UA53122A - Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів - Google Patents
Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів Download PDFInfo
- Publication number
- UA53122A UA53122A UA2002032132A UA200232132A UA53122A UA 53122 A UA53122 A UA 53122A UA 2002032132 A UA2002032132 A UA 2002032132A UA 200232132 A UA200232132 A UA 200232132A UA 53122 A UA53122 A UA 53122A
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- lymphocytes
- surface receptors
- cells
- peptide extract
- expression
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 2
- 230000000212 effect on lymphocytes Effects 0.000 claims 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 6
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 2
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 108010037782 cytomedins Proteins 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- HGHOBRRUMWJWCU-FXQIFTODSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-5-[[(2s)-3-carboxy-1-(carboxymethylamino)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O HGHOBRRUMWJWCU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001164 bioregulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 108010094145 epithalamin Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010083475 myelopeptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів включає інкубування in vitro попередньо відмитих лімфоцитів з пептидним екстрактом та оцінку його впливу на лімфоцити. Як пептидний екстракт використовують пептидний екстракт паренхиматозного органа з широким спектром біологічної активності, а вплив оцінюють за зміною характеру експресії поверхневих рецепторів лімфоцитів за допомогою моноклональних антитіл.
Description
Опис винаходу
Винахід відноситься до галузей біології та медицини та може бути використаний для фармакологічного 2 моделювання функціональної активності лімфоцитів периферійної крові.
Поверхневий рецепторний апарат, найбільш поширений у лімфоцитів, (Петров Р.В., Хаитов Р.М,.,
Атауллаханов Р.И. Иммуногенетика и искусственньюе антигень. М.: Медицина, 1983. -- 256 с.| забезпечує необхідний рівень життєдіяльності, можливість відповіді на зовнішні подразники, та в цілому відображає функціональний стан клітини. Зміна кількості та стану поверхневих рецепторів лімфоцитів можлива не тільки під 70 час імунної відповіді, але й може стати результатом впливу різних речовин ендогенного або екзогенного походження (Иммунология / Под ред. У. Пола. -- М., 1987. - т.11.
Відомі способи зміни експресії поверхневих рецепторів лімфоцитів під дією низькомолекулярних пептидних комплексів, таких, як тімалін Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Писарев О.А. Вьіделение из тимуса и изучение природьї фактора, стимулирующего иммуногенез // Докл. АН СССР. -- 1977.-- т.233, Мо 3. -- С. 491 - 494), вілон 12 (Сизоненко В.А., Варфоломеев А.Р. Биорегулирующая терапия при термической травме / Чита: Поиск, 1999. -- 159 с), епіталамін (Загородняя З.Д. Применение цитомединов в акушерско-гинекологической практике // Роль пептидньїх биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза. Л., 1987. -- С. 38 - 39. Загородняя З.Д.
Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза при гестозах препаратами зпифиза // Пептиднье биорегуляторь - цитомединь!. С.-П., 1992. -- 6. 61 - 62).
Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів, що включає інкубування іп мійго попередньо відмитих 0,590 гідролізатом лактальбуміна в розчині Хенкса лімфоцитів з пептидним екстрактом кісткового мозку (мієлопідом) у співвідношенні 40; 80 та 16Омкг на З х 105 лімфоцитів. Інкубування проводили в пластмасових пробірках фірми "РаІсоп" 0,5 годин при 37"С; 0,5 годин при 4"С та 18 годин при 4"С. Після інкубування проби відмивали холодним гідролізатом лактальбуміна і ставили 29 реакцію імунофлюоресценції або розеткоутворювання з мишачими еритроцитами (Т.П. Маркова. Сравнительное « изучение влияния миелопида и тактивина на рецепторь! В-клеток // Иммунология. -- 1995. -- Мо 1.-- С. 59 - 61).
Недоліками існуючого способу є: використання пептидного екстракту, отриманого із кісткового мозку, що потребує різних умов інкубації, що не дає можливості врахування змін функціонального стану клітин, дослідити зміну стану поверхневих рецепторів після дії інших чинників. сч
В основу винаходу поставлено завдання створити спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів Ге! шляхом удосконалення відомого способу, досягти можливості визначення змін функціонального стану лімфоцитів периферійної крові за фізіологічних умов та на фоні дії різних чинників. -
Поставлене завдання вирішують створенням способу моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів, що со включає інкубування іп міго попередньо відмитих лімфоцитів з пептидним екстрактом та оцінку його впливу на
Зо лімфоцити, який відрізняється тим, що згідно винаходу, в якості пептидного екстракту використовують пептидний що екстракт паренхиматозного органу з широким спектром біологічної активності, а вплив оцінюють за зміною характеру експресії поверхневих рецепторів з використанням моноклональних антитіл.
Спосіб, який заявляється, здійснюється слідуючим чиним. З периферійної крові донорів отримували « суспензію лімфоцитів шляхом центрифугування у градієнті густини фікол-триомбраст, з наступним відмиванням З7З то у фосфатно-сольовому буфері. Лімфоцити у кінцевій концентрації 1 - 1,5 х 10б/мл культивували у середовищі с 199 ("Зідта") з 1095 інактивованою телячою сироваткою. Інкубацію клітин з пептидним комплексом нирок в дозі :з» 0,05; 0,12 та О,5мкг/мл протягом 60 хвилин при 377"С проводили безпосередньо з інтактними лімфоцитами або після попередньої інкубації з фізіологічно-активними речовинами. В якості контролю використовували фосфатно-сольовий буфер. Експресію поверхневих рецепторів лімфоцитів оцінювали за допомогою реакцій сл но прямої та непрямої імунофлюоресценції на мікроскопі "Люмам - Р8" за зміною рівня та характеру флюоресценції відповідних антитіл. Підраховували кількість клітин, що світяться, на 200 клітин та визначали у відсотках. (95) Для оцінки рівня експресії рахували загальну кількість клітин, що світяться, та диференціювали ступінь - флюоресценції, виділяючи такі групи: перша група - клітини, у яких відсутня флюоресценція (0 балів); друга група - слабкий ступінь флюоресценції (1 бал); третя група - середній ступінь флюоресценції (2 бали); іме) 50 четверта група - сильний ступінь флюоресценції (З бали) |Современнье проблемь! ревматологии: Науч. обзор /
Кз Под ред. В.А. Насоновой. -- М., 1974). За відсутність флюоресценції приймали наявність власної флюоресценції (дуже слабке світіння). Зміну функціональної активності клітин оцінювали шляхом визначення типів перегрупувань рецепторів у площині мембрани. Низький рівень функціональної активності визначається дифузним типом світіння, коли рецептори рівномірно розподілені у площині мембрани. Підвищення функціональної активності реєструється, коли рецептори перерозподіляються, формуючи кепи (у вигляді в. "шапочки"), кластери (групи рецепторів) та петчі (у вигляді плям) |Иммунология / Под ред. У. Пола. -- М,., 1987. -- т. 1).
Використання запропонованого способу показало, що пептидний комплекс, отриманий з кіркової речовини нирок, впливає на рецепторний апарат переважно Т-клітин (СОЗ3, СО4, СО8) та НІ А-Ог, що супроводжується бо дозозалежним підсиленням їх експресії та зміною функціонального стану. Спостерігалось підвищення кількості клітин з перегрупуванням рецепторів у вигляді кепів, петчів, поява нових кластерів.
Враховуючи, що в організмі існує ціла сіть ендогенних імуномодуляторів - лімфокінів, монокінів, інтерлейкінів, інтерферонів, які відіграють важливу роль при фізіологічних та патологічних реакціях, ми б дослідили, як діє пептидний комплекс нирок на стан поверхневих рецепторів лімфоцитів на фоні о-інтерферону.
Попередня інкубація мононуклеарних клітин з о-інтерфероном протягом бО хвилини при 37"С в кінцевій концентрації Т100МО/мл призвела до зниження рівня експресії антигенних детермінант СОЗ, СО4, СО8 та НІ А-Ог (Табл. ). й ою
Під впливом о-інтерферона практично зникали клітини з діфузним типом світіння, зменшилась кількість СЮОЗ 75 Клітин, які формують на мембрані кепи слабкого та середнього ступеня флюоресценції, петчи всіх ступенів світіння. У два рази порівняно з висхідним рівнем зменшилась кількість СО4- клітин, які утворювали на мембрані кепи слабкого та середнього ступеня флюоресценції, на 1395 знизився рівень утворення петчів середнього ступеня світіння. Східні зміни спостерігались на СОв8яж- та НІ А-Ог- клітинах. Для В-клітин (СО72 в) підвищувався загальний рівень флюоресценції, збільшувалась кількість клітин з перегрупуванням рецепторів у вигляді кепів та петчів середнього ступеня світіння.
Додавання до суспензії преінкубованих з с-інтерфероном лімфоцитів пептидного комплекса з кіркової речовини нирок призводило до підвищення експресії усіх досліджуваних рецепторів (Табл.). Кількість клітин, які експресують НГА-Ог та СО72, не тількі відновлювалась, але й збільшилась вище висхідного рівня.
Спостерігався перерозподіл інтенсивності світіння клітин в бік сильного ступеня - кількість СО8 - клітин, які характеризувались сильним ступенем флюоресценції (З бала), збільшилась у 2,9 рази, а НГ А-Ог- - у 2,2 рази. Під впливом пептидного комплексу збільшилась кількість СОЗ- і НГА-ЮОг- - клітин, які формують на « мембрані петчи слабкого та середнього ступеня флюоресценції. Для СОвж и СО22- - клітин спостерігалось збільшення перегрупувань рецепторів у вигляді петчів та кепів середнього та сильного ступеня світіння, підвищилась кількість СО4-ї - клітин з кластерами середнього ступеня світіння. Ге
Таким чином, пептидний комплекс нирок виявляє антагонізм по відношенню до дії о-інтерферона на сч експресію мембранних маркерів Т-клітин (СОЗж-, СО4ж, СОвя) і синергізм - В-клітин (СО72ї). Властивість відновлювати знижену під впливом с-інтерферона експресію досліджуваних рецепторів дозволяє припустити, - що пептидний комплекс нирок реалізує свої ефекти моделювання рецепторів на мембранному рівні, сприяючи со появі на мембрані заглиблених в її шар рецепторів, або впливаючи на процеси синтезу та транспорту на мембрану нових рецепторних молекул. ів)
Claims (1)
- Формула винаходу « Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів, який включає інкубування іп міго попередньо - с відмитих лімфоцитів з пептидним екстрактом та оцінку його впливу на лімфоцити, який відрізняється тим, що а як пептидний екстракт використовують пептидний екстракт паренхиматозного органа з широким спектром ,» біологічної активності, а вплив оцінюють за зміною характеру експресії поверхневих рецепторів лімфоцитів за допомогою моноклональних антитіл.1 Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних сю мікросхем", 2003, М 1, 15.01.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. - з 50 Ко)Р 60 б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002032132A UA53122A (uk) | 2002-03-18 | 2002-03-18 | Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA2002032132A UA53122A (uk) | 2002-03-18 | 2002-03-18 | Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA53122A true UA53122A (uk) | 2003-01-15 |
Family
ID=74173736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2002032132A UA53122A (uk) | 2002-03-18 | 2002-03-18 | Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA53122A (uk) |
-
2002
- 2002-03-18 UA UA2002032132A patent/UA53122A/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Maric et al. | Class II MHC antigen (Ia)-bearing dendritic cells in the epithelium of the rat intestine. | |
| Andrus et al. | Inhibition of T‐cell activity by cyclosporin A | |
| Ryan et al. | NKR-P1, an activating molecule on rat natural killer cells, stimulates phosphoinositide turnover and a rise in intracellular calcium. | |
| Sarnacki et al. | Enhancement of CD3‐induced activation of human intestinal intraepithelial lymphocytes by stimulation of the β7‐containing integrin defined by HML‐1 monoclonal antibody | |
| Suzuki et al. | Anti-DNA antibody production by CD5+ and CD5-B cells of patients with systemic lupus erythematosus. | |
| Shevach et al. | L2C Guinea pig lymphatic leukemia: a" B" cell leukemia | |
| Mobley et al. | Regulation of adhesion molecule expression by CD8 T cells in vivo. II. Expression of L-selectin (CD62L) by memory cytolytic T cells responding to minor histocompatibility antigens. | |
| Miao et al. | Functional defects of Treg cells: New targets in rheumatic diseases, including ankylosing spondylitis | |
| DE69529515T2 (de) | Die regulation der aktivität zytotoxischer t-zelllymphozyten mit peptiden der mhc-klasse i | |
| Fischer et al. | Long-term human T-helper lines producing specific helper factor reactive to influenza virus | |
| Li et al. | Nardosinone enhances nerve growth factor-induced neurite outgrowth in a mitogen-activated protein kinase-and protein kinase C-dependent manner in PC12D cells | |
| Laurenzi et al. | Stimulation of human B lymphocyte differentiation by the neuropeptides substance P and neurokinin A | |
| Shiku et al. | Cytotoxic reactions of murine lymphoid cells studied with a tritiated proline microcytotoxicity test | |
| Schlitt et al. | T cell activation by monoclonal antibodies directed to different epitopes on the human T cell receptor/CD3 complex: evidence for two different modes of activation | |
| Zheng et al. | Mimic peptides bonding specifically with the first and second extracellular loops of the CC chemokine receptor 5 derived from a phage display peptide library are potent inhibitors of experimental autoimmune encephalomyelitis | |
| Moroda et al. | Self‐reactive forbidden clones are confined to pathways of intermediate T‐cell receptor cell differentiation even under immunosuppressive conditions | |
| Brooks et al. | Cell surface molecules involved in NK recognition by cloned cytotoxic T lymphocytes. | |
| UA53122A (uk) | Спосіб моделювання поверхневих рецепторів лімфоцитів | |
| Decker et al. | Liver‐associated macrophage precursors as natural cytotoxic effectors against Candida albicans and Yac‐1 cells | |
| Beraudi et al. | Distribution and expression of A1 adenosine receptors, adenosine deaminase and adenosine deaminase-binding protein (CD26) in goldfish brain | |
| Moorhead | Antigen receptors on murine T lymphocytes in contact sensitivity. I. Functional inhibition of effector T cells by monovalent 2, 4-dinitrophenol: implication for a two-receptor model. | |
| Hoffmann | The requirement for high intracellular cyclic adenosine monophosphate concentrations distinguishes two pathways of B cell activation induced with lymphokines and antibody to immunoglobulin. | |
| US6849596B1 (en) | Regulatory/unfolding peptides of ezrin | |
| Ptak et al. | Mechanisms of suppression in the transfer of contact sensitivity. Analysis of an I-J+ molecule required for Ly2 suppressor cell activity. | |
| Ballas et al. | Lymphokine-activated killer (LAK) cells: VI. NK1. 1+, CD3+ LAK effectors are derived from CD4−, CD8−, NK1. 1− precursors |