WO2009157802A1 - Strain of a реniсilliuм vеrruсоsuм fungus for producing agent exhibiting immunomodulating properties and an immunomodulator agent based thereon - Google Patents

Strain of a реniсilliuм vеrruсоsuм fungus for producing agent exhibiting immunomodulating properties and an immunomodulator agent based thereon Download PDF

Info

Publication number
WO2009157802A1
WO2009157802A1 PCT/RU2008/000749 RU2008000749W WO2009157802A1 WO 2009157802 A1 WO2009157802 A1 WO 2009157802A1 RU 2008000749 W RU2008000749 W RU 2008000749W WO 2009157802 A1 WO2009157802 A1 WO 2009157802A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
strain
fungus
drug
agent
immunomodulator
Prior art date
Application number
PCT/RU2008/000749
Other languages
French (fr)
Russian (ru)
Inventor
Татьяна Германовна МИХЕЕВА
Михаил Игоревич ЗОТОВ
Евгений Владимирович СТРАЗДИНГ
Original Assignee
Mikheeva Tatyana Germanovna
Zotov Mikhail Igorevich
Stpazding Evgeniy Vladimirovic
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mikheeva Tatyana Germanovna, Zotov Mikhail Igorevich, Stpazding Evgeniy Vladimirovic filed Critical Mikheeva Tatyana Germanovna
Publication of WO2009157802A1 publication Critical patent/WO2009157802A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/062—Ascomycota
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/80—Penicillium

Definitions

  • the invention relates to biotechnology, specifically to the development of new sources of biologically active substances and immunomodulating agents for influencing the living organism .. At present much interest in products of natural origin. the indisputable advantage of which is their physiology for the body and environmental harmlessness
  • Known biologically active preparations of immunostimulating action obtained from natural sources - on the basis of symbiotrophic fungi that live in natural conditions on plant roots, for example, drugs Emistim C, Agroemistim-Extra [1,2].
  • These biological products contain the optimal set of growth substances (phytohormones), vitamins, amino acids, fatty acids, microelements, which are optimal for stimulating the vital activity of plants.
  • Multiple trials of these drugs have shown that they provide increased seed germination, resistance to diseases and stress factors, increase yield and improve the quality of crop production, and reduce nitrate content [3]. This is due to the activation of the basic processes of plant life - the processes of photosynthesis, respiration, cell nutrition, activation of enzyme systems.
  • These drugs are made on a natural basis, obtained from epiphytic fungi of the root system of medicinal plants, certified and certified for environmental safety.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) It is also known biologically active agent (biocorrector) "Flovit E” based on the extract of the fungus Fusrium sambusipum, which is an effective immunomodulator and adaptogen [4].
  • This tool is widely used in clinical medicine both in the treatment of various diseases (diabetes mellitus, trophic disorders, joint diseases), and in the fight against viral infections. Its hepatoprotective effect, the effectiveness of its use in gastroenterology, obstetric and gynecological practice, and for healing and rejuvenating the body in regenerative medicine and cosmetics have been clinically shown [5].
  • the therapeutic possibilities of the drug “Flovit E” are associated, first of all, with its natural origin from the fungus Fusrium sambusipum and the uniqueness of the set of biologically active components that make up its composition.
  • the search for natural sources for the search and creation of highly effective biologically active agents with a unique set of constituent components and affecting the state of the human and animal organism is not an easy task. Isolation of a biologically active substance from a source of natural origin should also ensure the maximum preservation of beneficial properties, the absence of toxicity and side effects.
  • the solution to this problem is possible with the help of new agents of natural origin with immunomodulating properties that allow them to be used for a variety of therapeutic effects
  • a new strain of the fungus Repisill ⁇ m verrusosum VKPM F-984 is used, which is used to obtain an agent having immunomodulatory properties, and an agent obtained on the basis of the strain Repisill ⁇ m verrusoum VKPM F-984 having immunomodulatory properties.
  • This tool is obtained, in particular, by extraction of the mycelium of the specified strain, and is its hydroalcoholic extract.
  • the technical result of the claimed group of inventions consists in finding new natural sources of biologically active substances and expanding the range of highly effective means of immunomodulators of natural origin, designed to affect a living organism in the field of medicine, veterinary medicine or in complex recreational activities. Their use allows for more effective treatment and prevention of diseases by increasing immunity and complex effects on the body.
  • the immunomodulating agent obtained from the fungus strain Repisill ⁇ m verrusosum VKPM F-984 has an adaptogenic effect, increases the nonspecific resistance of the organism and its adaptive capabilities. To obtain it, the fungal mycelium is usually extracted with an aqueous alcohol solution.
  • the strain of the fungus Repisill ⁇ m verrusosum VKPM F-984 was isolated from the microflora of ginseng roots as follows.
  • ginseng roots are washed with running water, dried on filter paper and 4-5 order roots are taken, 5 grams of dry roots are treated with 60% H 2 SO 4 , crushed and transferred to flasks with a nutrient medium (nutrient composition: glucose - 8 , 0 g, K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to 1 liter).
  • a nutrient medium nutrient composition: glucose - 8 , 0 g, K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to 1 liter).
  • an agar medium is used: glucose - 8.0 g,
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to 1 liter, agar-agar 15.0 g.
  • the culture is seeded on Petri dishes, incubated in an incubator and used to prepare inoculum.
  • the isolated strain was deposited in the VKPM depository collection, it was assigned registration number F-984.
  • Macromorphological signs when inoculated with medium on agar on the 15th day of growth at + 24 ° C, a warty colony develops with a rounded shape of gray-green color, weak striation at the periphery, colony size is 35-40 mm in diameter, aerial mycelium is reverse white, surface sporulation , the color of the reverse side of the colony is brownish yellow.
  • Mycelium is colorless septate, a large number of small roundish greenish conidia, conidiophores monoverticular monoverticillate, spores of spherical shape, transparent, the shell is smooth.
  • the strain grows in the temperature range from 24 to 27 ° C, the optimum temperature is 25-27 ° C. With growth on nutrient media, slightly acidic pH values are preferred. The optimum pH is 6, 5. It is possible to grow on simple media using glucose as a carbon source, preferably containing potassium and magnesium in the media.
  • the method of obtaining funds based on the strain Repicillium verrusosum VKPM F-984 includes the following operations. The culture fluid, together with mycelium, is treated with activated carbon (5 g / l of liquid) with stirring, kept for 25 hours and filtered. Firm.
  • the fraction with vigorous stirring is extracted with an aqueous solution of alcohol (70%) during the day.
  • the extract is filtered off.
  • the obtained filtered alcoholic extract is a described agent having immunomodulatory properties.
  • Repicillium verrusosum VKPM F-984.B fermenters in sterile conditions add seed at a dose of 3% of the volume of the fermentation medium.
  • the fermentation medium includes: glucose - 8.0 g, K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to ll.
  • the fermentation process is completed as the fungus mycelium ripens and when the maximum accumulation of metabolic products of the fungus micromycete in the culture fluid is reached.
  • the resulting culture fluid with mycelium with vigorous stirring is treated with activated carbon at the rate of 5 g per 1 liter of fluid, kept at a temperature of 25 ° C for 24 hours and filtered.
  • the solid fraction is placed in a separate container and with vigorous stirring is extracted with a calculated amount of a 75% aqueous solution of ethyl alcohol for 24 hours. At the end of the extraction, filtration is carried out and a filtered extract is obtained.
  • Example 2 The study of the properties of the obtained immunomodulator. To study the effect of the drug on the hematological, biochemical and immunological parameters of the body, an experiment of 6 months was performed on male rats of the VISTAR line with an initial weight of 125-130 g. Rats were divided into 2 groups: control group — animals received a general vivar diet, experimental group - animals on the background of a general bivalent diet received a immunomodulator drug at a dose of 0.25 ml / kg animal weight daily with food
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The general condition of animals of all groups was satisfactory throughout the experiment. 10 organs from each rat were microscopically examined: liver, kidney, lungs, testes, lymphoid organs (mesenteric lymph node, spleen and thymus, thymus) gastrointestinal tract (small and large intestine, stomach). After 3 months from the start of the experiment, slight dystrophic changes in the liver were observed in the experimental group compared with the control. In the spleen and mesenteric lymph node, in some cases, lymphoid proliferation was observed in the experimental group compared to the control. After 6 months from the start of the experiment, no significant morphological changes in the internal organs were detected in the experimental group compared with the control. The effect of the drug on biochemical and hematological parameters of blood and urine.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) ROCK).
  • the severity of the delayed-type hypersensitivity reaction (HRT) was determined on 40 CBA mice.
  • the study drug was administered to the first group of animals at a dose of 0.25 ml / kg, the 2nd group to a dose of 0.5 ml / kg, the 3rd group - 1 ml / kg for 5 days orally, to all experimental groups 5- the first day in parallel with drug administration, a suspension of sheep erythrocytes (EB) was administered intraperitoneally (10% suspension) at a dose of 0.3 ml / kg. Animals of the control group were injected with only 10% suspension of EB.
  • EB sheep erythrocytes
  • the determination of antibody-forming cells (AOK) in the spleen was carried out in an experiment on 30 CBA mice.
  • the drug was administered at a dose of 0.25 ml / kg, the second - 0.5 ml / kg, and EB was administered intraperitoneally.
  • the number of AOK was counted in one sample among 200
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) lymphocytes.
  • the drug induces the transformation of B-lymphocytes into AOK in the spleen, the stimulation index (IS) is 1.4, and in the control group, IS was 0.9.
  • the kinetics of B-lymphocytes was determined in an experiment on 60 CBA mice.
  • EAC-rosette-forming cells in the blood of mice of the control group did not significantly differ from the experimental group during the entire study period and amounted to 19.4 ⁇ 2.6 - 20.9 ⁇ l, 4.B dynamics of the relative number of B-lymphocytes after administration at a dose of 0.25 ml / kg, a significant increase in EAC-POK was observed on the 10th and 15th days of the study, while in the 2nd group of animals (dose of 0.5 ml / kg) on the 5th , 10th, 15th days of observations, the content of EAC-POK was 23, 6 ⁇ 1.18 - 22.6 ⁇ 1.13.
  • the data obtained allow us to conclude that the studied drug at a dose of 0.5 ml / kg, administered orally, within 5 days increases the cellular immune response.
  • the determination of hemagglutinin titers in the blood serum of animals after drug administration was carried out on 30 CBA mice (2 experimental groups, 1 control group). On the 7th day after immunization, all animals were slaughtered and titers of total antibodies and antibodies of classes M and O were determined. The content of immunoglobulins M and O in the experimental groups was higher than in the control.
  • Immunological studies in rats The determination of the body's immune status was assessed by the competence of the cellular and humoral immune responses in male WISTAR rats with an initial mass of 125-13 Or in a chronic toxicological experiment lasting 6 months.
  • Rats were divided into 2 groups: the control group — the animals received a general brew diet, the experimental group, and the animals received a study drug at a dose of 0.25 ml per kg of rat weight along with a general diet.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) the severity of the leukocyte inhibition reaction in the presence of PHA and specific antigens and the degree of T-dependent cell cytotoxicity.
  • the mitogenic response of rat peripheral lymphocytes to PHA and specific antigen (CA) was evaluated by the percentage of transformed cells.
  • CA specific antigen
  • the data obtained indicate the immunostimulating role of the studied drug in relation to thymus-dependent lymphocytes.
  • the competence of humoral immunity was evaluated by the content of major classes of immunoglobulins in rat blood serum. Studies of the content of rat serum immunoglobulins when the drug is included in their diet allowed us to establish a general orientation towards the stimulation of the humoral immunogenesis link. After 3 months, the concentration of class O, A, M, E immunoglobulins in the control was 743 ⁇ 37.2; 138 ⁇ 6.8; 8 ⁇ 3.9; 0.45 ⁇ 0.01; in the experimental group 861 ⁇ 43.05; 132 ⁇ 6.6; 87 ⁇ 4.5; 0.42 ⁇ 0.03, respectively.
  • the drug was used in poultry farms to optimize metabolism, enhance immunity and increase productivity.
  • the bird observed an intensive increase in the mass of broiler chickens and an increase in the safety of the number of chickens.
  • the drug activates a specific antibody against genesis of Newcastle disease in birds; no adverse effects on the clinical condition of broiler chickens have been identified.
  • the protein indicator of meat quality is increased by 3.7%.
  • the use of an immunomodulatory drug improves the zootechnical indices of poultry rearing.
  • the production tests of the studied drug in livestock farms showed its high effectiveness as a therapeutic and prophylactic agent for dyspepsia of newborn calves, diarrhea of non-infectious etiology, bronchopneumonia.
  • SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Drinking newborn calves with a solution of the drug for 3-10 days at a dose of 0.17 - 0.25 ml / kg helped to reduce the number of sick calves by 1.6-4.5 times and the duration of the disease by 2-4 times.
  • the increase in live weight in the experimental groups exceeded the control animals by 3.2–6.2 kg at 30 days of age, and at 60 days of age by 4.4–8.1 kg.
  • Drinking the drug at a dose of 1 ml per day to newborn calves is an effective remedy for animal diarrhea.
  • the safety of the livestock in the experimental groups reached 90-100%.
  • the described immunomodulator is not toxic, has a therapeutic and prophylactic effect on a living organism, and can be effectively used in animal husbandry and veterinary medicine to affect the immunity of animals, increase weight gain and increase the safety of livestock.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

The invention relates to biotechnology and to novel sources for producing an agent which exhibits immunomodulating properties. The novel strain of a Реniсilliuм vеrruсоsuм fungus VKPM F-984 and a novel immunomodulator agent based thereon are claimed. Said strain is isolated from the microflora of ginseng roots and is maintained on a medium which contains mineral salts, glucose and asparagin. The fungus mycelium is extracted by means of a water-alcohol solution (70% ethyl alcohol solution), and the thus obtained extract produces a stimulating effect on a cellular and humoral immunity and increases the immunological status of an organism. The advantage of the inventive agent consists in that it has a natural origin and effectively stimulates the adaptive capacities of an organism.

Description

ШТАММ ГРИБА РЕNIСILLIUМ VЕRRUСОSUМ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО MUSHROOM STRAIN RENISILLIUM VERRUSOSUM USED FOR OBTAINING FACILITIES HAVING
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМИ СВОЙСТВАМИ, И СРЕДСТВО- ИММУНОМОДУЛЯТОР НА ЕГО ОСНОВЕ.IMMUNOMODULATING PROPERTIES, AND MEANS - IMMUNOMODULATOR ON ITS BASIS.
Область техникиTechnical field
Изобретение • относится к биотехнологии, в частности, к разработке новых источников получения биологически активных веществ и иммуномодулирующих средств для воздействия на живой организм.. В настоящее время большой интерес вызывают препараты природного происхождения, . неоспоримым преимуществом которых является их физиологичность для организма и экологическая безвредность • The invention relates to biotechnology, specifically to the development of new sources of biologically active substances and immunomodulating agents for influencing the living organism .. At present much interest in products of natural origin. the indisputable advantage of which is their physiology for the body and environmental harmlessness
Предшествующий уровень техникиState of the art
Известны биологически активные препараты иммуностимулирующего действия, полученные из природных источников - на основе симбиотрофных грибов, обитающих в естественных условиях на корнях растений, например, препараты Эмистим С, Агроэмистим-Экстра [ 1,2 ]. Эти биопрепараты содержат оптимальный для стимуляции жизнедеятельности растений набор ростовых веществ (фитогормонов), витаминов, аминокислот, жирных кислот, микроэлементов. Многократные испытания этих препаратов показали, что они обеспечивают повышение всхожести семян растений, устойчивость к болезням и стрессовым факторам, способствуют повышению урожая и улучшению качества продукции растениеводства, снижают содержание нитратов [3]. Это происходит за счет активизации основных процессов жизнедеятельности растений — процессов фотосинтеза, дыхания, питания клеток, активизации ферментных систем. Данные препараты изготовлены на природной основе, получены из грибов-эпифитов корневой системы лекарственных растений, сертифицированы и аттестованы на экологическую безопасность.Known biologically active preparations of immunostimulating action obtained from natural sources - on the basis of symbiotrophic fungi that live in natural conditions on plant roots, for example, drugs Emistim C, Agroemistim-Extra [1,2]. These biological products contain the optimal set of growth substances (phytohormones), vitamins, amino acids, fatty acids, microelements, which are optimal for stimulating the vital activity of plants. Multiple trials of these drugs have shown that they provide increased seed germination, resistance to diseases and stress factors, increase yield and improve the quality of crop production, and reduce nitrate content [3]. This is due to the activation of the basic processes of plant life - the processes of photosynthesis, respiration, cell nutrition, activation of enzyme systems. These drugs are made on a natural basis, obtained from epiphytic fungi of the root system of medicinal plants, certified and certified for environmental safety.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Известно также биологически активное средство (биокорректор) «Флopaвит Э» на основе экстракта гриба Fusаrium sаmbusiпum, являющееся эффективным иммуномодулятором и адаптогеном [4]. Данное средство широко используется в клинической медицине как при лечении различных заболеваний (сахарный диабет, трофические нарушения, заболевания суставов), так и при борьбе с вирусными инфекциями. Клинически показано его гепатопротекторное действие, эффективность применения в гастроэнтерологии, акушерско-гинекологической практике и для оздоровления и омоложения организма в восстановительной медицине и кocмeтикe[5]. Терапевтические возможности препарата «Флopaвит Э» связаны, в первую очередь, с его природным происхождением из гриба Fusаrium sаmbusiпum и уникальностью набора биологически активных компонентов, входящих в его состав. Однако, изыскание природных источников для поиска и создания высокоэффективных биологически активных средств, обладающих уникальным набором входящих в них компонентов и оказывающих влияние на состояние организма человека и животных, является непростой задачей. Выделение биологически активной субстанции из источника природного происхождения должно обеспечивать также максимальное сохранение полезных свойств, отсутствие токсичности и побочных эффектов. Решение этой задачи возможно с помощью новых средств природного происхождения, обладающих иммуномодулирующими свойствами, позволяющими применять их при самых разных терапевтических воздействияSUBSTITUTE SHEET (RULE 26) It is also known biologically active agent (biocorrector) "Flovit E" based on the extract of the fungus Fusrium sambusipum, which is an effective immunomodulator and adaptogen [4]. This tool is widely used in clinical medicine both in the treatment of various diseases (diabetes mellitus, trophic disorders, joint diseases), and in the fight against viral infections. Its hepatoprotective effect, the effectiveness of its use in gastroenterology, obstetric and gynecological practice, and for healing and rejuvenating the body in regenerative medicine and cosmetics have been clinically shown [5]. The therapeutic possibilities of the drug “Flovit E” are associated, first of all, with its natural origin from the fungus Fusrium sambusipum and the uniqueness of the set of biologically active components that make up its composition. However, the search for natural sources for the search and creation of highly effective biologically active agents with a unique set of constituent components and affecting the state of the human and animal organism is not an easy task. Isolation of a biologically active substance from a source of natural origin should also ensure the maximum preservation of beneficial properties, the absence of toxicity and side effects. The solution to this problem is possible with the help of new agents of natural origin with immunomodulating properties that allow them to be used for a variety of therapeutic effects
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Настоящее изобретение поясняется конкретными примерами, которые, однако, не являются единственно возможными, но наглядно демонстрируют возможность достижения приведенной совокупностью признаков требуемого технического результатаThe present invention is illustrated by specific examples, which, however, are not the only possible, but clearly demonstrate the ability to achieve a given set of features of the desired technical result
Это достигается использованием в качестве исходного природного сырья нового штамма гриба Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984 и выделениемThis is achieved by using a new strain of the fungus Repicillium verrucosum VKPM F-984 as an initial natural raw material and isolating
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) из него препарата, обладающего иммуномодулирующими свойствами.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) from it a drug having immunomodulatory properties.
Предлагается новый штамм гриба Репiсillшm vеrruсоsum ВКПМ F-984, используемый для получения средства, обладающего иммуномодулирующими свойствами, и средство, полученное на основе штамма Репiсillшm vеrruсоsа ВКПМ F-984, обладающее иммуномодулирующими свойствами. Данное средство получено, частности, экстракцией мицелия указанного штамма, и представляет собой его водноспиртовой экстракт. Технический результат заявленной группы изобретений состоит в изыскании новых природных источников биологически активных веществ и расширении ассортимента высокоэффективных средств-иммуномодуляторов природного происхождения, предназначенных для воздействия на живой организм в области медицины, ветеринарии или при комплексных оздоровительных мероприятиях. Применение их позволяет более эффективно осуществлять лечение и профилактику заболеваний за счет повышения иммунитета и комплексного воздействия на организм. Получаемое из штамма гриба Репiсillшm vеrruсоsum ВКПМ F-984 иммуномодулирующее средство обладает адаптогенным действием, повышает неспецифическую резистентность организма и его адаптационные возможности. Для его получения обычно осуществляют экстракцию мицелия гриба водным раствором спирта. Штамм гриба Репiсillшm vеrruсоsum ВКПМ F-984 выделен из микрофлоры корней женьшеня следующим образом. Метод выделения штамма: корни женьшеня отмывают проточной водой, подсушивают на фильтровальной бумаге и отбирают корешки 4-5 порядка, 5 грамм сухих корней обрабатывают 60% H2SO4, измельчают и переносят в колбы с питательной средой (состав питательной среды: глюкоза - 8,0 г, K2HPO4 - 0,5 г, KH2PO4 - 1,0 г, MgSO4 - 0,2 г, K2SO4 - 0,1 г, аспарагин - 20 мг, вода водопроводная — до 1 литра).A new strain of the fungus Repisillшm verrusosum VKPM F-984 is used, which is used to obtain an agent having immunomodulatory properties, and an agent obtained on the basis of the strain Repisillшm verrusoum VKPM F-984 having immunomodulatory properties. This tool is obtained, in particular, by extraction of the mycelium of the specified strain, and is its hydroalcoholic extract. The technical result of the claimed group of inventions consists in finding new natural sources of biologically active substances and expanding the range of highly effective means of immunomodulators of natural origin, designed to affect a living organism in the field of medicine, veterinary medicine or in complex recreational activities. Their use allows for more effective treatment and prevention of diseases by increasing immunity and complex effects on the body. The immunomodulating agent obtained from the fungus strain Repisillшm verrusosum VKPM F-984 has an adaptogenic effect, increases the nonspecific resistance of the organism and its adaptive capabilities. To obtain it, the fungal mycelium is usually extracted with an aqueous alcohol solution. The strain of the fungus Repisillшm verrusosum VKPM F-984 was isolated from the microflora of ginseng roots as follows. Strain isolation method: ginseng roots are washed with running water, dried on filter paper and 4-5 order roots are taken, 5 grams of dry roots are treated with 60% H 2 SO 4 , crushed and transferred to flasks with a nutrient medium (nutrient composition: glucose - 8 , 0 g, K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to 1 liter).
Для хранения и размножения эндофитного микромицета Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984 используют агаризированную среду: глюкоза - 8,0 г,For storage and reproduction of endophytic micromycetes of Repicillium verrusosum VKPM F-984, an agar medium is used: glucose - 8.0 g,
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) K2HPO4 - 0,5 г, KH2PO4 - 1,0 г, MgSO4 - 0,2 г, K2SO4 - 0,1 г, аспарагин - 20 мг, вода водопроводная - до 1 литра, агар-агар 15,0 г.Культуру высевают на чашки Петри, инкубируют в термостате и используют для приготовления посевного мaтepиaлa.Bыдeлeнный штамм был депонирован в коллекции- депозитарии ВКПМ, ему присвоен регистрационный номер F-984.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to 1 liter, agar-agar 15.0 g. The culture is seeded on Petri dishes, incubated in an incubator and used to prepare inoculum. The isolated strain was deposited in the VKPM depository collection, it was assigned registration number F-984.
Ky пьτур&пьно-морфологические свойства штамма.Ky etur & polno-morphological properties of the strain.
Макроморфологические признаки: при посеве уколом на среду с агаром на 15 день роста при +24°C развивается бородавчатая колония округлой форму серо-зеленого цвета, на периферии слабая исчерченность, размер колонии диаметр 35-40 мм, воздушный мицелий-реверс белый, поверхностное спороношение, цвет обратной стороны колонии коричневато-желтоватый. Мицелий бесцветный септированный, большое количество мелких округлых зеленоватых конидий, конидиеносцы одномутовчатые моновертициллятные, споры шаровидной формы, прозрачные, оболочка гладкая.Macromorphological signs: when inoculated with medium on agar on the 15th day of growth at + 24 ° C, a warty colony develops with a rounded shape of gray-green color, weak striation at the periphery, colony size is 35-40 mm in diameter, aerial mycelium is reverse white, surface sporulation , the color of the reverse side of the colony is brownish yellow. Mycelium is colorless septate, a large number of small roundish greenish conidia, conidiophores monoverticular monoverticillate, spores of spherical shape, transparent, the shell is smooth.
Физиолого-биохимические свойства штамма.Physiological and biochemical properties of the strain.
Штамм растет в температурном диапазоне от 24 от 27 °C, температурный оптимум 25-27 °C.Пpи росте на питательных средах предпочтительны слабокислые значения рН. рН-оптимум 6, 5. Возможно выращивание на простых средах с использованием глюкозы в качестве источника углерода, желательно содержание в средах калия и магния. Способ получения средства на основе штамма Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984 включает следующие операции. Культуральную жидкость вместе с мицелием при перемешивании обрабатывают активированным углем (5г/л жидкости), выдерживают в течение 25 часов и фильтруют. Твердую.The strain grows in the temperature range from 24 to 27 ° C, the optimum temperature is 25-27 ° C. With growth on nutrient media, slightly acidic pH values are preferred. The optimum pH is 6, 5. It is possible to grow on simple media using glucose as a carbon source, preferably containing potassium and magnesium in the media. The method of obtaining funds based on the strain Repicillium verrusosum VKPM F-984 includes the following operations. The culture fluid, together with mycelium, is treated with activated carbon (5 g / l of liquid) with stirring, kept for 25 hours and filtered. Firm.
фракцию при интенсивном перемешивании экстрагируют водным раствором спирта (70%) в течение суток. Экстракт отфильтровывают. Полученный отфильтрованный спиртовой экстракт является описываемым средством, обладающим иммуномодулирующими свойствами.fraction with vigorous stirring is extracted with an aqueous solution of alcohol (70%) during the day. The extract is filtered off. The obtained filtered alcoholic extract is a described agent having immunomodulatory properties.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Пример 1. Получение иммуномодулятора из штаммаSUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Example 1. Obtaining an immunomodulator from a strain
Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984.B ферментеры в стерильных условиях добавляют посевной материал при дозе 3% от объема ферментационной среды. Ферментационная среда включает: глюкоза - 8,0 г, K2HPO4 - 0,5 г, KH2PO4 - 1,0 г, MgSO4 - 0,2 г, K2SO4 - 0,1 г, аспарагин - 20 мг, вода водопроводная - до lл. Процесс ферментации заканчивают по мере созревания мицелия гриба и по достижении максимума накопления в культуральной жидкости продуктов метаболизма гриба-микромицета. Полученную культуральную жидкость с мицелием при интенсивном перемешивании обрабатывают активированным углем из расчета 5 г на 1 л жидкости, выдерживают при температуре 25°C в течение 24 часов и фильтруют. Твердую фракцию помещают в отдельную емкость и при интенсивном перемешивании экстрагируют расчетным количеством 75%-нoгo водного раствора этилового спирта в течение 24 часов. По окончании экстракции проводят фильтрацию и получают отфильтрованный экстракт.Repicillium verrusosum VKPM F-984.B fermenters in sterile conditions add seed at a dose of 3% of the volume of the fermentation medium. The fermentation medium includes: glucose - 8.0 g, K 2 HPO 4 - 0.5 g, KH 2 PO 4 - 1.0 g, MgSO 4 - 0.2 g, K 2 SO 4 - 0.1 g, asparagine - 20 mg, tap water - up to ll. The fermentation process is completed as the fungus mycelium ripens and when the maximum accumulation of metabolic products of the fungus micromycete in the culture fluid is reached. The resulting culture fluid with mycelium with vigorous stirring is treated with activated carbon at the rate of 5 g per 1 liter of fluid, kept at a temperature of 25 ° C for 24 hours and filtered. The solid fraction is placed in a separate container and with vigorous stirring is extracted with a calculated amount of a 75% aqueous solution of ethyl alcohol for 24 hours. At the end of the extraction, filtration is carried out and a filtered extract is obtained.
Пример 2. Исследование свойств полученного иммуномодулятора. Для изучения влияния препарата на гематологические, биохимические и иммунологические показатели организма был поставлен эксперимент продолжительностью 6 месяцев на крысах-самцах линии ВИСТАР с исходной массой 125-130 г. Крысы были разбиты на 2 группы: контрольная группа - животные получали общевиварный рацион, опытная группа - животные на фоне общевиварного рациона ежедневно вместе с кормом получали препарат- иммуномодулятор в дозе 0,25 мл/кг массы животногоExample 2. The study of the properties of the obtained immunomodulator. To study the effect of the drug on the hematological, biochemical and immunological parameters of the body, an experiment of 6 months was performed on male rats of the VISTAR line with an initial weight of 125-130 g. Rats were divided into 2 groups: control group — animals received a general vivar diet, experimental group - animals on the background of a general bivalent diet received a immunomodulator drug at a dose of 0.25 ml / kg animal weight daily with food
Проведено 2 забоя животных: через 3 и 6 месяцев от начала эксперимента . Влияние препарата-иммуномодулятора на морфологические показатели организма.2 slaughter of animals was carried out: after 3 and 6 months from the start of the experiment. The effect of the immunomodulator on the morphological parameters of the body.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Общее состояние животных всех групп было удовлетворительным на протяжении всего эксперимента.Проводили микроскопически исследования 10 органов от каждой крысы: печень, почки, легкие, семенники, лимфоидные органы (мезентериальный лимфоузел, селезенка и вилочковая железа, тимус) органы ЖКТ (тонкая и толстая кишка, желудок). Через 3 месяца от начала эксперимента отмечались небольшие дистрофические изменения печени в опытной группе по сравнению с контролем. В селезенке и мезентериальном лимфоузле в части случаев отмечалась лимфоидная пролиферация в опытной группе по сравнению с контролем. Через 6 месяцев от начала эксперимента не обнаружено существенных морфологических изменений внутренних органов в опытной группе по сравнению с контролем. Влияние препарата на биохимические и гематологические показатели крови и мочи.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) The general condition of animals of all groups was satisfactory throughout the experiment. 10 organs from each rat were microscopically examined: liver, kidney, lungs, testes, lymphoid organs (mesenteric lymph node, spleen and thymus, thymus) gastrointestinal tract (small and large intestine, stomach). After 3 months from the start of the experiment, slight dystrophic changes in the liver were observed in the experimental group compared with the control. In the spleen and mesenteric lymph node, in some cases, lymphoid proliferation was observed in the experimental group compared to the control. After 6 months from the start of the experiment, no significant morphological changes in the internal organs were detected in the experimental group compared with the control. The effect of the drug on biochemical and hematological parameters of blood and urine.
.При изучении биохимических показателей учитывали содержание общего белка, содержание глюкозы в сыворотке крови, активность некоторых ферментов сыворотки крови и печени крыс, содержание креатинина в моче. Содержание общего белка в сыворотке крови крыс, активность ферментов сыворотки крови и печени крыс при включении в их рацион иммуномодулирующего препарата, полученного по примеру 1, не отличались от контроля на протяжении всего эксперимента (через 3 и 6 месяцев). Не выявлено разницы между опытной группой и контролем по таким показателям как концентрация гемоглобина, общее количество эритроцитов, гематокрит, CCO, СКЭ на протяжении всего эксперимента. Лейкоцитарная формула у крыс при включении в их рацион исследуемого препарата существенно не отличалась от контроля..When studying biochemical parameters, the total protein content, serum glucose, the activity of certain enzymes of rat blood serum and liver, and urinary creatinine were taken into account. The total protein content in rat blood serum, the activity of rat blood serum and liver enzymes when the immunomodulating preparation obtained in Example 1 was included in their diet did not differ from the control throughout the experiment (after 3 and 6 months). There was no difference between the experimental group and the control by such indicators as the concentration of hemoglobin, the total number of red blood cells, hematocrit, CCO, SLE throughout the experiment. The leukocyte formula in rats when the study drug was included in their diet did not differ significantly from the control.
Иммунотоксические свойства препарата.Immunotoxic properties of the drug.
. Иммунотоксические свойства препарата были изучены в опыте на белых мышах-самцах массой 18-20 г.О влиянии препарата на клеточное звено иммунитета судили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа и аутологичным розеткообразующим клеткам (ауто-. The immunotoxic properties of the drug were studied in an experiment on white male mice weighing 18-20 g. The effect of the drug on the cellular immunity was judged by the severity of the delayed-type hypersensitivity reaction and autologous rosette-forming cells (auto-
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) РОК). Определение выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) проводили на 40 мышах линии CBA. Первой группе животных вводили исследуемый препарат в дозе 0,25 мл/кг, 2-й - группе в дозе 0,5 мл/кг, 3-й группе - 1 мл/кг в течение 5 дней перорально, всем опытным группам на 5-й день параллельно с ведением препарата вводили суспензию эритроцитов барана (ЭБ) внутрибрюшинно (10% суспензия) в дозе 0,3 мл/кг. Животным контрольной группы вводили только 10% суспензию ЭБ. Через 5 дней после сенсибилизации всем подопытным животным вводили разрешающую дозу 2% суспензии ЭБ в количестве 0,02 мл в правую лапку, а в левую физраствор - 0,02 мл. Контрольным животным вводили только 2% суспензию ЭБ и учитывали индекс стимуляции. При учете индекса стимуляции установлено, что исследуемый препарат обладает иммуностимулирующими свойствами во всех испытанных дозах (0,25;0,5;l,0 мл/кг живой массы) и индекс стимуляции (ИС) составил 9,8±0,7;10,l±0,2;9,45±0,4 соответственно по группам опытных животных, в контроле ИС = 4,5. Изменения в динамике ауто- POK у животных на фоне введения препарата изучали на 75 мышах линии CBA. 1-я группа мышей получала препарат в дозе 0,25 мл/кг, 2-я - в дозе 0,5 мл/кг перорально в течение 5 дней, 3-я группа служила контролем. Исследования проводили на 5,10,15,20 дни после последнего введения препарата. Кинетика ауто-РОК характеризовалась повышением как абсолютного, так и относительного количества розеткообразующих клеток в крови мышей.Изменения в динамике показателей аутологичных розеткообразующих клеток у мышей дает представление о влиянии препарата на клеточный иммунитет, что выражается в повышении функциональной активности Т-лимфоцитов. Оценку В-клеточного звена иммунной системы проводили по определению количества антителообразующих клеток в селезенке и кинетике В-лимфоцитов.Определение антителообразующих клеток (AOK) в селезенке проводили в опыте на 30 мышах линии CBA. Первой группе животных препарат вводили в дозе 0,25 мл/кг, 2-й - 0,5 мл/кг, одновременно внутрибрюшинно вводили ЭБ. Число AOK считали в одной пробе среди 200SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) ROCK). The severity of the delayed-type hypersensitivity reaction (HRT) was determined on 40 CBA mice. The study drug was administered to the first group of animals at a dose of 0.25 ml / kg, the 2nd group to a dose of 0.5 ml / kg, the 3rd group - 1 ml / kg for 5 days orally, to all experimental groups 5- the first day in parallel with drug administration, a suspension of sheep erythrocytes (EB) was administered intraperitoneally (10% suspension) at a dose of 0.3 ml / kg. Animals of the control group were injected with only 10% suspension of EB. 5 days after sensitization, all experimental animals were given a resolving dose of a 2% suspension of EB in the amount of 0.02 ml in the right paw, and 0.02 ml in the left saline solution. Control animals were injected with only a 2% suspension of EB and the stimulation index was taken into account. When taking into account the stimulation index, it was found that the studied drug has immunostimulating properties in all tested doses (0.25; 0.5; l, 0 ml / kg body weight) and the stimulation index (IS) was 9.8 ± 0.7; 10 , l ± 0.2; 9.45 ± 0.4, respectively, in the groups of experimental animals, in the control IP = 4.5. Changes in the dynamics of auto-POK in animals on the background of drug administration were studied in 75 CBA mice. The 1st group of mice received the drug at a dose of 0.25 ml / kg, the 2nd - at a dose of 0.5 ml / kg orally for 5 days, the 3rd group served as a control. Studies were performed on 5,10,15,20 days after the last injection. The kinetics of auto-ROCK was characterized by an increase in both the absolute and relative number of rosette-forming cells in the blood of mice. Changes in the dynamics of indicators of autologous rosette-forming cells in mice gives an idea of the effect of the drug on cellular immunity, which is expressed in an increase in the functional activity of T-lymphocytes. Evaluation of the B-cell link of the immune system was carried out by determining the number of antibody-forming cells in the spleen and the kinetics of B-lymphocytes. The determination of antibody-forming cells (AOK) in the spleen was carried out in an experiment on 30 CBA mice. In the first group of animals, the drug was administered at a dose of 0.25 ml / kg, the second - 0.5 ml / kg, and EB was administered intraperitoneally. The number of AOK was counted in one sample among 200
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) лимфоцитов. Препарат индуцирует трансформацию В-лимфоцитов в AOK в селезенке, индекс стимуляции (ИС) равен 1,4, в контрольной группе ИС составил 0,9. Кинетика В-лимфоцитов определялась в опыте на 60 мышах линии CBA. Содержание ЕАС-розеткообразующих клеток в крови мышей кон- трольной группы существенно не отличалось от опытной группы в течение всего периода исследований и составило 19,4±2,6 - 20,9±l,4.B динамике относительного количества В-лимфоцитов после ведения препарата в дозе 0,25 мл/кг наблюдали достоверное увеличение EAC-POK на 10-й и 15-й дни исследования, в то время как во 2-й группе животных (доза препарата 0,5 мл/кг) на 5-й, 10-й, 15-й дни наблюдений, содержание EAC-POK составило 23, 6± 1,18 - 22,6±1,13. Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что исследуемый препарат в дозе 0,5 мл/кг, введенный перорально, в течение 5 дней повышает клеточный иммунный ответ. Определение титров гемагглютининов в сыворотке крови животных после введения препарата проводили на 30 мышах линии CBA (2 опытные группы, 1 — контрольная группа). На 7-й день после иммунизации все животные были забиты и определены титры общих антител и антитела классов M и О. Содержание иммуноглобулинов M и О в опытных группах было выше, чем в контрольной. Иммунологические исследования на крысах Определение иммунного статуса организма оценивали по компетентности клеточного и гуморального иммунного ответа на крысах-самцах линии ВИСТАР с исходной массой 125- 13 Or в хроническом токсикологическом эксперименте продолжительностью 6 месяцев. Крысы были разбиты на 2 группы: контрольная группа - животные получали общевиварный рацион, опытная группа, животные на фоне общевиварного рациона вместе с кормом получали исследуемый препарат в дозе 0,25 мл на кг массы крысы. Компетентность клеточного иммунитета оценивали по индуцированной фитогемаглютинином (ФГА) и специфическим антигеном, приготовленным из исследуемого препарата, реакции стимуляции лимфоцитов периферической крови, поSUBSTITUTE SHEET (RULE 26) lymphocytes. The drug induces the transformation of B-lymphocytes into AOK in the spleen, the stimulation index (IS) is 1.4, and in the control group, IS was 0.9. The kinetics of B-lymphocytes was determined in an experiment on 60 CBA mice. The content of EAC-rosette-forming cells in the blood of mice of the control group did not significantly differ from the experimental group during the entire study period and amounted to 19.4 ± 2.6 - 20.9 ± l, 4.B dynamics of the relative number of B-lymphocytes after administration at a dose of 0.25 ml / kg, a significant increase in EAC-POK was observed on the 10th and 15th days of the study, while in the 2nd group of animals (dose of 0.5 ml / kg) on the 5th , 10th, 15th days of observations, the content of EAC-POK was 23, 6 ± 1.18 - 22.6 ± 1.13. The data obtained allow us to conclude that the studied drug at a dose of 0.5 ml / kg, administered orally, within 5 days increases the cellular immune response. The determination of hemagglutinin titers in the blood serum of animals after drug administration was carried out on 30 CBA mice (2 experimental groups, 1 control group). On the 7th day after immunization, all animals were slaughtered and titers of total antibodies and antibodies of classes M and O were determined. The content of immunoglobulins M and O in the experimental groups was higher than in the control. Immunological studies in rats The determination of the body's immune status was assessed by the competence of the cellular and humoral immune responses in male WISTAR rats with an initial mass of 125-13 Or in a chronic toxicological experiment lasting 6 months. Rats were divided into 2 groups: the control group — the animals received a general brew diet, the experimental group, and the animals received a study drug at a dose of 0.25 ml per kg of rat weight along with a general diet. The competence of cellular immunity was assessed by phytohemaglutinin (PHA) induced and specific antigen prepared from the studied drug, peripheral blood lymphocyte stimulation reaction, by
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) выраженности реакции торможения лейкоцитов в присутствии ФГА и специфических антигенов и по степени Т-зависимой клеточной цитотоксичности. Митогенный ответ периферических лимфоцитов крыс на ФГА и специфический антиген (CA) оценивали по процентному содержанию трансформированных клеток. В результате изучения влияния препарата на митогенную стимуляцию периферических лимфоцитов крыс было установлено, что он способен повышать пролиферативную активность Т-клеток. Величина индекса цитотоксичности крыс опытной группы через 3 месяца составила 0,35±0,02, через 6 месяцев 0,32±0,03, а в контрольной группе соответственно 0,28±0,04 и 0,24±0,01. Полученные данные указывают на иммуностимулирующую роль исследуемого препарата по отношению к тимусзависимым лимфоцитам.Компетентность гуморального иммунитета оценивали по содержанию в сыворотке крови крыс иммуноглобулинов основных классов. Исследования содержания иммуноглобулинов сыворотки крови крыс при включении в их рацион препарата позволили установить общую направленность к стимуляции гуморального звена иммуногенеза. Через 3 месяца концентрация иммуноглобулинов класса О, A, M, E составила в контроле 743±37,2;138±6,8;8±3,9;0,45±0,01; в опытной группе 861±43,05; 132±6,6; 87±4,5; 0,42±0,03 соответственно. Через 6 месяцев после начала эксперимента в контроле - 723±36,14; 131±6,5; 80±3,5; 0,45±0,01; в опытной группе -83б±41,8; 136±6,8; 86±4,3; 0,46±0,02 соответственно по классам иммуноглобулинов.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) the severity of the leukocyte inhibition reaction in the presence of PHA and specific antigens and the degree of T-dependent cell cytotoxicity. The mitogenic response of rat peripheral lymphocytes to PHA and specific antigen (CA) was evaluated by the percentage of transformed cells. As a result of studying the effect of the drug on mitogenic stimulation of peripheral lymphocytes in rats, it was found that it is able to increase the proliferative activity of T cells. The value of the cytotoxicity index of rats in the experimental group after 3 months was 0.35 ± 0.02, after 6 months 0.32 ± 0.03, and in the control group, 0.28 ± 0.04 and 0.24 ± 0.01, respectively. The data obtained indicate the immunostimulating role of the studied drug in relation to thymus-dependent lymphocytes. The competence of humoral immunity was evaluated by the content of major classes of immunoglobulins in rat blood serum. Studies of the content of rat serum immunoglobulins when the drug is included in their diet allowed us to establish a general orientation towards the stimulation of the humoral immunogenesis link. After 3 months, the concentration of class O, A, M, E immunoglobulins in the control was 743 ± 37.2; 138 ± 6.8; 8 ± 3.9; 0.45 ± 0.01; in the experimental group 861 ± 43.05; 132 ± 6.6; 87 ± 4.5; 0.42 ± 0.03, respectively. 6 months after the start of the experiment in the control - 723 ± 36.14; 131 ± 6.5; 80 ± 3.5; 0.45 ± 0.01; in the experimental group -83b ± 41.8; 136 ± 6.8; 86 ± 4.3; 0.46 ± 0.02, respectively, according to the classes of immunoglobulins.
Состояние неспецифических защитных показателей изучали по содержанию в сыворотке крови некоторых компонентов комплемента и по уровню отдельных сывороточных белков «ocтpoй фaзы» воспаления. Содержание компонентов комплемента СЗ, C4, C5, C9 в контроле составилоThe state of non-specific protective parameters was studied by the content of some complement components in the blood serum and by the level of individual serum proteins of the “acute phase” of inflammation. The content of complement components C3, C4, C5, C9 in the control was
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) 551+27,5; 239+12,0; 107+5,35: 38±1,9; в опытной группе 567±28,35; 269+43,45; 116+5,8; 46±2,3 соответственно.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) 551 + 27.5; 239 + 12.0; 107 + 5.35: 38 ± 1.9; in the experimental group 567 ± 28.35; 269 + 43.45; 116 + 5.8; 46 ± 2.3, respectively.
В результате проведенных экспериментов выявлено модулирующее влияние исследуемого препарата на клеточные иммунные реакции (повышение пролиферативного ответа периферических лимфоцитов на митогены (ФГА), усиление интенсивности цитотоксичности). Отмечается стимулирующее влияние на синтез иммуноглобулинов (lΛ0 и 1ЛM), компонентов комплемента (C4 и C9), белков «ocтpoй фазы воспаления)) (трансферин, С-реактивный белок).As a result of the experiments, the modulating effect of the studied drug on cellular immune responses (increased proliferative response of peripheral lymphocytes to mitogens (PHA), increased cytotoxicity intensity) was revealed. A stimulating effect on the synthesis of immunoglobulins (l Λ 0 and 1 L M), complement components (C4 and C9), proteins of the “acute phase of inflammation”) (transferrin, C-reactive protein) is noted.
В ходе исследований было выявлено, что исследуемый препарат не обладает иммунотоксическим действием по отношению к функциональной активности T- и В- клеток.In the course of studies, it was found that the studied drug does not have an immunotoxic effect with respect to the functional activity of T and B cells.
Промышленная применимостьIndustrial applicability
Препарат использовался в птицеводческих хозяйствах для оптимизации обмена веществ, активизации иммунитета и повышения продуктивности. При выпойке препарата с водой птице наблюдали интенсивное наращивание массы цыплят-бройлеров, повышение сохранности поголовья цыплят. Препарат активизирует специфический антителогенез против болезни Ньюкасла у птиц, не выявлено побочного действия на клиническое состояние цыплят-бройлеров. Белковый показатель качества мяса повышается на 3,7%. Таким образом использование иммуномодулирующего препарата способствует улучшению зоотехнических показателей выращивания птицы.The drug was used in poultry farms to optimize metabolism, enhance immunity and increase productivity. When the drug was drunk with water, the bird observed an intensive increase in the mass of broiler chickens and an increase in the safety of the number of chickens. The drug activates a specific antibody against genesis of Newcastle disease in birds; no adverse effects on the clinical condition of broiler chickens have been identified. The protein indicator of meat quality is increased by 3.7%. Thus, the use of an immunomodulatory drug improves the zootechnical indices of poultry rearing.
Проведенные производственные испытания исследуемого препарата в животноводческих хозяйствах показали его высокую эффективность как лечебно-профилактического средства при диспепсиях новорожденных телят, диареях неинфекционной этиологии, бронхопневмониях.The production tests of the studied drug in livestock farms showed its high effectiveness as a therapeutic and prophylactic agent for dyspepsia of newborn calves, diarrhea of non-infectious etiology, bronchopneumonia.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) Выпаивание новорожденным телятам раствора препарата в течение 3-10 дней в дозе 0,17 - 0,25 мл/кг способствовало снижению количества заболевших телят в 1,6-4,5 раза и продолжительности болезни в 2-4 раза. Прирост живой массы в опытных группах превосходил контрольных животных на 3,2-6,2 кг в 30-дневном возрасте, в 60-дневном возрасте на 4,4-8,1 кг. Выпаивание препарата в дозе 1 мл в сутки новорожденным телятам является эффективным средством против диареи животных. Сохранность поголовья в опытных группах достигала 90-100%.SUBSTITUTE SHEET (RULE 26) Drinking newborn calves with a solution of the drug for 3-10 days at a dose of 0.17 - 0.25 ml / kg helped to reduce the number of sick calves by 1.6-4.5 times and the duration of the disease by 2-4 times. The increase in live weight in the experimental groups exceeded the control animals by 3.2–6.2 kg at 30 days of age, and at 60 days of age by 4.4–8.1 kg. Drinking the drug at a dose of 1 ml per day to newborn calves is an effective remedy for animal diarrhea. The safety of the livestock in the experimental groups reached 90-100%.
Таким образом, описываемый иммуномодулятор не является токсичным, оказывает лечебно-профилактический эффект на живой организм, может эффективно применяться в животноводстве и ветеринарии для воздействия на иммунитет животных, увеличение привесов и повышение сохранности поголовья животных.Thus, the described immunomodulator is not toxic, has a therapeutic and prophylactic effect on a living organism, and can be effectively used in animal husbandry and veterinary medicine to affect the immunity of animals, increase weight gain and increase the safety of livestock.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) SUBSTITUTE SHEET (RULE 26)

Claims

Формула изобретения Claim
1. Штамм гриба Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984, используемый для получения средства, обладающего иммуномодулирующими свойствами.1. The strain of the fungus Repicillium verrusosum VKPM F-984, used to obtain funds with immunomodulatory properties.
2. Средство, обладающее иммуномодулирующими свойствами, характеризующееся тем, что оно получено на основе штамма гриба Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ F-984.2. A tool with immunomodulatory properties, characterized in that it is obtained on the basis of a strain of the fungus Repicillium verrusosum VKPM F-984.
3. Средство по П.2, отличающееся тем, что оно представляет собой водноспиртовой экстракт мицелия штамма гриба Репiсillium vеrruсоsum ВКПМ3. The tool according to claim 2, characterized in that it is a hydroalcoholic extract of the mycelium of the strain of the fungus Repisillium verrusosum VKPM
F-984.F-984.
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26) SUBSTITUTE SHEET (RULE 26)
PCT/RU2008/000749 2008-06-25 2008-12-05 Strain of a реniсilliuм vеrruсоsuм fungus for producing agent exhibiting immunomodulating properties and an immunomodulator agent based thereon WO2009157802A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008125408/13A RU2373276C1 (en) 2008-06-25 2008-06-25 Penicillium verrucosum fungal strain, used for making agent with immunomodulating properties, and immunomodulator agent based on said strain
RU2008125408 2008-06-25

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009157802A1 true WO2009157802A1 (en) 2009-12-30

Family

ID=41444727

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000749 WO2009157802A1 (en) 2008-06-25 2008-12-05 Strain of a реniсilliuм vеrruсоsuм fungus for producing agent exhibiting immunomodulating properties and an immunomodulator agent based thereon

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2373276C1 (en)
WO (1) WO2009157802A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2769617C1 (en) * 2021-05-31 2022-04-04 федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБНУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") Medicinal composition and method for the prevention of diarrhea in newborn calves

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2101020C1 (en) * 1994-11-04 1998-01-10 Богородский Сергей Эдуардович Preparation showing immunostimulating effect
RU2192873C1 (en) * 2001-05-08 2002-11-20 Герасименя Валерий Павлович Preparation influencing on tissue metabolism and use of fungus strain pleurotus 1137 for its preparing
JP2005035948A (en) * 2003-07-17 2005-02-10 Mercian Corp New physiologically active substance
RU2289957C1 (en) * 2005-12-23 2006-12-27 ООО "Гелла-Фарма" Method for production of biologically active product of hepatoprotective action
RU2322490C1 (en) * 2006-06-13 2008-04-20 Любовь Васильевна Маслиенко Penicillium vermiculatum dang. vizr-23 fungus strain for preparing preparation against phytopathogenic fungi

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2101020C1 (en) * 1994-11-04 1998-01-10 Богородский Сергей Эдуардович Preparation showing immunostimulating effect
RU2192873C1 (en) * 2001-05-08 2002-11-20 Герасименя Валерий Павлович Preparation influencing on tissue metabolism and use of fungus strain pleurotus 1137 for its preparing
JP2005035948A (en) * 2003-07-17 2005-02-10 Mercian Corp New physiologically active substance
RU2289957C1 (en) * 2005-12-23 2006-12-27 ООО "Гелла-Фарма" Method for production of biologically active product of hepatoprotective action
RU2322490C1 (en) * 2006-06-13 2008-04-20 Любовь Васильевна Маслиенко Penicillium vermiculatum dang. vizr-23 fungus strain for preparing preparation against phytopathogenic fungi

Also Published As

Publication number Publication date
RU2373276C1 (en) 2009-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2004276123B2 (en) Fermentation and culture method, fermented plant extract, fermented plant extract powder and composition containing the fermented plant extract
CN107047934A (en) Using bacillus subtilis strain to strengthen the method for animal health
AU2005297361A1 (en) Process for producing natural immunobiotic extract and uses thereof
CN101801212B (en) Use of cordyceps species or extract thereof in the egg production
Kryukov et al. The Derivative Of Prussian Blue Paint‒Khzh-90 Cesium Isotopes’ Sorbent At Mycotoxicoses
CN110742185A (en) Stevia-containing feed and use thereof
RU2040932C1 (en) Preparation influencing tissular metabolism and application of fusarium sambucinum fuckel var ossicolum (berkiet curf) bilai fungus strain to produce the preparation
Abdo et al. Microalgae biomass application in commercial broilers nutrition and their efficacy against challenge with epidemic Newcastle disease virus in Egypt
CN116875513B (en) Pediococcus acidilactici and application thereof in regulating lipid metabolism and protecting liver
RU2373276C1 (en) Penicillium verrucosum fungal strain, used for making agent with immunomodulating properties, and immunomodulator agent based on said strain
SU674653A3 (en) Feed for animals
CN108546653B (en) Novel lactobacillus fermentum and application thereof in feed field and sewage treatment field
RU2414227C1 (en) Immunomodulator for broiler culture and method for applying thereof
RU2038086C1 (en) Method for extracting biologically active product from wax moth larvae
Vakhidova et al. FUNGI OF THE GENUS PAECILOMYCES AND THEIR ROLE IN DEVELOPMENT ECHINOCOCCOSIS
WO2004014146A1 (en) The use of fermented wheat-germ in the feeding and veterinary practice
JP2621100B2 (en) Mutant strain YZH of Pseudomonas and method for producing 851 YZH nutrient solution by applying this strain
RU2538116C2 (en) Acellular probiotic based biologically active complex, fodder composition containing such complex, method for farm animals and poultry feeding
CN112625126A (en) anti-Hafnia alvei yolk antibody and preparation method and application thereof
JPH0799858A (en) Immunostimulated bred fish and method for simulating immunity of bred fish
WO2019192182A1 (en) Application of schizochytrium limacinum and preparation thereof in improvement of quality and yield of animal product
RU2563816C1 (en) Method for producing immune stimulant
RU2483567C1 (en) Fodder biologically active additive for young pigs
KR20050123002A (en) A fish-feed to containing an extract siberian-ginseng
CN111760032B (en) Composition for preventing and treating drug-resistant coccidiosis of chicken and preparation method and application thereof

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08874827

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 08874827

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1