of the propotropic extract (Propoiis) it causes an increase in permeation and a reduction in the potential of the membranes and cell walls, which contributes to reducing resistance to other toxic agents or constituents of the same extract or of other extracts, acting in synergy with the extract of ch ⁇ cuague. In cases of extreme infestations, this property of the composition could be used to carry out treatment combined with chemical compounds to which the populations of ticks to combat are not yet fully resistant.
  • composition of the present invention is capable of controlling all the ticks of veterinary importance of the family Ixodidae (Amb ⁇ yomma spp., BoophHus spp., Dermacenior spp., Haemaphysaüs spp., Hya ⁇ om a spp., Ixodes and Rhipicephalus ⁇ and of the Argasidae family (Ornithodorus spp. and Otobius spp.).
  • Ixodidae Amb ⁇ yomma spp., BoophHus spp., Dermacenior spp., Haemaphysaüs spp., Hya ⁇ om a spp., Ixodes and Rhipicephalus ⁇
  • Argasidae family Ornithodorus spp. and Otobius spp.
  • the test consists of immersing the full female for 1 minute in the composition and subsequently allowing it to perform oviposition in an environment of controlled temperature and humidity. 10 females are placed for each repetition. Subsequently, eggs deposited are weighed and their weight is compared against eggs deposited by females submerged in water, to calculate the% inhibition of oviposition. Once the females ovipositioned, the eggs are incubated until hatching and by counting under the microscope of the empty "shells", the percentage of inhibition of the hatching of Sos eggs from females treated with ia is calculated by comparison with the water control composition.
  • FIG. 2 shows the graph with results of 7 independent tests, using different concentrations of the composition within the range specified in the present invention; which consist of impregnating with 10m! of the composition a filter paper, place 300 larvae on the paper and cover them with another filter paper also impregnated with the composition. Controls are performed by impregnating the filter paper with water. The larvae remain in contact with the papers for 10 minutes and subsequently the papers are removed and the larvae are placed under conditions 5 temperature and humidity controlled to observe its mortality rate within 72 hours after the application of the composition. The larvae subjected to water treatment had 0% mortality.
  • Example 3 0 "Live m" trials with horses showed a decrease in infestation in a period of 72 hours after application of the formulation. The full females detached in their entirety and their mortality was 70%. Figures 3 and 4 show the effect on the wave and take respectively an equine specimen. The smposition was applied by spraying directly on the affected parts. S
  • Figure 1 shows two repetitions of! test with full females immersed in water (FiguralA) whose oviposition was considered as 100%.
  • Figure 1 B and 1C four repetitions of the test are shown with full females immersed in the composition at two different concentrations of the extracts, within the range specified in the claims of the present invention.
  • Figure 2 shows e! result of the survival of larvae treated with 7 different concentrations of the composition (within the range specified in the present invention), following the method of Sha. The result was a mortality range between 70.89 and 100%.
  • Figure 3 shows a series of photographs of the ear of a horse infested with ticks.
  • Figure 3A shows the infested ear
  • Figure 3B shows the decrease in the presence of ticks after 24 hours of application of the composition
  • Figure 3C shows the release of 90% of the females at 72 hours after the application of the composition.
  • Figure 4 shows a series of photographs of the neck of a horse infested with ticks.
  • a high population density of ticks attached to the horse's skin can be seen in Figures 4 A and B and in Figures 4C and 4D the detachment of 85% of the ticks can be seen 72 hours after the composition of the neck is applied. horse.
  • Figure 5 shows the legs of a bovine with low tick infestation, where Figure 5A shows the infested leg, Figure 5B shows the effects of detachment and mortality of females (due to the color change of the ticks, which are dead although they have not come off) 24 hours after applying the composition and Figure 5C shows the width 72 hours after applying the composition, showing 90% detachment and mortality of the ticks.
  • Figure 6 shows the legs of a bovine with a tick infestation, where the figure
  • FIG. 6A shows the infested leg
  • figure 68 shows the effects of detachment and mortality of females (evident by the color change of the ticks, which are dead even if they have not detached ⁇ 24 hours after applying the composition
  • figure 6C shows he is 72 hours after the composition is applied, evidencing a 80% mortality and detachment of the ticks.

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Abstract

La presente invención se refierea una composición insecticida a base de extractos naturales para el control y/o eliminación de garrapatas en ganado y/o en animales domésticos, caracterizada porque comprende: a) 50% a 65% de extracto de Heliopsis longipes; b) 5% a 20% de extracto de Propolis y c) 30% de un vehículo dérmico, todo esto debe sumar el 100%. La mezcla de la composción presenta un efecto sinérgico garantizando el control de adultos, ninfas, pupas, larvas y huevecillos; especialmente en hembras adultas alterando su capacidad de oviposición y afectando también la posibilidad de eclosión de los huevecillos y la sobrevivencia de las larvas; especialmente de todas las garrapatas de importancia veterinaria de la familia Ixodidae y de la familia Argasidae.

Description

Composición a base de extractos de H@íiopsis lorsgipes y Propoüs para @S contro! y/o eÍirriinacióo de garrapatas
Campo de la Invención
La presente invención se refiere a una composición a base de extractos naturaies de Heüopsis íongipes y Propolis para ei controí y/o eliminación de garrapatas, en donde e! extracto de Heüopsis Iongipes posee efectos de parálisis y toxicidad sobre ias garrapatas, actuando en sinergia con el extracto de Propolis el cual posee principios activos de alta toxicidad contra insectos, para su uso en ganado y/o animales domésticos.
Ánt essderstes de ia invención
La garrapata es uno de ios ectoparásitos de mayor importancia económica a niveí mundial, debido a las mermas que ocasiona en la producción de ganado bovino, caprino, ovino y equino. Consecuencias directas de la parasitación por garrapatas son la pérdida de peso debido a una menor ingesta de alimento y por efecto de toxinas e irritación de la piel, anemias producidas por pérdida de sangre, transmisión de hemoparásitos (Babesia bígemina, B. bovis y Anaplasnja margínale) y ia considerable depreciación de las pieles a causa de las perforaciones producidas por los piquetes. Además, estas perforaciones permiten ía infección por bacterias, desarrollo de micosis dermales e ingreso de larvas de moscas (miasis). Al lesionar la piel para chupar sangre, muchas especies de garrapatas pueden transmitir diversos agentes patógenos como virus, bacterias, riquetsias y protozoos. Esto puede conducir a enfermedades agudas y/o crónicas tales como piroplasmosis, enfermedad de Lyme, ehrlichiosis, tberileriosis, enfermedad de chagas, fiebre Q y íuiaremia e incluso a la muerte. De las estimadas 1 ,000 milíones de cabezas de ganado vacuno en el mundo, entre ei 70 y 80% vive en países tropicales y subtropicales, en Sos que ía garrapata es activa durante todo el año.
Las infestaciones por garrapatas pueden ser muy intensas, de manera que no es raro encontrar animales parasitados por cientos e incluso miles de ejemplares, lo que íógicamente multiplica ios daños, tanto directos como derivados de !a transmisión de enfermedades cuya profilaxis y tratamiento es un problema importante al que se enfrenta !a medicina veterinaria contemporánea.
En los anima es ¡os daños pueden ser muy aparatosos y llamativos, Sos más frecuentes son los siguientes: a) destrucción tisuíar causada por Sos apéndices bucales de las garrapatas y por la reacción inflamatoria tocai que se produce en respuesta a ia picadura; b) expoiio de sangre, que puede provocar anemias agudas en animales con infestaciones intensas; c) parálisis provocadas por las toxinas salivales de algunas especies de garrapatas, como la neurotoxina denominada hofocyclotoxina de la garrapata australiana ixodes oiocyclus una sola hembra de esta especie puede provocar parálisis y ia muerte de un animal; y d) toxicosis, tales como s eating sickness o enfermedad de ios sudores, producida por ias toxinas salivales de la especie africana Hyalo a truncatum en rumiantes esta enfermedad cursa con lesiones cutáneas eccemafosas e hipersecreción de exudados y provoca mortalidades superiores ai 75% en los animales jóvenes.
Desde el punto de vista de ios daños y el potencia! transmisor de enfermedades, a escaia mundial adquieren importancia veterinaria nueve géneros de garrapatas Ixodidae {Ambiyo ma spp., Boophüus spp., Dermacentor spp., Haemaphysalis spp., Hyalomma spp., ixodes y R ipicephalus) y Argasidae (Omithodorus spp. y Otobius spp.)
En los últimos años la problemática por garrapatas se ha incrementado y el manejo deficiente de su control ha creado serios problemas de resistencias múltiples a los diferentes productos químicos con que se las combate.
La estrategia más utiiizada para el control de garrapatas consiste en ¡a aplicación a intervalos específicos de ixodicidas sobre el cuerpo de ios animales infestados. La mayoría de los productos contra garrapatas contienen principios activos de contacto (organofosforados, piretroides, amidinas y fipronsl) y están disponibles como concentrados para baños de inmersión o aspersión o como "pour- on" listos para el uso. Son eficaces contra larvas, ninfas y adultos. Muchos de eüos también controlan otros parásitos de ios bovinos como moscas, piojos, ácaros, etc. Sin embargo, su uso irracional ha ocasionado la generación de cepas de garrapatas resistentes a la acción de estos productos químicos e incluso de combinaciones de ellos.
La resistencia es un fenómeno que se presenta en cualquier tipo de población, ya sea de insectos, artrópodos, bacterias, etc., cuando ésta es sometida a la acción constante y prolongada de alguna sustancia, de tal manera que algunos individuos van generando resistencia a ciertas dosis de los productos. Una vez desarroiiada esta capacidad, los individuos sobreviven a los tratamientos y cuando se reproducen, su descendencia será también resistente. Además, tanto la descarga o eíiminación de Sos baños garrapaíicidas como Sa de ios envases que contienen estos productos contaminan eí ambiente. En respuesta a esta problemática y buscando disminuir los costos que implica la creación de nuevas moléculas biológicamente activas, se han investigado las propiedades insecticidas de plañías que por íradición popular han sido reconocidas en estudios de etnobotánica como tales.
A partir de la necesidad de encontrar un garrapaticida eficiente, natural y que permita disminuir ei uso de productos químicos dañinos, surge una nueva alternativa de realizar una mezcía de extractos naturales, tales como el extracto de cniícuague {Heüopsís Songipes) y de propoleo (Propoiis), ambos con elevada actividad biológica, que permiten el control y/o eliminación de garrapatas en ganado bovino, ovino, caprino y animaies domésticos.
El documento CN10359922Q describe una composición para acariasis humana que contiene propóieo mezclado con cuatro raíces de origen Asiático, cabelio carbonizado, cuatro plantas (tres de origen Asiático y una de origen ibérico) y dos frutos de origen Asiático; cuya composición aunque contiene propóieo, difiere totalmente de ía que aquí se presenta.
El documento CN102670939 describe una composición para acariasis en ganado que contiene propóieo mezclado con tres raíces de origen Asiático, tres plantas de origen Asiático, dos plantas de origen Euro/Asiático, una plañía de origen mundial, piel de naranja seca y sulfato de calcio; cuya composición aunque contiene propóieo, difiere totalmente de la que aquí se presenta, Ei documento CN 102670863 describe una composición para acariasis en mascotas que contiene propóleo mezclado con azufre, aiumbre, un minera! de arsénico, dos plantas de origen mundial, una raíz de origen Asiático y un compuesto orgánico del grupo de ios íerpenos; cuya composición aunque contiene propóieo, difiere totalmente de la que aquí se presenta.
Descripción de ia is erseiórs
La presente invención se refiere a una composición a base de extractos de Heiiopsis longipes y Propolis, para el controi y/o eliminación de garrapatas, en donde ei exíracto de Heiiopsis longipes posee efectos de parálisis y toxicidad sobre las garrapatas, actuando en sinergia con el extracto de Propoüs eí cual posee principios activos de alta toxicidad contra insectos; para su uso en ganado y animales domésticos.
La composición de la presente invención para el control y/o eliminación de garrapatas, comprende: a) Un extracto natural de Heiiopsis longipes del 50 al 85% v/v
b) Un extracto natural de Propoüs del 5 a! 20% v/v y
c) Un vehículo dérmico al 30% v/v
Todo esto debe sumar ei 100%
Ei extracto de chilcuague (Heiiopsis longipes) en la composición funciona a través de su principio activo mayoriíario, la afinina, que es ia aicamida responsable de los principales efectos biológicos observados. Posee actividad insecticida provocando parálisis y toxicidad contra insectos,
Ei extracto de propóleo (Propolis) en ia composición funciona a través de las curnarinas que resultan tóxicas para las garrapatas, haciendo sinergia con ei extracto de chilcuague. Adicionalmente, el extracto de propóleo en ia composición, proporciona protección antibiótica a ios animales mediante la acción de sus componentes anfibacterianos y antifúngicos. El vehículo dérmico es seleccionado entre giicerina, aceite mineral, vaselina, etc. y/o mezclas de éstos.
Estos componentes en las mencionadas proporciones poseen una mayor efectividad y efecto prolongado en ei combate de garrapatas, garantizando eí control en adultos, larvas, ninfas y huevéenlos, especialmente en hembras adultas al alterar su eficiencia de oviposición, disminuyendo y eliminando la capacidad de depositar huevéenlos y afectando también la eclosión de los hueveciiíos y la sobrevivencia de las larvas.
Generalidades de! Chíicuague (Helíopsís Longipes)
Ei chíicuague (Helíopsís longipes S.F. Biake} es una hierba perenne endémica de ias sierras Álvarez y Gorda, región donde coinciden parte de los íerritorios de San Luis Potosí, Guanajuato y Guerétaro, ívléxico y de donde se conoce que su raíz tiene usos tradicionales.
Ei género Helíopsís pertenece a ía tribu Heliantheae de la familia Asteraceae, con cerca de 2,500 especies agrupadas en 189 géneros y fraccionada en diez subtribus, entre ellas Zinnia, Phüactis, Sanvitalia, Acmella, Podac aenium, Squa opappus, Spilant es y Salmea, que conforman la subtribu Zinníínae. Sus miembros comparten en su morfología la presencia de capítuios solitarios, receptáculos cónicos o hemisféricos, flores liguíadas pistiladas, fértiles y persistentes, flores del disco fértiles y aquenios del disco lateralmente comprimidos o angulados. La mayor diferencia que separa las especies de Helíopsís de las de otros géneros es la combinación de caracteres: la presencia de flores fértiles en el disco, flores liguíadas persistentes y fértiles, corolas sésiles y persistentes, aquenios gruesos y vilano ausente. El margen foliar es una característica importante. La mayoría de las especies presentan hojas dentadas o semidentadas, aunque algunas las tienen casi enteras o irregularmente crenadas. La textura de la hoja es generalmente firme, con excepción de las plantas anuales que tienen hojas usuaimente delgadas y frágiles, Ei pecíolo ha sido utilizado como un carácter valioso en la separación de las subespecies de H. helianthoides, tanto por su longitud como por su forma. Aleamidas en ef género Hsiiapsis
Las aicamidas se sintetizan mediante dos diferentes rutas metabóiicas. La parte acídica se origina a partir de urs ácido graso de longitud de cadena que puede ser de ocho a dieciocho carbonos, generalmente alifáíica o lineal; éste, ai condensarse con un aminoácido y en descarboxilación concomitante, resulta en ia producción de una aícamida. Las amidas, cuya cadena acídica es aiifática, dependiendo del tipo de enlaces insaturados que presenten se pueden separar en dos grupos: ias aicamidas olefínicas, con al menos una doble ligadura; y las aicamidas acetüénicas, con al menos una tripie ligadura. En el género Heüopsis sólo se han encontrado aicamidas aíifáticas y acetüénicas.
Se ha observado una importante acción inhibitoria de las aicamidas de! chilcuague sobre el desarrollo de cultivos in vitro de Escheríchia coli, Pseudomonas soíanacearu , Bacillus subtilis y Sacharomyces cerevisiae; asi como de algunos hongos fitopatógenos como Sclerotium cepivorum, Sclerotium rofísii y Fusarium oxysporu .
La afinina es la sustancia responsable de los efectos biológicos del ehilcuague entre los que se consideran actividades de anestésico local, saborizante, insecticida, fungicida y bactericida. Se acumula en sus raíces en grandes cantidades (hasta 1 % del peso total de la raíz).
Generalidades deS Propole© [Propolis)
El propóíeo es un producto de ia colmena formado por resinas que las abejas recolectan de las yemas de árboles, ias cuaíes se mezclan con la saliva, enzimas y otras secreciones propias de ias abejas. Es usado como un protector natural contras microorganismos patógenos y hongos; protege contra el frío durante el invierno y actúa como material de sellado en las paredes externas e internas de ia colmena para reducir la entrada de insectos. Este producto es muy apreciado por sus actividades biológicas: bactericida, antivirai, fungicida, anticancerígeno insecticida, antioxidante, cicatrizante, inmunoestimuiante, anestésico y analgésico entre otras. Estas características están reiacionadas con su composición química, origen botánico, época de recolección y la especie de abeja recolectara.
Composición química ú®l Propoüs
La composición química dei propo!eo es muy variable y compleja, dependiendo de la flora locaí cercana ai sitio donde se encuentra ia coimena. Sus principales componentes son resinas y bálsamos (50% a 55%), ceras (25% a 35%), aceites voiáíiies (5% a 10%), polen (2% a 6%), minerales y sustancias orgánicas (5% a 8%), Entre estas últimas se han detectado ácidos orgánicos, ácidos fenóücos, aldehidos aromáticos, cumarinas, compuestos fenóücos como flavonoides (flavonas, flavonoides, fiavanonas, flavonoies)y minerales (Ai, Ag, Ba, B, Cr, Co, Cu, Sn, Fe; iVfg, Mn, Ni, Pb, Se, Si, Sr, Ti, V y Zn). Contiene también vitaminas A, B1 , B2, B3 y B8. Ei grupo de compuestos con actividad biológica más comúnmente evaluados en extractos de propóieo son ios conocidos como compuestos fenóücos. La mayoría de éstos se presentan en forma de flavonoides. Así, la presencia de los ocho flavonoides rutina, miricetina, quercetina, kaempfero!, apigenina, pinocembrina, crisina y galangina, puede ser usada como marcador para diferenciar propóleos de otros productos de la colmena. El contenido de estos ocho flavonoides ha sido extensamente usado como parámetro de la calidad de ios propóleos.
Otros compuestos identificados en los propóleos son: dihidrofiavononas, derivados de! aicohoi benzííico, benzaldehído y ácido benzoico, derivados dei aicohoi cinámico, cumarinas, trigiicéridos fenóücos, otros elementos aromáticos, un monoterpeno, hexaterpenos, íriterpenos, esteróles, una gran cantidad de ácidos grasos, carbohidratos, poiisacársdos, vitaminas y otros compuestos. Los compuestos fenóücos constituyen más de! 50% de su peso total
Se ha demostrado que el efecto de los propóleos sobre una gran variedad de microorganismos y sobre algunos insectos es dependiente de Sa composición química Preparación del extracto ds chiicuague {Heüopsis ¡angipes)
En ursa modalidad de la presente invención el proceso para !a obíención de un extracto de chiicuague se realiza de !a siguiente manera: a) Recolección y selección de raíces de H. íongipes.
b) Secado y molienda en un molino hasta obtención de poivo fino,
c) Extracción con agua o con cualquier otro solvente orgánico en una relación de 2 a 10 L/kg de chiicuague, con agitación constante durante 18 a 30 horas a ursa temperatura de 35 a 45°C. d) Filtración del extracto mediante filtro prensa o cualquier otro método de filtración para eliminar partículas suspendidas.
e) Evaporación o destilación dei extracto obtenido a una temperatura de 45 a 75°C, hasta concentración,
f) Almacenaje a 4°C hasta su uso o adición del extracto a la mezcla deseada.
Preparación del extracto de propóleo {PropoHs}
En una modalidad de la presente invención ei proceso para ía obtención de un extracto de propóieo es: a) Selección y recolección de las resinas directamente de ias colmenas.
b) Limpieza de las resinas seleccionadas.
c) Extracción con etanol o con cualquier otro solvente orgánico en una proporción de 15% a 30% (en peso/volumen), utilizando preferentemente etanol de 70% a 95%.
d) aceración del extracto durante 5 a 10 días, con agitación frecuente.
e) Filtración del extracto mediante filtro prensa o cualquier otro método de filtración para eliminar partículas suspendidas.
f) Almacenaje en frascos ámbar, protegidos de la luz y a temperatura ambiente. Ventajas
1. - E! uso combinado de extractos naturales para el contra! de garrapatas, garantiza ¡a ausencia de resistencias y una muy baja probabilidad de que se desarrollen, ya que la combinación de metabolitos activos en ambos extractos proporciona una mezcla a la que difícilmente se adaptarán. Se espera que con este tipo de productos, el desarrollo de resistencias, (si es que ocurre} tome lapsos de tiempo prolongados,
2. - La composición mostró un alto porcentaje de control en lo que se refiere a inhibición de ¡a oviposición e inhibición de la eclosión, así como a ía sobrevivencia de larvas; io que garantiza resultados increméntales de generación en generación y podría llevar a la erradicación de las poblaciones de garrapatas. 3.- En la composición eí extracto de propóteo (Propoiis) provoca un incremento en la permeabiiidad y una reducción en el potencial de ias membranas y paredes celulares, lo que contribuye a disminuir la resistencia a oíros agentes o constituyentes tóxicos del mismo extracto o de otros extractos, actuando en sinergia con el extracto de chíícuague. En casos de infestaciones extremas, podría aprovecharse esta propiedad de la composición para realizar tratamiento combinados con compuestos químicos a los que aún no presenten resistencia total las poblaciones de garrapatas a combatir.
4.- La composición de ía presente invención es capaz de controlar todas las garrapatas de importancia veterinaria de la familia Ixodidae (Ambíyomma spp., BoophHus spp., Dermacenior spp., Haemaphysaüs spp., HyaÍom a spp., ixodes y Rhipicephalus} y de la familia Argasidae (Ornithodorus spp. y Otobius spp.). Ejemplos
EJemp!o 1
Ensayos de inmersión en hembras repletas, realizados con la composición y comparados con agua, mostraron porcentajes de control del 70 al 93%. El ensayo consiste en sumergir a la hembra repleta durante 1 minuto en la composición y posteriormente permitir que realice la oviposición en un ambiente de temperatura y humedad controladas. Se colocan 10 hembras por cada repetición. Posteriormente, se pesan ¡os huevecillos depositados y se compara el peso de éstos contra los huevéenlos depositados por hembras sumergidas en agua, para calcular el % de inhibición de la oviposición. Una vez que las hembras oviposicionaron, se incuban los huevos hasta eclosión y mediante conteo bajo microscopio de ios "cascarones" vacíos, se calcula por comparación con el testigo en agua el porcentaje de inhibición de la eclosión de Sos huevos provenientes de hembras tratadas con ía composición. Finalmente, ias larvas que emergen de los huevos, se incuban en condiciones controladas y se evalúa su porcentaje de sobrevivencia. Con éstos tres parámetros se determina el porcentaje de control, el cual integra la capacidad de la composición de inhibir la oviposición, inhibir la eclosión e impedir la sobrevivencia de larvas, en un solo valor conocido como porcentaje de control; el cual mientras mayor sea, indica mejores resultados. En la figura 1 se observa el efecto en la oviposición.
Eje p!o 2
Ensayos con larvas mediante la prueba Shaw arrojaron un rango en porcentajes de mortaíidad del 70.89 al 100%. En la figura 2 se muestra la gráfica con resultados de 7 ensayos independientes, utilizando diferentes concentraciones de la composición dentro del rango especificado en la presente invención; que consisten en impregnar con 10m! de la composición un papel filtro, colocar 300 larvas en el papel y cubrirlas con otro papel filtro también impregnado con la composición. Los controles se realizan impregnando el papel filtro con agua. Las larvas permanecen en contacto con los papeles durante 10 minutos y posteriormente se retiran los papeles y se colocan las larvas bajo condiciones 5 de temperatura y humedad controladas para observar su tasa de mortalidad dentro de f s 72 horas posteriores a la aplicación de la composición. Las larvas sometidas a tratamiento con agua presentaron mortalidad del 0%.
Ejemplo 3 0 Ensayos "m vivo" con equinos mostraron una disminución de ía infestación en ur lapso de 72 horas después de Sa aplicación de la formulación. Las hembras repletas se desprendieron en su totalidad y ía mortandad de ias mismas fue del 70%. En las figuras 3 y 4 se muestra el efecto en ia órela y tomo respectivamente de un ejemplar equino. La «smposición se aplicó asperjando de manera directa sobre las partes afectadas. S
Ejemplo 4
Ensayos "in vivo" en bovinos mostraron una disminución e ía infestación en un lapso de 72 horas después de la aplicación de ía formulación, tanto en casos de infestación alta como baja Las hembras repletas se desprendieron en su totalidad y ía mortandad de las mismas fue de! 90% En las0 figuras 5 y 6 se muestra el efecto sn un bovino con infestación baja y un bovino con infestación alia respectivamente. La composición se apiicó mediante baño con bomba de agua.
5 Descripción de ias figuras
La figura 1 muestra dos repeticiones de! ensayo con hembras repletas sumergidas en agua (FiguralA) cuya oviposición se consideró como ei 100%. En ias Figura 1 B y 1C se muestran cuatro repeticiones dei ensayo con hembras repletas sumergidas en la composición a dos diferentes concentraciones de ios extractos, dentro del rango especificado en las reivindicaciones de la presente invención.
La figura 2 muestra e! resultado de la sobrevivencia de larvas tratadas con 7 diferentes concentraciones de la composición (dentro dei rango especificado en la presente invención), siguiendo el método de Sha . El resultado fue de una rango de mortalidad entre 70.89 y 100%.
La figura 3 muestra una serie de fotografías de ia oreja de un caballo infestado de garrapatas. En la figura 3A se aprecia la oreja infestada, en la figura 3B se aprecia la disminución de las presencia de garrapatas después de 24 horas de aplicación de la composición y en la figura 3C se aprecia eí desprendimiento dei 90% de las hembras a las 72 horas posteriores a ia aplicación de ía composición.
La figura 4 muestra una serie de fotografías del cuello de un caballo infestado de garrapatas. En las figura 4 A y B se aprecia una alta densidad de población de garrapatas adheridas a la piel dei caballo y en las figuras 4C y 4D se aprecia el desprendimiento dei 85% de las garrapatas 72 horas después de aplicada la composición en eí cuello del caballo.
La figura 5 muestra las ancas de un bovino con infestación baja de garrapatas, donde ia figura 5A muestra el anca infestada, ía figura 5B muestra los efectos de desprendimiento y mortandad de hembras (eyidente por el cambio de color de ias garrapatas, que están muertas aunque no se hayan desprendido) 24 horas después de aplicar la composición y !a figura 5C muestra el anca 72 horas después de aplicada la composición, apreciándose desprendimiento y mortandad del 90% de las garrapatas. 33 la figura 6 muestra las ancas de un bovino con infestació alia de garrapatas, donde la figura
6A muestra el anca infestada, la figura 68 muestra los efectos de desprendimiento y mortandad de hembras (evidente por el cambio de color de las garrapatas, que están muertas aunque no se hayan desprendido} 24 horas después de aplicar la composición y la figura 6C muestra el anca 72 horas después de aplicada la composición, evidenciándose una mortandad y desprendimiento del 80% de las garrapatas.

Claims

1. Una composición a base de extractos naturales para el control y/o eliminación de garrapatas, caracterizada porque comprende:
a) Un extracto natural de H&iiopsis longipes;
b) Un extracto natural de Propolis y
c) Un vehículo dérmico
2. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque comprende:
a) Un extracto natural de Heliopsis longipes del 50 al 65% v/v
b) Un extracto natural de Propolis del 5 al 20% v/v y
c) Un vehículo dérmico al 30% v/v
Todo esto debe sumar el 100%.
3. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque ei vehículo dérmico es seleccionado entre glicerína, aceite mineral o vaselina y/o mezclas de estos.
4. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque es utilizada para el control de poblaciones de adultos, ninfas, pupas y huevecillos de garrapatas.
5. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque es utilizada para el control y posible erradicación de garrapatas, especialmente en hembras adultas alterando su capacidad de oviposición, disminuyendo afectando también la eclosión de los huevecillos y la sobrevivencia de las larvas.
6. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque es utilizada para e! controi y/o eliminación de todas las garrapatas de importancia veterinaria de la familia Ixodidae (Amblyomma spp., Boophilus spp., D rmacenior spp., Hae aphysaiis spp., Hyalomrna spp., ¡xodes y Rhipic&phaius) y de la familia Argasidae (O sthodorus spp. y Qtobius spp.).
7. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque es utilizada para el controi y/o eliminación de garrapatas, especialmente AmbSyomma cajennensi, Ambfyo ma americanum, Amblyomma macuiatum, AmbSyomma ebraeu , Ambiyomma varíegatu , Boophíius micropíus, Boophiius decoíoraíus, Boophiius annuiatus, Dermacentor margínalas, Dermacentor pictus, Dermacentor reticuiatus, Dermacentor nitens, Dermacentor variabais, ixodes scapuiarís y Rhipicep aius sanguíneas.
8. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque puede ser aplicada a ganado bovino, ovino, caprino, equino y en animales domésticos.
S. Una composición de conformidad con ía reivindicación 1 , caracterizada porque el extracto de chiicuague {Heiiopsss íongipes) tiene un efecto de parálisis y toxicidad sobre ¡as garrapatas, atacando principalmente poblaciones de adultos.
10. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque e! extracto de propóleo (Propoiis) provoca un incremento en la permeabilidad y una reducción en el potencial de las membranas y paredes celulares, lo que contribuye a disminuir la resistencia a otros agentes o constituyentes tóxicos del mismo extracto o de otros extractos, actuando en sinergia con el extracto de chiicuague.
11. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque la sustancia activa responsable de los efectos biológicos del chiicuague es la alcamida afinina.
12. Una composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque las sustancias activas responsables de ios efectos insecticidas del propóleo son principalmente las cumarinas.
13. Un proceso para la obtención de un extracto de chiicuague caracterizado porque comprende ios siguientes pasos:
a) Recolección y selección de raíces de H. Íongipes.
b) Secado y molienda en un molino hasta obtención de polvo fino.
c) Extracción con agua o con cualquier otro solvente orgánico en una relación de 2 a 10
L/kg de chiicuague, con agitación constante durante 18 a 30 horas a una temperatura de 35 a 45eC. d) Filtración del extracto mediante filtro prensa o cualquier otro método de filtración para eliminar partículas suspendidas,
e) Evaporación o destilación de! extracto obtenido a una temperatura de 45 a 650C, hasta concentración.
14. Un proceso para la obtención de un extracto de propóleo caracterizado porque comprende los siguientes pasos:
a) Selección y recolección de las resinas directamente de las colmenas de abejas. b) Limpieza de ias resinas para eliminar cera y otras partículas orgánicas
c) Mezcla de las resinas seleccionadas.
d) Extracción con etanol o con cualquier otro solvente orgánico en una proporción de 15% a 30% (en peso/volumen), utilizando preferentemente etanoi del 70% a 95%.
e) Maceración del extracto durante 5 a 10 días, con agitación frecuente.
f) Filtración deí extracto mediante filtro prensa o cualquier otro método de filtración para eliminar partículas suspendidas.
15. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 13 y 14, caracterizado porque la composición se formuía con: a} 50% a 85% de extracto natural de Heliopsis longipes; b) 5% a 20% de extracto natural de Propoiis y c) 30% de un vehícuio dérmico, todo esto debe sumar eí 100%.
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