WO1992021748A2 - Support pour milieux de culture compartimente et milieux de culture electifs complementaires - Google Patents

Support pour milieux de culture compartimente et milieux de culture electifs complementaires Download PDF

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WO1992021748A2
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Eduard Engelbrecht
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Milian Instruments S.A.
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/045—Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/04—Flat or tray type, drawers
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    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
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    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/34—Internal compartments or partitions

Definitions

  • the box of fig. 3 is round in shape and contains a compartment which occupies about a quarter of the surface. From the place where the two partitions which delimit it join, leaves a partition which divides the remaining part of the box into two parts of equal surfaces.
  • the compartments can be separated by simple partitions, or doubled in accordance with Figures i or 2.
  • the design of the box in fig ._____ is identical except that the box is square in shape with the small compartment located in one of the four corners.
  • 5 is a round box divided by a partition from edge to edge located in one axis and a partition perpendicularly
  • the box thus comprises a large compartment occupying approximately half the surface, and two small compartments each occupying approximately a quarter of the surface.
  • the partitions can be simple, or lined in accordance with figures l or ______ _ The figure
  • the partitions can also be located in the diagonals.
  • the partitions have a " height which is preferably five millimeters, thus exceeding by one millimeter the level of the surface of the culture media contained in the compartments, which preferably have a thickness of four millimeters.
  • the following examples describe, without limitation, how it is possible to separate the germs present in the inoculum into several distinct categories by a judiciously chosen combination of elective culture media: first example: in oto-rhino cultures laryngological, gynecological, urological and certain pus, in particular of surgical origin, it is advantageous, taking into account the multiplicity of germs present in the inocu ⁇ lum, to be able to separate from the beginning the gram positive germs from gram negative germs and to obtain isolated Neisseria and pathogenic yeasts, given their particular interest.
  • the first compartment contains a blood agar, prepared from the medium known as Colurnbia agar base, and en ⁇ rich with 4 to 6 percent defibrinated blood.
  • nystatin at the rate of 2 units per milliliter to prevent the growth of yeasts, and colimycin in the form of colistin methane sulfonate at the rate of 20 international units, or 1.7 micrograms per milliliter.
  • the second compartment is intended to receive a medium which not only electively promotes the growth of gram-negative germs, but which also makes it possible to identify the Haemophilus species and Neisseria species pathogens. Since there is no medium which meets these requirements, we have invented an ad hoc medium which contains approximately 12 grams of agar, 4 grams of sodium chloride, 10 grams of peptone, 2 grams for one liter. of meat extract, 2 gram of yeast extract, 10 gram of sucrose, 2 international units of nystatin and 15 ml of a 0.25 percent neutral red solution.
  • the common species of Neisseria and Haemophilus form red colonies due to the transformation of sucrose and possibly lactose into acid. Not having the ability to attack one or the other of these two sugars, the pathogenic Neisseria develop colorless, translucent and curved colonies, while the different biotypes of Haemophilus influenzae form colorless colonies, translucent and flat.
  • enterobacteria and gram negative rods, oxidase positive develop significantly larger and opaque colonies which are white or red depending on whether or not acid is formed.
  • the third compartment contains a medium generally called "chocolate agar", prepared from the basic agar medium according to Thayer-Marti at a rate of 40 grams for one liter. After sterilization, lysed defibrinated blood is added to it at a rate of 4 to 6 percent, then the medium is reheated to 80 ° C. for 30 minutes, with regular agitation of the bottle.
  • chocolate agar prepared from the basic agar medium according to Thayer-Marti at a rate of 40 grams for one liter. After sterilization, lysed defibrinated blood is added to it at a rate of 4 to 6 percent, then the medium is reheated to 80 ° C. for 30 minutes, with regular agitation of the bottle.
  • this medium only allows: growth of Neisseria meningitidis, Neisseria Gonorrhoeae, Candida and Saccharomyces species, Campylobacter species and Bacillus species, in particular Bacillus fusiformis, according to the composition of the culture atmosphere during incubation.
  • colimycin Streptococcus agalacteae blood agar can be identified directly. whitish, beta-hemolytic colonies, Streptococcus faecalis, curved, gray, non-hemolytic colonies, Gardnerella vaginalis, small flat colonies, translucent, hemolytic or not, depending on the human or ovine origin of the blood incorporated into the medium, the Corynebacterium species , including Listeria monocytogenes, white or grayish colonies, generally more or less clearly hemolytic when it comes to pathogenic species, the pathogenic Neisseria, curved colonies, trans ⁇ lucid, and Staphylococcus species, especially Staphy-- lococcus aureus, fairly large beta-hemolytic colonies, flat and gray, or curved and yellowish, while the Lactobaci1lus species and Proprionibacterium species appear in the form of small colonies generally alpha-hemolytic, and the Proteus species,
  • the germs sought are thus distributed over the three environments in distinct categories and, by the aspects that their colonies present on the particular environment, are directly identifiable there.
  • colimycin can be replaced in blood agar by polymyxin B at the rate of 2,500 international units per liter, in serum agar clindamycin by Hncomycin at the rate of 1 milligram by liter, or by a milliliter per liter of a 0.1 percent solution of crystal-violet, and in the chocolate-VCT medium trimethoprim with neomycin at a rate of 2 mg per liter.
  • lactose Since the acidification or not of the colonies by the degradation of the lactose alone, highlighted by the transfer of the indicator, is a generally accepted criterion, it suffices to incorporate only lactose at a rate of 10 grams per liter and to abstain from sucrose.
  • 1 gram of iron citrate and 6 grams of sodium thiosulphate per liter can be added, and the pH adjusted to 7.2.
  • the nystatin is not removed and the serum is only added if the medium must also serve to demonstrate the yeasts and Candida species, and Neisseria gonorrhoeae, respectively.
  • the advantage of clindamycin compared to methylviolet is that the former does not hinder the growth of said germs in any way.
  • This medium is then poured into the large compartment of a box comprising a large and two small compartments.
  • One of the two small compartments receives either the so-called mannitol-salt agar medium intended to highlight the Staphylococcus species, or the coli ⁇ mycin blood agar of the first example, with nalidixic acid and nystatin or amphotericin-B, in order to highlight not only the Staphylococcus species, but also the Streptococcus species, including beta-hemolytics and enterococci, as well as the Neisseria pathogens.
  • the second compartment receives the medium according to Slanetz and Bartley, which makes it possible to selectively highlight the enterococci.
  • the second small compartment is filled with a medium for the isolation of yeasts and of Candida species, the medium of Sabouraud for example, or the medium of chocolate- VCT of the first example.
  • the germs responsible for digestive tract disorders are among the negative gram rods, negative oxidase, namely salmonella, shigella, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, and the enterotoxic and enteropathogenic strains of Escherichia coli, gram sticks negative, positive oxidase, namely Aeromonas hydrophila, Pleisiomonas shigel loides, Pseudo ⁇ monas aeruginosa, Vibrio choiera and Vibrio parahaemolyticus, several Candida species, notably Candida al-bicans, several species of mold, as well as species of staphylococci alpha toxin.
  • negative oxidase namely salmonella, shigella, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis
  • enterotoxic and enteropathogenic strains of Escherichia coli gram sticks negative
  • our medium therefore contains, in addition to clindamycin or Hnco ⁇ mycin, lactose, 1 erythromycin or rovamy- " cine, and a ferric salt, the latter so that the salmonella colonies stand out for their blackening due to the interaction between iron and sulfur hydroxide formed by the majority of salmonella species.
  • This medium is poured into the large compartment of the petri dish divided into a large and two small compartments.
  • the two small receive respectively the mannitol-salt agar, for the demonstration of positive mannitol staphylo ⁇ shells, and the medium according to Sabouraud, this latter made elective with respect to mycoses, Candida included, by adding one or more products with antibacterial action, thus providing a set of media which makes it possible to isolate and identify the germs responsible for disorders of the digestive tract.
  • the examples given are not limiting: the elements which constitute this invention lend themselves to variants, such as the number of large and small sectors of the supports for culture media, which can be greater than mentioned, for example following Figures 7 and 8.
  • the shape of the petri dishes which can be rectangular, rather than square or round, the design of the double partitions, which is applicable to all supports for culture media having at least two sectors, combinations of media elective and selective, which can be chosen differently depending on the nature of the inoculum, as well as the volume and the concentration of their constituents, which can vary according to the origin of the products, the degree of electivity and the reaction intensity that one wishes to obtain.
  • blue china is more suitable for color blind people as an indicator of acidity.

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Abstract

Support multicompartimenté pour milieux de culture, rempli ou non de milieux de culture (micro)biologiques complémentaires. Il est prévu le doublement des cloisons qui séparent les secteurs portant les milieux de culture, comme il est prévu la division du support en des compartiments de dimensions différentes, de manière à ce qu'il comporte au moins un compartiment plus petit que les autres, destiné à être rempli d'un milieu sélectif et au moins un compartiment plus grand que les autres, destiné à être rempli d'un milieu électif, un milieu de culture électif nouveau étant mis au point à cette fin, contenant notamment un indicateur d'acidité et du saccharose et/ou du lactose, ou du mannitol et rendu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs par l'adjonction de clindamycine ou de lincomycine et, pour certaines applications, d'un macrolide et/ou d'une substance inhibant la croissance d'entérocoques et/ou de germes levuriformes et de champignons.

Description

SUPPORT POUR MILIEUX DE CULTURE COMPARTIMENTE
ET MILIEUX DE CULTURE ELECTIFS COMPLEMENTAIRES
Bon nombre d'analyses de microbiologie, notamment de micro¬ biologie clinique, sont compliquées par la présence de ger¬ mes d'espèces différentes, souvent en grands nombres. Quand les différentes colonies qui apparaissent alors dans la culture, ont un aspect assez identique, ou quand la crois¬ sance est très dense, la reconnaissance et l'isolement du ou des germe.s) en cause deviennent difficiles et prennent beaucoup de temps. Par conséquent, dans certains cas le(s> germe.s) en cause sont manqué.s), tandis que dans d'autres cas le diagnostic et l'antibiogramme sont obtenus trop tard pour avoir encore une utilité.
Afin d'obtenir un meilleur discernement des germes recher¬ chés et d'améliorer ainsi l'efficacité des analyses micro- biologiques, nous avons entrepris des recherches qui ont abouti dans l'élaboration d'un nouveau milieu de culture, dont les diverses variantes peuvent être utilisées seules, ou dans des combinaisons de milieux qui, par êlectivité, permettent de séparer les germes présents dans l'inoculu en catégories distinctes et du fait que chacun des milieux présente alors un nombre limité de colonies microbiennes qui, de plus, appartiennent à une catégorie déterminée, de reconnaître et d'isoler directement les germes importants.
Afin de faciliter l'examen de la culture nous avons encore conçu des boîtes dans le genre de la boîte dite de pétri, divisées en plusieurs compartiments afin de pouvoir conte¬ nir plusieurs milieux électifs complémentaires. Puis, nos recherches ont démontré que certains substances sont en mesure de diffuser à travers le plastic, polystyrène par exemple, et d'influencer le milieu contenu dans le compar¬ timent avoisant. Pour les combinaisons de milieux où une telle diffusion de substances pourrait gêner nous avons mis au point des boîtes â plusieurs compartiments, ayant des cloisons intérieures doublées, séparées par une fente. Les fentes sont fermées soit en bas au niveau du fond de la boîte (figure 1 ). soit en haut (figure 2 ) . Nous pré¬ férons la dernière solution pour la raison qu'elle permet l'orientation de la boîte dans un appareil de remplissage automatique par l'enfilement de plaquettes tatrices orien¬ tables.
Parmi les milieux électifs il y en a qui sont convenablemen appelés sélectifs pour la raison qu'ils inhibent la crois¬ sance de presque toutes les espèces de germes en faveur de quelques espèces bien déterminées. Pour l'isolement de ces dernières il suffit de ce fait d'une surface très réduite. Pour les combinaisons qui comportent un ou plusieurs de ces milieux nous avons inventé des boîtes qui ont des comparti¬ ment de dimensions différentes. Les figures 3 . ______ _ 5 et
6 montrent de manière non limitative quatre exemples. La boîte de la fig. 3 est de forme ronde et contient un com¬ partiment qui occupe environ un quart de la surface. A par¬ tir de l'endroit où les deux cloisons qui la délimitent se jointent, part une cloison qui divise la partie restante de la boîte en deux parties de surfaces égales. Les compar¬ timents peuvent être séparés par des cloisons simples, ou doublés conformément aux figures i ou 2 . La conception de la boîte de la fig._____ est identique à cette différence près que la boîte est de forme carrée avec le petit compar¬ timent situé dans un des quatre coins. La boîte de la figure
5 est une boîte ronde divisée par une cloison de bord en bord située dans 1 'axe et une cloison perpendiculairement
" à la première. La boîte comporte ainsi un grand comparti¬ ment occupant environ la moitié de la surface, et deux pe¬ tites compartiments occupant chacun environ un quart de la surface. Ici aussi, les cloisons peuvent être simples, ou doublées conformément aux figures l ou ______ _ La figure
6 montre une boîte basée sur la même conception à cette différence près qu'elle est de forme carrée. Dans le cas d'une boite carrée il est évident que les cloisons peuvent aussi être situées dans les diagonales. Dans tous les exe - pies les cloisons ont une "hauteur qui est préférablement de cinq millimètres, dépassant ainsi d'un millimètre le niveau de la surface des milieux de culture contenus dans les com¬ partiments, qui ont de préférence une épaisseur de quatre mi llimètres.
Les exemples suivants décrivent de manière non limitative comment il est possible de séparer les germes présents dans l'inoculum en plusieures catégories distinctes par une com¬ binaison judicieusement choisie de milieux de culture élec¬ tifs: premier exemple: dans les cultures oto-rhino-laryngolo- giques, gynécologiques, urologiques et de certains pus, notamment d'origine chirurgicale, on a avantage, compte tenu de la multiplici é de germes présents dans l'inocu¬ lum, de pouvoir séparer dès le début les germes à gram positifs des germes à gram négatifs et d'obtenir isolé¬ ment les Neisseria et levures pathogènes, vu leur intérêt particulier. Certains des germes présents dans ces pré¬ lèvements ont besoin de sérum sanguin pour pouvoir former des colonies, tandis que pour la mise en évidence de la formation d'liêinolysine par certains germes à gram posi¬ tifs la présence de sang complet est de rigueur. Nos re¬ cherches nous ont alors mené à composer un jeu de trois milieux électifs contenus dans une boite à trois compar¬ timents: le premier compartiment contient une gélose au sang, pré¬ parée à partir du milieu dit Colurnbia agar base, et en¬ richie avec 4 à 6 pour cent de sang dêfibriné. Pour la rendre élective nous ajoutons de la nystatine â raison de 2 unités par millilitre pour empêcher la croissance de le¬ vures, et de la colimycine en forme de colistine méthane sulfonate à raison de 20 unités internationales, soit 1,7 microgramme par millilitre. A cette concentration de la colimycine il n'y a que les germes à gram positifs qui poussent, à l 'exception des Protcus species, reconnais- sablés aux grandes colonies dont l'essaimage est inhibé, ainsi que de Neisseria mening idis et Neisseria gonor- rhoeae, qui se distinguent nettement par leurs colonies translucides. - A -
Le deuxième compartiment est destiné à recevoir un milieu qui favorise non seulement électivement la croissance de germes à gram négatifs, mais qui permet en plus d'identi¬ fier les Haemophilus species et Neisseria species patho¬ gènes. Puisqu'il n'existe pas de milieu qui répond à c&s exigences, nous avons inventé un milieu ad hoc, qui con¬ tient approximativement pour un litre 12 gram de gélose, 4 gram de chlorure de sodium, 10 gram de peptone, 2 gram d'extrait de viande, 2 gram d'extrait de levure, 10 gram de saccharose, 2 unités internationales de nystatine et 15 ml d'une solution de rouge neutre à 0,25 pour cent. Après stérilisation on y ajoute encore 10 ml d*Isovitalex, mélange enrichissant contenant les facteurs V et X, 40 ml de sérum stérile de cheval, et de la clindamycine en forme de clindamycinephosphate à raison de S milligramme par litre. En plus du saccharose on peut encore l'addition¬ ner de 10 gram de lactose par litre. A la concentration donnée de la clindamycine il n'y a que les germes à gram négatif qui poussent sur ce milieu, à l'exception de cer¬ tains Proprioni acterium species, qui y développent des colonies typiquement plates et petites, et d*entérocoques, immédiatement reconnaissables à leurs colonies petites, bombées et rouge foncé. Parmi les germes à gram négatifs, les espèces banales de Neisseria et d*Haemophilus forment des colonies rouges à cause de la transformation en acide du saccharose et, éventuellement du lactose. N'ayant pas la faculté de s'attaquer à l'un ou l'autre des ces deux sucres, les Neisseria pathogènes développent des colonies incolores, translucides et galbées, tandis que les dif¬ férents biotypes de Haemophilus influenzae forment des colonies incolores, translucides et plates. En poussant plus rapidement, les entérobactêries et les bâtonnets à gram négatifs, oxydase positifs, développent des colonies nettement plus grandes et opaques et qui sont blanches ou rouges suivant la formation ou non d'acide. Quand on désire empêcher la croissance de Proprionibac¬ terium species et d'entérocoques, on peut remplacer la clindamycine par du cristal-violet à raison de i milli¬ litre d'une solution à 0,1 pour cent par litre de milieu. On peut encore incorporer un sel ferrique dans ce milieu au cas où i 1 est souhaitable de mettre en évidence une éventuelle formation de hydroxyde de soufre. Le troisième compartiment contient un milieu généralement appelé "gélose chocolat", préparé à partir du milieu de base gélose selon Thayer-Marti à raison de 40 gram pour un litre. Après stérilisation on y ajoute du sang défibri- né lysê à raison de 4 à 6 pour cent, puis le milieu est rechauffé à 80°C pendant 30 minutes en agitant régulière¬ ment la bouteille. Par la suite on y ajoute encore une quantité adéquate d'un mélange enrichissant, 10 ml de VITQX par exemple, et 10 milligramme de yancomycine, 2'500 unités internationales de polymyxine-B, ainsi que 5 milligramme de triméthoprim par litre. Ainsi composé ce milieu ne permet: la croissance que de Neisseria méningitidis, Neisseria Go- norrhoeae, Candida et Saccharomyces species, Campylobacter species et Bacillus species, notamment Bacillus fusiformis, suivant la composition de l'atmosphère de la culture lors de l'incubation. Ainsi, i 1 ne peut y avoir croissance que de Neisseria pathogènes, de Candida et Saccharomyces spe¬ cies et de certaines souches de Bacillus fusiformis quand l'incubation a lieu dans l'air enrichi de 5 à 7 pour cent de dioxyde de carbone, tandis que l'on n'obtient la crois¬ sance que de levures et de bacilles anaêrobies, y compris Campylobacter species, quand la culture est incubée en atmosphère anaérobie.
Ces trois milieux, contenus dans une même boîte, permettent d'identifier directement dans les cultures oto-rhino-laryn- gologiques sur la gélose au sang à la colimycine Strepto- coccus pyogenes, colonies grises bèta-hémolytiques, Strepto- coccus pneumoniae, colonies translucides alpha-hémolytiques, Neisseria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, colonies galbées, dépolies, et les Corynebacterie species pathogènes, colonies blanchâtres, généralement plus ou moins nettement bèta-hémolytiques, ainsi que les Staphylococcus species, en particulier Staphylococcus aureus, assez grandes colonies bèta-hémolytiques plates et grises, ou galbées et jaunâtres; -sur le milieu au sérum à la clindamycine on reconnaît Neis¬ seria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, colonies gai- bées, translucides et incolores, Haemophilus influenzae, colonies plates, transparantes et incolores, ainsi que Hae¬ mophilus para-influenzae, colonies plates, transparantes et rouges, tandis que les Neisseria banals se présentent sous forme de colonies galbées, translucides et rouges; -sur le milieu chocolat-VCT on peut trouver les colonies de Neisseria méningitidis et Neisseria gonorrhoeae, transpa¬ rantes, de levures, blanches et échancrées, ainsi que de Bacillus fusiformis, opaques et brunâtres.
Inoculés avec des prélèvement gynécologiques ou urologiques on peut directement identifier sur la gélose au sang à la colimycine Streptococcus agalacteae. colonies blanchâtres, bèta-hémolytiques, Streptococcus faecalis, colonies galbées, grises, non hémolytiques, Gardnerella vaginalis, petites co¬ lonies plates, translucides, hémolytiques ou non, suivant l'origine humain ou ovin du sang incorporé dans le milieu, les Corynebacterium species, y compris Listeria monocyto- genes, colonies blanches ou grisâtres, généralement plus ou moins nettement hémolytiques quand il s'agit d'espèces patho gènes, les Neisseria pathogènes, colonies galbées, trans¬ lucides, et les Staphylococcus species, notamment Staphy-- lococcus aureus, assez grandes colonies bèta-hémolytiques, plates et grises, ou galbées et jaunâtres, tandis que les Lactobaci1lus species et Proprionibacterium species se pré¬ sentent sous forme de petites colonies généralement alpha- hémolytiques, et les Proteus species, rarement présentes, de grandes colonies blanches-grisâtres;
-sur le milieu au sérum à la clindamycine on reconnaît les colonies des bâtonnets à gram négatifs, grandes, galbées, et rouge lorsqu'ils sont capables de former de l'acide à partir du saccharose et/ou du lactose quand ce dernier sucre a été incorporé dans le milieu, ou blanchâtres en absence de formation d'acide, des Neisseria species patho¬ gènes, galbées, incolores et translucides, de Streptococ¬ cus faecalis, petites, bombées et rouge foncé et bien que peu fréquemment, de Proprionibacterium species. petites, plates et rouge ou blanchâtres et translucides, -sur le milieu chocolat-VCT on peut trouver les colonies des Neisseria species pathogènes, Neisseria gonorrhoeae en particulier, galbées et transparantes, ainsi que de levures, notamment Candida albicans, blanches et échan- crées.
Les germes recherchés sont ainsi répartis sur les trois milieux en catégories distinctes et, de par les aspects que présentent leurs colonies sur le milieu particulier, y sont directement identifiables.
Sans modifier l'électivité des milieux on peut remplacer dans la gélose au sang la colimycine par de la polymyxine B à raison de 2'500 unités internationales par litre, dans la gélose au sérum la clindamycine par de la Hncomycine à raison de 1 milligramme par litre, ou par un millilitre par litre d'une solution à 0,1 pour cent de crystal-violet, et dans le milieu chocolat-VCT le triméthoprim par de la néomycine à raison de 2 mg par litre.
Exceptionnellement certaines Pseudomonas species résis¬ tantes à la colimycine peuvent se développer sur la gélose à la colimycine. Toutefois, elles produisent de 1 'oxydase, ce qui permet de les différentier des Proteus species, qui sont oxydase négatives, en étalant un peu d'une colonie sur un morceau de papier imbibé du réactif ad hoc. Si l'on désire empêcher les membres col imycine-résistants de ces deux familles de se développer sur ce milieu, il suffit d'ajouter en plus de la colimycine de l'acide nali- dixique à raison de 15 mg par litre. On n'obtiendra alors que la croissance de germes à gram positifs dans ce com¬ partiment.
•Deuxième exemple: les germes généralement responsables d'infections urinaires sont les Enterobacteriaceae, les Pseudomonas species, les différentes espèces de staphylo¬ coque et les entérocoques. Dans des cas particuliers on cherche, outre les germes cités, le Neisseria gonorrhoeae, les Candida species et les levures pathogènes. Il existe plusieurs milieux pour l 'isolement des Enterobacteriaceae et des Pseudomonas species. Toutefois, nos recherches ont montré que le milieu à la clindamycine de l'exemple pré- cèdent, avec ou sans sérum, convient particulièrement bien ceci d'autant plus qu'on peut lui additionner d'un sel ferrique pour la mise en évidence de formation de hydr- oxyde de soufre, ce qui permet d'identifier directement Proteus vulgaris et Proteus mirabilis.
Puisque l'acidification ou non des colonies par la dégra¬ dation du seul lactose, mise en évidence par le virement de l'indicateur, est un critère généralement admis, il suffit d'incorporer uniquement du lactose à raison de 10 gram par litre et de faire abstention du saccharose. Pour la mise en évidence d'une éventuelle formation de hydr- oxyde de soufre on peut ajouter 1 gram de citrate de fer ainsi que 6 gram de thiosulphate de sodium par litre, et ajuster le pH à 7,2. La nystatine n'est supprimée et le sérum n'est ajouté que si le milieu devra également ser¬ vir à la mise en évidence des levures et Candida species, et de Neisseria gonorrhoeae, respectivement. L'avantage de la clindamycine par rapport au méthylviolet est que la première ne gène en rien la croissance desdits germes. Ce milieu est alors coulé dans le grand compartiment d'une boîte comportant un grand et deux petits compartiments. L'un des deux petits compartiments reçoit soit le milieu dit mannitol-salt agar destiné à mettre en évidence les Staphylococcus species, soit la gélose au sang à la coli¬ mycine du premier exemple, avec de l'acide nalidixique et de la nystatine ou de 1 'amphotéricine-B, afin de mettre en évidence non seulement les Staphylococcus species, mais aussi les Streptococcus species, y compris les bèta-hémoly¬ tiques et les entérocoques, ainsi que les Neisseria patho¬ gènes. Quand ce compartiment est muni du manitol-salt agar, le deuxième compartiment reçoit le milieu selon Slanetz et Bartley, qui permet de mettre sélectivement en évidence les entérocoques. Par contre, si le premier petit compar¬ timent reçoit la gélose au sang citée, le deuxième petit compartiment est rempli d'un milieu pour l'isolement de levures et de Candida species, le milieu de Sabouraud par exemple, ou le milieu chocolat-VCT du premier exemple. On a ainsi dans la même boîte trois milieux qui permettent d'isoler séparément soit les bâtonnets à gram négatifs et les levures et Candida species, les Staphylococcus species, et les entérocoques, respectivement, soit les bâtonnets à gram négatifs, les Neisseria pathogènes et les cocci à gram positifs, y compris- les entérocoques et les strepto¬ coques bèta-hémolytiques, et les levures et Candida spe¬ cies, respectivement.
Les deux combinaisons préférées sont:
1- dans le grand compartiment le milieu à la clindamycine, comprennant lactose, sel ferrique, thiosulphate de sodium, indicateur de pH, rouge de phénol* par exemple, avec ou sans sérum sanguin, et dans les petits compartiments le milieu selon Slanetz et Bartley, et le mannitol-sait agar, respectivement;
2- dans le grand compartiment le milieu à la clindamycine, comprennant lactose, sel ferrique, thiosulphate de sodium, indicateur de pH, rouge de phénol par exemple, et sérum sanguin, et dans les petits compartiments le milieu dit chocolat-VCT à la vancomycine, colimycine et triméthoprim, additionné de nystatine, et la gélose au sang à la coli¬ mycine et l'acide nalidixique, également additionnée de nystatine, respectivement. Cette dernière combinaison peut également servir aux cultures urologiques et gyné¬ cologiques.
Les germes responsables de troubles de la voie digestive se comptent parmi les bâtonnets à gram négatifs, oxydase négatifs, soit les salmonelles, shigelles, Yersinia enté- rocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, et les souches entérotoxiques et entéropathogènes d'Escherichia coli, les bâtonnets à gram négatifs, oxydase positifs, soit Aeromonas hydrophila, Pleisiomonas shigel loides, Pseudo¬ monas aeruginosa, Vibrio choiera et Vibrio parahaemoly- ticus, plusieures Candida species, notamment Candida al - bicans, plusieures espèces de moisissures, ainsi que les espèces de staphylocoques productrices d'alpha-toxine. Parce qu'aucun des bâtonnets à gram négatifs cités n'est en mesure de former de l'acide à partir du lactose pen- dant les premières 24 heures d'incubation, ledit "sucre est généralement incorporé dans les milieux destinés à isoler les bâtonnets à gram négatifs cités. Afin d'em¬ pêcher la croissance de germes à gram positifs, on les additionne de sels biliaires et de méthyl-violet (violet de gentiane). Toutefois, certains des bâtonnets à gram négatifs, notamment les shigelles, y sont également sen¬ sibles. Or, ces derniers se développent aussi bien que les autres germes à gram négatifs sur le milieu que nous avons inventé.
Dans l'exemple précédent l'éventuelle croissance de l'en- térocoque sur notre milieu à la clyndamycine constitue un avantage: l'apect typique de ses colonies permet d'iden¬ tifier immédiatement ce pathogène des voies urinaires. Par contre, sa mise en évidence dans les cultures de sel¬ les n'a aucun intérêt du fait qu'il appartient à la flore physiologique de l'intestin. Nous avons alors testé dif¬ férents antibiotiques et chimiothérapeutiques suscepti¬ bles d'en empêcher électivement la croissance, pour con¬ stater qu'il suffit d'additionner le milieu d'un macro¬ lide, de 1 'érythromycine à raison de 4 milligrammes par litre par exemple. Adapté aux cultures de selles, notre milieu contient donc, outre la clindamycine ou la Hnco¬ mycine, du lactose, de 1 'érythromycine ou de la rovamy-" cine, et un sel ferrique, ce dernier pour que les colo¬ nies de salmonelles se font remarquer par leur noircis¬ sement dû à l'interaction entre le fer et le hydroxyde de soufre formé par la majorité des espèces de salmonel¬ les. Ce milieu est coulé dans le grand compartiment de -la boîte de pétri divisé en un grand et deux petits com¬ partiments. Les deux petits reçoivent respectivement le mannitol-salt agar, pour la mise en évidence de staphylo¬ coques mannitol positifs, et le milieu selon Sabouraud, ce dernier rendu électif à l'égard des mycoses, Candida compris, par l'adjonction d'un ou plusieures produits à action antibactérienne. On a ainsi un ensemble de milieux qui permet d'isoler et d'identifier les germes responsa¬ bles de troubles de la voie digestive. Comme déjà dit, les exemples donnés ne sont pas limitatifs: les éléments qui constituent cette invention se prêtent à des variants, comme le nombre de secteurs grands et petits des supports pour milieux de culture, qui peut être plus grand que mentionné, par exemple suivant les figures 7 et 8 . la forme des boîtes de pétri, qui peut être rectangu¬ laire, plutôt que carrée ou ronde, la conception du double¬ ment des cloisons, qui est applicable à tous les supports pour milieux de culture ayant au moins deux secteurs, les combinaisons de milieux électifs et sélectifs, qui peuvent être choisies différemment en fonction de la nature de 1 ' in- oculum, ainsi que le volume et la concentration de leurs constituants, qui peuvent variés suivant l'origine des pro¬ duits, le degré d'électivité et l'intensité de réaction que l'on désire obtenir. Ainsi, le bleu de chine convient mieux aux daltoniens comme indicateur d'acidité.

Claims

REVENDICATIONS
l: support pour milieux de culture, divisé en au moins deux secteurs délimités par des cloisons, caractérisé en ce que les cloisons adjointes sont séparées par une fente.
2: support pour milieu de culture, caractérisé en ce qu'il consiste du fond d'une boîte à couvercle divisé en au moins trois secteurs adjoints, qui n'ont pas tous les mêmes di¬ mensions.
3: support pour milieux de culture selon les revendications i et/ou _______ caractérisé en ce que les secteurs sont sé¬ parés les uns des autres par des cloisons doubles dont les faces intérieures opposées sont pontées de façon à ce que la fente qui les sépare est close sur toute sa longueur.
4: support pour milieux de culture selon une ou plusieures des revendications précédentes, caractérisé en ce que les secteurs sont munis de milieux de culture microbiologiques électifs et/ou sélectifs.
5: support pour milieux de culture selon la revendication _______ caractérisé en ce qu'il est muni d'une combinaison de milieux de culture comprennant un milieu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs, ainsi qu'un milieu électif à l'égard de plusieurs germes à gram positifs, permettant la croissance des staphylocoques, des streptocoques et de Listeria monocytogenes en particulier, et un milieu sélec¬ tif à l'égard des espèces pathogènes de Neisseriaceae et/ou des germes levuriformes.
6: support pour milieux de culture selon la revendication ______ _ caractérisé en ce qu'il est muni d'une combinaison de milieux de culture comprennant un milieu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs, ainsi qu'un milieu électif à l'égard des staphylocoques, et électif ou non à l'égard des streptocoques et/ou des Neisseriaceae species, et/ou des germes levuriformes, et un milieu sélectif à l'égard des entérocoques.
7: support pour milieux de culture selon la revendication
4 . caractérisé en ce qu'il est muni d'une combinaison de milieux de culture comprennant un milieu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs, ainsi qu'un milieu électif à l'égard des staphylocoques et électif ou non à l'égard des streptocoques et/ou de Listeria monocytogenes, et un milieu sélectif à l'égard des mycoses, y compris les Can¬ dida et Saccharomyces species.
8: support pour milieux de culture selon une des revendi¬ cations 4 à 7 comprennant un grand secteur muni d'un milieu de culture enrichi ou non de sérum sanguin et/ou d'autres facteurs promoteurs de croissance bactérienne, caractérisé en ce qu'il est rendu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs par l'adjonction de clindamycine ou de Hncomycine et/ou un ou plusieurs autre(s) antibio¬ tiques et/ou chimiothérapeutiques.
9: support pour milieux de culture selon une des revendi¬ cations 4 à 7 comprennant un grand secteur muni d'un milieu de culture électif à l'égard des bactéries à gram négatifs, enrichi ou non de sérum sanguin et/ou d'autres facteurs promoteurs de croissance bactérienne, et/ou une ou plusieures substances inhibant la croissance d'entéro¬ coques et/ou de mycoses, y compris les champignons et les Candida et Saccharomyces species, caractérisé en ce qu'il contient en plus de la clindamycine ou de la Hncomycine, et/ou un macrolide, du saccharose et/ou du lactose, ou du mannitol et un colorant indicateur d'acidité.
10: support pour milieux de culture selon une des revendi¬ cations 4 à 7 comprennant un grand secteur muni d'un milieu de culture enrichi ou non de sérum sanguin et/ou d'autres facteurs promoteurs de croissance bactérienne et/ou une ou plusieures substances inhibant la croissance de mycoses, y compris les Candida et Saccharomyces spe- cies et/ou de la L-lysine, caractérisé en ce qu'il con¬ tient en plus un produit sulfuré et un sel ferrique, con¬ venables pour la mise en évidence d'une éventuelle forma¬ tion d'hydroxyde de soufre, un colorant indicateur de pH, du lactose et/ou du saccharose, ou du mannitol et qu'il est rendu électif à l'égard des bactéries à gram négatifs par l'adjonction de clindamycine ou de Hncomycine et/ou d'une ou plusieures autres antibiotiques, ou du cristal- violet.
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