UA116520C2 - CD38 ANTIBODY FOR MULTIPLE MYELOMA TREATMENT - Google Patents

CD38 ANTIBODY FOR MULTIPLE MYELOMA TREATMENT Download PDF

Info

Publication number
UA116520C2
UA116520C2 UAA201204050A UAA201204050A UA116520C2 UA 116520 C2 UA116520 C2 UA 116520C2 UA A201204050 A UAA201204050 A UA A201204050A UA A201204050 A UAA201204050 A UA A201204050A UA 116520 C2 UA116520 C2 UA 116520C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
human
region
zeo
peptide
Prior art date
Application number
UAA201204050A
Other languages
Ukrainian (uk)
Inventor
Мішель де Верс
Іво Граус
Юдіт Опрінс
Пауль Паррен Паррен
Ян ван де Вінкел
Мартін ван Вюгт
Original Assignee
Генмаб А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Генмаб А/С filed Critical Генмаб А/С
Publication of UA116520C2 publication Critical patent/UA116520C2/en

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)

Abstract

Винахід стосується антитіла, яке зв'язується з CD38 людини, зокрема специфічно зв'язується з областю SKRNIQFSCKNIYR і областю EKVQTLEAWVIHGG в CD38 людини (SEQ ID NО: 31), та що особливо впізнає мотиви RNIQF та WVIH, фармацевтичної композиції, що включає таке антитіло, ізольованої молекули нуклеїнової кислоти, що кодує таке антитіло, експресуючого вектора, трансфектоми, еукаріотичної або прокаріотичної клітини-хазяїна, імунокон'югата, біспецифічної або мультиспецифічної молекули, яка включає таке антитіло, способу інгібування росту та/або проліферації клітини, що експресує CD38, способу лікування та профілактики захворювання або порушення опосередкованого CD38, зокрема ревматоїдного артриту та множинної мієломи.The invention relates to an antibody that binds to human CD38, in particular specifically binds to the SKRNIQFSCKNIYR region and the EKVQTLEAWVIHGG region in human CD38 (SEQ ID NO: 31), and which particularly recognizes the motives of RNIQF and WVIH, a pharmaceutical composition comprising such an antibody , an isolated nucleic acid molecule encoding such an antibody, expressing vector, transfectome, eukaryotic or prokaryotic host cell, immunoconjugate, bispecific or multispecific molecule comprising such antibody, growth inhibition method, or inhibitory method of growth inhibition, pressed CD38, method of treatment and prevention of a disease or disorder mediated CD38, including rheumatoid arthritis and multiple myeloma.

Description

що особливо впізнає мотиви АМІОЕ та МУМІН, фармацевтичної композиції, що включає таке антитіло, ізольованої молекули нуклеїнової кислоти, що кодує таке антитіло, експресуючого вектора, трансфектоми, еукаріотичної або прокаріотичної клітини-хазяїна, імунокон'югата, біспецифічної або мультиспецифічної молекули, яка включає таке антитіло, способу інгібування росту та/або проліферації клітини, що експресує СОЗ8, способу лікування та профілактики захворювання або порушення опосередкованого СОЗ8, зокрема ревматоїдного артриту та множинної мієломи.that specifically recognizes AMIOE and MUMIN motifs, a pharmaceutical composition comprising such an antibody, an isolated nucleic acid molecule encoding such an antibody, an expression vector, a transfectome, a eukaryotic or prokaryotic host cell, an immunoconjugate, a bispecific or multispecific molecule comprising such an antibody, a method of inhibiting the growth and/or proliferation of a cell expressing SOZ8, a method of treating and preventing a disease or disorder mediated by SOZ8, in particular rheumatoid arthritis and multiple myeloma.

Даний винахід стосується антитіл, що зв'язують СЮОЗ8, які мають специфічні характеристики і які застосовуються для лікування іпієг аа множинної мієломи.The present invention relates to antibodies that bind SHOZ8, which have specific characteristics and which are used for the treatment of ipieg aa multiple myeloma.

Множинна мієлома є злоякісним переродженням В-клітин, яке характеризується латентним накопиченням у кістковому мозку секреторних плазматичних клітин з низьким проліферативним індексом і збільшеною тривалістю життя. Це захворювання, в остаточному підсумку, атакує кості та кістковий мозок, що приводить до множинних пухлин і повсюдного ушкодження всієї кістякової системи.Multiple myeloma is a malignant transformation of B-cells, which is characterized by a latent accumulation in the bone marrow of secretory plasma cells with a low proliferative index and an increased lifespan. This disease ultimately attacks the bones and bone marrow, leading to multiple tumors and widespread damage to the entire skeletal system.

Приблизно 1 95 всіх ракових захворювань і трохи більше 10 95 всіх злоякісних гематологічних захворювань можна віднести до множинної мієломи (ММ). Частота випадків ММ зростає в старіючій популяції, де медіана віку встановлення цього діагнозу доводиться приблизно на 61 рік.Approximately 1 in 95 of all cancers and just over 10 in 95 of all hematologic malignancies can be attributed to multiple myeloma (MM). The incidence of MM is increasing in an aging population, where the median age of diagnosis is approximately 61 years.

Доступні зараз терапії множинної мієломи включають хіміотерапію, трансплантацію стовбурових клітин, ТпаіютідйФ (талідомід), Меісаде? (ботремозид), АгедіаФ (памідронат) і 2готеїаФф (золедронова кислота). На сьогодні, протоколи лікування, які включають сполучення хіміотерапевтических агентів, таких як вінкристин, ВСМИ, мельфалан, циклофосфамід, адріаміцин і преднізон або дексаметазон, приводять до частоти повної ремісії тільки близько 5 95 і медіана виживаності становить приблизно 36-48 місяців від моменту постановки діагнозу.Currently available therapies for multiple myeloma include chemotherapy, stem cell transplants, TpaiyutidyF (thalidomide), Meisade? (Botremozide), AgediaF (pamidronate) and 2goteiaFf (zoledronic acid). Currently, treatment protocols that include combinations of chemotherapeutic agents such as vincristine, SSRIs, melphalan, cyclophosphamide, adriamycin, and prednisone or dexamethasone result in a complete remission rate of only about 5 95 and a median survival of approximately 36-48 months from diagnosis. .

Недавні досягнення при застосуванні хіміотерапії з високими дозами з наступною трансплантацією аутологічної тканини кісткового мозку або мононуклеарних клітин периферичної крові привели до збільшення відсотка повної ремісії та тривалості ремісії. Однак загальна виживаність збільшилася лише незначно і ніяких доказів лікування отримано не було.Recent advances in the use of high-dose chemotherapy followed by transplantation of autologous bone marrow tissue or peripheral blood mononuclear cells have led to increased rates of complete remission and duration of remission. However, overall survival increased only slightly and no evidence of treatment was obtained.

В остаточному підсумку, всі пацієнти із ММ одержують рецидив хвороби навіть при підтримуючій терапії інтерфероном-альфа (ІЕМ-а) самим по собі або в сполученні зі стероїдами.Ultimately, all patients with MM relapse even with maintenance therapy with interferon-alpha (IEM-a) alone or in combination with steroids.

Ефективність доступних режимів хіміотерапевтичного лікування при ММ обмежена низькою швидкістю проліферації клітин і розвитком множинної стійкості до ліків. У більш ніж 90 95 хворихThe effectiveness of available chemotherapeutic treatment regimens in MM is limited by the low rate of cell proliferation and the development of multiple drug resistance. In more than 90 95 patients

ММ захворювання стає стійким до хіміотерапії. В результаті йде пошук альтернативних режимів лікування з метою розробки адоптивної імунотерапії, спрямованої на поверхневі антигени на плазматичних клітинах.MM disease becomes resistant to chemotherapy. As a result, there is a search for alternative treatment regimens with the aim of developing adoptive immunotherapy directed at surface antigens on plasma cells.

СОЗ38 є прикладом антигену, експресованого такими злоякісними плазматичними клітинами,POP38 is an example of an antigen expressed by such malignant plasma cells,

Зо він експресується при різних злоякісних захворюваннях крові, включаючи, без обмеження, хронічний лімфоцитарний лейкоз В-клітин, гострий лімфоцитарний лейкоз В-клітин, макроглобулінемію Валденстрема, первинний системний амілоїдоз, лімфому клітин мантії, пролімфоцитарний/мієлоцитарний лейкоз, гострий мієлоїдний лейкоз, хронічний мієлоїдний лейкоз, фолікулярну лімфому, лейкоз МК-клітин і лейкоз плазматичних клітин. Експресія СОЗ8 описана для епітеліальних/ендотеліальних клітин різного походження, включаючи гранулярний епітелій простати, острівкові клітини підшлункової залози, епітелій проток у залозах, включаючи привушну залозу, клітини бронхіального епітелію, клітини яєчка та яєчників і клітини пухлини аденокарциноми ободової і прямої кишки. Захворювання, при яких може бути залучена експресія СОЗ38, включають, без обмеження, бронхо-епітеліальні карциноми легенів, рак грудей (що розвився зі злоякісної проліферації епітеліальної вистілки проток і часток груди), пухлини підшлункової залози, пухлини, що розвилися з Бр-клітин, з епітелію кишечнику (наприклад, аденокарцинома та карцинома лускатих клітин). У ЦНС нейробластома експресує СОЗ8. Інші захворювання включають карциному простати, семіноми яєчка та рак яєчника.It is expressed in various blood malignancies including, but not limited to B-cell chronic lymphocytic leukemia, B-cell acute lymphocytic leukemia, Waldenström macroglobulinemia, primary systemic amyloidosis, mantle cell lymphoma, prolymphocytic/myelocytic leukemia, acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia, follicular lymphoma, leukemia of MK cells and leukemia of plasma cells. SOC8 expression has been described for epithelial/endothelial cells of various origins, including prostate granular epithelium, pancreatic islet cells, ductal epithelium in glands including the parotid gland, bronchial epithelial cells, testicular and ovarian cells, and colon and rectal adenocarcinoma tumor cells. Diseases in which SOZ38 expression may be involved include, without limitation, bronchoepithelial carcinomas of the lung, breast cancer (arising from malignant proliferation of the epithelial lining of the ducts and lobules of the breast), pancreatic tumors, tumors arising from Br cells, from the intestinal epithelium (for example, adenocarcinoma and squamous cell carcinoma). In the CNS, neuroblastoma expresses SOZ8. Other conditions include prostate carcinoma, testicular seminomas, and ovarian cancer.

У нормі, СОЗ38 експресується гемопоетичними клітинами в щільних тканинах. Що стосується гемопоетичних клітин, основна частина медулярних тимоцитів є СО38:, спочиваючі та циркулюючі Т- і В-клітини є СОЗ8"7, і активовані клітини є СО38:. СОЗ8 також експресується в приблизно 80 95 спочиваючих МК клітин та моноцитів і лімфобластами центра розмноження лімфатичного вузла, плазматичними В-клітинами та деякими внутрішньофолікулярними клітинами. СО38 може також експресуватися деревоподібними клітинами. Значна частина нормальних клітин кісткового мозку, особливо клітини попередників, експресують СОЗ38. До того ж, 50-80 до кров'яних клітин пуповини є СОЗ8:" і залишається такими в крові людини протягом перших двох-трьох років життя. На додаток до лімфатичних клітин попередника, СОЗ8 також експресується в еритроцитах і кров'яних пластинках.Normally, SOC38 is expressed by hematopoietic cells in dense tissues. As for hematopoietic cells, the majority of medullary thymocytes are CO38:, resting and circulating T and B cells are COZ8"7, and activated cells are CO38:. COZ8 is also expressed in approximately 80 95 resting MK cells and monocytes and lymphoblasts of the germinal center lymph node, plasma B cells, and some intrafollicular cells. CO38 can also be expressed by dendritic cells. A large proportion of normal bone marrow cells, especially progenitor cells, express COZ38. In addition, 50-80% of cord blood cells are COZ8:" and remains so in a person's blood during the first two or three years of life. In addition to lymphoid progenitor cells, SOC8 is also expressed in erythrocytes and platelets.

Що стосується твердих тканин, СОЗ8 експресується в кишечнику інтраєпітеліаальними клітинами та лімфоцитами Іатіпа ргоргіа, клітинами Пуркінье та нейрофібрилярними клубками мозку, епітеліальними клітинами простати, В-клітинами підшлункової залози, остеокластами костей, ретинальними клітинами ока, сарколемою гладкої та поперечно-смугастої мускулатури.As for solid tissues, COZ8 is expressed in the intestine by intraepithelial cells and lymphocytes of Iatypia rgorgia, Purkinje cells and neurofibrillary tangles of the brain, epithelial cells of the prostate, B cells of the pancreas, bone osteoclasts, retinal cells of the eye, sarcolemma of smooth and striated muscles.

Функції, приписувані СОЗ38, включають як рецепторну роль в адгезії та передачі сигналу, так і (екто)-ферментативну активність. Виступаючи в ролі ектгоферменту, СОЗ38 застосовує НАД" як бо субстрат для утворення циклічної АДФ-рибози (ЦАДФР) і АДФР, а також нікотинаміду та нікотинамідаденіндинуклеотидфосфату (НАДФ). Показано, що цЦАДФР є вторинним месенджером для вивільнення Са?" з ендоплазматичного ретикулума. На додаток до передачі сигналу за допомогою Са", опосередкована СО38 передача сигналу відбувається за допомогою взаємодії (сго55-їаІК) з комплексами антиген-рецептор на Т- та В-клітинах або інших типах рецепторних комплексів, наприклад, молекулами МН, і в такий спосіб включена в кілька клітинних відповідей, а також у перемикання та секрецію ІдС1.The functions attributed to POP38 include both a receptor role in adhesion and signal transduction as well as (ecto)-enzymatic activity. Acting as an ectoenzyme, SOZ38 uses NAD as a substrate for the formation of cyclic ADP-ribose (CADGFR) and ADGFR, as well as nicotinamide and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP). It has been shown that cCADGFR is a secondary messenger for the release of Ca? from the endoplasmic reticulum. In addition to Ca"-mediated signal transduction, CO38-mediated signal transduction occurs through the interaction (Cgo55-IaK) with antigen-receptor complexes on T- and B-cells or other types of receptor complexes, for example, MH molecules, and in this way involved in several cellular responses as well as in IdC1 switching and secretion.

Анти-СОЗ38 антитіла описані в літературі, наприклад, в І апае К. еї аї., СеїІ Іттипої. 220 (1), 30-8 (2002), А!йсієїо СМ еї аї., Тіввиє апіїдепе 56(6), 539-547 (2000) та Соїпег Т. еї аї., Іпі.Anti-SOZ38 antibodies are described in the literature, for example, in I apae K. ei ai., Seii Ittipoi. 220 (1), 30-8 (2002), A!ysiyo SM ei ai., Tivvye apiidepe 56(6), 539-547 (2000) and Soipeg T. ei ai., Ipi.

ІттипорНагптасої. 3(3), 255-268 (1981). У СОЗ38 кілька функцій, які можуть активуватися або не активуватися молекулою, що зв'язалася з СЮОЗ8. Наприклад, мишачі анти-СРЗ8 антитіла ІВ4А мають агоністичними властивостями відносно СОЗ38. Показано, що ІВ4 індукують активацію Т- клітин, на що вказує вивільнення (мобілізація) Са-" у клітинах ЧУигкаї (2ибріацг М. еї аї., 9. Іттипої. 159(1), 193-205 (1997)), індукують значну проліферацію мононуклеарних клітин периферичної крові (РВМС), індукують вивільнення значних рівнів 1-6 та індукують вивільнення детектованих рівнів ІЕМ-у (Гапає, 2ибіаиг Моїта, АпвзіейПо, зирга).IttiporNagptasoi. 3(3), 255-268 (1981). POP38 has several functions that may or may not be activated by a molecule that binds to POP8. For example, murine anti-SRZ8 antibodies IV4A have agonistic properties against SOZ38. It was shown that IV4 induce activation of T-cells, as indicated by the release (mobilization) of Ca-" in Chuigkai cells (2ibriatsg M. ei ai., 9. Ittipoi. 159(1), 193-205 (1997)), induce a significant proliferation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC), induce the release of significant levels of 1-6 and induce the release of detectable levels of IEM (Gapaye, 2ibiaig Moita, ApvzieiPo, Zirga).

Розкриття винаходуDisclosure of the invention

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке кодується (1) нуклегїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, згідно з хЕО ІЮО МО: 1 та ЗЕОThe present invention provides an antibody that binds to human HCV8, which is encoded by (1) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising the nucleotide sequences in their variable regions according to the XEO IJOO MO: 1 and ZEO

ІО МО: 6, відповідно; (2) нуклегїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11 таIO MO: 6, respectively; (2) nucleic acids of human light chain and human heavy chain, including nucleotide sequences in their variable regions, according to ZEO IU MO: 11 and

ЗЕО ІЮО МО: 16, відповідно; (3) нуклегїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, згідно з 5ЕО ІЮО МО: 21 та 5ЕО ІЮ МО: 26, відповідно; або (4) нуклегїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, які є консервативними модифікаціями послідовностей за пунктами (1), (2) або (3).ZEO IYUO MO: 16, respectively; (3) human light chain and human heavy chain nucleic acids, including nucleotide sequences in their variable regions, according to 5EO IJU MO: 21 and 5EO IJU MO: 26, respectively; or (4) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions that are conservative modifications of the sequences in (1), (2) or (3).

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мн СОКЗ з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 10.The present invention provides an antibody that binds to human SOC8, which includes Mn SOCZ with the sequence according to ZEO IU MO: 10.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке включає Мі СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 5 та Мн СОКЗ з послідовністю згідно з хЕО ІЮ МО: 10.The present invention provides an antibody that binds to human HCV8, which includes Mi SOCZ with the sequence according to BEO IU MO: 5 and Mn SOCZ with the sequence according to xEO IU MO: 10.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮО38 людини, яке включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, де варіабельний область легкого ланцюга включає Мі СОКІ1 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮО МО: 3, Мі СОК2 з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 4 та Мі СОКЗ з послідовністю згідно з ХЕО ІЮО МО: 5, і варіабельний область важкого ланцюга включає ун СОМК1 з послідовністю згідно з ЗЕБЕО І МО: 8, ун СОКІ2 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 9 та ун СОКЗ з послідовністю згідно з ФЕО ІЮ МО: 10.The present invention provides an antibody that binds to human SHO38, which comprises the human light chain variable region and the human heavy chain variable region, where the light chain variable region comprises Mi SOKI1 with a sequence according to the ZEO IUO MO: 3, Mi SOKI2 with a sequence according to the BEO IU MO: 4 and Mi SOKZ with sequence according to HEO IUO MO: 5, and the variable region of the heavy chain includes un SOMK1 with sequence according to ZEBEO I MO: 8, un SOKI2 with sequence according to ZEO IU MO: 9 and un SOKZ with sequence according to the FEO of the Ministry of Internal Affairs of the Ministry of Defense: 10.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область з амінокислотною послідовністю згідно з ФЕО ІЮ МО: 2.The present invention provides an antibody that binds to human POP8, which includes the Mi region with the amino acid sequence according to FEO IU MO: 2.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область з амінокислотною послідовністю, яка має щонайменше 9095, наприклад щонайменше 95 95 ідентичності послідовності згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2.The present invention provides an antibody that binds to human COZ8, which includes an Mi region with an amino acid sequence that has at least 9095, for example at least 95 95 sequence identity according to ZEO IJOO MO: 2.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮО38 людини, яке включає ун область з амінокислотною послідовністю згідно з ФЕО ІЮ МО: 7.The present invention provides an antibody that binds to human SHO38, which includes a region with an amino acid sequence according to FEO IU MO: 7.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун область з амінокислотною послідовністю, що охоплює ун СОНІТ-ун СОМКЗ область 5ЕО ІЮО МО: 7.The present invention provides an antibody that binds to human SOZ8, which includes an un region with an amino acid sequence spanning un SONIT un SOMKZ region 5EO IYUO MO: 7.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає Мн область з амінокислотною послідовністю, яка має, щонайменше, 90 95, наприклад, щонайменше, 95 95 ідентичності послідовності згідно з БЗЕО ІЮО МО: 7, або яка охоплює ун СОНЗ-ун СОКЗ область послідовності згідно з зЗЕО ІЮО МО: 7.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38, which includes a Mn region with an amino acid sequence that has at least 90 95, for example, at least 95 95 sequence identity according to BZEO IJU MO: 7, or which spans the un SOZ -University of SOKZ area of sequence in accordance with ZEO IYUO MO: 7.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає Мн область, що має 1-5, наприклад, 1-3 заміщення, делеції або додавання амінокислот у порівнянні з послідовністю згідно з зЗЕО ІЮ МО: 7, або що охоплює ун СОВ1-ун СОМЗ область 5ЕО ІЮО МО: 7.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38, which includes a Mn region having 1-5, for example, 1-3 amino acid substitutions, deletions or additions compared to the sequence according to ZEO IU MO: 7, or comprising University of SOV1-University of SOMZ Region 5EO IYUO MO: 7.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке включає Мі область, як визначено вище, і ун область, як визначено вище.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ8, which includes the Mi region, as defined above, and the un region, as defined above.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун СОКЗ з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 20.The present invention provides an antibody that binds to human SOC8, which includes the un SOCZ with the sequence according to ZEO IU MO: 20.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 15 та ун СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 20.The present invention provides an antibody that binds to human POP8, which includes Mi SOCZ with the sequence according to BEO IU MO: 15 and un SOCZ with the sequence according to BEO IU MO: 20.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, де варіабельний область легкого ланцюга включає Мі СОКІ1 з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮ МО: 13, М СОК2 з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮО МО: 14 та Мі СОМЗ з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮ МО: 15, і варіабельний область важкого ланцюга включає ун СОК'І1 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 18, ун СОКЗ2 з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 19 та ун СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 20.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38, which includes the human light chain variable region and the human heavy chain variable region, where the light chain variable region comprises Mi SOCI1 with a sequence according to 5EO IU MO: 13, M SOC2 with a sequence according to 5EO IUO MO: 14 and Mi SOMZ with a sequence according to 5EO IU MO: 15, and the variable region of the heavy chain includes un SOK'I1 with a sequence according to ZEO IU MO: 18, un SOKZ2 with a sequence according to BEO IU MO: 19 and un SOKZ with sequence according to BEO IU MO: 20.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область с амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 12.The present invention provides an antibody that binds to human COZ8, which includes the Mi region with the amino acid sequence according to ZEO IU MO: 12.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область з амінокислотною послідовністю, яка має, щонайменше, 90 95, наприклад, щонайменше, 95 95 ідентичності послідовності згідно з ЗЕО ІЮ МО: 12.The present invention provides an antibody that binds to human COZ8, which includes an Mi region with an amino acid sequence that has at least 90 95, for example, at least 95 95 sequence identity according to ZEO IU MO: 12.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун область с амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17.The present invention offers an antibody that binds to human POP8, which includes the un region with the amino acid sequence according to ZEO IU MO: 17.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає ун область, що включає амінокислотну послідовність, яка охоплює ун СОВІТ-ун СОКЗ область 5ЕО ІЮ МО: 17.The present invention provides an antibody that binds to human SHUOZ38, which includes the un region, which includes the amino acid sequence that covers the un SOVIT-un SOKZ region 5EO IU MO: 17.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун область з амінокислотною послідовністю, що має, щонайменше, 90 956, наприклад, щонайменше, 95 95 ідентичності послідовності згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17, або що охоплює ун СОВ1-ун СОКЗ областьThe present invention provides an antibody that binds to human SOZ8, which includes an un region with an amino acid sequence having at least 90,956, e.g., at least 95,95 sequence identity according to ZEO IU MO: 17, or encompassing un SOB1 -University of SOKZ region

ЗЕО ІЮ МО: 17.ZEO IU MO: 17.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає мп область, що має 1-5, наприклад, 1-3 заміщення, делеції або додавання амінокислот у порівнянні з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17, або що охоплює ун СОВІТ-ун СОКЗ область ЗЕО ІЮО МО: 17.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38, which includes an mp region having 1-5, for example, 1-3 substitutions, deletions or additions of amino acids compared to the sequence according to ZEO IU MO: 17, or comprising SOVIT university, SOCZ university, ZEO region of the Ministry of Education, Culture and Science: 17.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке включає Мі область, як визначено вище, і ун область, як визначено вище.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ8, which includes the Mi region, as defined above, and the un region, as defined above.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун СОКЗ зThe present invention offers an antibody that binds to human SOZ8, which includes un SOCZ z

Ко) послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 30.Ko) sequence according to ZEO IU MO: 30.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке включає М СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 25 та ун СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 30.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ8, which includes M SOKZ with the sequence according to BEO IU MO: 25 and un SOKZ with the sequence according to BEO IU MO: 30.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮО38 людини, яке включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, де варіабельний область легкого ланцюга включає Мі СОКІ1 з послідовністю згідно з «ЕО ІЮ МО: 23, М СОК2 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮО МО: 24 та Мі СОМЗ з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮ МО: 25, і варіабельний область важкого ланцюга включає ун СОК'І1 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 28, ун СОКЗ2 з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 29 та ун СОКЗ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 30.The present invention provides an antibody that binds to human SHO38, which includes the human light chain variable region and the human heavy chain variable region, where the light chain variable region comprises Mi SOKI1 with a sequence according to "EO IU MO: 23, M SOKI2 with a sequence according to ZEO IYUO MO: 24 and Mi SOMZ with sequence according to 5EO IYU MO: 25, and the variable region of the heavy chain includes un SOK'I1 with sequence according to ZEO IYU MO: 28, un SOKZ2 with sequence according to BEO IYU MO: 29 and University of Sokoz with a sequence according to the BEO IU of the Ministry of Education: 30.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область з амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22.The present invention provides an antibody that binds to human POP8, which includes the Mi region with the amino acid sequence according to ZEO IU MO: 22.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає Мі область з амінокислотною послідовністю, що має щонайменше 9095, наприклад щонайменше 95 95 ідентичності послідовності згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22.The present invention provides an antibody that binds to human COZ8, which includes an Mi region with an amino acid sequence having at least 9095, for example at least 95 95 sequence identity according to ZEO IU MO: 22.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун область з амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27.The present invention provides an antibody that binds to human POP8, which includes a region with an amino acid sequence according to ZEO IU MO: 27.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає ун область с амінокислотною послідовністю, що охоплює ун СОНІТ-ун СОКЗ область 5ЕО ІО МО: 27.The present invention provides an antibody that binds to human SOZ8, which includes an un region with an amino acid sequence spanning un SONIT un SOKZ region 5EO IO MO: 27.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає Мн область з амінокислотною послідовністю, що має, щонайменше, 90 956, наприклад, щонайменше, 95 95The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38 that includes a Mn region with an amino acid sequence having at least 90,956, e.g., at least 95,95

БО ідентичності послідовності згідно з 5ЕО ІЮ МО: 27 або що охоплює ун СОВІТ-ун СОКЗ областьBO sequence identity according to 5EO IU MO: 27 or covering the SOVIET university-university of the SOKZ region

ЗЕО ІЮ МО: 27.ZEO IU MO: 27.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає мп область, що має 1-5, наприклад, 1-3 заміщення, делеції або додавання амінокислот у порівнянні з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27, або що охоплює ун СОВІТ-ун СОКЗ область ЗЕО ІЮО МО: 2.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ38, which includes an mp region having 1-5, for example, 1-3 substitutions, deletions or additions of amino acids compared to the sequence according to ZEO IU MO: 27, or comprising SOVIT university, SOCZ university, ZEO region of the Ministry of Education, Culture, Science and Technology: 2.

Даний винахід пропонує антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, яке включає Мі область, як визначено вище, і Мн область, як визначено вище.The present invention provides an antibody that binds to human SHOZ8, which includes the Mi region as defined above and the Mn region as defined above.

Даний винахід пропонує пептид, який зв'язується з СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31) і який не зв'язується з мутантним СО38 людини, де залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (5ЕО ІО МО: 34), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).The present invention provides a peptide that binds to human CO38 (5EO IU MO: 31) and which does not bind to mutant human CO38, where the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (5EO IO MO: 34), in the same degree of how it binds to human POP8 (ZEO IO MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (5ЕО ІЮ МО: 34), становить менше 50 95, наприклад менше 10 95, менше 5 95 або менше 1 95, величини ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).The present invention provides a peptide as defined above, where the EC50 for the binding of the peptide to a mutant human SOZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (5EO IU MO: 34) is less than 50 95, for example less than 10 95, less 5 95 or less than 1 95, values of ESzo for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IU MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, що зв'язується з СОЗ38 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31) ї не зв'язується з мутантним СОЗ38 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕОThe present invention offers a peptide that binds to human SOZ38 (ZEO IU MO: 31) and does not bind to mutant human SOZ38, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33), in the same degrees, how it binds to human POP8 (5EO

ІО МО: 31).IO MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІЮ МО: 33), становить менше 50 95, наприклад менше 10 95, менше 5 95 або менше 1 95, величини ЕСзхо для зв'язування пептиду з СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).The present invention provides a peptide as defined above, where the ESvo for binding of the peptide to a mutant human SOZ8 in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33) is less than 50 95, for example less than 10 95, less 5 95 or less than 1 95, values of ESzho for binding the peptide with human CO38 (5EO IU MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, де згаданий пептид зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32) в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІО МО: 31).The present invention provides a peptide as defined above, wherein said peptide binds to a mutant human POP8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32) to the same degree as it binds to human POP8 (5EO IO MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), відповідає 75 956-125 96 величини ЕСзо для зв'язування пептиду з СЮОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).The present invention offers a peptide as defined above, where the ECo for binding of the peptide to the human mutant SOZ8, in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (EOI MO: 32), corresponds to 75 956-125 96 of the ECo value for binding binding of the peptide from human SHUOZ8 (ZEO IU MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, що зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), де пептид має такі характеристики зв'язування: (1) зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), (2) зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІЮ МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), і (3) зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).The present invention provides a peptide that binds to human SOC8 (5EO IU MO: 31), where the peptide has the following binding characteristics: (1) binds to a mutant human SOC8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), to the same extent as it binds to human SOC8 (5EO IU MO: 31), (2) binds to a mutant human SOC8 in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33), to the same extent as it binds to human CO38 (5EO IU MO: 31), and (3) binds to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by to alanine (ZEO IU MO: 32), to the same extent as it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31).

Ко) Даний винахід пропонує пептид, що зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), де пептид має такі характеристики зв'язування: (1) не зв'язується з мутантним СОЗ38 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), (2) не зв'язується з мутантнимKo) The present invention provides a peptide that binds to human POP8 (5EO IU MO: 31), where the peptide has the following binding characteristics: (1) does not bind to mutant human POP38, in which the serine residue at position 274 substituted with a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), to the same extent as it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31), (2) does not bind to the mutant

СОЗ38 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІЮHuman SOZ38, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU

МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (З5ЕО ІЮ МО: 31), і (3) зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).MO: 33), to the same extent as it binds to human SOZ8 (Z5EO IU MO: 31), and (3) binds to a mutant human SOZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32), to the same degree as it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, де ЕС5о визначають за допомогою ЕГІЗА, як описано в прикладі 17 даного опису.The present invention provides a peptide where EC5o is determined using EHIZA, as described in example 17 of this description.

Даний винахід пропонує пептид, що конкурує з антитілом відповідно до втілення (1) вище за зв'язування СОЗ8. В одному втіленні конкуренцію визначають за допомогою ЕЇГ І5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу, де конкуренція визначена як сигнал, що становить, щонайменше, 90 95 при вимірюванні по поглинанню, або із застосуванням вимірів перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу, де конкуренція визначена як сигнал, що становить, щонайменше, 90 9о при вимірюванні по флуоресценції.The present invention provides a peptide that competes with the antibody according to embodiment (1) above the binding of POP8. In one embodiment, competition is determined using EIG I5A, as described in Example 8 or 9 of the invention, where competition is defined as a signal that is at least 90 95 when measured by absorbance, or using cross-blocking measurements, as described in Example 7 of the invention , where competition is defined as a signal of at least 90 9o when measured by fluorescence.

Даний винахід пропонує пептид, який специфічно зв'язується з епітопом СОЗ38, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом, як визначено вище.The present invention provides a peptide that specifically binds to the epitope of SOZ38, and the epitope is also specifically bound by the antibody as defined above.

Даний винахід пропонує пептид, що специфічно зв'язується з областю ЗКЕМОБЕЗСКМІМК і областю ЕКМОТІ ЕАМУМІНОС СО38 людини (ЗЕО ІО МО: 31).The present invention offers a peptide that specifically binds to the ZKEMOBEZSKMIMK region and the human ECMOTI EAMUMINOS CO38 region (ZEO IO MO: 31).

Даний винахід пропонує пептид, який має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування з СОЗ8 людини, як антитіло, що визначено вище.The present invention provides a peptide that has essentially the same characteristics of specific binding to human POP8 as the antibody defined above.

Даний винахід пропонує пептид, який зв'язується з СОЗ38 людини, де антитіло має одну чи більше з таких характеристик: (1) діє як антагоніст СОЗ8; (2) не індукує значну проліферацію мононуклеарних клітин периферичної крові, як визначають способом, описаним в прикладі 18 даного винаходу; (3) не індукує вивільнення значної кількості І.-6 моноцитами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові, як визначають способом, описаним в прикладі 19 даного винаходу;The present invention provides a peptide that binds to human POP38, wherein the antibody has one or more of the following characteristics: (1) acts as a POP8 antagonist; (2) does not induce significant proliferation of peripheral blood mononuclear cells, as determined by the method described in example 18 of this invention; (3) does not induce the release of a significant amount of I.-6 by human monocytes or peripheral blood mononuclear cells, as determined by the method described in example 19 of this invention;

(4) не індукує вивільнення детектованої кількості ІЕМ-у Т-клітинами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові, як визначають способом, описаним в прикладі 20 даного винаходу; (5) интерналізується клітинами, що експресують СОЗ38, наприклад, інтерналізується клітинами СНО-СО38 протягом 5-15 хв. при 37 "С способом, описаним в прикладі 12 даного винаходу; (6) індукує АОСС, наприклад, зі значенням ЕСвхо нижче 15 нг/мл, наприклад, нижче 10 нг/мл, у клітинах Рацайї-Іис і зі значенням ЕСвхо нижче 75 нг/мл, наприклад, нижче 50 нг/мл, 30 нг/мл або нг/мл, у клітинах ММ, як визначають способом, описаним в прикладі 5 даного винаходу; 10 (7) індукує СОС у присутності комплементу, наприклад, зі значенням ЕСв5о нижче 5 мкг/мл, наприклад, нижче 1 мкг/мл у клітинах Юацаі-їнс або СНО-СО38 відповідно до способу, описаному в прикладі Є даного винаходу; (8) інгібує синтез ЦГДФР; (9) інгібує синтез ЦАДФР; (10) зв'язується з СОЗ8 людини зі спорідненістю (Ко) нижче 10 М, наприклад, в інтервалі від 10238 М до 10-! М, наприклад, в інтервалі від 7х1079 М до 1079 М, як визначають за допомогою поверхневого плазмонового резонансу, як описано в прикладі 20 даного винаходу.(4) does not induce the release of a detectable amount of IEM by human T cells or peripheral blood mononuclear cells, as determined by the method described in Example 20 of this invention; (5) internalized by cells expressing SOZ38, for example, internalized by CHO-СО38 cells within 5-15 min. at 37 "C by the method described in example 12 of the present invention; (6) induces AOSS, for example, with an ESvho value below 15 ng/ml, for example, below 10 ng/ml, in Ratsai-Iis cells and with an ESvho value below 75 ng /ml, for example, below 50 ng/ml, 30 ng/ml or ng/ml, in MM cells, as determined by the method described in Example 5 of this invention; 10 (7) induces SOC in the presence of complement, for example, with an ECv50 value below 5 μg/ml, for example, below 1 μg/ml in Huacai-ins or CHO-CO38 cells according to the method described in Example E of the present invention; (8) inhibits the synthesis of CGDGFR; (9) inhibits the synthesis of CADGFR; (10) binds to human COZ8 with an affinity (Ko) below 10 M, e.g., in the range of 10238 M to 10-1 M, e.g., in the range of 7x1079 M to 1079 M, as determined by surface plasmon resonance as described in example 20 of this invention.

Даний винахід пропонує пептид, як описано вище, що інгібує синтез ЦГДФР не менш ніж на 25 956, наприклад, не менш ніж на 30 9о, через 90 хв. у концентрації З мкг/мл, як визначають за допомогою спектроскопічного способу, описаного в прикладі 24 даного винаходу.The present invention provides a peptide, as described above, that inhibits the synthesis of CGDFR by at least 25,956, for example, at least 30 9o, after 90 min. in a concentration of 3 μg/ml, as determined by the spectroscopic method described in example 24 of this invention.

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, що інгібує синтез ЦАДФР не менш ніж на 25 95, наприклад, не менш ніж на 30 95, через 90 хв. у концентрації З мкг/мл, як визначають за допомогою ВЕРХ, як описано у Мипзпі еї аї., 9. ВіоЇ. Спет. 275, 21566-21571 (2000).The present invention provides a peptide, as defined above, that inhibits the synthesis of CADFR by at least 25 95, for example, at least 30 95, after 90 min. at a concentration of 3 μg/ml, as determined by HPLC, as described in Mipzpa ei ai., 9. Viol. Spent 275, 21566-21571 (2000).

В одному втіленні пептид, як визначено вище, є моноклональним антитілом людини.In one embodiment, the peptide as defined above is a human monoclonal antibody.

Даний винахід пропонує антитіло, як визначено вище, яке відрізняється тим, що воно є повнорозмірним Ідс1, Ідс2, ІдсЗ, Ідс4, дО, ДА, ДЕ або ДМ антитілом, наприклад, Ідс1 антитілом, краще, Ідс1,к антитілом або ІдМ антитілом, краще, дм, к антитілом.The present invention provides an antibody as defined above, which is characterized by being a full-length Ids1, Ids2, Ids3, Ids4, dO, DA, DE or DM antibody, for example, an Ids1 antibody, preferably, an Ids1,k antibody, or an IdM antibody, preferably , dm, to antibody.

Даний винахід пропонує ізольоване моноклональне антитіло людини, яке включає (1) амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга, вироблену зThe present invention provides an isolated human monoclonal antibody comprising (1) a heavy chain variable region amino acid sequence produced from

Ко) Нм1263/3М28(Мні) послідовності зародкової лінії людини і амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга, вироблену з 115 (МкІ) послідовності зародкової лінії людини, де антитіло людини зв'язується з СЮОЗ8 людини, або (2) амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга, вироблену з унЗ-ЮОрР- 47/Л/3-23 (МниМІ) послідовності зародкової лінії людини, і амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга, одержану з 16 (МкіІ) послідовності зародкової лінії людини, де антитіло людини зв'язується з СЮОЗ8 людини.Co) Hm1263/3M28(Mni) human germline sequence and the amino acid sequence of the variable region of the light chain produced from 115 (MkI) of the human germline sequence, where the human antibody binds to the human SHOZ8, or (2) the amino acid sequence of the variable region of the heavy chain produced from the human germline sequence unZ-YuOrR-47/L/3-23 (MnyMI) and the amino acid sequence of the variable region of the light chain obtained from the 16 (MkiI) sequence of the human germline chain, where the human antibody binds to SHUOZ8 a person

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, де пептид глікозилований в еукаріотичній клітині.The present invention provides a peptide as defined above, wherein the peptide is glycosylated in a eukaryotic cell.

В одному втіленні, антитіло відповідно до винаходу є фрагментом антитіла або одиночним ланцюгом антитіла.In one embodiment, the antibody according to the invention is a fragment of an antibody or a single chain of an antibody.

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, який далі включає лінкер хелатор для приєднання радіоізотопу.The present invention provides a peptide as defined above, which further includes a chelator linker for attachment of a radioisotope.

Даний винахід пропонує пептид, як визначено вище, що находиться, в основному, в ізольованому виді.The present invention provides a peptide as defined above that is essentially in isolated form.

Даний винахід пропонує ізольовану нуклеїнову кислоту, що кодує пептид, як визначено вище.The present invention provides an isolated nucleic acid encoding a peptide as defined above.

Даний винахід пропонує експресуючий вектор, який включає послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує пептид, як визначено вище.The present invention provides an expression vector that includes a nucleic acid sequence encoding a peptide as defined above.

Даний винахід пропонує експресуючий вектор, що включаєThe present invention provides an expression vector comprising

БО (1) Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 1, (2) Мн нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 6, (3) Мі нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 1 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 6, (4) Мі нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11, (5) Мн нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 16, (6) МІ нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 11 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІО МО: 16, (7) Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 21, (8) Мн нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 26,BO (1) Mi nucleotide sequence according to BEO IUO MO: 1, (2) Mn nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 6, (3) Mi nucleotide sequence according to 5EO IO MO: 1 and Mn nucleotide sequence according to FEO IU MO: 6, (4) Mi nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 11, (5) Mn nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 16, (6) MI nucleotide sequence according to BEO IU MO: 11 and Mn nucleotide sequence according to with BEO IU MO: 16, (7) Mi nucleotide sequence according to BEO IUO MO: 21, (8) Mn nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 26,

(9) Мі нуклеотидну послідовність згідно з ЕС ІЮ МО: 21 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІО МО: 26.(9) Mi nucleotide sequence according to ES IU MO: 21 and Mn nucleotide sequence according to BEO IO MO: 26.

Даний винахід пропонує експресуючий вектор, як визначено вище, який далі включає нуклеотидну послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюгів антитіла людини.The present invention provides an expression vector as defined above, which further comprises a nucleotide sequence encoding the constant region of a light chain, a heavy chain, or both light and heavy chains of a human antibody.

Даний винахід пропонує експресуючий вектор, як визначено вище, де нуклеотидна послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюгів антитіла людини, кодує ІДО1 антитіло.The present invention provides an expression vector as defined above, where the nucleotide sequence encoding the constant region of the light chain, heavy chain, or both light and heavy chains of a human antibody encodes an IDO1 antibody.

Даний винахід пропонує гібридому, що продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають (1) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з ЗЕО ІЮ МО: 1 та 5ЕО ІО МО: 6, відповідно; (2) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з ФЕО ІЮ МО: 11 та 5ЕО ІЮ МО: 16, відповідно; (3) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 21 та 5ЕО ІЮО МО: 26, відповідно; або (4) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, які є консервативними модифікаціями послідовностей відповідно до пунктів (1), (2) або (3).The present invention provides a hybridoma producing a human monoclonal anti-CO38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising (1) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions according to ZEO IU MO: 1 and 5EO IO MO: 6, respectively; (2) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions according to FEO IU MO: 11 and 5EO IU MO: 16, respectively; (3) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IJU MO: 21 and 5EO IJU MO: 26, respectively; or (4) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions that are conservative modifications of the sequences according to (1), (2) or (3).

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що несе варіабельні області важкого ланцюга та легкого ланцюга людини, які включають (1) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 2 і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з ХЕО ІЮ МО: 7, (2) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮ МО: 12The present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-COZ38 antibody carrying human heavy chain and light chain variable regions comprising (1) a human light chain variable amino acid sequence according to ZEO IU MO: 2 and a human heavy chain variable amino acid sequence according to HEO IU MO: 7, (2) variable amino acid sequence of human light chain according to BEO IU MO: 12

Ко) і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ХЕО ІЮ МО: 17, (3) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮО МО: 22 і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІЮ МО: 27, або (4) консервативні модифікації послідовностей у варіабельних областях амінокислотних послідовностей легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини відповідно до пунктів (1), (2) або (3).Ko) and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to 5HEO IU MO: 17, (3) the variable amino acid sequence of the human light chain according to the BEO IUO MO: 22 and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to 5EO IU MO: 27, or ( 4) conservative modifications of the sequences in the variable regions of the amino acid sequences of the human light chain and the human heavy chain according to clauses (1), (2) or (3).

Даний винахід пропонує трансфектому, що продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають (1) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з ЗЕО ІЮ МО: 1 та 5ЕО ІО МО: 6, відповідно; (2) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 11 та 5ЕО ІЮО МО: 16, відповідно; (3) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 21 та 5ЕО ІЮО МО: 26, відповідно; або (4) нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях, що є консервативними модифікаціями послідовностей відповідно до пунктів (1), (2) або (3).The present invention provides a transfectome producing a human monoclonal anti-POZ38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising (1) human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in their variable regions according to ZEO IU MO: 1 and 5EO IO MO: 6, respectively; (2) human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IJU MO: 11 and 5EO IJU MO: 16, respectively; (3) human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IJU MO: 21 and 5EO IJU MO: 26, respectively; or (4) human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions that are conservative modifications of the sequences according to (1), (2) or (3).

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що несе варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають (1) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 2 і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ХЕО ІЮ МО: 7, (2) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮ МО: 12 і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ХЕО ІЮ МО: 17, (3) варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮО МО: 22 і варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮО МО: 27, абоThe present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-COZ38 antibody carrying human heavy chain and human light chain variable regions comprising (1) a human light chain variable amino acid sequence according to ZEO IU MO: 2 and a heavy chain variable amino acid sequence human according to 5HEO IU MO: 7, (2) variable amino acid sequence of human light chain according to BEO IU MO: 12 and variable amino acid sequence of human heavy chain according to 5HEO IU MO: 17, (3) variable amino acid sequence of human light chain according to with the BEO IUO MO: 22 and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to the ZEO IUO MO: 27, or

(4) консервативні модифікації послідовностей у варіабельних амінокислотних послідовностях легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини відповідно до пунктів (1), (2) або (3).(4) conservative sequence modifications in the variable amino acid sequences of the human light chain and the human heavy chain according to (1), (2) or (3).

Даний винахід пропонує еукаріотичну або прокаріотичну клітину хазяїна, що продукує пептид, як визначено вище.The present invention provides a eukaryotic or prokaryotic host cell that produces a peptide as defined above.

Даний винахід пропонує еукаріотичну або прокаріотичну клітину хазяїна, що містить експресуючий вектор, як визначено вище.The present invention provides a eukaryotic or prokaryotic host cell containing an expression vector as defined above.

Даний винахід пропонує трансгенну тварину, що не є людиною, або рослину, які включають нуклеїнові кислоти, що кодують важкий ланцюг людини та легкий ланцюг людини, де тварина або рослина продукує детектовану кількість пептиду, як визначено вище.The present invention provides a transgenic non-human animal or plant comprising nucleic acids encoding a human heavy chain and a human light chain, wherein the animal or plant produces a detectable amount of the peptide as defined above.

Даний винахід пропонує імунокон'югат, що включає пептид, як визначено вище, з'єднаний із цитотоксичним агентом, радіоїзотопом або ліками.The present invention provides an immunoconjugate comprising a peptide as defined above linked to a cytotoxic agent, radioisotope or drug.

Даний винахід пропонує імунокон'югат, що включає пептид, як визначено вище, де пептид є мономерним ІдМ антитілом, з'єднаним із цитотоксичним агентом, радіоїзотопом або ліками.The present invention provides an immunoconjugate comprising a peptide as defined above, wherein the peptide is a monomeric IdM antibody coupled to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug.

Даний винахід пропонує біспецифічну чи мультиспецифічну молекулу, що включає пептид, як визначено вище, і специфічність зв'язування ефекторної клітини людини.The present invention provides a bispecific or multispecific molecule comprising a peptide as defined above and the binding specificity of a human effector cell.

Даний винахід пропонує біспецифічну чи мультиспецифічну молекулу, що включає пептид, як визначено вище, і специфічність зв'язування СОЗ, СО4, СО138, І -15К, мембранно-зв'язаного або зв'язаного з рецептором ТЕМ-а, Ес рецептором людини або мембранно-зв'язаного чи зв'язаного з рецептором 1-15.The present invention offers a bispecific or multispecific molecule that includes a peptide as defined above and the specificity of binding POPs, CO4, CO138, I-15K, membrane-bound or bound to the TEM-a receptor, the human Es receptor or membrane-bound or bound to the receptor 1-15.

Даний винахід пропонує фармацевтичну композицію, що включає пептид, як визначено вище, або імунокон'югат, як визначено вище, і фармацевтично прийнятний носій.The present invention provides a pharmaceutical composition comprising a peptide as defined above or an immunoconjugate as defined above and a pharmaceutically acceptable carrier.

Даний винахід пропонує фармацевтичну композицію, як визначено вище, що включає один чи більше додаткових терапевтичних агентів.The present invention provides a pharmaceutical composition as defined above comprising one or more additional therapeutic agents.

Даний винахід пропонує спосіб інгібування росту та/або проліферації клітин, експресуючихThe present invention offers a method of inhibiting the growth and/or proliferation of expressing cells

СОЗ38, що включає введення пептиду, як визначено вище, імунокон'югата, як визначено вище, фармацевтичної композиції, як визначено вище, або експресуючого вектора, як визначено вище, так що ріст та/або проліферація клітин інгібується.COZ38, comprising the administration of a peptide as defined above, an immunoconjugate as defined above, a pharmaceutical composition as defined above, or an expression vector as defined above, so that cell growth and/or proliferation is inhibited.

Даний винахід пропонує спосіб лікування захворювання або порушення, що утягує клітини, які експресують СОЗ38 у суб'єкта, де спосіб включає введення пептиду, як визначено вище, імунокон'югата, як визначено вище, фармацевтичної композиції, як визначено вище, або експресуючого вектора, як визначено вище, суб'єкту, який потребує цього.The present invention provides a method of treating a disease or disorder involving cells expressing POP38 in a subject, wherein the method comprises administering a peptide as defined above, an immunoconjugate as defined above, a pharmaceutical composition as defined above, or an expression vector, as defined above, to the subject in need thereof.

Даний винахід пропонує спосіб запобігання захворювання або порушення, що утягує клітини, які експресують СОЗ38, де спосіб включає введення пептиду, як визначено вище, імунокон'югата, як визначено вище, фармацевтичної композиції, як визначено вище, або експресуючого вектора, як визначено вище, суб'єкту, який потребує цього.The present invention provides a method of preventing a disease or disorder involving cells expressing POP38, wherein the method comprises administering a peptide as defined above, an immunoconjugate as defined above, a pharmaceutical composition as defined above, or an expression vector as defined above, to the entity that needs it.

В одному втіленні захворювання або порушення є ревматоїдним артритом.In one embodiment, the disease or disorder is rheumatoid arthritis.

В одному втіленні захворювання або порушення є множинною мієломою.In one embodiment, the disease or disorder is multiple myeloma.

В одному втіленні спосіб включає введення одного чи більше додаткового терапевтичного агента суб'єкту.In one embodiment, the method includes administering one or more additional therapeutic agents to the subject.

В одному втіленні додаткові один чи більше терапевтичних агентів вибирають із хіміотерапевтичного агента, протизапального агента, імуносупресивного та/або імуномодуляторного агента.In one embodiment, the additional one or more therapeutic agents are selected from a chemotherapeutic agent, an anti-inflammatory agent, an immunosuppressive agent, and/or an immunomodulatory agent.

В одному втіленні додаткові один чи більше терапевтичних агентів вибирають із групи, що складається із цисплатину, гефітинібу, цетуксимабу, ритуксимабу, бевацизумабу, ерлотинібу, бортезомібу, талідоміду, памідронату, золедронової кислоти, клодронату, ризендронату, ібандронату, етидронату, алендронату, тилудронату, триокису миш'яку, леналідоміду, філграстиму, пегфілграстиму, зарграмостиму, суберройаніліду гідроксамової кислоти та 5СІО- 469.In one embodiment, the additional one or more therapeutic agents are selected from the group consisting of cisplatin, gefitinib, cetuximab, rituximab, bevacizumab, erlotinib, bortezomib, thalidomide, pamidronate, zoledronic acid, clodronate, risedronate, ibandronate, etidronate, alendronate, tiludronate, trioxide arsenic, lenalidomide, filgrastim, pegfilgrastim, zargramostim, hydroxamic acid suberoyanilide, and 5СИО-469.

Даний винахід пропонує іп міто спосіб детектування наявності СОЗ8 антигену або клітин, експресуючих СОЗ8, у зразку, який включає:The present invention offers an IP mito method for detecting the presence of POP8 antigen or cells expressing POP8 in a sample, which includes:

А) контактування зразка з пептидом, як визначено вище, в умовах, що дозволяють утворення комплексу між пептидом та СОЗ8, іA) contacting the sample with the peptide, as defined above, under conditions that allow the formation of a complex between the peptide and SOZ8, and

Б) детектування утворення цього комплексу.B) detection of the formation of this complex.

Даний винахід пропонує набір для детектування наявності СЮОЗ8 антигену або клітин, експресуючих СОЗ8, у зразку, що включає пептид, як визначено вище.The present invention provides a kit for detecting the presence of SHOZ8 antigen or cells expressing SHOZ8 in a sample comprising a peptide as defined above.

Даний винахід пропонує іп мімо спосіб детектування СОЗ38 антигену або клітин, експресуючихThe present invention offers a method for detecting the SOZ38 antigen or cells expressing it

СОЗ38 у суб'єкта, який включає:POP38 in the subject, which includes:

А) введення пептиду, як визначено вище, в умовах, що дозволяють утворення комплексу 60 між пептидом та СОЗ8, іA) administration of the peptide, as defined above, under conditions that allow the formation of complex 60 between the peptide and COZ8, and

Б) детектування утвореного комплексу.B) detection of the formed complex.

Даний винахід пропонує антиідіотипове антитіло, що зв'язується з антитілом, як визначено вище.The present invention provides an anti-idiotypic antibody that binds to an antibody as defined above.

В одному втіленні антиідіотипове антитіло застосовують для детектування рівня антитіла, як визначено вище, у зразку.In one embodiment, the anti-idiotypic antibody is used to detect the level of antibody, as defined above, in a sample.

В одному втіленні антиїдіотипове антитіло застосовують для детектування рівня моноклонального антитіла людини проти СОЗ8 у зразку.In one embodiment, the anti-idiotypic antibody is used to detect the level of a human monoclonal antibody against POP8 in a sample.

Короткий опис малюнківA brief description of the drawings

Фігура 1А показує зв'язування -003, -005 та антитіла контрольного ізотипу НиМар-КІН зFigure 1A shows the binding of -003, -005 and isotype control NiMar-KIN antibodies to

СО38-трансфекованими СНО (СНО-СОЗ38) клітинами при вимірюванні за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 4.by CO38-transfected CHO (CHO-CHOZ38) cells when measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 4.

Фігура 1Б показує зв'язування -024 та НимМар-КнН з СОЗв-трансфекованими СНО (СНО-Figure 1B shows the binding of -024 and NymMar-KnN to SOZv-transfected CHOs (CHO-

СОрз38) клітинами при вимірюванні за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 4.СОрз38) by cells when measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 4.

Фігура 2А показує зв'язування -003, -005 та НиМабр-КІ Н з бацаї клітинами при вимірюванні за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 4.Figure 2A shows the binding of -003, -005, and NiMabr-KI H to human cells as measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 4.

Фігура 2Б показує зв'язування -024 та НиМар-КІ Н з Бацаї клітинами при вимірюванні за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 4.Figure 2B shows the binding of -024 and NiMar-KI H to Batsai cells as measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 4.

Фігура З показує зв'язування -003, -005, -024 та НимМабр-КиІН із клітинами множинної мієломи.Figure C shows the binding of -003, -005, -024 and NymMabr-KiIN to multiple myeloma cells.

Постановка експерименту описана в прикладі 4.The setup of the experiment is described in example 4.

Фігура 4А показує здатність -003 та -005 індукувати лізис клітин Юацаї за допомогою АОСС у порівнянні з ритуксимабом та НимМар-КІН. Постановка експерименту описана в прикладі 5.Figure 4A shows the ability of -003 and -005 to induce Yuatsai cell lysis by AOSS compared to rituximab and NimMar-KIN. The setup of the experiment is described in example 5.

Фігура 4Б показує здатність -024 індукувати лізис клітин Юацаі за допомогою АОСС у порівнянні з НимМмар-КІ Н. Постановка експерименту описана в прикладі 5.Figure 4B shows the ability of -024 to induce lysis of Yuatsai cells by AOSS in comparison with NimMmar-KI N. The experimental setup is described in example 5.

Фігура 5А показує здатність -003, -005 та -024 індукувати лізис свіжих пухлинних клітин множинної мієломи за допомогою АОСС у порівнянні з НимМмар-кКІіН. Постановка експерименту описана в прикладі 5.Figure 5A shows the ability of -003, -005 and -024 to induce lysis of fresh multiple myeloma tumor cells by AOSS compared to NimMmar-kKIiN. The setup of the experiment is described in example 5.

Фігура 5Б показує здатність -003, -005 та -024 індукувати лізис свіжих пухлинних клітин лейкозу плазматичних клітин за допомогою АЮСС у порівнянні з НиМар-КІ Н. ПостановкаFigure 5B shows the ability of -003, -005, and -024 to induce lysis of fresh tumor cells of plasma cell leukemia by means of AYUSS in comparison with NyMar-KI N. Staging

Зо експерименту описана в прикладі 5.From the experiment described in example 5.

Фігура 6 показує здатність -003 та -005 індукувати лізис УКбі (клітин лінії множинної мієломи) за допомогою АОСС у порівнянні з НимМмар-КІН. Постановка експерименту описана в прикладі 5.Figure 6 shows the ability of -003 and -005 to induce lysis of UKbi (multiple myeloma cells) by AOSS compared to NimMmar-KIN. The setup of the experiment is described in example 5.

Фігура 7 показує здатність -003 та -005 індукувати лізис АМО-1 (клітин лінії множинної мієломи) за допомогою АОСС у порівнянні з НиМмар-КІН. Постановка експерименту описана в прикладі 5.Figure 7 shows the ability of -003 and -005 to induce lysis of AMO-1 (multiple myeloma cell line) by AOSS compared to NyMmar-KIN. The setup of the experiment is described in example 5.

Фігура 8 показує СОС-опосередкований лізис Бацаї-ІШс клітин, індукований -003 та -005, у порівнянні з НимМмар-КІ Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 8 shows SOC-mediated lysis of Batsai-IShs cells induced by -003 and -005 compared to NimMmar-KI N. The experimental setup is described in example 6.

Фігура 9А показує СОС-опосередкований лізис СНО-СОЗ8 клітин, індукований -003 та -005, у порівнянні з НиМар-КІН. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 9A shows SOS-mediated lysis of CHO-SOS8 cells induced by -003 and -005 compared to NyMar-KIN. The setup of the experiment is described in example 6.

Фігура 9Б показує СЮОС-опосередкований лізис СНО-СОЗ8 клітин, індукований -024, у порівнянні з НимМмар-КІ Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 9B shows SHOS-mediated lysis of CHO-SOZ8 cells induced by -024 compared to NimMmar-KI H. The experimental setup is described in Example 6.

Фігура 10А показує СОС-опосередкований лізис З 9о стійких до лікування пухлинних клітин у присутності -003, -005 та НиМар-КІ- Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 10A shows SOC-mediated lysis of C9o treatment-resistant tumor cells in the presence of -003, -005 and NiMar-KIN. The experimental setup is described in example 6.

Фігура 10Б показує СОС-опосередкований лізис 9 Фо стійких до лікування пухлинних клітин у присутності -003, -005 та НиМар-КІ-Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 10B shows SOC-mediated lysis of 9 Fo treatment-resistant tumor cells in the presence of -003, -005 and NyMar-KI-N. The setup of the experiment is described in example 6.

Фігура 108 показує СЮОС-опосередкований лізис 30-40 905 стійких до лікування пухлинних клітин у присутності -003, -005 та НиМаб-КІ Н. Постановка експерименту описана в прикладі б.Figure 108 shows SUS-mediated lysis of 30-40 905 tumor cells resistant to treatment in the presence of -003, -005 and NyMab-KI N. The setup of the experiment is described in example b.

Фігура 10Г показує СОС-опосередкований лізис 70 95 стійких до лікування пухлинних клітин у присутності -003, -005 та НиМар-КІ- Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure 10D shows SOC-mediated lysis of 70 95 treatment-resistant tumor cells in the presence of -003, -005 and NyMar-KIN-N. The setup of the experiment is described in example 6.

Фігура ТОД показує СОС-опосередкований лізис клітин множинної мієломи в присутності - 024 та НиМаб-КІ Н. Постановка експерименту описана в прикладі 6.Figure TOD shows SOS-mediated lysis of multiple myeloma cells in the presence of - 024 and NyMab-KI N. The setup of the experiment is described in example 6.

Фігура 11 показує, що -003 та -005 не виявляють перехресного блокування зв'язування зFigure 11 shows that -003 and -005 do not show cross-blocking binding with

СОо38. Постановка експерименту описана в прикладі 7.COo38. The setup of the experiment is described in example 7.

Фігура 12А показує імуногістологічне фарбування макрофагів, лімфоцитів і плазматичних В- клітин за допомогою -003. Постановка експерименту описана в прикладі 10.Figure 12A shows immunohistological staining of macrophages, lymphocytes, and plasma B cells with -003. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 12Б показує імуногістологічне фарбування бронхіального епітелію за допомогою -003.Figure 12B shows immunohistological staining of bronchial epithelium with -003.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 12У показує імуногістологічне фарбування міоцитів за допомогою -003. Постановка бо експерименту описана в прикладі 10.Figure 12U shows immunohistological staining of myocytes with -003. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 12М показує імуногістологічне фарбування лімфоїдної тканини мавпи циномолгус за допомогою -003. Постановка експерименту описана в прикладі 10.Figure 12M shows immunohistological staining of cynomolgus monkey lymphoid tissue with -003. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 13А показує імуногістологічне фарбування макрофагів, лімфоцитів і плазматичних В- клітин за допомогою -005. Постановка експерименту описана в прикладі 10.Figure 13A shows immunohistological staining of macrophages, lymphocytes and plasma B cells with -005. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 13Б показує імуногістологічне фарбування бронхіального епітелію за допомогою -005.Figure 13B shows immunohistological staining of bronchial epithelium with -005.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 13В показує імуногістологічне фарбування міоцитів за допомогою -005. Постановка експерименту описана в прикладі 10.Figure 13B shows immunohistological staining of myocytes with -005. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 13Г показує імуногістологічне фарбування лімфоїдної тканини мавпи циномолгус за допомогою -005. Постановка експерименту описана в прикладі 10.Figure 13G shows immunohistological staining of lymphoid tissue from a cynomolgus monkey with -005. The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 14А показує імуногістологічне фарбування ендотелія печінки за допомогою СОЗ31.Figure 14A shows immunohistological staining of liver endothelium with SOZ31.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 14Б показує імуногістологічне фарбування ендотелія печінки за допомогою УМ/Е.Figure 14B shows immunohistological staining of liver endothelium with UM/E.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 14В показує імуногістологічне фарбування ендотелія печінки за допомогою анти-КІ Н.Figure 14B shows immunohistological staining of liver endothelium with anti-KI H.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 14Г показує імуногістологічне фарбування ендотелія печінки за допомогою -003.Figure 14G shows immunohistological staining of liver endothelium with -003.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 14Д показує імуногістологічне фарбування ендотелія печінки за допомогою -005.Figure 14D shows immunohistological staining of liver endothelium with -005.

Постановка експерименту описана в прикладі 10.The setup of the experiment is described in example 10.

Фігура 15А показує перехресну реактивність -003 та -005 у порівнянні з НимМар-КІ Н на лімфоцитах мавпи циномолгус, вимірювану за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 11.Figure 15A shows the cross-reactivity of -003 and -005 compared to NymMar-KI H on cynomolgus monkey lymphocytes, measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 11.

Фігура 15Б показує перехресну реактивність -003 та -005 у порівнянні з НимМар-КІН на моноцитах мавпи циномолгус, вимірювану за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 11.Figure 15B shows the cross-reactivity of -003 and -005 compared to NymMar-KIN on cynomolgus monkey monocytes as measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 11.

Фігура 158 показує перехресну реактивність -003 та -005 у порівнянні з НиМабр-КІ Н на РВМС мавп резус, вимірювану за допомогою проточної цитометрії. Постановка експерименту описана в прикладі 11.Figure 158 shows the cross-reactivity of -003 and -005 in comparison with NyMabr-KI H on RBMS of rhesus monkeys, measured by flow cytometry. The setup of the experiment is described in example 11.

Зо Фігура 16А показує інтерналізацію -003 при вимірюванні по гасінню флуоресценції етидій броміду. Постановка експерименту описана в прикладі 12.Figure 16A shows the internalization of -003 as measured by ethidium bromide fluorescence quenching. The setup of the experiment is described in example 12.

Фігура 16Б показує інтерналізацію -005 при вимірюванні по гасінню флуоресценції етидій броміду. Постановка експерименту описана в прикладі 12.Figure 16B shows the internalization of -005 as measured by ethidium bromide fluorescence quenching. The setup of the experiment is described in example 12.

Фігура 17А показує обумовлене -003 та -005 у порівнянні з анти-СО20 моноклональним антитілом (ритуксимаб) і НиМабБ-КІ Н інгібування росту пухлинних клітин у превентивній постановці при вимірюванні за допомогою іп мімо 5СІЮ люциферазного одержання зображення.Figure 17A shows conditioned -003 and -005 versus anti-CO20 monoclonal antibody (rituximab) and NiMabB-KI H inhibition of tumor cell growth in a preventive setting as measured by IP mimo 5SIU luciferase imaging.

Постановка експерименту описана в прикладі 13.The setup of the experiment is described in example 13.

Фігура 17Б показує обумовлене -003 та -005 у порівнянні з анти-СО20 моноклональним антитілом (ритуксимаб) і НиМар-КІН інгібування росту пухлинних клітин у терапевтичній постановці і при вимірюванні за допомогою іп мімо 5СІЮ люциферазного одержання зображення. Постановка експерименту описана в прикладі 13.Figure 17B shows conditioned -003 and -005 versus anti-CO20 monoclonal antibody (rituximab) and NiMar-KIN inhibition of tumor cell growth in the therapeutic setting and when measured by IP mimo 5SIU luciferase imaging. The setup of the experiment is described in example 13.

Фігура 17В показує обумовлене -003 та -005 у порівнянні з анти-СО20 моноклональним антитілом (ритуксимаб) і НиМар-КІН інгібування росту пухлинних клітин у терапевтичній постановці Ії при вимірюванні за допомогою іп мімо 5СІЮ люциферазного одержання зображення. Постановка експерименту описана в прикладі 13.Figure 17B shows conditioned -003 and -005 versus anti-CO20 monoclonal antibody (rituximab) and NiMar-KIN inhibition of tumor cell growth in the therapeutic setting of Ii as measured by IP mimo 5SIU luciferase imaging. The setup of the experiment is described in example 13.

Фігура 17Г показує обумовлене -003 та -024 у порівнянні з НиМаб-КІ Н інгібування росту пухлинних клітин у терапевтичній постановці І при вимірюванні за допомогою іп мімо СІЮ люциферазного одержання зображення. Постановка експерименту описана в прикладі 13.Figure 17G shows the conditioned -003 and -024 compared to NiMab-KI H inhibition of tumor cell growth in therapeutic setting I when measured by IP mimo SIU luciferase imaging. The setup of the experiment is described in example 13.

Фігура 18 показує індукцію апоптозу за допомогою -003 та -005 у порівнянні з анти-СО20 моноклональним антитілом (ритуксимаб) і НиМар-КІН зі зшивками та без них. Постановка експерименту описана в прикладі 14.Figure 18 shows the induction of apoptosis by -003 and -005 compared to anti-CO20 monoclonal antibody (rituximab) and NiMar-KIN with and without crosslinks. The setup of the experiment is described in example 14.

Фігура 19 показує гістологічну оцінку СОЗ8-позитивних клітин в імплантованих КА-5СІЮ гетеротрансплантатах миші на 14 день після обробки анти-КІ Н (НиМаб-КіІ Н) або -005. Способи описані в прикладі 15.Figure 19 shows the histological assessment of SOC8-positive cells in implanted KA-5SIU mouse heterografts on day 14 after treatment with anti-Ki H (NiMab-KiI H) or -005. The methods are described in example 15.

Фігура 20 показує гістологічну оцінку СО138-позитивних клітин в імплантованих КА-5СІО гетеротрансплантатах миші на 14 день після обробки анти-КІ Н (НиМаб-КіІ Н) або -005. Способи описані в прикладі 15.Figure 20 shows the histological assessment of CO138-positive cells in implanted KA-5SIO mouse heterografts on day 14 after treatment with anti-KI H (NiMab-KiI H) or -005. The methods are described in example 15.

Фігура 21 показує СО38 фарбування В-клітин у гетеротрансплантатах перед імплантацією (А) або після обробки анти-КІ Н (Б) або -005 (В). Способи описані в прикладі 15.Figure 21 shows CO38 staining of B cells in heterografts before implantation (A) or after treatment with anti-KI H (B) or -005 (B). The methods are described in example 15.

Фігура 22 показує СО138 фарбування В-клітин у гетеротрансплантатах перед імплантацією (А) або після обробки анти-КІ Н (Б) або -005 (В). Способи описані в прикладі 15.Figure 22 shows CO138 staining of B cells in heterografts before implantation (A) or after treatment with anti-KI H (B) or -005 (B). The methods are described in example 15.

Фігура 23 показує зв'язування -003 та -005 з диким типом і мутантним СОЗ38 людини при вимірюванні за допомогою ЕГІЗА. 23А: зв'язування -003 та -005 з Т237А мутантом СО38 людини. 23Б: зв'язування -003 та -005 з 0272 мутантом СОЗ38 людини. 230: зв'язування -003 та -005 з 5274Е мутантом СО38 людини. Способи описані в прикладі 17.Figure 23 shows the binding of -003 and -005 to wild-type and mutant human SOZ38 as measured by EGISA. 23A: Binding of -003 and -005 to T237A by the human CO38 mutant. 23B: binding of -003 and -005 to the 0272 mutant of human SOZ38. 230: Binding of -003 and -005 to the 5274E mutant of human CO38. The methods are described in example 17.

Фігура 24 показує дію -003 та -005 у порівнянні з НиМар-КІН на проліферацію (А), продукціюFigure 24 shows the effect of -003 and -005 in comparison with NyMar-KIN on proliferation (A), production

І/-6 (Б) і продукцію ІЕМ-у (В) клітинами РВМС людини. Способи описані в прикладах 18, 19 та 20, відповідно.I/-6 (B) and IEM production (B) by human PBMC cells. The methods are described in examples 18, 19 and 20, respectively.

Фігура 25 показує ферментативну продукцію цГДф-рибози в присутності різних концентрацій -003 (Б), -005 (В), -024 (Г) або анти-КІ Н (А). Способи описані в прикладі 23.Figure 25 shows the enzymatic production of cGDf-ribose in the presence of different concentrations of -003 (B), -005 (B), -024 (G) or anti-KI H (A). The methods are described in example 23.

Фігура 26 показує порівняння між -003-005 та Могрпозу5 антитілом ТН-3079 при СОС клітинFigure 26 shows a comparison between -003-005 and Mogrpozu5 antibody TN-3079 in SOS cells

СНО-СО38 (26А), СОС клітин Оацайї (26Б) і АОСС клітин Рацаї (268В).CHO-СО38 (26A), SOC of Oatsai cells (26B) and AOSS of Ratsai cells (268B).

Послідовності відповідно до винаходу наведені в прикладеному списку послідовностей.The sequences according to the invention are given in the attached sequence list.

ЗЕО ІЮ МО: 1 є нуклеотидною послідовністю Мі області антитіла -003.ZEO IU MO: 1 is the nucleotide sequence of the Mi region of antibody -003.

ЗЕО ІЮО МО: 2 є амінокислотною послідовністю Мі області антитіла -003.ZEO IUO MO: 2 is the amino acid sequence of the Mi region of antibody -003.

ЗБО І МО: 3 є амінокислотною послідовністю Мі СОКІ! антитіла -003, що включає амінокислотні залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО: 2.ZBO AND MO: 3 is the amino acid sequence of Mi SOKI! antibodies -003, which includes amino acid residues 24-34 5EO IU MO: 2.

ЗБО ІЮ МО: 4 є амінокислотною послідовністю Мі СОК2 антитіла -003, що включає амінокислотні залишки 50-56 5БЕО ІЮ МО: 2.ZBO IU MO: 4 is the amino acid sequence of Mi SOC2 antibody -003, which includes amino acid residues 50-56 5BEO IU MO: 2.

ЗБО І МО: 5 є амінокислотною послідовністю Мі СОКЗ антитіла -003, що включає амінокислотні залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО: 2.ZBO I MO: 5 is the amino acid sequence of Mi SOKZ antibody -003, which includes amino acid residues 89-97 5EO IU MO: 2.

ЗЕО ІЮ МО: 6 є нуклеотидною послідовністю Мн р області антитіла -003.ZEO IU MO: 6 is the nucleotide sequence of the Mn p region of antibody -003.

ЗЕО ІЮО МО: 7 є амінокислотною послідовністю Мн області антитіла -003.ZEO IYUO MO: 7 is the amino acid sequence of the Mn region of antibody -003.

ЗБО ІЮ МО: 8 є амінокислотною послідовністю Мн СОКІ антитіла -003, що включає амінокислотні залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 7.ZBO IU MO: 8 is the amino acid sequence of Mn SOKI antibody -003, which includes amino acid residues 31-35 5EO IU MO: 7.

ЗБО ІЮ МО: 9 є амінокислотною послідовністю Мн СОК2 антитіла -003, що включає амінокислотні залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 7.ZBO IU MO: 9 is the amino acid sequence of Mn SOC2 antibody -003, which includes amino acid residues 50-66 5EO IU MO: 7.

ЗБО ІЮ МО: 10 є амінокислотною послідовністю Мн СОКЗ антитіла -003, що включаєZBO IU MO: 10 is the amino acid sequence of Mn SOKZ antibody -003, which includes

Ко) амінокислотні залишки 99-109 5ЕО ІЮО МО: 7.Ko) amino acid residues 99-109 5EO IYUO MO: 7.

ЗЕО ІЮ МО: 11 є нуклеотидною послідовністю Мі області антитіла -005.ZEO IU MO: 11 is the nucleotide sequence of the Mi region of antibody -005.

ЗЕО ІЮ МО: 12 є амінокислотною послідовністю Мі області антитіла -005.ZEO IU MO: 12 is the amino acid sequence of the Mi region of antibody -005.

ЗБО ІЮ МО: 13 є амінокислотною послідовністю Мі СОКІ антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО: 12.ZBO IU MO: 13 is the amino acid sequence of Mi SOKI antibody -005, which includes amino acid residues 24-34 5EO IU MO: 12.

ЗБО ІЮ МО: 14 є амінокислотною послідовністю Мі СОК2 антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО: 12.ZBO IU MO: 14 is the amino acid sequence of Mi SOC2 antibody -005, which includes amino acid residues 50-56 5EO IU MO: 12.

ЗБО І МО: 15 є амінокислотною послідовністю Мі СОКЗ антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО: 12.ZBO I MO: 15 is the amino acid sequence of Mi SOKZ antibody -005, which includes amino acid residues 89-97 5EO IU MO: 12.

ЗЕО ІЮ МО: 16 є нуклеотидною послідовністю Мн області антитіла -005.ZEO IU MO: 16 is the nucleotide sequence of the Mn region of antibody -005.

ЗЕО ІЮ МО: 17 є амінокислотною послідовністю Мн області антитіла -005.ZEO IU MO: 17 is the amino acid sequence of the Mn region of antibody -005.

ЗБО І МО: 18 є амінокислотною послідовністю Мн СОКІ антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 17.ZBO I MO: 18 is the amino acid sequence of Mn SOKI antibody -005, which includes amino acid residues 31-35 5EO IU MO: 17.

ЗБО ІЮ МО: 19 є амінокислотною послідовністю Мн СОК2 антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 17.ZBO IU MO: 19 is the amino acid sequence of Mn SOC2 antibody -005, which includes amino acid residues 50-66 5EO IU MO: 17.

ЗБО І МО: 20 є амінокислотною послідовністю Мн СОКЗ антитіла -005, що включає амінокислотні залишки 99-111 5ЕО ІЮ МО: 17.ZBO I MO: 20 is the amino acid sequence of Mn SOKZ antibody -005, which includes amino acid residues 99-111 5EO IU MO: 17.

ЗЕО ІЮ МО: 21 є нуклеотидною послідовністю Мі області антитіла -024.ZEO IU MO: 21 is the nucleotide sequence of the Mi region of antibody -024.

ЗЕО ІЮ МО: 22 є амінокислотною послідовністю Мі області антитіла -024.ZEO IU MO: 22 is the amino acid sequence of the Mi region of antibody -024.

ЗБО І МО: 23 є амінокислотною послідовністю Мі СОКІ антитіла -024, що включаєZBO AND MO: 23 is the amino acid sequence of Mi SOKI antibody -024, which includes

БО амінокислотні залишки 24-34 5ЕО ІЮ МО: 22.BO amino acid residues 24-34 5EO IU MO: 22.

ЗБО І МО: 24 є амінокислотною послідовністю Мі СОК2 антитіла -024, що включає амінокислотні залишки 50-56 5ЕО ІЮ МО: 22.ZBO I MO: 24 is the amino acid sequence of Mi SOK2 antibody -024, which includes amino acid residues 50-56 5EO IU MO: 22.

ЗБО І МО: 25 є амінокислотною послідовністю Мі СОКЗ антитіла -024, що включає амінокислотні залишки 89-97 5ЕО ІЮ МО: 22.ZBO I MO: 25 is the amino acid sequence of Mi SOKZ antibody -024, which includes amino acid residues 89-97 5EO IU MO: 22.

ЗЕО ІЮ МО: 26 є нуклеотидною послідовністю Ун області антитіла -024.ZEO IU MO: 26 is the nucleotide sequence of the Un region of antibody -024.

ЗЕО ІЮ МО: 27 є амінокислотною послідовністю Мн області антитіла -024.ZEO IU MO: 27 is the amino acid sequence of the Mn region of antibody -024.

ЗБО І МО: 28 є амінокислотною послідовністю Мн СОКІ антитіла -024, що включає амінокислотні залишки 31-35 5ЕО ІЮ МО: 27.ZBO I MO: 28 is the amino acid sequence of Mn SOKI antibody -024, which includes amino acid residues 31-35 5EO IU MO: 27.

ЗБО І МО: 29 є амінокислотною послідовністю Мн СОК2 антитіла -024, що включає бо амінокислотні залишки 50-66 5ЕО ІЮ МО: 27.ZBO I MO: 29 is the amino acid sequence of Mn SOC2 antibody -024, which includes amino acid residues 50-66 5EO IU MO: 27.

ЗБО І МО: 30 є амінокислотною послідовністю Мн СОКЗ антитіла -024, що включає амінокислотні залишки 99-111 5ЕО ІЮ МО: 27.ZBO I MO: 30 is the amino acid sequence of Mn SOKZ antibody -024, which includes amino acid residues 99-111 5EO IU MO: 27.

ЗЕО ІЮ МО: 31 є послідовністю СОЗ8 людини.ZEO IU MO: 31 is the sequence of human POP8.

ЗБОЮ МО: 32 є послідовністю мутантного СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну.MO FAILURE: 32 is the sequence of a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue.

ЗБО ІЮО МО: 33 є послідовністю мутантного СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну.ZBO IJU MO: 33 is the sequence of a mutant of human SOZ8 in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue.

ЗБО ІЮ МО: 34 є послідовністю мутантного СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну.ZBO IU MO: 34 is the sequence of a mutant of human SOZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue.

Здійснення винаходуImplementation of the invention

Даний винахід пропонує СОЗ8-зв'язуючі пептиди ("СОЗ8ВР"), які можна застосовувати для лікування, діагностики та запобігання різноманітних порушень, що втягують клітини, які експресують СОЗ8, наприклад, множинної мієломи.The present invention provides COZ8-binding peptides ("COZ8BP") that can be used to treat, diagnose, and prevent a variety of disorders involving cells that express COZ8, such as multiple myeloma.

В одному втіленні, СОЗ8ВР відповідно до винаходу є антитілом -003. -003 є моноклональним (901 антитілом людини, яке має Мі область, що складається з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 2, та Мн область, що складається з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 7.In one embodiment, the SOZ8BP according to the invention is antibody -003. -003 is a human monoclonal (901) antibody that has an Mi region consisting of a sequence according to "EO IU MO: 2 and a Mn region consisting of a sequence according to "EO IU MO: 7.

В одному втіленні, СОЗ8ВР відповідно до винаходу є антитілом -005. -005 є моноклональним (901 антитілом людини, яке має Мі область, що складається з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 12, та Мн область, що складається з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 17.In one embodiment, the SOZ8BP according to the invention is a -005 antibody. -005 is a human monoclonal (901) antibody that has an Mi region consisting of a sequence according to "EO IU MO: 12 and a Mn region consisting of a sequence according to FEO IU MO: 17.

В одному втіленні, СОЗ8ВР відповідно до винаходу є антитілом -024. -024 є моноклональним (901 антитілом людини, яке має Мі область, що складається з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 22, та Мн область, що складається з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 27.In one embodiment, the SOZ8BP according to the invention is a -024 antibody. -024 is a human monoclonal (901) antibody that has an Mi region consisting of a sequence according to "EO IU MO: 22 and a Mn region consisting of a sequence according to FEO IU MO: 27.

Антитіла взаємодіють із антигенами мішені первинно через амінокислотні залишки, які розташовані в шести областях важкого та легкого ланцюга (СО), що визначають комплементарність. Через це амінокислотні послідовності усередині СОК більше розрізняються між індивідуальними антитілами, ніж послідовності за межами СОК. Оскільки СОК послідовності відповідають за більшу частину взаємодій антиген-антитіло, можливо експресувати рекомбінантні антитіла, які симулюють властивості специфічних антитіл, що зустрічаються в природі, за допомогою створення експресуючих векторів, які включають СОК послідовності зіAntibodies interact with target antigens primarily through amino acid residues located in the six complementarity-determining regions of the heavy and light chains (CO). Because of this, amino acid sequences within the SOC vary more between individual antibodies than sequences outside the SOC. Since SOC sequences are responsible for the majority of antigen-antibody interactions, it is possible to express recombinant antibodies that mimic the properties of naturally occurring specific antibodies by creating expression vectors that include SOC sequences with

Зо специфічних антитіл, що зустрічаються в природі, вставлені серед каркасних послідовностей іншого антитіла з іншими властивостями (див., наприклад, Кіесптапп еї аї., Маїшге 332, 323-327 (1998), допез вї а!., Майте 321, 522-525 (1986), Ойееп єї аІ., РМАБ ОА 86, 10029-10033 (1989)).Of specific antibodies found in nature, inserted among the framework sequences of another antibody with other properties (see, for example, Kiesptapp ei ai., Maishge 332, 323-327 (1998), dopez vii a!., Mayte 321, 522- 525 (1986), Oyeep eyi AI., RMAB OA 86, 10029-10033 (1989)).

Оскільки в даній області техніки добре відомо, що СОКЗ домени важкого ланцюга антитіла грають особливо важливу роль у специфічності/спорідненості зв'язування антитіла з антигеном (Оішеї Н... єї аї., У. Іттипої. 157(2), 739-49 (1996), Вагбаз 5.М. еї аї, 9У. Ат. Спет. 5ос. 116, 2161-2162 (1994), Ваїбаз 5.М. єї аї., Ргос. Маї!. Асад. бсі. ОБА 92(7), 2529-33 (19953), СОЗ8ВР за винаходом можуть включати СОКЗ важкого ланцюга антитіл -003, -005 або -024. СОЗ8ВР за винаходом можуть також включати СОМКЗ важкого та легкого ланцюга антитіл -003, -005 або - 024. СОЗ8ВР за винаходом можуть далі включати СОК2 антитіл -003, -005 та -024, відповідно.Since it is well known in the art that the heavy chain domains of the heavy chain of an antibody play a particularly important role in the specificity/affinity of the binding of the antibody to the antigen (Oishei N... nei ai., U. Ittipoi. 157(2), 739-49 (1996). 7), 2529-33 (19953), SOZ8VR according to the invention may include heavy chain SOKZ of antibodies -003, -005 or -024. SOZ8VR according to the invention can also include heavy and light chain SOKZ of antibodies -003, -005 or - 024. SOZ8VR according to the invention may further include SOC2 antibodies -003, -005 and -024, respectively.

СОЗ8ВР за винаходом можуть далі включати СОК'1 антитіл -003, -005 та -024, відповідно.COZ8VR according to the invention may further include SOC'1 antibodies -003, -005 and -024, respectively.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, які конкурують із -003 за зв'язування з СОЗ8.The present invention provides SOZ8BPs that compete with -003 for binding to SOZ8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, які конкурують із -005 за зв'язування з СОЗ8.The present invention provides SOZ8BPs that compete with -005 for binding to SOZ8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, які конкурують із -024 за зв'язування з СОЗ8.The present invention provides SOZ8BPs that compete with -024 for binding to SOZ8.

В одному втіленні конкуренцію визначають за допомогою ЕГІБА, як описано в розділі прикладів.In one embodiment, competition is determined using EHIBA, as described in the examples section.

В одному втіленні конкуренцію визначають за допомогою ЕБАС5, як описано в розділі прикладів.In one embodiment, competition is determined using EBAS5 as described in the examples section.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, що специфічно зв'язується з епітопом СОЗ8, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілами -003 або -005 або -024.The present invention provides COZ8BP, which specifically binds to the epitope of COZ8, and the epitope is also specifically bound by antibodies -003 or -005 or -024.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, що має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування відносно СОЗ38 людини, як -003 або -005, або -024.The present invention provides a SOZ8VR having essentially the same specific binding characteristics relative to human SOZ38 as -003 or -005 or -024.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKI1, consisting mainly of

ЗЕО ПО МО: 3.ZEO on MO: 3.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOC2, consisting mainly of

ЗЕО ІО МО: 4.ZEO IO MO: 4.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ПО МО: 5.ZEO on MO: 5.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОВЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOVZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 5, та М. СОКІ, що складається, в основному, з зЕО ІЮО МО: 3.ZEO IYUO MO: 5, and M. SOKI, consisting mainly of ZEO IYUO MO: 3.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 5, та М СОК2, що складається, в основному, з зхЕО ІЮО МО: 4.ZEO IYUO MO: 5, and M SOC2, consisting mainly of zhEO IYUO MO: 4.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 5, та М СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 4, та М СОМ, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 3.ZEO IYUO MO: 5, and M SOK2, consisting mainly of ZEO IYU MO: 4, and M SOM, consisting mainly of BEO IYU MO: 3.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKI1, consisting mainly of

ЗЕОІЮ МО: 8.ZEOIU MO: 8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8BP, which includes Mn SOK2, consisting mainly of

ЗЕОІЮ МО: 9.ZEOIU MO: 9.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕОІЮ МО: 10.ZEOIU MO: 10.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 10, та Мн СОКТ1, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 8.ZEO IU MO: 10, and Mn SOKT1, consisting mainly of BEO IU MO: 8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 10, та Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 9.ZEO IU MO: 10, and Mn SOC2, consisting mainly of BEO IU MO: 9.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 10, та Мн СОК2, що складається, в основному, з 5ЕО ІЮ МО: 9, та Мн СОКІ1, що складається, в основному, з БЕО ІО МО: 8.ZEO IU MO: 10, and Mn SOC2, consisting mainly of 5EO IU MO: 9, and Mn SOKI1, consisting mainly of BEO IO MO: 8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKI1, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 13.ZEO IU MO: 13.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOC2, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 14.ZEO IU MO: 14.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕОІЮ МО: 15.ZEOIU MO: 15.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 15, та М СОК, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 13.ZEO IYUO MO: 15, and M SOC, consisting mainly of ZEO IYU MO: 13.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 15, та М СОК2, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 14.ZEO IYUO MO: 15, and M SOC2, consisting mainly of ZEO IYU MO: 14.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

Ко) ЗЕО ІЮ МО: 15, та М СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮО МО: 14, та М СОК'І1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 13.Ko) ZEO IYU MO: 15, and M SOK2, consisting mainly of ZEO IYUO MO: 14, and M SOK'I1, consisting mainly of ZEO IYU MO: 13.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKI1, consisting mainly of

ЗЕОІЮ МО: 18.ZEOIU MO: 18.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8BP, which includes Mn SOK2, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 19.ZEO IU MO: 19.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 20.ZEO IU MO: 20.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 20, та Мн СОК'І, що складається, в основному, з ЗЕО ІО МО: 18.ZEO IU MO: 20, and Mn SOC'I, consisting mainly of ZEO IU MO: 18.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 20, та Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 19.ZEO IU MO: 20, and Mn SOC2, consisting mainly of BEO IU MO: 19.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 20, та Мн СОВБ2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 19, та Мн СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 18.ZEO IYUO MO: 20, and Mn SOVB2, consisting mainly of ZEO IYU MO: 19, and Mn SOKI1, consisting mainly of ZEO IYU MO: 18.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKI1, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 23.ZEO IU MO: 23.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOC2, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 24.ZEO IU MO: 24.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 25.ZEO IU MO: 25.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 25, та М. СОМ, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮО МО: 23.ZEO IYUO MO: 25, and M. SOM, consisting mainly of ZEO IYUO MO: 23.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 25, та М СОК2, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 24.ZEO IYUO MO: 25, and M SOC2, consisting mainly of ZEO IYU MO: 24.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 25, та М СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІО МО: 24, та Мі СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 23.ZEO IU MO: 25, and M SOC2, consisting mainly of ZEO IU MO: 24, and Mi SOKI1, consisting mainly of ZEO IU MO: 23.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKI1, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 28.ZEO IU MO: 28.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8BP, which includes Mn SOK2, consisting mainly of

ЗЕО ІО МО: 29.ZEO IO MO: 29.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІО МО: 30.ZEO IO MO: 30.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 30, та Мн СОКТ1, що складається, в основному, з БЕО ІЮО МО: 28.ZEO IYU MO: 30, and Mn SOKT1, consisting mainly of BEO IYU MO: 28.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮ МО: 30, та Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 29.ZEO IU MO: 30, and Mn SOC2, consisting mainly of BEO IU MO: 29.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, зThis invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOKZ, consisting mainly of

ЗЕО ІЮО МО: 30, та Мн СОК2, що складається, в основному, з 5ЕО ІЮ МО: 29, та Мн СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 28.ZEO IUO MO: 30, and Mn SOC2, consisting mainly of 5EO IU MO: 29, and Mn SOKI1, consisting mainly of ZEO IU MO: 28.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) першу Мі область, що включає три Мі СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4 та БЕО ІЮО МО: 5, і (б) першу Мн область, що включає три Мн СОКЕК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9 та 5ЕО ІЮО МО: 10.The present invention offers a SOZ8VR, which includes (a) the first Mi region, which includes three Mi SOBCs, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 3, 5EO IU MO: 4 and BEO IUO MO: 5, and (b) the first Mn region, which includes three Mn SOKEK, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 8, 5EO IU MO: 9 and 5EO IYUO MO: 10.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) першу Мі область, що включає три Мі СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮ МО: 14 та 5ЕО ІЮО МО: 15, і (б) першу Мн область, що включає три Мн СОКЕК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 19 та 5ЕО ІЮ МО: 20.The present invention offers a SOZ8VR, which includes (a) the first Mi region, which includes three Mi SOBCs, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 13, 5EO IU MO: 14 and 5EO IUO MO: 15, and (b) the first Mn region, which includes three Mn SOKEK, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 18, 5EO IU MO: 19 and 5EO IU MO: 20.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) першу Мі область, що включає три Мі СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 23, 5ЕО ІЮ МО: 24 та 5ЕО ІЮ МО: 25, і (б) першу Мн область, що включає три Мн СОКЕК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 28, 5ЕО ІЮ МО: 29 та 5ЕО ІЮ МО: 30.The present invention offers a SOZ8VR, which includes (a) the first Mi area, which includes three Mi SOBCs, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 23, 5EO IU MO: 24 and 5EO IU MO: 25, and (b) the first Mn region, which includes three Mn SOKEK, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 28, 5EO IU MO: 29 and 5EO IU MO: 30.

В одному втіленні Мі область та Мн область обидві розташовані на одному ланцюзі пептиду.In one embodiment, the Mi region and the Mn region are both located on the same peptide chain.

В наступному втіленні Мі область та Мн область розділені гнучким лінкером.In the next embodiment, the Mi region and the Mn region are separated by a flexible linker.

В одному втіленні Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду.In one embodiment, the Mi region and the Mn region are located on different peptide chains.

Зо В наступному втіленні Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду скрученого білка імуноглобуліну.In the next embodiment, the Mi region and the Mn region are located on different peptide chains of the immunoglobulin coiled protein.

В одному втіленні перша Мі область і перша Мн область орієнтовані таким чином, що триIn one embodiment, the first Mi region and the first Mn region are oriented such that three

СОР в Мі області та три СОК в Мн області кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.The SOR in the Mi region and the three SOCs in the Mn region are cooperatively bound to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant of human SOZ8.

В наступному втіленні пептид включає другу Мі область, ідентичну першій Мі області, та другу Мн область, ідентичну першій Мн області, де друга Мі область і друга Мн область кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.In a further embodiment, the peptide comprises a second Mi region identical to the first Mi region and a second Mn region identical to the first Mn region, wherein the second Mi region and the second Mn region are cooperatively linked to contribute to selective and/or specific binding antigenic determinant of human SOZ8.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що є функціональним варіантомThe present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region that is a functional variant

Мі області антитіла -003 або -005, або -024.Mi regions of antibodies -003 or -005 or -024.

В одному втіленні Мі область СОЗ8ВР складається, в основному, з послідовності, яка має щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 60 96, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 7595, щонайменше приблизно 80 956, щонайменше приблизно 85 95, щонайменше приблизно 9095, щонайменше приблизно 9595 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ЗЕО І МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 12, або 5ЕО ІЮ МО: 22, відповідно. В одному втіленні, СОЗ8ВР має щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 60 95, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 80 95, щонайменше приблизно 90 95, або щонайменше приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіл - 003 або -005, або -024, відповідно.In one embodiment, the Mi region of SOZ8BP consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 96, at least about 70 95, at least about 7595, at least about 80 956, at least about 85 95, at least about 9095, at least approximately 9595 amino acid sequence identities of the sequence according to ZEO I MO: 2 or 5EO IU MO: 12, or 5EO IU MO: 22, respectively. In one embodiment, the SOZ8BP has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 80 95, at least about 90 95, or at least about 95 95 of the epitope-binding characteristics of antibodies -003 or -005, or -024, respectively.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн область, що є функціональним варіантомThe present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn region that is a functional variant

Мн області антитіла -003 або -005, або -024.Mn region of the antibody -003 or -005 or -024.

В одному втіленні Мн область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 60 96, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 7595, щонайменше приблизно 80 956, щонайменше приблизно 85 95, щонайменше приблизно 9095, щонайменше приблизно 9595, ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ЗЕО І МО: 7 або 5ЕО ІЮ МО: 17, або 5ЕО ІЮ МО: 27, відповідно. В одному втіленні, СОЗ8ВР має щонайменше приблизно 5095, щонайменше приблизно 60 95, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 80 95, щонайменше приблизно 90 95 або, щонайменше приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіл - 60 003 або -005, або -024, відповідно.In one embodiment, the Mn region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 96, at least about 70 95, at least about 7595, at least about 80 956, at least about 85 95, at least about 9095, at least approximately 9595, amino acid sequence identity according to ZEO I MO: 7 or 5EO IU MO: 17, or 5EO IU MO: 27, respectively. In one embodiment, the SOZ8BP has at least about 5095, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 80 95, at least about 90 95, or at least about 95 95 epitope-binding characteristics of the antibodies - 60 003 or -005, or -024, respectively.

Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає щонайменше один СОжЖ, що є функціональним варіантом СОЕК антитіла -003 або -005, або -024.The present invention offers SOZ8VR, which includes at least one SOzhZ, which is a functional variant of SOEK antibody -003 or -005, or -024.

В одному втіленні, щонайменше, один з СОЖК пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 5095, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ЗЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮО МО: 4, 5ЕОIn one embodiment, at least one of the LFAs of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 5095, at least about 6095, at least about 7095, at least about 7595, at least about 8095, at least about 8595 at least about 90 95 at least about 95 95 amino acid sequence identities sequence according to ZEO IU MO: 3, 5EO IUO MO: 4, 5EO

ІО МО: 5, БЕО ІЮО МО: 8, 5ЕО ІЮО МО: 9 чи ЗЕО ІЮ МО: 10, або згідно з БЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮ МО: 14, 5ЕО ІЮО МО: 15, 5ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 19 чи 5ЕО ІЮО МО: 20, або згідно з 5ЕО ІЮО МО: 23,IO MO: 5, BEO IYUO MO: 8, 5EO IYUO MO: 9 or ZEO IYU MO: 10, or according to BEO IYU MO: 13, 5EO IYU MO: 14, 5EO IYUO MO: 15, 5EO IYU MO: 18, 5EO IYU MO: 19 or 5EO IYUO MO: 20, or according to 5EO IYUO MO: 23,

ЗЕО ІО МО: 24, 5ЕО ІО МО: 25, 5ЕО ІО МО: 28, 5ЕО ІО МО: 29 чи 5ЕО ІО МО: 30, відповідно. В одному втіленні, СОЗ8ВР має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 90 95 або, щонайменше, приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла -003 або -005 або -024, відповідно.ZEO IO MO: 24, 5EO IO MO: 25, 5EO IO MO: 28, 5EO IO MO: 29 or 5EO IO MO: 30, respectively. In one embodiment, the COZ8BP has at least about 50 95 , at least about 60 95 , at least about 70 95 , at least about 80 95 , at least about 90 95 , or at least about 95 95 epitope-binding characteristics of an antibody -003 or -005 or -024, respectively.

В одному втіленні, СОЗ8ВР має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 80 9565, щонайменше, приблизно 90 95 або, щонайменше, приблизно 95 95 спорідненості, авідності чи специфічності антитіла -003 або -005 або -024.In one embodiment, the SOZ8BP has at least about 50 95, at least about 60 965, at least about 70 95, at least about 80 9565, at least about 90 95, or at least about 95 95 antibody affinity, avidity or specificity - 003 or -005 or -024.

В одному втіленні СОЗ8ВР конкурує з -003 або -005 або -024 за зв'язування СО38. В наступному втіленні конкуренцію вимірюють за допомогою ЕГІ5ЗА, як описано в розділі прикладів. В іншому подальшому втіленні конкуренцію вимірюють за допомогою ЕБАС5, як описано в розділі прикладів.In one embodiment, SOZ8BP competes with -003 or -005 or -024 for binding CO38. In the following embodiment, competition is measured using EGI5ZA, as described in the examples section. In another further embodiment, competition is measured using EBAS5 as described in the examples section.

В одному втіленні СОЗ8ВР специфічно зв'язується з епітопом СОЗ8, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом -003 або -005 або -024.In one embodiment, COZ8BP specifically binds to the epitope of COZ8, and the epitope is also specifically bound by antibody -003 or -005 or -024.

В одному втіленні СОЗ8ВР зв'язується з СОЗ8 людини з більшою спорідненістю, ніж -003 або -005 або -024.In one embodiment, COZ8BP binds to human COZ8 with greater affinity than -003 or -005 or -024.

В одному втіленні СОЗ8ВР має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування СОЗ8, як -003 або -005 або -024.In one embodiment, COZ8BP has substantially the same specific binding characteristics of COZ8 as -003 or -005 or -024.

В одному втіленні СОЗ8ВР, в основному, вільний від інших зв'язуючих СЮОЗ8 пептидів.In one embodiment, the SHOZ8BP is substantially free of other SHOZ8 binding peptides.

В одному втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є антитілом. В наступному втіленні СОЗ8ВР є антитілом людини. В іншому подальшому втіленні СОЗ8ВР є гуманізованим антитілом. В іншому подальшому втіленні СОЗ8ВР є химерним антитілом.In one embodiment, the SOZ8VR of the present invention is an antibody. In another embodiment, SOZ8BP is a human antibody. In another further embodiment, the SOZ8VR is a humanized antibody. In another further embodiment, SOZ8BP is a chimeric antibody.

В іншому втіленні антитіло за даним винаходом є моноклональним антитілом.In another embodiment, the antibody of the present invention is a monoclonal antibody.

В одному втіленні антитіло згідно з даним винаходом є Ідос1, Ід(еа2, дез, Ідея, до, ІЧА, ЧЕ або ДМ антитілом. В наступному втіленні антитіло є ДО1 антитілом. В наступному втіленні антитіло є ІдДО1,к антитілом. В іншому подальшому втіленні антитіло є ІДМ антитілом. В іншому подальшому втіленні антитіло є ІДМ, к антитілом.In one embodiment, the antibody according to the present invention is an Idos1, Id(ea2, dez, Idea, to, IR, CHE or DM antibody. In a further embodiment, the antibody is a DO1 antibody. In a further embodiment, the antibody is an IdDO1,k antibody. In another further embodiment the antibody is an IDM antibody In another further embodiment, the antibody is an IDM, k antibody.

В одному втіленні антитіло згідно з даним винаходом є фрагментом антитіла або одиночним ланцюгом антитілом.In one embodiment, the antibody of the present invention is an antibody fragment or a single chain antibody.

В одному втіленні СОЗ8ВР глікозилований в еукаріотичній клітині.In one embodiment, SOZ8BP is glycosylated in a eukaryotic cell.

В одному втіленні СОЗ8ВР далі включає лінкер хелатор для приєднання радіоізотопу.In one embodiment, SOZ8VR further includes a chelator linker for attachment of the radioisotope.

В одному втіленні СОЗ8ВР находиться, в основному, в ізольованій формі.In one embodiment, SOZ8VR is mainly in an isolated form.

Даний винахід пропонує ізольовану нуклеїнову кислоту, що кодує СОЗ8ВР за даним винаходом.The present invention provides an isolated nucleic acid encoding the SOZ8VR of the present invention.

Даний винахід пропонує експресуючий вектор, який включає послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує СОЗ8ВР згідно з даним винаходом.The present invention provides an expression vector that includes a nucleic acid sequence encoding the SOZ8BP according to the present invention.

В одному втіленні експресуючий вектор включає Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕОIn one embodiment, the expression vector includes an Mi nucleotide sequence according to BEO

ІО МО: 1, Мн нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 6 або Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІО МО: 1 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 6.IO MO: 1, Mn nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 6 or Mi nucleotide sequence according to BEO IO MO: 1 and Mn nucleotide sequence according to BEO IJU MO: 6.

В одному втіленні експресуючий вектор включає Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕОIn one embodiment, the expression vector includes an Mi nucleotide sequence according to BEO

ІЮ МО: 11, Мн нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО І МО: 16 або Мі нуклеотидну послідовність згідно з 5ХЕО ІЮО МО: 11 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з зХЕО ІЮО МО: 16.IU MO: 11, Mn nucleotide sequence according to 5EO I MO: 16 or Mi nucleotide sequence according to 5ЭО IХО MO: 11 and Mn nucleotide sequence according to хЭО IХО MO: 16.

В одному втіленні експресуючий вектор включає Мі нуклеотидну послідовність згідно з БЕОIn one embodiment, the expression vector includes an Mi nucleotide sequence according to BEO

ІЮ МО: 21, Мн нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО І МО: 26 або Мі нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 21 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з зХЕО ІЮО МО: 26.IU MO: 21, Mn nucleotide sequence according to 5EO I MO: 26 or Mi nucleotide sequence according to 5EO IHUO MO: 21 and Mn nucleotide sequence according to хЭО IХО MO: 26.

В наступному втіленні експресуючий вектор далі включає нуклеотидну послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюгів антитіла людини.In a further embodiment, the expression vector further includes a nucleotide sequence encoding the constant region of the light chain, heavy chain, or both light and heavy chains of the human antibody.

В наступному втіленні нуклеотидна послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюгів антитіла людини, кодує Ідс1 антитіло.In the next embodiment, the nucleotide sequence encoding the constant region of the light chain, heavy chain, or both light and heavy chains of a human antibody encodes an Ids1 antibody.

Даний винахід пропонує гібридому, що продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності у варіабельній області легкого ланцюга згідно з ЗЕО ІО МО: 1 або консервативні модифікації їхніх послідовностей і нуклеотидні послідовності у варіабельній області важкого ланцюга згідно з ФЕО ІЮО МО: 6 або консервативні модифікації їх послідовностей. В одному втіленні, нуклеїнова кислота легкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з 5Е0 ІЮО МО: 1, і нуклеїнова кислота важкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 6.The present invention provides a hybridoma producing a human monoclonal anti-CO38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in the variable region of the light chain according to ZEO IO MO: 1 or conservative modifications of their sequences and nucleotide sequences in to the variable region of the heavy chain according to the FEO IYU MO: 6 or conservative modifications of their sequences. In one embodiment, the human light chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to 5E0 IJU MO: 1, and the human heavy chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to ZEO IJU MO: 6.

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з ЗЕОThe present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody comprising human heavy chain and human light chain variable regions comprising the human light chain variable amino acid sequence according to ZEO

ІЮ МО: 2 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮО МО: 7 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні варіабельний область легкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 2 і варіабельний область важкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 7.IU MO: 2 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to ZEO IUO MO: 7 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain variable region comprises an amino acid sequence according to BEO IU MO: 2 and the human heavy chain variable region comprises an amino acid sequence according to "EO IU MO: 7.

Даний винахід пропонує трансфектому, що продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 1 або консервативними модифікаціями цієї послідовності та нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 6 або консервативними модифікаціями цієї послідовності. В одному втіленні моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини кодується нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 1 ії нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з ХЕО ІЮ МО: 6.The present invention provides a transfectome producing a human monoclonal anti-POZ38 antibody encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO: 1 or conservative modifications of this sequence and human heavy chain nucleic acids according to ZEO IU MO: 6 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human monoclonal anti-POZ38 antibody is encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO: 1 and human heavy chain nucleic acids according to HEO IU MO: 6.

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з ЗЕОThe present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody comprising human heavy chain and human light chain variable regions comprising the human light chain variable amino acid sequence according to ZEO

Зо ІЮ МО: 2 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮО МО: 7 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні легкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 2 і важкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ХЕО ІЮ МО: 7.Zo IJU MO: 2 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to ZEO IJU MO: 7 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain comprises a variable amino acid sequence according to ZEO IU MO:2 and the human heavy chain comprises a variable amino acid sequence according to HEO IU MO:7.

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності у варіабельній області легкого ланцюга згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11 або консервативні модифікації цих послідовностей, і нуклеотидні послідовності у варіабельній області важкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 16 або консервативні модифікації цих послідовностей. В одному втіленні, нуклеїнова кислота легкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 11, і нуклеїнова кислота важкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 16.The present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-CO38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in the variable region of the light chain according to ZEO IU MO: 11 or conservative modifications of these sequences, and nucleotide sequences in the variable region of the heavy chain according to BEO IU MO: 16 or conservative modifications of these sequences. In one embodiment, the human light chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to 5EO IU MO: 11, and the human heavy chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 16.

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають амінокислотну послідовність у варіабельній області легкого ланцюга згідно з ФЕОThe present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-COZ38 antibody comprising the human heavy chain variable region and the human light chain variable region comprising the amino acid sequence in the light chain variable region according to the FEO

ІО МО: 12 або консервативні модифікації цієї послідовності, та амінокислотну послідовність у варіабельній області важкого ланцюга згідно з зЗЕО ІЮ МО: 17 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні варіабельний область легкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 12, і варіабельний область важкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з БЗЕО ІЮ МО: 17.IO MO: 12 or conservative modifications of this sequence, and the amino acid sequence in the variable region of the heavy chain according to ZEO IU MO: 17 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IJU MO: 12, and the human heavy chain variable region comprises an amino acid sequence according to BZEO IJU MO: 17.

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами варіабельній області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11 або консервативними модифікаціями цієї послідовності, та нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з 5БЕО ІЮ МО: 16 або консервативними модифікаціями цієї послідовності. В одному втіленні моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини кодується нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11 і нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 16.The present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO: 11 or conservative modifications of this sequence, and human heavy chain nucleic acids according to 5BEO IU MO: 16 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human monoclonal anti-COZ8 antibody is encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO: 11 and human heavy chain nucleic acids according to ZEO IU MO: 16.

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, бо які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з 5хЕ0The present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody comprising the variable regions of the human light chain and the human heavy chain, for which include the variable amino acid sequence of the human light chain according to 5xE0

ІЮ МО: 12 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні легкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 12 і важкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 17.IU MO: 12 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to 5EO IU MO: 17 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain comprises a variable amino acid sequence according to ZEO IU MO: 12 and the human heavy chain comprises a variable amino acid sequence according to PEO IU MO: 17.

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидну послідовність у варіабельній області легкого ланцюга згідно з 5ЕО ІЮ МО: 21 або консервативні модифікації цієї послідовності, та нуклеотидну послідовність у варіабельній області важкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 26 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні, нуклеїнова кислота легкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 21, і нуклеїнова кислота важкого ланцюга людини включає нуклеотидну послідовність згідно з зЕО ІЮ МО: 26.The present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising a nucleotide sequence in the variable region of the light chain according to 5EO IU MO: 21 or conservative modifications of this sequence, and a nucleotide sequence in the variable region of the heavy chain according to BEO IU MO: 26 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to ZEO IU MO: 21, and the human heavy chain nucleic acid comprises a nucleotide sequence according to zEO IU MO: 26.

Даний винахід пропонує гібридому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з 5хЕ0The present invention provides a hybridoma that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody comprising human heavy chain and human light chain variable regions comprising the human light chain variable amino acid sequence according to 5xE0

ІЮ МО: 22 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні варіабельний область легкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 22, і варіабельний область важкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 27.IU MO: 22 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the heavy chain according to ZEO IU MO: 27 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IO MO: 22, and the human heavy chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IUO MO: 27.

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 21 або консервативними модифікаціями цієї послідовності, та нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з 5БЕО ІЮ МО: 26 або консервативними модифікаціями цієї послідовності. В одному втіленні моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини кодується нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 21 і нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 26.The present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO: 21 or conservative modifications of this sequence, and human heavy chain nucleic acids according to 5BEO IU MO: 26 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human monoclonal anti-COZ8 antibody is encoded by human light chain variable region nucleic acids according to ZEO IU MO:21 and human heavy chain nucleic acids according to ZEO IU MO:26.

Даний винахід пропонує трансфектому, яка продукує моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з 5хЕ0The present invention provides a transfectome that produces a human monoclonal anti-POZ38 antibody comprising human light chain variable regions and human heavy chain variable regions comprising the human light chain variable amino acid sequence according to 5xE0

ІЮ МО: 22 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІЮ МО: 27 або консервативні модифікації цієї послідовності. В одному втіленні легкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22, і важкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 27.IU MO: 22 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to 5EO IU MO: 27 or conservative modifications of this sequence. In one embodiment, the human light chain comprises a variable amino acid sequence according to ZEO IU MO: 22, and the human heavy chain comprises a variable amino acid sequence according to PEO IU MO: 27.

Даний винахід пропонує еукаріотичну або прокаріотичну клітину хазяїна, що продукуєThe present invention provides a eukaryotic or prokaryotic host cell that produces

СОЗз8ВР згідно з даним винаходом.СОЗз8ВР according to this invention.

Даний винахід пропонує еукаріотичну або прокаріотичну клітину хазяїна, що містить експресуючий вектор згідно з даним винаходом.The present invention provides a eukaryotic or prokaryotic host cell containing an expression vector according to the present invention.

Даний винахід пропонує трансгенну тварину, відмінну від людини, або рослину, які включають нуклеїнові кислоти, що кодують важкий ланцюг людини та легкий ланцюг людини, де тварина або рослина продукує детектовану кількість СОЗ8ВР згідно з даним винаходом.The present invention provides a transgenic non-human animal or plant that includes nucleic acids encoding a human heavy chain and a human light chain, wherein the animal or plant produces a detectable amount of the SOZ8BP according to the present invention.

Даний винахід пропонує імунокон'югат, що включає СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, з'єднаний із цитотоксичним агентом, радіоїзотопом або ліками. В одному втіленні пептид є мономерним ІдМ антитілом, з'єднаним із цитотоксичним агентом, радіоіїзотопом або ліками.The present invention provides an immunoconjugate comprising SOZ8BP according to the present invention coupled to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug. In one embodiment, the peptide is a monomeric IdM antibody coupled to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug.

Даний винахід пропонує біспецифічну чи мультиспецифічну молекулу, що включає СОЗВ8ВР згідно з даним винаходом і специфічність зв'язування ефекторної клітини людини. В одному втіленні специфічність зв'язування ефекторної клітини людини є специфічністю зв'язуванняThe present invention provides a bispecific or multispecific molecule that includes the SOZV8BP according to the present invention and the binding specificity of a human effector cell. In one embodiment, the binding specificity of the human effector cell is the binding specificity

БО СОо3, С04, СО0138, І/-15К, мембранно-зв'язаного або зв'язаного з рецептором ТЕМ-а, Ес рецептором людини або мембранно-зв'язаного чи зв'язаного з рецептором ІІ -15.BO COo3, С04, СО0138, I/-15K, membrane-bound or bound to the TEM-a receptor, human Es receptor or membrane-bound or bound to the II-15 receptor.

Даний винахід пропонує антиідіотипове антитіло, що зв'язується з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом.The present invention provides an anti-idiotypic antibody that binds to SOZ8BP according to the present invention.

Даний винахід пропонує застосування антиідіотипового антитіла згідно з даним винаходом для детектування рівня моноклонального антитіла людини проти СОЗ8 у зразку.The present invention provides the use of an anti-idiotypic antibody according to the present invention to detect the level of a human monoclonal antibody against POP8 in a sample.

Далі йде список вибраних втілень даного винаходу.The following is a list of selected embodiments of this invention.

Втілення 1: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮ МО: 1 та ЗЕО ІЮ МО: 6, відповідно або консервативні 60 модифікації їх послідовності.Embodiment 1: an antibody binding to human POP8 encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IU MO: 1 and ZEO IU MO: 6, respectively, or conservative 60 modifications of their sequence.

Втілення 2: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 1 та ЗЕО ІО МО: 6, відповідно.Embodiment 2: an antibody that binds to human POP8 encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IUO MO: 1 and ZEO IO MO: 6, respectively.

Втілення 3: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з ЗЕО ІЮ МО: 11 та 5ЕО ІО МО: 16, відповідно або консервативні модифікації їх послідовності.Embodiment 3: Human POP8-binding antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to ZEO IU MO: 11 and 5EO IO MO: 16, respectively, or conservative modifications their sequences.

Втілення 4: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 11 та ЗЕО ІО МО: 16, відповідно.Embodiment 4: an antibody that binds to human COZ8 encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IUO MO: 11 and ZEO IO MO: 16, respectively.

Втілення 5: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з 5ЕБЕО ІЮ МО: 21 та 5ЕБЕО ІЮ МО: 26, відповідно або консервативні модифікації їх послідовності.Embodiment 5: A human POP8-binding antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising the nucleotide sequences in their variable regions according to 5EBEO IU MO: 21 and 5EBEO IU MO: 26, respectively, or conservative modifications their sequences.

Втілення 6: антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 21 та ЗЕО ІО МО: 26, відповідно.Embodiment 6: an antibody that binds to human POP8 encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IUO MO: 21 and ZEO IO MO: 26, respectively.

Втілення 7: пептид, що конкурує з антитілом відповідно до втілення 2 за зв'язування з СОЗ8.Embodiment 7: A peptide that competes with the antibody according to embodiment 2 for binding to POP8.

Втілення 8: пептид за втіленням 7, де конкуренцію визначають за допомогою ЕГІЗА, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.Embodiment 8: the peptide according to embodiment 7, where the competition is determined using EHIZA, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 9: пептид за втіленням 7, де конкуренцію визначають шляхом вимірювання перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 9: The peptide according to embodiment 7, where competition is determined by measuring cross-blocking, as described in example 7 of the invention.

Втілення 10: пептид, що специфічно зв'язується з епітопом СОЗ38, де епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення 2.Embodiment 10: A peptide that specifically binds to an epitope of POP38, wherein the epitope is also specifically bound by an antibody according to embodiment 2.

Втілення 11: пептид, що має в основному такі ж характеристики специфічного зв'язування для зв'язування СОЗ8 людини, як антитіло відповідно до втілення 2.Embodiment 11: A peptide having substantially the same specific binding characteristics for binding human POP8 as the antibody according to embodiment 2.

Втілення 12: пептид, який включає Мі СОК/1, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 3.Embodiment 12: A peptide that includes Mi SOC/1 consisting mainly of zEO IU MO:3.

Втілення 13: пептид, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, з зХЕО ІЮ МО: 4.Embodiment 13: A peptide that includes Mi SOC2, consisting mainly of cHEO IU MO: 4.

Втілення 14: пептид, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, з зЕО ІЮО МО: 5.Embodiment 14: a peptide that includes Mi SOCZ consisting mainly of zEO IUO MO: 5.

Втілення 15: пептид відповідно до втілення 14, де пептид включає також Мі СОКІ1, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 3.Embodiment 15: The peptide according to embodiment 14, wherein the peptide also includes Mi SOKI1 consisting mainly of BEO IU MO:3.

Втілення 16: пептид відповідно до втілення 14, де пептид включає також Мі СОК2, що складається, в основному, з 5ЕО ІЮ МО: 4.Embodiment 16: The peptide according to embodiment 14, wherein the peptide also includes Mi SOC2 consisting mainly of 5EO IU MO:4.

Втілення 17: пептид відповідно до втілення 16, де пептид включає також Мі СОКІ1, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 3.Embodiment 17: The peptide according to embodiment 16, wherein the peptide also includes Mi SOKI1 consisting mainly of BEO IU MO:3.

Втілення 18: пептид, який включає Мн СОК'І, що складається, в основному, з БЕО ІЮО МО: 8.Embodiment 18: A peptide that includes Mn SOC'I consisting mainly of BEO IUO MO:8.

Втілення 19: пептид, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮО МО: 9.Embodiment 19: A peptide that includes Mn SOK2 consisting mainly of BEO IUO MO:9.

Втілення 20: пептид, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 10.Embodiment 20: a peptide that includes Mn SOCZ consisting mainly of BEO IU MO: 10.

Втілення 21: пептид відповідно до втілення 20, де пептид включає також Мн СОКІ, що складається, в основному, з 5ЕО ІЮ МО: 8.Embodiment 21: The peptide according to embodiment 20, wherein the peptide also includes Mn SOKI consisting mainly of 5EO IU MO:8.

Втілення 22: пептид відповідно до втілення 20, де пептид включає також Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 9.Embodiment 22: The peptide according to embodiment 20, wherein the peptide also includes Mn SOK2 consisting mainly of BEO IU MO:9.

Втілення 23: пептид відповідно до втілення 22, де пептид включає також Мн СОКІ1, що складається, в основному, з зЕО ІЮО МО: 8.Embodiment 23: The peptide according to embodiment 22, wherein the peptide also includes Mn SOKI1 consisting mainly of zEO IUO MO:8.

Втілення 24: пептид, який включає (а) першу Мі область, що включає три Мі СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4 та БЕО ІЮО МО: 5, і (б) першу Мн область, що включає три Мн СОКЕК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9 та 5ЕО ІЮО МО: 10.Embodiment 24: A peptide comprising (a) a first Mi region comprising three Mi SOBCs, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 3, 5EO IU MO: 4 and BEO IUO MO: 5, and (b) the first Mn region, which includes three Mn SOKEK, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 8, 5EO IU MO: 9 and 5EO IYUO MO: 10.

БО Втілення 25: пептид відповідно до втілення 24, де Мі область та Мн область обидва розташовані на одному ланцюзі пептиду.BO Embodiment 25: The peptide according to embodiment 24, wherein the Mi region and the Mn region are both located on the same peptide chain.

Втілення 26: пептид відповідно до втілення 24, де Мі область та Мн область розділені гнучким лінкером.Embodiment 26: The peptide according to embodiment 24, wherein the Mi region and the Mn region are separated by a flexible linker.

Втілення 27: пептид відповідно до втілення 24, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду.Embodiment 27: The peptide according to embodiment 24, where the Mi region and the Mn region are located on different chains of the peptide.

Втілення 28: пептид відповідно до втілення 24, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду в скрученому білку імуноглобуліну.Embodiment 28: The peptide according to embodiment 24, where the Mi region and the Mn region are located on different chains of the peptide in the folded immunoglobulin protein.

Втілення 29: пептид відповідно до втілень 24-28, де перший Мі область і перший Мн область орієнтовані таким чином, що три СОК в Мі області та три СОК в Мн області кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Embodiment 29: The peptide according to embodiments 24-28, wherein the first Mi region and the first Mn region are oriented such that the three SOCs in the Mi region and the three SOCs in the Mn region are cooperatively bound to contribute to selective and/or specific binding of human antigenic determinant SOZ8.

Втілення 30: пептид відповідно до втілення 29, де пептид включає другу Мі область, ідентичну першій М, у, та другу Мн область, ідентичну першій Мн області, де другий Мі область і другий Мн область кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Embodiment 30: The peptide according to embodiment 29, wherein the peptide comprises a second Mi region identical to the first M, and a second Mn region identical to the first Mn region, wherein the second Mi region and the second Mn region are cooperatively linked to contribute to selective and/or specific binding of the human POP8 antigenic determinant.

Втілення 31: пептид, який включає Мі область, що є функціональним варіантом Мі області антитіла відповідно до втілення 2.Embodiment 31: A peptide that includes a Mi region that is a functional variant of the Mi region of the antibody according to embodiment 2.

Втілення 32: пептид відповідно до втілення 31, де Мі область пептиду складається, в основному, з послідовності, що має, щонайменше, приблизно 50 9565, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 956, щонайменше, приблизно 80 96, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з 5ЕО ІЮО МО: 2.Embodiment 32: The peptide according to embodiment 31, wherein the Mi region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50,9565, at least about 60,965, at least about 70,95, at least about 75,956, at least about 80 96, at least about 8595, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to 5EO IUO MO: 2.

Втілення 33: пептид, який включає Мн область, що є функціональним варіантом Мн області антитіла відповідно до втілення 2.Embodiment 33: A peptide that includes a Mn region that is a functional variant of the Mn region of the antibody according to embodiment 2.

Втілення 34: пептид відповідно до втілення 33, де Мн область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 956, щонайменше, приблизно 80 96, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з 5ЕО ІЮО МО: 7.Embodiment 34: The peptide according to embodiment 33, wherein the Mn region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 965, at least about 70 95, at least about 75 956, at least about 80 96, at least about 8595, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to 5EO IYUO MO: 7.

Втілення 35: пептид, який включає, щонайменше, один СОЖК, що є функціональним варіантом СОК антитіла відповідно до втілення 2.Embodiment 35: a peptide that includes at least one LFA that is a functional variant of the SOC of the antibody according to embodiment 2.

Втілення 36: пептид відповідно до втілення 35, де, щонайменше, один СОК пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно зEmbodiment 36: The peptide according to embodiment 35, wherein at least one SOC of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95 , at least about 80 95, at least about 85 95, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to

ЗЕО ІО МО: 3, 5ЕО 10 МО: 4, 5ЕО ІЮ МО: 5, 5БЕО І МО: 8, 5ЕО І МО: 9, 5ЕО І МО: 10.ZEO IO MO: 3, 5EO 10 MO: 4, 5EO IU MO: 5, 5BEO AND MO: 8, 5EO AND MO: 9, 5EO AND MO: 10.

Втілення 37: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 31 до 36, де пептид має,Embodiment 37: The peptide according to any one of embodiments 31 to 36, wherein the peptide has

Ко) щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла відповідно до втілення 2.Co) at least about 50 95 at least about 60 95 at least about 70 95 at least about 75 95 at least about 80 95 at least about 85 95 at least about 90 95 at least about 95 95 epitope -binding characteristics of the antibody according to embodiment 2.

Втілення 38: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 31 до 36, де пептид має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 9565, щонайменше, приблизно 95 95 спорідненості, авідності або специфічності антитіла відповідно до втілення 2.Embodiment 38: The peptide according to any one of embodiments 31 to 36, wherein the peptide has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95, at least about 80 95, at least about 85 95 at least about 90 9565 at least about 95 95 affinity, avidity or specificity of the antibody according to embodiment 2.

Втілення 39: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 12 до 38, де пептид специфічно зв'язує СОЗ8 людини.Embodiment 39: The peptide according to any one of embodiments 12 to 38, wherein the peptide specifically binds human POP8.

Втілення 40: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 12 до 39, де пептид конкурує з антитілом відповідно до втілення 2 за зв'язування СОЗ8.Embodiment 40: The peptide according to any one of embodiments 12 to 39, wherein the peptide competes with the antibody according to embodiment 2 for binding POP8.

Втілення 41: пептид відповідно до втілення 40, де конкуренцію визначають за допомогоюEmbodiment 41: The peptide according to embodiment 40, wherein the competition is determined by

ЕГІ5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.EGI5A, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 42: пептид відповідно до втілення 7, де конкуренцію визначають шляхом визначення перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 42: The peptide according to embodiment 7, where competition is determined by determining cross-blocking, as described in example 7 of the invention.

Втілення 43: пептид відповідно до втілення 39, де пептид специфічно зв'язується з епітопомEmbodiment 43: The peptide according to embodiment 39, wherein the peptide specifically binds to the epitope

СОрз38, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення 2.COrz38, and the epitope is also specifically bound by the antibody according to embodiment 2.

Втілення 44: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 39 до 43, де пептид зв'язується зEmbodiment 44: The peptide according to any one of embodiments 39 to 43, wherein the peptide binds to

СО38 людини з більшою спорідненістю, ніж антитіло відповідно до втілення 2.Human CO38 with higher affinity than the antibody according to embodiment 2.

Втілення 45: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 39 до 43, де пептид має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування СОЗ8, як антитіло відповідно до втілення 2.Embodiment 45: The peptide according to any one of embodiments 39 to 43, wherein the peptide has substantially the same specific binding characteristics of POP8 as the antibody according to embodiment 2.

Втілення 46: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 39 до 45, де пептид, що зв'язуєEmbodiment 46: The peptide according to any one of embodiments 39 to 45, wherein the binding peptide

СОЗ38, в основному, вільний від інших пептидів, що зв'язують СОЗ8.COZ38 is largely free of other COZ8-binding peptides.

Втілення 47: пептид, що зв'язується з СЮОЗ8 людини (5ЕО ІЮО МО: 31) їі не зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (5ЕО ІЮ МО: 34), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮEmbodiment 47: a peptide that binds to human SHOZ8 (5EO IUO MO: 31) and does not bind to a mutant human SOZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (5EO IU MO: 34), in the same degrees, how it binds to human POP8 (5EO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 48: пептид відповідно до втілення 47, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 48: The peptide according to embodiment 47, wherein the ESvo to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 50 95 величини ЕСвзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Human SOZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 50 95 of the ESvzo value for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Втілення 49: пептид відповідно до втілення 48, де ЕСвхо для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 49: The peptide according to embodiment 48, wherein ESvho to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 10 956 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮHuman COZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34), is less than 10,956 ESvo for peptide binding to human COZ8 (5EO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 50: пептид відповідно до втілення 49, де ЕСвхо для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 50: The peptide according to embodiment 49, wherein ESvho to bind the peptide to the mutant

СО38 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 5 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СЮОЗ8 людини (ЗЕО ІЮHuman CO38, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 5 95 ESvo for the binding of the peptide to the human SHOZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 51: пептид відповідно до втілення 50, де ЕСвхо для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 51: The peptide according to embodiment 50, wherein ESvho to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 1 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮHuman COZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34), is less than 1 95 ESvo for peptide binding to human COZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 52: пептид, що зв'язується з СЮОЗ8 людини (5ЕО ІЮО МО: 31) їі не зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 52: a peptide that binds to human SHOZ8 (5EO IUO MO: 31) and does not bind to a mutant human SHOZ8, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IO MO: 33), in the same degree of how it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31).

Втілення 53: пептид відповідно до втілення 52, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 53: The peptide according to embodiment 52, wherein the ECo to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 50 95 величини ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Human SOZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 50 95 of the value of ESzo for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Втілення 54: пептид відповідно до втілення 53, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 54: Peptide according to embodiment 53, wherein ESvo to bind the peptide to the mutant

СО38 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 10 95 величини ЕСвзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Human CO38, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 10 95 of the ESvzo value for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Втілення 55: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 47 до 51, що не зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишкомEmbodiment 55: The peptide according to any one of embodiments 47 to 51, which does not bind to mutant human COZ8, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by

Зо аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).From arginine (ZEO IU MO: 33), to the same degree as it binds to human SOZ8 (5EO IU MO: 31).

Втілення 56: пептид відповідно до втілення 55, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 56: The peptide according to embodiment 55, wherein ESvo to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 50 95 величини ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Human SOZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 50 95 of the value of ESzo for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Втілення 57: пептид відповідно до втілення 55, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 57: The peptide according to embodiment 55, wherein ESvo to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 10 95 величини ЕСвзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Human SOZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 10 95 of the ESvzo value for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Втілення 58: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 47 до 57, де згаданий пептид зв'язується з мутантним СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕОEmbodiment 58: The peptide according to any one of embodiments 47 to 57, wherein said peptide binds to a mutant human COZ38 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32), to the same extent that how it binds to human POP8 (5EO

ІО МО: 31).IO MO: 31).

Втілення 59: пептид відповідно до втілення 58, де ЕСвхо для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 59: The peptide according to embodiment 58, wherein ESvho to bind the peptide to the mutant

СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮHuman SOZ38, in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU

МО: 32), становить більше 75 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮMO: 32), is more than 75 95 of the ESbho value for the binding of the peptide to human SOZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 60: пептид відповідно до втілення 59, де ЕСв»о для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 60: The peptide according to embodiment 59, wherein the ESO is to bind the peptide to the mutant

СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮHuman SOZ38, in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU

МО: 32), становить більше 85 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮMO: 32), is more than 85 95 of the value of ESbho for the binding of the peptide to human SOZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 61: пептид відповідно до втілення 60, де ЕСво для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 61: The peptide according to embodiment 60, wherein the ECo to bind the peptide to the mutant

СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮHuman SOZ38, in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU

МО: 32), становить більше 90 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮMO: 32), is more than 90 95 of the ESbho value for the binding of the peptide to human SOZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 62: пептид відповідно до втілення 61, де ЕСв»о для зв'язування пептиду з мутантнимEmbodiment 62: The peptide according to embodiment 61, wherein the ESO is to bind the peptide to the mutant

СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮHuman SOZ38, in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU

МО: 32), становить більше 95 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮMO: 32), is more than 95 95 of the value of ESbho for the binding of the peptide to human SOZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

Втілення 63: пептид, що конкурує з антитілом відповідно до втілення 4 за зв'язування СОЗ8.Embodiment 63: A peptide that competes with the antibody according to embodiment 4 for binding POP8.

Втілення 64: пептид відповідно до втілення 63, де конкуренцію визначають за допомогоюEmbodiment 64: The peptide according to embodiment 63, wherein the competition is determined by

ЕГІ5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.EGI5A, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 65: пептид відповідно до втілення 63, де конкуренцію визначають шляхом вимірювання перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 65: The peptide according to embodiment 63, wherein competition is determined by measuring cross-blocking as described in Example 7 of the invention.

Втілення 66: пептид, що специфічно зв'язується з епітопом СОЗ8, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення 4.Embodiment 66: A peptide that specifically binds to an epitope of POP8, wherein the epitope is also specifically bound by an antibody according to embodiment 4.

Втілення 67: пептид, що має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язуванняEmbodiment 67: A peptide having substantially the same specific binding characteristics

СО38, як антитіло відповідно до втілення 4.CO38 as an antibody according to embodiment 4.

Втілення 68: пептид, який включає Мі СОК/1, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 13.Embodiment 68: A peptide that includes Mi SOC/1 consisting primarily of zEO IU MO:13.

Втілення 69: пептид, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, з «ЕОІЮМО: 14.Embodiment 69: A peptide that includes Mi SOC2, consisting essentially of "EOIUMO: 14.

Втілення 70: пептид, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 15.Embodiment 70: A peptide that includes Mi SOCZ consisting mainly of zEO IU MO: 15.

Втілення 71: пептид відповідно до втілення 70, де пептид включає також Мі СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 13.Embodiment 71: The peptide according to embodiment 70, wherein the peptide also includes Mi SOKI1 consisting mainly of ZEO IU MO: 13.

Втілення 72: пептид відповідно до втілення 70, де пептид включає також Мі СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 14.Embodiment 72: The peptide according to embodiment 70, wherein the peptide also includes Mi SOC2 consisting primarily of ZEO IU MO: 14.

Втілення 73: пептид відповідно до втілення 72, де пептид включає також Мі СОК1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 13.Embodiment 73: The peptide according to embodiment 72, wherein the peptide also includes Mi SOK1 consisting mainly of ZEO IU MO: 13.

Втілення 74: пептид, який включає Мн СОК'І, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 18.Embodiment 74: A peptide that includes Mn SOC'I consisting mainly of BEO IU MO:18.

Втілення 75: пептид, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 19.Embodiment 75: A peptide that includes Mn SOC2 consisting primarily of BEO IU MO:19.

Втілення 76: пептид, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, з БЕО ІЮО МО: 20.Embodiment 76: A peptide that includes Mn SOCZ consisting mainly of BEO IUO MO:20.

Втілення 77: пептид відповідно до втілення 76, де пептид включає також Мн СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 18.Embodiment 77: The peptide according to embodiment 76, wherein the peptide also includes Mn SOKI1 consisting mainly of ZEO IU MO: 18.

Втілення 78: пептид відповідно до втілення 76, де пептид включає також Мн СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 19.Embodiment 78: The peptide according to embodiment 76, wherein the peptide also includes Mn SOK2 consisting mainly of ZEO IU MO: 19.

Втілення 79: пептид відповідно до втілення 78, де пептид включає також Мн СОКІ, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 18.Embodiment 79: The peptide according to embodiment 78, wherein the peptide also includes Mn SOKI consisting mainly of ZEO IU MO: 18.

Втілення 80: пептид, який включає (а) перша Мі область, що включає три Мі СОК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮ МО: 14 та 5ЕО ІЮО МО: 15, іEmbodiment 80: A peptide comprising (a) a first Mi region comprising three Mi SOCs, which independently of one another consist primarily of "EO IU MO: 13, 5EO IU MO: 14 and 5EO IUO MO: 15, and

Ко) (б) перша Мн область, що включає три Мн СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮ МО: 19 та 5ЕО ІЮ МО: 20.Ko) (b) the first Mn area, which includes three Mn SOBK, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 18, 5EO IU MO: 19 and 5EO IU MO: 20.

Втілення 81: пептид відповідно до втілення 80, де Мі область та Мн область обидві розташовані на одному ланцюзі пептиду.Embodiment 81: The peptide according to embodiment 80, wherein the Mi region and the Mn region are both located on the same peptide chain.

Втілення 82: пептид відповідно до втілення 81, де Мі область та Мн область розділені гнучким лінкером.Embodiment 82: The peptide according to embodiment 81, wherein the Mi region and the Mn region are separated by a flexible linker.

Втілення 83: пептид відповідно до втілення 80, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду.Embodiment 83: The peptide according to embodiment 80, wherein the Mi region and the Mn region are located on different chains of the peptide.

Втілення 84: пептид відповідно до втілення 83, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду в скрученому білку імуноглобуліну.Embodiment 84: The peptide according to embodiment 83, wherein the Mi region and the Mn region are located on different peptide chains in the folded immunoglobulin protein.

Втілення 85: пептид відповідно до втілень 80-84, де перша Мі область і перша Мн область орієнтовані таким чином, що три СОК в Мі області та три СОК в Мн області кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Embodiment 85: The peptide according to embodiments 80-84, wherein the first Mi region and the first Mn region are oriented such that the three SOCs in the Mi region and the three SOCs in the Mn region are cooperatively bound to contribute to selective and/or specific binding of human antigenic determinant SOZ8.

Втілення 86: пептид відповідно до втілення 85, де пептид включає другу Мі область, ідентичну першій Мі області, та другу Мн область, ідентичну першій Мн області, де друга Мі область і друга Мн область кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Embodiment 86: The peptide according to embodiment 85, wherein the peptide comprises a second Mi region identical to the first Mi region and a second Mn region identical to the first Mn region, wherein the second Mi region and the second Mn region are cooperatively linked to contribute to selective and/or specific binding of the antigenic determinant of human POP8.

Втілення 87: пептид, який включає Мі область, що є функціональним варіантом Мі області антитіла відповідно до втілення 4.Embodiment 87: A peptide that includes a Mi region that is a functional variant of the Mi region of the antibody according to embodiment 4.

Втілення 88: пептид відповідно до втілення 87, де Мі область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 60 96, щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 7595, щонайменше приблизно 80 95, щонайменше приблизно 85 95, щонайменше приблизно 90 95, принаймні приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ЗЕО ІЮО МО: 12.Embodiment 88: The peptide according to embodiment 87, wherein the Mi region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 96, at least about 70 95, at least about 7595, at least about 80 95, at least about 85 95, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to ZEO IYUO MO: 12.

Втілення 89: пептид, який включає Мн, що є функціональним варіантом Мн області антитіла відповідно до втілення 4.Embodiment 89: A peptide that includes a Mn that is a functional variant of the Mn region of the antibody according to embodiment 4.

Втілення 90: пептид відповідно до втілення 89, де Мн область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 956, щонайменше, приблизноEmbodiment 90: The peptide according to embodiment 89, wherein the Mn region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 965, at least about 70 95, at least about 75 956, at least about

80 96, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з зЕО ІЮ МО: 17.80 96, at least approximately 8595, at least approximately 90 95, at least approximately 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to zEO IU MO: 17.

Втілення 91: пептид, який включає, щонайменше, один з СОЖК, що є функціональним варіантом СОК антитіла відповідно до втілення 4.Embodiment 91: a peptide that includes at least one of the LFA that is a functional variant of the SOC of the antibody according to embodiment 4.

Втілення 92: пептид відповідно до втілення 91, де, щонайменше, один з СОК пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно зEmbodiment 92: The peptide according to embodiment 91, wherein at least one of the SOCs of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95 at least about 80 95 at least about 85 95 at least about 90 95 at least about 95 95 amino acid sequence identity sequence according to

ЗЕО ІО МО: 13, 5ЕО І МО: 14, 5БО ІО МО: 15, 5БЕО І МО: 18, 5ЕО ІО МО: 19, 5ЕО І МО: 20.ZEO IO MO: 13, 5EO I MO: 14, 5BO IO MO: 15, 5BEO I MO: 18, 5EO IO MO: 19, 5EO I MO: 20.

Втілення 93: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 87 до 92, де пептид має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла відповідно до втілення 4.Embodiment 93: The peptide according to any one of embodiments 87 to 92, wherein the peptide has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95, at least about 80 95, at least about 85 95 at least about 90 95 at least about 95 95 epitope-binding characteristics of the antibody according to embodiment 4.

Втілення 94: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 87 до 92, де пептид має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 9565, щонайменше, приблизно 95 95 спорідненості, авідності або специфічності антитіла відповідно до втілення 4.Embodiment 94: The peptide according to any one of embodiments 87 to 92, wherein the peptide has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95, at least about 80 95, at least about 85 95 at least about 90 9565 at least about 95 95 affinity, avidity or specificity of the antibody according to embodiment 4.

Втілення 95: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 68 до 94, де пептид специфічно зв'язує СОЗ8 людини.Embodiment 95: The peptide according to any one of embodiments 68 to 94, wherein the peptide specifically binds human POP8.

Втілення 96: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 68 до 95, де пептид конкурує з антитілом відповідно до втілення 4 за зв'язування СОЗ8.Embodiment 96: The peptide according to any one of embodiments 68 to 95, wherein the peptide competes with the antibody according to embodiment 4 for binding POP8.

Втілення 97: пептид відповідно до втілення 96, де конкуренцію визначають за допомогоюEmbodiment 97: The peptide according to embodiment 96, wherein the competition is determined by

ЕГІ5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.EGI5A, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 98: пептид відповідно до втілення 96, де конкуренцію визначають шляхом визначення перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 98: The peptide according to embodiment 96, where competition is determined by determining cross-blocking, as described in example 7 of the invention.

Втілення 99: пептид відповідно до втілення 95, де пептид специфічно зв'язується з епітопомEmbodiment 99: The peptide according to embodiment 95, wherein the peptide specifically binds to the epitope

Зо СО38, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення 4.From CO38, and the epitope is also specifically bound by the antibody according to embodiment 4.

Втілення 100: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 95 до 99, де пептид зв'язується зEmbodiment 100: The peptide according to any one of embodiments 95 to 99, wherein the peptide binds to

СО38 людини з більшою спорідненістю, ніж антитіло відповідно до втілення 4.Human CO38 with higher affinity than the antibody according to embodiment 4.

Втілення 101: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 95 до 99, де пептид має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування СОЗ8, як антитіло відповідно до втілення 4.Embodiment 101: The peptide according to any one of embodiments 95 to 99, wherein the peptide has substantially the same specific binding characteristics of POP8 as the antibody according to embodiment 4.

Втілення 102: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 95 до 101, де пептид, що зв'язуєEmbodiment 102: The peptide according to any one of embodiments 95 to 101, wherein the binding peptide

СОЗ38, в основному вільний від інших пептидів, що зв'язують СОЗ8.COZ38 is largely free of other COZ8-binding peptides.

Втілення 103: пептид, відповідно до будь-якого з втілень від 63 до 102, що зв'язується зEmbodiment 103: A peptide according to any one of embodiments 63 to 102 that binds to

СО38 людини (ЗЕО ІЮО МО: 31) і не зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (ЗЕОЇЮМО: 31).human CO38 (ZEO IUO MO: 31) and does not bind to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34) to the same extent as it binds to human COZ8 (ZEOIIUMO: 31).

Втілення 104: пептид відповідно до втілення 103, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 50 95 ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮО МО: 31).Embodiment 104: The peptide according to embodiment 103, wherein the EC50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34) is less than 50 95 EC50 for binding the peptide to Human POP8 (ZEO IYUO MO: 31).

Втілення 105: пептид відповідно до втілення 104, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (5ЕО ІЮО МО: 34), становить менше 10 95 ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 105: The peptide according to embodiment 104, wherein the EC 50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (5EO IJO MO: 34) is less than 10 95 EC 50 for binding the peptide to POP8 of humans (ZEO IU MO: 31).

Втілення 106: пептид відповідно до втілення 105, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 5 95 ЕСхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 106: The peptide according to embodiment 105, wherein the EC50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34) is less than 5 95 ECho for binding the peptide to POP8 of humans (ZEO IU MO: 31).

Втілення 107: пептид відповідно до втілення 106, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ3З8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 1 95 ЕСхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО.31).Embodiment 107: The peptide according to embodiment 106, wherein the EC50 for binding of the peptide to a mutant human COZ3Z8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34) is less than 1 95 EC0 for binding the peptide to Human POP8 (ZEO IU MO.31).

Втілення 108: пептид, що зв'язується з СЮОЗ38 людини (ЗЕО ІЮО МО: 31) ї не зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком 60 аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 108: A peptide that binds to human SHOZ38 (ZEO IUO MO: 31) and does not bind to mutant human SOZ8, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by arginine residue 60 (ZEO IO MO: 33), in which to the same degree as it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31).

Втілення 109: пептид відповідно до втілення 108, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮО МО: 34), становить менше 50 95 величини ЕСзхо для зв'язування пептиду зEmbodiment 109: The peptide according to embodiment 108, wherein the EC50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IUO MO: 34) is less than 50 95 of the value of EC50 for binding the peptide with

СОЗ38 людини (ЗЕО ІО МО: 31).POP38 of man (ZEO IO MO: 31).

Втілення 110: пептид відповідно до втілення 109, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 10 95 величини ЕСзхо для зв'язування пептиду зEmbodiment 110: The peptide according to embodiment 109, wherein the EC 50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34) is less than 10 95 of the EC 50 for binding the peptide with

СОЗ38 людини (ЗЕО ІО МО: 31).POP38 of man (ZEO IO MO: 31).

Втілення 111: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 103 до 107, що не зв'язується з мутантним СОЗ38 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 111: The peptide according to any one of embodiments 103 to 107, which does not bind to mutant human COZ38, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IO MO: 33), to the same extent as it binds to human POP8 (5EO IU MO: 31).

Втілення 112: пептид відповідно до втілення 111, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮО МО: 34), становить менше 50 95 величини ЕСзхо для зв'язування пептиду зEmbodiment 112: The peptide according to embodiment 111, wherein the EC 50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IUO MO: 34) is less than 50 95 of the EC 50 for binding the peptide with

СОЗ38 людини (ЗЕО ІО МО: 31).POP38 of man (ZEO IO MO: 31).

Втілення 113: пептид відповідно до втілення 112, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 10 95 величини ЕСзхо для зв'язування пептиду зEmbodiment 113: The peptide according to embodiment 112, wherein the EC50 for the binding of the peptide to the mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34) is less than 10 95 of the value of the EC50 for binding the peptide with

СО38 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).CO38 of a person (ZEO IU MO: 31).

Втілення 114: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 103 до 113, де згаданий пептид зв'язується з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), в такому ж ступені, як він зв'язується з СОЗ8 людини (5ЕОEmbodiment 114: The peptide according to any one of embodiments 103 to 113, wherein said peptide binds to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32), to the same degree that how it binds to human POP8 (5EO

ІО МО: 31).IO MO: 31).

Втілення 115: пептид відповідно до втілення 114, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СО38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 75 95 величини ЕСбоо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 115: The peptide according to embodiment 114, wherein the EC50 for binding of the peptide to mutant human CO38 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) is greater than 75 95 of the EC50 value for binding the peptide with human POP8 (ZEO IU MO: 31).

Втілення 116: пептид відповідно до втілення 115, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишкомEmbodiment 116: The peptide according to embodiment 115, wherein the EC50 to bind the peptide to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by a

Зо аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 85 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).of alanine (ZEO IU MO: 32), is more than 85 95 of the value of ESbho for binding the peptide to human SOZ8 (ZEO IU MO: 31).

Втілення 117: пептид відповідно до втілення 116, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 90 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 117: The peptide according to embodiment 116, wherein the EC50 for binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) is greater than 90 95 of the EC0 value for binding the peptide with human POP8 (ZEO IU MO: 31).

Втілення 118: пептид відповідно до втілення 117, де ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 95 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Embodiment 118: The peptide according to embodiment 117, wherein the EC50 for the binding of the peptide to the mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) is greater than 95 95 the EC0 value for binding the peptide with human POP8 (ZEO IU MO: 31).

Втілення 119: пептид, що конкурує з антитілом відповідно до втілення б за зв'язуванняEmbodiment 119: A peptide that competes with the antibody of embodiment b for binding

Соз38.Soz38.

Втілення 120: пептид відповідно до втілення 119, де конкуренцію визначають за допомогоюEmbodiment 120: The peptide according to embodiment 119, wherein the competition is determined by

ЕГІ5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.EGI5A, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 121: пептид відповідно до втілення 119, де конкуренцію визначають шляхом визначення перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 121: The peptide according to embodiment 119, where competition is determined by determining cross-blocking, as described in example 7 of the invention.

Втілення 122: пептид, який специфічно зв'язується з епітопом СОЗ8, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення 6.Embodiment 122: A peptide that specifically binds to an epitope of POP8, wherein the epitope is also specifically bound by an antibody according to embodiment 6.

Втілення 123: пептид, який має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування СОЗ8, як антитіло відповідно до втілення 6.Embodiment 123: A peptide that has substantially the same specific binding characteristics of COZ8 as the antibody of embodiment 6.

БО Втілення 124: пептид, який включає Мі СОКІ1, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 23.BO Embodiment 124: A peptide that includes Mi SOKI1 consisting primarily of zEO IU MO:23.

Втілення 125: пептид, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 24.Embodiment 125: A peptide that includes Mi SOC2 consisting primarily of zEO IU MO:24.

Втілення 126: пептид, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, з зЕО ІЮ МО: 25.Embodiment 126: A peptide that includes Mi SOCZ consisting primarily of zEO IU MO:25.

Втілення 127: пептид відповідно до втілення 126, де пептид включає також Мі СОК1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 23.Embodiment 127: The peptide according to embodiment 126, wherein the peptide also includes Mi SOC1 consisting mainly of ZEO IU MO:23.

Втілення 128: пептид відповідно до втілення 126, де пептид включає також Мі СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 24.Embodiment 128: A peptide according to embodiment 126, wherein the peptide also includes Mi SOC2 consisting primarily of ZEO IU MO:24.

Втілення 129: пептид відповідно до втілення 128, де пептид включає також Мі СОК1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 23.Embodiment 129: The peptide according to embodiment 128, wherein the peptide also includes Mi SOC1 consisting primarily of ZEO IU MO:23.

Втілення 130: пептид, який включає Мн СОКТ, що складається, в основному, з 5ЕО ІЮО МО: 28.Embodiment 130: A peptide that includes Mn SOCT consisting primarily of 5EO IUO MO:28.

Втілення 131: пептид, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 29.Embodiment 131: A peptide that includes Mn SOK2 consisting primarily of BEO IU MO:29.

Втілення 132: пептид, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, з БЕО ІЮ МО: 30.Embodiment 132: A peptide that includes a Mn SOCZ consisting primarily of BEO IU MO:30.

Втілення 133: пептид відповідно до втілення 132, де пептид включає також Мн СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 28.Embodiment 133: The peptide according to embodiment 132, wherein the peptide also includes Mn SOKI1 consisting mainly of ZEO IU MO:28.

Втілення 134: пептид відповідно до втілення 132, де пептид включає також Мн СОК2, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 29.Embodiment 134: The peptide according to embodiment 132, wherein the peptide also includes Mn SOK2 consisting primarily of ZEO IU MO:29.

Втілення 135: пептид відповідно до втілення 134, де пептид включає також Мн СОКІ1, що складається, в основному, з ЗЕО ІЮ МО: 28.Embodiment 135: The peptide according to embodiment 134, wherein the peptide also includes Mn SOKI1 consisting primarily of ZEO IU MO:28.

Втілення 136: пептид, який включає (а) перша Мі область, що включає три Мі СОК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 23, 5ЕО ІЮ МО: 24 та 5ЕО ІЮ МО: 25, і (б) перша Мн область, що включає три Мн СОБК, які незалежно одна від одної складаються, в основному, з «ЕО ІЮ МО: 28, 5ЕО ІЮ МО: 29 та 5ЕО ІЮ МО: 30.Embodiment 136: A peptide comprising (a) a first Mi region comprising three Mi SOCs that independently consist primarily of "EO IU MO: 23, 5EO IU MO: 24 and 5EO IU MO: 25, and (b) the first Mn region, which includes three Mn SOBCs, which independently of each other consist mainly of "EO IU MO: 28, 5EO IU MO: 29 and 5EO IU MO: 30.

Втілення 137: пептид відповідно до втілення 136, де Мі область та Мн область обидва розташовані на одному ланцюзі пептиду.Embodiment 137: The peptide according to embodiment 136, wherein the Mi region and the Mn region are both located on the same peptide chain.

Втілення 138: пептид відповідно до втілення 137, де Мі область та Мн область розділені гнучким лінкером.Embodiment 138: The peptide according to embodiment 137, wherein the Mi region and the Mn region are separated by a flexible linker.

Втілення 139: пептид відповідно до втілення 136, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду.Embodiment 139: The peptide according to embodiment 136, where the Mi region and the Mn region are located on different chains of the peptide.

Втілення 140: пептид відповідно до втілення 139, де Мі область та Мн область розташовані на різних ланцюгах пептиду в скрученому білку імуноглобуліну.Embodiment 140: The peptide according to embodiment 139, wherein the Mi region and the Mn region are located on different peptide chains in the folded immunoglobulin protein.

Втілення 141: пептид відповідно до втілень 136-140, де перший Мі область і перший Мн область орієнтовані таким чином, що три СОК в Мі області та три СОК в Мн областіEmbodiment 141: The peptide according to embodiments 136-140, wherein the first Mi region and the first Mn region are oriented such that three SOCs in the Mi region and three SOCs in the Mn region

Зо кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/"або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Zo are cooperatively bound so as to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant of human POP8.

Втілення 142: пептид відповідно до втілення 141, де пептид включає другу Мі область, ідентичну першій Мі області, та другу Мн область, ідентичну першій Мн області, де друга М. область і друга Мн область кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти СОЗ8 людини.Embodiment 142: The peptide according to embodiment 141, wherein the peptide comprises a second Mi region identical to the first Mi region and a second Mn region identical to the first Mn region, wherein the second M region and the second Mn region are cooperatively linked to contribute to selective and/or specific binding of the human POP8 antigenic determinant.

Втілення 143: пептид, який включає Мі область, що є функціональним варіантом Мі області антитіла відповідно до втілення 6.Embodiment 143: A peptide that includes a Mi region that is a functional variant of the Mi region of the antibody according to embodiment 6.

Втілення 144: пептид відповідно до втілення 143, де Мі область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 956, щонайменше, приблизно 80 96, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 22.Embodiment 144: The peptide according to embodiment 143, wherein the Mi region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 965, at least about 70 95, at least about 75 956, at least about 80 96, at least about 8595, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to FEO IU MO: 22.

Втілення 145: пептид, який включає Ун область, що є функціональним варіантом Мн області антитіла відповідно до втілення 6.Embodiment 145: A peptide that includes the Un region that is a functional variant of the Mn region of the antibody according to embodiment 6.

Втілення 146: пептид відповідно до втілення 145, де Мн область пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 965, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 956, щонайменше, приблизно 80 96, щонайменше, приблизно 8595, щонайменше, приблизно 90 95, принаймні, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з ФЕО ІЮО МО: 27.Embodiment 146: The peptide according to embodiment 145, wherein the Mn region of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 965, at least about 70 95, at least about 75 956, at least about 80 96, at least about 8595, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to FEO IUO MO: 27.

Втілення 147: пептид, який включає, щонайменше, один СОЖК, що є функціональним варіантом СОК антитіла відповідно до втілення 6.Embodiment 147: a peptide that includes at least one LFA that is a functional variant of the SOC of the antibody according to embodiment 6.

Втілення 148: пептид відповідно до втілення 147, де, щонайменше, один СОК пептиду складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно зEmbodiment 148: The peptide according to embodiment 147, wherein at least one SOC of the peptide consists essentially of a sequence having at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95 , at least about 80 95, at least about 85 95, at least about 90 95, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to

ЗЕО ІО МО: 23, 5ЕО І МО: 24, БО І МО: 25, 5ЕО ІЮ МО: 28, 5ЕО ІЮО МО: 29, 5ЕО ІЮО МО: 30.ZEO IU MO: 23, 5EO I MO: 24, BO I MO: 25, 5EO IYU MO: 28, 5EO IYUO MO: 29, 5EO IYUO MO: 30.

Втілення 149: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 143 до 148, де пептид має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, 60 щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95,Embodiment 149: The peptide according to any one of embodiments 143 to 148, wherein the peptide has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, 60 at least about 75 95, at least about 80 95 , at least approximately 85 95,

щонайменше, приблизно 90 95, щонайменше, приблизно 95 95 епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла відповідно до втілення 6.at least about 90 95 at least about 95 95 epitope-binding characteristics of the antibody according to embodiment 6.

Втілення 150: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 143 до 148, де пептид має, щонайменше, приблизно 50 95, щонайменше, приблизно 60 95, щонайменше, приблизно 70 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше, приблизно 80 95, щонайменше, приблизно 85 95, щонайменше, приблизно 90 9565, щонайменше, приблизно 95 95 спорідненості, авідності або специфічності антитіла відповідно до втілення 6.Embodiment 150: The peptide according to any one of embodiments 143 to 148, wherein the peptide has at least about 50 95, at least about 60 95, at least about 70 95, at least about 75 95, at least about 80 95, at least about 85 95 at least about 90 9565 at least about 95 95 affinity, avidity or specificity of the antibody according to embodiment 6.

Втілення 151: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 124 до 150, де пептид специфічно зв'язує СОЗ8 людини.Embodiment 151: The peptide according to any one of embodiments 124 to 150, wherein the peptide specifically binds human POP8.

Втілення 152: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 124 до 151, де пептид конкурує з антитілом відповідно до втілення 6 за зв'язування СОЗ8.Embodiment 152: The peptide according to any one of embodiments 124 to 151, wherein the peptide competes with the antibody according to embodiment 6 for binding COZ8.

Втілення 153: пептид відповідно до втілення 152, де конкуренцію визначають за допомогоюEmbodiment 153: The peptide according to embodiment 152, wherein the competition is determined by

ЕГІ5А, як описано в прикладі 8 або 9 винаходу.EGI5A, as described in example 8 or 9 of the invention.

Втілення 154: пептид відповідно до втілення 152, де конкуренцію визначають шляхом визначення перехресного блокування, як описано в прикладі 7 винаходу.Embodiment 154: The peptide according to embodiment 152, where competition is determined by determining cross-blocking, as described in example 7 of the invention.

Втілення 155: пептид відповідно до втілення 151, де пептид специфічно зв'язується з епітопом СОЗ38, причому епітоп також специфічно зв'язується антитілом відповідно до втілення б.Embodiment 155: The peptide according to embodiment 151, wherein the peptide specifically binds to the epitope of COZ38, and the epitope is also specifically bound by the antibody according to embodiment b.

Втілення 156: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 151 до 155, де пептид зв'язується з СЮОЗ38 людини з більшою спорідненістю, ніж антитіло відповідно до втілення 6.Embodiment 156: The peptide according to any one of embodiments 151 to 155, wherein the peptide binds to the human SHOZ38 with greater affinity than the antibody according to embodiment 6.

Втілення 157: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 151 до 155, де пептид має, в основному, такі ж характеристики специфічного зв'язування СОЗ8, як антитіло відповідно до втілення 6.Embodiment 157: The peptide according to any one of embodiments 151 to 155, wherein the peptide has substantially the same specific binding characteristics of POP8 as the antibody according to embodiment 6.

Втілення 158: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 151 до 157, де пептид, що зв'язує СОЮОЗ8, в основному вільний від інших пептидів, що зв'язують СЮОЗ8.Embodiment 158: The peptide according to any one of embodiments 151 to 157, wherein the peptide binding SHOZ8 is substantially free of other peptides that bind SHOZ8.

Втілення 159: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 158, де пептид не є агоністом СОЗ8.Embodiment 159: The peptide according to any one of embodiments 1 to 158, wherein the peptide is not a COZ8 agonist.

Втілення 160: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 159, де пептид не індукує значної проліферації мононуклеарних клітин периферичної крові.Embodiment 160: The peptide according to any one of embodiments 1 to 159, wherein the peptide does not induce significant proliferation of peripheral blood mononuclear cells.

Втілення 161: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 160, де пептид не індукує вивільнення значних рівнів І/-б6 моноцитами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові.Embodiment 161: The peptide according to any one of embodiments 1 to 160, wherein the peptide does not induce the release of significant levels of I/-β6 by human monocytes or peripheral blood mononuclear cells.

Втілення 162: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 161, де пептид не індукує вивільнення детектованих рівнів ІЕМ-у Т-клітинами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові.Embodiment 162: The peptide according to any one of embodiments 1 to 161, wherein the peptide does not induce the release of detectable levels of IEM by human T cells or peripheral blood mononuclear cells.

Втілення 163: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 7 до 162, де пептид є антитілом.Embodiment 163: The peptide according to any one of embodiments 7 to 162, wherein the peptide is an antibody.

Втілення 164: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 6 або 163, де антитіло є антитілом людини.Embodiment 164: The antibody according to any one of embodiments 1 to 6 or 163, wherein the antibody is a human antibody.

Втілення 165: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 6 або 163, де антитіло є гуманізованим антитілом.Embodiment 165: The antibody according to any one of embodiments 1 to 6 or 163, wherein the antibody is a humanized antibody.

Втілення 166: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 6 або 163, де антитіло є химерним антитілом.Embodiment 166: The antibody according to any one of embodiments 1 to 6 or 163, wherein the antibody is a chimeric antibody.

Втілення 167: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 6 або 163-166, де антитіло є моноклональним антитілом.Embodiment 167: The antibody according to any one of embodiments 1 to 6 or 163-166, wherein the antibody is a monoclonal antibody.

Втілення 168: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від Її до б або 163-167, яке характеризується тим, що воно є Ідс1, Ідс2, Іде, Ід, дО, ІдА, ІДЕ або дм антитілом.Embodiment 168: The antibody according to any one of embodiments I to b or 163-167, which is characterized in that it is an Ids1, Ids2, Ide, Id, dO, IdA, IDE or dm antibody.

Втілення 169: антитіло відповідно до втілення 168, що характеризується тим, що воно є Іде1 антитілом.Embodiment 169: The antibody according to embodiment 168, characterized in that it is an Ide1 antibody.

Втілення 170: антитіло відповідно до втілення 169, що характеризується тим, що воно єEmbodiment 170: The antibody according to embodiment 169, characterized in that it is

ІДС1,к антитілом.IDS1, to antibody.

Втілення 171: антитіло відповідно до втілення 168, що характеризується тим, що воно є (ДМ антитілом.Embodiment 171: The antibody according to embodiment 168, characterized in that it is a (DM antibody.

Втілення 172: антитіло відповідно до втілення 171, що характеризується тим, що воно є ІДМ, к антитілом.Embodiment 172: The antibody according to embodiment 171, characterized in that it is an IDM, to antibody.

Втілення 173: пептид відповідно до будь-якого з втілень від 2 до 172, де пептид глікозилований в еукаріотичній клітині.Embodiment 173: The peptide according to any one of embodiments 2 to 172, wherein the peptide is glycosylated in a eukaryotic cell.

Втілення 174: антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 6 або від 163 до 173, що є фрагментом антитіла або одиночним ланцюгом антитіла.Embodiment 174: The antibody according to any one of embodiments 1 to 6 or 163 to 173, which is an antibody fragment or a single antibody chain.

Втілення 175: пептид або антитіло відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 174, які далі бо включають лінкер хелатор для приєднання радіоізотопу.Embodiment 175: The peptide or antibody according to any one of embodiments 1 to 174, further comprising a chelator linker for attachment of the radioisotope.

Втілення 176: пептид відповідно до будь-якого з втілень від Її до 175, що находиться, в основному, в ізольованому виді.Embodiment 176: The peptide according to any one of embodiments 1 to 175, which is substantially isolated.

Втілення 177: ізольована нуклеїнова кислота, що кодує пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175.Embodiment 177: An isolated nucleic acid encoding a peptide according to any one of embodiments 1 to 175.

Втілення 178: експресуючий вектор, який включає послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175.Embodiment 178: An expression vector that includes a nucleic acid sequence encoding a peptide according to any one of embodiments 1 to 175.

Втілення 179: експресуючий вектор, який включає Мі нуклеотидну послідовність згідно зEmbodiment 179: an expression vector that includes the Mi nucleotide sequence according to

ЗЕО І МО: 1, Мн нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО І МО: б або Мі нуклеотидну послідовність згідно з хБЕО ІЮО МО: 1 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 6.ZEO I MO: 1, Mn nucleotide sequence according to 5EO I MO: b or Mi nucleotide sequence according to xBEO IUO MO: 1 and Mn nucleotide sequence according to BEO IU MO: 6.

Втілення 180: експресуючий вектор, який включає Мі нуклеотидну послідовність згідно зEmbodiment 180: an expression vector that includes the Mi nucleotide sequence according to

ЗЕО ІЮО МО: 11, Мн нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 16 або Мі нуклеотидну послідовність згідно з 5ХЕО ІЮО МО: 11 та Мн нуклеотидну послідовність згідно з зХЕО ІЮО МО: 16.ZEO IJU MO: 11, Mn nucleotide sequence according to 5EO IJU MO: 16 or Mi nucleotide sequence according to 5XEO IJU MO: 11 and Mn nucleotide sequence according to zXEO IJU MO: 16.

Втілення 181: експресуючий вектор відповідно до втілення 179 або 180, який далі включає нуклеотидну послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюгів антитіла людини.Embodiment 181: The expression vector according to embodiment 179 or 180, which further includes a nucleotide sequence encoding a constant region of a light chain, a heavy chain, or both light and heavy chains of a human antibody.

Втілення 182: експресуючий вектор відповідно до втілення 181, де нуклеотидна послідовність, що кодує константний область легкого ланцюга, важкого ланцюга або обох легкого та важкого ланцюга антитіла людини, кодує Іде1 антитіло.Embodiment 182: The expression vector according to embodiment 181, wherein the nucleotide sequence encoding the constant region of the light chain, heavy chain, or both light and heavy chains of a human antibody encodes an Ide1 antibody.

Втілення 183: гібридома, яка продукує моноклональне анти-СЮО38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, що включають нуклеотидні послідовності у варіабельній області легкого ланцюга згідно з 5БЕО ІЮEmbodiment 183: A hybridoma that produces a human monoclonal anti-SHUO38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids comprising nucleotide sequences in the light chain variable region according to 5BEO IU

МО: 1 або консервативні модифікації цих послідовностей, і нуклеотидні послідовності у варіабельній області важкого ланцюга згідно з зЗЕО ІЮ МО: 6 або консервативні модифікації цих послідовностей.MO: 1 or conservative modifications of these sequences, and nucleotide sequences in the variable region of the heavy chain according to ZEO IU MO: 6 or conservative modifications of these sequences.

Втілення 184: гібридома, відповідно до втілення 183, де нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини включають нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 1 і нуклеїнові кислоти важкого ланцюга людини включають нуклеотидну послідовність згідно з зХЕО ІЮО МО: 6.Embodiment 184: A hybridoma according to embodiment 183, wherein the human light chain nucleic acids comprise a nucleotide sequence according to 5EO IO MO: 1 and the human heavy chain nucleic acids comprise a nucleotide sequence according to zXEO IIOO MO: 6.

Втілення 185: гібридома, яка продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, якіEmbodiment 185: A hybridoma that produces a human monoclonal anti-CO38 antibody comprising human heavy chain and human light chain variable regions that

Зо включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 2 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 7 або консервативні модифікації цієї послідовності.Zo include the variable amino acid sequence of the light chain according to BEO IU MO: 2 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the heavy chain according to BEO IU MO: 7 or conservative modifications of this sequence.

Втілення 186: гібридома, відповідно до втілення 185, де варіабельний область легкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 2 і варіабельний область важкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7.Embodiment 186: A hybridoma according to embodiment 185, wherein the human light chain variable region comprises an amino acid sequence according to 5EO IU MO:2 and the human heavy chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IU MO:7.

Втілення 187: трансфектома, яка продукує моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини 5ЕО ІЮ МО: 1 або консервативними модифікаціями цих послідовностей, і нуклеїновими кислотами важкого ланцюга згідно з БЕО ІЮEmbodiment 187: A transfectome that produces a human monoclonal anti-COZ8 antibody encoded by human light chain nucleic acids 5EO IU MO: 1 or conservative modifications of these sequences, and heavy chain nucleic acids according to BEO IU

МО: 6 або консервативними модифікаціями цих послідовностей.MO: 6 or conservative modifications of these sequences.

Втілення 188: трансфектома відповідно до втілення 187, де моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини кодується нуклеїновою кислотою варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮ МО: 1 ії нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з БЕОEmbodiment 188: The transfectome according to embodiment 187, wherein the human monoclonal anti-COZ8 antibody is encoded by a human light chain variable region nucleic acid according to BEO IIU MO: 1 and human heavy chain nucleic acids according to BEO

ІО МО: 6.IO MO: 6.

Втілення 189: трансфектома, яка продукує моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 2 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга згідно з БЕО ІЮ МО: 7 або консервативні модифікації цієї послідовності.Embodiment 189: A transfectome that produces a human monoclonal anti-COZ8 antibody comprising human light chain variable regions and human heavy chain variable regions comprising a light chain variable amino acid sequence according to BEO IU MO: 2 or conservative modifications of this sequence, and a variable amino acid sequence heavy chain according to BEO IU MO: 7 or conservative modifications of this sequence.

Втілення 190: трансфектома відповідно до втілення 189, де легкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга згідно з 5ЕО ІЮ МО: 2, і важкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга згідно зEmbodiment 190: The transfectome according to embodiment 189, wherein the human light chain comprises a variable light chain amino acid sequence according to 5EO IU MO: 2, and the human heavy chain comprises a variable heavy chain amino acid sequence according to

ЗЕО ПО МО: 7.ZEO on MO: 7.

Втілення 191: гібридома, яка продукує моноклональне анти-СЮО38 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності у варіабельній області легкого ланцюга згідно з 5БЕО ІЮEmbodiment 191: A hybridoma that produces a human monoclonal anti-SHUO38 antibody encoded by human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in the light chain variable region according to 5BEO IU

МО: 11 або консервативні модифікації цих послідовностей, і нуклеотидні послідовності у варіабельній області важкого ланцюга згідно з зЗЕО ІЮ МО: 16 або консервативні модифікації цих послідовностей.MO: 11 or conservative modifications of these sequences, and nucleotide sequences in the variable region of the heavy chain according to ZEO IU MO: 16 or conservative modifications of these sequences.

Втілення 192: гібридома відповідно до втілення 191, де нуклеїнові кислоти легкого ланцюга людини включають нуклеотидну послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 11, нуклеїнові кислоти важкого ланцюга людини включають нуклеотидну послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 16.Embodiment 192: The hybridoma according to embodiment 191, wherein the human light chain nucleic acids comprise a nucleotide sequence according to 5EO IU MO: 11, the human heavy chain nucleic acids comprise a nucleotide sequence according to "EO IU MO: 16.

Втілення 193: гібридома, яка продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини, що включає варіабельні області важкого ланцюга людини та легкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮEmbodiment 193: A hybridoma that produces a human monoclonal anti-CO38 antibody comprising human heavy chain variable regions and human light chain variable regions comprising a human light chain variable amino acid sequence according to ZEO IU

МО: 12 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17 або консервативні модифікації цієї послідовності.MO: 12 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the heavy chain according to ZEO IU MO: 17 or conservative modifications of this sequence.

Втілення 194: гібридома відповідно до втілення 193, де варіабельний область легкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 12, і варіабельний область важкого ланцюга людини включає амінокислотну послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17.Embodiment 194: The hybridoma according to embodiment 193, wherein the human light chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IJU MO: 12, and the human heavy chain variable region comprises an amino acid sequence according to ZEO IJU MO: 17.

Втілення 195: трансфектома, яка продукує моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини, кодоване нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з БЕEmbodiment 195: A transfectome that produces a human monoclonal anti-COZ8 antibody encoded by human light chain variable region nucleic acids according to BE

ІЮ МО: 11 або консервативними модифікаціями цих послідовностей, і нуклеотидними послідовностями важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 16 або консервативними модифікаціями цих послідовностей.IU MO: 11 or conservative modifications of these sequences, and human heavy chain nucleotide sequences according to ZEO IU MO: 16 or conservative modifications of these sequences.

Втілення 196: трансфектома відповідно до втілення 195, де моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини кодується нуклеїновими кислотами варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з БЕО ІЮО МО: 11 і нуклеїновими кислотами важкого ланцюга людини згідно з ЗЕEmbodiment 196: The transfectome according to embodiment 195, wherein the human monoclonal anti-COZ8 antibody is encoded by human light chain variable region nucleic acids according to BEO IUO MO: 11 and human heavy chain nucleic acids according to ZE

ІО МО: 16.IO MO: 16.

Втілення 197: трансфектома, яка продукує моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають варіабельну амінокислотну послідовність легкого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІEmbodiment 197: A transfectome that produces a human monoclonal anti-COZ8 antibody comprising human light chain and human heavy chain variable regions comprising the human light chain variable amino acid sequence according to 5EO I

МО: 12 або консервативні модифікації цієї послідовності, та варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17 або консервативні модифікації цієї послідовності.MO: 12 or conservative modifications of this sequence, and the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to 5EO IU MO: 17 or conservative modifications of this sequence.

Втілення 198: трансфектома відповідно до втілення 197, де легкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність легсого ланцюга людини згідно з 5ЕО ІЮО МО: 12, іEmbodiment 198: The transfectome according to embodiment 197, wherein the human light chain comprises a variable human light chain amino acid sequence according to 5EO IJOO MO: 12, and

Зо важкий ланцюг людини включає варіабельну амінокислотну послідовність важкого ланцюга людини згідно з зЕО ІЮ МО: 17.ZO human heavy chain includes the variable amino acid sequence of the human heavy chain according to зEO IU MO: 17.

Втілення 199: еукаріотична або прокаріотична клітина хазяїна, що продукує пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175.Embodiment 199: A eukaryotic or prokaryotic host cell producing the peptide according to any one of embodiments 1 to 175.

Втілення 200: еукаріотична або прокаріотична клітина хазяїна, що містить експресуючий вектор відповідно до втілення 178.Embodiment 200: A eukaryotic or prokaryotic host cell containing the expression vector according to embodiment 178.

Втілення 201: трансгенна тварина, відмінна від людини, або рослина, які включають нуклеїнові кислоти, що кодують важкий ланцюг людини та легкий ланцюг людини, де тварина або рослина продукує детектовану кількість пептиду відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175.Embodiment 201: A transgenic non-human animal or plant comprising nucleic acids encoding a human heavy chain and a human light chain, wherein the animal or plant produces a detectable amount of the peptide according to any one of embodiments 1 to 175.

Втілення 202: імунокон'югат, який включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 174, з'єднаний із цитотоксичним агентом, радіоізотопом або ліками.Embodiment 202: An immunoconjugate that includes a peptide according to any one of embodiments 1 to 174 coupled to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug.

Втілення 203: імунокон'югат, який включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 168 або від 171 до 174, де пептид є мономерним ІДдМ антитілом, з'єднаним із цитотоксичним агентом, радіоізотопом або ліками.Embodiment 203: An immunoconjugate that includes the peptide according to any one of embodiments 1 to 168 or 171 to 174, wherein the peptide is a monomeric IDM antibody coupled to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug.

Втілення 204: біспецифічна або мультиспецифічна молекула, яка включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175, і специфічність зв'язування ефекторної клітини людини.Embodiment 204: a bispecific or multispecific molecule that includes a peptide according to any of embodiments 1 to 175, and the specificity of binding a human effector cell.

Втілення 205: біспецифічна або мультиспецифічна молекула, яка включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 175, і специфічність зв'язування СОЗ, СО4, І -15К, мембранно- зв'язаного або зв'язаного з рецептором ТЕМ-й4, Ес рецептором людини або мембранно- зв'язаного чи зв'язаного з рецептором 1-15.Embodiment 205: a bispecific or multispecific molecule that includes a peptide according to any one of embodiments 1 to 175, and the specificity of binding POP, CO4, I -15K, membrane-bound or bound to the TEM-y4 receptor , ES human receptor or membrane-bound or bound to the receptor 1-15.

Втілення 206: фармацевтична композиція, яка включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 176, або імунокон'югат відповідно до будь-якого з втілень від 202 до 205 і фармацевтично прийнятний носій.Embodiment 206: a pharmaceutical composition that includes a peptide according to any one of embodiments 1 to 176, or an immunoconjugate according to any one of embodiments 202 to 205 and a pharmaceutically acceptable carrier.

Втілення 207: фармацевтична композиція, відповідно до втілення 206, яка включає один чи більше додаткових терапевтичних агентів.Embodiment 207: A pharmaceutical composition according to embodiment 206, which includes one or more additional therapeutic agents.

Втілення 208: спосіб інгібування росту та/або проліферації клітин, експресуючих СОЗ38, який включає застосування пептиду відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 176, імунокон'югата відповідно до будь-якого з втілень від 202 до 205, фармацевтичної композиції відповідно до втілення 206 або 207, або експресуючого вектора відповідно до будь-якого з втілень від 178 до 60 182, так що ріст та/або проліферація клітин інгібуються.Embodiment 208: a method of inhibiting the growth and/or proliferation of cells expressing POP38, which includes the use of a peptide according to any one of embodiments 1 to 176, an immunoconjugate according to any one of embodiments 202 to 205, a pharmaceutical composition according to embodiment 206 or 207, or the expression vector according to any of embodiments 178 to 60 182, so that cell growth and/or proliferation is inhibited.

Втілення 209: спосіб лікування захворювання або порушення, що утягує клітини, які експресують СОЗ8, де цей спосіб включає застосування/введення пептиду відповідно до будь- якого з втілень від 1 до 176, імунокон'югата відповідно до будь-якого з втілень 202 до 205, фармацевтичної композиції відповідно до втілення 206 або 207, або експресуючого вектора відповідно до будь-якого з втілень від 178 до 182 суб'єкту, що потребує цього.Embodiment 209: A method of treating a disease or disorder involving cells that express POP8, wherein the method comprises administering/administering a peptide according to any one of embodiments 1 to 176, an immunoconjugate according to any one of embodiments 202 to 205 , a pharmaceutical composition according to embodiment 206 or 207, or an expression vector according to any of embodiments 178 to 182 to a subject in need thereof.

Втілення 210: спосіб запобігання захворювання або порушення, що утягує клітини, які експресують СОЗ8 у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості пептиду відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 176, імунокон'югата відповідно до будь-якого з втілень від 202 до 205, фармацевтичної композиції відповідно до втілення 206 або 207, або експресуючого вектора відповідно до будь-якого з втілень від 178 до 182 суб'єкту, що потребує цього.Embodiment 210: A method of preventing a disease or disorder involving cells expressing POP8 in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of a peptide according to any one of embodiments 1 to 176, an immunoconjugate according to any one of embodiments 202 to 205, a pharmaceutical composition according to embodiment 206 or 207, or an expression vector according to any of embodiments 178 to 182 to a subject in need thereof.

Втілення 211: спосіб відповідно до втілення 209 або 210, де захворювання або порушення є ревматоїдним артритом.Embodiment 211: The method according to embodiment 209 or 210, wherein the disease or disorder is rheumatoid arthritis.

Втілення 212: спосіб відповідно до втілення 209 або 210, де захворювання або порушення є множинною мієломою.Embodiment 212: The method according to embodiment 209 or 210, wherein the disease or disorder is multiple myeloma.

Втілення 213: спосіб відповідно до будь-якого з втілень від 209 до 212, де спосіб включає введення одного чи більше додаткового терапевтичного агента суб'єкту.Embodiment 213: The method according to any one of embodiments 209 to 212, wherein the method comprises administering one or more additional therapeutic agents to the subject.

Втілення 214: спосіб відповідно до втілення 213, де додаткові один чи більше терапевтичних агентів вибирають із хіміотерапевтичного агента, протизапального агента, імуносупресивного та/або імуномодуляторного агента.Embodiment 214: The method of embodiment 213, wherein the additional one or more therapeutic agents are selected from a chemotherapeutic agent, an anti-inflammatory agent, an immunosuppressive agent, and/or an immunomodulatory agent.

Втілення 215: спосіб відповідно до втілення 213, де додаткові один чи більше терапевтичні агенти вибирають із групи, що складається із цисплатину, гефітинібу, цетуксимабу, ритуксимабу, бевацизумабу, ерлотинібу, бортезомібу, талідоміду, памідронату, золедронової кислоти, клодронату, ризендронату, ібандронату, етидронату, алендронату, тилудронату, тріокисиду миш'яку, леналідоміду, філграстиму, пегфілграстиму, зарграмостиму, субероїланіліду гідроксамової кислоти та 5СІО-469.Embodiment 215: The method according to embodiment 213, wherein the additional one or more therapeutic agents is selected from the group consisting of cisplatin, gefitinib, cetuximab, rituximab, bevacizumab, erlotinib, bortezomib, thalidomide, pamidronate, zoledronic acid, clodronate, risendronate, ibandronate, etidronate, alendronate, tiludronate, arsenic trioxide, lenalidomide, filgrastim, pegfilgrastim, zargramostim, hydroxamic acid suberoylanilide, and 5SiO-469.

Втілення 216: іп міо спосіб детектування наявності СОЗ38 антигену або клітин, експресуючихEmbodiment 216: ip myo method for detecting the presence of POP38 antigen or cells expressing

СОЗ38, у зразку, який включає:SOZ38, in a sample that includes:

А) контактування зразка з пептидом відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 176, вA) contacting the sample with the peptide according to any of the embodiments from 1 to 176, in

Зо умовах, що дозволяють утворення комплексу між пептидом та СОЗ8, іFrom the conditions that allow the formation of a complex between the peptide and SOZ8, and

Б) детектування утворення цього комплексу.B) detection of the formation of this complex.

Втілення 217: іп міго спосіб відповідно до втілення 216, де згаданий пептид є антитілом.Embodiment 217: The method according to embodiment 216, wherein said peptide is an antibody.

Втілення 218: набір для детектування наявності СОЗ38 антигену або клітин, експресуючихEmbodiment 218: a kit for detecting the presence of COZ38 antigen or cells expressing

СОЗ38, у зразку, який включає пептид відповідно до будь-якого з втілень від 1 до 176.COZ38, in a sample that includes the peptide according to any one of embodiments 1 to 176.

Втілення 219: іп мімо спосіб детектування СОЗ8 антигену або клітин, експресуючих СОЗ8 у суб'єкта, який включає: а) введення пептиду відповідно до будь-якого з втілень від 1ї до 176, в умовах, що дозволяють утворення комплексу між пептидом та СОЗ8, і б) детектування утвореного комплексу.Embodiment 219: a method for detecting a COZ8 antigen or cells expressing COZ8 in a subject, which includes: a) administering the peptide according to any one of embodiments 1 to 176, under conditions that allow the formation of a complex between the peptide and COZ8, and b) detection of the formed complex.

Втілення 220: іп міго спосіб відповідно до втілення 219, де згаданий пептид є антитілом.Embodiment 220: The method according to embodiment 219, wherein said peptide is an antibody.

Втілення 221: антиідіотипове антитіло, що зв'язується з пептидом відповідно до будь-якого з втілень 2, 4 або від 163 до 174.Embodiment 221: an anti-idiotypic antibody that binds to the peptide according to any one of embodiments 2, 4, or 163 to 174.

Втілення 222: застосування антиіїдіотипового антитіла відповідно до втілення 221 для детектування рівня пептиду відповідно до будь-якого з втілень 2, 4 або від 163 до 174, у зразку.Embodiment 222: using the anti-idiotypic antibody according to embodiment 221 to detect the level of the peptide according to any one of embodiments 2, 4, or 163 to 174, in the sample.

Втілення 223: застосування антиіїдіотипового антитіла відповідно до втілення 221 для детектування рівня моноклонального антитіла людини проти СОЗ8 у зразку.Embodiment 223: the use of an anti-idiotypic antibody according to embodiment 221 to detect the level of a human monoclonal antibody against POP8 in a sample.

Терміни "СО38" та "антиген СОЗ38" застосовуються тут взаємозамінно та включають будь-які варіанти, ізоформи та види гомологів СОЗ8 людини, які природно експресуються клітинами, трансфекованими геном СОЗ38. Синоніми СОЗ8, як прийнято в даній області техніки, включаютьThe terms "CO38" and "COZ38 antigen" are used interchangeably herein and include any variants, isoforms, and species of human COZ8 homologues that are naturally expressed by cells transfected with the COZ38 gene. Synonyms of SOZ8, as accepted in this field of technology, include

АДФ-рибозил-циклазу 1, цАДФР-гідролазу 1, СОЗ38-г51, гідролазу 1 циклічної АДФ-рибози, 1-19,ADP-ribosyl-cyclase 1, cADDF-hydrolase 1, SOZ38-g51, cyclic ADP-ribose hydrolase 1, 1-19,

МІМ-НА5 антиген.MIM-NA5 antigen.

Термін "пептид" відносно як до СОЗ8-зв'язуючих пептидів, так і до не-СОЗ8 пептидів, описаних тут, включає будь-який придатний пептид і може застосовуватися як синонім термінам "поліпептид" та "білок", якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту; за умови, що читач розуміє, що кожен тип відповідної молекули, яка містить амінокислотний полімер, може бути зв'язаний з істотними розбіжностями і таким чином утворює окреме втілення даного винаходу (наприклад, такий пептид, як антитіло, що складається з декількох поліпептидних ланцюгів, значно відрізняється, наприклад, від одноланцюгового антитіла, пептидного імуноадгезину або одноланцюгового імуногенного пептиду). Тому термін "пептид" тут слід в бо основному розуміти як застосовний до будь-якого придатного пептиду будь-якого придатного розміру або складу (з погляду кількості амінокислот і числа об'єднаних ланцюгів у молекулі білка). Далі, пептиди в контексті способів і композицій винаходу, описаних тут, можуть включати залишки, що не зустрічаються в природі, та/або Не-І -амінокислотні залишки, якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту.The term "peptide" with respect to both POP8-binding peptides and non-POP8 peptides described herein includes any suitable peptide and may be used synonymously with the terms "polypeptide" and "protein" unless otherwise indicated or it is not inconsistent with the context; provided that the reader understands that each type of relevant molecule that contains an amino acid polymer may be associated with significant differences and thus form a separate embodiment of the present invention (e.g., a peptide such as an antibody consisting of multiple polypeptide chains, significantly different, for example, from a single-chain antibody, peptide immunoadhesin, or single-chain immunogenic peptide). Therefore, the term "peptide" here should basically be understood as applicable to any suitable peptide of any suitable size or composition (in terms of the number of amino acids and the number of combined chains in the protein molecule). Further, peptides in the context of the methods and compositions of the invention described herein may include non-naturally occurring residues and/or non-I amino acid residues, unless otherwise indicated or inconsistent with the context.

Як буде обговорюватися далі, якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту, термін пептид (і якщо обговорювати окремі втілення терміна, поліпептид та/або білок) також охоплює дериватизовані молекули пептиду. Стисло, у контексті даного винаходу, похідне (дериват) є пептидом, у якому один чи більше амінокислотних залишків хімічно модифіковані (наприклад, за допомогою алкілування, ацилювання, утворення складного ефіру, утворення аміду) або зв'язаний з одним чи більше неамінокислотним органічним та/або неорганічним атомним або молекулярним замісником (наприклад, групою поліетиленгліколю (ПЕГ), ліпофільним замісником (який при необхідності може бути зв'язаний з амінокислотною послідовністю пептиду через роздільний залишок або групу, таку як р-аланін, у-амінобутирову кислоту (ГАБК), Г/О-глутамінову кислоту, бурштинову кислоту і т.п.) флуорофором, біотином, радіоїзотопом і т.д., і може також або альтернативно включати неосновні, неприродного походження та/або не-Ї. амінокислотні залишки, якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту (однак, знову слід розуміти, що такі похідні можуть розглядатися як незалежні властивості даного винаходу і включення таких молекул в поняття пептиду зроблене скоріше заради зручності опису даного винаходу, ніж для введення якої би то не було рівності між голими пептидами та такими похідними). Необмежуючі приклади таких амінокислотних залишків включають, наприклад, 2-аміноадипінову кислоту, З-аміноадипінову кислоту, рВ-аланін, ВД- амінопропіонову кислоту, 2-аміномасляну кислоту, 4-аміномасляну кислоту, б-амінокапронову кислоту, 2-аміногептанову кислоту, 2-аміноїзомасляну кислоту, З-аміноїзомасляну кислоту, 2- амінопімелінову кислоту, 2,4-діаміномасляну кислоту, десмозин, 2,2'-діамінопімелінову кислоту, 2,3-діамінопропіонову кислоту, М-етилгліцин, М-етиласпарагін, гідроксилізин, ало-гідроксилізин,As will be discussed below, unless otherwise indicated or inconsistent with the context, the term peptide (and when discussing particular embodiments of the term, polypeptide and/or protein) also includes derivatized peptide molecules. Briefly, in the context of this invention, a derivative is a peptide in which one or more amino acid residues are chemically modified (for example, by alkylation, acylation, ester formation, amide formation) or linked to one or more non-amino acid organic and /or an inorganic atomic or molecular substituent (for example, a group of polyethylene glycol (PEG), a lipophilic substituent (which, if necessary, can be connected to the amino acid sequence of the peptide through a separating residue or a group such as p-alanine, γ-aminobutyric acid (GABA) , H/O-glutamic acid, succinic acid, etc.) with a fluorophore, biotin, radioisotope, etc., and may also or alternatively include non-basic, unnatural, and/or non-Y amino acid residues unless otherwise specified other or it does not contradict the context (however, it should be understood again that such derivatives can be considered as independent properties of this invention and the inclusion of such molecules in the concept of peptide is made (rather for convenience of description of this invention than to introduce any equivalence between naked peptides and such derivatives). Non-limiting examples of such amino acid residues include, for example, 2-aminoadipic acid, 3-aminoadipic acid, pB-alanine, VD-aminopropionic acid, 2-aminobutyric acid, 4-aminobutyric acid, b-aminocaproic acid, 2-aminoheptanoic acid, 2- aminoisobutyric acid, 3-aminoisobutyric acid, 2-aminopimelic acid, 2,4-diaminobutyric acid, desmosine, 2,2'-diaminopimelic acid, 2,3-diaminopropionic acid, M-ethylglycine, M-ethylasparagine, hydroxylysine, allo-hydroxylysine ,

З-гідроксипролін, 4-гідрокпролін, ізодесмозин, алоізолейцин, М-метилгліцин, М-метилізолейцин, 6-М-метиллізин, М-метилвалін, норвалін, норлейцин, орнітин і статин, галогеновані амінокислоти. "Антиген-зв'язуючий пептид" стосується будь-якого пептиду, що специфічно зв'язується із3-hydroxyproline, 4-hydroxyproline, isodesmosine, alloisoleucine, M-methylglycine, M-methylisoleucine, 6-M-methyllysine, M-methylvaline, norvaline, norleucine, ornithine and statin, halogenated amino acids. "Antigen-binding peptide" refers to any peptide that specifically binds to

Зо частиною даного антигену в клітинних та/або фізіологічних умовах протягом часу, достатнього, щоб індукувати, прискорити, підсилити та/або іншим чином модулювати фізіологічну дію, зв'язану з антигеном; щоб дозволити детекцію за допомогою ЕГІЗА, блотингу (Ууезіегп Біо) або інших подібних застосовних технік дослідження зв'язування білків, описаних тут та/або відомих в даній області техніки, та/або бути зв'язаним з ним іншим детектованим способом протягом відповідного часу (наприклад, щонайменше, приблизно 15 хв., щонайменше, приблизно 30 хв., щонайменше, приблизно 45 хв., щонайменше приблизно 1 година, щонайменше, приблизно 2 години, щонайменше, приблизно 4 години, щонайменше, приблизно б годин, щонайменше, приблизно 12 годин, приблизно 1-12 годин, приблизно 1-36 годин, приблизно 1-48 годин, приблизно 1-72 годин, приблизно один тиждень або довше).With a portion of a given antigen under cellular and/or physiological conditions for a time sufficient to induce, accelerate, enhance and/or otherwise modulate the physiological effect associated with the antigen; to allow detection by ELISA, blotting (Uueziegp Bio) or other similar applicable techniques for examining the binding of proteins described herein and/or known in the art, and/or to be bound thereto in another detectable manner for an appropriate time ( for example, at least about 15 min., at least about 30 min., at least about 45 min., at least about 1 hour, at least about 2 hours, at least about 4 hours, at least about b hours, at least about 12 hours, about 1-12 hours, about 1-36 hours, about 1-48 hours, about 1-72 hours, about one week or longer).

СО38-зв'язуючий пептид, або СОЗ8ВР, є пептидом, що зв'язує антиген, який специфічно зв'язується з антигеном СОЗ38. В одному втіленні, зв'язування СОЗ8ВР із СОЗ8 вимірюють за допомогою способу, описаного в прикладі 4.CO38-binding peptide, or COZ8BP, is an antigen-binding peptide that specifically binds to the COZ38 antigen. In one embodiment, the binding of COZ8BP to COZ8 is measured using the method described in Example 4.

Термін "імуноглобулін" стосується класу структурно споріднених глікопротеїдів, що складаються із двох пар поліпептидних ланцюгів, однієї пари легких (І) ланцюгів з низькою молекулярною вагою та однієї пари важких (Н) ланцюгів, де всі чотири зв'язані між собою дисульфідними зв'язками. Структура імуноглобулінів добре охарактеризована. Див., наприклад,The term "immunoglobulin" refers to a class of structurally related glycoproteins consisting of two pairs of polypeptide chains, one pair of low molecular weight light (I) chains and one pair of heavy (H) chains, all four linked by disulfide bonds . The structure of immunoglobulins is well characterized. See, for example,

Еипаатепіа! Іттипоіоду си. 7 (Раш! М/. Ед. 279 едй., Камеп Рге55, МУ (1989)). Стисло, кожен важкий ланцюг звичайно складається з варіабельної області важкого ланцюга (скорочено позначеного тут як мн) і константної області важкого ланцюга. Константний область важкого ланцюга звичайно складається із трьох доменів, Сн1, Сн2г і Сн3. Кожен легкий ланцюг звичайно складається з варіабельної області легкого ланцюга (скорочено позначеного тут як Мі і константної області легкого ланцюга. Константний область легкого ланцюга звичайно складається з одного домену Сі. Області Мн та М можна далі підрозділити на області гіперваріабельності (або гіперваріабельні області, які можуть бути гіперваріабельними по послідовності талабо формі петель, що задаються структурою), називані також областями, що визначають комплементарність (СОМ), які перемежовуються більш консервативними областями, називаними каркасними областями (ЕК).Eipaatepia! Ittypoiodu si. 7 (Rash! M/. Ed. 279 ed., Kamep Rge55, MU (1989)). Briefly, each heavy chain typically consists of a heavy chain variable region (abbreviated here as mn) and a heavy chain constant region. The heavy chain constant region usually consists of three domains, Chn1, Chn2g, and Chn3. Each light chain usually consists of a light chain variable region (abbreviated here as Mi and a light chain constant region. A light chain constant region usually consists of a single Si domain. The Mn and M regions can be further subdivided into hypervariable regions (or hypervariable regions that can be hypervariable in the sequence or the shape of the structure-specified loops), also called complementarity-determining regions (CMOs), which are interspersed with more conservative regions called framework regions (ECs).

Кожен Мн та Мі звичайно складається із трьох СОК і чотирьох ЕК, організованих від аміно- кінця до карбокси-кінця в такому порядку: ЕКТ, СОКІ1, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОМЗ, ЕКА (див. також бо СпоїШіа апа Гевзк, Ї Мої. Віої. 196, 901-917 (1987)). Звичайно, нумерацію амінокислотних залишків у цій області проводять у спосіб, описаний в Кабаї єї аїЇ., Зедоепсе5 ої Ргоївїп5 оїEach Mn and Mi usually consists of three SOCs and four ECs, organized from the amino end to the carboxy end in the following order: ECT, SOCI1, EC2, SOC2, EKZ, SOMZ, EKA (see also SpoiShia apa Gevzk, Yi Moi . Vioi. 196, 901-917 (1987)). Of course, the numbering of amino acid residues in this region is carried out in the manner described in Kabayi eyyi., Zedoepse5 oi Rgoivip5 oi

Ітітипоїіодіса! Іпієге5і, 5 єйд., Рибріїс Неацй Ббегмісе, Маїййопа! Іпвійціє ої Неайй, Веїпезаа, МО (1991) (такі фрази, як нумерація залишків варіабельної області, як у Кабата або за Кабатом, стосуються тут такої системи нумерації варіабельних доменів важкого ланцюга або варіабельних доменів легкого ланцюга). При застосуванні цієї системи нумерації дійсна лінійна амінокислотна послідовність пептиду може містити менше амінокислот або додаткові амінокислоти відповідно до укорочення або вставок в ЕК або СОР варіабельного домену.Ititipoiiodisa! Ipiege5i, 5 eid., Rybriis Neatsy Bbegmise, Maiyyopa! Ipviitsie oi Neaij, Veipezaa, MO (1991) (phrases such as Kabat's or Kabat's numbering of variable domain residues refer here to such a system of numbering heavy chain variable domains or light chain variable domains). When using this numbering system, the actual linear amino acid sequence of the peptide may contain fewer amino acids or additional amino acids according to truncations or insertions in the variable domain EC or COP.

Наприклад, варіабельний домен важкого ланцюга може включати вставку з одиничної амінокислоти (залишок 52а за Кабатом) після залишку 52 в Мн СОКаІ2 і вставлені залишки (наприклад, 82а, 826 та 82в і т.д., за Кабатом) після залишку 82 в ЕК важкого ланцюга.For example, the heavy chain variable domain can include a single amino acid insertion (residue 52a according to Kabat) after residue 52 in Mn SOKaI2 and inserted residues (eg, 82a, 826 and 82c, etc., according to Kabat) after residue 82 in EC heavy chain

Нумерацію залишків за Кабатом можна визначити для даного антитіла за допомогою зіставлення (вирівнювання) областей гомології послідовності зі "стандартною" пронумерованою послідовністю Кабата.Kabat residue numbering can be determined for a given antibody by mapping (aligning) regions of sequence homology to a "standard" Kabat numbered sequence.

Термін антитіло (АБ) у контексті даного винаходу стосується молекули імуноглобуліну, фрагменту молекули імуноглобуліну або похідного будь-якого з них, що має здатність специфічно зв'язуватися з антигеном у типових фізіологічних умовах протягом значних періодів часу, таких як, щонайменше, приблизно 30 хв., щонайменше, приблизно 45 хв., щонайменше, приблизно 1 година, щонайменше, приблизно 2 години, щонайменше, приблизно 4 години, щонайменше, приблизно 8 годин, щонайменше, приблизно 12 годин, приблизно 24 годин чи більше, приблизно 48 годин чи більше, приблизно 3, 4, 5, 6, 7 або більше днів і т.д., або будь- якого іншого відповідного визначеного функціонально періоду (такого, як час, достатній для того, щоб індукувати, прискорити, підсилити та/або модулювати фізіологічну відповідь, викликану зв'язуванням антитіла з антигеном).The term antibody (AB) in the context of this invention refers to an immunoglobulin molecule, a fragment of an immunoglobulin molecule, or a derivative of any of these, which has the ability to specifically bind to an antigen under typical physiological conditions for significant periods of time, such as at least about 30 min ., at least about 45 min., at least about 1 hour, at least about 2 hours, at least about 4 hours, at least about 8 hours, at least about 12 hours, about 24 hours or more, about 48 hours or more , approximately 3, 4, 5, 6, 7 or more days, etc., or any other appropriate functionally defined period (such as time sufficient to induce, accelerate, enhance, and/or modulate physiological the response caused by the binding of an antibody to an antigen).

Варіабельні області важкого та легкого ланцюгів молекули імуноглобуліну містять зв'язуючі домени, які взаємодіють із антигеном. Константні області антитіл (Абе) можуть опосередковувати зв'язування імуноглобуліну із тканинами хазяїна або факторами, що включають різні клітини імунної системи (такі як ефекторні клітини) і перший компонент (Сід) класичної системи комплементу.The variable regions of the heavy and light chains of the immunoglobulin molecule contain binding domains that interact with the antigen. Antibody constant regions (Abe) can mediate immunoglobulin binding to host tissues or factors including various cells of the immune system (such as effector cells) and the first component (Sid) of the classical complement system.

Анти-СО38 антитіло може бути біспецифічним антитілом, діателом або подібнимиThe anti-CO38 antibody can be a bispecific antibody, a diabody, or the like

Зо молекулами (див., наприклад, РМАБ ОБА 90(14), 6444-8 (1993) для опису діател). Дійсно, біспецифічні антитіла, діатела і т.п., запропоновані даним винаходом, можуть зв'язувати будь- яку придатну мішень на додачу до частини СОЗ8.With molecules (see, for example, RMAB OBA 90(14), 6444-8 (1993) for a description of diatels). Indeed, the bispecific antibodies, diabodies, etc., proposed by the present invention can bind any suitable target in addition to the POP8 portion.

Як відзначено вище, термін антитіло тут, якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту, включає фрагменти антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном. Показано, що антиген-зв'язуюча функція антитіла може здійснюватися фрагментами повнорозмірного антитіла. Приклади зв'язуючих фрагментів, охоплені терміном "антитіло", включають (1) Раб фрагмент, одновалентний фрагмент, який складається з доменів Мі, Мн, Сі іAs noted above, the term antibody herein, unless otherwise indicated or inconsistent with the context, includes antibody fragments that retain the ability to specifically bind to an antigen. It is shown that the antigen-binding function of an antibody can be performed by fragments of a full-length antibody. Examples of binding moieties encompassed by the term "antibody" include (1) a Rab moiety, a monovalent moiety that consists of Mi, Mn, Si, and

Сн1; (2) К(аб)»г та Е(ав)2 фрагменти, двовалентні фрагменти, що включають два Бар фрагменти, з'єднані дисульфідним містком у області зв'язування; (3) Ба фрагмент, який складається, в основному, 3 Мн ії Сні доменів; (4) Ем фрагмент, який складається, в основному, з Мі та Мн доменів однієї руки антитіла; (5) адаАБ фрагмент (Умага еї аї., Маїшге 341, 544-546 (1989)), який складається, в основному, з Мн домену; (б) ізольована область, що визначає комплементарність (СОК) ї (7) сполучення двох чи більше ізольованих СОК, які при необхідності можуть бути з'єднані синтетичним лінкером. Далі, хоч два домени Ем фрагмента, Мі та Мн, кодуються окремими генами, вони можуть бути з'єднані за допомогою рекомбінантних методів за допомогою синтетичного лінкера, що дозволяє одержувати їх у вигляді єдиного ланцюга білка, в якому Мі та Мн області утворюють пари для утворення одновалентних молекул (відомих, як одноланцюгові антитіла або одноланцюгове Ем (зсЕм), див., наприклад, Віга еї аї., Зсіепсе 242, 423-426 (1988) та Низіоп еї аі., РМАЗ ОЗА 85, 5879-5883 (1988)). Такі одноланцюгові антитіла охоплюються терміном антитіло, якщо не зазначено інше або це не суперечить контексту. Інші форми одноланцюгових антитіл, такі як діатела, включені в термін антитіло. Хоча такі фрагменти, в основному, включені в термін антитіло, вони всі разом і кожне окремо є унікальними властивостями даного винаходу, виявляючи різні біологічні властивості та застосування. Ці та інші корисні фрагменти антитіл у контексті даного винаходу обговорюються далі.Sn1; (2) K(ab)»g and E(av)2 fragments, divalent fragments that include two Bar fragments connected by a disulfide bridge in the binding region; (3) Ba fragment, which consists mainly of 3 Mn and Sni domains; (4) Em fragment, which consists mainly of Mi and Mn domains of one arm of the antibody; (5) adaAB fragment (Umaga ei ai., Maishge 341, 544-546 (1989)), which consists mainly of the Mn domain; (b) an isolated complementarity-determining region (SOC) and (7) a combination of two or more isolated SOCs, which, if necessary, can be connected by a synthetic linker. Further, although the two domains of the Em fragment, Mi and Mn, are encoded by separate genes, they can be joined by recombinant methods using a synthetic linker, which allows them to be obtained as a single protein chain in which the Mi and Mn regions form pairs for formation of monovalent molecules (known as single-chain antibodies or single-chain Em (csEm), see, for example, Viga et al., Zsiepse 242, 423-426 (1988) and Nisiop et al., RMAZ OZA 85, 5879-5883 (1988 )). Such single-chain antibodies are covered by the term antibody unless otherwise indicated or the context contradicts this. Other forms of single-chain antibodies, such as diabodies, are included in the term antibody. Although such fragments are generally included in the term antibody, they all together and individually are unique properties of the present invention, exhibiting different biological properties and applications. These and other useful antibody fragments in the context of the present invention are discussed below.

Також слід розуміти, що термін антитіло також, в основному, включає поліклональні антитіла, моноклональні антитіла (тАб»5), антитіло-подібні поліпептиди, такі як химерні антитіла та гуманізовані антитіла, антиідіотипові (апіі-ІЯ4) антитіла до антитіл і фрагменти антитіл, що зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (антиген-зв'язуючі фрагменти),It should also be understood that the term antibody also generally includes polyclonal antibodies, monoclonal antibodies (tAb'5), antibody-like polypeptides such as chimeric antibodies and humanized antibodies, anti-idiotypic (ApiI-IA4) anti-antibody antibodies, and antibody fragments. that retain the ability to specifically bind to the antigen (antigen-binding fragments),

надані будь-яким відомим способом, таким як ферментативне розщеплення, синтез пептидів та рекомбінантні техніки. Одержані антитіла можуть мати будь-який ізотип.provided by any known method such as enzymatic cleavage, peptide synthesis and recombinant techniques. The obtained antibodies can have any isotype.

Анти-СОЗ38 антитіло є антитілом, як описано вище, що специфічно зв'язується з антигеномAn anti-COZ38 antibody is an antibody, as described above, that specifically binds to an antigen

СОЗз8.SOZZ8.

Термін "епітоп" означає білкову детермінанту, здатну специфічно зв'язуватися з антитілом.The term "epitope" means a protein determinant capable of specifically binding to an antibody.

Епітопи звичайно складаються з хімічно активного поверхневого угруповання молекул, таких як амінокислоти, або бічних ланцюгів цукрів і звичайно мають специфічні тривимірні структурні характеристики, а також специфічні характеристики заряду. Конформаційні та неконформаційні епітопи розрізняються тим, що зв'язування з першим, але не з другим, втрачається в присутності денатуруючих розчинників. Епітоп може включати амінокислотні залишки, безпосередньо залучені у зв'язування (називані також імунодомінантним компонентом епітопа), та інші амінокислотні залишки, які не залучені безпосередньо у зв'язування, такі як амінокислотні залишки, що ефективно блокуються специфічно антиген-зв'язуючим пептидом (інакше кажучи, амінокислотний залишок розташований усередині відбитка (Тооїргіп!) специфічного антиген-зв'язуючого пептиду).Epitopes usually consist of a chemically active surface group of molecules such as amino acids or side chains of sugars and usually have specific three-dimensional structural characteristics as well as specific charge characteristics. Conformational and non-conformational epitopes differ in that binding to the former, but not to the latter, is lost in the presence of denaturing solvents. An epitope can include amino acid residues directly involved in binding (also called the immunodominant component of the epitope) and other amino acid residues that are not directly involved in binding, such as amino acid residues that are effectively blocked by a specific antigen-binding peptide ( in other words, the amino acid residue is located inside the imprint (Tooirhip!) of a specific antigen-binding peptide).

Термін "біспецифічна молекула" включає будь-який агент, такий як білок, пептид або комплекс білка чи пептиду, що має дві різні специфічності зв'язування. Наприклад, молекула може зв'язуватися з або реагувати з (а) антигеном клітинної поверхні, (б) Ес рецептором на поверхні ефекторної клітини. Термін "мультиспецифічна молекула" включає будь-який агент, такий як білок, пептид, або комплекс білка чи пептиду, що має більш ніж дві різні специфічності зв'язування. Наприклад, молекула може зв'язуватися з або реагувати з (а) антигеном клітинної поверхні та (б) Ес рецептором на поверхні ефекторної клітини та (в) щонайменше, ще одним компонентом. Відповідно, даний винахід включає, без обмеження цим, біспецифічні, триспецифічні, тетраспецифічні та інші мультиспецифічні молекули, спрямовані на СОЗ8 та на інші антигени або мішені клітинної поверхні, такі як Ес рецептори на ефекторних клітинах.The term "bispecific molecule" includes any agent, such as a protein, peptide, or protein or peptide complex, that has two different binding specificities. For example, a molecule can bind to or react with (a) a cell surface antigen, (b) an Es receptor on the surface of an effector cell. The term "multispecific molecule" includes any agent such as a protein, peptide, or protein or peptide complex that has more than two different binding specificities. For example, a molecule can bind to or react with (a) a cell surface antigen and (b) an Es receptor on the surface of an effector cell and (c) at least one other component. Accordingly, the present invention includes, but is not limited to, bispecific, trispecific, tetraspecific, and other multispecific molecules that target POP8 and other cell surface antigens or targets, such as Es receptors on effector cells.

Термін "біспецифічні антитіла" включає будь-яке анти-СОЗ38 антитіло, що є біспецифічною молекулою. Термін "біспецифічні антитіла" також включає діатела. Діатела є двовалентними біспецифічними антитілами, у яких Мн та Мі домени експресовані на одному поліпептидному ланцюзі, але із застосуванням лінкера, який є занадто коротким, щоб дозволити утворення париThe term "bispecific antibodies" includes any anti-COP38 antibody that is a bispecific molecule. The term "bispecific antibodies" also includes diabodies. Diatels are bivalent bispecific antibodies in which the Mn and Mi domains are expressed on the same polypeptide chain, but with a linker that is too short to allow pairing

Зо між двома доменами одного ланцюга, змушуючи таким чином домени утворювати пари з комплементарними домерами іншого ланцюга з утворенням двох антиген-зв'язуючих ділянок (див., наприклад, Ноїїїдег еї аі., РМАБ ОБА 90, 6444-6448 (1993), РоЦак ВУ еї аї., Бігисішге 2, 1121-1123 (1994)).between two domains of one chain, thus forcing the domains to form pairs with complementary domains of the other chain to form two antigen-binding sites (see, for example, Neuheideg et al., RMAB OBA 90, 6444-6448 (1993), RoTsak VU ei ai., Bigisishge 2, 1121-1123 (1994)).

Як застосовується тут, термін "ефекторна клітина" стосується імунної клітини, що бере участь в ефекторній фазі імунної відповіді, на противагу когнітивній та фазі активації імунної відповіді. Приклади імунних клітин включають клітину мієлоїдного або лімфоїдного походження, наприклад, лімфоцит (такий як В-клітини та Т-клітини, включаючи цитолітичні Т-клітини (СТІ), клітини-вбивці, природні клітини-вбивці, макрофаги, моноцити, еозинофіли, нейтрофіли, поліморфоядерні клітини, гранулоцити, гладкі клітини та базофіли. Деякі ефекторні клітини експресують специфічні Ес рецептори та виконують специфічні імунні функції. У ряді втілень ефекторна клітина здатна індукувати залежну від антитіла клітинну цитотоксичність (АОС), як, наприклад, нейтрофіл здатний індукувати АЮСС. Наприклад, моноцити, макрофаги, які експресують ЕСК, залучені в специфічне вбивство клітин мішені та презентацію антигенів для інших компонентів імунної системи або зв'язування із клітинами, що несуть антигени. У деяких втіленнях ефекторна клітина може фагоцитувати антиген мішені, клітину мішені або мікроорганізм. Експресія окремого ЕСК ефекторною клітиною може регулюватися гуморальними факторами, такими як цитокіни. Наприклад, виявлено, що експресія ЕсукКі! регулюється на підвищення інтерфероном у (ІЕМ-у) та/або 0-С5Е. Така підвищена експресія збільшує цитотоксичну активність клітин, що несуть ЕсукКІ, проти мішеней. Ефекторна клітина може фагоцитувати або лізувати антитіло-мішень або клітину-мішень.As used herein, the term "effector cell" refers to an immune cell involved in the effector phase of the immune response, as opposed to the cognitive and activation phase of the immune response. Examples of immune cells include a cell of myeloid or lymphoid origin, such as a lymphocyte (such as B cells and T cells, including cytolytic T cells (CTs), killer cells, natural killer cells, macrophages, monocytes, eosinophils, neutrophils, polymorphonuclear cells, granulocytes, mast cells, and basophils. Some effector cells express specific Es receptors and perform specific immune functions. In some embodiments, an effector cell is capable of inducing antibody-dependent cellular cytotoxicity (AOC), such as a neutrophil is capable of inducing AUCS. For example, monocytes, macrophages that express ESCs involved in specific killing of target cells and presentation of antigens to other components of the immune system or binding to antigen-bearing cells. In some embodiments, an effector cell can phagocytose a target antigen, a target cell, or a microorganism. Expression of a single ESC by an effector cell can be regulated by humoral factors such as cytokines . For example, it was found that the expression of EsukKi! regulated to increase by interferon in (IEM) and/or 0-C5E. Such increased expression increases the cytotoxic activity of EsukKI-bearing cells against targets. The effector cell may phagocytose or lyse the target antibody or target cell.

Термін "антитіло людини", як застосовується тут, включає антитіла, що мають варіабельні та константні області, виробленими з послідовностей імуноглобуліну зародкової лінії людини.The term "human antibody" as used herein includes antibodies having variable and constant regions produced from human germline immunoglobulin sequences.

Антитіла людини за даним винаходом можуть включати амінокислотні залишки, які не кодуються послідовностями імуноглобуліну зародкової лінії людини (наприклад, мутації, введені за допомогою випадкового або спрямованого мутагенезу іп міо або соматичні мутації іп мімо).Human antibodies of the present invention may include amino acid residues that are not encoded by human germline immunoglobulin sequences (eg, mutations introduced by random or site-directed mutagenesis of ip myo or somatic mutations of ip mimo).

Однак, термін "антитіло людини", як застосовується тут, не включає антитіла, у яких СОК послідовності, вироблені із зародкових ліній інших видів ссавців, таких як миша, були поміщені серед каркасних послідовностей людини.However, the term "human antibody" as used herein does not include antibodies in which SOC sequences produced from the germ lines of other mammalian species, such as the mouse, have been inserted into the human framework sequences.

Як застосовується тут, антитіло людини "вироблено з" послідовності певної зародкової лінії бо людини, якщо антитіло одержане із системи із застосуванням послідовностей імуноглобулінуAs used herein, a human antibody is "produced from" a specific human germline sequence if the antibody is derived from a system using immunoglobulin sequences

Зо людини, наприклад, за допомогою імунізації трансгенної миші, що несе гени імуноглобуліну людини, або за допомогою скринінгу бібліотеки генів імуноглобуліну людини, і де вибране антитіло людини є, щонайменше, на 90 95, наприклад, щонайменше, на 95 95, наприклад, щонайменше на 96 95, наприклад, щонайменше, на 97 95, наприклад, щонайменше, на 98 95, наприклад, щонайменше, на 99 95, ідентичним по послідовності амінокислот амінокислотній послідовності, що кодується зародковими Мн або Мі сегментами гена варіабельної області.From a human, for example, by immunization of a transgenic mouse carrying human immunoglobulin genes, or by screening a human immunoglobulin gene library, and wherein the selected human antibody is at least 90 95, e.g. at least 95 95, e.g. at least at 96 95, for example, at least 97 95, for example, at least 98 95, for example, at least 99 95, identical in sequence of amino acids to the amino acid sequence encoded by the embryonic Mn or Mi segments of the variable region gene.

Звичайно, антитіло людини, вироблене з окремого сегмента гена Мн або Мі варіабельної області зародкової лінії людини, виявляє не більше 10 амінокислот різниці, наприклад, не більше 5, наприклад, не більше 4, 3, 2 або 1 амінокислоти різниці у порівнянні з амінокислотною послідовністю, кодованою геном імуноглобуліну зародкової лінії.Of course, a human antibody produced from a single segment of the Mn or Mi gene of the human germline variable region detects no more than 10 amino acid differences, e.g., no more than 5, e.g., no more than 4, 3, 2, or 1 amino acid differences compared to the amino acid sequence , encoded by the germline immunoglobulin gene.

Химерне антитіло є антитілом, що містить одну чи більше областей одного антитіла та одну чи більше областей одного чи більше іншого антитіла, виробленого з інших видів.A chimeric antibody is an antibody that contains one or more regions of one antibody and one or more regions of one or more other antibodies produced from other species.

Одновалентне химерне антитіло є димером (НІ), утвореним химерним Н ланцюгом, зв'язаним за допомогою дисульфідних зв'язків з химерним І. ланцюгом. Двовалентне химерне антитіло є тетрамером (Н»еІ2), утвореним двома НІ димерами, зв'язаними за допомогою, щонайменше, одного дисульфідного зв'язку. Полівалентне химерне антитіло можна також одержати, наприклад, із застосуванням СН області, що олігомеризується (наприклад, з Н ланцюга ІМ абоA monovalent chimeric antibody is a dimer (NI) formed by a chimeric H chain connected by disulfide bonds to a chimeric I. chain. A bivalent chimeric antibody is a tetramer (H»eI2) formed by two NI dimers connected by at least one disulfide bond. A polyvalent chimeric antibody can also be obtained, for example, using the CH region that oligomerizes (for example, from the H chain of IM or

Мн ланцюга). Звичайно, химерне антитіло стосується антитіла, у якого частина важкого та/або легкого ланцюга ідентична або гомологічна відповідній послідовності антитіл, вироблених з певних видів, або приналежних до певного класу або підкласу антитіл, тоді як залишок ланцюга(ів) ідентичний або гомологічний відповідним послідовностям антитіл, вироблених з інших видів, або приналежних до певного класу або підкласу антитіл, а також фрагментів таких антитіл, поки вони виявляють бажану біологічну активність (див., наприклад, О5 4816567 таMn chain). Of course, a chimeric antibody refers to an antibody in which a portion of the heavy and/or light chain is identical or homologous to the corresponding antibody sequence produced from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass, while the remainder of the chain(s) is identical or homologous to the corresponding antibody sequences , produced from other species, or belonging to a certain class or subclass of antibodies, as well as fragments of such antibodies, as long as they exhibit the desired biological activity (see, for example, O5 4816567 and

Могтізоп єї аі., РМАБ ОБА 81., 6851-6855 (1984)). химерні антитіла одержують за допомогою рекомбінантних підходів, добре відомих у даній області техніки (див., наприклад, СарійПу еї аї.,Mogtizop eyi AI., RMAB OBA 81., 6851-6855 (1984)). chimeric antibodies are produced using recombinant approaches well known in the art (see, e.g.,

РМАБ БА 81, 3273-3277 (1984), Моттізоп єї аі.. РМАБ5 ОБА 81 6851-6855 (1984), Вошціаппе єї а!., Маїште 312, 643-646 (1984), ЕРІ25023, Мецйрегдег еї аї., Маїште 314, 268-270 (1985),RMAB BA 81, 3273-3277 (1984), Mottizop eyi ai.. RMAB5 OBA 81 6851-6855 (1984), Voshciappe eyi a!., Maishte 312, 643-646 (1984), ERI25023, Metsyregdeg eyi ai., Maishte 314, 268-270 (1985),

ЕР171496, ЕР173494, МУО86/01533, ЕР184187, Занадап ес! аї., 9. Іттипої. 137. 1066-1074 (1986),ЕР171496, ЕР173494, МУО86/01533, ЕР184187, Zanadap es! ai., 9. Ittipoi. 137. 1066-1074 (1986),

МО87/02671, Пи еї аІ., РМАБ О5А 84, 3439-3443 (1987), Бийп еї аІ., РМАБ О5А 84, 214-218 (1987),MO87/02671, Py ei aI., RMAB O5A 84, 3439-3443 (1987), Byip ei aI., RMAB O5A 84, 214-218 (1987),

Зо Вецег" вї аї., Зсієпсе 240, 1041-1043 (1988) та Нагіому єї аї!., Апіїбодієв: А І арогаюгу Мапиаї, Соїй оргіпд Нарог І арогаюгу Ргезв, Соїд бргіпд Набог, М.У., (1988)).Zo Vetseg" vy ai., Zsiepse 240, 1041-1043 (1988) and Nagiomu eyi ai!., Apiibodiev: A I arogayugu Mapiai, Soii orgipd Narog I arogayugu Rgezv, Soid brgipd Nabog, M.U., (1988)) .

Гуманізоване антитіло є антитілом, що вироблено з відмінних від людини видів, у якого певні амінокислоти в каркасних і константних областях важкого та легкого ланцюгів мутовані так, щоб уникнути або скасувати імунну відповідь у людини. Гуманізовані форми нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл є химерними антитілами, які містять мінімальну послідовність, вироблену з нелюдського імуноглобуліну. Здебільшого гуманізовані антитіла є імуноглобулінами людини (антитіло реципієнта), у яких залишки в гіперваріабельній області реципієнта заміщені залишками з гіперваріабельної області видів, відмінних від людини (антитіло донора), таких як миша, щур, кролик або примат, відмінний від людини, які мають бажані антигензв'язуючі характеристики, такі як специфічність і спорідненість. У деяких випадках, залишки Ем каркасної області (ЕК) імуноглобуліну людини заміщають відповідними нелюдськими залишками. Далі, гуманізовані антитіла можуть включати залишки, які не виявляються ні в антитілах донора, ані в антитілах реципієнта. Такі модифікації роблять, щоб далі оптимізувати властивості антитіл. В основному, гуманізоване антитіло включає здебільшого все з, принаймні, одного і, звичайно, двох варіабельних доменів, у яких всі або здебільшого всі гіперваріабельні петлі відповідають таким нелюдського імуноглобуліну та всі або здебільшого всі ЕК області є такими послідовностями імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло при необхідності також включає, щонайменше, частину константної області імуноглобуліну (Ес), звичайно, з імуноглобуліну людини. Деталі див. в Уопез еї аї., Маїшге 321, 522-525 (1986), Віесптапп 6ї аї.,A humanized antibody is an antibody produced from a non-human species in which certain amino acids in the framework and constant regions of the heavy and light chains are mutated to avoid or abrogate an immune response in humans. Humanized forms of non-human (eg, murine) antibodies are chimeric antibodies that contain a minimal sequence derived from a non-human immunoglobulin. Humanized antibodies are generally human immunoglobulins (recipient antibody) in which residues in the recipient hypervariable region are replaced by residues from the hypervariable region of a non-human species (donor antibody), such as a mouse, rat, rabbit, or non-human primate, that have the desired antigen binding characteristics such as specificity and affinity. In some cases, the Em residues of the framework region (EC) of human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. Further, humanized antibodies may include residues that are not detected in either the donor antibody or the recipient antibody. Such modifications are made to further optimize the properties of antibodies. Basically, a humanized antibody comprises substantially all of at least one and preferably two variable domains in which all or substantially all of the hypervariable loops correspond to those of a non-human immunoglobulin and all or substantially all of the EC regions are such human immunoglobulin sequences. If necessary, the humanized antibody also includes at least part of the constant region of immunoglobulin (EC), of course, from human immunoglobulin. See details in Uopez ei ai., Maishge 321, 522-525 (1986), Viesptapp 6i ai.,

Маїшге 332, 323-329 (1988) та Ргевіо, Сиг. Ор. зпнпісі. Віої. 2, 593-596 (1992).Maishge 332, 323-329 (1988) and Rgevio, Sig. Or. zpnpisi Vioi 2, 593-596 (1992).

Термін "моноклональне антитіло" або "композиція моноклонального антитіла", як застосовується тут, стосується одержання молекул антитіла єдиного молекулярного складу.The term "monoclonal antibody" or "monoclonal antibody composition" as used herein refers to the preparation of antibody molecules of a single molecular composition.

Композиція моноклонального антитіла виявляє єдину специфічність зв'язування та спорідненість для певного епітопа. Відповідно, термін "моноклональне антитіло людини" стосується антитіл, що виявляють єдину специфічність зв'язування, у яких варіабельний і константний області вироблені з послідовностей імуноглобуліну зародкової лінії людини.The composition of the monoclonal antibody reveals a single binding specificity and affinity for a certain epitope. Accordingly, the term "human monoclonal antibody" refers to antibodies exhibiting a single binding specificity in which the variable and constant regions are derived from human germline immunoglobulin sequences.

Моноклональні антитіла людини можуть вироблятися гібридомою, що включає В-клітину, одержану із трансгенної або трансхромосомної тварини, відмінної від людини, такої як трансгенна миша, що має геном, який включає трансген важкого ланцюга людини та трансген легкого ланцюга людини, об'єднані в безсмертній клітині. Моноклональне антитіло може скорочено позначатися як тАб.Human monoclonal antibodies can be produced by a hybridoma comprising a B cell derived from a non-human transgenic or transchromosomal animal, such as a transgenic mouse having a genome that includes a human heavy chain transgene and a human light chain transgene fused in an immortal the cell Monoclonal antibody can be abbreviated as tAb.

Термін "рекомбінантне антитіло людини", як застосовується тут, включає всі антитіла людини, які одержані, експресовані, створені або виділені за допомогою рекомбінантних підходів, такі як (а) антитіла, виділені із тварини (такої як миша), що є трансгенною або трансхромосомною відносно генів імуноглобуліну людини, або гібридома, одержана з них (описана тут далі), (б) антитіла, виділені із клітини хазяїна, трансформованої для експресії антитіл, такої як трансфектома, (в) антитіла, виділені з рекомбінантної комбінаторної бібліотеки антитіл людини і (г) антитіла, одержані, експресовані, створені або ізольовані іншими способами, які включають сплайсинг послідовностей гена імуноглобуліну людини в інші послідовності ДНК. Такі рекомбінантні антитіла людини включають варіабельні та константні області, вироблені з послідовностей імуноглобуліну зародкової лінії людини. У певних втіленнях, однак, такі рекомбінантні антитіла людини можуть піддаватися іп мйго мутагенезу (або, коли застосовують тварину, трансгенну відносно послідовностей імуноглобуліну людини, соматичному мутагенезу іп мімо) і, таким чином, амінокислотні послідовності Мн та М. областей рекомбінантних антитіл є послідовностями, які будучи виробленими 3, і спорідненими до, Мн таThe term "recombinant human antibody" as used herein includes all human antibodies that are produced, expressed, generated, or isolated by recombinant approaches, such as (a) antibodies isolated from an animal (such as a mouse) that is transgenic or transchromosomal with respect to human immunoglobulin genes, or a hybridoma derived therefrom (described hereinafter), (b) antibodies isolated from a host cell transformed for antibody expression, such as a transfectoma, (c) antibodies isolated from a recombinant combinatorial human antibody library, and ( d) antibodies obtained, expressed, created or isolated by other methods, which include splicing human immunoglobulin gene sequences into other DNA sequences. Such recombinant human antibodies include variable and constant regions produced from human germline immunoglobulin sequences. In certain embodiments, however, such recombinant human antibodies can be subjected to ip mimo mutagenesis (or, when using an animal transgenic for human immunoglobulin sequences, somatic ip mimo mutagenesis) and thus the amino acid sequences of the Mn and M regions of the recombinant antibodies are sequences, which being produced by 3, and related to, Mn and

Мі послідовностей зародкової лінії людини, можуть не існувати в природі серед набору антитіл зародкової лінії людини іп мімо.Mi sequences of the human germline may not exist in nature among the set of antibodies of the human germline and mimo.

Як застосовується тут, "гетерологічне антитіло" визначено відносно трансгенного організму, відмінного від людини, який продукує таке антитіло. Цей термін стосується антитіла, що має амінокислотну послідовність, яка відповідає послідовності, виявленій в організмі, який не є відмінною від людини твариною, в основному, з видів, відмінних від цієї трансгенної тварини, відмінної від людини. "Ігольоване антитіло", як застосовується тут, стосується антитіла, яке, в основному, звільнено від інших антитіл, що мають інші антигенні специфічності (наприклад, ізольоване антитіло, що специфічно зв'язується з СЮОЗ8, в основному, звільнено від антитіл, які специфічно зв'язуються з антигенами, відмінними від СОЗ38). Ізольоване антитіло, що специфічно зв'язується з епітопом, ізоформою або варіантом СОЗ38 людини, може, однак, мати перехресну реактивність із іншими спорідненими антигенами, наприклад, з інших видів (такими як видові гомологи СО38). Далі, ізольоване антитіло може бути, в основному, звільнено від інших клітинних матеріалів та/або хімічних речовин. В одному втіленні даного винаходу, комбінації "івольованих" моноклональних антитіл, що мають різні специфічності, суміщаються в добре визначеній композиції.As used herein, a "heterologous antibody" is defined relative to a non-human transgenic organism that produces such an antibody. This term refers to an antibody having an amino acid sequence that corresponds to a sequence found in a non-human animal, primarily from a species other than that transgenic non-human animal. "Needled antibody" as used herein refers to an antibody that is substantially free of other antibodies having different antigenic specificities (eg, an isolated antibody that specifically binds to SHOZ8 is substantially free of antibodies that specifically bind to antigens other than POP38). An isolated antibody that specifically binds to an epitope, isoform, or variant of human COZ38 may, however, be cross-reactive with other related antigens, for example, from other species (such as species homologues of CO38). Further, the isolated antibody may be substantially free of other cellular materials and/or chemicals. In one embodiment of the present invention, combinations of "volatile" monoclonal antibodies having different specificities are combined in a well-defined composition.

Як застосовується тут, "специфічне зв'язування" стосується антиген-зв'язуючого пептиду, такого як антитіло, що зв'язується з визначеним антигеном. Звичайно, антиген-зв'язучий пептид, такий як антитіло, зв'язується зі спорідненістю, що відповідає Ко близько 1077 М чи менше, наприклад, близько 108 М чи менше, наприклад, близько 109 М чи менше, близько 10-79 М чи менше або близько 107! М або ще менше при визначенні за допомогою техніки поверхневого плазмонового резонансу (ЗРК) із приладом ВіАсоге 3000 із застосуванням рекомбінантногоAs used herein, "specific binding" refers to an antigen-binding peptide, such as an antibody, that binds to a specific antigen. Of course, an antigen-binding peptide, such as an antibody, binds with an affinity corresponding to a K of about 1077 M or less, e.g., about 108 M or less, e.g., about 109 M or less, about 10-79 M or less than or around 107! M or even less when determined using the technique of surface plasmon resonance (SRK) with the ViAsoge 3000 device using recombinant

СО38 як ліганду та аналізованого антитіла. Антиген-зв'язуючий пептид може зв'язуватися з визначеним антигеном зі спорідненістю, яка відповідає Ко, що, щонайменше, в 10 разів нижче, наприклад, щонайменше, в 100 разів нижче, наприклад, щонайменше, в 1000 разів нижче, наприклад, щонайменше, в 10000 разів нижче, наприклад, щонайменше, в 100000 разів нижче, ніж його спорідненість до неспецифічного антигену (наприклад, БСА, казеїну), іншого, ніж визначений антиген або близькоспоріднений антиген. То, наскільки спорідненість нижче, залежить від Ко антиген-зв'язуючого пептиду так, що коли Ко антиген-зв'язуючого пептиду дуже низка (що означає дуже високу специфічність антиген-зв'язуючого пептиду), тоді різниця, на яку спорідненість до антигену вище в порівнянні зі спорідненістю до неспецифічного антигену, може становити не менше 10000 разів. Фрази "антиген-зв'язуючий пептид, що впізнає антиген" та "антиген-зв'язуючий пептид, специфічний для антигену" застосовуються взаємозамінно з терміном "антиген-зв'язуючий пептид, що специфічно зв'язується з антигеном". Подібним чином, фрази "антитіло, що впізнає антиген" та "антитіло, специфічне для антигену" застосовуються взаємозамінно з терміном "антитіло, що специфічно зв'язується з антигеном".CO38 as a ligand and analyzed antibody. An antigen-binding peptide can bind to a defined antigen with an affinity corresponding to a K0 that is at least 10-fold lower, e.g., at least 100-fold lower, e.g., at least 1000-fold lower, e.g., at least , 10,000-fold lower, for example, at least 100,000-fold lower than its affinity for a non-specific antigen (eg, BSA, casein) other than the defined antigen or a closely related antigen. How much lower the affinity is depends on the Co of the antigen-binding peptide so that when the Co of the antigen-binding peptide is very low (meaning very high specificity of the antigen-binding peptide), then the difference by which the affinity for the antigen higher compared to the affinity to a non-specific antigen, can be at least 10,000 times. The phrases "antigen-binding peptide that recognizes an antigen" and "antigen-binding peptide specific for an antigen" are used interchangeably with the term "antigen-binding peptide that specifically binds to an antigen". Similarly, the phrases "antigen-recognizing antibody" and "antigen-specific antibody" are used interchangeably with the term "antigen-specific antibody".

Термін "Ка" (с7), як застосовується тут, стосується константи швидкості реакції дисоціації даного комплексу антиген-антитіло. Згадана величина називається також значенням Кок.The term "Ka" (c7), as used herein, refers to the rate constant of the dissociation reaction of a given antigen-antibody complex. The mentioned value is also called the Kok value.

Термін "Ка" (М" с7), як застосовується тут, стосується константи швидкості реакції асоціації для даної взаємодії антиген-антитіло.The term "Ka" (M" c7) as used herein refers to the association reaction rate constant for a given antigen-antibody interaction.

Термін "Ко" (М), як застосовується тут, стосується константи рівноваги реакції дисоціації для даної взаємодії антиген-антитіло.The term "Co" (M), as used herein, refers to the equilibrium constant of the dissociation reaction for a given antigen-antibody interaction.

Термін "Ка" (М7), як застосовується тут, стосується константи рівноваги реакції асоціації для даної взаємодії антиген-антитіло, яку одержують шляхом ділення Ка на Ка.The term "Ka" (M7), as used herein, refers to the association reaction equilibrium constant for a given antigen-antibody interaction, which is obtained by dividing Ka by Ka.

Як застосовується тут, "ізотип" стосується класу антитіл (наприклад, Іде, Ід2, Ід, Ід,As used herein, "isotype" refers to a class of antibodies (eg, Ide, Id2, Id, Id,

ІЧО, ДА, ЧЕ або дм), який кодується генами константної області важкого ланцюга.ICHO, DA, CHE or dm), which is encoded by the genes of the constant region of the heavy chain.

Як застосовується тут, "переключення ізотипу" стосується феномена, за допомогою якого клас або ізотип антитіла змінюється від одного класу імуноглобуліну на той чи інший клас імуноглобуліну.As used herein, "isotype switching" refers to the phenomenon whereby the class or isotype of an antibody changes from one class of immunoglobulin to another class of immunoglobulin.

Як застосовується тут, "непереключений ізотип" стосується ізотипівого класу важкого ланцюга, продукованого, коли переключення ізотипу не мало місця; СН ген, що кодує непереключений ізотип, є, звичайно, першим СН геном відразу після функціонально реорганізованого МО.) гена. Переключення ізотипів підрозділяють на класичне або некласичне переключення ізотипу. Класичне переключення ізотипу відбувається за допомогою рекомбінації, яка включає щонайменше одну область перестановки послідовності у трансгена. Некласичне переключення ізотипу може відбуватися, наприклад, за допомогою гомологічної рекомбінації між си людини та хи (б-зв'язана делеція) людини. Альтернативні механізми некласичного переключення, такі як трансгенна та/або трансхромосомна рекомбінація, поміж інших, можуть відбуватися та здійснювати ізотипове переключення.As used herein, "unswitched isotype" refers to the heavy chain isotype class produced when no isotype switching has occurred; The CH gene encoding the unswitched isotype is, of course, the first CH gene immediately after the functionally reorganized MO.) gene. Isotype switching is divided into classical or non-classical isotype switching. Classical isotype switching occurs by means of recombination, which includes at least one region of sequence rearrangement in the transgene. Non-classical switching of the isotype can occur, for example, with the help of homologous recombination between human sy and human chy (b-linked deletion). Alternative mechanisms of non-classical switching, such as transgenic and/or transchromosomal recombination, among others, can occur and effect isotypic switching.

Як застосовується тут, термін "послідовність переключення" стосується таких послідовностей ДНК, які є відповідальними за рекомбінацію з переключенням. Послідовність "донора переключення", звичайно, область ц переключення, є 5" (тобто, вище по ходу)-областю конструкції що делетується при рекомбінації з переключенням. Область "акцептора переключення" находиться між областю конструкції, що делетується, і замінним константною областю (наприклад, у, є і т.д.-). Оскільки немає специфічної ділянки, де рекомбінація відбувається завжди, остаточну послідовність гена, звичайно, не можна передбачити по конструкції.As used herein, the term "switch sequence" refers to those DNA sequences that are responsible for switch recombination. The "switch donor" sequence, of course, the t-switch region, is the 5" (ie, upstream) region of the construct deleted upon recombination with the switch. The "switch acceptor" region lies between the region of the deleted construct and the replacement constant region ( for example, in, is, etc.-) Since there is no specific site where recombination always occurs, the final sequence of a gene cannot of course be predicted by design.

Як застосовується тут, "профіль глікозилування" визначається як профіль розташування вуглеводневих одиниць, які ковалентно приєднані до білка, точніше, до білка імуноглобуліну (антитіла). Профіль глікозилування гетерологічного антитіла можна охарактеризувати як, в основному, близький до профілю глікозилування, що зустрічається в природі у антитіл,As used herein, a "glycosylation profile" is defined as a profile of the location of hydrocarbon units that are covalently attached to a protein, more specifically to an immunoglobulin (antibody) protein. The glycosylation profile of a heterologous antibody can be characterized as broadly close to the glycosylation profile found in nature in antibodies,

Зо продукованих видами трансгенних тварин, що не є людиною, причому рядовий фахівець у даній області зрозуміє, що профіль глікозилування гетерологічного антитіла є ближчим до згаданого профілю глікозилування у видів трансгенних тварин, що не є людиною, ніж у видів, з яких Сн гени трансгенних тварин були вироблені.Produced from non-human transgenic animal species, and one of ordinary skill in the art will appreciate that the glycosylation profile of the heterologous antibody is closer to said glycosylation profile in the non-human transgenic animal species than in the species from which the Sn genes of the transgenic animals were produced.

Термін "що зустрічається в природі", як застосовується тут відносно об'єктів, стосується факту, що об'єкт може бути знайдений у природі. Наприклад, послідовність поліпептиду або полінуклеотиду, присутню в організму (включаючи віруси), яку можна ізолювати із природного джерела і яка не була навмисно змінена людиною в лабораторії, є такою, що зустрічається в природі.The term "naturally occurring" as used herein with respect to objects refers to the fact that the object can be found in nature. For example, a polypeptide or polynucleotide sequence present in an organism (including viruses) that can be isolated from a natural source and that has not been intentionally altered by humans in the laboratory is naturally occurring.

Термін "реорганізований", як застосовується тут, стосується конфігурації локусу важкого ланцюга або легкого ланцюга імуноглобуліну, де М-сегмент розташований безпосередньо поруч із 0-9у- або д-сегментом у конформації, що кодує в основному повний Мн- або Мі- домен, відповідно. Реорганізований локус гена імуноглобуліну (антитіла) можна ідентифікувати шляхом порівняння із ДНК зародкової лінії; у реорганізованому локусі буде, щонайменше, один рекомбінований гептамерний/нонамерний елемент гомології.The term "rearranged" as used herein refers to a configuration of an immunoglobulin heavy chain or light chain locus where the M-segment is located immediately adjacent to the 0-9y- or d-segment in a conformation that encodes essentially a complete Mn- or Mi-domain, in accordance. The rearranged immunoglobulin (antibody) gene locus can be identified by comparison with germline DNA; the rearranged locus will have at least one recombined heptameric/nonameric homology element.

Термін "нереорганізований" або "конфігурація зародкової лінії"? як застосовується тут відносно М-сегмента, стосується конфігурації, де М-сегмент не рекомбінований так, щоб бути безпосередньо поруч із Ю- або )-сегментом.The term "unrearranged" or "germline configuration"? as used herein with respect to an M-segment refers to a configuration where the M-segment is not recombined so as to be immediately adjacent to a Y- or )-segment.

Термін "молекула нуклеїнової кислоти", як застосовується тут, включає молекули ДНК і молекули РНК. Молекула нуклеїнової кислоти може бути одноланцюговою або дволанцюговою, але краще є дволанцюговою ДНК. Нуклеїнові кислоти можуть бути присутніми у цілій клітині, у клітинному лізаті або в частково очищеній або в основному чистій формі. Нуклеїнова кислота є "і ольованою" або "значно очищеною", коли вона відокремлена від інших клітинних компонентів або інших забруднень, таких як інші клітинні нуклеїнові кислоти чи білки, за допомогою стандартних способів, включаючи обробку лугом/ДСН, розділення в С5СІ, хроматографію на колонці, електрофорез в агарозному гелі та інші способи, добре відомі в даній області. (Див. Е.The term "nucleic acid molecule" as used herein includes DNA molecules and RNA molecules. A nucleic acid molecule can be single-stranded or double-stranded, but double-stranded DNA is preferred. Nucleic acids can be present in the whole cell, in a cell lysate, or in partially purified or substantially pure form. A nucleic acid is "purified" or "substantially purified" when it is separated from other cellular components or other contaminants, such as other cellular nucleic acids or proteins, by standard methods including alkaline/DSH treatment, C5Cl separation, chromatography on columns, electrophoresis in agarose gel and other methods well known in this area. (See E.

Айзирбеї еї аї., вед. Ситепі Ргоїюосої!в іп Моіесціаг Віоіоду, Стеєпе Рибіїзпіпуд апа УМіеу ІпіегосієпсеAizirbei ei ai., ved. Sitepi Rgoiyuosoi!v ip Moiesciag Vioiodu, Steepe Rybiizpipud apa UMieu Ipiegosiepse

Мем мок (1987).)Meme Mok (1987).)

Нуклеїнова кислота є "оперативно зв'язаною", коли находиться у функціональному взаємозв'язку з іншою послідовністю нуклеїнової кислоти. Наприклад, промотор або підсилювач бо оперативно зв'язані з кодуючою послідовністю, якщо вони впливають на транскрипцію послідовності. відносно транскрипції регуляторних послідовностей, оперативно зв'язаний означає, що послідовності ДНК, будучи зв'язані, є суміжними і, при необхідності, приєднані до двох областей, що кодують білок, безпосередньо та в рамці зчитування. Для послідовностей переключення, оперативно зв'язаний вказує, що послідовності здатні діяти на рекомбінацію з переключенням.A nucleic acid is "operably linked" when in functional relationship with another nucleic acid sequence. For example, a promoter or an enhancer is operatively linked to a coding sequence if they affect the transcription of the sequence. with respect to transcription regulatory sequences, operably linked means that the DNA sequences, when linked, are contiguous and, if necessary, attached to the two protein-coding regions directly and in-frame. For switch sequences, operably linked indicates that the sequences are capable of performing switch recombination.

Як застосовується тут, термін "інгібує ріст" (наприклад, відносно клітин) включає будь-яке вимірне зменшення росту клітин при контакті 3 СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитілом, у порівнянні з ростом тих же клітин за відсутності контакту з СОЗ8ВВР, таким як анти-СОЗ8 антитіло, наприклад, інгібування росту клітинної культури, щонайменше, приблизно на 10 95, 20 9, ЗО 9о, 40 90, 50 9, 60 о, 70 9о, 80 бо, 90 о, 99 90 або 100 95.As used herein, the term "inhibits growth" (e.g., with respect to cells) includes any measurable reduction in cell growth when contacted with a COZ8BVR, e.g., anti-COZ38 antibody, as compared to the growth of the same cells in the absence of exposure to COZ8BVR, such as anti-COZ8 antibody, for example, inhibition of cell culture growth by at least about 10 95 , 20 9 , ZO 9o , 40 90 , 50 9 , 60 o , 70 9o , 80 bo , 90 o , 99 90 , or 100 95 .

Як застосовується тут, терміни "інгібує зв'язування" та "блокує зв'язування" (наприклад, відносно інгібування/блокування зв'язування СОЗ38-зв'язуючого партнера з СОз38) застосовуються взаємозамінно та охоплюють як часткове, так і повне інгібування/блокування.As used herein, the terms "inhibits binding" and "blocks binding" (eg, with respect to inhibiting/blocking binding of a COz38-binding partner to COz38) are used interchangeably and encompass both partial and complete inhibition/blocking .

Інгібування/блокування зв'язування СОЗ8-зв'язуючого партнера з СОЗ38 може зменшувати або змінювати нормальний рівень або тип клітинного сигналу, що має місце, коли СОЗ8-зв'язуючий партнер зв'язується з СЮЗ38 за відсутності інгібування чи блокування. Інгібування та блокування також включають будь-яке вимірне зменшення спорідненості зв'язування СОЗ8-зв'язуючого партнера з СОЗ8 при контакті з СОЗ8ВР, таким як анти-СОЗ38 антитіло, у порівнянні з лігандом за відсутності контакту з СОЗ8ВР, таким як анти-СОЗ38 антитіло, наприклад, блокування зв'язування СЮОЗ8-зв'язуючого партнера з СОЗ38, щонайменше, приблизно на 10 95, 20 95, ЗО Об, 4О Фо, 50 У, 60 Фо, 70 95, 80 Зо, 90 Фо, 99 95 або 100 95. "Клітина мішені" означає будь-яку небажану клітину у суб'єкта (наприклад, людини або тварини), на яку може бути спрямована дія композиції (яка включає, наприклад, СОЗ8ВР, наприклад, моноклональне анти-СОЗ38 антитіло людини та/або біспецифічну чи мультиспецифічну молекулу, спрямовану проти СОЗ8) за даним винаходом. У деяких втіленнях, клітина мішені є клітиною, експресуючою або надекспресуючою СОЗ8У. Клітини, які експресують СОЗ38, звичайно включають гематопоетичні клітини, такі як медулярні тимоцити, активовані Т- і В-клітини, 8095 спочиваючих МК клітин і моноцитів, лімфобласти центра розмноження в лімфатичному вузлі, плазматичні В-клітини та деякі внутрішньофолікулярні клітини, деревоподібні клітини, нормальні клітини кісткового мозку, окремі клітини попередники, 50-80 95 кров'яних клітин пуповини, еритроцити та кров'яні пластинки. СОЗ8 також може експресуватися негематопоетичними клітинами, наприклад, у кишечнику інтраепітеліаальними клітинами та лімфоцитами Іатіпа ргоргіа, клітинами Пуркін'є та нейрофібрилярними клубками в мозку, епітеліальними клітинами простати, р-клітинами підшлункової залози, остеокластами костей, ретинальними клітинами ока, сарколеммою гладкої та поперечно-смугастої мускулатури. Серед злоякісних клітин СОЗ8 експресується при різних злоякісних захворюваннях крові, включаючи, без обмеження, множинну мієлому, первинний або вторинний лейкоз плазматичних клітин, хронічний лімфоцитарний лейкоз В-клітин, гострий лімфоцитарний лейкозInhibiting/blocking the binding of a COZ8-binding partner to COZ38 may reduce or alter the normal level or type of cellular signaling that occurs when the COZ8-binding partner binds to COZ38 in the absence of inhibition or blocking. Inhibition and blocking also include any measurable reduction in the binding affinity of a POP8-binding partner to POP8 when contacted with a POP8VR, such as an anti-POZ38 antibody, compared to the ligand in the absence of contact with a POP8VR, such as an anti-POZ38 antibody , e.g., blocking the binding of the SHOZ8-binding partner to SOZ38 by at least about 10 95, 20 95, ZO Ob, 4O Fo, 50 U, 60 Fo, 70 95, 80 Zo, 90 Fo, 99 95 or 100 95. "Target cell" means any undesired cell in a subject (e.g., human or animal) that may be targeted by a composition (which includes, for example, a COZ8BP, e.g., a human monoclonal anti-COZ38 antibody and/ or a bispecific or multispecific molecule directed against POP8) of the present invention. In some embodiments, the target cell is a cell expressing or overexpressing COZ8U. Cells that express SOC38 usually include hematopoietic cells such as medullary thymocytes, activated T and B cells, 8095 resting MK cells and monocytes, lymph node proliferative center lymphoblasts, plasma B cells and some intrafollicular cells, dendritic cells, normal bone marrow cells, individual progenitor cells, 50-80 95 umbilical cord blood cells, erythrocytes and platelets. POP8 can also be expressed by non-hematopoietic cells, for example, in the intestine by intraepithelial cells and Iatipargorgia lymphocytes, Purkinje cells and neurofibrillary tangles in the brain, epithelial cells of the prostate, p-cells of the pancreas, bone osteoclasts, retinal cells of the eye, sarcolemma of smooth and transverse striated muscles. Among malignant cells, COZ8 is expressed in various blood malignancies, including but not limited to multiple myeloma, primary or secondary plasma cell leukemia, B-cell chronic lymphocytic leukemia, acute lymphocytic leukemia

В-клітин, макроглобулінемію Валденстрема, первинний системний амілоїдоз, лімфому клітин мантії, пролімфоцитарний/мієлоцитарний лейкоз, гострий мієлоїдний лейкоз, хронічний мієлоїдний лейкоз, фолікулярну лімфому та лейкоз МК-клітин.B-cell, Waldenström macroglobulinemia, primary systemic amyloidosis, mantle cell lymphoma, prolymphocytic/myelocytic leukemia, acute myeloid leukemia, chronic myeloid leukemia, follicular lymphoma, and MK cell leukemia.

Термін "вектор", як застосовується тут, стосується молекули нуклеїнової кислоти, здатної переносити іншу нуклеїнову кислоту, з якою вона зв'язана. Одним типом вектора є плазміда, що стосується кільцевої дволанцюгової ДНК, в яку можна лігувати додатковий сегмент ДНК. Іншим типом вектора є вірусний вектор, де додаткові сегменти ДНК можна лігувати у вірусний геном.The term "vector" as used herein refers to a nucleic acid molecule capable of carrying another nucleic acid to which it is linked. One type of vector is a plasmid, which is circular double-stranded DNA into which an additional segment of DNA can be ligated. Another type of vector is a viral vector, where additional DNA segments can be ligated into the viral genome.

Певні вектори здатні до незалежної реплікації в клітині хазяїна, в яку вони уведені (наприклад, бактеріальні вектори, що мають бактеріальний початок реплікації та епісомальні вектори ссавців). Інші вектори, наприклад, неепісомальні вектори ссавців, інтегруються в геном клітини хазяїна після введення в клітину хазяїна та внаслідок цього реплікуються разом з геномом хазяїна. Далі, певні вектори здатні управляти експресією генів, з якими вони зв'язані на оперативному рівні. Такі вектори називаються тут "рекомбінантними експресуючими векторами" або просто "експресуючими векторами". Звичайно, експресуючі вектори, застосовувані в техніці рекомбінантних ДНК, часто представлені у формі плазмід. Терміни "плазміда" та "вектор" можуть тут застосовуватися взаємозамінно, оскільки плазміда є найпоширенішою формою вектора. Однак винахід охоплює і такі інші форми експресуючих векторів, як вірусні вектори (наприклад, ретровіруси з порушеною реплікацією, аденовіруси та адено-зв'язані віруси), що виконують такі ж функції.Certain vectors are capable of independent replication in the host cell into which they are introduced (eg, bacterial vectors having a bacterial origin of replication and mammalian episomal vectors). Other vectors, such as non-episomal mammalian vectors, integrate into the genome of the host cell after introduction into the host cell and thereby replicate together with the host genome. Further, certain vectors are able to control the expression of genes with which they are linked at the operative level. Such vectors are referred to herein as "recombinant expression vectors" or simply "expression vectors". Of course, expression vectors used in recombinant DNA technology are often presented in the form of plasmids. The terms "plasmid" and "vector" may be used interchangeably here, as the plasmid is the most common form of vector. However, the invention encompasses other forms of expression vectors, such as viral vectors (eg, replication-defective retroviruses, adenoviruses, and adeno-associated viruses), which perform the same functions.

Термін "рекомбінантна клітина хазяїна" (або просто "клітина хазяїна"), як застосовується тут, стосується клітини, в яку уведений рекомбінантний експресуючий вектор. Слід розуміти, що такі бо терміни стосуються не тільки клітин даного суб'єкта, але й потомства таких клітин. Оскільки певні модифікації можуть відбуватися в наступних генераціях через мутації або вплив навколишнього середовища, таке потомство може не бути по суті ідентичним батьківській клітині, але як і раніше охоплюється областю домагань терміна "клітина хазяїна", як застосовується тут. Рекомбінантні клітини хазяїна включають, наприклад, трансфектоми, такі якThe term "recombinant host cell" (or simply "host cell"), as used herein, refers to a cell into which a recombinant expression vector has been introduced. It should be understood that such terms refer not only to the cells of a given subject, but also to the offspring of such cells. Because certain modifications may occur in subsequent generations due to mutations or environmental influences, such progeny may not be substantially identical to the parent cell, but still fall within the scope of the term "host cell" as used herein. Recombinant host cells include, for example, transfectomas such as

СНО клітини, М5/О клітини та лімфоцитарні клітини.CHO cells, M5/O cells and lymphocyte cells.

Термін "регуляторна послідовність" включає промотори, підсилювачі та інші елементи контролю експресії (наприклад, сигнали поліаденілювання), які контролюють транскрипцію або трансляцію генів ланцюгів антитіла. Такі регуляторні послідовності описані, наприклад, вThe term "regulatory sequence" includes promoters, enhancers, and other expression control elements (eg, polyadenylation signals) that control transcription or translation of antibody chain genes. Such regulatory sequences are described, for example, in

Соєдавє!; Сепе Ехргеззіоп Тесппоіоду: Меїподз іп Еплутоіоду 185, Асадетіс Ргев55, Зап Оіедо,Soyedavye!; Sepe Ehrgeziopus Thesppoiodu: Meipodz ip Eplutoiodu 185, Asadetis Rgev55, Zap Oiedo,

СА (1990). Фахівцю в даній області буде ясно, що конструкція експресуючого вектора, включаючи вибір регуляторних послідовностей, може залежати від таких факторів, як вибір клітини хазяїна, яку будуть трансформувати, бажаного рівня експресії білка і т.д. Приклади регуляторних послідовностей для експресії в клітинах хазяїна ссавця включають вірусні елементи, які управляють високими рівнями експресії білка в клітинах ссавців, такі як промотори та/або підсилювачі, вироблені із цитомегаловірусів (СММ), Бітіап міги5 40 (5М40), аденовірусів (наприклад, основний пізній промотор аденовірусу (Аамі Р)) та поліоми. Альтернативно, можна застосовувати регуляторні послідовності невірусного походження, такі як Уубіквітиновий промотор або р-глобуліновий промотор.SA (1990). One skilled in the art will appreciate that the design of the expression vector, including the choice of regulatory sequences, may depend on factors such as the choice of host cell to be transformed, the desired level of protein expression, etc. Examples of regulatory sequences for expression in mammalian host cells include viral elements that drive high levels of protein expression in mammalian cells, such as promoters and/or enhancers produced from cytomegaloviruses (CMVs), Bitiap miga5 40 (5M40), adenoviruses (e.g., major adenovirus late promoter (Aami P)) and polyoma. Alternatively, regulatory sequences of non-viral origin, such as the Ubiquitin promoter or the p-globulin promoter, can be used.

Як застосовується тут, термін "суб'єкт" включає будь-яку людину або будь-яку тварину, відмінну від людини. Термін "тварина, відмінна від людини" включає всіх хребетних, наприклад, ссавців та нессавців, таких як примати, відмінні від людини, вівці, собаки, корови, курчата, земноводні, рептилії і т.д.As used herein, the term "subject" includes any human or any non-human animal. The term "non-human animal" includes all vertebrates, for example, mammals and non-mammals such as non-human primates, sheep, dogs, cows, chickens, amphibians, reptiles, etc.

Різні форми терміна "трансфекція" охоплюють широку розмаїтість технік, звичайно застосовуваних для введення чужорідних ДНК в прокаріотичну або еукаріотичну клітину хазяїна, наприклад, електропорацію, співосадження з фосфатом кальцію, трансфекцію, опосередковануThe various forms of the term "transfection" cover a wide variety of techniques commonly used to introduce foreign DNA into a prokaryotic or eukaryotic host cell, for example, electroporation, co-precipitation with calcium phosphate, transfection mediated

ДЕАЕ-декстраном, ліпофектинову трансфекцію і т.п.DEAE-dextran, lipofectin transfection, etc.

Термін "трансфектома", як застосовується тут, включає рекомбінантні еукаріотичні клітини хазяїна, експресуючі антитіло, такі як СНО клітини, М5/О клітини, НЕК293 клітини, клітини рослин або грибів, включаючи дріжджові клітини.The term "transfectome" as used herein includes recombinant eukaryotic host cells expressing the antibody, such as CHO cells, M5/O cells, HEK293 cells, plant or fungal cells, including yeast cells.

Термін "тварина, відмінна від людини" включає всіх хребетних, наприклад, ссавців та нессавців, таких як примати, відмінні від людини, вівці, собаки, корови, курчата, земноводні, рептилії і т.д.The term "non-human animal" includes all vertebrates, for example, mammals and non-mammals such as non-human primates, sheep, dogs, cows, chickens, amphibians, reptiles, etc.

Термін "трансгенна тварина, відмінна від людини" стосується тварини, відмінної від людини, яка має геном, що включає один чи більше трансгенів важкого ланцюга людини та/або легкого ланцюга людини або трансхромосоми (інтегровані чи неінтегровані в природну геномну ДНК тварини), здатні експресувати повністю людські антитіла. Наприклад, трансгенна миша може мати трансген легкого ланцюга людини та трансген важкого ланцюга людини або трансхромосому важкого ланцюга людини, так що миша при імунізації СОЗ8 антигеном продукує анти-СО38 антитіла людини та/або клітини, які експресують СО38. Трансген важкого ланцюга людини можна інтегрувати в хромосомну ДНК миші, як у випадку трансгенних мишей, наприклад, НИМАБ мишей, таких як НСо7 або НСо12 мишей, або трансген важкого ланцюга людини можна підтримувати поза хромосомою, як у випадку трансхромосомних КМ мишей, як описано в М/002/43478. Такі трансгенні та трансхромосомні миші (всі разом називані "трансгенними мишами") здатні продукувати множинні ізотипи моноклональних антитіл людини до даного антигену (таких як дос, ДА, ІМ, Ід! та/або ЧЕ), зазнаючи М-0-) рекомбінації та переключення ізотипу. Трансгенну тварину, відмінну від людини, можна також застосовувати для продукування антитіл проти специфічного антигену шляхом введення генів, що кодують таке специфічне антитіло, наприклад, за допомогою оперативного зв'язування генів з геном, що експресується в молоці тварини.The term "non-human transgenic animal" refers to a non-human animal having a genome comprising one or more human heavy chain and/or human light chain transgenes or transchromosomes (whether or not integrated into the natural genomic DNA of the animal) capable of expressing fully human antibodies. For example, a transgenic mouse may have a human light chain transgene and a human heavy chain transgene or a human heavy chain transchromosome, so that the mouse produces anti-human CO38 antibodies and/or cells expressing CO38 when immunized with the COZ8 antigen. The human heavy chain transgene can be integrated into mouse chromosomal DNA, as in the case of transgenic mice, for example, NIMAB mice, such as HCo7 or HCo12 mice, or the human heavy chain transgene can be maintained extrachromosomally, as in the case of transchromosomal CM mice, as described in M /002/43478. Such transgenic and transchromosomal mice (collectively referred to as "transgenic mice") are capable of producing multiple isotypes of human monoclonal antibodies to a given antigen (such as dos, DA, IM, Id! and/or CHE) by undergoing M-0-) recombination and switching isotype A transgenic non-human animal can also be used to produce antibodies against a specific antigen by introducing genes encoding such a specific antibody, for example, by operatively linking the genes to a gene expressed in the animal's milk.

Термін "специфічність" тут стосується здатності СОЗ8-зв'язуючого пептиду, такого як анти-The term "specificity" herein refers to the ability of a COZ8-binding peptide, such as an anti-

СО38 антитіло, впізнавати епітоп усередині СОЗ3З8, при цьому маючи тільки малу або ніякої реактивності відносно інших частин СОЗ38 (включаючи інші епітопи, зв'язані іншими СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитілом). Специфічність можна визначати у відносний спосіб в аналізах конкуренції, як описано тут. Специфічність можна більш точно визначати за допомогою будь-яких технік ідентифікації/характеризації епітопа, описаних тут, або їхніх еквівалентів, відомих в даній області.CO38 antibody, recognize an epitope within COZ3Z8, while having only little or no reactivity against other parts of COZ38 (including other epitopes bound by other COZ8BP, for example, anti-COZ38 antibody). Specificity can be determined in a relative manner in competition assays as described herein. Specificity can be more accurately determined using any of the epitope identification/characterization techniques described herein or their equivalents known in the art.

Антитіло, специфічне для даної антигенної детермінанти може, однак, вступати в перехресну реакцію з іншими біологічними молекулами, які можуть бути присутніми у ряді біологічних оточень разом з СОЗ38. Більш типово, СОЗ8ВР, таке як анти-СО38 антитіло, може бо вступати в перехресну реакцію з гомологами СОЗ8 з інших видів. У будь-якому чи в обох випадках, звичайно, такі перехресно реагуючі антитіла є вибірковими для СОЗ38 людини у порівнянні з подібними структурами та/або факторами середовища.An antibody specific for a given antigenic determinant may, however, cross-react with other biological molecules that may be present in a number of biological environments together with POPs38. More typically, COZ8BP, such as an anti-CO38 antibody, may cross-react with COZ8 homologues from other species. In either or both cases, of course, such cross-reacting antibodies are selective for human POP38 compared to similar structures and/or environmental factors.

Термін "вибірково" тут стосується кращого зв'язування СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіла, з окремою областю, мішенню або пептидом; звичайно, областю чи епітопом СОЗ38 на противагу одній чи більше іншим біологічним молекулам, структурам, клітинам, тканинам і т.д. В одному втіленні, СОЗ8ВР, таке як анти-СОЗ38 антитіло за даним винаходом, є вибірковим до порції СОЗ8 у клітин раку товстої кишки (наприклад, анти-СО38 антитіла вибірково зв'язуються з порцією СОЗ8 у порівнянні з іншими компонентами клітини рака товстої кишки).The term "selective" herein refers to preferential binding of a COZ8BP, eg, an anti-COZ38 antibody, to a particular region, target, or peptide; of course, a region or epitope of POP38 as opposed to one or more other biological molecules, structures, cells, tissues, etc. In one embodiment, a COZ8BP, such as an anti-COZ38 antibody of the present invention, is selective for a portion of COZ8 in colon cancer cells (eg, an anti-CO38 antibody selectively binds to a portion of COZ8 compared to other components of a colon cancer cell) .

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом звичайно застосовуються та надаються в значній мірі в ізольованому виді. У значній мірі ізольованою молекулою є молекула, яка є превалюючим видом у композиції, в якій вона находиться, серед класу молекул, до якого вона належить (тобто, вона становить, щонайменше, близько 50 96 типу молекул у композиції, і звичайно становить, щонайменше, близько 70 95, щонайменше, близько 80 956, щонайменше, близько 85 965, щонайменше, близько 90 95, щонайменше, близько 95 95 чи більше цього виду молекул, наприклад, пептидів, у композиції (наприклад, композиція виявляє, щонайменше, близько 98 95 або 99 95 гомогенності по СОЗ8ВР серед всіх присутніх видів пептидів)).The SOZ8VR according to the present invention are usually used and provided largely in isolated form. A substantially isolated molecule is one that is the predominant species in the composition in which it is present, among the class of molecules to which it belongs (ie, it constitutes at least about 50 96 of the type of molecules in the composition, and usually constitutes at least about 70 95, at least about 80 956, at least about 85 965, at least about 90 95, at least about 95 95 or more of this type of molecules, for example peptides, in the composition (for example, the composition detects at least about 98 95 or 99 95 homogeneity according to SOZ8BP among all types of peptides present)).

Ізольована молекула стосується молекули, яка не зв'язана зі значними рівнями (наприклад, більш ніж приблизно 1 95, більш ніж приблизно 2 95, більш ніж приблизно З 95, більш ніж приблизно 5 95) будь-яких сторонніх і небажаних фізіологічних факторів, таких як не-СОЗ38 зв'язуючі біомолекули (або СОЗ8-зв'язуючі молекули), які можуть заважати зв'язуванню та/або активності СОЗ8ВР за даним винаходом), що містяться в клітині або у тварини, де СОЗ8ВР продукується. Ізольована молекула також стосується будь-якої молекули, що пройшла етап очищення завдяки втручанню людини (будь то автоматичне, ручне або обидва). У багатьох різних композиціях, наданих даним винаходом, наприклад, у композиції, яка включає один чи більше фармацевтично прийнятних носіїв, СОЗ8ВР може бути присутнім у відносно невеликій числовій кількості від загальної кількості молекулярних видів у композиції (наприклад, у випадку композиції, що включає велику кількість фармацевтично прийнятного носія, стабілізатора та/або консерванту). У деяких випадках, додаткові пептиди, такі як БСА, можуть бути включені в таку композицію разом з попередньо очищеним СОЗ8ВР. Однак, при тому, що такі додатковіAn isolated molecule refers to a molecule that is not associated with significant levels (eg, greater than about 1 95 , greater than about 2 95 , greater than about C 95 , greater than about 5 95 ) of any extraneous and undesirable physiological factors such as as non-COZ38 binding biomolecules (or COZ8-binding molecules) that can interfere with the binding and/or activity of COZ8BP according to the present invention) contained in the cell or in the animal where COZ8BP is produced. An isolated molecule also refers to any molecule that has undergone a purification step through human intervention (whether automated, manual, or both). In many different compositions provided by the present invention, for example, in a composition that includes one or more pharmaceutically acceptable carriers, SOZ8BP may be present in a relatively small numerical amount of the total number of molecular species in the composition (e.g., in the case of a composition that includes a large amount pharmaceutically acceptable carrier, stabilizer and/or preservative). In some cases, additional peptides, such as BSA, can be included in such a composition together with pre-purified COZ8BP. However, despite the fact that these are additional

Зо компоненти є прийнятними для наміченого застосування СОЗ8ВР, таку композицію можна тим не менш вважати такою, що включає ізольований СОЗ8ВР.If the components are acceptable for the intended use of SOZ8BP, such a composition may nevertheless be considered to include isolated SOZ8BP.

СОЗ8ВР за даним винаходом, звичайно, в основному звільнені від інших СОЗ8ВР, наприклад, СОЗ8ВР, що мають інші антигенні специфічності. Однак даний винахід також надає композицію, що включає кілька СОЗ8ВР із різними специфічностями та характеристиками (наприклад, даний винахід пропонує "коктейль" з СОЗ8ВР, що мають різні характеристики специфічності та/або вибірковості). "Обробка/лікування" означає введення ефективної кількості терапевтично активної сполуки за даним винаходом з метою полегшення, поліпшення або викорінювання (лікування) симптомів або хворобливих станів.The COZ8BPs of the present invention are, of course, largely exempt from other COZ8BPs, for example, COZ8BPs having other antigenic specificities. However, the present invention also provides a composition comprising several SOZ8BPs with different specificities and characteristics (eg, the present invention provides a "cocktail" of SOZ8BPs having different specificity and/or selectivity characteristics). "Treatment/treatment" means the administration of an effective amount of a therapeutically active compound of the present invention for the purpose of alleviating, ameliorating, or eradicating (treating) symptoms or disease states.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 2.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region consisting mainly of the sequence according to "EO IU MO: 2.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 6.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn region consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 6.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з 5ЕБО ІЮ МО: 2, та Мн область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 6.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region consisting primarily of the sequence according to 5EBO IU MO: 2 and a Mn region consisting mainly of the sequence according to "EO IU MO: 6 .

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 3.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOKI1 region consisting mainly of the sequence according to "EO IU MO: 3.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2 область, щоIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP that includes the Mi SOC2 region that

БО складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 4.BO consists mainly of the sequence according to "EO IU MO: 4.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає М СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮО МО: 5.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR, which includes the M SOKZ region consisting mainly of the sequence according to "EO IYUO MO: 5.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 8.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOKI1 region consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 8.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 9.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOK2 region consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 9.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з БЗЕО ІЮ МО: 10.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOKZ region consisting primarily of the sequence according to BZEO IU MO: 10.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОМ області (М. СОН,In one embodiment, the present invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOM region (M. SON,

СОК2 та СОКЗ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з БЕО ІЮ МО: 3, 5ЕО ІЮSOK2 and SOKZ), consisting mainly of sequences according to BEO IU MO: 3, 5EO IU

МО: 4 та ЗЕО ІЮ МО: 5, відповідно.MO: 4 and ZEO IU MO: 5, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК області (МнIn one embodiment, the present invention provides SOZ8VR, which includes Mn SOC region (Mn

СОКІ1, СОК2 та СОКЗ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з «ЕО ІЮ МО: 8,SOKI1, SOK2 and SOKZ), consisting mainly of sequences according to "EO IU MO: 8,

ЗЕО ІЮ МО: 9 та 5ЕО ІЮ МО: 10, відповідно.ZEO IU MO: 9 and 5EO IU MO: 10, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІЮО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4 та 5ЕО ІО МО: 5 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою МІ СОЕ область ів у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZEO IUO MO: 3, 5EO IU MO: 4 and 5EO IO MO: 5 in close proximity to each other (for example, approximately with the discharge of MI SOE region iv in anti-SOZ38 wild-type antibody) in SOZ8VR, and (b) three Mn SOC regions, which independently consist mainly of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9 та 5ЕО ІО МО: 10 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.ZEO IU MO: 8, 5EO IU MO: 9 and 5EO IO MO: 10 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Un SOE regions in wild-type anti-SOZ38 antibodies) in SOZ8BP.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областю СОЗ8ВР. В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗВ8ВР, де Мі та Мн області присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що Мі СОКІ, СОК2 та СОКЗ та Мн СОКІ1, СОК2О таIn a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP that includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP. In another embodiment, the present invention provides SOZV8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate chains in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that Mi SOCI, SOC2 and SOCZ and Mn SOCI1, SOC2O and

СОКЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СО38. В іншому подальшому втіленні, даний винахід пропонуєSOCZ are cooperatively bound so as to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant to CO38. In another further embodiment, the present invention provides

СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки зв'язування антигенних детермінант.COZ8BP, which includes two sets of variable domains (sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains), so that COZ8BP includes two identical binding sites of antigenic determinants.

Очікується, що будь-який з таких СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, що маєAny of such COZ8BPs described in this paragraph are expected to have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity, and other characteristics as an antibody having

Мі область, який включає послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2, і Мн область, що включає послідовність згідно з ЗЕ ІЮ МО: 7, і, відповідно, може застосовуватися для лікування множинної мієломи.The Mi region, which includes the sequence according to ZEO IJU MO: 2, and the Mn region, which includes the sequence according to ZEE IJU MO: 7, and, accordingly, can be used for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 12.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes an Mi region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 12.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 17.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 17.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з 5ЕО ІО МО: 12, та Мн область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 17.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region consisting primarily of the sequence according to 5EO IO MO: 12 and a Mn region consisting primarily of the sequence according to FEO IU MO: 17.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 13.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOKI1 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 13.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 14.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOK2 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 14.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з БЗЕО ІЮ МО: 15.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOKZ region consisting primarily of the sequence according to BZEO IU MO: 15.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 18.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOKI1 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 18.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Ми СОМК2 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 19.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a MySOMK2 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 19.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 20.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOCZ region consisting primarily of the sequence according to FEO IU MO: 20.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОМ області (М. СОН,In one embodiment, the present invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOM region (M. SON,

СОК2 та СОКЗ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: 13, 5ЗЕОSOK2 and SOKZ), consisting mainly of sequences according to the BZEO of the IU MO: 13, 5ZEO

ІО МО: 14 та 5ЕО ІО МО: 15, відповідно.IO MO: 14 and 5EO IO MO: 15, respectively.

БО В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК області (МнBO In one embodiment, the present invention offers SOZ8VR, which includes Mn SOC region (Mn

СОКІ1, СОР2 та СОКУ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з зЗЕО ІЮ МО: 18,SOKI1, СОР2 and SOKU), consisting mainly of sequences according to ZEO IU MO: 18,

ЗЕО ІЮ МО: 19 та БЕО ІО МО: 20, відповідно.ZEO IU MO: 19 and BEO IO MO: 20, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮО МО: 14 та 5ЕО ІЮО МО: 15 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Мі СОК областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZEO IJU MO: 13, 5EO IJU MO: 14 and 5EO IJU MO: 15 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Mi SOC regions in wild-type anti-SOZ38 antibody) in SOZ8VR, and (b) three Mn SOC regions that independently consist mainly of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 19 та 5ЕО ІЮО МО: 20 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.ZEO IJU MO: 18, 5EO IJU MO: 19 and 5EO IJU MO: 20 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Un JOE regions in wild-type anti-SOZ38 antibody) in SOZ8VR.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областю СОЗ8ВР. В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗВ8ВР, де Мі та Мн області присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що М СОКІ, СОК2 та СОКЗ та Мн СОКІ, СОКО таIn a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP that includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP. In another embodiment, the present invention provides SOZV8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate chains in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that M SOCI, SOC2 and SOCZ and Mn SOCI, SOCO and

СОРЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СО38. В іншому подальшому втіленні, даний винахід пропонуєSORZ are cooperatively bound to contribute to selective and/or specific binding of the antigenic determinant to CO38. In another further embodiment, the present invention provides

СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки зв'язування антигенних детермінант.COZ8BP, which includes two sets of variable domains (sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains), so that COZ8BP includes two identical binding sites of antigenic determinants.

Очікується, що будь-який з таких СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, яке маєAny such COZ8BP described in this paragraph is expected to have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity, and other characteristics as an antibody having

Мі область, що включає послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 12, і Ми область, що включає послідовність згідно з ЗЕ ІЮ МО: 17, і, відповідно, може застосовуватися для лікування множинної мієломи.Mi region comprising the sequence according to ZEO IJU MO: 12 and My region including the sequence according to ZEE IJU MO: 17 and, accordingly, can be used for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 22.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 22.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає МП область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 27.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes an MP region consisting primarily of the sequence according to FEO IU MO: 27.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі область, що складається, в основному, з послідовності згідно з 5ЕО ІЮ МО: 22, та Мн область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 27.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi region consisting primarily of a sequence according to 5EO IJ MO:22 and a Mn region consisting primarily of a sequence according to FEO IJ MO:27.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 23.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOKI1 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 23.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає М СОК2 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 24.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a M SOK2 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 24.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 25.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi SOCZ region consisting primarily of the sequence according to the FEO IU MO: 25.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКІ1 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 28.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOKI1 region consisting essentially of the sequence according to FEO IU MO: 28.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2 область, що складається, в основному, з послідовності згідно з БЗЕО ІЮ МО: 29.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOK2 region consisting essentially of the sequence according to BZEO IU MO: 29.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ область, що складається, в основному, з послідовності згідно з ФЕО ІЮ МО: 30.In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOCZ region consisting primarily of the sequence according to the FEO IU MO: 30.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОМ області (М. СОН,In one embodiment, the present invention offers SOZ8VR, which includes Mi SOM region (M. SON,

СОК2 та СОКЗ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: 23, 5ЗЕОSOK2 and SOKZ), consisting mainly of sequences according to the BZEO of the IU MO: 23, 5ZEO

ІО МО: 24 та 5ЕО ІО МО: 25, відповідно.IO MO: 24 and 5EO IO MO: 25, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК області (МнIn one embodiment, the present invention provides SOZ8VR, which includes Mn SOC region (Mn

СОКІ, СОР2 та СОКУ), що складаються, в основному, з послідовностей згідно з 5ЕО ІЮ МО: 28,SOKI, SOR2 and SOKU), consisting mainly of sequences according to 5EO IU MO: 28,

ЗЕО ІЮ МО: 29 та БЕО ІО МО: 30, відповідно.ZEO IU MO: 29 and BEO IO MO: 30, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 23, 5ЕО ІЮО МО: 24 та 5ЕО ІЮО МО: 25 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Мі СОК областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZEO IJU MO: 23, 5EO IJU MO: 24 and 5EO IJU MO: 25 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Mi SOC regions in wild-type anti-SOZ38 antibody) in SOZ8VR, and (b) three Mn SOC regions that independently consist mainly of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 28, 5ЕО ІЮО МО: 19 та 5ЕО ІЮО МО: 30 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.ZEO IJU MO: 28, 5EO IJU MO: 19 and 5EO IJU MO: 30 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Un SJE regions in wild-type anti-SOZ38 antibodies) in SOZ8BP.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областюсСОЗ8ВР. В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗВ8ВР, де Мі та Мн області присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що Мі СОКІ, СОК2 та СОКЗ та Мн СОКІ1, СОКО таIn a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP, which includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP. In another embodiment, the present invention provides SOZV8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate chains in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that Mi SOCI, SOC2 and SOCZ and Mn SOCI1, SOCO and

СОКЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СО38. В іншому подальшому втіленні, даний винахід пропонуєSOCZ are cooperatively bound so as to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant to CO38. In another further embodiment, the present invention provides

СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки зв'язування антигенних детермінант.COZ8BP, which includes two sets of variable domains (sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains), so that COZ8BP includes two identical binding sites of antigenic determinants.

Очікується, що будь-який з таких СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, яке маєAny such COZ8BP described in this paragraph is expected to have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity, and other characteristics as an antibody having

Мі область, що включає послідовність згідно з 5ЕБЕО ІЮ МО: 22 і Мн область, що включає послідовність згідно з ЗЕБЕО ІЮ МО: 27, і, відповідно, може застосовуватися для лікування 60 множинної мієломи.The Mi region comprising the sequence according to 5EBEO IU MO: 22 and the Mn region comprising the sequence according to ZEBEO IU MO: 27 and, accordingly, can be used to treat 60 multiple myeloma.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК1, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: З або 5ЕО ІЮО МО: 13, або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes Mi SOC1 consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: Z or 5EO IUO MO: 13, or 5EO IU

МО: 23, де один чи більше М-кінцевих залишків та/або один, два чи три С-кінцевих амінокислотних залишків відсутні.MO: 23, where one or more M-terminal residues and/or one, two or three C-terminal amino acid residues are absent.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОК2, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 4 або 5ЕО ІЮО МО: 14, або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes Mi SOC2 consisting essentially of a sequence according to "EO IU MO: 4 or 5EO IUO MO: 14 or 5EO IU

МО: 24, де М-кінцевий залишок та/або один, два чи три С-кінцевих амінокислотних залишки відсутні.MO: 24, where the M-terminal residue and/or one, two or three C-terminal amino acid residues are missing.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мі СОКЗ, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 5 або 5ЕО ІЮО МО: 15, або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes Mi SOCZ consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 5 or 5EO IUO MO: 15, or 5EO IU

МО: 25, де М-кінцевий залишок та/або один, два, три чи чотири С-кінцевих амінокислотних залишки відсутні.MO: 25, where the M-terminal residue and/or one, two, three or four C-terminal amino acid residues are absent.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК1, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІЮО МО: 18, або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP that includes Mn SOC1 consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 8 or 5EO IUO MO: 18 or 5EO IU

МО: 28, де один, два, три чи чотири М-кінцевих залишки та/або один, два, три чи чотири С- кінцевих амінокислотних залишки відсутні.MO: 28, where one, two, three or four M-terminal residues and/or one, two, three or four C-terminal amino acid residues are absent.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОК2, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІЮО МО: 19, або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP that includes Mn SOC2 consisting essentially of the sequence according to "EO IU MO: 9 or 5EO IUO MO: 19 or 5EO IU

МО: 29, де один, два, три, чотири чи п'ять М-кінцевих залишків та/або один, два, три, чотири, п'ять чи шість С-кінцевих амінокислотних залишків відсутні.MO: 29, where one, two, three, four or five M-terminal residues and/or one, two, three, four, five or six C-terminal amino acid residues are absent.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає Мн СОКЗ, що складається, в основному, з послідовності згідно з «ЕО ІЮ МО: 10 або 5ЕО ІО МО: 20, або ЗЕОIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes Mn SOCZ consisting mainly of the sequence according to "EO IU MO: 10 or 5EO IO MO: 20, or ZEO

ІО МО: 30, де один, два чи три М-кінцевих залишки та/або один, два, три чи чотири С-кінцевих амінокислотних залишки відсутні.IO MO: 30, where one, two or three M-terminal residues and/or one, two, three or four C-terminal amino acid residues are missing.

Даний винахід також надає СОЗ8ВР, де такі "усічені" послідовності СОК комбіновані одна з одною та/або іншими послідовностями СОЕ, описаними тут.The present invention also provides SOZ8BP wherein such "truncated" SOC sequences are combined with each other and/or other COE sequences described herein.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІО МО: 3, 5ЕО ІЮ МО: 4 та 5ЕО ІО МО: 5 у тісній близькості одна до одної (наприклад,ZEO IO MO: 3, 5EO IU MO: 4 and 5EO IO MO: 5 in close proximity to each other (for example,

Зо приблизно з розрядкою Мі СОК областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZo approximately with the discharge of the Mi SOC regions in the anti-COZ38 wild-type antibody) in COZ8BP, and (b) three Mn SOC regions, which independently consist mainly of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 8, 5ЕО ІЮ МО: 9 та 5ЕО ІО МО: 10 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.ZEO IU MO: 8, 5EO IU MO: 9 and 5EO IO MO: 10 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Un SOE regions in wild-type anti-SOZ38 antibodies) in SOZ8BP.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областю СОЗ8ВР.In a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP that includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP.

В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, де Мі та Мн області присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що Мі СОК1, СОКІ2 таIn another embodiment, the present invention provides SOZ8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate chains in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that Mi SOC1, SOCI2 and

СОмЗ ї Мн СОКІ, СОК2 та СОКЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СОЗ38. В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки зв'язування антигенних детермінант. Очікується, що будь-який з таких СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІО МО: 2 та Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 7. В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зCOmZ and Mn SOCI, SOC2 and SOCZ are cooperatively bound to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant on SOC38. In a further embodiment, the present invention offers SOZ8BP, which includes two sets of variable domains (sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains), so that SOZ8BP includes two identical binding sites of antigenic determinants. Any of such COZ8BP described in this paragraph is expected to have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity, and other characteristics as an antibody having the Mi sequence according to BEO IO MO: 2 and the Mn sequence according to BEO IO MO: 7. In one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 13, 5ЕО ІЮО МО: 14 та 5ЕО ІЮО МО: 15 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Мі СОК областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZEO IJU MO: 13, 5EO IJU MO: 14 and 5EO IJU MO: 15 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Mi SOC regions in wild-type anti-SOZ38 antibody) in SOZ8VR, and (b) three Mn SOC regions that independently consist mainly of sequences according to

БО ЗЕО ІЮ МО: 18, 5ЕО ІЮО МО: 19 та 5ЕО ІЮО МО: 20 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.BO ZEO IJU MO: 18, 5EO IJU MO: 19 and 5EO IJU MO: 20 in close proximity to each other (eg, approximately with the discharge of Un JOE regions in wild-type anti-SOZ38 antibodies) in SOZ8VR.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областю СОЗ8ВР.In a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP that includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP.

В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, де Мі та Мн області присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що Мі СОК1, СОКІ2 таIn another embodiment, the present invention provides SOZ8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate chains in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that Mi SOC1, SOCI2 and

СОРЗ та Мн СОКІ, СОК2О та СОКЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СОЗ38. В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки бо зв'язування антигенних детермінант. Очікується, що будь-який з таких СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, яке має Мі область, що включає послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 12, та Мн область, що включає послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 17.SORZ and Mn SOKI, SOK2O and SOKZ are cooperatively bound to contribute to the selective and/or specific binding of the antigenic determinant on SOZ38. In a further embodiment, the present invention offers SOZ8BP, which includes two sets of variable domains (sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains), so that SOZ8BP includes two identical sites for binding antigenic determinants. Any of such COZ8BP described in this paragraph is expected to have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity and other characteristics as an antibody having an Mi region comprising the sequence according to ZEO IU MO: 12, and Mn the area that includes the sequence according to ZEO IU MO: 17.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає (а) три Мі СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP comprising (a) three Mi SOC regions that independently consist primarily of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 23, 5ЕО ІЮО МО: 24 та 5ЕО ІЮО МО: 25 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Мі СОК областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР, і (б) три Мн СОК області, які незалежно складаються, в основному, з послідовностей згідно зZEO IJU MO: 23, 5EO IJU MO: 24 and 5EO IJU MO: 25 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Mi SOC regions in wild-type anti-SOZ38 antibody) in SOZ8VR, and (b) three Mn SOC regions that independently consist mainly of sequences according to

ЗЕО ІЮ МО: 28, 5ЕО ІЮО МО: 29 та 5ЕО ІЮО МО: 30 у тісній близькості одна до одної (наприклад, приблизно з розрядкою Ун СОЄ. областей у анти-СОЗ38 антитіла дикого типу) в СОЗ8ВР.ZEO IJU MO: 28, 5EO IJU MO: 29 and 5EO IJU MO: 30 in close proximity to each other (e.g., approximately with the discharge of Un SJE. regions in anti-SOZ38 wild-type antibodies) in SOZ8VR.

В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає гнучкий лінкер, розташований між Мі областю та Мн областю СОЗ8ВР.In a further embodiment, the present invention provides SOZ8BP that includes a flexible linker located between the Mi region and the Mn region of SOZ8BP.

В іншому втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, де Мі та Мн області, присутні на окремих ланцюгах у скрученому білку імуноглобуліну та орієнтовані таким чином, що Мі СОН,In another embodiment, the present invention provides SOZ8BP, where the Mi and Mn regions are present on separate strands in the folded immunoglobulin protein and are oriented such that the Mi SON,

СОК2 та СОКЗ та Мн СОКІ, СОК2 та СОКЗ кооперативно зв'язані так, щоб вносити вклад у вибіркове та/"або специфічне зв'язування антигенної детермінанти на СО38. В наступному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає два набори варіабельних доменів (набори зв'язаних Мн та Мі доменів на зв'язаних окремих ланцюгах), так що СОЗ8ВР включає дві ідентичних ділянки зв'язування антигенних детермінант. Очікується, що будь-який з такихSOC2 and SOCZ and Mn SOCI, SOC2 and SOCZ are cooperatively bound to contribute to the selective and/or specific binding of an antigenic determinant on CO38. In a further embodiment, the present invention provides a SOC8VR that includes two sets of variable domains ( sets of linked Mn and Mi domains on linked separate chains) so that SOZ8BP includes two identical binding sites for antigenic determinants. It is expected that any of these

СОЗ8ВР, описаних у цьому абзаці, щонайменше, почасти має подібну специфічність до епітопа, вибірковість та інші характеристики, як антитіло, яке має Мі область, що включає послідовність згідно з ФЕО ІО МО: 22 і Мн область, що включає послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 27.The COZ8BPs described in this paragraph have, at least in part, similar epitope specificity, selectivity, and other characteristics as an antibody having a Mi region including a sequence according to FEO IO MO: 22 and a Mn region including a sequence according to BEO IU MO: 27.

Даний винахід також надає СОЗ8ВР, які включають функціональні варіанти Мі області, Мн області або одного чи більше СОЕ антитіл прикладів. Функціональний варіант Мі, Мн або СОК, застосовані у складі СОЗ8ВР, усе ще дозволяє СЮОЗ8ВР зберігати, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, 60 95, 70 95, 80 95, 90 9», 95 95 чи більше) спорідненості/авідності та/або специфічності/вибірковості батьківського антитіла і в деяких випадках, наприклад, такийThe present invention also provides SOZ8BPs that include functional variants of the Mi region, the Mn region, or one or more ESO antibodies of the examples. A functional variant of Mi, Mn, or SOC applied in the composition of SOZ8BP still allows the СЯОЗ8BP to retain at least a significant part (at least about 50 95, 60 95, 70 95, 80 95, 90 9", 95 95 or more) of affinity/ avidity and/or specificity/selectivity of the parent antibody and in some cases, for example, such

СОЗ8ВР може мати більшу спорідненість, вибірковість та/або специфічність, ніж батьківське антитіло.COZ8BP may have higher affinity, selectivity and/or specificity than the parent antibody.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант Мі, що складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, близько 50 95, наприклад, щонайменше, близько 60 95, наприклад, щонайменше, близько 70 95, наприклад, щонайменше, близько 75 95, наприклад, щонайменше, близько 80 95, наприклад, щонайменше, біля 85 95, наприклад, щонайменше, близько 90 95, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з 5хЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 12, або 5ЕО ІОIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mi variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g. at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 95, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to 5xEO IU MO: 2 or 5EO IO MO: 12, or 5EO IO

МО: 22, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, 60 9, 70 9, 80 95, 90 95, 9595 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант Мі послідовності згідно з ЗЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 12, або 5ЕО ІО МО: 22, відповідно, наприклад, антитіло, яке включає Мі послідовність згідно з зЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовності згідно з БЕО ІЮО МО: 7, та антитіло, яке включає Мі послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 12 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17, і антитіло, яке включає Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮMO: 22, wherein the SOZ8VR has at least a significant portion (at least about 50 95, 60 9, 70 9, 80 95, 90 95, 9595 or more) of the epitope-binding characteristics of an antibody having a Mi sequence variant according to ZEO IO MO: 2 or 5EO IO MO: 12, or 5EO IO MO: 22, respectively, for example, an antibody that includes an Mi sequence according to zEO IJO MO: 2 and a Mn sequence according to BEO IJO MO: 7, and an antibody, which includes a Mi sequence according to BEO IJU MO: 12 and a Mn sequence according to 5EO IJ MO: 17, and an antibody that includes a Mi sequence according to ZEO IJ

МО: 22 та Мн послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 27, відповідно.MO: 22 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 27, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант М. СОКІ1, що складається, в основному, з послідовності, яка має щонайменше близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше, близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: З або ЗЕО ІЮ МО: 13, або 5ЕО ІЮ МО: 23, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, бо б, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант М. СОМ послідовності згідно з БЕО ІЮ МО: З або 5ЕО ІЮО МО: 13, або 5БЕО ІЮ МО: 23, відповідно, наприклад, антитіла, що включає Мі послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a M. SOKI1 variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to BZEO IU MO: C or ZEO IU MO : 13, or 5EO IU MO: 23, where SOZ8VR has at least a significant part (at least about 50 95, but b, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 or more) of the epitope-binding characteristics of the antibody, which has a variant of the M. COM sequence according to BEO IU MO: C or 5EO IUO MO: 13 or 5BEO IU MO: 23, respectively, for example, antibodies that include the Mi sequence according to ZEO IU MO: 2 or 5EO I

МО: 12, або 5ЕО ІО МО: 22, відповідно, наприклад, антитіло, що має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 2 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 7, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 12 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 17, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27, відповідно.MO: 12, or 5EO IO MO: 22, respectively, for example, an antibody having a Mi sequence according to 5EO IO MO: 2 and a Mn sequence according to 5EO IUO MO: 7, or an antibody that includes an Mi sequence according to BEO IUO MO: 12 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 17, or an antibody that includes Mi sequence according to "EO IU MO: 22 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 27, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант М. СОК2, що складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше близько 50 95, наприклад, 60 щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: 4 або ЗЕО ІЮ МО: 14, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, 60 бо, 70 Уо, 80 9, 9095, 9595 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант М.СОВН2 послідовності згідно з 5ЕО І МО: 4 або 5ЕО ІО МО: 14, або 5ЕО ІО МО: 24, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з 5ХЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 12, або 5ЕО ІО МО: 22, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з Ф»ЕОIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a M. SOK2 variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., 60 at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g. at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to BZEO IU MO: 4 or ZEO IU MO: 14, where SOZ8VR has at least a significant part (at least about 50 95, 60 bo, 70 Uo, 80 9, 9095, 9595 or more) of the epitope-binding characteristics of an antibody that has a M.SOVN2 sequence variant according to with 5EO AND MO: 4 or 5EO IO MO: 14, or 5EO IO MO: 24, respectively, for example, an antibody that includes an Mi sequence according to 5EO IU MO: 2 or 5EO IO MO: 12, or 5EO IO MO: 22 , respectively, for example, an antibody that includes the Mi sequence according to F»EO

ІО МО: 2 та Мп послідовність згідно з зЗЕО ІО МО: 7, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з ЖЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з зЕО ІЮ МО: 27, відповідно.IO MO: 2 and Mp sequence according to ZEO IO MO: 7, or an antibody that includes Mi sequence according to ZEO IU MO: 12 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 17, or an antibody that includes Mi sequence according to FEO IU MO: 22 and Mn sequence according to the IU MO: 27, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант М. СОКЗ, що складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: 5 або ЗЕО ІЮ МО: 15, або 5ЕО ІЮ МО: 25, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, бо б, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант М. СОКЗ послідовності згідно з БЕО ІЮ МО: 5 або 5ЕО ІЮО МО: 15, або 5БЕО ІЮ МО: 25, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a M. SOKZ variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to BZEO IU MO: 5 or ZEO IU MO : 15, or 5EO IU MO: 25, where SOZ8VR has at least a significant part (at least about 50 95, for example, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 or more) of the epitope-binding characteristics of the antibody, which has a variant of the M. SOCZ sequence according to BEO IU MO: 5 or 5EO IUO MO: 15 or 5BEO IU MO: 25, respectively, for example, an antibody that includes the Mi sequence according to ZEO IU MO: 2 or 5EO IU

МО: 12, або 5ЕО ІО МО: 22, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 7, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 12 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 17, або антитіла, яке включає Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27, відповідно.MO: 12, or 5EO IO MO: 22, respectively, for example, an antibody that includes a Mi sequence according to ZEO IUO MO: 2 and a Mn sequence according to 5EO IUO MO: 7, or an antibody that includes an Mi sequence according to BEO IUO MO: 12 and Mn sequence according to BEO IU MO: 17, or an antibody that includes Mi sequence according to "EO IU MO: 22 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 27, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант Мн, що складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменшеIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least

Ко) близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше біля 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот послідовності згідно з 5Ж2ЕО ІЮ МО: 7 або 5ЕО ІЮО МО: 17, або 5ЕО ІОKo) about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of the sequence according to 5Ж2ЕО ИЙЙ MO: 7 or 5ЕО ЙЙО МО: 17 , or 5EO IO

МО: 27, де СОЗВВР має щонайменше значну частину (щонайменше близько 50 9», 60 9, 70 9, 80 95, 90 95, 9595 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант Мн послідовності згідно з 5ЕО І МО: 7 або 5ЕО ІО МО: 12, або 5ЕО ІО МО: 27, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно 3 5ЕО ІЮ МО: 7 та Мі послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 2, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з 5ХЕО ІЮ МО: 17 та М. послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 12, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЗЕОMO: 27, wherein the SOZVVR has at least a significant portion (at least about 50 9", 60 9, 70 9, 80 95, 90 95, 9595 or more) of the epitope-binding characteristics of an antibody having a Mn sequence variant according to 5EO I MO: 7 or 5EO IO MO: 12 or 5EO IO MO: 27, respectively, for example, an antibody that includes a Mn sequence according to 3 5EO IU MO: 7 and a Mi sequence according to BEO IUO MO: 2, or an antibody that includes Mn sequence according to 5HEO IU MO: 17 and M. sequence according to ZEO IJU MO: 12, or antibodies that include Mn sequence according to ZEO

ІО МО: 27 та Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22, відповідно.IO MO: 27 and Mi sequence according to ZEO IU MO: 22, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант Мн СОВІ1, що складається, в основному, з послідовності, яка має, щонайменше, близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з «ЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІО МО: 18 або 5ЗЕО ІО МО: 28, де СОЗ8ВР має щонайменше значну частину (щонайменше близько 50 95, бо б, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант Мн СОК!І послідовності згідно з БЕО ІЮ МО: 8 або 5ЕО ІО МО: 18, або 5ЕО ІЮ МО: 28, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з зЕО ІЮ МО: 7 або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a Mn SOVI1 variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to "EO IU MO: 8 or 5EO IO MO: 18 or 5ZEO IO MO: 28, wherein the SOZ8VR has at least a significant portion (at least about 50 95, for example, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 or more) of the epitope-binding characteristics of the antibody having the variant Mn SOC!I sequence according to BEO IU MO: 8 or 5EO IU MO: 18, or 5EO IU MO: 28, respectively, for example, an antibody that includes Mn sequence according to zEO IU MO: 7 or 5EO IU

БО МО: 17, або 5ЕО І МО: 27, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 7 або 5ЕО ІЮ МО: 17, або 5ЕО ІЮО МО: 27, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з «ЕО ІО МО: 7 та Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 2, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 17 та Мі послідовність згідно з 5ЕО ІО МО: 12, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27 та Мі послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 22, відповідно.BO MO: 17, or 5EO AND MO: 27, respectively, for example, an antibody that includes a Mn sequence according to 5EO IJU MO: 7 or 5EO IJU MO: 17, or 5EO IJU MO: 27, respectively, for example, an antibody that includes Mn sequence according to "EO IU MO: 7 and Mi sequence according to BEO IU MO: 2, or antibodies, which includes Mn sequence according to ZEO IUO MO: 17 and Mi sequence according to 5EO IU MO: 12, or antibodies, which includes Mn sequence according to ZEO IU MO: 27 and Mi sequence according to FEO IU MO: 22, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант Мн СОК2, що складається, в основному, з послідовності, яка має щонайменше близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, 60 наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з БЗЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІО МО: 19, або 5ЕО ІЮ МО: 29, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, бо б, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант Мн СОКІ1 послідовності згідно з «хЕО ІЮ МО: 9 або 5ЕО ІО МО: 19 або 5ЕО ІЮ МО: 29, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ХЕО ІЮО МО: 7 або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP that includes a Mn SOC2 variant consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, 60 for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to BZEO IU MO: 9 or 5EO IO MO: 19, or 5EO IU MO: 29, where SOZ8VR has at least a significant part (at least about 50 95, but b, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 or more) of the epitope-binding characteristics of an antibody which has a Mn SOKI1 variant of the sequence according to "xEO IU MO: 9 or 5EO IO MO: 19 or 5EO IU MO: 29, respectively, for example, an antibody that includes the Mn sequence according to XEO IUO MO: 7 or 5EO IU

МО: 17 або 5ЕО ІО МО: 27, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 7 та Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 2, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЖЕО ІЮ МО: 17 та Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 12, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 27 та Мі послідовність згідно з ФЕО ІЮО МО: 22, відповідно.MO: 17 or 5EO IO MO: 27, respectively, for example, an antibody that includes a Mn sequence according to ZEO IJU MO: 7 and a Mi sequence according to 5EO IJ MO: 2, or an antibody that includes a Mn sequence according to ZEO IJU MO : 17 and the Mi sequence according to 5EO IU MO: 12, or an antibody that includes the Mn sequence according to BEO IU MO: 27 and the Mi sequence according to FEO IJU MO: 22, respectively.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, який включає варіант Мн СОКЗ, що складається, в основному, з послідовності, яка має щонайменше близько 50 95, наприклад, щонайменше близько 60 95, наприклад, щонайменше близько 70 95, наприклад, щонайменше близько 75 95, наприклад, щонайменше близько 80 95, наприклад, щонайменше близько 85 95, наприклад, щонайменше близько 90 956, наприклад, щонайменше близько 95 95 ідентичності послідовності амінокислот будь-якої з послідовностей згідно з БЕО ІЮ МО: 10 або 5ЕО ІЮ МО: 20 або 5ЕО ІЮ МО: 30, де СОЗ8ВР має, щонайменше, значну частину (щонайменше, близько 50 95, бо б, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 чи більше) епітоп-зв'язуючих характеристик антитіла, яке має варіант Мн СОКЗ послідовності згідно з БЗЕО ІЮ МО: 10 або 5ЕО ІЮ МО: 20 або 5ЕО ІЮ МО: 30, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ХЕО ІЮО МО: 7 або 5ЕО ІЮIn one embodiment, the present invention provides a SOZ8VR that includes a variant Mn SOCZ consisting essentially of a sequence having at least about 50 95, e.g., at least about 60 95, e.g., at least about 70 95, e.g., at least about 75 95, for example, at least about 80 95, for example, at least about 85 95, for example, at least about 90 956, for example, at least about 95 95 amino acid sequence identity of any of the sequences according to BEO IU MO: 10 or 5EO IU MO: 20 or 5EO IU MO: 30, where SOZ8VR has at least a significant portion (at least about 50 95, for example, 70 95, 80 95, 90 95, 95 95 or more) of the epitope-binding characteristics of the antibody having the variant Mn SOCZ sequence according to BZEO IU MO: 10 or 5EO IU MO: 20 or 5EO IU MO: 30, respectively, for example, an antibody that includes Mn sequence according to KEO IUO MO: 7 or 5EO IU

МО: 17, або 5ЕО І МО: 27, відповідно, наприклад, антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7 та Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з ЖЕО ІЮ МО: 17 та Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 12, або антитіла, яке включає Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 27 та Мі послідовність згідно з ФЕО ІЮО МО: 22, відповідно.MO: 17, or 5EO AND MO: 27, respectively, for example, an antibody that includes a Mn sequence according to ZEO IU MO: 7 and a Mi sequence according to ZEO IUO MO: 2, or an antibody that includes a Mn sequence according to ZEO IU MO: 17 and the Mi sequence according to 5EO IU MO: 12, or an antibody that includes the Mn sequence according to BEO IU MO: 27 and the Mi sequence according to FEO IJU MO: 22, respectively.

Відсоток ідентичності між двома послідовностями є функцією числа ідентичних положень, поділеного на довжину послідовності (тобто 95 гомології - число ідентичних положень/загальне число положень х 100), беручи до уваги число розривів і довжину кожного пролому, які необхідно ввести для оптимального вирівнювання двох послідовностей. Порівняння послідовностей і визначення відсотка ідентичності двох послідовностей досягається із застосуванням математичних алгоритмів, як описано в нижченаведених прикладах, які не є обмежуючими.The percent identity between two sequences is a function of the number of identical positions divided by the length of the sequence (ie, 95 homologies - number of identical positions/total number of positions x 100), taking into account the number of breaks and the length of each break that must be introduced to optimally align the two sequences. Comparing the sequences and determining the percent identity of the two sequences is achieved using mathematical algorithms, as described in the following non-limiting examples.

Відсоток ідентичності між двома нуклеотидними послідовностями можна визначати за допомогою програми ЗАР програмного пакета СО (доступного на пер: /Лимлм.дс9.сот) із застосуванням МУУЗДарапа, матриці СМР, ваги пролому 40, 50, 60, 70 чи 80 і ваги довжини 1, 2,The percentage of identity between two nucleotide sequences can be determined using the ZAR program of the SO software package (available at: /Lymlm.ds9.sot) using MUUZDarap, the CMP matrix, the break weight of 40, 50, 60, 70 or 80 and the length weight of 1, 2,

З, 4, 5 чи 6. Відсоток ідентичності між двома нуклеотидними послідовностями визначають за допомогою алгоритму Е. Меуег5 апа у. МіПег (Сотриї. Аррі. Віовсі., 4: 11-17 (1989), включеного в програму АГІСМ (версія 2.0), застосовуючи таблицю ваги залишків (меїдні гезідце Таріє)C, 4, 5 or 6. The percentage of identity between two nucleotide sequences is determined using the algorithm of E. Meueg5 apa y. MiPeg (Sotryi. Arri. Viovsi., 4: 11-17 (1989), included in the program AGISM (version 2.0), using the table of the weight of residues (Meidni gezidce Tariye)

РАМ120, штраф за довжину пролому (а дар Іепдій репаку) 12 і штраф за пролом (а дар репакну) 4. Додатково, відсоток ідентичності між двома амінокислотними послідовностями можна визначити із застосуванням алгоритму Меєаієтап апа Ууип5сп, У. Мої. Віої. 48, 444-453 (19790), включеного в програму САР пакета ССО (доступного на пер: /лмимли.дсод.сот), із застосуванням матриці Віо55ит 62 або матриці РАМ250, ваги пролому 16, 14, 12, 10, 8, 6 чи 4 і ваги довжини 1, 2,3,4,5чи6.РАМ120, the penalty for the length of the break (and the gift of Iepdiy repak) is 12 and the penalty for the break (and the gift of repaknu) is 4. In addition, the percentage of identity between two amino acid sequences can be determined using the algorithm Meeaietap apa Uuip5sp, U. Moi. Vioi 48, 444-453 (19790), included in the SAR program of the SSO package (available at: /lmymly.dsod.sot), using the Vio55it 62 matrix or the RAM250 matrix, breaking weights 16, 14, 12, 10, 8, 6 or 4 and weights of length 1, 2, 3, 4, 5 or 6.

Послідовності нуклеїнової кислоти та білка згідно з даним винаходом далі можна застосовувати як "послідовності запиту" для проведення пошуку по загальнодоступних базах даних для того, щоб, наприклад, ідентифікувати споріднені послідовності. Такі пошуки можна проводити із застосуванням програм ВІ А5ТМ і ХВГА5Т (версія 2.0) по Айбспи! еї аїЇ. (1990) 9.Nucleic acid and protein sequences of the present invention can further be used as "query sequences" to search public databases to, for example, identify related sequences. Such searches can be carried out using the programs VI A5TM and KhVGA5T (version 2.0) according to Aibspa! oh oh oh (1990) 9.

Мої. Віої. 215: 403-10. Пошук нуклеотидів із застосуванням ВГАБТ можна проводити за допомогою програми ВГАБТМ з параметрами підрахунок-100, довжина слова-12 для одержання нуклеотидних послідовностей, гомологічних молекулам нуклеїнових кислот згідно з даним винаходом. Пошук білків із застосуванням ВГАБТ можна проводити за допомогою програми ХВІАБТ 3 параметрами ппідрахунок-50, довжина слова-3 для одержання амінокислотних послідовностей, гомологічних молекулам білків згідно з даним винаходом. Для одержання вирівнювань із проломами із цілями порівняння, можна застосовувати СаррейMy. Vioi 215: 403-10. The search for nucleotides using VGABT can be carried out using the VGABTM program with parameters count-100, word length-12 to obtain nucleotide sequences homologous to nucleic acid molecules according to the present invention. The search for proteins using VGABT can be carried out using the KhVIABT program with 3 parameters pcount-50, word length-3 to obtain amino acid sequences homologous to protein molecules according to the present invention. Surrey can be used to obtain faulted alignments for comparison purposes

ВІАБТ, як описано в АйЙбспи! еї аїЇ.,, (1997) Мисієїс Асій5 Кев5. 25 (17): 3389-3402. При застосуванні програм ВІ А5Т та Сарреа ВГА5Т можна застосовувати параметри за умовчанням відповідних програм (тобто, ХВІ А5Т та ВІ АЗТМ). Див. пер: /Лумлу. побБі. піт. пій.дом.VIABT, as described in AiYbspa! ей айЙ.,, (1997) Mysieis Asii5 Kev5. 25 (17): 3389-3402. When using the VI A5T and Sarrea VGA5T programs, you can use the default parameters of the corresponding programs (ie, XVI A5T and VI AZTM). See trans: /Lumlu. poby sweat. house

Послідовність СОМ варіантів може відрізнятися від послідовностей СОМ батьківського 60 антитіла найбільш консервативними заміщеннями, наприклад, щонайменше, близько 35 95,The COM sequence of the variants may differ from the COM sequences of the parent 60 antibody by the most conservative substitutions, for example, at least about 35 95,

близько 50 95 чи більше, близько 60 95 чи більше, близько 70 95 чи більше, близько 75 905 чи більше, близько 80 95 чи більше, близько 85 95 чи більше, близько 90 95 чи більше, близько 95 95 чи більше (наприклад, приблизно 65-99 95) заміщень у варіантів є консервативними заміщеннями амінокислотних залишків. У контексті даного винаходу, консервативні заміщення можна визначити як заміщення усередині класів амінокислот, наведених в одній чи більше з наступних таблиць:about 50 95 or more, about 60 95 or more, about 70 95 or more, about 75 905 or more, about 80 95 or more, about 85 95 or more, about 90 95 or more, about 95 95 or more (eg approximately 65-99 95) substitutions in variants are conservative substitutions of amino acid residues. In the context of the present invention, conservative substitutions may be defined as substitutions within the classes of amino acids listed in one or more of the following tables:

Класи амінокислотних залишків для консервативних заміщеньClasses of amino acid residues for conservative substitutions

Класи альтернативних консервативних заміщень амінокислотних залишків 2 ФфАсп)///////7777777 |глуУуЄЇ 7 Її 8 ФАсн(Му 77777777 |Іглн(ДГ///// С Ї77111111111111111111111111 74 ФАР) (лю Її 6 |Фенє) 77777777 |тире//////7777777777// ІтроюГ// СClasses of alternative conservative substitutions of amino acid residues 2 FfAsp)///////7777777 |gluUuYEI 7 Her 8 FAsn(Mu 77777777 |Igln(DG///// С Ю7711111111111111111111111111 74 PHAR) (lyu Her 6 |Fenye) 77777777 |dash //////7777777777// ItroyuG// S

Альтернативна фізична та функціональна класифікація амінокислотних залишківAlternative physical and functional classification of amino acid residues

Угрупування більш консервативного заміщення включають: валін-лейцин-ізолейцин, фенілаланін-тирозин лізин-аргінін, аланін-валін та аспарагін-глутамін. Додаткові групи амінокислот також можна утворити із застосуванням принципів, описаних, наприклад, вMore conservative substitution groups include: valine-leucine-isoleucine, phenylalanine-tyrosine lysine-arginine, alanine-valine, and asparagine-glutamine. Additional groups of amino acids can also be formed using the principles described, for example, in

Стеідніоп (1984) Ргоївїп5: бБіписішге апа Моїіесшаг Ргорепіє5з (24 Еа. 1993), М.Н. Егеетап апаSteidniop (1984) Rgoivip5: bBipisishge apa Moiiesshag Rgorepie5z (24 Ea. 1993), M.N. Egeetap apa

Сотрапу.Sotrapu

В одному втіленні даного винаходу, консервативність в термінах властивостей гідрофобності/гідрофільності та ваги/розміру залишків також, в основному, зберігається у варіантів СОК у порівнянні з СОК антитіла прикладів (наприклад, клас ваги, оцінка гідрофобності чи обидва у послідовностей зберігаються, щонайменше, на приблизно 50 95, щонайменше, на приблизно 6095, щонайменше, на приблизно 7095, щонайменше, на приблизно 7595, щонайменше, на приблизно 8095, щонайменше, на приблизно 85 95, щонайменше, на приблизно 90 956, щонайменше, на приблизно 95 95 чи більше (наприклад, приблизно 65-99 95). Наприклад, консервативні заміщення залишків можуть також або альтернативно грунтуватися на заміщенні за принципом збереження сильної або слабкої групи та за принципом ваги груп, як відомо в даній області.In one embodiment of the present invention, conservatism in terms of hydrophobicity/hydrophilicity and residue weight/size properties is also substantially preserved in variants of the SOC as compared to the SOC of the example antibodies (eg, weight class, hydrophobicity score, or both of the sequences are conserved at least at about 50 95 at least about 6095 at least about 7095 at least about 7595 at least about 8095 at least about 85 95 at least about 90 956 at least about 95 95 or more (eg, about 65-99 95.) For example, conservative substitutions of residues may also or alternatively be based on strong or weak group conservation and weight group substitution as is known in the art.

Збереження подібних залишків може також або альтернативно вимірюватися за допомогою оцінки подібності, як визначається в програмі ВІ А5Т (наприклад, ВІ А5Т 2.2.8 доступна черезConservation of similar residues can also or alternatively be measured using a similarity score as determined by the VI A5T program (e.g., VI A5T 2.2.8 available via

МСВІ). Придатні варіанти, звичайно, виявляють, щонайменше, приблизно 45 95, щонайменше, приблизно 55 965, щонайменше, приблизно 65 95, щонайменше, приблизно 75 95, щонайменше,Ministry of Internal Affairs and Communications). Suitable variants naturally exhibit at least about 45 95 at least about 55 965 at least about 65 95 at least about 75 95 at least

приблизно 85956, щонайменше, приблизно 9095, щонайменше, приблизно 9595 чи більше (наприклад, приблизно 70-99 95) подібності з батьківським пептидом.about 85,956, at least about 9,095, at least about 9,595 or more (eg, about 70-99 95) similarity to the parent peptide.

Значні зміни функції можна зробити, вибираючи заміщення, які є менш консервативними, ніж показані у визначених групах вище. Наприклад, можна зробити неконсервативні заміщення, які більш значним чином вплинуть на структуру пептиду в області зміни, наприклад, структуру альфа-спіралі або бета-листів; заряд або гідрофобність молекули на ділянці мішені; або об'єм бічних ланцюгів. Заміщеннями, які звичайно вважаються такими, що приводять до найбільших змін властивостей пептиду, є ті, де 1) гідрофільний залишок, наприклад, серил або треоніл, заміщається (або заміщає) гідрофобним залишком, наприклад, лейцилом, ізолейцилом, фенілаланілом, валілом або аланілом; 2) цистеїн або пролін заміщається (або заміщає) будь- яким іншим залишком; 3) залишок, що має електропозитивний бічний ланцюг, наприклад, лізил, аргініл або гістидил, заміщається (або заміщає) електронегативним залишком, наприклад, глутамілом або аспартилом; або 4) залишок, що має об'ємистий бічний ланцюг, наприклад, фенілаланіл, заміщається (або заміщає) залишком, у якого немає бічного ланцюга, наприклад, гліцином. Відповідно, ці та інші неконсервативні заміщення можна вводити у варіанти пептиду, коли потрібні значні зміни функції/структури і таких заміщень уникають, коли потрібно зберігати функцію/структуру.Significant changes in function can be made by choosing substitutions that are less conservative than those shown in the defined groups above. For example, you can make non-conservative substitutions that will more significantly affect the structure of the peptide in the region of change, for example, the structure of the alpha helix or beta sheets; charge or hydrophobicity of the molecule on the target site; or volume of side chains. Substitutions generally considered to result in the greatest changes in peptide properties are those where 1) a hydrophilic residue such as seryl or threonyl is (or is) replaced by a hydrophobic residue such as leucyl, isoleucyl, phenylalanyl, valyl or alanyl; 2) cysteine or proline is replaced (or replaced) by any other residue; 3) a residue having an electropositive side chain, for example, lysyl, arginyl or histidyl, is replaced (or replaced) by an electronegative residue, for example, glutamyl or aspartyl; or 4) a residue having a bulky side chain, such as phenylalanyl, is replaced (or replaced) by a residue that does not have a side chain, such as glycine. Accordingly, these and other non-conservative substitutions can be introduced into peptide variants when significant changes in function/structure are desired and such substitutions are avoided when function/structure is desired.

Зручним способом утворення варіантів заміщень є дозрівання спорідненості із застосуванням фага за допомогою способів, відомих у даній області Для того, щоб ідентифікувати можливі кандидати для модифікації серед ділянок гіперваріабельних областей, можна проводити також мутагенез зі скануванням аланіну, щоб ідентифікувати залишки гіперваріабельних областей, які роблять значний внесок у зв'язування антигену. Альтернативно або додатково, може бути корисним проаналізувати кристалічну структуру комплексу антиген- антитіло, щоб ідентифікувати точки контакту між антитілом та антигеном. Такі контактні залишки та сусідні залишки є досить придатними кандидатами для заміщення.A convenient way to generate substitution variants is through affinity maturation using phage using methods known in the art. In order to identify possible candidates for modification among hypervariable region regions, alanine scanning mutagenesis can also be performed to identify hypervariable region residues that make significant contribution to antigen binding. Alternatively or additionally, it may be useful to analyze the crystal structure of the antigen-antibody complex to identify points of contact between antibody and antigen. Such contact residues and neighboring residues are quite suitable candidates for substitution.

Коли для одержання варіанта антитіла роблять вставки в гіперваріабельні області, слід брати до уваги типовий діапазон довжини розглянутого варіабельної області у відомих антитіл.When insertions are made in hypervariable regions to obtain variant antibodies, the typical length range of the considered variable region in known antibodies should be taken into account.

Наприклад, для першої гіперваріабельної області варіабельного домену легкого ланцюга вставки можна вводити в Мі СОКТІ послідовність батьківського антитіла, зберігаючи при цьому вFor example, for the first hypervariable region of the variable domain of the insertion light chain, the sequence of the parent antibody can be entered into Mi SOCTI, while keeping in

Зо основному близький і тому очікуваний потрібний розмір, що згідно з Кабаї еї аї., 5!,ирга, наприклад, звичайно включає всього близько 9-20 (наприклад, близько 10-17) залишків.Zo is basically close to and therefore the expected required size, which according to Kabayi ei ai., 5!,irga, for example, usually includes only about 9-20 (for example, about 10-17) residues.

Аналогічно, М. СОКа2 звичайно має загальну довжину близько 5-10 залишків, М СОКЗ звичайно має довжину близько 7-20 залишків; Мн СОКІ1 звичайно має довжину близько 10-15 залишків, МнSimilarly, M. СОКа2 usually has a total length of about 5-10 residues, M СОКЗ usually has a length of about 7-20 residues; Mn SOKI1 usually has a length of about 10-15 residues, Mn

СОК2 звичайно має довжину близько 15-20 залишків, Мн СОКЗ звичайно має довжину близько 6-30 залишків (наприклад, 3-25 залишків). Вставки в Мн область звичайно роблять в Мн СОКЗ і звичайно поблизу від С-кінця домену, наприклад, приблизно біля залишків 97-102 батьківськогоSOC2 is usually about 15-20 residues long, Mn SOCZ is usually about 6-30 residues long (eg, 3-25 residues). Insertions in the Mn region are usually made in the Mn SOCZ and usually close to the C-terminus of the domain, for example, around residues 97-102 of the parent

Мн СОКЗ (наприклад, суміжні з або С-кінцеві в послідовності із залишком номер 100 батьківськоїMn SOCZ (for example, adjacent to or C-terminal in the sequence with residue number 100 of the parent

Мн СОКЗ послідовності), застосовуючи зіставлення та нумерацію, як описано у Кабат. Варіанти антитіла із вставленими амінокислотними залишками в гіперваріабельній області можуть бути вироблені у випадковий спосіб, особливо, коли початкова спорідненість зв'язування батьківського антитіла з антигеном мішені є такою, що одержані у випадковий спосіб варіанти антитіла легко піддавати скринінгу. Наприклад, фаговий дисплей надає зручний спосіб скринінгу таких випадкових варіантів.Mn SOCZ sequence), applying alignment and numbering as described in Kabat. Antibody variants with inserted amino acid residues in the hypervariable region can be generated in a random manner, especially when the initial binding affinity of the parent antibody to the target antigen is such that the randomly generated antibody variants are easily screened. For example, phage display provides a convenient way to screen for such random variants.

При розробці, конструюванні та/або оцінці варіантів СОК, можна приділити увагу тому факту, що СОК області можна змінювати, щоб здійснити краще зв'язування з епітопом. СОК антитіла звичайно діють, надаючи комплементарну поверхню, що, можливо, включає пальці, які можуть входити усередину білкової поверхні антигену, або іншу паратопічну структуру, до якої підходить епітоп. Якщо епітоп підходить не щільно, то антитіло не може виявляти високої спорідненості. Однак, як і у випадку епітопа, часто існує кілька ключових залишків у структурі паратопа, які вносять основний вклад в це зв'язування. Таким чином, послідовності СОК можуть значно варіювати по довжині та складу від антитіла до антитіла для того ж пептиду.When developing, designing and/or evaluating variants of the SOC, attention can be paid to the fact that the SOC region can be changed to achieve better binding to the epitope. SOC antibodies usually act by providing a complementary surface, possibly including fingers that can fit inside the protein surface of the antigen, or another paratopic structure to which the epitope fits. If the epitope does not fit tightly, the antibody cannot show high affinity. However, as with an epitope, there are often several key residues in the paratope structure that make the primary contribution to this binding. Thus, SOC sequences can vary significantly in length and composition from antibody to antibody for the same peptide.

Досвідчений фахівець в даній області зрозуміє, що певні залишки, такі як залишки тирозину (наприклад, у складі Мн СОКЗ послідовностей), які часто є важливими учасниками у зв'язуванні епітопа, звичайно зберігаються у варіантах СОБ.One of ordinary skill in the art will appreciate that certain residues, such as tyrosine residues (for example, in Mn SOCZ sequences), which are often important participants in epitope binding, are usually conserved in SOB variants.

Варіанти СОМ області можуть також збільшити контакти амінокислот між антигеном і варіантом антитіла в порівнянні з контактами амінокислот між антигеном і батьківським антитілом, шляхом введення одного чи більше амінокислотного залишку (за допомогою заміщення або вставки), які збільшують контакти або енергетично кращі взаємодії між одним чи більше амінокислотними залишками, присутніми в антигені, та одним чи більше амінокислотними залишками, присутніми у антитілі. Розглянуті взаємодії амінокислот можна вибирати з водневих зв'язків, ван-дер-ваальсових взаємодій та іонних зв'язків.Variants of the COM region may also increase the amino acid contacts between the antigen and the variant antibody compared to the amino acid contacts between the antigen and the parent antibody, by introducing one or more amino acid residues (by substitution or insertion) that increase contacts or energetically better interactions between one or more amino acid residues present in the antigen and one or more amino acid residues present in the antibody. The considered interactions of amino acids can be selected from hydrogen bonds, van der Waals interactions, and ionic bonds.

Фахівці в даній області інформовані про додаткові принципи, застосовувані при конструюванні та виборі СОЗ8ВР, що включають СОК варіанти антитіл згідно з даним винаходом.Those skilled in the art are aware of the additional principles used in the design and selection of SOZ8BPs, including SOC antibody variants of the present invention.

Поміж СОР варіантів, які є варіантами СОК антитіл із прикладів, особливо, серед варіантаAmong the variants, which are variants of the antibody SOC of the examples, especially, among the variants

СОК у анти-СО38 антитіл чи їх фрагментів, залишки, необхідні для підтримання та/або орієнтації структурної петлі в структурі СОК звичайно можуть зберігатися; залишки, що попадають у радіус 10 ангстрем від СОК структурної петлі (але при необхідності тільки ті залишки в цій області, у яких доступна водним розчинникам поверхня становить 5 ангстрем? чи більше), звичайно можуть бути незміненими або зміненими тільки за допомогою консервативних заміщень амінокислотних залишків; та/або амінокислотна послідовність може звичайно піддаватися тільки обмеженому числу вставок та/або делецій (якщо такі є), так що петлеподібні структури СОК зберігаються у варіанта (опис потрібних підходів і застосовних до цього принципів наданий, наприклад, в Зспімеск еї аї., У). Мої. Віої. 268(5), 934-51 (1997), Могеа,SOC in anti-CO38 antibodies or their fragments, the residues necessary for maintenance and/or orientation of the structural loop in the structure of SOC can usually be preserved; residues falling within a radius of 10 angstroms from the SOC of the structural loop (but if necessary only those residues in this region in which the surface accessible to aqueous solvents is 5 angstroms? or more) can usually be unchanged or changed only by means of conservative substitutions of amino acid residues ; and/or the amino acid sequence can usually be subjected to only a limited number of insertions and/or deletions (if any), so that loop-like structures of SOC are preserved in the variant (a description of the necessary approaches and the principles applicable to this is given, for example, in Zspimesk ei ai., In ). My. Vioi 268(5), 934-51 (1997), Mogea,

Віорпуз. Спет. 68(1-3), 9-16 (1997), ЗпПігаї єї а!., РЕВ5 І ей. 399(1-2), 1-8 (1996), ЗНікаї ега!., РЕВ5Viorpuz. Spent 68(1-3), 9-16 (1997), ZpPigai eyii a!., REV5 I ey. 399(1-2), 1-8 (1996), ZNikai ego!., REV5

І ей. 455(1-2), 188-97 (1999), Нескго еї а!., Ргоївїп Епа. 8(4), 389-95 (1995) і Еідепрбгої еї аї., 9У. Мої.And hey. 455(1-2), 188-97 (1999), Neskgo ei a!., Rgoivip Epa. 8(4), 389-95 (1995) and Eideprbgoi ei ai., 9U. My.

Віо!. 229(4), 969-95 (1993). Див. також УМО 03/048185, УМО 03/070747 та УМО 03/027246.Vio!. 229(4), 969-95 (1993). See also UMO 03/048185, UMO 03/070747 and UMO 03/027246.

Додаткові способи, які можна застосовувати для одержання варіантів антитіл, включають спрямовану еволюцію та інші варіанти підходів, описані, наприклад, в 5 20040009498, Магкз еї аІ.,, Метод» Мої. Віої. 248, 327-43 (2004), Алтівї-Козептеїйа еї аї., У. Мої. Віо!Ї. 335(1), 177-92 (2004),Additional methods that can be used to generate antibody variants include directed evolution and other variants of approaches, described, for example, in 5 20040009498, Magkz ei aI.,, Method» Moi. Vioi 248, 327-43 (2004), Altivi-Kosepteiia ei ai., U. Moi. Vio! 335(1), 177-92 (2004),

Рак єї а!., Віоспет Віорпуз Ве5 Соттип. 275(2). 553-7 (2000), Капо еї аї., Ргос. Маї). Асад. 5сі.Cancer of her a!., Viospet Viorpuz Ve5 Sottyp. 275(2). 553-7 (2000), Kapo eyi ai., Rhos. Mai). Asad 5

ИБА. 88(24), 11120-3 (1991), 7анпа еї аї., 9. Віої. Спет. 279(18), 18870-7 (2004), Хи єї аї., Снет.IBA 88(24), 11120-3 (1991), 7 anpa ei ai., 9. Vioi. Spent 279(18), 18870-7 (2004), Khyei ai., Snet.

Віо!. 9(8), 933-42 (2002), Вогаег єї а!., Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА, 97(20), 10701-5 (2000), Статеїі еї аї., Маї. Мей. 2(1), 100-2 (1996), і як описано в основному, наприклад, в УМО 03/048185.Vio!. 9(8), 933-42 (2002), Vogaeg eyi a!., Rgos. Mai). Asad si. OBA, 97(20), 10701-5 (2000), Stateii ei ai., May. May 2(1), 100-2 (1996), and as described generally in, for example, UMO 03/048185.

Одержані варіанти антитіл можна піддавати будь-якій придатній техніці скринінгу і антитіла з необхідними та бажаними поліпшеними властивостями відповідно до одного чи більше відповідних аналізів можна відбирати для подальшої розробці.The resulting antibody variants can be subjected to any suitable screening technique and antibodies with the required and desired improved properties according to one or more appropriate assays can be selected for further development.

СОКЗ38, що включають СОК послідовності, як описано вище, можуть включати будь-якеSOCZ38 comprising SOC sequences as described above may include any

Зо придатне число та сполучення таких Мі та Мн СОК, при цьому зберігаючи щонайменше основну частину (щонайменше приблизно 5095, 60, 7095, 8095, 9095, 9595 чи більше) спорідненості/авідності та/"або специфічності/вибірковості антитіла, яке має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з 560 ІЮ МО: 7, та/або антитіла, яке має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17, та/або антитіла, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮA suitable number and combination of such Mi and Mn SOCs while retaining at least a major portion (at least about 5095, 60, 7095, 8095, 9095, 9595 or more) of the affinity/affinity and/or specificity/selectivity of the antibody having the Mi sequence according to ZEO IUO MO: 2 and Mn sequence according to 560 IU MO: 7, and/or antibodies that have Mi sequence according to 5EO IU MO: 12 and Mn sequence according to 5EO IU MO: 17, and/or antibodies, which has Mi sequence according to BEO IU MO: 22 and Mn sequence according to BEO IU

МО: 27, але при необхідності відрізняючись по інших характеристиках, таких як імуногенність у хворої людини, спорідненість до епітопа, збільшений час напівжиття і т.д. У деяких випадках, наприклад, СОЗ8ВР може мати більшу спорідненість, вибірковість та/"або специфічність, ніж батьківське антитіло. В одному втіленні, в СОЗ38 за даним винаходом присутні менше повного набору областей М СОЕК та/або Мн СОК. В одному втіленні присутні всі області М. СОР та МнMO: 27, but if necessary, differing in other characteristics, such as immunogenicity in a sick person, epitope affinity, increased half-life, etc. In some cases, for example, a COZ8BP may have greater affinity, selectivity, and/or specificity than the parent antibody. In one embodiment, the COZ38 of the present invention contains less than the full set of M SOEC and/or Mn SOC regions. In one embodiment, all regions of M. SOR and Mn

Сов.Sov.

Прикладами інших функціональних властивостей антитіл, які можна змінити або зберегти у варіантів СОЗ8ВР за даним винаходом в порівнянні з -003 та -005 і -024 є (1) висока спорідненість зв'язування з СОЗ8; (2) низька швидкість дисоціації комплексу з СОЗ8; (3) інгібування або блокування зв'язування з СОЗ8-мішенню; (4) знищення Т-клітин або В-клітин, що експресують СОЗ8; (5) індукція високого рівня СОС чи то СО55/59 негативних, чи то СЮО55/59 позитивних клітин; (б) перенесення у ліпідні бляшки при зв'язуванні СОЗ8; (7) наведення толерантності Т-клітин; (8) інгібування проліферації Т- або В-клітин, що експресують СОЗ38; (9) інтерналізація СОЗ8; (10) інгібування індукції ферментативної активності СОЗ8; (11) інгібування індукції СОЗ8-індукованого перенесення сигналу; (12) індукція або інгібування продукції цитокінов; (13) індукція або блокування диференціації Т- або В-клітин; (14) індукція або порятунок від апоптозу; (15) атенюація або нарощування індукції лізису за допомогою МК клітин; (16) індукція або інгібування продукції інсуліну р клітинами підшлункової залози;Examples of other functional properties of antibodies that can be changed or preserved in variants of SOZ8BP according to this invention compared to -003 and -005 and -024 are (1) high binding affinity to SOZ8; (2) low rate of dissociation of the complex with SOZ8; (3) inhibition or blocking of binding to the SOZ8 target; (4) destruction of T cells or B cells expressing COZ8; (5) induction of a high level of SOC in either СО55/59 negative or СХО55/59 positive cells; (b) transfer to lipid plaques upon binding of SOZ8; (7) induction of T-cell tolerance; (8) inhibition of proliferation of T- or B-cells expressing SOC38; (9) internalization of POP8; (10) inhibition of the induction of the enzymatic activity of SOZ8; (11) inhibition of the induction of SOZ8-induced signal transduction; (12) induction or inhibition of cytokine production; (13) induction or blocking of T- or B-cell differentiation; (14) induction or rescue from apoptosis; (15) attenuation or enhancement of lysis induction by MK cells; (16) induction or inhibition of insulin production by pancreatic cells;

(17) продовжене виживання суб'єкта, що несе пухлинні клітини, які експресують СОЗ38, та/або (18) індукція АОСС мішеней СОЗ38 при змішуванні з придатними ефекторними клітинами.(17) prolonged survival of a subject bearing tumor cells that express SOC38 and/or (18) induction of AOSS targets of SOC38 when mixed with suitable effector cells.

Даний винахід також надає СОЗ8ВР, які охарактеризовані з погляду їхньої здатності конкурувати (конкурентно інгібувати) або перехресно конкурувати (тобто частково інгібувати зв'язування епітопа) з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з ЗЕБЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з ХЕО ІЮ МО: 7 (як антитіло -003), або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з 5БЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 17 (як антитіло -005), або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 22 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮThe present invention also provides SOZ8BPs that are characterized in terms of their ability to compete (competitively inhibit) or cross-compete (i.e., partially inhibit epitope binding) with an antibody having an Mi sequence according to ZEBEO IUO MO: 2 and a Mn sequence according to XEO IU MO: 7 (as antibody -003), or with an antibody having Mi sequence according to 5BEO IU MO: 12 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 17 (as antibody -005), or with an antibody having Mi sequence according to ZEO IYUO MO: 22 and Mn sequence according to ZEO IYU

МО: 27 (як антитіло -024), за зв'язування СОЗ8.MO: 27 (as antibody -024), for binding POP8.

Таке СОЗ8ВР може бути, наприклад, Бар фрагментом, виробленим з антитіла, що зв'язується з епітопом, ідентичним або таким, перекриви з епітопом, який зв'язується антитілом, що має Мі послідовність згідно з з«ЕО ІЮ МО: 2 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7, або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮSuch COZ8BP can be, for example, a Bar fragment produced from an antibody that binds to an epitope identical to or overlapping with an epitope that binds to an antibody having a Mi sequence according to "EO IU MO: 2 and Mn sequence according to ZEO IU MO: 7, or with an antibody that has Mi sequence according to BEO IU MO: 12 and Mn sequence according to ZEO IU

МО: 17, або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 22 та Мн послідовність згідно з 560 ІО МО: 27. Такий Бар фрагмент завдяки своєму відносно малому розміру у порівнянні з молекулами тАбБ не може значно конкурувати зі згаданими антитілами за зв'язування СОЗ8, хоча антитіло, з якого він вироблений, конкурує. Однак таке СОЗВВР може бути корисним при націлюванні аналогічно на близькорозташовані області СОЗ38 (наприклад, при націлюванні цитотоксину, радіоактивного ядра або у складі імунокон'югата СОЗ8ВР). Тому, такі СОЗ8ВР можуть бути корисними у способах за даним винаходом і, відповідно, вони також передбачені даним винаходом.MO: 17, or with an antibody that has a Mi sequence according to ZEO IJU MO: 22 and a Mn sequence according to 560 IO MO: 27. Such a Bar fragment, due to its relatively small size compared to tAbB molecules, cannot significantly compete with the mentioned antibodies for binding SOC8, although the antibody from which it is produced competes. However, such SOZVVR may be useful when targeting similarly to closely located regions of SOZ38 (for example, when targeting a cytotoxin, a radioactive nucleus, or as part of a SOZ8VR immunoconjugate). Therefore, such SOZ8VR may be useful in the methods of the present invention and, accordingly, are also contemplated by the present invention.

Конкуренцію за зв'язування з СОЗ8 або частиною СОЗ38 для двох чи більше СОЗ8ВР можна визначати за допомогою придатної техніки. В одному втіленні, конкуренцію визначають, як описано в прикладах 7, 8 та 9.Competition for binding to COZ8 or part of COZ38 for two or more COZ8BPs can be determined using suitable techniques. In one embodiment, competition is determined as described in Examples 7, 8 and 9.

Конкуренція в контексті даного винаходу стосується будь-якого помітного зменшення схильності окремої молекули зв'язувати даний партнер зв'язування в присутності іншої молекули, що зв'язується із цим партнером зв'язування. Звичайно, конкуренція означає не менш ніж приблизно 10 95 зменшення, наприклад, не менш ніж приблизно 15 95 зменшення абоCompetition in the context of this invention refers to any marked reduction in the propensity of an individual molecule to bind a given binding partner in the presence of another molecule that binds to that binding partner. Of course, competition means at least about 10 95 reduction, for example at least about 15 95 reduction or

Зо не менш ніж приблизно 20 95 зменшення зв'язування між СОЗ8ВР, і (а) формою СОЗ38 (наприклад, "обробленим", "зрілим", "необробленим", "неопрацьованим" або "незрілим" СОЗ8); (б) формою вільного СОЗ8 (наприклад, СО38 фрагмента, продукованого за допомогою іп мімо процесингу (обробки)); (в) гетеродимерним пептидом, що складається з іншого пептиду, зв'язаного з СОЗ38, наприклад, СОЗ1 і СОЗ8; (г) комплексом СОЗ38 з одним чи більше субстратом, наприклад, ЦАМФ, НАД: та/або цАДФф; (д) димеризованим, зв'язаним та/"або обробленим димером СОЗ38 з розчинним лігандом, наприклад, СОЗ1 або (є) частиною СОЗ8, обумовлене присутністю іншого СОЗ8ВР, яке визначають, наприклад, за допомогою аналізу з ЕГІБА або ЕГАСЗ5 аналізу (як описано в розділі прикладів), застосовуючи достатні кількості двох чи більше конкуруючих СОЗ8ВР і молекул СО38. Може також трапитися, що конкуренція може існувати між СОЗ8ВР відносно більш ніж одного СОЗ8 та/або частини СОЗ38, наприклад, коли властивості зв'язування антитіла даної області СОЗ38 зберігаються у його фрагментів, наприклад, у випадку добре представленого лінійного епітопа, розташованого на різних досліджуваних фрагментах, або конформаційного епітопа, що є присутнім у досить великихWith at least about 20 95 reduction in binding between SOZ8BP, and (a) a form of SOZ38 (eg, "processed", "mature", "unprocessed", "unprocessed" or "immature" SOZ8); (b) the form of free COZ8 (for example, the CO38 fragment produced by IP mimo processing); (c) a heterodimeric peptide consisting of another peptide bound to SOZ38, for example, SOZ1 and SOZ8; (d) a complex of SOZ38 with one or more substrates, for example, TsAMP, NAD: and/or cADPf; (e) a dimerized, bound and/or processed dimer of SOZ38 with a soluble ligand, for example, SOZ1 or (is) a part of SOZ8, due to the presence of another SOZ8BP, which is determined, for example, by means of an analysis with EGIBA or EGASZ5 analysis (as described in the examples section), using sufficient amounts of two or more competing COZ8BP and CO38 molecules. It may also happen that competition can exist between COZ8BP for more than one COZ8 and/or part of COZ38, for example, when the antibody binding properties of a given region of COZ38 are preserved in its fragments, for example, in the case of a well-represented linear epitope located on different studied fragments, or a conformational epitope present in rather large

СОоз38 фрагментів, а також в СОЗ8.СОоз38 fragments, as well as in СОЗ8.

Оцінка конкуренції звичайно включає оцінку відносного інгібування зв'язування із застосуванням першої кількості першої молекули, другої кількості другої молекули та третьої кількості третьої молекули (або стандарту, визначеного шляхом вивчення зв'язування, яке можна прийнятним образом порівняти з новими даними щодо зв'язуванню відносно першої та другої молекул як замінник дійсних одержаних одночасно даних), де перша, друга та третя кількості є достатніми для проведення порівняння, що надає інформацію про вибірковість та/або специфічності розглянутих молекул відносно інших присутніх молекул. Перша, друга та третя кількості можуть варіювати залежно від природи розглянутих СОЗ8ВР та потенційних мішеней. Наприклад, для оцінки за допомогою ЕГ І5А, подібних до описаних в розділі прикладів, необхідно близько 5-50 мкг (наприклад, приблизно 10-50 мкг, приблизно 20-50 мкг, приблизно 5- 20 мкг, приблизно 10-50 мкг і т.д) СОЗ8ВР та/або СОЗ38 мішеней, щоб визначити наявність бо конкуренції. Умови також повинні бути придатними для зв'язування. Звичайно, фізіологічні або близькі до фізіологічних умови (наприклад, температури близько 20-40 "С, рН близько 7-8 і т.д.) є придатними для СОЗ8ВР: СОЗ8 зв'язування.Evaluation of competition typically involves estimating relative inhibition of binding using a first amount of a first molecule, a second amount of a second molecule, and a third amount of a third molecule (or a standard determined by a binding study that can be reasonably compared to new binding data relative to of the first and second molecules as a substitute for the actual data obtained at the same time), where the first, second and third quantities are sufficient to make a comparison that provides information about the selectivity and/or specificity of the considered molecules relative to other molecules present. The first, second, and third quantities may vary depending on the nature of the SOZ8VR considered and the potential targets. For example, for evaluation with EG I5A, similar to those described in the examples section, about 5-50 μg is needed (for example, about 10-50 μg, about 20-50 μg, about 5-20 μg, about 10-50 μg, etc. .e) SOZ8VR and/or SOZ38 targets to determine the presence of competition. The conditions must also be suitable for binding. Of course, physiological or close to physiological conditions (for example, temperatures of about 20-40 "C, pH of about 7-8, etc.) are suitable for SOZ8BP:SOZ8 binding.

Часто конкуренцію встановлюють як значно більше відносне інгібування, ніж приблизно 5 95, як визначають із застосуванням ЕГІ5А та/або ЕАС5 аналізу. Може бути необхідним установити більш високий поріг відносного інгібування як критерій/детермінанту необхідного рівня конкуренції в даному контексті (наприклад, коли конкурентний аналіз застосовують для відбору або скринінгу нових антитіл, створених із цілеспрямованою функцією блокування зв'язування іншого пептиду або молекули з СОЗ8 (наприклад, природних партнерів зв'язування СОЗ8, таких як СОЗ31, також називаного СОЗ3З1 антигеном, ЕпадоОСАМ, ОРІПА" РЕСАМ-1, молекули адгезії кров'яних пластинок/«ендотеліальних клітин або природного анти-СОЗ38 антитіла). Так, наприклад, можливо встановити критерій конкурентноздатності, де детектується не менше приблизно 10 95 відносного інгібування, не менше приблизно 15 95 відносного інгібування або не менше приблизно 2095 відносного інгібування, до того, як антитіло вважається досить конкурентоздатним. У тих випадках, коли епітопи, що належать конкуруючим антитілам, близько розташовані на антигені, конкуренція може бути встановлена на величині більше приблизно 4095 відносного інгібування зв'язування СО38 (наприклад, не менше приблизно 45 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 50 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 5595 інгібування, наприклад, не менше приблизно 60 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 65 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 70 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 7595 інгібування, наприклад, не менше приблизно 80 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 8595 інгібування, наприклад, не менше приблизно 90 95 інгібування, наприклад, не менше приблизно 95 95 інгібування чи більш високий рівень відносного інгібування).Competition is often established as a significantly greater relative inhibition than about 5 95 as determined using EGI5A and/or EAC5 assays. It may be necessary to establish a higher relative inhibition threshold as a criterion/determinant of the required level of competition in a given context (e.g., when the competition assay is used to select or screen new antibodies designed with the targeted function of blocking the binding of another peptide or molecule to POP8 (e.g. natural binding partners of COZ8, such as COZ31, also called COZ3Z1 antigen, EpadoOSAM, ORIPA" RESAM-1, platelet/endothelial cell adhesion molecule or natural anti-COZ38 antibody). So, for example, it is possible to establish a criterion of competitiveness , where at least about 10 95 relative inhibition, at least about 15 95 relative inhibition, or at least about 2095 relative inhibition is detected before the antibody is considered sufficiently competitive. In cases where epitopes belonging to competing antibodies are closely spaced on antigens, the competition can be set at a higher value about 4095 relative inhibition of CO38 binding (e.g., at least about 45 95 inhibition, e.g., at least about 50 95 inhibition, e.g., at least about 5595 inhibition, e.g., at least about 60 95 inhibition, e.g., at least about 65 95 inhibition, for example, not less than about 70 95 inhibition, for example, not less than about 7595 inhibition, for example, not less than about 80 95 inhibition, for example, not less than about 8595 inhibition, for example, not less than about 90 95 inhibition, for example, not less approximately 95 95 inhibition or a higher level of relative inhibition).

Конкуренцію можна вважати оберненням перехресної реактивності між молекулою та двома потенційними партнерами зв'язування. У певних втіленнях СОЗ8ВР за даним винаходом специфічно зв'язується з одним чи більше залишками або областями СОЗ8, а також не вступає в перехресну реакцію з іншими пептидами, пептидними областями або молекулами, наприклад, даний винахід пропонує анти-СОЗ38 антитіло, що не вступає в перехресну реакцію з білками, гомологічними СОЗ8, наприклад, В5Т-1 (антиген 1 клітини строми кісткового мозку) і Мо5, такожCompetition can be thought of as the inverse of cross-reactivity between a molecule and two potential binding partners. In certain embodiments, a COZ8BP of the present invention specifically binds to one or more residues or regions of COZ8 and does not cross-react with other peptides, peptide regions, or molecules, e.g., the present invention provides an anti-COZ38 antibody that does not cross-react with cross-reaction with proteins homologous to POP8, for example, B5T-1 (bone marrow stromal cell antigen 1) and Mo5, as well

Зо називаним СО157; або анти-СО38 антитіла, які не вступають до перехресної реакції з СОЗ38 у нормальній тканині, наприклад, тканині, не залученій в множинну мієлому. Звичайно, недолік перехресної реактивності означає менш ніж приблизно 5595 відносного конкурентного інгібування між молекулами при визначенні за допомогою ЕГІЗА та/або ГАС5 аналізу із застосуванням достатніх кількостей молекул у придатних умовах аналізу.With the so-called СО157; or anti-CO38 antibodies that do not cross-react with CO38 in normal tissue, for example, tissue not involved in multiple myeloma. Of course, lack of cross-reactivity means less than about 5595 relative competitive inhibition between molecules as determined by EGISA and/or HAC5 assays using sufficient amounts of molecules under suitable assay conditions.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, що конкурує з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 7, наприклад, антитілом -003, за зв'язування СОЗ8 або його частини.In one embodiment, the present invention provides a COZ8BP that competes with an antibody having a Mi sequence according to 5EO IJO MO: 2 and a Mn sequence according to BEO IJO MO: 7, for example antibody -003, for binding of COZ8 or a portion thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗВВР, що конкурує з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 17, наприклад, антитілом -005, за зв'язування СОЗ8 або його частини.In one embodiment, the present invention provides a COZVVR that competes with an antibody that has an Mi sequence according to BEO IU MO: 12 and a Mn sequence according to BEO IUO MO: 17, for example, antibody -005, for binding COZ8 or a portion thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, що конкурує з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 27, наприклад, антитілом -024, за зв'язування СОЗ38 або його частини.In one embodiment, the present invention provides a COZ8BP that competes with an antibody that has an Mi sequence according to BEO IU MO: 22 and a Mn sequence according to BEO IUO MO: 27, for example, antibody -024, for binding COZ38 or a portion thereof.

Як обговорюється тут в іншому місці, якщо не зазначене інше або не суперечить контексту, посилання на зв'язування СОЗ8ВР із СО38 стосуються зв'язування в будь-якому придатному контексті, наприклад, у контексті конформації, коли є присутньою структура СОЗ38, або в контексті лінійного епітопа. Звичайно, зв'язування в обмеженому наборі таких контекстів може бути важливою характеристикою відносно СОЗ8ВР, запропонованого даним винаходом.As discussed elsewhere herein, unless otherwise indicated or inconsistent with the context, references to binding of COZ8BP to CO38 refer to binding in any suitable context, e.g., in the context of a conformation when the COZ38 structure is present, or in the context of linear epitope. Of course, binding in a limited set of such contexts may be an important characteristic of the SOZ8BP offered by the present invention.

Додаткові способи визначення специфічності СОЗ8ВР за допомогою конкурентного інгібування можна знайти, наприклад, в Нагіоу» еї аї., Апііродієв: А І абогаютгу Мапиаї, Соїа 5ргіпдAdditional methods of determining the specificity of SOZ8BP using competitive inhibition can be found, for example, in Nagyou" ei ai., Apiirodiev: A I abogayutgu Mapiai, Soia 5rgipd

Нартбог І арогаюгу Ргезв5, Соїд бргіпа Нагброг, М.У., 1988), СоїІїдап еї аї!., ед5., Ситепі Ргоїосоїв5 іпNartbog I arogayugu Rgezv5, Soid brgipa Nagbrog, M.U., 1988), SoiIidap ei ai!., ed5., Sitepi Rgoiosoiv5 ip

Іттипоїіоду, Сстеепе Рибіївпіпуд Авзос, апа У/іеу Іпіегосіепсе М.У., (1992,1993), апа Миїег, Меїй.Ittipoiiodu, Ssteepe Rybiivpipud Avzos, apa U/ieu Ipiegosiepse M.U., (1992, 1993), apa Miiieg, Meii.

Епгутої. 92, 589-601 (1983)).Epgutoi 92, 589-601 (1983)).

СОЗ38 людини включає велике число різних епітопів, які можуть включати (1) пептидні антигенні детермінанти, що містяться усередині одного пептидного ланцюга в СОЗ8 людини; (2) конформаційні антигенні детермінанти, які складаються з однієї чи більше несусідніх амінокислот на даному ланцюзі та/або амінокислот, що є присутніми на сусідніх у просторі, але різних пептидних ланцюгах (звичайно, коли відповідні амінокислотні послідовності ланцюгів розташовані розрізнено в поліпептидній послідовності СОЗ8 людини); (3) пост-трансляційні бо антигенні детермінанти, які складаються цілком або частково з молекулярних структур,Human POP38 includes a large number of different epitopes, which may include (1) peptide antigenic determinants contained within one peptide chain in human POP8; (2) conformational antigenic determinants that consist of one or more non-adjacent amino acids on a given chain and/or amino acids present on spatially adjacent but different peptide chains (usually when the corresponding amino acid sequences of the chains are located differently in the human POP8 polypeptide sequence ); (3) post-translational and antigenic determinants, which consist in whole or in part of molecular structures,

ковалентно приєднаних до СО38 людини, наприклад, вуглеводневих груп, або (4) сполучень за пунктами (1)-(3).covalently attached to human CO38, for example, hydrocarbon groups, or (4) compounds according to items (1)-(3).

Епітоп у контексті даного винаходу включає будь-який пептид або вироблену з пептиду детермінанту, здатну специфічно зв'язуватися з імуноглобуліном. Епітоп може включати будь- яке необхідне число амінокислот у будь-якому необхідному положенні (відносно лінійної послідовності СОЗ8), орієнтації (відносно організованого в просторі СОЗ8 або його фрагмента), будь-якого амінокислотного складу (і отже, щонайменше частково, заряду). Так, наприклад, епітоп може складатися із приблизно 3-10 амінокислот, звичайно, з 3-8 амінокислот, в одному чи більше суміжних або несуміжних положень відносно первинної послідовності СОЗ8 (наприклад, епітоп може складатися, в основному, з 2, 3, 4, 5, 6, 7 або 8 амінокислотних залишків, розподілених по 1, 2, 3, 4 або 5 несуміжним положенням в СО38). Альтернативно, наприклад, епітоп може вважатися певною областю із приблизно 5-40 суміжних амінокислотних залишків (наприклад, приблизно 7-30 амінокислотних залишків, приблизно 5-20 амінокислотних залишків або приблизно 3-15 амінокислотних залишків) в СОЗ38 (окремо або в сполученні із частиною суміжного домену СЮОЗ38). У деяких епітопах може трапитися, що тільки один амінокислотний залишок або всього кілька амінокислотних залишків є критичними для впізнавання одного СОК або ряду СОМ (і тому найбілош важливими для СОЗ8ВР: СОз38 антигенної спорідненості та авідності). Якщо так, епітоп можна охарактеризувати на основі одного чи більше таких критичних залишків з розумінням того, що інші залишки можуть також вносити якийсь менший внесок в епітоп. У випадку епітопа, визначеного областю амінокислот, може бути, що одна чи більше амінокислота області вносить дуже малий або навіть нехтуваний внесок у зв'язування антитіла, так що цей залишок може бути заміщений іншим придатним залишком без втрати епітопа, щонайменше, для деяких СОЗ8ВР, для нього специфічних.An epitope in the context of this invention includes any peptide or peptide-derived determinant capable of specifically binding to an immunoglobulin. An epitope can include any required number of amino acids in any required position (relative to the linear sequence of POP8), orientation (relative to spatially organized POP8 or its fragment), any amino acid composition (and therefore, at least partially, charge). Thus, for example, an epitope may consist of approximately 3-10 amino acids, typically 3-8 amino acids, in one or more contiguous or non-contiguous positions relative to the primary sequence of POP8 (e.g., an epitope may consist primarily of 2, 3, 4 , 5, 6, 7 or 8 amino acid residues divided by 1, 2, 3, 4 or 5 non-adjacent positions in CO38). Alternatively, for example, an epitope can be a specific region of about 5-40 contiguous amino acid residues (eg, about 7-30 amino acid residues, about 5-20 amino acid residues, or about 3-15 amino acid residues) in POP38 (alone or in combination with a portion of the adjacent domain of SHUOZ38). In some epitopes, it may happen that only one amino acid residue or only a few amino acid residues are critical for the recognition of one SOC or series of COMs (and therefore most important for COZ8BP:COz38 antigenic affinity and avidity). If so, the epitope can be characterized based on one or more such critical residues, with the understanding that other residues may also make some smaller contribution to the epitope. In the case of an epitope defined by a region of amino acids, it may be that one or more amino acids of the region make a very small or even negligible contribution to antibody binding, so that this residue can be replaced by another suitable residue without loss of the epitope, at least for some COZ8BPs. specific for him.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ8 антитіло, що специфічно зв'язується з СОЗ8 епітопом, який також специфічно зв'язаний з антитілом, яке маєIn one embodiment, the present invention provides a COZ8BP, e.g., an anti-COZ8 antibody that specifically binds to a COZ8 epitope that also specifically binds to an antibody that has

Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 7 (наприклад, антитілом -003), або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17 (наприклад, антитілом -005), або з антитілом, яке має Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 27 (наприклад, антитілом -024). Можливо, що СОЗ8ВР, які мають один чи більше СОК, що відрізняються відMi sequence according to 5EO IJU MO: 2 and Mn sequence according to BEO IJU MO: 7 (for example, antibody -003), or with an antibody that has Mi sequence according to 5EO IJU MO: 12 and Mn sequence according to 5EO IJU MO : 17 (for example, antibody -005), or with an antibody that has an Mi sequence according to "EO IU MO: 22 and a Mn sequence according to BEO IUO MO: 27 (for example, antibody -024). It is possible that SOZ8VR, which have one or more SOC, different from

СОК антитіла, яке має Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 2 та Мн послідовність згідно з БЕОSOC of an antibody that has an Mi sequence according to "EO IU MO: 2 and a Mn sequence according to BEO

ІО МО: 7, або СОЕ антитіла, яке має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 12 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 17, або СОК антитіла, яке має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з 5ЕО І МО: 27, можуть тим не менш бути специфічними для того ж епітопа, як антитіло, що має Мі послідовність згідно з зЗЕО ІО МО: 2 та Мн послідовність згідно зIO MO: 7, or ESR of an antibody that has Mi sequence according to ZEO IO MO: 12 and Mn sequence according to 5EO IU MO: 17, or SOC of an antibody that has Mi sequence according to 5EO IU MO: 22 and Mn sequence according to with 5EO and MO: 27, may nevertheless be specific for the same epitope as an antibody having an Mi sequence according to ZEO IO MO: 2 and a Mn sequence according to

ЗЕО ІО МО: 7, та антитіло, що має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 17 і антитіло, що має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 22 та Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 27, відповідно. У деяких з таких випадків розглянуті СОЗ8ВР можуть впізнавати або бути більш специфічними/вибірковими для окремих структур або областей епітопа, ніж антитіло, що має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 2 та Мн послідовність згідно з зЗЕО ІЮ МО: 7, та антитіло, що має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з хЕО ІЮ МО: 17 і антитіло, що має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮZEO IO MO: 7, and antibody having Mi sequence according to 5EO IJU MO: 12 and Mn sequence according to BEO IJU MO: 17 and antibody having Mi sequence according to ZEO IJU MO: 22 and Mn sequence according to BEO IO MO: 27, respectively. In some of these cases, the contemplated COZ8BPs may recognize or be more specific/selective for particular epitope structures or regions than an antibody having an Mi sequence according to 5EO IU MO: 2 and a Mn sequence according to ZEO IU MO: 7, and an antibody, having Mi sequence according to ZEO IU MO: 12 and Mn sequence according to XEO IU MO: 17 and antibody having Mi sequence according to BEO IU

МО: 22 та Мн послідовність згідно з ФЕО ІЮ МО: 27, відповідно.MO: 22 and Mn sequence according to FEO IU MO: 27, respectively.

СОЗз8 епітоп, що зв'язується антитілом, яке має Мі послідовність згідно з БЕО ІЮ МО: 2 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 7 (наприклад, антитілом -003), або антитілом, яке має Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з БЕО ІЮО МО: 17 (наприклад, антитілом -005), або антитілом, яке має Мі послідовність згідно з 5ЕБЕО ІО МО: 22 та Мн послідовність згідно з 5Е0О ІЮ МО: 27 (наприклад, антитілом -024), можна ідентифікувати за допомогою стандартних технік картування та опису, подальше удосконалення яких можна ідентифікувати за допомогою будь-якого придатного підходу, численні приклади яких доступні фахівцю в даній області. Ці підходи можна також застосовувати для ідентифікації та/або характеристики епітопів для СОЗ8ВР, в основному. Як приклад таких способів картування/характеристики, епітоп для анти-СОЗ8 антитіла можна визначити за допомогою техніки "відбитка" епітопа ("Чоої-ргіпііїпуд") із застосуванням хімічної модифікації доступних амінів/карбоксилів білка СОЗ8. Одним із прикладів такої техніки "відбитка" є застосування НХМ5 (обмін водень-дейтерій, детектований за допомогою мас-спектрометрії), де водень/дейтерій обмін амідних протонів білка рецептора та ліганду, зв'язування та зворотний обмін відбуваються, коли амідні групи бічних ланцюгів, що беруть участь у зв'язуванні білка, захищені від зворотного обміну і тому залишаються дейтерованими. Задіяні області можна бо ідентифікувати на цьому етапі за допомогою протеолізу пептидів, швидкої мікроколонкової рідинної хроматографії високого розділення та/або мас-спектрометрії з іонізацією в електроспреї. Див., наприклад, Епгіпуд Н, Апаїуїїса! Віоспетівігу, 267(2) 252-259 (1999) та/абоCOZz8 epitope bound by an antibody having an Mi sequence according to BEO IU MO: 2 and a Mn sequence according to 5EO IUO MO: 7 (eg, antibody -003), or an antibody having an Mi sequence according to "EO IU MO: 12 and Mn sequence according to BEO IUO MO: 17 (for example, antibody -005), or an antibody that has a Mi sequence according to 5EBEO IO MO: 22 and Mn sequence according to 5E0O IU MO: 27 (for example, antibody - 024), can be identified using standard mapping and description techniques, further refinements of which can be identified using any suitable approach, numerous examples of which are available to one skilled in the art. These approaches can also be used to identify and/or characterize epitopes for COZ8BP, in particular. As an example of such mapping/characterization methods, an epitope for an anti-COP8 antibody can be determined using an epitope "printing" technique ("Chooi-rhipipud") using chemical modification of the available amines/carboxyls of the COZ8 protein. One example of such a "footprinting" technique is the application of HCM5 (hydrogen-deuterium exchange detected by mass spectrometry), where hydrogen/deuterium exchange of the amide protons of the receptor protein and the ligand, binding and back-exchange occur when the amide groups of the side chains , involved in protein binding, are protected from reverse exchange and therefore remain deuterated. Involved regions can be identified at this stage using peptide proteolysis, high resolution microcolumn liquid chromatography and/or electrospray ionization mass spectrometry. See, for example, Ephipud N, Apaiuiisa! Viospetivhigu, 267(2) 252-259 (1999) and/or

Епаеп, У.А. апа тій, О.Г. (2001) АпаЇ. Спет. 73, 256А-265А. Іншим прикладом придатної техніки ідентифікації епітопа є картування епітопа із застосуванням ядерного магнітного резонансу (ЯМР), де звичайно порівнюють положення сигналів у двовимірних спектрах ЯМР вільного антигену та антигену в комплексі з антиген-зв'язуючим пептидом, наприклад, антитілом. Антиген звичайно вибірково помічений за допомогою ізотопу "М, так що в ЯМР- спектрі видні тільки сигнали, що відповідають антигену, і ніяких сигналів антиген-зв'язуючого пептиду. У сигналів антигенів, що належать амінокислотним залишкам, які беруть участь у взаємодії із зв'язуючим пептидом, звичайно зсунуте положення в спектрах комплексів у порівнянні зі спектрами вільного антигену, і амінокислоти, що беруть участь у зв'язуванні, можна ідентифікувати у такий спосіб. Див., наприклад, Егп5і Зспегіпд Ке5 Боипа Умогк5 Пор. (44), 149-67 (2004), Ниапду еї аїЇ, Чоштаї! ої МоїІесшіаг Віоіоду 281(1), 61-67 (1998) та Зайо апа Ракегзоп,Epaep, U.A. apa tiy, O.H. (2001) ApaY. Spent 73, 256A-265A. Another example of a suitable epitope identification technique is nuclear magnetic resonance (NMR) epitope mapping, which typically compares the signal positions in the two-dimensional NMR spectra of a free antigen and an antigen complexed with an antigen-binding peptide, such as an antibody. The antigen is usually selectively labeled with the "M" isotope, so that only signals corresponding to the antigen and no signals of the antigen-binding peptide are visible in the NMR spectrum. The signals of antigens belonging to amino acid residues that participate in the interaction with binding peptide, the position in the spectra of the complexes is usually shifted compared to the spectra of the free antigen, and the amino acids involved in the binding can be identified in this way. See, for example, Egp5i Zspegipd Ke5 Boipa Umogk5 Cf. (44), 149-67 (2004), Nyapdu ei aiYi, Chostai!oi MoiIesshiag Vioiodu 281(1), 61-67 (1998) and Zayo apa Rakegzop,

Меїпоав5. 9(3), 516-24 (1996). Картування/характеристику епітопа можна проводити (із застосуванням способів мас-спектрометрії. Див., наприклад, Оом/пугага, У Маз55 б5ресітот. 35(4), 493-503 (2000) та КізеІагапа Ооупага, Апа! Спет. 71.(9), 1792-801 (1999).Meipoav5. 9(3), 516-24 (1996). Epitope mapping/characterization can be performed (using mass spectrometry methods. See, for example, Oom/pugaga, U Maz55 b5resitot. 35(4), 493-503 (2000) and KiseIagapa Oupaga, Apa! Spect. 71.(9 ), 1792-801 (1999).

Техніки обробки протеазами також є корисними для картування та ідентифікації епітопа.Protease processing techniques are also useful for epitope mapping and identification.

Області/послідовності, що належать до антигенних детермінант, можна визначати за допомогою переварювання протеазами, наприклад, застосовуючи обробку трипсином у співвідношенні близько 1: 50 до СОЗ38 протягом ночі (п/н) при 37 "С ї рН 7-8 з наступним мас- спектрометричним (МС) аналізом для ідентифікації пептидів. Пептиди, захищені від розщеплення трипсином у присутності СОЗ8ВР, можна далі ідентифікувати шляхом порівняння зразків, підданих трипсиновій обробці, і зразків, інкубованих з СОЗ8ВР і потім підданих переварюванню, наприклад, трипсином (у такий спосіб виявляючи "відбитки" місць зв'язування).Regions/sequences belonging to antigenic determinants can be determined by digestion with proteases, for example, using trypsin treatment in a ratio of about 1: 50 to SOZ38 overnight (p/n) at 37 "C and pH 7-8, followed by mass- spectrometric (MS) analysis to identify peptides. Peptides protected from trypsin digestion in the presence of COZ8BP can be further identified by comparing trypsin-treated samples with samples incubated with COZ8BP and then digested with, e.g., trypsin (thus revealing " "imprints" of binding sites).

Інші ферменти, наприклад, хімотрипсин, пепсин і т.д., можна також або альтернативно застосовувати для подібного способу характеристики епітопа. СОЗ8ВР, що дає в основному такий саме результат, як антитіло, що має Мі послідовність згідно з ЗЕО ІО МО: 2 та Мн послідовність згідно з 5ЕО ІЮ МО: 7 (наприклад, антитіло -003), або антитіло, що має М послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 17 (наприклад,Other enzymes, for example, chymotrypsin, pepsin, etc., can also or alternatively be used for a similar way of characterizing the epitope. COZ8BP, which gives basically the same result as an antibody having an Mi sequence according to ZEO IO MO: 2 and a Mn sequence according to 5EO IU MO: 7 (eg, antibody -003), or an antibody having an M sequence according to with "EO IU MO: 12 and Mn sequence according to "EO IU MO: 17 (for example,

Ко) антитіло -005), або антитіло, що має Мі послідовність згідно з БЗЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з «ЕО ІО МО: 27 (наприклад, антитіло -024), при таких вимірах, вважається антитілом, що зв'язує такий саме епітоп, як антитіло, що має Мі послідовність згідно з 5ЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7 (наприклад, антитіло -003), або антитіло, що має М послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 17 (наприклад, антитіло -005), або антитіло, що має Мі послідовність згідно з БЗЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з БЕО ІО МО: 27 (наприклад, антитіло -024), відповідно. Див., наприклад, Мапса, Апп 151 зирег Запіїа. 27(1), 15-9 (1991) для обговорення подібних технік.Ko) antibody -005), or an antibody having a Mi sequence according to BZEO IU MO: 22 and a Mn sequence according to "EO IO MO: 27 (for example, antibody -024), with such measurements, is considered an antibody that binds the same epitope as an antibody having an Mi sequence according to 5EO IJU MO: 2 and a Mn sequence according to ZEO IJU MO: 7 (for example, antibody -003), or an antibody having an M sequence according to "EO IJU MO : 12 and Mn sequence according to "EO IU MO: 17 (for example, antibody -005), or an antibody having Mi sequence according to BZEO IU MO: 22 and Mn sequence according to BEO IU MO: 27 (for example, antibody - 024), respectively. See, for example, Maps, App 151 zireg Zapiia. 27(1), 15-9 (1991) for a discussion of similar techniques.

Картування епітопа за допомогою конкурентного зв'язування СОЗ8 із двома антитілами, де одне біотинільоване, є іншим способом ідентифікації відповідних областей антигенних детермінант.Epitope mapping using competitive binding of COZ8 with two antibodies, one of which is biotinylated, is another way to identify relevant regions of antigenic determinants.

Зв'язування антитіл з лінійними або петльовими пептидами СО38 із застосуванням основаного на РЕРБСАМ зв'язаного з ферментом імуно-аналізу є іншим способом ідентифікації відповідних областей антигенних детермінант, див., наприклад, біооїбвіга-ЛУ єї аї. Мо!-Оімегв5. 1, 87-96 (1996).Binding of antibodies to linear or looped CO38 peptides using a RERBSAM-based enzyme-linked immunoassay is another way to identify relevant regions of antigenic determinants, see, for example, bioobviga-LU eyi ai. Mo!-Oimegv5. 1, 87-96 (1996).

Сайт-спрямований мутагенез є іншим способом ідентифікації відповідних областей антигенних детермінант, див., наприклад, Роїуак апа Оєапвз, Віоса 99, 3956-3962 (2002).Site-directed mutagenesis is another way to identify relevant regions of antigenic determinants, see, for example, Roiuak apa Ojeapvz, Viosa 99, 3956-3962 (2002).

Різні техніки фагового дисплея також можна застосовувати для ідентифікації епітопів. Див., наприклад, Умапд апа ми, Сигг Огид Тагдеїв. 5(1), 1-15 (2004), Випоп, Іттипоїесппоіоду. 1 (2), 87- 94 (1995 Аца), Сопезе вї а!., Іттипоїесппоіоау. 1(2), 87-94 (1995) та Ігміпу еї аї., Сшт Оріп СпетVarious phage display techniques can also be used to identify epitopes. See, for example, Umapd apa we, Sigg Ogyd Tagdeev. 5(1), 1-15 (2004), Vypop, Ittipoiesppoiodo. 1 (2), 87-94 (1995 Atsa), Sopese vy a!., Ittipoiespppoioau. 1(2), 87-94 (1995) and Igmipu ei ai., Ssht Orip Spet

Віої. 5(3), 314-24 (2001). Узагальнюючі типові епітопи можна також ідентифікувати за допомогою модифікованих технік фагового дисплея (див. пер: /Ммиммі.о5.топіапа.еди/я«титеу/рарег5/ісрОо3. раї для обговорення).Vioi 5(3), 314-24 (2001). Generalizing typical epitopes can also be identified using modified phage display techniques (see per: /Mmymmi.o5.topiapa.edi/ya«titeu/rareg5/isrOo3.rai for discussion).

Інші способи, потенційно корисні для картування епітопів, включають кристалографічні техніки, техніки дифракції рентгенівських променів (такі як техніка дослідження послідовності за допомогою дифракції рентгенівських променів, розроблена Поляк та іншими в 1970-1980 роках) і застосування багатоштирьової технології пептидного синтезу (Мийіріп Реріїде ЗупіпевібOther techniques potentially useful for epitope mapping include crystallographic techniques, X-ray diffraction techniques (such as the X-ray diffraction technique developed by Polyak et al. in the 1970s and 1980s), and the use of multi-pin peptide synthesis technology (Miyirip Reriide Zupipevib

Тесппоіоду). Комп'ютерні способи, наприклад, аналіз послідовності та тривимірний структурний аналіз і аналіз стикування, можна також застосовувати для ідентифікації антигенних детермінант. Наприклад, епітоп можна також визначити за допомогою молекулярного бо моделювання із застосуванням структури СОЗ38 і стикування зі структурою Рар фрагмента індивідуального моноклонального антитіла. Ці та інші способи картування обговорюються вThesppoiod). Computational methods, such as sequence analysis and three-dimensional structural analysis and docking analysis, can also be used to identify antigenic determinants. For example, the epitope can also be determined using molecular modeling using the structure of SOC38 and docking with the structure of the Rar fragment of an individual monoclonal antibody. These and other mapping methods are discussed in

Еріюре Марріпо: А Ргасіїса! Арргоасі (М/евімоса апа Нау Едвз.) 2001 Охгога Опімегейу Ргев5.Eriyure Marripo: And Rgasiisa! Arrgoasi (M/evimosa apa Nau Edvs.) 2001 Ohgoga Opimegeiu Rgev5.

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, що має в основному такі ж характеристики специфічного зв'язування одного чи більше тАре, вибраних з антитіл, що мають Мі послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 2 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7 (наприклад, антитіло -003), або антитіл, що мають Мі послідовність згідно з зЕО ІЮ МО: 12 та Мн послідовність згідно з ЗЕО ІЮО МО: 17 (наприклад, антитіло -005), або антитіл, що мають Мі послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 22 та Мн послідовність згідно з «ЕО ІЮ МО: 27 (наприклад, антитіло -024).In one embodiment, the present invention provides a SOZ8BP having substantially the same specific binding characteristics of one or more tAres selected from antibodies having an Mi sequence according to ZEO IJU MO: 2 and a Mn sequence according to ZEO IJU MO: 7 (for example, antibody -003), or antibodies having a Mi sequence according to ZEO IJU MO: 12 and Mn sequence according to ZEO IJU MO: 17 (for example, antibody -005), or antibodies having a Mi sequence according to " EO IU MO: 22 and Mn sequence according to "EO IU MO: 27 (eg antibody -024).

Проведення картування показує, що кілька моноклональних антитіл, вироблених протиMapping shows that several monoclonal antibodies produced against

СО38 людини, зв'язуються з епітопом на С-кінцевій області СОЗ8 (220-296) (Нозпіпо еї аї. таHuman CO38 binds to the epitope on the C-terminal region of COZ8 (220-296) (Nozpipo ei ai. and

Ееггего еї аїЇ). Усередині цієї області виявлені розходження в три амінокислоти між послідовностями СОЗ8 людини і ліванської макаки циномолгуса (супотоЇди5): 237, 0272 та 5274 у людини відповідають А238, К273 та Б275 у мавпи. -005 не зв'язується із тканиною циномолгуса (дивися приклади 10 та 11). Існує обмежене число амінокислот, що розрізняються, між послідовностями СО38 у людини та мавпи, наприклад, у С-кінцевій частині білка, наприклад, три наступні амінокислоти розрізняються в послідовностях СЮОЗ8 людини і мавпи:Eeggego ei aiYi). Within this region, differences in three amino acids were found between the sequences of SOC8 of humans and Lebanese cynomolgus macaques (subotoYids5): 237, 0272, and 5274 in humans correspond to A238, K273, and B275 in monkeys. -005 does not bind to cynomolgus tissue (see Examples 10 and 11). There are a limited number of amino acids that differ between human and monkey CO38 sequences, for example in the C-terminal part of the protein, for example, the following three amino acids differ between human and monkey CO38 sequences:

Т237, 0272 та 5274 в СО38 людини відповідають А238, К273 та Е275 в СО38 циномолгуса (порівняйте 5ЕО ІЮО МО: 21 та 5ЕО ІЮ МО: 22). -005 не зв'язується з мутантним білком пиСОЗ38, де глутаміновий залишок у положенні 272 5ЕО ІО МО: 31 заміщений залишком аргініну (20272К), або з мутантним білком пиСОЗ38, де залишок серину в положенні 274 5ЕО ІЮ МО: 31 заміщений залишком фенілаланіну (5274Е) (показано в прикладі 17), в такому ж ступені, як він зв'язується зT237, 0272 and 5274 in human CO38 correspond to A238, K273 and E275 in cynomolgus CO38 (compare 5EO IJU MO: 21 and 5EO IJU MO: 22). -005 does not bind to the mutant pySOZ38 protein, where the glutamine residue at position 272 5EO IU MO: 31 is replaced by an arginine residue (20272K), or to the mutant pySOZ38 protein, where the serine residue at position 274 5EO IU MO: 31 is replaced by a phenylalanine residue ( 5274E) (shown in example 17), to the same degree as it binds to

СО38 людини дикого типу. Зв'язування -005 особливо змінюється при заміщенні амінокислоти в положенні 5274Е.Wild-type human CO38. The binding of -005 is especially altered when the amino acid at position 5274E is substituted.

Далі, даний винахід пропонує пептиди, які зв'язуються з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31) і які не зв'язуються з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІЮ МО: 33) в такому ж ступені, як вони зв'язуються з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО: 31).Further, the present invention provides peptides that bind to human SOC8 (ZEO IU MO: 31) and which do not bind to a mutant human SOC8 in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33) in to the same extent as they bind to human POP8 (ZEO IU MO: 31).

Даний винахід пропонує пептиди, які зв'язуються з СО38 людини (ЗЕО ІО МО: 31) ї неThe present invention offers peptides that bind to human CO38 (ZEO IO MO: 31) and not

Зо зв'язуються з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34) в такому ж ступені, як вони зв'язуються з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31).Zo bind to a mutant human SOZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34) to the same extent as they bind to human SOZ8 (ZEO IO MO: 31).

Термін "в такому ж ступені" слід інтерпретувати так, що зв'язування пептиду з мутантнимThe term "to the same degree" should be interpreted so that the binding of the peptide with the mutant

СОЗ38 людини значно нижче, ніж зв'язування пептиду з диким типом СОЗ8 людини. Зв'язування пептиду з молекулами СОЗ38 (дикого типу та мутанта) можна визначити багатьма способами і визначення того, чи вважається зв'язування з мутантним білком "значно нижчим", ніж зв'язування з диким типом, находиться в межах звичайних знань фахівця в даній області.Human SOC38 is significantly lower than peptide binding to wild-type human SOC8. Peptide binding to POP38 molecules (wild-type and mutant) can be determined in a number of ways, and determining whether binding to a mutant protein is considered "significantly lower" than binding to wild-type is within the ordinary skill of the art. region

Велике число різних технік для визначення зв'язування пептиду з іншим пептидом доступні фахівцю в даній області, наприклад, ЕГ І5А, радіоіїмуноаналіз, ВІіАсоге або проточна цитометрія.A large number of different techniques for determining the binding of a peptide to another peptide are available to a person skilled in the art, for example, EG I5A, radioimmunoassay, VIiAsoge or flow cytometry.

Одним способом визначення зв'язування є визначення ЕСзо для зв'язування пептиду з мутантним білком і з білюом дикого типу та порівняння одержаних величин. Іншим способом визначення зв'язування є розгляд амплітуди зв'язування при концентрації насичення (наприклад, на плато сигналу зв'язування) або шляхом визначення кінетичних констант швидкості Коп та Кої, наприклад, за допомогою ВіАсоге.One way to determine the binding is to determine the ESO for the binding of the peptide to the mutant protein and to the wild-type protein and compare the obtained values. Another way to determine binding is to consider the binding amplitude at a saturating concentration (for example, at the plateau of the binding signal) or by determining the Kop and Koi kinetic rate constants, for example, using ViAsoge.

В одному втіленні зв'язування розглянутого пептиду з СОЗ8 білками (мутантом або диким типом) проводять за допомогою ЕГІЗА, як описано в прикладі 17.In one embodiment, the binding of the peptide in question to SOZ8 proteins (mutant or wild type) is carried out using EGISA, as described in example 17.

В одному втіленні, ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СО38 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮО МО: 34), становить менше 50 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31). В одному втіленні,In one embodiment, the EC50 for the binding of the peptide to mutant human CO38 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IUO MO: 34) is less than 50 95 ECo for binding the peptide to human COZ38 (5EO IU MO : 31). In one embodiment,

ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 2714 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІЮ МО: 34), становить менше 10 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (З5ЕО ІО МО: 31). В одному втіленні, ЕСвзо для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 5 95 ЕСво для зв'язування пептиду зECo for the binding of the peptide to the human SOZ8 mutant, in which the serine residue at position 2714 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IU MO: 34), is less than 10 95 ECo for binding the peptide to human SOC8 (Z5EO IO MO: 31). In one embodiment, the ESvo binding of a peptide to a mutant human COZ8 in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34) is less than 5 95 ESvo for peptide binding to

СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31). В одному втіленні, ЕСзо для зв'язування пептиду з мутантнимCO38 of a person (5EO IU MO: 31). In one embodiment, ES3 to bind the peptide to the mutant

СОЗ8 людини, у якому залишок серину в положенні 274 заміщений залишком фенілаланіну (ЗЕО ІО МО: 34), становить менше 1 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮHuman COZ8, in which the serine residue at position 274 is replaced by a phenylalanine residue (ZEO IO MO: 34), is less than 1 95 ESvo for peptide binding to human COZ8 (ZEO IU

МО: 31).MO: 31).

В одному втіленні, ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СО38 людини, у якому 60 залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІЮ МО: 33), становить менше 50 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31). В одному втіленні,In one embodiment, the EC50 for the binding of the peptide to the human CO38 mutant, in which the 60 glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33), is less than 50 95 ECvo for the binding of the peptide to human COZ38 (5EO IU MO: 31). In one embodiment,

ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок глутаміну в положенні 272 заміщений залишком аргініну (ЗЕО ІО МО: 33), становить менше 10 95 ЕСво для зв'язування пептиду з СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31).The ESvo for binding the peptide to the human mutant SOZ8, in which the glutamine residue at position 272 is replaced by an arginine residue (ZEO IU MO: 33), is less than 10 95 ESvo for binding the peptide to human CO38 (5EO IU MO: 31).

В одному втіленні, пептиди відповідно до винаходу зв'язуються з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32) в такому ж ступені, як вони зв'язуються з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31). В одному втіленні, ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), становить більше 7595 величини ЕСво для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31). В одному втіленні, ЕСвзо для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ38 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІО МО: 32), становить більше 85 95 величини ЕСзо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІО МО: 31). В одному втіленні, ЕС5о для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 90 95 величини ЕСбхо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (5ЕО ІЮ МО: 31). В одному втіленні, ЕСво для зв'язування пептиду з мутантним СОЗ8 людини, у якому залишок треоніну в положенні 237 заміщений залишком аланіну (ЗЕО ІЮ МО: 32), становить більше 95 95 величини ЕСбо для зв'язування пептиду з СОЗ8 людини (ЗЕО ІЮ МО:In one embodiment, the peptides of the invention bind to a mutant human POP8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) to the same extent as they bind to human POP8 (5EO IU MO : 31). In one embodiment, the ECo for the binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32) is greater than 7595 ECo value for the binding of the peptide to human COZ8 (ZEO IO MO : 31). In one embodiment, the ESv0 for the binding of the peptide to a mutant human COZ38 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IO MO: 32) is greater than 85 95 the value of the ECz0 for binding the peptide to human COZ8 (ZEO IO MO: 31). In one embodiment, the EC50 for the binding of the peptide to a mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) is greater than 90 95 the ECb0 value for the binding of the peptide to human COZ8 (5EO IU MO: 31). In one embodiment, the ESvo for binding a peptide to mutant human COZ8 in which the threonine residue at position 237 is replaced by an alanine residue (ZEO IU MO: 32) is greater than 95 95 the ECvo value for binding the peptide to human COZ8 (ZEO IU MO:

З1).C1).

Щоб ідентифікувати більш специфічно можливі області антигенних детермінант в СОЗ38, можна застосовувати різні прогностичні аналітичні підходи. У першому аналітичному підходіDifferent predictive analytical approaches can be used to identify more specific possible regions of antigenic determinants in POP38. In the first analytical approach

СО38 можна аналізувати на (1) області з високою гідропатичністю (застосовуючи спосіб Кайт-СО38 can be analyzed for (1) regions with high hydropathicity (using the method of Kite-

Дулітл (Куїе-ЮооїїШе)); (2) антигенність при визначенні способом індексу випинання; (3) антигенність при визначенні способом Паркера; (4) антигенність при визначенні способомDoolittle (Kuiye-YoooiyShe)); (2) antigenicity when determined by the protrusion index method; (3) antigenicity when determined by the Parker method; (4) antigenicity when determined by the method

Хопп/Вуда та (5) гідрофільность при визначенні способами Голдмана, Енглемана та Стайца.Hopp/Wood and (5) hydrophilicity when determined by Goldman, Engleman and Steitz methods.

Послідовності в інтервалі довжини 10-40 амінокислот можна вибирати на основі вияву однієї чи більше з цих властивостей. Обгрунтуванням такого підходу є загальноприйнята ідея, що багато ідеальних епітопів В-клітин є гідрофільними, орієнтованими на поверхню та гнучкі послідовності із довжиною приблизно 8-10 амінокислот.Sequences in the length range of 10-40 amino acids can be selected based on the expression of one or more of these properties. The rationale for this approach is the generally accepted idea that many ideal B-cell epitopes are hydrophilic, surface-oriented, and flexible sequences of approximately 8-10 amino acids in length.

Зо Даний винахід пропонує СОЗ8ВР, специфічні до СОЗ8-областей СОЗ8, ідентифіковані у такий спосіб. Далі, кінці таких послідовностей можна порівнювати з передвіщеними областями антигенних детермінант, локалізованими за допомогою інших аналітичних підходів, описаних тут, для надання додаткових специфічних областей, що містять імовірні антигенні детермінанти.The present invention provides COZ8BPs specific to the COZ8-regions of COZ8, identified as follows. Further, the ends of such sequences can be compared to predicted regions of antigenic determinants localized using other analytical approaches described herein to provide additional specific regions containing putative antigenic determinants.

Інші схожі порівняння можна легко проробити, щоб надати додаткові області можливих антигенних детермінант, де зв'язування СОЗ8ВР із цими областями антигенних детермінант може вважатися ще однією властивістю даного винаходу.Other similar comparisons can easily be made to provide additional regions of possible antigenic determinants, where the binding of SOZ8BP to these regions of antigenic determinants can be considered another property of the present invention.

В одному втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є антитілом. Необмежувальні прикладиIn one embodiment, the SOZ8VR of the present invention is an antibody. Non-limiting examples

СО38-зв'язуючих молекул імуноглобуліну, наданих даним винаходом, включають (а) повну функціональну молекулу імуноглобуліну, яка включає: (1) два ідентичних химерних важких ланцюга, що включають варіабельний область з антигенною специфічністю поверхні В-клітини людини та константний область людини, і (2) два цілком ідентичних (тобто, нехимерних) легких ланцюга людини; (б) повну функціональну молекулу імуноглобуліну, яка включає: (1) дві ідентичних химерних важких ланцюга, що включають варіабельну область, як зазначено, і константний область людини, і (2) два цілком ідентичних (тобто, нехимерних) легких ланцюги не-людини; (в) моновалентне антитіло, тобто, повну функціональну молекулу імуноглобуліну, яка включає: (1) два ідентичних химерних важких ланцюга, що включають варіабельну область, як зазначено, і константний область людини і (2) два різних легких ланцюга, тільки один з яких має таку ж специфічність, як і варіабельний область важких ланцюгів. Утворювана молекула антитіла зв'язується тільки одним своїм кінцем і тому нездатна до двовалентного зв'язування.The CO38-binding immunoglobulin molecules provided by the present invention include (a) a fully functional immunoglobulin molecule comprising: (1) two identical chimeric heavy chains comprising a human B-cell surface antigen-specific variable region and a human constant region, and (2) two completely identical (ie, non-chimeric) human light chains; (b) a complete functional immunoglobulin molecule comprising: (1) two identical chimeric heavy chains comprising a variable region as indicated and a human constant region, and (2) two completely identical (ie, non-chimeric) non-human light chains ; (c) a monovalent antibody, i.e., a complete functional immunoglobulin molecule comprising: (1) two identical chimeric heavy chains comprising a variable region as indicated and a human constant region and (2) two different light chains, only one of which has the same specificity as the variable region of heavy chains. The resulting antibody molecule binds only at one end and is therefore incapable of divalent binding.

Як інша ілюстрація, пептиди, що належать до імуноглобулінів, надані даним винаходом, можна сказати, включають такі: (а) цілу молекулу імуноглобуліну; (б) 5сЕм; (в) моноклональне антитіло; (г) химерне антитіло; (д) гуманізоване антитіло; (е) Баб фрагмент; (ж) Рар' фрагмент; (3) Е(аб) фрагмент; (ї) Ем молекулу; (к) Ем молекулу, зв'язану дисульфідним зв'язком.As another illustration, peptides belonging to immunoglobulins provided by the present invention may be said to include the following: (a) an entire immunoglobulin molecule; (b) 5sEm; (c) monoclonal antibody; (d) chimeric antibody; (e) humanized antibody; (e) Bab fragment; (g) Rar' fragment; (3) E(ab) fragment; (i) Em molecule; (k) A molecule connected by a disulfide bond.

В одному втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є поліклональним антитілом. В одному втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є моноклональним антитілом. В наступному втіленні,In one embodiment, the SOZ8BP of the present invention is a polyclonal antibody. In one embodiment, the SOZ8BP of the present invention is a monoclonal antibody. In the next incarnation,

СОЗ8ВР за даним винаходом є моноклональним антитілом людини. В іншому подальшому втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є гуманізованим антитілом. В іншому подальшому втіленні СОЗВВР за даним винаходом є химерним антитілом. В іншому подальшому втіленніThe SOZ8BP according to the present invention is a human monoclonal antibody. In another further embodiment, the SOZ8VR of the present invention is a humanized antibody. In another further embodiment, the HCVAR of the present invention is a chimeric antibody. In another subsequent incarnation

СОЗ8ВР за даним винаходом є моноклональним антитілом, яке цілком походить з видів ссавців,The SOZ8BP of the present invention is a monoclonal antibody that is entirely derived from mammalian species,

відмінних від людини. В іншому подальшому втіленні СОЗ8ВР за даним винаходом є цілком мишачим моноклональним антитілом.different from humans. In another further embodiment, the SOZ8BP of the present invention is a fully murine monoclonal antibody.

Моноклональне антитіло належить до композиції, яка включає гомогенну популяцію антитіл, що мають однакову структуру та специфічність. Звичайно, моноклональне антитіло є антитілом, одержаним з популяції в основному гомогенних антитіл, наприклад, індивідуальні антитіла, що складають популяцію, є ідентичними за винятком можливих мутацій, що зустрічаються в природі, які можуть бути присутніми у невеликих кількостях. Моноклональні антитіла є високоспецифічними і кожне моноклональне антитіло звичайно спрямоване проти єдиного епітопа, на противагу препаратам поліклональних антитіл, які звичайно включають різні антитіла, спрямовані проти різних епітопів. Властивість моноклональності не слід тлумачити як вимогу виробництва антитіл якимсь особливим способом. Наприклад, моноклональні антитіла за даним винаходом можна продукувати за допомогою гібридомного способу, уперше описаногоMonoclonal antibody refers to a composition that includes a homogeneous population of antibodies having the same structure and specificity. Of course, a monoclonal antibody is an antibody derived from a population of substantially homogeneous antibodies, ie, the individual antibodies that make up the population are identical except for possible naturally occurring mutations that may be present in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific and each monoclonal antibody is usually directed against a single epitope, in contrast to polyclonal antibody preparations, which usually include different antibodies directed against different epitopes. The property of monoclonality should not be interpreted as a requirement to produce antibodies in any particular way. For example, the monoclonal antibodies of the present invention can be produced using the hybridoma method first described

Копіег єї аї., Маїиге 256, 495 (1975), або можна одержувати за допомогою ДНК-рекомбінантних способів. Моноклональні антитіла можна також ізолювати з фагових бібліотек антитіл, застосовуючи техніки, описані, наприклад, в Сіаскз5оп еї аї., Маїшге 352, 624-628 (1991) та Магк5 еї аї., У. Мої. Віої. 222. 581-597 (1991).Kopieg et al., Maighe 256, 495 (1975), or can be obtained using DNA-recombinant methods. Monoclonal antibodies can also be isolated from phage antibody libraries using techniques described, for example, in Siaskz5op ei ai., Maishge 352, 624-628 (1991) and Magk5 ei ai., U. Moi. Vioi 222. 581-597 (1991).

Моноклональні антитіла можна одержувати з будь-якого придатного джерела. Так, наприклад, моноклональні антитіла можна одержувати з гібридом, одержаних із В-клітин селезінки миші, одержаних з миші, імунізованої потрібним антигеном, наприклад, у формі клітин, експресуючих антиген на поверхні, або нуклеїнової кислоти, кодуючої потрібний антиген.Monoclonal antibodies can be obtained from any suitable source. Thus, for example, monoclonal antibodies can be obtained with a hybrid obtained from mouse spleen B cells obtained from a mouse immunized with the desired antigen, for example, in the form of cells expressing the antigen on the surface, or nucleic acid encoding the desired antigen.

Моноклональні антитіла можна також одержувати з гібридом, вироблених з експресуючих антитіла клітин імунізованих людей або ссавців, відмінних від людини, таких як щури, собаки, примати т.д.Monoclonal antibodies can also be obtained with a hybrid produced from antibody-expressing cells of immunized humans or non-human mammals such as rats, dogs, primates, etc.

Альтернативно, гени клонованих антитіл можна експресувати в інших системах експресії, включаючи прокаріотичні клітини, наприклад, мікроорганізми, наприклад, Е. Соїї для одержання одноланцюгових Ем антитіл, водорості, а також клітини комах. Далі, антитіла можна одержувати за допомогою трансгенних тварин, відмінних від людини, наприклад, у молоці овець чи кроликів або в курячих яйцях, або в трансгенних рослинах. Див., наприклад, Мегта, Р., еї аї., 9У. Іттипої.Alternatively, cloned antibody genes can be expressed in other expression systems, including prokaryotic cells, for example, microorganisms, for example, E. Soya to produce single-chain Em antibodies, algae, as well as insect cells. Further, antibodies can be obtained using transgenic animals other than humans, for example, in the milk of sheep or rabbits or in chicken eggs, or in transgenic plants. See, for example, Meghta, R., ей ай., 9У. And so on.

Мей. 216, 165-181 (1998); РоПоскК, еї аї., У. Іттипої. Меїб. 231, 147-157 (1999); і Гізопег, К., еї аї.,May 216, 165-181 (1998); RoPoskK, ei ai., U. Ittipoi. Maeb. 231, 147-157 (1999); and Hysopegus, K., ei ai.,

Зо ВіоІ. Спнет. 380, 825-839 (1999).From VioI. Turn off 380, 825-839 (1999).

В одному втіленні, моноклональні антитіла людини, спрямовані на СО38, можна одержувати за допомогою трансгенних або трансхромосомних мишей, що несуть частини імунної системи людини, а не системи миші. Такі трансгенні або трансхромосомні миші називаються тут НИМАБб миші та КМ миші, відповідно, і всі разом називаються "трансгенні миші". Моноклональні антитіла людини, вироблювані у таких мишей, можна скорочено називати НиМаб.In one embodiment, human monoclonal antibodies directed against CO38 can be produced using transgenic or transchromosomal mice carrying parts of the human immune system rather than the mouse system. Such transgenic or transchromosomal mice are referred to herein as NIMAbb mice and KM mice, respectively, and are collectively referred to as "transgenic mice". Monoclonal human antibodies produced in such mice can be abbreviated NyMab.

НимМАБ миша несе мінілокуси гена імуноглобуліну людини, які кодують переорганізовані послідовності важкого (н і у) і легкого (к) ланцюга імуноглобуліну людини разом зі спрямованими мутаціями, які інактивують ендогенні локуси | і к ланцюга (І опрего, М. еї аіІ., Маїиге 368, 856-859 (1994)). Відповідно, миша виявляє знижену експресію мишачого ДМ або к їі у відповідь на імунізацію внесені трансгени важкого та легкого ланцюга людини зазнають переключення класу та соматичну мутацію, щоб виробляти моноклональні антитіла дос, к з високою спорідненістю (Гопрего, М. єї аї. (1994), вирга; геміеєжей іп Гопрего, М. НапароокК ої Ехрегітепіа! РпаптасоЇоду 113, 49-101 (1994), І опрего, М. апа Нивзлаг, О., Іпїет. Нем. Іттипої. МоІї. 13 65-93 (1995) таMouse NimMAB carries human immunoglobulin gene miniloci that encode rearranged human immunoglobulin heavy (n and y) and light (k) chain sequences together with directed mutations that inactivate the endogenous loci | and to the chain (I oprego, M. ei aiI., Maiiige 368, 856-859 (1994)). Accordingly, the mouse exhibits reduced expression of murine DM or kii, and in response to immunization, introduced human heavy and light chain transgenes undergo class switching and somatic mutation to produce high-affinity ds, k monoclonal antibodies (Goprego, M. Yeyi Ai. (1994) , vyrga; hemiyezhei ip Hoprego, M. NaparookK oi Ekhregitepia! RpaptassoYodu 113, 49-101 (1994), I oprego, M. apa Nyvzlag, O., Ipiet. Nem. Ittipoi. MoIi. 13 65-93 (1995) and

Нагаїпо, РЕ. апа І опрего, М. Апп. М.У. Асад. 5сі 764 536-546 (1995)). Одержання НиМАБ детально описано у Тауїйог, Ї. еї аї., Мисіеїс Асід5 Кезеагсі 20, 6287-6295 (1992), Спеп, 5. еїа!., Іпіегпайіопаї!Nagaipo, RE. apa I oprego, M. App. M.U. Asad 5si 764 536-546 (1995)). The preparation of NyMAB is described in detail in Touyog, J. et al., Mysies Acid5 Kezeagsi 20, 6287-6295 (1992), Spep, 5. eia!., Ipiegpaiiopai!

Іттипоїоду 5, 647-656 (1993), Тиайоп еї аї., у. Іттипої. 152, 2912-2920 (1994), Таупог, Ї. еї аї.,Ittipoiodo 5, 647-656 (1993), Tyayop ei ai., u. And so on. 152, 2912-2920 (1994), Taupog, Y. ei ai.,

Іптетаїйопаї! Іттипоіоду 6, 579-591 (1994), РібпУліІа, 0. еї аї., Маїште ВіотесппоІоду 14, 845-851 (1996). Див. також 5 5545806, 05 5569825, 05 5625126, 05 5633425, 05 5789650, 005 5877397, 55661016, 005 5814318, 05 5874299, 005 5770429, 005 5545807, МО 98/24884, МО 94/25585,Iptetaiiopai! Ittypoiodu 6, 579-591 (1994), Ribpolia, 0. ei ai., Maishte ViotesppoIodu 14, 845-851 (1996). See Also 5 5545806, 05 5569825, 05 5625126, 05 5633425, 05 5789650, 005 5877397, 55661016, 005 5814318, 05 5874299, 005

УМО 93/1227, МО 92/22645, УМО 92/03918 та УМО 01/09187.UMO 93/1227, MO 92/22645, UMO 92/03918 and UMO 01/09187.

Миші НСо7 несуть порушення УКО у своїх ендогенних генах легких ланцюгів (к) (як описано у Спеп еї аІ., ЕМВО 3. 12, 821-830 (1993)), порушення СМО у своїх ендогенних генах важких ланцюгів (як описано в прикладі 1 М/О 01/14424), КСо5 трансген к легкого ланцюга людини (як описано у Різпм/йа еї аї., Маїшге Віоїесппоіоду 14, 845-851 (1996)) ії НСо7 трансоген важкого ланцюга людини (як описано у 05 5770429).HCo7 mice carry a violation of UKO in their endogenous genes of light chains (k) (as described in Spey aI., EMVO 3. 12, 821-830 (1993)), a violation of SMO in their endogenous genes of heavy chains (as described in example 1 M/O 01/14424), KCo5 transgene of human light chain (as described in Rizpm/ya ei ai., Maishge Biospoiodu 14, 845-851 (1996)) and HCo7 transgene of human heavy chain (as described in 05 5770429).

Миші НСо12 несуть порушення УКО у своїх ендогенних генах легких ланцюгів (к) (як описано у Спеп еї аІ., ЕМВО 3. 12, 821-830 (1993)), порушення СМО у своїх ендогенних генах важких ланцюгів (як описано в прикладі 1 М/О 01/14424), КСо5 трансген к легкого ланцюга людини (як описано у ЕРізпм/йа еї аї., Маїиге Віоїесппоїоду 14, 845-851 (1996)) і НСо12 трансген важкого бо ланцюга людини (як описано в прикладі 2 УМО 01/14424). У штаму мишей КМ ендогенний ген к легкого ланцюга миші був гомозиготно зруйнований, як описано в Спеп еї аї!., ЕМВО .. 12, 821- 830 (1993), і ендогенний ген важкого ланцюга миші гомозиготно зруйнований, як описано в прикладі 1 МО 01/09187. Цей мишачий штам несе трансген к легкого ланцюга людини, КСоб5, як описано у Різпм/йа еї аї!., Майиге ВіоїесппоЇоду 14, 845-851 (1996). Цей мишачий штам також несе трансхромосому важкого ланцюга людини, що складається із фрагмента СЕ 14-ої хромосоми (5020), як описано в М/О 02/43478.HCo12 mice carry a violation of UKO in their endogenous genes of light chains (k) (as described in Spey aI., EMVO 3. 12, 821-830 (1993)), a violation of SMO in their endogenous genes of heavy chains (as described in example 1 M/O 01/14424), KCo5 human light chain k transgene (as described in ERizpm/ya ei ai., Medical Biochemistry 14, 845-851 (1996)) and HCo12 human heavy bo chain transgene (as described in Example 2 of UMO 01/14424). In the KM strain of mice, the endogenous k gene of the mouse light chain was homozygously disrupted as described in Spec., EMVO .. 12, 821-830 (1993), and the endogenous mouse heavy chain gene was homozygously disrupted as described in Example 1 MO 01/09187. This mouse strain carries a human light chain transgene, KSob5, as described in Rizpm/ya ei ai!., Medical Biotechnology 14, 845-851 (1996). This mouse strain also carries a human heavy chain transchromosome consisting of a CE fragment of chromosome 14 (5020) as described in M/O 02/43478.

Миші КМ несуть трансхромосому важкого ланцюга людини та трансген к легкого ланцюга людини. Гени ендогенних важкого та легкого ланцюгів миші також порушені в КМ мишей, так що імунізація мишей приводить до продукції імуноглобулінів людини, а не миші. Конструкція КМ мишей та їхнє застосування для напрацювання імуноглобулінів людини детально описані в МО 02/43478.KM mice carry a human heavy chain transchromosome and a human light chain k transgene. The endogenous heavy and light chain genes of the mouse are also disrupted in the CM of mice, so that immunization of mice leads to the production of human, not mouse, immunoglobulins. The construction of the CM of mice and their use for the production of human immunoglobulins are described in detail in MO 02/43478.

Клітини селезінки таких трансгенних мишей можна застосовувати для одержання гібридом, які секретують моноклональні антитіла людини, згідно з добре відомими техніками. Такі трансгенні ссавці, ссавці, які включають працюючу послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує експресію СОЗ38ВР, ссавці, стабільно трансфековані однією чи більше послідовністю нуклеїнової кислоти, що кодує СОЗ8 і т.п., Є додатковою властивістю даного винаходу.Spleen cells of such transgenic mice can be used to produce hybridomas that secrete human monoclonal antibodies, according to well-known techniques. Such transgenic mammals, mammals that include a functional nucleic acid sequence encoding the expression of COZ38BP, mammals stably transfected with one or more nucleic acid sequences encoding COZ8, etc., are an additional feature of this invention.

Моноклональні чи поліклональні антитіла людини згідно з даним винаходом або антитіла за даним винаходом, що походять з інших видів, можна виробляти трансгенним способом шляхом одержання іншого ссавця, відмінного від людини, або рослини, що є трансгенними для розглянутих послідовностей важкого та легкого ланцюгів, і продукції антитіла у формі, придатній для виділення. У зв'язку із трансгенною продукцією у ссавців, антитіла можна робити та виділяти з молока овець, корів або інших ссавців. Див., наприклад, 5 5827690, 05 5756687, 05 5750172 та 5 5741957.Monoclonal or polyclonal human antibodies of the present invention or antibodies of the present invention derived from other species can be produced transgenically by obtaining a non-human mammal or a plant that is transgenic for the heavy and light chain sequences in question, and the products antibodies in a form suitable for isolation. In connection with transgenic products in mammals, antibodies can be made and isolated from the milk of sheep, cows or other mammals. See for example 5 5827690, 05 5756687, 05 5750172 and 5 5741957.

Далі, антитіла людини згідно з даним винаходом або антитіла за даним винаходом, що походять з інших видів, можна одержувати за допомогою технік дисплея, включаючи без обмежень, фаговий дисплей, ретровірусний дисплей, рибосомальний дисплей та інші техніки, добре відомі в даній області, і утворювані молекули можна піддавати додатковому дозріванню, такому як дозрівання спорідненості, за допомогою технік, добре відомих у даній області (див., наприклад, Ноодепроот еї аї.,У. Мої. Віо!І. 227. 381 (1991) (фаговий дисплей), Мацднап еї аї.,Further, human antibodies of the present invention or antibodies of the present invention derived from other species can be obtained using display techniques, including without limitation, phage display, retroviral display, ribosomal display, and other techniques well known in the art, and the resulting molecules can be subjected to additional maturation, such as affinity maturation, using techniques well known in the art (see, e.g., Noodeproot et al., U. Moi. Viol. I. 227. 381 (1991) (phage display) , Matsdnap ei ai.,

Зо Маїсиге Віоїеспі. 14. 309 (1996) (фаговий дисплей), Напез апа Ріисіпаи, РМАЗ ОА 94, 4937-4942 (1997) (рибосомальний дисплей), Рагптіеу апі тій, Сепе 73, 305-318 (1988) (фаговий дисплей), Зсой ТІВЗ 17, 241-245 (1992), См/па єї анІ., РМАБ5 ОБА 87, 6378-6382 (1990), Вивз5еї єї а!., Мисі. Асіа5 Незеагсі 21, 1081-1085 (1993), Ноодепроот еї аї., Іттипої. Немівем5 130, 43-68 (1992), Співме!!Ї апа МеСайепу ТІВТЕСН 10, 80-84 (1992) ії 05 5733743). Якщо технології дисплея застосовуються для продукції антитіл, які не є людськими, такі антитіла можна гуманізувати, наприклад, як описано тут.From Maisyge Vioyespi. 14. 309 (1996) (phage display), Napez apa Riisipai, RMAZ OA 94, 4937-4942 (1997) (ribosomal display), Ragptieu api tii, Sepe 73, 305-318 (1988) (phage display), Zsoi TIVZ 17, 241-245 (1992). Asia Pacific 21, 1081-1085 (1993), Noodeproot et al., Ittipoi. Nemivem5 130, 43-68 (1992), Spimme!!Y apa MeSayepu TIVTESN 10, 80-84 (1992) and 05 5733743). If display technologies are used to produce non-human antibodies, such antibodies can be humanized, for example as described herein.

Гуманізовані моноклональні антитіла за даним винаходом можна одержувати шляхом з'єднання константних доменів антитіла людини з варіабельними доменами з відмінних від людини видів. Приклади того, як одержати гуманізовані антитіла, можна знайти, наприклад, в 5 6054297, 05 5886152 та 05 5877293. Гуманізоване антитіло створюють так, щоб одержати більшу гомологію з імуноглобуліном людини, ніж у вироблених з тварин моноклональних антитіл. Амінокислотні залишки нелюдського походження з "внесеного" (тварини) варіабельного домену звичайно трансфекують в "кістякову" людину. Гуманізацію, в основному, можна проводити способом Вінтера та співавторів (опез еї аї!., Маїшге 321, 522-525 (1986), Віесптапп еї аї,, Майте 332, 323-327 (1988), Мегптоеуєп єї аїЇ., бсіепсе 239, 1534-1536 (1988)) шляхом заміщення областей гризуна, що визначають комплементарність ("СОМ5") або СОК послідовностей на відповідні послідовності антитіла людини. Відповідно, у таких гуманізованих антитілах СОК частини варіабельних областей людини заміщені відповідною послідовністю з видів, відмінних від людини. Так, гуманізовані антитіла є звичайно антитілами людини, у яких деякі залишки СОЖК і, можливо, деякі залишки каркасної області заміщені залишками з аналогічних ділянок антитіл гризунів. Вибір варіабельних областей людини, як легкого, так і важкого, для застосування в одержанні гуманізованих антитіл, є важливим для зменшення антигенності. Згідно з так званим способом "найкращої згоди", послідовність варіабельного домену антитіла гризуна піддають скринінгу проти всієї бібліотеки відомих послідовностей варіабельного домену людини. Послідовність людини, що виявляється найближчою до послідовності гризуна, далі застосовують як каркасну послідовність людини (ЕК) для гуманізованого антитіла (біт еї аї., у. Іттипої., 151, 2296 (1993), Споїпіа еї аї., У. Мої. Віої. 196, 901 (1987)). Інший спосіб застосовує окрему каркасну частину, вироблену з узагальнюючої типової послідовності антитіл людини окремої підгрупи легкого та важкого ланцюгів. Таку ж каркасну частину можна застосовувати для декількох різних гуманізованих антитіл (Сагіег еї аї.,Humanized monoclonal antibodies according to the present invention can be obtained by combining the constant domains of human antibodies with variable domains from non-human species. Examples of how to make humanized antibodies can be found, for example, in 5 6054297, 05 5886152 and 05 5877293. A humanized antibody is created to have greater homology with human immunoglobulin than monoclonal antibodies produced from animals. Amino acid residues of non-human origin from the "introduced" (animal) variable domain are usually transfected into a "bone" human. Humanization can mainly be carried out by the method of Winter and co-authors (opez ei ai!., Maishge 321, 522-525 (1986), Wiesptapp ei ai,, Maite 332, 323-327 (1988), Megptoeuyep ei aiY., bsiepse 239 , 1534-1536 (1988)) by replacing the rodent complementarity-determining regions ("COM5") or SOC sequences with the corresponding human antibody sequences. Accordingly, in such humanized SOC antibodies, parts of the human variable regions are replaced by the corresponding sequence from a non-human species. Thus, humanized antibodies are usually human antibodies, in which some residues of the LFA and possibly some residues of the framework region are replaced by residues from similar regions of rodent antibodies. The choice of human variable regions, both light and heavy, for use in the production of humanized antibodies is important to reduce antigenicity. According to the so-called "best match" method, the sequence of the variable domain of the rodent antibody is screened against the entire library of known sequences of the human variable domain. The human sequence, which turns out to be the closest to the rodent sequence, is then used as a human framework sequence (EC) for a humanized antibody (bit ei ai., u. Ittipoi., 151, 2296 (1993), Spoipia ei ai., U. Moi. Vioi 196, 901 (1987)). Another method uses a separate framework part produced from the generalization of the typical human antibody sequence of a separate subgroup of light and heavy chains. The same framework part can be used for several different humanized antibodies (Sagieg ei ai.,

РМАБ БА 89, 4285 (1992), Ргезіа в! аї., у. Іттипої. 151, 2623(1993)).RMAB BA 89, 4285 (1992), Rhezia in! ai., u. And so on. 151, 2623(1993)).

Звичайно також важливо, щоб гуманізовані антитіла зберігали високу спорідненість до антигену та інші сприятливі біологічні властивості. для досягнення цієї мети гуманізовані антитіла можна одержувати за допомогою аналізу батьківських послідовностей і різних відвернених гуманізованих продуктів із застосуванням тривимірних моделей батьківських і гуманізованих послідовностей. Тривимірні моделі імуноглобуліну доступні для всіх і знайомі фахівцю в даній області. Доступні комп'ютерні програми, які ілюструють і пропонують імовірні тривимірні конформаційні структури послідовностей імуноглобуліну вибраних кандидатів.Of course, it is also important that humanized antibodies retain high antigen affinity and other favorable biological properties. to achieve this goal, humanized antibodies can be obtained by analyzing the parent sequences and various reverse humanized products using three-dimensional models of the parent and humanized sequences. Three-dimensional models of immunoglobulin are available to everyone and are familiar to a person skilled in the art. Computer programs are available that illustrate and suggest probable three-dimensional conformational structures of selected candidate immunoglobulin sequences.

Перегляд цих дисплеїв дозволяє проаналізувати ймовірну роль певних залишків у функціонуванні послідовності імуноглобуліну кандидата, наприклад, аналіз залишків, які впливають на здатність послідовності імуноглобуліну кандидата зв'язувати свій антиген. Таким чином, залишки ЕК можна вибирати та комбінувати з послідовностей реципієнта та внесених послідовностей, так щоб довести до максимуму бажані характеристики антитіла, такі як збільшена спорідненість до антигену мішені, хоча саме СОК залишки прямо та найбільш значно впливають на зв'язування антигену.Viewing these displays allows analysis of the likely role of certain residues in the functioning of the candidate immunoglobulin sequence, for example, analysis of residues that affect the ability of the candidate immunoglobulin sequence to bind its antigen. Thus, EC residues can be selected and combined from recipient sequences and introduced sequences to maximize desired antibody characteristics, such as increased affinity for the target antigen, although it is the SOC residues that directly and most significantly affect antigen binding.

Мишачі антитіла або антитіла з інших видів можна гуманізувати або приматизувати із застосуванням будь-якої придатної техніки, велике число придатних технік уже добре відомо в даній області (див., наприклад, Уміпіег апа Наїгті5, Іттипої. Тодау 14, 43-46 (1993) і Мугідні еї аї.,Murine antibodies or antibodies from other species can be humanized or primatized using any suitable technique, a large number of suitable techniques are already well known in the art (see, e.g., Umipieg apa Naigti5, Ittipoi. Todau 14, 43-46 (1993) and Mugidni ey ai.,

Стії. Веміємв іп Іттипої. 125-168 (1992)). Дане антитіло можна побудувати за допомогою ДНК рекомбінантних технік, щоб замістити Сні, Сн2, Сн3, області зв'язки та/або каркасні домени відповідними послідовностями людини (див. М/ЛО 92/02190 та 05 5530101, 005 5585089, 5 5693761, 5 5693792, 05 5714350 їі 05 5777085).Stia Vemiemv ip Ittipoi. 125-168 (1992)). This antibody can be constructed using recombinant DNA techniques to replace the Cn, Cn2, Cn3, linker regions and/or framework domains with the corresponding human sequences (see M/LO 92/02190 and 05 5530101, 005 5585089, 5 5693761, 5 5693792, 05 5714350 and 05 5777085).

Гуманізацію антитіл можна також проводити за допомогою способу Вінтера та співавторів (Чопез єї аї!., Маїште 321, 522-525 (1986), Ніесптапп еї аї., Майте 332, 323-327 (1988), Метовуеп еіа!., 5сіепсе 239, 1534-1536 (1988)) шляхом заміщення послідовностей СОМ: або СОК гризунів відповідними послідовностями антитіла людини. Відповідно, такі "гуманізовані" антитіла є, у певному розумінні, химерними антитілами (05 4816567), де значно менше матеріалу, ніж інтактний варіабельний область людини, заміщено відповідною послідовністю з виду, відмінного від людини. На практиці гуманізовані антитіла є звичайно антитілами людини, у яких деякі СОК залишки та, імовірно, деякі ЕК залишки, заміщені залишками з аналогічних ділянок антитіл гризунів.Humanization of antibodies can also be carried out using the method of Winter and co-authors (Chopez et al., Maishte 321, 522-525 (1986), Niesptapp et al., Mayte 332, 323-327 (1988), Metovuep eia!., 5siepse 239 , 1534-1536 (1988)) by replacing the sequences of COM: or SOC of rodents with the corresponding sequences of human antibodies. Accordingly, such "humanized" antibodies are, in a sense, chimeric antibodies (05 4816567) where significantly less material than the intact human variable region is replaced by a corresponding sequence from a species other than human. In practice, humanized antibodies are usually human antibodies in which some SOC residues and presumably some EC residues are replaced by residues from similar regions of rodent antibodies.

Також, застосування кКДНК імуноглобуліну для конструкції генів химерного імуноглобуліну відомо в даній області техніки (див., наприклад, Гіш еї ам, РМАБ БА 84, 3439 (1987) ії 3.Also, the use of immunoglobulin cDNA for the construction of chimeric immunoglobulin genes is known in this field of technology (see, for example, Gish et al., RMAB BA 84, 3439 (1987) and 3.

Ітітипої. 139, 3521 (1987)). МРНК ізолюють із гібридоми або інших клітин, продукуючих антитіло, і застосовують для виробництва кКДНК. Розглянуті КДНК можна ампліфікувати із застосуванням полімеразної ланцюгової реакції з використанням специфічних праймерів (05 4683195 та 05 4683202). Альтернативно, роблять бібліотеку та проводять скринінг, щоб ізолювати потрібну послідовність. Послідовність ДНК, що кодує варіабельний область антитіла, далі з'єднують із послідовностями константної області людини. Послідовності константних областей людини (а також варіабельних областей) можна знайти в КаБбаї еї аї., (1991) Зедиепсе5 ої Ргоївіп5 оїItitipoi 139, 3521 (1987)). The mRNA is isolated from the hybridoma or other antibody-producing cells and used to produce cDNA. The considered cDNAs can be amplified using the polymerase chain reaction using specific primers (05 4683195 and 05 4683202). Alternatively, a library is made and screened to isolate the desired sequence. The DNA sequence encoding the variable region of the antibody is then joined with the sequences of the human constant region. Sequences of human constant regions (as well as variable regions) can be found in KaBbai ei ai., (1991) Zedyepse5 oi Rgoivip5 oi

Іттипо|одісаї Іпіегеві, М.І.Н. рибіїсайоп по. 91-3242, і більш недавні та стосовні до справи дані можна знайти на пр: /Люимли.Біоспет.исі.ас.ик/-тагіп/ар5зепегаїІпто.піті. Вибір ізотипу, звичайно, направляється бажаними функціями ефекторів, такими як фіксація комплементу або активність у залежній від антитіла клітинній цитотоксичності. Прикладами ізотипів є Іде, дог,Ittipo|odisai Ipiegevi, M.I.N. ribiisayop by. 91-3242, and more recent and relevant data can be found at: /Lyuimly.Biospet.ysi.as.ik/-tagip/ar5zepegaiIpto.piti. The choice of isotype is of course guided by the desired functions of the effectors, such as complement fixation or activity in antibody-dependent cellular cytotoxicity. Examples of isotypes are Ide, dog,

ІЗ та Ідс4. Будь-який з константних областей легкого ланцюга людини, к або А, можна застосовувати. химерне гуманізоване антитіло можна потім експресувати за допомогою загальноприйнятих способів.IZ and Ids4. Either of the human light chain constant regions, k or A, can be used. the chimeric humanized antibody can then be expressed using conventional methods.

СОЗ8ВР за даним винаходом може бути в будь-якій прийнятній формі з погляду мультимеризації. Анти-СО38 антитіла та фрагменти антитіл можуть бути, щонайменше, у гетеротримерній формі, якщо не у формі більш високої мультимерності, як такі, що зв'язані зThe SOZ8BP according to the present invention can be in any acceptable form from the point of view of multimerization. Anti-CO38 antibodies and antibody fragments may be at least in the heterotrimeric form, if not in a higher multimeric form, such as those associated with

ІДМ антитілами. В інших втіленнях, СОЗ8ВР може бути присутнім у вигляді димеру або мономера. Мономерні СОЗ8ВР за даним винаходом можуть бути, наприклад, модифіковані за допомогою будь-якої придатної техніки, так щоб утворювати мультимерні пептидні композиції.IDM antibodies. In other embodiments, SOZ8BP may be present as a dimer or monomer. Monomeric SOZ8BP according to the present invention can be, for example, modified using any suitable technique to form multimeric peptide compositions.

Якщо потрібно, клас анти-СОЗ8 антитіл за даним винаходом можна перемкнути за допомогою відомих способів. Наприклад, клас антитіла за даним винаходом, який спочатку належав до ДМ класу, можна перемкнути на Ідс антитіло згідно з даним винаходом. Далі, техніки переключення класу можна застосовувати для переведення одного підкласу до в іншій, наприклад, ІдДС1 в 952. Так, ефекторну функцію антитіл за даним винаходом можна змінювати із застосуванням переключення ізотипу, наприклад, Іде, Ідсе2, ІдеЗ, Іде, дО, ІдА, ІДЕ або ДМ антитіла для різних терапевтичних застосувань.If desired, the class of anti-COZ8 antibodies of the present invention can be switched using known methods. For example, the antibody class of the present invention, which originally belonged to the DM class, can be switched to the Ids antibody of the present invention. Further, class switching techniques can be used to convert one subclass to another, for example, IdDS1 in 952. Thus, the effector function of the antibodies of the present invention can be changed using isotype switching, for example, Ide, Idse2, IdeZ, Ide, dO, IdA, IDE or DM antibodies for various therapeutic applications.

В одному втіленні антитіло за даним винаходом є Ідс1 антитілом, наприклад, дс1,к абоIn one embodiment, the antibody of the present invention is an Ids1 antibody, for example, ds1,k or

І901,А ізотипу. В іншому втіленні, антитіло за даним винаходом є ІдоЗ антитілом, наприклад,I901, A isotype. In another embodiment, the antibody of the present invention is an IdoZ antibody, e.g.

ІдоЗ,к або ІдсЗ3,А ізотипу. В іншому втіленні, антитіло за даним винаходом є Ідс4 антитілом, наприклад, Ідс4,к або Ідс4,А ізотипу. В іншому втіленні, антитіло за даним винаходом є ІдА1 або ІдА2 антитілом. В іншому втіленні, антитіло за даним винаходом є дм антитілом.IdoZ,k or IdsZ3,A isotype. In another embodiment, the antibody of the present invention is an Ids4 antibody, for example, Ids4,k or Ids4,A isotype. In another embodiment, the antibody of the present invention is an IdA1 or IdA2 antibody. In another embodiment, the antibody of the present invention is a dm antibody.

Анти-СО38 антитіла можна одержувати з бібліотек рекомбінантних комбінаторних антитіл, таких як бібліотека 5сЕм фагового дисплея, які можна будувати з Мі та Мн кКДНК людини, одержаної із МРНК, виробленої з лімфоцитів людини. Способи одержання та скринінгу таких бібліотек відомі в даній області. Є велике число доступних у продажі наборів для одержання бібліотек фагового дисплея. Є також інші способи та реагенти, які можна застосовувати для одержання та скринінгу бібліотек дисплея антитіл (див., наприклад, 5 5223409, УМО 92/18619,Anti-CO38 antibodies can be obtained from recombinant combinatorial antibody libraries, such as the 5cEm phage display library, which can be constructed from human Mi and Mn cDNA derived from mRNA produced from human lymphocytes. Methods of obtaining and screening such libraries are known in the field. There are a large number of commercially available kits for obtaining phage display libraries. There are also other methods and reagents that can be used to prepare and screen antibody display libraries (see, for example, 5 5223409, UMO 92/18619,

МО 91/17271, МО 92/20791, МО 92/15679, МО 93/01288, МО 92/01047, МО 92/09690, Риснз еї а!., Віотесппоіоду 9, 1370-1372 (1991), Нау єї аї., Нит. Апіїрод. Нуріідотаз 3, 81-85 (1992), Низе еї а!І., Зсієпсе 246, 1275-1281 (1989), МесСанепу еї аї., Майшге 348, 552-554 (1990), Стінйнвг еї аї.,MO 91/17271, MO 92/20791, MO 92/15679, MO 93/01288, MO 92/01047, MO 92/09690. , Thread Apiirod. Nuriidotaz 3, 81-85 (1992), Nize ei a!I., Zsiepse 246, 1275-1281 (1989), MesSanepu ei ai., Maishge 348, 552-554 (1990), Stinynvg ei ai.,

ЕМВО .. 12, 725-734 (1993), НаууКіп5 еї аї., у). Мої. Віої. 226. 889-896 (1992), Сіасквоп еї аї.,EMVO .. 12, 725-734 (1993), NauuKip5 ei ai., y). My. Vioi 226. 889-896 (1992), Siaskwop ei ai.,

Маїште 352, 624-628 (1991), Стат єї ані, РМАБ ОБА 89, 3576-3580 (1992), Сатай еї аї.,Maishte 352, 624-628 (1991), Stat.

Віо/Гесппоіоду 9, 1373-1377 (1991), Ноодепроот еї аї!., Мис. Асіа Нев. 19, 4133-4137 (1991) таVio/Hesppoiodu 9, 1373-1377 (1991), Noodeproot ei ai!., Mys. Asia Nev. 19, 4133-4137 (1991) and

Вагбаз єї аІ., РМАБ ОА 88, 7978-7982 (1991)). Придатні послідовності нуклеїнових кислот Мі таVagbaz Yei A.I., RMAB OA 88, 7978-7982 (1991)). Suitable nucleic acid sequences Mi and

Мн можна відбирати із застосуванням придатних способів. Наприклад, Мі та Мн нуклеїнові кислоти можна відбирати, застосовуючи способи імпринтингу епітопа, описані в М/О 93/06213.Mn can be selected using suitable methods. For example, Mi and Mn nucleic acids can be selected using epitope imprinting methods described in M/O 93/06213.

Бібліотеки антитіл, наприклад, 5сЕм бібліотеки, можна одержувати та піддавати скринінгу із застосуванням відомих і придатних способів (з пептидами, що містять СО38 людини як антиген(и)), як описано, наприклад, в М/О92/01047, МсСапйепу еї аї., Майте 348, 552-554 (1990) іAntibody libraries, such as 5cEm libraries, can be obtained and screened using known and suitable methods (with peptides containing human CO38 as antigen(s)), as described, for example, in M/O92/01047, MsSapyepu et al. , Mayte 348, 552-554 (1990) and

СИН еї а, ЕМВО 4). 12, 725-734 (1993). Такі бібліотеки антитіл та інші комбінації СОЗ8ВР (бібліотеки, об'єднання і т.д.) є властивостями даного винаходу, які можна застосовувати терапевтично для надання більш повної імунної відповіді; як підходи в способах скринінгу імуногенних пептидів, невеликих молекул, інших анти-СОЗ38 антитіл (наприклад, за допомогоюSON of her, EMVO 4). 12, 725-734 (1993). Such antibody libraries and other combinations of SOZ8VR (libraries, pools, etc.) are properties of this invention that can be used therapeutically to provide a more complete immune response; as approaches in methods of screening immunogenic peptides, small molecules, other anti-POZ38 antibodies (for example, using

Зо конкурентного аналізу) і т.п. та/лабо в способах діагностики та у композиціях (наприклад, імуноаналітичний чип, що включає набір таких антитіл, при необхідності у зв'язку з іншими антитілами, можна зробити за допомогою стандартних технік). Як тільки початкові сегменти Мі та Мн людини відібрані, можна проводити експерименти "суміш та відповідності", у яких різні пари початково вибраних Мі та Мн сегментів піддають скринінгу на зв'язування СОЗ8-вмісних пептидів, щоб відібрати потрібні комбінації М//Мн пар. Наприклад, реактивність пептидів можна визначати за допомогою ЕГІЗА та інших придатних способів аналізу епітопа (див., наприклад,From competitive analysis) etc. and/or in diagnostic methods and compositions (for example, an immunoassay chip including a set of such antibodies, if necessary in conjunction with other antibodies, can be made using standard techniques). Once the initial human Mi and Mn segments are selected, "mix and match" experiments can be performed in which different pairs of the initially selected Mi and Mn segments are screened for binding of COZ8-containing peptides to select the desired combinations of M//Mn pairs. For example, the reactivity of peptides can be determined by EHIZA and other suitable epitope assays (see, e.g.,

ЗСої, УК. апа тії, с.Р. Зсієпсе 249, 386-390 (1990), Сміпа еї аі., РМАБ ОБА 87, 6378-6382 (1990), Реїїсі еї аї., У. Мої. Віої. 222, 301-310 (1991) і Кижабага єї а!., Маїиге Віотесппоіоду 15, 74- 78 (1997) для обговорення таких технік і принципів). Антитіла можна відбирати по їхній спорідненості до антигену та/або кінетикам дисоціації їхнього комплексу з антигеном (див., наприклад, Намжкіпз еї аї., у). Мої. Віо!. 226, 889-896 (1992)).ZSoi, University of Applied Sciences. apa tii, s.R. Zsiepse 249, 386-390 (1990), Smipa et al., RMAB OBA 87, 6378-6382 (1990), Reiisi et al., U. Moi. Vioi 222, 301-310 (1991) and Kizhabaga et al., Maiige Viotesppoiodu 15, 74-78 (1997) for a discussion of such techniques and principles). Antibodies can be selected according to their affinity to the antigen and/or kinetics of dissociation of their complex with the antigen (see, for example, Namzhkipz et al., y). My. Vio!. 226, 889-896 (1992)).

Щоб ще поліпшити якість та/або розмаїтість анти-СО38 антитіл, М та Мн сегменти М/Мн пар(и) можна піддавати випадковим мутаціям, наприклад, усередині СОКЗ області Мн та/або Мі. у процесі, аналогічному процесу соматичних мутацій іп мімо, відповідальному за дозрівання спорідненості антитіл при розвитку природної імунної відповіді. Таке дозрівання спорідненості іп міо можна одержати за допомогою ампліфікації областей Мн та Мі із застосуванням праймерів, комплементарних Мн СОКЗ або МІ СОКЗ, відповідно, причому праймери звичайно "збагачені" довільною сумішшю чотирьох нуклеотидних основ по певних положеннях, так що одержувані продукти ПЦР кодують Ун та Мі сегменти, у яких випадкові мутації уведені в Мн та/або М СОВЗ області. Такі у випадковий спосіб мутовані Мн та МІ. сегменти можна повторно піддати скринінгу на зв'язування СОЗ8-вмісних пептидів.To further improve the quality and/or diversity of anti-CO38 antibodies, the M and Mn segments of the M/Mn pair(s) can be subjected to random mutations, for example, within the Mn and/or Mi region of the SOCZ region. in a process similar to the process of somatic mutations of ip mimo, which is responsible for the maturation of antibody affinity during the development of a natural immune response. Such affinity maturation of ip myo can be obtained by amplifying the regions of Mn and Mi using primers complementary to Mn SOCZ or MI SOCZ, respectively, and the primers are usually "enriched" with an arbitrary mixture of four nucleotide bases at certain positions, so that the resulting PCR products encode Un and Mi segments in which random mutations are introduced in the Mn and/or M SOVZ region. Such randomly mutated Mn and MI. segments can be re-screened for binding of COZ8-containing peptides.

Після скринінгу нуклеїнові кислоти, що кодують вибране антитіло, можна виділити із суміші дисплея (наприклад, з фагового геному) і субклонувати у придатний вектор за допомогою стандартних технік рекомбінантних ДНК. Якщо потрібно, з такими нуклеїновими кислотами, що кодують антитіло, можна працювати далі, щоб створити іншу форму антитіла або СОЗ8ВР. Для експресії рекомбінантного антитіла, ізольованого за допомогою скринінгу з комбінаторної бібліотеки, звичайно, нуклеїнову кислоту, яка включає послідовність, що кодує антитіло, клонують у рекомбінантний експресуючий вектор і вводять в придатні клітини хазяїна (клітини ссавців, клітини дріжджів і т.д.) в умовах, потрібних для експресії нуклеїнової кислоти та бо продукції антитіла.After screening, nucleic acids encoding the selected antibody can be isolated from the display mixture (eg, from the phage genome) and subcloned into a suitable vector using standard recombinant DNA techniques. If desired, such antibody-encoding nucleic acids can be further worked to generate another form of antibody or COZ8BP. To express a recombinant antibody isolated by screening from a combinatorial library, of course, the nucleic acid that includes the sequence encoding the antibody is cloned into a recombinant expression vector and introduced into suitable host cells (mammalian cells, yeast cells, etc.) in conditions required for nucleic acid expression and antibody production.

Пептиди антитіла з високою спорідненістю, наприклад, одноланцюгові фрагменти антитіла людини Ем (5сЕм) і Раб, також можна ізолювати з таких бібліотек за допомогою технік намивання/лотка, у яких потрібний антиген іммобілізований на твердій поверхні, такій як пластини мікрофільтра або бусини (див., наприклад, Ваграх апа Вигіоп, Тгепавз. Віоїеснпої. 14, 230-234 (1996) і Аціате еї аїЇ,, Нит. Апійбодіез 8, 155-688 (1997). Фаговий дисплей великих простих бібліотек також уможливлює ізоляцію антитіл людини безпосередньо без імунізації (див., наприклад, де Наагоа еї аї., 9. Віої. Спет. 274(26), 18218-18230 (1999)).High-affinity antibody peptides, such as single-chain fragments of human antibody Em (5cEm) and Rab, can also be isolated from such libraries using wash/tray techniques in which the desired antigen is immobilized on a solid surface such as microfilter plates or beads (see , e.g., Vagrach apa Vigiop, Tgepavz. Violenspoi. 14, 230-234 (1996) and Aciate et al., Nat. Epibodyiz. 8, 155-688 (1997). Phage display of large simple libraries also enables the isolation of human antibodies directly without immunization (see, for example, de Naagoa ei ai., 9. Vioi. Spet. 274(26), 18218-18230 (1999)).

В одному втіленні даний винахід пропонує варіант анти-СОЗ38 антитіл. "Варіант" анти-СОЗ8 антитіла є антитілом, що відрізняється від батьківського антитіла (звичайно одержаного за допомогою імунізації) зміною одного чи більше потрібного амінокислотного залишку, якою є заміщення, делеція, вставка або додавання термінальних послідовностей у ділянках СОК або інших Мн та/або Мі послідовностей (представлених так, щоб значна частина епітоп-зв'язуючих характеристик батьківського антитіла зберігалася, якщо не поліпшувалася, за допомогою таких змін).In one embodiment, the present invention provides an anti-POP38 antibody variant. A "variant" anti-COZ8 antibody is an antibody that differs from the parent antibody (usually obtained by immunization) by a change in one or more of the desired amino acid residues, such as a substitution, deletion, insertion, or addition of terminal sequences in the SOC or other Mn regions and/or Mi sequences (presented so that a significant part of the epitope-binding characteristics of the parent antibody is preserved, if not improved, by such changes).

Варіації варіантів антитіла можна зробити в кожному з каркасних областей, константному домені та/або варіабельних областях (або одному чи більше СОК) у одного варіанта антитіла.Variations of antibody variants can be made in each of the framework regions, constant domain and/or variable regions (or one or more SOC) of a single antibody variant.

Альтернативно, варіації можна робити тільки в одній з каркасних областей, варіабельних областей (або єдиному СОК) або в константному домені антитіла. Техніку мутагенезу шляхом аланінового сканування, як описано в Сиппіпдапат апа Умеїї5, Зсіепсе 244, 1081-1085 (1989), можна застосовувати для ідентифікації залишків, придатних для заміщення або делеції при одержанні потрібних варіантів СОЗ8ВР, що включають варіант Мі, Мн, або окремих СОК послідовностей, хоча також можна застосовувати інші придатні техніки мутагенезу. Множинні заміщення амінокислот також можна проводити та тестувати за допомогою відомих способів мутагенезу та скринінгу, наприклад, як розкрито в Кеїдпааг-ОїЇзоп апа бЗапег, Зсівєпсе 241, 53-57 (1988) або Вом/є апа Зацег, РМАЗ ОА 86, 2152-2156(1989).Alternatively, variations can be made only in one of the framework regions, variable regions (or a single SOC) or in the constant domain of the antibody. The technique of alanine scanning mutagenesis, as described in Sippipdapat apa Umeya5, Science 244, 1081-1085 (1989), can be used to identify residues suitable for substitution or deletion in obtaining desired variants of SOZ8BP, including variant Mi, Mn, or individual SOCs sequences, although other suitable mutagenesis techniques can also be used. Multiple amino acid substitutions can also be made and tested using known mutagenesis and screening methods, for example as disclosed in Keidpaag-OiYizop apa bZapeg, Zsivepse 241, 53-57 (1988) or Vom/e apa Zaceg, RMAZ OA 86, 2152-2156 (1989).

Так, наприклад, у варіанта антитіла один чи більше амінокислотних залишків можна ввести або вставити або приєднати до одної чи більше гіперваріабельної областей батьківського антитіла, наприклад, одного чи більше СОК. Варіант анти-СОЗ38 антитіла може включати будь- яке число вставлених амінокислотних залишків, представлених знову так, щоб, щонайменше,Thus, for example, in a variant antibody, one or more amino acid residues can be introduced or inserted into or attached to one or more hypervariable regions of the parent antibody, for example, one or more SOCs. A variant of the anti-COZ38 antibody can include any number of inserted amino acid residues, again presented so that at least

Зо значна частина епітоп-зв'язуючих характеристик батьківського антитіла збереглася. Варіант анти-СО38 антитіла згідно з даним винаходом може, наприклад, включати від приблизно 1-30 вставлених амінокислотних залишків, наприклад, від приблизно 1-10, наприклад, від приблизно 2-10, наприклад, від приблизно 2-5, наприклад, від приблизно 1-5 вставлених амінокислотних залишків. Аналогічно, варіант анти-СО38 антитіла згідно з даним винаходом може, наприклад, включати від приблизно 1-30 делетованих амінокислотних залишків, наприклад, від приблизно 1-10, наприклад, від приблизно 2-10, наприклад, від приблизно 2-5, наприклад, від приблизно 1- 5 делетованих амінокислотних залишків. Аналогічно, варіант анти-СОЗ38 антитіла згідно з даним винаходом може, наприклад, включати від приблизно 1-30 заміщених амінокислотних залишків, наприклад, від приблизно 1-10, наприклад, від приблизно 2-10, наприклад, від приблизно 2-5, наприклад, від приблизно 1-5 заміщених амінокислотних залишків. Аналогічно, варіант анти-A significant part of the epitope-binding characteristics of the parent antibody was preserved. A variant anti-CO38 antibody of the present invention may, for example, include from about 1-30 inserted amino acid residues, for example from about 1-10, for example from about 2-10, for example from about 2-5, for example from approximately 1-5 inserted amino acid residues. Similarly, an anti-CO38 antibody variant of the present invention may, for example, include from about 1-30 deleted amino acid residues, for example from about 1-10, for example from about 2-10, for example from about 2-5, for example , from approximately 1-5 deleted amino acid residues. Similarly, an anti-COZ38 antibody variant of the present invention may, for example, include from about 1-30 substituted amino acid residues, for example from about 1-10, for example from about 2-10, for example from about 2-5, for example , from approximately 1-5 substituted amino acid residues. Similarly, the anti-

СО38 антитіла згідно з даним винаходом може, наприклад, включати від приблизно 1-30 додавань амінокислотних залишків термінальної послідовності, наприклад, від приблизно 1-10, наприклад, від приблизно 2-10, наприклад, від приблизно 2-5, наприклад, від приблизно 1-5 додавань амінокислотних залишків термінальної послідовності. Варіант антитіла згідно з даним винаходом може також включати комбінацію двох чи більше таких вставок, делецій і додавань амінокислотних залишків термінальної послідовності, наданих так, що варіант має, щонайменше, значну частину спорідненості, специфічності та/або вибірковості батьківських антитіл відносно одного чи більше СОЗ8 епітопа.CO38 antibodies of the present invention may, for example, include from about 1-30 additions of terminal amino acid residues, for example from about 1-10, for example from about 2-10, for example from about 2-5, for example from about 1-5 additions of amino acid residues of the terminal sequence. A variant antibody according to the present invention may also include a combination of two or more such insertions, deletions and additions of amino acid residues of the terminal sequence, provided that the variant has at least a significant part of the affinity, specificity and/or selectivity of the parent antibody for one or more POP8 epitopes .

Міркування при виборі варіантів антитіла (наприклад, збереження функціональних характеристик амінокислотних залишків, збереження характеристик гідропатичності амінокислотних залишків та/або збереження розміру/ваги амінокислотних залишків) описані тут в інших місцях. Звичайно, зміни амінокислотної послідовності, наприклад, варіації консервативних заміщень, по можливості, не повинні значно змінювати структурні характеристики батьківської послідовності (наприклад, заміна амінокислоти не повинна приводити до порушення вторинної структури, що характеризує функцію батьківської послідовності). Приклади відомих в даній області вторинних і третинних структур поліпептиду описані, наприклад, в Ргоїеїп5, Бігисішге5 апа Моїесшіаг Рііпсіріе5 (Стеідпіоп, Еа., М.Н. Егеетап апа Сотрапу, Мем Моїк (1984)), Іпігодисійоп о Ргоївєїп бігисіиге (С. Вгапаєп апа у. Тоог2е, едв.,Considerations in selecting antibody variants (eg, preservation of functional characteristics of amino acid residues, preservation of hydropathic characteristics of amino acid residues, and/or preservation of size/weight of amino acid residues) are described elsewhere herein. Of course, changes in the amino acid sequence, for example, variations of conservative substitutions, if possible, should not significantly change the structural characteristics of the parent sequence (for example, the replacement of an amino acid should not lead to a violation of the secondary structure that characterizes the function of the parent sequence). Examples of secondary and tertiary polypeptide structures known in the field are described, for example, in Rgoiyip5, Bigisishge5 apa Moiesshiag Riipsirie5 (Steidpiop, Ea., M.N. Egeetap apa Sotrapu, Mem Moik (1984)), Ipigodisiyop o Rgoivyeip bigisyige (S. Vgapayep apa u. Toog2e, edv.,

Сапапа Рибіїзпіпуо, Мем/ Могк, М.У. (1991)) ії Тпогпіоп еї аї., Маїшге 354, 105 (1991). Додаткові принципи, що стосуються створення та конструкції варіантів пептидів, обговорюються, наприклад, в СоїІіпеї еї аї!., 9. Віоі. Спнет. 275(23), 17428-33 (2000).Sapapa Rybiizpipuo, Mem/ Mogk, M.U. (1991)) ii Tpogpiop ei ai., Maishge 354, 105 (1991). Additional principles relating to the generation and design of variant peptides are discussed, for example, in SoiIipei et al., 9. Viol. Turn off 275(23), 17428-33 (2000).

Варіанти амінокислотної послідовності антитіла можна одержати шляхом введення придатних змін нуклеотидів в нуклеїнову кислоту, що кодує антитіло (наприклад, за допомогою спрямованого мутагенезу), або за допомогою хімічного синтезу пептиду. Такі варіанти включають, наприклад, делеції з та/або вставки в та/або заміщення та/або додавання термінальних послідовностей залишків в амінокислотних послідовностях антитіл наведених тут прикладів. Можна проводити будь-яку комбінацію делецій, вставок і заміщень, щоб одержати потрібний варіант, наданий так, що варіант має, щонайменше, значну частину епітоп-зв'язуючих характеристик батьківського антитіла. Зміни амінокислотної послідовності відносно батьківського антитіла можуть також міняти пост-трансляційний процесинг варіантів антитіла в порівнянні з батьківським антитілом, наприклад, за допомогою зміни числа або положення ділянок глікозилування.Variants of the amino acid sequence of the antibody can be obtained by introducing suitable nucleotide changes into the nucleic acid encoding the antibody (for example, by means of directed mutagenesis), or by chemical synthesis of the peptide. Such variants include, for example, deletions from and/or insertions into and/or substitutions and/or additions of terminal sequences of residues in the amino acid sequences of the antibodies of the examples given here. Any combination of deletions, insertions and substitutions can be made to obtain the desired variant, provided that the variant has at least a significant portion of the epitope-binding characteristics of the parent antibody. Changes in the amino acid sequence relative to the parent antibody can also alter the post-translational processing of antibody variants compared to the parent antibody, for example, by changing the number or position of glycosylation sites.

Варіанти антитіл згідно з даним винаходом можуть включати зміни в гіперваріабельній області, наприклад, у областях СОК. Приклади СОЗ8ВР, що включають такі СОК варіанти, описані тут в іншому місці і, як описано вище, такі СОЗ8ВР можуть бути антитілами.Variants of antibodies according to the present invention may include changes in the hypervariable region, for example, in regions of SOC. Examples of COZ8BPs comprising such SOC variants are described elsewhere herein and, as described above, such COZ8BPs may be antibodies.

Варіанти антитіл згідно з даним винаходом можуть включати зміни каркасних областей (ЕК), які перебувають поза гіперваріабельними областями, наприклад, в Ес області, де зміни можуть бути зв'язані зі сприятливими властивостями, наприклад, зміною функціональних і фармакокінетичних властивостей антитіл. Наприклад, заміщення або інша модифікація (вставка, делеція, додавання термінальної послідовності або їхня комбінація) у каркасній області або константному домені можуть бути зв'язані зі збільшенням часу напівжиття варіанта антитіла в порівнянні з батьківським антитілом, або можуть бути зроблені для зміни імуногенності варіанта антитіла в порівнянні з батьківським антитілом, для надання ділянки для ковалентного або нековалентного зв'язування іншої молекули, або для зміни такої властивості, як фіксація комплементу, наприклад, приводячи до зменшення або збільшення зв'язування С1а та СОС або ЕсукК і залежної від антитіла клітинної цитотоксичності (АОСС). Заміщення можуть бути зроблені, наприклад, по одному чи більше амінокислотному залишку 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 та 322 константній області важкого ланцюга, у такий спосіб обумовлюючи змінуVariants of antibodies according to the present invention may include changes in the framework regions (EC) that are outside the hypervariable regions, for example, in the EC region, where the changes may be associated with favorable properties, for example, a change in the functional and pharmacokinetic properties of antibodies. For example, a substitution or other modification (insertion, deletion, addition of a terminal sequence, or a combination thereof) in the framework region or constant domain may be associated with an increased half-life of the antibody variant compared to the parent antibody, or may be made to alter the immunogenicity of the antibody variant compared to the parent antibody, to provide a site for covalent or non-covalent binding of another molecule, or to alter a property such as complement fixation, for example, leading to decreased or increased binding of C1a and COS or EsukK and antibody-dependent cellular cytotoxicity (AOSS). Substitutions can be made, for example, at one or more amino acid residues 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320, and 322 of the heavy chain constant region, thereby causing a change

Зо ефекторної функції при збереженні зв'язування з антигеном у порівнянні з немодифікованим антитілом, 5 5624821 та 05 5648260. Далі можна послатися на УМО 00/42072, який розкриває антитіла зі зміненими Ес областями, що приводить до збільшення АЮСС, і УМО 94/29351, що розкриває антитіла з мутаціями в М-кінцевій області домену Снаг, які змінюють здатність антитіл зв'язуватися з ЕСКІ і тому зменшують здатність антитіл зв'язуватися з С1д, що у свою чергу приводить до зменшення здатності антитіл фіксувати комплемент. Далі, Зпієїа5 еї аї., 9. Віої.From the effector function while preserving binding to the antigen compared to the unmodified antibody, 5 5624821 and 05 5648260. Further, you can refer to UMO 00/42072, which discloses antibodies with modified Es regions, which leads to an increase in AYUSS, and UMO 94/29351 , which reveals antibodies with mutations in the M-terminal region of the Snag domain, which change the ability of antibodies to bind to ESCI and therefore reduce the ability of antibodies to bind to C1d, which in turn leads to a decrease in the ability of antibodies to fix complement. Further, Zpieia5 ei ai., 9. Vioi.

Спет. 276, 6591-6604 (2001) показують комбіновані варіанти з поліпшеним зв'язуванням Есук, наприклад, Т256А/5298А, 5298А/ЕЗЗЗА та 5298А/ЕЗЗЗА/КЗЗ4А.Spent 276, 6591-6604 (2001) show combination variants with improved Esuk binding, eg T256A/5298A, 5298A/EZZZA and 5298A/EZZZA/KZZ4A.

Час напівжиття антитіл іп мімо також можна поліпшити за допомогою модифікації епітопа рятувального рецептора константної області імуноглобуліну або імуноглобулінподібного константного домену, так що молекула не включає інтактний Сн2 домен або інтактну Ід. Ес область, див. ОЗ 6121022 та 05 6194551. Час напівжиття іп мімо можна ще збільшити, проводячи мутації Ес області, наприклад, шляхом заміщення треоніном лейцину в положенні 252, треоніном серину в положенні 254 і треоніном фенілаланіну в положенні 256, див. О5 6277375.The half-life of ip mimo antibodies can also be improved by modifying the rescue receptor epitope of the immunoglobulin constant region or immunoglobulin-like constant domain so that the molecule does not include an intact Sn2 domain or an intact Id. ES region, see OZ 6121022 and 05 6194551. The half-life of ip mimo can be further increased by mutating the Es region, for example, by replacing leucine with threonine at position 252, serine with threonine at position 254, and phenylalanine with threonine at position 256, see O5 6277375.

В одному втіленні даний винахід пропонує варіанти анти-СОЗ38 антитіл, де потенційні епітопиIn one embodiment, the present invention provides variants of anti-COP38 antibodies where potential epitopes

Т-клітин у антитіла зменшені або видалені за допомогою раціонального конструювання. Так, наприклад, в одному втіленні даний винахід пропонує "деімунізоване" анти-СО38 антитіло, у якого потенційні епітопи Т-клітин видалені. Створення та конструкцію деімунізованих анти-СОЗ38 антитіл можна здійснити за допомогою будь-якої придатної техніки (див., наприклад,T-cell antibodies have been reduced or removed by rational engineering. Thus, for example, in one embodiment, the present invention provides a "deimmunized" anti-CO38 antibody in which potential T-cell epitopes have been removed. The generation and construction of deimmunized anti-POZ38 antibodies can be accomplished by any suitable technique (see, e.g.,

УМО9852976 щодо способів одержання деїмунізованих антитіл). Очікується, що імуногенність у людини усувається або істотно зменшується, коли такі СОЗ8ВР (наприклад, варіант анти-СОЗ38 антитіла) призначають згідно з даним винаходом.UMO 9852976 on methods of obtaining deimmunized antibodies). Immunogenicity in humans is expected to be eliminated or substantially reduced when such COZ8BPs (eg, an anti-COZ38 antibody variant) are administered in accordance with the present invention.

Інші мутації каркасних областей можуть включати зміни послідовності, які можуть зменшувати схильність до протеолізу, зменшувати схильність до окиснення та/або надавати чи модифікувати інші фізико-хімічні або функціональні властивості даного варіанта антитіла.Other mutations of the framework regions may include sequence changes that may reduce propensity for proteolysis, reduce propensity for oxidation, and/or confer or modify other physicochemical or functional properties of a given antibody variant.

Варіації амінокислотної послідовності в каркасних областях можуть також приводити до зміненого профілю глікозилування у варіанта антитіла відносно батьківського антитіла. Під зміною мається на увазі усунення однієї чи більше вуглеводневої ланки, що виявляється у батьківського антитіла, та/або додавання однієї чи більше ділянки глікозилування, які були 60 відсутні у батьківського антитіла. глікозилування антитіл, звичайно, є або М-опосередкованим,Variations in the amino acid sequence in the framework regions can also lead to an altered glycosylation profile in the variant antibody relative to the parent antibody. Alteration refers to the removal of one or more hydrocarbon units found in the parent antibody and/or the addition of one or more glycosylation sites that were absent in the parent antibody. glycosylation of antibodies is, of course, either M-mediated,

або О-опосередкованим. М-опосередковане стосується приєднання вуглеводневої ланки до бічного ланцюга аспарагінового залишку. Трипептидні послідовності аспарагін-Х-серин та аспарагін-Х-треонін, де Х є будь-якою амінокислотою, крім проліну, є розповсюдженими послідовностями впізнавання для ферментативного приєднання вуглеводневої ланки до бічного ланцюга аспарагіна. Так, присутність у поліпептиді будь-якої з цих трипептидних послідовностей може створити потенційну ділянку глікозилування. О-опосередковане глікозилування стосується приєднання таких цукрів, як М-ацетилгалактозамін, галактоза або ксилоза, до гідрокси- амінокислоти, найчастіше, до серину або треоніну, хоча 5-гідроксипролін або 5-гідроксилізин також можуть застосовуватися. Додавання ділянок глікозилування можна легко зробити шляхом зміни амінокислотної послідовності так, що вона містить одну чи більше вищеописану трипептидну послідовність (для М-опосередкованих ділянок глікозилування). Зміну можна також зробити шляхом додавання та/або заміщення одним чи більше залишком серину чи треоніну послідовності вихідного антитіла (для О-опосередкованих ділянок глікозилування).or O-mediated. M-mediated refers to the attachment of a hydrocarbon link to the side chain of an asparagine residue. The tripeptide sequences asparagine-X-serine and asparagine-X-threonine, where X is any amino acid except proline, are common recognition sequences for the enzymatic attachment of a hydrocarbon moiety to the side chain of asparagine. Thus, the presence of any of these tripeptide sequences in a polypeptide can create a potential glycosylation site. O-mediated glycosylation involves the attachment of sugars such as M-acetylgalactosamine, galactose, or xylose to a hydroxy amino acid, most commonly serine or threonine, although 5-hydroxyproline or 5-hydroxylysine may also be used. The addition of glycosylation sites can easily be done by changing the amino acid sequence so that it contains one or more of the tripeptide sequences described above (for M-mediated glycosylation sites). The change can also be made by adding and/or replacing one or more serine or threonine residues of the original antibody sequence (for O-mediated glycosylation sites).

Антитіла можна також експресувати у трансфектомі, яка не додає одиницю фукози, звичайно приєднану до вуглеводню, з'єднаного з аспарагіном у положенні 297 Ес, для того щоб збільшити спорідненість Ес до ЕсукП, що у свою чергу приведе до збільшення АОСС антитіл у присутності МК клітин, див. ЗПпієЇїй еї аї., 9У. Віої. Спет. 277. 26733 (2002). Інші способи модифікації глікозилування, сфокусовані на фукозилюванні, описані в М/О 00/61739 ю Куоуа.Antibodies can also be expressed in a transfectome that does not add a fucose unit, usually attached to the hydrocarbon linked to asparagine at position 297 Es, in order to increase the affinity of Es for EsukP, which in turn will lead to increased AOSS of the antibody in the presence of MK cells , see ZPPieYiy ei ai., 9U. Vioi Spent 277. 26733 (2002). Other glycosylation modification methods focused on fucosylation are described in M/O 00/61739 by Kuoua.

Далі, можна проводити модифікацію галактозилювання, щоб модифікувати СОС. Далі можна послатися на УМО 99/54342 та Отапа еї аї., Маї. Віотесппої. 17, 176 (1999), що розкривають лінію клітин СНО, створену для експресії (пін, що приводить до експресії моноклональних антитіл зі зміненими глікоформами та поліпшеною активністю АЮСС.Next, galactosylation modification can be performed to modify the SOC. Further, you can refer to UMO 99/54342 and Otapa ei ai., May. Viotesppoi. 17, 176 (1999), which disclose a cell line of CHO, created for the expression (pin, which leads to the expression of monoclonal antibodies with changed glycoforms and improved activity of AYUSS.

Інші потенційно придатні підходи до одержання нових анти-СОЗ8 антитіл включають мутагенез "прогулянка по СОК" (улаіКіпу), перетасування (5Ппийіпу) ланцюга антитіла, "ощадливий мутагенез" ("рагзітопіси5 птшиадепевів") (Ваїїпї апа ІГагіск, Сепе 137, 109-118 (1993)) та інші техніки дозрівання спорідненості (див., наприклад, УМи еї аіІ., РМАБ ОА 95, 6037- 42 (1998)). Процедури клонування набору (Керегіоіїге)у можна застосовувати для одержання варіантів антитіл (див., наприклад, УМО 96/33279).Other potentially suitable approaches for the production of new anti-POZ8 antibodies include mutagenesis "walking on the SOC" (ulaiKipu), shuffling (5Ppiyipu) of the antibody chain, "thrifty mutagenesis" ("ragzitopisy5 ptshiadepeviv") (Vaiyipi apa IGagisk, Sepe 137, 109-118 (1993)) and other kinship maturation techniques (see, for example, UMy ei aiI., RMAB OA 95, 6037-42 (1998)). Kit cloning procedures can be used to generate antibody variants (see, for example, UMO 96/33279).

Є велике число технік, відомих для одержання СОК варіантів, і будь-яку придатну техніку чиThere are a large number of techniques known for obtaining SOC variants, and any suitable technique or

Зо їх комбінацію можна застосовувати в контексті даного винаходу для одержання СОК варіантів ділянок СОК антитіл прикладів. Приклади таких технік включають видалення несуттєвих залишків, як описано в 5іцйапіска єї аї., Ргоїєїп Епдіпеегіпуд 7, 805-814 (1994) (див. також зЗодепінпа еї аї., Іттипоїеснпоіоду. 4(3-4), 279-85 (1999), переміщуваний мутагенез СОК та інші техніки штучного дозрівання спорідненості (див., наприклад, Уапд еї аї., доигпа! ої МоїІесшагA combination of them can be used in the context of this invention to obtain the SOC variants of the sections of the SOC antibodies of the examples. Examples of such techniques include the removal of non-essential residues as described in 5itsyapiska yi ai., Rgoipei Epidipegipud 7, 805-814 (1994) (see also Zodepinpa ei ai., Ittipoiesnpoiodu. 4(3-4), 279-85 (1999) .

Віоїоду 254(3). 392-403 (1995), техніки змішування (зпийіп9у) СОК, де звичайно ампліфікуютьVioiodu 254(3). 392-403 (1995), mixing techniques (zpiyip9u) of SOC, where it is usually amplified

СОК з набором різноманітних генів матриць, які при необхідності включають синтетичні олігонуклеотиди, константні області Мі, Мн талабо СОК ампліфікуються і різні фрагменти змішуються (у вигляді одноланцюгових або дволанцюгових фрагментів) та поєднуються за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) з одержанням набору генів продуктів, які кодують фрагменти антитіл, що несуть перемішані СОК, вставлені в заданий каркас, які ампліфікують із застосуванням зовнішніх праймерів, що прилягають до ділянок поза внесеними ділянками рестрикції для забезпечення продукції повнорозмірних продуктів, які вставляють у вибраний вектор і застосовують для експресії білків, що містять варіанти СО. Потрібні структури можна визначити шляхом накладення варіант/мітуючих структур і структур батьківських послідовностей, наприклад, шляхом порівняння одержаних структур за допомогоюSOC with a set of various matrix genes, which, if necessary, include synthetic oligonucleotides, constant regions of Mi, Mn, and the SOC are amplified and different fragments are mixed (in the form of single-stranded or double-stranded fragments) and combined using the polymerase chain reaction (PCR) to obtain a set of product genes, which encode antibody fragments carrying scrambled SOCs inserted into a given framework, which are amplified using external primers flanking regions outside the inserted restriction sites to ensure the production of full-length products, which are inserted into a selected vector and used to express proteins containing the variants CO. The desired structures can be determined by superimposing the variant/mutant structures and the parent sequence structures, for example by comparing the resulting structures using

ЯМР. Корисні способи раціонального конструювання варіантів СОК послідовностей описані, наприклад, в ММО 91/09967 та УМО 93/16184. Додаткові приклади таких способів надані тут в інших місцях.NMR. Useful methods of rational construction of variants of SOC sequences are described, for example, in MMO 91/09967 and UMO 93/16184. Additional examples of such methods are provided elsewhere herein.

Даний винахід також надає фрагменти антитіл (включаючи варіанти антитіл) згідно з даним винаходом, де фрагменти мають здатність зв'язуватися з СОЗ8 (СО38-зв'язуючі фрагменти).The present invention also provides antibody fragments (including antibody variants) according to the present invention, where the fragments have the ability to bind to COZ8 (CO38-binding fragments).

СОЗ8ВР таким чином включають подібні до антитіла молекули, які включають менш ніж повну тетрамерну структуру, зв'язану з антитілами, що зустрічаються в природі. Фрагмент антитіла може бути будь-яким пептидом, що включає частину або повнорозмірне антитіло, в основному, антиген-зв'язуючий або варіабельний область його (це включає, наприклад, фрагменти гуманізованих антитіл, що включають СОР. антитіла за даним винаходом, їх варіанти або іншіCOZ8BP thus include antibody-like molecules that include less than the complete tetrameric structure associated with naturally occurring antibodies. An antibody fragment can be any peptide comprising part or a full-length antibody, mainly the antigen-binding or variable region thereof (this includes, for example, fragments of humanized antibodies, including COP. antibodies of the present invention, variants thereof or others

СОЖК, які дозволяють фрагменту антигену конкурувати з антитілом даного винаходу за зв'язування СЮОЗ38). В одному втіленні фрагмент стосується пептиду, який складається, в основному, тільки із частини молекули антитіла. В одному втіленні даний винахід пропонує фрагмент антитіла, яке включає, щонайменше, частину варіабельного домену важкого ланцюга, 60 що включає один чи більше Мн СОК антитіла за даним винаходом і при необхідності також варіабельний домен легкого ланцюга, що включає один чи більше Мі СОК антитіла за даним винаходом, де варіабельний домен важкого ланцюга і при необхідності варіабельний область легкого ланцюга, при необхідності є з'єднаним (з'єднаними) з додатковою ланкою, наприклад, константним доменом імуноглобуліну. Послідовності константної області можна додати до послідовності(ей) важкого ланцюга та/або легкого ланцюга з утворенням видів із частковою довжиною важкого та/або легкого ланцюгац(ів). Константні області або їх частини будь-якого ізотипу антитіла можна застосовувати для цієї мети, включаючи константні області до, ІМ, ІдА,SFAs, which allow the antigen fragment to compete with the antibody of this invention for the binding of SHUOZ38). In one embodiment, the fragment relates to a peptide that consists essentially of only a portion of the antibody molecule. In one embodiment, the present invention provides an antibody fragment that includes at least a portion of the heavy chain variable domain 60 comprising one or more Mn SOC antibodies of the present invention and optionally also a light chain variable domain comprising one or more Mi SOC antibodies of the present invention. this invention, where the variable domain of the heavy chain and, if necessary, the variable region of the light chain, if necessary, is connected (connected) with an additional link, for example, the constant domain of immunoglobulin. Constant region sequences can be added to the heavy chain and/or light chain sequence(s) to form partial length species of the heavy and/or light chain(s). The constant regions or portions thereof of any antibody isotype can be used for this purpose, including the constant regions to, IM, IdA,

ІЧО та ІЧЕ.ICHO and ICHE.

Приклади СОЗ8-зв'язуючих фрагментів антитіл включають Бар, Раб, Б(аб)» та Гм фрагменти. Фрагмент антитіла в контексті даного винаходу може також включати пептид, що включає СОК і т.п. В одному втіленні даний винахід пропонує фрагмент антитіла, який включає перший поліпептидний ланцюг, що включає будь-який з СОК важкого ланцюга, описаний тут, і другий поліпептидний ланцюг, що включає будь-який з СОК легкого ланцюга, описаний тут, причому два поліпептидні ланцюги ковалентно зв'язані за допомогою одного чи більше межланцюгових дисульфідних зв'язків. В одному втіленні даний винахід пропонує дволанцюговий фрагмент антитіла, який має такі властивості, де фрагмент антитіла вибирають із фрагментів Рабр, Раб", Раб'-5Н, Ем та/або Р(аб)».Examples of COZ8-binding fragments of antibodies include Bar, Rab, B(ab)' and Hm fragments. An antibody fragment in the context of this invention may also include a peptide including SOC and the like. In one embodiment, the present invention provides an antibody fragment that comprises a first polypeptide chain comprising any of the heavy chain SOCs described herein and a second polypeptide chain comprising any of the light chain SOCs described herein, wherein the two polypeptide chains covalently linked by one or more interchain disulfide bonds. In one embodiment, the present invention provides a double-chain antibody fragment having the following properties, wherein the antibody fragment is selected from Rab, Rab, Rab'-5H, Em and/or P(ab)' fragments.

Антитіла можна фрагментувати із застосуванням загальноприйнятих технік і фрагменти піддавати скринінгу на застосовність таким самим способом, як описано вище для цілих антитіл.Antibodies can be fragmented using conventional techniques and fragments screened for applicability in the same manner as described above for whole antibodies.

Наприклад, фрагменти Е(аб)»2 можна одержувати шляхом обробки антитіла пепсином.For example, E(ab)"2 fragments can be obtained by treating the antibody with pepsin.

Одержаний фрагмент антитіла можна обробляти з відновленням дисульфідних зв'язків для одержання фрагментів Бар'. ар фрагменти можна одержувати шляхом обробки дО антитіла папаїном; Бар' фрагменти можна одержувати шляхом переварювання пепсином дос антитіла.The resulting antibody fragment can be treated with the reduction of disulfide bonds to obtain Bar' fragments. ar fragments can be obtained by treating dO antibodies with papain; Bar' fragments can be obtained by digesting antibodies with pepsin.

Баб' фрагмент можна також одержувати шляхом зв'язування Рар', описаного нижче, через тіоефірний зв'язок або дисульфідний зв'язок. бар" фрагмент є фрагментом антитіла, одержаним шляхом розрізання дисульфідного зв'язку області зв'язування (піпде) в Е(аб)». Бар' фрагмент можна також одержати шляхом обробки Е(аб)г2 фрагмента відновним агентом, наприклад, дитіотреїтолом. Пептиди фрагмента антитіла можна також одержати шляхом експресії нуклеїнових кислот, кодуючих ці пептиди в рекомбінантних клітинах (див., наприклад, Емапз5 еїThe Bab' fragment can also be obtained by linking Rar', described below, through a thioester bond or a disulfide bond. bar" fragment is an antibody fragment obtained by cutting the disulfide bond of the binding region (pipde) in E(ab)". Bar' fragment can also be obtained by treating the E(ab)g2 fragment with a reducing agent, for example, dithiothreitol. Peptides antibody fragments can also be obtained by expressing nucleic acids encoding these peptides in recombinant cells (see, for example, Emapz5 ei

Зо а!І., У. Іттипої. Меїйб. 184, 123-38 (1995)). Наприклад, химерний ген, кодуючий частину Е(аб)» фрагмента, може включати послідовності ДНК, що кодують Сні домен і область зв'язування важкого ланцюга з наступним стоп-кодоном з одержанням усіченої молекули фрагмента антитіла.Zo a!I., U. Ittipoi. Mayib. 184, 123-38 (1995)). For example, a chimeric gene encoding a part of the E(ab)" fragment may include DNA sequences encoding the Sni domain and the binding region of the heavy chain, followed by a stop codon, resulting in a truncated antibody fragment molecule.

СОЗ8ВР також включають одновалентні антитіла та одноланцюгові антитіла. Одноланцюгові антитіла є пептидами, у яких Ем області важкого та легкого ланцюга зв'язані. В одному втіленні даний винахід пропонує одноланцюговий Ем (5СЕм), де важкий і легкий ланцюги в Ем анти-СОЗ8 антитіла за даним винаходом з'єднані гнучким пептидним лінкером (звичайно, із приблизно 10, 12, 15 чи більше амінокислотних залишків) в єдиному ланцюзі пептиду. Способи одержання таких антитіл описані, наприклад, в 05 4946778, РісКІйип іп Те Ріпаптасоіоду ої Мопосіопаї!COZ8BPs also include monovalent antibodies and single-chain antibodies. Single-chain antibodies are peptides in which the EM regions of the heavy and light chains are linked. In one embodiment, the present invention provides a single-chain Em (5SEm), wherein the heavy and light chains in the anti-COZ8 antibody Em of the present invention are joined by a flexible peptide linker (of about 10, 12, 15 or more amino acid residues, of course) in a single chain. peptide. Methods of obtaining such antibodies are described, for example, in 05 4946778, RisKIyip ip Te Ripaptasiodu oi Moposiopai!

Апііродієв, мої. 113, Возепригу апа Мооге єдв. бргіпдег-Мепад, Мем МоїКк, рр. 269-315 (1994), Віта еї а!І., 5сіепсе 242, 423-426 (1988), Нибюп вї аІ., РМАБ ОБА 85, 5879-5883 (1988) і МесСанегу еї аІ., Маїште 348, 552-554 (1990). Одноланцюгове антитіло може бути одновалентним, якщо застосовується тільки одну Мн та Мі область, двовалентним, якщо застосовуються два Мн та МІ області, або полівалентним, якщо застосовується більше двох Мн та Мі областей.Apiirodiev, my 113, Vozeprigu apa Mooge edv. Brgypdeg-Mepad, Mem MoiKk, pp. 269-315 (1994), Vita ei a!I., 5siepse 242, 423-426 (1988), Nybyup vy aI., RMAB OBA 85, 5879-5883 (1988) and MesSanegu ei AI., Maishte 348, 552-554 (1990). A single chain antibody can be monovalent if only one Mn and Mi region is used, bivalent if two Mn and Mi regions are used, or polyvalent if more than two Mn and Mi regions are used.

В одному втіленні даного винаходу, СОЗ8ВР можна дериватизувати або зв'язати з іншою функціональною молекулою, наприклад, іншим пептидом або білком (наприклад, Рар' фрагментом) для одержання біспецифічної або мультиспецифічної молекули, що зв'язується із множинними ділянками зв'язування епітопів мішені. Наприклад, антитіло за даним винаходом може бути функціонально зв'язане (наприклад, за допомогою хімічного сполучення, генетичного з'єднання, нековалентного зв'язку і т.п.) з однією чи більше зв'язуючими молекулами, наприклад, антитілом, пептидом або зв'язуючим міметиком. В одному втіленні, СОЗ8ВР є антитілом даного винаходу.In one embodiment of the present invention, COZ8BP can be derivatized or linked to another functional molecule, e.g., another peptide or protein (eg, a Par' fragment) to produce a bispecific or multispecific molecule that binds to multiple epitope binding sites of the target. . For example, an antibody of the present invention can be functionally linked (for example, by means of a chemical conjugation, a genetic connection, a non-covalent bond, etc.) to one or more binding molecules, for example, an antibody, a peptide or binding mimetic. In one embodiment, SOZ8BP is an antibody of the present invention.

Відповідно, даний винахід пропонує біспецифічні та мультиспецифічні молекули, які включають, щонайменше, одну першу специфічність зв'язування з СОЗ8 і другу специфічність зв'язування з другим епітопом мішені. В одному втіленні даного винаходу, другий епітоп мішені є Ес рецептором, наприклад, ЕСсСуК! рецептором людини (СОб64) або Есса рецептором людини (СО89), або рецептором Т-клітин, наприклад, СОЗ3. В одному втіленні даний винахід пропонує біспецифічні та мультиспецифічні молекули, здатні зв'язуватися як з ЕсукК, ЕсоаК, так і з ГсекК експресуючими ефекторними клітинами (наприклад, моноцитами, макрофагами або бо поліморфоядерними клітинами (РММ5)) і клітинами мішені, експресуючими СО38. Ці біспецифічні та мультиспецифічні молекули націлюють СОЗ8-експресуючі клітини на ефекторні клітини та приводять в дію активності ефекторних клітин, опосередковані Ес рецептором, наприклад, фагоцитоз СОЗ8-експресуючих клітин, залежну від антитіл клітинну цитотоксичність (АрСС), вивільнення цитокінів або генерацію аніона супероксиду.Accordingly, the present invention provides bispecific and multispecific molecules that include at least one first specificity of binding to POP8 and a second specificity of binding to a second target epitope. In one embodiment of the present invention, the second epitope of the target is an Es receptor, for example, EsSuK! human receptor (COb64) or human Essa receptor (CO89), or T-cell receptor, for example, COZ3. In one embodiment, the present invention provides bispecific and multispecific molecules capable of binding to both EsukK, EsoaK, and GsekK expressing effector cells (eg, monocytes, macrophages, or polymorphonuclear cells (PMM5)) and target cells expressing CO38. These bispecific and multispecific molecules target COZ8-expressing cells to effector cells and trigger Es receptor-mediated effector cell activities, such as phagocytosis of COZ8-expressing cells, antibody-dependent cellular cytotoxicity (ArCs), cytokine release, or superoxide anion generation.

Біспецифічні та мультиспецифічні молекули згідно з даним винаходом можуть далі включати третю специфічність зв'язування на додаток до специфічності анти-Ес зв'язування та специфічності анти-СОЗ8 зв'язування. В одному втіленні, третя специфічність зв'язування є частиною проти фактора посилення (ЕР), наприклад, молекулою, що зв'язується з білком поверхні, залученим у цитотоксичну активність, і таким чином збільшує імунну відповідь проти клітин мішені. "Частина проти фактора посилення" може бути антитілом, функціональним фрагментом антитіла або лігандом, що зв'язується з даною молекулою, наприклад, антигеном або рецептором, і у такий спосіб приводить до посилення ефекту зв'язування детермінант дляThe bispecific and multispecific molecules of the present invention may further include a third binding specificity in addition to the anti-Es binding specificity and the anti-COZ8 binding specificity. In one embodiment, the third binding specificity is a part of an anti-enhancing factor (ER), for example, a molecule that binds to a surface protein involved in cytotoxic activity and thus increases the immune response against target cells. An "anti-enhancement moiety" may be an antibody, a functional fragment of an antibody, or a ligand that binds to a given molecule, such as an antigen or receptor, and thus results in enhanced binding of a determinant for

Ес фактора або антигену клітини мішені. "Частина проти фактора посилення" може зв'язуватися з Ес рецептором або антигеном клітини мішені. Альтернативно, "частина проти фактора посилення" може зв'язуватися з одиницею, відмінної від одиниці, з якою зв'язуються перша та друга специфічності. Наприклад, "частина проти фактора посилення" може зв'язувати цитотоксичну Т-клітину (наприклад, через СО2, СОЗ3, СО8, С028, С04, СОр40, ІСАМ-1 або інші імунні клітини, що приводить до збільшеної імунної відповіді проти клітини мішені).ES factor or target cell antigen. The "anti-enhancement part" can bind to the Es receptor or antigen of the target cell. Alternatively, the "anti-enhancement moiety" may bind to a unit other than the unit to which the first and second specificities bind. For example, an "anti-enhancer moiety" can bind a cytotoxic T cell (eg, via CO2, COZ3, CO8, CO28, CO4, CO40, ISAM-1, or other immune cells, leading to an increased immune response against the target cell) .

В одному втіленні, біспецифічні та мультиспецифічні молекули за даним винаходом включають як специфічність зв'язування, щонайменше, ще одне антитіло, включаючи, наприклад, Раб, Рабр', Е(аб)г, Ем або 5сЕм. Далі, антитіло може також бути димером легких ланцюгів або важких ланцюгів, або будь-яким найменшим їхнім фрагментом, наприклад, Ем або одноланцюговою конструкцією, як описано в Гайдпег еї аІ., в 05 4946778. Антитіло також може бути складеним білком зі зв'язуючим доменом імуноглобуліну, як описано в 05 2003/0118592 та 5 2003/0133939.In one embodiment, the bispecific and multispecific molecules of the present invention include as binding specificity at least one more antibody, including, for example, Rab, Rabr', E(ab)g, Em or 5cEm. Further, the antibody may also be a dimer of light chains or heavy chains, or any smallest fragment thereof, such as an Em or a single-chain construct, as described in Heidpeg et al., at 05 4946778. The antibody may also be a folded protein with a binding immunoglobulin domain as described in 05 2003/0118592 and 5 2003/0133939.

В одному втіленні специфічність зв'язування для Ес рецептора надана моноклональним антитілом людини, зв'язування якого не блокується імуноглобуліном З людини (Ід). Як застосовується тут, термін "С рецептор" стосується будь-якого з восьми генів у-ланцюга, розташованих на хромосомі 1. Ці гени кодують в цілому дванадцять трансмембранних абоIn one embodiment, the binding specificity for the Es receptor is provided by a human monoclonal antibody, the binding of which is not blocked by human immunoglobulin C (Id). As used herein, the term "C receptor" refers to any of the eight y-chain genes located on chromosome 1. These genes encode a total of twelve transmembrane or

Зо розчинних ізоформ рецептора, які об'єднані в три класи Ес" рецепторів: КЕсукІ (СОб64), ЕсугіІ!Ї (С0О32) і ЕсукІ (СО016). В одному втіленні Есу рецептор є КЕсукІ людини з високою спорідненістю. Одержання та опис таких моноклональних антитіл наведені в Рапдег еї аї., в УМО 88/00052 та в 05 4954617. Такі антитіла зв'язуються з епітопом КЕсукІ, ЕсувІ! або Есуві на ділянці, що відрізняється від Есу зв'язуючої ділянки рецептора і, таким чином, їх зв'язування не блокується в значній мірі фізіологічними рівнями дсС. Специфічні анти-КЕсукі антитіла, застосовувані в даному винаході, є тАб 22, тАр 32, тАБ 44, тАБ 62 та тАБ 197. В інших втіленнях анти-КЕсукКіІ рецепторне антитіло є гуманізованою формою тА 22 (Н22). Продукція та характеристика антитіла Н22 описані в сгаліапо, К.Р. еї аї., у. Іттипої. 155(10), 4996-5002 (1995) ії УМО 94/10332. Клітинна лінія, продукуюча антитіло Н22, покладена на зберігання вOf the soluble isoforms of the receptor, which are combined into three classes of Es' receptors: KesukI (COb64), EsugI!I (COO32) and EsukI (CO016). In one embodiment of the Esu, the receptor is human KesukI with high affinity. Preparation and description of such monoclonal of antibodies are listed in Rapdeg ei ai., in UMO 88/00052 and in 05 4954617. Such antibodies bind to the epitope of KESukI, EsuvI! or EsuvI in a region that differs from the Esu binding region of the receptor and, thus, their binding binding is not significantly blocked by physiological levels of TSH. The specific anti-KESuKi antibodies used in the present invention are TAb 22, TAB 32, TAB 44, TAB 62 and TAB 197. In other embodiments, the anti-KESukKiI receptor antibody is a humanized form of tA 22 (H22). The production and characterization of the H22 antibody is described in Sgaliapo, K.R. and Ai., U. Ittipoi. 155(10), 4996-5002 (1995) and UMO 94/10332. The cell line producing the H22 antibody, deposited in

Американську колекцію типових культур (Атегісап Туре Сийиге СоПесійоп) 4 листопада 1992 р. під назвою НАО22СІ 1 і номером Мо. СК. 11177.American Type Culture Collection (Ategisap Toure Siyige SoPesiop) on November 4, 1992 under the name NAO22SI 1 and number Mo. SK. 11177.

В одному втіленні, специфічність зв'язування Ес рецептора надана антитілом, яке зв'язуєIn one embodiment, the binding specificity of the Es receptor is provided by an antibody that binds

ІА рецептор людини, наприклад, Еса рецептор (Бса1ї (СО89), зв'язування якого в одному втіленні не блокується імуноглобуліном А людини (ІдА). Термін "ІА рецептор" включає продукт одного а-гена (ЕсОаКІ), розташованого на хромосомі 19. Відомо, що цей ген кодує кілька трансмембранних ізоформ із альтернативним сплайсингом від 55 до 110 кДа. РсоКкІ (СО89) експресується о конститутивно у моноцитів/макрофагів, еозинофільних і нейтрофільних гранулоцитів, але не в неефекторній популяції клітин. ЕсСаКІ має середню спорідненість як доA human IA receptor, for example, an Esa receptor (Bsa1i (СО89), the binding of which in one embodiment is not blocked by human immunoglobulin A (IdA). The term "IA receptor" includes the product of one α gene (EsOAKI) located on chromosome 19. This gene is known to encode several transmembrane isoforms with alternative splicing ranging from 55 to 110 kDa. PsoCKI (CO89) is constitutively expressed in monocytes/macrophages, eosinophils, and neutrophils, but not in non-effector cell populations. EsCaKI has an average affinity for

ІДА1, так і до ІдА2, що зростає під дією цитокінів, наприклад, 5-С5Е або ЗМ-СО5Е (Мопоп, Н.О. єї аІ,, СтйісаиІ Вемієм іп Іттипоіоду 16, 423-440 (1996)). Описано чотири ЕсаКіІ-специфічних моноклональних антитіла, ідентифіковані як АЗ, А5Б9У, Аб2 та А77, які зв'язують ЕсакКіІ поза доменом зв'язуванням ІдА ліганду (Мопіевїго, К.С. еї аї., 9. Іттипої. 148, 1764(1992)).IDA1, as well as to Ida2, which increases under the influence of cytokines, for example, 5-C5E or ZM-СО5E (Mopop, N.O. Yei aI,, StysaiI Vemiem ip Ittypoiodu 16, 423-440 (1996)). Four EsaKiI-specific monoclonal antibodies, identified as AZ, A5B9U, Ab2 and A77, have been described, which bind EsaKiI outside the IdA ligand binding domain (Mopievigo, K.S. ei ai., 9. Ittypoi. 148, 1764(1992 )).

ЕсоКІ, РЕсукІ, КЕсСуКІ та КЕсукП, особливо КЕсукі! та КЕсукКіІйї, є прикладами запускаючих (тригерних) рецепторів для застосування в даному винаході, оскільки вони (1) первинно експресуються на імунних ефекторних клітинах, наприклад, моноцитах, РММ клітинах, макрофагах і деревоподібних клітинах; (2) експресуються на високих рівнях (наприклад, 5000- 100000 на клітину); (3) є медіаторами цитотоксичних активностей (наприклад, АОСС, фагоцитозу) і (4) опосередковують посилену презентацію антигенів, включаючи власний антиген націлювання на них. боEsoKI, RESUKI, KESSuKI and KESukP, especially KESuki! and KESukKiIi, are examples of triggering (trigger) receptors for use in this invention because they (1) are primarily expressed on immune effector cells, for example, monocytes, PMM cells, macrophages, and dendritic cells; (2) are expressed at high levels (eg, 5,000-100,000 per cell); (3) mediate cytotoxic activities (eg, AOSS, phagocytosis) and (4) mediate enhanced antigen presentation, including self-antigen targeting. for

В одному втіленні, СОЗ8ВР за даним винаходом є мультиспецифічним анти-СОЗ38 антитілом або подібною до антитіла молекулою, окремим прикладом якого є біспецифічне антитіло, яке включає, щонайменше, одну пару Мн послідовності та Мі послідовності ланцюгів, специфічних для одного епітопа, включеного, щонайменше, почасти в СОЗ8 і, щонайменше, одну пару Мн послідовності та Мі послідовності ланцюгів, специфічних для другого епітопа. Мн та Мі послідовності біспецифічного антитіла можуть включати повні Мн та Мі послідовності, що відповідають областям Мн та Мі анти-СОЗ38, варіанти Мн та/або Мі послідовностей або необхідні частини Мн та/або Мі областей, наприклад, потрібну комбінацію СОК послідовностей та інших послідовностей, достатніх для надання зв'язування з потрібними епітопами.In one embodiment, the COZ8BP of the present invention is a multispecific anti-COZ38 antibody or antibody-like molecule, a specific example of which is a bispecific antibody that includes at least one pair of Mn sequence and Mi sequence of chains specific for one epitope, including at least partly in SOZ8 and at least one pair of Mn sequence and Mi sequence of chains specific for the second epitope. The Mn and Mi sequences of a bispecific antibody may include the complete Mn and Mi sequences corresponding to the Mn and Mi regions of anti-POZ38, variants of the Mn and/or Mi sequences, or necessary portions of the Mn and/or Mi regions, for example, the desired combination of SOC sequences and other sequences , sufficient to provide binding to the desired epitopes.

Приклади молекул біспецифічного антитіла включають (1) два антитіла, одне зі специфічністю до СОЗ8, та інше - до другої мішені, які зв'язані разом, (2) одиночне антитіло, у якого один ланцюг специфічний до СОЗ8 і другий ланцюг специфічний до другої молекули, та (3) одноланцюгове антитіло, що має специфічність до СОЗ8 ії до другої молекули. Звичайно, друга мішень/друга молекула є молекулою, відмінною від СОЗ38. В одному втіленні, друга молекула є раковим антигеном/зв'язаним 3 пухлиною антигеном, таким як, карциноембріональний антиген (СЕА), антиген, специфічний для простати (РБЗА), КАСЕ (нирковий антиген), а-фетопротеїн, САМЕ (СТІ -розпізнаваний антиген меланоми), СТ антигени (наприклад, МАСЕ-В5, -В6, -С2, -С3 та Ю; Маде-12; СТ10; ММ-Е5О-1, 555Х-2, САСЕ,Examples of bispecific antibody molecules include (1) two antibodies, one specific for POP8 and one specific for a second target, which are linked together, (2) a single antibody in which one chain is specific for POP8 and the second chain is specific for a second molecule , and (3) a single-chain antibody having specificity for POP8 and a second molecule. Of course, the second target/second molecule is a molecule other than POP38. In one embodiment, the second molecule is a cancer antigen/tumor-associated antigen, such as carcinoembryonic antigen (CEA), prostate-specific antigen (RBSA), KACE (kidney antigen), α-fetoprotein, SAMe (STI-recognized melanoma antigen), ST antigens (for example, MACE-B5, -B6, -C2, -C3 and Y; Made-12; ST10; MM-E5O-1, 555X-2, CACE,

ВАСЕ, МАСЕ і 5АСЕ), мишачі антигени (наприклад, МОС1, муцин-СА125 і т.д.), гангліозидні антигени, тирозиназа, др75, С-тус, Майї, Меіап, МОМ-1, МОМ-2, МОМ-3, НІ А-В7 та Ер-САМ. В одному втіленні, друга молекула є зв'язаним з раком інтегрином, наприклад, інтегрином а5рВ3. В одному втіленні, друга молекула є ангиогенним фактором або іншим зв'язаним з раком фактором росту, наприклад, васкулярно-ендотеліальним фактором росту (МЕСЕ), фактором росту фібробластів (ЕСЕ), епідермальним фактором росту (ЕСЕ), рецептором епідермального фактора росту (ЕСЕК), ангіогеніном та їх рецепторами, зокрема, рецепторами, зв'язаними з розвитком раку (наприклад, одним з НЕК1-НЕКА4 рецепторів). Інші білки, зв'язані з розвитком раку, обговорювані тут, можуть також бути придатною другою молекулою. В одному втіленні, друга молекула є молекулою, експресованою на поверхні клітин множинної мієломи, такою якACE, MACE and 5ACE), mouse antigens (for example, MOS1, mucin-CA125, etc.), ganglioside antigens, tyrosinase, dr75, C-tus, Mayi, Meiap, MOM-1, MOM-2, MOM-3 , NI A-B7 and Er-SAM. In one embodiment, the second molecule is a cancer-associated integrin, for example, α5β3 integrin. In one embodiment, the second molecule is an angiogenic factor or other cancer-associated growth factor, such as vascular endothelial growth factor (VEF), fibroblast growth factor (EFF), epidermal growth factor (EFF), epidermal growth factor receptor (EGF ), angiogenin and their receptors, in particular, receptors associated with the development of cancer (for example, one of the NEK1-NEKA4 receptors). Other proteins associated with the development of cancer, discussed here, may also be a suitable second molecule. In one embodiment, the second molecule is a molecule expressed on the surface of multiple myeloma cells, such as

СОр138.СОр138.

В одному втіленні, біспецифічне антитіло за даним винаходом є діателом.In one embodiment, the bispecific antibody of the present invention is a diatel.

Біспецифічні антитіла також включають зшиті або "гетерокон'юговані" антитіла. Наприклад, одне з антитіл гетерокон'югата може бути сполучене з авідином, та інше з біотином.Bispecific antibodies also include cross-linked or "heteroconjugated" antibodies. For example, one of the antibodies of the heteroconjugate can be conjugated with avidin, and the other with biotin.

Передбачається, що такі антитіла, наприклад, направляють клітини імунної системи на небажані клітини (див., наприклад, 05 4676980). Антитіла гетерокон'югати можна одержувати із застосуванням будь-якого загальновідомого способу зшивання. Придатні агенти для зшивання пептидів і відповідні техніки добре відомі в даній області і приклади таких агентів та технік розкриті, наприклад, в 05 4676980.Such antibodies are thought to, for example, direct cells of the immune system to target unwanted cells (see, for example, 05 4676980). Antibodies heteroconjugates can be obtained using any known method of crosslinking. Suitable peptide crosslinking agents and related techniques are well known in the art and examples of such agents and techniques are disclosed, for example, in 05 4676980.

Так, хоча обговорення тут може фокусуватися на антитілах, слід розуміти, що втілення та властивості антитіл можна так само застосовувати до фрагментів антитіл, наприклад, Еар фрагментів, Баб' фрагментів та 5сЕм пептидів, антитіло-подібних пептидів (пептидів, що включають СОР), бі- і мультиспецифічних антитіл та інших СОЗ8ВР, якщо буде потрібно, наданих так, що СОЗ8ВР за даним винаходом зберігає, щонайменше, значну частину антиген- зв'язуючих властивостей відповідного повного антитіла. У деяких випадках, фрагменти антитіл можуть мати більш низьку спорідненість зв'язування антигену, але можуть пропонувати інші сприятливі властивості, які можуть відшкодувати таку втрату спорідненості.Thus, although the discussion here may focus on antibodies, it should be understood that the embodiments and properties of antibodies may equally apply to antibody fragments, e.g., Ear fragments, Bab' fragments, and 5cEm peptides, antibody-like peptides (peptides that include CRP), bi- and multispecific antibodies and other SOZ8VR, if necessary, provided so that the SOZ8VR according to the present invention retains at least a significant part of the antigen-binding properties of the corresponding complete antibody. In some cases, antibody fragments may have lower antigen binding affinity, but may offer other beneficial properties that may compensate for such loss of affinity.

СОЗ8ВР за даним винаходом і особливо анти-СО38 антитіла можна відбирати на основі того, чи можуть вони надати здатність до фіксації комплементу чи ні. Є велике число ізотипів антитіл, здатних до фіксації комплементу та СОС, включаючи, без обмеження, такі: мишачийThe COZ8BPs of the present invention and especially the anti-CO38 antibodies can be selected based on whether or not they can confer complement-fixing ability. There are a large number of isotypes of antibodies capable of fixing complement and SOC, including, without limitation, the following: murine

ІМ, мишачий Ідсга, мишачий Ідс260, мишачий ІдеЗ, (ДМ людини, ІДО1 людини та ІдсеЗ людини.IM, mouse Idsga, mouse Ids260, mouse IdeZ, (human DM, human IDO1 and human IdseZ.

Такі ізотипи, які не включають, без обмеження, (952 людини та Ід54 людини. Визначення ізотипу та інші способи модифікації фіксації комплементу та СОС функціональні характеристики антитіл відомі в даній області.Such isotypes that do not include, without limitation, human (952) and human Id54. Isotype determination and other methods of modifying complement fixation and SOC functional characteristics of antibodies are known in the art.

СОЗ8ВР за даним винаходом також включають імуноадгезини, які є молекулами, де один чи більше з СОК анти-СО38 антитіла є ковалентно або нековалентно зв'язаним з молекулою.COZ8BP according to the present invention also include immunoadhesins, which are molecules where one or more of the SOC anti-CO38 antibodies is covalently or non-covalently linked to the molecule.

Імуноадгезин може включати СОК як частину більшого поліпептидного ланцюга, може ковалентно зв'язувати СОК з іншим поліпептидним ланцюгом, або може включати СОК нековалентно. СОК дозволяють імуноадгезину специфічно зв'язуватися з СОЗ8.Immunoadhesin can include SOC as part of a larger polypeptide chain, can covalently bind SOC to another polypeptide chain, or can include SOC non-covalently. SOCs allow immunoadhesin to specifically bind to POP8.

Даний винахід також надає СОЗ8ВР складові білки. СОЗ8ВР складові білки можуть включати будь-яку придатну амінокислотну послідовність або комбінацію послідовностей, що є 60 специфічними та/або вибірковими, щонайменше, для одного домену, які, щонайменше, почасти включені в СОЗ8 (наприклад, Мн домен, Мі домен анти-СОЗ38 антитіла або, зокрема, їх СОК) і, щонайменше, одну негомологічну та звичайно неблизьку амінокислотну послідовність (що мають, наприклад, менш, ніж приблизно 40 95, менш, ніж приблизно 35 95, менш, ніж приблизно 3095, менш, ніж приблизно 25 95, менш, ніж приблизно 20 95, ідентичності з послідовності амінокислот послідовності, специфічної/вибіркової по СЮОЗ38), що надає детектовану біологічну функцію або характеристику складеному білку, яку не можна приписати тільки послідовності, специфічній/вибірковій по СОЗ8 (наприклад, збільшений час напівжиття іп мімо, рлуоресценція, збільшене націлювання на певний тип клітин і т.д.). Функціональні послідовності такого складеного білка можуть бути розділені гнучким лінкером(ами). Вторинна послідовність(ї) може також бути вироблена із цитотоксичних або апоптичних пептидів. Вторинні послідовності можуть також надавати діагностичні властивості. Приклади таких послідовностей включають вироблені з легко відслідковуваних ферментів, наприклад, пероксидази хрону.The present invention also provides SOZ8VR component proteins. COZ8BP component proteins may include any suitable amino acid sequence or combination of sequences that are 60 specific and/or selective for at least one domain that are at least partially incorporated into COZ8 (eg, Mn domain, Mi domain of anti-COZ38 antibody or, in particular, their SOC) and at least one non-homologous and usually non-close amino acid sequence (having, for example, less than about 40 95, less than about 35 95, less than about 3095, less than about 25 95 , less than about 20 95 amino acid sequence identity of the POPS-specific/selective sequence38) that confers a detectable biological function or characteristic to the folded protein that cannot be attributed solely to the POPS-specific/selective sequence8 (eg, increased half-life mimo, rluorescence, increased targeting of a specific cell type, etc.). The functional sequences of such a folded protein can be separated by flexible linker(s). The secondary sequence(s) may also be produced from cytotoxic or apoptotic peptides. Secondary sequences may also provide diagnostic properties. Examples of such sequences include those produced from readily traceable enzymes, such as horseradish peroxidase.

СОЗ8ВР складові білки можна також характеризувати шляхом включення додаткової епітопної мітки. Послідовність епітопної мітки є амінокислотною послідовністю, що має достатню кількістю залишків для надання епітопа, проти якого можна одержати антитіла, у контексті СОЗ8ВР ще й досить коротка, так щоб, в основному, не заважати активності (вибірковості, специфічності, спорідненості та/або біологічної активності) СОЗ8ВР (у порівнянні з батьківським СОЗ8ВР, позбавленим епітопної мітки). Епітоп хвостик, бажано, є досить унікальним, щоб антитіла до епітопної мітки не виявляли значної перехресної реактивності з іншими епітопами. Придатні для епітопної мітки поліпептиди звичайно мають, щонайменше, близько шести амінокислотних залишків і звичайно між приблизно 8-50 амінокислотних залишків (наприклад, приблизно 9-30 залишків). Приклади епітопної мітки включають поліпептидну мітку НА вірусу грипу та його антитіло 12С АБ (Рівїй еї аї., Мої. Сеїї. Віої. 8, 2159- 2165 (1988)); с-тус таг та його антитіла 8Е9, 3С7, 6Е10, 4, В7 і 9Е10 (Емап еї а!., Мої. Сеїї. Віої. 5(12), 3610-3616 (1985)), таг глікопротеїну О (9) герпесу простого та його антитіло (Рарог5Ку еї а!., Ргоївіп Епдіпеегіпа З3(6), 547-553 (1990)). У певних втіленнях епітопна мітка є "рятувальним епітопом зв'язування рецептора". Як застосовується тут, термін "рятувальний епітоп зв'язування рецептора" стосується епітопа Ес області (до молекули (наприклад, Ідс1, Ідс2, дез або Ідсаі), що відповідає за збільшення напівжиття молекули Ідс у сироватці іп мімо.COZ8BP component proteins can also be characterized by including an additional epitope tag. The sequence of the epitope tag is an amino acid sequence having sufficient number of residues to provide an epitope against which antibodies can be raised, and in the context of SOZ8BP, also short enough so as not to substantially interfere with activity (selectivity, specificity, affinity and/or biological activity ) СОЗ8ВР (compared to the parental СОЗ8ВР, devoid of the epitope tag). The tail epitope is preferably unique enough that antibodies to the epitope tag do not show significant cross-reactivity with other epitopes. Suitable epitope tag polypeptides usually have at least about six amino acid residues and usually between about 8-50 amino acid residues (eg, about 9-30 residues). Examples of an epitope tag include the NA polypeptide tag of the influenza virus and its 12C AB antibody (Rev., Sci., Vol. 8, 2159-2165 (1988)); c-tus tag and its antibodies 8E9, 3C7, 6E10, 4, B7 and 9E10 (Emap et al., Moi. Seii. Vioi. 5(12), 3610-3616 (1985)), glycoprotein O tag (9) herpes simplex and its antibody (Rarog5Ku ei a!., Rgoivip Epdipeegipa Z3(6), 547-553 (1990)). In certain embodiments, the epitope tag is a "rescue receptor binding epitope". As used herein, the term "rescue receptor binding epitope" refers to an epitope of the Es region (to a molecule (eg, Ids1, Ids2, dez, or Idsai)) that is responsible for increasing the half-life of the Ids molecule in serum.

СОЗ8ВР за даним винаходом також включають похідні СОЗ8ВР. Похідним є пептид, у якого один чи більше амінокислотний залишок пептиду хімічно модифікований (наприклад, за допомогою алкілування, ацилювання, утворення складного ефіру, утворення аміду) або ковалентно зв'язаний з одним чи більше гетерологічним замісником (наприклад, ліпофільним замісником групою поліетиленгліколю (ПЕГ), пептидним бічним ланцюгом, зв'язаним з придатною органічною ланкою, лінкером і т.д.). Пептид може також бути кон'югований з терапевтичною ланкою, наприклад, цитотоксином, хіміотерапевтичними ліками, імуносупресантом або радіоїзотопом (так званий імунокон'югат), В основному, СОЗ8ВР, описаний тут, можна модифікувати шляхом включення будь-якого придатного числа таких модифікованих амінокислот та/або зв'язків з такими кон'югованими замісниками. Придатність у даному контексті, в основному, визначається здатністю, щонайменше, здебільшого зберігатиСОЗ8ВР according to the present invention also include derivatives of СОЗ8ВР. A derivative is a peptide in which one or more amino acid residues of the peptide are chemically modified (for example, by alkylation, acylation, ester formation, amide formation) or covalently linked to one or more heterologous substituents (for example, a lipophilic substituent with a polyethylene glycol group (PEG ), a peptide side chain connected to a suitable organic link, linker, etc.). The peptide may also be conjugated to a therapeutic moiety, such as a cytotoxin, chemotherapeutic drug, immunosuppressant, or radioisotope (so-called immunoconjugate). In principle, the SOZ8BP described herein can be modified by incorporating any suitable number of such modified amino acids and /or connections with such conjugated substituents. Suitability in this context is mainly determined by the ability to at least mostly store

СО38 вибірковість та/або специфічність, властиві недериватизованому батьківському СОЗ8ВР.СО38 selectivity and/or specificity inherent in the non-derivatized parental СОЗ8ВР.

Включення однієї чи більше модифікованих амінокислот може давати переваги, наприклад, (а) збільшення напівжиття пептиду в сироватці, (б) зменшення антигенності поліпептиду або (в) збільшення здатності поліпептиду до зберігання. Амінокислота(и) модифікують, наприклад, під час трансляції або після трансляції протягом продукції рекомбінант (наприклад, М- опосередковане глікозилування по М-Х-5/Ї мотиву при експресії в клітинах ссавців) або модифікують синтетичними способами. Необмежуючі приклади модифікованих амінокислот включають глікозиловану амінокислоту, сульфатовану амінокислоту, пренільовану амінокислоту (наприклад, фарнезильовану, геранілгеранільовану) амінокислоту, ацетильовану амінокислоту, ациловану амінокислоту, пегильовану амінокислоту, біотинільовану амінокислоту, карбоксиловану амінокислоту, фосфориловану амінокислоту і т.п. Література переповнена посиланнями, достатніми для наставляння фахівця в даній області при модифікації амінокислот. Приклади протоколів є в УмаїКег (1998) Ргоївїп РгоїосоЇї5 Оп Са-Нот, Нитапа Ргевз5,The inclusion of one or more modified amino acids may provide benefits such as (a) increasing the serum half-life of the peptide, (b) reducing the antigenicity of the polypeptide, or (c) increasing the storage capacity of the polypeptide. Amino acid(s) are modified, for example, during translation or after translation during the production of recombinants (for example, M-mediated glycosylation on the M-X-5/Y motif when expressed in mammalian cells) or modified by synthetic methods. Non-limiting examples of modified amino acids include a glycosylated amino acid, a sulfated amino acid, a prenylated (eg, farnesylated, geranylgeranylated) amino acid, an acetylated amino acid, an acylated amino acid, a pegylated amino acid, a biotinylated amino acid, a carboxylated amino acid, a phosphorylated amino acid, and the like. The literature is replete with references sufficient to guide a person skilled in the art in modifying amino acids. Examples of protocols are in UmaiKeg (1998) Rgoivip Rgoiosoyi5 Op Sa-Not, Nytapa Rgevz5,

Тоулаїа, М. Модифіковані амінокислоти можна вибирати із глікозилованої амінокислоти, пегільовананої амінокислоти, фарнезильованої амінокислоти, ацетильованої амінокислоти, біотинільованої амінокислоти, амінокислоти, кон'югованої з ліпідною частиною, та амінокислоти, кон'югованої з органічним дериватизуючим агентом.Toulaia, M. The modified amino acid can be selected from a glycosylated amino acid, a pegylated amino acid, a farnesylated amino acid, an acetylated amino acid, a biotinylated amino acid, an amino acid conjugated to a lipid moiety, and an amino acid conjugated to an organic derivatizing agent.

Додатково, антитіла можна модифікувати хімічно за допомогою ковалентної кон'югації з полімером, щоб, наприклад, збільшити їх циркуляторний час напівжиття. Приклади полімерів і 60 способів приєднання до них проілюстровані, наприклад, в 5 4766106, 05 4179337, 05 4495285 та 05 4609546. Додаткові ілюстративні приклади включають поліоксіетиловані поліоли та поліетиленгліколь (ПЕГ) (наприклад, ПЕГ з молекулярною вагою між приблизно 1000 і приблизно 40000, наприклад, між приблизно 2000 і приблизно 20000, наприклад, між приблизно 3000 і приблизно 12000).Additionally, antibodies can be chemically modified by covalent conjugation with a polymer to, for example, increase their circulating half-life. Examples of polymers and 60 methods of joining them are illustrated, for example, in 5 4766106, 05 4179337, 05 4495285 and 05 4609546. Additional illustrative examples include polyoxyethylated polyols and polyethylene glycol (PEG) (eg, PEG with a molecular weight between about 1000 and about 40000, for example between about 2000 and about 20000, for example between about 3000 and about 12000).

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, кон'югований із другою молекулою, вибраною з радіоїзотопу, ферменту, субстрату ферменту, кофактора, флуоресцентної мітки, хемілюмінесцентної мітки, пептидного тага або магнітної частинки. В одному втіленні, СОЗ8ВР може бути кон'югований з одним чи більше фрагментом антитіла, нуклеїновими кислотами (олігокон'югати), нуклеазами, гормонами, імуномодуляторами, хелаторами, сполуками бору, фотоактивними агентами, барвниками і т.п. Ці та інші придатні агенти можна з'єднувати прямо або опосередковано з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом. Одним прикладом непрямого з'єднання другого агента є з'єднання через ланку роздільника. Такі роздільники у свою чергу можуть бути нерозчинними або розчинними (див., наприклад, Оіепег еї аї., 5сіепсе 231. 148 (1986)) і можуть вибиратися, щоб дозволити вивільнення ліків 3 СОЗ8ВР на ділянці мішені та/або за певних умов. Додаткові приклади терапевтичних агентів, які можуть бути з'єднані зIn one embodiment, the present invention provides SOZ8BP conjugated to a second molecule selected from a radioisotope, an enzyme, an enzyme substrate, a cofactor, a fluorescent label, a chemiluminescent label, a peptide tag, or a magnetic particle. In one embodiment, SOZ8BP can be conjugated to one or more antibody fragments, nucleic acids (oligoconjugates), nucleases, hormones, immunomodulators, chelators, boron compounds, photoactive agents, dyes, etc. These and other suitable agents can be combined directly or indirectly with SOZ8VR according to the present invention. One example of an indirect connection of a second agent is a connection through a splitter link. Such separators in turn may be insoluble or soluble (see, eg, Ophthalmology, 5th Siepse 231. 148 (1986)) and may be chosen to allow release of the drug 3 COZ8VR at the target site and/or under certain conditions. Additional examples of therapeutic agents that may be combined with

СОЗ8ВР, включають лектини та флуоресцентні пептиди.СОЗ8ВР, include lectins and fluorescent peptides.

В одному втіленні, надані похідні СОЗ8ВР, які включають одну чи більше амінокислоту, мічену радіоїзотопом. Мічений радіоїзотопом СОЗ8ВР можна застосовувати як з діагностичними, так і з терапевтичними цілями (кон'югація з радіоактивними молекулами є іншою можливою властивістю). Необмежуючі приклади міток для поліпептидів включають, без обмеження, ЗН, 17С, 19М, 355, 90, 99Тс, 125|, 191) та ї86Ке. Способи одержання радіоактивно мічених амінокислот і застосовні до цього похідні поліпептидів відомі в даній області (див., наприклад,In one embodiment, SOZ8BP derivatives are provided that include one or more radioisotope-labeled amino acids. Radiolabeled SOZ8BP can be used for both diagnostic and therapeutic purposes (conjugation with radioactive molecules is another possible property). Non-limiting examples of labels for polypeptides include, without limitation, ZN, 17C, 19M, 355, 90, 99Ts, 125|, 191) and 186Ke. Methods of obtaining radioactively labeled amino acids and applicable polypeptide derivatives are known in this area (see, for example,

Уипднапз еї аї., іп Сапсег СпетоїНпегару апа Віоїйегару 655-686 (2а еайоп, СНнаїпег апа І опдо, ед5., Гірріпсой Камеп (1996)) ії 05 4681581, 05 4735210, 05 5101827, 05 5102990 (005Uipdnapz ei ai., ip Sapseg SpetoiNpegaru apa Vioiyegaru 655-686 (2nd eayop, SNnaipeg apa I opdo, ed5., Girripsoi Kamep (1996)) ii 05 4681581, 05 4735210, 05 5101827, 05 51025990 (0

КЕЗ35,500), 05 5648471 та 05 5697902. Наприклад, радіоактивні ізотопи можуть бути приєднані способом із хлораміном Т.КЕЗ35,500), 05 5648471 and 05 5697902. For example, radioactive isotopes can be attached by the chloramine T method.

Кращими радіоїзотопами для діагностики є ізотопи індію, а для терапевтичного застосування - ізотопи ітрію, які є цитотоксичними. Радіоїзотопи, що випускають протон, в основному, є кращими в діагностиці (способи радіоїмуносцинтиографії (КІ5)). У Оже-електронів дуже коротка довжина пробігу (5-10 нм) і вони повинні бути інтерналізовані, щоб бути цитотоксичними (див., наприклад, Ааеїв5іевїп еї аї., Мисі. Меа. Віої. 14,165-169 (1987)). Відповідно, пептиди, кон'юговані з такими радіоїзотопами, можуть бути корисними для діагностичних способів, але тільки інтерналізовані пептиди можна розглядати для застосування з радіоїзотопами, що випускають електрони Оже, з метою терапії. Альфа-частинки повинні випускатися близько до клітини (у межах 3-4 діаметрів клітини), щоб бути ефективними як терапевтичні агенти (Мгіезепдогр еї аї., "Кадіоїттиподіобиїйп (пегару, " іп Нідпй Бозе СапсегThe best radioisotopes for diagnosis are indium isotopes, and for therapeutic use - yttrium isotopes, which are cytotoxic. Proton-emitting radioisotopes are generally better in diagnosis (radioimmunoscintiography methods (KI5)). Auger electrons have a very short path length (5-10 nm) and must be internalized to be cytotoxic (see, e.g., Aaeiv5ievip ei ai., Mysi. Mea. Vioi. 14,165-169 (1987)). Accordingly, peptides conjugated to such radioisotopes can be useful for diagnostic methods, but only internalized peptides can be considered for use with Auger electron-emitting radioisotopes for therapeutic purposes. Alpha particles must be emitted close to the cell (within 3-4 cell diameters) to be effective as therapeutic agents (Mgiezepdogr ei ai., "Kadioittipodiobiiip (pegaru," ip Nidpy Bose Sapseg

Тпегару Аптіаде еї аї., (ед5). (ММіШіате 8 УМіКіп5, Вайітоге, Ма. 1992)). Передбачається, що випромінювачі як електронів Оже, так і альфа-частинок повинні мати високу вибірковість, оскільки їхнє випромінювання з коротким пробігом не буде опромінювати сусідні неракові клітини.Tpegaru Aptiade ei ai., (ed5). (MMiShiate 8 UMiKip5, Waiitoge, Ma. 1992)). Emitters of both Auger electrons and alpha particles are expected to have high selectivity because their short-range radiation will not irradiate nearby non-cancerous cells.

Радіоактивні метали "п та 90 є, відповідно, чистим у-випромінювачем і чистим ВД- випромінювачем. Йод-125, найбільш відомий випромінювач електронів. Оже з часом напівжиття близько 60 днів, часто вивільняється імунокон'югатами іп мімо (завдяки дегалогенізації).Radioactive metals "p" and "90" are, respectively, a pure γ-emitter and a pure VD-emitter. Iodine-125, the best-known electron emitter, with a half-life of about 60 days, is often released by ip mimo immunoconjugates (due to dehalogenation).

Найчастіше застосовувані альфа-випромінювачі для клінічного застосування, астат-211 і вісмут- 212, мають порівняно короткі часи напівжиття (7,2 години та 1,0 години, відповідно) і перетворюються на радіоактивні ізотопи, які не можуть утримуватися імунокон'югатом після першого альфа-випромінювання Умібиг, Апіїбіої. Іттипосопіцд. Кадіорпатт. 4, 5-97 (1991)). для діагностичних застосувань можна використовувати СОЗ8ВР, мічений індієм-111 або технецієм- 99т. Обидва ці ізотопи випускають гамма-промені з енергією в інтервалі, придатному для одержання іміджів (100-250 кКЕв). Енергії нижче цього рівня звичайно не є досить проникаючими, щоб досягати зовнішніх пристроїв для одержання зображень. Енергії більш високих рівнів важко колімувати і вони дають зображення з низьким розділенням. Короткоїіснуючий "Тс звичайно обмежує своє застосування імунокон'югатами зі швидким поглинанням пухлинами.The most commonly used alpha emitters for clinical use, astatine-211 and bismuth-212, have relatively short half-lives (7.2 hours and 1.0 hours, respectively) and are converted to radioactive isotopes that cannot be retained by the immunoconjugate after the first alpha radiation Umibig, Apiibioi. Ittiposopicd. Kadiorpatt. 4, 5-97 (1991)). for diagnostic applications, you can use SOZ8VR labeled with indium-111 or technetium-99t. Both of these isotopes emit gamma rays with energy in the interval suitable for obtaining images (100-250 kEv). Energies below this level are usually not penetrating enough to reach external imaging devices. Higher energy levels are difficult to collimate and produce low resolution images. The short-lived "Ts" usually limits its use to immunoconjugates with rapid absorption by tumors.

В одному втіленні, надані перший і другий кон'юЮгати СОЗ8ВР з першим і другим радіоїзотопами. В іншому втіленні наданий один СОЗ8ВР, кон'югований із двома радіоїзотопами. Перевагою застосування двох окремих радіоізотопів, наприклад, одного для одержання зображення, та іншого для терапії, є те, що це полегшує амбулаторне лікування.In one embodiment, first and second conjugates of SOZ8BP with first and second radioisotopes are provided. In another embodiment, one SOZ8BP conjugated to two radioisotopes is provided. The advantage of using two separate radioisotopes, for example one for imaging and one for therapy, is that it facilitates outpatient treatment.

Низька кількість радіоактивності, застосовувана для діагностики, не представляє радіаційної погрози, тоді як радіація, випромінювана терапевтичним ізотопом, таким як чистий р- 60 випромінювач, звичайно, здебільшого поглинається в оточенні клітин мішені.The low amount of radioactivity used for diagnosis does not pose a radiation hazard, whereas the radiation emitted by a therapeutic isotope such as the pure p-60 emitter is, of course, mostly absorbed in the target cell environment.

Радіоїзотопи можуть бути приєднані до СОЗ8ВР прямо або опосередковано. Радіоізотопи 1251, 191|, 99Тс, 186Ке та 188Ке можуть бути, наприклад, ковалентно зв'язані з білками (включаючи антитіла) через функціональні групи амінокислот. Радіоактивний йод звичайно зв'язаний через фенольну групу, що находиться на тирозині. Є безліч методів для досягнення цього: хроматін-Т (див., наприклад, Стеепмжоос еї а!., Віоспет .). 89, 114-123 (1963) і йодоген (Заїасіп»кі еї аї., Апаї.Radioisotopes can be attached to SOZ8BP directly or indirectly. Radioisotopes 1251, 191|, 99Ts, 186Ke and 188Ke can be, for example, covalently bound to proteins (including antibodies) through functional groups of amino acids. Radioactive iodine is usually bound through the phenolic group located on tyrosine. There are many methods to achieve this: chromatin-T (see, for example, Steepmjoos ei a!., Viospet .). 89, 114-123 (1963) and iodogen (Ziasip»ki ei ai., Apai.

Віоспет. НЯ, 136-146 (1981)). Ізотопи Тс та Ке можуть бути ковалентно зв'язані через сульфгідрильну групу цистеїну (див., наприклад, Сгіййн5 еї аІ., Сапсег Ке5. 51, 4594-4602 (1991)). Однак, такі композиції можуть бути порівняно краще придатними для діагностичних цілей, оскільки організм часто може легко розбивати такі ковалентні зв'язки, вивільняючи радіоїзотопи в циркуляторну систему.Viospet. NYA, 136-146 (1981)). Isotopes Tc and Ke can be covalently linked through the sulfhydryl group of cysteine (see, for example, Sgiyin5 ei aI., Sapseg Ke5. 51, 4594-4602 (1991)). However, such compositions may be relatively better suited for diagnostic purposes, since the body can often easily break such covalent bonds, releasing radioisotopes into the circulatory system.

СОЗ8В можна також позначити ферментами, придатними для детекції, наприклад, пероксидазою хрону, В-галактозидазою, люциферазою, лужною фосфатазою, глюкозооксидазою і т.п. СОЗВВР також можна позначити біотином і відповідно детектувати шляхом непрямого вимірювання зв'язування авідину або стрептавідину. СОЗ8ВР також можна позначити попередньо визначеними поліпептидними епітопами, що розпізнаються вторинним репортером (наприклад, послідовністю лейцинової застібки, ділянками зв'язування вторинних антитіл, доменами зв'язування металів, епітопами-тагами і т.д.). Додаткові приклади ферментів кандидатів у кон'югати включають малат-дегідрогеназу, нуклеазу стафілокока, дельта-у- стероїд-ізомеразу, алкогольдегідрогеназу дріжджів, а-гліцерофосфат-дегідрогеназу, триозофосфат-ізомеразу, аспарагіназу, глюкозооксидазу, рибонуклеазу, уреазу, каталазу, глюкозо-6-фосфат-дегідрогеназу, глюкоамілазу та ацетилхолінестеразу.COZ8B can also be labeled with enzymes suitable for detection, for example, horseradish peroxidase, B-galactosidase, luciferase, alkaline phosphatase, glucose oxidase, etc. COZVVR can also be labeled with biotin and accordingly detected by indirect measurement of avidin or streptavidin binding. COZ8BP can also be labeled with predefined polypeptide epitopes recognized by a secondary reporter (for example, a leucine zipper sequence, secondary antibody binding sites, metal binding domains, epitope tags, etc.). Additional examples of candidate enzyme conjugates include malate dehydrogenase, staphylococcal nuclease, delta-u-steroid isomerase, yeast alcohol dehydrogenase, α-glycerophosphate dehydrogenase, triose phosphate isomerase, asparaginase, glucose oxidase, ribonuclease, urease, catalase, glucose-6 -phosphate dehydrogenase, glucoamylase and acetylcholinesterase.

Додаткові приклади ланок, що можуть бути мітками, в основному включають, без обмеження, спин-мічені молекули та інші мітки діагностичного значення.Additional examples of moieties that may be labels include, but are not limited to, spin-labeled molecules and other labels of diagnostic value.

В одному втіленні, даний винахід пропонує перехресно зшиті похідні СОЗ8ВР. Наприклад, таке похідне СОЗВ8ВР можна одержати за допомогою перехресного зшивання двох чи більше антитіл, з яких, щонайменше, одне є специфічним/вибірковим для СОЗ38 (одного типу чи різних типів, наприклад, щоб створити біспецифічні антитіла). Придатні перехресно зшивальні агенти включають такі, які є гетеробіфункціональними, маючи дві реактивні групи, що чітко розрізняються, розділені придатним спейсером (наприклад, м-малеімідобензоїл-М-In one embodiment, the present invention provides cross-linked SOZ8BP derivatives. For example, such a COZB8BP derivative can be obtained by cross-linking two or more antibodies, of which at least one is specific/selective for COZ38 (of the same type or different types, for example, to create bispecific antibodies). Suitable cross-linking agents include those that are heterobifunctional, having two distinct reactive groups separated by a suitable spacer (eg, m-maleimidobenzoyl-M-

Зо гідроксисукцинімідний ефір) або гомобіфункціональними (наприклад, дисукцинімідилсуберат).Zo hydroxysuccinimide ether) or homobifunctional (for example, disuccinimidylsuberate).

Такі зшивальні агенти можна придбати у Ріегсе Спетіса! Сотрапу, Коскгога, ПП.Such crosslinking agents can be purchased from Riegse Spetis! Sotrapu, Koskgoga, PP.

СОЗ8ВР також можна кон'югувати із хімічною групою будь-якого придатного типу, наприклад, поліетиленгліколем (ПЕГ), метильною або етильною групою або вуглеводневою групою. Ці та інші придатні кон'юговані групи можна застосовувати для поліпшення біологічних характеристик СОЗ8ВР, наприклад, поліпшення сироваткового часу напівжиття, розчинності та/або зв'язування тканин.COZ8BP can also be conjugated with a chemical group of any suitable type, for example, a polyethylene glycol (PEG), a methyl or ethyl group, or a hydrocarbon group. These and other suitable conjugated groups can be used to improve the biological characteristics of SOZ8BP, for example, improving serum half-life, solubility and/or tissue binding.

Похідні СОЗ8ВР можна одержувати шляхом хімічного приєднання радіоізотопу, білка або іншого агента/ланки/сполуки до (а) М-кінцевої ділянки або С-кінцевої ділянки СОЗ8ВР або його суб'одиниці (наприклад, важкого ланцюга анти-СОЗ8ВР антитіла, легкого ланцюга анти-СОЗ8ВР антитіла або його анти-СОЗ8ВР специфічного/вибіркового фрагмента), придатної групи замісника або бічного ланцюга або (б) ланцюга цукру в СОЗ8ВР (наприклад, див. АпіїбодуCOZ8BP derivatives can be prepared by chemically attaching a radioisotope, protein, or other agent/link/compound to (a) the M-terminal region or the C-terminal region of COZ8BP or its subunit (eg, the heavy chain of an anti-COP8BP antibody, the light chain of an anti- COZ8BP antibody or anti-COZ8BP specific/selective fragment thereof), a suitable substituent group or side chain or (b) a sugar chain in COZ8BP (e.g. see Apiibodu

Епаіпеетіпд Напабсок, едіеда Бу Озати Капетіїзи, рибіїзпеа Бу Спійп ЗпоКап (1994)). Похідні також можна одержувати шляхом приєднання по внутрішнім залишкам або цукрам, коли потрібно.Epaipeetipd Napabsok, edieda Bu Ozati Kapetiiza, ribiizpea Bu Spiip ZpoKap (1994)). Derivatives can also be obtained by attachment to internal residues or sugars when desired.

СОЗ8ВР також можна дериватизувати за допомогою детектованих агентів, наприклад, флуоресцентних сполук, включаючи флуоресцеїн, флуоресцеїнізотіоціанат, родамін, 5- диметиламін-1-нафталінсульфонілхлорид, лантанідні фосфори і т.п. Додатковими прикладами придатних флуоресцентних міток є 72Еи мітка, ізотіоціанатна мітка, фікоеритринова мітка, фікоціанінова мітка, алофікоціанінова мітка, о-фтальдегідна мітка, флуорескамінова мітка і т.д.COZ8BP can also be derivatized with detectable agents, for example, fluorescent compounds, including fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, 5-dimethylamine-1-naphthalenesulfonyl chloride, lanthanide phosphors, etc. Additional examples of suitable fluorescent labels are 72Ey label, isothiocyanate label, phycoerythrin label, phycocyanin label, allophycocyanin label, o-phthalaldehyde label, fluorescamine label, etc.

Приклади хемілюмінесцентних міток включають люмінальні мітки, ізолюмінальні мітки, мітки з ароматичними ефірами акридинію, імідазольні мітки, мітки із солями акридинію, мітки з ефірами оксалату, люциферинові мітки, люциферазні мітки, екворинові мітки і т.д.Examples of chemiluminescent labels include luminal labels, isoluminal labels, acridinium aromatic ester labels, imidazole labels, acridinium salt labels, oxalate ester labels, luciferin labels, luciferase labels, aequorin labels, etc.

В одному втіленні, похідне СОЗ8ВР включає кон'юговану нуклеїнову кислоту або зв'язану з нуклеїновою кислотою молекулу. В одному такому аспекті даного винаходу кон'югована нуклеїнова кислота є цитотоксичною рибонуклеазою. В одному втіленні даного винаходу кон'югована нуклеїнова кислота є антисмисловою нуклеїновою кислотою (наприклад, 5100А10 націлена антисмислова молекула, що може бути незалежним компонентом у складеній композиції або комбінованому способі введення згідно з даним винаходом, див., наприклад, 7Ппапод еї аї!., У. Віої. Снет. 279(3), 2053-62 (2004)). В одному втіленні, кон'югована нуклеїнова бо кислота є інгібіторною РНК молекулою (наприклад, біРНК молекулою). В одному втіленні,In one embodiment, the COZ8BP derivative comprises a conjugated nucleic acid or nucleic acid-linked molecule. In one such aspect of the present invention, the conjugated nucleic acid is a cytotoxic ribonuclease. In one embodiment of the present invention, the conjugated nucleic acid is an antisense nucleic acid (e.g., 5100A10 targeting antisense molecule, which can be an independent component in a compound composition or combined method of administration according to the present invention, see, e.g., 7Ppapod eii ai!., U. Vioi. Snet. 279(3), 2053-62 (2004)). In one embodiment, the conjugated nucleic acid is an inhibitory RNA molecule (eg, a biRNA molecule). In one embodiment,

кон'югована нуклеїнова кислота є імуностимуляторною нуклеїновою кислотою (наприклад, імуностимуляторна молекула, молекула ДНК, що містить ЦфГ-мотив). В одному втіленні кон'югована нуклеїнова кислота є експресуючою касетою, що кодує експресію гена супресора пухлини, протиракову вакцину, протираковий цитокін або агент апоптозу. Такі похідні можуть також включати кон'югацію нуклеїнової кислоти, що кодує експресію одного чи більше цитотоксичних білків, таких як рослинні або бактеріальні токсини.the conjugated nucleic acid is an immunostimulatory nucleic acid (eg, an immunostimulatory molecule, a DNA molecule containing a CfH motif). In one embodiment, the conjugated nucleic acid is an expression cassette that encodes the expression of a tumor suppressor gene, an anticancer vaccine, an anticancer cytokine, or an apoptosis agent. Such derivatives may also include conjugation of nucleic acid encoding the expression of one or more cytotoxic proteins, such as plant or bacterial toxins.

В одному втіленні, СОЗ8ВР кон'югований з функціональною молекулою нуклеїнової кислоти.In one embodiment, SOZ8BP is conjugated to a functional nucleic acid molecule.

Функціональні нуклеїнові кислоти включають антисмислові молекули, взаємодіючі молекули нуклеїнової кислоти (наприклад, 5іРНК молекули), аптамери, рибозими, триплекс-утворюючі молекули та зовнішні провідні послідовності. Функціональні молекули нуклеїнової кислоти можуть діяти як ефектори, інгібітори, модулятори та стимулятори специфічної активності, яку має молекула мішені, або функціональні молекули нуклеїнової кислоти можуть мати де помо активність, незалежну від будь-якої іншої молекули. Представницькі приклади способів і технік, що мають на меті створення та застосування антисмислових молекул, можна знайти в наступному необмежуючому списку патентів ОБ: ОЗ 5135917, 05 5294533, 5 5627158, 05 5641754, 05 5691317, О5 5780607, 05 5786138, 5 5849903, 05 5856103, 005 5919772, 05 5955590, 05 5990088, 05 5994320, 05 5998602, 05 6005095, 05 6007995, О5 6013522, 5 6017898, 005 6018042, 05 6025198, 005 6033910, 05 6040296, 05 6046004, 05 6046319 та 05 6057437.Functional nucleic acids include antisense molecules, interacting nucleic acid molecules (eg, 5iRNA molecules), aptamers, ribozymes, triplex-forming molecules, and external leader sequences. Functional nucleic acid molecules can act as effectors, inhibitors, modulators, and stimulators of a specific activity that a target molecule has, or functional nucleic acid molecules can have de pomo activity independent of any other molecule. Representative examples of methods and techniques aimed at the creation and use of antisense molecules can be found in the following non-limiting list of OB patents: ОЗ 5135917, 05 5294533, 5 5627158, 05 5641754, 05 5691317, О5 5780607, 05 5786138, 5 90 3509 354 5856103, 005 5919772, 05 5955590, 05 5990088, 05 5994320, 05 5998602, 05 6005095, 05 6007995, О5 6013522, 5 6017898, 005 6018042, 05 6025198, 005 6033910, 05 6040296, 05 6046004, 05 6046319 та 05 6057437.

В одному втіленні СОЗ8ВР кон'югований з аптамером. Аптамери є молекулами, які взаємодіють із молекулою мішені, наприклад, у специфічний спосіб. Звичайно, аптамери є невеликими нуклеїновими кислотами в інтервалі від 15-50 основ довжиною, які скручені в певні вторинні та третинні структури, наприклад, стебла-петлі або Г-квартети. Аптамери можуть зв'язувати маленькі молекули, такі як АТФ (5 5631146) і теофілін (05 5580737), а також великі молекули, як зворотна транскриптаза (05 5786462) і тромбін (5 5543293). Представницькі приклади того, як одержувати та застосовувати аптамери для зв'язування різних молекул мішені, можна знайти в списку таких необмежуючих патентів: 05 5476766, 005 5503978, 05 5631146, 005 5731424, 005 5780228, 05 5792613, 005 5795721, 5 5846713, 05 5858660, 05 5861254, 05 5864026, 005 5869641, 5 5958691, 05 6001988, 05 6011020, 005 6013443, 5In one embodiment, SOZ8BP is conjugated to an aptamer. Aptamers are molecules that interact with a target molecule, for example, in a specific way. Of course, aptamers are small nucleic acids in the range of 15-50 bases in length that are twisted into specific secondary and tertiary structures, such as stem-loops or G-quartets. Aptamers can bind small molecules such as ATP (5 5631146) and theophylline (05 5580737) as well as large molecules such as reverse transcriptase (05 5786462) and thrombin (5 5543293). Representative examples of how to make and use aptamers to bind various target molecules can be found in the list of the following non-limiting patents: 05 5476766, 005 5503978, 05 5631146, 005 5731424, 005 5780228, 05 5792613, 005 57955781, 5,73521 5858660, 05 5861254, 05 5864026, 005 5869641, 5 5958691, 05 6001988, 05 6011020, 005 6013443, 5

Зо 6020130, 05 6028186, 05 6030776 та 5 6051698.From 6020130, 05 6028186, 05 6030776 and 5 6051698.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, кон'югований з рибозимом. Рибозими є молекулами нуклеїнової кислоти, здатні каталізувати хімічні реакції, внутрішньомолекулярні або міжмолекулярні. Рибозими є, таким чином, каталітичними нуклеїновими кислотами. Є велика кількість різних типів рибозимів, які каталізують реакції нуклеазного або нуклеополімеразного типу, які основані на рибозимах, виявлених у природних системах, наприклад, як (а) рибозими з голівкою молотка (описані, наприклад, в 5 5334711, 005 5436330, 005 5616466, 05 5633133, 5 5646020, 0О5:5652094, 05 5712384, 05 5770715, 05 5856463, 5 5861288, 05 5891683, 05 5891684, 05 5985621, 005 5989908, 05 5998193, 005 5998203, УМО 9858058, УМО 9858057 та МО 9718312), (6) шпилькаподібні рибозими (описані, наприклад, в О5 5631115, 05 5646031, 5 5683902, 005 5712384, ШШ5 5856188, О5 5866701, 05 5869339 та 05 6022962) і (в) тетрагіменові рибозими (описані, наприклад, в 5 5595873 та 5 5652107). Є також велике число рибозимів, які не виявляються в природних системах, але які створені, щоб каталізувати специфічні реакції де помо (приклади яких описані, наприклад, в Б 5580967, 05 5688670, 005 5807718 та 05 5910408). Рибозими звичайно розщеплюють субстрати РНК та ДНК їі частіше розщеплюютьIn one embodiment, the present invention provides ribozyme-conjugated SOZ8BP. Ribozymes are nucleic acid molecules capable of catalyzing chemical reactions, intramolecular or intermolecular. Ribozymes are, thus, catalytic nucleic acids. There are a large number of different types of ribozymes that catalyze nuclease- or nucleopolymerase-type reactions that are based on ribozymes found in natural systems, such as (a) hammerhead ribozymes (described, for example, in 5 5334711, 005 5436330, 005 5616466, 05 5633133, 5 5646020, 0О5:5652094, 05 5712384, 05 5770715, 05 5856463, 5 5861288, 05 5891683, 05 5891684, 05 5985621, 005 5989908, 05 5998193, 005 5998203, УМО 9858058, УМО 9858057 та МО 9718312), (6) hairpin ribozymes (described, for example, in О5 5631115, 05 5646031, 5 5683902, 005 5712384, ШШ5 5856188, О5 5866701, 05 5869339, and 05 6022962) and (c) tetrahymene ribozymes (described, for example, in О5 5856188, О5 5869339, and 05 6022962). 5 5652107). There are also a large number of ribozymes that are not found in natural systems, but which are designed to catalyze specific de pomo reactions (examples of which are described, for example, in B 5580967, 05 5688670, 005 5807718 and 05 5910408). Ribozymes usually cleave RNA and DNA substrates and they are often cleaved

РНК. Рибозими звичайно розщеплюють нуклеїнові кислоти шляхом впізнавання та зв'язування субстрату мішені та наступного розщеплення. Це впізнавання часто основане в основному на канонічних або неканонічних взаємодіях пар нуклеотидів. Ця властивість робить рибозими особливо гарними кандидатами для специфічного розщеплення мішеней нуклеїнових кислот тому, що впізнавання субстрату мішені основане на послідовності субстрату мішені.RNA. Ribozymes normally cleave nucleic acids by recognizing and binding a target substrate and subsequent cleavage. This recognition is often based primarily on canonical or non-canonical interactions of nucleotide pairs. This property makes ribozymes particularly good candidates for specific cleavage of nucleic acid targets because recognition of the target substrate is based on the sequence of the target substrate.

Представницькі приклади того, як одержувати та застосовувати рибозими для каталізу різноманітних реакцій, можна знайти в наступному необмежуючому списку патентів США: О5 5646042, 05 5693535, 05 5731295, 05 5811300, 005 5837855, 05 5869253, 005 5877021, 05 5877022, 005 5972699, 005 5972704, 05 5989906 та О5 6017756.Representative examples of how to receive and use fish for catalysis of various reactions can be found in the following non -amazing list of US patents: O5 5646042, 05 5693535, 05 5731295, 05 5811300, 005 5837855 005 5972704, 05 5989906 and O5 6017756.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, кон'югований з нуклеїновою кислотою, що утворює триплекс. Такі молекули нуклеїнової кислоти можуть взаємодіяти або із дволанцюговою, або з одноланцюговою нуклеїновою кислотою. Коли молекули триплекса взаємодіють із областю мішені, утворюється структура, називана триплексом, у якій три ланцюжки ДНК утворюють комплекс, залежний як від формування пар основ за Утсоном-In one embodiment, the present invention provides SOZ8BP conjugated to a triplex-forming nucleic acid. Such nucleic acid molecules can interact with either double-stranded or single-stranded nucleic acid. When the triplex molecules interact with the target region, a structure called a triplex is formed, in which the three DNA strands form a complex that depends on both the formation of Utson base pairs-

Криком, так і за Хугстином. Молекули триплекса можуть зв'язувати області мішені з високою бо спорідненістю та специфічністю. Представницькі приклади того, як одержувати та застосовувати триплекс-утворюючі молекули для зв'язування ряду різних молекул-мішеней, можна знайти в наступному необмежуючому списку патентів США: 05 5176996, 005 5645985, 05 5650316, 05 5683874, 5 5693773, 5 5834185, 05 5869246, 05 5874566 та 5 5962426.Cryom, and according to Hoogstyn. Triplex molecules can bind target regions with high affinity and specificity. Representative examples of how to prepare and use triplex-forming molecules to bind a number of different target molecules can be found in the following non-limiting list of US patents: 05 5176996, 005 5645985, 05 5650316, 05 5683874, 5 5693773, 5 5834185, 05 5869246, 05 5874566 and 5 5962426.

В одному втіленні даний СОЗ8ВР кон'югований із зовнішньою провідною послідовністю.In one embodiment, this SOZ8BP is conjugated to an external leader sequence.

Зовнішні провідні послідовності (Ебо5) є молекулами, які зв'язують молекули нуклеїнової кислоти мішені з утворенням комплексу, що впізнається РНКазою Р, що розщеплює молекулу мішені. Е65 можна конструювати так, щоб специфічно націлюватися на вибрану молекулу РНК.External leader sequences (Ebo5) are molecules that bind target nucleic acid molecules to form a complex recognized by RNase P, which cleaves the target molecule. E65 can be engineered to specifically target a selected RNA molecule.

РНКаза Р допомагає при процесингу транспортних РНК (тРНК) у клітині. Бактеріальна РНКаза Р може бути задіяна для розщеплення фактично будь-якої послідовності РНК за допомогою ЕС5, що утворює комплекс мішень РНК: ЕС5, який імітує природний субстрат тРНК (див., наприклад,RNase P helps in the processing of transfer RNAs (tRNAs) in the cell. Bacterial RNase P can be engaged to cleave virtually any RNA sequence with EC5, which forms an RNA target:EC5 complex that mimics the natural substrate tRNA (see, e.g.,

МО 92/03566 та Рогбіег апа АШтап, Зсіепсе 238, 407-409 (1990) для обговорення).MO 92/03566 and Rogbieg apa Ashtap, Zsiepse 238, 407-409 (1990) for discussion).

Представницькі приклади того, як одержувати та застосовувати ЕО5 молекули для полегшення розщеплення розмаїтості різних молекул мішеней, надані в наступному необмежуючому спискуRepresentative examples of how to prepare and use EO5 molecules to facilitate cleavage of a variety of different target molecules are provided in the following non-limiting list

ОЗ патентів: 05 5168053, 05 5624824, 05 5683873, 005 5728521, 5 5869248 та 05 5877162.Number of patents: 05 5168053, 05 5624824, 05 5683873, 005 5728521, 5 5869248 and 05 5877162.

В одному втіленні СОЗ8ВР кон'югований із взаємодіючою молекулою нуклеїнової кислоти, такою як 5іРНК або інша молекула РНК (наприклад, інгібіторна дволанцюгова (дц) молекулаIn one embodiment, COZ8BP is conjugated to an interacting nucleic acid molecule, such as 5iRNA or another RNA molecule (e.g., an inhibitory double-stranded (ds) molecule

РНК із приблизно 20-25 нуклеотидів), яка спрямована на те, щоб заважати дії продукту експресії гена мішені, наприклад, продукту експресії гена, залученого в СОо38-опосередковане захворювання або стан. Способи продукції та застосування взаємодіючих молекул нуклеїнової кислоти надані, наприклад, в МізпіКига, СеїЇ. 107(4). 415-8 (2001), НРрозе єї аї., Віоїесппо!ї Аппиan RNA of about 20-25 nucleotides) that is directed to interfere with the action of the expression product of a target gene, for example, the expression product of a gene involved in a COo38-mediated disease or condition. Methods of production and use of interacting nucleic acid molecules are provided, for example, in MizpiKiga, Seyi. 107(4). 415-8 (2001)

Вем. 7, 31-57 (2001), Напоп, Маїшге 418, 244-51 (2002), Вгапії, Віоспіт Віорпуз Асіа. 1575(1-3), 15-25 (2002), ТивспІ, Спетбіоснет. 2(4), 239-45 (2001), Сарієп, Ехреп Оріп Віо! Тнег. 3(4), 575- 86 (2003), І и еї аІ., Си Оріп Мої. Тег. 5(3), 225-34 (2003), 5П!еу еї а!., Огид Оівсом Тодау. 7(20), 1040-6 (2002), 5Ні, Ттепаз Сепеї. 19(1), 9-12 (2003), Комаг єї аіІ., Хетіп Сапсег Віої. 13(4), 275-81 (2003), І амгєу єї аіІ., Ситм Оріп Огид Рібсом Оемеї. 6(4), 561-9 (2003), Сієшеу, Соттип бів РибіїсVem. 7, 31-57 (2001), Napop, Maishge 418, 244-51 (2002), Vgapii, Viospit Viorpuz Asia. 1575(1-3), 15-25 (2002), TyvspI, Spetsbiosnet. 2(4), 239-45 (2001), Sariep, Ekhrep Orip Vio! Tneg. 3(4), 575-86 (2003), I i ei aI., Si Orip Moi. Tag. 5(3), 225-34 (2003), 5P!eu ei a!., Ogyd Oivsom Todau. 7(20), 1040-6 (2002), 5Ni, Ttepaz Sepei. 19(1), 9-12 (2003), Komag Yei AI., Hetip Sapseg Vioi. 13(4), 275-81 (2003), I amgeu eyi aiI., Sitm Orip Ogyd Ribsom Oemei. 6(4), 561-9 (2003), Siesheu, Sottip biv Rybiis

Неай. 6(2), 162-3 (2003), Бихригу єї аї., У Зигу Вев. 117(2), 339-44 (2004), Сарієп евї а!., Апп МУNay 6(2), 162-3 (2003), Bykhrigu eyi ai., U Zygu Vev. 117(2), 339-44 (2004), Sariep evi a!., App MU

Асай сі. 1002, 56-62 (2003), УМО 01/75164, О5 6506559, 5 20040086884, 05 20040077574, 05 20040063654, 5 20040033602, 05 20030167490, 05 20030157030, 05 20030114409, 05 20030108923, 005 20040014113 та О5 .20020132788.Asai si. 1002, 56-62 (2003), UMO 01/75164, O5 6506559, 5 20040086884, 05 20040077574, 05 20040063654, 5 20040033602, 05 20030167490, 05 20030

В одному втіленні СОЗ8ВР кон'югований з доменом або молекулою пептиду, націленими на пухлину. В одному втіленні СОЗ8ВР кон'югований з послідовністю фактора МІіІ, націленого на пухлину.In one embodiment, COZ8BP is conjugated to a tumor-targeting peptide domain or molecule. In one embodiment, SOZ8VR is conjugated to a tumor-targeting MIiI factor sequence.

Будь-який відомий в даній області спосіб для кон'югації СОЗ8ВР із кон'югованою молекулою можна застосовувати, як, наприклад, описані вище, включаючи способи, описані в Нипієг еї аї.,Any method known in the art for conjugating COZ8BP to a conjugated molecule can be used, such as those described above, including methods described in Nypieg et al.,

Маїшцге 144, 945 (1962), Оаміа еї а!., Віоспетівігу 13, 1014 (1974), Раїп еї аї., 9. Іттипої. Меп. 40, 219 (1981) і Мудгеп, у. Нібоспет. апа Суоспет. 30, 407 (1982). Зв'язування/кон'югацію можна проводити будь-яким придатним способом. Наприклад, ковалентний зв'язок може приймати форму дисульфідного зв'язку (якщо потрібно та можливо, можна створити СОЗ8ВР, що містить додатковий кодон цистеїну, який, краще, не заважає СОЗ8-зв'язуючій активності молекули.Maishtsge 144, 945 (1962), Oamia ei a!., Viospetivhigu 13, 1014 (1974), Raip ei ai., 9. Ittipoi. Mep. 40, 219 (1981) and Mudgep, y. sky apa Suospet. 30, 407 (1982). The binding/conjugation can be carried out by any suitable method. For example, the covalent bond can take the form of a disulfide bond (if necessary and possible, COZ8BP can be created containing an additional cysteine codon, which, preferably, does not interfere with the COZ8-binding activity of the molecule.

Молекула токсину, дериватизована сульфгідрильною групою, що реагує із цистеїном СОЗ8ВР, може утворити імунокон'югат з СОЗ8ВР пептидом. Альтернативно, сульфгідрильну групу можна ввести безпосередньо в СОЗ8ВР, застосовуючи поліпептидні техніки у твердій фазі. Наприклад, введення сульфгідрильних груп в пептиди описане в НізхКеу, Рерііде5 3, 137 (1981). Введення сульфгідрильних груп у білки описане в Маазхеп еї аї., Ешиг. У. Віоспет. 134, 32 (1983). Як тільки потрібна сульфгідрильна група на місці, цитотоксин та СОЗ8ВР можна очистити, відновити обидві сульфгідрильні групи, змішати цитотоксин та ліганд (наприклад, у співвідношенні приблизно від 1: 5 до 1: 20) і залишити інкубуватися до завершення утворення дисульфідного зв'язку (в основному, приблизно 20-30 хв.) при кімнатній температурі. Суміш можна далі діалізувати проти фосфатного буфера з фізіологічним розчином або хроматографувати на такому носії, як Сефадекс, для видалення непрореагованих молекул ліганду та токсину.The toxin molecule, derivatized with a sulfhydryl group that reacts with the cysteine of SOZ8BP, can form an immunoconjugate with the SOZ8BP peptide. Alternatively, the sulfhydryl group can be introduced directly into SOZ8BP using solid-phase polypeptide techniques. For example, the introduction of sulfhydryl groups into peptides is described in NizhKeu, Reriide5 3, 137 (1981). The introduction of sulfhydryl groups into proteins is described in Maazhep ei ai., Eshig. U. Viospet. 134, 32 (1983). Once the desired sulfhydryl group is in place, the cytotoxin and COZ8BP can be purified, both sulfhydryl groups restored, the cytotoxin and ligand mixed (eg, in a ratio of about 1:5 to 1:20) and allowed to incubate until disulfide bond formation is complete (in mostly, about 20-30 min.) at room temperature. The mixture can be further dialyzed against phosphate buffered saline or chromatographed on a support such as Sephadex to remove unreacted ligand and toxin molecules.

Численні типи цитотоксичних сполук можна приєднувати до білків за допомогою застосування реактивної групи цитотоксичної сполуки або за допомогою застосування зшивального агента. Розповсюдженою реактивною групою, що утворює стабільний ковалентний зв'язок іп мімо з аміном, є ізотіоціанат (Меапз еї а!., Спетіса! тодійсайнопв ої ргоїєїн5 (НоїЇдеп-Many types of cytotoxic compounds can be attached to proteins through the use of a reactive group of the cytotoxic compound or through the use of a crosslinking agent. A widespread reactive group that forms a stable covalent bond with an amine is an isothiocyanate (Meapz ei a!., Spetisa! tadiysainopv oi rgoyein5 (NoiYidep-

Вау, Зап Егапсівсо 1971) рр. 105-110). Ця група краще реагує з е-аміногрупою лізину. Малеїмід є широко застосовуваною реактивною групою для утворення стабільного іп мімо ковалентного зв'язку із сульфгідрильною групою цистеїну (9і., Меїйо9д5 Епгутої 91, 580-609 (1983).Vau, Zap Egapsivso 1971) pp. 105-110). This group reacts better with the ε-amino group of lysine. Maleimide is a widely used reactive group for the formation of a stable ip mimo covalent bond with the sulfhydryl group of cysteine (9i., Meilio9d5 Epigutoi 91, 580-609 (1983).

Моноклональні антитіла звичайно нездатні утворювати ковалентні зв'язки з іонами радіоактивних металів, але вони можуть бути приєднані до антитіла опосередковано шляхом бо застосування хелатуючих агентів, які ковалентно зв'язані з антитілами. Хелатуючі агенти можуть бути приєднані через аміни (Меаге5 еї аї.,, Апаї. Віоспет. 142, 68-78 (1984), і сульфгідрильні групи (Коуата, Спет. АбБебїг. 120, 2172621 (1994)) амінокислотних залишків, а також через вуглеводневі групи (Коамеї! еї ам. РМАБ ОБА 83, 2632-2636 (1986), Оцааіі еї аї.,Monoclonal antibodies are usually unable to form covalent bonds with radioactive metal ions, but they can be attached to the antibody indirectly by using chelating agents that are covalently bound to the antibodies. Chelating agents can be attached through amines (Meaghe et al., Apai. Biospet. 142, 68-78 (1984), and sulfhydryl groups (Kowata, Spec. AbBebig. 120, 2172621 (1994)) of amino acid residues, as well as through hydrocarbon groups (Koamei! ei am. RMAB OBA 83, 2632-2636 (1986), Ocaaii ei ai.,

МисіІ. Мей. ВіоІ. 20, 559-570 (1993)). Оскільки такі хелатуючі агенти містять два типи функціональних груп, одну для зв'язування іонів металу та іншу для приєднання хелатора до антитіла, вони звичайно називаються біфункціональними хелатуючими агентами (Зипабегд еї а!., Майте 250, 587-588 (1974)).MysiI. May VioI. 20, 559-570 (1993)). Since such chelating agents contain two types of functional groups, one for binding metal ions and the other for attaching the chelator to the antibody, they are commonly referred to as bifunctional chelating agents (Zypabegd et al., Maite 250, 587-588 (1974)).

Зшивальні агенти із двома реактивними функціональними групами підрозділяються на гомо- або гетеробіфункціональні. Прикладами гомобіфункціональних зшивальних агентів є бісмалеімідогексан (ВМН), що реагує із сульфгідрильними групами (Спеп еї аї., У. Віої. Спет 266, 18237-18243 (1991)), та етиленглікольбісІсукцинімідилсукцінат!, (Ебв5) який реагує з аміногрупами (Вгомупіпд еї аі, У. ІттипоЇ. 143, 1859-1867 (1989). Прикладом гетеробіфункціонального зшивального агента є м-малеїімідобензоїл-М-гідроксисукцинімідний ефір (МВ5) (Муег5 еї аї., У). Іттипої. Мей. 171, 129-142 (1989)). Ці способи прості та часто застосовуються.Crosslinking agents with two reactive functional groups are divided into homo- or heterobifunctional. Examples of homobifunctional crosslinking agents are bismaleimidohexane (BMH), which reacts with sulfhydryl groups (Spep et al., U. Vioi. Speth 266, 18237-18243 (1991)), and ethylene glycol bisuccinimidyl succinate! ai, U. Ittypoi. 143, 1859-1867 (1989). An example of a heterobifunctional crosslinking agent is m-maleimidobenzoyl-M-hydroxysuccinimide ether (MV5) (Mueg5 ei ai., U. Ittipoi. May. 171, 129-142 ( 1989)). These methods are simple and often used.

Терапевтичний або діагностичний агент можна також або альтернативно приєднувати в області зв'язування відновленого компонента антитіла через утворення дисульфідного зв'язку.A therapeutic or diagnostic agent can also or alternatively be attached to the binding region of the reduced component of the antibody through the formation of a disulfide bond.

Як альтернатива, такі пептиди можна приєднувати до компонента антитіла із застосуванням гетеробіфункціонального зшивального агента, наприклад, М-сукциніл-3-(2- піридилдитіо)упропіонату (ЗРОР). Ми еї аї., пі. у. Сапсег 56, 244 (1994). Основні способи такого приєднання добре відомі в даній області. Див., наприклад, УМопуд, СПетівігу ОЇ РгоївіпAlternatively, such peptides can be attached to the antibody component using a heterobifunctional crosslinking agent, for example, M-succinyl-3-(2-pyridyldithio)upropionate (ZPOP). We ey ai., pi. in. Sapseg 56, 244 (1994). The main methods of such joining are well known in this area. See, for example, UMopud, SPetivigu OY Rgoivip

Сопіидайноп Апа Сгов5-І іпКіпд (САС Ргеззв 1991), Оревіасів єї а!., "Модіїсайоп ої Апіїродіє5 БуSopiidainop Apa Sgov5-I ipKipd (SAS Rgezzv 1991), Oreviasiv eyi a!., "Modiisayop oi Apiirodie5 Bu

Спетіса! Меїйодв, " Іп Мопосіопаї! Апііродієв: Ргіпсірієз Апа Арріїсайіопв, Вігсп еї аї., (еав5.) (УМеу-Spetis! Meiyodv, " Ip Moposiopai! Apiirodiev: Rgipsiriez Apa Arriisaiiopv, Vigsp ei ai., (eav5.) (UMeu-

І ів5, Іпс. 1995), Ргісе, "Ргодисіюп апа СНагасієгігайоп ої Зупіпеїйс Рерііде-Оегімед Апііродієв, " іпI iv5, Ips. 1995), Rgise, "Rhodisiyup apa SNagasiegigayop oi Zupipeiis Reriide-Oeghimed Apiirodiev, " ip

Мопосіопа! Апіїбодіев: Ргодисіп, Епдіпеєегіпд Апа Сіїпіса! Арріїсайоп, Вінег єї аї., (едв.) (Сатьгідде Опімегейу Ргез5 1995).Moposiope! Apiibodiev: Rgodisip, Epdipeeegipd Apa Siipisa! Arriisayop, Vineg eyi ai., (Edv.) (Satgidde Opimegeyu Rgez5 1995).

У деяких втіленнях мітки та інші кон'юговані замісники приєднані до амінокислотної послідовності СОЗ8ВР за допомогою розділових рук різної довжини для зменшення потенційного стеричного ускладнення.In some embodiments, labels and other conjugated substituents are attached to the amino acid sequence of SOZ8BP using spacer arms of varying lengths to reduce potential steric hindrance.

Зо Немічені СОЗ8ВР можна застосовувати в комбінації з іншими міченими антитілами (вторинними антитілами), реактивними з СОЗ8ВР, наприклад, антитілами, специфічними для константних областей імуноглобуліну людини, які зв'язуються з анти-СО38 тАбв.Unlabeled COZ8BP can be used in combination with other labeled antibodies (secondary antibodies) reactive with COZ8BP, for example, antibodies specific for constant regions of human immunoglobulin that bind to anti-CO38 tAbv.

Альтернативно, СОЗ8ВР можна позначити прямо. Широку розмаїтість міток можна застосовувати для прямого або непрямого мічення СОЗ8ВР, наприклад, мічення радіоїзотопами, флуорофорами, ферментами, субстратами ферментів, кофакторами ферментів, інгібіторами ферментів, лігандами (особливо, гаптенами) і т.д.Alternatively, СОЗ8ВР can be labeled directly. A wide variety of labels can be used for direct or indirect labeling of SOZ8BP, for example, labeling with radioisotopes, fluorophores, enzymes, enzyme substrates, enzyme cofactors, enzyme inhibitors, ligands (especially haptens), etc.

Вставки амінокислотних послідовностей включають аміно- та/або карбокси-кінцеві приєднання довжиною від одного залишку до поліпептидів, які містять сто чи більше залишків, а також внутрішні вставки в послідовність з одного чи багатьох амінокислотних залишків.Amino acid sequence insertions include amino- and/or carboxy-terminal additions of one residue length to polypeptides that contain one hundred or more residues, as well as internal insertions in the sequence of one or more amino acid residues.

Приклади кінцевих вставок включають антитіло з М-кінцевим залишком метіонілу або антитіло, приєднане до епітопної мітки. Інші варіанти молекул антитіл із вставкою включають приєднання до М- або С-кінця антитіла ферменту чи поліпептиду, або ПЕГ, що збільшує сироватковий час напівжиття антитіла. Такі складові з анти-Сй38 антитілом білки, що включають СОЗ8ВР послідовності, є іншою властивістю даного винаходу.Examples of end inserts include an antibody with an M-terminal methionyl residue or an antibody attached to an epitope tag. Other variants of inserted antibody molecules include the addition of an enzyme or polypeptide, or PEG, to the M- or C-terminus of the antibody, which increases the serum half-life of the antibody. Such components with anti-Cy38 antibody proteins, including the SOZ8BP sequence, are another property of this invention.

В одному втіленні даний винахід пропонує молекули, які включають СОЗ8ВР, наприклад, анти-СО38 антитіло людини згідно з даним винаходом, кон'юговане з терапевтичною ланкою, такою як цитотоксин, хіміотерапевтичні ліки, імуносупресант або радіоактивний ізотоп. Такі кон'югати називаються тут "імунокон'югатами". Імунокон'югати, які включають один чи більше цитотоксин, називаються "імунотоксинами".In one embodiment, the present invention provides molecules that include COZ8BP, for example, a human anti-CO38 antibody of the present invention, conjugated to a therapeutic moiety, such as a cytotoxin, chemotherapeutic drug, immunosuppressant, or radioactive isotope. Such conjugates are referred to herein as "immunoconjugates". Immunoconjugates that include one or more cytotoxins are called "immunotoxins".

Цитотоксин або цитотоксичний агент включає будь-який агент, що спричинює шкоду (тобто, вбиває) клітинам. для опису таких класів ліків, відомих в даній області, та механізмів їх дії, див.Cytotoxin or cytotoxic agent includes any agent that damages (ie, kills) cells. for a description of such classes of drugs known in the field and their mechanisms of action, see

Соодтап еї аЇ., Сбоодтап ап Сіїтап'є Те РНаптасоіодіса! Вазів ОЇ Тнегарешіісв, 8Ій Еад.,Soodtap ei aY., Sboodtap ap Siitapye Te Rnaptasoiodisa! Vaziv OI Tnegareshiisv, 8th Ed.,

Мастійап Рибіїєпіпуд Со., 1990. Додаткові способи, що стосуються одержання антитіл імунотоксинів, надані, наприклад, в Міекна, Іттипої!. Тодау 14, 252 (1993) і 05 5194594.Mastiap Rybiiepipud So., 1990. Additional methods relating to the production of immunotoxin antibodies are provided, for example, in Miekna, Ittipoi!. Todau 14, 252 (1993) and 05 5194594.

Придатні терапевтичні агенти для утворення імунокон'югатів згідно з даним винаходом включають таксол, цитохалазин В, граміцидин 0, етидій бромід, еметин, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідроксіантрациндіон, мітоксантрон, актиноміцин 0, і-дегідрокситестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин, антиметаболіти (наприклад, метотрексат, 60 б-меркаптопурин, б-тіогуанідин, цитарабін, флюдарабін, 5-фторурацил, декарбазин,Suitable therapeutic agents for the formation of immunoconjugates according to the present invention include taxol, cytochalasin B, gramicidin 0, ethidium bromide, emetine, mitomycin, etoposide, tenoposide, vincristine, vinblastine, colchicine, doxorubicin, daunorubicin, dihydroxyanthracenedione, mitoxantrone, actinomycin 0, and -dehydroxytestosterone, glucocorticoids, procaine, tetracaine, lidocaine, propranolol and puromycin, antimetabolites (eg, methotrexate, 60 b-mercaptopurine, b-thioguanidine, cytarabine, fludarabine, 5-fluorouracil, decarbazine,

гідроксисечовина, аспарагіназа, гемцитабін, кладрибін), алкілувальні агенти (наприклад, мехлоретамін, тіотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (В5МО), ломустин (ССМ), циклофосфамід, бусульфан, дибромманіт, стрептозотоцин, дакарбазин (ОТІС), прокарбазин, мітоміцин С, цисплатин та інші похідні платини, наприклад, карбоплатин), антибіотики (наприклад, дактиноміцин (раніше актиноміцин), блеоміцин, даунорубіцин (раніше дауноміцин), доксорубіцин, ідарубіцин, мітраміцин, каліхеаміцин, мітоміцин, мітоксантрон, плікаміцин, антраміцин (АМС)), дифтерійний токсин і споріднені молекули (наприклад, активні фрагменти А ланцюга дифтерійного токсину та гібридні молекули), токсин рицин (наприклад, рицин А або деглікозилований токсин ланцюга А рицину), токсин холери, шигоподібний токсин, (ЗІ Т-І, БІ Т-ІЇ,hydroxyurea, asparaginase, gemcitabine, cladribine), alkylating agents (for example, mechlorethamine, thiotepa, chlorambucil, melphalan, carmustine (B5MO), lomustine (SCM), cyclophosphamide, busulfan, dibrommannite, streptozotocin, dacarbazine (OTIS), procarbazine, mitomycin C, cisplatin and other platinum derivatives, eg, carboplatin), antibiotics (eg, dactinomycin (formerly actinomycin), bleomycin, daunorubicin (formerly daunomycin), doxorubicin, idarubicin, mithramycin, calicheamicin, mitomycin, mitoxantrone, plicamycin, anthramycin (AMC)), diphtheria toxin and related molecules (e.g., active fragments of diphtheria toxin A chain and hybrid molecules), ricin toxin (e.g., ricin A or deglycosylated ricin A chain toxin), cholera toxin, shiga toxin, (ZI T-I, BI T-II,

ЗІ Т-ІМ), ГТ токсин, СЗ токсин, шига-токсин, токсин пертусину, токсин правця, інгібітор протеазZI T-IM), GT toxin, SZ toxin, Shiga toxin, pertussis toxin, tetanus toxin, protease inhibitor

Боумана-Бірка із соєвих бобів, екзотоксин Рзхендотопавх, алорин, сапорин, модексин, геланін, ланцюг абрину А, модексину А ланцюг, альфа-сарцин, білки АїІеипгісез Тогаїї, білки діантину, білкиBowman-Birka from soybeans, Rzhendotopavh exotoxin, alorin, saporin, modexin, gelanin, abrin A chain, modexin A chain, alpha-sarcin, AiIeipgisez Togaii proteins, diantin proteins, proteins

Рпуюіасса Атегісапа (РАРІ, РРІЇ та РАР-5) Мотогаїса сНагапійа інгібітор, курцин, кротин, інгібітор з бараопана огйісіпаїї5, гелонін, мітогелін, рестриктоцин, феноміцин та еноміцин.Rupuiassa Ateguisapa (RARI, RRII and PAP-5) Motogaisa sNagapiya inhibitor, curcin, crotin, inhibitor of baropan ogissipaii5, gelonin, mitogelin, restrictocin, phenomycin and enomycin.

Терапевтичні агенти, які можна призначати в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, як описано в іншому місці тут, також можуть бути кандидатами в терапевтичні частини для кон'югації з СОЗ8ВР за даним винаходом. Наприклад, ланка ліків може бути білком або поліпептидом, що має бажану біологічну активність. Такі білюм можуть включати, наприклад, ферментативно активні токсини або їх активний фрагмент, наприклад, абрин, рицин А, екзотоксин Рзепдотопа:х або дифтерійний токсин; білок, наприклад, фактор некрозу пухлин або інтерферон-у або модифікатори біологічної відповіді, наприклад, лімфокіни, інтерлейкін-1 (ІІ -1), інтерлейкін-2 (ІІ -2), інтерлейкін-б (1-6), фактор стимуляції колоній макрофагів гранулоцитів (СМ-СЗЕ), фактор стимуляції колоній гранулоцитів ((5-С5Е) або інші фактори росту та білки, індукуючі апоптоз, виділені з мітохондрій.Therapeutic agents that can be administered in combination with a COZ8BP according to the present invention, as described elsewhere herein, may also be candidate therapeutic moieties for conjugation with a COZ8BP according to the present invention. For example, a drug link can be a protein or polypeptide that has the desired biological activity. Such bilyum can include, for example, enzymatically active toxins or their active fragment, for example, abrin, ricin A, exotoxin Rzepdotopa:x or diphtheria toxin; protein, eg, tumor necrosis factor or interferon-γ or biological response modifiers, eg, lymphokines, interleukin-1 (II-1), interleukin-2 (II-2), interleukin-b (1-6), colony-stimulating factor granulocyte macrophages (CM-SZE), granulocyte colony-stimulating factor ((5-C5E) or other growth factors and apoptosis-inducing proteins isolated from mitochondria.

В одному втіленні, цитотоксичний агент є каліхеаміцином, Оу, 125| та 1911,In one embodiment, the cytotoxic agent is calicheamicin, O, 125| and 1911,

Інші приклади терапевтичних цитотоксинів, які можна кон'югувати із СОЗ8ВР за даним винаходом, включають каліхеаміцини та дуокарміцини. Як відзначалося вище, лікарську ланку не слід тлумачити як обмежену класичними хімічними терапевтичними агентами. Наприклад, лікарська ланка може бути білком або поліпептидом, що має бажану біологічну активність. Такі білки можуть включати, наприклад, агент, активний на поверхні клітин, наприклад, ферменти фосфоліпази, наприклад, фосфоліпазу С.Other examples of therapeutic cytotoxins that can be conjugated to SOZ8BP of the present invention include calicheamicins and duocarmycins. As noted above, the medicinal element should not be interpreted as limited to classical chemical therapeutic agents. For example, the drug link can be a protein or polypeptide that has the desired biological activity. Such proteins may include, for example, an agent active on the surface of cells, for example, phospholipase enzymes, for example, phospholipase C.

Лізуючу частину токсину можна легко приєднати до Раб фрагмента антитіла або фрагмента антитіла згідно з даним винаходом. Інші придатні для кон'югації молекули включають рибонуклеазу (РНКазу), ДНКазу І, стафілококовий ентеротоксин А, антивірусний білок лаконосу, дифтерійний токсин та ендотоксин Рзхепдотопав. Див., наприклад, Разіап еї аї., Сеї! 47, 641 (1986) апа СоІдепрего, Саїйї. А Сапсег дошигпаї! їог Сііпісіап5 44, 43 (1994). Додаткові токсини, придатні для застосування в даному винаході, відомі фахівцям в даній області техніки (див., наприклад, 05 6077499).The lysing portion of the toxin can be readily attached to the Rab antibody fragment or antibody fragment of the present invention. Other suitable molecules for conjugation include ribonuclease (RNase), DNase I, staphylococcal enterotoxin A, lacunosa antiviral protein, diphtheria toxin, and Rzhepdotopav endotoxin. See, for example, Raziap ei ai., Sei! 47, 641 (1986) apa SoIdeprego, Saiyi. And Sapseg doshigpai! iog Siipsiap5 44, 43 (1994). Additional toxins suitable for use in this invention are known to those skilled in the art (see, for example, 05 6077499).

Кон'югати СОЗ8ВР, такі як антитіла, та такі як цитотоксичні ланки, можна одержувати із застосуванням біфункціональних агентів зв'язування білків. Приклади таких реагентів включають 5РОР, ІТ, біфункціональні похідні імуноефірів, наприклад, диметиладипімідат НСІ, активні ефіри, наприклад, дисукцинімідиніл суберат, альдегіди, наприклад, глутаральдегід, біс- азидо сполуки, наприклад, біс(п-азидобензоїл)гександіамін, похідні біс-діазонію, наприклад, біс- (п-діазонійбензоїл)етилендіамін, діїзоціанати, наприклад, толілен-2,6-діїзоціанат і біс-активні сполуки фтору, наприклад, 1,5-дифтор-2,4-динітробензол і протимітотичні агенти (наприклад, вінкристин, вінбластин, доцетаксель, паклітаксель та вінорелбин).Conjugates of SOZ8BP, such as antibodies, and such cytotoxic moieties can be prepared using bifunctional protein binding agents. Examples of such reagents include 5POP, IT, bifunctional immunoester derivatives, e.g., dimethyl adipimidate NCI, active esters, e.g., disuccinimidinyl suberate, aldehydes, e.g., glutaraldehyde, bis-azido compounds, e.g., bis(p-azidobenzoyl)hexanediamine, bis-diazonium derivatives , e.g., bis-(p-diazoniumbenzoyl)ethylenediamine, diisocyanates, e.g., tolylene-2,6-diisocyanate, and bis-active fluorine compounds, e.g., 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene, and antimitotic agents (e.g., vincristine , vinblastine, docetaxel, paclitaxel and vinorelbine).

Способи кон'югації таких терапевтичних ланок з СОЗ8ВР, наприклад, антитіл, добре відомі, див., наприклад, Агпоп еї аї., "Мопосіопа! Апіїбодіеє5 Рог Іттипоїагдейпод ОЇ Огид5 Іп СапсегMethods for conjugating such therapeutic moieties to antibodies, such as antibodies, are well known, see, e.g., Agpop et al.

Тпегару", іп Мопосіопа! Апіїбодіез Апа Сапсег Тпегару, Неївгейа еї аї., (єадв.), рр. 243-56 (Аіап В.Tpegaru", ip Moposiopa! Apiibodiez Apa Sapseg Tpegaru, Neivgeia ei ai., (adv.), yr. 243-56 (Aiap V.

Їів5, Іпс. 1985), НеїЇвіот еї аї., "Апіїродієє Рог Огид Оеїїмегу", іп Сопігоїїей Огид Оеєїїмегу (2паYiiv5, Ips. 1985), NeiYiviot ei ai., "Apiirodiee Rog Ogyd Oeiiimegu", ip Sopigoiiie Ogyd Oeiiimegu (2pa

Еа.), Робріпзоп еї аї., (едв.), рр. 623-53 (Магсе! Реккег, Іпс. 1987), ТПогре, "Апіїбоду Сатіетв ОЇEa.), Robripzop ei ai., (Edv.), pp. 623-53 (Magse! Rekkeg, Ips. 1987), TPogre, "Apiibodu Satietv ОI

Суїюхіс Адепів Іп Сапсег ТНегару: А Вемієм/", іп Мопосіопа! Апііродієв "84: Віоіодіса! Апа СіїпісаїSuiyuhis Adepiv Ip Sapseg TNegaru: A Vemiem/", ip Moposiopa! Apiirodiev "84: Viioodisa! Apa Siipisai

Арріїсайопв5, Ріпснега еї аї., (веав.), рр. 475-506 (1985), "Апаїузів, Незиїйїв5, Апа Ешиге Ргоз5ресіїмеArrisaiopv5, Ripsnega eyi ai., (veav.), pp. 475-506 (1985), "Apaiuziv, Neziyiv5, Apa Eshige Rgoz5resiime

ОЇ Те ТПегарешііс Ове ОЇ Надіоіареїєд Апіїроду Іп Сапсег Тегару", іп Мопосіопаї! Апіїродієв БогОИ Te TPegareshiis Ove ОИ Nadioiareied Apiirodu Ip Sapseg Tegaru", ip Moposiopai! Apiirodiev God

Сапсег Оєїесіюп Апа Тнегару, Ваїдм/іп еї аї!., (еа5.), рр. 303-16 (Асадетіс Ргезз 1985) апа Тногре еї аІ., "Не Ргерагайоп Апа Суюїохіс Ргорепівз ОЇ Апіїроду-Тохіп Сопійдаїев", Іттипої. Вему. 62, 119-58 (1982).Sapseg Oyeyesiyup Apa Tnegaru, Vaidm/ip ei ai!., (ea5.), pp. 303-16 (Asadetis Rgezz 1985) apa Tnogre ei aI., "Ne Rgeragayop Apa Suyuiohis Rgorepivs OY Apiirodu-Tohip Sopiidayev", Ittipoi. Wem 62, 119-58 (1982).

В одному втіленні, даний винахід пропонує СОЗ8ВР, кон'югований зі змішаним токсином.In one embodiment, the present invention provides SOZ8BP conjugated to a mixed toxin.

Молекула змішаного токсину є молекулою, виробленою із двох різних (звичайно поліпептидних) 60 токсинів. В основному, пептидні токсини включають один чи більше доменів, відповідальний за генералізоване зв'язування еукаріотичних клітин, щонайменше один ферментативно активний домен і щонайменше один транслокаційний домен. Зв'язуючі та транслокуючі домени необхідні для впізнавання клітин і входу токсину, відповідно. Поширені в природі білки, що, як відомо, включають домен транслокації, включають дифтерійний токсин, ендотоксин А Рзейдотопавз і, можливо, інші пептидні токсини. Домени транслокації дифтерійного токсину та ендотоксину АA mixed toxin molecule is a molecule made from two different (usually polypeptide) 60 toxins. Basically, peptide toxins include one or more domains responsible for generalized binding of eukaryotic cells, at least one enzymatically active domain and at least one translocation domain. The binding and translocating domains are required for cell recognition and toxin entry, respectively. Common naturally occurring proteins known to include a translocation domain include diphtheria toxin, endotoxin A, and possibly other peptide toxins. Translocation domains of diphtheria toxin and endotoxin A

Рзепдотопах добре охарактеризовані (див., наприклад, Носії еї аІ., РМАБ5 О5А 82, 1692 (1985),Rzepdotopah are well characterized (see, for example, Nosii ei aI., RMAB5 O5A 82, 1692 (1985),

Соіотрбаці еї аї., 9. Віої. Снет. 26.)., 3030 (1986) апа Оеїеегз: еї аІ., РЕВЗ І ей. 160, 82 (1983)) і існування та розташування такого домену в інших молекулах можна визначити способами, наприклад, застосованими в Нугапо еї а!., Сеї! 48, 129 (1987) апа Сгау еї аІ., РМАБ5 ОА 8.).2645 (1984). З урахуванням цих способів застосовна молекула змішаного гібридного токсину може бути утворена, наприклад, шляхом з'єднання ферментативно-активної А суб'одиниці шигаподібного токсину з ЕЕ. Соїї (Саідепуоод сеї аі, РМАБ ИОБА 84, 4364 (1987)) із транслокаційним доменом (амінокислотними залишками від 202 до 460) дифтерійного токсину та з молекулою, спрямованою на певний тип клітин, як описано в 05 5906820. Напрямна частина такого тричастинного гібрида може обумовити специфічне приєднання молекули до клітин мішені і транслокаційна частина дифтерійного токсину може діяти так, щоб увести ферментативно активну суб'єдиницю А шигаподібного токсину в клітину мішені. Ферментативно активна частина шигаподібного токсину подібно дифтерійному токсину діє на механізм синтезу білка в клітині, запобігаючи синтезу білка, у такий спосіб вбиваючи клітину мішені.Soiotrbatsi ei ai., 9. Vioi. Snet 26.)., 3030 (1986) apa Oeieegz: ei aI., REVZ I ey. 160, 82 (1983)) and the existence and location of such a domain in other molecules can be determined by methods, for example, applied in Nugapo ei a!., Seii! 48, 129 (1987) apa Sgau ei aI., RMAB5 OA 8.).2645 (1984). Taking into account these methods, an applicable molecule of a mixed hybrid toxin can be formed, for example, by connecting the enzymatically active A subunit of Shiga-like toxin with EE. Soy (Saidepuood sei ai, RMAB IOBA 84, 4364 (1987)) with the translocation domain (amino acid residues 202 to 460) of diphtheria toxin and with a molecule targeting a specific cell type as described in 05 5906820. The targeting part of such a three-part hybrid can cause the specific attachment of the molecule to the target cells and the translocation part of the diphtheria toxin can act to introduce the enzymatically active subunit A of the shiga-like toxin into the target cell. The enzymatically active part of Shiga toxin, like diphtheria toxin, acts on the mechanism of protein synthesis in the cell, preventing protein synthesis, thus killing the target cell.

Імунокон'югати згідно з даним винаходом можуть також включати радіоізотопи, наприклад, йод-131, ітрій-90 або індій-111 для генерації цитотоксичних радіоактивних ліків для лікування зв'язаних з СОЗ8ВР порушень, наприклад, множинної мієломи.Immunoconjugates according to the present invention may also include radioisotopes, for example, iodine-131, yttrium-90 or indium-111 to generate cytotoxic radioactive drugs for the treatment of SOZ8BP-related disorders, for example, multiple myeloma.

В одному втіленні, СОЗ8ВР, такі як антитіла людини згідно з даним винаходом, приєднані до лінкера-хелатора, наприклад, тіуксетану, що дозволяє кон'югувати антитіло з радіоізотопом.In one embodiment, SOZ8VR, such as human antibodies according to the present invention, are attached to a chelating linker, for example, thiuxetane, which allows conjugation of the antibody with a radioisotope.

Додатково застосовні кон'юговані замісники включають протиракові ретиноїди. Кон'югати таксану (див., наприклад, Уаїте еї аї., Апіїсапсег Ке5. 21.(2А), 1119-28 (2001), кон'югати цисплатину, тапсигаргінові кон'югати, кон'югати ліноленової кислоти, кон'югати каліхеаміцину (див., наприклад, Сатіе еї аї., Си Оріп Рпагтасої. 3(4), 386-90 (2003), кон'югати доксорубіцину, кон'югати гелданаміцину і т.п., також можуть застосовуватися для полегшення лікування раку (див., в основному, Тгаї! єї аІ., Сапсег Іттипої ІтптипоїПпег. 52(5), 328-37 (2003)).Additional useful conjugated substitutes include anticancer retinoids. Taxane conjugates (see, e.g., White et al., Apiasapseg Ke5. 21.(2A), 1119-28 (2001), cisplatin conjugates, thapsigargin conjugates, linolenic acid conjugates, calicheamicin (see, e.g., Satie et al., Sy Orip Rpagtasoi. 3(4), 386-90 (2003), doxorubicin conjugates, geldanamycin conjugates, etc., may also be used to facilitate the treatment of cancer (see, mainly, Tgai! eyi aI., Sapseg Ittipoi ItptipoiPpeg. 52(5), 328-37 (2003)).

В одному втіленні даний винахід пропонує вторинні та антиідіотипові антитіла, вироблені проти анти-СОЗ8 антитіл згідно з даним винаходом. Вторинне антитіло стосується антитіла, специфічного до та звичайно виробленого проти анти-СО38 антитіла. Антиідіотипове антитіло (Іа) є антитілом, яке впізнає унікальні детермінанти, в основному, зв'язані з антиген-зв'язуючою ділянкою антитіла. Ід-антитіло можна одержувати шляхом імунізації тварини того ж виду та генетичного типу, як джерело анти-СОЗ8 тАб за допомогою тАб, до якого одержують анти-1а.In one embodiment, the present invention provides secondary and anti-idiotypic antibodies raised against anti-COP8 antibodies according to the present invention. A secondary antibody refers to an antibody specific to and commonly produced against an anti-CO38 antibody. Anti-idiotypic antibody (Ia) is an antibody that recognizes unique determinants, mainly associated with the antigen-binding region of the antibody. Id-antibody can be obtained by immunizing an animal of the same species and genetic type as the source of anti-COZ8 tAb with the tAb to which anti-1a is obtained.

Імунізована тварина, звичайно, може розпізнавати та відповідати на ідіотипові детермінанти імунізуючого антитіла шляхом продукції антитіла до цих ідіотипових детермінант (анти-їа антитіло). Такі антитіла описані, наприклад, в 05 4699880. Такі антитіла є ще однією властивістю даного винаходу.The immunized animal can, of course, recognize and respond to the idiotypic determinants of the immunizing antibody by producing antibodies to these idiotypic determinants (anti-Ia antibody). Such antibodies are described, for example, in 05 4699880. Such antibodies are another property of this invention.

Анти-Іа антитіло можна також застосовувати як "імуноген" для індукції імунної відповіді є ще однієї тварини, продукуючої так зване анти-анти-Ій антитіло. Анти-анти-І4 антитіло може бути ідентично по епітопу вихідному тАбБ, що індукувало анти-ій антитіло. Так, застосовуючи антитіла до ідіотипових детермінантів тАб, можливо ідентифікувати інші клони, експресуючі антитіла з ідентичною специфічністю. Анти-Іа антитіла можна варіювати (у такий спосіб роблячи варіанти анти-Їй антитіла) та/або дериватизувати будь-яким придатним способом, наприклад, як описано тут в іншому місці відносно анти-СОЗ38 антитіл згідно з даним винаходом. Наприклад, анти-ІЯ тАБб можна з'єднувати з переносником, наприклад, гемоціаніном молюска (КеупоїеThe anti-Ia antibody can also be used as an "immunogen" to induce an immune response in another animal producing the so-called anti-anti-Ii antibody. The anti-anti-I4 antibody can be identical in epitope to the original tAbB that induced the anti-I4 antibody. Thus, using antibodies to idiotypic determinants of tAb, it is possible to identify other clones expressing antibodies with identical specificity. Anti-Ia antibodies can be varied (thus making variants of anti-His antibodies) and/or derivatized in any suitable manner, for example as described elsewhere herein for anti-COZ38 antibodies according to the present invention. For example, anti-IA tAbs can be combined with a carrier, for example, mollusk hemocyanin (Keupoiet

Іптпрею (КІН) і застосовувати для імунізації ВАЇВ/с мишей. Сироватка таких мишей звичайно містить анти-анти-І4 антитіла, які мають властивості зв'язування, подібні, якщо не ідентичні, таким вихідного/батьківського СОЗ8 антитіла.Iptpreu (KIN) and use for immunization of VAIV/s mice. The serum of such mice usually contains anti-anti-I4 antibodies that have binding properties similar, if not identical, to those of the original/parental COZ8 antibody.

В одному втіленні даний винахід пропонує нуклеїнову кислоту, що кодує СОЗ8ВР.In one embodiment, the present invention provides a nucleic acid encoding SOZ8VR.

Нуклеїнова кислота, що кодує СОЗ8ВР, може мати будь-які придатні характеристики та включати будь-які придатні властивості або їхню комбінацію. Так, наприклад, нуклеїнова кислота, що кодує СОЗ8ВР, може бути у формі ДНК, РНК або їх гібрида і може включати основи, які не зустрічаються в природі, модифікований кістяк (наприклад, фосфотіоатний кістяк, що сприяє стабільності нуклеїнових кислот) або обидва. Нуклеїнова кислота краще включає властивості, що сприяють бажаній експресії в клітині хазяїна мішені, реплікації та/або відбору.The nucleic acid encoding SOZ8BP may have any suitable characteristics and include any suitable properties or a combination thereof. Thus, for example, the nucleic acid encoding COZ8BP may be in the form of DNA, RNA, or a hybrid thereof and may include bases that do not occur in nature, a modified backbone (eg, a phosphothioate backbone that contributes to nucleic acid stability), or both. The nucleic acid preferably includes properties that promote the desired expression in the host cell of the target, replication and/or selection.

Приклади таких властивостей включають компонент початку реплікації, компонент відбору гена,Examples of such properties include a replication origin component, a gene selection component,

компонент промотору, компонент елемента підсилювача, компонент послідовності поліаденілювання, компонент термінації і т.п.promoter component, enhancer element component, polyadenylation sequence component, termination component, etc.

В одному втіленні даний винахід пропонує вектор, який включає нуклеїнову кислоту, що кодує СОЗ8ВР. Вектор стосується засобу доставки, який сприяє експресії нуклеїнової кислоти, що кодує СОЗ8ВР, продукції СОЗ8ВР пептиду, трансфекції/трансформації клітин мішені, реплікації нуклеїнової кислоти, що кодує СОЗ8ВР, сприяє стабільності нуклеїнової кислоти, сприяє детекції нуклеїнової кислоти та/або трансформованих/трансфекованих клітин, або іншим способом надає вигідну біологічну функцію нуклеїновій кислоті, що кодує СОЗ8ВВР. Вектор у контексті даного винаходу може бути будь-яким придатним вектором, включаючи вектори, що складаються із хромосомної, нехромосомної та синтетичної нуклеїнової кислоти (послідовність нуклеїнової кислоти, що включає необхідний набір елементів контролю експресії). Приклади таких векторів включають похідні 5М40, бактеріальні плазміди, фагову ДНК, бакуловірус, плазміди дріжджів, вектори, вироблені з комбінації плазміди та фагової ДНК і вірусну нуклеїнову кислоту (РНК або ДНК) векторів. В одному втіленні, кодуюча СОЗ8ВР нуклеїнова кислота включає вектор з голої ДНК або РНК, який включає, наприклад, лінійний елемент експресії (як описано, наприклад, в ЗуКе5 апа допп5іоп, Маї Віоїесп Т7, 355-59 (1997)), вектор зі стисненої нуклеїнової кислоти (як описано, наприклад, в З 6077835 та/або М/О 00/70087), плазмідний вектор, як рВК322, рОС 19/18 або рис 118/119, "мошку" вектор з нуклеїнової кислоти мінімального розміру (як описано, наприклад, в 5спакомузкі еї аї., Мої. Тег 3, 793-800 (2001)), або осаджену конструкцію вектора з нуклеїнової кислоти, наприклад, СаРО--осаджена конструкція (як описана, наприклад, в УМО 00/46147, Вепмепівіїу апа Кезпеї, РМА5 ОА 83, 9551- 55 (1986), М/ідіег єї а!., Сеї! 14, 725 (1978) і Согаго апа Реагзоп, Зотаїіс Сеї!Ї Сепеїіс5 7, 603 (1981)). Такі вектори з нуклеїнової кислоти та їх застосування добре відомі в даній області (див., наприклад, 05 5589466 та 05 5973972).In one embodiment, the present invention provides a vector that includes a nucleic acid encoding SOZ8BP. A vector relates to a delivery vehicle that facilitates the expression of a nucleic acid encoding SOZ8BP, the production of a SOZ8BP peptide, the transfection/transformation of target cells, the replication of a nucleic acid encoding SOZ8BP, promotes the stability of the nucleic acid, facilitates the detection of the nucleic acid and/or transformed/transfected cells, or otherwise provides a beneficial biological function to the nucleic acid encoding SOZ8BVR. A vector in the context of this invention can be any suitable vector, including vectors consisting of chromosomal, non-chromosomal and synthetic nucleic acid (a nucleic acid sequence that includes the required set of expression control elements). Examples of such vectors include derivatives of 5M40, bacterial plasmids, phage DNA, baculovirus, yeast plasmids, vectors produced from a combination of plasmid and phage DNA, and viral nucleic acid (RNA or DNA) vectors. In one embodiment, the nucleic acid encoding SOZ8BP comprises a naked DNA or RNA vector that includes, for example, a linear expression element (as described, for example, in ZuKe5 apa dopp5iop, May Biosp T7, 355-59 (1997)), a vector from a compressed nucleic acid (as described, for example, in C 6077835 and/or M/O 00/70087), a plasmid vector, such as rVK322, pOS 19/18 or ris 118/119, a "fly" nucleic acid vector of minimal size (as described , e.g., in 5spakomuzki ei ai., Moi. Teg 3, 793-800 (2001)), or a deposited nucleic acid vector construct, e.g., a CaPO--deposited construct (as described, e.g., in UMO 00/46147, Vepmepiviiu apa Kezpei, RMA5 OA 83, 9551-55 (1986), M/idieg ei a!., Sei! 14, 725 (1978) and Sogago apa Reagzop, Zotais Sei!I Sepeis5 7, 603 (1981)). Such nucleic acid vectors and their uses are well known in the art (see, for example, 05 5589466 and 05 5973972).

В одному втіленні вектор є придатним для експресії СОЗ8ВР у бактеріальній клітині.In one embodiment, the vector is suitable for expression of COZ8BP in a bacterial cell.

Приклади таких векторів включають, наприклад, вектори, які направляють високий рівень експресії складених білків, які легко очищати (наприклад, мультифункціональні клонуючі та експресуючі вектори Е. соїї, наприклад, Вісезсгірі (Зігаїадепе), рІМ вектори (Мап НеекКе 8Examples of such vectors include, for example, vectors that direct high-level expression of folded proteins that are easy to purify (eg, E. soybean multifunctional cloning and expression vectors, such as Viseszgiri (Zigaiadepe), pIM vectors (Map Neekke 8

Зеспизвіег, у. Віої. Спет 264, 5503-5509 (1989), рЕТ вектори (Момадеп, Мадіхоп МІ) і т.п.).Zespizwieg, u. Vioi Speth 264, 5503-5509 (1989), pET vectors (Momadep, Madihop MI), etc.).

Зо Експресуючий вектор може також або альтернативно бути вектором, придатним для експресії в дріжджовій системі. Будь-який вектор, придатний для експресії в дріжджовій системі, можна застосовувати. Придатні вектори для застосування, наприклад, в басспаготусев5 сегемізіає включають, наприклад, вектори, які включають конститутивні або індуцибельні промотори, наприклад, альфа фактор, алкоголь-оксидаза та РОН (огляд в: ЕР. А!зибеї еї аї., ей. Ситепі Ргоїосої5 іп МоіІесшціаг Віоіоду, Стеєпе Рибіїзпіпуд апа УМіеу Іпіегосієпсе Мем Могк (1987), апа Стгапі еї аї., Меїподв іп Епгутої 153. 516-544 (1987)).The expression vector may also or alternatively be a vector suitable for expression in a yeast system. Any vector suitable for expression in a yeast system can be used. Suitable vectors for use, for example, in bass spagothus5 semigesis include, for example, vectors that include constitutive or inducible promoters, for example, alpha factor, alcohol oxidase and RON (reviewed in: ER. (1987)

Нуклеїнова кислота та/або вектор може також включати послідовність нуклеїнової кислоти, кодуючу послідовність секреції/розташування, яка може направляти поліпептид, наприклад, народжуваний поліпептидний ланцюг, у потрібний компартмент клітини, мембрану чи органелу, або який направляє секрецію поліпептиду в периплазматичний простір або в культуральне середовище клітини. Такі послідовності відомі в даній області та включають секреторний лідер або сигнальні пептиди, послідовності, що направляють в органели (наприклад, послідовності ядерної локалізації, сигнали втримання в ЕР, послідовності перенесення в хлоропласти), мембранні локалізуючі/якірні послідовності (наприклад, послідовності зупинки перенесення, послідовності ОРІ якоря) і т.п.The nucleic acid and/or vector may also include a nucleic acid sequence encoding a secretion/location sequence that can direct the polypeptide, e.g., a nascent polypeptide chain, to a desired cellular compartment, membrane, or organelle, or that directs secretion of the polypeptide into the periplasmic space or into the culture medium. cell environment. Such sequences are known in the art and include secretory leader or signal peptides, organelle targeting sequences (e.g., nuclear localization sequences, ER retention signals, chloroplast transfer sequences), membrane localization/anchoring sequences (e.g., transfer stop sequences, sequence of ORI anchor) etc.

СОЗ8ВР-кодуючі нуклеїнові кислоти можуть включати або бути зв'язаними з будь-яким придатним промотором, підсилювачем та іншими полегшуючими експресію елементами.COZ8BP-encoding nucleic acids can include or be linked to any suitable promoter, enhancer and other facilitating expression elements.

Приклади таких елементів включають сильні промотори експресії (наприклад, СММ І1Е промотор/підсилювач людини, а також КМ, 5М40, 513-3, ММТМ та НІМ ІТК промотори), ефективні полі(А) термінуючі послідовності, початок реплікації плазмід в Е. сої, ген стійкості до антибіотика як маркер селективності та/"або придатну ділянку клонування (наприклад, полілінкер). Нуклеїнові кислоти також можуть включати індуцибельний промотор на противагу конститутивному промотору, такому як СММ ІЕ (фахівець в даній області зрозуміє, що ці терміни насправді описують ступінь експресії гена в певних умовах).Examples of such elements include strong expression promoters (eg, the human SMM I1E promoter/enhancer, as well as the KM, 5M40, 513-3, MMTM, and NIM ITK promoters), efficient poly(A) terminator sequences, initiation of plasmid replication in E. soybean, an antibiotic resistance gene as a selectivity marker and/or a suitable cloning site (e.g., a polylinker). Nucleic acids may also include an inducible promoter as opposed to a constitutive promoter such as SMM IE (one skilled in the art will appreciate that these terms actually describe the degree of expression gene under certain conditions).

В одному втіленні, нуклеїнова кислота може перебувати та/або доставлятися в клітину хазяїна або тварину хазяїна за допомогою вірусного вектора. Будь-який придатний вірусний вектор можна застосовувати для цього та кілька таких векторів відомі в даній області. Вірусний вектор може включати будь-яке число вірусних полінуклеотидів окремо або в сполученні з одним чи більше вірусним білком, що полегшує доставку, реплікацію та/або експресію бо нуклеїнової кислоти згідно з даним винаходом в потрібній клітині хазяїна. Вірусний вектор може бути полінуклеотидом, який включає весь або частину вірусного геному, вірусним кон'югатом білок/нуклеїнова кислота, вірусоподібною частинкою (МІ Р), вектором, подібним до описаних в 05 5849586 та МО 97/04748, або інтактною вірусною частинкою, що включає вірусну нуклеїнову кислоту та нуклеїнову кислоту згідно з даним винаходом. Вірусний вектор вірусної частинки може включати вірусну частинку дикого типу або модифіковану вірусну частинку. Вірусний вектор може бути вектором, що вимагає присутності іншого вектора або вірусу дикого типу для реплікації та/або експресії (наприклад, він може бути залежним від помічника вірусом), наприклад, амплікону аденовірусного вектора. Звичайно, такі вірусні вектори складаються, в основному, з вірусної частинки дикого типу або вірусної частинки, модифікованої по своєму білковому або нуклеїновокислотному вмісту для збільшення трансгенної здатності або допомоги при трансфекції та/або експресії нуклеїнової кислоти (приклади таких векторів включають амплікони вірусу герпесу/ААМ). Звичайно, вірусний вектор схожий на та/або вироблений з вірусу, що у нормі інфікує тварин. Частинки придатного вірусного вектора в цьому відношенні включають, наприклад, частинки аденовірусного вектора (включаючи будь-який вірус або вироблений з вірусу сімейства аденовірусних), адено-зв'язану вірусну частинку (ААМ вірусні частинки) або інші парвовіруси та парвовірусні векторні частинки, папіломавірусні векторні частинки, флавівірусні вектори, альфавірусні вектори, вектори вірусу герпесу, вектори вірусу віспи, ретровірусні вектори, включаючи лентивірусні вектори. Приклади таких вірусів і вірусних векторів є, наприклад, в Ріеєїд5 еї аї., еа5., Мігоїоду Камеп Ргез5, Ц., Мем ХогК (Зга ей., 1996 апаIn one embodiment, the nucleic acid may reside in and/or be delivered to a host cell or animal host using a viral vector. Any suitable viral vector can be used for this purpose and several such vectors are known in the art. A viral vector may include any number of viral polynucleotides alone or in combination with one or more viral proteins that facilitate delivery, replication and/or expression of a nucleic acid according to the present invention in the desired host cell. The viral vector can be a polynucleotide that includes all or part of the viral genome, a viral protein/nucleic acid conjugate, a virus-like particle (MI R), a vector similar to those described in 05 5849586 and MO 97/04748, or an intact viral particle that includes viral nucleic acid and nucleic acid according to the present invention. A viral vector of a viral particle may include a wild-type viral particle or a modified viral particle. A viral vector may be a vector that requires the presence of another vector or a wild-type virus for replication and/or expression (eg, it may be a helper-dependent virus), such as an adenoviral vector amplicon. Of course, such viral vectors consist primarily of a wild-type viral particle or a viral particle modified in its protein or nucleic acid content to increase transgenic capacity or to aid in transfection and/or nucleic acid expression (examples of such vectors include herpesvirus/AAM amplicons ). Of course, the viral vector is similar to and/or produced from a virus that normally infects animals. Suitable viral vector particles in this regard include, for example, adenovirus vector particles (including any virus or produced from a virus of the adenovirus family), adeno-associated viral particle (AAM viral particles) or other parvoviruses and parvovirus vector particles, papillomavirus vector particles particles, flavivirus vectors, alphavirus vectors, herpesvirus vectors, poxvirus vectors, retroviral vectors, including lentiviral vectors. Examples of such viruses and viral vectors can be found, for example, in Rieyeid5 ei ai., ea5., Migoiodu Kamep Rgez5, Ts., Mem KhogK (Zha ei., 1996 apa

ДН єд., 2001), Епсусіореєдіа ої Мігоіоду, А.С. Мерзівєг вї аї., єд5., Асадетіс Ргез5 (2па єад., 1999),DN ed., 2001), Epsusioredia oi Migoiodu, A.S. Merzivyeg vy ai., ed. 5., Asadetis Rgez 5 (2nd ed., 1999),

Еипдатепіа! Мікіоду, РієЇїй5 еї аї., едв., ІІрріпсой-Намеп (За ей. 1995), І еміпе, "Мігивев5, "Eipdatepia! Mikiodu, RyeYiy5 ei ai., edv., IIrripsoi-Namep (Za ey. 1995), I emipe, "Mihyvev5, "

Зсіепіййс Атегісап І їбгагу Мо. 37 (1992), Медіса! Мігоіоду, О.О. М/піе сеї а!., едв., Асад. Ргевз (2па ей. 1994), апа Іпігодисіоп Юю Модегп Мігоіоду, ОітосК, М. У. еї аї., єдв., ВіасКмеї! 5сієпійісZsiepiyys Ategisap I yibgagu Mo. 37 (1992), Medesa! Migoiodu, O.O. M/pie sei a!., edv., Asad. Rgevs (2pa ey. 1994), apa Ipigodisiop Yuyu Modegp Migoiodu, OitosK, M.U. ei ai., edv., ViasKmeii! 5siepiys

Рибіісайопв, (а. (1994).Rybiisayopv, (a. (1994).

Вірусні вектори, які можна застосовувати разом з полінуклеотидами згідно з даним винаходом, та способи, описані тут, включають аденовірусний та адено-зв'язані вектори, як, наприклад, в Сагіег, Сигг. Оріпіоп Віоїесп. 3, 533-539 (1992) та Миг2су?Ка, Си. Тор. Місгобіо!.Viral vectors that can be used in conjunction with the polynucleotides of the present invention and the methods described herein include adenoviral and adeno-associated vectors, as, for example, in Sagieg, Sigg. Oripiope Vioiesp. 3, 533-539 (1992) and Myg2su?Ka, Sy. Torus. Misgobio!.

Ітітипої. 158, 97-129 (1992). Додаткові типи та аспекти ААМ векторів описані, наприклад, вItitipoi 158, 97-129 (1992). Additional types and aspects of AAM vectors are described, for example, in

Сапег, Сопінб. Містобіо!. 4, 85-86 (2000), Зтій-Атіса, Ст. Сагаїйо!. Вер. 3(1), 41-49 (2001), Таї, 9.Sapeg, Sopinb. Mystobio!. 4, 85-86 (2000), Ztiy-Atisa, Art. Sagaiyo!. Sept. 3(1), 41-49 (2001), Tai, 9.

Зо Віотеа. Зсі. 7(4), 279-91 (2000), Мідпа еї аї., У. Сепе Меа. 2(5), 308-16 (2000), КіітаїсНема еї аї.,From Viotea. All together. 7(4), 279-91 (2000), Midpa ei ai., U. Sepe Mea. 2(5), 308-16 (2000), KiitaisNema ei ai.,

Егопі. Віовсі. 4, 0481-96 (1999), І емег єї а!., Віоспет. бос. Тгапв. 27(6), 841-47 (1999), 5пуаетг, уEgopi Anyway. 4, 0481-96 (1999), I emeg eyi a!., Viospet. boss. Thapv 27(6), 841-47 (1999), 5puaetg, u

Сепе Меа. 1(3), 166-75 (1999), Сегісн еї аІ., Кпее Б!иг9. брогів Тгаштаїйо!. АйНгозс. 5(2), 118-23 (1998) ї Юигіпуд, Аду. Огид ОеєїЇїм. Неміеж 27(1), 83-94 (1997) ії 05 4797368, 005 5139941, 05 5173414, 5 5614404, О5 5658785, 5 5858775 та 5 5994136). Адено-зв'язані вірусні вектори можна конструювати та/або очищати із застосуванням способів, описаних наприклад, в 5 4797368 та І ашдніїйп еї аїЇ.,, Сепе 23, 65-73 (1983).Sepe Mea. 1(3), 166-75 (1999), Segisn ei aI., Kpee B!ig9. brogiv Tgashtaiyo!. AiNgozs. 5(2), 118-23 (1998) and Yuigipud, Adu. Abomination OeeiYiim. Nemiezh 27(1), 83-94 (1997) ии 05 4797368, 005 5139941, 05 5173414, 5 5614404, O5 5658785, 5 5858775 and 5 5994136). Adeno-linked viral vectors can be constructed and/or purified using methods described, for example, in 5 4797368 and I ashdniip ei aiYi., Sepe 23, 65-73 (1983).

Інший тип вірусного вектора, який можна застосовувати з полінуклеотидами та способами згідно з даним винаходом, є папіломавірусним вектором. Придатні папіломавірусні вектори відомі в даній області та описані, наприклад, в Немхоп, Мої. Мед. Тодау 5(1), 8 (1999), Бтерпепв,Another type of viral vector that can be used with the polynucleotides and methods of the present invention is a papillomavirus vector. Suitable papillomavirus vectors are known in the art and are described, for example, in Nemhop, Moi. Honey. Todau 5(1), 8 (1999), Bterpepv,

Віоспет 4). 248(1), 1-11 (1987) ї 05 5719054. Приклади папіломавірусних векторів надані, наприклад, в УМО 99/21979. Альфавірусні вектори можуть бути засобами доставки генів в іншому контексті. Альфавірусні вектори відомі в даній області та описані, наприклад, в Сагіег,Viospet 4). 248(1), 1-11 (1987) and 05 5719054. Examples of papillomavirus vectors are provided, for example, in UMO 99/21979. Alphaviral vectors can be a means of gene delivery in another context. Alphavirus vectors are known in this area and described, for example, in Sagieg,

Сит Оріпіоп Віоїеснй 3, 533-539 (1992), МигсуКа, Сит. Тор. МістобріоІ. Іттипої. 158, 97-129 (1992), ЗсПіІезіпдег, Ехреп Оріп Віо! Тег. 1(2), 177-91 (2001), Роїо єї а!., Оєм Віо! (Вазеї). 104, 181-5 (2000), Ууаніогз еї а!Ї., Сепе ТНег. 7(6), 472-80 (2000), Соіотьаде еї аї., Мігоїоду. 250(1), 151-63 (1998) та УМО 01/81609, УМО 00/39318, УМО 01/81553, УМО 95/07994 і УМО 92/10578.Scit Orihop Vioiesny 3, 533-539 (1992), MygsuKa, Scit. Torus. MystobrioI. And so on. 158, 97-129 (1992), ZsPiIezipdeg, Ekhrep Orip Vio! Tag. 1(2), 177-91 (2001), Royo yei a!., Oem Vio! (Vasei). 104, 181-5 (2000), Uuaniogz ei a!Yi., Sepe TNeg. 7(6), 472-80 (2000), Soiotyade ei ai., Migoiodu. 250(1), 151-63 (1998) and UMO 01/81609, UMO 00/39318, UMO 01/81553, UMO 95/07994 and UMO 92/10578.

Іншою групою вірусних векторів є вектори вірусу герпесу. Приклади векторів на основі вірусу герпесу описані, наприклад, в Гасптапнп еї аї., Сигг. Оріп. Мої. Тпег. 1(5), 622-32 (1999), Егавєїе! єї а|., Адм Мігив Вев. 55, 425-51 (2000), Нцага єї аі., Меиготизвсиі 2(5), 299-313 (1997), Спіопозо еї аї.,Another group of viral vectors are herpes virus vectors. Examples of vectors based on the herpes virus are described, for example, in Gastapnp eii ai., Sigg. Orip. My. Tpeg. 1(5), 622-32 (1999), Egaveie! her a|., Adm. Mihyv Rev. 55, 425-51 (2000), Ntsaga et al., Meigotizvsii 2(5), 299-313 (1997), Spioposo et al.,

Аппи Нем Місгобіо!. 49, 675-710 (1995), І адсптап, Мої. Віотесппої. 2(2), 179-95 (1994), апа ЕгепкКеї! еіа!., Ссепе ТНег. і(Биррі 1), 540-6 (1994), а також в 05 6261552 та 05 5599691.Appy Nem Misgobio!. 49, 675-710 (1995), I adsptap, Moi. Viotesppoi. 2(2), 179-95 (1994), apa EgepKei! eia!., Ssepe TNeg. and (Berry 1), 540-6 (1994), as well as in 05 6261552 and 05 5599691.

Ретровірусні вектори, включаючи лентивірусні вектори, також можуть бути корисними засобами доставки генів в окремих випадках. Є безліч ретровірусних векторів, відомих в даній області. Приклади ретровірусних векторів описані, наприклад, в Мійег, Сигг. Тор. Місгобіо!.Retroviral vectors, including lentiviral vectors, can also be useful means of gene delivery in certain cases. There are many retroviral vectors known in the art. Examples of retroviral vectors are described, for example, in Mieg, Sigg. Torus. Misgobio!.

Іттипої!. 158. 1-24 (1992), Заітопе апа Сип2бигу, Нитап Сепе Пегару 4, 129-141 (1993), МіПег еї аї., Меїйос5 іп Епгутоїіоду 217, 581-599 (1994), Мебег еї аї., Сигг Оріп Мої. Тпег. 3(5), 439-53 (2001), Ни єї аї., Рпагтасої Кем. 52(4), 493-511 (2000), Кіт еї аїЇ., Айм Міги5 Нев. 55, 545-63 (2000), Раш єї аІ., Нем Меа Міо. 10(3), 185-202 (2000) апа ТаКеисні єї а!І., Адм Ехр Меа Віої. 465, 23-35 (2000), а також в 5 6326195, 05 5888502, 05 5580766 і 05 5672510.And so on! 158. 1-24 (1992), Zaitope apa Sip2bygu, Nytap Sepe Pegaru 4, 129-141 (1993), MiPeg ei ai., Meijos5 ip Epgutoiiodu 217, 581-599 (1994), Mebeg ei ai., Sigg Orip Moi . Tpeg. 3(5), 439-53 (2001), Ny eyi ai., Rpagtasoi Chem. 52(4), 493-511 (2000), Kit ei aiYi., Aim Mihy5 Nev. 55, 545-63 (2000), Rush et al., Nem Mea Mio. 10(3), 185-202 (2000) apa TaKeisni eyi a!I., Adm Ehr Mea Vioi. 465, 23-35 (2000), as well as in 5 6326195, 05 5888502, 05 5580766 and 05 5672510.

Аденовірусні вектори також можуть бути придатними векторами для перенесення генів.Adenoviral vectors may also be suitable vectors for gene transfer.

Аденовірусні вектори добре відомі в даній області та описані, наприклад, в сгапат еї аї., Мо).Adenoviral vectors are well known in the art and are described, for example, in sgapat ei ai., Mo).

Віоїеснпої 33(3), 207-220 (1995), Єерпепзоп, Сіїп біадп Мігої 10(2-3), 187-94 (1998), дасобрв, СіїпViolations 33(3), 207-220 (1995), Yeerpepsop, Siip biadp Migoi 10(2-3), 187-94 (1998), dasobrv, Siip

Зсі (опа). 85(2), 117-22 (1993), 005 5922576, 005 5965358 апа 05 6168941 та М/О98/22588,All over (oops). 85(2), 117-22 (1993), 005 5922576, 005 5965358 apa 05 6168941 and M/O98/22588,

УМО98/56937, УМО99/15686, УМУО99/54441 та УМО00/32754. Аденовірусні вектори, вектори на основі вірусу герпесу та 5іпарі5 вірусні вектори, корисні в практиці даного винаходу, описані, наприклад, в ЧУоПйу Сапсег Сепе Тпегару 1, 51-64 (1994), І аїсптап Моїес Віоїеснпо! 2,179-195 (1994) і дхопаппіпо еї аї., Мисі Асіаз Кез 23, 1495-1501 (1995).UMO98/56937, UMO99/15686, UMO99/54441 and UMO00/32754. Adenoviral vectors, herpesvirus-based vectors, and 5ipari5 viral vectors useful in the practice of the present invention are described, for example, in ChuoPyu Sapseg Sepe Tpegaru 1, 51-64 (1994), I aisptap Moyes Vioyesnpo! 2,179-195 (1994) and dhopappipo ei ai., Misi Asiaz Kez 23, 1495-1501 (1995).

Інші придатні вірусні вектори включають вектори вірусу віспи. Приклади таких векторів описані, наприклад, в Вегепсзві еї аї., У Іптесії Оі5 183(8), 1171-9 (2001), Нозепм/ійнй еї аї., Массіпе 19(13-14), 1661-70 (2001), КішШезеп еї аї., ) Іттипої 164(8), 4204-11 (2000), Вгомп еї а!., СепеOther suitable viral vectors include poxvirus vectors. Examples of such vectors are described, for example, in Vegepsvi ei ai., In Iptesiya Oi5 183(8), 1171-9 (2001), Nosepm/iin ei ai., Massipe 19(13-14), 1661-70 (2001), KishShezep ei ai., ) Ittipoi 164(8), 4204-11 (2000), Vgomp ei a!., Sepe

ТНег 7(19), 1680-9 (2000), КапезаїНназап еєї аї!., Массіпе 19(4-5), 483-91 (2000), теп, Огид 60(2), 249-71 (2000). Вектори вірусу вакцинії можуть бути векторами вірусу віспи. Приклади таких векторів та їхнє застосування надані, наприклад, в МепидораїЇ еї аї!., Ке5 Меї Зсі 57(2), 188-193 (1994), Мо55 Оем Віо! апа 82, 55-63 (1994), Меїі57 еї а!., Мої. Сеї! Віо! 43, 137-159 (1994), Манг апа Раупе, Іттипобіоіоем 184(2-3), 126-146 (1992), Нгибу, Сіїп Містобріо! Вем З3(2), 153-170 (1990) і ММО92/07944, МУО98/13500 та УМО89/08716.TNeg 7(19), 1680-9 (2000), KapezaiNnazap eyei ai!., Massipe 19(4-5), 483-91 (2000), tep, Ogyd 60(2), 249-71 (2000). Vaccinia virus vectors can be smallpox virus vectors. Examples of such vectors and their application are given, for example, in Mepidoraiyi ei ai!., Ke5 Mei Zsi 57(2), 188-193 (1994), Mo55 Oem Vio! apa 82, 55-63 (1994), Meii57 ei a!., Moi. Sow! Vio! 43, 137-159 (1994), Mang apa Raupe, Ittypobioioem 184(2-3), 126-146 (1992), Ngibu, Siip Mistobrio! Vem Z3(2), 153-170 (1990) and ММО92/07944, МУО98/13500 and УМО89/08716.

Інші властивості даного винаходу включають рекомбінантні клітини, такі як дріжджові, бактеріальні або клітини ссавців (наприклад, безсмертні клітини ссавців), що включають таку нуклеїнову кислоту, вектор або комбінацію з одним чи обома з них. Наприклад, в одному втіленні даний винахід пропонує клітину, що включає нуклеїнову кислоту, стійко інтегровану в клітинний геном, яка включає послідовність, що кодує експресію СОЗ8ВР згідно з даним винаходом. В одному втіленні даний винахід пропонує клітину, що включає неінтегровану нуклеїнову кислоту, наприклад, плазміду, косміду, фагеміду або лінійний елемент експресії, які включають послідовність, кодуючу експресію СОЗ8ВР.Other features of the present invention include recombinant cells, such as yeast, bacterial, or mammalian cells (eg, immortalized mammalian cells), comprising such a nucleic acid, a vector, or a combination of one or both of them. For example, in one embodiment, the present invention provides a cell comprising a nucleic acid, stably integrated into the cellular genome, that includes a sequence encoding the expression of SOZ8BP according to the present invention. In one embodiment, the present invention provides a cell comprising a non-integrated nucleic acid, such as a plasmid, cosmid, phagemid, or linear expression element, that includes a sequence encoding the expression of COZ8BP.

Даний винахід також надає імуногенні пептиди, які включають будь-яку з вищеописаних частин антигенних детермінант СОЗ8-специфічних для СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, наприклад, частини антигенних детермінант СОЗ8, специфічні для -003 та -005 і -023. Такі імуногени можна застосовувати для викликання прямої імунної відповіді у спосіб, який включає режим активної імунотерапії. Даний винахід далі надає складений білок, що включає такийThe present invention also provides immunogenic peptides that include any of the above-described parts of the antigenic determinants of COZ8-specific for COZ8BP according to the present invention, for example, parts of the antigenic determinants of COZ8 specific for -003 and -005 and -023. Such immunogens can be used to induce a direct immune response in a manner that includes an active immunotherapy regimen. The present invention further provides a protein complex comprising the following

СО38 імуноген і послідовність партнера, що поліпшує час напівжиття складеного білка (наприклад, шляхом включення послідовності домену імуноглобуліну); спрощує детекцію та/або очищення складеного білка (шляхом включення, наприклад, послідовності флуоресціюючого білка, послідовності репортерного ферменту, епітопної мітки, шестигістидинової послідовності і т.п.); сприяє націлюванню складеного білка (наприклад, шляхом включення ліганду або частини ліганду, специфічного для рецептора клітини мішені); сприяє індукції чіткої імунної відповіді (наприклад, відповідає раковому антигену або його імуногенному фрагменту), є цитотоксичним агентом, або забезпечує будь-яку їх комбінацію (наприклад, білок теплового шоку як партнер може збільшувати імунну відповідь, створювану проти несхожого, гетерологічного антигену частини складеного білка, у той саме час збільшуючи іп мімо час життя складеного білка).CO38 immunogen and a partner sequence that improves the half-life of the folded protein (for example, by including an immunoglobulin domain sequence); simplifies the detection and/or purification of the folded protein (by including, for example, a fluorescent protein sequence, a reporter enzyme sequence, an epitope tag, a six-histidine sequence, etc.); facilitates targeting of the folded protein (for example, by incorporating a ligand or part of a ligand specific for a target cell receptor); contributes to the induction of a distinct immune response (e.g., corresponds to a cancer antigen or an immunogenic fragment thereof), is a cytotoxic agent, or provides any combination thereof (e.g., a heat shock protein as a partner can increase the immune response generated against a dissimilar, heterologous antigen of a part of a folded protein , at the same time increasing ip beyond the lifetime of the folded protein).

Складені білюи можуть також включати одну чи більше ділянок розщеплення, особливо між доменами.Folded bilayers may also include one or more cleavage sites, especially between domains.

Варіанти таких пептидів і похідні таких імуногенних пептидів або варіанти імуногенних пептидів є додатковими властивостями даного винаходу (наприклад, такі похідні СОЗ8 імуногенні пептиди можна модифікувати за допомогою хімічного спряження, генетичного зв'язування, нековалентного зв'язування і т.п. з іншими молекулярними модулями, наприклад, антитілами, токсинами, радіоїзотопами, цитотоксичними агентами або цитостатичними агентами). Пептидні мімеотопи, включаючи послідовності СОЗ38 епітопа, можна також, наприклад, застосовувати як кандидати на роль вакцини. Такі пептиди можна також застосовувати для очищення анти-СОЗ8 антитіл. Додатково до послідовностей епітопів В- клітин, описаних тут, такі пептиди можна конструювати або вибирати також або альтернативно так, щоб вони включали один чи більше анти-СОЗ38 епітоп Т-клітини. Такі епітопи можна ідентифікувати за допомогою будь-якої придатної техніки, відомої в даній області (наприклад, за допомогою прикладних програм прогнозування епітопа Т-клітин).Variants of such peptides and derivatives of such immunogenic peptides or variants of immunogenic peptides are additional properties of this invention (for example, such derivatives of COZ8 immunogenic peptides can be modified by chemical conjugation, genetic binding, non-covalent binding, etc. with other molecular modules , for example, antibodies, toxins, radioisotopes, cytotoxic agents or cytostatic agents). Peptide mimeotopes, including POP38 epitope sequences, can also, for example, be used as vaccine candidates. Such peptides can also be used to purify anti-POZ8 antibodies. In addition to the B-cell epitope sequences described herein, such peptides can be designed or selected to also or alternatively include one or more anti-COZ38 T-cell epitopes. Such epitopes can be identified using any suitable technique known in the art (eg, using T-cell epitope prediction applications).

В одному втіленні даний винахід пропонує нуклеїнову кислоту, кодуючу такий імуногенний пептид. Таку нуклеїнову кислоту можна доставляти хазяїну за допомогою будь-якого придатного вектора, наприклад, спрямованого вектора з порушеною реплікацією (наприклад, спрямований нуклеїновокислотний вектор або спрямований аденовірусний вектор з порушеною реплікацією).In one embodiment, the present invention provides a nucleic acid encoding such an immunogenic peptide. Such a nucleic acid can be delivered to the host using any suitable vector, such as a directed replication-defective vector (eg, a directed nucleic acid vector or a directed replication-defective adenoviral vector).

Даний винахід також надає композиції з одного чи більше таких імуногенних пептидів та/або 60 нуклеїнових кислот, кодуючих імуногенний пептид.The present invention also provides compositions of one or more such immunogenic peptides and/or 60 nucleic acids encoding an immunogenic peptide.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом включають "нейтралізуючі" СОЗ8ВР, наприклад, нейтралізуючі антитіла. Термін "нейтралізуючі СОЗ8ВР" та "нейтралізуючі антитіла" стосуєтьсяCOZ8BPs according to the present invention include "neutralizing" COZ8BPs, for example, neutralizing antibodies. The terms "neutralizing COZ8BP" and "neutralizing antibodies" refer

СОЗ8ВР або антитіла, здатних в значному ступені інгібувати або знищувати біологічну активність СОЗ8-зв'язаного пептиду. Звичайно, нейтралізуюче СОЗ8ВР, наприклад, нейтралізуюче анти-СОЗ38 антитіло, може інгібувати прямо або опосередковано функцію СОЗ8, наприклад, ферментативну активність, передачу сигналу, індукцію експресії цитокінів, індукцію проліферації чи диференціації або індукцію лізису в ступені, що приблизно дорівнює чи більше інгібування таких клітин завдяки застосуванню приблизно рівної кількості -003 або -005 або -024.COZ8BP or antibodies capable of significantly inhibiting or destroying the biological activity of the COZ8-bound peptide. Of course, a neutralizing COZ8BP, e.g., a neutralizing anti-COZ38 antibody, can directly or indirectly inhibit COZ8 function, e.g., enzymatic activity, signal transduction, induction of cytokine expression, induction of proliferation or differentiation, or induction of lysis to a degree approximately equal to or greater than the inhibition of such cells due to the application of approximately equal amounts of -003 or -005 or -024.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом може мати будь-яку придатну спорідненість та/або авідність до одного чи більше епітопа, що міститься, щонайменше, почасти, в СОЗ38.COZ8BP according to the present invention may have any suitable affinity and/or avidity for one or more epitopes contained, at least in part, in COZ38.

Спорідненість стосується сили зв'язування СОЗ8ВР з таким епітопом. Звичайно, спорідненість вимірюють за допомогою константи дисоціації Ка, визначуваної як (АБІ х ГАо) / (АБ-АдІ, де (АБ-Affinity refers to the binding strength of SOZ8BP to such an epitope. Of course, affinity is measured using the dissociation constant Ka, defined as (ABI x GAo) / (AB-AdI, where (AB-

Аді| - це молярна концентрація комплексу антитіло-антиген (або комплексу СОЗ8ВР-антиген),Adi| is the molar concentration of the antibody-antigen complex (or the SOZ8BP-antigen complex),

ІАБІ - молярна концентрація незв'язаного антитіла (або СОЗ8ВР) і Аді - молярна концентрація незв'язаного антигену. Константа спорідненості Ка визначається як 1/Ка. Придатні способи визначення специфічності та спорідненості за допомогою конкурентного інгібування можна знайти, наприклад, в Нагіоу»у еї аї., Апііроаіе5: А Гарогагу Мапаиаї, Соїа Зргіпд Нагбог ГарогафогуIABI is the molar concentration of unbound antibody (or COZ8BP) and Adi is the molar concentration of unbound antigen. The affinity constant Ka is defined as 1/Ka. Suitable methods for determining specificity and affinity by means of competitive inhibition can be found, for example, in Nagiou»u ei ai., Apiiroaie5: A Garogagu Mapaiai, Soia Zrgipd Nagbog Garogafogu

Ргез5, Соїй бргіпд Нагброг, М.М., 1988), Соїйдап еї аї., ед5., Сштепі Ргоїосоїв іп Іттипоіоау,Rgez5, Soii brhipd Nagbrog, M.M., 1988), Soiidap eii ai., ed.

Стеєпе Рибіїзпіпд Авб5ос, апа Уміеу Іпіегосіепсе М.У., (1992, 1993) і МийПег, Мей. Епгутої. 92, 589-601 (1983).Steepe Rybiizpipd Avb5os, apa Umieu Ipiegosiepse MU, (1992, 1993) and MiyPeg, May. Epgutoi 92, 589-601 (1983).

СОЗ8ВР і, зокрема, анти-СОЗ3З8 антитіла згідно з даним винаходом можуть мати спорідненість, щонайменше, до одного епітопа, щонайменше, частково включеного в СОЗ8 в інтервалі від приблизно 107 до приблизно 1079 М". Термін "імунореагує" звичайно стосується тут зв'язування СОЗ8ВР з СОЗ8 епітопом з константою дисоціації Ка нижче приблизно 10 М".COZ8BP and, in particular, anti-COZ3Z8 antibodies of the present invention can have an affinity for at least one epitope, at least partially included in COZ8, in the range from about 107 to about 1079 M". The term "immunoreactive" generally refers here to binding SOZ8BP with the SOZ8 epitope with a dissociation constant Ka below approximately 10 M".

СОЗ38В може мати спорідненість, яка є, щонайменше, такою саме великою для СОЗ8, як у антитіл -003, -005 та -024, і в деяких втіленнях має спорідненість, яка є, щонайменше, приблизно такою саме великою, як у антитіл -003, -005 та -024. Спорідненість можна визначати за допомогою будь-якого зі способів, описаних тут, або їх відомих в даній області еквівалентів.COZ38B can have an affinity that is at least as great for COZ8 as antibodies -003, -005, and -024, and in some embodiments has an affinity that is at least about as great as antibody -003 , -005 and -024. Affinity can be determined using any of the methods described herein or their art-known equivalents.

Приклад способу, який можна застосовувати для визначення спорідненості, наведений в аналізіAn example of a method that can be used to determine kinship is given in the analysis

Зо по Скетчарду в Мипзоп 4 Роїага, Апаї. Віоспет. 107, 220 (1980). Спорідненість зв'язування можна також визначати за допомогою рівноважних способів (наприклад, аналізу за допомогою зв'язаного з ферментом імуноабсорбенту (ЕГІ5А) або радіоіїмунологічного аналізу (КІА) або кінетичного аналізу (наприклад, ВІАСОКЕ "М аналізу).From Scatchard to Mipsop 4 Roiaga, Apai. Viospet. 107, 220 (1980). Binding affinity can also be determined using equilibrium methods (for example, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or radioimmunoassay (RIA) or kinetic analysis (for example, VIASOKE "M assay).

Звичайно, константа дисоціації для СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіл, згідно з даним винаходом становить менше приблизно 100 нМ, менше приблизно 50 нМ, менше приблизно 10Of course, the dissociation constant for COZ8BP, e.g., anti-COZ38 antibodies, according to the present invention is less than about 100 nM, less than about 50 nM, less than about 10

НМ, приблизно 5 нМ чи менше, приблизно 1 нМ чи менше, приблизно 0,5 нМ чи менше, приблизно 0,1 нМ чи менше, приблизно 0,01 нМ чи менше, або навіть приблизно 0,001 нМ чи менше.NM, about 5 nM or less, about 1 nM or less, about 0.5 nM or less, about 0.1 nM or less, about 0.01 nM or less, or even about 0.001 nM or less.

СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіла згідно з даним винаходом можуть виявляти подібні функціональні характеристики, як -003 та -005 і -024, як можна визначити за допомогою аналізу залежної від антитіла клітинної цитотоксичності (АДОСС) і опосередкованої комплементом цитотоксичності (СОС) (див., наприклад, 5 5500362).COZ8BP, e.g., anti-COZ38 antibodies of the present invention may exhibit similar functional characteristics as -003 and -005 and -024, as determined by antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADC) and complement-mediated cytotoxicity (CCT) assays ( see, for example, 5 5500362).

В одному втіленні, пептид згідно з даним винаходом не діє як агоніст СОЗ8 або антагоніст сОрз38. Агоніст СОЗ38 є молекулою, що активує одну чи більше функцію, приписувану СОЗ8. Такі функції можуть включати опосередковування рецептора в адгезії та процесах передачі сигналу і (екто-уферментативну активність. Далі, як екгофермент, СОЗ38 застосовує НАД" як субстрат для утворення циклічної АДф-рибози (цАДФР) і АДФР, а також нікотинаміду та аденіндинуклеотидфосфату нікотинової кислоти (НКАДФ). Показано, що цАДФР діє як вторинний месенджер для мобілізації Са" з ендоплазматичного ретикулума. Додатково до передачі сигналу через Са", передача сигналу за допомогою СОЗ38 відбувається через взаємодію (сго55--аЇК) з антиген-рецепторними комплексами на Т- та В-клітинах або іншими типами рецепторних комплексів, наприклад, МНС молекулами, і таким чином залучена в кілька клітинних відповідей, а також у переключення та секрецію Ідс1.In one embodiment, the peptide of the present invention does not act as a COZ8 agonist or cOrz38 antagonist. A COZ38 agonist is a molecule that activates one or more functions attributed to COZ8. Such functions may include receptor mediation in adhesion and signal transduction processes and (ecto-enzymatic activity. Further, as an exoenzyme, SOZ38 uses NAD as a substrate for the formation of cyclic ADP-ribose (cADDP) and ADDP, as well as nicotinamide and nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate ( It has been shown that cADGFR acts as a secondary messenger for the mobilization of Ca" from the endoplasmic reticulum. In addition to signal transmission through Ca", signal transmission by SOZ38 occurs through the interaction (сго55--аЙК) with antigen-receptor complexes on T- and B cells or other types of receptor complexes, for example, MHC molecules, and is thus involved in several cellular responses, as well as in Ids1 switching and secretion.

В одному втіленні, пептид згідно з даним винаходом не індукує значної проліферації РМВС.In one embodiment, the peptide of the present invention does not induce significant proliferation of PMVS.

В одному втіленні, пептид згідно з даним винаходом не індукує вивільнення значних рівнів ІІ -6.In one embodiment, the peptide of the present invention does not induce the release of significant levels of II-6.

В одному втіленні, пептид згідно з даним винаходом не індукує вивільнення детектованих рівнівIn one embodiment, the peptide of the present invention does not induce detectable levels of release

ІЕМ-у. Такі аналізи можна проводити, як описано в Аийзіеїо еї аї., Тізвуе апіїдеп5 56, 538-547 (2000).IEM-y. Such assays can be performed as described in Aiyzielio eyi ai., Tizvuue apiidep5 56, 538-547 (2000).

Анти-СО38 антитіла згідно з даним винаходом, а також інші СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна одержувати за допомогою рекомбінантної експресії в будь-якому придатному типі клітин або тварин.Anti-CO38 antibodies according to the present invention, as well as other COZ8BP according to the present invention can be obtained by recombinant expression in any suitable type of cells or animals.

Рекомбінантні СОЗ8ВР, наприклад, рекомбінантні антитіла, наприклад, рекомбінантні антитіла людини, включають СОЗ8ВР, наприклад, антитіла, наприклад, антитіла людини, які одержують, експресують, створюють або виділяють за допомогою рекомбінантних способів, наприклад, СОЗ8ВР, наприклад, антитіла, наприклад, антитіла людини, експресовані із застосуванням рекомбінантного експресуючого вектора, трансфекованого в клітину хазяїна.Recombinant COZ8BPs, e.g., recombinant antibodies, e.g., recombinant human antibodies, include COZ8BPs, e.g., antibodies, e.g., human antibodies that are obtained, expressed, generated, or secreted by recombinant methods, e.g., COZ8BPs, e.g., antibodies, e.g., antibodies human, expressed using a recombinant expressing vector transfected into the host cell.

Рекомбінантні антитіла, наприклад, рекомбінантні антитіла людини, також включають антитіла, виділені з рекомбінантних комбінаторних бібліотек антитіл людини, антитіла, виділені із тварин, наприклад, трансгенних тварин, або антитіла, одержані, експресовані, створені чи виділені будь-яким способом, що виключає сплайсинг послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують імуноглобулін людини, з іншими послідовностями нуклеїнових кислот, екзогенних для нуклеїнових кислот, які кодують імуноглобулін людини і генів, які кодують імуноглобулін людини.Recombinant antibodies, e.g., recombinant human antibodies, also include antibodies isolated from recombinant combinatorial human antibody libraries, antibodies isolated from animals, e.g., transgenic animals, or antibodies obtained, expressed, generated, or isolated by any method that excludes splicing sequences of nucleic acids that encode human immunoglobulin with other sequences of nucleic acids exogenous to nucleic acids that encode human immunoglobulin and genes that encode human immunoglobulin.

Рекомбінантні антитіла людини, звичайно, мають варіабельні та константні області, вироблені з послідовностей імуноглобуліну зародкових ліній людини. У певних втіленнях, однак, такі рекомбінантні антитіла людини піддають мутагенезу іп мйго (або у випадку застосування тварини, трансгенної для послідовностей імуноглобуліну людини, соматичного мутагенезу іп мімо) і таким чином амінокислотні послідовності Мн та Мі областей рекомбінантних антитіл можуть бути послідовностями, які будучи виробленими і спорідненими Ун та Мі послідовностям зародкових ліній людини, можуть не існувати в природі в репертуарах антитіл зародкових ліній людини іп мімо. Обидва типи антитіл людини надані даним винаходом.Recombinant human antibodies, of course, have variable and constant regions produced from human germline immunoglobulin sequences. In certain embodiments, however, such recombinant human antibodies are subjected to ip mygo mutagenesis (or in the case of an animal transgenic for human immunoglobulin sequences, somatic ip mimo mutagenesis) and thus the amino acid sequences of the Mn and Mi regions of the recombinant antibodies may be sequences that, when produced and related Un and Mi sequences of human germ lines, may not exist in nature in the repertoires of antibodies of human germ lines and mimo. Both types of human antibodies are provided by the present invention.

Придатні способи продукції рекомбінантних білків відомі в даній області, див., наприклад, затбргоокК апа Визвзеї| (едв.), Моїесшіаг сіопіпо, піка еайіоп, 2001, Соїд бргіпд Нагог І арогаїюгуSuitable methods for the production of recombinant proteins are known in the art, see, for example, zatbrgookK apa Vyzvzei| (edv.), Moiesshiag siopipo, pica eaiiop, 2001, Soid brgipd Nagog I arogaiyugu

Ргезв, Соїа ріпа Нагброг, Мем Могк, ОА.Rgezv, Soya turnip Nagbrog, Mem Mogk, OA.

Аналогічно, придатні способи продукції антитіл відомі в даній області та включають такі, що описані, наприклад, в Нагіоу» еї а!., Апіібодіев: А І абогаїгу Мапиаї, Соїа 5ргіпд Нагбог ГарогайгуSimilarly, suitable methods for the production of antibodies are known in the art and include those described, for example, in Nagiou»ei a!., Apiibodiev: A I abogaigu Mapiai, Soia 5rgipd Nagbog Garogaigu

Ргезв5, Соїй бргіпу Нагброг, М.У., (1988), Напом апа Іапе: Овіпуд Апііродіев: А І арогаюгу Мапиаї (Соїа 5рііпу Натог І арогаюгу Ргезз (1999)), 05 4376110 та А!йзиБбеї еї аї., еа5., Сигепі Ргоїосої5Rgezv5, Soii brgipu Nagbrog, M.U., (1988), Napom apa Iape: Ovipud Apiirodiev: A I arogayugu Mapiai (Soiya 5riipu Natog I arogayugu Rgezz (1999)), 05 4376110 and A!yzyBbeii ei ai., ea5. , Sigepi Rgoiosoi5

Коо) іп Моїесшіаг Віоіоду, Стеепе Рибіїєпіпуд Аввос, апа МУУйеу Іпіегосієпсе М.МУ., (1987, 1992).Koo) ip Moiesshiag Vioiodu, Steepe Rybiiepipud Avvos, apa MUUieu Ipiegosiepse M.MU., (1987, 1992).

Моноклональні антитіла можна одержувати за допомогою гібридомних способів, описаних уперше в КопПіег еї аї!., Макиге 256, 495 (1975), або за допомогою інших добре відомих пізніше розроблених способів (див., наприклад, Содіпд, Мопосіопаї! Апііродієв: Ргіпсіріе5 апа Ргасіїсе, рр.59-103 (Асадетіс Ргез5, 1986)). Гібридоми, корисні для продукції анти-СО38 антитіл згідно з даним винаходом, також надані даним винаходом. Такі гібридоми можна одержувати за допомогою хімічного злиття, електричного злиття або будь-якої іншої придатної техніки з будь- яким придатним типом мієломи, гетеромієломи, фобластоїдної клітини, плазмацитоми або інших їх еквівалентів, і будь-якого придатного типу клітини, експресуючої антитіла.Monoclonal antibodies can be produced by the hybridoma methods first described in Kopieg ei ai!., Makige 256, 495 (1975) or by other well-known methods developed later (see, for example, Sodipd, Moposiopai! Apiirodiev: Rgipsirie5 apa Rgasiise , pp. 59-103 (Asadetis Rgez5, 1986)). Hybridomas useful for the production of anti-CO38 antibodies according to the present invention are also provided by the present invention. Such hybridomas can be obtained by chemical fusion, electrical fusion, or any other suitable technique with any suitable type of myeloma, heteromyeloma, phoblastoid cell, plasmacytoma or other equivalents thereof, and any suitable antibody-expressing cell type.

Трансформовані безсмертні В-клітини можна також застосовувати для ефективної продукції антитіл згідно з даним винаходом і вони також надані даним винаходом. Такі клітини можна одержувати за допомогою стандартних технік, наприклад, трансформації вірусом Епштейн-Transformed immortal B-cells can also be used for effective production of antibodies according to the present invention and are also provided by the present invention. Such cells can be obtained using standard techniques, for example, transformation with Epstein-Barr virus

Барра або трансформуючого гена (див., наприклад, "Сопіїпиоизіу Ргоїїегайпд Нитап сеї І іпе5 зЗупіпезігіпд Апіїроду ої Ргедеїепттіпей 5ресіїйсйу, " гигамакі, М. В. еї аї., іп Мопосіопа! Апііродієв, ейд. ру Кеппеїї В.Н. еї а!., Рієпит Ргезв5, М.У. 1980, рр. 19-33). Так, стійкі та безперервні та/або безсмертні клітини та клітинні лінії, експресуючі анти-СО38 антитіла, є властивістю даного винаходу. Еукаріотичні та прокаріотичні клітини (наприклад, дріжджові клітини, безперервні та/або безсмертні лінії клітин ссавців (наприклад, клітинні лінії похідні лімфоїдних продукуючих антитіла клітин), рослинні клітини, клітини комах і бактеріальні клітини, наприклад, клітини Е. сої і т.д.), які включають нуклеїнові кислоти, що кодують СОЗ8ВР або фрагмент СОЗ8ВР, надані даним винаходом. Трансгенні тварини, наприклад, нелюдські примати, гризуни (наприклад, хом'ячки, морські свинки та щури, включаючи їх модифіковані штами, наприклад, миші з агаммаглобулінеміею швейцарського типу (ЗСІВ) та інші імунообтяжені штами тварин), собаки і т.д., що експресують анти-СОЗ38 антитіла людини, також надані даним винаходом.Barr or a transforming gene (see, for example, "Sopiipioisiu Rgoiiegaipd Nytap sei I ipe5 zZupipezigipd Apiirodu oi Rgedeiepttipei 5resiiisiu, " Gigamaki, M.V. ei ai., ip Moposiopa! Apiirodiev, eid. ru Keppeii V.N. ei a! ., Riepyt Rgezv5, M.U. 1980, pp. 19-33). Thus, stable and continuous and/or immortal cells and cell lines expressing anti-CO38 antibodies are a property of this invention. Eukaryotic and prokaryotic cells (e.g., yeast cells, continuous and/or immortalized mammalian cell lines (e.g., cell lines derived from lymphoid antibody-producing cells), plant cells, insect cells, and bacterial cells, e.g., E. soya cells, etc. ), which include nucleic acids encoding COZ8BP or a fragment of COZ8BP provided by the present invention. Transgenic animals, e.g., non-human primates, rodents (e.g., hamsters, guinea pigs, and rats, including modified strains thereof, e.g., mice with agammaglobulinemia of Swiss type (SSIV) and other immunocompromised animal strains), dogs, etc., expressing human anti-COZ38 antibodies are also provided by the present invention.

Рекомбінантні клітини, що включають екзогенні нуклеїнові кислоти, які кодують СОЗ8ВР, можна одержувати за допомогою будь-якої придатної техніки (наприклад, трансфекції/трансформації голої ДНК плазмідного вектора, вірусним вектором, вектором інвазивної бактеріальної клітини та інших векторів цілих клітин і т.д., що включають СОЗ8ВР- кодуючу послідовність (або послідовності), які доставляють у клітину за допомогою полегшеної преципітації з фосфатом кальцію, трансфекції, опосередкованого рецептором націлювання та бо трансфекції, балістичної доставки, електропорації, опосередкованої декстраном трансфекції,Recombinant cells comprising exogenous nucleic acids that encode SOZ8BP can be obtained by any suitable technique (eg, transfection/transformation of naked DNA of a plasmid vector, a viral vector, an invasive bacterial cell vector, and other whole cell vectors, etc. , comprising the COZ8BP coding sequence (or sequences) that are delivered into the cell by facilitated calcium phosphate precipitation, transfection, receptor-mediated targeting and bo transfection, ballistic delivery, electroporation, dextran-mediated transfection,

опосередкованої ліпосомами трансформації, злиття протопластів, прямої мікроін'єкції і т.д.).liposome-mediated transformation, fusion of protoplasts, direct microinjection, etc.).

Способи трансформації/трансфекції клітин добре відомі в даній області техніки (див., наприклад, Затьгоок еї аї., МоїІесшаг Сіопіпд: А ІГабогаогу Мапиаї, Соїа бргіпа Нагбог І абогаюгуMethods of cell transformation/transfection are well known in the art (see, for example, Zatgook ei ai., MoiIesshag Siopipd: A IGAbogaogu Mapiai, Soia brgipa Nagbog I abogayugu

Ргез5 (29 Еайоп, 1989 апа зга Едйіоп, 2001) та Р. А!зибеї еї а!., еад. Сштепі Ргоїосої5 іп МоїІесшагRgez5 (29 Eyop, 1989 apa zga Eyyop, 2001) and R. A!zibeii eyi a!., ead. Shtepi Rgoiosoi5 ip MoiIesshag

Віоіоду, Сгеепе Рибріїхпіпд апа Уміеу Іпіегосіепсе Мем ХогКк (1987). Такі рекомбінантні клітини є властивістю даного винаходу.Vioiodu, Sgeepe Rybriihpipd apa Umieu Ipiegosiepse Mem HogKk (1987). Such recombinant cells are a property of this invention.

Клітинні лінії, доступні як хазяї для експресії рекомбінантних білків, добре відомі в даній області та включають багато безсмертних клітинних ліній, доступних в Американській колекції типів культур (АТСС). Вони включають іпіег аа клітини яєчника китайського хом'яка (СНО),Cell lines available as hosts for expression of recombinant proteins are well known in the art and include many immortalized cell lines available in the American Type Culture Collection (ATCS). They include ipieg aa cells of the Chinese hamster ovary (CHO),

МБО, 5Р2 клітини, Нег а клітини, клітини нирок карликового (бабу) хом'яка (ВНК), клітини нирок мавпи (СО5), клітини печінковоклітинної карциноми людини (наприклад, Нер 02), А549 клітини та велику кількість інших клітинних ліній. Іншими клітинними лініями, які можна застосовувати, є лінії клітин комах, наприклад, 519 клітини. Коли нуклеїнові кислоти (або вектори, що містять нуклеїнові кислоти), які кодують білки, наприклад, СОЗ8ВР (включаючи анти-СОЗ38 антитіла), вводять у клітини хазяїна ссавця, білки, наприклад, СОЗ8ВР, можна продукувати за допомогою культивування клітин хазяїна протягом періоду часу, достатнього для експресії білка, наприклад, СОЗ8ВР, у клітинах хазяїна або для секреції білка, наприклад, СОЗ8ВР, у культуральне середовище, в якому ростуть клітини хазяїна. СОЗ8ВР можна одержати з культурального середовища із застосуванням стандартних способів очищення білка. СОЗ8ВР можна також виділити з лізатів клітин хазяїна, коли вони експресуються прямо без секреторного сигналу.MBO, 5P2 cells, Neg a cells, dwarf hamster kidney (DKN) cells, monkey kidney (CO5) cells, human hepatocellular carcinoma cells (eg, Ner 02), A549 cells, and a large number of other cell lines. Other cell lines that can be used are insect cell lines, such as 519 cells. When nucleic acids (or vectors containing nucleic acids) encoding proteins, e.g., COZ8BP (including anti-COZ38 antibodies) are introduced into cells of a mammalian host, the proteins, e.g., COZ8BP, can be produced by culturing the host cells for a period of time , sufficient to express a protein, e.g., COZ8BP, in host cells or to secrete a protein, e.g., COZ8BP, into the culture medium in which the host cells are growing. СОЗ8ВР can be obtained from the culture medium using standard protein purification methods. COZ8BP can also be isolated from host cell lysates when expressed directly without a secretory signal.

СОЗ8ВР, наприклад, анти-СО38 антитіла, можна також продукувати у бактеріальних клітинах та еукаріотичних одноклітинних організмах, наприклад, дріжджах. Бактеріальні клітини, що продукують СОЗ8ВР, наприклад, анти-СО38 антитіла, звичайно позбавлені нормального глікозилування, і бактеріальні клітини, що продукують анти-СОЗ38 антитіла, можуть у такий спосіб бути більш-менш дефіцитними в термінах АЮОСС функцій та інших аспектів імунної відповіді, зв'язаної з анти-СО38 антитілами, продукованими в клітинах ссавців та/або тварин (наприклад, залучення МК клітин). Дріжджові клітини, що продукують СОЗ8ВР, наприклад, анти-COZ8BP, such as anti-CO38 antibodies, can also be produced in bacterial cells and eukaryotic unicellular organisms, such as yeast. Bacterial cells producing COZ8BP, such as anti-CO38 antibodies, are usually devoid of normal glycosylation, and bacterial cells producing anti-COZ38 antibodies may thus be more or less deficient in terms of AUCS functions and other aspects of the immune response, including associated with anti-CO38 antibodies produced in mammalian and/or animal cells (for example, involvement of MK cells). Yeast cells producing SOZ8BP, for example, anti-

СОЗ38 антитіла, звичайно виявляють інші типи глікозилування, ніж у антитіл, продукованих уPOP38 antibodies usually show different types of glycosylation than antibodies produced in

Зо клітинах ссавців. Однак, способи продукції антитіл з ефективним глікозилуванням у дріжджах зараз розвиваються такими компаніями, як СіІусоїї, Іпс. (Герапоп, МН, ОСОБА). Див. також УМ 5. еї а!., Маї. Нем. Містобіої. З(2), 119-28(2005).From mammalian cells. However, methods of production of antibodies with effective glycosylation in yeast are now being developed by such companies as SiIusoi, Ips. (Herapop, MN, PERSON). See also UM 5. ei a!., Mai. German City dwellers Z(2), 119-28(2005).

Коли рекомбінантні експресуючі вектори, що кодують гени СОЗ8ВР (включаючи гени анти-When the recombinant expression vectors encoding the SOZ8BP genes (including the genes of anti-

СОрЗз8 антитіл), вводять у клітину хазяїна ссавця, СОЗ8ВР продукують шляхом культивації клітин хазяїна протягом періоду часу, достатнього для експресії СОЗ8ВР у клітинах хазяїна або для секреції антитіла в культуральне середовище, у якому клітини хазяїна ростуть. Очищення антитіл та інших СОЗ8ВР із клітинних культур, клітинних лізатів і тварин (наприклад, асцитної рідини трансгенної тварини, що продукує анти-СОЗ8 антитіла) можна здійснювати із застосуванням великого числа різних технік, відомих в цій області, включаючи, наприклад, очищення на імуноафінних колонках, осадження сульфатом, хроматофокусування, препаративний електрофорез (505-РАСЕ) і т.п.COr338 antibodies) are injected into a mammalian host cell, COZ8BP is produced by culturing the host cells for a period of time sufficient for the expression of COZ8BP in the host cells or for secretion of the antibody into the culture medium in which the host cells are growing. Purification of antibodies and other COZ8BPs from cell cultures, cell lysates, and animals (e.g., ascitic fluid of a transgenic animal producing anti-COZ8 antibodies) can be accomplished using a variety of techniques known in the art, including, for example, purification on immunoaffinity columns , sulfate precipitation, chromatofocusing, preparative electrophoresis (505-RACE), etc.

Моноклональні антитіла людини згідно з даним винаходом можна також продукувати за допомогою різноманітних технік, включаючи загальноприйняту методологію моноклональних антитіл, наприклад, стандартну техніку соматичної гібридизації клітин по Копіег апа Міївіеїп,Human monoclonal antibodies of the present invention can also be produced using a variety of techniques, including conventional monoclonal antibody methodology, for example, the standard somatic cell hybridization technique by Kopieg apa Miiwieip,

Маїшге 256, 495 (1975). Інші техніки одержання моноклональних антитіл також можна застосовувати, наприклад, техніки фагового дисплея із застосуванням бібліотек генів антитіл людини. В одному втіленні, анти-СОЗ8 антитіла згідно з даним винаходом, продукують із застосуванням гібридоми, утвореної в мишачій системі. Гібридомна продукція у миші є загальноприйнятою процедурою. Протоколи імунізації та техніки виділення імунізованих клітин селезінки для злиття відомі в даній області техніки. Партнери злиття (наприклад, клітини мієломи мишії) і процедура злиття також відомі.Maishge 256, 495 (1975). Other techniques for obtaining monoclonal antibodies can also be used, for example, phage display techniques using human antibody gene libraries. In one embodiment, the anti-COP8 antibodies of the present invention are produced using a hybridoma generated in a murine system. Hybridoma production in the mouse is a common procedure. Immunization protocols and techniques for isolating immunized spleen cells for fusion are known in the art. The fusion partners (eg, mouse myeloma cells) and the fusion procedure are also known.

Для одержання цілком людських моноклональних антитіл до СОЗ8 можна імунізувати трансгенних або трансхромосомних мишей, що містять гени імуноглобулінів людини (наприклад, НСо12, НСо7 або КМ мишей) збагаченим препаратом СОЗ38 антигену та/або клітин, що експресують СОЗ8, як описано, наприклад, в І опрегу еї аї., (1994), вирга, РівПпуліа еї аї., (1996), зирга, і ЛО 98/24884. Альтернативно, мишей можна імунізувати ДНК, що кодує СОЗ8 людини. Миші можуть бути у віці 6-16 тижнів під час першої інфузії. Наприклад, збагачений препарат (5-50 мкг) СО38 антигену можна застосовувати для імунізації НиМАБб мишей внутрішньоочеревинно. У того випадку, якщо імунізація із застосуванням очищеного або бо збагаченого препарату СОЗ3З8 антигену не приводить до вироблення антитіл, мишей можна також імунізувати клітинами, що експресують СО38, наприклад, клітинною лінією, для прискорення імунних відповідей.To obtain fully human monoclonal antibodies to COZ8, transgenic or transchromosomal mice containing human immunoglobulin genes (e.g., HCo12, HCo7, or mouse CM) can be immunized with an enriched preparation of COZ38 antigen and/or cells expressing COZ8, as described, for example, in I opregu ei ai., (1994), vyrga, RivPpulia ei ai., (1996), zirga, and LO 98/24884. Alternatively, mice can be immunized with DNA encoding human POP8. Mice can be 6-16 weeks old at the time of the first infusion. For example, an enriched preparation (5-50 μg) of CO38 antigen can be used for intraperitoneal immunization of NiMABb mice. In the event that immunization using a purified or enriched preparation of COZ3Z8 antigen does not lead to the production of antibodies, mice can also be immunized with cells expressing CO38, for example, a cell line, to accelerate immune responses.

Накопичувальний дослід з різними антигенами показав, що НиМАБ трансгенні миші відповідають найкраще, коли спочатку імунізовані внутрішньоочеревинно (і.р.) або підшкірно (5.6. експресуючими СОЗ38 клітинами в повному розчиннику Фрейнда (Ргеипа5 адіимап| з наступними і.р. імунізаціями через тиждень (усього до 10) СОЗ38 експресуючими клітинами вAn accumulation study with different antigens showed that NyMAB transgenic mice respond best when first immunized intraperitoneally (i.p.) or subcutaneously (5.6. with POP38-expressing cells in complete Freund's solvent (Rhepa5 adiimap| followed by i.v. immunizations one week later ( only up to 10) POP38 expressing cells in

РВ5. За імунною відповіддю можна стежити по ходу протоколу імунізації за допомогою зразків плазми, одержаних шляхом ретроорбітальної кровотечі. Плазму можна піддавати скринінгу за допомогою БАСЗ аналізу та мишей з достатнім титром анти-СО38 імуноглобуліну людини можна застосовувати для злиття. Мишей можна стимулювати внутрішньовенно СО38- експресуючими клітинами, наприклад, протягом 4 та З днів до забою та видалення печінки.RV5. The immune response can be monitored throughout the immunization protocol using plasma samples obtained by retroorbital bleeding. Plasma can be screened using the ALS assay and mice with sufficient anti-CO38 human immunoglobulin titers can be used for fusion. Mice can be stimulated intravenously with CO38-expressing cells, for example, for 4 and 3 days prior to slaughter and removal of the liver.

Для одержання гібридом, продукуючих моноклональні антитіла до СО38 людини, клітини селезінки та клітини лімфатичного вузла від імунізованих мишей можна ізолювати та з'єднувати з придатною безсмертною клітинною лінією, наприклад, лінією клітин мишачої мієломи.To obtain hybridomas producing monoclonal antibodies to human CO38, spleen cells and lymph node cells from immunized mice can be isolated and combined with a suitable immortal cell line, for example, a murine myeloma cell line.

Утворені гібридоми можна потім піддавати скринінгу на продукцію антиген-специфічних антитіл.The resulting hybridomas can then be screened for the production of antigen-specific antibodies.

Наприклад, суспензії одиночних клітин селезінкових лімфоцитів з імунізованих мишей можна з'єднати з 5Р2/0 несекретуючими клітинами мієломи миші (АТСС, СК. 1581) за допомогою 50 95For example, single cell suspensions of splenic lymphocytes from immunized mice can be combined with 5P2/0 non-secreting mouse myeloma cells (ATSS, SK. 1581) using 50 95

ПЕГ (мас/об.). Клітини можна розсадити при приблизно 1х107т на лунку на плоскодонний мікротитрувальний планшет з наступною інкубацією протягом двох тижнів у селективному середовищі, що містить, крім звичайних реагентів, 1095 сироватки клону плода, 5-10 95 оригінального фактора клонування гібридоми (СЕМ) і їх НАТ (5ідта). Через приблизно два тижні клітини можна культивувати в середовищі, у якому НАТ замінений на НТ. Окремі лунки можна потім піддавати скринінгу методом ЕГІЗА на антитіла, що містять каппа-легкий ланцюг людини, та методом ЕБАС5 аналізу, застосовуючи СОЗ8-експресуючі клітини, на СО38 специфічність. Як тільки відбувається великий ріст гібридоми, середовище можна перевіряти звичайно через 10-14 днів. Секретуючі антитіла гібридоми можна пересівати, знову піддавати скринінгу та за умови збереження позитивності відносно людських імуноглобулінів, можна субклонувати анти-СО38 моноклональні антитіла, щонайменше, двічі шляхом обмеженого розведення. Стійкі субклони можна потім культивувати іп мйто для одержання антитіла вPEG (w/v). Cells can be plated at approximately 1x107t per well on a flat-bottom microtitre plate followed by incubation for two weeks in a selective medium containing, in addition to the usual reagents, 1095 fetal clone serum, 5-10 95 original hybridoma cloning factor (CEM) and their NAT (5idta ). After about two weeks, the cells can be cultured in a medium in which NAT is replaced by NT. Individual wells can then be screened by EHIZA for antibodies containing human kappa light chain and by EBAS5 analysis using COZ8-expressing cells for CO38 specificity. As soon as there is a large growth of the hybridoma, the medium can be checked usually after 10-14 days. The secreting hybridoma antibodies can be recultured, rescreened and, provided positivity remains for human immunoglobulins, anti-CO38 monoclonal antibodies can be subcloned at least twice by limited dilution. Resistant subclones can then be cultured in vitro to produce antibodies

Зо середовищі культури тканини для характеризації.From tissue culture medium for characterization.

Антитіла людини згідно з даним винаходом можна також продукувати у клітині хазяїна трансфектоми, застосовуючи, наприклад, комбінацію рекомбінантних технік ДНК і способів трансфекції генів, як добре відомо в даній області, див., наприклад, Моїтізоп, 5., Зсіепсе 229, 1202 (1985).Human antibodies of the present invention can also be produced in a transfectome host cell using, for example, a combination of recombinant DNA techniques and gene transfection techniques as is well known in the art, see, e.g., Moitisop, 5., Zsiepse 229, 1202 (1985 ).

Наприклад, для експресії антитіл або фрагментів антитіл ДНК, що кодують частини або повнорозмірні важкий та легкий ланцюги, можна одержувати за допомогою стандартних технік молекулярної біології (наприклад, ПЛР ампліфікації, спрямованого мутагенезу) і можна вставляти в експресуючі вектори, так що гени виявляються оперативно зв'язаними з послідовностями контролю транскрипції та трансляції. У цього контексті термін "оперативно зв'язаний" означає, що ген антитіла легований у вектор так, що послідовності транскрипційного та трансляційного контролю вектора виконують функції, для яких вони наперед введені, у регуляції транскрипції та трансляції гена антитіла. Експресуючий вектор і послідовності контролю експресії вибирають так, щоб вони були сумісні із клітиною хазяїна, застосовуваною для експресії. Ген легкого ланцюга антитіла та ген важкого ланцюга антитіла можна поміщати в роздільні вектори або, більш типово, обидва гени поміщають у той самий експресуючий вектор.For example, for the expression of antibodies or antibody fragments, DNA encoding parts or full-length heavy and light chains can be obtained using standard molecular biology techniques (eg, PCR amplification, site-directed mutagenesis) and can be inserted into expression vectors so that the genes are readily detected by associated with transcription and translation control sequences. In this context, the term "operably linked" means that the antibody gene is doped into the vector so that the transcriptional and translational control sequences of the vector perform the functions for which they are pre-introduced in the regulation of transcription and translation of the antibody gene. The expression vector and expression control sequences are chosen to be compatible with the host cell used for expression. The antibody light chain gene and the antibody heavy chain gene can be placed in separate vectors or, more typically, both genes are placed in the same expression vector.

Гени антитіл можна вставляти в експресуючий вектор за допомогою стандартних способів (наприклад, легування комплементарних ділянок рестрикції у фрагмент гена антитіла та вектор або легування тупих кінців, якщо немає ділянок рестрикції). Варіабельні області легкого та важкого ланцюгів антитіл, описані тут, можна застосовувати для створення повнорозмірних генів антитіл будь-якого ізотипу антитіла за допомогою вставки їх в експресуючі вектори, які вже кодують константний область важкого ланцюга та константний область легкого ланцюга потрібного ізотипу, наприклад, Мн сегмент оперативно зв'язаний з Сн сегментом(ами) усередині вектора і Мі сегмент оперативно зв'язаний з Сі сегментом усередині вектора. Додатково або альтернативно, рекомбінантний експресуючий вектор може кодувати сигнальний пептид, що полегшує секрецію ланцюга антитіла із клітини хазяїна. Ген ланцюга антитіла можна клонувати у вектор, так що сигнальний пептид зв'язаний в рамці зчитування з аміно-кінцем гена ланцюга антитіла. Сигнальний пептид може бути сигнальним пептидом імуноглобуліну або гетерологічним сигнальним пептидом (наприклад, сигнальний пептид з неімуноглобулінового білка).Antibody genes can be inserted into an expression vector using standard methods (eg, ligation of complementary restriction sites into the antibody gene fragment and vector or ligation of blunt ends if there are no restriction sites). The antibody light and heavy chain variable regions described herein can be used to generate full-length antibody genes of any antibody isotype by inserting them into expression vectors that already encode the heavy chain constant region and the light chain constant region of the desired isotype, e.g., the Mn segment operably connected to the Сn segment(s) within the vector and the Mi segment operably connected to the І segment within the vector. Additionally or alternatively, the recombinant expression vector may encode a signal peptide that facilitates secretion of the antibody chain from the host cell. The antibody chain gene can be cloned into a vector so that the signal peptide is linked in frame to the amino terminus of the antibody chain gene. The signal peptide can be an immunoglobulin signal peptide or a heterologous signal peptide (eg, a signal peptide from a non-immunoglobulin protein).

На додаток до генів ланцюгів антитіла, рекомбінантні експресуючі вектори згідно з даним винаходом несуть регуляторні послідовності, які дозволяють контролювати експресію генів ланцюгів антитіла в клітині хазяїна.In addition to the antibody chain genes, the recombinant expression vectors of the present invention carry regulatory sequences that allow controlling the expression of the antibody chain genes in the host cell.

На додаток до генів ланцюгів антитіла та регуляторних послідовностей, рекомбінантні експресуючі вектори згідно з даним винаходом можуть нести додаткові послідовності, наприклад, послідовності, що регулюють реплікацію вектора в клітині хазяїна (наприклад, початок реплікації) і гени маркерів відбору. Гени маркерів відбору полегшують селекцію клітин хазяїна, до якого потрапив вектор (див., наприклад, 5 4399216, 005 4634665 та 05 5179017).In addition to antibody chain genes and regulatory sequences, recombinant expression vectors of the present invention may carry additional sequences, for example, sequences that regulate vector replication in the host cell (eg, replication initiation) and selectable marker genes. Selection marker genes facilitate the selection of host cells into which the vector has entered (see, for example, 5 4399216, 005 4634665 and 05 5179017).

Наприклад, звичайно гени маркерів відбору надають стійкість до ліків, наприклад, 418, гігроміцину або метотрексату, у клітини хазяїна, в яку ввели вектор. Приклади генів маркерів відбору включають ген дигідрофолат-редуктази (ОНЕЕ) (для застосування в апіт-клітині хазяїна при селекції за допомогою метотриксату/ампліфікації) і ген нео (пес) (для селекції з (3418).For example, usually selectable marker genes confer resistance to drugs, such as 418, hygromycin or methotrexate, in host cells into which the vector has been introduced. Examples of selectable marker genes include the dihydrofolate reductase (ONEE) gene (for use in the host apit cell in methotrexate selection/amplification) and the neo (pes) gene (for selection from (3418).

Для експресії легкого та важкого ланцюгів експресуючі вектори, що кодують важкий та легкий ланцюги, трансфекують у клітину хазяїна за допомогою стандартних технік. Клітини хазяїна можуть бути прокаріотичними або еукаріотичними клітинами хазяїна, наприклад, клітинами ссавців. Наприклад, антиген-зв'язуючі фрагменти можна експресувати у прокаріотичних клітинах хазяїна та повнорозмірні антитіла можна експресувати в еукаріотичних клітинах хазяїна.To express the light and heavy chains, expression vectors encoding the heavy and light chains are transfected into a host cell using standard techniques. The host cells can be prokaryotic or eukaryotic host cells, for example, mammalian cells. For example, antigen-binding fragments can be expressed in prokaryotic host cells and full-length antibodies can be expressed in eukaryotic host cells.

В одному втіленні антитіла експресують в еукаріотичних клітинах хазяїна, наприклад, клітинах ссавців. Приклади клітин хазяїна ссавця для експресії рекомбінантних антитіл згідно з даним винаходом включають клітини СНО (включаючи апі-СНО клітини, описані в Огіацб апаIn one embodiment, the antibodies are expressed in eukaryotic cells of the host, for example, mammalian cells. Examples of mammalian host cells for expression of recombinant antibodies of the present invention include CHO cells (including api-CHO cells described in

СНназіп, РМА5 ОА 77, 4216-4220 (1980), застосовувані з маркером селекції ОНЕК, наприклад, як описано в К.). Каштап апа РА ЗпПагр, Мої. Віої. 159, 601-621 (1982)), М5/О клітини мієломи,CHnazip, РМА5 OA 77, 4216-4220 (1980), used with the ONEK selection marker, for example, as described in K.). Kashtap apa RA ZpPagr, Moi. Vioi 159, 601-621 (1982)), M5/O myeloma cells,

СО5 клітини, НЕК293 клітини та 5Р2.0 клітини. Зокрема, для застосування з М5/О клітинами мієломи іншим прикладом системи експресії є система експресії гена 5 (глутамінсинтетази), як розкрито в ММО87/04462, ММО89/01036 та ЕРЗ338841.CO5 cells, NEK293 cells and 5P2.0 cells. In particular, for use with M5/O myeloma cells, another example of an expression system is the 5 (glutamine synthetase) gene expression system as disclosed in MMO87/04462, MMO89/01036 and EPZ338841.

Гени СОЗ8ВР можна експресувати в інших системах експресії, включаючи прокаріотичні клітини, наприклад, мікроорганізми, наприклад, Е. соїї, для продукції 5сЕм антитіл, водорості, а також клітини комах. Далі, СОЗ8ВР можна продукувати у трансгенних тварин, відмінних відCOZ8BP genes can be expressed in other expression systems, including prokaryotic cells, for example, microorganisms, for example, E. soy, for the production of 5cEm antibodies, algae, as well as insect cells. Further, SOZ8BP can be produced in transgenic animals other than

Зо людини, наприклад, у молоці овець або кроликів або в курячих яйцях, або в трансгенних рослинах. Див., наприклад, Мегта, К. еї аї., У. Іттипої. Мей. 216, 165-181 (1998), РоПоск еї аї.,From humans, for example, in the milk of sheep or rabbits, or in chicken eggs, or in transgenic plants. See, for example, Meghta, K. ei ai., U. Ittipoi. May 216, 165-181 (1998), RoPosk et al.,

У. Іттипої. Ме. 23., 147-157 (1999) та Різопег, К. еї а!., Віої. Спет. 380, 825-839 (1999).U. Ittipoi. Me. 23., 147-157 (1999) and Rizopeg, K. ei a!., Vioi. Spent 380, 825-839 (1999).

Біспецифічні та мультиспецифічні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна одержувати за допомогою хімічних способів (див., наприклад, О.М. Кгап; еї аІ., РМА5 О5А 78, 5807 (1981)), технік "полідоми" (див. 05 4474893) або технік рекомбінантних ДНК.Bispecific and multispecific SOZ8VR according to this invention can be obtained using chemical methods (see, for example, O.M. Kgap; ей аи., РМА5 О5А 78, 5807 (1981)), the "polydomy" technique (see 05 4474893) or recombinant DNA technology.

Біспецифічні антитіла згідно з даним винаходом можна одержувати за допомогою різноманітних відомих способів, включаючи злиття гібридом або зв'язування Рар' фрагментів (див., наприклад, Зоподбімііаі 5 Гасптапп, Сііп. Ехр. Іттипої. 79, 315-321 (1990) і КоегеїІпу еї аї.,Bispecific antibodies of the present invention can be prepared by a variety of known methods, including hybridoma fusion or ligation of Rar' fragments (see, e.g., Zopodbimiii 5 Gasptapp, Siip. Exhr. Ittipoi. 79, 315-321 (1990) and Kogeilipu hey ay.,

У. Іттипої. М8, 1547-1553 (1992)). Традиційно, рекомбінантна продукція біспецифічних антитіл основана на коекспресії двох пар важкого ланцюга та легкого ланцюга імуноглобуліну, де у двох важких ланцюгів різні специфічності (див., наприклад, Міїбєїеіп апа СицейПйо, Маїшге 305, 537 (1983)). Через випадкове об'єднання важких і легких ланцюгів такі гібридоми (квадроми) потенційно продукують суміш із 10 різних молекул антитіл, серед яких тільки одна має правильну біспецифічну структуру. Подібні процедури розкриті в УМО 93/08829 та ТгаипескКег еї аІ.,, ЕМВО 4). 10, 3655 (1991).U. Ittipoi. M8, 1547-1553 (1992)). Traditionally, recombinant production of bispecific antibodies is based on the co-expression of two pairs of immunoglobulin heavy chain and light chain, where the two heavy chains have different specificities (see, e.g., Miibieieip apa SiseiPyo, Maishge 305, 537 (1983)). Due to the random combination of heavy and light chains, such hybridomas (quadroms) potentially produce a mixture of 10 different antibody molecules, among which only one has the correct bispecific structure. Similar procedures are disclosed in UMO 93/08829 and TgaipeskKeg ei aI.,, EMVO 4). 10, 3655 (1991).

Відповідно до іншого підходу, варіабельні домени антитіл з потрібними специфічностями зв'язування (ділянками, що комбінують антитіло та антиген) з'єднані з послідовностями константних областей імуноглобуліну за допомогою рекомбінантних або хімічних способів.According to another approach, the variable domains of antibodies with the desired specificities of binding (sites combining antibody and antigen) are connected to the sequences of constant regions of immunoglobulin using recombinant or chemical methods.

Послідовність варіабельного домену, звичайно, з'єднана з константним доменом важкого ланцюга імуноглобуліну, що включає, щонайменше, частину зв'язки, Сн2 та Сн3 області.The sequence of the variable domain is, of course, connected to the constant domain of the immunoglobulin heavy chain, which includes at least part of the linkage, Cn2 and Cn3 regions.

Звичайно також, перший константний область важкого ланцюга (Сн1), який містить ділянку, необхідну для зв'язування легкого ланцюга, також є присутнім, щонайменше, в одному складеного пептиді. У більш специфічному прикладі підходу такого типу, продукується біспецифічне антитіло, яке включає гібрид важкого ланцюга імуноглобуліну з першою специфічністю зв'язування на одній руці та гібридну пару з важкого ланцюга та легкого ланцюга імуноглобуліну (що надає другу специфічність зв'язування) на іншій руці. Така асиметрична структура може полегшити відділення потрібної біслецифічної сполуки від небажаних комбінацій ланцюгів імуноглобуліну (наприклад, як описано в УМО 94/04690). Більш детальний опис одержання біспецифічних антитіл див., наприклад, в бигезі еї аїЇ., Мешод5 іп Епгутоіоду 60 121, 210 (1986).Of course, the first constant region of the heavy chain (Cn1), which contains the area necessary for the binding of the light chain, is also present in at least one folded peptide. In a more specific example of this type of approach, a bispecific antibody is produced that includes an immunoglobulin heavy chain hybrid with a first binding specificity on one arm and an immunoglobulin heavy chain/light chain hybrid pair (conferring a second binding specificity) on the other arm. Such an asymmetric structure may facilitate the separation of the desired bislecific compound from undesired combinations of immunoglobulin chains (eg, as described in UMO 94/04690). For a more detailed description of the preparation of bispecific antibodies, see, for example, in Bighesi et al., Meshod5 ip Epgutoiodu 60 121, 210 (1986).

При іншому підході, поверхня контакту між парою молекул антитіл може бути побудована так, щоб зробити найбільшим відсоток гетеродимерів, присутніх у культурі рекомбінантної клітини, щоб утворити популяцію молекул біспецифічних антитіл. Звичайно, така поверхня контакту включає, щонайменше, частину Сн3 домену константної області антитіла. Звичайно, таким способом один чи більше амінокислотних залишків з меншим розміром бічного ланцюга з поверхні контакту молекули першого антитіла заміщають амінокислотним залишком з бічним ланцюгом більшого розміру (наприклад, тирозином або триптофаном). Відповідні "пази" ідентичні або близькі по розміру великим бічним ланцюгам амінокислотних залишків, створюються на поверхні контакту другої молекули антитіла шляхом заміщення амінокислотних залишків з більшими бічними ланцюгами на менші (наприклад, аланін або треонін). Це може надати механізм збільшення виходу гетеродимерів відносно інших непотрібних кінцевих продуктів, наприклад, гомодимерів.In another approach, the contact surface between a pair of antibody molecules can be engineered to maximize the percentage of heterodimers present in the recombinant cell culture to form a population of bispecific antibody molecules. Of course, such a contact surface includes at least part of the Сn3 domain of the constant region of the antibody. Of course, in this way, one or more amino acid residues with a smaller side chain size from the contact surface of the first antibody molecule are replaced by an amino acid residue with a larger side chain (for example, tyrosine or tryptophan). Corresponding "grooves" identical or similar in size to large side chains of amino acid residues are created on the contact surface of the second antibody molecule by substituting amino acid residues with larger side chains for smaller ones (for example, alanine or threonine). This may provide a mechanism to increase the yield of heterodimers relative to other unwanted end products, such as homodimers.

Біспецифічні та мультспецифічні молекули згідно з даним винаходом можна одержувати за допомогою кон'югації специфічностей зв'язування компонентів, наприклад, анти-Ес та анти-Bispecific and multispecific molecules according to the present invention can be obtained by conjugating the binding specificities of components, for example, anti-Es and anti-

СО38 специфічностей зв'язування, за допомогою способів, відомих в даній області. Наприклад, кожну специфічність зв'язування біспецифічних та мультиспецифічних молекул можна одержати окремо і потім кон'югувати одну з одною. Коли специфічності зв'язування здійснюються білками або пептидами, можна застосовувати велику розмаїтість сполучних або зшивальних агентів для ковалентної кон'югації. Приклади зшивальних агентів включають білокСО38 binding specificities, using methods known in this area. For example, each binding specificity of bispecific and multispecific molecules can be obtained separately and then conjugated to each other. When binding specificities are carried out by proteins or peptides, a wide variety of binding or cross-linking agents can be used for covalent conjugation. Examples of crosslinking agents include protein

А, карбодіїмід, М-сукцинімідил-5-ацетилтіоацетат (ЗАТА), 5,5'-дитіобіс(2-наторбензойна кислота) (ОТМВ), о-фенілендималеїмід (ОРОМ), М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонат (ЗРОР) їі сульфосукцинімідил-4-(М-малеімідометил)циклогексан-1-карбоксилат (зийо-5МСОС), див., наприклад, Кагроу5кКу еї аї., У. Ехр. Мед. 160, 1686 (1984), Гіц, М. А. еї аіІ., РМАБ5 О5А 82, 8648 (1985). В іншому прикладі, Вгеппап еї аї., Зсіепсе 229, 81 (1985) описують спосіб, де інтактні антитіла протеолітично розщеплюють із одержанням Е(аб)г2 фрагментів. Ці фрагменти відновлюють у присутності комплексуючого дитіол агента арсеніту натрію, щоб стабілізувати сусідні дитіоли та запобігти утворенню внутрішньомолекулярних дисульфідних зв'язків.A, carbodiimide, M-succinimidyl-5-acetylthioacetate (ZATA), 5,5'-dithiobis(2-natorbenzoic acid) (OTMV), o-phenylenedimaleimide (OROM), M-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate (ZPOP) and sulfosuccinimidyl-4-(M-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate (Zyio-5MCOS), see, for example, Kagrow5kKu ei ai., U. Exhr. Honey. 160, 1686 (1984), Hitz, M. A. ei aiI., RMAB5 O5A 82, 8648 (1985). In another example, Vgeppap et al., Zsiepse 229, 81 (1985) describe a method where intact antibodies are proteolytically cleaved to obtain E(ab)g2 fragments. These fragments are reduced in the presence of the dithiol complexing agent sodium arsenite to stabilize neighboring dithiols and prevent the formation of intramolecular disulfide bonds.

Одержані Рар' фрагменти можна потім перетворити на тіонітробензоатні (ТМВ) похідні. Одне зThe obtained Rar' fragments can then be converted into thionitrobenzoate (TMB) derivatives. One of

БабБ-тМВ похідних можна потім перетворити знову на Рар'їол шляхом відновленняBabB-tMV derivatives can then be converted back to Rariol by reduction

Зо меркаптоетиламіном і змішати з еквімолярною кількістю іншого Рар-ТМВ похідного з утворенням біспецифічного антитіла. Зпаїіару еї аї., У. Ехр. Мей. 175, 217-225 (1992) описує продукцію молекули цілком гуманізованого біспецифічного антитіла Е(ар)» відповідно до подібного способу. Інші способи включають описані в Рашиз (Вейгіпд Іп5. МІН. Мо. 78, 118-132 (1985)) та СіІеппіє еї аї.,». Іттипої. 139, 2367-2375 (1987). Прикладами кон'югуючих агентів єWith mercaptoethylamine and mix with an equimolar amount of another Par-TMV derivative to form a bispecific antibody. Zpaiiaru ei ai., U. Ehr. May 175, 217-225 (1992) describes the production of a molecule of fully humanized bispecific antibody E(ar)" according to a similar method. Other methods include those described in Rashiz (Weigipd Ip5. MIN. Mo. 78, 118-132 (1985)) and SiIepiye ei ai.,». And so on. 139, 2367-2375 (1987). Examples of conjugating agents are

ЗАТА та 5йио-5МСС, обидва доступні від Ріегсе Спетісаї Со. (Коскога, І).ZATA and 5yio-5MSS, both available from Riegse Spetisai So. (Koskoga, I).

Коли специфічності зв'язування виявляються антитілами, вони можуть бути кон'юговані через сульфгідрильні групи С-кінцевих областей зв'язування на двох важких ланцюгах. В одному втіленні, область зв'язування модифікований до кон'югації, щоб містити непарне число сульфгідрильних груп, наприклад, одну.When binding specificities are detected by antibodies, they can be conjugated through the sulfhydryl groups of the C-terminal binding regions on the two heavy chains. In one embodiment, the binding region is modified prior to conjugation to contain an odd number of sulfhydryl groups, such as one.

Альтернативно, обидві специфічності зв'язування можуть кодуватися тим самим вектором і експресуватися та збиратися в одній і тій саме клітині хазяїна. Цей спосіб є особливо застосовним, коли біспецифічні та мультипецифичні молекули є тАрхтАб, тАрхРаБ,Alternatively, both binding specificities can be encoded by the same vector and expressed and assembled in the same host cell. This method is especially applicable when the bispecific and multispecific molecules are tArkhAb, tArkhRaB,

ЕархЕ(абв)»2 або лігандхРар складеним білком. Біспецифічні та мультипецифичні молекули згідно 3 даним винаходом можуть бути одноланцюговою молекулою, наприклад, одноланцюговим біспецифічним антитілом, одноланцюговою біспецифічною молекулою, що включає одне одноланцюгове антитіло і зв'язуючий детермінант, або одноланцюговою біспецифічною молекулою, що включає два зв'язуючі детермінанти. Біспецифічні та мультипецифичні молекули можуть також бути одноланцюговими молекулами або можуть включати, щонайменше, дві одноланцюгові молекули. Способи одержання бі- і мультиспецифічних молекул описані, наприклад, в 5 5260203, 005 5455030, 005 4881175, 05 5132405, 05 5091513, 05 5476786, 05 5013653, 05 5258498 та 5 5482858.EarhE(abv)»2 or ligandhRar folded protein. Bispecific and multispecific molecules according to 3 of the present invention can be a single-chain molecule, for example, a single-chain bispecific antibody, a single-chain bispecific molecule including one single-chain antibody and a binding determinant, or a single-chain bispecific molecule including two binding determinants. Bispecific and multispecific molecules may also be single-chain molecules or may include at least two single-chain molecules. Methods of obtaining bi- and multispecific molecules are described, for example, in 5 5260203, 005 5455030, 005 4881175, 05 5132405, 05 5091513, 05 5476786, 05 5013653, 05 5258498 and 5 5482858.

Різні техніки одержання та виділення біспецифічних фрагментів антитіл прямо з культур рекомбінантних клітин також описані. Наприклад, біспецифічні антитіла можна одержувати за допомогою лейцинової застібки (див., наприклад, КобзіеїІпу еї аї., 9. Іттипої. 148(5), 1547-1553 (1992)). Пептиди лейцинової застібки з Ро5 та дип білків зв'язують із Гар' частинами двох різних антитіл шляхом з'єднання генів і утворені гомодимери антитіл відновлюють у області зв'язування з утворенням мономерів, які можна знову окислити з утворенням гетеродимерів антитіла. Технологія "діатела", описана Ноїїпдег еї аіІ., РМАБ ОСОБА 90, 6444-6448 (1993), також надає альтернативний механізм одержання біспецифічних фрагментів антитіла. Інша стратегія одержання біспецифічних фрагментів антитіла із застосуванням одноланцюгових Ем (5Ем) димерів також описана. Див., наприклад, Сгибегегзаї!., у. Іттипої. 152, 5368 (1994).Various techniques for obtaining and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell cultures are also described. For example, bispecific antibodies can be obtained with the help of a leucine clasp (see, for example, KobzieiIpu ei ai., 9. Ittypoi. 148(5), 1547-1553 (1992)). Peptides of the leucine clasp from Po5 and dip proteins are linked to the Har' parts of two different antibodies by gene fusion, and the formed antibody homodimers are restored in the binding region to form monomers that can be oxidized again to form antibody heterodimers. The "diatel" technology, described by Noiipdeg ei ai., RMAB OSOBA 90, 6444-6448 (1993), also provides an alternative mechanism for obtaining bispecific antibody fragments. Another strategy for obtaining bispecific antibody fragments using single-chain Em (5Em) dimers is also described. See, for example, Sgybegegzai!., u. And so on. 152, 5368 (1994).

До того ж, біспецифічні антитіла можна утворювати як "діатела" (Ноїїїдег еї аіІ., РМАЗ ОА, 90, 6444-6448 (1993)) або "Янусини" ("Уапивіп5") (Ттаипескег еї аІ., ЕМВО 4). 10, 3655-3659 (1991) і ТсаипескКег еї аї., Іпї У Сапсег Зиррі 7, 51-52 (1992)). Біспецифічні антитіла за визначенням не існують у формі фрагментів, що мають одиночну ділянкою зв'язування (наприклад, Раб, Рар' таIn addition, bispecific antibodies can be formed as "diatels" (Noiiideg ei aI., RMAZ OA, 90, 6444-6448 (1993)) or "Janusins" ("Uapivip5") (Ttaipeskeg ei aI., EMVO 4). 10, 3655-3659 (1991) and TsaipeskKeg ei ai., Ipi U Sapseg Zirri 7, 51-52 (1992)). Bispecific antibodies by definition do not exist in the form of fragments with a single binding site (eg, Rab, Rar' and

Ем фрагменти, які також надані даним винаходом).Em fragments, which are also provided by the present invention).

Зв'язування біспецифічних та мультиспецифічних молекул з їхніми специфічними мішенями можна підтверджувати за допомогою зв'язаного з ферментом імуносорбентного аналізу (ЕГІ5А), радіоїмуноаналізу (КІА), ЕАС5З аналізу, біоаналізу (наприклад, інгібування росту) або блотингу (УУезієт Віої Авзау). Кожний із цих аналітичних підходів, в основному, детектує присутність шуканих комплексів білок-антитіло за допомогою реагенту мічення (наприклад, антитіла), специфічного для шуканого комплексу. Наприклад, комплекси ЕсК-антитіло можна детектувати за допомогою, наприклад, зв'язаного з ферментом антитіла або фрагмента антитіла, що впізнає та специфічно зв'язується з комплексами ЕсК-антитіло. Альтернативно, комплекси можна детектувати за допомогою великого числа інших імуноаналізів. Наприклад, антитіло можна радіоактивно помітити та застосовувати в радіоіїмуноаналізі (КІА) (див., наприклад, УуУеїпігацб,The binding of bispecific and multispecific molecules to their specific targets can be confirmed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), EAS5Z assay, bioassay (eg, growth inhibition), or blotting (Uiesiet Vioi Avsau). Each of these analytical approaches basically detects the presence of the desired protein-antibody complexes using a labeling reagent (eg, an antibody) specific for the desired complex. For example, ESK-antibody complexes can be detected using, for example, an enzyme-linked antibody or antibody fragment that recognizes and specifically binds to ESK-antibody complexes. Alternatively, the complexes can be detected using a large number of other immunoassays. For example, the antibody can be radioactively labeled and used in a radioimmunoassay (RIA) (see, e.g.,

В., Ргіпсіріє5 ої Вадіоїттипоаззау5, бЗемепі!п Тгаіпіпд Сошйгзе оп Вадіоїїдапа Аззау Тесппіднев,V., Rgipsirie5 oi Vadioittipoazzau5, bZemepi!p Tgaipipd Soshigze op Vadioiidapa Azzau Tesppidnev,

Те Епдосгіпе Зосієїу, Магсй, 1986). Радіоактивний ізотоп можна детектувати такими способами, як у-лічильник або сцинтиляційний лічильник або ауторадіографія.Te Epdosgipe Zosieiu, Magsy, 1986). The radioactive isotope can be detected by methods such as y-counter or scintillation counter or autoradiography.

Як стверджувалося вище, антитіла взаємодіють із мішенями антигенами спочатку через амінокислотні залишки, що перебувають у шести областях важких і легких ланцюгів, які визначають комплементарність (СОК). Даний винахід пропонує антитіла, що мають СОК області, ідентичні або похідні СОМК областей -003 або -005, або -024. Такі антитіла можна одержувати шляхом конструкції експресуючих векторів, що включають послідовності СОК з -003 або -005, або -024, поміщені в каркасні послідовності з різних антитіл з різними властивостями.As stated above, antibodies interact with target antigens first through amino acid residues located in the six complementarity-determining regions (CDLs) of the heavy and light chains. The present invention provides antibodies having a SOK region identical to or derived from SOMK regions -003 or -005 or -024. Such antibodies can be obtained by the construction of expressing vectors, which include sequences of SOC from -003 or -005, or -024, placed in framework sequences from different antibodies with different properties.

Такі каркасні послідовності можна одержати із загальнодоступних баз даних, що включають послідовності генів антитіл зародкових ліній. Ці послідовності зародкових ліній відрізняються від зрілих послідовностей генів антитіл, тому що вони не включають повністю зібрані варіабельні гени, які утворюються за допомогою М(0) з'єднання під час дозрівання В-клітин. Послідовності зародкових ліній також відрізняються від послідовностей вторинного набору антитіла високої спорідненості, які містять мутації по всьому варіабельному гену, але звичайно розташовані кластерами в СОК. Наприклад, соматичні мутації є відносно рідкими в аміно-кінцевому відділі каркасної області 1 та в карбоксикінцевому відділі каркасної області 4. З цієї причини не потрібно одержувати всю послідовність ДНК даного антитіла, щоб відтворити інтактне рекомбінантне антитіло, яке має зв'язуючі властивості, подібні до вихідного антитіла (див. УМО 99/45962). Часткові послідовності важкого та легкого ланцюга, що охоплюють СОМ. області, звичайно достатні для цієї мети. Неповна послідовність застосовується для визначення того, які варіабельні та сполучні сегменти гена зародкової лінії вносять вклад у варіабельні гени рекомбінантного антитіла. Послідовності зародкової лінії потім застосовуються для заповнення пустуючих ділянок у варіабельних областях. Лідерні послідовності важкого та легкого ланцюга відщеплюються при дозріванні білка та не роблять внеску у властивості кінцевого антитіла. Щоб додати відсутні послідовності, клоновані послідовності КДНК можна комбінувати із синтетичними олігонуклеотидами шляхом лігування або ПЛР ампліфікації. Альтернативно, весь варіабельний область можна синтезувати у вигляді набору коротких перекривних олігонуклеотидів і комбінувати за допомогою ПЛР ампліфікації для створення клону цілком синтетичного варіабельної області. Цей процес відрізняється певними перевагами, наприклад, видаленням або введенням окремих ділянок рестрикції, або оптимізацією окремих кодонів.Such framework sequences can be obtained from publicly available databases that include germline antibody gene sequences. These germline sequences differ from mature antibody gene sequences because they do not include fully assembled variable genes that are formed by M(0) splicing during B-cell maturation. The germline sequences also differ from the sequences of the high-affinity secondary set of antibodies, which contain mutations throughout the variable gene, but are usually clustered in SOC. For example, somatic mutations are relatively rare in the amino-terminal region of framework region 1 and in the carboxy-terminal region of framework region 4. For this reason, it is not necessary to obtain the entire DNA sequence of a given antibody to generate an intact recombinant antibody that has binding properties similar to original antibody (see UMO 99/45962). Partial heavy and light chain sequences spanning the COM. areas, of course, are sufficient for this purpose. The incomplete sequence is used to determine which variable and connecting segments of the germline gene contribute to the variable genes of the recombinant antibody. The germline sequences are then used to fill in the blanks in the variable regions. The heavy and light chain leader sequences are cleaved off during protein maturation and do not contribute to the properties of the final antibody. To add missing sequences, cloned cDNA sequences can be combined with synthetic oligonucleotides by ligation or PCR amplification. Alternatively, the entire variable region can be synthesized as a set of short overlapping oligonucleotides and combined by PCR amplification to create a fully synthetic variable region clone. This process has certain advantages, for example, the removal or introduction of individual restriction sites, or the optimization of individual codons.

Нуклеотидні послідовності транскриптів важкого та легкого ланцюгів з гібридом застосовують для створення набору перекривних синтетичних олігонуклеотидів для створення синтетичних М послідовностей з можливостями кодування амінокислот ідентичними природним послідовностям. Синтетичні послідовності важкого та каппа ланцюгів можуть відрізнятися від природних послідовностей по трьох пунктах: протяжності повторюваних нуклеотидних основ перервані, щоб полегшити синтез олігонуклеотидів і ПЛР ампліфікацію; включені ділянки оптимальної ініціації трансляції відповідно до правил Козака (Колак, 5. Віої. Спет. 266, 19867- 19870 (1991); і НіпапІ ділянки вставлені вище ділянок ініціації трансляції.Nucleotide sequences of heavy and light chain transcripts with a hybrid are used to create a set of overlapping synthetic oligonucleotides to create synthetic M sequences with amino acid coding capabilities identical to natural sequences. Synthetic sequences of heavy and kappa chains can differ from natural sequences in three ways: stretches of repeating nucleotide bases are interrupted to facilitate oligonucleotide synthesis and PCR amplification; sites of optimal translation initiation are included according to Kozak's rules (Kolak, 5. Vioi. Spet. 266, 19867-19870 (1991); and NipapI sites are inserted above the translation initiation sites.

Для варіабельних областей як важкого, так і легкого ланцюгів оптимізовані кодуючі і відповідні некодуючі ланцюжки послідовностей розірвані на 30-50 нуклеотидів приблизно в середній точці відповідного некодуючого олігонуклеотиду. Таким чином, для кожного ланцюга бо олігонуклеотиди можуть зібратися в перекривні дволанцюгові набори, які охоплюють сегменти зFor the variable regions of both heavy and light chains, the optimized coding and corresponding non-coding chains of the sequences are broken by 30-50 nucleotides approximately at the midpoint of the corresponding non-coding oligonucleotide. Thus, for each strand, oligonucleotides can assemble into overlapping double-stranded sets that cover segments with

150-400 нуклеотидів. Набір потім застосовують як матриці для одержання продукту ПЛР ампліфікації з 150-400 нуклеотидів. Звичайно, один набір одноланцюгових олігонуклеотидів варіабельної області розбивають на дві частини, які роздільно ампліфікують для одержання двох перекривних ПЛР продуктів. Такі перекривні продукти потім комбінують за допомогою ПЛР ампліфікації для утворення повного варіабельної області. Може бути також бажано включити перекривний фрагмент константної області важкого або легкого ланцюга (включаючи Врб5і ділянку каппа легкого ланцюга або Адеї! ділянку гамма важкого ланцюга) у ПЛР ампліфікації для одержання фрагментів, які легко клонувати в конструкції експресуючих векторів.150-400 nucleotides. The kit is then used as a matrix to obtain a PCR amplification product of 150-400 nucleotides. Of course, one set of single-stranded variable region oligonucleotides is split into two parts, which are separately amplified to produce two overlapping PCR products. Such overlapping products are then combined by PCR amplification to form the complete variable region. It may also be desirable to include an overlapping fragment of the heavy or light chain constant region (including the Vrb5i kappa region of the light chain or the Adei! gamma region of the heavy chain) in PCR amplification to obtain fragments that are easily cloned into expression vector constructs.

Реконструйовані варіабельні області важкого та легкого ланцюга потім комбінують із послідовностями клонованого промотору, лідера, ініціації трансляції, константної області, 3'- нетрансльованої ділянки, ділянки поліаденілювання та термінації транскрипції для утворення конструкцій експресуючого вектора. Експресуючі конструкції важкого та легкого ланцюга можна комбінувати в одиночному векторі, ко-трансфекувати, серійно трансфекувати або роздільно трансфекувати у клітини хазяїна і потім об'єднати для утворення клітини хазяїна, експресуючої обидва ланцюги.The reconstructed heavy and light chain variable regions are then combined with cloned promoter, leader, translation initiation, constant region, 3'-untranslated region, polyadenylation region, and transcription termination sequences to form expression vector constructs. The heavy and light chain expressing constructs can be combined in a single vector, co-transfected, serially transfected, or separately transfected into host cells and then combined to form a host cell expressing both chains.

Можна застосовувати подібну процедуру, щоб прищепити нову специфічність до антигену на існуюче зріле мишаче антитіло. Звичайно, вибирають антитіло акцептор, яке походить з того ж варіабельного гена зародкової лінії, як і СОРБ-донорне антитіло, але інші акцепторні антитіла також можна вибрати. Один чи більше СОЖК з донорного антитіла потім переносять із застосуванням техніки, описаної вище.A similar procedure can be used to graft a new antigen specificity onto an existing mature murine antibody. Of course, an acceptor antibody derived from the same germline variable gene as the SORB donor antibody is chosen, but other acceptor antibodies can also be chosen. One or more LFAs from the donor antibody are then transferred using the technique described above.

В одному втіленні даного винаходу структурні властивості -003 та -005 та -024 застосовують для створення структурно споріднених анти-СОЗ38 антитіл, наприклад, анти-СОЗ38 антитіл людини, які зберігають, щонайменше, одну функціональну властивість -003 та -005, та -024, а саме, зв'язування з СЮОЗ38. Більш специфічно, одну чи більше СОК областей -003 або -005, або - 024 можна комбінувати рекомбінантним способом з відомими каркасними обласними людини таIn one embodiment of the present invention, the structural properties of -003 and -005 and -024 are used to create structurally related anti-POZ38 antibodies, for example, human anti-POZ38 antibodies, which retain at least one functional property of -003 and -005 and -024 , namely, linking with the SHUOZ38. More specifically, one or more SOC regions -003 or -005 or -024 can be combined recombinantly with known human framework regions and

СОК для створення додаткових, створених рекомбінантним способом, анти-СОЗ38 антитіл людини згідно з даним винаходом.SOC for creating additional, recombinantly produced, human anti-POZ38 antibodies according to the present invention.

Приклади плазмід для застосування в конструкції експресуючих векторів для ЇІЧОК людини описані нижче. Плазміди сконструйовані так, що ампліфицировані за допомогою ПЛР кКДНнКExamples of plasmids for use in the construction of expression vectors for human HCC are described below. Plasmids designed to be PCR-amplified by cDNA

Зо послідовності М каппа важкого ланцюга та М каппа легкого ланцюга можна застосовувати для реконструкції повних мінігенів важкого та легкого ланцюга. Такі плазміди можна застосовувати для експресії повністю людських Ідс1, або 1ідс4,к антитіл. Подібні плазміди можна конструювати для експресії інших ізотипів важкого ланцюга або для експресії антитіл, що включають лямбда легкі ланцюги.The sequence of M kappa heavy chain and M kappa light chain can be used to reconstruct the complete heavy and light chain minigenes. Such plasmids can be used for the expression of fully human Ids1 or Ids4,k antibodies. Similar plasmids can be designed to express other heavy chain isotypes or to express antibodies that include lambda light chains.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, наприклад, анти-СОЗ38 антитіла людини згідно з даним винаходом, можна ізолювати та характеризувати за допомогою великої кількості різних способів. Наприклад, вибрані гібридоми можна вирощувати в придатних флаконах для очищення моноклональних антитіл. Супернатанти можна потім фільтрувати та концентрувати перед афінною хроматографією із протеїн-А-сефарозою (для антитіл ізотипу ІдО1) (Рпагтасіа,COZ8BPs of the present invention, e.g., human anti-COZ38 antibodies of the present invention, can be isolated and characterized using a number of different methods. For example, selected hybridomas can be grown in suitable vials for monoclonal antibody purification. Supernatants can then be filtered and concentrated prior to protein A-Sepharose affinity chromatography (for IdO1 isotype antibodies) (Rpagtasia,

Різсаїаулзау, МО) або покритою проти-людським дсС сефарозою або протеїн-С-сефарозою у випадку антитіл ізотипу ІдсЗ. Елюйовані дсС можна перевіряти за допомогою гель- електрофорезу та рідинної хроматографії високого розрізнення для забезпечення чистоти.Rissailsau, MO) or with anti-human dsC-coated Sepharose or protein-C Sepharose in the case of antibodies of the Ids3 isotype. Eluted dSs can be checked by gel electrophoresis and high-performance liquid chromatography to ensure purity.

Буферний розчин можна замінити на РВ5 і концентрацію можна визначати по ООЮрхво, застосовуючи коефіцієнт екстинкції 1,43. Моноклональні антитіла можна розділити на аліквоти та зберігати при -80 "С.The buffer solution can be replaced with РВ5 and the concentration can be determined by OOYurkhvo, using the extinction coefficient of 1.43. Monoclonal antibodies can be divided into aliquots and stored at -80 °C.

Щоб визначити, чи зв'язуються вибрані СОЗ8ВР, наприклад, анти-СО38 моноклональні антитіла людини, з унікальними епітопами, можна застосовувати сайт-спрямований або мультисайт-спрямований мутагенез.Site-directed or multisite-directed mutagenesis can be used to determine whether selected COZ8BPs, such as human anti-CO38 monoclonal antibodies, bind to unique epitopes.

Для визначення ізотипу очищеного антитіла, можна проводити ізотип ЕГІБА. Лунки мікротитрувальних планшетів можна покривати 10 мкг/мл анти-людського Ід протягом ночі при 4 "С. Після блокування 595 БСА (бичачим сироватковим альбуміном) планшети піддають реакції з 10 мкг/мл моноклональних антитіл або очищеного ізотипу контролю при кімнатній температурі протягом 2 годин. Лунки можна потім піддавати реакції з Іде1, Ідс2, дез або Ідся,To determine the isotype of the purified antibody, it is possible to perform the EHIBA isotype. Wells of microtitre plates can be coated with 10 µg/ml anti-human Id overnight at 4°C. After blocking with 595 BSA (bovine serum albumin), the plates are reacted with 10 µg/ml of monoclonal antibodies or purified isotype control at room temperature for 2 hours. The wells can then be reacted with Ide1, Ids2, des or Idsya,

ЧЕ, ІЧА1, ІДА2 людини або зі специфічними до (ЯМ людини пробами, кон'югованими з лужною фосфатазою. Після промивання плати проявляють за допомогою рМРР субстрату (1 мг/мл) і аналізують по оптичному поглинанню при 405 нм.CHE, ICHA1, IDA2 of a person or with samples specific to (YAM of a person conjugated with alkaline phosphatase. After washing the plate, it is developed with the help of pMPR substrate (1 mg/ml) and analyzed by optical absorption at 405 nm.

Для демонстрації присутності анти-СО38 антитіл у сироватці імунізованої миші або зв'язування СОЗ8ВР (включаючи анти-СОЗ38 антитіла) з живими клітинами, що експресуютьTo demonstrate the presence of anti-CO38 antibodies in the serum of an immunized mouse or the binding of COZ8BP (including anti-COZ38 antibodies) to living cells expressing

СО38, можна застосовувати проточну цитометрію. Стисло, клітинні лінії, експресуючі СОЗ8 бо (вирощені в стандартних умовах росту) змішують із різними концентраціями СОЗ8ВР в РВ5, що містить 0,195 БСА та 0,02 95 азиду натрію та інкубують при 4 С протягом 30 хв. Після промивання клітини піддають реакції з міченим флуоресцеїном анти-людським дос антитілом у таких саме умовах, як взаємодія з первинним антитілом. Приклади можна аналізувати за допомогою проточної цитометрії, використовуючи проточний цитометр (наприклад, ВесіопСО38, flow cytometry can be used. Briefly, cell lines expressing SOZ8bo (grown under standard growth conditions) are mixed with various concentrations of SOZ8BP in РВ5 containing 0.195 BSA and 0.02 95 sodium azide and incubated at 4 C for 30 min. After washing, the cells are reacted with a fluorescein-labeled anti-human dos antibody under the same conditions as the interaction with the primary antibody. Examples can be analyzed by flow cytometry using a flow cytometer (eg Vesiop

Біскіпвоп РГАСЗ іпезігитепі), застосовуючи світло та властивості бічного світлорозсіювання для настроювання приладу на одиночну живу клітину. Як альтернативний аналіз можна застосовувати флуоресцентну мікроскопію додатково або замість проточної цитометрії. Клітини можна забарвлювати точно так, як описано вище, та аналізувати за допомогою флуоресцентної мікроскопії. Цей спосіб дозволяє спостерігати окремі клітини, але має зменшену чутливість в залежності від щільності антигену.Biskipwop RGASZ ipezigitepi), using light and lateral light scattering properties to tune the device to a single living cell. As an alternative analysis, fluorescence microscopy can be used in addition to or instead of flow cytometry. Cells can be stained exactly as described above and analyzed by fluorescence microscopy. This method allows you to observe individual cells, but has a reduced sensitivity depending on the density of the antigen.

СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 дО людини, можна далі тестувати на реактивність із СОЗ8 антигеном за допомогою блотингу. Стисло, клітинні екстракти із клітин, що експресують СОЗ38, можна одержувати та піддавати електрофорезу в поліакриламідному гелі із ДСН. Після електрофорезу, розділені антигени переносять на нітроцелюлозні мембрани, блокують 20 95 нежирним молоком і тестують з СОЗ8ВР. Зв'язування (ДО людини можна детектувати із застосуванням анти-людського ІдС з лужною фосфатазою та проявляти за допомогою таблетованого субстрату ВСІР/МВТ (Зідта Спет. Со., 51. Іоці5, МО), а також можна застосовувати детектуючі агенти, спрямовані на інші специфічні частини СОЗ8ВР.COZ8BP, such as human anti-COZ38 dO, can be further tested for reactivity with COZ8 antigen by blotting. Briefly, cell extracts from cells expressing SOC38 can be prepared and subjected to polyacrylamide gel electrophoresis with SDS. After electrophoresis, separated antigens are transferred to nitrocellulose membranes, blocked with 20 95 skim milk and tested with SOZ8BP. Binding (human DO can be detected using anti-human IDS with alkaline phosphatase and shown using the tableted substrate VSIR/MVT (Zidta Spet. So., 51. Iotsi5, MO), and you can also use detecting agents aimed at other specific parts of SOZ8VR.

На додаток до специфічного зв'язування з СОЗ38, СОЗ8ВР (включаючи анти-СОЗ8 антитіла людини) можна тестувати на їх здатність інгібувати різні активності клітин, що експресуютьIn addition to specific binding to COZ38, COZ8BPs (including human anti-COZ8 antibodies) can be tested for their ability to inhibit various activities of cells expressing

СО38, наприклад, без обмеження, продукцію інсуліну, вивільнення Са-", продукцію цитокінів, індукцію лізису та проліферації.CO38, for example, without limitation, insulin production, Ca release, cytokine production, induction of lysis and proliferation.

В одному втіленні даний винахід пропонує трансгенних і трансхромосомних тварин, відмінних від людини, наприклад, трансгенних і трансхромосомних мишей, здатних експресувати антитіла людини, які специфічно зв'язуються з СОЗ8. В окремому втіленні даний винахід пропонує трансгенну або трансхромосомну мишу, яка має геном, що включає трансген важкого ланцюга людини, так що миша продукує анти-СО38 антитіла при імунізації клітинами, що експресують СО38. Трансген важкого ланцюга людини може бути інтегрований у хромосомну ДНК миші, як у випадку трансгенних, наприклад, НиМАБбБ мишей, як детальноIn one embodiment, the present invention provides non-human transgenic and transchromosomal animals, such as transgenic and transchromosomal mice, capable of expressing human antibodies that specifically bind to POP8. In a separate embodiment, the present invention provides a transgenic or transchromosomal mouse that has a genome including a human heavy chain transgene such that the mouse produces anti-CO38 antibodies when immunized with cells expressing CO38. A human heavy chain transgene can be integrated into the chromosomal DNA of a mouse, as in the case of transgenic, e.g., NyMABbB mice, as detailed

Зо описано тут. Альтернативно, трансген важкого ланцюга людини можна підтримувати позахромосомно, як у випадку трансхромосомних мишей (наприклад, КМ), як описано в УМО 02/43478. Такі трансгенні та трансхромосомні тварини здатні продукувати множинні ізотипи моноклональних антитіл людини до СОЗ38 (наприклад, Ідс, ІдА та/або ЧЕ), зазнаючи М-0-О//-у рекомбінацію та переключення ізотипів. Створення трансгенних і трансхромосомних тварин, відмінних від людини, які відповідають на стимуляцію чужорідним антигеном, продукуючи гетерологічний набір антитіл, вимагає, щоб трансгени гетерологічних імуноглобулінів, що містяться усередині трансгенної тварини, функціонували правильно по ходу розвитку В-клітин.It is described here. Alternatively, the human heavy chain transgene can be maintained extrachromosomally, as in the case of transchromosomal mice (eg, KM), as described in UMO 02/43478. Such transgenic and transchromosomal animals are capable of producing multiple isotypes of human monoclonal antibodies to SOZ38 (eg, Ids, IdA, and/or ЭЭ), undergoing M-0-O//-y recombination and isotype switching. The creation of non-human transgenic and transchromosomal animals that respond to foreign antigen stimulation by producing a heterologous set of antibodies requires that the heterologous immunoglobulin transgenes contained within the transgenic animal function properly during B-cell development.

Це включає, наприклад, переключення ізотипу трансгена гетерологічного важкого ланцюга людини. Відповідно, трансгени побудовані так, щоб переключення ізотипу можна було індукувати і виявлялася одна чи більше з таких характеристик генів антитіла: (1) високий рівень і специфічна до типу клітини експресія, (2) перебудова функціонального гена, (3) активація відповіді на виключення алелі, (4) експресія достатнього первинного набору, (5) передача сигналу, (6) соматична гіпермутація та (7) перевага локусу трансгенного антитіла під час імунної відповіді.This includes, for example, isotype switching of a human heterologous heavy chain transgene. Accordingly, transgenes are constructed such that isotype switching can be induced and one or more of the following characteristics of antibody genes are exhibited: (1) high level and cell type-specific expression, (2) rearrangement of a functional gene, (3) activation of the allelic exclusion response , (4) expression of sufficient priming, (5) signal transduction, (6) somatic hypermutation, and (7) preference of the transgenic antibody locus during the immune response.

Не всі з перелічених вище критеріїв треба виконувати. Наприклад, у таких втіленнях, де локуси ендогенного імуноглобуліну трансгенної тварини функціонально порушені, трансгену не треба активувати виключення алеля. Далі, у таких втіленнях, коли трансген включає функціонально перебудований ген важкого та/або легкого ланцюга імуноглобуліну, другий критерій функціональної перебудови гена не є обов'язковим, принаймні для такого трансгена, що вже перебудований. Основи молекулярної імунології див. в Рипдатепіа! Іттипоіоду, 2па еайоп (1989), Раш Мат Е., єд. Намеп Ргез5, М. У.Not all of the criteria listed above must be met. For example, in such embodiments where the endogenous immunoglobulin loci of the transgenic animal are functionally impaired, the transgene does not need to activate allele exclusion. Further, in such embodiments, when the transgene includes a functionally rearranged heavy and/or light chain immunoglobulin gene, the second criterion of functional rearrangement of the gene is not mandatory, at least for such a transgene that has already been rearranged. Fundamentals of molecular immunology see in Ripdatepia! Ittypoiodu, 2nd edition (1989), Rush Mat E., ed. Namep Rgez5, M. U.

У деяких втіленнях, трансгенні або трансхромосомні тварини, відмінні від людини, застосовувані для одержання моноклональних антитіл людини згідно з даним винаходом, містять перебудовані, неперебудовані та комбінацію перебудованих і неперебудованих трансгенів важкого та легкого ланцюга гетерологічних імуноглобулінів у зародковій лінії трансгенних тварин. Кожний із трансгенів важкого ланцюга включає, щонайменше один Сн ген.In some embodiments, non-human transgenic or transchromosomal animals used to produce human monoclonal antibodies of the present invention contain rearranged, non-rearranged, and a combination of rearranged and non-rearranged heavy and light chain heterologous immunoglobulin transgenes in the germline of the transgenic animals. Each of the heavy chain transgenes includes at least one Sn gene.

Додатково, трансген важкого ланцюга може включати послідовності функціонального переключення ізотипу, здатні підтримувати переключення ізотипу гетерологічного трансгена, кодуючого множинні Сн гени в В-клітинах трансгенної тварини. Такі послідовності переключення бо можуть бути такими, що зустрічаються природно в локусі імуноглобуліну зародкової лінії з видів,Additionally, the heavy chain transgene may include functional isotype switching sequences capable of supporting isotype switching of a heterologous transgene encoding multiple Cn genes in the B cells of the transgenic animal. Such switching sequences can be those that occur naturally in the germline immunoglobulin locus from species

що служать джерелом трансгенних Сн генів, або такі послідовності переключення можуть бути вироблені з таких, що зустрічаються у видів, які повинні одержати трансгенну конструкцію (трансгенних тварин). Наприклад, конструкція трансгена людини, що застосовується для одержання трансгенної, може давати більш високу частоту подій переключення ізотипу, якщо вона включає послідовності переключення, подібні до таких, що зустрічаються в природі в локусі важкого ланцюга миші, оскільки очевидно, що мишачі послідовності переключення оптимізовані для роботи з мишачою системою рекомбіназних ферментів переключення, у той час як послідовності переключення людини - ні. Послідовності переключення можна виділяти та клонувати за допомогою загальноприйнятих способів, або можна синтезувати де помо з перекривних синтетичних олігонуклеотидів, створених на основі опублікованої інформації про послідовності, що стосується послідовностей областей переключення імуноглобулінів (Мійв еї аі,, Мисі. Асідє Вев. 15, 7305-7316 (1991) Бідегав5 єї аї., Іл. Іттипої. 1, 631-642 (1989)). Для кожної з перелічених вище трансгенних тварин трансгени функціонально перебудованих гетерологічних важкого та легкого ланцюгів імуноглобуліну виявлені в значній фракції В-клітин трансгенної тварини (щонайменше, 10 Об).that serve as a source of transgenic Cn genes, or such switch sequences can be produced from those found in the species to receive the transgenic construct (transgenic animals). For example, a human transgene construct used to produce a transgenic may produce a higher frequency of isotype switching events if it includes switching sequences similar to those found naturally in the mouse heavy chain locus, since it is apparent that mouse switching sequences are optimized for work with the mouse system of recombinase switching enzymes, while human switching sequences are not. Switch sequences can be isolated and cloned using conventional methods, or can be synthesized ad hoc from overlapping synthetic oligonucleotides generated from published sequence information relating to immunoglobulin switch region sequences (Miiv et al., Mysi. Aside Rev. 15, 7305- 7316 (1991) Bidegav5 eyi ai., Il. For each of the transgenic animals listed above, transgenes of functionally rearranged heterologous heavy and light immunoglobulin chains were detected in a significant fraction of B cells of the transgenic animal (at least 10 Ob).

Трансгени, застосовувані для одержання трансгенних тварин, відмінних від людини згідно з даним винаходом, включають трансген важкого ланцюга, що включає ДНК, яка кодує, щонайменше, один варіабельний сегмент гена, один сегмент розмаїтості, один сполучний сегмент гена і щонайменше один сегмент константної області гена. Трансген легкого ланцюга імуноглобуліну включає ДНК, яка кодує щонайменше один варіабельний сегмент гена, один сполучний сегмент гена і щонайменше один сегмент константної області гена. Сегменти гена, що кодують легкий та важкий ланцюги, є гетерологічними для трансгенної тварини, у якої вони одержані, або відповідають ДНК, які кодують сегменти гена легкого та важкого ланцюгів з видів, що не включають трансгенну тварину, відмінну від людини. В одному втіленні даного винаходу трансген складений так, що індивідуальні сегменти гена не перебудовані, тобто, не перебудовані так, щоб кодувати функціональний легкий або важкий ланцюг імуноглобуліну.Transgenes used to produce non-human transgenic animals of the present invention include a heavy chain transgene comprising DNA encoding at least one variable gene segment, one diversity segment, one linker gene segment, and at least one gene constant region segment . An immunoglobulin light chain transgene includes DNA that encodes at least one variable gene segment, one connecting gene segment and at least one gene constant region segment. The gene segments encoding the light and heavy chains are heterologous to the transgenic animal from which they are derived, or correspond to DNA encoding the light and heavy chain gene segments from a species that does not comprise the transgenic animal other than a human. In one embodiment of the present invention, the transgene is constructed so that the individual gene segments are not rearranged, that is, not rearranged to encode a functional immunoglobulin light or heavy chain.

Такий неперебудований трансген підтримує рекомбінацію М, О та У сегментів гена (функціональну перебудову) і може підтримувати включення всієї або частини Ю області сегмента гена в одержуваний перебудований важкий ланцюг імуноглобуліну у трансгенноїSuch an unreconstructed transgene supports the recombination of the M, O, and Y segments of the gene (functional rearrangement) and can support the incorporation of all or part of the Y region of the gene segment into the resulting rearranged immunoglobulin heavy chain in the transgenic

Зо тварини при дії СОЗ8 антигену.From an animal under the influence of SOZ8 antigen.

В альтернативному втіленні, трансгени включають неперебудований "мінілокус". Такі трансгени звичайно включають значну частину С, О та у) сегментів, а також піднабір сегментів М гена. У таких трансгенних конструкціях різні регуляторні послідовності, наприклад, промотори, підсилювачі, області переключення класів, послідовності донорів при сплайсингу та акцепторів при сплайсингу для одержання РНК, сигнали рекомбінації і т.п., включають відповідні послідовності, вироблені з гетерологічних ДНК. Такі регуляторні послідовності можуть бути включені в трансген з того ж або спорідненого виду тварини, відмінної від людини, застосовуваного згідно з даним винаходом. Наприклад, сегменти гена імуноглобуліну людини можна комбінувати в трансгені з послідовністю підсилювача із гризуна для застосування у трансгенної миші. Альтернативно, у трансген можна включати синтетичні регуляторні послідовності, де такі синтетичні регуляторні послідовності не є гомологічними функціональній послідовності ДНК, що, як відомо, находиться природно в геномі ссавців. Синтетичні регуляторні послідовності створюються відповідно до загальноприйнятих правил, наприклад, містять припустимі послідовності ділянки акцептора при сплайсингу або мотив промотору/підсилювача. Наприклад, мінілокус включає частину геномного локусу імуноглобуліну, що має, щонайменше, одну внутрішню (наприклад, не на кінці частини) делецію несуттєвої частини ДНК (наприклад, проміжної послідовності, інтрона або його частини) у порівнянні з локусом імуноглобуліну зародкової лінії, що зустрічається в природі.In an alternative embodiment, the transgenes comprise an unreconstructed "minilocus". Such transgenes usually include a significant portion of the C, O, and y) segments, as well as a subset of the M gene segments. In such transgenic constructs, various regulatory sequences, for example, promoters, enhancers, class switch regions, splicing donor and acceptor sequences to produce RNA, recombination signals, etc., include corresponding sequences produced from heterologous DNA. Such regulatory sequences may be included in a transgene from the same or a related non-human animal species used in accordance with the present invention. For example, human immunoglobulin gene segments can be combined in a transgene with a rodent enhancer sequence for use in a transgenic mouse. Alternatively, synthetic regulatory sequences can be included in the transgene, where such synthetic regulatory sequences are not homologous to a functional DNA sequence known to occur naturally in the mammalian genome. Synthetic regulatory sequences are created according to generally accepted rules, for example, contain acceptable sequences of the splice acceptor site or the promoter/enhancer motif. For example, a minilocus includes a portion of an immunoglobulin genomic locus that has at least one internal (eg, not at the end of the portion) deletion of a nonessential DNA portion (eg, an intervening sequence, an intron, or a portion thereof) compared to a germline immunoglobulin locus found in nature

Приклади трансгенних і трансхромосомних тварин, відмінних від людини, наприклад, миші, виявляють продукцію імуноглобуліну зі значною розмаїтістю в ідеалі, в основного подібну до такої у людини після приведення до об'єму.Examples of transgenic and transchromosomal animals other than humans, such as mice, show immunoglobulin production with considerable diversity, ideally, essentially similar to that of humans after scaling up.

Набір/розмаїтість ідеально наблизиться до такого, показаного у людини, коли після приведення до об'єму виявляє відхилення, щонайменше, приблизно 10 95, наприклад, 25-50 95 чи більше. Звичайно, продукується, щонайменше, тисяча різних імуноглобулінів (в ідеалі Ідс), наприклад, 107-106 чи більше, залежно від числа різних МУ, У та ОО областей, введених у геном миші та керованих додаткової розмаїтості, утвореного перебудовами М(-0-)) сегмента гена та випадковими додаваннями нуклеотидів у областях сполуки. Звичайно, імуноглобуліни виявляють спорідненість (Ка) для попередньо відібраних антигенів нижче 108 М, наприклад, нижче 109 М, 1079 М або 10-7 М, або ще нижче. Трансгенні та трансхромосомні тварини, 60 відмінні від людини, наприклад, миші, як описано вище, можуть бути імунізовані, наприклад,A set/diversity will ideally approximate that seen in a human when, after volume adjustment, it exhibits a deviation of at least about 10 95 , eg 25-50 95 or more. Of course, at least a thousand different immunoglobulins (ideally Ids) are produced, for example, 107-106 or more, depending on the number of different MU, U and OO regions introduced into the mouse genome and controlled by the additional diversity generated by rearrangements of M(-0- )) of the gene segment and random additions of nucleotides in the regions of the compound. Of course, immunoglobulins show affinity (Ka) for preselected antigens below 108 M, for example, below 109 M, 1079 M or 10-7 M, or even lower. Transgenic and transchromosomal animals, 60 other than humans, such as mice, as described above, can be immunized, e.g.

клітинами, що експресують СО38. Альтернативно, трансгенні тварини можуть бути імунізованіcells expressing CO38. Alternatively, transgenic animals can be immunized

ДНК, що кодує СОЗ3З8 людини. Тварини при цьому будуть продукувати В-клітини, які зазнають переключення класу за допомогою перемикальної рекомбінації (сіз-переключення) та експресують імуноглобуліни, реактивні з СО38. Імуноглобуліни є антитілами людини (називаними також "антитіла послідовностей людини"), де поліпептиди важкого та легкого ланцюгів кодуються послідовностями трансгена людини, які можуть включати послідовності, вироблені за допомогою соматичної мутації та рекомбінаторних приєднань М областей, а також послідовностями із зародкової лінії; такі антитіла людини можна називати, в основному, ідентичними поліпептидній послідовності, що кодується Мі та Лі або Мн, Он та дн сегментами гена, навіть якщо інші послідовності не із зародкової лінії можуть бути присутніми в результаті соматичної мутації та різних У-У та М-0-У рекомбінаційних з'єднань. Варіабельні області кожного ланцюга антитіла звичайно, щонайменше, на 80 95 подібні з М та у) сегментами генів зародкової лінії людини та, у випадку важких ланцюгів, М, О та.) сегментами зародкової лінії людини; часто, щонайменше, на 8595 подібні з послідовностями зародкової лінії людини, присутніми у трансгені, часто на 9095 або 9595 подібні з послідовностями зародкової лінії людини, присутніми у трансгені. Однак, оскільки послідовності не із зародкової лінії включені за допомогою соматичних мутацій та Му та МОУ з'єднання, антитіла послідовностей людини часто будуть мати деякі послідовності варіабельної області, які не кодуються У, О або .) сегментами гена людини, як виявлено в трансгені(нах) людини в зародковій лінії миші. Звичайно, такі послідовності не зародкової лінії (або окремі положення нуклеотидів) групуються в або поблизу від СОК або в областях, де, як відомо, групуються соматичні мутації.DNA encoding human SOZ3Z8. Animals will produce B-cells that undergo class switching by means of switch recombination (siz switching) and express immunoglobulins reactive with CO38. Immunoglobulins are human antibodies (also called "antibodies of human sequences") where the heavy and light chain polypeptides are encoded by human transgene sequences, which may include sequences produced by somatic mutation and recombinant additions of M regions, as well as germline sequences; such human antibodies can be said to be essentially identical to the polypeptide sequence encoded by the Mi and Li or Mn, On and dn gene segments, even though other non-germline sequences may be present as a result of somatic mutation and various U-U and M- 0-U recombination compounds. The variable regions of each antibody chain are usually at least 80 95 similar to M and y) segments of human germline genes and, in the case of heavy chains, M, O and.) segments of human germline; often at least 8595 similar to the human germline sequences present in the transgene, often 9095 or 9595 similar to the human germline sequences present in the transgene. However, because non-germline sequences are incorporated by somatic mutations and Mu and MOU splicing, antibodies of human sequences will often have some variable region sequences that are not encoded by U, O, or .) segments of the human gene as found in the transgene( nah) of a person in the germ line of a mouse. Of course, such non-germline sequences (or individual nucleotide positions) cluster in or near SOC or in regions where somatic mutations are known to cluster.

Даний винахід також надає В-клітини, вироблені із трансгенних або трансхромосомних тварин, як описано тут. В-клітини можна застосовувати для одержання гібридом, експресуючих моноклональні антитіла людини, які зв'язуються з високою спорідненістю (наприклад, з константою дисоціації (Ка) нижче 108 М) з СО38 людини. Так, в одному втіленні даний винахід пропонує гібридому, що продукує антитіла людини зі спорідненістю (Ка) нижче 109 М, наприклад, нижче 1079 М, нижче 1079 М або 10-! М, або ще нижче при визначенні за допомогою аналізу Скетчарда у клітин, що експресують СОЗ8, із застосуванням радіоактивного-міченого моноклонального антитіла, або шляхом визначення напівмаксимальної концентраціїThe present invention also provides B cells produced from transgenic or transchromosomal animals as described herein. B-cells can be used to produce hybridomas expressing human monoclonal antibodies that bind with high affinity (for example, with a dissociation constant (Ka) below 108 M) to human CO38. Thus, in one embodiment, the present invention provides a hybridoma that produces human antibodies with affinity (Ka) below 109 M, for example, below 1079 M, below 1079 M, or 10-! M, or even lower when determined using the Scatchard assay in cells expressing POP8 using a radioactively labeled monoclonal antibody, or by determining the half-maximal concentration

Зо зв'язування із застосуванням БАС аналізу, або за допомогою аналізу з використанням поверхневого плазмонового резонансу, як вимірюють за допомогою приладу ВіІАсоге.From binding using BAS analysis, or using surface plasmon resonance analysis, as measured using the ViIAsoge device.

Даний винахід пропонує анти-СОЗ8 антитіло, яке включає послідовність легкого ланцюга людини, що складається з (1) варіабельної області легкого ланцюга з поліпептидною послідовністю, що в основному ідентична поліпептидній послідовності, кодованій Мі сегментом гена людини та і сегментом людини і (2) константної області легкого ланцюга, кодованого Сі сегментом гена людини, та послідовність важкого ланцюга людини, що складається з (1) варіабельної області важкого ланцюга з поліпептидною послідовністю, яка в основному ідентична поліпептидній послідовності, кодованій Мн сегментом гена людини, ЮО областю та Ун сегментом людини і (2) константної області, кодованої Сн сегментом гена людини. Слід відзначити, що О гени людини можуть бути значно змінені за допомогою рекомбінацій та соматичних мутацій, так що вихідні послідовності зародкової лінії людини можуть не бути легко впізнаваними.The present invention provides an anti-COZ8 antibody that includes a human light chain sequence consisting of (1) a light chain variable region with a polypeptide sequence substantially identical to the polypeptide sequence encoded by the human Mi gene segment and the human and human I segment and (2) a constant a light chain region encoded by a human C gene segment, and a human heavy chain sequence consisting of (1) a heavy chain variable region with a polypeptide sequence that is substantially identical to a polypeptide sequence encoded by a human Mn gene segment, a YO region, and a human Un segment, and (2) the constant region encoded by the Sn segment of the human gene. It should be noted that human O genes can be significantly altered by recombination and somatic mutations, so that the original human germline sequences may not be readily recognizable.

Розвиток моноклональних антитіл людини з високою спорідненістю проти СОЗ38 можна полегшити за допомогою способу для розширення набору сегментів варіабельної області гена у трансгенних тварин, відмінних від людини, що мають геном, який включає інтегрований трансген імуноглобуліну людини, причому згаданий спосіб включає введення в геном трансгенаThe development of human monoclonal antibodies with high affinity against POP38 can be facilitated by a method for expanding the set of variable region segments of a gene in a non-human transgenic animal having a genome that includes an integrated human immunoglobulin transgene, said method comprising introducing the transgene into the genome

М гена, що включає сегменти гена М області, відсутні в згаданому інтегрованому трансгені імуноглобуліну людини. Часто, трансген М області є дріжджовою штучною хромосомою (УАС), що включає частину матриці (аггау) Мн або Мі (Мк) сегментів гена людини, яка може бути присутньою природно в геномі людини або може бути об'єднана шляхом сплайсингу за допомогою рекомбінантних способів, які можуть включати несправні або пропущені М сегменти гена. Часто, щонайменше, п'ять чи більше функціональних М сегментів гена містяться в АС. У цьому варіанті можливо зробити трансгенну тварину, одержану за допомогою способів розширення М набору, де тварина експресує ланцюг імуноглобуліну, що включає послідовність варіабельної області, кодовану М областю сегмента гена, присутнього у трансгені М області, таM gene, which includes segments of the M region gene, are absent in the mentioned integrated human immunoglobulin transgene. Often, the M region transgene is a yeast artificial chromosome (UAC) comprising a portion of the matrix (aggau) Mn or Mi (Mk) segments of the human gene, which may be present naturally in the human genome or may be spliced together by recombinant means , which may include faulty or missing M segments of the gene. Often, at least five or more functional M gene segments are contained in AS. In this embodiment, it is possible to make a transgenic animal obtained by M kit expansion methods, where the animal expresses an immunoglobulin chain comprising a variable region sequence encoded by the M region of a gene segment present in the M region transgene, and

С областю, кодованою трансгеном імуноглобуліну людини. За допомогою способу розширенняWith the region encoded by the human immunoglobulin transgene. Using the extension method

М набору можна одержати трансгенних тварин, які мають щонайменше п'ять різних М генів, а також тварин, які містять щонайменше приблизно 24 М гени чи більше. Деякі М сегменти гена можуть бути нефункціональними (наприклад, псевдогени і т.п.); ці сегменти можна залишити або можна вибірково видалити за допомогою рекомбінантних способів, доступних фахівцю в даній області, якщо потрібно.M set can be obtained transgenic animals that have at least five different M genes, as well as animals that contain at least approximately 24 M genes or more. Some M gene segments may be non-functional (for example, pseudogenes, etc.); these segments can be left in or can be selectively removed using recombinant methods available to one skilled in the art, if desired.

Як тільки створена зародкова лінія миші, що містить функціональний МАС, який має розширений набір М сегмента, в основному відсутнього в трансгені імуноглобуліну людини, що містить У та С сегменти гена, цю рису можна поширити та розмножити на інших генетичних фонах, включаючи фони, де функціональний МАС, що має розширений набір М сегмента, розмножують у зародковій лінії тварини, відмінної від людини, яка має інший трансген імуноглобуліну людини. Множинні функціональні ХАС, що мають розширений набір М сегмента, можна розмножити в зародковій лінії, щоб працювати із трансгеном імуноглобуліну людини (або множинними трансгенами імуноглобуліну людини). Хоча вони тут і називаються МУАС трансгенами, такі трансгени при інтеграції в геном можуть у значній мірі втрачати послідовності дріжджів, наприклад, послідовності, необхідні для автономної реплікації в дріжджах, такі послідовності можна при необхідності видалити за допомогою підходів генної інженерії (наприклад, переварювання рестриктазами та електрофорезу в імпульсному полі, або інших придатних способів), оскільки після реплікації в дріжджах вони більше не потрібні (наприклад, перед введенням в ЕбЗ клітину миші або мишачу прозиготу). Способи поширення ознаки експресії послідовності імуноглобуліну людини включають розведення трансгенних тварин, що несуть трансген(и) імуноглобуліну людини і, при необхідності, мають також функціональні ХАС із розширеним набором М сегментів. Обидва сегменти гена Мі та Мі можуть бути присутніми вOnce a mouse germ line containing a functional MAC that has an expanded set of the M segment, largely absent in the human immunoglobulin transgene containing the U and C segments of the gene, is established, the trait can be propagated and propagated to other genetic backgrounds, including backgrounds where a functional MAC having an expanded set of M segment is propagated in the germ line of a non-human animal that has another human immunoglobulin transgene. Multiple functional CACs having an expanded set of the M segment can be propagated in the germline to work with a human immunoglobulin transgene (or multiple human immunoglobulin transgenes). Although referred to herein as MUAS transgenes, such transgenes, when integrated into the genome, may substantially lose yeast sequences, e.g., sequences required for autonomous replication in yeast, such sequences may, if necessary, be removed by genetic engineering approaches (e.g., digestion with restriction enzymes and electrophoresis in a pulsed field, or other suitable methods), since they are no longer needed after replication in yeast (for example, before introducing a mouse cell or a mouse prozygote into EbZ). Methods of propagating the human immunoglobulin sequence expression feature include breeding transgenic animals that carry the human immunoglobulin transgene(s) and, if necessary, also have functional CAS with an expanded set of M segments. Both Mi and Mi gene segments can be present in

МАС. Трансгенну тварину можна розводити на будь-якому фоні, вибраному практиком, включаючи фони, що несуть інші трансгени людини, включаючи трансген імуноглобуліну людини та/або трансгени, що кодують інші білки лімфоцитів людини. Даний винахід також надає послідовність імуноглобуліну людини з високою спорідненістю, продукованого трансгенною мишею, що несе МАС трансген з розширеним набором М області. Хоча вище описане специфічне втілення трансгенної тварини згідно з даним винаходом, також розглядаються інші втілення, класифіковані по трьох категоріях: (1) Трансгенні тварини, що містять трансген імуноглобуліну з неперебудованим важким і перебудованим легким ланцюгами; (2) Трансгенні тварини, що містять трансген імуноглобуліну з неперебудованим важким іMAS. The transgenic animal can be bred on any background selected by the practitioner, including backgrounds carrying other human transgenes, including the human immunoglobulin transgene and/or transgenes encoding other human lymphocyte proteins. The present invention also provides the sequence of a high-affinity human immunoglobulin produced by a transgenic mouse carrying a MAS transgene with an expanded set of M regions. Although a specific embodiment of a transgenic animal according to the present invention is described above, other embodiments are also contemplated, classified into three categories: (1) Transgenic animals containing an immunoglobulin transgene with unrearranged heavy and rearranged light chains; (2) Transgenic animals containing an immunoglobulin transgene with unrearranged heavy i

Зо неперебудованим легким ланцюгами; (3) Трансгенні тварини, що містять трансген імуноглобуліну з перебудованим важким і неперебудованим легким ланцюгами.With unreconstructed light chains; (3) Transgenic animals containing an immunoglobulin transgene with rearranged heavy and unrearranged light chains.

В одному втіленні даний винахід пропонує фармацевтичну композицію, що включає терапевтично активну кількість СОЗ8ВР згідно з даним винаходом. Фармацевтичні композиції можуть бути складені з фармацевтично прийнятними носіями або розріджувачами, а також з іншими відомими допоміжними речовинами та наповнювачами відповідно до загальноприйнятих способів, розкритих в Кетіпдіоп: Те Зсіепсе апа Ргасіїсе ої Рпагтасу, 191пIn one embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a therapeutically active amount of SOZ8BP according to the present invention. Pharmaceutical compositions may be formulated with pharmaceutically acceptable carriers or diluents, as well as with other known excipients and excipients, according to the generally accepted methods disclosed in Ketipdiop: Te Zsiepse apa Rgasiise oi Rpagtasu, 191p

Едйіоп, Сеппаго, Ед., Маск Рибіїзніпа Со., Еавіоп, РАТ 1995.Ediiop, Seppago, Ed., Musk Rybiiznipa So., Eaviop, RAT 1995.

Фармацевтично прийнятні носії або розріджувачі, а також інші відомі допоміжні речовини та наповнювачі, повинні підходити для вибраної сполуки згідно з даним винаходом та вибраного способу введення/надання. Придатність носіїв та інших компонентів фармацевтичних композицій визначають на основі відсутності значного негативного впливу на потрібні біологічні властивості вибраної сполуки або фармацевтичної композиції згідно з даним винаходом (наприклад, менш, ніж значний вплив (10 95 чи менше відносного інгібування, 5 96 чи менше відносного інгібування і т.д.) на зв'язування антигену.Pharmaceutically acceptable carriers or diluents, as well as other known excipients and excipients, should be suitable for the selected compound of the present invention and the selected method of administration/administration. The suitability of carriers and other components of pharmaceutical compositions is determined based on the absence of a significant adverse effect on the desired biological properties of the selected compound or pharmaceutical composition according to the present invention (for example, less than a significant effect (10 95 or less relative inhibition, 5 96 or less relative inhibition and etc.) on antigen binding.

Фармацевтична композиція згідно з даним винаходом може також включати розчинники, наповнювачі, солі, буфери, детергенти (наприклад, неіонний детергент як Тмееп-80), стабілізатори (наприклад, цукри або очищені від білка амінокислоти), консерванти, тканеві фіксативи, солюбілізатори та/або інші матеріали, придатні для включення у фармацевтичну композицію.A pharmaceutical composition according to the present invention may also include solvents, excipients, salts, buffers, detergents (e.g., a nonionic detergent such as Tmeep-80), stabilizers (e.g., sugars or deproteinized amino acids), preservatives, tissue fixatives, solubilizers, and/or other materials suitable for inclusion in a pharmaceutical composition.

Фактичні рівні дозування інгредієнтів у фармацевтичних композиціях згідно з даним винаходом можуть варіювати, так щоб одержати кількість активного інгредієнта, ефективну для досягнення бажаної терапевтичної відповіді у даного хворого, композиції та способу введення, не токсичну для хворого. Вибраний рівень дозування залежить від різних фармакокінетичних факторів, включаючи активність даної застосовуваної композиції згідно з даним винаходом або її ефіру, солі чи аміду, шлях прийому, час прийому, швидкість виділення даної застосованої сполуки, тривалість лікування, інші ліки, сполуки та/або матеріали, застосовувані у комбінації з даною застосовуваною композицією, вік, стать, вага, стан, загальний стан здоров'я і попередня історія хвороби хворого на лікуванні, та подібних факторів, добре відомих в області медицини.The actual dosage levels of the ingredients in the pharmaceutical compositions according to the present invention may vary so as to obtain an amount of the active ingredient effective to achieve the desired therapeutic response in a given patient, composition and method of administration that is not toxic to the patient. The dosage level selected depends on various pharmacokinetic factors, including the activity of the given compound used according to the present invention or its ester, salt or amide, the route of administration, the time of administration, the rate of excretion of the given compound used, the duration of treatment, other drugs, compounds and/or materials, used in combination with this applied composition, the age, sex, weight, condition, general health and previous medical history of the patient under treatment, and similar factors well known in the field of medicine.

Фармацевтичну композицію можна застосовувати будь-яким придатним шляхом. Придатні шляхи для застосування сполуки згідно з даним винаходом іп мімо та іп міо добре відомі в даній області та можуть бути вибрані звичайними фахівцями.The pharmaceutical composition may be administered by any suitable route. Suitable routes for the administration of a compound of the present invention are ip mimo and ip myo are well known in the art and can be selected by those of ordinary skill in the art.

Сполуки згідно з даним винаходом можна надавати будь-яким придатним шляхом, наприклад, через рот, через ніс, за допомогою інгаляції, топікальним (включаючи защічний, черезшкірний та під'язичний), ректальним, вагінальним та/або парентеральним шляхом.The compounds of the present invention may be administered by any suitable route, such as oral, nasal, inhalation, topical (including buccal, transdermal, and sublingual), rectal, vaginal, and/or parenteral routes.

В одному втіленні фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом призначають через рот, наприклад, з інертним розчинником або перетравлюваним їстівним носієм. Активний інгредієнт можна поміщати у тверді або м'які желатинові капсули, пресувати в таблетки або прямо включати в дієту хворого. Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, придатні для прийому через рот, включають таблетки для ковтання, защічні таблетки, таблетки, капсули, еліксири, суспензії, сиропи, вафлі і т.п., що містять носії, придатні для даного випадку, як відомо в даній області. Щоб давати сполуку згідно з даним винаходом шляхом введення через рот, може бути необхідним покривати сполуку або давати сполуку разом з матеріалом для запобігання її інактивації.In one embodiment, a pharmaceutical composition according to the present invention is administered orally, for example, with an inert diluent or a digestible edible carrier. The active ingredient can be placed in hard or soft gelatin capsules, pressed into tablets or directly included in the patient's diet. Pharmaceutical compositions of the present invention suitable for oral administration include lozenges, buccal lozenges, tablets, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, etc., containing suitable carriers as known in this region. To administer a compound of the present invention by oral administration, it may be necessary to coat the compound or administer the compound with a material to prevent its inactivation.

В одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом призначають через ніс. Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, придатні для введення через ніс, відомі в даній області техніки та звичайно включають спреї, краплі для носа та інгалятори.In one embodiment, the pharmaceutical composition according to the present invention is administered through the nose. Pharmaceutical compositions of the present invention suitable for nasal administration are known in the art and typically include sprays, nasal drops and inhalers.

В одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно 3 даним винаходом застосовують топікально. Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, придатні для топікального або черезшкірного застосування, відомі в даній області техніки та звичайно включають порошки, спреї, мазі, пасти, креми, лосьйони, гелі, розчини, пластири та інгалятори, що містять такі носії, придатні для такого випадку відповідно до даної області техніки.In one embodiment, the pharmaceutical composition according to 3 of the present invention is applied topically. Pharmaceutical compositions according to the present invention suitable for topical or transdermal use are known in the art and typically include powders, sprays, ointments, pastes, creams, lotions, gels, solutions, patches and inhalers containing such carriers suitable for such case according to this field of technology.

В одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно 3 даним винаходом застосовують ректально. Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, придатні для ректального застосування, відомі в даній області техніки та включають гелі, пасти, спрейні рецептури, супозиторії.In one embodiment, the pharmaceutical composition according to 3 of the present invention is administered rectally. Pharmaceutical compositions according to the present invention, suitable for rectal use, are known in the art and include gels, pastes, spray formulations, suppositories.

В одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно 3 даним винаходом застосовують вагінально. Фармацевтичні композиції згідно 3 даним винаходом, придатні для вагінального застосування, відомі в даній області техніки та звичайно включають песарії, тампони, креми, гелі, пасти, піни або спрейні рецептури, що містять такі носії, придатні для такого випадку відповідно до даної області техніки.In one embodiment, the pharmaceutical composition according to 3 of the present invention is applied vaginally. Pharmaceutical compositions according to 3 of the present invention, suitable for vaginal use, are known in the art and typically include pessaries, tampons, creams, gels, pastes, foams or spray formulations containing such carriers suitable for such a case according to the art.

В одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом призначають парентерально.In one embodiment, the pharmaceutical composition according to the present invention is administered parenterally.

Фрази "парентеральне застосування" або "призначається парентерально" застосовують тут для позначення способів введення, відмінних від ентерального та топікального введення, звичайно, за допомогою ін'єкції ії включають епідермальну, внутрішньовенну, внутрішньом'язову, внутрішньоартеріальну, інтратекальну, внутрішньосуглобну, внутрішньоочноямкову, внутрішньосерцеву, внутрішньошкірну, інтраперитонеальну, внутрішньосухожильну, транстрахеальну, підшкірну, підшкірну, внутрішньосуглобну, субкапсулярну, субарахноїдну, інтраспинальну, внутрішньочерепну, внутрішньогрудну, епідуральну та інтрастернальну ін'єкцію та інфузію.The phrases "parenteral administration" or "administered parenterally" are used herein to refer to routes of administration other than enteral and topical, of course by injection, and include epidermal, intravenous, intramuscular, intraarterial, intrathecal, intraarticular, intraocular, intracardiac , intradermal, intraperitoneal, intratendinous, transtracheal, subcutaneous, subcutaneous, intraarticular, subcapsular, subarachnoid, intraspinal, intracranial, intrathoracic, epidural, and intrasternal injection and infusion.

В одному втіленні, таку фармацевтичну композицію призначають за допомогою внутрішньовенної або підшкірної ін'єкції або інфузії.In one embodiment, such a pharmaceutical composition is administered by intravenous or subcutaneous injection or infusion.

В одному втіленні, сполуки згідно з даним винаходом застосовують у кристалічній формі за допомогою підшкірної ін'єкції, див. Хапд еї аі., РМАБ ОБА 100(12), 6934-6939 (2003).In one embodiment, the compounds of the present invention are administered in crystalline form by subcutaneous injection, see Khapd eyi ai., RMAB OBA 100(12), 6934-6939 (2003).

Фармацевтичні композиції можна давати із застосуванням медичних пристроїв, відомих в даній області. Наприклад, в одному втіленні, фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом можна призначати з безголковими пристроями для гіподермічної ін'єкції, як пристрої, розкриті в ОЗ 5399163, 05 5383851, 05 5312335, 05 5064413, 5 4941880, 05 4790824 або 05 4596556. Приклади добре відомих імплантів та модулів, застосовних для даного винаходу, включають 05 4487603, які розкривають імплантований мікроінфузійний насос для подачі ліків з контрольованою швидкістю; 5 4486194, що розкриває терапевтичний пристрій для подачі ліків через шкіру; 5 4447233, що розкриває медичний інфузійний насос для доставки ліків з точною швидкістю інфузії; 05 4447224, що розкриває імплантований пристрій для інфузії зі змінною швидкістю для постійної доставки ліків; 5 4439196, що розкриває осмотичну систему доставки ліків, яка має багатокамерні відсіки; і 05 4475196, що розкриває осмотичну систему доставки ліків. Багато інших імплантів, систем доставки та модулів відомі фахівцю в даній області.Pharmaceutical compositions can be administered using medical devices known in the art. For example, in one embodiment, a pharmaceutical composition according to the present invention can be administered with needle-free devices for hypodermic injection, such as the devices disclosed in US Pat. well-known implants and modules applicable to this invention include 05 4487603, which discloses an implantable microinfusion pump for rate-controlled drug delivery; 5 4486194, which discloses a therapeutic device for the delivery of drugs through the skin; 5,4447,233, which discloses a medical infusion pump for delivering medication at a precise infusion rate; 05 4447224, which discloses an implantable variable rate infusion device for continuous drug delivery; 5 4439196, which discloses an osmotic drug delivery system having multi-compartment compartments; and 05 4475196, which discloses an osmotic drug delivery system. Many other implants, delivery systems, and modules are known to those skilled in the art.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можна складати для особливих шляхів 60 введення, наприклад, для введення через рот, через ніс, топікального (включаючи защічний,Pharmaceutical compositions according to the present invention can be formulated for special routes of administration 60, for example, for oral, nasal, topical (including buccal,

черезшкірний і під'язичний), ректального, вагінального та/(або парентерального введення.transdermal and sublingual), rectal, vaginal and/or parenteral administration.

Фармацевтичні композиції можна придатним образом представляти в одиницях формодози та можна одержувати будь-яким способом, відомим в області фармацевтики. Кількість активного інгредієнта, яку можна комбінувати з матеріалом носія для одержання однієї формодози, варіює залежно від об'єкта лікування та даного способу введення. Кількість активного інгредієнта, яку можна комбінувати з матеріалом носія для одержання одиночної формодози, в основному є такою кількістю композиції що дає терапевтичний ефект. В основному, поза 100 95, така кількість находиться в інтервалі від приблизно 0,01 95 до приблизно 99 95 активного інгредієнта, наприклад, від приблизно 0,195 до приблизно 7095, наприклад, від приблизно 195 до приблизно 30 95.The pharmaceutical compositions may conveniently be presented in dosage units and may be prepared by any method known in the pharmaceutical art. The amount of active ingredient that can be combined with the carrier material to obtain one dosage form varies depending on the object of treatment and the given method of administration. The amount of active ingredient that can be combined with the carrier material to obtain a single dosage form is basically the amount of the composition that provides a therapeutic effect. Generally, outside of 100 95, such amount will be in the range of from about 0.01 95 to about 99 95 of the active ingredient, for example from about 0.195 to about 7095, for example from about 195 to about 30 95.

Незалежно від вибраного шляху застосування, сполуки згідно з даним винаходом, які можна застосовувати у формі фармацевтично прийнятної солі або в придатної гідратованої формі, та/або фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом формулюють у фармацевтично прийнятні формодози за допомогою загальноприйнятих способів, відомих фахівцю в даній області. "Фармацевтично прийнятна сіль" стосується солі, що зберігає потрібну біологічну активність батьківської сполуки та не вносить ніяких небажаних токсичних ефектів (див., наприклад, Вегде, 5.М. еї аї., У. Рпагт. зЗсі. 66, 1-19 (1977)). Приклади таких солей включають солі приєднання кислот і основ. Солі приєднання кислот включають такі, що вироблені з нетоксичних неорганічних кислот, наприклад, соляної, азотної, фосфорної, сірчаної, бромистоводневої, йодистоводневої, фосфористої кислоти і т.п., а також нетоксичних органічних кислот, наприклад, аліфатичних моно- та дикарбонових кислот, фенілзаміщених алканових кислот, гідроксіалканових кислот, ароматичних кислот, аліфатичних та ароматичних сульфонових кислот і т.п. Солі приєднання основ включають такі, що вироблені з лужних металів, наприклад, натрію, калію, магнію, кальцію і т.п., а також нетоксичних органічних амінів, наприклад, М, М'-дибензилетилендіаміну, М-метилглюкаміну, хлорпрокаїну, холіну, діетаноламіну, етилендіаміну, прокаїну і т.п.Regardless of the chosen route of administration, the compounds of the present invention, which may be administered in the form of a pharmaceutically acceptable salt or in a suitable hydrated form, and/or the pharmaceutical compositions of the present invention are formulated into pharmaceutically acceptable dosage forms using conventional methods known to those skilled in the art. . "Pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt that retains the desired biological activity of the parent compound and does not introduce any undesirable toxic effects (see, for example, Vegde, 5.M. ei ai., U. Rpagt. zZsi. 66, 1-19 ( 1977)). Examples of such salts include addition salts of acids and bases. Acid addition salts include those prepared from non-toxic inorganic acids, for example, hydrochloric, nitric, phosphoric, sulfuric, hydrobromic, hydroiodic, phosphoric acid, etc., as well as non-toxic organic acids, for example, aliphatic mono- and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, etc. Base addition salts include those made from alkali metals, for example, sodium, potassium, magnesium, calcium, etc., as well as non-toxic organic amines, for example, M, M'-dibenzylethylenediamine, M-methylglucamine, chlorprocaine, choline, diethanolamine, ethylenediamine, procaine, etc.

Фармацевтично прийнятні носії включають будь-які та всі придатні розчинники, диспергувальні середовища, покривні, протибактеріальні, протигрибкові агенти, ізотонічні агенти, антиоксиданти та агенти, що сповільнюють адсорбцію і т.п., які фізіологічно сумісні зіPharmaceutically acceptable carriers include any and all suitable solvents, dispersing media, coating, antibacterial, antifungal agents, isotonic agents, antioxidants and adsorption retarding agents, etc., which are physiologically compatible with

Зо сполукою згідно з даним винаходом.With a compound according to the present invention.

Приклади придатних водних і неводних носіїв, які можна застосовувати у фармацевтичних композиціях згідно з даним винаходом, включають воду, фізіологічний розчин, фізіологічний розчин на фосфатному буфері, етанол, декстрозу, поліоли (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь, поліетиленгліколь і т.п.) та їх придатні суміші, рослинні масла, наприклад, маслинову олію, кукурудзяну олію, бавовняну олію та кунжутну олію, колоїдні розчини карбоксиметилцелюлози, смолу трагаканта та органічні ефіри для ін'єкцій, наприклад, етилолеат, та/або різні буфери. Інші носії добре відомі в області фармацевтики.Examples of suitable aqueous and non-aqueous carriers that can be used in the pharmaceutical compositions of the present invention include water, saline, phosphate-buffered saline, ethanol, dextrose, polyols (e.g., glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.) and suitable mixtures thereof, vegetable oils such as olive oil, corn oil, cottonseed oil, and sesame oil, colloidal solutions of carboxymethylcellulose, gum tragacanth, and injectable organic ethers such as ethyl oleate, and/or various buffers. Other carriers are well known in the field of pharmaceuticals.

Фармацевтично прийнятні носії включають стерильні водні розчини або дисперсії та стерильні порошки для негайного готування стерильних розчинів або дисперсій для ін'єкцій.Pharmaceutically acceptable carriers include sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders for the immediate preparation of sterile solutions or dispersions for injection.

Застосування таких середовищ та агентів для фармацевтично активних речовин відомо в даній області. Крім того та доти, поки загальноприйняте середовище або агент не стає несумісним з активною сполукою, їх застосування у фармацевтичних композиціях охоплюється винаходом.The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is known in this area. Furthermore, and as long as the conventional medium or agent does not become incompatible with the active compound, their use in pharmaceutical compositions is encompassed by the invention.

Потрібну плинність можна підтримувати, наприклад, за допомогою покривних матеріалів, наприклад, лецитину, шляхом підтримання потрібного розміру частинок у випадку дисперсій і за допомогою будь-якої поверхнево-активної речовини.The required fluidity can be maintained, for example, by coating materials such as lecithin, by maintaining the required particle size in the case of dispersions, and by any surfactant.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можуть також включати прийнятні антиоксиданти, наприклад, (1) водорозчинні антиоксиданти, наприклад, аскорбінову кислоту, цистеїн гідрохлорид, бісульфат натрію, метабісульфат натрію, сульфіт натрію і т.п., (2) жиророзчинні антиоксиданти, наприклад, аскорбілпальмітат, бутильований гідроксіанізол (ВНА), бутильований гідрокситолуол (АНТ), лецитин, пропілгалат, альфа-токоферол і т.п., та (3) агенти хелатори металів, наприклад, лимонна кислота, етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТА), сорбіт, виннокам'яна кислота, фосфорна кислота і т.п.Pharmaceutical compositions according to the present invention may also include acceptable antioxidants, for example, (1) water-soluble antioxidants, for example, ascorbic acid, cysteine hydrochloride, sodium bisulfate, sodium metabisulfate, sodium sulfite, and the like, (2) fat-soluble antioxidants, for example, ascorbyl palmitate, butylated hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (ANT), lecithin, propyl gallate, alpha-tocopherol, etc., and (3) metal chelating agents, e.g., citric acid, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), sorbitol, tartaric acid acid, phosphoric acid, etc.

Фармацевтичні композиції згідно 3 даним винаходом можуть також включати агенти, що надають ізотонічність, наприклад, цукри, багатоатомні спирти, наприклад, маніт, сорбіт, гліцерин або хлористий натрій, у композиціях.Pharmaceutical compositions according to 3 of the present invention may also include isotonic agents, for example, sugars, polyhydric alcohols, for example, mannitol, sorbitol, glycerin or sodium chloride, in the compositions.

Фармацевтично прийнятні розріджувачі включають фізіологічний розчин і водні буферні розчини.Pharmaceutically acceptable diluents include saline and aqueous buffer solutions.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можуть також містити одну чи більше допоміжну речовину, придатну для вибраного шляху прийому, наприклад, консерванти, бо зволожуючі агенти, емульгувальні агенти, диспергувальні агенти, консерванти або буфери, які можуть збільшувати час зберігання або ефективність фармацевтичних композицій. Сполуки згідно з даним винаходом, можна, наприклад, змішувати з лактозою, сахарозою, порошками (наприклад, порошком крохмалю), ефірами целюлози та алканових кислот, стеариновою кислотою, стеаратом магнію, окисом магнію, натрієвими та кальцієвими солями фосфорної та сірчаної кислот, аравійською камеддю, желатином, альгінатом натрію, полівінілпіролідоном та/або полівініловим спиртом. Іншими прикладами ад'ювантів є 0521, ЗМ-С5Е, 5ВІ-172, гістамін дигідрохлорид, тимокартин, тіотепа, композиції монофосфорил-ліпід А/мікобактерії, галун, неповний ад'ювант Фрейнда (Ргешипа'5 адіимапі), монтанід І5А, ад'ювантна система риби (ії), ад'ювант ТйегМах, ад'ювантні суміші синтекс (5упіех адіимапі Топтшайопв), імуностимулювальні комплекси (ІЗСОМ5), ад'ювант гербу (дегбш), ЦфгГ (Сро) олігодезоксинуклеотиди, ліпополісахарид і поліінозинова.поліцитидинова кислота.Pharmaceutical compositions according to the present invention may also contain one or more excipients suitable for the chosen route of administration, for example, preservatives, as wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents, preservatives or buffers, which can increase the shelf life or effectiveness of the pharmaceutical compositions. Compounds according to the present invention can, for example, be mixed with lactose, sucrose, powders (for example, starch powder), cellulose and alkanoic acid esters, stearic acid, magnesium stearate, magnesium oxide, sodium and calcium salts of phosphoric and sulfuric acids, gum arabic , gelatin, sodium alginate, polyvinylpyrrolidone and/or polyvinyl alcohol. Other examples of adjuvants are 0521, ZM-C5E, 5VI-172, histamine dihydrochloride, thymocartin, thiotepa, monophosphoryl-lipid A/mycobacteria compositions, alum, incomplete Freund's adjuvant (Rgeshipa'5 adiimapi), montanide I5A, ad' fish adjuvant system (ii), TyegMach adjuvant, synthex adjuvant mixtures (5upiekh adiimapi Toptshayopv), immunostimulating complexes (IZSOM5), coat of arms adjuvant (degbsh), TsfgH (Cro) oligodeoxynucleotides, lipopolysaccharide and polyinosinic, polycytidinic acid.

Запобігання присутності мікроорганізмів можна забезпечити як за допомогою процедур стерилізації, так і шляхом включення різних протибактеріальних і протигрибкових агентів, наприклад, парабену, хлорбутанолу, фенолу, сорбінової кислоти і т.п. Додатково, тривалу абсорбцію фармацевтичній формі для ін'єкції можна надати шляхом включення агентів, які затримують абсорбцію, наприклад, моностеарату алюмінію та желатину.Prevention of the presence of microorganisms can be ensured both with the help of sterilization procedures and by including various antibacterial and antifungal agents, for example, paraben, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, etc. In addition, prolonged absorption of the pharmaceutical form for injection can be provided by including agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, що включають сполуку згідно з даним винаходом, можуть також включати його придатну сіль. Будь-яка придатна сіль, наприклад, сіль лужного металу в будь-якій придатній формі (наприклад, буферна сіль) може застосовуватися для стабілізації сполуки згідно з даним винаходом. Придатні солі звичайно включають хлорид натрію, сукцинат натрію, сульфат натрію, хлорид калію, хлорид магнію, сульфат магнію та хлорид кальцію. В одному втіленні, застосовують сіль алюмінію для стабілізації сполуки згідно з даним винаходом у фармацевтичній композиції згідно з даним винаходом, де сіль алюмінію може також служити як розріджувач, коли композицію призначають хворому.Pharmaceutical compositions according to the present invention comprising a compound according to the present invention may also include a suitable salt thereof. Any suitable salt, eg an alkali metal salt in any suitable form (eg a buffer salt) can be used to stabilize a compound of the present invention. Suitable salts typically include sodium chloride, sodium succinate, sodium sulfate, potassium chloride, magnesium chloride, magnesium sulfate, and calcium chloride. In one embodiment, an aluminum salt is used to stabilize a compound of the present invention in a pharmaceutical composition of the present invention, where the aluminum salt may also serve as a diluent when the composition is administered to a patient.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можуть існувати в різноманітних формах. Такі форми включають, наприклад, рідку, напівтверду та тверду лікарські форми, наприклад, рідкі розчини (наприклад, розчини для ін'єкцій та інфузій), дисперсії або суспензії, емульсії, мікроемульсії, гелі, креми, гранули, порошки, таблетки, пігулки, порошки, ліпосоми, дендримери та інші наночастинки (див., наприклад, Ваєек еї аїЇ., Мемйод5 Еплутої. 362, 240-9Pharmaceutical compositions according to the present invention can exist in various forms. Such forms include, for example, liquid, semi-solid and solid dosage forms, for example, liquid solutions (for example, solutions for injections and infusions), dispersions or suspensions, emulsions, microemulsions, gels, creams, granules, powders, tablets, pills, powders, liposomes, dendrimers, and other nanoparticles (see, for example, Vayeek et al., Memyod5 Eplutoi. 362, 240-9

Коо) (2003), МідамекКаг єї аї., Рнагт Незв. 21(3), 476-83 (2004), мікрочастинки та супозиторії.Co., Ltd.) (2003), MidamekKag eyi ai., Rnagt Nezv. 21(3), 476-83 (2004), microparticles and suppositories.

Оптимальна форма залежить від вибраного способу застосування, природи композиції та терапевтичного застосування. Рецептури можуть включати, наприклад, порошки, пасти, мазі, желе, воски, масла, ліпіди, ліпід-(катіонні або аніонні)-вмісні бульбашки, ДНК кон'югати, безводні абсорбційні пасти, емульсії масло-у-воді та вода-у-маслі, емульсії карбоваксу (поліетиленгліколі різних молекулярних мас), напівтверді гелі та напівтверді суміші, що містять карбовакс. Будь-що з переліченого вище може бути придатним для лікування та терапії згідно з даним винаходом, надаючи активний інгредієнт у фармацевтичній композиції, який не є деактивированим рецептуванням, і рецептура є фізіологічно сумісною зі шляхом введення. Див., наприклад,The optimal form depends on the chosen method of application, the nature of the composition and the therapeutic application. Formulations may include, for example, powders, pastes, ointments, jellies, waxes, oils, lipids, lipid (cationic or anionic)-containing vesicles, DNA conjugates, anhydrous absorbent pastes, oil-in-water and water-in emulsions. - oils, carbowax emulsions (polyethylene glycols of various molecular weights), semi-solid gels and semi-solid mixtures containing carbowax. Any of the above may be suitable for treatment and therapy according to the present invention, providing the active ingredient in a pharmaceutical composition that is not a deactivated formulation, and the formulation is physiologically compatible with the route of administration. See, for example,

Ромеї! єї аї!., "Сотрепаїцт ої ехсіріепів їог рагепієга! оптиїіайоп5" РОА .) Рпагт 5сі Тесппої. 52, 238-311 (1998) та цитати у ньому для додаткової інформації, що стосується допоміжних речовин і носіїв, відомих хімікам-фармацевтам.Romans! Yei ai!., "Sotrepaitst oi eksiriepiv yog ragepiega! optiiiaiop5" ROA .) Rpagt 5si Tesppoi. 52, 238-311 (1998) and references therein for additional information regarding excipients and carriers known to pharmaceutical chemists.

Сполуки згідно з даним винаходом можна одержувати з носіями, які будуть захищати сполуки від швидкого вивільнення, наприклад, рецептури з контрольованим вивільненням, включаючи імпланти, черезшкірні накладки (пластири) та мікроінкапсульовані системи доставки.The compounds of the present invention can be formulated with carriers that will protect the compounds from rapid release, such as controlled release formulations, including implants, transdermal patches, and microencapsulated delivery systems.

Такі носії можуть включати желатин, гліцерилмоностеарат, гліцерилдистеарат, біодеградовані біосумісні полімери, наприклад, етиленвінілацетат, поліангідриди, полігліколева кислота, колаген, поліортоефіри та полімолочна кислота самі по собі чи з воском, або інші матеріали, добре відомі в даній області. Способи одержання таких рецептур, в основному, відомі фахівцю в даній області. Див., наприклад, Зивіаіїпей апа Сопігоїїей Кеїеазе Огид Оеїїмегу Зузіетв, У...Such carriers may include gelatin, glyceryl monostearate, glyceryl distearate, biodegradable biocompatible polymers such as ethylene vinyl acetate, polyanhydrides, polyglycolic acid, collagen, polyorthoesters and polylactic acid alone or with wax, or other materials well known in the art. Methods of obtaining such formulations are generally known to a specialist in this field. See, e.g.

БО Вобіпзоп, єд., Магсеї! ОеккКетг, Іпс., Мем МоїКк, 1978.BECAUSE Wobipsop, ed., Magsei! OekkKetg, Ips., Mem MoiKk, 1978.

Щоб уводити композиції згідно з даним винаходом за допомогою певних шляхів введення, може бути необхідним покривати сполуку або вводити сполуку разом з матеріалом для запобігання її інактивації. Наприклад, сполуку згідно з даним винаходом можна вводити суб'єкту разом з придатним носієм, наприклад, у ліпосомах або розчиннику. Ліпосоми включають вода-в маслі-у воді СОЕ емульсії, а також і загальновідомі ліпосоми (5ігезап еї аї.,.. Меигоїттипої. 7, 27 (1984)).In order to administer the compositions of the present invention by certain routes of administration, it may be necessary to coat the compound or to administer the compound with a material to prevent its inactivation. For example, a compound of the present invention can be administered to a subject together with a suitable carrier, for example, in liposomes or a solvent. Liposomes include water-in-oil-in-water SOE emulsions, as well as well-known liposomes (5igezap ei ai.,.. Meigoittipoi. 7, 27 (1984)).

Залежно від шляху введення активну сполуку можна покривати матеріалом для захисту сполуки від дії кислот та інших природних умов, які можуть інактивувати сполуку. Наприклад, сполуку можна вводити суб'єкту з придатним носієм, наприклад, ліпосомами. Ліпосоми включають вода-в маслі-у воді СОЕ емульсії, а також загальновідомі ліпосоми (5іге)зап еї аї.,».Depending on the route of administration, the active compound may be coated with a material to protect the compound from acids and other natural conditions that may inactivate the compound. For example, the compound can be administered to a subject with a suitable carrier, such as liposomes. Liposomes include water-in-oil-in-water SOE emulsions, as well as the well-known liposomes (5ihe) zap eii ai.,».

Мешпгоїттипої. 7, 27 (1984)).Meshpgoittipoi. 7, 27 (1984)).

В одному втіленні сполуки згідно з даним винаходом можна включати в рецептури для забезпечення правильного розподілу іп мімо. Наприклад, гематоенцефалічний бар'єр (ГЕБ) виключає багато сильно гідрофільних сполук. Для забезпечення того, щоб терапевтичні сполуки згідно з даним винаходом перетинали ГЕБ (при необхідності), їх треба включати в рецептури, наприклад, з ліпосомами. Способи одержання ліпосом див., наприклад, в 05 4522811, 05 5374548 апа 5 5399331. Ліпосоми можуть включати один чи більше компонент, який вибірково переноситься в специфічну клітину або орган, що підсилює спрямовану доставку ліків (див., наприклад, М.М. Кападе 9. Сіїп. Рпагтасої. 29, 685 (1989)). Приклади напрямних компонентів включають фолат або біотин (див., наприклад, 5 5416016), манозиди (Штеауа еї аї.,In one embodiment, the compounds of the present invention can be incorporated into formulations to ensure proper distribution of ip mimo. For example, the blood-brain barrier (BBB) excludes many highly hydrophilic compounds. To ensure that the therapeutic compounds according to the present invention cross the BBB (if necessary), they should be included in formulations, for example, with liposomes. For methods of obtaining liposomes, see, for example, in 05 4522811, 05 5374548 apa 5 5399331. Liposomes can include one or more components that are selectively transferred to a specific cell or organ, which enhances the targeted delivery of drugs (see, for example, M.M. Kapade 9. Siip. Rpagtasoi. 29, 685 (1989)). Examples of guiding components include folate or biotin (see, e.g., 5 5416016), mannosides (Steaua et al.,

Віоспет. Віорпу5. Ке5. Соттип. 153, 1038 (1988)), антитіла (Р... ВІіоетап еї аї., РЕВЗ Г ей. 357, 140 (1995), М. Омаїз» еї аї., Апійтісгор. Адепі5 СпетоїпПпег. 39, 180 (1995)), поверхневий рецептор білка А (Вгізсое еї аіІ., Ат. У). РПувзіоЇї. 1233. 134 (1995)), різні види яких можуть включати фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом, а також сполуки винайдених молекул, р120 (Зсепгеїєег еї аї., У. Віої. Спет. 269, 9090 (1994)), див. також К. Кеіпапеп, М.І. І ашККапеп,Viospet. Viorpu5. Ke5. Sottype 153, 1038 (1988)), antibodies (R... VIioetap ei ai., REVZ G ei. 357, 140 (1995), M. Omaiz" ei ai., Apiitishor. Adepi5 SpetoipPpeg. 39, 180 (1995)) , surface receptor of protein A (Vgizsoe ei aiI., At. U). RPuvzioi. 1233. 134 (1995)), various types of which may include pharmaceutical compositions according to the present invention, as well as compounds of the invented molecules, p120 (Zsepgeiieg eyi ai., U. Vioi. Spet. 269, 9090 (1994)), see also K. Keipapep, M.I. And ashKKapep,

ЕЕВ5 Гей. 346, 123 (1994) та 99. КіПоп, 19. РіаІег, Іттипоптейосд3з 4, 273 (1994).EEV5 Hey. 346, 123 (1994) and 99. KiPop, 19. Riag, Ittipopteiosd3z 4, 273 (1994).

В одному втіленні даного винаходу сполуки згідно з даним винаходом включені в рецептуру з ліпосомами. В наступному втіленні, ліпосоми включають компонент націлювання. В наступному втіленні сполуки в ліпосомах доставляються за допомогою болюсного вливання в ділянку, розташовану поблизу від потрібної області, наприклад, ділянки запалення чи інфекції або ділянки пухлини. Композиція повинна бути текучою в такому ступені, щоб з нею було легко управлятися за допомогою шприца. Вона повинна бути стабільною під час виробництва та зберігання і повинна бути забезпечена від забруднюючої дії мікроорганізмів, наприклад, бактерій і грибків.In one embodiment of the present invention, the compounds of the present invention are included in a formulation with liposomes. In a further embodiment, the liposomes include a targeting component. In another embodiment, compounds in liposomes are delivered by bolus infusion to a site located close to the desired area, such as an area of inflammation or infection or a tumor site. The composition should be fluid to such an extent that it is easy to control with a syringe. It must be stable during production and storage and must be protected from the contaminating action of microorganisms, such as bacteria and fungi.

В одному втіленні, сполуки згідно з даним винаходом можна включати в рецептуру для зменшення їхнього перенесення через плаценту. Це можна зробити за допомогою способів, відомих в даній області, наприклад, за допомогою ПЕГилювання сполук або застосуванняIn one embodiment, the compounds of the present invention can be included in a formulation to reduce their transfer across the placenta. This can be done using methods known in the field, for example, by means of PEGylation of compounds or application

Каб)» фрагментів. Далі, можна послатися на Сиппіпдпат-Нипаїез с. еї аї., У. Іттипої. МеШйоав5. 152, 177-190 (1992), та на І апаог М., Апп АПегду Авзійта Іттипої 74, 279-283 (1995).Kab)" fragments. Next, you can refer to Sippipdpat-Nipayez p. ei ai., U. Ittipoi. Meshioav5. 152, 177-190 (1992), and on I apaog M., App APegdu Avziyta Ittipoi 74, 279-283 (1995).

Фармацевтично прийнятні носії для парентерального застосування включають стерильні водні розчини або дисперсії або стерильні порошки для негайного приготування стерильних розчинів або дисперсій для ін'єкції Застосування таких середовищ та агентів для фармацевтично активних речовин відомо в даній області. Крім тих випадків, коли загальноприйняте середовище або агент несумісні з активною сполукою, їх застосування у фармацевтичних композиціях згідно з даним винаходом охоплюється винаходом. Додаткові активні сполуки також можна включати в композиції.Pharmaceutically acceptable carriers for parenteral administration include sterile aqueous solutions or dispersions or sterile powders for the immediate preparation of sterile solutions or dispersions for injection. The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is known in the art. Except where the conventional medium or agent is incompatible with the active compound, their use in pharmaceutical compositions according to the present invention is encompassed by the invention. Additional active compounds can also be included in the composition.

Фармацевтичні композиції для ін'єкції звичайно повинні бути стерильними та стабільними в умовах виробництва та зберігання. Композиції можна готовити у вигляді розчинів, мікроемульсій, ліпосом та інших організованих структур, придатних для високої концентрації ліків. Носій може бути водним або неводним розчинником або середовищем для дисперсії, які містять, наприклад, воду, етанол, поліоли (наприклад, гліцерин, пропіленгліколь, поліетиленгліколь і т.п.) та їх придатні суміші, рослинні масла, наприклад, маслинову олію, і органічні ефіри для ін'єкцій, наприклад, етилолеат. Потрібну плинність можна підтримувати, наприклад, за допомогою матеріалів покриття, наприклад, лецитину, за допомогою підтримання потрібного розміру частинок у випадку дисперсій і за допомогою будь-якої поверхнево-активної речовини. У багатьох випадках краще включати в композиції ізотонічні агенти, наприклад, цукри, багатоатомні спирти, наприклад, гліцерин, маніт, сорбіт або хлористий натрій. Продовжену абсорбцію фармацевтичній формі для ін'єкції можна надати шляхом включення агентів, які затримують абсорбцію, наприклад, солей моностеарату та желатину. Стерильні розчини для ін'єксцій можна одержувати шляхом включення активної сполуки в необхідній кількості в придатний розчинник з одним або комбінацією складових, наприклад, перелічених вище, при необхідності, з наступною стерилізацією шляхом мікрофільтрації. В основному, дисперсії одержують шляхом включення сполуки в стерильний засіб, що містить основне середовище для дисперсії та інші необхідні інгредієнти, наприклад, з перелічених вище. У випадку стерильних порошків для одержання стерильного розчину для ін'єкцій прикладами способів одержання є вакуумне сушіння та ліофілізація, що приводить до одержання порошку активного інгредієнта плюс будь-який додатковий потрібний інгредієнт з його попередньо стерилізованого шляхом стерильного фільтрування розчину.Pharmaceutical compositions for injection should usually be sterile and stable under manufacturing and storage conditions. Compositions can be prepared in the form of solutions, microemulsions, liposomes and other organized structures suitable for high concentration of drugs. The carrier can be an aqueous or non-aqueous solvent or dispersion medium containing, for example, water, ethanol, polyols (eg, glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.) and suitable mixtures thereof, vegetable oils, for example, olive oil, and organic ethers for injections, for example, ethyl oleate. The desired fluidity can be maintained, for example, by coating materials such as lecithin, by maintaining the desired particle size in the case of dispersions, and by any surfactant. In many cases, it is better to include isotonic agents in the composition, for example, sugars, polyhydric alcohols, for example, glycerin, mannitol, sorbitol or sodium chloride. Prolonged absorption of the pharmaceutical form for injection can be provided by including agents that delay absorption, for example, salts of monostearate and gelatin. Sterile solutions for injections can be obtained by including the active compound in the required amount in a suitable solvent with one or a combination of components, for example, those listed above, if necessary, followed by sterilization by microfiltration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the compound into a sterile vehicle containing a base medium for dispersion and other necessary ingredients, such as those listed above. In the case of sterile powders for the preparation of a sterile solution for injection, examples of methods of preparation are vacuum drying and lyophilization, which results in the preparation of a powder of the active ingredient plus any additional desired ingredient from its previously sterilized solution by sterile filtration.

Стерильні розчини для ін'єкцій можна одержувати шляхом включення активної сполуки в необхідній кількості в придатний розчинник з одним або комбінацією складових, наприклад, перелічених вище, при необхідності, з наступною стерилізацією шляхом мікрофільтрації. В основному, дисперсії одержують шляхом включення сполуки в стерильний засіб, що містить основне середовище для дисперсії та інші необхідні інгредієнти з перелічених вище. У випадку стерильних порошків для одержання стерильного розчину для ін'єкцій прикладами способів одержання є вакуумне сушіння та ліофілізація, що приводить до одержання порошку активного інгредієнта плюс додатковий потрібний інгредієнт із його попередньо стерилізованого шляхом стерильного фільтрування розчину.Sterile solutions for injections can be obtained by incorporating the active compound in the required amount in a suitable solvent with one or a combination of components, for example, those listed above, if necessary, followed by sterilization by microfiltration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the compound into a sterile vehicle containing a base medium for dispersion and other necessary ingredients listed above. In the case of sterile powders for the preparation of a sterile solution for injection, examples of preparation methods are vacuum drying and lyophilization, which leads to the preparation of a powder of the active ingredient plus an additional desired ingredient from its pre-sterilized solution by sterile filtration.

Фармацевтична композиція згідно з даним винаходом може містити одну сполуку згідно з даним винаходом або комбінацію сполук згідно з даним винаходом. Так, в одному втіленні, фармацевтична композиція згідно 3з даним винаходом включає комбінацію декількох (наприклад, двох чи більше) сполук згідно з даним винаходом, які діють по різних механізмах, наприклад, одну сполуку, яка в основному діє шляхом включення СОС, у комбінації з іншою сполукою, яка в основному діє шляхом включення апоптозу.A pharmaceutical composition according to the present invention may contain a single compound according to the present invention or a combination of compounds according to the present invention. Thus, in one embodiment, a pharmaceutical composition according to the present invention comprises a combination of several (e.g., two or more) compounds according to the present invention that act by different mechanisms, for example, one compound that primarily acts by incorporating SOC, in combination with another compound that mainly works by turning on apoptosis.

СОЗ8ВР (включаючи анти-СО38 антитіла, імунокон'югати, біспецифічні/умультиспецифічні молекули, композиції та інші похідні, описані тут) згідно з даним винаходом мають численні іп міїго та іп мімо діагностичні та терапевтичні застосування, які включають діагностику та лікування порушень, що включають клітини, які експресують СОЗ38. Наприклад, антитіла можна давати клітинам у культурі, наприклад, іп міо або ех мімо, або суб'єктам людям, наприклад, іп мімо, для лікування, запобігання та діагностики різноманітних порушень. Як застосовується тут, термін "суб'єкт" включає людей і тварин, відмінних від людини, які відповідають на СОЗ8ВР. Суб'єкти можуть, наприклад, включати хворих людей з порушеннями, які можна коректувати або усунути шляхом інгібування функції СОЗ38, наприклад, ферментативної активності, передачі сигналу, індукції експресії цитокінів, індукції проліферації або диференціації та/або індукції лізису та/або знищення/зменшення числа експресуючих СОЗ8 клітин.The COZ8BPs (including anti-CO38 antibodies, immunoconjugates, bispecific/multispecific molecules, compositions and other derivatives described herein) of the present invention have numerous ip miigo and ip mimo diagnostic and therapeutic applications that include the diagnosis and treatment of disorders including cells expressing POP38. For example, antibodies can be administered to cells in culture, eg ip myo or ex mimo, or to human subjects, eg ip mimo, for the treatment, prevention and diagnosis of a variety of disorders. As used herein, the term "subject" includes humans and non-human animals that respond to SOZ8VR. Subjects may, for example, include human patients with disorders that can be corrected or eliminated by inhibiting POP38 function, e.g., enzymatic activity, signal transduction, induction of cytokine expression, induction of proliferation or differentiation, and/or induction of lysis and/or destruction/reduction the number of cells expressing SOZ8.

Наприклад, СОЗ8ВР можна застосовувати для вияву іп мімо або іп міо однієї чи більше з таких біологічних активностей: інгібування функції СО38, (наприклад, ферментативної активності, передачі сигналу, індукції експресії цитокінів, індукції проліферації або диференціаціїFor example, COZ8BP can be used to detect ip mimo or ip myo for one or more of the following biological activities: inhibition of CO38 function, (eg, enzymatic activity, signal transduction, induction of cytokine expression, induction of proliferation or differentiation

Зо та/або індукції лізису), знищення експресуючих СОЗ38 клітин, опосередкування фагоцитозу абоZo and/or induction of lysis), destruction of cells expressing SOC38, mediation of phagocytosis or

АрСС продукуючих СЮОЗ8 клітин у присутності ефекторних клітин людини та шляхом опосередкування СОС експресуючих СОЗ3З8 клітин в присутності комплементу або шляхом знищення експресуючих СОЗ8 клітин за допомогою апоптозу.АрСС of ХОЗ8-producing cells in the presence of human effector cells and by mediating the ОС of ХОЗ3З8-expressing cells in the presence of complement or by killing ХОЗ8-expressing cells by means of apoptosis.

Будь-яка композиція, що включає СОЗ8ВР антитіла згідно з даним винаходом, які мають ділянки зв'язування комплементу, наприклад, частини Ідс1, -2, або -3 або ІДМ, які зв'язують комплемент, може також застосовуватися в присутності комплементу. В одному втіленні, обробку ех мімо популяції клітин, що включає клітини мішені СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та придатні ефекторні клітини, можна доповнювати шляхом додавання комплементу або сироватки, що містить комплемент. Фагоцитоз або лізис клітин мішені, покритих СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, можна поліпшити шляхом зв'язування білків комплементу. В одному втіленні клітини мішені, покриті СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, можуть також лізуватися комплементом. В одному втіленні клітини, покриті СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, не активують комплемент.Any composition comprising SOZ8BP antibodies of the present invention that have complement-binding sites, such as parts of Ids1, -2, or -3 or complement-binding IDMs, can also be used in the presence of complement. In one embodiment, ex vivo treatment of a population of cells comprising the target cells of SOZ8BP according to the present invention and suitable effector cells can be supplemented by the addition of complement or complement-containing serum. Phagocytosis or lysis of target cells coated with SOZ8BP according to the present invention can be improved by binding complement proteins. In one embodiment, target cells coated with SOZ8BP according to the present invention can also be lysed by complement. In one embodiment, cells coated with SOZ8BP according to the present invention do not activate complement.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна також застосовувати разом з комплементом.СОЗ8ВР according to the present invention can also be used together with complement.

Відповідно, даний винахід охоплює композиції, які включають СОЗ8ВР із сироваткою або комплементом. У таких композиціях комплемент находиться в тісній близькості від СОЗ8ВР, наприклад, за рахунок кон'югації, або може підбиратися для одночасного застосування.Accordingly, the present invention encompasses compositions that include serum- or complement-enriched SOZ8BP. In such compositions, the complement is in close proximity to СОЗ8ВР, for example, due to conjugation, or it can be selected for simultaneous use.

Альтернативно, СОЗ8ВР і сироватку або комплемент можна застосовувати окремо.Alternatively, SOZ8BP and serum or complement can be administered separately.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом також можна застосовувати для націлювання на експресуючі ЕсукК або СОЗ38 клітини, наприклад, щоб помітити такі клітини. Для такого застосування СОЗ8ВР може бути зв'язаний з молекулою, яку можна детектувати. Так, даний винахід пропонує способи локалізації іп мімо або іп міо клітин, що експресують Ес рецептори, наприклад, ЕсукК або СО38. Детектованими мітками можуть бути, наприклад, радіоізотоп, флуоресцентна сполука, фермент або кофактор ферменту.COZ8BP according to the present invention can also be used to target EsukK or COZ38 expressing cells, for example to mark such cells. For such an application, SOZ8BP can be linked to a molecule that can be detected. Thus, the present invention offers methods of localization of ip mimo or ip myo cells expressing Es receptors, for example, EsukK or CO38. Detected labels can be, for example, a radioisotope, a fluorescent compound, an enzyme or an enzyme cofactor.

Специфічні для мішені ефекторні клітини, наприклад, ефекторні клітини, зв'язані з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, можна також застосовувати як терапевтичні агенти. Ефекторні клітини для націлювання можуть бути лейкоцитами людини, такими як макрофаги, нейтрофіли або моноцити. Інші клітини включають еозинофіли, природні клітини-вбивці та інші клітини, що несуть Ідо- або ІдА-рецептори. Якщо потрібно, ефекторні клітини можна одержувати у суб'єкта бо на лікуванні. Ефекторні клітини, специфічні для мішені, можна давати у вигляді суспензії клітин у фізіологічно прийнятному розчині. Число призначуваних клітин може складати приблизно від 108 до 109, але варіює залежно від терапевтичної мети. В основному, кількість повинна бути достатньою для одержання локалізації на клітині мішені, наприклад, раковій клітині, що експресує СОЗ8, і для ефективного знищення клітини, наприклад, за рахунок фагоцитозу або лізису.Target-specific effector cells, for example, effector cells bound to SOZ8BP according to the present invention, can also be used as therapeutic agents. Effector cells for targeting can be human leukocytes, such as macrophages, neutrophils or monocytes. Other cells include eosinophils, natural killer cells, and other cells bearing Ido or Ida receptors. If desired, effector cells can be obtained from a subject undergoing treatment. Effector cells specific for the target can be given in the form of a suspension of cells in a physiologically acceptable solution. The number of cells to be administered can range from about 108 to 109, but varies depending on the therapeutic goal. Basically, the amount should be sufficient to localize to a target cell, for example, a cancer cell expressing COZ8, and to effectively destroy the cell, for example, by phagocytosis or lysis.

Терапія специфічними для мішені ефекторними клітинами може проводитися в сполученні з іншими техніками для видалення клітин мішені. Наприклад, протиракову терапію із застосуванням СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та/або ефекторних клітин, озброєних такими композиціями, можна застосовувати в сполученні з хіміотерапією. Додатково, комбінаторну імунотерапію можна застосовувати для направляння двох різних цитотоксичних ефекторних популяцій на відторгнення пухлинної клітини. Наприклад, СОЗ8ВР, зв'язаний з анти-Есук або анти-СО38, можна застосовувати в сполученні з агентами, що специфічно зв'язують ддс- абоTarget-specific effector cell therapy can be used in conjunction with other techniques to remove target cells. For example, anti-cancer therapy using SOZ8BP according to the present invention and/or effector cells armed with such compositions can be used in combination with chemotherapy. Additionally, combinatorial immunotherapy can be used to target two different cytotoxic effector populations for tumor cell rejection. For example, COZ8BP bound to anti-Esuk or anti-CO38 can be used in combination with agents that specifically bind dds- or

ІДА-рецептори. Біспецифічні та мультиспецифічні молекули за даним винаходом також можна застосовувати для модуляції рівнів са або Есук на ефекторних клітинах, наприклад, за допомогою покриття та знищення рецепторів на поверхні клітини. Суміші анти-Ес рецепторів можна також застосовувати для цієї мети.IDA receptors. The bispecific and multispecific molecules of the present invention can also be used to modulate Ca or Esuk levels on effector cells, for example, by coating and knocking down receptors on the cell surface. Mixtures of anti-E receptors can also be used for this purpose.

В одному втіленні, даний винахід пропонує способи детектування присутності СОЗ8 антигену в зразку або вимірювання кількості СОЗ38 антигену, які включають контактування зразка та контрольного зразка з СОЗ8ВР, що специфічно зв'язується з СОЗ8, в умовах, що дозволяють утворення комплексу між СОЗ8ВР або його частиною та СО38. Утворення комплексу далі детектують, причому різниця в утворенні комплексу між зразком і контрольним зразком є показником присутності СОЗ8-антигену в зразку. Приклади способів для детектування при імуноаналізі включають, без обмеження, ЕГІЗА, КІА, ЕАС5 аналіз, аналіз за допомогою плазмонового резонансу, хроматографічний аналіз, імуногістохімію тканин, блотинг (УмевіегпIn one embodiment, the present invention provides methods for detecting the presence of a COZ8 antigen in a sample or measuring the amount of COZ38 antigen, which include contacting the sample and a control sample with COZ8BP that specifically binds to COZ8, under conditions that allow the formation of a complex between COZ8BP or a portion thereof and CO38. The formation of the complex is further detected, and the difference in the formation of the complex between the sample and the control sample is an indicator of the presence of SOZ8-antigen in the sample. Examples of immunoassay detection methods include, but are not limited to, EGISA, KIA, EAS5 assay, plasmon resonance assay, chromatographic assay, tissue immunohistochemistry, blotting (Umeviegp

Біо) та/або імунопреципітацію.Bio) and/or immunoprecipitation.

В одному втіленні, СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна застосовувати для детектування рівнів циркулюючого СОЗ38 або рівнів клітин, що містять СОЗ8 на поверхні своєї мембрани, де ці рівні можуть потім бути зв'язані із симптомами певних захворювань.In one embodiment, COZ8BP according to the present invention can be used to detect levels of circulating COZ38 or levels of cells containing COZ8 on the surface of their membrane, where these levels can then be associated with symptoms of certain diseases.

Альтернативно, СОЗВВР можна застосовувати для виснажування або взаємодії з функцієюAlternatively, SOZVVR can be used to deplete or interact with function

Зо експресуючих СЮОЗ8 клітин, у такий спосіб визначаючи ці клітини як важливі посередники захворювання. Цього можна досягти шляхом контактування зразка та контрольного зразка з анти-СО38 антитілом в умовах, що дозволяють утворення комплексу між антитілом та СОЗ8В, детекції та порівняння контролю та зразка.From the SHUOZ8-expressing cells, thus identifying these cells as important mediators of the disease. This can be achieved by contacting the sample and the control sample with an anti-CO38 antibody under conditions that allow the formation of a complex between the antibody and COZ8B, detection and comparison of the control and the sample.

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна спочатку тестувати на присутність активності зв'язування для терапевтичного або діагностичного застосування іп міо. Наприклад, СОЗ8ВР можна тестувати за допомогою проточної цитометрії. Далі, можна аналізувати активністьSOZ8BP according to the present invention can first be tested for the presence of binding activity for therapeutic or diagnostic use of IP myo. For example, SOZ8BP can be tested by flow cytometry. Next, you can analyze the activity

СОЗ8ВР у запуску, щонайменше, однієї опосередкованої ефектором активності ефекторної клітини. Наприклад, можна аналізувати здатність анти-СОЗ38 антитіл згідно з даним винаходом запускати СОС та/або апоптоз. Протоколи для аналізу СОС, гомотипової адгезії, утворення молекулярних кластерів або апоптозу добре відомі в даній області техніки.СОЗ8ВР in triggering at least one effector-mediated activity of the effector cell. For example, the ability of anti-COS38 antibodies according to the present invention to trigger SOC and/or apoptosis can be assayed. Protocols for the analysis of SOC, homotypic adhesion, molecular cluster formation, or apoptosis are well known in the art.

В одному втіленні, даний винахід пропонує спосіб детектування присутності або кількісної оцінки експресуючих СО38 клітин іп мімо або іп міго. Спосіб включає (1) надання суб'єктуIn one embodiment, the present invention provides a method for detecting the presence or quantification of CO38-expressing IP mimo or IP migo cells. The method includes (1) providing a subject

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, кон'югованого з детектованим маркером, (2) обстеження суб'єкта придатним способом для детекції згаданого детектованого маркера для ідентифікації зон, що містять експресуючі СОЗ8 клітини.COZ8BP according to the present invention, conjugated with a detected marker, (2) examination of the subject by a method suitable for the detection of said detected marker to identify zones containing expressing COZ8 cells.

В одному втіленні, імунокон'югати згідно з даним винаходом можна застосовувати для націлювання сполук (наприклад, терапевтичних агентів, міток, цитотоксинів, імуносупресантів і т.д.) на клітини, що мають на своїй поверхні СОЗ8, із застосуванням таких націлюючих сполук як терапевтичних сполук в імунокон'югатах згідно з даним винаходом.In one embodiment, the immunoconjugates of the present invention can be used to target compounds (eg, therapeutic agents, labels, cytotoxins, immunosuppressants, etc.) to cells bearing POP8 on their surface, using such targeting compounds as therapeutic compounds in immunoconjugates according to the present invention.

В одному втіленні, даний винахід також надає способи локалізації ех мімо або іп міго експресуючих СО38 клітин (наприклад, за допомогою детектованої мітки, наприклад, радіоїзотопу, флуоресцентної сполуки, ферменту або кофактора ферменту).In one embodiment, the present invention also provides methods for localizing ex mimo or ip migo expressing CO38 cells (eg, using a detectable label, eg, radioisotope, fluorescent compound, enzyme, or enzyme cofactor).

В одному втіленні даний винахід пропонує способи знищення клітин, що мають СОЗ38, зв'язаний з поверхнею, шляхом введення імунотоксинів згідно з даним винаходом.In one embodiment, the present invention provides methods of killing cells having surface-bound POP38 by administering immunotoxins according to the present invention.

Даний винахід пропонує способи лікування або запобігання порушень, що включають експресуючі СОЗ38 клітини, у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично активної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього. Такі СОЗ8ВР застосовують для інгібування індукованих СО38 активностей, зв'язаних 3 деякими порушеннями, щоб знищити або зменшити число експресуючих СОЗ8 клітин.The present invention provides methods of treating or preventing disorders involving COZ38-expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically active amount of COZ8BP according to the present invention to a subject in need thereof. Such SOZ8BPs are used to inhibit CO38-induced activities associated with 3 certain disorders in order to destroy or reduce the number of expressing SOZ8 cells.

Такий спосіб включає введення суб'єкту композиції СОЗ8ВР згідно з даним винаходом в кількості, ефективній для лікування або запобігання порушення. СОЗ8ВР композицію можна вводити саму по собі або з іншим терапевтичним агентом, наприклад, як описано тут в іншого місці, що діє в сполученні або синергічно з СОЗ8ВР композицією для лікування або запобігання порушення, що залучає експресуючі СОЗ8 клітини. Альтернативно, можна застосовувати імунокон'югати для знищення клітин, які мають на своїй поверхні експресований СОЗ8, шляхом націлювання цитотоксинів або радитоксинів на СОЗ8.Such a method includes administering to the subject a composition of SOZ8BP according to the present invention in an amount effective to treat or prevent the disorder. A COZ8BP composition can be administered alone or with another therapeutic agent, for example, as described elsewhere herein, that acts in combination or synergistically with a COZ8BP composition to treat or prevent a disorder involving COZ8-expressing cells. Alternatively, immunoconjugates can be used to kill cells that have expressed POP8 on their surface by targeting POP8 with cytotoxins or raditoxins.

В одному втіленні даного винаходу порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини, може бути пухлиногенним порушенням, наприклад, порушенням, яке характеризується присутністю пухлинних клітин, що експресують СО38, наприклад, лімфомою В-клітин, злоякісним переродженням плазматичних клітин, лімфомоютТ/МК клітин та мієлоїдними злоякісними порушеннями.In one embodiment of the present invention, a disorder involving COZ8-expressing cells may be a tumorigenic disorder, e.g., a disorder characterized by the presence of tumor cells expressing CO38, e.g., B-cell lymphoma, plasma cell malignancy, T/MK cell lymphoma, and myeloid malignant disorders.

Приклади таких пухлиногенних захворювань включають лімфому/лейкози В-клітин, включаючи лімфобластичний лейкоз/лімфому попередника В-клітин і неходжкінську лімфому В- клітин, гострий промієлоцитарний лейкоз, гострий лімфобластозний лейкоз і неоплазми зрілихExamples of such tumorigenic diseases include B-cell lymphoma/leukemia, including B-cell lymphoblastic leukemia/progenitor lymphoma and B-cell non-Hodgkin lymphoma, acute promyelocytic leukemia, acute lymphoblastic leukemia, and mature neoplasms.

В-клітин, наприклад, хронічний лімфоцитарний лейкоз В-клітин/умалу лімфоцитарну лімфому, гострий лімфоцитарний лейкоз В-клітин, пролімфоцитарний лейкоз В-клітин, лімфопластичну лімфому, лімфому клітин мантії, фолікулярну лімфому, включаючи низький ступінь, проміжний ступінь і високий ступінь, лімфому шкірних фолікулярних центрів, лімфому В-клітин маргінальної зони (МАГТ типу, вузлового та селезінкового типу), лейкоз ворсистих клітин, дифузійну лімфому великих В-клітин, лімфому Беркітта, плазмацитому, мієлому плазматичних клітин, лейкоз плазматичних клітин, посттрансплантаційне лімфопроліферативне порушення, макроглобулінемію Вальденстрема, лейкоз плазматичних клітин та анапластичну лімфому великих клітин.B-cell, eg B-cell chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma, B-cell acute lymphocytic leukemia, B-cell prolymphocytic leukemia, lymphoplastic lymphoma, mantle cell lymphoma, follicular lymphoma, including low-grade, intermediate-grade and high-grade, lymphoma of skin follicular centers, B-cell lymphoma of the marginal zone (MAGT type, nodal and splenic type), hairy cell leukemia, diffuse large B-cell lymphoma, Burkitt's lymphoma, plasmacytoma, plasma cell myeloma, plasma cell leukemia, post-transplantation lymphoproliferative disorder, macroglobulinemia Waldenström, plasma cell leukemia and large cell anaplastic lymphoma.

В одному втіленні, порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини, є множинною мієломою.In one embodiment, the disorder comprising the COZ8-expressing cells is multiple myeloma.

Прикладами неходжкінських лімфом В-клітин є лімфоматоїдний лімфогрануломатоз, первинна ефузіонна лімфома, інтраваскулярна лімфома великих В-клітин, медіастинальна лімфома великих В-клітин, захворювання важких ланцюгів (включаючи у, |н і «є захворювання),Examples of non-Hodgkin's B-cell lymphomas are lymphomatoid lymphogranulomatosis, primary effusion lymphoma, intravascular large B-cell lymphoma, mediastinal large B-cell lymphoma, heavy chain disease (including y, |n and "ie diseases),

Зо лімфоми, індуковані терапією імуносупресивними агентами, наприклад, лімфома, індукована циклоспорином і лімфома, індукована метотриксатом.From lymphomas induced by therapy with immunosuppressive agents, for example, cyclosporine-induced lymphoma and methotrexate-induced lymphoma.

В одному втіленні даного винаходу порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини, може бути лімфомою Ходжкіна.In one embodiment of the present invention, the disorder involving COZ8-expressing cells may be Hodgkin's lymphoma.

Прикладами порушень, що включають експресуючі СОЗ8 клітини, можуть бути злоякісні переродження, що відбулися з Т та МК клітин, включаючи неоплазми зрілих Т-клітин та МК клітин, включаючи пролімфоцитарний лейкоз Т-клітин, великий гранулярний лімфоцитарний лейкоз великих Т-клітин, агресивний лейкоз МК клітин, лейкоз/лімфому Т-клітин дорослих, лімфому позавузлових МК/Т-клітин, лімфому Т-клітин назального типу, ентеропатичного типу, лімфому печінково-селезінкових Т-клітин, підшкірну панікулітоподібну лімфому Т-клітин, бластичну лімфому МК клітин, фунгоїдний мікоз/синдром Сезарі, лімфопроліферативне порушення первинних шкірних СОЗО позитивних Т-клітин (первинна шкірна анапластична лімфома великих клітин С-АЇСІ!, лімфоматоїдний папулез, граничні ушкодження), ангіомунобластичну лімфому Т-клітин, неспецифічну лімфому периферичних Т-клітин та анапластичну лімфому великих клітин.Examples of disorders involving SOC8-expressing cells can be malignant transformations arising from T and MK cells, including neoplasms of mature T cells and MK cells, including T-cell prolymphocytic leukemia, large T-cell large granular lymphocytic leukemia, aggressive leukemia MK cell, adult T-cell leukemia/lymphoma, extranodal MK/T-cell lymphoma, nasal T-cell lymphoma, enteropathic type, hepatosplenic T-cell lymphoma, subcutaneous panniculitis T-cell lymphoma, MK cell blastic lymphoma, fungoid mycosis/Sézary syndrome, lymphoproliferative disorder of primary cutaneous SOZO-positive T-cells (primary cutaneous anaplastic large-cell lymphoma C-AISI!, lymphomatoid papulosis, borderline lesions), angioimmunoblastic T-cell lymphoma, nonspecific peripheral T-cell lymphoma, and anaplastic large-cell lymphoma .

Приклади злоякісних захворювань, що виникли з мієлоїдних клітин, включають гострий мієлоїдний лейкоз, включаючи гострий промієлоцитарний лейкоз і хронічні мієлопроліферативні захворювання, включаючи хронічний мієлоїдний лейкоз.Examples of malignant diseases arising from myeloid cells include acute myeloid leukemia, including acute promyelocytic leukemia, and chronic myeloproliferative diseases, including chronic myeloid leukemia.

В одному втіленні даного винаходу порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини, може бути імунним порушенням, при якому залучені експресуючі СОЗ38 В-клітини, моноцити та Т- клітини.In one embodiment of the present invention, the disorder involving SOC8-expressing cells may be an immune disorder involving SOC38-expressing B-cells, monocytes, and T-cells.

Приклади імунних порушень, при яких залучені експресуючі СОЗ8 В-клітини, моноцити та Т- клітини, включають аутоімунні порушення, наприклад, псоріаз, псоріатичний артрит, дерматити, системну склеродерму та склероз, запальне захворювання кишечнику, хворобу Крона, виразковий коліт, синдром респіраторного захворювання, менінгіт, енцефаліт, увеїт, гломерулонефрит, екзему, астму, атеросклероз, дефіцит адгезії лейкоцитів, розсіяний склероз, синдром Рейно, синдром Шегрена, початковий ювенільний діабет, хворобу Рейтера, хворобуExamples of immune disorders in which SOZ8-expressing B cells, monocytes, and T cells are involved include autoimmune disorders such as psoriasis, psoriatic arthritis, dermatitis, systemic scleroderma and sclerosis, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, ulcerative colitis, respiratory disease syndrome , meningitis, encephalitis, uveitis, glomerulonephritis, eczema, asthma, atherosclerosis, leukocyte adhesion deficiency, multiple sclerosis, Raynaud's syndrome, Sjogren's syndrome, initial juvenile diabetes, Reiter's disease,

Бехчета, імунний складний нефрит, ДА нефропатію, ІДМ полінейропатію, імуно-опосередковану тромбоцитопенію, наприклад, гостру ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру та хронічну ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру, гемолітичну анемію, міастенію вагітних, вовчак нирок, бо системний червоний вовчак, ревматоїдний артрит, атопічний дерматит, пухирчатку, хворобуBehçet's, immune complex nephritis, DA nephropathy, IDM polyneuropathy, immune-mediated thrombocytopenia, such as acute idiopathic thrombocytopenic purpura and chronic idiopathic thrombocytopenic purpura, hemolytic anemia, myasthenia gravis, renal lupus, because systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, atopic dermatitis, pemphigus , disease

Грейвса, тиреоїдит Хашимото, грануломатоз Вегенера, синдром Оменна, хронічну ниркову недостатність, гострий інфекційний мононуклеоз, розсіяний склероз, НІМ та захворювання, зв'язані з вірусом герпесу. Далі, прикладами є синдром тяжкого гострого дихального ускладнення та хореоретиніт. Далі, включені інші захворювання та порушення, наприклад, такі, що обумовлені або опосередковані інфекцією В-клітин вірусом, наприклад, вірусом Епштейн-Graves' disease, Hashimoto's thyroiditis, Wegener's granulomatosis, Omen syndrome, chronic renal failure, acute infectious mononucleosis, multiple sclerosis, NIM, and herpes virus-related diseases. Further, examples are severe acute respiratory syndrome and choreoretinitis. Further, other diseases and disorders are included, e.g., those caused by or mediated by infection of B cells with a virus, e.g., Epstein-Barr virus.

Барра.Barra.

В одному втіленні, порушення, що залучає експресуючі СЮОЗ8 клітини, є ревматоїдним артритом.In one embodiment, the disorder involving SHOZ8-expressing cells is rheumatoid arthritis.

Інші приклади запальних, імунних та/або аутоїмунних порушень, при яких аутоантитіла та/або надмірна активність В та Т лімфоцитів є значними, і які можна лікувати згідно з даним винаходом, включають такі:Other examples of inflammatory, immune and/or autoimmune disorders in which autoantibodies and/or overactivity of B and T lymphocytes are significant and which may be treated according to the present invention include the following:

Васкулідити та інші захворювання посудин, наприклад, мікроскопічний поліангіїт, синдромVasculitis and other diseases of vessels, for example, microscopic polyangiitis, syndrome

Чарг-Штрауса та інші АМСА-зв'язані васкулідити, поліартрит вузлуватий, основний кріоглобулінемічний васкулідит, шкірний лейкоцитокластичний ангіїт, хворобу Кавазаки, артеріїтCharg-Strauss and other AMSA-related vasculitis, polyarthritis nodosa, primary cryoglobulinemic vasculitis, cutaneous leukocytoclastic angiitis, Kawasaki disease, arteritis

Такаясу, артеріїт гігантських клітин, пурпуру Енош-Шенлейна, первинний або ізольований церебральний ангіїт, еритему вузлувату, облітеруючий тромбангіїт, тромботичну тромбоцитопенічну пурпуру (включаючи гемолітичний уремічний синдром) і вторинні васкулідити, включаючи шкірний лейкоцитокластичний васкулідит (наприклад, вторинний при гепатиті В, гепатиті С, макроглобулінемії Вальденстрема, неоплазіях В-клітин, ревматоїдному артриті, синдромі Шегрена або системному червоному вовчаку); далі прикладами є еритема вузлувата, алергійний васкуліт, панікуліт, хвороба Вебер-Кристіана, гіперглобулінемічна пурпура та хвороба Бергера;Takayasu, giant cell arteritis, Enosh-Schönlein purpura, primary or isolated cerebral angiitis, erythema nodosum, thromboangiitis obliterans, thrombotic thrombocytopenic purpura (including hemolytic uremic syndrome), and secondary vasculitides, including cutaneous leukocytoclastic vasculitis (eg, secondary to hepatitis B, hepatitis C , Waldenström's macroglobulinemia, B-cell neoplasia, rheumatoid arthritis, Sjogren's syndrome or systemic lupus erythematosus); further examples are erythema nodosum, allergic vasculitis, panniculitis, Weber-Christian disease, hyperglobulinemic purpura, and Berger's disease;

Шкірні порушення, наприклад, контактні дерматити, дерматоз лінійного ІдА, вітиліго, піодерму гангренозну, надбаний бульозний епідермоліз (ерідегтоїубхіє Бийоза асадпівйа), звичайну пухирчатку (включаючи рубцевий пемфігоїд (сісайгісіаї ретрпідоід) і бульозний пемфігоїд (биПои5 ретрпідоіа)), кругову алопецію (включаючи загальну плішивість (аіоресіа ипімегзаїйє) і повну плішивість (аіоресіа (0оїаїї5)), герпесоподібний дерматит (дегптаййівSkin disorders, such as contact dermatitis, dermatosis linear IdA, vitiligo, pyoderma gangrenosum, epidermolysis bullosa acquired (eridegtoiubhiye Biyoza asadpivya), pemphigus vulgaris (including cicatricial pemphigoid (sisaigisiai retripidoia) and bullous pemphigoid (biPoi5 retripidoia)), including alopecia areata (incl. baldness (aioresia ipimegzaiiye) and complete baldness (aioresia (0oiaiii5)), herpes-like dermatitis (degptaiyiv

ПегреїйогІтії), поліморфну еритему та хронічну аутоїмунну кропивницю (включаючи ангіоневротичну едему та зв'язаний із кропивницею васкуліт (игпісагіа! мазсиїйів5));Pegreiogiitis), polymorphic erythema and chronic autoimmune urticaria (including angioneurotic edema and urticaria-related vasculitis (igpisaggia! mazsiiiiv5));

Зо Імуноопосередковані цитопенії, наприклад, аутоїмунну нейтропенію та чисту аплазію еритроцитів;From Immune-mediated cytopenias, for example, autoimmune neutropenia and pure aplasia of erythrocytes;

Порушення сполучної тканини, наприклад, СМ5 вовчак, дискоїдний червоний вовчак, СКЕ5Т синдром, змішане захворювання сполучної тканини, поліоміозит/дерматоміозит, міозит тілець включення, вторинний амілоїдоз, кріоглобулінемію типу І і типу Ії, фіброміалгію, синдром фосфоліпідних антитіл, вторинну гемофілію, поворотний поліхондрит, саркоїдоз, синдром скованої людини та ревматична лихоманка; далі прикладом є еозинофільний фасциліт;Connective tissue disorders, eg CM5 lupus, discoid lupus erythematosus, SKE5T syndrome, mixed connective tissue disease, poliomyositis/dermatomyositis, inclusion body myositis, secondary amyloidosis, type I and type II cryoglobulinemia, fibromyalgia, phospholipid antibody syndrome, secondary hemophilia, reversible polychondritis , sarcoidosis, shackled man syndrome and rheumatic fever; further example is eosinophilic fascilitis;

Артрити, наприклад, анкілоїдний спондиліт, ювенільний хронічний артрит, хворобу Стілла дорослих і синдром ЗАРНО; далі прикладами є сарколеїт, реактивний артрит, хвороба Стілла та подагра;Arthritis, such as ankylosing spondylitis, juvenile chronic arthritis, adult Still's disease, and ZARNO syndrome; further examples are sarcoleitis, reactive arthritis, Still's disease, and gout;

Гематологічні порушення, наприклад, апластичну анемію, первинну гемолітичну анемію (включаючи синдром холодного аглютиніну), гемолітичну анемію, вторинну для СІЇ або системного червоного вовчака, синдром РОЕМ5, перніціозну анемію та гіперглобулінемічну пурпуру Вальдемстрема; далі приклади включають агранулоцитоз, аутоїмунну нейтропенію, хворобу Франкліна, хворобу Селігмана, хвороба гамма важкого ланцюга, паранейропластичний синдром, вторинний для тимоми та лімфом, паранейропластичний синдром, вторинний для тимоми та лімфом і утворення інгібітора фактора МІ;Hematologic disorders, such as aplastic anemia, primary hemolytic anemia (including cold agglutinin syndrome), hemolytic anemia secondary to SLE or systemic lupus erythematosus, ROEM5 syndrome, pernicious anemia, and hyperglobulinemic Waldenström purpura; further examples include agranulocytosis, autoimmune neutropenia, Franklin disease, Seligman disease, gamma heavy chain disease, paraneuroplastic syndrome secondary to thymoma and lymphoma, paraneuroplastic syndrome secondary to thymoma and lymphoma, and MI factor inhibitor formation;

Ендокринопатії, наприклад, поліендокринопатію та хворобу Адисона, далі прикладами є аутоїмунна гіпоглікемия, аутоїмунний гіпотиреоїдит, аутоїмунний інсуліновий синдром, тиреоїдит де-Кервена та опосередкована антитілом до рецептора інсуліну стійкість до інсуліну;Endocrinopathies, such as polyendocrinopathy and Addison's disease, further examples are autoimmune hypoglycemia, autoimmune hypothyroidism, autoimmune insulin syndrome, de Quervain thyroiditis, and insulin receptor antibody-mediated insulin resistance;

Гепато-гастроінтестінальні порушення, наприклад, захворювання целіак, хворобу Віппла, первинний жовчний цироз, хронічний активний гепатит і первинний склеротичний холангіїт, подальшим прикладом є аутоїмунний гастрит;Hepato-gastrointestinal disorders, for example, celiac disease, Whipple's disease, primary biliary cirrhosis, chronic active hepatitis and primary sclerosing cholangitis, a further example is autoimmune gastritis;

Нефропатії, наприклад, швидкий прогресуючий гломерулонефрит, постстрептококовий нефрит, синдром Соодравзіиге, мембранний гломерулонефрит і кріоглобулінемічний нефрит, далі прикладом є хвороба мінімальної зміни;Nephropathies, for example, rapidly progressive glomerulonephritis, poststreptococcal nephritis, Soodravziige syndrome, membranous glomerulonephritis, and cryoglobulinemic nephritis, further example is minimal change disease;

Нейрологічні порушення, наприклад, аутоїмунні нейропатії, топопецйгйі5 тиПйріех, міастенічний синдром Ламберта-Ігона, хорею Сіденхама, їабез догзаїї5 і синдром Пийена-Барре, далі прикладами є мієлопатичний/тропікальний спастичний парапарез, міастенія вагітних, гостра запальна демієлінізуюча полінейропатія та хронічна запальна демієлінізуюча бо полінейропатія, розсіяний склероз;Neurological disorders, for example, autoimmune neuropathies, topocephaly, Lambert-Egon myasthenic syndrome, Sydenham's chorea, yabes dogzai5 and Piyen-Barre syndrome, further examples are myelopathic/tropical spastic paraparesis, myasthenia gravis, acute inflammatory demyelinating polyneuropathy and chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy. , multiple sclerosis;

Серцеві та легеневі порушення, наприклад, СОРО, фіброзний альвеоліт, облітеруючий бронхіолит, алергійний аспергілоз, фіброзний цистит, синдром Леффлера, міокардит і перикардит, далі прикладами є гіперсенситивна пневмонія та паранеопластичний синдром, вторинний для раку легенів;Cardiopulmonary disorders, such as OSA, alveolitis fibrosis, bronchiolitis obliterans, allergic aspergillosis, cystitis fibrosis, Leffler's syndrome, myocarditis and pericarditis, further examples are hypersensitivity pneumonia and paraneoplastic syndrome secondary to lung cancer;

Алергійні порушення, наприклад, бронхіальну астму, гіпер-Іде синдром, далі приклад включає атаицговів Тидах;Allergic disorders, for example, bronchial asthma, hyper-Ide syndrome, further examples include ataytsgov's Tydakh;

Офтальмологічні захворювання, наприклад, ідіопатичний хоріоретиніт;Ophthalmological diseases, for example, idiopathic chorioretinitis;

Інфекційні захворювання, наприклад, інфекцію парвовірусу В (включаючи синдром рук-і- носків);Infectious diseases, for example, parvovirus B infection (including hand-and-foot syndrome);

Гінекологічні-родопомічні порушення, наприклад, рецидивний аборт, рецидивну втрату плода і внутрішньоматкове уповільнення росту, далі прикладом є паранеопластичний синдром, вторинний для гінекологічних неоплазм;Gynecological and obstetric disorders, for example, recurrent abortion, recurrent fetal loss and intrauterine growth retardation, further example is paraneoplastic syndrome secondary to gynecological neoplasms;

Порушення чоловічої репродуктивної системи, наприклад, паранеопластичний синдром, вторинний для неоплазми яєчка, іDisorders of the male reproductive system, for example, paraneoplastic syndrome secondary to testicular neoplasm, and

Порушення, що виникають при трансплантації, наприклад, відторгнення алотрансплантата або ксенотрансплантата та хворобу трансплантат-проти-хазяїна.Transplantation disorders such as allograft or xenograft rejection and graft-versus-host disease.

Антитіло можна також призначати профілактично, щоб зменшити ризик розвитку раку, наприклад, при пухлиногенному порушенні, як описано вище, затримати настання події при такому розвитку раку талабо зменшити ризик рецидиву під час ремісії раку. Це може бути особливо корисним для хворих, коли важко локалізувати пухлину, про присутність якої відомо завдяки іншим біологічним факторам.The antibody can also be administered prophylactically to reduce the risk of cancer development, for example, in a tumorigenic disorder as described above, to delay the onset of an event in such cancer development, or to reduce the risk of recurrence during cancer remission. This can be especially useful for patients who have difficulty localizing a tumor whose presence is known due to other biological factors.

Композиції згідно з даним винаходом можуть включати "терапевтично ефективну кількість" або "профілактично ефективну кількість" СОЗ8ВР. "Терапевтично ефективна кількість" стосується кількості, ефективної при необхідних дозуваннях і періоді часу застосування для досягнення терапевтичного результату. Терапевтично ефективна кількість СОЗ8ВР може варіювати відповідно до таких факторів, як стадія хвороби, вік, стать і вага індивідуума та здатність СОЗ8ВР виявляти потрібну відповідь у індивідуума. Терапевтично ефективна кількість є також такою, у якій будь-які токсичні або шкідливі впливи антитіла або частин антитіла переважуються терапевтично доброчинними впливами. "Профілактично ефективна кількість"Compositions according to the present invention may include a "therapeutically effective amount" or a "prophylactically effective amount" of SOZ8BP. "Therapeutically effective amount" refers to the amount effective at the required dosages and duration of administration to achieve a therapeutic effect. The therapeutically effective amount of COZ8BP may vary according to factors such as the stage of the disease, the age, sex, and weight of the individual and the ability of COZ8BP to elicit the desired response in the individual. A therapeutically effective amount is also one in which any toxic or deleterious effects of the antibody or antibody portions are outweighed by the therapeutically beneficial effects. "Prophylactically effective amount"

Зо стосується кількості, ефективної в потрібних дозуваннях і періоді часу застосування для досягнення бажаного профілактичного результату (наприклад, зменшення ймовірності розвитку порушення, зменшення інтенсивності або поширення порушення, збільшення ймовірності виживання при погрозі порушення, затримання настання хворобливого стану і т.д.). Звичайно, оскільки профілактична доза застосовується у суб'єктів до або на ранній стадії хвороби, профілактично ефективна кількість буде нижче терапевтично ефективної кількості. "Терапевтично ефективну кількість" для пухлинної терапії можна також вимірювати по їх здатності стабілізувати розвиток хвороби. Здатність сполуки інгібувати рак можна оцінити у тваринній модельній системі, що дає прогноз ефективності для пухлин людини. Альтернативно, цю властивість композиції можна оцінити шляхом дослідження здатності сполуки інгібувати ріст клітин або індукувати апоптоз за допомогою аналізу іп мйго, відомого кваліфікованому практичному фахівцю. Терапевтично ефективна кількість або терапевтична сполука може зменшити розмір пухлини або яким-небудь іншим способом полегшити симптоми захворювання у суб'єкта. Фахівець в даній області зможе визначити таку кількість, грунтуючись на таких факторах, як розмір суб'єкта, тяжкість симптомів у суб'єкта та дана композиція або вибраний спосіб застосування. "Терапевтично ефективна кількість" при ревматоїдному артриті може приводити, щонайменше, до АСКго попереднього визначення поліпшення (Ргеїйтіпагу Оейпйопо оїZo refers to the amount effective in the required dosages and time period of application to achieve the desired prophylactic result (for example, reducing the probability of developing a disorder, reducing the intensity or spread of a disorder, increasing the probability of survival in the event of a threat of a disorder, delaying the onset of a painful condition, etc.). Of course, since the prophylactic dose is administered to subjects before or at an early stage of the disease, the prophylactically effective amount will be lower than the therapeutically effective amount. A "therapeutically effective amount" for tumor therapy can also be measured by their ability to stabilize disease progression. The ability of a compound to inhibit cancer can be evaluated in an animal model system, which provides a prediction of efficacy for human tumors. Alternatively, this property of the composition can be assessed by examining the ability of the compound to inhibit cell growth or induce apoptosis using an IP myo assay known to the skilled practitioner. A therapeutically effective amount or therapeutic compound can reduce the size of a tumor or otherwise alleviate the symptoms of a disease in a subject. One of ordinary skill in the art will be able to determine such amount based on factors such as the size of the subject, the severity of the subject's symptoms, and the composition or route of administration chosen. "Therapeutically effective amount" in rheumatoid arthritis can lead to, at least, ASA preliminary determination of improvement

Іптргометепі) у хворих, наприклад, щонайменше, до АСК»5хо попереднього визначення поліпшення, наприклад, щонайменше, до АСКоо попереднього визначення поліпшення.Iptrhometepi) in patients, for example, at least until АСК»5хо preliminary determination of improvement, for example, at least until АСКоо of preliminary determination of improvement.

АСВАго попереднього визначення поліпшення визначають як: 22095 поліпшення в числі припухлих суглобів Тепдег удоїпії Соцпі (ТОУС) і числі опухлих суглобів Зм/оПеп Одоїпі Соипі (59), і 220 95 поліпшення в трьох з таких 5 оцінок: оцінка болю хворим (МА5)1, загальна оцінка хворим (МА5), загальна оцінка терапевтом (МА5), немічність хворого по його самооцінці (НАС), реактант гострої фази (СЕР або ЕЗК).The ASVAgo of the preliminary definition of improvement is defined as: 22095 improvement in the number of swollen joints of Tepdeg Udoipii Soipi (TOUS) and the number of swollen joints Zm/oPep Odoipi Soipi (59), and 220 95 improvement in three of the following 5 assessments: assessment of pain by patients (MA5)1 , general assessment by the patient (MA5), general assessment by the therapist (MA5), weakness of the patient according to his self-assessment (NAS), acute phase reactant (SEP or ESR).

АСвбо та АСКоо визначаються у такий саме спосіб з поліпшеннями 25095 та 270 Об, відповідно. Більш детально див. ЕРеї5зоп еї аї., іп Атегісап Соїеде ої Кпештай|іоду РгеїйтіпагуASvbo and ASkoo are determined in the same way with improvements of 25095 and 270 Ob, respectively. For more details, see ERei5zop ei ai., ip Ategisap Soyede oi Kpeshtai|iodu Rgeiitipagu

Оеїіпйоп ої Ітргометепі іп АНпештайоіа Аппийїів; Апйийї5 Апешйтаїївт 38, 727-735 (1995).Oeiipyop oi Itrgometepi ip ANpeshtaioia Appiyiiv; Apyiyi5 Apeshitayiivt 38, 727-735 (1995).

Альтернативно, терапевтично ефективну кількість для ревматоїдного артриту можна вимірювати за допомогою БА5 (рахунок активності хвороби), включаючи СА528 та/"або ЮА556, як визначено ЕШГАК.Alternatively, a therapeutically effective amount for rheumatoid arthritis can be measured using BA5 (disease activity score), including CA528 and/or UA556, as determined by ESHGAK.

Режими дозування підбирають так, щоб надати оптимальну потрібну відповідь (наприклад, терапевтичну відповідь). Наприклад, можна призначати єдине болюсне вливання, можна призначати кілька розділених доз протягом часу, або дозу можна пропорційно зменшити чи збільшувати за показниками терапевтичної ситуації. Парентеральні композиції можна включати в одиниці лікарської форми для простоти застосування та однаковості дозування. Одиниця лікарської форми, як застосовується тут, стосується звичайно окремих фізичних одиниць, придатних як одиничні дози для суб'єктів на лікуванні; кожна одиниця містить кількість активної сполуки, розраховану на одержання потрібного терапевтичного впливу, в сполученні з необхідним фармацевтичним носієм. Специфікація одиниць лікарської форми згідно з даним винаходом продиктована і прямо залежить від (а) унікальних характеристик активної сполуки та даного терапевтичного ефекту, якого треба досягти і (б) обмежень, властивих даній області техніки, щодо розрахунку кількостей такої активної сполуки для лікування з урахуванням чутливості індивідуумів.Dosage regimens are selected to provide the optimal desired response (eg, therapeutic response). For example, a single bolus infusion may be administered, multiple divided doses may be administered over time, or the dose may be proportionally reduced or increased according to the therapeutic situation. Parenteral formulations can be incorporated into unit dosage forms for ease of administration and uniformity of dosage. A unit of dosage form, as used herein, generally refers to individual physical units suitable as unit doses for subjects under treatment; each unit contains the amount of active compound calculated to obtain the desired therapeutic effect in combination with the necessary pharmaceutical carrier. The specification of dosage form units according to the present invention is dictated by and directly depends on (a) the unique characteristics of the active compound and the given therapeutic effect to be achieved and (b) the limitations inherent in this field of technology in calculating the amounts of such active compound for treatment taking into account sensitivity individuals

Ефективні дозування та схеми введення доз для СОЗ8ВР згідно з даним винаходом залежать від захворювання або стану, який треба лікувати, і можуть бути визначені фахівцем в даній області. Наприклад, необмежуючий інтервал для терапевтично ефективної кількості сполуки згідно з даним винаходом становить приблизно 0,1-100 мг/кг, наприклад, приблизно 0,1-50 мг/кг, наприклад, приблизно 0,1-20 мг/кг, наприклад, приблизно 0,1-10 мг/кг, наприклад, приблизно 0,5, наприклад, приблизно 0,3, приблизно 1, або приблизно З мг/кг.Effective dosages and dosing regimens for SOZ8VR according to the present invention depend on the disease or condition to be treated and can be determined by one of ordinary skill in the art. For example, a non-limiting range for a therapeutically effective amount of a compound of the present invention is about 0.1-100 mg/kg, e.g., about 0.1-50 mg/kg, e.g., about 0.1-20 mg/kg, e.g. about 0.1-10 mg/kg, for example about 0.5, for example about 0.3, about 1, or about 3 mg/kg.

Терапевт або ветеринар, які є звичайними фахівцями в даній області, легко визначать і пропишуть ефективну кількість необхідної фармацевтичної композиції. Наприклад, терапевт або ветеринар можуть почати з доз СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, включених у фармацевтичні композиції, на рівнях нижче необхідних для досягнення потрібної терапевтичної дії, і поступово збільшувати дозування, поки не буде досягнута потрібна дія. В основному, придатною щоденною дозою композиції згідно з даним винаходом стане така кількість сполуки, що є найнижчою дозою, ефективною для надання терапевтичного впливу. Така ефективнаA physician or veterinarian of ordinary skill in the art will readily determine and prescribe an effective amount of the required pharmaceutical composition. For example, a therapist or veterinarian may begin with doses of the SOZ8BP of the present invention included in pharmaceutical compositions at levels below those necessary to achieve the desired therapeutic effect, and gradually increase the dosage until the desired effect is achieved. In general, a suitable daily dose of a composition according to the present invention will be that amount of compound that is the lowest dose effective to provide a therapeutic effect. So effective

Зо доза, в основному, буде залежати від вищеописаних факторів. Застосування може бути внутрішньовенним, внутрішньом'язовим, внутрішньоочеревинним або підшкірним і, наприклад, призначатися поблизу від ділянки мішені. При необхідності, ефективну щоденну дозу фармацевтичної композиції можна давати як дві, три, чотири, п'ять, шість чи більше піддоз, призначуваних окремо через потрібні інтервали часу протягом доби при необхідності в одиницях формодози. Хоча для сполуки згідно з даним винаходом можливе призначення її самої, краще призначати сполуку у вигляді фармацевтичної композиції, як описано вище.The dose will mainly depend on the factors described above. Administration can be intravenous, intramuscular, intraperitoneal or subcutaneous and, for example, administered near the target site. If necessary, the effective daily dose of the pharmaceutical composition can be given as two, three, four, five, six or more sub-doses, administered separately at the required time intervals during the day, if necessary in units of formodose. Although it is possible for the compound of the present invention to be administered by itself, it is preferable to administer the compound in the form of a pharmaceutical composition as described above.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна призначати за допомогою інфузії при щотижневому дозуванні від 10 до 500 мг/м-, наприклад, від 200 до 400 мг/м". Таке застосування можна повторювати, наприклад, від 1 до 8 разів, наприклад, 3-5 разів.In one embodiment, the SOZ8VR according to the present invention can be administered by infusion at a weekly dosage of 10 to 500 mg/m-, for example, 200 to 400 mg/m". Such administration can be repeated, for example, from 1 to 8 times, e.g. , 3-5 times.

Застосовувати можна за допомогою безперервної інфузії протягом періоду часу від 2 до 24 годин, наприклад, від 2 до 12 годин.It can be administered by continuous infusion over a period of 2 to 24 hours, for example, 2 to 12 hours.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна призначати за допомогою повільної інфузії протягом тривалого періоду часу, наприклад, більше 24 годин, щоб зменшити токсичні побічні ефекти.In one embodiment, the COZ8BP of the present invention can be administered by slow infusion over a long period of time, eg, more than 24 hours, to reduce toxic side effects.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна призначати при щотижневому дозуванні від 250 мг до 2000 мг, наприклад, 300 мг, 500 мг, 700 мг, 1000 мг, 1500 мг або 2000 мг, до 8 разів, наприклад, від 4 до б разів. Застосовувати можна за допомогою безперервної інфузії протягом періоду часу від 2 до 24 годин, наприклад, від 2 до 12 годин. Такий режим можна повторювати один чи більше разів, при необхідності, через 6 місяців або 12 місяців. Дозування можна визначати шляхом вимірювання кількості сполуки згідно з даним винаходом в крові при проведенні лікування шляхом, наприклад, узяття біологічних зразків і застосування антиідіотипових антитіл, які націлені на область зв'язування антигену СОЗ8ВР згідно з даним винаходом.In one embodiment, the COZ8VR according to the present invention can be administered at a weekly dosage of from 250 mg to 2000 mg, for example, 300 mg, 500 mg, 700 mg, 1000 mg, 1500 mg or 2000 mg, up to 8 times, for example from 4 to b times It can be administered by continuous infusion over a period of 2 to 24 hours, for example, 2 to 12 hours. This regimen can be repeated one or more times, if necessary, after 6 months or 12 months. The dosage can be determined by measuring the amount of the compound according to the present invention in the blood during treatment by, for example, taking biological samples and using anti-idiotypic antibodies that target the binding region of the SOZ8BP antigen according to the present invention.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна призначати за допомогою підтримуючої терапії, наприклад, раз на тиждень протягом 6 місяців чи більше.In one embodiment, the SOZ8VR according to the present invention can be administered with maintenance therapy, for example, once a week for 6 months or more.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна призначати за схемою, що включає одну інфузію СОЗ8ВР згідно з даним винаходом з наступною інфузію СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, кон'югованого з радіоїзотопом. Схему можна повторювати, наприклад, на 7-9 днів пізніше.In one embodiment, the COZ8BP according to the present invention can be administered according to a scheme that includes one infusion of the COZ8BP according to the present invention followed by an infusion of the COZ8BP according to the present invention, conjugated with a radioisotope. The scheme can be repeated, for example, 7-9 days later.

Як нелімітуючі приклади, лікування згідно з даним винаходом можна проводити у вигляді щоденного дозування сполуки згідно з даним винаходом в кількості приблизно 0,1-100 мг/кг, наприклад, 0,5, 0,9, 1,0,1,1,1,5,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26,27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 або 100 мг/кг в день, принаймні, через один із днів 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27,28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 або 40, або альтернативно, принаймні, через одну з тижнів 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 після початку лікування або будь-якої їхньої комбінації, застосовуючи одиночну або розділені дози кожні 24, 12, 8, 6, 4 або 2 години, або будь-яку їх комбінацію.As non-limiting examples, treatment according to the present invention can be administered in the form of a daily dosage of a compound according to the present invention in an amount of about 0.1-100 mg/kg, for example, 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1,5,2,3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, or 100 mg/kg/day on at least one of days 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, or 40, or alternatively, at least one of weeks 1,2, 3,4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, or 20 after initiation of treatment or any combination thereof, using single or divided doses every 24, 12, 8, 6, 4, or 2 hours, or any their combination.

Фармацевтичні композиції згідно з даним винаходом можна також призначати в комбінаційній терапії, наприклад, в комбінації з іншими терапевтичними агентами, що стосуються захворювання або стану, який треба лікувати. Такі введення можуть бути одночасними, роздільними або послідовними. Для одночасного введення агенти можна давати у вигляді однієї композиції або у вигляді окремих композицій, як потрібно.The pharmaceutical compositions of the present invention may also be administered in combination therapy, for example, in combination with other therapeutic agents relevant to the disease or condition to be treated. Such inputs can be simultaneous, separate or sequential. For simultaneous administration, the agents can be given as a single composition or as separate compositions, as required.

Відповідно, даний винахід пропонує способи лікування порушення, що залучає експресуючіAccordingly, the present invention provides methods of treating a disorder involving expression

СОЗ38 клітини, як описано вище, причому способи включають введення СОЗ8ВР згідно з даним винаходом в комбінації з одним чи більше терапевтичним агентом, як описано вище.COZ38 cells as described above, and the methods include the introduction of COZ8BP according to the present invention in combination with one or more therapeutic agents as described above.

Даний винахід також надає застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення, щонайменше, з одним хіміотерапевтичним агентом при порушенні, що залучає експресуючі СОЗ8 клітини, як описано вище.The present invention also provides the use of COZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for administration with at least one chemotherapeutic agent in a disorder involving COZ8-expressing cells as described above.

В одному втіленні комбінована терапія може включати введення композиції згідно з даним винаходом разом з, щонайменше, одним хіміотерапевтичним агентом, щонайменше, одним протизапальним агентом або, щонайменше, одним імуносупресивним та/або імуномодуляторним агентом.In one embodiment, combination therapy may include administration of a composition according to the present invention together with at least one chemotherapeutic agent, at least one anti-inflammatory agent, or at least one immunosuppressive and/or immunomodulatory agent.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що залучає експресуючі СЮОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного хіміотерапевтичного агента суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving SHOZ8 expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of the SHOZ8BP according to the present invention and at least one chemotherapeutic agent to a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного хіміотерапевтичного агента суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of a SOZ8BP according to the present invention and at least one chemotherapeutic agent to a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення, щонайменше, 3 одним хіміотерапевтичним агентом для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for the administration of at least 3 one chemotherapeutic agent for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати з антиметаболітів, таких як метотриксат, б-меркаптопурин, б-тіогуанідин, цитарабін, флюдарабін, 5-фторурацил, декарбазин, гідроксисечовина, аспарагіназа, гемцитабін, кладротибін і подібні агенти.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be selected from antimetabolites such as methotrexate, b-mercaptopurine, b-thioguanidine, cytarabine, fludarabine, 5-fluorouracil, decarbazine, hydroxyurea, asparaginase, gemcitabine, cladrotibine, and similar agents.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати з алкілувальних агентів, таких як мехлоретамін, тіоепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (ВМО), ломустин (ССМО), циклофосфамід, бусульфан, дибромманіт, стрептозотоксин, дакарбазин (ОТІС), прокарбазин, мітоміцин С, цисплатин та інші похідні платини, наприклад, карбоплатин, і подібні агенти.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent may be selected from alkylating agents such as mechlorethamine, thioep, chlorambucil, melphalan, carmustine (WMO), lomustine (SSMO), cyclophosphamide, busulfan, dibrommannite, streptozototoxin, dacarbazine (OTIS), procarbazine, mitomycin C, cisplatin and other platinum derivatives, such as carboplatin, and similar agents.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати з антибіотиків, таких як дактиноміцин (раніше актиноміцин), блеоміцин, даунорубіцин (раніше дауноміцин), доксорубіцин, ідарубіцин, мітраміцин, каліхеаміцин, мітоміцин, мітоксантрон, плікаміцин, антраміцин (АМС) і подібні агенти.In one embodiment, such chemotherapeutic agent can be selected from antibiotics such as dactinomycin (formerly actinomycin), bleomycin, daunorubicin (formerly daunomycin), doxorubicin, idarubicin, mithramycin, calicheamicin, mitomycin, mitoxantrone, plicamycin, anthramycin (AMC), and similar agents.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати із протимітотичних агентів, таких як таксани, наприклад, доцетаксель і паклітаксель, та алкалоїдів барвінку, наприклад, віндезин, вінкристин, вінбластин і вінорелбін.In one embodiment, such chemotherapeutic agent can be selected from antimitotic agents such as taxanes, eg, docetaxel and paclitaxel, and periwinkle alkaloids, eg, vindesine, vincristine, vinblastine, and vinorelbine.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати з інгібітора топоїзомерази, такого як топотекан.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be selected from a topoisomerase inhibitor such as topotecan.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент можна вибрати з інгібіторів фактора росту, таких як ЕгбІ (ЕСЕК) (наприклад, гефітиніб (ІгеззафФ), цетуксимаб (ЕгойихФ), ерлотиніб (ТагсемаФ), НиМах-ЕСЕг (28 розкритий в МО 2002/100348) і подібні агенти), інгібітор Егр2 (Негг/пеи) (наприклад, трастузумаб (НегсеріїпФ)) і подібні агенти) та подібні агенти. В одному втіленні такий інгібітор фактора росту може бути інгібітором фарнезил-трансферази, наприклад,In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be selected from growth factor inhibitors such as EgbI (ESEK) (e.g., gefitinib (IgezzafF), cetuximab (EgoyihF), erlotinib (TagsemaF), NiMax-ESEg (28 disclosed in MO 2002/100348) and similar agents), an Egr2 inhibitor (Negg/pei) (eg, trastuzumab (NeggseriP)) and similar agents) and similar agents. In one embodiment, such a growth factor inhibitor may be a farnesyl transferase inhibitor, e.g.

ЗСН-66336 та К115777. В одному втіленні такий інгібітор фактора росту може бути інгібітором фактора росту ендотелію (МЕСЕ), наприклад, бевасизумаб (АмавііпФ)).ZSN-66336 and K115777. In one embodiment, such a growth factor inhibitor may be an endothelial growth factor inhibitor (EGF), such as bevacizumab (AmaviipF)).

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент може бути інгібітором тирозинкінази, наприклад, іматиніб (Сіїмес, сівєемес 571571), лапатиніб, РТК787/2К222584 і подібні агенти.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be a tyrosine kinase inhibitor, for example, imatinib (Siimes, Siviemes 571571), lapatinib, RTK787/2K222584, and similar agents.

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент може бути інгібітором гістон-деацетилази.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be a histone deacetylase inhibitor.

Приклади таких інгібіторів гістон-деацетилази включають основані на гідроксамовій кислоті гібридні полярні сполуки, наприклад, 5АНА (субероїланілідгідроксамова кислота).Examples of such histone deacetylase inhibitors include hydroxamic acid-based hybrid polar compounds such as 5ANA (suberoylanilide hydroxamic acid).

В одному втіленні такий хіміотерапевтичний агент може бути інгібітором РЗ38 МАР кінази, наприклад, ЗСІО-469.In one embodiment, such a chemotherapeutic agent can be an inhibitor of RZ38 MAP kinase, for example, ZSIO-469.

В одному втіленні даний винахід пропонує способи лікування порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількостіIn one embodiment, the present invention provides methods of treating a disorder involving SOC8-expressing cells, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount

СОЗ8ВР згідно 3 даним винаходом і, щонайменше, одного інгібітора ангіогенезу, неоваскуляризації та/або іншої васкуляризації у суб'єкта, який потребує цього.SOZ8BP according to 3 of the present invention and at least one inhibitor of angiogenesis, neovascularization and/or other vascularization in a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує способи лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного інгібітора ангіогенезу, неоваскуляризації та/або іншої васкуляризації у суб'єкта, який потребує цього.In one embodiment, the present invention provides methods of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of SOZ8BP according to the present invention and at least one inhibitor of angiogenesis, neovascularization, and/or other vascularization.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення, щонайменше, з одним інгібітором ангіогенезу, неоваскуляризації та/або іншої васкуляризації для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for administration with at least one inhibitor of angiogenesis, neovascularization and/or other vascularization for the treatment of multiple myeloma.

Прикладами таких інгібіторів ангіогенезу є інгібітори урокінази, інгібітори металопротеази матриксу (наприклад, маримастат, неовастат, ВАМ 12-9566, Асі 3340, ВМ5-275291 і подібні агенти), інгібітори міграції та проліферації ендотеліальної клітини (наприклад, ТМР-470, скваламін, 2-метоксіестрадіол, комбретастатин, ендостатин, ангіостатин, пеніциламін,Examples of such angiogenesis inhibitors are urokinase inhibitors, matrix metalloprotease inhibitors (eg, marimastat, neovastat, VAM 12-9566, Asi 3340, ВМ5-275291 and similar agents), inhibitors of endothelial cell migration and proliferation (eg, TMP-470, squalamine, 2 - methoxyestradiol, combretastatin, endostatin, angiostatin, penicillamine,

ЗСНббЗ336 (5спегіпд-Ріоцай Согр, Мадізоп, МУ), 8115777 (Шапозеп Рпаптасешіса, Іпс, ТіивмПе,ЗSNbbЗ336 (5spegipd-Riotsai Sogr, Madizop, MU), 8115777 (Shaposep Rpaptaseshisa, Ips, TiivmPe,

МУ) ії подібні агенти), антагоністи ангіогенних факторів росту (наприклад, 206474, 506668, антитіла проти ангіогенних агентів та їх рецепторів (наприклад, МЕСЕ, БЕСОБЕ та ангіопоетин-1) талідомід (ТаіотідФт), аналоги талідоміду (наприклад, СС-5013 (леналідомід, Кеміїйтій "М)) іїMU) and similar agents), angiogenic growth factor antagonists (eg, 206474, 506668, antibodies against angiogenic agents and their receptors (eg, MESE, BESOBE, and angiopoietin-1) thalidomide (TaiotideFt), thalidomide analogs (eg, SS-5013 ( lenalidomide, Chemiiitii "M)) iii

СС4047 (Асійїтій"М) Зидеп 5416, 505402, протиангіогенний рибозим (наприклад, ангіозим), інтерферон а (наприклад, інтерферон ага), сурамін і подібні агенти), МЕСБЕ-Е інгібітори кінази та інші проти-ангіогенні інгібітори тирозин-кінази (наприклад, 50011248), інгібітори ендотелій- специфічного сигналу інтегрин/виживання (наприклад, вітаксин і подібні агенти), хелатори антагоністи міді (наприклад, тетратіомолібдат, каптонрил і подібні агенти),CC4047 (Asiyitiy"M) Zydep 5416, 505402, anti-angiogenic ribozyme (eg, angiozyme), interferon a (eg, interferon aga), suramin and similar agents), MESBE-E kinase inhibitors and other anti-angiogenic tyrosine kinase inhibitors (eg , 50011248), inhibitors of endothelium-specific integrin/survival signaling (eg, vitaxin and similar agents), copper antagonist chelators (eg, tetrathiomolybdate, captonril and similar agents),

Зо карбоксіамідотриазол (САЇ), АВТ-627, СМ101, інтерлейкін-12, (1-12), ІМ862, РМО145156Е, а також молекули нуклеотидів, інгібуючі ангіогенез (наприклад, протисмислова-МЕСЕ кКДНК, кДНК, що кодує ангіостатин, КДНК, що кодує р53 і кКДНК, що кодує дефіцитний рецептор-2) та подібні агенти.From carboxyamidotriazole (SAI), AVT-627, CM101, interleukin-12, (1-12), IM862, РМО145156Е, as well as nucleotide molecules that inhibit angiogenesis (for example, antisense-MESE cDNA, cDNA encoding angiostatin, cDNA that encoding p53 and cDNA encoding deficient receptor-2) and similar agents.

Іншими прикладами таких інгібіторів ангіогенезу, неоваскуляризації та/або іншої васкуляризації є протиангіогенні похідні гепарину та споріднені молекули (наприклад, гепариназа ІІ), темолозомід, МК4, фактор інгібування міграції макрофагів (МІР), інгібітори циклооксигенази 2, інгібітори індукованого гіпоксією фактора 1, протиангіогенні ізофлавони сої, олтипраз, фумагілін та його аналоги, аналоги соматостатину, пентозан полісульфат, текогалан натрію, далтепарин, тумстаїн, тромбоспондін, ММ-3, комбрестатин, канстатин, авастатин, антитіла проти інших близьких мішеней (наприклад, анти-альфа-у/бета-3 інтегрин та антикініностатин тАбв5) і подібні агенти.Other examples of such inhibitors of angiogenesis, neovascularization, and/or other vascularization are antiangiogenic heparin derivatives and related molecules (eg, heparinase II), temolozomide, MK4, macrophage migration inhibitory factor (MIR), cyclooxygenase 2 inhibitors, hypoxia-inducible factor 1 inhibitors, antiangiogenic isoflavones. soy, oltipraz, fumagillin and its analogs, somatostatin analogs, pentosan polysulfate, tecogalan sodium, dalteparin, tumstein, thrombospondin, MM-3, combrestatin, canstatin, avastatin, antibodies against other close targets (for example, anti-alpha-u/beta- 3 integrin and antikininostatin tAbv5) and similar agents.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення з талідомідом (ТпаіотіаФф)), аналогами талідоміду (наприклад, СС-5013 (леналідомід, Кеміїйтій"М) та/або СС4047 (Асійтій"мМ) В наступному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення з талідомідом.In one embodiment, the present invention provides the use of COZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for administration with thalidomide (TpaiothiaFf)), thalidomide analogues (for example, SS-5013 (lenalidomide, Chemilidomide) and/or SS4047 (Acilidomide) B in the next embodiment, the present invention offers the use of SOZ8BP according to the present invention to obtain a pharmaceutical composition for administration with thalidomide.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення з анти-СО20 антитілом, наприклад, ритуксимаб (КйихапФ, Мабрійега?т) моноклональне анти-СО20 антитіло, як розкрито в М/О 2004/035607, наприклад, 1188, 2Е2 або 708.In one embodiment, the present invention provides the use of a COZ8VR according to the present invention to prepare a pharmaceutical composition for administration with an anti-CO20 antibody, for example, rituximab (KyihapF, Mabriyega?t) a monoclonal anti-CO20 antibody, as disclosed in M/O 2004/035607, for example, 1188, 2E2 or 708.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути інгібітором протеасоми, наприклад, бортазомібом (УеїЇсадеф)).In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with a COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be a proteasome inhibitor, for example, bortazomib (Uelizadef).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути кортикостероїдом, наприклад, преднізоном, преднізолоном, дексаметазоном і т.п.In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be a corticosteroid, for example, prednisone, prednisone, dexamethasone, and the like.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути протираковим імуногеном, наприклад, антиген раку/зв'язаний з пухлиною антиген (наприклад, молекула адгезії бо епітеліальної клітини (ЕРСАМ/ТАСЗТОЇ), муцин 1 (МОС1), карциноембріональний антигенIn one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be an anti-cancer immunogen, for example, a cancer antigen/tumor-associated antigen (eg, epithelial cell adhesion molecule (ERSAM/ TASZTOI), mucin 1 (MOS1), carcinoembryonic antigen

(СЕА), зв'язаний з пухлиною глікопротеїн 72 (ТАС-72), др100, Меіап-А, МАВТ-1, КОВ, ВАСАБІ,(CEA), tumor-associated glycoprotein 72 (TAS-72), dr100, Meiap-A, MAVT-1, KOV, WASABI,

МОА?, зв'язані з раком вірусні вакцини (наприклад, вакцини папіломавірусу людини), вироблені з пухлин білки теплового шоку, та подібних агентів. Велике число інших придатних ракових антигенів/зв'язаних з пухлиною антигенів, описаних тут, і подібних молекул, відомих в даній області, можна також або альтернативно застосовувати в такому втіленні. Протиракові імуногенні пептиди також включають протиїдіотипові вакцини, наприклад, ВЕС2 антиідіотипові антитіла, мітумомаб (Міштотаб), Сеамас і споріднені антиідіотипові антитіла, антиідіотипове антитіло до МО7 антитіла та інші протиракові антиідіотипові антитіла (див., наприклад, Вігерепі еї а)., Массіпе. 21(15), 1601-12 (2003), Ії єї аї., Сніп Мей У (Епої). 114(9), 962-6 (2001), стій єї а!., Нубіідота. 13(5), 389-96 (1994), МаІопеу сеї а!., Нубгідота. 4(3), 191-209 (1985), Вауспаганигі еї аї., У Іттипої. 137(5), 1743-9 (1986), РОНПІ еї аї., Іпї У Сапсег. 50(6), 958-67 (1992), Вопіеп 6! аї.,MOAs?, cancer-associated viral vaccines (eg, human papillomavirus vaccines), tumor-derived heat shock proteins, and similar agents. A large number of other suitable cancer antigens/tumor-associated antigens described herein and similar molecules known in the art can also or alternatively be used in this embodiment. Anti-cancer immunogenic peptides also include anti-idiotype vaccines, e.g., BEC2 anti-idiotype antibodies, mitumomab (Mishtotab), Seamas and related anti-idiotype antibodies, anti-idiotype antibody to MO7 antibodies, and other anti-cancer anti-idiotype antibodies (see, e.g., Vigerepi et al., Massipe). 21(15), 1601-12 (2003), Yee Yee Yee., Snip May U (Epoi). 114(9), 962-6 (2001), stand yei a!., Nubiidota. 13(5), 389-96 (1994), MaIopeu sei a!., Nubgidota. 4(3), 191-209 (1985), Vauspaganigi ei ai., In Ittipoi. 137(5), 1743-9 (1986), RONPI ei ai., Ipi U Sapseg. 50(6), 958-67 (1992), Vopiep 6! ai.,

СуюкКіпез Мої. Тег. 2(4), 231-8 (1996) і Магоуата, У Іттипо! Меїпод5. 264(1-2), 121-33 (2002)).SuyukKipez Moi. Tag. 2(4), 231-8 (1996) and Magowata, In Ittipo! Meipod 5. 264(1-2), 121-33 (2002)).

Такі антиїдіотипові Ар5 можна при необхідності кон'югувати із носієм, що може бути синтетичною (звичайно інертною) молекулою носія, білком (наприклад, гемоціанін молюска (Кеупоїе Іппреб (КІН) (див., наприклад, Оспі еї аїЇ., Еиг У Іттипої. 17(11), 1645-8 (1987)), або клітиною (наприклад, еритроцитом, див., наприклад, М/і еї а!., У Іттипої! Меїпоа». 122(2), 227- 34(1989)).Such anti-idiotypic Aβ can, if necessary, be conjugated to a carrier, which can be a synthetic (usually inert) carrier molecule, a protein (for example, hemocyanin of a mollusk (Keupoye Ippreb (KIN)) (see, for example, Ospi ei aiY., Eig U Ittipoi. 17(11), 1645-8 (1987)), or a cell (for example, an erythrocyte, see, for example, M/i ei a!., U Ittipoi! Meipoa". 122(2), 227-34(1989) ).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути бісфосфонатом.In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be a bisphosphonate.

Прикладами потенційно придатних бісфосфонатів є памідронат (АгедіафФ), золедронова кислота (Хотеїаф), клодронат (Вопеїо5б), ризендронат (Асіопеб), ібандронат (ВопімаФ), етидронат (Оідгопек), алендронат (БозатахФ?т), титлудронат (ЗКеїй(ф), інкадронат (УатапоисніExamples of potentially suitable bisphosphonates are pamidronate (Agediaf), zoledronic acid (Hoteiaf), clodronate (Vopei5b), risendronate (Asiopeb), ibandronate (VopimaF), etidronate (Oidgopek), alendronate (BozatakhF?t), titludronate (ZKeii(f), inkadronate (Uatapoisni

Рпаптасецшісаї) і мінодронат (УМ529, Матапоисні).Rpaptasecshisai) and minodronate (UM529, Matapoisni).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути фактором стимуляції колоній. Прикладами придатних факторів стимуляції колоній можуть бути фактори стимуляції колоній гранулоцитів (5-С5Е), наприклад, філграстим (МепиродепФф)) пегфілграстим (Мешавіаф)) і фактори стимуляції колоній макрофагів (ЗМ-С5Е), наприклад, саграмостин (І ейКіпеф)).In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with SOZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be a colony stimulating factor. Examples of suitable colony-stimulating factors are granulocyte colony-stimulating factors (5-C5E), for example, filgrastim (MepirodepFf)) pegfilgrastim (Meshaviaf)) and macrophage colony-stimulating factors (ZM-C5E), for example, sagramostin (I eyKipef)).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути еритропоетичний агент.In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with SOZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be an erythropoietic agent.

Прикладами придатних еритропоетичних агентів є еритропоетин (ЕРО), наприклад, епоетин альфа (наприклад, Ргосгікж, ЕродепФ і ЕргехФ)) і епоетин бета (наприклад, МеоКесогтопФ)) і білки, що стимулюють еритропоез (наприклад, Агапеврф)).Examples of suitable erythropoietic agents are erythropoietin (EPO), such as epoetin alpha (eg, Rgosgikz, ErodepF, and ErgexF)) and epoetin beta (eg, MeoKesogtopF)) and proteins that stimulate erythropoiesis (eg, Agapevrf)).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути протираковий цитокін, хемокін або їх сполучення. Прикладами придатних цитокінів є фактори росту, включаючи ІЕЄМУу,In one embodiment, a therapeutic agent for use in combination with a COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be an anticancer cytokine, a chemokine, or a combination thereof. Examples of suitable cytokines are growth factors, including IEEMUu,

І -2, 1-4, 1-6, 1-7, 11-10, 1-12, 11-13, 1-15, 11-18, 1-23, ІІ -24, 1-27, ІІ -28а, ІІ -286Б, ІІ -29, Ка,I -2, 1-4, 1-6, 1-7, 11-10, 1-12, 11-13, 1-15, 11-18, 1-23, II -24, 1-27, II - 28a, II -286B, II -29, Ka,

ІЕРМа (наприклад, ІМЕса2Б), ІРМВ, ЗМ-С5Е, СО40Ї, РИЗ5 ліганд, фактор стовбурових клітин, анцестим та ТМРа. Придатними хемокінами можуть бути Глу-Лей-Арг (ЕЇ К)-негативні хемокіни, наприклад, ІР-10, МСР-3, МІС та БОБЕ-1а із сімейства СХС та С-С хемокінів людини. Придатні цитокіни включають похідні цитокіну, варіанти цитокіну, фрагменти цитокіну та складові білки із цитокіном.IERMa (for example, IMEsa2B), IRMV, ZM-C5E, СО40Й, RIZ5 ligand, stem cell factor, ancestim and TMRa. Suitable chemokines can be Glu-Leu-Arg (EI K)-negative chemokines, for example, IR-10, MCP-3, MIS and BOBE-1a from the family of human SCS and C-C chemokines. Suitable cytokines include cytokine derivatives, cytokine variants, cytokine fragments, and cytokine component proteins.

Ці та інші способи і застосування, що включають нуклеїнові кислоти, які кодують пептиди, що зустрічаються в природі, тут можна альтернативно або додатково здійснювати за допомогою "генної активації" і технік підвищувального регулювання гомологічних рекомбінантних генів, наприклад, як описано в ОЗ 5968502, 05 6063630 та 05 6187305 та ЕР 0505500.These and other methods and applications involving nucleic acids encoding naturally occurring peptides herein can alternatively or additionally be accomplished by "gene activation" and homologous recombinant gene up-regulation techniques, for example, as described in US Pat. No. 5,968,502, 05 6063630 and 05 6187305 and ER 0505500.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути агентом, що модулює, наприклад, підсилює або інгібує експресію або активність са або ЕРеу рецепторів. Приклади придатних для такого застосування агентів включають інтерлейкін-1 (ІІ-1), інтерлейкін-2 (ІІ-2), інтерлейкін-б (1-6), фактор стимуляції колоній гранулоцитів (5-С5Е), наприклад, філграстим (МепиродепФф)) і пегфілграстим (Мешіавзіафт), фактори стимуляції колоній гранулоцитів марофагів (СМ-СЗЕ) наприклад, сарграмостим (ІеиКіпефФ), інтерферон-у (ІЕМу) і фактор некрозу пухлин (ТЕ).In one embodiment, a therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be an agent that modulates, for example, enhances or inhibits the expression or activity of ca or Ерю receptors. Examples of agents suitable for such use include interleukin-1 (II-1), interleukin-2 (II-2), interleukin-b (1-6), granulocyte colony-stimulating factor (5-C5E), such as filgrastim (MepirodepFf) ) and pegfilgrastim (Meshiavziaft), granulocyte colony-stimulating factors of macrophages (CM-SZE), for example, sargramostim (IeKipeF), interferon-y (IEMu) and tumor necrosis factor (TE).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути регулятором контролю клітинного циклу/апоптозу (або "регулюючим агентом"). Регулятор контролю клітинного циклу/"апоптозу може включати молекули, (1) які направляють і модулюють регулятори контролю клітинного циклу/апоптозу, наприклад, сас-25 (наприклад, МС 663284), (2) циклін- бо залежні кінази, які надстимулюють клітинний цикл (наприклад, флавопіридол (1868275,In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be a regulator of cell cycle control/apoptosis (or "regulatory agent"). A cell cycle/apoptosis regulator may include molecules that (1) target and modulate cell cycle/apoptosis regulators, e.g., sas-25 (e.g., MS 663284), (2) cyclin-dependent kinases that overstimulate the cell cycle (eg, flavopiridol (1868275,

НМК1275), У-гідроксистауроспорин (ШСМ-01, КМУ-2401) ії росковітин (К-росковітин, СУС202)), і (3) модулятори теломераз (наприклад, ВІВК1532, 501-095, ЗКМ163 і композиції, описані, наприклад, в ОЗ 6440735 та 05 6713055). Нелімітуючі приклади молекул, які взаємодіють зі шляхами апоптозу, включають ТМЕ-зв'язаний індукуючий апоптоз ліганд (ТКА! )/апоптоз-2 ліганд (Аро-2І), агенти, що індукують МЕ-кВ блокаду, яка приводить до інгібування продукції ІІ - б, антитіла, що активують ТКАЇЇ. рецептори, ІЕМ51, антисмислові ВсІ-2 та Аб2Оз (триоксид миш'яку, Тгізепохф)).NMK1275), Y-hydroxystaurosporine (SHSM-01, KMU-2401) and roscovitine (K-roscovitine, СУС202)), and (3) telomerase modulators (e.g., VIVK1532, 501-095, ZKM163 and compositions described, for example, in OZ 6440735 and 05 6713055). Non-limiting examples of molecules that interact with apoptotic pathways include TME-linked apoptosis-inducing ligand (TKA! )/apoptosis-2 ligand (Apo-2I), agents that induce ME-kV blockade, which leads to inhibition of the production of II - b, antibodies that activate TKAII. receptors, IEM51, antisense BsI-2 and Ab2Oz (arsenic trioxide, Tgizepokhf)).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути гормональним регулюючим агентом, наприклад, агентами, застосовними в проти-андрогенній і проти- естрогенній терапії. Прикладами таких гормональних регулюючих агентів є тамоксифен, ідоксифен, фулверстрант, дролоксифен, тореміфен, ралоксифен, діетилстильбестрол, етинілестрадіол/естиніл, антиандроген (наприклад, флутамінд/еулексин), прогестин (наприклад, гідроксипрогестерон капроат, медроксипрогестерон/провера, мегестрол ацепат/мегас), адренокортикостероїд (наприклад, гідрокортизон, преднізон), гормон вивільнення лютеїнізуючого гормону (і його аналоги та інші І НЕН агоністи, наприклад, бузерелін і гозерелін), інгібітор ароматази (наприклад, анастразол/аримідекс, аміноглютетимід/цитраден, екземестан), інгібітор гормону (наприклад, октреотид/сандостатин) і подібні агенти.In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be a hormone regulating agent, for example, agents useful in anti-androgen and anti-estrogen therapy. Examples of such hormone-regulating agents are tamoxifen, idoxifene, fulverstrant, droloxifene, toremifene, raloxifene, diethylstilbestrol, ethinylestradiol/estinyl, antiandrogen (eg, flutaminde/eulexin), progestin (eg, hydroxyprogesterone caproate, medroxyprogesterone/provera, megestrol acepat/megas), Adrenocorticosteroid (eg, hydrocortisone, prednisone), luteinizing hormone-releasing hormone (and its analogs and other NEN agonists, eg, buserelin and goserelin), aromatase inhibitor (eg, anastrazole/arimidex, aminoglutethimide/citradene, exemestane), hormone inhibitor (eg , octreotide/sandostatin) and similar agents.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути протианергічним агентом (наприклад, сполуки невеликих молекул, білки, глікопротеїни або антитіла, які порушують толерантність до пухлин і ракових антигенів). Прикладами таких сполук є молекули, що блокують активність СТІ А-4, наприклад, МОХ-010 (Рнап єї аІ., РМАБ ОА 100, 8372 (2003)).In one embodiment, a therapeutic agent for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be an anti-anergic agent (eg, small molecule compounds, proteins, glycoproteins or antibodies that break tolerance to tumors and cancer antigens). Examples of such compounds are molecules that block the activity of STI A-4, for example, MOX-010 (Rnap et al., RMAB OA 100, 8372 (2003)).

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗЗВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути нуклеїновою кислотою або вектором, що містять ген супресора пухлини, наприклад, аденовірус із порушеною реплікацією, кодуючий людський рекомбінантний дикий тип р53/5СН58500 і т.д.; протисмислові нуклеїнові кислоти, спрямовані на онкогени, мутовані або дерегульовані гени; або 5ігРНК, спрямовані на мутовані або дерегульовані гени. Приклади мішеней супресорів пухлинIn one embodiment, a therapeutic agent for use in combination with an SSRI according to the present invention to treat disorders as described above can be a nucleic acid or vector containing a tumor suppressor gene, for example, a replication-defective adenovirus encoding human recombinant wild-type p53/ 5СН58500 etc.; antisense nucleic acids targeting oncogenes, mutated or deregulated genes; or 5sRNAs targeting mutated or deregulated genes. Examples of tumor suppressor targets

Зо включають, наприклад, ВКСАТ1, ЕВ1, ВЕСА2, ОРСА (Зтаді), М5Н2, МІНІ та ОСС.These include, for example, VKSAT1, EB1, VESA2, ORSA (Tadi), M5N2, MINI and OSS.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути протираковою нуклеїновою кислотою, наприклад, генасенс (аугмерозен /53139), І М900003 (І5І5 3521), ІБІ5 2503, ООах-011 (ІБІЗ5 112989), І Е-АОМ/ ЕгаїАОМ (інкапсульований в ліпосоми с-гаї протисмисловий олігонуклеотид/15І8-5132), МО98 та інші протисмислові нуклеїнові кислоти, спрямовані на РКСа, кластерин, ІСЕВР», протеїнкіназу А, циклін О1 або Всі-2п.In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with SOZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above can be an anticancer nucleic acid, for example, genasense (augmerosen /53139), I M900003 (I5I5 3521), IBI5 2503, ООх- 011 (IBIZ5 112989), I E-AOM/EgaiAOM (antisense oligonucleotide encapsulated in liposomes c-gai/15I8-5132), MO98 and other antisense nucleic acids targeting RKSa, clusterin, ISEVR", protein kinase A, cyclin O1 or All -2p.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, може бути протираковою інгібіторною молекулою РНК (див., наприклад, іп еї аїЇ.,, Сит Сапсег Огид Тагдеїв5. 1(3), 241-7 (2001), ЄЕтают іп: Си Сапсег Огид Тагаєїв5. 3(3), 237 (2003), І іта єї аІ., Сапсег Сепе ТНег. 11(5), 309-16 (2004), Стятії еї аї., Іпї У Опсої. 4(1), 97-105 (2004), Сов єї аї., Іпі У Вадіаї Опсої! ВіоIn one embodiment, a therapeutic agent for use in combination with a COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above may be an anti-cancer inhibitory RNA molecule (see, e.g., ip eii aiY.,, Syt Sapseg Ogyd Tagdeiv5. 1(3) . AI., Ipi U Opsoi. 4(1), 97-105 (2004), Soviet AI., Ipi U Vadiai Opsoi! Vio

Рпуз. 57(2 Зиррі), 5144 (2003), Мапд еї аЇ., Опсодепе. 22(36), 5694-701 (2003) і 7папод еї аї.,Rpuz. 57(2 Zirri), 5144 (2003), Mapd eyi aYi., Opsodepe. 22(36), 5694-701 (2003) and 7 papers, pp.

Віоснет Віорпуз Не5 Соттип. 303(4), 1169-78 (2003)).Viosnet Viorpuz Ne5 Sottype. 303(4), 1169-78 (2003)).

Композиції та комбінації способів застосування згідно з даним винаходом також включають введення вакцин нуклеїнових кислот, наприклад, вакцин з голою ДНК, кодуючою такі ракові антигени/зв'язані з пухлинами антигени (див., наприклад, О5 5589466, 005 5593972, 05 5703057, 5 5879687, 005 6235523 і 05 6387888). В одному втіленні, комбінований спосіб введення та/або комбінована композиція включає композицію аутологічної вакцини. В одному втіленні, комбінована композиція та/або комбінований спосіб введення включає вакцину цілої клітини або цитокін-експресуючої клітини (наприклад, фібробласт, експресуючий рекомбінантний І -2, розгалужені клітини, що експресують рекомбінантний цитокін і т.п.) (див., наприклад, Коум/аіслук еї аї., Асіа Віоспіт Рої. 50(3), 613-24 (2003), КейШу еї аїЇ., Меїпоаз Мої. Мед. 69, 233-57 (2002) таCompositions and combination methods of administration of the present invention also include administration of nucleic acid vaccines, e.g., naked DNA vaccines encoding such cancer antigens/tumor-associated antigens (see, e.g., O5 5589466, 005 5593972, 05 5703057, 5 5879687, 005 6235523 and 05 6387888). In one embodiment, the combination method of administration and/or combination composition comprises an autologous vaccine composition. In one embodiment, the combination composition and/or combination method of administration comprises a whole cell or cytokine-expressing cell vaccine (e.g., fibroblast expressing recombinant I-2, ramified cells expressing recombinant cytokine, etc.) (see, e.g. .

Тігари єї аї., Сцт Сепе ТНег. 2(1), 79-89 (2002). Іншим прикладом такого аутологічного клітинного підходу, який можна застосовувати в комбінованих способах згідно з даним винаходом, єTigari eyi ai., St. Sepe TNeg. 2(1), 79-89 (2002). Another example of such an autologous cellular approach that can be used in the combined methods of the present invention is

Мумажхж(К) спосіб персоналізованої імунотерапії (раніше відомий як СТОР-99) (СеппореMumazhkhzh(K) method of personalized immunotherapy (formerly known as STOR-99) (Seppore

Согрогайоп-Неджоса Спу, СА, ОА).Sogrogayop-Nejosa Spu, SA, OA).

В одному втіленні, даний винахід пропонує комбіновані композиції та/або комбіновані способи введення, де СОЗ8ВР комбінують або спільно призначають із вірусами, вірусними білками і т.п. Віруси з порушеною реплікацією, які звичайно здатні тільки до одного або бо декількох циклів реплікації іп мімо, і які націлені на пухлинні клітини, можуть, наприклад, бути корисними компонентами таких композицій і способів. Такі вірусні агенти можуть включати або бути зв'язаними з нуклеїновими кислотами, кодуючими імуностимулятори, наприклад, ЗМ-С5Е та/або 1-2. Як природні онколітичні, так і рекомбінантні онколітичні віруси (наприклад, НеМ-1 віруси, реовіруси, аденовіруси з порушеною реплікацією та чутливою реплікацією і т.д.) можуть бути корисними компонентами таких способів і композицій. Відповідно, в одному втіленні даний винахід пропонує комбіновані композиції та/"або комбіновані способи введення, де СОЗ8ВР комбінують або спільно призначають із онколітичним вірусом. Приклади таких вірусів включають онколітичні аденовіруси та віруси герпесу, які можуть бути або можуть не бути модифікованими вірусами (див., наприклад, Зпанй еї аї., У Меигоопсої. 65(3), 203-26 (2003), 5Шев5 еї а)І., Зигдегу. 134(2), 357-64 (2003), Зипагтига еї а!., Рапсгеав. 28(3), 326-9 (2004), Тезпіданага еї а!., У Бигу Опсої!. 85(1), 42-7 (2004), Магопезе сеї аї., Сапсег Сепе ТНег. 9(12), 967-78 (2002),In one embodiment, the present invention provides combination compositions and/or combination methods of administration where SOZ8BP is combined or co-administered with viruses, viral proteins, etc. Replication-impaired viruses, which are usually capable of only one or more cycles of replication per mimo, and which target tumor cells, may, for example, be useful components of such compositions and methods. Such viral agents may include or be associated with nucleic acids encoding immunostimulators, for example, ZM-C5E and/or 1-2. Both natural oncolytic and recombinant oncolytic viruses (eg, NeM-1 viruses, reoviruses, replication-defective and replication-sensitive adenoviruses, etc.) may be useful components of such methods and compositions. Accordingly, in one embodiment, the present invention provides combination compositions and/or combination methods of administration wherein the COZ8BP is combined or co-administered with an oncolytic virus. Examples of such viruses include oncolytic adenoviruses and herpes viruses, which may or may not be modified viruses (see , for example, Zpany ei ai., U Meigoopsoi. 65(3), 203-26 (2003), 5Shev5 ei a)I., Zygdegu. 134(2), 357-64 (2003), Zipagtyga ei a!., Rapsgeav. 28(3), 326-9 (2004), Tezpidanaga ei a!., U Bygu Opsoi!. 85(1), 42-7 (2004), Magopeze sei ai., Sapseg Sepe TNeg. 9(12) , 967-78 (2002),

Ууапег єї аї., Сапсег Вез. 59(2), 410-3 (1999), МатапакКка, Ійї ) Опсої!. 24(4), 919-23 (2004) і 2 міервеї! єї а!., Зетіп Опсої. 28(4), 336-43(2001).Uuapeg eyi ai., Sapseg Vez. 59(2), 410-3 (1999), MatapakKka, Iyi ) Opsoi!. 24(4), 919-23 (2004) and 2 miervei! Yei a!., Zetip Opsoi. 28(4), 336-43(2001).

Комбіновані композиції та комбіновані способи введення згідно з даним винаходом можуть також включати способи імунотерапії з "цілою клітиною" або "адоптивні". Наприклад, такі способи можуть включати інфузію або повторну інфузію клітин імунної системи (наприклад, лімфоцити, що інфільтрують пухлину (Ті 5), наприклад, СО4- та/або СО8-Т клітини (наприклад,The combined compositions and combined methods of administration of the present invention may also include "whole cell" or "adoptive" immunotherapy methods. For example, such methods may include infusion or reinfusion of immune system cells (e.g., tumor-infiltrating lymphocytes (T5), e.g., CO4- and/or CO8-T cells (e.g.,

Т-клітини, посилені пухлиноспецифічними антигенами та/або генетичними підсилювачами), експресуючі антитіла В-клітини або інші клітини, що продукують/презентують антитіло, деревоподібні клітини, культивовані з О-посилюючим агентом, наприклад, з5М-С5Е та/або РЗ-Ї. та/або навантажені зв'язаним з пухлиною антигеном деревоподібні клітини), протипухлинні МК клітини, так звані гібридні клітини або їх комбінації. Клітинні лізати також можна застосовувати в таких способах і композиціях. Клітинні "вакцини" у клінічних випробуваннях, які можуть бути корисні в таких випадках, включають Сапмахіп"м, АРС-8015 (дендреон), НБРРС-96 (антигенік) іT-cells boosted with tumor-specific antigens and/or genetic enhancers), antibody-expressing B-cells or other antibody-producing/presenting cells, dendritic cells cultured with an O-enhancing agent, e.g., c5M-C5E and/or RZ-Y . and/or loaded with tumor-associated antigen dendritic cells), antitumor MK cells, so-called hybrid cells or their combinations. Cell lysates can also be used in such methods and compositions. Cell "vaccines" in clinical trials that may be useful in such cases include Sapmahip, ARS-8015 (dendreon), NBRRS-96 (antigen), and

Меїасіпеф клітинні лізати. Антигени, що відпали від ракових клітин, та їх суміші (див., наприклад,Meiasipef cell lysates. Antigens released from cancer cells and their mixtures (see, for example,

Вузігуп евї аї!., Сііпіса! Сапсег ВРезеагсі Мої. 7, 1882-1887, УшШу 2001), при необхідності змішані з допоміжними речовинами, як наприклад, галун, також можуть компонентами в таких способах і композиціях.Vuzigup evi ai!., Siipisa! Sapseg VRezeagsi Moi. 7, 1882-1887, UshShu 2001), if necessary, mixed with auxiliary substances, such as alum, can also be components in such methods and compositions.

В одному втіленні, СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна доставляти хворому вIn one embodiment, SOZ8VR according to this invention can be delivered to the patient in

Зо комбінації із застосуванням способу внутрішньої вакцинації. Внутрішня вакцинація стосується індукованої загибелі пухлинних або ракових клітин, як наприклад, індукована ліками або індукована радіацією загибель пухлинних клітин у хворого, що звичайно приводить до прояву імунної відповіді, спрямованої проти (1) пухлинних клітин як цілого або (2) частин пухлинних клітин, включаючи (а) секретовані білки, глікопротеїни та інші продукти, (б) мембранно-зв'язані білки або глікопротеїни чи інші продукти, зв'язані або занурені в мембрани, та/або (в) внутрішньоклітинні білки або інші внутрішньоклітинні компоненти. Імунна відповідь, індукована внутрішньою вакцинацією, може бути сгуморальною (наприклад, антитіло-комплемент опосередкованою) або опосередкованою клітинами (наприклад, розвиток або збільшення ендогенних цитотоксичних Т лімфоцитів, які впізнають вбиті усередині пухлинні клітини або їхні частини). На додаток до радіотерапії, нелімітуючими прикладами ліків та агентів, які можна застосовувати для індукції згаданої загибелі пухлинних клітин і внутрішньої вакцинації, є загальноприйняті хіміотерапевтичні агенти, інгібітори клітинного циклу, протиангіогенні ліки, моноклональні антитіла, агенти, індукуючі апоптоз, та інгібітори передачі сигналу.From a combination using the method of internal vaccination. Internal vaccination refers to the induced death of tumor or cancer cells, such as drug-induced or radiation-induced death of tumor cells in a patient, which usually results in an immune response directed against (1) the tumor cells as a whole or (2) parts of the tumor cells, including (a) secreted proteins, glycoproteins and other products, (b) membrane-bound proteins or glycoproteins or other products bound or embedded in membranes, and/or (c) intracellular proteins or other intracellular components. The immune response induced by internal vaccination can be humoral (eg, antibody-complement mediated) or cell-mediated (eg, the development or increase of endogenous cytotoxic T lymphocytes that recognize internalized tumor cells or their parts). In addition to radiotherapy, non-limiting examples of drugs and agents that can be used to induce said tumor cell death and internal vaccination include conventional chemotherapeutic agents, cell cycle inhibitors, anti-angiogenic drugs, monoclonal antibodies, apoptosis-inducing agents, and signal transduction inhibitors.

Прикладами інших протиракових агентів, які можуть бути придатними як терапевтичні агенти для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, є агенти, індукуючі диференціацію, ретиноєва кислота та аналоги ретиноєвої кислоти (наприклад, транс-ретиноєва кислота, 13-цис-ретиноєва кислота та подібні агенти), аналоги вітаміну О (наприклад, сеокальцитол і подібні агенти)), інгібітори Егб3, Егр4, ІСБ-ІВ, рецептора інсуліну, РОСЕКа, РОСЕКреїа, РІК2, ЕНЯ, ЕСЕКІ, ЕСЕК2, ЕОЕКЗ, ЕОЕК4, ТЕКА,Examples of other anticancer agents that may be suitable as therapeutic agents for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above are differentiation-inducing agents, retinoic acid and retinoic acid analogs (e.g., trans-retinoic acid, 13-cis-retinoic acid and similar agents), vitamin O analogues (for example, seocalcitol and similar agents)), inhibitors of Egb3, Egr4, ISB-IV, insulin receptor, ROSEKa, ROSEKreia, RIK2, ENYA, ESEKI, ESEK2, EOEKZ, EOEK4, TEKA,

БО ТАКС, с-теї, Воп, з5веєа, Тіє, Тіє2, Ерн, Веї, Роз, АК, І ТК, РТК? і подібні агенти.BO TAX, s-tei, Vop, z5veea, Tiye, Tiye2, Ern, Vei, Roz, AK, I TK, RTK? and similar agents.

Прикладами інших протиракових агентів, що можуть бути придатними як терапевтичні агенти для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, є катепсин В, модулятори катепсин ЮО-дегідрогеназної активності, глютатіон-5-трансферази (наприклад, глютацилцистеїн синтаза та лактат дегідрогеназа) і подібні агенти.Examples of other anticancer agents that may be suitable as therapeutic agents for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above are cathepsin B, modulators of cathepsin SO dehydrogenase activity, glutathione 5-transferase (eg, glutacylcysteine synthase and lactate dehydrogenase) and similar agents.

Прикладами інших протиракових агентів, що можуть бути придатними як терапевтичні агенти для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, є естрамустин та епірубіцин.Examples of other anticancer agents that may be suitable as therapeutic agents for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above are estramustine and epirubicin.

Прикладами інших протиракових агентів, що можуть бути придатними як терапевтичні 60 агенти для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, є інгібітор Н5РОО, як 17-аліл-аміногелд-анаміцин, антитіла, спрямовані проти пухлинних антигенів, наприклад, РБА, СА125, КЗА і т.д., інтегрини подібно інтегрину ВІ, інгібітори МСАМ і подібні агенти.Examples of other anticancer agents that may be suitable as therapeutic agents for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above include an H5POO inhibitor such as 17-allyl-aminogeld-anamycin, antibodies directed against tumor antigens , for example, RBA, CA125, KZA, etc., integrins like integrin VI, inhibitors of MSAM and similar agents.

Прикладами інших протиракових агентів, що можуть бути придатними як терапевтичні агенти для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, є кальцинейрин-інгібітори (наприклад, валсподар, РБ5С 833 та іншіExamples of other anticancer agents that may be suitable as therapeutic agents for use in combination with COZ8BP according to the present invention for the treatment of disorders as described above are calcineurin inhibitors (eg, valspodar, RB5C 833 and others

МОВ-1 або р-глікопротеїн інгібітори), ТОК-інгібітори (наприклад, сиролімус, еверолімус і рапаміцин) і інгібітори механізмів "наведення лімфоцитів" (наприклад, ЕТУ720) та агенти, що впливають на клітинні сигнали, наприклад, інгібітори адгезії молекул (наприклад, анти-і РА і т.п.).MOV-1 or p-glycoprotein inhibitors), TOC inhibitors (e.g. sirolimus, everolimus and rapamycin) and lymphocyte homing inhibitors (e.g. ETU720) and agents that affect cell signaling such as adhesion molecule inhibitors (e.g. , anti-RA, etc.).

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що включає експресуючі СЮОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та радіотерапії суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving SHOZ8 expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of SHOZ8BP according to the present invention and radiotherapy to the subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та радіотерапії суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of SOZ8BP according to the present invention and radiotherapy to a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції, що призначається разом з радіотерапією для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition to be administered in conjunction with radiotherapy for the treatment of multiple myeloma.

Радіотерапія може включати опромінення або спільне введення радіоактивних фармацевтичних речовин хворому. Джерело радіації може бути зовнішнім або внутрішнім відносно хворого на лікуванні (радіаційне лікування може, наприклад, бути у формі радіаційної терапії із зовнішнім променем (ЕВКТ), брахітерапії (ВТ) або радіотерапії, націленої на скелет).Radiotherapy may include irradiation or co-administration of radioactive pharmaceutical substances to the patient. The source of radiation may be external or internal to the patient being treated (radiation treatment may, for example, be in the form of external beam radiation therapy (EBCT), brachytherapy (BT), or radiation therapy targeted to the skeleton).

Радіоактивні елементи, які можна застосовувати в практиці таких способів, включають, наприклад, радій, цезій-137, іридій-192, америцій-241, золото-198, кобальт-57, мідь-б7, технецій-99, йод-131 та індій-111.Radioactive elements that can be used in the practice of such methods include, for example, radium, cesium-137, iridium-192, americium-241, gold-198, cobalt-57, copper-b7, technetium-99, iodine-131 and indium -111.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що включає експресуючі СЮОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього, у комбінації зIn one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving SHOZ8 expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of SHOZ8BP according to the present invention, in combination with

Зо пересадженням аутологічних периферичних стовбурових клітин або кісткового мозку.With transplantation of autologous peripheral stem cells or bone marrow.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом суб'єкту, який потребує цього, у комбінації з пересадженням аутологічних периферичних стовбурових клітин або кісткового мозку.In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of SOZ8BP according to the present invention to a subject in need thereof, in combination with transplantation of autologous peripheral stem cells or bone marrow.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення спільно з пересадженням аутологічних периферичних стовбурових клітин або кісткового мозку для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for administration in conjunction with transplantation of autologous peripheral stem cells or bone marrow for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, яке включає експресуючі СОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом суб'єкту, що потребує цього, у комбінації з ортопедичним втручанням.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder that includes COZ8 expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of COZ8BP according to the present invention to a subject in need thereof, in combination with orthopedic intervention.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення спільно пересадженням аутологічних периферичних стовбурових клітин або кісткового мозку для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention for the preparation of a pharmaceutical composition for administration together with transplantation of autologous peripheral stem cells or bone marrow for the treatment of multiple myeloma.

Ортопедичне втручання можна застосовувати для лікування порушення, що включає експресуючі СО38, наприклад, множинної мієломи, для допомоги в контролі болю або збереженні функції чи рухливості. Такі втручання можуть включати фізіотерапію, шинування костей для запобігання чи лікування переломів або хірургічні підходи (малі або великі) для лікування переломів.Orthopedic intervention may be used to treat a disorder involving CO38 expression, such as multiple myeloma, to help control pain or preserve function or mobility. Such interventions may include physical therapy, bone splints to prevent or treat fractures, or surgical approaches (minor or major) to treat fractures.

В одному втіленні СОЗ8ЗВР згідно з даним винаходом можна призначати у зв'язку з доставкою одного чи більше агента, що сприяє доступу СОЗ8ВР або комбінованої композиції до внутрішності пухлини. Такі способи можна, наприклад, здійснювати разом з доставкою релаксину, здатного розслабити пухлину (див., наприклад, 05 6719977). В одному втіленніIn one embodiment, the SOZ8ZVR according to the present invention can be prescribed in connection with the delivery of one or more agents that facilitate the access of the SOZ8VR or the combined composition to the interior of the tumor. Such methods can, for example, be carried out together with the delivery of relaxin, which can relax the tumor (see, for example, 05 6719977). In one embodiment

СОЗ8ВР згідно з даним винаходом може бути зв'язаний з проникаючим в клітину пептидом (СРР). Проникаючі в клітину пептиди або споріднені пептиди (наприклад, сконструйовані проникаючі в клітину антитіла) описані, наприклад, в 2пао еї аї., у) Іттипої Меїпоа». 254(1-2), 137-45 (2001), Нопа еї а!., Сапсег Вез. 60(23), 6551-6 (2000). І іпадгеп еї аї., Віоспет У. 377(РІ 1), 69-76 (2004), Виегдег вї а!., ) Сапсег Вез Сіїп Опсої. 129(12), 669-75 (2003), Роода єї аІ., РАБЕВ 60 У. 12(1), 67-77 (1998) і Тзепод еї аї., Мої. Рпаптасої. 62(4), 864-72 (2002).COZ8BP according to the present invention can be linked to a cell-penetrating peptide (CPP). Cell-penetrating peptides or related peptides (e.g., engineered cell-penetrating antibodies) are described, for example, in 2pao eii ai., u) Ittipoi Meipoa''. 254(1-2), 137-45 (2001), Nopa ei a!., Sapseg Vez. 60(23), 6551-6 (2000). I ipadgep ei ai., Viospet U. 377(RI 1), 69-76 (2004), Viegdeg vy a!., ) Sapseg Vez Siip Opsoi. 129(12), 669-75 (2003), Rooda et al., RABEV 60 U. 12(1), 67-77 (1998) and Tzepod et al., Moi. Rpaptosai 62(4), 864-72 (2002).

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що включає експресуючі СЮОЗ38 клітини, у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного протизапального агента суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving SHOZ38-expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of the SHOZ8BP according to the present invention and at least one anti-inflammatory agent to the subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного протизапального агента суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of a SOZ8BP according to the present invention and at least one anti-inflammatory agent to a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення спільно, щонайменше, з одним протизапальним агентом для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention to obtain a pharmaceutical composition for administration together with at least one anti-inflammatory agent for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні такий протизапальний агент можна вибирати зі стероїдних ліків та МЗАЇЮ (нестероїдних протизапальних ліків).In one embodiment, such an anti-inflammatory agent can be selected from steroid drugs and NSAIDs (non-steroidal anti-inflammatory drugs).

В одному втіленні такий протизапальний агент можна вибирати з аспірину та інших саліцилатів, Сох-2 інгібіторів (наприклад, рофекоксибу та целекоксибу), М5ЗАЇЮ (таких як ібупрофен, фенопрофен, напроксен, суліндак, диклофенак, піроксикам, кетопрофен, дифлунізал, набуметон, етодолак, оксапрозин та індометацин), анти-ІЇ б антитіл, анти-ї/ 8 антитіл, анти-І-15 антитіл, антн-І15К антитіл, анти-СО4 антитіл, анти-СО11а антитіл (наприклад, ефалізумаб), анти-альфа-4/бета-і інтегрину (МіА4) антитіл (наприклад, наталізумаб), СТІ А4-19 для лікування запальних захворювань, преднізолону, преднізону, модифікуючих захворювання протиревматичних ліків (ОМАКО»5), таких як метотрексат, гідроксихлорокін, сульфазалазин, інгібіторів синтезу піримідинів (наприклад, лефлуномід), агентів, що блокують І/Ї/-1 рецептори (наприклад, анакінра), агентів, що блокують ТМЕ-а (наприклад, етанерсепт, інфликсимаб та адалімумаб) і подібні агенти.In one embodiment, such an anti-inflammatory agent can be selected from aspirin and other salicylates, Cox-2 inhibitors (eg, rofecoxib and celecoxib), M5ZAII (such as ibuprofen, fenoprofen, naproxen, sulindac, diclofenac, piroxicam, ketoprofen, diflunisal, nabumetone, etodolac, oxaprozin and indomethacin), anti-IIb antibodies, anti-I/8 antibodies, anti-I-15 antibodies, anti-I15K antibodies, anti-CO4 antibodies, anti-CO11a antibodies (for example, efalizumab), anti-alpha-4 /beta-and integrin (MiA4) antibodies (for example, natalizumab), STI A4-19 for the treatment of inflammatory diseases, prednisolone, prednisone, disease-modifying antirheumatic drugs (OMAKO»5), such as methotrexate, hydroxychloroquine, sulfasalazine, pyrimidine synthesis inhibitors ( e.g., leflunomide), agents that block I/Y/-1 receptors (e.g., anakinra), agents that block TME-a (e.g., etanercept, infliximab, and adalimumab), and similar agents.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і, щонайменше, одного імуносупресивного та/або імуномодуляторного агента суб'єкту, що потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving COZ8 expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of the COZ8BP of the present invention and at least one immunosuppressive and/or immunomodulatory agent to the subject in need thereof .

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом і,In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of a COZ8BP according to the present invention and,

Зо щонайменше, одного імуносупресивного та/або імуномодуляторного агента суб'єкту, що потребує цього.At least one immunosuppressive and/or immunomodulatory agent for a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення разом 3, щонайменше, одним імуносупресивним та/або імуномодуляторним агентом для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention offers the use of SOZ8BP according to the present invention to obtain a pharmaceutical composition for administration together with 3 at least one immunosuppressive and/or immunomodulatory agent for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні такий імуносупресивний та/або імуномодуляторний агент можна вибирати із циклоспорину, азатіоприну, мікофенолової кислоти, мікофенолату мофетилу, кортикостероїдів, таких як преднізолон, метотриксат, солі золота, сульфасалазин, протималярийні агенти, брекінар, мізорибін, 15-дезокиспергуалін, б-меркаптопурин, циклофосфамід, рапаміцин, такролімус (ЕК-506), ОКТЗ, протитимоцитний глобулін, тимопентин, тимозин-а і подібних агентів.In one embodiment, such immunosuppressive and/or immunomodulatory agent can be selected from cyclosporine, azathioprine, mycophenolic acid, mycophenolate mofetil, corticosteroids such as prednisone, methotrexate, gold salts, sulfasalazine, antimalarial agents, brekinar, misoribine, 15-deoxyspergualine, b-mercaptopurine , cyclophosphamide, rapamycin, tacrolimus (EK-506), OKTZ, antithymocyte globulin, thymopentin, thymosin-a and similar agents.

В одному втіленні такий імуносупресивний та/або імуномодуляторний агент можна вибирати з імуносупресивних антитіл, наприклад, антитіл, що зв'язуються з МНС, С0О2, СО3, 204, СО07, сор28, В7, 2040, 045, ІЄМ?, ТМЕ-7, ІІ -4, 1-5, 1-68, 1-6; ІС, ІЗЕВТ, 1-7, 1-8, 11-10, СО1та, або СО58, або антитіл, що зв'язуються з іншими лігандами.In one embodiment, such an immunosuppressive and/or immunomodulatory agent can be selected from immunosuppressive antibodies, for example, antibodies that bind to MHC, СОО2, СО3, 204, СО7, Сор28, B7, 2040, 045, IEM?, TME-7, II -4, 1-5, 1-68, 1-6; IS, IZEVT, 1-7, 1-8, 11-10, СО1ta, or СО58, or antibodies that bind to other ligands.

В одному втіленні такий імуносупресивний та/або імуномодуляторний агент можна вибирати з розчинних 1 -158, 1-10, В7 молекул (87-1, В7-2, їх варіантів та їх фрагментів), ІСО5 та ОХ40, інгібітора регулятора негативних Т клітин (наприклад, антитіла проти СТІ А4) і подібних агентів.In one embodiment, such an immunosuppressive and/or immunomodulatory agent can be selected from soluble 1-158, 1-10, B7 molecules (87-1, B7-2, their variants and their fragments), ISO5 and OX40, an inhibitor of the regulator of negative T cells ( for example, antibodies against STI A4) and similar agents.

В одному втіленні СОЗ86Р згідно з даним винаходом можна призначати в комбінації з одним або двома імуносупресивними або імуномодуляторними агентами, наприклад, у комбінації із преднізолоном і циклоспорином; преднізоном, циклоспорином та азатіосприном або преднізолоном, циклоспорином і мікофенолат мофети л ом.In one embodiment, SOZ86R according to the present invention can be prescribed in combination with one or two immunosuppressive or immunomodulatory agents, for example, in combination with prednisone and cyclosporine; prednisone, cyclosporine and azathioprine or prednisone, cyclosporine and mycophenolate mofetil.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування порушення, що включає експресуючі СЮОЗ8 клітини у суб'єкта, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та анти-СЗБ(ї) антитіла суб'єкту, який потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating a disorder involving SHOZ8-expressing cells in a subject, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of the SHOZ8BP according to the present invention and an anti-SHOZ(s) antibody to a subject in need thereof.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб лікування множинної мієломи, де спосіб включає введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та анти-СЗЦ(ї) антитіла суб'єкту, який потребує цього.In one embodiment, the present invention provides a method of treating multiple myeloma, wherein the method comprises administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of SOZ8BP according to the present invention and an anti-SZC(s) antibody.

В одному втіленні даний винахід пропонує застосування СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для одержання фармацевтичної композиції для введення разом з анти-СЗБ(ї) антитілом для лікування множинної мієломи.In one embodiment, the present invention provides the use of SOZ8BP according to the present invention to prepare a pharmaceutical composition for administration together with an anti-SZB(s) antibody for the treatment of multiple myeloma.

В одному втіленні терапевтичний агент для застосування в комбінації з СОЗ8ВР згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, можна вибирати з інгібіторів гістон-деацетилази (наприклад, фенілбутирату) та/або агентів заліковування ДНК (наприклад, ферменти заліковування ДНК і споріднені композиції, як димерицин).In one embodiment, the therapeutic agent for use in combination with COZ8BP of the present invention for the treatment of disorders as described above may be selected from histone deacetylase inhibitors (e.g., phenylbutyrate) and/or DNA repair agents (e.g., DNA repair enzymes and related compositions , as dimericin).

Способи згідно з даним винаходом для лікування порушень, як описано вище, що включають введення терапевтично ефективної кількості СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, можуть також включати спрямовану проти раку фотодинамічну терапію (наприклад, протиракову лазерну терапію, яку при необхідності можна практикувати із застосуванням фотосенсибілізуючого агента, див., наприклад, 7Ппапд еї аї., У СопігоЇ КеїІеєазе. 93(2), 141-50 (2003)), протиракові терапії за допомогою звукових хвиль і хвильових стрибків (див., наприклад,Methods of the present invention for treating disorders as described above, comprising administration of a therapeutically effective amount of a SOZ8BP of the present invention, may also include anti-cancer photodynamic therapy (e.g., anti-cancer laser therapy, which may optionally be practiced with a photosensitizing agent, see, e.g., 7Ppapd et al., U SopigoYi KeiIease. 93(2), 141-50 (2003)), anticancer therapies using sound waves and wave hopping (see, e.g.

Катрбе есеї аї., Нит Сеї. 10(1), 87-94 (1997)), та/"або протиракову нутрацевтичну терапію (див., наприклад, Коцйадебизі еї аї., Меї Сіїп Мой Ат 5таї! Апіт Ргасі. З4(О 249-69, мії (2004) і Каї,,Katrbe essays ai., Nit Seyi. 10(1), 87-94 (1997)), and/or anticancer nutraceutical therapy (see, e.g., Kocyadebizi ei ai., Mei Siip Moi At 5tai! Apit Rgashi. Z4(O 249-69, mii (2004) ) and Kai,,

Миїйіоп. 20(1), 78-82 (2004). Аналогічно, СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна застосовувати для одержання фармацевтичної композиції для лікування порушень, як описано вище, щоб призначати разом зі спрямованої проти раку фотодинамічною терапією (наприклад, протираковою лазерною терапією, що при необхідності можна практикувати із застосуванням фотосенсибілізуючого агента, протиракових терапій за допомогою звукових хвиль і хвильових стрибків та/або протиракової нутрацевтичної терапії).Miyyyop. 20(1), 78-82 (2004). Similarly, the SOZ8BP of the present invention can be used to prepare a pharmaceutical composition for the treatment of disorders as described above, to be administered together with anti-cancer photodynamic therapy (e.g., anti-cancer laser therapy, which can optionally be practiced with a photosensitizing agent, anti-cancer therapies of using sound waves and wave jumps and/or anti-cancer nutraceutical therapy).

Як описано вище, фармацевтичну композицію згідно з даним винаходом можна призначати в комбінованій терапії, наприклад, у комбінації з одним чи більше агентом, що стосується захворювання або стану, які треба лікувати, у вигляді окремих фармацевтичних композицій або у складі рецептур зі сполуками згідно з даним винаходом разом з одним чи більше додатковим терапевтичним агентом, як описано вище. Такі комбіновані терапії можуть вимагати більш низьких дозувань сполуки згідно з даним винаходом та/або спільно призначуваних агентів, у такий спосіб запобігаючи можливим токсичним діям або ускладненням, зв'язаним з різними монотерапіями.As described above, a pharmaceutical composition according to the present invention can be administered in combination therapy, for example, in combination with one or more agents related to the disease or condition to be treated, as separate pharmaceutical compositions or as part of formulations with compounds according to this invention together with one or more additional therapeutic agents as described above. Such combination therapies may require lower dosages of the compound of the present invention and/or co-administered agents, thus preventing possible toxic effects or complications associated with various monotherapies.

В одному втіленні даний винахід пропонує СОЗ8ВР, кон'югований з імуномодулятором, таким як цитокін, фактор росту стовбурових клітин, лімфотоксин (наприклад, ТМЕ, наприклад,In one embodiment, the present invention provides a COZ8BP conjugated to an immunomodulator, such as a cytokine, stem cell growth factor, lymphotoxin (e.g., TME, e.g.

ТМЕа), або гематопоетичний фактор. Приклади таких молекул, які можна застосовувати як кон'югати, включають 1-1, І -2, 11 -3, 11 -6, 1-10, 11-12, 1-18 та ІС-21, фактори стимуляції росту колоній (наприклад, фактор стимуляції росту колоній гранулоцитів (5-С5Е) і фактор стимуляції росту колоній гранулоцитів макрофагів (ЗМ-С5БЕ)), інтерферони (наприклад, ІЄМа, ІЕМ і ІЄМУ), фактор росту стовбурових клітин, називаний "51 фактор", еритропоетин і тромбопоетин, їх активні фрагменти, їх похідні або будь-які їх комбінації.TMEa), or hematopoietic factor. Examples of such molecules that can be used as conjugates include 1-1, I-2, 11-3, 11-6, 1-10, 11-12, 1-18, and IS-21, colony-stimulating factors ( for example, granulocyte colony-stimulating factor (5-C5E) and macrophage granulocyte colony-stimulating factor (ZM-C5BE)), interferons (for example, IEMa, IEM and IEMU), stem cell growth factor called "factor 51", erythropoietin and thrombopoietin, their active fragments, their derivatives or any combination thereof.

В одному втіленні СОЗ8ВР згідно з даним винаходом можна застосовувати іп мімо або іп міто для діагностики захворювань, де активовані експресуючі СОЗ8 клітини відіграють активну роль у патогенезі, шляхом детектування рівнів СОЗ8 або рівнів клітин, що містять СОЗ8 на поверхні своєї мембрани. Цього можна досягти, наприклад, за допомогою контактування зразка для тестування, при необхідності разом з контрольним зразком, з СОЗ8ВР в умовах, що дозволяють утворення комплексу між антитілом та СОЗ38. Утворення комплексу далі детектують (наприклад, за допомогою ЕГІЗА). Коли застосовують контрольний зразок разом з тестованим зразком, комплекс визначають в обох зразках і будь-яка статистично значуща різниця в утворенні комплексу між зразками вказує на присутність СОЗ8 у тестованому зразку.In one embodiment, COZ8BP according to the present invention can be used ip mimo or ip mito to diagnose diseases where activated COZ8-expressing cells play an active role in pathogenesis, by detecting levels of COZ8 or levels of cells containing COZ8 on the surface of their membrane. This can be achieved, for example, by contacting the test sample, if necessary together with a control sample, with COZ8BP under conditions that allow the formation of a complex between the antibody and COZ38. The formation of the complex is further detected (for example, with the help of EGISA). When a control sample is used together with a test sample, the complex is determined in both samples and any statistically significant difference in complex formation between the samples indicates the presence of POP8 in the test sample.

Більш конкретно, даний винахід пропонує способи ідентифікації та діагностики інвазивних клітин і тканин та інших клітин, на які спрямовані СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, та моніторингу прогресу терапевтичних лікувань, стану після проведення лікування, ризику розвитку рака, прогресії раку і т.п.More specifically, the present invention provides methods for identifying and diagnosing invasive cells and tissues and other cells targeted by the SOZ8VR according to the present invention, and for monitoring the progress of therapeutic treatments, post-treatment status, cancer risk, cancer progression, etc.

В одного прикладі такого діагностичного аналізу даний винахід пропонує спосіб діагностики рівня інвазивних клітин у тканини, що включає утворення імунокомплексу між СОЗ8ВР і потенційно утримуючими СОЗ8ВР тканинами та детектування утворення імунокомплексу, де утворення імунокомплексу корелює із присутністю інвазивних клітин у тканині. Контактування можна проводити іп мімо, застосовуючи мічені ізольовані антитіла та стандартні техніки одержання зображень, або можна проводити іп міїго на зразках тканини.In one example of such diagnostic analysis, the present invention provides a method of diagnosing the level of invasive cells in a tissue, which includes the formation of an immune complex between SOZ8BP and potentially containing SOZ8BP tissues and detecting the formation of the immune complex, where the formation of the immune complex correlates with the presence of invasive cells in the tissue. Contacting can be performed by IP mimo using labeled isolated antibodies and standard imaging techniques, or IP miigo can be performed on tissue samples.

СОЗ8ВР можна застосовувати для детектування СОЗ3З8-вмісних пептидів і пептидних фрагментів у будь-якому придатному біологічному зразку за допомогою придатних підходів.COZ8BP can be used to detect COZ3Z8-containing peptides and peptide fragments in any suitable biological sample using suitable approaches.

Приклади загальноприйнятих імуноаналізів, надавані згідно з даним винаходом, включають, без 60 обмеження, ЕГІЗА, КІА, БАС5 аналізи, аналіз за допомогою плазмонового резонансу,Examples of conventional immunoassays provided in accordance with the present invention include, without limitation, EGISA, KIA, BAS5 assays, plasmon resonance assays,

хроматографічні аналізи, імуногістохімію тканин, блотинг та/або імунопреципітацію із застосуванням СОЗ8ВР. Анти-СОЗ38 антитіла згідно з даним винаходом можна застосовувати для детектування СОЗ38 і фрагментів СОЗ38 з людини. Придатні мітки для СОЗ8ВР і вторинних антитіл, застосовувані в таких підходах, включають, без обмеження, різні ферменти, простетичні групи, флуоресцентні матеріали, люмінесцентні матеріали та радіоактивні матеріали. Приклади придатних ферментів включають пероксидазу хрону, лужну фосфатазу, Д- галактозидазу або ацетилхолін-естеразу; приклади придатних комплексів простетичних груп включають стрептавідин/біотин та авідин/біотин; приклади придатних флуоресцентних матеріалів включають умбеліферон, флуоресцеїн, флуоресцеїн ізотіоціанат, родамін, дихлортриазиніламін флуоресцеїн, дансил хлорид або фікоеритрин; приклади люмінесцентних матеріалів включають люмінол, приклади придатних радіоактивних матеріалів включають "25, 131), 3555 та ЗН.chromatographic analyses, tissue immunohistochemistry, blotting and/or immunoprecipitation using SOZ8BP. Anti-POZ38 antibodies according to the present invention can be used to detect POP38 and POP38 fragments from humans. Suitable labels for COZ8BP and secondary antibodies used in such approaches include, without limitation, various enzymes, prosthetic groups, fluorescent materials, luminescent materials, and radioactive materials. Examples of suitable enzymes include horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, D-galactosidase or acetylcholinesterase; examples of suitable prosthetic group complexes include streptavidin/biotin and avidin/biotin; examples of suitable fluorescent materials include umbelliferone, fluorescein, fluorescein isothiocyanate, rhodamine, dichlorotriazinylamine fluorescein, dansyl chloride or phycoerythrin; examples of luminescent materials include luminol, examples of suitable radioactive materials include "25, 131), 3555 and ZN.

СОЗ8ВР можна також аналізувати в біологічних зразках за допомогою конкурентного імуноаналізу, застосовуючи СОЗ8-пептидні стандарти, мічені детектованими речовинами, і немічений СОЗ8ВР, наприклад, немічене анти-СОЗ38 антитіло. У такого аналізі біологічний зразок, мічений СОЗ8-пептидний стандарти) і СОЗ8ВР комбінують та вимірюють кількість міченого СОЗ8 стандарту, зв'язаного з неміченим СОЗ8ВР. Кількість СОЗ38 пептиду в біологічного зразку обернено пропорційна кількості міченого СОЗ8 стандарту, зв'язаного зCOZ8BP can also be analyzed in biological samples by competitive immunoassay using COZ8-peptide standards labeled with detectable substances and unlabeled COZ8BP, for example, unlabeled anti-COZ38 antibody. In such an assay, a biological sample, a labeled COZ8-peptide standard) and COZ8BP are combined and the amount of labeled COZ8 standard bound to unlabeled COZ8BP is measured. The amount of POP38 peptide in a biological sample is inversely proportional to the amount of labeled POP8 standard bound to

СОоЗ8вР.SOoZ8vR.

СОЗ38ВР особливо корисні для одержання зображень пухлин іп мімо. Одержувати зображення зв'язаних з СЮОЗ8 пухлин іп мімо можна за допомогою будь-якої придатної техніки.The SOZ38VR is particularly useful for imaging ip mimo tumors. Any suitable technique can be used to image ip mimo tumors associated with SHOZ8.

Наприклад, можна застосовувати У"То-мітку або іншу мітку за допомогою іншого випромінюючі гамма-промені ізотопу, щоб позначити анти-СОЗ38 антитіла в пухлині або вторинні мічені (наприклад, РІТС мічені)) СОЗ8ВР: СО38 комплекси з пухлин та одержувати зображення за допомогою гамма-сцинтиляційної камери (наприклад, пристрій ЕїІзсіпї Арех 409ЕСТ), звичайно із застосуванням коліматора для низьких енергій і високого розділення або коліматора для низьких енергій і всіх цілей. Пофарбовані тканини можна далі аналізувати на радіоактивне лічення як індикатор кількості СОЗ8-зв'язаних пептидів у пухлині. Зображення, одержані із застосуванням таких технік, можна застосовувати для аналізу біологічного розподілу СОЗ8 уFor example, one can use a Y"To-label or another label with another gamma-emitting isotope to label anti-COZ38 antibodies in the tumor or secondary labeled (e.g., RITS labeled) COZ8BP:CO38 complexes from tumors and image with gamma scintillation camera (e.g., an EISSIP Arex 409EST device), usually using a low-energy, high-resolution collimator or a low-energy, all-purpose collimator.Stained tissues can be further analyzed for radiocounting as an indicator of the amount of COZ8-bound peptides in Images obtained using such techniques can be used to analyze the biodistribution of POP8 in the tumor

Зо хворого, ссавця або в тканині, наприклад, із застосуванням СОЗ8 або фрагментів СЮОЗ8 як біомаркерів присутності інвазивних ракових клітин. Варіанти такої техніки можуть включати застосування одержання зображень за допомогою магнітного резонансу (МКІ) для поліпшення зображень у порівнянні з технікою гамма-камери. Подібні способи та принципи імуносцинтіографії описані, наприклад, в 5гімазіама (еа.), Кадіоіарбеієа Мопосіопа! Апііродіе5 БогFrom a patient, a mammal or in a tissue, for example, using SOC8 or fragments of SOC8 as biomarkers for the presence of invasive cancer cells. Options for such a technique may include the use of magnetic resonance imaging (MRI) to improve images compared to gamma camera techniques. Similar methods and principles of immunoscintiography are described, for example, in 5himaziama (ea.), Kadioiarbeiia Moposiopa! Apiirodie5 God

Ітадіпа Апа ТНегару (Рієпит Ргез5 1988), Спазе, "Меадіса! Арріїсайопе ої Вадіоізоїорев, " іпItadipa Apa TNegaru (Riepit Rgez5 1988), Spaze, "Meadisa! Arriisaiope oi Vadioizoiorev, " ip

Ветіпдіоп'є Ріаптасешіса! Зсіепсе5, 181й Еайоп, Сеппаго еї аї., (едв5.), рр. 624-652 (МаскVetipdiopye Riaptaseshisa! Zsiepse5, 181st Eaiop, Seppago eii ai., (Edv5.), 624-652 (Mask

Рибіївєпіпд Со., 1990), апа Вгомлп, "Сіїпісаї Обе ої Мопосіопа! Апііродієв5, " іп Віоїесппоіїоду АпаRybiivepipd So., 1990), apa Vgomlp, "Siipisai Obe oi Moposiopa! Apiirodiev5," ip Vioiiespppoiiodo Apa

Ріпаптасу 227-49, Ре7цщ0о еї аї., (ед5.) (Спартап 8. НаїЇ 1993). Такі зображення можна також застосовувати для цільової доставки протиракових агентів, приклади яких описані тут (наприклад, агенти апоптозу або СНОР хіміотерапевтичні композиції). Далі, такі зображення можуть також або альтернативно бути основою для хірургічних підходів до видалення пухлин.Ripaptasu 227-49, Re7tssh0o ei ai., (ed5.) (Spartap 8. NaiYi 1993). Such imaging can also be used for the targeted delivery of anticancer agents, examples of which are described herein (eg, apoptosis agents or SNP chemotherapeutic compositions). Further, such images may also or alternatively be the basis for surgical approaches to tumor removal.

Далі, таке одержання зображень іп мімо може дозволяти ідентифікувати та локалізувати пухлини у випадку, коли в пацієнта визнана наявність пухлини (через присутність інших біомаркерів, метастаз і т.д.), але рак не можна ідентифікувати за допомогою традиційних аналітичних підходів. Всі ці способи є властивостями даного винаходу.Further, such ip mimo imaging can allow the identification and localization of tumors in cases where the presence of a tumor is recognized in a patient (due to the presence of other biomarkers, metastases, etc.), but the cancer cannot be identified using traditional analytical approaches. All these methods are properties of this invention.

Одержання зображень іп мімо та інші діагностичні способи, надані даним винаходом, особливо корисні при детектуванні мікрометастаз у хворої людини (наприклад, хворого, у якого раніше не діагностували рак, або хворого в періоді видужання/ремісії від раку). Показано, що ракові клітини карциноми, які можуть становити до 90 95 всіх ракових клітин, забарвлюються дуже добре за допомогою композицій з кон'югатами СОЗ38 антитіла. Детектування за допомогою моноклональних анти-СОЗ8 антитіл та інших СОЗ8ВР, описаних тут, може вказувати на присутність карцином, що є агресивними/інвазивними і також або альтернативно надавати індикацію здійсненності застосування споріднених моноклональних анти-СОЗ38 антитіл, СОЗ8ВР або споріднених композицій проти таких мікрометастаз. Далі, моноклональні анти-СОЗ8 антитіла, спрямовані на ракові клітини, в більшому ступені здатні відрізняти такі зв'язані з раком тканини та клітини від нормальних клітин, з якими можуть бути зв'язані інші форми СОЗ38.ip mimo imaging and other diagnostic methods provided by the present invention are particularly useful in detecting micrometastases in a patient (eg, a patient not previously diagnosed with cancer, or a patient in recovery/remission from cancer). It is shown that carcinoma cancer cells, which can make up to 90-95% of all cancer cells, are stained very well with the help of compositions with conjugates of SOZ38 antibodies. Detection by monoclonal anti-COZ8 antibodies and other COZ8BPs described herein may indicate the presence of carcinomas that are aggressive/invasive and also or alternatively provide an indication of the feasibility of using related monoclonal anti-COZ38 antibodies, COZ8BPs or related compositions against such micrometastases. Further, monoclonal anti-COZ8 antibodies directed at cancer cells are more able to distinguish such cancer-associated tissues and cells from normal cells to which other forms of COZ38 may be bound.

В одному втіленні даний винахід пропонує спосіб одержання зображень іп мімо, де СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіло згідно з даним винаходом, кон'юговано зі сприятливим для детектування радіонепроникним агентом, причому кон'юговане антитіло дають хазяїнові, бо наприклад, за допомогою ін'єкції в кровотік і аналізують наявність та розташування мічених антитіл у хазяїна. За допомогою цієї техніки та будь-якого іншого діагностичного підходу, наданого тут, даний винахід пропонує спосіб скринінгу на наявність зв'язаних із захворюванням клітин у хворої людини або в біологічному зразку, узятому у хворої людини.In one embodiment, the present invention provides a method for obtaining IP mimo images, where a SOZ8BP, for example, an anti-SOZ38 antibody according to the present invention, is conjugated with a radiopaque agent favorable for detection, and the conjugated antibody is administered to the host, for example, with the help of other injection into the bloodstream and analyze the presence and location of labeled antibodies in the host. Using this technique and any other diagnostic approach provided herein, the present invention provides a method of screening for the presence of disease-related cells in a sick person or in a biological sample taken from a sick person.

Для одержання зображень з метою діагностики, радіоізотопи можуть бути зв'язані з СОЗ8ВР прямо або опосередковано із застосуванням проміжної функціональної групи. Застосовні проміжні функціональні групи включають хелатори, наприклад, етилендіамінтетраоцтову кислоту та діетилентриамінпентаоцтову кислоту (див., наприклад, 5 5057313). У таких діагностичних аналізах, що включають кон'юговані з радіоїзотопом СОЗ8ВР, дозування кон'югованого пептиду, що доставляється хворому, звичайно підтримують на якомога нижчому рівні шляхом добирання ізотопу для кращого сполучення мінімального часу напівжиття, мінімального утримання в організмі та мінімальної кількості ізотопу, що дозволить детекцію та точний вимір.For diagnostic imaging, radioisotopes can be linked to SOZ8BP directly or indirectly using an intermediate functional group. Useful intermediate functional groups include chelators, for example, ethylenediaminetetraacetic acid and diethylenetriaminepentaacetic acid (see, for example, 5 5057313). In such diagnostic assays involving radioisotope-conjugated COZ8BP, the dosage of conjugated peptide delivered to the patient is usually kept as low as possible by isotope selection to best combine minimum half-life, minimum retention in the body, and minimum amount of isotope that will allow detection and accurate measurement.

На додаток до радіоізотопів і непроникних для радіації агентів, діагностичні способи можна проводити із застосуванням СОЗ8ВР, кон'югованих з барвниками (наприклад, з комплексом біотин-стрептавідин), контрастними агентами, флуоресцентними сполуками або молекулами та посилюючими агентами (наприклад, парамагнітними іонами) для одержання зображень за допомогою магнітного резонансу (МК!) (див., наприклад, 05 Раї. Мо. 6331175, що описують техніки МК та одержання антитіл, кон'югованих з посилюючими МКІ агентами). Такі агенти для діагностики/детектування можна вибирати з агентів для застосування в одержанні зображень за допомогою магнітного резонансу та флуоресцентних сполук. Щоб навантажити СОЗ8ВР, наприклад, антитіло, сполукою з радіоактивними металами або парамагнітними іонами, може знадобитися його взаємодія з реагентом, що має довгий хвіст, до якого приєднані множинні або хелатуючі групи для зв'язування іонів. Такий хвіст може бути полімером, таким як полілізин, полісахарид або інші дериватизовані або придатні для дериватизації ланцюги з підвішеними групами, до яких можна приєднувати хелатуючі групи, наприклад, порфірини, поліаміни, краун- ефіри, бістіосемікарбазони та подібні групи, відомі для застосування з такою метою. Хелатори можна приєднати до СОЗ8ВР за допомогою стандартних хімічних підходів. Хелатори звичайно зв'язані з СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 тАВ, за допомогою групи, що дозволяє утворення зв'язку з молекулою при мінімальній втраті імунореактивності та мінімальній агрегації та/абоIn addition to radioisotopes and radiopaque agents, diagnostic methods can be performed using SOZ8BP conjugated with dyes (e.g., biotin-streptavidin complex), contrast agents, fluorescent compounds or molecules, and enhancing agents (e.g., paramagnetic ions) for obtaining images with the help of magnetic resonance (MK!) (see, for example, 05 Rai. Mo. 6331175, which describe the techniques of MK and obtaining antibodies conjugated with enhancing MKI agents). Such diagnostic/detection agents may be selected from agents for use in magnetic resonance imaging and fluorescent compounds. To load COZ8BP, for example, an antibody, with a compound with radioactive metals or paramagnetic ions, it may be necessary to interact with a long-tailed reagent to which multiple or chelating groups are attached to bind ions. Such a tail can be a polymer such as polylysine, polysaccharide or other derivatized or derivatizable chains with pendant groups to which chelating groups can be attached, for example porphyrins, polyamines, crown ethers, bisthiosemicarbazones and similar groups known for use with such chains purpose Chelators can be attached to SOZ8BP using standard chemical approaches. Chelators are usually linked to COZ8BP, e.g., anti-COZ38 tAV, by means of a group that allows the formation of a bond with the molecule with minimal loss of immunoreactivity and minimal aggregation and/or

Зо внутрішнього зшивання. Інші більш звичайні способи та реагенти для кон'югування хелаторів з антитілами розкриті, наприклад, в 5 4824659. Приклади потенційно придатних сполучень метал-хелатор включають 2-бензил-ДТПА та його монометильний і циклогексильний аналоги, застосовувані з ізотопами для діагностики в основному інтервалі енергії від 60 до 4000 кЕв, наприклад, 125|, 123), 124), в2бу, бу, ТЕ, пуп, 6703а, 67(3а, 99Тс, Тс, С, 13М, 150 та 76Вг для одержання радіозображень. Такі та подібні до них хелатори при утворенні комплексів з нерадіоактивними металами, такими як марганець, залізо та гадоліний, можуть застосовуватися для МК діагностичних підходів у зв'язку з СОЗ8ВР. Макроциклічні хелатори, наприклад, МОТА, ротА та ТЕТА, застосовні з різними металами та радіоактивними металами, особливо, з радіоактивним галієм, ітрієм та міддю, відповідно. Такі комплекси метал-хелатор можна зробити дуже стабільними шляхом добору розміру циклу для розглянутого металу. Інші хелатори циклічного типу, наприклад, макроциклічні поліефіри, потрібні для стабільного зв'язування ізотопів, наприклад, Ка для ВАЇТ, також можуть бути придатними для діагностичних способів.From internal stitching. Other more conventional methods and reagents for conjugating chelators to antibodies are disclosed, for example, in 5 4824659. Examples of potentially suitable metal-chelator combinations include 2-benzyl-DTPA and its monomethyl and cyclohexyl analogues used with diagnostic isotopes in the main energy range from 60 to 4000 keV, for example, 125|, 123), 124), v2bu, bu, TE, navel, 6703a, 67(3a, 99Ts, Ts, C, 13M, 150 and 76Vg for obtaining radio images. Such and similar to of these chelators when complexed with non-radioactive metals such as manganese, iron and gadolinium can be used for MK diagnostic approaches in connection with SOZ8VR.Macrocyclic chelators such as MOTA, rotA and TETA are applicable with various metals and radioactive metals, especially , with radioactive gallium, yttrium, and copper, respectively. Such metal-chelator complexes can be made very stable by selecting the ring size for the metal in question. Other cyclic-type chelators, such as macrocyclic polyesters required for stable binding of isotopes, for example, Ka for VIT, may also be suitable for diagnostic methods.

Таким чином, даний винахід пропонує діагностичні кон'югати СОЗ8ВР, де СОЗ8ВР кон'югований з контрастним агентом (наприклад, для одержання зображень за допомогою магнітного резонансу, комп'ютерної томографії або агентом, що підсилює ультразвуковий контраст) або радіоактивним ізотопом, що може бути, наприклад, випромінювачем гамма-, бета- , альфа-променів, оже-електронів або позитронів. Додаткові застосовні кон'юЮговані СОЗ8ВР, описані тут в іншому місці, також можуть застосовуватися в діагностичних підходах і композиціях (наприклад, наборах для діагностики), надаваних даним винаходом.Thus, the present invention provides diagnostic conjugates of SOZ8BP, where SOZ8BP is conjugated to a contrast agent (eg, for magnetic resonance imaging, computed tomography, or an ultrasound contrast-enhancing agent) or a radioactive isotope that can be , for example, an emitter of gamma, beta, alpha rays, Auger electrons or positrons. Additional applicable SOZ8BP conjugates described elsewhere herein may also be used in the diagnostic approaches and compositions (eg, diagnostic kits) provided by the present invention.

В одному втіленні даний винахід пропонує набір для діагностики раку, що включає контейнер з СОЗ8ВР, наприклад, з анти-СОЗ8 антитілом, і один чи більше реагентів для детектування зв'язування СОЗ8ВР із СОЗ38 пептидом. Реагенти можуть включати, наприклад, флуоресцентні доважки (таги), ферментативні таги та інші детектовані таги. Реагенти можуть також включати вторинні чи третинні антитіла або реагенти для ферментативних реакцій, де ферментативна реакція виробляє продукт, який можна побачити. В одному втіленні даний винахід пропонує набір для діагностики, що включає один чи більше СОЗ8ВР, наприклад, анти-In one embodiment, the present invention provides a kit for the diagnosis of cancer, including a container with COZ8BP, for example, with an anti-COZ8 antibody, and one or more reagents for detecting the binding of COZ8BP to the COZ38 peptide. Reagents may include, for example, fluorescent tags (tags), enzymatic tags, and other detectable tags. Reagents may also include secondary or tertiary antibodies or reagents for enzymatic reactions where the enzymatic reaction produces a product that can be seen. In one embodiment, the present invention provides a diagnostic kit comprising one or more SOZ8BP, e.g., anti-

СО38 антитіла згідно з даним винаходом в міченій або неміченій формі в придатному контейнері(ах), реагенти для інкубації для непрямого аналізу та субстрати або дериватизуючі агенти для детекції при такому аналізі залежно від природи мітки. Контрольні реагенти та бо інструкції із застосування також можуть бути включені.CO38 antibodies according to the present invention in labeled or unlabeled form in a suitable container(s), incubation reagents for indirect assays, and substrates or derivatizing agents for detection in such assays depending on the nature of the label. Control reagents and instructions for use may also be included.

Діагностичні набори можна поставляти для застосування з СОЗ8ВР, наприклад, кон'югованим/міченим анти-СОЗ8 антитілом, для детектування клітинної активності або для детектування наявності СОЗ8 пептидів у зразку тканини або організмі хазяїна. У таких діагностичних наборах, а також у наборах для терапевтичного застосування, описаних тут,Diagnostic kits can be supplied for use with COZ8BP, for example, a conjugated/labeled anti-COZ8 antibody, to detect cellular activity or to detect the presence of COZ8 peptides in a tissue sample or host organism. In such diagnostic kits, as well as in the therapeutic use kits described herein,

СОЗ38ВР звичайно наданий у ліофілізованій формі в контейнері один або разом з додатковими антитілами, специфічними для клітини або пептиду мішеней. Звичайно, фармацевтично прийнятний носій (наприклад, інертний розчинник) та/або його компоненти, наприклад, Трис, фосфатний чи карбонатний буфер, стабілізатори, консерванти, біоциди, інертні білки, наприклад, бичачий сироватковий альбумін і т.п., також включені (звичайно в окремому контейнері для змішування), а також додаткові реагенти (також звичайно в окремому контейнері(ах)). У певних наборах вторинне антитіло здатне зв'язуватися з анти-СО38 антитілом або іншими СОЗ8ВР, що звичайно находиться в окремому контейнері, також включено.COZ38BP is usually provided in lyophilized form in a container alone or together with additional antibodies specific for the target cell or peptide. Of course, a pharmaceutically acceptable carrier (e.g., an inert diluent) and/or components thereof, e.g., Tris, phosphate or carbonate buffer, stabilizers, preservatives, biocides, inert proteins, e.g., bovine serum albumin, etc., are also included (of course in a separate mixing container) as well as additional reagents (also usually in a separate container(s)). In certain kits, a secondary antibody capable of binding to an anti-CO38 antibody or other COZ8BP, usually in a separate container, is also included.

Вторинне антитіло звичайно кон'юговано з міткою та включено в рецептуру у спосіб, подібний до такого для анти-СОЗ38 антитіла або іншого СОЗ8ВР згідно з даним винаходом.The secondary antibody is usually conjugated to a label and included in the formulation in a manner similar to that for an anti-COZ38 antibody or other COZ8BP according to the present invention.

За допомогою способів, описаних вище та в інших місцях тексту, СОЗ8ВР можна застосовувати для визначення підмножини ракових/пухлинних клітин і характеризувати такі клітини та споріднені тканини/розростання.Using the methods described above and elsewhere in the text, COZ8BP can be used to identify a subset of cancer/tumor cells and characterize such cells and related tissues/growths.

В одному прикладі СОЗ8ВР або анти-СО38 антитіло можна додавати до нітроцелюлози або до іншої твердої підкладки, здатної до іммобілізації клітин, клітинних частинок або розчинних білків. Таку підкладку можна потім промити придатними буферами з наступною обробкою міченим СОЗ38 пептидом або антитілом. Тверду підкладку можна потім промити буфером другий раз для видалення незв'язаного пептиду або антитіла. Кількість зв'язаної мітки на твердій підкладці можна потім визначити за допомогою відомих способів.In one example, the COZ8BP or anti-CO38 antibody can be added to nitrocellulose or to another solid support capable of immobilizing cells, cell particles, or soluble proteins. Such a substrate can then be washed with suitable buffers followed by treatment with a POP38-labeled peptide or antibody. The solid substrate can then be washed with buffer a second time to remove unbound peptide or antibody. The amount of bound label on the solid substrate can then be determined using known methods.

Зв'язані ферменти, які реагують із доступним субстратом, можна застосовувати для одержання хімічної ланки, яку можна детектувати, наприклад, спектрофотометрично, флуориметрично або візуальними способами в оточенні СОЗ8ВР кон'югатів та/або складових білків. Ферменти, які можна застосовувати для детектованого мічення СОЗ8ВР та анти-СОЗ38 антитіл, включають малат-дегідрогеназу, стафілококову нуклеазу, дельта-5-стероїд ізомеразу, дріжджову алкогольдегідрогеназу, альфа-гліцерофосфат-дегідрогеназу, триозофосфат-Bound enzymes that react with an available substrate can be used to produce a chemical link that can be detected, for example, spectrophotometrically, fluorimetrically, or visually in the presence of SOZ8BP conjugates and/or component proteins. Enzymes that can be used for detectable labeling of COZ8BP and anti-COZ38 antibodies include malate dehydrogenase, staphylococcal nuclease, delta-5-steroid isomerase, yeast alcohol dehydrogenase, alpha-glycerophosphate dehydrogenase, triose phosphate-

Зо ізомеразу, пероксидазу хрону, лужну фосфатазу, аспарагіназу, глюкозоксидазу, бета- галактозидазу, рибонуклеазу, уреазу, каталазу, глюкозо-6-фосфат-дегідрогеназу, глюкоамілазу та ацетилхолінестеразу. Можна також помітити СОЗ8ВР флуоресцентними сполуками. Коли антитіло із флуоресцентною міткою освітлюють світлом потрібної довжини хвилі, його присутність можна детектувати по флуоресценції. До найбільш широко застосовуваних флуоресцентних агентів мічення належать флуоресцеїн ізотіоціанат, родамін, фікоеритрин, фікоціанін, алофікоціанін, о-фтальдегід і флуорескамін.Z isomerase, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase, asparaginase, glucose oxidase, beta-galactosidase, ribonuclease, urease, catalase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, glucoamylase and acetylcholinesterase. COZ8BP can also be observed with fluorescent compounds. When a fluorescently labeled antibody is illuminated with light of the right wavelength, its presence can be detected by fluorescence. The most widely used fluorescent labeling agents include fluorescein isothiocyanate, rhodamine, phycoerythrin, phycocyanin, allophycocyanin, o-phthalaldehyde, and fluorescamine.

СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіла, можна також детектованим способом мітити за допомогою металів, що випромінюють флуоресценцію, наприклад, "2Еу чи інших із серії лантанідів. Такі метали можна приєднувати до анти-СОЗ38 антитіла, наприклад, за допомогою таких хелатуючих метали груп, як діетилентриамінпентаоцтова кислота (ДТПА) або етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТА).COZ8BP, e.g., anti-COZ38 antibodies, can also be detectably labeled with fluorescence-emitting metals, e.g., 2Eu or others from the lanthanide series. Such metals can be attached to anti-COZ38 antibodies, for example, with such chelating metal groups , such as diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA).

СОЗ38ВР та анти-СО38 антитіла можна також детектованим способом позначити шляхом з'єднання з хемілюмінесцентною сполукою. Присутність хемилюмінесцентно-міченого СОЗВВР далі визначають шляхом детектування наявності люмінесценції, що з'являється по ходу хімічної реакції. Прикладами особливо застосовних хемілюмінесцентних міток є люмінол, ізолюмінол, тероматичний ефір акридинію, імідазол, сіль акридинію та ефір оксалату.COZ38BP and anti-CO38 antibodies can also be labeled in a detectable manner by conjugation with a chemiluminescent compound. The presence of chemiluminescent-labeled SOZVVR is further determined by detecting the presence of luminescence that appears during the chemical reaction. Examples of particularly useful chemiluminescent labels are luminol, isoluminol, theromatic acridinium ether, imidazole, acridinium salt, and oxalate ether.

Аналогічно, можна застосовувати біолюмінесцентні сполуки, щоб помітити СОЗ8ВР.Similarly, bioluminescent compounds can be used to detect SOZ8BP.

Біолюмінесценція є типом хемілюмінесценції, виявленої в біологічних системах, при якій каталітичний білок збільшує ефективність хемілюмінесцентної реакції. Присутність біолюмінесцентного білка визначають по наявності біолюмінесценції. Важливими біолюмінесцентними сполуками для цілей внесення мітки є люциферин, люцифераза та екворин.Bioluminescence is a type of chemiluminescence found in biological systems in which a catalytic protein increases the efficiency of a chemiluminescent reaction. The presence of bioluminescent protein is determined by the presence of bioluminescence. Important bioluminescent compounds for labeling purposes are luciferin, luciferase, and aequorin.

Детектування міченого пептиду або антитіла, фрагмента антитіла або похідного можна проводити за допомогою сцинтиляційного лічильника, наприклад, якщо детектована мітка є гамма-випромінювачем, або за допомогою флуориметра, наприклад, якщо мітка є флуоресцентним матеріалом. У випадку ферментативної мітки детектування можна проводити за допомогою колориметричних способів, що включають субстрат ферменту. Детектування можна також проводити за допомогою зорового порівняння ступеня ферментативного перетворення субстрату в порівнянні з аналогічно одержаним стандартом.Detection of the labeled peptide or antibody, antibody fragment, or derivative can be performed using a scintillation counter, for example, if the detected label is a gamma emitter, or with a fluorometer, for example, if the label is a fluorescent material. In the case of an enzymatic label, detection can be carried out using colorimetric methods that include an enzyme substrate. Detection can also be carried out by visual comparison of the degree of enzymatic conversion of the substrate in comparison with a similarly obtained standard.

Ці та інші діагностичні прийоми можна застосовувати для скринінгу будь-якого придатного матеріалу на СО38 пептиди або СОЗ38 фрагменти. Приклади матеріалів, які можна піддавати скринінгу, включають, наприклад, кров, сироватку, лімфу, сечу, запальний ексудат, спинномозкову рідину, навколоплідну рідину, екстракт або гомогенат тканини і т.п. Однак, даний винахід не обмежується аналізом із застосуванням тільки цих зразків, для фахівця в даній області можливо визначити умови, що дозволяють застосовувати інші зразки.These and other diagnostic techniques can be used to screen any suitable material for CO38 peptides or COZ38 fragments. Examples of materials that can be screened include, for example, blood, serum, lymph, urine, inflammatory exudate, cerebrospinal fluid, amniotic fluid, tissue extract or homogenate, and the like. However, the present invention is not limited to analysis using only these samples, for a specialist in this field it is possible to determine the conditions that allow the use of other samples.

Детектування іп 5йи можна проводити шляхом узяття у хворого біологічного зразка та додавання комбінації мічених СОЗ8ВР, наприклад, анти-СОЗ38 антитіл згідно з даним винаходом, до такого зразку. СОЗ8ВВР, анти-СОЗ38 антитіло (або фрагмент) згідно з даним винаходом можна додавати шляхом прикладання або накладення міченого СОЗ8ВР, наприклад, міченого анти-СО38 антитіла (або фрагмента) згідно з даним винаходом, на біологічний зразок. За допомогою такої процедури можна визначати не тільки наявність СОЗ8 або фрагментів СОЗ8, а також розподіл таких пептидів у досліджуваній тканині (наприклад, для аналізу поширення ракових клітин). Застосовуючи даний винахід, рядові фахівці в даній області легко зрозуміють, що будь-який з широкої розмаїтості гістологічних підходів (наприклад, процедури фарбування) можна модифікувати, щоб одержати таке детектування іп зйи.Detection of ip 5yi can be carried out by taking a biological sample from a patient and adding a combination of labeled COZ8BP, for example, anti-COZ38 antibodies according to the present invention, to such a sample. COZ8BVR, an anti-COZ38 antibody (or fragment) according to the present invention can be added by applying or overlaying a labeled COZ8VR, for example, a labeled anti-CO38 antibody (or fragment) according to the present invention, to a biological sample. With the help of such a procedure, it is possible to determine not only the presence of POP8 or fragments of POP8, but also the distribution of such peptides in the examined tissue (for example, to analyze the spread of cancer cells). In practicing the present invention, one of ordinary skill in the art will readily appreciate that any of a wide variety of histological approaches (eg, staining procedures) can be modified to obtain such detection of DNA.

Даний винахід далі надає спосіб сприяння продажу та/або застосуванню СОЗ8ВР згідно з даним винаходом, що включає поширення інформації (наприклад, за допомогою друкованих матеріалів, що роздаються, розсилаються і т.п. за допомогою реклами, телевізійних програм та оголошень, за допомогою радіопрограм та оголошень, розсилання в Інтернеті, по електронній пошті та за допомогою телемаркета, за допомогою поширення по квартирах і поміж людей, за допомогою фінансової підтримки та проведення конференцій, панелей, форумів і т.д., за допомогою наймання рознощиків і продавців та/або медичних/наукових зв'язків, за допомогою фінансування та проведення наукових досліджень і публікацій, що стосуються застосування і т.д.), яка стосується застосування сполуки для запобігання або лікування будь-якого стану або комбінації станів, як описано тут, поміж будь-яких людей і співтовариств можливого інтересу (наприклад, фармацевтичних ланцюгів, менеджерів формулярів, страхових компаній, НМО, лікарень і лікарських ланцюгів, інших організацій охорони здоров'я, менеджерів аптечної справи, потенційних хворих, хворих раком, раніше хворих раком, хворих у стані ремісії, терапевтівThe present invention further provides a method of promoting the sale and/or use of the SOZ8VR according to the present invention, which includes the dissemination of information (e.g., by means of printed materials, distributed, mailed, etc., by means of advertising, television programs and announcements, by means of radio programs and advertisements, distribution on the Internet, by e-mail and telemarketing, by means of distribution in apartments and between people, by means of financial support and holding of conferences, panels, forums, etc., by means of employment of peddlers and sellers and/or medical/scientific connections, by funding and conducting scientific research and publications related to the use, etc.) that relates to the use of the compound for the prevention or treatment of any condition or combination of conditions as described herein, between any which people and communities of possible interest (for example, pharmaceutical chains, formulary managers, insurance companies, NMOs, hospitals and medical chains, other healthcare organizations, pharmacy managers, potential patients, cancer patients, former cancer patients, patients in remission, therapists

Зо першого звернення, лікарів або фармацевтів та/або лідерів суспільної думки).From the first application, doctors or pharmacists and/or leaders of public opinion).

Даний винахід також надає набори, що включають фармацевтичні композиції із сполуками згідно з даним винаходом та інструкції для застосування. Набір може далі містити один чи більше додаткових агентів, наприклад, імуносупресивний реагент, хіміотерапевтичний реагент, протизапальний агент або радіоїзотопний агент, як описано вище, або один чи більше додаткових СОЗ8ВР згідно з даним винаходом (наприклад, СОЗ8ВР, що має комплементарну активність). Набір згідно з даним винаходом може також включати діагностичні агенти та/або інші терапевтичні агенти. В одному втіленні набір згідно з даним винаходом включає СОЗ8ВР згідно з даним винаходом та діагностичний агент для діагностики стану або наявності порушення, що включає експресуючі СОЗ8 клітини у суб'єкта. В одному втіленні набір включаєThe present invention also provides kits comprising pharmaceutical compositions of the compounds of the present invention and instructions for use. The kit may further contain one or more additional agents, for example, an immunosuppressive agent, a chemotherapeutic agent, an anti-inflammatory agent, or a radioisotope agent, as described above, or one or more additional COZ8BPs according to the present invention (eg, a COZ8BP having complementary activity). A kit according to the present invention may also include diagnostic agents and/or other therapeutic agents. In one embodiment, a kit according to the present invention includes a COZ8BP according to the present invention and a diagnostic agent for diagnosing a condition or disorder involving COZ8-expressing cells in a subject. In one embodiment, the kit includes

СОЗ38ВР згідно з даним винаходом у високо стабільній формі (наприклад, у ліофілізованій формі) в комбінації з фармацевтично прийнятним носієм(іями), який можна змішувати з високостабільною композицією для одержання композиції для ін'єкцій.SOZ38BP according to the present invention in a highly stable form (for example, in a lyophilized form) in combination with a pharmaceutically acceptable carrier(s), which can be mixed with the highly stable composition to obtain a composition for injections.

Всі посилання, включаючи публікації, патентні заявки та патенти, процитовані тут, є таким чином включеними в такому саме ступені, якби кожне посилання було індивідуально та специфічно відзначене, як включене за допомогою посилання і наведене тут повністю.All references, including publications, patent applications and patents, cited herein are hereby incorporated to the same extent as if each reference were individually and specifically noted as being incorporated by reference and incorporated herein in their entirety.

Всі заголовки та підзаголовки застосовуються тут тільки для зручності і ніяким чином не можуть розглядатися як такі, що обмежують винахід.All headings and subheadings are used herein for convenience only and are not to be construed as limiting the invention in any way.

Всі комбінації вищеописаних елементів у всіх можливих варіантах охоплені даним винаходом, якщо не зазначене противне або якщо немає чіткого протиріччя контексту.All combinations of the above-described elements in all possible variants are covered by the present invention, unless otherwise indicated or unless there is a clear contradiction of the context.

Застосування термінів "а" та "ап" і "Ше" та подібних посилань у контексті опису даного винаходу слід розглядати як такі, що поширюються як на однину, так і на множину, якщо не зазначене противне або якщо немає чіткого протиріччя контексту.The use of the terms "a" and "ap" and "She" and similar references in the context of the description of the present invention should be construed as applying to both the singular and the plural, unless the contrary is indicated or unless the context clearly contradicts.

Зазначення інтервалів і величин тут просто служить як стенографічний спосіб посилання на кожну окрему величину, що потрапляє до інтервалу, якщо не зазначене противне і кожна окрема величина включена в опис, якби вона була індивідуально згадана. Якщо не зазначене противне, всі точні величини, надані тут, є представницькими для відповідних приблизних величин (наприклад, всі приблизні величини, надані відносно окремого фактора або виміру, можуть уважатися такими, що надають відповідний приблизний вимір, модифікований за допомогою "приблизно", якщо потрібно).The designation of intervals and quantities here simply serves as a shorthand way of referring to each individual quantity falling within the interval, unless otherwise specified, and each individual quantity is included in the description if it were individually mentioned. Unless otherwise noted, all exact values provided herein are representative of the corresponding approximate values (eg, all approximate values provided for a single factor or dimension may be considered to provide the corresponding approximate measurement modified by "about" if necessary).

Всі способи, описані тут, можна проводити в будь-якому придатному порядку, якщо не зазначене противне або якщо немає чіткого протиріччя контексту.All of the methods described herein may be performed in any suitable order unless otherwise indicated or unless the context clearly contradicts.

Застосування будь-якого та всіх прикладів або приблизної мови (наприклад, "такий як", "наприклад"), надані тут, повинні просто краще висвітлювати даний винахід і не накладають обмеження на область домагань даного винаходу, якщо не зазначене противне. Ніяка мова в описі на повинна розглядатися як така, що вказує на важливість якого-небудь елемента для практики даного винаходу, поки це не виражено ясно.The use of any and all examples or approximate language (e.g., "such as," "for example") provided herein is merely to better illustrate the present invention and is not intended to limit the scope of the claims of the present invention unless otherwise indicated. No language in the specification should be construed as indicating the importance of any element to the practice of the invention unless expressly so expressed.

Цитування та включення документів патентів робиться тут тільки для зручності та не відображує ніякої думки про цінність, патентоспроможність та/"або можливість примусового втілення таких патентних документів.Citation and inclusion of patent documents herein is for convenience only and does not reflect any opinion as to the value, patentability and/or enforceability of such patent documents.

Опис тут будь-якого втілення даного винаходу із застосуванням таких термінів, як "що складає", "що має", "що включає" або "що містить" відносно елемента або елементів, повинен надавати підтримку для подібного втілення даного винаходу, яке "складається з", "складається в основному з" або "в основному включає" цей окремий елемент або елементи, якщо не зазначене противне або якщо немає ясного протиріччя контексту (наприклад, композицію, описану тут, що включає окремий елемент, слід розуміти як таку, що описує також композицію, яка складається із цього елемента, якщо не зазначене противне або якщо немає ясного протиріччя контексту).A description herein of any embodiment of the present invention using terms such as "consisting of," "having," "comprising," or "comprising" with respect to an element or elements shall provide support for a similar embodiment of the present invention that "comprises of," "consists principally of" or "consists principally of" that particular element or elements unless otherwise indicated or unless the context clearly contradicts (e.g., a composition described herein comprising a particular element shall be understood to mean that also describes a composition consisting of that element, unless otherwise indicated or unless the context clearly contradicts it).

Даний винахід включає всі модифікації та еквіваленти предмета розгляду, згадані у втіленнях, представлених тут, у максимальному ступені, дозволеному застосовним законом.The present invention includes all modifications and equivalents of the subject matter mentioned in the embodiments presented herein to the fullest extent permitted by applicable law.

Всі патенти, підвішені патенти та інші публікації, процитовані тут, включені за допомогою посилання повністю.All patents, pending patents and other publications cited herein are incorporated by reference in their entirety.

Даний винахід далі проїілюстрований наступними прикладами, які не слід розглядати як лімітуючі.The present invention is further illustrated by the following examples, which should not be construed as limiting.

ПрикладиExamples

Приклад 1Example 1

Одержання трансфекованих люциферазою (Бацаї-Іис) клітинProduction of cells transfected with luciferase (Batsai-IIs).

Культуру клітин Юацаї (що походять з лімфоми Беркітта) культивують у культуральному середовищі КРМІ 1640, доповненому 10 95 ЕС (Оріїтит С241, М/івепі Іпс., 5. Вгипо, ОС,The culture of Yuatsai cells (derived from Burkitt's lymphoma) is cultivated in culture medium KRMI 1640, supplemented with 10 95 EC (Oriititis C241, M/ivepi Ips., 5. Vhypo, OS,

Зо Сапада), 2 мМ І-глютаміну, 100 ІШ/мл пеніциліну, 100 мг/мл стрептоміцину, 1 мМ пірувату натрію (усі одержані від (ірсо ВКІ, Ійе Тесппоіодіе5, РаїбІіеу, ЗсоПЦапа). Середовище обновляють двічі на тиждень. Перед трансфекціею клітини розділяють і розсівають при 1- 1,5х105 клітин/мл для забезпечення життєздатності та оптимального росту.Zo Sapada), 2 mM I-glutamine, 100 IU/ml penicillin, 100 mg/ml streptomycin, 1 mM sodium pyruvate (all obtained from (irso VKI, Iye Tesppoiodie5, RaibIieu, ZsoPCapa). The medium is renewed twice a week. Before transfection cells are separated and seeded at 1-1.5x105 cells/ml to ensure viability and optimal growth.

Трансфекція люоциферазою 8,2х105 2О38: клітин Юацаї відбирають в 300 мкл ЕРМІ (доповненої 10 95 аЕС5, сібсо ВЕ.) і переносять в кювету для електропорації (Віогад, Нетеї! Нетрзіеай, Негі5, ОК). Потім додають мкг 9УМ2 люциферази з Т5 (Аідемгоп, Рагдо, МО, ОБА) і 10 мкг рРиг вектора (ВОTransfection with lyuciferase 8.2x105 2O38: Yuatsai cells are selected in 300 μl of ERMI (supplemented with 10 95 aES5, sibso VE.) and transferred to a cuvette for electroporation (Viogad, Netei! Netrzieai, Negi5, OK). Then add mcg of 9UM2 luciferase from T5 (Aidemgop, Ragdo, MO, OBA) and 10 μg of pRyg vector (VO

Віозсіепсе5, АІрпеп а/й Вій, Те Меїпепапаб5), що надає стійкість до пуроміцину. Після витримування клітин на льоді протягом 10 хв., клітини піддають електропорації (250 В, 950 мкф; 40 Сепе Риїзег ІІ, Віогаа Гарогагіез стр, Мипспеп, сСептапу). Клітини знову витримують на льоді та відбирають в 40 мл ЕРМІ (доповненого 10 95 ЕС5). Потім клітини розсівають на платі для культури тканин на 96 лунок (100 мкл/лунку). Через 48 годин додають пуроміцин (кінцева концентрація 1 мкг/мл Зідта-АїІагісй Спетіе ВМ, 2мі|пагеснї, Те Меїпепгіапав5). Стійкі до пуроміцину клони далі вирощують на платах для культури тканин на 24 лунки.Viozsiepse5, AIrpep a/y Vii, Te Meipepapab5), which confers resistance to puromycin. After keeping the cells on ice for 10 min, the cells are subjected to electroporation (250 V, 950 µf; 40 Sepe Riizeg II, Viogaa Garogagiez str, Mypspep, sSeptapu). Cells are kept on ice again and collected in 40 ml of ERMI (supplemented with 10 95 EC5). Cells are then plated on a 96-well tissue culture plate (100 μl/well). After 48 hours, add puromycin (final concentration of 1 μg/ml Zidta-Algissi Spetie VM, 2mi|pagesni, Te Meipepgiapav5). Puromycin-resistant clones are further grown in 24-well tissue culture plates.

Визначення люциферазної активностіDetermination of luciferase activity

Люциферазну активність клітин визначають за допомогою системи аналізу люциферази (2ЖЕ4030, Рготеда, Мадізоп, УМ, ОА). 1х105 клітин центрифугують (13500 об./хв., 1 хв.) у центрифузі фірми Еппендорф та осад промивають в 100 мкл РВ5. Після центрифугування (13500 об./хв., 1 хв.), осад лізують з 20 мкл Керопег ГГ узіє Виїег (Рготеда), заморожують і відтаюють. Після центрифугування (13500 об./хв., 1 хв.), 20 мкл супернатанта відкидають і додають 100 мкл реагенту для люциферазного аналізу (у спеціальних люмінометричних пробірках, Рготеда). Люмінесценцію вимірюють (10 с) у люмінометрі (189507, Вепгппйоїа,The luciferase activity of the cells is determined using the luciferase assay system (2ZHE4030, Rgoteda, Madizop, UM, OA). 1x105 cells are centrifuged (13,500 rpm, 1 min.) in an Eppendorf centrifuge and the sediment is washed in 100 μl of PB5. After centrifugation (13500 rpm, 1 min.), the precipitate is lysed with 20 μl of Keropeg GG uzie Viieg (Rgoteda), frozen and thawed. After centrifugation (13,500 rpm, 1 min.), 20 μl of the supernatant is discarded and 100 μl of the reagent for luciferase analysis (in special luminometric tubes, Rgoteda) is added. Luminescence is measured (10 s) in a luminometer (189507, Vegpppyoia,

Мімоогає, Веїдішт).Mimoogaye, Veidisht).

Приклад 2Example 2

Імунізація мишей та одержання гібридомImmunization of mice and hybridoma production

Протокол імунізації для -003Immunization protocol for -003

Мишей НсСо12 імунізують кожні два тижні за допомогою 20 мкг очищеного НА-СО38. Першу імунізацію проводять інтраперитонеально (і.р.) у присутності 100 мкл РВ5, змішаного з 100 мкл повного ад'юванта Фрейнда (СЕА). Після першої імунізації наступні підтримуючі введення (13х) бо очищеного НА-СОЗ38 проводять у присутності 100 мкл РВ5, змішаного з 100 мкл ІпсоптріеїеHsCo12 mice are immunized every two weeks with 20 μg of purified HA-CO38. The first immunization is carried out intraperitoneally (i.r.) in the presence of 100 μl of PB5 mixed with 100 μl of Freund's complete adjuvant (CEA). After the first immunization, the following maintenance administrations (13x) of purified HA-SOZ38 are carried out in the presence of 100 μl of PB5 mixed with 100 μl of Ipsoptrium

Егеипа5 Аа)имапі (ІРА), чергуючи 5.6. та ір. Після розвитку титру мишей підтримують за допомогою 20 мкг НА-СОЗ38 в РВ5, і.м.Egeypa5 Aa)imapi (IRA), alternating 5.6. and others After the development of the titer, the mice are supported with 20 μg of NA-SOZ38 in RV5, i.m.

Протокол імунізації для -005 та -024Immunization protocol for -005 and -024

Мишей НСо12 імунізують кожні два тижні за допомогою 20 мкг очищеного НА-СО3З8, чергуючи з МІН-373-СО0О38 трансфекованими клітинами. Першу імунізацію проводять за допомогою 5х106 клітин в 100 мкл РВ5, змішаного з 100 мкл СЕА, і.р., другу та наступні імунізації із застосуванням НА-СОЗ38 5.с, у присутності 100 мкл РВ5, змішаного з 100 мкл ІРА.HCo12 mice are immunized every two weeks with 20 μg of purified HA-CO3Z8, alternating with MIN-373-COO38 transfected cells. The first immunization is carried out with the help of 5x106 cells in 100 μl of PB5 mixed with 100 μl of CEA, i.r., the second and subsequent immunizations with the use of NA-SOZ38 5.s, in the presence of 100 μl of PB5 mixed with 100 μl of IRA.

Наступні імунізації трансфекованими клітинами проводять у присутності 200 мкл РВ5. Після розвитку титру мишей підтримують за допомогою 20 мкг НА-СО38 в РВУ, і.м.Subsequent immunizations with transfected cells are carried out in the presence of 200 μl of PB5. After the development of the titer, mice are supported with 20 μg of НА-СО38 in RVU, i.m.

Генерація гібридом, продукуючих моноклональні антитіла людини до СОЗ8.Generation of hybridomas producing human monoclonal antibodies to POP8.

Клітини селезінки миші ізолюють із НСо12 мишей і вводять разом з ПЕГ у клітинну лінію мієломи миші, грунтуючись на стандартних протоколах. Утворені гібридоми піддають скринінгу на продукцію антитіл людини за допомогою ЕГІЗА і на СОЗ8-специфічність за допомогою СОЗ8- трансфекованих М5/0О клітин за допомогою ЕГАС5 аналізу та на зв'язування рекомбінантного білка НА-СО38 за допомогою ЕГІЗА. Відбирають три клітинні лінії гібридоми, експресуючі моноклональні анти-СО38 антитіла людини, -003, -005 та -024, відповідно.Mouse spleen cells are isolated from HCo12 mice and injected together with PEG into a mouse myeloma cell line, based on standard protocols. The resulting hybridomas are screened for the production of human antibodies using EGISA and for SOZ8-specificity with the help of SOZ8-transfected M5/0O cells using EGAS5 analysis and for the binding of recombinant NA-CO38 protein with the help of EGISA. Three hybridoma cell lines expressing human monoclonal anti-CO38 antibodies, -003, -005 and -024, respectively, are selected.

Приклад ЗExample C

Трансфекція МІН клітин за допомогою СЮОЗ8Transfection of MIN cells using SHYOZ8

Вектор рсіригоСОЗ38) для продукції МІН-373-СО38 одержують від Ргої. М. Сіеппіе (Тепоми5Vector rsyrigoSOZ38) for MIN-373-СО38 products is obtained from Rgoya. M. Siepie (Tepomy5

Везеагсі І абогаюгу, Зоцшйпатріоп Сепега! Нозріїаі, Зошійпатріоп, ОК). МІН-3Т3 клітини (05М72,Vezeagsi I abogayugu, Zotshchypatriop Sepega! Nozriyai, Zoshiipatriop, OK). MIN-3T3 cells (05M72,

АСС 59; 150000 клітин/лунку; 0,5 мл; плоскодонна плата на 96 лунок, Сгеїіпег) культивують вACC 59; 150,000 cells/well; 0.5 ml; flat-bottom plate for 96 wells, Sgeiipeg) are cultivated in

ОМЕМ (доповненому глюкозою (4,5 г/л), 1095 ЕС5, І-глютамін, Ма-піруват; ВіоУуУпінакег) протягом 24 годин. Потім ДНК (0,8 мкг) і ліпофектамін (Іпмігодеп, Вгеда, Тпе МеїПегіапавз) розводять в ОМЕМ і змішують (20 хв., комн. темп). Далі суміш (100 мкл) додають в кожну лунку та інкубують (протягом ночі, 37 "С).OMEM (supplemented with glucose (4.5 g/l), 1095 EC5, I-glutamine, Ma-pyruvate; VioUuUpinakeg) for 24 hours. Then DNA (0.8 μg) and Lipofectamine (Ipmigodep, Vgeda, Tpe MeiPegiapavz) are diluted in OMEM and mixed (20 min., room temperature). Next, the mixture (100 μl) is added to each well and incubated (overnight, 37 "C).

Скринінг на експресію СОЗ8Screening for SOC8 expression

Клітини МІН-373-СО038 промивають (в 1 мл РВ5) і обробляють трипсином (200 мкл, трипсин-MIN-373-СО038 cells are washed (in 1 ml of РВ5) and treated with trypsin (200 μl, trypsin-

ЕДТА, ВіоумпіШакег). Потім додають 1 мл ОМЕМ їі суміш переносять піпеткою в пробірки дляEDTA, WioumpiShakeg). Then add 1 ml of OMEM and transfer the mixture with a pipette to test tubes

ЕАС5Б. Після центрифугування (1200 об./хв., 5 хв.) клітини промивають в РАС5З буфері (ЕВ; РВ5,EAS5B. After centrifugation (1200 rpm, 5 min.), cells are washed in РАС5З buffer (EB; РВ5,

Зо 0,05 95 БСА, 0,02 95 МаМз») і суспендують в 1 мл ЕВ. Після центрифугування (1200 об./хв., 5 хв.) супернатант видаляють і додають мишачі анти-людські СОЗ8-РЕ (розведення 1/50, запаціп,From 0.05 95 BSA, 0.02 95 MaMz") and suspend in 1 ml of EB. After centrifugation (1200 rpm, 5 min.), the supernatant is removed and mouse anti-human SOZ8-RE is added (dilution 1/50,

Атоеегдат, Те Меїпепіапаз). Після промивання клітин два рази в ЕВ, клітини ресуспендують вAtoeegdat, Te Meipepiapaz). After washing the cells twice in EV, the cells are resuspended in

ЕВ для проведення проточної цитометрії.EV for flow cytometry.

Розведення та селекціяBreeding and selection

Після обробки трипсином клітини переносять у флакони Т25 (ОСгеіпег) в ОМЕМ (доповненою глюкозою 4,5 г/л, 2 ММ І-глутаміном і пуроміцином (2 мкг/мл) Віоуупічцакег). Стійкі до пуроміцину клітини тестують на стабільність експресії СОЗ8 за допомогою проточної цитометрії через два тижні на середовищі з пуроміцином. Відібрані МІН-373-СО38 клітини субклонують за допомогою обмеженого розведення. Після розмноження клітин всі 15 МІН-373-СО038 піддають скринінгу на експресію СОЗ38. МІН-373-СО38 клітини з високою експресією СОЗ8 заморожують у рідкому азоті (-80 "С) до застосування.After treatment with trypsin, the cells are transferred to T25 vials (OSgeipeg) in OMEM (supplemented with glucose 4.5 g/l, 2 mM I-glutamine and puromycin (2 μg/ml) Viouupichtsakeg). Puromycin-resistant cells are tested for the stability of SOC8 expression by flow cytometry after two weeks in medium with puromycin. Selected MIN-373-CO38 cells are subcloned using limited dilution. After cell proliferation, all 15 MIN-373-СО038 are screened for SOC38 expression. MIN-373-CO38 cells with high expression of COZ8 are frozen in liquid nitrogen (-80 "С) before use.

Культура МІН-3Т3-СО38 клітинCulture of MIN-3T3-СО38 cells

Клітини культивують в ЮМЕМ (доповненому глюкозою (4,5 г/л), 10956 ЕС5, 2 ММ 1- глютаміном, Ма-піруватом, пеніциліном, стрептоміцином). Клітини пасивують двічі на тиждень із застосуванням трипсину/ЕДТА та розсівають у концентрації 1х105 клітин/флакон Т25. МІН-3Т3-Cells are cultivated in UMEM (supplemented with glucose (4.5 g/l), 10956 EC5, 2 mM 1-glutamine, Ma-pyruvate, penicillin, streptomycin). Cells are passivated twice a week using trypsin/EDTA and seeded at a concentration of 1x105 cells/T25 vial. MIN-3T3-

СОЗ38 клітини з високою експресією СОЗ8 заморожують у рідкому азоті (-80 "С) до застосування.SOZ38 cells with high expression of SOZ8 are frozen in liquid nitrogen (-80 "C) before use.

Очищення НА-СО38 антигенуPurification of HA-CO38 antigen

Сефарозу 48 (Атег5йпат Віозсіепсе, Оррзаїа, Зу'едеп) сполучають із анти-СОЗ38 антитілом (Зегоїес, Охіога, ОК). Колонку (колонка НК5/20 упакована на 12 см носія у висоту, об'єм стовпчика 2,4 мл; максимальна швидкість течії 0,5 мл/хв.) урівноважують, щонайменше, 5 об'ємами колонки (СМ) буфера РВ5. Зразки фільтрують і наносять на колонку. Колонку промивають РВ5, поки сигнал не повернеться на базову лінію (приблизно З СМ). Елюцію проводять 0,1 М гліцином при рН 2. Елюйовані фракції нейтралізують 1 95 (06./06.) 2М Трис-НСІ, рн 9.Sepharose 48 (Atteg5ypat Viozsiepse, Orrzaia, Zu'edep) is combined with anti-COZ38 antibody (Zegoyes, Ohio, OK). The column (NK5/20 column is packed with 12 cm of media in height, column volume 2.4 ml; maximum flow rate 0.5 ml/min.) is balanced with at least 5 column volumes (CM) of PB5 buffer. The samples are filtered and applied to the column. The column is washed with PB5 until the signal returns to the baseline (approximately 3 CM). Elution is carried out with 0.1 M glycine at pH 2. The eluted fractions are neutralized with 1 95 (06./06.) 2M Tris-HCl, pH 9.

Очищення анти-СОЗ8 антитілPurification of anti-POZ8 antibodies

Анти-СОЗ38 антитіла людини очищають із супернатантів культури тканини. По-перше, супернатанти фільтрують через 0,2 мкм фільтр із прямим потоком. Потім, супернатант наносять на 5 мл колонку з Білком А (гРгоївіп А ЕЕ, Атег5пат Віозсіепсе) і елююють 0,1 М лимонною кислотою-Маон, рн 3. Елюат негайно нейтралізують за допомогою 2М Трис-НСІ, рН 9 і бо діалізують протягом ночі проти 12,6 мМ фосфату натрію, 140 мм Масі, рН 7,4 (В. Вгацп, О55,Human anti-COP38 antibodies are purified from tissue culture supernatants. First, the supernatants are filtered through a 0.2 µm straight-through filter. Then, the supernatant is applied to a 5 ml column with Protein A (gRgoivip A EE, Ateg5pat Wiozsiepse) and eluted with 0.1 M citric acid-Maon, pH 3. The eluate is immediately neutralized with 2M Tris-HCI, pH 9 and dialyzed overnight against 12.6 mM sodium phosphate, 140 mM Mass, pH 7.4 (V. Vgatsp, O55,

Тпе Меїйпегіапавз). Після діалізу зразки стерилізують фільтруванням через 0,2 мкм фільтр із прямою течією.Tpe Meijpegiapavs). After dialysis, the samples are sterilized by filtration through a 0.2 μm direct flow filter.

Очищення об'ємів Ніз-СС0О38Cleaning of Niz-СС0О38 volumes

Білок находиться в супернатанті клітинної культури клітин, що експресують Ніз-СО38, з конструкцією ДНК, яка містить послідовність для позаклітинного домену СОЗ38. Додаткова послідовність із декількох залишків гістидину (роїу-Ніз--ад) включена в конструкцію та находиться на М-кінці білка. Такий таг дозволяє очищати за допомогою хроматографії на афінній колонці з іммобілізованим металом. У цьому процесі хелатор, зафіксований на хроматографічному носії, заряджений катіонами Со--. Зокрема, послідовність, що включає 6 амінокислотних залишків гістидину, міцно зв'язує Со". Тому СОЗ8 білки з гістидиновим тагом міцно зв'язуються з таким стовпчиком, у той час як інші присутні в культуральному супернатанті білки проходять крізь колонку або вимиваються. Міцнозв'язані білки СОЗ8 з гістидиновим тагом потім елююють буфером, що містить імідазол, що конкурує з гістидином за зв'язування із Сог».The protein is in the cell culture supernatant of cells expressing Niz-CO38 with a DNA construct that contains the sequence for the extracellular domain of COZ38. An additional sequence of several histidine residues (roiu-Niz--ad) is included in the design and is located at the M-end of the protein. Such a tag allows purification by chromatography on an affinity column with an immobilized metal. In this process, the chelator, fixed on the chromatographic carrier, is charged with Co-- cations. In particular, a sequence that includes 6 amino acid residues of histidine strongly binds Co. Therefore, COZ8 proteins with a histidine tag bind strongly to such a column, while other proteins present in the culture supernatant pass through the column or are washed out. bound SOZ8 proteins with histidine tag are then eluted with a buffer containing imidazole, which competes with histidine for binding to Sog.

Коли очищено досить Ні5--СО38, елюент видаляють із білка за допомогою заміни буфера на колонці для знесолювання.When enough Ni5--CO38 has been purified, the eluent is removed from the protein by buffer exchange on the desalting column.

Приклад 4Example 4

Зв'язування -003. -005 та -024 з СОЗв-трансфекованими СНО (СНО-СОЗ38) клітинами, зBinding -003. -005 and -024 with COZv-transfected CHO (CHO-CHOZ38) cells, with

Рацаї-Ійс клітинами та свіжими пухлинними клітинами множинної мієломи (ММ).Ratsai-Iis cells and fresh multiple myeloma (MM) tumor cells.

Після збирання та підрахунку Юапцаїі-с клітини, СНО клітини, трансфековані СОЗ38 і контрольні клітини ресуспендують в (РВ5 1х105 клітин/мл). Потім клітини поміщають на плати зAfter collection and counting of Yuaptsaii-c cells, CHO cells, transfected SOZ38 and control cells are resuspended in (PB5 1x105 cells/ml). The cells are then placed on plates with

М-подібним дном на 96 лунок (100 мкл/лунку) і двічі промивають в РВ5-БСА (РВ5, доповнений 0,1 95 БСА та 0,02 95 азиду натрію). Потім 50 мкл розчину антитіла в РВ5-БСА додають до клітин (4 "С, 30 хв.). Після трикратного промивання в РВ5З-БСА додають 50 мкл (1: 400 розведення) кролячого анти-людського ІДО-РІТС в РВ5З-БСА (4 "С у темряві 30 хв.). Клітини промивають три рази та специфічне зв'язування СОЗв-антитіл з СНО-СОЗ8 та Рапцаі-ІШс клітинами детектують за допомогою проточної цитометрії. НимМмар-КІН (моноклональне антитіло людини проти КІН (гемоціанін молюска морське блюдечко) одержаний від в Септар В.М.,M-shaped bottom for 96 wells (100 μl/well) and washed twice in РВ5-BSA (РВ5 supplemented with 0.1 95 BSA and 0.02 95 sodium azide). Then 50 μl of the antibody solution in РВ5-BSA is added to the cells (4 "С, 30 min). After washing three times in РВ5З-BSA, 50 μl (1: 400 dilution) of rabbit anti-human IDO-RITS in РВ5З-BSA ( 4 "C in the dark for 30 min.). Cells are washed three times and specific binding of SOZv-antibodies to CHO-SOZ8 and Raptsai-IShs cells is detected by flow cytometry. NimMmar-KIN (monoclonal human antibody against KIN (hemocyanin mollusk sea saucer) obtained from V. M. Septar,

Шігеспї, Тпе Меїпегіапа5х, за допомогою протоколів імунізації, описаних тут в іншого місці) застосовують як контроль. Фігури 1 та 2 показують, що -003, -005 та -024 зв'язуються з СНО-Shigespi, Tpe Meipegiapa5x, using immunization protocols described elsewhere herein) were used as controls. Figures 1 and 2 show that -003, -005 and -024 bind to CHO-

Зо СОЗ38 клітинами та з Юацаі-Іцс клітинами, хоча і з різними ЕСзхо (таблиця 1). Ніякого зв'язування з контрольними СНО клітинами не спостерігалося (дані не показані). Свіжі ММ пухлинні клітини одержують від Ог. І оКпог5ї (Опімегейу Медіса! Сепіег (Хгеспї, геспї, Те Меїпепапа». Клітини пухлини ізолюють із кісткового мозку хворих множинною мієломою за допомогою центрифугування в градієнті фіколу (Віо М/пінакег; середовище розділення лімфоцитів, номер за каталогом 17-829Е). Після збирання та підрахунку клітини ММ (100,000 клітин/лунку) ресуспендують з 25 мкл РІТС-мічених СОЗ8-специфічних антитіл та 25 мкл СО138. Після інкубації (4 "С, 30 хв.) клітини промивають в РВ5З-БСА та додають Ре-мічений козячий анти- мишачий імуноглобулін (1: 200 даскбоп ІттипоКезеагсії Еигоре (а. 5опат, ОК). Після інкубації (4"С, 30 хв.) і промивання клітин в РВ5-БСА вимірюють флуоресценцію за допомогою проточної цитометрії.With SOZ38 cells and with Yuatsai-Ics cells, although with different ECs (table 1). No binding to control CHO cells was observed (data not shown). Fresh MM tumor cells are obtained from Og. I oKpog5i (Opimegeiu Medisa! Sepieg (Hgespi, hespi, Te Meipepapa". Tumor cells are isolated from the bone marrow of patients with multiple myeloma by centrifugation in a ficoll gradient (Vio M/pinakeg; lymphocyte separation medium, catalog number 17-829E). After harvesting and counting MM cells (100,000 cells/well) are resuspended with 25 μl of RITS-labeled COZ8-specific antibodies and 25 μl of CO138. After incubation (4 °C, 30 min.), cells are washed in RV5Z-BSA and Re-labeled goat anti-mouse immunoglobulin (1: 200 daskbop of IttypoKezeagsii Eigore (a. 5opat, OK). After incubation (4"С, 30 min.) and washing of cells in РВ5-BSA, fluorescence is measured using flow cytometry.

Фігура З показує, що -003, -005 та -024 зв'язуються із ММ клітинами.Figure C shows that -003, -005 and -024 bind to MM cells.

Таблиця 1Table 1

Величини ЕСозо для зв'язування анти-СОЗ антитіл на СНО-СОЗ8Кклітинах,EC values for binding of anti-SOZ antibodies on CHO-SOZ8K cells,

Рацаї-Інс клітинах і свіжих ММ пухлинних клітинах антитіла (мкг/мл) (мкг/мл) 6005 | 777717171171023 | ..7р7р/р0097777 |... 004Ratsai-Ins cells and fresh MM tumor cells antibodies (μg/ml) (μg/ml) 6005 | 777717171171023 | ..7р7р/р0097777 |... 004

Приклад 5Example 5

Залежна від антитіла опосередкована клітиною цитотоксичністьAntibody-dependent cell-mediated cytotoxicity

Клітини Оацаї-Іис, свіжі пухлинні клітини множинної мієломи, свіжі пухлинні клітини лейкозу плазматичних клітин і клітини множинної мієломи УКбІ та АМО-1 збирають (5х105 клітин) вOatsai-Iis cells, fresh tumor cells of multiple myeloma, fresh tumor cells of plasma cell leukemia and cells of multiple myeloma UKbI and AMO-1 are collected (5x105 cells) in

ВРМІ" (культуральне середовище КРМІ 1640, доповнене 1095 великої сироватки теляти (НуСіопе, І одап, ОТ, ОБА)), до якої додають 100 мкКі "Ст (Спготіит-51; АтегзНат Віозсівєпсе5VRMI" (culture medium KRMI 1640, supplemented with 1095 large calf serum (NuSiope, I odap, OT, OBA)), to which 100 μCi of "St (Spgotiit-51; AtegzNat Viozsivepse5) are added

Еигоре Сть, Коозепаааї, Тне МеїПепапаФв) і суміш інкубують на водяній бані при 37 "С протягомEigore St, Koozepaaai, Tne MeiPepapaFv) and the mixture is incubated in a water bath at 37 "C for

1 години. Після промивання клітин (двічі в РВ5, 1500 об./хв., 5 хв.) клітини суспендують в1 hour. After washing the cells (twice in RV5, 1500 rpm, 5 min.), the cells are suspended in

ВРМІ- і підраховують за допомогою ексклюзії трипанового синього. Клітини доводять до концентрації 1 х109 клітин/мл.VRMI- and calculated using trypan blue exclusion. Cells are brought to a concentration of 1 x 109 cells/ml.

Одержання ефекторних клітинProduction of effector cells

Свіжі мононуклеарні клітини периферичної крові (здорові добровольці, ШМС гесні, (Хгесні,Fresh mononuclear cells of peripheral blood (healthy volunteers, ShMS Hesni, (Xhesni,

Тпе МеїШепапаз) ізолюють із 40 мл гепаринової крові за допомогою фіколу (Віо М/пінакег; середовище поділу лімфоцитів, кат. Мо 17-829Е) відповідно до інструкції виробника. Після суспендування клітин в КРМІ- клітини підраховують за допомогою ексклюзії трипанового синього та доводять до концентрації 1 х107 клітин/мл.Tpe MeiShepapaz) is isolated from 40 ml of heparinized blood using ficol (Vio M/pinakeg; lymphocyte separation medium, cat. Mo 17-829E) according to the manufacturer's instructions. After suspending cells in KRMI, cells are counted using trypan blue exclusion and brought to a concentration of 1 x 107 cells/ml.

Постановка АОСС 50 мкл »'"Стг-мічених клітин мішені поміщають за допомогою піпетки на плату на 96 лунок і додають 50 мкл антитіла, розведеного середовищем КРМІ-- (кінцеві концентрації 10, 1, 0,1, 0,01 мкг/мл). Клітини інкубують (кімн. темп., 15 хв.) і додають 50 мкл ефекторних клітин, що приводить до співвідношення ефектора до мішені 100: 1 (для визначення максимального лізису додають 100 мкл 5 95 Тритону Х-100 замість ефекторних клітин; для визначення спонтанного лізису додають 50 мкл клітин мішені та 100 мкл ЕРМІ-У). Клітини центрифугують (500 об./хв., 5 хв.) і інкубують (37 "С, 5 95 СО», 4 години). Після осадження клітин (1500 об./хв., 5 хв.) збирають 100 мкл супернатанта в пробірки тісгопіс і підраховують за допомогою гамма-лічильника.AOSS preparation 50 μl of Stg-labeled target cells are placed with a pipette on a 96-well plate and 50 μl of antibody diluted in KRMI medium is added (final concentrations 10, 1, 0.1, 0.01 μg/ml) . Cells are incubated (room temperature, 15 min.) and 50 μl of effector cells are added, resulting in an effector to target ratio of 100:1 (to determine maximal lysis, add 100 μl of 5 95 Triton X-100 instead of effector cells; to determine of spontaneous lysis, 50 μl of target cells and 100 μl of ERMI-U are added.) Cells are centrifuged (500 rpm, 5 min.) and incubated (37 "С, 5 95 СО", 4 hours). After cell sedimentation (1500 rpm, 5 min.), collect 100 μl of the supernatant in Tisgopis tubes and count with a gamma counter.

Відсоток специфічного лізису обчислюють у такий спосіб: (срт зразка - срт тільки клітин мішені)Хсрт максимального лізису - срт тільки клітин мішені), де срт означає імпульси за хвилину.The percentage of specific lysis is calculated as follows: (CRT of the sample - CRT of only target cells) Hsrt of maximum lysis - CRT of only target cells), where CRT means pulses per minute.

У клітинах Рацаї-Інс (фігура 4 і таблиця 2) -003, -005 та -024 індукують лізис за допомогоюIn Ratsai-Ins cells (Figure 4 and Table 2), -003, -005, and -024 induce lysis by

АРрСС, -005 і -005 проявляють себе трохи краще, ніж ритуксимаб (анти-С38 тАБ). Цікаво, що при застосуванні свіжих пухлинних клітин множинної мієломи (одержаних від Ог. Н. ГоКлогві,ARrSS, -005 and -005 perform slightly better than rituximab (anti-C38 tAB). It is interesting that when using fresh multiple myeloma tumor cells (obtained from Og. N. GoKlogvi,

ОМС, Те МеїШегіапав5) як клітин мішені, АОСС індукується антитілами -003, -005 та -024 (фігура 5 і таблиця 2).OMS, Te MeiShegiapav5) as target cells, AOSS is induced by antibodies -003, -005 and -024 (Figure 5 and Table 2).

Таблиця 2Table 2

Величини ЕСзо для СОЗ8-специфічних антитіл, одержані в АОСС нин п: п ПО: ХО ПОЛО ДОESzo values for COZ8-specific antibodies, obtained in AOSS nin p: p PO: HO POLO DO

Збагачення мононуклеарних клітин Егапдеп периферичної крові людини Кров людейEnrichment of Egapdep mononuclear cells of human peripheral blood Human blood

Зо добровольців (університет Ерланген, Егіапдеп, Септапу) розводять двічі середовищем ЕРМІ 1640 і нашаровують клітини крові на фікол (середовище поділу лімфоцитів 1077 г/мл, 710 м, кімн. темп., 20 хв.; Віоуупіцакег, Сатогех Віо зсіепсе Мегміег5, Мегміег5, ВеїІдішт, саї. 1 7-829БЕ, ої по. 0148 32). Мононуклеарні клітини периферичної крові (ММС5) збирають із інтерфази, промивають і суспендують у культуральному середовищі ЕРМІ 1640, доповненому 10 95 ЕС5, 2From volunteers (University of Erlangen, Egiapdep, Septapu) they are diluted twice with ERMI 1640 medium and blood cells are layered on Ficol (lymphocyte separation medium 1077 g/ml, 710 m, room temperature, 20 min.; Viouupitsakeg, Satogeh Vio zsiepse Megmieg5, Megmieg5 , VeiIdisht, sai. 1 7-829BE, oi po. 0148 32). Peripheral blood mononuclear cells (MMC5) are collected from interphase, washed and suspended in culture medium ERMI 1640 supplemented with 10 95 EC5, 2

ММ С-глютаміном, 5 од./мл пеніциліну, 50 мкг/мл стрептоміцину (усе від Віоуупіцакег), до якого додають 25 ММ НЕРЕ (ВіоуУмпічнакег).MM with C-glutamine, 5 units/ml of penicillin, 50 μg/ml of streptomycin (all from ViouUmpicnakeg), to which 25 MM of NERE (ViouUmpicnakeg) is added.

Постановка АОСС ІЇProduction of AOSS II

Клітини мішені (свіжі пухлинні клітини лейкозу плазматичних клітин, УКбІ та АМО-1 лінії В- клітин від Ог. Т. МаІегіи5, Опімегейу ої Епапдеп, Егіапдеп, Сепгтапу) мітять за допомогою 20 мкКі "Ст (Атегзпат Віозсіепсе5, Оррзаїа, Змуедеп) протягом 2 годин. Після промивання великою кількістю КРМІ-10 клітини доводять до 1 х105 клітин/мл. ММС (50 мкл), сенсибілізовані антитіла (50 мкл) і ЕРМІ-10 (50 мкл) поміщають на круглодонні плати для мікротитру (Огеіпег Віо-ОпеTarget cells (fresh tumor cells of plasma cell leukemia, UKbI and AMO-1 B-cell line from Og. T. MaIegia5, Opimegeyu oi Epapdep, Egiapdep, Sepgtapu) are labeled with 20 μCi "St (Ategzpat Viozsiepse5, Orrzaia, Zmuedep) during 2 hours After washing with copious amounts of CMRI-10, the cells are adjusted to 1 x 105 cells/mL MMC (50 µl), sensitized antibodies (50 µl) and ERMI-10 (50 µl) are placed on round-bottom microtitre plates (Ogeipeg Vio-Ope

Сітб, Егіскеппаийзеп, Сегтапу). Аналіз починають додаванням свіжих пухлинних клітин лейкозу плазматичних клітин, УКбІ. або АМО-1 клітин (50 мкл) з одержанням кінцевого об'єму 200 мкл.Sitb, Egiskeppaiizep, Segtapu). The analysis begins with the addition of fresh tumor cells of plasma cell leukemia, UKbI. or AMO-1 cells (50 μl) with a final volume of 200 μl.

Застосовують співвідношення ефектора до мішені (Е: М) 40: 1. Після інкубації (З години, 37 "С) реакцію зупиняють за допомогою центрифугування і вивільнення ?'Сг вимірюють із потрійним повтором в імпульсах за хвилину (ерт) у сцинтиляційному лічильнику. Відсоток клітинної токсичності розраховують за допомогою такої формули:A ratio of effector to target (E: M) of 40: 1 is applied. After incubation (3 hours, 37 "C), the reaction is stopped by centrifugation and the release of ?'Sg is measured with three repetitions in pulses per minute (ert) in a scintillation counter. Percentage cellular toxicity is calculated using the following formula:

Фо специфічного лізису - (експериментальний срт - базовий срт)//максимальний срт - базовий срт)х100 де максимальне вивільнення "Ст визначають шляхом додавання перхлорної кислоти (3 95 кінцева концентрація) до клітин мішені, а базове вивільнення вимірюють за відсутності сенсибілізованих антитіл та ефекторних клітин.Fo of specific lysis - (experimental srt - base srt)//maximum srt - base srt)x100 where the maximum release of "St is determined by adding perchloric acid (3 95 final concentration) to the target cells, and the base release is measured in the absence of sensitized antibodies and effectors cells

В обох клітинних ліній множинної мієломи (УКбіІ. та АМО-1) лізис індукується як -003, так і - 005 (фігури 6 та 7), навіть коли експресія СОЗ8 низька (АМО-1 лінія клітин). -003, -005 та -024 індукують АОСС первинних пухлинних клітин лейкозу плазматичних клітин (фігура 5Б).In both multiple myeloma cell lines (UKbiI. and AMO-1), lysis is induced by both -003 and -005 (Figures 6 and 7), even when COZ8 expression is low (AMO-1 cell line). -003, -005 and -024 induce AOSS of primary plasma cell leukemia tumor cells (Figure 5B).

Приклад 6Example 6

Залежна від комплементу цитотоксичністьComplement-dependent cytotoxicity

Після збору та підрахунку клітин Юацаі-Ішс життєздатність клітин повинна бути 290 95. Після промивання (РВ5) клітини суспендують при концентрації 2х105 клітин/мл в КРМІ-В (ВРМІ, доповнене 1 95 БСА). Потім поміщають у круглодонні плати на 96 лунок при концентрації 1х105 клітин/імл (50 мкл/лунку). Потім додають 50 мкл антитіл на лунку (кінцева концентрація в інтервалі 0-100 мкг/мл (триразове розведення в КРМІ-В)). Після інкубації (кімн. темп., 15 хв.) додають 11 мкл об'єднаної сироватки людини (від 18 здорових донорів) в кожну лунку (37 "С, 45 хв.). Вміст лунок суспендують один раз та 120 мкл переносять у пробірки для ГАСЗ (Сгеїпег).After collecting and counting the Yuatsai-Ishs cells, the viability of the cells should be 290 95. After washing (RV5), the cells are suspended at a concentration of 2x105 cells/ml in KRMI-B (VRMI, supplemented with 1 95 BSA). Then they are placed in round-bottom 96-well plates at a concentration of 1x105 cells/ml (50 μl/well). Then add 50 μl of antibodies per well (final concentration in the range of 0-100 μg/ml (three-fold dilution in KRMI-B)). After incubation (room temperature, 15 min.), add 11 μl of pooled human serum (from 18 healthy donors) to each well (37 "С, 45 min). The contents of the wells are suspended once and 120 μl are transferred to test tubes for GASZ (Sgeipeg).

Потім додають до цієї суспензії 10 мкл пропідій йодиду (РІ; Зідта-АЇагісй СНнетіє В.М.) (10 мкг/мл розчину). Лізис детектують за допомогою проточної цитометрії (ГАС зЗсаїїри((ТМ), ВесіопThen 10 μl of propidium iodide (RI; Zidta-Alagisii SNnetie V.M.) (10 μg/ml of solution) is added to this suspension. Lysis is detected using flow cytometry (GAS zZsaiyri((TM), Vesiop

Оіскіпзоп, зап біедо, СА, ОБА) шляхом вимірювання відсотка мертвих клітин (що відповідає Рі- позитивним клітинам).Oiscipzop, zap biedo, SA, OBA) by measuring the percentage of dead cells (corresponding to Ri-positive cells).

Фігура 8 і таблиця 2 показують, що лізис Юацаї-ис клітин індукується -005 (близько 60 95 максимального лізису) і що лізис за рахунок -003 спостерігається тільки при дуже високих концентраціях антитіла. -024 не індукує СОС на Вацаї-Ішс клітинах (дані не наведені). У СНОFigure 8 and Table 2 show that the lysis of Yuatsai cells is induced by -005 (about 60 95 maximal lysis) and that lysis due to -003 is observed only at very high concentrations of the antibody. -024 does not induce SOS in Vatsai-Ishs cells (data not shown). In SNO

С0З38 клітин лізис індукується як -003, -005, так і -024 (фігура 9 і таблиця 3). Лізис за допомогою -003 індукується при високих концентраціях. У пухлинних клітинах (усі одержані від Ог. ГоКпогвї апа Ог. Віоет, Опімегейу Медіса! Сепіег (Хгеснпі, Те Меїпепапавз), одержаних від різних хворих ізC0Z38 cell lysis is induced by both -003, -005, and -024 (Figure 9 and Table 3). Lysis with -003 is induced at high concentrations. In tumor cells (all obtained from Og. GoKpogwi apa Og. Vioet, Opimegeiu Medisa! Sepieg (Hgesnpi, Te Meipepapawz)) obtained from different patients from

ММ (А: З Фо стійких пухлинних клітин, Б: 9 9о стійких пухлинних клітин, В: 30-40 96 пухлинних клітин їі Г: 70 95 пухлинних клітин) СОС-опосередкований лізис спостерігається в присутності - 005, але не в присутності -003 (фігура 10). -024 також індукують лізис ММ пухлинних клітинMM (A: 300 resistant tumor cells, B: 990 resistant tumor cells, C: 30-40 96 tumor cells and D: 70 95 tumor cells) SOC-mediated lysis is observed in the presence of -005, but not in the presence of -003 (figure 10). -024 also induce lysis of MM tumor cells

Коо) (фігура 10Д).Koo) (figure 10D).

Таблиця ЗTable C

Величини ЕСзо для СОЗ8-специфічних антитіл, одержані в СОСESzo values for SOZ8-specific antibodies obtained in SOC

Приклад 7Example 7

Дослідження перехресного блокування із застосуванням ЕАС5 СНО-СОЗ38 клітини інкубують з надлишком неміченого СОЗ8-специфічного антитіла (4 "С, 15 хв.). Потім клітини інкубують зCross-blocking studies using EAS5 CHO-SOZ38 cells are incubated with an excess of unlabeled SOZ8-specific antibody (4 °C, 15 min). Then the cells are incubated with

ЕІТО-міченими СОЗ8-специфічними антитілами (концентрації приблизно ЕСвео, 4 С, 45 хв.).EITO-labeled SOZ8-specific antibodies (concentrations approximately ESveo, 4 C, 45 min.).

Після дворазового промивання клітин РВ5З-БСА вимірюють флуоресценцію за допомогою проточної цитометрії. Фігура 11 показує, що немічені -003 блокують зв'язування РІТС-мічених - 003, у той же час зв'язування РІТС-мічених -005 не блокується. Також, немічені -005 блокують зв'язування РІТС-мічених -005, у той же час зв'язування РІТС-мічених -003 не блокується. -003 та -005 зв'язуються з різними епітопами, оскільки вони не конкурують за зв'язування.After washing the cells twice with РВ5Z-BSA, fluorescence is measured using flow cytometry. Figure 11 shows that unlabeled -003 blocks binding of RITS-labeled -003, while binding of RITS-labeled -005 is not blocked. Also, unlabeled -005 blocks binding of RITS-labeled -005, while binding of RITS-labeled -003 is not blocked. -003 and -005 bind to different epitopes because they do not compete for binding.

Приклад 8Example 8

Дослідження перехресного блокування за допомогою ЕГІ5АStudy of cross-blocking using EGI5A

Розчинними людськими СОЗ38 покривають поверхню пластини ЕГІ5А. Такі СОЗ8 інкубують з надлишком немічених СОЗ8-специфічних антитіл протягом приблизно 15 хв. і потім додають біотинільовані СОЗ38-специфічні антитіла (концентрації приблизно ЕСоо, кімн. темп., 1 година).Soluble human SOZ38 cover the surface of the EGI5A plate. Such SOC8 are incubated with an excess of unlabeled SOC8-specific antibodies for approximately 15 min. and then add biotinylated POP38-specific antibodies (concentrations of about ECoo, room temp., 1 hour).

Після трикратного промивання за допомогою РВ5З/жееп додають стрептавідин, кон'югований з пероксидазою із хрону (НЕР) і суміш інкубують при кімн. темп, протягом 1 години. Комплекс можна детектувати шляхом додавання розчину АВТ5 і перетворення субстрату, опосередковане НЕР, вимірюють за допомогою реєструючого пристрою ЕГІ5ЗА при 405 нм.After washing three times with РВ5З/Жеп, streptavidin conjugated with horseradish peroxidase (HER) is added and the mixture is incubated at room temperature. pace, for 1 hour. The complex can be detected by adding a solution of AVT5 and the transformation of the substrate, mediated by HER, is measured using the EGI5ZA recording device at 405 nm.

Приклад 9Example 9

Дослідження перехресного блокування за допомогою сендвіч-ЕЇ ІБАStudy of cross-blocking using IBA sandwich EI

СОрЗ38-специфічними антитілами покривають поверхню пластини ЕЕГ І5ЗА. Зв'язані із пластиною антитіла інкубують з біотинільованими розчинними СО38 у присутності СОЗ8- специфічних антитіл у рідкій фазі. Після промивання за допомогою РВБбБ/Гмееп зв'язані біотинільовані СО38 детектують за допомогою стрептавідину, кон'югованого з НЕР, протягом 1 години при кімн. темп. Цей комплекс можна детектувати шляхом додавання розчину АВТ5 (після промивання РВ5-Туееп) і перетворення субстрату, опосередковане НЕР, вимірюють за допомогою реєструючого пристрою ЕГІЗА при 405 нм.SORZ38-specific antibodies cover the surface of the EEG I5ZA plate. Plate-bound antibodies are incubated with biotinylated soluble CO38 in the presence of COZ8-specific antibodies in the liquid phase. After washing with RBBbB/Hmeep, bound biotinylated CO38 is detected using streptavidin conjugated with HER for 1 hour at room temperature. tempo. This complex can be detected by adding a solution of ABT5 (after washing with РВ5-Tueep) and the transformation of the substrate, mediated by HER, is measured with the help of an EGISA recording device at 405 nm.

Приклад 10Example 10

Реактивність із рядом тканин людини та перехресна реактивність із тканинами мавпи супотоїди5, визначувана за допомогою імуногістохімії.Reactivity with a number of human tissues and cross-reactivity with the tissues of the Supotoid monkey5 determined by immunohistochemistry.

Секції заморожених тканин людини (одержані від ЮОг. Н. Міеззеп, Егее Опімегейу МеаісаїSections of frozen human tissues (obtained from YuOg. N. Miezep, Egee Opimegeiu Meaisai

Сепіег, Ат5іегдат, Те МешШегіапавз) або тканин мавпи (Іпуеге5К Кезеагсі, Сіаздом, ЗсойМапа) розрізають на 6 мкм та сушать на повітрі протягом ночі. Такі кріостат-секції фіксують в ацетоні (кімн. темп., 10 хв.) і сушать на повітрі (близько 5 хв.). Потім секції інкубують з їх буфером лимонна кислота/фосфат, що містить 0,1 95 НгОг (рН 5,8; Зідта) для блокування ендогенної пероксидази. Через 20 хв. при кімн. темп, секції промивають два рази в РВ5 та 0,05 95 Гуееп-20 (РВ5Т, кімн. темп., 5 хв., Кієде! де-Наеп, Септапу). Потім секції інкубують з авідином (кімн. темп., 15 хв., ВАКО, Сіозігир, Оептагк), промивають два рази в РВ5Т та інкубують з біотином (кімн. темп., 15 хв., ФАКО) для блокування ендогенного біотину. Після промивання секцій два рази в РВ5Т секції пре-інкубують з РВ5Т" (РВ5Т, доповнений 10 95 нормальною сироваткою людини (МН, СІ В, Атеїегдат, Меїйпегіапав) і 10 96 нормальною сироваткою кози (МО5; САКО) (кімн. темп., 20 хв.). Після видалення пре-інкубованої сироватки секції інкубують з РІТС- міченими первинними антитілами, розведеними 295 РВБОТ при зазначених концентраціях (кімн. темп., 60 хв.). Далі секції інкубують із кролячими анти-РІТС (1: 1000, ВАКО) в 2 95 РВ5ЗТ- (кімн. темп., 30 хв.). Після промивання в РВЗТ секції інкубують з козячими анти-кролячими біотинільованими антитілами (1: 400, БАКО) в 2 95 РВОТ" (кімн. темп., 30 хв.). Потім секції промивають та інкубують з ЗАВС-НЕР (1: 100; БАКО) в 2 95 РВ5Т"- (кімн. темп., 30 хв.). Після промивання секцій в РВЗ5Т два рази їх інкубують (кімн. темп., 10 хв.) з аміноетилкарбазольним (АЕС) проявним розчином (50 мм ацетатний буфер, рН 4,9, 0,01 95 НгО», Вієдеє!-де-Наєп). ПідSepieg, At5iegdat, Te MeshShegiapavz) or monkey tissues (Ipuege5K Kezeagsi, Siazdom, ZsoiMapa) are cut into 6 µm and air-dried overnight. Such cryostat sections are fixed in acetone (room temperature, 10 min.) and dried in air (about 5 min.). The sections are then incubated with their citric acid/phosphate buffer containing 0.1 95 NgOg (pH 5.8; Zidta) to block endogenous peroxidase. In 20 minutes. at room temp., the sections are washed twice in РВ5 and 0.05 95 Gueep-20 (РВ5Т, room temp., 5 min., Kiede! de Naep, Septapu). Then the sections are incubated with avidin (room temp., 15 min., VAKO, Siozigir, Oeptagk), washed twice in РВ5T and incubated with biotin (room temp., 15 min., FAKO) to block endogenous biotin. After washing the sections twice in RV5T, the sections are pre-incubated with RV5T" (RV5T, supplemented with 10 95 normal human serum (MN, SI V, Ateiegdat, Meijpegiapav) and 10 96 normal goat serum (MO5; SAKO) (room temp., 20 min.). After removing the pre-incubated serum, the sections are incubated with RITS-labeled primary antibodies diluted in 295 RBBOT at the indicated concentrations (room temp., 60 min.). Next, the sections are incubated with rabbit anti-RITS (1: 1000, VAKO) in 2 95 RV5ZT- (room temp., 30 min.). After washing in RVZT, the sections are incubated with goat anti-rabbit biotinylated antibodies (1: 400, BAKO) in 2 95 RVOT" (room temp., 30 min.). Then the sections are washed and incubated with ZAVS-NER (1: 100; BAKO) in 2 95 RV5T"- (room temp., 30 min.). After washing the sections in RVZ5T, they are incubated twice (room temp. ., 10 min.) with aminoethylcarbazole (AES) developing solution (50 mm acetate buffer, pH 4.9, 0.01 95 NgO", Viedeille-de-Naep). Under

Зо кінець секції промивають на міліпорі водою (5 хв.) і орарблюють гематоксиліном (БАКО). За допомогою гліцергелю (37 "С) секції фіксують під покривними стеклами та досліджують за допомогою світлової мікроскопії (Ахіомізіоп-2; 7вів5, Ппотмоой, МУ, ОБА).The end of the section is washed on a millipore with water (5 min.) and stained with hematoxylin (BAKO). With the help of glycergel (37 "С), the sections are fixed under cover glasses and examined with the help of light microscopy (Achiomisiop-2; 7viv5, Ppotmooi, MU, OBA).

Бронхіальний епітелій офарблюється за допомогою -003 та -005 (фігури 12Б та 13Б), а також поперечносмугасті м'язи (міоцити, фігури 128 та 138), макрофаги, лімфоцити та плазматичні В-клітини (фігури 12А та 13А). -024 виявляє подібне фарбування поперечносмугастих м'язів і бронхіального епітелію, але фарбування менш інтенсивно. Ніякого фарбування ендотеліальних клітин не спостерігається ні з -003 (фігура 14Г), -005 (14Д), ні з -024 (дані не наведені), у той час як виразне фарбування спостерігається з антитілами позитивного контролю проти маркерів ендотеліальних клітин СОЗ1 (фігура 14А) ії ММ/Е (14Б). Анти-КІ Н застосовують як антитіло негативного контролю (фігура 148). -003 (фігура 12Г) ї -024 (дані не наведені), але не -005 (фігура 13М) виявляють перехресну реактивність із лімфоїдною тканиною мавпи.Bronchial epithelium is stained with -003 and -005 (Figures 12B and 13B), as well as striated muscle (myocytes, Figures 128 and 138), macrophages, lymphocytes and plasma B cells (Figures 12A and 13A). -024 reveals similar staining of striated muscles and bronchial epithelium, but staining is less intense. No endothelial cell staining is observed with either -003 (Figure 14D), -005 (14D), or -024 (data not shown), while significant staining is observed with positive control antibodies against the endothelial cell marker POP1 (Figure 14A ) and MM/E (14B). Anti-KI H is used as a negative control antibody (Figure 148). -003 (Figure 12G) and -024 (data not shown), but not -005 (Figure 13M), show cross-reactivity with monkey lymphoid tissue.

Приклад 11Example 11

Перехресна реактивність із мононуклеарними клітинами периферичної крові мавп циномолгус або резус (РВМС5), вимірювана за допомогою проточної цитометрії 5 мл периферичної крові мавпи циномолгус (Іпмеге5К Кезеагсі) лізують шляхом додавання 4,5 мл шок-буфера (1,7 мМ МНЬ:СІ, 1 мМ ЕДТА), 40 мл НО та 450 мкл 10 95 КНСО»з). Після гемолізу клітини центрифугують (12000 об./хв., 10 хв.) і тричі промивають в РВ5. Після підрахунку клітин за допомогою ексклюзії трипанового синього клітини суспендують в РВ5-БСА (1х105 клітин/мл). 17,5 мл периферичної крові мавпи резус (ВРЕС, Кі)5м/|К, Тпе МеїПепгіапавз) розводять 1: 1 вCross-reactivity with cynomolgus or rhesus monkey peripheral blood mononuclear cells (PBMC5) measured by flow cytometry 5 ml of peripheral blood of a cynomolgus monkey (Ipmege5K Kezeagsi) is lysed by adding 4.5 ml of shock buffer (1.7 mM MNH:CI, 1 mM EDTA), 40 ml HO and 450 μl 10 95 KNSO»z). After hemolysis, the cells are centrifuged (12,000 rpm, 10 min.) and washed three times in RV5. After counting cells using trypan blue exclusion, cells are suspended in РВ5-BSA (1x105 cells/ml). 17.5 ml of peripheral blood of a rhesus monkey (VRES, Ki)5m/|K, Tpe MeiPepgiapavz) diluted 1: 1 in

ЕРМІ 1640 і нашаровують на фікол (1,077 г/мл; Віоуупінакег, саї. 17-829БЕ, ої по. 0148 32). Після центрифугування (710хо, кімн. темп., 20 хв.) інтерфазу збирають і двічі промивають в ЕРМІ.ERMI 1640 and layered on Ficol (1.077 g/ml; Viouupinakeg, sai. 17-829BE, oi po. 0148 32). After centrifugation (710x, room temperature, 20 min.), the interphase is collected and washed twice in ERMI.

Після останнього промивання клітини суспендують в ЕРМІ при концентрації 1 х105 клітин/50 мкл.After the last washing, the cells are suspended in ERMI at a concentration of 1 x 105 cells/50 μl.

Далі клітини переносять на плату на 96 лунок (100000 РВМСз5/лунку), промивають ЕАС5 буфером (РВ5, 0,05 95 БСА, 0,02 95 МаМвз) та інкубують з первинними антитілами (4 "С, 30 хв.).Next, the cells are transferred to a 96-well plate (100,000 PBMCs5/well), washed with EAS5 buffer (PB5, 0.05 95 BSA, 0.02 95 MaMvz) and incubated with primary antibodies (4 "С, 30 min).

Після промивання в РВ5-БСА додають 50 мкл РІТС-мічених гр-апіі-ніяЯ (0АКО, аповігир,After washing, 50 μl of RITS-labeled gr-apii-niaYa (0АКО, apovigir,

Оептаїгк) (4 "С, 30 хв.). Під кінець клітини збирають в РАС5 пробірках у загальному об'ємі 150 мкл. Зразки вимірюють та аналізують за допомогою ЕАСзсаїїриг((ТМ) (Весіоп бісКіпзоп, Зап 60 Оіедо, СА, ОБА).Oeptaigk) (4 "C, 30 min). Towards the end, cells are collected in RAS5 test tubes in a total volume of 150 μl. Samples are measured and analyzed with the help of ЕАЗзсайриг((TM) (Vesiop bisKipzop, Zap 60 Oiedo, SA, OBA) .

Обмірювана за допомогою проточної цитометрії перехресна реактивність -003, але не -005, показана з лімфоцитами циномолгус (фігура 15А) і моноцитами (фігура 15Б). Також у випадку мавпи резус спостерігається перехресна реактивність -003, але не -005, на мононуклеарних клітинах (фігура 158).Flow cytometric cross-reactivity of -003, but not -005, is shown with cynomolgus lymphocytes (Figure 15A) and monocytes (Figure 15B). Also, in the case of the rhesus monkey, cross-reactivity of -003, but not -005, is observed on mononuclear cells (Figure 158).

Приклад 12Example 12

Експерименти з інтерналізаціїExperiments on internalization

СНО-СО38 клітини офарблюють при концентрації насичення РІТС-мічених СОЗ38- специфічних антитіл (на льоді, 30 хв.). Після промивання клітин (в КРМ11640, доповненому 96 РС5) одну порцію клітин нагрівають до 37 "С для проведення інтерналізації, а іншу порцію 10 залишають на льоді. Через певні інтервали часу (0-120 хв.) аліквоти клітин відбирають і переносять в охолоджений на льоді РВ5-БСА, щоб зупинити інтерналізацію. Після промивання зразків два рази в РВЗ-БСА додають етидій бромід (розведений в РВ5-БСА, кінцева концентрація 2 мг/мл) для гасіння мембранно-зв'язаного РІТС. Флуоресценцію вимірюють за допомогою проточної цитометрії.CHO-CO38 cells are stained at a saturation concentration of RITS-labeled COZ38-specific antibodies (on ice, 30 min.). After washing the cells (in KRM11640, supplemented with 96 RS5), one portion of cells is heated to 37 "C for internalization, and the other portion is left on ice. After certain time intervals (0-120 min.), aliquots of cells are selected and transferred to a cooled RB5-BSA on ice to stop internalization. After washing the samples twice in RBZ-BSA, ethidium bromide (diluted in RB5-BSA, final concentration 2 mg/ml) is added to quench membrane-bound RITS. Fluorescence is measured by flow cytometry .

Фігури 16А та 16Б показують, що -003 та -005 інтерналізовані СНО-СОЗ38 клітинами протягом 5 хв. при 37 "С.Figures 16A and 16B show that -003 and -005 are internalized by CHO-SOZ38 cells within 5 min. at 37 "C.

Приклад 13Example 13

Експерименти іп мімо з БХСІЮ-люциферазоюIP mimo experiments with BHSIU-luciferase

У цій моделі пухлинні клітини трансфекують люциферазою світляків. При дачі люциферину (МоїІесшаг Ргобез, І еіїідеп, Тпе МеШепапаз) мишам мічені клітини можна детектувати іп мімо шляхом одержання біолюмінесцентних зображень із застосуванням високочутливої ССО камери, див. У/ейегмаїа еї а!., Атегісап уоитаї ої Рашоїоду 160(3), 1143-1153 (2002).In this model, tumor cells are transfected with firefly luciferase. When giving luciferin (MoiIesshag Rgobez, I eiiiidep, Tpe MeShepapaz) to mice, the labeled cells can be detected immediately by obtaining bioluminescence images using a highly sensitive SCO camera, see U/eiegmaia ei a!., Ategisap uoitai oi Rashoiodu 160(3), 1143-1153 (2002).

Клітини ФБацаї трансфекують 9УМІ2 люциферазою з Сепе ТПегару 5у«іетзв (Зап Оіеодо, СА) і культивують в КРМІ з 10 95 ЕС51, пеніцилін/стрептоміцин, піруват натрію та 1 мкг/мл пуроміцину (бБідта). Клітини аналізують на експресію люциферази (виражену в КІГ Ш/1х105 клітин) у люмінометрі та на експресію СОЗ8 за допомогою ЕАС5. 2,5х106 трансфекованих люциферазою клітин Юацді на мишу впорскують ім. ЗСІЮ мишам. Мишей обробляють -003, -005, антитілом контрольного ізотипу (НиМабр-КІ-Н) або ритуксимабом (анти-СО20 антитілом). Антитіла вводять внутрішньоочеревинно. Застосовують чотири постановки обробки антитілом (див. Табл. 4). ПриFBasai cells were transfected with 9UMI2 luciferase from Sepe TPegaru 5u«ietzv (Zap Oieodo, CA) and cultured in KRMI with 10 95 EC51, penicillin/streptomycin, sodium pyruvate, and 1 μg/ml puromycin (bBidta). Cells are analyzed for the expression of luciferase (expressed in KIG Sh/1x105 cells) in a luminometer and for the expression of SOZ8 using EAS5. 2.5x106 Yuatsdi cells transfected with luciferase per mouse are injected im. To all the mice. Mice are treated with -003, -005, control isotype antibody (NiMabr-KI-H) or rituximab (anti-CO20 antibody). Antibodies are administered intraperitoneally. Four stages of antibody treatment are used (see Table 4). At

Зо превентивній постановці антитіло (100 мкг/мишу) і клітини дають одночасно. При терапевтичній постановці І антитіла (300 мкг/мишу) вводять через 7 днів після введення клітин. При терапевтичній постановці ІІ антитіла (10 мкг/мишу) вводять через 14 днів після введення клітин.Antibody (100 μg/mouse) and cells are given at the same time as a preventive measure. In the therapeutic setting, antibodies (300 μg/mouse) are administered 7 days after the introduction of cells. In the therapeutic setting, II antibodies (10 μg/mouse) are administered 14 days after the introduction of cells.

При терапевтичній постановці ЇЇ антитіла (100 мкг/мишу) вводять через 7 днів після введення клітин. Для одержання зображень мишей піддають анестезії ір. за допомогою, наприклад, ін'єкції суміші кетамін/ксилазин/атропін. Синтетичний ЮО-люциферин (натрієва сіль, МоІесшагIn the therapeutic setting, HER antibodies (100 μg/mouse) are administered 7 days after the introduction of cells. To obtain images, mice are anesthetized ir. using, for example, an injection of a mixture of ketamine/xylazine/atropine. Synthetic UO-luciferin (sodium salt, MoIesshag

Ргобез) дають і.р., наприклад, у дозі 25 мг/мл. Мишей потім поміщають в освітлений закритий ящик і через З хв. починають знімати зображення за допомогою охолоджуваного рідким азотомRgobez) is given i.r., for example, in a dose of 25 mg/ml. Mice are then placed in a lighted closed box and after 3 min. begin to capture images using cooled liquid nitrogen

ССО детектора Мег5АІтау 13008 (Корег Зсіепіййс). Фотони, що випускаються люциферином, підраховують при часі експозиції 5 хв. При освітленні роблять чорно-білі зображення для порівняння. Для збирання даних та аналізу зображень застосовують програмний пакет МеїаМце зоїймаге (Опімегза! Ітадіпуд Согр). Статистичну значущість різниці між групами встановлюють за допомогою однобічного аналізу відхилення за допомогою тесту Ньюмана-Койлс (Меултап-Кеців роз Тез), застосовуючи сгарпРаай РКІЗМ мегзіоп 3.02 (сгарпрад Боїмаге Іпс).SSO detector Meg5AItau 13008 (Coreg Zsiepiys). Photons emitted by luciferin are counted with an exposure time of 5 min. When illuminated, black and white images are taken for comparison. For data collection and image analysis, the MeiaMce zooimage software package (Opimegza! Itadipud Sogr) is used. The statistical significance of the difference between groups is determined by means of one-sided analysis of deviation using the Newman-Coyles test (Meultap-Ketsiv roz Tez) using sgarpRaai RKIZM megsiop 3.02 (sgarprad Boimage Ips).

Таблиця 4Table 4

Постановки обробки антитілом для експериментів з люциферазою іп мімо клітин) (мкг/миша) (Превентивнапостановкаї | 7777/0777 |Ї711111117100с1СProcedures for treatment with antibody for experiments with luciferase ip mimo cells) (μg/mouse) (Preventive procedure | 7777/0777 | Y711111117100c1C

Фігури 17А та 17Б показують, що -003 та -005 інгібують ріст пухлинних клітин при превентивній постановці та терапевтичній постановці і, аналогічно з інгібуванням, спостережуваним для анти-СОЗ38 антитіла. Обидва антитіла виявляють себе значно краще, ніж антитіло контрольного ізотипу. Також, при терапевтичній постановці І СОЗ8 антитіла сповільнюють ріст пухлинних клітин Юапцаі-Ішс (фігура 178). При терапевтичній постановці ПІ-003 та -024 показують ясне інгібування росту пухлинних клітин Бацаї-Іис (фігура 17).Figures 17A and 17B show that -003 and -005 inhibit the growth of tumor cells in a preventive setting and a therapeutic setting and similarly to the inhibition observed for the anti-COZ38 antibody. Both antibodies perform significantly better than the control isotype antibody. Also, in the therapeutic setting of I SOZ8, antibodies slow down the growth of Yuaptsai-Ishs tumor cells (figure 178). In the therapeutic setting, PI-003 and -024 show a clear inhibition of the growth of Batsai-Iis tumor cells (Figure 17).

Приклад 14Example 14

АпоптозApoptosis

Аналіз апоптозу проводять відповідно до інструкцій виробника (Аппехіп-М Ароріозів Кії, ВОApoptosis analysis is performed according to the manufacturer's instructions (Appehip-M Arorioziv Kyiv, VO

Віозсіепсе5, АІрпеп ай. Ві)п, МейїШйегпапавзх). Стисло, СО38 тАр5 додають до 2х1095 клітин (трансфекованих люциферазою клітин Юацді в 0,5 мл КРМІ-: на платі на 24 лунки) в концентрації 5 мкг/мл -003 або -005, або анти-СО38 антитіл самих по собі або в присутності перехресно-блокуючих гбр-апіїі-пІЧО (50 мкг/мл).Viozsiepse5, AIrpep ay. Vi)p, MeyiShyegpapavzh). Briefly, CO38 tAr5 is added to 2x1095 cells (luciferase-transfected Yuacdi cells in 0.5 ml of KRMI-: on a 24-well plate) at a concentration of 5 μg/ml -003 or -005, or anti-CO38 antibodies alone or in the presence cross-blocking hbr-apiiii-pICHO (50 μg/ml).

Після інкубації (37 "С, 5 95 СО», 20 годин) клітини обережно збирають і промивають буфером зв'язування (1200 об./хв., 4 "С, 5 хв., ВО Віозсіепсе5). Осад суспендують в 100 мкл буфера зв'язування. Потім до суспензії додають 5 мкл Аппехіп-М-РІТС (ВО Віозсіепсев) і 10 мкл РІ (ВОAfter incubation (37 "С, 5 95 СО", 20 hours), the cells are carefully collected and washed with binding buffer (1200 rpm, 4 "С, 5 min., VO Viozsiepse5). The precipitate is suspended in 100 μl of binding buffer. Then 5 μl of Appehip-M-RITS (VO Viozsiepsev) and 10 μl RI (VO

Віозсіепсез) та інкубують протягом 15 хв. при кімн. темп. Додають 400 мкл буфера зв'язування та зразки вимірюють (РІ зчитування в РІ/2) Для аналізу апоптичних клітин всі Аппехіп-У- позитивні клітини підраховують методом проточної цитометрії за допомогою приладуViozsiepsez) and incubate for 15 min. at room tempo. Add 400 μl of binding buffer and measure the samples (PI reading in PI/2) To analyze apoptotic cells, all AppeHip-U-positive cells are counted by flow cytometry using the device

ЕАсСзсаїїриг Пом/ суїоптегїег із програмним пакетом СеїОиеві рго (ВО Віозсіепсе5). Для аналізу збирають, щонайменше, 10000 подій. Така популяція включає як Рі-позитивні, так і РІ-негативні клітини.EAsSzsaiirig Pom/suioptegieg with the program package SeiOievi rgo (VO Viozsiepse5). At least 10,000 events are collected for analysis. Such a population includes both RI-positive and RI-negative cells.

Фігура 18 показує, що -003 та -005 не індукують апоптоз. Однак, після зшивання апоптоз клітин мішені спостерігається. -003 після зшивання індукують апоптоз, близький до апоптозу, індукованого анти-С20 антитілом (ритуксимаб). -005 менш здатний до індукції апоптозу після зшивання. Подібні результати одержані з КАМО5 клітинами як мішенню (дані не наведені).Figure 18 shows that -003 and -005 do not induce apoptosis. However, after crosslinking, apoptosis of the target cells is observed. -003 after cross-linking induce apoptosis similar to apoptosis induced by anti-C20 antibody (rituximab). -005 is less able to induce apoptosis after cross-linking. Similar results were obtained with KAMO5 cells as a target (data not shown).

Приклад 15Example 15

Дія -005 на тканинний трансплантат В-клітин в КА-5СІОЮО мишачої моделіEffect of -005 on the tissue graft of B cells in the KA-5СЙОЮО mouse model

Імплантація синовіальної тканиниImplantation of synovial tissue

Мишей 5СІЮ, штам С.В.-17/сгСтІ-5С10-ро, самців/самок, 4-12 тижнів, одержаних від Спагієб55SIU mice, strain S.V.-17/sgStI-5S10-ro, male/female, 4-12 weeks old, obtained from Spagieb5

Кімег І арогафогіез Медепапа (Маабзігісні, те МейшШепапавз) тримають в ІМС клітках в стандартних умовах температури та освітлення та годують лабораторним кормом і напувають водою по потребі. Перед імплантацією мишей (три миші в кожній дослідній групі, день 0) анестезують заKimeg and arogafogies Medepapa (Maabzigisni, te MeishShepapavs) are kept in IMS cages under standard conditions of temperature and light and are fed laboratory food and watered as needed. Before implantation, mice (three mice in each experimental group, day 0) are anesthetized for

Зо допомогою внутрішньоочеревинної ін'єкції кетаміну (МІМАТЕК, ЕигомМе) і ксилазину (Котрип,With the help of intraperitoneal injection of ketamine (MIMATEK, EigomMe) and xylazine (Kotrip,

Вауег) у співвідношенні 1: 1. Роблять невеликі надрізи шкіри за допомогою хірургічних ножиців.Vaueg) in a ratio of 1: 1. Small incisions are made in the skin using surgical scissors.

Збуджену синовіальну тканину від хворого ревматоїдним артритом, що перетерпів заміну суглоба, імплантують підшкірно у вигляді кластера із шести невеликих фрагментів (усього 2-3 мм) на кожен бік миші. Рани закривають за допомогою ціаноакрилатного клею Рептасої. На 1- ий день експерименту синовіальну тканину, що залишилася, аналізують, щоб перевірити на В- клітини в збуджених синовіальних трансплантатах. -005 (12 мкг/кг) або контрольне антитіло (анти КІН, 30 мг/кг) вводять за допомогою ін'єкції ім. в об'ємі 200 мкл на 8-ий день експерименту. Під кінець експерименту (14-ий день) мишей умертвляють за допомогою інгаляції вуглекислого газу та витягають синовіальні трансплантати. Один із трансплантатів швидко заморожують у сполуці ОСТ (ТіззцеТекК, Засига Ріпеєек Еигоре» для подальшого імуногістохімічного аналізу, а інший заморожують шляхом занурення в рідкий азот для подальшого аналізу РНК.Excited synovial tissue from a patient with rheumatoid arthritis who underwent joint replacement is implanted subcutaneously in the form of a cluster of six small fragments (only 2-3 mm) on each side of the mouse. Wounds are closed with Reptasoi cyanoacrylate glue. On day 1 of the experiment, the remaining synovial tissue is analyzed to check for B cells in the stimulated synovial grafts. -005 (12 μg/kg) or a control antibody (anti-KIN, 30 mg/kg) is administered by injection. in a volume of 200 μl on the 8th day of the experiment. At the end of the experiment (14th day), the mice are killed by inhalation of carbon dioxide and the synovial grafts are removed. One of the transplants is quickly frozen in OST compound (TizzceTekK, Zasyga Ripeek Eigore) for further immunohistochemical analysis, and the other is frozen by immersion in liquid nitrogen for further RNA analysis.

ІмуногістохіміяImmunohistochemistry

Готовлять 5 мкм кріосекції на ЗирегЕго5і (Мепе! сть, Вгайпоспугеід) слайдах за допомогоюPrepare 5 μm cryosections on ZyregEgo5i (Mepe!st, Vgaypospugeid) slides using

ІГЕІСА СМ1900 кріостата та зберігають при -80 "С. Розморожені секції фіксують в ацетоні протягом 10 хв., сушать при кімн. темп, і промивають 3х5 хв. в РВ5. Всі етапи проводять при кімнатній температурі. Ендогенну пероксидазну активність блокують шляхом інкубації з РВ5, доповненим 0,3 96 перекисом водню та 0,1 95 азидом натрію, протягом 20 хв. Слайди потім промивають 3х5 хв. в РВ5 та інкубують з 10 965 нормальною сироваткою людини (МНЗ)/10 95 нормальною сироваткою кроля (МКЬБ5) в РВБ/1 95 БСА протягом 30 хв. Далі, первинні антитіла (мишачі тАб), розведені в РВ5, доповненому 10 95 МНБ/10 95 МЕЬ5 інкубують протягом 60 хв.IGEISA CM1900 cryostat and stored at -80 "C. Thawed sections are fixed in acetone for 10 min., dried at room temperature, and washed 3 x 5 min. in PB5. All stages are carried out at room temperature. Endogenous peroxidase activity is blocked by incubation with PB5 , supplemented with 0.3 96 hydrogen peroxide and 0.1 95 sodium azide, for 20 min. Slides are then washed 3 x 5 min in PB5 and incubated with 10 965 normal human serum (NHS)/10 95 normal rabbit serum (MKB5) in RBB /1 95 BSA for 30 min. Next, primary antibodies (mouse tAb) diluted in РВ5 supplemented with 10 95 MNB/10 95 MEЬ5 are incubated for 60 min.

Після 3х5 хв. промивань в РВ5 додають НЕР кон'югати (козячі анти-мишачі ІД-НАР; СВАКОAfter 3x5 min. HER conjugates (goat anti-mouse ID-NAR; SVAKO

РО447), розведені 1: 50 в РВ5 (доповненому 1 95 БСА / 10 95 МН5 / 10 96 МКБ5) протягом 30 хв.РО447), diluted 1:50 in RV5 (supplemented with 1 95 BSA / 10 95 МН5 / 10 96 MKB5) for 30 minutes.

Сигнал пероксидази підсилюють за допомогою Т5А"М біотинової системи (РеїКіп ЕІтег І йеThe peroxidase signal is amplified using the T5A"M biotin system (ReiKip EIteg I ye

Зсіепсе5, МЕЇ 700). Слайди промивають 3х2 хв. в РВЗ та інкубують з біотиніл тирамідом, розведеним 1: 1600 буфером для ампліфікації протягом 30 хв. Після 3х5 хв. промивань в РВ5 додають стрептавідин-НЕР, розведений 1: 400 в РВ5 (доповненим 1 95 БСА) на 30 хв. Слайди промивають 3х5 хв. в РВ5 та інкубують з розчином ВАВ (БАКО Суіотаїйоп КЗ3465) протягом 5 хв. Кольорову реакцію зупиняють за допомогою дистильованої води. Під кінець, слайди офарблюють гематоксиліном (МЕКСК), промивають під струменем води та покривають гліцерином Кайзера та покривним склом.Zsiepse5, MEI 700). Slides are washed 3 x 2 min. in RVZ and incubated with biotinyl tyramide diluted 1:1600 with amplification buffer for 30 min. After 3x5 min. of washings, streptavidin-HER diluted 1: 400 in RB5 (supplemented with 1 95 BSA) is added for 30 min. Slides are washed for 3x5 min. in РВ5 and incubated with BAV solution (BAKO Suiotaiyop KZ3465) for 5 min. The color reaction is stopped with distilled water. Finally, the slides are counterstained with hematoxylin (MECSC), rinsed under running water, and coverslipped with Kaiser's glycerin and a glass coverslip.

Оценка інтенсивності фарбуванняEvaluation of staining intensity

Оцінку пофарбованих трансплантатів синовіальної тканини проводять сліпим способом за допомогою двох тренованих людей. Спочатку вибирають найсильніше пофарбовану секцію із серії секцій і цій секції порівняння надають максимальний бал 8. Інтенсивність фарбування інших секцій оцінюють по шкалі від 0 до 8 відносно секції порівняння.Evaluation of stained synovial tissue grafts is performed in a blinded manner with the help of two trained people. First, the most strongly stained section from the series of sections is selected and this comparison section is given a maximum score of 8. The staining intensity of the other sections is evaluated on a scale from 0 to 8 relative to the comparison section.

Статистичний аналізStatistical analysis

Оцінку (бали) інтенсивності фарбування аналізують за допомогою Кгиз5КаІ-Маїй5 однобічного тесту АМОМА з наступним тестом множинного порівняння Данна (Юипп'є тийіріе сотрагізоп їе5)), застосовуючи Сгарі Раа Ргізт мегвзіоп 4.01 (Сгарі Рай зоїмаге, Іпс., зап Оієдо, СА, ОА).The score (scores) of staining intensity are analyzed using the Kgiz5KaI-Maiy5 one-tailed AMOMA test followed by Dunn's multiple comparison test (Yuppie tiiirie sotragizop ie5)) using Sgari Raa Rgizt megvsiop 4.01 (Sghari Ray zoimage, Ips., zap Oyedo, SA, AA).

Фігура 19 ії фігура 21 показують, що число анти-СОЗ8-позитивних плазматичних клітин зменшено після обробки -005. Фарбування плазматичних клітин анти-СО138 підтверджує, що - 005 приводить до зменшення числа плазматичних клітин (фігури 20 та 22).Figure 19 and Figure 21 show that the number of anti-COZ8-positive plasma cells is reduced after treatment with -005. Staining of plasma cells with anti-CO138 confirms that - 005 leads to a decrease in the number of plasma cells (figures 20 and 22).

Приклад 16Example 16

Секвенування кодуючих послідовностей людських антитіл проти СОЗ8Sequencing of coding sequences of human antibodies against POP8

Одержання РНКObtaining RNA

Загальну РНК одержують із 5х105 клітин клітинної лінії гібридоми, експресуючої моноклональні антитіла -003, -005 та -024, відповідно, за допомогою набору ЕМеабву Кії (Оіадеп,Total RNA was obtained from 5x105 cells of a hybridoma cell line expressing monoclonal antibodies -003, -005, and -024, respectively, using the EMeabvu Kii kit (Oiadep,

Умезібиго, І еизаеп, Мешегіапавз) відповідно до інструкцій виробника.Umezibigo, I eizaep, Meshegiapavz) according to the manufacturer's instructions.

Одержання кКДНК -003, -005 та -024 5-ВДСЕ-комплементарну ДНК (кДНК) із РНК одержують із 100 нг загальної РНК, застосовуючи набір ЗМАКТ КАСЕ сОМА Аптрійісайоп Кії (Сіопіесп) відповідно до протоколу виробника.Preparation of cDNAs -003, -005 and -024 5-VDSE-complementary DNA (cDNA) from RNA was prepared from 100 ng of total RNA using the ZMACT KASE COMA Aptreysayop Kii kit (Syopiesp) according to the manufacturer's protocol.

Олігонуклеотидні праймери синтезують та оцінюють кількісно за допомогою ІзодепOligonucleotide primers are synthesized and quantified using Izodep

Віозсіепсе (Маагезеп, Те Меїпегіапаз). Праймери розчиняють у воді в концентрації 100 пмоль/мкл і зберігають при -20 "С. Всі ПЛР праймери та праймери для секвенування наведені в таблиці (таблиця 5). Для ПЛР застосовують ДНК полімеразу РішТигро(К) Ноївіаг (5ігагадепе,Viozsiepse (Maagezep, Te Meipegiapaz). The primers are dissolved in water at a concentration of 100 pmol/μl and stored at -20 "С. All PCR primers and primers for sequencing are listed in the table (table 5). For PCR, RishTygro(K) Neuviag DNA polymerase (5igagadepe,

Атвіегдат, Те Меїпегіапа5; ргодисі 600322) відповідно до інструкцій виробника. КожнаAtwiegdat, Te Meipegiapa5; Rhodysi 600322) in accordance with the manufacturer's instructions. Each one

Зо реакційна суміш містить 200 мкМ змішаних дНТФ (Коспе Оіадповіїс5, АІтеге, Тпе МеїПпегіапав; ргодисі 1814362), 12 пмоль зворотного праймера (КАСЕСТАТ для Мн3003-005, ВАСЕМНАраї для Мн3003-003 та КАСЕМІ ВзіумІ для Мі.3003-003 та 005), 7,2 пмоль ОРМ-Міх (ОРМ-Міх: 2 мкмThe reaction mixture contains 200 µM of mixed dNTPs (Cospe Oiadpoviis5, AItege, Tpe MeiPpegiapav; rgodisi 1814362), 12 pmol of reverse primer (CASESTAT for Mn3003-005, VASEMNArai for Mn3003-003 and KASEMI VziumI for Mi.3003-003 and 005), 7.2 pmol ORM-Mix (ORM-Mix: 2 μm

ЗпПОоПОРМНЗ та 0,4 мкм ГопоОРМНЗ), 0,6 мкл 5КАСЕ кДНК матриці і 1,5 одиниці ДНК полімерази РішТигро(К) Ноіївіагі у буфері для ПЛР реакції (що постачається з полімеразою) у загальному об'ємі 30 мкл. ПЛР реакції проводять в апараті ТОгадіеєпі Тпегтосусіег 96 (У/лайтапZpPOoPORMNZ and 0.4 μm GopoORMNZ), 0.6 μl of 5CASE cDNA template and 1.5 units of RichTiger(K) Noiviagi DNA polymerase in PCR reaction buffer (supplied with the polymerase) in a total volume of 30 μl. PCR reactions are carried out in the Togadieepi Tpegtosusieg 96 apparatus (U/laytap

Віотеїа, Сюоейціпдеп, Септапу; ргодисі 050-801), застосовуючи програму з 35 циклів: денатурація при 95 "С протягом 2 хв.; 35 циклів з 95 "С протягом 30 с, 55 "С протягом 30 с та 727С протягом 1,5 хв.; кінцеве нарощування при 72 "С протягом 10 хв. Якщо потрібно, ПЛР суміші зберігають при 4 "С до наступного аналізу або обробки.Vioteia, Suoeicipdep, Septapu; Rhodysi 050-801), using a program of 35 cycles: denaturation at 95 "С for 2 min.; 35 cycles of 95 "С for 30 s, 55 "С for 30 s and 727С for 1.5 min.; final extension at 72 "C for 10 min. If necessary, the PCR mixture is stored at 4 °C until the next analysis or processing.

Таблиця 5Table 5

Праймери назва послідовність попу МАиЗ 00 ТСАЛАОСТТСТААТАССАСТСАСТАТАООооСPrimers name sequence pop MAyZ 00 TSALAOSTTSTAATAASSASTSASTATAOOOOS

КАСЕМ ВМ | ВОААВАТОАДАСАСАОАТОСТОСАОССАССОТАСОKASEM VM | VOAAVATOADASASAAOATOSTOSAOSSASSOTASO

КАСЕУНАра | ЗбАОвОоОоТОССАВООООСААСАССВАТОСОСОССТТKASEUNara | ЗбАОвОоОоТОССАВОООООСААССВАТОСОССОССТ

ВАСЕСТАЇ | бОБАСТАСАСТОСТОАОСАСТОVASESTAI | bOBASTASASTOSTOAOSASTO

Таблиця 5Table 5

ПраймериPrimers

ГоплаШеМНа ТОАААОСТТСТААТАССАСТСАСТАТАОВОСАДОСАСТООТАТ ІHoplaSheMNa TOAAAOSTTTSTAATASASSASTSASTATAOVOSADOSASTOOTAT AND

СААСОССАСАСТSAASOSSASAST

НСзедб ООТСАСОбСООССтТОАСТТССАСоNSzedb OOTSASObSOOSSStTOASTTSSASo

ГУНЗОО3-003гог. ІП ОАТААОСТТОССОССАССАТОСАСТОСАССТОВАвОТТОСТо /МНЗО03-5ог 0 | ВАТААССТТОССОССАССАТОВАСТТТОСОСТОАОСТООСТGUNZOO3-003 year IP ОАТААОСТТОССОССАССАТОСАСТОСАСССТОВОТТОСТО/МНЗО03-5ог 0 | VATAASSTTOSSOSSASSATOVASTTTTOSOSTOAOSTOOST

У.3003-5ехог. | ОАТААОСТТОСОСОССАССАТОВААСОСССАОСТоАОСТТСТоU.3003-5echog. | ОАТААОСТТОСОСОССАССАТОВААСОСССАОСТoАОСТТСТо

МІ.-3003-0031юг | БАТААОСТТОССОССАССАТОАСОСТоСтТоОоСстТоАОСсТоСТаMI.-3003-0031 south | BATAAOSTTOSOSSSASSATOASOSToStToOoSstToAOSsToSTa

УНЗО0З24ехіог / САТААОСТТОССОССАССАТОВОСТСААССОССАТОСТООСО м. 3003-24. САТААОСТТОССООССАССАТОСААОССоСАОСТСАОСТТСТО ехоUNZO0Z24ehiog / САТААОСТТОССОССАССАТОВОСТСААССОССАТОСТООСО 3003-24. SATAAOSTTOSSOOSSASSATOSSAAOSSoSAOSTSAOSTTTSTO echo

Клонування -003-2Е5 Мн та Мі та -005 М. та -024 Мн та Мі в РОЕМТ-вектор системи ЇЇCloning of -003-2E5 Mn and Mi and -005 M. and -024 Mn and Mi into the ROEMT-vector of the HER system

Продукти реакції розділяють за допомогою електрофорезу на 1 95 ТАЕ агарозному гелі та офарблюють за допомогою етидій броміду. Смуги правильного розміру вирізують із гелю та виділяють ДНК із агарози за допомогою набору для екстракції Оіаєхі! де! ехігасійоп Кії (Оіадеп, саї. по. 20021).The reaction products are separated by electrophoresis on a 1 95 TAE agarose gel and stained with ethidium bromide. Bands of the correct size are cut from the gel and DNA is extracted from the agarose using the Oiaehi Extraction Kit! where! ehigasiyop of Kia (Oiadep, sai. po. 20021).

До ізольованих з гелю ПЛР фрагментів додають кінцеві А шляхом інкубації протягом 10 хв. при 72 "С із 200 мкМ дАТФ та 2,5 од. Атрійад (РегКіп ЕІПлтег) і очищають за допомогою колонок для мініелюції (Сіадеп) ПЛР фрагменти з кінцевими А клонують у вектор рРОЕМТеазу (Рготеда), застосовуючи набір РОЕМТ еазу месіог зуєтет ЇЇ КИ ії протокол (19270, раде 3/4). 2 мкл суміші після лігування трансформують у компетентні клітини Е. соїї Опебйної ОНеГаІрна|Т1 В (Іпмігодеп) і розсівають на чашках із середовищем І В/ампіцилін/Р ТО/Хааї.Terminal A is added to the fragments isolated from the PCR gel by incubation for 10 min. at 72 "C with 200 μM dATP and 2.5 units of Atriad (RegKip EIPlteg) and purified using mini-elution columns (Siadep) PCR fragments with terminal A are cloned into the pROEMTase vector (Rgoteda) using the ROEMTase mesiog kit ii protocol (19270, row 3/4). 2 μl of the mixture after ligation are transformed into competent cells of E. soy Opebynaya ONeGaIrna|T1 B (Ipmigodep) and spread on dishes with medium I B/ampicillin/P TO/Haai.

СеквенуванняSequencing

М-області -003 та -024 та -005 Мі область секвенують за допомогою АСОУМА (Вегїіїйп,M-regions -003 and -024 and -005 Mi region are sequenced using ASOUMA (Vegiiiip,

Сегптапу) після захоплення, відповідно, 20 (Мн-003), 16 (Мі-003), 15 (Мі-005) ії 6 (Мн та Мі-024) білих колоній, виділення плазмід і секвенування зі зворотним праймером М13. Мн область секвенують прямо із ПЛР продуктом, застосовуючи праймер НСзед»5. Послідовності секвенують із застосуванням системи Месіог МТІ адмапсеа зийе (Іпмігодеп).Segptapu) after capture, respectively, of 20 (Mn-003), 16 (Mi-003), 15 (Mi-005) and 6 (Mn and Mi-024) white colonies, isolation of plasmids and sequencing with reverse primer M13. The Mn region is sequenced directly with the PCR product, using the primer NSzed"5. Sequences are sequenced using the Mesiog MTI admapsea ziye (Ipmigodep) system.

Одержання експресуючих векторів для антитіл -003, -005, -024 та Могрпозуз антитіла 3079Obtaining expressing vectors for antibodies -003, -005, -024 and Mogrposuz antibody 3079

Область, кодуючу Мн-003, ампліфікують за допомогою ПЛР із клону плазміди рсет, що містить Мн область -003, застосовуючи праймери Мн3003-003їог та КАСЕМНАраї, що вводять потрібні ділянки рестрикції (НіпанІ та Араї) для клонування в рСоп10.4 (І оп7а Віоіодіе5, БІОШОИ,The coding region of Mn-003 is amplified by PCR from a rset plasmid clone containing the Mn-003 region, using primers Mn3003-003yog and KASEMNAray, introducing the required restriction sites (NipanI and Aray) for cloning into pSop10.4 (I op7a Viioiodie5, BIOSHOI,

ОК) ї ідеальну послідовність Когак (зССсОсСсСАСС). Вектор рСоп110.4 містить константний область важкого ланцюга людського (301 Мн ПЛР фрагмент вставляють в рамці зчитування в рСоп1710.4, застосовуючи Ніпапйп ота АраЇ. Конструкцію перевіряють шляхом аналізу послідовності.OK) and the perfect sequence Kogak (сССсОсСсСАСС). The pSop110.4 vector contains the human heavy chain constant region (301 Mn PCR fragment is inserted in-frame into pSop1710.4 using Nipap ota Array. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу Мн-005, ампліфікують за допомогою ПЛР із клону плазміди рсет, що містить Мн область -005, застосовуючи праймери МнЗ3З003-5їог та КАСЕМНАраї, які вводять потрібні ділянки рестрикції (НіпаПй та АраїЇ) для клонування в рСоп1ї10.4 та ідеальнуThe Mn-005 coding region is amplified by PCR from a rset plasmid clone containing the Mn-005 region, using primers Mn3Z003-500 and KASEMNArAi, which introduce the required restriction sites (NipaPy and ArAiY) for cloning into pSop1i10.4 and an ideal

Зо послідовність Козака. Мн ПЛР фрагмент вставляють в рамці зчитування у вектор рСоп110.4, застосовуючи Ніпап! та Араї. Конструкцію перевіряють за допомогою аналізу послідовності.From the sequence of the Cossack. Mn PCR fragment is inserted in the reading frame into the pSop110.4 vector using Nipap! and Arai. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу Мн-024, ампліфікують за допомогою ПЛР із клону плазміди рбет, що містить Мн область -024, застосовуючи праймери Мн300324ехіог та КАСЕМНАраї, які вводять потрібні ділянки рестрикції (Ніпапй та Араї) для клонування в рСоп170.4 та ідеальну послідовність Козака. Мн ПЛР фрагмент вставляють в рамці зчитування у вектор рСоп110.4, застосовуючи Ніпап! та Араї. Конструкцію перевіряють за допомогою аналізу послідовності.The Mn-024 coding region is amplified by PCR from a rbet plasmid clone containing the Mn-024 region using primers Mn300324ehiog and KASEMNArai, which introduce the required restriction sites (Nipapy and Arai) for cloning into pSop170.4 and the ideal Kozak sequence. Mn PCR fragment is inserted in the reading frame into the pSop110.4 vector using Nipap! and Arai. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу Мн Могрпо5зуб5 антитіла 3079, синтезують за допомогою СепеАгі (Кедепориго, Сегптапу), грунтуючись на даних, опублікованих у патенті МО 2005/103083 А2.The region encoding Mn Mogrpo5zub5 antibody 3079 is synthesized using SepeAgi (Kedeporygo, Segptapu), based on the data published in MO patent 2005/103083 A2.

Кодуючий область оптимізують по кодонах для експресії в НЕК клітинах для посилення рівнів експресії та вводять потрібні ділянки рестрикції (Ніпа!! та Араї) для клонування в рСоп100.4 та ідеальну послідовність Козака. Плазміду, що містить синтетичну Мн область, обробляють Араї та Ніпа ї Мн фрагмент вставляють в рамці зчитування у вектор рСоп110.4. область, кодуючу Мі-005, ампліфікують за допомогою ПЛР на клоні плазміди рбет, що містить Мі область -005, застосовуючи праймери МІ 3003-5ехіог та КАСЕМІ В5ІіУМІ, які вводять потрібні ділянки рестрикції (Ніпап! та РП2ЗІЇ) для клонування в рСопКарраб.4 (І опа Віоіодіє5) та ідеальну послідовність Козака. Вектор рСопКарраб.4 містить константний область каппа легкого ланцюга. Мі ПЛР фрагмент вводять в рамці зчитування у вектор рСопКарраб.4 за допомогою НіпаїІ та РЯ23ЗІЇ. Конструкцію перевіряють за допомогою аналізу послідовності.The coding region is codon-optimized for expression in HEC cells to enhance expression levels and the required restriction sites (Nip!! and Arai) are introduced for cloning into pSop100.4 and the ideal Kozak sequence. A plasmid containing a synthetic Mn region is processed by Arai and Nipa, and the Mn fragment is inserted in the reading frame into the pSop110.4 vector. The region encoding Mi-005 is amplified by PCR on a clone of the rbet plasmid containing the Mi region -005, using the primers MI 3003-5ehiog and KASEMI B5IIUMI, which introduce the necessary restriction sites (Nipap! and RP2ZII) for cloning into pSopCarrab.4 (I opa Vioiodije5) and the perfect sequence of Kozak. The pSopKarrab.4 vector contains the kappa constant region of the light chain. My PCR fragment is inserted in the reading frame into the pSopKarrab.4 vector with the help of NipaI and RYA23ZII. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу Мі-003, ампліфікують за допомогою ПЛР на клоні плазміди рсет, що містить Мі область -003, застосовуючи праймери МІ 3003-0037тог та КАСЕМІ В5іуМІ, які вводять потрібні ділянки рестрикції (Ніпап та РЯ2ЗІЇ) для клонування в рСопКарраб.4 та ідеальну послідовність Козака. М. ПЛР фрагмент вводять в рамці зчитування у вектор рСопКарраб.4 за допомогою НіпаїІ та РЯ23ЗІЇ. Конструкцію перевіряють за допомогою аналізу послідовності.The Mi-003 coding region is amplified by PCR on a rset plasmid clone containing the Mi-003 region, using primers MI 3003-0037tog and KASEMI B5iuMI, which introduce the required restriction sites (Nipap and RY2ZII) for cloning into pSopCarrab.4 and the perfect sequence of the Cossack. M. The PCR fragment is introduced in the reading frame into the pSopKarrab.4 vector with the help of NipaI and RYA23ZII. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу МІ-024, ампліфікують за допомогою ПЛР на клоні плазміди рбет, що містить Мі область -024, застосовуючи праймери МІ 3003-24-5ехіог та КАСЕМІ В5ІМІ, які вводять потрібні ділянки рестрикції (Ніпап та РЯ2ЗІЇ) для клонування в рСопКарраб.4 та ідеальну послідовність Козака. М. ПЛР фрагмент вводять в рамці зчитування у вектор рСопКарраб.4 за допомогою НіпаїІ та РЯ23ЗІЇ. Конструкцію перевіряють за допомогою аналізу послідовності.The MI-024 coding region is amplified by PCR on a backbone plasmid clone containing the Mi-024 region, using primers MI 3003-24-5ehiog and KASEMI B5IMI, which introduce the necessary restriction sites (Nipap and RY2ZII) for cloning into pSopCarrab. 4 and Kozak's perfect sequence. M. The PCR fragment is introduced in the reading frame into the pSopKarrab.4 vector with the help of NipaI and RYA23ZII. The construct is verified by sequence analysis.

Область, кодуючу МІ Могрпобзу5х антитіла 3079, синтезують за допомогою сСепеАгі, грунтуючись на даних, опублікованих в МО 2005/103083. Кодуючий область оптимізують по кодонах для експресії в НЕК клітинах для посилення рівнів експресії та вводять потрібні ділянки рестрикції (НіпапІ та РЯ2ЗІЇ) для клонування в рСопКарраб.4 та ідеальну послідовність Козака.The region encoding MI Mogrpobzu5x antibody 3079 is synthesized with the help of cSepaAgi, based on the data published in MO 2005/103083. The coding region is codon-optimized for expression in HEC cells to enhance expression levels and the required restriction sites (NipapI and RY2ZII) are introduced for cloning into pSopKarrab.4 and the ideal Kozak sequence.

Плазміду, що містить синтетичну Мі область, обробляють РІЇ2ЗІЇ та Ніпац та Мн фрагмент вставляють в рамці зчитування у вектор рСопКарраб.4.The plasmid containing the synthetic Mi region is processed by RIZII and Nipac and the Mn fragment is inserted in the reading frame into the vector pSopKarrab.4.

Антитіла тимчасово експресують у клітинах НЕК-293Е, як описано в Прикладі 17, шляхомAntibodies are temporarily expressed in HEK-293E cells, as described in Example 17, by

Зо котрансфекції їх векторів важкого та легкого ланцюгів.From cotransfection of their vectors of heavy and light chains.

Одержання стійких клітинних ліній в СНО-К154М клітинахProduction of stable cell lines in CHO-K154M cells

Для одержання стійких клітинних ліній вектори важкого та легкого ланцюгів -003 та -005 комбінують в одному векторі із двома генами за допомогою стандартних технік клонування.To obtain stable cell lines, heavy and light chain vectors -003 and -005 are combined in a single vector with two genes using standard cloning techniques.

Вектори з подвійними генами -003 та -005 лінеаризують і трансфекують у клітини СНО-КІ5М (Гопла Віоіодіе5), в основному, як описано виробником. Стійкі клітинні лінії відбирають за допомогою селекції з 25 мкм І-метіонін-сульфоміксину (МОХ), як описано в І опа ВіоіІодіев5.Vectors with double genes -003 and -005 are linearized and transfected into CHO-KI5M cells (Hopla Bioiodie5) essentially as described by the manufacturer. Resistant cell lines are selected using selection with 25 μm I-methionine-sulfomyxin (MOX), as described in I opa VioliIodiev5.

Клони з найбільшою продуктивністю відбирають та розмножують у середовищі СО-СНО (Іпмігодеп) і антитіла очищають із клітинного супернатанта, як описано в прикладі 3.Clones with the highest productivity are selected and propagated in CO-CHO medium (Ipmigodep) and antibodies are purified from the cell supernatant as described in Example 3.

Приклад 17Example 17

Картування епітопа за допомогою сайт-спрямованого мутагенезуEpitope mapping by site-directed mutagenesis

Олігонуклеотидні праймери синтезують і кількість їх оцінюють за допомогою ІзодепOligonucleotide primers are synthesized and their quantity is estimated using Izodep

Віозсіепсе (Маагезеп, Те Меїпегіапаз). Праймери розчиняють у воді в концентрації 100 пмоль/мкл і зберігають при -20 "С. Всі ПЛР праймери та праймери для секвенування наведені в таблиці 6. Для ПЛР застосовують ДНК полімеразу РішТигро(К) Ноївіагі (Зігаїадепе, Атвіегдат,Viozsiepse (Maagezep, Te Meipegiapaz). Primers are dissolved in water at a concentration of 100 pmol/μl and stored at -20 "C. All PCR primers and primers for sequencing are listed in Table 6. For PCR, RishTigro(K) Noiviagi DNA polymerase (Zigaiadepe, Atviegdat,

Тне МешШепапав; ргодисі 2600322) відповідно до інструкцій виробника. Кожна реакційна суміш містить 200 мкМ змішаних дНТФ (Коспе Оіадповійс5, АІтеге, Те МеїПпепапаб), 10 пмоль прямого та зворотного праймера, 100 нг геномної ДНК або 1 нг ДНК плазміди та 1 одиницю ДНК полімерази РішТигро Ноївїагі у буфері для ПЛР реакції (постачається з полімеразою) у загальному об'ємі 20 мкл. ПЛР реакції проводять в апараті ТОгадіепі Тпептосусіег 96 (М/пайтапTne MeshShepapav; Rhodysi 2600322) in accordance with the manufacturer's instructions. Each reaction mixture contains 200 µM of mixed dNTPs (Cospe Oiadpoviys5, AItege, Te MeiPpepab), 10 pmol of forward and reverse primer, 100 ng of genomic DNA or 1 ng of plasmid DNA, and 1 unit of RisTigro Novihagi DNA polymerase in PCR reaction buffer (supplied with the polymerase ) in a total volume of 20 μl. PCR reactions are carried out in the TOgadiepi Tpeptosusieg 96 apparatus (M/paytap

Віотеїа, Соейціпдеп, Септапу; ргодисі 050-801), застосовуючи програму на 32 циклів: денатурації при 95 "С протягом 2 хв.; 30 циклів з 95 "С протягом 30 с, градієнт 60-70 "С (або інша специфічна температура прилягання) протягом 30 с та 72 "С протягом З хв.; кінцеве нарощування при 72 "С протягом 10 хв. Якщо потрібно, ПЛР суміші зберігають при 4 "С до наступного аналізу або обробки.Vioteia, Soeicipdep, Septapu; rhodysi 050-801), using a program for 32 cycles: denaturation at 95 "C for 2 min.; 30 cycles of 95 "C for 30 s, a gradient of 60-70 "C (or other specific adhesion temperature) for 30 s and 72 "C during 3 min.; final extension at 72 °C for 10 min. If required, PCR mixtures are stored at 4 °C until further analysis or processing.

Електрофорез в агарозному гелі проводять по Самбруку (Затбгоок, КиззеїЇ еї аІ. 2000), застосовуючи гелі з 50 мл на 1Х трис-ацетат-ЕДТА буфері. ДНК визначають шляхом включення в гель етидій броміду та спостереження в УФ світлі. Зображення гелів записують за допомогоюElectrophoresis in an agarose gel is carried out according to Sambrook (Zatbgook, Kizzey et al. 2000), using gels with 50 ml on 1X Tris-acetate-EDTA buffer. DNA is determined by including ethidium bromide in the gel and observing in UV light. Images of gels are recorded using

ССО камери та системи аналізу зображень (сепеспоте; Зупдепе, міа УУезіригоу В.М., І еизаєп,SSO cameras and image analysis systems (sepespote; Zupdepe, mia UUezirigou V.M., I eizaep,

Тне Мей епапаФв).Tne Mei epapaFv).

Очищення потрібних фрагментів ПЛР проводять за допомогою набору МіпЕІше РСКPurification of the necessary PCR fragments is carried out with the help of the MipEIshe RSC kit

Ритітісаноп Кії (Оіадеп, міа Умезібиго, І еиздеп, Те Меїпепапав; ргодисі 28006) за інструкціями виробника. Виділені ДНК кількісно оцінюють за допомогою УФ спектроскопії (див. нижче) і аналізують якість за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.Rititisanop Kiyi (Oiadep, mia Umezibigo, I eizdep, Te Meipepapav; rgodisi 28006) according to the manufacturer's instructions. Extracted DNA is quantified by UV spectroscopy (see below) and analyzed for quality by agarose gel electrophoresis.

Альтернативно, продукти ПЛР або переварювання розділяють за допомогою електрофорезу в агарозному гелі (наприклад, коли присутні множинні фрагменти), застосовуючи 1 95 Трис- ацетат-ЕДТА агарозний гель. Потрібний фрагмент вирізають із гелю та виділяють ДНК за допомогою набору ОІАЕХ ЇЇ (Се! Ехігасіоп КИ (Оіадеп; ргодисі" 20051) за інструкціями виробника.Alternatively, PCR or digestion products are separated by agarose gel electrophoresis (eg, when multiple fragments are present) using a 1 95 Tris-acetate-EDTA agarose gel. The desired fragment is cut out of the gel and DNA is isolated using the OIAEX HER kit (Se! Ehigasiop KI (Oiadep; rgodisi" 20051) according to the manufacturer's instructions.

Оптичну густину нуклеїнових кислот визначають за допомогою спектрофотометра МапоОгорThe optical density of nucleic acids is determined using a MapoOhor spectrophotometer

МО-1000 Зресігорпоїотеїег (Ізодеп І йе Зсіепсе, Мааге5зеп, Те МеїПпепапа5) за інструкціями виробника. Концентрацію ДНК визначають за допомогою аналізу оптичної густини (00) при 260 нм (1 одиниця ОЮгво-50 мкг/мл). Для всіх зразків як порівняння застосовують буфер, у якому розчинені нуклеїнові кислоти.MO-1000 Zresigorpoioteieg (Izodep I ye Zsiepse, Maage5zep, Te MeiPpepapa5) according to the manufacturer's instructions. The concentration of DNA is determined by analyzing the optical density (00) at 260 nm (1 unit of OYugvo-50 μg/ml). For all samples, a buffer in which nucleic acids are dissolved is used as a comparison.

Ферменти рестрикції та додаткові речовини одержані від Мем/ Епдіапа Віоїабз (Вемепу, МА,Restriction enzymes and additional substances were obtained from Mem/Epdiapa Vioiabz (Wemepu, MA,

О5А) або Регтеїазх (міІпій5, І Кпиапіа) і застосовуються відповідно до інструкцій постачальників.O5A) or Regteiazh (miIpiy5, I Kpyapia) and are used in accordance with the instructions of the suppliers.

ДНК (100 нг) обробляють 5 одиницями ферменту(ів) у придатному буфері в кінцевому об'ємі 10 мкл (об'єм реакції збільшують у потрібну кількість разів, якщо потрібно). Обробку (переварювання) проводять при рекомендованій температуре протягом не менше 60 хв. У випадку фрагментів, що вимагають подвійного переварювання рестриктазами, які висувають несумісні вимоги до буферів або температур, обробки проводять послідовно. При необхідності продукти переварювання очищають за допомогою електрофорезу в агарозному гелі та екстракції з гелю.DNA (100 ng) is treated with 5 units of enzyme(s) in a suitable buffer in a final volume of 10 μl (reaction volume is increased by the required number of times if necessary). Processing (boiling) is carried out at the recommended temperature for at least 60 minutes. In the case of fragments requiring double digestion with restriction enzymes that impose incompatible buffer or temperature requirements, treatments are performed sequentially. If necessary, digestion products are purified using agarose gel electrophoresis and gel extraction.

Лігування фрагментів ДНК проводять за допомогою ОпціскК Гідацйоп Кі (Мем/ ЕподІапа Віоїабз) відповідно до інструкцій постачальника. Для кожного лігування ДНК вектора змішують із приблизно трикратним надлишком ДНК вставки.Ligation of DNA fragments is carried out using OptiskK Hydacyop Ki (Mem/EpodIapa Vioibz) according to the supplier's instructions. For each ligation, vector DNA is mixed with an approximately threefold excess of insert DNA.

Плазмідну ДНК (1-5 мкл розчину ДНК, звичайно, 2 мкл суміші ДНК після лігування) трансформують у клітинах Опе Зпої ОНоба-тТ19 Е. соїї (Іпмікодеп, Вгеда, Те МеїПепапав; ргодисі 12297-016) із застосуванням способу теплового шоку відповідно до інструкцій постачальника.Plasmid DNA (1-5 μl of DNA solution, of course, 2 μl of DNA mixture after ligation) is transformed in Ope Zpoi ONoba-tT19 cells of E. soybean (Ipmikodep, Vgeda, Te MeiPepapav; Rgodisi 12297-016) using the method of heat shock according to supplier's instructions.

Зо Далі, клітини розсівають на чашках з агаризованим середовищем Лурія-Бертані (І.В), що містить 50 мкг/мл ампіциліну. Чашки інкубують протягом 16-18 годин при 37 "С, поки колонії бактерій не стануть помітними.Next, the cells are spread on plates with Luria-Bertani (IV) agar medium containing 50 μg/ml of ampicillin. The cups are incubated for 16-18 hours at 37 "C until bacterial colonies become visible.

Бактеріальні колонії піддають скринінгу на присутність векторів, що містять потрібні послідовності, за допомогою ПЛР колоній із застосуванням суміші для ПЛР Тпегтоєіатг РСКBacterial colonies are screened for the presence of vectors containing the desired sequences by PCR of colonies using a mixture for PCR Tpegtoeiatg RSC

Маєзхіег Міх (Ардепе, міа М/еїзриго, І еиздеп, Те МеїПепапав; ргодисі" АВ-938-ОС15/Б) і праймерів рСопізед1 та рЕЕ13.45едгем2 (таблиця 6). Відібраних колоній злегка торкаються наконечником для піпетки на 20 мкл і швидко торкаються ним же 2 мл ЇВ для малих культур і потім суспендують у суміші для ПЛР. ПЛР проводять в апараті ТОгадієпі Тпептосусіег 96 із застосуванням програми на 35 циклів: денатурація при 95 "С протягом 15 хв.; 35 циклів з 94 "С протягом 30 с, 55 "С протягом 30 с та 72 "С протягом 2 хв.; з наступним етапом кінцевого нарощування протягом 10 хв. при 72 "С. Якщо потрібно, ПЛР суміші зберігають при 4 "С до наступного аналізу або обробки.Maezhieg Mich (Ardepe, mia M/eizrygo, I eizdep, Te MeiPepapav; rgodisi" AB-938-OS15/B) and primers pSopized1 and pEE13.45edgem2 (table 6). The selected colonies are lightly touched with a 20 μl pipette tip and quickly 2 ml of IV for small cultures are touched with it and then suspended in a mixture for PCR. PCR is carried out in the TOgadiepi Tpeptosusieg 96 apparatus using a program for 35 cycles: denaturation at 95 "C for 15 min.; 35 cycles of 94 "C for 30 s, 55 "C for 30 s, and 72 "C for 2 min; followed by a final extension step for 10 min at 72 "C. If necessary, the PCR mixture is stored at 4 °C until the next analysis or processing.

Плазмідну ДНК ізолюють із культур Е. соїї за допомогою наборів від Оіадеп (міа М/евіриго,Plasmid DNA is isolated from E. soybean cultures using kits from Oiadep (mia M/evirigo,

Їеизаеєп, Те Меїпегіапавз) відповідно до інструкцій постачальника. Для одержання великих препаратів плазмід (з 50-150 мл культури) застосовують Нізреей Ріазтій Махі Кії (ргодисі 12663) або Нібреєй Ріахзтій Міді Кі (ргодисі 12643). Для одержання невеликих кількостей плазмід (близько 2 мл культури) застосовують Оіаргер Зріп Міпіргер Кії (ргодисі 27106) ії ДНК елююють в 50 мкл буфера для елюції (наданого в наборі).Yeizaeep, Te Meipegiapavz) according to the supplier's instructions. To obtain large preparations of plasmids (from 50-150 ml of culture) use Nizrei Riaztiy Mahi Kii (Rhodisi 12663) or Nibrei Riahztiy Midi Kii (Rhodisi 12643). To obtain small amounts of plasmids (about 2 ml of culture), Oiarger Zrip Mipirger Kii (Rhodisi 27106) is used and the DNA is eluted in 50 μl of elution buffer (provided in the kit).

Конструкція експресуючого НА-СО38 вектора РЕЕ13.АНАСОзЗ8Construction of the РЕЕ13.АНАСО38 expressing vector НА-СО38

Позаклітинний домен СОЗ38 людини ампліфікують із плазміди рСіригоСОЗ8 (одержаної відThe extracellular domain of human SOZ38 is amplified from the pSyrigoSOZ8 plasmid (obtained from

Ргої. М. СіІеппіє, Тепоми5 Везеагсі І арогаюгу, зоцшійатріоп Сепега! Нозріа!, Зошйпатріоп, ОК) за допомогою праймерів сазватгта та сазвехгем. За допомогою цієї ПЛР реакції вводять НА-таг.Rogoi M. SiIeppie, Tepomy5 Vezeagsi I arogayugu, zotsshiiatriop Sepega! Nozria!, Zoshypatriop, OK) using the primers sazvatgta and sazvehhem. Using this PCR reaction, HA-tag is introduced.

Такий продукт ПЛР застосовують як матрицю для другої реакції ПЛР із праймерамиSuch a PCR product is used as a matrix for the second PCR reaction with primers

ЗРНММЗвех та сазвехгем. За допомогою цієї реакції ПЛР вводять сигнальний пептид 5РНММ, ділянки рестрикції та ідеальну послідовність Козака (ЗССОССАСС) для оптимальної експресії.ZRNMMZveh and sazvehgem. This PCR reaction introduces the 5RNMM signal peptide, restriction sites, and the ideal Kozak sequence (ZSSOSSASS) for optimal expression.

Після очищення такий продукт ПЛР клонують в експресуючий вектор рЕЕ13.4 (І оп7а Віоіодіев5) і повну кодуючу послідовність підтверджують за допомогою секвенування із праймерами рСопКзеаді, рЕЕ13.45едгем, сазвзедіїог та сазвзедаггем (таблиця 6). Цю конструкцію називаютьAfter purification, this PCR product is cloned into the expressing vector pEE13.4 (I op7a Viioiodiev5) and the complete coding sequence is confirmed by sequencing with primers pSopKzeadi, pEE13.45edhem, sazvediiog and sazvedaghem (table 6). This construction is called

РЕЕ13.4НАСОЗ8. бо Сайт-спрямований мутагенезREE13.4NASOZ8. for Site-directed mutagenesis

Конструюють три одиночні мутантні білки з пиСОЗ8, у яких Т мутований в А у положенні 237 (Т237А, 5ЕО ІЮ МО: 32), О мутований в К у положенні 272 (0272К, 5ЕБЕО ІЮО МО: 33), або 5 мутований в Е у положенні 274 (5274Е, 5ЕО ІО МО: 34). Сайт-спрямований мутагенез проводять за допомогою набору ОціскСпапде ІІ ХІІ 5йе-Оігесієй Миїадепезів Кії (Зігаїадепе, Атвівегдат,Construct three single mutant proteins from piSOZ8, in which T is mutated to A at position 237 (T237A, 5EO IYU MO: 32), O is mutated to K at position 272 (0272K, 5EBEO IYU MO: 33), or 5 is mutated to E in position 274 (5274E, 5EO IO MO: 34). Site-directed mutagenesis is carried out with the help of a set of OciskSpapde ІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІІА

Те Меїфйегіапід5) відповідно до інструкцій постачальника. Цей спосіб включає введення додаткової мовчазної ділянки рестрикції для скринінгу успішних мутантів (додаткова Хбаї ділянка для Т237А мутанта, додаткова Всої! ділянка для 0272К мутанта та втрата 55рі ділянки для 5274 мутанта) Стисло, 5 мкл 10х реакційного буфера, 1 мкл олігонуклеотидуTe Meifiegiapid5) according to the supplier's instructions. This method involves the introduction of an additional silent restriction site for screening successful mutants (an additional Xbai site for the T237A mutant, an additional Vsoi! site for the 0272K mutant, and loss of the 55 site for the 5274 mutant) Brief, 5 μl of 10x reaction buffer, 1 μl of oligonucleotide

НАСОЗ8Т237Агт0г2, НАСОЗ8О272ЕТог або НАСОЗ85274Етог (100 пмоль/мкл), 1 мкл олігонуклеотиду НАСОЗ8Т237Агем2, НАСЮОЗ8О272Кгем або НАСОЗ385274Егем (100 пмоль/мкл), 1 мкл суміші дДНТФ, З мкл Опіскзоїшіоп, 1 мкл плазміни РЕЕ13.4НАСОЗ8 (50 нг/мкл) і 1 мкл ДНК полімерази Рішйга НЕ ОМА змішують у кінцевому об'ємі 50 мкл та ампліфікують в апаратіНАСОЗ8Т237Агт0г2, НАСОЗ8О272ЕТог або НАСОЗ85274Етог (100 пмоль/мкл), 1 мкл олігонуклеотиду НАСОЗ8Т237Агем2, НАСЮОЗ8О272Кгем або НАСОЗ385274Егем (100 пмоль/мкл), 1 мкл суміші дДНТФ, З мкл Опіскзоїшіоп, 1 мкл плазміни РЕЕ13.4НАСОЗ8 (50 нг/мкл) і 1 µl of Rishiga DNA polymerase NO OMA is mixed in a final volume of 50 µl and amplified in the apparatus

Тагадієпі Тнептосусієї 96 (М/наїйтап Віотеїга, Стіоеціпдеп, Стептапу; ргодисі 050-801) із застосуванням програми з 18 циклів: денатурація при 95 "С протягом 1 хв.; 18 циклів з 9570 протягом 50 с, 60 "С протягом 50 с та 68 "С протягом 10 хв. ПЛР суміші зберігають при 4 "С до наступного застосування. Далі, суміші ПЛР інкубують з 1 мкл Орпі протягом 60 хв. при 37 "С для переварювання вектора рЕЕ13.4НАСОЗ8 дикого типу та зберігають при 4 "С до наступного застосування. ДНК із реакційної суміші осаджують за допомогою 5 мкл ацетату натрію та 125 мкл етанолу, інкубують протягом 20 хв. при -20 "С і збирають центрифугуванням протягом 20 хв. при 4 "С при 14000 об./хв. Осад ДНК промивають 70 95 етанолом, сушать і розчиняють в 4 мкл води. 4 мкл об'єму реакції цілююм трансформують у компетентні клітини Опе пої Тор 10ОН5а тА Б. соїї (Іпмігодеп, Вгеда, Тпе Мейшегіапа5) відповідно до інструкцій постачальника (Іпмігодеп). Далі, клітини розсівають на чашках з агаризованим середовищем Лурія-Бертані (ІВ), що містять 50 мкг/мл ампіциліну. Чашки інкубують протягом 16-18 годин при 37 "С, поки колонії бактерій не стануть помітними. Колонії піддають скринінгу за допомогою ПЛР колоній, застосовуючи праймери рСоп1ізед1і та рЕЕ13.45едгем2 (таблиця 5) і обробляють відповідними ферментами рестрикції для скринінгу на включення мутагенного олігонуклеотиду. Два позитивні клони для кожного мутанта вирощують і виділяють плазмідну ДНК. Повну НАСОЗ8-кодуючу нуклеотидну послідовність визначають за допомогою праймерів сазвзедіїог, рСопізед1і таTagadiepi Tneptosusiyei 96 (M/naiytap Vioteiga, Stioetsipdep, Steptapu; rgodisi 050-801) using a program of 18 cycles: denaturation at 95 "C for 1 min.; 18 cycles of 9570 for 50 s, 60 "C for 50 s and 68 "C for 10 min. The PCR mixture is stored at 4 "C until the next use. Next, the PCR mixture is incubated with 1 μl of Orpi for 60 min. at 37 "C to digest the wild-type pEE13.4NASOZ8 vector and store at 4 "C until the next use. DNA from the reaction mixture is precipitated with 5 μl of sodium acetate and 125 μl of ethanol, incubated for 20 min. at -20 "C and collected by centrifugation for 20 min. at 4 "C at 14,000 rpm. The DNA precipitate is washed with 70-95% ethanol, dried and dissolved in 4 μl of water. 4 μl of the total reaction volume is transformed into competent cells of Ope poi Tor 10OH5a and B. soii (Ipmigodep, Vgeda, Tpe Meishegiapa5) according to the supplier's instructions (Ipmigodep). Next, the cells are plated on Luria-Bertani (IV) agar plates containing 50 μg/ml ampicillin. Cups are incubated for 16-18 hours at 37 "C until bacterial colonies become visible. Colonies are screened by colony PCR using primers pSop1ized1i and pEE13.45edhem2 (table 5) and treated with appropriate restriction enzymes to screen for the inclusion of a mutagenic oligonucleotide. Two positive clones for each mutant were grown and plasmid DNA was isolated.

Зо РЕЕ13.45едгем2, щоб підтвердити присутність мутацій і відсутність додаткових небажаних мутацій.From REE13.45edhem2 to confirm the presence of mutations and the absence of additional unwanted mutations.

Секвенування ДНКDNA sequencing

Зразки плазмідної ДНК посилають в АСОУМА (Вепіп, Септапу) для аналізу послідовностей.Plasmid DNA samples are sent to ASOUMA (Vepip, Septapu) for sequence analysis.

Послідовності аналізують за допомогою сучасної програми Месіог МТІ (Іптоптах, Охіога, ОК).Sequences were analyzed using the modern Mesiog program of MTI (Iptoptah, OH, OK).

Тимчасова експресія в клітинах НЕК-293ЕTransient expression in NEK-293E cells

Клітини РгеезіуіеєтМ) 293-Е (субклон НЕК-293 пристосований до росту в суспензії та у хімічно визначеному середовищі Егеевзіуіє, (НЕК-293Е)) одержують від Іпмігодеп і трансфекують рРЕЄ!Т3.4НАСОЗ8 та трьома конструкціями, що несуть мутації Т237А, 0272 і 5274Е, відповідно до протоколу постачальника із застосуванням 293фектину (Іпмігодеп). Клітинні супернатанти від трансфекованих клітин застосовують в ЕГІЗА для дослідження зв'язування анти-СОЗ38.Cells (RheeziuietM) 293-E (a subclone of NEK-293 adapted to growth in suspension and in chemically defined medium of Egeevsieu, (NEK-293E)) are obtained from Ipmigodep and transfected with pREE!T3.4NASOZ8 and three constructs carrying mutations T237A, 0272 and 5274E, according to the supplier's protocol using 293fectin (Ipmigodep). Cell supernatants from transfected cells are used in EGISA to study the binding of anti-POZ38.

Зв'язування анти-СОЗ38 антитілBinding of anti-POZ38 antibodies

Пластини ЕГІЗА (СОгеїіпег, 2655092) покривають протягом ночі при 4 "С 1 мкг анти-НА антитіла (бідта, ЖН-9658) і далі блокують за допомогою 2 95 сироватки курчати. Культуральні супернатанти від трансфекованих клітин НЕК29ЗЕ розводять, наносять на пластини ЕГІЗА та інкубують протягом 1 години при кімн. темп. Після промивання додають серійні розведенняEHIZA plates (SOgeiipeg, 2655092) are coated overnight at 4 °C with 1 μg of anti-HA antibody (bidta, ZhN-9658) and then blocked with 2 95 chicken serum. Culture supernatants from transfected NEK29ZE cells are diluted, applied to EHIZA plates and incubate for 1 hour at room temperature After washing, add serial dilutions

НиМабз»-003 та -005 та інкубують протягом 1 години при кімн. темп. Зв'язані антитіла детектують за допомогою НЕР-кон'югованих козячих анти-людських Ід антитіл. Аналіз проявляють за допомогою АВТЗ (Коспе, Ж1112597) і оптичне поглинання вимірюють при 405 нм за допомогою спектрофотометра.NyMabz"-003 and -005 and incubated for 1 hour at room temperature. tempo. Bound antibodies are detected using HER-conjugated goat anti-human Id antibodies. The analysis is carried out using AVTZ (Kospe, Zh1112597) and the optical absorption is measured at 405 nm using a spectrophotometer.

Як можна бачити на фігурах 23А-23В, як -003, так і -005 зв'язуються з диким типом СОЗ38 людини. На зв'язування -003 не впливає введення мутацій Т237А (фігура 23А), 0272 (фігура 23Б) або 5274Е (фігура 238). -005 здатний зв'язувати СОЗ38, що несе мутацію Т237А (фігура 23А). Зв'язування -005 з СОЗ8 з мутацією 0272К серйозно змінене (фігура 23Б), як з поглядуAs can be seen in Figures 23A-23B, both -003 and -005 bind to wild-type human COZ38. The binding of -003 is not affected by the introduction of mutations T237A (Figure 23A), 0272 (Figure 23B) or 5274E (Figure 238). -005 is able to bind SOZ38 carrying the T237A mutation (Figure 23A). The binding of -005 to SOZ8 with the 0272K mutation is severely altered (Figure 23B), as seen

ЕсСобо, так і максимальної ємності зв'язування. -005 не здатний зв'язуватися з мутантом СОЗ8, у якому серин в положенні 274 заміщений фенілаланіном (фігура 238В).EsSobo, as well as the maximum binding capacity. -005 is unable to bind to the mutant SOZ8, in which serine at position 274 is replaced by phenylalanine (Figure 238B).

Ці дані показують, що -003 та -005 зв'язуються з різними епітопами. Далі, ці дослідження виявляють, що зв'язування -005 з СОЗ38 є чутливим до мутацій по положеннях 272 та 274.These data show that -003 and -005 bind to different epitopes. Further, these studies reveal that the binding of -005 to POP38 is sensitive to mutations at positions 272 and 274.

Особливо 5274 важливий для зв'язування -005 з СОЗ8.Especially 5274 is important for binding -005 to SOZ8.

Таблиця 6Table 6

Праймери сазвіота СстоСстотТасвсссАТООТОТОООСсСтТАСССтТТАСОАСС тОоССтТОАСТАСОоССАвОТОбСОоССАвАСОеТОовАОсС сізвбехгем АСБОТСАВОТАССТСАВАТСТСАВАТОТОСААОPrimers of sazviota SstoSstotTasvsssATOOTOOTOOOSsStTASSStTTASOASS tOOSStTOASTASOoSSAvOTObSOoSSAvaSOeTOovAOsS sizvbehgem ASBOTSAVOTASSTSSAVATSTSSAVATOTOSAAO

ЗРНММЗВех ТАТАОСОСОвОБССОССАССАТОТОСТООССВОСТОТ светосвстастостостостостастасттТООооСссСАТ зотатовобс роопіведі! СААСАСТТААВОСАОСООСАСАА реопкгеді СТАСТСТОДОСАСТАСТСОТТОСЗРНММЗВех ТАТАОСОСОвОБССОССАССАТОТОСТОССВОСТОТ светосвстастостостостастасттТООооСссСАТ zotatovobs roopivedi! SAASASTTAAVOSAOSOOSASAAA reopkgedi STASTSTODOSASTASTSOTTOS

РЕЄТЗ.4ведгеу ТОСАТТСАТТТТАТОТТТСАВОТREETZ.4vedgeu TOSATTSATTTTATOTTTSAVOT

РЕЕЛЗ.48ецтеч2 ТСООАСАТСТСАТОАСТТ СТ сазвеедітє АОбАСсАСОСТОСТАВОСТАССТТ сазаведотеу стестТТТестОоСАСТСтТОвОосСААоREELZ.48ectech2 TSOOASATSTSATOASTT ST sazveeditye АОбАСsАСОСОСТАВОСТАССТСТ sazavedoteu stestTTTestOoSASTStTOvOosSAAo

НАСОЗВТоЗТАтМ? ТОСАССАТОТАТСАСССАВОССТОТАСАСОСТОДАССТ тетстосттоNASOZVToZTAtM? TOSASSATOTATSASSSSAVOSSSTOTASASASOSTODASST tetstostto

НАСОЗВТ237АюЮ 0 бААСБАВАСААВОТТСАСОСТОТАВАВОССТВООТОАNASOZVT237АюЮ 0 бААСБАВАСААВОТТСАСОСОТАВОСТВООТООА

ТАСАТОСТОбАEQUALITY

НАСОЗВО272КтеМ 0/0 ОАТАТТСТТОСАСОСДАДАТОСОААТАТТОСТТТТОСТТАТNASOZVO272KteM 0/0 OATATTSTTOSASOSDADATOSOAAATATTOSTTTTOSTTTAT

НАСОЗВОДТОВОГ 0/0 АТААССААААОСААТАТТОСАТТТТОСТОСААСААТАТОNASOSOVDTOVOG 0/0 ATAASSAAAAAOSAATATTOSATTTTOSTOSAASAATATO

НАСПЗВВ274Бг Тех ТОСТОТАВБАТАТТСТТОСАВАААААТТОААТИИТТОСТТNASPZVV274Bg Tech TOSTOTAVBATATTSTTOSAVAAAAAATTOAATIITTOSTTT

ОСТТАТАTHE REMAINDER

НАСОЗВ5274РіЮї 0/ ТАТААССАААДОСААСАТТСААТТТТТСТОСААСААТАТNASOZV5274RiUi 0/ TATAASSAAADOSAASATTSAAATTTTTTSTOSAASAATAT

СТАСАСАSTASSAS

Приклад 18Example 18

Індукція проліферації РВМС -003, -005 та -024 тестують в аналізі, в основному, як описано в АйзіеєїІо еї аї., Тізвие апідепе5 56, 538-547 (2000). Стисло, РМВС від здорових донорів культивують при концентрації 1х105 клітин/лунку на плоскодонних платах на 96 лунок у присутності антитіл (кінцеві концентрації: 1,1-3,3-10-30 мкг/мл) в 200 мкл КРМІ-. Стимуляцію клітин І--15 (при 333 нг/мл; Атдеп Іпс.,Proliferation induction of PBMCs -003, -005 and -024 was tested in an assay essentially as described in Aiziei Io ei ai., Tizvye apidep5 56, 538-547 (2000). Briefly, PMVS from healthy donors are cultured at a concentration of 1x105 cells/well on 96-well flat-bottom plates in the presence of antibodies (final concentrations: 1.1-3.3-10-30 μg/ml) in 200 μl of KRMI-. Stimulation of I--15 cells (at 333 ng/ml; Atdep Ips.,

Тпоизапа Оак5х, СА, О5А) застосовують як позитивний контроль. Через 4 дні інкубації при 37 "С додають 30 мкл ЗН-тимідину (16,7 мкКі/мл) і культивування продовжують протягом ночі.Tpoizapa Oak5x, SA, O5A) are used as a positive control. After 4 days of incubation at 37 "С, 30 μl of ZN-thymidine (16.7 μCi/ml) is added and cultivation is continued overnight.

Включення ЗН-тимідину аналізують за допомогою гамма-лічильника РасКагі Собга датта сошпіег (РаскКага Іпзігитепів5, Мегідеп, ОТ, О5А) відповідно до інструкцій постачальника. Дані показані у вигляді середніх значень підрахунку в срт (-5ЕМ) РВМС, одержаного від 10 донорів.The inclusion of ZN-thymidine is analyzed using a gamma counter RasKaga Sobga datta soshpieg (RaskKaga Ipzigitepiv5, Megidep, OT, O5A) in accordance with the supplier's instructions. The data are shown in the form of average values of the calculation in srt (-5EM) of PBMC obtained from 10 donors.

Результати показують, що -003 та -005 не індукують значної проліферації РВМС (фігура 24А).The results show that -003 and -005 do not induce significant proliferation of PBMCs (Figure 24A).

Також -024 не індукують значної проліферації РВМС (дані не наведені).Also, -024 did not induce significant proliferation of PBMCs (data not shown).

Приклад 19Example 19

Індукція 1-6Induction 1-6

-003, -005 та -024 тестують в аналізі, як описано в А!йзіеПо еї аї., Тівце апіїдеп5 56, 538-547 (2000). Стисло, РМВС культивують при концентрації 1 х105 клітин/лунку на платах на 48 лунок у присутності 20 мкг/мл антитіл та 10 нг/мл ГРБ5 (Зідта-АїІдгісй СНетіє, 2мі|пагесні, ТНе-003, -005, and -024 are tested in an assay as described in A!yziePo ei ai., Tivtse apiidep5 56, 538-547 (2000). Briefly, PMVS are cultured at a concentration of 1 x 105 cells/well on 48-well plates in the presence of 20 μg/ml of antibodies and 10 ng/ml of HRB5 (Zidta-AiIdgisy SNetiye, 2mi|pagesni, TNe

Меїпегіапав) в 500 мкл КЕРМІ. Після інкубації протягом ночі при 37 "С супернатант збирають і зберігають при -20 "С. Концентрацію І/-6 визначають за допомогою ЕГІЗА (1-6 ЕГІБЗА Кі, О-Meipegiapav) in 500 μl of KERMI. After overnight incubation at 37 "C, the supernatant is collected and stored at -20 "C. The concentration of I/-6 is determined using EGIZA (1-6 EGIBZA Ki, O-

СуТесп Віозсіепсе5, (Лгеспї, Тпе Меїпепапавх) відповідно до інструкцій постачальника. Дані представляють середні концентрації у пг/мл (45ЕМ) від 7 донорів. Результати показують, що - 003 та -005 не індукують вивільнення значних рівнів 1-6 (фігура 24Б). Також, -024 не індукує вивільнення значних рівнів ІІ--6 (дані не наведені).SuTesp Viozsiepse 5, (Lgespi, Tpe Meipepapavh) in accordance with the supplier's instructions. Data represent mean concentrations in pg/ml (45EM) from 7 donors. The results show that -003 and -005 do not induce the release of significant levels 1-6 (Figure 24B). Also, -024 did not induce the release of significant levels of II--6 (data not shown).

Приклад 20Example 20

Індукція вивільнення ІЕМ-у -003, -005 та -024 тестують в аналізі, як описано в А!йвіеїо еї а!., Ті5це апіїдеп5 56, 538-547 (2000). Стисло, РМВС від здорових донорів культивують при концентрації 1 х105 клітин/лунку на платах на 48 лунок у присутності 20 мкг/мл антитіл та 1 мкг/мл ОКТ-3 (Запдиціп, Ат5іегдат, ТеInduction of IEM release in -003, -005 and -024 was tested in an assay as described in A!ivieio ei a!., Ti5ce apiidep5 56, 538-547 (2000). Briefly, PMVS from healthy donors are cultured at a concentration of 1 x 105 cells/well on 48-well plates in the presence of 20 μg/ml antibodies and 1 μg/ml OKT-3 (Zapdycip, At5iegdat, Te

Мейїшегіапав5) в 500 мкл ЕРМІ". Після інкубації протягом ночі при 37 "С супернатант збирають і зберігають при -20 "С. Концентрацію ІЕМ-у визначають за допомогою ЕГІЗА (ІЕМ-у ЕГІЗА Кії, О-Meyishegiapav5) in 500 μl of ERMI". After overnight incubation at 37 "C, the supernatant is collected and stored at -20 "C. The concentration of IEM-u is determined using EGISA (IEM-u EGISA Kiev, O-

СуТесп Віозсіепсе5, Штесні, Те Меїйпегіапд5) відповідно до інструкцій постачальника. Дані представляють середні концентрації в пг/мл (-5ЕМ) від 9 донорів. Результати показують, що - 003 та -005 не індукують вивільнення детектованих рівнів ІЕМ-у (фігура 24Б). Також -024 не індукує вивільнення значних рівнів ІЄМ-у (дані не наведені).SuTesp Wiozsiepse5, Shtesni, Te Meijpegiapd5) according to the supplier's instructions. Data represent average concentrations in pg/ml (-5EM) from 9 donors. The results show that -003 and -005 do not induce the release of detectable levels of IEM (Figure 24B). Also, -024 did not induce the release of significant levels of IEM (data not shown).

Приклад 21Example 21

Спорідненість зв'язування -003 та -005 з рекомбінантним СОЗ8Binding affinity of -003 and -005 to recombinant SOZ8

Зв'язування -003 та -005 з СОЗ38 тестують за допомогою поверхневого плазмонового резонансу. Стисло, очищені антитіла іммобілізують на сенсорних чипах СМ-5 5епвгог спір (Віасоге, Оррзаїа, Змуедеп) через амінний зв'язок. СОЗ8 з НА-тагом (див. приклад 3) протікають над чипом і зв'язування антигену з тАб детектують по зміні показника заломлення на поверхні чипа за допомогою установки Віасоге 3000 (Віасоге). Константи асоціації та швидкості для -003 (таблиця 7) і -005 (таблиця 8) підсумовані нижче (середнє по трьох експериментах СО) і показують, що -003 та -005 мають високу спорідненість до СОЗ8.The binding of -003 and -005 to SOZ38 is tested using surface plasmon resonance. Briefly, purified antibodies are immobilized on sensor chips SM-5 5epvgog spir (Viasoge, Orrzaia, Zmuedep) through an amine bond. COZ8 with NA-tag (see example 3) flow over the chip and the binding of antigen to tAb is detected by the change in refractive index on the surface of the chip using the Viasoge 3000 (Viasoge). Association and rate constants for -003 (Table 7) and -005 (Table 8) are summarized below (average of three CO experiments) and show that -003 and -005 have a high affinity for POP8.

Коо)Coo)

Таблиця 7Table 7

Константи асоціації та швидкості при 25 "С для -003 17110031Association and rate constants at 25 "C for -003 17110031

Таблиця 8Table 8

Константи асоціації та швидкості при 25 "С для -005 17771111005.1Association and rate constants at 25 "C for -005 17771111005.1

Приклад 22Example 22

Картування епітопаEpitope mapping

Картування епітопа за допомогою підходу РЕРБСАМEpitope mapping using the RERBSAM approach

Відповідно до відомих процедур (Сеузеп еї аї. 1984. Ове ої рерііде зупіпеві5 о ргобе мігаї! апіїдеп5 їог еріорев5 їо а гезоішіоп ої а віпдіє атіпо асід. Ргос Маї! Асай сі ОБА 81: 3998;According to known procedures (Seusep ei ai. 1984. Ove oi reriide zupipevi5 o rgobe migai! apiidep5 iog eriorev5 io a gezoishiop oi a vypdie atipo asid. Rgos Mai! Asai si OBA 81: 3998;

Зіооївіга єї а). 1996. Зтисшгаї! азресів ої апіїбоду-апіїдеп іпіегасіюп геуеаїей Іптоцой 5таї! гтапдот рерііде Ійбгагіе5. Мої. Оімег5 1: 87; РиїкК еї аІ. 2001. Зедтепі зупіпеві5. іп РСТ, Те Меїйепапав, р.1.), перекривні 20-мірні лінійні та 15-мірні петльові пептиди синтезують, охоплюючи 138 амінокислот на С-кінці СО38 людини. Далі, грунтуючись на послідовності С-кінця, роблять однопетльові пептиди різного розміру, що покривають областьZiooiviga eyi a). 1996. Ztysshgai! azresiv oi apiibodu-apiidep ipiegasiup geueaiei Iptocoi 5taii! gtapdot reriide Iybgagie5. My. Oimeg5 1: 87; RiikK ei aI. 2001. Zedtepi zupipevi5. ip PCT, Te Meijepapav, r.1.), overlapping 20-dimensional linear and 15-dimensional loop peptides are synthesized covering 138 amino acids at the C-terminus of human CO38. Next, based on the sequence of the C-terminus, single-loop peptides of different sizes are made that cover the region

КМІМЕРОКЕ ОСУКМРЕЮЗЗСТОЕЇ, область СУНнНМГОРЕКМОТ ЕАМУМІНОС і 0 областьKMIMEROKE OSUKMREYUZZSTOEI, SUNnNMHOREKMOT EAMUMINOS region and 0 region

СІ ЕБІІЗКАЕАМОГЕЗАКМІУКС. Додатково, створені додаткові набори для реконструкції областей з подвійними петлями, які складаються з ЗКАМОБЗСКМІУК та ЕКМОТІ ЕАМ/У/ЛІНОС. Природні цистеїни замінені на аланіни. Петиди піддані скринінгу за допомогою аналізу ЕГІ5ЗА із застосуванням карт тіпі-"ЕРЗСАМ розміром із кредитну карту.SI EBIIZKAEAMOGESAKMIUKS. In addition, additional sets have been created for the reconstruction of regions with double loops, consisting of ZKAMOBZSKMIUK and ECMOTI EAM/U/LINOS. Natural cysteines are replaced by alanines. Petids were screened using EGI5ZA analysis using credit card-sized tipi-"ERZSAM" cards.

Синтез пептидівSynthesis of peptides

Пептиди синтезують за допомогою стандартної хімії Етос і захист знімають із застосуванням ТЕА з поглиначами. Далі, пептиди зі знятим захистом піддають реакції з мікроматрицею З 0,5 ММ розчином 2,6-біс(бромметил)піридину або 2,4,6- трис(бромметил)мезитилену в бікарбонаті амонію (20 мМ, рн 7,9), доповненим ацетонітрилом (1: 1 об'єм/об'єм). Мікроматриці обережно струшують у розчині протягом 30-60 хв. при повному покритті розчином. Під кінець мікроматриці промивають великою кількістю води МіПіроге та озвучують у буфері для руйнування, що містить 195 додецилсульфат натрію, 0,1 95 р- меркаптоетанол в РВ (рН 7,2) при 70 "С протягом 30 хв, із наступним озвучуванням у водіPeptides are synthesized using standard Ethos chemistry and deprotected using TEA with absorbers. Next, deprotected peptides are subjected to a reaction with a micromatrix with a 0.5 mM solution of 2,6-bis(bromomethyl)pyridine or 2,4,6-tris(bromomethyl)mesitylene in ammonium bicarbonate (20 mM, pH 7.9), supplemented with acetonitrile (1:1 v/v). The micromatrices are gently shaken in the solution for 30-60 minutes. with complete solution coverage. Towards the end, the micromatrix is washed with a large amount of MiPiroge water and sonicated in a buffer for destruction containing 195 sodium dodecyl sulfate, 0.1 95 r-mercaptoethanol in RB (pH 7.2) at 70 "С for 30 min, followed by sonication in water

МіПіроге протягом ще 45 хв.MiPiroge for another 45 minutes.

Аналіз РЕРБЗСАМ ЕП ІЗАAnalysis of RERBZSAM EP IZA

Поліетиленову картку на 445 лунок розміром у кредитну картку, що містить ковалентно- зв'язані пептиди, інкубують із сироваткою (наприклад, розведеною 1: 1000 блокувальним розчином, що містить 5 95 кінську сироватку (об./об.) і 5 95 овальбумин (мас/об.) (40 "С протягом ночі). Після промивання пептиди інкубують із кролячим анти-людським Ід, зв'язаним з пероксидазою, (розведення 1: 1000, 25 "С, 1 година) і після промивання додають субстрат пероксидази (2,2-азиноді-3-етилбензилтіазолін сульфонат та 2 мкл/мл З 95 НгОг). Через одну година розвиток фарбування вимірюють за допомогою ССО камери та системи обробки зображень. Установка складається із ССО камери з 55 мм лінзами (5опу ССО Мідео Сатега ХСО- 77ВН, Мікоп тісго-пікког 55 тт 1/2.8 Іеп5), адаптора камери (Зопу Сатега адаріог ОС-77КК) і програми Ітаде Ргосеззіпд зоймжаге расКаде Орійтав5, мегзіоп 6.5 (Медіа Субрегпеїіс5, Зімег зргіпд, МО 20910, 0О.5.А.; Орітах працює на комп'ютері репіїшт І).A 445-well credit card-sized polyethylene card containing covalently bound peptides is incubated with serum (e.g., diluted 1:1000 with a blocking solution containing 5 95 horse serum (v/v) and 5 95 ovalbumin ( wt/vol.) (40 "C overnight). After washing, the peptides are incubated with rabbit anti-human Id bound to peroxidase (dilution 1: 1000, 25 "C, 1 hour) and after washing, the peroxidase substrate is added ( 2,2-azinodi-3-ethylbenzylthiazoline sulfonate and 2 μl/ml of 95 NgOg). After one hour, the development of staining is measured using a SCO camera and imaging system. The setup consists of a SCO camera with a 55 mm lens (5opu SCO Mideo Satega XCO - 77VN, Mikop tisgo-pikkog 55 tt 1/2.8 Iep5), camera adapter (Zopu Satega adariog OS-77KK) and program Itade Rgosezzipd zoymzhage rasKade Oriytav5, megsiop 6.5 (Media Subregpeiis5, Zimeg zrgipd, MO 20910, 0О.5.А .; Oritah is working on the computer of repiisht I).

Зо Спосіб презентації епітопаFrom Epitope presentation method

Індивідуальні амінокислоти ідентифікують по дипептидних мотивах, які представляють найменші унікальні одиниці в амінокислотній послідовності СОЗ38 людини. Всім дипептидним мотивам, присутнім в кожному з 1164 тестованих пептидів, надаються ЕГІЗА значення, одержані для відповідного повного пептиду. Щоб вибудувати ряд дипептидних мотивів від сильного до слабкого зв'язування, розраховують відносний сигнал за допомогою розподілуIndividual amino acids are identified by dipeptide motifs, which represent the smallest unique units in the amino acid sequence of human POP38. All dipeptide motifs present in each of the 1164 tested peptides are assigned the EHIZA values obtained for the corresponding full peptide. To construct a series of dipeptide motifs from strong to weak binding, the relative signal is calculated using the distribution

ЕІЗА значень, одержаних для кожного індивідуального мотиву, на усереднені ЕГІЗА значення від всіх 1164 лінійних та петльових пептидів і сортують їх по зменшенню величин. У такий спосіб визначають внески амінокислот у конформаційні епітопи. Для кожного тестованого тА відбирають всі дипептидні мотиви, що одержали вище 2,5 балів (наприклад, ЕГІЗА значення пептидів, що містять ці мотиви, щонайменше, в 2,5 рази більше усередненої ЕГІ5А величини, одержаної з усіма 1164 пептидами). Дані розкладають на внески одиночних амінокислот, представлені в лінійній послідовності СО3З8 за допомогою системи балів. Переміщаючись уздовж лінійної послідовності СОЗ8 і застосовуючи унікальні дипептидні одиниці як точку відліку, надають один бал щоразу, коли амінокислота СОЗ38 присутня в цьому наборі пептидів з високими балами.EIZA values obtained for each individual motif to the averaged EIZA values from all 1164 linear and loop peptides and sorted them in decreasing order of magnitude. In this way, the contributions of amino acids to conformational epitopes are determined. For each tested tA, all dipeptide motifs that scored above 2.5 points are selected (for example, the EHIZA value of peptides containing these motifs is at least 2.5 times greater than the average EGI5A value obtained with all 1164 peptides). The data are decomposed into the contributions of single amino acids, presented in the linear sequence СО3З8 using a scoring system. Moving along the linear sequence of COZ8 and using unique dipeptide units as a reference point, one score is assigned each time the amino acid COZ38 is present in this set of high-scoring peptides.

Виявлено, що -003, -005 та -024 зв'язуються з областю ЗККМОБЗСКМІУК таIt was found that -003, -005 and -024 are associated with the region ZKKMOBZSKMIUK and

ЕКМОТІ ЕАМУМІНОС у СО38 людини. -003 особливо впізнає мотиви ЕМІОЄ та МУМІН, -005 особливо впізнає мотиви КЕМ та МОТІ.ECMOTI EAMUMINOS in CO38 of man. -003 especially recognizes the motifs of EMIOYE and MOOMIN, -005 especially recognizes the motifs of KEM and MOTI.

Приклад 23Example 23

Ферментативна активністьEnzymatic activity

Ферментативну активність СОЗ8 людини вимірюють в аналізі, в основному, як описано вEnzymatic activity of human SOZ8 is measured in the assay, mainly as described in

Стаеї еї аї., у. Віої. Снет. 269, 30260-30267 (1994). Стисло, субстрат МОЮ: (80 мкМ) інкубують з сСОз38 (0,6 мкг/мл позаклітинного домену СОЗ8 з Гис-тагом, див. приклад З щодо очищення Нів-Staei ei ai., u. Vioi Snet 269, 30260-30267 (1994). Briefly, the MYU substrate: (80 μM) is incubated with cCO38 (0.6 μg/ml Hist-tagged COZ8 extracellular domain, see example C for the purification of Niv-

СО38) у буфері, який містить 20 мМ Трис-НСЇ, рН 7.0. Продукцію ЦГДФР можна спостерігати спектрофотометрично з довжиною хвиль емісії 410 нм (збудження при 300 нм). У цьому прикладі застосовують фільтр на збудженні 340260 нм і фільтр на емісії 43028 нм.СО38) in a buffer containing 20 mM Tris-HCl, pH 7.0. The production of CGDFR can be observed spectrophotometrically with an emission wavelength of 410 nm (excitation at 300 nm). In this example, an excitation filter of 340260 nm and an emission filter of 43028 nm are used.

Щоб тестувати дію -003, -005 та -024 на ферментативну активність СОЗ8, рекомбінантний білок Ніх-СО38 пре-інкубують протягом 15 хв. при кімн. темп. з різними концентраціями (30, 3, 0,3 та 0,03 мкг/мл) різних антитіл перед додаванням субстрату МОЮ». Продукцію циклічної ГДФ-To test the effect of -003, -005 and -024 on the enzymatic activity of SOZ8, the recombinant protein Nix-CO38 was pre-incubated for 15 min. at room tempo. with different concentrations (30, 3, 0.3 and 0.03 μg/ml) of different antibodies before adding the MYU substrate." Production of cyclic GDP-

рибози (ЦГДФР) реєструють в різні моменти часу після додавання антитіл (3, 6, 9, 12, 30, 45, 60, 75 та 90 хв.).ribose (CGDFR) is recorded at different time points after the addition of antibodies (3, 6, 9, 12, 30, 45, 60, 75 and 90 min.).

Фігура 26Б показує, що -005 має значну інгібіторну дію на продукцію цГгДФР. Через 90 хв. додавання 30 та З мкг/мл -005 приводить до зменшення на 32 95 та 34 95 продукції ЦГДФР (таблиця 9). Подібні результати спостерігаються в незалежних експериментах із застосуванням різних партій -005.Figure 26B shows that -005 has a significant inhibitory effect on cHgDFR production. After 90 min. addition of 30 and 3 μg/ml -005 leads to a decrease of 32 95 and 34 95 in the production of CGDFR (table 9). Similar results are observed in independent experiments using different batches of -005.

Ніякого інгібіторного дії на продукцію ЦГДФР не спостерігається після додавання -003 (фігура 25Б, таблиця 9), -024 (фігура 25М, таблиця 9) або анти-КІ-Н (фігура 25А, таблиця 9).No inhibitory effect on the production of CGDFR is observed after the addition of -003 (Figure 25B, Table 9), -024 (Figure 25M, Table 9) or anti-KI-H (Figure 25A, Table 9).

На основі цих даних очікується, що -005 також інгібує синтез циклічної АДФ-рибози (ЦАДФР)Based on these data, it is expected that -005 also inhibits the synthesis of cyclic ADP-ribose (CADGFR)

З НАД". Інгібування синтезу ЦАДФР можна визначати відповідно до способу ВЕРХ, описаного вWith NAD". Inhibition of the synthesis of CADFR can be determined according to the HPLC method described in

Мипзвні еї аї., у. ВіоЇ. Снет. 275. 21566-21571 (2000).Mypzvni ei ai., u. Vio Snet 275. 21566-21571 (2000).

Таблиця 9Table 9

Продукція цГДФ-рибози в присутності СЮОЗ8-специфічних антитіл або анти-КІ Н дО ко 71777207 17777117991 | 108 | пл 6003 Ї77771711789977 | 77100 | 7717107. | 17107 005 | .ю.68 2 2 щЩщЩ| 66 2 2 щЩ | 98 2 2 щЩ | 102 лт024 | 77777789... |... ло | 104 | лоProduction of cGDF-ribose in the presence of SHUOZ8-specific antibodies or anti-KI N dO ko 71777207 17777117991 | 108 | pl 6003 Y77771711789977 | 77100 | 7717107. | 17107 005 | .ю.68 2 2 шЩЩЩЩ| 66 2 2 shЩ | 98 2 2 shsh | 102 lt024 | 77777789... |... lo | 104 | lol

Приклад 24Example 24

Порівняння -003 та -005 з Могрпозув антитілом 3079Comparison of -003 and -005 with Mogrpozuv antibody 3079

Антитіла -003 та -005 функціонально порівнюють із Могрпозу5 антитілом 3079 (ТН-3079).Antibodies -003 and -005 are functionally compared with Mogrpozu5 antibody 3079 (TN-3079).

Способи клонування та експресії Могрпо5уб5 антитіла 3079 описані в Прикладі 16. Способи проведення СОС описані в прикладі 6. Способи проведення АОСС описані в прикладі 5. Фігура 26А показує, що -003 та -005 ії ТН-3079 індукують СОС-опосередкований лізис трансфекованихMethods of cloning and expression of Mogrpo5ub5 antibody 3079 are described in Example 16. Methods of carrying out SOC are described in Example 6. Methods of conducting AOSS are described in Example 5. Figure 26A shows that -003 and -005 and TN-3079 induce SOC-mediated lysis of transfected

СО38-СНО клітин з подібними значеннями максимального лізису. При порівнянні величин ЕСбо, -005 антитіло виявляється кращим, ніж ТНЗО79, в індукції лізису СО38-СНО клітин, причомуСО38-СНО of cells with similar values of maximum lysis. When comparing the values of ESbo, -005, the antibody is better than TNZO79 in inducing the lysis of СО38-СНО cells, and

ЕсСбво у два рази нижче (див. таблицю 10).EsSbvo is two times lower (see table 10).

Фігура 26Б показує, що -005 перевершує ТН-3079 в індукції СОС-опосередкованого лізисуFigure 26B shows that -005 is superior to TN-3079 in inducing SOC-mediated lysis

Рацаї-Ііис клітин, причому максимальний лізис за допомогою -005 в 2-3-рази вище, ніж за допомогою ТН-3079. При порівнянні величин ЕСво антитіла -005 подібні із ТН-3079 в індукції лізису Бацаї-Ішс клітин (див. Таблицю 10). -003 не індукують значного СОС-опосередкованого лізису Бацаї-ІШс клітин.Ratsai-Iiis cells, and the maximum lysis with the help of -005 is 2-3 times higher than with the help of TN-3079. When comparing the ESvo values, antibodies -005 are similar to TN-3079 in inducing the lysis of Batsai-Ishs cells (see Table 10). -003 do not induce significant SOC-mediated lysis of Batsai-IShs cells.

Фігура 268 показує, що в цьому експерименті -005, -003 ї ТН-3079 опосередковують лізисFigure 268 shows that in this experiment -005, -003 and TN-3079 mediate lysis

ОБацаї клітин мішеней через АОСС. Ніякої різниці не виявлено в значеннях логарифма ЕсСбзо іOBatsai target cells through AOSS. No difference was found in the values of the logarithm of EsSbzo and

Зо максимального лізису (таблиця 11, п-5).From maximum lysis (table 11, p-5).

Таблиця 10Table 10

Максимальний лізис і значення ЕСзо для СОЗ8-специфічних антитіл у реакції СОС 71111110 снНо-СОЗвклини(пе2), | Оацйніосклітини(п-2).д 11111111 | ЕСвомкуимл | Звбмакс,лізису / ЕСвомку/мл | Обмакс,лізису::ЧThe maximum lysis and EC value for SOZ8-specific antibodies in the reaction of SOZ 71111110 snNo-SOZvclin (pe2), | Oatsynios cells (p-2).d 11111111 | ESvomkuiml | Zvbmax, lysis / ESvomku/ml | Obmax, lysis:: Ch

Таблиця 11Table 11

Максимальний лізис і значення ЕСхо для СОЗ8-специфічних антитіл у реакції СОС 77111111 | о9ЕСю | 5ТОіо9ЕСвю | Макс. лізис(9) | 570 макс, лізисуMaximum lysis and ECho values for SOC8-specific antibodies in the SOC reaction 77111111 | o9ESyu | 5TOio9ESvyu | Max. lysis(9) | 570 max, lysis

Іоотнзотю | 096 | оо | 7 438 | 120Iootnzotyu | 096 | oh | 7 438 | 120

Перелік послідовностейList of sequences

Антитіла проти СОЗ8 для лікування множинної мієломи «110» Септаб А/5 «120» Антитіло проти СОЗ8 для лікування множинної мієломи «1305 Р/18.МО «160» 34 «17О» Раїепіїп мегвіоп 3.2 «21051 «2115 321 10. «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «4005 1 чуасаскосаца сувессвасо бебасостьса обасобусве сбусацазуа свуаческсо 5 ексвсскако доЗсдацесса оросассясо зпобуоєссає ссоссосаєса усвуваассв 120 воваацессе ссвадкссеї двсесвеос зоскосанес сдсввавосоє досссоаеса 180 запессасса чсвоссччасе кодбасецає сесасбебся совесадсву ссбдсадсоє 340 чага кеси севоскасса ссуссвасво сасвабассЄ засосесвао чЕсСсСЯЧсСОоВе 300 доуассааує бадазаєсва а. за «21052 «2115 107 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «Аа» 2 Й дно ї1е бів Меб тв» бій бег Рко бе бек цез Бех Аза бек Узі у і 5 іо 15Antibodies against POP8 for the treatment of multiple myeloma "110" Septab A/5 "120" Antibody against POP8 for the treatment of multiple myeloma "1305 Р/18.MO "160" 34 "17O" Raiepiip megviop 3.2 "21051 "2115 321 10. "212 » ДНК «213» Ното зарієп5 «4005 1 чуасаскосаца сувессвасо бебасостьса обасобусве сбусацазуа свуаческсо 5 ексвсскако доЗсдацесса оросассясо зпобуоєссає ссоссосаєса усвуваассв 120 воваацессе ссвадкссеї двсесвеос зоскосанес сдсввавосоє досссоаеса 180 запессасса чсвоссччасе кодбасецає сесасбебся совесадсву ссбдсадсоє 340 чага кеси севоскасса ссуссвасво сасвабассЄ засосесвао чЕсСсСЯЧсСОоВе 300 доуассааує бадазаєсва а. for "21052 "2115 107 "212" Protein "213" Noto zariep5 "Aa" 2 Y dno i1e biv Meb tv" biy beg Rko be bek tsez Beh Aza bek Uzi u i 5 io 15

Авр ака уві Тих ї18 Три Суб йху Аїа Чек с12 біУ хів бех Бех Тр 45 30 це Аза Тхротух 012 Оіп був Ро 015 цу Аз рго Пув Вех цей їїа г) 45 тук Аіа а1із Бек бБеє рей бій Зах біу Чаї рко бах ха це бак сту ; БВ 55 оAvr aka uv Tih i18 Three Sub yhu Aia Chek s12 biU hiv beh Beh Tr 45 30 ce Aza Throtukh 012 Oip was Ro 015 tsu Az rgo Puv Veh this ijea d) 45 tuk Aia a1iz Bek bBeye rey biy Zah biu Chai rko bach ha ce bak stu ; BV 55 o

Бек ЗІу Бех сіу Тпх Анр пе Тих ей ТІ Ї18 бек Бех пецч б1а роBek ZIu Beh siu Tph Anr pe Tyh ey TI Y18 bek Beh pech b1a ro

Зі Мер Рпе АТа Тр Тух Тух Сув бій бів Тух Авп бек Тух Рго Акч 85 50 95 тТвх Ра біу біл біу Тпк був уаї сім Т18, бує 20 100 505 «2105 3 «2О5 11Z Mer Rpe ATa Tr Tukh Tukh Suv bij biv Tukh Avp bek Tukh Rgo Akch 85 50 95 tTvh Ra biu biu biu Tpk was wai sim T18, buye 20 100 505 "2105 3 "2О5 11

«212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 З"212" Protein "213" Noto zariep5 "4005 Z

АкчЧ Аїа Бек бів З1у т16 бек бек тр ей ДІВ ї 5 10 «2105» 4 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 4 діа Аза Бех Бек Пец бів Бек м 5 «21055 «21159 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 5AkchCh Aia Bek biv Z1u t16 bek bek trey DIV y 5 10 "2105" 4 "21157 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 4 dia Aza Beh Bek Petz biv Bek m 5 "21055 "21159 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005 5

Сіа іп Тух Ан Бег Тух РКО Ак ТВх ну 5 «210556 «2115» 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 6 садусссадс сецсцовасс сеусосбовоа сеовадаває ссдддсоссс десувадасеSia ip Tukh An Beg Tukh RKO Ak TVh nu 5 "210556 "2115" 366 "212" DNA "213" Noto zariep5 "400" 6 sadusssads sessscovass seusosbovoa seovadavaye ssdddsosss desuvadase

БО сосечсавує сксскоазчауу сасосєссвує адсбасосоє Ксадеососує дсдасавуас 120 сокцдасаат часссовуєд забсодавує десасосссе Єсоссоосає восавастсе 180 | І І | | І чсасадвавс Сбссадозовя адссвсаасЕ ассдсодасв аасосводая сасацоссве 40 абасасскоа дозшоессвпач абосувзосвс всвуссястає абсаохвене дапачасувх зу асадсвоасае скоЧКосеКЕ ковоскасвод дуссауочаа сессоукове сусскесксвBO soseksavue sksskoazchauu sasosessvue adsbasosoye Xadeososuye dsdasavouas 120 sokcdasaat chasssovyed zabsodavye desasossse Yesossoosae vosavastse 180 | And And | | And chsasadvavs Sbssadozovya adssvsaasE assdsodasv aasosvodaya sasatsossve 40 abasasskoa dozshoesssvpach orsuvzosvs vsvussyastae absaokhvene dapachasuvh zu asadsvoasae skoChKoseKE kovoskasvod dussauochaa sessoukove susskesksv

ЗОZO

Ччоеосопо 356 «2105 7 «2115 122 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 7 тп уаї бі пе) уаї ЗІ» Бак бі Аза біб Уві бує був ВКОо ОБу Бех ї 5 10 15Chchoeosopo 356 "2105 7 "2115 122 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 7 tp uai bi pe) uai ZI" Bak bi Aza bib Uvi buye was VKOo OBu Beh yi 5 10 15

Щех Уаї був Чаї Бек Суп бу діа бет С1у П1у тк Ра бах Бех тТух 0 25 30Shcheh Uai was Chai Bek Sup bu dia bet S1u P1u tk Ra bach Beh tTuh 0 25 30

А1а ББа беу Тур уаї дтЯ сій Аза Ро Ш1у піп бО1у ем бів Тхр Меє 35 40 25 сіу дкч Уаї їі Руто Ріє цей щіу її Аіз дей бек Атя біп Був ВВ 50 55 50A1a BBa beu Tour uai dtYa siy Aza Ro Sh1u pip bO1u em biv Thr Mee 35 40 25 siu dkch Uai ii Ruto Rie this shiu her Aiz dey bek Atya bip Buv VV 50 55 50

Зіп бїу ка таї Та тів Тйх Аіа Авр бує Бек ТНК Чег тв Аїв тує 55 70 75 80Zip biu ka tai Ta tiv Tyh Aia Avr buye Bek TNK Cheg tv Aiv tuye 55 70 75 80

Мес двр тей бех Бех рез ака Бех 0ій дер Тих Аза Уаї Тук Тук Суя 85 за 55Mes dvr tey beh Beh rez aka Beh 0iy der Tyh Aza Uai Tuk Tuk Suya 85 for 55

Аіза аку Авр о Авр І1їе АтТа Віа цез б1і1у вхо Рре Авр Тук Ткв Зіу 51 109 105 10Aiza aku Avr o Avr I1ie AtTa Via cez b1i1u vho Rre Avr Tuk Tkw Ziu 51 109 105 10

Зіу Тпх Без узї Тож уаї бах ЧЗех Аза бек 115 20 «2105» 8 «2115 5 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 8Ziu Tph Without Uzi Toh wai bah ChZeh Aza bek 115 20 "2105" 8 "2115 5 "212" Protein "213" Noto zaryep5 "400" 8

Зех Тух Аіа Ра бах ї 6 «2105» 9 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 9Zeh Tukh Aia Ra bah yi 6 "2105" 9 "211517 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005" 9

Атхя Уаї її ро Ре Пец сіу хзе діа деп бек А1їа 915 був Ре біл х 5 хо 15 оіуУ «2105» 10 «211511 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 10 «Авр Авр Ії Аза дів пем Зі Ро Бвпе АЮ Туг «2105 11 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 11 аваїсосуї Суасасачес Босоадуюсвясо скосу сессауаоаде йаувассвоо сескосссяса заосовавсв зазсассаче адссасєкад сосяуквося асадзавосе 129 усовоцеко совоспсессї сахстаєдає зозеєссваса додссвосяу сассссанисо тво зуссесваку дсассочусе созчасаоас сбсвесосса ссавсаусач осад 240 чзззаїсебо сазебсасєса сбоссадово собадсавоб чдосесосова укссодосва 300 чачассазоач садаваєсав а 331 «-2105 12 -2115107 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 12 сьо Іте уві рей ТіПх біп бек Бко Аїа Тік пей бек Пец Бех рхо Фу 1 5 їй 15 бі: аку Аїв Тв без беж Сув Аку АтТа бек сіб бе; уз бек Зак ТукAthya Uai her ro Re Pec siu hze dia dep bek A1ia 915 was Re bil x 5 ho 15 oiuU "2105" 10 "211511 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 10 "Avr Avr Ii Aza div pem Zi Ro Bvpe АЮ Туг «2105 11 «2115 321 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 11 аваїсосуї Суасасачес Босоадуюсвясо скосу сессауаоаде йаувассвоо сескосссяса заосовавсв зазсассаче адссасєкад сосяуквося асадзавосе 129 усовоцеко совоспсессї сахстаєдає зозеєссваса додссвосяу сассссанисо тво зуссесваку дсассочусе созчасаоас сбсвесосса ссавсаусач осад 240 чзззаїсебо сазебсасєса sbossadovo sobadsaob chdosesosova ukssodosva 300 chachassazoach sadavaesav a 331 "-2105 12 -2115107 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005 12 syo Ite uv rei TiPh bip bek Bko Aia Tik pei bek Petz Beh rho Fu 1 5 ila 15 bi: aku Aiv Tv bez bej Suv Aku AtTa bek sib be; tight end Zach Took

КІ 45 30KI 45 30

Бей Аїа Тур отук ЗІБ біп пузв Ро фу Зіп ліз Рко аку вес без Ії118 35 40 45Bei Aia Tur otuk ZIB bip puzv Ro fu Zip liz Rko aku ves without Ii118 35 40 45

Тух Авр Аза Бек Ан дхо А1ія Твх О1у І18 РКО Ата АкЯ Різ Нею Ф1У 56 55 воTuh Avr Aza Bek An dho A1iya Tvh O1u I18 RKO Ata AkYA Riz Neyu F1U 56 55 vo

Бах Сіу бех біу так Анр рпе Тнх Бец Тихе Іі бех ВЗек Печ бій Рко 55 9 -5 во сі др впе Аза уві ТУХ ТУХ Су С1п бів Аку бек вза Тв РКО Рхо 85 з 85Bah Siu beh biu tak Anr rpe Tnh Bec Tyche Ii beh Vzek Pech bij Rko 55 9 -5 vo si dr vpe Aza in TUK TUK Su S1p biv Aku bek vza Tv RKO Rho 85 of 85

Тпх вне біу біп п01у тах цув Уві іч ТтТе Іїдеа 00 505 «-2105 13 «2115 11 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 13Tph vne biu biu p01u tah tsuv Uvi ich TtTe Iidea 00 505 "-2105 13 "2115 11 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005 13

Аку Аза дах бів бех чаї Вес Зах Тух без Аза ї 5 30 «-2105» 14 -21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 14Aku Aza dah biv beh chai Ves Zah Tukh bez Aza y 5 30 "-2105" 14 -21157 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005" 14

Ав» діа бег деп Ак Аза тах ї 5Av» dia beg dep Ak Aza tah i 5

«2105 15 «2115 10 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 15 сіп одіз вах Зегодеп отр о БЕО Рко Тахо РНе 1 5 То «210516 «2115 372 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «4005» 16 чайчсасачо гЧЕкедавке счадчааоое Есоосасацє сечссочуєе ссбоздавьо. 50"2105 15 "2115 10 "212" Protein "213" Noto zaryep5 "4005" 15 sip odiz vah Zegodep otr o BEO Rko Taho RNe 1 5 To "210516 "2115 372 "212" DNA "213" Noto zaryep5 "4005" 16 chaychsasacho gCHEkedavke schadchaaooe Esoosasacie sechssochuye ssbozdavyo. 50

Ксабуєшсво бебсбодчакс сассссваве воосксуоса саозосодує осасовозеоє 120 ссадучаауу Зуссучачся довессацек «Екеусцаса яко Ечасоо сасасаскас 189 зчзсачассосая сазадоссся чссовссвио ссовувовов ассссавойа засоссасвє 240 скусаваєдв асацостово воссуачевс всядссоцває абссосуєяс чааазсаєває 300 акссососовс ссчдацяссо сзсоссвсаЯво Сассудазос аоодвасосї зууссассуо 360Ксабуєшсво бебсбодчакс сассссваве воосксуоса саозосодує осасовозеоє 120 ссадучаауу Зуссучачся довессацек «Екеусцаса яко Ечасоо сасасаскас 189 зчзсачассосая сазадоссся чссовссвио ссовувовов ассссавойа засоссасвє 240 скусаваєдв асацостово воссуачевс всядссоцває абссосуєяс чааазсаєває 300 акссососовс ссчдацяссо сзсоссвсаЯво Сассудазос аоодвасосї зууссассуо 360

Есоєсвассє со 472 «210517 15. «2115 124 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 17 сіл уяї бій беш ем 01 Зех З1у біу Зіу Шео уві Зіп охо О1іУу ЯЛУ ї 5 10 15Esoyesvassye so 472 "210517 15. "2115 124 "212" Belok "213" Noto zariep5 "400" 17 sel uyai biy besh em 01 Zeh Z1u biu Ziu Sheo u Zip oho O1iUu YaLU i 5 10 15

Яєт йпез вхо пед беї Сув Аза Уві Зег б1уУ Ріє ТП Ре АвпоЗек РеYaet ypez vho ped bei Suv Aza Uvi Zeg b1uU Riye TP Re AvpoZek Re

Кт, 75 30Kt, 75 30

Віа Меї баг Тсв уаїв Ага бій Аза ро Зіу Був О1У Пец 01 Тув Уві.Via Mei bag Tsv waiiv Aga bij Aza ro Ziu Buv O1U Pec 01 Tuv Uvi.

Яск АЛа Ії бек біу Бех Сіу 01у 91у Тлх Тух Тух діа Авр Бех УаїYask Ala Ii bek biu Beh Siu 01u 91u Tlh Tukh Tukh dia Avr Beh Uai

БО цув Ф1іу Аку Бре Тр ї1іе дек Аку АвроАвп бек пув Аяп о тТну дей о тук 85 70 75 85 бе) біп Меб дво Зек бе Ага Аїв біз Авр їх віз Уаії Тух рве СузBO tsuv F1iu Aku Bre Tr i1ie dec Aku AvroAvp bek puv Ayap o tTnu dey o tuk 85 70 75 85 be) bip Meb dvo Zek be Aga Aiv biz Avr ih vis Uaii Tukh rve Suz

85 30 8585 30 85

А1а пу Ар оБув Іі реп Тхр Ре 01у бій рхо Уві Рів Авр о Тух ТЕр 100 105 110 о1іУу біз оту тих Беб уаї тТВу уві бех ех Аза бек й 120 «210518 «2115 5 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 18A1a pu Ar oBuv Ii rep Thr Re 01u bij rho Uvi Riv Avr o Tukh TER 100 105 110 o1iUu biz otu tich Beb uai tTVu uv beh eh Aza bek y 120 "210518 "2115 5 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400 » 18

Чек БВйе діа Меб БЕК ї 5 «2105» 19 «211517 «2 х 2» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 19Chek BVye dia Meb BEK i 5 "2105" 19 "211517 "2 x 2" Protein "213" Noto zariep5 "400" 19

Аїа її баг О1у бВех піу 201у З1у Тих тТух Тух діа бер Бек тв Був 1 5 10 ! вуж «210» 20 «2115 13 «212» Білок «213» Ното зарієп5 -400;2520Aia her bag O1u bVeh piu 201u Z1u Tyh tTuh Tuh dia ber Bek tv Buv 1 5 10 ! Snake "210" 20 "2115 13 "212" Squirrel "213" Noto zaryep5 -400;2520

Аво мув ї1і8 пе Тер вве біу 911 Рго Уаї Бпе АвротТує 1 5 10 «2105» 21 «2115» 321 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 21Avo muv i1i8 pe Ter vve biu 911 Rgo Uai Bpe AvrotTue 1 5 10 "2105" 21 "2115" 321 "212" DNA "213" Noto zariep5 "400" 21

Заавссусеє соасасвубо есапесасо сбзссбссаК сосесеводуда ааздадеосасоZaavssusee soasasvubo esapesaso sbzssbssaK sosesevoduda aazdadeosaso

Бо скосесбдса бозссваїса засеуєтаче зостасссад сссоасвсса всачадаєсоє. 125 счосацшеко сесудчеоссоб сасоквецає зсевссвзаса додессеесоу сабсссадес 180 аачЕсовост псачедочео соусасацас бссастссов совассвусає зссвчачаве 40 чавовЕсксту садесваєка споссвусвя сухаусавнос ууссовессає сессодедва 320 чЧчеудвссзачца кгазачавсай а 321 «2105» 22 «2115 107 «212» Білок 00 «213» Ното 5арієпоBecause skosesbdsa bozssvaisa zaseuetache zostasssad sssoasvssa vsachadayesoye. 125 счосацшеко сесудчеоссоб сасоквецає зсевссвзаса додессеесоу сабсссадес 180 аачЕсовост псачедочео соусасацас бссастссов совассвусає зссвчачаве 40 чавовЕсксту садесваєка споссвусвя сухаусавнос ууссовессає сессодедва 320 чЧчеудвссзачца кгазачавсай а 321 «2105» 22 «2115 107 «212» Білок 00 «213» Ното 5арієпо

«400» 22 піз їїє чаї без ТВ Оті бес Рко Аза Тпх без Яах во Бах рко 01Ж ії 5 10 15 біз жа дів ТВ: цей бет Сув йо діва бек бій Зехк Уві Бек бех Тут 20 25 30 фец діа Тхр Тух біп бів був хо Ф1у бів Аза Рко б1у пей йеч 18 35 40 45"400" 22 piz iye chai bez TV Oti bes Rko Aza Tph bez Yaah wo Bach rko 01Ж ii 5 10 15 biz zha div TV: this bet Suv yo diva bek bij Zehk Uvi Bek beh Tut 20 25 30 fec dia Thr Tuh bip biv was ho F1u biv Aza Rko b1u pey yech 18 35 40 45

Тук Авр о Аїв бех дво одку діа Бей О1уУ тів РЖО Аза Ак Бве бат О1У 50: 53 5ОTuk Avr o Aiv beh dvo odku dia Bey O1uU tiv RZHO Aza Ak Bve bat O1U 50: 53 5O

Зак б1іу ех 01у Мк Авр оре ТБх ей Тих 116 Беж бек ОБи ФМ РКО 55 7а 5 80 із дер Рпе Аіїа уві Туг Тук Сув бів Біп АтЯ бек дя То ро рей 85 що тик Рпе пйіУу біу 01у ТВж був уаі сії Хіт цу 300 195 «210» 23 «211511 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 23 дку дія бек Сів бек о уаї бек беж Тух ей Аза ї 5 10 «210» 24 «21157 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 24Zak b1iu eh 01u Mk Avr ore TBh ey Tykh 116 Bej bek OBy FM RKO 55 7a 5 80 iz der Rpe Aiia uv Tug Tuk Suv biv Bip AtYa bek dya To ro rey 85 that tik Rpe pyiUu biu 01u TVzh was uai sii Hit tsu 300 195 "210" 23 "211511 "212" Squirrel "213" Noto zariep5 "400" 23 dku dia bek Siv bek o wai bek beige Tukh ey Aza y 5 10 "210" 24 "21157 "212" Squirrel "213" Noto zariep5 "400" 24

Авр Аза бех Аап АхЯ Аївн бах ів З з «210» 25 «21159 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 25 "й 15 Агу дек АБИ ТкроРго печ так і 5 «210» 26 «2115» 366 «212» ДНК «213» Ното зарієп5 «400» 26 басусссвоє Боусясавсо росдадсвузу убуазазаус сосусудчачес ссбдзачаєсAvr Aza beh Aap AhYa Ayivn bah iv Z z "210" 25 "21159 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 25 "y 15 Agu dec ABY TkroRgo pech tak i 5 "210" 26 "2115" 366 "212 » DNA "213" Noto zariep5 "400" 26 basusssvoye Bousiasavso rosdadsvuzu ubuazazaus sosusudchaches ssbdzachayes

БоFor

Есссдсвасо деБскорака садссосеесе авсбасьдав Кедоссдаче дооосацаєу 120 сседоцаава чсебузавку часчсоваєс всобаєосте азсдассссда бассасакаєй о ассссуєссє Сссаводеса дусовоссбо єсадссодаса аусссассву сассдсскає ссдсаусоза дсвчусосава чпоассоксясас асовосавеає вебасєукУус дадасвкока 390 чечеосччаї сососкасся чсасессузо сбсбодеусо ядсцосассо дассвакево 359Есссдсвасо деБскорака садссосеесе авсбасьдав Кедоссдаче дооосацаєу 120 сседоцаава чсебузавку часчсоваєс всобаєосте азсдассссда бассасакаєй о ассссуєссє Сссаводеса дусовоссбо єсадссодаса аусссассву сассдсскає ссдсаусоза дсвчусосава чпоассоксясас асовосавеає вебасєукУус дадасвкока 390 чечеосччаї сососкасся чсасессузо сбсбодеусо ядсцосассо дассвакево 359

Кесоа 366 «2105» 27 «2115 122 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005 27 бі чаї іп пвеий у сій бех Фу дів біз уаї був Пув хо зу 1 ! 10 15 дах реч Був те Бех Сув Мув О1у Бек сіу Тук бех РНе бек депо тТух є 45 30Kesoa 366 "2105" 27 "2115 122 "212" Squirrel "213" Noto zariep5 "4005 27 bi chai ip pveiy in siy beh Fu div biz uai was Puv ho zu 1 ! 10 15 dach rech Buv te Beh Suv Muv O1u Bek siu Tuk beh RNe bek depot tTuh is 45 30

Тер ї16 ву ТтТкр уаії джу сіб Мек рго 01У бує 015 Бей бій тгр Мве і 40 45Ter i16 vu TtTkr uaii ju sib Mek rgo 01U buye 015 Bei bij tgr Mve i 40 45

О1У ї18 те Тут Рхо нів Авр Бех Аво Аза Ак Тус бек Рко Чек рив 5о 55 50O1U i18 te Tut Rho niv Avr Beh Avo Aza Ak Tus bek Rko Chek riv 5o 55 50

Зіп біу біп Уа) Твх Ре бек Аза Аєр цу бБег І1е бек Тк Аза ту 65 70 78 80 бе біп Тр бех йек Пе Цув А1а бех дер Таж Аза Мей тує тТук СувZip biu bip Ua) Tvh Re bek Aza Ayer tsu bBeg I1e bek Tk Aza tu 65 70 78 80 be beep Tr beh yek Pe Tsuv A1a beh der Taj Aza Mei tuye tTuk Suv

Вя 80 55Vya 80 55

Аїа дка Нів уві Шіу Тхо сіу бек АхаЯа Тук Ткр оТух Ре Авр Шеч Тур 100 105 в) су Ак бСіу тлх без Уаї Так уаї Чек 8Е 115 120 «210» 28 «2О» 5 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 28Aia dka Niv in Shiu Tho siu bek AkhaYa Tuk Tkr oTuh Re Avr Shech Tur 100 105 c) su Ak bSiu tlh bez Uai Tak uai Chek 8E 115 120 "210" 28 "2O" 5 "212" Protein "213" Noto zariep5 " 400" 28

АвпоТук ТЕр Ії З1у. (4 5 «210» 29 «211517 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 29AvpoTuk TER Ii Z1u. (4 5 "210" 29 "211517 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 29

К3Зе Т3е Тух Бто Нів Авр Бех Ав Азів Ат Тук бах ро бах Ре сів їі 5 19 15 піт «210» 30 «2115 13K3Ze T3e Tukh Bto Niv Avr Beh Av Aziv At Tuk bah ro bah Re siv ii 5 19 15 pit "210" 30 "2115 13

«212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 30"212" Squirrel "213" Noto zariep5 "400" 30

Нів уЩді біу Тхр піу Бех Ат Тук Тр о тук Ріа Аво бец 1 5 19 «2105» 31 «2115» З00 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» З1Niv uShdi biu Thr piu Beh At Tuk Tr o tuk Ria Avo bets 1 5 19 "2105" 31 "2115" Z00 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" Z1

Мех Аїа Аєп Сув біз РБе бек Рхо уві Щек б1у Ар цує рго Сув Сув ї 5 10 | КІMeh Aia Ayep Suv biz RBe bek Rho in Chek b1u Ar tsue rgo Suv Suv i 5 10 | CI

Ат Вей бек Ат Аху Аза б1іп Пец Сув Пем З1у Уаї бек їіє цей Уві ей ї1і6 без У8і Уаі Уві ред лів уві Уві Уві Рко дка Тв Ак бій чо 45 бій Тер ек щу Бу біу тТвК Твх ому АкУ Ра веб Ота тТнх уд Бей ліз Аху Суз уві пузв Тук Тйх 014 Хієе Мів Ро б) Ме Ах Нів уві 65 70 шо 75 во дер Сув сів бек Уві Тер Аво ліа Ре був Сіу Аїа РП Ії бак Був 85 90 з5At Wei bek At Ahu Aza b1ip Pec Suv Pem Z1u Uai bek iiye this Uvi ey i1i6 without Uvi Uvi Rko dka Tv Ak bii cho 45 bii Ter ek schu Bu biu tTvK Tvh omu AkU Ra web Ota tTnh ud Bey liz Ahu Suz uv puzv Tuk Tykh 014 Hiee Miv Ro b) Me Ah Niv vu 65 70 sho 75 vo der Suv siv bek Uvi Ter Avo lia Re was Siu Aia RP Ii bak Buv 85 90 z5

Нів хо Сув Ап Т1є Тр с1ш 018 Ар Тух 01 Вко Бей Мей був ви лов | іа5 ІЙNiv ho Suv Ap T1e Tr s1sh 018 Ar Tukh 01 Vko Bay Mei was you lov | ia5 IJ

Зфіу Тк бій тТбх Уві реко Сує Аво опув Х1е пез пес Тр оЗек Акоа ї18 115 20 125 пує Ар цей діва нів бів Ре ТвВк бій чаї 01 Ако Авр МеєЄ Ра оте 130 135 140Zfiu Tk bij tTbh Uvi reko Suye Avo opuv X1e pes Tr ozek Akoa y18 115 20 125 puye Ar this divan niv biv Re TvVk bij chai 01 Ako Avr MeeE Ra ote 130 135 140

Бей біз Авр отвкК Пец цем 0іу Тух о йем діа дер дер реп тк Тур сСув 745 5 155 160Bey biz Avr otvkK Pec cem 0iu Tukh o yem dia der der rep tk Tur sSuv 745 5 155 160

О1у 910 РПе АВи тах Бек пув ІЗе Авп о Тух бій бек Су Ро Авр тТкр 165 | то 178О1у 910 РПе АВы тах Бек пув ИЗе Авп о Tух бий бек Su Ro Avr tТkr 165 | then 178

Акч цув Ар оСув бек Аяп баб Рко Ма) Бех Уві Бра тор цув ТЕ Маї їв 185 350 бах Ах Ахт Рре ЗІ бі» Аза Аза Су Авр уві уві Вів узі Меб пев 195 І 205Akch tsuv Ar oSuv bek Ayap bab Rko Ma) Beh Uvi Bra tor tsuv TE Mai yiv 185 350 bah Ah Aht Rre ZI bi» Aza Aza Su Avr uv uv Viv uzi Meb pev 195 I 205

Ай Зіу Бек Акт бес ру їі Рпе Авр Шу Ави бах тик рве п1уУ бек 219 о а18 220Ai Ziu Bek Akt bes ru ii Rpe Avr Shu Avy bah tik rve p1uU bek 219 o a18 220

Уві Я уаї Ні Авп пес Зів рго 010 був уві б1п тах без біз лів. 225 239 835 240Uvi Ya uai Ni Avp pes Ziv rgo 010 was in b1p tah without biz left. 225,239,835,240

Тхр Уаі її нНіз З1у бі Аху 310 Авробех Ата Авр ей Сув 01й Ар ва5 250 855Thr Uai her nNiz Z1u bi Ahu 310 Avrobeh Ata Avr ey Suv 01y Ar va5 250 855

Ето тик ІЗе був йїй Пез Зі бек Тіз її бек бує Аху АяЗ тїз їй 250 255 270 тпе дек Сув Пув АВ Ії Тук дхЯ РХо Ар пув Ре пев бій Сув Уві 275 зво 255Eto tyk IZe was her Pez Zi bek Tiz her bek buye Ahu AyaZ tiz her 250 255 270 tpe dec Suv Puv AV Ii Tuk dhYa RHo Ar puv Re pev bij Suv Uvi 275 zvo 255

Був Ав орхо біз Ар бег Бех Сув Так о бех Зі ї1в 290 295 305 «-2105 32 -2115 З00 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «4005» 32Was Av orho biz Ar beg Beh Suv Tak o beh Zi y1v 290 295 305 "-2105 32 -2115 З00 "212" Protein "213" Noto zariep5 "4005" 32

Мес Аза Авп оСув біз Рбе Бех Рко уві бах Зіу Авр Був рко Сув Сув ї 5 10 15Mes Aza Avp oSuv biz Rbe Beh Rko uv bach Ziu Avr Buv rko Suv Suv y 5 10 15

Зжя бемх век Аа Ака Аза сів пез Суя рез зу уаії бек 15 без уві 28 25 ЗОZzhya bemh vek Aa Aka Aza siv pez Suya rez zu uaii bek 15 without uv 28 25 ZO

Та 16 без Уві Уві Уві бец Аза Уві Уаії Уаі рго дка Тхр Ака сій сій Тстрбех с1у хо З1Уу Так Так був Ах Бе хо и ТЕ Уаї пем ва 5 діа Аху Су Уві був Тух ТИЖ О1ч їіе Нів Рко 01 Меб АкФ бів Уві ча 75 60Ta 16 without Uvi Uvi Uvi bec Aza Uvi Uaii Uai rgo dka Thr Aka siy siy Tstrbeh s1u ho Z1Uu Tak Tak was Ah Be ho i TE Uai pem wa 5 dia Ahu Su Uvi was Tuh WEEK O1h iie Niv Rko 01 Meb AkF biv Uvi cha 75 60

Ачр и Су Сіп бек Уві Тхр Авр Аїа РБе пуя О1У Аза Ре її бе був 85 80 55Achr and Su Sip bek Uvi Thr Avr Aia RBe puya O1U Aza Re her be was 85 80 55

Нів ро Суз Аа Ї1 ТЕ Зі З2и Аво отТух іп рРХО Пе) Мей пув МеВ 100 105; 130Niv ro Suz Aa Y1 TE Z Z2y Avo otTuh ip rRHO Pe) May puv MeV 100 105; 130

Зіу Тіт сіб Ту Уві рхо Сув бай був її пе рез Тер Бех ду ї3а т118 135 25Ziu Tit sib Tu Uvi rho Suv bai was her through Ter Beh du y3a t118 135 25

Був Ано без дія нів бій рве Тих бій уаї бій Аху дар Ме вав о тВу 130 135 449 цем Зі АБр тн Те пес 0іУу Тук пе дів Авр о авв ей тк Тхр о Сув 145 150 55 боThere was Ano without actions, bij rve Tih bij wai bij Ahu dar Me vav o tVu 130 135 449 cem Z ABr tn Te pes 0iUu Tuk pe div Avr o avv ey tk Thr o Suv 145 150 55 bo

О1у З1ч Рне дай ТВ бех ую тів деп отТук бів Вех Сун Рко Двю тТхр 65 170 75O1u Z1h Rne give TV beh uyu tiv dep otTuk biv Veh Sun Rko Two tThr 65 170 75

Акч цу АвроСуз Бек диво Ав руб Уві бак уаї ве Тїхр Був тп ук 180 155 90 бак Ак Аку Ре діа 910 Аза Аза Сув Авр Уаії уаї Вів уаії Ме Без 195 209 205Akch tsu AvroSuz Bek divo Av rub Uvi bak wai ve Tihr Buv tp uk 180 155 90 bak Ak Aku Re dia 910 Aza Aza Suv Avr Uaii uai Viv uaii Me Bez 195 209 205

Аяп б1іу Зех Аху Бек пул 118 Біе Аве Був Авп бек ТВх Ре с1Уу бег 210 5 220 уст аа уаї нія Ава пев їй Вхо О1х бЗуз уві 010 ів без 1 дів 325 330 235 240 тер уаі ї1в ні С1у біу дхЯ 010 йвр бак АК "Аве їво Сув біп Авур 545 250 255Ayap b1iu Zeh Ahu Bek pool 118 Bie Ave Buv Avp bek TVh Re s1Uu beg 210 5 220 ust aa wai niya Ava pev her Vho O1h bZuz in 010 iv without 1 div 325 330 235 240 ter uai y1v ni S1u biu dhYa 010 yvr bak AK "Ave ivo Suv bip Avur 545 250 255

Бко Тр їіє ув З1іч Пез біз ет їі Із Бех ув Ахб дво ІЗе бій 360 265 270Bko Tr iiye uv Z1ich Pez biz et ii Iz Beh uv Ahb dvo Ize bij 360 265 270

Віз Бех Су був Аза о ї1їв тує Аму рго бр цу Рпе реч біл Суя Уувї 875 280 285Wiz Beh Su was Aza o yi1iv tuye Amu rgo br tsu Rpe rech bil Suya Uuvvi 875 280 285

Був Аша Вхо сій Ано бес бех Сув їТВк бек бів тів 290 295 300 «210» 33 «2115» З00 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 33 ЙThere was Asha Vho sii Ano bes beh Suv yTVk bek biv tiv 290 295 300 "210" 33 "2115" Z00 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 33 Y

Мес Аза АвБп Сув Зій Рче бех Рхо Чаї Бех ОКУ Авр Гук Бко Сув був ї 5 19 15Mes Aza AvBp Suv Ziy Rche beh Rho Chai Beh OKU Avr Guk Bko Suv was i 5 19 15

Ага Пец бек дк АК Аза бів рей Сув Бех сі Уді бак жів реч Ууді 29 25 30Aha Petz bek dk AK Aza biv rey Suv Beh si Udi bak lived thing Udi 29 25 30

Без її Пец уаї уві уаї Без діа уві узі уві рко АкЯ тую Ах бій 48Without her Pecs uai uai Without dia uzi u rko AkYa tuyu Ah biy 48

ССіп тур бек б1іу рхо біу Твк Таб цув Аг впе бхо за Твх Уаї ем воSSip tur bek b1iu rho biu Twk Tab tsuv Ag vpe bho za Tvh Uai em vo

З1і3 Ахса Су уві цуз Тух Тих Зіз ї1їе пів рхо 15 Меб да нів увіZ1i3 Ahsa Su in tzuz Tukh Tikh Ziz i1ie half rho 15 Meb da niv in

55 70 75 о55 70 75 o

Авр Суя (115 Бех Уаї Тер Ар Ата Ріє Був біу діа Ріпа ї1є Бех Буя 85 50 35 нів рхо Сув дп ї1іе тах іч бій дя Тук бій Бо Пе Меб оїув Бей 100 185 ї1їа сіу тп б10 Ток оуаї хо був деп Був Ї3Зе Пец бе Тр бех дку ї1е 115 120 125 муз дар цей Аїів нія Бій Ра Тпх 1 чаї іп Ах Авр Мес ЕВе тн: 130 435. 140 вч СВ Ар ТВк рей пе 01У Туш цеу А1а дар др ез Тк Ткр Сув 145 | 180 їі55 60 бі бій вре Аяп тах бек пув ї18 Авц тТук іп бек Сув рРхо дор їхр 155 179 МAvr Suya (115 Beh Uai Ter Ar Ata Rie Buv biu dia Ripa i1e Beh Buya 85 50 35 niv rho Suv dp i1ie tah ich biy dya Tuk biy Bo Pe Meb oiuv Bey 100 185 i1ia siu tp b10 Tok ouai ho buly dep Buv Yi3Ze Pec be Tr beh dku i1e 115 120 125 muz dar this Aiiv niya Biy Ra Tph 1 chai ip Ah Avr Mes EVe tn: 130 435. 140 uch SV Ar TVk rey pe 01U Tush tseu A1a dar dr ez Tk Tkr Suv 145 | 180 ii55 60 bi bij vre Ayap tah bek puv i18 Avts tTuk ip bek Suv rRho dor ihr 155 179 M

АхУ Муз Авр о Сув бек Ап Авп о рхо Маї бек узі ре хр Був Три Уві 180 185 580AhU Mus Avr o Suv bek Ap Avp o rho Mai bek uzi re hr Buv Tri Uvi 180 185 580

Бех Ахч Аку ве Аїа 1 Ма Аїа Сув дер уві уві нів уаіїі Меб рей 195 290 205Beh Ahch Aku ve Aia 1 Ma Aia Suv der uv uv niv vaiii Meb rey 195 290 205

Авп біу Чек Акхя Бех цу їі Ра дар пув Ап бек ТНх вро б1у бек 819 215 220 ві бій Уві Нія Ав Ббес бій рко п2м мув уві бій Твх рей бі діа 225 230 835 249Avp biu Chek Akhya Beh tsu yii Ra dar puv Ap bek TNh vro b1u bek 819 215 220 vy biy Uvi Niya Av Bbes biy rko p2m muv vy biy Tvh rey bi dia 225 230 835 249

Ттр уві І18 нів 81у С1у АКЯ 1 дар дех АкаЧ Авр реч Сую бів дер 245 250 заTtr in I18 niv 81u S1u AKYA 1 dar deh AkaCh Avr rech Suyu biv der 245 250 for

Бхо Ту тів пув біз ем біз Бех ї3е ті бЗеї буз Ася Ап її АхФ 280 265 570Bho Tu tiv puv biz em biz Beh i3e ti bZei buz Asya Ap her AhF 280 265 570

Рьпа бех Суз Муз Ав о ї1їє Тук Аку Ро йвр був Ре Пеи біп Суя уві 275 280 285Rpa beh Suz Muz Av o i1ie Tuk Aku Ro yvr was Re Pey bip Suya in 275 280 285

Мув Аво Рхо 01 Авр Вес Бех Сую ТНж беж бі ї1ї8 255 00 «210» 34 5 «2115» З00 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 34Muv Avo Rho 01 Avr Ves Beh Suyu TNzh beige bi i1i8 255 00 "210" 34 5 "2115" Z00 "212" Protein "213" Noto zariep5 "400" 34

Ме Аїа Ап Сув Сі Бвпо бек хо уаі бер 01у Ввр о Мув Бо був Сув ї 5 зо 5Me Aia Ap Suv Si Bvpo bek ho uai ber 01u Vvr o Muv Bo was Suv i 5 zo 5

Ага їви Чех Ака ДК дів ай цей був баб пСтіу Уаї бек 318 ївуи чаї 80 25 30 пез хів сезш уаї Узі уУаї без Аба уаї уві Чаї Ехо АкЯ Тер Ах бій 35 49 45 бій Тхрек біу рхо з1іу Тік тик був Ах Ре руб Ода тах уд) аз 50 55 виAha yiv Cheh Aka DK div ay this was bab pStiu Uai bek 318 yvuy chai 80 25 30 pez khiv sezsh wai Uzi uUai without Aba wai in Chai Echo AkYa Ter Ah bij 35 49 45 bij Threk biu rho z1iu Tik tik was Ah Re rub Oda tah ud) az 50 55 you

Аз Ак Сун уві Пцув Тук Тих біз тів нія Бо бій Меб дес нія уві 65 То 75 80Az Ak Sun in Ptsuv Tuk Tyh biz tiv niya Bo bij Meb des niya in 65 To 75 80

Авр о Суз біп бек Уві Тхр дар Аза Ре пув ЯіУ Аїа Рпе хІї6 паж БувAvr o Suz beep bek Uvi Thr dar Aza Re puv YaiU Aia Rpe hIi6 page Buv

Нія Рго Сун дяп Її ТИЖ сіб Січ Ар оТух бів Бхо Пед Меб Був Бей що 195 Тео сіу ТНЕ біп Тих Уві Рго Сує Авюи був її Пец пвец Ткр бек Аху її 115 129 25 їуз йвр Пец Аїв Нів біп РБе Тих Зіп УВІ О1п Ак Авр Мей бе Те 535 135 140 пез піч Аво Тахо Бей пей б)іу Тух Бей Аза дО Авр обец тик ТкросСув 145 150 155 150 сіу Сів Рпе АбБл Тв бек Був тів Авд тух СІЙ Жек Сун Рхо Авр Тур 65 170 175Niya Rgo Sun dyap Her TYJ sib Sich Ar oTuh biv Bho Ped Meb Buv Bey that 195 Teo siu TNE bip Tyh Uvi Rgo Suye Avyuy was her Pec pvec Tkr bek Ahu her 115 129 25 yuuz yvr Pec Aiv Niv bip RBe Tyh Zip UVI O1p Ak Avr Mei be Te 535 135 140 pez pich Avo Taho Bey pey b)iu Tukh Bey Aza dO Avr obec tik TkrosSuv 145 150 155 150 siu Siv Rpe AbBl Tv bek Buv tiv Avd tuh SIY Zhek Sun Rho Avr Tur 65 170 175

Аку Буз Авр Сув Бех Авп Анни орто Уві Бех ах Ріє Тер зує Тис Уаї ї850 185 190 бек АкчЯ Агу Ре Ата сій Аза діва Суя Авр Уві уаї Нів Уаї Меб пев 300 2505Aku Buz Avr Suv Beh Avp Anna ortho Uvi Beh ah Rie Ter zue Tys Uai i850 185 190 bek AkchYa Agu Re Ata siy Aza diva Suya Avr Uvi uai Niv Uai Meb pev 300 2505

Ап Біу бек Аку бек пу ІЇ1ів Рпе дво Бу Аяп обех ТЕ Рпе піу бек о 215 РУТ узгі біз ува Ні дяп ем бів Рко ба пув Уві ста ТУ Бей біз дів 225 230 335 340 тТхр уаї Їїїв Нів бО3іу Зіу Ак5 біс Авр Бек Аку АБр Без Суз біп Авр 245 250 а55Ap Biu bek Aku bek pu IЙ1iv Rpe dvo Bu Ayap obeh TE Rpe piu bek o 215 RUT uzgi biz uva Ni dyap em biv Rko ba puv Uvista sta TU Bey biz div 225 230 335 340 tThr uai Yijeiv Niv bO3iu Ziu Ak5 bis Avr Bek Aku ABr Without Suz bip Avr 245 250 a55

Рхо ТВ 116 був 010 Пес бій Бек Ї18 ї1е Бех Був Аку АвпоЇїТе їв 260 365 270Rho TV 116 was 010 Pes bij Bek Y18 i1e Beh Was Aku AvpoYiTe ate 260 365 270

Ре Рпе Сув Пув Ап ої1їе Тук ойку рРко Анр пут Ре пей 9185 Сув уві 2178 380 285 ув Авп о Вхо 012 Авр бек бек Сув Тв Бех піз їі1в в 250 295 300Re Rpe Suv Puv Ap oi1ie Tuk oiku rRko Anr put Re pey 9185 Suv in 2178 380 285 uv Avp o Vho 012 Avr bek bek Suv Tv Beh piz ii1v in 250 295 300

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУFORMULA OF THE INVENTION 1. Антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, кодоване () нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з зЗЕО ІЮ МО: 1 та БЕО ІО МО: 6, відповідно; або (ї) нуклеїновими кислотами легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, які включають нуклеотидні послідовності в їх варіабельних областях згідно з БЕО ІЮО МО: 21 та 5ЕО ІЮО МО: 26, відповідно.1. An antibody that binds to human SOZ8, encoded by () human light chain and human heavy chain nucleic acids, which include nucleotide sequences in their variable regions according to ZEO IU MO: 1 and BEO IO MO: 6, respectively; or (i) human light chain and human heavy chain nucleic acids that include nucleotide sequences in their variable regions according to BEO IJU MO: 21 and 5EO IJU MO: 26, respectively. 2. Антитіло, що зв'язується з СЮОЗ8 людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, де варіабельна область легкого ланцюга включає Мі. СОКТ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 3, М СОК2 з послідовністю згідно з БЕО ІЮО МО: 4 та Мі СреЗ з послідовністю згідно з зЕО ІО МО: 5, і варіабельна область важкого ланцюга включає МН СОКТ з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮ МО: 8, МН СОК2 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 9 та МН СОН з послідовністю згідно з БЕО ІЮО МО: 10.2. An antibody that binds to the human SHOZ8, comprising the variable regions of the human light chain and the human heavy chain, where the variable region of the light chain includes Mi. SOCT with the sequence according to BEO IU MO: 3, M SOC2 with the sequence according to BEO IUO MO: 4 and Mi SreZ with the sequence according to zEO IU MO: 5, and the variable region of the heavy chain includes MN SOKT with the sequence according to 5EO IU MO : 8, МН СОК2 with the sequence according to ZEO IYU MO: 9 and МН SON with the sequence according to BEO IЮО МО: 10. 3. Антитіло за п. 2, яке включає Мі. область з амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО:3. Antibody according to claim 2, which includes Mi. the region with the amino acid sequence according to the ZEO IU MO: 2.2. 4. Антитіло за п. 2, яке включає Мі область, що має щонайменше приблизно 90 95, наприклад приблизно 95 95, ідентичності амінокислотної послідовності з послідовністю згідно з «ЕО ІЮ МО:4. An antibody according to claim 2, which includes an Mi region having at least about 90 95, for example about 95 95, amino acid sequence identity with the sequence according to "EO IU MO: 2.2. 5. Антитіло за п. 2, яке включає УН область з амінокислотною послідовністю згідно з 52ЕО І МО:5. Antibody according to claim 2, which includes the UN region with the amino acid sequence according to 52EO and MO: 7.7. 6. Антитіло за п. 2, яке включає МН область, що включає амінокислотну послідовність, яка охоплює область МН СОР1 - МН СОРЗ 5ЕО І МО: 7.6. Antibody according to claim 2, which includes the MN region, which includes the amino acid sequence that covers the region of MN SOR1 - MN SORZ 5EO I MO: 7. 7. Антитіло за п. 2, яке включає МН область, що має щонайменше приблизно 90 95, наприклад приблизно 95 95, ідентичності амінокислотної послідовності з послідовністю згідно з «ЕО ІЮ МО: 7 або з областю, що охоплює МН СОК1 - МН СОКЗ в 5ЕО І МО: 7.7. An antibody according to claim 2, which includes a MN region having at least about 90 95, for example about 95 95, amino acid sequence identity with the sequence according to "EO IU MO: 7 or with the region covering MN SOK1 - MN SOKZ in 5EO And MO: 7. 8. Антитіло за п. 2, яке включає МН область, що має 1-5, наприклад 1-3, амінокислотні заміщення, делеції або вставки в порівнянні з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 7 або з Ко) областю, що охоплює МН СОКІ1 - МН СОКЗ в 5ЕО ІЮО МО: 7.8. The antibody according to claim 2, which includes the MN region having 1-5, for example 1-3, amino acid substitutions, deletions or insertions compared to the sequence according to the ZEO IU MO: 7 or with the Ko) region covering the MN SOKI1 - MN SOCZ in 5EO IYUO MO: 7. 9. Антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає Мі. область, як визначено за п. 3, ії МН область, як визначено за п. 5.9. An antibody that binds to human SHUOZ38, which includes Mi. region, as defined by claim 3, and MN region, as defined by claim 5. 10. Антитіло, що зв'язується з СОЗ8 людини, що включає варіабельні області легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини, де варіабельна область легкого ланцюга включає Мі. СОКТ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 23, МІ СОКа2 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 24 та М СОМКЗ з послідовністю згідно з 5ЕО ІЮО МО: 25, і варіабельна область важкого ланцюга включає МН СОКТ з послідовністю згідно з БЕО ІЮ МО: 28, МН СОКЗ2 з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮО МО: 29 та МН СОКЕЗ з послідовністю згідно з ФЕО ІЮ МО: 30.10. An antibody that binds to human POP8, comprising the variable regions of a human light chain and a human heavy chain, wherein the variable region of the light chain includes Mi. SOCT with the sequence according to BEO IU MO: 23, MI SOKa2 with the sequence according to ZEO IU MO: 24 and M SOMKZ with the sequence according to 5EO IUO MO: 25, and the variable region of the heavy chain includes MN SOKT with the sequence according to BEO IU MO : 28, MN SOKZ2 with sequence according to ZEO IYUO MO: 29 and MN SOKEZ with sequence according to FEO IU MO: 30. 11. Антитіло за п. 10, яке включає Мі. область з амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22.11. Antibody according to claim 10, which includes Mi. region with the amino acid sequence according to ZEO IU MO: 22. 12. Антитіло за п. 10, яке включає Мі область, що має щонайменше приблизно 90 95, наприклад приблизно 95 95, ідентичності амінокислотної послідовності з послідовністю згідно з з«ЕО ІЮ МО:12. An antibody according to claim 10, which includes an Mi region having at least about 90 95, for example about 95 95, amino acid sequence identity with the sequence according to "EO IU MO: 22.22. 13. Антитіло за п. 10, яке включає МН область з амінокислотною послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27.13. Antibody according to claim 10, which includes the MN region with the amino acid sequence according to ZEO IU MO: 27. 14. Антитіло за п. 10, яке включає МН область, що включає амінокислотну послідовність, яка охоплює область МН СОР1 - МН СОР з 5ЕО ІЮ МО: 27.14. The antibody according to claim 10, which includes the MN region, which includes an amino acid sequence that covers the region of MN COP1 - MN COP with 5EO IU MO: 27. 15. Антитіло за п. 10, що зв'язується з СОЗ8 людини, яке включає МН область, що має щонайменше приблизно 90 95, наприклад приблизно 95 95, ідентичності амінокислотної БО послідовності з послідовністю згідно з зЗЕО ІЮ МО: 27 або з областю, що охоплює МН СОК1 - МН СОМКЗ в 5ЕО ІЮ МО: 27.15. The antibody according to claim 10, which binds to human POP8, which includes a MH region having at least about 90 95, for example about 95 95, amino acid BO sequence identity with the sequence according to ZEO IU MO: 27 or with a region that covers MN SOK1 - MN SOMKZ in 5EO IU MO: 27. 16. Антитіло за п. 10, що зв'язується з СЮО3З8 людини, яке включає МН область, що має 1-5, наприклад 1-3, амінокислотні заміщення, делеції або вставки в порівнянні з послідовністю згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27 або з областю, що охоплює МН СОКІ1 - МН СОКЗ в 5ЕО І МО: 27.16. The antibody according to claim 10, which binds to human SHO3Z8, which includes the MN region having 1-5, for example 1-3, amino acid substitutions, deletions or insertions compared to the sequence according to ZEO IU MO: 27 or with the area covering MN SOKI1 - MN SOKZ in 5EO and MO: 27. 17. Антитіло, що зв'язується з СЮОЗ38 людини, яке включає Мі область, як визначено за п. 11, МН область, як визначено за п. 13.17. An antibody that binds to human HCV38, which includes the Mi region as defined in claim 11, the MN region as defined in claim 13. 18. Антитіло, що зв'язується з СО38 людини, що специфічно зв'язується з областю ЗКеЕМОБЗСКМІУК і областю ЕКМОТГ ЕАМ/УМІНОС в СО38 людини (5ЕО ІЮ МО: 31), та що особливо впізнає мотиви ЕМІОЕ та МЛ/Н.18. An antibody that binds to human CO38 that specifically binds to the ZKeEMOBZSKMIUK region and the ECMOTG EAM/UMINOS region in human CO38 (5EO IU MO: 31) and that specifically recognizes the EMIOE and ML/N motifs. 19. Антитіло за будь яким з пп. 1-18, де антитіло має одну чи більше з таких характеристик зв'язування: (ї) діє як антагоніст СОЗ8; (ії) не індукує значну проліферацію мононуклеарних клітин периферичної крові, яку визначають способом, описаним в Прикладі 18 опису; (ії) не індукує вивільнення значної кількості І/-6 моноцитами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові, яке визначають способом, описаним в Прикладі 19 опису; (м) не індукує вивільнення детектованої кількості ІРМ-у Т-клітинами людини або мононуклеарними клітинами периферичної крові людини, яке визначають способом, описаним в Прикладі 20 опису; (м) інтерналізується клітинами, що експресують СОЗ8; наприклад інтерналізується клітинами СнНО-СО38 протягом 5-15 хв. при 37 "С, у спосіб, описаний в прикладі 12 опису; (м) індукує АОСС; наприклад, зі значенням ЕСзо нижче 15 нг/мл, наприклад нижче 10 нг/мл, у клітинах Вацаї-Інс, і зі значенням ЕСзо нижче 75 нг/мл, наприклад нижче 50 нг/мл, 30 нг/мл, або 10 нг/мл, у клітинах ММ, як визначають способом, описаним в прикладі 5 опису; (мі) індукує СОС у присутності комплементу, наприклад, зі значенням ЕСв5о нижче 5 мкг/мл, наприклад нижче 1 мкг/мл, у клітинах Юацаї-іс або СНО-СОЗ38, у спосіб, описаний в прикладі 6 опису; (мії) зв'язується з СЮОЗ38 людини зі спорідненістю (Ко) нижче 103 М, наприклад в інтервалі від 10- 8 М до 10-! М, наприклад в інтервалі від 7х109 М до 1079 М, як визначають за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, як описано в прикладі 20 опису.19. An antibody according to any one of claims 1-18, where the antibody has one or more of the following binding characteristics: (i) acts as a POP8 antagonist; (iii) does not induce significant proliferation of peripheral blood mononuclear cells, which is determined by the method described in Example 18 of the description; (iii) does not induce the release of a significant amount of I/-6 by human monocytes or peripheral blood mononuclear cells, which is determined by the method described in Example 19 of the description; (m) does not induce the release of a detectable amount of IRM by human T-cells or human peripheral blood mononuclear cells, which is determined by the method described in Example 20 of the description; (m) internalized by cells expressing SOZ8; for example, it is internalized by SnHO-СО38 cells within 5-15 minutes. at 37 "C, in the manner described in example 12 of the description; (m) induces AOSS; for example, with an ECzo value below 15 ng/ml, for example below 10 ng/ml, in Vatsai-Ins cells, and with an ECzo value below 75 ng/ml, for example below 50 ng/ml, 30 ng/ml, or 10 ng/ml, in MM cells, as determined by the method described in Example 5 of the description; (mi) induces SOC in the presence of complement, for example, with an EC50 value below 5 μg/ml, for example below 1 μg/ml, in Yuatsai-is or CHO-SOZ38 cells, in the manner described in Example 6 of the description; (mi) binds to human CHO-SOZ38 with an affinity (Co) of less than 103 M, for example in the range from 10-8 M to 10-1 M, for example in the range from 7x109 M to 1079 M, as determined by surface plasmon resonance, as described in example 20 of the description. 20. Антитіло за будь-яким з пп. 12-19, що є моноклональним антитілом людини.20. The antibody according to any one of claims 12-19, which is a human monoclonal antibody. 21. Антитіло за будь-яким з пп. 1-20, яке характеризується тим, що воно є повнорозмірним антитілом Ідс1, Ідс2, дз, Ідс4, дО, ІдДА, ІЗ4Е, або ІдМ, наприклад антитілом Ідс1, краще антитілом ІдС1,к або антитілом ІДМ, краще антитілом ІДМ,к.21. The antibody according to any of claims 1-20, which is characterized by the fact that it is a full-length antibody Ids1, Ids2, dz, Ids4, dO, IdDA, IZ4E, or IdM, for example an Ids1 antibody, preferably an IdS1,k antibody or an antibody IDM, better IDM antibody, k. 22. Антитіло за п. 20, яке включає (І) амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга людини, похідну від послідовності зародкової лінії людини Нм1263/3М28 (Мні),, і амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга людини, похідну від послідовності зародкової лінії людини 1 15 (М,ї), де антитіло людини зв'язується з СОЗ8 людини, Зо або (ІІ) амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга людини, похідну від послідовності зародкової лінії людини МНЗ-ЮР-47/У3-23 (МніІ), і амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга людини, похідну від послідовності зародкової лінії людини І 6 (Мкі), де антитіло людини зв'язується з СОЗ8 людини.22. The antibody according to claim 20, which includes (I) the amino acid sequence of the variable region of the human heavy chain, derived from the sequence of the human germ line Hm1263/3M28 (Mni), and the amino acid sequence of the variable region of the human light chain, derived from the sequence of the human germ line 1 and the amino acid sequence of the variable region of the human light chain, derived from the sequence of the human germline I 6 (Mki), where the human antibody binds to the human POP8. 23. Антитіло за будь-яким з пп. 1-22, де антитіло є глікозилованим в еукаріотичній клітині.23. The antibody according to any one of claims 1-22, wherein the antibody is glycosylated in a eukaryotic cell. 24. Антитіло за будь-яким з пп. 1-20 або 23, що є фрагментом антитіла або одноланцюговим антитілом.24. The antibody according to any one of claims 1-20 or 23, which is an antibody fragment or a single-chain antibody. 25. Антитіло за будь-яким з пп. 1-24, яке додатково включає хелатуючий лінкер для приєднання радіоізотопу.25. The antibody according to any one of claims 1-24, which additionally includes a chelating linker for attachment of a radioisotope. 26. Антитіло за будь-яким з пп. 1-25, що знаходиться, по суті, в ізольованій формі.26. The antibody according to any one of claims 1-25, which is essentially in isolated form. 27. Іазольована нуклеїнова кислота, що кодує антитіло за будь-яким з пп. 1-26.27. Isolated nucleic acid encoding an antibody according to any of claims 1-26. 28. Експресуючий вектор, який включає послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує антитіло за будь-яким з пп. 1-27.28. An expression vector that includes a nucleic acid sequence that encodes an antibody according to any one of claims 1-27. 29. Експресуючий вектор за п. 28, який включає: (ї) нуклеотидну послідовність МІ. згідно з ХЕО ІЮ МО: 1, (ії) нуклеотидну послідовність МН згідно з ФЕО ІЮО МО: 6, (ії) нуклеотидну послідовність МІ. згідно з «ЕО ІЮ МО: 1 і нуклеотидну послідовність МН згідно з ЗЕОІЮ МО: 6, (ім) нуклеотидну послідовність МІ. згідно з зЗЕО ІЮ МО: 21, (м) нуклеотидну послідовність МН згідно з зЕО ІЮ МО: 26, або (мі) нуклеотидну послідовність МІ. згідно з БЕО ІЮО МО: 21 і нуклеотидну послідовність МН згідно з ЗЕО ІЮ МО: 26.29. Expressing vector according to claim 28, which includes: (i) nucleotide sequence MI. according to KEO IU MO: 1, (ii) nucleotide sequence of MH according to FEO IYUO MO: 6, (ii) nucleotide sequence of MI. according to "EO IU MO: 1 and nucleotide sequence of MH according to ZEOIU MO: 6, (im) nucleotide sequence of MI. according to ZEO IU MO: 21, (m) nucleotide sequence of MH according to ZEO IU MO: 26, or (mi) nucleotide sequence of MI. according to the BEO IUO MO: 21 and the nucleotide sequence of MH according to the ZEO IU MO: 26. 30. Експресуючий вектор за п. 28 або 29, який додатково включає нуклеотидну послідовність, що кодує константну область легкого ланцюга, важкого ланцюга або як легкого, так і важкого ланцюга антитіла людини.30. An expression vector according to claim 28 or 29, which further includes a nucleotide sequence encoding a constant region of a light chain, a heavy chain, or both a light and a heavy chain of a human antibody. 31. Експресуючий вектор за п. 30, нуклеотидна послідовність якого, кодуюча константну область легкого ланцюга, важкого ланцюга або як легкого, так і важкого ланцюга антитіла людини кодує антитіло ІДС1.31. The expression vector according to claim 30, the nucleotide sequence of which, encoding the constant region of a light chain, a heavy chain, or both a light and a heavy chain of a human antibody encodes an IDS1 antibody. 32. Трансфектома, що продукує моноклональне анти-СО38 антитіло людини за будь-яким з пп. 1-26.32. A transfectome producing a human monoclonal anti-CO38 antibody according to any one of claims 1-26. 33. Трансфектома за п. 32, яка продукує моноклональне анти-СОЗ8 антитіло людини, що має варіабельні області важкого ланцюга та легкого ланцюга людини, які включають: () амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 2 та амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга людини згідно з ЗБОЮ МО: 7, (ії) амінокислотну послідовність варіабельної області легкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 22 та амінокислотну послідовність варіабельної області важкого ланцюга людини згідно з ЗЕО ІЮ МО: 27, або (ії) консервативні модифікації амінокислотних послідовностей варіабельних областей легкого ланцюга людини та важкого ланцюга людини відповідно до пунктів (ї) або (ії).33. The transfectome according to claim 32, which produces a human monoclonal anti-COZ8 antibody having human heavy chain and light chain variable regions, which include: () the amino acid sequence of the human light chain variable region according to ZEO IU MO: 2 and the amino acid sequence of the variable of the human heavy chain region according to SBYU MO: 7, (ii) the amino acid sequence of the variable region of the human light chain according to ZEO IU MO: 22 and the amino acid sequence of the variable region of the human heavy chain according to ZEO IU MO: 27, or (ii) conservative modifications amino acid sequences of the variable regions of the human light chain and the human heavy chain according to points (i) or (iii). 34. Еукаріотична або прокаріотична клітина-хазяїн, що продукує антитіло за будь-яким з пп. 1-34. A eukaryotic or prokaryotic host cell that produces an antibody according to any of claims 1- 26.26. 35. Еукаріотична або прокаріотична клітина-хазяїн, що містить експресуючий вектор за будь- яким з пп. 28-31.35. A eukaryotic or prokaryotic host cell containing an expression vector according to any one of claims 28-31. 36. Імунокон'югат, який включає антитіло за будь-яким з пп. 1-26, зв'язаний із цитотоксичним агентом, радіоізотопом або лікарським засобом.36. An immunoconjugate comprising an antibody according to any one of claims 1-26 linked to a cytotoxic agent, radioisotope or drug. 37. Імунокон'югат, який включає антитіло за будь-яким з пп. 1-26, де антитіло є мономерним антитілом ІДМ, зв'язаним із цитотоксичним агентом, радіоїзотопом або лікарським засобом.37. An immunoconjugate comprising an antibody according to any one of claims 1-26, wherein the antibody is a monomeric IDM antibody linked to a cytotoxic agent, radioisotope, or drug. 38. Біспецифічна або мультиспецифічна молекула, яка включає антитіло за будь-яким з пп. 1-26 і специфічність зв'язування для ефекторної клітини людини.38. Bispecific or multispecific molecule, which includes an antibody according to any of claims 1-26 and binding specificity for a human effector cell. 39. Біспецифічна або мультиспецифічна молекула, яка включає антитіло за будь-яким з пп. 1-26 і специфічність зв'язування для СОЗ, СО4, СО138, 1 -15К, мембранно-зв'язаного або зв'язаного з рецептором ТМЕ-а, людського Ес рецептора або мембранно-зв'язаного чи зв'язаного з рецептором І--15.39. Bispecific or multispecific molecule, which includes an antibody according to any of claims 1-26 and binding specificity for POPs, СО4, СО138, 1-15K, membrane-bound or bound to the TME receptor, human ES receptor or membrane-bound or bound to the receptor I--15. 40. Фармацевтична композиція, яка включає антитіло за будь-яким з пп. 1-26 або імунокон'югат за п. 36 або 37 і фармацевтично прийнятний носій.40. Pharmaceutical composition, which includes an antibody according to any of claims 1-26 or an immunoconjugate according to claim 36 or 37 and a pharmaceutically acceptable carrier. 41. Фармацевтична композиція за п. 40, яка включає один чи більше додаткових терапевтичних агентів.41. The pharmaceutical composition according to claim 40, which includes one or more additional therapeutic agents. 42. Спосіб інгібування росту та/або проліферації клітин, що експресують СОЗ38, який включає Зо введення антитіла за будь-яким з пп. 1-26, імунокон'югата за п. 36 або 37, фармацевтичної композиції за п. 40 або 41 або експресуючого вектора за будь-яким з пп. 28-31, так що ріст та/або проліферація клітин інгібуються.42. A method of inhibiting the growth and/or proliferation of cells expressing POP38, which includes the administration of an antibody according to any of claims 1-26, an immunoconjugate according to claim 36 or 37, a pharmaceutical composition according to claim 40 or 41, or an expression vector according to any of claims 28-31, so that cell growth and/or proliferation is inhibited. 43. Спосіб лікування захворювання або порушення, що залучає експресуючі СОЗ8 клітини, у суб'єкта, де спосіб включає введення антитіла за будь-яким з пп. 1-26, імунокон'югата за п. 36 або 37, фармацевтичної композиції за п. 40 або 41 або експресуючого вектора за будь-яким з пп. 28-31 суб'єкту, що потребує цього.43. A method of treating a disease or disorder involving POP8-expressing cells in a subject, where the method includes administration of an antibody according to any of claims 1-26, an immunoconjugate according to claim 36 or 37, a pharmaceutical composition according to claim 40 or 41 or an expressing vector according to any of claims 28-31 to a subject in need thereof. 44. Спосіб профілактики захворювання або порушення, що залучає експресуючі СОЗ8 клітини, у суб'єкта, де спосіб включає введення антитіла за будь-яким з пп. 1-26, імунокон'югата за п. 36 або 37, фармацевтичної композиції за п. 40 або 41 або експресуючого вектора за будь-яким з пп. 28-31 суб'єкту, що потребує цього.44. A method of preventing a disease or disorder involving POP8-expressing cells in a subject, where the method includes administration of an antibody according to any of claims 1-26, an immunoconjugate according to claim 36 or 37, a pharmaceutical composition according to claim 40 or 41 or an expressing vector according to any of claims 28-31 to a subject in need thereof. 45. Спосіб за п. 42 або 43, де захворювання або порушення є ревматоїдним артритом.45. The method of claim 42 or 43, wherein the disease or disorder is rheumatoid arthritis. 46. Спосіб за п. 42 або 43, де захворювання або порушення є множинною мієломою.46. The method of claim 42 or 43, wherein the disease or disorder is multiple myeloma. г ч в й ОБ - чо ще ш Нимаї- Кім в УЖ с 1000» у її З В 75о : і ж / Кс й в оо 5 ги ви Й т щи че БІ ти МКглМи Гея - Зв'язування -024 на клітинах СНО-СОЗВ І б 5 2604 х ХНН Е з й аа Яр 100 Га з Бо- ве ї- 105 02 той т? т 132 що мг/мg h v y OB - what else sh Nymai- Kim in UZH with 1000" in her Z B 75o: i z / Ks y v oo 5 gy vy Y t schyche BI ty MKglMy Gay - Binding -024 on SNO cells -SOZV I b 5 2604 x KHNN E z y aa Yar 100 Ha z Bove i- 105 02 toy t? t 132 mg/m Фіг. 1Fig. 1 А: | п Й о 05 0 ово ще я нмавкіН пе х ра ой її І 8 че ї Ж ! У твої о а за С Й о Га як ве ук б ; чі ще чо че 10: МЕКглмл Е: до ! . я в кН ШО во "ши, 5 ї 200. оо з 2 т то9 НЕ ще МкоМмлA: | p Y o 05 0 ovo still I nmavkiN pe kh ra oi her I 8 che i Z ! In your o a for S Y o Ga as ve uk b ; chi still cho che 10: MEKGlml E: to ! . I am in kN SHO in "shi, 5 th 200. oo with 2 t to9 NOT yet MkoMml Фіг. 2Fig. 2 Е 70009 я ЙО г пак 0 75004 а 5 Бь У зі о «й З і ! як її 25 х. Ж о дякай с -00 ла й че ще ча то 0 то концентрація антитіла (мкг/мл)Э 70009 я Я г пак 0 75004 а 5 Бъ У з о «и З и ! as her 25 x. The concentration of the antibody (μg/ml) Фіг. З ДВ то з -ю03 - 005 Ве ОМ - ритуксимаб в дритатттт -е-КІн в 5 Ку а:Fig. With DV then with -yu03 - 005 Ve OM - rituximab in dritattt -e-Kin in 5 Ku a: 28. се нн нн Ки Б ПВ ї то 09 кону. мкг/мл Б: щи дОоСе на клітинах Гвцаої Й Донор А | Донор / «в а 5 Же КЕ. В в КЗ о ; ще ет ня и ж АТ Івсконц мега Їво конц. мккіми фіг. 428. se nn nn Ki B PV i to 09 Konu. μg/ml B: schi dOOSe on cells of Gvtsaoi Y Donor A | Donor / "in a 5 Same KE. In the short circuit about ; still et nya and JSC Ivskonts mega Yvo conc. small fig. 4 А; єв а -КЗ 5О Е С м е «5 з- шо -0п24 щ ю о КН е щей чо п в -46- в. ЕД Е: 10 100 іо кону. мкг/мл Е: ш -е-КЕН й у: шк янінн до 5 Е /; іAND; ev a -KZ 5O E S m e «5 z- sho -0p24 sh yu o KN e scheich cho p v -46- c. ED E: 10,100 io conu. µg/ml E: sh -e-KEN and y: shk yaninn up to 5 E /; and Ко. ШУ. че їі боб ож щи ві Я чо чо МКМCo. SHU che ii bob osh schi vi Ya cho cho MKM Фіг. 5 (1/2)Fig. 5 (1/2) КАЄ Т - а | и КУ і і --- ОМА КЦН - і є / сен «ДОВ щк ще ї і се «ОАKAE T - a | и КУ и и --- ОМА КЦСН - и и е / сен «ДОВ шк ще и и se «OA О.К О.О ЕКЗ ЕД. ї чо чай МКЕгЛЯиO.K O.O ECZ ED. i cho tea MKEgLYay Фіг. 6 ру Я зв. --НОІМавКІН ОМ нав «003 ж 1 ; тан 005 й ! р нен йено, Е ша чне ренееннніюетя нн шани сення шк оо щи 84 то тва МКМFig. 6 ru I zv. --NOIMavKIN OM nav "003 z 1 ; tan 005 and ! r nen yeno, E sha chne reneennnniyuetya nn shan senia sh o o shchi 84 to tva MKM Фіг. 7Fig. 7 ! -0Ю3 8о- у. « -05 - овен о КЕН їх 80 ак я і ве с МЕ ВИНИ НИ у " м он древня че 107 то2 ЕН їба кони. мкгмл! -0Ю3 8о- у. "-05 - ram o KEN their 80 aka i ves ME WINS NI in " m on drevnya che 107 to2 EN iba kony. mkgml Фіг. 8 д 1904 ішли а во | Ж в | ж -003 Ж 8оч Ї " 005 т | Ї, / о КН Б і І 20-Fig. 8 d 1904 went to | Same in | f -003 F 8och Y " 005 t | Y, / o KN B and I 20- в. В ек нан жи В нн. не ШИК о ДИ окр нккнкю Режтн 0.1 о то 100 кону. МмКг/Ми Б: ве ав шо -024 тая ВА в КІН ву во- в щ5о- і -- «0 а 30- 20- и а о о 04 7 т чай 0 їва кону. мкг/млin. V ek nan zhi V nn. not CHIK o DY okr nkknkyu Rezhtn 0.1 o to 100 konu. MmKg/My B: ve av sho -024 taya VA in KIN vu vo- in sh5o- and -- «0 a 30- 20- и a o o 04 7 t chai 0 iva konu. µg/ml Фіг. 9Fig. 9 100 що що» то НОМавр-кіН 80- п нин - «005 ТО я -003 б во і Щ во і 40ч в-100 what what" then NOMavr-kiN 80- p nin - "005 TO i -003 b vo i Sh vo i 40h v- 0.01 0 1 10 100 мкг/мл Б: 1600 свя тя : жи ми -е- НоМар-Ккун 7в- т е -е -005 5 , «003 що 5о я п ге шли чих ни У нити: їх о вл 1 то чо МмКгмИ0.01 0 1 10 100 μg/ml B: 1600 svyatya: zhi we -e- NoMar-Kkun 7v- t e -e -e -005 5 , "003 that 5o i p ge shl chich ny U nits: their o wl 1 to what MmKgmY Фіг. 10 (1/3)Fig. 10 (1/3) В: 70 ще ІA: 70 more I «о . а НомМав-кім во ЩЕ, Мних . -005 е «404 и 304 у Ж 20 ши я ж. я я04 нь шк. Й. во о рити а п 4 ча 0 мкм Г ев 100 - Шк. С жотв . ж «003 ВЕ « -0О5 8 Бо І о НимМаюкін З Є шо 25 ве др 0 а і мини пах мона онов зими 105 405 00004 109 з: 102 МКуМИ"oh and NomMav-kim in SCHE, Many. -005 e "404 and 304 in Zh 20 shi i zh. i i04 n shk. J. vo o ryti a claim 4 cha 0 μm H ev 100 - Shk. From October z «003 ВЕ « -0О5 8 Bo I o NimMayukin Z Ye sho 25 ve dr 0 a and mini pakh mona onov zimi 105 405 00004 109 z: 102 MKuMY Фіг. 10 (273)Fig. 10 (273) Д. ' со 026 де ВІ и ж жа | це -е 255 ; Ж Нут Шк їж ї ; її в -- в 04 1 о о юс кону. мкг/млD. ' so 026 de VI and same zha | this is 255; Z Nut Shk eat it ; her in -- in 04 1 o o yus konu. µg/ml Фіг. 104373)Fig. 104373) Ст-003-ЕІто : 1-003-ЕНС ще | КЕР ИО : з я ше ше ще Фі іє. 11 о пн : вн ПЛИНИ пп Диня днк с ПИШИ Б о о п. с в її ; 1 : яв 5 ще с З ЩЕ нн ! Я КОТУ Ко п х с 1 ПО с. У пе З ШК ЕЕ о 5 З ; ще еВ ПКЕЕ КО ПОВ ХО ши шн ЗЕ 6 ща нн сх 0 З ОО ще 0 ще В ВЕ ЕВ І я Б о в: ОЕ УМ Я ЗЕ ВН ЕЕ ! т Зх ЗМ Та ОМ КОХ п о п ТКА ОХ ОВ ПК ТЕЖ Я о. ОВ Ма ОКО ПЕД ПО зх ОК ек Ве ЗБ ІПН НН ВУХ ПУ, МК о о. о НЕ БО ЗОНаяя п З ВЕУ ДК; З оон ДНВВиВЕ вв Ох У ВВ ОМ п я Фі пк і. 12А й ! т нки не КЕ в Ше А ЕНН Б КМУ З шиЖУ вид КТ ВІ, НО ВАОлея я ше 5-6 й. я її В КТК Блю ца я С ЯК В по он Я ОК Же ж и ЩЕ ка ен. п Б кн .. . Е ОК жк Мт ОО о ЗИ яви ї Бах УНК вто Же во й ЧЕ ЗЕ ще Бен, о о щі та кни ви У У Е пк й НЕ з КАК З ї АК ки од Оу КОКОН ЗБ : х Де п ки ЩЕ МК в з з МО, Б жеК В : ВЕ В я ве ДЕ 8 ї а дя ОК й як ї НОЯ ВЖК Ух Ой ко КЕ ве ОВК совка і ша ке я ВО жо СВК ие Хо чек ве тя МОУ КК ек ЯК же ПУБ Бе ВО й З о т Ох о. ша г - ВІ хх в ЖК 5 я. ов е То В с о НИ що: ще Ка я Ко ж я в У Є: ох іг. 175 ГЕ й АЖ ТК Ко ТІ Ку л ХУ ШИ . щі: ка Я я Ох пджеккюку, з М ех х МК Е й; ке ТА У ОЕ х ОВ мала пр о І 5 Се її о ше КЕ ТОМ Кк Й ще Ех еВ С МК: До од ЗА: п КК ТОМ КВ МКК: ех КК НАВ ! З в В я ТЕ Есе ВІ КВ ок я й пн 5 тм ве хх ме жо З. Б еф тх З З 5 АХЕ я ВВ КОКОС Я! Як ЕМ ЗК у еНУ М хх у У МК Ох. ОККО їх щі о ЕЕ МеЕКе 5 о. ОО я: МЕ ЕКО зе Ве ОК ний п. «КОЛЕ КВ ОО КУ МКУ ка ше а що Ден о а жи ПК ОВК ЩА Ох . п Бу УЗА КУ МОЖ ЗАЗ Ве В ее о кВ. КМ 5 М М ОБОХ й ОО ї Ма. че Кк Зх ОВК КУЗЯ НК х Зх ще МК і ще с ї жа. ча. чу - ВАН Ех ххх ж ВО ЯК НОЯ Ва ще ша о. Фі Аня г. 128.St-003-EIto: 1-003-ENS more | KER IO: with I she she still Fi ie. 11 a.m.: vn PLYNY pp Melon dnk s WRITE B o o p. s in her; 1: yav 5 more with Z MORE nn! I CAT Ko p x s 1 PO s. In pe Z ShK EE at 5 Z ; more eV PKEE KO POV HO shi shn ZE 6 shcha nn sh 0 Z OO more 0 more V VE EV I I B o v: OE UM I ZE VN EE ! t Zh ZM Ta OM KOH p o p TKA OH OV PK TOO I o. OV Ma OKO PED PO zh OK ek Ve ZB IPN NN VUH PU, MK o o. o NE BO ZONaya p Z VEU DK; Z oon DNVVyVE vv Oh U VV OM p i Phi pk i. 12 And ! t nki ne KE v She A ENN B KMU Z shiZHU vid KT VI, BUT VAOleya i she 5-6 y. I'm her in KTK Blue tsa I S HOW IN po he I OK Jhe same i SCHE ka en. p B kn .. . E OK zhk Mt OO o ZY yavy y Bach UNK tuo Zhe vo y CHE ZE sce Ben, o o schi and kny vy U U E pk y NE z KAK Z y AK ky od Ou KOKON ЗB : х De p ky ШЕ MK v z z MO, B zheK V : VE V i ve DE 8 th a dya OK and how НОЯ VZHK Uh Oy ko KE ve OVK sovka and sha ke I VO zho SVK ie Ho chek ve tia MOU KK ek HOW PUB Be VO y Z o t Oh o. sha g - VI xx in residential complex 5 i. ov e To V s o NI what: still Ka I Who is I in U E: oh ig. 175 GE and AJ TK Ko TI Ku l HU SHY . shchi: ka Ya ya Oh pjekkyuku, with M eh x MK E y; ke TA U OE x OV mala pr o I 5 Se her o she KE TOM Kk Y more Eh eV S MK: To od ZA: p KK TOM KV MKK: eh KK NAV ! Z in V i TE Ese VI KV ok i i pn 5 tm ve xx me zho Z. B ef th Z Z 5 AHE i VV COCONUT I! As EM ZK in eNU M xx in U MK Oh. OKKO their shchi o EE MeEKe 5 o. OO i: ME ECO ze Ve OK ny p. "KOLE KV OO KU MKU ka she a what Den o a zhi PK OVK SCHA Oh . BU UZA KU MAY ZAZ Ve V ee o KV. KM 5 M M OBOH and OO and Ma. che Kk Zh OVK KUZYA NK x Zh even MK and still sy zha. Cha. chu - VAN Eh xxx what is it like NOAH And still sha o. Fi Anya, 128. Коня у Ку ЛК КЕ В ок В Я І Ов и и МК МК КО ВХ Я ан по о ЕЕ МІХОВ ОКХ В ; ОБМІН он о в ЕК ЕТ ОВ УК ОК НВК ВК я З МК Хо КАСУ Хо ОБ КВ о КВ ; о Ве МКМ ЗЕ а БЕЗ 5 ЗОН КНУ о у 0-. ЗМО КОМ 5 ОКУ ЗЕ:Konya u Ku LK KE V ok V I I Ov i i MK MK KO VH I an po o EE MIHOV OKH V ; EXCHANGE on EK ET OV UK OK NVK VC i Z MK Ho CASU Ho OB KV o KV ; o Ve MKM ZE a WITHOUT 5 ZON KNU o in 0-. ZMO KOM 5 OKU ZE: о. КК Ве НОЇ МК ВХ НН ЗБК У те 8 ЗА В КК кон хЯ и и о. ке і ов щи о ПОН М МАН : Фіг: 12Г Ти МУКУ ЕК КСВ ОВх МО г я КИПІТИ КО Я 5 с о М В КК що им КК МОУ о КІ І В о. а и ПК КК КК а хх Кт ВО ши. ХХ у в КК ОКО УМ о Но: Кк В о ка а ОЮ УК КО В В МО КВ ШОК ПИ и М ВОВК ЗОНУ о я МЕ Я о ПК М ПІat. KK Ve NOI MK ВХ NN ZBK U te 8 ZA V KK kon хЯ i i o. ke and ovshchi o PON M MAN : Fig: 12G Ti FLOUR EK KSV OVh MO g i BOIL KO I 5 s o M V KK that im KK MOU o KI I V o. a and PC KK KK a xx Kt VO shi. XX y v KK OKO UM o No: Kk V o ka a OYU UK KO V V MO KV SHOK PI i M VOVK ZONE o i ME I o PK M PI Фіг. 13А БК ех КІ ОК а о о ен ШИ М ОХ Ка щ дО М ЕК ХУ Пов ВИ М о А ОН а СО ки ОКО ОКО ОКО КИНЕ Я; пен В кв ую ООН В КК Ве ПИД Ех: а КИ КК. п ВОК оз ЖИ о и Кв ОН а шк Бе КЕ: ОВК чи у и З КК ши нх КУОВВВЬ я ЕХ ке ЖЕ ПОЕТ. ав ЯН о Я Е СКК у шу ОН б ДК ОН а я ЕМ Ва М ВО В ВИН ню ге па КН В В КК Хо щаFig. 13A BK ek KI OK a o o en SHY M OH Ka sh dO M EK HU Pov VY M o A ON a SO ky OKO OKO OKO OKO KINE I; pen V q uyu UNO V KK Ve PID Ex: a KI KK. p VOK oz ZHI o i Kv ON a shk Be KE: OVK chi y i Z KK shi nh KUOVVVV I EH ke JHE POET. av YAN o I E SKK u shu ON b DK ON a i EM Va M VO V VYN nyu ge pa KN V V KK Khoshcha Фіг. 1356 нка а ОЗ Ве ЗОНУ Тих ОА КУКИ ОВО КУ КК КІ шо і п НМ КК КВ Оки В НИ в пою з пров НВО око ИН М х ни ни М ОБЧКО ж ос НН и о Ин НК я ОО он НН и МЕТ и ПТК ВК КВ ВКА МК ДОН ЗЛ тм в КК Бе ЕТО ді кн ан НК НИ я о в НИ ЕК Ве у вк В ВА Во и лк ККУ 5 ОО мин нн Ко В а нн НН НН оо й В В Ви М вит шо КОТ М, КК оо В ШИ М НН ОК пед КК КМИН ЗО о жу КК ОК НН НН З 5 ке ееви - : У ОнFig. 1356 nka a OZ Ve ZONU Tyh OA KUKY OVO KU KK KI sho i p NM KK KV Oky V ny in poyu z prov NVO oko YN Mkh ny ny M OBCHKO z os NN i o In NK i OO on NN i MET i PTK VK KV VKA MK DON ZL tm v KK Be ETO di kn an NK NI i o v NI EK Ve u vk V VA Vo i lk KKU 5 OO min nn Ko V a nn NN NN oo y V V Vy M vyt sho KOT M . Фіг. 138Fig. 138 КИ: ТИЖ ска КК р вевх ВЖК ех ХО се Й МО З Х ОВ ОВО КО ви КУ сх ВОК Ве ЗО и свв 55 у КН ІК: УКХ ОВК. ОО Де ХО І ОВУ ЗKY: TYZH ska KK r vevh VZHK eh HO se Y MO Z HOV OVO KO you KU skh VOK Ve ZO i svv 55 in KN IC: UKH OKK. OO De HO AND OVU Z С с. п З КО КО ЕХ ТАК МОУ ОК ЖК ХУ ЗКОЯ ЕКО ОК У я ки я пов ОК с. ОККО я ох ОККО ех З я ОХ х МКМ З Ж ОК КККІХ ЗУ ЗК БЕЗ Б я и СО А УКХ ТВ УМ ПОВЕ СВК З ОО Я ку ОКХ зх ЗОМ КМ у УМ ШТ МЄВ КУ . ЕКО В МЕТ КОХ хе о. їх УЖ Же ЗИ Бк МКК ех КЕН 3 КОКС ПЕ КЕ о. У Ми ВН МБ о оон УКОСИ пе к МО їх ЗО Ко БО ОКО Сх СОМИ шою Ху ЯМ КО ма ит, АК ну що їх ПОМ Зак М пи Дю й УК СК ЗИ ЕЕ прут У ОБ ЗМОВ ще тд СО ОКще ОБ ки ее и ВХ о КК ОХ М МУ ЯКО ох Ох Ох у х й УК У я х шення ММ фіг, 13Г і КЕ су 145 ККУ ВОК КУ КЕ ле : с -к і ЕКО НО ЕКО сх 5. зу ОК х СЕК с т вки М КВК В о Б Ж КОКОН я УМ КВК ВМІВ ПОН Е ХК Ж ВОМ КОН ення МАМ ОО . ПК КІМН ВКМ УК оо ко неви с 0 . с ше ОК ПИВ ЗКУ ООН ХК Зв ККУ ОВ КОЛЕ ОВЕ НУ М ко ІМ НО 5 Га я ПМК ново КУ БО ОК ВК ВК ЕК ЗК дан Ки КК МАВКА КК ОМС МЕ хх КЕКВ о . с МКК КК КК МЕ ха ОНИ ОО о З МОНО КН КН ЗХ ОН с ЕХ п ТІК КН ЗК МІК АК щКЕ ОК ВВЕ 2. МКК ЗМО ООФКК ПЕКИ МКМ НК МНН ЕЕ ЕВ УКВ з ККУ ПОС ОО МОН я ПЕК с я с Не КК п о. ТЕ ще в в ПК ОК ЗЕ о я СО КВ ОККО МКК ЗУ КЕ ТО УЖ УК КН о цу на ПММ МОТКІВ МХ ЕЕ ЕХ КВК В он зіЯ о. ВОНО Ме УКВ ЗК ОСНОВ ЗО ЗВ сг М НЕК: ЗАМ КО СОМ УЧ З Е сг ПОККНІВВ ОК МЕ З с У Б) ЗХ ОеО КЕ КО ВВ КЕ КК ОО ОК ЗМ ЕК КУ АК ХУ НК, МКК МНК ЯЗ МАК ЗУ ЗХ се КК КВН ЗК ОН СЕ ВОК А ВОНО Зх Не» ї ПО о КОХ Пе ЗЯ МУ Я я МІК ОКУ ТІ БО УК СЕК ОВО ЗК, НКТ КН КЕН В ВК ООН НВ хх КОКО КО п КК ІМ ОК ЗВ М кі яв їх пе КЗ с ЕК: ЗНО ХУБИКНЕ Й КК СН МЕЖ З ПОН КК КОМ НК Я : ЗЕ ВВ Ну о о що ен ; МКК Се КЕ МК ОВ ОК НО ВНне МНЕ й ОК ОО ВХ З ЩЕ щЕ 1485 шана. г --е КАК МІОМИ ВХ т МУХА ОК В В | АГ Щ порно ее тео ТА ші ПО й МЕ пе НЕО ТЕХ КН СЕН У с ВІ по ЕЕ НЕ СОЯ ВОНИ ПИВ ТОК КЕ ЕК ЕТО с ЗУ КМ с -- ОК с КМ ЗІ МКК им я МТ КИ ПМК ПОД ї ОН ОКЕАН МК, КО ПОКИ Кік ОК КОНКІ ОВО В шо хі КК КК ОКЕАНИ КК СЕ ВЕК ОО ОО ІЕС Ко я ІОН КН М МОМ НО УМ ПНІВ МК ЮК ПОН т о ЕЕ ее МКК ТОК ХК КЕ КК ВЕК Ме ВН ПОМ ее МК В Не певен КОКО ЕК ОМКоН ЕМ УК КОКО КК нен ЕК ЇВ с КК ЗЕМ Е ЗА Ня пе НК о МКК НОМ ВАК ВК пн І КОХА їх ХНН МКК ВОК Я ПИКА 5 У Ще ЗНО МК ЕМВ вх ОН КК М ОУН МКК НН КЗ у. сон БУХ КЕ пе КУ КАК ЕХ НИК КК ЗОН ЗОН ОКА Е с ВЕБ ЕУКЕХ пе КОКО ВВ У ЕОМ КН НН Ве КК ООН а ЯК КОКОН с о КЕ ще В ВО УК ТАК ка 5 КОЖ ІМ о їх т ЗОН КВК ІМК ще ЗМК МЕ КОМ ЯК ВВЕ ЗК КО Ка ЕК нн Кон ОО ДЖ: ККУ Не В Б В Сея ПЕ не ОН о ВК ЗК Ох ОКО КЕ НН КК с с о о о: . ах КТК МОЖ У НУК МІЖ т ОО ВОК М УК МЕДІ М зх Ко Ох КК о. ї ОН Я ех КВК НЯ Я КСО КОХ БУ 5 КВ ЩЕ сх ЕК КК ОТ МКК ЕМ УЖ У ККУ ХВ КО У МІЙ ХКЖК Зх ТАКЕ КУ МАК З З ТКУ З: АКТ М ПОКЕК КМ Я КОХ У МКК ВУХ УК з ПК ЗІ СОМ КОТУ ві ККУ УКХ ПММ КК ОКООЯ ЗІ п З: . | ох п. о ЗХ МУК ККУ УКВ ЗА НУ КОН по с с й МУ М Ку сЕКЕ ЗУ НЕХУК М ЗХ ; | п ее 14 Й ши ря КЯ УК ОКО и ОКО ВК НЕ а ПВА о с тво МИ МИКИКВК ОКА ЕК ОКУ с ЗЕ с 0. І ее ЗМОЖЕ ПК: у НН МКК ху ЕН СКК х ЕМ НИ МІК ЗА ВЕБ МОХ ПЕК НЕ МЕНЕ З НО ІЕМ ПІШКИ Зх ХНУ Х УКОХМ ММ ХК ще ТИМ Ки ФО с ! с шо 5 ОКО ЗЕ і ДОК я ЩІ КОЖ ОМС ХК с ПоКеьО КВК Поки ДЕПЕКІМХ ще ВВ о. о. З ХУ ж, ТОЖ х З МК яка п с ох у іх с яку СК СУ с Ж З і о. 6. п. а Кох КЕН о с ТЕН СХ ОК о ня Я а ХО ще у ДК БО со АВК ЩЕ с о: і Ох с СА ПИНИМWith p. p Z KO KO EH TAK MOU OK ZK HU ZKOYA ECO OK U ya ky i pov OK p. OKKO i oh OKKO eh Z i OH x MKM Z Ж OK KKKIH ZU ZK BEZ B i SO A UKH TV UM POVE SVK Z OO Ya ku OKH zh ZOM KM u UM Sht MEEV KU . IVF IN MET KOH heh o. ih UZH Zhe ZY Bk MKK ek KEN 3 KOKS PE KE o. U We VN MB o oon UKOSY pe k MO them ZO Ko BO OKO Sh SOMY shoyu Hu YAM KO ma it, AK well that their POM Zak M py Du y UK SK ZY EE prut U OB ZMOV more td SO OKshe OB ki ee y Х о КК ОХ M MU КА ох Ох Ох х ы У Х х шения MM fig, 13G and KE su 145 KKU VOK KU KE le : s -k i ECO NO ECO skh 5. zu OK x SEC s t vky M KVK V o B Zh KOKON i UM KVK VMIV PON E ХK Z VOM KON ene MAM OO . PC KIMN VKM UK oo ko nevys 0 . s she OK PIV ZKU UNO HC Zv KKU OV KOLE OVE NUM M ko IM NO 5 Ha i PMK novo KU BO OK VC VK EK ZK dan Ky KK MAVKA KK OMS ME xx KEKV o . s IKK KK KK ME ha ONY OO o Z MONO KN KN ZH ON s ЕХ p TIC KN ZK MIC AK shKE OK VVE 2. IKK ZMO OOFKK PEKY MKM NK MNN EE EV UKV z KKU POS OO MON i PEK s i s Not KK p o. TE still in in PC OK ZE o I SO KV OKKO MKK ZU KE TO UZH UK KN o tsu na PMM MOTKIV MH EE EH KVK V on ziYA o. IT ME UKV ЗK ОСNOV З ЗВ sg M NEK: ZAM KO SOM UCH Z E sg POKKNIVV OK ME Z s U B) ZH OeO KE KO VV KE KK OO OK ZM EC KU AK HU NK, MKK MNK YAZ MAK ZU ZH se KK KVN ZK ON SE VOK A VONO Zh Ne»i PO o KOH PE ZYA MU I I MIK OKU TI BO UK SEC OVO ZK, NKT KN KEN V VK UNO NV xx COKO KO p KK IM OK ZV M ki yav ih pe KZ s EK: ZNO HUBYKNE AND KK SN BETWEEN MON KK KOM NK I : ZE VV Well oh oh what en ; MKK Se KE MK OV OK BUT VNne MNE and OK OO ВХ Z ШЭ ШЭ 1485 honor. g --e HOW MYOMIA VX t MUHA OK V V | AG Ш porn ee teo TA shi PO y ME pe NEO TECH KN SEN U s VI po EE NE SOYA THEY PIV TOK KE EK ETO s ZU KM s -- OK s KM ZI MKK im I MT KI PMK PO i ON OCEAN MK, KO POKY Kik OK KONKI OVO W sho hi KK KK OCEANS KK SE VEK OO OO IES Ko i ION KN M MOM NO UM PNIV MK YUK PON t o EE ee MKK TOK KK KE KK CENTURY Me VN POM ee MK V Not sure KOKO EK OMKON EM UK COKO KK nen EK YIV s KK ZEM E ZA Nya pe NK o MKK NOM VAK VC pn I KOHA ih HNN MKK VOK I PIKA 5 U More ZNO MK EMV vh ON KK M OUN MKK NN KZ u. sleep BUH KE pe KU KAK EH NIC KK ZON ZON OKA E s WEB EUKEH pe COKO VV U EOM KN NN Ve KK UN a JAK KOKON s o KE more V VO UK TAK ka 5 KOHZ IM o ih t ZON KVK IMK more ZMK ME KOM JAK VVE ZK KO Ka EK nn Kon OO DJ: KKU Ne V B V Seya PE ne ON o VK ZK Oh OKO KE NN KK s s o o o: . ah CTK MOZ U NUK MIZH t OO VOK M UC MEDI M zh Ko Okh KK o. и ОН I ех КВК НЯ I KSO KOH BU 5 KV STILL SH EK KK OT MKK EM ALREADY IN KKU ХV KO IN MY ХКЖК Х ТАКЕ KU MAK Z Z TKU Z: AKT M POKEK KM I KOH U MKK VUH UK z PC ZI SOM KOTU vi KKU UKH PMM KK OKOOYA ZI p Z: . | oh n. | п ее 14 І шрия КЯ УК ОКО и ОКО ВК На ПВА о ство МИ МИКИКВК ОКА ЕК ОКУ с ЗЕ s 0. AND EE CAN PC: u NN MKK hu EN SKK x EM NI MIK ZA WEB MOH PEK NOT MENE Z BUT IEM PISKY Зх ХНУ Х УКОХМ MM ХК even TIM Ki FO s! with sho 5 OKO ZE and DOK i SCHI KOH OMS HC with PoKeO KVK While DEPEKIMH still VV o. at. Z ХУ, ТОХ x Z MK yak p s oh y ih s yak SK SU s Ж Z i o. 6. p. a Koch KEN o s TEN SH OK o nya I a HO still in DK BO so AVK SCHE s o: and Okhs SA PINIM '.'. Фіг. 14 ее «005 12004 в " «003 10004) ож о НиМарб-К.Н ш 8004 лк Ж оо 4004 й У 200- Ко а Шви емо ту 001 00040010 0400 4000 40000 мкг/млFig. 14 ее «005 12004 в " «003 10004) ож о NyMarb-К.Н ш 8004 лк Жоо 4004 и У 200- Ко а Shvy emo tu 001 00040010 0400 4000 40000 μg/ml Фіг. ТА 1400- і -05 1200- м ж -пО03 10004 ра о Нимар-КіН до 8005 й Ж вою 400-; Пили 200 Евро кн Б 04004000 40 0000 4000 0000 мкг/млFig. TA 1400- and -05 1200- m zh -pO03 10004 ra o Nymar-KiN to 8005 and Zh voy 400-; Saw 200 Euro kn B 04004000 40 0000 4000 0000 μg/ml Фіг. 1556Fig. 1556 -к «й я ск 500 жо | -е--005 ШЕ ч--- 003-k «y I sk 500 zho | -e--005 SHE h--- 003 В. | -х- Нимар-КЕН тоб 04004000 0100 л000 10000 їх МмигМмлV. | -x- Nymar-KEN tob 04004000 0100 l000 10000 of them MmigMml Фіг. 158 1 що- ен ОЗ ЕТО еесебфння СКЗ ЗТ що | сіре дрон яю ЕВ: зв Зо ак що хвилинFig. 158 1 every- en OZ ETO eesebhnya SKZ ZT what | gray drone yayu EV: zv Zo ak every minute Фіг. 16АFig. 16A 120ю 10о0н г оди снід «юввтОЄ дк ж Ша сення КЮВЕТ ЗЄС ШО оо ! аю здо. І! шини помити знннниня нн ї 15 зо 4в во хвилин120 ю 10о0н h оди снид «уввтОЕ дк ж Ша сеня CUVET ZEES ШО oo ! I'm sorry AND! wash the tires for 15 to 4 minutes Фіг. 165 и ЕЕ «а НоМарКЬН х | он ВПОВ-СЮОВ таб З во ротя--003 БО зджюон т 005 «же ітАВ Ре ШО аю / ; НИ гу й / 100 мкг тАб/мишу о ад в. --Е "М г Кк в З порі ілі інеті інн НВК шк. ЕВ а Її іа 2 28 днівFig. 165 and EE «a NoMarKN x | he VPOV-SYUOV tab Z vo rotya--003 BO zjuon t 005 "zhe itAV Re SHO ayu / ; NI gu y / 100 μg of tAb/mouse o ad c. --E "M g Kk in Z pori ili ineti inn NVK shk. EV a Her ia 2 28 days Фіг. 17А де «ет айв ! щ дО ОК | «в НіМаь-кІН в т нон ВМ-СЮО тАБ ЕЕ | ЇЇ яе-- 006 т Ф ока о тдь / ! ще ду ! ії З 4 иЗ Якої . й я е БЕ 500деуі дерті 10000 мкмишу ж З б 7 ча М 28 3 4» 49 5 днівFig. 17 And where is it? sh dO OK | "in NiMa'-kIN in t non VM-SYUO tAB EE | Her her-- 006 t F oka o tdj / ! more du! ии З 4 иZ Какой . and I e BE 500deui derti 10000 mmyshu z b 7 cha M 28 3 4» 49 5 days Фіг. 175 в закат» ті | се Впб-СроЮ тА В 00озджя тен 003 ЕО0зааті тен Нимар-КіН заотя , що фо і 545 уло мкг тАВ/МИШУ о, й цлїння Млин иFig. 175 at sunset" those | se Vpb-SroYu tA In 00ozja ten 003 EO0zaati ten Nymar-KiN zaotya , that fo and 545 ulo mcg TAV/MISHU o, and tslinnya Mlyn i 2. НУ й ч пек сшенк; Ва. ва 0 т мМ п З? Б'є є в чині. їі Бі днів2. NU and h pek sshenk; Va. va 0 t mm p Z? Beating is in order. ii Bi days Фіг. 178 Б Е- здете- ІНН . --кін 5 ке ях зер «ЮА Ж лк. та ВЕ Ф жо чем 0 тав з їй А 4, ств О що Зою І у10о мкг тАБ/мишу я жо а 7 м М 28 35 йй 4 яв днівFig. 178 B E- zdete- TIN. --kin 5 ke yah zer "YUA Zh lk. and VE F zho chem 0 tav with her A 4, stv O that Zoya I u10o mcg tAB/mouse I zho a 7 m M 28 35 th y 4 yav days Фіг. 17Г ВЕ КОЮ Кк а НК ко ВО4 Шия БІДА Нимаркьн ав с ши 003 одиє ШЧНИ, з с : ве її ш Е є Ом ЇЇ шк Ж і ВОНО нн ШКО КК що ЯК нн ШЕ а Ки Ве В ей по : а бо ни ши пе тань зчи без зшиванняFig. 17G VE KOYU Kk a NK ko VO4 Shiya BIDA Nymarkn av s shi 003 odie ShCHNY, with s : ve her sh E is Om HER shk Z i IT nn ShKO KK that HOW nn SHE a Ki Ve V ey po : a bo ni shi petan zchi without stitching Фіг. 19 ре00 Я ве і х о --- («РА ЕІ 8 ва з 5. В в- З оч иFig. 19 re00 Ya ve i h o --- ("RA EI 8 va z 5. V v- Z och y 52 . анти-КІ.Н "005 обробка52. anti-KI.N "005 treatment Фіг. 19 реоов 85 а Є г н-И во --2--- я З а в З ше СХ анти-КіМ «05 обробкаFig. 19 reoov 85 a Ye g n-Y vo --2--- i Z a in Z she Х anti-KiM «05 processing Фіг. 20Fig. 20 Б пана У І Я : ; пор о Ко ВЕ СКК є . я ен ВШ а Ко в В кн ОК ох, : й ов иа; Б ке. : вх РЕК Кт ОК НЄ ох в ки Бо ; Ко не фу о хх ОЗ ше НИ ех п а і ЧО у и Кк ши СО я зе тю КЕ КН по В. : ' Ша : ОВ щох Сех ке С р щей СА АЖ В пок ох о Ще Кн в ек о Б В КО Ку НЯ В я у кі Ох, ос Ко Ж ик ха 5 МК а КТ Ви хо сх фен ЕН ша ж ша Кан во й ХО НЕ кое і Не о о зла г: ша бю Я ми ЩЕ то 5 Ох а» КВ КА й як б. БУ СЯ БЕЗ У КВ я хх СОКИ ОБУ с ех ко В ШО БУ ж КК ех хх Й в 5. пока КУ Ой КВ за ЩІ г дк У У ВА жB of Mr. U and I : ; por o Co VE SKK is . I en VSH a Ko v V kn OK oh, : y ov ia; B ke. : вх РЕК Кт ОК НЕ ох в ки Бо ; Ko ne fu o xx OZ she NI eh p a i CHO u i Kk shi SO ya ze tyu KE KN po V. : ' Sha : OV schoh Seh ke S r scheche SA AJH V pok oh o She Kn v ek o B V KO Ku NYA V i u ki Oh, os Ko Z yk ha 5 MK a KT You ho sh fen EN sha zh sha Kan vo i HO NE koe i Ne o o zla g: sha byu I we STILL 5 Oh a» KV KA and as b. BU SYA WITHOUT U KV i xx JUICES BOTH s eh ko V SH BU same KK eh xx Y v 5. poka KU Oi KV for SHCHI g dk U U VA same Як. 5. А: НН я ок ве КВ ЗО Е я Вашу в с Ек МК ай ша оз ще що Я г кОм ки В КК о Ко З У 5 Я ин ВК КТ Уа МКМ ще з о г. о В КК КО Ж ЗВ НКУ Й ОО КИ НЕ Же хм ук Я Я Ми кВ КЕ КК Й як ОККО ОК КУ Вих: бю ще ЕЕ Ми ЩО ОО ДУ А и Кк х о а ОК в ке МК РЕ а а с а ие ке и й хуй МКК у ли К КО ККК ОХ СУЯ Яма ОКХ он ен он ВИ й ет я ще е ше 5. нев МК і и : ХХ Я я «ЖЕ ЗШ я о Хек Ва І - НН о ШЕ сеAs. 5. A. NKU Y OO KY NE Zhe hmm uk I I We kV KE KK Y as OKKO OK KU Vyh: byu more EE We SCHO OO DU A i Kkk h o a OK v ke MK RE a a s a ie ke i y huy MKK u ly K KO KKK OH SUYA Yama OKH on en on YOU and et i still e she 5. nev MK i i : ХХ I i "ЖЕ ZШ i o Hek Va I - NN o SHE se КК. у ду ЖЖ ак 2 ПЕВ КК Кн, Ко с о ван М при а ОМ зок КО ПК ох п Ж а о Я пд и Ки ки а Кг ан: НАХ о ВЕНИ: о кА В А в ад ови ОКХ по КІННИЙ як: р а: ка АЙ я ва о ех щи м «5. ШИ ЗМ а щи в шу и ше й В кра ; ом нях в пли ктощани не ї ОБ АН БНАЯ КО» іже: .KK. u du ЖЖ ak 2 PEV KK Kn, Kos o van M pri a OM zok KO PK oh p Z a o Ya pd y Ky ki a Kg an: NAH o VENI: o kA VA A v ad ovy OKH po KINNY as: r a: ka AI ya va o eh shchi m "5. ШИ ЗМа шчи шу и ше и В кра ; om niah v ply ktoshchans ne yi OB AN BNAYA KO" izhe: . ВК. пеясоко роя и МК Про КАК оз а ХМК жо ЕМ я МЕ КОКх КК М ух Ко же и ; фЖи везе Яке хо ех ПАН Я ; А Ов з ШИ БУК КК ВУ КУ ОНА ОИ ї У В сан в НИ о ж УМХ ЗК В ВИ пен ние соя жОсжх 5 М я КК ду : я КЕ КОХ: мое ї 5 КО ке : ОБ ка СЕМ и а ЗК поВБУщУя ХМК клоп он вн В ек яв Ж КК у в Пн Я КТК ЗА и о о п кН в о с. п КЕ . ная і Тк п КИ Ж КТК ЗОМ еВ НК Х ме Оу КК ОККО в КОТИ СУ КК ПЕ Я ся Яке п ох о Я і УК ук М КАК ЕВVK. peyasoko roya i MK About KAK oz a KHMK zho EM i ME KOKh KK M uh Kozhe y; fZhy veze Yake ho eh PAN Ya ; A Ov z SHY BUK KK VU KU ONA OI i U V san v NI o z UMH ZK V VY pennie soya zOszhh 5 M i KK du : i KE KOH: moe i 5 KO ke : OB ka SEM i a ZK poVBUschUya KhMK klop on vn V ek jav Zh KK u v Pn Y KTK ZA i o o p kN v o s. n KE. naya i Tk p KI Z KTK ZOM eV NK H me Ou KK OKKO v KOTY SU KK PE I sia Yake p oh o I i UK uk M KAK EV Ж ж. Ох у, ке У М ВХ КОХ КО пек ж Ж ЕОМ АХ ОО ВМ ВК ее ЗА МАК Ох ОКО МК Кох Фін як ТИН по ПК СЕН ди ї- в а ен Коен НН їх КАК ВЕК Ом - «фіг: 21Yes, yes. Oh y, ke U M VH KOH KO pek z Ж EOM AH OO VM VK ee ZA MAK Oh OKO MK Koch Fin as TIN po PK SEN di yi- v a en Cohen NN ih KAK VEK Om - "fig: 21 А Е г: еко уява: ях пари КОН ок я : Ко ов ОН 5 КЕ б МНН її пен вч сш ее и В КК В и и НИ ННЯ ав но М Нед Я С З ан о кру; ВЕ а В А и у ж ВН о х Не чення я хо я Е.А т. КВК о ех КО вх Си вн о ИЙ КИ ше мин и Ви М ов ой М ОНИ КИ ОН : Ме ове Ое М, Я у Кк ке не ; УК о і В В ДИ я КУ ток ик Ж вна МЕМ МЕЖ ШК М ВК ж и КК фе ти ВАК Я сх ум Все ші ок, ше є р ННІ г ЗА ка СУЯ, хе - ЗК ОК КК М ск к хЖ Ах ко щи я х ЕЕ п и и НН МК КК ке ох ва я жу Са и : КЕ о и в А Е, ше. ШЕ Б о БО в «Бі ж Ко и я «У КОХ СХ НО Х ен Не ох М о я з ОК я в , В Ку КК Ва Мов КК КК С ОА Ж З а ЕН АС у В я ще го ВО В НИ ВО ОК НИ Мая ре ПО КО ее Мена пн : ке я Ко о пе пох нн Но м НН да ИН з КК В о и ЖК ден ву зх пк ек Я З Ух Ка М ВН ЗОБА А НИК Ж же Кт МКК ДК Гох от ЗК З В то КУ 5 В я Я Се З в В Ку ж А р Є Я. : й зн ух МК м і вка ї фен Кн и ще : саше о і а щ НЕТ з пр су Во ка Б у Я і Ге УЖ о ще а кої ТО кон Тео КЕ а ще ке ЗИ БУМ ; пак : 0 ЕК : шо но о оКВе ЩА ВУ кН а ИЙ г аа ше ХЕ ОВ КЯ я Ка ве А МЕЖ : ти АН Ї в ВОНО А Б кі пах Хо й а и и КК НО Й АК МЕЛЕ, З Ве ки ГИ Я ще вив о бю жк ен о Ср А ВАН, : о АНА п : УК КК А ТАКО ВоКе ОА МК ЕК оз Кн их ШЕ ОО ІК Я ЕК МК СІВ кн шо КС ОМ КА ВК КК о ви и пе ох ж Її ше ВО А В В : ер о а но МН и ОВ АВ ЕК ОЙ Ах В ко КН я М КК. я Хе в НИ : її КК А ЕК ВІК шим ВАВ. Уч М МЕ м НИЙ ши ОН КО АК ок в ша а В ООA E g: eco imagination: yah pari KON ok ya : Ko ov ON 5 KE b MNN her pen vch ssh ee i V KK V i i NI NNYA av no M Ned I S Z an o kru; VE a VA i u zh VN o x Ne chenia i ho i E.A t. KVK o eh KO vyh Sy vyn o IY KY she min y You M oy M MONIK KY ON : Me ove Oe M, I u Kk ke not; UK o i V V DY i KU tok ik Ж вна MEM МЕЖ ШК M ВК ж i КК fe ty ВАК I шх um Vse shi ok, she is r NNI g ZA ka SUYA, he - ZK OK KK M sk k hЖ Ah ko shchi i x EE p i i NN MK KK ke ohva i zhu Sa i : KE o i v A E, she. SHE B o BO in "Bi zh Ko i i "U KOH SHH NO H en Ne oh M o i z OK i v , V Ku KK Va Mov KK KK S OAZ Z a EN AS u V i still ho VO V NI VO OK NI Maya re PO KO ee Mena pn : ke ia Ko o pe poh nn No m NN da YN z KK Vo i ZK den vu zh pk ek I Z Uh Ka M VN ZOBA A NIC Jhe Kt MKK DK Goh ot ZK Z V to KU 5 V i I Se Z v V Ku zh A r E Y.: y znuh MK m i vka i fen Kn i sce: sashe o i a scht NO z prsu Vo ka B u I i Ge UZH o still a koi TO kon Teo KE a still ke ZY BUM ; pak : 0 EK : sho no o okVe SCHA VU kN a IY g aa she HE OV KYA i Ka ve A MEZH : ti AN Y in IT A B ki pah Ho y a y i KK NO Y AK MELE, Z Ve ky GY I still learned about byu zhk en o Sr A VAN, : o ANA p : UK KK A TAKO VoKe OA MK EK oz Kn ih SHE OO IC I EK MK SIV kn sho KS OM KA VK KK o vy i pe oh zh Her she VO A V V : er o a no MN i OV AV EK OY Ah V ko KN i M KK. I He v NI : her KK A EK VIK shim VAV. Uch M ME m NY shi ON KO AK ok v sha a V OO Фіг. 2иFig. 2y А: Й | що ТОЗТА еВ я-а-- ДИКОГО ТИПУ о т / 1 19 00 1000 чО000 концентрація антитіла (-003) (нг/мл)A: And | that TOZTA eV i-a-- WILD TYPE o t / 1 19 00 1000 hO000 antibody concentration (-003) (ng/ml) з . ТАЕГПА щи: «ан ДИКОГО ТИПУ о, Й ох їж 0 ж 000 концентрація антитіла (-005) (нг/мл)with TAEGPA schi: «an WILD-TYPE o, Y oh eat 0 z 000 antibody concentration (-005) (ng/ml) Фіг. 23Fig. 23 Б: з я СТО . реве ---ДиИКОГО ТИП 2- Щ- й у ще у, ше Ї ! я і о. ще 7 юю 300 т чо концентрація антитіла (003) (нг/мл) . СОТОВ й - ДИКОГО ТИПУ 4 ж З чо ча 1000 чо концентрація антитіла (-005) (нгмл)B: with I STO. reve ---DiYKOHO TYPE 2- Щ- и у еще у, ше І ! I and Fr. another 7 yuyu 300 t cho concentration of antibody (003) (ng/ml) . WILD-TYPE CELLS 4 g with 1000 units of antibody concentration (-005) (ngml) Фіг. 23Fig. 23 В: з ж БОТЯЕ Мини нн сен ДИКОГО ТИПУ й Ж т : ' ге ши 1 70 100 чОо00 00 концентрація антитіла (-003) (нг/мл) З цк -- БОТАЕ Ши -«в- ДИКОГО ТИПУ га г! - 1 то 190 оо чо000 концентрація антитіла (005) (нг/мл)C: z z BOTYAE Mini nn sen WILD TYPE y Zh t : ' ge shi 1 70 100 chOo00 00 antibody concentration (-003) (ng/ml) Z tsk -- BOTAE Shi -«v- WILD TYPE ha g! - 1 to 190 oo per 000 antibody concentration (005) (ng/ml) Фіг. 23Fig. 23 КЗ о Ве зх ач В гу ЗІНеХ У СОТНЯ ії н -Ї їх Соуусередовище Б Ох 3 5 5. : веж ЇВ ж ї ще Я ох ДУХ. ОО Б ши ШЕ ШЕ НЕ Кк Я ше іш ШІ, я Ж Ящ щО і ІН: З: МИ Кк ШЕ ЕЕ канцентвація (мкм Ес З сіння сех ВН» і З но. 0 у НЕК п с п т, 0о- . Ми фи н мк Ох НамавкЕи МЕ середенніща ех Ме ща Як, ее п : ка о З Я 2 о: Я о: «ОЗ «ВО НеванкяЯ КЗ «кередовищеKZ o Vezhach V gu ZINEH U SOTNIA ii n -Yi ih Sousredovishche B Oh 3 5 5. : vezh YIV same i still I oh SPIRIT. OO B shi SHE SHE NE Kk I she ish SHI, I Z Yash schoO and IN: Z: WE Kk SHE EE concentration (mkm Es Z sinnia seh VN" and Z no. 0 in NEK p s p t, 0o-. We fi n mk Oh NamavkEy ME sredennyshche eh Meshcha Yak, ee p : ka o Z I 2 o: I o: "OZ "VO NevankyaYa KZ "keredovishche Фіг. 24Fig. 24 А вокіо ЛИ шк я ант ш-ш ЗО Мег/ЛМл г Де: сс а З мкг/мл о аомач й у Я . ОЗмкУмли Чо зомон ТИ о ВОЗ Мкмя Фо звжевкі у, | а МОО контроль ЩІ адже 75 Во 105 120 часіхв.) в вда в.дхов- є : Ки т що ЗО мепмл Ко ДА | 0 З мкг/мл є алко ДО а ОЗ меми зо ДИ о 0О3 мкг/мл о. чо кентоол ре оо. шо я дин вики нин сн, нин й МО ваній ль й це се ТлЬКИ ТрИС-НОЇ ее. о в 45 30 45 60 75 90 405 120 часіхв.)A vokio LY shk i ant sh-sh ZO Meg/LMl g Where: ss a Z μg/ml o aomach y Я . OZmkUmly Cho zomon TI about WHO Mkmya Fo zzhevki y, | and MOO control SHI after all 75 Vo 105 120 chasihv.) in vda v.dkhov-e: Ki t that ZO mepml Ko DA | 0 With mcg/ml is alko DO and OZ memes with DY about 0O3 mcg/ml o. cho kentool re oo. that I din vyky nin sn, nin and MO vanii l and this is only THREE-NOI ee. at 45 30 45 60 75 90 405 120 hours and minutes.) фіг. 25 (1/2)fig. 25 (1/2) В бохо сох10е Ши ш- 30 мкг/мл дО Ше и: З 40108. де стненннідннннннняя ф0 03 МК/МП - 30105 ла І о 0,03 мкг/мл СИН | 4 МОВ контроль роко дня де тільки трис-Ної 1ох1ое о 15 30 45 60 75 80 105 120 час хв.)In boho soh10e Shi sh- 30 mcg/ml dO She y: Z 40108. de stnennnidnnnnnnnyaya f0 03 MK/MP - 30105 la I o 0.03 mcg/ml SYN | 4 MOV control year of the day where only Tues-Noi 1oh1oe at 15 30 45 60 75 80 105 120 time min.) г б.охчое є Боже п НН ш ЗО мкм : дяк НИЙ 7 а Змкма о аж ра й . 0,3 мг/мл «че а Й - акт? ге 2 0,05 мкумМи г а МОЮ контроль то кто же сен ТіПЬКИ ТриЄ-НОЇ їх о- о 5 30 45 60 75 я 405 150 час (хв.g b.ohchoe is God p NN sh ZO mkm: thank you 7 a Zmkma o azh ra y . 0.3 mg/ml "what a Y - act? ге 2 0.05 мкумМы г a MY control that kto zhe sen TiPKY TriE-NOI their o- o 5 30 45 60 75 i 405 150 time (min. Фіг. 25 (2/9)Fig. 25 (2/9) А спе снОосрав 905 Що во Ше . ТНАЮВ 2 604 У я 4 о -005 о Бо | т ЛЬКІН ге до З г щк з Е ще і 104 ще: ! да ання т т оо ци 0 Е! 10 60 мкг/мл б СОС Ванна» люцифераза що до й а ТНЗОТО за з ЗМ . 03 у вд о -005 м ! У ТКА к і Ж ак 305 ЩІ. нн кни ни ви сн сн ук ти Й У ОО: п х! 10 400 МКМA spe snOosrav 905 What in She . TNAYUV 2 604 U i 4 o -005 o Bo | t LKIN ge to Z g shk with E more and 104 more: ! giving t t oo tsi 0 E! 10 60 μg/ml b SOS Vanna" luciferase to and a TNZOTO for with ZM . 03 in the west at -005 m! In TKA k and Zh ak 305 Shchi. nn kny ni you sn sn uk ti Y U OO: p h! 10,400 MKM Фіг. 26 (1/7)Fig. 26 (1/7) в Сацаї клітини Донор В 80 8о- пк же о «005 704 У и ТЕЗО7О з. Е К.М - й о 0 гу й " -ЮЗ3 8 803 // -а-ТНКІН Га зо Е що Ж за жо я са етно, 104 п- 001 04 040010 400 4000 10000 німиin Satsai cells Donor B 80 8opk same o "005 704 U i TEZO7O z. E K.M - y o 0 gu y " -YUZ3 8 803 // -a-TNKIN Ga zo E that Ж za zo i sa etno, 104 p- 001 04 040010 400 4000 10000 them Фіг. 265 (2/2)Fig. 265 (2/2)
UAA201204050A 2005-03-23 2006-03-23 CD38 ANTIBODY FOR MULTIPLE MYELOMA TREATMENT UA116520C2 (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200500429 2005-03-23
US66757905P 2005-04-01 2005-04-01
US69616305P 2005-07-01 2005-07-01
US72856105P 2005-10-20 2005-10-20
UAA200711639A UA98756C2 (en) 2005-03-23 2006-03-23 Antibody which binds to human cd38 for the treatment of cd38 mediated disease

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA116520C2 true UA116520C2 (en) 2018-04-10

Family

ID=50644285

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA200711639A UA98756C2 (en) 2005-03-23 2006-03-23 Antibody which binds to human cd38 for the treatment of cd38 mediated disease
UAA201204050A UA116520C2 (en) 2005-03-23 2006-03-23 CD38 ANTIBODY FOR MULTIPLE MYELOMA TREATMENT

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA200711639A UA98756C2 (en) 2005-03-23 2006-03-23 Antibody which binds to human cd38 for the treatment of cd38 mediated disease

Country Status (11)

Country Link
KR (1) KR20140033240A (en)
DK (1) DK1866338T3 (en)
ES (2) ES2644982T3 (en)
HU (2) HUE034962T2 (en)
LT (2) LT2567976T (en)
NZ (2) NZ600059A (en)
PL (1) PL1866338T3 (en)
PT (2) PT1866338T (en)
RS (1) RS55442B1 (en)
SG (1) SG10201610317VA (en)
UA (2) UA98756C2 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
LT2567976T (en) 2017-12-11
PL1866338T3 (en) 2017-04-28
PT2567976T (en) 2017-10-19
DK1866338T3 (en) 2017-01-02
LT1866338T (en) 2017-01-25
ES2644982T3 (en) 2017-12-01
SG10201610317VA (en) 2017-02-27
PT1866338T (en) 2016-12-14
UA98756C2 (en) 2012-06-25
NZ625944A (en) 2016-01-29
KR20140033240A (en) 2014-03-17
HUE030783T2 (en) 2017-06-28
HUE034962T2 (en) 2018-03-28
ES2606762T3 (en) 2017-03-27
NZ600059A (en) 2016-01-29
RS55442B1 (en) 2017-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6494053B2 (en) Antibodies against CD38 for the treatment of multiple myeloma
KR101624381B1 (en) Anti-human trop-2 antibody having antitumor activity in vivo
JP6141638B2 (en) Antibodies specific for cadherin-17
UA128035C2 (en) Antibodies that specifically bind pd-1 and methods of use
CN107849132A (en) Humanization and affinity maturation the antibody and application method for FcRH5
UA120247C2 (en) Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
EA016186B1 (en) Human monoclonal antibodies to cd70 and use thereof
JP2015532587A (en) LSR antibodies and their use for the treatment of cancer
UA103297C2 (en) Method of treating an immune related disorder by simultaneous targeting of il-17a and il-17f
CN110267678A (en) Anti- MIC antibody and application method
UA121464C2 (en) Anti-jagged1 antibodies and methods of use
JP2014502955A (en) antibody
UA126115C2 (en) Gitr antibodies, methods, and uses
JP6247209B2 (en) Antibody to ADP ribosyl cyclase 2
CA2886772C (en) Anti-hdlk-1 antibody having an anti-tumor activity in vivo
US9428586B2 (en) Heparanase splice variant
UA116520C2 (en) CD38 ANTIBODY FOR MULTIPLE MYELOMA TREATMENT
US20200024347A1 (en) Or10h1 antigen binding proteins and uses thereof
AU2014227437A1 (en) 4-1BB binding molecules
UA99276C2 (en) ISOLATED MONOCLONAL ANTIBODY WHICH BINDS TO ErbB3 AND USES THEREOF