UA28628U - A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS - Google Patents

A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS Download PDF

Info

Publication number
UA28628U
UA28628U UAU200709075U UAU200709075U UA28628U UA 28628 U UA28628 U UA 28628U UA U200709075 U UAU200709075 U UA U200709075U UA U200709075 U UAU200709075 U UA U200709075U UA 28628 U UA28628 U UA 28628U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
monoclonal antibodies
hybridomas
producers
iga
systems
Prior art date
Application number
UAU200709075U
Other languages
Ukrainian (uk)
Original Assignee
Nikolaienko Ihor Vasyliovych
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nikolaienko Ihor Vasyliovych filed Critical Nikolaienko Ihor Vasyliovych
Priority to UAU200709075U priority Critical patent/UA28628U/en
Publication of UA28628U publication Critical patent/UA28628U/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A set of hybridomas-producers of monoclonal antibodies to IgA of human, suitable for use in immune ferment test-systems, relates to hybridoma technology and immune biotechnology.

Description

Опис винаходуDescription of the invention

Корисна модель стосується гібридомної технології та імунобіотехнології і може бути використана для 2 одержання гібридом-продуцентів моноклональних антитіл (МКАТ) специфічних до імуноглобулінів людини класуThe useful model relates to hybridoma technology and immunobiotechnology and can be used to 2 produce hybridoma-producing monoclonal antibodies (MCAT) specific for human immunoglobulin class

ІДА. Метою корисної моделі є одержання нових гібридом, що продукують високоафінні та високоспецифічні моноклональні антитіла до ІдДА людини, придатні до використання у імуноферментних тест-системах.IDA The purpose of the useful model is to obtain new hybridomas that produce high-affinity and highly specific monoclonal antibodies to human IdDA, suitable for use in enzyme-linked immunosorbent assays.

Відомі гібридоми, які продукують моноклональні антитіла до ІДА людини |1), які є непридатними для застосування у тест-системах, що побудовані за принципом імуноферментного аналізу та призначені для 70 виявлення специфічних антитіл класу ІдА до збудників інфекційних захворювань.Known hybridomas that produce monoclonal antibodies to human IDA |1), which are unsuitable for use in test systems built on the principle of enzyme-linked immunosorbent assay and intended for the detection of specific antibodies of the Ida class to pathogens of infectious diseases.

Найбільш близькими до запропонованої корисної моделі є гібридоми, що синтезують моноклональні антитіла специфічні до ІДА людини (|2)1. Проте у порівнянні із вищезгаданими гібридоми 413Е7, 12508, 41205 характеризуються більшою активністю у ІФА, специфічністю та афінністю моноклональних антитіл, що продукують. 12 Гібридоми одержані при злитті (гібридизації) клітин мишачої мієломи Зр 2/0-Ад-14 (скорочено - Зр 2/0) та імунокомпетентних В-лімфоцитів мишей лінії ВаІр/с та мають типову морфологію лімфоїдних клітин. Можуть культивуватися іп мйго та іп мімо, в організмі мишей. Характеристика МКАТ, які продукуються гібридомами наведена у таблиці. гібридоми ІМКАТ |ІМКАТ, Чт019М культуральній рідині зт яв 00009500 в складі імуноферментного кон'югату у діагностиці хламіозу,The closest to the proposed useful model are hybridomas that synthesize monoclonal antibodies specific for human IDA (|2)1. However, in comparison with the above-mentioned hybridomas 413E7, 12508, 41205 are characterized by greater activity in ELISA, specificity and affinity of producing monoclonal antibodies. 12 Hybridomas were obtained by fusion (hybridization) of mouse myeloma cells Zr 2/0-Ad-14 (abbreviated as Zr 2/0) and immunocompetent B-lymphocytes of mice of the BaIr/s line and have a typical morphology of lymphoid cells. IP mygo and IP mimo can be cultivated in the body of mice. The characteristics of MKAT produced by hybridomas are given in the table. IMKAT hybridomas |IMKAT, Cht019M to the culture liquid with the identification number 00009500 as part of the enzyme-immunoconjugate in the diagnosis of chlamyosis,

БО явіІ00001МО000000000001М00о 000 у бкооплазмову, уреаплазмозу, мікоплазмозу 7BO yaviI00001МО000000000001М00о 000 in bcoplasmosis, ureaplasmosis, mycoplasmosis 7

Приклад 1. Одержання гібридом (процедура гібридизації) |З, 41. 09Example 1. Obtaining a hybrid (hybridization procedure) |Z, 41. 09

Тварину-донора імунокомпетентних лімфоцитів вибирали за результатами титрування сироваток мишей. сThe animal-donor of immunocompetent lymphocytes was selected based on the results of mouse sera titration. with

Селезінку після забою миші стерильно видаляли та м'яко гомогенізували в середовищі з 1095 ембріональної телячої сироватки (ЕТС). Для лізису еритроцитів селезінки клітини після центрифугування ресуспендували в шо 0,8396 розчині хлориду амонію. Спленоцити витримували Зхв. при 492С і осаджували при 1500об/хв. бхв. Потім с ще раз відмивали середовищем без сироватки, ресуспендували в ї5мл ОМЕМ та підраховували кількість сч життєздатних клітин у камері Горяєва.After slaughtering the mouse, the spleen was sterilely removed and gently homogenized in a medium containing 1095 fetal calf serum (ECS). For lysis of erythrocytes of the spleen, the cells after centrifugation were resuspended in a 0.8396 ammonium chloride solution. Splenocytes were kept in Zhv. at 492C and precipitated at 1500 rpm. bhv. Then, the cells were washed once more with serum-free medium, resuspended in 15 ml of OMEM, and the number of viable cells was counted in the Goryaev chamber.

Таким чином одержували (3-5)4103 лімфоцитів із високою життєздатністю за результатами виключення тріпанового синього. їх змішували з мієломними клітинами у співвідношенні 2:1 і центрифугували при 1000об/хв протягом 12хв у пробірці ємністю 5Омл. Середовище майже повністю видаляли, а клітинний осад старанно « 20 розбивали, постукуючи пробіркою по столу ламінарного ооксу. Потім у суспензію клітин вносили їмл 4090 - с розчину ПЕГ з 595 ДМСО.In this way, (3-5)4103 lymphocytes with high viability according to the results of exclusion of trypan blue were obtained. they were mixed with myeloma cells in a 2:1 ratio and centrifuged at 1,000 rpm for 12 minutes in a 5-mL test tube. The medium was almost completely removed, and the cell sediment was carefully broken by tapping the test tube on the laminar ox table. Then 4090 mL of PEG solution with 595 DMSO was added to the cell suspension.

Суміш клітин витримували в середовищі з ПЕГ 5хв при кімнатній температурі і центрифугували при 1000об/хв :з» 2хв. Потім суспензію повільно розводили середовищем ЮМЕМ без сироватки до об'єму 5Омл. До суспензії додавали Змл ЕТС. Клітини після зливання осаджували при 1000об/хв 15хв. Надосад відсмоктували, а осад обережно ресуспендували у повному ростовому середовищі ЮОМЕМ з 1595 ЕТС і 5Омкг/мл гентаміцину. ко Концентрацію клітин доводили до (1-2)Ч4105/мл і вносили в 96-лункові планшети по 100мкл на лунку.The mixture of cells was kept in the medium with PEG for 5 minutes at room temperature and centrifuged at 1000 rpm for 2 minutes. Then the suspension was slowly diluted with UMEM medium without serum to a volume of 5 Oml. Zml ETS was added to the suspension. After confluence, the cells were sedimented at 1000 rpm for 15 min. The supernatant was aspirated, and the pellet was gently resuspended in complete growth medium UOMEM with 1595 ETS and 5 µg/ml gentamicin. The concentration of cells was adjusted to (1-2)Ch4105/ml and introduced into 96-well tablets at 100 μl per well.

Приклад 2. Зберігання гібридом у рідкому азоті. со Для зберігання гібридом-продуцентів використовували кріосередовище, що містить 596 ДМСО, 5095 ЕТС таExample 2. Storage of hybrids in liquid nitrogen. For the storage of producer hybrids, a cryogenic medium containing 596 DMSO, 5095 ETS and

Ф 4595 ОМЕМ.F 4595 OMEM.

В одну ампулу вносили від 109 до 24105 клітин, які суспендували в Імл кріосередовища, шляхом змивання о моношару з 1-2 лунок 24-лункового планшету. Потім ампули поміщали в контейнер із теплоізоляційного с матеріалу і повільно охолоджували до мінус 702. На другу добу ампули переносили в резервуар з рідким азотом. Таким чином, кріоконсервацію проводили по двоетапній схемі.From 109 to 24105 cells were introduced into one ampoule, which were suspended in Iml of cryomedium by washing against a monolayer from 1-2 wells of a 24-well plate. Then the ampoules were placed in a container made of heat-insulating material and slowly cooled to minus 702. On the second day, the ampoules were transferred to a tank with liquid nitrogen. Thus, cryopreservation was carried out according to a two-stage scheme.

Приклад 3. Клонування гібридомExample 3. Hybrid cloning

Гібридоми клонували методом лімітувальних розведень |5). Суть його полягає у поступовому розведенні клітинної суспензії, поки концентрація не досягне однієї або менше клітин на лунку. Клонування проводили на с 96-лункових плашках, на які попередньо вносили фідер із перитонеальних макрофагів по 100мкл на лунку.Hybridomas were cloned by the method of limiting dilution |5). Its essence is to gradually dilute the cell suspension until the concentration reaches one or less cells per well. Cloning was carried out on 96-well plates, on which a feeder of peritoneal macrophages was previously applied, 100 μl per well.

Із суспензії гібридом відбирали об'єм від 1 до 1Омкл, у залежності від вихідної концентрації клітин, і розводили до Змл повним ростовим середовищем. Розносили по 10Омкл на 1/4 частину плашки. Потім ще тричі бо повторювали розведення до заповнення всієї плашки. Таким чином, сумарний об'єм середовища в лунках становив 20Омкл. У результаті отримували чотири різні концентрації клітин. У якомусь із розведень обов'язково росли ізольовані клони, які після тестування, пересаджували або знову клонували.From the hybrid suspension, a volume of 1 to 1 μm was taken, depending on the initial concentration of cells, and diluted to 3 ml with complete growth medium. Distributed 10 Ohms on 1/4 part of the die. Then the dilution was repeated three more times until the entire die was filled. Thus, the total volume of the medium in the wells was 20 Ωcl. As a result, four different concentrations of cells were obtained. Isolated clones necessarily grew in some of the breedings, which, after testing, were transplanted or cloned again.

Приклад 4. Одержання асцитичної рідини.Example 4. Obtaining ascitic fluid.

Для накопичення значної кількості МКАТ гібридоми культивували у черевних порожнинах мишей. Для цього 65 за 10-14 днів до ін'єкції клітин мишам вводили внутрішньочеревно по 0,5мл пристану. Мінеральне масло слугувало сильним стимулятором асцитоутворення. Потім вводили від 24105 до 107 гібридом в їмл середовища. -Д-To accumulate a significant amount of MKAT, hybridomas were cultured in the abdominal cavities of mice. To do this, 65 10-14 days before the injection of cells, mice were injected intraperitoneally with 0.5 ml of Pristan. Mineral oil served as a strong stimulator of ascites formation. Then introduced from 24105 to 107 hybridoma in iml medium. -D-

Через 5-8 днів у мишей починала накопичуватися рідина в черевній порожнині. її відбирали шляхом проколювання черевної стінки товстою голкою. З однієї миші за кілька разів вдавалося отримати від 5 до 1Омл асцитичної рідини. Після центрифугування при З00боб/хв. протягом 5 хвилин асцит зберігали в замороженому стані.After 5-8 days, mice began to accumulate fluid in the abdominal cavity. it was taken by piercing the abdominal wall with a thick needle. It was possible to obtain 5 to 1 Oml of ascitic fluid from one mouse several times. After centrifugation at 300 rpm. ascites was kept frozen for 5 minutes.

Літературні посилання: 1. Кий В., МУевіоп С, Кей: Р. еї аЇ. Омідисіа! апіроду гезропзе о а деїїпей гесотбріпапі зрегт апіїдеп іп тасдцез // ВіоЇ. Кергодисі. - 1997. - Мої. 57. - Р.981-989. 2. МіШег Ї., Іг2о М., МУетей Г). ей аЇ. Іпсгеазед ріазта ІдДА, відА, апа СЗ-апа ІдА-сопівіпіпд іттипе 7/0 ботріехев м/йп гепа! діотегиїаг дерозіїв іп аїіарейс гаїв // Оіарегев. - 1988. - Мої. 37, 2. - Р.185 - 193.Literary references: 1. Kiy V., Mueviop S, Kay: R. ей аЙ. Omydisia! apirodu gezropze o a deiipei gesotbripapi zregt apiidep ip tasdcez // VioYi. Kergodisi - 1997. - Mine. 57. - R.981-989. 2. MiSheg Y., Ig2o M., Muetey G). hey ay Ipsgeazed riazta IdDA, vidA, apa SZ-apa IdA-sopivippd ittype 7/0 botriehev m/yp hepa! diotegiiag deroziiv ip aiiareis gaiv // Oiaregev. - 1988. - Mine. 37, 2. - R.185 - 193.

З. Ніколаєнко І.В. Отримання та порівняльний аналіз гібридом - продуцентів моноклональних антитіл, що диференціюють вакцинні та вірулентні поліовіруси І, І та ПШ типів: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. -Z. Nikolayenko I.V. Obtaining and comparative analysis of hybridomas - producers of monoclonal antibodies that differentiate vaccine and virulent polioviruses I, I and PS types: Autoref. thesis ... candidate honey. of science -

Київ, 1999. - 18с. 4. Широбоков В.П., Ніколаенко І.В., Копаниця Л.В. та ін. Панель моноклональних антитіл для 7/5 Внутрішньотипової диференціації поліовірусів І! типу // Мікробіол. журн. - 1997. - Моб. - С.27-35. 5. бодіпу У. Мопосіопа! апііродіев. Ргіпсіріев апа ргасіісе. - Зап Оіедо: Аседетіс ргезв, 1996. - 492р.Kyiv, 1999. - 18 p. 4. Shirobokov V.P., Nikolaenko I.V., Kopanytsia L.V. etc. Monoclonal antibody panel for 7/5 Intratype differentiation of polioviruses I! type // Microbiol. journal - 1997. - Mob. - P.27-35. 5. bodipu U. Moposiopa! Apiirodiev Rgipsiriev apa rgasiise. - Zap Oiedo: Asedetis rzhezv, 1996. - 492 p.

Claims (1)

Формула винаходу й й й В Набір гібридом-продуцентів моноклональних антитіл до ДА людини, придатних для використання у імуноферментних тест-системах, які отримані внаслідок хімічно індукованої гібридизації імунокомпетентних В-лімфоцитів та мієломи Зр 2/0, який відрізняється тим, що отримані за довгостроковою схемою імунізації мишей лінії ВА! В/с характеризуються більшою активністю у імуноферментному аналізі, специфічністю та афінністю моноклональних антитіл. - Офіційний бюлетень "Промислова власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2007, М 20, 10.12.2007. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. со сч (Се) с с ші с ;»The formula of the invention y y y В Set of hybridoma producers of monoclonal antibodies to human DA, suitable for use in immunoenzymatic test systems, which are obtained as a result of chemically induced hybridization of immunocompetent B-lymphocytes and Zr 2/0 myeloma, which differs in that they are obtained by long-term scheme of immunization of mice line VA! V/c are characterized by greater activity in immunoenzymatic analysis, specificity and affinity of monoclonal antibodies. - Official Bulletin "Industrial Property". Book 1 "Inventions, useful models, topographies of integrated microcircuits", 2007, M 20, 10.12.2007. State Department of Intellectual Property of the Ministry of Education and Science of Ukraine. со сч (Се) с с с ши с ;" іме) (ее) (22) з 50 ІЧ е)ime) (ee) (22) with 50 IR e) с 60 б5p. 60 b5
UAU200709075U 2007-08-07 2007-08-07 A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS UA28628U (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU200709075U UA28628U (en) 2007-08-07 2007-08-07 A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU200709075U UA28628U (en) 2007-08-07 2007-08-07 A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA28628U true UA28628U (en) 2007-12-10

Family

ID=39229113

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU200709075U UA28628U (en) 2007-08-07 2007-08-07 A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA28628U (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9708654B2 (en) High throughput sequencing of multiple transcripts
EP1928999B1 (en) Methods of producing stable b-lymphocytes
Casali et al. Human monoclonals from antigen-specific selection of B lymphocytes and transformation by EBV
US20100323401A1 (en) General method for generating human antibody responses in vitro
UA28628U (en) A SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgA OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS
UA28629U (en) SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TONUCLEOSAPSIDE ANTIGEN p24 OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS
UA28626U (en) SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgM OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNE FERMENT TEST-SYSTEMS
RU2663003C1 (en) Strain of cultivated animal hybrid cells mus musculus-producer of monoclonal antibody to the membrane protein, which is common for tcp + the strains of cholera vibrios of the o1 and o139 serogroups
EP2398823A1 (en) Monoclonal antibodies against vaginolysin
UA28625U (en) SET OF HYBRIDOMAS-PRODUCERS OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO IgG OF HUMAN SUITABLE FOR USE IN IMMUNOFERMENT TEST-SYSTEMS
UA28627U (en) Hybridoma-producer of monoclonal antibodies to main protein of external membrane of chlamydia trachomatis, suitable for use in immune ferment test-systems
RU2699193C1 (en) Strain of hybrid cultured cells of homo sapiens / mus musculus 8d4e9-ba-lf-producer of human monoclonal antibodies against lethal factor of anthrax agent
RU2583306C1 (en) Hybrid strain of cultured cells of animals mus musculus -t 2e5 - producer of monoclonal antibodies isotype g 1 to b subunit of cholera toxin
RU2785463C1 (en) Strain of cultured animal hybrid cells mus. musculus - producer of monoclonal antibodies to the membrane protein common to typical and atypical serogroup 01 cholera vibrios
RU2425875C1 (en) CULTIVATED HYBRID CELL STRAIN OF Mus Musculus L ANIMALS - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO LPS OF CHOLERA VIBRIO 0139 SEROGROUP
RU2611359C1 (en) Method and set for determination of cholera toxin production and differentiation of epidemiologically significant strains of cholera vibrios of classical and el tor biovars
RU2425874C1 (en) CULTIVATED HYBRID CELL STRAIN OF Mus musculus L ANIMALS - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO O-ANTIGENE OF CHOLERA VIBRIO SEROGROUP O1
RU2652885C1 (en) MUS MUSCULUS HYBRID CULTIVATED ANIMAL CELLS STRAIN α - THE PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO THE CANCER-TESTICULAR ANTIGEN OF THE PERSON GAGE
RU2265658C2 (en) Strain of hybrid cells of animal mus musculus l, 9e2, used in preparing monoclonal antibody to west nile virus protein e of strain wnv/leiv-vig99-27889
RU2788359C1 (en) THE STRAIN OF HYBRID CULTURED HOMO SAPIENS/Mus MUSCULUS CELLS Hu-C6D7-RBD IS A PRODUCER OF HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO THE RBD DOMAIN S OF THE SARS-CoV-2 VIRUS PROTEIN
RU2265051C1 (en) Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars
SU1742325A1 (en) Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculis l - a producer of monoclonal antibodies to choleric enterotoxin of eltor biotype
RU2590587C1 (en) Cultivated hybrid animal cells mus musculus ht 3e5 - producer of monoclonal antibodies isotype g 2a to b- subunit of cholera toxin
RU2198922C2 (en) Strain of hybrid cells r1/s-5a6 of animals mus musculus l producing monoclonal antibody raised to rickettsia prowazekii
Jones et al. Human dendritic cell culture and bacterial infection