UA119700C2

UA119700C2 - METHOD OF MANUFACTURE OF IMPLANTATION DEHYDRATED BONE BIOMATERIAL OF ALOGENOUS ORIGIN IN THE FORM OF POWDER

Info

Publication number: UA119700C2
Application number: UAA201709456A
Authority: UA
Inventors: Микола Олексійович Корж; Петро Михайлович Воронцов; Оксана Михайлівна Сльота; Валерія Сергіївна Гусак; Ольга Анатоліївна Нікольченко; Марія Петрівна Воронцова
Priority date: 2017-09-27
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2019-07-25

Abstract

Винахід стосується способу виготовлення імплантаційного дегідратованого кісткового біоматеріалу, що передбачає механічне очищення та здрібнювання алогенної кістки, обробку кісткових фрагментів перекисом водню, етанолом, сольовими розчинами, пакування та стерилізацію, причому виготовляють імплантаційний дегідратований кістковий біоматеріал у вигляді порошку, обробку кісткових фрагментів здійснюють 10 % перекисом водню впродовж 20-24 годин з заміною розчину 1-2 рази, потім обробляють сумішшю етанолу з діетиловим ефіром у співвідношенні 1:1 впродовж 8-10 годин з подальшим витримуванням при температурі мінус 25 °С у 0,45 М розчині натрію хлориду впродовж 20-24 годин, витримують у 0,1 М розчині натрію фосфорнокислого двозаміщеного впродовж 8-24 годин з проміжним між стадіями розморожуванням, промиванням водою впродовж 1-3 годин та висушуванням при кімнатній температурі, після чого кістковий матеріал піддають конвекційному висушуванню при температурі від +35 до +45 °С впродовж 3-5 діб, здрібнюють до фракції порошку розміром 0,5-1,5 мм, пакують та піддають радіаційній стерилізації дозою від 15 до 25 кГр.The invention relates to a method of manufacturing an implantable dehydrated bone biomaterial, which provides mechanical cleaning and grinding of allogeneic bone, treatment of bone fragments with hydrogen peroxide, ethanol, saline solutions, packaging and sterilization, and make implantation dehydrated bone in the form of bone hydrogen for 20-24 hours with a change of solution 1-2 times, then treated with a mixture of ethanol with diethyl ether in a ratio of 1: 1 for 8-10 hours, followed by keeping at a temperature of minus 25 ° C in 0.45 M sodium chloride solution for 20 -24 hours, incubated in 0.1 M disubstituted sodium phosphate solution for 8-24 hours with intermediate thawing, washing with water for 1-3 hours and drying at room temperature, after which the bone material is subjected to convection drying at a temperature of +35 up to +45 ° C for 3-5 days, retail to a powder fraction of 0.5-1.5 mm in size, packaged and subjected to radiation sterilization at a dose of 15 to 25 kGy.

Description

стерилізацію, причому виготовляють імплантаційний дегідратований кістковий біоматеріал у вигляді порошку, обробку кісткових фрагментів здійснюють 10 95 перекисом водню впродовж 20-24 годин з заміною розчину 1-2 рази, потім обробляють сумішшю етанолу з діетиловим ефіром у співвідношенні 1:1 впродовж 8-10 годин з подальшим витримуванням при температурі мінус 25 "С у 0,45 М розчині натрію хлориду впродовж 20-24 годин, витримують у 0,1 М розчині натрію фосфорнокислого двозаміщеного впродовж 8-24 годин з проміжним між стадіями розморожуванням, промиванням водою впродовж 1-3 годин та висушуванням при кімнатній температурі, після чого кістковий матеріал піддають конвекційному висушуванню при температурі від 435 до 145 "С впродовж 3-5 діб, здрібнюють до фракції порошку розміром 0,5- 1,5 мм, пакують та піддають радіаційній стерилізації дозою від 15 до 25 кГр.sterilization, and implant dehydrated bone biomaterial is made in the form of a powder, bone fragments are treated with 10 95 hydrogen peroxide for 20-24 hours with the solution replaced 1-2 times, then treated with a mixture of ethanol and diethyl ether in a ratio of 1:1 for 8-10 hours with further holding at a temperature of minus 25 "С in a 0.45 M solution of sodium chloride for 20-24 hours, kept in a 0.1 M solution of disubstituted sodium phosphate for 8-24 hours with intermediate thawing between stages, washing with water for 1-3 hours and drying at room temperature, after which the bone material is subjected to convection drying at a temperature from 435 to 145 "C for 3-5 days, crushed to a powder fraction with a size of 0.5-1.5 mm, packed and subjected to radiation sterilization with a dose of 15 up to 25 kGy.

Винахід належить до медицини, а саме до травматології та ортопедії, зокрема до технології виготовлення дегідратованого біоматеріалу з алогенної кістки, який може бути використаний самостійно або як носій біологічно активних речовин, лікарських засобів та клітин за умов хірургічного втручання у пацієнтів із травматичними ушкодженнями та пухлинними ураженнями кісток, переломами, що не зрослися або консолідуються уповільнено, несправжніми суглобами та в інших областях відновної хірургії для виконання остеопластики та оптимізації репаративного остеогенезу.The invention belongs to medicine, namely to traumatology and orthopedics, in particular to the technology of manufacturing dehydrated biomaterial from allogeneic bone, which can be used independently or as a carrier of biologically active substances, medicines and cells under the conditions of surgical intervention in patients with traumatic injuries and tumor lesions bones, non-union or slowly consolidating fractures, false joints and in other areas of reconstructive surgery to perform osteoplasty and optimize reparative osteogenesis.

Разом із впровадженням у клінічну практику нових та вдосконалених методів хірургічного лікування пацієнтів із травмами та захворюваннями опорно-рухової системи актуальною є проблема вибору імплантаційного матеріалу, який має виконувати не тільки замісну функцію, але й інтегруватися в ооточуючу кісткову тканину, підтримувати фізіологічний рівень остеобластичної та остеокластичної активності, сприяючи формуванню і ремоделюванню кісткової тканини.Together with the introduction into clinical practice of new and improved methods of surgical treatment of patients with injuries and diseases of the musculoskeletal system, the problem of choosing an implant material that should perform not only a substitute function, but also integrate into the surrounding bone tissue, maintain the physiological level of osteoblastic and osteoclastic activity, contributing to the formation and remodeling of bone tissue.

Виготовлення дегідратованої алогенної кістки у вигляді порошку є необхідним для його клінічного використання як остеопластичного матеріалу, який формує з поверхнею кісткової порожнини щільний контакт та забезпечує високе початкове значення факторів, що ініціюють регенерацію в зоні контакту імплантованого матеріалу з кісткою пацієнта.Production of dehydrated allogeneic bone in the form of a powder is necessary for its clinical use as an osteoplastic material that forms a tight contact with the surface of the bone cavity and provides a high initial value of factors that initiate regeneration in the contact zone of the implanted material with the patient's bone.

Відомий спосіб виготовлення дегідратованого біосумісного матеріалу у вигляді кісткового порошку, який передбачає розпилювання кістки на блоки розміром 1 см3, обробку ферментами (трипсином та папаїном), обробку сумішшю метанолу, етанолу, хлороформу, діетилового ефіру (1:1:1:1), здрібнювання в рідкому азоті до отримання кісткової крихти розміром від 7 до 700 мкм, обробку 1 95 розчином перекису водню, промивання дистильованою водою (та центрифугування, додаткову ферментну обробку розчином папаїну (від 0,1 до 1,0 9б), щонайменше одноразове кип'ятіння впродовж 60 хвилин, висушування при температурі від 110 до 120 "С та насичення водним розчином колагену та сульфатованих глікозаміногліканів (Пат. 2155025 С1 КО МПК АбІ1К 6/097 (2000.01). Способ получения биосовместимого материала для стоматологии / Панасюк Л.Ф. и др. (КИ). Мо 99126221/14; заявл. 14.12.1999; опубл. 27.08.2000,There is a known method of manufacturing dehydrated biocompatible material in the form of bone powder, which involves sawing bone into blocks of 1 cm3 size, processing with enzymes (trypsin and papain), processing with a mixture of methanol, ethanol, chloroform, diethyl ether (1:1:1:1), grinding in liquid nitrogen to obtain bone crumb from 7 to 700 μm in size, treatment with 1 95 hydrogen peroxide solution, washing with distilled water (and centrifugation, additional enzyme treatment with papain solution (from 0.1 to 1.0 9b), at least one-time boiling for 60 minutes, drying at a temperature of 110 to 120 "С and saturation with an aqueous solution of collagen and sulfated glycosaminoglycans (Pat. 2155025 C1 KO MPK AbI1K 6/097 (2000.01). Method of obtaining biocompatible material for stomatology / Panasyuk L.F. et al. . (KY). Mo 99126221/14; application. 12.14.1999; published 08.27.2000,

Бюл. Мо 24). Запропонований спосіб дозволяє підвищити ступінь очищення кістки від колагену, глікопротеїнів та гліколіпідів, що визначають антигенність тканини. Недоліками даного способу єBul. Mo 24). The proposed method allows to increase the degree of cleaning of the bone from collagen, glycoproteins and glycolipids, which determine the antigenicity of the tissue. The disadvantages of this method are

Зо використання ферментів трипсину та папаїну, що викликає гідроліз факторів росту та спричинює втрату обробленим кістковим матеріалом своїх остеоіндуктивних властивостей.From the use of enzymes trypsin and papain, which causes the hydrolysis of growth factors and causes the processed bone material to lose its osteoinductive properties.

Стерилізація матеріалу кип'ятінням із подальшим висушуванням при високій температурі знижують його механічні властивості (міцність). Здрібнювання кістки в рідкому азоті технічно ускладнює виконання методу, а дуже низька температура також знижує міцнісні якості отриманого біоматеріалу. Використання хлороформу збільшує ризик токсичності кінцевого продукту та небезпеку його використання. Даний спосіб не передбачає консервацію кісткового порошку.Sterilization of the material by boiling followed by drying at a high temperature reduces its mechanical properties (strength). Grinding bone in liquid nitrogen technically complicates the method, and very low temperature also reduces the strength qualities of the obtained biomaterial. The use of chloroform increases the risk of toxicity of the final product and the danger of its use. This method does not involve preservation of bone powder.

Відомий спосіб виготовлення дегідратованого біосумісного матеріалу у вигляді кісткового порошку передбачає механічне очищення та здрібнювання кістки до крихти розміром від 70 до 400 мкм, дворазову обробку 0,4 Н розчином лугу (МаОН або КОН) впродовж 10-24 годин з промиванням деіїонізованою водою, щонайменше дворазову обробку сумішшю 1 95 розчинів аміаку та етанолу (1:11) впродовж 10-16 годин, обробку 1 95 розчином перекису водню, щонайменше дворазову обробку сумішшю етанолу та хлороформу (1:2), висушування при кімнатній температурі та насичення розчином колагену і сульфатованими глікозаміногліканами (Пат. 2278655 С1 КИ МПК АЄ1К 6/097 (2006.1). Способ получения биосовместимого материала для стоматологий / Иванов С.Ю. и др. (КО). - Мо 2005111015/15; заявл. 15.04.2005; опубл. 27.06.2006, Бюл. Мо 18). Даний спосіб дозволяє знизити антигенні властивості, підвищити біосумісність та надати матеріалу властивості, які стимулюють остеорепарацію. Недоліками даного способу є використання лугу, що робить обробку біоматеріалу більш жорсткою, тому руйнуються не тільки неколагенові білки, але й колаген, який має низьку антигенну активність, а також використання хлороформу, що збільшує ризик токсичності та небезпеку використання кінцевого продукту. Даний спосіб включає стерилізацію матеріалу тільки за рахунок перекису водню та не містить інформації щодо його консервації.A known method of manufacturing dehydrated biocompatible material in the form of bone powder involves mechanical cleaning and grinding of bone to crumb size from 70 to 400 μm, two-time treatment with a 0.4 N alkali solution (MaOH or KOH) for 10-24 hours with washing with deionized water, at least twice treatment with a mixture of 1 95 solutions of ammonia and ethanol (1:11) for 10-16 hours, treatment with a 1 95 solution of hydrogen peroxide, at least two treatments with a mixture of ethanol and chloroform (1:2), drying at room temperature and saturation with a solution of collagen and sulfated glycosaminoglycans (Pat. 2278655 C1 KY IPK AE1K 6/097 (2006.1). Method of obtaining biocompatible material for stomatologists / Ivanov S.Yu. et al. (KO). - Mo 2005111015/15; application. 04.15.2005; publ. 06.27. 2006, Bull. Mo 18). This method makes it possible to reduce antigenic properties, increase biocompatibility and give the material properties that stimulate osteoreparation. The disadvantages of this method are the use of alkali, which makes the processing of the biomaterial more rigid, so not only non-collagen proteins are destroyed, but also collagen, which has low antigenic activity, as well as the use of chloroform, which increases the risk of toxicity and the danger of using the final product. This method includes sterilization of the material only due to hydrogen peroxide and does not contain information about its preservation.

Відомий спосіб виготовлення дегідратованого біосумісного матеріалу у вигляді кісткового порошку передбачає розпилювання губчастої кістки на блоки розміром від 0,008 до 0,125 см, обробку 2 96 розчином натрію хлориду впродовж 24-48 годин, промивання дистильованою водою, обробку 2 95 розчином нагрію гідроксиду впродовж 24-48 годин, промивання дистильованою водою, обробку 3-4 95 розчином перекису водню впродовж 10-16 годин, промивання дистильованою водою, обробку сумішшю хлороформу та етанолу (2:11) впродовж бо 48-72 годин, промивання дистильованою водою, прогрівання за умов рівномірного збільшення температури від 600 до 1200 "С, додаткове прогрівання при температурі від 1200 до 1300 "С впродовж 2-5 хвилин та здрібнювання до крихти розміром від 700 до 2000 мкм, стерилізацію потоком прискорених електронів дозою 18:25 кГр (Пат. 2517037 С1 КО МПК АбІК 35/32, Аб1Р 19/10. Способ получения костного минерального компонента и костньій минеральньй компонент для замещения и восстановления дефектов костной ткани / Ларионов Е.В. (КМ). Мо 2013105243/15; заявл. 08.02.2013; опубл. 27.05.2014, Бюл. Мо 15). Отриманий кістковий матеріал виявляє виражений остеокондуктивний ефект. Недоліками даного способу є використання лугу, через що окрім неколагенових білків руйнується і колаген, та використання хлороформу, через що збільшуються ризик токсичності кінцевого продукту, а також високотемпературне прогрівання матеріалу, яке призводить до зниження його міцнісних якостей.A known method of manufacturing dehydrated biocompatible material in the form of bone powder involves sawing cancellous bone into blocks of 0.008 to 0.125 cm in size, processing 2 96 with a sodium chloride solution for 24-48 hours, washing with distilled water, processing 2 95 with a heated hydroxide solution for 24-48 hours , washing with distilled water, treatment with 3-4 95 hydrogen peroxide solution for 10-16 hours, washing with distilled water, treatment with a mixture of chloroform and ethanol (2:11) for 48-72 hours, washing with distilled water, heating under the conditions of a uniform increase in temperature from 600 to 1200 "C, additional heating at a temperature from 1200 to 1300 "C for 2-5 minutes and grinding to crumb size from 700 to 2000 microns, sterilization with a stream of accelerated electrons with a dose of 18:25 kGy (Pat. 2517037 C1 KO MPK AbIK 35/32, Ab1R 19/10. The method of obtaining a bone mineral component and a bone mineral component for replacing and restoring defects to spinal cord / Larionov E.V. (KM). MO 2013105243/15; statement 08.02.2013; published 05/27/2014, Bul. Mo 15). The obtained bone material shows a pronounced osteoconductive effect. The disadvantages of this method are the use of alkali, due to which, in addition to non-collagen proteins, collagen is also destroyed, and the use of chloroform, which increases the risk of toxicity of the final product, as well as high-temperature heating of the material, which leads to a decrease in its strength qualities.

Відомий спосіб виготовлення дегідратованого біосумісного матеріалу у вигляді кісткового порошку включає розпилювання губчастої кістки на фрагменти необхідних розмірів, обробку 6 95 розчином перекису водню впродовж 48 годин (чотириразово через кожні 12 годин), центрифугування, обробку сумішшю етанолу та хлороформу (1:11) впродовж 48 годин (чотириразово через кожні 12 годин), центрифугування, висушування при кімнатній температурі впродовж 24 годин, заморожування при температурі -70 "С впродовж 24 годин, ліофілізацію впродовж 48 годин, пакування у подвійний пакет та стерилізацію потоком прискорених електронів дозою 1855 кГр (Пат. 2172104 КО МПК АО1ТМ 1/00. Способ изготовления имплантатов из губчатой костной ткани / Лекишвили М.В. и др. (КО). Мо 2000115228/14; заявл. 15.06.2000; опубл. 20.08.2001, Бюл. Мо 23). Даний спосіб забезпечує низьку антигенність та повну стерильність кінцевого продукту. Недоліками даного способу є тривала обробка біоматеріалу перекисом водню, що може спричинити руйнування кісткових морфогенетичних білкових факторів і втрату обробленою кісткою остеоіндуктивних властивостей, а також використання хлороформу, що збільшує ризик токсичності отриманого імплантаційного матеріалу та небезпеку його використання.A known method of producing dehydrated biocompatible material in the form of bone powder includes sawing spongy bone into fragments of the required size, treatment with 6 95 hydrogen peroxide solution for 48 hours (four times every 12 hours), centrifugation, treatment with a mixture of ethanol and chloroform (1:11) for 48 hours (four times every 12 hours), centrifugation, drying at room temperature for 24 hours, freezing at a temperature of -70 "C for 24 hours, lyophilization for 48 hours, packing in a double bag and sterilization with a stream of accelerated electrons with a dose of 1855 kGy (Pat. 2172104 KO MPK AO1TM 1/00. Method of manufacturing implants from cancellous bone tissue / Lekyshvili M.V. et al. (KO). Mo 2000115228/14; application 06/15/2000; published 08/20/2001, Bull. Mo 23) This method ensures low antigenicity and complete sterility of the final product. The disadvantages of this method are long-term treatment of biomaterial with hydrogen peroxide, which can cause destruction the formation of bone morphogenetic protein factors and the loss of osteoinductive properties of the processed bone, as well as the use of chloroform, which increases the risk of toxicity of the obtained implant material and the danger of its use.

Найближчим до винаходу, що заявляється, є спосіб виготовлення біоматеріалу з кістки природного походження, який передбачає механічне очищення та здрібнювання кістки до фрагментів необхідного розміру, щонайменше дворазову обробку 10 95 розчином перекису водню впродовж 24 годин, промивання проточною водою впродовж 45 хвилин, висушування при кімнатній температурі, обробку сумішшю етанолу та хлороформу (1:11) впродовж 8 годин, промивання проточною водою впродовж 45 хвилин, висушування при кімнатній температурі, обробку 0,45 М розчином натрію хлориду при температурі -25 "С впродовж 20 годин, розморожування та промивання дистильованою водою, обробку 0,1 М розчином натрію фосфорнокислого двозаміщеного (Маг2НРОї) при температурі -25 "С впродовж 8 годин, розморожування та промивання дистильованою водою, насичення розчином цефтриаксону (у 0,9 95 Масі з додаванням диметилсульфоксиду) та аскорбіновою кислотою, пакування у стерильні пакети, зберігання при температурі -25 "С (Пат. 108813 ЮА МПК АбІК 35/32, АБбІЕ 2/28, Аб1Р 19/00, АОТМ 1/00, АЄТІ. 27/00. Спосіб виготовлення біоматеріалу з кісткової тканини /The closest to the claimed invention is the method of manufacturing biomaterial from bone of natural origin, which involves mechanical cleaning and grinding of bone to fragments of the required size, at least two treatments with 10 95 hydrogen peroxide solution for 24 hours, washing with running water for 45 minutes, drying at room temperature temperature, treatment with a mixture of ethanol and chloroform (1:11) for 8 hours, washing with running water for 45 minutes, drying at room temperature, treatment with 0.45 M sodium chloride solution at a temperature of -25 "C for 20 hours, thawing and washing with distilled with water, treatment with a 0.1 M solution of disubstituted sodium phosphate (Mag2HPO) at a temperature of -25 "C for 8 hours, thawing and washing with distilled water, saturation with a solution of ceftriaxone (at 0.995 Mass with the addition of dimethyl sulfoxide) and ascorbic acid, packaging in sterile bags, storage at a temperature of -25 "C (Pat. 108813 UA MPK AbIK 35/32, ABbIE 2/28, Ab1R 19/00, AOTM 1/00, AETI. 27/00. Method of production of biomaterial from bone tissue /

Корж М.О. та ін. (ША). - Мо а201403313; заявл. 25.11.2014; опубл. 10.06.2015, Бюл. Мо 11).Korzh M.O. etc. (SHA). - MO a201403313; statement 25.11.2014; published 10.06.2015, Bull. Mo 11).

Даний спосіб вибрано за найближчий аналог. Найближчий аналог і винахід, що заявляється, мають такі спільні ознаки: обробка матеріалу 10 95 розчином перекису водню, використання етанолу, послідовна обробка 0,45 М розчином натрію хлориду та 0,1 М розчином натрію фосфорнокислого двозаміщеного (МагНРО»х) при температурі -25 "С, висушування при кімнатній температурі. Але, відомий спосіб потребує зберігання отриманого імплантаційного біоматеріалу в морозильній камері при температурі -25 "С та постійного контролю над процесом зберігання, через що виникають відповідні технічні труднощі у разі його транспортування. Крім того, обробка біоматеріалу передбачає використання хлороформу, який збільшує ризик токсичності та небезпеки використання кінцевого продукту. До недоліків також можна віднести недостатню стерилізацію біоматеріалу (лише за рахунок обробки перекисом водню) та його насичення антибіотиком, що обмежує термін збереження обробленого кінцевого продукту (придатність до експлуатації не більше 1-го місяця).This method was chosen as the closest analogue. The closest analog and the claimed invention have the following common features: treatment of the material with a 10 95 hydrogen peroxide solution, the use of ethanol, sequential treatment with a 0.45 M sodium chloride solution and a 0.1 M disubstituted sodium phosphate solution (MagHPO»x) at a temperature of - 25 "С, drying at room temperature. However, the known method requires storage of the obtained implantation biomaterial in a freezer at a temperature of -25 "С and constant control over the storage process, due to which corresponding technical difficulties arise in case of its transportation. In addition, the processing of biomaterial involves the use of chloroform, which increases the risk of toxicity and the danger of using the final product. The disadvantages include insufficient sterilization of the biomaterial (only due to treatment with hydrogen peroxide) and its saturation with an antibiotic, which limits the shelf life of the processed final product (usability for use no more than 1 month).

В основу винаходу поставлено задачу підвищити якість клінічних та експлуатаційних властивостей імплантаційного кісткового біоматеріалу алогенного походження у вигляді порошку шляхом зниження антигенних властивостей кісткової тканини, збереження в ній колагену та мінерального компоненту, підсилення режиму стерилізації та збільшення терміну зберігання обробленого алотрансплантата.The invention is based on the task of improving the quality of the clinical and operational properties of the bone biomaterial of allogeneic origin in the form of a powder by reducing the antigenic properties of bone tissue, preserving collagen and mineral components in it, strengthening the sterilization regime and increasing the shelf life of the processed allograft.

Поставлена задача вирішена тим, що у способі виготовлення імплантаційного дегідратованого кісткового біоматеріалу у вигляді порошку, що передбачає механічне очищення бо та здрібнювання алогенної кістки, обробку кісткових фрагментів перекисом водню, сумішшю етанолу з диетиловим ефіром, сольовими розчинами, конвекційне висушування, здрібнювання кісткових фрагментів до порошку, пакування та стерилізацію, згідно з винаходом, обробку кісткових фрагментів здійснюють 10 96 перекисом водню впродовж 20-24 годин з заміною розчину 1-2 рази, потім сумішшю етанолу з діетиловим ефіром у співвідношенні 1:1 впродовж 8- годин, подальшим витримуванням при температурі -25 "С у 0,45 М розчині натрію хлориду впродовж 20-24 годин та 0,1 М розчині натрію фосфорнокислого двозаміщеного впродовж 8-24 годин з проміжним розморожуванням та промиванням дистильованою водою, після чого кістковий матеріал піддають конвекційному висушуванню при температурі від «35 до 45 С впродовж 3-5 діб, здрібнюють до фракції порошку розміром 0,5-1,5 мм, пакують та піддають 10 радіаційній стерилізації дозою від 15 до 25 кГр.The task is solved by the fact that in the method of manufacturing dehydrated bone biomaterial for implantation in the form of powder, which involves mechanical cleaning and grinding of allogeneic bone, treatment of bone fragments with hydrogen peroxide, a mixture of ethanol with diethyl ether, salt solutions, convection drying, grinding of bone fragments into powder , packing and sterilization, according to the invention, treatment of bone fragments is carried out with 10 96 hydrogen peroxide for 20-24 hours with replacement of the solution 1-2 times, then with a mixture of ethanol and diethyl ether in a ratio of 1:1 for 8 hours, further exposure at temperature -25 "C in a 0.45 M sodium chloride solution for 20-24 hours and a 0.1 M disubstituted sodium phosphate solution for 8-24 hours with intermediate thawing and washing with distilled water, after which the bone material is subjected to convection drying at a temperature of 35 to 45 C for 3-5 days, grind to a powder fraction 0.5-1.5 mm in size, packed and subjected to 10 radiation sterilization with a dose of 15 to 25 kGy.

Спосіб виконують таким чином. 1. Виділення фрагментів із кістки, отриманої як післяопераційний матеріал реконструктивно- відновних хірургічних втручань. Механічне очищення поверхні кісткових фрагментів від м'яких тканин, хряща, окістя та здрібнювання кістки. 2. Обробка кісткових фрагментів 10 95 розчином перекису водню впродовж 20-24 годин.The method is performed as follows. 1. Isolation of fragments from bone obtained as postoperative material of reconstructive and restorative surgical interventions. Mechanical cleaning of the surface of bone fragments from soft tissues, cartilage, periosteum and bone grinding. 2. Treatment of bone fragments with 10 95 hydrogen peroxide solution for 20-24 hours.

Розчин замінюють 1-2 рази. Матеріал промивають проточною водою впродовж 1-3 годин та висушують при кімнатній температурі. Етап забезпечує видалення елементів крові та первинну стерилізацію кісткового матеріалу. 3. Обробка кісткових фрагментів сумішшю етанолу і діетилового ефіру (1:1) впродовж 8-10 годин. Матеріал промивають проточною водою впродовж 1-3 годин та висушують при кімнатній температурі. Етап забезпечує видалення жирових компонентів (ліпідів, ліпопротеїдів тощо) та вторинну стерилізацію. 4. Витримування кісткових фрагментів у 0,45 М розчині натрію хлориду при температурі -25 "С впродовж 20-24 годин. Матеріал розморожують при кімнатній температурі та промивають дистильованою водою впродовж 1-3 годин. Етап забезпечує зниження антигенних властивостей за рахунок екстракції неколагенових білків. 5. Витримування кісткових фрагментів у 0,1 М розчині натрію фосфорнокислого двозаміщеного (МагНРО») при температурі -25 "С впродовж 8-24 годин. Матеріал розморожують при кімнатній температурі та промивають дистильованою водою впродовж 1-3 годин. ЕтапThe solution is replaced 1-2 times. The material is washed with running water for 1-3 hours and dried at room temperature. The stage provides removal of blood elements and primary sterilization of bone material. 3. Treatment of bone fragments with a mixture of ethanol and diethyl ether (1:1) for 8-10 hours. The material is washed with running water for 1-3 hours and dried at room temperature. The stage ensures the removal of fatty components (lipids, lipoproteins, etc.) and secondary sterilization. 4. Keeping the bone fragments in a 0.45 M sodium chloride solution at a temperature of -25 "C for 20-24 hours. The material is thawed at room temperature and washed with distilled water for 1-3 hours. The stage provides a reduction in antigenic properties due to the extraction of non-collagenous proteins 5. Keeping the bone fragments in a 0.1 M solution of disubstituted sodium phosphate (MagHPO) at a temperature of -25 "C for 8-24 hours. The material is thawed at room temperature and washed with distilled water for 1-3 hours. Stage

Зо забезпечує зниження антигенних властивостей за рахунок екстракції неколагенових білків. 6. Висушування кісткових фрагментів за допомогою конвекційної сушарки при температурі від «35 до 45 "С впродовж 3-5 діб. 7. Здрібнювання кісткових фрагментів до фракції порошку (крихта розміром 0,5-1,5 мм) за допомогою кісткового млина шнекового типу. 8. Пакування кісткового порошку у подвійну упаковку, яка складається із зовнішнього комбінованого пакета та поліпропіленового флакона, маркування та радіаційній стерилізації дозою від 15 до 25 кГр.Zo provides a reduction in antigenic properties due to the extraction of non-collagenous proteins. 6. Drying of bone fragments using a convection dryer at a temperature of "35 to 45"C for 3-5 days. 7. Grinding of bone fragments into a powder fraction (crumb size 0.5-1.5 mm) using a screw-type bone mill 8. Packaging of bone powder in a double package, which consists of an external combined package and a polypropylene bottle, labeling and radiation sterilization with a dose of 15 to 25 kGy.

Після стерилізації кісткового порошку проводять мікробіологічне дослідження в бактеріологічній лабораторії (по чотири зразки з кожної партії). У випадку встановлення факту росту мікрофлори препарати даної партії вилучають та утилізують.After sterilization of bone powder, a microbiological study is carried out in a bacteriological laboratory (four samples from each batch). If the fact of the growth of microflora is established, the drugs of this batch are withdrawn and disposed of.

Claims

FORMULA OF THE INVENTION A method of manufacturing dehydrated bone biomaterial for implantation, which involves mechanical cleaning and grinding of allogeneic bone, treatment of bone fragments with hydrogen peroxide, ethanol, saline solutions, packaging and sterilization, which is distinguished by the fact that implantable dehydrated bone biomaterial is produced in the form of powder, treatment of bone fragments carry out 10 95 with hydrogen peroxide for 20-24 hours with replacement of the solution 1-2 times, then treat with a mixture of ethanol and diethyl ether in a ratio of 1:1 for 8-10 hours with further exposure at a temperature of minus 25 "C in a 0.45 M solution of sodium chloride for 20-24 hours, kept in a 0.1 M solution of disubstituted sodium phosphate for 8-24 hours with 3 intermediate stages of thawing, washing with water for 1-3 hours and drying at room temperature, after which the bone material was subjected to convection drying at temperature from 4-35 to 145 "С for 3-5 days, grind to a powder fraction with a size of 0.5-1.5 mm, pack and subject to radiation sterilization with a dose of 15 to 25 kGy.