細胞死誘導剤及び抗癌剤 Cell death inducer and anticancer agent
技術分野 Technical field
[0001] 本発明は、ポリオキシエチレン 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテルを活性成分 とする細胞死誘導剤または抗癌剤に関する。 The present invention relates to a cell death inducer or anticancer agent comprising polyoxyethylene 2,4-diisooctylphenol ether as an active ingredient.
背景技術 Background art
[0002] 細胞死を誘導する化合物あるいは細胞死を誘導する化合物の作用を増強する化 合物としては種々の化合物が知られており、種々の疾患の予防あるいは治療用の医 薬における有効成分としての利用につ 、ての検討は盛んに行なわれて 、る。 [0002] Various compounds are known as compounds that induce cell death or compounds that enhance the action of compounds that induce cell death, and are useful as active ingredients in pharmaceuticals for the prevention or treatment of various diseases. There are many studies on the use of this.
[0003] 特開 2004 - 51513号公報にはアポトーシスを誘導する物質であるリンゴ由来のプ 口アントシァ-ジン成分を有効成分とした抗腫瘍剤が記載されており、特開 2002— 1 28690号公報にはサイト力インとしての TNF— a及び IL— 4を有効成分とし、これら のアポトーシス誘導作用を利用した悪性腫瘍の予防'治療剤が記載されている。更 に、特開 2000— 72749号公報にはキノリン誘導体を有効成分とするアポトーシス誘 導剤が抗癌剤として利用できる点が記載されている。また、特開 2003— 238567号 公報にはシユードモナス属に属する細菌由来のベンゾクラトン'エネミドィ匕合物が細 胞障害活性を有し、抗腫瘍剤の活性成分として有用であることが記載されて ヽる。 発明の開示 [0003] Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-51513 describes an antitumor agent comprising an active ingredient of apple-derived panthocyanin, which is a substance that induces apoptosis, as disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-128690. Describes a prophylactic / therapeutic agent for malignant tumors using TNF-a and IL-4 as site force-in as active ingredients and utilizing their apoptosis-inducing action. Furthermore, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2000-72749 describes that an apoptosis inducer containing a quinoline derivative as an active ingredient can be used as an anticancer agent. In addition, JP 2003-238567 A describes that a benzocratone enenemy compound derived from a bacterium belonging to the genus Pseudomonas has a cytopathic activity and is useful as an active ingredient of an antitumor agent. The Disclosure of the invention
発明が解決しょうとする課題 Problems to be solved by the invention
[0004] 癌細胞においてアポトーシスを誘導し、正常細胞においてはアポトーシスを起す確 率が低い物質や化合物は、抗癌剤の成分としての利用が期待できる。本発明は、抗 癌剤の有効成分としても利用し得る新規な化合物を提供することを目的とするもので ある。 [0004] Substances and compounds that induce apoptosis in cancer cells and have a low probability of causing apoptosis in normal cells can be expected to be used as components of anticancer agents. An object of the present invention is to provide a novel compound that can also be used as an active ingredient of an anticancer agent.
課題を解決するための手段 Means for solving the problem
[0005] 本発明の細胞死誘導剤または抗癌剤は、下記式(1)で示されるポリオキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテルを活性成分として含むことを特徴とするもの である。
[0006] [化 1] [0005] The cell death inducer or anticancer agent of the present invention is characterized by containing polyoxyethylene 2,4-diisootatyl ether represented by the following formula (1) as an active ingredient. [0006] [Chemical 1]
(上記式中、 nは 3〜15の整数である。 ) (In the above formula, n is an integer of 3 to 15.)
また、式(1)の nとしては、 9〜 13が好ましい。 Moreover, as n of Formula (1), 9-13 are preferable.
発明の効果 The invention's effect
[0007] 本発明により、ポリオキシエチレン 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテルを有効成 分とする細胞死誘導剤及び抗癌剤を提供することができる。 [0007] According to the present invention, it is possible to provide a cell death inducing agent and an anticancer agent comprising polyoxyethylene 2,4-diisooctylphenol ether as an effective component.
図面の簡単な説明 Brief Description of Drawings
[0008] [図 1]各化合物の作用濃度と細胞生存率の関係を示す図である。 FIG. 1 is a graph showing the relationship between the action concentration of each compound and the cell viability.
[図 2]2種の化合物を単独または混合して用いた場合の作用濃度と細胞生存率の関 係を示す図である。 FIG. 2 is a graph showing the relationship between action concentration and cell viability when two kinds of compounds are used alone or in combination.
[図 3(1)]2種の化合物を単独または混合して用いた場合の癌細胞における DNA合 成阻害効果の試験結果を示す図である。 FIG. 3 (1) is a view showing the test results of the DNA synthesis inhibitory effect in cancer cells when two kinds of compounds are used alone or in combination.
[図 3(2)]2種の化合物を単独または混合して用いた場合の癌細胞における DNA合 成阻害効果の試験結果を示す図である。 FIG. 3 (2) is a graph showing the test results of the DNA synthesis inhibitory effect in cancer cells when two kinds of compounds are used alone or in combination.
[図 4]式(1)の nが 0である化合物のデータを示す図である。 FIG. 4 is a diagram showing data of a compound in which n in Formula (1) is 0.
[図 5]式(1)の nが 5である化合物のデータを示す図である。 FIG. 5 is a diagram showing data of a compound in which n in formula (1) is 5.
[図 6]式(1)の nが 6である化合物のデータを示す図である。 FIG. 6 is a diagram showing data of a compound in which n is 6 in formula (1).
[図 7]式(1)の nが 7である化合物のデータを示す図である。 FIG. 7 is a diagram showing data on a compound in which n is 7 in formula (1).
[図 8]式(1)の nが 8である化合物のデータを示す図である。 FIG. 8 is a diagram showing data of a compound in which n is 8 in formula (1).
[図 9]式(1)の nが 9である化合物のデータを示す図である。 FIG. 9 is a diagram showing data on a compound in which n is 9 in formula (1).
[図 10]式(1)の nが 10である化合物のデータを示す図である。 FIG. 10 is a diagram showing data on a compound in which n is 10 in formula (1).
[図 11]式( 1)の nが 12である化合物のデータを示す図である。
発明を実施するための最良の形態 FIG. 11 is a diagram showing data of a compound in which n in formula (1) is 12. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
[0009] 本発明における細胞死誘導剤や抗癌剤は、上記の式(1)の化合物及びその薬理 学的に許容される塩カゝら選択された少なくとも 1種を試薬あるいは製剤用の担体や希 釈剤と混合して試薬や製剤とすることで調製することができる。製剤の形態としては、 例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤などの固形製剤、注射剤、懸 濁剤、シロップ剤、乳剤などの液体製剤、貼付剤等の半固形剤などを挙げることがで き、これらの剤形に応じた担体、希釈剤、賦形剤、各種添加剤を適宜選択して製剤 化を行うことができる。 [0009] The cell death inducer and anticancer agent in the present invention include at least one selected from the compound of the above formula (1) and a pharmacologically acceptable salt thereof as a reagent or a carrier for preparation or a rare agent. It can be prepared by mixing with an excipient to make a reagent or preparation. Examples of the formulation include solid preparations such as tablets, pills, powders, granules, capsules and suppositories, liquid preparations such as injections, suspensions, syrups and emulsions, and semisolids such as patches. The preparation can be prepared by appropriately selecting carriers, diluents, excipients and various additives according to these dosage forms.
[0010] 上記の式(1)の化合物の薬理学的に許容される塩は常法によって得ることができ、 例えば、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸などの無機酸、あるいはギ酸、酢酸 [0010] The pharmacologically acceptable salt of the compound of the above formula (1) can be obtained by a conventional method, for example, an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, sulfuric acid, or formic acid. , Acetic acid
、フマル酸、クェン酸、マレイン酸、シユウ酸、リンゴ酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ベ ンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸などの有機酸との塩として用いることがで きる。 It can be used as a salt with an organic acid such as fumaric acid, citrate, maleic acid, oxalic acid, malic acid, tartaric acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid or p-toluenesulfonic acid.
[0011] 本発明の抗癌剤は、肺がん、脾臓がんに特に有効である。 [0011] The anticancer agent of the present invention is particularly effective for lung cancer and spleen cancer.
[0012] 式(1)の化合物の 2種を組み合わせる場合は、 nが 9である化合物と、 nが 12である 化合物の組み合わせが好ましい。これらの配合割合は、重量基準で、(nが 9である 化合物): (nが 12である化合物) = 25 : 75〜75: 25が好ましい。 [0012] When two kinds of compounds of the formula (1) are combined, a combination of a compound in which n is 9 and a compound in which n is 12 is preferable. These compounding ratios are preferably (compound in which n is 9): (compound in which n is 12) = 25: 75 to 75:25 on a weight basis.
[0013] 式(1)の化合物は、これらを生産する糸状菌から抽出、精製して得られたものであり 、化学合成により製造することができる。 [0013] The compound of the formula (1) is obtained by extraction and purification from the filamentous fungus that produces them, and can be produced by chemical synthesis.
[0014] 式(1)の化合物を生産する糸状菌としては、糸状菌(Asupergirus lumigatus) SRT 株 (FERM BP-5030) (平成 7年 3月 3日付で、その当時の通商産業省工業技術院生 命工学工業技術研究所、 日本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号にブタペスト条約 下における寄託として寄託されて 、る)を挙げることができる。 [0014] Filamentous fungi that produce the compound of formula (1) include Asupergirus lumigatus SRT strain (FERM BP-5030) (as of March 3, 1995, a student of the Ministry of International Trade and Industry at the time. Biotechnology Industrial Technology Research Institute, Ibaraki, Tsukuba, 1-chome, 1-3 1-3, deposited as a deposit under the Budapest Treaty.
[0015] この式(1)の化合物は両親媒性であり、癌細胞においてアポトーシスを誘導し、力 つ正常細胞においてアポトーシスを起し難いという特性を有する。更に、 DNA合成 抑制あるいは阻害作用も有し、抗癌剤の活性成分として有用である。 [0015] The compound of the formula (1) is amphiphilic and has the property of inducing apoptosis in cancer cells and hardly causing apoptosis in normal cells. In addition, it also has an inhibitory or inhibitory effect on DNA synthesis and is useful as an active ingredient of anticancer agents.
[0016] 式(1)の化合物を化学合成する場合は、以下の工程 (A)〜(C)を有する方法を用 いることがでさる。
(A)下記式 (2) : When the compound of formula (1) is chemically synthesized, a method having the following steps (A) to (C) can be used. (A) The following formula (2):
[0017] [化 2] [0017] [Chemical 2]
(上記式中、 nは 3〜15の整数を示す。) (In the above formula, n represents an integer of 3 to 15.)
で表わされるポリエチレングリコールとパラトルエンスルホ -ルを反応させて、下記式( 4) : Is reacted with polyethylene glycol represented by the following formula (4):
[0018] [化 3] [0018] [Chemical 3]
(上記式中、 nは式(1)と同じ意味を表す。 ) (In the above formula, n represents the same meaning as in formula (1).)
で表わされるポリオキシエチレン モノ(ρ トルエンスルホ -ル)エーテルを得る工程 と、 Obtaining a polyoxyethylene mono (ρ toluenesulfol) ether represented by:
(B) 2, 4, 4 トリメチル 1—ペンテンとフエノールから 2, 4 ジイソオタチルフエノ ールを得る工程と、 (B) 2,4,4 trimethyl 1,4-pentene and phenol to obtain 2,4 diisooctylphenol,
(C)前記ポリオキシエチレン モノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテルと、前記 2, 4— ジイソオタチルフヱノールとを反応させて、前記ポリエチレン 2, 4 ジイソォクチルフ ェ-ルエーテルを得る工程。 (C) A step of reacting the polyoxyethylene mono (p-toluenesulfol) ether with the 2,4-diisooctylphenol to obtain the polyethylene 2,4-diisooctylphenol ether.
[0019] 本発明のポリオキシエチレン 2, 4 ジイソォクチルフエ-ルエーテルの製造では、 出発物質として、下記(4)で示されるポリオキシエチレン ジ (p トルエンスルホ-ル )エーテルと下記式(7)で表わされる 2, 4 ジイソォクチルフエノールが用いられる。
[化 4] In the production of the polyoxyethylene 2,4 diisooctylphenol ether of the present invention, the starting material is polyoxyethylene di (ptoluenesulfol) ether represented by the following (4) and the following formula (7 2,4 diisooctylphenol represented by the following formula: [Chemical 4]
式(4)で表わされるポリオキシエチレン ジ(p トルエンスルホニル)エーテルは、 下記式(2)で表わされるポリエチレングリコールと下記式(3)で表わされる p トルェ ンスルホ-ルを反応させて得ることができる(工程 A)。 The polyoxyethylene di (p-toluenesulfonyl) ether represented by the formula (4) can be obtained by reacting a polyethylene glycol represented by the following formula (2) with a p-toluene sulfonate represented by the following formula (3). Yes (Step A).
[化 5] [Chemical 5]
また、式(7)で表わされる 2, 4 ジイソォクチルフエノールは、下記式(5)で表わさ れるフエノールと下記式(6)で表わされる 2、 4, 4 トリメチルー 1 ペンテンとを反応 させて得ることができる(工程 B)。
The 2,4 diisooctylphenol represented by the formula (7) is obtained by reacting a phenol represented by the following formula (5) with 2,4,4 trimethyl-1-pentene represented by the following formula (6). (Step B).
工程 Aは、ジクロロメタン等の不活性溶媒中で行なうことができる。反応は、酸化銀、 ヨウ化カリウム等の存在下で行なうことができる。低温度 (例えば— 20°C)下で、各成 分を不活性溶媒中に添加して反応溶液を調製し、その後、温度を、例えば室温まで 上げて反応を開始させ、必要時間保持する。反応終了後、反応液から目的とする式 (4)で示される化合物を回収する。この回収には、ろ過、各種のクロマトグラフィーを 利用した分離方法などの常法を用いることができる。 Step A can be performed in an inert solvent such as dichloromethane. The reaction can be carried out in the presence of silver oxide, potassium iodide or the like. Under low temperature (for example, −20 ° C.), each component is added to an inert solvent to prepare a reaction solution, and then the temperature is raised to, for example, room temperature to start the reaction, and is maintained for a necessary time. After completion of the reaction, the desired compound represented by the formula (4) is recovered from the reaction solution. For this recovery, conventional methods such as filtration and separation methods using various chromatographies can be used.
[0023] 工程 Bは、式(5)の化合物と式 (6)の化合物とを、濃硫酸などの触媒の存在下で行 なうことができる。また、この反応は加熱下 (例えば、 100°C)、窒素気流下などの不活 性雰囲気下で行なうこともできる。反応終了後、反応液から目的とする式 (7)で示さ れ化合物を回収する。この回収には、ろ過、各種のクロマトグラフィーを利用した分離 方法などの常法を用いることができる。 [0023] Step B can be performed between the compound of formula (5) and the compound of formula (6) in the presence of a catalyst such as concentrated sulfuric acid. This reaction can also be performed under heating (for example, 100 ° C.) or in an inert atmosphere such as a nitrogen stream. After completion of the reaction, the desired compound represented by the formula (7) is recovered from the reaction solution. For this recovery, conventional methods such as filtration and separation methods using various chromatographies can be used.
[0024] 式 (4)の化合物と式(7)の化合物との反応(工程 A)は、 NaH、炭酸カリウムなどの 存在下、テトラヒドロフラン (THF)、ジメチルホルムアミド (DMF)等の不活性溶媒中 、窒素気流下などの不活性雰囲気で行なうことができる。反応終了後、反応液から目 的とする式(1)で示されィ匕合物を回収する。この回収には、ろ過、各種のクロマトダラ フィーを利用した分離方法などの常法を用いることができる。 [0024] The reaction of the compound of formula (4) with the compound of formula (7) (step A) is carried out in an inert solvent such as tetrahydrofuran (THF) or dimethylformamide (DMF) in the presence of NaH or potassium carbonate. In an inert atmosphere such as under a nitrogen stream. After completion of the reaction, the compound represented by the target formula (1) is recovered from the reaction solution. For this recovery, conventional methods such as filtration and separation methods using various chromatographies can be used.
[0025] 本発明の方法によれば、所望とするォキシエチレン鎖数 (n= 3〜 15)の式(1)で示 される化合物を安定して製造することが可能となる。 [0025] According to the method of the present invention, it is possible to stably produce a compound represented by the formula (1) having a desired number of oxyethylene chains (n = 3 to 15).
実施例
[0026] 以下実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。 Example [0026] Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples.
(合成例 1) (Synthesis Example 1)
下記に示す工程によりノナエチレングリコール ジ(p—トルエンスルホ -ル)エーテ ルを得た。 Nonaethylene glycol di (p-toluenesulfol) ether was obtained by the steps shown below.
[0027] [化 7] [0027] [Chemical 7]
( 4 ) ( Four )
(X@A) (X @ A)
まず、塩ィ匕カルシウム乾燥管を装着した 50mLナスフラスコ中、ノナエチレングリコ ール(1. 69mmol、 700mg)をジクロロメタン(17mL)に溶解した.これを撹拌しなが ら氷一メタノール浴に浸し、 20°Cに冷却した.これに酸化銀 (I) (2. 53mmol、 58 6mg)およびヨウ化カリウム(335mmol、 55. 6mg)を加え、次に、塩化 p—トルエンス ルホ-ル(1. 86mmol、 354mg)をゆっくり加えた。氷浴を除き、室温に戻しながら 1 . 5時間撹拌を続けた。その後、反応液をセライト濾過し、エバボレーターで溶媒を留 去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒:クロ口ホルム —メタノール混合溶媒(30 : 1;容量比)によって精製し、ノナエチレングリコール モノ
(p—トルエンスルホ -ル)エーテルを得た(収率:59%、 988 ^ m, 563mg)。この際 、副生成物として、下記式で表わされるノナエチレングリコール ジ (p トルエンスル ホ -ル)エーテルが得られた(収率:23%、 394mmol、 285mg)。 First, nonaethylene glycol (1.69 mmol, 700 mg) was dissolved in dichloromethane (17 mL) in a 50 mL eggplant flask equipped with a salt-calcium calcium drying tube. This was immersed in an ice-methanol bath while stirring. To this was added silver (I) oxide (2.53 mmol, 58.6 mg) and potassium iodide (335 mmol, 55.6 mg), followed by p-toluene chloride (1. 86 mmol, 354 mg) was added slowly. The ice bath was removed and stirring was continued for 1.5 hours while returning to room temperature. Thereafter, the reaction solution was filtered through Celite, and the solvent was distilled off with an evaporator. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (developing solvent: chloroform-methanol mixed solvent (30: 1; volume ratio)) and nonaethylene glycol mono (p-Toluenesulfol) ether was obtained (yield: 59%, 988 ^ m, 563 mg). At this time, nonaethylene glycol di (p-toluenesulfol) ether represented by the following formula was obtained as a by-product (yield: 23%, 394 mmol, 285 mg).
[化 8] [Chemical 8]
(工程 B) (Process B)
(その 1) (Part 1)
オートクレープ中、 2, 4, 4 トリメチルー 1 ペンテン(17. 3mmol、 19. 5mg)とフ ェノール(3. 44mmol、 323mg)を混合し、これに濃硫酸を 2滴加えた。これを撹拌し ながら窒素下で 7気圧に加圧し、 100°Cで 3時間加熱した。常圧、室温に戻した後、 酢酸ェチル (20mL)で反応混合物を希釈し、飽和重曹水(30mL)、飽和食塩水(3 OmL)で順次これを洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。これをろ紙で濾過し、ェ バポレーターで揮発成分を留去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー( 展開溶媒:へキサン一クロ口ホルム混合溶媒:(1 : 0→2 : 1) (容量比))で精製し、 2, 4ージイソォクチルフエノールを淡黄色液体として得た(収率: 57%、 1. 95mmol、 6 21mg) 0この際、副生成物として、 4 (1, 1, 3, 3—テトラメチルブチル)フエノール 力 S得られた(収率: 18%、 619 /ζ πιο1、 128mg) 0 In an autoclave, 2,4,4 trimethyl-1-pentene (17.3 mmol, 19.5 mg) and phenol (3.44 mmol, 323 mg) were mixed, and 2 drops of concentrated sulfuric acid were added thereto. This was stirred and pressurized to 7 atm under nitrogen and heated at 100 ° C for 3 hours. After returning to normal pressure and room temperature, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (20 mL), washed successively with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (30 mL) and saturated brine (3 OmL), and dried over anhydrous sodium sulfate. This is filtered through a filter paper, and the volatile components are distilled off with an evaporator. The residue is chromatographed on a silica gel column (developing solvent: hexane-chloroform mixed solvent: (1: 0 → 2: 1) (volume ratio) ) To give 2,4-diisooctylphenol as a pale yellow liquid (yield: 57%, 1.95 mmol, 6 21 mg) 0 In this case, 4 (1, 1, 3 , 3-tetramethylbutyl) phenol force S obtained (yield: 18%, 619 / ζ πιο1, 128 mg) 0
(その 2) (Part 2)
塩ィ匕カルシウム乾燥管及びジムロート冷却管を装着した 200mL二口ナスフラスコ 中、 2, 4, 4 トリメチル 1—ペンテン(524mmol、 83. Omg)とフエノール(104m mol、 9. 83g)を混合し、これに濃硫酸を 10滴カ卩えた。 100°Cで 3時間加熱した。室 温に戻した後、酢酸ェチル(lOOmL)で反応混合物を希釈し、飽和重曹水(lOOmL )、飽和食塩水(lOOmL)で順次これを洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。これ をろ紙で濾過し、エバポレーターで揮発成分を留去した後、残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー(展開溶媒:へキサン クロ口ホルム混合溶媒:(1 : 0→2 : 1) (容量 比))で精製し、 2, 4 ジイソオタチルフヱノールを淡黄色液体として得た (収率: 65 %、 67. 8mmol、 21. 6g)。 Mix 2, 4, 4 trimethyl 1-pentene (524mmol, 83. Omg) and phenol (104mmol, 9.83g) in a 200mL two-necked eggplant flask equipped with a salty calcium drying tube and a Dimroth condenser. Ten drops of concentrated sulfuric acid were added to this. Heated at 100 ° C for 3 hours. After returning to room temperature, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (lOOmL), washed successively with saturated aqueous sodium bicarbonate (lOOmL) and saturated brine (lOOmL), and dehydrated over anhydrous sodium sulfate. This is filtered with filter paper, and volatile components are distilled off with an evaporator. Purification by chromatography (developing solvent: hexane mixed solvent: (1: 0 → 2: 1) (volume ratio)) gave 2,4 diisooctaylphenol as a pale yellow liquid. Rate: 65%, 67.8 mmol, 21.6 g).
[0030] (工程。) [0030] (Process.)
窒素気流下、 2, 4ージイソォクチルフエノール(300 mol、 9. 85mg)をテトラヒド 口フラン (2mL)に溶解した。これを撹拌しながら氷浴に浸し、水素化ナトリウム (ミネラ ルオイル懸濁: 540 /ζ πιο1、 18. Omg)を添加した。これを室温で 30分撹拌した後、ノ ナエチレングリコール ジ(p トルエンスルホ -ル)エーテル(300 πιπιο1、 171mg )のテトラヒドロフラン(lmL)溶液を添加した。室温で 24時間撹拌した後、反応溶液 を酢酸ェチル (4mL)で希釈し、これを希塩酸(1M、 2mL)、飽和重曹水(2mL)及 び飽和食塩水(2mL)で順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで脱水した後、これを濾 過し、エバポレーターで溶媒を蒸去し、得られた残渣をシリカゲル薄層クロマトグラフ ィー (展開溶媒:クロ口ホルム—メタノール混合溶媒、 30 : 1 (混合比))で精製し、ノナ エチレングリコール 2, 4 ジイソォクチルフエ-ルエーテル [2—(2—(2—(2— (2 一(2— (2— (2— (2— (2,4 ビス一(1, 1, 3, 3—テトラメチルブチル)フエノキシ) エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)エタノール ;あるいはノナオキシエチレン 2, 4 ジイソォクチルフエ-ルエーテル]を淡黄色液 体として得た(収率 54%、 162 /ζ πιο1、 116mg)。 Under a nitrogen stream, 2,4-diisooctylphenol (300 mol, 9.85 mg) was dissolved in tetrahydrofuran (2 mL). This was immersed in an ice bath with stirring, and sodium hydride (mineral oil suspension: 540 / ζ πιο1, 18. Omg) was added. After stirring at room temperature for 30 minutes, a solution of nonaethylene glycol di (ptoluenesulfol) ether (300 πιπιο1, 171 mg) in tetrahydrofuran (1 mL) was added. After stirring at room temperature for 24 hours, the reaction solution was diluted with ethyl acetate (4 mL), and washed successively with dilute hydrochloric acid (1M, 2 mL), saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (2 mL), and saturated brine (2 mL). After dehydration with anhydrous sodium sulfate, this was filtered, the solvent was distilled off with an evaporator, and the resulting residue was subjected to silica gel thin-layer chromatography (developing solvent: black-form form-methanol mixed solvent, 30: 1 ( (Non-ethylene glycol 2, 4 diisooctyl phenol ether [2— (2— (2— (2— (2 one (2— (2— (2— (2— (2, 4 bis (1, 1, 3, 3-tetramethylbutyl) phenoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) ethanol; or nonoxyethylene 2, 4 diisooctylphenol] Was obtained as a pale yellow liquid (yield 54%, 162 / ζ πιο1, 116 mg).
[0031] (合成例 2) [0031] (Synthesis example 2)
ノナエチレングリコールの代わりに、ポリエチレングリコールのォキシエチレン鎖(一 Instead of nonaethylene glycol, polyethylene glycol oxyethylene chain (one
CH -CH—O )の数の異なるポリオキシエチレングリコールをそれぞれ用いて、CH—CH—O) having different numbers of polyoxyethylene glycols,
2 2 twenty two
実施例 1と同様にして、ォキシエチレン鎖(一 CH -CH—0— )の数の異なるポリオ In the same manner as in Example 1, polio having different numbers of oxyethylene chains (one CH 2 —CH—0—).
2 2 twenty two
キシエチレン 2, 4 ジイソォクチルフエ-ルエーテルを合成した。得られた各化合物 の収率などを以下に示す。 Xylene 2,4 diisooctylphenol ether was synthesized. The yield of each compound obtained is shown below.
[0032] なお、使用したィ匕合物の中で巿販化合物は、以下のとおりである。 [0032] Among the compounds used, commercially available compounds are as follows.
ペンタエチレンリコール(シグマ アルドリッチ Co. ) Pentaethylene Recall (Sigma Aldrich Co.)
へキサエチレングリコール (東京化成株式会社) Hexaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
ヘプタエチレングリコール (東京化成株式会社)
ォクタエチレングリコール (東京化成株式会社) Heptaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) Octaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
ノナエチレングリコール (東京化成株式会社) Nonaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
デカエチレングリコール (東京化成株式会社) Decaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
ドデカエチレングリコール (東京化成株式会社) Dodecaethylene glycol (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
2, 4, 4—トリメチル—1—ペンテン (東京化成株式会社) 2, 4, 4-Trimethyl-1-pentene (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)
テトラヒドロフラン (脱水、和光純薬工業株式会社) Tetrahydrofuran (Dehydration, Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
p -トルエンスルホ-ル (ナカライテスタ株式会社) p-Toluenesulfol (Nacalai Testa Co., Ltd.)
(中間体に関するデータ: nは式 (4)の nの値である。 ) (Data on intermediate: n is the value of n in formula (4).)
(1)ペンタエチレングリコールモノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテル; n = 5;収率 94 % ;無色液体 (1) Pentaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 5; yield 94%; colorless liquid
( 2)へキサエチレングリコールモノ(p -トルエンスルホ -ル)エーテル; n = 6;収率 90 % ;無色液体; (2) Hexaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 6; yield 90%; colorless liquid;
(3)ヘプタエチレングリコールモノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテル; n= 7 ;収率 99 % ;無色液体; (3) heptaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 7; yield 99%; colorless liquid;
(4)ォクタエチレングリコールモノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテル; n = 8;収率 75 %;無色液体;副生物:ォクタエチレングリコールジ(p—トルエンスルホ -ル)エーテ ル(収率 14%) (4) Octaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 8; yield 75%; colorless liquid; by-product: octaethylene glycol di (p-toluenesulfol) ether (yield) (Rate 14%)
(5)デカエチレングリコールモノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテル; n = 10;収率 67 %;無色液体;副生成物:デカエチレングリコールジ(p—トルエンスルホ -ル)エーテ ル(収率 19%) (5) Decaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 10; Yield 67%; Colorless liquid; By-product: Decaethylene glycol di (p-toluenesulfol) ether (Yield 19%)
(6)ドデカエチレングリコールモノ(p—トルエンスルホ -ル)エーテル; n= 12;収率 6 3;無色液体;副生成物:ドデカエチレングリコールジ(p—トルエンスルホ -ル)エーテ ル(収率 23%) (6) dodecaethylene glycol mono (p-toluenesulfol) ether; n = 12; yield 63; colorless liquid; by-product: dodecaethylene glycol di (p-toluenesulfol) ether (yield) twenty three%)
(目的化合物に関するデータ: nは式(1)の nの値である。 ) (Data on target compound: n is the value of n in formula (1).)
(1)ペンタォキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; n = 5;収率 45%; 淡黄色液体 (1) pentaoxyethylene 2, 4-diisooctylphenol ether; n = 5; yield 45%; pale yellow liquid
(2)へキサォキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; n = 6;収率 38% ;淡黄色液体
(3)へプタオキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; n = 7;収率 48% ;淡黄色液体 (2) Hexoxyethylene 2,4-diisooctylphenol ether; n = 6; Yield 38%; Pale yellow liquid (3) Heptaoxyethylene 2, 4-diisooctylphenol ether; n = 7; Yield 48%; Pale yellow liquid
(4)ォクタォキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; n= 8;収率 71 %; 淡黄色液体 (4) Octaoxyethylene 2, 4-diisooctylphenol ether; n = 8; Yield 71%; Pale yellow liquid
(5)デカオキシエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; n = 10;収率 72%; 淡黄色液体 (5) Decaoxyethylene 2,4-diisooctylphenol ether; n = 10; yield 72%; pale yellow liquid
(6)ドデカオキシエチレン 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテル; n = 12 ;収率 47 % ;淡黄色液体 (6) Dodecaoxyethylene 2,4-diisooctylphenol ether; n = 12; Yield 47%; Pale yellow liquid
(各生成物の分析結果) (Results of analysis of each product)
1.質量分析 1. Mass spectrometry
各生成物のナトリウム塩の質量分析を日本電子 ¾iMS—T100 (ESI-TOF)を用 い、以下の条件で行った。 Mass analysis of the sodium salt of each product was performed using JEOL ¾ iMS-T100 (ESI-TOF) under the following conditions.
測疋モ ~~ト: Positive mode 测 疋 モ ~~ ト : Positive mode
観測範囲: 100〜1000 Observation range: 100-1000
分解能: 6000 Resolution: 6000
得られた結果を、化合物名;式(1)中の n;組成式;理論値;測定値の順に以下に示 す。 The obtained results are shown below in the order of compound name; n in formula (1); composition formula; theoretical value;
(1)ペンタエチレン 2, 4 -ジイソオタチルフエ-ルエーテル; 5; C32H5806N1 ;561.4 1311 ;561.40948 (1) pentaethylene 2,4-diisooctylphenol ether; 5; C32H5806N1; 561.4 1311; 561.40948
(2)へキサエチレン 2, 4 -ジイソオタチルフエ-ルエーテル; 6; C34H6207Nal; 605. 43932 ;605.43340 (2) Hexaethylene 2,4-diisooctylphenol ether; 6; C34H6207Nal; 605. 43932; 605.443340
(3)ヘプタエチレン 2, 4 -ジイソオタチルフエ-ルエーテル; 7; C36H6608Nal; 649. 46554 ;649.45656 (3) Heptaethylene 2, 4-diisooctylphenol ether; 7; C36H6608Nal; 649. 46554; 649.45656
(4)オタタエチレン 2, 4 -ジイソオタチルフエ-ルエーテル; 8; C38H70O9Nal; 693.4 9175 ;693.48241 (4) Otaethylene 2,4-diisooctylphenol ether; 8; C38H70O9Nal; 693.4 9175; 693.48241
(5)ノナエチレン 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテル: 9: C40H74O10Nal: 737.51 797 : 737.51372 (5) Nonaethylene 2, 4-diisooctyl phenol ether: 9: C40H74O10Nal: 737.51 797: 737.51372
(6)デカエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル; 10; C42H7801 INal; 781.
54418 ; 781.54057 (6) Decaethylene 2,4-diisooctylphenol ether; 10; C42H7801 INal; 781. 54418; 781.54057
(7)ドデカエチレン 2, 4—ジイソオタチルフエ-ルエーテル;12 ; C46H86013Nal; 86 9.59661 ;869.59470 (7) Dodecaethylene 2,4-diisooctylphenol ether; 12; C46H86013Nal; 86 9.59661; 869.59470
2. NMR分析 2. NMR analysis
測定装置: JEOL ECX-400 Measuring device: JEOL ECX-400
磁場強度: 9. 4T Magnetic field strength: 9.4T
共鳴周波数: 400MHz Resonance frequency: 400MHz
測定温度: 25°C Measurement temperature: 25 ° C
測定溶媒: CDC1 Measuring solvent: CDC1
2 2
標準物質:テトラメチルシラン (TMS)を内部標準 (Oppm)として使用 Standard substance: Tetramethylsilane (TMS) used as internal standard (Oppm)
図 5〜: L 1に各化合物(n= 5、 6、 7、 8、 9、 10及び 12)の NMR分析データをそれ ぞれ示す。なお、図 4に n=0の場合の NMRデータを参考に示す。 Fig. 5 ~: L 1 shows NMR analysis data of each compound (n = 5, 6, 7, 8, 9, 10 and 12). Fig. 4 shows the NMR data for n = 0 for reference.
[0033] 実施例 1 [0033] Example 1
合成例 1で得られた各化合物につ!/、て MTTアツセィを行なった。 Each compound obtained in Synthesis Example 1 was subjected to MTT assembly.
[0034] まず、試験化合物(20mg)を Dulbecco's MEM培地に 10重量%ゥシ胎児血清(FB S)、 2. 5重量%ゥマ血清(HS)、ペニシリン及びストレプトマイシンを含む培地(4ml) 中に添加し、ボルテックス ミキサーで 1分間の攪拌混合後、 4°Cで一晩放置し、更に 、 1分間の攪拌をし、 0. 22 /z mのポアサイズのフィルターでろ過滅菌を行なった。濾 液を上記と同じ組成の培地に希釈し、 100ppm、 24ppm、 0. 8ppmのサンプルをそ れぞれ調製した。各サンプルを以下の MTTアツセィに供した。 [0034] First, a test compound (20 mg) is added to Dulbecco's MEM medium in medium (4 ml) containing 10% by weight urinary fetal serum (FB S), 2.5% by weight urinary serum (HS), penicillin and streptomycin. The mixture was added and stirred with a vortex mixer for 1 minute, then allowed to stand overnight at 4 ° C, further stirred for 1 minute, and sterilized by filtration with a 0.22 / zm pore size filter. The filtrate was diluted in a medium having the same composition as described above, and 100 ppm, 24 ppm, and 0.8 ppm samples were prepared. Each sample was subjected to the following MTT assembly.
[0035] ヒト脾臓ガン由来細胞 MIAPaCa— 2 (大日本製薬)を 96ゥエルプレートに 1ゥエル あたり I X 105個で捲種し、 37°C、 5容量0 /oCOのインキュベータ中で Dulbecco's M [0035] Human spleen cancer-derived cells MIAPaCa-2 (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) were seeded on 96 well plates at IX 10 5 per well, in a 37 ° C, 5 volume 0 / oCO incubator Dulbecco's M
2 2
EM培地に 10重量%ゥシ胎児血清(FBS)、 2. 5重量%ゥマ血清(HS)、ペニシリン及 びストレプトマイシンを含む培地で 2時間培養した。培地を前記したサンプルと交換し て、 37°C、 5容量0 /oCOのインキュベータ中で 72時間培養した後、 5mgZmlMTT The EM medium was cultured for 2 hours in a medium containing 10% by weight urine fetal serum (FBS), 2.5% by weight urine serum (HS), penicillin and streptomycin. After replacing the medium with the sample described above and culturing in an incubator at 37 ° C, 5 volumes 0 / oCO for 72 hours, 5mgZmlMTT
2 2
溶液を 10 /z lZゥエルの割合で添カ卩した。ゥエルを更に 37°C、 5容量%COのインキ The solution was added at a rate of 10 / z lZ well. Further ink at 37 ° C and 5% CO by volume
2 ュベータ中で 4時間培養し、 150 1のイソプロパノール一 HC1を添カ卩した。 1時間経 過後十分にピッぺティングを行い、ホルマザンを溶解させ、 560nmでの吸光度を測
定した。得られた吸光度力も試験化合物の濃度と腫瘍生存率の関係を求めた。得ら れた結果を図 1に示す。また、 Triton X— 100を陽性コントロールとして用い、上記 と同様にしてその濃度と腫瘍生存率の関係を求めた。 The cells were cultured for 4 hours in the incubator and supplemented with 1501 isopropanol / HC1. Pipette well after 1 hour to dissolve formazan and measure absorbance at 560 nm. Set. The relationship between the concentration of the test compound and the tumor survival rate was also determined for the obtained absorbance power. Figure 1 shows the results obtained. Triton X-100 was used as a positive control, and the relationship between the concentration and tumor survival rate was determined in the same manner as described above.
[0036] (実施例 2) [Example 2]
実施例 1と同様にして、ノナエチレングリコール 2, 4ージイソォクチルフエ-ルエー テル(n= 9)、ドデカエチレングリコール 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテル(n = 12)及びこれらの混合物の濃度と腫瘍生存率の関係を求めた。結果を図 2に示す In the same manner as in Example 1, nonaethylene glycol 2,4-diisooctylphenol ether (n = 9), dodecaethylene glycol 2,4-diisooctylphenol ether (n = 12) and mixtures thereof The relationship between the concentration of and the survival rate of the tumor was determined. The result is shown in figure 2
[0037] (実施例 3) [0037] (Example 3)
ノナエチレングリコール 2, 4ージイソォクチルフエ-ルエーテル(n= 9)、ドデカェ チレングリコール 2, 4—ジイソォクチルフエ-ルエーテル(n= 12)及びこれらの混 合物の Meth— A腫瘍細胞に対する DNA合成阻害効果を試験した。 Nonaethylene glycol 2,4-diisooctylphenol ether (n = 9), dodecaethylene glycol 2,4-diisooctylphenol ether (n = 12) and their mixtures against Meth-A tumor cells The DNA synthesis inhibitory effect was tested.
[0038] Meth— A腫瘍細胞は、 RPMI1640+FBC15重量0 /0培養液に 96ゥエルプレート の各ゥエル中で培養した。試験化合物は、
[0038] Meth- A tumor cells were cultured in each Ueru in RPMI1640 + FBC15 weight 0/0 culture solution 96 © El plate. The test compound is
で上記培養液で希釈し、培養液と細胞を含むゥエルと、所定の濃度での試験化合物 、培養液及び細胞とを含むゥエルと、を用意した。次に、各ゥエルにアイソトープ(3H —チミジン)を 74kBqの量となるように加え、 37°Cで 24時間培養を行なった。細胞に 取り込まれた 3H—チミジンの放射活性 (cpm)を測定した。各測定値について、対照 (試験化合物無添加)の放射活性を 100とした相対値を算出した。得られた結果を図 3 (1)及び(2)に示す。 The well containing the culture solution and the cells and the well containing the test compound, the culture solution and the cells at a predetermined concentration were prepared. Next, isotope (3H-thymidine) was added to each well so as to have an amount of 74 kBq, and cultured at 37 ° C for 24 hours. The radioactivity (cpm) of 3H-thymidine incorporated into the cells was measured. For each measured value, a relative value was calculated with the radioactivity of the control (no test compound added) as 100. The obtained results are shown in Fig. 3 (1) and (2).
[0039] 図 3において PEN9は n= 9である式(1)の化合物を、 PEN12は n= 12である式(1 )の化合物を、 Mixlは PEN9 (75重量%)と PEN12 (25重量%)の混合物を、 Mix2 は PEN9 (50重量%)と PEN12 (50重量%)の混合物を、 Mix3は PEN9 (25重量 %)と PEN12 (75重量0 /0)の混合物を、 SRT— KAは、糸状菌(Asupergirus lumigat us) SRT株の PEN9などを含む抽出物を表す。
In FIG. 3, PEN9 is a compound of formula (1) where n = 9, PEN12 is a compound of formula (1) where n = 12, Mixl is PEN9 (75 wt%) and PEN12 (25 wt% the mixture), the Mix2 mixture of PEN9 (50 wt%) and PEN12 (50 wt%), MIX3 is a mixture of PEN9 (25 wt%) and PEN12 (75 wt 0/0), SRT- KA is It represents an extract containing PEN9 etc. of Asupergirus lumigat us SRT strain.