TWI742648B - 細胞培養裝置及其使用方法 - Google Patents

Abstract

一種細胞培養裝置利用培養液混合腔室作為細胞養分來源，可同時與多個細胞培養腔室連通，均勻地提供富有養分及氧氣的培養液，並同時回收經使用的培養液，與使用前的培養液混合均勻，以形成再循環系統。本發明的細胞培養裝置可容易地依需求增加或減少細胞培養腔室，且可充分利用培養液內殘留的養分以降低成本。

Description

細胞培養裝置及其使用方法

本發明是關於細胞培養的領域，特別是可提供不同使用方式的細胞培養裝置及其使用方法。

近年來，動物/哺乳動物細胞培養已成為新生物技術發展的重要技術，其中，固定化床生物反應器為主要使用裝置，其包含用於細胞生長的多孔載體，可保護細胞免受剪力影響，且因載體具有大表面積，細胞密度可高於其他系統，通常可達到5〜10×10⁷ 細胞數/毫升(cells/ml)的密度。

當前的固定化床生物反應器雖以不同的原理操作，然而，因氧合作用(oxygenation)限制、異質分佈不均(heterogeneous distribution)、通道效應(channeling effect)、有限的氧氣供應和養分梯度問題而造成培養環境不穩定等因素，限制了固定化床的細胞培養規模在30公升的範圍內。不過，目前一般仍期望以高細胞密度的細胞培養方法來大幅降低製造成本。

市售的TideCell^R 反應器，透過特殊充氧方法，使設備的培養規模可進一步擴展至約100公升(L)的載體固定化床，相當於2,000公升微載體攪拌槽(microcarrier stir tank)，解決傳統固定化床培養裝置對於細胞培養規模受限的問題。雖然如此，但透過間歇性地進行固定化床的暴露(emerging)(暴露載體床)和浸入(沉浸載體床  (emerge and submerge))，在不同固定化床的垂直位置上的暴露時間和浸入時間不同，固定化床的上方部分將更早消耗完養分，而固定化床的下方部分將更早消耗完氧氣，一旦培養規模不斷增加，浸入和暴露的時間變長, 無論養分供應和pH的變化皆可能產生問題，需加以改善。

本發明提供一種細胞培養裝置及其使用方法，可解決曝氣或氧合作用的限制，並穩定培養期間營養物和pH值的變化。細胞培養裝置可採用載體固定化床的間歇性暴露和浸入相結合的培養方法，或對於持續暴露的載體固定化床，可結合分配器、噴灑器或類似裝置，從載體固定化床的頂部均勻噴灑培養液。

本發明提供一種細胞培養裝置及其使用方法，在充足氧氣供應的情況下，可輕易地擴大培養規模至任何實際所需的生產規模，以及固定化床頂部的分配器可在細胞培養過程中，提供更好且均勻的培養環境。

依據上述，本發明提供一種細胞培養裝置，包含：一培養腔室，具有多個多孔載體填充於其中；一混合腔室，裝載一培養液於其中且具有一混合裝置以混合該培養液；以及一培養液迴流分配組件，連結該混合腔室及該培養腔室且包含一分配器位於該些多孔載體的上方與一流體加壓裝置，該培養液迴流分配組件將該混合腔室中的該培養液通過該分配器分灑至該培養腔室中的該些多孔載體，並且通過該些多孔載體的該培養液流經該培養液迴流分配組件流送回該混合腔室；其中，該流體加壓裝置協同該分配器以分灑該培養液的流速等於或小於該培養液流送回混合腔室的流速，以使該多個多孔載體沉浸於該培養液中或從該培養液中露出。

依據上述，本發明提供一種細胞培養方法，包含下列步驟：提供一培養腔室，其中填充多個多孔載體，以及一噴灑器設置於該培養腔室的頂部；提供一混合腔室，其中裝載一培養液，且具有一混合裝置以混合該培養液；提供一培養液迴流分配組件，連結該混合腔室及該培養腔室且包含一分配器位於該些多孔載體的上方與一流體加壓裝置；透過該培養液迴流分配組件將該混合腔室中的該培養液通過該分配器分灑至該培養腔室中的該些多孔載體，並且通過該些多孔載體的該培養液流經該培養液迴流分配組件流送回該混合腔室；以及調整該流體加壓裝置和該分配器二者至少之一，使該分配器分灑該培養液的流速等於或小於該培養液流送回該混合腔室的流速。

以下將詳述本發明之各實施例，並配合圖式作為例示，使讀者對本發明有較完整的瞭解。本文之說明可廣泛地施行於其它的實施例中，在本發明精神下，任何所述實施例的輕易替代、修改、等效變化都應包含在本發明之範圍內。本發明之專利權應以申請專利範圍作為界定基準。特別注意的是，圖式僅為示意之用，並非代表元件實際之尺寸或數量，有些細節可能未完全繪出，以求圖式之簡潔。本發明實施例可用於培養任何細胞，例如真核和原核細胞，特別是動物細胞和/或哺乳動物細胞。本發明的實施例可用於產生從細胞產生的任何產物，例如重組蛋白、酶、病毒或細胞本身。

本發明的細胞培養裝置包含複數個腔室，其具有至少二腔室。其中之一腔室(第一腔室)作為混合容器之用，可謂之混合腔室，其包含設置在混合腔室的頂部、用於引入或移除培養液、氣體出入或其他目的之複數個開口或通氣孔通氣孔，以及設置於混合腔室的內部或外部、用於均化培養液的一混合裝置。可選擇地，在混合腔室內可設置噴氣器(sparger)，以提高培養液中的氧氣含量。當混合裝置設置於混合腔室的內部時，可使用螺旋槳、攪拌葉片，當設置於混合腔室的外部時，可使用搖床、搖臂或循環離心泵。其次，混合腔室可以具有可撓性且供一次性使用的容器，或是可以為剛性金屬、玻璃或塑料容器。另外，混合腔室可由平台支撐，或是透過平台或其他外部裝置提供溫度調控。

相對地，另一腔室(第二腔室)作為培養之用，可謂之培養或固定化床腔室，其可包含設置於頂部的一或多個通氣孔以及填充於培養腔室中、供細胞附著及生長的複數個多孔載體(matrix)，其中多孔載體可以隨機設置且鬆散地填充於固定化床腔室內的一匣(cartridge，圖上未繪)中，或是直接隨機設置且鬆散地填充於固定化床腔室內。

本發明的細胞培養裝置進一步包括一培養液迴流分配組件。培養液迴流分配組件包括至少一或多個管線或通道連通混合腔室和培養腔室彼此的底部和頂部，如設置管線(第一管線)將混合腔室底部與培養腔室頂部連通，以及設置另一管線(第二管線)將混合腔室底部與培養腔室底部連通。於此種培養液迴流分配組件的例子中，混合腔室中的培養液與氧氣混合均勻後富含氧氣並被調節為所需的pH值。然後，透過第一管線、混合後的培養液從混合腔室底部流至培養腔室頂部。另一方面，在培養腔室中流經多孔載體的培養液從培養腔室底部開口透過第二管線流回至混合腔室底部相同或不同的開口，作為一循環，且在細胞培養過程中持續該循環。在上述循環的同時，或當培養液從培養腔室流入混合腔室時的特定情況下，部分培養液從混合腔室或其他腔室(第三腔室)流至培養腔室的頂部。在一些實施例中，培養液迴流分配組件更包括可設置於培養腔室的頂部的噴嘴或其他可從由多孔載體構成的固定床的頂部均勻分佈培養液的部件/手段。當培養液流經頂部時，透過此分配手段可將培養液從固定床的頂部開始均勻分配。

本發明提供培養液迴流分配組件的一個或多個管線或通道將第一(混合)腔室連通第二(培養)腔室，培養液可於第一腔室和第二腔室之間流動。當在垂直方向上移動第二腔室，使第二腔室低於或高於第一腔室中的培養液液面的情形時，培養液可因重力作用而於第一腔室和第二腔室之間流動。本發明可透過透過外部機械方式(例如雙向泵)或氣動方式(例如壓力和真空)使得培養液液面在第一腔室和第二腔室之間流動。第二腔室中的培養液液面上限和下限是由設置於第二腔室下方平台上的重量傳感器(load cell)或設置在第二腔室中的液位傳感器(level sensor)控制，而停留在上限或下限位置的時間是由計時器控制。當培養液於第一腔室及第二腔室之間流動的期間，不論適當培養液從第二腔室流向第一腔室時，或當培養液從第一腔室流向第二腔室時，可透過其他驅動裝置使培養液從第一腔室或另一第三腔室流至第二腔室的頂部，並且培養液經過一噴嘴或分配器噴灑在第二腔室中。其中，驅動裝置可以是蠕動泵(peristaltic pump)、離心泵(centrifugal pump)、空氣幫浦(air pressure)或其他能夠在密閉系統中進行液體輸送而不會引起污染的驅動裝置。較佳地，本發明中的第一腔室與第二腔室於培養過程中是固定而不改變彼此的相對高度。

續，從第二腔室頂部流入的培養液的流速或流入頻率(in-flow frequency)可調整以形成不同的培養方法，例如從第二腔室的頂部流入的培養液輸入流速(input flow rate)(從第一腔室到第二腔室的流量)與從第二腔室的底部輸出流速(output flow rate)(從第二腔室到第一腔室的流量)相同，且若第二腔室的培養液液面位於固定床的頂部，則屬於浸沉式系統(submerge system)。而培養液從第二腔室的頂部流入的輸入流速(從第一腔室到第二腔室的流量)比從底部(從第二腔室到第一腔室的流量)流出的輸出流速慢的情形下，可透過控制流速或流動頻率使得培養液的液面間歇性降低和增加，此則屬於暫時性浸沉/暴露系統(temporary submerge/emerge system)。

除上述培養方法外，本發明的細胞培養裝置尚提供第三種培養方法。透過從第二腔室的頂部額外流入培養液，有助於改善培養環境，減少養分和氧氣分佈不均勻的影響。如，培養液在第二腔室的頂部流入的輸入流速(從第一腔室到第二腔室的流量)與從第二腔室底部流出的輸出流速(從第二腔室到第一腔室的流量)相同，且第二腔室中的培養液的液面位於第二腔室的底部時，本發明的細胞培養裝置可進行另一種培養方法，例如降膜(滴淋式)生物反應器(falling film bioreactor)，此時，培養液在第二腔室頂部的流量可以透過不同的週期來控制，如連續性的、間歇性的或偶發性的週期。培養液在第二腔室頂部的流量可以取決於或獨立於其在底部的流量，例如當培養液從第二腔室的底部流至第一腔室時，可以觸發培養液從第二腔室頂部流出，反之亦然。亦可每隔幾分鐘觸發一次培養液從第二腔室的頂部流入，並持續幾分鐘，此時與第二腔室底部的流動方向無關。

請參考圖1，第一 (混合)腔室102包含用於引入或移除培養液、氣體出入或其他目的的複數個開口，其中，用於氣體出入口的開口可設置一空氣過濾器105。其次，混合裝置108可設置於第一腔室102的內部或外部，以及一噴氣器(sparger) 109可選擇地設置在第一腔室102內以提供培養液(圖上未示)的額外的氧氣含量(oxygenation capability)。再者，第二(培養)腔室101包含用於氣體出入口的開口、用於引入細胞、培養液或緩衝溶液的頂部開口，其中，用於氣體出入口的開口可設置空氣過濾器104。其次，至少一多孔載體103填充在第二腔室101內。又，於第一實施例中，培養液迴流分配組件包括將第一腔室102的底部與第二腔室101的底部連通的管線110，以及將第一腔室102的底部與第二腔室101的頂部連通的管線111，其中，一流體加壓裝置，例如一泵106設置於管線111上以驅動培養液從第一腔室102的底部流向第二腔室101的頂部。其次，一分配器(disperser)設置於第二腔室101的頂部並與管線111連接，分配器可為一噴灑器107，其可均勻地將培養液噴灑於第二腔室101內部。

本發明的細胞培養裝置提供多種操作方法來因應不同的需求，例如粘附細胞或非粘附細胞、剪力敏感性細胞或非剪力敏感性細胞、低氧或高氧等。請參考圖2，培養液於培養腔室的頂部入口流速小於底部入口及底部出口的流速，形成一種間歇性曝氣及浸沉培養模式。類似圖1的裝置，但圖2顯示培養液113注入了第一腔室102中以及第二腔室101中。在操作過程中，培養液113從設置在第二腔室101的頂部的噴灑器107噴灑至第二腔室101中，當培養液113於第二腔室101頂部的管線111入口的流速為零或小於第二腔室101底部連通管線110處的流速，第二腔室101中的培養液液面112可在細胞培養期間向下和向上移動，以使多孔載體103間歇性浸沉及露出於培養液113。

當培養液於第二腔室的頂部入口流速等同於底部出口流速，且第二腔室中培養液的液面位於頂部以浸沉多孔載體的條件下，形成浸沉式再循環培養模式，請參考圖3，於此種操作下，培養液的液面112淹沒或高於整個多孔載體103，並透過適當的手段阻斷(block)空氣過濾器104。透過泵106協同噴灑器107，將培養液113從第二腔室101頂部的噴灑器107噴灑進入第二腔室101，並驅使培養液113於第二腔室101頂部的管線111處的入口流速等於第二腔室101底部的管線110處的出口流速，迫使第二腔室101內的培養液從第二腔室101流向第一腔室102，作為浸沉式再循環細胞培養系統。

當培養液在第二腔室的頂部入口流速等同於底部出口流速，且第二腔室的培養液液面位於底部以暴露出載體，形成露出式再循環降膜(滴淋式)培養模式，請參考圖4，於此種操作下，培養液的液面112位於多孔載體103的底部，致使全部或部分多孔載體103暴露於氣相(gaseous phase)環境下，空氣過濾器104仍被阻斷，透過泵106將培養液113從頂部噴灑器107噴灑進入第二腔室101中，使第二腔室101頂部的管線111中的培養液入口流速等於第二腔室101底部的管線110中的出口流速，迫使第二腔室101內的培養液113從第二腔室101流向第一腔室102，作為再循環降膜(滴淋式)細胞培養系統。

要說明的是，上揭圖式中的第二腔室101中的複數個多孔載體103形成一鬆散填充載體 (packed matrix)以作為深度過濾器(depth filter)，在培養液113流動過程中可最大程度地捕獲細胞、使細胞錨定及/或嵌入於多孔載體103上。當多孔載體103從培養液113暴露出時，多孔載體103提供較薄的空氣與培養液113界面，使空氣與培養液113接觸面積最大化。多孔載體103可為以任何尺寸和形狀的多孔基材，且可隨機地設置於第二腔室101內以形成鬆散堆積的深層過濾器。每一多孔載體103皆為一小過濾器，以捕獲細胞或將細胞附著於載體上。然而，每一多孔載體103之間的空隙(void space)必須足夠大，以避免在培養液113流動過程中造成細胞堵塞或結垢。在較佳實施例中，多孔載體103為無紡纖維載體(non-woven fibrous matrix)，可作為過濾器將細胞包裹。在另一較佳實施例中，多孔載體103為大孔載體(microporous)，其孔徑為50μm至200μm，且孔隙率(porosity)大於70％。在又另一較佳實施例中，多孔載體103可選擇能提供最大表面積的載體，以用於細胞捕獲、貼附、生長和氧合。根據本發明之較佳實施例，更提供一種易於收集含有細胞產物之培養液的方法，由於大部分的細胞都被多孔載體所捕獲，可減少流失細胞的問題。根據本發明之較佳實施例，本發明的細胞培養裝置可保護細胞免於直接暴露於空氣、氣泡或由氣體流入所產生的剪力，避免任何對細胞有害的影響。

可以選擇的，透過驅動裝置驅動培養液流入及流入第二腔室的底部，驅動裝置可藉由電磁閥控制的空氣幫浦，請參考圖5，培養腔室101中填充多孔載體103，空氣過濾器104設置於培養腔室101的頂部，管線 111於向培養腔室101的開口處可選擇性地連接分配器或噴灑器107，培養腔室101透過管線110及管線111連接混合腔室102，驅動裝置106可安裝於管線111上。混合腔室102包含混合裝置108及選擇性配置的噴氣器(sparger)109以在混合過程中導入空氣或氧氣，另一空氣過濾器105則設置於混合腔室102的頂部。在操作過程中，培養液113可由頂部的噴灑器107噴灑進入培養腔室101中。其次，透過啟動和停止的方式來調整流速或流量頻率以使得培養腔室101中的頂部的整體流速小於培養腔室101底部的整體流速。再者，在培養腔室101中的培養液液面112在細胞培養過程中上下垂直移動以將多孔載體103浸入及暴露出。培養液液面112的上下移動可透過驅動裝置114控制而驅使，驅動裝置114可為一空氣泵，與空氣過濾器104連通，藉著控制空氣流動方向而給予壓力或抽真空，並透過電磁閥(solenoid valves)115、115’控制空氣流量，以產生驅動力來驅動培養液113在第二腔室101內向下或向上流動。

可以選擇地，培養腔室底部的培養液流動方向可藉由電磁裝置推動培養腔室內的插梢而驅動。請參考圖6，在此實施例中，培養液迴流分配組件包括管線110和通道130，其中通道130包圍固定化床117，固定床化117由填充多孔載體103所構成，即通道130類似套在固定化床117外的一外槽，二者整合成為一培養腔室101。以圓筒形來看，固定化床117的直徑小於通道130的環狀直徑，空氣過濾器104設置於培養腔室101和通道130的頂部。培養液迴流分配組件更包括一分配器116設置於培養腔室101的頂部。培養腔室101的底部具有一底部開口118連通通道130，一擋板元件120，例如由塞子和彈簧所組成，設置於底部開口118以用於開啟或關閉底部開口118。再者，另一流體加壓裝置，例如泵121可安裝在管線110上以幫助和控制其中培養液的流動和流向。於本實施例中，擋板元件120更包含可以由磁力驅動的金屬或磁鐵。一電磁裝置119設置於第二腔室101和通道130的下方外部，可以磁力拉動或推動擋板元件120以開啟和關閉底部開口118，進而控制培養液113的流動方向。

續圖6，培養腔室101透過通道130和設置於培養腔室101底部處的管線110而連通至混合腔室102的底部，混合腔室102如本發明其他實施例所示，於此不贅述。在操作過程中，可開啟電磁裝置119以拉開擋板元件120，從而開啟培養腔室101的底部開口118，當培養液113從混合腔室102流向培養腔室101時，培養液113可通過底部開口118而流入培養腔室101的固定化床117，並且同時流入固定化床117周圍的通道130，使得固定化床117的多孔載體103被培養液113浸沒。可理解的，當培養液113從第二腔室101流向第一腔室102時，培養液113可以從固定化床117的內部和外部同時流出以暴露出於固定化床117中的多孔載體103之外。

參考圖7，為圖6的系統另一操作方式，其中電磁裝置119可用拉或推的方式控制擋板元件120的開或關，進而控制培養液113的流向。在操作中，關閉電磁裝置119、釋放擋板元件120，從而關閉固定化床117下方的底部開口118，如此使得來自混合腔室102、流經管線110的培養液113從培養腔室101的底部流入通道130，並且沿著固定化床117周圍的通道130流向培養腔室101的頂部，進而由固定化床117上方的分配器116噴灑於固定化床117的多孔載體103。在培養期間，可驅動電磁裝置119的開或關，若開啟固定化床117下方的底部開口118時，培養液113可由底部開口118進入固定化床117中，進而將多孔載體113浸沒。當浸沒階段到達一特定程度時，可以關閉底部開口118，培養液113則沿著通道130向上流至培養腔室101的頂部後，由分配器116噴灑於固定化床117的多孔載體103。

圖8為類似圖1的實施例，與圖1不同之處在於管線110上亦可以安裝泵121上以幫助和控制其中培養液的流動和流向，其餘操作方式類似圖1，於此不贅述。

綜上所述，本發明的細胞培養裝置利用培養液混合腔室作為細胞養分來源，可同時與多個細胞培養腔室連通以輸送富有養分及氧氣的培養液，並可同時回收經使用的培養液，與使用前的培養液混合均勻，以形成再循環培養系統。本發明的細胞培養裝置可容易地依需求增加或減少細胞培養腔室，且可充分循環利用培養液內殘留的養分以降低培養成本。

101:第二腔室 102:第一腔室 103:多孔載體 104,105:空氣過濾器 106,121:泵 107:噴灑器 108:混合裝置 109:噴氣器 110:管線 111:管線 112:培養液液面 113:培養液 114:驅動裝置 115,115’:電磁閥 116:分配器 117:固定化床 118:底部開口 119:電磁裝置 120:擋板元件 130:通道

以下所提供的圖式僅為例示性說明，並不意欲限制本發明於任何所述的特定實施例。該些說明可以理解為用於結合附圖於此作為本說明書的參照內容。

圖1為本發明之第一實施例的細胞培養裝置示意圖。

圖2為本發明之第一實施例的細胞培養方法示意圖。

圖3為本發明之第二實施例的細胞培養方法示意圖。

圖4為本發明之第三實施例的細胞培養方法示意圖。

圖5為本發明之第二實施例的細胞培養裝置和方法示意圖。

圖6為本發明之第三實施例的細胞培養裝置和方法示意圖。

圖7為本發明之第三實施例的細胞培養裝置和方法示意圖。

圖8為本發明之第四實施例的細胞培養裝置示意圖。

無

101:第二腔室

102:第一腔室

103:多孔載體

104,105:空氣過濾器

106,121:泵

107:噴灑器

108:混合裝置

109:噴氣器

110:管線

111:管線

113:培養液

116:分配器

Claims (16)

1. 一種細胞培養裝置，包含：一培養腔室，具有多個多孔載體填充於其中；一混合腔室，裝載一培養液於其中且具有一混合裝置以混合該培養液；以及一培養液迴流分配組件，連結該混合腔室及該培養腔室且包含一分配器位於該些多孔載體的上方與一流體加壓裝置，該培養液迴流分配組件將該混合腔室中的該培養液通過該分配器分灑至該培養腔室中的該些多孔載體，並且通過該些多孔載體的該培養液流經該培養液迴流分配組件流送回該混合腔室；其中，該流體加壓裝置協同該分配器以分灑該培養液的流速等於或小於該培養液流送回混合腔室的流速，以使該多個多孔載體沉浸於該培養液中或從該培養液中露出。
2. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該培養液迴流分配組件更包含：一第一管線連通該分配器，並且連接該混合腔室的底部及該培養腔室的頂部，其中該分配器設置於該培養腔室的頂部；以及一第二管線，連接該混合腔室的底部及該培養腔室的底部以將通過該些多孔載體的該培養液流送回該混合腔室。
3. 如請求項2所述之細胞培養裝置，其中該流體加壓裝置包括一或多個泵安裝於該第一管線和該第二管線二者至少之一上，藉以幫助和控制該培養液於該第一管線和該第二管線二者至少之一中的一流速或一流向。
4. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該培養液迴流分配組件更包括一空氣過濾器設置於該培養腔室的頂部，藉以驅使該培養腔室中的該培養液的一液面水平改變。
5. 如請求項4所述之細胞培養裝置，更包括一空氣泵與該空氣過濾器連通以給予壓力或抽真空。
6. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該培養液迴流分配組件更包含：一管線設置於該混合腔室的底部和該培養腔室的底部；一通道連接該分配器並且位於該些多孔載體的一外圍，該通道與該管線連通，其中該通道位於該培養腔室內，且該些多孔載體組成一固定化床；以及一擋板元件位於該固定化床的一底部開口和該通道之間，藉以控制該培養液從該底部開口進出該固定化床。
7. 如請求項6所述之細胞培養裝置，更包括一電磁裝置設置於該培養腔室的底部以控制該擋板元件以開啟或關閉該培養液從該底部開口進出該固定化床。
8. 如請求項6所述之細胞培養裝置，其中，該流體加壓裝置包括一泵安裝於該管線上，藉以幫助和控制該培養液於該管線中的一流速或一流向。
9. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該分配器為一噴灑器。
10. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該多孔載體隨機地填充於該培養腔室內。
11. 如請求項1所述之細胞培養裝置，其中該培養腔室和該混合腔室維持固定的一高度。
12. 一種細胞培養方法，包含下列步驟：提供一培養腔室，其中填充多個多孔載體，以及一噴灑器設置於該培養腔室的頂部；提供一混合腔室，其中裝載一培養液，且具有一混合裝置以混合該培養液；提供一培養液迴流分配組件，連結該混合腔室及該培養腔室且包含一分配器位於該些多孔載體的上方與一流體加壓裝置；透過該培養液迴流分配組件將該混合腔室中的該培養液通過該分配器分灑至該培養腔室中的該些多孔載體，並且通過該些多孔載體的該培養液流經該培養液迴流分配組件流送回該混合腔室；以及調整該流體加壓裝置和該分配器二者至少之一，使該分配器分灑該培養液的流速等於或小於該培養液流送回該混合腔室的流速。
13. 如請求項12所述之細胞培養方法，更包含重複下列步驟：將該分配器分灑該培養液的流速調整為零；以及將該分配器分灑該培養液的流速調整為小於該培養液流送回該混合腔室的流速以使該多個多孔載體間歇地沉浸於該培養液中或從該培養液中露出。
14. 如請求項12所述之細胞培養方法，更包含調整該分配器分灑該培養液的流速等於該培養液流送回該混合腔室的流速，以使該多個多孔載體沉浸於該培養液中。
15. 如請求項12所述之細胞培養方法，更包含在該多孔載體從該培養液中露出時，調整該分配器分灑該培養液的流速等於該培養液流送回該混合腔室的流速。
16. 如請求項12所述之細胞培養方法，更包含維持該培養腔室和該混合腔室的一固定高度。

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