WO2008068392A1 - Novel imidazo[1,2-a]pyridine-3-ylamine fluorophore derivatives and process for the preparation thereof - Google Patents

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Olga Burchak
Laurent Mugherli
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Definitions

  • the present invention relates to novel molecules derived from imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine, their process of preparation and their use as fluorophores.
  • the invention relates to novel compounds having an imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine ring.
  • the invention relates to molecules having an imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine ring, with particular substituents, which have the particularity of being fluorescent. This property makes it possible to envisage their use to study the kinetics of the multicomponent reactions from which they are derived, or as fluorescent markers in chemical or biological reactions.
  • the invention also relates to a process for the preparation of these molecules, this process being characterized by a multicomponent synthesis step.
  • the invention relates to the uses of these molecules and their method of preparation for the implementation of screening methods in chemistry or biology. Some of these molecules are also likely to have therapeutic properties in addition to their fluorescence properties, which makes them usable as a drug. Some of these molecules can also be used in pharmacokinetic studies, as bio markers in medical imaging and for the identification of receptors in a human or animal organism.
  • the invention relates more particularly to the molecules corresponding to one of the formulas (Ia) (Ib) and (Ic) below:
  • R 1 and R 3 to R 8 which are identical or different, represent a group chosen from
  • alkyl group C 1 -C 5 alkenyl, C 2 -C 15 alkynyl, C 2 -C 5, optionally substituted, especially by one or more groups selected from: A halogen atom, a hydroxyl group, a C 1 -C 6 alkoxy group, an NH 2 amine group, a C 1 -C 6 alkylamino group, a C 1 -C 6 dialkylamino group, a mercapto-SH group or a C 1 -C 6 alkyl thio group; 6 , a C 3 -C 2 cyclooheteroalkyl group, carbonyl -CHO, C 1 -C 6 ketone, carboxyl -
  • R 1 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8
  • R ', R' 2 , R ' 3 and R' 4 identical or different, represent a group chosen from:
  • alkyl group Cj-C 15 alkenyl, C 2 -C] 5 alkynyl, C 2 -C 15, optionally substituted with one or more groups chosen in particular from:
  • a halogen atom, a hydroxyl group -OH, a C 1 -C 6 alkoxy group, an amino group NH 2 , a C 6 -C 6 alkylamino, a C 1 -C 6 dialkylamino, a mercapto -SH, a C 1 -C 6 alkylthio group; C 6 -alkyl, Ci-C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl; alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6; carbonyl -CHO ketone 5 -C-C 6 carboxyl - COOH, alkyl oxycarbonyl -C -C 6 carboxamide - CONH 2, N-alkylcarboxamide, C 1 -C 6, N 5 N- dialkylcarboxamide Cj-C 6, imino -CH NH, N-C 1 -C 6 alkylimino, sulfoxide -SO-,
  • a saturated or unsaturated C 3 -C 15 cycloheteroalkyl group optionally substituted with one or more groups, in particular chosen from:
  • a halogen atom a hydroxyl group -OH, an alkoxy group of C 1 -C 6 alkyl, an amino group NH 2, alkylamino C 1 -C 6 dialkylamino, C 1 -C 6, mercapto - SH, alkyl thio C 1 -C 6 alkyl, sulfonato -SO 3 ", alkyl C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkenyl,
  • X 1 and X 2 identical or different each represent a halogen atom
  • the invention also relates to molecules of formula (Id) below, in which the variables R 1, R 2 , R 3 , R 4 and R 7 have the same definition as above for the molecules ( Ia) (Ib) and (Ic) and R ' 6 represents a group chosen from C 1 -C 5 alkyls, C 6 -C 5 aryls, aralkyls containing
  • C 1 -C 15 alkyl denotes a linear, branched or cyclic hydrogenated hydrocarbon radical comprising from 1 to 15 carbon atoms; there may be mentioned, for example, methyl, propyl, n-butyl, isopropyl, isobutyl, terbutyl, n-pentyl, hexyl, isohexyl, 1-ethylpropyl, n-heptyl, the n-octyl, ...
  • C 2 -C 15 alkenyl denotes a linear, branched or cyclic hydrogenated hydrocarbon radical comprising at least one double bond and 2 to 15 carbon atoms.
  • propene-2-yl may be mentioned.
  • C 6 -C 15 aryl denotes an aromatic group containing from 6 to 15 carbon atoms, for example a phenyl, naphthyl group, etc.
  • C 6 -C 15 heteroaryl denotes an aromatic group comprising from 6 to 15 carbon atoms and at least one heteroatom such as N 3 S, O, such as for example a pyridine group, etc.
  • aralkyl denotes an alkyl radical, linear, branched or cyclic, substituted by an aryl group, such as for example a benzyl.
  • cycloheteroalkyl, C 3 -C] 5 denotes a heterocyclic ring having at least three carbon atoms and at least one heteroatom, such as N, S or O, and optionally one or more unsaturations, such as, for example, an azetidine, oxazole or thiazine ring.
  • C 1 -C 6 haloalkyl denotes an alkyl chain comprising 1 to 6 carbon atoms and comprising at least one halogen atom in substitution for a hydrogen atom on the alkyl chain, such as, for example, 2-chloro ethyl, trifluoromethyl.
  • C 1 -C 6 heteroalkyl denotes an alkyl chain comprising 1 to 6 carbon atoms and comprising at least one bridge formed by a heteroatom, such as N, O or S, such as, for example, 2-ethyloxyethyl, 'oxazolane.
  • halogen atoms can be chosen from the following list: F,
  • the alkoxy group in C 1 -C 6 denotes a radical -O-W wherein W represents alkyl CJ-C 6.
  • W represents alkyl CJ-C 6.
  • a methoxy or isopropoxy radical may be mentioned.
  • the C 1 -C 6 alkylamino group denotes a -NHW radical in which W represents a C 1 -C 6 alkyl.
  • the dialkylamino group C 1 -C 6 denotes a radical -NWjW 2 in which W 1 and W 2 each represent a C 1 -C 6 alkyl.
  • W 1 and W 2 each represent a C 1 -C 6 alkyl.
  • an N, N-dimethylamino, N-ethyl or N-propylamino radical may be mentioned.
  • alkylthio C 1 -C 6 denotes a radical -SW wherein W represents an alkyl-C 6.
  • W represents an alkyl-C 6.
  • a methylthio, isopropylthio or n-hexylthio radical may be mentioned.
  • the anions of a mineral or organic acid may be chosen from anions of mineral acids such as, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid; anions of organic acids such as, for example, acetic acid, oxalic acid, tartaric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, gluconic acid, citric acid, malic acid, ascorbic acid, benzoic acid.
  • the R 2 groups all have a double or a triple bond or an atom with a free doublet, in alpha of the pyridine ring.
  • R 2 is chosen from:
  • R 5 H and R 6 is selected from: H, alkyl C 1 -C 6 alkyl optionally substituted, aralkyl C 7 -C 0 optionally substituted, optionally substituted aryl, heteroalkyl, - (CH 2 ) n -CO-R "group wherein n represents an integer from 1 to 6 and R" is selected from -OH, a C 1 -C 4 alkoxy group; C 6 alkylamino group CJ -C 6 alkylamino or di-Cj-C 6.
  • R 6 is chosen from: H, a tert-butyl, a cyclohexyl group, a benzyl group, an isopropyl group, a
  • R 7 is selected from alkenyls, alkyls, aralkyls, heteroaryls, heteroaralkyls, optionally substituted, preferably conjugated.
  • R 7 substituents include: 4-methoxy cinnamyl, 4-dimethylamino cinnamyl, 2-furanoyl-, 4-chlorophenyl-.
  • Scheme 1 illustrates a multi compound reaction.
  • Multi-compound reactions are different from sequential multistep reactions: they are performed by mixing several starting reagents (3 or more) in the same vessel, which react in an ordered sequence of reactions (Domling, A. Ugi, I. Angew Chem Int Ed Engl 2000, 39, (18), 3168-3210). More specifically, Scheme 1 illustrates a multi-compound condensation reaction (Bienayme, H., Bouzid, K., Angew Chem Int.Ed. 1998, 37, (16), 2234-2237, Blackburn, C.
  • mild reaction conditions eg no heating
  • a Bronsted or Lewis acid for example scandium triflate
  • a solvent for example in an alcohol (MeOH 3 EtOH) and / or in a chlorinated solvent, (CH 2 Cl 2 , chloroform), in DMSO, in an aqueous solution, or in mixtures of these solvents.
  • this condensation reaction is carried out in a microreactor (volume less than 1 .mu.l), for example on a microchip, preferably in a droplet (Butler J. et al., (2001) J. Am. 123, 8887, Schaack B et al (2005) NanoBiotechnology 1, 166, Mugherli L et al (2004) MicroTAS, VoLl, 542).
  • a microreactor volume less than 1 .mu.l
  • a droplet preferably in a droplet
  • the imidazo [1,2-a] pyridinyl amine is brought into contact with the alkylating agent R 6 (J represents a halogen) and sodium hydride.
  • Diagram Ib According to the process described in Scheme Ib, a palladium-carbon catalyzed hydrogenolysis in the presence of formic acid or a treatment with acid trifluoroacetic, allows to release the amine in position 3 of the imidazo [1,2-ajpyridinyl.
  • the products of formula (Ib) are prepared from the products of formula (Ia), according to a process described in scheme 2:
  • the reaction is carried out in an anhydrous solvent such as, for example, THF, advantageously at a temperature of between 25 and 50 ° C.
  • the boron derivative BX 1 X 2 Q used is a boron halide (Q represents a halogen atom).
  • Q represents a halogen atom
  • This reaction can be done in a conventional reactor and it can also be done on a chip, optionally in a drop, directly at the end of the reaction of Scheme 1, without intermediate purification.
  • the products of formula (Ic) are prepared from the products of formula (Ia), according to a method described by scheme 3:
  • reaction is carried out by contacting (Ia) and the alkylating agent R 8 X 3 in an anhydrous solvent, for example THF, or directly in the pure alkylating agent, for example MeI, advantageously at a temperature between 25 and 40 ° C.
  • anhydrous solvent for example THF
  • MeI pure alkylating agent
  • the transformation reaction of a compound (Id) into compound (Ia) can be done directly in the presence of the analyte to be tested.
  • the products (Ia) can be released directly by the biological medium to be tested, which reacts with the molecule (Id).
  • the drop-on-chip reactions are made under the following conditions: Substrates, usually glass, are used as support. These substrates are chemically modified to include areas whose surface is hydrophilic, or pads, surrounded by areas whose surface is hydrophobic. These hydrophilic zones are regularly distributed on the surface to form a matrix. Reagents that may be different are used on the different rows and columns of the same matrix. Thus, for the reaction of Scheme 1, if a matrix of 10 rows and 10 columns is used, it is possible to employ 10 distinct amino pyridines, each occupying one row of the matrix and 10 distinct aldehydes, each occupying one column, so as to give rise to to 100 different molecules of formula (Ia).
  • the matrix-like arrangement of the drop-receiving zones is given for illustrative purposes, but other arrangements can be envisaged, in the form of a star, concentric circles, etc.
  • This procedure gives access with small quantities. quantities of reagent and in a very short time, to a very large number of easily identifiable molecules and placed on a support that allows them to be used directly in a subsequent screening test. Some locations may be reserved for reference molecules in the screening test.
  • the drops are positioned stably on the hydrophilic pads of the microchip, even during manipulations or displacements of the substrate, thanks to the surface tension forces.
  • the use of water, DMSO, buffers containing high percentages of surfactants or of cellular medium does not interfere with the maintenance of the drops on the microchip.
  • a substrate a glass, silicone or any other material whose surface has been chemically modified to form a covalent bond with certain molecules.
  • a starting reagent such as pyridine:
  • one of the functions R 1, R 2 , R 3 or R 4 is covalently connected to the support.
  • the reactions described above can be made in a conventional reactor and they can also be made on a solid phase such as for example on the surface of a previously modified glass slide or a resin suitable for solid phase synthesis.
  • a solid phase such as for example on the surface of a previously modified glass slide or a resin suitable for solid phase synthesis.
  • the starting aminopyridine compound it is possible to use a molecule attached to a solid support by means of one of the substituents of the pyridine ring, in particular an amino pyridine having an acylamido group placed at 7 of the imidazo [1,2- a] pyridine (cf figure 1 for the numbering of the atoms): Cleavage
  • the molecules resulting from the application of the synthetic methods described above will also be covalently bound to the support.
  • a matrix arrangement of an assortment of molecules of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) on such a support also makes it possible to carry out chemical or biological screening tests.
  • a substantially planar support comprising a modification of its surface in regular form, advantageously in the form of a matrix, to constitute zones for receiving molecules, whether they are in solution, in drops positioned on the reception zones by the reaction forces.
  • surface tension, or covalently fixed to the reception zones, and in which one or more of the reception zones is occupied by one or more molecules of the formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) constitutes another object of the invention.
  • the microreactors occupying each reception zone make it possible to carry out as many different tests, the results of which can be compared with one another.
  • the reagents are dispensed using an automated system and a piezoelectric distributor.
  • Another object of the invention is an analysis kit, characterized in that it comprises at least one support as described above, a piezoelectric distributor and a fluorescence detector, in particular a fluorescence scanner.
  • a piezoelectric distributor and a fluorescence detector, in particular a fluorescence scanner.
  • fluorescence detector in particular a fluorescence scanner.
  • Such carriers are valuable for their ability to rapidly test the biological effects of a large number of molecules and can be used for applications in chemical genetics and high throughput screening.
  • proteins in order to search for their ligands and their inhibitors; enzymes and their substrates, looking for inhibitors of enzymatic activity.
  • the subject of the invention is also a method for screening molecules, characterized in that an entity, or analyte, to be tested is distributed on the microreactors or receiving zones of the support of the invention, and then one carries out a fluorescence measurement.
  • the subject of the invention is furthermore the use of the compounds of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) as fluorescence agents, in particular as substrates or as fluorescent markers.
  • This attenuation can consist of a variation of the intensity of the fluorescence, a variation of the time constant of the fluorescence, a variation of the polarization
  • Another object of the invention is the use of the compounds described above as fluorescent dyes.
  • the molecules of the invention can be used to color any substrate with which they have an affinity, whether it is chemical molecules, biological, cells or biological tissues.
  • Certain compounds of the invention are likely to be used as benzodiazepine receptor ligands and as such are likely to have therapeutic properties to fight against anxiety, depression, stress or likely to be used as analgesics for example.
  • another subject of the invention is a medicinal product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) defined above in a pharmaceutically acceptable carrier .
  • Certain compounds of the invention are likely to be used as beta amyloid aggregates ligands and as such are likely to have properties in medical imaging to visualize such aggregates in patients suffering from Alzheimer's disease, for example . They can also be used to visualize the reception sites of benzodiazepines.
  • another subject of the invention is a medical imaging product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) defined above in a pharmaceutically acceptable carrier.
  • Such medical imaging products can be used to conduct pharmacokinetic studies, or as biomarkers to study the distribution (duration, routes, targets) of drugs in a human or animal organism.
  • the compounds (Ia), (Ib) and (Ic) have three points in common allowing their attachment by a covalent or non-covalent bond to another molecule. These points of attachment are shown in Figure 5 below in the case of the molecule (Ia).
  • the compounds of the invention can be used as fluorogenic substrates, by for example, when a molecule reacts with the amine function placed at 3 of the imidazo [1,2-a] pyridine ring or with the double bond of the R 2 group placed in alpha of the pyridine ring to form a covalent bond.
  • the creation of this bond is such as to pass the imidazo-pyridine nucleus from the fluorescent state to the non-fluorescent state.
  • They can also be used as molecular probes: by forming a complex between a molecule and the imidazopyridine nucleus, a fluorescent state change of the molecule of the invention can be observed.
  • the compounds of the invention may also be employed as fluorescent ion detectors by creating an ionic bond between an ion and the nitrogen atom of the pyridine ring.
  • Route 1 - use as a fluorogenic substrate (scheme 6): after hydrolysis of the groups R 5 and R 6 , a molecule (R 8 -CHO or R 9 -COOH) with a carbonyl or carboxylic acid function reacts with the amine function placed in 3 of the imidazole ring to form an imine or an amide:
  • Microchips Glass slides coated with a matrix of 4x10x10 hydrophilic pads of 500 ⁇ m diameter separated by a surface of perfluorinated silanes (supplied by Memscap) were used.
  • Piezoelectric ejector the piezoelectric ejector Sciflexarrayer marketed by the German company Scienion, or the solenoid ejector marketed by the company Innovadyne Technologies, was used.
  • Fluorescence Detectors Spectrophotometer scanner images and fluorescence emission spectrum measured with a Perkin-Elmer LS-50B luminescence spectrometer.
  • Figure 1 Numbering of the imidazo [1,2-a] pyridine ring
  • Figure 3 Histograms from scanner images of the microchip.
  • This histogram represents the fluorescence intensity observed for each plot of the microchip and for four different wavelengths (FITC, Cy3, TR and Cy5).
  • the abscissa axis is divided into blocks (i.e. by type of aminopyridine) and then subdivided by aldehydes (in the order Bl, B2, ..., B20).
  • Figure 4 Spectral characteristics of different compounds of the invention. The excitation and emission spectra of three fluorophores of the invention. The corresponding structures are shown on the right. The compounds were dissolved at
  • Figures 5A and 5B Fluorescence measurement of a compound of the invention complexed with different metal ions.
  • Table 1 List of aldehydes.
  • Aminopyridines are called A2 and A3:
  • the aldehydes of Table 1 are deposited with the aid of the piezoelectric ejector in the micro-chip pads (B1-B1 on lines 1 & 6, B1-B20 on lines 2 & 7, B21-B30 on FIGS. lines 3 & 8, B31 to B40 on lines 4 & 9), lines 5 & 10 being reserved for reference fluorophores used as controls ( Figure 2).
  • the aminopyridines A2 and A3 are deposited respectively in blocks 1 & 5, 2 & 6, 3 & 7, 4 & 8 (FIG. 2). Scandium triflate (Sc (OTf) 3 10 mol%) was premixed with the aminopyridines.
  • Aldehydes and aminopyridines are at a concentration of 10 mM in a water / DMSO mixture (1: 1).
  • the microchip After adding the mixture of aldehydes and (aminopyridines + scandium triflate) on the pads according to the deposition plan, the microchip is placed in the device for adding the gaseous cyclohexylisonitrile reactant at room temperature and in the dark for 15 hours. in a glass petri dish. The microchip is then extracted from the device and allowed to evaporate, so as to remove all traces of isonitrile, then a mixture containing 20% of glycerol, 30% of ultrapure water and 50% of DMSO is added in all the pads, before moving on to reading the results.
  • the microchip is read with a fluorescence scanner for four sets of different excitation and emission wavelengths (Table 2).
  • Table 2 Sets of lasers used to visualize fluorophores with the scanner.
  • Table 3 Fluorophore candidate structures and corresponding wavelengths.
  • microdroplets containing the identified candidates of interest were identified, we re-synthesized, purified, and photochemically characterized the fluorescent compounds to confirm the results.
  • the microchip is positioned on a motorized platform, and the microscope photographs each pad one by one with four sets of fluorescent filters (Table 4).
  • Table 4 Sets of lasers used to visualize fluorophores with the microscope.
  • the images obtained for the FITC, PhycoE (PhycoErythrine) and RhodB (Rnhodamine B) filters corroborate the results obtained with the scanner.
  • the UV excitation shows a weak residual fluorescence at 460 nm in the majority of the droplets of the blocks corresponding to aminopyridines A2 and A3.
  • the spectra of different compounds were analyzed in solution DMSO (Fig. 4).
  • the excitation and emission spectra show a maximum at 390-430 nm and at 510-580 nm with a displacement of Stocks up to 160 nm (Table 5). This property can be useful for applications such as energy transfer fluorescence resonance and multi-color labeling.

Landscapes

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Abstract

Molecules of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id), derived from imidazo[1,2-a]pyridine-3-ylamine, process for the preparation thereof and also use thereof as fluorophores.

Description

NOUVEAUX DÉRIVÉS FLUOROPHORES IMIDAZO [1,2-a] PYRIDIN-3-YL- AMINE ET LEUR PROCÉDÉ DE PRÉPARATION NOVEL IMIDAZO [1,2-a] PYRIDIN-3-YL-AMINE FLUOROPHORE DERIVATIVES AND PROCESS FOR PREPARING THE SAME
La présente invention a pour objet de nouvelles molécules dérivées d'imidazo [1 ,2-a] pyridin-3-yl-amine, leur procédé de préparation ainsi que leur utilisation comme fluorophores.The present invention relates to novel molecules derived from imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine, their process of preparation and their use as fluorophores.
Plus particulièrement, l'invention a pour objet de nouveaux composés comportant un noyau imidazo [1 ,2-a] pyridin-3-yl-amine.More particularly, the invention relates to novel compounds having an imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine ring.
Des composés comportant un noyau imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl- amine et leur synthèse ont été décrits dans la littérature, notamment dans K Groebke et al., SYNLETT, June 1998, 661 ; Blackburn, C et al., Tetrahedron Letters 1998, 39, (22), 3635-3638 ; Bienayme, H.; Bouzid, K., Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, (16), 2234-2237 ; J. Schwerkoske et al., Tetrahedron Letters 46, 2005, 8355-8357 ; US- 6,638,933 ; A. Kyselyov et al., Tetrahedron Letters 46, 2005, 4487-4490.Compounds having an imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine ring and their synthesis have been described in the literature, especially in K Groebke et al., SYNLETT, June 1998, 661; Blackburn, C. et al., Tetrahedron Letters 1998, 39, (22), 3635-3638; Bienayme, H .; Bouzid, K., Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, (16), 2234-2237; J. Schwerkoske et al., Tetrahedron Letters 46, 2005, 8355-8357; US 6,638,933; A. Kyselyov et al., Tetrahedron Letters 46, 2005, 4487-4490.
Toutefois, les molécules décrites dans ces documents sont des structures destinées à une utilisation thérapeutique potentielle ou à la préparation de molécules plus complexes.However, the molecules described in these documents are structures intended for a potential therapeutic use or for the preparation of more complex molecules.
Aucun de ces documents ne mentionne ou ne suggère de propriétés fluorophores de telles molécules.None of these documents mention or suggest fluorophore properties of such molecules.
L'invention concerne des molécules comportant un noyau imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine, dotées de substituants particuliers, qui ont la particularité d'être fluorescentes. Cette propriété permet d'envisager leur utilisation pour étudier la cinétique des réactions multicomposants dont elles sont issues, ou comme marqueurs fluorescents dans des réactions chimiques ou biologiques.The invention relates to molecules having an imidazo [1,2-a] pyridin-3-yl-amine ring, with particular substituents, which have the particularity of being fluorescent. This property makes it possible to envisage their use to study the kinetics of the multicomponent reactions from which they are derived, or as fluorescent markers in chemical or biological reactions.
L'invention concerne également un procédé de préparation de ces molécules, ce procédé se caractérisant par une étape de synthèse multicomposant.The invention also relates to a process for the preparation of these molecules, this process being characterized by a multicomponent synthesis step.
Enfin l'invention concerne les utilisations de ces molécules et de leur procédé de préparation pour la mise en œuvre de procédés de criblages en chimie ou en biologie. Certaines de ces molécules sont en outre susceptibles d'être dotées de propriétés thérapeutiques en plus de leurs propriétés de fluorescence, ce qui les rend utilisables comme médicament. On peut également employer certaines de ces molécules dans des études de pharmacocinétique, comme bio marqueurs en imagerie médicale et pour l'identification de récepteurs dans un organisme humain ou animal.Finally, the invention relates to the uses of these molecules and their method of preparation for the implementation of screening methods in chemistry or biology. Some of these molecules are also likely to have therapeutic properties in addition to their fluorescence properties, which makes them usable as a drug. Some of these molecules can also be used in pharmacokinetic studies, as bio markers in medical imaging and for the identification of receptors in a human or animal organism.
L'invention concerne plus particulièrement les molécules répondant à l'une des formules (Ia) (Ib) et (Ic) ci-dessous :
Figure imgf000003_0001
The invention relates more particularly to the molecules corresponding to one of the formulas (Ia) (Ib) and (Ic) below:
Figure imgf000003_0001
(Ia)(Ia)
Figure imgf000003_0002
Figure imgf000003_0002
(Ib)(Ib)
Figure imgf000003_0003
Figure imgf000003_0003
(Ic)(Ic)
dans lesquellesin which
R1 et R3 à R8, identiques ou différents représentent un groupement choisi parmiR 1 and R 3 to R 8 , which are identical or different, represent a group chosen from
- un atome d'hydrogène ;a hydrogen atom;
- un groupement alkyle en C1-Ci5, alcényle en C2-C15, alcynyle en C2-Ci5, éventuellement substitués, notamment par un ou plusieurs groupements choisis parmi : • un atome d'halogène, un groupement hydroxyle, un groupe alcoxy en Cj-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en Ci-C6, dialkylamino en Ci-C6, mercapto - SH, alkyl thio en Ci-C6, un groupement cyclohétéroalkyle en C3-C]2, carbonyl -CHO, cétone en C1-C6, carboxyl -- an alkyl group C 1 -C 5 alkenyl, C 2 -C 15 alkynyl, C 2 -C 5, optionally substituted, especially by one or more groups selected from: A halogen atom, a hydroxyl group, a C 1 -C 6 alkoxy group, an NH 2 amine group, a C 1 -C 6 alkylamino group, a C 1 -C 6 dialkylamino group, a mercapto-SH group or a C 1 -C 6 alkyl thio group; 6 , a C 3 -C 2 cyclooheteroalkyl group, carbonyl -CHO, C 1 -C 6 ketone, carboxyl -
COOH, alkyl oxycarbonyl en C1-C6, carboxamide - CONH2, N-alkylcarboxamide en Cj-C6, N9N- dialkylcarboxamide en C1-C6, imino -CH=NH, N- alkylimino en C1-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)-, acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ; - un groupement aryle en C6-Ci5, aralkyle en C7-Ci5, hétéroaryle en C6-Cj5, hétéro aralkyle en C7-C15, éventuellement substitués , notamment par un ou plusieurs groupements choisis parmi :COOH, alkyl oxycarbonyl C 1 -C 6 carboxamide - CONH 2, N-alkylcarboxamide, Cj-C 6, N 9 N- dialkylcarboxamide C 1 -C 6 alkyl, -CH = NH imino, N-alkylimino, C 1 - C 6 , sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a diazo group -N = N-, an azido -N 3 group , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN; - an aryl group, C 6 -C 5, aralkyl C 7 -C 5 heteroaryl, C 6 -cj 5, hetero aralkyl, C 7 -C 15, optionally substituted, especially by one or more groups selected from:
• un atome d'halogène, un groupement hydroxyle -OH, un groupe alcoxy en Cj-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en Cj-C6, dialkylamino en Cj-C6, mercapto -• a halogen atom, a hydroxyl group -OH, an alkoxy group -C-C 6, an amino group NH 2, alkylamino, Cj-C 6 dialkylamino, Cj-C 6 mercapto -
SH, alkyl thio en Ci-C6, un groupement alkyle en Cj-C6, halogénoalkyle en Cj-C6, alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6, hétéroalkyle en Cj-C6; carbonyl -CHO, cétone en Cj-C6, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl en Cj-C6, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide en Cj-C6,SH, alkylthio Cl-C 6 -alkyl, Cj-C 6 haloalkyl, Cj-C 6 alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 heteroalkyl Cj-C 6; carbonyl -CHO, keto -C-C 6 carboxyl -COOH, -C alkyloxycarbonyl C 6, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, Cj-C 6,
N,N-dialkylcarboxamide en Cj-C6, imino -CH=NH, N- alkylimino en Cj-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)-, acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ;N, N-dialkylcarboxamide C 1 -C 6 , imino -CH = NH, N-C 1-6 alkylimino, sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid - COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a group diazo -N = N-, a group azido -N 3 , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN;
- un groupement cyclohétéroalkyle en C3-Ci5, saturé ou insaturé, et éventuellement comportant un ou plusieurs substituants, notamment choisis parmi : • un atome d'halogène, un groupement hydroxyle -OH, un groupe alcoxy en Cj-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en Cj-C6, dialkylamino en Cj-C6, mercapto - SH, alkyl thio en Cj-C6, un groupement alkyle en Cj-C6, un groupement halogénoalkyle en C1-C6, alcényle en C2- C6, alcynyle en C2-C6, hétéroalkyle en C]-C6, aryle en C6- C12, carbonyl -CHO, cétone en C1-C6, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl en C1-C6, carboxamide -CONH2, N- alkylcarboxamide en Cj-C6, N,N-dialkylcarboxamide ena saturated or unsaturated C 3 -C 5 cycloheteroalkyl group and optionally containing one or more substituents, in particular chosen from: a halogen atom, a hydroxyl group -OH, a C 1 -C 6 alkoxy group, a amino group NH 2, alkylamino, Cj-C 6 dialkylamino, Cj-C 6 mercapto - SH, alkylthio -C -C 6 -alkyl, Cj-C 6, a haloalkyl group C 1 -C 6 alkenyl, C 2 - C 6 alkynyl, C 2 -C 6 heteroalkyl, C] -C 6 alkyl, C 6 - C 12 carbonyl -CHO, keto C 1 -C 6 alkyl, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl C 1 -C 6 alkyl, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, Cj-C 6, N, N-dialkylcarboxamide
Cj-C6, imino -CH=NH, N-alkylimino en Cj-C6, sulfoxide - SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)-, acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ; R2 représente un groupement choisi parmi :Cj-C 6 , imino -CH = NH, N-C 1-6 alkylimino, sulfoxide - SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3H, a nitro group -NO 2, -NO nitroso, a diazo group -N = N-, an azido group -N 3, -NCO isocyanato, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN; R 2 represents a group chosen from:
- un groupement hydroxyle, un groupe alcoxy en C1-C6, mercapto -SH, alkylmercapto en C1-C6, carbonyl -CHO, cétone en C1-C6, carboxyl - COOH, alkyloxycarbonyl en Cj-C6, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide en C1- C6, N,N-dialkylcarboxamide en Cj-C6, imino -CH=NH, N-alkylimino en Cj-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)- , acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ;- a hydroxyl group, an alkoxy group of C 1 -C 6 alkyl, -SH mercapto, alkylmercapto, C 1 -C 6 carbonyl -CHO, keto C 1 -C 6 alkyl, carboxyl - COOH, alkyloxycarbonyl -C-C 6, carboxamide -CONH 2, N-alkylcarboxamide, C 1 - C 6, N, N-dialkylcarboxamide Cj-C 6, -CH = NH imino, N-alkylimino Cj-C 6 sulphoxide -SO-, sulphone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a diazo group -N = N-, an azido group -N 3 isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN;
- un groupement alcényle en C2-Cj5, alcynyle en C2-Cj5, aryle en C6-C15, aralkyle en C7-C15, hétéroaryle en C6-Cj5, comportant une double ou triple liaison en alpha du cycle pyridine, éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements, notamment choisis parmi : • un atome d'halogène, un groupement hydroxyle -OH, un groupe alcoxy en C 1-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en C1-C6, dialkylamino en C1-C6, mercapto - SH, alkyl thio en C1-C6, un groupement alkyle en Cj-C6, un halogénoalkyle en C1-C6, cyclohétéroalkyle en C3-Ci2 ; carbonyl -CHO, cétone en C1-C6, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl en C1-C6, carboxamide -CONH2, N- alkylcarboxamide en Cj-C6, N,N-dialkylcarboxamide en Cj-C6, imino -CH=NH, N-alkylimino en Cj-C6, sulfoxide - SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)- , acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO. isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ; où deux groupements Ri (i=l , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) voisins sont susceptibles d'être reliés par une liaison covalente de façon à former avec le noyau imidazo pyridinyl une structure cyclique, ou hétérocyclique, éventuellement aromatique ; R' j, R'2, R'3 et R'4, identiques ou différents représentent un groupement choisi parmi :- alkenyl C 2 -cj 5 alkynyl, C 2 -cj 5, C 6 -C 15 aralkyl, C 7 -C 15 heteroaryl, C 6 -cj 5, having a double or triple bond in alpha of the pyridine ring, optionally substituted with one or more groups, in particular chosen from: • a halogen atom, a hydroxyl group -OH, a C 1 -C 6 alkoxy group, an amino group NH 2 , a C 1 alkylamino group -C 6 dialkylamino, C 1 -C 6, mercapto - SH, alkylthio C 1 -C 6 alkyl group Cj-C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl, cycloheteroalkyl, C 3 -C 2 ; carbonyl -CHO, keto C 1 -C 6 alkyl, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl C 1 -C 6 alkyl, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, Cj-C 6, N, N-dialkylcarboxamide Cj-C 6, imino -CH = NH, N-C 1-6 alkylimino, sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a group diazo -N = N-, a group azido -N 3 , isocyanato -NCO. isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN; where two adjacent groups R 1 (i = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) are capable of being connected by a covalent bond so as to form with the imidazo pyridinyl ring a cyclic or heterocyclic structure, optionally aromatic; R ', R' 2 , R ' 3 and R' 4 , identical or different, represent a group chosen from:
- un atome d'hydrogène ;a hydrogen atom;
- un groupement alkyle en Cj-C15, alcényle en C2-C]5, alcynyle en C2-C15, éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements, notamment choisis parmi :- an alkyl group Cj-C 15 alkenyl, C 2 -C] 5 alkynyl, C 2 -C 15, optionally substituted with one or more groups chosen in particular from:
• un atome d'halogène, un groupement hydroxyle, un groupe alcoxy en Ci-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en C1-C6, dialkylamino en Cj-C6, mercapto - SH, alkyl thio en Cj-C6, cyclohétéroalkyle en C3-Cj2, carbonyl -CHO, cétone en C1-C6, carboxyl -COOH, alkyl oxycarbonyl en Cj-C6, carboxamide -CONH2, N- alkylcarboxamide en C1-C6, N,N-dialkylcarboxamide en C1-C6, imino -CH=NH, N-alkylimino en C1-C6, sulfoxide - SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)- , acide thio carboxylique -COSH5 acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ;• a halogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group-C 6, an amino group NH 2, alkylamino C 1 -C 6 dialkylamino, Cj-C 6 mercapto - SH, alkylthio in CJ C 6, C 3 cycloheteroalkyl -CJ 2, carbonyl -CHO, keto C 1 -C 6 alkyl, carboxyl -COOH, -C alkyl oxycarbonyl C 6, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, C 1 -C 6, N, N-dialkylcarboxamide C 1 -C 6 , imino -CH = NH, N-C 1 -C 6 alkylimino, sulfoxide - SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio acid carboxylic acid -COSH 5 sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a group diazo -N = N-, a group azido -N 3 , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group - CN;
- un groupement aryle en C6-Cj5, aralkyle en C7-Cj5, hétéroaryle en C6-Cj5, éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements, notamment choisis parmi :- an aryl group, C 6 -cj 5, aralkyl C 7 -cj 5, C 6 heteroaryl -cj 5, optionally substituted with one or more groups chosen in particular from:
• un atome d'halogène, un groupement hydroxyle -OH, un groupe alcoxy en Cj-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en C J-C6, dialkylamino en Cj-C6, mercapto - SH, alkyl thio en Cj-C6, un groupement alkyle en Ci-C6, un halogénoalkyle en C1-C6 ; alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6 ; carbonyl -CHO5 cétone en Cj-C6, carboxyl - COOH, alkyl oxycarbonyl en Cj-C6, carboxamide - CONH2, N-alkylcarboxamide en C1-C6, N5N- dialkylcarboxamide en Cj-C6, imino -CH=NH, N- alkylimino en Cj-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)-, acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H5 un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ;A halogen atom, a hydroxyl group -OH, a C 1 -C 6 alkoxy group, an amino group NH 2 , a C 6 -C 6 alkylamino, a C 1 -C 6 dialkylamino, a mercapto -SH, a C 1 -C 6 alkylthio group; C 6 -alkyl, Ci-C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl; alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6; carbonyl -CHO ketone 5 -C-C 6 carboxyl - COOH, alkyl oxycarbonyl -C -C 6 carboxamide - CONH 2, N-alkylcarboxamide, C 1 -C 6, N 5 N- dialkylcarboxamide Cj-C 6, imino -CH = NH, N-C 1 -C 6 alkylimino, sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H 5 a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a group diazo -N = N-, a group azido -N 3 , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN;
- un groupement cyclohétéroalkyle en C3-C15, saturé ou insaturé éventuellement substitués par un ou plusieurs groupements, notamment choisis parmi :a saturated or unsaturated C 3 -C 15 cycloheteroalkyl group optionally substituted with one or more groups, in particular chosen from:
• un atome d'halogène, un groupement hydroxyle -OH, un groupe alcoxy en C1-C6, un groupement aminé NH2, alkylamino en C1-C6, dialkylamino en C1-C6, mercapto - SH, alkyl thio en C1-C6, sulfonato -SO3 ", un groupement alkyle en C1-C6, un halogénoalkyle en C1-C6 ; alcényle en• a halogen atom, a hydroxyl group -OH, an alkoxy group of C 1 -C 6 alkyl, an amino group NH 2, alkylamino C 1 -C 6 dialkylamino, C 1 -C 6, mercapto - SH, alkyl thio C 1 -C 6 alkyl, sulfonato -SO 3 ", alkyl C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkenyl,
C2-C6, alcynyle en C2-C6 ; carbonyl -CHO, cétone en C1- C6, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl en C1-C6, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide en C]-C6, N,N-dialkylcarboxamide en C1-C6, imino -CH=NH, N- alkylimino en Ci-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)- , acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ; où deux groupements R'i (i=l , 2, 3, 4) sont susceptibles d'être reliés par une liaison covalente de façon à former une structure cyclique, ou hétérocyclique, éventuellement aromatique, de préférence une structure conjuguée avec le noyau imidazo pyridinyl ; Y représente un groupement choisi parmi : O, NH et S ;C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6; carbonyl -CHO, keto C 1 - C 6, carboxyl -COOH, alkyloxycarbonyl C 1 -C 6 alkyl, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, C] -C 6 alkyl, N, N-dialkylcarboxamide, C 1 -C 6 , imino -CH = NH, N-C 1-6 alkylimino, sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a group diazo -N = N-, a group azido -N 3 , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN; wherein two R'i groups (i = 1, 2, 3, 4) are capable of being connected by a covalent bond so as to form a ring structure, or heterocyclic, optionally aromatic, preferably a structure conjugated with the imidazo ring pyridinyl; Y represents a group chosen from: O, NH and S;
X1 et X2 identiques ou différents représentent chacun un atome d'halogène ;X 1 and X 2 identical or different each represent a halogen atom;
X3 représente un anion d'un acide minéral ou organique, à l'exclusion du composé de formule (Ia) pour lequel R] et R2 forment ensemble avec le noyau pyridine auquel ils sont rattachés un cycle phényle, R3=R4=R5=H, R6= terbutyle et R7=méthyle.X 3 represents an anion of a mineral or organic acid, excluding the compound of formula (Ia) for which R 1 and R 2 together with the pyridine ring to which they are attached form a phenyl ring, R 3 = R 4 = R 5 = H, R 6 = terbutyl and R 7 = methyl.
Selon une variante, l'invention concerne aussi des molécules de formule (Id) ci-dessous, dans laquelle les variables Rj, R2, R3, R4, R7, ont la même définition que ci-dessus pour les molécules (Ia) (Ib) et (Ic) et R'6 représente un groupement choisi parmi les alkyles en C1-Ci5, les aryles en C6-Ci5, les aralkyles enAccording to one variant, the invention also relates to molecules of formula (Id) below, in which the variables R 1, R 2 , R 3 , R 4 and R 7 have the same definition as above for the molecules ( Ia) (Ib) and (Ic) and R ' 6 represents a group chosen from C 1 -C 5 alkyls, C 6 -C 5 aryls, aralkyls containing
C7-C15, les acides aminés naturels ou synthétiques.
Figure imgf000008_0001
C 7 -C 15 , natural or synthetic amino acids.
Figure imgf000008_0001
(Id)(Id)
De tels composés sont des précurseurs des composés (Ia) avec R5=R6=H, qui, lorsqu'ils sont mis dans des conditions appropriées, notamment en présence d'hydrolases (estérase, protéases), libèrent le composé (Ia) correspondant suivant le schéma ci-dessous :Such compounds are precursors of the compounds (Ia) with R 5 = R 6 = H, which, when put under appropriate conditions, especially in the presence of hydrolases (esterase, proteases), release the compound (Ia) corresponding according to the diagram below:
Figure imgf000008_0002
non-fluorescent fluorescent
Figure imgf000008_0002
fluorescent non-fluorescent
Le terme alkyle en C1-C15 désigne un radical hydrogénocarboné linéaire, ramifié ou cyclique comprenant de 1 à 15 atomes de carbone ; on peut citer par exemple le méthyle, le propyle, le n-butyle, Pisopropyle, l'isobutyle, le terbutyle, le n- pentyle, l'hexyle, l'isohexyle, le 1-éthyl-propyle, le n-heptyle, le n-octyle,...The term C 1 -C 15 alkyl denotes a linear, branched or cyclic hydrogenated hydrocarbon radical comprising from 1 to 15 carbon atoms; there may be mentioned, for example, methyl, propyl, n-butyl, isopropyl, isobutyl, terbutyl, n-pentyl, hexyl, isohexyl, 1-ethylpropyl, n-heptyl, the n-octyl, ...
Le terme alcényle en C2-C15 désigne un radical hydrogénocarboné linéaire, ramifié ou cyclique comportant au moins une double liaison et 2 à 15 atomes de carbone. On peut citer par exemple le propène-2-yle.The term C 2 -C 15 alkenyl denotes a linear, branched or cyclic hydrogenated hydrocarbon radical comprising at least one double bond and 2 to 15 carbon atoms. For example, propene-2-yl may be mentioned.
Le terme aryle en C6-C15 désigne un groupement aromatique comportant de 6 à 15 atomes de carbone comme par exemple un groupement phényle, naphtyle...The term C 6 -C 15 aryl denotes an aromatic group containing from 6 to 15 carbon atoms, for example a phenyl, naphthyl group, etc.
Le terme hétéroaryle en C6-C15 désigne un groupement aromatique comportant de 6 à 15 atomes de carbone et au moins un hétéroatome tel que N3 S, O, comme par exemple un groupement pyridine, ...The term C 6 -C 15 heteroaryl denotes an aromatic group comprising from 6 to 15 carbon atoms and at least one heteroatom such as N 3 S, O, such as for example a pyridine group, etc.
Le terme aralkyle désigne un radical alkyle, linéaire, ramifié ou cyclique, substitué par un groupement aryle, comme par exemple un benzyle.The term aralkyl denotes an alkyl radical, linear, branched or cyclic, substituted by an aryl group, such as for example a benzyl.
Le terme cyclohétéroalkyle en C3-C]5 désigne un hétérocycle comportant au moins trois atomes de carbone et au moins un hétéroatome, tel que N, S ou O, et éventuellement une ou plusieurs insaturations, comme par exemple un cycle azétidine, oxazole , thiazine....The term cycloheteroalkyl, C 3 -C] 5 denotes a heterocyclic ring having at least three carbon atoms and at least one heteroatom, such as N, S or O, and optionally one or more unsaturations, such as, for example, an azetidine, oxazole or thiazine ring.
Le terme halogénoalkyle en C1-C6 désigne une chaîne alkyle comprenant 1 à 6 atomes de carbone et comprenant au moins un atome d'halogène en substitution d'un atome d'hydrogène sur la chaîne alkyle, comme par exemple le 2- chloro-éthyle, le trifluorométhyle.The term C 1 -C 6 haloalkyl denotes an alkyl chain comprising 1 to 6 carbon atoms and comprising at least one halogen atom in substitution for a hydrogen atom on the alkyl chain, such as, for example, 2-chloro ethyl, trifluoromethyl.
Le terme hétéroalkyle en C1-C6 désigne une chaîne alkyle comprenant 1 à 6 atomes de carbone et comprenant au moins un pont formé par un hétéroatome, tel que N, O ou S, comme par exemple l'éthyloxy-2 éthyle, l'oxazolane. Les atomes d'halogène peuvent être choisis parmi la liste suivante : F,The term C 1 -C 6 heteroalkyl denotes an alkyl chain comprising 1 to 6 carbon atoms and comprising at least one bridge formed by a heteroatom, such as N, O or S, such as, for example, 2-ethyloxyethyl, 'oxazolane. The halogen atoms can be chosen from the following list: F,
Cl, Br, I.Cl, Br, I.
Le groupement alcoxy en C1-C6 désigne un radical -OW dans lequel W représente un alkyle en CJ-C6. On peut citer par exemple un radical méthoxy, isopropoxy. Le groupement alkylamino en Cj-C6 désigne un radical -NHW dans lequel W représente un alkyle en Ci-C6. On peut citer par exemple un radical isopropylamino, terbutylaminoThe alkoxy group in C 1 -C 6 denotes a radical -O-W wherein W represents alkyl CJ-C 6. For example, a methoxy or isopropoxy radical may be mentioned. The C 1 -C 6 alkylamino group denotes a -NHW radical in which W represents a C 1 -C 6 alkyl. For example, an isopropylamino radical, terbutylamino
Le groupement dialkylamino en C1-C6 désigne un radical -NWjW2 dans lequel W1 et W2 représentent chacun un alkyle en C1-C6. On peut citer par exemple un radical N,N-diméthylamino, N-éthyl,N-propylamino.The dialkylamino group C 1 -C 6 denotes a radical -NWjW 2 in which W 1 and W 2 each represent a C 1 -C 6 alkyl. For example, an N, N-dimethylamino, N-ethyl or N-propylamino radical may be mentioned.
Le terme alkyl thio en C1-C6 désigne un radical -SW dans lequel W représente un alkyle en Ci-C6. On peut citer par exemple un radical méthyl thio, isopropyl thio, n-hexyl thio.The term alkylthio C 1 -C 6 denotes a radical -SW wherein W represents an alkyl-C 6. For example, a methylthio, isopropylthio or n-hexylthio radical may be mentioned.
Les anions d'un acide minéral ou organique peuvent être choisis parmi les anions des acides minéraux tels que par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide nitrique ; les anions des acides organiques tels que par exemple, l'acide acétique, l'acide oxalique, l'acide tartrique, l'acide succinique, l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide gluconique, l'acide citrique, l'acide malique, l'acide ascorbique, l'acide benzoïque. Les groupements R2 possèdent tous une double ou une triple liaison ou un atome doté d'un doublet libre, en alpha du cycle pyridine. De préférence R2 est choisi parmi :The anions of a mineral or organic acid may be chosen from anions of mineral acids such as, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid; anions of organic acids such as, for example, acetic acid, oxalic acid, tartaric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, gluconic acid, citric acid, malic acid, ascorbic acid, benzoic acid. The R 2 groups all have a double or a triple bond or an atom with a free doublet, in alpha of the pyridine ring. Preferably R 2 is chosen from:
- une fonction acide carboxylique -COOH, alkyloxycarbonyle en Cj-C3, un groupement cyano -CN, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide en Cj-C6, N,N-dialkylcarboxamide en Ci-C6, isothiocyanato -NCS ; - un groupement alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6, éventuellement substitué.a carboxylic acid function -COOH, C 1 -C 3 alkyloxycarbonyl, a cyano -CN group, carboxamide -CONH 2 , C 1 -C 6 N-alkylcarboxamide, N, N-dialkylcarboxamide C 1 -C 6 , isothiocyanato -NCS; - alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6, optionally substituted.
Avantageusement, dans les formules (Ia), (Ib) et (Ic), R5=H et R6 est choisi parmi : H, un alkyle en C1-C6 éventuellement substitué, un aralkyle en C7-Ci0 éventuellement substitué, un aryle éventuellement substitué, un hétéroalkyle, un groupement -(CH2)n-CO-R" dans lequel n représente un entier allant de 1 à 6 et R" est choisi parmi -OH, un groupement alcoxy en C1-C6, un groupement alkylamino en Cj- C6 ou di-alkylamino en Cj-C6.Advantageously, in the formulas (Ia), (Ib) and (Ic), R 5 = H and R 6 is selected from: H, alkyl C 1 -C 6 alkyl optionally substituted, aralkyl C 7 -C 0 optionally substituted, optionally substituted aryl, heteroalkyl, - (CH 2 ) n -CO-R "group wherein n represents an integer from 1 to 6 and R" is selected from -OH, a C 1 -C 4 alkoxy group; C 6 alkylamino group CJ -C 6 alkylamino or di-Cj-C 6.
Encore plus préférentiellement R6 est choisi parmi : H, un ter butyle, un groupement cyclohexyle, un groupement benzyle, un groupement isopropyle, unEven more preferentially, R 6 is chosen from: H, a tert-butyl, a cyclohexyl group, a benzyl group, an isopropyl group, a
CH2 CH 2
fluorophényle, un groupement o , un groupement -(CH2)n-CO-R" avec n=l , 2, 3, et R" est choisi parmi -Ot-Bu, -OH, un groupement di-(n-propyl)amino.fluorophenyl, a group o, a group - (CH 2 ) n -CO-R "with n = 1, 2, 3, and R" is selected from -Ot-Bu, -OH, a group di- (n-propyl) ) amino.
De façon avantageuse,
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Advantageously,
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De façon préférentielle, R7 est choisi parmi les alcényles, les alkyles, les aralkyles, les hétéroaryles, les hétéroaralkyles, éventuellement substitués, de préférence conjugués. Parmi les substituants R7 préférés, on peut citer : le 4-méthoxy cinnamyl, le 4-diméthylamino cinnamyl, le 2-furanoyl-, le 4-chlorophényl-.Preferably, R 7 is selected from alkenyls, alkyls, aralkyls, heteroaryls, heteroaralkyls, optionally substituted, preferably conjugated. Among the preferred R 7 substituents include: 4-methoxy cinnamyl, 4-dimethylamino cinnamyl, 2-furanoyl-, 4-chlorophenyl-.
Certains composés préférés sont illustrés ci-dessous :Some preferred compounds are illustrated below:
On peut citer notamment les composés susceptibles d'être des ligands des récepteurs des benzodiazépines tels que le composé BON-903:Mention may in particular be made of compounds which may be benzodiazepine receptor ligands, such as the BON-903 compound:
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BON-903 Alpidem ZolpidemBON-903 Alpidem Zolpidem
D'autres composés aux formules variées : Other compounds with varied formulas:
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Les composés de l'invention de formule (Ia) peuvent être préparés selon une méthode de synthèse exposée dans le schéma 1 ci-dessous:The compounds of the invention of formula (Ia) may be prepared according to a synthesis method set forth in scheme 1 below:
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(Ia)(Ia)
Schéma 1 Le schéma 1 illustre une réaction multi composés. Les réactions multi composés sont différentes des réactions séquentielles à plusieurs étapes : elles sont réalisées en mélangeant dans un même récipient plusieurs réactifs de départ (3 ou plus), qui réagissent en une séquence ordonnée de réactions (Domling, A.; Ugi, I. L, Angew Chem Int Ed Engl 2000, 39, (18), 3168-3210). De façon plus précise, le schéma 1 illustre une réaction de condensation multi composés (Bienayme, H.; Bouzid, K., Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, (16), 2234-2237, Blackburn, C. et al., Tetrahedron Letters 1998, 39, (22), 3635-3638 ; Zhuang, Z. P. et al., J Med Chem 2003, 46, (2), 231 A3) , particulièrement intéressante pour la synthèse d'hétérocycles en parallèle, car elle permet de former des composés hétérocycliques avec une grande diversité de substituants. Selon l'invention, les composés de formule (Ia) ont été préparés en appliquant des conditions de réaction douces (e.g. pas de chauffage), fondées sur la réaction entre une aminopyridine, un aldéhyde R7-C=O et un isonitrile R5-NC, et catalysées par un acide de Bronsted ou de Lewis comme par exemple du triflate de scandium, dans un solvant, comme par exemple dans un alcool (MeOH3 EtOH) et /ou dans un solvant chloré, (CH2Cl2, chloroforme), dans du DMSO, dans une solution aqueuse, ou dans des mélanges de ces solvants.Scheme 1 Scheme 1 illustrates a multi compound reaction. Multi-compound reactions are different from sequential multistep reactions: they are performed by mixing several starting reagents (3 or more) in the same vessel, which react in an ordered sequence of reactions (Domling, A. Ugi, I. Angew Chem Int Ed Engl 2000, 39, (18), 3168-3210). More specifically, Scheme 1 illustrates a multi-compound condensation reaction (Bienayme, H., Bouzid, K., Angew Chem Int.Ed. 1998, 37, (16), 2234-2237, Blackburn, C. et al., Tetrahedron Letters 1998, 39, (22), 3635-3638, Zhuang, ZP et al., J Med Chem 2003, 46, (2), 231 A3), of particular interest for the synthesis of heterocycles in parallel. because it makes it possible to form heterocyclic compounds with a wide variety of substituents. According to the invention, the compounds of formula (Ia) have been prepared by applying mild reaction conditions (eg no heating), based on the reaction between an aminopyridine, an aldehyde R 7 -C = O and an isonitrile R 5 -NC, and catalysed by a Bronsted or Lewis acid, for example scandium triflate, in a solvent, for example in an alcohol (MeOH 3 EtOH) and / or in a chlorinated solvent, (CH 2 Cl 2 , chloroform), in DMSO, in an aqueous solution, or in mixtures of these solvents.
De façon avantageuse, cette réaction de condensation est réalisée dans un microréacteur (volume inférieur à 1 Oμl), comme par exemple sur une micro puce, de préférence dans une goutte (Butler J et al. (2001) J. Am. Chem. Soc 123, 8887; Schaack B et al. (2005) NanoBiotechnology 1, 166; Mugherli L et al. (2004) MicroTAS, VoLl, 542). Ces conditions de travail permettent de faire des réactions en batterie et de préparer une grande variété de composés (Ia) sur une même puce, ce qui augmente la rapidité de synthèse et d'analyse, la facilité de test des produits formés et une comparaison plus facile des performances de chaque produit. Les produits obtenus sont analysés par chromatographie liquide haute performance (CLHP) et par fluorescence.Advantageously, this condensation reaction is carried out in a microreactor (volume less than 1 .mu.l), for example on a microchip, preferably in a droplet (Butler J. et al., (2001) J. Am. 123, 8887, Schaack B et al (2005) NanoBiotechnology 1, 166, Mugherli L et al (2004) MicroTAS, VoLl, 542). These working conditions make it possible to make battery reactions and to prepare a wide variety of compounds (Ia) on the same chip, which increases the speed of synthesis and analysis, the ease of testing of the products formed and a comparison more easy performance of each product. The products obtained are analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) and fluorescence.
Des étapes supplémentaires sont prévues dans le cas où R6 est différent de H (Schéma la) ou lorsque R5=R6=H (Schéma Ib) ou pour synthétiser des composés pour lesquels R6 représente un groupement -(CH2)n-CO-R" dans lequel n représente un entier allant de 1 à 6 et R" est choisi parmi -OH, un groupement alcoxy en Ci-C6, un groupement alkylamino en Cj-C6 ou di-alkylamino en Ci-C6 (Schéma Ic).Additional steps are provided in the case where R 6 is different from H (Scheme 1a) or when R 5 = R 6 = H (Scheme Ib) or to synthesize compounds for which R 6 represents a group - (CH 2 ) n -CO-R "wherein n represents an integer from 1 to 6 and R" is selected from -OH, an alkoxy group Ci-C 6 alkylamino group Cj-C 6 alkylamino or di-Ci-C 6 (Diagram Ic).
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Suivant le procédé illustré sur Ie schéma la, Pimidazo[l,2-a]pyridinyl aminé est mise en présence de l'agent alkylant R6J (J représente un halogène) et d'hydrure de sodium.According to the process illustrated in Scheme 1a, the imidazo [1,2-a] pyridinyl amine is brought into contact with the alkylating agent R 6 (J represents a halogen) and sodium hydride.
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Schéma Ib Suivant le procédé décrit sur le schéma Ib, une hydrogénolyse catalysée par du palladium sur charbon en présence d'acide formique ou un traitement par de l'acide trifluoroacétique, permet de libérer l'aminé en position 3 du cycle imidazo[l,2- ajpyridinyl.Diagram Ib According to the process described in Scheme Ib, a palladium-carbon catalyzed hydrogenolysis in the presence of formic acid or a treatment with acid trifluoroacetic, allows to release the amine in position 3 of the imidazo [1,2-ajpyridinyl.
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Schéma IcScheme Ic
L'utilisation de la réaction à trois composants sur puce génère rapidement un grand nombre de molécules fluorescentes présentant des propriétés variées, grâce à un squelette fluorescent acceptant des groupements susceptibles de moduler cette fluorescence (rendement quantique, longueurs d'onde d'absorption et d'émission, forme des spectres). L'observation de la fluorescence émise avec divers substituants permet alors d'optimiser rapidement les fluorophores obtenus.The use of the three-chip on-chip reaction rapidly generates a large number of fluorescent molecules with varied properties, thanks to a fluorescent backbone accepting groups capable of modulating this fluorescence (quantum yield, absorption and absorption wavelengths). emission, forms spectra). Observing the fluorescence emitted with various substituents then makes it possible to rapidly optimize the fluorophores obtained.
Toutefois, il est également possible de faire cette réaction multi composés dans un réacteur classique.However, it is also possible to make this multi compound reaction in a conventional reactor.
Selon l'invention, les produits de formule (Ib) sont préparés à partir des produits de formule (Ia), selon un procédé décrit par le schéma 2 :
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According to the invention, the products of formula (Ib) are prepared from the products of formula (Ia), according to a process described in scheme 2:
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Schéma 2Figure 2
La réaction se fait dans un solvant anhydre comme par exemple le THF, avantageusement à une température comprise entre 25 et 50°C, le dérivé du bore BX1X2Q utilisé est un halogénure de bore (Q représente un atome d'halogène), comme par exemple l'éthérate de trifluorure de bore BFSxEt2O
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The reaction is carried out in an anhydrous solvent such as, for example, THF, advantageously at a temperature of between 25 and 50 ° C., the boron derivative BX 1 X 2 Q used is a boron halide (Q represents a halogen atom). , such as boron trifluoride etherate BFSxEt 2 O
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Cette réaction peut être faite dans un réacteur classique et elle peut également être faite sur puce, éventuellement dans une goutte, directement à l'issue de la réaction du schéma 1, sans purification intermédiaire.This reaction can be done in a conventional reactor and it can also be done on a chip, optionally in a drop, directly at the end of the reaction of Scheme 1, without intermediate purification.
Selon l'invention, les produits de formule (Ic) sont préparés à partir des produits de formule (Ia), selon un procédé décrit par le schéma 3 :According to the invention, the products of formula (Ic) are prepared from the products of formula (Ia), according to a method described by scheme 3:
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Figure imgf000017_0003
(la) (Ic)(the) (Ic)
Schéma 3Figure 3
La réaction se fait par mise en contact de (Ia) et de l'agent d'alkylation R8X3, dans un solvant anhydre, comme par exemple le THF, ou directement dans l'agent d'alkylation pur, comme par exemple MeI, avantageusement à une température comprise entre 25 et 4O0C.The reaction is carried out by contacting (Ia) and the alkylating agent R 8 X 3 in an anhydrous solvent, for example THF, or directly in the pure alkylating agent, for example MeI, advantageously at a temperature between 25 and 40 ° C.
Un autre objet de l'invention est un procédé de préparation d'un composé de formule (Ia) avec R5=R6=H, caractérisé en ce que le produit de départ est un composé (Id) tel que défini ci-dessus et en ce que le produit (Id) est soumis à l'action d'une hydrolase (protéase ou estérase) suivant le schéma 4 ci-dessous :Another subject of the invention is a process for preparing a compound of formula (Ia) with R 5 = R 6 = H, characterized in that the starting material is a compound (Id) as defined above and in that the product (Id) is subjected to the action of a hydrolase (protease or esterase) according to scheme 4 below:
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(Id) (la)(Id) (the)
Schéma 4Figure 4
La réaction de transformation d'un composé (Id) en composé (Ia) peut être faite directement en présence de l'analyte à tester. Par exemple dans le cas de tests sur des entités biologiques, les produits (Ia) peuvent être libérés directement par le milieu biologique à tester, qui réagit avec la molécule (Id).The transformation reaction of a compound (Id) into compound (Ia) can be done directly in the presence of the analyte to be tested. For example, in the case of tests on biological entities, the products (Ia) can be released directly by the biological medium to be tested, which reacts with the molecule (Id).
Toutes ces réactions peuvent également être faites sur puce en phase liquide, éventuellement dans une goutte, directement à l'issue de la réaction du schéma 1, sans purification intermédiaire.All these reactions can also be done on a liquid-phase chip, optionally in a drop, directly at the end of the reaction of Scheme 1, without intermediate purification.
Ces procédés de préparation constituent un autre objet de l'invention. Les réactions sur puce en goutte sont faites dans les conditions suivantes : Des substrats, généralement de verre sont utilisés comme support. Ces substrats sont modifiés chimiquement pour comprendre des zones dont la surface est hydrophile, ou plots, entourées de zones dont la surface est hydrophobe. Ces zones hydrophiles sont réparties régulièrement sur la surface pour former une matrice. Des réactifs qui peuvent être différents sont utilisés sur les différentes lignes et colonnes d'une même matrice. Ainsi pour la réaction du schéma 1, si on utilise une matrice de 10 lignes et 10 colonnes, on peut employer 10 amino pyridines distinctes, chacune occupant une ligne de la matrice et 10 aldéhydes distincts, chacun occupant une colonne, de façon à donner naissance à 100 molécules de formule (Ia) différentes. La disposition en forme de matrice des zones de réception des gouttes est donnée à titre illustratif, mais d'autres dispositions peuvent être envisagées, sous forme d'étoile, de cercles concentriques etc.. Cette façon de procéder donne accès avec de petites quantités de réactif et en un temps très court, à un très grand nombre de molécules facilement identifiables et placées sur un support qui permet de les utiliser directement dans un test de criblage ultérieur. Certains emplacements peuvent être réservés pour des molécules de référence dans le test de criblage. Les gouttes sont positionnées de façon stable sur les plots hydrophiles de la micro puce, même lors de manipulations ou de déplacements du substrat, grâce aux forces de tension de surface. L'utilisation d'eau, de DMSO, de tampons contenant des pourcentages élevés de tensio actifs ou de milieu cellulaire ne nuit pas au maintien des gouttes sur la micro puce.These preparation methods constitute another object of the invention. The drop-on-chip reactions are made under the following conditions: Substrates, usually glass, are used as support. These substrates are chemically modified to include areas whose surface is hydrophilic, or pads, surrounded by areas whose surface is hydrophobic. These hydrophilic zones are regularly distributed on the surface to form a matrix. Reagents that may be different are used on the different rows and columns of the same matrix. Thus, for the reaction of Scheme 1, if a matrix of 10 rows and 10 columns is used, it is possible to employ 10 distinct amino pyridines, each occupying one row of the matrix and 10 distinct aldehydes, each occupying one column, so as to give rise to to 100 different molecules of formula (Ia). The matrix-like arrangement of the drop-receiving zones is given for illustrative purposes, but other arrangements can be envisaged, in the form of a star, concentric circles, etc. This procedure gives access with small quantities. quantities of reagent and in a very short time, to a very large number of easily identifiable molecules and placed on a support that allows them to be used directly in a subsequent screening test. Some locations may be reserved for reference molecules in the screening test. The drops are positioned stably on the hydrophilic pads of the microchip, even during manipulations or displacements of the substrate, thanks to the surface tension forces. The use of water, DMSO, buffers containing high percentages of surfactants or of cellular medium does not interfere with the maintenance of the drops on the microchip.
De façon plus classique, on peut également utiliser comme substrat une plaque de verre, de silicone, ou de tout autre matériau, dont la surface a été modifiée chimiquement pour former une liaison covalente avec certaines molécules. On peut alors choisir d'utiliser un réactif de départ tel qu'une pyridine :In a more conventional manner, it is also possible to use as a substrate a glass, silicone or any other material whose surface has been chemically modified to form a covalent bond with certain molecules. One can then choose to use a starting reagent such as pyridine:
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dont l'une des fonctions Rj, R2, R3 ou R4 est reliée de façon covalente au support.one of the functions R 1, R 2 , R 3 or R 4 is covalently connected to the support.
Les réactions décrites ci-dessus peuvent être faites dans un réacteur classique et elles peuvent également être faites sur phase solide comme par exemple à la surface d'une lame de verre préalablement modifiée ou une résine adaptée pour la synthèse sur phase solide. Par exemple on peut utiliser comme composé aminopyridine de départ une molécule fixée à un support solide par l'intermédiaire de l'un des substituants du cycle pyridine, notamment une amino pyridine ayant un groupement acylamido placé en 7 du cycle imidazo[l,2-a]pyridine (cf figure 1 pour la numérotation des atomes) : Clivage
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The reactions described above can be made in a conventional reactor and they can also be made on a solid phase such as for example on the surface of a previously modified glass slide or a resin suitable for solid phase synthesis. For example, as the starting aminopyridine compound, it is possible to use a molecule attached to a solid support by means of one of the substituents of the pyridine ring, in particular an amino pyridine having an acylamido group placed at 7 of the imidazo [1,2- a] pyridine (cf figure 1 for the numbering of the atoms): Cleavage
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Les molécules résultant de l'application des procédés de synthèse décrits ci-dessus seront elles aussi liées de façon covalente au support. Une disposition en matrice d'un assortiment de molécules de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) sur un tel support permet également de faire des tests de criblage chimique ou biologique.The molecules resulting from the application of the synthetic methods described above will also be covalently bound to the support. A matrix arrangement of an assortment of molecules of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) on such a support also makes it possible to carry out chemical or biological screening tests.
Un support sensiblement plan, comportant une modification de sa surface sous forme régulière, avantageusement sous forme de matrice, pour constituer des zones de réception de molécules, qu'elles soient en solution, dans des gouttes positionnées sur les zones de réception par les forces de tension de surface, ou fixées de façon covalente aux zones de réception, et dont une ou plusieurs des zones de réception est occupée par une ou plusieurs molécules de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) constitue un autre objet de l'invention. Les microréacteurs qui occupent chaque zone de réception permettent de procéder à autant de tests différents et dont on peut comparer les résultats entre eux. De façon avantageuse, on prévoit de distribuer les réactifs à l'aide d'un système automatisé et d'un distributeur piezo électrique. Un autre objet de l'invention est un kit d'analyse, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un support tel que décrit ci-dessus, un distributeur piezo électrique et un détecteur de fluorescence, notamment un scanner de fluorescence. De tels supports sont intéressants pour leur capacité à tester rapidement les effets biologiques d'un grand nombre de molécules et ils peuvent être utilisés pour des applications en génétique chimique et en criblage à haut débit. Parmi les analytes que l'on peut être intéressé de tester, on peut citer notamment les protéines, afin de rechercher leurs ligands et leurs inhibiteurs ; les enzymes et leurs substrats, à la recherche d'inhibiteurs de l'activité enzymatique.A substantially planar support, comprising a modification of its surface in regular form, advantageously in the form of a matrix, to constitute zones for receiving molecules, whether they are in solution, in drops positioned on the reception zones by the reaction forces. surface tension, or covalently fixed to the reception zones, and in which one or more of the reception zones is occupied by one or more molecules of the formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) constitutes another object of the invention. The microreactors occupying each reception zone make it possible to carry out as many different tests, the results of which can be compared with one another. Advantageously, the reagents are dispensed using an automated system and a piezoelectric distributor. Another object of the invention is an analysis kit, characterized in that it comprises at least one support as described above, a piezoelectric distributor and a fluorescence detector, in particular a fluorescence scanner. Such carriers are valuable for their ability to rapidly test the biological effects of a large number of molecules and can be used for applications in chemical genetics and high throughput screening. Among the analytes that may be interested in testing, there may be mentioned in particular proteins, in order to search for their ligands and their inhibitors; enzymes and their substrates, looking for inhibitors of enzymatic activity.
L'invention a encore pour objet un procédé de criblage de molécules, caractérisé en ce qu'une entité, ou analyte, à tester est distribué sur les microréacteurs ou zones de réception du support de l'invention puis que l'on procède à une mesure de fluorescence.The subject of the invention is also a method for screening molecules, characterized in that an entity, or analyte, to be tested is distributed on the microreactors or receiving zones of the support of the invention, and then one carries out a fluorescence measurement.
L'invention a en outre pour objet l'utilisation des composés de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) comme agents de fluorescence, notamment comme substrats ou comme marqueurs fluorescents.The subject of the invention is furthermore the use of the compounds of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) as fluorescence agents, in particular as substrates or as fluorescent markers.
En effet, par la mise en contact des composés de l'invention avec d'autres molécules, lorsqu'il se forme une liaison covalente ou non covalente avec ces autres molécules, on observe une disparition ou une atténuation de cette fluorescence.Indeed, by contacting the compounds of the invention with other molecules, when a covalent or non-covalent bond is formed with these other molecules, a disappearance or attenuation of this fluorescence is observed.
Cette atténuation peut consister en une variation de l'intensité de la fluorescence, une variation de la constante de temps de la fluorescence, une variation de la polarisationThis attenuation can consist of a variation of the intensity of the fluorescence, a variation of the time constant of the fluorescence, a variation of the polarization
(anisotropie) de la fluorescence ou un décalage spectral en longueur d'onde de la fluorescence. L'observation de la variation ou de la disparition de la fluorescence est le signe de l'établissement d'une interaction de nature covalente ou non covalente entre la molécule de l'invention et la molécule testée.(anisotropy) fluorescence or wavelength shift in fluorescence. The observation of the variation or disappearance of the fluorescence is the sign of the establishment of a covalent or non-covalent interaction between the molecule of the invention and the molecule tested.
Un autre objet de l'invention est l'utilisation des composés décrits ci- dessus comme colorants fluorescents. En effet les molécules de l'invention peuvent être utilisées pour colorer tout substrat avec lequel elles présentent une affinité, qu'il s'agisse de molécules chimiques, biologiques, de cellules ou de tissus biologiques.Another object of the invention is the use of the compounds described above as fluorescent dyes. Indeed the molecules of the invention can be used to color any substrate with which they have an affinity, whether it is chemical molecules, biological, cells or biological tissues.
Certains composés de l'invention sont susceptibles d'être utilisés comme ligands des récepteurs des benzodiazépines et à ce titre sont susceptibles d'avoir des propriétés thérapeutiques pour lutter contre l'anxiété, la dépression, le stress ou susceptibles d'être utilisés comme analgésiques par exemple.Certain compounds of the invention are likely to be used as benzodiazepine receptor ligands and as such are likely to have therapeutic properties to fight against anxiety, depression, stress or likely to be used as analgesics for example.
Par conséquent, un autre objet de l'invention est un médicament caractérisé en ce qu'il comporte au moins une molécule de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) définie ci-dessus dans un support pharmaceutiquement acceptable. Certains composés de l'invention sont susceptibles d'être utilisés comme ligands d'agrégats bêta amyloïdes et à ce titre sont susceptibles d'avoir des propriétés en imagerie médicale pour visualiser de tels agrégats chez des patients atteints de la maladie d'Alzheimer par exemple. Ils peuvent également être utilisés pour visualiser les sites de réception des benzodiazépines.Therefore, another subject of the invention is a medicinal product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) defined above in a pharmaceutically acceptable carrier . Certain compounds of the invention are likely to be used as beta amyloid aggregates ligands and as such are likely to have properties in medical imaging to visualize such aggregates in patients suffering from Alzheimer's disease, for example . They can also be used to visualize the reception sites of benzodiazepines.
Par conséquent, un autre objet de l'invention est un produit d'imagerie médicale caractérisé en ce qu'il comporte au moins une molécule de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) définie ci-dessus dans un support pharmaceutiquement acceptable.Therefore, another subject of the invention is a medical imaging product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) defined above in a pharmaceutically acceptable carrier.
De tels produits d'imagerie médicale peuvent être utilisés pour faire des études de pharmacocinétique, ou comme biomarqueurs pour étudier la distribution (durée, trajets, cibles) de médicaments dans un organisme humain ou animal.Such medical imaging products can be used to conduct pharmacokinetic studies, or as biomarkers to study the distribution (duration, routes, targets) of drugs in a human or animal organism.
Selon la présente invention, les composés (Ia), (Ib) et (Ic) sont dotés de trois points communs permettant leur rattachement par une liaison covalente ou non covalente à une autre molécule. Ces points de rattachement sont représentés sur le schéma 5 ci-dessous dans le cas de la molécule (Ia).According to the present invention, the compounds (Ia), (Ib) and (Ic) have three points in common allowing their attachment by a covalent or non-covalent bond to another molecule. These points of attachment are shown in Figure 5 below in the case of the molecule (Ia).
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Figure imgf000022_0001
Schéma 5Figure 5
Ces possibilités de former une liaison avec une autre molécule permettent d'utiliser les composés de l'invention dans différentes applications. Les composés de l'invention peuvent être utilisés comme substrats fluorogéniques, par exemple lorsqu'une molécule réagit avec la fonction aminé placée en 3 du cycle imidazo[l,2-a]pyridine ou avec la double liaison du groupement R2 placée en alpha du cycle pyridine pour former une liaison covalente. La création de cette liaison est de nature à faire passer le noyau imidazo-pyridine de l'état fluorescent à l'état non fluorescent.These possibilities of forming a bond with another molecule make it possible to use the compounds of the invention in different applications. The compounds of the invention can be used as fluorogenic substrates, by for example, when a molecule reacts with the amine function placed at 3 of the imidazo [1,2-a] pyridine ring or with the double bond of the R 2 group placed in alpha of the pyridine ring to form a covalent bond. The creation of this bond is such as to pass the imidazo-pyridine nucleus from the fluorescent state to the non-fluorescent state.
Ils peuvent également être utilisés comme sonde moléculaire : par formation d'un complexe entre une molécule et le noyau imidazo-pyridine, on peut observer un changement d'état fluorescent de la molécule de l'invention.They can also be used as molecular probes: by forming a complex between a molecule and the imidazopyridine nucleus, a fluorescent state change of the molecule of the invention can be observed.
Les composés de l'invention peuvent également être employés comme détecteurs d'ions fluorescents, par création d'une liaison ionique entre un ion et l'atome d'azote du noyau pyridine.The compounds of the invention may also be employed as fluorescent ion detectors by creating an ionic bond between an ion and the nitrogen atom of the pyridine ring.
Voie 1 — utilisation comme substrat fluorogénique (schéma 6) : après hydrolyse des groupement R5 et R6, une molécule (Rg-CHO ou R9-COOH) dotée d'une fonction carbonyle ou acide carboxylique réagit avec la fonction aminé placée en 3 du cycle imidazole pour former une imine ou une amide :Route 1 - use as a fluorogenic substrate (scheme 6): after hydrolysis of the groups R 5 and R 6 , a molecule (R 8 -CHO or R 9 -COOH) with a carbonyl or carboxylic acid function reacts with the amine function placed in 3 of the imidazole ring to form an imine or an amide:
Figure imgf000023_0001
fluorescent
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non-fluorescent
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fluorescent
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Non-fluorescent
Schéma 6Figure 6
Voie 2 - sondes moléculaires (schéma 7) : Une molécule vient se complexer avec le noyau imidazo pyridine et modifier l'état de fluorescence du composé (Ia). Route 2 - Molecular Probes (Scheme 7): A molecule complexed with the imidazo pyridine ring and modify the fluorescence state of the compound (Ia).
(la) Complexe Etat fluorescent 1 Etat fluorescent 2(la) Fluorescent state complex 1 Fluorescent state 2
Schéma 7Figure 7
Voie 3 - Détecteurs d'ions fluorescents (schéma 8) : un ion vient former une liaison ionique avec l'atome d'azote du cycle imidazoleRoute 3 - Fluorescent ion detectors (Scheme 8): an ion forms an ionic bond with the nitrogen atom of the imidazole ring
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000024_0002
Schéma 8 EXEMPLESFigure 8 EXAMPLES
I- Matériel et méthodes :I- Materials and methods:
Micro puces : On a utilisé des lames de verre recouvertes d'une matrice de 4x10x10 plots hydrophiles de 500μm de diamètre séparés par une surface de silanes perfluorés (fournies par la société Memscap)Microchips: Glass slides coated with a matrix of 4x10x10 hydrophilic pads of 500 μm diameter separated by a surface of perfluorinated silanes (supplied by Memscap) were used.
Ejecteur piézoélectrique : on a utilisé l'éjecteur piézoélectrique Sciflexarrayer commercialisé par la société allemande Scienion, ou l'éjecteur solénoïde commercialisé par la société Innovadyne TechnologiesPiezoelectric ejector: the piezoelectric ejector Sciflexarrayer marketed by the German company Scienion, or the solenoid ejector marketed by the company Innovadyne Technologies, was used.
Détecteurs de fluorescence : Images scanner spectrophotomètre et spectre d'émission de fluorescence mesurés avec un spectromètre de luminescence Perkin-Elmer LS-50B. Un microscope Olympus BX51 équipé d'un appareil photographique Hamamatsu ORCA R d'une lampe Olympus U-RFL-T ont été utilisés. Des images ont été obtenues avec un scanner GeneTAC LS IV (Genomic Solutions, Ann Arbor, MI, USA). Les images au microscope ont été analysées quantitativement à l'aide d'un logiciel IMSTAR (Imstar, Paris, France,(15)), et les images scanner ont été analysées avec un logiciel Genepix Pro 4.0 (Axon Instruments, Union City, CA, USA). FiguresFluorescence Detectors: Spectrophotometer scanner images and fluorescence emission spectrum measured with a Perkin-Elmer LS-50B luminescence spectrometer. An Olympus BX51 microscope equipped with a Hamamatsu ORCA R camera with an Olympus U-RFL-T lamp was used. Images were obtained with a GeneTAC LS IV scanner (Genomic Solutions, Ann Arbor, MI, USA). The microscope images were analyzed quantitatively using IMSTAR software (Imstar, Paris, France, (15)), and the scanner images were analyzed with Genepix Pro 4.0 software (Axon Instruments, Union City, CA). , USA). figures
Figure 1 : Numérotation du cycle imidazo[l,2-a]pyridine Figure 2 : Plan de dépôt des aldéhydes et des aminopyridines sur les micropuces. Les colonnes et les lignes de chaque bloc sont indiquées. Chaque bloc reçoit une aminopyridine (avec du triflate de scandium 10% mol.) différente A2, A3. Tous les blocs ont la même disposition d'aldéhydes (B1-B40, voir tableau 1 pour les structures) et de fluorophores de référence pour plusieurs types de longueurs d'ondes (DAPI, FITC, Cy3, TexasRed = TR et Cy5)Figure 1: Numbering of the imidazo [1,2-a] pyridine ring Figure 2: Aldehyde and aminopyridine deposition plan on the microchips. The columns and lines of each block are indicated. Each block receives an aminopyridine (with different scandium triflate 10 mol%) A2, A3. All blocks have the same arrangement of aldehydes (B1-B40, see Table 1 for structures) and reference fluorophores for several types of wavelengths (DAPI, FITC, Cy3, TexasRed = TR and Cy5)
Figure 3 : Histogrammes issus des images scanner de la micropuce.Figure 3: Histograms from scanner images of the microchip.
Cet histogramme représente l'intensité de fluorescence observée pour chaque plot de la micropuce et pour quatre longueurs d'ondes différentes (FITC, Cy3, TR et Cy5). L'axe des abscisses est divisé par blocs (i.e. par type d' aminopyridine) puis sous-divisé par aldéhydes (dans l'ordre Bl, B2,...,B20).This histogram represents the fluorescence intensity observed for each plot of the microchip and for four different wavelengths (FITC, Cy3, TR and Cy5). The abscissa axis is divided into blocks (i.e. by type of aminopyridine) and then subdivided by aldehydes (in the order Bl, B2, ..., B20).
Figure 4 : Caractéristiques spectrales de différents composés de l'invention. Les spectres d'excitation et d'émission de trois fluorophores de l'invention. Les structures correspondantes sont présentées à droitee. Les composés ont été dissous àFigure 4: Spectral characteristics of different compounds of the invention. The excitation and emission spectra of three fluorophores of the invention. The corresponding structures are shown on the right. The compounds were dissolved at
500 nM dans le DMSO pure, et les spectres de fluorescence ont été mesurés dans une cuvette de 500 μl avec un spectromètre de luminescence Perkin-Elmer LS-50B.500 nM in pure DMSO, and the fluorescence spectra were measured in a 500 μl cuvette with a Perkin-Elmer LS-50B luminescence spectrometer.
Figures 5A et 5B : mesure de fluorescence d'un composé de l'invention complexé avec différents ions métalliques. (5A) Effet des ions sur la fluorescence d'un fluorophore de l'invention.Figures 5A and 5B: Fluorescence measurement of a compound of the invention complexed with different metal ions. (5A) Effect of ions on the fluorescence of a fluorophore of the invention.
Le fluorophore a été dissous à 5 μM dans un tampon aqueux en présence des différents ions (la concentration est indiquée en équivalents par rapport au composé de l'invention IPAm-Py, 1 eq. = 5 μM). La fluorescence est mesurée à 535 nm (l'excitation à 402 nm). (5B) L'effet de diminution de fluorescence des différents ions à 50 μM (10 équivalents par rapport au IPAm-Py exprimé comme un rapport d'intensité de fluorescence sans (Io) ou avec (I) un ion donné. L'effet spécifique de Cu2+ est bien distingué. Figures 6 à 11 : marquage par des composés de formule (Ia) de cellules primaires de fibroblastes de peau humaine. Le marquage est observé sur des localisations granulaires (figures 6 et 8), filamenteuses (figures 7, 9 et 10), cytoplasmiques (figures 10 et 11), et membranaires (figures 7 et 11). Synthèse :The fluorophore was dissolved at 5 μM in an aqueous buffer in the presence of the various ions (the concentration is indicated in equivalents relative to the compound of the invention IPAm-Py, 1 eq = 5 μM). Fluorescence is measured at 535 nm (excitation at 402 nm). (5B) The fluorescence decrease effect of the different ions at 50 μM (10 equivalents relative to the IPAm-Py expressed as a ratio of fluorescence intensity without (Io) or with (I) a given ion. Cu2 + specific is well distinguished. Figures 6 to 11: labeling with compounds of formula (Ia) of primary cells of human skin fibroblasts. The labeling is observed on granular (FIGS. 6 and 8), filamentous (FIGS. 7, 9 and 10), cytoplasmic (FIGS. 10 and 11) and membrane (FIGS. 7 and 11) locations. Synthesis:
Validation par HPLC de la condensation à trois composés Un mélange de 3-méthoxycinnamaldéhyde, de l'acide nicotinique et du triflate de scandium est déposé dans tous les plots de la micro puce, et mis en contact avec du cyclohexylisonitrile. Afin de maintenir la micro puce dans une atmosphère saturée en isonitrile, la micro puce a été enfermée dans une boîte de Pétri en verre, au fond de laquelle quelques microlitres d' isonitrile et de DMSO étaient déposés. En utilisant ce dispositif, la formation du produit de la condensation à trois composés a été mise en évidence. Le chromatogramme indique la formation du dérivé de 3-aminoimidazo[l,2-a]pyridine attendu.HPLC Validation of the Three-Compound Condensation A mixture of 3-methoxycinnamaldehyde, nicotinic acid and scandium triflate is deposited in all the pads of the microchip, and brought into contact with cyclohexylisonitrile. In order to keep the microchip in an atmosphere saturated with isonitrile, the microchip was enclosed in a glass Petri dish, at the bottom of which a few microliters of isonitrile and DMSO were deposited. Using this device, the product formation of the three compound condensation has been demonstrated. The chromatogram indicates the formation of the expected 3-aminoimidazo [1,2-a] pyridine derivative.
a. Synthèse combinatoire de composésat. Combinatorial synthesis of compounds
Les réactions de condensation à trois composés, ont été réalisées selon les protocoles décrits par Blackburn (Blackburn, C. et a l. Tetrahedron Letters 1998,The three-compound condensation reactions were carried out according to the protocols described by Blackburn (Blackburn, C. and A. Tetrahedron Letters 1998,
39, (22), 3635-3638). Le mélange d'une aminopyridine, d'un aldéhyde et d'un isonitrile, en présence de triflate de scandium, conduit à des dérivés de 3- aminoimidazo[l,2-a]pyridines suivant le schéma 1 :39, (22), 3635-3638). The mixture of an aminopyridine, an aldehyde and an isonitrile, in the presence of scandium triflate, leads to 3-aminoimidazo [1,2-a] pyridine derivatives according to Scheme 1:
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0001
(Ia) Schéma 1(Ia) Diagram 1
Nous avons choisi 40 aldéhydes illustrés dans le tableau 1 pour faire varier le substituant R7, et deux aminopyridines conduisant à différents substituants en R15 R25 R3 Ct R4.
Figure imgf000027_0001
We have chosen 40 aldehydes shown in Table 1 to vary the substituent R 7 , and two aminopyridines leading to different substituents in R 15 R 25 R 3 C R 4 .
Figure imgf000027_0001
Tableau 1 : Liste des aldéhydes.Table 1: List of aldehydes.
Les aminopyridines sont dénommées A2 et A3 :
Figure imgf000028_0001
Aminopyridines are called A2 and A3:
Figure imgf000028_0001
Les aldéhydes du tableau 1 sont déposés à l'aide de l'éjecteur piézoélectrique dans les plots de la micro puce (Bl à BlO sur les lignes 1 & 6, Bl 1 à B20 sur les lignes 2 & 7, B21 à B30 sur les lignes 3 & 8, B31 à B40 sur les lignes 4 & 9), les lignes 5 & 10 étant réservées aux fluorophores de référence utilisés comme contrôles (Figure 2). Les aminopyridines A2 et A3 sont déposées respectivement dans les blocs 1 & 5, 2 & 6, 3 & 7, 4 & 8 (Figure 2). Du triflate de scandium (Sc(OTf)3 10% mol.) a été préalablement mélangé aux aminopyridines. Aldéhydes et aminopyridines sont à une concentration 10 mM dans un mélange eau/DMSO (1 :1).The aldehydes of Table 1 are deposited with the aid of the piezoelectric ejector in the micro-chip pads (B1-B1 on lines 1 & 6, B1-B20 on lines 2 & 7, B21-B30 on FIGS. lines 3 & 8, B31 to B40 on lines 4 & 9), lines 5 & 10 being reserved for reference fluorophores used as controls (Figure 2). The aminopyridines A2 and A3 are deposited respectively in blocks 1 & 5, 2 & 6, 3 & 7, 4 & 8 (FIG. 2). Scandium triflate (Sc (OTf) 3 10 mol%) was premixed with the aminopyridines. Aldehydes and aminopyridines are at a concentration of 10 mM in a water / DMSO mixture (1: 1).
Après ajout du mélange des aldéhydes et des (aminopyridines + triflate de scandium) sur les plots conformément au plan de dépôt, la micro puce est placée dans le dispositif d'ajout du réactif gazeux cyclohexylisonitrile à température ambiante et dans l'obscurité pendant 15 heures dans une boîte de Pétri en verre. La micro puce est alors extraite du dispositif et laissée à évaporer, de façon à enlever toute trace d'isonitrile, puis un mélange contenant 20% de glycérol, 30% d'eau ultrapure et 50% de DMSO est ajouté dans tous les plots, avant de passer à la lecture des résultats.After adding the mixture of aldehydes and (aminopyridines + scandium triflate) on the pads according to the deposition plan, the microchip is placed in the device for adding the gaseous cyclohexylisonitrile reactant at room temperature and in the dark for 15 hours. in a glass petri dish. The microchip is then extracted from the device and allowed to evaporate, so as to remove all traces of isonitrile, then a mixture containing 20% of glycerol, 30% of ultrapure water and 50% of DMSO is added in all the pads, before moving on to reading the results.
La lecture de la micro puce est effectuée avec un scanner de fluorescence pour quatre jeux de longueurs d'ondes d'excitation et d'émission différents (Tableau 2).The microchip is read with a fluorescence scanner for four sets of different excitation and emission wavelengths (Table 2).
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Tableau 2 : Jeux de lasers utilisés pour visualiser les fluorophores avec le scanner.Table 2: Sets of lasers used to visualize fluorophores with the scanner.
De nombreuses micro gouttes sont fluorescentes. Certaines gouttes fluorescent principalement à une seule longueur d'onde, comme le mélange A2-B24 qui ne brille que dans la couleur FITC (vert), tandis que d'autres sont fluorescentes sur un spectre plus large (mélange de couleurs). Une simple lecture de la fluorescence permet ainsi d'identifier directement des fluorophores potentiels.Many micro drops are fluorescent. Some drops fluoresce mainly at a single wavelength, like the A2-B24 mixture which shines only in the FITC color (green), while others are fluorescent on a spectrum wider (mix of colors). A simple reading of the fluorescence thus makes it possible to directly identify potential fluorophores.
La quantification de la fluorescence dans chaque goutte, et le traitement des données à l'aide des tableaux croisés dynamiques d'Excel, permet de construire et de manipuler aisément des histogrammes représentant les intensités de fluorescence, à différentes longueurs d'onde, des combinaisons aldéhydes- aminopyridines (figure 3).Quantitation of fluorescence in each drop, and data processing using Excel's pivot tables, makes it easy to construct and manipulate histograms representing fluorescence intensities, at different wavelengths, combinations aldehyde aminopyridines (Figure 3).
Ces résultats permettent d'identifier des candidats fluorophores pour les différentes longueurs d'onde en sélectionnant les molécules émettant des niveaux de fluorescence élevés, et sélectivement dans une gamme de longueur d'onde (Tableau 3).These results make it possible to identify fluorophore candidates for the different wavelengths by selecting the molecules emitting high levels of fluorescence, and selectively in a range of wavelengths (Table 3).
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Tableau 3 : Structures de candidats fluorophores et longueurs d'ondes correspondantes.Table 3: Fluorophore candidate structures and corresponding wavelengths.
b. Observation par microscopie automatiséeb. Observation by automated microscopy
Une fois les microgouttes contenant les candidats d'intérêt identifiées, nous avons re-synthétisé, purifié, et caractérisé, du point de vue photochimique, les composés fluorescents pour confirmer les résultats. Nous avons également analysé les composés par microscopie à fluorescence automatisée. Outre la résolution plus élevée, le microscope apporte aussi la possibilité d'exciter dans l'UV avec le jeu de filtres DAPI (Di Aminido Phenyl lndol), ce qui pourrait permettre de trouver des composés fluorescents autres que ceux observés avec le scanner. La micropuce est positionnée sur une plateforme motorisée, et le microscope photographie chaque plot un par un avec quatre jeux de filtres fluorescents (Tableau 4).
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Once the microdroplets containing the identified candidates of interest were identified, we re-synthesized, purified, and photochemically characterized the fluorescent compounds to confirm the results. We also analyzed the compounds by automated fluorescence microscopy. In addition to the higher resolution, the microscope also provides the opportunity to excite in the UV with the set of DAPI filters (Di Aminido Phenyl Indol), which could make it possible to find fluorescent compounds other than those observed with the scanner. The microchip is positioned on a motorized platform, and the microscope photographs each pad one by one with four sets of fluorescent filters (Table 4).
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Tableau 4 : Jeux de lasers utilisés pour visualiser les fluorophores avec le microscope.Table 4: Sets of lasers used to visualize fluorophores with the microscope.
Les images obtenues pour les filtres FITC, PhycoE (PhycoErythrine) et RhodB (Rnhodamine B) corroborent les résultats obtenus au scanner. L'excitation UV montre une faible fluorescence résiduelle à 460 nm dans la majorité des gouttelettes des blocs correspondant aux aminopyridines A2 et A3.The images obtained for the FITC, PhycoE (PhycoErythrine) and RhodB (Rnhodamine B) filters corroborate the results obtained with the scanner. The UV excitation shows a weak residual fluorescence at 460 nm in the majority of the droplets of the blocks corresponding to aminopyridines A2 and A3.
c. Modulation des propriétés de fluorescence des composés de l'inventionvs. Modulation of the fluorescence properties of the compounds of the invention
Une réaction à 3 composants de type réaction Ugi permet de préparer les différents composés avec des propriétés de fluorescence distinctes. Nous avons choisi 7 isocyanides nommés Cl à C7 et illustrés ci-dessous pour faire varier le substituant en position-3 du squelette imidazo[l,2-a]pyridine.A reaction with 3 components of Ugi reaction type makes it possible to prepare the various compounds with distinct fluorescence properties. We chose 7 isocyanides named Cl to C7 and shown below to vary the 3-position substituent of the imidazo [1,2-a] pyridine backbone.
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C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7
Différentes substitutions en position correspondant aux composés 2- aldéhyde, 3- isocyanide et 7- aminopyridine du squelette imidazo[l,2-a]pyridine induisent un déplacement dans le maximum d'excitation et d'émission et changement du rendement quantique (Tableau 5). L'effet est généralement plus marqué pour les substitutions sur le composé 2-aldéhyde (variation du paramètre B), mais il est aussi significatif pour l'isocyanide (variation du paramètre C) et pour la quaternization du squelette imidazo[l,2-a]pyridine (la structure Ic d'IPAm, comparer A2B2C1-Me+J- avec A2B2C). Composé . [a] . [b] , [c] λabs λem φ fDifferent positional substitutions corresponding to the 2-aldehyde, 3-isocyanide and 7-aminopyridine compounds of the imidazo [1,2-a] pyridine backbone induce displacement in the excitation and emission maximum and change in quantum yield (Table 5). ). The effect is generally more pronounced for substitutions on the 2-aldehyde compound (variation of parameter B), but it is also significant for isocyanide (variation of parameter C) and for quaternization of the imidazo skeleton [1,2- a] pyridine (the Ic structure of IPAm, compare A2B2C1-Me + J- with A2B2C). Composed. [at] . [b], [c] λabs λ em φ f
[nm] [nm][nm] [nm]
A2 342 424 0.28A2 342 424 0.28
A3 342 408 0.27A3 342 408 0.27
A2B16C6 400 528 0.27A2B16C6 400 528 0.27
A2B16C3 384 542 0.52A2B16C3 384 542 0.52
A2B16C2 416 554 0.48A2B16C2 416 554 0.48
A2B16C5 419 555 0.52A2B16C5 419 555 0.52
A2B16C4 413 558 0.49A2B16C4 413 558 0.49
A2B16C1 414 559 0.42A2B16C1 414 559 0.42
A2B27C1 368 516 0.24A2B27C1 368 516 0.24
A2B26C1 388 524 0.42A2B26C1 388 524 0.42
A2B8C1 384 526 0.51A2B8C1 384 526 0.51
A2B33C1 387 529 0.83A2B33C1 387 529 0.83
A2B13C1 392 530 0.64A2B13C1 392 530 0.64
A2B38C1 391 532 0.10A2B38C1 391 532 0.10
A2B35C1 392 532 0.67A2B35C1 392 532 0.67
A2B21C1 393 533 0.31A2B21C1 393 533 0.31
A2B37C1 394 533 0.10A2B37C1 394 533 0.10
A2B2C1 398 535 0.71A2B2C1 398 535 0.71
A2B22C1 382 539 0.62A2B22C1 382 539 0.62
A2B15C1 392 542 0.51A2B15C1 392 542 0.51
A2B36C1 413 558 0.37A2B36C1 413 558 0.37
A2B16C1 414 559 0.42A2B16C1 414 559 0.42
A2B31C1 434 573 0.35A2B31C1 434 573 0.35
A2B16Cl-hydrazide 402 542 0.48A2B16Cl-hydrazide 402 542 0.48
A2B16Cl-acid 410 549 0.55A2B16Cl-acid 410 549 0.55
A3B16C1 416 553 0.65A3B16C1 416 553 0.65
A2B16Cl -ester 414 559 0.42A2B16Cl -ester 414 559 0.42
A2B2C1 398 535 0.71A2B2C1 398 535 0.71
A2B2C1-Me+ J- 399 568 0.42A2B2C1-Me + J- 399 568 0.42
A3B20C7 368 520 0.98A3B20C7 368 520 0.98
A2B20C7 385 523 0.70A2B20C7 385 523 0.70
A2B2C7 394 532 0.64A2B2C7 394 532 0.64
A2B40C7 398 537 0.11A2B40C7 398 537 0.11
Tableau 5. Propriétés d'absorptions et d'émission des composés de l'inventionTable 5. Absorption and emission properties of the compounds of the invention
[a] Maximum d'absorption dans le DMSO.[a] Maximum absorption in DMSO.
[b] Maximum du spectre de fluorescence dans le DMSO.[b] Maximum of the fluorescence spectrum in DMSO.
[c] Utilisation de la fluorescéine comme référence externe (^f =0.92). d. Propriétés de fluorescence des composés de l'invention[c] Using fluorescein as an external reference (^ f = 0.92). d. Fluorescence properties of the compounds of the invention
Les spectres de différents composés (500 nM de fiuorophore) ont été analysés dans le DMSO en solution (Fig. 4). Les spectres d'excitation et d'émission montrent un maximum à 390-430 nm et à 510-580 nm avec un déplacement de Stocks atteignant 160 nm (Tableau 5). Cette propriété peut être utile pour des applications telles que la résonance de fluorescence par transfert d'énergie et le marquage multicolore.The spectra of different compounds (500 nM fluorophore) were analyzed in solution DMSO (Fig. 4). The excitation and emission spectra show a maximum at 390-430 nm and at 510-580 nm with a displacement of Stocks up to 160 nm (Table 5). This property can be useful for applications such as energy transfer fluorescence resonance and multi-color labeling.
e. Application : détection d'ionse. Application: ion detection
Différents ions induisent une baisse de fluorescence des composés de l'invention, notamment selon la structure ci-dessous (employé dilué à 10 μM), Cu2+ étant le plus efficace (Fig. 5A). Ce composé peut être considéré comme un réactif test spécifique de Cu2+ - (Fig. 5B).Different ions induce a decrease in fluorescence of the compounds of the invention, in particular according to the structure below (employed diluted to 10 μM), Cu 2 + being the most effective (FIG 5A). This compound can be considered as a test reagent specific for Cu2 + - (Figure 5B).
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000032_0001
IPAm-PyIPAM-Py
f. Application : Marquage cellulairef. Application: Cell Marking
On a étudié la capacité de 48 fluorophores à marquer les compartiments cellulaires en utilisant des cultures de cellules primaires de fibroblastes de peau humaine. Le marquage est observé sur des localisations granulaires (figures 6 et 8), filamenteuses (figures 7, 9 et 10), cytoplasmiques (figures 10 et 11), et membranaires (figures 7 et 11). Le marquage de cellules vivantes peut être observé au microscope à fluorescence en utilisant un jeu de filtres "DAPI" (λex=360/40 nm, λem=460/50 nm), "fluorescein" (λex=485/22 nm, λem=530/30 nm), et "rhodamin" (λex=546/10 nm, λem=580/30 nm). The ability of 48 fluorophores to label cell compartments was investigated using primary cell cultures of human skin fibroblasts. The labeling is observed on granular (FIGS. 6 and 8), filamentous (FIGS. 7, 9 and 10), cytoplasmic (FIGS. 10 and 11) and membrane (FIGS. 7 and 11) locations. The labeling of living cells can be observed under a fluorescence microscope using a set of filters "DAPI" (λ ex = 360/40 nm, λ em = 460/50 nm), "fluorescein" (λ ex = 485/22 nm , λ em = 530/30 nm), and "rhodamine" (λ ex = 546/10 nm, λ em = 580/30 nm).

Claims

REVENDICATIONS
1 -Molécule répondant à l'une des formules (Ia) (Ib) et (Ic)1 -Molecule corresponding to one of the formulas (Ia) (Ib) and (Ic)
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000033_0001
(Ia)(Ia)
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000033_0002
(Ib)(Ib)
Figure imgf000033_0003
Figure imgf000033_0003
(Ic)(Ic)
dans lesquelles R1 et R3 à R8, identiques ou différents représentent un groupement choisi parmi : - un atome d'hydrogène ;in which R 1 and R 3 to R 8 , which are identical or different, represent a group chosen from: a hydrogen atom;
- un groupement alkyle en C1-C15, alcényle en C2-C15, alcynyle en C2-C 15, éventuellement substitués ;- an alkyl group in C 1 -C 15 alkenyl, C 2 -C 15 alkynyl, C 2 -C 15, optionally substituted;
- un groupement aryle en C6-C15, aralkyle en C7-C15, hétéroaryle en C6-C]5, hétéroaralkyle en C7-CJ 5, éventuellement substitués ;- an aryl group, C 6 -C 15 aralkyl, C 7 -C 15 heteroaryl, C 6 -C] 5, heteroaralkyl, C 7 -C J 5, optionally substituted;
- un groupement cyclohétéroalkyle en C3-C15, saturé ou insaturé, et éventuellement comportant un ou plusieurs substituants ;a saturated or unsaturated C 3 -C 15 cycloheteroalkyl group and optionally containing one or more substituents;
R2 représente un groupement choisi parmi :R 2 represents a group chosen from:
- un groupement hydroxyle, un groupe alcoxy en Cj-C6, mercapto -SH, alkylmercapto en Cj-C6, carbonyl -CHO, cétone en Cj-C6, carboxyl -a hydroxyl group, a C 1 -C 6 alkoxy group, a mercapto -SH group, a C 1 -C 6 alkylmercapto group, a carbonyl -CHO group and a C 1 -C 6 ketone carboxyl group;
COOH, alkyloxycarbonyl en Cj-C6, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide en Ci- C6, N,N-dialkylcarboxamide en Cj-C6, imino -CH-NH, N-alkylimino en C1-C6, sulfoxide -SO-, sulfone -SO2-, thiocarbonyl -C(=S)- , acide thio carboxylique -COSH, acide sulfonique -SO3H, un groupement nitro -NO2, nitroso -NO, un groupement diazo -N=N-, un groupement azido -N3, isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, un groupement cyano -CN ;COOH, alkyloxycarbonyl -C-C 6, -CONH 2 carboxamide, N-alkylcarboxamide, C 6 -C, N, N-dialkylcarboxamide Cj-C 6, -CH-NH imino, N-alkylimino, C 1 -C 6 alkyl, sulfoxide -SO-, sulfone -SO 2 -, thiocarbonyl -C (= S) -, thio carboxylic acid -COSH, sulfonic acid -SO 3 H, a nitro group -NO 2 , nitroso -NO, a diazo group -N = N-, an azido group -N 3 , isocyanato -NCO, isothiocyanato -NCS, a cyano group -CN;
- un groupement alcényle en C2-C15, alcynyle en C2-C15, aryle en C6-C15, aralkyle en C7-C15, hétéroaryle en C6-C15, comportant une double ou triple liaison en alpha du cycle pyridine, éventuellement substitués ; où deux groupements Ri (i=l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) voisins sont susceptibles d'être reliés par une liaison covalente de façon à former avec le noyau imidazo pyridinyl une structure cyclique, ou hétérocyclique, éventuellement aromatique ;- alkenyl, C 2 -C 15 alkynyl, C 2 -C 15 aryl, C 6 -C 15 aralkyl, C 7 -C 15 heteroaryl, C 6 -C 15, having a double or triple bond in pyridine ring alpha, optionally substituted; where two adjacent groups R 1 (i = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8) are capable of being connected by a covalent bond so as to form with the imidazo pyridinyl ring a cyclic or heterocyclic structure, optionally aromatic;
R'i, R'2, R'3 et R'4, identiques ou différents représentent un groupement choisi parmi :R'i, R ' 2 , R' 3 and R ' 4 , identical or different, represent a group chosen from:
- un atome d'hydrogène ;a hydrogen atom;
- un groupement alkyle en C1-Ci5, alcényle en C2-Cj5, alcynyle en C2-Cj5, éventuellement substitués ;- an alkyl group C 1 -C 5 alkenyl, C 2 -cj 5 alkynyl, C 2 -cj 5, optionally substituted;
- un groupement aryle en C6-Ci5, aralkyle en C7-Cj5, hétéroaryle en C6-C15, éventuellement substitués ;- an aryl group, C 6 -C 5 -C 7 aralkyl -cj 5 heteroaryl, C 6 -C 15, optionally substituted;
- un groupement cyclohétéroalkyle en C3-C15, saturé ou insaturé éventuellement substitués ; où deux groupements R'i (i=l, 2, 3, 4) sont susceptibles d'être reliés par une liaison covalente de façon à former une structure cyclique, ou hétérocyclique, éventuellement aromatique, de préférence une structure conjuguée avec le noyau imidazo pyridinyl ;an optionally substituted C 3 -C 15 cycloheteroalkyl group, which may be saturated or unsaturated; wherein two R'i groups (i = 1, 2, 3, 4) are capable of being connected by a covalent bond so as to form a ring structure, or heterocyclic, optionally aromatic, preferably a structure conjugated with the imidazo ring pyridinyl;
Y représente un groupement choisi parmi : O, NH et S ; Xi et X2 identiques ou différents représentent chacun un atome d'halogène ;Y represents a group chosen from: O, NH and S; X 1 and X 2, which are identical or different, each represent a halogen atom;
X3 représente un anion d'un acide minéral ou organique, à l'exclusion du composé de formule (Ia) pour lequel Rj et R2 forment ensemble avec le noyau pyridine auquel ils sont rattachés un cycle phényle, R3=R4=R5=H, R6= terbutyle et R7=méthyle.X 3 represents an anion of a mineral or organic acid, with the exception of the compound of formula (Ia) for which R 1 and R 2 together with the pyridine ring to which they are attached form a phenyl ring, R 3 = R 4 = R 5 = H, R 6 = terbutyl and R 7 = methyl.
2. Molécule selon la revendication 1, caractérisée en ce que R2 est choisi parmi :2. Molecule according to claim 1, characterized in that R 2 is chosen from:
- une fonction acide carboxylique -COOH, alkyloxycarbonyle en C1-C3, un groupement cyano -CN, carboxamide -CONH2, N-alkylcarboxamide ena carboxylic acid function -COOH, C 1 -C 3 alkyloxycarbonyl, a cyano-CN group, carboxamide -CONH 2 , N-alkylcarboxamide in
Ci-C6, N,N-dialkylcarboxamide en C1-C6, isothiocyanato -NCS ;Ci-C 6, N, N-dialkylcarboxamide, C 1 -C 6 isothiocyanato -NCS;
- un groupement alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6, éventuellement substitués.- alkenyl, C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6, optionally substituted.
3. Molécule selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que R5=H et R6 est choisi parmi : H, un alkyle en C]-C6 éventuellement substitué, un aralkyle en C7-CiO éventuellement substitué, un aryle éventuellement substitué, un hétéroalkyle, un groupement -(CH2)n-CO-R" dans lequel n représente un entier allant de 1 à 6 et R" est choisi parmi -OH, un groupement alcoxy en Cj-C6, un groupement alkylamino en C1-C6 ou di-alkylamino en Cj-C6. 3. A molecule according to claim 1 or claim 2, characterized in that R 5 = H and R 6 is selected from: H, a C] -C 6 alkyl optionally substituted, aralkyl C 7 -C O optionally substituted optionally substituted aryl, heteroalkyl, - (CH 2 ) n -CO-R "group in which n represents an integer from 1 to 6 and R" is selected from -OH, a C 1 -C 6 alkoxy group , an alkylamino group, C 1 -C 6 alkylamino or di-Cj-C 6.
4. Molécule selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que
Figure imgf000035_0001
4. Molecule according to any one of the preceding claims, characterized in that
Figure imgf000035_0001
5. Molécule selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que R7 est choisi parmi les alcényles, les alkyles, les aralkyles, les hétéroaryles, les hétéroaralkyles, éventuellement substitués, de préférence conjugués. 5. Molecule according to any one of the preceding claims, characterized in that R 7 is selected from alkenyls, alkyls, aralkyls, heteroaryls, heteroaralkyls, optionally substituted, preferably conjugated.
6. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle est choisie dans la liste suivante : 6. Molecule according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it is chosen from the following list:
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000036_0002
Figure imgf000036_0003
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000036_0002
Figure imgf000036_0003
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
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Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
7. Procédé de préparation d'une molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape de réaction multi composés suivant le schéma 1 :7. Process for the preparation of a molecule according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it comprises at least one multi-compound reaction step according to scheme 1:
Figure imgf000039_0002
Figure imgf000039_0002
(Ia)(Ia)
Schéma 1 dans laquelle on fait réagir une aminopyridine, un aldéhyde R7-C=O et un isonitrile R5-CN, en présence d'un catalyseur du type un acide de Bronsted ou de Lewis, dans un solvant.Scheme 1 in which an aminopyridine, an aldehyde R 7 -C = O and an isonitrile R 5 -CN are reacted in the presence of a catalyst of the type of a Bronsted or Lewis acid, in a solvent.
8. Procédé selon la revendication 7, caractérisée en ce que la réaction est réalisée dans un microréacteur.8. Process according to claim 7, characterized in that the reaction is carried out in a microreactor.
9. Procédé selon la revendication 8, caractérisée en ce que la réaction est réalisée dans une goutte.9. Process according to claim 8, characterized in that the reaction is carried out in a drop.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, de préparation des composés de formule (Ib), caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape au cours de laquelle les produits de formule (Ia) sont traités suivant le procédé décrit par le schéma 2 :
Figure imgf000040_0001
10. Process according to any one of claims 7 to 9, for the preparation of compounds of formula (Ib), characterized in that it further comprises at least one step during which the products of formula (Ia) are treated according to the method described by scheme 2:
Figure imgf000040_0001
(Ib)(Ib)
Schéma 2Figure 2
Dans lequel un halogénure de bore BX1X2Q, avec Q représentant un atome d'halogène, est mis à réagir avec le composé (Ia) dans un solvant anhydre/Wherein a boron halide BX 1 X 2 Q, with Q representing a halogen atom, is reacted with the compound (Ia) in an anhydrous solvent /
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, de préparation des composés de formule (Ic), caractérisé en ce qu'il comporte en outre au moins une étape au cours de laquelle, les produits de formule (Ia) sont traités suivant le procédé décrit par le schéma 3 :11. Process according to any one of claims 7 to 9, for the preparation of compounds of formula (Ic), characterized in that it also comprises at least one step during which the products of formula (Ia) are processed according to the process described in scheme 3:
Figure imgf000040_0002
Figure imgf000040_0002
(la) (Ic)(the) (Ic)
Schéma 3Figure 3
Dans lequel la réaction se fait par mise en contact de (Ia) et de l'agent d'alkylation R8X3, soit dans un solvant anhydre, soit directement dans l'agent d'alkylation pur.In which the reaction is carried out by contacting (Ia) and the alkylating agent R 8 X 3 , either in an anhydrous solvent or directly in the pure alkylating agent.
12. Procédé de préparation d'un composé de formule (Ia) selon la revendication 1, avec R5=R6=H5 caractérisé en ce que le produit de départ est un composé de formule (Id) dans laquelle R1, R2, R3, R4, R7, ont la même définition que pour la molécule (Ia), R'6 représente un groupement choisi parmi les alkyles en C1-C1S, les aryles en C6-Ci5, les aralkyles en C7-C15, les acides aminés naturels ou synthétiques et en ce que le produit (Id) est soumis à l'action d'une hydrolase (protéase ou estérase) suivant le schéma 4 ci-dessous :12. Process for the preparation of a compound of formula (Ia) according to claim 1, with R 5 = R 6 = H 5, characterized in that the starting material is a compound of formula (Id) in which R 1 , R 2, R 3, R 4, R 7 have the same definition as for the molecule (Ia), R '6 represents a group selected from alkyl C 1 -C 1S, aryls C 6 -C 5, the C 7 -C 15 aralkyls, natural or synthetic amino acids and in that the product (Id) is subjected to the action of a hydrolase (protease or esterase) according to scheme 4 below:
Figure imgf000041_0001
Figure imgf000041_0001
(Id) (la) Schéma 4(Id) (la) Figure 4
13. Support sensiblement plan comportant une modification de sa surface sous forme régulière, avantageusement sous forme de matrice, pour constituer des zones de réception, et dont une ou plusieurs des zones de réception est occupée par une ou plusieurs molécules de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 12.13. Substantially flat support comprising a modification of its surface in regular form, advantageously in the form of a matrix, to form reception zones, and one or more of the reception zones is occupied by one or more molecules of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) according to any one of claims 1 to 6 and 12.
14. Support selon la revendication 13 caractérisé en ce que les molécules de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) sont en solution dans des gouttes positionnées sur les zones de réception.14. Support according to claim 13 characterized in that the molecules of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) are in solution in drops positioned on the receiving zones.
15. Support selon l'une quelconque des revendications 13 et 14, caractérisée en ce qu'il est en verre et modifié chimiquement pour comprendre des zones de réception dont la surface est hydrophile, entourées de zones dont la surface est hydrophobe.15. Support according to any one of claims 13 and 14, characterized in that it is glass and chemically modified to include receiving areas whose surface is hydrophilic, surrounded by areas whose surface is hydrophobic.
16. Support selon la revendication 13 caractérisé en ce que les molécules sont fixées au support de façon covalente sur les zones de réception. 16. Support according to claim 13 characterized in that the molecules are fixed to the support covalently on the receiving areas.
17. Kit d'analyse, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un support selon l'une quelconque des revendications 13 à 16, un distributeur piezo électrique et un détecteur de fluorescence.17. Analysis kit, characterized in that it comprises at least one support according to any one of claims 13 to 16, a piezoelectric distributor and a fluorescence detector.
18. Procédé de criblage de molécules, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape au cours de laquelle un analyte à tester est distribué sur les zones de réception du support selon l'une quelconque des revendications 13 à 16 puis que l'on procède à une mesure de fluorescence. 18. A method of screening molecules, characterized in that it comprises at least one step during which an analyte to be tested is distributed on the receiving areas of the support according to any one of claims 13 to 16 and that the a fluorescence measurement is carried out.
19. Procédé selon la revendication 18, caractérisé en ce que l'analyte est sélectionné parmi les protéines, les enzymes et leurs substrats.19. The method of claim 18, characterized in that the analyte is selected from proteins, enzymes and their substrates.
20. Utilisation d'un composé de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 12, comme agent de fluorescence. 20. Use of a compound of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) according to any one of claims 1 to 6 and 12, as fluorescence agent.
21. Utilisation selon la revendication 20, comme colorant fluorescent.21. Use according to claim 20 as a fluorescent dye.
22. Utilisation selon la revendication 20, comme substrat fluorogénique.22. Use according to claim 20 as a fluorogenic substrate.
23. Utilisation selon la revendication 20, comme sonde moléculaire.23. Use according to claim 20 as a molecular probe.
24. Utilisation selon la revendication 20, comme détecteur d'ionsfluorescents.24. Use according to claim 20, as a fluorescent ion detector.
25. Médicament caractérisé en ce qu'il comporte au moins une molécule de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 12 dans un support pharmaceutiquement acceptable.25. Medicinal product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) according to any one of claims 1 to 6 and 12 in a pharmaceutically acceptable carrier.
26. Produit d'imagerie médicale caractérisé en ce qu'il comporte au moins une molécule de formule (Ia), (Ib), (Ic) ou (Id) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 12 dans un support pharmaceutiquement acceptable. 26. Medical imaging product characterized in that it comprises at least one molecule of formula (Ia), (Ib), (Ic) or (Id) according to any one of claims 1 to 6 and 12 in a support pharmaceutically acceptable.
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