WO2014112665A1 - 스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품 - Google Patents

스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품 Download PDF

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cells
steroid
ins
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functional food
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김병천
장병철
김지혜
박유경
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(주)월드바이오텍
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    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
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    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
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    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating steroid-induced diabetes mellitus (SID) and to a health functional food, and more specifically, to extract an extract of Ceriporia lacerata culture solution as an active ingredient.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of steroid-induced diabetes and the health functional food containing.
  • steroidal drugs have strong anti-inflammatory and immunomodulatory activity, and are widely used in the treatment and organ transplantation of various human diseases such as rheumatoid arthritis, hematologic cancer, multiple sclerosis, and neuropathy.
  • various human diseases such as rheumatoid arthritis, hematologic cancer, multiple sclerosis, and neuropathy.
  • SID steroid-induced diabetes
  • SID is very closely associated with decreased insulin secretion and synthesis, induction of insulin resistance and increased glucose production in the liver. SID is also known to be deeply involved in the inhibition of proliferation and death of pancreatic ⁇ -cells (major insulin secretion and synthesis sites) by steroid drugs. However, the mechanisms by which steroid drugs inhibit the growth of ⁇ -cells and induce apoptosis are not well understood. Therefore, for the prevention and treatment of SID, ⁇ -cell protection that can block the proliferation inhibition and death induction of ⁇ -cells by steroid drugs and precise molecular mechanisms of inhibiting and inhibiting ⁇ -cell proliferation by steroid drugs The search and development of (regenerated) materials is very urgently needed.
  • Ceriporia lacerata Ceriporia lacerata
  • lignin Liignin
  • Seriferia La Serrata Ceriporia lacerata Study of food and drug using the present invention is a Korean Patent No. 10-1031605 filed by the present inventors "Ceriporia racerata for the prevention and treatment of diabetes disease Method for preparing a culture extract and the seriferia racerata Culture extracts "are internationally unique.
  • the present invention has been made to solve the problems of the prior art as described above, the problem to be solved in the present invention is a steroid-induced diabetes (steroid-) containing a culture extract of Ceriporia lacerata ( Ceriporia lacerata ) as an active ingredient It is to provide a pharmaceutical composition and health functional food for the prevention or treatment of induced diabetes (SID).
  • steroid- a steroid-induced diabetes
  • Ceriporia lacerata Ceriporia lacerata
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of steroid-induced diabetes (SID) containing a Ceriporia lacerata culture extract as an active ingredient to provide.
  • SID steroid-induced diabetes
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for enhancing survival of pancreatic ⁇ -cells containing Ceriporia lacerata culture extract as an active ingredient.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for inhibiting apoptosis of pancreatic ⁇ -cells containing Ceriporia lacerata culture extract as an active ingredient.
  • the present invention is a seriporia racerata ( Ceriporia lacerata ) Provides a dietary supplement for improving steroid-induced diabetes (SID) disease, containing the culture extract as an active ingredient.
  • SID steroid-induced diabetes
  • the pharmaceutical composition and the nutraceutical according to the present invention have a protective activity against INS-1 insulin secreting cells by blocking proliferation inhibition and induction of cell death of steroid mediated INS-1 insulin secreting cells. Accordingly, the pharmaceutical compositions and dietary supplements of the present invention can be developed as active ingredients of drugs or functional food compositions for the protection or regeneration of ⁇ -cells by blocking the growth inhibition and killing of steroid mediated ⁇ -cells.
  • Figure 1 (A) relates to the blocking (protective) effect of Ceriporia lacerata culture extract (hereinafter, also referred to as 'CLCE') on the inhibition of steroid-mediated INS-1 insulin secretion cell proliferation.
  • 'CLCE' Ceriporia lacerata culture extract
  • Figure 1 (B) relates to the blocking (protective) effect of the extract of Ceriporia lacerata culture on the induction of steroid-mediated INS-1 cell death.
  • Figure 3 relates to the elimination of the blocking effect on steroid-mediated INS-1 insulin secretory cell proliferation inhibition and death induced by the extract of Ceriporia lacerata culture of LY294002 (PI3K / PKB inhibitor).
  • Figure 4 (A) shows the seriporia racerata for reducing the INS-1 cell viability of interleukin-1 ⁇ (IL-1 ⁇ ) Ceriporia lacerata ) It is the result of measuring the effect of the culture extract.
  • IL-1 ⁇ interleukin-1 ⁇
  • Figure 4 (B) is the result of measuring the effect of the extract of Ceriporia lacerata ( Ceriporia lacerata ) on the reduction of INS-1 cell viability of streptozotocin (streptozotocin, STZ).
  • Figure 4 (C) is the result of measuring the effect of the extract of Ceriporia lacerata ( Ceriporia lacerata ) on the reduction of INS-1 cell viability of thapsigargin (TG).
  • Figure 4 (D) shows the seriporia racerata for reducing the survival rate of INS-1 cells of tunicamycin (TN) ( Ceriporia lacerata ) It is the result of measuring the effect of the culture extract.
  • the present invention is a serifria racerata ( Ceriporia lacerata ) Provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of steroid-induced diabetes (SID) containing a culture extract as an active ingredient.
  • Ceriporia racerata of the present invention Ceriporia lacerata
  • the culture extract can be used as a pharmaceutical composition for enhancing the survival of pancreatic ⁇ -cells or as a pharmaceutical composition for inhibiting apoptosis of pancreatic ⁇ -cells.
  • the present invention is a seriporia racerata ( Ceriporia lacerata ) Provides a dietary supplement for improving steroid-induced diabetes (SID) disease, containing the culture extract as an active ingredient.
  • SID steroid-induced diabetes
  • the inventors of the present invention have steroid ⁇ - mediated cell research efforts to develop a substance which can inhibit or prevent the growth inhibition and apoptosis induction result, three reports Ria la sera other (Ceriporia lacerata) culture extracts from INS-1 insulin secreting cell Inhibition of steroid-mediated INS-1 cell proliferation and induction of cell death at the same time. Experimental evidence that this blocking effect is closely related to increased PKB activity suggests that this material can be developed for the prevention or treatment of SID. It confirmed and completed this invention.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of steroid-induced diabetes (SID) containing the extract of Ceriporia lacerata culture as an active ingredient.
  • SID steroid-induced diabetes
  • Ceriporia lacerata culture extract of the present invention can be used as a pharmaceutical composition for enhancing the survival of pancreatic ⁇ -cells or a pharmaceutical composition for inhibiting apoptosis of pancreatic ⁇ -cells.
  • the present invention provides a dietary supplement for improving steroid-induced diabetes (SID) disease, containing Ceriporia lacerata culture extract as an active ingredient.
  • SID steroid-induced diabetes
  • Ceriporia lacerata culture extract which is an active ingredient in the pharmaceutical composition for preventing or treating steroid-induced diabetic diseases of the present invention and health functional food, can be prepared by the following method.
  • Ceriporia racerata in the step (a) Ceriporia lacerata Liquid culture of the mycelium is carried out using Ceriporia racerata to obtain extracellular polysaccharide (Exopolysaccharide).
  • Ceriporia lacerata The medium composition for culturing the mycelium in a liquid is 1 ⁇ 2% by weight sugar, 0.2 ⁇ 1% by weight of glucose, 0.2 ⁇ 1% by weight starch, 0.1 ⁇ 0.5% by weight of water, 0.1 ⁇ 0.5% of wheat flour 0.5 wt%, soy flour 0.2-2 wt%, magnesium sulfate (MgSO 4 0.05 to 0.1% by weight, potassium monophosphate (KH 2 PO 4 0.05-0.1% by weight, potassium diphosphate (K 2 HPO 4 ) 0.05 to 0.1% by weight and may include 92 to 98% by weight of water.
  • liquid culture maintains 20 ⁇ 25 °C of hydrogen ion concentration (pH) 4.5 ⁇ 6.0
  • light source maintains blue LED
  • illuminance 0.5 LUX air is injected at 0.5 ⁇ 1.5 (kgf / cm 2 ) and carbon dioxide concentration is 1,000
  • the parent strain in step (a) is one of the superior strains stored at 4 °C in the PDA medium, using a PDB medium in the Erlenmeyer flask to maintain a constant temperature of 25 °C in a shaker incubator for 7 to 9 days Use rough ones.
  • the amount of mycelia to be added to the inoculum is most preferably 0.5% of the solution to be cultured.
  • the high mycelial mass (% / 100 ml) does not increase the content of extracellular polysaccharides, so the medium composition is a selective culture condition that forms the highest content of extracellular polysaccharides rather than the best nutritional ratio and environmental conditions for mycelial growth. Should be applied.
  • the culture solution is separated and purified into a mycelium and an aqueous solution.
  • the separation tablet was repeatedly purified to remove the mycelium with a centrifuge with a multi-sheet filter press and a vibration centrifugal separator (PALLSEP), and then irradiated with ultraviolet (UV) light for 1 minute. It should also be kept sealed after removing oxygen. This is because the presence of mycelia in the solution causes a change in the content of the active ingredient by the growth of the mycelia.
  • step (b) the mycelia culture solution prepared in step (a) is powdered by vacuum drying or lyophilization.
  • the drying is preferably carried out for 48 hours to 96 hours at a low temperature of 40 ° C or less, preferably 30 ° C or less, since a substantial portion of the effective substance may be lost when the drying is carried out at a high temperature.
  • step (c) the mycelium culture broth obtained in step (b) is extracted with a solvent, and the seriporia racerata according to the present invention ( Ceriporia lacerata ) Mycelium An extracellular polysaccharide, which is a culture extract, is isolated and prepared.
  • the process is well suspended by adding 100 mL of distilled water to 5 g of dry powder, followed by centrifugation (8,000 rpm, 20 min) to add a cold alcohol corresponding to 2 to 3 times the amount thereof to the supernatant and the refrigerator (4). Put it in for 12 hours.
  • the extract is preferably vacuum freeze dried at 30 or less.
  • step (d) the Ceriporia racerata obtained in step (c) Ceriporia lacerata ) Mycelium
  • the process further includes suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions and nutraceuticals.
  • the extract Prepared by mixing 200 mg, 100 mg of fine powder, 10 mg of talc and filled into an airtight bag.
  • the tablet is prepared by mixing 100 mg of the extract, 50 mg of fine powder, 10 mg of lactose, and 2 mg of magnesium stearate.
  • the preparation of the liquid preparation is prepared by suspending 100 ml of the extract, 5 g of isomerized sugar, a suitable amount of scent of fragrance, and an amount of preservative to fill the brown bottle.
  • the resultant of step (a) may be used directly.
  • Ceriporia racerata produced by the present invention ( Ceriporia lacerata ) Mycelium
  • the extract of the culture solution has a remarkably high content of active ingredients effective in the treatment of steroid-induced diabetes, and is very effective in stopping and treating the progress of related diseases and complications.
  • the seriporia racerata according to the present invention ( Ceriporia lacerata ) Mycelium
  • the culture extract contained extracellular polysaccharides known to have antidiabetic effects in a very high content of 3.00 ⁇ 0.03% / 100 ml in the culture and 5.00 ⁇ 0.02% / 100 mg in the dry extract.
  • the prepared Ceriporia lacerata mycelium culture was powdered by lyophilization for 72 hours at a low temperature of 25 °C using a vacuum freeze dryer. Suspend well by adding 100 ml of distilled water to 5 g of dry powder, followed by centrifugation (8,000 rpm, 20 minutes), and adding 2 ⁇ 3 times the amount of cold alcohol to the supernatant thereof in a refrigerator (4 ° C.). Put in for 12 hours. After centrifugation (8,000 rpm, 20 minutes) again only the supernatant from the stationary material, the precipitate was recovered to extract crude Exopolysaccharide. Crude extracellular polysaccharide was dried in a freeze dryer for 72 hours to obtain complete Exopolysaccharide.
  • RPMI-1640 medium, fetal bovine serum, penicillin and streptomycin were purchased from WelGENE (Daegu, Korea).
  • IL-1 ⁇ was purchased from R & D SYSTEMS (Minneapolis, MN, USA).
  • p-ERK-1 / 2, T-ERK-1 / 2, p-PKB, and T-PKB antibodies were purchased from Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA).
  • LY294002 and streptozotocin (STZ) were purchased from Biomol (Plymouth Meeting, PA, USA).
  • Antibodies against MKP-1 and goat anti-rabbit or anti-mouse secondary horseradish peroxidase were purchased from Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA).
  • the mouse-derived insulin secreting cell line INS-1 was 95% in RPMI-1640 medium supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS), 100 units / ml penicillin, and 100 g / ml streptomycin. It was kept at 37 ° C. under humidity conditions and 5% CO 2 conditions.
  • FBS heat-inactivated fetal bovine serum
  • INS-1 cells were incubated in 24-well plates at a concentration of 1 ⁇ 10 5 cells in 500 mL volume one day prior to reagent or CLCE treatment.
  • INS-1 cells were treated with reagents (Dex, LY294002, IL-1 ⁇ , STZ, TG, TN) and / or CLCE at the indicated times and concentrations.
  • reagents Dex, LY294002, IL-1 ⁇ , STZ, TG, TN
  • CLCE CLCE at the indicated times and concentrations.
  • the number of viable INS-1 cells was directly counted under the microscope by staining with trypan blue. Cell count analysis was performed three times. Data is presented as the average of three independent experiments.
  • INS-1 cells were cultured in 6-well plates at a concentration of 1 ⁇ 10 6 cells in 2 mL volumes one day prior to reagent or CLCE treatment. These INS-1 cells were incubated for 24 hours with the indicated concentrations of Dex and / or CLCE. After 24 hours each cell was recovered, washed and lysed at 55 ° C. for 3 hours in buffer [50 mM Tris (pH 8.0), 0.5% sarkosyl, 0.5 mg / mL proteinase K, and 1 mM EDTA], RNase A (0.5 ⁇ g / mL) was added and then further incubated for 55 to 18 hours. Lysates were centrifuged at 10,000 xg for 20 minutes.
  • Genomic DNA in the supernatant was extracted with an equal volume of neutral phenol-chloroform-isoamyl alcohol mixture (25: 24: 1) and analyzed by electrophoresis on 1.7% agarose gel. DNA was stained with ethidium bromide (0.1 ⁇ g / mL) and visualized under UV irradiation and photographed.
  • INS-1 cells were cultured in 6-well plates at a concentration of 0.5 ⁇ 10 6 cells in 2 mL volume one day prior to reagent or CLCE treatment. These INS-1 cells were incubated for 4 hours with the indicated concentrations of Dex and / or CLCE.
  • INS-1 cells were then washed twice with PBS supplemented with 1 mM Na 3 VO 4 and 1 mM NaF, and lysis buffer [50 mM Tris-Cl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 0.1% sodium dodecyl sulfate , 0.25% sodium deoxycholate, 1% Triton X-100, 1% Nonidet P-40, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, proteinase inhibitor cocktail (1x)].
  • Cell lysates were collected in 1.5 mL tubes and centrifuged at 12,000 rpm, 4 ° C. for 20 minutes. The supernatant was recovered and the protein concentration determined by Bradford reagent.
  • Membranes were washed with TBS (10 mM Tris, 150 mM NaCl) [TBST] supplemented with 0.05% (vol / vol) Tween 20 and blocked with TBST containing 5% (wt / vol) non-fat dry milk. It was.
  • the membranes are MKP-1 (1: 2,000), p-ERK-1 / 2 (1: 2,000), T-ERK-1 / 2 (1: 2,000), p-PKB (1: 2,000), T-PKB ( 1: 2,000) or Actin (1: 5,000) specific incubated overnight at 4 ° C.
  • the membrane was exposed to secondary antibodies bound to horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours.
  • the membranes were washed with TBST at room temperature. Immune reactivity was detected with ECL reagent. Equivalent protein loading was assessed by expression level of Actin protein.
  • MKP-1 is a type of dephosphoryse that interferes with phosphorylation of ERK-1 / 2 and / or PKB.
  • Dex and / or CLCE treatment regulates the expression and activation (phosphorylation) of these proteins in INS-1 cells.
  • MKP-1 protein expression was greatly increased when Dex alone was treated for 4 hours, but phosphorylation of ERK-1 / 2 and PKB was significantly decreased.
  • the present inventors investigated the importance of PKB activation in the effect of blocking Dex-induced INS-1 cell survival and CLCE's Dex-induced cell survival reduction using LY294002 (PI3K / PKB inhibitor). As shown in FIG. 3, treatment with LY294002 alone compared to the control showed a decrease in INS-1 cell survival of about 24%. On the other hand, the treatment of Dex alone reduced INS-1 cell survival by about 55%, but when Dex was mixed with LY294002, INS-1 was higher than the reduction of INS-1 cell survival by Dex alone (55%). Decreased cell survival (75%).
  • compositions and dietary supplements of the present invention can be developed as active ingredients of drugs or functional food compositions for the protection or regeneration of ⁇ -cells by blocking the growth inhibition and killing of steroid-mediated ⁇ -cells. The chances are very high.

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Abstract

본 발명은 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은 스테로이드 매개 INS-1 인슐린 분비 세포의 증식 억제 및 세포사 유도를 차단하여 INS-1 인슐린 분비 세포에 대한 보호 활성을 갖는다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은 스테로이드 매개 β-세포의 생육 억제 및 사멸을 차단시켜 β-세포의 보호 또는 재생 용도의 약물 또는 기능성 식품 조성물의 활성성분으로서 개발될 수 있다.

Description

스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품
본 발명은 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것이다.
임상적으로 스테로이드계 약물은 강한 항염증 및 면역조절 활성을 가지고 있어서, 류마토이드 관절염, 혈액암, 다발성 경화증, 신경장애 등 여러 인체 질환의 치료제 및 기관이식 시 많이 사용되고 있다. 그러나, 많은 기초 및 임상연구에서 스테로이드계 약물을 장기간 또는 과량 사용 시 인체의 여러 부작용이 유발된다는 것이 보고되고 있다. 스테로이드에 의한 부작용의 하나로 스테로이드 유도 당뇨병 (steroid-induced diabetes, SID)이 있다.
SID는 인슐린 분비 및 합성 감소, 인슐린 저항성 유도 및 간에서의 글루코오스 생성 증가와 매우 밀접한 관련이 있다. SID는 또한 스테로이드 약물에 의한 췌장 β-세포(주요 인슐린 분비 및 합성 장소)의 증식 억제 및 사멸 유도와 깊은 관련이 있다고 알려져 있다. 그러나, 현재 스테로이드 약물에 의한 β-세포의 증식 억제 및 세포사(apoptosis) 유도 작용기전은 잘 규명되어 있지 않은 상태이다. 그러므로, SID의 예방 및 치료를 위해, 스테로이드 약물에 의한 β-세포 증식 억제 및 사멸 유도의 정확한 분자 기전 규명 및 스테로이드 약물에 의한 β-세포의 증식 억제 및 사멸 유도를 차단시킬 수 있는 β-세포 보호(재생) 물질의 탐색 및 개발이 매우 절실히 요구된다.
이전의 국내외 연구에서 합성 스테로이드 약물의 하나인 덱사메타손(dexamethasone, Dex)이 인슐린 분비 세포 및 기타 여러 종류의 세포 증식 억제 및 세포사를 유도한다는 것이 보고되었으며, 이러한 Dex의 세포사 유도 효능은 Dex 처리에 따른 세포 내 미토콘드리아 cytochrome c 방출, caspase 활성 증가, 활성산소종 발생, NF-kB 전사인자 단백질 활성 증가, insulin receptor substrate-2 및 protein kinase B(PKB) 인산화(활성) 감소, mitogen-activated protein kinase(MAPK) phosphatase-1(MKP-1) 발현 증가, extracellular signal-regulated protein kinase-1/2(ERK-1/2) 인산화(활성) 감소와 깊은 관련이 있음이 밝혀졌다.
한편, 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)는 백색 부후균의 일종으로서, 생태계에서 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스 등의 탄소원을 이용하기 위하여 리그닌(Lignin)분해라는 공동대사를 수행한다. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)의 존재가 2002년 처음으로 학계에 보고된 때문인지 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)의 산업화에 대한 연구는 극소수에 불과하고, 이 또한 토양오염 방지제화 및 표백제화에 관한 2가지 연구만 있다.
또한, 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)를 이용한 식품 및 의약품화의 연구는 본 발명자가 출원한 대한민국 등록특허 제10-1031605호 "당뇨병 질환의 예방 및 치료를 위한 세리포리아 라세라타 배양액 추출물의 제조방법 및 이에 따른 세리포리아 라세라타 배양액 추출물"이 국제적으로 유일하다.
그러나, 아직까지 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액에 의한 스테로이드 매개 β-세포 증식 억제 및 세포사 유도의 차단 효능 및 이에 대한 작용 기작은 보고된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 제공하고자 하는 것이다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 췌장 β-세포의 생존 증진용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 췌장 β-세포의 세포사멸(apoptosis) 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID) 질환 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.
본 발명에 따른 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은 스테로이드 매개 INS-1 인슐린 분비 세포의 증식 억제 및 세포사 유도를 차단하여 INS-1 인슐린 분비 세포에 대한 보호 활성을 갖는다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은 스테로이드 매개 β-세포의 생육 억제 및 사멸을 차단시켜 β-세포의 보호 또는 재생 용도의 약물 또는 기능성 식품 조성물의 활성성분으로서 개발될 수 있다.
도 1의 (A)는 스테로이드 매개 INS-1 인슐린 분비세포 증식 억제 에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물(이하, 'CLCE'라고도 함)의 차단(보호) 효과에 관한 것이다.
도 1의 (B)는 스테로이드 매개 INS-1 세포 사멸 유도에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물의 차단(보호) 효과에 관한 것이다.
도 2는 스테로이드 처리된 INS-1 세포내 MKP-1, ERK-1/2, 및 PKB 단백질 발현 및/또는 활성(인산화)에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물의 효과에 관한 것이다.
도 3은 LY294002(PI3K/PKB 저해제)의 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 가진 스테로이드 매개 INS-1 인슐린 분비세포 증식 억제 및 사멸 유도에 대한 차단 효과의 소거에 관한 것이다.
도 4의 (A)는 인터루킨-1β(IL-1β)의 INS-1 세포 생존율 감소에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 미치는 영향을 측정한 결과이다.
도 4의 (B)는 스트렙토조토신(streptozotocin, STZ)의 INS-1 세포 생존율 감소에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 미치는 영향을 측정한 결과이다.
도 4의 (C)는 탑시갈진(thapsigargin, TG)의 INS-1 세포 생존율 감소에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 미치는 영향을 측정한 결과이다.
도 4의 (D)는 튜니카마이신(tunicamycin, TN)의 INS-1 세포 생존율 감소에 대한 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 미치는 영향을 측정한 결과이다.
본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물은 췌장 β-세포의 생존 증진용 약학적 조성물 또는 췌장 β-세포의 세포사멸(apoptosis) 억제용 약학적 조성물로서 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID) 질환 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 발명자들은 스테로이드 매개 β-세포 증식 억제 및 세포사 유도를 억제 또는 예방할 수 있는 물질을 개발하기 위해 연구 노력한 결과, 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물이 INS-1 인슐린 분비 세포에서 스테로이드 매개 INS-1 세포 증식 억제 및 세포사 유도를 동시에 차단하는 효능을 보이며, 이러한 차단효능이 PKB 활성 증가와 깊은 관련이 있음을 실험적으로 증명함으로써 이 물질이 SID 예방 또는 치료용도로 개발될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물은 췌장 β-세포의 생존 증진용 약학적 조성물 또는 췌장 β-세포의 세포사멸(apoptosis) 억제용 약학적 조성물로서 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID) 질환 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.
본 발명의 스테로이드 유도 당뇨병 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 유효 성분인 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있다.
(a) 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 배양하여 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액을 얻는 단계;
(b) 상기 배양액을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화하는 단계;
(c) 상기 분말을 물, 에탄올 및 메탄올로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택된 용매로 추출하는 단계; 및
(d) 약학적 조성물 및 건강 기능 식품으로 제형화하는 단계.
상기 (a) 단계에서의 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체의 액체배양은 세포외 다당체(Exopolysaccharide)를 획득하기 위하여 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 액체내에서 배양하는 것으로 상기 액체배양을 위한 배지 조성물은 설탕 1~2중량%, 포도당 0.2~1중량%, 전분 0.2~1중량%, 수수분 0.1~0.5중량%, 대맥분 0.1~0.5중량%, 대두분 0.2~2중량%, 황산마그네슘(MgSO4)0.05~0.1중량%, 1인산칼륨(KH2PO4) 0.05~0.1중량%, 2인산칼륨(K2HPO4) 0.05~0.1중량% 및 물 92~98중량%를 포함하는 것일 수 있다.
이때 액체배양은 20~25℃에서 수소이온농도(pH) 4.5~6.0, 광원은 청색 LED, 조도는 0.5 LUX를 유지하며 공기는 0.5~1.5(kgf/cm2)으로 주입하고 이산화탄소의 농도는 1,000~2,000 PPM으로 유지하면서 8~13일간 수행되는 것이 바람직하고, 22℃, pH 5.0, 1.0(kgf/cm2), 1,500 PPM 조건에서 10일간 수행되는 것이 세포외 다당체(Exopolysaccharide)의 함량이 높으므로 가장 바람직하다.
상기 (a) 단계에서의 모균주는 PDA배지 상태로 4℃에 보관중인 우량균주 1개를, 삼각플라스크에 PDB배지를 사용하여 진탕배양기에서 25℃의 항온을 유지하며 7~9일간 배양과정을 거친 것을 사용한다. 이때 접종원으로 투입될 균사체의 량은 배양할 용액의 0.5%가 가장 바람직하다. 균사체량(%/100 ml)이 높다고 세포외 다당체의 함량도 같이 높아지는 것이 아니므로 배지 조성은 균사체의 성장에 가장 양호한 영양 비율 및 환경조건이 아닌 세포외 다당체의 함량을 가장 높게 형성시키는 선택적 배양조건을 적용해야 한다.
상기 배양액은 균사체와 수용액으로 분리 정제한다. 상기의 분리정제는 원심분리기로 균사체를 제거한 용액을 다중필터프레스(Multi-Sheet Filter Press)와 진동원심막분리기(PALLSEP)로 반복하여 정제한 후 1분간 자외선(UV)을 조사한다. 또한, 산소를 제거한 후 밀봉 보관하여야 한다. 이는 용액속에 균사가 존재할 경우 균사의 성장으로 유효성분의 함량에 변화를 가져오기 때문이다.
(b) 단계에서는 상기 (a) 단계에서 제조된 균사체 배양액을 진공건조 또는 동결건조시켜 분말화한다. 상기의 건조는 고온에서 수행할 경우 유효물질의 상당부분이 소멸될 수 있으므로 40℃ 이하의 저온, 바람직하게는 30℃ 이하의 온도에서 48시간~96시간 동안 수행되는 것이 바람직하다. 그리고, (b)단계에서의 건조는 증발온도를 상대적으로 높게 설정하는 진공건조기 보다 진공동결건조기를 사용하는 것이 유효물질 함량 변화가 최소화되므로 더욱 바람직하다.
(c) 단계에서는 (b) 단계에서 얻은 균사체 배양액 건조물을 용매로 추출하여 본 발명에 따른 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양물 추출물인 세포외 다당체를 분리 제조한다.
상기 과정은 건조 분말 5g에 증류수 100 mL을 첨가하여 잘 현탁한 후, 원심 분리(8,000 rpm, 20 min)하여 이의 상등액에 그 양의 2~3배에 해당하는 차가운 알코올을 첨가하고 냉장고(4)에 넣어 12시간 정치시킨다.
상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리(8,000 rpm, 20 min)한 후, 침전물을 회수하여 crude한 Exopolysaccharide를 제조한다. 상기 추출물은 30 이하에서 진공동결건조하는 것이 바람직하다.
(d) 단계에서는 (c) 단계에서 얻은 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양물의 용매 추출물을 함유하는 약학적 조성물과 건강 기능 식품을 제조한다. 상기 과정에는 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제가 더 포함된다.
예를 들어, 산제의 제조에는 상기 추출물 200 mg, 미분 100 mg, 탈크 10 mg를 혼합하여 제조한 후 기밀포에 충진한다.
예를 들어, 정제의 제조는 상기 추출물 100 mg, 미분 50 mg, 유당 10 mg, 스테아린산 마그네슘 2 mg 을 혼합한 후 타정하여 제조한다.
예를 들어, 액제의 제조는 상기 추출물 100 ml, 이성화당 5 g, 솔향 적량, 방부제 적량을 현탁하여 갈색병에 충진하여 제조한다. 이 경우 상기 추출물 대신에 상기 단계 (a)의 결과물을 직접 사용할 수도 있다.
이와 같이 본 발명에 의해 제조된 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액의 추출물은 스테로이드 유도 당뇨병의 치료에 효과가 있는 유효성분들의 함량이 현저히 높아, 관련 질병 및 합병증의 진행을 정지시키고 치료하는 효과가 매우 뛰어나다. 더욱 구체적으로는, 본 발명에 따른 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액 추출물은 항당뇨 효능이 있다고 알려진 세포외 다당체가 배양액에는 3.00±0.03%/100 ml, 건조 추출물에는 5.00±0.02%/100 mg의 매우 높은 함량으로 포함되어 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
재료 및 방법
1. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물의 제조
세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata)는 참나무 변제부 속에서 분리 체취한 후 계대배양을 통해 육성한 모균을 -80℃에 냉동보관 하였고, 보관중인 균주를 PDA배지(87플라스틱 배양구)에서 2~3회 계대 후 충분한 수량의 완전한 균주만을 4℃ 냉장고에 보관하여 사용하였다. 그리고, 삼각플라스크에 PDB배지 600 ml를 조성한 후, PDA 배양균주 1개를 넣고 8일간 진탕배양하였다. 그리고, 설탕 1.5중량%, 포도당 0.5중량%, 감자전분 0,5중량%, 소맥분 0.25중량%, 수수분 0.25중량%, 황산마그네슘(MgSO4) 0.05중량%, 1인산칼륨(KH2PO4) 0.05중량%, 2인산칼륨(K2HPO4) 0.05중량% 및 물 96.85중량%를 포함하는 액체배양 배지를 800 L 발효조에서 121, 1.5kgf/cm2로 20분간 살균한 후, 23℃로 냉각한 상태에서 스타터로 사용할 PDB 배양균주 600 ml를 접종하고, 공기를 0.5~1.5(kgf/cm2)로 통기시키면서, 이산화탄소의 농도는 1,000~2,000 PPM으로 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체를 23℃의 항온에서 10일간 액체 배양함으로써 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액을 제조하였다.
제조된 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 균사체 배양액을 진공동결건조기를 이용하여 25℃의 저온에서 72시간 동안 동결건조시켜 분말화하였다. 건조 분말 5 g에 증류수 100 ml를 첨가하여 잘 현탁한 후, 원심 분리(8,000 rpm, 20분)하여 이의 상등액에 그 양의 2~3배에 해당하는 차가운 알코올을 첨가하고 냉장고(4℃)에 넣어 12시간 정치시켰다. 상기의 정치물에서 상등액만을 다시 원심분리(8,000 rpm, 20분)한 후, 침전물을 회수하여 crude한 Exopolysaccharide를 추출하였다. Crude한 세포외 다당체는 동결건조기에서 72시간 건조시켜 완전한 Exopolysaccharide를 획득하였다.
2. 실험 재료
RPMI-1640 배지, 태아소혈청, 페니실린 및 스트렙토마이신은 WelGENE(Daegu, Korea)으로부터 구입하였다. IL-1β는 R&D SYSTEMS(Minneapolis, MN, USA)으로부터 구입하였다. p-ERK-1/2, T-ERK-1/2, p-PKB, 및 T-PKB 항체는 Cell Signaling Technology(Danvers, MA, USA)으로부터 구입하였다. LY294002 및 streptozotocin (STZ)는 Biomol(Plymouth Meeting, PA, USA)으로부터 구입하였다. MKP-1 및 염소 항-래빗 또는 항-마우스 2차 호오스래디쉬 퍼옥시다아제에 대한 항체는 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA)로부터 구입하였다. Bradford 시약은 Bio-Rad(Hercules, CA, USA)로부터 구입하였다. Enzyme-linked chemiluminescence(ECL) 웨스턴 블랏 시약은 Thermo SCIENTIFIC(Waltham, MA, USA)으로부터 구입하였다. Dexamethasone(Dex) 및 actin 항체 및 다른 시약들은 Sigma(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다.
3. 세포배양
쥐에서 유래된 인슐린 분비세포주 INS-1은 10% 열-불활성화 FBS(fetal bovine serum), 100 units/ml 페니실린, 및 100 g/ml 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI-1640 배지를 사용하여 95%의 습도조건 및 5%의 CO2 조건으로 37℃에서 유지하였다.
4. 세포 계수 분석
INS-1 세포를 시약 또는 CLCE 처리 하루 전에 500 mL 부피에서 1 X 105 세포의 농도로 24-웰 플레이트에서 배양하였다. INS-1 세포들을 지시된 시간 및 농도로 시약(Dex, LY294002, IL-1β, STZ, TG, TN) 및/또는 CLCE로 처리하였다. 각각의 시점에서 트립판 블루(trypan blue)로 염색하여 생존 INS-1 세포의 수를 현미경하에서 직접 계수하였다. 세포 계수 분석은 3회 반복하여 행하였다. 데이터는 3회의 독립적 실험의 평균으로 나타내었다.
5. DNA 단편화 측정
INS-1 세포를 시약 또는 CLCE 처리 하루 전에 2 mL 부피에서 1 x 106 세포의 농도로 6-웰 플레이트에서 배양하였다. 이들 INS-1 세포들을 지시된 농도의 Dex 및/또는 CLCE로 24시간 동안 배양하였다. 24 시간 후 각각의 세포들을 회수하여, 세척하고, 완충액 [50 mM Tris(pH 8.0), 0.5% sarkosyl, 0.5 mg/mL proteinase K, 및 1 mM EDTA] 내에서 55℃로 3시간 동안 용해시키고, RNase A(0.5 ㎍/mL)을 첨가한 후, 55에서 18시간 동안 추가 인큐베이션 하였다. 용해물들을 10,000 x g에서 20분간 원심분리하였다. 상등액내의 게놈 DNA는 중성 페놀-클로로포름-이소아밀알코올 혼합물의 동일한 부피로 추출하고(25:24:1), 1.7% 아가로스겔상에서 전기영동하여 분석하였다. DNA는 에티디움브로마이드(ethidium bromide)(0.1 ㎍/mL)으로 염색한 후 UV 조사하에서 시각화한 후 사진을 촬영하였다.
6. 전 세포(whole cell) 용해물의 제조
INS-1 세포를 시약 또는 CLCE 처리 하루 전에 2 mL 부피내에서 0.5 x 106 세포의 농도로 6-웰 플레이트에서 배양하였다. 이들 INS-1 세포들을 지시된 농도의 Dex 및/또는 CLCE로 4시간 동안 배양하였다. 이어서, INS-1 세포들은 1 mM Na3VO4 및 1 mM NaF이 보충된 PBS으로 2회 세척하고, 세포용해 완충액 [50 mM Tris-Cl(pH 7.4), 150 mM NaCl, 0.1% sodium dodecyl sulfate, 0.25% sodium deoxycholate, 1% Triton X-100, 1% Nonidet P-40, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, proteinase inhibitor cocktail (1x)]에 노출시켰다. 세포 용해물은 1.5 mL 튜브에 수집하고, 12,000 rpm, 4℃에서 20분간 원심분리하였다. 상등액을 회수하여 단백질 농도를 Bradford 시약으로 결정하였다.
7. 웨스턴 블로팅 분석 (Western blot analysis)
단백질(50 ㎍)은 SDS-PAGE(10%)에 의해 분리하고, 니트로셀룰로오스 멤브레인(Millipore)상으로 이전시켰다. 멤브레인은 0.05%(vol/vol) Tween 20이 보충된 TBS (10 mM Tris, 150 mM NaCl)[TBST]으로 세척하고, 5%(wt/vol)의 비-지방 건조우유를 포함하는 TBST으로 블로킹하였다. 멤브레인들은 MKP-1(1:2,000), p-ERK-1/2(1:2,000), T-ERK-1/2(1:2,000), p-PKB(1:2,000), T-PKB(1:2,000) 또는 Actin(1:5,000)에 특이적인 항체들로 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 멤브레인은 호오스래디쉬 퍼옥시다아제에 결합된 2차 항체들에 상온에서 2시간 동안 노출시켰다. 멤브레인들은 상온에서 TBST으로 세척하였다. 면역반응성은 ECL 시약으로 검출하였다. Actin 단백질의 발현 수준에 의해 동등한 단백질 로딩을 평가하였다.
실험 결과
1. 스테로이드 Dex에 의한 INS-1 세포의 생존 감소 및 사멸 유도의 차단
스테로이드 Dex에 의한 INS-1 세포의 생존 감소 및 사멸 유도에 대한 상이한 농도의 CLCE의 영향은 각각 세포 계수 분석 및 핵 DNA 단편화에 의해 측정하였다. 도 1의 패널 A에서 보이는 것처럼, Dex를 24 시간 단독 처리한 경우 INS-1 세포의 생존률이 약 50% 감소하였으나, Dex를 CLCE와 혼합하여 처리할 경우 Dex에 의한 INS-1 세포의 생존률 감소가 크게 차단되었다. 이어서, CLCE의 Dex에 의한 INS-1 세포의 세포사(apoptosis)에 미치는 영향을 apoptosis 마커로 잘 알려진 핵 DNA 단편화를 측정하여 결정하였다. 도 1의 패널 B에 나타나는 바와 같이, Dex를 24 시간 단독 처리한 경우 핵 DNA 단편화가 증가하였다. 하지만, Dex를 CLCE와 혼합하여 처리 시 Dex에 의한 INS-1 세포내 DNA 단편화가 일어나지 않았다. 이러한 결과는 CLCE가 Dex에 의한 INS-1 세포의 생존 감소 및 세포사 유도를 차단하는 INS-1 세포 보호 효과를 가지고 있음을 명확히 보여주는 결과이다.
2. INS-1 세포내 Dex에 의한 PKB 활성 감소의 선택적 차단
ERK-1/2 및/또는 PKB의 활성화(인산화)는 세포의 생존(survival)과 매우 밀접한 관련이 있다. MKP-1는 일종의 탈인산화효소로서 ERK-1/2 및/또는 PKB의 인산화를 방해한다. 따라서, 본 발명자들은 INS-1 세포내에서 Dex 및/또는 CLCE 처리가 이들 단백질의 발현 및 활성화(인산화)를 조절하는 지를 측정하였다. 도 2에서 보이는 것처럼, 4시간 동안 Dex를 단독 처리할 경우 MKP-1 단백질 발현이 크게 증가하였으나, ERK-1/2 및 PKB의 인산화는 크게 감소하였다. Dex를 CLCE와 혼합하여 처리할 경우 Dex에 의한 PKB 인산화 감소가 크게 차단되었으나, Dex에 의한 MKP-1 단백질 발현 증가와 ERK-1/2 인산화 감소는 아무런 영향을 받지 않았다. 이러한 결과들은 CLCE가 특이적으로 Dex에 의한 INS-1 세포내에서 PKB 인산화감소를 차단하는 효과를 가지고 있음을 명확히 보여주었으며, 이러한 CLCE 매개 PKB 인산화 증가는 MKP-1의 발현과 아무런 관련 없이 일어나고 있음을 암시한다.
3. Dex에 의한 INS-1 세포 생존 감소 차단 효과와 CLCE의 PKB 활성화(인산화)와의 관계
본 발명자들은 Dex에 의한 INS-1 세포 생존 감소 및 CLCE의 Dex에 의한 세포 생존 감소 차단 효과에 있어 PKB 활성화의 중요성을 LY294002 (PI3K/PKB 저해제)를 사용하여 조사하였다. 도 3에서 보이는 것처럼, 대조군과 비교하여 LY294002를 단독으로 처리할 경우 약 24%의 INS-1 세포 생존 감소가 나타났다. 한편, Dex를 단독으로 처리 시 약 55%의 INS-1 세포 생존 감소가 일어났으나, Dex를 LY294002와 혼합 처리 시 Dex 단독에 의한 INS-1 세포 생존 감소(55%)보다 더욱 높은 INS-1 세포 생존 감소(75%) 현상이 나타났다. CLCE를 단독 처리 시 INS-1 세포의 생존은 아무런 변화가 일어나지 않았고, LY294002와 CLCE를 혼합하여 처리 시 오히려 INS-1 세포의 생존이 대조군보다 약간 더 증가하였다. Dex 단독에 의한 INS-1 세포 생존 감소(55%)와 비교하여, Dex를 CLCE와 혼합하여 처리할 경우 약 22%의 INS-1 세포 생존 감소가 관찰되었다. Dex 및 CLCE 혼합 처리에 의한 INS-1 세포 생존 감소(22%)와 비교하여, Dex, CLCE, 및 LY294002를 혼합하여 처리할 경우 약 61%의 INS-1 세포 생존 감소가 일어났다. 이러한 결과들은 PKB 활성(유지, 증가)은 INS-1 세포의 생존에 매우 중요하고, Dex는 이러한 PKB의 활성억제를 통해 INS-1 세포의 생존을 감소시키고 있음을 명확히 보여주었으며, CLCE에 의한 PKB 활성 유지 및/증가가 Dex 매개 INS-1 세포 생존 감소의 중요한 작용기작의 하나임을 암시한다.
4. IL-1 , STZ, TG, 또는 TN에 의한 INS-1 세포 생존 감소 효과
CLCE의 INS-1 세포 보호효과가 스테로이드(Dex) 이외에 다른 베타세포 독성물질에서도 나타나는지를 알아보기 위해, INS-1 세포에 IL-1β STZ, TG, 또는 TN을 단독 또는 이들 각각의 물질과 CLCE을 혼합하여 24 시간 처리 후 CLCE에 의한 INS-1 세포 보호 효과를 조사하였다. 도 4의 패널 A, B, C, 및 D에서 보이는 것처럼, 대조군과 비교하여 IL-β STZ, TG, 및 TN를 단독으로 처리할 경우 약 45%, 82%, 88%, 및 50%의 INS-1 세포 생존 감소가 나타났다. 하지만, IL-1 , STZ, TG, 또는 TN과 CLCE을 혼합하여 처리할 경우 약 65%, 81%, 88%, 및 58%의 INS-1 세포 생존 감소가 보였다. 이러한 결과들은 CLCE가 특이적으로 Dex에 의한 INS-1 세포의 생존 감소를 차단하는 효과를 가지고 있음을 암시한다.
본 발명의 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은 스테로이드 매개 β-세포의 생육 억제 및 사멸을 차단시켜 β-세포의 보호 또는 재생 용도의 약물 또는 기능성 식품 조성물의 활성성분으로서 개발될 수 있어 그 산업상 이용가능성이 매우 높다 할 것이다.

Claims (4)

  1. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 췌장 β-세포의 생존 증진용 약학적 조성물.
  3. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 췌장 β-세포의 세포사멸(apoptosis) 억제용 약학적 조성물.
  4. 세리포리아 라세라타(Ceriporia lacerata) 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 스테로이드 유도 당뇨병(steroid-induced diabetes, SID) 질환 개선용 건강 기능 식품.
PCT/KR2013/000393 2013-01-18 2013-01-18 스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품 WO2014112665A1 (ko)

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PCT/KR2013/000393 WO2014112665A1 (ko) 2013-01-18 2013-01-18 스테로이드 유도 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품

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