UA121878C2

UA121878C2 - Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин

Info

Publication number: UA121878C2
Application number: UAA201708269A
Authority: UA
Inventors: Сон-Йон Х. Юн; Кетлін Сордс; Кэтлин Сордс; Д. Рай ВАГНЕР; Сельвасундарам Раджагопал
Original assignee: Агрінос Ас; Агринос Ас
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2016-02-26
Publication date: 2020-08-10
Also published as: US20180237353A1; AU2016224902A1; EP3262151A1; CA2976866A1; MX2017010786A; US11230505B2; CA2976866C; BR112017018106A2; RU2718538C2; RU2017133323A; US20190322601A1; CN107849516A; AR103800A1; WO2016135699A1; NZ734549A; CN107849516B; AU2016224902B2; RU2017133323A3

Abstract

Винахід стосується мікробного консорціуму та композиції, які включають мікроби, наприклад, для застосування у сільському господарстві або для біодеградації. У деяких варіантах втілення ґрунт, рослини та/або частини рослин (такі як насіння, сіянці, паростки, корені, листя, плоди, стебла або гілки) контактують з описаними мікробними консорціумами або композицією, що включає мікроби. Мікробні консорціуми або композиції, що містять мікроби, можуть застосовуватися на ґрунті, рослині та/або частинах рослини окремо або у комбінації з додатковими компонентами (такими як хітин, хітозан, глюкозамін, амінокислоти та/або рідке добриво). У додаткових варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції, які включають мікроби, застосовують згідно зі способами розщеплення біологічних матеріалів, таких як хітиновмісні біологічні матеріали.

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

Дана заявка заявляє пріоритет для попередньої заявки США Мо 62/126,337, поданої 27 лютого 2015 р., яка є включеною до цього опису шляхом посилання у повному обсязі.

ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ

Даний винахід стосується мікробних консорціумів та способів застосування мікробів, включених до консорціумів, зокрема, для біодеградації та сільськогосподарських процесів і застосування у сільському господарстві.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

У світі зростає потреба у продуктах харчування під тиском невпинного росту населення.

Однак працівники сільського господарства, крім інших проблем, постають перед зменшенням земель, доступних для сільського господарства, виснаженням грунтів та зміною умов навколишнього середовища. Таким чином, існує потреба у розробці композицій та способів, які дозволяють збільшувати виробництво продуктів харчування з одночасним зменшенням застосування потенційно шкідливих гербіцидів, інсектицидів та фунгіцидів.

КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Авторами описуються мікробні консорціуми та композиції, які включають мікроби для застосування у сільському господарстві або для біодеградації. У деяких варіантах втілення мікробна композиція згідно з даним винаходом являє собою мікробний консорціум, який був депонований в Американській колекції типових культур (АТСС, Мапаззав5, МА) 25 листопада 2014 р. і отримав номер депонування РТА-121751 (у цій заявці також вказується як А1002), або композицію, яка включає деякі або всі мікроби в А1002. У інших варіантах втілення композиція згідно з даним винаходом включає мікроби п'яти або більшої кількості мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., Ал7о5ріпШит 5рр., Рзепдотопаб5 5рр., Гасіорасійи5 5рр.,

Резинососсив 5рр., ОезиПоїотасиїшт з5рр., Магіпобасієг 5рр., Мітозоритіїш5 5рр. Витіпососсив 5рр., Адиабасієгцт врр., Асідігота 5рр., Містосоієив врр., Сіозійдіит в5рр., Хепососсив5 5рр.,

Вгемібасієегішт 5рр., та Меїйапозаєїа 5рр. У додаткових варіантах втілення композиція включає п'ять або більшу кількість (наприклад, 5, 10, 15 або більше) мікробів, перелічених у Таблиці 1.

Описані композиції також можуть включати додаткові компоненти, включаючи, крім інших, один або декілька додаткових видів мікробів, хітин, хітозан, глюкозамін та/або амінокислоти.

Зо Також описується сільськогосподарське застосування описаних мікробних консорціумів або композицій. У деяких варіантах втілення способи (застосування) включають контактування грунту, рослин та/або частин рослин (таких як насіння, сіянці, корені, листя, стебла або гілки) з описаним мікробним консорціумом (таким як А1002), причому композиція включає деякі або всі мікроби з А1002, або композиція включає п'ять або більше з мікробних видів, перелічених у

Таблиці 1. Мікробні консорціуми або композиції, що містять мікроби, можуть застосовуватися на грунті, рослині та/або частинах рослини окремо або у комбінації з додатковими компонентами (такими як додаткові мікроби, хітин, хітозан, глюкозамін, білок, амінокислоти та/або добавки до грунту або добрива, такі як рідкі добрива).

У додаткових варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції, які включають мікроби, застосовують згідно зі способами розщеплення біологічних матеріалів, таких, як хітиновмісні біологічні матеріали. У деяких прикладах хітиновмісні матеріали змішують з мікробним консорціумом (таким як АТ002) або композицією, яка включає п'ять або більше з мікробних видів, перелічених у Таблиці 1, і ферментують для утворення ферментованої суміші.

Ферментовану суміш необов'язково розділяють на тверду та рідку фракції. Ферментовану суміш або одержані з неї фракції застосовують у сільському господарстві у комбінації з описаними мікробними консорціумами або композиціями або застосовують у процесах подальшого розщеплення, наприклад, для підвищення рівня продуктів розщеплення у фракціях.

Вищезгадані та інші особливості винаходу стануть більш очевидними по ознайомленню з представленим нижче детальним описом, який подано з посиланням на супровідні фігури.

КОРОТКИЙ ОПИС ФІГУР

Фігура 1 схематично представляє типовий процес ферментації, який застосовують для одержання мікробного консорціуму А1002.

Фігура 2 схематично представляє типовий процес біодеградації хітиновмісного біологічного матеріалу (на прикладі креветкових відходів) описаним мікробним консорціумом або мікробною композицією.

Фігура З схематично представляє типовий процес біодеградації хітину описаним мікробним консорціумом або мікробною композицією (такою як А1002).

Фігури 4А-40 є графіками, які представляють вплив на результат обробки кукурудзи мікробною композицією (Фігури 4А-4С та 4Е), НУТЬ (Фігури 40 та 4Р) або мікробною бо композицією в умовах дефіциту води (Фігура 45).

Фігури 5БА-50 демонструють вплив на результат обробки пшениці мікробною композицією (Фігури 5А-58) або мікробною композицією плюс НУТЬ (Фігура 5С). Фігура 50 є цифровим зображенням, на якому показано коріння рослин пшениці, оброблених мікробною композицією плюс НУТЬ (випробування), у порівнянні з контрольними рослинами.

Фігури бА-6Е представляють низку графіків, на яких показано вплив на результат обробки томатів мікробною композицією.

Фігура 7 є графіком, який показує вплив на результат обробки соняшника мікробною композицією.

Фігура 8 є графіком, який показує вплив на результат обробки рису мікробною композицією.

Фігури 9А-9В показують вплив на результат обробки сої мікробною композицією (Фігура 9А) або мікробною композицією плюс НУТЬ (Фігура 9В).

Фігура 10 є графіком, який показує вплив на результат обробки полуниць мікробною композицією плюс НУТ.

Фігура 11 є графіком, який показує вплив на результат обробки столового буряка мікробною композицією плюс НУТ.

Фігури 12А та 128 є графіками, які представляють вплив на результат обробки савойської капусти мікробною композицією плюс НУТЬ у двох випробуваннях (Фігури 12А та 128, відповідно).

Фігура 13 є графіком аналізу життєздатності огірків, на якому показано індекс площі першого листа на 18-й день у рослин, які обробляли НУТа (А1002). "р«0,01 згідно з аналізом АМОМА. перелік послідовностей

Будь-які нуклеїновокислотні та амінокислотні послідовності, перелічені у цьому описі або у супровідному переліку послідовностей, показано з використанням стандартних літерних скорочень для нуклеотидних основ та амінокислот, як визначено у правилі 37 С.Р.К., 5 1.822.

Принаймні у деяких випадках показано лише один ланцюг кожної нуклеїновокислотної послідовності, але слід розуміти, що комплементарний ланцюг включено шляхом будь-якого посилання на показаний ланцюг.

Послідовності БЕО ІО МО: 1 та 2 є прямими та зворотними праймерами, відповідно, які застосовують для ампліфікації 165 рДНК з А1002. детальний опис винаходу

У природі на баланс мікробних видів у грунті впливають тип грунту, плодючість грунту, вологість, конкуруючі мікроби та рослини (Гакхптапагп еї аї., Ріапі Рпузіоі!. 166: 689 - 700, 2014).

Взаємодія між мікробними видами та рослинами також зазнає впливу сільськогосподарської практики, яка може поліпшити або погіршити мікробіом грунту ІАадаїг еї аї., Епмігоп. Місгобіо!.

Вер. 5: 404-413, 2013; Сагропецо єї аї., Р о5 Опе 9: е99949, 2014; Ікеда єї а!., Місторе5 Епмігоп. 29: 50-59, 2014. Плодючі або високопродуктивні грунти мають склад природних мікробів, відмінний від того, який має грунт з вичерпаними поживними речовинами або пов'язаний з низькою врожайністю. Різні мікробні види є тісно пов'язаними з рослинами, на надземних поверхнях рослин у філосфері, на поверхні коріння у ризосфері грунту або безпосередньо як ендофіти. Великомасштабний аналіз ДНК цих мікробних асоціацій виявив несподівану філогенетичну складність |Віпсоп-Ріоге? еї аї., Оімегейу 5: 581-612, 2013; Ії акобптапанп есеї а!., Ріапі

РНузіої!. 166: 689-700, 2014). Дослідження визначили складні мікробіоми, які можуть корелювати з продуктивністю рослин, врожайністю, стресостійкістю, накопиченням вторинних метаболітів та стійкістю до хвороб |Впагаула) еї аї., Місгобріа! Сеї! Расіогіе5 13: 66-75, 2014; МасНегоп 6ї аї.,

Егопіїєгв Ріапі бсіепсе 4: 1-19, 2014). Крім того, рослини можуть специфічно вибирати мікробні суміші з місцевого середовища та мають можливість точного регулювання мікробіому на рівні сорту культури (Нагітапп еї аї., Ріапі Зої 321: 235-257, 2009; ВЮоотрбоз єї а!., Адгоп. Зивіаїп. ЮОєм. 32: 227-243, 2012; Магазсо евї аї!., Рі о5 Опе 7: е48479, 2012; РеїНег єї а!., Ргос. Маї!. Асад. 5сі.

ИБА 110: 6548-6553; Виїдагеїїї єї а!., Апп. Рем. Ріапі Віої. 64: 807-838, 20141.

Асоційовані з корінням мікроби можуть сприяти ростові рослини та коріння через сприяння кругообігові та поглинанню поживних речовин шляхом прямої фітостимуляції, шляхом опосередковування біофертилізації або шляхом забезпечення переваг для росту через біологічне регулювання патогенів. До корисних для сільського господарства популяцій належать ризобактерії, що сприяють ростові рослин (РОРК), ризобактерії, що пригнічують патогени, мікоризи, азотфіксуючі ціанобактерії, стресостійкі ендофіти плюс мікроби з різними можливостями біорозщеплення. До мікробів, задіяних у кругообігу азоту, належать азотфіксуючі роди Агоїобасіег та Вгадугпігорішт, азотфіксуючі ціанобактерії, бактерії, що окиснюють аміак (наприклад, родів Міго5отопах та Миіїгоз5ріга), окиснюючі нітрити роди, такі як Мігозріга та

Мигобрасіег, та гетеротрофно денітрифікуючі бактерії (наприклад, родів Рзепдотопа5 та 60 А?озріпі ит; (Ізобе апа ОнНіє, Місторев Епмігоп. 29: 4-16, 20141). До бактерій, які є активними при солюбілізації та збільшують доступ рослин до фосфору, належать Рхепдотопах, Васійси5,

Місгососси5 та РІаморасієегішт плюс низка грибкових родів (Ріпа еї аї., 9. Віотепії. Віореві. З: 4, 20121), тоді як види Васійн5 та Сіовігідішт сприяють солюбілізації та мобілізації калію

ЇМопаттадсі еї аї., У. Аагіс. ВіоЇ. Зсі. 7: 307-316, 20121. Фітостимуляція росту рослин та послаблення біотичних та абіотичних стресів забезпечується численними бактеріальними та грибковими асоціаціями безпосередньо через утворення стимулюючих вторинних метаболітів або опосередковано шляхом викликання захисної реакції рослин низького рівня |Саїего еї аї.,

Атег. У. Вої. 100: 1738-1750, 2013; Впагама) єї а!., Місторіа! Сеї! Расіогіез 13: 66-76, 2014).

Крім активності у середовищі, мікроби також можуть забезпечувати унікальні біорозщеплювальні властивості іп мйго в умовах спрямованої ферментації. Застосування певних мікробних сумішей для розщеплення хітину та загального білку може забезпечувати біологічно активні молекули, такі як вільні І-амінокислоти, І-пептиди, хітин та хітозан, які посилюють ріст або стимулюють стресостійкість шляхом активації природного імунітету рослини

ІНІ!Ї еї аі., РГо5 Опе 6: е19220, 2011; ТапаКа єї аї., Ріапі бідпаІ Венаху. Е22598-147, 20131.

Конкретні мікробні угруповання можуть виконувати багато завдань шляхом забезпечення унікальних продуктів ферментативного розпаду, які самі є біологічно сприятливими для культур, та утворюваного у результаті мікробного консорціуму, який може забезпечуватись як сільськогосподарський продукт для підвищення продуктивності культури.

Як описано авторами, консорціуми аеробних та/або анаеробних мікробів, взятих з плодючого грунту та морських джерел, були успішно спільно ферментовані та стабілізовані, забезпечуючи прямі переваги росту та врожайності для рослин. Ферментна активність цих мікробних сумішей також забезпечувала продукти ферментації з хітином, глюкозаміном, білком та/або амінокислотами. У деяких варіантах втілення пряме внесення мікробних консорціумів та/або композицій може забезпечувати можливість ранньої колонізації коріння та сприяти утворенню ризосферних або ендофітних асоціацій. У деяких варіантах втілення застосування мікробних консорціумів забезпечує одну або декілька переваг, до яких належать посилений ріст коріння, збільшення продукування кореневих волосків, збільшення площі поверхні коріння, зміцнення рослин для витримування трансплантаційного шоку, прискорення формування стеблостою, протистояння абіотичним стресам та підвищення продуктивності та врожайності

Зо рослин. Комплексні мікробні суміші охоплюють різні види та генотипи рослин, які взаємодіють з мікробними грунтовими угрупованнями, для забезпечення переваг для широкого кола культур, які вирощуються у різних сільськогосподарських умовах.

І. Терміни

Якщо не зазначено іншого, технічні терміни вживаються згідно з традиційними значеннями.

Визначення загальноприйнятих термінів у молекулярній біології можна знайти у публікаціях

ІКтерз еї аї., І ем/іп'є Сепез ХІ видавництва допез апа Вапей І вагпіпд, 2012 (ІЗВМ 1449659853);

Кепагем/ еї аї. (ед5.), Тпе Епсусіоредіа ої МоїІесшаг Віоїоду видавництва ВіасКу"еїЇ Рибіїзпегв, 1994 (І58М 0632021829); Вореп А. Меуєїгв (єд.), Моїесшаг Віоіоду апа Віоїеснпоіоду: а

Сотргепепзіме ЮОезК Кеїегепсе видавництва Уміеу, дойп 8 Зопв5, Іпс., 2011 (ІЗВМ 8126531789); та Сеогде Р. Кедеї, Епсусіоредіс Оісіопагу ої Сепеїїіс5, (зепотісв5, апа Ргоїеотісв, 2п4 Еайіоп, 2003 (ІЗВМ: 0-471-26821-6)|.

Представлені нижче пояснення термінів та способів мають на меті поліпшення опису даного винаходу та надання спеціалістам у даній галузі рекомендацій з практичного втілення даного винаходу. Форми однини можуть стосуватись як однини, так і множини, якщо контекстом чітко не вказується інше. Наприклад, термін "включаючи клітину" охоплює одну або багато клітин і вважається рівноцінним фразі "включаючи принаймні одну клітину." У контексті даного опису "включає" означає "охоплює." Таким чином, "включаючи А або В" означає "охоплює А, В або А та В", не виключаючи додаткових елементів. Усі публікації, патентні заявки, патенти та інші згадані авторами джерела є включеними до цього опису шляхом посилання у повному обсязі у будь-якому сенсі. У разі протиріччя даний опис, включаючи пояснення термінів, має переважну силу.

Хоча для практичного втілення або випробування описаної технології можуть застосовуватися способи та матеріали, подібні або рівноцінні тим, які описуються авторами, прийнятні способи та матеріали описуються нижче. Матеріали, способи та приклади є лише пояснювальними і не мають на меті обмеження обсягу винаходу.

Для полегшення ознайомлення з різними варіантами втілення цього винаходу представлено такі пояснення конкретних термінів:

Водяна тварина: тварина, яка живе у солоній або прісній воді. У описаних авторами варіантах втілення до водяних тварин належать водяні членистоногі, такі як креветки, криль, бо веслоногі ракоподібні, вусоногі раки, краби, омари та лангусти. У інших варіантах втілення до водяних тварин належать риби. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, зокрема, частини, одержані у результаті промислової обробки водяних тварин. Таким чином, у деяких прикладах до побічних продуктів водяних тварин належать головогруди або зовнішній скелет креветок, зовнішній скелет краба або омара або шкіра або луска риби.

Контактування: приведення у прямий фізичний зв'язок, як у твердій, так і у рідкій формі.

Наприклад, контактування може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та біологічним зразком у розчині. Контактування також може відбуватися з одним або декількома мікробами (такими як мікроби у мікробному консорціумі) та грунтом, рослинами та/або частинами рослин (такими як листя, стебла, сіянці, коріння та/або насіння).

Культивування: плановане вирощування одного або декількох організмів чи клітин у присутності джерел вуглецю, азоту та мінеральних солей, які піддаються засвоєнню. Згідно з прикладом, такий ріст може відбуватись у твердому або напівтвердому поживному середовищі або у рідкому середовищі, у якому розчиняються або суспендуються поживні речовини. У іншому прикладі культивування може відбуватися на поверхні або із застосуванням зануреної культури. Поживне середовище може складатися з комплексних поживних речовин або може бути хімічно задане.

Ферментація: процес, результатом якого є розклад складних органічних сполук на простіші сполуки, наприклад, мікробними клітинами (такими як бактерії та/або гриби). Процес ферментації може відбуватися у аеробних умовах, анаеробних умовах або і тих, і інших умовах (наприклад, у великому об'ємі, коли деякі частини є аеробними, а інші частини є анаеробними).

У деяких необмежувальних варіантах втілення ферментація включає ферментативне та/або неферментативне розщеплення сполук, присутніх у організмі водяних тварин або побічних продуктах тварин, таких як хітин.

Рідкі добрива: водний розчин або суспензія, що містить розчинний азот. У деяких прикладах розчинний азот у рідких добривах включає органічне джерело азоту, таке як сечовина або сечовина, яка є похідною безводного аміаку (наприклад, розчин сечовини та нітрату амонію (ОАМ)). Також може застосовуватися водний розчин аміаку (20-32 95 безводний аміак). У інших

Зо прикладах розчинний азот у рідких добривах включає азотовмісні неорганічні солі, такі як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або комбінації двох або більшої кількості з них. У деяких варіантах втілення рідкі добрива включають штучне джерело азоту (наприклад, пірофосфат амонію або тіосульфат амонію) та/або інші компоненти, які не зустрічаються у природі.

Зазвичай рідкі суміші штучних добрив вказуються за їхнім вмістом азоту-фосфату-калію (відсотком М-Р-К) та включають додавання інших компонентів, таких як сірка або цинк.

Прикладами штучних сумішей можуть бути 10-34-0, 10-30-0 з 295 сірки та 0,25 95 цинку (хелатні), 11-37-0, 12-30-0 з З Фо сірки, 2-4-12, 2-6-12, 4-10-10, 3-18-6, 7-22-5, 8-25-3, 15-15-3, 17- 17-0 з 2 9о сірки, 18-18-0, 18-18-0 з 2 95 сірки, 28-0-0 САМ, 9-27-0 з 2 Фо сірки та тіосульфат калію.

Мікроб: мікроорганізм, включаючи, крім інших, бактерії, архебактерії, гриби та водорості (такі як мікроводорості). У деяких прикладах мікроби є одноклітинними організмами (такими як бактерії, ціанобактерії, деякі гриби або деякі водорості). У інших прикладах термін "мікроби" охоплює багатоклітинні організми, такі як деякі гриби або водорості (наприклад, багатоклітинні нитчасті гриби або багатоклітинні водорості).

Мікробна композиція: композиція (яка може бути твердою, рідкою або принаймні частково і твердою, і рідкою), яка включає принаймні один мікроб (або популяцію принаймні одного мікробу). У деяких прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (у одній або декількох популяціях мікробів) у рідкому середовищі (такому як середовище для зберігання, культивування або ферментації), наприклад, у формі суспензії у рідкому середовищі. У інших прикладах мікробна композиція являє собою один або декілька мікробів (або одну або декілька популяцій мікробів) на поверхні або всередині твердого або желеподібного середовища (включаючи, крім інших, культуральні планшети) або суспензії або пасти.

Мікробний консорціум: суміш, асоціація або сукупність двох або більшої кількості мікробних видів, які у деяких випадках перебувають у фізичному контакті один з іншим. Мікроби у консорціумі можуть впливати один на інший через прямий фізичний контакт або через біохімічну взаємодію, або і те, і інше. Наприклад, мікроби у консорціумі можуть обмінюватися між собою поживними речовинами, метаболітами або газами. Таким чином, у деяких прикладах принаймні деякі з мікробів у консорціумі можуть бути метаболічно взаємозалежними. Характер та ступінь бо такої взаємозалежної взаємодії може змінюватися з часом і зі зміною умов культивування.

ІІ. Мікробні консорціуми та композиції

Авторами описується декілька мікробних консорціумів. Типовий мікробний консорціум згідно з даними винаходом було депоновано у Американській колекції типових культур (АТСС,

Мапаззавз, МА) 25 листопада 2014 р. та отримав номер депонування РТА-121751, який у цьому описі вказується як А1002. Консорціум АТ1002 включає принаймні Васійиз 5рр., А2озріпшчт 5рр.,

Рзепдотопавзх 5рр., І асіобасіїїи5 5рр., ОезиПососсив 5рр., ОезиПоїютасиїшт з5рр., Магіпобасієг в5рр., Мітозоритіїш5 5рр. Нитіпососси5 5рр., Адиабасієгшт врр., Асідігота 5рр., Містосоївив5 5рр., Сіозійаішт врр., Хепососсизв 5рр., Вгемібасіегцт 5рр., Меїйапозавїа 5рр., І узіпірасіїи5 врр., та Раепірасійи5 5рр., які було виявлено шляхом мікроматричного аналізу та/або секвенування 165 рДНК. Авторами також описуються консорціуми або мікробні композиції, які включають два або більше (наприклад, 2 або більше, 5 або більше, 10 або більше, 20 або більше або 50 або більше) з усіх мікробів у А1002. У деяких варіантах втілення описана авторами мікробна композиція є визначеною композицією, наприклад, композицією, яка включає вказані мікробні види та, необов'язково, додаткові немікробні компоненти (включаючи, крім інших, солі, мікроелементи, хітин, хітозан, глюкозамін та/або амінокислоти).

Як обговорюється нижче, ідентичність мікробів, присутніх у А1002, визначили із застосуванням мікроматричного аналізу (Приклад 3) та/або секвенування 165 рДНК (Приклад 4). Додаткові способи розпізнавання мікробів, присутніх у мікробній суміші або консорціумі, є відомими спеціалістам у даній галузі, включаючи секвенування або ПЛР-аналіз нуклеїнових кислот, таких як 165 рДНК, з окремих мікробних колоній, які ростуть всередині консорціуму або суміші. Додаткові технології розпізнавання мікробів, присутніх у мікробній суміші або консорціумі, також включають 1) способи на основі нуклеїнових кислот, які грунтуються на аналізі та диференціації мікробної ДНК (такому як Аналіз ДНК-мікрочіпів нуклеїнових кислот, метагеноміка або іп 5йи гібридизація у поєднанні з сортуванням флуоресцентно-активованих клітин (ЕАС5)), 2) біохімічні способи, які грунтуються на відокремленні та ідентифікації низки біомолекул, включаючи аналіз метилових естерів жирних кислот (ЕАМЕ), мас-спектрометричний аналіз часопролітної матрично-активованої лазерної десорбції / іонізації (МАСОІ-ТОЕ) або аналіз клітинної миколевої кислоти шляхом високоефективної рідинної хроматографії (МУСО-

ЇС5) та 3) мікробіологічні способи, які здійснюються із застосуванням традиційних засобів

Зо (таких як вибіркове вирощування та мікроскопічне дослідження) для забезпечення більш загальних характеристик угруповання у цілому та/або звуження та розпізнавання лише малої підгрупи представників цього угруповання.

У деяких прикладах мікроби у суміші або консорціумі розділяють (наприклад, із застосуванням технологій сортування за фізичним розміром та/або клітинного сортингу) з наступним глибоким секвенуванням ДНК або повного геному одержаних у результаті мікробів (або підгруп або підпопуляцій мікробів). Застосування іншої мікроматриці та застосування інших способів розпізнавання дозволяє розпізнавати присутність інших мікробів (більшої, меншої кількості або інших мікробних таксонів або видів) порівняно з тими, які розпізнаються шляхом мікроматричного аналізу, який виконують на описаному авторами А1002, через відмінності у чутливості та специфічності вибраних способів аналізу. Крім того, різні технології (включаючи мікроматричний аналіз або ПЛР-аналіз ДНК) можуть не виявляти конкретні мікроби (навіть якщо вони є присутніми у зразку), наприклад, якщо аналіз не включає зонди, здатні виявляти конкретні мікроби. Крім того, спеціалістам у даній галузі стане зрозуміло, що класифікація та номенклатура мікробів з часом може змінюватися, що у результаті призводить до перекласифікації та/або перейменування мікробів.

У інших варіантах втілення описані мікробні консорціуми або композиції включають, здебільшого складаються або складаються з 2 або більшої кількості (наприклад, 5 або більшої кількості, 10 або більшої кількості, 15 або більшої кількості, 20 або більшої кількості або всіх) мікробів, перелічених у Таблиці 1.

Таблиця 1

Мікроби 1 Мікроб///| 77717171 ТиповівидиЇ7//://-:/ НН

Юевийососсивврр. | 77777777

Оевийоютасиитврр.Ї 77777711 оМітоворитішв вро. | 77777777

Аговрійштерр. ЇЇ 77777771

Васіїи5 зиЇибійї5, Васійи5 сегеив, Васійи5 тедаїегіит, ВасіПш5 І спПепітоптів,

Васіив 5рр. Васійиз5 Іиппдієпвів5, Васійи5 атупоїЇїднегасієпо5, Васійи5 равівцті, Васіїїи5 оЇІегопій5

І І асіобасіи5 рагасавзвеї, І асіобасіїив аєїргиескії, Састорасіїив5 рисппетгі

Адиарасівїитврро. | 77777777

Асідівотаврр.ї ОЇ 7777777 (Містособвивврріо/////|Ї77777771111111

І Сіовітідіит 5рпепоідев, Сіовітідіит рітептепіапь (Хепососсивврр.////|Ї 77777777

Втемірасійтитврр. | 77777777 (Мешаповавіаврр.// | (77777777

Консорціуми або композиції необов'язково можуть включати один або декілька додаткових мікробів. До додаткових мікробів належать, крім інших, один або декілька таких видів, як

Оеіпососси5 5зрр., Іеріоїупдобуа зрр., Агоїорасіег 5зрр. (наприклад, Ал7оїобБасіег міпеїапаії),

Вгадугпігорішт 5рр., ГеріозрігПит 5рр. (наприклад, ГІ еріозрігйШит Теггодіагоїгорі), Раепірасійи5 5рр. (наприклад, Раєпірасійи5 аптуїоїіси5), Кподоїегах 5рр., Наіогпардив 5рр., КПпі2обішт 5рр. (наприклад, КПпі2орішт |аропісит), Вгадугпігобішт 5рр., Місгососси5 5рр. (наприклад, тісгососсив Ішіейив), МіИгобрасієї в5рр., Мігтобзотопав в5рр., Мігтососси5 в5рр., Суїорпада зрр.,

Асііпотусез в5рр., Оемовіа з5рр., Зігеріотусез 5рр., Зігеріососсив зрр., І асіососсив 5рр., Ргоїви5 5рр. (наприклад, Ргоїеи5 миїЇдагіб), Тгісподепта 5рр. (наприклад, Тгісподегта Ваглапит),

Редіососси5 5рр. (наприклад, Редіососси5 репіозасеи5), Асейорасіег 5рр. (наприклад,

Асейорасіег асеїї), Тгеропета 5рр., Сапаїдаюше5 5рр., Засспаготусе5 5рр. (наприклад, засспаготусев сегемізіає), РепісШіит (наприклад, Репісійшит годиейсогії), Мопазсиз (наприклад,

Мопазсив гирег), АзрегуйШи5 5рр. (наприклад, АзрегудйШи5 огугає), Агппгозріга (наприклад,

Агіпгозріга ріасепвів), та АзсорпуПит 5рр. (наприклад, Азсорпуїшт подозит). Придатні додаткові мікроби можуть бути розпізнані спеціалістом у даній галузі, наприклад, на основі бажаних характеристик, які мали б бути включеними до консорціумів або композицій.

Описані мікробні консорціуми або композиції можуть включати один або декілька інших компонентів додатково до мікробів, включаючи, крім інших, солі, іони металів та/або буфери (наприклад, один або декілька з КНгРО», КаНРО», СасСі», М950О», ЕРесСіз, МаМоО»: та/або

Маг2МоО»), мікроелементи (такі як сірка, сульфат, сульфіт, мідь або селен), вітаміни (такі як вітаміни В або вітамін К), цукри (такі як сахароза, глюкоза або фруктоза), хітин, хітозан, глюкозамін, білок та/або амінокислоти. До додаткових компонентів, які також можуть бути включені до композицій, належать НУТ, НУТс та/або НУТа, одне або декілька добрив (наприклад, рідких добрив), один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінацій з двох або більшої кількості цих компонентів.

Зо У деяких варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів у описаних авторами мікробних консорціумах, перебувають у рідкому середовищі (такому як культуральне або ферментаційне середовище) або інокулумі. У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів, перелічених у Таблиці 1, є присутніми у твердому або желеподібному середовищі (такому як культуральний планшет), яке містить або підтримує мікроби.

У інших варіантах втілення мікробні консорціуми або композиції, які включають п'ять або більше мікробних видів, є присутніми у сухих композиціях, таких як сухий порошок, драже або гранули. Сухі композиції приготовляють шляхом додавання осмопротектора (такого як цукор, наприклад, трегалоза та/або мальтодекстрин) до мікробної композиції у розчині у потрібному співвідношенні. Цей розчин комбінують з сухим носієм або абсорбентом, таким як деревне борошно або глина, у потрібній концентрації мікробної композиції (такій як 2-30 95, наприклад, 2,5-10 96, 5-15 96, 7,5-20 95 або 15-30 95). Гранули утворюють шляхом включення глини або полімерних зв'язувальних речовин, які слугують для утримання гранул від розпаду або забезпечують конкретні фізичні або розщеплювальні властивості. Гранули утворюють із застосуванням роторного гранулятора, змішувача-гранулятора або шляхом екструзії, які представляють декілька можливих способів. Додаткові способи одержання сухих композицій, які включають один або декілька мікробних видів, є відомими спеціалістам у даній галузі, наприклад, як описано у публікації (Рогтишацйоп ої Місгоріа! Віоребзіїсідеє: ВепеїсіаЇ

Містоогдапізтв, Метаїйодев апа беей Тгеаїтепів, Вигдев, ейд., Зргіпдег Зсієпсе, 1998; Вазпап,

Віотесппої. Аду. 16: 729-770, 1998; Наші! еї а!., Іпі. Нев. у). Рпагт. 4: 90-95, 20131.

У деяких прикладах композиції, які включають мікроби або мікробні консорціуми, тримають при температурі, яка підтримує ріст мікробу(ів), наприклад, при температурі приблизно 25-457С (наприклад, приблизно 30-35 С, приблизно 30-40С або приблизно 35-40). У інших прикладах композиції зберігають при температурі, при якій мікроб(и) не ростуть або є неактивними, наприклад, нижчій за 25 "С (наприклад, 4 "С, -20 "С, -40 "С, -70 "С або нижчій).

Спеціаліст у даній галузі може створювати композиції для холодного зберігання, наприклад, шляхом включення стабілізаторів (таких як гліцерин). У інших прикладах композиції зберігають при навколишній температурі, наприклад, приблизно 0-35 "С (наприклад, приблизно 10-30 "С або приблизно 15-25 7С).

І. Процеси біодеградації

Описані мікробні консорціуми або композиції застосовують для розщеплення біологічних матеріалів, таких як багаті на хітин матеріали, наприклад, водяних тварин або побічних

Зо продуктів водяних тварин, комах або грибів. Таким чином, у деяких варіантах втілення авторами описуються способи, які включають змішування одного або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій з хітиновмісним біологічним матеріалом для утворення суміші та ферментації суміші. У деяких варіантах втілення способи також включають розділення суміші на тверду, водну та, необов'язково, ліпідну фракції (Фігура 2).

У деяких варіантах втілення описаний авторами процес біодеградації включає змішування мікробного консорціуму (такого як А1002), композиції, яка включає деякі або всі мікроби у АТ002, або композиції, яка включає п'ять або більше мікробних видів з Таблиці 1), з одним або декількома хітиновмісними біологічними матеріалами. До хітиновмісних біологічних матеріалів, крім інших, належать водяні тварини або побічні продукти водяних тварин, комахи або гриби. У деяких прикладах хітиновмісним біологічним матеріалом є водяна тварина, така як водяна членистонога тварина (наприклад, представник класу вищих раків). До водяних членистоногих для використання згідно з описаними способами належать креветки, краби, омари, лангусти або криль. У деяких прикладах згідно з описаними авторами способами біодеградації використовують цілих водяних тварин (таких як водяні членистоногі) або побічні продукти водяних тварин. До побічних продуктів водяних тварин належать будь-які частини водяних тварин, наприклад, будь-які частини, одержані шляхом переробки водяних тварин. У деяких прикладах побічним продуктом водяної тварини є цілий зовнішній скелет або частина зовнішнього скелета водяної тварини, наприклад, панцир креветки, краба, лангуста або омара.

У інших прикладах побічним продуктом водяної тварини є частина водяної тварини, наприклад, головогруди креветки.

У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає гриби, такі як гриби Рпуїшт 7удотусоїа, Вазідіотусоїа, Азсотусоїа або Оешеготусоїа. Зокрема, прикладами грибів можуть бути такі види, як Азрегойши5 5рр., Репісійит 5рр., Тгісподепта 5рр., засспаготусев 5рр. та

Зспігозасспаготусе5 5рр. Таким чином, потоки відходів з хлібопекарських, пивоварних та ректифікаційних підприємств можуть забезпечувати джерела хітиновмісного біологічного матеріалу. У інших прикладах хітиновмісний біологічний матеріал включає комах, які містять хітин у їхніх зовнішніх скелетах, таких як коники, цвіркуни, жуки та інші комахи. Побічні продукти переробки таких комах також розглядаються як джерела хітину.

Хітиновмісний біологічний матеріал змішують з композицією, яка включає мікроби, описані 60 вище у Розділі ІЇ (такою як мікробний консорціум А1002 або інший консорціум або композиція,

описані у Розділі Ії), для утворення практично гомогенної суміші. У деяких прикладах хітиновмісний біологічний матеріал розтирають, розламують, подрібнюють, перемелюють або іншим чином диспергують перед змішуванням з описаними авторами мікробами або мікробними консорціумами. У конкретних прикладах суміш містить приблизно 10-50 95 (наприклад, приблизно 10-20 95, приблизно 20-30 956, приблизно 30-40 95, приблизно 25-40 95, наприклад, приблизно 2595, приблизно 30 95, приблизно 35 95, приблизно 40 95, приблизно 45 95, або приблизно 50 95) хітиновмісного матеріалу (такого як голови креветок) (маса/об'єм) у інокулумі, що містить приблизно 0,1-5 95 (наприклад, приблизно 0,1-1 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1- 2 ую, приблизно 2-3 95, приблизно 0,1 95, приблизно 0,2 95, приблизно 0,3 95, приблизно 0,5 95, приблизно 0,895, приблизно 1 95, приблизно 1,25 95, приблизно 1,595, приблизно 1,75 95, приблизно 2 95, приблизно 2,5 95, приблизно З 95, приблизно 4 95 або приблизно 5 95) мікробів (об'єм/об'єм).

У деяких прикладах інокулум, хітиновмісний біологічний матеріал та цукор (або інше джерело вуглецю) змішують, наприклад, шляхом перемішування або збовтування. У інших прикладах один або декілька мікробів у мікробній композиції або консорціумі необов'язково активують перед змішуванням з хітиновмісним біологічним матеріалом та ферментацією.

Активація для описаних авторами способів не вимагається. Регулювання часу та/або температури ферментації може здійснюватися спеціалістом у даній галузі залежно від того, чи активуються мікроби перед ферментацією. Активація мікробної композиції може здійснюватися шляхом інкубації інокулуму мікробів з джерелом вуглецю (таким як цукор, наприклад, глюкоза, сахароза, фруктоза або інші цукри) при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів. У деяких прикладах інокулум мікробів (наприклад, описані авторами мікробний консорціум або композиція) має концентрацію приблизно 0,05-5 95 (об'єм/об'єм) (наприклад, приблизно 0,5-5 95, приблизно 0,5-2 95, приблизно 1-2 95 або приблизно 2-3 95) у рідкому середовищі. Інокулум розводять у розчині, який містить приблизно 0,1-1 95 цукру (наприклад, приблизно 0,1-0,5 95, приблизно 0,1-0,3 95, приблизно 0,2-0,6 95 або приблизно 0,5- 195, наприклад, приблизно 0,195, приблизно 0,295, приблизно 0,395, приблизно 0,4 95, приблизно 0,5 95, приблизно 0,6 95, приблизно 0,7 95, приблизно 0,8 95, приблизно 0,9 95, або приблизно 1 95) та інкубують при навколишніх температурах, наприклад, приблизно 20-40 С

Ко) (наприклад, приблизно 20 "С, приблизно 25"С, приблизно 30 "С, приблизно 35"С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-5 днів (наприклад, приблизно 24 годин, приблизно 48 годин, приблизно 72 годин, приблизно 96 годин або приблизно 120 годин). У інших прикладах активація мікробної композиції може відбуватися шляхом інкубації інокулуму мікробів при температурі та протягом періоду часу, які є достатніми для росту мікробів, наприклад, інкубації при приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 25-35 "С) протягом періоду від 12 годин до 5 днів (наприклад, 1-4 днів або 2-3 днів). У деяких необмежувальних прикладах мікроби вважаються активованими, коли культура досягає оптичної густини 20,005 при 600 нм.

Після змішування хітиновмісного біологічного матеріалу та мікробів або мікробного консорціуму (які необов'язково активують) суміш піддають ферментації. У деяких прикладах перед ферментацією вимірюють рівень рН суміші. Рівень рН перед ферментацією у разі необхідності регулюють до заданого діапазону (наприклад, рН від приблизно З до приблизно 4 або приблизно від 3,5 до 4). Суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-36 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 С, приблизно 39 "С, або приблизно 40 "С) протягом приблизно 1-30 днів (наприклад, приблизно 3- 28 днів, приблизно 7-21 днів, приблизно 3, 5, 7, 10, 14, 16, 20, 24, 28 або 30 днів). Суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У деяких прикладах суміш збовтують протягом періоду часу кожні 1-7 днів, наприклад, кожні 1, 2, 3, 4, 5, 6 або 7 днів.

У деяких необмежувальних прикладах ферментація відбувається доти, доки титрована кислотність (ТТА) не становить приблизно 3-5 95, а рівень рН - приблизно 4-5.

Після ферментації одержану у результаті ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідку фракції. У деяких прикладах ферментацію переносять з резервуара до обладнання для осадження. Після цього рідину зливають та центрифугують. У одному необмежувальному прикладі ферментовану суміш центрифугують при 1250 об/хв (930ха) протягом 15 хвилин при приблизно 5"С для одержання рідинної та ліпідної (наприклад, пігментної) фракцій. Рідинна (або водна) фракція, одержана у процесі біодеградації, може зберігатися при навколишній температурі. У деяких необмежувальних прикладах цукор додають до рідинної фракції, наприклад, у кількості 1-10 95 (об'єм/об'єм).

Рідинна фракція може включати такі компоненти, як білок, амінокислоти, глюкозамін, бо мікроелементи (такі як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець) та/або ферменти

(такі, як молочні ферменти, протеази, ліпази та/або хітинази). У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 1-5595 всього амінокислот, приблизно 3-7 95 білку, приблизно 0,1-2 95 азоту, менше, ніж приблизно 0,295 фосфору, приблизно 0,5-1 96 калію, приблизно 4-8 95 вуглецю, приблизно 0,2-1 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,2 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,2 95 натрію та/або приблизно 0,1-0,4 95 сірки. У додаткових необмежувальних прикладах рідинна фракція включає приблизно 0,01-0,2 95 глюкозаміну (наприклад, приблизно 0,1 95 або менше). Рідинна фракція також може містити один або декілька мікробів (наприклад, з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації) та/або слідову кількість хітозану або хітину. Рідинна фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТБ-

Тверда фракція, одержана внаслідок процесу біодеградації, містить хітин (наприклад, приблизно 50-70 956 або приблизно 50-60 95 хітину). Тверда фракція також може містити один або декілька мікроелементів (таких як кальцій, магній, цинк, мідь, залізо та/або марганець), білок або амінокислоти та/або один або декілька мікробів з інокулуму, який використовують для початку процесу ферментації. Тверда фракція у деяких прикладах вказується авторами як "НУТс." НУТс необов'язково тонко подрібнюють для утворення тонко подрібненого хітину та залишкового хітину. У деяких необмежувальних прикладах тверда фракція містить (маса/об'єм) приблизно 9-35 95 загальних амінокислот, приблизно 30-50 95 неочищеного білку, приблизно 5- 10 95 азоту, приблизно 0,3-1 95 фосфору, менше, ніж приблизно 0,3 95 калію, приблизно 35-55 95 вуглецю, приблизно 0,5-2 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, приблизно 0,1-0,4 95 натрію та/або приблизно 0,2-0,5 95 сірки.

У деяких прикладах ліпідну фракцію також відокремлюють від твердої та рідинної фракцій.

Ліпідна фракція є верхньою фазою рідинної фракції. Ліпідна фракція містить такі сполуки, як стерини, вітамін А та/або вітамін Е, жирні кислоти (такі, як ОНА та/або ЕНА) та у деяких прикладах каротиноїдні пігменти (наприклад, астаксантин). Ліпідна фракція може використовуватися з різними цілями, включаючи, крім інших, виробництво косметики або харчових приодуктів.

У додаткових варіантах втілення хітин ферментують мікробним консорціумом (таким, як

А1002 або деякі або всі мікроби у А1002) або композицією, яка містить п'ять або більше

Зо мікробних видів з Таблиці 1. У деяких прикладах хітин (такий як НУТс або тонко подрібнений та/або залишковий хітин, утворений, як описано вище) змішують з мікробним консорціумом або композицією, що містить описані авторами мікроби та гідролізат білку (наприклад, НУТЬ), та ферментують для утворення ферментованої суміші. Принаймні частина хітину у вихідній суміші розщеплюється у результаті ферментації. У деяких прикладах суміш інкубують при температурі приблизно 20-40 "С (наприклад, приблизно 30-35 "С, наприклад, приблизно 30 "С, приблизно 31 "С, приблизно 32 "С, приблизно 33 "С, приблизно 34 "С, приблизно 35 "С, приблизно 36 "С, приблизно 37 "С, приблизно 38 "С, приблизно 39 "С або приблизно 40 С) протягом періоду приблизно від 1 дня до 30 днів (наприклад, приблизно 2-28 днів, приблизно 4-24 днів, приблизно 16-30 днів, приблизно 10-20 днів або приблизно 12-24 днів). У деяких прикладах суміш періодично збовтують (наприклад, шляхом переривчастого збовтування). У інших прикладах суміш збовтують безперервно. У одному необмежувальному прикладі суміш збовтують протягом приблизно 1-12 годин щодня (наприклад, приблизно 2-8 годин або приблизно 4-10 годин). Рівень рН ферментаційної суміші періодично контролюють. У деяких прикладах рівень рН необов'язково підтримують на рівні приблизно 4-5. У деяких прикладах ферментація триває доти, доки загальна титрована кислотність (ТТА) не досягає принаймні приблизно 1-10 95 (наприклад, приблизно 2-8 95, приблизно 4-8 95, або приблизно 5-10 95).

Після ферментації утворену ферментовану суміш розділяють принаймні на тверду та рідинну фракції, наприклад, шляхом декантації, фільтрації та/"або центрифугування. Рідинна фракція, утворена у результаті ферментації НУТЬ та хітину мікробною композицією, у деяких прикладах вказується як "НУта." У деяких необмежувальних прикладах рідинна фракція містить (маса/об'єм) приблизно 0,5-2 95 загальних амінокислот, приблизно 3-7 95 білку, приблизно 0,5- 195 азоту, менше, ніж приблизно 0,1 95 фосфору, приблизно 0,4-1 95 калію, приблизно 3-7 95 вуглецю, менше, ніж приблизно 0,5 95 кальцію, менше, ніж приблизно 0,1 95 магнію, менше, ніж приблизно 0,3 95 натрію і/або менше, ніж приблизно 0,3 95 сірки. Крім того, НУТа містить менше, ніж приблизно 50 95 хітину (наприклад, менше, ніж приблизно 45 95, менше, ніж приблизно 40 95, менше, ніж приблизно 3595 або менше, ніж приблизно 30 95 хітину) та менше, ніж 2 95 глюкозаміну (наприклад, менше, ніж приблизно 1,595 або менше, ніж приблизно 1 95 глюкозаміну). У інших прикладах НУТа містить приблизно 25-50 95 хітину та приблизно 0,5-2 95 глюкозаміну. 60 ІМ. Процеси обробки грунту, рослин та/або насіння

Описані мікробні консорціуми, композиції, які містять мікроби, та/або описані авторами продукти (такі як НУТЬЮ, НМУТс та/або НуУтТа) застосовують для обробки грунту, рослин або частин рослин (таких як коріння, стебла, листя, насіння або сіянці). У деяких прикладах обробка мікробними консорціумами, композиціями, які містять мікроби, та/або продуктами поліпшує ріст рослин, поліпшує стресостійкість та/або підвищує врожайність.

У деяких варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (таких як листя, стебла, коріння, сіянці або інші частини рослин) або насіння з консорціумом (таким як

А1002) або композицією, що включає мікроби, присутні у одному або декількох з описаних мікробних консорціумів або композицій. Способи також можуть включати вирощування попередньо оброблених рослин, частин рослин або насіння та/або культивування рослин або насіння у обробленому грунті.

Мікроби необов'язково активують перед застосуванням. У деяких прикладах активація мікробів відбувається згідно з представленим вище описом у Розділі Ш. У інших прикладах мікроби активують шляхом змішування 100 частин води та 1 частини мікробного консорціуму або композиції та інкубації при приблизно 15-40 "С (наприклад, приблизно 20-40 "С, приблизно 15-30 "С або приблизно 25-35 "С) протягом приблизно 12 годин - 14 днів (наприклад, приблизно 1-14 днів, 3-10 днів, 3-5 днів або 5-7 днів). Суміш для активації також необов'язково може включати 1 частину НУТЬ, якщо мікробний консорціум або композиція має застосовуватись у комбінації з НУТЬ.

У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з продуктом описаних мікробних консорціумів або композицій, наприклад,

НУТЬ, НУТс, НУТа або їх комбінацій. У інших варіантах втілення способи включають контактування грунту, рослин або насіння з описаним мікробним консорціумом або композицією, що включає описані мікроби та один або декілька з НУТЬ, НУТс та Нута (наприклад, одним, двома або всіма з НУТЬ, НУТс та НУТа)» НУТ, НУТс та/або НУТа можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які містять мікроби.

У деяких прикладах способи також включають контактування грунту, рослин (або частин рослин) або насіння з одним або декількома додатковими компонентами, до яких, крім інших, належать хітин, хітозан, глюкозамін, білок, амінокислоти, рідкі добрива, один або декілька пестицидів, один або декілька фунгіцидів, один або декілька гербіцидів, один або декілька інсектицидів, один або декілька рослинних гормонів, один або декілька еліситорів рослин або комбінації з двох або більшої кількості цих компонентів. Додаткові компоненти можуть включатися до композиції, яка включає мікроби, або до описаних авторами мікробних консорціумів, або можуть окремо застосовуватися до грунту, рослин (або частин рослин) та/або насіння, наприклад, послідовно, одночасно або по суті одночасно з описаними мікробними консорціумами або композиціями, які містять мікроби.

У конкретних варіантах втілення мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, водним розчином або суспензією, що містить розчинний азот). У деяких прикладах рідкі добрива включають органічне джерело азоту, таке як сечовина, або азотовмісну неорганічну сіль, таку як гідроксид амонію, нітрат амонію, сульфат амонію, пірофосфат амонію, тіосульфат амонію або їх комбінації. Водний розчин аміаку (20-24,6 95 безводного аміаку) також може застосовуватись як розчинний азот. У деяких прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) безпосередньо перед застосуванням або незадовго до застосування (наприклад, від 10 хвилин до 24 годин перед застосуванням, наприклад, приблизно за 30 хвилин, 1 годину, 2 години, З години, 4 години, 6 годин, 8 годин, 12 годин, 16 годин, 18 годин або 24 години до застосування).

У інших прикладах мікробний консорціум або композицію комбінують з рідкими добривами (наприклад, змішують з рідкими добривами) принаймні за 24 години до застосування (наприклад, від 24 годин до 6 місяців, наприклад, принаймні 36 годин, принаймні 48 годин, принаймні 72 години, принаймні 96 годин, принаймні один тиждень, принаймні два тижні, принаймні чотири тижні, принаймні вісім тижнів або принаймні 12 тижнів до застосування).

У деяких прикладах розраховують кількість композиції(й) для застосування (наприклад, на акр або гектар) та композицію розводять у воді (або у деяких прикладах у рідких добривах) до кількості, достатньої для обприскування або зрошення площі, яка підлягає обробці (якщо композиція є рідкою, такою як мікробні консорціуми або композиції, НУТ або НУТа). У інших прикладах композиція може змішуватися з розведеними гербіцидами, інсектицидами, пестицидами або хімікатами, які регулюють ріст рослин. Якщо композиція для застосування є бо твердою (наприклад, сухою композицією мікробів, НУТс, хітину, глюкозаміну, хітозану або амінокислот), тверда композиція може бути внесена безпосередньо у грунт, нанесена на рослини або частини рослин або може бути суспендована або розчинена у воді (або іншій рідині) перед застосуванням. У деяких прикладах НУТс висушують та тонко подрібнюють перед застосуванням.

Описані мікробні композиції (окремо або у комбінації з іншими описаними авторами компонентами, такими як НУТЬ, НУТс та/або НУТа), можуть доставлятися різними способами на різних стадіях розвитку рослин, залежно від умов вирощування та сільськогосподарської практики. У деяких прикладах описану мікробну композицію та НУТр змішують, розводять рідкими добривами та вносять під час висівання насіння у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НУТЬ змішують, розводять та вносять при висіванні насіння, а також наносять на грунт біля коріння декілька разів під час росту рослин у кількості від 0,5 до 1-2 літрів на кожен акр або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У інших прикладах описану мікробну композицію та НУТЬ розводять та доставляють разом шляхом крапельного зрошення у низькій концентрації під час формування сіянців або розсади, доставляють шляхом зрошення затопленням або розподіляють як розведену суміш з поживними речовинами при дощувальному або крапельному зрошенні у теплицях на сіянцях або укорінених рослинах або, у альтернативному варіанті, застосовують окремо. У додаткових прикладах описану мікробну композицію додають до інших засобів обробки грунту у полі, наприклад, додають до засобів інсектицидної обробки для полегшення застосування. У інших прикладах, наприклад, у теплицях, описану мікробну композицію та НУТЬ застосовують окремо або разом, у комбінації з рідкими добривами (такими як рибні добрива) та іншими поживними речовинами та нагнітають у дощувальну зрошувальну систему або крапельні зрошувальні лінії під час росту рослин. У прикладі з тепличним вирощуванням описану мікробну композицію та НУТЬ застосовують разом, наприклад, розводять та застосовують під час дощувального зрошення фертигації у кількості від 0,25 до 1 літра при проростанні сіянців з наступним внесенням від 0,25 до 1 літра у середньому циклі росту під час фертигації та остаточних від 0,25 до 1 літра під час фертигації протягом кінцевих 5-10 днів циклу росту.

У деяких варіантах втілення описану мікробну композицію або консорціум та НУТЬ

Зо застосовують разом або окремо (наприклад, послідовно) для стимулювання росту, життєздатності, відповідності типу, якості, розвитку коріння та стресостійкості культур. У одному конкретному прикладі, у якому культурою є кукурудза, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції додають у борозну з рідкими добривами при висіванні насіння або застосовують як міжрядне підживлення під час внесення добрив після стадії М3, з наступним застосуванням від 0,5 до 2 л/иіакр НЖТЬ для обприскування листя після стадії М5, з додаванням та розведенням з гербіцидами, пестицидами для нанесення на листя, поживними мікроелементами або добривами.

У іншому конкретному прикладі, у якому культурою є картопля, від 1 до З л/акр мікробної композиції розводять і застосовують окремо або з 1-3 л/(акр НУТЬ при висаджуванні бульб; після цього може відбуватися внесення у грунт мікробної композиції та НМУТЬр перед бульбоутворенням, окремо (наприклад, послідовно) або спільно. Після появи рослини здійснюють нанесення на листя НУТЬ у кількості від 1 до 2 л/акр, або з окремим розведенням, або у суміші з гербіцидом, пестицидом для нанесення на листя, поживним мікроелементом або добривами і застосовують протягом сезону росту одноразово, двічі, тричі, чотири рази або більше.

У ще одному конкретному прикладі, у якому культурою є бавовна, від 1 до 2 л/акр мікробної композиції вносять у борозну при висіванні як міжрядне підживлення сабо 2 х 2 (2 дюйми убік і 2 дюйми під насінням), з добривами або без них. При появі перших білих квіток бавовни здійснюють обробку листя у кількості від 0,5 до 2 л/акр НУТБЬ, з окремим розведенням або у комбінації з іншою поживною речовиною, гербіцидною або пестицидною обробкою.

У іншому конкретному прикладі, в якому культурою є пшениця, мікробну композицію (від 1 до 2 л/акр) застосовують після зимової сплячки (стадія 54), та НУТЬ наносять на листя (від 0,5 до 2 л/акр; стадії з 54 по 510).

У прикладі, у якому культурою є цукрова тростина, один спосіб застосування передбачає використання описаної мікробної композиції та НУТЬ по 2-4 л/акр, які вносять у грунт під час сівби тростини або як міжрядне підживлення, причому НУТЬ наносять на листя у кількості від 1 до 2 л/акр при змішуванні з водою або добривами або поживними мікроелементами.

НУТЬ Застосовують окремо для обробки листя в усіх культурах для поліпшення таких властивостей, як стресостійкість, потужність рослини, якість врожаю та врожайність. У прикладі, бо у якому культурою є кукурудза, НУТЬ застосовують у кількості від 72 до 1 л/акр, один або декілька разів, змішуючи з водою або пестицидами або гербіцидами. У іншому прикладі НУТЬ застосовують для обробки пшениці як засіб обприскування листя, змішаний з водою або пестицидами або гербіцидами у кількості від 72 до 1 л/акр, з одноразовим або багаторазовим застосуванням.

В усіх культурах НУТс додають до грунту у кількості приблизно 0,5-2 кг/акр (наприклад, приблизно 0,5 кг/акр, приблизно 1 кг/акр, приблизно 1,5 кг/акр або приблизно 2 кг/акр) під час формування рослини або садіння. У інших прикладах НУТс додають до розчину описаної мікробної композиції та НУТЬ для крапельного зрошення або додають до добрив, які містять описану мікробну композицію та НУТ, у теплицях, як у наведених вище прикладах.

У додаткових варіантах втілення НУТа (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують у кількості приблизно 1-20 л/га (наприклад, приблизно 1-15 л/га, приблизно 3-10 л/га або приблизно 3-5 л/га). У інших прикладах НУТа (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) застосовують як засіб обробки насіння для підвищення врожайності та продуктивності (наприклад, приблизно 1-10 л/кг насіння, наприклад, приблизно 1-3 л/кг, приблизно 3-5 л/кг або приблизно 5-10 л/кг). У альтернативному варіанті НУТа застосовують у грунті (окремо або у комбінації з мікробами або іншими описаними авторами компонентами) у кількості приблизно 1-

З л/га для збільшення росту рослин, наприклад, для сприяння збереженню продуктивності рослин в умовах стресу.

У деяких прикладах обробка грунту, насіння, рослин або частин рослин композицією, яка включає мікроби у описаному мікробному консорціумі збільшує ріст рослин (наприклад, загальний розмір рослини, кількість листя, кількість коренів, діаметр коріння, довжину коріння, утворення пагонів, вироблення плодів, вироблення пилку або вироблення насіння) принаймні приблизно на 5 95 (наприклад, принаймні приблизно на 10 95, принаймні приблизно на 30 95, принаймні приблизно на 50 95, принаймні приблизно на 75 95, принаймні приблизно на 100 95, принаймні приблизно удвічі, принаймні приблизно утричі, принаймні приблизно у 5 разів, принаймні приблизно у 10 разів або більше). У інших прикладах описані способи у результаті забезпечують підвищену врожайність приблизно на 10-75 95 (наприклад, приблизно на 20-60 95 або приблизно на 30-50 95) порівняно з необробленими культурами. Іншими мірами

Зо продуктивності культури є кількість плодів, вихід, вміст крохмалю або сухих речовин, вміст цукру або сухих речовин за шкалою Брікса, термін зберігання плодів або зібраного продукту, вихід товарного врожаю заданого розміру, якість плодів або продукту, кущіння трави та стійкість дернини до витоптування, запилення та зав'язування плодів, цвітіння, кількість квіток, тривалість цвітіння, якість квіток, укорінення та маса коріння, стійкість врожаю до полягання, абіотична стресостійкість до спеки, посухи, холоду та відновлюваність після стресу, здатність до адаптації до бідних грунтів, рівень фотосинтезу та зеленіння та здоров'я рослини. Для визначення ефективності продуктів контроль включає таку саму паралельно здійснювану агрономічну практику, але без додавання мікробів.

Описані способи можуть застосовуватись у зв'язку з будь-якою культурою (наприклад, для прямої обробки культури або для обробки грунту до або після висаджування або сівби).

Типовими культурами, крім інших, є люцерна, мигдаль, банан, ячмінь, броколі, канола, морква, цитрусові та садові деревні культури, кукурудза, бавовна, огірки, квітучі та декоративні рослини, часник, злаки, хміль, плодові культури, цибуля-порей, диня, олійна пальма, цибуля, арахіс та бобові, ананас, тополя, сосна та деревинні дерева, картопля, малина, рис, кунжут, сорго, соя, гарбуз, полуниця, цукрова тростина, соняшник, томат, дернові та фуражні трави, кавуни, пшениця та евкаліпт.

Представлені нижче приклади передбачено для пояснення певних конкретних особливостей та/або варіантів втілення. Ці приклади не слід розглядати як такі, що обмежують винахід конкретними описаними особливостями або варіантами втілення.

Приклад 1

Мікробний консорціум АТ002

У цьому прикладі описується утворення мікробного консорціуму А1002.

А1002 було утворено з посівної партії мікробів, яку початково було одержано з плодючих грунтів та додаткових мікробів (таких як Васійй5 5рр.) (див., наприклад, патент США Мо 8,748,124, включений до цього опису шляхом посилання). "Посівну" культуру змішували з суспензією, яка містила 5,595 (маса/маса) білку молочної сироватки та 1,2 95 (маса/маса) йогурту у воді ("С маї"), та суспензією, яка містила 0,1 9о (маса/маса) спіруліни та 0,1 95 (маса/маса) екстракту бурої водорості у воді (А маї"). Суспензії А маї та С маї окремо приготовляли за З дні до змішування з посівною культурою та інкубувати при навколишній бо температурі. Посівну культуру, С маї та А маї змішували у пропорції приблизно 81:9:9. Після змішування суспензію додаткових компонентів, яка містила приблизно 70 95 (об'єм/об'єм) меляси, 0,595 (об'єм/об'єм) НУТЬ, 0,003 95 (маса/об'єм) аравійської камеді та 0,02 95 (маса/об'єм) пивних дріжджів (5. сегемізіає), змішували з сумішшю посівної культури, С маї та А маї та додатковою водою у співвідношенні приблизно 16:34:50. Суміш піддавали ферментації протягом приблизно 7 днів при навколишній температурі (приблизно 19-35 С). Через 7 днів резервуари піддавали аерації протягом 30 хвилин через день. Ще додавали води (ще приблизно 10 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували за таких самих умов протягом ще приблизно 10 днів. Ще додавали води (приблизно ще 4 95 (об'єм/об'єм)) та ферментацію продовжували протягом ще приблизно 7 днів, та у цей час зразки збирали для аналізу та депонування у АТСС. Після цього А1002 зберігали у контейнерах при навколишній температурі.

Приклад 2

Аналіз мікробів у А1002 шляхом посіву

У цьому прикладі описується аналіз мікробів, присутніх у АТ002, шляхом паралельного посіву у аеробних та анаеробних умовах.

Зразки (50 мкл) збирали з аерованого контейнера з А1002 (підданим перемішуванню із застосуванням лопаті мішалки з нержавіючої сталі при 120 об/хвил. протягом 8 хвилин) із застосуванням підданого санітарній обробці сифонного роторного насоса. У 1-й день зразок вортексували (наприклад, протягом 60 секунд при 2000 ооб/хвил.) для забезпечення рівномірного розподілу мікробів. У пробірку з 9,8 мл стерильної води додавали 0,1 мл зразка

А1002 та 0,1 мл НУТр (розведення 107). Пробірку інкубували при 35 "С протягом 72 годин без збовтування. Через 72 години (3-й день) пробірку протягом короткого часу вортексували та здійснювали послідовні 10-разові розведення у стерильній воді від 103 до 10).

Кожен розведений зразок висівали (100 мкл) на планшет з поживним агаром (для аеробного культивування мікроорганізму) та планшет з агаром для стандартних способів (для анаеробного культивування мікроорганізму), з З репліками для кожного. Планшети з поживним агаром культивували при 27 "С протягом 48 годин. Планшети з агаром для стандартних способів інкубували при 35 "С протягом 72 годин у анаеробній камері. Після інкубації для кожної культури вибирали розведення, яке давало на виході менше, ніж 100 колоній. Для вибраного розведення всі з колоній на кожній з реплік планшетів підраховували та розраховували кількість

Зо колонієутворюючих одиниць (КУС)/мл. Посів АТ002 показував 4,6 х 107 КУО/мл у аеробних умовах та 4,0 х 107 КУО/мл у анаеробних умовах.

Приклад З

Мікроматричний аналіз мікробів у А1002

Цей приклад описує мікроматричний аналіз мікробів, присутніх у А1002.

Зразок А1002 аналізували за допомогою бесопа Сепоте (Зоцій Зап Ргапсізсо, СА) із застосуванням аналізу 3 РпуїоСТір м. ДНК виділяли зі зразка із застосуванням комплекту для виділення ДНК РомжегбБоїйфФ (Мо Віо Іарогаїйогіє5, Іпс., Сагієрад, СА) згідно з інструкціями виробника. 165 рРНК ампліфікували (35 циклів ПЛР). Гени ампліфікували із застосуванням виродженого прямого праймера 27Р.1 (АСЕСТТТОАТСМТООСТСАСс; 5БО І МО: 1) та невиродженого зворотного праймера 1492К (ССТТАССТТОТТАСОАСТТ; БО ІЮО МО: 2).

Продукти ампліфікації концентрували із застосуванням способу твердофазної зворотної іммобілізації та кількісно визначали шляхом електрофорезу із застосуванням біоаналізатору

Адпепі 2100 Віоапаіулег8. До кожного ампліфікованого продукту додавали РпуїоСТВір Сопігої

Міх м, Амплікони фрагментували, мітили біотином та гібридизували з матрицею РпуїоСпВір м (3, яка включає »1,1 мільйона зондів, спрямованих приблизно на 55 000 окремих мікробних таксонів, з багатьма підтвердженнями на кожну операційну таксономічну одиницю (ОТ).

Матриці промивали, забарвлювали та сканували із застосуванням сканера СепеАіІтау? (комплекту для мікроматричного аналізу СепеСпіре», АПутеїгіх).

За допомогою програми для обробки РіуіоСпір від бесопі Сепоте випробували та аналізували приблизно 330 мільярдів молекул. Серія наборів проб з ідеальним спарюванням (РМ) та порушенням спарювання (ММ) забезпечувала дані інтенсивності флуоресценції (Р), які фіксувались як пікселі на зображенні та збирались як ціле число. Потім програма здійснювала поправку на фонову флуоресценцію та оцінку шуму та нормалізувала результати за рангом.

Після цього результати використовували як вхідні дані для емпіричного виявлення наборів зондів. Емпіричний ОШТ, відстежений набором зондів, після цього отримував таксономічну анотацію з посиланням на опубліковану у травні 2013 р. базу даних Сгеепдепе5 для 165 рРНК (дгеепдепев.ІБІ.дом) з комбінації 8-мерів, які містились в усіх зондах набору. Потім таксони розпізнавали за стандартною таксономічною назвою або за допомогою ієрархічного ідентифікатора таксонів. 60 Після розпізнавання таксонів для включення до аналізу значення, які використовували для кожного зразка таксонів, заповнювали двома різними способами. У першому випадку показник відносного поширення використовували для визначення рангу поширення кожного таксону відносно інших. У другому випадку застосовували бінарну метрику присутності / відсутності для визначення наявності кожного таксону у зразку.

Дані мікроматричного аналізу також використовували для вибору мікробів для включення до описаних авторами композицій (таких як мікроби, перелічені у Таблиці 1 та будь-якій іншій частині цього опису). Мікроби (таксон, рід або вид) розташовували у порядку відносного поширення та ці мікроби відбирали на основі потрібних характеристик.

Приклад 4

Аналіз мікробів у А1002 шляхом секвенування

У цьому прикладі описуються типові способи аналізу мікробів у АТ1002 шляхом секвенування 165 рДнНК. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішного секвенування та аналізу мікробів у А1002.

Геномну ДНК видобували зі зразка А1002. 165 рДНК ампліфікували шляхом ПЛР та секвенували, наприклад, із застосуванням мікробної розпізнавальної системи МІСКО5ЗЕО ІЮ (Арріїей Віозузіетв5// Пе Тесппоодіе5, Стгапа Ізіапа, МУ). Дані секвенування аналізували, застосовуючи програму ЗНЕКГОСК ОМА (МІСІ Гарз, Мемжагк, ОЕ). Розпізнані очищені ізоляти перелічено у Таблиці 2. Відповідність на рівні виду присвоювали, якщо 95 видової відмінності (9650) між невідомим зразком та найближчим відповідником була меншою за приблизне середнє значення 9050) між видами у межах конкретної генетичної родини, що зазвичай становить 1 95. Відповідність на рівні роду присвоювали, якщо послідовність не відповідала вимогам для відповідності на рівні виду, але все ж була зосереджена у межах чітко визначеного роду (СО більше, ніж 1 95, та менше, ніж приблизно 3 Об).

Таблиця 2

Мікроби, розпізнані у А1002 шляхом 165 рДНК секвенування. оЗразок| Мікроб | Рівеньдостовірності | 9500 | Пари основ ла |Васіїнвоюютив 0 |Вид//////7777777777/ | 7 0037. | 537 16 |Васіїювійшйпдієпвівї / |Вид/ 77777777 | 71028. | 537 о їс |Сувіпірасіїивврпаєйсив |Рід/ 77777777 771,96 | 536 о га |Гасіюрасійиврисппеі / |Вид///////77777777777 | 0И8 | 561 ас |Васіїмвоієютив ///// |Вид/ 77777777 | 09 | 537 щЩ 24 |Раепірасійивспірепвівї |Рід/ 77777777 77139 | 538 о За (Іасіюрасійшвбиснлей (Вид 177027 | 561 45 |Васіїювоюютив ////// |Вид//////777777/ | 7 0037. | 537 о Ба |Гасіобасіїиврисппей |Вид/ 77777777 | 0036 | 561

Приклад 5

Біодеградація хітиновмісних матеріалів

У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітиновмісних біологічних

Зо матеріалів із застосуванням мікробного консорціуму А1002. Однак у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітиновмісних біологічних матеріалів.

Побічні продукти креветок одержують від підприємств з переробки креветок та транспортують у закритих охолоджених контейнерах. Після перевірки якості сировини побічні продукти креветок гомогенізують для досягнення розміру частинок приблизно до 3-5 мм.

Попередньо активовані мікробні культури А1002 (приблизно 0,2-100 мл/л) та цукор (приблизно 5 г/л) змішують з гомогенізованим побічним продуктом креветок (приблизно 50 г/л) та перемішують до гомогенності суміші При безперервному перемішуванні температуру підтримують на рівні навколишньої температури (приблизно 19-35 "С) та рівень рН доводять до 3,5-4,0 лимонною кислотою. Змішані інгредієнти переносять до у підданий санітарній обробці ферментаційний чан (25 000 л) і ферментують при 30-36 "С протягом 120 год. Застосовують перемішування протягом 30 хвилин принаймні двічі на день. Під час процесу ферментації відстежують рівень рН і загальну титровану кислотність (ТТА, 95) визначають шляхом титрування з 0,1 М Маон. Ферментацію припиняють, коли ТТА досягає приблизно 3,5 95, та/або рН досягає приблизно 4-5.

Ферментовані культури подають у безперервний декантатор. Відокремлений твердий шар з етапу зціджування піддають центрифугуванню для видалення ліпідного шару. Очищену рідину (НУТБ) змішують з цукром (таким, як меляса, 10 95 (об'єм/об'єм)), потім зберігають у баках- накопичувачах або розподіляють по контейнерах. Тверді матеріали з етапу зціджування висушують перегрітим повітрям при 120 "С, доки вміст вологи у них не стає нижчим за 8 95, потім перемелюють до 200 меш. Висушений продукт (НУТс) пакують у пакети або мішки.

Приклад 6

Біодеградація хітину

У цьому прикладі описуються типові способи біодеградації хітину із застосуванням мікробного консорціуму А1002. Однак спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для успішної біодеградації хітину.

Мікробну культуру А1002 попередньо активують цукром (приблизно 2,5 г/л) у чані на 10000 л протягом трьох днів. Активований інокулум змішують з гідролізатом білка, таким, як НУТЬ (приблизно 500 мл/л) та хітином (НУТс, наприклад, одержаним, як описано у Прикладі 5). Суміш обережно перемішують протягом 1 години для досягнення повної гомогенізації. Суміш ферментують протягом 20 днів при навколишній температурі (наприклад, приблизно 19-35 "С) з перемішуванням протягом приблизно 8 годин щодня та контролем рівня рН (рН 4,0-5,0). Зразки збирають періодично, наприклад, кожні два дні, для кількісного визначення глюкозаміну та, необов'язково, хітозану. Після завершення ферментації суміш фільтрують крізь фільтр, який затримує частинки по 300 меш, здебільшого залишки хітину. Фільтрат утримують та поміщують у пляшки після характеризації продукту.

Приклад 7

Обробка польової кукурудзи мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності кукурудзи із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка польової кукурудзи мікробною композицією, приготовленою подібно до А1002, або

Зо з НЖТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 здійснювали для оцінки врожаю після додавання мікробної композиції до типового азотного міжрядного підживлення (1 л/акр мікробної композиції; 32 САМ рідких добрив; випробувана ділянка) у порівнянні з необробленою контрольною (порівняльною) ділянкою, при застосуванні на стадії М2. У двох великомасштабних реплікованих випробуваннях на смугах (загалом 1 акр) врожаї на випробуваних смугах були на 8-10 95 вищими, ніж на паралельних контрольних (порівняльних) смугах (Фігура 4А).

Випробування 2 продемонструвало, що внесення у борозну та міжрядне підживлення були однаково ефективними для підвищення врожайності кукурудзи. У випробуванні на 1-акровій смузі великі ділянки обробляли мікробною композицією, яку додавали у борозну під час висівання насіння (1 л/акр) або на стадії М2 як міжрядне підживлення (3 галони рідких добрив

МРК, 1 літр суміші поживних мікроелементів). Обидва способи застосування продемонстрували, що випробувані смуги мали приблизно 5 95 підвищення врожаю, приблизно 10 бушелів/акр порівняно з контрольними ділянками (Фігура 4В). Додавання суміші промислового виробництва 1095 гумінової кислоти / біостимулятора до випробуваної композиції (Асіцаге) у борозну забезпечувало таке саме 595 підвищення врожаю, що й при додаванні лише мікробної композиції порівняно з необробленими контрольними ділянками (Фігура 48).

Випробування З продемонструвало, що додавання азотних стабілізуючих продуктів або не мало впливу, або трохи збільшувало ефект підвищення врожаю, забезпечуваний мікробною композицією для кукурудзи, та додатково підтверджувало незмінне підвищення врожайності, забезпечуване мікробною композицією, або внесеною у борозну, або змішуваною з композицією для міжрядного підживлення (Фігура 4С). При випробуванні на 1-акровій смузі внесення у борозну та міжрядне підживлення забезпечувало З 95 підвищення врожайності (8 бушелів/акр) у порівнянні з контрольною (порівняльною) ділянкою. Додавання Асіцаїе викликало невелике підвищення врожайності (4 95 зростання врожайності, на 9 бушелів/акр більше у порівнянні з контрольною ділянкою). Додавання азотних стабілізуючих продуктів, Іпеїіпсі або М-Ктгев55, або не давало ефекту (незначне 2,5 95 зростання врожайності для Іп5ііпсі) або дещо більше зростання бо врожайності (4,6 95 підвищення врожайності для М-Кгез5, на 11 бушелів/акр більше у порівнянні з контрольною ділянкою).

Випробування 4 продемонструвало, що НЖТЬ при внесенні у борозну також підвищує врожайність порівняно з контрольними ділянками. У 20-акровому випробуванні НУТЬ додавали до добривно-поживної суміші для внесення у борозну (1 л/акр). Порівняно з паралельною контрольною (порівняльною) площею оброблені НУТЬ акри давали підвищену на 3,595 (7 бушелів/акр) врожайність (Фігура 40).

Випробування 5 продемонструвало, що при оцінці у режимі випробування на реплікованих ділянках одноразова бактеризація грунту для вирощування кукурудзи мікробною композицією у кількості 1 л/акр з внесенням у борозну на стадії Мб, яку доставляли з 28 95 азотних добрив через крапельне зрошення, забезпечувала 1495 підвищення врожайності у порівнянні з необробленою контрольною ділянкою по п'ятьох реплікованих ділянках (Фігура 4Е).

Випробування 6 продемонструвало, що НУТЬ при окремому застосуванні для обробки листя кукурудзи також забезпечує 9,595 підвищення врожайності порівняно з необробленою контрольною ділянкою при випробуванні у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками.

НУТЬ наносили шляхом обприскування на листя двічі по 1 л/акр щоразу на стадіях У8 та МТ (Фігура 4Б).

Випробування 7 також було випробуванням у рандомізованому режимі з реплікованими ділянками кукурудзи, яке здійснювали в умовах дефіциту води. У цьому дослідженні кількість зрошення була обмеженою до 11 дюймів води у порівнянні з ділянками з належним поливом, які отримували 17 дюймів зрошення. Одноразова обробка із застосуванням 1 л/акр мікробної композиції, яку доставляли на стадії Мб з 2895 азотних добрив через крапельне зрошення (оброблена ділянка), забезпечувала 38 95 підвищення врожайності у порівнянні з ділянками, які обробляли лише добривами (необроблена порівняльна ділянка). Збільшення врожаю, яке спостерігалося при обробці мікробною композицією, представляє потенціал збільшення врожайності на 31 бушелів/акр (Фігура 45).

Приклад 8

Обробка пшениці мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності пшениці із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка пшениці мікробною композицією, приготовленою у спосіб, подібний до приготування А1002, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 продемонструвало значне підвищення врожайності пшениці, якому сприяло внесення мікробної композиції у грунт. У цьому 80-акровому випробуванні мікробну композицію додавали у кількості 1 л/акр до суміші добрив для поверхневого підживлення на стадії 54.

Зібраний врожай демонстрував 11 95 (10 бушелів/акр) підвищення врожайності при застосуванні мікробної композиції (Фігура 5А).

У випробуванні 2 порівнювали три великі випробування у одній географічній зоні із загальною площею 271 акр обробленої мікробною композицією (випробуваної) та 354 акри паралельно вирощуваної необробленої (контрольної) пшениці. Усі випробування виконували однаково, з додаванням мікробної композиції (1 л/акр) до суміші добрив для поверхневого підживлення та застосуваннями на стадії росту пшениці 54. Відносно паралельних контрольних акрів на тій самій фермі оброблена пшениця давала вищі врожаї, з підвищенням врожаю від бою до 1795 ії до 3695, з середнім підвищенням врожаю для трьох показників по фермі приблизно 16 95 (Фігура 5В).

У випробуванні З оцінювали обробку пшениці мікробною композицією та НУТЬ у комбінації, та було виявлено, що комбінація підвищує врожайність. У великому випробуванні з круговим зрошенням (129 акрів) мікробну композицію вносили до сівби у кількості 1 л/акр, включену до нормальної програми підживлення, з наступним круговим доставленням НУТЬ як засобом обприскування листя (1 л/акр) та гербіциду на стадії росту пшениці 56. Порівняно з необробленими контрольними (порівняльними) рослинами оброблена площа давала на 10 95 вищий врожай (14 бушелів/акр), ніж контрольна площа (Фігура 5С). Крім того, типові рослини пшениці з оброблених ділянок візуально мали більше коріння порівняно з необробленими контрольними рослинами (Фігура 50).

Приклад 9 60 Обробка томатів мікробною композицією

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності томатів із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка томатів мікробною композицією, одержаною подібно до АТ1002, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бурянами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/лакр з одноразовим внесенням при пересаджуванні (у воді для пересаджування) з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (чотири рази). На 10-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 10-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 8 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура бА).

Випробування 2 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/"акр шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (п'ять разів). На 49,6- акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 4,45-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 9 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6В).

Випробування З мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/лакр з одноразовим внесенням при пересаджуванні (у воді для пересаджування) з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (тричі). На 15,6-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 73,2-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 2995 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6С).

Випробування 4 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/«акр шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (чотири рази). На 8,7- акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 6,57-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала знижений врожай у порівнянні з контрольною (ФІГУРА 60). Однак на це

Зо випробування вплинуло серйозне навантаження через хворобу (Ризагішт), яке, очевидно, зумовило результат випробування. Крім того, у цьому випробуванні розмір ділянки був відносно малим, а також воно включало обробку різних культурних сортів.

Випробування 5 мало на меті оцінку обробки томатів мікробною композицією із застосуванням 1 л/акр у комбінації з обробкою добривами. Одне внесення здійснювали при пересаджуванні у режимі 8-7-7 з наступним застосуванням шляхом крапельного зрошення кожні три тижні (тричі) ОАМ. На 33,3-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 16,45-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 5 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 6Е).

Приклад 10

Обробка соняшника мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності соняшника із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка культури соняшника мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1002, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

У цьому випробуванні оцінювали обробку соняшника мікробною композицією, яку застосовували у кількості 1 л/акр шляхом крапельного зрошення через 30 днів та 60 днів після сівби. На 93,5-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 97,13-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 5095 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 7). Крім того, обробка у результаті забезпечувала збільшення швидкості проростання.

Приклад 11

Обробка рису мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності рису із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що 60 способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка рису мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1002, продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

У цьому випробуванні оцінювали обробку рису мікробною композицією, яку застосовували у кількості 1 л/акр з водним розчином аміаку. На 61,8-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 100,7-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 6 956 вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 8).

Приклад 12

Обробка сої мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності сої із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка сої мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1002, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування 1 продемонструвало підвищення врожайності сої, якому сприяло застосування НУТр у кількості 1 л/(акр з фунгіцидом. У двох випробуваннях на одному акрі оброблена площа давала приблизно на 5 95 більший врожай у порівнянні з контрольними рослинами (Фігура 9А).

Випробування 2 мало на меті оцінку обробки сої мікробною композицією або обробки мікробною композицією та НУТ у кількості 1 л/акр шляхом листового та міжрядного підживлення. Оброблена площа давала знижений врожай у порівнянні з контрольною (Фігура

Зо 98). Однак випробування здійснювали на ділянці малого розміру у поєднанні з проблемами, створеними дикими тваринами (перед збиранням врожаю на ділянці оселились олені, які споживали боби).

Випробування З продемонструвало підвищення врожайності сої, якому сприяло застосування НУТЬ у кількості 0,5 л/акр з гербіцидом шляхом нанесення на листя. На 60-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 26,48-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 12 95 підвищений врожай у порівнянні з контрольною.

Приклад 13

Обробка полуниць мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності полуниць, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка полуниць мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1002 плюс НУТЬ продемонструвала збільшення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Збільшенню сукупної товарної продуктивності сприяло застосування мікробної композиції та

НУТЬ шляхом крапельного зрошення. У цих п'яти незалежних випробуваннях сорт Забгіпа оцінювали в Уельві, Іспанія. За тиждень до пересаджування розсади на ділянках з підвищеними грядками 2 л мікробної композиції та 4 л НУТЬ розводили у воді тай додавали до розчину для крапельного зрошення на гектар при однаковій нормі застосування через 2, 4 та 6 тижнів після пересаджування. На 3, 5 та 7-й тижні розведену мікробну композицію додавали у кількості 1 л/га та розведену НУТ у кількості 2 л/га. З 9-го тижня до кінця сезону збирання врожаю розведену мікробну композицію та НМТЬ додавали по 1 л/га. В усіх п'яти випробуваннях обробка збільшувала врожайність на 5-11 95 порівняно з паралельними необробленими ділянками з середнім підвищенням врожайності приблизно на 8 95 для всіх п'яти випробувань (Фігура 10).

Приклад 14

Обробка столового буряка мікробними композиціями бо У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності столового буряка, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка столового буряка мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування АТ1002 плюс НУТЬ продемонструвала збільшення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Збільшенню середньої маси зібраних коренеплодів сприяло застосування мікробної композиції (2 л/акр) та НУТЬ (2 л/акр) шляхом крапельного зрошення та НУТЬ (1 л/акр) шляхом нанесення на листя. На 8-акровій випробувальній ділянці порівняно з 9-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно у 2,2 разу вищий врожай у порівнянні з контрольною (Фігура 11).

Приклад 15

Обробка савойської капусти мікробними композиціями

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності савойської капусти, із застосуванням мікробного консорціуму. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка савойської капусти мікробною композицією, приготовленою із застосуванням способу, подібного до способу приготування А1002, або з НУТЬ продемонструвала значне підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними і здійснювалися паралельно для оброблених мікробною композицією або НУТЬ ділянок (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Випробування продемонстрували збільшення врожайності капусти завдяки застосуванню мікробної композиції (2 л/акр) та НУТЬ (2 л/акру шляхом крапельного зрошення та НУТЬ (1 л/акр) шляхом нанесення на листя. Капусту збирали у два цикли, представлені як "перший зріз" качанів капусти та наступний "другий зріз" качанів капусти. Як показано на Фігурі 12А, на 10,9-

Зо акровій випробувальній ділянці порівняно з 14,9-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 18 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (перший зріз) та приблизно на 31 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (другий зріз). Як показано на

Фігурі 12В, на 3,7-акровій випробувальній ділянці у порівнянні з 1,5-акровою контрольною ділянкою оброблена площа давала приблизно на 6195 вищий врожай у порівнянні з контрольною (перший зріз) та приблизно на 64 95 вищий врожай у порівнянні з контрольною (другий зріз).

Приклад 16

Обробка насіння та бульб НУТа

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищеної врожайності пшениці та картоплі із застосуванням попередньої обробки насіння або насінних бульб НУТа. Спеціалістові у даній галузі стане зрозуміло, що способи, які відхиляються від цих конкретних способів, також можуть застосовуватися для підвищення врожайності.

Обробка насіння пшениці або насінних бульб перед сівбою композицією НУТа, яку приготовляли із застосуванням мікробного консорціуму у спосіб, подібний до приготування

А1002, продемонструвала підвищення кінцевого врожаю. Усі агротехнічні заходи стосовно внесення добрив, культивації, боротьби з бур'янами та боротьби зі шкідниками були ідентичними та здійснювалися паралельно для оброблених (випробуваних) та контрольних (порівняльних) ділянок.

Для пшениці насіння обробляли у розведеній суспензії НУТа, яку розводили у кількості З мл

НУута у воді на кг насіння. Після вкривання насіння та висушування на повітрі оброблене насіння висівали та порівнювали з ідентичними ділянками необробленого насіння. Паралельно засіяні ділянки площею у один акр демонстрували приблизно 22 95 збільшення зібраного врожаю пшениці (Таблиця 3)

Обробку насінних бульб картоплі здійснювали шляхом розведення НУТАа у воді та обробки у кількості 1 мл на кг насінних бульб. Після висушування на повітрі оброблені насінні бульби висівали паралельно з необробленими контрольними бульбами на реплікованих ділянках по 1200 метрів. Оброблені НУТа насінні бульби давали збільшення врожаю картоплі на 32-35 95 у двох окремих випробуваннях (Таблиця 4).

Таблиця З

Врожай від обробленого НуУтТа насіння пшениці

Обробка Доза Вага соломи / Вага зерен / Врожай й (мл/кг насіння) 5 ме площі (кг) 5 ме площі (кг) (кг/акр) нНУта 77800..7ї1.ЙМБМ 8 1177726 с 1980

Необробл! 3333-1155. 1...17.11610

Таблиця 4

Врожай від оброблених НуУтТа насінних бульб

Доза Кількість бульб/ | Вага бульб / м: | Кінцевий вихід | 95 збільшення

Обробка . (мл/кг насіння) рослину (кг) (кг/акр) виходу бульб

Випробування 1 нНУта 12448

Необробл.ї | - | 6 | 168 | 9440 0

Випробування 2 нНУта 700 77777178 7177252 | 10720

Необробл. 7932 0

Приклад 17

Підвищена стресостійкість картоплі

У цьому прикладі описано типовий спосіб досягнення підвищення якості бульб картоплі шляхом обробки мікробною композицією, подібною до А1002 та НУТЬ, під час вирощування у стресових польових умовах.

Сорт картоплі Кибхбзеї Виграпк вирощували у традиційних умовах у випробуванні з реплікованими ділянками (чотири ділянки) та обробляли (мікробна композиція та НУТЬ у кількості 1 л на акр під час сівби у борозну, з наступним дворазовим нанесенням на листя НУТЬ у кількості 1 л/акр через 55 днів, а потім через 85 днів після сівби), або не обробляли (контроль).

Сорт Киззеї Виграпк є схильним до зниження якості в умовах нестачі води, поживних речовин або спеки. У цьому випробуванні обробка мікробною композицією та НУТЬ підвищувала толерантність до викликаного стресом зниження якості, яке називається дуплистістю. На ділянках, оброблених мікробною композицією, 1,68 95 зібраних бульб було уражено дуплистістю на відміну від контрольних ділянок, де відсоток дуплистості складав 8,35 95 (Таблиця 5).

Таблиця 5

Дефект дуплистості картоплі 32181 8,35 9

Мікробна композиція плюс НУТЬ 32,636 1,68 96" хр«0,01 у порівнянні з необробленими

Приклад 18

Аналіз життєздатності огірків

Швидкі функціональні аналізи рослин застосовують для швидкої оцінки реакції рослини на нові мікробні композиції. із застосуванням аналізу життєздатності та росту огірків цей приклад демонструє, що А1002 посилює ріст та розширення листя рослин.

Після попереднього пророщування сіянців огірків у просоченому поживними речовинами рулонному папері для пророщування протягом чотирьох днів пророщені та синхронізовані рослини обробляли розведеною сумішшю рідких добрив та мікробного консорціуму. Рослини переносили до підготовленого безгрунтового середовища росту, попередньо обробленого добривами та випробувальним розчином. Мікробну композицію А1002 розводили у

Зо співвідношенні 112000 у поживному добривному середовищі. Як контрольну обробку для порівняння брали еквівалентну кількість води, яку додавали до поживного середовища.

Принаймні 16 рослин, які представляли кожну обробку й вирощувались у горщиках, включаючи контрольні рослини, рандомізовано розподіляли по планшетах і вирощували у визначених умовах росту з контролем температури та світла. Через 18 днів вимірювали індекс площі листя (ГАЇ) першого справжнього листа кожної рослини. Також записували вологу масу всієї рослини.

Дані аналізували із застосуванням однофакторного аналізу АМОМА (дисперсійного аналізу) та апостеріорного критерію Тьюкі для порівняння зразків у експерименті.

На 18-й день показник ГАЇ першого листа завдяки обробці АТ002 був значно вищим за контрольне значення (Фігура 13).

У альтернативному або додатковому до описаного вище варіанті описуються такі варіанти втілення:

Варіант втілення 1 стосується композиції, яка включає мікроби у депонованому у АТСС зразку РТА-121751 (А1002).

Варіант втілення 2 стосується композиції, яка включає п'ять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 з5рр., Алозрігійшт 5рр., Резепдотопа5 взрр., Іасіобрбасіїй5 врр.,

Вгемірасієгіит 5рр. та Меїпапозавєїа 5рр.

Варіант втілення З стосується композиції, яка включає десять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., Ал7о5ріпШит 5рр., Рзепдотопаб5 5рр., Гасіорасійи5 5рр.,

Резинососсив 5рр., ОезиПоїотасиїшт з5рр., Магіпобасієг 5рр., Мігозоритійй5 5рр. НВитіпососсив5 5рр., Адиабасієгцт врр., Асідігота 5рр., Містосоієив врр., Сіозійдіит в5рр., Хепососсив5 5рр.,

Вгемібасіегішт 5рр., та Меїпапозаєїа 5рр.

Варіант втілення 4 стосується композиції, яка включає п'ятнадцять або більше мікробних видів, вибраних з-поміж Васійи5 5рр., А2о5рігпійшт 5рр., Рхейдотопах 5рр., Гасіобасійи5 5рр.,

Резинососсив 5рр., ОезиПоїотасиїшт з5рр., Магіпобасієг 5рр., Мітозоритіїш5 5рр. Витіпососсив 5рр., Адиабасієгцт врр., Асідігота 5рр., Містосоієив врр., Сіовігідішт 5рр., Хепососсив в5рр.,

Вгемібасіегішт 5рр. та Меїйпапозаєїа 5рр.

Варіант втілення 5 стосується композиції згідно з будь-яким з варіантів втілення з 1 по 4, яка також включає один або декілька компонентів, до яких належать хітин, хітозан, глюкозамін та

Зо амінокислоти.

Варіант втілення 6 стосується способу, який включає: - змішування хітиновмісного біологічного зразку з композицією згідно з будь-яким з варіантів втілення з 1 по 5 для утворення суміші; - ферментацію суміші; та - розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

Варіант втілення 7 стосується способу згідно з варіантом втілення 6, причому хітиновмісне біологічне джерело включає водяну тварину або побічний продукт водяної тварини, комаху або гриб.

Варіант втілення 8 стосується способу згідно з варіантом втілення 7, причому водяною твариною є водяна членистонога тварина.

Варіант втілення 9 стосується способу згідно з варіантом втілення 8, причому водяною членистоногою твариною є креветка, краб або криль.

Варіант втілення 10 стосується водної фракції, утвореної способом згідно з будь-яким з варіантів втілення з 6 по 9.

Варіант втілення 11 стосується твердої фракції, утвореної способом згідно з будь-яким з варіантів втілення з 6 по 9.

Варіант втілення 12 стосується способу, який включає контактування грунту, рослин, або частин рослин з композицією згідно з будь-яким з варіантів втілення з 1 по 5.

Варіант втілення 13 стосується способу згідно з варіантом втілення 12, який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з компонентів, до яких належать хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

Варіант втілення 14 стосується способу згідно з варіантами втілення 12 або 13, який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з водною фракцією згідно з варіантом втілення 10 або твердою фракцією згідно з варіантом втілення 11.

Варіант втілення 15 стосується способу згідно з будь-яким з варіантів втілення з 12 по 14, який також включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом.

З огляду на багато можливих варіантів втілення, до яких можуть застосовуватися принципи винаходу, слід визнати, що наведені варіанти втілення є лише прикладами та не можуть розглядатись як такі, що обмежують обсяг винаходу. Натомість обсяг винаходу визначається 60 представленою нижче формулою винаходу. Таким чином, ми заявляємо як винахід усе, що охоплюється обсягом та сутністю цієї формули винаходу.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Адектпо5 до чооп, 5упо-жопа НН чзаогіа5, Каспівеп шадпег, В. Ву казїадора! , 5зеімазипдагат «120» МІКРОБНІ КОНСОРЦІУМИ «130» 9223-93922-02 «1505 5 62/126,337 «1515 2015-02-27 «1605 2 «170» РатептІп уегеіоп 3.5 «2105 1 «211» 20 «2125» ДНК «913» Штучна послідовність «220» й | Й Й «223» Синтетичний олігонуклеотидний праймер «40025 1 адгуєєтдаї стрддсісавао 20 «210» 2 «9211» 19 «2122» ДНК «213» Штучна послідовність «220» . «223» Синтетичний олігонуклеотидний праймер «4005 2 додєтасстїтд стасцдастї 19

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Композиція для підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин, яка включає мікроби з патентного депонування мікроорганізмів АТСС під номером РТА-121751.

2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що додатково включає одне або декілька з наступних: хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

3. Спосіб біодеградації хітиновмісного біологічного матеріалу, який включає: змішування хітиновмісного біологічного джерела з композицією за п. 1 або п. 2 для утворення суміші; ферментацію суміші; та розділення ферментованої суміші на тверду, водну та ліпідну фракції.

4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що хітиновмісне біологічне джерело включає водяну тварину або побічний продукт водяної тварини, комаху або гриб.

5. Спосіб за п. 4, який відрізняється тим, що водяною твариною є водяна членистонога тварина.

6. Спосіб за п. 5, який відрізняється тим, що водяною членистоногою твариною є креветка, краб або криль.

7. Водна фракція, одержана відповідно до способу за будь-яким із пп. 3-6.

8. Тверда фракція, одержана відповідно до способу за будь-яким із пп. 3-6.

9. Спосіб підвищення врожайності сільськогосподарських культур рослин, який включає контактування грунту, рослин або частин рослин з композицією за п. 1 або п. 2.

10. Спосіб за п. 9, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома з наступних: хітин, хітозан, глюкозамін та амінокислоти.

11. Спосіб за п. 9 або п. 10, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з водною фракцією за п. 7 або твердою фракцією за п. 8.

12. Спосіб за будь-яким із пп. 9-11, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з рідким добривом.

13. Спосіб за будь-яким із пп. 9-11, який відрізняється тим, що додатково включає контактування грунту, рослин або частин рослин з одним або декількома пестицидами, одним або декількома фунгіцидами, одним або декількома гербіцидами, одним або декількома інсектицидами, одним або декількома рослинними гормонами, одним або декількома еліситорами рослин або комбінаціями з двох або більшої їх кількості. інн! :

т. 705222 (А 5 А Х «А 2 4 сстттттттттттттттттттх Змі я АТ002 СУАТ вальний ві ' Ь, окьокьдктььскьдквьдквьдьсььсььдктьдксьсьсксьЙ миши сини ! : Ферментація ні | | Вода. Насшщня г. 1 щ о щ ке е і х 5 щ- ра і Ми й щоб шо ЩО ща з -ї ЕМ ож За - ж я щ поля ся я ш щ Я джек З А. г вт до І З : Ж ді

; 5. Кр ке ! шк щ х ж ко ян яку КА щох че о щі -ж щі --е- і «і що СУД Га ЯН Е щу г 5 нишнй ї ща ча кх ще нишнй з Е Кк и де ЩО

ЗШ. «Що ще Се шай ЗЕ - ! Мі З Ж За рем Жук щк Ген нки що | Ек д - оо; ев І - и | МОБ Ох ка Бо Ь 5 ше ОО пли соч й ши о Ку ее г Я - З о рені ЕМО К оо НАНУ роя ко К СС НЕЯ 9. . Я ж кл ЩО г Ех ( не От м ЧІ льше,

НЕ.

ил нини най Декантація р, і бак дляллляллляллялляллялллля ОоНУте СО «Верментація С АЗлО0 З І Н Н

ФІГ. 3 т сх «й; жінк з вжи й жк х Дані випробування І на кукуруазі (Айова) Ж зм 175 1781 ооляж КЕ ВООЄ ХО ВОМ ШЕ Тая 0 157,96 у я Контроль щоб Мм ПИ о. З п зе БО ш- її ш- й ш ше: ная ЕОЗ Оброблені З МКК ее ня ши 0 шк ! шо а о п. Фо яд шою оон БК он В я шо ше й 7

ФГ. ЗА

Д -е. ск т С, Ще і ре й ; Ех Кк КТ ь Заг пре вки Дані випробування 2 на кукурудзі (Кентуккі) і 3104 Ое зок ПО ЗУ ро ВИ Ки с с 0: З ех ко оо во МИХ Я ВАК що Же ЗМО КК Я ОХ Й - затв Ве тав на п З с АК ОБОЄ МУ ЗО щи ОО г- г 5 зе ОН: МАМО сфнилеюииоє МОХ ХНН оо ОВ 7 ши І х КОМІ ВЕ ОН 0 З еВ о поро, ВО сне МОЄ пе ВЕ Ж шо ВО Ви о ЕЕ Бо 495 пишне ВОНО ши тр п а НН НК Я МОБ ЗБЕ що ши ОО шк 5 ДЮ Д( (я СЕ: МОХ ЖЕО: ВОК пон М мк 0 ОВ ПОБо и ВЕ пе о СО ВМ Би ВОМ ПАК:

ЯМ. В ВОВК В ВКЯВК я бо М... У борозну У куме я КА крядне Асзае птптаживлення ччг. яв ДЦ, 2 св-ьх б я син : ї ів й К хЕ вок екв З куті воюдня лат випцосування зна кукурудяи (Кентуккі) ЖК ак зей ! ша я яз Я -й зав , ща т І «ЯК зак МУКИ те «им : ОО но МОХ МБО 5 зас 33 Вй меї зва вя сю що Й РИ ла вт тя нє з НН ВЕ ЗОН ЕКО Я 0 Ж пжахх й ме ее СК отит МОМ сет МОЖ. свои ОО що КОНТ ії зв І й: ЕЕ о Контроль Фони ВВ он В по ВО СИМОНА КОКО сон ЗВ сей - кеИи зак зов о. ко в Оброблені : за КБ ОБОХ Нм ШО по ВК пи МООКО со З ше нн й ше в и в в З х її й ж й їх. о. п. ях МОЩІ ВОМ оо ВОК зон Ж по В що ВО ни її ЕЕ й й й я як. пе ОК ст ОК о МО ЩО МОХ о» мк о КО 0 БОБ і ОО К с. МОХ ВЕ 5 . З о В. КО МО о МО . ВЕБ ЗО 2 су» ВАК. ВАН ООН АНА КА АНА ОК. ії. ЖЕ. У борозну У берознж я 0 Мібкрядне Уїниюзни т У борозну є Асщище 0 ВеркиБЛЕННЯ Зівзцт МУКтєвв Ява

Ії Кк я я Я катки їх ї Дані випробування на кукурудзі (Айова) 206,24 М: ОО ОКО ж ; с : Ко МО ІЗ с ВОДУ слооочннянетнишн ному мання в ИН в , о но ! КО У 6 КОНТ. я 159.19 с ОПТ ч- зов як ОО ж ОБроб - цен зи МО щ Бе с Ж Я сомуєтелуєттчю нев ПЕДЕЕНОЦ о пеніс с путтетт сире др тктютею іти Ф с с т ПН ов М Я Е п ОО с Ш зе с с жи 0/0ИМСН ООН В В, ем я ох оон и В с НН В В В

ФІГ. 40 Я 8 - КК овен я о . й " ВИХ М жо Мо с пеня . попит - в КО В З го с . ! Бк, и ВАВ о ДЕНО ор Мекми хо ще пис ня» ВВЕ. я піт ПОВ Х як . - 100 с с - ЕЕ ОКО о ши шо 80. Шо пишна - | ин їжа ВМО Фа й п, Е: о - 80 п пепинннн Е | ше МЕ о г. п п ШО40 с що - . ше є ЕЕ ООК В БЕХ пон; : з в ОВ о. - -їх ВАНН Мо ноя Еаасім 9 зп тяияяялиитититя ння НВК пінитися, ках сх шу . пе. Ей 0. с ! Й ЕЕ н М Кх й . МОСС І о пн, Оброблені Контроль Обробка ге

- ва 000000 а п о б с . З с . Я о я і. с. че с о : З Ко ЕКО Кох ; ш до с . о с с г ит, ОМА ОВ п як Бо с НВ нин Пт й ши ш Коен і: ши ( НН миня я що. Др слини ШИ нн нн ж леж ни, нНУтВ Контроль Обробка ГО ЗЕ

Ж и.

2 о. с - | ! "ВМ І І шо М І - ЕК с 5 .

5. с о яко 0 НН х . о

- Б. . о ж ОК р ох ХК З е НК й о. : : В ин Бе 30 ш-ен 0 ше пеня с : що в 0. - о с с ЗО г. і оон Б й гопиихи МУ .сОС пит, плити пи, Сіл лезі І Кант Оброблені Обробка Контроль

ФІГ.

Ки щ. Цанів її слі в і нпробування Її на шпенині (Лжоряжія) ма ражоо ДОб5 ння 75 : пнів тв ково

З 5. с пгт Я ЗО пед с 3 одини ня дини тет ек уч клину нти, о і ї няння тю сдднтчтиия МО щ- З о в ОК ОХ ще ЗУ мк і

Ж о. 0 ши Сюроблені ОВО соня с г: Що пероні покйнемнсо Оя с Й ї- ОВ ЗО в прин к тую урия 5 ! а Б ш 000 ши ; ОК С оо шннН Вінюкан сбушелів'акр) жан ібушеліивакрі

ФГ. ЗА Чані Дані випробування 2 на ншениці (Меріленд ша за58 дню одне я й ! Ку КЗ . ЩО н- лев ие ше й о. Б УЛАМОВ ОХ А: що ПЕ ЕЙ сен ши с. і: я, шШ і Пд ВВ 1568 «ВО ой м 5 шк НЕ. пос о. хх КиантОиль Мб нн ех ша о 0. пи ВОВК о. ях - й ШЕ. 000178 Оброблені кв Кк В о ЗШ при й ни Ж ов ш ШЕ й -

їх. зано о ші я. Щ век А ПК КОСУ ВАЖ СО . УЛ ХНИ ОКХ і ПУ. ВХ 5 С о УМ НН МК З Куй, пос. ВШ. В Б ОО Виробник А ЦШивовних В й нин оон Вивобних В Виробник Поле 1 Кк . ЗЛЕ УН ц Що ПОЗ Дані випробування 2 на пшевнняі (Вашин й пн. зашингтені 14745 о ПК КК в с г: п ее З НИ

З 5. і Ох : БО с ннннннняя с ЗО ОК щу ОК ще і ! зд НИ ПВ Г3 прета усквенкенеИ с і що поолея я с с ран Се с с ру ШО с УТ рН КК ЗИ о Б п І с 135 сне ННЯ го Є

По НЯ А ше МОБ с г с с 9 с с М о у З шо ХК б; с ОО ОМ и В УМО пе КК З . Шк А ХОМ, 3 с І о о ох о с с М З НМ М ОН пе ЗМУ с ОБ Я ЕД В ех ОКХ ня БУ г ПОМ с с . с о. с о с с і ОК СЕ с нею КЕ Не ЗО с МЕ ех НК шо а Ко З Ж КОКО ря ІЕЕ с с о. КМ 0. с с . . с с - с А с о ПОС г ОК С о . о. 0 По ха ТОВ 0 ХХ СК НИК АВ Он ОК ся НО КК сш ОХ с . с о п. с с Є с ЕЕ ння ОКО СЕК Кия ОО я Не ОК ах он ня с З с 5 с с с . 0. . З с пі о ря рух с о ПЕ ОО ВН с п ОН я По г ВЕН пики я пон 0 с о

- о. ОО Пед н ПМК МЕ В Коди ЕТО ОХ ЗМ - с п ОК оре НА ПОХЕ ОХ пове я ХХХ Ор 85 о. ЩІ ОБО не о. зх Є ОН КО ща ПІК ШИН ППО ОВК 5 ДСК ХК МИ ен КК КВК ианннонн ПОДИВ З шен я БЕЖ НУ п о СОН ПОТ и В 6 ПО ОО 5, ЕНН хе ау УК ня п и н.с Ек о НО о. | . 0. пан п о ОВ Мк УК ПДЕИЛІМЧІ ух се у НУ ШИНИ ПІТИ юки Ви З х о. її. о Вих ПОВ, ще 5. НЯ ення ня ОН о хо с у ; с 1 З не о о КНННЯ ШО ЛТ КВ КОЗА Дн Нео Й о о о о . З Пн по По В ОКО АН З М ВВ ХО се НН В с о о. о. ій Б. об кноя НН . с КОСИ пес, що хх ЗХ ЖК МОм ОЗ НКИ синя СІК я СВ не СОН оо НН Я ОХ ЗАМКІВ ВН ВУ ЕКО ПК Я йо М І ЗОН т о. п - ПТ п с о Ен Ша о НО У шт с ІК о ПО ОН о о. с ШК пеш я ООН и ДННЕ По і Я о о. -. о. ТО вних с о с З 1 нак км Ес ЕХ ДЯ о с . Зоя Ведення КЕ о п . ши он НК З ен ин Но ХХ ких ПИШИ сен ОХ о . о о но що ж З 0 КЛІ ни ПО с ЕВ МКК о. є Ех аа НИ ПИШИ ТИКИ КИ МУ КИМ СЕНТ ПОДА ВЕН КЕН о ах с - Яд: НЕМОВ пооонн н 5 с ве ї . п шо її ля В рооуват тя, І окре екесвр ЖК пн пи К ше бя В ЕО ОТО ву сптинн ння, шо ШО я ук я ЩЕ і п ща щи сонний внтро Ні ОА Я ОККО пис ЕК А НВ ПНЯ єс Ше о БЕРДНИК ДЕН ооо МОЗ ПооттЕ кот он БЕБЕВ, УМІННЯ 2 а шо щ 5. Ме ОО . я

ФІ. 5 ТЕ жк: Її Й ї данівнпробування 1 його х і на томатах (Каліворні М Казіфорнія) і Нью ик Й Я змогу ки вх п Що ав. текти кет уми якк тя . : ши с шо - в 565.047 с шо да ОО 5: НИ ОО --н-щх - Ме Я о х ід; нічне 5 000000 шк як петн ВКе р реЯ о Що я Сюбробле - о нн ог ШИ и тини КК х КА ЕМО ОУН о. .

З. с ХЕНИХ КО ВН ОО ПО с ОЗ ОХ мічна зи З с 4 ЗК ОО» п ЩЕ -- АК МИ ОМ вв в ши о ПЕКИ щ ; шення зукчнняні Я КК ОМ ее Що ях ОКО КМ пгт мнх ПКИВ Б я УСС

І. ва

Дані внпробування 2 на томатах (Каліфорнія)

5.1 дек, КО о. кове ОККО ДЕКО рен усю тчтрь ШОВ оон нею 000 Подннуттстттняо я Контронь ОК й с о. ва о сжвобаені МКК ! й ії г: ЖОО54 оон нетнютняткнтя о. моенуниннннунснсяяя 0 ВЕ Оброблені - 51.69 с ву с с х - З ос СЕМИ КОКО шин НН 00000000 ННЯ ріг. ев Дані внпробув; 2 на томатах (Калиірвній чдатнтвнр ре У ання 5 натеоматах (| й орнн сани нн НН ще 5Б.41 КОВО учню тутт потен 0 ронннииносяюя ЗО КОнНЕжрОадь Я Н . ОК х те п я ж : Х ЗХ ож ; с Я ах МОМ. отв. 2 клю ко 54 нн нн нн ян - ЩЕ Оброблені : ЗОМ. 7 ЕМ М а пен бе нн МУ уми ую мя ; : о п ЗД ! п й дн мянюкн ситет до чн. вв

Зк з І ; . жов ТИ Я |З у «на З : низкою Кал жрїкк Дані пинпіаотУвання з ня гоматИях (вЯль орні 5751 ОО о що Шо В я ЕМО ; хх МК:

Е 0. Бллай . «Шон ни інн тет сни У ХХ юн КЗ що ОХ ще с же йе шо єв пнтфинн пити няння 00 Жонхроль а с : щ Я ме с З пе : ораоолені і: ПО х. МУ Х З МО покути не ХК В КК Ж, БО ОВ ОО о БО ях ПИТИ ММ щи ще ПВ ХХ ДНУ ДИНЮ ЕН БЕ Ех Я нс х : ТК ев жи в жд я й Ж 2 х яз з ї: т Ву Ж Е: 4 З УК й РУ ла Я чі ІЗ ях ТЕ З ї дані випровування з на тамаках ( алююЮрнНня

51.4 ВЕ ВО 4ва ну ПЕ ни ЕМВ, нн М пдтит нти топити ВЕТО Й нн и шо вн Я аЕие н По ; ДЕ НИ ОО х пон с щі ПАКТ ВАМИ ПО ОС ай. МИ МОМ тими тя зі ВЕ ВИ ОХ ЗХ у: Й 7 м ПЕОМ ВЕК се Со 2 Ен ПЕК КК Я х. й не ох ВОМ 5 кКонеронв -ке п с й Контровь ІОВ селі ЗАКО Осн ння щ Скровлені ре ОПІК Ол С 7 сі орослені Ї Пе ПК ГУ ще КК я щ З ОО ОО Я - ще х 0 5 З . СОКИ НКО ОМ ОО о ОВ ЕЕ: ВОМ 0 с ЩЕ зоенннн онн ВНВВ.

Н.О

Ві! чо С2 вн випрой пня ування 5 п о зу «ЦІВ сотня Е знтечкн ОО лях а о ШИ « Й вн: ПО ПК, СОКИ пут що ОК СО Ух ов жо певне і я еунутен с З й зутичнктия вся ення 1. о. о ше ї ря ші с ще ши що и СНИ и ЕЕ пХ ОВК Ж Доля с чити й ТЯ ее КВ дек п пхженночнннн В МОВ Ме с Яни як сн о о с пекия пи о МКК. о п ши екон ЕХ С г Ес пня вто де ЗАКО ся ХК УКВ - пити ОБУ ОКО БА я плн КУСАМИ ох ТО хх. й З доня с щ . Оброб ше о й с меня роблені сх т я ї но З ОО ЕТ с ам еВ пня В о. - 12 Й я на сон Е: НК - пика Й в оодллння, ще ще ХК " нини оо о і що 9 не ше. те пли, зижучуя Ух КХ х я "Х мити риття о з З що Й ше о. "Е 0 5 - о. понжнн Що й пи пе х СК З КУ Ух хх миннчни АВ пелет с З Ж 7 с нення с рення Ф 0 -- о ЕЕ ши их с ЕІ яння с БО с : о. 5 ша пиши 0 с оо : о що с яння с жонто пня і с - КІ; ІАЕ . й с пня рооле : змен КК о о її Й В чних 1 Я яння с пн Я ЛКК СКК дн нн с й ФГ в рон й ктчлчлитиняя вк випроб ї Що- ши ування - в пон не -- ліф 2 дя синте не діння фрорні т сх пи. ТІ Тит 1 с й З тих см і ко ще -к шо птн ЗК 0 ми : сл сем зум У с дя . ї У ке о, Я Гак Ко ккжюх рен о МАХ ях матю іо -- - з о І ще віх ще ІЗ Е с СЯ нюху щ ши МО сте Е с не їй що Її с шн пи с ПИВ хкохкху с мя зі м ц я, ПЕНЯ КЕ ПЕН «ВАВ М о мин . о 2 о. її я хо п" о ше | як АЖ Ти 75 пі. і с спот : Кох Ве ЕЕ зга с сн сет мен Е о пе с них род я покум / ши: Я пан п дя хе їх Я, й - пунк : чи во вити « я вия Тех - потхкктух пит. плини оо щ- ще шк й пийшня ши 5.53 пл рез сік, споия Й дней пл 59 ще ще 5 вини о я: 7 ки Ша нини шо СОЗБНИ ХУ З пах й пи нн 0 с пет Мк текти сті о сплю п о : щ пкт сміх о с нах со ОО МИ. Ох их що: Ж За то с с З ш Щ | пеня о ПО с Мети : 46 пи с ше о 5 З5 п - ш : с 5 цк КЕ ЗОЯ ж ДККВ КУ о КО х ПК ПЕК ШИ сс о Ж Є зВиН С МЕ ООДКХ МОХ т о. МОХ МК ЗК я Е СО Бе ПИ п с . й ОВО ОВЕН У ЖЕ З ЗО є - пт о х о М о. ЩЕ Ж ой я; ЩО В о КО ох о о МОЗ нене «ТІК нах щШЕ ЗО щХ ІВ ВИХ ЗОВ щи Й Б У я Е ро НИ ЖЕ пижх ще шо нний ж по КО: З ПОВ ВІжНя

Ло. щі ЕЕ ї с с Ї роб зле «КК; МЕ о АК о КОХ ще М ПК : див ши що і о і щі танці шани і о ці ш "ех З ВУХ г ши же й о Е с мя ще ОО о на Ла пня г Десні - о й КІЗ Я ФЕ їдна Б Кг, ча КЗ аниці ох е 2

Ножі и. 55 Б Ти Меч Я левоневК 545 ни щ шо пимеу и в -кк КО Пе З БЗН Мк К 4 є ПО. ПТК ЕХ ПО : «В Во Контроль ететенню Й пдв 4.8 Коен зо: КК мотН і гла У ЗЕ нНех Е КЕКВ Я і ше Во КО ск Й Х 5 КОН мицух З її - Е: Ікробна | іквобна ШИ . МЕНІ ЕОМ пишна 5 жк Що. с ших о Мікробна В 45 с о композиція Пипінняи г ікробна же Крот -щ Б Ох ХВ ких стих КОКД хх ІЗ Кей . во омнознція В 00000 В с шен шо : ня Пе З КК КК би Я Я ою с с о - ВО ж шо с С. п о. З що о с ЗВ с й щ. о Ва шо ОО с т 35 с с нн с Б ослея що о о с ох полоси . о ШАХ У КК с я ПО нн Ох нн ооо и п 30 Бо. я с в с зо ДЕ г. о, й ше с о я ПО с с ВОНО нен не с Ко п ХОСЕ. ПАК ОХ в шт о х Що ХНН МУК СК ПЕКИ З щу я я ММ Збі ФІГ. 98 зльшен рожа веорітя: те зівняно з контро: Дб тртннниннях | циилем - жали ще ' пнннння з (сорту заргі 2 : декани ВЕН. кое о : ЕшИ плед В шк ; ШО я М Е -к не МІНИ ЛЕДИСНе пити : БО НЯ ш Е- і я о НИ, о ---кки де -- п о що Ес Н КО пишне Би ДОЗИ т І пон с ВШ «до Б шЕНИлВ і Ф ї ВЕ КЕНЕ ФЕН Ше я Ос о а ВАНЯ | ПО а шини Па о 2 Ж ДОК ве ян МО о ж Н ВУ птн ВАХ МЕНЯ ПНО ще шк п т Й ПИББОЕ Б ШИ Б Бе ЩО 5: «м : КО КК с НИНННИ ДЕ ее що Фо МО ие ше ШОЕ мине Бе о сне Шу ПОщия вену 5 ЗВ ше о - м нон Я МОН КЗ БМ БО З В 00 ПНО Кая АК по ВО по | ще ШИ п / Дол МКК НО ВО ПОС КЕЕ «ДЕ Мии ПКОЯ отр Б У 5 ШИ шо

Вип. | По ння Б о. ві К т ПІ ВУТ АК ЕМЯ МЕС АОХ. ЗЕ Випр 7 з ше пр. 4 Випр 5 Серед роя ре Не Як зинавшення - х 7 Фе 1о врожану їй

КУ Я ок Ла ян ; сяк жу ек сту вк: пи З Діані внаиробування на столовому буряку (Гехає) 258 з нан а а а ни ще ОМ З - ОКХ ХЕ Он ЯОЗЮ0 оон с ї КАК ЛА з Е г я Конвюль е 0. ПОЛ 000000 сБроблені ; ВОМ ОО -- сан Кн сююснннчкнн и ВВ нення МЕП с т ФО, ХОМ КАК ОА КК шк вн МЕНЯ ПК Я шення 0000 НН 00 НН ві ЦІ ци «гий. ; ; Чан ! "при ШИНИ ну жна МИ Дані вниробування І ни савойській капусті (Техас)

г. ВеКОВКК. і Ки М не т у о (Її пн п пох ооо ВК КЕ Й ЕФЕ ЕАККЯ, М Я КОКО я ВН Оле що о Я 7 ; -тет и шо Оброб і Б ШЕ 00 304 с в юри х ОМ но ВО нт ее сні Етно В ВК о пон НН здо ее НН НН сон ВН. по 0 рих х з. «заг ен стежте ки яд о пзчуя 1-5 ріх, Кількість ящик -еМ зр. Кількість СУКНЯ ТОБ А Ще й кл В НИ сі та що я Й -ї вок ж леж т ан випробування 2 на сапоїКкькій капуси (Гехаєс) З МОМ ШО ДЕД няння дру нн вида нн Е зо ЗОЗ як - НОЯ М Каїна шко вн їж п" й й Контроль з й Б ПЕК у дея зу х ; и НН В ше а М т В ХРях с ЖЖ ляхи ИЙ ПМК УКХ У Я 3 з Ж У т, Й рН «й зміз Кількість пнів проб дузі ість зреруде 1-4 зріз. Кількість ящиків 2-й зріз. Кількість ящиків І В а пн нн в а п п п п п п п що МясУ о о Зоо : п що | Ох с 5 дя, КК МОУ. х с ЖОВ ср уми плн Долоня ауру куту юн с пиття зо Го о.

БД вія п ї г: п с с ре с о. с ши нн ОО М ОК Контроль Обройка Сінна Цнивезення АВ І 13