Cycloalkoxy-substituierte 4-Phenyl-3,5-dicvanopyridine und ihre Verwendune
Die vorliegende Anmeldung betrifft neue, Cycloalkoxy-substituierte 4-Phenyl-3,5-dicyanopyridin- Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung zur Behandlung und/oder Prävention von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/ oder Prävention von Krankheiten, vorzugsweise zur Behandlung und/oder Prävention von kardiovaskulären und Stoffwechsel-Erkrankungen.
Adenosin, ein Purin-Nukleosid, ist in allen Zellen vorhanden und wird unter einer Vielzahl von physiologischen und pathophysiologischen Stimuli freigesetzt. Adenosin entsteht intrazellulär beim Abbau von Adenosin-5'-monophosphat (AMP) und S-Adenosylhomocystein als Zwischen- produkt, kann jedoch aus der Zelle freigesetzt werden und übt dann durch Bindung an spezifische Rezeptoren Funktionen als hormonähnliche Substanz oder Neurotransmitter aus.
Unter normoxischen Bedingungen ist die Konzentration des freien Adenosin im Extrazellulärraum sehr niedrig. Die extrazelluläre Konzentration von Adenosin erhöht sich in den betroffenen Organen jedoch dramatisch unter ischämischen bzw. hypoxischen Bedingungen. So ist beispiels- weise bekannt, dass Adenosin die Thrombozyten- Aggregation hemmt und die Durchblutung der Herzkranzgefäße steigert. Weiterhin wirkt es auf den Blutdruck, die Herzfrequenz, auf die Ausschüttung von Neurotransmittern und auf die Lymphozyten-Differenzierung. In Adipozyten ist Adenosin in der Lage, die Lipolyse zu hemmen und somit die Konzentration an freien Fettsäuren und Triglyzeriden im Blut zu senken.
Diese Wirkungen von Adenosin zielen darauf ab, das Sauerstoffangebot der betroffenen Organe zu erhöhen bzw. den Stoffwechsel dieser Organe zu drosseln, um damit unter ischämischen oder hypoxischen Bedingungen eine Anpassung des Organstoffwechsels an die Organdurchblutung zu erreichen.
Die Wirkung von Adenosin wird über spezifische Rezeptoren vermittelt. Bekannt sind bisher die Subtypen Al, A2a, A2b und A3. Als "Adenosinrezeptor-selektive Liganden" werden erfindungsgemäß solche Substanzen bezeichnet, die selektiv an einen oder mehrere Subtypen der Adenosin- rezeptoren binden und dabei entweder die Wirkung des Adenosin nachahmen (Adenosin- Agonisten) oder dessen Wirkung blockieren (Adenosin-Antagonisten) können.
Die Wirkungen dieser Adenosin-Rezeptoren werden intrazellulär durch den Botenstoff cAMP vermittelt. Im Falle der Bindung von Adenosin an die A2a- oder A2b-Rezeptoren kommt es über eine Aktivierung der membranständigen Adenylatzyklase zu einem Anstieg des intrazellulären
cAMP, während die Bindung des Adenosin an die Al- oder A3-Rezeptoren über eine Hemmung der Adenylatzyklase eine Abnahme des intrazellulären cAMP-Gehalts bewirkt.
Im Herz-Kreislaufsystem sind die Hauptwirkungen der Aktivierung von Adenosin-Rezeptoren: Bradykardie, negative Inotropie und Protektion des Herzens vor Ischämie ("preconditioning") über Al -Rezeptoren, Dilation der Gefäße über A2a- und A2b-Rezeptoren sowie Inhibition der Fibroblasten und Glattmuskelzellproliferation über A2b-Rezeptoren.
Im Falle von Al-Agonisten (Kopplung bevorzugt über Gj-Proteine) wird dabei eine Abnahme des intrazellulären cAMP-Gehaltes beobachtet (bevorzugt nach direkter Vorstimulation der Adenylatzyklase durch Forskolin). Entsprechend fuhren A2a- und A2b-Agonisten (Kopplung bevorzugt über Gs-Proteine) zu einer Zunahme und A2a- und A2b-Antagonisten zu einer Abnahme im cAMP-Gehalt der Zellen. Im Falle der A2-Rezeptoren ist eine direkte Vorstimulation der Adenylatzyklase durch Forskolin nicht hilfreich.
Die Aktivierung von AI-Rezeptoren durch spezifische Al-Agonisten führt beim Menschen zu einer frequenzabhängigen Senkung der Herzfrequenz, ohne einen Einfluss auf den Blutdruck zu haben. Selektive Al-Agonisten könnten somit unter anderem für die Behandlung von Angina pectoris und Vorhofflimmern geeignet sein.
Die Aktivierung von A2b-Rezeptoren durch Adenosin oder spezifische A2b-Agonisten führt über die Erweiterung von Gefäßen zu einer Blutdrucksenkung. Die Blutdrucksenkung ist von einem reflektorischen Herzfrequenzanstieg begleitet. Der Herzfrequenzanstieg kann durch die Aktivie- rung von AI-Rezeptoren durch spezifische Al-Agonisten reduziert werden.
Die kombinierte Wirkung von selektiven Al/A2b-Agonisten auf das Gefäßsystem und die Herzfrequenz resultiert somit in einer systemischen Blutdrucksenkung ohne relevanten Herzfrequenzanstieg. Mit einem solchen pharmakologischen Profil könnten duale Al/A2b-Agonisten zur Behandlung z.B. der Hypertonie beim Menschen eingesetzt werden.
In Adipozyten bewirkt die Aktivierung von Al- und A2b-Rezeptoren eine Inhibition der Lipolyse. Die selektive bzw. kombinierte Wirkung von Al- und Al/A2b-Agonisten auf den Lipidstoff- wechsel führt somit zu einer Senkung von freien Fettsäuren und Triglyzeriden. Eine Senkung der Lipide wiederum führt bei Patienten mit Metabolischem Syndrom und bei Diabetikern zur Verringerung der Insulinresistenz und zur Verbesserung der Symptomatik.
Die zuvor genannte Rezeptor-Selektivität lässt sich bestimmen durch die Wirkung der Substanzen an Zelllinien, die nach stabiler Transfektion mit der entsprechenden cDNA die jeweiligen Rezeptorsubtypen exprimieren [siehe hierzu die Druckschrift M. E. Olah, H. Ren, J. Ostrowski, K.
A. Jacobson, G. L. Stiles, "Cloning, expression, and characterization of the unique bovine Al adenosine receptor. Studies on the ligand binding site by site-directed mutagenesis", J. Biol. Chem. 267 (1992), Seiten 10764-10770, deren Offenbarung hiermit im vollen Umfang durch Bezugnahme eingeschlossen ist].
Die Wirkung der Substanzen an solchen Zelllinien lässt sich erfassen durch biochemische Messung des intrazellulären Botenstoffes cAMP [siehe hierzu die Druckschrift K. N. Klotz, J. Hess- ling, J. Hegler, C. Owman, B. KuIl, B. B. Fredhohn, M. J. Lohse, "Comparative pharmacology of human adenosine receptor Subtypes - characterization of stably transfected receptors in CHO cells", Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 357 (1998), Seiten 1-9, deren Offenbarung hier- mit im vollen Umfang durch Bezugnahme eingeschlossen ist].
Bei den aus der Literatur bekannten, als "Adenosinrezeptor-spezifisch" geltenden Liganden handelt es sich überwiegend um Derivate auf Basis des natürlichen Adenosins [S. -A. Poulsen und R. J. Quinn, "Adenosine receptors: New opportunities for future drugs", Bioorganic and Medicinal Chemistry 6 (1998), Seiten 619-641]. Adenosin-Liganden dieses Strukturtyps haben jedoch in der Regel den Nachteil, dass sie nicht wirklich rezeptorspezifisch wirken, schwächer wirksam sind als das natürliche Adenosin oder nach oraler Applikation nur sehr schwach wirksam sind. Deshalb werden sie überwiegend nur für experimentelle Zwecke verwendet.
In WO 01/25210, WO 02/070484, WO 02/070485 und WO 02/079195 werden verschiedenartig substituierte 2-Thio- bzw. 2-Oxy-3,5-dicyano-4-phenyl-6-aminopyridine als Adenosinrezeptor- Liganden für die Behandlung von Erkrankungen offenbart. In WO 03/053441 werden spezifisch substituierte 2-Thio-3,5-dicyano-4-phenyl-6-aminopyridine als selektive Liganden des Adenosin- Al -Rezeptors beschrieben, und in WO 2006/027142 werden substituierte Phenylaminothiazol- Derivate als duale Adenosin-Al/A2b-Agonisten für die Behandlung der Hypertonie und anderer kardiovaskulärer Erkrankungen beansprucht. Allerdings zeigte es sich, dass diese Verbindungen zum Teil bezüglich ihrer physikochemischen Eigenschaften, wie beispielsweise ihrer Löslichkeit und/oder Formulierbarkeit, oder hinsichtlich ihrer in vivo-Eigenschaften, wie beispielsweise ihrem pharmakokinetischen Verhalten, ihrer Dosis-Wirkungsbeziehung und/oder ihrer Metabolisierung, Nachteile aufweisen.
Weiterhin werden in WO 01/62233 verschiedene Pyridin- und Pyrimidin-Derivate sowie deren Verwendung als Adenosinrezeptor-Modulatoren offenbart. Substituierte 3,5-Dicyanopyridine als Calcium-abhängige Kaliumkanalöffher zur Behandlung urologischer Erkrankungen werden in EP 1 302 463-A1 beansprucht. Die Verwendung von 2-Amino-4-aryl-5-cyanopyridinen als Androgen- rezeptor-Modulatoren wird in US 2005/0182105-Al beschrieben. Ferner werden in WO 98/06697
Verbindungen mit einer 4-Phenoxypiperidin-Partialstruktur als Muskarin-Antagonisten zur Behandlung kognitiver Erkrankungen offenbart.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer Verbindungen, die als selektive Agonisten des Adenosin Al- und/oder A2b-Rezeptors wirken, als solche zur Behandlung und/oder Prävention insbesondere von kardiovaskulären Erkrankungen wie Hypertonie, Angina pectoris, Myokardinfarkt, Herzinsuffizienz und Vorhofflimmern, des Metabolischen Syndroms, von Diabetes und Dyslipidämien sowie zur Organprotektion bei Transplantationen und operativen Eingriffen geeignet sind und darüber hinaus ein verbessertes Eigenschaftsprofil gegenüber den aus dem Stand der Technik bekannten Verbindungen aufweisen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I)
in welcher
A für CH2, CH2CH2, O, N-R7, S, S(=O) oder S(O)2 steht, worin
R7 Wasserstoff, (Ci-C4)-Alkyl, (CrC4)-Acyl oder (Ci-C4)-Alkylsulfonyl bedeutet,
wobei die genannten Alkyl-, Acyl- und Alkylsulfonyl-Gruppen ihrerseits mit
Hydroxy, Amino oder Carboxyl substituiert sein können,
Z für O oder S steht,
R1 für Wasserstoff steht,
R2 für Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Mono-(Ci-C4)-alkylamino oder Di-(Ci-C4)-alkylamino steht
oder
R1 und R2 zusammen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, eine Carbonyl-Gruppe bilden,
R3 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, (CrC4)-Alkyl oder (CrC4)-Alkoxy steht,
wobei die genannten Alkyl- und Alkoxy-Gruppen bis zu dreifach mit Fluor substituiert sein können,
R4 für eine Gruppe der Formel -OR8 oder -NR9R10 steht, worin
R8 (Ci-Ce)-AIlCyI, das ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit Hydroxy, (Q- C4)-Alkoxy, Carboxyl und/oder (Ci-C4)-Alkoxycarbonyl oder bis zu dreifach mit Fluor substituiert sein kann, oder (C4-Ce)-CyClOaIlCyI bedeutet,
und
R9 und R10 gleich oder verschieden sind und unabhängig voneinander Wasserstoff oder
(Ci-C6)-Alkyl, das bis zu dreifach mit Fluor oder ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit Hydroxy, (CrC4)-Alkoxy, Amino, Mono-(Ci-C4)-alkylamino, Di-
(Ci-C4)-alkylamino, Carboxyl, (Ci-C4)-Alkoxycarbonyl und/oder einem 4- bis 7- gliedrigen Heterocyclus substituiert sein kann, bedeuten,
wobei der genannte Heterocyclus ein oder zwei Ring-Heteroatome aus der Reihe N, O und/oder S enthält und seinerseits ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit (Ci-C4)-Alkyl, Hydroxy, Oxo und/oder (Ci-C4)-Alkoxy substituiert sein kann,
oder
R9 und R10 zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 4- bis 7- gliedrigen Heterocyclus bilden, der ein weiteres Ring-Heteroatom aus der Reihe N, O oder S enthalten und ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit Fluor, (Ci- C4)-Alkyl, Hydroxy, Oxo, (Ci-C4)-Alkoxy, Amino, Mono-(CrC4)-alkylamino, Di- (Ci-C4)-alkylamino, Azetidino, Pyrrolidino, Piperidino und/oder Morpholino substituiert sein kann,
R5 für Wasserstoff oder (CrC4)-Alkyl steht
und
R6 für (Ci-C4)-Alkyl, das mit Hydroxy, (Ci-C4)-Alkoxy oder bis zu dreifach mit Fluor substituiert sein kann, steht
oder
für (C6-Cio)-Aryl oder 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl mit bis zu drei Ring-Heteroatomen aus der Reihe N, O und/oder S steht, welche jeweils
(0 ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Halogen, Nitro, Cyano, (Ci-C
6)-Alkyl, Trifluormethyl, Hydroxy, (Ci-C
6)-Alkoxy, Amino, Mono-(Ci-C
6)-alkylamino, Di-(C i-C
6)-alkylamino,
(Cp C
6)-Alkylsulfonylamino, Carboxyl, (Ci-C
6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Mono- (Ci-C
6)-alkylaminocarbonyl, Di-(Ci-C
6)-alkylaminocarbonyl, Aminosulfonyl, Mono-
(Ci-C6)-alkylaminosulfonyl und Di-(C 1-C6)-alkylaminosulfonyl
und/oder
(U) mit Pyrrolidino, Piperidino, Moφholino, Piperazino, N'-(Ci-C4)-Alkylpiperazino, Tetrazolyl oder einer Gruppe der Formel -L-R11, worin
L eine Bindung, NH oder O bedeutet
und
R1 ' Phenyl oder 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit bis zu drei Ring-Heteroatomen aus der Reihe N, O und/oder S bedeutet, welche jeweils ein- bis dreifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Halogen, Nitro, Cyano, (C,-C6)-Alkyl, Trifluormethyl, Hydroxy, (CrC6)-Alkoxy, Difluormeth- oxy, Trifluormethoxy, Amino, Mono-(Ci-C6)-alkylamino, Di-(C i-C6)-alkyl- amino, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl und Carboxyl substituiert sein können,
substituiert sein können,
sowie ihre N-Oxide, Salze, Solvate, Salze der N-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.
Erfϊndungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate
der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der er- findungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säure- additionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" umfaßt Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
(Q-Q)-Alkyl und (Q-Q)-Alkyl stehen im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methyl, Ethyl, π-Propyl, Isopropyl, «-Butyl, isσ-Butyl, sec. -Butyl, terf. -Butyl, 1-Ethyl- propyl, n-Pentyl und /j-Hexyl.
(C_-Q)-Cvcloalkyl steht im Rahmen der Erfindung für eine monocyclische, gesättigte Cycloalkyl- gruppe mit 4 bis 6 Ring-Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Cyclo- butyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
(C1-Q)-AIkOXV und (C1-Q)-AIkOXy stehen im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxyrest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkoxyrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methoxy, Ethoxy, «-Propoxy, Isopropoxy, /i-Butoxy, tert.-Butoxy, w-Pentoxy und «-Hexoxy.
(Q-Q)-Alkoxycarbonyl und (Q-Q)-Alkoxycarbonyl stehen im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxyrest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, der über eine Carbonylgruppe verknüpft ist. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkoxy- carbonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkoxy-Gruppe. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n-Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, w-But- oxycarbonyl und tert.-Butoxycarbonyl.
(Q-Q)-Acyl und (Q-Q)-Acyl [(C]-C6)-Alkanoyl und (Ci-C4)-Alkanoyl] stehen im Rahmen der Erfindung für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, der in der 1 -Position ein doppelt gebundenes Sauerstoffatom trägt und über die 1 -Position verknüpft ist. Bevorzugt ist ein Acylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugs- weise seien genannt: Formyl, Acetyl, Propionyl, «-Butyryl, wo-Butyryl, «-Pentanoyl, Pivaloyl und «-Hexanoyl.
(CVCfiVAcylamino steht im Rahmen der Erfindung für eine Amino-Gruppe mit einem geradket- tigen oder verzweigten Acyl-Substituenten, der 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist und über die Carbonylgruppe mit dem N-Atom verknüpft ist. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Foπnylamino, Acetylamino, Propionylamino, /j-Butyrylamino, /so-Butyrylamino und Pivaloyl- amino.
(CrCft)-Alkylsulfonyl und (Cj-CaVAlkylsulfonyl stehen im Rahmen der Erfindung für einen gerad- kettigen oder verzweigten Alkylsulfonyl-Rest mit 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Alkylsulfonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl, n-Propylsulfonyl, Iso- propylsulfonyl, n-Butylsulfonyl und tert.-Butylsulfonyl.
(Cx-C^-Alkylsulfonylamino steht im Rahmen der Erfindung für eine Amino-Gruppe mit einem geradkettigen oder verzweigten Alkylsulfonyl-Substituenten, der 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist und über die Sulfonylgruppe mit dem N-Atom verknüpft ist. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methylsulfonylamino, Ethylsulfonylamino, /j-Propylsulfonylamino, Isopropylsulfo- nylamino, π-Butylsulfonylamino und tert.-Butylsulfonylamino.
stehen im Rahmen der Erfindung für eine Amino-Gruppe mit einem geradkettigen oder verzweigten Alkylsubstituenten, der 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatome aufweist. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Monoalkyl- amino-Rest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methyl- amino, Ethylamino, /j-Propylamino, Isopropylamino, «-Butylamino, teλt.-Butylamino, n-Pentyl- amino und n-Hexylamino.
Di-(CVCV)-alkylamino und Di-CCVCVl-alkylamino stehen im Rahmen der Erfindung für eine Amino-Gruppe mit zwei gleichen oder verschiedenen geradkettigen oder verzweigten Alkylsubstituenten, die jeweils 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatome aufweisen. Bevorzugt ist ein geradkettiger oder verzweigter Dialkylamino-Rest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: N,N-Dimethylamino, NN-Diethylamino, N-Ethyl-N-methyl- amino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-Isopropyl-N-H-propylamino, NN-Diisopropylamino, N-n- Butyl-N-methylamino, N-ter/.-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino und N-H-Hexyl-N- methylamino.
stehen im Rahmen der Erfindung für eine Amino-Gruppe, die über eine Carbonylgruppe verknüpft ist und die einen geradkettigen oder verzweigten bzw. zwei gleiche oder verschiedene geradkettige oder verzweigte Alkylsubstituenten mit jeweils 1 bis 6 bzw. 1 bis 4 Kohlenstoffatomen aufweist.
Bevorzugt ist ein Mono- bzw. Dialkylaminocarbonyl-Rest mit jeweils 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methylaminocarbonyl, Ethyl- aminocarbonyl, «-Propylaminocarbonyl, Isopropylaminocarbonyl, n-Butylaminocarbonyl, tert.- Butylaminocarbonyl, NN-Dimethylaminocarbonyl, NN-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methyl- aminocarbonyl, N-Methyl-N-λi-propylaminocarbonyl, N-n-Butyl-N-methylaminocarbonyl und N- tert.-Butyl-N-methylaminocarbonyl.
Mono- bzw. Di-((_V(_W)-alkylaminosulfonyl stehen im Rahmen der Erfindung für eine Amino- Gruppe, die über eine Sulfonylgruppe verknüpft ist und die einen geradkettigen oder verzweigten bzw. zwei gleiche oder verschiedene geradkettige oder verzweigte Alkylsubstituenten mit jeweils 1 bis 6 Kohlenstoffatomen aufweist. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt: Methylamino- sulfonyl, Ethylaminosulfonyl, «-Propylaminosulfonyl, Isopropylaminosulfonyl, n-Butylaminosul- fonyl, ter/.-Butylaminosulfonyl, N,N-Dimethylaminosulfonyl, N,N-Diethylaminosulfonyl, N-Ethyl- N-methylaminosulfonyl, N-Methyl-N-7i-propylaminosulfonyl, N-«-Butyl-N-methylaminosulfonyl undN-terf.-Butyl-N-methylaminosulfonyl.
(Cfi-CHi*)-Aryl steht im Rahmen der Erfindung für einen aromatischen Carbocyclus mit 6 oder 10 Ring-Kohlenstoffatomen. Bevorzugte Arylreste sind Phenyl und Νaphthyl.
Ein 4- bis 7-gliedriger Heterocyclus steht im Rahmen der Erfindung für einen gesättigten Hetero- cyclus mit insgesamt 4 bis 7 Ringatomen, der ein oder zwei Ring-Heteroatome aus der Reihe Ν, O und/oder S enthält und über ein Ring-Kohlenstoffatom oder gegebenenfalls ein Ring-Stickstoff- atom verknüpft ist. Bevorzugt ist ein 4- bis 6-gliedriger Heterocvclus mit ein oder zwei Ring- Heteroatomen aus der Reihe Ν und/oder O. Beispielhaft seien genannt: Azetidinyl, Oxetanyl, Pyrrolidinyl, Pyrazolidinyl, Tetrahydrofuranyl, Piperidinyl, Piperazinyl, Tetrahydropyranyl, Mor- pholinyl, Thiomorpholinyl, Hexahydroazepinyl und Hexahydro-l,4-diazepinyl. Bevorzugt sind Azetidinyl, Pyrrolidinyl, Tetrahydrofuranyl, Piperidinyl, Piperazinyl, Tetrahydropyranyl und Mor- pholinyl.
5- bis 10-gliedriges Heteroaryl steht im Rahmen der Erfindung für einen mono- oder gegebenenfalls bicyclischen aromatischen Heterocyclus (Heteroaromaten) mit insgesamt 5 bis 10 Ringatomen, der bis zu drei gleiche oder verschiedene Ring-Heteroatome aus der Reihe Ν, O und/oder S enthält und über ein Ring-Kohlenstoffatom oder gegebenenfalls über ein Ring-Stickstoffatom verknüpft ist. Beispielhaft seien genannt: Furyl, Pyrrolyl, Thienyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Thia- zolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Triazolyl, Oxadiazolyl, Thiadiazolyl, Pyridyl, Pyrimi- dinyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Triazinyl, Benzofuranyl, Benzothienyl, Benzimidazolyl, Benzoxa- zolyl, Benzothiazolyl, Benzotriazolyl, Indolyl, Indazolyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Νaphthyri- dinyl, Chinazolinyl, Chinoxalinyl, Phthalazinyl, Pyrazolo[3,4-b]pyridinyl. Bevorzugt sind mono-
cyclische 5- oder 6-gliedrige Heteroaryl-Reste mit bis zu zwei Ring-Heteroatomen aus der Reihe N, O und/oder S wie beispielsweise Furyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Isothiazolyl, Isoxazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl.
Halogen schließt im Rahmen der Erfindung Fluor, Chlor, Brom und Iod ein. Bevorzugt sind Chlor oder Fluor.
Eine Oxo-Gruppe steht im Rahmen der Erfindung für ein Sauerstoffatom, das über eine Doppelbindung an ein Kohlenstoffatom gebunden ist.
Wenn Reste in den erfindungsgemäßen Verbindungen substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach substituiert sein. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung gilt, dass für alle Reste, die mehrfach auftreten, deren Bedeutung unabhängig voneinander ist. Eine Substitution mit ein, zwei oder drei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem oder zwei gleichen oder verschiedenen Substituenten.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
A für CH2, CH2CH2, O oder NH steht,
Z für O oder S steht,
R1 für Wasserstoff steht,
R2 für Wasserstoff, Hydroxy oder Amino steht,
R3 für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Methyl oder Methoxy steht,
R4 für eine Gruppe der Formel -NR9R10 steht, worin
R9 Wasserstoff bedeutet,
R10 Wasserstoff oder (Q-GO-Alkyl, das ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit Hydroxy, (Ci-C4)-Alkoxy, Amino, Mono-(CrC4)-alkylamino und/oder Di-(Cr C4)-alkylamino substituiert sein kann, bedeutet
oder
R9 und R10 zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 4- bis 6- gliedrigen Heterocyclus bilden, der ein weiteres Ring-Heteroatom aus der Reihe N oder O enthalten und ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit (Ci-C4)-
Alkyl, Hydroxy, (Ci-C4)-Alkoxy, Amino, Mono-(Ci-C4)-alkylamino und/oder Di- (Ci-C4)-alkylamino substituiert sein kann,
R5 für Wasserstoff oder Methyl steht
und
R6 für Phenyl oder 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl mit bis zu zwei Ring-Heteroatomen aus der Reihe N, O und/oder S steht, welche jeweils
(/') ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Fluor, Chlor, Cyano, (Ci-C4)-Alkyl, Trifiuormethyl, (Ci-C4)-Alkoxy, Amino, Carboxyl, (Ci-C4)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl und Mono-(Ci-C4)-alkylamino- carbonyl
und/oder
(U) mit einer Gruppe der Formel -L-R1 ', worin
L eine Bindung oder NH bedeutet
und
R11 Phenyl oder Pyridyl bedeutet, welche jeweils ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Fluor, Chlor, Cyano, (CrC4)-Alkyl, Trifiuormethyl, (CrC4)-Alkoxy, Trifluormethoxy, (CrC4)- Alkoxycarbonyl und Carboxyl substituiert sein können,
substituiert sein können,
sowie ihre N-Oxide, Salze, Solvate, Salze der N-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.
Besonders bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
A für CH2 oder O steht,
Z für S steht,
R1 für Wasserstoff steht,
R2 für Wasserstoff oder Hydroxy steht,
R3 für Wasserstoff oder Fluor steht,
R4 für eine Gruppe der Formel -NR9R10 steht, worin
R9 Wasserstoff bedeutet,
R10 Wasserstoff oder (Ci-C4)-Alkyl, das ein- oder zweifach mit Hydroxy substituiert sein kann, bedeutet
oder
R9 und R10 zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Azetidino-, Pyrrolidino- oder Piperidino-Ring bilden, der jeweils mit Hydroxy substituiert sein kann,
R5 für Wasserstoff steht
und
R6 für Phenyl, Pyridyl, Oxazolyl oder Thiazolyl steht, welche jeweils
(z) ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Fluor, Chlor, Cyano, Methyl, Trifluormethyl, Amino, Carboxyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Aminocarbonyl und Methylaminocarbonyl
und/oder
(U) mit einer Gruppe der Formel -L-R1 ' , worin
L eine Bindung oder NH bedeutet
und
R11 Phenyl bedeutet, welches ein- oder zweifach, gleich oder verschieden, mit einem Rest ausgewählt aus der Reihe Fluor, Chlor, Methyl, Trifluormethyl, Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl und Carboxyl substituiert sein kann,
substituiert sein können,
sowie ihre N-Oxide, Salze, Solvate, Salze der N-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.
Besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugs- bereiche.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I), in welcher R4 für NH2 steht, dadurch gekennzeichnet, dass man
[A] eine Verbindung der Formel (H)
in welcher A, R , R , R und Z jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel (ID)
in welcher R5 und R6 die oben angegebenen Bedeutungen haben und
X für eine geeignete Abgangsgruppe, vorzugsweise für Halogen, insbesondere Chlor, Brom oder Iod, oder für Mesylat, Tosylat oder Triflat steht,
umsetzt
oder alternativ im Fall, dass Z für O steht,
[B] eine Verbindung der Formel (IV-A)
in welcher A, R , R und R jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer Base mit einer Verbindung der Formel (V)
in welcher R und R die oben angegebenen Bedeutungen haben,
umsetzt
und die resultierenden Verbindungen der Formel (I-A)
in welcher A, R1, R2, R3, R5, R6 und Z jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
gegebenenfalls nach dem Fachmann bekannten Methoden in ihre Enantiomere und/oder Diastereo- mere trennt und/oder gegebenenfalls mit den entsprechenden (J) Lösungsmitteln und/oder (Ji) Basen oder Säuren in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
Das zuvor beschriebene Verfahren kann durch das folgende Reaktionsschema beispielhaft erläutert werden:
Schema 1
Als Lösungsmittel für die Reaktion (H) + (JE) eignen sich alle organischen Lösungsmittel, die unter den Reaktionsbedingungen inert sind. Hierzu gehören Ketone wie Aceton und Methylethyl- keton, acyclische und cyclische Ether wie Diethylether, Methyl-tert.-butylether, 1 ,2-Dimethoxy- ethan, Tetrahydrofuran und Dioxan, Ester wie Essigsäureethylester oder Essigsäurebutylester, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan und Cyclohexan, chlorierte Kohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan und Chlorbenzol, oder andere Lösungsmittel wie Di- methylformamid (DMF), Dimethylsulfoxid (DMSO), N-Methylpyrrolidinon (NMP), Acetonitril oder Pyridin. Ebenso ist es möglich, Gemische der zuvor genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Dimethylformamid oder N-Methylpyrrolidinon verwendet.
AIs Basen für diese Umsetzung eignen sich die üblichen anorganischen oder organischen Basen. Hierzu gehören bevorzugt Alkalihydroxide wie beispielsweise Lithium-, Natrium- oder Kaliumhydroxid, Alkalicarbonate wie Lithium-, Natrium-, Kalium- oder Cäsiumcarbonat, Alkalihydrogen- carbonate wie Natrium- oder Kaliumhydrogencarbonat, Alkalialkoholate wie Natrium- oder Kaliummethanolat, Natrium- oder Kaliumethanolat oder Kalium-tert.-butylat, Amide wie Natrium- amid, Lithium-, Natrium- oder Kalium-bis-(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, metallorganische Verbindungen wie Butyllithium oder Phenyllithium, oder organische Amine wie Triethylamin, Diisopropylethylamin, Pyridin, l,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU) oder 1,5- Diazabicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN). Bevorzugt sind Alkalicarbonate und -hydrogencarbonate wie Kaliumcarbonat und Natriumhydrogencarbonat.
Die Base kann hierbei in einer Menge von 1 bis 10 Mol, bevorzugt von 1 bis 5 Mol, insbesondere von 1 bis 3 Mol, bezogen auf 1 Mol der Verbindung der Formel (II), eingesetzt werden.
Die Reaktion (II) + (HI) erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von -78°C bis +1500C, bevorzugt im Bereich von -200C bis +1200C, insbesondere bei 00C bis +800C (für Z = S) bzw. +200C bis +1000C (für Z = O). Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. im Bereich von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Als inerte Lösungsmittel für die Reaktion (IV-A) + (V) eignen sich insbesondere acyclische und cyclische Ether wie Diethylether, Methyl-tert.-butylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Tetrahydrofuran und Dioxan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan und Cyclohexan, oder dipolare Lösungsmittel wie Dimethylformamid (DMF), Dimethylsulfoxid (DMSO), N-Methylpyrrolidinon (ΝMP) und Pyridin. Ebenso ist es möglich, Gemische dieser Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird 1 ,2-Dimethoxyethan verwendet.
Als Basen für diese Umsetzung sind insbesondere Alkalialkoholate wie Natrium- oder Kalium- methanolat, Natrium- oder Kaliumethanolat oder Natrium- oder Kalium-tert.-butylat, Amide wie Natriumamid, Lithium-, Natrium- oder Kalium-bis-(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, oder metallorganische Verbindungen wie Butyllithium oder Phenyllithium geeignet. Bevorzugt wird Kalium-tert.-butylat verwendet.
Die Base wird hierbei in der Regel in einer Menge von 1 bis 1.25 Mol, bevorzugt in äquimolarer Menge, bezogen auf 1 Mol der Verbindung der Formel (V), eingesetzt.
Die Reaktion (FV-A) + (V) erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von -200C bis +1200C, bevorzugt bei +200C bis +1000C. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder er-
niedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. im Bereich von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I), in welcher R4 für die Gruppe -NR9R10 steht, worin mindestens einer der beiden Reste R9 und R10 nicht Wasserstoff bedeutet, können ausgehend von den Verbindungen der Formel (I-A) dadurch hergestellt werden, dass man diese zunächst in einem geeigneten Lösungsmittel mit Isoamylnitrit in Gegenwart von Kupfer(π)chlorid oder mit Natriumnitrit in Gegenwart von Salzsäure in Verbindungen der Formel (VI)
in welcher A, R1, R2, R3, R5, R6 und Z jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
überfuhrt und letztere dann mit einer Verbindung der Formel (VH)
H
R9A/N^R10A (vπ))
in welcher
R9A die oben angegebene Bedeutung von R9 hat,
R10A die oben angegebene Bedeutung von R10 hat,
jedoch mindestens einer der beiden Reste R9Λ und RI0A nicht für Wasserstoff steht,
zu Verbindungen der Formel (I-B)
in welcher A, R1, R2, R3, R5, R6, R9A, R10A und Z jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
umsetzt
und die Verbindungen der Formel (I-B) gegebenenfalls nach dem Fachmann bekannten Methoden in ihre Enantiomere und/oder Diastereomere trennt und/oder gegebenenfalls mit den entsprechenden (/) Lösungsmitteln und/oder (iι) Basen oder Säuren in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
Das zuvor beschriebene Verfahren kann durch das folgende Reaktionsschema erläutert werden:
Schema 2
Die Umsetzung (I- A) — > (VI) erfolgt im Allgemeinen in einem Molverhältnis von 2 bis 10 Mol Isoamylnitrit und 2 bis 10 Mol Kupfer(II)chlorid bezogen auf 1 Mol der Verbindung der Formel (I- A); alternativ kann die Umsetzung auch mit 2 bis 10 Mol-Äquivalenten Natriumnitrit in Salzsäure durchgeführt werden.
Als Lösungsmittel für die Isoamylnitrit/Kupfer(II)chlorid- Variante eignen sich alle organischen Lösungsmittel, die unter den Reaktionsbedingungen inert sind. Hierzu gehören acyclische und cyclische Ether wie Diethylether und Tetrahydrofuran, Ester wie Essigsäureethylester oder Essig- säurebutylester, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan und Cyclohexan, chlorierte Kohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, 1 ,2-Dichlorethan und Chlorbenzol, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Acetonitril oder Pyridin. Ebenso ist es möglich, Gemische der zuvor genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugte Lösungsmittel sind Acetonitril und Dimethylformamid.
Bei Verwendung von Natriumnitrit wird bevorzugt überschüssige Salzsäure als Lösungsmittel eingesetzt, gegebenenfalls in Kombination mit einem der oben genannten organischen Lösungsmittel.
Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von -78°C bis +1500C, bevorzugt im Bereich von -200C bis +1000C, insbesondere bei +00C bis +800C. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. im Bereich von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Die Umsetzung (VT) + (VIT) -» (I-B) erfolgt im Allgemeinen in einem Molverhältnis von 1 bis 8 Mol der Verbindung der Formel (VIT) bezogen auf 1 Mol der Verbindung der Formel (VI).
Als Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (VI) + (VIT) — » (I-B) eignen sich alle organischen Lösungsmittel, die unter den Reaktionsbedingungen inert sind. Hierzu gehören Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol und tert.-Butanol, Ketone wie Aceton und Methylethylketon, acyclische und cyclische Ether wie Diethylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Tetra- hydrofuran und Dioxan, Ester wie Essigsäureethylester oder Essigsäurebutylester, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan und Cyclohexan, chlorierte Kohlenwasserstoffe wie Di- chlormethan, 1 ,2-Dichlorethan und Chlorbenzol, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylform- amid, Acetonitril, Pyridin oder Dimethylsulfoxid. Wasser ist als Lösungsmittel ebenfalls geeignet. Ebenso ist es möglich, Gemische der zuvor genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugte Lösungsmittel sind Tetrahydrofuran und Dimethylformamid.
Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 00C bis +1800C, bevorzugt im Bereich von +200C bis +1500C, insbesondere bei +2O0C bis +1000C. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. im Bereich von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Auf analoge Weise können auch Verbindungen der Formel (IV-A) in die entsprechenden substituierten Verbindungen der Formel (IV-B)
in welcher A, R1, R2, R3, R9A und R10A jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
überfuhrt werden.
Die Verbindungen der Formel (II), worin Z für S steht, können in Analogie zu literaturbekannten Methoden dadurch hergestellt werden, dass man Aldehyde der Formel (VHI)
in welcher A, R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen haben,
in Gegenwart einer Base entweder mit zwei Äquivalenten 2-Cyanothioacetamid oder zunächst mit Malodinitril und dann mit 2-Cyanothioacetamid umsetzt [siehe Schema 3; vgl. z.B. Dyachenko et al., Russ. J. Chem. 33 (7), 1014-1017 (1997), 34 (4), 557-563 (1998); Dyachenko et al., Chemistry ofHeterocyclic Compounds 34 (2), 188-194 (1998); Qintela et al., Eur. J. Med. Chem. 33, 887-897 (1998); Kandeel et al., Z. Naturforsch. 42b, 107-111 (1987); Reddy et al., J. Med. Chem. 49, 607- 615 (2006); Evdokimov et al., Org. Lett. 8, 899-902 (2006)].
Schema 3
NMM,
NC' 'CN EtOH, 0-800C
Alternativ können Verbindungen der Formel (H), worin Z für S steht, auch ausgehend von Verbindungen der Formel (IV-A) durch Reaktion mit einem Alkalisulfid erhalten werden. Diese Herstel- lungsmethode wird durch das folgende Formelschema erläutert:
Schema 4
AIs Alkalisulfid wird vorzugsweise Natriumsulfid in einer Menge von 1 bis 10 Mol, bevorzugt von 1 bis 8 Mol, insbesondere von 1 bis 5 Mol, bezogen auf 1 Mol der Verbindung der Formel (IV-A), eingesetzt.
Als Lösungsmittel für diesen Verfahrensschritt eignen sich alle organischen Lösungsmittel, die unter den Reaktionsbedingungen inert sind. Hierzu gehören Alkohole wie Methanol, Ethanol, n- Propanol, Isopropanol, n-Butanol und tert.-Butanol, Ketone wie Aceton und Methylethylketon, acyclische und cyclische Ether wie Diethylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Tetrahydrofuran und Dioxan, Ester wie Essigsäureethylester oder Essigsäurebutylester, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan und Cyclohexan, chlorierte Kohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, 1 ,2-Di- chlorethan und Chlorbenzol, oder dipolare Lösungsmittel wie Acetonitril, Pyridin, Dimethylform- amid, Dimethylsulfoxid oder N-Methylpyrrolidinon. Wasser ist als Lösungsmittel ebenfalls geeignet. Ebenso ist es möglich, Gemische der zuvor genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugtes Lösungsmittel ist Dimethylformamid.
Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 00C bis +1800C, bevorzugt im Bereich von +200C bis +1200C, insbesondere bei +400C bis +1000C. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. im Bereich von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Auf analoge Weise sind ausgehend von Verbindungen der Formel (IV-B) die entsprechenden N- substituierten Verbindungen der Formel (IX)
in welcher A, R . 1 , D R2 , n R3 , D R?A „ un_d. T R5 IOA j ■eweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
erhältlich.
Verbindungen der Formel (II), worin Z für O steht, und N-substituierte Derivate hiervon können ausgehend von Verbindungen der Formel (IV-A) bzw. (IV-B) durch Erhitzen mit einem Alkalihydroxid erhalten werden. Diese Herstellungsmethode wird durch das folgende Reaktionsschema erläutert:
Schema 5
Als Alkalihydroxid wird vorzugsweise überschüssiges Natrium- oder Kaliumhydroxid eingesetzt. Als Lösungsmittel sind insbesondere Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n- Butanol und tert.-Butanol sowie deren Mischungen mit Wasser geeignet. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von +200C bis +1200C, bevorzugt bei +500C bis +1000C.
Die Verbindungen der Formel (IV-A) ihrerseits können ausgehend von Verbindungen der Formel (Vπi) in Analogie zu literaturbeschriebenen Verfahren hergestellt werden [vgl. z.B. Kambe et al., Synthesis, 531-533 (1981); Elnagdi et al., Z. Natuφrsch. 47b, 572-578 (1991); Reddy et al., J. Med. Chem. 49, 607-615 (2006); Evdokimov et al., Org. Lett. 8, 899-902 (2006)].
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I), in welcher R4 für die Gruppe -OR8 steht, sind beispielsweise ausgehend von Verbindungen der Formel (VI) in Analogie zur Umsetzung (VI) + (VIT) → (I-B) erhältlich [siehe Schema 6; vgl. z.B. D. Mabire et al., J. Med. Chem. 48, 2134- 2153 (2005)]:
Schema 6
Solche Verbindungen der Formel (I-C), worin Z für S steht, können auch in Analogie zu den zuvor beschriebenen Reaktionssequenzen ausgehend von Verbindungen der Formel (VJH) durch Um- Setzung mit Malodinitril und einem entsprechenden Alkoholat, nachfolgende N/S-Transformation und Alkylierung mit einer Verbindung der Formel (DI) hergestellt werden (siehe Schema 7; vgl. Z.B. US 2005/0182105-A1):
Schema 7
[M+ = Na+ oder K+].
In einem weiteren Alternatiwerfahren können die Verbindungen der Formel (I-C) auch durch Alkylierung von Verbindungen der Formel (X) erhalten werden (siehe Schema 8):
Schema 8
Die Verbindungen der Formel (X) ihrerseits sind nach literaturbekannten Methoden aus Verbin- düngen der Formel (VT) oder (I-A) zugänglich [vgl. z.B. G. Lavecchia et al., Tetrahedron Lett. 45, 6633-6636 (2004)].
Die Verbindungen der Formel (VIH) können in Analogie zu literaturbeschriebenen Verfahren beispielsweise über (A) die Ringöffnung von Epoxiden oder (B) eine Phenolether-Bildung unter Mit- sunobu-Bedingungen, jeweils ausgehend von 4-Hydroxybenzaldehyden der Formel (XI), herge- stellt werden [siehe Schema 9; vgl. z.B. R. Seemayer et al., Recl. Trav. Chim. Pays-Bas 110, 171 (1991); S. R. Adams et al., J. Am. Chem. Soc. JJO, 3212 (1988); S. Matsunaga et al., J. Am. Chem. Soc. 122, 2252 (2000); D. L. Hughes, Org. Prep. Proceed. Int. 28, 127 (1996)]:
Schema 9
So erhaltene Verbindungen der Formel (VIII-A) mit einem frα/w-ständigen ß-Hydroxysubstituen- ten in der Phenolether-Kopfgruppe lassen sich nach literaturbekannten Methoden in die entspre- chenden c/s-konfigurierten Verbindungen (VHI-C) überführen [siehe Schema 10; vgl. z.B. M. Takahashi et al., Tetrahedron Asymmetry 6, 1617 (1995)]:
Schema 10
Die Verbindungen der Formel (IQ) sind kommerziell erhältlich, literaturbekannt oder nach literaturbekannten Methoden herstellbar. So können beispielsweise durch Reaktion von Amiden, Thio- amiden bzw. Thioharnstoff-Derivaten mit einem 1,3-Dihalogenaceton substituierte Oxazol- und Thiazol-Derivate der Formel (EI-A), (DI-B) bzw. (IH-C) erhalten werden [siehe Schema 11; vgl. z.B. I. Simiti et al., Chem. Ber. 95, 2672-2679 (1962); I. Simiti, E. Chindris, Arch. Pharm. (Weinheim) 304, 425-429 (1971)]:
Schema 11
(πi-B)
(iii-c)
Im Falle der Verbindungen (IH-C) können diese entweder analog zur Literatur hergestellt und isoliert werden, oder sie können in situ erzeugt und direkt weiter mit einer Verbindung der Formel (H) umgesetzt werden. Bevorzugt ist die in s/ta-Erzeugung unter Verwendung von 1,3-Dichloraceton in Dimethylformamid oder Ethanol als Lösungsmittel.
2,5-Disubstituierte Oxazol-Derivate gemäß Formel (IH) können in Analogie zu literaturbekannten Verfahren beispielsweise wie im folgenden Reaktionsschema 12 exemplarisch beschrieben hergestellt werden:
Schema 12
[vgl. z.B. Y. Goto et al., Chem. Pharm. Bull. 1971, 19, 2050-2057].
In 5-Position substituierte Oxazol-Derivate gemäß Formel (UI) können beispielsweise durch Reduktion und nachfolgende Halogenierung entsprechender Oxazol-4-carbonsäureester erhalten werden, welche ihrerseits durch Acylierung von α-Isocyanatoacetaten zugänglich sind (siehe Schema 13):
Schema 13
COOCH,
(RCO)2O LiAIH4
CN' VCOOCH,
DBU O. sM
N^
[vgl. z.B. M. Suzuki et al., J. Org. Chem. 1973, 38, 3571-3575].
2-Aryloxazol-Derivate gemäß Formel (IH) sind auch über eine Palladium-katalysierte Kupplung von Arylboronsäuren mit 2-Iodoxazol-4-carbonsäureestern erhältlich, wie in Schema 14 beispiel- haft dargestellt ist:
Schema 14
SOCI
[vgl. z.B. E.A. Krasnokutskaya et al., Synthesis 2007, 1, 81-84; J. Hassan et al., Chem. Rev. 2002, 102, 1359-1469].
Die Verbindungen der Formel (V) sind gleichfalls kommerziell erhältlich oder literaturbekannt oder sie können in Analogie zu literaturbeschriebenen Verfahren, beispielsweise ähnlich wie die Verbindungen der Formel (HT), hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formeln (VT-) und (XI) schließlich sind entweder kommerziell erhältlich, als solche in der Literatur beschrieben oder nach üblichen Methoden herstellbar.
Weitere erfindungsgemäße Verbindungen können gegebenenfalls auch hergestellt werden durch Umwandlungen von funktionellen Gruppen einzelner Reste und Substituenten, insbesondere den unter R2, R4, R6 und R7 aufgeführten, ausgehend von den nach obigen Verfahren erhaltenen Verbindungen der Formel (I). Diese Umwandlungen werden nach üblichen, dem Fachmann bekannten Methoden durchgeführt und umfassen beispielsweise Reaktionen wie nukleophile oder elektro- phile Substitution, Oxidation, Reduktion, Hydrierung, Halogenierung, Alkylierung, Acylierung, Sulfonylierung, Aminierung, Hydroxylierung, Bildung von Carbonsäureamiden und -estern, Ester- Spaltung und Veretherung.
Bei den zuvor beschriebenen Herstellverfahren können gegebenenfalls in einzelnen Resten und Substituenten vorhandene funktionelle Gruppen - wie insbesondere Amino-, Hydroxy- und Carb- oxylgruppen -, falls zweckmäßig oder erforderlich, auch in temporär geschützter Form vorliegen. Die Einführung und Entfernung solcher Schutzgruppen erfolgt hierbei nach üblichen, dem Fach- mann bekannten Methoden [siehe z.B. T.W. Greene und P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky und A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer- Verlag, Berlin, 1984]. Bei Vorhandensein mehrerer Schutzgruppen kann die Entfernung gegebenenfalls simultan in einer Eintopf-Reaktion oder in separaten Reaktionsschritten vorgenommen werden.
Als Amino-Schutzgruppe wird bevorzugt tert.-Butoxycarbonyl (Boc), Benzyloxycarbonyl (Z) oder /»-Tolylsulfonyl (Tosyl) verwendet. Zum Schutz von Carboxylgruppen eignen sich insbesondere die entsprechenden Methyl-, Ethyl- oder tert.-Butylester. Für eine Hydroxy-Funktion wird als Schutzgruppe vorzugsweise Benzyl oder eine Silylgruppe wie Trimethylsilyl, ter/.-Butyldimethyl- silyl oder Dimethylphenylsilyl eingesetzt. Bei Vorliegen einer 1,2- oder 1,3-Diol-Gruppierung wird bevorzugt ein von symmetrischen Ketonen wie Aceton oder Cyclohexanon abgeleitetes Ketal (1,3-Dioxolan bzw. 1,3-Dioxan) als gemeinsame Schutzgruppe verwendet.
Überraschenderweise zeigen die erfindungsgemäßen Verbindungen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum und sind daher in besonderem Maße zur Prophylaxe und/ oder Behandlung von Erkrankungen, insbesondere von kardiovaskulären Erkrankungen, geeignet.
Gegenüber den aus dem Stand der Technik bekannten Substanzen weisen die erfindungsgemäßen Verbindungen ein verbessertes Eigenschaftsprofil auf, wie insbesondere eine erhöhte Löslichkeit in physiologischen Medien und/oder wässrig-organischen, für die Formulierung relevanten Lösungsmittelsystemen.
Die pharmakologische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen lässt sich über ihre Wirkung als potente, selektive Liganden an Adenosin Al- und/oder A2b-Rezeptoren erklären. Sie agieren hierbei als selektive Al-Agonisten, als selektive A2b-Agonisten oder als selektive duale Al/A2b-Agonisten.
Als "selektive Liganden an Adenosin Al- und/oder A2b-Rezeptoren" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung solche Adenosin-Rezeptorliganden bezeichnet, bei denen einerseits eine deutliche Wirkung an Al- und/oder A2b-Adenosinrezeptor-Subtypen und andererseits keine oder eine deutliche schwächere Wirkung (Faktor 10 oder höher) an A2a- und A3-Adenosinrezeptor- Subtypen zu beobachten ist, wobei bezüglich der Testmethoden für die Wirk-Selektivität Bezug genommen wird auf die im Abschnitt B-I. beschriebenen Tests.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer jeweiligen Struktur als volle oder als partielle Adenosinrezeptor-Agonisten fungieren. Partielle Adenosinrezeptor- Agonisten sind hierbei definiert als Rezeptorliganden, die eine funktionelle Antwort an Adenosin- rezeptoren auslösen, welche geringer ist als bei vollen Agonisten. Partielle Agonisten weisen infolgedessen eine geringere Wirksamkeit bezüglich der Rezeptoraktivierung auf als volle Agonisten.
Die Verbindungen der Formel (I) sind allein oder in Kombination mit einem oder mehreren anderen Wirkstoffen zur Prophylaxe und/oder Behandlung verschiedener Erkrankungen geeignet, so beispielsweise insbesondere von Hypertonie und anderen Erkrankungen des Herzkreislauf- Systems (kardiovaskulären Erkrankungen), zur Kardioprotektion nach Schädigungen des Herzens sowie von Stoffwechsel-Erkrankungen.
Im Sinne der vorliegenden Erfindung sind unter Erkrankungen des Herzkreislauf-Systems bzw. kardiovaskulären Erkrankungen neben der Hypertonie beispielsweise insbesondere die folgenden
Erkrankungen zu verstehen: periphere und kardiale Gefäßerkrankungen, koronare Herzerkrankung, koronare Restenose wie z.B. Restenose nach Ballondilatation von peripheren Blutgefäßen, akutes
Koronarsyndrom, stabile und instabile Angina pectoris, Herzinsuffizienz, Tachykardien, Arrhythmien, Vorhof- und Kammerflimmem sowie periphere Durchblutungsstörungen.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere auch zur Reduktion des von einem Infarkt betroffenen Myokardbereichs sowie zur Prophylaxe von Sekundärinfarkten.
Des weiteren sind die erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere zur Prophylaxe und/oder Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen und Ischämien wie Myokardinfarkt, Hirnschlag und transitorischen ischämischen Attacken sowie zur Protektion von Organen bei Transplantationen und operativen Eingriffen, beispielsweise am Herzen, geeignet.
Weitere Indikationsgebiete, für die die erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden kön- nen, sind beispielsweise insbesondere die Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen des
Urogenitalbereiches, wie z.B. Reizblase, erektile Dysfunktion und weibliche sexuelle Dysfunktion, daneben aber auch die Prophylaxe und/oder Behandlung von inflammatorischen Erkrankungen, wie z.B. Asthma und entzündliche Dermatosen, von neuroinflammatorischen Erkrankungen des
Zentralnervensystems, wie beispielsweise Zustände nach Hirninfarkt, der Alzheimer-Erkrankung, weiterhin auch von neurodegenerativen Erkrankungen sowie von Schmerzzuständen, Krebs und
Übelkeit und Erbrechen in Verbindung mit Krebstherapien.
Ein weiteres Indikationsgebiet sind beispielsweise insbesondere die Prophylaxe und/oder Behandlung von Erkrankungen der Atemwege wie beispielsweise Asthma, chronische Bronchitis, Lungenemphysem, Bronchiektasien, zystische Fibrose (Mukoviszidose) und pulmonale Hypertonie.
Schließlich kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen insbesondere auch für die Prophylaxe und/oder Behandlung von Stoffwechsel-Erkrankungen in Betracht, wie beispielsweise Diabetes, insbesondere Diabetes mellitus, diabetische Folgeerkrankungen wie z.B. Nephropathie und Neuropathie, das Metabolische Syndrom sowie Dyslipidämien.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfϊndungsgemäßen Ver- bindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfϊndungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfϊndungsgemäßen Verbindungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können allein oder bei Bedarf in Kombination mit anderen Wirkstoffen eingesetzt werden. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen.
Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt: den Fettstoff- Wechsel verändernde Wirkstoffe, Antidiabetika, Blutdruck-Senker, durchblutungsfördernd und/ oder antithrombotisch wirkende Mittel, Antioxidantien, Chemokin-Rezeptor-Antagonisten, p38- Kinase-Inhibitoren, NPY-Agonisten, Orexin-Agonisten, Anorektika, PAF-AH-Inhibitoren, Anti- phlogistika (COX-Inhibitoren, LTB4-Rezeptor-Antagonisten) sowie Analgetika wie beispielsweise Aspirin.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind insbesondere Kombinationen mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen mit mindestens einem den Fettstoffwechsel verändernden Wirkstoff, einem Antidiabetikum, einem blutdrucksenkenden Wirkstoff und/oder einem antithrombotisch wirkenden Mittel.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können vorzugsweise mit einem oder mehreren
• den Fettstoffwechsel verändernden Wirkstoffen, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der HMG-CoA-Reduktase-Inhibitoren, Inhibitoren der HMG-CoA-Reduktase-Expression, Squalensynthese-Inhibitoren, ACAT-Inhibitoren, LDL-Rezeptor-Induktoren, Cholesterin- Absorptionshemmer, polymeren Gallensäureadsorber, Gallensäure-Reabsorptionshemmer, MTP-Inhibitoren, Lipase-Inhibitoren, LpL-Aktivatoren, Fibrate, Niacin, CETP-Inhibitoren, PPAR-α-, PPAR-γ- und/oder PPAR-δ-Agonisten, RXR-Modulatoren, FXR-Modulatoren, LXR-
Modulatoren, Thyroidhormone und/oder Thyroidmimetika, ATP-Citrat-Lyase-Inhibitoren, Lp(a)-Antagonisten, Cannabinoid-Rezeptor 1 -Antagonisten, Leptin-Rezeptor-Agonisten, Bom- besin-Rezeptor-Agonisten, Histamin-Rezeptor-Agonisten sowie der Antioxidantien/Radikal- fänger;
• Antidiabetika, die in der Roten Liste 2004/π, Kapitel 12 genannt sind, sowie beispielhaft und vorzugsweise jenen aus der Gruppe der Sulphonylharnstoffe, Biguanide, Meglitinid-Derivate, Glukosidase-Inhibitoren, Oxadiazolidinone, Thiazolidindione, GLP 1 -Rezeptor- Agonisten, GIu-
kagon- Antagonisten, Insulin-Sensitizer, CCK 1 -Rezeptor- Agonisten, Leptin-Rezeptor- Agonisten, Inhibitoren von Leberenzymen, die an der Stimulation der Glukoneogenese und/ oder Glykogenolyse beteiligt sind, Modulatoren der Glukoseaufnahme sowie der Kaliumkanal- öffher, wie z.B. denjenigen, die in WO 97/26265 und WO 99/03861 offenbart sind;
• den Blutdruck senkenden Wirkstoffen, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Calcium-Antagonisten, Angiotensin AH-Antagonisten, ACE-Hemmer, beta-Rezeptoren-Blocker, alpha-Rezeptoren-Blocker, Diuretika, Phosphodiesterase-Inhibitoren, sGC-Stimulatoren, Verstärker der cGMP-Spiegel, Aldosteron-Antagonisten, Mineralocorticoid-Rezeptor-Antago- nisten, ECE-Inhibitoren sowie der Vasopeptidase-Inhibitoren, und/oder
• antithrombotisch wirkenden Mitteln, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Thrombozytenaggregationshemmer oder der Antikoagulantien
kombiniert werden.
Unter den Fettstoffwechsel verändernden Wirkstoffen werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der HMG-CoA-Reduktase-Inhibitoren, Squalensynthese-Inhibitoren, ACAT-Inhibitoren, Cholesterin- Absorptionshemmer, MTP-Inhibitoren, Lipase-Inhibitoren, Thyroidhormone und/oder Thyroidmimetika, Niacin-Rezeptor-Agonisten, CETP-Inhibitoren, PPAR-α-Agonisten, PPAR-γ- Agonisten, PPAR-δ-Agonisten, polymeren Gallensäureadsorber, Gallensäure-Reabsorptionshem- mer, Antioxidantien/Radikalfänger sowie der Cannabinoid-Rezeptor 1 -Antagonisten verstanden.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor aus der Klasse der Statine, wie beispielhaft und vorzugsweise Lovastatin, Simvastatin, Pravastatin, Fluvastatin, Atorvastatin, Rosuvastatin, Cerivastatin oder Pitavastatin, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Squalensynthese-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise BMS-188494 oder TAK-475, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem ACAT-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Avasimibe, Melinamide, Pactimibe, Eflucimibe oder SMP-797, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Cholesterin-Absorptionshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Ezetimibe, Tiqueside oder Pamaqueside, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausfiihrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem MTP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Implitapide, BMS-201038, R- 103757 oder JTT- 130, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Lipase-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Orlistat, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Thyroidhormon und/oder Thyroidmimetikum, wie beispielhaft und vorzugsweise D-Thyroxin oder 3,5,3'-Triiodothyronin (T3), verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Agonisten des Niacin-Rezeptors, wie beispielhaft und vorzugsweise Niacin, Acipimox, Acifran oder Radecol, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem CETP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Torcetrapib, JTT-705, BAY 60-5521, BAY 78-7499 oder CETP Vaccine (Avant), verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-γ-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Pio- glitazone oder Rosiglitazone, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem PPAR-δ-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise GW- 501516 oder BAY 68-5042, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem polymeren Gallensäureadsorber, wie beispielhaft und vorzugsweise Cholestyramin, Colestipol, Colesolvam, CholestaGel oder Colestimid, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Gallensäure-Reabsorptionshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise ASBT (= roAT)-Inhibitoren wie z.B. AZD-7806, S-8921, AK-105, BARI-1741, SC-435 oder SC-635, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Antioxidans/Radikalfänger, wie beispielhaft und vorzugsweise Probucol, AGI-1067, BO-653 oder AEOL-10150, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Cannabinoid-Rezeptor 1 -Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Rimonabant oder SR- 147778, verabreicht.
Unter Antidiabetika werden vorzugsweise Insulin und Insulinderivate sowie oral wirksame hypo- glykämische Wirkstoffe verstanden. Insulin und Insulinderivate umfasst hierbei sowohl Insuline tierischen, menschlichen oder biotechnologischen Ursprungs als auch Gemische hieraus. Die oral wirksamen hypoglykämischen Wirkstoffe umfassen vorzugsweise Sulphonylharnstoffe, Biguanide, Meglitinid-Derivate, Glukosidase-Inhibitoren und PPAR-γ-Agonisten.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit Insulin verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Sulphonylharnstoff, wie beispielhaft und vorzugsweise Tolbutamid, Glibenclamid, Glimepirid, Glipizid oder Gliclazid, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Biguanid, wie beispielhaft und vorzugsweise Metformin, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Meglitinid-Derivat, wie beispielhaft und vorzugsweise Repagli- nid oder Nateglinid, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Glukosidase-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Mig- litol oder Acarbose, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-γ-Agonisten beispielsweise aus der Klasse der Thiazoli- dindione, wie beispielhaft und vorzugsweise Pioglitazone oder Rosiglitazone, verabreicht.
Unter den Blutdruck senkenden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Calcium-Antagonisten, Angiotensin AH-Antagonisten, ACE-Hemmer, beta-Rezeptoren-Blocker, alpha-Rezeptoren-Blocker und Diuretika verstanden.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Calcium-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Nifedipin, Amlodipin, Verapamil oder Diltiazem, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausfiihmngsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Angiotensin Aü-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Losartan, Valsartan, Candesartan, Embusartan, Olmesartan oder Telmisartan, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem ACE-Hemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Enalapril, Captopril, Lisinopril, Ramipril, Delapril, Fosinopril, Quinopril, Perindopril oder Trandopril, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem beta-Rezeptoren-Blocker, wie beispielhaft und vorzugsweise Propranolol, Atenolol, Timolol, Pindolol, Alprenolol, Oxprenolol, Penbutolol, Bupranolol, Meti- pranolol, Nadolol, Mepindolol, Carazalol, Sotalol, Metoprolol, Betaxolol, Celiprolol, Bisoprolol, Carteolol, Esmolol, Labetalol, Carvedilol, Adaprolol, Landiolol, Nebivolol, Epanolol oder Bucin- dolol, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem alpha-Rezeptoren-B locker, wie beispielhaft und vorzugsweise Prazosin, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Diuretikum, wie beispielhaft und vorzugsweise Furosemid, Bumetanid, Torsemid, Bendroflumethiazid, Chlorthiazid, Hydrochlorthiazid, Hydroflumethiazid, Methyclothiazid, Polythiazid, Trichlormethiazid, Chlorthalidon, Indapamid, Metolazon, Quineth- azon, Acetazolamid, Dichlorphenamid, Methazolamid, Glycerin, Isosorbid, Mannitol, Amilorid oder Triamteren, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit Antisympathotonika wie Reserpin, Clonidin oder alpha-Methyl-Dopa, mit Kaliumkanal-Agonisten wie Minoxidil, Diazoxid, Dihydralazin oder Hydralazin, oder mit Stickoxid freisetzenden Stoffen wie Glycerinnitrat oder Nitroprussidnatrium verabreicht.
Unter antithrombotisch wirkenden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Thrombozytenaggregationshemmer oder der Antikoagulantien verstanden.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem Thrombozytenaggregationshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Aspirin, Clopidogrel, Ticlopidin oder Dipyridamol, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Thrombin-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Ximela- gatran, Melagatran, Bivalirudin oder Clexane, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbin- düngen in Kombination mit einem GPÜb/IIIa-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Tirofiban oder Abciximab, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Faktor Xa-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Riva- roxaban (BAY 59-7939), DU- 176b, Apixaban, Otamixaban, Fidexaban, Razaxaban, Fondaparinux, Idraparinux, PMD-3112, YM-150, KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 oder SSR-128428, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit Heparin oder einem low molecular weight (LMW)-Heparin-Derivat verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäßen Verbindungen in Kombination mit einem Vitamin K-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Coumarin, verabreicht.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nicht- toxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otisch oder als Implan- tat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die erfindungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht-überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit
magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszuberei- tungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen oder -sprays, lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wäßrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (z.B. Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Bevorzugt sind die orale oder parenterale Applikation, insbesondere die orale und die intravenöse Applikation.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecyl- sulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.01 bis 100 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 20 mg/kg und ganz besonders bevorzugt 0.1 bis 10 mg/kg Körpergewicht.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindest- menge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen.
Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindung. Die Erfindung ist nicht auf die Beispiele beschränkt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen.
A. Beispiele
Verwendete Abkürzungen und Akronyme:
Bsp. Beispiel
CI chemische Ionisation (bei MS) d Tag(e)
DBU l,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en
DC Dünnschichtchromatographie
DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)
DEAD Diethylazodicarboxylat
DIAD Diisopropylazodicarboxylat
DME 1 ,2-Dimethoxyethan
DMF N,N-Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid d. Th. der Theorie (bei Ausbeute) ee Enantiomerenüberschuss
EE Ethylacetat (Essigsäureethylester)
EI Elektronenstoß-Ionisation (bei MS) ent enantiomerenrein, Enantiomer
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
Et Ethyl
EtOH Ethanol
Fp. Schmelzpunkt
GC Gaschromatographie ges. gesättigt h Stunde(n)
HOAc Essigsäure
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie konz. konzentriert
KO'Bu Kalium-tert. -butylat krist. kristallin, kristallisiert
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie
LDA Lithiumdiisopropylamid
Lit. Literatur(stelle)
Lsg. Lösung min Minute(n)
MS Massenspektrometrie
NMM N-Methylmoφholin
NMR Kernresonanzspektrometrie
PBS Phosphat-gepufferte Kochsalz-Lösung
PEG Polyethylenglykol
Ph Phenyl quant. quantitativ (bei Ausbeute) rac racemisch, Racemat
RP-HPLC reverse phase HPLC
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
TFA Trifluoressigsäure
THF Tetrahydrofuran verd. verdünnt wässr. wässrig
HPLC-. LC-MS- und GC-MS-Methoden:
Methode 1 (HPLC):
Instrument: Hewlett Packard Series 1050; Säule: Symmetry TM Cl 8 3.9 x 150 mm; Fluss: 1.5 ml/min; Eluent A: Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: → 0.6 min 10% B → 3.8 min 100% B -> 5.0 min 100% B — > 5.5 min 10% B; Stopzeit: 6.0 min; Injektionsvolumen: 10 μl; Diodenarray- detektor-Signal: 214 und 254 nm.
Methode 2 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 100 mm x 4.6 mm; Eluent A: Wasser + 500 μl 50%-ige Ameisensäure / 1, Eluent B: Acetonitril + 500 μl 50%-ige Ameisensäure / 1; Gradient: 0.0 min 10% B — > 7.0 min 95% B → 9.0 min 95% B; Ofen: 350C; Fluss: 0.0 min 1.0 ml/min → 7.0 min 2.0 ml/min → 9.0 min 2.0 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 3 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Gemini 3μ 30 mm x 3.00 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0
min 5% A — > 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 4 (LC-MSV
Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Onyx Monolithic Cl 8, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 2 min 65% A → 4.5 min 5% A → 6 min 5% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 400C; UV-Detektion: 208-400 nm.
Methode 5 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Merck Chromolith RP- 18e, 100 mm x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2 min 65% A → 4.5 min 5% A → 6 min 5% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 400C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 6 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A — > 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.1 min 90% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 208-400 nm.
Methode 7 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100A Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A — > 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01 min 90% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 (LC-MS):
Instrument: Micromass Platform LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 0.2 min 100% A → 2.9
min 30% A → 3.1 min 10% A → 5.5 min 10% A; Fluss: 0.8 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 9 (LC-MSV
Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A — ► 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 208-400 nm.
Methode 10 (LC-MSV
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 11 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 10OA Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.1 min 90% A; Fluss: 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 12 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e 100 mm x 4.6 mm; Eluent A: Wasser + 500 μl 50%-ige Ameisensäure / 1; Eluent B: Acetonitril + 500 μl 50%-ige Ameisensäure / 1; Gradient: 0.0 min 10% B → 7.0 min 95% B → 9.0 min 95% B; Fluss: 0.0 min 1.0 ml/min → 7.0 min 2.0 ml/min → 9.0 min 2.0 ml/min; Ofen: 35°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 13 (LC-MS):
Gerätetyp MS: M-40 DCI (NH3); Gerätetyp HPLC: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml HClO4 (70%-ig) / Liter Wasser, Eluent B:
Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 6.5 min 90% B → 6.7 min 2% B → 7.5 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperatur: 300C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 14 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 1.5 min 10% A → 2.2 min 10% A; Fluss: 0.33 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 15 (präparative HPLC):
Gerätetyp HPLC: Abimed/Gilson Pump 305/306; Manometric Module 806; UV Knauer Variable Wavelenght Monitor; Säule: Gromsil Cl 8, 10 nm, 250 mm x 30 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 99%-ige Trifluoressigsäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 2% B → 10 min 2% B → 50 min 90% B; Fluss: 20 ml/min; Volumen: 628 ml A und 372 ml B.
Methode 16 (ΗPLC):
Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Merck Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 mm x 4.6 mm; Eluent A: 0.05% H3PO4, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 5% B → 2.5 min 95% B → 3.0 min 95% B; Fluss: 5 ml/min; Säulentemperatur: 400C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 17 (präparative HPLC):
Säule: Grom-Sil C 18, 10 μm, 250 mm x 30 mm; Eluent A: Wasser + 0.1% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril; Fluss: 50 ml/min; Programm: 0-5 min 10% B, 5-38 min Gradient bis 95% B; UV- Detektion: 210 nm.
Methode 18 (präparative HPLC):
Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5.
Methode 19 (HPLC):
Instrument: HP 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Kromasil 100 RP-18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μm; Eluent A: 5 ml HClO4 (70%-ig) / Liter Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0 min 2% B → 0.5 min 2% B → 4.5 min 90% B → 9 min 90% B → 9.2 min 2% B → 10 min 2% B; Fluss: 0.75 ml/min; Säulentemperatur: 300C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 20 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Waters ZQ; Gerätetyp HPLC: Agilent 1100 Series; UV DAD; Säule: Thermo Hypersil GOLD 3μ 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%-ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A → 4.1 min 100% A (Fluss 2.5 ml/min); Fluss: 2 ml/min; Ofen: 55°C; UV- Detektion: 210 nm.
Methode 21 (GC-MS):
Instrument: Micromass GCT, GC 6890; Säule: Restek RTX-35, 15 m x 200 μm x 0.33 μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88 ml/min; Ofen: 700C; Inlet: 2500C; Gradient: 700C, 30°C/min → 3100C (3 min halten).
Ausgangsverbindungen und Intermediate:
Beispiel IA
rac-irαπ5-4-[(2-Hydroxycyclopentyl)oxy]benzaldehyd
Zu einer Lösung von 36.85 g (301.7 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd in 100 ml DMF gab man 40 ml (38.84 g, 452.5 mmol) Cyclopentenoxid sowie 3.5 g (30.2 mmol) Kalium-tert.-butylat und rührte 4 h bei 1300C. Danach gab man weitere 10 ml (9.71 g, 113.1 mmol) Cyclopentenoxid hinzu und rührte nochmals 5 h bei 1300C. Im Vakuum wurde dann der Großteil des DMF abdestilliert und der Rückstand zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die wässrige Phase wurde dreimal mit Ethylacetat nachextrahiert, und die vereinigten organischen Phasen wurden mit Wasser und gesättigter Kochsalz-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Das ölige Rohprodukt (66.4 g, 94% d. Th.; 88% Gehalt nach LC-MS) wurde ohne Reinigung weiter umgesetzt. Für die Analytik wurde eine Probe über präparative HPLC gereinigt.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.81 min; MS (ESIpos): m/z = 207 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 9.87 (s, IH); 7.86 (d, 2H); 7.13 (d, 2H); 5.08 (d, IH); 4.62- 4.56 (m, IH); 4.11-4.04 (m, IH); 2.23-2.12 (m, IH); 1.93-1.83 (m, IH); 1.83-1.50 (m, 4H).
Beispiel 2A
rac-/ra/M-4-[2-Hydroxycyclohexyl]oxy}benzaldehyd
Die Titel Verbindung wurde analog zur Vorschrift für Beispiel IA aus 4-Hydroxybenzaldehyd und Cyclohexenoxid hergestellt.
Ausbeute: 100% d. Th. (94% Gehalt nach LC-MS)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.8 min; MS (ESIpos): m/z = 221 (M+H)+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 9.95 (s, IH); 7.82 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 4.98 (d, IH); 4.22 (br., IH); 3.55 (br., IH); 2.05-1.98 (m, IH); 1.91-1.83 (m, IH); 1.67-1.48 (m, 2H); 1.40-1.20 (m, 4H).
Beispiel 3A
rac-trans-4- { [4-Hydroxytetrahydrofuran-3 -yl]oxy } benzaldehyd
6.00 g (49.1 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd wurden in 16 ml DMF vorgelegt, mit 6.34 g (73.7 mmol) 3,4-Epoxytetrahydrofuran sowie 551 mg (4.91 mmol) Kalium-tert.-butylat versetzt und 20 h unter Argon bei 120°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde danach in 200 ml Wasser eingerührt und die entstandene Suspension mit 300 ml Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde mit Wasser und gesättigter wässriger Kochsalz-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Der erhaltene Rückstand wurde über Kieselgel mit Dichlor- methan/Methanol (100: 1) als Laufmittel chromatographiert.
Ausbeute: 4.10 g (40% d. Th.)
LC-MS (Methode 9): R, = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 209 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 9.89 (s, IH); 7.89 (d, 2H); 7.18 (d, 2H); 5.57 (d, IH); 4.81 (d, IH); 4.24 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.61 (dd, IH).
Beispiel 4A
rac-trans-A- { [4- { [tert. -Butyl(dimethyl)silyl]oxy} tetrahydrofuran-3-yl]oxy }benzaldehyd
4.10 g (19.7 mmol) der Verbindung aus Beispiel 3A wurden in 80 ml Dichlormethan vorgelegt, mit 3.26 g (21.7 mmol) tert.-Butyldimethylchlorsilan, 3.02 ml (21.7 mmol) Triethylamin sowie 96.2 mg (0.79 mmol) 4-NN-Dimethylaminopyridin versetzt und 2 d bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wurde danach im Vakuum abdestilliert und der Rückstand in 100 ml Cyclohexan suspendiert. Vom Niederschlag wurde abfiltriert, das Filtrat eingeengt und der Rückstand über Kieselgel mit Cyclohexan/Essigsäureethylester (9:1) als Laufmittel chromatographiert.
Ausbeute: 2.31 g (36% d. Th.)
LC-MS (Methode 2): R, = 2.87 min; MS (ESIpos): m/z = 323 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.89 (s, IH); 7.89 (d, 2H); 7.14 (d, 2H); 4.87 (d, IH); 4.41 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 4.01 (dd, IH); 3.79 (d, IH); 3.54 (dd, IH); 0.88 (s, 9H); 0.09 (s, 3H); 0.07 (s, 3H).
Beispiel 5A
rαc-c/5-2-(4-Formylphenoxy)cyclopentyl-4-nitrobenzoat
Zu einer Lösung von 6.84 g (27.2 mmol) der Verbindung aus Beispiel IA und 7.85 g (30 mmol)
Triphenylphosphin in 50 ml THF tropfte man bei ca. 100C 6.3 ml (30 mmol) Azodicarbonsäure- diisopropylester hinzu. Nach der Hälfte der Zugabe gab man zunächst 1 g (6 mmol) 4-Nitrobenzoe- säure und nach Ende des Zutropfens weitere 4 g (24 mmol) 4-Nitrobenzoesäure hinzu und rührte über Nacht bei RT. Danach gab man erneut 6.4 g (24 mmol) Triphenylphosphin sowie 5.2 ml (24.7 mmol) Azodicarbonsäurediisopropylester hinzu und rührte eine weitere Nacht bei RT. Es wurde dann im Vakuum zu einem gelben Rückstand eingeengt. Man chromatographierte diesen zweimal über Kieselgel zunächst mit Toluol/Ethylacetat (10: 1) und dann mit Isohexan/Ethylacetat (4: 1) als Laufmittel und erhielt 1.33 g (14% d. Th.) der Titelverbindung als einen Feststoff.
LC-MS (Methode 3): R, = 2.71 min; MS (ESIpos): m/z = 356 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.8 (s, IH); 8.28 (d, 2H); 8.02 (d, 2H); 7.78 (d, 2H); 7.11 (d, 2H); 5.50 (m, IH); 5.11 (m, IH); 2.25-2.11 (m, 2H); 1.97-1.83 (m, 3H); 1.76-1.62 (m, IH).
Beispiel 6A
rac-cis-4- { [-2-Hydroxycyclopentyl]oxy} benzaldehyd
Eine Lösung von 1.33 g (3.74 mmol) der Verbindung aus Beispiel 5A in 33 ml Methanol wurde mit 1.5 ml einer 30%-igen Lösung von Natriummethanolat in Methanol versetzt und bei RT über Nacht stehen gelassen. Es wurde danach eingeengt, der Rückstand zwischen Ethylacetat und Was-
ser verteilt und die wässrige Phase noch zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Kochsalz-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und zu einem dunklen Öl (555 mg) eingeengt. Reinigung über präparative HPLC ergab 206 mg (27% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.85 min; MS (ESIpos): m/z = 207 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-(I6): δ = 9.86 (s, IH); 7.84 (d, 2H); 7.13 (d, 2H); 4.71 (d, IH); 4.71- 4.62 (m, IH); 4.19-4.10 (m, IH); 2.08-1.94 (m, IH); 1.88-1.60 (m, 4H); 1.60-1.46 (m, 4H).
Beispiel 7A
rac-4-(Tetrahydrofuran-3-yloxy)benzaldehyd
3.00 g (24.6 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd, 2.16 g (24.6 mmol) 3-Hydroxytetrahydrofuran und 9.67 g (36.8 mmol) Triphenylphosphin wurden in 100 ml THF gelöst und innerhalb von 15 min portionsweise mit 16.0 g (36.8 mmol) einer 40%-igen Lösung von Diethylazodicarboxylat in Toluol versetzt. Die Lösung wurde 4 h unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Erkalten wurde mit Essigsäureethylester versetzt, mit 0.5 N Natronlauge und gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde über Kieselgel mit Cyclohexan/Essigsäureethylester (7:3) als Laufmittel chromatographiert.
Ausbeute: 1.80 g (38% d. Th.)
LC-MS (Methode 8): Rt = 2.81 min; MS (ESIpos): m/z = 193 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-Cl6): δ = 9.87 (s, IH); 7.87 (d, 2H); 7.12 (d, 2H); 5.17 (t, IH); 3.92 (dd, IH); 3.88-3.74 (m, 3H); 2.29 (m, IH); 1.99 (m, IH).
Beispiel 8A
rac-3-Methoxy-4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)benzaldehyd
Analog zur Vorschrift für Beispiel 7A erhielt man aus 10.0 g (65.7 mmol) Vanilin 5.57 g (38% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 3): R, = 1.53 min; MS (ESIpos): m/z = 223 (M+H)+.
Beispiel 9A
rac-3 -Fluor-4-(tetrahydrofuran-3 -yloxy)benzaldehyd
Analog zur Vorschrift für Beispiel 7A erhielt man aus 5.15 g (36.7 mmol) 3-Fluor-4-hydroxybenz- aldehyd 1.61 g (21% d. Th.) der Titelverbindung.
GC-MS (Methode 21 ): R, = 5.95 min; MS (CIpos): m/z = 211 (M+H)+.
Beispiel IQA
rac-terΛ-Butyl-3-(4-formylphenoxy)pyrrolidin-l-carboxylat
2.00 g (16.4 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd, 3.07 g (16.4 mmol) tert.-Butyl 3-hydroxypyrrolidin-l- carboxylat und 6.44 g (24.6 mmol) Triphenylphosphin wurden in 67 ml THF gelöst und innerhalb von 15 min portionsweise mit 10.7 g (24.6 mmol) einer 40%-igen Lösung von Diethylazodi- carboxylat in Toluol versetzt. Die Lösung wurde 2 h unter Rückfluss erhitzt, anschließend eingeengt und der Rückstand über Kieselgel mit Cyclohexan/Essigsäureethylester (7:3) als Laufmittel chromatographiert.
Ausbeute: 1.89 g (38% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R1 = 2.44 min; MS (ESIpos): m/z = 292 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9.88 (s, IH); 7.87 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 5.16 (br., IH); 3.60 (m, IH); 3.47-3.29 (m, 3H); 2.19 (m, IH); 2.08 (m, IH).
Beispiel IIA
rac-/ra«5-4-({4-Hydroxy-l-[(4-methylphenyl)sulfonyl]pyrrolidin-3-yl}oxy)benzaldehyd
1.00 g (8.19 mmol) 4-Hydroxybenzaldehyd wurden in 2.7 ml DMF vorgelegt, mit 2.74 g (11.5 mmol) 3-[(4-Methylphenyl)sulfonyl]-6-oxa-3-azabicyclo[3.1.0]hexan [D.M. Hodgson, TJ. Miles, J. Witherington, Tetrahedron 59 (49), 9729-9742 (2003)] sowie 91.9 mg (0.82 mmol) Kalium- tert.-butylat versetzt und 7 h unter Argon bei 130
0C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde danach in 50 ml Wasser eingerührt und 1 h bei 5O
0C gerührt. Der entstandene Niederschlag wurde abfϊl- triert, mit Wasser gewaschen, getrocknet und ohne weitere Reinigung umgesetzt.
Ausbeute: 3.01 g (87% Gehalt nach LC-MS, 88% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.32 min; MS (ESIpos): m/z = 323 [M+H]+.
Beispiel 12A
rαc-^rα«5-4-(2-Hydroxycyclopentyl)oxybenzylidenmalononitril
5.0 g (21.8 mmol) der Verbindung aus Beispiel IA wurden in 45 ml Ethanol gelöst, mit 1.44 g (21.8 mmol) Malonodinitril und 48.0 μl (0.436 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wurde danach im Vakuum abdestilliert. Der Rückstand wur- de nach Reiben mit einem Glasstab fest und wurde ohne weitere Reinigung weiterverarbeitet.
Ausbeute: 6.35 g (81% Gehalt nach LC-MS, 93% d. Th.)
LC-MS (Methode 10): R, = 2.37 min; MS (ESIpos): m/z = 255 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-(I6): δ = 8.41 (s, IH); 7.98 (d, 2H); 7.20 (d, 2H); 5.12 (d, IH); 4.63- 4.59 (m, IH); 4.08 (br., IH); 2.22-2.12 (m, IH); 1.93-1.82 (m, IH); 1.82-1.50 (m, IH).
Beispiel 13A
rαc-?rαn5-4-(2-Hydroxycyclohexyl)oxybenzylidenmalononitril
Die Titelverbindung wurde analog zur Vorschrift für Beispiel 12A aus der Verbindung aus Beispiel 2A hergestellt.
Ausbeute: 92% d. Th. (Rohprodukt, 92% Gehalt nach LC-MS)
LC-MS (Methode 10): R, = 2.43 min; MS (ESIpos): m/z = 269 [M+H]+.
Beispiel 14A
rac-trans-{4- { [4- { [tert. -Butyl(dimethyl)silyl]oxy } tetrahydrofuran-3-yl]oxy } benzyliden)malono- nitril
2.25 g (6.98 mmol) der Verbindung aus Beispiel 4A wurden in 20 ml Ethanol gelöst, mit 484 mg (7.33 mmol) Malonodinitril und 15.0 μl (0.14 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abdestilliert und der Rückstand ohne weitere Reinigung direkt weiterverarbeitet.
Ausbeute: 2.49 g (96% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-(I6): δ = 8.41 (s, IH); 7.98 (d, 2H); 7.19 (d, 2H); 4.89 (d, IH); 4.41 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 4.01 (dd, IH); 3.78 (d, IH); 3.53 (dd, IH); 0.88 (s, 9H); 0.08 (s, 3H); 0.07 (s, 3H).
Beispiel 15A
rαc-frα«5-(4-{[4-Hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}benzyliden)malononitril
4.00 g (19.21 mmol) der Verbindung aus Beispiel 3A wurden in 60 ml Ethanol gelöst, mit 1.33 g (20.17 mmol) Malonodinitril und 42 μl (0.384 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionslösung wurde danach ohne Aufarbeitung direkt weiterverwendet.
Beispiel 16A
rac-cw-(4-{[-2-Hydroxycyclopentyl]oxy}benzyliden)malononitril
195 mg (0.364 mmol) der Verbindung aus Beispiel 6A wurden in 3 ml Ethanol gelöst, mit 12 mg
(0.18 mmol) Malonodinitril und 4 μl (0.036 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 1 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden je zweimal weitere 12 mg (0.18 mmol) Malonodinitril und
4 μl (0.036 mmol) 4-Methylmorpholin zugegeben und jeweils erneut 4 h unter Rückfluss erhitzt.
Danach wurde im Vakuum zur Trockene eingeengt und der Rückstand über präparative HPLC gereinigt.
Ausbeute: 55 mg (74% Gehalt nach LC-MS, 59% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 2.16 min; MS (ESIpos): m/z = 255 [M+H]+.
Beispiel 17A
rac-[4-(Tetrahydrofuran-3-yloxy)benzyliden]malononitril
1.60 g (8.32 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A wurden in 24 ml Ethanol gelöst, mit 0.58 mg (8.74 mmol) Malonodinitril und 92 μl (0.83 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 2 h unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionslösung wurde danach ohne Aufarbeitung direkt weiterverwendet.
Beispiel 18A
/ert.-Butyl-3-[4-(2,2-dicyanovinyl)phenoxy]pyrrolidin-l-carboxylat
1.80 g (6.18 mmol) der Verbindung aus Beispiel 1OA wurden in 18 ml Ethanol gelöst, mit 0.43 g (6.49 mmol) Malonodinitril und 68 μl (0.62 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 1 h unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionslösung wurde danach ohne Aufarbeitung direkt weiterverwendet.
Beispiel 19A
rac-?rαn5-2-Arnino-4-(4-{[-2-hydroxycyclopentyl]oxy}phenyl)-6-mercaptopyridin-3,5-dicarbonitril
2.9 g (11 mmol) der Verbindung aus Beispiel 12A und 0.65 g (5.5 mmol) 2-Cyanothioacetamid wurden in 32 ml Ethanol mit 2.5 ml (23 mmol) N-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden weitere 0.53 g (4.5 mmol) 2-Cyanothioacetamid zugesetzt und nochmals 1 h unter Rückfluss erhitzt. Man gab dann 11.4 ml 2 Ν Salzsäure zu, rührte 1 h bei RT und engte im Vakuum zu einem braunen Öl (7 g) ein. 6.5 g dieses Rückstands wurden über Kieselgel mit Dichlormethan und Dichlormethan/Methanol (0.5% bis 10%) als Laufmittel chromatogra- phiert. Man erhielt 1.33 g (34% d. Th.) nach Einengen der produkthaltigen Fraktionen. Durch Ausrühren mit Dichlormethan/Methyl-ter/.-butylether wurden 580 mg (14% d. Th.) der reinen Titel- Verbindung als Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 2): R, = 1.60 min; MS (ESIpos): m/z = 353 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSOd6): δ = 13.10-12.85 (br., IH); 8.20-7.60 (br., 2H); 7.46 (d, 2H); 7.10 (d, 2H); 5.05 (br., IH); 4.57-4.51 (m, IH); 4.12-4.06 (m, IH); 2.21-2.11 (m, IH); 1.93-1.82 (m, IH); 1.81-1.60 (m, 3H); 1.60-1.51 (m, IH).
Beispiel 2OA
rac-fra/i5-2-Amino-4-(4-{[-2-hydroxycyclohexyl]oxy}phenyl)-6-mercaptopyridm-3,5-dicarbonitril
Die Titelverbindung wurde analog zur Vorschrift für Beispiel 19A aus der Verbindung aus Beispiel 13 A erhalten. Die Reinigung erfolgte durch Lösen des nach Behandlung mit 2 N Salzsäure erhaltenen Rückstands in verdünnter Natronlauge, Extrahieren mit Essigsäureethylester, Ansäuern der wässrigen Phase mit verdünnter Salzsäure und abermaliges Extrahieren mit Essigsäureethylester. Die zweite Essigester-Phase wurde eingeengt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. Dieses Rohprodukt wurde ohne weitere Aufreinigung in der Folgestufe eingesetzt.
Ausbeute: 69% d. Th. (79% Gehalt nach LC-MS)
LC-MS (Methode 9): R, = 2.01 min; MS (ESIpos): m/z = 367 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 13.05-12.85 (br. s, IH); 8.20-7.60 (br. s, 2H); 7.43 (d, 2H); 7.12 (d, 2H); 4.95 (br. d, IH); 4.15 (br. m, IH); 3.60-3.45 (br., IH); 2.05 (m, IH); 1.90 (m, IH); 1.63 (m, 2H); 1.44-1.20 (m, 4H).
Beispiel 21A
A-αc-^απ5-2-Amino-4-(4-{[4-{[ϊer?.-butyl(dimethyl)silyl]oxy}tetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)-6- mercaptopyridin-3,5-dicarbonitril
Zu einer Lösung von 100 mg (0.27 mmol) der Verbindung aus Beispiel 14A in 3.0 ml Ethanol gab man 54.1 mg (0.54 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 59.0 μl (0.54 mmol) 4-Methylmorpholin und erhitzte 18 h unter Rückfluss. Das Reaktionsgemisch wurde danach mit 6 ml 1 N Salzsäure versetzt. Vom erhaltenen Niederschlag wurde abdekantiert, und der Rückstand wurde mit Wasser gewaschen und über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 20 mg (85% Gehalt nach LC-MS, 13% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 12.9 (br. s, IH); 8.10-7.60 (br. s5 2H); 7.48 (d, 2H); 7.11 (d, 2H); 4.81 (d, IH); 4.41 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 4.01 (dd, IH); 3.79 (d, IH); 3.55 (dd, IH); 0.88 (s, 9H); 0.09 (s, 3H); 0.07 (s, 3H).
LC-MS (Methode 2): R, = 2.52 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+.
Beispiel 22A
rac-/ra«5-2-Amino-4-(4-{[4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)-6-mercaptopyridin-3,5-di- carbonitril
4.92 g (19.2 mmol) der Verbindung aus Beispiel 15A wurden in 60 ml Ethanol gelöst, mit 2.11 g (21.1 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 2.32 ml (21.1 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 18 h unter Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wurde danach im Vakuum abdestilliert und der Rückstand ohne weitere Reinigung direkt weiterverarbeitet.
Ausbeute: 8.30 g (50% Gehalt nach LC-MS, 64% d. Th.)
LC-MS (Methode 9): R, = 1.45 min; MS (ESIpos): m/z = 355 [M+H]+.
Beispiel 23A
rαc-c/5-2-Arnino-4-(4-{[-2-hydroxycyclopentyl]oxy}phenyl)-6-mercaptopyridin-3,5-dicarbonitril
55 mg der Verbindung aus Beispiel 16A (74% Gehalt, 0.16 mmol) wurden mit 9 mg (0.09 mmol) 2-Cyanothioacetamid und 37 μl 4-Methylmorpholin (0.34 mmol) in 0.5 ml Ethanol 1.5 h lang unter Rückfluss erhitzt. Anschließend wurden weitere 4 mg (0.04 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 20 μl 4-Methylmorpholin zugegeben und nochmals 1.5 h unter Rückfluss erhitzt. Die Reaktionslösung wurde danach ohne Aufarbeitung direkt weiterverwendet.
LC-MS (Methode 9): R, = 1.71 min; MS (ESIpos): m/z = 353 [M+H]+.
Beispiel 24A
rαc-2-Amino-6-mercapto-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
Zur in Beispiel 17A erhaltenen Reaktionslösung gab man 0.92 g (9.15 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 0.92 ml (8.32 mmol) 4-Methylmorpholin und erhitzte 18 h unter Rückfluss. Der entstandene Niederschlag wurde abfϊltriert, mit etwas Ethanol gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 0.68 g (22% d. Th.)
LC-MS (Methode 20): R, = 1.65 min; MS (ESIpos): m/z = 339 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 12.9 (br. s, IH); 8.15-7.60 (br. s, 2H); 7.48 (d, 2H); 7.09 (d, 2H); 3.96-3.75 (m, 4H); 2.28 (m, IH); 2.00 (m, IH).
Beispiel 25A
rαc-2-Amino-4-[3-methoxy-4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]-6-sulfanylpyridin-3,5-dicarbonitril
5.50 g (24.7 mmol) der Verbindung aus Beispiel 8A wurden in 120 ml Ethanol gelöst, mit 4.96 g (49.5 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 5.44 ml (49.5 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde vom entstandenen Niederschlag abfiltriert, das Filtrat im Vakuum vom Lösungsmittel befreit, der Rückstand in 100 ml Essigsäureethylester und
100 ml 1 N Salzsäure suspendiert und das Gemisch 10 Minuten lang mit Ultraschall behandelt. Der Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser und Diethylether gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 1.71 g (19% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.65 min; MS (ESIpos): m/z = 368 [M+H]+.
Beispiel 26A
rac-2-Amino-4-[3-fluor-4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]-6-sulfanylpyridin-3,5-dicarbonitril
1.60 g (7.61 mmol) der Verbindung aus Beispiel 9A wurden in 37 ml Ethanol gelöst, mit 1.52 g (15.2 mmol) 2-Cyanothioacetamid sowie 1.67 ml (15.2 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde mit Diethylether versetzt, der Niederschlag abfiltriert, mit Diethylether gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 0.68 g (23% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.79 min; MS (ESIpos): m/z = 356 [M+H]+.
Beispiel 27A
fer/.-Butyl-3-[4-(2-amino-3,5-dicyano-6-mercaptopyridin-4-yl)phenoxy]pyrrolidin-l-carboxylat
Zur in Beispiel 18A erhaltenen Reaktionslösung gab man 0.68 g (6.78 mmol) 2-Cyanothioacetamid und 0.69 ml (6.17 mmol) 4-Methylmorpholin und erhitzte 18 h unter Rückfluss. Das Lösungsmittel wurde danach im Vakuum abdestilliert und der Rückstand ohne weitere Reinigung direkt weiter- verarbeitet.
Ausbeute: 3.12 g (51% Gehalt nach LC-MS, 59% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): Rt = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 438 [M+H]+.
Beispiel 28A
rαc-frα«5-2-Amino-4-[4-({4-hydroxy-l-[(4-methylphenyl)sulfonyl]pyrrolidin-3-yl}oxy)phenyl]-6- mercaptopyridin-3,5-dicarbonitril
3.00 g (8.30 mmol) der Verbindung aus Beispiel 1 IA wurden in 86 ml Ethanol gelöst, mit 1.66 g (16.6 mmol) 2-Cyanothioacetamid und 1.82 ml (16.6 mmol) 4-Methylmorpholin versetzt und 3 h unter Rückfluss gerührt. Man rührte danach den Ansatz in 150 ml 1 N Salzsäure ein, ließ 1 h bei RT nachrühren, filtrierte den Niederschlag dann ab und nahm diesen in Essigsäureethylester auf. Die wässrige Mutterlauge wurde mit Essigsäureethylester extrahiert, die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde über Kieselgel mit Dichlormethan/Methanol (50:1) als Laufmittel chromatographiert. Man erhielt drei produkthaltige Fraktionen, die ohne weitere Reinigung umgesetzt wurden:
Fraktion 1 : 2.00 g (24% Gehalt nach LC-MS, 11 % d. Th.); Fraktion 2: 0.27 g (29% Gehalt nach LC-MS, 1.8% d. Th.); Fraktion 3 : 1.12 g (71 % Gehalt nach LC-MS, 19% d. Th.).
LC-MS (Methode 5): R1 = 2.78 min; MS (ESIpos): m/z = 508 [M+H]+.
Beispiel 29A
terΛ-Butyl-3-{4-[2-amino-6-({[2-(4-chloφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)-3,5-dicyano- pyridin-4-yl]phenoxy}pyrrolidin-l-carboxylat
500 mg (0.58 mmol) der Verbindung aus Beispiel 27A und 156 mg (0.64 mmol) 4-(Chlormethyl)-
2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol wurden in 5.8 ml DMF gelöst, mit 107 mg (1.28 mmol) Natrium- hydrogencarbonat versetzt und 1 h bei 500C gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präpara-
tive HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufinittel-Gradient: Acetonitril/ Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 175 mg (47% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-O6): δ = 8.35-7.95 (br. s, 2H), 7.95 (d, 2H); 7.92 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.49 (d, 2H); 7.11 (d, 2H); 5.10 (br., IH); 4.63 (s, 2H); 3.60 (m, IH); 3.48-3.31 (m, 3H); 2.18 (m, IH); 2.08 (m, IH); 1.40 (s, 9H).
LC-MS (Methode 3): R, = 1.40 min; MS (ESIpos): m/z = 646 [M+H]+.
Beispiel 3OA
rac-/rα«^-2-Chlor-6-({[2-(4-chlθφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}sulfanyl)-4-(4-{[4-hydroxy- tetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
521 mg (0.93 mmol) der Verbindung aus Beispiel 24 wurden in 10 ml 37%-iger Salzsäure gelöst. Zu dem Gemisch wurden bei 00C 192 mg (2.78 mmol) Natriumnitrit gegeben. Es wurde zunächst 1 h bei 00C und dann über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reinigung der Reaktions- mischung erfolgte direkt mittels präparativer HPLC (Säule: Reprosil C 18, 10 μm; Eluent A: Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min 10% B → 30 min 95% B -> 34 min 95% B → 34.01 min 10% B → 38 min 10% B; Fluss: 50 ml/min).
Ausbeute: 406 mg (75% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-(I6): δ = 7.95 (d, 2H); 7.75 (s, IH); 7.64 (d, 2H); 7.57 (d, 2H); 7.23 (d, 2H); 4.79-4.75 (m, 3H); 4.25 (m, IH); 4.08 (dd, IH); 3.94 (dd, IH); 3.87-3.70 (m, 2H); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 3): R, = 3.01 min; MS (ESIpos): m/z = 581 [M+H]+.
Beispiel 31A
rαc-3-[({6-Chlor-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl}sulfanyl)methyl]- benzamid
0.78 g (1.65 mmol) der Verbindung aus Beispiel 43 und 0.44 g (3.30 mmol) Kupfer(I)chlorid wur- den unter Argon in 40 ml Acetonitril vorgelegt, mit 0.44 ml (3.30 mmol) Isopentylnitrit versetzt und 4 h bei 600C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde der Ansatz mit 3.3 ml 1 N Salzsäure und 30 ml Wasser versetzt und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde mit Wasser und gesättigter wässriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer vom Lösungsmittel befreit. Das erhaltene Rohprodukt wurde über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 0.19 g (22% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 2.33 min; MS (ESIpos): m/z = 490 [M+H]+.
Die Verbindungen in nachfolgender Tabelle wurden nach den Verfahren in den jeweils zitierten Literaturstellen hergestellt:
Beispiel 36A
4-(Chlormethyl)-N-methylpyridin-2-carboxamid-Hydrochlorid
10 g (45.32 mmol) der Verbindung aus Beispiel 32A wurden in 160 ml Dichlormethan suspendiert und auf 00C abgekühlt. Nach Zugabe von 16.18 g (135.96 mmol) Thionylchlorid wurde das Reaktionsgemisch auf RT erwärmt und über Nacht bei RT gerührt. Der Ansatz wurde danach eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 10 g (quant.)
LC-MS (Methode 14): R, = 0.71 min; MS (ESIpos): m/z = 185 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.85-8.78 (m, IH); 8.65 (d, IH); 8.10 (s, IH); 7.64 (d, IH); 4.90 (s, 2H); 2.83 (d, 3H).
Beispiel 37A
2-(4-Chlorphenyl)-4,5-dimethyl-l ,3-oxazol-3-oxid
1.00 g (9.89 mmol) Diacetylmonoxim und 1.53 g (10.88 mmol) 4-Chlorbenzaldehyd wurden in 2 ml (34.94 mmol) Eisessig vorgelegt. Dann wurde 30 min lang Chlorwasserstoff-Gas unter Eisbad-Kühlung des Reaktionsgemisches eingeleitet. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch mit 10 ml Diethylether versetzt. Es fiel ein Niederschlag aus, der abgesaugt und zweimal mit je 2 ml Diethylether gewaschen wurde. Der Niederschlag wurde in ca. 5 ml Wasser re-suspendiert und die Suspension mit Ammoniak basisch gestellt. Es wurde dann viermal mit je 10 ml Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde ohne weitere Reinigung in der Folgereaktion eingesetzt.
Ausbeute: 1.85 g (84% d. Th.)
LC-MS (Methode 5): R, = 2.29 min; MS (ESIpos): m/z = 224 [M+H]+.
Beispiel 38A
4-(Chlormethyl)-2-(4-chlθφhenyl)-5-methyl-l,3-oxazol
1.00 g (4.47 mmol) der Verbindung aus Beispiel 37A wurden in 15 ml Chloroform vorgelegt und vorsichtig mit 1.5 ml (16.10 mmol) Phosphorylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 30 min unter Rühren zum Rückfluss erhitzt. Der Ansatz wurde anschließend auf 00C abgekühlt
und durch Zugabe von Ammoniak schwach basisch gestellt. Das Gemisch wurde dreimal mit je 20 ml Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden zweimal mit je 5 ml Wasser gewaschen und anschließend über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde ohne weitere Reinigung in den Folge- stufen eingesetzt.
Ausbeute: 1.33 g (96% d. Th., 78% Reinheit)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.95 (d, 2H); 7.60 (d, 2H); 4.77 (s, 2H); 2.44 (s, 3H).
LC-MS (Methode 3): R, = 2.80 min; MS (ESIpos): m/z = 242 [M+H]+.
Beispiel 39A
rac-tran s-2-Amino-4-(4- { [4- { [ter£.-butyl(dimethyl)silyl]oxy } tetrahydrofuran-3-yl]oxy } phenyl)-6- ({[2-(4-chlθφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)pyridin-3,5-dicarbonitril
190 mg (0.34 mmol) der Verbindung aus Beispiel 21A und 91.5 mg (0.38 mmol) 4-(Chlormethyl)- 2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol wurden in 3.4 ml DMF gelöst, mit 94.1 mg (0.68 mmol) Kalium- carbonat versetzt und 1 h bei 500C gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 196 mg (85% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-Cl6): δ = 8.30-7.90 (br. s, 2H); 7.96 (s, IH); 7.92 (d, 2H); 7.50 (d, 2H); 4.81 (d, IH); 4.64 (s, 2H); 4.41 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 4.01 (dd, IH); 3.79 (d, IH); 3.54 (dd, IH); 0.88 (s, 9H); 0.08 (s, 3H); 0.06 (s, 3H).
HPLC (Methode 19): R, = 6.33 min; MS (ESIpos): m/z = 676 [M+H]+.
Beispiel 4OA
rac-£rart£-2-Amino-6-(benzylthio)-4-[4-( {4-hydroxy- 1 -[(4-methylphenyl)sulfonyl]pyrrolidin-3-yl} - oxy)phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
2.00 g (1.14 mmol) der Produktfraktion 1 aus Beispiel 28A wurden zusammen mit 0.21 g (1.26 mmol) Benzylbromid in 11.4 ml DMF gelöst, mit 0.35 g (2.51 mmol) Kaliumcarbonat versetzt und
1 h bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präparative HPLC gereinigt
(Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5).
Man erhielt 270 mg der Zielverbindung (90% Reinheit nach LC-MS, 36% d. Th.), wovon 50 mg mittels erneuter präparativer HPLC nachgereinigt wurden. Man erhielt so 32 mg (4.5% d. Th.) der reinen Titelverbindung.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.35-7.95 (br. s, 2H); 7.61 (d, 2H); 7.51 (d, 2H); 7.42 (d, 2H); 7.39-7.26 (m, 5H); 6.78 (d, 2H); 5.60 (d, IH); 4.63 (d, IH); 4.50 (s, 2H); 4.15 (br. t, IH); 3.59 (dd, IH); 3.40-3.30 (m, 2H); 3.18 (m, IH); 2.40 (s, 3H).
LC-MS (Methode 20): R, = 2.55 min; MS (ESIpos): m/z = 598 [M+H]+.
Beispiel 41A
2-Amino-6-(phenylsulfanyl)-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
7.0 g (36.4 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A, 4.81 g (72.8 mmol) Malonsäuredinitril sowie 4.0 g (36.4 mmol) Thiophenol wurden in 65 ml Ethanol vorgelegt, mit 0.1 ml Triethylamin versetzt und über Nacht unter Rückfluss gerührt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit etwas kaltem Ethanol gewaschen und im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 6.28 g (41% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 2.51 min; MS (ESIpos): m/z = 415 [M+H]+.
Beispiel 42A und Beispiel 43A
e/tf-[4-(Tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]methanol
20 g (104.049 mmol) der Verbindung aus Beispiel 7A wurden in 350 ml THF gelöst und tropfenweise bei 00C mit 83 ml (83.239 mmol) einer 1 M Lösung von Lithiumaluminiumhydrid in THF versetzt. Nach einstündigem Rührem bei 00C wurden nacheinander 260 ml Essigsäureethylester, 10 ml Wasser, 10 ml 1 N Natronlauge und nochmals 21 ml Wasser zugegeben. Der Niederschlag
wurde abfiltriert und das Filtrat am Rotationsverdampfer eingeengt. Durch präparative HPLC des Rückstands an chiraler Phase wurde die Titelverbindung in die Enantiomere aufgetrennt [Säule: Daicel Chiralpak AS-H, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol 70:30 (v/v); Fluss: 15 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm]:
Beispiel 42A (Enantiomer 1):
Ausbeute: 9.9 g (ehem. Reinheit 65%, 32% d. Th., >99% ee)
R, = 7.60 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AS-H, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol 70:30 (v/v);
Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 35°C; UV-Detektion: 220 nm]
LC-MS (Methode 3): R, = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 177 [M-H2O+H]+.
Beispiel 43A (Enantiomer 2):
Ausbeute: 8.8 g (ehem. Reinheit 65%, 28% d. Th., >98% ee)
Rt = 8.77 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AS-H, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol 70:30 (v/v); Fluss: 1 ml/min; Temperatur: 35°C; UV-Detektion: 220 nm]
LC-MS (Methode 3): R, = 1.22 min; MS (ESIpos): m/z = 177 [M-H2O+H]+.
Beispiel 44A
e«i-4-(Tetrahydrofuran-3-yloxy)benzaldehyd
9.9 g (Reinheit 65%, 33.13 mmol) der Verbindung aus Beispiel 42A (Enantiomer 1) wurden in 85 ml Methanol gelöst und mit 23.042 g (265.043 mmol) Mangandioxid versetzt. Es wurde über Nacht bei 400C gerührt. Danach wurde das Reaktionsgemisch über Kieselgel filtriert, das Filtrat
eingeengt und der Rückstand an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/THF zunächst 40:1, dann 20:1).
Ausbeute: 5.74 g (Reinheit 87%, 78% d. Th.)
LC-MS (Methode 14): R, = 0.84 min; MS (ESIpos): m/z = 193 [M+H]+.
Beispiel 45A
e/j^-2-Amino-6-mercapto-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
6.275 g (32.645 mmol) der Verbindung aus Beispiel 44A, 6.538 g (65.291 mmol) 2-Cyanothio- acetamid und 6.604 g (65.291 mmol) 4-Methylmorpholin wurden in 80 ml Ethanol gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde 4 h unter Rückfluss gerührt und dann auf 00C abgekühlt. Der ausgefallene Feststoff wurde abgesaugt, mit wenig eiskaltem Ethanol gewaschen und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 2.72 g (25% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.69 min; MS (ESIpos): m/z = 339 [M+H]+.
Ausführungsbeispiele:
Beispiel 1
rαc-frαπ5-2-Amino-4-(4-{[-2-hydroxycyclopentyl]oxy}phenyl)-6-[(pyridin-3-ylmethyl)thio]- pyridin-3 ,5-dicarbonitril
Eine Lösung von 200 mg (0.568 mmol) der Verbindung aus Beispiel 19A in 2 ml DMF wurde zusammen mit 107 mg (0.624 mmol) 3-Chlormethylpyridin-Hydrochlorid und 157 mg (1.135 mmol) Kaliumcarbonat über Nacht bei 50°C gerührt. Nach Zugabe von 0.7 ml 5 N Essigsäure wurde die Reaktionsmischung direkt über präparative HPLC aufgereinigt.
Ausbeute: 174 mg (69% d. Th.)
LC-MS (Methode 9): R, = 1.84 min; MS (ESIpos): m/z = 444 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.78 (d, IH); 8.48-8.41 (m, IH); 8.41-7.70 (br. s, 2H); 7.97- 7.90 (m, IH); 7.45 (d, 2H); 7.38-7.30 (m, IH); 7.08 (d, 2H); 5.03 (d, IH); 4.56-4.44 (m, 3H); 4.12- 4.04 (m, IH); 2.22-2.09 (m, IH); 1.93-1.82 (m, IH); 1.83-1.59 (m, 3H); 1.59-1.50 (m, IH).
Analog zur Vorschrift für Beispiel 1 wurden die Verbindungen in der nachfolgenden Tabelle aus den angegebenen Edukten und den entsprechenden Alkylierungskomponenten hergestellt. Die Alkylierungskomponenten sind kommerziell erhältlich oder zuvor beschrieben worden, oder sie können nach üblichen, dem Fachmann bekannten Methoden hergestellt werden.
Beispiel 20 und Beispiel 21
e«f-fra«5-2-Amino-6-({[2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}sulfanyl)-4-(4-{[2-hydroxy- cyclohexyl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 11 in die Enantio- mere getrennt [Gerätetyp: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Methanol/Isopropanol (3: 1 :1); Fluss: 20 ml/min; Temperatur: 24°C; UV-Detektion: 250 nm]:
Beispiel 20 (Enantiomer IY
R, = 5.305 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Methanol/Isopropanol
(4:1 :1); Fluss: 1.5 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 21 (Enantiomer 2Y
R, = 6.441 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Methanol/Isopropanol (4: 1 :1); Fluss: 1.5 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 22 und Beispiel 23
e«f-frα«5-2-Amino-6-[(2-cyanobenzyl)sulfanyl]-4-(4-{[2-hydroxycyclohexyl]oxy}phenyl)pyridin- 3,5-dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 12 in die Enantio- mere getrennt [Gerätetyp: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Daicel Chiralcel OD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (65:35); Fluss: 20 ml/min; Temperatur: 24°C; UV- Detektion: 220 nm]:
Beispiel 22 (Enantiomer 1):
R4 = 13.416 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 23 (Enantiomer 2):
R, = 15.233 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 24
rac-frα«5-2-Amino-6-({[2-(4-chloφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)-4-(4-{[4-hydroxytetra- hydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
170 mg (0.25 mmol) der Verbindung aus Beispiel 39A wurden in 2.5 ml THF gelöst und mit 0.5 ml einer 1 M Lösung von Tetra-H-butylammoriiumfluorid in THF versetzt. Das Reaktionsge- misch wurde 1 h bei RT gerührt. Der Ansatz wurde dann in 20 ml Wasser eingerührt und mit 20 ml Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Phase wurde mit gesättigter wässriger Kochsalz- Lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt.
Ausbeute: 131 mg (93% d. Th.)
1H-NMR (500 MHz, DMSO-Cl6): δ = 8.45-7.90 (br. s, IH); 7.95 (d, 2H); 7.92 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.50 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 5.54 (d, IH); 4.74 (d, IH); 4.64 (s, 2H); 4.24 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
HPLC (Methode 19): R, = 4.90 min; MS (DCI/NH3): m/z = 562 [M+H]+.
Beispiel 25 und Beispiel 26
eΛ^rra«5-2-Amino-6-({[2-(4-chloφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)-4-(4-{[4-hydroxytetra- hydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 24 in die Enantio- mere getrennt [Gerätetyp: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (7:3); Fluss: 15 ml/min; Temperatur: 24°C; UV- Detektion: 290 nm]:
Beispiel 25 (Enantiomer 1):
Rt = 12.41 min. [Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (7:3); Fluss: 1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 26 (Enantiomer 2):
R, = 14.49 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (7:3); Fluss: 1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 27
rac-fra/J5-2-({[2-(4-Chloφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}sulfanyl)-6-(3-hydroxyazetidin-l-yl)-4- (4- { [4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy} phenyl)pyridin-3 ,5-dicarbonitril
415 mg (0.71 mmol) der Verbindung aus Beispiel 3OA wurden in 10 ml THF gelöst, mit 156 mg (1.43 mmol) 3-Hydroxyazetidin-Hydrochlorid sowie 185 mg (1.43 mmol) N,N-Diisopropylethyl- amin versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Die Reinigung der Reaktionsmischung erfolgte direkt mittels präparativer HPLC (Säule: Reprosil C 18, 10 μm; Eluent A: Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0.0 min 10% B → 30 min 95% B -> 34 min 95% B → 34.01 min 10% B → 38 min 10% B; Fluss: 50 ml/min).
Ausbeute: 183 mg (41% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 2.67 min; MS (ESIpos): m/z = 618 [M+H]+.
Beispiel 28 und Beispiel 29
ent-trans-2-( {[2-(4-Chlorphenyl)-l ,3-thiazol-4-yl]methyl} sulfanyl)-6-(3-hydroxyazetidin-l -yl)-4- (4- { [4-hydroxytetrahydrofuran-3 -yl] oxy } phenyl)pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 27 in die Enantio- mere getrennt [Säule: Chiralpak IC, 250 mm x 20 mm; Eluent: Methyl-tert.-butylether/Acetonitril (7:3); Fluss: 15 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 220 nm]:
Beispiel 28 (Enantiomer 1):
R, = 6.01 min.
[Säule: Chiralpak IC, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Methyl-ter/.-butylether/Acetonitril (7:3); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm].
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.95 (d, 2H); 7.68 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.49 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 5.88 (d, IH); 5.54 (d, IH); 4.74 (d, IH); 4.71-4.54 (m, 5H); 4.24 (br. s, IH); 4.16 (br. d, 2H); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.79 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
Beispiel 29 (Enantiomer 2):
R, = 7.46 min.
[Säule: Chiralpak IC, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Methyl-ter^-butylether/Acetonitril (7:3); Fluss: 1.0 ml/min; Temperatur: 25°C; UV-Detektion: 220 nm].
Beispiel 30
rαc-;rα«5-2-Amino-4-(4-{[4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)-6-[(pyridin-3-ylmethyl)- thio]pyridin-3 ,5-dicarbonitril
300 mg (0.42 mmol) des Rohprodukts aus Beispiel 22A und 76.4 mg (0.47 mmol) 3-Picolyl- chlorid-Hydrochlorid wurden in 4.2 ml DMF gelöst, mit 128 mg (0.93 mmol) Kaliumcarbonat versetzt und 1 h bei 500C gerührt. Der Ansatz wurde direkt über präparative HPLC (Methode 18) auf- gereinigt. Zur weiteren Reinigung wurde nochmals über Kieselgel mit Dichlormethan/Methanol (50:1) als Laufmittel chromatographiert.
Ausbeute: 45 mg (23% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.78 (s, IH); 8.45 (d, IH); 8.40-7.90 (br. s, 2H); 7.95 (d, IH); 7.50 (d, 2H); 7.34 (dd, IH); 7.14 (dd, 2H); 5.54 (d, IH); 4.74 (d, IH); 4.49 (s, 2H); 4.23 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.92 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 2): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z = 445 [M+H]+.
Beispiel 31
rαc-/rα«5-2-Amino-4-(4-{[4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)-6-[(pyridin-2-ylmethyl)- thio]pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen.
Ausbeute: 53% d. Th.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.53 (d, IH); 8.40-7.90 (br. s, 2H); 7.76 (dt, IH); 7.65 (d, IH); 7.50 (dd, IH); 7.29 (t, IH); 7.15 (dd, 2H); 5.54 (d, IH); 4.75 (d, IH); 4.61 (s, 2H); 4.24 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 3): R, = 1.86 min; MS (ESIpos): m/z = 445 [M+H]+.
Beispiel 32 und Beispiel 33
e«Nfrα«5-2-Amino-4-(4-{[4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)-6-[(pyridin-2-ylmethyl)- thio]pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 31 in die Enantio- mere getrennt [Gerätetyp: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss: 20 ml/min; Temperatur: 24°C; UV- Detektion: 290 nm]:
Beispiel 32 (Enantiomer 1):
R, = 14.12 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 33 (Enantiomer 2):
R, = 21.40 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 34
rαc-?rα«5-2-Amino-6-[({2-[(4-fluorphenyl)amino]-l,3-thiazol-4-yl}methyl)thio]-4-(4-{[4-hydroxy- tetrahydrofuran-3 -yl]oxy } phenyl)pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den Ausgangsverbindungen 22A und 35A.
Ausbeute: 42% d. Th.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 10.2 (s, IH); 8.30-7.90 (br. s, 2H); 7.62 (dd, 2H); 7.50 (d, 2H); 7.14 (m, 4H); 6.97 (s, IH); 5.54 (d, IH); 4.75 (d, IH); 4.45 (s, 2H); 4.24 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 3): R, = 2.47 min; MS (ESIpos): m/z = 560 [M+H]+.
Beispiel 35 und Beispiel 36
e«i-iran5-2-Amino-6-[({2-[(4-fluoφhenyl)amino]-l,3-thiazol-4-yl}methyl)thio]-4-(4-{[4-hydroxy- tetrahydroruran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 34 in die Enantio- mere getrennt [Gerätetyp: Agilent 1100 mit DAD-Detektion; Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (3:2); Fluss: 20 ml/min; Temperatur: 24°C; UV- Detektion: 290 nm]:
Beispiel 35 (Enantiomer 1\.
R, = 21.42 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 36 {Enantiomer 2):
R, = 28.31 min.
[Säule: Daicel Chiralpak AD-H, 5 μm, 250 mm x 4 mm; Eluent: Isohexan/Ethanol (3:2); Fluss:
1.0 ml/min; Temperatur: 300C; UV-Detektion: 290 nm].
Beispiel 37
rac-fra«5-2-Amino-6-[(2-fluorethyl)thio]-4-(4-{[4-hydroxytetrahydroruran-3-yl]oxy}phenyl)- pyridin-3,5-dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen.
Ausbeute: 10% d. Th.
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.25-7.85 (br. s, 2H); 7.51 (d, 2H); 7.16 (d, 2H); 5.54 (d, IH); 4.76 (d, IH); 4.72 (t, 2H); 4.60 (t, 2H); 4.25 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.64-3.53 (m, 3H).
LC-MS (Methode 4): R, = 3.02 min; MS (ESIpos): m/z = 401 [M+H]+.
Beispiel 38
rαc-frα«5-2-Amino-6-[(2,2-difluorethyl)thio]-4-(4-{[4-hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)- pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen.
Ausbeute: 11% d. Th.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-(I6): δ = 8.40-7.90 (br. s, 2H); 7.53 (d, 2H); 7.17 (d, 2H); 6.32 (tt, IH); 5.55 (d, IH); 4.76 (d, IH); 4.25 (br. t, IH); 4.09 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.87-3.74 (m, 3H); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 4): R, = 3.13 min; MS (ESIpos): m/z = 419 [M+H]+.
Beispiel 39
rac-trans-2-£imino-6-( { [2-(4-chlorphenyl)- 1 ,3-oxazol-4-yl]methyl} thio)-4-(4- { [4-hydroxytetra- hydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den Ausgangsverbindungen 22A und 34A.
Ausbeute: 14% d. Th.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-(I6): δ = 8.36 (s, IH); 8.30-7.90 (br. s, IH); 7.97 (d, 2H); 7.60 (d, 2H); 7.49 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 5.54 (d, IH); 4.74 (d, IH); 4.42 (s, 2H); 4.24 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH).
LC-MS (Methode 3): R, = 2.21 min; MS (ESIpos): m/z = 546 [M+H]+.
Beispiel 40
rac-fra«5-2-Amino-6-({[2-(4-chloφhenyl)-5-methyl-l,3-oxazol-4-yl]methyl}thio)-4-(4-{[4- hydroxytetrahydrofuran-3-yl]oxy}phenyl)pyridin-3,5-dicarbonitril
Die Darstellung der Titelverbindung erfolgte analog zur Vorschrift von Beispiel 30 aus den Ausgangsverbindungen 22A und 38 A.
Ausbeute: 19% d. Th.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-(I6): δ = 8.22-7.95 (br. s, IH); 7.92 (d, 2H); 7.58 (d, 2H); 7.49 (d, 2H); 7.15 (d, 2H); 5.54 (d, IH); 4.75 (d, IH); 4.51 (s, 2H); 4.24 (br. t, IH); 4.08 (dd, IH); 3.93 (dd, IH); 3.80 (d, IH); 3.60 (dd, IH); 2.47 (s, 3H).
LC-MS (Methode 6): R, = 2.33 min; MS (ESIpos): m/z = 560 [M+H]+.
Beispiel 41
rac-c/s-2-Amino-4-(4- { [2-hydroxycyclopentyl]oxy } phenyl)-6-[(pyridin-3-ylmethyl)sulfanyl]- pyridin-3,5-dicarbonitril
Die in Beispiel 23A erhaltene Reaktionslösung wurde mit 1 ml DMF, 43 mg (0.25 mmol) 3-Chlor- methylpyridin-Hydrochlorid sowie 70 mg (0.5 mmol) Kaliumcarbonat versetzt und über Nacht bei 500C gerührt. Es wurden dann 0.2 ml 5 N Essigsäure zugegeben, und die Lösung wurde direkt über präparative HPLC gereinigt. Die produkthaltigen Fraktionen wurden durch nochmalige präparative HPLC nachgereinigt. Der erhaltene Feststoff (21.6 mg) wurde in heißem Ethanol gelöst, mit Wasser versetzt und partiell eingeengt. Der dabei ausfallende Niederschlag wurde abgesaugt, mit Wasser gewaschen und im Hochvakuum getrocknet.
Ausbeute: 6.8 mg (9% d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 1.84 min; MS (ESIpos): m/z = 444 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.79 (s, IH); 8.49-8.40 (m, IH); 8.40-7.70 (br. s, 2H); 7.98- 7.92 (m, IH); 7.45 (d, 2H); 7.40-7.32 (m, IH); 7.10 (d, 2H); 4.75-4.60 (br., IH); 4.62-4.55 (m, IH); 4.50 (s, 2H); 4.18-4.08 (m, IH); 2.04-1.90 (m, IH); 1.87-1.60 (m, 4H); 1.60-1.44 (m, IH).
Beispiel 42
rαc-2-Arnino-6-({[2-(4-chlθφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)- phenyl]pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
100 mg (0.30 mmol) der Verbindung aus Beispiel 24A und 79.4 mg (0.32 mmol) 4-(Chlormethyl)- 2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol wurden in 3.0 ml DMF gelöst, mit 54.6 mg (0.65 mmol) Natrium- hydrogencarbonat versetzt und 1 h bei 500C gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präpara- tive HPLC (Methode 18) aufgereinigt.
Ausbeute: 113 mg (70% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.35-7.95 (br. s, 2H); 7.95 (d, 2H); 7.93 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.49 (d, 2H); 7.09 (d, 2H); 5.13 (br. t, IH); 4.65 (s, 2H); 3.95-3.75 (m, 4H); 2.18 (m, IH); 2.00 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): R, = 2.40 min; MS (ESIpos): m/z = 547 [M+H]+.
Analog zur Vorschrift von Beispiel 42 wurden die Verbindungen in der nachfolgenden Tabelle ausgehend von Beispiel 24 A und den entsprechenden Alkylierungskomponenten hergestellt:
Beispiel 49
rac-4-{4-[({6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl}thio)methyl]- 5-methyl- 1 ,3 -oxazol-2-yl } benzoesäure
0.13 g (0.23 mmol) der Verbindung aus Beispiel 45 wurden in 15 ml Dioxan suspendiert, mit 0.46 ml (0.46 mmol) 1 N Natronlauge versetzt und 2 Tage bei 500C gerührt. Anschließend wurde mit 1 N Salzsäure auf pH 3 gestellt und mit 30 ml Wasser verdünnt. Der entstandene Niederschlag wurde abfϊltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 86 mg (68% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 13.21 (s, IH); 8.30-7.95 (br. m, 6H); 7.51 (d, 2H); 7.10 (d, 2H); 5.15 (br. t, IH); 4.55 (s, 2H); 3.95-3.75 (m, 4H); 2.28 (m, IH); 2.00 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): R, = 1.88 min; MS (ESIpos): m/z = 554 [M+H]+.
Beispiel 50
rac-4-[( { 6- Amino-3 ,5 -dicyano-4- [4-(tetrahydrofuran-3 -yloxy)phenyl]pyridin-2-yl } sulfanyl)- methyl] -1,3 -thiazol-2-carboxamid
0.20 g (0.39 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47 wurden in 4 ml Methanol und 4 ml Acetonitril gelöst, mit 0.56 ml einer 7 M methanolischen Ammoniak-Lösung (3.94 mmol) versetzt und 18 h bei 500C gerührt. Anschließend wurden weitere 5.0 ml der Ammoniak-Lösung zugegeben und 2 h bei Raumtemperatur nachgerührt. Der Ansatz wurde dann am Rotationsverdampfer vom Lösungsmittel befreit und der Rückstand über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel-Gradient: Acetonitril/Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 105 mg (56% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.35-7.95 (br. s, IH); 8.13 (br. s, IH); 8.11 (s, IH); 7.85 (br. s, IH); 7.48 (d, 2H); 7.09 (d, 2H); 5.11 (br. t, IH); 4.60 (s, 2H); 3.95-3.75 (m, 4H); 2.27 (m, IH); 2.00 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): Rt = 1.55 min; MS (ESIpos): m/z = 478 [M+H]+.
Beispiel 51
rac-4-[( { 6- Amino-3 ,5 -dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3 -yloxy)phenyl]pyridin-2-yl } sulfanyl)- methyl]-N-methyl-l,3-thiazol-2-carboxamid
0.20 g (0.39 mmol) der Verbindung aus Beispiel 47 wurden in 10 ml Methanol und 5 ml Aceto- nitril gelöst, mit 0.25 ml einer 33%-igen ethanolischen Methylamin-Lösung (1.97 mmol) versetzt und 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit etwas Methanol gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 36 mg (19% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.73 (q, IH); 8.35-7.95 (br. s, IH); 8.11 (s, IH); 7.48 (d, 2H); 7.09 (d, 2H); 5.11 (br. t, IH); 4.60 (s, 2H); 3.95-3.75 (m, 4H); 2.78 (d, 3H); 2.28 (m, IH); 2.00 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): R, = 1.69 min; MS (ESIpos): m/z = 492 [M+H]+.
Beispiel 52
rac-3-[({3,5-Dicyano-6-[(3R)-3-hydroxypyrrolidin-l-yl]-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]- pyridin-2-yl} sulfanyl)methyl]benzamid
0.15 g (0.31 mmol) der Verbindung aus Beispiel 31A und 29.0 mg (0.33 mmol) (Λ)-3-Pyrrolidinol wurden in 3 ml THF 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präpa- rative HPLC (Methode 18) gereinigt.
Ausbeute: 18.0 mg ( 11 % d. Th.)
LC-MS (Methode 3): R, = 2.09 min; MS (ESIpos): m/z = 541 [M+H]+.
Beispiel 53
rαc-3-{[(3,5-Dicyano-6-{[(21S)-2,3-dihydroxypropyl]amino}-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)- phenyl]pyridin-2-yl)sulfanyl]methyl}benzamid
0.09 g (0.18 mmol) der Verbindung aus Beispiel 31A und 18.3 mg (0.20 mmol) (5)-3-Amino- propan-l,2-diol wurden in 1.8 ml THF und 0.18 ml DMSO 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präparative HPLC (Methode 18) gereinigt.
Ausbeute: 54 mg (54% d. Th.)
LC-MS (Methode 14): Rt = 0.97 min; MS (ESIpos): m/z = 545 [M+H]+.
Beispiel 54
rac-2-Amino-6-({[2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}sulfanyl)-4-[3-methoxy-4-(tetra- hydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
100 mg (46% Reinheit, 0.12 mmol) der Verbindung aus Beispiel 25A und 30.5 mg (0.12 mmol) 4-(Chlormethyl)-2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol wurden in 1.65 ml DMF gelöst, mit 21.0 mg (0.25 mmol) Natriumhydrogencarbonat versetzt und 1 h bei 500C gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel- Gradient: Acetonitril/ Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 38 mg (53% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.40-7.95 (br. s, 2H); 7.95 (d, 2H); 7.91 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.20 (d, IH); 7.10 (m, 2H); 5.08 (br. m, IH); 4.64 (s, 2H); 3.93-3.73 (m, 4H); 3.77 (s, 3H); 2.24 (m, IH); 2.00 (m, IH).
LC-MS (Methode 3): R, = 2.83 min; MS (ESIpos): m/z = 576 [M+H]+.
Analog zur Vorschrift von Beispiel 54 wurden die Verbindungen in der nachfolgenden Tabelle hergestellt:
Beispiel 57
rαc-2-Amino-6-({[2-(4-chloφhenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}sulfanyl)-4-[3-fluor-4-(tetrahydro- furan-3 -yloxy)phenyl]pyridin-3 ,5 -dicarbonitril
100 mg (93% Reinheit, 0.26 mmol) der Verbindung aus Beispiel 26A und 31.5 mg (0.13 mmol) 4-(Chlormethyl)-2-(4-chloφhenyl)-l,3-thiazol wurden in 1.70 ml DMF gelöst, mit 21.7 mg (0.26 mmol) Natriumhydrogencarbonat versetzt und 1 h bei 50
0C gerührt. Der Ansatz wurde danach direkt über präparative HPLC gereinigt (Säule: YMC GEL ODS-AQ S-5, 15 μm; Laufmittel- Gradient: Acetonitril/ Wasser 10:90 → 95:5).
Ausbeute: 50 mg (34% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.40-7.95 (br. s, 2H); 7.95 (d, 2H); 7.92 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.53 (d, IH); 7.33 (m, 2H); 5.19 (br. m, IH); 4.64 (s, 2H); 3.93 (dd, IH); 3.96 (m, 2H); 3.77 (m, IH); 2.29 (m, IH); 2.02 (m, IH).
LC-MS (Methode 14): R4 = 1.46 min; MS (ESIpos): m/z = 564 [M+H]+.
Analog zur Vorschrift von Beispiel 57 wurde die Verbindung in der nachfolgenden Tabelle hergestellt:
Beispiel 59
rαc-2-Amino-6-({[2-(4-chlorphenyl)-l,3-thiazol-4-yl]methyl}thio)-4-[4-(pyrrolidin-3-yloxy)- phenyl]pyridin-3,5-dicarbonitril
0.15 g (0.23 mmol) der Verbindung aus Beispiel 29A wurden in 4.8 ml Dioxan suspendiert, mit 1.5 ml einer 4 M Lösung von Chlorwasserstoff in Dioxan versetzt und 6 h bei Raumtemperatur gerührt. Der Ansatz wurde danach in 40 ml einer halbkonzentrierten wässrigen Lösung von Natrium- hydrogencarbonat eingerührt. Der Niederschlag wurde abfϊltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 86 mg (65% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.35-7.95 (br. s, 2H); 7.95 (d, 2H); 7.92 (s, IH); 7.57 (d, 2H); 7.46 (d, 2H); 7.05 (d, 2H); 4.92 (br. t, IH); 4.63 (s, 2H); 3.08 (dd, IH); 2.95-2.85 (m, 2H); 2.80- 2.74 (m, IH); 2.10-2.00 (m, IH); 1.81-1.73 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): R, = 1.49 min; MS (ESIpos): m/z = 545 [M+H]+.
Beispiel 60
rac-3-[({6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl}oxy)methyl]- benzoesäure
487 mg (4.34 mmol) Kalium-tert.-butylat wurden in 3.8 ml 1 ,2-Dimethoxyethan suspendiert, mit 512 mg (2.9 mmol) 3-(Hydroxymethyl)benzoesäure und anschließend mit 300 mg (0.724 mmol) der Verbindung aus Beispiel 41A versetzt und dann 12 h bei 600C gerührt. Die Reaktionslösung wurde danach mit 5 ml Wasser versetzt und unter Kühlung mit 1 N Salzsäure angesäuert. Es wurde dreimal mit Ethylacetat extrahiert, und die vereinten organischen Phasen wurden einmal mit gesättigter Natriumchlorid-Lösung gewaschen. Nach Eindampfen wurde der Rückstand über präparative HPLC (unter Zusatz von 0.1% TFA) gereinigt.
Ausbeute: 113 mg (34% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 13.08 (br. s, IH); 8.40-7.65 (m, 5H); 7.55 (t, IH); 7.49 (d, 2H); 7.09 (d, 2H); 5.52 (s, 2H); 5.13-5.10 (m, IH); 3.98-3.72 (m, 4H); 2.32-2.20 (m, IH); 2.06- 1.95 (m, IH).
LC-MS (Methode 14): Rt = 1.06 min; MS (ESIpos): m/z = 457 [M+H]+.
Beispiel 61
rac-3-[({6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl}oxy)methyl]- benzamid
120 mg (0.237 mmol) der Verbindung aus Beispiel 60 wurden in 2 ml DMF gelöst, mit 68 mg (0.355 mmol) l-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid sowie 48 mg (0.355 mmol) 1-Hydroxy-lH-benzotriazol-Hydrat versetzt und 10 min bei RT gerührt. Anschließend wur- den 63 mg (1.18 mmol) Ammoniumchlorid und 214 mg (0.36 mmol) N,N-Diisopropylethylamin zugesetzt und der Ansatz über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde danach mit etwas Wasser versetzt und direkt über präparative HPLC (unter Zusatz von 0.1% TFA) aufgereinigt.
Ausbeute: 100 mg (93% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.40-7.72 (m, 5H); 7.68 (d, IH); 7.53-7.35 (m, 4H); 7.09 (d, 2H); 5.50 (s, 2H); 5.13-5.10 (m, IH); 3.98-3.72 (m, 4H); 2.34-2.22 (m, IH); 2.06-1.96 (m, IH).
LC-MS (Methode 7): R, = 1.54 min; MS (ESIpos): m/z = 456 [M+H]+.
Beispiel 62
3-[ 1 -( {6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl} sulfanyl)ethyl]- benzoesäuremethylester
500 mg (1.478 mmol) der Verbindung aus Beispiel 45A wurden in 5 ml DMF gelöst, mit 395 mg (1.625 mmol) 3-(l-Bromethyl)benzoesäuremethylester (zur Herstellung siehe z.B. US 4,499,299) sowie 372 mg (4.433 mmol) Natriumhydrogencarbonat versetzt und 3 Stunden bei RT gerührt. An- schließend wurde mit soviel Wasser versetzt, dass eine klare Lösung entstand. Das Reaktionsgemisch wurde dann direkt über präparative HPLC (unter Zusatz von 0.1% TFA) aufgereinigt.
Ausbeute: 577 mg (78% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.30-7.95 (m, 3H); 7.90 (d, IH); 7.86 (d, IH); 7.51 (d, IH); 7.46 (d, 2H); 7.07 (d, 2H); 5.28 (q, IH); 5.11 (m, IH); 3.92 (dd, IH); 3.87 (s, 3H); 3.84-3.74 (m, 3H); 2.27 (m, IH); 1.99 (m, IH); 1.75 (d, 3H).
LC-MS (Methode 7): R, = 2.18 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+.
Beispiel 63 und Beispiel 64
ent-3-[ 1 -( {6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl} sulfanyl)- ethyl]benzoesäuremethylester
Durch präparative HPLC an chiraler Phase wurde die Verbindung aus Beispiel 62 (530 mg) in die Enantiomere getrennt [Säule: Daicel Chiralcel OD-H, 5 μm, 250 mm x 20 mm; Eluent: Isohexan/ Isopropanol (1:1); Fluss: 15 ml/min; Temperatur: 400C; UV-Detektion: 220 nm]:
Beispiel 63 (Enantiomer 1):
Ausbeute: 258 mg (>99% ehem. Reinheit, >99% ee)
Rt = 6.16 min.
[Säule: Daicel Chiralcel OD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (4:6);
Fluss: 1.0 ml/min; Temperatur: 400C; UV-Detektion: 215 nm].
Beispiel 64 (Enantiomer 2):
Ausbeute: 248 mg (>99% ehem. Reinheit, >99% ee)
R1 = 8.62 min.
[Säule: Daicel Chiralcel OD-H, 5 μm, 250 mm x 4.6 mm; Eluent: Isohexan/Isopropanol (4:6);
Fluss: 1.0 ml/min; Temperatur: 400C; UV-Detektion: 215 nm].
Beispiel 65
ent-3-[ 1 -( {6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl} sulfanyl)- ethyl]benzoesäure
245 mg (0.489 mmol) der Verbindung aus Beispiel 64 wurden in 10 ml THF gelöst, mit 0.98 ml einer 1 N Lösung von Lithiumhydroxid in Wasser versetzt und über Nacht bei 400C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch mit 1 N Salzsäure angesäuert und die Lösung direkt über präparative HPLC (unter Zusatz von 0.1% TFA) aufgereinigt.
Ausbeute: 234 mg (98% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 13.08 (br. s, IH); 8.40-7.78 (m, 5H); 7.49-7.42 (m, 3H); 7.09 (d, 2H); 5.30 (q, IH); 5.12-5.09 (m, IH); 3.95-3.71 (m, 4H); 2.31-2.20 (m, IH); 2.05-1.95 (m, IH); 1.76 (d, 3H).
LC-MS (Methode 3): R, = 2.34 min; MS (ESIpos): m/z = 487 [M+H]+.
Beispiel 66
e«f-3-[l-({6-Amino-3,5-dicyano-4-[4-(tetrahydrofuran-3-yloxy)phenyl]pyridin-2-yl}sulfanyl)- ethyl]benzoesäureamid
75 mg (0.154 mmol) der Verbindung aus Beispiel 65 wurden in 1.5 ml DMF gelöst, mit 44 mg (0.231 mmol) l-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid sowie 31 mg (0.231 mmol) 1-Hydroxy-lH-benzotriazol-Hydrat versetzt und 10 Minuten bei RT gerührt. Anschließend wurden 41 mg (0.771 mmol) Ammoniumchlorid und 139 mg (1.079 mmol) N,N-Diisopropylethyl- amin zugegeben und der Ansatz über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde dann mit Wasser versetzt und direkt über präparative HPLC (unter Zusatz von 0.1% TFA) aufgereinigt.
Ausbeute: 47 mg (63% d. Th.)
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 8.40-7.82 (m, 4H); 7.79 (d, IH); 7.75 (d, IH); 7.49-7.38 (m, 4H); 7.08 (d, 2H); 5.21 (q, IH); 5.12-5.09 (m, IH); 3.94-3.71 (m, 4H); 2.32-2.20 (m, IH); 2.04- 1.95 (m, IH); 1.75 (d, 3H).
LC-MS (Methode 20): R, = 2.06 min; MS (ESIpos): m/z = 486 [M+H]+.
B. Bewertung der pharmakologischen und physiologischen Wirksamkeit
Die pharmakologische und physiologische Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in folgenden Assays gezeigt werden:
B-I. Indirekte Bestimmung des Adenosin-Agonismus über Genexpression
Zellen der permanenten Linie CHO (Chinese Hamster Ovary) werden stabil mit der cDNA für die Adenosin-Rezeptor-Subtypen Al, A2a und A2b transfϊziert. Die Adenosin-Al -Rezeptoren sind über G,-Proteine und die Adenosin-A2a- und A2b-Rezeptoren über Gs-Proteine an die Adenylat- cyclase gekoppelt. Entsprechend wird die cAMP-Bildung in der Zelle inhibiert bzw. stimuliert. Über einen cAMP-abhängigen Promotor wird danach die Expression der Luziferase moduliert. Der Luziferase-Test wird mit dem Ziel hoher Sensitivität und Reproduzierbarkeit, geringer Varianz und guter Eignung für die Durchführung auf einem Robotersystem optimiert durch Variation mehrerer Testparameter, wie z.B. Zelldichte, Dauer der Anzuchtphase und der Testinkubation, Forskolin- Konzentration und Medium-Zusammensetzung. Zur pharmakologischen Charakterisierung der Zellen und zum Roboter-gestützten Substanz-Screening wird das folgende Testprotokoll verwen- det:
Die Stammkulturen werden in DMEM/F12-Medium mit 10% FCS (fötales Kälberserum) bei 37°C unter 5% CO2 gezüchtet und jeweils nach 2-3 Tagen 1:10 gesplittet. Testkulturen werden mit 2000 Zellen pro Napf in 384-well-Platten ausgesät und ca. 48 Stunden bei 37°C angezogen. Dann wird das Medium durch eine physiologische Kochsalzlösung (130 mM Natriumchlorid, 5 mM Kalium- chlorid, 2 mM Calciumchlorid, 20 mM HEPES, 1 mM Magnesiumchlorid-Hexahydrat, 5 mM Natriumhydrogencarbonat, pH 7.4) ersetzt. Die in DMSO gelösten zu testenden Substanzen werden in einer Verdünnungsreihe von 5 x 10*11 M bis 3 x 10~6 M (Endkonzentration) zu den Testkulturen pipettiert (maximale DMSO-Endkonzentration im Testansatz: 0.5%). 10 Minuten später wird Forskolin zu den Al -Zellen zugegeben und anschließend werden alle Kulturen für vier Stunden bei 37°C inkubiert. Danach wird zu den Testkulturen 35 μl einer Lösung, bestehend zu 50% aus Lyse-Reagenz (30 mM Dinatriumhydrogenphosphat, 10% Glycerin, 3% TritonXIOO, 25 mM TrisHCl, 2 mM Dithiotreitol (DTT), pH 7.8) und zu 50% aus Luciferase-Substrat-Lösung (2.5 mM ATP, 0.5 mM Luciferin, 0.1 mM Coenzym A, 10 mM Tricin, 1.35 mM Magnesiumsulfat, 15 mM DTT, pH 7.8) zugegeben, ca. 1 Minute geschüttelt und die Luciferase- Aktivität mit einem Kamerasystem gemessen. Bestimmt werden die EC5o-Werte, d.h. die Konzentrationen, bei denen bei der Al -Zelle 50% der Luciferase-Antwort inhibiert bzw. bei den A2b- und A2a-Zellen 50% der maximalen Stimulierbarkeit mit der entsprechenden Substanz erreicht sind. Als Referenzverbindung dient in diesen Experimenten die Adenosin-analoge Verbindung NECA (5-N-Ethylcarbox- amido-adenosin), die mit hoher Affinität an alle Adenosin-Rezeptor-Subtypen bindet und eine
agonistische Wirkung besitzt [Klotz, K.N., Hessling, J., Hegler, J., Owman, C, KuIl, B., Fredholm, B.B., Lohse, M. J., "Comparative pharmacology of human adenosine receptor Subtypes - characteri- zation of stably transfected receptors in CHO cells", Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 357. 1-9 (1998)].
In der folgenden Tabelle 1 sind die EC5o-Werte repräsentativer Ausführungsbeispiele für die Rezeptorstimulation an Adenosin Al-, A2a- und A2b-Rezeptor-Subtypen aufgeführt:
Tabelle 1
B-2. Untersuchung an isolierten Gefäßen
Aus narkotisierten Ratten wird die Arteria caudalis präpariert und in eine konventionelle Apparatur zur Messung isolierter Gefäße eingespannt. Die Gefäße werden in einem Wärmebad perfundiert und mit Phenylephrin kontrahiert. Das Maß der Kontraktion wird über einen Kontraktionsmesser ermittelt. Zu den vorkontrahierten Gefäßen werden Testsubstanzen gegeben und die Abnahme der Kontraktion der Gefäße gemessen. Eine Abnahme der Kontraktion entspricht einer Dilatation der Gefäße. Als EC50- Wert einer Testsubstanz bzgl. ihrer relaxierenden Eigenschaften wird die Konzentration angegeben, bei der die Kontraktion der Gefäße um 50% verringert ist.
B-3. Blutdruck- und Herzfrequenz-Messungen an wachen Ratten
Wachen SH (spontaneously hypertensive)-Ratten, die einen internen Sender tragen, der dauerhaft sowohl Blutdruck als auch Herzfrequenz messen kann (telemetrische Erfassung von hämodyna- mischen Parametern), werden Testsubstanzen in verschiedenen Dosierungen oral verabreicht. An- schließend werden über 24 Stunden Blutdruck und Herzfrequenz und deren Veränderungen aufgezeichnet.
B-4. Blutdruck- und Herzfrequenz-Messungen an wachen Krallenaffen
Wachen Krallenaffen, die einen internen Sender tragen, der dauerhaft sowohl Blutdruck als auch Herzfrequenz messen kann (telemetrische Erfassung von hämodynamischen Parametern), werden Testsubstanzen in verschiedenen Konzentrationen oral verabreicht. Anschließend werden über 6-24 Stunden Blutdruck und Herzfrequenz und deren Veränderungen aufgezeichnet.
B-5. Bestimmung pharmakokinetischer Kenngrößen nach intravenöser und oraler Gabe
Die zu untersuchende Substanz wird Tieren (z.B. Maus, Ratte, Hund) intravenös als Lösung appliziert, die orale Applikation erfolgt als Lösung oder Suspension über eine Schlundsonde. Nach Substanzgabe wird den Tieren zu festgelegten Zeitpunkten Blut entnommen. Dieses wird heparini- siert, anschließend wird daraus durch Zentrifugation Plasma gewonnen. Die Substanz wird im
Plasma über LC/MS-MS analytisch quantifiziert. Aus den so ermittelten Plasmakonzentration- Zeit-Verläufen werden die pharmakokinetischen Kenngrößen wie AUC (Fläche unter der Konzentration-Zeit-Kurve), Cn13x (maximale Plasmakonzentration), Tm (Halbwertszeit) und CL (Clearance) mittels eines validierten pharmakokinetischen Rechenprogramms berechnet.
B-6. Bestimmung der Löslichkeit
Benötigte Reagenzien:
• PBS-Puffer pH 6.5: 90.00 g NaCl p.a. (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.06404.1000), 13.61 g KH2PO4 p.a. (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.04873.1000) und 83.35 g 1 N Natronlauge (z.B. Fa. Bernd Kraft GmbH, Art.-Nr. 01030.4000) werden in einen 1 Liter-Messkolben eingewogen, mit destilliertem Wasser auf 1 Liter aufgefüllt und für 1 Stunde gerührt. Danach wird mit 1 N
Salzsäure (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 1.09057.1000) der pH- Wert auf 6.5 eingestellt.
• PEG/Wasser-Lösung (70:30 v/v): 70 ml Polyethylenglykol 400 (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 8.17003.1000) und 30 ml destilliertes Wasser werden in einem 100 ml-Messkolben homogenisiert.
• PEG/PBS-Puffer pH 6.5 (20:80 v/v): 20 ml Polyethylenglykol 400 (z.B. Fa. Merck, Art.-Nr. 8.17003.1000) und 80 ml PBS-Puffer pH 6.5 werden in einem 100 ml-Messkolben homogenisiert.
• Dimethylsulfoxid (z.B. Fa. Baker, Art.-Nr. 7157.2500)
• destilliertes Wasser.
Herstellung der Ausgangslösung (TJrlösung):
Mindestens 4 mg der Testsubstanz werden in ein Weithals- 10 mm Screw V-Vial (Fa. Glastechnik Gräfenroda GmbH, Art.-Nr. 8004-WM-H/V15μ) mit passender Schraubkappe und Septum genau eingewogen, in einem Pipettierroboter mit DMSO bis zu einer Konzentration von 50 mg/ml versetzt und 10 Minuten geschüttelt.
Herstellung der Kalibrierlösungen:
Herstellung der Ausgangslösung fύr Kalibrierlösungen (Stammlösung): Li eine Mikrotiterplatte werden 10 μl der Urlösung mit Hilfe eines Pipettierroboters überführt und mit DMSO bis zu einer Konzentration von 600 μg/ml aufgefüllt. Die Probe wird bis zu ihrer vollständigen Lösung geschüttelt.
Kalibrierlösung 1 (20 μg/ml): 34.4 μl der Stammlösung werden mit 1000 μl DMSO versetzt und homogenisiert.
Kalibrierlösung 2 (2.5 μg/ml): 100 μl der Kalibrierlösung 1 werden mit 700 μl DMSO versetzt und homogenisiert.
Herstellune der Probenlösungen:
Probenlösung für Löslichkeit bis 5 g/Liter in PBS-Puffer pH 6.5: In eine Mikrotiterplatte werden 10 μl Urlösung transferiert und mit 1000 μl PBS-Puffer pH 6.5 versetzt.
Probenlösung für Löslichkeit bis 5 g/Liter in PEG/Wasser (70:30): In eine Mikrotiterplatte werden 10 μl Urlösung transferiert und mit 1000 μl PEG/Wasser (70:30) versetzt.
Probenlösung für Löslichkeit bis 5 g/Liter in PEG/PBS-Puffer pH 6.5 (20:80): In eine Mikrotiterplatte werden 10 μl Urlösung transferiert und mit 1000 μl PEG/PBS-Puffer pH 6.5 (20:80) versetzt.
Durchführung:
Die so hergestellten Probenlösungen werden 24 Stunden bei 1400 rpm mittels eines temperier- baren Schüttlers (z.B. Fa. Eppendorf Thermomixer comfort Art.-Nr. 5355 000.011 mit Wechselblock Art.-Nr. 5362.000.019) bei 200C geschüttelt. Von diesen Lösungen werden jeweils 180 μl abgenommen und in Beckman Polyallomer Centrifuge Tubes (Art.-Nr. 343621) überführt. Diese Lösungen werden 1 Stunde mit ca. 223.000 x g zentrifugiert (z.B. Fa. Beckman Optima L-90K Ultracentrifuge mit Type 42.2 Ti Rotor bei 42.000 rpm). Von jeder Probenlösung werden 100 μl des Überstandes abgenommen und mit DMSO zu 1:5 und 1 :100 verdünnt. Es wird von jeder Verdünnung eine Abfüllung in ein geeignetes Gefäß für die HPLC-Analytik vorgenommen.
Analytik:
Die Proben werden mittels RP-HPLC analysiert. Quantifiziert wird über eine Zwei-Punkt-Kalibra- tionskurve der Testverbindung in DMSO. Die Löslichkeit wird in mg/Liter ausgedrückt. Analysen- sequenz: 1) Kalibrierlösung 2.5 mg/ml; 2) Kalibrierlösung 20 μg/ml; 3) Probenlösung 1 :5; 4) Probenlösung 1:100.
HPLC-Methode für Säuren:
Agilent 1100 mit DAD (Gl 315A), quat. Pumpe (Gl 31 IA), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule: Phenomenex Gemini C18, 50 mm x 2 mm, 5 μ;
Temperatur: 400C; Eluent A: Wasser/Phosphorsäure pH 2; Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 0.7 ml/min; Gradient: 0-0.5 min 85% A, 15% B; Rampe: 0.5-3 min 10% A, 90% B; 3-3.5 min 10% A, 90% B; Rampe: 3.5-4 min 85% A, 15% B; 4-5 min 85% A, 15% B.
HPLC-Methode fiir Basen:
Agilent 1100 mit DAD (Gl 315A), quat. Pumpe (G1311A), Autosampier CTC HTS PAL, Degaser (G1322A) und Säulenthermostat (G1316A); Säule: VDSoptilab Kromasil 100 C18, 60 mm x 2.1 mm, 3.5 μ; Temperatur: 300C; Eluent A: Wasser + 5 ml Perchlorsäure/Liter; Eluent B: Acetonitril; Flussrate: 0.75 ml/min; Gradient: 0-0.5 min 98% A, 2% B; Rampe: 0.5-4.5 min 10% A, 90% B; 4.5-6 min 10% A, 90% B; Rampe: 6.5-6.7 min 98% A, 2% B; 6.7-7.5 min 98% A, 2% B.
C. Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überfuhrt werden:
Tablette:
Zusammensetzung:
100 mg der erfϊndungsgemäßen Verbindung, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke (nativ), 10 mg Polyvinylpyrrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Ludwigshafen, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus erfindungsgemäßer Verbindung, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat 5 Minuten gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben). Als Richtwert für die Verpressung wird eine Presskraft von 15 kN verwendet.
Oral applizierbare Suspension:
Zusammensetzung:
1000 mg der erfϊndungsgemäßen Verbindung, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel® (Xanthan gum der Firma FMC, Pennsylvania, USA) und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die erfϊndungsgemäße Verbindung wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluß der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt.
Oral applizierbare Lösung:
Zusammensetzung:
500 mg der erfϊndungsgemäßen Verbindung, 2.5 g Polysorbat und 97 g Polyethylenglycol 400. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 20 g orale Lösung.
Herstellung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in der Mischung aus Polyethylenglycol und Polysorbat unter Rühren suspendiert. Der Rührvorgang wird bis zur vollständigen Auflösung der erfϊndungsgemäßen Verbindung fortgesetzt.
i.v.-Lösung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Kochsalzlösung, Glucose- lösung 5% und/oder PEG 400-Lösung 30%) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.