WO1994012504A1 - Method of purifying 7-aminocephalosporanic acid - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a method for purifying 7-aminophosphoronic acid (hereinafter abbreviated as 7ACA). More specifically, an aqueous solution of 7 ACA containing ⁇ -amino diapic acid as an impurity is treated with a styrene-based strong basic anion-exchange resin to obtain ⁇ -aminoadipic acid.
- the present invention relates to a method for purifying 7 ACA, which involves removing aminoadipic acid.
- the enzymatic cleavage of cephalosporin C includes D-amino acid oxidase and glutaryl 7 ACA (hereinafter abbreviated as GL-7AC).
- GL-7AC glutaryl 7 ACA
- a two-stage cleavage method using sylase is known, a single-stage cleavage method using cephalosporin C acylase has not been extensively studied. Although it has been done, it has not been industrialized yet.
- One of the reasons for this is that it is not possible to efficiently remove ct-aminopydinoic acid, which is a by-product of the cleavage reaction solution, and produces high yields. This means that 7 ACA crystals with a purity cannot be obtained.
- GL-7 ACA is produced from cephalosporin C by a synthetic method or an enzymatic method, and then the side chain (glutaryl acid) is produced by an acylase. ) Can be easily removed from glutaric acid only by isoelectric focusing after concentration according to a known method. Of 7 ACA is obtained. Or however, when isoelectric focusing was performed after concentration from the solution after direct cleavage reaction with cephalosporin C acylase, ct-aminodipic acid Eliminating it was associated with significant difficulties, and as a result, it was not possible to obtain high purity 7 ACA in high yield.
- the present inventors have conducted intensive studies in order to establish a method for purifying 7ACA having a high purity at a high yield from an aqueous solution of 7ACA containing ⁇ -aminoaminodipic acid. It is very efficient if a 7 ACA aqueous solution containing ⁇ -aminoadipic acid as an impurity is treated with a styrene-based strong anion-ion exchange resin. We have surprisingly found that ⁇ -aminodipic acid can be fractionated and removed, and as a result of further research, we have completed the present invention.
- the 7-ACA aqueous solution containing ⁇ -aminodipic acid used in the present invention cleaves cephalosporin C at the 7-position of ct monoaminodivinic acid. It is obtained by doing so.
- a solution of Cephalosporin C in an aqueous solution of Cephalosporin C for example, pseudomonas' diminimeter N 17 Cephalosporin C acylases of Escherichia coli 6 and Espy SE83 (Microorganism Depositary No. 7649), respectively (European Patent Application Publication No. 47, respectively) Reaction liquid obtained by enzymatic digestion to generate 7 ACA using 5 6 5 2 publication and USP 4 7 7 4 1 7 9 And so on.
- styrene-based strongly basic anion exchange resin used in the present invention include, for example, Diaion SA11A, PA306.
- PA406 and PA408 (trademark, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), Announcement IRA401 (trademark, room-and-node) Styrene-based strongly basic anion with low degree of cross-linking such as Lenox MP500 and MP500OA (trademark, manufactured by Bayer).
- Exchange resins are listed. Also, it is preferable to use these resins in C1 type, CH3C00 type or P04 type.
- ACA aqueous solution with a styrene-based strong basic anion-exchange resin that is, adsorption and desorption of 7 ACA by a column method or a notch method according to a conventional method.
- the type of eluate used for ACA elution is not particularly limited.
- a resin solution is prepared by converting it into a water solution containing the same salt as the resin type. Can be used repeatedly without.
- Preferable examples of such an eluate include, for example, when the resin is a C1 type, a CH3COO type, and a P04 type, respectively.
- Aqueous solutions such as salt, sodium acetate, and phosphate buffer are listed.
- a mixed solution of an aqueous solution containing a salt and a water-miscible organic solvent as described above is mentioned.
- the water-miscible organic solvent include methanol, ethanol, isopronole, and acetone.
- a 7-aqueous ACA solution containing ⁇ -aminopyridinic acid as an impurity can be converted to a styrene-based strong basic anion-exchange resin.
- a 7 ACA aqueous solution from which ⁇ -aminoaminodipic acid has been removed is required to obtain a 7 ACA aqueous solution.
- ⁇ -Aminoadipic acid removal ratio in solution that is, the conversion of ⁇ -aminodidivic acid to 7 ACA It is preferable to set the content mole ratio to 0.3 or less, and it is most preferable to set it to 0.24 or less. Therefore, the amount of the resin is appropriately increased or decreased.
- 7-Aminose aprosporic acid obtained by this method can be further purified into 7ACA crystals by crystallization and other operations. It can.
- the crystallization method is as follows: a 7-ACA aqueous solution containing ⁇ -amino didipic acid from which ⁇ -amino didipic acid has been removed is applied with an isoelectric force of 3 to 4 to give an isoelectric current. Just do a spot precipitation. Further, for example, after performing a concentration operation such as concentration under reduced pressure and concentration of a reverse osmosis membrane, isoelectric point precipitation can be performed.
- ⁇ -amino diaponic acid-containing 7 ACA aqueous solution (7 ACA concentration: 1.5 mg Z ml, ct-amino Dipynic acid concentration: 0.75 mg Z ml) was adsorbed to each resin loaded on a column (inner diameter: 2 cm, height: 30 cm), and 7 ACA Measure the concentration of 7 ACA and ⁇ -aminoadipic acid contained in the flow-through liquid when the load is 30 g of normal resin, and determine the ratio to the load liquid. are shown in Table 1.
- the resin used for the test was Diaion ⁇ 408 (trademark, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), Amberlite 1 RA401 (trademark, mouth and mouth) ⁇ 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 AP 4 AP It is.
- Resin name Resin acid, salt type 7 ACA Amino Adipi Matrix Basic leakage rate Acid leakage rate
- the method of the present invention has a remarkably superior ability to fractionate and purify ACA and ct-aminodiadipic acid compared to other methods. And became illuminated.
- Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m) 2 Add 2 liters of pseudomonas' dimminator N176 Add cephalosporin C acylase to a concentration of 2 mg / m1, and add sodium hydroxide aqueous solution at pH 8.5--9 at 25 ° C. The mixture was stirred for 1 hour under 0 control. After completion of the reaction, the cephalosporin acylase was removed quickly using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and 7 ACA and -amino Four liters of an aqueous solution containing adipic acid in an equimolar amount were obtained as an ultrafiltration solution.
- an ultrafiltration membrane molecular weight cut-off: 600,000
- Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m 1) Same as Example 1 in two liters of Cephalosporin C acylase Was adjusted to 2 mg / m 1, and the mixture was stirred at 25 ° C with an aqueous sodium hydroxide solution under PH 8.5 control for 1 hour. After the reaction is completed, the cephalosporin C acylase is quickly removed using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and the ultrafiltration membrane and the permeated liquid are separated. I got it.
- an ultrafiltration membrane molecular weight cut-off: 600,000
- the eluted activity (540 ml) was adjusted to pH 3.5 with 17.5% hydrochloric acid with stirring to precipitate 7 ACA. After allowing to stand for 2 hours under cooling, the mixture was separated and dried under vacuum to obtain 5.0 g of crystals having a purity of 7 ACA of 90% and containing no ⁇ -aminodipic acid.
- Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m1) 2 liters of the same Cephalosporin C acylase as in Example 1 was added to a concentration of 2 mg / m 1, and the mixture was stirred with sodium hydroxide aqueous solution at 25 ° C under ⁇ ⁇ 8.5-9.0 control for 1 hour. . After completion of the reaction, the cephalosporin C 'acylase was quickly removed using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and the resulting solution was used as the permeate of the ultrafiltration membrane. Obtained.
Abstract
A method of obtaining high-purity 7-aminocephalosporanic acid from an aqueous solution thereof contaminated with α-aminoadipic acid, which comprises treating the aqueous solution with a strongly basic styrene-base anion-exchange resin to thereby remove the α-aminoadipic acid.
Description
' 明 細 書 ' Specification
7 一 ア ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン 酸 の精製法 技術分野 7-1 Aminocephalosporanic acid purification technology
本発明 は 7 — ア ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン酸 （以下 7 A C A と 略称す る ） の精製法 に関す る。 さ ら に詳細 に は、 α —ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 を 不純物 と し て含有す る 7 A C A 水溶液 を ス チ レ ン系強塩基性陰イ オ ン交換樹脂で処理 し て、 α —ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 除去す る こ と か ら な る 7 A C A の精製法 に 関す る も ので あ る。 背景技術 The present invention relates to a method for purifying 7-aminophosphoronic acid (hereinafter abbreviated as 7ACA). More specifically, an aqueous solution of 7 ACA containing α-amino diapic acid as an impurity is treated with a styrene-based strong basic anion-exchange resin to obtain α-aminoadipic acid. The present invention relates to a method for purifying 7 ACA, which involves removing aminoadipic acid. Background art
セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C の酵素開裂法と し ては、 D — ァ ミ ノ 酸ォ キ シ ダ ー ゼ と グル タ リ ル 7 A C A (以下 G L — 7 A C Α と 略称す る ） ア シ ラ ー ゼ を 使用 す る 2 段開裂法 は知 ら れ て い る が、 セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ア シ ラ ー ゼ を 使用 す る 1 段 開裂法は多 く の研究がな さ れて い る も の の未だ工業ィヒ さ れ て い な い。 こ の原因の 1 つ は、 開裂反応液か ら副生す る 等 モ ノレ の ct 一 ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸 を 効率良 く 除 く こ と が出来な い ので、 収率良 く 髙純度の 7 A C A結晶が得 ら れな い こ と で あ る。 The enzymatic cleavage of cephalosporin C includes D-amino acid oxidase and glutaryl 7 ACA (hereinafter abbreviated as GL-7AC). Although a two-stage cleavage method using sylase is known, a single-stage cleavage method using cephalosporin C acylase has not been extensively studied. Although it has been done, it has not been industrialized yet. One of the reasons for this is that it is not possible to efficiently remove ct-aminopydinoic acid, which is a by-product of the cleavage reaction solution, and produces high yields. This means that 7 ACA crystals with a purity cannot be obtained.
例 え ば、 セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C か ら合成法ま た は酵素法で G L - 7 A C A を 生成 さ せ、 そ の後ア シ ラ ー ゼで側鎖 （ グ ル タ リ ル酸 ) を 切断 し た も の に つ いて は、 既知の方法に従 い濃縮後等電点沈澱す る だ け で グル タ リ ル酸 を簡単に除去 す る 事がで き 髙収率で髙純度の 7 A C A が得 ら れ る。 し か
し な が ら、 セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ア シ ラ ー ゼ に よ る 直接開裂 反応後の 液 か ら 濃縮後等電点沈澱 し た 場合、 ct ー ァ ミ ノ ァ ジ ピ ン酸 を 除去 す る こ と は 著 し い 困難 が伴い、 そ の 結果、 髙収率で 髙純度 の 7 A C A を 得 る こ と は で き な 力、 つ た， For example, GL-7 ACA is produced from cephalosporin C by a synthetic method or an enzymatic method, and then the side chain (glutaryl acid) is produced by an acylase. ) Can be easily removed from glutaric acid only by isoelectric focusing after concentration according to a known method. Of 7 ACA is obtained. Or However, when isoelectric focusing was performed after concentration from the solution after direct cleavage reaction with cephalosporin C acylase, ct-aminodipic acid Eliminating it was associated with significant difficulties, and as a result, it was not possible to obtain high purity 7 ACA in high yield.
発明 の開示 DISCLOSURE OF THE INVENTION
本発明者 ら は α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸含有 7 A C A 水溶液 か ら 髙収 率 で髙純度 の 7 A C A を 精製 す る 方法 を 確立す る た め に 鋭意研究 を 重 ね た 結果、 α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 不 純物 と し て 含有 す る 7 A C A水溶液 を ス チ レ ン 系 強塩基性 陰 イ オ ン 交 換樹脂で 処理す れ ば、 非常 に 効率 よ く α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 分別 除 去 で き る と 言 う 驚 く べ き 知見 を 得、 さ ら に研究 の結果、 本発 明 を 完成 す る に 至 っ た。 The present inventors have conducted intensive studies in order to establish a method for purifying 7ACA having a high purity at a high yield from an aqueous solution of 7ACA containing α-aminoaminodipic acid. It is very efficient if a 7 ACA aqueous solution containing α-aminoadipic acid as an impurity is treated with a styrene-based strong anion-ion exchange resin. We have surprisingly found that α-aminodipic acid can be fractionated and removed, and as a result of further research, we have completed the present invention.
本発明 で 用 い ら れ る α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸含有 7 A C A 水溶液は， セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C を 7 位 の ct 一 ア ミ ノ ア ジ ビ ン 酸 を 切断 す る こ と に よ り 得 ら れ る。 例 え ば セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C 水溶液 に セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ア シ ラ ー ゼ、 例 え ば シ ユ ー ド モ ナ ス ' デ ィ ミ ニ ユ ー タ N 1 7 6 や エ ス ピ ー S E 8 3 (微ェ研 菌寄託第 7 6 4 9 号） の セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ァ シ ラ ー ゼ （ そ れ ぞれ 欧州特許 出 願公開第 4 7 5 6 5 2 号 公 報 お よ び U S P 4 7 7 4 1 7 9 号 公報参 照） を 用 い て 酵素 分解 し 7 A C A を 生 成 さ せ る こ と に よ り 得 ら れ る 反 応液等 が挙 げ ら れ る。 こ の発 明 で 用 い る ス チ レ ン 系 強塩基性 陰 ィ オ ン 交換樹脂 の好 ま し い 例 と し て は、 例 え ば ダ イ ヤ イ オ ン S A 1 1 A、
P A 3 0 6. P A 4 0 6 お よ び P A 4 0 8 ( 商標、 三菱化 成社製） 、 ア ン ノ 一 ラ イ ト I R A 4 0 1 (商標、 ロ ー ム - ア ン ド ' ノヽ ー ス 社製 ） 、 レ ノく チ ッ ト M P 5 0 0 お よ び M P 5 0 O A ( 商標、 バ イ エ ル社製 ） 等 の低架橋度の ス チ レ ン 系強塩基性陰 イ オ ン 交換樹脂が挙 げ ら れ る。 ま た、 こ れ ら の樹脂 を C 1 型、 C H 3 C 0 0型 ま た は P 04型で 用 レ、 る の が好 ま し い。 7 A C A水溶液の ス チ レ ン 系強塩基性陰 ィ ォ ン 交 換樹脂 で の 処理、 す な わ ち 7 A C A の吸脱着 は カ ラ ム 式 ま た は ノ ツ チ 式で 常 法 に よ り 行 わ れ る。 7 A C Aの溶 出 に 用 い ら れ る 溶 出 液 の 種類 は特 に 限定 さ れ な い 力 樹脂 タ ィ プ と 同 じ 塩 を 含有 す る 水 溶液 に す る こ と に よ リ 樹脂再生 工程 な し に 繰 り 返 し 使用 す る こ と がで き る。 こ の よ う な 溶 出 液 の好適 な例 と し て は、 例 え ば、 樹脂が C 1 タ イ プ、 C H 3C O O タ イ プ、 P 04タ イ プの場合 は、 そ れ ぞ れ、 食塩、 酢酸 ナ ト リ ウ ム、 リ ン 酸バ ッ フ ァ な ど の 水溶 液が挙 げ ら れ る。 ま た、 特 に 好 ま し い 溶 出液 と し て は、 上記の よ う な 塩 を 含有 す る 水溶 液 と 水 混和性の 有機溶媒 と の 混液 が挙 げ ら れ る。 水 混 和性 の有 機溶媒 と し て は、 メ タ ノ ー ル、 ェ タ ノ ー ル、 イ ソ プ ロ ノ ノ ー ル， ア セ ト ン 等 が挙 げ ら れ る。 The 7-ACA aqueous solution containing α-aminodipic acid used in the present invention cleaves cephalosporin C at the 7-position of ct monoaminodivinic acid. It is obtained by doing so. For example, a solution of Cephalosporin C in an aqueous solution of Cephalosporin C, for example, pseudomonas' diminimeter N 17 Cephalosporin C acylases of Escherichia coli 6 and Espy SE83 (Microorganism Depositary No. 7649), respectively (European Patent Application Publication No. 47, respectively) Reaction liquid obtained by enzymatic digestion to generate 7 ACA using 5 6 5 2 publication and USP 4 7 7 4 1 7 9 And so on. Preferable examples of the styrene-based strongly basic anion exchange resin used in the present invention include, for example, Diaion SA11A, PA306. PA406 and PA408 (trademark, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), Announcement IRA401 (trademark, room-and-node) Styrene-based strongly basic anion with low degree of cross-linking such as Lenox MP500 and MP500OA (trademark, manufactured by Bayer). Exchange resins are listed. Also, it is preferable to use these resins in C1 type, CH3C00 type or P04 type. 7 Treatment of ACA aqueous solution with a styrene-based strong basic anion-exchange resin, that is, adsorption and desorption of 7 ACA by a column method or a notch method according to a conventional method. Is performed. 7 The type of eluate used for ACA elution is not particularly limited. A resin solution is prepared by converting it into a water solution containing the same salt as the resin type. Can be used repeatedly without. Preferable examples of such an eluate include, for example, when the resin is a C1 type, a CH3COO type, and a P04 type, respectively. Aqueous solutions such as salt, sodium acetate, and phosphate buffer are listed. In addition, as a particularly preferred eluate, a mixed solution of an aqueous solution containing a salt and a water-miscible organic solvent as described above is mentioned. Examples of the water-miscible organic solvent include methanol, ethanol, isopronole, and acetone.
こ の よ う に し て α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 不 純物 と し て 含 有 す る 7 A C A水溶液 か ら ス チ レ ン 系強塩基性陰 イ オ ン 交 換樹脂 に よ り α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 除 去 し た 7 A C A水 溶液 が得 ら れ る 力 s、 7 A C Aの よ り 純粋 な結 晶 を 得 る た め に は、 そ の 7 A C A水 溶液 中 の α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸除 去 割 合、， す な わ ち 7 A C A に 対す る α - ア ミ ノ ア ジ ビ ン 酸 の
含有 モ ル比 は 0. 3 以下 に す る の が好 ま し く、 0. 2 4 以 下 に す る の が最 も 好 ま し い ので、 樹脂 の 量 を 適宜増減す る。 In this way, a 7-aqueous ACA solution containing α-aminopyridinic acid as an impurity can be converted to a styrene-based strong basic anion-exchange resin. In order to obtain more pure crystals of 7 ACA, a 7 ACA aqueous solution from which α-aminoaminodipic acid has been removed is required to obtain a 7 ACA aqueous solution. Α-Aminoadipic acid removal ratio in solution, that is, the conversion of α-aminodidivic acid to 7 ACA It is preferable to set the content mole ratio to 0.3 or less, and it is most preferable to set it to 0.24 or less. Therefore, the amount of the resin is appropriately increased or decreased.
こ の方法 に よ り 得 ら れ た 7 — ア ミ ノ セ プ ア ロ ス ポ ラ ン 酸 は， さ ら に 晶析 等 の 操作 に よ り、 純粋 な 7 A C A結 晶 に す る こ と がで き る。 晶 析 の方 法 は α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 を 除 去 し た α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸含有 7 A C A水溶液 を Ρ Η を 3 か ら 4 に あ わ せ、 等 電点沈澱 を 行 え ば よ い。 ま た、 例 え ば減圧濃縮、 逆浸透 膜濃縮等の 濃縮操作 を 行 っ た 後、 等電 点沈澱を 行 う こ と も で き る。 7-Aminose aprosporic acid obtained by this method can be further purified into 7ACA crystals by crystallization and other operations. it can. The crystallization method is as follows: a 7-ACA aqueous solution containing α-amino didipic acid from which α-amino didipic acid has been removed is applied with an isoelectric force of 3 to 4 to give an isoelectric current. Just do a spot precipitation. Further, for example, after performing a concentration operation such as concentration under reduced pressure and concentration of a reverse osmosis membrane, isoelectric point precipitation can be performed.
以下、 実施例 に よ り 本願発明 を よ り 詳細 に 説明 す る。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
比較例 Comparative example
樹脂母体 の種類や 官 能基 の タ イ プ を 換 え、 α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸含 有 7 A C A水溶液 （ 7 A C Aの濃度 ： 1. 5 m g Z m l、 ct 一 ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 の濃度 ： 0. 7 5 m g Z m l ) を カ ラ ム （ 内 径 ： 2 c m、 高 さ ： 3 0 c m ) に 充 填 し た 各 々 の 樹脂 に 吸着 さ せ、 7 A C A の 負 荷量が 3 0 g ノ リ ッ ト ル 樹脂 の 時 の 通過液 に 含 ま れ る 7 A C A お よ び α ー ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 の 濃度 を 測定 し、 負 荷液 と の 比率 を 表 1 に 示 し た。 試験 に 用 い た 樹脂 は ダ イ ヤ イ オ ン Ρ Α 4 0 8 ( 商 標、 三 菱 化成 社 製 ） 、 ア ン バ ー ラ イ ト 1 R A 4 0 1 ( 商標、 口 一 ム ア ン ド ノヽ ― ス 社製） 、 レ ノく チ ッ ト Μ Ρ 6 4、 Α Ρ 2 4 7 Α, A P 4 9、 C N P 8 0 お よ び Μ Ρ 6 2 ( 商 標、 バ イ エ ル社製） で あ る。
樹脂名 樹脂 酸 ， 塩 型 7 A C A ア ミ ノ ア ジ ピ 母体 基性 洩 れ率 ン 酸洩 れ率 By changing the type of resin matrix and the type of functional group, α-amino diaponic acid-containing 7 ACA aqueous solution (7 ACA concentration: 1.5 mg Z ml, ct-amino Dipynic acid concentration: 0.75 mg Z ml) was adsorbed to each resin loaded on a column (inner diameter: 2 cm, height: 30 cm), and 7 ACA Measure the concentration of 7 ACA and α-aminoadipic acid contained in the flow-through liquid when the load is 30 g of normal resin, and determine the ratio to the load liquid. Are shown in Table 1. The resin used for the test was Diaion Α 408 (trademark, manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.), Amberlite 1 RA401 (trademark, mouth and mouth)ヽ 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 AP 4 AP It is. Resin name Resin acid, salt type 7 ACA Amino Adipi Matrix Basic leakage rate Acid leakage rate
PA408 ス チ 強塩基 C1 1. 3 6 8. 5 PA408 St Strong base C1 1.3 6 8.5
レ ン Len
IRA401 ス チ 強塩基 C1 1. 7 7 2. 0 IRA401 ST Strong base C1 1.7 7 2.0
レ ン Len
MP64 ス チ 強塩基 C1 7 5. 9 9 4. 8 MP64 S Strong base C1 7.5.9 94.8
レ ン Len
AP247A ァ ク 強塩基 C1 3 2. 8 7 1. 7 AP247A Fak Strong base C1 3 2.8 7 1.7
リ ル Lil
AP49 ァ ク 中 塩基 C1 5 4. 8 7 8. 6 AP49 Base in C1 5 4.8 7 8.6
y ル y le
C P80 ァ ク 弱酸 H 9 9. 2 9 7. 9 C P80 Fak Weak acid H 99.2 97.9
リ ル Lil
MP 62 ス チ . 0H 8 3. 6 9 2. 5 MP62 stee 0H 8 3.6 9 2.5
レ ン Len
MP 62 ス チ 弱 塩基 C1 4 3. 3 8 5. 5 MP62 Ste Weak base C1 4 3.3 8 5.5
レ ン 上記 デー タ か ら、 本願発 明 の 方法 は他 の方法 に 比 べ て Ί A C A と ct — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 と の著 し く 分 別精製能が優 れて い る こ と が 明 力、 と な つ た。 From the above data, it can be seen that the method of the present invention has a remarkably superior ability to fractionate and purify ACA and ct-aminodiadipic acid compared to other methods. And became illuminated.
実施例 1 Example 1
セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ナ ト リ ウ ム 水溶液 ( 5. 0 m g / m 】 ） 2 リ ッ ト ル に シ ユ ー ド モ ナ ス ' デ ィ ミ ニ ユ ー タ N 1 7 6 の セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ア シ ラ ー ゼ を 2 m g / m 1 に な る よ う に 加 え、 2 5 °C、 水酸化ナ ト リ ウ ム 水溶液で P H 8. 5 〜 9. 0 コ ン ト ロ ー ル下 で 1 時間撹拌 し た。 反応終 了 後、 限外濾過膜 （分 画分子量 6 0 0 0 ) を 用 い素 早 く セ フ ァ ロ ス ポ リ ン 〇 · ア シ ラ ー ゼ を 除去 し、 7 A C A と — ァ ミ ノ
ア ジ ピ ン酸 が等 モ ル 含有 さ れ た 水溶液 4 リ ッ ト ル を 限外攄 過膜透過液 と し て 得 た。 Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m) 2 Add 2 liters of pseudomonas' dimminator N176 Add cephalosporin C acylase to a concentration of 2 mg / m1, and add sodium hydroxide aqueous solution at pH 8.5--9 at 25 ° C. The mixture was stirred for 1 hour under 0 control. After completion of the reaction, the cephalosporin acylase was removed quickly using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and 7 ACA and -amino Four liters of an aqueous solution containing adipic acid in an equimolar amount were obtained as an ultrafiltration solution.
上記透過液 を 塩酸で P H 6. 5 に調製 し た 後、 ス チ レ ン 系 強塩基性 陰 イ オ ン 交 換樹脂、 ダ イ ヤ イ オ ン P A 4 0 8 ( C H 3C O O型） 1 4 0 m l に 4 2 0 m l ノ時間 で 通液 し た。 通液終了 後、 樹脂 を 水 1 4 0 m 1、 7 0 % メ タ ノ ー ル 1 4 0 m 1 で 洗浄 し た。 こ の 時、 吸着 洗浄廃液 区 へ の 7' A C Aの 回 収率 は 1 % で あ り， 一方 α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 の 回 収率 は 7 2 %で あ っ た。 After adjusting the pH of the above permeate to pH 6.5 with hydrochloric acid, styrene-based strong basic anion-exchange resin, Diaion PA408 (CH3COO type) 14 The solution was passed through 0 ml for 420 hours. After the completion of the passage, the resin was washed with 140 ml of water and 140 ml of 70% methanol. At this time, the recovery of 7 'ACA in the waste liquid section for adsorption and washing was 1%, while the recovery of α-aminoadipinic acid was 72%.
上記洗浄後、 0. 9 Μ食塩 を 含 む 7 0 % メ タ ノ ー ル 水 溶 液で 溶 出 し、 7 A C A収率 9 5 %、 α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 収率 2 7 % の溶 出活性 区 4 2 0 m 1 を 得 た。 こ の 溶 出 活 性区 4 2 0 m l を 撹拌 下 1 7. 5 %塩酸 で P H 3. 5 に 調 整 し、 7 A C A を 析 出 さ せ た。 冷却下 で 2 時 間静置後結 晶 を 分離 し、 真空 乾燥 し、 7 A C A純度 9 1 %、 α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン 酸 0. 2 % 含有結 晶 を 5. 3 g 得た。 After the above washing, it is eluted with 70% aqueous methanol solution containing 0.9% sodium chloride, 7 ACA yield 95%, α-aminoadipic acid yield 27 % Eluted active area of 420 m1 was obtained. P H 3. and 5 two adjusted in this elution activity ku 4 under stirring 2 0 ml 1 7. 5% hydrochloric acid, it was left analyze 7 ACA. After standing for 2 hours under cooling, the crystals were separated and dried under vacuum to obtain 5.3 g of crystals containing 7 ACA purity of 91% and α-aminodidipic acid of 0.2%. .
実施例 2 Example 2
セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ナ ト リ ウ ム 水溶液 （ 5. 0 m g / m 1 ) 2 リ ツ ト ル に実施例 1 と 同 じ セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ァ シ ラ ー ゼ を 2 m g / m 1 に な る よ う に 力 Πえ、 2 5 °C、 水酸化 ナ ト リ ウ ム 水溶液で P H 8. 5 コ ン ト ロ ー ル 下 で 1 時間撹 拌 し た。 反 応終 了 後、 限外濾過膜 （ 分 画分子量 6 0 0 0 ) を 用 い 素早 く セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ア シ ラ ー ゼ を 除 去 し、 限 外濾過膜透過液 と し て 得 た。 Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m 1) Same as Example 1 in two liters of Cephalosporin C acylase Was adjusted to 2 mg / m 1, and the mixture was stirred at 25 ° C with an aqueous sodium hydroxide solution under PH 8.5 control for 1 hour. After the reaction is completed, the cephalosporin C acylase is quickly removed using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and the ultrafiltration membrane and the permeated liquid are separated. I got it.
上記透過液 を 塩酸 で P H 6. 5 に 調製後、 ス チ レ ン 系 強
塩基性陰イ オ ン 交換樹脂、 レ ノ チ ッ ト M P 5 0 O A ( C 1 型） 2 7 0 m 1 に 1 3 5 0 m 1 /時間で通液 し た。 通液終 了後， 樹脂 を 水 2 7 0 m 1 で洗浄 し た。 こ の時、 吸着洗浄 廃液区への 7 A C A の回収率は 1 %以下であ り、 一方 α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸の 回収率は 7 5 %で あ っ た。 上記洗浄後、 0. 9 Μ食塩 を 含む 7 0 % メ タ ノ ー ル水溶液で溶 出 し、 7 A C A収率 9 5 %、 α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン酸収率 2 5 % の溶 出活性区 5 4 0 m 1 を 得た。 After adjusting the pH of the above permeate to 6.5 with hydrochloric acid, The solution was passed through a basic anion-exchange resin, Lenotit MP50OA (C1 type) 270 m1, at 135 m1 / hour. After completion of the passage, the resin was washed with water (270 ml). At this time, the recovery rate of 7 ACA in the waste liquid section for adsorption washing was 1% or less, while the recovery rate of α-aminodipic acid was 75%. After the above washing, it is eluted with 70% aqueous solution of methanol containing 0.9% sodium chloride, and has a 7 ACA yield of 95% and an α-aminodipic acid yield of 25%. 540 m 1 of the active group was obtained.
こ の溶出活性区 5 4 0 m l を 撹拌下 1 7. 5 %塩酸で P H 3. 5 に調整 し、 7 A C A を 析 出 さ せ た。 冷却下で 2 時 間静置後分離、 真空乾燥 し、 7 A C A純度 9 0 % で α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 を含有 し な い結晶 を 5. 0 g 得た„ The eluted activity (540 ml) was adjusted to pH 3.5 with 17.5% hydrochloric acid with stirring to precipitate 7 ACA. After allowing to stand for 2 hours under cooling, the mixture was separated and dried under vacuum to obtain 5.0 g of crystals having a purity of 7 ACA of 90% and containing no α-aminodipic acid.
実施例 3 Example 3
セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ナ ト リ ウ ム水溶液 （ 5. 0 m g / m 1 ) 2 リ ッ ト ル に実施例 1 と 同 じ セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ァ シ ラ ー ゼ を 2 m g / m 1 に な る よ う に加え、 2 5 °C、 水酸化 ナ ト リ ウ ム水溶液で ρ Η 8· 5 〜 9. 0 コ ン ト ロ ー ル下で 1 時間撹拌 し た。 反応終了後、 限外濾過膜 （分画分子量 6 0 0 0 ) を 用 い素早 く セ フ ァ ロ ス ポ リ ン C ' ア シ ラ ー ゼ を 除去 し、 限外濾過膜透過液 と し て得た。 Cephalosporin C sodium aqueous solution (5.0 mg / m1) 2 liters of the same Cephalosporin C acylase as in Example 1 Was added to a concentration of 2 mg / m 1, and the mixture was stirred with sodium hydroxide aqueous solution at 25 ° C under ρ Η 8.5-9.0 control for 1 hour. . After completion of the reaction, the cephalosporin C 'acylase was quickly removed using an ultrafiltration membrane (molecular weight cut-off: 600,000), and the resulting solution was used as the permeate of the ultrafiltration membrane. Obtained.
上記透過液を 塩酸で ρ Η 6. 5 に調製後， ス チ レ ン系強 塩基性陰イ オ ン 交換樹脂、 ダイ ヤ イ オ ン Ρ Α 4 0 6 ( C 1 型） 1 8 0 m l に 5 4 0 m 1 ノ時間で通液 し た。 通液終了 後、 樹脂 を 水 1 8 0 m l お よ びエ タ ノ ー ル 1 8 0 m l で洗 浄 し た。 こ の時、 吸着洗浄廃液区への 7 A C Aの 回収率は
1 % 以下 で あ り、 一 方 " ー ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 の 回 収率 は 7 5 % で あ っ た。 上記 洗浄後、 0 . 9 M 食塩 を 含む 7 0 % メ タ ノ 一 ル 水 溶液 で溶 .出 し、 7 A C A収率 9 5 %、 α — ア ミ ノ ア ジ ピ ン 酸収率 2 5 % の溶 出 活性区 5 4 0 m 1 を 得た。
After adjusting the permeate to ρ 6.5 with hydrochloric acid, add styrene-based strong basic anion exchange resin, diaion The liquid was passed for 540 m 1 hour. After the completion of the passage, the resin was washed with 180 ml of water and 180 ml of ethanol. At this time, the recovery rate of 7 ACA to the adsorption washing waste liquid section was On the other hand, the recovery of "-aminoadipic acid was 75%. After the above washing, 70% methanol containing 0.9 M sodium chloride was contained. The eluate was eluted with an aqueous solution of toluene to obtain 540 ml of an eluted active zone with a 7 ACA yield of 95% and an α-aminodipic acid yield of 25%.
Claims
1 . α — ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 を 不純物 と し て 含有す る 7 —ァ ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン 酸水溶液 を ス チ レ ン系 強塩基性陰 ィ オ ン 交換樹脂で 処理 し て、 α —ァ ミ ノ ア ジ ピ ン酸 を 除 去 す る こ と を 特徴 と す る 7 — ア ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン 酸 の精製 法。 1. An aqueous solution of 7-aminocephalosporic acid, which contains α-aminoadipic acid as an impurity, is a styrene-based strongly basic anion exchange resin. 7-Aminocephalosporanic acid purification method characterized by removing α-aminoadipic acid by treating with.
2 . ス チ レ ン 系 強塩基性陰 イ オ ン 交換樹脂が低架橋度 の ス チ レ ン 系 強塩基 性陰 イ オ ン 交換樹脂で あ る こ と を 特徴 と す る 請 求項 1 に 記載の 精製法。 2. Claim 1 characterized in that the styrene-based strong basic anion-exchange resin is a styrene-based strong basic anion-exchange resin having a low degree of crosslinking. Purification method as described.
3 . ス チ レ ン 系 強塩基性陰 イ オ ン 交換樹脂 を C 1 型、 C H 3 C 0 0 型 ま た は Ρ 0 4型で 使用 す る こ と を 特徴 と す る 請求 項 1 一 2 に い ず れか に 記載 の精製法。 3. The styrene type strongly basic anion exchange resin is used in C 1 type, CH 3 C 0 0 type or Ρ04 type. The purification method according to any of the above.
4. ス チ レ ン 系 強塩基性陰 イ オ ン 交換樹脂の 溶 出 剤 と し て、 樹脂 と 同 じ 型の 塩溶液 を 使用 す る こ と を 特徴 と す る 請求項 1 一 3 の い ずれ か に 記載の精製法。 4. The method according to claim 13, wherein a salt solution of the same type as the resin is used as an eluent for the styrene-based strongly basic anion-exchange resin. The purification method according to any one of the above.
5 . 請求項 1 の 方法 に よ り 得 ら れ た 7 — ア ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン 酸 を 等電 点沈澱法 に 付す こ と を 特徴 と す る 7 — ア ミ ノ セ フ ァ ロ ス ポ ラ ン 酸 の精製法。
5. A 7-aminoceph characterized by subjecting 7-aminocephalosporanic acid obtained by the method of claim 1 to an isoelectric point precipitation method. A method for purifying arospironic acid.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998055484A1 (en) * | 1997-06-04 | 1998-12-10 | Biochemie Gesellschaft Mbh | Improved precipitation process of 7-aminocephalosporanic acid (7-aca) |
| CN101768169B (en) * | 2008-12-30 | 2011-09-21 | 焦作健康元生物制品有限公司 | Mother liquid recovery process for 7-aminocephalosporanic acid production |
Citations (3)
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| JPS49284A (en) * | 1972-03-09 | 1974-01-05 | ||
| JPS4913195A (en) * | 1972-06-01 | 1974-02-05 | ||
| JPS49126692A (en) * | 1973-04-16 | 1974-12-04 |
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1993
- 1993-11-29 WO PCT/JP1993/001734 patent/WO1994012504A1/en active Application Filing
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