WO2008048085A1 - Composición farmacéutica sinérgica que contiene pentoxifilina, vitamina b6, vitamina b 12 y ácido fólico - Google Patents

Composición farmacéutica sinérgica que contiene pentoxifilina, vitamina b6, vitamina b 12 y ácido fólico Download PDF

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WO2008048085A1
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folic acid
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pentoxifylline
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PCT/MX2007/000119
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Leopoldo de Jesús ESPINOSA ABDALA
María Elena GARCÍA ARMENTA
Victor Guillermo ÁLVAREZ OCHOA
Josefina Santos Murillo
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Espinosa Abdala Leopoldo De Je
Garcia Armenta Maria Elena
Alvarez Ochoa Victor Guillermo
Josefina Santos Murillo
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Definitions

  • Synergistic pharmaceutical composition containing pentoxifylline, vitamin B6, vitamin B 12 and folic acid.
  • the present invention relates to the association or combination of (1- [5-oxohexyl] -3, 7- dimethyl] xanthine and a complex of Pyridoxine, Cyanocobalamin and folic acid to improve function
  • Endothelial dysfunction is the alteration, primary in vascular pathologies; this dysfunction It is defined as the inability of the blood vessel to increase its diameter in response to a known stimulus, caused by an insufficient generation of vasodilator agents in the endothelium.
  • endothelium-dependent dilation is observed in response to vasoactive stimuli (ischemia, acetylcholine) while in different disease states it has been shown that this vasodilator effect, or even a vasoconstrictor effect, is a product of the prevalence of direct acetylcholine defect over receptors. Muscarinics of the underlying smooth muscle.
  • the vascular endothelium is a functionally complex tissue, producing multiple agents that act in endocrine, paracrine and autocrine form that affect vasoregulation proliferation of vascular smooth muscle cells platelet aggregation and monocyte adhesion.
  • Vasoregulation occurs as a result of a balance between the release of relaxing and constrictor factors.
  • the predominant relax factor is NO (oxide nitric), synthesized from L-arginine through the enzyme system known as nitric oxide (NOS) that converts L-arginine and oxygen into NO and L-citrulline.
  • NOS nitric oxide
  • Three NOS isoforms are distinguished, two of them constitutive, which are expressed in different tissues under physiological or pathological conditions and are dependent on calcium, endothelial (eNOS) and neural (nNOS);
  • Inducible isoform (iNOS) is present in macrophages and inflammatory cells. Physiologically, the inducible isoform is expressed in very low concentrations and its transcription can be induced as interleukin-1, tumor necrosis factor and growth factors.
  • Stimuli that activate eNOS include thrombin, ADP, bradykinin, substance P, muscarinic agonists, tangential rubbing and circular current.
  • the cGMP generates a decrease in the concentration of intracellular calcium, through the activation of kinase proteins sensitive to cGMP that phosphorylate key proteins such as ion channels, pumps and enzymes that lead to the relaxation of the underlying smooth muscle.
  • NO-cGMP pathway mediates the relaxing effects of many hormones, including histamine, nitro-vasodilators, acetylcholine, estrogens, isoproterenol and insulin.
  • NO (among other functions) is an inhibitor of cell growth and migration, of the expression of pro-inflammatory and adhesion molecules.
  • the normal endothelium has anti-thrombotic and anti-atherosclerotic functions, inhibits platelet aggregation, monocyte adhesion and vascular smooth muscle proliferation, all important factors in the development of atherosclerosis and disruption of the atherosclerotic plaque .
  • the dysfunctional endothelium induces the synthesis of guimotactic and adhesion molecules for monocytes and T lymphocytes and factors that induce differentiation of monocytes to macrophages.
  • the dysfunctional endothelium promotes platelet aggregation through reduced availability of nitric oxide and promotes thrombosis through an alteration of the relationship between plasminogen activator versus its endogenous inhibitor.
  • endothelial cells from an endothelium dysfunctional they have a protombotic state characterized by an increase in the activity of the tissue factor and a decrease in the activity of protein C.
  • Atherosclerotic disease is one of the main causes of morbidity and mortality in developed countries and in our country.
  • the endothelium is the primary target of mechanical forces and humeral disorders related to cardiovascular risk factors, such as active and passive smoking, diabetes mellitus, arterial hypertension, dyslipideraia and hyperhomocysteinemia.
  • endothelial dysfunction Among the conditions associated with endothelial dysfunction are advanced age, family history of cardiovascular disease, male sex, high fat diet, high cholesterol, diabetes mellitus, high blood pressure, obesity, smoking, estrogen deficiency and elevated homocysteine.
  • Homocysteine is a substance derived from the metabolism of methionine; essential amino acid of the diet.
  • the metabolism of methionine is influenced by changes in the concentration of folates (folic acid). Pyridoxine (vitamin B6), cyanocobalamine vitamin B12).
  • Homocysteine travels in the protein-bound bloodstream via disulfide bridges, mainly 80% albumin, the remaining 20% appears in the form of oxidized homocysteine (homocysteine-homocysteine dimer, homocysteine-cysteine) and a free fraction in the form of monomers.
  • the normal homocysteine concentration is 5 to 12 ⁇ mol / L.
  • Homocysteine induces direct endothelial damage by producing peroxides that produce a denotation of endothelial cells. 2. Alters platelet adhesiveness.
  • Homocysteine activates factor XII and factor V.
  • Thrombomodulin deficit changes fibrin formation. All these events effectively change the balance of coagulant and anticoagulant substances and there is an increase in consumption of antithrombin III, which is why these substances may be diminished in the blood of patients.
  • hyperhomocysteinemia causes a decrease in the production of nitric oxide which can induce coronary spasm in these patients and the other roles of nitric oxide at the gastric cerebral level are also altered.
  • homocysteine causes thickening of vascular smooth muscle cells. 9. Decreases the production of the natural anticoagulant protein S.
  • Homocystin and cholesterol combine to produce endothelial damage.
  • Homocysteine thiolactone is a chemically reactive intermediate that is formed when homocysteine is metabolized and combined with apolipoprotein B, component of LDL cholesterol. When their sulphydryl groups oxidize, the LDL becomes denser, aggregates and precipitates spontaneously.
  • This material is taken by the phagocytic cells in the arterial wall and, when broken, cholesterol and other lipids are deposited in the arterial wall.
  • the circle is completed when homocysteine is released from degraded forms of self-oxidized LDL to form super-oxides and hydrogen peroxide, which oxidize LDL and stimulate the proliferation of smooth muscle cells.
  • This theory would demonstrate how two independent risk factors combine to initiate atherosclerotic disease.
  • q ue (1- [5-oxohexyl] -3, 7-dimethyl xanthine), known as pentoxifylline
  • a complex of pyridoxine (vitamin B6), cyanocobalamin (vitamin B12 ) and folic acid whose combination produces a synergistic effect, better tolerated, with lower adverse effects, using lower doses of pentoxifylline, than when administered independently of commonly used doses.
  • Pentoxifylline is a methylxanthine (1- [5- oxohexyl] -3,7, dimethyl-xanthine), which has effects on blood viscosity:
  • erythrocytes red blood cells and platelets.
  • FAP platelet activation factor
  • TNF tumor necrosis factor
  • PMN polymorphonuclear
  • alpha-2-macroglobulin Decrease alpha-I-antitrypsin. It has effects on connective tissue and healing processes:
  • fibroblast response to TNF Pyridoxine (vitamin 66), acts as a factor for cystatin synthetase; Cyanocobalamin (vitamin B12) regulates the pathway catalyzed by methionine synthetase.
  • Folic acid regulates the metabolic pathway catalyzed by methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR), folic acid is essential in the metabolization of homocysteine to methionine providing methyl groups for the methylation of DNA, RNA and proteins.
  • MTHFR methylenetetrahydrofolate reductase
  • Endothelial dysfunction can be evaluated through measurements of endothelial-dependent vasodilation and also by plasma markers such as endothelin 1, von Willebrand factor, thrombomedulin and monocyte adhesion molecules. However, none of them alone reflects the indemnity of the endothelial function.
  • Lis animals were distributed in 4 groups: Group i (16 in the normal diet group), Group II (16 in the hypercholesterolemic diet group supplemented with pentoxifylline administered every 8 hours), Group III (16 in the hypercholesterolemic supplemented diet group with the vitamin complex of Pyridoxine, Cyanocobalamin and folic acid administered every 12 hours) and Group IV (16 in the hypercholesterolemic diet group supplemented with the combination of pentoxifylline + Pyridoxine, Cyanocobalamin and folic acid administered every 12 hours).
  • mice that were included in the group control were fed only with standard pig feed; those of the hypercholesterolemic groups were fed with the mixture 60% standard pig feed, 30% animal tallow, 5% cholesterol and 5% ox bile powder.
  • the velocity of arterial flow (maximum instantaneous velocity and medial velocity) was recorded continuously, in a graphic recorder throughout the protocol.
  • the animals were allowed a period of equilibrium to ensure the stability of the measurements and the left internal iliac artery was selectively prefused with 4.8 ml of 5% glucose serum by the distal lumen of the doppler catheter for 2 minutes.
  • 2.5 ml of acetylcholine were injected at concentrations of ICT 5 , 10 ⁇ 5 and 10 "4 mol / 1 using one minute for each concentration.
  • 1 mg of nitroglycerin was injected by the same route. After each injection 5 minutes of rest were allowed, so that the flow velocity returned to baseline values.
  • the graphic records were digitized with a video camera and processed with the Optimal 5.2 program to obtain the average flow rate in each period. The results were expressed as a variation of the average flow rate with respect to the average baseline flow rate (in%).
  • Iliac angiographies were performed in the first intervention, after flow velocity measurements and in the second intervention, before sacrifice. 25 ml of ionic contrast was injected before the iliac bifurcation, with an automatic injector. The images were recorded on video.
  • the lesion of the endothelium was performed in the first intervention, after angiography by inflating an angioplasty balloon over the middle portions of the right internal and external iliac arteries.
  • the diameter of the balls was chosen so that the ratio of the diameter of the balloon / diameter of the arterial was greater than 1.2.
  • Three 30-second inflation was performed on each arterial, leaving about 30 seconds of rest between each inflation.
  • Video recordings of the first and last inflation of the ball were made.
  • the animals were sacrificed with a lethal endovenous injection of 80 mEq of potassium chloride.
  • the block iliac tree including the distal segment of the abdominal aorta, was pre-fused with paraformaldehyde (4% in PBS) at 4 0 C for 15 minutes, at a pressure of 100 cm of water and immersed in 500 ml of paraformaldehyde ( 4% in PBS) at 4 0 C for 4 hours.
  • the hemoglobin, hematocrit, leukocyte and platelet count, mean platelet volume and erythrocyte mean corpuscular volume values were determined with a Coulter STKS automatic counter. Lipid determinations (total cholesterol, HDL and triglycerides) were performed in serum, in a Hitachi 717 automatic analyzer.
  • Plasma PAI-I activity was determined with the amideolytic assay - chromogenic substrates. He Fibrinogen was determined by Clauss coagulative method.
  • the arteries will be cut into segments 1 cm long and included in paraffin. Histological sections of 3 ⁇ m thick were obtained and stained with hematoxylin-eosin, elastic staining of Van Gieson and Masson's trichrome.
  • Group I (383 ⁇ 22.6 mg / dl), Group II (289 ⁇ 9.3 mg / dl), Group III (323 ⁇ 19.2 mg / dl), Group IV (358 ⁇ 23.2 mg / dl) increased significantly after angioplasty (384 + 25.7 mg / dl) (p ⁇ 0.01) Group II (323 ⁇ 21.5 mg / dl) (p ⁇ 0.01), Group III (368 ⁇ 22.7 mg / dl) (p ⁇ 0.01), Group IV (398 ⁇ 24.6 mg / dl) (p ⁇ 0.01) respectively. Discussion and Conclusions
  • the pig model has a greater similarity with the human in the pathophysiology of atherosclerosis compared to other animal models such as the mouse, the rat and the rabbit.
  • the proposed objectives were: to reproduce the porcine hypercholesterolemic model, to study whether the administration of hemorrhagic substances and vitamin complexes as well as the combination of both had a synergistic effect and improved vascular endothelial dysfunction, evaluated by the lipid profile, and to observe the effect of the combination on the development of vascular lesions induced by balloon dilation.
  • the administration of the combination improved the levels of total cholesterol, LDL and raised levels of c-HDL in Group IV.
  • the variation in mean platelet volume is the same as that observed in risk groups such as diabetics, smokers and obese patients associated with a higher incidence of atherosclerosis and coronary heart disease.
  • Plasma PAI-I activity in all groups increased significantly after angioplasty.
  • the tendency for plasma levels of PM-I in Group I and IV to return to normal before the other two groups suggests that high cholesterol levels favor the establishment of a pro-coagulant state that would be returned to normal with the combination of pentaxifylline + the vitamin complex and folic acid.
  • Obliterating lower limb arteriopathy (Fontaine grade II) of atherosclerotic and / or diabetic etiology. All patients presented with low obstruction (femoral, popliteal or tibial), confirmed by the reduction or absence of peripheral palpation pulses, and the decrease in the index of systolic ankle / arm pressure determined by doppler,
  • Hemorrhaological parameters were evaluated by studying the viscoelastic characteristics of peripheral blood. Adverse effects were evaluated.
  • VST total blood viscosity
  • Total blood filterability is quantified in ⁇ l / sec and measured by passing Ice from it through 5 ⁇ diameter polycarbonate filters (Nucleopore filters) at the pressure of 20 cm of water according to Reid's model. Dormandy
  • Erythrocyte deformability is determined in the form of a stiffness index (IR) of the washed and resuspended red blood cells in phosphate buffer • PBS saline according to the technique described by the International Committee for Standardization in Hematology, its value being an absolute figure.
  • IR stiffness index
  • the aggregation of red blood cells is also expressed in absolute value with a Myrenne aggregometer by quantifying the intensity of a beam of light that passes through the blood under study corrected to a hematocrit of 45 j-2%, both in Total blood stasis (MO determination) as at low VC (MI).
  • Group i received: Pentoxifylline 400 mg every 8 hours and a vitamin complex of Vitamin B6 50 mg every 12 hours; Vitamin B12 1 mg every 12 hours and folic acid 2 mg every 12 hours for a period of 90 days,
  • Group II received Pentoxifylline 400 mg and the vitamin complex Vitamin B6 50 mg, 612 1 mg and folic acid 2 mg in a single dose unit every 12 hours for a period of 90 days.
  • I Claudication Distance :. The means of distance of appearance of pain (1) and maximum distance that patients (M) could walk at a constant speed of 1 m / sec, are shown in table 1.
  • Group I 45: The initial mean distance of initial claudication (I) of the 45 patients in the group I was 163.5 • + 64.7 m and the average value of the maximum distance they could walk (M) was 276.6 + _ 106.5 m.
  • the initial mean distance of initial claudication (1) of the 45 patients in group I was 251.2 Hr 129.9 m and the average value of the maximum distance they could walk (M) was 360.4 + 153.6 m.
  • Group II (n 45): The initial mean distance of initial claudication (I) of the 45 patients in group II was 160.5 + _ 62.8 m and the average value of the maximum distance they could walk (M) was 273.6 ⁇ 103.5 m.
  • the initial mean distance of initial claudication (I) of the 45 patients of Group Il was 251.1 + 128.5 m and the average value of the maximum distance they could walk
  • Table II shows that Group I patients had an average total blood filtration of 12.7 ⁇ l / sec before starting treatment and that value rose significantly to 17.3 ⁇ l / sec at 90 days of treatment (p ⁇ 0.001).
  • FST Average total blood filtration
  • FHL filterability of washed red blood cells
  • the average baseline homocysteine concentration was 17.4 ⁇ 1.0 ⁇ mol / L and 18.2 + 1.0 ⁇ mol / L decreasing after 90 days of treatment to 13.3
  • Total Cholesterol Level C-LDL and C-HDL. Triglycerides, Apolipoprotein-B and Fibrinogen.
  • Apolipoprotein B 145.0 ⁇ 8.0 78.2 ⁇
  • Apolipoprotein B and Fibrinogen are reported in mg / dL (p ⁇ 0.0001). Adverse events. During the study, 12 (26.6%) Group I patients presented with gastric pain with each medication intake and 4
  • red blood cells have less flexibility as seen in the results obtained with washed red blood cells (FHL).

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Abstract

La presente invención se refiere a la combinación sinérgica de (1- [5-oxohexil] -3, 7-dimetil) xantina y un complejo de Piridoxina, Cianocobalamina y ácido fólico en una sola unidad de dosis para el tratamiento de la disfunción del endotelio vascular, que mejora el flujo microcirculatorio y reduce los niveles de hiperhomocisteinemia y los niveles de lípidos para el tratamiento y prevención de enfermedades vasculares.

Description

Composición farmacéutica sinérgica que contiene pentoxifilina, vitamina B6, vitamina B 12 y ácido fólico.
CAMPO DE LA INVENCIÓN
5
La presente invención se refiere a la asociación o combinación de (1- [5-oxohexil] -3 , 7- dimetil] xantina y un complejo de Piridoxina, Cianocobalamina y ácido fólico para mejorar la función
10 del eridotelio vascular, el flujo microcirculatorio y reducir los niveles de hiperhomocisteinemia los niveles de lípidos para el tratamiento Y prevención do enfermedades vasculares. La combinación de estos principios activos produce un efecto sinérgico, cuando
15 se administran en combinación, que cuando se administran en forma independiente, con una menor dosificación de al menos uno de los compuestos, maximizando su efecto terapéutico y reduciendo el riesgo de eventos adversos .
20
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La disfunción endotelial es la alteración, primaria en las patologías vasculares; esta disfunción se define como la imposibilidad del vaso sanguíneo de aumentar su diámetro en respuesta a un estimulo conocido, ocasionado por una insuficiente generación de agentes vasodilatadores en el endotelio. En arterias sanas se observa dilatación dependiente del endotelio en respuesta a estímulos vasoactivos (isquemia, acetilcolina) mientras que en diferentes estados patológicos se ha demostrado ausencia de este efecto vasodilatador, o incluso un efecto vasoconstrictor, producto del predominio del defecto directo de acetilcolina sobre receptores muscarinicos del músculo liso subyacente.
El endotelio vascular es un tejido funcionalmente complejo, productor de múltiples agentes que actúan en forma endocrina, paracrina y autocrina que afectan la vasoregulación proliferación de células del músculo liso vascular agregación plaquetaria y adhesión de monocitos.
La vasoregulación ocurre como resultado de un equilibrio entre la liberación de factores relaj adores y constrictores .
El factor relaj ador predominante es NO (óxido nítrico) , sintetizado desde L-arginina a través del sistema de enzimas conocido como óxido nítrico (NOS) que convierte L-arginina y oxigeno en NO y L-citrulina. Se distinguen tres isoformas de NOS, dos de ellas constitutivas, que se expresan en diferentes tejidos en condiciones fisiológicas o patológicas y son dependientes de calcio, la endotelial (eNOS) y la neural (nNOS) ; la isoforma inducible (iNOS) está presente en macrófagos y células inflamatorias . Fisiológicamente, la isoforma inducible se expresa en muy bajas concentraciones y su transcripción puede ser inducida como interleukina-1, factor de necrosis tumoral y factores de crecimiento.
Los estímulos que activan la eNOS incluyen trombina, ADP, bradicinina, sustancia P, agonistas muscarínicos, roce tangencial y corriente circular.
El aumento de actividad de eNOS producto del roce tangencial de la sangre contra la capa endotelial (shear stress) , contribuye a la vasodilatación mediada por flujo, un importante mecanismo de autorregulación por el cual aumenta el flujo sanguíneo en respuesta al ejercicio . Una vez producido el NO difunde desde la célula endotelial al músculo liso subyacente, en el que activa el sistema enzimático de guanilato ciclasa soluble, que al unirse a NO aumenta la concentración de GMPc, responsable final de los efectos celulares inducidos por NO.
El GMPc genera disminución en la concentración de calcio intracelular, a través de activación de proteínas kinasas sensibles a GMPc que fosforilan proteínas claves como canales iónicos, bombas y enzimas que llevan a la relajación del músculo liso subyacente.
De este modo la vía NO - GMPc es la mediadora de los efectos relaj adores de muchas hormonas, incluyendo histamina, nitro-vasodilatadores, acetilcolina, estrógenos, isoproterenol e insulina.
Existen otros factores de relajación que incluyen a prostaciclina y al factor hiperpolarizante
(cuya estructura es desconocida) , que son antagonizados por factores constrictores también liberados por el endotelio tales como endotelina-1, tromboxano y prostaglandina H2. Además de su rol vasodilatador, el NO (entre otras funciones) es un inhibidor de crecimiento y migración celular, de la expresión de moléculas pro- inflamatorias y de adhesión. Por este motivo, el endotelio normal tiene funciones anti-trombóticas y anti-ateroescleróticas , inhibe la agregación plaquetaria, la adhesión de monocitos y la proliferación del músculo liso vascular, todos factores de importancia en el desarrollo de la ateroesclerosis y disrupción de la placa ateroesclerótica.
Por el contrario, el endotelio disfuncional se induce la síntesis de moléculas guimiotácticas y de adhesión para monocitos y linfocitos T y de factores que inducen diferenciación de monocitos a macrófagos . El endotelio disfuncional promueve la agregación plaquetaria a través de una menor disponibilidad de óxido nítrico y favorece la trombosis a través de una alteración de la relación entre activador del plasminógeno versus su inhibidor endógeno.
Estudios in vitro han evidenciado que las células endoteliales provenientes de un endotelio disfuncional, presentan un estado protombótico caracterizado por un aumento de la actividad del factor tisular y disminución de la actividad de proteina C.
Modelos experimentales de ateroesclerosis han demostrado una relación inversa entre disponibilidad del óxido nítrico y aparición de la enfermedad. La disminución experimental de la disponibilidad de óxido nítrico a través, de un inhibidor de NOS aumenta el desarrollo de ateroesclerosis, mientras que el aumento de la disponibilidad de L-arginina, disminuye su desarrollo. Esto sugiere un importante rol del endotelio en la patogenia de la ateroesclerosis.
La enfermedad ateroesclerótica es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en los países desarrollados y en nuestro país.
En los últimos años, el conocimiento de su patogenia ha aumentado en especial en lo que se refiere al rol del endotelio en la homeostasis vascular.
Dada su localización, el endotelio es blanco primario de las fuerzas mecánicas y de las alteraciones humerales relacionadas con los factores de riesgo cardiovascular, como el tabaquismo activo y pasivo, diabetes mellitus, hipertensión arterial, dislipideraia e hiperhomocisteinemia.
Estos factores de riesgo condicionan una alteración de las funciones normales del endotelio, favoreciendo la vasoconstricción, agregación plaquetaria y trombosis, aumento de la permeabilidad, adhesión y proliferación celular; condiciones que llevarán finalmente a la formación de la placa ateroesclerótica y a su trombosis y/o ruptura. Se ha demostrado que la disfunción endotelial, tanto en la arteria braquial como en las coronarias se asocia a la presencia de los factores de riesgo cardiovascular reconocidos, aun cuando no exista evidencia demostrable de ateroesclerosis . Esto sugiere que esta condición ocurre precozmente en el proceso de la enfermedad cardiovascular y que representa una anormalidad sistémica del endotelio. Mas aún en pacientes con enfermedad ateroescierótica demostrada y/o disfunción endotelial, existe reducción de eventos clínicos adversos y reversión del proceso de disfunción del endotelio con intervenciones terapéuticas sobre diferentes factores de riesgo cardiovascular.
Dentro de las condiciones asociadas a disfunción endotelial se encuentra la edad avanzada, historia familiar de enfermedad cardiovascular, sexo masculino, alimentación de alto contenido graso, colesterol elevado, diabetes mellitus, hipertensión arterial, obesidad, tabaquismo, deficiencia de estrógenos y homocisteína elevada.
La homocisteína es una sustancia derivada del metabolismo de la metionina; aminoácido esencial de la dieta.
El metabolismo de la metionina, es influenciado por alteraciones en la concentración de folatos (ácido fólico) . Piridoxina (vitamina B6) , cianocobalamína vitamina B12) .
La homocisteína viaja en el torrente sanguíneo unida a proteínas por puentes disulfuro, principalmente a la albúmina en un porcentaje del 80%, el restante 20% aparece en forma de homocisteína oxidada (dímero de homocisteína-homocisteína, homocisteína-cisteína) y una fracción libre en forma de monómeros . La concentración normal de homocisteína es de 5 a 12 μmol/L.
Los mecanismos por los cuales la homocisteína produce arterioesclerosis y eventos, trombóticos están bien estudiados.
Mecanismos posibles de daño endotelial;
1. La homocisteína induce daño endotelial directo por producir peróxidos que producen una denudación de las células endoteliales . 2. Altera la adhesividad plaquetaria.
3. La homocisteína activa el factor XII y el factor V.
4. Elevadas concentraciones de homocisteína inhiben la trombomodulina. 5. A causa de la unión de trombina a trombomodulina cambia la formación del anticoagulante proteína C e inhibe la activación de trombina con fibrinógeno .
6. El déficit de trombomodulina cambia la formación de fibrina. Todos estos eventos efectivamente cambian el balance de sustancias coagulantes y anticoagulantes y se produce un aumento en el consumo de antitrombina III, razón por la cual estas sustancias pueden encontrarse disminuidas en la sangre de los pacientes .
7. A nivel de endotelio, la hiperhomocisteinemia produce una disminución en la producción de óxido nitrico lo que puede inducir espasmo coronario en estos pacientes y se alteran también los otros papeles del óxido nítrico a nivel cerebral gástrico. 8. Además la homocisteína produce engrosamiento de las células del músculo liso vascular. 9. Disminuye la producción de la proteína S anticoagulante natural.
Corno se ha descrito, el principal mecanismo por el cual la homocisteína ejerce su efecto ateroesclerótico es mediante el estrés oxidativo. Como consecuencia del proceso de auto-oxidación de la homocisteína se genera superóxido y peróxido de hidrógeno, ambos relacionados con el proceso de daño endotelial.
Asimismo se he observado que la generación de radicales libres incrementa la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad y por lo tanto su captación por parte de los macrófagos en la pared vascular. La lipoproteína cambia también su estructura y aumenta su afinidad por la fibrina. La hiperhomocisteinemia previene la dilatación de las pequeñas arterias, pues disminuye la producción de óxido nítrico por lo que se hace más vulnerable a la obstrucción por coágulos o placas.
La homocísteína y el colesterol (la fracción LDL) se combinan para producir daño endotelial. La homocisteína tiolactona es un intermediario químicamente reactivo que se forma cuando la homocisteína se metaboliza y se combina con la apolipoproteína B, componente de la LDL colesterol. Cuando sus grupos sulfidrilos se oxidan, la LDL se vuelve más densa, se agrega y precipita espontáneamente .
Este material es tomado por las células fagocíticas en la pared arterial y, cuando se rompe, el colesterol y otros llpidos se depositan en la pared arterial. El círculo se completa cuando la homocisteína se libera de las formas degradadas de LDL autooxídadas para formar superδxidos y peróxido de hidrógeno, los cuales oxidan el LDL y estimulan la proliferación de células musculares lisas. Esta teoría demostraría cómo dos factores de riesgo independientes se combinan para iniciar la enfermedad arterioesclerótica.
Los tratamientos actuales de esta condición, se enfocan al uso de antiagregantes plaquetarios, en asociación con algunas otras sustancias que reduzcan las condiciones asociadas a esta patología, sin embargo, dentro de los antiagregantes plaquetarios el más utilizado es la aspirina, pero su actividad es sólo a cierto nivel y puede ser utilizado en forma preventiva, otro antiagregante es el clopidogrel, pero por su actividad, es utilizado una vez que los pacientes hubieran sufrido alguna patología isquémica y no se recomienda en sujetos susceptibles de patología isquémica en forma rutinaria.
Ante esta problemática, investigamos sustancias que favorecieran y mejoraran la disfunción endotelíal, que tuvieran una actividad sinérgica terapéutica, que redujeran el riesgo de efectos adversos, que pudieran ser utilizadas por una basta mayoría de pacientes con. disfunción endotelial.
Dentro de estas sustancias investigamos la (1- [5-oxohexil] -3, 7,dimetil-xantina) , derivada de la teobromina y conocida como Pentoxifilina. Esta droga tiene una actividad hemoreológica que influye sobre los cambios fisiopatológicos que conducen a la situación isquémica; disminuye la viscosidad sanguínea, inhibe la agregación plaquetaria, aumenta la flexibilidad eritrocitaria y diminuye la concentración de fibrinógeno; se ha utilizado a dosis de 400 mg cada 8 horas, sin embargo se ha encontrado que a dosis mayores puede producir vasodilatación severa.
Por otra parte, revisamos que la Piridoxina (vitamina B6) , la cianocobalamina (vitamina B12) y el ácido fólico son co-factores de las enzimas metionina sintetasa, 5-metil-tetradidrofolato-homocisteína-s- metil-transfersa y cistationina β sintetasa, incrementan el catabolismo de la homocisteína plasmática y reducen los niveles de lípidos. Una vez que revisamos la fisiopatología de las alteraciones isquémicas así como los factores que influyen en estas alteraciones como la homocisteína los lípidos y los tratamientos actuales; realizamos diferentes pruebas utilizando la (1- [5-oxohexil] - 3 , 7 , dimetil-xantina) , un complejo de Piridoxina (vitamina B6) , cianocobalamina (vitamina B12) y ácido fólico y la combinación de ambas con menores dosis de la (1- [5-oxohetil] -3 , 7 , dimetil-xantina) , en una sola unidad de dosis, para administración oral, demostrando que, dosis menores de (1- [5-oxohetil] -3 , 7, dimetil- xantina) , en combinación con el complejo de Piridoxina (vitamina B6) , cianocobalamina (vitamina B12) y ácido fólico, producen un efecto sinérgico, con una mayor eficacia y menores efectos adversos, especialmente se reduce el daño endotelial y las condiciones asociadas a éste.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DB LA INVENCIÓN
De acuerdo a la presente invención, realizamos la combinación farmacológica que comprende la (1- [5-oxohexil] -3, 7, dimetil-xantina) , conocida como Pentoxifilina y un complejo de Piridoxina (vitamina B6) , cianocobalamina (vitamina B12) y ácido fólico, cuya combinación produce un efecto sinérgico, mejor tolerado, con menores efectos adversos, utilizando menores dosis de la pentoxifilina, que cuando se administran en forma independiente a las dosis comúnmente utilizadas. La pentoxifilina es una metilxantina (1- [5- oxohexil] -3 , 7 , dimetil-xantina) , que tiene efectos sobre la viscosidad sanguínea:
- Aumenta la deformabilidad del eritrocito (hematíe) dentro de la microcirculación. - Inhibe la constricción microvascular .
Inhibe la agregación de eritrocitos (hematíes y plaquetas.
- Estimula la fibrinolisis .
Disminuye los niveles plasmáticos de fibrinógeno.
- Suprime la hiperreactividad del leucocito por aumento de la deformabilidad del leucocito, disminución de adhesión y liberación de superóxidos . y efecto sobre el factor de activación plaquetaria (PAF) . Tiene efectos inmunológícos :
- Disminuye la adherencia y agregación de neutrófilos, sin afectar fagocitosis. - Aumenta la movilidad y quimiotaxis del PMN.
- Aumenta la fagocitosis.
- Bloquea los efectos del factor de necrosis tumoral (FNT) en la adherencia de polimorfonucleares (PMN) al endotelio vascular.
- Disminuye la respuesta del leucocito a la IL-I.
Inhibe la producción de FNT por lo monocitos . - Bloquea los efectos tóxicos director de FNT en las células endoteliales .
Tiene efectos sobre coagulación y fibrinolisis :
- Disminuye la agregación plaquetaria. - Disminuye la adhesión plaquetaria.
- Disminuye el factor de Von Willebrand.
- Aumenta el plasminógeno tisular.
- Aumenta la plasmina.
- Aumenta la antitrombina III. - Disminuye alfa-2-antiplasmina.
Disminuye alfa-2-macroglobulina. Disminuye alfa-I-antitripsina. Tiene efectos en tejido conectivo y procesos de cicatrización:
- Aumenta la actividad de las colagenasas .
- Disminuye el colágeno de los fibroblastos. - Disminuye la fibronectina del fibroblasto.
Disminuye los glicosaminoglicanos del fibroblasto .
- Disminuye la respuesta del fibroblasto al FNT. La piridoxina (vitamina 66) , actúa como co- factor para la cístationina sintetasa; la cianocobalamina (vitamina B12) regula la vía catalizada por la metionina sintetasa. El ácido fólico regula la vía metabólica catalizada por la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) , el ácido fólico es imprescindible en la metabolización de la homocisteína a metionina proveyendo grupos metilos para la metilación del DNA, RNA y proteínas .
La combinación de vitamina B6, B12 y ácido fólico produce:
- Reducción de niveles de homocisteína.
- Reducción de producción de peróxidos . - Reducción de la adhesividad plaquetaria.
Reducción de la inhibición de trombomodulina .
Produce un balance entre sustancias coagulantes y anticoagulantes .
- Aumenta la producción de óxido nítrico.
- Reduce el engrosamiento de las células del músculo liso vascular.
Aumenta la producción de la proteína S anticoagulante natural.
La disfunción endotelial puede ser evaluada a través de mediciones de vasodilatación dependiente de endotelio y también por marcadores plasmáticos como endotelina 1, factor von Willebrand, trombomedulina y moléculas de adhesión de monocitos. Sin embargo, ninguno de ellos por sí solo logra reflejar la indemnidad de la función endotelial.
Hasta ahora la evaluación más eficaz de la función endotelial se logra a través de la respuesta vasodilatadora a un estímulo farmacológico o mecánico como el roce provocado por un aumento de flujo sanguíneo constituye un estímulo mecánico de la vasodilataciδn a través de la liberación de óxido nítrico .
Ejemplo 1:
Realizamos un estudio experimental en un modelo porcino porque ha sido ampliamente aceptado que los cerdos poseen un sistema cardiovascular (particularmente una circulación coronaria) muy similar a la de los humanos y las adaptaciones crónicas de la circulación coronaria porcina en modelos experimentales de CAD (enfermedad arterial coronaria) son similares a los pacientes con CAD.
Materiales y Métodos:
Se utilizaron 64 cerdos miniatura de la raza Yucatán. Los animales incluidos en el estudio experimental tenían 4 meses de edad los cuales se mantuvieron aislados, se les administró agua a libertad y tuvieron periodos artificiales de luz y oscuridad de 12 horas . Después de un periodo de adaptación de 3 días, a cada animal se le extrajo 40 mi de sangre para realizar las determinaciones analíticas básales, mediante punción percutánea de la vena femoral o yugular. El cuidado y manejo de los animales se realizó siguiendo el Real Decreto 223/1988 del Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación y en la Directiva 86/609 del Consejo de Europa sobre protección de animales utilizados para experimentación y otros fines científicos (BOE, 1988; DOCE, 1986) .
Diseño experimental:
Lis animales se distribuyeron en 4 grupos: Grupo i (16 en el grupo de dieta normal) , Grupo II (16 en el grupo de dieta hipercolesterolémica suplementada con pentoxifilina administrada cada 8 horas) , Grupo III (16 en el grupo de dieta hipercolesterolémica suplementada con el complejo vitamínico de Piridoxina, Cianocobalamina y ácido fólico administrados cada 12 horas) y Grupo IV (16 en el grupo de dieta hipercolesterolémica suplementada con la combinación de pentoxifilina + Piridoxina, Cianocobalamina y ácido fólico administrados cada 12 horas) .
Los animales que se incluyeron en el grupo control se alimentaron únicamente con pienso porcino estándar; los de los grupos hipercolesterolémicos se alimentaron con la mezcla 60% de pienso porcino estándar, 30% de sebo animal, 5% de colesterol y 5% de bilis de buey polvo.
A todos los animales se les practicó una intervención tras 4 semanas de dieta.
Protocolo experimental: Cada animal se mantuvo en ayunas, con agua en libertad 24 horas previas a la intervención. Después de sedarlo se canalizaron la vena yugular (interna o externa) y la arteria carótida derechas . Después de la extracción de sangre arterial para las determinaciones analíticas se canalizó la arteria ilíaca interna izquierda con un catéter Judkins 7F. Utilizando una guía de angioplastía de 0.014*, se avanzó un catéter Doppler 3F de 20 MHz conectado a un velocímetro doppler y se colocó a unos 2 ó 3 cm del extremo distal del catéter guía, en una zona de la arteria ilíaca interna izquierda sin ramificaciones. El catéter guía se retiró después a la aorta descendente. La velocidad del flujo arterial (velocidad máxima instantánea y velocidad medial) se registró de forma continua, en un registrador gráfico a lo largo de todo el protocolo. Se permitió a los animales un periodo de equilibrio para asegurar la estabilidad de las medidas y se prefundió selectivamente la arteria ilíaca interna izquierda con 4.8 mi de suero glucosado al 5% por el lumen distal del catéter doppler durante 2 minutos.. De forma similar se inyectaron 2.5 mi de acetilcolina a concentraciones de ICT5, 10~5 y 10"4 mol/1 empleando un minuto para cada concentración. Al final de las inyecciones de acetilcolina se inyectó 1 mg de nitroglicerina por la misma vía. Después de cada inyección se dejaban 5 minutos de reposo, para que la velocidad del flujo retornase a los valores básales.
Los registros gráficos se digitalizaron con una cámara de video y se procesaron con el programa Óptimas 5.2 para obtener la velocidad media de flujo en cada periodo. Los resultados se expresaron como variación de la velocidad media de flujo respecto a la velocidad media del flujo basal (en %) . Angiografía y angioplastía
Se realizaron angiografías ilíacas en la primera intervención, después de las mediciones de velocidad de flujo y en la segunda intervención, antes del sacrificio. Se inyectaron 25 mi de contraste iónico antes de la bifurcación ilíaca, con un inyector automático. Las imágenes se registraron en video.
La lesión del endotelio se realizó en la primera intervención, después de la angiografía mediante el inflado de un balón de angioplastía sobre las porciones medias de las arterias ilíacas interna y externa derechas . El diámetro de los balones se escogió de forma que la relación diámetro del balón/diámetro de la arterial fuera superior a 1.2. Se realizaron 3 inflados de 30 segundos en cada arterial, dejando unos 30 segundos de reposo entre cada inflado. Se realizaron grabaciones en video del primer y del último inflado del balón. Los animales se sacrificaron con una inyección letal endovenosa de 80 mEq de cloruro potásico. Se realizó una laparotomía media y se extrajo el árbol ilíaco en bloque, incluido el segmento distal de la aorta abdominal, se prefundió con paraformaldehído (4% en PBS) a 40C durante 15 minutos, a una presión de 100 cm de agua y se sumergió en 500 mi de paraformaldehído (4% en PBS) a 40C durante 4 horas.
Los valores de hemoglobina, hematocrito, recuento leucocitario y plaquetar, volumen plaquetar medio y volumen corpuscular medio eritrocitario se determinaron con un contador automático Coulter STKS. Las determinaciones de lípidos (colesterol total, HDL y triglicéridos) se realizaron en suero, en un analizador automático Hitachi 717.
El cálculo del colesterol asociado a LDL (c- LDL) se realizó mediante la fórmula de Friedewald modificada de acuerdo con la relación masa de colesterol/masa de triglicéridos de las proteínas de muy baja densidad
(c-VLDL) porcinas 8:1 c-LDL. (mg/100 mi) =colesterol total (c-HDL+triglicéridos 8) ,
La actividad PAI-I plasmática se determinó con el ensayo amidolítico- sustratos cromogénicos . El fibrinδgeno se determinó por el método coagulativo de Clauss .
Después de disecar el árbol ilíaco en bloque, incluyendo el segmento distal de la aorta abdominal, se prefundiδ con paraformaldehído (4% en PBS) a 40C durante 15 minutos a una presión de 100 cm de agua y se sumergió en 500 mi de paraformaldehído (4% en PBS) a 40C durante 4 horas.
Las arterias se cortaran en segmentos de 1 cm de largo y se incluyeron en parafina. Se obtuvieron cortes histológicos de 3 μm de grosor y se tiñeron con hematoxilina-eosina, tinción de elásticas de Van Gieson y tricrómico de Masson.
Resultados
La edad media de los animales al llegar al laboratorio fue de 4 meses. De los 64 animales que comenzaron el estudio todos los supervivientes aumentaron de peso de forma significativa. El incremento fue constante sin encontrar diferencias estadísticamente significativas entre los grupos de animales. A continuación se presenta la tabla con las observaciones básales y les evaluaciones después de la primera intervención y posterior al sacrificio por grupos
Figure imgf000027_0001
Perfil de Lípidos
En el Grupo I (control) no se observaron variaciones en la concentración plasmática de las fracciones lipídicas a lo largo del estudio y mostró valores semejantes a las determinaciones básales (anexo tablas de colesterol total c-LDL, c-HDL) .
Velocidad de flujo arterial La respuesta vasomotora de la Arteria ilíaca interna izquierda en el Grupo II, III se encontró significativamente disminuida respecto al Grupo I y IV para las tres concentraciones de Acetilcolina. El Grupo IV presentó una respuesta de vasodilataciδn frente a la acetilcolina similar a la del Grupo I siendo estadísticamente significativa. La respuesta vasomotora a la nitroglicerina, que es independiente del endotelio, fue similar en los tres grupos.
PAI-I y Fibrinógeno
La actividad PAI-I plasmática en el Grupo I (29.3 ¿ 0.7 U/ml) , el Grupo III (26.0 + 0.8 U/ml) , el
Grupo IV (28.0 ± 0.7 U/ml) se incrementó significativamente después de la angioplastia. 36.3 ±
1.3 U/ml (p<0.01), 36.7 ± 1.2 U/ml), (p<0.01), 32.3 ±
1.4 U/ml (p<0.01) y 37.5 ± 1.5 U/ml (p<0.01). La cantidad de fibrinógeno plasmático en el
Grupo I (383 ± 22.6 mg/dl) , Grupo II (289 ± 9.3 mg/dl) , Grupo III (323 ± 19.2 mg/dl), Grupo IV (358 ± 23.2 mg/dl) se incrementó significativamente después de la angioplastia (384 + 25.7 mg/dl) (p<0.01) Grupo II (323 ± 21.5 mg/dl) (p<0.01), Grupo III (368 ± 22.7 mg/dl) (p<0.01), Grupo IV (398 ± 24.6 mg/dl) (p<0.01) respectivamente . Discusión y conclusiones
Como se comentó anteriormente el modelo porcino tiene una mayor similitud con el humano en la fisiopatologla de la ateroesclerosis en comparación con otros modelos animales como el ratón, la rata y el conejo.
Los objetivos propuestos fueron: reproducir el modelo hipercolesterolémico porcino, estudiar si la administración de sustancias hemorreológicas y complejos vitamínicos así como la combinación de ambos tuviera un efecto sinérgico y mejorara la disfunción del endotelio vascular, evaluado por el perfil lipídico, y observar el efecto de la combinación sobre el desarrollo de lesiones vasculares inducidas por dilatación con balón.
Al observar los perfiles lipidióos plasmáticos confirman la obtención de un buen modelo de hipercolesterolemia porcina. La administración de la dieta hipercolesterolémica, similar a otras descritas en la literatura, se tradujo en un incremento significativo de los niveles plasmáticos de colesterol total y sus fracciones . Las concentraciones alcanzadas resultan semejantes a las que se observan en la hipercolesterolemia humana moderada.
La administración de la combinación mejoró los niveles de colesterol total, LDL y elevo los niveles de c-HDL en el Grupo IV.
La variación en el volumen plaquetar medio es igual al observado en grupos de riesgo como diabéticos, fumadores y obesos asociados con una mayor incidencia de ateroesclerosis y enfermedad coronaria.
La actividad PAI-I plasmática en todos los grupos se incrementó significativamente después de la angioplastía. La tendencia a que los niveles plasmáticos de PM-I en el Grupo I y IV retornen a la normalidad antes que los otros dos grupos sugiere que los niveles altos de colesterol favorecen el establecimiento de un estado pro-coagulante que sería devuelto a la normalidad con la combinación de pentaxifilina + el complejo vitamínico y el ácido fólico.
La reducción de la vasodilatación frente a las distintas concentraciones de acetilcotina en el Grupo IV confirma la existencia de una disfunciδn endotelial en la arteria iliaca interna de los animales hipercolesterolémicos, que se revierte completamente con la combinación administrada en el Grupo IV.
Ejemplo 2
Materiales y métodos
Realizamos un estudio clínico que envolvió a 90 pacientes del sexo masculino o femenino con edades entre los 45 y les 85 años (media de 67) con los siguientes criterios de inclusión;
Arteriopatía obliterante de miembros inferiores (grado II de Fontaine) de etiología arterioesclerosa y/o diabética. Todos los pacientes presentaban obstrucción baja (femoral, poplítea o tibial) , confirmada por la reducción o ausencia de pulsos periféricos a la palpación, y la disminución en el índice de presión sistólica tobillo/brazo determinada mediante el doppler,
Elevación de los niveles de homocisteína, por arriba de 12 μmol/L. Elevación de colesterol total > 200 mg/dL
Elevación de LDL > 130 mg/dL.
Elevación de triglicéridos > 200 mg/dL
Reducción de colesterol HDL < 30 mg/dL Elevación de apolipoproteina 8 > 125 mg/dL
Elevación de fibrinógeno > 365 mg/dL.
Se evaluaron los parámetros hemorreológicos mediante estudio de las características viscoelásticas de sangre periférica. Fueron evaluados los efectos adversos .
La determinación de la viscosidad en sangre total (VST) se evaluó en centipoise (cps) a velocidades de cizallamiento (VD) de 230, 23 y 2.3 seg y 37°C me- diante un viscosímetro conoplast modelo WeIl-
Brookfield.
La filtrabilidad de sangre total (FST) se cuantifica en μl/seg y se midió haciendo pasar Ice de ésta a través de filtros de policarbonato de 5μ de diámetro (Nucleopore filters) a la presión de 20 cm de agua según el modelo de Reid-Dormandy .
La deformabilidad eritrocitaria (DE) se determinó en forma de índice de rigidez (IR) de los hematíes lavados y resuspendidos en tampón fosfato • salino PBS según la técnica descrita por el Comité Internacional de Estandarización en Hematología, siendo su valor una cifra absoluta.
La agregabilidad de los hematíes (AE) se expresa igualmente en forma de valor absoluto con un agregómetro de Myrenne por cuantificación de la intensidad de un haz de luz que atraviesa la sangre a estudio corregida a un hematocríto de 45 j- 2%, tanto en estasis sanguínea total (determinación MO) como a baja VC (MI) .
En ambos estados el valor de la AE viene determinado por una cifra absoluta, carente de unidades.
Los pacientes no tomaron medicamentos con actividad hemorreológica desde 15 días antes de iniciar el estudio (periodo de lavado) . El estudio tuvo un seguimiento de 3 meses . Los pacientes fueron divididos en 2 grupos de estudio en forma aleatoria y se les administró el tratamiento durante 90 días: Se tornaron muestras basabas y al final del estudio
El Grupo i: recibió: Pentoxifilina 400 mg cada 8 horas y un complejo vitamínico de Vitamina B6 50 mg cada 12 horas; Vitamina B12 1 mg cada 12 horas y ácido fólico 2 mg cada 12 horas por un periodo de 90 días,
El Grupo II: recibió Pentoxifilina 400 mg y el complejo vitamínico de Vitamina B6 50 mg, 612 1 mg y ácido fólico 2 mg en una sola unidad de dosis cada 12 horas por un período de 90 días.
Resultados
I: Distancia de Claudicación:. Las medias de distancia de aparición del dolor (1) y de distancia máxima que pudieron caminar los pacientes (M) a una velocidad constante de 1 m/seg, se indican en la tabla 1.
En la tabla los pacientes aparecen divididos en 2 grupos (Grupo I y Grupo II) .
Grupo I (n=45) : La distancia media inicial de claudicación inicial (I) de las 45 pacientes del grupo I fue de 163.5 •+ 64,7 m y el valor medio de la distancia máxima que podían caminar (M) fue de 276.6 +_ 106.5 m.
A los 90 días de tratamiento la distancia media inicial de claudicación inicial (1) de los 45 pacientes del grupo I fue de 251.2 Hr 129.9 m y el valor medio de la distancia máxima que podían caminar (M) fue de 360.4 + 153.6 m.
Grupo II (n=45) : La distancia media inicial de claudicación inicial (I) de los 45 pacientes del grupo II fue de 160.5 +_ 62.8 m y el valor medio de la distancia máxima que podían caminar (M) fue de 273.6 ± 103.5 m.
A los 90 días de tratamiento la distancia media inicial de claudicación inicial (I) de los 45 pacientes del Grupo Il fue de 251.1 + 128.5 m y el valor medio de la distancia máxima que podían caminar
(M) fue de 364.9 156.9m Estos incrementos son estadísticamente significativos (p<0.05) comparando un grupo con otro. Tabla 1
Grupos de pacientes Basal 90 días
Grupo I (n=45) Inicial 163.5 251.2 (64.7) (129.9)
Máximo 276.6 360.4 (62.8) (129.9)
Grupo II (n=45) Inicial 160.5 251.1 (62.8) (1218.5;
Máximo 273.6 364.9 (103.5) (156.9)
(1) Inicial (distancia media inicial de claudicación) . (M) Máxima (valor medio de la distancia máxima que podían caminar)
Filtrabilidad de sangre total y de hematíes lavados.
Los valores medios de la filtrabilidad de sangre total (FST) y de hematíes lavados (FHL) expresados en sea se indican en la tabla II,
La Tabla II muestra que los pacientes del Grupo I presentaban una filtración media de sangre total de 12.7 μl/seg antes de iniciar el tratamiento y dicho valor se elevó significativamente a 17.3 μl/seg a los 90 días de tratamiento (p<0.001).
Esta mejoría de la filtrabilidad de sangre total se acompañó de la mejor deformabilidad intrínseca del hematíe ya que la FHL cambio de 41.2 a 49.4 μl/seg (p<0.001)
Los pacientes del Grupo II presentaban una filtración media de sangre total de 11.6 μl/seg antes de iniciar el tratamiento y dicho valor se elevó significativamente a 18.5 μl/seg a los 90 días de tratamiento (p<0.001).
Esta mejoría de la filtrabilidad de sangre total se acompañó de la mejor deformabilidad intrínseca del hematíe ya que la FHL cambió de 39.9 a 52.3 μl/seg (p<0.001)
Tabla II
Grupo de Pacientes Basal 90 días Grupo I(n=45) FST 12.7 17.3
(1,3) (2.0)
FHL 41.2 49.4
(7.5) (7.9)
Grupo II (n=45) FST 11.6 18.5 (1.01) (3.1)
FHL 39.9 52.3
(7.1) (8.4)
FST (Filtración media de sangre total) FHL (filtrabilidad de hematíes lavados) .
Valor medio y desvío estándar (indicado entre paréntesis) del número de leucocitos (L) y concentración de fibrinógeno (F) del estudio.
La concentración basal promedio de Homocisteína fue de 17.4 ± 1.0 μmol/L y 18.2 + 1.0 μmol/L disminuyendo a los 90 días de tratamiento a 13.3
+ 1.2 μmol/L y 8.5 + 0.9 μmol/L en los grupos y II respectivamente (Tabla 111) .
Tabla III Niveles de Homocisteína μmol/L X + DS
Grupo I Homocisteína Basal 90 días
17.4 ± 1.0 13.3 + 1.2
Grupo II 18.2 + 1.0 8.5 + 0.9
Las cifras muestran promedios (X) + DS = desviación estándar P<0.001 para la diferencia entre grupos de 0 a
120 días.
Tabla IV
Nivel de Colesterol Total, C-LDL y C-HDL. Triglicéridos, Apolipoproteína-B y Fibrinógeno .
Grupo I Niveles Básales 90 días
Colesterol total. 248.5 ± 38.1 217.3 ±
35.5
C-LDL 151.3 ± 22.5 135.6 ±-29.1
C-HDL 25.2 + 4.0 32 0 ±
3.0
Triglicéridos 400.0 ± 66.2 300.3 ±
56.4 Apolipoproteína B 145.0 ± 8.0 78.2 ±
6.0
Fibrinδgeno 372.0 ± 3.0 345.2 ±
3.0
Grupo Il Niveles Básales 90 días
Colesterol total 256.6 ± 13.7 178.3 ± 9.2
C-LDL 153.4 ± 24.2 104.2 ±
10.3
C-HDL. 24.6 ± 1.4 35.1 ± 4.0
Triglicéridos 398.2 + 27.3 187.8 ±
22.1
Apolipoproteína B 143.2 + 7.0 38.5 ±
1.0 Fibrinógeno 374.2 ± 1.0 195.0 +
2.0
Colesterol total, c-LDL, c-HDL, triglicéridos,
Apolipoproteína B y Fibrinógeno están reportados en mg/dL (p<0.0001) . Eventos adversos. Fueron reportados durante el estudio 12 (26.6%) pacientes del Grupo I presentaron dolor gástrico con cada ingesta del medicamento y 4
(8.8%) de ellos mostraron hipotensión ortostática severa; pero en ninguno de los casos fue necesario suspender el tratamiento.
Discusión y conclusiones Como se puede observar los resultados en ambos grupos fueron de mejoría estadísticamente significativa desde el periodo basal a los 90 días de tratamiento; sin embargo, las diferencias entre el Grupo I y 11 también fueron estadísticamente significativas; lo cual nos muestra que estas sustancias en combinación muestran un efecto sinérgico.
De acuerdo a los resultados, es evidente el compromiso hemorreológico en pacientes con claudicación intermitente grado 11 de Fontaine, por los datos básales mostrados de FST como de FHL que se encontraron reducidos en ambos grupos de estudio, antes de iniciar el tratamiento. La disminución de la FST podría atribuirse a la menor deformabilidad del hematíe como a la mayor concentración del fibrinógeno.
Algunos autores, atribuyen la menor filtrabilídad de sangre total en estos enfermos a la leucocitosis e hiperfibrínogenemia concomitante.
Es fácil deducir que el aumento de fibrinógeno podría contribuir a la menor filtrabilidad en sangre total así como, los hematíes presentan una menor flexibilidad tal como se observa en los resultados obtenidos con hematíes lavados (FHL) .
La mejoría de la filtrabilidad sanguínea en ambos grupos sugiere un efecto directo de la pentoxifilina sobre la flexibilidad eritrocítaria; sin embargo, fue mas marcada en el grupo de la combinación en una sola unidad de dosis: esto puede ser debido a un efecto directo tanto de la pentoxifilina en las arteriolas como el efecto de las vitaminas B6 y B12 como el ácido fólico sobre la homocisteína en el endotelio vascular.
La reducción marcada en el Grupo II en relación con la homocisteína, colesterol total, L-LDL, triglicéridos , Apalipoproteina B y fibrinógeno, así como, el incremento en el c-HDL abre un camino para el tratamiento de estos pacientes, ya que muestra un efecto sinérgico con menor riesgo de eventos adversos, sin la necesidad de incrementar las dosis de la pentoxifilina.
Resulta de vital importancia disminuir los niveles de homocisteína circulante en plasma, así como el mejoramiento de la microcirculaciδn, ya que existe una relación directa entre los altos niveles de homocisteína y los lípidos con la enfermedad arterial y en especial en la microcirculación. Podemos inferir que el uso de esta combinación en una sola unidad de dosis no solo disminuye les niveles de homocisteína plasmática, sino que incrementa el equilibrio entre los procesos de síntesis y degradación de las moléculas para la reproducción celular y sobre la microcirculación.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓNHabiendo descrito la presente invención, se considera como novedad y, por lo tanto, se relaciona como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :REIVINDICACIONES
1. Una composición farmacéutica sinérgica caracterizada porque contiene la combinación de (1- [5-oxohexil] -3 , 7-dimetil) — xantina y un complejo de vitaminas como vitamina B6, vitamina B12, y ácido fólico.
2. Una composición farmacéutica sinérgica de conformidad con la reivindicación 1 porque la (1- [5-oxohexil] -3 , 7-dimetil) - xantina es conocida como Pentoxifilina y el complejo de vitaminas como vitamina B6 es piridoxina, vitamina B 12 es cianocobalamina y el ácido fólico.
3. Una composición farmacéutica sinérgica de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2 porque la
(1- [5-oxohexil] -3 , 7-dimetil) - xantina conocida como Pentoxifilina se encuentra en 400 mg y el complejo de vitamina Bβ Piridoxina se encuentra en 50 mg, la vitamina B12 cianocobalamina se encuentra en 1 mg y el ácido fólico en 2 mg.
4. Una composición farmacéutica sinérgica de conformidad con las reivindicaciones 1, 2 y 3 porque la
(1- [5-oxohexil] -3 , 7-dimetil) - xantina conocida como Pentoxifilina se encuentra en 400 mg y el complejo de vitamina B6 Piridoxina se encuentra en 50 mg, la vitamina B12 cianocobalamina se encuentra en 1 mg y el ácido fólico en 2 mg se encuentran en una sola unidad de dosis para administración oral.
5. Una composición farmacéutica sinérgica de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, 3 y 4 porque la combinación de la (1- [5-oxohexil] -3, 7-dimetil) — xantina conocida como Pentoxifilina 400 mg y el complejo de vitamina B6 Piridoxina 50 mg, la vitamina B12 cianocobalamina 1 mg y el ácido fólico 2 mg en una sola unidad de dosis produce un efecto sinérgico con menores efectos secundarios.
6. Una composición farmacéutica sinérgica de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, 3 y 4 porque la combinación de la (1- [5-oxohexil] -3 , 7-dimetil) xantina conocida corno Pentoxifilina 400 mg y el complejo de vitamina Bβ Piridoxina 50 mg, la vitamina B12 cianocobalamina 1 mg y el ácido fólico 2 mg en una sola unidad de dosis es para el tratamiento de la disfunción endotelial, incrementa la microcirculación, reduciendo los niveles de homocisteína y de lípidos.
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