WO1994018572A1 - Procedimiento para la deteccion de los sistemas abo y rh en hematies y anti-a y anti-b en suero o plasma - Google Patents

Procedimiento para la deteccion de los sistemas abo y rh en hematies y anti-a y anti-b en suero o plasma Download PDF

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WO1994018572A1
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blood cells
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plasma
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Francisco Llopis Lopez
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Centro De Transfusiones De La Comunidad Valenciana
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/80—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood groups or blood types or red blood cells

Definitions

  • the present invention aims at a method for the detection of ABO and RH systems on red blood cells based on the preexistence of a plaque
  • COPIADECONFIRMATION microtiter whose wells have fixed a monolayer of red blood cells positive for the antigen to be studied. Fixation is carried out by using low ionic strength buffers containing citrate. The procedure involves the incorporation of a specific antiserum that reacts with the red cell monolayer attached to the bottom of the well and the subsequent incorporation of the red blood cells to be typified which will then be centrifuged on the red cell monolayer. If the red blood cells to be typed are positive they will be fixed by means of the antibody to the red blood cell monolayer, while if they are negative they will not. The weak positives cited above can be easily identified by this procedure.
  • the microtiter plate In the detection of anti-A and anti-B antibodies in plasma or serum, the microtiter plate is prepared by previously forming a double layer of red blood cells of the type corresponding to the antibody to be studied. On this the plasma to be analyzed is dispensed. It is then centrifuged and the result is displayed.
  • Figure 1 shows a well that has a reagent.
  • Figure 2 shows a well to which washing is being applied.
  • Figure 3 shows a well that is incubating antiserum.
  • Figure 4 shows a well to which the red blood cells to be typed have been attached.
  • Figure 5 shows a positive reaction in the well.
  • Figure 6 shows a negative reaction in the well.
  • Figure 1 shows a well that has a reagent and a monolayer of positive red blood cells, in which the well is indicated with 1, with 2 fixing reagent, and with 3 fixing red blood cells at the bottom of said well.
  • Figure 2 shows a well to which washing identified by 4 is being applied to remove the fixing reagent.
  • Figure 3 shows a well that is being incubated with antiserum indicated by 5.
  • Figure 4 shows a well to which the red blood cells to be added have been annexed, indicated by 6.
  • Figure 5 shows a positive reaction in the well indicated by 7.
  • Figure 6 shows a negative reaction in the well indicated by 8. The example of use is that described.
  • the exemplary embodiment is that described.
  • This embodiment has advantages in terms of the simplification involved when designing an automatic device since the necessary dispensing of red blood cells by the device to detect anti A and anti B antibodies is suppressed and therefore the device has to be less complex and the time for performing the technique is shortened
  • the use of gelatin allows a convenient transport of the microplates in the case of their commercialization, or use outside the laboratory.

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Abstract

Procedimiento para la detección de los sistemas ABO y RH en hematíes, para lo cual se utiliza una placa microtiter en la que previamente se han formado y sensibilizado con antisuero monocapas de hematíes positivos. Para los sistemas anti-A y anti-B, se forma previamente una doble capa de hematíes, se dispensa plasma y se centrifuga. De aplicación en análisis clínicos y hematológicos.

Description

Procedimiento para la detección de los sistemas ABO y RH en hematíes y anti-A y anti-B en suero o plasma.
El sector de la técnica de esta patente es el de la hematología clínica. Indicación del Estado de la Técnica anterior.
Anteriormente, la detección de sistemas ABO y RH en placa microtiter, consistía en: a) incubación de hematíes a analizar y antisuero en los pocilios de la microplaca; b) centrifugación de la microplaca para llevar los hematíes a fondo,- c) resuspensión de los hematíes; d) posterior sedimentación para diferenciar los positivos cuando se aglutinan en el fondo y negativos cuando no lo hacen. Esta tecnología permite una clara diferenciación entre positivos y negativos, pero era poco eficaz para identificar antígenos débiles por ejemplo subgrupos débiles de A, antígeno D débil. En el primer caso (antígeno A3 por ejemplo) era necesario la comprobación en placa,- en el caso de D débil, era necesario llevar los hematíes a la fase de Coombs, lo que implica; 1) lavado de hematíes,- 2) incubación de 30 minutos con antisuero específico; 3) lectura; 4) lavado del antisuero; 5) incubación con antiglobulina y 6) lectura.
Resulta evidente que dicho procedimiento tradicional ocupa un tiempo que puede evitarse según el procedimiento de la presente invención que se describe en las líneas siguientes.
La presente invención tiene por objeto un procedimiento para la detección de los sistemas ABO y RH sobre hematíes que se basa en la preexistencia de una placa
COPIADECONFIRMACIÓN microtiter cuyos pocilios poseen fijados una monocapa de hematíes positivos para el antígeno a estudiar. La fijación se lleva a cabo mediante el uso de tampones de baja fuerza iónica que contienen citrato. El procedimiento comporta la incorporación de un antisuero específico que reacciona con la monocapa de hematíes fijados al fondo del pocilio y la posterior incorporación de los hematíes a tipificar que luego serán centrifugados sobre la monocapa de hematíes. Si los hematíes a tipificar son positivos se fijarán por medio del anticuerpo a la monocapa de hematíes, mientras que si son negativos no lo harán. Los positivos débiles citados anteriormente pueden ser fácilmente identificados por éste procedimiento. En la detección de los anticuerpos anti-A y anti-B en plasma o suero, la placa microtiter se prepara mediante la previa formación de una doble capa de hematíes del tipo correspondiente al anticuerpo a estudiar. Sobre esta se dispensa el plasma a analizar. Posteriormente se centrifuga y se visualiza el resultado.
Con objeto de hacer mas clara la explicación que va a seguir, se acompaña una hoja de dibujos que en seis figuras representa la esencia de la presente invención.
La figura 1 muestra un pocilio que posee un reactivo.
La figura 2 muestra un pocilio al que se está aplicando lavado.
La figura 3 muestra un pocilio que se halla incubando antisuero.
La figura 4 muestra un pocilio al que se ha anexionado los hematíes a tipificar. La figura 5 muestra una reacción positiva en el pocilio.
La figura 6 muestra una reacción negativa en el pocilio. La figura 1 muestra un pocilio que posee un reactivo y una monocapa de hematíes positivos, en la que se indica con 1 el pocilio, con 2 el reactivo de fijación, y con 3 la fijación de hematíes en el fondo del dicho pocilio.
La figura 2 muestra un pocilio al que se está aplicando lavado identificado por 4 para eliminar el reactivo de fijación.
La figura 3 muestra un pocilio que se halla incubando con antisuero señalado por 5.
La figura 4 muestra un pocilio al que se ha anexionado los hematíes a tipificar, indicados por 6.
La figura 5 muestra una reacción positiva en el pocilio indicada por 7.
La figura 6 muestra una reacción negativa en el pocilio indicada por 8. El ejemplo de utilización es el descrito.
La detección de anticuerpos anti A y anti B se realiza según el siguiente procedimiento:
Formación de monocapas de hematíes sobre el pocilio de una placa microtiter en las condiciones expresadas anteriormente, 1.
Lavado de la placa para eliminar los hematíes sobrantes 2.
Formación de una segunda capa sobre la anterior fijada suavemente con gelatina, dextrano, etcétera, 3. Depósito del plasma problema a tipar 4.
Centrifugación e interpretación de los resultados como anteriormente se ha expresado 5.
El ejemplo de realización es el descrito. Esta realización presenta ventajas en cuanto a la simplificación que supone a la hora de diseñar un aparato automático ya que se suprime la necesaria dispensación de hematíes por el aparato para detectar anticuerpos anti A y anti B y por tanto el aparato ha de ser menos complejo y se acorta el tiempo de realización de la técnica. Además el uso de gelatina permite un cómodo transporte de las microplacas en el caso de su comercialización, o utilización fuera de laboratorio.

Claims

R E I V I N D I C A C I O N E S 1.- Procedimiento para la detección de los sistemas ABO y RH en hematíes y anti-A y anti-B en suero o plasma, caracterizado por que para la detección de los sistemas sistemas antigénicos ABO y RH, se dispone en una placa microtiter preexistente que en la base de cada uno de sus pocilios se halla fijada una monocapa de hematíes positivos para un antígeno y sensibilizados con el correspondiente antisuero; en dichos pocilios se incorporan los hematíes a analizar, los cuales determinan tras un centrifugado la unión o no unión entre los hematíes fijados y los aportados .
2.- Procedimiento, para la detección de anticuerpos Anti-A y anti-B en placas microtiter, caracterizado por que la placa microtiter se prepara mediante la previa formación de una doble capa de hematíes sobre los que se dispensa el plasma a analizar, determinándose la presencia o ausencia de anticuerpos mediante una centrifugación y visualización posterior de la unión o no unión de las dos capas de hematíes.
PCT/ES1994/000014 1993-02-12 1994-02-11 Procedimiento para la deteccion de los sistemas abo y rh en hematies y anti-a y anti-b en suero o plasma WO1994018572A1 (es)

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