WO2014131846A1 - Culture insert and appliance for culturing cells and tissue cultures and also yeasts and bacteria - Google Patents

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WO2014131846A1
WO2014131846A1 PCT/EP2014/053857 EP2014053857W WO2014131846A1 WO 2014131846 A1 WO2014131846 A1 WO 2014131846A1 EP 2014053857 W EP2014053857 W EP 2014053857W WO 2014131846 A1 WO2014131846 A1 WO 2014131846A1
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WO
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holder
membrane
legs
cultivating
cells
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PCT/EP2014/053857
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Hans Nagels
Simone Valley
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Alpha Plan Gmbh
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    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters

Definitions

  • the invention relates to culturing inserts for cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects and devices for cultivating cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects with cultivating inserts.
  • cells are grown by standard on polystyrene surfaces. This is done, for example, in sterile Petri dishes or so-called T-bottles.
  • inserts are known whose bottom consists of a membrane. These have different sized pores, whereupon cells are cultivated. These cell culture inserts are used for so-called co-cultivations.
  • co-cultivations In addition to the cells on the membrane of the inserts, there are cells on the bottom of the vessel in which the cell culture insert hangs or stands.
  • the document DE 101 28 810 A1 discloses a device for cultivating cells, in particular human or animal cells.
  • cells of at least one specific type each have a culture set in a defined environment, the cells of the relevant culture being supplied with associated liquid nutrient media, growth factors, gases or the like.
  • a predetermined number of cell culture chambers are provided, which can be connected either in series or in parallel.
  • the cell culture chambers are self-contained as chambers. A special design is not provided.
  • Document DE 696 17 303 T2 discloses a two-tank cell culture insert in which the containers are separated by a microporous membrane.
  • the cell culture insert is first placed horizontally in the media container and then placed vertically. Only then can the cultivation take place in the first chamber. Before the second cultivation in the second chamber either the medium must be completely changed or the medium in the first chamber to be aspirated and filled with new medium. Only then does the first cultivation take place. It is not excluded that one of the two membrane sides can come into contact with the medium, which is intended for the other side of the membrane.
  • Document US 2004/0043 481 A1 describes a device and a method for cultivating and maintaining cells and tissues in which the risk of contamination is to be minimized. In most cases, however, only one-sided cultivation is possible.
  • a reversible membrane insert for the cultivation of cells is known.
  • On a frame a membrane is stretched. Around the frame is an O-ring for sealing.
  • the frame is inserted into a housing.
  • the exact position of the frame in the housing can be determined.
  • Through recesses in the lower region of the housing medium can penetrate when the housing is placed in an initially empty medium container and then medium is filled on the outside of the housing in the medium container. From the top then a second medium can be applied.
  • the housing including the frame is rotated and a new medium and a new cell culture can be applied from above.
  • air bubbles can not escape completely through the recesses. This is only possible if the housing is dipped obliquely into the medium. As a result, however, the housing can not be used in custom-fit containers.
  • the invention disclosed in claims 1 and 8 has for its object to provide a simple cultivation use for cells, tissue cultures, yeasts and bacteria.
  • the cultivation inserts and the devices for cultivating cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria with such cultivating inserts are characterized in particular by their simple realization with simultaneous ease of handling.
  • first annular and a first chamber-forming holder with first legs and a pore-containing membrane and thus culturable from both sides, so that the membrane spans the interior of the first holder
  • the object to be cultivated is simply placeable on the membrane of the first annular holder.
  • the second annular holder forms a second chamber, wherein the membrane is the bottom of this second chamber.
  • the second annular holder is displaceable relative to the first annular holder.
  • the first annular holder with the membrane with the objects forms a primary side which can be contacted with a medium.
  • the first annular support with the membrane as the bottom can now be provided with a cell culture insert as a secondary side.
  • the first annular support forms the first chamber for this purpose.
  • the membrane has pores, for example, with a size of 3 to 15 ⁇ .
  • the membrane may be designed to disk or cup-shaped.
  • the disc-shaped membrane can have depressions for at least one first object in each case.
  • a depression may have a base area of, for example, less than or equal to 50 ⁇ 50 ⁇ m 2 .
  • the annular holders have legs. This leads to air being able to escape, thus ensuring complete wetting of the membrane and of the cells arranged thereon.
  • the legs of the annular holder advantageously result in that the air can escape between the membrane and the bottom of the body when filling the body.
  • the membrane on the first holder can advantageously terminate with the edge regions of the second holder between the second legs or project beyond these edge regions.
  • the objects on the primary ropes can thus be completely supplied with the medium in the body. Bubbles caused by air bubbles during wetting are avoided.
  • the voided membrane causes objects to permeate the membrane during culture and affect objects on the secondary side of the membrane.
  • the first annular holder projects beyond the first legs, so that a stop for the latching noses is present.
  • end portions of the first legs are designed as stops for the latching noses according to the embodiment of claim 3.
  • the holder can be easily moved against each other, without causing the holders are separated from each other due to the existing in both directions of movement stops.
  • the membrane according to the embodiment of claim 4 consists of a polycarbonate or polyethylene terephthalate.
  • the membrane has according to the embodiment of claim 5 pores equal to / greater than 0.1 ⁇ and less than / equal to 15 ⁇ .
  • the membrane is a nuclear track membrane.
  • the membrane is according to the embodiment of claim 7, glued or sealed to the first holder membrane. Gluing and sealing are known joining techniques that ensure a secure hold of the membrane on the holder.
  • An embodiment of the invention is illustrated in principle in the drawings and will be described in more detail below.
  • FIG. 1 shows a cultivating insert for cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects in an exploded view
  • FIG. 3 shows a device with cultivation inserts.
  • a culture use for cells 7 and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects essentially consists of a first holder 1 with first legs 2, a membrane 3, a second holder 4 with second legs 5 and an O-ring seal 6.
  • Fig. 1 shows a cultivation use for cells and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects in a schematic exploded view.
  • the first holder 1 is a first annular and a first chamber forming holder 1 with the first legs 2.
  • the membrane 3 is applied.
  • the membrane 3 spans the interior of the first holder 1 and thus forms a bottom.
  • the membrane may consist of a polycarbonate or polyethylene terephthalate.
  • the membrane 3 has pores, so that the membrane is a membrane 3 cultivable from both sides. The pores are, for example, equal to / greater than 0.1 ⁇ and less than or equal to 10 ⁇ .
  • the second holder 4 is an annular and a second chamber forming holder 4 for the first holder. 1 Furthermore, the second holder 4 has second legs 5, so that the first legs 2 and the second legs 5 face outward.
  • the O-ring seal 6 is arranged sealingly, which rests against the outer surface of the first Garis 1 and the inner surface of the second holder 4.
  • the first holder 1 in the second holder 4 is displaceable.
  • the first holder 1 have a circumferential groove for the O-ring seal 6.
  • FIGS. 2a to 2c show a cultivating insert with objects in basic representations.
  • FIG. 3 shows a device with cultivation inserts in a basic representation.
  • the device for cultivating cells and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects consists of a trough-shaped and filled with a medium 9 body 10 in which several cultivation inserts are used.
  • the assembled cultivation insert is inserted into the trough-shaped body 10.
  • 4 ml of medium 9 with first objects 7 are applied to the membrane 3.
  • the second holder 4 forms a chamber with the membrane 3.
  • the first cells 7 grow on the primary side thus present (representation in FIG. 2 a).
  • the spent medium 9 is removed after a time determined by cell growth.
  • the second holder 4 is now pressed down (representation in FIG. 2b).
  • the cultivation insert is rotated by 180 ° (shown in Fig. 2c).
  • fibroblasts with collagen are given as second objects 8 on the secondary side and covered with medium 1 1.
  • medium 9 is placed in the trough-shaped body 10, so that the membrane 3 with the adhering first objects 7 are on the primary side in the medium 9 and the primary side has air bubble-free contact with the medium 9. Now the device with the cultivation inserts can be transferred to an incubator for further incubation.
  • 4 locking lugs are located on the inner surface of the second holder. Furthermore, the first annular holder 1 projects beyond the first legs 2, so that a stop for the latching noses is present. In addition, the end portions of the first legs 2 are designed as stops for the latching noses.

Abstract

The invention relates to culture inserts for cells and tissue cultures and also yeasts and bacteria as objects and appliances having culture inserts. The culture inserts and the appliances are distinguished, in particular, by simple implementation thereof with at the same time simple handleability. For this purpose, a culture insert has a first ring-shaped holder that forms a first chamber and has first legs and a membrane having pores and thereby can be cultured from both sides, and so the membrane spans the interior of the first holder, a second ring-shaped holder forming a second chamber for the first holder having second legs, and so the first legs and the second legs point outwards, and a O‑ring seal on the outer surface of the first holder and on the inner surface of the second holder, and so the O‑ring seal is situated between the first holder and second holder, and the first holder is displaceable within the second holder.

Description

Kultivierungseinsatz und Einrichtung zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien  Cultivation Use and Device for Cultivating Cells and Tissue Cultures, Yeasts and Bacteria
Die Erfindung betrifft Kultivierungseinsätze für Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte und Einrichtungen zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte mit Kultivierungseinsätzen. The invention relates to culturing inserts for cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects and devices for cultivating cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects with cultivating inserts.
In bekannten Einrichtungen zur Zellkultivierung werden Zellen standardmäßig auf Oberflächen aus Polysterol gezüchtet. Das erfolgt beispielsweise in sterilen Petrischalen oder sogenannten T-Flaschen. Darüber hinaus sind Einsätze bekannt, deren Boden aus einer Membran besteht. Diese verfügen über unterschiedlich große Poren, worauf Zellen kultiviert werden. Diese Zellkultureinsätze werden für sogenannte Kokultivierungen eingesetzt. Neben den Zellen auf der Membran der Einsätze gibt es Zellen auf dem Boden des Gefäßes, worin der Zellkultureinsatz hängt oder steht. In known cell culture facilities, cells are grown by standard on polystyrene surfaces. This is done, for example, in sterile Petri dishes or so-called T-bottles. In addition, inserts are known whose bottom consists of a membrane. These have different sized pores, whereupon cells are cultivated. These cell culture inserts are used for so-called co-cultivations. In addition to the cells on the membrane of the inserts, there are cells on the bottom of the vessel in which the cell culture insert hangs or stands.
Durch die Druckschrift DE 101 28 810 A1 ist eine Einrichtung zur Kultivierung von Zellen, insbesondere menschlicher oder tierischer Zellen, bekannt. Dabei wird von Zellen wenigstens einer bestimmten Art jeweils eine Kultur in einer definierten Umgebung angesetzt, wobei die Zellen der betreffenden Kultur mit zugeordneten flüssigen Nährmedien, Wachstumsfaktoren, Gasen oder dergleichen versorgt werden. Dazu sind eine vorgegebene Anzahl von Zellkulturkammern vorgesehen, die entweder in Reihe oder parallel geschaltet sein können. Die Zellkulturkammern sind als Kammern in sich abgeschlossen. Eine spezielle Ausgestaltung ist dabei nicht vorgesehen. The document DE 101 28 810 A1 discloses a device for cultivating cells, in particular human or animal cells. In this case, cells of at least one specific type each have a culture set in a defined environment, the cells of the relevant culture being supplied with associated liquid nutrient media, growth factors, gases or the like. For this purpose, a predetermined number of cell culture chambers are provided, which can be connected either in series or in parallel. The cell culture chambers are self-contained as chambers. A special design is not provided.
Die Druckschrift DE 696 17 303 T2 offenbart einen Zwei-Behälter-Zellkultureinsatz, bei dem die Behälter durch eine mikroporöse Membran voneinander getrennt sind. Der Zellkultureinsatz wird zunächst waagerecht in den Medienbehälter gegeben und dann senkrecht aufgestellt. Erst dann kann die Kultivierung in der ersten Kammer erfolgen. Vor der zweiten Kultivierung in der zweiten Kammer muss entweder das Medium komplett gewechselt werden oder das Medium in der ersten Kammer abgesaugt und neues Medium eingefüllt werden. Erst dann erfolgt die erste Kultivierung. Dabei ist nicht auszuschließen, dass eine der beiden Membranseiten mit dem Medium in Kontakt kommen kann, welches für die jeweils andere Membranseite bestimmt ist. Die Druckschrift US 2004/0043 481 A1 beschreibt eine Einrichtung und ein Verfahren zur Kultivierung und Erhaltung von Zellen und Geweben, bei denen die Kontaminierungsgefahr minimiert werden soll. Zumeist ist aber nur eine einseitige Kultivierung möglich. Document DE 696 17 303 T2 discloses a two-tank cell culture insert in which the containers are separated by a microporous membrane. The cell culture insert is first placed horizontally in the media container and then placed vertically. Only then can the cultivation take place in the first chamber. Before the second cultivation in the second chamber either the medium must be completely changed or the medium in the first chamber to be aspirated and filled with new medium. Only then does the first cultivation take place. It is not excluded that one of the two membrane sides can come into contact with the medium, which is intended for the other side of the membrane. Document US 2004/0043 481 A1 describes a device and a method for cultivating and maintaining cells and tissues in which the risk of contamination is to be minimized. In most cases, however, only one-sided cultivation is possible.
Durch die Druckschrift DE 696 24 483 T2 ist ein umkehrbarer Membraneinsatz zur Kultivierung von Zellen bekannt. Auf einen Rahmen ist eine Membran aufgespannt. Um den Rahmen herum läuft ein O-Ring zur Abdichtung. Der Rahmen wird in ein Gehäuse eingesetzt. Mit Hilfe einer Festhalteeinrichtung kann die genaue Position des Rahmens im Gehäuse bestimmt werden. Durch Aussparungen im unteren Bereich des Gehäuses kann Medium eindringen, wenn das Gehäuse in einen zunächst leeren Medium-Behälter gestellt wird und anschließend Medium an der Außenseite des Gehäuses in den Medium-Behälter gefüllt wird. Von oben ist dann ein zweites Medium aufbringbar. Wenn die erste Zellschicht kultiviert ist, wird das Gehäuse samt Rahmen gedreht und es kann von oben ein neues Medium und eine neue Zellkultur aufgebracht werden. Beim Eintauchen in das Medium können Luftblasen nicht vollständig durch die Aussparungen entweichen. Das ist nur möglich, wenn das Gehäuse schräg in das Medium eingetaucht wird. Dadurch kann aber das Gehäuse nicht in passgenaue Behälter eingesetzt werden. By the document DE 696 24 483 T2 a reversible membrane insert for the cultivation of cells is known. On a frame a membrane is stretched. Around the frame is an O-ring for sealing. The frame is inserted into a housing. By means of a retaining device, the exact position of the frame in the housing can be determined. Through recesses in the lower region of the housing medium can penetrate when the housing is placed in an initially empty medium container and then medium is filled on the outside of the housing in the medium container. From the top then a second medium can be applied. When the first cell layer is cultured, the housing including the frame is rotated and a new medium and a new cell culture can be applied from above. When immersed in the medium, air bubbles can not escape completely through the recesses. This is only possible if the housing is dipped obliquely into the medium. As a result, however, the housing can not be used in custom-fit containers.
Der in den Patentansprüchen 1 und 8 angegebenen Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, einen einfachen Kultivierungseinsatz für Zellen, Gewebekulturen, Hefen und Bakterien zu schaffen. The invention disclosed in claims 1 and 8 has for its object to provide a simple cultivation use for cells, tissue cultures, yeasts and bacteria.
Diese Aufgabe wird mit den in den Patentansprüchen 1 und 8 aufgeführten Merkmalen gelöst. This object is achieved with the features listed in the claims 1 and 8.
Die Kultivierungseinsätze und die Einrichtungen zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien mit derartigen Kultivierungseinsätzen zeichnen sich insbesondere durch ihre einfache Realisierung bei gleichzeitiger einfacher Handhabbarkeit aus. The cultivation inserts and the devices for cultivating cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria with such cultivating inserts are characterized in particular by their simple realization with simultaneous ease of handling.
Dazu weist ein Kultivierungseinsatz This is indicated by a cultivation application
- einen ersten ringförmigen und eine erste Kammer bildenden Halter mit ersten Beinen und einer Poren aufweisenden und damit von beiden Seiten kultivierbaren Membran, so dass die Membran den Innenraum des ersten Halters überspannt,  a first annular and a first chamber-forming holder with first legs and a pore-containing membrane and thus culturable from both sides, so that the membrane spans the interior of the first holder,
- einen zweiten ringförmigen und eine zweite Kammer bildenden Halter für den ersten Halter mit zweiten Beinen, so dass die ersten Beine und die zweiten Beine nach außen weisen, und - eine O-Ringdichtung an der Außenfläche des ersten Halters und der Innenfläche des zweiten Halters, so dass sich die O-Ringdichtung zwischen erstem Halter und zweitem Halter befindet und der erste Halter im zweiten Halter verschiebbar ist, auf. - A second annular and a second chamber forming holder for the first holder with second legs, so that the first legs and the second legs facing outward, and - An O-ring seal on the outer surface of the first holder and the inner surface of the second holder, so that the O-ring seal between the first holder and the second holder is and the first holder is slidable in the second holder on.
Das zu kultivierende Objekt ist einfach auf der Membran des ersten ringförmigen Halters platzierbar. Dazu bildet der zweite ringförmige Halter eine zweite Kammer, wobei die Membran der Boden dieser zweiten Kammer ist. Der zweite ringförmige Halter ist gegenüber dem ersten ringförmigen Halter verschiebbar. Durch Drehen des Kultivierungseinsatzes bildet der erste ringförmige Halter mit der Membran mit den Objekten eine Primärseite, die mit einem Medium kontaktierbar ist. Der erste ringförmige Träger mit der Membran als Boden kann jetzt mit einem Zellkultureinsatz als Sekundärseite versehen werden. Der erste ringförmige Träger bildet dazu die erste Kammer. Die Membran verfügt über Poren, beispielsweise mit einer Größe von 3 bis 15 μηη. The object to be cultivated is simply placeable on the membrane of the first annular holder. For this purpose, the second annular holder forms a second chamber, wherein the membrane is the bottom of this second chamber. The second annular holder is displaceable relative to the first annular holder. By turning the cultivation insert, the first annular holder with the membrane with the objects forms a primary side which can be contacted with a medium. The first annular support with the membrane as the bottom can now be provided with a cell culture insert as a secondary side. The first annular support forms the first chamber for this purpose. The membrane has pores, for example, with a size of 3 to 15 μηη.
Damit können vorteilhafterweise Zellen von beiden Seiten in Form der Primär- und der Sekundärseite kultiviert werden. Dadurch kann der Einfluss der Zellen auf der Primär- und der Sekundärseite aufeinander studiert werden. This can advantageously be cultivated cells from both sides in the form of the primary and the secondary side. This allows the influence of the cells on the primary and the secondary side to be studied one on the other.
Darüber hinaus wird es damit ermöglicht, eine Infiltration von Krebszellen in gesundes Gewebe, wie beispielsweise Melanomzellen infiltrieres Hautgewebe, zu studieren. Dies kann dann zu einem Modell der Krebsentstehung führen. Das wird vorteilhafterweise dadurch ermöglicht, dass die Membran Poren aufweist, die von den Melanomzellen durchwandert werden, auf gesunde Haut treffen und so Tumoren in der gesunden Haut verursachen können. In addition, it is thus possible to study an infiltration of cancer cells into healthy tissue, such as melanoma cells infiltrated skin tissue. This can then lead to a model of carcinogenesis. This is advantageously made possible by the membrane having pores that are traversed by the melanoma cells, can strike healthy skin and thus cause tumors in the healthy skin.
Die Membran kann dazu Scheiben- oder topfförmig ausgebildet sein. Darüber hinaus kann die scheibenförmige Membran Vertiefungen für wenigstens jeweils ein erstes Objekt aufweisen. Dazu kann eine Vertiefung eine Grundfläche von beispielsweise kleiner/gleich 50 x 50 μηη2 aufweisen. The membrane may be designed to disk or cup-shaped. In addition, the disc-shaped membrane can have depressions for at least one first object in each case. For this purpose, a depression may have a base area of, for example, less than or equal to 50 × 50 μm 2 .
Ein weiterer Vorteil besteht darin, dass die ringförmigen Halter Beine aufweisen. Das führt dazu, dass Luft entweichen kann und somit eine vollständige Benetzung der Membran und der darauf angeordneten Zellen gewährleistet ist. Dazu können in einer Einrichtung zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte mehrere Kultivierungseinsätze in einem wannenförmigen und mit einem Medium befüllten Körper angeordnet werden. Die Beine der ringförmigen Halter führen vorteilhafterweise dazu, dass die Luft jeweils zwischen Membran und Boden des Körpers beim Befüllen des Körpers entweichen kann. Dazu kann die Membran auf dem ersten Halter vorteilhafterweise mit den Randbereichen des zweiten Halters zwischen den zweiten Beinen abschließen oder diese Randbereiche überragen. Die Objekte auf der Primärseile können damit mit dem Medium im Körper vollständig versorgt werden. Durch Luftblasen hervorgerufene Fehlstellen bei der Benetzung werden vermieden. Die Poren aufweisende Membran führt dazu, dass Objekte während der Kultivierung die Membran durchdringen und Objekte auf der Sekundärseite der Membran beeinflussen können. Another advantage is that the annular holders have legs. This leads to air being able to escape, thus ensuring complete wetting of the membrane and of the cells arranged thereon. For this purpose, in a device for cultivating cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects several cultivation inserts in a trough-shaped and filled with a medium body to be ordered. The legs of the annular holder advantageously result in that the air can escape between the membrane and the bottom of the body when filling the body. For this purpose, the membrane on the first holder can advantageously terminate with the edge regions of the second holder between the second legs or project beyond these edge regions. The objects on the primary ropes can thus be completely supplied with the medium in the body. Bubbles caused by air bubbles during wetting are avoided. The voided membrane causes objects to permeate the membrane during culture and affect objects on the secondary side of the membrane.
Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung sind in den Patentansprüchen 2 bis 7 angegeben. Advantageous embodiments of the invention are specified in the claims 2 to 7.
Nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 2 befinden sich an der Innenfläche des zweiten Halters Rastnasen. Weiterhin überragt der erste ringförmige Halter die ersten Beine, so dass ein Anschlag für die Rastnasen vorhanden ist. According to the embodiment of claim 2 are located on the inner surface of the second holder locking lugs. Furthermore, the first annular holder projects beyond the first legs, so that a stop for the latching noses is present.
In Fortführung sind nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 3 die Endenbereiche der ersten Beine als Anschläge für die Rastnasen ausgebildet. In continuation, the end portions of the first legs are designed as stops for the latching noses according to the embodiment of claim 3.
Damit lassen sich die Halter einfach gegeneinander bewegen, ohne dass dabei, auf Grund der in beiden Bewegungsrichtungen vorhandenen Anschläge, die Halter voneinander getrennt werden. Thus, the holder can be easily moved against each other, without causing the holders are separated from each other due to the existing in both directions of movement stops.
Günstigerweise besteht die Membran nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 4 aus einem Polycarbonat oder Polyethylenterephthalat. Conveniently, the membrane according to the embodiment of claim 4 consists of a polycarbonate or polyethylene terephthalate.
Die Membran besitzt nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 5 Poren gleich/größer 0,1 μηη und kleiner/gleich 15 μηη. The membrane has according to the embodiment of claim 5 pores equal to / greater than 0.1 μηη and less than / equal to 15 μηη.
Nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 6 ist die Membran eine Kernspurmembran. According to the embodiment of claim 6, the membrane is a nuclear track membrane.
Die Membran ist nach der Weiterbildung des Patentanspruchs 7 eine auf den ersten Halter geklebte oder gesiegelte Membran. Das Verkleben und Versiegeln sind bekannte Verbindungstechniken, die einen sicheren Halt der Membran auf dem Halter gewährleistet. Ein Ausführungsbeispiel der Erfindung ist in den Zeichnungen jeweils prinzipiell dargestellt und wird im Folgenden näher beschrieben. The membrane is according to the embodiment of claim 7, glued or sealed to the first holder membrane. Gluing and sealing are known joining techniques that ensure a secure hold of the membrane on the holder. An embodiment of the invention is illustrated in principle in the drawings and will be described in more detail below.
Es zeigen: Show it:
Fig. 1 ein Kultivierungseinsatz für Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte in einer Explosionsdarstellung, 1 shows a cultivating insert for cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects in an exploded view,
Fig. 2a bis 2c ein Kultivierungseinsatz mit Objekten und  2a to 2c, a cultivation use with objects and
Fig. 3 eine Einrichtung mit Kultivierungseinsätzen.  3 shows a device with cultivation inserts.
Ein Kultivierungseinsatz für Zellen 7 und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte besteht im Wesentlichen aus einem ersten Halter 1 mit ersten Beinen 2, einer Membran 3, einem zweiten Halter 4 mit zweiten Beinen 5 und einer O-Ringdichtung 6. A culture use for cells 7 and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects essentially consists of a first holder 1 with first legs 2, a membrane 3, a second holder 4 with second legs 5 and an O-ring seal 6.
Die Fig. 1 zeigt einen Kultivierungseinsatz für Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte in einer prinzipiellen Explosionsdarstellung. Fig. 1 shows a cultivation use for cells and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects in a schematic exploded view.
Der erste Halter 1 ist ein erster ringförmiger und eine erste Kammer bildender Halter 1 mit den ersten Beinen 2. Auf dem ersten Halter 1 ist die Membran 3 aufgebracht. Zur Verbindung werden dazu bekannte Schweiß- oder Klebverfahren genutzt. Die Membran 3 überspannt dabei den Innenraum des ersten Halters 1 und bildet damit einen Boden. Die Membran kann aus einem Polycarbonat oder Polyethylenterephthalat bestehen. Die Membran 3 besitzt Poren, so dass die Membran eine von beiden Seiten kultivierbare Membran 3 ist. Die Poren sind beispielsweise gleich/größer 0,1 μηη und kleiner/gleich 10 μηη. Der zweite Halter 4 ist ein ringförmiger und eine zweite Kammer bildender Halter 4 für den ersten Halter 1 . Weiterhin besitzt der zweite Halter 4 zweite Beine 5, so dass die ersten Beine 2 und die zweiten Beine 5 nach außen weisen. Zwischen dem ersten Halter 1 und dem zweiten Halter 4 ist die O- Ringdichtung 6 dichtend angeordnet, die damit an der Außenfläche des ersten Halteis 1 und der Innenfläche des zweiten Halters 4 anliegt. Damit ist der erste Halter 1 im zweiten Halter 4 verschiebbar. Dazu kann der erste Halter 1 eine umlaufende Nut für die O-Ringdichtung 6 aufweisen. The first holder 1 is a first annular and a first chamber forming holder 1 with the first legs 2. On the first holder 1, the membrane 3 is applied. For connection, known welding or adhesive methods are used for this purpose. The membrane 3 spans the interior of the first holder 1 and thus forms a bottom. The membrane may consist of a polycarbonate or polyethylene terephthalate. The membrane 3 has pores, so that the membrane is a membrane 3 cultivable from both sides. The pores are, for example, equal to / greater than 0.1 μηη and less than or equal to 10 μηη. The second holder 4 is an annular and a second chamber forming holder 4 for the first holder. 1 Furthermore, the second holder 4 has second legs 5, so that the first legs 2 and the second legs 5 face outward. Between the first holder 1 and the second holder 4, the O-ring seal 6 is arranged sealingly, which rests against the outer surface of the first Halteis 1 and the inner surface of the second holder 4. Thus, the first holder 1 in the second holder 4 is displaceable. For this purpose, the first holder 1 have a circumferential groove for the O-ring seal 6.
Die Fig. 2a bis 2c zeigen ein Kultivierungseinsatz mit Objekten in prinzipiellen Darstellungen. Die Fig. 3 zeigt eine Einrichtung mit Kultivierungseinsätzen in einer prinzipiellen Darstellung. Die Einrichtung zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte besteht aus einem wannenförmigen und mit einem Medium 9 befüllten Körper 10, in dem mehrere Kultivierungseinsätze eingesetzt sind. FIGS. 2a to 2c show a cultivating insert with objects in basic representations. FIG. 3 shows a device with cultivation inserts in a basic representation. The device for cultivating cells and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects consists of a trough-shaped and filled with a medium 9 body 10 in which several cultivation inserts are used.
An Hand der Fig. 2a bis 2c und der Fig. 3 wird die Funktion des Kultivierungseinsatzes nachfolgend näher erläutert. The function of the cultivating insert is explained in more detail below with reference to FIGS. 2 a to 2 c and FIG. 3.
Der zusammengebaute Kultivierungseinsatz wird in den wannenförmigen Körper 10 eingesetzt. Im ersten Schritt wird beispielsweise 4 ml Medium 9 mit ersten Objekten 7 auf die Membran 3 aufgebracht. Der zweite Halter 4 bildet mit der Membran 3 eine Kammer. Auf der damit vorhandenen Primärseite wachsen die ersten Zellen 7 an (Darstellung in der Fig. 2a). Das verbrauchte Medium 9 wird nach einer durch das Zellwachstum bestimmten Zeit entfernt. Der zweite Halter 4 wird jetzt nach unten gedrückt (Darstellung in der Fig. 2b). Der Kultivierungseinsatz wird um 180° gedreht (Darstellung in der Fig. 2c). Jetzt werden beispielsweise Fibroblasten mit Kollagen als zweite Objekte 8 auf die Sekundärseite gegeben und mit Medium 1 1 überschichtet. Weiterhin wird Medium 9 in den wannenförmigen Körper 10 gegeben, so dass die Membran 3 mit den anhaftenden ersten Objekten 7 auf der Primärseite im Medium 9 stehen und die Primärseite luftblasenfrei Kontakt zum Medium 9 hat. Jetzt kann die Einrichtung mit den Kultivierungseinsätzen zur weiteren Inkubation in einen Inkubator überführt werden. The assembled cultivation insert is inserted into the trough-shaped body 10. In the first step, for example, 4 ml of medium 9 with first objects 7 are applied to the membrane 3. The second holder 4 forms a chamber with the membrane 3. The first cells 7 grow on the primary side thus present (representation in FIG. 2 a). The spent medium 9 is removed after a time determined by cell growth. The second holder 4 is now pressed down (representation in FIG. 2b). The cultivation insert is rotated by 180 ° (shown in Fig. 2c). Now, for example, fibroblasts with collagen are given as second objects 8 on the secondary side and covered with medium 1 1. Furthermore, medium 9 is placed in the trough-shaped body 10, so that the membrane 3 with the adhering first objects 7 are on the primary side in the medium 9 and the primary side has air bubble-free contact with the medium 9. Now the device with the cultivation inserts can be transferred to an incubator for further incubation.
In einer Ausführungsform befinden sich an der Innenfläche des zweiten Halters 4 Rastnasen. Weiterhin überragt der erste ringförmige Halter 1 die ersten Beine 2, so dass ein Anschlag für die Rastnasen vorhanden ist. Darüber hinaus sind die Endenbereiche der ersten Beine 2 als Anschläge für die Rastnasen ausgebildet. In one embodiment, 4 locking lugs are located on the inner surface of the second holder. Furthermore, the first annular holder 1 projects beyond the first legs 2, so that a stop for the latching noses is present. In addition, the end portions of the first legs 2 are designed as stops for the latching noses.

Claims

Patentansprüche claims
1 . Kultivierungseinsatz für Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte mit 1 . Cultivation use for cells and tissue cultures as well as yeasts and bacteria as objects with
- einem ersten ringförmigen und eine erste Kammer bildenden Halter (1 ) mit ersten Beinen (2) und einer Poren aufweisenden und damit von beiden Seiten kultivierbaren Membran (3), so dass die Membran (3) den Innenraum des ersten Halters (1 ) überspannt,  - A first annular and a first chamber forming holder (1) having first legs (2) and a pores and thus culturable from both sides membrane (3), so that the membrane (3) spans the interior of the first holder (1) .
- einem zweiten ringförmigen und eine zweite Kammer bildenden Halter (4) für den ersten Halter (1 ) mit zweiten Beinen (5), so dass die ersten Beine (2) und die zweiten Beine (5) nach außen weisen,  - a second annular and a second chamber forming holder (4) for the first holder (1) with second legs (5), so that the first legs (2) and the second legs (5) face outward,
- einer O-Ringdichtung (6) an der Außenfläche des ersten Halters (1 ) und der Innenfläche des zweiten Halters (4), so dass sich die O-Ringdichtung (6) zwischen erstem Halter (1 ) und zweitem Halter (4) befindet und der erste Halter (1 ) im zweiten Halter (4) verschiebbar ist.  - An O-ring seal (6) on the outer surface of the first holder (1) and the inner surface of the second holder (4), so that the O-ring seal (6) between the first holder (1) and second holder (4) and the first holder (1) in the second holder (4) is displaceable.
2. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass sich an der Innenfläche des zweiten Halters (4) Rastnasen befinden und dass der erste ringförmige Halter (1 ) die ersten Beine (2) überragt, so dass ein Anschlag für die Rastnasen vorhanden ist. 2. cultivating insert according to claim 1, characterized in that on the inner surface of the second holder (4) locking lugs are and that the first annular holder (1) projects beyond the first legs (2), so that a stop for the latching noses is present.
3. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Endenbereiche der ersten Beine (2) als Anschläge für die Rastnasen ausgebildet sind. 3. cultivation insert according to claim 1 or 2, characterized in that the end regions of the first legs (2) are designed as stops for the latching noses.
4. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Membran (3) aus einem Polycarbonat oder Polyethylenterephthalat besteht. 4. cultivating insert according to claim 1, characterized in that the membrane (3) consists of a polycarbonate or polyethylene terephthalate.
5. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Membran (3) Poren gleich/größer 0,1 μηη und kleiner/gleich 15 μηη besitzt. 5. cultivating insert according to claim 1, characterized in that the membrane (3) has pores equal to / greater than 0.1 μηη and less than or equal to 15 μηη.
6. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Membran (3) eine Kernspurmembran (3) ist. 6. cultivating insert according to claim 1, characterized in that the membrane (3) is a nuclear track membrane (3).
7. Kultivierungseinsatz nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Membran (3) eine auf den ersten Halter (1 ) geklebte oder gesiegelte Membran (3) ist. 7. cultivating insert according to claim 1, characterized in that the membrane (3) on the first holder (1) glued or sealed membrane (3).
8. Einrichtung zur Kultivierung von Zellen und Gewebekulturen sowie Hefen und Bakterien als Objekte mit Kultivierungseinsätzen nach Patentanspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass mehrere Kultivierungseinsätze in einem wannenförmigen und mit einem Medium (9) befüllten Körper (10) angeordnet sind. 8. A device for cultivating cells and tissue cultures and yeasts and bacteria as objects with cultivation inserts according to claim 1, characterized in that a plurality of cultivation inserts in a trough-shaped and with a medium (9) filled body (10) are arranged.
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