TWM557264U - 密閉式系統之細胞培養袋及其細胞分離裝置 - Google Patents

Abstract

一種密閉式系統之細胞分離裝置包含第一培養袋、第二培養袋、複數免疫磁珠及連接管。第一培養袋與第二培養袋藉由連接管相互密閉式連接，並且第一培養袋內具有複數免疫磁珠且培養有複數細胞。當第一培養袋受到磁力及外力時，第一培養袋中複數免疫磁珠未抓取的細胞因外力而通過連接管移動至第二培養袋中，而第一培養袋中複數免疫磁珠所抓取的細胞因磁力而留於第一培養袋中，以致使細胞能在不受外界污染的情況下進行分離。

Description

密閉式系統之細胞培養袋及其細胞分離裝置

本創作係有關一種細胞分離裝置，尤其是一種密閉式系統之細胞培養袋及其細胞分離裝置。

為了治療疾病、提升農業生產量或改善環境等多種原因，生物技術及其產品的研發腳步愈來愈快。為追求生物技術發展，細胞分離技術是一種不可或缺的技術手段，可以協助取得純化的各種細胞，以便進行下一階段的使用或實驗。

常見的細胞分離方法包括：差速離心法（differential centrifugation）、密度梯度離心法（density gradient centrifugation）、流式細胞術（Flow CytoMetry）、細胞電泳法（cell electrophoresis）等等。由於上述各種細胞分離技術常需要多次反複的操作，才能提高細胞純化的程度，無法有效率的提升細胞的純化，又增加操作人的時間負擔。並且，習知細胞分離的操作於離新後，使用者需要在無菌操作台內利用移液器（pipette）吸取懸浮液，以達成細胞分離。然而，此操作方式能是在開放空間下進行，細胞仍有相當高的機會被污染。

在一實施例中，一種密閉式系統之細胞分離裝置，其包含複數培養袋、複數免疫磁珠及連接管。每個培養袋包括袋體、二可開啟式封閉性開口及可開啟式封閉性連接口。袋體內部具有容置空間，並用以培養複數細胞。二可開啟式封閉性開口位於袋體上，並連通於容置空間。此二可開啟式封閉性開口用以輸入或輸出複數細胞的培養液。可開啟式封閉性連接口位於袋體上並連通於容置空間。複數培養袋中包括一個第一培養袋及至少一個第二培養袋。複數免疫磁珠位於第一培養袋的容置空間內。各別免疫磁珠上設有複數結合件，並且此些結合件用以抓取特定細胞(前述複數細胞中的至少一或全部)。連接管密閉式連接在第一培養袋的可開啟式封閉性連接口與第二培養袋的可開啟式封閉性連接口之間。當第一培養袋受到磁力及外力時，第一培養袋中免疫磁珠未抓取的細胞(該複數細胞中未被該複數免疫磁珠抓取的細胞)因外力作用而通過連接管移動至第二培養袋中(該至少一第二培養袋中之一)。

在一實施例中，一種密閉式系統之細胞培養袋，其包含袋體、二個可開啟式封閉性開口及一個可開啟式封閉性連接口。袋體內部具有容置空間，並用以培養複數細胞。二可開啟式封閉性開口位於袋體上，並連通於容置空間。此二可開啟式封閉性開口用以輸入或輸出複數細胞的培養液。可開啟式封閉性連接口位於袋體上並連通於容置空間。

其中，可開啟式封閉性連接口密閉式連接於一連接管的其中一端。在一些實施例中，此連接管可為一對一管線。在另一些實施例中，此連接管可為一對多管線。

綜上所述，根據本創作實施例之密閉式系統之細胞分離方法、其細胞培養袋及其細胞分離裝置可提供一密閉式培養系統，其藉由密閉式連接的複數培養袋，使得細胞能在不受外界污染的情況進行分離純化以接續下一階段的培養。

圖1係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第一實施例之示意圖。在一實施例中，參考圖1，細胞分離裝置1是以一密閉式系統來進行細胞培養和/或分離等作業。細胞分離裝置1包含複數培養袋及連接管30。為方便描述，以下先以二培養袋為例，此二培養袋分別稱之為第一培養袋10與第二培養袋12。

第一培養袋10包括袋體101、第一可開啟式封閉性開口102、第二可開啟式封閉性開口103及可開啟式封閉性連接口104。袋體101內部具有容置空間105，並且容置空間105用來容置培養液42及複數免疫磁珠（圖1未示）。第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103位於袋體101上，並且第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103連通於容置空間105。第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103用以輸入或輸出培養液42。可開啟式封閉性連接口104位於袋體101上並連通於容置空間105。當第一可開啟式封閉性開口102、第二可開啟式封閉性開口103及可開啟式封閉性連接口104均關閉時，容置空間105形成密閉空間。

在進行細胞培養時，具有複數細胞40（圖1未示）的培養液42能經由第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103中之一注入至容置空間105。其中，第一可開啟式封閉性開口102及第二可開啟式封閉性開口103可用來在進行細胞培養的過程中，可以依需求添加培養液42或其他營養劑，亦可以用來取出部分培養液42以便進行細胞成長的觀察和分析。整個培養過程維持在密閉式系統之中，避免細胞污染的狀況發生。

第二培養袋12包括袋體121、第一可開啟式封閉性開口122、第二可開啟式封閉性開口123及可開啟式封閉性連接口124。袋體121內部具有容置空間125。第一可開啟式封閉性開口122與第二可開啟式封閉性開口123位於袋體121上，並且第一可開啟式封閉性開口122與第二可開啟式封閉性開口123連通於容置空間125。第一可開啟式封閉性開口122、第二可開啟式封閉性開口123用以輸入或輸出培養液42。可開啟式封閉性連接口124位於袋體121上並連通於容置空間125。

連接管30可密閉性連接第一培養袋10的可開啟式封閉性連接口104與第二培養袋12的可開啟式封閉性連接口124，以致使第一培養袋10的容置空間105能藉由連接管30連通至第二培養袋12的容置空間125。

當進行細胞分離操作時，藉由連接管30連通第一培養袋10與第二培養袋12並且施加磁力與外力在第一培養袋10上，以致使容置空間105內的培養液42經由連接管30流至第二培養袋12的容置空間125。換言之，當進行細胞分離操作時，第二培養袋12的容置空間125將用來承接來自第一培養袋10內的全部或部分培養液42。

在一些實施例中，各培養袋的材質可以是醫療級塑化材料，例如PVC、PE、PP、PET、PU、EVA、FEP（fluorinated ethylene propylene）等，或是其他具備可撓性、可經由滅菌處理，並且提供足夠氣體交換的材質。其中又以可透視材質為佳，以便提供使用人觀察細胞狀態。

在一些實施例中，第一培養袋10與第二培養袋12可為大致上相同的結構。換言之，第一培養袋10的第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103位於袋體101的第一側，而可開啟式封閉性連接口104則位於袋體101相對第一側的第二側。同樣地，第二培養袋12的第一可開啟式封閉性開口122與第二可開啟式封閉性開口123位於袋體121的第一側，而可開啟式封閉性連接口124則位於袋體121相對第一側的第二側。

圖2係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第二實施例之示意圖。

在另一些實施例中，第一培養袋10與第二培養袋12亦可為不同或略為不同的結構。參考圖2，第一培養袋10的第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103位於袋體101的第一側，而可開啟式封閉性連接口104位於袋體101相對第一側的第二側。第二培養袋12的第一可開啟式封閉性開口122、第二可開啟式封閉性開口123及可開啟式封閉性連接口124則位於袋體101的相同側。

在一些實施例中，連接管30是一種密閉式連接管，並且其各端具備有密閉式連接頭。

續參考圖1及圖2。在一些實施例中，連接管30可為一對一管線，並且此一對一管線的二端均具備有密閉式連接頭。連接管30用以供密閉式連接在第一培養袋10的可開啟式封閉性連接口104與第二培養袋12的可開啟式封閉性連接口124之間，使第一培養袋10的容置空間105經由連接管30連通於第二培養袋12的容置空間125。連接管30可以依實際操作時的需求進行連接或脫離。

在一些實施例中，連接管30包括管路300。管路300的一端密閉式連接第一培養袋10的可開啟式封閉性連接口104，而管路300的另一端密閉式連接第二培養袋12的可開啟式封閉性連接口124。在一些實施例中，管路300的材質可選擇具備可撓性、可經由滅菌處理，並且可透視材質為佳，以便提供使用人培養液42流動的狀態。

在一些實施例中，連接管30可更包括閥門311。閥門311設置管路300上。於此，閥門311可用來控制第一培養袋10與第二培養袋12之間的流通或封閉。在一些實施例中，閥門311還可以控制管路300的流量多寡。

圖3係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第三實施例之示意圖。在另一些實施例中，參照圖3，第二培養袋12、13可為多個，即密閉式系統之細胞分離裝置1具有三個或三個以上的培養袋。以下以三個培養袋為例，此三個培養袋分別為一個第一培養袋10以及二第二培養袋12、13。此時，連接管32可為一對多管線，並此一對多管線用以密閉式將第一培養袋10連通於複數個第二培養袋12、13。在一些實施例中，第二培養袋12與第二培養袋13可為大致上相同的結構，亦可以為不同或略為不同的結構。在圖3中，第二培養袋13的第一可開啟式封閉性開口132與第二可開啟式封閉性開口133位於袋體131的第一側，而可開啟式封閉性連接口134則位於袋體131相對第一側的第二側。袋體131內部具有容置空間135。

圖4係圖3之連接管一實施例之示意圖。同時參考圖3及圖4，一對二連接管32包括管路320、第一端301、第二端302及另一第二端303。管路320透過第一端301密閉式連接第一培養袋10的可開啟式封閉性連接口104。管路320透過第二端302密閉式連接第二培養袋12的可開啟式封閉性連接口124。管路320透過另一第二端303密閉式連接另一第二培養袋13的可開啟式封閉性連接口134。在一些實施例中，管路320的材質可選擇具備可撓性、可經由滅菌處理，並且可透視材質為佳，以便提供使用人培養液42流動的狀態。

在一些實施例中，連接管32更包括有閥門312及閥門313，用以控制管路320的流通。閥門312設置管路320上靠近第二端302的位置，用來控制第一培養袋10與第二培養袋12之間的流通或封閉，閥門313設置管路320上靠近另一第二端303的位置，用來控制第一培養袋10與第二培養袋13之間的流通或封閉。

圖5A及圖5B係圖1之密閉式系統之細胞分離裝置的一實施例之細胞分離操作之示意圖。參考圖5A，複數免疫磁珠20位於第一培養袋10的容置空間105內。免疫磁珠20是具有可以受到磁力吸引的微粒。在一些實施例中，免疫磁珠20的尺吋可以由50nm~4500nm。在一些實施例中，免疫磁珠20的材質可選自具備有超強的順磁性的材質。於此，順磁性是指在磁場的存在下能迅速聚集，離開磁場能夠均勻分散，不出現聚集現象。

各個免疫磁珠20的表面均具有複數結合件22，並且此些結合件22可以與複數細胞40中具有特定表面抗原作特異性抗體的細胞結合。換言之，免疫磁珠20即為外表會塗佈上各種不同的抗體，使免疫磁珠20可選擇性的和想要分離的目標物(細胞)結合，也就是細胞表面抗原能與塗佈於免疫磁珠20的特異性單抗相結合。於是，免疫磁珠20便可以抓取複數細胞40中具有此特定表面抗原的細胞。為了清楚描述，以下將能被免疫磁珠20的結合件22抓取的細胞稱之為第一細胞44，並且將不能被免疫磁珠20抓取的細胞稱之為第二細胞46。

參考圖5B，當具有複數免疫磁珠20的第一培養袋10受到磁力及外力時，已與免疫磁珠20結合的第一細胞44因為受到磁力的吸引而留滯於第一培養袋10的容置空間105內，而未與免疫磁珠20結合的第二細胞46與培養液42因外力作用而通過連接管30移動至第二培養袋12的容置空間125內。

圖6係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第一實施例之流程圖。在一實施例中，參考圖6，密閉式系統之細胞分離方法包括利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋10（步驟S106）及利用轉盤50之轉動提供離心力於第一培養袋10（步驟S108）。於此離心力係為上述所指的外力的其中一種實現方式。於此，第一培養袋10於轉盤50上的位置相對於第二培養袋12於轉盤50上的位置接近轉動中心。因此，第一培養袋10中的培養液42與未與免疫磁珠20結合的第二細胞46因離心力作用而流入連接管30並經由連接管30流入第二培養袋12，而已與免疫磁珠20結合的第一細胞44則因磁力吸引而留滯於第一培養袋10中。

在一些實施例中，於此磁力裝置可以藉由永久磁鐵、電磁鐵等來實現。

圖7係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第一實施例之示意圖。參考圖5A、圖5B、圖6及圖7。在一實施例中，密閉式系統之細胞分離裝置1可更包括有轉盤50。轉盤50的中央區域為磁力吸附區510，而轉盤50的外圍區域為非磁力吸附區520。在一些實施例中，磁力裝置係由磁力吸附區510來實現，舉例來說，轉盤50的中央區域可以由磁鐵形成。在一些實施例中，磁力裝置可設置在轉盤50的中央區域的下方或上方，並且朝轉盤50的中央區域施加一磁力以使轉盤50的中央區域形成磁力吸附區510。當進行細胞分離操作時，第二培養袋12置於非磁力吸附區520，而第一培養袋10置於磁力吸附區510上。於此，第一培養袋10的容置空間105內的複數免疫磁珠20受到磁力吸附區510所提供的磁力而吸引（步驟S106）。因此，當轉盤50轉動而對第一培養袋20產生離心力（步驟S108）時，已與免疫磁珠20結合的第一細胞44因為受到磁力的吸引而留滯於第一培養袋10的容置空間105內，而第二細胞46與培養液42因為受到離心力而透過連接管30移動至第二培養袋12的容置空間125內。

在一些實施例中，磁力吸附區510的大小可對應於第一培養袋10的容置空間105的尺寸，以使得容置空間105的複數免疫磁珠20均能受到磁力，以提高純化的程度。

在一些實施例中，免疫磁珠20可於第一培養袋10購入時即存在在容置空間105內。在另一些實施例中，免疫磁珠20亦可是在進行細胞培養時注入至第一培養袋10內與細胞一同培養。在又另一些實施例中，免疫磁珠20亦可是在進行細胞分離時才注入至第一培養袋10內。

圖8係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第二實施例之流程圖。在一實施例中，在進行步驟S106之前，可先透過第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103中之至少一者注入複數免疫磁珠20於第一培養袋10內（步驟S101），然後混合複數免疫磁珠20與複數細胞40致使複數結合件22抓取複數細胞40中的複數個第一細胞44（步驟S102）。於反應後（結合件22與第一細胞44充份結合後），再進行步驟S106及後續步驟。在一些實施例中，步驟102可以經由充份的搖動第一培養袋10，或利用其他方式充份攪動培養液42，使得結合件22能完整的抓取第一細胞44。

在一些實施例中，複數培養袋及連接管30於購入時即已經接合在一起。

在另一些實施例中，複數培養袋及連接管30於購入時可為各自獨立的無菌包裝；於進行細胞分離操作時，再將連接管30與培養袋的可開啟式封閉性連接口104、124連接。

續參考圖8，在進行步驟S106之前，可以先將連接管30（管路300）二端的密閉式連接頭分別密閉式連接第一培養袋10的可開啟式封閉性連接口104與第二培養袋12的可開啟式封閉性連接口124（步驟S103）。

在另一些實施例中，當連接管30設有閥門311時，可在進行步驟S103之後，再開啟連接管30的閥門311（步驟S104），以由管路300提供連通第一培養袋10與第二培養袋12之通道。

由上述可知，在細胞培養的階段，連接管30不一定必須接通第一培養袋10與第二培養袋12，可以依需求或操作習慣在進行細胞分離操作的不同階段再進行連接或連通。

需注意的是，雖然前述依序描述各步驟，但此順序並非本創作之限制，熟習相關技藝者應可瞭解在合理情況下部分步驟的執行順序可同時進行或先後對調。舉例來說，對於步驟S101與步驟102相對於步驟S103與步驟104的先後次序並無限制，可以先步驟S101與步驟102後步驟S103與步驟104，也可以是先步驟S103與步驟104再進行步驟S101與步驟102，或同時進行步驟S101與步驟S103。

圖9係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第五實施例之示意圖。同時參考圖3及圖9。在一些實施例中，細胞分離裝置1的轉盤50更包括複數固定架531~533用以使複數培養袋於轉盤50轉動時固定在轉盤50上，避免位移。固定架531~533設置於轉盤50的上表面，其中固定架532位於非磁力吸附區520，而固定架531及固定架533位於磁力吸附區510，並且固定架531位於較接近轉盤50中央的位置。當進行細胞分離操作時，第二培養袋12置於固定架532內，故第二培養袋12可以排除於磁力作用範圍以外。第一培養袋10置於固定架531內，並且位於磁力吸附區510，第二培養袋13置於固定架533內，而位於磁力吸附區510。一對二連接管32連通於第一培養袋10、第二培養袋12及第二培養袋13。於此，一對二連接管32的第一端301及另一第二端303貼近於磁力吸附區510而受到磁力，第二端302則不受到磁力。因此，當轉盤50轉動而對第一培養袋10產生離心力（步驟S108）時，已與免疫磁珠20結合的第一細胞44因受到磁力的吸引（離心力的作用不大於磁力的作用）而留滯於第一培養袋10內或因同時受到磁力與離心力的作用（離心力的作用大於磁力的作用）而透過一對二連接管32的另一第二端303而進入到第二培養袋13內，而第二細胞46與培養液42因為僅受到離心力而透過連接管30移動至第二培養袋12的容置空間125內。

圖10係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第三實施例之流程圖。在一些實施例中，在步驟S106之前，先進行將連接管32的第一端301密閉式連接第一培養袋10，連接管32的第二端302密閉式連接第二培養袋12，以及連接管32的另一第二端303密閉式連接第二培養袋13（步驟S105），再進行步驟S106及後續步驟。

在另一些實施例中，在步驟S108之前，磁力裝置（磁力吸附區510）更提供磁力於連接管32（步驟S107）上。於此，對於步驟S106與步驟S107先後次序並無限制，可以先步驟S106後步驟S107，也可以是先步驟S107再進行步驟S106，或同時進行步驟S106與步驟S107。

圖11係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第四實施例之流程圖。圖12係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第六實施例之示意圖。在些一實施例中，參考圖11及圖12，密閉式系統之細胞分離方法包括利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋10（步驟S206），以及使第一培養袋10位於第一設置位置611並使第二培養袋12位於低於第一設置位置611的第二設置位置612（步驟S208）。於此，利用第一設置位置611高於第二設置位置612而形成的重力差係為上述所指的外力的其中一種實現方式。因此，第一培養袋10中的培養液42與未與免疫磁珠20結合的第二細胞46因重力作用而流入連接管30並經由連接管30流入第二培養袋12，而已與免疫磁珠20結合的第一細胞44則因磁力吸引而留滯於第一培養袋10中。

參考圖5A、圖5B、圖11及圖12。在一些實施例中，細胞分離裝置1包括有平板60，平板60的部分區域為磁力吸附區610，平板60的其他區域為非磁力吸附區620。在一些實施例中，磁力裝置係由磁力吸附區610來實現，舉例來說，平板60的右側區域可以由磁鐵形成。在一些實施例中，磁力裝置可設置在平板60內部的右側區域的，並且朝平板60的右側區域上表面施加一磁力以使平板60的右側區域形成磁力吸附區610。當進行細胞分離操作時，第二培養袋12置於非磁力吸附區620，而第一培養袋10置於磁力吸附區610上，以使容置空間105內的複數免疫磁珠20受到磁力吸附區610所提供的磁力而吸引。將平板60傾斜而使得第一培養袋10位於第一設置位置611，而第二培養袋12位於第二設置位置612，並且第二設置位置612低於第一設置位置611，故而使第一培養袋10受到磁力及重力的同時作用。在另一些實施例中，除了平板60以外，也可以利用吊掛或其他方式而使得第一培養袋10位於第一設置位置611而高於第二培養袋12所在的第二設置位置612，並不以此為限。

在一些實施例中，雖然圖12是顯示單一板狀結構平板60，然本創作不限於此，磁力吸附區610與非磁力吸附區620亦可為分離設置的或可彼此分離的二個板狀結構。

圖13係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第五實施例之流程圖。在一些實施例中，在注入複數免疫磁珠20於第一培養袋10(步驟S201)後混合複數免疫磁珠20與複數細胞40(步驟S202)，參考圖13，在步驟S206之前，可以先進行將連接管30二端分別密閉式連接第一培養袋10與第二培養袋12（步驟S203）。

在另一些實施例中，在進行步驟S208之後，然後再開啟連接管30的閥門311（步驟S204），使連接管30的管路300連通第一培養袋10與第二培養袋12。因此，可於確定第一培養袋10已在磁力作用範圍內（也就是確認磁力裝置已吸附其上接合有第一細胞44的免疫磁珠20）後，才開啟閥門311使得第一培養袋10與第二培養袋12透過連接管30而連通，藉以避免第一細胞44未充分受到磁力作用之前就誤入第二培養袋12。

雖然前述依序描述各步驟，但此順序並非本創作之限制，熟習相關技藝者應可瞭解在合理情況下部分步驟的執行順序可同時進行或先後對調。舉例來說，對於步驟S202相對於步驟S203的先後次序並無限制，可以先步驟S202後步驟S203，也可以是先步驟S203後步驟S202。

圖14係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第六實施例之流程圖。在一些實施例中，參照圖14，密閉式系統之細胞分離方法包括利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋10（步驟S306）以及將培養液42注入第一培養袋10使複數免疫磁珠20未抓取的第二細胞46從第一培養袋10通過連接管30移動到第二培養袋12（步驟S308）。於此注入之培養液42所產生的流力係為上述所指的外力的其中一種實現方式。因此，第一培養袋10中的與未與免疫磁珠20結合的第二細胞46因流力作用而隨著培養液42流入連接管30並經由連接管30流入第二培養袋12，而已與免疫磁珠20結合的第一細胞44則因磁力吸引留滯於第一培養袋10中。

在步驟S308的一實施例中，注入培養液42可以經由第一培養袋10的第一可開啟式封閉性開口102或第二可開啟式封閉性開口103來進行。

圖15係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第七實施例之流程圖。在一些實施例中，免疫磁珠20可於第一培養袋10購入時即存在在容置空間105內。在另一些實施例中，參考圖15，在步驟S306之前，可先透過第一可開啟式封閉性開口102與第二可開啟式封閉性開口103中之至少一者注入複數免疫磁珠20於第一培養袋10內（步驟S301），然後混合複數免疫磁珠20與複數細胞40使複數結合件22抓取複數細胞40中的複數個第一細胞44（步驟S302）。於反應後（結合件22與第一細胞44充份結合後），再進行步驟S306及後續步驟。

續參考圖15。在一些實施例中，第一培養袋10、第二培養袋12及連接管30於購入時即已經接合在一起。於此，藉由連接管30上的閥門311的關閉將第一培養袋10的容置空間105與第二培養袋12的容置空間125隔離。於進行細胞分離操作時，在進行步驟S306之前，先開啟連接管30的閥門311（步驟S304），以使管路300連通於第一培養袋10的容置空間105與第二培養袋12的容置空間125之間，再進行步驟S306及後續步驟。

在不同的實施例中，可以採用不同的外力來源，例如離心力、重力（重力差）、流力或其組合等以將複數免疫磁珠20未抓取的第二細胞46從第一培養袋10通過連接管30移動到第二培養袋12或第二培養袋13，並且磁力可以分別或同時作用於第一培養袋10或連接管30、32，據以控制複數免疫磁珠20未抓取的第二細胞46所移動的方向。在上述的實施例中已分別說明各種不同相互搭配的實施例，但此些實施例並非本創作之限制，熟習相關技藝者應可瞭解在合理情況下部分步驟可以調動順序或搭配操作，同樣能達到本創作的目的。

綜上所述，根據本創作實施例之密閉式系統之細胞分離方法、其細胞培養袋及其細胞分離裝置1可提供一密閉式培養系統，其藉由密閉式連接的複數培養袋，使得細胞能在不受外界污染的情況進行分離純化以接續下一階段的培養。

舉例來說，在進行多形態的細胞（如，免疫細胞等）培養時，可將初代細胞注入第一培養袋10並於第一培養袋10進行培養。於培養一段時日後，第一培養袋10內會存在有至少二種形態的細胞（如，第一細胞44與第二細胞46）。於進行細胞分離操作時，可在磁力與外力的作用下，利用免疫磁珠20選取其中一種形態的細胞（如，第一細胞44）並留滯於第一培養袋10，然後將其他型態的細胞（如，第二細胞46）分離至第二培養袋12。分離後，位於第一培養袋10中的第一細胞44與位於第二培養袋12中的第二細胞46即可以各自的特性進行後續細胞培養或利用。

雖然本創作以前述之實施例揭露如上，然其並非用以限定本創作，任何熟習相像技藝者，在不脫離本創作之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本創作之專利保護範圍須視本說明書所附之申請專利範圍所界定者為準。

1‧‧‧細胞分離裝置
10‧‧‧第一培養袋
101‧‧‧袋體
102‧‧‧第一可開啟式封閉性開口
103‧‧‧第二可開啟式封閉性開口
104‧‧‧可開啟式封閉性連接口
105‧‧‧容置空間
12‧‧‧第二培養袋
121‧‧‧袋體
122‧‧‧第一可開啟式封閉性開口
123‧‧‧第二可開啟式封閉性開口
124‧‧‧可開啟式封閉性連接口
125‧‧‧容置空間
13‧‧‧第二培養袋
131‧‧‧袋體
132‧‧‧第一可開啟式封閉性開口
133‧‧‧第二可開啟式封閉性開口
134‧‧‧可開啟式封閉性連接口
135‧‧‧容置空間
30‧‧‧連接管
300、320‧‧‧管路
311~313‧‧‧閥門
32‧‧‧連接管
301‧‧‧第一端
302‧‧‧第二端
303‧‧‧另一第二端
20‧‧‧免疫磁珠
22‧‧‧結合件
40‧‧‧複數細胞
42‧‧‧培養液
44‧‧‧第一細胞
46‧‧‧第二細胞
50‧‧‧轉盤
510、610‧‧‧磁力吸附區
520、620‧‧‧非磁力吸附區
531~533‧‧‧固定架
60‧‧‧平板
611‧‧‧第一設置位置
612‧‧‧第二設置位置
S101‧‧‧注入複數免疫磁珠於第一培養袋
S102‧‧‧混合複數免疫磁珠與複數細胞
S103‧‧‧連接管二端分別密閉式連接第一培養袋與第二培養袋
S104‧‧‧開啟連接管的閥門
S105‧‧‧連接管的第一端密閉式連接第一培養袋，且第二端密閉式連接第二培養袋以及另一第二端密閉式連接另一第二培養袋
S106‧‧‧利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋
S107‧‧‧利用磁力裝置提供磁力於連接管
S108‧‧‧利用轉盤之轉動提供離心力於第一培養袋
S201‧‧‧注入複數免疫磁珠於第一培養袋
S202‧‧‧混合複數免疫磁珠與複數細胞
S203‧‧‧連接管二端分別密閉式連接第一培養袋與第二培養袋
S206‧‧‧利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋
S208‧‧‧使第一培養袋位於第一設置位置並使第二培養袋位於低於第一設置位置的第二設置位置
S204‧‧‧開啟連接管的閥門
S301‧‧‧注入複數免疫磁珠於第一培養袋
S302‧‧‧混合複數免疫磁珠與複數細胞
S304‧‧‧開啟連接管的閥門
S306‧‧‧利用磁力裝置提供磁力於第一培養袋
S308‧‧‧將培養液注入第一培養袋

圖1係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第一實施例之示意圖； 圖2係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第二實施例之示意圖； 圖3係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第三實施例之示意圖； 圖4係圖3之連接管一實施例之示意圖； 圖5A及圖5B係圖1之密閉式系統之細胞分離裝置的一實施例之細胞分離操作之示意圖； 圖6係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第一實施例之流程圖； 圖7係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第一實施例之示意圖； 圖8係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第二實施例之流程圖； 圖9係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第五實施例之示意圖； 圖10係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第三實施例之流程圖； 圖11係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第四實施例之流程圖； 圖12係根據本創作之密閉式系統之細胞分離裝置第六實施例之示意圖； 圖13係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第五實施例之流程圖； 圖14係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第六實施例之流程圖；及 圖15係根據本創作之密閉式系統之細胞分離方法第七實施例之流程圖。

Claims (15)

1. 一種密閉式系統之細胞分離裝置，包含： 複數培養袋，各該培養袋包括： 一袋體，內部具有一容置空間，用以培養複數細胞； 二可開啟式封閉性開口，位於該袋體上並連通於該容置空間，用以輸入或輸出該複數細胞的一培養液；及 一可開啟式封閉性連接口，位於該袋體上並連通於該容置空間； 複數免疫磁珠，位於該複數培養袋中之一第一培養袋的該容置空間中，其中各該免疫磁珠上設有複數結合件，且該複數結合件用以抓取該複數細胞中的複數個；及 一連接管，密閉式連接在該第一培養袋的該可開啟式封閉性連接口與該複數培養袋中至少一第二培養袋的該至少一可開啟式封閉性連接口之間； 其中，當該第一培養袋受到一磁力及一外力時，該複數細胞中該複數免疫磁珠未抓取的細胞因該外力通過該連接管移動至該至少一第二培養袋中之一。
2. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，其中該至少一第二培養袋為一個，該連接管為一一對一管線，該一對一管線的二端分別密閉式連接該第一培養袋的該可開啟式封閉性連接口與該第二培養袋的該可開啟式封閉性連接口。
3. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，其中該至少一第二培養袋為複數個，該連接管為一一對多管線，該一對多管線的一第一端密閉式連接該第一培養袋的該可開啟式封閉性連接口，且該一對多管線的複數第二端分別密閉式連接該複數第二培養袋的該複數可開啟式封閉性連接口。
4. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，其中該連接管具有一管路以及一閥門，該管路連通該第一培養袋與該至少一第二培養袋，且該閥門控制該管路的流通。
5. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，其中各該培養袋的該二可開啟式封閉性開口及該可開啟式封閉性連接口位於該袋體的同一側。
6. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，其中各該培養袋的該可開啟式封閉性連接口設置於該袋體對應於該二可開啟式封閉性開口的另一側。
7. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，更包括： 一磁力裝置，以提供該磁力於該第一培養袋；及 一轉盤，以透過轉動該第一培養袋以提供該外力於該第一培養袋。
8. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，更包括： 一磁力裝置，以提供該磁力於該第一培養袋；及 一高度調整裝置，具有一第一設置位置與低於該第一設置位置的至少一第二設置位置，其中該第一培養袋位於該第一設置位置，且該至少一第二培養袋位於該至少一第二設置位置，以致使該外力形成於該第一培養袋中。
9. 如請求項1所述之密閉式系統之細胞分離裝置，更包括： 一磁力裝置，以提供該磁力於該第一培養袋，其中當該第一培養袋的該二可開啟式封閉性開口中之一保持密閉且該可開啟式封閉性連接口連通該連接管時，該第一培養袋的該二可開啟式封閉性開口中之另一輸入該培養液以形成該外力。
10. 一種密閉式系統之細胞培養袋，包含： 一袋體，內部具有一容置空間，用以培養複數細胞； 二可開啟式封閉性開口，位於該袋體上並連通於該容置空間，用以輸入或輸出該複數細胞的一培養液；及 一可開啟式封閉性連接口，位於該袋體上並連通於該容置空間。
11. 如請求項10所述之密閉式系統之細胞培養袋，更包括： 一連接管，該連接管的一端密閉式連接該可開啟式封閉性連接口。
12. 如請求項11所述之密閉式系統之細胞培養袋，其中該連接管為一一對一管線。
13. 如請求項11所述之密閉式系統之細胞培養袋，其中該連接管為一一對多管線。
14. 如請求項12或13所述之密閉式系統之細胞培養袋，其中該連接管具有一管路以及一閥門，該管路密閉式連接該可開啟式封閉性連接口，且該閥門控制該管路的流通。
15. 如請求項10所述之密閉式系統之細胞培養袋，更包括： 複數免疫磁珠，位於該容置空間中，其中各該免疫磁珠上設有複數結合件，且該複數結合件用以抓取該複數細胞中的複數個。