WO2000002881A2 - Use of cysteine derivatives for preparing a medicine for treating pathologies resulting from the formation of heterotrimeric g protein - Google Patents

Use of cysteine derivatives for preparing a medicine for treating pathologies resulting from the formation of heterotrimeric g protein Download PDF

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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • cysteine derivatives to prepare a medicament for treating pathologies which result from the formation of the heterotimeric protein G
  • the present invention relates in particular to the use of cysteine derivatives for preparing a medicament intended to treat pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein.
  • diseases include in particular diseases related to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine and paracrine regulation, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis , viral infection, immunological functions, diabetes, obesity, and benign and malignant proliferative diseases.
  • the G proteins are in fact the structural association of three distinct subunits called ⁇ , ⁇ and ⁇ , but function as dissociable entities constituted by ⁇ subunits on one side and ⁇ / ⁇ dimers on the other. .
  • the G proteins participate in the transmission of signals from outside the cell thanks to its interaction with receptors with seven transmembrane domains inwards via various effectors including adenylate cyclase, phospholipase C or ion channels.
  • the enzyme adenylate cyclase generates cyclic AMP (cAMP) (cf. Gilman, A. G. Biosci. Rep. 15, 65-97 (1995)).
  • cAMP cyclic AMP
  • it is known that to activate adenylate cyclase it is necessary for the G proteins to be transiently in a heterotrimeric form, in which form the monomer constituted by an ⁇ subunit is associated with the dimer constituted by the ⁇ and ⁇ . It is only in this situation that the signal from outside the cell can activate the ⁇ subunit of a G protein, which after dissociation can modulate adenylate cyclase and modulate cAMP production.
  • ⁇ / ⁇ dimers can directly activate effectors leading to the activation of kinases regulated by extracellular signals (ERKs) or MAP kinases.
  • ERKs extracellular signals
  • MAP kinases kinases regulated by extracellular signals
  • a direct link between the ⁇ / ⁇ subunits and the src or src like kinases has been demonstrated (cf. Gutkind, J.S. J. Biol. Chem. 273, 1839-1842 (1998)).
  • bacterial toxins such as Vibrio choiera and Bortella pertussis
  • peptides such as mastoparan and suramin
  • G proteins cf. Freissmuth, M., Boehm, S., Beindl, W. , et al. Mol. Pharmacol. 49, 602-611 (1996); Boehm, S., Huck, S., Motejlek, A., et al. Journal of Neurochemistry 66, 1019-1026 (1996); Cachero, TG , Rigual, R., Rocher, A. & Gonzalez, C. Eur.J. Neurosci.
  • cholera toxin modifies the as subunit of protein G by adding ADP-ribose from NAD to an arginine-specific acceptor site. This completely blocks the activity of GTPase, causing persistent stimulation of its next effector, adenylate cyclase and leading to overproduction of cAMP.
  • cAMP cyclopentasine sodium, taurine, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematom, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma
  • X represents R 12 and Y represents R & , or X and Y complete a 6-membered ring, the set XY representing the radical -CH (R 8 ) -CH (R 9 ) -;
  • Ri represents H, an alkyl or lower alkylthio radical
  • R 2 and R 3 independently represent H or a lower alkyl radical
  • R 4 represents H 2 or O
  • R 5 represents H, or one of the lower alkyl, lower alkenyl, lower alkynyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of an alkyl radical lower, -O-RJO, -S (O) m R ⁇ o (m representing 0, 1, or 2), -N (R ⁇ oXRn), -NC (O) -R ⁇ o, -NH- (SO 2 ) -R ⁇ o, - CO2-R10, C (O) -N (R 10 ) (Rn), and - (SO 2 ) - N (R ⁇ o Rn);
  • R and R 7 independently represent H, a radical -C (O) -NH-CHRi 3 -C ⁇ 2 Ri 4 , or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or lower alkyl heterocycle radicals, these radicals possibly being able to be substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or lower alkoxy, N (R ⁇ oXRn), COOH, CON (R ⁇ o) (Rn), and halo, or Rô and R 7 together form an aryl radical or a heterocycle ;
  • R8 and R9 independently represent, H, or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or lower alkoxy radicals , N (R ⁇ o) (R ⁇ ), COOH, CON (R 10 ) (Rn) and halo, or R ⁇ and R 9 together form an aryl radical or a heterocycle;
  • Rio and Ri 1 independently represent H, an aryl or heterocycle radical, or an alkyl, arylalkyl or heterocycle lower alkyl radical;
  • R 12 represents NR 9 , S, or O
  • Ri 3 represents a lower alkyl radical optionally substituted by a radical chosen from the lower alkyl radicals, -OR 10 , -S (O) m Rjo (m representing 0, 1, or 2) and -N (R ⁇ oXRn); R 14 represents H or a lower alkyl radical; or the compounds of general formula (B):
  • Wj represents a residue derived from a cysteine in reduced or unreduced form
  • Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is optionally substituted
  • W 2 represents an amino acid, preferably an aliphatic amino acid
  • Zj represents a lower alkyl radical
  • Z 2 and Z 3 both represent H or else Z 2 and Z 3 together form a chain having from 2 to 4 elements chosen from the radicals -C (O) -, -CH 2 -, -CH (NH 2 ) - and -S-, it being understood that two successive elements are not both -C (O) -;
  • lower alkyl radical means a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms, and in particular the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl and tert-butyl, pentyl, neopentyl radicals, isopentyle, hexyle, isohexyle.
  • heterocycle radical is meant a radical consisting of one or more rings and including at least one heteroatom.
  • arylalkyl radical, alkyl heterocycle, alkylthio or lower alkoxy is meant the radicals whose alkyl radical has the meaning indicated above.
  • the radical Ar included in the formula (B) is optionally substituted by an alkyl radical comprising from 1 to 6 carbon atoms or an aryl radical, these alkyl or aryl radicals themselves being optionally preferentially substituted by an alkoxy radical having 1 to 4 carbon atoms, fluoro, chloro, bromo.
  • the aryl radical preferably a phenyl can itself be substituted by an alkyl radical.
  • the compounds of general formula (B) will be such that Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is substituted by a phenyl radical and W 2 represents an aliphatic amino acid.
  • the following compounds can be used to prepare medicaments intended to treat pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein:
  • the invention therefore relates first of all to the use of the compounds of general formula (A), (B) or (C) as described above for preparing a medicament intended for treating pathologies which result from the formation of the protein G heterotimeric.
  • it relates to the use of said inhibitors for preparing medicaments intended for treating diseases linked to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine regulation and paracrine, blood pressure, embryogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes and obesity.
  • the invention relates to the use of the compounds of general formula (A), (B) or (C) for preparing a medicament intended to treat cholera, Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS), diarrhea travel and early male familial puberty.
  • the subject of the invention is also new products of general formula (A) numbered from 1 to 7 and described below in the examples, namely: - 7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
  • the invention relates more particularly to the use of the abovementioned compounds for preparing a medicament intended for treating cholera, Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS), traveler's diarrhea and male familial precocious puberty.
  • the compounds of general formula (A) and their preparation are described in patent application WO 97/30053 or in the examples below.
  • the compounds of general formula (B) and their preparation are described in patent application WO 96/21456.
  • the preparation of the compounds of general formula (C) is described in PCT patent application WO 95/00497, except for the compound of formula (VII) for which the synthesis is described in the experimental part of this application.
  • compositions comprising a compound of the invention can be in the form of solids, for example powders, granules, tablets, capsules, liposomes or suppositories.
  • Suitable solid carriers can be, for example, calcium phosphate, magnesium stearate, talc, sugars, lactose, dextrin, starch, gelatin, cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose sodium, polyvinylpyrrolidine and wax.
  • compositions comprising a compound of the invention can also be presented in liquid form, for example, solutions, emulsions, suspensions or syrups.
  • suitable liquid carriers can be, for example, water, organic solvents such as glycerol or glycols, as well as their mixtures, in varying proportions, in water.
  • a medicament according to the invention can be done by topical, oral, parenteral, by injection (intramuscular, subcutaneous, intravenous, etc.), etc.
  • the route of administration will of course depend on the type of disease to be treated.
  • the administration dose envisaged for a medicament according to the invention is between 0.1 mg to 10 g depending on the type of pathology to be treated.
  • Example 1 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyI) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 1
  • L-phenylalanine (10.0 g; 60.6 mmol) is combined with PtO 2 (430 mg) in acetic acid (60 ml) and the mixture is hydrogenated at 20-50 psi H2 overnight. A 5% aqueous HCl solution is added to the mixture to obtain a clear solution and the hydrogenation is continued until the consumption of hydrogen ceases. The catalyst is removed by filtration and the filtrate concentrated under reduced pressure. The residue is taken up in methanol and water and the pH adjusted to 4.4 by addition of a 10% NaOH solution. The product obtained is recovered by filtration and used without additional purification.
  • the keto-ester obtained is dissolved in xylenes (100 ml) and ammonium acetate (19.5 g; 0.25 mol) is added. The mixture is heated under reflux for approximately 3 hours with elimination of excess ACONH4 and of the water released via a Dean-Stark trap. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure, taken up in AcOEt and washed with a saturated NaHCO3 solution (100 ml) and a saturated NaCl solution (100 ml). The AcOEt phase is dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo. The crude product obtained is purified by flash chromatography on silica gel with a CHCl3 / MeOH 98/2 mixture as eluent. The fractions containing the pure product are combined and concentrated to give the product (2.52 g; 40%) in the form of a slightly brown foam which is used in the next step without further purification.
  • step l .c The crude intermediate from step l .c is dissolved in acetic acid (50 ml) containing a 10% Pd catalyst on carbon (152 mg), then hydrogenated under a pressure of 50 psi of H2 for 18 hours at room temperature. The catalyst is removed by filtration and the filtrate heated at 70 ° C for 2 hours. The mixture obtained is concentrated under reduced pressure, dissolved in CH2Cl2 (100 ml) and washed with saturated NaHCO3 solution (100 ml). The CH 2 C1 2 layer is dried over Na2SO4, filtered and concentrated to give a viscous oil which is used in the next step without further purification. Spec. mass: 324.3 MH +.
  • step 1.c The crude intermediate from step 1.c is dissolved in THF (25 ml) and treated at room temperature with an XM solution of BH3 in THF (25 ml) for half an hour then brought to reflux for 1 hour. The mixture is cooled by an ice bath and HCl AN (40 ml) is added dropwise at 0 ° C. The mixture is brought to room temperature then brought to reflux for 1 hour. The reaction medium is then cooled, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue is treated with a saturated NaHCO3 solution (50 ml) and extracted with CH2Cl2 (3x 50 ml). The CH2CI2 phases are dried over Na2SO4, filtered and concentrated to give a slightly brown oil (1.63 g; 87% yield compared to steps l.c, l .d and e). Spec. mass: 310.3 MH +.
  • step lf (3.54 g; 4.69 mmol) is dissolved in trifluoroacetic acid (TFA, 80 ml) containing triisopropylsilane (1.92 ml; 9.38 mmol) and the reaction mixture is stirred at room temperature under nitrogen for one hour. The reaction mixture is filtered and the filtrate concentrated under reduced pressure. The residue is extracted by trituration with an aqueous 0.1% TFA solution (6x 65 ml) and filtered. The crude product is purified by preparative HPLC on a Cl 8 column using a gradient from 0 to 20% of CH 3 CN in an aqueous solution of 0.1% TFA for 30 minutes. The pure product fractions are combined and lyophilized. The initial product is lyophilized twice from a dilute HCl solution to give the product in the form of its hydrochloride (740 mg; 32%). Spec. mass: 413.2 MH +.
  • Compound 2 is prepared according to Scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 1, 2-bromoacetophenone replacing 2-bromo-2'-methylacetophenone in step b. Spec. mass: 399.2 MH +.
  • Compound 3 is prepared according to Scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 1, Boc- (L) -Ser (Bzl) -OH replacing Cbz- (L) -cyclohexylalanine in step b and step d being replaced by deprotection using TFA and iP SiH according to a method analogous to reaction 1.g.
  • the product is obtained in the form of a couple of diastereoisomers in a 2: 3 proportion. Spec. mass: 453.2 MH +.
  • Compound 4 is prepared according to scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 3, Boc- (L) -Thr (Bzl) -OH replacing Boc- (L) -Ser ( Bzl) -OH in step b. Spec. mass: 467.3 MH +.
  • the keto-ester obtained is triturated with a 1: 1 mixture of Et O: hexanes (2x 40 ml) and then suspended in xylenes (100 ml).
  • Ammonium acetate (17.5 g; 0.23 mol) is added and the mixture is heated at reflux for approximately one and a half hours with elimination of AcONF j. in excess and water released through a Dean-Stark trap.
  • the reaction medium is washed with a saturated NaHCO 3 solution (50 ml), dried over Na 2 S0 4 , filtered and concentrated in vacuo to give 6.66 g (98%) of the desired product.
  • Intermedium 5.1 (746 mg; 2.00 mmol) is dissolved in THF (10 ml) containing triphenylphosphine (550 mg; 2.1 mmol) and phenol (198 mg; 2.1 mmol). The mixture is cooled to 0 ° C. under nitrogen and diethylazodicarboxylate (330 ⁇ l; 2.1 mmol) is added dropwise over 10 minutes. The reaction mixture is then stirred for 2 hours at room temperature. The reaction medium is then cooled again to 0 ° C. and triphenylphosphine (275 mg; 1.05 mmol) and phenol (99 mg; 1.05 mmol) are added.
  • Product 5 is prepared from intermediate 5.n according to a method analogous to that of step l .g. Spec. mass: 274.3 MH +.
  • Example 7 7- (2-arnino-1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 8- (phenylsulfonyIethyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine : 7:
  • Step 7.n is carried out according to a method analogous to step 5.n.
  • the crude product is used without further purification in the next step.
  • Step 7.o is carried out according to a method analogous to step 5.o. Spec. mass: 501.3 MH +.
  • R ' H or CH ,
  • Cys - Cysteine, Cys-al Cysteinal
  • Pen Penicillamine
  • Pen-al Penicillaminylal PHARMACOLOGICAL SECTION
  • MCF-7 cell lines human pleural cells, breast cancer
  • the American Tissue Culture Collection Rockville, Maryland, USA.
  • MCF-7 cells (2.10 cells / well) seeded in 24-well plates, are cultured for 5 days in Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco -Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by heating (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50,000 units 1 of penicillin and 50 mg / 1 streptomycin (Gibco-Brl, Cergy -Pontoise, France), and 2 mM glutamine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France).
  • the culture medium is replaced after two washes with a serum-free medium, whether or not supplemented with the agents specified for a time indicated in the various figures.
  • Agents activating the production of cyclic AMP are then added at 37 ° C.
  • the reaction is stopped after 30 minutes by removing the medium and rapidly adding 100 ⁇ l of 0.1N HCl solution. These extracts are frozen at -80 ° C until they are used.
  • concentration of cAMP is measured using a commercial measurement kit (reference NEK033 from NEN, Les Ulis, France) following the manufacturer's instructions. Radioactivity is determined by a Gamma counter (Gamma Master-1277, LKB, Turku, Finland).
  • MCF-7 cells (3000 cells / well) are cultured in 96-well plates in 80 ⁇ l of Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by heating (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50,000 units / 1 of penicillin and 50 mg / 1 streptomycin (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), and 2 mM glutamine (Gibco-Brl. Cergy-Pontoise, France) were seeded on a 96-well plate on day 0.
  • Eagle medium modified by Dulbecco Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France
  • 10% fetal calf serum inactivated by heating Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France
  • the cells were treated on day 1 for 96 hours with concentrations increasing up to 50 ⁇ M of each of the compounds to be tested. At the end of this period, the quantification of cell proliferation is evaluated by colorimetric test based on the cleavage of the tetrazolium salt WST1 by mitochondrial dehydrogenases in viable cells leading to the formation of formazan (Boehringer Mannheim, Meylan, France ). These tests are carried out in duplicate with 8 determinations per concentration tested. For each compound to be tested, the values included in the linear part of the sigmoid were used for a linear regression analysis and used to estimate the inhibitory concentration (IC50).
  • MCF7 cells (5.105 cells / well) are cultured in 6-well plates in Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum (Gibco- Brl, Cergy-Pontoise, France), a mixture of antibiotics: 50,000 units / 1 of penicillin and 50 mg / 1 of streptomycin (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) and 2 mM of glutamine (Gibco-Brl, Cergy -Pontoise, France).
  • the cells After 24 hours of culture, the cells are incubated for 48 hours in medium not containing serum to bring the cells to the resting state. The cells are then treated for 1 hour either with compound I or with PD98059 (Calbiochem, France Biochem, Meudon, France), a specific inhibitor of MAP kinase activation. The cells are then stimulated (or not) for 5 minutes with 12.5 ng / ml of epidermal growth factor (EGF).
  • EGF epidermal growth factor
  • the reaction is stopped by two washes with PBS (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), at 4 ° C containing neither calcium nor magnesium and by addition of 150 ⁇ l of lysis buffer at 4 ° C, the composition of which is the following: 10 mM tris, 150 mM NaCl, 2 mM EGTA, 2 mM dithiothreitol, 1 mM PMSF, 2 mM orthovanadate, 10 ⁇ g / ml leupeptin and 10 ⁇ g / ml aprotinin.
  • the proteins contained in the extracts are assayed using the Bradford method (Biorad reagents, Ivry-Sur-Seine, France).
  • MAP kinase activity is measured using a commercial measurement kit (reference RPN 84, Amersham, Life Science, Les Ulis, France) by following the manufacturer's instructions. Radioactivity is determined using a Packard scintillation counter (Tricarb 5000CA).
  • vaso-intestinal peptide was acquired from Bachem (Voisins le Bretonneux, France). Cholera toxin, forskolin, isoproterenol, prostaglandin E2 and PD 98059 were acquired from Calbiochem (France Biochem, Meodon, France). The compounds of formulas (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) and (VII) were supplied by Biomeasure Inc. (Milford, MA, USA). All these compounds were used following the recommendations of their manufacturers.
  • Figure 1 shows that the activation of adenylate cyclase by cholera toxin (200 ng / ml) or by forskolin (10 ⁇ M) leads to a very significant increase in the level of cyclic AMP.
  • Pretreatment of the cells for 30 minutes with 30 ⁇ M of compound (I) does not modify the production of cyclic AMP induced by the direct activator of the adenylate cyclase, forskolin.
  • the production of cyclic AMP stimulated by the direct activator of the subunit, the cholera toxin is strongly inhibited by the compound (I). This shows that adenylate cyclase, itself, is not modified by compound (I) and that the latter prevents the formation of the heterotrimeric complex.
  • VIP has been presented as an extracellular ligand of a receptor coupled to protein G which stimulates the synthesis of cyclic AMP in human breast cancer cells.
  • Figure 2 shows that VIP treatment of human MCF-7 breast cancer cells increases the intracellular amount of cyclic AMP in a concentration-dependent fashion.
  • the VIP concentration of 10 nM which offers a quasi-optimal cyclic AMP production will be used for the following tests. This concentration is in agreement with the data already published concerning the human breast cancer cell line T47D.
  • FIG. 3 shows that a 30-minute pretreatment of MCF-7 cells from in vitro cultures with the compound of formula (I) is sufficient to inhibit, in a concentration-dependent manner, the accumulation of cyclic AMP stimulated by the VIP. Almost complete inhibition was obtained at a concentration of 100 ⁇ M of the compound of formula (I).
  • FIG. 4 shows that a treatment of one hour with the compound of formula (I) is sufficient to modify the response to VIP. Longer duration treatments (8 hours and 24 hours) continue to inhibit the production of cyclic AMP but the main effect is obtained very quickly.
  • Compound (I) is also capable of inhibiting the formation of cyclic AMP induced by other agents which stimulate receptors with seven transmembrane domains.
  • the activity of adenylate cyclase very greatly increased with prostaglandin E 2 is inhibited by a 30-minute treatment with compound (I). This suggests that the treatment of cells with compound (I) modifies the heterotrimeric form of the G proteins by dissociating the subunit of the ⁇ / ⁇ dimer.
  • the inhibition of stimulation by VIP is not restricted to compounds of structure analogous to that of the compound of formula (I). As shown in Table I, the compounds (II), (III), (IV) , (V), (VI) and (VII) tested in the same model, are also capable of reducing the amount of cyclic AMP induced by VIP.
  • FIG. 6 shows that a treatment of the cells for 1 hour with the compound (I) doubles the basal activity of the MAP kinase. This suggests that by preventing the formation of the heterotimeric complex, compound (I) releases the heterodimer - which, in turn, remains bound to the membrane and activates the ras pathway.
  • FIG. 7 shows that after a stimulation of MAP kinase by growth factor EGF for 5 minutes, the activity of the enzyme is increased by approximately 7 times.
  • Pretreatment for 1 hour of the cells either with compound (I) or with PD98059, a specific inhibitor of MAP kinase activation, reduced by 2 times the activity of MAP kinase.
  • Table II indeed shows that compounds (I), (II), (III) and (IV) are capable of inhibiting the proliferation in vitro of human tumor cells MCF7.
  • the cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compounds I, II, III and IV (30 ⁇ M) which are then stimulated by 10 " 8 M of VIP.
  • the quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay.
  • the results of the IC 50 are expressed in ⁇ M and represent the average of 2 experiments.
  • Figure 1 Effect of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by cholera toxin or forskolin in MCF7 cells
  • the cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compound I (30 ⁇ M) and then stimulated either by cholera toxin (200 ng / ml) for 90 minutes or by forskolin (10 ⁇ 5 M) for 30 minutes.
  • the cells are stimulated for 30 minutes by the VIP at the indicated concentrations.
  • the quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay.
  • the cells are incubated for 24 hours in the presence of increasing concentrations of compound I and then stimulated for 30 minutes with 10 " 8 M of VIP.
  • the quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay.
  • FIG. 4 Effect of incubation time of MCF7 cells in the presence of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by VIP
  • the cells are incubated for 1, 8 or 24 hours in the presence or not of compound I (30 ⁇ M) and then stimulated with 10 " 8 M of VIP.
  • the quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay.
  • Figure 5 Effect of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by VIP, isoproterenol or prostaglandin E 2 in MCF7 cells
  • the cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compound I
  • Figure 6 Effect of compound I on the basal activity of MAP kinase in MCF7 cells.
  • the cells deprived of serum for 48 hours, are treated for 1 hour with compound I (10 and 50 ⁇ M).
  • Figure 7 Effect of compound I compared to PD98059 on the activity of MAP kinase in MCF7 cells.

Abstract

The invention concerns the use of cysteine derivatives for preparing a medicine for treating diseases resulting from the formation of heterotrimeric G protein. Said diseases include in particular diseases related to biological functions or the following disorders: smell, taste, light perception, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of endocrine and exocrine glands, autocrine and paracrine regulation, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes, obesity, benign and malign proliferative diseases. Said cystein derivatives comprise in particular: bis-1,1'-[7-(2-amino-1-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylmethyl)-2-(2-methoxyphenyl)-5,6,7,8-tetrahydroimidazol[1,2a]pyrazine (I) disulphide; and bis-1,1'-7- (2-amino- 1-oxo-thiopropyl- (2-(1-naphthyl)-8- (2-methylpropyl)- 5,6,7,8- tetrahydroimidazol [1,2a]pyrazin-7-yl) disulphide (II).

Description

Utilisation de dérivés de la cysteine pour préparer un médicament destiné à traiter les pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique Use of cysteine derivatives to prepare a medicament for treating pathologies which result from the formation of the heterotimeric protein G
La présente invention concerne notamment l'utilisation de dérivés de la cysteine pour préparer un médicament destiné à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique. Ces maladies comprennent en particulier des maladies liées aux fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, prolifération cellulaire bénigne, oncogénese, infection virale, fonctions immunologiques, diabète, obésité, et maladies prolifératives bénignes et malignes.The present invention relates in particular to the use of cysteine derivatives for preparing a medicament intended to treat pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein. These diseases include in particular diseases related to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine and paracrine regulation, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis , viral infection, immunological functions, diabetes, obesity, and benign and malignant proliferative diseases.
Les protéines G sont en fait l'association structurale de trois sous-unités distinctes appelées α, β et γ, mais fonctionnent comme des entités dissociables constituées par des sous-unités α d'un côté et des dimères β / γ de l'autre.The G proteins are in fact the structural association of three distinct subunits called α, β and γ, but function as dissociable entities constituted by α subunits on one side and β / γ dimers on the other. .
Les protéines G participent à la transmission de signaux de l'extérieur de la cellule grâce à son interaction avec les récepteurs à sept domaines transmembranaires vers l'intérieur par l'intermédiaire de différents effecteurs incluant l'adénylate cyclase, la phospholipase C ou encore les canaux ioniques. L'enzyme adénylate cyclase génère de l'AMP cyclique (AMPc) (cf. Gilman, A. G. Biosci.Rep. 15, 65-97 (1995)). Ainsi, on sait que pour activer l'adénylate cyclase, il est nécessaire que les protéines G soient transitoirement dans une forme hétérotrimérique, forme dans laquelle le monomère constitué par une sous-unité α est associée au dimère constitué par les sous-unités β et γ. C'est uniquement dans cette situation que le signal de l'extérieur de la cellule peut activer la sous-unité α d'une protéine G, laquelle pourra après dissociation moduler l'adénylate cyclase et moduler la production d'AMPc.The G proteins participate in the transmission of signals from outside the cell thanks to its interaction with receptors with seven transmembrane domains inwards via various effectors including adenylate cyclase, phospholipase C or ion channels. The enzyme adenylate cyclase generates cyclic AMP (cAMP) (cf. Gilman, A. G. Biosci. Rep. 15, 65-97 (1995)). Thus, it is known that to activate adenylate cyclase, it is necessary for the G proteins to be transiently in a heterotrimeric form, in which form the monomer constituted by an α subunit is associated with the dimer constituted by the β and γ. It is only in this situation that the signal from outside the cell can activate the α subunit of a G protein, which after dissociation can modulate adenylate cyclase and modulate cAMP production.
On sait aussi que les dimères β / γ peuvent activer directement des effecteurs conduisant à l'activation de kinases régulées par des signaux extracellulaires (ERKs) ou des MAP kinases. Un lien direct entre les sous-unités β / γ et les kinases src ou src like a été démontré (cf. Gutkind, J.S. J.Biol.Chem. 273, 1839-1842 (1998)).It is also known that the β / γ dimers can directly activate effectors leading to the activation of kinases regulated by extracellular signals (ERKs) or MAP kinases. A direct link between the β / γ subunits and the src or src like kinases has been demonstrated (cf. Gutkind, J.S. J. Biol. Chem. 273, 1839-1842 (1998)).
Par ailleurs, des toxines bactériennes comme Vibrio choiera et Bortella pertussis, des peptides comme le mastoparan et la suramine ont été présentés comme modulant directement l'activité des protéines G (cf. Freissmuth, M., Boehm, S., Beindl, W., et coll. Mol.Pharmacol. 49, 602-611 (1996) ; Boehm, S., Huck, S., Motejlek, A., et coll. Journal of Neurochemistry 66, 1019-1026 (1996) ; Cachero, T.G., Rigual, R., Rocher, A. & Gonzalez, C. Eur.J.Neurosci. 8, 2320-2327 (1996) ; Danilenko, M., Worland, P. , Carlson, B . , Sausville, E.A. & Sharoni, Y. Biochem.Biophys.Res.Commun. 196, 1296-1302 (1993) ; Beindl, W., Mitterauer, T., Hohenegger, M., Ijzerman, A. P., Nanoff, C. & Freissmuth, M. Mol.Pharmacol. 50, 415-423 (1996)).In addition, bacterial toxins such as Vibrio choiera and Bortella pertussis, peptides such as mastoparan and suramin have been presented as directly modulating the activity of G proteins (cf. Freissmuth, M., Boehm, S., Beindl, W. , et al. Mol. Pharmacol. 49, 602-611 (1996); Boehm, S., Huck, S., Motejlek, A., et al. Journal of Neurochemistry 66, 1019-1026 (1996); Cachero, TG , Rigual, R., Rocher, A. & Gonzalez, C. Eur.J. Neurosci. 8, 2320-2327 (1996); Danilenko, M., Worland, P., Carlson, B. , Sausville, EA & Sharoni, Y. Biochem.Biophys.Res.Commun. 196, 1296-1302 (1993); Beindl, W., Mitterauer, T., Hohenegger, M., Ijzerman, AP, Nanoff, C. & Freissmuth, M. Mol. Pharmacol. 50, 415-423 (1996)).
Par exemple, la toxine cholérique modifie la sous-unité as de la protéine G par addition d'un ADP-ribose provenant du NAD à un site accepteur spécifique arginine. Ceci bloque complètement l'activité de la GTPase, provoquant une stimulation persistante de son effecteur suivant, l'adénylate cyclase et conduisant à une surproduction d'AMPc.For example, cholera toxin modifies the as subunit of protein G by adding ADP-ribose from NAD to an arginine-specific acceptor site. This completely blocks the activity of GTPase, causing persistent stimulation of its next effector, adenylate cyclase and leading to overproduction of cAMP.
Les effets néfastes d'un taux anormal d'AMPc sont également connus et ont notamment lieu au niveau des fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, prolifération cellulaire bénigne, oncogénese, infection virale et fonctions immunologiques, diabète et obésité.The harmful effects of an abnormal level of cAMP are also known and take place in particular at the level of the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine regulation and paracrine, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis, viral infection and immunological functions, diabetes and obesity.
La demanderesse vient de découvrir que certains dérivés de la cysteine, à savoir les composés de formule générale (A)The Applicant has just discovered that certain derivatives of cysteine, namely the compounds of general formula (A)
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000004_0001
(A)(AT)
correspondant aux sous-formules (Al) ou (A2) :corresponding to the sub-formulas (Al) or (A2):
Figure imgf000004_0002
dans lesquelles :
Figure imgf000004_0002
in which :
X représente R12 et Y représente R&, ou X et Y complètent un cycle à 6 chaînons, l'ensemble X-Y représentant le radical -CH(R8)-CH(R9)- ;X represents R 12 and Y represents R & , or X and Y complete a 6-membered ring, the set XY representing the radical -CH (R 8 ) -CH (R 9 ) -;
Ri représente H, un radical alkyle ou alkylthio inférieur ;Ri represents H, an alkyl or lower alkylthio radical;
R2 et R3 représentent indépendamment H ou un radical alkyle inférieur ;R 2 and R 3 independently represent H or a lower alkyl radical;
R4 représente H2 ou O ;R 4 represents H 2 or O;
R5 représente H, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, alkényle inférieur, alkynyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé d'un radical alkyle inférieur, -O-RJO, -S(O)mRιo (m représentant 0, 1, ou 2), -N(RιoXRn), -N-C(O)-Rιo, -NH-(SO2)-Rιo, -CO2-R10, C(O)-N(R10)(Rn), et -(SO2)- N(Rιo Rn) ;R 5 represents H, or one of the lower alkyl, lower alkenyl, lower alkynyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of an alkyl radical lower, -O-RJO, -S (O) m Rιo (m representing 0, 1, or 2), -N (RιoXRn), -NC (O) -Rιo, -NH- (SO 2 ) -Rιo, - CO2-R10, C (O) -N (R 10 ) (Rn), and - (SO 2 ) - N (Rιo Rn);
R et R7 représentent indépendamment H, un radical -C(O)-NH-CHRi3-Cθ2Ri4, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé des radicaux OH, alkyle ou alkoxy inférieur, N(RιoXRn), COOH, CON(Rιo)(Rn), et halo, ou Rô et R7 forment ensemble un radical aryle ou un hétérocycle ;R and R 7 independently represent H, a radical -C (O) -NH-CHRi 3 -Cθ 2 Ri 4 , or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or lower alkyl heterocycle radicals, these radicals possibly being able to be substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or lower alkoxy, N (RιoXRn), COOH, CON (Rιo) (Rn), and halo, or Rô and R 7 together form an aryl radical or a heterocycle ;
R8 et R9 représentent indépendamment, H, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé des radicaux OH, alkyle ou alkoxy inférieur, N(Rιo)(Rπ), COOH, CON(R10)(Rn) et halo, ou Rβ et R9 forment ensemble un radical aryle ou un hétérocycle ;R8 and R9 independently represent, H, or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or lower alkoxy radicals , N (Rιo) (Rπ), COOH, CON (R 10 ) (Rn) and halo, or Rβ and R 9 together form an aryl radical or a heterocycle;
Rio et Ri 1, représentent indépendamment H, un radical aryle ou hétérocycle, ou un radical alkyle, arylalkyle ou hétérocycle alkyle inférieur ;Rio and Ri 1 independently represent H, an aryl or heterocycle radical, or an alkyl, arylalkyl or heterocycle lower alkyl radical;
Rl2 représente NR9, S, ou O ;R 12 represents NR 9 , S, or O;
Ri 3 représente un radical alkyle inférieur éventuellement substitué par un radical choisi parmi les radicaux alkyle inférieur, -OR10, -S(O)mRjo (m représentant 0, 1, ou 2) et -N(RιoXRn) ; R14 représente H ou un radical alkyle inférieur ; ou les composés de formule générale (B) :Ri 3 represents a lower alkyl radical optionally substituted by a radical chosen from the lower alkyl radicals, -OR 10 , -S (O) m Rjo (m representing 0, 1, or 2) and -N (RιoXRn); R 14 represents H or a lower alkyl radical; or the compounds of general formula (B):
Wι-Ar-W2 (B)Wι-Ar-W 2 (B)
dans laquelle :in which :
Wj représente un reste issu d'une cysteine sous forme réduite ou non réduite ;Wj represents a residue derived from a cysteine in reduced or unreduced form;
Ar représente un radical dérivé d'un acide aminobenzoïque dont le noyau aromatique est éventuellement substitué ;Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is optionally substituted;
W2 représente un acide aminé, de préférence un acide aminé aliphatique ;W 2 represents an amino acid, preferably an aliphatic amino acid;
ou encore les composés de formule générale (C) :or the compounds of general formula (C):
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0001
(C)(VS)
dans laquelle :in which :
Zj représente un radical alkyle inférieur ;Zj represents a lower alkyl radical;
Z2 et Z3 représentent tous deux H ou bien Z2 et Z3 forment ensemble une chaîne ayant de 2 à 4 éléments choisis parmi les radicaux -C(O)-, -CH2-, -CH(NH2)- et -S-, étant entendu que deux éléments successifs ne sont pas tous deux -C(O)- ;Z 2 and Z 3 both represent H or else Z 2 and Z 3 together form a chain having from 2 to 4 elements chosen from the radicals -C (O) -, -CH 2 -, -CH (NH 2 ) - and -S-, it being understood that two successive elements are not both -C (O) -;
étant entendu que les composés de formule générale (C) peuvent également se présenter sous forme de dimères, lorsque le radical Z2 représente un atome d'hydrogène pouvant être éliminé par oxydation ;it being understood that the compounds of general formula (C) can also be in the form of dimers, when the radical Z 2 represents a hydrogen atom which can be eliminated by oxidation;
ou encore un sel pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule générale (A), (B) ou (C) ;or a pharmaceutically acceptable salt of a compound of general formula (A), (B) or (C);
peuvent être utilisés pour préparer des médicaments destinés à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique. Par radical alkyle inférieur, on entend un radical alkyle linéaire ou ramifié comptant de 1 à 6 atomes de carbone, et notamment les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle et tert-butyle, pentyle, néopentyle, isopentyle, hexyle, isohexyle. Par radical hétérocycle, on entend un radical constitué de un ou plusieurs cycles et incluant au moins un hetéroatome. Par radical arylalkyle, hétérocycle alkyle, alkylthio ou alkoxy inférieur, on entend les radicaux dont le radical alkyle a la signification indiquée précédemment.can be used to prepare drugs to treat conditions that result from the formation of heterotimeric G protein. The term “lower alkyl radical” means a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 6 carbon atoms, and in particular the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl and tert-butyl, pentyl, neopentyl radicals, isopentyle, hexyle, isohexyle. By heterocycle radical is meant a radical consisting of one or more rings and including at least one heteroatom. By arylalkyl radical, alkyl heterocycle, alkylthio or lower alkoxy, is meant the radicals whose alkyl radical has the meaning indicated above.
De préférence, le radical Ar compris dans la formule (B) est éventuellement substitué par un radical alkyle comportant de 1 à 6 atomes de carbone ou un radical aryle, ces radicaux alkyle ou aryle étant eux mêmes éventuellement substitués préférentiellement par un radical alkoxy ayant de 1 à 4 atomes de carbone, fluoro, chloro, bromo. Le radical aryle de préférence un phényle peut lui même être substitué par un radical alkyle.Preferably, the radical Ar included in the formula (B) is optionally substituted by an alkyl radical comprising from 1 to 6 carbon atoms or an aryl radical, these alkyl or aryl radicals themselves being optionally preferentially substituted by an alkoxy radical having 1 to 4 carbon atoms, fluoro, chloro, bromo. The aryl radical preferably a phenyl can itself be substituted by an alkyl radical.
De préférence encore, les composés de formule générale (B) seront tels que Ar représente un radical dérivé d'un acide aminobenzoïque dont le noyau aromatique est substitué par un radical phényle et W2 représente un acide aminé aliphatique.More preferably, the compounds of general formula (B) will be such that Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is substituted by a phenyl radical and W 2 represents an aliphatic amino acid.
En particulier, les composés suivants peuvent être utilisés pour préparer des médicaments destinés à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique :In particular, the following compounds can be used to prepare medicaments intended to treat pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein:
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- l-oxo-3-thiopropyl)-8-(l-méthylpropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (1-methylpropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la l-[2(R)-amino-3-mercaptopropyl]-2(S)-n-butyl-4-(l-naphtoyl)pipérazine ;- 1- [2 (R) -amino-3-mercaptopropyl] -2 (S) -n-butyl-4- (1-naphthoyl) piperazine;
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(méthoxyphényl)- 8-( 1 -méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine] ;- bis-1 disulfide, - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (methoxyphenyl) - 8- (1 -methylpropyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine];
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- le disulfure de bis- l ,l '-7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl-(2-( l-naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazin-7-yle) ; - le composé de formule- bis-l disulfide, -7- (2-amino- l -oxo-3-thiopropyl- (2- (l-naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yle); - the compound of formula
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0001
(VII)(VII)
le composé de formule :the compound of formula:
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000008_0002
- la 7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylmethoxy) methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-( 1 -phénylméthoxy)éthyl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (1-phenylmethoxy) ethyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine ;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthyoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7,8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine, ou sa forme dimérique ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methyoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine, or its dimeric form;
- et la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydro-imidazo[l ,2a]pyrazine ; ou encore un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces composés.- and 7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7, 8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine ; or a pharmaceutically acceptable salt of one of these compounds.
On utilisera de préférence l'un des composés suivants pour l'invention :One of the following compounds will preferably be used for the invention:
- le disulfure de bis-l ,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (I) ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (I);
- le disulfure de bis-l,l'-7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl-(2-(l-naphtyl)-- bis-l disulfide, l'-7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl- (2- (l-naphthyl) -
8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazin-7-yle) (II) ;8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yl) (II);
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (III) ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (III) ;
- le composé de formule :- the compound of formula:
Figure imgf000009_0001
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (V) ;
Figure imgf000009_0001
- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (V);
- le disulfure de bis-l ,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(méthoxyphényl)- 8-(l-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine] (VI) ; - bis-1 disulfide, - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (methoxyphenyl) - 8- (1-methylpropyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine] (VI);
le composé de formulethe compound of formula
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000010_0001
(VII)(VII)
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-( 1 -méthylpropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (1-methylpropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la l-[2(R)-amino-3-mercaptopropyl]-2(S)-n-butyl-4-(l-naphtoyl)pipérazine.- l- [2 (R) -amino-3-mercaptopropyl] -2 (S) -n-butyl-4- (1-naphthoyl) piperazine.
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
Plus préférentiellement, l'un des composés suivants sera utilisé pour l'invention :More preferably, one of the following compounds will be used for the invention:
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (I) ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (I);
- le disulfure de bis- l , l '-7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl-(2-( l -naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazin-7-yle) (II) ;- bis-l disulfide, -7- (2-amino- l -oxo-3-thiopropyl- (2- (l -naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yl) (II);
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (III) ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (III) ;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (V) ; - le composé de formule- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (V); - the compound of formula
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(VII)(VII)
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
Enfin, les composés suivants seront plus particulièrement préférés :Finally, the following compounds will be more particularly preferred:
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (I) ;- bis-1 disulfide, - - [7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (I);
- le disulfure de bis-l,l'-7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl-(2-(l-naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazin-7-yle) (II) ;- bis-l disulfide, l'-7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl- (2- (l-naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazin-7-yle) (II);
ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
L'invention concerne donc tout d'abord l'utilisation des composés de formule générale (A), (B) ou (C) tels que décrits précédemment pour préparer un médicament destiné à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique. En particulier, elle concerne l'utilisation desdits inhibiteurs pour préparer des médicaments destinés à traiter des maladies liées aux fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, infection virale, fonctions immunologiques, diabète et obésité.The invention therefore relates first of all to the use of the compounds of general formula (A), (B) or (C) as described above for preparing a medicament intended for treating pathologies which result from the formation of the protein G heterotimeric. In particular, it relates to the use of said inhibitors for preparing medicaments intended for treating diseases linked to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine regulation and paracrine, blood pressure, embryogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes and obesity.
De façon plus particulière, l'invention concerne l'utilisation des composés de formule générale (A), (B) ou (C) pour préparer un médicament destiné à traiter le choléra, le Syndrome Immuno-Déficitaire Acquis (SIDA), la diarrhée du voyageur et la puberté précoce familiale masculine.More particularly, the invention relates to the use of the compounds of general formula (A), (B) or (C) for preparing a medicament intended to treat cholera, Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS), diarrhea travel and early male familial puberty.
L'invention a aussi pour objet de nouveaux produits de formule générale (A) numérotés de 1 à 7 et décrits ci-après dans les exemples, à savoir : - la 7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6.7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;The subject of the invention is also new products of general formula (A) numbered from 1 to 7 and described below in the examples, namely: - 7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylmethoxy) methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-( 1 -phénylméthoxy )éthyl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (1-phenylmethoxy) ethyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine ;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthyoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine, ou sa forme dimérique ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methyoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine, or its dimeric form;
- et la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine.- and 7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7, 8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine .
Elle a également pour objet lesdits nouveaux produits ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables à titre de médicaments, ainsi que leur utilisation pour préparer un médicament destiné à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique. En particulier, elle concerne l'utilisation desdits produits pour préparer des médicaments destinés à traiter des maladies liées aux fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, prolifération cellulaire bénigne, oncogénese, infection virale, fonctions immunologiques, diabète, obésité, et maladies prolifératives bénignes et malignes.It also relates to said new products or their pharmaceutically acceptable salts as medicaments, as well as their use for preparing a medicament intended for treating pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein. In particular, it relates to the use of said products for preparing medicaments intended for treating diseases linked to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine regulation and paracrine, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes, obesity, and benign and malignant proliferative diseases.
Les produits particulièrement préférés pour une utilisation selon l'invention seront donc les suivants :The products particularly preferred for use according to the invention will therefore be the following:
- le disulfure de bis-l,r-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine ;- bis-l, r- [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo disulfide [1,2a] pyrazine;
- le disulfure de bis-l,l'-7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl-(2-(l-naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazin-7-yle) ; le composé de formule- bis-l disulfide, l'-7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl- (2- (l-naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazin-7-yle); the compound of formula
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Figure imgf000013_0001
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylmethoxy) methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-( 1 -phénylméthoxy)éthyl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (1-phenylmethoxy) ethyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine ;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthyoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine, ou sa forme dimérique ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methyoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine, or its dimeric form;
- et la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- and 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
De même, l'invention concerne plus particulièrement l'utilisation des composés précédemment cités pour préparer un médicament destiné à traiter le choléra, le Syndrome Immuno-Déficitaire Acquis (SIDA), la diarrhée du voyageur et la puberté précoce familiale masculine. Les composés de formule générale (A) et leur préparation sont décrits dans la demande de brevet WO 97/30053 ou dans les exemples ci-après. Les composés de formule générale (B) et leur préparation sont décrits dans la demande de brevet WO 96/21456. Enfin, la préparation des composés de formule générale (C) est décrite dans la demande de brevet PCT WO 95/00497, sauf pour le composé de formule (VII) pour lequel la synthèse est décrite dans la partie expérimentale de cette demande.Likewise, the invention relates more particularly to the use of the abovementioned compounds for preparing a medicament intended for treating cholera, Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS), traveler's diarrhea and male familial precocious puberty. The compounds of general formula (A) and their preparation are described in patent application WO 97/30053 or in the examples below. The compounds of general formula (B) and their preparation are described in patent application WO 96/21456. Finally, the preparation of the compounds of general formula (C) is described in PCT patent application WO 95/00497, except for the compound of formula (VII) for which the synthesis is described in the experimental part of this application.
Les compositions pharmaceutiques comprenant un composé de l'invention peuvent être sous forme de solides, par exemple des poudres, des granules, des comprimés, des gélules, des liposomes ou des suppositoires. Les supports solides appropriés peuvent être, par exemple, le phosphate de calcium, le stéarate de magnésium, le talc, les sucres, le lactose, la dextrine, l'amidon, la gélatine, la cellulose, la cellulose de méthyle, la cellulose carboxyméthyle de sodium, la polyvinylpyrrolidine et la cire.The pharmaceutical compositions comprising a compound of the invention can be in the form of solids, for example powders, granules, tablets, capsules, liposomes or suppositories. Suitable solid carriers can be, for example, calcium phosphate, magnesium stearate, talc, sugars, lactose, dextrin, starch, gelatin, cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose sodium, polyvinylpyrrolidine and wax.
Les compositions pharmaceutiques comprenant un composé de l'invention peuvent aussi se présenter sous forme liquide, par exemple, des solutions, des émulsions, des suspensions ou des sirops. Les supports liquides appropriés peuvent être, par exemple, l'eau, les solvants organiques tels que le glycérol ou les glycols, de même que leurs mélanges, dans des proportions variées, dans l'eau.The pharmaceutical compositions comprising a compound of the invention can also be presented in liquid form, for example, solutions, emulsions, suspensions or syrups. Suitable liquid carriers can be, for example, water, organic solvents such as glycerol or glycols, as well as their mixtures, in varying proportions, in water.
L'administration d'un médicament selon l'invention pourra se faire par voie topique, orale, parentérale, par injection (intramusculaire, sous-cutanée, intraveineuse,etc), etc. La voie d'administration dépendra bien entendu du type de maladie à traiter.The administration of a medicament according to the invention can be done by topical, oral, parenteral, by injection (intramuscular, subcutaneous, intravenous, etc.), etc. The route of administration will of course depend on the type of disease to be treated.
La dose d'administration envisagée pour un médicament selon l'invention est comprise entre 0,1 mg à 10 g suivant le type de pathologie à traiter.The administration dose envisaged for a medicament according to the invention is between 0.1 mg to 10 g depending on the type of pathology to be treated.
A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les publications, demandes de brevets, tous les brevets et toutes autres références mentionnées ici sont incorporées par référence. Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as that commonly understood by an ordinary specialist in the field to which this invention belongs. Likewise, all publications, patent applications, all patents and all other references mentioned herein are incorporated by reference.
EXEMPLESEXAMPLES
Exemple 1 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyI)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthyIphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine : 1Example 1: 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyI) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 1
Le composé 1 a été préparé selon le schéma synthétique ci-dessous :Compound 1 was prepared according to the synthetic scheme below:
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Figure imgf000015_0001
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Schéma 1Diagram 1
l.a) Carbobenzyloxy-L-cyclohexylalaninel.a) Carbobenzyloxy-L-cyclohexylalanine
De la L-phénylalanine (10,0 g ; 60,6 mmol) est combinée avec PtO2 (430 mg) dans de l'acide acétique (60 ml) et le mélange est hydrogéné sous 20-50 psi H2 durant une nuit. Une solution aqueuse de HC1 à 5% est ajoutée au mélange pour obtenir une solution limpide et l'hydrogénation est poursuivie jusqu'à ce que la consommation d'hydrogène cesse. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat concentré sous pression réduite. Le résidu est repris dans du methanol et de l'eau et le pH ajusté à 4,4 par addition d'une solution de NaOH à 10%. Le produit obtenu est récupéré par filtration et utilisé sans purification supplémentaire.L-phenylalanine (10.0 g; 60.6 mmol) is combined with PtO 2 (430 mg) in acetic acid (60 ml) and the mixture is hydrogenated at 20-50 psi H2 overnight. A 5% aqueous HCl solution is added to the mixture to obtain a clear solution and the hydrogenation is continued until the consumption of hydrogen ceases. The catalyst is removed by filtration and the filtrate concentrated under reduced pressure. The residue is taken up in methanol and water and the pH adjusted to 4.4 by addition of a 10% NaOH solution. The product obtained is recovered by filtration and used without additional purification.
La L-cyclohexylalanine (60,6mmol) est mise en suspension dans de l'eau (100 ml), du K 2C O 3 (8,36 g ; 60,6 mmol) est ajouté, puis une solution de N-(benzyloxycarbonyloxy)succinimide ( 15, 1 g ; 60,6 mmol) dans CH3CN (150 ml) et le mélange obtenu est agité vigoureusement durant 45 minutes. Le mélange est concentré pour donner un volume d'environ 100 ml et lavé avec Et2Û (100 ml), puis acidifié avec HC1 concentré et extrait avec AcOEt (2x 50 ml). Les phases AcOEt combinées sont séchées sur Na2S Û4 , filtrées et concentrées pour donner une huile claire ( 17,27 g ; 93 %).L-cyclohexylalanine (60.6 mmol) is suspended in water (100 ml), K 2 CO 3 (8.36 g; 60.6 mmol) is added, then a solution of N- (benzyloxycarbonyloxy) succinimide (15.1 g; 60.6 mmol) in CH3CN (150 ml) and the mixture obtained is stirred vigorously for 45 minutes. The mixture is concentrated to give a volume of approximately 100 ml and washed with Et2O (100 ml), then acidified with concentrated HCl and extracted with AcOEt (2x 50 ml). The combined AcOEt phases are dried over Na2S Û4, filtered and concentrated to give a clear oil (17.27 g; 93%).
RMN ] H (DMSO-d6) : 7,5-7,6 ( 1H, d) ; 7,2-7,5 (5H, m) ; 5,0-5, 1 (2H, s) ; 3,9-4, 1 (1H, m) ; 0,7- 1 ,8 ( 13H, m). NMR] (DMSO-d6): 7.5-7.6 (1H, d); 7.2-7.5 (5H, m); 5.0-5.1 (2H, s); 3.9-4.1 (1H, m); 0.7-1.8 (13H, m).
l .b) 2-(l-(S)-((phénylméthoxy)carbonyl)-amino-2-(cyclohexyl)méthyl)- 4-(2-méthylphenyl)-imidazolel .b) 2- (l- (S) - ((phenylmethoxy) carbonyl) -amino-2- (cyclohexyl) methyl) - 4- (2-methylphenyl) -imidazole
De la Cbz-(L)-cyclohexylalanine (4,58 g ; 15,0 mmol) et du CS2CO3 (2,44 g ; 7,50 mmol) sont placés dans un mélange 2: 1 de DMF:H2Û (75 ml). Le mélange obtenu est agité jusqu'à ce qu'il devienne homogène. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu dissous dans du DMF (60 ml) et de la 2-bromo-2'-méthylacétophénone (3,20g ; 15,0 mmol) dans du DMF (30 ml) est ajoutée. Le mélange est agité une nuit durant à température ambiante puis filtré et concentré sous pression réduite. Le céto-ester obtenu est mis en solution dans des xylènes (100 ml) et de l'acétate d'ammonium (19,5 g ; 0,25 mol) est ajouté. Le mélange est chauffé à reflux pendant environ 3 heures avec élimination de ACONH4 excédentaire et de l'eau libérée par le biais d'un piège de Dean-Stark. Le mélange réactionnel est concentré sous pression réduite, repris dans AcOEt et lavé avec une solution saturée de NaHC03 (100 ml) et une solution saturée de NaCl (100 ml). La phase AcOEt est séchée sur Na2SÛ4, filtrée et concentrée sous vide. Le produit brut obtenu est purifié par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange CHCl3/MeOH 98/2 comme éluant. Les fractions contenant le produit pur sont combinées et concentrées pour dionner le produit (2,52 g ; 40 %) sous forme d'une mousse légèrement brune qui est utilisée dans l'étape suivante sans purification supplémentaire.Cbz- (L) -cyclohexylalanine (4.58 g; 15.0 mmol) and CS2CO3 (2.44 g; 7.50 mmol) are placed in a 2: 1 mixture of DMF: H2O (75 ml) . The mixture obtained is stirred until it becomes homogeneous. The solvents are removed under reduced pressure, the residue dissolved in DMF (60 ml) and 2-bromo-2'-methylacetophenone (3.20 g; 15.0 mmol) in DMF (30 ml) is added. The mixture is stirred overnight at room temperature then filtered and concentrated under reduced pressure. The keto-ester obtained is dissolved in xylenes (100 ml) and ammonium acetate (19.5 g; 0.25 mol) is added. The mixture is heated under reflux for approximately 3 hours with elimination of excess ACONH4 and of the water released via a Dean-Stark trap. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure, taken up in AcOEt and washed with a saturated NaHCO3 solution (100 ml) and a saturated NaCl solution (100 ml). The AcOEt phase is dried over Na2SO4, filtered and concentrated in vacuo. The crude product obtained is purified by flash chromatography on silica gel with a CHCl3 / MeOH 98/2 mixture as eluent. The fractions containing the pure product are combined and concentrated to give the product (2.52 g; 40%) in the form of a slightly brown foam which is used in the next step without further purification.
l .c) 2-(l-(S)-((phénylméthoxy)carbonyl)-amino-2-(cyclohexyl)méthyl)-]-((2-éthoxy- 2-oxo)éthyl)-4-(2-méthylphényl)-imidazolel .c) 2- (l- (S) - ((phenylmethoxy) carbonyl) -amino-2- (cyclohexyl) methyl) -] - ((2-ethoxy- 2-oxo) ethyl) -4- (2- methylphenyl) -imidazole
L'intermédiaire l .b (2,52 g ; 6,0 mmol) est mis en solution dans du DMF (20 ml) et traité avec K2 C O 3 ( 1 ,67g, 12, l mmol) et du bromoacétate d'éthyle (1 ,34 ml ; 12,5 mmol) est ajouté. Le mélange obtenu est chauffé à 45° C pendant une heure et demie. Le mélange est dilué avec de l'éther (50 ml) et lavé avec une solution saturée de NaHCθ3 solution (50 ml) puis avec une solution saturée de NaCl (50 ml). La couche éthérée est séchée sur Na2S04, filtrée et concentrée pour donner une huile qui est utilisée dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. Spec. masse : 504,3 MH+.Intermediate 1.b (2.52 g; 6.0 mmol) is dissolved in DMF (20 ml) and treated with K2 CO 3 (1.67g, 12.1 mmol) and ethyl bromoacetate (1.34 ml; 12.5 mmol) is added. The mixture obtained is heated at 45 ° C for one and a half hours. The mixture is diluted with ether (50 ml) and washed with saturated NaHCO3 solution (50 ml) then with saturated NaCl solution (50 ml). The The ethereal layer is dried over Na2SO4, filtered and concentrated to give an oil which is used in the next step without further purification. Spec. mass: 504.3 MH +.
l.d) 8-(cyclohexylméthyl)-6-oxo-2-(2-méthylphényl)-imidazo[l,2-a]pyrazinel.d) 8- (cyclohexylmethyl) -6-oxo-2- (2-methylphenyl) -imidazo [1,2-a] pyrazine
L'inter édiaire brut de l'étape l .c est mis en solution dans de l'acide acétique (50 ml) contenant un catalyseur Pd 10% sur carbone ( 152 mg), puis hydrogéné sous une pression de 50 psi de H2 pendant 18 heures à température ambiante. Le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat chauffé à 70° C pendant 2 heures. Le mélange obtenu est concentré sous pression réduite, dissous dans CH2CI2 (100 ml) et lavé avec une solution saturée de NaHCÛ3 (100 ml). La couche du CH2C12 est séchée sur Na2SÛ4, filtrée et concentrée pour donner une huile visqueuse qui est utilisée dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. Spec. masse : 324,3 MH+.The crude intermediate from step l .c is dissolved in acetic acid (50 ml) containing a 10% Pd catalyst on carbon (152 mg), then hydrogenated under a pressure of 50 psi of H2 for 18 hours at room temperature. The catalyst is removed by filtration and the filtrate heated at 70 ° C for 2 hours. The mixture obtained is concentrated under reduced pressure, dissolved in CH2Cl2 (100 ml) and washed with saturated NaHCO3 solution (100 ml). The CH 2 C1 2 layer is dried over Na2SO4, filtered and concentrated to give a viscous oil which is used in the next step without further purification. Spec. mass: 324.3 MH +.
1. e ) 8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)-4,5, 6, 7-tétrahydro- imidazo[ 1 ,2-a]pyrazine1. e) 8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) -4,5, 6, 7-tetrahydro-imidazo [1, 2-a] pyrazine
L'intermédiaire brut de l'étape 1.c est mis en solution dans du THF (25 ml) et traité à température ambiante par une solution XM de BH3 dans du THF (25 ml) durant une demi-heure puis porté à reflux pendant 1 heure. Le mélange est refroidi par un bain de glace et du HC1 AN (40 ml) est additionné goutte à goutte à 0° C. Le mélange est ramené à température ambiante puis porté à reflux durant 1 heure. Le mileu réactionnel est ensuite refroidi, filtré et concentré sous pression réduite. Le résidu est traité avec une solution saturée de NaHC03 (50 ml) et extrait avec CH2CI2 (3x 50 ml). Les phases de CH2CI2 sont séchées sur Na2S04, filtrées et concentrées pour donner une huile légèrement brune (1,63 g ; rendement de 87 % par rapport aux étapes l.c, l .d et e). Spec. masse : 310,3 MH+.The crude intermediate from step 1.c is dissolved in THF (25 ml) and treated at room temperature with an XM solution of BH3 in THF (25 ml) for half an hour then brought to reflux for 1 hour. The mixture is cooled by an ice bath and HCl AN (40 ml) is added dropwise at 0 ° C. The mixture is brought to room temperature then brought to reflux for 1 hour. The reaction medium is then cooled, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue is treated with a saturated NaHCO3 solution (50 ml) and extracted with CH2Cl2 (3x 50 ml). The CH2CI2 phases are dried over Na2SO4, filtered and concentrated to give a slightly brown oil (1.63 g; 87% yield compared to steps l.c, l .d and e). Spec. mass: 310.3 MH +.
1.f ) 8-(cyclohexylméthyl)- 7-[2-(((l,l-diméthyléthoxy)carbonyl)amino)-l-oxo-1.f) 8- (cyclohexylmethyl) - 7- [2 - (((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) amino) -l-oxo-
3-((triphénylméthyl)thio)propyl]- 2-(2-méthylphényl)-4, 5,6, '-tétrahydro-imidazo- [l,2a]-pipérazine3 - ((triphenylmethyl) thio) propyl] - 2- (2-methylphenyl) -4, 5,6, '-tetrahydro-imidazo- [1,2a] -piperazine
Du diisopropylcarbodiimide (908 μl ; 5,80 mmol) et du BocCys(trt)-OH (5,37g ; 1 1 ,6 mmol) sont mis en solution dans CH2CI2 (25 ml), le mélange obtenu étant agité durant 45 minutes. De la 8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)-4,5,6,7-tétrahydro- imidazo[ l ,2-a]pyrazine (1 ,63 g ; 5,27 mmol) est ensuite ajoutée. Le mélange réactionnel est agité durant une nuit à température ambiante. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le produit obtenu purifié par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange CH2Cl2/MeOH 98/2 comme éluant. Les fractions pures sont concentrées pour donner une huile visqueuse qui est utilisée dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. Spec. masse : 755,6 MH+.Diisopropylcarbodiimide (908 μl; 5.80 mmol) and BocCys (trt) -OH (5.37 g; 11.6 mmol) are dissolved in CH2Cl2 (25 ml), the mixture obtained being stirred for 45 minutes. 8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) -4,5,6,7-tetrahydroimidazo [1,2-a] pyrazine (1.63 g; 5.27 mmol) is then added. The reaction mixture is stirred overnight at room temperature. The solvent is removed under reduced pressure and the product obtained purified by flash chromatography on silica gel with a CH 2 Cl 2 / MeOH 98/2 mixture as eluent. The pure fractions are concentrated to give a viscous oil which is used in the next step without further purification. Spec. mass: 755.6 MH +.
1.g) 7-(2-amino-l-oxo-3-(mercaptopropyl))-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 4,5 ,6,7-tétrahydro-imidazo-l 1 ,2a]-pipérazine : 1 :1.g) 7- (2-amino-l-oxo-3- (mercaptopropyl)) - 8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 4,5,6,7-tetrahydro-imidazo-l 1 , 2a] -piperazine: 1:
L'intermédiaire de l'étape l.f (3,54 g ; 4,69 mmol) est mis en solution dans de l'acide trifluoroacétique (TFA, 80 ml) contenant du triisopropylsilane (1,92 ml ; 9,38 mmol) et le mélange réactionnel est agité à température ambiante sous azote durant une heure. Le mélange réactionnel est filtré et le filtrat concentré sous pression réduite. Le résidu est extrait par trituration avec une solution aqueuse de TFA à 0,1 % (6x 65 ml) et filtré. Le produit brut est purifié par HPLC préparative sur une colonne Cl 8 en utilisant un gradiant de 0 à 20 % de CH3CN dans une solution aqueuse de TFA à 0,1 % durant 30 minutes. Les fractions pures de produit sont rassemblées et lyophilisées. Le produit initial est lyophilisé par deux fois à partir d'une solution diluée de HCl pour donner le produit sous forme de son chlorhydrate (740 mg ; 32 %). Spec. masse : 413,2 MH+.The intermediate from step lf (3.54 g; 4.69 mmol) is dissolved in trifluoroacetic acid (TFA, 80 ml) containing triisopropylsilane (1.92 ml; 9.38 mmol) and the reaction mixture is stirred at room temperature under nitrogen for one hour. The reaction mixture is filtered and the filtrate concentrated under reduced pressure. The residue is extracted by trituration with an aqueous 0.1% TFA solution (6x 65 ml) and filtered. The crude product is purified by preparative HPLC on a Cl 8 column using a gradient from 0 to 20% of CH 3 CN in an aqueous solution of 0.1% TFA for 30 minutes. The pure product fractions are combined and lyophilized. The initial product is lyophilized twice from a dilute HCl solution to give the product in the form of its hydrochloride (740 mg; 32%). Spec. mass: 413.2 MH +.
RMN ]H (DMSO-d6) : 8,5-9,0 (3H, d, large) ; 7,8-8,0 (IH, s) ; 7,5-7,7 (IH, d) ; 7,2-7,5 (3H, m) ; 5,8-6,1 (IH, m) ; 4,65-4,8 (IH, s) ; 4,5-4,7 (IH, d) ; 4,1-4,4 (2H, m) ; 3,8-4,0 (IH, m) ; 3,2-3,7 (H2O) ; 2,8-3,1 (2H, m) ; 2,35-2,5 (3H, s) ; 2,0-2,2 (IH, m) ; 1,8-2,05 (2H, m) ; 1,25-1,4 (4H, s large) ; 1,3-0,9 (6H, m). NMR] (DMSO-d6): 8.5-9.0 (3H, d, br); 7.8-8.0 (1H, s); 7.5-7.7 (1H, d); 7.2-7.5 (3H, m); 5.8-6.1 (1H, m); 4.65-4.8 (1H, s); 4.5-4.7 (1H, d); 4.1-4.4 (2H, m); 3.8-4.0 (1H, m); 3.2-3.7 (H 2 O); 2.8-3.1 (2H, m); 2.35-2.5 (3H, s); 2.0-2.2 (1H, m); 1.8-2.05 (2H, m); 1.25-1.4 (4H, br s); 1.3-0.9 (6H, m).
Exemple 2 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cycIohexylméthyI)- 2-phényl-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine : 2 :Example 2: 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cycIohexylmethyI) - 2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 2:
Le composé 2 est préparé selon le schéma 1 , étapes b à g, selon une méthode analogue à celle de l'exemple 1 , la 2-bromoacétophénone remplaçant la 2-bromo- 2'-méthylacétophénone dans l'étape b. Spec. masse : 399,2 MH+.Compound 2 is prepared according to Scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 1, 2-bromoacetophenone replacing 2-bromo-2'-methylacetophenone in step b. Spec. mass: 399.2 MH +.
RMN !H (DMSO-d6) : 8,5-8,9 (3H, d large) ; 8,0-8,2 (IH, s) ; 7,8-8,0 (2H, d) ; 7,45-7,56 (2H, t) ; 7,35-7,5 (IH, t) ; 5,9-6,05 (IH, s large) ; 4,65-4,8 (IH, s) ; 4,5-4,65 (IH, d) ; 4,1-4,35 (2H, m) ; 3,8-4,0 (IH, m) ; 3,2-3,8 (H2O) ; 3,25-3,4 (IH, t) ; 2,8-3,05 (2H, m) ; 2,05-2,2 (IH, d) ; 1,85-2,05 (2H, t) ; 1,55-1,75 (4H, s large) ; 1,15-1,3 (IH, s large) ; 1,2-0,9 (5H, m). Exemple 3 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine : 3 :NMR ! H (DMSO-d6): 8.5-8.9 (3H, broad d); 8.0-8.2 (1H, s); 7.8-8.0 (2H, d); 7.45-7.56 (2H, t); 7.35-7.5 (1H, t); 5.9-6.05 (1H, broad s); 4.65-4.8 (1H, s); 4.5-4.65 (1H, d); 4.1-4.35 (2H, m); 3.8-4.0 (1H, m); 3.2-3.8 (H 2 O); 3.25-3.4 (1H, t); 2.8-3.05 (2H, m); 2.05-2.2 (1H, d); 1.85-2.05 (2H, t); 1.55-1.75 (4H, br s); 1.15-1.3 (1H, br s); 1.2-0.9 (5H, m). Example 3: 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 8- (phenylmethoxy) methyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 3:
Le composé 3 est préparé selon le schéma 1, étapes b à g, selon une méthode analogue à celle de l'exemple 1 , le Boc-(L)-Ser(Bzl)-OH remplaçant la Cbz-(L)-cyclohexylalanine dans l'étape b et l'étape d étant remplacée par une déprotection utilisant le TFA et iP SiH selon une méthode analogue à la réaction 1.g. Le produit est obtenu sous forme d'un couple de diastéréoisomères dans une proportion 2:3. Spec. masse : 453,2 MH+.Compound 3 is prepared according to Scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 1, Boc- (L) -Ser (Bzl) -OH replacing Cbz- (L) -cyclohexylalanine in step b and step d being replaced by deprotection using TFA and iP SiH according to a method analogous to reaction 1.g. The product is obtained in the form of a couple of diastereoisomers in a 2: 3 proportion. Spec. mass: 453.2 MH +.
Les temps de rétention pour les diastréoisomères sont de 6,58 et 7,07 minutes respectivement dans le système de HPLC suivant :The retention times for the diastereomers are 6.58 and 7.07 minutes respectively in the following HPLC system:
Eluant : 30-50% CH3CN / 0.1 % TFAEluent: 30-50% CH 3 CN / 0.1% TFA
Durée d'élution 24 minutes Détection 254 nm Colonne protéine Vydac et peptide Cl 8Elution time 24 minutes Detection 254 nm Vydac protein column and Cl 8 peptide
Exemple 4 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 8-(l-phénylméthoxy)éthyI- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine : 4 :Example 4: 7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 8- (l-phenylmethoxy) ethyl I- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 4:
Le composé 4 est préparé selon le schéma 1, étapes b à g, selon une méthode analogue à celle de l'exemple 3, le Boc-(L)-Thr(Bzl)-OH remplaçant le Boc-(L)-Ser(Bzl)-OH dans l'étape b. Spec. masse : 467,3 MH+.Compound 4 is prepared according to scheme 1, steps b to g, according to a method analogous to that of Example 3, Boc- (L) -Thr (Bzl) -OH replacing Boc- (L) -Ser ( Bzl) -OH in step b. Spec. mass: 467.3 MH +.
RMN JH (DMSO-d6) : 8,5-8,9 (3H, d, large) ; 8,0-8,1 (IH, s) ; 7,95-8,1 (2H, d) ; 7,4-7,5 (IH, t) ; 7,15-7,3 (IH, d) ; 7,0-7,2 (3H, m) ; 6,9-7,05 (2H, m) ; 5,85-5,95 (IH, d) ; 4,75-4,85 (IH, s large) ; 4,65-4,8 (IH, s large) ; 4,35-4,65 (3H, m) ; 4,1-4,25 (2H, q) ; 3,9-4,0 (3H, s) ; 2,8-3,1 (2H, m) ; 1,2-1,4 (3H, d). J H NMR (DMSO-d6): 8.5 to 8.9 (3H, d, br); 8.0-8.1 (1H, s); 7.95-8.1 (2H, d); 7.4-7.5 (1H, t); 7.15-7.3 (1H, d); 7.0-7.2 (3H, m); 6.9-7.05 (2H, m); 5.85-5.95 (1H, d); 4.75-4.85 (1H, br s); 4.65-4.8 (1H, broad s); 4.35-4.65 (3H, m); 4.1-4.25 (2H, q); 3.9-4.0 (3H, s); 2.8-3.1 (2H, m); 1.2-1.4 (3H, d).
Exemple 5 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine : 5 :Example 5: 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine: 5 :
Le composé 5 a été préparé selon le schéma synthétique ci-après :Compound 5 was prepared according to the following synthetic scheme:
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000020_0001
Schéma 2Diagram 2
5. h ) 2-(l-(S)-((phénylméthoxy)carbonyl)-amino-2-(2-oxo-2-(phénylméthoxy)éthyl)- 4-(2-méthoxyphényl)-imidazole5.h) 2- (1- (S) - ((phenylmethoxy) carbonyl) -amino-2- (2-oxo-2- (phenylmethoxy) ethyl) - 4- (2-methoxyphenyl) -imidazole
Du Cbz-(L)-Asp(Obzl)-OH (5,00 g ; 14,0 mmol) et du Cs2CO3 (2,28 g ; 7,00 mmol) sont mélangés dans un mélange 1 : 1 de DMF:H O (75 ml). Le mélange obtenu est agité jusqu'à ce qu'il devienne homogène. Les solvants sont éliminés sous pression réduite, le résidu dissous dans du DMF (60 ml) et de la 2-bromo- 2'-méthoxyacétophénone (3,21 g ; 14.0 mmol) dans du DMF (30 ml) est ajoutée. Le mélange obtenu est agité durant u!ne demi-heure à température ambiante puis filtré et concentré sous pression réduite. Le céto-ester obtenu est trituré avec un mélange 1 : 1 de Et O:hexanes (2x 40 ml) puis mis en suspension dans des xylènes (100 ml). De l'acétate d'ammonium (17,5 g ; 0,23 mol) est ajouté et le mélange est chauffé à reflux pendant environ une heure et demie avec élimination de AcONF j. en excès et de l'eau libérée par le biais d'un piège de Dean-Stark. Le milieu réactionnel est lavé avec une solution saturée de NaHCθ3 (50 ml), séché sur Na2S04, filtré et concentré sous vide pour donner 6,66g (98 %) du produit désiré. Spec. masse : 486,3 (MH+).Cbz- (L) -Asp (Obzl) -OH (5.00 g; 14.0 mmol) and Cs 2 CO 3 (2.28 g; 7.00 mmol) are mixed in a 1: 1 mixture of DMF: HO (75 ml). The mixture obtained is stirred until it becomes homogeneous. The solvents are removed under reduced pressure, the residue dissolved in DMF (60 ml) and 2-bromo-2'-methoxyacetophenone (3.21 g; 14.0 mmol) in DMF (30 ml) is added. The mixture obtained is stirred for a half hour at room temperature then filtered and concentrated under reduced pressure. The keto-ester obtained is triturated with a 1: 1 mixture of Et O: hexanes (2x 40 ml) and then suspended in xylenes (100 ml). Ammonium acetate (17.5 g; 0.23 mol) is added and the mixture is heated at reflux for approximately one and a half hours with elimination of AcONF j. in excess and water released through a Dean-Stark trap. The reaction medium is washed with a saturated NaHCO 3 solution (50 ml), dried over Na 2 S0 4 , filtered and concentrated in vacuo to give 6.66 g (98%) of the desired product. Spec. mass: 486.3 (MH +).
5. i ) 2-(l-(S)-((phénylméthoxy)carbonyl)-amino-2-((2-phénylméthoxy-2-oxo)éthyl)- l-((2-éthoxy-2-oxo)éthyl)-4-(2-méthoxyphényl)-imidazole5. i) 2- (l- (S) - ((phenylmethoxy) carbonyl) -amino-2 - ((2-phenylmethoxy-2-oxo) ethyl) - l - ((2-ethoxy-2-oxo) ethyl ) -4- (2-methoxyphenyl) -imidazole
L'intermédiaire 5.i est préparé selon une méthode analogue à celle de l'étape l.c. Spec. masse : 572,3 MH+.Intermediate 5.i is prepared according to a method analogous to that of step l.c. Spec. mass: 572.3 MH +.
5. j ) acide (6-oxo-2-(2-méthoxyphényl)-5,6, 7,8-tétrahydro-imidazo[ 1 ,2-a]pyrazin- 8-yl)-acétique5. j) (6-oxo-2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1, 2-a] pyrazin- 8-yl) -acetic acid
L'intermédiaire 5.j est préparé selon une méthode analogue à celle de l'étape l.d. Spec. masse : 302,2 MH+.Intermediate 5.j is prepared according to a method analogous to that of step l.d. Spec. mass: 302.2 MH +.
RMN ]H (DMSO-d6) : 8,35-8,5 (IH, d, large) ; 8,0-8,1 (IH, dd) ; 7,45-7,55 (IH, s) ; 7,15-7,25 (IH, m) ; 7,0-7,1 (IH, m) ; 6,9-7,0 (IH, m) ; 4,85-5,0 (IH, s large) ; 4,55-4,75 (2H, q) ; 3,85-3,95 (3H, s) ; 2,8-2,95 (2H, d). NMR] (DMSO-d6): 8.35 to 8.5 (IH, d, br); 8.0-8.1 (1H, dd); 7.45-7.55 (1H, s); 7.15-7.25 (1H, m); 7.0-7.1 (1H, m); 6.9-7.0 (1H, m); 4.85-5.0 (1H, broad s); 4.55-4.75 (2H, q); 3.85-3.95 (3H, s); 2.8-2.95 (2H, d).
5.k) 8-hydroxyéthyl-2-(2-méthoxyphényl)-5,6, 7,8-tétrahydro-imidazo[ 1 ,2-a]pyrazine5.k) 8-hydroxyethyl-2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1, 2-a] pyrazine
L'intermédiaire 5.k est préparé selon une méthode analogue à celle de l'étape l.e, excepté le fait qu'une proportion molaire de 6/9 de BH3 par rapport au substrat est utilisée. Spec. masse : 274,3 MH+.Intermediate 5.k is prepared according to a method analogous to that of step le, except that a molar proportion of 6/9 of BH 3 relative to the substrate is used. Spec. mass: 274.3 MH +.
5.1) 7-((l, 1 -diméthyléthoxy)carbonyl)-8-hydroxyéthyl-2-(2-méthyoxyphényl) -5,6, 7,8-tétrahydro-imidazol 1 ,2-a]pyrazine5.1) 7 - ((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) -8-hydroxyethyl-2- (2-methyoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydro-imidazol 1,2-a] pyrazine
L'intermédiaire 5.k (1,36 g ; 5,0 mmol) est mis en suspension dans H2O (5 ml) et un mélange de di-t-butyldicarbonate (1,20 g ; 5,5 mmol) dans du p-dioxane (10 ml) est ajouté. Le mileu réactionnel est agité vigoureusement et maintenu à pH 8,0-8,4 par addition goutte à goutte d'une solution 2,5N de NaOH jusqu'à ce que la réaction soit terminée (suivi de la réaction par CCM sur gel de silice, éluant AcOEt:hexanes 3:2). Le produit brut est purifié par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange AcOEt:hexanes 3:2 comme éluant (système Biotage, colonnes pré-remplies 4 x 15 cm). Les fractions contenant le produit sont combinées et concentrées sous vide pour donner une mousse blanche (1,60 g ; 86 %). Spec. masse : 374,3 MH+. RMN I H (DMSO-d6) : 7,95-8,05 (IH, d,d) ; 7,45-7,55 (IH, s) ; 7,10-7,25 (IH, m) ; 7,0-7, 1 ( IH, m) ; 6,9-7,05 ( I H, m) ; 5,05-5, 15 ( I H, t) ; 4,25-4,35 ( IH, t) ; 4,05-4,2 ( IH, s large) ; 4,0-4, 1 (IH m) ; 3,9-4,0 (3H, s) ; 3,9-4,0 (IH, m) ; 3,25-3,35 (2H, m) ; 1 ,9-2,1 (2H, m) ; 1,15-1,25 (9H, s).Intermediate 5.k (1.36 g; 5.0 mmol) is suspended in H2O (5 ml) and a mixture of di-t-butyldicarbonate (1.20 g; 5.5 mmol) in p -dioxane (10 ml) is added. The reaction medium is stirred vigorously and maintained at pH 8.0-8.4 by dropwise addition of a 2.5N NaOH solution until the reaction is complete (monitoring of the reaction by TLC on gel of silica, eluent AcOEt: hexanes 3: 2). The crude product is purified by flash chromatography on silica gel with an AcOEt: hexanes 3: 2 mixture as eluent (Biotage system, pre-filled columns 4 x 15 cm). The product containing fractions are combined and concentrated in vacuo to give a white foam (1.60 g; 86%). Spec. mass: 374.3 MH +. 1 H NMR (DMSO-d6): 7.95-8.05 (1 H, d, d); 7.45-7.55 (1H, s); 7.10-7.25 (1H, m); 7.0-7.1 (1H, m); 6.9-7.05 (1H, m); 5.05-5.15 (1H, t); 4.25-4.35 (1H, t); 4.05-4.2 (1H, br s); 4.0-4.1 (1H m); 3.9-4.0 (3H, s); 3.9-4.0 (1H, m); 3.25-3.35 (2H, m); 1.9-2.1 (2H, m); 1.15-1.25 (9H, s).
5. m ) 7 -((1,1 -diméthyléthoxy)carbonyl)-8-phénoxyéthyl-2-(2-méthoxyphényl) -5, 6, 7, 8-tétrahydro-imidazo[l,2-a]pyrazine5.m) 7 - ((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) -8-phenoxyethyl-2- (2-methoxyphenyl) -5, 6, 7, 8-tetrahydro-imidazo [1,2-a] pyrazine
L'inter édiaire 5.1 (746 mg ; 2,00 mmol) est dissous dans du THF (10 ml) contenant de la triphénylphosphine (550 mg ; 2, 1 mmol) et du phénol (198 mg ; 2,1 mmol). Le mélange est refroidi à 0 °C sous azote et du diéthylazodicarboxylate (330 μl ; 2, 1 mmol) est ajouté goutte à goutte durant 10 minutes. Le mélange réactionnel est ensuite agité durant 2 heures à température ambiante. Le milieu réactionnel est ensuite refroidi à nouveau à 0 °C et de la triphénylphosphine (275 mg ; 1,05 mmol) et du phénol (99 mg ; 1 ,05 mmol) sont ajoutés. On ajoute ensuite du diéthylazodicarboxylate (166 μl ; 1,05 mmol) goutte à goutte durant 10 minutes puis le mélange est agité encore pendant 1 heure à température ambiante. Les solvants sont éliminés sous pression réduite et le produit brut est purifié par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange AcOEt:hexanes 3:2 comme éluant. Les fractions contenant le produit sont combinées et concentrées sous vide. Après recristallisation dans AcOEt et les hexanes, on obtient le produit désiré sous forme d'un solide blanc (863 mg ; 96 %) .Intermedium 5.1 (746 mg; 2.00 mmol) is dissolved in THF (10 ml) containing triphenylphosphine (550 mg; 2.1 mmol) and phenol (198 mg; 2.1 mmol). The mixture is cooled to 0 ° C. under nitrogen and diethylazodicarboxylate (330 μl; 2.1 mmol) is added dropwise over 10 minutes. The reaction mixture is then stirred for 2 hours at room temperature. The reaction medium is then cooled again to 0 ° C. and triphenylphosphine (275 mg; 1.05 mmol) and phenol (99 mg; 1.05 mmol) are added. Diethylazodicarboxylate (166 μl; 1.05 mmol) is then added dropwise for 10 minutes, then the mixture is stirred again for 1 hour at room temperature. The solvents are removed under reduced pressure and the crude product is purified by flash chromatography on silica gel with an AcOEt: hexanes 3: 2 mixture as eluent. The product-containing fractions are combined and concentrated in vacuo. After recrystallization from AcOEt and hexanes, the desired product is obtained in the form of a white solid (863 mg; 96%).
Spec. masse : 450,4 MH+.Spec. mass: 450.4 MH +.
5.n) 7-(2-(((l,l-diméthyléthoxy)carbonyl)amino)-l-oxo-3-((triphénylméthyl) thio)propyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)-4,5,6, 7-tétrahydro-imidazo- [l,2a]-pipérazine5.n) 7- (2 - (((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) amino) -l-oxo-3 - ((triphenylmethyl) thio) propyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl ) -4,5,6,7-tetrahydro-imidazo- [1,2a] -piperazine
L'intermédiaire 5. m (850 mg ; 1 ,89 mmol) est traité avec un mélange de TFA (10 ml) contenant iPr3SiH (387μl, 1.89mmol) à température ambiante pendant 20 min. Les solvants sont éliminés sous pression réduite et le produit brut est réparti entre AcOEt (15 ml) et une solution saturée de NaHCθ3 (15 ml). La phase AcOEt est séchée sur Na2Sθ4, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le produit déprotégé est couplé à Boc-(L)-Cys(Trt)-OH selon une méthode analogue à celle de l'étape l .f ( 1 ,26 g ; 84 %) . 5. o ) 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 4,5,6,7 -tétrahydro-imidazo-l 1 ,2a]-pipérazineIntermediate 5. m (850 mg; 1.89 mmol) is treated with a mixture of TFA (10 ml) containing iPr3SiH (387μl, 1.89mmol) at room temperature for 20 min. The solvents are removed under reduced pressure and the crude product is distributed between AcOEt (15 ml) and a saturated solution of NaHCθ3 (15 ml). The AcOEt phase is dried over Na 2 Sθ4, filtered and concentrated under reduced pressure. The deprotected product is coupled to Boc- (L) -Cys (Trt) -OH according to a method analogous to that of step I.f (1.26 g; 84%). 5.o) 7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 4,5,6,7 -tétrahydro-imidazo-l 1, 2a ] -piperazine
Le produit 5 est préparé à partir de l'intermédiaire 5.n selon une méthode analogue à celle de l'étape l .g. Spec. masse : 274,3 MH+.Product 5 is prepared from intermediate 5.n according to a method analogous to that of step l .g. Spec. mass: 274.3 MH +.
RMN ] H (DMSO-d6 à 90 °C) : 8,5-9,2 (3H, s, large) ; 7,95-8, 1 ( IH, d) ; 7,85-8,0 (IH, s) ; 7,35-7,5 (IH, m) ; 7,15-7,35 (3H, m) ; 7,0-7,15 (IH, t) ; 6,85-7,0 (3H, m) ; 5,9-6,1 (IH, s, large) ; 4,5-4,8 (2H, m, large) ; 4,15-4,45 (3H, m, large) ; 3,9-4,0 (3H, s) ; 3,75-4,0 (IH, m, large) ; 2,8-3,05 (2H, m, large) ; 2,55-2,75 (2H, m, large). NMR] (DMSO-d6 at 90 ° C): 8.5 to 9.2 (3H, s, br); 7.95-8.1 (1H, d); 7.85-8.0 (1H, s); 7.35-7.5 (1H, m); 7.15-7.35 (3H, m); 7.0-7.15 (1H, t); 6.85-7.0 (3H, m); 5.9-6.1 (1H, s, broad); 4.5-4.8 (2H, m, wide); 4.15-4.45 (3H, m, wide); 3.9-4.0 (3H, s); 3.75-4.0 (1H, m, broad); 2.8-3.05 (2H, m, wide); 2.55-2.75 (2H, m, wide).
Exemple 6 : 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-Example 6: 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -
8-(phénoxyéthyl)-5,6,7,8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine, dimère : 6 :8- (phenoxyethyl) -5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine, dimer: 6:
Le composé 5.o (467 mg ; 0,687 mmol) est mis en solution dans H2O (25 ml) et le pH de la solution est ajusté à 7,2 par addition d'une solution aqueuse diluée de NH4OH. De l'acétonitrile est ajouté pour donner une solution limpide et le mélange est agité à température ambiante durant une nuit. Le produit brut est purifié par HPLC préparative sur une colonne Cl 8 en utilisant un gradient de 15 à 40 % CH3CN dans du TFA à 0,1 % sur une durée de 50 minutes. Les fractions pures de produit sont rassemblées et lyophilisées. Le produit initial est lyophilisé par deux fois à partir d'une solution diluée de HCl pour donner le produit sous forme de son chlorhydrate (161 mg ; 45 %). Spec. masse : 903,5 MH+.Compound 5.o (467 mg; 0.687 mmol) is dissolved in H 2 O (25 ml) and the pH of the solution is adjusted to 7.2 by addition of a dilute aqueous solution of NH 4 OH. Acetonitrile is added to give a clear solution and the mixture is stirred at room temperature overnight. The crude product is purified by preparative HPLC on a Cl 8 column using a gradient of 15 to 40% CH3CN in 0.1% TFA over a period of 50 minutes. The pure product fractions are combined and lyophilized. The initial product is lyophilized twice from a dilute HCl solution to give the product in the form of its hydrochloride (161 mg; 45%). Spec. mass: 903.5 MH +.
RMN ! H (DMSO-d6 à 90° C) : 8,7-9,3 (3H, s large) ; 7,95-8,1 (IH, d) ; 7,85-8,0 (IH, s) ; 7,3-7,5 (IH, t) ; 7,1-7,3 (3H, m) ; 7,0-7,15 ( IH, t) ; 6,8-7,0 (3H, m) ; 5,85-6,1 (IH, s large) ; 4,7-4,9 (IH, s large) ; 4,45-4,7 (IH, m large) ; 4,1-4,5 (4H, m large) ; 3,85-4,0 (4H, s) ; 3,3-3,5 (2H, m large) ; 2,5-2,8 (2H, m large). NMR ! H (DMSO-d6 at 90 ° C): 8.7-9.3 (3H, br s); 7.95-8.1 (1H, d); 7.85-8.0 (1H, s); 7.3-7.5 (1H, t); 7.1-7.3 (3H, m); 7.0-7.15 (1H, t); 6.8-7.0 (3H, m); 5.85-6.1 (1H, br s); 4.7-4.9 (1H, br s); 4.45-4.7 (1H, broad m); 4.1-4.5 (4H, broad m); 3.85-4.0 (4H, s); 3.3-3.5 (2H, m wide); 2.5-2.8 (2H, m wide).
Exemple 7 : 7-(2-arnino-l -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 8-(phénylsulfonyIéthyl)-5,6,7,8-tétrahydro- imidazo[l,2a]pyrazine : 7 :Example 7: 7- (2-arnino-1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 8- (phenylsulfonyIethyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine : 7:
Le composé 7 a été préparé selon le schéma synthétique ci-dessous :Compound 7 was prepared according to the synthetic scheme below:
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0001
Schéma 3Diagram 3
7. p ) 7-((l,l-diméthyléthoxy)carbonyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylthioéthyl)- 5,6,7,8-tétrahydro-imidazo[ 1 ,2-a]pyrazine7.p) 7 - ((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylthioethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1, 2-a] pyrazine
De l'intermédiaire 5.1 ( 1 ,23 g ; 3,30 mmol), de la tri-n-butylphosphine (1,64 ml ; 6,60 mmol), et du phényldisulfide (1 ,44 g ; 6,60 mmol) sont mélangés dans du THF (10 ml). Le mélange est agité à température ambiante sous argon durant 4 heures. Les solvants sont éliminés sous pression réduite et le produit brut est purifié par chromatographie éclair sur gel de silice avec un mélange AcOEt:hexanes 1 : 1 comme éluant. Les fractions contenant le produit sont combinées et concentrées sous vide pour donner le produit sous forme d'une mousse blanche (1,43 g ; 93 %). Spec. masse : 466,3 MH+.Intermediate 5.1 (1.23 g; 3.30 mmol), tri-n-butylphosphine (1.64 ml; 6.60 mmol), and phenyldisulfide (1.44 g; 6.60 mmol) are mixed in THF (10 ml). The mixture is stirred at room temperature under argon for 4 hours. The solvents are removed under reduced pressure and the crude product is purified by flash chromatography on silica gel with an AcOEt: hexanes mixture 1: 1 as eluent. The product containing fractions are combined and concentrated in vacuo to give the product as a white foam (1.43 g; 93%). Spec. mass: 466.3 MH +.
7. q ) 7-((l, 1 -diméthyléthoxy)carbonyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7,8-tétrahydro-imidazol 1 ,2-a]pyrazine7.q) 7 - ((1,1-dimethylethoxy) carbonyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazol 1,2-a] pyrazine
L'intermédiaire 7.p (650 mg ; 1,40 mmol) est dissous dans du CH2CI2 (10 ml) et de l'acide 3-chloroperoxybenzoïque (483 mg ; 2,80 mmol) est ajouté en plusieurs portions sur une période de 10 minutes. Le mélange est versé sur une colonne de silice et élue avec un mélange hexanes:AcOEt 7:3, puis un mélange hexanes:AcOEt 1: 1 pour donner le produit pur (220 mg ; 32 %). Spec. masse : 498,3 MH+.Intermediate 7.p (650 mg; 1.40 mmol) is dissolved in CH 2 CI 2 (10 ml) and 3-chloroperoxybenzoic acid (483 mg; 2.80 mmol) is added in several portions over a period of 10 minutes. The mixture is poured onto a silica column and eluted with a hexane: AcOEt 7: 3 mixture, then a hexane: AcOEt 1: 1 mixture to give the pure product (220 mg; 32%). Spec. mass: 498.3 MH +.
RMN ] H (DMSO-d6 à 30 °C) : 7,9-8,0 (3H, m) ; 7,7-7,85 (IH, m) ; 7,6-7,75 (2H, m) ; 7,45-7,55 (lH,s) ; 7,15-7,25 (IH, m) ; 6,9-7,1 (2H, m) ; 5,1-5,25 (IH, t) ; 4,1-4,3 (IH, d large) ; 4,0-4,15 (IH, m) ; 3,8-4,0 (IH, m) ; 3,85-3,95 (3H, s) ; 3,6-3,8 (IH, m) ; 3,4-3,6 (IH, m) ; 3,2-3,4 (H2O plus un signal flou) ; 1 ,9-2,3 (2H, m) ; 1 ,3-1,5 (9H, s). NMR] (DMSO-d6 at 30 ° C): 7.9-8.0 (3H, m); 7.7-7.85 (1H, m); 7.6-7.75 (2H, m); 7.45-7.55 (1H, s); 7.15-7.25 (1H, m); 6.9-7.1 (2H, m); 5.1-5.25 (1H, t); 4.1-4.3 (1H, broad d); 4.0-4.15 (1H, m); 3.8-4.0 (1H, m); 3.85-3.95 (3H, s); 3.6-3.8 (1H, m); 3.4-3.6 (1H, m); 3.2-3.4 (H 2 O plus a fuzzy signal); 1.9-2.3 (2H, m); 1, 3-1.5 (9H, s).
Etape 7.n)Step 7.n)
L'étape 7.n est réalisée selon une méthode analogue à l'étape 5.n. Le produit brut est engagé sans purification complémentaire dans l'étape suivante.Step 7.n is carried out according to a method analogous to step 5.n. The crude product is used without further purification in the next step.
Etape 7.o)Step 7.o)
L'étape 7.o est réalisée selon une méthode analogue à l'étape 5.o. Spec. masse : 501,3 MH+. Step 7.o is carried out according to a method analogous to step 5.o. Spec. mass: 501.3 MH +.
Préparation du composé de formule (VII):Preparation of the compound of formula (VII):
Ce composé, proche de ceux décrits dans la demande de brevet PCT WO 97/30053, peut être préparé selon le schéma synthétique suivant :This compound, close to those described in PCT patent application WO 97/30053, can be prepared according to the following synthetic scheme:
1) Trt1) Trt
I BOC-Cys-alI BOC-Cys-al
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0001
Trt I 3) BOC-Cys / EDC / HOBTTrt I 3) BOC-Cys / EDC / HOBT
Figure imgf000026_0002
Figure imgf000026_0002
Trt TrtTrt Trt
H IH I
Figure imgf000026_0003
Figure imgf000026_0003
Trt TrtTrt Trt
R QR Q
)- 1) - 1
H Ar
Figure imgf000026_0004
 H ar
Figure imgf000026_0004
4) [O] (cyclisation)4) [O] (cyclization)
5) déprotection5) deprotection
R' ≈ H ou CH,;R '≈ H or CH ,;
Cys - Cysteine, Cys-al = Cystéinal;Cys - Cysteine, Cys-al = Cysteinal;
Pen = Pénicillamine, Pen-al = Pénicillaminylal PARTIE PHARMACOLOGIOUEPen = Penicillamine, Pen-al = Penicillaminylal PHARMACOLOGICAL SECTION
Afin d'illustrer l'utilité de l'invention, on étudiera l'effet d'un traitement d'une lignée de cellules humaines MCF-7 par les composés suivants :In order to illustrate the utility of the invention, the effect of a treatment of a human cell line MCF-7 with the following compounds will be studied:
- disulfure de bis- l , l '-[7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine, désigné dans cette partie comme composé (I) ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine, designated in this part as compound (I);
- disulfure de bis- l , l '-7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl-(2-( l -naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazin-7-yle), désigné dans cette partie comme composé (II) ;- bis- l disulfide, -7- (2-amino- l -oxo-3-thiopropyl- (2- (l -naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yle), designated in this part as compound (II);
- 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine, désigné dans cette partie comme composé (III) ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine, designated in this part as compound (III);
- le composé de formule :- the compound of formula:
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000027_0001
désigné dans cette partie comme composé (IV) ;designated in this part as compound (IV);
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)-- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) -
5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine, désigné dans cette partie comme composé (V) ;5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine, designated in this part as compound (V);
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(méthoxyphényl)- 8-(l-méthylpropyl)~5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine], désigné dans cette partie comme composé (VI) ; - le composé de formule- bis-l disulfide, l - [7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (methoxyphenyl) - 8- (l-methylpropyl) ~ 5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine], designated in this part as compound (VI); - the compound of formula
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désigné dans cette partie comme composé (VII) ;designated in this part as compound (VII);
ProcéduresProcedures
Lignée cellulaire Les lignées cellulaires MCF-7 (cellules pleurales humaines, cancer du sein) ont été acquises auprès de American Tissue Culture Collection (Rockville, Maryland, USA).Cell line The MCF-7 cell lines (human pleural cells, breast cancer) were acquired from the American Tissue Culture Collection (Rockville, Maryland, USA).
Mesure de la quantité intracellulaire d'AMP cyclique pour les cellules MCF-7 Des cellules MCF-7 (2.10 cellules/puits) ensemencées en plaques de 24 puits, sont mises en culture durant 5 jours dans le milieu de Eagle modifié par Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) complété avec 10% de sérum foetal de veau inactivé par chauffage (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France ), 50000 unités 1 de pénicilline et 50 mg/1 streptomycine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), et 2 mM de glutamine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). Le milieu de culture est remplacé après deux lavages avec un milieu sans sérum complété ou non avec les agents spécifiés pour un temps indiqué dans les différentes figures. Des agents activant la production d' AMPcycliqueyclique sont ensuite ajoutés à 37 °C. La réaction est stoppée au bout de 30 minutes par suppression du milieu et addition rapide de 100 μl de solution HCl 0,1N. Ces extraits sont congelés à -80 °C jusqu'à ce qu'ils soient utilisés. La concentration d' AMPc est mesurée en utilisant un kit commercial de mesure (référence NEK033 de NEN, Les Ulis, France) en suivant les instructions du fabricant. La radioactivité est déterminée par un compteur Gamma (Gamma Master-1277, LKB, Turku, Finland ).Measurement of the intracellular quantity of cyclic AMP for MCF-7 cells MCF-7 cells (2.10 cells / well) seeded in 24-well plates, are cultured for 5 days in Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco -Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by heating (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50,000 units 1 of penicillin and 50 mg / 1 streptomycin (Gibco-Brl, Cergy -Pontoise, France), and 2 mM glutamine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). The culture medium is replaced after two washes with a serum-free medium, whether or not supplemented with the agents specified for a time indicated in the various figures. Agents activating the production of cyclic AMP are then added at 37 ° C. The reaction is stopped after 30 minutes by removing the medium and rapidly adding 100 μl of 0.1N HCl solution. These extracts are frozen at -80 ° C until they are used. The concentration of cAMP is measured using a commercial measurement kit (reference NEK033 from NEN, Les Ulis, France) following the manufacturer's instructions. Radioactivity is determined by a Gamma counter (Gamma Master-1277, LKB, Turku, Finland).
Mesure de la prolifération cellulaire in vitroMeasuring cell proliferation in vitro
Les cellules MCF-7 (3000 cellules/puits) sont cultivées en plaques 96 puits dans 80 μl de milieu de Eagle modifié par Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) complété avec 10% de sérum foetal de veau inactivé par chauffage (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50000 unités/1 de pénicilline et 50 mg/1 streptomycine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), et 2 mM de glutamine (Gibco-Brl. Cergy-Pontoise, France) ont été ensemencées sur une plaque de 96 puits au jour 0. Les cellules ont été traitées au jour 1 pendant 96 heures avec des concentrations croissantes allant jusqu'à 50 μM de chacun des composés à tester. A la fin de cette période, la quantification de la prolifération cellulaire est évaluée par test colorimétrique en se basant sur le clivage du sel de tétrazolium WST1 par les déhydrogénases mitochondriales dans les cellules viables conduisant à la formation de formazan (Boehringer Mannheim, Meylan, France). Ces tests sont effectués en double avec 8 déterminations par concentration testée. Pour chaque composé à tester, les valeurs incluses dans la partie linéaire de la sigmoïde ont été retenues pour une analyse en régression linéaire et utilisées pour estimer la concentration inhibitrice (CI50).MCF-7 cells (3000 cells / well) are cultured in 96-well plates in 80 μl of Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% fetal calf serum inactivated by heating (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), 50,000 units / 1 of penicillin and 50 mg / 1 streptomycin (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), and 2 mM glutamine (Gibco-Brl. Cergy-Pontoise, France) were seeded on a 96-well plate on day 0. The cells were treated on day 1 for 96 hours with concentrations increasing up to 50 μM of each of the compounds to be tested. At the end of this period, the quantification of cell proliferation is evaluated by colorimetric test based on the cleavage of the tetrazolium salt WST1 by mitochondrial dehydrogenases in viable cells leading to the formation of formazan (Boehringer Mannheim, Meylan, France ). These tests are carried out in duplicate with 8 determinations per concentration tested. For each compound to be tested, the values included in the linear part of the sigmoid were used for a linear regression analysis and used to estimate the inhibitory concentration (IC50).
Mesure de l 'activité de la MAP kinaseMeasurement of MAP kinase activity
Des cellules MCF7 (5.105 cellules/puits) sont cultivées en plaques 6 puits dans le milieu de Eagle modifié par Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) complété avec 10 % de sérum de veau foetal inactivé par la chaleur (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), un mélange d'antibiotiques : 50000 unités/1 de pénicilline et 50 mg/1 de streptomycine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) et 2 mM de glutamine (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France). Après 24 heures de culture, les cellules sont incubées pendant 48 heures dans du milieu ne contenant pas de sérum pour amener les cellules à l'état de repos. Les cellules sont alors traitées pendant 1 heure soit par le composé I soit par le PD98059 (Calbiochem,France Biochem, Meudon, France), un inhibiteur spécifique de l'activation de la MAP kinase. Les cellules sont ensuite stimulées (ou non) pendant 5 minutes par 12.5 ng/ml de facteur de croissance épidermique (EGF). La réaction est stoppée par deux lavages avec du PBS(Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), à 4° C ne contenant ni calcium ni magnésium et par addition de 150 μl de tampon de lyse à 4° C dont la composition est la suivante: 10 mM de tris, 150 mM de NaCl, 2 mM d'EGTA, 2 mM de dithiothreitol, 1 mM de PMSF,2 mM d'orthovanadate, lOμg/ml de leupeptine et 10 μg/ml d'aprotinine. Un dosage des protéines contenues dans les extraits est réalisé par la méthode de Bradford (réactifs Biorad,Ivry-Sur-Seine, France). Ces extraits sont congelés à -80 °C jusqu'à ce qu'ils soient utilisés. L'activité de la MAP kinase est mesurée à l'aide d'un kit commercial de mesure (référence RPN 84, Amersham, Life Science, Les Ulis, France) en suivant les instructions du fabricant. La radioactivité est déterminée à l'aide d'un compteur à scintillation Packard (Tricarb 5000CA).MCF7 cells (5.105 cells / well) are cultured in 6-well plates in Eagle medium modified by Dulbecco (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) supplemented with 10% heat-inactivated fetal calf serum (Gibco- Brl, Cergy-Pontoise, France), a mixture of antibiotics: 50,000 units / 1 of penicillin and 50 mg / 1 of streptomycin (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France) and 2 mM of glutamine (Gibco-Brl, Cergy -Pontoise, France). After 24 hours of culture, the cells are incubated for 48 hours in medium not containing serum to bring the cells to the resting state. The cells are then treated for 1 hour either with compound I or with PD98059 (Calbiochem, France Biochem, Meudon, France), a specific inhibitor of MAP kinase activation. The cells are then stimulated (or not) for 5 minutes with 12.5 ng / ml of epidermal growth factor (EGF). The reaction is stopped by two washes with PBS (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, France), at 4 ° C containing neither calcium nor magnesium and by addition of 150 μl of lysis buffer at 4 ° C, the composition of which is the following: 10 mM tris, 150 mM NaCl, 2 mM EGTA, 2 mM dithiothreitol, 1 mM PMSF, 2 mM orthovanadate, 10 μg / ml leupeptin and 10 μg / ml aprotinin. The proteins contained in the extracts are assayed using the Bradford method (Biorad reagents, Ivry-Sur-Seine, France). These extracts are frozen at -80 ° C until they are used. The MAP kinase activity is measured using a commercial measurement kit (reference RPN 84, Amersham, Life Science, Les Ulis, France) by following the manufacturer's instructions. Radioactivity is determined using a Packard scintillation counter (Tricarb 5000CA).
Matériel Le peptide vaso-intestinal (VIP) a été acquis chez Bachem (Voisins le Bretonneux, France). La toxine cholérique, la forskoline, l'isoprotérénol, la prostaglandine E2 et le PD 98059 ont été acquis chez Calbiochem (France Biochem, Meodon, France). Les composés de formules (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) et (VII) ont été fournis par Biomeasure Inc. (Milford, MA, USA). Tous ces composés ont été utilisés en suivant les recommandations de leurs fabricants.Material The vaso-intestinal peptide (VIP) was acquired from Bachem (Voisins le Bretonneux, France). Cholera toxin, forskolin, isoproterenol, prostaglandin E2 and PD 98059 were acquired from Calbiochem (France Biochem, Meodon, France). The compounds of formulas (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) and (VII) were supplied by Biomeasure Inc. (Milford, MA, USA). All these compounds were used following the recommendations of their manufacturers.
RésultatsResults
La figure 1 montre que l'activation de l'adénylate cyclase par la toxine cholérique (200 ng/ml) ou par la forskoline (10 μM) conduit à une élévation très importante du taux d'AMP cyclique. Un prétraitement des cellules pendant 30 minutes avec 30 μM de composé (I) ne modifie pas la production d'AMP cyclique induite par l'activateur direct de l'adénylate cyclase, la forskoline. En revanche, la production d'AMP cyclique stimulée par l'activateur direct de la sous-unité, la toxine cholérique, est fortement inhibée par le composé (I). Ceci montre que l'adénylate cyclase, elle-même, n'est pas modifiée par le composé (I) et que celui-ci empêche la formation du complexe hétérotrimérique.Figure 1 shows that the activation of adenylate cyclase by cholera toxin (200 ng / ml) or by forskolin (10 μM) leads to a very significant increase in the level of cyclic AMP. Pretreatment of the cells for 30 minutes with 30 μM of compound (I) does not modify the production of cyclic AMP induced by the direct activator of the adenylate cyclase, forskolin. On the other hand, the production of cyclic AMP stimulated by the direct activator of the subunit, the cholera toxin, is strongly inhibited by the compound (I). This shows that adenylate cyclase, itself, is not modified by compound (I) and that the latter prevents the formation of the heterotrimeric complex.
Le VIP a été présenté comme un ligand extra-cellulaire d'un récepteur couplé à la protéine G qui stimule la synthèse d'AMP cyclique dans des cellules humaines de cancer du sein. La figure 2 montre que le traitement par le VIP de cellules humaines de cancer du sein MCF-7 augmente la quantité intracellulaire d'AMP cyclique de façon concentration-dépendante. La concentration de VIP de 10 nM qui offre une production d'AMP cyclique quasi-optimale sera utilisée pour les tests suivants. Cette concentration est en accord avec les données déjà publiées concernant la lignée de cellules humaines de cancer du sein T47D.VIP has been presented as an extracellular ligand of a receptor coupled to protein G which stimulates the synthesis of cyclic AMP in human breast cancer cells. Figure 2 shows that VIP treatment of human MCF-7 breast cancer cells increases the intracellular amount of cyclic AMP in a concentration-dependent fashion. The VIP concentration of 10 nM which offers a quasi-optimal cyclic AMP production will be used for the following tests. This concentration is in agreement with the data already published concerning the human breast cancer cell line T47D.
La figure 3 montre qu'un prétraitement de 30 minutes des cellules MCF-7 issues de cultures in vitro par le composé de formule (I) est suffisant pour inhiber de façon dépendante de la concentration, l'accumulation d'AMP cyclique stimulée par le VIP. Une inhibition presque complète a été obtenue à une concentration de 100 μM du composé de formule (I). Ces résultats montrent qu'un traitement par le composé (I) est suffisant pour bloquer la transduction du signal dont la voie utilise les protéines G hétérotrimériques comme médiateurs.FIG. 3 shows that a 30-minute pretreatment of MCF-7 cells from in vitro cultures with the compound of formula (I) is sufficient to inhibit, in a concentration-dependent manner, the accumulation of cyclic AMP stimulated by the VIP. Almost complete inhibition was obtained at a concentration of 100 μM of the compound of formula (I). These results show that a treatment with compound (I) is sufficient to block the transduction of the signal, the pathway of which uses heterotrimeric G proteins as mediators.
La figure 4 montre qu'un traitement d'une heure par le composé de formule (I) est suffisant pour modifier la réponse au VIP. Des traitements d'une durée plus longue (8 heures et 24 heures) continuent d'inhiber la production d'AMP cyclique mais le principal effet est obtenu très rapidement.FIG. 4 shows that a treatment of one hour with the compound of formula (I) is sufficient to modify the response to VIP. Longer duration treatments (8 hours and 24 hours) continue to inhibit the production of cyclic AMP but the main effect is obtained very quickly.
Le composé (I) est aussi capable d'inhiber la formation d'AMP cyclique induite par d'autres agents qui stimulent les récepteurs à sept domaines transmembranaires. Dans les cellules MCF7, par exemple, l'activité de l'adénylate cyclase très fortement augmentée par la prostaglandine E2 est inhibée par un traitement de 30 minutes par le composé (I). Ceci suggère que le traitement des cellules par le composé (I) modifie la forme hétérotrimérique des protéines G en dissociant la sous-unité du dimère β/γ.Compound (I) is also capable of inhibiting the formation of cyclic AMP induced by other agents which stimulate receptors with seven transmembrane domains. In MCF7 cells, for example, the activity of adenylate cyclase very greatly increased with prostaglandin E 2 is inhibited by a 30-minute treatment with compound (I). This suggests that the treatment of cells with compound (I) modifies the heterotrimeric form of the G proteins by dissociating the subunit of the β / γ dimer.
L'inhibition de la stimulation par le VIP n'est pas restreinte à des composés de structure analogue à celle du composé de formule (I) .Comme le montre le tableau I, les composés (II), (III), (IV), (V), (VI) et (VII) testés dans le même modèle, sont aussi capables de réduire la quantité d'AMP cyclique induite par le VIP.The inhibition of stimulation by VIP is not restricted to compounds of structure analogous to that of the compound of formula (I). As shown in Table I, the compounds (II), (III), (IV) , (V), (VI) and (VII) tested in the same model, are also capable of reducing the amount of cyclic AMP induced by VIP.
L'ensemble de ces résultats suggèrent que les composés testés modulent l'activité de l'adénylate cyclase en modifiant la forme hétérotrimérique des protéines G. Or, on sait que les dimères β/γ peuvent activer directement des effecteurs conduisant à l'activation de kinases régulées par des signaux extracellulaires (ERKs) ou MAP kinases.All of these results suggest that the compounds tested modulate the activity of adenylate cyclase by modifying the heterotrimeric form of the G proteins. However, it is known that the β / γ dimers can directly activate effectors leading to the activation of kinases regulated by extracellular signals (ERKs) or MAP kinases.
La figure 6 montre qu'un traitement des cellules pendant 1 heure par le composé (I) double l'activité basale de la MAP kinase . Ceci suggère qu'en empêchant la formation du complexe hétérotrimérique, le composé (I) libère l'hétérodimère - qui, lui, reste lié à la membrane et active la voie de ras. En revanche, la figure 7 montre qu'après une stimulation de 5 minutes de la MAP kinase par le facteur de croissance EGF, l'activité de l'enzyme est augmentée d'environ 7 fois. Un pré-taitement pendant 1 heure des cellules soit par le composé (I) soit par le PD98059, un inhibiteur spécifique de l'activation de la MAP kinase, réduit de 2 fois l'activité de la MAP kinase. Ces résultats suggèrent que le composé (I) stimule à l'état basai la voie de ras et inhibe cette même voie si celle-ci est stimulée expliquant ainsi son effet antiprolifératif.FIG. 6 shows that a treatment of the cells for 1 hour with the compound (I) doubles the basal activity of the MAP kinase. This suggests that by preventing the formation of the heterotimeric complex, compound (I) releases the heterodimer - which, in turn, remains bound to the membrane and activates the ras pathway. On the other hand, FIG. 7 shows that after a stimulation of MAP kinase by growth factor EGF for 5 minutes, the activity of the enzyme is increased by approximately 7 times. Pretreatment for 1 hour of the cells either with compound (I) or with PD98059, a specific inhibitor of MAP kinase activation, reduced by 2 times the activity of MAP kinase. These results suggest that the compound (I) stimulates in the basal state the ras pathway and inhibits this same pathway if the latter is stimulated, thus explaining its antiproliferative effect.
Le tableau II montre en effet que les composés (I), (II), (III) et (IV) sont capables d'inhiber la prolifération in vitro des cellules tumorales humaines MCF7.Table II indeed shows that compounds (I), (II), (III) and (IV) are capable of inhibiting the proliferation in vitro of human tumor cells MCF7.
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Tableau I
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Table I
Effets des composés I, II, III et IV incubés pendant 30 minutes sur la production d'AMP cyclique stimulée par le VIP dans les cellules MCF7.Effects of compounds I, II, III and IV incubated for 30 minutes on the production of VIP-stimulated cyclic AMP in MCF7 cells.
Les cellules sont incubées pendant 30 minutes en présence ou non des composés I, II, III et IV (30 μM) qui sont stimulées ensuite par 10"8 M de VIP. La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique. Les données représentent la moyenne ± ESM (n=5 pour le témoin et n=l pour les différents composés ).The cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compounds I, II, III and IV (30 μM) which are then stimulated by 10 " 8 M of VIP. The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay. The data represent the mean ± ESM (n = 5 for the control and n = l for the various compounds).
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Tableau IITable II
Inhibition de la croissance in vitro des cellules MCF7 par les composés I, II, III et IV.Inhibition of the in vitro growth of MCF7 cells by compounds I, II, III and IV.
Les résultats des CI50 sont exprimés en μM et représentent la moyenne de 2 expériences. The results of the IC 50 are expressed in μM and represent the average of 2 experiments.
FIGURESFIGURES
Figure 1 : Effet du composé I sur la production d'AMP cyclique stimulée par la toxine cholérique ou la forskoline dans les cellules MCF7Figure 1: Effect of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by cholera toxin or forskolin in MCF7 cells
Les cellules sont incubées pendant 30 minutes en présence ou non du composé I (30 μM) et stimulées ensuite soit par la toxine cholérique (200 ng/ml) pendant 90 minutes soit par la forskoline (10~5 M) pendant 30 minutes. La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique. Les données représentent la moyenne ± ESM (n=3)The cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compound I (30 μM) and then stimulated either by cholera toxin (200 ng / ml) for 90 minutes or by forskolin (10 ~ 5 M) for 30 minutes. The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay. Data represent mean ± ESM (n = 3)
Figure 2 : Effet de concentrations croissantes de VIP sur la production d'AMP cyclique dans les cellules MCF7Figure 2: Effect of increasing VIP concentrations on cyclic AMP production in MCF7 cells
Les cellules sont stimulées pendant 30 minutes par le VIP aux concentrations indiquées. La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique.The cells are stimulated for 30 minutes by the VIP at the indicated concentrations. The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay.
Figure 3 : Effet de différentes concentrations de composé I sur la production d'AMP cyclique stimulée par le VIP dans les cellules MCF7Figure 3: Effect of different concentrations of compound I on the production of VIP-stimulated cyclic AMP in MCF7 cells
Les cellules sont incubées pendant 24 heures en présence de concentrations croissantes du composé I et stimulées ensuite pendant 30 minutes par 10"8 M de VIP. La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique. Les données représentent la moyenne ± ESM (n = 3).The cells are incubated for 24 hours in the presence of increasing concentrations of compound I and then stimulated for 30 minutes with 10 " 8 M of VIP. The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay. The data represent the mean ± ESM (n = 3).
Figure 4 : Effet du temps d'incubation des cellules MCF7 en présence du composé I sur la production d'AMP cyclique stimulée par le VIPFigure 4: Effect of incubation time of MCF7 cells in the presence of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by VIP
Les cellules sont incubées pendant 1 , 8 ou 24 heures en présence ou non du composé I (30 μM) et stimulées ensuite par 10"8 M de VIP. La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique. Les données représentent la moyenne ± ESM (n=l).The cells are incubated for 1, 8 or 24 hours in the presence or not of compound I (30 μM) and then stimulated with 10 " 8 M of VIP. The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay. The data represent the mean ± ESM (n = l).
Figure 5 : Effet du composé I sur la production d'AMP cyclique stimulée par le VIP, l'isoprotérénol ou la prostaglandine E2 dans les cellules MCF7Figure 5: Effect of compound I on the production of cyclic AMP stimulated by VIP, isoproterenol or prostaglandin E 2 in MCF7 cells
Les cellules sont incubées pendant 30 minutes en présence ou non du composé IThe cells are incubated for 30 minutes in the presence or not of compound I
(30 μM) et stimulées ensuite pendant 30 minutes soit par le VIP (10"8 M), soit par l'isoprotérénol (10~6 M), soit par la PGE2 (10"6 M). La quantification d'AMP cyclique est déterminée par dosage radio-immunologique. Les données représentent la moyenne ± ESM (n = 3).(30 μM) and then stimulated for 30 minutes either by the VIP (10 " 8 M), or by isoproterenol (10 ~ 6 M), or by PGE 2 (10" 6 M). The quantification of cyclic AMP is determined by radioimmunoassay. Data represent mean ± ESM (n = 3).
Figure 6 : Effet du composé I sur l'activité basale de la MAP kinase dans les cellules MCF7.Figure 6: Effect of compound I on the basal activity of MAP kinase in MCF7 cells.
Les cellules, privées en sérum pendant 48 heures sont traitées pendant 1 heure par le composé I (10 et 50 μM). L'activité de la MAP kinase est déterminée dans les lysats cellulaires et est exprimée en pmole de Pi incorporé / minute / 4 μg de protéine. (n = 3 pour les échantillons témoins et n = 2 pour les cellules traitées par le composé I).The cells, deprived of serum for 48 hours, are treated for 1 hour with compound I (10 and 50 μM). The activity of MAP kinase is determined in cell lysates and is expressed in pmol of incorporated Pi / minute / 4 μg of protein. (n = 3 for the control samples and n = 2 for the cells treated with compound I).
Figure 7 : Effet du composé I comparé au PD98059 sur l'activité de la MAP kinase dans les cellules MCF7.Figure 7: Effect of compound I compared to PD98059 on the activity of MAP kinase in MCF7 cells.
Les cellules, privées en sérum pendant 48 heures sont traitées pendant 1 heure soit par le composé I (10 et 50 μM) soit par le PD98059 (10 et 50 μM). Les cellules sont ensuite stimulées par l'addition d'EGF (12,5 ng/ml) pendant 5 minutes. L'activité de la MAP kinase est déterminée dans les lysats cellulaires et est exprimée en pmole de Pi incorporé / minute / 4 μg de protéine. (n = 4). The cells, deprived of serum for 48 hours, are treated for 1 hour either with compound I (10 and 50 μM) or with PD98059 (10 and 50 μM). The cells are then stimulated by the addition of EGF (12.5 ng / ml) for 5 minutes. The activity of MAP kinase is determined in cell lysates and is expressed in pmol of incorporated Pi / minute / 4 μg of protein. (n = 4).

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'un dérivé de cysteine, choisi parmi le groupe composé1. Use of a cysteine derivative, chosen from the compound group
- d'un composé de formule générale (A) :- a compound of general formula (A):
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000035_0001
(A)(AT)
correspondant aux sous-formules (Al) ou (A2)corresponding to the sub-formulas (Al) or (A2)
Figure imgf000035_0002
Figure imgf000035_0002
(Al) (A2) dans lesquelles :(Al) (A2) in which:
X représente Rι2 et Y représente Rs, ou X et Y complètent un cycle à 6 chaînons, l'ensemble X-Y représentant le radical -CH(Rs)-CH(R9)- ;X represents Rι 2 and Y represents Rs, or X and Y complete a 6-membered ring, the set XY representing the radical -CH (Rs) -CH (R9) -;
Ri représente H, un radical alkyle ou alkylethio inférieur ;R1 represents H, an alkyl or lower alkylethio radical;
R2 et R3 représentent indépendamment H ou un radical alkyle inférieur ;R 2 and R 3 independently represent H or a lower alkyl radical;
R4 représente H2 ou O ;R 4 represents H 2 or O;
R5 représente H, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, alkenyle inférieur, alkynyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé d'un radical alkyle inférieur, -O-Rin, -S(O)mRjo (m représentant 0, 1, ou 2), -N(RιoXRn), -N-C(O)-Rιo, -NH-(SO2)-R10, -CO2-R10, C(O)-N(R10)(Rn), et -(SO2)- N(RιoKRn) ;R 5 represents H, or one of the lower alkyl, lower alkenyl, lower alkynyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of an alkyl radical lower, -O-Rin, -S (O) m Rjo (m representing 0, 1, or 2), -N (RιoXRn), -NC (O) -Rιo, -NH- (SO 2 ) -R 10 , -CO2-R10, C (O) -N (R 10 ) (Rn), and - (SO 2 ) - N (RιoKRn);
R(, et R7 représentent indépendamment H, un radical -C(O)-NH-CHR]3-Cθ2Ri4, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé des radicaux OH, alkyle ou alkoxy inférieur, N(Rιo)(Rn), COOH, CON(RιoXRn), et halo, ou R(, et R7 forment ensemble un radical aryle ou un hétérocycle ;R (, and R 7 independently represent H, a radical -C (O) -NH-CHR] 3 -Cθ 2 Ri 4 , or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or heterocycle lower alkyl radicals, these radicals which may optionally be substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or lower alkoxy, N (Rιo) (Rn), COOH, CON (RιoXRn), and halo, or R (, and R 7 radicals together form a aryl radical or a heterocycle;
Rδ et R9 représentent indépendamment, H, ou l'un des radicaux alkyle inférieur, aryle, arylalkyle inférieur, hétérocycle ou hétérocycle alkyle inférieur, ces radicaux pouvant éventuellement être substitués par des radicaux choisis parmi le groupe composé des radicaux OH, alkyle ou alkoxy inférieur, N(R]0)(Rι 1), COOH, CON(Rιo)(Rn) et halo, ou Rg et R9 forment ensemble un radical aryle ou un hétérocycle ;R δ and R9 independently represent, H, or one of the lower alkyl, aryl, lower arylalkyl, heterocycle or lower alkyl heterocycle radicals, these radicals possibly being substituted by radicals chosen from the group consisting of OH, alkyl or alkoxy radicals lower, N (R] 0 ) (Rι 1 ), COOH, CON (Rιo) (Rn) and halo, or Rg and R 9 together form an aryl radical or a heterocycle;
Rio et Ri 1, représentent indépendamment H, un radical aryle ou hétérocycle, ou un radical alkyle, arylalkyle ou hétérocycle alkyle inférieur ;Rio and Ri 1 independently represent H, an aryl or heterocycle radical, or an alkyl, arylalkyl or heterocycle lower alkyl radical;
Rl2 représente NR9, S, ou O ; The R 2 is NR 9, S, or O;
R13 représente un radical alkyle inférieur éventuellement substitué par un radical choisi parmi les radicaux alkyle inférieur, -OR10, -S(O)mRιo (m représentant 0, 1, ou 2) et -N(R10)(Rn) ; Rj4 représente H ou un radical alkyle inférieur ;R 1 3 represents a lower alkyl radical optionally substituted by a radical chosen from lower alkyl radicals, -OR 1 0, -S (O) m Rιo (m representing 0, 1, or 2) and -N (R 10 ) ( Rn); Rj 4 represents H or a lower alkyl radical;
étant entendu que les composés de formule générale (A) peuvent également se présenter sous forme de dimères, lorsque deux radicaux Rj représentant chacun un atome d'hydrogène sont éliminés par oxydation ;it being understood that the compounds of general formula (A) can also be in the form of dimers, when two radicals Rj each representing a hydrogen atom are eliminated by oxidation;
- d'un composé de formule générale (B)- a compound of general formula (B)
Wι-Ar-W (B)Wι-Ar-W (B)
dans laquelle :in which :
W] représente un reste issu d'une cysteine sous forme réduite ou non réduite ;W] represents a residue derived from a cysteine in reduced or unreduced form;
Ar représente un radical dérivé d'un acide aminobenzoïque dont le noyau aromatique est éventuellement substitué ; W2 représente un acide aminé, de préférence un acide aminé aliphatique ;Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is optionally substituted; W 2 represents an amino acid, preferably an aliphatic amino acid;
- d'un composé de formule générale (C) :- a compound of general formula (C):
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000037_0001
(C)(VS)
dans laquelle :in which :
Zj représente un radical alkyle inférieur ;Zj represents a lower alkyl radical;
Z et Z3 représentent tous deux H ou bien Z2 et Z3 forment ensemble une chaîne ayant de 2 à 4 éléments choisis parmi les radicaux -C(O)-, -CH2-, -CH(NH2)- et -S-, étant entendu que deux éléments successifs ne sont pas tous deux -C(O)- ;Z and Z 3 both represent H or else Z 2 and Z 3 together form a chain having from 2 to 4 elements chosen from the radicals -C (O) -, -CH 2 -, -CH (NH 2 ) - and - S-, it being understood that two successive elements are not both -C (O) -;
étant entendu que les composés de formule générale (C) peuvent également se présenter sous forme de dimères, lorsque le radical Z2 représente un atome d'hydrogène pouvant être éliminé par oxydation ;it being understood that the compounds of general formula (C) can also be in the form of dimers, when the radical Z 2 represents a hydrogen atom which can be eliminated by oxidation;
- et d'un sel pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule générale (A), (B) ou (C) ;- And a pharmaceutically acceptable salt of a compound of general formula (A), (B) or (C);
pour préparer un médicament destiné à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique.to prepare a medicament for the treatment of pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein.
2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé utilisé est :2. Use according to claim 1, characterized in that the compound used is:
- soit un composé de formule générale (A) tel que défini dans la revendication 1 ;- or a compound of general formula (A) as defined in claim 1;
- soit un composé de formule générale (B) pour lequel Ar représente un radical dérivé d'un acide aminobenzoïque dont le noyau aromatique est substitué par un radical phényle et Wi représente un acide aminé aliphatique ; - Or a compound of general formula (B) for which Ar represents a radical derived from an aminobenzoic acid whose aromatic nucleus is substituted by a phenyl radical and Wi represents an aliphatic amino acid;
3. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le composé utilisé est choisi parmi l'un des composés suivants :3. Use according to claim 1, characterized in that the compound used is chosen from one of the following compounds:
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-( 1 -méthylpropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (1-methylpropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine;
- la l-[2(R)-amino-3-mercaptopropyl]-2(S)-n-butyl-4-(l-naphtoyl)pipérazine ;- 1- [2 (R) -amino-3-mercaptopropyl] -2 (S) -n-butyl-4- (1-naphthoyl) piperazine;
- le disulfure de bis-l ,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(méthoxyphényl)- 8-(l-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine] ;- bis-1 disulfide, - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (methoxyphenyl) - 8- (1-methylpropyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine];
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- le disulfure de bis- l , l '-7-(2-amino-l -oxo-3-thiopropyl-(2-(l-naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazin-7-yle) ;- bis-1 disulfide, -7- (2-amino-1 -oxo-3-thiopropyl- (2- (1-naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yle);
- le composé de formule :- the compound of formula:
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000038_0001
(VII) le composé de formule :(VII) the compound of formula:
Figure imgf000039_0001
Figure imgf000039_0001
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylmethoxy) methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méfhoxyphényl)-8-( 1 -phénylméthoxy)éthyl- 5 ,6,7 ,8-tétrahydroimidazo [ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-mephoxyphenyl) -8- (1-phenylmethoxy) ethyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine ;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthyoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine, ou sa forme dimérique ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methyoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine, or its dimeric form;
- et la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine ;- and 7- (2-amino-l-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7, 8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine ;
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que que le composé utilisé est choisi parmi l'un des composés suivants :4. Use according to claim 3, characterized in that the compound used is chosen from one of the following compounds:
- le disulfure de bis-l, -[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (I) ;- bis-1, disulfide - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8-tetrahydroimidazo [ 1,2a] pyrazine (I);
- le disulfure de bis- l , l'-7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl-(2-( l -naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazin-7-yle) (II) ; la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine (III) ;- bis-1 disulfide, l'-7- (2-amino- l -oxo-3-thiopropyl- (2- (l -naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazin-7-yl) (II); 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (III);
le composé de formule :the compound of formula:
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000040_0001
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-butyl-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (V) ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8-butyl-2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (V);
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(méthoxyphényl)- 8-(l-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine] (VI) ;- bis-1 disulfide, - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (methoxyphenyl) - 8- (1-methylpropyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine] (VI);
- le composé de formule :- the compound of formula:
Figure imgf000040_0002
Figure imgf000040_0002
(VII)(VII)
la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5 ,6,7 ,8-tétrahydroimidazo f 1 ,2a]pyrazine ;7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5, 6,7,7, 8-tetrahydroimidazo f 1, 2a] pyrazine;
la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-( 1 -méthylpropyl)-2-(2-méthoxyphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l ,2a]pyrazine ; - la l-[2(R)-amino-3-mercaptopropyl]-2(S)-n-butyl-4-(l-naphtoyl)pipérazine ;7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (1-methylpropyl) -2- (2-methoxyphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine; - 1- [2 (R) -amino-3-mercaptopropyl] -2 (S) -n-butyl-4- (1-naphthoyl) piperazine;
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que que le composé utilisé est choisi parmi l'un des composés suivants :5. Use according to claim 4, characterized in that the compound used is chosen from one of the following compounds:
- le disulfure de bis-l,l'-[7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)- 2-(2-méthoxyphényl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine (I) ;- bis-1, disulfide - - [7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) - 2- (2-methoxyphenyl) -5,6,7,8- tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine (I);
- le disulfure de bis-l , l '-7-(2-amino- l -oxo-3-thiopropyl-(2-( l-naphtyl)- 8-(2-méthylpropyl)-5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazin-7-yle) (II) ;- bis-l disulfide, -7- (2-amino- l -oxo-3-thiopropyl- (2- (l-naphthyl) - 8- (2-methylpropyl) -5,6,7,8 -tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazin-7-yle) (II);
- ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un de ces derniers.- or a pharmaceutically acceptable salt of one of these.
6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la pathologie à traiter est choisie parmi des pathologies liées aux fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, infection virale, fonctions immunologiques, diabète et obésité.6. Use according to one of claims 1 to 5, characterized in that the pathology to be treated is chosen from pathologies linked to the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the glands endocrines and exocrines, autocrine and paracrine regulation, blood pressure, embryogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes and obesity.
7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la pathologie à traiter est choisie parmi les pathologies suivantes : le choléra, le Syndrome Immuno-Déficitaire Acquis (SIDA), la diarrhée du voyageur et la puberté précoce familiale masculine.7. Use according to one of claims 1 to 5, characterized in that the pathology to be treated is chosen from the following pathologies: cholera, Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS), traveler's diarrhea and precocious familial puberty masculine.
8. Produit caractérisé en ce qu'il s'agit d'un des composés suivants :8. Product characterized in that it is one of the following compounds:
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-(2-méthylphényl)- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2- (2-methylphenyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-8-(cyclohexylméthyl)-2-phényl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[ 1 ,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -8- (cyclohexylmethyl) -2-phenyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1, 2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylméthoxy)méthyl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylmethoxy) methyl-5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-( 1 -phénylméthoxy )éthyl- 5,6,7,8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ; - la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénoxyéthyl)- 5,6,7, 8-tétrahydroimidazo[l,2a]pyrazine ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (1-phenylmethoxy) ethyl- 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine ; - 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenoxyethyl) - 5,6,7,8-tetrahydroimidazo [1,2a] pyrazine;
- la 7-(2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthyoxyphényl)-8-(phénoxyéfhyl)- 5,6,7,8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine, ou sa forme dimérique ;- 7- (2-amino- 1 -oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methyoxyphenyl) -8- (phenoxyéfhyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine, or its dimeric form;
- et la 7-(2-amino-l-oxo-3-thiopropyl)-2-(2-méthoxyphényl)-8-(phénylsulfonyléthyl)- 5,6,7,8-tétrahydro-imidazo[l,2a]pyrazine.- and 7- (2-amino-1-oxo-3-thiopropyl) -2- (2-methoxyphenyl) -8- (phenylsulfonylethyl) - 5,6,7,8-tetrahydro-imidazo [1,2a] pyrazine .
9. A titre de médicament, un produit selon la revendication 8 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce produit.9. As a medicament, a product according to claim 8 or a pharmaceutically acceptable salt of this product.
10. Composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif un produit selon la revendication 7 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce produit.10. Pharmaceutical composition comprising, as active principle, a product according to claim 7 or a pharmaceutically acceptable salt of this product.
11. Utilisation d'un produit selon la revendication 8 pour fabriquer un médicament pour préparer un médicament destiné à traiter des pathologies qui résultent de la formation de la protéine G hétérotrimérique.11. Use of a product according to claim 8 for manufacturing a medicament for preparing a medicament intended for treating pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein.
12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que la pathologie est liée à l'une des fonctions biologiques ou désordres suivants : odorat, goût, perception de la lumière, neurotransmission, neurodégénérescence, fonctionnement des glandes endocrines et exocrines, régulation autocrine et paracrine, tension artérielle, embryogenèse, prolifération cellulaire bénigne, oncogénese, infection virale, fonctions immunologiques, diabète, obésité, et maladies prolifératives bénignes et malignes. 12. Use according to claim 11, characterized in that the pathology is linked to one of the following biological functions or disorders: smell, taste, perception of light, neurotransmission, neurodegeneration, functioning of the endocrine and exocrine glands, autocrine regulation and paracrine, blood pressure, embryogenesis, benign cell proliferation, oncogenesis, viral infection, immunological functions, diabetes, obesity, and benign and malignant proliferative diseases.
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