WO2001030988A8 - Procedes de fabrication et d'utilisation de reactifs de voies de synthese d'acides gras - Google Patents

Procedes de fabrication et d'utilisation de reactifs de voies de synthese d'acides gras

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Abstract

L'invention concerne un procédé de criblage de composés influant sur la biosynthèse d'acides gras, le procédé consistant en ce qui suit: (A) fournir un mélange de réaction comprenant: (1) (a) un groupe fonctionnel transporteur d'enzymes ou (b) des enzymes ou précurseurs suffisants pour générer un groupe fonctionnel transporteur d'enzymes; (2) une voie de signalisation bactérienne enzymatique comprenant au moins deux (et de préférence trois, voire quatre ou cinq) enzymes agissant de manière consécutive, sélectionnée dans le groupe constitué de: (a) malonyl-CoA:ACP transacylase, (b) β-kétoacyl-ACP synthase III, (c) β-kétoacyl-ACP réductase dépendant de NADPH, (d) β-hydroxyacyl-ACP déhydrase et (e) enoyl-ACP réductase; et (3) des substrats et cofacteurs nécessaires au fonctionnement des enzymes; (B) mettre en contact le mélange de réaction avec un agent biologique prospecté; (C) effectuer des mesures haut débit de l'activité de la voie de signalisation enzymatique; et (D) déterminer si la mise en contact a modifié l'activité de la voie de signalisation enzymatique. L'invention concerne aussi un procédé de dosage des composés influençant la biosynthèse d'acides gras, qui consiste en ce qui suit: (A) fournir un mélange de réaction comprenant: (1) (a) un groupe fonctionnel transporteur d'acyles ou (b) des enzymes et précurseurs suffisant pour générer le groupe fonctionnel transporteur d'acyles; (2) une voie de signalisation bactérienne enzymatique comprenant au moins deux enzymes agissant de manière consécutive, sélectionnée dans le groupe constitué de: (a) malonyl-CoA:ACP transacylase, (b) β-kétoacyl-ACP synthase III, (c) β-kétoacyl-ACP réductase dépendant de NADPH, (d) β-hydroxyacyl-ACP déhydrase et (e) enoyl-ACP réductase; et (3) des substrats et cofacteurs nécessaires pour le fonctionnement des enzymes; (B) mettre en contact le mélange de réaction avec un agent biologique prospecté; (C) effectuer des mesures haut débit de l'activité de la voie de signalisation enzymatique; et (D) déterminer si la mise en contact a modifié l'activité de la voie de signalisation enzymatique, pourvu qu'au moins ce qui suit soit valable: (1) la réductase enoyl-ACP est une réductase enoyl-ACP spécifique au NADH; ou (2) la β-kétoacyl-ACP synthase III et une β-kétoacyl-ACP synthase III dérivée de E.coli ou H. influenzae; ou (3) NADPH est fourni au stade de réaction de façon constante de manière à ce que la consommation de NADH par enoyl-ACP réductase (FabI) peut être quantifiée avec précision et sans interférence, ou une quantité efficace pour réduire la consommation de NADH par des enzymes plus dépendantes de NADPH; ou (4) la β-kétoacyl-ACP réductase dépendant de NADPH est dérivée de Streptococcus, Staphylococcus or Pseudomonas.
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