UA57689C2 - Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form - Google Patents
Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form Download PDFInfo
- Publication number
- UA57689C2 UA57689C2 UA2003010137A UA2003010137A UA57689C2 UA 57689 C2 UA57689 C2 UA 57689C2 UA 2003010137 A UA2003010137 A UA 2003010137A UA 2003010137 A UA2003010137 A UA 2003010137A UA 57689 C2 UA57689 C2 UA 57689C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- insulin
- substance
- solution
- preparation
- proinsulin
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 232
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 title claims abstract description 113
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 113
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 title claims abstract description 111
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 10
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 title abstract 2
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 title abstract 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 42
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 30
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 6
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 16
- 108010026951 Short-Acting Insulin Proteins 0.000 claims description 13
- 229940123958 Short-acting insulin Drugs 0.000 claims description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 15
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002152 aqueous-organic solution Substances 0.000 abstract description 3
- BIGPRXCJEDHCLP-UHFFFAOYSA-N ammonium bisulfate Chemical compound [NH4+].OS([O-])(=O)=O BIGPRXCJEDHCLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 abstract 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 108700025187 desamido (A21)- insulin Proteins 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 108700022849 desamido- insulin Proteins 0.000 description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-fluorophenyl)methyl]piperazine Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1CN1CCNCC1 OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- -1 isotonic Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003421 short acting drug Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940074545 sodium dihydrogen phosphate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Abstract
Description
Опис винаходуDescription of the invention
Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної промисловості і може використовуватися у виробництві 2 монокомпонентних препаратів інсулінів короткої дії на основі свинячої субстанції інсуліну.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in the production of 2 monocomponent preparations of short-acting insulins based on porcine insulin substance.
Відомий спосіб одержання нейтральних препаратів на основі свинячого інсуліну, який включає розчинення кристалів субстанції інсуліну в розбавленій кислоті за рН 3, стерилізацію отриманого розчину фільтрацією та змішування його з розчинами консерванту, ізотонічного та буферного агента, при наявності останнього.There is a known method of obtaining neutral drugs based on porcine insulin, which includes dissolving crystals of the insulin substance in dilute acid at pH 3, sterilizing the resulting solution by filtration, and mixing it with solutions of a preservative, isotonic, and buffer agent, in the presence of the latter.
Отриманий розчин поступово нейтралізують розбавленим лугом та коректують його активність добавкою 70 стерильної води |СаїЇепісв ої Іпзціп Ргерагайопв, У. Вгапде еї. аїЇ., розділ З, стор.27)|. До недоліків цього способу відноситься невисока якість одержуваних препаратів, завдяки використанню недостатньо очищеної субстанції свинячого інсуліну, та технологічна складність процесу виробництва, який при відсутності у рецептурі препарату буферного агента вимагає обов'язкової наявності трьох виробничих потоків: спочатку необхідно розчинити у воді ізотонічний агент та консервант і додати, перемішуючи, МасоН до рН 9,0. Потім 12 приготувати розчин субстанції інсуліну в кислоті за рН 3,0-3,3. Третій виробничий потік - то розчин Ммаон, який залишився згідно з рецептурою, в воді. За способом приготування препарату інсуліну короткої дії, можливого на практиці, розчини другого і третього потоків необхідно додавати у розчин першого потоку одночасно, не допускаючи зниження рН нижче 7,1. Інакше препарат інсуліну отримати неможливо, враховуючи властивості субстанції інсуліну, ніпагіну та інших складових компонентів.The resulting solution is gradually neutralized with diluted alkali and its activity is corrected with the addition of 70% sterile water. aii., section C, p. 27)|. The disadvantages of this method include the low quality of the drugs obtained, due to the use of an insufficiently purified substance of porcine insulin, and the technological complexity of the production process, which, in the absence of a buffer agent in the formulation of the drug, requires the mandatory presence of three production flows: first, it is necessary to dissolve an isotonic agent and a preservative in water and add, stirring, MasoN to pH 9.0. Then 12 prepare a solution of insulin substance in acid at pH 3.0-3.3. The third production flow is the solution of Mmaon, which remained according to the recipe, in water. According to the method of preparation of the short-acting insulin preparation, which is possible in practice, the solutions of the second and third streams must be added to the solution of the first stream at the same time, not allowing the pH to drop below 7.1. Otherwise, it is impossible to obtain the insulin preparation, taking into account the properties of the insulin substance, nipagin and other components.
Більш досконалим є спосіб одержання препарату інсуліну короткої дії за деклараційним патентом України на винахід Мо33796 А, кл. АЄ1КЗ38/28, авторів Лазарева О.П., Староверова С.М. та інших, взятий нами за прототип.More perfect is the method of obtaining a short-acting insulin preparation according to the declaratory patent of Ukraine for the invention Mo33796 A, cl. АЭ1КЗ38/28, authors O.P. Lazareva, S.M. Staroverova. and others, taken by us as a prototype.
Згідно з цим патентом високоочищену субстанцію свинячого інсуліну одержують водно-спиртовою екстракцією підшлункової залози тварин, концентрують та виділяють субстанцію з екстракту іонообмінною хроматографією, яку проводять 0,1-1,0М бікарбонатним буфером з рН 6,5-9,0, потім хроматографічне відокремлюють від інсуліну с проінсулін та інші баластні білки на сорбенті С16, використовуючи при цьому як елюент водні розчини з вмістом (3 ізопропілового спирту 10-5095 і оцтової кислоти 0,1-5,095, очистку від дезамідованих форм інсуліну та інших інсулінів проводять у градієнті водно-органічного елюенту з вмістом оцтової кислоти 0,2-0,895о та в кінці кожного етапу проводять кристалізацію субстанції інсуліну, потім одержану високоочищену субстанцію свинячого інсуліну розчиняють порціями в 0,005-0,05М оцтовій кислоті і змішують поступово з розчинами гліцерину, о консерванту (наприклад, ніпагіну) та з розчином натрію гідроксиду. Препарат інсуліну короткої дії, який с одержують за способом-прототипом, має наступний склад, г/л: субстанція свинячого інсуліну 1,44-1,65; кислота оцтова 0,8-1,2; натрію гідроксид 0,35-1,1; гліцерин 10-20; ніпагін або інший консервант 0,085-1,4; вода ке, високоочищена - до 1л. ї-According to this patent, a highly purified substance of porcine insulin is obtained by water-alcohol extraction of the pancreas of animals, the substance is concentrated and isolated from the extract by ion-exchange chromatography, which is carried out with a 0.1-1.0M bicarbonate buffer with a pH of 6.5-9.0, then chromatographically separated from insulin with proinsulin and other ballast proteins on C16 sorbent, while using as an eluent aqueous solutions containing (3 isopropyl alcohol 10-5095 and acetic acid 0.1-5.095, purification from deamidated forms of insulin and other insulins is carried out in a gradient of water- of an organic eluent with an acetic acid content of 0.2-0.895% and at the end of each stage, crystallization of the insulin substance is carried out, then the obtained highly purified substance of porcine insulin is dissolved in portions in 0.005-0.05M acetic acid and mixed gradually with solutions of glycerol, a preservative (for example, nipagin) and with sodium hydroxide solution. Short-acting insulin preparation, which is obtained according to the prototype method, has the following composition, g/l: pig insulin substance 1.44-1.65; acetic acid 0.8-1.2; sodium hydroxide 0.35-1.1; glycerin 10-20; nipagin or other preservative 0.085-1.4; tap water, highly purified - up to 1 l. uh-
Недоліками цього способу являються використання для концентрації та виділення субстанції інсуліну |онообмінної хроматографії на колонці з сульфокатіонітом на першому етапі та такої рухомої фази, як о ізопропіловий спирт у кількості 10-5095 та оцтова кислота у кількості 0,1-5,096, на другому етапі одержання субстанції інсуліну. Це призводить до етерифікації та дезамідації інсуліну при сорбції спиртових екстрактів на сульфокатіоніті та до великих втрат інсуліну (до 2095) внаслідок блокування поверхні сульфокатіонітного « сорбенту ліпідами, фосфоліпідами та ліпід-протеїновими комплексами. Використання при очистці від проінсуліну З та інших баластних білків на силікагелі С 16 вказаної рухомої фази, яка є низькоселективною щодо них, також с призводить до втрат інсуліну (15-2095) та до низьких питомих навантажень на колонку (38,2г на 1л сорбенту).The disadvantages of this method are the use of ion exchange chromatography on a column with sulfocation in the first stage and such a mobile phase as isopropyl alcohol in the amount of 10-5095 and acetic acid in the amount of 0.1-5.096 for the concentration and isolation of the insulin substance in the second stage of preparation insulin substance. This leads to esterification and deamidation of insulin during the sorption of alcohol extracts on sulfocation and to large losses of insulin (up to 2095) due to blocking of the surface of the sulfocation sorbent by lipids, phospholipids, and lipid-protein complexes. In the purification of proinsulin C and other ballast proteins on silica gel C 16, the use of the indicated mobile phase, which is low selective for them, also leads to insulin losses (15-2095) and to low specific loads on the column (38.2 g per 1 liter of sorbent) .
Із» Низькі питомі навантаження на колонку характерні для способу-прототипу і при очистці від інсулінспоріднених домішок (13,8г). Це призводить до недостатньої ефективності виробництва. Окрім того, такий спосіб одержання препарату інсуліну короткої дії відзначається досить складною технологією.From" Low specific loads on the column are typical for the prototype method and when cleaning from insulin-related impurities (13.8g). This leads to insufficient production efficiency. In addition, this method of obtaining a short-acting insulin preparation is characterized by a rather complex technology.
Завданням винаходу, який заявляється, є поліпшення якості монокомпонентних препаратів інсуліну на основі і-й одержуваної свинячої субстанції, спрощення технології та збільшення ефективності виробництва. -І Поставлене завдання вирішується тим, що в способі одержання препарату інсуліну короткої дії, що включає водно-спиртову екстракцію підшлункової залози свині, концентрацію та виділення субстанції інсуліну з б екстракту, її хроматографічну очистку від проінсуліну, інших баластних білків та від інсулінспоріднених о 20 домішок, кристалізацію, приготування розчину одержаної субстанції інсуліну в кислоті, приготування водних розчинів інших компонентів та їх змішування, згідно з винаходом, хроматографічну очистку субстанції свинячого с інсуліну проводять на обернено-фазових силікагелях С8 або С18, як елюент на стадії очистки від проінсуліну та інших баластних білків використовують водно-органічний розчин із значенням рН не більше 3,5, який містить 12-21965, переважно 18-2095, ізопропанолу або пропанолу та не більше 0,25М, переважно 0,01 - О,06М, ацетату 29 натрію, ацетату амонію, сульфату амонію або сульфату натрію, стадію очистки від інсулінспоріднених домішокThe object of the invention, which is claimed, is to improve the quality of monocomponent insulin preparations based on the obtained pig substance, to simplify the technology and increase the efficiency of production. -I The task is solved by the fact that in the method of obtaining a short-acting insulin preparation, which includes water-alcohol extraction of the pancreas of a pig, the concentration and isolation of the insulin substance from b extract, its chromatographic purification from proinsulin, other ballast proteins and from insulin-related impurities o 20 . proteins, use an aqueous-organic solution with a pH value of no more than 3.5, which contains 12-21965, preferably 18-2095, isopropanol or propanol and no more than 0.25M, preferably 0.01 - 0.06M, sodium acetate 29, acetate ammonium, ammonium sulfate or sodium sulfate, the stage of purification from insulin-related impurities
ГФ) проводять в ізократичному режимі або у градієнті органічного модифікатора, а одержану субстанцію інсуліну суспендують у воді, доводять рН суспензії кислотою до 3,1-3,2, одержують розчин інсуліну, готують водний о розчин буферного та ізотонічних агентів і консервантів та, перемішуючи, доводять рН розчину лугом до 7,6-7,8 і додають перший розчин до другого. 60 Для вирішення поставленого завдання автори відмовляються від використання сульфокатіоніту і на першому етапі для концентрації і виділення субстанції інсуліну спиртові екстракти упарюють до вмісту етанолу менше 1,095 об., відокремлюють від ліпідів фільтрацією та висалюють субстанцію інсуліну за рН 2,0-3,3 та концентрації хлориду натрію, хлориду амонію, сульфату натрію або сульфату амонію від 2,0 до З,Омоль/л. На другому етапі очистку від проінсуліну, білків і поліпептидів панкреатичного походження, полімерних білків та бо дігментів проводять на обернено-фазових силікагелях С8 або С18 з розміром часток не більше 5Омкм,HF) is carried out in an isocratic mode or in a gradient of an organic modifier, and the resulting insulin substance is suspended in water, the pH of the suspension is adjusted to 3.1-3.2 with an acid, an insulin solution is obtained, an aqueous solution of buffer and isotonic agents and preservatives is prepared and, stirring , adjust the pH of the solution with alkali to 7.6-7.8 and add the first solution to the second. 60 To solve the task, the authors refuse to use sulfocation and at the first stage, for the concentration and isolation of the insulin substance, alcohol extracts are evaporated to an ethanol content of less than 1.095 vol., separated from lipids by filtration, and the insulin substance is salted out at a pH of 2.0-3.3 and a concentration of of sodium chloride, ammonium chloride, sodium sulfate or ammonium sulfate from 2.0 to 3.Omol/l. At the second stage, purification from proinsulin, proteins and polypeptides of pancreatic origin, polymeric proteins and pigments is carried out on reversed-phase silica gels C8 or C18 with a particle size of no more than 5 µm,
переважно 15-20мкм, та з розміром пор не менше УОнм, переважно 12-15нм, а в якості рухомої фази використовують водно-органічний буферний розчин зі значенням рН не більше 3,5, який містить 12-2190, переважно 18-2095, ізопропанолу або пропанолу та не більше 0,25М, переважно 0,01-0,06М, ацетату натрію, ацетату амонію, сульфату амонію або сульфату натрію. Питоме навантаження на сорбент складає не більшеpreferably 15-20 μm, and with a pore size of at least 12-15 nm, preferably 12-15 nm, and as a mobile phase, an aqueous-organic buffer solution with a pH value of no more than 3.5 is used, which contains 12-2190, preferably 18-2095, of isopropanol or propanol and no more than 0.25M, preferably 0.01-0.06M, sodium acetate, ammonium acetate, ammonium sulfate or sodium sulfate. The specific load on the sorbent is no more
ЗООг/л. На третьому етапі очистку від інсулінспоріднених домішок проводять на обернено-фазових силікагеляхZOOg/l At the third stage, purification from insulin-related impurities is carried out on reversed-phase silica gels
С8 або С18 з розміром часток не більше 5О0мкм, переважно 10-15мкм, та з розміром пор не менше Унм, переважно 12-15нм, а в якості рухомої фази використовують водно-органічний розчин, який містить 5-4090 органічного модифікатора (пропанолу, ізопропанолу, етанолу або ацетонітрилу) і кислоту оцтову з 70 концентрацією не більше 0,5М, переважно 0,2-0,3М. Питоме навантаження на сорбент складає не більше Зог/л.C8 or C18 with a particle size of no more than 5O0μm, preferably 10-15μm, and with a pore size of not less than Unm, preferably 12-15nm, and as a mobile phase an aqueous-organic solution containing 5-4090 of an organic modifier (propanol, isopropanol , ethanol or acetonitrile) and acetic acid with a concentration of no more than 0.5M, preferably 0.2-0.3M. The specific load on the sorbent is no more than Zog/l.
Елюцію субстанції інсуліну проводять або в ізократичному режимі, або у градієнті концентрації органічного модифікатора протягом 6-10 об'ємів колонки, а одержану субстанцію інсуліну суспендують у воді, доводять рН суспензії кислотою до 3,1-3,2, одержують розчин інсуліну, готують водний розчин буферного та ізотонічних агентів і консервантів та, перемішуючи, доводять рН розчину лугом до 7,6-7,8, і додають перший розчин до /5 другого.Elution of the insulin substance is carried out either in the isocratic mode or in the gradient of the concentration of the organic modifier during 6-10 column volumes, and the resulting insulin substance is suspended in water, the pH of the suspension is adjusted to 3.1-3.2 with an acid, an insulin solution is obtained, prepared aqueous solution of buffer and isotonic agents and preservatives and, stirring, bring the pH of the solution to 7.6-7.8 with alkali, and add the first solution to /5 of the second.
Вирішення поставленого завдання ілюструється прикладами конкретного виконання.The solution of the given task is illustrated by examples of specific implementation.
Приклад 1Example 1
На першому етапі 38,1кг підшлункових залоз свиней подрібнюють, екстрагують 190,5л 7095 етанолу за рН-З,о (використовують ортофосфорну кислоту) за кімнатної температури протягом 1,5 години. Баластні білки в 2о екстракті осаджують за рН-4,5 та відділяють сепаруванням, освітлений екстракт упарюють на вакуумному роторному плівковому випарнику за температури кипіння 259С до об'єму 22,8бл. Упарений екстракт фільтрують від ліпідів через фільтрувальний картон. В освітлений екстракт для висалювання інсуліну за рН-2,5 додають 3,352кг хлористого натрію. Одержаний висіл відокремлюють від маточного розчину, розчиняють у 0,762л води, очищеної за рН-8,6, та додають для кристалізації 110г хлористого натрію. Отримані кристали субстанції с інсуліну розчиняють в 380 мл води, очищеної за рН-8,6б, та додають для перекристалізації 33,5г хлористого натрію. Одержані кристали відокремлюють від маточного розчину центрифугуванням, одержують 9,525г по о технічній масі (4,762г в перерахунку на суху речовину) субстанції інсуліну-сирцю з вмістом інсуліну 92965.At the first stage, 38.1 kg of pig pancreases are crushed, extracted with 190.5 liters of 7095 ethanol at a pH of 3.0 (orthophosphoric acid is used) at room temperature for 1.5 hours. Ballast proteins in the 2o extract are precipitated at pH-4.5 and separated by separation, the clarified extract is evaporated on a vacuum rotary film evaporator at a boiling temperature of 259C to a volume of 22.8bl. The evaporated extract is filtered from lipids through filter paper. 3.352 kg of sodium chloride is added to the clarified extract for salting out insulin at pH-2.5. The resulting precipitate is separated from the mother liquor, dissolved in 0.762 l of water purified to a pH of 8.6, and 110 g of sodium chloride is added for crystallization. The obtained crystals of the insulin substance are dissolved in 380 ml of water purified to a pH of 8.6b, and 33.5 g of sodium chloride are added for recrystallization. The resulting crystals are separated from the mother liquor by centrifugation, and 9.525 g by technical weight (4.762 g in terms of dry matter) of crude insulin substance with an insulin content of 92965 are obtained.
На другому етапі 9,525г по технічній масі (4,762г в перерахунку на суху речовину) субстанції інсуліну-сирцю розчиняють в 41,0мл буферного розчину А, який містить 0,05М натрію ацетату та 19905 Ге»! ізопропанолу, значення рН доводять до 2,5 розчином соляної кислоти з масовою долею 1095. Одержаний розчин субстанції інсуліну фільтрують через мембранний фільтр з утримуючою здатністю О0,2мкм, одержують 47,62мл со розчину субстанції інсуліну-сирцю. Для очистки від проінсуліну, білків панкреатичного походження, полімерних Ге) білків та пігментів одержаний розчин пропускають зі швидкістю потоку 0,7мл/хв. через хроматографічну колонку діаметром 1 см, висотою 20см, яка заповнена 15,7мл силікагелю С18 (розмір пор 15нм, розмір часток 15мкм). -At the second stage, 9.525 g by technical weight (4.762 g in terms of dry matter) of crude insulin substance is dissolved in 41.0 ml of buffer solution A, which contains 0.05 M sodium acetate and 19905 He»! of isopropanol, the pH value is adjusted to 2.5 with a solution of hydrochloric acid with a mass fraction of 1095. The resulting solution of the insulin substance is filtered through a membrane filter with a retention capacity of 0.2 μm, and 47.62 ml of a solution of the crude insulin substance are obtained. For purification from proinsulin, proteins of pancreatic origin, polymeric Ge) proteins and pigments, the resulting solution is passed at a flow rate of 0.7 ml/min. through a chromatographic column with a diameter of 1 cm and a height of 20 cm, which is filled with 15.7 ml of silica gel C18 (pore size 15 nm, particle size 15 μm). -
Після введення розчину субстанції інсуліну колонку промивають 47,бмл буферного розчину А. Отримують 10Змл ю розчину субстанції інсуліну, який містить 4,526г в перерахунку на суху речовину з вмістом основної речовини 9596 і вмістом проінсуліну З,8р.р.м.After the introduction of the insulin substance solution, the column is washed with 47.bml of buffer solution A. 10.0ml of the insulin substance solution is obtained, which contains 4.526g on a dry basis with a basic substance content of 9596 and a proinsulin content of 3.8ppm.
На третьому етапі до 10З3мл розчину субстанції інсуліну, який одержали на другому етапі, додають Звмл очищеної води, і для очистки інсуліну від інсулінспоріднених домішок одержаний розчин вводять зі швидкістю « потоку бмл/хв. через хроматографічну колонку діаметром 2см, висотою 50см, яка заповнена 157мл силікагелю с С18 (розмір пор 15нм, розмір часток 15мкм). Після введення субстанції інсуліну колонку промивають 149мл й буферного розчину В, який містить 0,25М кислоти оцтової і 1095 ізопропанолу. Елюцію субстанції інсуліну ведуть и? протягом 2,6 години зі швидкістю потоку 8 мл/хв. у лінійному градієнті ізопропанолу від 12 до 1895, для чого змішують буферний розчин В з буферним розчином С, який містить 0,25М кислоти оцтової і 5095 ізопропанолу.At the third stage, 103 ml of the insulin substance solution obtained at the second stage is added to 10 ml of purified water, and to purify insulin from insulin-related impurities, the resulting solution is injected at a flow rate of 1 ml/min. through a chromatographic column with a diameter of 2 cm and a height of 50 cm, which is filled with 157 ml of silica gel with C18 (pore size 15 nm, particle size 15 μm). After the introduction of the insulin substance, the column is washed with 149 ml of buffer solution B, which contains 0.25 M acetic acid and 1095 isopropanol. Elution of the insulin substance is carried out by for 2.6 hours at a flow rate of 8 ml/min. in a linear gradient of isopropanol from 12 to 1895, for which buffer solution B is mixed with buffer solution C, which contains 0.25M acetic acid and 5095 isopropanol.
Регенерацію сорбенту на другому на третьому етапі проводять промиванням буферним розчином В. Елюат, який сл містить інсулін, розбивають на фракції об'ємом 15мл. Фракції аналізують методом високоефективної рідинної хроматографії (методом ВЕРХ) на вміст домішок. За результатами аналізу формують головну фракцію, якаRegeneration of the sorbent in the second and third stages is carried out by washing with buffer solution B. The eluate, which contains insulin, is divided into fractions with a volume of 15 ml. Fractions are analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) for the content of impurities. Based on the results of the analysis, the main faction is formed, which
Ше містить 3,982г субстанції інсуліну (ЗАВОмл елюату з концентрацією інсуліну 10,48мг/мл) наступного складу:It contains 3.982 g of insulin substance (10 ml of eluate with an insulin concentration of 10.48 mg/ml) of the following composition:
Ге»! 98,995 основної речовини, 0,395 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,890 інсулінспоріднених домішок. В розчин головної фракції, перемішуючи, додають 381 мл розчину кислоти лимонної з масовою долею 2,095, 4,19мл розчину цинку бо хлористого з масовою долею 1095. Потім, перемішуючи, в розчин субстанції інсуліну додають розчин гідроокисуGee! 98.995 of the main substance, 0.395 of desamido(A-21) insulin, 0.890 of insulin-related impurities. 381 ml of a solution of citric acid with a mass fraction of 2.095, 4.19 ml of a solution of zinc chloride with a mass fraction of 1095 are added to the solution of the main fraction, while stirring. Then, while stirring, a solution of hydroxide is added to the solution of the insulin substance
Ге) натрію з масовою долею 10,0956 до значення рН-б,6. Розчин перемішують протягом 1,5 години. Потім розчином кислоти соляної з масовою долею 5,0 906 доводять значення рН до 5,9 і продовжують перемішування ще протягом 4,0 годин, після чого одержані кристали субстанції інсуліну відокремлюють від маточного розчину Ццентрифугуванням. Кристали промивають очищеною водою і сушать ліофільне. Одержують 4,149г субстанції інсуліну по технічній масі (3,943г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,895 основної іФ) речовини, 0,495 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,895 інсулінспоріднених домішок, 0О,бр.р.м. проінсуліну. 4,149г ко субстанції свинячого інсуліну, суспендують в 530 мл води та, перемішуючи, доводять рН 1М НОЇ до 3,1-3,2, одержуючи таким чином розчин інсуліну. 4,73г гліцерину, 5,62г натрію дигідрогенфосфату дигідрату, 0,535г бо натрію хлориду, 7,23г м-крезолу розчиняють в 1,875л води, перемішуючи та додаючи 1М Маон до значення рн-7,8. Перемішуючи, додають один розчин до другого, доводять об'єм розчину водою до 2,6б8л, проводять стерилізуючу фільтрацію і розлив в асептичних умовах у флакони або інші користувачі і укупорюють. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 39,8 МО/мл; вміст (А21)дезамідоінсуліну б5 - 0,3870; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,8390о; вміст високомолекулярних білків - 0,1595; осмоляльність - 250тО5моль/кг. При цьому рН препарату, який був одержаний за способом, що заявляється, становить 7,35.Ge) of sodium with a mass fraction of 10.0956 to a value of рН-б.6. The solution is stirred for 1.5 hours. Then, with a solution of hydrochloric acid with a mass fraction of 5.0 906, the pH value is brought to 5.9 and stirring is continued for another 4.0 hours, after which the resulting crystals of the insulin substance are separated from the mother solution by centrifugation. The crystals are washed with purified water and lyophilized. 4.149 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.943 g in terms of dry matter) of the following composition: 98.895 of the main iF) substance, 0.495 of desamido(A-21) insulin, 0.895 of insulin-related impurities, 0O,br.r.m. proinsulin 4.149 g of porcine insulin substance are suspended in 530 ml of water and, while stirring, bring the pH of 1M NOI to 3.1-3.2, thereby obtaining an insulin solution. 4.73 g of glycerin, 5.62 g of sodium dihydrogen phosphate dihydrate, 0.535 g of sodium chloride, and 7.23 g of m-cresol are dissolved in 1.875 l of water, stirring and adding 1 M Mahon to the pH value of 7.8. While stirring, add one solution to the other, bring the volume of the solution to 2.6b8l with water, carry out sterilizing filtration and pour under aseptic conditions into vials or other users and cap. Analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography according to the main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 39.8 IU/ml; the content of (A21) desamidoinsulin b5 - 0.3870; the content of insulin-related impurities - 0.8390o; the content of high molecular weight proteins - 0.1595; osmolality - 250tO5mol/kg. At the same time, the pH of the drug, which was obtained by the claimed method, is 7.35.
Приклад 2Example 2
Процес виділення та очистки субстанції інсуліну, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому та третьому етапах замість ізопропанолу використовують пропанол. Одержують 4,123г субстанції інсуліну по технічній масі (3,р917г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,795 основної речовини, 0,590 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,89о інсулінспоріднених домішок,The process of isolating and purifying the insulin substance, as well as obtaining a short-acting insulin preparation based on it, is conducted similarly to example 1, but in the second and third stages, propanol is used instead of isopropanol. 4.123 g of insulin substance by technical weight (3.917 g in terms of dry matter) of the following composition are obtained: 98.795 of the main substance, 0.590 of desamido (A-21) insulin, 0.89 o of insulin-related impurities,
О,бр.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за головними показниками засвідчує також високу якість препарату: активність - 39,5МО/мл; вміст (А21)дезамідоіїнсуліну - 0,4590; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,7595; вміст /р Високомолекулярних білків - 0,295; осмоляльність - 245тОЗмоль/кг.Oh, br.r.m. proinsulin The analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography, according to the main indicators, also confirms the high quality of the preparation: activity - 39.5 IU/ml; content of (A21)desamidoinsulin - 0.4590; the content of insulin-related impurities - 0.7595; the content of high molecular weight proteins - 0.295; osmolality - 245tOZmol/kg.
Приклад 3.Example 3.
Процес виділення та очистки субстанції інсуліну, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на третьому етапі замість ізопропанолу використовують етанол.The process of isolating and purifying the insulin substance, as well as obtaining a short-acting insulin preparation based on it, is carried out similarly to example 1, but at the third stage, ethanol is used instead of isopropanol.
Одержують 4,0г субстанції інсуліну по технічній масі (3,802г в перерахунку на суху речовину) наступного 7/5 складу: 98,7956 основної речовини, 0,495 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,995 інсулінсцоріднених домішок, 0,Ор.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за головними показниками засвідчує також високу якість препарату: активність - 39,7МоО/мл; вміст (А21)дезамідоіїнсуліну -0,3595; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,8595; вміст високомолекулярних білків - 0,239; осмоляльність - 253тОЗмоль/кг.4.0 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.802 g in terms of dry matter) of the following 7/5 composition: 98.7956 of the main substance, 0.495 of desamido (A-21) insulin, 0.995 of insulin-related impurities, 0.Or.r.m . proinsulin The analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography, according to the main indicators, also confirms the high quality of the preparation: activity - 39.7MoO/ml; content of (A21)desamidoinsulin -0.3595; the content of insulin-related impurities - 0.8595; the content of high molecular weight proteins - 0.239; osmolality - 253tOZmol/kg.
Приклад 4Example 4
Процес виділення та очистки субстанції інсуліну, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на третьому етапі замість лінійного градієнту ізопропанолу використовують ізократичний режим елюції за концентраціїї ізопропанолу 15,595 об. Одержують 4,157г субстанції інсуліну по технічній масі (3,947 г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,795 основної с сов речовини, 0,670 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,795 інсулінспоріднених домішок, 0О,5р.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за і) головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 39,8МО/мл; вміст (А21)дезамідоінсуліну - 0,5595; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,6595; вміст високомолекулярних білків - 0,1495; осмоляльність - 248тО5МмОоЛлЬ/Кг. Ге! зо Приклад 5The process of isolating and purifying the insulin substance, as well as obtaining a short-acting insulin preparation based on it, is carried out similarly to example 1, but at the third stage, instead of a linear isopropanol gradient, an isocratic elution mode is used at an isopropanol concentration of 15.595 vol. 4.157 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.947 g in terms of dry matter) of the following composition: 98.795 of the main substance, 0.670 of desamido(A-21) insulin, 0.795 of insulin-related impurities, 0.5 r.r.m. proinsulin Analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography according to i) main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 39.8 IU/ml; content of (A21)desamidoinsulin - 0.5595; the content of insulin-related impurities - 0.6595; the content of high molecular weight proteins - 0.1495; osmolality - 248tO5MmOoLlL/Kg. Gee! from Example 5
Процес виділення та очистки інсуліну, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі со ведуть аналогічно прикладу 1, але на третьому етапі замість ізопропанолу використовують ацетонітрил. («йThe process of isolating and purifying insulin, as well as obtaining a short-acting insulin preparation based on it, is similar to example 1, but at the third stage, acetonitrile is used instead of isopropanol. ("and
Одержують 4,115г субстанції інсуліну по технічній масі (3,Р909г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,590 основної речовини, 0,895 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,790 інсулінспоріднених домішок, О0,бр.р.м. - проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної ю хроматографії за головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 394Мо/мл; вміст (А21)дезамідо інсуліну - 0,7995; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,7390; вміст високомолекулярних білків -0,295; осмоляльність - 258тО5моль/кг.4.115 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.P909 g in terms of dry matter) of the following composition: 98.590 of the main substance, 0.895 of desamido(A-21) insulin, 0.790 of insulin-related impurities, O0.br.r.m. - proinsulin. The analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography according to the main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 394Mo/ml; content of (A21) desamido insulin - 0.7995; the content of insulin-related impurities - 0.7390; the content of high molecular weight proteins -0.295; osmolality - 258tO5mol/kg.
Приклад 6 «Example 6 "
Процес виділення та очистки субстанції інсуліну ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі з с значення рН підвищують до 4,0. Внаслідок близькості до ізоелектричної точки інсуліну (рі - 5,3) не вдається одержати стабільний розчин його субстанції. Процес припиняють. з Приклад 7The process of isolation and purification of the insulin substance is carried out similarly to example 1, but in the second stage with c, the pH value is increased to 4.0. As a result of proximity to the isoelectric point of insulin (ri - 5.3), it is not possible to obtain a stable solution of its substance. The process is stopped. from Example 7
Процес виділення та очистки ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буферний розчин А з вмістом ізопропанолу 10,09 об. Одержують 3,65г субстанції інсуліну по технічній масі (3,467г в с перерахунку на суху речовину) наступного складу: 97,79 основної речовини, 0,595 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,890 інсулінспоріднених домішок, 15,1р.р.м. проінсуліну. Якість одержаної субстанції інсуліну не дозволяєThe isolation and purification process is carried out similarly to example 1, but at the second stage, buffer solution A with an isopropanol content of 10.09 vol is used. 3.65 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.467 g per dry matter) with the following composition: 97.79 of the main substance, 0.595 of desamido(A-21) insulin, 1.890 of insulin-related impurities, 15.1 r.r.m. proinsulin The quality of the insulin substance obtained does not allow
Ш- використовувати її для приготування препарату інсуліну.Sh- to use it for preparation of insulin preparation.
Ге» Приклад 8Ge" Example 8
Процес виділення та очистки ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буферний со розчин А з вмістом ізопропанолу 22,0956 об. Одержують 4,275г субстанції інсуліну по технічній масі (4,061г вThe isolation and purification process is carried out similarly to example 1, but at the second stage, buffer solution A with an isopropanol content of 22.0956 vol is used. 4.275 g of insulin substance are obtained by technical weight (4.061 g in
Ге) перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,195 основної речовини, 0,695 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,390 інсулінспоріднених домішок, 52,2р.р.м. проінсуліну. Якість одержаної субстанції інсуліну не дозволяє використовувати її для приготування препарату інсуліну.Ge) conversion to dry matter) of the following composition: 98.195 of the main substance, 0.695 of desamido(A-21) insulin, 1.390 of insulin-related impurities, 52.2 r.r.m. proinsulin The quality of the obtained insulin substance does not allow its use for the preparation of an insulin preparation.
Приклад 9Example 9
Процес виділення та очистки ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буфернийThe isolation and purification process is carried out similarly to example 1, but at the second stage, a buffer is used
Ф) розчин А з вмістом ацетату натрію 0,5М . Одержують 3,734г субстанції інсуліну по технічній масі (3,547г в ка перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,295 основної речовини, 0,895 дезамідо(А-21)інсуліну, 1,090 інсулінспоріднених домішок, 12р.р.м. проінсуліну. Якість одержаної субстанції інсуліну не дозволяє бо Використовувати її для приготування препарату інсуліну.F) solution A containing 0.5M sodium acetate. 3.734 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.547 g on a dry matter basis) with the following composition: 98.295 of the main substance, 0.895 of desamido(A-21) insulin, 1.090 of insulin-related impurities, 12 r.r.m. proinsulin The quality of the insulin substance obtained does not allow it to be used for the preparation of an insulin preparation.
Приклад 10Example 10
Процес виділення та очистки, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буферний розчин А з вмістом сульфату амонію 0,01М. Одержують 4,115г субстанції інсуліну по технічній масі (3,924г в перерахунку на суху речовину) б5 наступного складу: 98,7956 основної речовини, 0,590 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,89о інсулінспоріднених домішок,The process of isolation and purification, as well as the preparation of a short-acting insulin preparation based on it, is carried out similarly to example 1, but at the second stage, buffer solution A containing 0.01M ammonium sulfate is used. 4.115 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.924 g in terms of dry matter) b5 of the following composition: 98.7956 of the main substance, 0.590 of desamido (A-21) insulin, 0.89 o of insulin-related impurities,
О,Зр.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 39,3МО/мл; вміст (А21)дезамідоінсуліну - 0,459; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,8390; вміст високомолекулярних білків - 0,2595; осмоляльність - 251тО5моль/кг.O,Zr.r.m. proinsulin The analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography according to the main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 39.3 IU/ml; content of (A21)desamidoinsulin - 0.459; the content of insulin-related impurities - 0.8390; the content of high molecular weight proteins - 0.2595; osmolality - 251tO5mol/kg.
Приклад 11Example 11
Процес виділення та очистки, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буферний розчин А з вмістом сульфату натрію 0,01М. Одержують 4,134г субстанції інсуліну по технічній масі (3,р928г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,895 основної речовини, 0,69о дезамідо(А-21)інсуліну, О0,69о інсулінспоріднених домішок, 7/0 9,4р.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної рідинної хроматографії за головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 394МоО/мл; вміст (А21)дезамідоінсуліну - 0,4890; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,6390; вміст високомолекулярних білків - О0,1595; осмоляльність - 247тОмоль/кг.The process of isolation and purification, as well as the preparation of a short-acting insulin preparation based on it, is carried out similarly to example 1, but at the second stage, buffer solution A with a sodium sulfate content of 0.01M is used. 4.134 g of insulin substance by technical weight (3.928 g in terms of dry matter) of the following composition are obtained: 98.895 of the main substance, 0.69% of desamido(A-21) insulin, O0.69% of insulin-related impurities, 7/0 9.4% .m. proinsulin Analysis of the obtained insulin preparation using analytical high-performance liquid chromatography according to the main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 394MoO/ml; content of (A21)desamidoinsulin - 0.4890; the content of insulin-related impurities - 0.6390; the content of high molecular weight proteins - O0.1595; osmolality - 247tOmol/kg.
Приклад 12Example 12
Процес виділення та очистки, а також одержання препарату інсуліну короткої дії на її основі ведуть аналогічно прикладу 1, але на другому етапі використовують буферний розчин А з вмістом ацетату амонію 0,05М. Одержують 4,145г субстанції інсуліну по технічній масі (3,94г в перерахунку на суху речовину) наступного складу: 98,895 основної речовини, 0,590 дезамідо(А-21)інсуліну, 0,790 інсулінспоріднених домішок,The process of isolation and purification, as well as the preparation of a short-acting insulin preparation based on it, is carried out similarly to example 1, but at the second stage, buffer solution A containing 0.05M ammonium acetate is used. 4.145 g of insulin substance are obtained by technical weight (3.94 g in terms of dry matter) of the following composition: 98.895 of the main substance, 0.590 of desamido (A-21) insulin, 0.790 of insulin-related impurities,
О,7р.р.м. проінсуліну. Аналіз одержаного препарату інсуліну за допомогою аналітичної високоефективної Відинної хроматографії за головними показниками засвідчує високу якість препарату: активність - 39,3МО/мл; вміст (А21)дезамідоінсуліну - 0,4490; вміст інсулінспоріднених домішок - 0,7190; вміст високомолекулярних білків - О0,1895; осмоляльність - 241тО5моль/кг.Oh, 7 r.r.m. proinsulin The analysis of the obtained insulin preparation by means of analytical high-performance single chromatography according to the main indicators confirms the high quality of the preparation: activity - 39.3 IU/ml; content of (A21) desamidoinsulin - 0.4490; the content of insulin-related impurities - 0.7190; the content of high molecular weight proteins - O0.1895; osmolality - 241tO5mol/kg.
Приклад 13Example 13
Процес виділення та очистки субстанції інсуліну ведуть аналогічно прикладу 1, але на третьому етапі сч ов ВИиКОристовують буферні розчини В та С з вмістом кислоти оцтової 1,0М. Спостерігають різкий ріст тиску на хроматографічній колонці внаслідок полімеризації інсуліну. Процес припиняють. і)The process of isolation and purification of the insulin substance is carried out similarly to example 1, but at the third stage of the preparation, buffer solutions B and C containing 1.0M acetic acid are used. A sharp increase in pressure on the chromatographic column due to the polymerization of insulin is observed. The process is stopped. and)
Таким чином, при використанні рішення, що заявляється, вдається одержати субстанцію інсуліну з чистотою краще за 98,795, з вмістом проінсуліну менше 1,Ор.р.м., що забезпечує поліпшення якості препаратів короткої дії на основі цієї субстанції; вихід по інсуліну збільшується на 27-44 95, питомі навантаження на сорбент б зо збільшуються на другому етапі одержання субстанції свинячого інсуліну у 7-8 разів, а на третьому - у 2 рази, що дозволяє збільшити ефективність виробництва препаратів за технологією, що заявляється, приблизно на со 3090; окрім того, заміна трипоточного виробництва-на двохпоточне дозволяє спростити технологію та позбутися «о виконання ряду складних операцій. чаThus, when using the claimed solution, it is possible to obtain an insulin substance with a purity better than 98.795, with a proinsulin content of less than 1.Or.r.m., which ensures an improvement in the quality of short-acting drugs based on this substance; the yield of insulin increases by 27-44 95, the specific loads on the sorbent b z o increase by 7-8 times at the second stage of obtaining the pig insulin substance, and at the third stage - by 2 times, which allows to increase the efficiency of the production of drugs according to the claimed technology, approximately at so 3090; in addition, the replacement of three-flow production with two-flow allows to simplify the technology and get rid of performing a number of complex operations. Cha
ЗоZo
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003010137A UA57689C2 (en) | 2003-01-03 | 2003-01-03 | Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2003010137A UA57689C2 (en) | 2003-01-03 | 2003-01-03 | Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA57689C2 true UA57689C2 (en) | 2006-08-15 |
Family
ID=37503864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2003010137A UA57689C2 (en) | 2003-01-03 | 2003-01-03 | Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA57689C2 (en) |
-
2003
- 2003-01-03 UA UA2003010137A patent/UA57689C2/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5714583A (en) | Factor IX purification methods | |
| DK175251B1 (en) | Pure Preparation of Erythropoietin | |
| KR20180032588A (en) | Novel trypsin isoforms and uses thereof | |
| CN106167522A (en) | A kind of method of extensive isolated and purified teriparatide (Teriparatide) | |
| US8138150B2 (en) | Method for removing endotoxin from proteins | |
| WO2010133071A1 (en) | Highly purified follicle stimulating hormone from urea and method for preparing thereof | |
| CN101798334B (en) | Purification method of human parathyroid hormone (1-34) | |
| US20040102615A1 (en) | Method for isolating and purifying a protein and resulting protein | |
| UA57689C2 (en) | Method for producing substance of insulin suitable for immediate release dosage form | |
| CN105968173B (en) | The purification process of mikafen precursor FR901379 | |
| ES2683518T3 (en) | Extraction process to obtain hCG that has a high biological activity | |
| CN115768789A (en) | Method for obtaining a composition comprising human plasma-derived immunoglobulins M | |
| CN113683663A (en) | Purification method of organism-protected polypeptide crude product | |
| TWI593702B (en) | Purification of cell culture derived alpha1 protease inhibitor | |
| UA57690C2 (en) | Method for producing substance of insulin suitable for delayed release dosage form | |
| RU2252782C2 (en) | Method for production of insulin drug of durable action | |
| WO2019077432A1 (en) | Improved purification method of recombinant pth (1-34) | |
| UA57687C2 (en) | Method for producing porcine insulin substance of high purity | |
| EP1439191B1 (en) | Process for the purification of bacterially expressed proteins | |
| WO1999061474A1 (en) | Purified human activin and process for producing the same | |
| RU2027444C1 (en) | Method of insulin preparing | |
| RU2578414C1 (en) | Method of purifying goserelin | |
| RU2261108C2 (en) | Method for preparing human insulin combined preparation | |
| RU2261107C2 (en) | Method for preparing ready medicinal formulation of insulin with short effect | |
| WO2021017793A1 (en) | Method for preparing chemically synthesized acidic polypeptide |