UA110375C2 - Біологічно чиста культура bradyrhizobium japonicum для підсилення росту рослин - Google Patents
Біологічно чиста культура bradyrhizobium japonicum для підсилення росту рослин Download PDFInfo
- Publication number
- UA110375C2 UA110375C2 UAA201312667A UAA201312667A UA110375C2 UA 110375 C2 UA110375 C2 UA 110375C2 UA A201312667 A UAA201312667 A UA A201312667A UA A201312667 A UAA201312667 A UA A201312667A UA 110375 C2 UA110375 C2 UA 110375C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- strain
- registration number
- deposit
- mani
- strains
- Prior art date
Links
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims description 7
- 241000589174 Bradyrhizobium japonicum Species 0.000 title description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 90
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 83
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 77
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 112
- 102100026933 Myelin-associated neurite-outgrowth inhibitor Human genes 0.000 claims description 58
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 46
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 39
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 35
- ZNJFBWYDHIGLCU-HWKXXFMVSA-N jasmonic acid Chemical group CC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](CC(O)=O)CCC1=O ZNJFBWYDHIGLCU-HWKXXFMVSA-N 0.000 claims description 26
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 18
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 claims description 17
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 claims description 17
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 16
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 16
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 16
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 14
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 14
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 14
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- ZNJFBWYDHIGLCU-UHFFFAOYSA-N jasmonic acid Natural products CCC=CCC1C(CC(O)=O)CCC1=O ZNJFBWYDHIGLCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 12
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 claims description 11
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 claims description 10
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims description 9
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 7
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 5
- PXQAMVFVNSKEFN-NGCHAASRSA-N CCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]3O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]1O Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]3O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]1O PXQAMVFVNSKEFN-NGCHAASRSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 58
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 abstract description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 13
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 235000010958 polyglycerol polyricinoleate Nutrition 0.000 abstract 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 55
- 239000000463 material Substances 0.000 description 35
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 26
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 18
- -1 and clays (eg Substances 0.000 description 14
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 13
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 11
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 7
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 7
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 7
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 6
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- AGJBKFAPBKOEGA-UHFFFAOYSA-M 2-methoxyethylmercury(1+);acetate Chemical compound COCC[Hg]OC(C)=O AGJBKFAPBKOEGA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 101100190537 Homo sapiens PNN gene Proteins 0.000 description 5
- 102100038374 Pinin Human genes 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 5
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000024121 nodulation Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N Bromadiolone Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC(Br)=CC=2)C=CC=1C(O)CC(C=1C(OC2=CC=CC=C2C=1O)=O)C1=CC=CC=C1 OWNRRUFOJXFKCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N nalidixic acid Chemical compound C1=C(C)N=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=C1 MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000210 nalidixic acid Drugs 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- GEWDNTWNSAZUDX-WQMVXFAESA-N (-)-methyl jasmonate Chemical compound CC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](CC(=O)OC)CCC1=O GEWDNTWNSAZUDX-WQMVXFAESA-N 0.000 description 2
- ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran-2-one Chemical compound O=C1C=CC=CO1 ZPSJGADGUYYRKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004649 C2-C8 alkynyl group Chemical group 0.000 description 2
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000016063 arterial thoracic outlet syndrome Diseases 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N daidzein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 2
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 2
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002216 flavonol derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 description 2
- HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N formononetin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- GEWDNTWNSAZUDX-UHFFFAOYSA-N methyl 7-epi-jasmonate Natural products CCC=CCC1C(CC(=O)OC)CCC1=O GEWDNTWNSAZUDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 2
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 description 1
- VFDRGIJZSHUKEI-UISOVIGQSA-N (3s,4r,5r,6s)-3,4,5,6-tetrahydroxyheptan-2-one Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(C)=O VFDRGIJZSHUKEI-UISOVIGQSA-N 0.000 description 1
- PGOOBECODWQEAB-UHFFFAOYSA-N (E)-clothianidin Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C(/NC)NCC1=CN=C(Cl)S1 PGOOBECODWQEAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FTVWIRXFELQLPI-CYBMUJFWSA-N (R)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- NUPJIGQFXCQJBK-UHFFFAOYSA-N 2-(4-isopropyl-4-methyl-5-oxo-4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yl)-5-(methoxymethyl)nicotinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(COC)=CN=C1C1=NC(C)(C(C)C)C(=O)N1 NUPJIGQFXCQJBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQQIAHNFBAFBCS-UHFFFAOYSA-N 2-[2-chloro-5-(1,3-dioxo-4,5,6,7-tetrahydroisoindol-2-yl)-4-fluorophenoxy]acetic acid Chemical compound C1=C(Cl)C(OCC(=O)O)=CC(N2C(C3=C(CCCC3)C2=O)=O)=C1F GQQIAHNFBAFBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CABMTIJINOIHOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-methyl-5-oxo-4-(propan-2-yl)-4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yl]quinoline-3-carboxylic acid Chemical compound N1C(=O)C(C(C)C)(C)N=C1C1=NC2=CC=CC=C2C=C1C(O)=O CABMTIJINOIHOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEFDLKXOSOFUIN-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-4-pentenoic acid d-lactone Chemical class O=C1CCC=CO1 VEFDLKXOSOFUIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241001136249 Agriotes lineatus Species 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241001124076 Aphididae Species 0.000 description 1
- 101100412417 Arabidopsis thaliana REM5 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 239000005730 Azoxystrobin Substances 0.000 description 1
- 208000034309 Bacterial disease carrier Diseases 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 239000005476 Bentazone Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000824799 Canis lupus dingo Species 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256135 Chironomus thummi Species 0.000 description 1
- 241001414720 Cicadellidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000005497 Clethodim Substances 0.000 description 1
- 239000005499 Clomazone Substances 0.000 description 1
- 239000005888 Clothianidin Substances 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 241001465977 Coccoidea Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005781 Fludioxonil Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005566 Imazamox Substances 0.000 description 1
- 239000005981 Imazaquin Substances 0.000 description 1
- XVOKUMIPKHGGTN-UHFFFAOYSA-N Imazethapyr Chemical compound OC(=O)C1=CC(CC)=CN=C1C1=NC(C)(C(C)C)C(=O)N1 XVOKUMIPKHGGTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005906 Imidacloprid Substances 0.000 description 1
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000014647 Lens culinaris subsp culinaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000043158 Lens esculenta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000005807 Metalaxyl Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 1
- 241000018242 Obba <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000589157 Rhizobiales Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- CSPPKDPQLUUTND-NBVRZTHBSA-N Sethoxydim Chemical compound CCO\N=C(/CCC)C1=C(O)CC(CC(C)SCC)CC1=O CSPPKDPQLUUTND-NBVRZTHBSA-N 0.000 description 1
- 239000005941 Thiamethoxam Substances 0.000 description 1
- 241000953561 Toia Species 0.000 description 1
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N apigenin Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008714 apigenin Nutrition 0.000 description 1
- KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N apigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117893 apigenin Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N azoxystrobin Chemical compound CO\C=C(\C(=O)OC)C1=CC=CC=C1OC1=CC(OC=2C(=CC=CC=2)C#N)=NC=N1 WFDXOXNFNRHQEC-GHRIWEEISA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- ZOMSMJKLGFBRBS-UHFFFAOYSA-N bentazone Chemical compound C1=CC=C2NS(=O)(=O)N(C(C)C)C(=O)C2=C1 ZOMSMJKLGFBRBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- CNBGNNVCVSKAQZ-UHFFFAOYSA-N benzidamine Natural products C12=CC=CC=C2C(OCCCN(C)C)=NN1CC1=CC=CC=C1 CNBGNNVCVSKAQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 150000001789 chalcones Chemical class 0.000 description 1
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- RIUXZHMCCFLRBI-UHFFFAOYSA-N chlorimuron Chemical compound COC1=CC(Cl)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(O)=O)=N1 RIUXZHMCCFLRBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- SILSDTWXNBZOGF-JWGBMQLESA-N clethodim Chemical compound CCSC(C)CC1CC(O)=C(C(CC)=NOC\C=C\Cl)C(=O)C1 SILSDTWXNBZOGF-JWGBMQLESA-N 0.000 description 1
- KIEDNEWSYUYDSN-UHFFFAOYSA-N clomazone Chemical compound O=C1C(C)(C)CON1CC1=CC=CC=C1Cl KIEDNEWSYUYDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000007240 daidzein Nutrition 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 1
- 150000002190 fatty acyls Chemical group 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003949 flavanone Natural products 0.000 description 1
- 150000002208 flavanones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011981 flavanones Nutrition 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N fludioxonil Chemical compound C=12OC(F)(F)OC2=CC=CC=1C1=CNC=C1C#N MUJOIMFVNIBMKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N formononetin Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC=CC=C2C1=O RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 description 1
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 description 1
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000010440 gypsum Substances 0.000 description 1
- 229910052602 gypsum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N hesperetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N hesperetin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010209 hesperetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001587 hesperetin Drugs 0.000 description 1
- 150000008273 hexosamines Chemical group 0.000 description 1
- FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N homoeriodictyol Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N imidacloprid Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C1/NCCN1CC1=CC=C(Cl)N=C1 YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940056881 imidacloprid Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N lactofen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC(C)C(=O)OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 CONWAEURSVPLRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005481 linolenic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N luteolin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N luteolin Natural products OC1=CC(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009498 luteolin Nutrition 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- ZQEIXNIJLIKNTD-GFCCVEGCSA-N metalaxyl-M Chemical compound COCC(=O)N([C@H](C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N methyl N-(2,6-dimethylphenyl)-N-(methoxyacetyl)alaninate Chemical compound COCC(=O)N(C(C)C(=O)OC)C1=C(C)C=CC=C1C ZQEIXNIJLIKNTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000004674 methylcarbonyl group Chemical group CC(=O)* 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 229910052901 montmorillonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 description 1
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 238000005935 nucleophilic addition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229930195732 phytohormone Natural products 0.000 description 1
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 1
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- NWWZPOKUUAIXIW-FLIBITNWSA-N thiamethoxam Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C/1N(C)COCN\1CC1=CN=C(Cl)S1 NWWZPOKUUAIXIW-FLIBITNWSA-N 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Винахід належить до бактеріальних штамівта композицій на їх основі, які підсилюють ріст рослин (PGPR), мають підвищену конкурентну перевагу при колонізації бобових рослин та підвищують загальну продуктивність росту бобових рослин. Також винахід розкриває спосіб скринінгу та добору бактеріальних штамів, що мають вищезгадані вигідні характеристики.
Description
бобових рослин та підвищують загальну продуктивність росту бобових рослин.
Також винахід розкриває спосіб скринінгу та добору бактеріальних штамів, що мають вищезгадані вигідні характеристики.
Посилання на перелік послідовностей
Дана заявка містить перелік послідовностей у формі, що читається комп'ютером. Форма, що читається комп'ютером, включена в даний документ посиланням.
Посилання на депозит біологічного матеріалу
Дана заявка містить посилання на депозит біологічного матеріалу, цей депозит включений в даний документ посиланням. Для повної інформації дивись таблицю 1.
Галузь винаходу
Даний винахід відноситься до виділених бактеріальних штамів та способу добору бактеріальних штамів із підвищеними конкурентоспроможністю та характеристиками продуктивності.
Передумови винаходу
Для того, щоб підтримувати нормальний ріст, рослини повинні добувати ряд елементів з грунту, в якому вони зростають. Ці елементи включають азот та так називані мікронутрієнти (наприклад, мідь, залізо та цинк), але багато грунтів мають недостатньо таких елементів або вони містять їх тільки у формах, які не можуть легко поглинатися рослинами (як правило вважають, що важливі елементи не можуть легко поглинатися рослинами, крім випадків, коли вони присутні у розчиненій формі у грунті). Азот є важливим елементом для більшості рослин, оскільки він грає певну роль в синтезі амінокислот, білків, нуклеотидів, нуклеїнових кислот, хлорофілу, коферментів та у загальному рості та здоров'ї рослини. Для перешкоджання таким нестачам зазвичай до грунту вносять джерела елементів, котрих не вистачає, для того, щоб підвищити темпи росту та врожаї, що отримують від сільськогосподарських культур. Наприклад, нітрат та/або амоній часто додають в грунт для перешкоджання браку доступного азоту.
В галузі рослинництва добре відомо, що багато оброблюваних культур потребують, щоб грунт надавав рослині відносно великі кількості азоту. Примітні виключення з тих рослин, що потребують азот через грунт, являють собою рослини з родини бобових.
А саме, бобові рослини відмінні від не бобових рослин своєю здатністю зв'язувати атмосферний азот в аміак. Здатність зв'язувати атмосферний азот в придатне джерело азоту для рослини усуває для рослини необхідність отримувати азот з грунту. Зв'язування азоту, однак, потребує симбіотичних відносин між бобовою рослиною та природними бактеріями в
Зо грунті. Одні з найбільш ретельно вивчених партнерів в симбіотичних відносинах є бактерії, що належить до роду Вгадугпігорбішт або КПігобішт (Сгевзпоїй, Р. (1999). ІЗепійісайіоп ої Ріапі Сепеб5
Іпмоїмед іп Ріапі-Місторе Іпіегасіюп5; іасеу, С. б Кееп, Т. (Еа.), Ріапі-Місторе Іпіегасіюпв5 (А ей.) (СН. 6). 5. Раці: АРБ5 Ргев5).
Симбіоз зазвичай досягається за допомогою обміну складними двосторонніми сигналами між рослиною та мікробом і мікробом та рослиною. Типово, рослинні фактори, такі як флавоноїди та подібні до флавоноїдів речовини, стимулюють колонізацію бактерій в кореневій бульбочці бобової рослини (Огев5поїй, 1999). Після того, як бактерії колонізували кореневу бульбочку, бактерії здійснюють морфологічні зміни в рослини, а саме завивання кореневого волоска та розвиток нового органа кореня - бульбочки (Сгевз5Ппоїї, 1999). Бульбочка дає можливість формування нового фізіологічного оточуючого середовища для бульбочки, стимулюючи диференціювання бактерій в азотфіксуючий ендосимбіонт, або бактероїд, для колонізованої рослини (Сгеззпоїї, 1999).
Добре відомо, що рухливість та хемотаксис ЕПілобіаї є важливими властивостями для конкурентоспроможності штаму. Наприклад, АкКпабеооїїї, еї аІ., 2008, РЕМ5 Містгобіо!. І ей. 282: 115-123 обмірковує отримання спонтанного мутантного штаму від ОБОА 110 з підвищеною рухливістю, яка посилює утворення бульбочок у порівнянні з його штамом дикого типу. Крім того, Маїег, еї аї., 1990, Аррі. Епмігоп. Місгобіо!ї. 56 (8): 2341-2346 обмірковує роль молібдену під час біологічного процесу зв'язування азоту. Більш того, АЇме5, еї аї., 2003, Ріапі апа Зої 252: 1-9 обмірковує інокулянти, отримані з сої, застосовувані в Бразилії, та важливість конкурентоспроможності для ефективного зв'язування азоту. Зрештою, Віоет, «.Р., еї а!., 2001,
Віо ЕРепії. Боїв 33: 181-189 повідомляє про важливість конкурентоспроможності при доборі штаму. При дослідженні дослідники застосовують способи генної інженерії, щоб ввести репортерний ген (505) в їх індексний штам у якості способу визначення конкурентоспроможності штамів (Віоет, еї аІ. 2001). Оскільки здійснюване дослідження (Віоет, ег а. 2001) потребувало широкого застосування хімічного забарвлювання та технології мікроскопічного дослідження, повідомлений спосіб залишається непрактичним підходом для скринінгу великих зразків мікробів.
Метою даного винаходу є забезпечення суперконкурентної(их) культури (культур) бактерій з роду Вгадугпігобіа для колонізування бобових рослин, що перевершує комерційно доступні 60 штами, наприклад, промисловий штам ОБОА 532С, у здатності до колонізування. Ще одною метою даного винаходу є забезпечення суперконкурентної(их) культури (культур) бактерій з роду Вгадугпі2обіа щодо колонізування бобових рослин, здатної(их) підвищити ефективність при стимуляції росту бобових рослин у порівнянні з комерційно доступними штамами, наприклад, промисловим штамом ОБОА 5326.
Короткий опис винаходу
Для поліпшення загального стану здоров'я рослини та доступності придатного до використання джерела азоту для рослин існує потреба у бактеріальних штамах, які є ліпшими у колонізуванні рослини та підсиленні загального росту рослини. Виділені штами даного винаходу реалізує ці переваги.
Даний винахід відноситься до виділених штамів бактерій, які мають щонайменше наступні поліпшені особливості у порівнянні з комерційно доступними штамами, наприклад, промисловим штамом ЗОБА 532С, де поліпшені властивості включають, без обмеження: а. підвищену конкурентоспроможність щодо колонізування рослини та р. підвищену ефективність при стимуляції росту рослини.
Даний винахід спрямований на біологічно чисту(ті) культуру(и) штаму(ів) Вгадугпі2оБбіа )аропісит: штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50593 (депонований також під номером МКК. В-59572); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50586 (депонований також під номером МКК. В-59565); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50588 (депонований також під номером МКК. В-59567); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50587 (депонований також під номером МКК. В-59566); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50589 (депонований також під номером МКК. В-59568); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50591 (депонований також під номером МКК. В-59570); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50590 (депонований також під номером МКК. В-59569); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50594 (депонований також під номером МКК. В-50493); штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729 та штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50730 або комбінацію щонайменше двох або більше вищевказаних депонованих штамів.
Даний винахід також відноситься до виділеного(их) бактеріального(их) штаму(ів) даного винаходу, включаючи штам(и), який(які) є близькоспорідненим(ми) до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 1655РрДНК, та який характеризується щонайменше 9595 ідентичності з будь-яким з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК.
Даний винахід, крім того, включає спосіб підсилення росту рослини, що включає застосування щодо рослин, насіння рослин або грунту, що оточує рослини або насіння рослин, композиції що містить щонайменше один зі штамів даного винаходу або комбінацію щонайменше двох або більше із вищевказаних депонованих штамів.
Даний винахід, крім того, включає композиції, що містять один або декілька штамів даного винаходу, включаючи з агрономічно прийнятним носієм.
Короткий опис графічних матеріалів
На фіг. 1А представлено зображення ПЛР-гелю, на якому видно унікальний праймер 209, специфічний до ОБОА 53260.
На фіг. 18 представлено зображення ПЛР-гелю, на якому видно праймер 209, специфічний до ОБОА 532С, та природні штами.
На фіг 2А представлено зображення ПЛР-гелю, на якому видно штам ШБОА 5320
Вгадугпі2обіа ї(аропісит у якості конкурентно домінантного штаму для утворення бульбочок сої.
На фіг. 28 представлено зображення ПЛР-гелю, на якому видно штами, відмінні від штаму бо ИБОА 532С Вгадугті2обБіа |іаропісит, у якості конкурентно домінантного штаму для утворення бульбочок сої.
На фіг. ЗА представлена дендограма, отримана в результаті ДНК-фінгерпринтування виділених штамів та ОБОА 532: 138 - МАН 8-50589 (депонований також під номером МКК В-59568); 13 - МАНІ 8в-50586 (депонований також під номером МАНІ. В-59565); рі40- ОБОА 5320; 184 - МАНІ 8-50594 (депонований також під номером МКК В-50493); 142 - МАН 8-50590 (депонований також під номером МКК В-59569); 130 - МАВ В-50587 (депонований також під номером МКК В-59566); 65 - МАВ. 8-50588 (депонований також під номером МКК. В-59567); 198 - МАН. 8-50592 (депонований також під номером МКК В-59571); 135 - МАВ В-50591 (депонований також під номером МКК В-59570) та 48 - МАНІ 8-50593 (депонований також під номером МАК. В-59572).
На фіг. ЗВ представлена дендограма, отримана в результаті ДНК-фінгерпринтування виділених штамів та ШБОА 5320: 138 - МАН 8-50589 (депонований також під номером МКК В-59568); 13 - МАНІ в-50586 (депонований також під номером МАК В-59565); 140 - ОБРА 5320; 184 - МАНІ 8-50594 (депонований також під номером МКК. В-50493); 142 - МАН 8-50590 (депонований також під номером МКК В-59569); 130 - МАВ В-50587 (депонований також під номером МКК В-59566); 65 - МАВ. 8-50588 (депонований також під номером МКК. В-59567); 198 - МАН 8-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571); 135 - МАВ В-50591 (депонований також під номером МКК В-59570); 48 -- МАНІ 8-50593 (депонований також під номером МАК. В-59572) 318 - МАНІ. в-50727, 278 - МАНІ. в-50726, 727 - МАНІ. В-50730, 370 - МАНІ. в-50728 та
Зо 518 - МАНІ. 8-50729.
Детальний опис винаходу
Даний винахід забезпечує виділені штами бактерій, що мають щонайменше наступні поліпшені властивості у порівнянні з комерційно доступними штамами, наприклад, промисловим штамом О5ОА 532С, де поліпшені властивості включають, без обмеження: а. підвищену конкурентоспроможність щодо колонізування рослини та р. підвищену ефективність при стимуляції росту рослини. «Бактеріальний(ні) штам(и)», як використовується в даному документі, означає бактеріальні штами, що є діазотрофами. Іншими словами, це бактерії, які є симбіотичними азотфіксуючими бактеріями. Необмежуючі приклади бактеріальних штамів, які використовуються в даному документі, включають, без обмеження, бактерії з родів ЕПігобішт 5рр. (наприклад, К. сеїміо5іїуїсит, А. дає|)еєопепзе, Н. ей, НЯ. даІєдає, НА. даїїйсит, В. діагаіпії, А. Наіпапепзе, В. пиашіепзе, В. іпаідоїтегає, В. Ієдитіпозагит, В. Іое5зепвзе, В. Іюріпі, А. Інвйапит, А. топдоїепзе,
К. тійнопепзе, К. 5цШає, К. ігорісі, ЕК. ипаїсоїа та/або ЕК. уапдіїпдепзе), Вгадутпігобішт 5рр. (наприклад, В. реїе, В. сапагієпзе, В. еїКапії, В. іпотоїепзе, В. іаропісит, В. |ісатає, В. Іаопіпдепве,
В. распугппігі та/"або В. усаптіпдепзе), Агогпі2обішт 5рр. (наприклад, А. саціподап5 та/або А. доерегеєїпегає), біпогпі2обішт 5рр. (наприклад, 5. абгі, 5. аапаєгепв5, 5. атегісапит, 5. арогів, 5. їтедії 5. іпаіаеєпве, 5. Ковієпвє, 5. Киттегом/іає, 5. тедісає, 5. теїШоїї, 5. техісапив, 95. тогеїеп5зе, 5. запеїї, 5. їегапдає та/або 5. хіпіапдепзе), МезогПпігобішт в5рр (М. аїріліає, М. атогрпає, М. спасоепзе, М. сісегі, М. ПпиакКиї, М. Іоїї, М. теаййетапецйт, М. ріцітагпит, М. взеріепітпопаї!є, М. їетрегайшт, М. Чапепапепзе). В одному конкретному варіанті здійснення бактеріальний(ні) штам(и) даного винаходу додатково включає(ють) штами Вгадуті2орійт )аропісит з реєстраційними номерами, наданим при депонуванні, МКК. В-50592 (депонований також під номером МКК В-59571), МАНІ 8-50593 (депонований також під номером МКК В- 59572), МАНІ В8-50586 (депонований також під номером МАК В-59565), МАНІ Вв-50588 (депонований також під номером МКК В-59567), МАНІ В8-50587 (депонований також під номером МКК. В-59566), МАНІ 8-50589 (депонований також під номером МКК В-59568),
МАНІ. 8-50591 (депонований також під номером МКК. 8В-59570); МАВ. В-50590 (депонований також під номером МКК В-59569); МАНІ. 8-50594 (депонований також під номером МКК В- 50493); МАВ В-50726; МАВ В-50727; МАВ В-50728; МАНІ 8-50729; МАВІ В-50730 або 60 комбінацію щонайменше двох або більше вищевказаних депонованих штамів, включаючи два з вищевказаних штамів, щонайменше три з вищевказаних штамів, щонайменше чотири з вищевказаних штамів, щонайменше п'ять з вищевказаних штамів, щонайменше шість з вищевказаних штамів, щонайменше сім з вищевказаних штамів, щонайменше вісім з вищевказаних штамів, щонайменше дев'ять з вищевказаних штамів, щонайменше десять з вищевказаних штамів, щонайменше одинадцять з вищевказаних штамів, щонайменше дванадцять з вищевказаних штамів, щонайменше тринадцять з вищевказаних штамів, аж до всіх та включаючи всі з вищевказаних штамів.
Вираз «комерційно доступний(ні) штам(и)» означає комерційно доступні бактеріальні штами, наприклад, ОЗБА 532С, ОБОА 110, ОБОА 123, ОБОА 127, ОББА 129 і т. д. (Стедап, Р.В., еї аї., 1989, Аррі. апа Епміго. Містобіої. 55 (10): 2532-2536).
Як використовується в даному документі, «підвищена конкурентоспроможність» та/або «підвищене утворення бульбочок» за визначенням позначає бактеріальний(ні) штами), які мають переважний процент заселеності бульбочок, наприклад, щонайменше 5095, щонайменше 5596, щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8096, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92965, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97965, щонайменше 9895, щонайменше 9995 до 10095 заселеності бульбочок. «Підвищену конкурентоспроможність» визначали згідно з докладним(и) методом(ами), описаним(и) нижче (дивись Матеріали та способи: «Протокол первинного скринінгу» та «Протокол дослідження конкуренції»).
Як використовується в даному документі, вираз «бульбочка» за визначенням включає, але не повинен обмежуватися, детермініновані бульбочки, недетерміновані бульбочки або їх комбінацію. Приклади детермінованих бульбочок та недетермінованих бульбочок добре відомі в галузі техніки та описані в Оепізоп, К. Е., 2000, Те Атег. Маїймншгаїїбї. 156 (6): 567-576.
Детерміновані бульбочки знаходять на видах Сіусіпе, І оїш5 або РПпазеоїц5, вони є круглими та сферичними за формою (Оепізоп, 2000). Детерміновані бульбочки ростуть тільки впродовж обмеженого періоду часу - типово декілька тижнів (Оепізоп, 2000). На відміну від детермінованих бульбочок, недетерміновані бульбочки знаходять на видах Медісадо, Тгоїїшт та Різічт, вони мають витягнуту форму та ростуть постійно (Оепізоп, 2000). «Заселеність бульбочок» є виразом відомим в галузі техніки (МеОегтоїй Т.К. 5 сгапат, Р.Н.,
Зо Аррі. апа ЄЕпмігоп. Містобіої. 55(10): 2493-2498). Як використовується в даному документі, «заселеність бульбочок» означає відсоток бульбочок, заселених бактеріальним(ними) штамом(ами), відмінним(іними) від комерційно доступного штаму Вгаадугпі2обішт, наприклад
ОБОА 532С, та/або число бульбочок, що містять конкретний(ні) бактеріальний(ні) штами), відмінний(ні) від комерційно доступного штаму Вгадугпі2обішт, наприклад ОБОА 532С, поділене на загальне число бульбочок, що містять всі бактеріальні штами. «Заселеність бульбочок» визначали згідно з докладним(и) способом(ами), описаним(и) нижче (дивись Матеріали та способи: «Протокол первинного скринінгу» та «Протокол дослідження конкуренції»), та може бути визначена в результаті аналізу бульбочок з рослин, отриманих або зі зразків з теплиці, або зі зразків з поля. Як приклад, відсоток заселеності бульбочок - АЛАВ), де А являє собою число бульбочок, що містять конкретний(ні) бактеріальний(ні) штам(и), відмінний(ні) від комерційно доступного штаму Вгадугпігобішт, наприклад, ОБОА 532С, та В являє собою число бульбочок, які містять комерційно доступний штам Вгадугпіг2обічшт, наприклад, ОБОА 532. В галузі техніки добре відомо, що, незважаючи на рідкі виключення, одна бульбочка буде містити тільки один бактеріальний штам (Чопп5іоп, А.ЛМУ.В., еї аї., 1974, 9. сзеп. Місгобіо! 87: 343-350; Оипнат, 0. Н. 4
Ваїдм/п, І.С., 1931, бої бсіеєпсе 32: 235-249; допп5зоп, НМУ., єї аї., 1963, Адгопо. 9. 55: 269-271;
Оидтап, МУ.Р. 8. ВгосКмуеїЇ, 9У., 1968, у. Аадгісці!. Вез. 19: 739-747; Місої, Н. а Тнопоп, Н.О, 1941,
Ргос. Воу. бос. В 130, 32-59; Ниапез, 0.О0., б. Міпсепі, У.М., 1942, Ргос. ої Ійе І іппепап 5ос. ої
Мем оці У/аїез 67: 142-152; та Міпсепі, У.М. 8. УМаїегв, І.М., 1953, у). Сеп. Містобіо!. 9: 357-370).
Як використовується в даному документі, «підвищена ефективність при стимуляції росту» включає щонайменше одне зі збільшеного врожаю рослини, вимірюваного у перерахунку на бушель/акр, збільшеної кількості плодів, збільшеної кількості коренів, збільшеної довжини коренів, збільшеної маси коренів, збільшеного об'єму коренів, збільшеної площі листя, збільшеної густоти стояння рослин, збільшеної сили рослини та/або підвищеної здатності зв'язувати азот (Мг). «Підвищену ефективність при стимуляції росту» визначали згідно з докладним(ми) способом(ами), описаним(и) нижче (дивись Матеріали та способи: «Протокол первинного скринінгу» та «Протокол дослідження продуктивності»), та вона може бути визначена в результаті аналізу рослин, отриманих або зі зразків з теплиці, або зі зразків з поля.
Як використовується в даному документі, «збільшена кількість плодів» означає збільшене загальне число бобів сої на рослині сої та/або збільшену загальну суху вагу бобів сої на рослині бо сої.
Як використовується в даному документі, «загальна суха вага» означає вагу рослинної речовини (наприклад, плід рослини, боби рослини, корені рослини, бульбочки рослини, цілі рослини, неповні рослини і т. д.) після інкубації при 807С впродовж визначеного періоду часу, наприклад, щонайменше 4 годин, щонайменше 8 годин, щонайменше 12 годин, щонайменше 24 годин, щонайменше 48 годин і т. д., або будь-якого періоду часу, необхідного для висушування рослинної речовини. Необхідно розуміти, що час сушіння для цілей визначення «загальної сухої ваги» залежить від багатьох факторів. Необмежуючі фактори, які можуть впливати на час сушіння, включають матеріал, що треба висушити, масу матеріалу, що треба висушити, кількість матеріалу, що треба висушити та/або їх комбінації. Інкубацію можна виконувати у будь- якому обладнанні з контрольованою температурою, застосовуваному у галузі техніки. Для цілей даного винаходу «загальну суху вагу» визначали за допомогою термостата Ерреподогї Іппома? 428.
Вираз «підвищена здатність зв'язувати азот (Мг)», як використовується в даному документі, означає, що виділені бактерії можуть збільшувати зв'язування азоту (Мг). Згідно з «Протоколом дослідження продуктивності», представленим нижче (Матеріали та способи), відносна здатність бактерій зв'язувати азот (М2) може бути кількісно визначена за допомогою вимірювання загального вмісту азоту рослини, використовуючи стандартні способи визначення кількості азоту, відомі фахівцеві в даній галузі техніки (наприклад, спосіб К'єльдаля і т. д.). Дивись
ТаКапабвні, М., єї аі., 2007. ОріаКе, А55ітіїіайоп, апа Моме! Меїабоїїєт ої Мігодеп Оіохіде іп Ріапів, р. 109-118. Іп М. УМіеу (єд9.), Рпуїогетедіайоп: Меїнодз» апа Немієм/в5, мої. 23. Нитапа Ргев55, Мем
УоКк; Вгетпетг, У. М. 1965. Тоїа! пітодеп, р. 1149-1178. Іп С.А. ВіаскК (єд.), МеїйоодЗз ої вої! апа|узів, мо! 2. Атегісап босієїу г Адгопоту, Мадізоп; Зспапк, 5.С., еї а!І., 1981, Арр. апа Епміго.
Містгобіо!., 41 (2): 342-345.
У ще іншому аспекті даного винаходу виділений(ні) бактеріальний(ні) штам(и) мають підвищену витривалість до температур. «Підвищена витривалість до температур» означає діапазон температур, при яких виділений(ні) бактеріальний(ні) штам(и) здатні рости, наприклад, максимальні та мінімальні температури, при яких виділений(ні) штам(и) Вгадаугпігорійт може(уть) рости. В одному аспекті «підвищену витривалість до температур» визначали відповідно до «Протоколу температурного режиму», описаного нижче (Матеріали та способи).
Зо У ще іншому аспекті даного винаходу виділений(ні) бактеріальний(ні) штам(и) є природно стійким(ми) до гліфосату. В одному аспекті «підвищену витривалість до температур» визначали відповідно до «Протоколу профілю стійкості до гліфосату», описаного нижче (Матеріали та способи).
В іншому аспекті виділений(ні) бактеріальний(ні) штам(и) даного винаходу включає(ють) штам(и), що є близькоспорідненим(ми) до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК. Дивись 5басКебгапаї Е, еї аїЇ., «Керогп ої Ше ай пос соттіШее ог Ше ге-емаІцайноп ої (Ше 5ресіез5 дейпйіоп іп Ббасіегіоіоду,» пі У Бузі Емо! Місгобіо|. 52(3):1043-7 (2002) щодо застосування ідентичності послідовності 165 рДНК для визначення спорідненості у бактерій. У варіанті здійснення щонайменше один штам є щонайменше на 9595 ідентичним до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНнК, щонайменше на 9695 ідентичним до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 9795 ідентичним до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 9895 до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 98,595 ідентичним до будь-якого з вищевказаних штамів виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 9995 ідентичним до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, або щонайменше на 99,595 до будь-якого з вищевказаних штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК.
В іншому варіанті здійснення даний винахід включає спосіб виділення бактеріального(них) штаму(мів), що має(ють) підвищену конкурентоспроможність для заселення бульбочок бобової рослини та підвищену ефективність стимуляції росту бобової рослини. Як використовується в даному документі, вираз «виділяють, виділяє, виділення та/або виділений і т. д.» означає, що згадуваний матеріал видаляють з оточуючого середовища, в якому його зазвичай знаходять.
Спосіб включає, між іншим, етапи, на яких: а. одержують бактеріальний|(ні) штами) із зразка грунту;
Б. бобову рослину піддають впливу бактеріального(них) штаму(ів) та комерційно доступного штаму; с. відбирають бактеріальний(ні) штам(и), який (які) є більш конкурентним(и), ніж комерційно доступний штам щодо заселення бульбочок бобової рослини; бо 0. аналізують вибраний(ні) бактеріальний(ні) штам(и), який(які) є більш конкурентними),
ніж комерційно доступний штам щодо заселення бульбочок бобової рослини відносно того(тих) бактеріального(них) штаму(мів), що мають підвищену ефективність при стимуляції росту бобової рослини та е. виділяють бактеріальний(ні) штам(и), що мають підвищену ефективність при стимуляції росту бобової рослини.
В одному аспекті виділений(ні) бактеріальний(ні) штам(и) є штамом(ами) з роду
Вгадугпігобішт. У ще іншому аспекті спосіб додатково включає етап, на якому проводять скринінг штаму(мів) Вгадугпігорішт за допомогою специфічного праймера, властивого тільки для комерційно доступного штаму Вгадугппі2обіа, наприклад, промислового штаму ОБОА 5326.
У ще іншому аспекті спосіб включає виділення культури Вгадугпіг2обіа іаропісит, вибраної із групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50593 (депонований також під номером МКК. В-59572); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50586 (депонований також під номером МКК. В-59565); штам з реєстраційним номером депонування МКК 8В-50588 (депонований також під номером МКК. В-59567); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50587 (депонований також під номером МКК. В-59566); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50589 (депонований також під номером МКК. В-59568); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50591 (депонований також під номером МКК. В-59570); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50590 (депонований також під номером МКК. В-59569); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50594 (депонований також під номером МКК. В-50493);
Зо штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729 та штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50730 або комбінацію щонайменше двох або більше з вищевказаних депонованих штамів, включаючи більше двох, наприклад, щонайменше три з вищевказаних штамів, щонайменше чотири з вищевказаних штамів, щонайменше п'ять з вищевказаних штамів, щонайменше шість з вищевказаних штамів, щонайменше сім з вищевказаних штамів, щонайменше вісім з вищевказаних штамів, щонайменше дев'ять з вищевказаних штамів, щонайменше десять з вищевказаних штамів, щонайменше одинадцять з вищевказаних штамів, щонайменше дванадцять з вищевказаних штамів, щонайменше тринадцять з вищевказаних штамів, аж до включення всіх з вищевказаних штамів.
У ще іншому аспекті спосіб включає виділення бактеріального(их) штаму(ів), що мають підвищену витривалість до температур. Дивись Матеріали та способи: «Протокол температурного режиму».
Більш того, спосіб включає виділення бактеріального(их) штаму(ів), що мають природну стійкість до гліфосату. Дивись Матеріали та способи: «Протокол профілю стійкості до гліфосату».
В іншому переважному аспекті спосіб включає виділення бактеріального(их) штаму(ів), вибраного(их) з родів, що включають КпПі2обішт та Вгадугпігорішт, здатних підвищувати утворення бульбочок бобової рослини.
Композиція
Даний винахід включає композицію, що містить щонайменше один із виділених бактеріальних штамів даного винаходу або комбінацію щонайменше двох або більше із вищевказаних депонованих штамів, включаючи більше двох, наприклад, щонайменше три з вищевказаних штамів, щонайменше чотири з вищевказаних штамів, щонайменше п'ять з вищевказаних штамів, щонайменше шість 3 вищевказаних штамів, щонайменше сім з вищевказаних штамів, щонайменше вісім з вищевказаних штамів, щонайменше дев'ять з вищевказаних штамів, щонайменше десять з вищевказаних штамів, щонайменше одинадцять з бо вищевказаних штамів, щонайменше дванадцять з вищевказаних штамів, щонайменше тринадцять з вищевказаних штамів, аж до включення всіх з вищевказаних штамів та агрономічно прийнятного носія.
В деяких варіантах здійснення композиція може являти собою композицію інокулянту. Як використовується в даному документі та в галузі техніки, вираз «композиція інокулянту» зазвичай відноситься до композицій або матеріалів, що вводять сумісні бактеріальні штами або на зовнішню поверхню насіння, або у борозну для насіння.
Композиція може містити один або декілька агрономічно прийнятних носіїв. У випадках коли використовують декілька агрономічно прийнятних носіїв, агрономічно прийнятні носії можуть бути однаковими або різними. Як використовується в даному документі по відношенню до «носію», вираз «агрономічно прийнятний» відноситься до будь-якого матеріалу, який можна використовувати для доставки активних речовин до насіння, грунту або рослини, та переважно носія, який можна додати (до насіння, грунту або рослини) без шкідливого впливу на ріст рослини, структуру грунту, осушення грунту або подібного. Прийнятні носії включають, без обмеження, луску пшениці, висівки, помелену солому пшениці, порошки або гранули з торфом, гранули з гіпсом та глини (наприклад, каолін, бентоніт, монтморилоніт). Для покриття насіння будуть придатними склади, такі як рідкий, торф'яний або змочуваний порошок. При застосуванні для покриття насіння матеріал можна змішувати з водою, наносити на насіння та можна давати йому можливість висохнути. Приклад ще інших носіїв включає зволожені висівки, висушені, просіяні та нанесені на насіння перед покриттям адгезивом, наприклад, гуміарабіком. У варіантах здійснення, що включають склад активних речовин, агрономічно прийнятний носій може бути водним. Якщо застосовують рідкий носій, рідкий (наприклад, водний) носій буде типово включати середовища для росту для культивування бактеріальних штамів. Необмежуючі приклади придатних середовищ для росту для бактеріальних штамів включають дріжджовий екстракт з манітом, дріжджовий екстракт з гліцерином або будь-які середовища, відомі фахівцеві в даній галузі техніки, що сумісні з бактеріальними штамами та/або надають нутрієнти для росту бактеріальним штамам.
Також охопленими композиціями даного винаходу є композиції, що містять одну або декілька сигнальних молекул. Необмежуючі приклади сигнальних молекул рослин включають
Моа-фактори (тобто ліпо-хітоолігосахариди), хітоолігосахариди, хітинові сполуки, флавоноїди,
Зо жасмонову кислоту або її похідні, лінолеву кислоту або її похідні, ліноленову кислоту або її похідні, карикіни або їх комбінації.
Ліпо-хітоолігосахаридні сполуки (СО), також відомі в даній галузі техніки як симбіотичні
Мод-сигнали або Моа-фактори, містять олігосахаридний скелет із зв'язаних В-І,4-зв'язками залишків М-ацетил-О-глюкозаміну («СІСМАс»), що зв'язані за М-атомом з ацильним ланцюгом жирної кислоти, сконденсованих за кінцем, що не відновлює. ЇСО розрізняються в кількості залишків СІСМАс в скелеті, за довжиною та ступенем насиченості жирного ацильного ланцюга та в замінах залишків цукру, що відновлюють, та залишків цукру, що не відновлюють. Приклад
СО представлено нижче у вигляді формули Ї,
СНО. СНЬОВ» в) в)
ОВ» Ов, о--с
Око
МН-СО-В, Ммн-В, п в якій:
Сб являє собою гексозамін, який може бути заміщений, наприклад, ацетильною групою за азотом, сульфатною групою, ацетильною групою та/або ефірною групою за киснем,
Ви, Р», В», В5, Вб та К»7, які можуть бути однаковими або різними, являють собою Н, СНзСОо-,
СХ Ну СО-, де х являє собою ціле число від 0 до 17, та у являє собою ціле число від 1 до 35, або будь-яку іншу ацильну групу, наприклад, карбаміл,
Ва. являє собою моно-, ди- або триненасичений аліфатичний ланцюг, що містить щонайменше 12 атомів вуглецю, та п являє собою ціле число від 1 до 4.
СО можна отримати (виділити та/або очистити) з бактерій, таких як ЕПі2обіа, наприклад,
КПпі2орішт 5рр., Вгадугпі2обішт 5рр., зіпогпі2орішт 5рр. та А2огппігобішт 5рр. Структура СО є характерною для кожних таких бактеріальних видів, та кожний штам може продукувати різні
ЇСО з різними структурами. Наприклад, специфічні СО з 5. теїйоїї також були описані в патенті США Мо 5549718, як ті, що мають формулу ІЇ, р снон нс сноон 2 -0 -0 -0 но но но огр'но о он і
МН МН МН
(о) (е) нзс е) Сну
Нн й й п
То
К не
Ше
Сну в якій Е являє собою Н або СНзСО-, та п дорівнює 2 або 3.
Ще більш специфічні СО включають Модем, МоавкмМ-1, МоанмМ-3. При ацетилюванні (А-СНзіСО-), вони стають АсМодКМ-1 та АсМмодЕМ-3, відповідно (патент США Мо 5545718).
СО з Вгадугпігобішт |аропісит описані в патентах США Мо 5175149 та Мо 5321011.
Загалом, вони є пентасахаридними фітогормонами, що містять метилфукозу. Описано ряд цих
І СО, отриманих з В. іаропісит, а саме: ВіМоа-м (Ствл); ВімМоа-м (Ас, Стівл), ВІМод-М (Сівл) та
Вімоа-М (Ас, Стів), де «У» вказує на наявність п'яти М-ацетилглюкозамінів; «Ас»- ацетилювання; число після «С» вказує кількість атомів вуглецю у боковому ланцюзі жирної кислоти та число після «:» - кількість подвійних зв'язків.
І СО, застосовувані в композиціях даного винаходу, можна одержати (тобто виділити та/або очистити) з бактеріальних штамів, що продукують СО, таких як штами А?огпі2обріцт,
Вгадугпігорішт (включаючи В. |аропісишт), Мезогпігорішт, КПпігобішт (включаючи К.
Іедитіпозагит), зЗіпогпігорішт (включаючи З. птеїЙоїї) та бактеріальні штами, створені способами генетичної інженерії для продукування І СО.
Також даним винаходом охоплені композиції, в яких використовують І СО, одержані (тобто виділені та/або очищені) з мікоризного гриба, наприклад, грибів групи Сіотегосусоїа, наприклад, Сіотивх іпігагадісиє. Структури типових СО, отриманих з цих грибів, описані в
МО 2010/049751 та УМО 2010/049751 (І СО описані та також згадувані як «Мус-фактори»).
Додатково охопленим виразом «композиції даного винаходу» є застосування синтетичних сполук І СО, таких як ті, що описані в УМО 2005/063784, та рекомбінантних І СО, отриманих за допомогою генної інженерії. Основна структура СО природного походження, може містити модифікації або заміни, які зустрічаються в І СО природного походження, такі як ті, що описані в
Зо зЗраїпкК, Стії. Веу. Ріапі 5сі. 54:257-288 (2000) та О'Нає?е, еї аї., СІусобіоіоду 12:798-10548 (2002).
Олігосахаридні молекули-попередники (СО, котрі, як описано нижче, також придатні у якості рослинних сигнальних молекул в даному винаході) для побудови СО також можуть бути синтезовані організмами, отриманими способами генетичної інженерії, наприклад, як у Затаїп, еї а!., Сагь. Вез. 302:35-42 (1997); Ззатаїп, еї а!., у. Віотесппої. 72:33-47 (1999).
СО можна використовувати у різних формах чистоти та можна застосовувати окремо або у вигляді культури І СО-продукуючих бактерій або грибів. Способи забезпечення по суті чистих
СО включають просте видалення мікробних клітин із суміші СО та мікроорганізму або з подальшим виділенням та очищенням молекул І СО через відділення І СО в фазі розчинника з подальшою ВЕРХ-хроматографією, як описано, наприклад, в патенті США Мо 5549718.
Очищення можна поліпшити за допомогою повторюваної ВЕРХ та очищені молекули СО можна ліофілізувати для тривалого зберігання.
Хітоолігосахариди (СО) відомі в даній галузі техніки як М-ацетилглюкозамінові структури, зв'язані В-1-4-зв'язками, які виявляють як хітинові олігомери, також як /М- ацетилхітоолігосахариди. СО мають унікальні та різноманітні відмітні бічні ланцюги, що робить їх відмінними від молекул хітину МСвНізМОв)п, Мо САЗ 1398-61-4|), та молекул хітозану
КС5НиМОз)п, Мо САЗ 9012-76-4)|. Типова література, що описує структуру та одержання СО, є наступною: Мап дег Но!ві, еї аІ.,, Сштепі Оріпіоп іп 5ігисічга! Віоіоду, 11:608-616 (2001); Нобіпа, єї а!., Темапедгоп 58:521-530 (2002); Напеї, еї аї., Ріапіа 232:787-806 (2010); ВКоцде, єї аІ. Спарієг 27, «Пе МоїІесшаг Іттипоіоду ої Сотріех Сагропуагаїех» іп Адмапсезх іп Ехрегітепіа! Меадісіпе апа Віоіоду, Зрііпдег Зсієпсе; ММап, еїаї., Ріапі Сеїї 21:1053-69 (2009); РСТ/Р100/00803 (9/21/2000); та ЮОетопі-Сацієї, еї аї., Ріапі РНузіої. 120(1):83-92 (1999). СО можуть бути синтетичними або рекомбінантними. Способи одержання рекомбінантних СО відомі в даній галузі техніки. Дивись, наприклад, Затаїп, еї аЇ. (вище); СоНа, еї аїЇ.,, Ме. Епад. 7(4):311-7 (2005) та затайп, єї аї., У. Віотесппої. 72:33-47 (1999).
Композиції даного винаходу можуть також містити хітинові сполуки (відмінні від СО), флавоноїди, жасмонову кислоту, лінолеву кислоту та ліноленову кислоту та їхні похідні та карикіни.
Хітини та хітозани, які являють собою головні компоненти клітинної стінки грибів та екзоскелетів комах та ракоподібних, також складаються із залишків сІСМАс. Хітинові сполуки включають хітин (ІЮПАК:. І-(5-(З-ацетиламіно-4,5-дигідрокси-6-(гідроксиметил)оксан-2- іл|метоксиметил)|-2-((5-ацетиламіно-4,б-дигідрокси-2-(гідроксиметил)оксан-3-іл|Іметоксиметилі|-4-
Зо гідрокси-6-(гідроксиметил)оксан-3-іс|іетанамід) та хітозан (ІЮПАК: 5-аміно-6-(5-аміно-6-(5-аміно- 4,6-дигідрокси-2(гідроксиметил)оксан-3-іл|окси-4-гідрокси-2-(гідроксиметил)оксан-З3-іл|окси- 2(гідроксиметил)оксан-3,4-діол). Ці сполуки можна отримати комерційно, наприклад, від 5ідта-
Аїайгісп, або одержати від комах, з панцерів ракоподібних або клітинних стінок грибів. Способи одержання хітину та хітозану відомі в даній галузі техніки та були описані, наприклад, в патенті
США Мо 4536207 (одержання з панцерів ракоподібних), Роспапамапісн, еї аї., І ей. Аррі. Містобіо|. 35:17-21 (2002) (отримання з клітинних стінок грибів) та патенті США Мо 5965545 (отримання з панцерів крабів та гідроліз комерційного хітозану). Можна отримати деацетильовані хітини та хітозани з діапазоном деацетилювання від менш ніж 3595 до більш ніж 9095, та вони охоплюють широкий спектр молекулярної ваги, наприклад, хітозанові олігомери з низькою молекулярною вагою менше 15 кДа та хітинові олігомери з молекулярною вагою від 0,5 до 2 кДа; хітозан «практичного типу» з молекулярною вагою від приблизно 15 кДа; та хітозан з високою молекулярною вагою до 70 кДа. Хітинові та хітозанові композиції, складені для оброблення насіння, також комерційно доступні. Комерційні продукти включають, наприклад, ЕГЕХАФ (Ріапі
Оетепзе Воозіегв5, Іпс.) та ВЕМОМО "м (Адгіпоизе, Іпо.).
Флавоноїди являють собою фенольні сполуки, що мають загальну структуру з двох ароматичних кілець, зв'язаних тривуглецевим містком. Флавоноїди продукуються рослинами та мають багато функцій, наприклад, у якості корисних сигнальних молекул та у якості захисту від комах, тварин, грибів та бактерій. Класи флавоноїдів включають халкони, антоціаніди, кумарини, флавони, флавоноли, флавоноли, флаванони та ізофлавони. Дивись «аїп, еї аї., ».
Ріапі Віоспет. 5 Віоїесппої. 1111-10 (2002); ЗНнам, єї аї., Епмігоптепіа! Місгобіої. 11:1867-80 (2006).
Типові флавоноїди, що можуть бути придатними в композиціях даного винаходу, включають геністеїн, даідзеїн, формононетин, нарингенін, гесперетин, лютеолін та апігенін. Флавоноїдні сполуки є комерційно доступними, наприклад, від Майапа Іпегпайопа! Согр., Кезеагсп Тгпападіеє
Рак, МС; МР Віотеаісаї!5, Ігміпе, СА; І С І арогаїюгіе5, М/обигп МА. Флавоноїдні сполуки можна виділити з рослин або насіння, наприклад, як описано в патентах США Мо 5702752; Мо 5990291 та Мо 6146668. Флавоноїдні сполуки можуть також продукуватися організмами, одержаними способами генетичної інженерії, наприклад дріжджами, як описано в Каїбіоп, еї аї., Ріапі
Рпузіоіоду 137:1375-88 (2005). бо Жасмонову кислоту (ЧА, ПАК-Па,28(2)1|-3-оксо-2-(пентеніл)уциклопентаноцтову кислоту) та її похідні, лінолеву кислоту ((2,27)-9,12-октадекадієнову кислоту) та її похідні та ліноленову кислоту (2,2,2)-9,12,15-октадекатриєнову кислоту) та її похідні можна також застосовувати в композиціях даного винаходу. Жасмонова кислота та її метиловий естер, метилжасмонат (МеА), разом відомі як жасмонати, є октадеканоїдними сполуками, які природно зустрічаються в рослинах. Жасмонова кислота продукується коренями сходів пшениці та мікроорганізмами- грибами, наприклад, Воїгуодіріодіа Шеобготає та сірргеїа їціКигої, дріжджи (Засспаготусев5 сегемізіає), та патогенні і непатогенні штами Е5спегіспіа соїї. Лінолева кислота та ліноленова кислота продукуються в ході біосинтезу жасмонової кислоти. Як повідомлялося, жасмонати, лінолева кислота та лінолева кислота (та їх похідні) є індукторами експресії Моа-генів або продукції СО різобактеріями. Дивись, наприклад, Мабоой, Ралії, давєтопагевз іпдисе Ше ехргеввіоп ої под депез іп Вгадугпігобішт |аропісит, Мау 17, 2001; апа Маброса, Ралії, «Гіпоївїс апа ІіпоІепіс асіа іпдисе (пе ехргезвзіоп ої пой депез іп Вгадугпі7обішт |аропісит,» ОБОА 3, Мау 17, 2001.
Придатні похідні лінолевої кислоти, ліноленової кислоти та жасмонової кислоти, що можуть бути придатними в композиціях даного винаходу, включають естери, аміди, глікозиди та солі.
Типові естери являють собою сполуки, в яких карбоксильна група лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти була заміщена -СОВ-групою, де К являє собою -
ОВ'-групу, в якій К' являє собою алкільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкільна група Сі-Св, наприклад, метильна, етильна або пропільна група; алкенільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкенільна група С2-Св; алкінільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкінільна група С2-Св; арильну групу з, наприклад, від 6 до 10 атомами вуглецю; або гетероарильну групу з, наприклад, від 4 до 9 атомами вуглецю, де гетероатоми в гетероарильній групі можуть являти собою, наприклад, М, О, Р або 5. Типові аміди є сполуками, в яких карбоксильна група лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти була заміщена -«СОВ-групою, де КЕ являє собою МК2А-групу, в якій К2 та КЗ незалежно являють собою водень; алкільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкільна група Сі-Св, наприклад, метильна, етильна або пропільна група; алкенільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкенільна група С2-Св; алкінільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкінільна група С2-Св; арильну групу з, наприклад, від 6 до 10
Зо атомами вуглецю; або гетероарильну групу з, наприклад, від 4 до 9 атомами вуглецю, де гетероатоми в гетероарильній групі можуть являти собою, наприклад, М, О, Р або 5. Естери можна одержати відомими способами, такими як каталізоване кислотою нуклеофільне приєднання, при якому здійснюють реакцію карбонової кислоти зі спиртом в присутності каталітичної кількості мінеральної кислоти. Аміди також можна отримати відомими способами, такими як здійснення реакції карбонової кислоти з відповідним аміном в присутності зв'язуючого агента, такого як дициклогексилкарбодіїмід (ОСС), за нейтральних умов. Придатні солі лінолевої кислоти, ліноленової кислоти та жасмонової кислоти включають, наприклад, солі приєднання основи. Основи, які можна використовувати в якості реагентів для отримання метаболічно прийнятних основних солей цих сполук, включають ті, що походять від катіонів, таких як катіонів лужних металів (наприклад, калію та натрію), та катіонів лужноземельних металів (наприклад, кальцію та магнію). Ці солі можна легко отримати через змішування разом розчину лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти з розчином основи. Сіль можна осадити з розчину та зібрати фільтрацією або можна вилучити іншим засобами, такими як випаровуванням розчинника.
Карикіни являють собою вінілогічні 4Н-пірони, наприклад, 2Н-фурої|2,3-с|піран-2-они, включаючи їх похідні та аналоги. Приклади цих сполук представлені наступною структурою, о) Я ва їн 7 К де 7 являє собою 0, 5 або МЕ; кожний з К., В2, Вз та Б4 незалежно являє собою Н, алкіл,
алкеніл, алкініл, феніл, бензил, гідроксі, гідроксіалкіл, алкоксі, фенілоксі, бензилоксі, СМ, СОКв,
СооОК-, галоген, МКеВ? або МО» та кожний з Е»5, Нв та К7 незалежно являє собою Н, алкіл або алкеніл, або її біологічно прийнятною сіллю. Приклади біологічно прийнятних солей цих сполук можуть включати солі приєднання кислоти, утворені з біологічно прийнятних кислот, приклади яких включають гідрохлорид, гідробромід, сульфат або бісульфат, фосфат або гідрофосфат, ацетат, бензоат, сукцинат, фумарат, малеат, лактат, цитрат, тартрат, глюконат; метансульфонат, бензолсульфонат та п-толуолсульфонову кислоту. Додаткові біологічно прийнятні солі металів можуть включати солі лужних металів з основ, приклади яких включають натрієві та калієві солі. Приклади сполук, охоплені структурою та які можуть бути придатними для застосування в даному винаході, включають наступні: З-метил-2Н-фуро|2,3-с|піран-2-он (де
В8І-СНз, В», Вз, ВА-Н), 2Н-фуро|2,3-с|Іпіран-2-он (де Кі, В», Вз, В4-Н), 7-метил-2Н-фуро|2,3- с|Іпіран-2-он (де РК, В2, ВА-Н, Вз-СНз), 5-метил-2Н-фуро|2,3-с|Іпіран-2-он (де Кі, В», Вз-Н,
ВА-СН»з), 3,7-диметил-2Н-фурої|2,3-с|Іпіран-2-он (де Кі, Нз-СНз, Аг, ВА-Н), З3,5-диметил-2Н- фурої2,3-с|піран-2-он (де Кі, ВА-СН»з, В», Вз-Н), 3,5,7-триметил-2Н-фурої|2,3-с|піран-2-он (де Кі,
Аз, Ва-СНз, В2-Н), 5-метоксиметил-З-метил-2Н-фуро|2,3-с|Іпіран-2-он (де КІ-СНз, В», Вз-Н, вВАСНгОСН»), 4-бром-3,7-диметил-2Н-фурої|2,3-с|Іпіран-2-он (де Кі, Нз-СНз, В2-ВІ, ВА-Н), 3- метилфурої2,3-с|Іпіридин-2(ЗН)-он (де 2-МН, КІ-СНз, В», Аз, ВА-Н), 3,б-диметилфурої|2,3- сІпіридин-2(6Н)-он (де 2-М-СНз, ВІ-СНз, В2, Аз, ВА-Н). Дивись патент США Мо 7576213. Ці молекули також відомі як карикіни. Дивись Наїога, вище.
Композиції даного винаходу можуть додатково включати агрикультурно/агрономічно корисний засіб. Необмежуючі приклади таких засобів, що можуть бути придатними в практичному здійсненні даного винаходу, включають гербіциди, фунгіциди та інсектициди.
Придатні гербіциди включають бентазон, адифлуорфен, хлоримурон, лактофен, кломазон, флуазифол, глуфосинат, гліфосат, сетоксидим, імазетапір, імазамокс, фомесаф, флуміклорак, імазаквін та клетодим. Комерційні продукти, що містять кожну з цих сполук, легко доступні.
Концентрація гербіциду в композиції буде зазвичай відповідати позначеній робочій концентрації для конкретного гербіциду. «Фунгіцид», як використовується в даному документі та в даній галузі техніки, являє собою засіб, що знищує гриби або інгібує ріст грибів. Як використовується в даному документі,
Зо фунгіцид «проявляє активність по відношенню до» конкретного виду грибів, якщо оброблення фунгіцидом приводить до знищення або інгібування популяції грибів (наприклад, в грунті) відносно необробленої популяція. Ефективні фунгіциди згідно з даним винаходом будуть відповідно проявляти активність по відношенню до широкого спектра патогенів, включаючи, без обмеження, Рпуїоріпївога, КПі2осіопіа, Ризагішт, Рушйішт, Рпоторб5ів або Зеїегоїйпіа і РпаКорзога та їх комбінації.
Комерційні фунгіциди можуть бути придатними для застосування в даному винаході.
Придатні комерційно доступні фунгіциди включають РЕОТЕСЕ, ВІМАЇ. або АГ ЕСІАМСЕ Р. або 5 (Сивіаївоп, Плано, Техас), МАКОЕМ КТА (Аодгіапсе, Сент-Пол, Мінесота), АРКОМ ХІІ,
АРКОМ МАХХ КТА або КЕС, МАХІМ 4Е5 або Хі (Зупдепіа, Уілмінгтон, Делавер), САРТАМ (Агуезіа, Гелф, Онтаріо) та РКОТКЕАТ (Міїгадіп Агдепііпа, Буенос-Айрес, Аргентина). Активні інгредієнти в цих та інших комерційних фунгіцидах включають, без обмеження, флудіоксоніл, мефеноксам, азоксистробін та металаксил. Комерційні фунгіциди найкраще застосовувати згідно з інструкцією виробника в рекомендованих концентраціях.
Як використовується в даному документі, інсектицид «проявляє активність по відношенню до» конкретного виду комах, якщо оброблення інсектицидом приводить до знищення або інгібування популяції комах відносно необробленої популяції. Ефективні інсектициди згідно з даним винаходом будуть відповідно проявляти активність по відношенню до широкого спектра комах, включаючи, без обмеження, дротяників, совок, свищів, злакового кореневого хробака, личинку мухи росткової, грунтових блішок, клопів-наземників, афід, листоїдів та щитників.
Комерційні інсектициди можуть бути придатними для застосування в даному винаході.
Придатні комерційно-доступні інсектициди включають СКИОІЗЕК (Зупдепіа, Уілмінгтон,
Делавер), ЗАОСНО та РОМСНО (Сизагїзоп, Плано, Техас). Активні інгредієнти в цих та інших комерційних інсектицидах включають тіаметоксам, клотіанідин та імідаклоприд. Комерційні інсектициди найкраще застосовувати згідно з інструкцією виробника в рекомендованих концентраціях.
Вираз «композиції даного винаходу», як передбачено, також включає застосування одного або декількох засобів, які роблять фосфат розчинним. Як використовується в даному документі, засоби, які роблять фосфат розчинним, включають, без обмеження, мікроорганізми, які роблять фосфат розчинним. Як використовується в даному документі, «мікроорганізм, який робить бо фосфат розчинним,» являє собою мікроорганізм, який здатен підвищувати кількість фосфору,
доступного для рослини. Мікроорганізми, які роблять фосфат розчинним, включають штами грибів та бактеріальні штами. У варіанті здійснення мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, являє собою спорогенний мікроорганізм.
Необмежуючі приклади мікроорганізмів, які роблять фосфат розчинним, включають види з роду, вибраного з групи, що включає Асіпейорасіег, Агпійпгорасіег, Агпйпгороїгуз, Азрегоїи5,
А?озріпійшт, Васіїйи5, ВиЖКПоЇдегіа, Сапаїда, СНгузеотопав, Епієгобасієї, Еирепісіййшт,
Ехіднобасієгішт, Кіерзівіа, Кінумега, Містгобасієгішт, Мисогї, Раесіютусев5, Раепібасій5,
РепісіШит, Рзепдотопаз, беїтайа, Зієепошпорпотопаб5, бігеріотусе5, 5Геріозрогапдійт, зуатіпаївапіа, Тпіобасійи5, Тогиіозрога, Мібгіо, Хапіпобасієег та Хапіпотопав.
Необмежуючі приклади мікроорганізмів, які роблять фосфат розчинним, вибрані з групи, що включає Асіпеїобасіег саІсоасеїіси5, Асіпесобасіег 5рр., Агйпгобрасіег 5рр., Агіпгобоїгуз оїїдозрога,
АврегоїПив5 підег, Азрегойив5 5рр., Аго5рійПит НапІоргаєїегапз, Васіїїн5 атупоїЇїдиетасієпо, ВасПШив айорпаєих, Васійй5 сікєсціап5, Васійиє Іспепібогптіх, Васійиє зиЇИБШів5, ВикКПпоїдегіа серасіа,
ВигКроЇдегіа умієїпатієпвіє5, Сапаїда Кгівзвії СНгузеотопа5 Ішеоїа, Епіегорасієї аєгодепев,
Епівегорасієї азригпає, Епієгорасієї 5рр., Епіегобасієї їауїогає, ЕирепісШит рагмит,
Ехіднобрасієтішт зрр., КіерзієІа зрр., КіІсумега сгуостебзсеп5, Містобасієгцт 5рр., Мисог гатобвівбвіти5, Раесіотусев Періаїйй, Раесіотусе5 тагдиапайї, Раепірбасіййє тасегапв,
Раєпібасіїїш5 тисііадіпобзи5, Рапіоєа адіотегапв, Репісіййшт ехрапзит, Реепдотопав соітидаїе,
Резепдотопавз Пногебзсеп5, Реецдотопаб5 Ішеа, Рзепдотопаб5 роає, Рбзейдотопавз риїаа,
Резєидотопав вішїгегі, Реєеидотопав ігіміа|є, Зетайа тагсезсепв, 5іепоїгорпотопав тайорніїа, зігеріотусев 5р., 5ігеріозрогапдійт 5рр., Зматіпаїнапіа заійоієгап5, ТНіорасійшв5 Тепоохідапв,
Тогиіозрога діороза, Мібгіо ргоїеоїунси5, Хапіпобасіег адії5 та Хапіпотопах сатрезігів.
В одному варіант здійснення мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, являє собою штам грибів РепісйШіит. Штами грибів Репісійшт, що можуть бути придатними для практичного здійснення даного винаходу, включають Р. Бііаіає (раніше відомий як Р. бійїаї), Р. аІрідит, Р. аигапіодгізеит, Р. спгузодепит, Р. сітеопідгит, Р. сігпит, Р. дідйпашт, Р. їМедиепіав, Р. Тиб5сит,
Р. даевігмоги5, Р. діабгит, Р. дгізеоїшімит, Р. ітріїсайшт, Р. іапійіпейШт, Р. Шасіпит, Р. тіпіоїшіецт, Р. топіапеп5е, Р.підгісапе, Р. охаїсит, Р. ріпейогит, Р. ріпорпійшит, Р. ригригодепит, Р. гадісапв, Р. гадісит, Р. гаївініскії, Р. гидшиовзит, Р. вітріїсіввітит, Р. воїйит, Р. мапабіеє, Р. меіІшіпит, Р. мігідісаїт, Р. діайсит, Р. Тиззірогив та Р. ехрапзит.
В іншому варіанті здійснення мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, видів
Репісіййшт являє собою Р. Бііаіає, Р. даебвігімоги5 та/або їх комбінацію. У ще іншому варіанті здійснення штами Р. Бііаіае вибрані з групи, що включає АТСС 20851, МАКІ 50169, АТОС 22348, АТОС 18309, МАВ 50162 (МакКеїйп, єї а!., 2004. Віо! Репії боїв 40:36-43), та штам Р. даевігімоги5 являє собою МЕНІ. 50170 (дивись Умакеїїп, вище.).
Згідно з композиціями даного винаходу передбачається, що можна використовувати більше одного мікроорганізму, який робить фосфат розчинним, наприклад, щонайменше два, щонайменше три, щонайменше чотири, щонайменше п'ять, щонайменше 6, включаючи будь- яку комбінацію Асіпеїобасієг, Агпйгобасіег, Агіпгобоїгу5, Аврегуйи5, Алозріншт, Васійив,
ВиКпоїдегтіа, Сапаїда, Спгузеотопавз, Епіегорасієї, ЕирепісіПит, Ехідпобасієгішт, Кіебрвзівйа,
Кінумега, Містобасієтішт, Мисог, Раесіотусев, Раепібасіїїшв, РепісШіит, Рвейдотопав, Зеїтайа,
Зіепоїторпотопав, Бігеріотусе5, Змнеріозрогапдіит, булатіпаїйапіа, Тніобасіїйш5, Тогціозрога, міргіо, Хапіпорасієг та Хапіпотопах, включаючи один вид, вибраний з наступної групи:
Асіпеюбасієї саїісоасеїїси5, Асіпеїобасієї з5рр., Аппгобасієї 5рр., Аппгороїув5 оїїдозрога,
АврегаоїПи5 підег, Азрегайив5 5рр., А2о5рійшШт НапІоргаєїегап5, Васійн5 атупоїїдиеїасієп5, Васі айорпаєих, Васійй5 сікєсціап5, Васійиє Іспепіїоптів, Васійй5 5и!иБійв5, ВиЖПоїЇдегіа серасіа,
ВигКПоЇдегіа умівїпатієпвіє5, Сапаїда Кгізвії СНгузеотопа5 Ішеоїа, Епіегорасієї аєгодепев,
Епівегорасієї азригпає, Епієгорасієї 5рр., Епіегобасієї їауїогає, ЕирепісШит рагмит,
Ехіднобрасієтішт зрр., КіерзієПа врр., Кісумега сгуосгтезсеп5, Місторасієгішт 5рр., Мисог гатовівбвітиє, Раесіотусев5 Періаїйй, РаесіОтусе5 тагдцапаїй, РаепірасіШи5 /тасегапв,
Раєпібасіїїш5 тисііадіпобзи5, Рапіоєа адіотегапв, Репісіййшт ехрапзит, Реепдотопав соітидаїе,
Резепдотопавз Пиогезсеп5, Реецдотопаб5 Ішеа, Рзепдотопаз роає, Реепдотопавз риїаа,
Резєидотопав вішїгеїгі, Реєеидотопав ігіміа|є, Зетайа тагсезсеп5, Зіепоїторпотопа5 таПорніїїа, зЗігеріотусев в5рр., зігеріозрогапдійт 5рр., ЗулатіпаїНнапіа заїйоїІегапв, Тніобасійн5 Тетоохідапв,
Тогиозрога діороза, Мібгіо ргоїеоїуїїси5, Хапіпобасіег ацдіїїз та Хапіпотопаз сатревзвігів.
В іншому варіанті здійснення даний винахід включає спосіб підсилення росту рослин, що включає внесення до рослин, насіння рослин, грунту, що оточує рослини або насіння рослин, одного або декількох бактеріальних штамів даного винаходу (включаючи композицію, що містить щонайменше один із виділених бактеріальних штамів даного винаходу та агрономічно бо прийнятний носій). Один або декілька бактеріальних штамів можуть включати тільки один бактеріальний штам або комбінацію щонайменше двох або більше штамів даного винаходу, включаючи більше двох, наприклад, щонайменше три з вищевказаних штамів, щонайменше чотири з вищевказаних штамів, щонайменше п'ять з вищевказаних штамів, щонайменше шість з вищевказаних штамів, щонайменше сім з вищевказаних штамів, щонайменше вісім з вищевказаних штамів, щонайменше дев'ять з вищевказаних штамів, щонайменше десять з вищевказаних штамів, щонайменше одинадцять з вищевказаних штамів, щонайменше дванадцять з вищевказаних штамів, щонайменше тринадцять з вищевказаних штамів, до включення всіх з вищевказаних штамів.
Застосування
Способи даного винаходу включають етап обробки, на якому вносять щонайменше один з виділених штамів та/або одну з композицій, що містять щонайменше один з виділених штамів, до насіння, сходів, коренів, рослин, грунтів або їх комбінації. Вирази «оброблення» або «обробка» використовуються в даному документі та галузі техніки, відносяться до будь-якого застосування, яке приводить до контакту насіння, сходів, коренів або рослин з ефективною кількістю композиції для обробки або компонентів для обробки із підвищенням конкурентоспроможності щодо колонізації рослини та ефективності при стимуляції росту рослини.
Ефективна кількість та/або придатні норми внесення варіюють відповідно до типу грунту, типу рослин, розміру джерела мікронутрієнтів, присутніх в грунті або доданих в нього і т. д., та придатну норму можна легко знайти за допомогою простих випробувань шляхом проб та помилок для кожного конкретного випадку. Зазвичай норма внесення щонайменше одного із виділених штамів та/або композицій, що містять щонайменше один із виділених штамів, належить до діапазону від 1 х 102 до 1 х 108 колонієутворюючих одиниць (кус) на насінину (при застосуванні дражируваного насіння). У конкретному варіанті здійснення норма внесення належить до діапазону від 1 х 107 до 1 х 105 колонієутворюючих одиниць (кус) на насінину (при застосуванні дражируваного насіння). Норма внесення для зернистого носія належить до діапазону від 1 х 108 до 1 х 103 куо на гектар. У конкретному варіанті здійснення норма внесення для зернистого носія належить до діапазону від 2 х 10! до 6 х 10"! куо на гектар. Не дивлячись на те, що композиції інокулянту та/або композиції, застосовувані згідно з даним
Зо винаходом, можуть включати суміш/комбінацію щонайменше двох або більше різних бактеріальних штамів, по всьому опису приводиться загальна кількість колонієутворюючих одиниць в об'єднаній суміші. Ефективну кількість Ї СО та/або СО, застосовуваних в композиції даного винаходу для безпосереднього оброблення насіння, виражають в одиницях концентрації, та вони зазвичай варіюють від приблизно 105 до приблизно 10-27 М (молярна концентрація) та в деяких варіантах здійснення від приблизно 107 до приблизно 10-! М, та в деяких інших варіантах здійснення від приблизно 1077 до приблизно 108 М. Виражена в одиницях ваги ефективна кількість зазвичай варіює від приблизно 1 до приблизно 400 мкг/хандредвейт (см/і) насіння, та в деяких варіантах здійснення від приблизно 2 до приблизно 70 мкг/см, та в деяких інших варіантах здійснення від приблизно 2,5 до приблизно 3,0 мкг/сУ/л насіння.
В цілях обробки насіння опосередковано, тобто внесенням в борозну, ефективна кількість
СО або СО зазвичай варіює від 1 мкг/(акр до приблизно 70 мкг/акр та в деяких варіантах здійснення від приблизно 50 мкг/акр до приблизно 60 мкг/акр. В цілях нанесення на рослини ефективна кількість СО або СО зазвичай варіює від 1 мкг/акр до приблизно 30 мкг/акр та в деяких варіантах здійснення від приблизно 11 мкг/акр до приблизно 20 мкг/акр.
Обробку можна здійснити безпосередньо, тобто нанесенням безпосередньо на насіння, сходи, корені або рослини (включаючи листя), або можна здійснити опосередковано, тобто внесенням в грунт (включаючи борозну).
Як буде зрозуміло, обробку за допомогою кожного компонента можна здійснювати послідовно або одночасно. Наприклад, якщо застосовують рідкий носій, компоненти можна спільно суспендувати в комерційному змішувальному резервуарі для обробки та пізніше наносити на насіння будь-яким придатним способом нанесення покриття, наприклад, плівкове покриття. В процесі плівкового покриття суспензію розпорошують на насіння під час безперервного процесу нанесення покриття. Альтернативно, наприклад, якщо використовують пилоподібний або порошкоподібний носій, компоненти можна наносити послідовно. Відповідно, обробка може також охоплювати нанесення на листя та/або внесення композицій в борозну.
Необмежуючі приклади рослин, які підлягають обробці виділеними штамами та/або композиціями, що містять щонайменше один із виділених штамів, включають бобові культури.
Необмежуючі приклади бобових культур включають, без обмеження, рослини, такі як соя, бо люцерна, земляний горіх, горох, сочевиця, квасоля та конюшина. Як буде зрозуміло, вираз
"сільськогосподарська культура" охоплює будь-який рослинний матеріал, який можна зібрати.
Культура
Даний винахід спрямований на біологічно чисту культуру штаму(ів) Вгадугпі:обіа іаропісит: штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50593 (депонований також під номером МКК. В-59572); штам з реєстраційним номером депонування МАККІ В-50586 (депонований також під номером МКК. В-59565); штам з реєстраційним номером депонування МКК 8В-50588 (депонований також під номером МКК. В-59567); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50587 (депонований також під номером МКК. В-59566); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50589 (депонований також під номером МКК. В-59568); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50591 (депонований також під номером МКК. В-59570); штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50590 (депонований також під номером МКК. В-59569); штам з реєстраційним номером депонування МКК 8В-50594 (депонований також під номером МКК. В-50493); штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729 та штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50730.
Як використовується в даному документі, фраза «біологічно чиста культура» означає культуру, яка є по суті вільною від біологічного забруднення та має генетичну однорідність, так що різноманітні субкультури взяті з неї будуть демонструвати по суті однакові генотипи та
Зо фенотипи (наприклад, культури мають чистоту щонайменше 60905, щонайменше 65905, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90965, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 95965, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895, щонайменше 9995, до 10095 чистоти).
Такі культури можуть бути придатні в широкомасштабній ферментації або для інших комерційних цілей. Відповідно, мутанти, транскон'юганти, рекомбінанти та варіанти, одержані способами генетичної інженерії, які отримані зі штамів Вгадугпігобішт іаропісит з реєстраційними номерами, наданими при депонуванні, МЕКІ. В-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571), МАНІ 8-50593 (депонований також під номером МКК В-59572),
МАНІ. 8-50586 (депонований також під номером МКК. 8В-59565), МАВ. В-50588 (депонований також під номером МКК В-59567), МАНІ. В-50587 (депонований також під номером МКК В- 59566), МАНІ В8-50589 (депонований також під номером МКК В-59568), МАНІ В-50591 (депонований також під номером МКК В-59570); МАНІ 8-50590 (депонований також під номером МКК. В-59569); МАНІ 8-50594 (депонований також під номером МКК В-50493);
МАНІ в-50726; МАВ В-50727; МАНІ 8-50728; МАНІ 8-50729; МАНІ В-50730 та їх культури включені в обсяг даного винаходу.
В одному варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50592 (депонований також під номером МКК. В-59571). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МЕКІ. В-50593 (депонований також під номером МКК В-59572). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК! В-50586 (депонований також під номером МАККІ В-59565). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50588 (депонований також під номером МКК В- 59567). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50587 (депонований також під номером МКК. В-59566). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МЕКІ. В-50589 (депонований також під номером МКК В-59568). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МАКІ В-50591 (депонований також під номером МАККІ В-59570). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50590 (депонований також під номером МКК В- бо 59569). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50594 (депонований також під номером МКК. В-50493). В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50726.
В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МАК В-50727. В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МКК! В-50728. В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МЕКІ. 8В-50729. В іншому варіанті здійснення культура являє собою штам з реєстраційним номером депонування МЕМ. В-50730.
Депонування біологічного матеріалу
Нижченаведений біологічний матеріал був депонований за умов Будапештського договору в
Американській колекції типових культур (АТСС), 10801 Опімегзйу Віма., Мапаззаз, МА 20108,
О5А, та ІПйе Місгобіа! бСепотіс5 апа Віоргосеззіпд Кезеагосп Опії (МКК) Національного центру прикладних досліджень в сільському господарстві, 1815 М. Опімегейу 5ігеєї, Реогіа, І 61604,
ОИ5А, та отримав наступний номер доступу:
Таблиця 1
Депозит біологічного матеріалу
МАВ В-59571 Березень-08-2011
МАВ в-59572 Березень-08-2011
МАВ в-59565 Березень-08-2011
МАВ В-59567 Березень-08-2011
МАВ в-59566 Березень-08-2011
МАВ в-59568 Березень-08-2011
МАВ в-59570 Березень-08-2011
МАВ в-59569 Березень-08-2011
МАВ в-50493 Березень-08-2011 "МАК означає депонування в колекції культур Служби досліджень в сільському господарстві (Адгісинкига! Кезеагсп Зегмісе Сийиге СоїПесійоп), Реогіа, Ії...
Штам був депонований за умов, які гарантують, що доступ до культури буде дійсним впродовж розгляду даної патентної заявки для особи, що отримає право доступу від уповноваженого Патентів та Знаків для товарів та послуг за 37 С.Б.К. 51.14 та 35 0.5.0. 5122.
Депозит являє собою чисту культуру депонованого штаму. Депозит є доступним згідно з іноземним патентним законодавством в країнах, де подані еквівалентні заявки даної заявки або споріднені їй. Однак, треба розуміти, що доступність депозиту не передбачає дозволу на роботу з даним винаходом з ціллю обмежити права на патент, надані діями уряду.
Наступні приклади включені тільки для цілей ілюстрації та не призначені обмежити обсяг даного винаходу.
ПРИКЛАДИ
Матеріали та способи
Середовища
МЕМ-агар (УЕМА): (10 г/л О-маніту; 0,50 г/л дріжджового екстракту Охоїа; 0,10 г/л масі; 0,50 г/л К"НРО»; 0,20 г/л МаЗО»:7НгоО; 12,0 г/л агару; рНеб,8).
Рідкий МЕМ: (10 г/л Ю-маніту; 0,50 г/л дріжджового екстракту Охоїй; 0,10 г/л масі; 0,50 г/л
К»НРО»Х; 0,20 г/л МазО4:7НгО; рНеб, 8).
Протокол виділення ДНК
Для штамів, що росли у чашках, петлю на 1 мкл кожного штаму з чашок окремо додавали до 100 мкл розчину для виділення ДНК РгерМапе Окга від Арріїей Віозухіетв5. Розчин нагрівали до 100"С впродовж 10 хвилин. Виділену ДНК використовували для ПЛР-аналізу.
Для ДНК виділеної з бульбочок, бульбочки видаляли за допомогою пінцета з коренів сої та полоскали в дінго. Роз'єднані бульбочки окремо поміщали в 100 мкл розчину для виділення
ДНК РгерМап? ОПйга від Арріїей Віозузівет5 та нагрівали при 100" впродовж 10 хвилин з використанням 9б-лункового ПЛР-планшета також від Арріїей Віозузіет5. Щоб уникнути перехресного зараження використовували одноразові шпички для розламування бульбочок.
Виділену ДНК використовували для ПЛР-аналізу.
Протокол ПЛР
Полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) виконували з використанням 96б-лункового термоциклеру для проведення швидкої ПЛР від Арріїей Віозузіет5 Мегйе. ПЛР проводили для кожного штаму. Додавали 2 мкл ДНК до 0,5 мкл 3' праймера, 0,5 мкл 5' праймера, 0,5 мкл Тад- полімерази (Мем/ Епдіапа Віоїаре5, Іпс.) та 21,5 мкл Ріайпит Віше РСВ БЗирегтіх? (Іпийтодеп).
ПЛР-суміш нагрівали до 94"С впродовж 4 хвилин. Після денатурації, ПЛР виконували впродовж 35 циклів з наступною програмою: 94"С впродовж 1 хвилини, 68"С або температураси), залежна) від відпалювання праймера, впродовж 1 хвилини та реакція подовження при 727С впродовж 1 хвилини. Після завершення програми ПЛР 5 мкл ПЛР-суміші проводили на системі
Гопга? РіазнСв!2.
Протокол виділення штаму
Для виділення штамів поверхню бульбочок стерилізували 1095 господарським відбілювачем протягом 2 хвилин. Бульбочки полоскали в стерильній воді та потім поміщали в мікроцентрифужну пробірку з 250 мкл стерильної води. Бульбочки роздрібнювали стерильними шпичками та вивільняли штами Кпі2обішт у воду. Дві 10 мкл петлі води наносили штрихами у чашки з МЕМА для поодиноких колоній. Усі планшети обгортали Рагайт? та вирощували при
Зо 30"С в термостаті Еррепдогї Іппома? 42К. Час росту різнився для кожного ізоляту.
Протокол первинного скринінгу
Здійснювали первинний скринінг штамів за двома окремими протоколами, тобто «Протокол відносно грунтів з полів з соєю (поле, оброблене ОБОА 532С)» та «Протокол відносно необроблених (контрольних) полів». Кожен протокол описали.
Протокол відносно грунтів з полів з соєю (поле, оброблене ОШБОА 532)
Насіння сої, покриті ОБЮОА 532С, висаджували у різноманітні грунти в усіх регіонах, де вирощують сою, в Сполучених Штатах, наприклад, Південна Дакота, Північна Дакота, Джорджія,
Айова, Небраска, Іллінойс, Індіана, Техас, Канзас, Міннесота і т. д. Насіння сої, оброблене штамом ОБОА 532С Вгадугпі2обішт іаропісит, вирощували у цих грунтах, збирали та одразу ж аналізували бульбочки сої з використанням ПЛР-аналізу. Сорок (40) бульбочок збирали з кожного зразка грунту. Окремі бульбочки сої завантажували в поодинокі лунки 96-лункового титраційного мікропланшета. ДНК з цих окремих бульбочок сої виділяли безпосередньо з бульбочок на основі описаного вище способу (дивись Матеріали та способи: Протокол виділення ДНК).
ПЛеР-аналіз з використанням О5БОА 532С-специфічного праймера 209 здійснювали безпосередньо на 96б-лунковому планшеті (дивись Матеріали та способи: Протокол ПЛР).
Обраховували ампліфікацію праймера 209 (смужка 0,9 т.п.о.) із 40 бульбочок, щоб визначити відсоткову ампліфікацію. Якщо ДНК-ампліфікація 0,9 т.п.о. становила 3095 або менше (тобто 7095 або більше результатів ПЛР були негативними щодо ампліфікації праймера 209), тоді зразок грунту містив штами Вгадугпігорішт іаропісшт з більшою конкурентоспроможністю, ніж штам ОБОА 532С. Бульбочки сої з меншою або рівною 3095 ампліфікацією містили природні штами визначені як більш конкурентні, ніж ОБОА 532С на основі описаного способу (дивись
Матеріали та способи: Протокол виділення штаму).
Якщо більше ніж 3095 бульбочок сої були колонізовані штамом ОЮА 532С Вгадугпі2обіа
Іаропісит, тоді грунт вважали непридатним для виділення нового штаму та припиняли роботу з цим зразком грунту.
Протокол відносно необроблених (контрольних) полів
Бульбочки отримували з сої з полів, необроблених ОБОА 532С, у наступних штатах:
Арканзас, Джорджія, Іллінойс, Індіана, Айова, Оклахома, Небраска, Канзас, Міссурі та Техас. 60 Штами Вгадугпігобішт іаропісит виділяли безпосередньо з цих бульбочок відповідно описаному вище протоколу (дивись Матеріали та способи: Протокол виділення штаму). Виділені штами піддали прямій конкуренції зі штамом ИОБОА 532С Вгадугпігобіа |аропісшт відповідно «Протоколу дослідження конкуренції» (дивись Матеріали та способи: Протокол дослідження конкуренції). Виділені штами, які заселили більше 7095 бульбочок сої при зрівнянні зі штамом
ИБОА 5320 Вгадугпігобіа |аропісит, відбирали для оцінювання продуктивності (дивись
Матеріали та способи: Протокол дослідження продуктивності).
Протокол дослідження конкуренції
Визначали оптичну густину (спектрофотометр Маподгор? МО1000). Отримували співвідношення 1:1 інокуляту ОБОА 532С до кожного виділеного штаму. ОБОА 532С розводили або концентрували до оптичної густини 0,5 при 600 нм та 0,5 мл інокуляту ОБОА 532С залишали для кожного ізоляту. Усі виділені штами або концентрували, або розводили до оптичної густини 0,5 при 600 нм з використанням наступного обчислювання: (0,5 оптична густина ОБОА 53202) х (0,5 мл ОБОА 53202) - (оптична густина виділеного штаму) х (мл виділеного штаму). Додавали 0,5 мл ОБОА 532С до 0,5 мл кожного ізоляту в якості окремої обробки. Насіння сої покривали сумішшю інокуляту при нормі 0,5 мл суміші інокуляту на 12 насінин сої. Забезпечували просочування насіння впродовж 30 хвилин. 5 з 12 оброблених насінин сої висаджували в грунтову суміш Раїага?є зВ в горщик на 1 галон. Рукавиці одягали при посадці насіння та змінювали між обробками. Після саджання 7 оброблених насінин сої, що залишилися, відбракували.
При проростанні горщики проріджували до З рослин. Рослини вирощували впродовж 6-7 тижнів в теплиці та уникали перехресного зараження під час процесу поливання. Температури варіювали від приблизно 237С до 32"С. Поливання здійснювали способом «за необхідністю».
Бульбочки збирали з кожної обробленої рослини та використовували для виділення ДНК та
ПЛР-аналізу з ОБОА 532С-специфічним праймером 209. Дивись Матеріали та способи:
Протокол виділення ДНК та протокол ПЛР.
Протокол дослідження продуктивності
Дослідження продуктивності являє собою пряме порівняння продуктивності штам до штаму між окремим виділеним штамом та комерційно доступним штамом ОБОА 5320 Вгадугпігорійт )аропісшт. Виділений штам та контрольний штам (штам ОБОА 532С Вгадупі2обічт |аропісшт)
Зо наносили штрихами одночасно на окремі чашки з УЕМА. Виділений штам та контрольний штам окремо засівали в 5 мл рідкого середовища УЕМ, щоб отримати початкову оптичну густину 0,03 при 600 нм в кожній пробірці з інокулятом (спектрофотометр Маподгор? МО1000). Виділений штам та контрольний штам інкубували окремо при 30"С впродовж З днів. Після інкубації інокулят для виділеного штаму та контрольного штаму додатково розводили або концентрували до кінцевої оптичної густини 0,5 при 600 нм в кожній пробірці з інокулятом (спектрофотометр
Маподгор? МО1000) з отриманням експериментального засобу для обробки (виділений штам) та контрольного засобу для обробки (контрольний штам, штам ОБОА 532С Вгадугпігорішт )аропісит).
Додавали 0,75 мл експериментального засобу для обробки до 32 насінин сої. Забезпечили просочування обробленого насіння впродовж 30 хвилин. Після 30 хвилин по 2 насінини висаджували в 15 окремих (4"х4"хб") горщиків з грунтовою сумішшю Раїага? ЗВ. Одягали рукавиці при посадці насіння та змінювали між обробками. Після саджання 2 оброблені насінини сої, що залишилися, відбракували. Цей процес повторили для контрольного засобу для обробки.
При проростанні горщики з експериментальним засобом для обробки та контрольним засобом для обробки проріджували до однієї рослини. Рослини вирощували впродовж 8- 10 тижнів в теплиці та уникали перехресного зараження під час процесу поливання.
Температури варіювали від приблизно 237С до 32"С. Поливання здійснювали способом «за необхідністю». Після 8-10 тижнів боби збирали та висушували впродовж ночі при 80"С. Для визначення статистично значущого підвищення продуктивності у порівнянні зі штамом ОБОА 5320 Вгадутпігобішт |аропісит застосовували аналіз із статистичним програмним забезпеченням УМР (5АБ5 Іпзійціе, Іпс.).
Протокол температурного режиму
Виділені штами Вгадугпіг2обіт іаропісшит наносили штрихами на чашки з МЕМА (10 г/л 0- маніту; 0,50 г/л дріжджового екстракту Охоїд; 0,10 г/л Масі; 0,50 г/л КаНРО»; 0,20 г/л
Ма5зо:7Нго; 12,0 г/л агару; рН-б,8) та інкубували при 30"С та 35"С, відповідно, впродовж 7 днів. Виділений штами аналізували за здатністю вирощування з них виділених колоній.
Протокол профілю стійкості до гліфосату
Виділені штами Вгадугпігобічт |аропісит наносили штрихами на чашки з ХМЕМА з 1 ммоль бо гліфосату та 2 ммоль гліфосату (10 г/л ЮО-маніту; 0,50 г/л дріжджового екстракту Охоїа; 0,10 г/л
Масі; 0,50 г/л К"НРО»; 0,20 г/л Ма5Оа4:7 НгО; 12,0 г/л агару; рНн-б,8). Чашки інкубували при З30"7С впродовж 7 днів та штами аналізували за здатністю вирощування з них виділених колоній.
Протокол антибіотичного профілю
Виділені штами Вгадугпі2обішт |іаропісит наносили Т-штрихами на УЕМА з гентаміцином (50 мг/л), МЕМА з хлорамфеніколом (50 мг/л) МЕМА з поліміксином В (100 мг/л), МЕМА з карабеніциліном (100 мг/л), ХУЕМА з неоміцином (50 мг/л) та ХЕМА з налідиксовою кислотою (50 мг/л). Чашки інкубували при З0"С впродовж 7 днів та штами аналізували за здатністю вирощування з них виділених колоній.
Протокол ПЛР Оімег:зіїар?
ПЛР Оімег:Паре виконували з використанням Оімег5йар Рхеидотопаз Кі від ВіоМегівих. Цей набір містив запатентовані компанією праймери, призначені для ампліфікації різноманітних частин геному, для здійснення фінгерпринтінгу багаторазової ампліфікації ДНК. Кожний штам має унікальний фінгерпринт, та можна визначити відсоток схожості серед штамів з використанням програмного забезпечення Оімегіїаб.
ПЛР виконували відповідно. 2 мкл ДНК додавали до 18,0 мкл Ке-РСК ММІ, 2,0 мкл суміші праймерів, 0,5 мкл Тад-полімерази (Мем Епдіапа Віоїар5, Іпс.) та 2,5 мкл буферу з Тад- полімеразою (Мем Еподіапа Віоїаре, Іпс.) до загального об'єму 25 мкл. ПЛР нагрівали до 947С впродовж 2 хвилин та потім виконували 35 циклів відповідно до наступного: 947"С впродовж 0,5 хвилини, потім 50"С впродовж 0,5 хвилини та наприкінці 707С впродовж 1,5 хвилини. Після завершення 35 циклів усю реакцію підтримували при 70"С впродовж З хвилин. Після завершення ПЛР-аналізу ПЛР-продукт проводили на Адіїепі? 2100 бегпев5 Віоапаїулег. Для завантаження ПЛР-продукту на чипи Оімегейаре? Зувіет використовували ЮОімегейаре ОМА
Кеадепіх 5 Бирріїе5 Кії від ВіоМегівих. Набір експлуатували відповідно до інструкцій. Перед застосуванням набір знаходився при кімнатній температурі впродовж 30 хвилин перед завантаженням чипу Оімег5Пйаре. Чіп Оімег5йаре завантажували в повній відповідності з усіма передбаченими протоколами та інструкціями. По завершенні завантаження чипу Оімег:5іар? чіп завантажували в Адііепі? 2100 бегієз Віоапаїугег та здійснювали аналіз до завершення.
Приклад 1
Структура унікального праймера для комерційного штаму ОБОА 532С Вгадугпігорішт
Зо Спосіб генетичної ідентифікації розробили для оцінювання конкурентоспроможності комерційного штаму ОБОА 532С Вгадугппі2обішт |аропісит в порівнянні з природними штамами в польових умовах. Ідентифікували праймер специфічний до ОБОА 532С та застосовували
ПЛР-технологію, щоб ефективно оцінити конкурентоспроможність ОБОА 532С в польових умовах.
Секвенування цілого геному ОБОА 532С здійснювали у Момогутевз Оамі5. Було виявлено, що двадцять п'ять різноманітних ДНК-фрагментів мають низьку гомологію /|із загальнодоступними послідовностями Вгадугпігобішт іаропісит. ДНК виділяли із штамів В. )аропісшт (ЮБОА 532С, Р152, Ві173, Вг187, Р190 та Р194), що росли на чашках відповідно до описаного вище способу (дивись Матеріали та способи: Протокол виділення ДНК). Відносно цих двадцяти п'яти ДНК-фрагментів здійснювали додатковий аналіз послідовностей. Передбачувані унікальні праймери для штаму ОБОА 532С обирали та застосовували для скринінгу ОБОА 5320- специфічного праймера за допомогою ПЛР відносно деяких типових штамів Вгадугпігобійт
Іаропісит. Після оцінювання ПЛР було ідентифіковано один унікальний праймер для ОБОА 532С та названо р209.
Послідовність праймера 209 була наступною:
ЗЕО І МО: 1 - РАО9ро-ттасаттадасАтассСсАссСсааАсца,
ЗЕО Ір МО: 2 - РгОЗрз- что тоАатпасссАассСАСаасас.
Специфічність праймера
Двадцять п'ять праймерів окремо тестували відносно позитивної ідентифікації ОБОА 5320.
Праймери далі тестували відносно специфічності по відношенню до ЮБОА 532С за допомогою
ПЛР з використанням ОБОА 532С та 5 різноманітних природних штамів В. іаропісит (Р152,
Вг173, Вг187, Р190 та Р194) для порівняння. Секвенування геному показало, що Вг187 та ОБОА 532С були генетично ідентичними.
Таблиця 2
Узагальнення скринінгу праймера 2787 1117-1171 111-11-16 843 17771111сю | ях 115 | ж 1. | я | 6 21251111 117-11-11 117-17-16 и 1111ю 117-11-11 жк 117-17-16 487 17771111 17-11 1111-17-16 2567 17771111сю ЇЇ 1111-11 11-11 ї11586щЩ 4111. 17-11 111-11-16 8 1111ю 117-11-11 111-116 989 1711111сю 17-11 Їж 1-1 - 1168 10739. ї7777ю 17-11 1117-17-16 98ва,.17777111сю ЇЇ 1111-11 жк 111-111 64 895 111111сю 17-11 Їж 111-116 12254111 | 17117111 || 68 7607 ї177711ю 17-11 Їж 1. | я 168 889 17711111сю ЇЇ 1111-11 1 | я 16 72817111 | 1111-1116 778698 1711ю 17-11 Їж 1 | я 116 714244 1771111 | 1-15 11-16 п ЕЕ: ПО Я ОХ ПОН НО ОХ НО ОО НО НО ст ПОН 798986. 17771111сю 1-11 Їж 1 | я | 65 77895... ж | - 1 ях | вх | | я | 6 " 943 177771711сю | 1117-11. 1-16 "Праймер 209 показував найчистіші смужки та був вибраний для подальшого оцінювання.
Таблиця 2 узагальнює отриманні результати («ї» означає позитивну ідентифікацію смужки
ПЛР-ампліфікації в гелі, «-» означає відсутність ампліфікації ДНК).
У відношенні фіг. ТА, було показано, що виділений праймер 209 є специфічним до ОБЮОА 532С та Вг187. Додаткове генетичне тестування показало, що О5БОА 532С та штам Р187
Вгадугпігорішт іаропісит є ідентичними (результати не показані). Вміст лунки (зліва направо) показує наступні природні штами ОБОА 532С, Р152, Ві173, Вг187, Вг190, Вг194 та контрольну драбинку. Дивись фіг. 1А.
Специфічність праймера 209 тестували відносно природних штамів Р152, Вг173, Вг187,
Вг190, Вг194 та ОБОА 532С. Дивись фіг. 18. ПЛР з праймером 209 проводили для 100 штамів, отриманих з необроблених ділянок у польових випробуваннях відповідно до вищевказаного способу (дивись Матеріали та способи: Протокол відносно необроблених (контрольних) полів).
Штам ОБОА 532С Вгаадугпі2обішт |аропісит не додавали до цих ділянок. Тільки 395 природних штамів з протестованих штамів може бути ампліфіковано з одержанням смужки 0,9 т.п.о., специфічної до праймера 209. Цей результат демонструє, що праймер 209 можна застосовувати для специфічного визначення ОБОА 5320.
Приклад 2
Аналізування та виділення нових штамів
Праймер 209 застосовували у якості маркера, щоб показати наявність або відсутність колонізації штамом ОБОА 532 Вгадуті2обіа (аропісшт в кореневих бульбочках рослин сої.
Смужки (тобто смужка 0,9 т.п.о.), що показують наявність праймера 209, виконують роль позитивної ідентифікації штаму ОБОА 532С Вгадугпі2обіа іаропісит. Дивись фіг. 2А. Фіг. 2А є ілюстративною для прикладу, де штам ОБОА 532С Вгадугпігобіа іаропісшт є переважно конкурентним штамом щодо колонізації бульбочок рослини сої порівняно з іншими природними штамами КпПі2обіаІ. На фіг. 2В кількість смужок, що показують позитивну ідентифікацію для праймера 209 та, таким чином, наявність штаму ОБОА 532С Вгадупі2обіа |(аропісит, знижена у порівнянні із загальною кількістю смужок, наявних для праймера 209 на фіг. 2А. На фіг. 2А та фіг. 28 продемонстровано, що наявність або відсутність праймера 209 можна використовувати для визначення, чи є ЗОБА 532С переважно конкурентним штамом в бульбочках рослини сої.
Виділені штами Вгадугпігобішт іаропісит відбирали з бульбочок відповідно до обох протоколів скринінгу (дивись Матеріали та способи: Протокол первинного скринінгу). Відібрані штами виділяли з бульбочок відповідно до способу виділення (дивись Матеріали та способи:
Протокол виділення штаму).
Приклад З
Оцінювання прямої конкуренції
Усі виділені штами використовували в програмі скринінгу, призначеної для безпосереднього випробування конкурентоспроможності ізоляту відносно штаму ОБОА 532С Вгадугпігорійт
Іаропісит щодо здатності колонізувати бульбочки (дивись Матеріали та способи: Протокол дослідження конкуренції).
Виділений праймер 209 специфічний до ОБОА 532С використовували у якості маркера, щоб показати наявність або відсутність колонізації штамом ОБОА 532С Вгадугпіі2обіа іаропісит в кореневих бульбочках рослин сої. Позитивна ідентифікація для праймера 209 вказала на колонізацію штамом ОБОА 532С Вгадугппі2обіа іаропісит в кореневих бульбочках рослин сої.
Навпаки, відсутність смужок, що показують позитивну ідентифікацію для праймера 209, вказує на колонізацію природним штамом в кореневих бульбочках рослин сої, відмінним від штаму
ИБВА 53260 Вгадугтпі2обріа іаропісит. Виділені штами, що демонстрували більше 7095 колонізації аналізованих бульбочок, обирали для вторинного оцінювання для підтвердження. Штами піддавали щонайменше двом циклам оцінювання конкуренції. Під час цієї процедури більше 1000 ізолятів піддавали скринінгу щодо підвищеної конкурентоспроможності.
Приклад 4
Оцінювання продуктивності
Дослідження продуктивності являє собою пряме порівняння штаму до штаму виділених штамів до ОБОА 532С. Підвищену продуктивність вимірювали як функцію сухої ваги бобів (г).
Дивись Матеріали та способи: Протокол дослідження продуктивності. Результати представлені в таблицях ЗА - 30.
Коо)
Таблиця ЗА
Підвищена продуктивність як функція від сухої ваги бобів (г)
МАВ В-59567. | -:ЙИфК 80777777 Ї1111111111111162СССсСсС у
МАВ В-59565. | -:Ф/ 80777777 Ї11111111111111587..ЙЙ.СС2С о ОБОАБЗАС | 77777175
Відсоток колонізації підтверджували у трикратному дослідженні та підвищену суху вагу бобів підтверджували в двократному дослідженні для всіх штамів.
Таблиця ЗВ
Підвищена продуктивність як функція від сухої ваги бобів (г) о МАВСВ-БеБИЮ | 77777777777771780111717171717171111111111111111111153011111сСс1С у 11 БОАБЗАС ОЇ 7777777777717117-11111111111111111Ї111111111545ССсСсСсС
Відсоток колонізації підтверджували у трикратному дослідженні та підвищену суху вагу бобів підтверджували в двократному дослідженні для всіх штамів.
Таблиця ЗС
Підвищена продуктивність як функція від сухої ваги бобів (г)
Суха вага бобів (г)
МАНІ. В-59566
МАНІ. В-59569
МАНІ. В-59568
Відсоток колонізації підтверджували у трикратному дослідженні та підвищену суху вагу бобів підтверджували в двократному дослідженні для всіх штамів.
Таблиця 30
Підвищена продуктивність як функція від сухої ваги бобів (г)
МАНІ. В-50726
МАНІ. В-50727
МАНІ. В-50728
МАНІ. В-50729 мав в-еої3ої ЇЇ 77777777777117890111111111Ї1111111111111111584111СсС1С уЗОАБЗ2-С нини зни
Відсоток колонізації та підвищену суху вагу бобів підтверджували у двократному дослідженні для всіх штамів, крім МКК. В-50730"У, який пройшов один цикл тестування.
Комерційно доступний штам ОБЮОА 532С застосовували у якості контролю для кожного оцінювання. Результати таблиць ЗА-3О0 показують, що усі, крім одного, із виділених штамів мали підвищену продуктивність порівняно з контролем, ОБОА 5320.
Приклад 5
Дослідження характеристик
Виділені штами Вгадугпігобішт |аропісит додатково характеризували виходячи з температури, стійкості до гліфосату та антибіотичних профілів (дивись Матеріали та способи: температурний режим, профіль стійкості до гліфосату та протоколи антибіотичних профілів).
Результати наведені в таблиці 4.
Таблиця 4:
Характеристика виділених штамів як функції від температурного режиму, стійкості до гліфосату та стійкості до антибіотиків
МАВІ | МАВІ. | МАВІ | МАНІ | МАНІ | МАНІ | МАВІ | МАВ | МАВ ЮА
Обробка В- В- вВ- В- В- вВ- В- В- В- Б32о 59565 | 59572 | 59567 | 59566 | 59570 | 59568 | 59569 | 50493 | 59571 5855 15171171 1,0 ммоль ня ня ня ня гліфосату 2,0 ммоль 4- ня гліфосату олеамані 5 17111, оХлорамфенол/ я | 11131111 71
Марабеншилн | я 17111 111111 рр обмані 5 | 7111 111
Налідиксова ня ня кислота
Таблиця 4 узагальнює результати («жї» означає ріст виділених колоній, «-» означає відсутність росту та «ї-» означає декілька виділених колоній/мінімальний та спорадичний ріст).
Результати показують, що штами МКК В-59570, МАВІ. В-59568, МАН в-59565, МАВ в-59566 та МКК 8В-50493 є витривалими до температур фактично 35"С. Результати додатково показують, що виділені штами МКК В-59569, МАВ 8в-59568, МАНІ В-59565 та МКК. В-50493 є природно стійкими до гліфосату. Було виявлено, що штами МКК! 8-59566 та МКК! 8-59569 мають стійкість до налідиксової кислоти.
Приклад 5
Дослідження ДНК-фінгерпринтінгу
Найрезультативніші ізоляти піддавали аналізу ДНК-фінгерпринтінгу Оімег5іар? (дивись
Матеріали та способи: Протокол ПЛР бімег:5Пар-). ДНК виділяли з кожного штаму відповідно до способів, що обмірковуються (дивись Матеріали та способи: Протокол виділення ДНК).
Виділену ДНК застосовували для ПЛР-аналізу.
Результати аналізу ДНК-фінгерпринтінгу Оімег5ійар показані на фіг. ЗА - ЗВ. Результати демонструють, що виділені штами є унікальними штамами та штамами відмінними від ОБОА 5326.
Даний винахід описаний, щонайменше частково, наступними пронумерованими параграфами: 1. Біологічно чиста культура Вгадугпі2обіа іаропісит, вибрана з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50592; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50593; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50586; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50588; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50587; штам з реєстраційним номером депонування МКК В-50589; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50591; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50590;
Зо штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50594; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726;
штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729 та штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50730. 2. Штами Вгадугпігорічшт за параграфом 1, де вказані штами здатні стимулювати зв'язування азоту в рослини.
З. Штами Вгадугпігобішт за будь-яким з параграфів 1-2, де вказані штами витривало ростуть при температурі фактично 3570. 4. Штами Вгадугпігобішт за будь-яким з параграфів 1-3, де вказані штами, вибрані з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50591; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50589; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50586; штам з реєстраційним номером депонування МЕКІГ. 50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів. 5. Штами Вгадугйпі2орічт за будь-яким з параграфів 1-4, де вказані штами Вгадугпігорішт є природно стійкими до гліфосату. б. Штами Вгадугппі2орічт за параграфом 5, де вказані штами вибрані з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50590; штам з реєстраційним номером депонування МЕКІ В-50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів. 7. Штами Вгадугпігобішт за будь-яким з параграфів 1-6, де вказані штами мають підвищену конкурентоспроможність щодо колонізації рослини. 8. Штами Вгадугпігорішт за будь-яким з параграфів 1-7, де вказані штами мають підвищену ефективність при стимуляції росту рослини. 9. Штами Вгадугпігобішт за будь-яким з параграфів 1-8, де підвищена конкурентоспроможність включає щонайменше 5195 заселеність бульбочок, наприклад, щонайменше 5595, щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 75965, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92965, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895, щонайменше 9995 або 10095 заселеність бульбочок. 10. Штами Вгадугпіг2обішт за будь-яким з параграфів 1-9, де підвищена ефективність при стимуляції росту рослини включає щонайменше одне з збільшеного врожаю рослини, вимірюваного у перерахунку на бушель/акр, збільшеної кількості плодів, збільшеної кількості коренів, збільшеної довжини коренів, збільшеної маси коренів, збільшеного об'єму коренів, збільшеної площі листя, збільшеної густоти стояння рослин, збільшеної сили рослини та/або збільшеної здатності зв'язувати азот (М2г) у порівнянні з комерційно доступним штамом, наприклад, ОБОА 5326. 11. Штами Вгадугпі2обішт за будь-яким з параграфів 1-10, де підвищена ефективність при стимуляції росту сої включає підвищення загальної сухої ваги бобів сої на вказаній рослині сої при порівнянні вказаної загальної сухої ваги бобів сої із загальною сухою вагою бобів сої на рослині сої, підданої впливу комерційно доступного штаму, наприклад, промислового штаму иИБОА 5320. 12. Композиція, що містить штам Вгадугпі2обіа іаропісит, вибраний з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50592; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50593; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50586; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50588; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50587; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50589; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50591; штам з реєстраційним номером депонування МКНАГ В-50590; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50594; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729; штам з реєстраційним номером депонування МАК В-50730 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів, та агрономічно прийнятний носій. бо 13. Композиція за параграфом 12, де вказана композиція включає одну або декілька сигнальних молекул. 14. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою ліпо- хітоолігосахарид (І СО). 15. Композиція за будь-яким з параграфів 13-14, де І СО є синтетичним. 16. Композиція за будь-яким з параграфів 13-15, де І СО є рекомбінантним. 17. Композиція за будь-яким з параграфів 13-16, де Ї СО має природне походження. 18. Композиція за будь-яким з параграфів 13-17, де СО отриманий з виду КпПі2обіа, вибраного з ЕПігорічшт 5рр., Вгадугпігобішт 5рр., Зіпогпігорічт 5рр. та Агогпігорішт 5рр. 19. Композиція за будь-яким з параграфів 13-18, де СО отриманий з Вгадугпігобійт |аропісит. 20. Композиція за будь-яким з параграфів 13-19, де СО отриманий з деревоподібного мікоризного гриба. 21. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою хітинову сполуку. 22. Композиція за параграфом 22, де хітинова сполука являє собою хітоолігомер (СО). 23. Композиція за будь-яким з параграфів 21-22, де СО є синтетичним. 24. Композиція за будь-яким з параграфів 21-23, де СО є рекомбінантним. 25. Композиція за будь-яким з параграфів 21-24, де СО має природне походження. 26. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою флавоноїд. 27. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою жасмонову кислоту або її похідну. 28. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою лінолеву кислоту або її похідну. 29. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою ліноленову кислоту або її похідну. 30. Композиція за параграфом 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою карикін. 31. Композиція за будь-яким з параграфів 12-30, де композиція включає щонайменше дві різні рослинні сигнальні молекули.
Зо 32. Композиція за будь-яким з параграфів 12-31, де композиція включає щонайменше один агрономічно корисний засіб. 33. Композиція за параграфом 32, де агрономічно корисний засіб являє собою гербіцид, інсектицид або фунгіцид. 34. Композиція за параграфом 33, де агрономічно корисний засіб являє собою щонайменше один мікроорганізм, який робить фосфат розчинним. 35. Композиція за параграфом 34, де щонайменше один мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, містить штам гриба Репісійшт. 36. Композиція за параграфом 35, де щонайменше один мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, містить штам Р. бБііаіає. 37. Композиція за параграфом 36, де штам Р. Вііаіїае вибраний з групи, що включає МЕМ. 50162, МЕКІ 50169, АТС 20851, АТСС 22348 та АТСС 18309. 38. Композиція за параграфом 34, де щонайменше один мікроорганізм, який робить фосфат розчинним, містить штам Р. даеєвіймогив. 39. Композиція за параграфом 38, де штам Р. даезігімоги5 являє собою МКК. 50170. 40. Спосіб виділення бактеріального(них) штаму(ів), вибраних з родів, що включають
КПпі2орішт та Вгадугпі2обішт, що мають підвищену конкурентоспроможність щодо колонізування бобової рослини та підвищену ефективність при стимуляції росту бобової рослини, що включає етапи, на яких: а. отримують бактеріальний(ні) штами) із зразка грунту;
Б. бобову рослину піддають впливу вказаного(их) бактеріального(их) штаму(ів) та комерційно доступного(их) штаму(ів), наприклад промисловому штаму ОБОА 532С; с. відбирають бактеріальний(ні) штамси), який (які) є більш конкурентними, ніж комерційно доступний штам щодо заселення бульбочок бобової рослини;
Ї. аналізують вибраний(ні) бактеріальний(ні) штам(и), який(які) є більш конкурентними, ніж комерційно доступний штам щодо заселення бульбочок бобової рослини відносно того(тих) бактеріального(них) штаму(мів) з підвищеною ефективністю при стимуляції росту бобової рослини та а. виділяють вказаний(ні) бактеріальний(ні) штам(и) з підвищеною ефективністю при стимуляції росту бобової рослини. бо 41. Виділений бактеріальний штам за параграфом 40, де вказаний бактеріальний штам являє собою штам ВгадугпігоБбічт 5рр. 42. Виділений штам Вгадугпігобішт за параграфом 41, де вказаний штам Вгадугпі2обійт 5рр. являє собою штам Вгадугпігобішт іаропісит. 43. Виділений штам Вгадугпігобішт за будь-яким з параграфів 41-42, де вказаний штам являє собою штам Вгадугпі2обіа і(аропісит, вибраний з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50592; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50593; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50586; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50588; штам з реєстраційним номером депонування МАК В-50587; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50589; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50591; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50590; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50594; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50726; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50727; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50728; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50729; штам з реєстраційним номером депонування МАК В-50730 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів. 44. Спосіб за будь-яким з параграфів 40-43, де виділений штам Вгадугпі2обіа іаропісит здатний зв'язувати азот в рослині. 45. Спосіб за будь-яким з параграфів 40-44, де виділений штам Вгадугпігобіа іаропісит витривало росте при температурі фактично 35760. 46. Спосіб за параграфом 45, де виділений штам Вгадугі2обріа їіаропісшт вибраний з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50591; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50589; штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50586;
Зо штам з реєстраційним номером депонування МКК. 50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів. 47. Спосіб за будь-яким з параграфів 40-46, де штам Вгадугпі2обіа іаропісит має природну стійкість до гліфосату. 48. Спосіб за параграфом 47, де виділений штам Вгадугі2обріа їіаропісшт вибраний з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МКК. В-50590; штам з реєстраційним номером депонування МАК В-50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів. 49. Спосіб підсилення росту рослини, що включає етап, на якому оброблюють насіння, сходи, корінь, рослину, грунт або їх комбінацію композицією за будь-яким з параграфів 1-39. 50. Спосіб за параграфом 49, де насіння, сходи, корінь або рослина належать до бобових. 51. Спосіб за параграфом 50, де насіння, сходи, корінь або рослина являють собою насіння сходи, корінь або рослину сої. 52. Спосіб за будь-яким з параграфів 49-51, де вказану композицію додають до грунту в кількості від 1 х 109 до 1 х 10'З колонієутворюючих одиниць на гектар, переважно від 2 х 10"! до б х 1017! колонієутворюючих одиниць на гектар. 53. Спосіб за будь-яким з параграфів 49-52, де вказану композицію застосовують у якості покриття для насіння, що включає від 1 х 102 до 1 х 108, переважно від 1 х 107 до 1 х 105 колонієутворюючих одиниць на насінину.
Даний винахід, описаний та заявлений у даному документі, не повинен обмежуватися в обсягу розкритими в даному документі конкретними варіантами здійснення, оскільки дані варіанти здійснення, як призначається, є ілюстрацією деяких аспектів даного винаходу. Будь-які рівноцінні варіанти здійснення передбачаються в обсязі даного винаходу. Дійсно різні модифікації даного винаходу на додаток до тих, що показані та описані в даному документі, будуть очевидними для фахівців в даній галузі техніки з попереднього опису. Такі модифікації також, як передбачено, охоплені обсягом доданої формули винаходу. У випадку суперечок, дане розкриття, включаючи приведені в ньому визначення, буде мати переважну силу.
Різні посилання процитовані в даному документі, розкриття яких включені посиланням у всій своїй повноті. (516)
Перелік послідовностей «110» Канг, Яовей
Семонс, Шоун
Сміт, Джессіка
Вудс, Крісті «120» Конкурентоспроможні та ефективні бактеріальні штами -1305 12091-МО-РСТ -160» 2 «170» РаїепіНп версія 3.5 «2105» 1 «2115» 27 «212» ДНК -213» Штвтучна послідовність «220» 223» Праймер 209рь -4005 1 падундаяд саїдсссасс сддас9дд 27 «2105» 2 «2115» 25
Коо) «2125 ОМА -213» Штвтучна послідовність «220» 223» Праймер 209рз «4005 2 дісісадну ссдадсссас ддсдс 25
Claims (22)
1. Біологічно чиста культура Вгадутіобіа іаропісит для підсилення росту рослини, вибрана з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50592, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50593, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50586, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50588, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50587, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50589, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50591, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ 8-50590, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50594, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50726, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50727, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50728, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50729 та штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50730.
2. Біологічно чиста культура Вгадугпігоріа іаропісит за п. 1, де вказані штами здатні стимулювати зв'язування азоту в рослині.
3. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обріа іаропісит за будь-яким з пп. 1-2, де вказані штами витривало ростуть при температурі фактично 35 "С.
4. Біологічно чиста культура Вгадутіобіа і(аропісит за будь-яким з пп. 1-3, де вказані штами вибрані з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50591, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50589, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50586, штам з реєстраційним номером депонування МАВ. 50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів.
5. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обріа іаропісит за будь-яким з пп. 1-4, де вказані штами Вгадуті2оБрішт є природно стійкими до гліфосату.
6. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обіа (аропісут за п. 5, де вказані штами вибрані з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МАНІ 8-50590, штам з реєстраційним номером депонування МАВ В-50594 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів.
7. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обріа іаропісит за будь-яким з пп. 1-6, де вказані штами мають підвищену конкурентоспроможність щодо колонізування рослини.
8. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обріа іаропісит за будь-яким з пп. 1-7, де вказані штами мають підвищену ефективність при стимуляції росту рослини.
9. Біологічно чиста культура Вгадутпігоріа іаропісит за будь-яким з пп. 1-8, де підвищена конкурентоспроможність включає щонайменше 51 95 заселеність бульбочок, наприклад, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 91 95, щонайменше 92 9о, щонайменше 93 95, щонайменше 94 956, щонайменше 95 965, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895, щонайменше 9995 або 10095 заселеність бульбочок.
10. Біологічно чиста культура Вгадугпіг2обіа і(аропісшит за будь-яким з пп. 1-9, де підвищена ефективність при стимуляції росту рослини включає щонайменше одне зі збільшеного врожаю рослини, вимірюваного у перерахунку на бушель/акр, збільшеної кількості плодів, збільшеної Ко) кількості коренів, збільшеної довжини коренів, збільшеної маси коренів, збільшеного об'єму коренів, збільшеної площі листя, збільшеної густоти стояння рослин, збільшеної сили рослини та/або збільшеної здатності зв'язувати азот (Мг) у порівнянні з комерційно доступним штамом, наприклад, ОБОА 5326.
11. Біологічно чиста культура Вгадуті2обріа і(аропісит за будь-яким з пп. 1-10, де підвищена ефективність при стимуляції росту сої включає збільшення загальної сухої ваги бобів сої на вказаній рослині сої при порівнянні вказаної загальної сухої ваги бобів сої із загальною сухою вагою бобів сої на рослині сої, підданої впливу комерційно доступного штаму, наприклад промислового штаму ОБОА 5326.
12. Композиція, що містить штам Вгадугпі2обіа іаропісит, вибраний з групи, що включає: штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50592, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50593, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50586, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50588, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50587, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50589, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50591, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50590, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50594, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50726, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50727, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ в-50728, штам з реєстраційним номером депонування МАНІ В-50729, штам з реєстраційним номером депонування МАВ В-50730 та комбінацію щонайменше двох або більше штамів, та агрономічно прийнятний носій.
13. Композиція за п. 12, де вказана композиція включає одну або декілька сигнальних молекул.
14. Композиція за п. 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою ліпохітоолігосахарид, хітинову сполуку, флавоноїд або карикін.
15. Композиція за п. 13, де рослинна сигнальна молекула являє собою жасмонову кислоту, лінолеву кислоту, ліноленову кислоту або їх похідну. бо
16. Композиція за будь-яким з пп. 12-15, де композиція включає щонайменше один агрономічно корисний засіб.
17. Композиція за п. 16, де агрономічно корисний засіб являє собою щонайменше один мікроорганізм, який робить фосфат розчинним.
18. Спосіб підсилення росту рослини, що включає етап, на якому оброблюють насіння, сходи, корінь, рослину, грунт або їх комбінації композицією за будь-яким з пп. 12-17.
19. Спосіб за п. 18, при якому насіння, сходи, корінь або рослина належать до бобових.
20. Спосіб за п. 19, при якому насіння, сходи, корінь або рослина являють собою насіння, сходи, корінь або рослину сої.
21. Спосіб за будь-яким з пп. 18-20, при якому вказану композицію додають до грунту в кількості від їх108 до 1х10!з колонієутворюючих одиниць на гектар, переважно від 2х10"! до 6бх10!! колонієутворюючих одиниць на гектар.
22. Спосіб за будь-яким з пп. 18-21, при якому вказану композицію застосовують як покриття для насіння, що включає від 1х102 до 1х108, переважно від 1х107 до 1х105 колонієутворюючих одиниць на насінину. ОВ В КК КК ох Ох п Фігура ТА
А 110 її й г и ; о. с . . з - СК о ЗКУ хх 1 З о 1 З с о г ЗЕ с с о І: о АХ о. . с пекти КОС: х 1 ОХ хх о г ст; о Ох с . Я о п о ОХ с С ПК М о с о В ах А с п КО ОО с п Є с п щ. . о п МО о М КЕ о я п. о с 5 ще її с п. с . о п с ах с Я и. сОХ о с сх о ХО поря Ох п. о 1 с о. 5 ОХ о о с п що У З А о о с о о о о о о о о У ОО у о о .
о. Ох КК с о о. З о о. п о. о. у с Ох о МОЯ с хх о Ох Ж ЗУ о. З с "ет о о г її шо п п п 5 Ох МК о сш я ; шо ше пен о с п 0 о о п о - гура а ї 5 а о Фі о. с й о я -е о о. м с г -- нин о. сх с СХ о . З о о п з я З с як о ж с ст. о хх о о с о. о. о ХО о. З о с : о о КО о. У С о. ТК с т С Ох с 5 М м І с с о о ХО ща ПК ще с. ях с с о о. о ЗК їй сх я ЗХ о. сх о с З о по х о с с
М о. о їх с т ванн. о шо с Ка З ЕК В Х с ВУ о. п о ще де о хх я
1. 5 г о З ле ан п ; ї : | | нн і З о п . ххх ще пита ХХ о. х по о - - 5 о -- дО о хх о пиши п.
о о. о о. М ну г Я п. и НК ме о с о : о. о ВИ о ! є | о і о не о с З - о Я о. п То т ще п не,
о о. ех с п.
п. о о ще . с с Е о о не 1 кажан ще о. с о ен З СИМ я . с . с 1 о " о ш
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161470145P | 2011-03-31 | 2011-03-31 | |
| PCT/US2012/031584 WO2012135704A1 (en) | 2011-03-31 | 2012-03-30 | Competitive and effective bradyrhizobium japonicum strains |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA110375C2 true UA110375C2 (uk) | 2015-12-25 |
Family
ID=55171927
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201312667A UA110375C2 (uk) | 2011-03-31 | 2012-03-30 | Біологічно чиста культура bradyrhizobium japonicum для підсилення росту рослин |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA110375C2 (uk) |
-
2012
- 2012-03-30 UA UAA201312667A patent/UA110375C2/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6581161B2 (ja) | 競合的且つ有効な細菌株 | |
| US8921089B2 (en) | Bradyrhizobium strains | |
| KR101408683B1 (ko) | 항진균성 미생물 배양체를 포함하는 유기질비료 조성물 및 이의 제조방법 | |
| CN109112087B (zh) | 一株土地类芽孢杆菌yc16-08及其应用 | |
| WO2014175496A1 (ko) | 식물 내생세균 바실러스 메칠로트로피쿠스 와이씨7007 균주 및 이를 이용한 다기능 생물농약 및 미생물비료 개발 | |
| CN111040976A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| RU2440413C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus licheniformis (его варианты), обладающий бактерицидной и фунгицидной активностью, и препарат на основе этого штамма | |
| RU2458028C2 (ru) | Способ получения микробного органоминерального удобрения со свойствами иммуномодулятора и обладающего лечащим эффектом при поражении растений бактериальными болезнями | |
| CN114703098A (zh) | 一种用于棉花枯萎病防治的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的发酵制备及应用 | |
| UA110375C2 (uk) | Біологічно чиста культура bradyrhizobium japonicum для підсилення росту рослин | |
| Hassanien et al. | Multifaceted potentialities of some rhizobacteria associated with sorghum plants on their growth and development | |
| Innosensia et al. | First Report of Tripartite Symbiosis Potential among Soybean, Bradyrhizobium japonicum, and Dark Septate Endophytes. Agronomy 2023, 13, 1788 | |
| BR122018069737B1 (pt) | Método para intensificar o crescimento da planta | |
| RU2588483C2 (ru) | Штамм bradyrhizobium для улучшения роста растений (варианты), композиция, содержащая указанный штамм, и семя, покрытое композицией | |
| UA45103A (uk) | Штам ентомопатогенних бактерій групи bacillus thuringiensis 0239, який використовують для приготування біопрепарату проти листогризучих шкідників сільськогосподарських культур |