WO2011111108A1 - Instrument for enzyme-linked immunoassay, and enzyme-linked immunoassay - Google Patents
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Abstract
Disclosed is an instrument for use in an enzyme-linked immunoassay, comprising: a development base material in which a fluid material can be infused by means of a capillary action; a developing solution zone which is so separated from the development base material in an accessible manner and contains a substrate; and a developing solution which can be supplied to the developing solution zone. The instrument is characterized in that the development base material has, formed thereon, a sample addition zone to which a sample to be added, an enzyme-labeled reagent zone and a detection zone that is located downstream of the sample addition zone and the enzyme-labeled reagent zone, and the developing solution zone and the developing solution are provided upstream of the sample addition zone and the enzyme-labeled reagent zone in the development base material.
Description
本発明は、検体中の生体成分や薬物等、試料中の被検物質を簡便に測定する酵素免疫測定器具及び測定方法に関する。
The present invention relates to an enzyme immunoassay instrument and a measurement method for simply measuring a test substance in a sample such as a biological component or a drug in a specimen.
免疫反応を利用して検体中にタンパク質等の抗原や生体成分、薬物等が入っているかいないかを簡便に検査や測定をする器具や方法として、酵素を標識物質として用いて、毛細管現象によって送液可能な展開基材上で、検体、酵素標識試薬及び基質を反応させる測定方法が提案されている。
例えば、下記特許文献１に記載された酵素免疫測定用試験片においては、毛細管現象によって輸液可能な展開器材の上流側に展開液供給ゾーンを付設し、この展開液供給ゾーンには、酵素阻害剤を添加した展開液を貯留する展開液槽から展開液を供給可能にしている。また展開液供給ゾーンの下端には、乾燥状態の基質を有する基質ゾーンを設けている。
展開器材における基質ゾーンの下流側には、検体を点着する検体点着ゾーンがあり、この検体点着ゾーン付近には、検体中の検出すべき抗原または抗体と反応する前記抗体または抗原等の免疫反応物質が酵素標識された、酵素試薬を点着した酵素標識試薬ゾーンが設けられている。酵素標識試薬ゾーンの下流側には検出ゾーンを設け、更にその下流側に検出ゾーンにトラップされなかった展開液を吸収する吸収パットを設けている。 As an instrument or method for easily examining and measuring whether or not antigens such as proteins, biological components, drugs, etc. are contained in a sample using an immune reaction, it is sent by capillary action using an enzyme as a labeling substance. There has been proposed a measurement method in which a specimen, an enzyme labeling reagent, and a substrate are reacted on a liquid-based development substrate.
For example, in the test specimen for enzyme immunoassay described inPatent Document 1 below, a developing solution supply zone is provided on the upstream side of a developing device that can be infused by capillary action, and the developing solution supply zone includes an enzyme inhibitor. The developing solution can be supplied from a developing solution tank that stores the developing solution to which is added. Further, a substrate zone having a dry substrate is provided at the lower end of the developing solution supply zone.
There is a specimen spotting zone for spotting a specimen on the downstream side of the substrate zone in the developing device, and in the vicinity of the specimen spotting zone, the antigen to be detected in the specimen or the antibody or antigen that reacts with the antibody, etc. There is provided an enzyme-labeled reagent zone in which an immunoreactive substance is enzyme-labeled and spotted with an enzyme reagent. A detection zone is provided on the downstream side of the enzyme labeling reagent zone, and an absorption pad for absorbing a developing solution that has not been trapped in the detection zone is provided on the downstream side thereof.
例えば、下記特許文献１に記載された酵素免疫測定用試験片においては、毛細管現象によって輸液可能な展開器材の上流側に展開液供給ゾーンを付設し、この展開液供給ゾーンには、酵素阻害剤を添加した展開液を貯留する展開液槽から展開液を供給可能にしている。また展開液供給ゾーンの下端には、乾燥状態の基質を有する基質ゾーンを設けている。
展開器材における基質ゾーンの下流側には、検体を点着する検体点着ゾーンがあり、この検体点着ゾーン付近には、検体中の検出すべき抗原または抗体と反応する前記抗体または抗原等の免疫反応物質が酵素標識された、酵素試薬を点着した酵素標識試薬ゾーンが設けられている。酵素標識試薬ゾーンの下流側には検出ゾーンを設け、更にその下流側に検出ゾーンにトラップされなかった展開液を吸収する吸収パットを設けている。 As an instrument or method for easily examining and measuring whether or not antigens such as proteins, biological components, drugs, etc. are contained in a sample using an immune reaction, it is sent by capillary action using an enzyme as a labeling substance. There has been proposed a measurement method in which a specimen, an enzyme labeling reagent, and a substrate are reacted on a liquid-based development substrate.
For example, in the test specimen for enzyme immunoassay described in
There is a specimen spotting zone for spotting a specimen on the downstream side of the substrate zone in the developing device, and in the vicinity of the specimen spotting zone, the antigen to be detected in the specimen or the antibody or antigen that reacts with the antibody, etc. There is provided an enzyme-labeled reagent zone in which an immunoreactive substance is enzyme-labeled and spotted with an enzyme reagent. A detection zone is provided on the downstream side of the enzyme labeling reagent zone, and an absorption pad for absorbing a developing solution that has not been trapped in the detection zone is provided on the downstream side thereof.
この試験片を用いた測定では、検体を検体点着ゾーンに添加し、展開液供給ゾーンに展開液槽から展開液を供給して展開液供給ゾーン中の基質ゾーンで基質を溶解する。そして、検体点着ゾーンでは、加えられた検体が酵素標識試薬ゾーンの試薬と反応し、試薬と反応した検体は展開液供給ゾーンから流れてくる基質を含む展開液に流されて検出ゾーンに到達する。
検体中の抗原または抗体が、検出ゾーンに固定化されている抗原または抗体にトラップされると、検体中の抗原または抗体は酵素標識試薬と結合しているために、酵素標識試薬も検出ゾーンに留まる。そして、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には、検出ゾーンにトラップされた抗原または抗体と結合している酵素標識試薬の酵素が展開液中の基質と反応して発色する。そのため、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれているか否かは、検出ゾーンで発色するか否かによって判別することができる。
しかも、展開液に含まれる酵素阻害剤により酵素反応が阻害されて所定時間後には反応による発色が停止すると開示されている。 In the measurement using this test piece, the specimen is added to the specimen spotting zone, the developing solution is supplied from the developing solution tank to the developing solution supply zone, and the substrate is dissolved in the substrate zone in the developing solution supply zone. In the specimen spotting zone, the added specimen reacts with the reagent in the enzyme labeling reagent zone, and the specimen that has reacted with the reagent is flowed to the developing solution containing the substrate flowing from the developing solution supply zone and reaches the detection zone. To do.
When the antigen or antibody in the sample is trapped by the antigen or antibody immobilized on the detection zone, the antigen or antibody in the sample is bound to the enzyme labeling reagent. stay. If the specimen contains an antigen or antibody to be detected, the enzyme labeled reagent that binds to the antigen or antibody trapped in the detection zone reacts with the substrate in the developing solution to develop color. To do. Therefore, whether or not the antigen or antibody to be detected is contained in the sample can be determined by whether or not color is developed in the detection zone.
Moreover, it is disclosed that the enzyme reaction is inhibited by the enzyme inhibitor contained in the developing solution, and color development due to the reaction stops after a predetermined time.
検体中の抗原または抗体が、検出ゾーンに固定化されている抗原または抗体にトラップされると、検体中の抗原または抗体は酵素標識試薬と結合しているために、酵素標識試薬も検出ゾーンに留まる。そして、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には、検出ゾーンにトラップされた抗原または抗体と結合している酵素標識試薬の酵素が展開液中の基質と反応して発色する。そのため、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれているか否かは、検出ゾーンで発色するか否かによって判別することができる。
しかも、展開液に含まれる酵素阻害剤により酵素反応が阻害されて所定時間後には反応による発色が停止すると開示されている。 In the measurement using this test piece, the specimen is added to the specimen spotting zone, the developing solution is supplied from the developing solution tank to the developing solution supply zone, and the substrate is dissolved in the substrate zone in the developing solution supply zone. In the specimen spotting zone, the added specimen reacts with the reagent in the enzyme labeling reagent zone, and the specimen that has reacted with the reagent is flowed to the developing solution containing the substrate flowing from the developing solution supply zone and reaches the detection zone. To do.
When the antigen or antibody in the sample is trapped by the antigen or antibody immobilized on the detection zone, the antigen or antibody in the sample is bound to the enzyme labeling reagent. stay. If the specimen contains an antigen or antibody to be detected, the enzyme labeled reagent that binds to the antigen or antibody trapped in the detection zone reacts with the substrate in the developing solution to develop color. To do. Therefore, whether or not the antigen or antibody to be detected is contained in the sample can be determined by whether or not color is developed in the detection zone.
Moreover, it is disclosed that the enzyme reaction is inhibited by the enzyme inhibitor contained in the developing solution, and color development due to the reaction stops after a predetermined time.
特許文献１に記載された酵素免疫測定方法及び試験片では、検体を試験片の展開器材の検体点着ゾーンに滴下して酵素標識試薬と検体とを反応させ、反応が進んだ一定時間経過後に、展開液を展開基材中の検出ゾーンに移送する必要がある。しかしながら、この酵素免疫測定用の試験片では、検体と酵素標識試薬との反応液は展開器材の毛細管現象によって下流側だけでなく上流側にも移送させられる。このため展開液を供給する前に、上流側に移送された反応液が展開液供給ゾーンの下流端に設けた基質ゾーンのパットに付着している基質と接触して反応してしまう。そのため基質及び酵素標識試薬が消費され、検出領域において正規の反応を生じないおそれがある。
これを防ぐために、特許文献１に記載された酵素免疫測定方法では、検体を検体点着ゾーンに添加した後、検体と酵素標識試薬とを反応させると共に、この反応液が基質ゾーンに到達する前であって、かつ所定時間経過後に、展開液を展開液ゾーンから流す必要があった。このように特許文献１の試験片では、検体添加後の時間の管理が煩雑であるという不具合があった。 In the enzyme immunoassay method and the test piece described inPatent Document 1, the specimen is dropped on the specimen spotting zone of the developing device of the test piece, the enzyme-labeled reagent and the specimen are reacted, and after a certain time has elapsed since the reaction has progressed. The developing solution needs to be transferred to the detection zone in the developing substrate. However, in this enzyme immunoassay test strip, the reaction solution of the specimen and the enzyme labeling reagent is transferred not only downstream but also upstream by capillary action of the developing device. For this reason, before supplying the developing solution, the reaction solution transferred to the upstream side reacts with the substrate attached to the pad of the substrate zone provided at the downstream end of the developing solution supply zone. For this reason, the substrate and the enzyme labeling reagent are consumed, and there is a possibility that a normal reaction does not occur in the detection region.
In order to prevent this, in the enzyme immunoassay method described inPatent Document 1, after adding the specimen to the specimen spotting zone, the specimen is reacted with the enzyme labeling reagent and before the reaction solution reaches the substrate zone. In addition, it is necessary to flow the developing solution from the developing solution zone after a predetermined time has elapsed. As described above, the test piece of Patent Document 1 has a problem that the time management after the sample addition is complicated.
これを防ぐために、特許文献１に記載された酵素免疫測定方法では、検体を検体点着ゾーンに添加した後、検体と酵素標識試薬とを反応させると共に、この反応液が基質ゾーンに到達する前であって、かつ所定時間経過後に、展開液を展開液ゾーンから流す必要があった。このように特許文献１の試験片では、検体添加後の時間の管理が煩雑であるという不具合があった。 In the enzyme immunoassay method and the test piece described in
In order to prevent this, in the enzyme immunoassay method described in
本発明は、このような実情に鑑みて、酵素免疫測定に際し、検体添加後の時間管理の必要がなく反応による測定を確実に行える酵素免疫測定器具及び酵素免疫測定方法を提供することを目的とする。
In view of such circumstances, the present invention aims to provide an enzyme immunoassay instrument and an enzyme immunoassay method that can reliably perform measurement by reaction without the need for time management after addition of a sample in enzyme immunoassay. To do.
上記目的を達成するため、本発明は以下の第一の態様の酵素免疫測定器及び第二の態様の酵素免疫測定方法を提供する。
（１）本発明の第一の態様は、
毛細管現象によって輸液可能な展開基材と、前記展開基材に接触可能に分離しており基質を含む展開液領域と、前記展開液領域に供給可能な展開液とを含み、
前記展開基材には、検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられ、
展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域の上流側に、前記展開液領域と、前記展開液とを設けたことを特徴とする酵素免疫測定器具である。
（２）上記（１）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域の下流側部分に基質が設けられている事が好ましい。
（３）上記（１）及び（２）の酵素免疫測定器は、前記展開液には酵素阻害剤を含まない事が好ましい。
（４）上記（１）から（３）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域が、前記基質を含む区域と、その上流側に酵素阻害剤を含む区域とを有する事が好ましい。
（５）上記（１）から（４）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域の近傍に展開液を貯留する展開液貯留槽を備えており、前記展開液貯留槽から前記展開液領域に展開液を供給する事が好ましい。
（６）上記（５）の酵素免疫測定器は、前記展開液貯留部には展開液を封止する封止膜が設けられ、前記封止膜を開封することで前記展開液領域に展開液を供給させる操作部が更に設けられている事が好ましい。
（７）上記（６）の酵素免疫測定器は、前記操作部による前記展開液貯留部の封止膜の開封に連動して、前記展開液領域を前記展開基材に接触させる作動部が設けられている事が好ましい。 In order to achieve the above object, the present invention provides the enzyme immunoassay device of the following first aspect and the enzyme immunoassay method of the second aspect.
(1) The first aspect of the present invention is
A development base material that can be infused by capillary action, a development liquid region that is separated so as to be in contact with the development base material and includes a substrate, and a development liquid that can be supplied to the development liquid region,
The development substrate is provided with a sample addition region for adding a sample and an enzyme labeling reagent region, and a detection region provided on the downstream side of the sample addition region and the enzyme labeling reagent region,
An enzyme immunoassay instrument comprising the developing solution region and the developing solution provided upstream of the specimen addition region and the enzyme labeling reagent region of the developing substrate.
(2) In the enzyme immunoassay device according to (1), it is preferable that a substrate is provided in a downstream portion of the developing solution region.
(3) In the enzyme immunoassay devices of (1) and (2) above, it is preferable that the developing solution does not contain an enzyme inhibitor.
(4) In the enzyme immunoassay device according to (1) to (3), it is preferable that the developing solution region has a region containing the substrate and a region containing an enzyme inhibitor upstream thereof.
(5) The enzyme immunoassay device according to (1) to (4) above includes a developing solution storage tank that stores a developing solution in the vicinity of the developing solution region, and the developing solution storage tank transfers the developing solution region to the developing solution region. It is preferable to supply a developing solution.
(6) In the enzyme immunoassay of (5) above, the developing solution reservoir is provided with a sealing film for sealing the developing solution, and the developing solution is opened in the developing solution region by opening the sealing film. It is preferable that an operation unit for supplying the liquid is further provided.
(7) The enzyme immunoassay device according to (6) is provided with an operation unit for bringing the developing solution region into contact with the developing substrate in conjunction with opening of the sealing film of the developing solution storing unit by the operation unit. It is preferable that
（１）本発明の第一の態様は、
毛細管現象によって輸液可能な展開基材と、前記展開基材に接触可能に分離しており基質を含む展開液領域と、前記展開液領域に供給可能な展開液とを含み、
前記展開基材には、検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられ、
展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域の上流側に、前記展開液領域と、前記展開液とを設けたことを特徴とする酵素免疫測定器具である。
（２）上記（１）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域の下流側部分に基質が設けられている事が好ましい。
（３）上記（１）及び（２）の酵素免疫測定器は、前記展開液には酵素阻害剤を含まない事が好ましい。
（４）上記（１）から（３）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域が、前記基質を含む区域と、その上流側に酵素阻害剤を含む区域とを有する事が好ましい。
（５）上記（１）から（４）の酵素免疫測定器は、前記展開液領域の近傍に展開液を貯留する展開液貯留槽を備えており、前記展開液貯留槽から前記展開液領域に展開液を供給する事が好ましい。
（６）上記（５）の酵素免疫測定器は、前記展開液貯留部には展開液を封止する封止膜が設けられ、前記封止膜を開封することで前記展開液領域に展開液を供給させる操作部が更に設けられている事が好ましい。
（７）上記（６）の酵素免疫測定器は、前記操作部による前記展開液貯留部の封止膜の開封に連動して、前記展開液領域を前記展開基材に接触させる作動部が設けられている事が好ましい。 In order to achieve the above object, the present invention provides the enzyme immunoassay device of the following first aspect and the enzyme immunoassay method of the second aspect.
(1) The first aspect of the present invention is
A development base material that can be infused by capillary action, a development liquid region that is separated so as to be in contact with the development base material and includes a substrate, and a development liquid that can be supplied to the development liquid region,
The development substrate is provided with a sample addition region for adding a sample and an enzyme labeling reagent region, and a detection region provided on the downstream side of the sample addition region and the enzyme labeling reagent region,
An enzyme immunoassay instrument comprising the developing solution region and the developing solution provided upstream of the specimen addition region and the enzyme labeling reagent region of the developing substrate.
(2) In the enzyme immunoassay device according to (1), it is preferable that a substrate is provided in a downstream portion of the developing solution region.
(3) In the enzyme immunoassay devices of (1) and (2) above, it is preferable that the developing solution does not contain an enzyme inhibitor.
(4) In the enzyme immunoassay device according to (1) to (3), it is preferable that the developing solution region has a region containing the substrate and a region containing an enzyme inhibitor upstream thereof.
(5) The enzyme immunoassay device according to (1) to (4) above includes a developing solution storage tank that stores a developing solution in the vicinity of the developing solution region, and the developing solution storage tank transfers the developing solution region to the developing solution region. It is preferable to supply a developing solution.
(6) In the enzyme immunoassay of (5) above, the developing solution reservoir is provided with a sealing film for sealing the developing solution, and the developing solution is opened in the developing solution region by opening the sealing film. It is preferable that an operation unit for supplying the liquid is further provided.
(7) The enzyme immunoassay device according to (6) is provided with an operation unit for bringing the developing solution region into contact with the developing substrate in conjunction with opening of the sealing film of the developing solution storing unit by the operation unit. It is preferable that
また、本発明に係る酵素免疫測定方法は、毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用いた酵素免疫測定方法において、前記展開基材と分離して基質を含む展開液領域を設けておき、検体を展開基材上に添加して酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応させ、その後に前記展開液領域を通して前記展開基材に基質を含む展開液を供給するようにしたことを特徴とする。
すなわち、本発明の第二の態様は、
（８）毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用いた酵素免疫測定方法において、検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられている、毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用意する工程と、展開基材と分離して基質を含む展開液領域を設ける工程と、検体を展開基材の検体添加領域上に添加して、酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応させる工程と、反応後に、前記展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域より上流側に位置する部分と展開液領域とを接触させ、展開液領域を通して展開基材に基質を含む展開液を供給する工程と、を含むことを特徴とする酵素免疫測定方法である。 In addition, the enzyme immunoassay method according to the present invention is the enzyme immunoassay method using a development base material that can be infused by capillary action. In the enzyme immunoassay method, a development liquid region containing a substrate is provided separately from the development base material. Is added onto the developing substrate to react with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and then a developing solution containing a substrate is supplied to the developing substrate through the developing solution region.
That is, the second aspect of the present invention is
(8) In an enzyme immunoassay method using a development substrate that can be infused by capillary action, a sample addition region and an enzyme labeling reagent region to which a sample is added, and provided downstream of these sample addition region and enzyme labeling reagent region A step of preparing a development base material capable of being infused by capillary action, provided with a detection region, a step of providing a development liquid region containing the substrate separately from the development base material, and adding a specimen to the specimen of the development base material And a step of reacting with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and after the reaction, a portion located on the upstream side of the specimen addition region and the enzyme labeling reagent region of the developing substrate and a developing solution region. And a step of supplying a developing solution containing a substrate to a developing substrate through a developing solution region.
すなわち、本発明の第二の態様は、
（８）毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用いた酵素免疫測定方法において、検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられている、毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用意する工程と、展開基材と分離して基質を含む展開液領域を設ける工程と、検体を展開基材の検体添加領域上に添加して、酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応させる工程と、反応後に、前記展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域より上流側に位置する部分と展開液領域とを接触させ、展開液領域を通して展開基材に基質を含む展開液を供給する工程と、を含むことを特徴とする酵素免疫測定方法である。 In addition, the enzyme immunoassay method according to the present invention is the enzyme immunoassay method using a development base material that can be infused by capillary action. In the enzyme immunoassay method, a development liquid region containing a substrate is provided separately from the development base material. Is added onto the developing substrate to react with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and then a developing solution containing a substrate is supplied to the developing substrate through the developing solution region.
That is, the second aspect of the present invention is
(8) In an enzyme immunoassay method using a development substrate that can be infused by capillary action, a sample addition region and an enzyme labeling reagent region to which a sample is added, and provided downstream of these sample addition region and enzyme labeling reagent region A step of preparing a development base material capable of being infused by capillary action, provided with a detection region, a step of providing a development liquid region containing the substrate separately from the development base material, and adding a specimen to the specimen of the development base material And a step of reacting with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and after the reaction, a portion located on the upstream side of the specimen addition region and the enzyme labeling reagent region of the developing substrate and a developing solution region. And a step of supplying a developing solution containing a substrate to a developing substrate through a developing solution region.
本発明による酵素免疫測定器具及び酵素免疫測定方法によれば、検体の添加時には、基質を含む展開液領域を展開基材から分離した状態に保持している。このため、基質と検出領域でトラップされた酵素とが反応する前に、検体と酵素標識試薬との反応液が展開基材の上流側で基質と反応することを防止できて、目的とする検体の反応を確実に行うことができる。そのため、酵素免疫測定に際し、検体添加後、反応液が上流側に展開しないように展開液が展開する時間を厳密に管理する必要がなく、測定が簡単且つ容易である。
According to the enzyme immunoassay instrument and the enzyme immunoassay method according to the present invention, when the specimen is added, the developing solution region containing the substrate is maintained in a state separated from the developing substrate. For this reason, it is possible to prevent the reaction solution of the sample and the enzyme labeling reagent from reacting with the substrate upstream of the development substrate before the substrate and the enzyme trapped in the detection region react with each other. It is possible to reliably perform the reaction. Therefore, in the enzyme immunoassay, it is not necessary to strictly control the time for the developing solution to develop so that the reaction solution does not develop upstream after the sample is added, and the measurement is simple and easy.
以下、本発明の好ましい実施の形態について説明する。しかしながら本発明はこれら例のみに限定されるものではない。
本発明による酵素免疫測定器具では、検体添加領域に検体が添加されて酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応し、この反応液が毛細管現象で展開基材の下流側だけでなく上流側にも流れる。しかしながら、本発明では展開液領域は展開基材と非接触に保持されているので、上流側に展開する反応液が基質と反応してしまうことがない。よって使用時には、検出領域において検体、酵素標識試薬、及び基質の反応が順調に進むことができ、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には、基質が発色する事が確認できる。
本発明による酵素免疫測定器具では、展開液領域はその下流側部分に基質が設けられていることが好ましい。展開液領域に展開液を供給すると、展開液領域の下流側に含まれる基質が展開液に溶解されて展開基材に移送される。
また本発明による酵素免疫測定方法では、展開基材に検体が添加されて酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応し、この反応液が毛細管現象で展開基材の下流側だけでなく上流側にも展開する。しかしながら、上述したように、展開液領域は展開基材に非接触であるから、反応液は基質と反応しない。その後、基質を含む展開液領域を介して、展開液を展開基材に供給することになる。従って基質が検出領域に供給されて検出領域にトラップされた酵素標識試薬と基質が反応することになり、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には基質が発色する。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described. However, the present invention is not limited to these examples.
In the enzyme immunoassay device according to the present invention, a sample is added to the sample addition region and reacts with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and this reaction solution is not only on the downstream side but also on the upstream side of the development substrate due to capillary action. Flowing. However, in the present invention, since the developing solution region is held in non-contact with the developing substrate, the reaction solution developed upstream does not react with the substrate. Therefore, at the time of use, it is confirmed that the reaction of the sample, the enzyme labeling reagent, and the substrate can proceed smoothly in the detection region, and that if the sample contains an antigen or antibody to be detected, the substrate is colored. it can.
In the enzyme immunoassay device according to the present invention, it is preferable that the developing solution region is provided with a substrate at a downstream portion thereof. When the developing solution is supplied to the developing solution region, the substrate contained on the downstream side of the developing solution region is dissolved in the developing solution and transferred to the developing substrate.
Further, in the enzyme immunoassay method according to the present invention, a specimen is added to the development substrate and reacts with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and this reaction solution is not only on the downstream side of the development substrate but also on the upstream side by capillary action. Also expand. However, as described above, since the developing solution region is not in contact with the developing substrate, the reaction solution does not react with the substrate. Thereafter, the developing solution is supplied to the developing substrate through the developing solution region containing the substrate. Accordingly, the substrate is supplied to the detection region, and the enzyme labeling reagent trapped in the detection region reacts with the substrate. When the antigen or antibody to be detected is contained in the sample, the substrate develops color.
本発明による酵素免疫測定器具では、検体添加領域に検体が添加されて酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応し、この反応液が毛細管現象で展開基材の下流側だけでなく上流側にも流れる。しかしながら、本発明では展開液領域は展開基材と非接触に保持されているので、上流側に展開する反応液が基質と反応してしまうことがない。よって使用時には、検出領域において検体、酵素標識試薬、及び基質の反応が順調に進むことができ、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には、基質が発色する事が確認できる。
本発明による酵素免疫測定器具では、展開液領域はその下流側部分に基質が設けられていることが好ましい。展開液領域に展開液を供給すると、展開液領域の下流側に含まれる基質が展開液に溶解されて展開基材に移送される。
また本発明による酵素免疫測定方法では、展開基材に検体が添加されて酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応し、この反応液が毛細管現象で展開基材の下流側だけでなく上流側にも展開する。しかしながら、上述したように、展開液領域は展開基材に非接触であるから、反応液は基質と反応しない。その後、基質を含む展開液領域を介して、展開液を展開基材に供給することになる。従って基質が検出領域に供給されて検出領域にトラップされた酵素標識試薬と基質が反応することになり、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には基質が発色する。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described. However, the present invention is not limited to these examples.
In the enzyme immunoassay device according to the present invention, a sample is added to the sample addition region and reacts with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and this reaction solution is not only on the downstream side but also on the upstream side of the development substrate due to capillary action. Flowing. However, in the present invention, since the developing solution region is held in non-contact with the developing substrate, the reaction solution developed upstream does not react with the substrate. Therefore, at the time of use, it is confirmed that the reaction of the sample, the enzyme labeling reagent, and the substrate can proceed smoothly in the detection region, and that if the sample contains an antigen or antibody to be detected, the substrate is colored. it can.
In the enzyme immunoassay device according to the present invention, it is preferable that the developing solution region is provided with a substrate at a downstream portion thereof. When the developing solution is supplied to the developing solution region, the substrate contained on the downstream side of the developing solution region is dissolved in the developing solution and transferred to the developing substrate.
Further, in the enzyme immunoassay method according to the present invention, a specimen is added to the development substrate and reacts with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region, and this reaction solution is not only on the downstream side of the development substrate but also on the upstream side by capillary action. Also expand. However, as described above, since the developing solution region is not in contact with the developing substrate, the reaction solution does not react with the substrate. Thereafter, the developing solution is supplied to the developing substrate through the developing solution region containing the substrate. Accordingly, the substrate is supplied to the detection region, and the enzyme labeling reagent trapped in the detection region reacts with the substrate. When the antigen or antibody to be detected is contained in the sample, the substrate develops color.
本発明による酵素免疫測定器具及び酵素免疫測定方法では、展開液には酵素阻害剤を含まなくてもよい。本発明の酵素免疫測定器具及び酵素免疫測定方法による酵素免疫測定は、短時間で処理及び測定され観察できるため、酵素阻害剤によって発色を停止させなくても問題はない。
しかしながら、展開液領域は、基質を含む区域を有すると共に、基質を含む区域の上流側に酵素阻害剤を含む区域を有するように構成してもよい。検体を展開基材上に添加して酵素標識領域の酵素標識試薬と反応させ、その後に、展開液領域の基質を含む区域に展開液を供給して展開基材に基質を含む展開液を供給すると、展開液領域では供給される展開液が基質を含んで下流側に展開する。一方で供給された展開液は、展開基材の上流側へも流れて酵素阻害剤を含む区域の酵素阻害剤を溶解させて、その結果酵素阻害剤を含む展開液が下流側に流れる。展開基材の下流側では、検体と酵素標識試薬との反応液に基質が反応して発色した後で、酵素阻害剤を含む展開液が流入して基材の発色を停止させる。 In the enzyme immunoassay instrument and enzyme immunoassay method according to the present invention, the developing solution may not contain an enzyme inhibitor. Since the enzyme immunoassay by the enzyme immunoassay instrument and the enzyme immunoassay method of the present invention can be processed, measured and observed in a short time, there is no problem even if the color development is not stopped by the enzyme inhibitor.
However, the developing solution region may have an area containing the substrate and an area containing the enzyme inhibitor upstream of the area containing the substrate. The sample is added onto the developing substrate and reacted with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling region, and then the developing solution is supplied to the developing solution region containing the substrate and the developing solution containing the substrate is supplied to the developing substrate. Then, in the developing solution region, the supplied developing solution develops downstream including the substrate. On the other hand, the supplied developing solution flows to the upstream side of the developing substrate to dissolve the enzyme inhibitor in the area including the enzyme inhibitor, and as a result, the developing solution containing the enzyme inhibitor flows to the downstream side. On the downstream side of the development substrate, after the substrate reacts with the reaction solution of the specimen and the enzyme labeling reagent to develop color, the development solution containing the enzyme inhibitor flows in to stop the development of the substrate.
しかしながら、展開液領域は、基質を含む区域を有すると共に、基質を含む区域の上流側に酵素阻害剤を含む区域を有するように構成してもよい。検体を展開基材上に添加して酵素標識領域の酵素標識試薬と反応させ、その後に、展開液領域の基質を含む区域に展開液を供給して展開基材に基質を含む展開液を供給すると、展開液領域では供給される展開液が基質を含んで下流側に展開する。一方で供給された展開液は、展開基材の上流側へも流れて酵素阻害剤を含む区域の酵素阻害剤を溶解させて、その結果酵素阻害剤を含む展開液が下流側に流れる。展開基材の下流側では、検体と酵素標識試薬との反応液に基質が反応して発色した後で、酵素阻害剤を含む展開液が流入して基材の発色を停止させる。 In the enzyme immunoassay instrument and enzyme immunoassay method according to the present invention, the developing solution may not contain an enzyme inhibitor. Since the enzyme immunoassay by the enzyme immunoassay instrument and the enzyme immunoassay method of the present invention can be processed, measured and observed in a short time, there is no problem even if the color development is not stopped by the enzyme inhibitor.
However, the developing solution region may have an area containing the substrate and an area containing the enzyme inhibitor upstream of the area containing the substrate. The sample is added onto the developing substrate and reacted with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling region, and then the developing solution is supplied to the developing solution region containing the substrate and the developing solution containing the substrate is supplied to the developing substrate. Then, in the developing solution region, the supplied developing solution develops downstream including the substrate. On the other hand, the supplied developing solution flows to the upstream side of the developing substrate to dissolve the enzyme inhibitor in the area including the enzyme inhibitor, and as a result, the developing solution containing the enzyme inhibitor flows to the downstream side. On the downstream side of the development substrate, after the substrate reacts with the reaction solution of the specimen and the enzyme labeling reagent to develop color, the development solution containing the enzyme inhibitor flows in to stop the development of the substrate.
また、本発明による酵素免疫測定器具は、展開液領域近傍に展開液を貯留する展開液貯留槽を備え、展開液貯留槽から展開液領域に展開液を供給してもよい。
展開液貯留槽から展開液を展開液領域に供給することで展開液領域に含まれた基質を溶解して展開基材に流すことが可能になる。
また、展開液貯留槽には展開液を封止する封止膜が設けられてもよく、また封止膜を開封することで展開液領域に展開液を供給させる操作部が更に設けられていてもよい。
酵素免疫測定器具の操作部を操作することで展開液貯留槽の封止膜は破断して展開液を展開液領域に流出させることができる。 Moreover, the enzyme immunoassay instrument according to the present invention may include a developing solution storage tank that stores the developing solution in the vicinity of the developing solution region, and supply the developing solution from the developing solution storage tank to the developing solution region.
By supplying the developing solution from the developing solution storage tank to the developing solution region, the substrate contained in the developing solution region can be dissolved and flowed to the developing substrate.
Further, the developing solution storage tank may be provided with a sealing film for sealing the developing solution, and further provided with an operation unit for supplying the developing solution to the developing solution region by opening the sealing film. Also good.
By operating the operation part of the enzyme immunoassay instrument, the sealing film of the developing solution reservoir is broken and the developing solution can flow out to the developing solution region.
展開液貯留槽から展開液を展開液領域に供給することで展開液領域に含まれた基質を溶解して展開基材に流すことが可能になる。
また、展開液貯留槽には展開液を封止する封止膜が設けられてもよく、また封止膜を開封することで展開液領域に展開液を供給させる操作部が更に設けられていてもよい。
酵素免疫測定器具の操作部を操作することで展開液貯留槽の封止膜は破断して展開液を展開液領域に流出させることができる。 Moreover, the enzyme immunoassay instrument according to the present invention may include a developing solution storage tank that stores the developing solution in the vicinity of the developing solution region, and supply the developing solution from the developing solution storage tank to the developing solution region.
By supplying the developing solution from the developing solution storage tank to the developing solution region, the substrate contained in the developing solution region can be dissolved and flowed to the developing substrate.
Further, the developing solution storage tank may be provided with a sealing film for sealing the developing solution, and further provided with an operation unit for supplying the developing solution to the developing solution region by opening the sealing film. Also good.
By operating the operation part of the enzyme immunoassay instrument, the sealing film of the developing solution reservoir is broken and the developing solution can flow out to the developing solution region.
また、操作部による展開液貯留部の封止膜の開封に連動して、展開液領域を展開基材に接触させる作動部が設けられていてもよい。この構成によって操作部の開封操作に連動して展開液領域を展開基材に接触できるので、展開液貯留槽から流出した展開液は展開液領域を通ることで基質を溶解させて、展開液領域から前述の展開基材に基質を含む展開液を移送させることができる。
In addition, an operation unit that brings the developing solution region into contact with the developing substrate may be provided in conjunction with the opening of the sealing film of the developing solution storing unit by the operation unit. With this configuration, the developing solution region can be brought into contact with the developing substrate in conjunction with the opening operation of the operation unit, so that the developing solution flowing out from the developing solution storage tank dissolves the substrate by passing through the developing solution region, and the developing solution region From the above, the developing solution containing the substrate can be transferred to the aforementioned developing substrate.
以下、本発明による酵素免疫測定器具及び測定方法の実施例について、添付の図１乃至図９Ｂに基づいて説明する。本発明はこれら例のみに限定されるものではなく、特に制限の無い限り、数、位置、材料、形状などを必要に応じて変更、追加、省略してもよい。
図１は本発明の実施例による酵素免疫測定器具を上部筐体と下部筐体とに分離した分解斜視図、図２は下部筐体の斜視図、図３Ａ及び図３Ｂは上部筐体の平面図とＡ－Ａ線中央縦断面図、図４は上部筐体の裏面を示す斜視図、図５は図４に示す上部筐体における展開液貯留槽の分解図、図６は展開液パッドを展開基材に接触させた状態の部分斜視図、図７は操作部を操作する前の状態の酵素免疫測定器具を示す中央縦断面図、図８は操作部を押圧した状態の中央縦断面図、図９Ａと図９Ｂは操作部を操作する前と後の状態を示す幅方向縦断面図である。
本実施例による酵素免疫測定器具１は、添加する検体の抗原または抗体を酵素標識試薬と結合させて、検出ゾーンの抗体または抗原で前述の酵素標識試薬と結合された抗原または抗体をトラップし、さらに結合された酵素標識試薬と基質とを反応させて、基質の発色の有無を検出ゾーンで確認することによって、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれるか否か等を検査及び測定する器具である。例えばイムノクロマト法による測定方法に使用される。図１において、酵素免疫測定器具１は例えば合成樹脂からなる嵌合可能な上部筐体２と下部筐体３とを嵌合して形成されている。 Hereinafter, examples of the enzyme immunoassay instrument and measurement method according to the present invention will be described with reference to FIGS. 1 to 9B attached. The present invention is not limited to these examples, and the number, position, material, shape, and the like may be changed, added, or omitted as necessary unless otherwise limited.
1 is an exploded perspective view of an enzyme immunoassay instrument according to an embodiment of the present invention separated into an upper housing and a lower housing, FIG. 2 is a perspective view of the lower housing, and FIGS. 3A and 3B are plan views of the upper housing. FIG. 4 is a perspective view showing the rear surface of the upper casing, FIG. 5 is an exploded view of the developing liquid storage tank in the upper casing shown in FIG. 4, and FIG. FIG. 7 is a central longitudinal sectional view showing the enzyme immunoassay instrument in a state before operating the operating section, and FIG. 8 is a central longitudinal sectional view of the operating section pressed. 9A and 9B are longitudinal sectional views in the width direction showing states before and after operating the operation unit.
Theenzyme immunoassay instrument 1 according to this example binds an antigen or antibody of a specimen to be added to an enzyme labeling reagent, traps the antigen or antibody bound to the enzyme labeling reagent with the antibody or antigen in the detection zone, Furthermore, the bound enzyme labeling reagent is reacted with the substrate, and the presence or absence of coloration of the substrate is confirmed in the detection zone to inspect and measure whether or not the antigen or antibody to be detected is contained in the sample. It is an instrument. For example, it is used in a measurement method by immunochromatography. In FIG. 1, an enzyme immunoassay instrument 1 is formed by fitting an upper housing 2 and a lower housing 3 that are made of, for example, a synthetic resin.
図１は本発明の実施例による酵素免疫測定器具を上部筐体と下部筐体とに分離した分解斜視図、図２は下部筐体の斜視図、図３Ａ及び図３Ｂは上部筐体の平面図とＡ－Ａ線中央縦断面図、図４は上部筐体の裏面を示す斜視図、図５は図４に示す上部筐体における展開液貯留槽の分解図、図６は展開液パッドを展開基材に接触させた状態の部分斜視図、図７は操作部を操作する前の状態の酵素免疫測定器具を示す中央縦断面図、図８は操作部を押圧した状態の中央縦断面図、図９Ａと図９Ｂは操作部を操作する前と後の状態を示す幅方向縦断面図である。
本実施例による酵素免疫測定器具１は、添加する検体の抗原または抗体を酵素標識試薬と結合させて、検出ゾーンの抗体または抗原で前述の酵素標識試薬と結合された抗原または抗体をトラップし、さらに結合された酵素標識試薬と基質とを反応させて、基質の発色の有無を検出ゾーンで確認することによって、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれるか否か等を検査及び測定する器具である。例えばイムノクロマト法による測定方法に使用される。図１において、酵素免疫測定器具１は例えば合成樹脂からなる嵌合可能な上部筐体２と下部筐体３とを嵌合して形成されている。 Hereinafter, examples of the enzyme immunoassay instrument and measurement method according to the present invention will be described with reference to FIGS. 1 to 9B attached. The present invention is not limited to these examples, and the number, position, material, shape, and the like may be changed, added, or omitted as necessary unless otherwise limited.
1 is an exploded perspective view of an enzyme immunoassay instrument according to an embodiment of the present invention separated into an upper housing and a lower housing, FIG. 2 is a perspective view of the lower housing, and FIGS. 3A and 3B are plan views of the upper housing. FIG. 4 is a perspective view showing the rear surface of the upper casing, FIG. 5 is an exploded view of the developing liquid storage tank in the upper casing shown in FIG. 4, and FIG. FIG. 7 is a central longitudinal sectional view showing the enzyme immunoassay instrument in a state before operating the operating section, and FIG. 8 is a central longitudinal sectional view of the operating section pressed. 9A and 9B are longitudinal sectional views in the width direction showing states before and after operating the operation unit.
The
上部筐体２は図１から図３Ｂに示すように、例えば略長方形形状の板材を段付きに形成されたものであり、筐体の一端部には片持ち押し操作する操作部５が設けられ、長手方向に沿って検体の投入部である投入孔６、検体の反応を観察する検出窓７，余分な展開液を蒸発させるための空気穴８とが設けられている。
なお、本実施例において、上部筐体２及び下部筐体３において、長手方向に見て後述する展開液２６の輸液方向により、操作部５側を上流側とし長手方向他端側を下流側という。 As shown in FIGS. 1 to 3B, theupper housing 2 is formed by, for example, a substantially rectangular plate material having a step, and an operation unit 5 for cantilever operation is provided at one end of the housing. Along the longitudinal direction, there are provided a loading hole 6 which is a sample loading portion, a detection window 7 for observing the reaction of the sample, and an air hole 8 for evaporating excess developing liquid.
In the present embodiment, in theupper housing 2 and the lower housing 3, the operation unit 5 side is referred to as the upstream side and the other end in the longitudinal direction is referred to as the downstream side, depending on the infusion direction of the developing liquid 26 described later when viewed in the longitudinal direction. .
なお、本実施例において、上部筐体２及び下部筐体３において、長手方向に見て後述する展開液２６の輸液方向により、操作部５側を上流側とし長手方向他端側を下流側という。 As shown in FIGS. 1 to 3B, the
In the present embodiment, in the
下部筐体３は図２に示すように上部筐体２に嵌合可能な例えば略長方形形状を有している。上部筐体２の操作部５に対向する下部筐体３の一端部には、他の領域よりも一段高い段部３ａが形成され、幅方向両端から中央に向けて傾斜する傾斜部１０ａ，１０ａが形成され、さらにその中央下部には複数条の溝が形成された溝部１１が設けられている。溝部１１の溝は傾斜部１０ａから流入する展開液を下部筐体３の他端方向（下流方向）に毛細管現象で流すように傾斜して形成されている。溝部１１の下流側に隣接する下部筐体３の底部には長手方向に沿って台座１２が設けられ、台座１２の上にパッド部材からなる帯状の展開基材１４が設置される（図１参照）。展開基材１４は毛細管現象によって展開液を流動させる材質であればよく、例えばニトロセルロース、スポンジ、及び吸水性の不織布等が用いられる。
なお、下部筐体３の周壁には所定間隔で筒状凹部１５が植設されている。 Thelower housing 3 has, for example, a substantially rectangular shape that can be fitted into the upper housing 2 as shown in FIG. At one end portion of the lower housing 3 facing the operation portion 5 of the upper housing 2, a step portion 3a that is one step higher than the other regions is formed, and the inclined portions 10a and 10a are inclined from both ends in the width direction toward the center. Further, a groove portion 11 in which a plurality of grooves are formed is provided at the center lower portion. The groove of the groove portion 11 is formed so as to be inclined so that the developing liquid flowing in from the inclined portion 10a flows in the other end direction (downstream direction) of the lower housing 3 by capillary action. A pedestal 12 is provided along the longitudinal direction at the bottom of the lower housing 3 adjacent to the downstream side of the groove 11, and a belt-shaped development base material 14 made of a pad member is installed on the pedestal 12 (see FIG. 1). ). The developing substrate 14 may be made of any material that allows the developing solution to flow by capillary action. For example, nitrocellulose, sponge, water-absorbing nonwoven fabric, or the like is used.
Note thatcylindrical recesses 15 are planted on the peripheral wall of the lower housing 3 at predetermined intervals.
なお、下部筐体３の周壁には所定間隔で筒状凹部１５が植設されている。 The
Note that
図１に示す下部筐体３において、展開基材１４の上流側には、基質を乾燥状態で含む展開液パッド１６が展開液領域として溝部１１上に設けられる。展開液パッド１６の一部は展開基材１４の一部と上方向から見て重なっていてよく、すなわち展開液パッド１６の自由端部は段部３ａから展開基材１４の上方に非接触で延びている。展開液パッド１６には、好ましくはその長手方向下流側（自由端側）に、基質が乾燥状態で含まれており、後述するように展開液が投入されると展開液は溶解された基質を含んだ状態で、展開基材１４に吸着される。
展開基材１４には上部筐体２における検体の投入孔６の下方に検体添加領域１７が設けられている。検体添加領域１７上には、検体の検出すべき抗原や抗体と反応する抗体や抗原等の免疫反応物質が酵素標識された標識試薬を多量に含有させた標識試薬パッド１８が酵素標識試薬領域として設置されている。標識試薬パッド１８は吸水性のある材質であればよく、例えばニトロセルロース、セルロース、及びポリビニルアルコール等の多孔質の天然または合成の高分子化合物からなる材料で形成されたスポンジ、吸水性不織布、及び濾紙等を用いることができる。
標識試薬パッド１８において、付着される標識試薬として用いる酵素は任意で選択でき、公知の標識に用いられる任意の酵素があげられる。具体的には、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、エステラーゼ、及びβ－Ｄ－グルクロニダーゼなどが挙げられる。好ましくはより高感度で安定な検出を達成することが可能なペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びβ－Ｄ－ガラクトシダーゼである。かかる酵素は、単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。 In thelower housing 3 shown in FIG. 1, on the upstream side of the developing substrate 14, a developing solution pad 16 containing the substrate in a dry state is provided on the groove 11 as a developing solution region. A part of the developing liquid pad 16 may overlap with a part of the developing base material 14 when viewed from above, that is, the free end of the developing liquid pad 16 is not in contact with the developing base material 14 from the step portion 3a. It extends. The developing solution pad 16 preferably includes a substrate in a dry state on the downstream side (free end side) in the longitudinal direction. When the developing solution is introduced as described later, the developing solution contains the dissolved substrate. In a state of being included, it is adsorbed to the developing substrate 14.
The developingbase material 14 is provided with a specimen addition region 17 below the specimen insertion hole 6 in the upper housing 2. On the specimen addition region 17, a labeling reagent pad 18 containing a large amount of a labeling reagent labeled with an enzyme or an immunoreactive substance such as an antigen that reacts with an antigen to be detected or an antibody is used as the enzyme labeling reagent region. is set up. The labeling reagent pad 18 may be any material that absorbs water, for example, a sponge formed of a porous natural or synthetic polymer compound such as nitrocellulose, cellulose, and polyvinyl alcohol, a water-absorbing nonwoven fabric, and Filter paper or the like can be used.
In thelabeling reagent pad 18, an enzyme used as a labeling reagent to be attached can be arbitrarily selected, and any enzyme used for a known labeling can be used. Specific examples include peroxidase, alkaline phosphatase, β-D-galactosidase, glucose oxidase, luciferase, esterase, and β-D-glucuronidase. Preferred are peroxidase, alkaline phosphatase, and β-D-galactosidase, which can achieve more sensitive and stable detection. Such enzymes can be used alone or in admixture of two or more.
展開基材１４には上部筐体２における検体の投入孔６の下方に検体添加領域１７が設けられている。検体添加領域１７上には、検体の検出すべき抗原や抗体と反応する抗体や抗原等の免疫反応物質が酵素標識された標識試薬を多量に含有させた標識試薬パッド１８が酵素標識試薬領域として設置されている。標識試薬パッド１８は吸水性のある材質であればよく、例えばニトロセルロース、セルロース、及びポリビニルアルコール等の多孔質の天然または合成の高分子化合物からなる材料で形成されたスポンジ、吸水性不織布、及び濾紙等を用いることができる。
標識試薬パッド１８において、付着される標識試薬として用いる酵素は任意で選択でき、公知の標識に用いられる任意の酵素があげられる。具体的には、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、エステラーゼ、及びβ－Ｄ－グルクロニダーゼなどが挙げられる。好ましくはより高感度で安定な検出を達成することが可能なペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びβ－Ｄ－ガラクトシダーゼである。かかる酵素は、単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。 In the
The developing
In the
また、基質は、標識試薬に用いられた酵素と反応して発色し得る基質であればよく、任意で選択できる。具体的には、発色基質、蛍光基質、及び発光基質等の発色性化学物質を用いることができる。例えば、酵素がアルカリフォスファターゼの場合、ｐ－ニトロフェニルホスフェート、５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、及びＡＳ－ＴＲホスフェート等が挙げられる。また、酵素がペルオキシダーゼの場合、２，２’－アジノ－ビス（３－エチルベンズチアゾリン）－６－スルホン酸、ｏ－フェニレンジアミン、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ｏ－ジアニジジン、５－アミノサリサイクリックアシッド、３，３’－ジアミノベンジシン、３－アミノ－９－エチルカルバゾール、及び４－クロロ－１－ナフトール等が挙げられる。
基質としての発色性化学物質の塗布量としては、ＢＣＩＰを例にとると、発色を明瞭にするという観点から塗布部１ｃｍ２ 当たり０．１～１０ｍｇ程度が好ましい。発色基質の量が低いと発色強度が得られず、一方で発色基質の量が多いとバックグランドが高くなり、検出感度が得られなくなる。 The substrate may be any substrate as long as it can react with the enzyme used for the labeling reagent and develop color. Specifically, chromogenic chemical substances such as chromogenic substrates, fluorescent substrates, and luminescent substrates can be used. For example, when the enzyme is alkaline phosphatase, p-nitrophenyl phosphate, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (BCIP), AS-TR phosphate and the like can be mentioned. When the enzyme is peroxidase, 2,2′-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline) -6-sulfonic acid, o-phenylenediamine, 3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine (TMB) O-dianididine, 5-aminosalicyclic acid, 3,3′-diaminobenzidine, 3-amino-9-ethylcarbazole, 4-chloro-1-naphthol and the like.
The application amount of the chromogenic chemical substance as the substrate is preferably about 0.1 to 10 mg per 1 cm 2 of the coating part from the viewpoint of clarifying the color development when BCIP is taken as an example. If the amount of the chromogenic substrate is low, the chromogenic intensity cannot be obtained. On the other hand, if the amount of the chromogenic substrate is large, the background becomes high and detection sensitivity cannot be obtained.
基質としての発色性化学物質の塗布量としては、ＢＣＩＰを例にとると、発色を明瞭にするという観点から塗布部１ｃｍ２ 当たり０．１～１０ｍｇ程度が好ましい。発色基質の量が低いと発色強度が得られず、一方で発色基質の量が多いとバックグランドが高くなり、検出感度が得られなくなる。 The substrate may be any substrate as long as it can react with the enzyme used for the labeling reagent and develop color. Specifically, chromogenic chemical substances such as chromogenic substrates, fluorescent substrates, and luminescent substrates can be used. For example, when the enzyme is alkaline phosphatase, p-nitrophenyl phosphate, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (BCIP), AS-TR phosphate and the like can be mentioned. When the enzyme is peroxidase, 2,2′-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline) -6-sulfonic acid, o-phenylenediamine, 3,3 ′, 5,5′-tetramethylbenzidine (TMB) O-dianididine, 5-aminosalicyclic acid, 3,3′-diaminobenzidine, 3-amino-9-ethylcarbazole, 4-chloro-1-naphthol and the like.
The application amount of the chromogenic chemical substance as the substrate is preferably about 0.1 to 10 mg per 1 cm 2 of the coating part from the viewpoint of clarifying the color development when BCIP is taken as an example. If the amount of the chromogenic substrate is low, the chromogenic intensity cannot be obtained. On the other hand, if the amount of the chromogenic substrate is large, the background becomes high and detection sensitivity cannot be obtained.
展開基材１４において、検体添加領域１７の下流側には検出領域１９が設けられている。検出領域１９では、検体中の検出すべき抗原または抗体と反応する抗体、抗原等の免疫反応物質が、物理的吸着や化学結合等によって展開基材１４に保持される。検体中の抗原または抗体は、検出領域１９に固定化されている抗体または抗原にトラップされ留まり、検体中の抗原または抗体は酵素標識試薬と結合しているために結合された酵素標識試薬も検出領域１９に留まり、その結果、検出領域１９ではトラップされた酵素標識試薬の酵素が展開液中の基質と反応する。従って検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれているか否かは発色の有無によって検出する。
発色の有無は上部筐体２における検出窓７を通して観察できる。
検出領域１９の下流側には吸収パッド２０が配設され、検出領域１９でトラップされなかったもの、例えば余分な展開液や検体や標識試薬等が吸収される。また検体に検出すべき抗体または抗原を含まない場合にはトラップは起こらず、移動してきた標識試薬や展開液等が吸収パッド２０に吸収される。吸収パッド２０の貯留された展開液は空気孔８を通して乾燥させられる。 In thedevelopment substrate 14, a detection area 19 is provided on the downstream side of the specimen addition area 17. In the detection region 19, an antigen to be detected in the specimen or an antibody that reacts with the antibody, or an immunoreactive substance such as an antigen is held on the development substrate 14 by physical adsorption or chemical bonding. The antigen or antibody in the specimen is trapped and retained by the antibody or antigen immobilized on the detection region 19, and the bound enzyme labeling reagent is also detected because the antigen or antibody in the specimen is bound to the enzyme labeling reagent. As a result, the enzyme of the enzyme labeling reagent trapped in the detection region 19 reacts with the substrate in the developing solution. Therefore, whether or not the antigen or antibody to be detected is contained in the specimen is detected by the presence or absence of color development.
The presence or absence of color development can be observed through thedetection window 7 in the upper housing 2.
Anabsorption pad 20 is disposed on the downstream side of the detection region 19, and things that are not trapped in the detection region 19, for example, an excess developing solution, a specimen, a labeling reagent, and the like are absorbed. Further, when the antibody or antigen to be detected is not contained in the specimen, trapping does not occur, and the moved labeling reagent, developing solution, etc. are absorbed by the absorption pad 20. The developing solution stored in the absorbent pad 20 is dried through the air holes 8.
発色の有無は上部筐体２における検出窓７を通して観察できる。
検出領域１９の下流側には吸収パッド２０が配設され、検出領域１９でトラップされなかったもの、例えば余分な展開液や検体や標識試薬等が吸収される。また検体に検出すべき抗体または抗原を含まない場合にはトラップは起こらず、移動してきた標識試薬や展開液等が吸収パッド２０に吸収される。吸収パッド２０の貯留された展開液は空気孔８を通して乾燥させられる。 In the
The presence or absence of color development can be observed through the
An
図１及び図３Ｂにおいて、操作部５は未使用状態では上部筐体２の本体に形成した枠２２に一端部５ａを片持ち支持されており、他端部は容易に破断可能な細いリブ５ｂを介して本体に連結されている。操作部５の両サイドは枠２２に連結されていない。そのため、操作部５を押すことで、リブ５ｂが分断されて下部筐体３内の展開液パッド１６上に傾斜降下し、後述する構成によってその状態を維持する。
図４は上部筐体２を上下反転した上部筐体２の裏面を示す。操作部５の裏面には操作部５の周囲を囲う側壁２４ａを有する展開液２６の貯留槽２４が形成され、その中央には切り裂き部として例えば略三角錐形状の凸起２５が突出して設けられている。操作部５は非押圧状態では上側に凸の湾曲形状をなすと共に、押圧状態では下側へ凹んだ湾曲状態をなせるように、裏面に凸起２５を有する押圧部分の周囲は薄肉形状に形成されている（図８、図９Ａ、及び図９Ｂ参照）。
図５に示すように、貯留槽２４内には展開液２６が任意に選択される適当量、例えば２００～４００マイクロリットルで貯留されており、貯留槽２４の壁面には封止膜２７として例えばアルミシールまたはポリエチレンフィルムシート等が緊張状態に設けられ、液密に展開液２６を密封している。密封の方法は任意に選択でき、例えば熱溶着、超音波溶着、接着剤による接着、及び成形品での嵌着等が用いられる。封止膜２７の存在によって、上部筐体２が貯留槽２４を下向きに保持しても展開液２６が下方に漏れ出すことはない。封止膜２７はアルミシールまたはポリエチレンフィルムシートに限定されることなく、液密性があって破断容易な構造を形成することが可能な材質であれば使用できる。
展開液２６としては、酢酸緩衝液、硼酸緩衝液、トリス緩衝液、ジェタノールアミン緩衝液等の各種緩衝液が用いられる。 In FIG. 1 and FIG. 3B, theoperation portion 5 is cantilevered at one end 5a on a frame 22 formed on the main body of the upper housing 2 when not in use, and the other end is a thin rib 5b that can be easily broken. It is connected to the main body via. Both sides of the operation unit 5 are not connected to the frame 22. Therefore, when the operation unit 5 is pressed, the rib 5b is divided and inclined down onto the developing liquid pad 16 in the lower housing 3, and the state is maintained by the configuration described later.
FIG. 4 shows the back surface of theupper housing 2 that is obtained by turning the upper housing 2 upside down. A reservoir 24 of a developing liquid 26 having a side wall 24a surrounding the operation unit 5 is formed on the back surface of the operation unit 5, and a substantially triangular pyramid-shaped protrusion 25 is provided in a protruding manner at the center as a slit. ing. The operation portion 5 has a curved shape that is convex upward in the non-pressed state and a thin shape around the pressed portion that has the protrusion 25 on the back surface so that it can be curved downwardly depressed in the pressed state. (See FIGS. 8, 9A, and 9B).
As shown in FIG. 5, the developingliquid 26 is stored in the storage tank 24 in an appropriate amount arbitrarily selected, for example, 200 to 400 microliters. An aluminum seal or a polyethylene film sheet or the like is provided in a tension state, and the developing solution 26 is sealed in a liquid-tight manner. The sealing method can be arbitrarily selected, and for example, thermal welding, ultrasonic welding, adhesion with an adhesive, and fitting with a molded product are used. Due to the presence of the sealing film 27, the developing liquid 26 does not leak downward even when the upper housing 2 holds the storage tank 24 downward. The sealing film 27 is not limited to an aluminum seal or a polyethylene film sheet, and any material can be used as long as it is liquid-tight and can form a structure that can be easily broken.
As the developingsolution 26, various buffer solutions such as acetate buffer solution, borate buffer solution, Tris buffer solution, and ethanolamine buffer solution are used.
図４は上部筐体２を上下反転した上部筐体２の裏面を示す。操作部５の裏面には操作部５の周囲を囲う側壁２４ａを有する展開液２６の貯留槽２４が形成され、その中央には切り裂き部として例えば略三角錐形状の凸起２５が突出して設けられている。操作部５は非押圧状態では上側に凸の湾曲形状をなすと共に、押圧状態では下側へ凹んだ湾曲状態をなせるように、裏面に凸起２５を有する押圧部分の周囲は薄肉形状に形成されている（図８、図９Ａ、及び図９Ｂ参照）。
図５に示すように、貯留槽２４内には展開液２６が任意に選択される適当量、例えば２００～４００マイクロリットルで貯留されており、貯留槽２４の壁面には封止膜２７として例えばアルミシールまたはポリエチレンフィルムシート等が緊張状態に設けられ、液密に展開液２６を密封している。密封の方法は任意に選択でき、例えば熱溶着、超音波溶着、接着剤による接着、及び成形品での嵌着等が用いられる。封止膜２７の存在によって、上部筐体２が貯留槽２４を下向きに保持しても展開液２６が下方に漏れ出すことはない。封止膜２７はアルミシールまたはポリエチレンフィルムシートに限定されることなく、液密性があって破断容易な構造を形成することが可能な材質であれば使用できる。
展開液２６としては、酢酸緩衝液、硼酸緩衝液、トリス緩衝液、ジェタノールアミン緩衝液等の各種緩衝液が用いられる。 In FIG. 1 and FIG. 3B, the
FIG. 4 shows the back surface of the
As shown in FIG. 5, the developing
As the developing
図５において、上部筐体２の貯留槽２４の展開基材１４側、すなわち前方には、側壁２４ａから間隔を開けて、展開液パッド１６の自由端を上から押圧するための作動片２８が設けられている。
操作部５を押してリブ５ｂを分断して操作部５を傾斜させると、凸起２５が封止膜２７を引き裂き、その結果、貯留槽２４内の展開液２６が下に位置する展開液パッド１６上に移動する。また操作部５の傾斜により、作動片２８が展開液パッド１６の先端を下方向に押して展開液パッド１６の先端部が展開基材１４に接触される（図６、図８参照）。また、段部３ａにはテーパ部３０が設けられており、貯留槽２４が傾斜した状態でテーパ部３０は側壁２４ａに当接してこれを係止させ、使用者が指を操作部５から離した際に貯留槽２４が元の位置に戻るのを防止する（図１、図２参照）。
酵素免疫測定器具１の未使用状態では、上部筐体２の凸起２５は貯留槽２４の側壁２４ａの下側端部より上側に引っ込んでおり、作動片２８は側壁２４ａの下側端部より下側に突出している。上記構成によって、操作部５の押圧によって作動片２８が展開液パッド１６を展開基材１４に押圧させた位置で停止し、貯留槽２４の側壁２４ａも停止保持されるため、凸起２５による封止膜２７の引き裂きが容易である。
また、上部筐体２の裏面には周壁に沿ってピン部２９が所定間隔で植設されている。下部筐体３の各筒状凹部１５に上部筐体２の各ピン部２９を嵌合することで、酵素免疫測定器具１を組み立てることができる。
以上のように、本発明の酵素免疫測定器具１は、要約すれば、下部筐体３に設けた毛細管現象で輸液可能な展開基材１４に、検体を添加する検体添加領域１７と、検体添加領域１７上またはその上流側または下流側に設けた酵素標識試薬パッド１８と、これらの下流側に設けた検出領域１９とを有する構造である。展開基材１４の上流側には、展開基材１４から分離した基質を含む展開液パッド１６を設ける。上部筐体２に設けた操作部５の裏面に展開液の貯留槽と凸起を設けると共に、貯留槽に隣接して展開液パッド１６を展開基材１４に接触させる作動片を設ける。操作部５を押すことで、作動片によって展開液パッドが展開基材に接触し、貯留槽の封止膜を凸起で破断して展開液を展開液パッド１６に供給し、基質を含む展開液を展開基材１４に流す事が可能である。 In FIG. 5, anoperation piece 28 for pressing the free end of the developing solution pad 16 from above at a distance from the side wall 24 a on the developing substrate 14 side of the storage tank 24 of the upper housing 2, that is, the front side. Is provided.
When the operatingportion 5 is pushed to divide the rib 5b and the operating portion 5 is inclined, the protrusion 25 tears the sealing film 27, and as a result, the developing solution pad 16 in which the developing solution 26 in the storage tank 24 is located below. Move up. Further, due to the inclination of the operation unit 5, the operating piece 28 pushes the tip of the developing solution pad 16 downward, and the tip of the developing solution pad 16 comes into contact with the developing substrate 14 (see FIGS. 6 and 8). Further, the stepped portion 3a is provided with a tapered portion 30, and the tapered portion 30 abuts against and locks the side wall 24a in a state where the storage tank 24 is inclined, and the user releases the finger from the operation portion 5. This prevents the storage tank 24 from returning to its original position (see FIGS. 1 and 2).
When theenzyme immunoassay instrument 1 is not used, the protrusion 25 of the upper housing 2 is retracted above the lower end of the side wall 24a of the storage tank 24, and the operating piece 28 is from the lower end of the side wall 24a. Projects downward. With the above configuration, the operation piece 28 stops at the position where the developing liquid pad 16 is pressed against the developing base material 14 by the pressing of the operation unit 5, and the side wall 24 a of the storage tank 24 is also stopped and held. It is easy to tear the stop film 27.
Further,pin portions 29 are planted at predetermined intervals along the peripheral wall on the back surface of the upper housing 2. The enzyme immunoassay instrument 1 can be assembled by fitting the pin portions 29 of the upper housing 2 into the cylindrical recesses 15 of the lower housing 3.
As described above, theenzyme immunoassay instrument 1 of the present invention can be summarized as follows: the sample addition region 17 for adding the sample to the development base material 14 that can be infused by capillary action provided in the lower housing 3, and the sample addition The structure has an enzyme labeling reagent pad 18 provided on the region 17 or upstream or downstream thereof, and a detection region 19 provided on the downstream side thereof. A developing solution pad 16 containing a substrate separated from the developing substrate 14 is provided on the upstream side of the developing substrate 14. A developing liquid storage tank and protrusions are provided on the back surface of the operation unit 5 provided in the upper casing 2, and an operating piece for bringing the developing liquid pad 16 into contact with the developing base material 14 is provided adjacent to the storage tank. By pressing the operating portion 5, the developing liquid pad is brought into contact with the developing base material by the operating piece, the sealing film of the storage tank is ruptured by the protrusion, and the developing liquid is supplied to the developing liquid pad 16, and the developing including the substrate is performed. It is possible to cause the liquid to flow through the developing substrate 14.
操作部５を押してリブ５ｂを分断して操作部５を傾斜させると、凸起２５が封止膜２７を引き裂き、その結果、貯留槽２４内の展開液２６が下に位置する展開液パッド１６上に移動する。また操作部５の傾斜により、作動片２８が展開液パッド１６の先端を下方向に押して展開液パッド１６の先端部が展開基材１４に接触される（図６、図８参照）。また、段部３ａにはテーパ部３０が設けられており、貯留槽２４が傾斜した状態でテーパ部３０は側壁２４ａに当接してこれを係止させ、使用者が指を操作部５から離した際に貯留槽２４が元の位置に戻るのを防止する（図１、図２参照）。
酵素免疫測定器具１の未使用状態では、上部筐体２の凸起２５は貯留槽２４の側壁２４ａの下側端部より上側に引っ込んでおり、作動片２８は側壁２４ａの下側端部より下側に突出している。上記構成によって、操作部５の押圧によって作動片２８が展開液パッド１６を展開基材１４に押圧させた位置で停止し、貯留槽２４の側壁２４ａも停止保持されるため、凸起２５による封止膜２７の引き裂きが容易である。
また、上部筐体２の裏面には周壁に沿ってピン部２９が所定間隔で植設されている。下部筐体３の各筒状凹部１５に上部筐体２の各ピン部２９を嵌合することで、酵素免疫測定器具１を組み立てることができる。
以上のように、本発明の酵素免疫測定器具１は、要約すれば、下部筐体３に設けた毛細管現象で輸液可能な展開基材１４に、検体を添加する検体添加領域１７と、検体添加領域１７上またはその上流側または下流側に設けた酵素標識試薬パッド１８と、これらの下流側に設けた検出領域１９とを有する構造である。展開基材１４の上流側には、展開基材１４から分離した基質を含む展開液パッド１６を設ける。上部筐体２に設けた操作部５の裏面に展開液の貯留槽と凸起を設けると共に、貯留槽に隣接して展開液パッド１６を展開基材１４に接触させる作動片を設ける。操作部５を押すことで、作動片によって展開液パッドが展開基材に接触し、貯留槽の封止膜を凸起で破断して展開液を展開液パッド１６に供給し、基質を含む展開液を展開基材１４に流す事が可能である。 In FIG. 5, an
When the operating
When the
Further,
As described above, the
上記展開液２６には酵素阻害剤は含まれていないが、発色を停止させるために含めてもよい。破断後に展開液に酵素阻害剤を含ませるような構成を採用してもよい。すなわち酵素阻害剤は、後述のように展開液パッド１６上の基質部分より上流側に添加し乾燥させることにより、展開液パッド１６上に設けても良い。酵素阻害剤は、酵素の基質結合部位に基質の代わりに結合し、酵素活性を可逆的に阻害する拮抗型酵素阻害剤、または基質結合部位とは異なる部位で酵素と結合して酵素分子の構造を変化させて阻害する非拮抗型酵素阻害剤である。
ここで、酵素としてアルカリ性ホスファターゼを用いる場合、酵素阻害剤としては、例えばリン酸、リン酸塩（リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等）、リン酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリセロールリン酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタノールアミン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリン、グリコースリン酸等のリン酸化合物、エチレンジアミン四酢酸、エチレングリコースビス四酢酸等のキレート化合物を挙げることができる。
酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合には、酵素阻害剤として、アスコルビン酸等の還元剤、アジ化ナトリウム、アジ化カリウム等のアジ化化合物を挙げることができる。酵素としてβ－Ｄガラクトシダーゼを用いる場合には、酵素阻害剤として、ラクトース等を挙げることができる。また、いずれの酵素を用いる場合においても、所定時間後の検出ゾーンでの酵素の至適ｐＨをずらすために、酸又は塩基等を酵素阻害剤として使用することもできる。 The developingsolution 26 does not contain an enzyme inhibitor, but may be included to stop color development. You may employ | adopt the structure which an enzyme inhibitor is included in a developing solution after a fracture | rupture. That is, the enzyme inhibitor may be provided on the developing solution pad 16 by adding it to the upstream side of the substrate portion on the developing solution pad 16 and drying it, as will be described later. Enzyme inhibitors are antagonistic enzyme inhibitors that bind to the substrate binding site of the enzyme instead of the substrate and reversibly inhibit the enzyme activity, or the structure of the enzyme molecule by binding to the enzyme at a site different from the substrate binding site. It is a non-antagonistic enzyme inhibitor that inhibits by altering.
Here, when alkaline phosphatase is used as the enzyme, examples of enzyme inhibitors include phosphate, phosphate (sodium phosphate, potassium phosphate, etc.), phosphate monoester, naphthol phosphate, glycerol phosphate, phenyl phosphate. And phosphoric acid compounds such as phosphoethanolamine, phosphorylcholine, phenanthroline, and glycholic acid, and chelating compounds such as ethylenediaminetetraacetic acid and ethyleneglycose bistetraacetic acid.
When peroxidase is used as the enzyme, examples of the enzyme inhibitor include reducing agents such as ascorbic acid and azide compounds such as sodium azide and potassium azide. When β-D galactosidase is used as an enzyme, lactose and the like can be mentioned as an enzyme inhibitor. In addition, in the case of using any enzyme, an acid or a base can be used as an enzyme inhibitor in order to shift the optimum pH of the enzyme in the detection zone after a predetermined time.
ここで、酵素としてアルカリ性ホスファターゼを用いる場合、酵素阻害剤としては、例えばリン酸、リン酸塩（リン酸ナトリウム、リン酸カリウム等）、リン酸モノエステル、ナフトールリン酸、グリセロールリン酸、フェニルホスフェート、ホスフォエタノールアミン、ホスフォリルコリン、フェナンスロリン、グリコースリン酸等のリン酸化合物、エチレンジアミン四酢酸、エチレングリコースビス四酢酸等のキレート化合物を挙げることができる。
酵素としてペルオキシダーゼを用いる場合には、酵素阻害剤として、アスコルビン酸等の還元剤、アジ化ナトリウム、アジ化カリウム等のアジ化化合物を挙げることができる。酵素としてβ－Ｄガラクトシダーゼを用いる場合には、酵素阻害剤として、ラクトース等を挙げることができる。また、いずれの酵素を用いる場合においても、所定時間後の検出ゾーンでの酵素の至適ｐＨをずらすために、酸又は塩基等を酵素阻害剤として使用することもできる。 The developing
Here, when alkaline phosphatase is used as the enzyme, examples of enzyme inhibitors include phosphate, phosphate (sodium phosphate, potassium phosphate, etc.), phosphate monoester, naphthol phosphate, glycerol phosphate, phenyl phosphate. And phosphoric acid compounds such as phosphoethanolamine, phosphorylcholine, phenanthroline, and glycholic acid, and chelating compounds such as ethylenediaminetetraacetic acid and ethyleneglycose bistetraacetic acid.
When peroxidase is used as the enzyme, examples of the enzyme inhibitor include reducing agents such as ascorbic acid and azide compounds such as sodium azide and potassium azide. When β-D galactosidase is used as an enzyme, lactose and the like can be mentioned as an enzyme inhibitor. In addition, in the case of using any enzyme, an acid or a base can be used as an enzyme inhibitor in order to shift the optimum pH of the enzyme in the detection zone after a predetermined time.
本実施形態による酵素免疫測定器具１は上述の構成を備えている。次にこの酵素免疫測定器具１を用いた酵素免疫測定方法について説明する。
酵素免疫測定器具１の未使用状態では、図７及び図９Ａに示すように、展開液２６は操作部５の裏面の貯留槽２４内に封止されており、基質を含浸する展開液パッド１６と分離している。展開液パッド１６は展開基材１４とも離間している。
この状態から、検体を投入孔６から展開基材１４の検体添加領域１７に滴下する。すると、検体添加領域１７では、検体が酵素標識試薬を含有させた標識試薬パッド１８の酵素標識試薬と抗原抗体反応し、検体と酵素標識試薬の反応液は、検体添加領域１７から展開基材１４を毛細管現象によって下流側の検出領域１９に向けて流れると共に上流側にも流れて拡散する。上流側に拡散する検体と酵素標識試薬の反応液は、展開基材１４が展開液パッド１６と非接触であるために、反応液中の酵素が基質と反応することはない。 Theenzyme immunoassay instrument 1 according to the present embodiment has the above-described configuration. Next, an enzyme immunoassay method using the enzyme immunoassay instrument 1 will be described.
When theenzyme immunoassay instrument 1 is not used, as shown in FIGS. 7 and 9A, the developing solution 26 is sealed in the storage tank 24 on the back surface of the operation unit 5, and the developing solution pad 16 impregnated with the substrate is used. And are separated. The developing liquid pad 16 is also separated from the developing base material 14.
From this state, the specimen is dropped from theintroduction hole 6 onto the specimen addition region 17 of the development substrate 14. Then, in the sample addition region 17, the sample undergoes an antigen-antibody reaction with the enzyme labeling reagent of the labeling reagent pad 18 containing the enzyme labeling reagent, and the reaction solution of the sample and the enzyme labeling reagent is transferred from the sample addition region 17 to the developing substrate 14. Flows toward the detection region 19 on the downstream side by the capillary phenomenon, and also flows to the upstream side and diffuses. In the reaction solution of the specimen diffusing upstream and the enzyme labeling reagent, since the developing substrate 14 is not in contact with the developing solution pad 16, the enzyme in the reaction solution does not react with the substrate.
酵素免疫測定器具１の未使用状態では、図７及び図９Ａに示すように、展開液２６は操作部５の裏面の貯留槽２４内に封止されており、基質を含浸する展開液パッド１６と分離している。展開液パッド１６は展開基材１４とも離間している。
この状態から、検体を投入孔６から展開基材１４の検体添加領域１７に滴下する。すると、検体添加領域１７では、検体が酵素標識試薬を含有させた標識試薬パッド１８の酵素標識試薬と抗原抗体反応し、検体と酵素標識試薬の反応液は、検体添加領域１７から展開基材１４を毛細管現象によって下流側の検出領域１９に向けて流れると共に上流側にも流れて拡散する。上流側に拡散する検体と酵素標識試薬の反応液は、展開基材１４が展開液パッド１６と非接触であるために、反応液中の酵素が基質と反応することはない。 The
When the
From this state, the specimen is dropped from the
この酵素免疫測定方法では、標識試薬パッド１８を中心に検体と酵素標識試薬との抗原抗体反応が起こってから、展開液２６を標識試薬パッド１８に流す必要がある。このため検体の滴下後、所定時間経過した時点で酵素免疫測定器具１の操作部５を押す。滴下から操作部を押すまでの時間は条件等を考慮して決定できる。図８及び図９Ｂに示すように、操作部５を押すことによって、操作部５のリブ５ｂは容易に分断されて、操作部５は一端部５ａを支点として展開液パッド１６側に傾斜し押し込まれる。操作部５の裏面に設けられた作動片２８は展開液パッド１６の自由端部を押して展開基材１４と端部を接触させる。この状態で、裏面の貯留槽２４が傾斜部１０ａ，１０ａに接近あるいは当接し、貯留槽２４の側壁２４ａの一部は一対のテーパ部３０，３０間に挟持されて固定され、操作部５が停止する。
押された操作部５の裏面中央が容器内側に凹むことで、下に向いた凸部２５が貯留槽２４の周壁２４ａに熱溶着された封止膜２７を突き破る。その結果、貯留槽２４内の展開液２６が流出して展開液パッド１６に吸い取られる。なお段部３ａより上流側の位置で、展開液２６の一部が貯留槽２４から展開液パッド１６の両側に流出した場合でも、傾斜部１０ａや溝部１１によって展開液パッド１６に吸収される。 In this enzyme immunoassay method, it is necessary to flow the developingsolution 26 to the labeling reagent pad 18 after an antigen-antibody reaction between the specimen and the enzyme labeling reagent occurs mainly in the labeling reagent pad 18. For this reason, the operation part 5 of the enzyme immunoassay instrument 1 is pushed when a predetermined time elapses after the sample is dropped. The time from dropping to pressing the operation unit can be determined in consideration of conditions and the like. As shown in FIGS. 8 and 9B, by pushing the operation portion 5, the rib 5b of the operation portion 5 is easily divided, and the operation portion 5 is inclined and pushed toward the developing solution pad 16 side with the one end portion 5a as a fulcrum. It is. The operating piece 28 provided on the back surface of the operation unit 5 pushes the free end of the developing solution pad 16 to bring the developing substrate 14 into contact with the end. In this state, the storage tank 24 on the back surface approaches or comes into contact with the inclined portions 10a and 10a, a part of the side wall 24a of the storage tank 24 is sandwiched and fixed between the pair of taper portions 30 and 30, and the operation unit 5 is Stop.
The center of the back surface of the pressedoperation portion 5 is recessed inside the container, so that the downward convex portion 25 breaks through the sealing film 27 thermally welded to the peripheral wall 24a of the storage tank 24. As a result, the developing solution 26 in the storage tank 24 flows out and is sucked into the developing solution pad 16. Even when a part of the developing solution 26 flows out from the storage tank 24 to both sides of the developing solution pad 16 at a position upstream of the stepped portion 3a, it is absorbed by the developing solution pad 16 by the inclined portion 10a and the groove portion 11.
押された操作部５の裏面中央が容器内側に凹むことで、下に向いた凸部２５が貯留槽２４の周壁２４ａに熱溶着された封止膜２７を突き破る。その結果、貯留槽２４内の展開液２６が流出して展開液パッド１６に吸い取られる。なお段部３ａより上流側の位置で、展開液２６の一部が貯留槽２４から展開液パッド１６の両側に流出した場合でも、傾斜部１０ａや溝部１１によって展開液パッド１６に吸収される。 In this enzyme immunoassay method, it is necessary to flow the developing
The center of the back surface of the pressed
展開液パッド１６に含まれた基質は展開液２６に溶解し、展開液２６と共に展開基材１４に吸い取られる。そして、標識試薬パッド１８で反応した検体と酵素標識試薬との反応液が、上流側から供給された展開液２６によって下流側の検出領域１９に到達する。ここで、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれている場合には、検体中の抗原または抗体が検出領域に予め固定保持されている抗体または抗原にトラップされる。検体中の抗原または抗体は酵素標識試薬と反応しているため、抗原や抗体と反応した酵素標識試薬も検出領域１９に留まる。
次に、検出領域１９にトラップされた酵素は展開液２６中の基質と反応し、基質は発色する。検出領域１９における発色の有無は上部筐体２の検出窓７を通して観察できる。展開液２６やトラップされなかった反応液等はその下流側の吸収パッド２０に吸収される。
一方、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれていない場合には、酵素標識試薬が検出領域１９でトラップされないために検出領域１９で発色が確認されず、抗原又は抗体や酵素標識試薬は吸収パッド２０に吸収される。 The substrate contained in the developingsolution pad 16 is dissolved in the developing solution 26 and sucked together with the developing solution 26 by the developing substrate 14. Then, the reaction solution of the sample and the enzyme labeling reagent reacted on the labeling reagent pad 18 reaches the downstream detection region 19 by the developing solution 26 supplied from the upstream side. Here, when an antigen or antibody to be detected is contained in the specimen, the antigen or antibody in the specimen is trapped by the antibody or antigen fixed and held in advance in the detection region. Since the antigen or antibody in the sample has reacted with the enzyme labeling reagent, the enzyme labeling reagent that has reacted with the antigen or antibody also remains in the detection region 19.
Next, the enzyme trapped in thedetection region 19 reacts with the substrate in the developing solution 26, and the substrate develops color. The presence or absence of color development in the detection region 19 can be observed through the detection window 7 of the upper housing 2. The developing liquid 26, the reaction liquid not trapped, and the like are absorbed by the absorption pad 20 on the downstream side.
On the other hand, when the specimen does not contain an antigen or antibody to be detected, the enzyme-labeled reagent is not trapped in thedetection region 19, so that color development is not confirmed in the detection region 19, and the antigen, antibody, or enzyme-labeled reagent is not Absorbed by the absorbent pad 20.
次に、検出領域１９にトラップされた酵素は展開液２６中の基質と反応し、基質は発色する。検出領域１９における発色の有無は上部筐体２の検出窓７を通して観察できる。展開液２６やトラップされなかった反応液等はその下流側の吸収パッド２０に吸収される。
一方、検体中に検出すべき抗原または抗体が含まれていない場合には、酵素標識試薬が検出領域１９でトラップされないために検出領域１９で発色が確認されず、抗原又は抗体や酵素標識試薬は吸収パッド２０に吸収される。 The substrate contained in the developing
Next, the enzyme trapped in the
On the other hand, when the specimen does not contain an antigen or antibody to be detected, the enzyme-labeled reagent is not trapped in the
上述のように本実施例による酵素免疫測定器具１及び酵素免疫測定方法によれば、展開基材１４への検体の滴下時には、基質を含む展開液パッド１６を展開基材１４から分離した状態に保持して、一定時間経過後に、展開液２６と共に基質を展開液パッド１６を介して展開基材１４に流し、展開基材１４の検体添加領域１７及び酵素標識パッド１８、そして検出領域１９に基質を含んだ展開液２６を移送する。この構成により、基質を検出領域１９でトラップされた酵素と反応させる前に、すなわち展開液を流す前に、検体と酵素標識試薬の反応液が逆流して上流側で基質と反応してしまうことを防止できて、検体の反応と測定を確実に行える。
しかも、展開液２６に酵素阻害剤を含まなくても良いので、その分コストを低減できる。 As described above, according to theenzyme immunoassay instrument 1 and the enzyme immunoassay method according to the present embodiment, when the specimen is dropped onto the developing substrate 14, the developing solution pad 16 containing the substrate is separated from the developing substrate 14. After a predetermined time has passed, the substrate is flowed together with the developing solution 26 to the developing substrate 14 via the developing solution pad 16, and the substrate is added to the specimen addition region 17, the enzyme labeling pad 18, and the detection region 19 of the developing substrate 14. The developing liquid 26 containing is transferred. With this configuration, before the substrate is reacted with the enzyme trapped in the detection region 19, that is, before the developing solution is flowed, the reaction solution of the specimen and the enzyme labeling reagent flows backward and reacts with the substrate upstream. Can be prevented, and the reaction and measurement of the specimen can be performed reliably.
In addition, since the developingsolution 26 does not need to contain an enzyme inhibitor, the cost can be reduced accordingly.
しかも、展開液２６に酵素阻害剤を含まなくても良いので、その分コストを低減できる。 As described above, according to the
In addition, since the developing
以上、本発明の実施例について説明したが、本発明は上記の実施例に限定されるものではなく、その趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更可能である。
例えば、操作部５の裏面に設けた凸起２５は図１０Ａに示すように三角錐等の角錐形状を有し封止膜２７を破断し易い構造であるが、凸起２５はこのような形状に限定されない。封止膜２７等の封止膜を押圧力で容易に切り裂き可能な形状であれば適宜の形状を適用できる。例えば、図１０Ｂに示すように、角錐の頂部に更に先鋭に突出する尖頭部２５ａを設けた凸起２５Ａを設けてもよく、或いは図１０Ｃに示すように三角板を交差させた凸起２５Ｂを設ける等の形状でもよい。 As mentioned above, although the Example of this invention was described, this invention is not limited to said Example, In the range which does not deviate from the meaning, it can change suitably.
For example, theprotrusion 25 provided on the back surface of the operation unit 5 has a pyramid shape such as a triangular pyramid as shown in FIG. 10A and has a structure in which the sealing film 27 is easily broken, but the protrusion 25 has such a shape. It is not limited to. Any shape can be applied as long as the sealing film such as the sealing film 27 can be easily torn by pressing force. For example, as shown in FIG. 10B, a protrusion 25A provided with a pointed head 25a that protrudes further sharply at the apex of the pyramid may be provided, or a protrusion 25B that intersects a triangular plate as shown in FIG. 10C. It may be a shape such as providing.
例えば、操作部５の裏面に設けた凸起２５は図１０Ａに示すように三角錐等の角錐形状を有し封止膜２７を破断し易い構造であるが、凸起２５はこのような形状に限定されない。封止膜２７等の封止膜を押圧力で容易に切り裂き可能な形状であれば適宜の形状を適用できる。例えば、図１０Ｂに示すように、角錐の頂部に更に先鋭に突出する尖頭部２５ａを設けた凸起２５Ａを設けてもよく、或いは図１０Ｃに示すように三角板を交差させた凸起２５Ｂを設ける等の形状でもよい。 As mentioned above, although the Example of this invention was described, this invention is not limited to said Example, In the range which does not deviate from the meaning, it can change suitably.
For example, the
なお、上述の実施例では、展開基材１４における酵素標識パッド１８は検体添加領域１７上に設けられている。しかし検出領域１９の上流側で且つ展開液パッド１６と展開基材１４との接触部より下流側であれば、検体添加領域１７の上流側または下流側に設けてもよい。
また、上述の実施例では、上部筐体２に設けた操作部５の裏面に展開液の貯留槽２４の封止膜２７等を破断する凸起２５と、展開液パッド１６を展開基材１４に接触させる作動片２８とを操作部５の傾動により連動するようにしてある。しかしながら、操作部５の凸起２５と作動片２８の作動は個別に行うようにしてもよい。この場合、作動片２８の作動を凸起２５による封止膜２７の破断より遅らすことが、検体中の抗原または抗体と酵素標識試薬の反応液が展開液パッド１６に展開するのを抑制できて好ましい。
また、上述の実施例では、酵素免疫測定器具１は上部筐体２と下部筐体３とからなる容器内に展開基材１４や展開液パッド１６等の各種測定部材が収容されている。しかしながら、必ずしも上部筐体２と下部筐体３は設けなくてもよい。この場合、例えば図２に示すように、下部筐体３の底板の台座１２に相当するシート状の基板上に展開基材１４と展開液パッド１６を非接触で設け、展開液パッド１６近傍に展開液の貯留槽２４を破断する操作部５と作動片２８を配設した構成を備えてたものでもよい。 In the above-described embodiment, theenzyme labeling pad 18 in the development substrate 14 is provided on the specimen addition region 17. However, it may be provided upstream or downstream of the sample addition region 17 as long as it is upstream of the detection region 19 and downstream of the contact portion between the development liquid pad 16 and the development substrate 14.
Further, in the above-described embodiment, theprotrusion 25 that breaks the sealing film 27 of the developing liquid storage tank 24 and the like on the back surface of the operation unit 5 provided in the upper casing 2 and the developing liquid pad 16 are provided on the developing base material 14. The operating piece 28 to be brought into contact with the actuator is interlocked by the tilting of the operation unit 5. However, you may make it operate | move the protrusion 25 of the operation part 5, and the action | operation piece 28 separately. In this case, delaying the operation of the operating piece 28 from the breakage of the sealing film 27 by the protrusion 25 can suppress the development of the reaction solution of the antigen or antibody and the enzyme labeling reagent in the sample on the developing solution pad 16. preferable.
Further, in the above-described embodiment, theenzyme immunoassay instrument 1 contains various measuring members such as the developing base material 14 and the developing solution pad 16 in a container composed of the upper housing 2 and the lower housing 3. However, the upper housing 2 and the lower housing 3 are not necessarily provided. In this case, for example, as shown in FIG. 2, the developing base material 14 and the developing solution pad 16 are provided in a non-contact manner on a sheet-like substrate corresponding to the base 12 of the bottom plate of the lower housing 3, It may have a configuration in which the operation section 5 and the operation piece 28 for breaking the developing solution storage tank 24 are disposed.
また、上述の実施例では、上部筐体２に設けた操作部５の裏面に展開液の貯留槽２４の封止膜２７等を破断する凸起２５と、展開液パッド１６を展開基材１４に接触させる作動片２８とを操作部５の傾動により連動するようにしてある。しかしながら、操作部５の凸起２５と作動片２８の作動は個別に行うようにしてもよい。この場合、作動片２８の作動を凸起２５による封止膜２７の破断より遅らすことが、検体中の抗原または抗体と酵素標識試薬の反応液が展開液パッド１６に展開するのを抑制できて好ましい。
また、上述の実施例では、酵素免疫測定器具１は上部筐体２と下部筐体３とからなる容器内に展開基材１４や展開液パッド１６等の各種測定部材が収容されている。しかしながら、必ずしも上部筐体２と下部筐体３は設けなくてもよい。この場合、例えば図２に示すように、下部筐体３の底板の台座１２に相当するシート状の基板上に展開基材１４と展開液パッド１６を非接触で設け、展開液パッド１６近傍に展開液の貯留槽２４を破断する操作部５と作動片２８を配設した構成を備えてたものでもよい。 In the above-described embodiment, the
Further, in the above-described embodiment, the
Further, in the above-described embodiment, the
また、上述の実施例では、短時間での発色反応の有無を見るために検出領域１９における酵素反応を阻害して発色を停止する酵素阻害剤を用いていない。しかし、酵素免疫測定器具１に酵素阻害剤を用いて発色状態で停止させるようにしてもよい。この場合、展開液２６に酵素阻害剤を混ぜてもよい。この場合、酵素と基質との反応で発色が生じた後、酵素反応が阻害されて発色の変化が停止するため、所定時間経過後でも観察できる。
また、酵素阻害剤は、展開基材における検体添加領域及び／または酵素標識試薬領域の上流側であって、展開液領域の基質が含まれる部分より上流側の部分に含有させるようにしてもよい。 In the above-described embodiment, an enzyme inhibitor that stops the color development by inhibiting the enzyme reaction in thedetection region 19 is not used in order to check the presence or absence of the color development reaction in a short time. However, the enzyme immunoassay instrument 1 may be stopped in a colored state using an enzyme inhibitor. In this case, an enzyme inhibitor may be mixed in the developing solution 26. In this case, after color development occurs due to the reaction between the enzyme and the substrate, the enzyme reaction is inhibited and the change in color development stops, so that observation is possible even after a predetermined time has elapsed.
Further, the enzyme inhibitor may be contained in a portion upstream of the specimen addition region and / or the enzyme labeling reagent region in the development substrate and upstream of the portion of the development solution region containing the substrate. .
また、酵素阻害剤は、展開基材における検体添加領域及び／または酵素標識試薬領域の上流側であって、展開液領域の基質が含まれる部分より上流側の部分に含有させるようにしてもよい。 In the above-described embodiment, an enzyme inhibitor that stops the color development by inhibiting the enzyme reaction in the
Further, the enzyme inhibitor may be contained in a portion upstream of the specimen addition region and / or the enzyme labeling reagent region in the development substrate and upstream of the portion of the development solution region containing the substrate. .
次に展開液パッド１６に基質と酵素阻害剤を添加した構成を、変形例として図１１により説明する。なお、図１１において、上述の実施例と同一または同様な部材、部分などには同一の符号を用いて説明を省略する。
図１１に示す酵素免疫測定器具１において、展開液パッド１６の一部、例えば長手方向の中央部分または下流側部分に例えば乾燥状態の基質を含む区域３１を設ける。この区域３１以外には展開液パッド１６は基質を含まない。そして、展開液パッド１６には更に、基質を含む区域３１から離間した上流側に、例えば乾燥状態の酵素阻害剤を含む区域３２が設けられている。貯留槽２４において凸起２５は基質を含む区域３１に対向する位置またはその近傍にある。操作部５を押圧して貯留槽２４の側壁２４ａを傾斜部１０ａ，１０ａに当接するまで傾斜させた際には、封止膜２７を破断した凸起２５は展開液パッド１６の基質を含む区域３１の領域またはその近傍に当接する一方で、酵素阻害剤を含む区域３２からは離間している。そのため、破断した封止膜２７の穴から流出する展開液は、直接酵素阻害剤を含む区域３２に接触しない。
従って、封止膜２７を破断した穴から流出する展開液は、展開液パッド１６の基質を含む区域３１で溶解された基質を含んで下流側に流れ、作動片２８によって移動させられた展開液パッドの先端より、展開基材１４に展開する。そして、展開液パッド１６に流出した展開液は毛細管現象で徐々に上流側にも展開するため、酵素阻害剤を含む区域３２へ浸透して展開液が酵素阻害剤を溶解して、その結果酵素阻害剤を含んで下流側に流れる。そのため、検体と酵素標識と基質とが反応して基質が発色した後、遅れて酵素阻害剤を含む展開液が流れて発色を固定する。
この場合、展開液を展開液パッド１６に投入するタイミングを考慮する必要がなく、操作部５を押した後、酵素免疫測定具１を長時間放置したとしても基質の反応をタイミングよく停止させて正確な判定を行う事が可能である。 Next, a configuration in which a substrate and an enzyme inhibitor are added to the developingsolution pad 16 will be described with reference to FIG. 11 as a modified example. In FIG. 11, the same reference numerals are used for the same or similar members and parts as those in the above-described embodiment, and the description thereof is omitted.
In theenzyme immunoassay instrument 1 shown in FIG. 11, a region 31 containing, for example, a dry substrate is provided in a part of the developing solution pad 16, for example, a central portion or a downstream portion in the longitudinal direction. Except for this area 31, the developing solution pad 16 contains no substrate. The developing solution pad 16 is further provided with an area 32 containing, for example, a dry enzyme inhibitor, on the upstream side away from the area 31 containing the substrate. In the storage tank 24, the protrusion 25 is located at a position facing the area 31 containing the substrate or in the vicinity thereof. When the operation part 5 is pressed and the side wall 24a of the storage tank 24 is inclined until it contacts the inclined parts 10a, 10a, the protrusion 25 that breaks the sealing film 27 is a region containing the substrate of the developing solution pad 16. While abutting at or near the region 31, it is spaced from the region 32 containing the enzyme inhibitor. Therefore, the developing solution flowing out from the hole of the broken sealing film 27 does not directly contact the area 32 containing the enzyme inhibitor.
Therefore, the developing solution flowing out from the hole in which the sealingfilm 27 is broken flows downstream including the substrate dissolved in the region 31 including the substrate of the developing solution pad 16 and is moved by the working piece 28. It develops on the development substrate 14 from the tip of the pad. Since the developing solution that has flowed out to the developing solution pad 16 gradually develops to the upstream side by capillary action, the developing solution penetrates into the region 32 containing the enzyme inhibitor and the developing solution dissolves the enzyme inhibitor. Flows downstream with inhibitor. Therefore, after the sample, the enzyme label, and the substrate react and the substrate develops color, the developing solution containing the enzyme inhibitor flows with a delay and the color development is fixed.
In this case, it is not necessary to consider the timing of supplying the developing solution to the developingsolution pad 16, and the reaction of the substrate is stopped in a timely manner even if the enzyme immunoassay instrument 1 is left for a long time after pressing the operation unit 5. It is possible to make an accurate determination.
図１１に示す酵素免疫測定器具１において、展開液パッド１６の一部、例えば長手方向の中央部分または下流側部分に例えば乾燥状態の基質を含む区域３１を設ける。この区域３１以外には展開液パッド１６は基質を含まない。そして、展開液パッド１６には更に、基質を含む区域３１から離間した上流側に、例えば乾燥状態の酵素阻害剤を含む区域３２が設けられている。貯留槽２４において凸起２５は基質を含む区域３１に対向する位置またはその近傍にある。操作部５を押圧して貯留槽２４の側壁２４ａを傾斜部１０ａ，１０ａに当接するまで傾斜させた際には、封止膜２７を破断した凸起２５は展開液パッド１６の基質を含む区域３１の領域またはその近傍に当接する一方で、酵素阻害剤を含む区域３２からは離間している。そのため、破断した封止膜２７の穴から流出する展開液は、直接酵素阻害剤を含む区域３２に接触しない。
従って、封止膜２７を破断した穴から流出する展開液は、展開液パッド１６の基質を含む区域３１で溶解された基質を含んで下流側に流れ、作動片２８によって移動させられた展開液パッドの先端より、展開基材１４に展開する。そして、展開液パッド１６に流出した展開液は毛細管現象で徐々に上流側にも展開するため、酵素阻害剤を含む区域３２へ浸透して展開液が酵素阻害剤を溶解して、その結果酵素阻害剤を含んで下流側に流れる。そのため、検体と酵素標識と基質とが反応して基質が発色した後、遅れて酵素阻害剤を含む展開液が流れて発色を固定する。
この場合、展開液を展開液パッド１６に投入するタイミングを考慮する必要がなく、操作部５を押した後、酵素免疫測定具１を長時間放置したとしても基質の反応をタイミングよく停止させて正確な判定を行う事が可能である。 Next, a configuration in which a substrate and an enzyme inhibitor are added to the developing
In the
Therefore, the developing solution flowing out from the hole in which the sealing
In this case, it is not necessary to consider the timing of supplying the developing solution to the developing
酵素免疫測定に際し、検体添加後の展開液の展開開始時間を厳しく管理する必要がなく測定を簡単且つ容易に実施する事ができる。
In the enzyme immunoassay, it is not necessary to strictly manage the development start time of the developing solution after the sample is added, and the measurement can be performed easily and easily.
１ 酵素免疫測定器具
５ 操作部
１４ 展開基材
１６ 展開液パッド（展開液領域）
１７ 検体添加領域
１８ 酵素標識パッド（酵素標識試薬領域）
１９ 検出領域
２０ 吸収パッド
２４ 貯留槽（展開液貯留槽）
２５、２５Ａ、２５Ｂ 凸起（切り裂き部）
２６ 展開液
２７ アルミシール（封止膜）
２８ 作動片（作動部）
３１ 基質を含む区域
３２ 酵素阻害剤を含む区域 DESCRIPTION OFSYMBOLS 1 Enzyme immunoassay instrument 5 Operation part 14 Deploying base material 16 Developing solution pad (Developing solution region)
17Sample addition area 18 Enzyme label pad (enzyme label reagent area)
19Detection area 20 Absorption pad 24 Storage tank (developing liquid storage tank)
25, 25A, 25B Protrusion (Cut)
26 Developingliquid 27 Aluminum seal (sealing film)
28 Actuating piece (actuating part)
31Area containing substrate 32 Area containing enzyme inhibitor
５ 操作部
１４ 展開基材
１６ 展開液パッド（展開液領域）
１７ 検体添加領域
１８ 酵素標識パッド（酵素標識試薬領域）
１９ 検出領域
２０ 吸収パッド
２４ 貯留槽（展開液貯留槽）
２５、２５Ａ、２５Ｂ 凸起（切り裂き部）
２６ 展開液
２７ アルミシール（封止膜）
２８ 作動片（作動部）
３１ 基質を含む区域
３２ 酵素阻害剤を含む区域 DESCRIPTION OF
17
19
25, 25A, 25B Protrusion (Cut)
26 Developing
28 Actuating piece (actuating part)
31
Claims (8)
- 毛細管現象によって輸液可能な展開基材と、前記展開基材に接触可能に分離しており基質を含む展開液領域と、前記展開液領域に供給可能な展開液とを含み、
前記展開基材には、検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられ、
前記展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域の上流側に、前記展開液領域と、前記展開液とを設けたことを特徴とする酵素免疫測定器具。 A development base material that can be infused by capillary action, a development liquid region that is separated so as to be in contact with the development base material and includes a substrate, and a development liquid that can be supplied to the development liquid region,
The development substrate is provided with a sample addition region for adding a sample and an enzyme labeling reagent region, and a detection region provided on the downstream side of the sample addition region and the enzyme labeling reagent region,
An enzyme immunoassay instrument comprising the developing solution region and the developing solution provided upstream of the sample addition region and the enzyme labeling reagent region of the developing substrate. - 前記展開液領域の下流側部分に基質が設けられている請求項１に記載された酵素免疫測定器具。 The enzyme immunoassay device according to claim 1, wherein a substrate is provided in a downstream portion of the developing solution region.
- 前記展開液には酵素阻害剤を含まない請求項１に記載された酵素免疫測定器具。 The enzyme immunoassay device according to claim 1, wherein the developing solution does not contain an enzyme inhibitor.
- 前記展開液領域が、前記基質を含む区域と、その上流側に酵素阻害剤を含む区域とを有する、請求項１に記載された酵素免疫測定器具。 The enzyme immunoassay device according to claim 1, wherein the developing solution region has a region containing the substrate and a region containing an enzyme inhibitor upstream thereof.
- 前記展開液領域の近傍に展開液を貯留する展開液貯留槽を備えており、前記展開液貯留槽から前記展開液領域に展開液を供給する請求項１に記載された酵素免疫測定器具 The enzyme immunoassay device according to claim 1, further comprising a developing solution reservoir for storing a developing solution in the vicinity of the developing solution region, and supplying the developing solution from the developing solution reservoir to the developing solution region.
- 前記展開液貯留部には展開液を封止する封止膜が設けられ、前記封止膜を開封することで前記展開液領域に展開液を供給させる操作部が更に設けられている請求項５に記載された酵素免疫測定器具。 6. The developing liquid storage part is provided with a sealing film for sealing the developing liquid, and further provided with an operation part for opening the sealing film to supply the developing liquid to the developing liquid region. The enzyme immunoassay device described in 1.
- 前記操作部による前記展開液貯留部の封止膜の開封に連動して、前記展開液領域を前記展開基材に接触させる作動部が設けられている請求項６に記載された酵素免疫測定器具。 The enzyme immunoassay device according to claim 6, further comprising an operation unit that brings the developing solution region into contact with the developing substrate in conjunction with opening of the sealing film of the developing solution storage unit by the operation unit. .
- 毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用いた酵素免疫測定方法において、
検体を添加する検体添加領域及び酵素標識試薬領域と、これら検体添加領域及び酵素標識試薬領域の下流側に設けた検出領域とが設けられている、毛細管現象によって輸液可能な展開基材を用意する工程と、
前記展開基材と分離して基質を含む展開液領域を設ける工程と、
検体を展開基材の検体添加領域上に添加して、酵素標識試薬領域の酵素標識試薬と反応させる工程と、
反応後に、前記展開基材の検体添加領域及び酵素標識試薬領域より上流側に位置する部分と展開液領域とを接触させ、前記展開液領域を通して前記展開基材に基質を含む展開液を供給する工程と、を含むことを特徴とする酵素免疫測定方法。 In an enzyme immunoassay method using a deployment substrate that can be infused by capillary action,
Prepare a development base material that can be infused by capillary action, provided with a sample addition region and an enzyme labeling reagent region to which a sample is added, and a detection region provided downstream of these sample addition region and enzyme labeling reagent region Process,
Providing a developing solution region containing a substrate separated from the developing substrate;
Adding a sample on the sample addition region of the development substrate and reacting with the enzyme labeling reagent in the enzyme labeling reagent region;
After the reaction, a portion located upstream of the specimen addition region and the enzyme labeling reagent region of the development substrate is brought into contact with the development solution region, and a development solution containing a substrate is supplied to the development substrate through the development solution region. And an enzyme immunoassay method comprising the steps of:
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|---|---|---|---|
| PCT/JP2010/001757 WO2011111108A1 (en) | 2010-03-11 | 2010-03-11 | Instrument for enzyme-linked immunoassay, and enzyme-linked immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| PCT/JP2010/001757 WO2011111108A1 (en) | 2010-03-11 | 2010-03-11 | Instrument for enzyme-linked immunoassay, and enzyme-linked immunoassay |
Publications (1)
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