WO1996032402A1 - Novel compounds fr182876 and fr182877, process for producing the same, and use thereof - Google Patents

Novel compounds fr182876 and fr182877, process for producing the same, and use thereof Download PDF

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WO1996032402A1
WO1996032402A1 PCT/JP1996/000974 JP9600974W WO9632402A1 WO 1996032402 A1 WO1996032402 A1 WO 1996032402A1 JP 9600974 W JP9600974 W JP 9600974W WO 9632402 A1 WO9632402 A1 WO 9632402A1
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compound
culture
ppm
absorption spectrum
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PCT/JP1996/000974
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French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Bunji Sato
Hidenori Nakajima
Michiyo Miyauchi
Hideyuki Muramatsu
Katsuhiko Ito
Shigehiro Takase
Hiroshi Terano
Original Assignee
Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.
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Filing date
Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Definitions

  • the present invention relates to novel compounds FR 1 828 776 and FR 1 828 77. More specifically, the present invention relates to novel compounds FR 182876 and FR 82877 having microtubule polymerization accelerating activity, FR 828 76 and NR or FR 1 828 76 belonging to Streptomyces ⁇ in a medium. Method for producing FR 1 828 776 and / or FR 1 2877 by culturing 82877-producing bacteria, and FR
  • compositions containing 1 828 76 and No or FR 182877 are provided.
  • the present inventors screened a novel microtubule polymerization promoting substance from a product of a microorganism. As a result, the present inventors have isolated novel compounds FR182876 and FR182877 from cultures of strains belonging to Streptomyces.
  • the present invention provides novel compounds FR 1 82876 and FR 1 82877 which have microtubule polymerization promoting activity and have physicochemical properties as described below.
  • the present invention also provides a method for culturing FR 182876 and Z or FR 18 2877-producing bacteria belonging to the genus Streptomyces in a medium, and producing a compound FR 18 2876 and / or FR 18 2877 from the obtained culture.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compounds FR 18 2876 and Z or FR 1 828 77 as active ingredients and a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the new compounds FR 1 828 76 and FR 1 828 77 have the following physicochemical properties.
  • V I 3400. 3300. 2950. 1720. 1660. 1610. 1550, 1440. 1385.
  • Soluble water, methanol
  • Soluble methanol, ethanol, ethyl acetate, dichloromethane, acetone
  • FR 182876 and Z or FR 182877 can be used as a medium for producing FR 182876 and Z or FR 182877 producing bacteria belonging to Streptomyces ⁇ ⁇ ⁇ , such as Strei iomyces sp. It is produced by harvesting FR182876 and Z or FR182877 from the obtained culture.
  • strain No. 9885 was isolated from a soil samble collected in Tokushima Prefecture. Media and methods for investigating the morphology, culture characteristics, and physiological properties of this strain are mainly described in Shirring. E. B. and D. Gottling: Methods for chara-cterization of Streptomyces.
  • yeast extract, malt extract agar, oatmeal agar, inorganic salt, agar agar, yeast extract, agar, and glucose and agar Observed with a scanning electron microscope.
  • Yeast extract, starch, and glucose agar are prepared by dissolving 2 g of yeast extract (Daigo Nutrition, Osaka), 10 g of soluble starch, 5 g of glucose, and 16 g of agar in 1 liter of tap water, and After adjusting the pH to 7.2 with an aqueous solution of sodium hydroxide, autoclave sterilization was performed to prepare.
  • Yeast extract and malt extract agar were used to determine the growth temperature.
  • the towers of Pridham Godriver Principal, TG and D. Gottlieb: The utilization of carbon compounds by some Acti, ycetales as an acid for species
  • freeze-dried sambre of this strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, National Institute of Technology, Patent Depositary Depositary Center (zip code: 305, 1-1-11, Higashi, Tsukuba, Ibaraki Prefecture) with the number FERM BP-507. (Deposit date: February 17, 1995).
  • the use of the specific microorganisms listed in this report is for illustrative purposes only, and the production of the new compounds FR 18 2876 and FR 1 828 77 is not limited to this. .
  • the present invention also relates to naturally occurring mutants and to conventional methods such as Xdi or UV irradiation, and treatment with N-methyl-N'-nitro2N-nitrosogazine or 2-aminobulin. Includes any of the mutants capable of producing FR188766 and FR1 or FR182877, including artificial variants that can be produced from the microorganisms described above by the method.
  • Streptomyces' SP No. 9 8 85 has the following morphological characteristics, culture characteristics, Has physiological characteristics.
  • the underlying hypha develops well and branches irregularly but does not tear.
  • the aerial hyphae elongating from the underlying hyphae are simply branched and form long spore chains.
  • the form of aerial hyphae is hook-shaped, circumscribed, incompletely spiral, and belongs to the RA eve of the classification of Prydham, etc. (Pridoham. TC. Et al. Appl. Microbiol. 6: 54. 1958).
  • One spore chain consists of 10 or more spores. The spores were hairy on the surface and cylindrical, measuring 0.5-0.6 x 0.7-0.9 / m. Sclerotia, spores and zoospores are not observed and o
  • Table 1 shows the results.
  • the color of the aerial mycelium was pale gray on yeast extract, starch, and glucose agar.
  • No aerial mycelium was formed on yeast extract, malt extract agar, inorganic salt, and starch agar.
  • Glycerin ⁇ No growth is observed on asparagine agar.
  • the color on the back of the growth is light brown, brown or light orange.
  • Intracellular pigments are not pH sensitive.
  • No melanoid pigment was produced on Tribton / Yeast extract medium and peptone / yeast extract iron agar.
  • Slightly soluble pigment was produced on yeast extract and malt dex agar and oatmeal agar. The soluble dye was not pH sensitive.
  • the cell wall type of this strain is considered to be type I.
  • strain No. 9885 was considered to be Streptomyces ⁇ (Buchanan. RE and NE Gibbons: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 8th edition: The Williams and Wilkins Co.) ., Baltimore. 1974; Williams, S. T: Bergey's Manual of Systematic
  • Streptomyces sp. No. 9885 strain was named Streptomyces sp. No. 9885 strain.
  • FR182876 and Z or FR182877 is a medium containing a carbon source and a nitrogen source that can assimilate FR182876 and Z or FR182877-producing bacteria, preferably in aerobic conditions. It can be manufactured by culturing under (eg, shaking !: culture, tank culture, etc.).
  • Suitable carbon sources in the medium include carbohydrates such as glucose, fructose, glycerin and starch.
  • Other carbon sources include lactose and ara. Binose, xylose, dextrin, molasses, etc. are available.
  • Suitable nitrogen sources include yeast extract, peptone, gluten meal, cottonseed flour, soy flour, corn steep liquor, dried yeast, and the like, and ammonium salts (eg, ammonium sulfate, ammonium sulfate, ammonium phosphate, etc.). And inorganic and organic nitrogen compounds such as urea, amino acids and the like.
  • the carbon and nitrogen sources are used in combination. It is not necessary to use a pure source of a low-purity raw material, as long as it contains a trace amount of growth factors and a considerable amount of inorganic nutrients, because it is suitable for use.
  • an inorganic salt such as calcium carbonate, sodium phosphate, potassium phosphate, sodium iodide, potassium iodide, magnesium salt, or cobalt chloride may be added to the medium.
  • an antifoaming agent such as liquid paraffin, high alcohol, vegetable oil, mineral oil or silicone may be added, especially if the culture broth is significantly foaming.
  • aerobic tank fermentation is preferred for the production of FR 1828876 and FR182287.
  • For small-volume production shake or culture in flasks or bottles.
  • inoculate a seed culture of the production bacterium into the production tank in order to prevent a delay in the growth of the production process of FR1828876 and FR188287. Is preferred. Therefore, first, a relatively small amount of medium is inoculated with spores or hypha of the producing bacterium, and the inoculated medium is cultured to obtain a seed culture, which is aseptically transferred to a large tank.
  • a medium for producing the seed culture a medium that is substantially the same as or slightly different from the medium used in the production of FR182876 and FR182877 can be used.
  • Agitation and aeration of the culture tie mixture can be accomplished in a variety of ways. Agitation is performed by a propeller or similar mechanical agitation device, by rotating or shaking the fermenter, by various pumping devices, or by passing sterile air through the culture. be able to. Aeration can be performed by passing sterile air through the fermentation mixture.
  • the fermentation is usually at about 4 to about 40'C, preferably at about 20 to about 30 for 50 hours. It takes 100 hours. However, this can be changed depending on the fermentation conditions and scale.
  • the FR 188876 and Z or FR 188877 produced in this manner can be purified by methods commonly used to separate and purify other enzyme products such as antibiotics. Collected from the medium.
  • FR 1 828 776 and FR 1 828 777 use concentrated solvents under reduced pressure, freeze-drying and conventional solvents from the culture solution obtained by filtration or centrifugation. Extraction, pH adjustment, treatment with resent resins (eg, anion or cation exchange resins, nonionic adsorbed resins), resorptive adsorbents (activated carbon, gay acid, silica gel, cellulose, alumina) , Crystallization, recrystallization and the like.
  • resins eg, anion or cation exchange resins, nonionic adsorbed resins
  • resorptive adsorbents activated carbon, gay acid, silica gel, cellulose, alumina
  • FIG. 1 is a chart showing the UV-visible absorption spectrum of FR1828876 measured in a methanol solution (concentration: 100 g / m1).
  • FIG. 2 is a chart showing the infrared absorption spectrum of FR1828876 measured by the potassium bromide method.
  • FIG. 3 is a chart showing the —NMR (nuclear magnetic resonance) spectrum of FR 1 828 776.
  • FIG. 4 is a chart showing a 13 C-NMR spectrum of FR1828876.
  • Fig. 5 shows FR 1 82 measured in a methanol solution (concentration: 100 z gZml).
  • 8 is a chart showing an ultraviolet-visible absorption spectrum of 8777.
  • FIG. 6 is a chart showing the infrared absorption spectrum of FR182877 measured by the potassium bromide method.
  • FIG. 7 is a chart showing the ' ⁇ -NMR spectrum of FR 1828877.
  • FIG. 8 is a chart showing a 13 C-NMR spectrum of FR 1828877.
  • FIG. 9 is a graph showing the microtubule polymerization promoting activity of FR1828876 measured in Test Example 3. It is rough.
  • FIG. 10 is a graph showing the microtubule polymerization-promoting activity of FR 182877 measured in Test Example 3.
  • Test Example 1 Inhibition of human tumor cell expansion in vitro by FR 1 828 76 and FR 1 828 77
  • FR 182876 aqueous solution
  • benicillin 50 uints Zml
  • streptomycin 50 uints Zml
  • FR 182877 a two-fold dilution liquid (methanol solution) of FR 182877 was prepared in a 96-microliter titration plate containing the above-mentioned medium 100 ⁇ 1.
  • a 54 9 were suspended in complete medium 1 00 1 double sequential dilution prepared, MCF 7, HT2 9 and Ju Rkat cells (5 X 1 0 3) were added, respectively, at 37 hands, 4 After incubation for one day, the cells were analyzed by the colorimetric MTT (tetrazolium) method according to the method of Mosmann (J. I. unol. Methods. 65.55-63, 1983).
  • MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -1,2,5-diphenyltetrazolium bromide, manufactured by Sigma] was added to phosphate buffer (PBS) at 5 mg / m2.
  • Test Example 2 Anti-tumor activity of FR 18876 and FR 18877 against mouse leukemia cell P388)
  • the antitumor activity of FR18876 and FR182877 was measured in a mouse tumor model.
  • BDF leukemic cells P 38 8 (transplanted. For 24 hours after tumor ⁇ inoculation was FR 1 8 28 76 or in the 1 x 1 0 6 intraperitoneally on day 0 into the system mice (female, 6 weeks old)
  • FR1 2877 Administered intraperitoneally FR1 2877 to mice Mice were administered intraperitoneally once a day on days 1, 4 and 7 with FR1828776 or FR182828.
  • the results are shown in Tables 5 and 6.
  • the antitumor activity was evaluated by the exact percentage value (median survival time of the treatment group Z median survival time of the control group X100).
  • Tubulin (without glycerol) was purchased from Cytoskeletone Corp. The reaction of tubulin with FR182876 or FR182877 was performed in G-PEM buffer (pH 6.8).
  • G-PEM buffer is 80 mM biazine-N, N * mono-bis (2-ethanesulfonic acid) sexodim salt, ImM magnesium chloride, ImM ethylene glycol bis (2-aminoethyl ether) N , N, ⁇ ', N, tetrahydrous acid and ImM guanosine 5'-triphosphate.
  • FIG. 9 shows the results of FR 1 828 776.
  • the concentration of FR1828876 was 25 ⁇ gZml (- ⁇ -), 50 g / m1 (- ⁇ 1) or no additive (1 bite).
  • FIG. 10 shows the results of FR 1 828 777.
  • the concentration of FR1828876 was 25 2g / m1 (- ⁇ -), 50g / m1 (one-one) or 100 ⁇ gZm1 (—Hataichi) .
  • FR 1 828 776 and FR 1 828 777 promoted the polymerization of tubulin.
  • Test example 4 (acute toxicity)
  • FR 18 287 6 or FR 18 287 7 (dose: 25 mg Zkg) was intraperitoneally administered to 5 BDF, strain mice (female, 6 years old). One mouse was observed, but no mice died.
  • the FR 18 287 6 and / or FR 18 287 8 of the present invention can be used as a mixture with a pharmaceutically acceptable carrier, as an antitumor agent, especially a microtubule polymerization such as an antitumor agent against a solid tumor.
  • a pharmaceutically acceptable carrier as an antitumor agent, especially a microtubule polymerization such as an antitumor agent against a solid tumor.
  • it can be administered orally or parenterally to mammals including humans in the form of pharmaceutical compositions such as capsules, tablets, contraceptives, powders, buccals, sublinguals and solutions. it can.
  • Pharmaceutically acceptable carriers include various organic or inorganic carrier materials commonly used in pharmaceutical applications, such as excipients (eg, sucrose, starch, mannite, sorbitol, lactose, glucose, cellulose) , Talc, calcium phosphate, calcium carbonate, etc.), binders (eg, cellulose, methylcellulose, hydratable xycellulose pill cellulose, polypropylpyrrolidone, gelatin, gum arabic, polyethylene glycol, sucrose, starch, etc.), disintegrants ( For example, starch, carboxymethylcellulose, calcium salt of carboquine methylcellulose, hydroxybutyral pill, starch, sodium salt of glycol-starch, sodium hydrogencarbonate, calcium phosphate, calcium citrate, etc.
  • excipients eg, sucrose, starch, mannite, sorbitol, lactose, glucose, cellulose) , Talc, calcium phosphate, calcium carbonate, etc.
  • binders eg, cellulose, methylcellulose
  • Lubricants for example, magnesium stearate, air-gill, talc, sodium lauryl sulfate, etc.
  • flavoring agents for example, citrate, menthol, glycine, orange powder, etc.
  • Preservatives eg, sodium benzoate, sodium bisulfite, methylparaben, propylparaben, etc.
  • stabilizers eg, citric acid, sodium citrate, acetic acid, etc.
  • suspending agents eg, methylcellulose, polyvinylpyrroli Don, aluminum stearate, etc.
  • dispersants eg, surfactants
  • aqueous diluents eg, water
  • oils eg, sesame oil, etc.
  • base waxes eg, cocoa butter, polyethylene Glycol, white petrolatum, etc.
  • the dosage of FR 182876 or FR 182877 can be varied depending on various factors such as the type of disease, the weight and / or age of the patient, the type of administration route, and the like.
  • Preferred dosages of FR 1 828 76 or FR 1 828 77 are usually selected from the range of 0.1 to 25 mgZkg per day.
  • aqueous medium 160 ml containing glucose (1, defatted soy flour (0.5%), bouillon (0.5%), and yeast extract (0.5%) was added to a volume of 500 ml. The mixture was poured into an Erlenmeyer flask and sterilized for 30 minutes at 120. A platinum loop was inoculated with a slant culture of Streptomyces' SP No. 9885 into the medium, and a rotary shaker (220 rpm) was used. , Amplitude 5.1 cm) at 3 O'C for 5 days Glucose (1%), soluble starch (29 (0, dry yeast (1%), wheat germ (1%), Kinase (1) and a sterile medium containing calcium carbonate (0.2%) (pH 7.
  • Adekinol LG-109 (0.05%, antifoaming agent, manufactured by Asahi Chemical Industry Co., Ltd.) and silicone KM-70 (0.05%, antifoaming agent, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. (Manufactured by Shikisha Co., Ltd.)
  • 20 liters of a sterilized production medium (pH 6.8, 60 liters) was injected into each of three 30 liter jar armamentors. (360 ml). The culture was carried out at 30'C for 6 days with aeration at 20 liters and stirring at 200 rpm.
  • the resulting culture (60 liters) was extracted with an equivalent amount of acetone and passed through diatomaceous earth.
  • the resulting solution was concentrated under reduced pressure to obtain an aqueous solution (50 liter).
  • the pH of the solution was adjusted to 4.0 with hydrochloric acid, and extracted twice with an equivalent amount of ethyl sulphate.
  • the aqueous layer was applied to a column (10 liters) of a polymer adsorbent, Dianion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation).
  • the column was washed with water (30 liter) and a 10% aqueous methanol solution (30 liter), and then eluted with a 30% aqueous methanol solution (30 liter) and a 50% aqueous methanol solution (30 liter).
  • the eluted fractions were combined and concentrated under reduced pressure to 30 liters.
  • the concentrate was applied to an anion exchange (Dowex 1, chloride ion type, Dow Chemical Co., 2 liter) column.
  • the active fraction that passed through the column was applied to a reversed-phase column (YMC gel, 0DS-AM120-S-50, manufactured by YMC, 2 liter).
  • the concentrated solution was applied to a preparative HP LC column (YMC gel, ODS-AM 120-S-50, manufactured by YMC, 80 m 1), and the column was developed with a 0.1% aqueous solution of 25% acetonitrile containing acid. did.
  • the active substance thus obtained was accumulated and freeze-dried to obtain FR182876 as colorless crystals (27 Omg).
  • Glucose (4%), dried yeast (1, carbonated calcium (0.296), Adekinol LG-109 (0.05%, defoamer, Asahi) 30 liters of sterilized production medium (60 liters) containing KAGAKU KOGYO CO., LTD. And silicone KM-70 (0.05%, defoamer, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.)
  • the seed culture (360 ml) was inoculated by injecting 20 liters into each of three jar armamenters. Was adjusted to 6.8 prior to the addition of um. Cultures were aerated with 20 liter Toruno min, while ⁇ stirred at 20 0 r pm, it was carried out for 4 days at 3 0 e C.
  • the resulting culture (60 liters) was extracted with an equal volume of acetone at pH 7.
  • the active substance was eluted with the same solvent, and the active fractions were combined and concentrated under reduced pressure to obtain an oily substance (2.1 g).
  • the oil was dissolved in methanol (10 ml).
  • This solution was applied to a reversed-phase column (YMC gel, ODS-AM120-S-50, manufactured by YMC, 350 ml), and the column was developed with a 70% aqueous solution of acetonitrile.
  • the active fractions were combined and decompressed, applied to a gel-based (GS-310P, Asahi Kasei Corporation, 180 ml) column, and developed with a 903 ⁇ 4 aqueous methanol solution.
  • the active fraction was accumulated, reduced and concentrated.
  • the concentrate was applied to a preparative HPLC column (YMC gel, ODS-AM 120-S-50, manufactured by YMC, 80 ml), and the column was developed with 70% aqueous acetonitrile solution. .
  • the active fractions thus obtained were collected, concentrated under reduced pressure to distill off the solvent, and extracted twice with an equivalent amount of ethyl acetate.
  • the extract was decompressed and concentrated to obtain FR 1 828 77 as colorless crystals (57 mg).
  • novel compounds FR 182876 and FR 182877 of the present invention have microtubule polymerization promoting activity and are useful as antitumor agents, particularly as antitumor agents against solid tumors.

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Abstract

Novel compounds FR182876 and FR182877 having the activity of accelerating microtubule polymerization; a process for producing FR182876 and/or FR182877 by culturing FR182876 and/or FR182877 producing bacteria of the genus Streptomyces in a medium; and medicinal compositions containing FR182876 and/or FR182877.

Description

明 細 害  Harm
新規化合物 FR 1 8 28 7 6および FR 1 8 28 77、 その製造方法  New compounds FR 1 828 76 and FR 1 828 77, their preparation
およびその用途  And its uses
技術分野  Technical field
本発明は、 新規化合物 FR 1 828 7 6および FR 1 828 77に関する。 更 に詳しくは、 本発明は微小管重合促進活性を有する新規化合物 FR 1 82 8 76 および FR 1 828 77、 培地でストレブトミセス （Strゆ tomyces) 厲に属する FR 1 828 76およびノまたは FR 1 82877生産菌を培養することにより FR 1 828 7 6および/または FR 1 8 2877を製造する方法、 および FR The present invention relates to novel compounds FR 1 828 776 and FR 1 828 77. More specifically, the present invention relates to novel compounds FR 182876 and FR 82877 having microtubule polymerization accelerating activity, FR 828 76 and NR or FR 1 828 76 belonging to Streptomyces で in a medium. Method for producing FR 1 828 776 and / or FR 1 2877 by culturing 82877-producing bacteria, and FR
1 8 28 76およびノまたは FR 1 82877を含有する医薬組成物に関する。 Pharmaceutical compositions containing 1 828 76 and No or FR 182877.
発明の開示  Disclosure of the invention
本発明者らは、 微生物の産物から新規な微小管重合促進物質をスクリーニング した。 その結果、 本発明者らはストレブトミセス厲に厲する菌株の培養物から、 新規化合物 FR 1 828 76および FR 1 82877を単離した。  The present inventors screened a novel microtubule polymerization promoting substance from a product of a microorganism. As a result, the present inventors have isolated novel compounds FR182876 and FR182877 from cultures of strains belonging to Streptomyces.
本発明は、 微小管重合促進活性を有し、 以下に述べるような物理化学的特性を 有する新規化合物 FR 1 828 76および FR 1 82877を提供する。  The present invention provides novel compounds FR 1 82876 and FR 1 82877 which have microtubule polymerization promoting activity and have physicochemical properties as described below.
本発明はまた、 培地でストレブトミセス属に厲する FR 1 828 76および Z または FR 1 8 2877生産菌を培養し、 得られた培養物から化合物 F R 1 8 2 876および または FR 1 8 2877を採取することからなる化合物 F R 1 8 The present invention also provides a method for culturing FR 182876 and Z or FR 18 2877-producing bacteria belonging to the genus Streptomyces in a medium, and producing a compound FR 18 2876 and / or FR 18 2877 from the obtained culture. The compound consisting of harvesting FR 18
2876および Zまたは FR 1 82877の製造方法を提供する。 2876 and Z or FR 1 82877 are provided.
更に、 本発明は、 有効成分として化合物 FR 1 8 2876および Zまたは FR 1 828 77と医薬上許容されうる担体とを含有する医薬組成物を提供するもの である。  Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising the compounds FR 18 2876 and Z or FR 1 828 77 as active ingredients and a pharmaceutically acceptable carrier.
新規化合物 FR 1 8 28 76および FR 1 8 28 77は次の物理化学的性質を 有する。  The new compounds FR 1 828 76 and FR 1 828 77 have the following physicochemical properties.
( 1 ) FR 1 828 76  (1) FR 1 828 76
a ) 外観：無色結晶 b) 分子式： C3eHe。N4 Os a) Appearance: colorless crystal b) Molecular formula: C 3e H e. N 4 Os
c) 融点： 1 7 9— 1 8 3'C (分解） c) Melting point: 1 7 9 1 8 3'C (decomposition)
d) 分子！:： d) Molecule! ::
6 8 2 CF AB-MS ： m/z 6 8 3 (M + H) 〕  6 8 2 CF AB-MS: m / z 6 8 3 (M + H)]
HRF AB-MS ： /z 測定値： 6 8 3. 3 6 9 2  HRF AB-MS: / z measured value: 6 8 3. 3 6 9 2
理論値 C3«H51NU Os ： 6 8 3. 3 6 5 6 Theoretical value C 3 «H 51 NU O s : 6 8 3. 3 6 5 6
e)紫外可視吸収スぺク トル ： （図 1に示す） e) UV-visible absorption spectrum: (shown in Fig. 1)
λ'·, (CH3 OH) ： 224 nm (s h) λ '·, (CH 3 OH): 224 nm (sh)
f ) 赤外線吸収スペク トル ： （図 2に示す） f) Infrared absorption spectrum: (shown in Fig. 2)
V I ： 3400. 3300. 2950. 1720. 1660. 1610. 1550, 1440. 1385.  V I: 3400. 3300. 2950. 1720. 1660. 1610. 1550, 1440. 1385.
1230, 1210, 1120. 1030. 940 cm"1 1230, 1210, 1120. 1030. 940 cm " 1
g) 溶解性： g) Solubility:
可溶：水、 メタノール  Soluble: water, methanol
難溶： アセトン  Poorly soluble: acetone
不溶： n—へキサン、 齚酸ェチル、 ジクロロメタン  Insoluble: n-hexane, ethyl acetate, dichloromethane
h)呈色反応 h) Color reaction
陽性：硫酸セリウム反応  Positive: Cerium sulfate reaction
ヨウ素蒸気との反応  Reaction with iodine vapor
モーリ ッシュ反応  Mauritian reaction
エールリ ッヒ反応  Ehrlich reaction
陰性：ニンヒ ドリ ン反応  Negative: ninhydrin reaction
塩化第二鉄反応  Ferric chloride reaction
i ) !H- R スペク トル （400MHz. 約 0.01N DC1-D20 ) (図 3に示す） δ ppm ： 9.26 (1H, br s). ! i) H- R spectrum (400MHz about 0.01N DC1-D 2 0) (shown in FIG. 3) δ ppm:. 9.26 ( 1H, br s).
7.73 (1H. br s).  7.73 (1H.br s).
5.47 (1H. br s).  5.47 (1H.br s).
4.87 (1H. m), 4.67 (IH, dd， J=10Hz. 5Hz). 4.87 (1H.m), 4.67 (IH, dd, J = 10Hz; 5Hz).
3.98 (3H, s),  3.98 (3H, s),
3.80 - 3.75 (2H, m),  3.80-3.75 (2H, m),
3.51 - 3.34 (5H, m),  3.51-3.34 (5H, m),
3.15 (IH, dd, J=16Hz. 10Hz).  3.15 (IH, dd, J = 16Hz.10Hz).
2.73 (IH, m),  2.73 (IH, m),
2.62 - 2.39 (3H, m),  2.62-2.39 (3H, m),
2.30 - 1.93 (5H. m).  2.30-1.93 (5H.m).
2.02 (3H, s).  2.02 (3H, s).
1.81 - 1.60 (5H. m).  1.81-1.60 (5H.m).
1.63 (3H, br s),  1.63 (3H, br s),
1.48 (3H. s),  1.48 (3H.s),
1.39 (IH. m).  1.39 (IH.m).
1.17 (3H. d. J=7Hz).  1.17 (3H.d.J = 7Hz).
0.80 (3H, d, J=7Hz).  0.80 (3H, d, J = 7Hz).
j ) 13 C-NMR スペク トル （100MHz. 約 0.01N DC1-D20 ) (図 4に示す） δ ppm ： 176.4 (s)， 175.8 (s). 174.8 (s). . j) 13 C-NMR spectrum (100 MHz to about 0.01N DC1-D 2 0) (shown in FIG. 4) δ ppm:. 176.4 ( s), 175.8 (s) 174.8 (s).
174.2 (s). 140.6 (s). 136.1 (s).  174.2 (s) .140.6 (s) .136.1 (s).
120.5 (d), 117.1 (d). 90.6 (s),  120.5 (d), 117.1 (d) .90.6 (s),
83.6 (d), 80.2 (d). 79.2 (s),  83.6 (d), 80.2 (d) .79.2 (s),
77.6 (d). 54.6 (d). 53.4 (d),  77.6 (d) .54.6 (d) .53.4 (d),
53.3 (d), 49.7 (d). 45.8 (d).  53.3 (d), 49.7 (d) .45.8 (d).
45.7 (d). 45.2 (d), 45.1 (d).  45.7 (d) .45.2 (d), 45.1 (d).
43.8 (d). 43.6 (d). 36,7 (t)，  43.8 (d). 43.6 (d). 36,7 (t),
35.9 (t). 34.7 (t). 34.6 (q).  35.9 (t) .34.7 (t) .34.6 (q).
33.3 (t), 27.2 (q), 27.0 (t).  33.3 (t), 27.2 (q), 27.0 (t).
23.3 (t), 22.7 (q). 22.2 (q). 18.0 (q), 8.5 (q). 23.3 (t), 22.7 (q) .22.2 (q). 18.0 (q), 8.5 (q).
k ) 比旋光度：  k) Specific rotation:
【α 3 = - 5 2. 8。 （c = 0. 5, 0. 0 1 N HC 1 ) 1 ) 薄層クロマトグラフィー [Α 3 = -5 2.8. (C = 0.5, 0.01 N HC 1) 1) Thin layer chromatography
シリカゲル 60 F 264 (E. Me r c k) , 70%2—プロパノ 水溶液 Silica gel 60 F 26 4 (E. Merck), 70% 2-propano aqueous solution
R f = 0. 28  R f = 0.28
(2) FR 1 828 77  (2) FR 1 828 77
a ) 外観：無色結晶  a) Appearance: colorless crystal
b) 分子式： C2*H3206 b) Molecular formula: C 2 * H 32 0 6
c) 融点： 1 64 - 1 6 7'C (分解）  c) Melting point: 1 64-16 7'C (decomposition)
d) 分子量：  d) Molecular weight:
4 0 0 CFAB-MS ： m/z 4 0 1 (M + H) 〕  400 CFAB-MS: m / z 410 (M + H)]
HRF AB-MS ： m/z 測定値： 4 0 1. 2328  HRF AB-MS: m / z measured value: 401.2328
理論値 C24H33Oe ： 4 0 1. 2328 Theoretical C 24 H 33 O e: 4 0 1. 2328
e) 紫外可視吸収スペク トル ： （図 5に示す）  e) UV-visible absorption spectrum: (shown in Fig. 5)
λΒ„ (CH3 OH) ： 24 1 nm (ε= 1 4 8 0 ) , λ Β „(CH 3 OH): 24 1 nm (ε = 1480),
28 5 nm (£ = 2 64 0)  28 5 nm (£ = 2 64 0)
f ) 赤外線吸収スペク トル ： （図 6に示す）  f) Infrared absorption spectrum: (shown in Fig. 6)
V \ ： 3450, 2930. 2900, 1700, 1630, 1450. 1380, 1350. 1320,  V \: 3450, 2930. 2900, 1700, 1630, 1450. 1380, 1350. 1320,
1270, 1230. 1140, 1070, 1040, 1000. 950, 870cm"1 g) 溶解性： 1270, 1230. 1140, 1070, 1040, 1000. 950, 870cm " 1 g) Solubility:
可溶 ： メタノール、 エタノール、 酢酸ェチル、 ジクロロメタン、 アセトン  Soluble: methanol, ethanol, ethyl acetate, dichloromethane, acetone
難溶： n—へキサン  Poorly soluble: n-hexane
不溶：水  Insoluble: water
h) 呈色反応 暘性：硫酸セリウム反応 h) Color reaction Youthfulness: Cerium sulfate reaction
ヨウ素蒸気との反応  Reaction with iodine vapor
リンモリブデン酸反応  Phosphomolybdic acid reaction
陰性：ニンヒドリン反応  Negative: ninhydrin reaction
モーリッシュ反応  Maurish reaction
塩化第二鉄反応  Ferric chloride reaction
エールリッヒ反応  Ehrlich reaction
i ) 1 H-NMR スペク トル （400MHz. CD30D ) (図 7に示す） δ ppm ： 5.41 (1H, m), i) 1 H-NMR spectrum (400 MHz. CD 30 D) (shown in Fig. 7) δ ppm: 5.41 (1H, m),
4.42 (1H, m).  4.42 (1H, m).
3.61 (1Η· m).  3.61 (1Ηm).
3.48 - 3.43 (2H. m).  3.48-3.43 (2H.m).
2.77 (1H. m).  2.77 (1H.m).
2.64 (1H. m).  2.64 (1H.m).
2.43 (1H. m).  2.43 (1H.m).
2,28 (1H, m).  2,28 (1H, m).
2.03 (1H, HI),  2.03 (1H, HI),
1.94 (1H, m),  1.94 (1H, m),
1.82 - 1.71 (4H. m),  1.82-1.71 (4H.m),
1.70 (3H, br s),  1.70 (3H, br s),
1.68 - 1.53 (3H. m).  1.68-1.53 (3H.m).
1.40 (3H. s),  1.40 (3H.s),
1.12 (3H. d, J=7Hz).  1.12 (3H.d, J = 7Hz).
1.10 (3H, d. J=7Hz).  1.10 (3H, d. J = 7Hz).
j ) 13 C-NMR スぺク トル （100MHz. CD30D ) (図 8に示す） <5 ppm ： 172.8 (s). 169.1 (s). 140.4 (s). . j) 13 C-NMR spectrum (100MHz CD 3 0D) (shown in FIG. 8) <5 ppm:.. 172.8 (s) 169.1 (s) 140.4 (s).
121.2 (d), 116.0 (s). 88.6 (s). 84.6 (d). 79.4 (d). 78.4 (d), 121.2 (d), 116.0 (s) .88.6 (s). 84.6 (d) .79.4 (d) .78.4 (d),
54.5 (d). 53.2 (d). 52.5 (d),  54.5 (d) .53.2 (d) .52.5 (d),
47.4 (d). 46.9 (d). 46.3 (d),  47.4 (d) .46.9 (d) .46.3 (d),
43.4 (d). 42.5 (d), 36.3 (t)，  43.4 (d). 42.5 (d), 36.3 (t),
33.7 (t). 25.2 (t), 24.1 (q).  33.7 (t) .25.2 (t), 24.1 (q).
22.8 (q). 18.5 (q). 9.3 (q).  22.8 (q) .18.5 (q) .9.3 (q).
k) 比旋光度：  k) Specific rotation:
[a li8 = - 3. 5· (c= 1. 0， CH3 OH) [a li 8 = -3.5 · (c = 1.0, CH 3 OH)
1 ) 薄層クロマトグラフィー  1) Thin layer chromatography
シリカゲル 60 F2 B 4 (E. Me r c k) , Silica gel 60 F 2 B 4 (E. Merck),
ジクロロメタン： メタノール = 1 0 : 1 Dichloromethane: methanol = 1 0: 1
R f = 0. 36  R f = 0.36
FR 1 82876および Zまたは FR 1 82877は、 ストレブトミセス *ェ スピー （ Strei)iomyces sp. ) No. 9885などのようなストレブトミセス厲 に属する FR 1 82876および Zまたは FR 1 82877生産菌を培地で培蹇 し、 得られた培養物から FR 1 82876および Zまたは FR 1 82877を採 取することにより製造される。 ストレブトミセス厲に属する FR 1 82876お よび Zまたは FR 1 82877生産菌の中でも、 No. 9885株は、 徳島県で 採集した土壌サンブルから分離された。 本菌株の形態、 培養性状、 生理的性質を 調べるための培地および方法は、 主にシャーリングとゴッ トリーブ（Shirling. E. B. and D. Gottlieb: Methods for chara-cterization of Streptomyces  FR 182876 and Z or FR 182877 can be used as a medium for producing FR 182876 and Z or FR 182877 producing bacteria belonging to Streptomyces よ う な, such as Strei iomyces sp. It is produced by harvesting FR182876 and Z or FR182877 from the obtained culture. Among the strains producing FR 182876 and Z or FR 182877 belonging to Streptomyces II, strain No. 9885 was isolated from a soil samble collected in Tokushima Prefecture. Media and methods for investigating the morphology, culture characteristics, and physiological properties of this strain are mainly described in Shirring. E. B. and D. Gottlieb: Methods for chara-cterization of Streptomyces.
species. Int. J. Syst. Bacteriol. 16, 313-340, 1966)およびワックスマン （ Waksman, S. A.： The acti匪 ycetes Vol. 2： Classification, identification and description of genera and species: The Williams and Wilkins Co.. 16, Int. J. Syst. Bacteriol. 16, 313-340, 1966) and Waksman, SA: The acti bandits ycetes Vol. 2: Classification, identification and description of genera and species: The Williams and Wilkins Co. .
Baltimore. 1961 ) に従った。 それぞれの培養は 30てで 21日間行った後、 観 察した。 形態観察は、 酵母エキス ·麦芽エキス寒天、 オートミール寒天、 無機塩 でんぶん寒天、 酵母エキス，でんぶん ' グルコース寒天で培養後、 光学および走 査型電子顕微鏡で観察した。 酵母エキス ·でんぶん · グルコース寒天は酵母ェキ ス （大五栄養、 大阪） 2 g、 可溶性でんぷん 1 0 g、 グルコース 5 g、 寒天 1 6 gを水道水 1 リッ トルに溶解し、 1規定の水酸化ナトリウム水溶液で pH 7. 2 に修正した後、 オートクレープ滅菌を行い作製した。 生育温度の判定には、 酵母 エキス ·麦芽エキス寒天を用いた。 炭素源の利用性の判定にはプリ ドハム ·ゴッ ドリーブの塔地（Pridohatn, T. G. and D. Gottlieb: The utilization of carbon compounds by some Acti画 ycetales as an acid for species Baltimore. 1961). Each culture was performed for 30 days at 21 days and then observed. Morphological observations were performed on yeast extract, malt extract agar, oatmeal agar, inorganic salt, agar agar, yeast extract, agar, and glucose and agar. Observed with a scanning electron microscope. Yeast extract, starch, and glucose agar are prepared by dissolving 2 g of yeast extract (Daigo Nutrition, Osaka), 10 g of soluble starch, 5 g of glucose, and 16 g of agar in 1 liter of tap water, and After adjusting the pH to 7.2 with an aqueous solution of sodium hydroxide, autoclave sterilization was performed to prepare. Yeast extract and malt extract agar were used to determine the growth temperature. In order to determine the availability of carbon sources, the towers of Pridham Godriver (Pridohatn, TG and D. Gottlieb: The utilization of carbon compounds by some Acti, ycetales as an acid for species
determination: J. Bacteriol. 56 107-114. 1948)を用いた。 色名は "メシュ ーェン 'ハンドブック ·ォブ 'カラー" （Kornerup, A. and J. H. Wanscher: Methuen Handbook of Colour. Methuen. London. 1978 ) から引用した。 細胞壁 のアミノ酸の分析はベッカーなど（Becker, B.. M. P. Lechevalier. R. E. determination: J. Bacteriol. 56 107-114. 1948) was used. The color names are taken from "Meshwen's Handbook of Color" (Kornerup, A. and J. H. Wanscher: Methuen Handbook of Color. Methuen. London. 1978). The analysis of cell wall amino acids was performed by Becker et al. (Becker, B. M. P. Lechevalier. R. E.
Gordon and H. A. Lechevalier: Rapid differentiation between Nocardia and Streptom ces by paper chromatography of whole-cell hydrolysates: Appl. Microbiol. 12. 421-423. 1964) および山口（Yamaguchi. T.： Comparison of the cell wall composition of morphologically distinct actinoraycetes: J. Bacteriol. 89 . 444-453. 1965)の方法に従った。 Gordon and HA Lechevalier: Rapid differentiation between Nocardia and Streptom ces by paper chromatography of whole-cell hydrolysates: Appl. Microbiol. 12. 421-423. 1964) and Yamaguchi. T .: Comparison of the cell wall composition of morphologically distinct actinoraycetes: J. Bacteriol. 89. 444-453. 1965).
本菌株の凍結乾燥サンブルは、 工業技術院生命工学工業技術研究所、 特許徹生 物寄託センター （郵便番号 30 5、 茨城県つくば市東 1一 1一 3) へ FERM BP- 5 0 07の番号で寄託された （寄託日 ： 1 9 9 5年 2月 1 7日） 。  The freeze-dried sambre of this strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, National Institute of Technology, Patent Depositary Depositary Center (zip code: 305, 1-1-11, Higashi, Tsukuba, Ibaraki Prefecture) with the number FERM BP-507. (Deposit date: February 17, 1995).
本明紬害中で挙げた特定な微生物を使用する方法は、 単に説明の目的で挙げた ものであり、 新規化合物 FR 1 8 2876および FR 1 828 77の製造はこれ に限定されるものではない。 本発明はまた、 自然発生した変異体および、 X棣ま たは紫外線照射、 および N-メチルー N' —二トロー N—二トロソグァ二ジンま たは 2—アミノブリンなどによる処理のような慣用の方法によつて上述の微生物 から製造することのできる人為的な変異体をはじめとする FR 1 8 28 7 6およ びノまたは FR 1 828 77を製造することのできるいかなる変異体をも含む。 ストレブトミセス 'エスピー No. 9 8 85は以下の形態的特徴、 培養性状、 生理的特徴を有する。 The use of the specific microorganisms listed in this report is for illustrative purposes only, and the production of the new compounds FR 18 2876 and FR 1 828 77 is not limited to this. . The present invention also relates to naturally occurring mutants and to conventional methods such as Xdi or UV irradiation, and treatment with N-methyl-N'-nitro2N-nitrosogazine or 2-aminobulin. Includes any of the mutants capable of producing FR188766 and FR1 or FR182877, including artificial variants that can be produced from the microorganisms described above by the method. Streptomyces' SP No. 9 8 85 has the following morphological characteristics, culture characteristics, Has physiological characteristics.
( 1 ) 形態的特黴  (1) Morphological special mold
基生菌糸はよく発達し、 不規則に分枝するが断裂しない。 基生菌糸から伸長し た気菌糸は単純分枝し、 長い胞子鎖を形成する。 気菌糸の形は、 かぎ状、 環伏、 不完全ならせん状でプリ ドハムなどの分類 （Pridoham. T. C. et al. Appl. Microbiol. 6: 54. 1958) の RA夕イブに属する。 1つの胞子連鎖は 1 0個以上 の胞子からなる。 胞子は表面が毛状（hairy) で、 0. 5— 0. 6 x 0. 7— 0. 9 / mの大きさの円筒型であった。 菌核、 胞子囊および遊走子は観察されなかつ o  The underlying hypha develops well and branches irregularly but does not tear. The aerial hyphae elongating from the underlying hyphae are simply branched and form long spore chains. The form of aerial hyphae is hook-shaped, circumscribed, incompletely spiral, and belongs to the RA eve of the classification of Prydham, etc. (Pridoham. TC. Et al. Appl. Microbiol. 6: 54. 1958). One spore chain consists of 10 or more spores. The spores were hairy on the surface and cylindrical, measuring 0.5-0.6 x 0.7-0.9 / m. Sclerotia, spores and zoospores are not observed and o
( 2 ) 培養性状  (2) Culture characteristics
結果を表 1に示す。 酵母エキス ·でんぶん · グルコース寒天上で気菌糸の色は 淡灰色であった。 酵母エキス ·麦芽エキス寒天、 無機塩 ·でんぶん寒天上では気 菌糸の着生は認められなかった。 グリセリン ·ァスパラギン寒天上では生育は認 められない。 生育裏面の色は明茶色、 茶色または明橙色を呈する。 菌体内色素は pH感受性ではない。 トリブトン ·酵母エキス培地およびペプトン，酵母エキス 鉄寒天上では、 メラノイド色素の産生はみられなかった。 酵母エキス ·麦芽ェキ ス寒天、 オートミール寒天上で、 わずかに可溶性色素が産生された。 可溶性色素 は pH感受性ではなかった。 Table 1 shows the results. The color of the aerial mycelium was pale gray on yeast extract, starch, and glucose agar. No aerial mycelium was formed on yeast extract, malt extract agar, inorganic salt, and starch agar. Glycerin · No growth is observed on asparagine agar. The color on the back of the growth is light brown, brown or light orange. Intracellular pigments are not pH sensitive. No melanoid pigment was produced on Tribton / Yeast extract medium and peptone / yeast extract iron agar. Slightly soluble pigment was produced on yeast extract and malt dex agar and oatmeal agar. The soluble dye was not pH sensitive.
表 1 table 1
Να 9885株の培養性状  培養 Culture properties of α 9885 strain
培地 培養性状  Medium culture characteristics
酵母エキス ·麦芽エキス寒天 普通  Yeast extract · Malt extract agar Normal
( I SP- 2) なし  (I SP-2) None
明茶色 （ 6 D 8 )  Light brown (6D8)
少置、 赤味橙色 （ B 7) ォートミール寒天  Small, reddish orange (B7) oatmeal agar
( I SP- 3) 極めて贫弱、 白色 （ 1 A 1 ) 孝色 （7E8)  (ISP-3) Extremely weak, white (1A1)
少量、 茶味橙色 （ 7 C 7 ) 無機塩 ·でんぶん寒天 贫弱  Small amount, brownish orange (7 C 7) Inorganic salt
( I SP-4) AAAARAARRRRR GS G G GS G G GSSSS なし  (I SP-4) AAAARAARRRRR GS G G GS G G GSSSS None
明橙色 （ 6 A 5 )  Light orange (6 A 5)
極少量、 赤味白色 （8 A2) グリセリン ·ァスバラギン寒天 生育しない  Very small amount, reddish white (8 A2) glycerin / asbaragin agar Does not grow
(I SP-5)  (ISP-5)
茶無普贫極貧無ななななな  I'm so poor
ペプトン ·酵母エキス ·鉄寒天 通弱弱色め色色ししししし  Peptone · yeast extract · iron agar
( I SP- 6) Ίて  (I SP-6)
淡贫 7  Tan 7
灰弱 B  Low ash B
色 6  Color 6
チロシン寒天  Tyrosine agar
(I SP— 7) 酵母エキス ·でんぶん ·  (ISP-7) Yeast extract
グルコース寒天
Figure imgf000011_0001
略号； G：生育 A：気菌糸 R：生育裏面の色 S：可溶性色素 Glucose agar
Figure imgf000011_0001
Abbreviations; G: Growth A: Aerial mycelium R: Color of growth back surface S: Soluble pigment
(3)細胞壁タイプ (3) Cell wall type
全菌体分解物の分析の結果、 LLージアミノビメリン酸の存在が確認できた。 従って本菌株の細胞壁タイプは I型と考えられる。  As a result of analysis of all the cell decomposed products, the presence of LL diaminobimelic acid was confirmed. Therefore, the cell wall type of this strain is considered to be type I.
( 4 ) 生理的性質  (4) Physiological properties
表 2に示すようにグリセロール、 イノシトール、 D-マンニトール、 シユーク ロースの利用性が陰性であつた。 でんぶんの加水分解活性は偽陽性であつた。 表 2 As shown in Table 2, the availability of glycerol, inositol, D-mannitol, and sucrose was negative. The hydrolysis activity of starch was false positive. Table 2
Not 9 8 8 5株の生理的特徴 条件 特徴  Physiological characteristics of Not 9 8 8 5 strain Condition Characteristics
生育温度範囲 （で） 1 3. 5 - 3 6. 5 Growth temperature range (in) 13.5-36.5
メラノィド色素の産生 Production of melanoid pigment
可溶性色素の產生 Production of soluble pigment
でんぶん加水分解活性 Hydrolysis activity
炭素源の利用性 Utilization of carbon source
D—グルコース  D—glucose
シユークロース  Sucrose
D—キシロース  D—Xylose
D—フルク トース  D—Fructose
L一ラムノース  L-Ramnose
ラフイノース  Lahu North
Lーァラビノース  L-arabinose
イノシトール  Inositol
D—マンニトール  D—mannitol
グリセロール  Glycerol
+： ffi性 偽陽性 一：陰性  +: Ffi property False positive 1: Negative
(5) 同定 (5) Identification
形態観察および化学分析の結果から、 No. 9 8 8 5株はストレブトミセス厲 に厲すると考えられる (Buchanan. R. E. and N. E. Gibbons: Bergey' s Manual of Determinative Bacteriology. 8th edition: The Williams and Wilkins Co., Baltimore. 1974; Williams, S. T: Bergey' s Manual of Systematic  From the results of morphological observation and chemical analysis, strain No. 9885 was considered to be Streptomyces 厲 (Buchanan. RE and NE Gibbons: Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 8th edition: The Williams and Wilkins Co.) ., Baltimore. 1974; Williams, S. T: Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology. Vol. 4. Williams and Wilkins, Baltimore. 1989)。 そこで本菌 株をストレブトミセス ·エスピー No. 98 85株と命名した。  Bacteriology. Vol. 4. Williams and Wilkins, Baltimore. 1989). Therefore, this strain was named Streptomyces sp. No. 9885 strain.
一般的に、 FR 1 82876および Zまたは FR 1 82877は、 F R 1 8 2 8 7 6および Zまたは FR 1 82877生産菌を同化し得る炭素源および窒素源 を含有する培地で、 好ましくは好気性条件下 （例えば振！:培養、 タンク培養など） にて培養することにより製造することができる。  In general, FR182876 and Z or FR182877 is a medium containing a carbon source and a nitrogen source that can assimilate FR182876 and Z or FR182877-producing bacteria, preferably in aerobic conditions. It can be manufactured by culturing under (eg, shaking !: culture, tank culture, etc.).
培地中の好適な炭素源としては、 グルコース、 フルクトース、 グリセリンおよ びでんぶんなどの炭水化物が挙げられる。 他の炭素源としてはラクトース、 ァラ ビノース、 キシロース、 デキストリン、 糖蜜などが举げられる。 Suitable carbon sources in the medium include carbohydrates such as glucose, fructose, glycerin and starch. Other carbon sources include lactose and ara. Binose, xylose, dextrin, molasses, etc. are available.
好適な窒素源としては、 酵母エキス、 ペプトン、 グルテンミール、 綿実粉、 大 豆粉、 コーンスティーブリカー、 乾燥酵母など、 並びにアンモニゥ厶塩 （例えば、 硓酸アンモニゥム、 硫酸アンモニゥ厶、 リン酸アンモニゥムなど） 、 尿素、 アミ ノ酸などのような無機および有機窒素化合物などが挙げられる。  Suitable nitrogen sources include yeast extract, peptone, gluten meal, cottonseed flour, soy flour, corn steep liquor, dried yeast, and the like, and ammonium salts (eg, ammonium sulfate, ammonium sulfate, ammonium phosphate, etc.). And inorganic and organic nitrogen compounds such as urea, amino acids and the like.
炭素源および窒素源は組み合わせて使用することが有利である。 純度の低い原 料でも微量の生育因子および相当量の無機栄養素を含有するものなら、 使用に好 適であるので、 純品を用いる必要はない。 必要に応じて、 炭酸カルシウム、 リン 酸ナトリウム、 リン酸カリウム、 ヨウ化ナトリウム、 ヨウ化カリウム、 マグネシ ゥム塩、 塩化コバルトなどの無機塩を培地に添加してもよい。 必要に応じて、 特 に培養液が著しく発泡する場合は、 流動パラフィン、 高极アルコール、 植物油、 鉱油またはシリコーンのような消泡剤を添加してもよい。  Advantageously, the carbon and nitrogen sources are used in combination. It is not necessary to use a pure source of a low-purity raw material, as long as it contains a trace amount of growth factors and a considerable amount of inorganic nutrients, because it is suitable for use. If necessary, an inorganic salt such as calcium carbonate, sodium phosphate, potassium phosphate, sodium iodide, potassium iodide, magnesium salt, or cobalt chloride may be added to the medium. If necessary, an antifoaming agent such as liquid paraffin, high alcohol, vegetable oil, mineral oil or silicone may be added, especially if the culture broth is significantly foaming.
大量製造の条件として、 F R 1 8 2 8 7 6および F R 1 8 2 8 7 7の製造には 好気性タンク ¾養が好ましい。 少量の製造には、 フラスコまたはボトル内で振通 培養または表面培養を行う。 更に、 大型タンクで培養を行う場合は、 F R 1 8 2 8 7 6および F R 1 8 2 8 7 7の製造工程における増殖遅延を防止するために、 製造タンク内へ生産菌の種培養物を接種することが好ましい。 従って、 まず 初 に比較的少量の培地に生産菌の胞子または菌糸を接種し、 接種した培地を培養す ることにより種培養物を得、 これを無菌的に大型タンクに移す。 種培養物を製造 する培地としては、 F R 1 8 2 8 7 6および F R 1 8 2 8 7 7の生産培養で利用 する培地と実質的に同じかあるいは若干異なる培地を使用することができる。 培餮混合物の浸拌および通気は、 種々の方法で行うことができる。 擾拌はプロ ペラまたは同様の機械的擾拌装置により、 醱酵槽を回転または振通することによ つて、 種々の揚水装置によって、 あるいは培養液中に無菌空気を通すことによつ て行うことができる。 通気は無菌空気を醱酵混合物中に通すことによって行うこ とができる。  As a condition for mass production, aerobic tank fermentation is preferred for the production of FR 1828876 and FR182287. For small-volume production, shake or culture in flasks or bottles. In addition, when cultivating in a large tank, inoculate a seed culture of the production bacterium into the production tank in order to prevent a delay in the growth of the production process of FR1828876 and FR188287. Is preferred. Therefore, first, a relatively small amount of medium is inoculated with spores or hypha of the producing bacterium, and the inoculated medium is cultured to obtain a seed culture, which is aseptically transferred to a large tank. As a medium for producing the seed culture, a medium that is substantially the same as or slightly different from the medium used in the production of FR182876 and FR182877 can be used. Agitation and aeration of the culture tie mixture can be accomplished in a variety of ways. Agitation is performed by a propeller or similar mechanical agitation device, by rotating or shaking the fermenter, by various pumping devices, or by passing sterile air through the culture. be able to. Aeration can be performed by passing sterile air through the fermentation mixture.
発酵は通常約 4で〜約 4 0 'C、 好ましくは約 2 0で〜約 3 0でで、 5 0時間か ら 1 0 0時間かけて行う。 ただし、 これは醱酵条件および規模により変更するこ とができる。 The fermentation is usually at about 4 to about 40'C, preferably at about 20 to about 30 for 50 hours. It takes 100 hours. However, this can be changed depending on the fermentation conditions and scale.
このように産生された FR 1 8 2 8 7 6および Zまたは FR 1 8 2 8 7 7は、 抗生物質のような他の醱酵生成物を分離 ·精製するために通常用いられる惯用の 方法により培地から採取される。  The FR 188876 and Z or FR 188877 produced in this manner can be purified by methods commonly used to separate and purify other enzyme products such as antibiotics. Collected from the medium.
—般的に、 産生された FR 1 8 2 8 7 6および FR 1 8 2 8 7 7の大部分は培 養滤液中に見出される。 従って、 FR 1 8 2 8 7 6および FR 1 8 2 8 7 7は培 養液を滤過または遠心分離することによって得られる濂液から、 滅圧下での濃縮、 凍結乾燥、 慣用の溶媒を用いた抽出、 pH調整、 憤用の樹脂 （例えば、 陰イオン または暘イオン交換樹脂、 非イオン性吸着榭脂） による処理、 憤用の吸着剤 （活 性炭、 ゲイ酸、 シリカゲル、 セルロース、 アルミナ） による処理、 結晶化、 再結 晶などのような慣用の方法により単離される。  —Generally, most of the produced FR 18 28 76 and FR 18 28 77 are found in the culture broth. Therefore, FR 1 828 776 and FR 1 828 777 use concentrated solvents under reduced pressure, freeze-drying and conventional solvents from the culture solution obtained by filtration or centrifugation. Extraction, pH adjustment, treatment with resent resins (eg, anion or cation exchange resins, nonionic adsorbed resins), resorptive adsorbents (activated carbon, gay acid, silica gel, cellulose, alumina) , Crystallization, recrystallization and the like.
図面の簡単な説明  BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
図 1は、 メタノール溶液 （濃度： 1 0 0 g/m 1 ) 中で測定した FR 1 8 2 8 7 6の紫外可視吸収スベタトルを示すチャートである。  FIG. 1 is a chart showing the UV-visible absorption spectrum of FR1828876 measured in a methanol solution (concentration: 100 g / m1).
図 2は、 臭化カリウム法で測定した FR 1 8 2 8 7 6の赤外線吸収スぺクトル を示すチャートである。  FIG. 2 is a chart showing the infrared absorption spectrum of FR1828876 measured by the potassium bromide method.
図 3は、 FR 1 8 2 8 7 6の — NMR (核磁気共鳴） スぺクトルを示すチ ヤートである。  FIG. 3 is a chart showing the —NMR (nuclear magnetic resonance) spectrum of FR 1 828 776.
図 4は、 FR 1 8 2 8 7 6の13 C— NMRスぺクトルを示すチャートである。 図 5は、 メタノール溶液 (濃度 ： 1 0 0 z gZm l ) 中で測定した FR 1 8 2FIG. 4 is a chart showing a 13 C-NMR spectrum of FR1828876. Fig. 5 shows FR 1 82 measured in a methanol solution (concentration: 100 z gZml).
8 7 7の紫外可視吸収スぺクトルを示すチヤ一トである。 8 is a chart showing an ultraviolet-visible absorption spectrum of 8777.
図 6は、 臭化カリウム法で測定した FR 1 8 2 8 7 7の赤外線吸収スぺクトル を示すチャートである。  FIG. 6 is a chart showing the infrared absorption spectrum of FR182877 measured by the potassium bromide method.
図 7は、 FR 1 8 2 8 7 7の 'Η— NMRスぺクトルを示すチヤ一トである。 図 8は、 FR 1 8 2 8 7 7の13 C— NMRスぺクトルを示すチヤ一トである。 図 9は、 試験例 3で測定した FR 1 8 2 8 7 6の微小管重合促進活性を示すグ ラフである。 FIG. 7 is a chart showing the 'Η-NMR spectrum of FR 1828877. FIG. 8 is a chart showing a 13 C-NMR spectrum of FR 1828877. FIG. 9 is a graph showing the microtubule polymerization promoting activity of FR1828876 measured in Test Example 3. It is rough.
図 1 0は、 試験例 3で測定した FR 1 8 28 77の微小管重合促進活性を示す グラフである。  FIG. 10 is a graph showing the microtubule polymerization-promoting activity of FR 182877 measured in Test Example 3.
試験例 ·実施例  Test example
以下の試験により、 FR 1 828 76および FR 1 828 77の生物学的特徴 を詳細に説明する。  The following test details the biological characteristics of FR 1 828 76 and FR 1 828 77.
試験例 1 (FR 1 828 76および FR 1 828 77による生体外でのヒト腫瘓 細胞増通の阻害） Test Example 1 (Inhibition of human tumor cell expansion in vitro by FR 1 828 76 and FR 1 828 77)
細胞毒性を調べるため、 FR 1 828 7 6の 2倍順次希釈液 （水溶液） を 1 0 %仔牛血淸、 ベニシリン （5 0 u n i t s Zm l ) およびストレブトマイシン To determine cytotoxicity, two-fold serial dilutions of FR 182876 (aqueous solution) were added to 10% calf blood, benicillin (50 uints Zml) and streptomycin.
(50 u g/m 1 ) をそれぞれ添加したダルベッコ（Dulbecco)変法最少必須培地Dulbecco's Modified Minimum Essential Medium supplemented with (50 μg / m 1)
(A 54 9、 MCF— 7および HT29) または RPM 1 - 1 64 0 (J u r k a t) \ 0 0 ii ]を含む 9 6ウェルマイクロ滴定ブレート中で調製した。 FR 1 82877の場合は、 FR 1 82877の 2倍頓次希釈液 （メタノール溶液） を 上記した培地 1 00〃 1を含む 9 6ゥヱルマイクロ滴定ブレート中で調製した。 調製した 2倍順次希釈液に完全培地 1 00 1中に懸濁した A 54 9、 MCF— 7、 HT2 9および Ju r k a t細胞 （5 X 1 03 ) をそれぞれ添加し、 37て にて、 4日間インキュベーションした後、 Mosmann の方法（J. I國 unol. Methods. 65. 55 - 63, 1983)に従い、 比色 MTT (テトラゾリゥム） 法により分析した。 (A549, MCF-7 and HT29) or RPM1-1640 (Jurkat) \ 00ii] in 96-well microtiter plates. In the case of FR 182877, a two-fold dilution liquid (methanol solution) of FR 182877 was prepared in a 96-microliter titration plate containing the above-mentioned medium 100〃1. A 54 9 were suspended in complete medium 1 00 1 double sequential dilution prepared, MCF 7, HT2 9 and Ju Rkat cells (5 X 1 0 3) were added, respectively, at 37 hands, 4 After incubation for one day, the cells were analyzed by the colorimetric MTT (tetrazolium) method according to the method of Mosmann (J. I. unol. Methods. 65.55-63, 1983).
MTT 〔3— （4, 5—ジメチルチアゾールー 2—ィル） 一 2, 5—ジフエニル テトラゾリゥムブロミ ド、 シグマ社製] をリン酸緩衝液 （PBS) に 5mg/mMTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -1,2,5-diphenyltetrazolium bromide, manufactured by Sigma] was added to phosphate buffer (PBS) at 5 mg / m2.
1溶解し、 滅菌および少量の不溶性残渣を除去するために據過した。 ヒト瞜瘪紬 胞の培養終了後、 この MTT溶液 （培地 1 0 0 1あたり 1 0 1 ) を全分析用 ゥエルに添加し、 さらに 37でにて 4時間インキュベーションした。 酸性イソブ 口ビルアルコール （0. 04 N塩酸含有ィソブロピルアルコール 1 00 1 ) を 全ゥ ルに添加し、 喑青色結晶を溶解するために充分に混合した。 全結晶が溶解 した後、 2波長マイクロブレートフオトメーター （Model MTP-120 ； コロナ電気 社製） を用いて、 6 60 nmを対照波長として 5 5 0 n mにおける吸光度を測定 した。 結果を表 3および表 4に示す。 表 3 1 Dissolved, sterilized and relied on to remove small amounts of insoluble residue. After the culture of the human cells, this MTT solution (101 per 1001 of medium) was added to all the analytical wells, and further incubated at 37 for 4 hours. Acidic isobutyl bil alcohol (isopropyl alcohol 1001 containing 0.04 N hydrochloric acid) was added to all the bottles and mixed well to dissolve the blue crystals. After all crystals are dissolved, a two-wavelength microplate photometer (Model MTP-120; Corona Electric) The absorbance at 550 nm was measured using 660 nm as a control wavelength. The results are shown in Tables 3 and 4. Table 3
FR 1 8 28 7 6による生体外でのヒト瞜瘪钿胞增 ¾の阻害  Inhibition of human cells in vitro by FR1828776
、ヒ Lト腫 RS^攝 rtr細胞 -株M* /一 — ノ 1 ヽ  , Birth L tomato RS ^ feeding rtr cells -strain M * / one — ノ 1 ヽ
Iし so ( n g/m 1リ  I shi so (n g / m 1
A 54 9 (肺痛） 57  A 54 9 (Lung pain) 57
MCF- 7 (乳癌) 28  MCF-7 (breast cancer) 28
HT2 9 (大腸癌） 4 4  HT2 9 (colorectal cancer) 4 4
J υ r k a t (T钿胞リンパ腫） 4 8 表 4  J υ r k att (T cell lymphoma) 4 8 Table 4
FR 1 82877による生体外でのヒト腫癡钿胞増殖の阻害  Inhibition of human tumor cell proliferation in vitro by FR 1 82877
ヒト腫癍細胞株 I CB。 (n g/m 1 ) Human tumor cell line IC B. (ng / m 1)
A 54 9 (肺癌） 73  A 54 9 (Lung cancer) 73
MCF- 7 (乳癌） 27  MCF-7 (breast cancer) 27
HT2 9 (大腸癌 5 73  HT2 9 (Colorectal cancer 5 73
J u r k a t (T钿胞リンパ腫） 3 3  J ur k at (T cell lymphoma) 3 3
試験例 2 (マウス白血病钿胞 P 38 8に対する FR 1 82876および FR 1 8 2877の抗腫瘙活性） Test Example 2 (Anti-tumor activity of FR 18876 and FR 18877 against mouse leukemia cell P388)
FR 1 82 8 7 6および FR 1 8 28 77の抗腫瘍活性は、 マウス腫痛モデル で測定した。 BDF, 系マウス （雌、 6週齡） に白血病細胞 P 38 8 ( 1 x 1 06 を 0日目に腹腔内に移植した。 腫瘍钿胞接種後 24時間して FR 1 8 28 76ま たは FR 1 8 2877をマウスに腹腔内投与した。 FR 1 828 7 6または FR 1 82877の投与は、 1、 4および 7日目に 1日 1回腹腔内投与した。 FR 1 8 28 7 6は、 等張塩化ナトリウム水溶液に溶解した。 FR 1 828 77は、 2 0 %ボリエチレングリコール # 4 0 0 (wZv、 ナカライテスク社製） に懸菊し た。 対照のマウスには、 FR 1 828 7 6の実験では等張塩化ナトリウム水溶液 を、 FR 1 8 28 77の実験では 2 0 %ボリエチレングリコール # 4 0 0をそれ それ腹腔内投与した。 The antitumor activity of FR18876 and FR182877 was measured in a mouse tumor model. BDF, leukemic cells P 38 8 (transplanted. For 24 hours after tumor钿胞inoculation was FR 1 8 28 76 or in the 1 x 1 0 6 intraperitoneally on day 0 into the system mice (female, 6 weeks old) Administered intraperitoneally FR1 2877 to mice Mice were administered intraperitoneally once a day on days 1, 4 and 7 with FR1828776 or FR182828. Was dissolved in an isotonic sodium chloride aqueous solution, and FR 1 828 77 was suspended in 20% polyethylene glycol # 400 (wZv, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.). In the experiment of 6, the isotonic sodium chloride aqueous solution was used, and in the experiment of FR 1 828 77, 20% polyethylene glycol # 400 was used. It was administered intraperitoneally.
結果を表 5および表 6に示す。 抗腫瘍活性は丁 じ％値 （処置群の生存時間中 央値 Z対照群の生存時間中央値 X 1 0 0) によって評価した。  The results are shown in Tables 5 and 6. The antitumor activity was evaluated by the exact percentage value (median survival time of the treatment group Z median survival time of the control group X100).
表 5  Table 5
マウス白血病紬胞 P 3 8 8に対する FR 1 8 2 8 7 6の沆瞜瘪活性  1 activity of FR 1 8 2 8 7 6 against mouse leukemia cell P 3 8 8
1 / し  1 /
(m g/k gZ曰）  (Says mg / kg gZ)
対照 1 0 0  Control 1 0 0
25 1 3 0  25 1 3 0
1 2. 5 1 30 表 6  1 2.5 5 30 Table 6
マウス白血病紬胞 P 3 8 8に対する FR 1 8 28 77の抗腫瘪活性  Antitumor activity of FR182877 against murine leukemia cell P3888
投与量 T/C  Dose T / C
(mg/k gZ日） (%)  (mg / kg gZ days) (%)
対照 1 00  Control 1 00
6. 3 1 30  6. 3 1 30
3. 2 1 3 0  3.2 2 1 3 0
1. 6 1 20 試験例 3 (微小管重合促進活性）  1.6 1 20 Test Example 3 (Microtubule polymerization accelerating activity)
チューブリン （グリセロール不含） は、 Cytoskeletone Corp. 社より購入した。 チューブリンと FR 1 82876または FR 1 82877との反応は G— PEM 緩衝液 （pH6. 8) 中で行った。 G— PEM緩衝液は、 8 0mMビぺラジン一 N, N* 一ビス （2 -エタンスルホン酸） セキソジゥ厶塩、 I mM塩化マグネシ ゥム、 I mMエチレングリコール ビス （ 2—アミノエチルエーテル） N， N, Ν' , N， 一四酔酸および I mMグアノシン 5' —三リン酸を含有していた。 最終濃度が 1 mg/m 1 となるように、 チューブリンを G— PEM緩衝液で希釈 し、 3 5eCにて FR 1 82876または FR 1 8 28 77で処理した。 34 0 η mにおける吸光度の変化を、 分光光度計にて測定した。 チューブリンが重合する と、 吸光度の上昇が見られた。 FR 1 8 2 8 7 6の結果を図 9に示す。 FR 1 8 2 8 7 6の濃度は、 2 5〃 gZ m l (—▲-) 、 5 0 g/m 1 (ー鲁一） または無添加 （一口一） であった。 Tubulin (without glycerol) was purchased from Cytoskeletone Corp. The reaction of tubulin with FR182876 or FR182877 was performed in G-PEM buffer (pH 6.8). G-PEM buffer is 80 mM biazine-N, N * mono-bis (2-ethanesulfonic acid) sexodim salt, ImM magnesium chloride, ImM ethylene glycol bis (2-aminoethyl ether) N , N, Ν ', N, tetrahydrous acid and ImM guanosine 5'-triphosphate. To a final concentration of 1 mg / m 1, it was diluted tubulin in G-PEM buffer and treated with FR 1 82876 or FR 1 8 28 77 at 3 5 e C. The change in absorbance at 34 0 ηm was measured with a spectrophotometer. As tubulin polymerized, an increase in absorbance was observed. FIG. 9 shows the results of FR 1 828 776. The concentration of FR1828876 was 25〃gZml (-▲-), 50 g / m1 (-鲁 1) or no additive (1 bite).
FR 1 8 2 8 7 7の結果を図 1 0に示す。 F R 1 8 2 8 7 6の濃度は、 2 5〃 g/m 1 (-■-) 、 5 0 g/m 1 (一▲一） または 1 0 0〃 gZm 1 (—秦一） であつた。  FIG. 10 shows the results of FR 1 828 777. The concentration of FR1828876 was 25 2g / m1 (-■-), 50g / m1 (one-one) or 100〃gZm1 (—Hataichi) .
図 9および図 1 0に示すように、 FR 1 8 2 8 7 6および FR 1 8 2 8 7 7は、 チューブリンの重合を促進した。  As shown in FIG. 9 and FIG. 10, FR 1 828 776 and FR 1 828 777 promoted the polymerization of tubulin.
試験例 4 (急性毒性） Test example 4 (acute toxicity)
FR 1 8 2 8 7 6または FR 1 8 2 8 7 7 (投与量： 2 5mgZk g) を 5匹 の BDF, 系マウス （雌、 6通齡） に腹腔內に投与した。 1通間観察したが、 死 亡したマウスはいなかった。  FR 18 287 6 or FR 18 287 7 (dose: 25 mg Zkg) was intraperitoneally administered to 5 BDF, strain mice (female, 6 years old). One mouse was observed, but no mice died.
本発明の FR 1 8 2 8 7 6および または FR 1 8 2 8 77は、 医薬上許容で きる担体との混合物として、 抗臛瘍剤、 特に固形腫瘍に対する抗腫瘙剤のような 微小管重合促進剤として、 ヒトを含む哺乳動物に対し、 カブセル剤、 錠剤、 顆拉 剤、 散剤、 バッカル剤、 舌下剤および液剤のような医薬組成物の形態で経口また は非経口的に投与することができる。  The FR 18 287 6 and / or FR 18 287 8 of the present invention can be used as a mixture with a pharmaceutically acceptable carrier, as an antitumor agent, especially a microtubule polymerization such as an antitumor agent against a solid tumor. As an enhancer, it can be administered orally or parenterally to mammals including humans in the form of pharmaceutical compositions such as capsules, tablets, contraceptives, powders, buccals, sublinguals and solutions. it can.
医薬上許容される担体としては、 医薬用途に惯用に使用される種々の有機また は無機担体材料、 例えば陚形剤 （例えば、 スクロース、 でんぶん、 マンニッ ト、 ソルビッ ト、 ラク トース、 グルコース、 セルロース、 タルク、 リン酸カルシウム、 炭酸カルシウムなど） 、 結合剤 （例えば、 セルロース、 メチルセルロース、 ヒ ド 口キシブ口ピルセルロース、 ボリプロピルピロリ ドン、 ゼラチン、 アラビアゴム、 ボリエチレングリコール、 スクロース、 でんぷんなど） 、 崩壊剤 （例えば、 でん ぶん、 カルボキシメチルセルロース、 カルボキンメチルセルロースのカルシウム 塩、 ヒドロキシブ口ピル一でんぶん、 グリコール—でんぷんのナトリウム塩、 炭 酸水素ナトリウム、 リン酸カルシウム、 クェン酸カルシウムなど） 、 滑沢剤 （例 えば、 ステアリン酸マグネシウム、 エア口ジル、 タルク、 ラウリル硫酸ナトリウ ムなど） 、 镇味剤 （例えば、 クェン酸、 メントール、 グリシン、 オレンジ末など） 、 保存剤 （例えば、 安息香酸ナトリウム、 亜硫酸水素ナトリウム、 メチルパラベン、 プロピルバラベンなど） 、 安定化剤 （例えば、 クェン酸、 クェン酸ナトリウム、 齚酸など）、 懸溷化剤 （例えば、 メチルセルロース、 ボリビニルピロリ ドン、 ス テアリン酸アルミニウムなど） 、 分散剤 （例えば、 界面活性剤など） 、 水性希釈 剤 （例えば、 水） 、 油類 （例えば、 ゴマ油など） 、 および基剤ワックス （例えば、 カカオ脂、 ボリエチレングリコール、 白色ワセリンなど） が例示される。 Pharmaceutically acceptable carriers include various organic or inorganic carrier materials commonly used in pharmaceutical applications, such as excipients (eg, sucrose, starch, mannite, sorbitol, lactose, glucose, cellulose) , Talc, calcium phosphate, calcium carbonate, etc.), binders (eg, cellulose, methylcellulose, hydratable xycellulose pill cellulose, polypropylpyrrolidone, gelatin, gum arabic, polyethylene glycol, sucrose, starch, etc.), disintegrants ( For example, starch, carboxymethylcellulose, calcium salt of carboquine methylcellulose, hydroxybutyral pill, starch, sodium salt of glycol-starch, sodium hydrogencarbonate, calcium phosphate, calcium citrate, etc. ), Lubricants (for example, magnesium stearate, air-gill, talc, sodium lauryl sulfate, etc.), flavoring agents (for example, citrate, menthol, glycine, orange powder, etc.), Preservatives (eg, sodium benzoate, sodium bisulfite, methylparaben, propylparaben, etc.), stabilizers (eg, citric acid, sodium citrate, acetic acid, etc.), suspending agents (eg, methylcellulose, polyvinylpyrroli Don, aluminum stearate, etc.), dispersants (eg, surfactants), aqueous diluents (eg, water), oils (eg, sesame oil, etc.), and base waxes (eg, cocoa butter, polyethylene) Glycol, white petrolatum, etc.).
FR 1 828 76または FR 1 8 2877の投与量は、 疾患の種類、 患者の体 重および/または年齢、 投与経路の種類などの種々の要因により変更することが できる。  The dosage of FR 182876 or FR 182877 can be varied depending on various factors such as the type of disease, the weight and / or age of the patient, the type of administration route, and the like.
FR 1 8 28 76または FR 1 828 77の好ましい投与量は、 通常 1 日に 0. 1〜25mgZk gの範囲から選択される。  Preferred dosages of FR 1 828 76 or FR 1 828 77 are usually selected from the range of 0.1 to 25 mgZkg per day.
以下に、 本発明を説明するために実施例を举げる。  Hereinafter, examples will be given to explain the present invention.
実施例 1 Example 1
( 1 ) ストレブトミセス 'エスピー No. 9 88 5の培養  (1) Culture of Streptomyces' SP No. 9885
グルコース （ 1 、 脱脂大豆粉 （0. 5 %) 、 ブイヨン （0. 5%) および 酵母エキス （ 0. 5 %) を含有する水性培地 （ 1 6 0 m 1 ) を、 5 0 0 m 1容ェ ルレンマイヤーフラスコに注ぎ、 1 20でにて 3 0分間滅菌した。 培地にストレ ブトミセス 'エスピー No. 9 88 5の斜面培養物を、 一白金耳接種し、 回転振 蓬器 （220 r pm、 振幅 5. 1 cm) で 3 O'Cにて 5日間振蓬した。 グルコ一 ス （ 1 %) 、 可溶性でんぶん （ 29(0 、 乾燥酵母 （ 1 %) 、 小麦胚芽 （ 1 %)、 きな粉 （ 1 および炭酸カルシウム （0. 2%) を含有する滅菌培地 （pH7. An aqueous medium (160 ml) containing glucose (1, defatted soy flour (0.5%), bouillon (0.5%), and yeast extract (0.5%) was added to a volume of 500 ml. The mixture was poured into an Erlenmeyer flask and sterilized for 30 minutes at 120. A platinum loop was inoculated with a slant culture of Streptomyces' SP No. 9885 into the medium, and a rotary shaker (220 rpm) was used. , Amplitude 5.1 cm) at 3 O'C for 5 days Glucose (1%), soluble starch (29 (0, dry yeast (1%), wheat germ (1%), Kinase (1) and a sterile medium containing calcium carbonate (0.2%) (pH 7.
0) を、 5 0 0 m l容エルレンマイヤーフラスコ 9本にそれぞれ 1 6 0 m 1ずつ 加え、 先に得た培養物 3. 2 m 1を接種した。 フラスコを回転振蓬器 （220 r pm、 振幅 5. 1 cm) で 3 O'Cにて 3日間振蓬した。 グルコース （ 1. 4 %) 、 変性でんぶん （4, 2%) 、 チキンミートボーンミール （ 5%) 、 肉エキス0) was added to nine 500 ml Erlenmeyer flasks at a rate of 160 ml each, and 3.2 ml of the culture obtained above was inoculated. The flask was shaken at 3 O'C for 3 days with a rotary shaker (220 rpm, amplitude 5.1 cm). Glucose (1.4%), denatured starch (4, 2%), chicken meat bone meal (5%), meat extract
( 0. 5 %) 、 アデ力ノール LG— 1 0 9 ( 0. 0 5 %、 消泡剤、 旭鼋化工業株 式会社製） およびシリコーン KM - 70 ( 0. 05 %、 消泡剤、 信越化学工業株 式会社製） を含有する滅菌された産生培地 （pH 6. 8, 6 0リッ トル） を、 3 0リッ トル容ジャーフアーメンター 3基中にそれぞれ 20リッ トルずつ注入し、 得られた種培養物 （ 3 6 0 m l ) を接種した。 培養は、 20リツ トル 分で通気 し、 20 0 r pmで携拌しながら、 30 'Cにて 6日間行った。 (0.5%), Adekinol LG-109 (0.05%, antifoaming agent, manufactured by Asahi Chemical Industry Co., Ltd.) and silicone KM-70 (0.05%, antifoaming agent, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. (Manufactured by Shikisha Co., Ltd.), 20 liters of a sterilized production medium (pH 6.8, 60 liters) was injected into each of three 30 liter jar armamentors. (360 ml). The culture was carried out at 30'C for 6 days with aeration at 20 liters and stirring at 200 rpm.
(2) FR 1 8 28 7 6の単離および精製  (2) Isolation and purification of FR 1 828 776
このようにした得た培養物 （ 6 0リツ トル） を、 当量のァセトンで抽出し、 け い藻土で滤過した。 據液を減圧濃縮することにより、 水溶液 （5 0リツ トル） を 得た。 溶液の pHを塩酸で 4. 0に調整し、 当量の醉酸ェチルで 2回抽出した。 水層を高分子吸着剤ジァニオン HP— 20 (三菱化成社製） カラム （ 1 0 リツ トル） に付した。 カラムを水 （ 30リッ トル） および 1 0 %メタノール水溶液 （ 3 0 リツ トル） で洗浄後、 3 0%メタノール水溶液 （30リッ トル） および 5 0 %メタノール水溶液 （30リツ トル） で溶出した。 溶出画分を合わせ、 30リツ トルになるまで減圧濃縮した。 濃縮液を陰イオン交換 （ダウエックス 1、 塩化 物イオン型、 ダウケミカル社製、 2リットル） カラムに付した。 カラムをパスし た活性画分を、 逆相カラム （YMCゲル、 0DS-AM 120-S-50 , YMC社製， 2リ ッ トル） に付した。 カラムを水 （ 6リツ トル） および 1 0 %ァセトニ卜リル水溶 液 （6リツ トル） で洗浄後、 カラムを 1 5 %ァセトニトリル水溶液で展開した。 得られた活性面分を減圧濃箱し、 得られた濃縮物をメタノール （20m l ) に溶 解した。 活性溶液をあらかじめィソプロピルアルコールで平衡化しておいたシリ 力ゲルカラム （シリカゲル 60、 メルク社製、 200 m l ) に付した。 カラムを ィソプロピルアルコール （ 6 00 m 1 ) 、 9 0 %ィソブロピルアルコール水溶液 The resulting culture (60 liters) was extracted with an equivalent amount of acetone and passed through diatomaceous earth. The resulting solution was concentrated under reduced pressure to obtain an aqueous solution (50 liter). The pH of the solution was adjusted to 4.0 with hydrochloric acid, and extracted twice with an equivalent amount of ethyl sulphate. The aqueous layer was applied to a column (10 liters) of a polymer adsorbent, Dianion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation). The column was washed with water (30 liter) and a 10% aqueous methanol solution (30 liter), and then eluted with a 30% aqueous methanol solution (30 liter) and a 50% aqueous methanol solution (30 liter). The eluted fractions were combined and concentrated under reduced pressure to 30 liters. The concentrate was applied to an anion exchange (Dowex 1, chloride ion type, Dow Chemical Co., 2 liter) column. The active fraction that passed through the column was applied to a reversed-phase column (YMC gel, 0DS-AM120-S-50, manufactured by YMC, 2 liter). After washing the column with water (6 liters) and a 10% aqueous solution of acetonitrile (6 liters), the column was developed with a 15% aqueous solution of acetonitrile. The obtained active surface was concentrated under reduced pressure, and the obtained concentrate was dissolved in methanol (20 ml). The active solution was applied to a silica gel column (silica gel 60, manufactured by Merck, 200 ml) which had been equilibrated with isopropyl alcohol in advance. Column is isopropyl alcohol (600 ml), 90% isopropropyl alcohol aqueous solution
( 6 0 0 m l ) および 8 0 %ィソブロピルアルコール水溶液 （ 6 0 Om 1 ) で洗 浄後、 活性画分を 70%イソプロピルアルコール水溶液で溶出した。 溶出液を 1After washing with (600 ml) and an 80% aqueous solution of isopropyl alcohol (60 Om 1), the active fraction was eluted with a 70% aqueous solution of isopropyl alcohol. Eluate 1
Om 1になるまで減圧濃縮し、 n—ブタノール：酢酸：水 （4 ： 1 ： 2、 体積比） の混合溶媒に溶解し、 あらかじめ n—ブ夕ノール：酢酸：水 （4 ： 1 ： 2、 体積 比） の混合溶媒で平衡化しておいたシリカゲルカラム （シリカゲル 60、 メルク 社製、 2 0 0 m l ) に付し、 カラムを同じ混合溶媒で展開した。 活性画分を合わ せ、 1 0m lになるまで滅圧濃縮した。 濃槠液を分取用 HP LCカラム （YMC ゲル、 ODS-AM 120-S-50 , YMC社製， 80 m 1 ) に付し、 カラムを 0. 1 %齚 酸含有 25 %ァセトニトリル水溶液で展開した。 このようにして得た活性物質を 蓄積し、 凍結乾燥することにより、 無色結晶 （27 Omg) として FR 1 8 28 76を得た。 Concentrate under reduced pressure to Om1, dissolve in a mixed solvent of n-butanol: acetic acid: water (4: 1: 2, volume ratio), and preliminarily dissolve n-butanol: acetic acid: water (4: 1: 2, The mixture was applied to a silica gel column (silica gel 60, manufactured by Merck, 200 ml) equilibrated with a mixed solvent (volume ratio), and the column was developed with the same mixed solvent. Combine the active fractions And concentrated under reduced pressure to 10 ml. The concentrated solution was applied to a preparative HP LC column (YMC gel, ODS-AM 120-S-50, manufactured by YMC, 80 m 1), and the column was developed with a 0.1% aqueous solution of 25% acetonitrile containing acid. did. The active substance thus obtained was accumulated and freeze-dried to obtain FR182876 as colorless crystals (27 Omg).
実施例 2 Example 2
( 1 ) ストレブトミセス 'エスピー No. 9 8 85の培養  (1) Culture of Streptomyces' SP No. 98885
コーンスターチ （ 1 、 グルコース （ 1 、 ピーナッツパウダー （0. 5 Corn starch (1, glucose (1, peanut powder (0.5
%) 、 きな粉 （0. 5%) 、 乾燥酵母 （0. 596) および炭酸カルシウム （0. 2%) を含有する水性培地 （ 1 6 0m I ) を、 5 0 0 m l容エルレンマイヤーフ ラスコに注ぎ、 1 20でにて 30分間滅菌した。 培地にストレブトミセス ·エス ピー No. 9 88 5の斜面培養物を一白金耳接種し、 回転振蓬器 （220 r pm、 振幅 5. 1 cm) で 30でにて 5日間振 ¾した。 グルコース （ 1 、 可溶性で んぶん （2%) 、 乾燥酵母 （ 1 、 小麦胚芽 （ 1 、 きな粉 （ 1 および 炭酸カルシウム （0. 2%) を含有する滅菌培地 （pH 7. 0) を 50 0 m l容 エルレンマイヤーフラスコ 9本にそれぞれ 1 6 0m lずつ加え、 先に得た培 ¾物 3. 2m 1を接種した。 フラスコを回転振蓬器 （220 r pm、 振幅 5. 1 cm) で 30eCにて 3日間振蓬した。 グルコース （4 %) 、 乾燥酵母 （ 1 、 炭酸力 ルシゥ厶 （0. 296) 、 アデ力ノール LG- 1 0 9 ( 0. 05 %、 消泡剤、 旭 ¾ 化工業株式会社製） およびシリコーン KM— 70 ( 0. 0 5 %、 消泡剤、 信越化 学工業株式会社製） を含有する滅菌した産生培地 （ 6 0リットル） を、 3 0リッ トル容ジャーフアーメンター 3基中にそれぞれ 20 リッ トルずつ注入し、 得られ た種培養物 （ 3 6 0 m l ) を接種した。 培地の pHを、 炭酸カルシウムの添加の 前に 6. 8に調整した。 培養は、 20リッ トルノ分で通気し、 20 0 r pmで攙 拌しながら、 3 0eCにて 4日間行った。 %), Kinako (0.5%), Dried yeast (0.596) and calcium carbonate (0.2%) in an aqueous medium (160 ml) containing 500 ml Erlenmeyer flask And sterilized at 120 for 30 minutes. One platinum loop of the slant culture of Streptomyces sp. No. 9885 was inoculated into the medium, and shaken at 30 with a rotary shaker (220 rpm, amplitude 5.1 cm) for 5 days. 500 ml of sterile medium (pH 7.0) containing glucose (1, soluble soluble (2%), dried yeast (1, wheat germ (1, kinako) (1 and calcium carbonate (0.2%)) Each of the nine Erlenmeyer flasks was added in an amount of 160 ml each, and 3.2 ml of the previously obtained culture was inoculated.The flask was rotated with a rotary shaker (220 rpm, amplitude 5.1 cm) for 30 minutes. Shake for 3 days at e C. Glucose (4%), dried yeast (1, carbonated calcium (0.296), Adekinol LG-109 (0.05%, defoamer, Asahi) 30 liters of sterilized production medium (60 liters) containing KAGAKU KOGYO CO., LTD. And silicone KM-70 (0.05%, defoamer, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.) The seed culture (360 ml) was inoculated by injecting 20 liters into each of three jar armamenters. Was adjusted to 6.8 prior to the addition of um. Cultures were aerated with 20 liter Toruno min, while攙stirred at 20 0 r pm, it was carried out for 4 days at 3 0 e C.
(2) FR 1 828 77の単離および精製  (2) Isolation and purification of FR 1 828 77
このようにした得た培養物 （6 0リッ トル） を、 pH 7で当量のアセトンで抽  The resulting culture (60 liters) was extracted with an equal volume of acetone at pH 7.
1 θ 出し、 けい藻土で濂過した。 濂液を減圧濃縮することにより、 水溶液 （5 0 リツ トル） を得、 当量の齚酸ェチルで 2回抽出した。 抽出物を滅圧膿縮し、 得られた 油状物贊 ( 30 g) をあらかじめ n—へキサンで平衡化しておいたシリカゲル力 ラム （シリカゲル 6 0、 メルク社製、 1 リッ トル） に付した。 カラムを n—へキ サン （3リッ トル） および n—へキサンと酢酸ェチルの混合物 （ 1 : 1体積比、 3リッ トル） で洗浄後、 活性物質を酢酸ェチル （3リツ トル） および 酸ェチル とァセトンの混合物 （ 1 : 1体積比、 3リッ トル） で溶出した。 溶出画分を減圧 濃縮し、 ジクロロメタンおよびメタノールの混合物 （25 : 1体積比、 20m l ) で溶解し、 あらかじめ同じ溶媒で平衡化しておいたシリカゲルカラム （シリカゲ ル 6 0、 メルク社製、 20 0 m l ) に付し、 カラムを同じ溶媒で展開した。 同溶 媒でカラムを洗浄 （4 0 0 m 1 ) 後、 活性物質を同じ溶媒で溶出し、 活性画分を 合わせ減圧濃縮し、 油伏物質 （2. 1 g) を得た。 油状物質をメタノール （ 1 0 m l ) に溶解した。 この溶液を逆相カラム （YMCゲル、 ODS-AM 120-S-50 , Y MC社製， 35 0m l ) に付し、 カラムを 70 %ァセトニトリル水溶液で展開し た。 活性画分を合わせ滅圧 し、 ゲル據過 (GS-310P. 旭化成社製、 1 8 0m l ) カラムに付し、 カラムを 90¾メタノール水溶液で展開した。 活性画分を蓄積し 減 E濃縮し、 分取用 HPLCカラム （YMCゲル、 ODS-AM 120-S-50 . YMC社 製， 8 0m l ) に付し、 カラムを 70%ァセトニトリル水溶液で展開した。 この ようにして得た活性画分を集め、 滅圧濃縮することにより溶媒留去し、 当量の酢 酸ェチルで 2回抽出した。 抽出物を滅圧濃縮することにより、 無色結晶 （5 7m g) として FR 1 828 77を得た。 1 θ Out and filtered through diatomaceous earth. An aqueous solution (50 liters) was obtained by concentrating the solution under reduced pressure, and the solution was extracted twice with an equivalent amount of ethyl acetate. The extract was decompressed and purulent, and the obtained oily substance (30 g) was applied to a silica gel column (silica gel 60, Merck, 1 liter) previously equilibrated with n-hexane. . After washing the column with n-hexane (3 liters) and a mixture of n-hexane and ethyl acetate (1: 1 by volume, 3 liters), the active substance is washed with ethyl acetate (3 liters) and ethyl acetate. And acetone (1: 1 volume ratio, 3 liter). The eluted fraction is concentrated under reduced pressure, dissolved with a mixture of dichloromethane and methanol (25: 1 by volume, 20 ml), and silica gel column (silica gel 60, manufactured by Merck, 200%) previously equilibrated with the same solvent. ml) and the column was developed with the same solvent. After washing the column with the same solvent (400 ml), the active substance was eluted with the same solvent, and the active fractions were combined and concentrated under reduced pressure to obtain an oily substance (2.1 g). The oil was dissolved in methanol (10 ml). This solution was applied to a reversed-phase column (YMC gel, ODS-AM120-S-50, manufactured by YMC, 350 ml), and the column was developed with a 70% aqueous solution of acetonitrile. The active fractions were combined and decompressed, applied to a gel-based (GS-310P, Asahi Kasei Corporation, 180 ml) column, and developed with a 90¾ aqueous methanol solution. The active fraction was accumulated, reduced and concentrated. The concentrate was applied to a preparative HPLC column (YMC gel, ODS-AM 120-S-50, manufactured by YMC, 80 ml), and the column was developed with 70% aqueous acetonitrile solution. . The active fractions thus obtained were collected, concentrated under reduced pressure to distill off the solvent, and extracted twice with an equivalent amount of ethyl acetate. The extract was decompressed and concentrated to obtain FR 1 828 77 as colorless crystals (57 mg).
産業上の利用可能性  Industrial applicability
本発明の新規化合物 FR 1 8 28 76および FR 1 8 2877は、 微小管重合 促進活性を有し、 抗腫瘪剤として、 特に固形腫瘪に対する抗腫瘪剤として有用で ある。  INDUSTRIAL APPLICABILITY The novel compounds FR 182876 and FR 182877 of the present invention have microtubule polymerization promoting activity and are useful as antitumor agents, particularly as antitumor agents against solid tumors.

Claims

請求の範囲  The scope of the claims
1. ( 1 ) または （2) の特性を有する新規化合物 FR 1 828 76または FR
Figure imgf000023_0001
1. Novel compound FR 1 828 76 or FR with the properties of (1) or (2)
Figure imgf000023_0001
( 1 ) FR 1 8 28 76  (1) FR 1 8 28 76
a ) 外観：無色結晶  a) Appearance: colorless crystal
b)分子式： C3eH5。N4 09 b) Molecular formula: C 3e H 5. N 4 0 9
c) 融点： 1 79 - 1 8 3で （分解）  c) Melting point: 179-183 (decomposed)
d ) 分子量：  d) Molecular weight:
6 82 CFAB-MS ： m/z 6 8 3 (M + H) 〕  6 82 CFAB-MS: m / z 6 8 3 (M + H)]
HRF AB-MS ： m/z 測定値： 6 8 3. 3 6 9 2  HRF AB-MS: m / z measured value: 6 8 3. 3 6 9 2
理論値 C3eH51N4 Os ： 6 8 3. 3 6 5 6 Theoretical value C 3e H 51 N 4 O s : 6 8 3.3 6 5 6
e) 紫外可視吸収スペク トル ： （図 1に示す）  e) UV-visible absorption spectrum: (shown in Fig. 1)
λ.,χ (CH3 OH) ： 224 nm (s h) λ., χ (CH 3 OH): 224 nm (sh)
f ) 赤外線吸収スペク トル ： （図 2に示す）  f) Infrared absorption spectrum: (shown in Fig. 2)
V Ϊ5; ： 3400. 3300, 2950, 1720. 1660, 1610. 1550. 1440, 1385.  V Ϊ5;: 3400. 3300, 2950, 1720. 1660, 1610. 1550. 1440, 1385.
1230. 1210. 1120. 1030. 940 cm-1 1230.1210.1120.1030.940 cm -1
g) 溶解性：  g) Solubility:
可溶：水、 メタノール  Soluble: water, methanol
難溶： アセトン  Poorly soluble: acetone
不溶： n—へキサン、 齚酸ェチル、 ジクロロメタン  Insoluble: n-hexane, ethyl acetate, dichloromethane
h) 呈色反応  h) Color reaction
陽性：硫酸セリウム反応  Positive: Cerium sulfate reaction
ヨウ素蒸気との反応  Reaction with iodine vapor
モーリ ッシュ z¾ [じ、  Maurish z¾ [ji,
エールリッヒ反応  Ehrlich reaction
陰性：ニンヒ ドリ ン反応  Negative: ninhydrin reaction
塩化第二鉄反応 i ) 1 H-NMRスペク トル （400MHz, 約 0.01N DC1-D20 ) (図 3に示す） δ ppm ： 9.26 (IH. br s), Ferric chloride reaction i) 1 H-NMR spectrum (400 MHz, about 0.01 N DC1-D 20 ) (shown in Fig. 3) δ ppm: 9.26 (IH.brs),
7.73 (IH, br s).  7.73 (IH, br s).
5.47 (IH, br s).  5.47 (IH, br s).
4.87 (IH, m),  4.87 (IH, m),
4.67 (IH. dd, J=10Hz, 5Hz).  4.67 (IH.dd, J = 10Hz, 5Hz).
3,98 (3H, s),  3,98 (3H, s),
3.80 - 3.75 (2H. m).  3.80-3.75 (2H.m).
3.51 - 3.34 (5H. m).  3.51-3.34 (5H.m).
3.15 (IH, dd, J=16Hz. 10Hz).  3.15 (IH, dd, J = 16Hz.10Hz).
2.73 (IH, m).  2.73 (IH, m).
2.62 - 2.39 (3H, m).  2.62-2.39 (3H, m).
2.30 - 1.93 (5H. m).  2.30-1.93 (5H.m).
2.02 (3H, s).  2.02 (3H, s).
1.81 - 1.60 (5H. m).  1.81-1.60 (5H.m).
1.63 (3H. br s),  1.63 (3H.br s),
1.48 (3H, s),  1.48 (3H, s),
1.39 (IH, m).  1.39 (IH, m).
1.17 (3H, d. J=7Hz).  1.17 (3H, d. J = 7Hz).
0.80 (3H, d， J=7Hz).  0.80 (3H, d, J = 7Hz).
j ) 13 C-NMRスペク トル （lOOMHz, 約 O.OIN DC1-D20 ) (図 4に示す） δ ppm ： 176.4 (s). 175.8 (s)， 174.8 (s). j) 13 C-NMR spectrum (lOOMHz, about O.OIN DC1-D 2 0) (shown in FIG. 4) δ ppm:. 176.4 ( s) 175.8 (s), 174.8 (s).
174.2 (s), 140.6 (s), 136.1 (s).  174.2 (s), 140.6 (s), 136.1 (s).
120.5 (d), 117.1 (d)， 90.6 (s),  120.5 (d), 117.1 (d), 90.6 (s),
83.6 (d), 80.2 (d). 79.2 (s).  83.6 (d), 80.2 (d) .79.2 (s).
77.6 (d), 54.6 (d). 53.4 (d),  77.6 (d), 54.6 (d) .53.4 (d),
53.3 (d), 49.7 (d). 45.8 (d). 53.3 (d), 49.7 (d) .45.8 (d).
45.7 (d), 45.2 (d). 45.1 (d), 45.7 (d), 45.2 (d) .45.1 (d),
43.8 (d). 43.6 (d). 36.7 (t),  43.8 (d) .43.6 (d) .36.7 (t),
35.9 (t). 34.7 (t), 34.6 (q).  35.9 (t) .34.7 (t), 34.6 (q).
33.3 (t), 27.2 (q), 27.0 (t),  33.3 (t), 27.2 (q), 27.0 (t),
23.3 (t). 22.7 (q). 22.2 (q).  23.3 (t) .22.7 (q) .22.2 (q).
18.0 (q), 8.5 (q).  18.0 (q), 8.5 (q).
k ) 比旋光度：  k) Specific rotation:
la n: =- 52. 8* (c = 0. 5, 0. 0 1 N HC 1 )la n : =-52.8 * (c = 0.5, 0. 0 1 N HC 1)
(2) FR 1 8 2877 (2) FR 1 8 2877
a ) 外観：無色結晶  a) Appearance: colorless crystal
b) 分子式： C24H3206 b) Molecular formula: C 24 H 32 0 6
c ) 融点： 1 64 - 1 67て （分解）  c) Melting point: 1 64-1 67 (decomposition)
d) 分子量：  d) Molecular weight:
4 0 0 CFAB-MS ： m/z 4 0 1 (M + H) 〕  400 CFAB-MS: m / z 410 (M + H)]
HRFAB-MS ： m/z 測定値： 4 0 1. 2328  HRFAB-MS: m / z measured value: 401.2328
理論值 C24H33Ot ： 4 0 1. 2328 Theory 值 C 24 H 33 O t : 40 1.2328
e ) 紫外可視吸収スぺクトル： （図 5に示す）  e) UV-visible absorption spectrum: (shown in Fig. 5)
λ«.χ (CH3 OH) ： 24 1 nm (ε= 1 4 8 0 ) , λ «. χ (CH 3 OH): 24 1 nm (ε = 1 480),
28 5 nm (ε = 2 64 0)  28 5 nm (ε = 2 64 0)
f ) 赤外線吸収スペク トル： （図 6に示す）  f) Infrared absorption spectrum: (shown in Fig. 6)
V ： 3450, 2930, 2900. 1700. 1630, 1450. 1380, 1350, 1320,  V: 3450, 2930, 2900. 1700. 1630, 1450. 1380, 1350, 1320,
1270. 1230, 1140. 1070. 1040, 1000. 950. 870cm"1 g) 溶解性： 1270. 1230, 1140. 1070. 1040, 1000. 950. 870cm " 1 g) Solubility:
可溶： メタノール、 エタノール、 酢酸ェチル、 ジクロロメタン、 アセトン  Soluble: methanol, ethanol, ethyl acetate, dichloromethane, acetone
難溶： n—へキサン  Poorly soluble: n-hexane
不溶：水 h) 呈色反応 Insoluble: water h) Color reaction
陽性：硫酸セリウム反応  Positive: Cerium sulfate reaction
ヨウ素蒸気との反応  Reaction with iodine vapor
リンモリブデン酸反応  Phosphomolybdic acid reaction
陰性：ニンヒドリン反応  Negative: ninhydrin reaction
モーリ ッシュ反応  Mauritian reaction
塩化第二鉄反応  Ferric chloride reaction
エールリッヒ反応  Ehrlich reaction
i ) 1 H-NMR スペク トル （400MHz, CD30D ) (図 7に示す） δ ppm ： 5.41 (1H, m). i) 1 H-NMR spectrum (400MHz, CD 3 0D) (shown in FIG. 7) δ ppm: 5.41 (1H , m).
4.42 (1H. m).  4.42 (1H.m).
3.61 (1H, m),  3.61 (1H, m),
3.48 - 3.43 (2H. m).  3.48-3.43 (2H.m).
2.77 (1H. 0).  2.77 (1H. 0).
2.64 (1H. m).  2.64 (1H.m).
2.43 (1H. m).  2.43 (1H.m).
2.28 (1H. m),  2.28 (1H.m),
2.03 (1H, m).  2.03 (1H, m).
1.94 (1H. m).  1.94 (1H.m).
1.82 - 1.71 (4H. m).  1.82-1.71 (4H.m).
1.70 (3H. br s),  1.70 (3H.br s),
1.68 - 1.53 (3H, m).  1.68-1.53 (3H, m).
1.40 (3H, s),  1.40 (3H, s),
1.12 (3H. d. J=7Hz).  1.12 (3H.d.J = 7Hz).
1.10 (3H. d, J=7Hz).  1.10 (3H.d, J = 7Hz).
j ) 13 C-NMR スぺク トル （lOOMHz. CD30D ) (図 8に示す） δ ppm ： 172.8 (s), 169.1 (s). 140.4 (s). . j) 13 C-NMR spectrum (lOOMHz CD 3 0D) (shown in FIG. 8) δ ppm:. 172.8 ( s), 169.1 (s) 140.4 (s).
121.2 (d), 116.0 (s). 88.6 (s). 121.2 (d), 116.0 (s) .88.6 (s).
84.6 (d), 79.4 (d), 78.4 (d).  84.6 (d), 79.4 (d), 78.4 (d).
54.5 (d). 53.2 (d). 52.5 (d),  54.5 (d) .53.2 (d) .52.5 (d),
47.4 (d), 46.9 (d), 46.3 (d),  47.4 (d), 46.9 (d), 46.3 (d),
43.4 (d). 42.5 (d). 36.3 (t),  43.4 (d) .42.5 (d) .36.3 (t),
33.7 (t), 25.2 (t). 24.1 (q).  33.7 (t), 25.2 (t) .24.1 (q).
22.8 (q), 18.5 (q)， 9.3 (q).  22.8 (q), 18.5 (q), 9.3 (q).
k) 比旋光度：  k) Specific rotation:
l a 3 = - 3. 5" (c= 1. 0, CH, OH) la 3 = -3.5 "(c = 1.0, CH, OH)
2. FR 1 8 2 8 76である請求の範囲第 1項記載の化合物。  2. The compound according to claim 1, wherein the compound is FR1828876.
3. FR 1 8 28 77である請求の範囲第 1項記載の化合物。  3. The compound according to claim 1, which is FR182877.
4. ストレブトミセス展に厲する FR 1 82876および または FR 1 8 28 77生産菌を培地で培養し、 得られた培養物から FR 1 828 7 6および Zまた は FR 1 8 2 877を採取することを特 ¾とする請求の範囲第 1項記載の化合物 FR 1 82 8 7 6および Zまたは FR 1 828 77の製造方法。  4. Cultivate the FR 182876 and / or FR 182877-producing bacterium in the medium for the Streptomyces exhibition, and collect FR1828776 and Z or FR1882877 from the obtained culture. A method for producing the compound FR1882876 and Z or FR182877 according to claim 1, characterized in that:
5. 有効成分として、 請求の範囲第 1項記載の化合物 FR 1 8 28 76および または FR 1 8 2877並びに医薬上許容されうる担体とを含有する医薬組成物 c 5. As an active ingredient, a pharmaceutical composition c containing the compound FR 1 828 76 and / or FR 18 2877 according to claim 1 and a pharmaceutically acceptable carrier.
6. 微小管重合促進剤としての請求の範囲第 1項記載の化合物 FR 1 828 76 または FR 1 8 28 77の使用。 6. Use of the compound FR 1 828 76 or FR 1 828 77 according to claim 1 as a microtubule polymerization promoter.
7. 抗腫疡剤としての請求の範囲第 1項記載の化合物 FR 1 8287 6または F R 1 828 77の使用。  7. Use of the compound FR182876 or FR18282877 according to claim 1 as an antitumor agent.
8. 固形腫 ¾に対する抗腫瘼剤としての請求の範囲第 1項記載の化合物 FR 1 8 28 76または FR 1 8 2877の使用。  8. Use of the compound FR 182876 or FR 18 2877 according to claim 1 as an antitumor agent against solid tumors.
9. ストレブトミセス 'エスピー No. 9 8 8 5の生物学的に純粋な培養物。  9. A biologically pure culture of Streptomyces' SP No. 9 8 8 5.
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