WO2009063116A1 - Empleo de micropartículas para su uso como vacunas y la liberación de moléculas biológicamente activas - Google Patents
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- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0084—Guluromannuronans, e.g. alginic acid, i.e. D-mannuronic acid and D-guluronic acid units linked with alternating alpha- and beta-1,4-glycosidic bonds; Derivatives thereof, e.g. alginates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
- C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L67/00—Compositions of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
- C08L67/04—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids, e.g. lactones
Definitions
- the invention relates to microparticles based on a biodegradable polymer of the PLGA type and an alginate polymer that encapsulate immunologically active / active peptides or proteins.
- Said microparticles, as well as pharmaceutical compositions derived from them and their uses, have application in the field of human and animal health as a vaccine and as a system for the release of biologically active molecules.
- Vaccines from Latin vaccinus-a-um, beef; from vacca-ae, cow
- an antibody which eliminates the antigen. This response generates immunological memory, producing, in most cases, permanent immunity against the disease.
- Inactivated harmful microorganisms that have been treated with chemicals or heat and have lost their danger.
- Live attenuated microorganisms that have been cultivated under specific conditions so that they lose their harmful properties.
- Toxoids they are inactivated toxic components from microorganisms, in cases where those components are those that cause the disease instead of the microorganism itself.
- Subunit they are fragments of a microorganism that can generate an immune response.
- Immune adjuvants were originally described as substances that used in combination with a given antigen produce a more intense immune response than when the antigen is administered alone.
- the only adjuvant approved for use in humans is aluminum salts, generically referred to as Alum; This substance has a good safety profile but several studies conducted with different vaccines of a protein nature show that its adjuvant capacity is quite limited and it is also a fact that the induced response is fundamentally humoral, that is Th2 (Gupta et al. 1998, Adv. Drug Del, Rev. 32: 155-172).
- Th2 Th2
- Alum is not effective in inducing an immunological response at the mucosal level.
- IgE which has been associated with allergic reactions.
- PLGA microparticles represent an interesting strategy as a vehicle for vaccine administration, since they control the release rate of the encapsulated antigen, which allows simulating repeated injections of conventional calendars with a single dose of immunization (Men et al. 1996, Vaccine 14: 1442-1450; Igartua et al. 1998, J. Control. ReI. 56: 63-73).
- the microparticles confer stability to the antigen, protecting it against enzymatic hydrolysis and gastric acid pH, and allowing the presence of the intact antigen at the place of deposit, as well as its administration by mucosal pathways.
- the antigen particulation favors its uptake by antigen presenting cells (APCs) such as dendritic cells, from which the immune response is initiated.
- APCs antigen presenting cells
- Immunization studies carried out with PLGA microparticles have shown that they are capable of achieving good antibody response, T-cytotoxic cell activity (CTL), and induce mixed Thl / Th2 responses.
- the alginates are natural copolymers of polysaccharides consisting of manuronic and glucuronic acids. Although synthetic polymers outperform natural ones in purity and reproducibility, the ultrapurification of alginates gives them low toxicity, being considered biocompatible.
- ECM extracellular matrix
- biodegradability and biocompatibility allows them to be widely used as biomaterials in tissue engineering, cell therapy through their immobilization and as controlled release systems of various therapeutic agents.
- ECM extracellular matrix
- numerous studies have described the recurrence of alginates as polymeric matrices for the microencapsulation of peptides and proteins. Examples of such work are set out in European patent EP 1079811.
- RGD sequences are amino acid sequences (arginine, glycine and aspartic acid) that act as specific receptors for integrins and are capable of inducing phagocytosis mediated by receptors.
- WO9511010 describes methods and compositions for encapsulating antigens in PLGA microspheres for use as vaccines.
- Document ES2190350A1 describes a brucellosis vaccine composition comprising poly ⁇ caprolactone microparticles as an adjuvant.
- Document WO00 / 50050 describes multiparticular polymeric non-parenteral formulations as a system for releasing prophylactic and diagnostic therapeutic agents through mucous membranes.
- microspheres formed by at least one biodegradable polymer (PLGA; alginate or chitosan) and a protein
- the invention relates to a microparticle comprising (i) a first biodegradable polymer of the type PLGA [poly (lactic-glycolic acid)] and (ii) a second alginate polymer bound to a specific ligand for a receptor of cell surface, which encapsulates an immunologically active / active peptide or protein.
- microparticle described in the present invention as well as the pharmaceutical composition and the kit containing it and the method of preparing said microparticle constitute additional aspects of the present invention.
- the invention relates to a microparticle as described in the present invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of a microparticle in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual or as a system for releasing immunologically active / active peptides or proteins.
- the invention in another aspect, relates to a pharmaceutical composition
- a pharmaceutical composition comprising the microparticle of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier that, optionally, may comprise a therapeutic agent.
- the invention relates to the pharmaceutical composition of the invention for use as a vaccine and its use in the preparation of medicament to stimulate the immune response in an individual or as a system for releasing immunologically active / active peptides or proteins. .
- the invention relates to kit comprising the microparticle of the invention.
- the invention relates to the kit of the invention for use as a vaccine, the use of the kit in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual and the use of the kit as a system of release of immunologically active / active peptides or proteins.
- the invention in another aspect, relates to a process for the preparation of a microparticle according to the invention comprising the steps of a. prepare a solution of PLGA in an organic solvent, b. Prepare an aqueous alginate solution bound to a specific ligand for a cell surface receptor, c. emulsify the solutions with the immunologically active / active peptide or protein, d. add the emulsion obtained in section c) on a solution containing calcium chloride and e. isolate the microparticles
- the present invention also contemplates the possibility of obtaining microparticles where the alginate is not bound to a specific ligand for a cell surface receptor, but that the microparticle itself has all the properties and characteristics of the microparticle above. described.
- the invention relates to a process for the preparation of a microparticle comprising the steps of a. prepare a solution of PLGA in an organic solvent, b. Prepare an aqueous alginate solution, c. emulsify the solutions with the immunologically active / active peptide or protein, d. add the emulsion obtained in section c) on a solution containing calcium chloride and e. Isolate the microparticles.
- microparticle obtainable by the method described above, wherein the alginate is not bound to a specific ligand for a surface receptor, constitutes an additional aspect of the present invention, as well as all applications and uses derived therefrom, such as , its use as a vaccine, in the preparation of a medicament to stimulate and / or induce the immune response in an individual, as a system for releasing immunologically active / active peptides and proteins, and forming part of pharmaceutical compositions and kit, including uses of said compositions and kits.
- the invention relates to the use of alginate as an adjuvant of an immunologically active / active peptide or protein.
- Figure 1 are scanning electron microscopy photographs of the different formulations of microparticles made.
- Figure 2 is a graph showing the antigen release profile for each formulation of microparticles loaded with SPf66 or S-3.
- Figure 3 is a bar chart showing the profile of specific IgG antibody titers against SPf66.
- Figure 4 is a bar chart showing the IgG antibody profile against S-3.
- Figure 5 is a bar chart depicting the IgG2a / IgGl vs. SPf66 ratio at 9 weeks of immunization.
- Figure 6 is a bar chart depicting the IgG2a / IgGl ratio versus S-3 at 9 weeks of immunization.
- Figure 7 is a bar chart showing IFN- ⁇ secretion at 48 hours of in vitro stimulation of cell culture of lymph nodes of animals immunized with SPf66.
- Figure 8 is a bar chart showing IFN- ⁇ secretion at 48 hours of in vitro stimulation of cell culture of lymph nodes of animals immunized with S-3.
- microparticles of biocompatible and biodegradable polymers such as microparticles formed by PLGA [poly (lactic-glycolic acid)] plus alginate bound to a specific ligand for a cell surface receptor, are capable of not only increasing the immune response against the antigen encapsulated in the microparticle, but also allowing the administration of immunologically active / active peptides and proteins by less invasive routes, such as the nasal or intradermal route, than the usual administration routes.
- the invention relates to a microparticle, hereinafter microparticle [I] of the invention, comprising (i) a first biodegradable polymer of the PLGA type [poly (lactic-glycolic acid)] and (ii) a second alginate polymer bound to a specific ligand for a cell surface receptor, which encapsulates an immunologically active / active peptide or protein.
- microparticle is understood as that particle comprising a diameter of less than 1 mm, preferably between 1 and 500 micrometers. Between 1 and 0.9, between 0.9 and 0.8, between 0.8 and 0.7, between 0.7 and 0.6, between 0.6 and 0.5, between 0.5 and 0, 4, between 0.4 and 0.3, between 0.3 and 0.2, between 0.2 and 0.1 or less than 0.1 mm in diameter.
- the average size of the microparticles is mainly influenced by different technological factors of the production process of said microparticles, such as the concentration of the biodegradable polymer, concentration of the surfactant present in the external phase of the double emulsion and stirring speed.
- the first polymer that is part of the microparticle [I] of the invention is a biodegradable polymer of the PLGA type.
- biodegradable polymer is understood to mean polymers that dissolve or degrade in a period of time that is acceptable for the desired application, in this case in vivo therapy, once they are exposed to a physiological pH solution. between 4 and 9, at a temperature between 25 0 C and 40 0 C.
- polymers poly (lactic-glycolic acid) or PLGA, a polymer formed from lactic acid and glycolic acid with the structural formula
- PLGA may have different proportions of lactic acid and glycolic acid.
- PLGAs that can be used in the present invention preferably include 50:50 PLGA (50% lactic acid: 50% glycolic acid), 75:25 PLGA (75% lactic acid: 25% glycolic acid) or combinations of both.
- the second polymer that is part of the microparticle [I] of the invention is an alginate polymer bound to a specific ligand for a cell surface receptor.
- any alginate capable of forming a hydrogel is suitable for use in the microparticles of the invention.
- the microparticles [I] of the invention may contain alginate formed mainly by regions of manuronic acid (MM blocks), by regions of guluronic acid (GG blocks) and by regions of mixed sequence (MG blocks).
- MM blocks manuronic acid
- GG blocks regions of guluronic acid
- MG blocks regions of mixed sequence
- the percentage and distribution of uronic acids differ according to the origin of the alginate and contribute to the properties of the alginate such as its viscosity.
- the person skilled in the art knows the percentages of each of the different blocks that appear in the different biological sources of alginates.
- the invention contemplates the use of alginates from Laminaria hyperborea, Lithuania nigrescens, Lessonia trabeculata, Durvillaea antarctica, Laminaria digitata, Eclonia maxim, Macrocystis pyrifera, Ascophyllum nodosum and / or Laminaria japanica as well as mixtures of alginates of different species until the desired content in GG, MM or GM blocks.
- a suitable combination of alginate polymers a mixture whose modulus of elasticity has an adequate value can be obtained while the viscosity of the pre-gel solution is maintained at sufficiently low levels to allow adequate encapsulation / release of the immunologically active / active peptide or protein.
- the alginates that can be used in the present invention include GG alginates, MM alginates or combinations of both in a ratio of 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30 : 70, 20:80 or 10:90.
- the results shown in the present invention have been obtained with medium viscosity alginate having more than 60% G blocks.
- the invention also contemplates the use of alginates derived from the treatment of natural alginates with enzymes that are capable of modifying the integrating blocks to give rise to alginates with improved properties.
- the invention contemplates the use of alginates that have been modified by different physical treatments, in particular, gamma rays, irradiation with ultrasound or with ultraviolet light as described by Wasikiewicz et al. (Rad. Phys. Chem. 2005, 73: 287-295).
- the alginate that is part of the microparticle [I] of the invention is linked to a specific ligand for a cell surface receptor.
- specific ligand for a cell surface receptor is understood to be the molecule or peptide that is capable of recognizing a cell surface receptor and specifically binding to it. This ligand allows the microparticle [I] of the invention to be recognized by the receptors on the surface of specific cells, So you can join them and interact with them. In principle, any peptide that possesses specific binding sites that can be recognized by cell surface receptors can be used in the present invention.
- the specific ligand for a cell surface receptor can come from cell adhesion molecules that interact with the extracellular matrix such as fibronectin, the different members of the selectin families, the caderins, lectins, integrins, immunoglobulins, the collective and the galectinas.
- the specific ligand for a cell surface receptor employed in the present invention can be a peptide derived from a region selected from the fibronectin regions that are involved in binding with the integrins found in the cell membrane.
- said peptides are derived from the region of the tenth repetition type III of fibronectin containing the RGD peptide, from the region of the fourteenth repetition type III of the fibronectin containing the IDAPS peptide (SEQ ID NO : 3), of the CSI region of fibronectin containing the LDV peptide and the CS5 region of fibrinectin containing the REDV peptide (SEQ ID NO: 4).
- These peptides may consist of fragments of the corresponding regions that retain their adhesive capacity, such as, for example, the QAGDV peptide (SEQ ID NO: 5) of the fibrinogen, the LDV peptide of the fibronectin and the peptide IDSP (SEQ ID NO: 6 ) of VCAM-I.
- the present invention also contemplates the use of integrin binding peptides as a specific ligand for a cell surface receptor, which are derived from the region of the tenth type III fibronectin repeat comprising the RGD sequence, such as, for example, a peptide selected from the group of RGD, RGDS (SEQ ID NO: 7), GRGD (SEQ ID NO: 8), RGDV (SEQ ID NO: 9), RGDT (SEQ ID NO: 10), GRGDG (SEQ ID NO: 11) , GRGDS (SEQ ID NO: 12), GRGDY (SEQ ID NO: 13), GRGDF (SEQ ID NO: 14), YRGDS (SEQ ID NO: 15), YRGDDG (SEQ ID NO: 16), GRGDSP (SEQ ID NO: 17), GRGDSG (SEQ ID NO: 18), GRGDSY (SEQ ID NO: 19), GRGDVY (SEQ ID NO: 20), GRGDSPK (SEQ ID NO: 21), CG
- the specific ligand for a cell surface receptor is a peptide comprising the RGD sequence.
- the specific ligand for a cell surface receptor can be bound to the alginate polymer with varying degrees of substitution, so that the concentrations of both components can vary and thereby control the number of specific ligands for a cell surface receptor. which are bound to the alginate polymer.
- the invention contemplates alginates containing between 1 and 100, between 100 and 200, between 200 and 300, between 300 and 400, between 400 and 500, between 500 and 600, between 600 and 700, between 700 and 800, between 800 and 900 and between 900 and 1000 molecules of said specific ligand for each polymer molecule.
- the microparticle [I] of the invention can encapsulate an immunologically active / active peptide or protein.
- immunologically active / active peptide or protein is understood as that peptide or protein that stimulates the immune response (humoral, cellular response or both) when introduced into an organism other than the organism from which said peptide comes from or protein.
- said immunologically active / active peptide or protein is called an antigen.
- the term "antigen" refers to any substance capable of being recognized by the immune system of a subject and / or capable of inducing in a subject a humoral immune response or a cellular immune response that leads to activation. of B and / or T lymphocytes when introduced into a subject; by way of illustration, said term includes any immunogenic, native or recombinant product, obtained from a higher organism or from a microorganism, by for example, a bacterium, a virus, a parasite, a protozoan, a fungus, etc., which contains one or more antigenic determinants, for example, structural components of said organisms; toxins, for example, exotoxins, etc. Virtually any antigen can be used in the preparation of microparticles of the invention loaded with antigen
- immunologically active / active peptides and proteins examples include:
- Peptides or proteins capable of (appropriate or designed to) induce an immune response against an infectious disease such as an infectious disease in animals caused by pathogenic microorganisms of animals, including humans, for example, viruses, bacteria, fungi and infectious parasites, relevant in human or animal health.
- the proteins or peptides capable of inducing an immune response may be recombinant proteins or peptides, identical or similar to the natural antigens of a specific microorganism.
- infectious viruses include viruses of the families: Arteriviridae, Retro viridae, Picornaviridae, Calciviridae, Togaviridae, Flaviridae, Coronoviridae, Rhabdoviradae, Filoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxoviridaeiridae, Bungaviridaeviridaeviridaeviridae, Bungaviridaeviridae, Bungaviridaeviridae, Bungaviridaeviridae, Bungaviridaeviridae, Bungaviridaeviridae, Bungavirviridae, Bungavirvirvir
- antigens include, but are not limited to, HIV antigens, gpl20 antigen, hepatitis B surface antigen, rotavirus antigens such as VP4 and VP7, influenza virus antigens such as hemagglutinin or nucleoprotein, herpes simplex thymidine kinase antigen, etc.
- bacteria include both Gram positive bacteria, eg, Pasteurella sp., Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Etc., and Gram negative bacteria, eg, Escherichia coli, Pseudomonas sp., Salmonella sp., Etc. .
- infectious bacteria include: Helicobacter pylori, Borelia burgdorferi, Legionella pneumoplailia, Mycobacteria sp. (eg, M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansaii, M.
- infectious fungi include Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatitidis, Chlamydia trachomatis and Candida albicans.
- Infectious parasites include, by way of illustration, not limitation, protozoa, such as Plasmodium sp., Causing malaria, e.g. P. falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax, etc., Leishmania sp., Causing leishmaniasis, eg, L. major, L. donovani, L. infantum, L. braziliensis, L.
- antigens for these parasites include the circumsporozoite antigen of Plasmodium spp .; the merozoite surface antigen of Plasmodium spp .; SPf66 antigen from P. falciparum; the S-3 antigen, a molecule that includes four epitopes corresponding to different stages of the life cycle of P. falciparum; the gp63 of Leishmania spp., etc.
- tumor markers capable of (appropriate or designed to) induce an immune response against a tumor or cancerous cell, so that the peptide or protein can be used in the treatment of cancers by stimulating an antigen specific immune response against a tumor antigen.
- the selection of tumor antigens or antigenic determinants for the treatment of cancers can be performed by a person skilled in the art in view of the state of the art (Renkvist et al. 2001, Cancer Immunol. Immunother. 50:
- antigens and antigenic determinants being included within the scope of the present invention.
- antigens or antigenic determinants include: Her2 (breast cancer); GD2 (neuroblastoma); EGF-R (malignant glioblastoma); CEA (medullary thyroid cancer); CD52 (leukemia); human melanoma gplOO protein; melanoma-A / MART-1 human melanoma protein; tyrosinase; NAl protein 7- A nt; MAGE-3 protein; p53 protein; HPVl 6E7 protein; and antigenic fragments of said peptides or proteins.
- allergen refers to a peptide or protein to which a subject is sensitive and causes an immune reaction, for example, allergenic extracts of pollens, allergenic extracts of insects, allergenic extracts of food. or food products, components present in saliva, tweezers or stingers of insects that induce a sensitivity reaction in a subject, components present in plants that induce a sensitivity reaction in a subject, etc.
- allergens include protein extracts from pollens, e.g., from Lolium perenne, Poa pratense, Phleum pratense, Cynodon dactylon, Festuca pratensis,
- Dactylis glomerata Sécale cereale, Hordeum vulgare, Avena sativa, Triticum sativa, Artemisia vulgaris, Chenopodium album, Plantago lanceolata, Taraxacum vulgare, Parietaria judaica, Salsala kali, Urtica dioica, Olea Europea, Platanus sp., Cupressus sp., etc .
- Protein extracts of insects eg, from Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Acarus Siró, Blomia tropicalis, Euroglyphus maynei, Glyciphagus domesticus, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae, etc .
- Protein extracts from fungi or animal epithelia eg, Penicillium sp., Alternar ⁇ a alternata, Cladosporium herbarum, dog epithe
- auto-antigen refers to peptides or proteins encoded by the subject's DNA and products generated by proteins or RNA encoded by the subject's DNA Examples of self-antigens are described in WO 02/56905.
- the microparticle [I] of the invention is suitable for the release into the body of immunologically active / active peptides or proteins and thereby stimulate the immune response of the organism against to said peptides and proteins. Therefore, in another aspect, the invention relates to the microparticle [I] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of the microparticle [I] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual.
- “individual” or “subject” means a member of an animal species, preferably a mammal, and includes, but is not limited to, a domestic animal, a primate and a human; In the context of the present invention, the individual is preferably a human, male or female, of any race or age.
- the microparticle of the invention Due to the ability of the microparticle of the invention to release the peptides and proteins encapsulated therein, the microparticle is very useful as device for the release of compounds of a peptide nature with biological activity.
- the invention relates to the use of microparticle [I] of the invention for the release of immunologically active / active peptides and proteins.
- the release of peptides and proteins can be done in a controlled manner by an adequate selection of the proportion of monomers (lactic acid and glycolic acid) that form the PLGA used in the preparation of the microparticle.
- the degradation rate of these polymers depends fundamentally on the proportion of both monomers. Thus, by proper selection of said composition it is possible to achieve that the degradation takes place over periods of time that may range from a few days to several months.
- the molecular weight of the polymer also influences the degradation rate, since the lower the molecular weight, the less time will be required to obtain small oligomers or hydrophilic monomers (Lewis, et al. Controlled relée of bioactive agents from lactide / glycolide Polyesters In: Chasin, M. et al. Biodegradable polymers as drug delivery systems. Ed. Marcel Decker, Inc. New York, 1990).
- the microparticle [I] of the invention can be administered to the individual alone or as part of pharmaceutical compositions together with a pharmaceutically acceptable carrier and, optionally, together with the simultaneous or separate administration of a therapeutic agent. Therefore, in another aspect, the invention relates to a pharmaceutical composition, hereinafter, pharmaceutical composition [I] of the invention, comprising the microparticle [I] of the invention together with a pharmaceutically acceptable carrier.
- pharmaceutically acceptable vehicles used in the preparation of pharmaceutical compositions can be found in the book "Rowe, R, Sheskey, P. and Owen, S. Handbook of Pharmaceutical Excipients. 5 a Ed.
- microparticles [I] of the invention upon administration to a subject, are capable of releasing the immunologically active / active peptide or protein stably and gradually for prolonged times, so that they act as sustained release medications. Therefore, the microparticle [I] of the invention it allows to avoid the continuous and repeated administration of therapeutic agent in those patients that require basal levels of said agent during a prolonged time.
- microparticle [I] of the invention or the pharmaceutical composition [I] of the invention can be administered to the patient parenterally, including intravascular, intraperitoneal, subcutaneous, intradermal, etc. and non-parenteral, for example, topically, through the mucous membranes, that is, oral, buccal, sublingual, nasal (by inhalation), vaginal, etc., and will be formulated in a pharmaceutical form appropriate to the route of administration chosen, for example, in the form of sterile solutions, suspensions or lyophilized products in an appropriate unit dosage form. Suitable excipients, such as buffering agents, surfactants, preservatives, etc. may be used.
- microparticles [I] of the invention to be administered to an individual can vary over a wide range, for example, between about 0.01 and 100 mg per kg of body weight.
- the pharmaceutical composition of the invention comprises the microparticle [I] of the invention, a pharmaceutically acceptable carrier and a therapeutic agent.
- therapeutic agent includes any compound that can be used to treat, prevent or cure diseases in a subject or that used to improve physical and mental well-being in humans and animals.
- therapeutic agents include, but are not limited to, a chemotherapeutic agent, allergens, analgesics, antitumor agents, a steroid, a retinoid, an antibiotic compound (antimicrobial, antiviral or antifungal), an antioxidant, an anti-inflammatory, neuroprotective, anti-asthmatic compound, pulmonary surfactants, vitamin analogs, salicylic acid, etc.
- a therapeutic agent includes pharmaceutically acceptable salts thereof, prodrugs and pharmaceutical derivatives thereof.
- the invention relates to the pharmaceutical composition [I] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of the pharmaceutical composition [I] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response of an individual.
- the invention relates to the use of the pharmaceutical composition [I] of the invention as a system for releasing immunologically active / active peptides or proteins.
- microparticle [I] of the invention may be contained in a kit that, optionally, may comprise a therapeutic agent as defined above.
- kit [I] of the invention which comprises the microparticle [I] of the invention and which, in a particular embodiment, further comprises a therapeutic agent
- kits are understood as a product that contains the microparticles [I] of the invention or the various components of the pharmaceutical composition [I] of the invention packaged to allow transport, storage and administration simultaneously. or sequential So, the kits The invention may contain one or more suspensions, tablets, capsules, inhalers, syringes, patches and the like containing the microparticles [I] of the invention or the various components of the pharmaceutical composition [I] of the invention, and which can be found prepared in a single dose or as multiple doses.
- the kit may contain a vehicle suitable for resuspension of the microparticles [I] of the invention or the various components of the pharmaceutical composition [I] of the invention, such as aqueous media, eg saline solution, Ringer solution, Ringer solution lactate, dextrose and sodium chloride, water soluble media, such as alcohol, polyethylene glycol, propyl ethylene glycol and water insoluble vehicles such as corn oil, cottonseed oil, peanut oil, sesame oil, ethyl oleate, myristate Isopropyl and benzyl benzoate.
- a packaging that allows the formulations of the invention to be kept within certain limits. Suitable materials for the preparation of such packaging include glass, plastic (polyethylene, polypropylene, polycarbonate and the like), bottles, vials, paper, envelopes and the like.
- kit [I] of the invention constitute additional inventive aspects.
- the invention relates to the kit [I] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the kit [I] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual.
- the invention relates to the use of the kit [I] of the invention as a system for releasing immunologically active / active peptides and proteins.
- the microparticles can be obtained from biodegradable polymers which, in the case of the present invention are PLGA and alginate, by a process comprising dissolving said polymers in a suitable solvent (eg, dichloromethane, ethyl acetate, acetone , water etc.) and subsequent emulsification with an aqueous phase. Then this first emulsion is added on a solution of a surfactant (eg polyvinyl alcohol) to form a double emulsion.
- a suitable solvent eg, dichloromethane, ethyl acetate, acetone , water etc.
- a surfactant eg polyvinyl alcohol
- the desolvation or extraction of the solvent in which the PLGA was solubilized is carried out after the addition of an appropriate solvent, for example, a solvent or a mixture of solvents miscible with the dissolution of the biodegradable polymer, such as an isopropanol-water mixture , obtaining an aqueous suspension of microparticles from which the microparticles are isolated by conventional methods, for example, by vacuum filtration or centrifugation.
- an appropriate solvent for example, a solvent or a mixture of solvents miscible with the dissolution of the biodegradable polymer, such as an isopropanol-water mixture
- the ratio, by volume, organic phase: hydroalcoholic solution (isopropanol / water) can vary within a wide range, for example, between 1:10 and 1: 100 (v: v).
- the proportion of the immunologically active / active peptide or protein incorporated into the microparticle of the invention can vary within a wide range, for example, it can be up to 25% by weight with respect to the total weight of the microparticles. However, the appropriate proportion will depend in each case on the peptide or protein incorporated.
- the incorporation of the immunologically active / active peptide or protein into the microparticles of the invention can be done as described in WO 02/069938, by incorporation into the solution of the biodegradable polymer (in the internal phase of the first emulsion) before the microparticle formation, or subsequently add it to the aqueous suspension of the already formed microparticles.
- the invention relates to a process for the preparation of the microparticle [I] of the invention, which comprises the steps of a. prepare a solution of PLGA in an organic solvent, b. Prepare an aqueous alginate solution bound to a specific ligand for a cell surface receptor, c. emulsify the solutions with the immunologically active / active peptide or protein, d. add the emulsion obtained in section c) on a solution containing calcium chloride and e. Isolate the microparticles.
- the emulsion obtained in section c) can be added onto a solution of a surfactant (eg polyvinyl alcohol) to obtain a double emulsion and then, adding said double emulsion on a hydroalcoholic solution containing calcium chloride to ensure total alginate gelation.
- a surfactant eg polyvinyl alcohol
- said process may comprise additional steps that involve preferred embodiments of the process, such as an evaporation / solvent extraction step to obtain the PLGA-alginate microparticles containing said immunologically active peptides and proteins. active, followed by a step of isolating the microparticles and, optionally, lyophilizing or drying the obtained microparticles.
- microparticles [I] of the invention can be purified or isolated by conventional methods, for example, by centrifugation, ultracentrifugation, tangential filtration, vacuum filtration, or evaporation, including the use of vacuum.
- the specific ligand for a cell surface receptor is a peptide comprising the RGD sequence.
- the microparticles [I] of the invention can be lyophilized by conventional methods. From a pharmacological point of view, it is important to be able to have microparticles in lyophilized form since this improves their stability during long-term storage and preservation, in addition to reducing the volume of the product to be handled.
- microparticles [I] of the invention can be lyophilized in the presence of a usual cryoprotective agent such as glucose, sucrose, mannitol, trehalose, glycerol, lactose, sorbitol, polyvinyl pyrridone, etc., preferably, sucrose or mannitol; at a concentration within a wide range, preferably between 0.1% and 20% by weight.
- a crosslinking agent can be added to improve the stability of the microparticles [I] of the invention, as described in WO 02/069938.
- crosslinking agents examples include diamine compounds, for example 1.3 diaminopropane, simple polysaccharides or saccharides, proteins and, in general, any molecule that has functional groups capable of reacting with the functional groups present in the biodegradable polymer.
- the invention also relates to a process for the preparation of a microparticle in which the alginate is not bound to a specific ligand for a cell surface receptor but which, due to the characteristics of the alginate in combination with the PLGA, preserves the properties of the microparticle [I] of the invention. Therefore, in another aspect, the invention relates to a process for the preparation of a microparticle, hereinafter, microparticle [II] of the invention, comprising the steps of a. prepare a solution of PLGA in an organic solvent, b. Prepare an aqueous alginate solution, c. emulsify the solutions with the immunologically active / active peptide or protein, d. add the emulsion obtained in section c) on a solution containing calcium chloride and e. Isolate the microparticles.
- the emulsion obtained in section c) can be added onto a solution of a surfactant (eg polyvinyl alcohol) to obtain a double emulsion and then, adding said double emulsion on a hydroalcoholic solution containing calcium chloride to ensure total alginate gelation.
- a surfactant eg polyvinyl alcohol
- said process may comprise additional steps that involve preferred embodiments of the process, such as, for example, an evaporation / solvent extraction step to obtain the PLGA-alginate microparticles containing said immunologically active / active peptides and proteins, followed by a step of isolating the microparticles and, optionally, lyophilizing or drying the obtained microparticles.
- microparticles [II] of the invention can be purified or isolated by conventional methods, for example, by centrifugation, ultracentrifugation, tangential filtration, vacuum filtration, or evaporation, including the use of vacuum.
- the alginate bound or not to a specific ligand can be included in the external phase of the double emulsion and the rest of the manufacturing process would be the same as described above.
- microparticle [II] of the invention comprising (i) a first biodegradable polymer of the PLGA type
- poly (lactic-glycolic acid) poly (lactic-glycolic acid)
- a second alginate polymer which encapsulates an immunologically active / active peptide or protein.
- microparticle [II] of the invention constitute additional inventive aspects.
- the invention relates to the microparticle [II] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of the microparticle [II] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual.
- the invention relates to the use of microparticle [II] of the invention as a system for releasing immunologically active / active peptides or proteins.
- the invention relates to a pharmaceutical composition comprising microparticle [II] of the invention, hereinafter, pharmaceutical composition [II] of the invention, and a pharmaceutically acceptable carrier.
- the pharmaceutical composition [II] of the invention further comprises a therapeutic agent.
- the invention relates to the pharmaceutical composition [II] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of the pharmaceutical composition [II] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response of an individual.
- the invention relates to the use of the pharmaceutical composition [II] of the invention as a system for releasing immunologically active / active proteins or peptides.
- kit [II] of the invention comprising the microparticle [II] of the invention.
- the invention relates to the kit [II] of the invention for use as a vaccine.
- the invention relates to the use of the kit [II] of the invention in the preparation of a medicament for stimulating and / or inducing the immune response in an individual.
- the invention relates to the use of the kit [II] of the invention in the release of immunologically active / active peptides or proteins.
- the invention relates to the use of alginate as an adjuvant of an immunologically active / active peptide or protein.
- the 50:50 PLGA marketed by Boehringer Ingelheim G.K., Ingelheim, Germany, was used to make the microparticles.
- the alginate used was an MVG alginate (medium viscosity, rich in G blocks) from NovaMatrix, FMC Biopolymers Philadelphia, PA, USA and the RGD alginate was obtained by modifying the MVG alginate following the procedure described by Rowley et al 1999. Biomaterials 20 : 45-53.
- SPf66 and S3 peptides were obtained by solid phase synthesis following the methodology described by Merrifield (Merrifield, B. Solid phase peptide synthesis. I. Synthesis of Thetrapeptide. J. Am. Chem. Soc. 2149-2154. 1963) and modified by Houghten (Houghten R. General method for the rapid solid-phase synthesis of large number of peptides. Specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids. Proc. Nat. Acad. Sci, 82: 5131-5135. 1985.), under conditions of Correct Manufacturing Standards (GMP) in the Institute of Immunology Institute of Colombia.
- GMP Correct Manufacturing Standards
- the amino acid sequence of the SPf66 peptide in one letter code, is as follows: CGDELEAETQNVYAAPNANPYSLFQKEKMVLPNANPPANKKNAGC (SEQ ID NO: 1).
- the amino acid sequence of the S3 peptide is as follows: DELEAETQNVYAAPNANPYSLFQKEKMVLPNANPPANKKNA (SEQ ID NO: 2).
- the remaining reagents are analytical grade and are obtained through regular distributors of chemical products.
- microparticles were made using the double emulsion evaporation / solvent extraction technique.
- MP microparticles
- PLGA MP MP of PLGA
- MP of PLGA and 2% alginate w / w
- MP of PLGA and 2% alginate bound with RGD PLGA-alg RGD MP
- the double emulsion was then added on another 2% aqueous solution of isopropanol (v / v) and allowed to stir with a paddle stirrer (HEIDOLPH. Mod.RZRl) to promote evaporation / extraction of the organic solvent and thus induce the microparticle formation.
- a paddle stirrer HIDOLPH. Mod.RZRl
- the MPs were collected by centrifugation 10,000 rpm and washed 3 times with distilled water by centrifugation and subsequent resuspension.
- the PLGA microparticles (PLGA MP) were resuspended in milliQ water and lyophilized.
- the preparation of the alginate MP (PLGA-alg MP) was carried out in a manner similar to those of PLGA but with certain modifications.
- the aqueous phase in addition to the 10% peptide, also contained the alginate in a proportion 2% (w / w) with respect to the PLGA.
- This first emulsion was formed by sonication, as well as the second by a turbine homogenizer. Once the w / o / w was obtained, it was added over 2% isopropanol and 0.6 mM CaCl 2 to ensure total alginate gelation while dichloromethane is evaporated. The following steps are the same as for the previous formulation.
- microparticles were made, they were completely characterized by determining their morphology, size, Z potential, percentage of encapsulated and adsorbed peptide to the surface and in vitro release profile.
- Morphological characterization was performed using the scanning electron microscopy technique (Jeol JSM-35 CF). The particle size was determined by the laser diffraction technique using a COULTER ® COUNTER LS 130 particle analyzer. To determine the percentage of encapsulated peptide (w / w) the modified Lowry test known as the bicinconinic acid method was used (micro-BCA) (Smith et al. 1985, Anal. Biochem. 150: 76-85.). The zeta potential was determined by doppler laser velocimetry (Malvern ® Zetasizer 3000). The encapsulated total peptide was determined after complete digestion of the microspheres with a 0.2 M NaOH solution.
- the peptide adsorbed or associated to the surface of the microparticles was determined by suspending the microparticles, in a 20 mM phosphate buffer solution, pH 7.4 and incubating at 37 ° C, under continuous orbital agitation for 30 min. The microspheres were subsequently sedimented by centrifugation and in the supernatant the content of SPf66 was analyzed by the micro-BCA technique.
- the surface-associated peptide corresponds to the percentage of the total encapsulated peptide that is present on the surface of the microparticles and consequently available for rapid release.
- the different parameters characterized in the microparticles are shown in Table 1. As can be seen in the table, the different types of MPs produced had an average particle size around 1 micrometer. Without However, the net surface charge of the microparticles is influenced by the presence of alginate, since notable differences were observed in the Zeta potentials of the MPs depending on the presence or not of alginate in the formulation. For both peptides (SPf66 and S-3), the MP with alginate had more negative zeta potential values than their respective MP PLGA. These results show that alginate (polyanion) is incorporated into the microparticles, and at least in part it does so at the surface level, because alginate is a polyanion.
- EE encapsulation efficiency
- SAP surface adsorbed peptide
- the release profiles of the peptides from the microparticles have a three-phase behavior. Only differences in the release of the peptide are found in the initial times (surface-associated peptide), while the rest of the profile obtained during the 112 day duration of the test shows very similar release rates between the PLGA formulations and the 2 of PLGA-alginate, for each of the peptides.
- mice The immune response induced by the microparticles was evaluated in Balb / c mice weighing 25 g and 6-8 weeks divided into 6 groups of 7 mice.
- Group 1 received an intradermal dose of 100 ⁇ g of the microencapsulated SPf66 antigen in 50:50 PLGA microspheres (PLGA MP).
- Group 2 received the same dose of microencapsulated SPf66 antigen in microspheres of PLGA and 2% alginate (PLGA-alg MP).
- Group 3 received 100 ⁇ g of the SPf66 antigen microencapsulated in PLGA microspheres and 2% of RGD-linked alginate (PLGA-alg RGD MP).
- Groups 4, 5 and 6 received the same dose of microencapsulated S3 antigen in the three types of microparticles described above, PLGA MP, PLGA-alg MP and PLGA-alg RGD MP, respectively.
- Figures 3 and 4 show the levels of antibodies (total IgG) obtained for the different groups of animals immunized with 100 ⁇ g of the SPf66 or S-3 antigen.
- the PLGA microparticles (PLGA MP) loaded with both SPf66 and S-3 caused a high humoral response administered intradermally.
- alginate microparticles (PLGA-alg MP) significantly improved the response for both peptide antigens.
- the production of antibody isotypes (IgGl and IgG2a) by immunized mice was studied at 9 weeks. All formulations induced high and similar levels of IgGl. As for IgG2a, although all groups showed detectable levels, differences were observed between the formulations administered.
- the MPs incorporating alginate induced levels of IgG2a higher than those of the PLGA MP.
- the MPs containing the alginate modified with RGD sequences increased the secretion of this cyclophilic isotype (IgG2a for mice) with respect to the MPs of the unbound alginate, said increase being greater in the case of the SPf66 peptide than in S-3.
- the secretion of IFN- ⁇ from the cell culture of the lymph nodes extracted from the mice after 14 weeks after immunization was determined by capture ELISA (OptEIA IFN- ⁇ ELISA kit (Pharmingen, Becton Dickinson, San Diego, CA).
- PLGA-alg RGD MP and PLGA-alg MP secreted intermediate levels to those of the other 2 formulations.
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Abstract
La invención se relaciona con micropartículas a base de un polímero biodegradable de tipo PLGA y un polímero de alginato que encapsulan péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas. Dichas micropartículas, así como las composiciones farmacéuticas derivadas de ellas y sus usos, tienen aplicación en el campo de la salud humana y animal como vacuna y como sistema de liberación de moléculas biológicamente activas.
Description
EMPLEO DE MICROPARTICULAS PARA SU USO COMO VACUNAS Y LA LIBERACIÓN DE MOLÉCULAS BIOLÓGICAMENTE ACTIVAS
CAMPO DE LA INVENCIÓN
La invención se relaciona con micropartículas a base de un polímero biodegradable de tipo PLGA y un polímero de alginato que encapsulan péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas. Dichas micropartículas, así como las composiciones farmacéuticas derivadas de ellas y sus usos, tienen aplicación en el campo de la salud humana y animal como vacuna y como sistema de liberación de moléculas biológicamente activas.
ANTECEDENTES
El desarrollo de vacunas eficaces frente a las enfermedades infecciosas representa un reto único para la comunidad científica. No debemos olvidar, sin embargo, que es necesario utilizar nuevos adyuvantes y sistemas de liberación que mejoren la capacidad inmunogénica de los antígenos.
Las vacunas (del latín vaccinus-a-um, vacuno; de vacca-ae, vaca) son preparados de antígenos que una vez dentro del organismo provocan una respuesta de ataque, denominada anticuerpo (que elimina el antígeno). Esta respuesta genera memoria inmunológica produciendo, en la mayoría de los casos, inmunidad permanente frente a la enfermedad.
En general, se considera que hay cuatro tipos tradicionales de vacunas: • Inactivadas: microorganismos dañinos que han sido tratadas con productos químicos o calor y han perdido su peligro. • Vivas atenuadas: microorganismos que han sido cultivados bajo condiciones concretas para que pierdan sus propiedades nocivas.
• Toxoides: son componentes tóxicos inactivados procedentes de microorganismos, en casos donde esos componentes son los que provocan la enfermedad en lugar del propio microorganismo.
• Subunitarias: son fragmentos de un microorganismo que pueden generar una respuesta inmunitaria.
Los adyuvantes inmunológicos fueron originalmente descritos como sustancias que utilizadas en combinación con un determinado antígeno producen una respuesta inmune más intensa que cuando se administra el antígeno sólo. El único adyuvante aprobado para su uso en humanos son las sales de aluminio, denominadas genéricamente como Alum; esta sustancia presenta un buen perfil de seguridad pero diversos estudios realizados con diferentes vacunas de naturaleza proteica demuestran que su capacidad adyuvante es bastante limitada y además es un hecho constatado que la respuesta inducida es fundamentalmente humoral, es decir Th2 (Gupta et al. 1998, Adv. Drug Del, Rev. 32: 155-172). Además el Alum no es efectivo en la inducción de una respuesta inmunológica a nivel de mucosas Por último se ha observado que también puede inducir IgE, lo cual ha sido asociado con reacciones alérgicas.
Diversos estudios han puesto de manifiesto que las micropartículas de PLGA representan una interesante estrategia como vehículo para la administración de vacunas, puesto que controlan la velocidad de liberación del antígeno encapsulado, lo que permite simular repetidas inyecciones de los calendarios convencionales con una única dosis de inmunización (Men et al. 1996, Vaccine 14: 1442-1450; Igartua et al. 1998, J. Control. ReI. 56: 63-73).
Por otro lado, las micropartículas confieren estabilidad al antígeno, protegiéndolo frente a la hidrólisis enzimática y el pH ácido gástrico, y permitiendo la presencia del antígeno intacto en el lugar de depósito, así como su administración por vías mucosas. Por último, la particulación del antígeno favorece su captación por parte de las células presentadoras de antígenos (APCs) como por ejemplo las células dendríticas, a partir de las cuales se inicia la respuesta inmune. Los estudios de inmunización llevados a cabo con micropartículas de PLGA han demostrado que son capaces de conseguir una buena
respuesta de anticuerpos, actividad celular T-citotóxica (CTL), e inducir respuestas Thl/Th2 mixtas.
Por otro lado están los alginatos. Los alginatos son copolímeros naturales de polisacáridos constituidos por los ácidos manurónico y glucurónico. Aunque los polímeros sintéticos superan a los naturales en pureza y reproducibilidad, la ultrapurificación de los alginatos les confiere una baja toxicidad, siendo considerados biocompatibles. Además del importante papel que los alginatos representan en la industria textil y alimenticia, su similitud con la matriz extracelular (ECM) junto con su biodegradabilidad y biocompatibilidad les permite ser ampliamente usados como biomateriales en ingeniería tisular, terapia celular mediante la inmovilización de las mismas y como sistemas de liberación controlada de diversos agentes terapéuticos. Al igual que para el PLGA, numerosos trabajos han descrito la recurrencia a los alginatos como matrices poliméricas para la microencapsulación de péptidos y proteínas. Ejemplos de dichos trabajos se recogen en la patente europea EP 1079811.
Las últimas tendencias en el desarrollo de vacunas indican que la captación de antígenos por parte de las células dendríticas es más eficiente cuando las características superficiales de los sistemas microparticulares son diseñadas de acuerdo a los denominados patrones moleculares asociados a patógenos que son secuencias de moléculas pequeñas que habitualmente presentan los patógenos en su superficie como por ejemplo el lipopolisacárido bacteriano (LPS), péptidoglicanos, ácidos nucleicos, secuencias CpG y RGD. Las secuencias RGD son secuencias de aminoácidos (arginina, glicina y ácido aspártico) que actúan como receptores específicos para integrinas y son capaces de inducir fagocitosis mediada por receptores.
En la actualidad se dispone de un amplio abanico de antígenos sintéticos de naturaleza peptídica o proteica que presentan como limitación su baja inmunogenicidad, siendo necesaria su administración conjunta con sustancias adyuvantes y de forma repetida para obtener una respuesta inmune eficaz.
En las últimas décadas las micropartículas poliméricas biodegradables se han convertido en un prometedor sistema de liberación de antígenos peptídicos y proteicos para obtener vacunas frente a diversas enfermedades infecciosas:
• El documento WO9511010 describe métodos y composiciones para la encapsulación de antígenos en microsferas de PLGA para su utilización como vacunas.
• El documento ES2190350A1 describe una composición de vacuna frente a la brucelosis que comprende micropartículas de poliεcaprolactona como adyuvante. • El documento WO00/50050 describe formulaciones multiparticulares poliméricas no parenterales como sistema de liberación de agentes terapéuticos profilácticos y diagnósticos a través de mucosas.
• El documento Jin, Xiao Bing; et al. Ectopic neocartilage formation from predifferentiated human adipose derived stem cells induced by adenoviral-mediated transfer of hTGF beta2. Biomaterials 2007, VoI. 28 (19), 2994-3003, presenta microsferas de alginato embebidas en films de PLGA para su aplicación en ingeniería tisular.
• El documento Liu, Xiaohua; et al. Novel polymeric microspheres containing norcantharidin for chemoembolization. J. Control. ReI. 2006, VoI. 116 (1), 35-41, describe microesferas de PLGA-alginato para su aplicación en quimioembolización para el tratamiento de tumores.
• El documento Wang, Ye; et al. Biodegradable and complexed microspheres used for sustained delivery and activity protection of SOD. J. Biomed. Mat. Res., Part B: Appl. Biomat. 2006, Vol.79B (1), 74-78, muestra microsferas formadas por al menos un polímero biodegradable (PLGA; alginato o quitosano) y una proteina
(superóxido dismutasa).
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN
En un aspecto, la invención se relaciona con una micropartícula que comprende (i) un primer polímero biodegradable de tipo PLGA [ácido poli (láctico-glicólico)] y (ii) un segundo polímero de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de
superficie celular, que encapsula un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
Los usos de la micropartícula descrita en la presente invención, así como la composición farmacéutica y el kit que la contienen y el método de preparación de dicha micropartícula constituyen aspectos adicionales de la presente invención.
En otro aspecto la invención se relaciona con una micropartícula según se describe en la presente invención para su uso como vacuna.
En otros aspectos, la invención se relaciona con el uso de una micropartícula en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo o como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende la micropartícula de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable que, opcionalmente, puede comprender un agente terapéutico.
Asimismo, en otros aspectos la invención se relaciona con la composición farmacéutica de la invención para su uso como vacuna y su uso en la elaboración de medicamento para estimular la respuesta inmune en un individuo o como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
En otro aspecto, la invención se relaciona con kit que comprende la micropartícula de la invención. En otros aspectos, la invención se relaciona con el kit de la invención para su uso como vacuna, el uso del kit en la elaboración de un medicamentos para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo y el uso del kit como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
En otro aspecto, la invención se relaciona con un procedimiento para la preparación de una micropartícula según la invención que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico,
b. preparar una disolución acuosa de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas
Por otro lado, la presente invención también contempla la posibilidad de obtener micropartículas en donde el alginato no se encuentra ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, pero que la micropartícula por sí misma posee todas las propiedades y características de la micropartícula anteriormente descrita.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con un procedimiento para la preparación de una micropartícula que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico, b. preparar una disolución acuosa de alginato, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas.
La micropartícula obtenible por el método anteriormente descrito, en donde el alginato no se encuentra ligado a un ligando específico para un receptor de superficie, constituye un aspecto adicional de la presente invención, así como todas las aplicaciones y usos derivados de la misma, tales como, su uso como vacuna, en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo, como sistema de liberación de péptidos y proteínas inmunológicamente activos/activas, y formando parte de composiciones farmacéuticas y kit, incluyendo los usos de dichas composiciones y kits.
Por último, en otro aspecto la invención se relaciona con el uso del alginato como adyuvante de un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 son unas fotografías de microscopía electrónica de barrido de las diferentes formulaciones de micropartículas elaboradas.
La Figura 2 es una gráfica que muestra el perfil de liberación del antígeno para cada formulación de micropartículas cargadas con SPf66 ó S-3.
La Figura 3 es un diagrama de barras que muestra el perfil de títulos de anticuerpos IgG específicos frente a SPf66.
La Figura 4 es un diagrama de barras que muestra el perfil de anticuerpos IgG frente a S-3.
La Figura 5 es un diagrama de barras que representa el ratio IgG2a/IgGl frente a SPf66 a las 9 semanas de inmunización.
La Figura 6 es un diagrama de barras que representa el ratio IgG2a/IgGl frente a S-3 a las 9 semanas de inmunización.
La Figura 7 es un diagrama de barras que muestra la secreción de IFN-γ a las 48 horas de la estimulación in vitro del cultivo de celular de los nodulos linfáticos de los animales inmunizados con SPf66.
La Figura 8 es un diagrama de barras que muestra la secreción de IFN-γ a las 48 horas de la estimulación in vitro del cultivo de celular de los nodulos linfáticos de los animales inmunizados con S-3.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los autores de la presente invención han observado que, sorprendentemente, micropartículas de polímeros biocompatibles y biodegradables, tales como las micropartículas formadas por PLGA [ácido poli(láctico-glicólico)] más alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, son capaces no sólo de incrementar la respuesta inmune frente al antígeno encapsulado en la micropartícula, sino que también permiten la administración de péptidos y proteínas inmunológicamente activos/activas por vías menos invasivas, tales como la vía nasal o intradérmica, que las rutas de administración habituales.
Sin tener intención de estar vinculado por ninguna teoría, se piensa que este efecto es debido a la presencia de alginato en la micropartícula que, en combinación con PLGA, permite una mayor encapsulación de péptidos sintéticos de bajo peso molecular y una menor liberación inicial del péptido, consiguiendo además un incremento de la respuesta inmune inducida frente al péptido o proteína encapsulado (antígeno), además de favorecer la administración de antí genos por vías no invasivas gracias a la mucoadhesividad de los alginatos.
Por tanto, en un primer aspecto, la invención se relaciona con una micropartícula, de aquí en adelante micropartícula [I] de la invención, que comprende (i) un primer polímero biodegradable de tipo PLGA [ácido poli(láctico-glicólico)] y (ii) un segundo polímero de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, que encapsula un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
En la presente invención se entiende por "micropartícula" a aquella partícula que comprende un diámetro inferior a 1 mm, preferentemente, entre 1 y 500 micrómetros. Entre 1 y 0,9, entre 0,9 y 0,8, entre 0,8 y 0,7, entre 0,7 y 0,6, entre 0,6 y 0,5, entre 0,5 y 0,4, entre 0,4 y 0,3, entre 0,3 y 0,2, entre 0,2 y 0,1 o menos de 0,1 mm de diámetro.
El tamaño medio de las micropartículas se ve influenciado principalmente por diferentes factores tecnológicos del procedimiento de producción de dichas micropartículas, tales como la concentración del polímero biodegradable, concentración
del agente tensioactivo presente en la fase externa de la doble emulsión y velocidad de agitación.
El primer polímero que forma parte de la micropartícula [I] de la invención es un polímero biodegradable de tipo PLGA. En la presente invención, se entiende por "polímero biodegradable" a polímeros que se disuelven o degradan en un periodo de tiempo que es aceptable para la aplicación deseada, en este caso terapia in vivo, una vez que se exponen a una solución fisiológica de pH comprendido entre 4 y 9, a una temperatura comprendida entre 250C y 400C.
Entre este tipo de polímeros se encuentra el ácido poli(láctico-glicólico) o PLGA, un polímero formado a partir de ácido láctico y ácido glicólico con la fórmula estructural
El PLGA puede presentar diferente proporción de ácido láctico y ácido glicólico. Así, los PLGAs que pueden utilizarse en la presente invención incluyen preferentemente el PLGA 50:50 (50% ácido láctico: 50% ácido glicólico), PLGA 75:25 (75% ácido láctico: 25% ácido glicólico) o combinaciones de ambos.
El segundo polímero que forma parte de la micropartícula [I] de la invención es un polímero de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular. En principio, cualquier alginato capaz de formar un hidrogel es adecuado para ser usado en las micropartículas de la invención. Así, las micropartículas [I] de la invención pueden contener alginato formado mayoritariamente por regiones de ácido manurónico (bloques MM), por regiones de ácido gulurónico (bloques GG) y por regiones de secuencia mixta (bloques MG). El porcentaje y distribución de los ácidos urónicos difieren según el origen del alginato y contribuyen a las propiedades del alginato tales como su viscosidad. El experto en la materia conoce los porcentajes de
cada uno de los distintos bloques que aparecen en las distintas fuentes biológicas de los alginatos. Así, la invención contempla el uso de alginatos procedentes de Laminaria hyperborea, Letonia nigrescens, Lessonia trabeculata, Durvillaea antárctica, Laminaria digitata, Eclonia máxima, Macrocystis pyrifera, Ascophyllum nodosum y/o Laminaria japónica así como mezclas de alginatos de distintas especies hasta conseguir el contenido deseado en bloques GG, MM o GM. Mediante el uso de una combinación adecuada de polímeros de alginato, se puede obtener una mezcla cuyo módulo de elasticidad presenta un valor adecuado mientras que la viscosidad de la solución pre-gel se mantiene a niveles suficientemente bajos como para permitir la adecuada encapsulación/liberación del péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa. Así, los alginatos que pueden usarse en la presente invención incluyen alginatos GG, alginatos MM o combinaciones de ambos en una relación de 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30:70, 20:80 o 10:90. LOS resultados que se muestran en la presente invención se han obtenido con alginato de viscosidad media que posee más de un 60% de bloques G.
La invención también contempla el uso de alginatos derivados del tratamiento de alginatos naturales con enzimas que son capaces de modificar los bloques integrantes para dar lugar a alginatos con propiedades mejoradas. Así, alginatos resultantes del tratamiento de alginatos con C5-epimerasas, que convierten bloques M en bloques G, así como con la enzima AlgE4 de la bacteria Azotobacter vinelandii que es capaz de convertir los bloques M relativamente rígidos en bloques MG. Alternativamente, la invención contempla el uso de alginatos que han sido modificados por distintos tratamientos físicos, en particular, rayos gamma, irradiación con ultrasonidos o con luz ultravioleta según ha sido descrito por Wasikiewicz et al. (Rad. Phys. Chem. 2005, 73: 287-295).
Adicionalmente, el alginato que forma parte de la micropartícula [I] de la invención está ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular. En la presente invención, se entiende por "ligando específico para un receptor de superficie celular" a la molécula o péptido que es capaz de reconocer un receptor de la superficie celular y unirse a él de forma específica. Este ligando permite que la micropartícula [I] de la invención sea reconocida por los receptores de la superficie de células concretas,
por lo que puede unirse a las mismas e interaccionar con ellas. En principio, cualquier péptido que posea sitios de unión específicos que puedan ser reconocidos por receptores de superficie de las células puede ser usado en la presente invención. Así, el ligando específico para un receptor de superficie celular puede proceder de moléculas de adhesión celular que interaccionan con la matriz extracelular como la fibronectina, los distintos miembros de la familias de las selectinas, las caderinas, las lectinas, las integrinas, las inmunoglobulinas, las colectinas y las galectinas.
Así, el ligando específico para un receptor de superficie celular empleado en la presente invención puede ser un péptido derivado de una región seleccionada de las regiones de la fibronectina que intervienen en la unión con las integrinas que se encuentran en la membrana celular. Por ejemplo, y sin limitar la invención, dichos péptidos derivan de la región de la décima repetición tipo III de fibronectina que contiene el péptido RGD, de la región de la decimocuarta repetición tipo III de la fibronectina que contiene el péptido IDAPS (SEQ ID NO: 3), de la región CSI de fibronectina que contiene el péptido LDV y la región CS5 de la fibrinectina que contiene el péptido REDV (SEQ ID NO: 4). Estos péptidos pueden consistir en fragmentos de las regiones correspondientes que conservan su capacidad adhesiva, como, por ejemplo, el péptido QAGDV (SEQ ID NO: 5) del fibrinógeno, el péptido LDV de la fibronectina y el péptido IDSP (SEQ ID NO: 6) de VCAM-I.
La presente invención también contempla el uso de péptidos de unión a integrinas como un ligando específico para un receptor de superficie celular, que derivan de la región de la décima repetición tipo III de fibronectina que comprende la secuencia RGD, como, por ejemplo, un péptido seleccionado del grupo de RGD, RGDS (SEQ ID NO: 7), GRGD (SEQ ID NO: 8), RGDV (SEQ ID NO: 9), RGDT (SEQ ID NO: 10), GRGDG (SEQ ID NO: 11), GRGDS (SEQ ID NO: 12), GRGDY (SEQ ID NO: 13), GRGDF (SEQ ID NO: 14), YRGDS (SEQ ID NO: 15), YRGDDG (SEQ ID NO: 16), GRGDSP (SEQ ID NO: 17), GRGDSG (SEQ ID NO: 18), GRGDSY (SEQ ID NO: 19), GRGDVY (SEQ ID NO: 20), GRGDSPK (SEQ ID NO: 21), CGRGDSPK (SEQ ID NO: 22), CGRGDSPK (SEQ ID NO: 23), CGRGDSY (SEQ ID NO: 24), ciclo(RGDfK) (SEQ ID NO: 25), YAVTGRGD (SEQ ID NO: 26), AcCGGNGEPRGDYRAY-NH2 (SEQ ID NO: 27), AcGCGYGRGDSPG (SEQ ID NO: 28) and RGDPASSKP (SEQ ID
NO: 29), variantes cíclicas de dichos péptidos, variantes multivalentes tanto lineales como ramificadas (ver por ejemplo Dettin et al. 2002, J. Biomed. Mater. Res. 60:466- 471; Monaghan et al. 2001, Arkivoc, 2: U42-49; Thumshirn et al. 2003, Chemistry 9: 2717-2725; Scott et al, 2001, J. Gene Med. 3: 125-134) así como combinaciones de dos o más de dichos péptidos.
Por tanto, en otra realización todavía más particular de la micropartícula [I] de la invención, el ligando específico para un receptor de superficie celular es un péptido comprende la secuencia RGD.
Asimismo, el ligando específico para un receptor de superficie celular puede estar ligado al polímero de alginato con distintos grados de sustitución, de forma que las concentraciones de ambos componentes pueden variar y de este modo controlar el número de ligandos específicos para un receptor de superficie celular que están ligados al polímero de alginato. Así, la invención contempla alginatos que contienen entre 1 y 100, entre 100 y 200, entre 200 y 300, entre 300 y 400, entre 400 y 500, entre 500 y 600, entre 600 y 700, entre 700 y 800, entre 800 y 900 y entre 900 y 1000 moléculas de dicho ligando específico por cada molécula de polímero.
Tal como se ha citado anteriormente, la micropartícula [I] de la invención puede encapsular un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa. En la presente invención, se entiende por "péptido o proteína inmunológicamente activo/activa" a aquel péptido o proteína que estimula la respuesta inmune (respuesta humoral, celular o ambas) cuando se introduce en un organismo distinto del organismo de donde procede dicho péptido o proteína. De forma genérica, a dicho péptido o proteína inmunológicamente activo/activa se le denomina antígeno.
Por tanto, en la presente invención, el término antígeno se refiere a cualquier sustancia capaz de ser reconocida por el sistema inmune de un sujeto y/o capaz de inducir en un sujeto una respuesta inmune humoral o una respuesta inmune celular que conduce a la activación de linfocitos B y/o T cuando se introduce en un sujeto; a modo ilustrativo, dicho término incluye cualquier producto inmunogénico, nativo o recombinante, obtenido de un organismo superior o de un microorganismo, por
ejemplo, una bacteria, un virus, un parásito, un protozoo, un hongo, etc., que contiene uno o más determinantes antigénicos, por ejemplo, componentes estructurales de dichos organismos; toxinas, por ejemplo, exotoxinas, etc. Prácticamente cualquier antígeno puede ser utilizado en la elaboración de micropartículas de la invención cargadas con antígeno
Ejemplos de péptidos y proteínas inmunológicamente activos/activas, sin que sirvan para limitar la invención, incluyen:
• Péptidos o proteínas capaces de (apropiados o diseñados para) inducir una respuesta inmune frente a una enfermedad infecciosa, tal como una enfermedad infecciosa en animales causada por microorganismos patógenos de animales, incluyendo al ser humano, por ejemplo, virus, bacterias, hongos y parásitos infecciosos, relevantes en sanidad humana o animal.
Las proteínas o péptidos capaces de inducir una respuesta inmune pueden ser proteínas o péptidos recombinantes, idénticos o similares a los antígenos naturales de un microorganismo específico.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de virus infecciosos incluyen virus de las familias: Arteriviridae, Retro viridae, Picornaviridae, Calciviridae, Togaviridae, Flaviridae, Coronoviridae, Rhabdoviradae, Filoviridae, Paramyxoviridae, Orthomyxoviridae, Bungaviridae, Arenaviridae, Reoviridae, Birnaviridae,
Hepadnaviridae, Parvoviridae (parvovirus), Papovaviridae, Adenoviridae, Herpesviridae, Poxviridae, Iridoviridae, etc. Ejemplos de antígenos que se pueden emplear según la presente invención incluyen, aunque no se limita a, antígenos de HIV, antígeno gpl20, antígeno de superficie de la hepatitis B, antígenos de rotavirus como VP4 y VP7, antígenos del virus de la influenza como la hemaglutinina o la nucleoproteína, antígeno del herpes simplex timidina kinasa, etc.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de bacterias incluyen tanto bacterias Gram positivas, e.g., Pasteurella sp., Staphylococcus sp., Streptococcus sp., etc., como bacterias Gram negativas, e.g., Escherichia coli, Pseudomonas sp., Salmonella sp., etc. Ejemplos específicos de bacterias infecciosas incluyen: Helicobacter pylori, Borelia burgdorferi, Legionella pneumoplailia, Mycobacteria sp. (e.g., M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansaii, M. gordonae),
Staphylococcus aureus, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogefaes (Grupo A de Streptococcus), Streptococcus agalactiae (Grupo B de Streptococcus), Streptococcus (grupo viridans), Streptococcus faecalis, Streptococcus bovis, Streptococcus (especies anaeróbicas), Streptococcus pneumoniae, Campylobacter sp., Enterococcus sp.,
Haemophilus influenzae, Bacillus aratracis, Corynebacteriumdiphtlzeriae, Corynebacterium sp., Erysipelothrix rhusiopathiae, Clostridium perfringers, Clostridium tetani, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pyzeunaoniae, Pasturella multocida, Bacteroides sp., Fusobacterium nucleatum, Streptobacillus moniliformis, Treponemapallidium, Treponema pertenue, Leptospira, Rickettsia,
Actinornyces israelli, Chlamydia, etc.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de hongos infecciosos incluyen Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatitidis, Chlamydia trachomatis y Candida albicans. Entre los parásitos infecciosos se incluyen, a modo ilustrativo, no limitativo, protozoos, tales como Plasmodium sp., causantes de la malaria, e.g. P. falciparum, P. malariae, P. ovale, P. vivax, etc., Leishmania sp., causantes de leishmaniasis, e.g., L. major, L. donovani, L. infantum, L. braziliensis, L. panamensis, L. mexicana, etc., Toxoplasma gondii, Schistosoma sp., etc., así como nematodos parásitos, tales como Dirofilaria immitis, etc. Ejemplos de antígenos para estos parásitos incluyen el antígeno circumsporozoito de Plasmodium spp.; el antígeno de superficie merozoito de Plasmodium spp.; el antígeno SPf66 de P. falciparum; el antígeno S-3, molécula que incluye cuatro epitopos correspondientes a diferentes estadios del ciclo de vida de P. falciparum; el gp63 de Leishmania spp., etc.
" Péptidos o proteínas asociados a tumores o cánceres ("marcadores tumorales") capaces de (apropiados o diseñados para) inducir una respuesta inmune frente a una célula tumoral o cancerosa, por lo que el péptido o proteína puede ser utilizado en el tratamiento de cánceres mediante la estimulación de una respuesta inmune específica de antígeno frente a un antígeno tumoral.
Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de cánceres que podrían ser potencialmente tratados de acuerdo con las enseñanzas de la presente invención incluyen cáncer
del tracto biliar, cáncer cerebral, cáncer de mama, cáncer cervical, coriocarcinoma, cáncer de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer de estómago, neoplasmas intraepiteliales, linfomas, cáncer de hígado, cáncer de pulmón (e.g., cáncer de pulmón de células pequeñas y de células no pequeñas), melanoma, neuroblastomas, cáncer de boca, cáncer de ovarios, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de recto, sarcomas, cáncer de piel, cáncer de testículos, cáncer de tiroides y cáncer renal, así como otros carcinomas y sarcomas. La selección de antígenos tumorales o determinantes antigénicos para el tratamiento de cánceres puede ser realizada por un experto en la materia a la vista del estado de la técnica (Renkvist et al. 2001, Cáncer Immunol. Immunother. 50:
3-15), estando dichos antígenos y determinantes antigénicos incluidos dentro del ámbito de la presente invención. Ejemplos representativos de dichos antígenos o determinantes antigénicos incluyen: Her2 (cáncer de mama); GD2 (neuroblastoma); EGF-R (glioblastoma maligno); CEA (cáncer de tiroide medular); CD52 (leucemia); proteína gplOO de melanoma humano; proteína melan-A/MART-1 de melanoma humano; tirosinasa; proteína NAl 7- A nt; proteína MAGE-3; proteína p53; proteína HPVl 6E7; y fragmentos antigénicos de dichos péptidos o proteínas.
" Péptidos o proteínas capaces de (apropiados o diseñado para) inducir una respuesta inmune frente a un alérgeno.
Tal como se utiliza en esta descripción, el término "alérgeno" se refiere a un péptido o proteína a la que un sujeto es sensible y provoca una reacción inmunitaria, por ejemplo, extractos alergénicos de pólenes, extractos alergénicos de insectos, extractos alergénicos de alimentos o productos alimenticios, componentes presentes en saliva, pinzas o aguijones de insectos que inducen una reacción de sensibilidad en un sujeto, componentes presentes en plantas que inducen una reacción de sensibilidad en un sujeto, etc. Ejemplos ilustrativos, no limitativos de alérgenos incluyen extractos proteicos de pólenes, e.g., de Lolium perenne, Poa pratense, Phleum pratense, Cynodon dactylon, Festuca pratensis,
Dactylis glomerata, Sécale cereale, Hordeum vulgare, Avena sativa, Triticum sativa, Artemisia vulgaris, Chenopodium álbum, Plantago lanceolata, Taraxacum vulgare, Parietaria judaica, Salsola kali, Urtica dioica, Olea europea, Platanus
sp., Cupressus sp., etc.; extractos proteicos de insectos, e.g., de Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Acarus siró, Blomia tropicalis, Euroglyphus maynei, Glyciphagus domesticus, Lepidoglyphus destructor, Tyrophagus putrescentiae, etc.; extractos proteicos de hongos o de epitelios animales, e.g., Penicillium sp., Alternaría alternata, Cladosporium herbarum, epitelio de perro, epitelio de gato, epitelio de caballo, etc.; extractos proteicos de alimentos o productos alimenticios, etc.
" Péptidos o proteínas capaces de (apropiados o diseñados para) inducir una respuesta mejorada frente a un auto-antígeno. El término "auto-antígeno", tal como aquí se utiliza, se refiere a péptidos o proteínas codificados por el ADN del sujeto y productos generados por proteínas o ARN codificado por el ADN del sujeto. Ejemplos de auto-antí genos se describen en WO 02/56905.
Gracias a las características técnicas de la micropartícula [I] de la invención y explicadas al comienzo de la presente descripción, ésta es adecuada para la liberación en el organismo de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas y estimular con ello la respuesta inmune del organismo frente a dichos péptidos y proteínas. Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con la micropartícula [I] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la micropartícula [I] de la invención en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
En la presente invención se entiende por "individuo" o "sujeto" a un miembro de una especie de animal, preferentemente mamífero e incluye, pero no se limita a, un animal doméstico, un primate y un humano; en el contexto de la presente invención, el individuo es preferiblemente un ser humano, masculino o femenino, de cualquier raza o edad.
Debido a la capacidad de la micropartícula de la invención de liberar los péptidos y proteínas encapsuladas en su interior, la micropartícula resulta de gran utilidad como
dispositivo para la liberación de compuestos de naturaleza peptídica con actividad biológica. Así, en otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la micropartícula [I] de la invención para la liberación de péptidos y proteínas inmunológicamente activos/activas.
La liberación de los péptidos y proteínas puede hacerse de forma controlada mediante una adecuada selección de la proporción de monómeros (ácido láctico y ácido glicólico) que forman el PLGA utilizado en la elaboración de la micropartícula. La velocidad de degradación de estos polímeros depende fundamentalmente de la proporción de ambos monómeros. De este modo, mediante una adecuada selección de dicha composición es posible conseguir que la degradación tenga lugar durante periodos de tiempo que pueden comprender desde unos pocos días hasta varios meses. El peso molecular del polímero también influye en la velocidad de degradación, ya que cuanto menor sea el peso molecular menor será el tiempo necesario para la obtención de pequeños oligómeros o monómeros hidrofílicos (Lewis, et al. Controlled reléase of bioactive agents from lactide/glicolide polyesters. En: Chasin, M. et al. Biodegradable polymers as drug delivery systems. Ed. Marcel Decker, Inc. New York, 1990).
La micropartícula [I] de la invención puede administrarse al individuo por sí sola o formando parte de composiciones farmacéuticas junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, junto a la administración simultánea o separada de un agente terapéutico. Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica, de aquí en adelante, composición farmacéutica [I] de la invención, que comprende la micropartícula [I] de la invención junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Vehículos farmacéuticamente aceptables empleados en la elaboración de composiciones farmacéuticas, pueden encontrarse en el libro "Rowe, R, Sheskey, P. y Owen, S. Handbook of Pharmaceutical Excipients. 5a Ed.
APhA y Pharmaceutical Press. Londres, 2004".
Las micropartículas [I] de la invención, tras su administración a un sujeto, son capaces de liberar el péptido o proteína inmunológicamente activo/activa de manera estable y gradual durante tiempos prolongados, de forma que actúan como medicamentos de liberación sostenida. Por ello, la micropartícula [I] de la invención
permite evitar la administración continua y repetida de agente terapéutico en aquellos pacientes que requieran niveles básales de dicho agente durante un tiempo prolongado.
La micropartícula [I] de la invención o la composición farmacéutica [I] de la invención pueden ser administradas al paciente de forma parenteral, incluyendo intravascular, intraperitoneal, subcutánea, intradérmica, etc. y no parenteral, por ejemplo, tópica, a través de las mucosas, es decir, oral, bucal, sublingual, nasal (por inhalación), vaginal, etc., y se formularán en una forma farmacéutica apropiada a la vía de administración elegida, por ejemplo, en forma de soluciones estériles, suspensiones o productos liofilizados en una forma farmacéutica unitaria apropiada. Pueden usarse excipientes adecuados, tales como agentes tamponantes, tensioactivos, conservantes, etc. Información sobre dichos excipientes y formas farmacéuticas de administración de la micropartícula [I] de la invención o la composición farmacéutica [I] de la invención, puede encontrarse en el libro "Ro we, R, Sheskey, P. y Owen, S. Handbook of Pharmaceutical Excipients. 5a Ed. APhA y Pharmaceutical Press. Londres, 2004", citado at supra.
La dosis de micropartículas [I] de la invención a administrar a un individuo puede variar de un amplio intervalo, por ejemplo, entre aproximadamente 0,01 y 100 mg por Kg de peso corporal..
La producción de dichas formas farmacéuticas de administración por cualquiera de las vías elegidas puede llevarse a cabo mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia. A modo ilustrativo, información sobre los procedimientos para la producción de dichas formas farmacéuticas de administración de la proteína de la invención puede encontrarse en el libro "Swarbrick. J., Boylan, J.C. Encyclopedia of Pharmaceutical technology. 2a Ed. Marcel Dekker Inc. New York, 2002-2004".
En otra realización particular, la composición farmacéutica de la invención comprende la micropartícula [I] de la invención, un vehículo farmacéuticamente aceptable y un agente terapéutico.
El término "agente terapéutico" incluye cualquier compuesto que puede usarse para tratar, prevenir o curar las enfermedades en un sujeto o aquel utilizado para mejorar el bienestar físico y mental en humanos y animales. "Agentes terapéuticos" incluyen, pero no se limitan a, un agente quimioterápico, alérgenos, analgésicos, antitumorales, un esteroide, un retinoide, un compuesto antibiótico (antimicrobiano, antiviral o antifüngico), un antioxidante, un compuesto antiinflamatorio, neuroprotector, antiasmático, surfactantes pulmonares, análogos de vitaminas, ácido salicílico, etc. Un agente terapéutico incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, profármacos y derivados farmacéuticos de los mismos.
En otro aspecto, la invención se relaciona con la composición farmacéutica [I] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica [I] de la invención en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune de un individuo.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica [I] de la invención como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
Como entiende el experto en la materia, la micropartícula [I] de la invención puede estar contenida en un kit que, opcionalmente, puede comprender un agente terapéutico tal como se ha definido anteriormente.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con un kit, de aquí en adelante kit [I] de la invención, que comprende la micropartícula [I] de la invención y que, en una realización particular, comprende, además, un agente terapéutico.
En la presente invención se entiende por "kit", un producto que contiene las micropartículas [I] de la invención o los distintos componentes de la composición farmacéutica [I] de la invención empaquetados para permitir su transporte, almacenamiento y su administración de forma simultánea o secuencial. Así, los kits de
la invención pueden contener una o más suspensiones, comprimidos, cápsulas, inhaladores, jeringuillas, parches y similares que contienen las micropartículas [I] de la invención o los distintos componentes de la composición farmacéutica [I] de la invención, y que se pueden encontrar preparadas en una dosis única o como múltiples dosis. Adicionalmente, el kit puede contener un vehículo adecuado para la resuspensión de las micropartículas [I] de la invención o los distintos componentes de la composición farmacéutica [I] de la invención, tales como medios acuosos, e.g. solución salina, solución Ringer, solución Ringer lactato, dextrosa y cloruro sódico, medios solubles en agua, tales como alcohol, polietilenglicol, propil etilenglicol y vehículos insolubles en agua como aceite de maíz, aceite de semillas de algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato bencílico. Otro componente que puede estar presente en el kit es un empaquetamiento que permite mantener las formulaciones de la invención dentro de unos límites determinados. Materiales adecuados para la preparación de tales empaquetamientos incluyen cristal, plástico (polietileno, polipropileno, policarbonato y similares), botellas, viales, papel, sobres y similares.
Los usos del kit [I] de la invención constituyen aspectos inventivos adicionales. Así, en otro aspecto, la invención se relaciona con el kit [I] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el kit [I] de la invención en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso del kit [I] de la invención como sistema de liberación de péptidos y proteínas inmunológicamente activos/activas.
En general, las micropartículas pueden obtenerse a partir de polímeros biodegradables que, en el caso de la presente invención son PLGA y alginato, mediante un procedimiento que comprende la disolución de dichos polímeros en un disolvente adecuado (e.g., diclorometano, acetato de etilo, acetona, agua etc.) y posterior emulsificación con una fase acuosa. A continuación esta primera emulsión se adiciona
sobre una solución de un agente tensioactivo (e.g. alcohol polivinílico) para formar una doble emulsión. Finalmente se procede a la desolvatación o extracción del solvente en el que estaba solubilizado el PLGA tras la adición de un disolvente apropiado, por ejemplo, un disolvente o una mezcla de disolventes miscible con la disolución del polímero biodegradable, tal como una mezcla isopropanol-agua, obteniéndose una suspensión acuosa de micropartículas de la que se aislan la microparticulas por métodos convencionales, por ejemplo, mediante filtración a vacío o centrifugación. La relación, en volumen, fase orgánica: solución hidroalcohólica (isopropanol/agua) puede variar dentro de un amplio intervalo, por ejemplo, entre 1:10 y 1:100 (v:v).
La proporción del péptido o proteína inmunológicamente activo/activa incorporada en la micropartícula de la invención puede variar dentro de un amplio intervalo, por ejemplo, puede ser de hasta un 25% en peso respecto al peso total de las micropartículas. No obstante, la proporción adecuada dependerá en cada caso del péptido o proteína incorporada.
La incorporación del péptido o proteína inmunológicamente activo/activa a las micropartículas de la invención se puede hacer tal como se describe en WO 02/069938, por incorporación a la solución del polímero biodegradable (en la fase interna de la primera emulsión) antes de la formación de micropartículas, o bien posteriormente adicionarla a la suspensión acuosa de las micropartículas ya formadas.
Por tanto, en otro aspecto la invención se relaciona con un procedimiento para la preparación de la micropartícula [I] de la invención, que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico, b. preparar una disolución acuosa de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas.
En una realización preferida del procedimiento para la preparación de la micropartícula [i] de la invención, la emulsión obtenida en el apartado c) se puede adicionar sobre una solución de un agente tensioactivo (e.g. alcohol polivinílico) para obtener una doble emulsión y seguidamente, adicionar dicha doble emulsión sobre una solución hidroalcohólica que contiene cloruro calcico para asegurar la total gelificación del alginato.
Como entiende el experto en la materia, dicho procedimiento puede comprende etapas adicionales que suponen realizaciones preferidas del procedimiento, como por ejemplo, una etapa de evaporación/extracción del disolvente para obtener las micropartículas de PLGA-alginato que contienen dichos péptidos y proteínas inmunológicamente activos/ activas, seguido de una etapa de aislamiento de las micropartículas y, opcionalmente, liofilizar o desecar las micropartículas obtenidas.
Las micropartículas [I] de la invención pueden purificarse o aislarse por métodos convencionales, por ejemplo, mediante centrifugación, ultracentrifugación, filtración tangencial, filtración a vacío, o evaporación, incluyendo la utilización de vacío.
En una realización particular del procedimiento para la preparación de la micropartícula [I] de la invención, el ligando específico para un receptor de superficie celular es un péptido comprende la secuencia RGD.
Asimismo, si se desea, las micropartículas [I] de la invención pueden ser liofilizadas por métodos convencionales. Desde un punto de vista farmacológico, es importante poder disponer de micropartículas en forma liofilizada dado que ello mejora su estabilidad durante el almacenamiento y conservación a largo plazo, además de reducir el volumen del producto que va a ser manipulado. Las micropartículas [I] de la invención pueden ser liofilizadas en presencia de un agente crioprotector habitual tal como glucosa, sacarosa, manitol, trehalosa, glicerol, lactosa, sorbitol, polivinilpilorridona, etc., preferentemente, sacarosa o manitol; a una concentración comprendida dentro de un amplio intervalo, preferentemente, entre 0,1% y 20% en peso.
Opcionalmente, se puede añadir un agente reticulante para mejorar la estabilidad de las micropartículas [I] de la invención, tal como se describe en WO 02/069938. Ejemplos ilustrativos, no limitativos, de agentes reticulantes que se pueden utilizar incluyen compuestos diaminados, por ejemplo 1,3 diaminopropano, polisacáridos o sacáridos simples, proteínas y, en general, cualquier molécula que presente grupos funcionales capaces de reaccionar con los grupos funcionales presentes en el polímero biodegradable.
Adicionalmente, la invención también se relaciona con un procedimiento para la preparación de una micropartícula en la que el alginato no está ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular pero que, debido a las características del alginato en combinación con el PLGA, conserva las propiedades de la micropartícula [I] de la invención. Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con un procedimiento para la preparación de una micropartícula, de aquí en adelante, micropartícula [II] de la invención, que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico, b. preparar una disolución acuosa de alginato, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas.
En una realización preferida del procedimiento para la preparación de la micropartícula [II] de la invención, la emulsión obtenida en el apartado c) se puede adicionar sobre una solución de un agente tensioactivo (e.g. alcohol polivinílico) para obtener una doble emulsión y seguidamente, adicionar dicha doble emulsión sobre una solución hidroalcohólica que contiene cloruro calcico para asegurar la total gelificación del alginato.
Como entiende el experto en la materia, dicho procedimiento puede comprende etapas adicionales que suponen realizaciones preferidas del procedimiento, como por ejemplo, una etapa de evaporación/extracción del disolvente para obtener las
micropartículas de PLGA-alginato que contienen dichos péptidos y proteínas inmunológicamente activos/ activas, seguido de una etapa de aislamiento de las micropartículas y, opcionalmente, liofilizar o desecar las micropartículas obtenidas.
Tal como se ha citado anteriormente, las micropartículas [II] de la invención pueden purificarse o aislarse por métodos convencionales, por ejemplo, mediante centrifugación, ultracentrifugación, filtración tangencial, filtración a vacío, o evaporación, incluyendo la utilización de vacío.
En una realización particular, el alginato ligado o no a un ligando específico puede incluirse en la fase externa de la doble emulsión y el resto del procedimiento de elaboración sería igual al descrito anteriormente.
Así, en otro aspecto la invención se relaciona con una micropartícula obtenible por un procedimiento según se ha descrito anteriormente, en donde el alginato de la micropartícula resultante que no está ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, es decir, una micropartícula, de aquí en adelante micropartícula [II] de la invención, que comprende (i) un primer polímero biodegradable de tipo PLGA
[ácido poli(láctico-glicólico)] y (ii) un segundo polímero de alginato, que encapsula un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
Los diferentes usos de la micropartícula [II] de la invención constituyen aspectos inventivos adicionales.
Por tanto, en otro aspecto, la invención se relaciona con la micropartícula [II] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la micropartícula [II] de la invención en elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la micropartícula [II] de la invención como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende la micropartícula [II] de la invención, de aquí en adelante, composición farmacéutica [II] de la invención, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En una realización particular, la composición farmacéutica [II] de la invención comprende, además, un agente terapéutico.
En otro aspecto, la invención se relaciona con la composición farmacéutica [II] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica [II] de la invención en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune de un individuo.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la composición farmacéutica [II] de la invención como sistema de liberación de proteínas o péptidos inmunológicamente activos/activas
En otro aspecto, la invención se relaciona con un kit, de aquí en adelante, kit [II] de la invención, que comprende la micropartícula [II] de la invención.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el kit [II] de la invención para su uso como vacuna.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso del kit [II] de la invención en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso del kit [II] de la invención en la liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
En un último aspecto, la invención se relaciona con el uso del alginato como adyuvante de un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
La invención se ilustra a continuación en base a los siguientes ejemplos que se proporcionan a modo ilustrativo y no limitativo del alcance de la invención.
EJEMPLO 1
I. Elaboración de las micropartículas de la invención
Para la elaboración de las micropartículas se utilizaron el PLGA 50:50, comercializados por Boehringer Ingelheim G.K., Ingelheim, Germany. El alginato utilizado era un alginato MVG (de viscosidad media, rico en bloques G) de NovaMatrix, FMC Biopolymers Philadelphia, PA, USA y el alginato RGD fue obtenido mediante modificación del alginato MVG siguiendo el procedimiento descrito por Rowley et al 1999. Biomaterials 20: 45-53.
Los péptidos SPf66 y S3, se obtuvieron mediante síntesis en fase sólida siguiendo la metodología descrita por Merrifield (Merrifield, B. Solid phase peptide synthesis. I. Synthesis of Thetrapeptide. J. Am. Chem. Soc. 2149-2154. 1963) y modificada por Houghten (Houghten R. General method for the rapid solid-phase synthesis of large number of peptides. Specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids. Proc. Nat. Acad. Sci, 82: 5131-5135. 1985.), bajo condiciones de Normas de Correcta Fabricación (GMP) en la Fundación Instituto de Inmunología de Colombia. La secuencia de aminoácidos del péptido SPf66, en código de una letra, es la siguiente: CGDELEAETQNVYAAPNANPYSLFQKEKMVLPNANPPANKKNAGC (SEQ ID NO: 1). La secuencia de aminoácidos del péptido S3, es la siguiente: DELEAETQNVYAAPNANPYSLFQKEKMVLPNANPPANKKNA (SEQ ID NO: 2).
El resto de reactivos son de grado analítico y se obtienen a través de distribuidores habituales de productos químicos.
Las micropartículas (MP) se elaboraron mediante la técnica de doble emulsión evaporación/extracción del solvente. Para cada antígeno se prepararon 3 formulaciones de MP diferentes: MP de PLGA (PLGA MP), MP de PLGA y alginato al 2%(w/w)
(PLGA-alg MP), y MP de PLGA y 2% de alginato ligado con RGD (PLGA-alg RGD MP).
" Preparación de las MP de PLGA
Una solución acuosa del péptido al 10% (w/v) se adicionó sobre otra de diclorometano con el polímero PLGA al 5% (w/v) emulsionándolas mediante sonicación durante 30 s a 50 W (Branson® sonifier 250). Esta emulsión w/o se vertió sobre una solución acuosa de alcohol polivinílico al 8% (w/v) homogenizándolas durante 5 minutos a 8.000 rpm para favorecer la formación de una segunda emulsión w/o/w mediante homogenizador de turbina (Ultaturrax ® T-25). A continuación la doble emulsión se adicionó sobre otra solución acuosa de isopropanol al 2% (v/v) y se dejó agitando con un agitador de paletas (HEIDOLPH. Mod.RZRl) para favorecer la evaporación/extracción del solvente orgánico e inducir así la formación de las micropartículas. Al cabo de 1 hora, se recogieron las MP mediante centrifugación 10.000 rpm y se lavaron 3 veces con agua destilada mediante centrifugación y resuspensión sucesiva. Finalmente las micropartículas de PLGA (PLGA MP) se resuspendieron en agua milliQ y se liofilizaron.
" Preparación de las MP de PLGA-alginato
La preparación de las MP de alginato (PLGA-alg MP) se llevó a cabo de una forma similar a las de PLGA pero con ciertas modificaciones. Para la formación de la primera emulsión w/o, la fase acuosa, además del péptido al 10%, también contenía el alginato en una proporción 2% (w/w) respecto del PLGA. Esta primera emulsión se formó mediante sonicación, así como la segunda mediante un homogenizador de turbina. Una vez que se obtuvo la w/o/w, ésta se adicionó sobre isopropanol 2% y CaCl2 0,6 mM para asegurar la total gelificación del alginato a la vez que se evapora el diclorometano. Los siguientes pasos son igual que para la anterior formulación.
" Preparación de las MP de PLGA-alginatoRGD
En cuanto a las micropartículas de PLGA-alginato ligado a un péptido RGD (PLGA-algRGD MP), éstas se elaboraron exactamente igual que PLGA-alg MP pero utilizando un alginato que ha sido unido o ligado con RGD (alg RGD).
II. Caracterización de las micropartículas
Una vez elaboradas las micropartículas se procedió a su completa caracterización mediante la determinación de su morfología, tamaño, potencial Z, porcentaje de péptido encapsulado y adsorbido a la superficie y perfil de liberación in vitro.
La caracterización morfológica se realizó empleando la técnica de microscopía electrónica de barrido (Jeol JSM-35 CF). El tamaño de partícula se determinó mediante la técnica de difracción de rayos láser utilizado un analizador de partículas COULTER® COUNTER LS 130. Para determinar el porcentaje de péptido encapsulado (p/p) se utilizó el ensayo de Lowry modificado conocido como método del ácido bicinconínico (micro-BCA) (Smith et al. 1985, Anal. Biochem. 150: 76-85.). El potencial zeta se determinaró mediante velocimetría láser doppler (Malvern® Zetasizer 3000).El péptido total encapsulado se determinó tras la digestión completa de las microesferas con una solución de NaOH 0.2 M. El péptido adsorbido o asociado a la superficie de las micropartículas, se determinó resuspendiendo las micropartículas, en una solución tampón fosfato 20 mM, pH 7,4 e incubando a 37°C, bajo agitación orbital continua durante 30 min. Las microesferas fueron posteriormente sedimentadas por centrifugación y en el sobrenadante se analizó el contenido de SPf66 mediante la técnica de micro-BCA. El péptido asociado a la superficie corresponde al porcentaje del péptido total encapsulado que está presente en la superficie de las micropartículas y consecuentemente disponible para una liberación rápida.
El análisis de las micropartículas mediante microscopía electrónica de barrido permitió observar sus características morfológicas, siendo partículas esféricas de superficie lisa (figura 1).
Los diferentes parámetros caracterizados en las micropartículas se encuentran recogidos en la Tabla 1. Tal y como puede observarse en la tabla, los diferentes tipos de MP elaboradas presentaron un tamaño de partícula medio en torno a 1 micrómetro. Sin
embargo, la carga superficial neta de las micropartículas se ve influenciada por la presencia de alginato, ya que se observaron notables diferencias en los potenciales Zeta de las MP dependiendo de la presencia o no de alginato en la formulación. Para ambos péptidos (SPf66 y S-3), las MP con alginato presentaron valores de potencial zeta más negativos que sus respectivas PLGA MP. Estos resultados ponen de manifiesto que el alginato (polianión) se incorpora a la micropartículas, y al menos en parte lo hace a nivel superficial, a que el alginato es un polianión. Respecto a la eficiencia de encapsulación (EE) y péptido adsorbido a la superficie (SAP), se observa un incremento de la EE al introducir el alginato mientras que la SAP se redujo notablemente, con respecto a las micropartículas preparadas únicamente con PLGA (PLGA MP). La inclusión de alginato en la fase acuosa interna de la doble emulsión, junto con el péptido, permite aumentar la viscosidad de la primera emulsión dificultando la difusión del péptido hacia la fase externa acuosa, lo cual, junto la posibilidad de gelificar el alginato por entrecruzamiento con el cloruro calcico, evita la pérdida del péptido durante la fase de formación de las micropartículas. Tabla 1
Estudios de liberación in vitro
Con el propósito de obtener el perfil de liberación del péptido a partir de las micropartículas de PLGA, se pesaron exactamente 20 mg de microesferas en tubos de ensayo y se resuspendieron en tampón fosfato 20 mM, pH 7,4 incubándose a 37°C en agitación orbital continua. A intervalos de tiempo preestablecidos, las muestras se
centrifugaron a 10.000 rpm durante 10 min. El sobrenadante fue extraído y analizado para cuantificar el péptido, mediante la técnica de micro-BCA descrita anteriormente. El sobrenadante retirado es reemplazado con un volumen equivalente de solución tampón fresca para continuar con el ensayo de liberación. El perfil de liberación del péptido obtenido para cada formulación de micropartículas fue expresado en términos de porcentaje acumulado de péptido liberado en función del tiempo. Los ensayos de liberación se realizaron por triplicado para cada una de las formulaciones elaboradas.
Como puede observarse en la figura 2 los perfiles de liberación de los péptidos a partir de las micropartículas presentan un comportamiento trifásico. Solo se encuentran diferencias en la liberación del péptido en los tiempos iniciales (péptido asociado a la superficie), mientras que el resto del perfil obtenido durante los 112 días de duración del ensayo muestra velocidades de liberación muy similares entre las formulaciones de PLGA y las 2 de PLGA-alginato, para cada uno de los péptidos.
III. Estudios de inmunización
La respuesta inmune inducida por las micropartículas se evaluó en ratones Balb/c de 25 g de peso y 6-8 semanas divididos en 6 grupos de 7 ratones. El grupo 1 recibió una dosis intradérmica de 100 μg del antígeno SPf66 microencapsulado en microesferas de PLGA 50:50 (PLGA MP). El grupo 2 recibió la misma dosis del antígeno SPf66 microencapsulado en microesferas de PLGA y alginato al 2% (PLGA-alg MP). El grupo 3 recibió 100 μg del antígeno del antígeno SPf66 microencapsulado en microesferas de PLGA y 2% de alginato ligado con RGD (PLGA-alg RGD MP). Los grupos 4, 5 y 6 recibieron la misma dosis de antígeno S3 microencapsulado en los tres tipos de micropartículas anteriormente descritas, PLGA MP, PLGA-alg MP y PLGA-alg RGD MP, respectivamente.
Determinación de anticuerpos
Todos los animales fueron sangrados del plexo retro-orbital bajo anestesia, antes de la primera inmunización y a intervalos periódicos hasta la semana 12. Las muestras de sangre fueron centrifugadas a 5.000 rpm durante 5 minutos, el suero fue recuperado
y almacenado a -80°C para su posterior caracterización inmunoquímica. Los niveles de anticuerpos anti-péptido IgG total IgG2a e IgGl se determinaron mediante una técnica de ELISA convencional.
Las Figuras 3 y 4 muestras los niveles de anticuerpos (Ig G totales) obtenidos para los diferentes grupos de animales inmunizados con 100 μg del antígeno SPf66 ó S-3. Tal y como se había observado en estudios previos, las micropartículas de PLGA (PLGA MP) cargadas tanto con SPf66 como con S-3 originaron una alta respuesta humoral administradas por vía intradérmica. Asimismo, cabe destacar que las micropartículas con alginato (PLGA-alg MP) mejoraron significativamente la respuesta para ambos antígenos peptídicos. Por otro lado, la incorporación de las secuencias RGD en el alginato (PLGA-alg RGD MP), se observaron también diferencias entre las partículas formuladas sin alginato (PLGA MP), con el alginato no ligado (PLGA-alg MP) o el algRGD (PLGA-alg RGD MP), sobretodo en los tiempos iniciales, 3 y 6 semanas, donde las PLGA-algRGD MP indujeron títulos de IgG superiores a los de las PLGA-alg MP. Las secuencias RGD inducen un reconocimiento específico por parte de las células presentadoras de antígenos (APCs), pudiendo éstas captar las MP de una forma más eficiente.
La producción de isotipos de anticuerpos (IgGl e IgG2a) por los ratones inmunizados fue estudiada a las 9 semanas. Todas las formulaciones indujeron niveles elevados y similares de IgGl. En cuanto a la IgG2a, aunque todos los grupos mostraron niveles detectables, se observó diferencias entre las formulaciones administradas. Para ambos péptidos, las MP que incorporan alginato indujeron niveles de IgG2a superiores a los de las PLGA MP. Además, las MP que contenían el alginato modificado con secuencias RGD aumentaron la secreción de este isotipo citofílico (IgG2a para ratones) respecto a las MP del alginato no ligado, siendo dicho incremento mayor para el caso del péptido SPf66 que para el S-3. Esto resulta de gran importancia, ya que en la infección por malaria los anticuerpos citofílicos juegan un papel importante a la hora de generar protección frente al parásito. Tal y como puede observarse en las figuras 5 y 6 la relación IgG2a/IgGl resultó significativamente superior para las MP con alginato que para las elaboradas únicamente con PLGA, para ambos péptidos. Los ratios más altos corresponden en ambos casos para las formulaciones PLGA-alg RGD MP.
Ensayos de secreción de IFN-γ
La secreción de IFN-γ del cultivo celular de los nodulos linfáticos extraídos de los ratones transcurridas 14 semanas desde la inmunización, fue determinada mediante ELISA de captura (OptEIA IFN- γ ELISA kit (Pharmingen, Becton Dickinson, San Diego, CA).
Como muestran las figuras 7 y 8 todos los cultivos celulares de los nodulos linfáticos de los grupos inmunizados con las micropartículas de SPf66 ó S-3 produjeron niveles detectables de la citoquina IFN-γ tras su estimulación in vitro con el péptido correspondiente a la inmunización. Los grupos que recibieron las PLGA MP indujeron los menores niveles de IFN-γ, mientras que los más altos fueron conseguidos por las
PLGA-alg RGD MP y las PLGA-alg MP secretaron niveles intermedios a los de las otras 2 formulaciones.
Claims
1. Una micropartícula que comprende (i) un primer polímero biodegradable de tipo PLGA [ácido poli(láctico-glicólico)] y (ii) un segundo polímero de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, que encapsula un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
2. Micropartícula según la reivindicación 1, en la que el ligando específico para un receptor de superficie celular es un péptido comprende la secuencia RGD.
3. Una micropartícula según la reivindicación 1 ó 2 para su uso como vacuna.
4. Uso de una micropartícula según la reivindicación 1 ó 2 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
5. Uso de un micropartícula según la reivindicación 1 ó 2 como sistema de liberación de dichos péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
6. Una composición farmacéutica que comprende una micropartícula según la reivindicación 1 ó 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. Composición según la reivindicación 6 que comprende, además, un agente terapéutico.
8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 6 ó 7 para su uso como vacuna.
9. Uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 6 ó 7 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune de un individuo.
10. Uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 6 ó 7 como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
11. Un kit que comprende una micropartícula según la reivindicación 1 ó 2.
12. Kit según la reivindicación 11 que comprende, además, un agente terapéutico.
13. Un kit según la reivindicación 11 ó 12 para su uso como vacuna.
14. Uso de un kit según la reivindicación 11 ó 12 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
15. Uso de un kit según la reivindicación 11 ó 12 como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
16. Un procedimiento para la preparación de una micropartícula según la reivindicación 1 que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico, b. preparar una disolución acuosa de alginato ligado a un ligando específico para un receptor de superficie celular, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas.
17. Procedimiento según la reivindicación 16, en donde el ligando específico para un receptor de superficie celular es un péptido comprende la secuencia RGD
18. Un procedimiento para la preparación de una micropartícula que comprende las etapas de a. preparar una disolución de PLGA en un disolvente orgánico, b. preparar una disolución acuosa de alginato, c. emulsificar las disoluciones con el péptido o la proteína inmunológicamente activo/activa, d. adicionar la emulsión obtenida en el apartado c) sobre una solución que contiene cloruro calcico y e. aislar las micropartículas.
19. Una micropartícula obtenible por un procedimiento según la reivindicación 18.
20. Una micropartícula según la reivindicación 19 para su uso como vacuna.
21. Uso de una micropartícula según la reivindicación 19 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune de un individuo.
22. Uso de una micropartícula según la reivindicación 19 como sistema de liberación de dichos péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
23. Una composición que comprende una micropartícula según la reivindicación 19 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
24. Composición según la reivindicación 23 que comprende, además, un agente terapéutico.
25. Una composición farmacéutica según la reivindicación 23 ó 24 para su uso como vacuna.
26. Uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 23 ó 24 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune de un individuo.
27. Uso de una composición farmacéutica según la reivindicación 23 ó 24 como sistema de liberación de péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
28. Un kit que comprende una micropartícula según la reivindicación 19.
29. Un kit según la reivindicación 28 para su uso como vacuna.
30. Uso de un kit según la reivindicación 28 en la elaboración de un medicamento para estimular y/o inducir la respuesta inmune en un individuo.
31. Uso de un kit según la reivindicación 18 en la liberación péptidos o proteínas inmunológicamente activos/activas.
32. Uso del alginato como adyuvante de un péptido o proteína inmunológicamente activo/activa.
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Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102988301A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-03-27 | 温州医学院 | 一种含贝伐单抗的长效缓释微球的制备方法 |
US20150238534A1 (en) * | 2014-02-27 | 2015-08-27 | Gwo Xi Stem Cell Applied Technology Co., Ltd. | Novel hollow particles |
WO2021087179A1 (en) * | 2019-10-29 | 2021-05-06 | The Regents Of The University Of California | Periodontal micropatch and uses thereof |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3075883A (en) * | 1961-11-08 | 1963-01-29 | Cons Lab Inc | Novel parenteral vaccine antigen compositions and methods of making and using |
US5382435A (en) * | 1993-03-24 | 1995-01-17 | Southwest Research Institute | Microparticulate pharmaceutical delivery system |
WO1995011010A1 (en) | 1993-10-22 | 1995-04-27 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines |
WO2000050050A1 (en) | 1999-02-23 | 2000-08-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Multiparticulate formulation |
EP1079811A1 (en) | 1998-05-18 | 2001-03-07 | Amgen Inc. | Biodegradable sustained-release alginate gels |
WO2002056905A2 (en) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
WO2002069938A1 (es) | 2001-03-06 | 2002-09-12 | Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. | Fabricacion de nanoparticulas a base del copolimero de metil vinil eter y anhidrido maleico para la administracion de farmacos de naturaleza hidrofilica, en particular de bases puricas y pirimidinicas |
ES2190350A1 (es) | 2001-07-31 | 2003-07-16 | Inst Tecnologico De Navarra S | Composicion de vacuna frente a la brucelosis que comprende microparticulas de poli (e-caprolactona) como adyuvante. |
-
2007
- 2007-11-14 ES ES200703014A patent/ES2327375B1/es active Active
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2008
- 2008-11-14 EP EP08850531A patent/EP2221050A1/en not_active Withdrawn
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- 2008-11-14 WO PCT/ES2008/000717 patent/WO2009063116A1/es active Application Filing
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3075883A (en) * | 1961-11-08 | 1963-01-29 | Cons Lab Inc | Novel parenteral vaccine antigen compositions and methods of making and using |
US5382435A (en) * | 1993-03-24 | 1995-01-17 | Southwest Research Institute | Microparticulate pharmaceutical delivery system |
WO1995011010A1 (en) | 1993-10-22 | 1995-04-27 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines |
EP1079811A1 (en) | 1998-05-18 | 2001-03-07 | Amgen Inc. | Biodegradable sustained-release alginate gels |
WO2000050050A1 (en) | 1999-02-23 | 2000-08-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Multiparticulate formulation |
WO2002056905A2 (en) | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
WO2002069938A1 (es) | 2001-03-06 | 2002-09-12 | Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. | Fabricacion de nanoparticulas a base del copolimero de metil vinil eter y anhidrido maleico para la administracion de farmacos de naturaleza hidrofilica, en particular de bases puricas y pirimidinicas |
ES2190350A1 (es) | 2001-07-31 | 2003-07-16 | Inst Tecnologico De Navarra S | Composicion de vacuna frente a la brucelosis que comprende microparticulas de poli (e-caprolactona) como adyuvante. |
Non-Patent Citations (18)
Title |
---|
DETTIN ET AL., J. BIOMED. MATER. RES., vol. 60, 2002, pages 466 - 471 |
GUPTA ET AL., ADV. DRUG DEL, REV., vol. 32, 1998, pages 155 - 172 |
HOUGHTEN R.: "General method for the rapid solid-phase synthesis of large number of peptides. Specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids", PROC. NAT. ACAD. SCI, vol. 82, 1985, pages 5131 - 5135 |
IGARTUA ET AL., J. CONTROL. REL., vol. 56, 1998, pages 63 - 73 |
JIN, XIAO BING ET AL.: "Ectopic neocartilage formation from predifferentiated human adipose derived stem cells induced by adenoviral-mediated transfer of hTGF beta2", BIOMATERIALS, vol. 28, no. 19, 2007, pages 2994 - 3003 |
LIU X. ET AL.: "Novthe polymeric microspheres containing norcantharidin for chemoembolization", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, vol. 116, 2006, pages 35 - 41, XP024957683 * |
LIU, XIAOHUA ET AL.: "Novel polymeric microspheres containing norcantharidin for chemoembolization", J. CONTROL. REL., vol. 116, no. 1, 2006, pages 35 - 41 |
MEN ET AL., VACCINE, vol. 14, 1996, pages 1442 - 1450 |
MERRIFIELD, B.: "Solid phase peptide synthesis. I. Synthesis of Tetrapeptide", J. AM. CHEM. SOC., 1963, pages 2149 - 2154 |
MONAGHAN ET AL., ARKIVOC, vol. 2, 2001, pages U42 - 49 |
RENKVIST ET AL., CANCER IMMUNOL. IMMUNOTHER., vol. 50, 2001, pages 3 - 15 |
ROWLEY ET AL., BIOMATERIALS, vol. 20, 1999, pages 45 - 53 |
ROWLEY J.A. ET AL.: "Alginate hydrogels as synthetic extracellular matrix materials", BIOMATERIALS, vol. 20, 1999, pages 45 - 53, XP009071577 * |
SCOTT ET AL., J. GENE MED., vol. 3, 2001, pages 125 - 134 |
SMITH ET AL., ANAL. BIOCHEM., vol. 150, 1985, pages 76 - 85 |
THUMSHIRN ET AL., CHEMISTRY, vol. 9, 2003, pages 2717 - 2725 |
WANG, YE ET AL.: "Biodegradable and complexed microspheres used for sustained delivery and activity protection of SOD", J. BIOMED. MAT. RES., PART B: APPL. BIOMAT., vol. 79B, no. 1, 2006, pages 74 - 78 |
WASIKIEWICZ ET AL., RAD. PHYS. CHEM., vol. 73, 2005, pages 287 - 295 |
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---|---|
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