WO2005090989A1 - 有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査薬及び方法 - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a test agent for testing adult infections of tapeworms and tapeless tapeworms, and a method of testing these drugs.
- Taenia solium is a parasite in the gastrointestinal tract of humans that ingests pork, etc. containing its larvae (called Cysticercus cellulosae) in its muscles without passing through sufficient heat. It is a "tamandid that grows several meters long like a kishimen.” Cygnus cysts (hereinafter abbreviated as cysts) develop throughout the body of humans and pigs that orally ingest eggs that are excreted from humans harboring the adults. Infection of striated tapeworms in humans is basically due to ingestion of “porcine meat infected with cysts”.
- Taenia saginata has the same structure and life cycle as those of Taenia saginata and has few symptoms.
- Non-Patent Document 1 hydrophobic ligand binding protein (HLBP) is a low-molecular-weight protein with a molecular weight of about 10 kDa, which is unique to tapeworms. But its detailed function was unknown (Non-Patent Document 2)
- Non-Patent Document 1 Inspection and Technology Vol. 26, No. 4, 391-393 (1998)
- Non-Patent Document 2 FEBS Letters 487 (2000) 181-184
- HLBP adult-derived hydrophobic ligand binding protein
- the present invention relates to an amino acid sequence containing at least the 22nd to 65th amino acids of the 20th to 85th amino acid sequences of any of SEQ ID NOs: 14 (that is, any one of SEQ ID NOs: 14 to 14). It is a test drug for adult infection of tapeworms and tapeworms whose main component is a peptide consisting of the amino acid sequence of amino acids 20 to 22 to 65 to 85) or SEQ ID NO: 5.
- the present invention is a method for detecting adult infection with tapered tapeworms and tapeless tapeworms, which comprises reacting the serum of a subject (human) with the above-mentioned test drug.
- the present invention also provides a peptide comprising an amino acid sequence containing at least the 22nd to 65th amino acid sequence of any of the 20th to 85th amino acid sequences of any of SEQ ID NOs: 14 or SEQ ID NO: 5; And then reacting it with the serum of the subject, reacting it with a labeled probe, and detecting this label. It is.
- the present invention relates to a test kit for detecting adult infection of tapeworms and tapeworms with a serum power of a subject, wherein the test kit comprises any one of SEQ ID NOS: 14 fixed to a support.
- This test kit has an amino acid sequence containing at least the 22nd to 65th amino acids of the 85th amino acid sequence or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and the peptide power.
- test agent or antigen peptide of the present invention is considered to be extremely effective in serodiagnosis of humans. If the test agent of the present invention is applied to an antibody measurement system, the presence or absence of an adult infection can be determined by detecting a specific antibody from a test subject.
- Anchodiasis and arborealis are mild diseases as they only involve an adult in the digestive tract. However, adult infected people will pollute the living environment as egg sprayers without their knowledge. In particular, in the case of tapeworm, when scattered eggs are ingested by others, the larvae can invade the central nervous system (cysticercosis).
- Tapeworms and tapeworms are not rare diseases in developing countries, and tapeworms are particularly important in public health as they cause cysticercosis. Since humans are the only end hosts for these parasites, eradication is possible if adult carriers can be efficiently detected and anesthetized.
- test reagents and test methods of the present invention are thought to contribute to the efficiency of mass screening of migrants from endemic areas in developed countries.
- HLBP hydrophobic ligand binding protein
- Moniezia expansa (Mexp, SEQ ID NO: 7) was isolated for the first time from a tapeworm of Hedge (Non-Patent Document 1, 2403292A). Both are proteins derived from adults.
- Hdim and Mexp adult HLBPs (AHLBPs) and the hook-free tapeworms obtained by the present inventors (AHLBPs)
- Taenia saginata (abbreviated as Tsag) Different from adult AHLBP (40-49% homology).
- Tsag_AHLBP_c20 (SEQ ID NOs: 1, 8) of the adult tape-free tapeworm obtained by the present inventors,
- Table 1 shows a comparison between Tsag_AHLBP_c35 (SEQ ID NOS: 4,11) and exon (Tsol_exon) of adult barculates (SEQ ID NOs: 5, 12). [table 1]
- HLBP adult HLBP
- Tsag tapeworm
- Tsol tapeworm
- the present inventors used RT-PCR to compare what HLBP gene is expressed between the larval stage and the adult stage, using a tapeworm as a model. As a result, although various HLBP genes were expressed during the larval stage, it was confirmed that these larval HLBP genes were not expressed at all in adults. Then, when a cDNA library of the adult tapeworm was searched, it was possible to clone an adult HLBP gene having a homology different from that of the larval HLBP gene (Examples 1 and 2).
- HLBP molecules belonging to the same family were present in larvae and adults, and their expression was strictly controlled during the larval and adult stages. This means that the larval and adult antibody responses can be detected separately using each HLBP molecule as an antigen.
- a recombinant protein of E. coli was produced using the cleaved adult HLBP gene and reacted with the sera of adults without infected tapeworms or tapeworms. The molecule was proven to be antigenic, helping to use it as a diagnostic antigen.
- the test agent (antigen) of the present invention is used to react with an antibody produced in a subject (human) infested with a tape-less tapeworm or a tape-shaped tapeworm, thereby obtaining a tape-less tapeworm or a hook. It can be tested for the presence of tapeworm parasitism. Examples of such a test subject include serum, urine, and the like of a subject, and preferably use serum. If the test subject is parasitized with a tape-less tapeworm or a tapeworm, the antibody reacts with the antigen because the antibody is produced and present in the serum.
- the method for detecting the antigen-antibody reaction is not particularly limited, and examples thereof include an immunoblot method, a dot plot method, and an ELISA method.
- a preferable test method for a tape-less tapeworm or a tape-shaped tapeworm is to immobilize the antigen of the present invention on a support, react it with the serum of a subject, and react it with a labeled probe. And detecting this label.
- a washing step is appropriately inserted between each step.
- the support is not particularly limited, but polystyrene or the like can be used.
- This antigen is reacted with an antibody present in the serum of a subject (when a tape-less tapeworm or parasitoids is parasitized), and further reacted with a probe that recognizes this antibody.
- probes include anti-human HgG antibodies, protein G, protein A, protein L, and the like.
- This probe is usually labeled.
- the label includes a radioisotope ( 12 12 , an enzyme (peroxidase, alkaline phosphatase).
- an enzyme antibody is used, a change in the substrate (eg, coloration) can be observed by reacting the substrate. .
- the antigen of the present invention can be synthesized, and therefore can be conveniently and stably supplied as a test antigen, and quality control is easy.
- the degenerate primer (FYDEDPL (SEQ ID NO: 16) where the amino acid sequence is conserved in adult HLBP (Non-Patent Document 1, 2403292A)
- TTYTAYGAYGARGAYCCNYT SEQ ID NO: 17
- SEQ ID NO: 15 the reverse primer of the tag sequence (SEQ ID NO: 15)
- the above-described adult tapeless tapeworm cDNA was amplified to form a type III PCR amplification. did.
- Tsag_AHLBP_c20 (SEQ ID NO: 8 (corresponding amino acid sequence: SEQ ID NO: 1)
- Tsag_AHLBP_c25 (SEQ ID NO: 9 (corresponding amino acid sequence: SEQ ID NO: 2)
- Tsag_AHLBP_c27 (SEQ ID NO: 10 (corresponding amino acid sequence: SEQ ID NO: 3)
- Tsag_AHLBP_c35 (SEQ ID NO: 11 (corresponding amino acid sequence: SEQ ID NO: 4)) was obtained.
- the sequence corresponding to position 119 of these amino acid sequences is a putative signal sequence.o
- genomic DNA of tapeworms collected in China was used as type I DNA, a forward primer (SEQ ID NO: 20) created from the signal sequence of Tsag_AHLBP, and a reverse primer near the stop codon (SEQ ID NO: 18).
- SEQ ID NO: 20 a forward primer created from the signal sequence of Tsag_AHLBP
- SEQ ID NO: 18 a reverse primer near the stop codon
- Tsol_AHLBP_exon (121-253 of SEQ ID NO: 12 (corresponding amino acid sequence: SEQ ID NO: 5). This exon site was estimated from the fact that the homology with Tsag_AHLBP is high!).
- Tsag_AHLBP_c20 64th to 195th of SEQ ID NO: 8
- Tsag_AHLBP_c35 64th to 195th of SEQ ID NO: 11
- Tsol_AHLBP_exon 121 to 253th of SEQ ID NO: 12
- FIG. 2 shows a photograph of an immunoblot obtained by reacting with (B).
- CBD + Tsag—AHLBP—c20
- CBD + Tsag—AHLBP—c35
- CBD + Tsol—AHLBP—exon
- Both sera can be seen to react with AHLBP.
- Infected people serum it is determined that the positive Do not react with a fusion partner CBD, it was also sure 0
- HLBP which is a tapeworm and a tapeworm
- HLBP which is an adult of tapeworm and non-tape
- has high amino acid homology It has been found that can also be used.
- FIG. 1 is a view showing an enzyme map of a pET35b vector (Novagen, USA, FIG. 1).
- FIG. 2 is a diagram showing an immunoblot of Example 1. l: CBD + Tsag_AHLBP_c20, 2:
- A shows the serum of an adult without tapeworm, and B shows the serum of an adult with tapeworm.
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Abstract
【課題】 無鉤条虫と有鉤条虫の成虫がヒトに寄生した場合の成虫感染を検査する方法を提供する。
【解決手段】 条虫から分離した成虫由来の疎水性リガンド結合性蛋白（HLBP, hydrophobic ligand binding protein）に抗原性があることを見出した。配列番号1～4のいずれかの20～85番目のアミノ酸配列のうち少なくとも22～65番目を含むアミノ酸配列又は配列番号5のアミノ酸配列から成るペプチドを主成分とする有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査薬である。被検者（ヒト）の血清をこの検査薬と反応させて有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染を検査できる。
Description
有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査薬及び方法
技術分野
[0001] この発明は、有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査のための検査薬及びこれ らを検査する方法に関する。
背景技術
[0002] 人体寄生性のテ-ァ科条虫のうち公衆衛生上重要なものとして、ヒトが終宿主とな る有鉤条虫と無鉤条虫、ィヌゃキツネが終宿主となる単包条虫と多包条虫を挙げるこ とがでさる。
有鉤条虫（Taenia solium)はその幼虫（有鉤嚢虫（Cysticercus cellulosae)と呼ばれ る）を筋肉内に宿しているブタ肉等を十分火を通さずに摂取したヒトの消化管に寄生 する「きしめん様の数メートルの長さに発育するサナダムシ」である。この成虫を宿し ているヒトから排泄される虫卵を経口摂取したヒトゃブタの全身に有鉤嚢虫（以下、嚢 虫と略す。）が発育する。ヒトへの有鉤条虫の感染は基本的には「嚢虫が感染してい るブタ肉」の摂取による。ヒト（嚢虫→有鉤条虫→虫卵)ーブタ（虫卵→嚢虫）ーヒト（嚢 虫→有鉤条虫→虫卵）の間で、この寄生虫の生活環が完成するものであり、ヒトが「 嚢虫感染ブタ肉の生食」を避けることによって長期的にはこの寄生虫の生活環を絶 つことができるものである。し力し、人体嚢虫症（cysticercosis)の問題点は有鉤条虫 を宿しているヒト (保虫者)から排泄された虫卵がブタに感染するのみならず、他のヒト にも感染することである。
無鉤条虫（Taenia saginata)は有鉤条虫と同様の構造と生活環をもつ力 症状は少 なく人体糸且織に嚢虫を生ずることはない。
[0003] 有鉤条虫と無鉤条虫の感染を終宿主において証明するために、糞便から片節ゃ虫 卵を検出する方法が一般的であった。最近では、終宿主力 排泄されたものの形態 学的な同定ば力りでなぐ糞便内の抗原や DNAの検出によって条虫感染を確認する ことが試みられている。しかし、血清抗体の検出によって成虫感染を証明する実用的 な方法は未開発であった (非特許文献 1)。
一方、疎水性リガンド結合性蛋白 (HLBP, hydrophobic ligand binding protein)は条 虫類に特有な分子量約 10 kDaの低分子蛋白で、脂質やビタミンと結合し、生命維持 に必須な成分と考えられているが、その詳細な機能は不明であった (非特許文献 2)
[0004] 非特許文献 1：検査と技術第 26卷第 4号 391-393 (1998)
非特許文献 2 : FEBS Letters 487 (2000) 181-184
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 本発明は、無鉤条虫と有鉤条虫の成虫がヒトに寄生した場合に検便以外の方法で 成虫感染を検査する方法を提供することを目的とする。
課題を解決するための手段
[0006] 消化管に寄生する条虫類の成虫には宿主の抗体が産生されにくいと一般に考えら れている。しかし、本発明者らは、条虫から分離した成虫由来の疎水性リガンド結合 性蛋白（HLBP, hydrophobic ligand binding protein)に抗原性があることを見出し、本 発明を完成させるに至った。
[0007] 即ち、本発明は、配列番号 1一 4のいずれかの 20— 85番目のアミノ酸配列のうち少 なくとも 22— 65番目を含むアミノ酸配列（即ち、配列番号 1一 4のいずれかの 20— 22番 目から 65— 85番目までのアミノ酸配列）又は配列番号 5のアミノ酸配列力 成るぺプ チドを主成分とする有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査薬である。
また本発明は、被検者 (ヒト)の血清を上記の検査薬と反応させることから成る有鉤 条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査方法である。
[0008] また本発明は、配列番号 1一 4のいずれかの 20— 85番目のアミノ酸配列のうち少な くとも 22— 65番目を含むアミノ酸配列又は配列番号 5のアミノ酸配列力 成るペプチド を支持体に固定し、これに被検者の血清を反応させ、これに標識を付したプローブを 反応させ、この標識を検出することから成る、有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の 検査方法である。
更に、本発明は、被検者の血清力も有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染を検出す るための検査キットであって、支持体に固定された配列番号 1一 4のいずれかの 20—
85番目のアミノ酸配列のうち少なくとも 22— 65番目を含むアミノ酸配列又は配列番号 5のアミノ酸配列力も成るペプチド力も成る検査キットである。
発明の効果
[0009] 本発明の検査薬 (又は抗原ペプチド）はヒトの血清診断にお!、て極めて有効である と考えられる。本発明の検査薬を抗体測定系に応用すれば、検査対象者から特異抗 体を検出することで、成虫感染の有無を判定することが可能となる。
無鉤条虫症，有鉤条虫症は消化管に成虫が寄生するだけなので、疾病としては軽 度なものである。しかし、成虫感染者は本人に自覚のないままに虫卵散布者として生 活環境を汚染することになる。特に、有鉤条虫の場合、散布された虫卵が他人に経 口的に摂取されると、幼虫が中枢神経系を侵すことがある (有鉤嚢虫症)。
無鉤条虫や有鉤条虫は発展途上国では稀な疾患ではなぐ特に有鉤条虫は嚢虫 症を引き起こすので公衆衛生上特に重要である。これらの寄生虫はヒトが唯一の終 宿主であるため、成虫の保有者を効率よく検出し、集団駆虫することができれば、根 絶が可能となる。
一方、先進国では無鉤条虫や有鉤条虫の土着は認められないが、発展途上国の 流行地から旅行者及び労働者が多数流入しており、二次感染の危険が懸念されて いる。本発明の検査薬や検査法は先進国での流行地からの移住者の集団検診の効 率化に貢献すると考えられる。
発明を実施するための最良の形態
[0010] HLBP(hydrophobic ligand binding protein)はもともと縮小条虫の成虫において特定 された蛋白であり、 Hymenolepis diminuta (Hdim、配列番号 6)というネズミの条虫や
Moniezia expansa (Mexp、配列番号 7)というヒッジの条虫から初めて分離された（非 特許文献 1、 2403292A)。両者とも成虫由来の蛋白である。
これら Hdim及び Mexp成虫由来 HLBP(AHLBP)と、今回発明者らが得た無鉤条虫（
Taenia saginata, Tsagと略）成虫の AHLBPとは異なる（相同性 40— 49%)。
[0011] 一方、今回発明者らが得た無鉤条虫成虫の Tsag_AHLBP_c20 (配列番号 1,8)、
Tsag_AHLBP_c35 (配列番号 4,11)及び有鉤条虫成虫のェクソン (Tsol_exon) (配列番 号 5, 12)の比較を表 1に示す。
[表 1]
これら無鉤条虫 (Tsag)と有鉤条虫 (Tsol)の成虫 HLBP(AHLBP)はきわめて類似して いる（相同性 89— 82%)。これは、無鉤条虫の成虫 HLBPが無鉤条虫症及び有鉤条虫 症の両者の抗体検出に抗原として利用できることを意味している。
[0012] 本発明者らは無鉤条虫をモデルとして、幼虫期と成虫期にどの様な HLBP遺伝子 が発現しているかを RT- PCR法で比較した。その結果、幼虫期には様々な HLBP遺 伝子が発現しているものの、成虫ではこれらの幼虫 HLBP遺伝子が全く発現してい ないことを確認した。そこで、無鉤条虫成虫の cDNAライブラリーを検索したところ、幼 虫 HLBP遺伝子とはホモロジ一の異なる成虫 HLBP遺伝子をクロー-ングすることに 成功した（実施例 1及び 2)。
[0013] 同一のファミリーに属す HLBP分子が幼虫と成虫に存在し、それらは幼虫期と成虫 期で厳密に発現コントロールされていることは予想外であった。これはそれぞれの HLBP分子を抗原として用いれば、幼虫期と成虫期の抗体応答を区別して検出でき ることを意味する。後述の実施例で示すが、クローユングした成虫 HLBP遺伝子で大 腸菌による組換え蛋白を作成して、無鉤条虫や有鉤条虫の成虫感染者の血清と反 応させたところ、成虫 HLBP分子には抗原性があることが証明され、診断用抗原として 利用できることが分力つた。
[0014] 本発明の検査薬 (抗原)を用いて、無鉤条虫や有鉤条虫が寄生した被検者 (ヒト）に 生成する抗体と反応させることにより、無鉤条虫や有鉤条虫の寄生の有無を検査す ることができる。このような被検物として、被検者の血清、尿等が挙げられるが、好まし くは血清を用いる。被検者に無鉤条虫や有鉤条虫が寄生していれば、血清中にその 抗体が生成されて存在するため、この抗体と上記抗原とが反応する。この抗原抗体 反応を検知する方法に特に制限はないが、ィムノブロット法、ドットプロット法、 ELISA 法等が挙げられ、 ELISA法を用いることが好まし 、。
[0015] 好ましい無鉤条虫や有鉤条虫の検査方法は、本発明の抗原を支持体に固定し、こ れに被検者の血清を反応させ、これに標識を付したプローブを反応させ、この標識を 検出することから成る。各工程間に適宜洗浄工程を入れることが好ましい。
この支持体には、特に制限はないが、ポリスチレン等を用いることができる。 この抗原を、被検者 (無鉤条虫や有鉤条虫が寄生した場合)の血清中に存在する 抗体と反応させ、更にこの抗体を認識するプローブを反応させる。このプローブとして は、抗ヒ HgG抗体、プロテイン G、プロテイン A、プロテイン Lなどが挙げられる。この プローブには通常標識を付す。この標識としては、放射性同位元素 (12¾、酵素 (ぺ ルォキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ）が挙げられる。酵素抗体を用いた場合に は、基質を反応させてその変化 (着色等)を観察すればょ 、。
本発明の抗原は、合成可能であり、そのため検査抗原として簡便かつ安定に供給 することができ、かつ品質管理が容易である。
[0016] 以下、実施例にて本発明を例証するが本発明を限定することを意図するものでは ない。
纖例 ί 免疫不全マウスで発育させた無鉤条虫幼虫、または中国人から駆虫して得た無鉤条 虫成虫を材料として、常法に従ってそれぞれ mRNAを取り出し、タグ配列付加オリゴ dTプライマー（配列番号 13)を用いて逆転写し、幼虫 cDNAと成虫 cDNAを作成し た。幼虫 cDNAを铸型として、幼虫 HLBPのシグナル配列から作成したフォワードプラ イマ一（配列番号 14)とタグ配列リバースプライマー（配列番号 15)で PCRを行!、、増 幅産物をクローユングした。その結果、幼虫 HLBPには膨大な多型があることが判明 した。し力し、この幼虫由来のフォワードプライマー（配列番号 14)を用いて成虫 cDNA を铸型 DNAとした場合はまったく増幅産物は得られない。
縮小条虫の成虫 HLBP (非特許文献 1, 2403292A)でアミノ酸配列が保存されてい る部位 FYDEDPL (配列番号 16)から degenerate primer (
TTYTAYGAYGARGAYCCNYT,配列番号 17)を作成し、これとタグ配列のリバースプ ライマー（配列番号 15)を用いて、上記の無鉤条虫成虫 cDNAを铸型として PCR増幅
した。
[0017] 増幅産物の塩基配列を読んだところ、 HLBPが増幅されたことがわ力つたので、次 にこの配列のストップコドン近傍からリバースプライマー（配列番号 18)を作成した。 また発明者の研究室に保存されているファージベクターで無鉤条虫成虫 cDNAライ ブラリーから、このファージ液を铸型として PCR増幅を行なった。その際、ベクターのク ローニング部位近傍のフォワードプライマー（配列番号 19)と新たに作成した HLBPス トップコドン近傍リバースプライマー（配列番号 18)を用いた。増幅産物はクローニン グして全長を含んでいるものを選び出した。次に、シグナル配列力もフォワードプライ マー（配列番号 20)を作成した。このプライマーとタグ配列リバースプライマー（配列番 号 15)を用いて、無鉤条虫成虫 cDNAを铸型として HLBP全長を PCR増幅した。
これをクローユングした結果、次の 4つの多型のみが観察された。 Tsag_AHLBP_c20 (配列番号 8 (対応アミノ酸配列:配列番号 1))、 Tsag_AHLBP_c25 (配列番号 9 (対応ァ ミノ酸配列:配列番号 2))、 Tsag_AHLBP_c27 (配列番号 10 (対応アミノ酸配列:配列番 号 3))、 Tsag_AHLBP_c35 (配列番号 11 (対応アミノ酸配列:配列番号 4))を得た。これ らのアミノ酸配列の 1一 19番目に相当する配列はシグナル配列 (putative signal sequence)である o
[0018] 一方、中国で採集された有鉤条虫のゲノム DNAを铸型 DNAとして、 Tsag_AHLBPの シグナル配列から作成したフォワードプライマー（配列番号 20)、またストップコドン近 傍のリバースプライマー（配列番号 18)で PCRを行 、、 Tsol_AHLBP_exon (配列番号 12の 121— 253番目（対応アミノ酸配列:配列番号 5)を増幅した。この exon部位は Tsag_AHLBPとホモロジ一が高!、ことから推定した。
実施例 1
[0019] 準備例 1で得た Tsag_AHLBP_c20 (配列番号 8の 64— 195番目）、 Tsag_AHLBP_c35 ( 配列番号 11の 64— 195番目）、 Tsol_AHLBP_exon (配列番号 12の 121— 253番目）の 塩基配列を pET35bベクター (Novagen, USA,図 1)の EcoRI, Sailサイトに組込んだ。こ れらをそれぞれ大腸菌 BL21(DE3)pLysS (Novagen)に導入して、 Cellulose binding domain (CBD)との融合蛋白を作成した。
[0020] これらの融合蛋白を無鉤条虫成虫保有者の血清 (A)と有鉤条虫成虫保有者の血清
(B)と反応させて得たィムノブロットの写真を図 2に示す。図中の 1一 4は、ぞれぞれ（1 ) CBD+Tsag— AHLBP— c20、 (2) CBD+Tsag— AHLBP— c35、 (3) CBD+Tsol— AHLBP— exon 、 (4)lusion partner CBDのみを示す。いずれの血清も AHLBPと反応するのが分か る。陽性と判定された感染者血清は融合パートナーである CBDと反応しな 、ことも確 した 0
実施例 2
[0021] また実施例 1と同様の方法で、これらの組換え蛋白を無鉤条虫成虫感染者 3名、有 鉤条虫成虫感染者 2名と反応させたところ、融合蛋白の種類に関わらず、無鉤条虫 成虫感染者 3名中 2名（67%)、有鉤条虫成虫感染者 2名中 2名（100%)が IgG抗体陽 性と判定された。対照とした正常人血清 1名は陰性だった。
[0022] 以上の結果から、無鉤条虫及び有鉤条虫の成虫 HLBPには抗原性があることが示 された。また、有鉤条虫と無鉤条虫の成虫の HLBPはアミノ酸の相同性が高ぐ無鉤 条虫の成虫の HLBPは有鉤条虫 ·無鉤条虫どちらの成虫感染者の抗体検出にも利 用可能であることが明らかとなった。
図面の簡単な説明
[0023] [図 l]pET35bベクター (Novagen, USA,図 1)の酵素地図を示す図である。
[図 2]実施例 1のィムノブロットを示す図である。 l : CBD+Tsag_AHLBP_c20、 2 :
CBD+Tsag— AHLBP— c35、 3 : CBD+Tsol— AHLBP— exon、 4 :fosion partner CBDのみを 示す。 Aは、無鉤条虫成虫保有者の血清、 Bは、有鉤条虫成虫保有者の血清を用い たものを示す。
Claims
[1] 配列番号 1一 4のいずれかの 20— 85番目のアミノ酸配列のうち少なくとも 22— 65番目 を含むアミノ酸配列又は配列番号 5のアミノ酸配列力 成るペプチドを主成分とする 有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査薬。
[2] 被検者の血清を請求項 1に記載の検査薬と反応させることから成る有鉤条虫及び無 鉤条虫の成虫感染の検査方法。
[3] 配列番号 1一 4のいずれかの 20— 85番目のアミノ酸配列のうち少なくとも 22— 65番目 を含むアミノ酸配列又は配列番号 5のアミノ酸配列力 成るペプチドを支持体に固定 し、これに被検者の血清を反応させ、これに標識を付したプローブを反応させ、この 標識を検出することから成る、有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染の検査方法。
[4] 被検者の血清から有鉤条虫及び無鉤条虫の成虫感染を検出するための検査キット であって、支持体に固定された配列番号 1一 4のいずれかの 20— 85番目のアミノ酸配 列のうち少なくとも 22— 65番目を含むアミノ酸配列又は配列番号 5のアミノ酸配列から 成るペプチドから成る検査キット。
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